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Transfection and Mutagenesis of Target Genes in Mosquito Cells by Locked Nucleic Acid-modified Oligonucleotides

Plasmodium parasites, the causative agent of malaria, are transmitted through the bites of infected Anopheles mosquitoes resulting in over 250 million new ...

Université Paris Descartes

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&#x808C;&#x8089; electrotransfer &#x4F5C;&#x4E3A;&#x5B66;&#x4E60;&#x7279;&#x5B9A;&#x7684;&#x808C;&#x8089;&#x7EA4;&#x7EF4;&#x548C;&#x4F9D;&#x8D56;&#x7684;&#x795E;&#x7ECF;&#x6D3B;&#x52A8;&#x7684;&#x4FC3;&#x8FDB;&#x8005;&#x7684;&#x5DE5;&#x5177;&#x3002;

Muscle electrotransfer has recently become a promising tool for efficient delivery of plasmids and transgene expression in skeletal muscle. This technology has been mainly applied to use of muscle as a bioreactor for production of therapeutic proteins. However, it remains to be determined whether muscle electrotransfer may also be accurately used as an alternative tool to transgenesis for studying aspects of muscle-specific gene control that must be explored in fully mature muscle fibers in vivo, such as fiber specificity and nerve dependence. It was also not known to what extent the initial electrical stimulations alter muscle physiology and gene expression. Therefore, optimized conditions of skeletal muscle electroporation were first tested for their effects on muscles of transgenic mice harboring a pM310-CAT transgene in which the CAT reporter gene was under control of the fast IIB fiber-specific and nerve-dependent aldolase A pM promoter. Surprisingly, electrostimulation led to a drastic but transient shutdown of pM310-CAT transgene expression concomitant with very transient activation of MyoD and, mostly, with activation of myogenin, suggesting profound alterations in transcriptional status of the electroporated muscle. Return to a normal transcriptional state was observed 7-10 days after electroporation. Therefore, we investigated whether a reporter construct placed under control of pM could exhibit fiber-specific expression 10 days after electrotransfer in either fast tibialis anterior or slow soleus muscle. We show that not only fiber specificity, but also nerve dependence, of a pM-driven construct can be reproduced. However, after electrotransfer, pM displayed a less tight control than previously observed for the same promoter when integrated in a chromatin context.

Muscle electrotransfer as a tool for studying muscle fiber-specific and nerve-dependent activity of promoters.

Muscle ELECTROTRANSFERT est r&eacute;cemment devenu un outil prometteur pour la prestation efficace des plasmides et expression du transg&egrave;ne dans le muscle squelettique. Cette technologie a &eacute;t&eacute; appliqu&eacute;e principalement &agrave; l&#39;utilisation du muscle comme un bior&eacute;acteur pour la production de prot&eacute;ines th&eacute;rapeutiques. Toutefois, il reste &agrave; d&eacute;terminer si ELECTROTRANSFERT musculaire peut &eacute;galement pr&eacute;cis&eacute;ment servir un outil alternatif &agrave; la transg&eacute;n&egrave;se pour &eacute;tudier les aspects du contr&ocirc;le de g&egrave;nes musculaires sp&eacute;cifiques qui doivent &ecirc;tre explor&eacute;es en pleine maturit&eacute;s des fibres musculaires in vivo, comme sp&eacute;cificit&eacute; de fibre et de la d&eacute;pendance du nerf. On ne sait pas &eacute;galement dans quelle mesure les stimulations &eacute;lectriques initiales alter expression de g&egrave;ne et de la physiologie musculaire. Par cons&eacute;quent, des conditions optimales d&#39;&eacute;lectroporation de muscle squelettique furent d&#39;abord test&eacute;es pour leurs effets sur les muscles de souris transg&eacute;niques contenant un transg&egrave;ne pM310-CAT dans lequel le g&egrave;ne rapporteur CAT &eacute;tait sous contr&ocirc;le de la rapide IIB sp&eacute;cifiques de fibre et de nerf d&eacute;pendant aldolase un promoteur MP. &Eacute;tonnamment, l&#39;&eacute;lectrostimulation a conduit &agrave; un arr&ecirc;t drastique mais transitoire d&#39;expression de transg&egrave;nes pM310-CAT concomitante avec activation tr&egrave;s transitoire de MyoD et, surtout, avec activation de la myog&eacute;nine, sugg&eacute;rant des alt&eacute;rations profondes en &eacute;tat transcriptionnel du muscle &eacute;lectroporation. Retour &agrave; un &eacute;tat normal de transcription a &eacute;t&eacute; observ&eacute;e &agrave; 7-10 jours apr&egrave;s &eacute;lectroporation. Par cons&eacute;quent, nous avons examin&eacute; si une construction journaliste plac&eacute;e sous le contr&ocirc;le des particules pourrait exposer expression sp&eacute;cifique des fibres 10 jours apr&egrave;s ELECTROTRANSFERT soit tibialis rapide du muscle sol&eacute;aire ant&eacute;rieur ou lent. Nous montrons que non seulement sp&eacute;cificit&eacute; de fibre, mais aussi la d&eacute;pendance de nerf, d&#39;une construction ax&eacute;e sur les pM peut &ecirc;tre reproduits. Cependant, apr&egrave;s ELECTROTRANSFERT, pM affiche un contr&ocirc;le moins serr&eacute; que celle observ&eacute;e pr&eacute;c&eacute;demment pour le promoteur m&ecirc;me lorsqu&#39;elle est int&eacute;gr&eacute;e dans un contexte de chromatine.

ELECTROTRANSFERT muscle comme un outil pour &eacute;tudier l&#39;activit&eacute; sp&eacute;cifique des fibres musculaires et nerveuses d&eacute;pendant des promoteurs.

Muscle Elektrotransfer als Werkzeug zur Untersuchung der Muskelfaser-spezifische und Nerven-abh&#xE4;ngige Aktivit&#xE4;t von Promotoren.

Muscolo electrotransfer recentemente &egrave; diventato uno strumento promettente per la distribuzione efficiente dei plasmidi ed espressione del transgene nel muscolo scheletrico. Questa tecnologia &egrave; stata applicata principalmente per l&#39;utilizzo del muscolo come un bioreattore per la produzione di proteine terapeutiche. Tuttavia, rimane essere determinato se muscolo electrotransfer con precisione utilizzabile anche come uno strumento alternativo per transgenesi per studiare gli aspetti di controllo muscolo-specifici del gene che deve essere esplorato nelle fibre muscolari pienamente maturi in vivo, come specificit&agrave; di fibra e dipendenza dal nervo. Inoltre non era noto in che misura le stimolazioni elettriche iniziali alterano espressione genica e fisiologia muscolare. Pertanto, ottimizzate le condizioni del muscolo scheletrico elettroporazione in primo luogo sono state testate per i loro effetti sui muscoli di topi transgenici che harboring un transgene pM310-CAT, in cui il gene reporter CAT era sotto il controllo della veloce IIB fibra-specifici e dipendente dal nervo aldolasi un promotore di pM. Sorprendentemente, l&#39;elettrostimolazione ha portato a un arresto drastico ma transitorio dell&#39;espressione del transgene pM310-CAT concomitante con molto transitoria attivazione di MyoD e, soprattutto, con l&#39;attivazione di myogenin, suggerendo profonde alterazioni nello stato di transcriptional del muscolo electroporated. Ritorno a uno stato normale di transcriptional &egrave; stato osservato 7-10 giorni dopo l&#39;elettroporazione. Quindi, abbiamo valutato se un costrutto reporter posizionato sotto il controllo dei pM potrebbe esibire fibra specifica espressione 10 giorni dopo electrotransfer o muscolo soleo anteriore o lento veloce tibiale. Mostriamo che non solo la specificit&agrave; di fibra, ma anche dipendenza del nervo, di un costrutto di pM pu&ograve; essere riprodotte. Tuttavia, dopo electrotransfer, pM visualizzato un controllo meno stretto quanto precedentemente osservato per il promotore stesso quando integrati in un contesto di cromatina.

Muscolo electrotransfer come strumento per lo studio delle attivit&agrave; specifiche della fibra muscolare e nervo-dipendente dei promotori.

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IIB &#x7E4A;&#x7DAD;&#x56FA;&#x6709;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x795E;&#x7D4C;&#x4F9D;&#x5B58;&#x578B;&#x30A2;&#x30EB;&#x30C9;&#x30E9;&#x30FC;&#x30BC;&#x65E5;&#x30D7;&#x30ED;&#x30E2;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x306E;&#x5236;&#x5FA1;&#x4E0B;&#x3067;&#x3055;&#x308C;&#x305F; pM310 &#x732B; transgene &#x3092;&#x304B;&#x304F;&#x307E;&#x3063;&#x3066;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30B8;&#x30A7;&#x30CB;&#x30C3;&#x30AF; &#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x306E;&#x7B4B;&#x8089;&#x3078;&#x306E;&#x5F71;&#x97FF;&#x306E;&#x30C6;&#x30B9;&#x30C8;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x9A5A;&#x3044;&#x305F;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3001;&#x96FB;&#x6C17;&#x523A;&#x6FC0;&#x304C;&#x3001;&#x629C;&#x672C;&#x7684;&#x306A;&#x904E;&#x6E21;&#x306E;&#x30B7;&#x30E3;&#x30C3;&#x30C8; &#x30C0;&#x30A6;&#x30F3; pM310 &#x732B; transgene &#x5F0F;&#x4F75;&#x7528; MyoD &#x306E;&#x975E;&#x5E38;&#x306B;&#x4E00;&#x6642;&#x7684;&#x306A;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x3068;&#x8EE2;&#x5199;&#x30B9;&#x30C6;&#x30FC;&#x30BF;&#x30B9; electroporated &#x7B4B;&#x306E;&#x6DF1;&#x9060;&#x306A;&#x5909;&#x5316;&#x3092;&#x793A;&#x5506; myogenin &#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x3092;&#x4E3B;&#x306B;&#x3001;&#x3064;&#x306A;&#x304C;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x8EE2;&#x5199;&#x306E;&#x5E38;&#x614B;&#x306B;&#x623B;&#x308B;&#x30A8;&#x30EC;&#x30AF;&#x30C8;&#x30ED;&#x30DD;&#x30EC;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x5F8C; 7-10 &#x65E5;&#x89B3;&#x5BDF;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3057;&#x305F;&#x304C;&#x3063;&#x3066;&#x3001;pM &#x306E;&#x7BA1;&#x7406;&#x4E0B;&#x306B;&#x7F6E;&#x304B;&#x30EC;&#x30DD;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC; &#x30B3;&#x30F3;&#x30B9;&#x30C8;&#x30E9;&#x30AF;&#x30C8;&#x304C; 10 &#x65E5;&#x5F8C;&#x306B;&#x3069;&#x3061;&#x3089;&#x304B;&#x901F;&#x3044;&#x811B;&#x9AA8;&#x524D;&#x65B9;&#x304B;&#x9045;&#x3044;&#x30E9;&#x30C3;&#x30C8;&#x30D2;&#x30E9;&#x30E1;&#x7B4B;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x96FB;&#x5B50;&#x4F1D;&#x9054;&#x7CFB;&#x7E4A;&#x7DAD;&#x56FA;&#x6709;&#x8868;&#x73FE;&#x3092;&#x8868;&#x308F;&#x3059;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x308B;&#x304B;&#x3069;&#x3046;&#x304B;&#x3092;&#x8ABF;&#x3079;&#x305F;&#x3002;&#x7E4A;&#x7DAD;&#x306E;&#x7279;&#x7570;&#x6027;&#x3060;&#x3051;&#x3067;&#x306A;&#x304F; pM &#x99C6;&#x52D5;&#x30B3;&#x30F3;&#x30B9;&#x30C8;&#x30E9;&#x30AF;&#x30C8;&#x306E;&#x795E;&#x7D4C;&#x4F9D;&#x5B58;&#x6027;&#x3092;&#x518D;&#x73FE;&#x3067;&#x304D;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x305F;&#x3060;&#x3057;&#x3001;&#x96FB;&#x5B50;&#x4F1D;&#x9054;&#x7CFB;&#x5F8C; pM &#x4EE5;&#x524D;&#x30AF;&#x30ED;&#x30DE;&#x30C1;&#x30F3; &#x30B3;&#x30F3;&#x30C6;&#x30AD;&#x30B9;&#x30C8;&#x3067;&#x7D71;&#x5408;&#x3059;&#x308B;&#x3068;&#x3001;&#x540C;&#x3058;&#x30D7;&#x30ED;&#x30E2;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x306E;&#x89B3;&#x6E2C;&#x3088;&#x308A;&#x3082;&#x5C11;&#x306A;&#x3044;&#x30BF;&#x30A4;&#x30C8;&#x306A;&#x30B3;&#x30F3;&#x30C8;&#x30ED;&#x30FC;&#x30EB;&#x304C;&#x8868;&#x793A;&#x3002;

&#x7B4B;&#x96FB;&#x5B50;&#x4F1D;&#x9054;&#x7CFB;&#x30D7;&#x30ED;&#x30E2;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x306E;&#x7B4B;&#x7DDA;&#x7DAD;&#x306B;&#x56FA;&#x6709;&#x3068;&#x795E;&#x7D4C;&#x306B;&#x4F9D;&#x5B58;&#x3057;&#x305F;&#x6D3B;&#x52D5;&#x306E;&#x52C9;&#x5F37;&#x306E;&#x30C4;&#x30FC;&#x30EB;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x3002;

&#xADFC;&#xC721; electrotransfer &#xACE8;&#xACA9; &#xADFC;&#xC721;&#xC5D0; &#xD50C;&#xB77C;&#xC2A4; &#xBBF8;&#xB4DC; &#xBC0F; transgene &#xC2DD;&#xC758; &#xD6A8;&#xC728;&#xC801;&#xC778; &#xB0A9;&#xD488;&#xC744; &#xC704;&#xD55C; &#xC720;&#xB9DD;&#xD55C; &#xB3C4;&#xAD6C;&#xAC00; &#xB418;&#xACE0;&#xC788;&#xB2E4; &#xCD5C;&#xADFC;. &#xC774; &#xAE30;&#xC220;&#xC740; &#xC8FC;&#xB85C; &#xCE58;&#xB8CC; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xC0DD;&#xC0B0;&#xC744; &#xC704;&#xD55C; &#xC0DD;&#xBB3C; &#xBC18;&#xC751; &#xAE30;&#xB97C; &#xADFC;&#xC721;&#xC758; &#xC0AC;&#xC6A9;&#xC5D0; &#xC801;&#xC6A9; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098;, &#xADF8;&#xAC83;&#xC740; &#xC5EC;&#xBD80; &#xADFC;&#xC721; electrotransfer &#xC0AC;&#xC6A9;&#xD560; &#xC218;&#xB3C4; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xC815;&#xD655; &#xD558; &#xAC8C; transgenesis &#xB300;&#xCCB4; &#xB3C4;&#xAD6C;&#xB85C; &#xC644;&#xC804;&#xD788; &#xC131;&#xC219;&#xD55C; &#xADFC;&#xC721; &#xC12C;&#xC720; &#xC0DD;&#xCCB4; &#xC870;&#xAC74;, &#xC12C;&#xC720; &#xD2B9;&#xC774;&#xC131; &#xB4F1; &#xC2E0;&#xACBD; &#xC758;&#xC874;&#xC131;&#xC5D0;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD0D0;&#xAD6C; &#xD574;&#xC57C; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xADFC;&#xC721; &#xAD00;&#xB828; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xC81C;&#xC5B4;&#xC758; &#xCE21;&#xBA74;&#xC744; &#xACF5;&#xBD80; &#xD558;&#xB294; &#xAC83;&#xC744; &#xD655;&#xC778;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xB2E4;. &#xADF8;&#xAC83;&#xC740; &#xB610;&#xD55C; &#xC54C;&#xB824;&#xC9C0;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC558;&#xB2E4; &#xC5B4;&#xB290; &#xC815;&#xB3C4; &#xCD08;&#xAE30; &#xC804;&#xAE30; stimulations &#xBCC0;&#xACBD; &#xADFC;&#xC721; &#xC0DD;&#xB9AC;&#xD559;&#xACFC; &#xC9C4; &#xC2DD;. &#xB530;&#xB77C;&#xC11C;, &#xACE8;&#xACA9; &#xADFC;&#xC721; electroporation&#xC758; &#xCD5C;&#xC801;&#xD654; &#xB41C; &#xC870;&#xAC74;&#xC740; &#xBA3C;&#xC800; &#xC740;&#xB2C9; pM310 &#xACE0;&#xC591;&#xC774; transgene &#xBE60;&#xB978; IIB &#xC12C;&#xC720; &#xBC0F; &#xC2E0;&#xACBD; &#xC885;&#xC18D; aldolase &#xC624;&#xD6C4; &#xBC1C;&#xAE30;&#xC778;&#xC758; &#xD1B5;&#xC81C; &#xACE0;&#xC591;&#xC774; &#xB9AC;&#xD3EC;&#xD130; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xB294; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xBCC0;&#xD615; &#xC950;&#xC758; &#xADFC;&#xC721;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC758; &#xD6A8;&#xACFC; &#xB300; &#xD55C; &#xD14C;&#xC2A4;&#xD2B8; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB180;&#xB78D;&#xAC8C;&#xB3C4;, &#xD1B5;&#xD574; &#xACFC;&#xAC10; &#xD55C; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xACFC;&#xB3C4; &#xC885;&#xB8CC;&#xB97C; &#xC218; &#xBC18;&#xD558;&#xB294; pM310 &#xACE0;&#xC591;&#xC774; transgene &#xC2DD; Myod&#xC758; &#xB9E4;&#xC6B0; &#xACFC;&#xB3C4; &#xD65C;&#xC131;&#xD654;&#xC640; &#xD568;&#xAED8;, &#xC8FC;&#xB85C;, myogenin, electroporated &#xADFC;&#xC721;&#xC758; transcriptional &#xC0C1;&#xD0DC;&#xC5D0;&#xC11C; &#xAE4A;&#xC740; &#xBCC0;&#xACBD; &#xC81C;&#xC548; &#xD65C;&#xC131;&#xD654;&#xB97C; &#xC774;&#xB04C;&#xC5C8;&#xB2E4;. &#xC815;&#xC0C1;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; transcriptional &#xB3CC;&#xC544;&#xAC00;&#xAE30; electroporation &#xD6C4; 7-10 &#xC77C; &#xAD00;&#xCC30; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;. &#xB530;&#xB77C;&#xC11C;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xC624;&#xD6C4;&#xC758; &#xC81C;&#xC5B4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xAE30;&#xC790; &#xAD6C;&#xBB38; &#xC12C;&#xC720; &#xAD00;&#xB828; &#xC2DD; &#xBE60;&#xB978; tibialis &#xC55E;&#xCABD; &#xB610;&#xB294; &#xB290;&#xB9B0; soleus &#xADFC;&#xC721; &#xC911;&#xC5D0;&#xC11C; electrotransfer &#xD6C4;&#xC5D0; 10 &#xC77C; &#xC804;&#xC2DC; &#xC218; &#xC788;&#xB294;&#xC9C0; &#xC5EC;&#xBD80;&#xB97C; &#xC870;&#xC0AC; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xC12C;&#xC720; &#xD2B9;&#xC774;&#xC131; &#xBFD0; &#xC544;&#xB2C8;&#xB77C; &#xC624;&#xD6C4; &#xC81C;&#xC5B4; &#xAD6C;&#xBB38;&#xC774;&#xC758; &#xC2E0;&#xACBD; &#xC758;&#xC874;&#xB3C4; &#xC7AC;&#xD604;&#xD560; &#xC218; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098;, electrotransfer, &#xC624;&#xD6C4; chromatin &#xB9E5;&#xB77D;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD1B5;&#xD569; &#xD558;&#xB294; &#xACBD;&#xC6B0; &#xB3D9;&#xC77C;&#xD55C; &#xBC1C;&#xAE30;&#xC778;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC774;&#xC804;&#xC5D0; &#xAD00;&#xCC30; &#xB41C; &#xAC83; &#xBCF4;&#xB2E4; &#xB35C; &#xD0C0;&#xC774;&#xD2B8; &#xCEE8;&#xD2B8;&#xB864; &#xD45C;&#xC2DC;.

&#xBC1C;&#xAE30;&#xC778;&#xC758; &#xADFC;&#xC721; &#xC12C;&#xC720; &#xBC0F; &#xC2E0;&#xACBD;&#xC5D0; &#xC885;&#xC18D;&#xC801;&#xC778; &#xC791;&#xC5C5;&#xC744; &#xACF5;&#xBD80; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD55C; &#xB3C4;&#xAD6C;&#xB85C; &#xADFC;&#xC721; electrotransfer.

M&uacute;sculo i recientemente se ha convertido en una herramienta prometedora para la entrega eficiente de pl&aacute;smidos y expresi&oacute;n del transg&eacute;n en m&uacute;sculo esquel&eacute;tico. Esta tecnolog&iacute;a se ha aplicado principalmente al uso de m&uacute;sculo como un biorreactor para la producci&oacute;n de prote&iacute;nas terap&eacute;uticas. Sin embargo, queda por determinarse si i de m&uacute;sculo puede exactamente usarse tambi&eacute;n como una herramienta alternativa para la transg&eacute;nesis para estudiar aspectos de control de gene de m&uacute;sculos espec&iacute;ficos que deben ser exploradas en plena madurez fibras musculares in vivo, como la especificidad de la fibra y la dependencia del nervio. Tampoco se conoce en qu&eacute; medida las estimulaciones el&eacute;ctricas iniciales alteran muscular fisiolog&iacute;a y expresi&oacute;n gen&eacute;tica. Por lo tanto, condiciones optimizadas de electroporaci&oacute;n de m&uacute;sculo esquel&eacute;tico se probaron por sus efectos sobre los m&uacute;sculos de los ratones transg&eacute;nicos que abrigan un transgen de pM310-CAT en el que el gen reportero de CAT estaba bajo control de la r&aacute;pida IIB espec&iacute;fica de fibra y nervio dependiente aldolasa un promotor de la pM. Sorprendentemente, electroestimulaci&oacute;n condujo a una parada dr&aacute;stica pero transitoria de la expresi&oacute;n de transgenes pM310-CAT concomitante con activaci&oacute;n muy transitoria de MyoD y, sobre todo, con la activaci&oacute;n de myogenin, sugiriendo profundas alteraciones en el estado transcripcional del m&uacute;sculo electroporated. Regresar a un estado normal de transcripcional observ&oacute; 7-10 d&iacute;as despu&eacute;s de la electroporaci&oacute;n. Por lo tanto, hemos investigado si una construcci&oacute;n de reportero puesta bajo el control de la pM podr&iacute;a exhibir la expresi&oacute;n espec&iacute;fica de fibra 10 d&iacute;as despu&eacute;s de la i en ambos r&aacute;pido tibial anterior o lento s&oacute;leo. Demostramos que se puede reproducir no s&oacute;lo especificidad de fibra, sino tambi&eacute;n la dependencia del nervio, de una construcci&oacute;n basadas en la pM. Sin embargo, despu&eacute;s de i, pM muestra un menos estricto control que previamente observado por el mismo promotor cuando se integra en un contexto de cromatina.

M&uacute;sculo i como una herramienta para estudiar la actividad espec&iacute;fica de fibra muscular y nervio dependiente de promotores.

&#x6211;&#x4EEC;&#x4EE5;&#x524D;&#x7279;&#x70B9;&#x7684;&#x7279;&#x5B9A;&#x808C;&#x8089;-&#x5FEB;&#x901F;&#x7684;&#x8C03;&#x63A7;&#x5E8F;&#x5217;&#x4ECE;&#x4EBA;&#x7C7B;&#x7684;&#x919B;&#x7F29;&#x9176;&#x4E0B;&#x5348;&#x542F;&#x52A8;&#x5B50;&#x9A71;&#x52A8;&#x6C2F;&#x9709;&#x7D20;&#x4E59;&#x9170;&#x57FA;&#x8F6C;&#x79FB;&#x9176;&#x57FA;&#x56E0;&#x8868;&#x8FBE;&#x7684;&#x8F6C;&#x57FA;&#x56E0;&#x5C0F;&#x9F20;&#x3002;&#x7A81;&#x53D8;&#x7684; NF1/MEF2 &#x7ED1;&#x5B9A;&#x5728;&#x6B64;&#x542F;&#x52A8;&#x5B50;&#x7AD9;&#x70B9; &#xFF08;M2 &#x6BCD;&#x9898;) &#x4E0D;&#x4F1A;&#x5F71;&#x54CD;&#x5149;&#x7EA4;&#x7C7B;&#x578B;&#x7279;&#x5F02;&#x6027;&#x7684;&#x8F6C;&#x57FA;&#x56E0;&#xFF0C;&#x4F46;&#x4FEE;&#x6539;&#x5FEB;&#x901F;&#x62BD;&#x6410;&#x80A2;&#x4F53;&#x4E00;&#x7EA7;&#x4F18;&#x5148;&#x5F71;&#x54CD;&#x8FDC;&#x7AEF;&#x80A2;&#x4F53;&#x808C;&#x8089;&#x7EA4;&#x7EF4;&#x5176;&#x8868;&#x8FBE;&#x7684;&#x4E00;&#x4E2A;&#x5B50;&#x96C6;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x8C03;&#x67E5;&#x4E86;&#x8FD9;&#x79CD;&#x5947;&#x7279;&#x7684;&#x8868;&#x60C5;&#x6A21;&#x5F0F;&#xFF0C;&#x63D0;&#x4F9B;&#x9002;&#x5F53;&#x7684;&#x6A21;&#x578B;&#x8FDB;&#x884C;&#x5B9A;&#x6027;&#x8D1F;&#x8D23;&#x808C;&#x8089;&#x4F4D;&#x7F6E;&#x4FE1;&#x606F;&#x7684;&#x673A;&#x5236;&#x7684;&#x5206;&#x5B50;&#x4E0E;&#x7EC6;&#x80DE;&#x57FA;&#x7840;&#x3002;&#x7531;&#x76F4;&#x63A5; electrotransfer &#x7684;&#x7A81;&#x53D8; M2 &#x6784;&#x5EFA;&#x6210;&#x4EBA;&#x7684;&#x808C;&#x8089;&#x7EC4;&#x7EC7;&#x4E2D;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x5C55;&#x793A;&#x7A81;&#x53D8; M2 &#x8F6C;&#x57FA;&#x56E0;&#x8868;&#x8FBE;&#x7684;&#x5B9A;&#x4F4D;&#x5DEE;&#x5F02;&#x4E0D;&#x89C2;&#x5BDF;&#x5230;&#x5F53;&#x8F6C;&#x57FA;&#x56E0;&#x4E0D;&#x7EB3;&#x5165;&#x67D3;&#x8272;&#x8D28;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;&#x8FD9;&#x79CD;&#x8F6C;&#x57FA;&#x56E0;&#x8868;&#x8FBE;&#x6A21;&#x5F0F;&#x4F3C;&#x4E4E;&#x5E76;&#x4E0D;&#x4E0E;&#x5728;&#x5176;&#x542F;&#x52A8;&#x5B50;&#x5E8F;&#x5217;&#x4E2D; CpG &#x7532;&#x57FA;&#x5316;&#x7684;&#x7A0B;&#x5EA6;&#x76F8;&#x5173;&#x3002;&#x6700;&#x540E;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x663E;&#x793A;&#x732B;&#x6C34;&#x5E73;&#x6240;&#x53CD;&#x6620;&#x7684;&#x4F4D;&#x7F6E;&#x503C;&#x90FD;&#x4FDD;&#x6301;&#x5728;&#x539F;&#x4EE3;&#x57F9;&#x517B;&#x5EFA;&#x7ACB;&#x4ECE;&#x4E0D;&#x540C;&#x6210;&#x4EBA;&#x4E0B;&#x80A2;&#x808C;&#x8089;&#xFF0C;&#x4EE5;&#x53CA;&#x5728;&#x9AA8;&#x819C;&#x79FB;&#x690D;&#x808C;&#x8089;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x7ED3;&#x679C;&#x8868;&#x660E;&#x8BE5;&#x7A81;&#x53D8;&#x7684;&#x7AD9;&#x70B9;&#x6709;&#x52A9;&#x4E8E;&#x63ED;&#x793A;&#x5206;&#x5B50;&#x8BB0;&#x5FC6;&#x7684;&#x5149;&#x7EA4;&#x547D;&#x8FD0;&#x4F1A;&#x6210;&#x7ACB;&#x65E5;&#x4E0B;&#x5348;&#x542F;&#x52A8;&#x5B50;&#x5728;&#x5F00;&#x53D1;&#x8FC7;&#x7A0B;&#x4E2D;&#xFF0C;&#x6301;&#x7EED;&#x5230;&#x6210;&#x5E74;&#x540E;&#x53EF;&#x80FD;&#x901A;&#x8FC7;&#x4FDD;&#x6301;&#x4E0E;&#x5404;&#x79CD;&#x4E0B;&#x80A2;&#x808C;&#x8089;&#x76F8;&#x5173;&#x7684;&#x536B;&#x661F;&#x7EC6;&#x80DE;&#x67D3;&#x8272;&#x8D28;&#x5370;&#x8BB0;&#x7684; M2&#x3002;

&#x9F20;&#x6807;&#x808C;&#x8089;&#x8EAB;&#x4EFD;&#xFF1A; &#x4F4D;&#x7F6E;&#x4F9D;&#x8D56;&#x6027;&#x548C;&#x5FEB;&#x901F;&#x7EA4;&#x7EF4;&#x5177;&#x4F53;&#x8868;&#x8FBE;&#x7684;&#x8F6C;&#x57FA;&#x56E0;&#x4E0B;&#x80A2;&#x808C;&#x8089;&#x662F;&#x7532;&#x57FA;&#x5316;&#x72EC;&#x7ACB;&#x548C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x81EA;&#x4E3B;&#x3002;

We previously characterised transgenic mice in which fast-muscle-specific regulatory sequences from the human aldolase A pM promoter drive the chloramphenicol acetyltransferase gene expression. Mutation of a NF1/MEF2 binding site (M2 motif) in this promoter does not affect fibre-type specificity of the transgene but modifies its expression in a subset of fast-twitch fibres at the limb level, preferentially affecting distal limb muscles. We investigated the molecular and cellular bases of this peculiar expression pattern that provided an adequate model to characterise the mechanisms responsible for muscle positional information. By direct electrotransfer of mutated M2 construct in adult muscle, we demonstrate that positional differences in mutated M2 transgene expression are not observed when the transgene is not integrated into chromatin. Also, this transgene expression pattern does not seem to be correlated with the extent of CpG methylation in its promoter sequence. Finally, we show that positional values reflected by CAT levels are maintained in primary cultures established from different adult limb muscles, as well as in heterotopically transplanted muscles. Our results suggest that mutation of the M2 site contributes to reveal a molecular memory of fibre fate that would be set up on pM promoter during development and persist into adulthood possibly through a chromatin imprint maintained in satellite cells associated with various limb muscles.

Mouse muscle identity: the position-dependent and fast fiber-specific expression of a transgene in limb muscles is methylation-independent and cell-autonomous.

Nous avons caract&eacute;ris&eacute; pr&eacute;c&eacute;demment souris transg&eacute;niques dans lequel fast-musculaires sp&eacute;cifiques des s&eacute;quences r&eacute;gulatrices de l&#39;aldolase humaine un promoteur pM conduire l&#39;expression du g&egrave;ne chloramphenicol ac&eacute;tyltransf&eacute;rase. Mutation d&#39;une NF1/MEF2 binding site (motif de M2) dans ce promoteur n&#39;affecte pas la sp&eacute;cificit&eacute; du type de fibre du transg&egrave;ne, mais modifie son expression dans un sous-ensemble de fibres &agrave; contraction rapide au niveau des membres, touchant pr&eacute;f&eacute;rentiellement les muscles des membres distale. Nous avons &eacute;tudi&eacute; les bases mol&eacute;culaires et cellulaires de ce mod&egrave;le d&#39;expression particuli&egrave;re qui a fourni un mod&egrave;le ad&eacute;quat pour caract&eacute;riser les m&eacute;canismes responsables de l&#39;information de position de muscle. Par direct ELECTROTRANSFERT mut&eacute; m2 construire dans le muscle adulte, nous d&eacute;montrons que positionnels dans l&#39;expression de transg&egrave;nes mutante M2 sont observe pas de diff&eacute;rences quand le transg&egrave;ne n&#39;est pas int&eacute;gr&eacute; dans la chromatine. En outre, ce mod&egrave;le d&#39;expression de transg&egrave;nes ne semble pas &ecirc;tre en corr&eacute;lation avec l&#39;ampleur de la m&eacute;thylation CpG dans sa s&eacute;quence promotrice. Enfin, nous montrons que les valeurs positionnels refl&eacute;t&eacute;es par les niveaux de chat sont conserv&eacute;es dans des cultures primaires &eacute;tablis &agrave; partir des muscles des membres adultes diff&eacute;rents, ainsi que dans les muscles &eacute;jaculation transplant&eacute;s. Nos r&eacute;sultats sugg&egrave;rent cette mutation du M2 site contribue &agrave; r&eacute;v&eacute;ler une m&eacute;moire mol&eacute;culaire du destin de fibre qui serait constitu&eacute; sur le promoteur de la MP au cours du d&eacute;veloppement et de persiste &agrave; l&#39;&acirc;ge adulte, peut-&ecirc;tre au moyen d&#39;une empreinte de la chromatine dans les cellules satellites associ&eacute;s &agrave; diff&eacute;rents muscles des membres.

Identit&eacute; de muscle de souris : l&#39;expression d&eacute;pendant de la position et rapide sp&eacute;cifiques de fibre d&#39;un transg&egrave;ne dans les muscles des membres est ind&eacute;pendant de la m&eacute;thylation et cellulaire autonome.

Maus Muskel Identit&#xE4;t: die ortsabh&#xE4;ngigen und schnelle Glasfaser-spezifische Expression eines Transgens in Gliedmuskeln ist Methylierungs-unabh&#xE4;ngige und Zell-autonom.

Abbiamo precedentemente caratterizzato topi transgenici in cui sequenze regolatrici fast-muscolo-specifico dall&#39;aldolasi umano un promotore pM guidano l&#39;espressione genica di cloramfenicolo acetiltransferasi. Mutazione di una NF1/MEF2 binding sito (motivo M2) in questo promotore non influisce la specificit&agrave; del tipo di fibra del transgene ma modifica la sua espressione in un sottoinsieme delle fibre rapide a livello degli arti, che colpisce preferenzialmente i muscoli distali degli arti. Abbiamo studiato le basi molecolari e cellulari di questo pattern di espressione peculiare che ha fornito un modello adeguato per caratterizzare i meccanismi responsabili informazioni posizionali muscolare. Electrotransfer diretto di M2 mutato costruire nel muscolo adulto, dimostreremo che differenze posizionali nel mutato espressione del transgene M2 non sono osservate quando il transgene non &egrave; integrato nella cromatina. Inoltre, questo modello di espressione del transgene non sembra essere correlata con la misura di metilazione CpG nella sua sequenza promotore. Infine, ci mostra che i valori posizionali riflettuti dai livelli di CAT sono mantenuti in colture primarie stabilite dai muscoli dell&#39;arto adulti diversi, cos&igrave; come nei muscoli heterotopically trapiantati. I nostri risultati suggeriscono che mutazione di M2 sito contribuisce a rivelare una memoria molecolare del destino di fibra che vuoi impostare sul promotore pM durante lo sviluppo e persiste nell&#39;et&agrave; adulta possibilmente attraverso un&#39;impronta della cromatina mantenuto nelle cellule satellite associate a vari muscoli degli arti.

Mouse identit&agrave; muscolo: l&#39;espressione veloce fibra-specifiche e dipendente dalla posizione di un transgene in muscoli dell&#39;arto &egrave; cellula-autonoma e indipendente dalla metilazione.

&#x6211;&#x3005; &#x4EE5;&#x524D;&#x306E;&#x30AF;&#x30ED;&#x30E9;&#x30E0;&#x30D5;&#x30A7;&#x30CB; &#x30B3;&#x30FC;&#x30EB;&#x306E;&#x30A2;&#x30BB;&#x30C1;&#x30EB;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30D5;&#x30A7;&#x30E9;&#x30FC;&#x30BC;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x767A;&#x73FE;&#x9AD8;&#x901F;&#x7B4B;&#x7279;&#x7570;&#x898F;&#x5236;&#x30B7;&#x30FC;&#x30B1;&#x30F3;&#x30B9; &#x30A2;&#x30EB;&#x30C9;&#x30E9;&#x30FC;&#x30BC;&#x65E5;&#x30D7;&#x30ED;&#x30E2;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x304B;&#x3089;&#x30C9;&#x30E9;&#x30A4;&#x30D6; &#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30B8;&#x30A7;&#x30CB;&#x30C3;&#x30AF; &#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x306E;&#x7279;&#x5FB4;&#x3002;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8; &#xFF08;M2 &#x30E2;&#x30C1;&#x30FC;&#x30D5;&#xFF09; &#x3053;&#x306E;&#x30D7;&#x30ED;&#x30E2;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x3067;&#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C9; NF1/MEF2 &#x306E;&#x7A81;&#x7136;&#x5909;&#x7570;&#x306F;&#x3001;transgene &#x306E;&#x30D5;&#x30A1;&#x30A4;&#x30D0;&#x30FC;&#x578B;&#x7279;&#x7570;&#x6027;&#x306B;&#x306F;&#x5F71;&#x97FF;&#x3057;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x304C;&#x3001;&#x305D;&#x306E;&#x30B5;&#x30D6;&#x30BB;&#x30C3;&#x30C8;&#x306E;&#x5F0F;&#x9AD8;&#x901F;&#x30C8;&#x30A5;&#x30A4;&#x30C3;&#x30C1;&#x7E4A;&#x7DAD;&#x512A;&#x5148;&#x7684;&#x9060;&#x4F4D;&#x56DB;&#x80A2;&#x306E;&#x7B4B;&#x8089;&#x306B;&#x5F71;&#x97FF;&#x3092;&#x4E0E;&#x3048;&#x308B;&#x3001;&#x624B;&#x8DB3;&#x306E;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x3092;&#x5909;&#x66F4;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x7B4B;&#x4F4D;&#x7F6E;&#x60C5;&#x5831;&#x306B;&#x5BFE;&#x3059;&#x308B;&#x8CAC;&#x4EFB;&#x306E;&#x30E1;&#x30AB;&#x30CB;&#x30BA;&#x30E0;&#x3092;&#x7279;&#x5FB4;&#x4ED8;&#x3051;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x9069;&#x5207;&#x306A;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3053;&#x306E;&#x7279;&#x6709;&#x306E;&#x8868;&#x73FE;&#x30D1;&#x30BF;&#x30FC;&#x30F3;&#x306E;&#x5206;&#x5B50;&#x30FB;&#x7D30;&#x80DE;&#x57FA;&#x76E4;&#x3092;&#x691C;&#x8A0E;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x76F4;&#x63A5;&#x96FB;&#x5B50;&#x4F1D;&#x9054;&#x7CFB;&#x5909;&#x7570; M2 &#x306E;&#x6210;&#x4EBA;&#x306E;&#x7B4B;&#x306E;&#x69CB;&#x7BC9;&#x3001;&#x79C1;&#x305F;&#x3061;&#x5909;&#x7570; M2 transgene &#x5F0F;&#x3067;&#x4F4D;&#x7F6E;&#x7684;&#x306A;&#x9055;&#x3044;&#x304C;&#x3068;&#x304D;&#x3001;transgene &#x30AF;&#x30ED;&#x30DE;&#x30C1;&#x30F3;&#x306B;&#x7D71;&#x5408;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x306A;&#x3044;&#x89B3;&#x5BDF;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x307E;&#x305F;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x5C0E;&#x5165;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x767A;&#x73FE;&#x30D1;&#x30BF;&#x30FC;&#x30F3;&#x305D;&#x306E;&#x30D7;&#x30ED;&#x30E2;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x306E; CpG &#x306E;&#x30E1;&#x30C1;&#x30EB;&#x5316;&#x306E;&#x7A0B;&#x5EA6;&#x3068;&#x76F8;&#x95A2;&#x3059;&#x308B;&#x3088;&#x3046;&#x3067;&#x3059;&#x306A;&#x3044;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x6700;&#x5F8C;&#x306B;, &#x7570;&#x306A;&#x308B;&#x6210;&#x4EBA;&#x56DB;&#x80A2;&#x306E;&#x7B4B;&#x8089;&#x304B;&#x3089;&#x3001;&#x8A2D;&#x7ACB;&#x521D;&#x4EE3;&#x57F9;&#x990A;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x79FB;&#x690D;&#x7B4B;&#x8089;&#x732B;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x53CD;&#x6620;&#x4F4D;&#x7F6E;&#x306E;&#x5024;&#x304C;&#x7DAD;&#x6301;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x305D;&#x306E;&#x65E5;&#x30D7;&#x30ED;&#x30E2;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x306E;&#x958B;&#x767A;&#x4E2D;&#x306B;&#x8A2D;&#x5B9A;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x3060;&#x308D;&#x3046;&#x3057;&#x3001;&#x6210;&#x4EBA;&#x671F;&#x3092;&#x901A;&#x3058;&#x3066;&#x69D8;&#x3005; &#x306A;&#x624B;&#x8DB3;&#x306E;&#x7B4B;&#x8089;&#x3068;&#x95A2;&#x9023;&#x4ED8;&#x3051;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x885B;&#x661F;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x7DAD;&#x6301;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x30AF;&#x30ED;&#x30DE;&#x30C1;&#x30F3;&#x306E;&#x62BC;&#x5370;&#x306B;&#x6C38;&#x7D9A;&#x5316;&#x30D5;&#x30A1;&#x30A4;&#x30D0; &#x30FB;&#x904B;&#x547D;&#x306E;&#x5206;&#x5B50;&#x30E1;&#x30E2;&#x30EA;&#x3092;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x3059;&#x308B;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x3092;&#x8CA2;&#x732E; M2 &#x306E;&#x7A81;&#x7136;&#x5909;&#x7570;&#x304C;&#x793A;&#x5506;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;

&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x7B4B;&#x30A2;&#x30A4;&#x30C7;&#x30F3;&#x30C6;&#x30A3;&#x30C6;&#x30A3;: &#x30E1;&#x30C1;&#x30EB;&#x5316;&#x975E;&#x4F9D;&#x5B58;&#x3068;&#x30BB;&#x30EB;&#x81EA;&#x5F8B;&#x56DB;&#x80A2;&#x306E;&#x7B4B;&#x8089;&#x306B; transgene &#x306E;&#x4F4D;&#x7F6E;&#x306B;&#x4F9D;&#x5B58;&#x3057;&#x3066;&#x9AD8;&#x901F;&#x7E4A;&#x7DAD;&#x56FA;&#x6709;&#x8868;&#x73FE;&#x3067;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xC774;&#xC804;&#xC5D0;&#xB294; &#xC778;&#xAC04;&#xC758; aldolase &#xC624;&#xD6C4; &#xBC1C;&#xAE30;&#xC778;&#xC5D0;&#xC11C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBE60;&#xB978; &#xADFC;&#xC721; &#xAD00;&#xB828; &#xADDC;&#xC81C; &#xC2DC;&#xD000;&#xC2A4; &#xB4DC;&#xB77C;&#xC774;&#xBE0C; &#xD398;&#xB2C8; acetyltransferase &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xBC1C;&#xD604; &#xD558;&#xB294; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xBCC0;&#xD615; &#xC950;&#xB97C; &#xD2B9;&#xC9D5; &#xC774;&#xB2E4;. N f 1/MEF2 &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8; (M2 &#xBAA8;&#xD2F0;&#xBE0C;)&#xC774;&#xC774; &#xBC1C;&#xAE30;&#xC778;&#xC758; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; transgene&#xC758; &#xD30C;&#xC774;&#xBC84; &#xD615; &#xD2B9;&#xC774;&#xC131;&#xC5D0; &#xC601;&#xD5A5;&#xC744; &#xBBF8;&#xCE58;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xC6B0;&#xC120;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xC6D0;&#xC2EC; &#xC0AC;&#xC9C0; &#xADFC;&#xC721;&#xC5D0; &#xC601;&#xD5A5;&#xC744; &#xBBF8;&#xCE58;&#xB294; &#xC0AC;&#xC9C0; &#xC218;&#xC900;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD328;&#xC2A4;&#xD2B8; &#xD2B8; &#xC704;&#xCE58; &#xD2B8; &#xC704;&#xCE58; &#xC12C;&#xC720;&#xC758; &#xC77C;&#xBD80;&#xC5D0; &#xADF8; &#xD45C;&#xD604; &#xC218;&#xC815;. &#xC6B0;&#xB9AC; &#xADFC;&#xC721; &#xC704;&#xCE58; &#xC815;&#xBCF4;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xCC45;&#xC784; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998; characterise&#xC5D0; &#xC801;&#xC808; &#xD55C; &#xBAA8;&#xB378;&#xC744; &#xC81C;&#xACF5; &#xD558;&#xB294;&#xC774; &#xB3C5;&#xD2B9;&#xD55C; &#xC2DD; &#xD328;&#xD134;&#xC758; &#xBD84;&#xC790; &#xBC0F; &#xC138;&#xD3EC; &#xAE30;&#xCD08; &#xC870;&#xC0AC;. &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; m 2&#xC758; &#xC9C1;&#xC811; electrotransfer&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC131;&#xC778; &#xADFC;&#xC721; &#xC0DD;&#xC131;, &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; M2 transgene &#xC2DD;&#xC758; &#xC704;&#xCE58; &#xCC28;&#xC774; transgene chromatin&#xC5D0; &#xD1B5;&#xD569; &#xB418;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xB54C; &#xAD00;&#xCC30; &#xD558;&#xC9C0;&#xB294; &#xBCF4;&#xC5EC; &#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB610;&#xD55C;,&#xC774; transgene &#xC2DD; &#xD328;&#xD134; &#xBC1C;&#xAE30;&#xC778; &#xC21C;&#xCC28;&#xC801; CpG &#xBA54; &#xD2F8; &#xD654; &#xBC94;&#xC704;&#xC640; &#xC0C1;&#xAD00; &#xD558;&#xC9C0; &#xC54A;&#xB294; &#xAC83;. &#xB9C8;&#xC9C0;&#xB9C9;&#xC73C;&#xB85C;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; heterotopically &#xC774;&#xC2DD;&#xB41C; &#xADFC;&#xC721; &#xBFD0;&#xB9CC; &#xC544;&#xB2C8;&#xB77C; &#xB2E4;&#xB978; &#xC131;&#xC778; &#xC0AC;&#xC9C0; &#xADFC;&#xC721;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC124;&#xB9BD; &#xC8FC; &#xBB38;&#xD654;&#xC5D0; &#xACE0;&#xC591;&#xC774; &#xC218;&#xC900;&#xC73C;&#xB85C; &#xBC18;&#xC601; &#xD558;&#xB294; &#xC704;&#xCE58; &#xAC12;&#xC774; &#xC720;&#xC9C0; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xAC83;&#xC744; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xACB0;&#xACFC; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8;&#xB97C; &#xAC1C;&#xBC1C; &#xD558;&#xB294; &#xB3D9;&#xC548; &#xC624;&#xD6C4; &#xBC1C;&#xAE30;&#xC778;&#xC5D0; &#xC124;&#xC815;&#xD560; &#xAC83;&#xC774; &#xACE0; &#xC544;&#xB9C8;&#xB3C4; &#xB2E4;&#xC591; &#xD55C; &#xB2E4;&#xB9AC; &#xADFC;&#xC721;&#xACFC; &#xAD00;&#xB828; &#xB41C; &#xC704;&#xC131; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC720;&#xC9C0; chromatin &#xC778;&#xC1C4;&#xBB3C;&#xC744; &#xD1B5;&#xD574; &#xC131;&#xC778;&#xC73C;&#xB85C; &#xC720;&#xC9C0; &#xD558;&#xB294; &#xC12C;&#xC720; &#xC6B4;&#xBA85;&#xC758; &#xBD84;&#xC790; &#xBA54;&#xBAA8;&#xB9AC; &#xACF5;&#xAC1C; &#xAE30;&#xC5EC; m 2&#xC758; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xC88B;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4; &#xADFC;&#xC721; &#xC815;&#xCCB4;&#xC131;: &#xC0AC;&#xC9C0; &#xADFC;&#xC721;&#xC5D0; transgene&#xC758; &#xC704;&#xCE58;&#xC5D0; &#xB530;&#xB77C; &#xB2E4;&#xB985;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xBC0F; &#xBE60;&#xB978; &#xC12C;&#xC720; &#xAD00;&#xB828; &#xD45C;&#xD604;&#xC740; &#xBA54; &#xD2F8; &#xD654; &#xBC0F; &#xC140; &#xC790;&#xC728;.

Previamente nos caracteriza ratones transg&eacute;nicos que secuencias reguladoras de r&aacute;pido-m&uacute;sculo-espec&iacute;fica de la aldolasa humano un promotor de la pM en coche la expresi&oacute;n g&eacute;nica de cloranfenicol acetiltransferasa. Mutaci&oacute;n de un NF1/MEF2 vinculante sitio (adorno M2) en este promotor no afecta la especificidad del tipo de fibra del transg&eacute;n, pero modifica su expresi&oacute;n en un subconjunto de las fibras de contracci&oacute;n r&aacute;pida en el nivel de la extremidad, preferencial, que afectan a los m&uacute;sculos de la extremidad distal. Investigamos las bases moleculares y celulares de este patr&oacute;n de expresi&oacute;n peculiar que proporciona un modelo adecuado para caracterizar los mecanismos responsables de la informaci&oacute;n posicional del m&uacute;sculo. Por i directa de mutados M2 construir m&uacute;sculo adulto, demostramos que posicional diferencias en la expresi&oacute;n de transgenes de mutados M2 no se observan cuando el transg&eacute;n no se integra en la cromatina. Tambi&eacute;n, este patr&oacute;n de expresi&oacute;n del transg&eacute;n no parece estar correlacionada con el grado de metilaci&oacute;n CpG en su secuencia de promotor. Por &uacute;ltimo, os mostramos que valores posicionales que se refleja en los niveles de CAT se mantienen en cultivo primario establecido de m&uacute;sculos de miembro adulto diferentes, as&iacute; como en los m&uacute;sculos heterotopically trasplantados. Nuestros resultados sugieren que la mutaci&oacute;n de la M2 sitio contribuye a revelar una memoria molecular del destino de la fibra que se crear&iacute;a en promotor de pM durante el desarrollo y persiste en la edad adulta, posiblemente a trav&eacute;s de una huella de cromatina en c&eacute;lulas sat&eacute;lite asociadas con varios m&uacute;sculos de la extremidad.

Identidad de m&uacute;sculo de rat&oacute;n: la expresi&oacute;n dependiente de la posici&oacute;n y r&aacute;pido fibra espec&iacute;fica de un transgen en los m&uacute;sculos de la extremidad es independiente de la metilaci&oacute;n y c&eacute;lulas aut&oacute;nomas.

&#x8840;&#x6E05;&#x53CD;&#x5E94;&#x56E0;&#x5B50; (SRF) &#x662F;&#x5728;&#x63A7;&#x5236;&#x7684;&#x7ACB;&#x5373;&#x65E9;&#x671F;&#x53CD;&#x5E94;&#x57FA;&#x56E0;&#x4E0E;&#x808C;&#x8089;&#x7279;&#x5B9A;&#x57FA;&#x56E0;&#x8F6C;&#x5F55;&#x7684;&#x591A;&#x4E2A;&#x4FE1;&#x53F7;&#x4F20;&#x5BFC;&#x901A;&#x8DEF;&#x7684;&#x4EA4;&#x6C47;&#x5904;&#x3002;&#x5728;&#x8868;&#x8FBE;&#x5305;&#x62EC;&#x6B63;&#x5E38;&#x548C;&#x75C5;&#x6001;&#x7684;&#x5FC3;&#xFF0C;&#x4E09;&#x4E2A;&#x808C;&#x8089;&#x5931;&#x4F20;&#x7684; 50 &#x591A;&#x4E2A;&#x57FA;&#x56E0;&#x4E2D;&#x6709;&#x79EF;&#x6781;&#x6210;&#x679C;&#x76EE;&#x6807;&#x5E8F;&#x5217;&#x3002;&#x7136;&#x800C;&#xFF0C;&#x5728;&#x5FC3;&#x4E2D;&#x5F62;&#x6210;&#x7684;&#x6218;&#x7565;&#x6210;&#x679C;&#x6846;&#x67B6;&#x4F5C;&#x7528;&#x672A;&#x5904;&#x7406;&#x4F53;&#x5185;&#x8FC4;&#x4ECA;&#x7531;&#x4E8E;&#x4E2D;&#x80DA;&#x5C42;&#x5F62;&#x6210;&#x7684;&#x65E9;&#x671F;&#x6210;&#x679C;&#x5FC5;&#x8981;&#x6761;&#x4EF6;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x6709;&#x6761;&#x4EF6;&#x7A81;&#x53D8;&#x4F53;&#x7684;&#x6218;&#x7565;&#x6210;&#x679C;&#x6846;&#x67B6;&#x4F7F;&#x7528;&#x751F;&#x6210;&#x7684; Cre-loxp &#x5E8F;&#x5217;&#x91CD;&#x7EC4;&#x6218;&#x7565;&#xFF0C;&#x5C06;&#x662F;&#x975E;&#x5E38;&#x6709;&#x7528;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x6210;&#x679C;&#x5728;&#x80DA;&#x80CE;&#x548C;&#x4EA7;&#x540E;&#x7684;&#x5FC3;&#x810F;&#x529F;&#x80FD;&#xFF0C;&#x4EE5;&#x53CA;&#x5728;&#x5176;&#x4ED6;&#x7EC4;&#x7EC7;&#x4E2D;&#x7684;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;&#x8FD9;&#x4EFD;&#x62A5;&#x544A;&#x663E;&#x793A;&#x6218;&#x7565;&#x6210;&#x679C;&#x6846;&#x67B6;&#x4E2D;&#x4F7F;&#x7528;&#x65B0;&#x7684; beta MHC Cre &#x8F6C;&#x57FA;&#x56E0;&#x5C0F;&#x9F20;&#x884C;&#x80DA;&#x80CE;&#x5FC3;&#x810F;&#x7279;&#x5B9A;&#x5220;&#x9664;&#x4F1A;&#x5BFC;&#x81F4;&#x80DA;&#x80CE;&#x5929; 10.5 &#xFF08;E10.5&#xFF09; &#x4E4B;&#x95F4;&#x7684;&#x81F4;&#x547D;&#x5FC3;&#x810F;&#x7F3A;&#x9677;&#x548C;&#x8111;&#x795E;&#x7ECF;&#xFF0C;&#x5F02;&#x5E38;&#x8584;&#x5FC3;&#x808C;&#xFF0C;&#x53EF;&#x4EE5;&#x770B;&#x51FA;&#x6269;&#x5F20;&#x6027;&#x5FC3;&#x810F;&#x5206;&#x5EAD;&#x3001; &#x5C0F;&#x6881;&#xFF0C;&#x8D2B;&#x56F0;&#x5316;&#x548C;&#x6742;&#x4E71;&#x65E0;&#x7AE0;&#x7684;&#x5BA4;&#x95F4;&#x9694;&#x3002;&#x5728; E9.5&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x53D1;&#x73B0;&#x663E;&#x8457;&#x7684;&#x51CF;&#x5C11;&#x8868;&#x8FBE;&#x7684;&#x91CD;&#x8981;&#x76D1;&#x7BA1;&#x673A;&#x6784;&#x7684;&#x5FC3;&#x810F;&#x53D1;&#x80B2;&#xFF0C;&#x5305;&#x62EC; Nkx2.5&#x3001; GATA4&#x3001; &#x7279;&#x5F02;&#xFF0C;&#x6218;&#x7565;&#x6210;&#x679C;&#x6846;&#x67B6;&#x76EE;&#x6807;&#x57FA;&#x56E0; c-fos &#x4E4B;&#x524D;&#x516C;&#x5F00;&#x7684;&#x53D1;&#x80B2;&#x4E0D;&#x826F;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x5F97;&#x51FA;&#x7ED3;&#x8BBA;&#x6210;&#x679C;&#x662F;&#x5173;&#x952E;&#x5FC3;&#x810F;&#x5206;&#x5316;&#x53CA;&#x6210;&#x719F;&#xFF0C;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x4E00;&#x4E2A;&#x5168;&#x7403;&#x76D1;&#x7BA1;&#x673A;&#x6784;&#x591A;&#x53D1;&#x80B2;&#x57FA;&#x56E0;&#x3002;

&#x6709;&#x9488;&#x5BF9;&#x6027;&#x5730;&#x7684;&#x706D;&#x6D3B;&#x7684;&#x8840;&#x6E05;&#x53CD;&#x5E94;&#x56E0;&#x5B50;&#x5728;&#x53D1;&#x5C55;&#x4E2D;&#x56FD;&#x5BB6;&#x5FC3;&#x7ED3;&#x679C;&#x5FC3;&#x808C;&#x7F3A;&#x635F;&#x548C;&#x80DA;&#x80CE;&#x81F4;&#x6B7B;&#x7387;&#x3002;

Serum response factor (SRF) is at the confluence of multiple signaling pathways controlling the transcription of immediate-early response genes and muscle-specific genes. There are active SRF target sequences in more than 50 genes expressed in the three muscle lineages including normal and diseased hearts. However, the role of SRF in heart formation has not been addressed in vivo thus far due to the early requirement of SRF for mesoderm formation. We have generated a conditional mutant of SRF by using Cre-LoxP strategy that will be extremely useful to study the role of SRF in embryonic and postnatal cardiac functions, as well as in other tissues. This report shows that heart-specific deletion of SRF in the embryo by using a new beta MHC-Cre transgenic mouse line results in lethal cardiac defects between embryonic day 10.5 (E10.5) and E13.5, as evidenced by abnormally thin myocardium, dilated cardiac chambers, poor trabeculation, and a disorganized interventricular septum. At E9.5, we found a marked reduction in the expression of essential regulators of heart development, including Nkx2.5, GATA4, myocardin, and the SRF target gene c-fos prior to overt maldevelopment. We conclude that SRF is crucial for cardiac differentiation and maturation, acting as a global regulator of multiple developmental genes.

Targeted inactivation of serum response factor in the developing heart results in myocardial defects and embryonic lethality.

Facteur de r&eacute;ponse s&eacute;rique (SRF) est au confluent de plusieurs voies de signalisation contr&ocirc;lant la transcription des g&egrave;nes pr&eacute;coces imm&eacute;diats r&eacute;ponse et g&egrave;nes musculaires sp&eacute;cifiques. Il y a des s&eacute;quences de cible SRF actives dans plus de 50 g&egrave;nes exprim&eacute;s dans des lign&eacute;es de trois muscles dont les c&oelig;urs normaux et malades. Toutefois, le r&ocirc;le du cadre de r&eacute;sultats strat&eacute;giques dans la formation de coeur n&#39;a pas &eacute;t&eacute; abord&eacute; in vivo jusqu&#39;&agrave; pr&eacute;sent en raison de l&#39;exigence au d&eacute;but du cadre de r&eacute;sultats strat&eacute;giques pour la formation du m&eacute;soderme. Nous avons g&eacute;n&eacute;r&eacute; un mutant conditionnels de SRF &agrave; l&#39;aide de la strat&eacute;gie de Cre-LoxP qui sera extr&ecirc;mement utile d&#39;&eacute;tudier le r&ocirc;le du cadre de r&eacute;sultats strat&eacute;giques dans les fonctions cardiaques embryonnaires et postnatales, ainsi que dans d&#39;autres tissus. Ce rapport montre que suppression sp&eacute;cifique au c&oelig;ur du cadre de r&eacute;sultats strat&eacute;giques dans l&#39;embryon &agrave; l&#39;aide d&#39;une nouvelle gamme de souris transg&eacute;niques b&ecirc;ta MHC-Cre se traduit par des anomalies cardiaques mortelles entre embryonnaire jour 10,5 (E10.5) et E13, comme en t&eacute;moigne le myocarde anormalement mince, dilatation cardiaques chambers, trabeculation pauvre et un septum interventriculaire d&eacute;sorganis&eacute;. &Agrave; E9.5, nous avons constat&eacute; une r&eacute;duction marqu&eacute;e dans l&#39;expression des r&eacute;gulateurs essentiels du d&eacute;veloppement du coeur, y compris Nkx2.5, GATA4, myocardine et la SRF cible g&egrave;ne c-fos avant mald&eacute;veloppement manifeste. Nous concluons que les SRF est crucial pour la diff&eacute;renciation cardiaque et de la maturation, agissant comme un r&eacute;gulateur global de plusieurs g&egrave;nes.

Inactivation cibl&eacute;e de r&eacute;ponse s&eacute;rique du facteur dans les r&eacute;sultats de coeur en d&eacute;veloppement d&eacute;fauts myocardiques et la l&eacute;talit&eacute; embryonnaire.

Gezielte Inaktivierung von Serum Response Factor in den sich entwickelnden Herzens f&#xFC;hrt zu Herzinfarkt M&#xE4;ngel und embryonale Letalit&#xE4;t.

Fattore di risposta del siero (SRF) si trova alla confluenza delle vie di segnalazione pi&ugrave; controllare la trascrizione dei geni di risposta immediata iniziale e muscolo-specifici geni. Ci sono sequenze di destinazione SRF attivi in pi&ugrave; di 50 geni espressi nei lignaggi tre muscolo tra cui cuori normali e malati. Tuttavia, il ruolo di SRF nella formazione del cuore non &egrave; stato affrontato in vivo finora a causa del requisito precoce della SRF per la formazione del mesoderma. Noi abbiamo generato un mutante condizionale di SRF utilizzando Cre-LoxP strategia che sar&agrave; estremamente utile per studiare il ruolo della SRF in funzioni cardiache embrionale e postnatale, cos&igrave; come in altri tessuti. Questa relazione Mostra che cuore specifiche eliminazione della SRF nell&#39;embrione tramite una nuova linea di mouse transgenici beta MHC-Cre si traduce in difetti cardiaci letali tra giorno embrionale 10.5 (E10.5) ed E13.5, come evidenziato dal miocardio anormalmente sottile, dilatate camere cardiache, trabeculation poveri e un setto interventricolare disorganizzato. A E9.5, abbiamo trovato una marcata riduzione nell&#39;espressione di regolatori essenziali dello sviluppo di cuore, tra cui NKX 2.5, GATA4, myocardin e la SRF destinazione gene c-fos prima palese variano. Concludiamo che SRF &egrave; cruciale per cardiaco differenziazione e maturazione, agendo come un regolatore di molteplici geni dello sviluppo globale.

Inattivazione mirato di risposta del siero di fattore nei risultati del cuore in via di sviluppo in difetti del miocardio e letalit&agrave; embrionale.

&#x8840;&#x6E05;&#x5FDC;&#x7B54;&#x56E0;&#x5B50; &#xFF08;SRF&#xFF09; &#x306E;&#x5373;&#x6642;&#x521D;&#x671F;&#x5FDC;&#x7B54;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x7B4B;&#x7279;&#x7570;&#x7684;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x8EE2;&#x5199;&#x3092;&#x5236;&#x5FA1;&#x3059;&#x308B;&#x8907;&#x6570;&#x306E;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#x7D4C;&#x8DEF;&#x306E;&#x5408;&#x6D41;&#x5730;&#x70B9;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x6B63;&#x5E38;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x75C5;&#x7684;&#x5FC3;&#x3092;&#x542B;&#x3080; 3 &#x3064;&#x306E;&#x7B4B;&#x8089;&#x7CFB;&#x7D71;&#x3067;&#x767A;&#x73FE;&#x3059;&#x308B;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x4EE5;&#x4E0A; 50 &#x306E;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6;&#x306E; SRF &#x30BF;&#x30FC;&#x30B2;&#x30C3;&#x30C8; &#x30B7;&#x30FC;&#x30B1;&#x30F3;&#x30B9;&#x306F;&#x3002;&#x305F;&#x3060;&#x3057;&#x3001;&#x5FC3;&#x81D3;&#x5F62;&#x6210;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B; SRF &#x306E;&#x5F79;&#x5272;&#x306F; in vivo SRF &#x306E;&#x521D;&#x671F;&#x306E;&#x8981;&#x4EF6;&#x306E;&#x4E2D;&#x80DA;&#x8449;&#x5F62;&#x6210;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x3053;&#x308C;&#x307E;&#x3067;&#x5BFE;&#x51E6;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x306F;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3002;&#x80CE;&#x751F;&#x671F;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x751F;&#x5F8C;&#x306E;&#x5FC3;&#x6A5F;&#x80FD;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x4ED6;&#x306E;&#x30C6;&#x30A3;&#x30C3;&#x30B7;&#x30E5;&#x306E; SRF &#x306E;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x7814;&#x7A76;&#x3059;&#x308B;&#x975E;&#x5E38;&#x306B;&#x5F79;&#x306B;&#x7ACB;&#x3064;&#x3067;&#x3057;&#x3087;&#x3046; Cre-loxp &#x6226;&#x7565;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x3001;SRF &#x306E;&#x6761;&#x4EF6;&#x4ED8;&#x304D;&#x306E;&#x5909;&#x7570;&#x4F53;&#x3092;&#x751F;&#x307F;&#x51FA;&#x3057;&#x305F;&#x3002;SRF &#x306E;&#x5FC3;&#x81D3;&#x7279;&#x7570;&#x524A;&#x9664;&#x65B0;&#x3057;&#x3044;&#x30D9;&#x30FC;&#x30BF; MHC Cre &#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30B8;&#x30A7;&#x30CB;&#x30C3;&#x30AF; &#x30DE;&#x30A6;&#x30B9; &#x30E9;&#x30A4;&#x30F3;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x80DA;&#x81F4;&#x6B7B;&#x306E;&#x5FC3;&#x81D3;&#x6B20;&#x9665;&#x840C;&#x82BD;&#x671F;&#x65E5; 10.5 (E10.5) &#x306E;&#x9593;&#x3067;&#x7D50;&#x679C;&#x3053;&#x3068;&#x3053;&#x306E;&#x30EC;&#x30DD;&#x30FC;&#x30C8;&#x3092;&#x8868;&#x793A;&#x304A;&#x3088;&#x3073; E13.5 &#x7570;&#x5E38;&#x8584;&#x3044;&#x5FC3;&#x7B4B;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x8A3C;&#x660E;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x3088;&#x3046;&#x306B;&#x62E1;&#x5F35;&#x3057;&#x305F;&#x5FC3;&#x81D3;&#x533A;&#x57DF;&#x3001;&#x8CA7;&#x3057;&#x3044;&#x80A5;&#x539A;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x7121;&#x79E9;&#x5E8F;&#x9694;&#x5FC3;&#x3002;&#x80CE;&#x751F; 9.5 &#x65E5;&#x307E;&#x3067;&#x3067;&#x6211;&#x3005; Nkx2.5&#x3001;GATA4&#x3001;myocardin&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x3001;SRF &#x30BF;&#x30FC;&#x30B2;&#x30C3;&#x30C8;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50; c-fos &#x3042;&#x304B;&#x3089;&#x3055;&#x307E;&#x306A;&#x767A;&#x80B2;&#x7570;&#x5E38;&#x524D;&#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x5FC3;&#x81D3;&#x958B;&#x767A;&#x306E;&#x4E0D;&#x53EF;&#x6B20;&#x306A;&#x30EC;&#x30AE;&#x30E5;&#x30EC;&#x30FC;&#x30BF;&#x306E;&#x5F0F;&#x306E;&#x30DE;&#x30FC;&#x30AF;&#x4ED8;&#x304D;&#x306E;&#x6E1B;&#x5C11;&#x3092;&#x767A;&#x898B;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x6211;&#x3005; SRF &#x8907;&#x6570;&#x767A;&#x9054;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x30B0;&#x30ED;&#x30FC;&#x30D0;&#x30EB; &#x30EC;&#x30AE;&#x30E5;&#x30EC;&#x30FC;&#x30BF;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x6F14;&#x6280;&#x306B;&#x5FC3;&#x7B4B;&#x5206;&#x5316;&#x3084;&#x6210;&#x719F;&#x306E;&#x91CD;&#x8981;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3068;&#x7D50;&#x8AD6;&#x3065;&#x3051;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x8840;&#x6E05;&#x5FDC;&#x7B54;&#x306E;&#x5BFE;&#x8C61;&#x3068;&#x306A;&#x308B;&#x4E0D;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x56E0;&#x5B50;&#x306E;&#x767A;&#x5C55;&#x9014;&#x4E0A;&#x306E;&#x5FC3;&#x7D50;&#x679C;&#x5FC3;&#x7B4B;&#x6B20;&#x9665;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x80DA;&#x6027;&#x81F4;&#x6B7B;&#x306B;&#x3002;

&#xD608; &#xCCAD; &#xBC18;&#xC751; &#xACC4;&#xC218; (SRF) &#xC989;&#xC2DC; &#xCD08;&#xAE30; &#xBC18;&#xC751; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC640; &#xADFC;&#xC721; &#xD2B9;&#xC815; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC758; &#xC804;&#xC0AC;&#xB97C; &#xC870;&#xC808; &#xD558;&#xB294; &#xC5EC;&#xB7EC; &#xC2E0;&#xD638; &#xD1B5;&#xB85C;&#xC758; &#xD569;&#xB958;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC815;&#xC0C1;&#xC801;&#xC774; &#xACE0; &#xBCD1;&#xC5D0; &#xAC78;&#xB9B0; &#xC2EC; &#xD63C;&#xC744; &#xD3EC;&#xD568; &#xD558; &#xC5EC; 3 &#xAC1C;&#xC758; &#xADFC;&#xC721; &#xACC4;&#xBCF4;&#xC5D0; &#xD45C;&#xD604; &#xB41C; 50 &#xAC1C; &#xC774;&#xC0C1;&#xC758; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xD65C;&#xC131; SRF &#xB300;&#xC0C1; &#xC2DC;&#xD000;&#xC2A4;&#xAC00; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098;, &#xC2EC;&#xC7A5; &#xD615;&#xC131;&#xC5D0; SRF&#xC758; &#xC5ED;&#xD560;&#xC740; &#xD574;&#xACB0; &#xB418;&#xC9C0; mesoderm &#xD615;&#xC131;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; SRF &#xCD08;&#xAE30; &#xC694;&#xAD6C; &#xB54C;&#xBB38;&#xC5D0; &#xC9C0;&#xAE08;&#xAE4C;&#xC9C0; &#xC0DD;&#xCCB4; &#xC870;&#xAC74;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xBC30;&#xC544; &#xBC0F; &#xCD9C;&#xC0DD; &#xD6C4; &#xC2EC;&#xC7A5; &#xAE30;&#xB2A5; &#xBFD0;&#xB9CC; &#xC544;&#xB2C8;&#xB77C; &#xB2E4;&#xB978; &#xC870;&#xC9C1; SRF&#xC758; &#xC5ED;&#xD560; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xC5D0; &#xB9E4;&#xC6B0; &#xB3C4;&#xC6C0;&#xC774; &#xB420; &#xAC83;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4; Cre LoxP &#xC804;&#xB7B5;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; SRF&#xC758; &#xC870;&#xAC74;&#xBD80; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xC0DD;&#xC131;. &#xC774; &#xBCF4;&#xACE0;&#xC11C;&#xB294; &#xC0C8;&#xB85C;&#xC6B4; &#xBCA0;&#xD0C0; MHC-Cre &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xBCC0;&#xD615; &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4; &#xB77C;&#xC778;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xD0DC;&#xC544;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC2EC;&#xC7A5; &#xAD00;&#xB828; &#xC0AD;&#xC81C; SRF&#xC758; &#xBC30;&#xC544; &#xC77C; 10.5 (E10.5) &#xC0AC;&#xC774;&#xC758; &#xCE58;&#xBA85;&#xC801;&#xC778; &#xC2EC;&#xC7A5; &#xACB0;&#xD568;&#xC5D0; &#xACB0;&#xACFC; &#xD45C;&#xC2DC; &#xBC0F; E13.5, &#xBE44;&#xC815;&#xC0C1;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xC587;&#xC740; &#xC2EC;&#xADFC;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC785;&#xC99D;&#xC73C;&#xB85C; &#xB113;&#xD790; &#xC2EC;&#xC7A5; &#xCC54;&#xBC84;, &#xBD88; &#xC30D; &#xD55C; trabeculation, &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; &#xBE44; &#xC870;&#xC9C1;&#xB41C; interventricular &#xC2EC;&#xC7A5;. E9.5&#xC5D0;&#xC11C; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; Nkx2.5, GATA4, myocardin, &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0;&#xB294; SRF &#xB300;&#xC0C1; &#xC720;&#xC804;&#xC790; c-fos &#xBA85;&#xBC31;&#xD55C; maldevelopment &#xC774;&#xC804;&#xC744; &#xD3EC;&#xD568; &#xD55C; &#xC2EC;&#xC7A5; &#xAC1C;&#xBC1C;&#xC758; &#xD544;&#xC218; &#xB808; &#xADE4; &#xB808;&#xC774; &#xD130; &#xC2DD;&#xC5D0; &#xD45C;&#xC2DC; &#xB41C; &#xAC10;&#xC18C;&#xB97C; &#xBC1C;&#xACAC;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; SRF&#xAC00; &#xC2EC;&#xC7A5; &#xBD84;&#xD654; &#xBC0F; &#xC131;&#xC219;, &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xC5EC;&#xB7EC; &#xBC1C;&#xB2EC; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC758; &#xAE00;&#xB85C;&#xBC8C; &#xB808; &#xADE4; &#xB808;&#xC774; &#xD130; &#xACB0;&#xB860;.

&#xD608; &#xCCAD; &#xBC18;&#xC751;&#xC758; &#xD0C0;&#xAC9F;&#xB41C; &#xBE44;&#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xC2EC;&#xADFC; &#xACB0;&#xD568;&#xACFC; &#xBC30;&#xC544; &#xCE58; &#xC0AC; &#xC728;&#xC5D0;&#xC11C; &#xAC1C;&#xBC1C; &#xC2EC;&#xC7A5; &#xACB0;&#xACFC;&#xC5D0; &#xC694;&#xC18C;.

Factor de respuesta s&eacute;rica (SRF) est&aacute; en la confluencia de m&uacute;ltiples v&iacute;as de se&ntilde;alizaci&oacute;n controla la transcripci&oacute;n de genes de respuesta inmediata y principios y genes de m&uacute;sculos espec&iacute;ficos. Hay secuencias de Diana SRF activas en m&aacute;s de 50 genes expresados en los linajes de tres m&uacute;sculos incluyendo el coraz&oacute;n normal y enferma. Sin embargo, el papel de SRF en la formaci&oacute;n del coraz&oacute;n no ha sido abordado en vivo hasta el momento debido al requisito de principio de SRF para la formaci&oacute;n del mesodermo. Hemos generado a un mutante condicional de SRF utilizando la estrategia de Cre-LoxP que ser&aacute; muy &uacute;til para estudiar el papel de SRF en funciones cardiacas embrionarias y postnatales, as&iacute; como en otros tejidos. Este informe demuestra que eliminaci&oacute;n de coraz&oacute;n espec&iacute;ficos de SRF en el embri&oacute;n mediante el uso de una nueva l&iacute;nea de rat&oacute;n transg&eacute;nico beta MHC-Cre da lugar a defectos cardiacos letales entre los d&iacute;as embrionarios 10.5 (E10.5) y E13.5, seg&uacute;n lo evidenciado por el miocardio anormalmente delgado, dilatados c&aacute;maras cardiacas, trabeculaci&oacute;n pobre y un septo interventricular desorganizado. En E9.5, encontramos una reducci&oacute;n marcada en la expresi&oacute;n de reguladores esenciales del desarrollo del coraz&oacute;n, incluyendo Nkx2.5, GATA4, myocardin y el SRF objetivo gen c-fos antes maldevelopment abierta. Concluimos que SRF es crucial para cardiaca diferenciaci&oacute;n y maduraci&oacute;n, actuando como un regulador global de m&uacute;ltiples genes del desarrollo.

Inactivaci&oacute;n espec&iacute;fica de la respuesta del suero factor en los resultados en desarrollo del coraz&oacute;n en defectos del miocardio y la mortalidad embrionaria.

&#x808C;&#x8089;&#x7EA4;&#x7EF4;&#x663E;&#x793A;&#x5176;&#x6536;&#x7F29;&#x548C;&#x4EE3;&#x8C22;&#x7684;&#x6027;&#x80FD;&#x5DEE;&#x522B;&#x5F88;&#x5927;&#x3002;&#x8FD9;&#x79CD;&#x591A;&#x6837;&#x6027;&#x4F7F;&#x9AA8;&#x9ABC;&#x808C;&#xFF0C;&#x6EE1;&#x8DB3;&#x548C;&#x9002;&#x5E94;&#x4E0D;&#x540C;&#x7684;&#x4EFB;&#x52A1;&#x3002;&#x5728;&#x672C;&#x62A5;&#x544A;&#x4E2D;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x5C55;&#x793A;&#x516D;/&#x57C3;&#x4E9A;&#x901A;&#x8DEF;&#x7275;&#x8FDE;&#x5728;&#x5EFA;&#x7ACB;&#x548C;&#x7EF4;&#x6301;&#x7684;&#x5FEB;&#x808C;&#x7EA4;&#x7EF4;&#x9AA8;&#x9ABC;&#x808C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8868;&#x578B;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x8868;&#x73B0;&#x51FA;&#x7684; MEF3/Six DNA &#x7ED1;&#x5B9A;&#x5143;&#x7D20;&#x5B58;&#x5728;&#x4E8E;&#x4E0B;&#x5348;&#x542F;&#x52A8;&#x5B50;&#x533A;&#x919B;&#x7F29;&#x9176;&#x4ECB;&#x5BFC;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x6B64;&#x542F;&#x52A8;&#x5B50;&#x5728;&#x7CD6;&#x9175;&#x89E3;&#x7684;&#x5FEB;&#x901F;&#x98A4;&#x6410; (&#x4F46;&#x4E0D;&#x662F;&#x5728;&#x6162;&#x98A4;&#x6410;) &#x808C;&#x8089;&#x7EA4;&#x7EF4;&#x7684;&#x9AD8;&#x6C34;&#x5E73;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x8FD8;&#x663E;&#x793A;&#x516D;&#x548C;&#x57C3;&#x4E9A;&#x4E4B;&#x95F4;&#x57FA;&#x56E0;&#x4EA7;&#x54C1;&#x8868;&#x793A;&#x5728;&#x5C0F;&#x9F20;&#x9AA8;&#x9ABC;&#x808C;&#xFF0C;Six1 &#x548C; Eya1 &#x86CB;&#x767D;&#x4F18;&#x5148;&#x5728;&#x539F;&#x5B50;&#x6838;&#x5FEB;&#x901F;&#x62BD;&#x6410;&#x808C;&#x8089;&#x4E2D;&#x5806;&#x79EF;&#x3002;&#x5F3A;&#x8FEB;&#x7684;&#x8868;&#x8FBE;&#x7684; Six1 &#x548C; Eya1 &#x4E00;&#x8D77;&#x6162;&#x98A4;&#x6410;&#x6BD4;&#x76EE;&#x9C7C;&#x808C;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x7EA4;&#x7EF4;&#x7C7B;&#x578B;&#x8FC7;&#x6E21;&#x7684;&#x7279;&#x70B9;&#x808C;&#x7403;&#x86CB;&#x767D;&#x91CD;&#x94FE;&#x7684;&#x66F4;&#x6362;&#x6211;&#x548C; IIA &#x5F02;&#x6784;&#x4F53;&#x7684;&#x901F;&#x5EA6;&#x66F4;&#x5FEB;&#x7684; IIB &#x548C; &#xFF08;&#x6216;&#xFF09; IIX &#x5F02;&#x6784;&#x4F53;&#x3001; &#x5FEB;&#x808C;&#x7EA4;&#x7EF4;&#x7EA4;&#x7EF4;&#x7279;&#x5F02;&#x6027;&#x57FA;&#x56E0;&#xFF0C;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x548C;&#x7CD6;&#x9175;&#x89E3;&#x4EE3;&#x8C22;&#x8F6C;&#x53D8;&#x3002;&#x96C6;&#x4F53;&#xFF0C;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x6570;&#x636E;&#x6807;&#x8BC6;&#x4E3A;&#x7B2C;&#x4E00;&#x7684;&#x8F6C;&#x5F55;&#x590D;&#x5408;&#x7269;&#xFF0C;&#x80FD;&#x591F;&#x91CD;&#x65B0;&#x7F16;&#x7A0B;&#x6210;&#x4EBA;&#x6162;&#x98A4;&#x6410;&#x6C27;&#x5316;&#x7EA4;&#x7EF4;&#x8D70;&#x5411;&#x5FEB;&#x901F;&#x62BD;&#x6410;&#x7CD6;&#x9175;&#x89E3;&#x8868;&#x578B; Six1 &#x548C; Eya1&#x3002;

Six1 &#x548C; Eya1 &#x7684;&#x8868;&#x8FBE;&#x53EF;&#x4EE5;&#x91CD;&#x65B0;&#x4ECE;&#x6162;&#x98A4;&#x6410;&#x8868;&#x578B;&#x6210;&#x4EBA;&#x808C;&#x8089;&#x7F16;&#x7A0B;&#x5230;&#x5FEB;&#x808C;&#x7EA4;&#x7EF4;&#x8868;&#x578B;&#x3002;

Muscle fibers show great differences in their contractile and metabolic properties. This diversity enables skeletal muscles to fulfill and adapt to different tasks. In this report, we show that the Six/Eya pathway is implicated in the establishment and maintenance of the fast-twitch skeletal muscle phenotype. We demonstrate that the MEF3/Six DNA binding element present in the aldolase A pM promoter mediates the high level of activation of this promoter in fast-twitch glycolytic (but not in slow-twitch) muscle fibers. We also show that among the Six and Eya gene products expressed in mouse skeletal muscle, Six1 and Eya1 proteins accumulate preferentially in the nuclei of fast-twitch muscles. The forced expression of Six1 and Eya1 together in the slow-twitch soleus muscle induced a fiber-type transition characterized by the replacement of myosin heavy chain I and IIA isoforms by the faster IIB and/or IIX isoforms, the activation of fast-twitch fiber-specific genes, and a switch toward glycolytic metabolism. Collectively, these data identify Six1 and Eya1 as the first transcriptional complex that is able to reprogram adult slow-twitch oxidative fibers toward a fast-twitch glycolytic phenotype.

Six1 and Eya1 expression can reprogram adult muscle from the slow-twitch phenotype into the fast-twitch phenotype.

Fibres musculaires montrent beaucoup de diff&eacute;rences dans leurs propri&eacute;t&eacute;s m&eacute;taboliques et contractiles. Cette diversit&eacute; permet aux muscles squelettiques r&eacute;pondre et s&#39;adapter aux diff&eacute;rentes t&acirc;ches. Dans le pr&eacute;sent rapport, nous montrons que la voie de Six/Eya joue un r&ocirc;le dans l&#39;&eacute;tablissement et le maintien du ph&eacute;notype du muscle squelettique &agrave; contraction rapide. Nous d&eacute;montrons que l&#39;&eacute;l&eacute;ment de liaison de l&#39;ADN MEF3/Six pr&eacute;sent dans l&#39;aldolase, un promoteur de la pM est responsable du haut niveau de l&#39;activation des fibres du muscle promoteur dans glycolytique &agrave; contraction rapide (mais pas en contraction lente). Nous montrons &eacute;galement que parmi les Six et Eya produits de g&egrave;ne exprim&eacute; dans le muscle squelettique de souris, Six1 et Eya1 prot&eacute;ines s&#39;accumulent pr&eacute;f&eacute;rentiellement dans les noyaux des muscles &agrave; contraction rapide. L&#39;expression forc&eacute;e de Six1 et Eya1 ensemble dans le muscle sol&eacute;aire &agrave; contraction lente provoqu&eacute;e par un type de fibre de transition caract&eacute;ris&eacute;e par le remplacement de la cha&icirc;ne lourde de myosine I et IIA isoformes par les isoformes IIB ou IIX plus rapides, l&#39;activation des g&egrave;nes sp&eacute;cifiques des fibres &agrave; contraction rapide et un interrupteur vers m&eacute;tabolisme glycolytique. Collectivement, ces donn&eacute;es identifient Six1 et Eya1 comme le premier complexe de transcription qui est capable de reprogrammer les adultes lentes fibres oxydatives vers un ph&eacute;notype glycolytique &agrave; contraction rapide.

Expression Six1 et Eya1 peut reprogrammer musculaires adultes depuis le ph&eacute;notype lentes dans le ph&eacute;notype &agrave; contraction rapide.

SIX1 und EYA1 Ausdruck kann erwachsenen Muskel aus der langsam zuckenden Ph&#xE4;notyp umprogrammieren in den schnell zuckenden Ph&#xE4;notyp.

Fibre muscolari mostrano grandi differenze nella loro propriet&agrave; contrattili e metaboliche. Questa diversit&agrave; permette i muscoli scheletrici di adempiere e adattarsi alle diverse attivit&agrave;. In questa relazione, ci mostra che il percorso di sei/Eya &egrave; implicato nella creazione e manutenzione della fenotipo del muscolo scheletrico contrazione rapida. Dimostriamo che l&#39;elemento di associazione del DNA MEF3/Six presente nell&#39;aldolasi promotore pM da intermediario l&#39;alto livello di attivazione delle fibre del muscolo promotore a contrazione rapida glicolitica (ma non in contrazione lenta). Mostriamo anche che tra i sei ed Eya prodotti del gene espresso in muscolo scheletrico del mouse, Six1 ed Eya1 proteine si accumulano preferenzialmente nei nuclei dei muscoli a contrazione rapida. L&#39;espressione forzata di Six1 ed Eya1 insieme nel muscolo soleo slow-twitch indotta da un tipo di fibra transizione caratterizzata dalla sostituzione delle catene pesanti della miosina I e IIA isoforme le isoforme IIB o IIX pi&ugrave; veloce, l&#39;attivazione di geni specifici di fibre rapide e un interruttore verso metabolismo glicolitico. Collettivamente, questi dati identificano Six1 ed Eya1 come il primo complesso trascrizionale che &egrave; in grado di riprogrammare adulti slow-twitch ossidativi fibre verso un fenotipo glicolitico rapide.

Espressione Six1 ed Eya1 possibile riprogrammare muscolo adulto dal fenotipo di contrazione lenta nel fenotipo rapide.

&#x7B4B;&#x7DDA;&#x7DAD;&#x306E;&#x53CE;&#x7E2E;&#x3084;&#x4EE3;&#x8B1D;&#x7279;&#x6027;&#x306B;&#x5927;&#x304D;&#x306A;&#x9055;&#x3044;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x591A;&#x69D8;&#x6027;&#x9AA8;&#x683C;&#x306E;&#x7B4B;&#x8089;&#x3092;&#x679C;&#x305F;&#x3057;&#x3001;&#x3055;&#x307E;&#x3056;&#x307E;&#x306A;&#x30BF;&#x30B9;&#x30AF;&#x306B;&#x9069;&#x5FDC;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x5831;&#x544A;&#x3067;&#x306F;, 6/&#x7D75;&#x5C4B;&#x7D4C;&#x8DEF;&#x78BA;&#x7ACB;&#x53CA;&#x3073;&#x7DAD;&#x6301;&#x901F;&#x7B4B;&#x9AA8;&#x683C;&#x7B4B;&#x5F62;&#x8CEA;&#x306B;&#x95A2;&#x4E0E;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3068;&#x3044;&#x3046;. &#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005; MEF3/Six DNA &#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C7;&#x30A3;&#x30F3;&#x30B0;&#x8981;&#x7D20;&#x30A2;&#x30EB;&#x30C9;&#x30E9;&#x30FC;&#x30BC;&#x65E5;&#x30D7;&#x30ED;&#x30E2;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x306E;&#x5B58;&#x5728;&#x3053;&#x306E;&#x30D7;&#x30ED;&#x30E2;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x901F;&#x7B4B;&#x306E;&#x89E3;&#x7CD6;&#x7CFB; &#xFF08;&#x305F;&#x3060;&#x3057;&#x9045;&#x3044;&#x53CE;&#x7E2E;&#x3067;&#x306F;&#x306A;&#x3044;&#xFF09; &#x306E;&#x7B4B;&#x7DDA;&#x7DAD;&#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x306E;&#x9AD8;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x3092;&#x4EF2;&#x4ECB;&#x3059;&#x308B;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005; &#x3082;&#x516D;&#x3064;&#x3068;&#x7D75;&#x5C4B;&#x306E;&#x4E2D;&#x306B;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x7523;&#x7269;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x9AA8;&#x683C;&#x7B4B;&#x3001;Six1 &#x3068; Eya1 &#x3067;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x8868;&#x73FE;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3059;&#x512A;&#x5148;&#x7684;&#x901F;&#x7B4B;&#x306E;&#x7B4B;&#x8089;&#x306E;&#x6838;&#x5185;&#x84C4;&#x7A4D;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;Six1 &#x3068; Eya1 &#x5F37;&#x5236;&#x767A;&#x73FE;&#x9045;&#x3044;&#x53CE;&#x7E2E;&#x30D2;&#x30E9;&#x30E1;&#x7B4B;&#x3067;&#x4E00;&#x7DD2;&#x306B;&#x7E4A;&#x7DAD;&#x306E;&#x7A2E;&#x985E;&#x8A98;&#x8D77;&#x9077;&#x79FB;&#x30DF;&#x30AA;&#x30B7;&#x30F3;&#x91CD;&#x9396;&#x7F6E;&#x63DB;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x3092;&#x7279;&#x5FB4;&#x3068;&#x3057;&#x3001;&#x9AD8;&#x901F; IIB &#x304A;&#x3088;&#x3073;/&#x307E;&#x305F;&#x306F; IIX &#x306E;&#x30A2;&#x30A4;&#x30BD; &#x30D5;&#x30A9;&#x30FC;&#x30E0;, &#x901F;&#x7B4B;&#x7E4A;&#x7DAD;&#x7279;&#x5B9A;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x3068;&#x89E3;&#x7CD6;&#x7CFB;&#x4EE3;&#x8B1D;&#x306B;&#x5411;&#x304B;&#x3063;&#x3066;&#x30B9;&#x30A4;&#x30C3;&#x30C1;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066; IIA &#x30A2;&#x30A4;&#x30BD; &#x30D5;&#x30A9;&#x30FC;&#x30E0;&#x3002;&#x7DCF;&#x79F0;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x30C7;&#x30FC;&#x30BF;&#x306F;&#x5927;&#x4EBA;&#x306E;&#x9045;&#x3044;&#x53CE;&#x7E2E;&#x9178;&#x5316;&#x7E4A;&#x7DAD;&#x306B;&#x5411;&#x304B;&#x3063;&#x3066;&#x901F;&#x7B4B;&#x306E;&#x89E3;&#x7CD6;&#x7CFB;&#x306E;&#x8868;&#x73FE;&#x578B;&#x3092;&#x30D7;&#x30ED;&#x30B0;&#x30E9;&#x30E0;&#x3057;&#x76F4;&#x3059;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x308B;&#x6700;&#x521D;&#x306E;&#x8EE2;&#x5199;&#x8907;&#x5408;&#x4F53;&#x3068;&#x3057;&#x3066; Six1 &#x3068; Eya1 &#x3092;&#x7279;&#x5B9A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

Six1 &#x3068; Eya1 &#x5F0F;&#x30A2;&#x30C0;&#x30EB;&#x30C8;&#x7B4B;&#x9045;&#x7B4B;&#x5F62;&#x8CEA;&#x304B;&#x3089;&#x901F;&#x7B4B;&#x5F62;&#x8CEA;&#x306B;&#x518D;&#x30D7;&#x30ED;&#x30B0;&#x30E9;&#x30E0;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#xADFC;&#xC721; &#xC12C;&#xC720;&#xC758; &#xC218;&#xCD95; &#xC131; &#xBC0F; &#xB300;&#xC0AC; &#xC18D;&#xC131;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD070; &#xCC28;&#xC774;&#xC810;&#xC744; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774; &#xB2E4;&#xC591;&#xC131; &#xACE8;&#xACA9; &#xADFC;&#xC721;&#xC744; &#xCDA9;&#xC871; &#xD558; &#xACE0; &#xB2E4;&#xB978; &#xC791;&#xC5C5;&#xC5D0; &#xC801;&#xC6A9;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774; &#xBCF4;&#xACE0;&#xC11C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; 6/Eya &#xD1B5;&#xB85C; &#xC124;&#xB9BD; &#xBC0F; &#xC720;&#xC9C0; &#xBCF4;&#xC218; &#xBE60;&#xB978; &#xD2B8; &#xC704;&#xCE58; &#xACE8;&#xACA9; &#xADFC;&#xC721; &#xD615;&#xC758;&#xC5D0; &#xC5F0;&#xB8E8; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. MEF3/Six DNA &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xC694;&#xC18C; aldolase &#xC624;&#xD6C4; &#xBC1C;&#xAE30;&#xC778;&#xC5D0; &#xC911;&#xC7AC;&#xC774; &#xBC1C;&#xAE30;&#xC778; &#xBE60;&#xB978; &#xD2B8; glycolytic (&#xC5D0; &#xC2AC;&#xB85C;&#xC6B0; &#xD2B8; &#xC704;&#xCE58;) &#xADFC;&#xC721; &#xC12C;&#xC720;&#xC758; &#xC815;&#xD488; &#xC778;&#xC99D;&#xC758; &#xB192;&#xC740; &#xC218;&#xC900;&#xC744; &#xBCF4;&#xC5EC; &#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xB610;&#xD55C; &#xADF8; 6&#xC640; Eya &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xC81C;&#xD488; &#xB2E8;&#xC704;&#xB85C; &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4; &#xACE8;&#xACA9; &#xADFC;&#xC721;, Six1 &#xBC0F; Eya1 &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xBCF4;&#xC5EC; &#xD328;&#xC2A4;&#xD2B8; &#xD2B8; &#xC704;&#xCE58; &#xADFC;&#xC721;&#xC758; &#xD575;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC6B0;&#xC120;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xCD95;&#xC801;. &#xB290;&#xB9B0; &#xD2B8; &#xC704;&#xCE58; soleus &#xADFC;&#xC721;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD568;&#xAED8; Six1 &#xBC0F; eya1&#xC758; &#xAC15;&#xC81C; &#xC2DD; &#xC720;&#xB3C4; &#xB41C; &#xC12C;&#xC720; &#xD0C0;&#xC785; &#xC804;&#xD658; myosin &#xBB34;&#xAC70;&#xC6B4; &#xCCB4;&#xC778;&#xC758; &#xAD50;&#xCCB4; &#xB098; &#xD558; &#xACE0; &#xBE60;&#xB978; IIB &#xB610;&#xB294; IIX isoforms, &#xD328;&#xC2A4;&#xD2B8; &#xD2B8; &#xC704;&#xCE58; &#xD2B8; &#xC704;&#xCE58; &#xC12C;&#xC720; &#xAD00;&#xB828; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC758; &#xD65C;&#xC131;&#xD654;&#xC640; glycolytic &#xB300;&#xC0AC; &#xCABD;&#xC73C;&#xB85C; &#xC2A4;&#xC704;&#xCE58;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; IIA isoforms &#xD2B9;&#xC9D5;. &#xC0E8; &#xB2E4;, &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xB370;&#xC774;&#xD130; &#xD328;&#xC2A4;&#xD2B8; &#xD2B8; &#xC704;&#xCE58; glycolytic &#xD45C;&#xD604; &#xD615;&#xC744; &#xD5A5;&#xD574; &#xC0B0;&#xD654; &#xC12C;&#xC720; &#xC131;&#xC778; &#xC2AC;&#xB85C;&#xC6B0; &#xD2B8; &#xC704;&#xCE58;&#xB97C; &#xC7AC; &#xC124; &#xC815;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xB294; &#xCCAB; &#xBC88;&#xC9F8; transcriptional &#xBCF5;&#xC7A1; &#xD55C;&#xC73C;&#xB85C; Six1 &#xBC0F; eya1&#xB97C; &#xC2DD;&#xBCC4; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Six1&#xACFC; Eya1 &#xC2DD; &#xC2AC;&#xB85C;&#xC6B0; &#xD2B8; &#xC704;&#xCE58; phenotype&#xC5D0;&#xC11C; &#xC131;&#xC778; &#xADFC;&#xC721;&#xC744; &#xC7AC; &#xC124; &#xC815;&#xD560; &#xD328;&#xC2A4;&#xD2B8; &#xD2B8; &#xC704;&#xCE58; &#xD45C;&#xD604; &#xD615;&#xC73C;&#xB85C; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Las fibras musculares muestran grandes diferencias en sus propiedades contr&aacute;ctiles y metab&oacute;licas. Esta diversidad permite a los m&uacute;sculos esquel&eacute;ticos satisfacer y adaptarse a diferentes tareas. En este informe, se muestra que el camino de seis/Eya est&aacute; implicado en el establecimiento y mantenimiento del fenotipo contracci&oacute;n r&aacute;pida del m&uacute;sculo esquel&eacute;tico. Demostramos que la encuadernaci&oacute;n MEF3/Six ADN presente en la aldolasa promotor pM media el alto nivel de activaci&oacute;n de las fibras del m&uacute;sculo de este promotor en contracci&oacute;n r&aacute;pida glicol&iacute;ticas (pero no en lentas). Demostramos tambi&eacute;n que entre los seis y Eya productos g&eacute;nicos expresan en m&uacute;sculo esquel&eacute;tico de rat&oacute;n, Six1 y Eya1 prote&iacute;nas se acumulan preferentemente en los n&uacute;cleos de los m&uacute;sculos de contracci&oacute;n r&aacute;pida. La expresi&oacute;n forzada de Six1 y Eya1 juntos en el m&uacute;sculo s&oacute;leo lentas inducida por un tipo de fibra transici&oacute;n caracterizada por la sustituci&oacute;n de la cadena pesada de miosina I y IIA isoformas por las isoformas IIB o IIX m&aacute;s r&aacute;pidas, la activaci&oacute;n de genes espec&iacute;ficos de fibra de contracci&oacute;n r&aacute;pida y un interruptor hacia metabolismo glicol&iacute;tico. Colectivamente, estos datos identifican Six1 y Eya1 como el primer complejo transcripcional que es capaz de reprogramar adultos lentas las fibras oxidativas hacia un fenotipo de glucolisis de contracci&oacute;n r&aacute;pida.

Six1 y Eya1 expresi&oacute;n puede reprogramar m&uacute;sculo adulto del fenotipo lentas en el fenotipo de contracci&oacute;n r&aacute;pida.

&#x5B9A;&#x5411;&#x7684;&#x8BF1;&#x53D8;&#x6307;&#x793A;&#x7684;&#x5BE1;&#x6838;&#x82F7;&#x9178; (ONs) &#x662F;&#x7528;&#x4E8E;&#x64CD;&#x4F5C;&#x4E2D;&#x9AD8;&#x7B49;&#x771F;&#x6838;&#x751F;&#x7269;&#x57FA;&#x56E0;&#x7EC4;&#x7684;&#x65B0;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3002;&#x5728;&#x6B64;&#x7814;&#x7A76;&#x4E2D;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x5DF2;&#x6BD4;&#x8F83;&#x57FA;&#x56E0;&#x4E24;&#x4E2A;&#x65B0;&#x76EE;&#x6807;&#x5E8F;&#x5217;&#x3001; eBFP &#x548C; rd1 &#x7A81;&#x53D8;&#x611F;&#x5149;&#x5668; betaPDE &#x6269;&#x589E;&#xFF0C;&#x5176;&#x4E2D;&#x5408;&#x5E76;&#x6210;&#x5355;&#x4E00;&#x526F;&#x672C;&#x8F6C;&#x57FA;&#x56E0; 293T &#x7EC6;&#x80DE;&#x57FA;&#x56E0;&#x7EC4;&#x540C;&#x4E00;&#x5730;&#x70B9;&#x4E0D;&#x540C; ONs &#x7684;&#x7F16;&#x8F91;&#x3002;&#x6709;&#x8DA3;&#x7684;&#x662F;&#xFF0C;&#x53CD;&#x4E49; ONs &#x9AD8;&#x4E8E;&#x611F;&#x53D7; ONs &#x4EC5;&#x4E00;&#x9879;&#x6307;&#x6807;&#x663E;&#x793A;&#x76EE;&#x6807;&#x5E8F;&#x5217;&#x672C;&#x8EAB;&#x53EF;&#x4EE5;&#x4F20;&#x6388;&#x57FA;&#x56E0;&#x7F16;&#x8F91;&#x4E2D;&#x7684;&#x94A2;&#x7EDE;&#x7EBF;&#x504F;&#x89C1;&#x3002;&#x6700;&#x6709;&#x6548;&#x7684; ONs &#x4E86;&#x77ED; 25 nt ONs &#x4E0E;&#x4FA7;&#x7FFC;&#x9501;&#x5B9A;&#x7684;&#x6838;&#x9178; &#xFF08;LNAs&#xFF09;&#xFF0C;&#x53EA;&#x6709;&#x7ECF;&#x8FC7;&#x6709;&#x9488;&#x5BF9;&#x6027;&#x7684;&#x6838;&#x82F7;&#x9178;&#x81F4;&#x7A81;&#x53D8;&#x6027;&#x7684;&#x9175;&#x6BCD;&#x548C;&#x786B;&#x4EE3;&#x8054;&#x7CFB; 25 nt ONs &#x7684;&#x5316;&#x5B66;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x8868;&#x660E;&#x4F4E;&#x566A;&#x58F0;&#x653E;&#x5927;&#x5668;&#x4FEE;&#x6539; ONs &#x8C03;&#x89E3;&#x5242;&#x91CF;&#x4F9D;&#x8D56;&#x6027;&#x76EE;&#x6807;&#x4FEE;&#x6539;&#x548C;&#x5206;&#x6790;&#x4F4E;&#x566A;&#x58F0;&#x653E;&#x5927;&#x5668;&#x7684;&#x4F4D;&#x7F6E;&#x548C;&#x5185;&#x5BB9;&#x7684;&#x91CD;&#x8981;&#x6027;&#x3002;&#x91CD;&#x8981;&#x7684;&#x662F;&#xFF0C;&#x5F53;&#x4F7F;&#x7528;&#x5E26;&#x4FA7;&#x7FFC; LNAs ONs&#xFF0C;&#x9776;&#x5411;&#x6027;&#x7684;&#x57FA;&#x56E0;&#x6539;&#x6027;&#x7A33;&#x5B9A;&#x8F6C;&#x4EA4;&#x671F;&#x95F4;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5206;&#x88C2;&#xFF0C;&#x5141;&#x8BB8;&#x53EF;&#x9760;&#x7684;&#x5DF2;&#x4FEE;&#x6539;&#x7684;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#xFF0C;&#x514B;&#x9686;&#x529F;&#x80FD;&#x8FDB;&#x4E00;&#x6B65;&#x5728;&#x529F;&#x80FD;&#x57FA;&#x56E0;&#x7EC4;&#x5B66;&#x548C;&#x57FA;&#x56E0;&#x6CBB;&#x7597;&#x4E2D;&#x7684;&#x5E94;&#x7528;&#x7A0B;&#x5E8F;&#x7684;&#x5FC5;&#x8981;&#x6761;&#x4EF6;&#x3002;&#x6700;&#x540E;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x663E;&#x793A;&#x4E0E;&#x4FA7;&#x7FFC;&#x65E8;&#x5728;&#x7EA0;&#x6B63; rd1 &#x505C;&#x6B62;&#x7A81;&#x53D8; LNAs ONs &#x53EF;&#x4FC3;&#x8FDB; rd1 &#x57FA;&#x56E0;&#x7A81;&#x53D8;&#x5C0F;&#x9F20;&#x89C6;&#x7F51;&#x819C;&#x7684;&#x611F;&#x5149;&#x7EC6;&#x80DE;&#x751F;&#x5B58;&#x6697;&#x793A;&#x4ED6;&#x4EEC;&#x4E5F;&#x79EF;&#x6781;&#x7684;&#x4F53;&#x5185;&#x3002;

&#x7A33;&#x5B9A;&#x4E0E;&#x4FA7;&#x7FFC; LNAs &#x4F7F;&#x7528;&#x5355;&#x94FE;&#x5BE1;&#x6838;&#x82F7;&#x9178;&#x9776;&#x5411;&#x6027;&#x7684;&#x57FA;&#x56E0;&#x6539;&#x6027;&#x7684;&#x4F20;&#x8F93;&#x3002;

Targeted mutagenesis directed by oligonucleotides (ONs) is a promising method for manipulating the genome in higher eukaryotes. In this study, we have compared gene editing by different ONs on two new target sequences, the eBFP and the rd1 mutant photoreceptor betaPDE cDNAs, which were integrated as single copy transgenes at the same genomic site in 293T cells. Interestingly, antisense ONs were superior to sense ONs for one target only, showing that target sequence can by itself impart strand-bias in gene editing. The most efficient ONs were short 25 nt ONs with flanking locked nucleic acids (LNAs), a chemistry that had only been tested for targeted nucleotide mutagenesis in yeast, and 25 nt ONs with phosphorothioate linkages. We showed that LNA-modified ONs mediate dose-dependent target modification and analyzed the importance of LNA position and content. Importantly, when using ONs with flanking LNAs, targeted gene modification was stably transmitted during cell division, which allowed reliable cloning of modified cells, a feature essential for further applications in functional genomics and gene therapy. Finally, we showed that ONs with flanking LNAs aimed at correcting the rd1 stop mutation could promote survival of photoreceptors in retinas of rd1 mutant mice, suggesting that they are also active in vivo.

Stable transmission of targeted gene modification using single-stranded oligonucleotides with flanking LNAs.

Mutagen&egrave;se cibl&eacute;e r&eacute;alis&eacute; par oligonucl&eacute;otides (ONs) est une m&eacute;thode prometteuse pour la manipulation du g&eacute;nome chez les eucaryotes sup&eacute;rieurs. Dans cette &eacute;tude, nous avons compar&eacute; la g&egrave;ne &eacute;dit&eacute; par ONs diff&eacute;rentes sur deux nouvelles s&eacute;quences cibles, l&#39;eBFP et rd1 photor&eacute;cepteur mutant betaPDE ADNc, qui ont &eacute;t&eacute; int&eacute;gr&eacute;s comme les transg&egrave;nes exemplaire unique sur le m&ecirc;me site de g&eacute;nomique dans les cellules 293 t. Fait int&eacute;ressant, les ONs antisens &eacute;taient sup&eacute;rieures aux sens ONs pour une cible uniquement, montrant que s&eacute;quence cible peut en soi donner strand-partialit&eacute; dans l&#39;&eacute;dition de g&egrave;ne. L&#39;ONs plus efficaces ont &eacute;t&eacute; courtes 25 ONs nt avec flanquant verrouill&eacute;es d&#39;acides nucl&eacute;iques (LNA), une chimie qui avait seulement &eacute;t&eacute; test&eacute; pour mutagen&egrave;se cibl&eacute;e des nucl&eacute;otides chez la levure et 25 ONs nt avec liens phosphorothioate. Nous avons montr&eacute; que ONs LNA-modification modification li&eacute;e &agrave; la dose cible de m&eacute;diation et analys&eacute; l&#39;importance du contenu et de la position de la LNA. Ce qui est important, lorsque vous utilisez ONs avec accompagnement de LNA, modification du g&egrave;ne cibl&eacute; a &eacute;t&eacute; stablement transmise pendant la division cellulaire, qui a permis &agrave; fiable de clonage de cellules modifi&eacute;es, une caract&eacute;ristique essentielle pour les autres demandes en functional genomics et la th&eacute;rapie g&eacute;nique. Enfin, nous avons montr&eacute; que ONs avec accompagnement LNA visant &agrave; corriger la mutation d&#39;arr&ecirc;t rd1 pourraient favoriser la survie des photor&eacute;cepteurs de la r&eacute;tine de souris mutantes rd1, sugg&eacute;rant qu&#39;ils sont aussi actifs in vivo.

Transmission stable de modification g&eacute;n&eacute;tique cibl&eacute;e utilisant des oligonucl&eacute;otides monocat&eacute;naires avec accompagnement de LNA.

Eine stabile &#xDC;bertragung gezielte Ver&#xE4;nderung der Gene mit Hilfe einzelstr&#xE4;ngige Oligonukleotide mit flankierenden LNAs.

Mutagenesi mirata regia di oligonucleotidi (ONs) &egrave; un metodo promettente per la manipolazione del genoma negli eucarioti superiori. In questo studio abbiamo confrontato gene modifica di ONs differenti su due nuove sequenze bersaglio, il eBFP e il mutante fotorecettore rd1 betaPDE cDNAs, che sono stati integrati come singola copia transgeni nello stesso sito genomico in cellule 293T. &Egrave; interessante notare, ONs antisenso erano superiori ai senso ONs per una destinazione solo, mostrando che sequenza bersaglio pu&ograve; di per s&eacute; conferiscono strand-bias nella modifica del gene. L&#39;ONs pi&ugrave; efficienti erano 25 nt ONs con accompagnamento bloccati gli acidi nucleici (LNAs), una chimica che era stato testato solo per mutagenesi mirata nucleotide in lievito e 25 nt ONs con fosforotioato collegamenti a breve. Abbiamo mostrato che LNA-modificato ONs mediare modifica destinazione dose-dipendente e analizzato l&#39;importanza della posizione di LNA e contenuto. Importante, quando si utilizza ONs con accompagnamento LNAs, modificazione genetica mirata stabile &egrave; stato trasmesso durante la divisione cellulare, che ha permesso affidabile clonazione di cellule modificate, una caratteristica essenziale per ulteriori applicazioni in terapia genica e genomica funzionale. Infine, abbiamo mostrato che ONs con accompagnamento LNAs volti a correggere la mutazione stop rd1 potrebbe promuovere la sopravvivenza dei fotorecettori nella retina di topi mutanti rd1, suggerendo che essi sono anche attivi in vivo.

Trasmissione stabile di modificazione genetica mirata utilizzando oligonucleotidi a singolo filamento con accompagnamento LNAs.

&#x30AA;&#x30EA;&#x30B4;&#x30CC;&#x30AF;&#x30EC;&#x30AA;&#x30C1;&#x30C9; (ONs &#x306E;) &#x30BF;&#x30FC;&#x30B2;&#x30C3;&#x30C8;&#x7279;&#x7570;&#x7684;&#x5909;&#x7570;&#x5C0E;&#x5165;&#x9AD8;&#x7B49;&#x771F;&#x6838;&#x751F;&#x7269;&#x306E;&#x30B2;&#x30CE;&#x30E0;&#x3092;&#x64CD;&#x4F5C;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x6709;&#x671B;&#x306A;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x672C;&#x7814;&#x7A76;&#x3067;&#x306F;, &#x907A;&#x4F1D;&#x5B50; by &#x7570;&#x306A;&#x308B;&#x79C1;&#x305F;&#x3061;&#x306E; 2 &#x3064;&#x306E;&#x65B0;&#x3057;&#x3044;&#x30BF;&#x30FC;&#x30B2;&#x30C3;&#x30C8; &#x30B7;&#x30FC;&#x30B1;&#x30F3;&#x30B9;&#x3001;eBFP&#x3001;&#x7D71;&#x5408;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x5358;&#x4E00;&#x30B3;&#x30D4;&#x30FC; transgenes 293 t &#x7D30;&#x80DE;&#x3068;&#x540C;&#x3058;&#x30B2;&#x30CE;&#x30E0; &#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x3068;&#x3057;&#x3066; rd1 &#x5909;&#x7570;&#x8996;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E; betaPDE cDNAs &#x3092;&#x7DE8;&#x96C6;&#x3092;&#x6BD4;&#x8F03;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x8208;&#x5473;&#x6DF1;&#x3044;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3001;&#x30A2;&#x30F3;&#x30C1;&#x30BB;&#x30F3;&#x30B9; ONs &#x306F; ONs &#x30BF;&#x30FC;&#x30B2;&#x30C3;&#x30C8; &#x30B7;&#x30FC;&#x30B1;&#x30F3;&#x30B9;&#x81EA;&#x4F53;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x30B9;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30C9; - &#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x7DE8;&#x96C6;&#x30D0;&#x30A4;&#x30A2;&#x30B9;&#x3092;&#x4F1D;&#x3048;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3059; 1 &#x3064;&#x306E;&#x30BF;&#x30FC;&#x30B2;&#x30C3;&#x30C8;&#x306E;&#x307F;&#x306E;&#x611F;&#x899A;&#x306B;&#x512A;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x305F;&#x3002;&#x6700;&#x3082;&#x52B9;&#x7387;&#x7684;&#x306A; ONs &#x30ED;&#x30C3;&#x30AF;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x6838;&#x9178; (Lna)&#x3001;&#x6A19;&#x7684;&#x5869;&#x57FA;&#x914D;&#x5217;&#x5909;&#x7570;&#x9175;&#x6BCD;&#x3068; 25 nt ONs &#x30DB;&#x30B9;&#x30DB;&#x30ED;&#x30C1;&#x30AA;&#x30A8;&#x30FC;&#x30C8; &#x30EA;&#x30F3;&#x30B1;&#x30FC;&#x30B8;&#x3067;&#x306E;&#x307F;&#x30C6;&#x30B9;&#x30C8;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x305F;&#x5316;&#x5B66;&#x306B;&#x4E26;&#x3076;&#x3068; 25 &#x306E; nt ONs &#x3092;&#x77ED;&#x3044;&#x3044;&#x305F;&#x3002;LNA &#x5909;&#x66F4; ONs &#x3092;&#x7528;&#x91CF;&#x4F9D;&#x5B58;&#x30BF;&#x30FC;&#x30B2;&#x30C3;&#x30C8;&#x5909;&#x66F4;&#x3092;&#x4EF2;&#x4ECB;&#x3057;&#x3066; LNA &#x4F4D;&#x7F6E;&#x3068;&#x30B3;&#x30F3;&#x30C6;&#x30F3;&#x30C4;&#x306E;&#x91CD;&#x8981;&#x6027;&#x306E;&#x5206;&#x6790;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x306F;&#x3001;Lna &#x306E;&#x4E21;&#x8107;&#x306B;&#x30A2;&#x30C9;&#x30AA;&#x30F3;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3059;&#x308B;&#x5834;&#x5408;&#x3001;&#x30BF;&#x30FC;&#x30B2;&#x30C3;&#x30C8;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x6539;&#x5909;&#x5B89;&#x5B9A;&#x4E2D;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x5206;&#x88C2;&#x306F;&#x3001;&#x4FE1;&#x983C;&#x6027;&#x306E;&#x9AD8;&#x3044;&#x5909;&#x66F4;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x6A5F;&#x80FD;&#x306E;&#x66F4;&#x306A;&#x308B;&#x30A2;&#x30D7;&#x30EA;&#x30B1;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x6A5F;&#x80FD;&#x30B2;&#x30CE;&#x30DF;&#x30AF;&#x30B9;&#x3068;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x7642;&#x6CD5;&#x306B;&#x4E0D;&#x53EF;&#x6B20;&#x306A;&#x30AF;&#x30ED;&#x30FC;&#x30CB;&#x30F3;&#x30B0;&#x3092;&#x53EF;&#x80FD;&#x306B;&#x4F1D;&#x308F;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x6700;&#x5F8C;&#x306B;&#x3001;rd1 &#x505C;&#x6B62;&#x7A81;&#x7136;&#x5909;&#x7570;&#x306E;&#x88DC;&#x6B63;&#x3092;&#x76EE;&#x6307;&#x3057;&#x3066; Lna &#x306B;&#x4E26;&#x3076;&#x3068; ONs &#x304C;&#x307E;&#x305F;&#x751F;&#x4F53;&#x5185;&#x3067;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x5506; rd1 &#x5909;&#x7570;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x306E;&#x7DB2;&#x819C;&#x306E;&#x8996;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x751F;&#x5B58;&#x3092;&#x4FC3;&#x9032;&#x3067;&#x304D;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x305F;&#x3002;

Lna &#x306E;&#x4E21;&#x8107;&#x306B; 1 &#x672C;&#x9396;&#x30AA;&#x30EA;&#x30B4;&#x30CC;&#x30AF;&#x30EC;&#x30AA;&#x30C1;&#x30C9;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3059;&#x308B;&#x76EE;&#x6A19;&#x3068;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x6539;&#x5909;&#x3092;&#x5B89;&#x5B9A;&#x3057;&#x3066;&#x4F1D;&#x9001;&#x3002;

Oligonucleotides (&#xBD80;&#xAC00; &#xAE30;&#xB2A5;)&#xC744; &#xC5F0;&#xCD9C; &#xD558;&#xB294; &#xD0C0;&#xAC9F;&#xB41C; mutagenesis &#xB192;&#xC740; &#xC9C4;&#xD575;&#xC0DD;&#xBB3C;&#xC758; &#xAC8C;&#xB188;&#xC744; &#xC870;&#xC791; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD55C; &#xC720;&#xB9DD;&#xD55C; &#xBC29;&#xBC95;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xB450; &#xC0C8; &#xB300;&#xC0C1; &#xC2DC;&#xD000;&#xC2A4;&#xB294; eBFP &#xBC0F; rd1 &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xD3EC;&#xD1A0; &#xB9AC;&#xC149;&#xD130; betaPDE cDNAs 293T &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0; &#xB3D9;&#xC77C;&#xD55C; &#xAC8C;&#xB188; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8;&#xC5D0;&#xC11C; transgenes &#xB2E8;&#xC77C; &#xBCF5;&#xC0AC;&#xBCF8;&#xC73C;&#xB85C; &#xD1B5;&#xD569; &#xD558;&#xB294; &#xB2E4;&#xB978; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xD3B8;&#xC9D1; &#xBE44;&#xAD50;&#xB294;. &#xD765;&#xBBF8;&#xB86D;&#xAC8C;&#xB3C4;, &#xC13C;&#xC2A4; &#xAE30;&#xB2A5; &#xB6F0;&#xC5B4;&#xB09C; &#xADF8; &#xB300;&#xC0C1; &#xC2DC;&#xD000;&#xC2A4; &#xC218; &#xC790;&#xCCB4;&#xB85C; &#xC5BB;&#xC73C;&#xBA70; &#xAC00;&#xB2E5; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xD3B8;&#xC9D1;&#xC5D0; &#xBC14;&#xC774;&#xC5B4;&#xC2A4;&#xB97C; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC8FC;&#xB294; &#xD558;&#xB098;&#xC758; &#xB300;&#xC0C1;&#xC5D0;&#xB9CC; &#xC77C;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC744; &#xD588;&#xB2E4;. &#xAC00;&#xC7A5; &#xD6A8;&#xC728;&#xC801;&#xC778; &#xAE30;&#xB2A5; 25 nt &#xAE30;&#xB2A5; &#xC7A0;&#xAE34;&#xB41C; &#xD575; &#xC0B0; (Lna), &#xD6A8; &#xBAA8;, &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; phosphorothioate &#xC5F0;&#xACC4;&#xC640; 25 nt &#xAE30;&#xB2A5;&#xC5D0; &#xD0C0;&#xAC9F;&#xB41C; &#xB274;&#xD074;&#xB808;&#xC624;&#xD2F0;&#xB4DC; mutagenesis&#xB9CC; &#xD14C;&#xC2A4;&#xD2B8; &#xD588;&#xB2E4; &#xD654;&#xD559; &#xCE21;&#xBA74;&#xC73C;&#xB85C; &#xC9E7;&#xC740; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; &#xBCF4;&#xC600;&#xB2E4; LNA &#xC218;&#xC815; &#xAE30;&#xB2A5; &#xBCF5;&#xC6A9;&#xB7C9; &#xC758;&#xC874; &#xB300;&#xC0C1; &#xC218;&#xC815; &#xC911;&#xC7AC; LNA &#xC704;&#xCE58; &#xBC0F; &#xCF58;&#xD150;&#xCE20;&#xC758; &#xC911;&#xC694;&#xC131;&#xC744; &#xBD84;&#xC11D; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xAC83;&#xC740;, Lna &#xCE21;&#xBA74; &#xBD80;&#xC640; &#xBD80;&#xAC00; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558;&#xB294; &#xACBD;&#xC6B0; &#xB300;&#xC0C1;&#xB41C; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xC218;&#xC815; &#xC138;&#xD3EC; &#xBD84;&#xC5F4;, &#xC218;&#xC815;&#xB41C; &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xC548;&#xC815;&#xC801;&#xC778; &#xD074;&#xB85C;&#xB2DD; &#xAE30;&#xB2A5; &#xC720;&#xC804;&#xCCB4;&#xD559; &#xBC0F; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xCE58;&#xB8CC;&#xC5D0; &#xCD94;&#xAC00; &#xC751;&#xC6A9; &#xD504;&#xB85C;&#xADF8;&#xB7A8;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xD544;&#xC218;&#xC801;&#xC778; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC744; &#xD5C8;&#xC6A9; &#xD558;&#xB294; &#xB3D9;&#xC548; &#xC548;&#xC815;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xC804;&#xC1A1; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB9C8;&#xC9C0;&#xB9C9;&#xC73C;&#xB85C;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xADF8;&#xB4E4;&#xB3C4; &#xBE44;&#xBCF4;&#xC5D0; &#xC801;&#xADF9;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xC81C;&#xC548; &#xB418;&#xB294; &#xC0DD;&#xC874; rd1 &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xC950;&#xC758; &#xB9DD;&#xB9C9;&#xC5D0;&#xB294; &#xB300;&#xB1CC;&#xC758; Lna rd1 &#xC815;&#xC9C0; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xC815;&#xC815;&#xC744; &#xACA8;&#xB0E5; &#xD55C; &#xCE21;&#xBA74; &#xBD80;&#xC640; &#xBD80;&#xAC00; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC5D0; &#xD64D;&#xBCF4;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xB294; &#xAC83;&#xC744; &#xBCF4;&#xC600;&#xB2E4;.

&#xD0C0;&#xAC9F;&#xB41C; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xC218;&#xC815; &#xB2E8;&#xC77C; &#xAC00;&#xB2E5; oligonucleotides &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; Lna &#xCE21;&#xBA74;&#xC758; &#xC548;&#xC815;&#xC801;&#xC778; &#xC804;&#xC1A1;.

Mutag&eacute;nesis dirigida dirigida por oligonucle&oacute;tidos (ONs) es un m&eacute;todo prometedor para manipular el genoma en eucariotas superiores. En este estudio, comparamos gene edici&oacute;n por ONs diferentes en dos nuevas secuencias de Diana, el eBFP y los cDNAs de betaPDE rd1 fotorreceptor mutante, que fueron integrados como los transgenes de la &uacute;nica copia en el mismo sitio gen&oacute;mico en c&eacute;lulas 293T. Curiosamente, ONs antisentidos fueron superiores al sentido ONs para un objetivo solamente, mostrando que secuencia de destino puede impartir por s&iacute; mismo filamento-sesgo en la edici&oacute;n de gene. Los ONs m&aacute;s eficientes eran cortos 25 nt ONs con flanqueando bloqueados los &aacute;cidos nucleicos (LNAs), una qu&iacute;mica que s&oacute;lo hab&iacute;a sido probado para la mutag&eacute;nesis dirigida nucle&oacute;tido en levadura y 25 nt ONs con v&iacute;nculos de medicamento. Mostramos que ONs LNA-modificado median modificaci&oacute;n dependiente de la dosis objetivo y analizaron la importancia de la posici&oacute;n de LNA y contenido. Lo importante, si utiliza ONs con acompa&ntilde;amiento LNAs, modificaci&oacute;n gen&eacute;tica dirigida fue transmitido estable durante la divisi&oacute;n celular, que permiti&oacute; confiable clonaci&oacute;n de c&eacute;lulas modificadas, una caracter&iacute;stica esencial para otros usos en terapia gen&oacute;mica y gene funcional. Finalmente, demostramos que ONs con acompa&ntilde;amiento LNAs encaminadas a corregir la mutaci&oacute;n de la parada de rd1 podr&iacute;an promover la supervivencia de los fotorreceptores en la retina de ratones mutantes rd1, sugiriendo que tambi&eacute;n son activos en vivo.

Transmisi&oacute;n estable de modificaci&oacute;n de genes espec&iacute;ficos utilizando oligonucle&oacute;tidos monocatenario con acompa&ntilde;amiento LNAs.

Gli3 &#x662F; proteolytically &#x52A0;&#x5DE5;&#x6210;&#x7F3A;&#x4E4F; C &#x7EC8;&#x7AEF;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x57DF;&#x622A;&#x65AD;&#x963B;&#x904F;&#x7269;&#x7684;&#x950C;&#x6307;&#x8F6C;&#x5F55;&#x56E0;&#x5B50;&#x3002;Gli3 &#x5904;&#x7406;&#x662F;&#x7531;&#x86CB;&#x767D;&#x6FC0;&#x9176; A &#xFF08;PKA&#xFF09; &#x523A;&#x6FC0;&#x548C;&#x6291;&#x5236;&#x4FE1;&#x53F7;&#xFF0C;&#x4E3B;&#x8981;&#x7684;&#x4FE1;&#x53F7;&#x8F6C;&#x5BFC;&#x901A;&#x8DEF;&#x53CA;&#x5176;&#x5728;&#x810A;&#x690E;&#x52A8;&#x7269;&#x53D1;&#x80B2;&#x548C;&#x75BE;&#x75C5;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#x5C55;&#x793A;&#x7684;&#x591A;&#x7AD9;&#x70B9;&#x7CD6;&#x539F;&#x5408;&#x9176;&#x6FC0;&#x9176; 3beta (GSK3beta) &#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x548C;&#x6CDB;&#x7531; SCFbetaTrCP &#x6240;&#x9700;&#x7684; Gli3 &#x5904;&#x7406;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x786E;&#x5B9A; betaTrCP &#x7ED1;&#x5B9A;&#x5728; Gli3&#x3001; DSGX2-4S &#x6BCD;&#x9898;&#x76F8;&#x5173;&#x7684;&#x591A;&#x4E2A;&#x7AD9;&#x70B9;&#xFF0C;&#x5176;&#x4E2D;&#x4E0E; PKA &#x548C; GSK3beta &#x7F51;&#x7AD9;&#x548C;&#x5BF9;&#x5904;&#x7406;&#x81F3;&#x5173;&#x91CD;&#x8981;&#x7684; SCFbetaTrCP &#x76EE;&#x6807; lysines &#x4EA4;&#x7EC7;&#x5728;&#x4E00;&#x8D77;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x7ED3;&#x679C;&#x652F;&#x6301;&#x4E00;&#x4E2A;&#x7B80;&#x5355;&#x7684;&#x6A21;&#x578B;&#xFF0C;&#x5373; PKA &#x89E6;&#x53D1;&#x7531; GSK3beta &#x548C;&#x6F5C;&#x5728;&#x987E;&#x5BA2;&#xFF0C;&#x4EE5;&#x76F4;&#x63A5; betaTrCP &#x7ED1;&#x5B9A;&#x7684; CK1 Gli3 &#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x548C;&#x6CDB;&#x7684; SCFbetaTrCP &#x7EA7;&#x8054;&#x3002;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x7684; betaTrCP &#x5230; Gli3 N &#x548C; C-&#x7AEF;&#x57DF;&#x7F3A;&#x4E4F; DSGX2 4S &#x76F8;&#x5173;&#x56FE;&#x6848;&#x8FD8;&#x6307;&#x51FA;&#xFF0C;&#x8FD9;&#x53EF;&#x80FD;&#x53CD;&#x6620;&#x51FA;&#x7684;&#x523A;&#x732C;&#x4FE1;&#x53F7;&#x3001; &#x6291;&#x764C;&#x8150;&#x4E73;&#x7B49;&#x5176;&#x4ED6;&#x7EC4;&#x4EF6;&#x901A;&#x8FC7;&#x95F4;&#x63A5;&#x4E92;&#x52A8;&#x3002;Gli3 &#x56E0;&#x6B64;&#x52A0;&#x5165;&#x8F6C;&#x5F55;&#x56E0;&#x5B50;&#x7684;&#x5904;&#x7406;&#x7531;&#x6CDB;&#x7D20;-&#x86CB;&#x767D;&#x9176;&#x4F53;&#x901A;&#x8DEF;&#x89C4;&#x7BA1;&#x4E00;&#x5C0F;&#x5957;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x63ED;&#x793A;&#x4E86; PKA &#x78F7;&#x9178;&#x5316; Gli3 &#x5904;&#x7406;&#x4E2D;&#x7684;&#x4F5C;&#x7528;&#xFF0C;&#x5E76;&#x5C06;&#x6709;&#x52A9;&#x4E8E;&#x5206;&#x6790;&#x7684; Gli3 &#x52A0;&#x5DE5;&#x53D6;&#x5F97;&#x7684;&#x523A;&#x732C;&#x4FE1;&#x53F7;&#x5982;&#x4F55;&#x4F9D;&#x8D56;&#x5242;&#x91CF;&#x7684;&#x8C03;&#x6574;&#x3002;

&#x591A;&#x7AD9;&#x70B9;&#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#x6FC0;&#x9176; A &#x548C;&#x7CD6;&#x539F;&#x5408;&#x9176;&#x6FC0;&#x9176; 3beta &#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x5BFC;&#x81F4;&#x7684; SCFbetaTrCP Gli3 &#x6CDB;&#x3002;

Gli3 is a zinc finger transcription factor proteolytically processed into a truncated repressor lacking C-terminal activation domains. Gli3 processing is stimulated by protein kinase A (PKA) and inhibited by Hedgehog signaling, a major signaling pathway in vertebrate development and disease. We show here that multisite glycogen synthase kinase 3beta (GSK3beta) phosphorylation and ubiquitination by SCFbetaTrCP are required for Gli3 processing. We identified multiple betaTrCP-binding sites related to the DSGX2-4S motif in Gli3, which are intertwined with PKA and GSK3beta sites, and SCFbetaTrCP target lysines that are essential for processing. Our results support a simple model whereby PKA triggers a cascade of Gli3 phosphorylation by GSK3beta and CK1 that leads to direct betaTrCP binding and ubiquitination by SCFbetaTrCP. Binding of betaTrCP to Gli3 N- and C-terminal domains lacking DSGX2-4S-related motifs was also observed, which could reflect indirect interaction via other components of Hedgehog signaling, such as the tumor suppressor Sufu. Gli3 therefore joins a small set of transcription factors whose processing is regulated by the ubiquitin-proteasome pathway. Our study sheds light on the role of PKA phosphorylation in Gli3 processing and will help to analyze how dose-dependent tuning of Gli3 processing is achieved by Hedgehog signaling.

Multisite protein kinase A and glycogen synthase kinase 3beta phosphorylation leads to Gli3 ubiquitination by SCFbetaTrCP.

G&egrave;ne GLI3 est un facteur de transcription de doigt de zinc clivage prot&eacute;olytique transform&eacute; en un r&eacute;presseur tronqu&eacute; manque des domaines d&#39;activation C-terminaux. G&egrave;ne GLI3 traitement est stimul&eacute;e par la prot&eacute;ine kinase A (PKA) et inhib&eacute;e par le h&eacute;risson de signalisation, une voie de signalisation majeure dans le d&eacute;veloppement des vert&eacute;br&eacute;s et de la maladie. Nous montrons ici que multisite glycog&egrave;ne synthase kinase 3beta (GSK3beta) la phosphorylation et l&#39;ubiquitination de SCFbetaTrCP sont n&eacute;cessaires pour le traitement du g&egrave;ne Gli3. Nous avons identifi&eacute; plusieurs sites liant le betaTrCP sur le motif DSGX2-4 dans le g&egrave;ne Gli3, qui sont &eacute;troitement li&eacute;s aux sites PKA et GSK3beta et SCFbetaTrCP les lysines cible qui sont essentielles pour le traitement. Nos r&eacute;sultats confirment un mod&egrave;le simple par laquelle PKA d&eacute;clenche une cascade de phosphorylation du g&egrave;ne Gli3 par GSK3beta et CK1 qui m&egrave;ne &agrave; betaTrCP liaison directe et l&#39;ubiquitination de SCFbetaTrCP. La liaison de betaTrCP &agrave; g&egrave;ne Gli3 N - et C-terminal domaines d&eacute;pourvus de motifs li&eacute;s &agrave; DSGX2-4 s a aussi observ&eacute;s, qui pourrait refl&eacute;ter une interaction indirecte via les autres composants de la signalisation de h&eacute;risson, tels que le suppresseur de tumeur Sufu. G&egrave;ne GLI3 rejoint donc un petit ensemble de facteurs de transcription dont le traitement est r&eacute;glement&eacute; par la voie ubiquitine-prot&eacute;asome. Notre &eacute;tude met en lumi&egrave;re le r&ocirc;le de la phosphorylation de la PKA dans le traitement du g&egrave;ne Gli3 et vous aidera &agrave; analyser comment dose-d&eacute;pendante, r&eacute;glage du g&egrave;ne Gli3 traitement est r&eacute;alis&eacute; par signalisation Hedgehog.

Multisite de prot&eacute;ine kinase A et glycog&egrave;ne synthase kinase 3beta phosphorylation entra&icirc;ne l&#39;ubiquitination g&egrave;ne Gli3 par SCFbetaTrCP.

GLI3 ist ein Zink-Finger-Transkriptionsfaktor spaltet in eine abgeschnittene Hemmer fehlt C-terminalen Aktivierung Dom&auml;nen verarbeitet. GLI3 Verarbeitung ist durch Proteinkinase A (PKA) angeregt und durch Igel-signalisieren, eine gro&szlig;e Signalweges in vertebrate Entwicklung und Krankheit gehemmt. Wir zeigen hier, dass Mehrfachstandort Glykogen-Synthase Kinase 3beta (GSK3beta) Phosphorylierung und Ubiquitination von SCFbetaTrCP f&uuml;r Gli3 Verarbeitung erforderlich sind. Wir identifiziert mehrere BetaTrCP-Bindungsstellen mit Bezug auf das DSGX2-4S-Motiv in Gli3, die miteinander verflochten sind, mit PKA und GSK3beta Websites und SCFbetaTrCP Ziel Lysin, die f&uuml;r die Verarbeitung von wesentlicher Bedeutung sind. Unsere Ergebnisse unterst&uuml;tzen ein einfaches Modell, bei dem PKA eine Kaskade von Gli3 Phosphorylierung von GSK3beta und CK1, das f&uuml;hrt l&ouml;st zu BetaTrCP Bindung direkt und Ubiquitination von SCFbetaTrCP. Bindung von BetaTrCP an Gli3 N - und C-Terminal wurde die Dom&auml;nen fehlen DSGX2-4S-bezogene Motive auch beobachtet und die k&ouml;nnten indirekte Interaktion &uuml;ber andere Komponenten Igel zu signalisieren, wie der Tumorsuppressor Sufu widerspiegeln. GLI3 schlie&szlig;t sich daher eine kleine Gruppe von Transkriptionsfaktoren, die deren Verarbeitung durch das Ubiquitin-Proteasom-Signalweg reguliert wird. Unsere Studie wirft ein Licht auf die Rolle der PKA Phosphorylierung Gli3 Verarbeitung und hilft um zu analysieren, wie dosisabh&auml;ngige tuning Gli3 Verarbeitung von Igel-signalisieren erreicht wird.

Mehrfachstandort Proteinkinase A und Glykogen-Synthase Kinase 3beta Phosphorylierung f&uuml;hrt zur Gli3 Ubiquitination von SCFbetaTrCP.

Gli3 &egrave; un fattore di trascrizione dito di zinco proteoliticamente trasformato in un tronco repressor privo di domini di attivazione di C-terminale. Elaborazione Gli3 &egrave; stimolata dalla proteina chinasi A (PKA) e inibito da Hedgehog signaling, un&#39;importante via di segnalazione in sviluppo vertebrato e malattia. Mostriamo qui che multisito glicogeno sintasi chinasi 3beta fosforilazione (GSK3beta) e ubiquitination di SCFbetaTrCP sono necessari per l&#39;elaborazione di Gli3. Abbiamo identificato pi&ugrave; betaTrCP-associazione siti correlati al motivo DSGX2-4S Gli3, che si intrecciano con PKA e GSK3beta siti e Lisine destinazione SCFbetaTrCP che sono essenziali per l&#39;elaborazione. I nostri risultati supportano un modello semplice per cui PKA innesca una cascata di fosforilazione Gli3 da GSK3beta e CK1 che conduce a dirigere betaTrCP associazione e ubiquitination di SCFbetaTrCP. Associazione di betaTrCP a Gli3 N - e C-terminale domini mancano motivi correlati a DSGX2-4S inoltre &egrave; stati osservati, che potrebbe riflettere interazione indiretta tramite altri componenti di Hedgehog signaling, come ad esempio il soppressore del tumore Sufu. Gli3 pertanto si unisce a un piccolo insieme di fattori di trascrizione regolata nella cui elaborazione il pathway ubiquitina-proteasoma. Il nostro studio mette in luce il ruolo della fosforilazione di PKA Gli3 elaborazione e vi aiuter&agrave; ad per analizzare come dose-dipendente tuning di Gli3 elaborazione &egrave; raggiunto da Hedgehog signaling.

Multisito protein chinasi A e glicogeno sintasi chinasi 3beta fosforilazione porta ad Gli3 ubiquitination di SCFbetaTrCP.

Gli3 &#x751F; C &#x30BF;&#x30FC;&#x30DF;&#x30CA;&#x30EB;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x306E;&#x6B20;&#x3051;&#x3066;&#x5207;&#x308A;&#x6368;&#x3066;&#x3089;&#x308C;&#x305F;&#x30EA;&#x30D7;&#x30EC;&#x30C3;&#x30B5;&#x30FC;&#x306B;&#x51E6;&#x7406;&#x4E9C;&#x925B;&#x30D5;&#x30A3;&#x30F3;&#x30AC;&#x30FC; &#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30AF;&#x30EA;&#x30D7;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x8981;&#x56E0;&#x3067;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;Gli3 &#x51E6;&#x7406;&#x306F;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC; A(PKA) &#x306E;&#x523A;&#x6FC0;&#x3057;&#x3001;&#x30CF;&#x30EA;&#x30CD;&#x30BA;&#x30DF;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x3001;&#x810A;&#x690E;&#x52D5;&#x7269;&#x306E;&#x767A;&#x751F;&#x3068;&#x75BE;&#x60A3;&#x306E;&#x4E3B;&#x8981;&#x306A;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#x7D4C;&#x8DEF;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x963B;&#x5BB3;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067; &#xFF08;GSK3beta&#xFF09; &#x306E;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x3068;&#x30E6;&#x30D3;&#x30AD;&#x30C1;&#x30F3;&#x5316; SCFbetaTrCP &#x306B;&#x3088;&#x308B; Gli3 &#x51E6;&#x7406;&#x304C;&#x5FC5;&#x8981;&#x3067;&#x3059;&#x3001;&#x30DE;&#x30EB;&#x30C1;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8; &#x30B0;&#x30EA;&#x30B3;&#x30FC;&#x30B2;&#x30F3;&#x5408;&#x6210;&#x9175;&#x7D20;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC; 3 &beta; &#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005; &#x304C; PKA &#x3068; GSK3beta &#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x51E6;&#x7406;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x6B20;&#x304B;&#x305B;&#x306A;&#x3044; SCFbetaTrCP &#x30BF;&#x30FC;&#x30B2;&#x30C3;&#x30C8; &#x30EA;&#x30B7;&#x30F3;&#x3068;&#x7D61;&#x307F;&#x5408;&#x3063;&#x3066;&#x3044;&#x308B; Gli3 &#x3067; DSGX2 4S &#x30E2;&#x30C1;&#x30FC;&#x30D5;&#x306B;&#x95A2;&#x9023;&#x3059;&#x308B;&#x8907;&#x6570;&#x306E; betaTrCP &#x7D50;&#x5408;&#x90E8;&#x4F4D;&#x3092;&#x8B58;&#x5225;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005; &#x306E;&#x7D50;&#x679C; whereby PKA GSK3beta &#x3068;&#x76F4;&#x63A5; betaTrCP &#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C9;&#x306B;&#x3064;&#x306A;&#x304C;&#x308B; CK1 &#x306B;&#x3088;&#x308B; Gli3 &#x306E;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x3068;&#x30E6;&#x30D3;&#x30AD;&#x30C1;&#x30F3;&#x5316;&#x306B;&#x3088;&#x308B; SCFbetaTrCP &#x306E;&#x30AB;&#x30B9;&#x30B1;&#x30FC;&#x30C9; &#x30C8;&#x30EA;&#x30AC;&#x30FC;&#x306E;&#x5358;&#x7D14;&#x306A;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x3092;&#x30B5;&#x30DD;&#x30FC;&#x30C8;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;BetaTrCP &#x306B; Gli3 N &#x672B;&#x7AEF;&#x3068; C &#x672B;&#x7AEF;&#x306E;&#x7D50;&#x5408;&#x30E2;&#x30C1;&#x30FC;&#x30D5; DSGX2 4S &#x95A2;&#x9023;&#x6B20;&#x3051;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x3082;&#x3001;&#x3069;&#x306E;&#x30CF;&#x30EA;&#x30CD;&#x30BA;&#x30DF;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA; &#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;&#x3001;&#x816B;&#x760D;&#x306E;&#x30B5;&#x30D7;&#x30EC;&#x30C3;&#x30B5;&#x30FC;&#x5468;&#x5E03;&#x306A;&#x3069;&#x306E;&#x9593;&#x63A5;&#x7684;&#x306A;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x3066;&#x4ED6;&#x306E;&#x30B3;&#x30F3;&#x30DD;&#x30FC;&#x30CD;&#x30F3;&#x30C8;&#x3092;&#x53CD;&#x6620;&#x3067;&#x304D;&#x308B;&#x89B3;&#x5BDF;&#x3055;&#x308C;&#x305F;.Gli3 &#x306F;&#x3001;&#x3057;&#x305F;&#x304C;&#x3063;&#x3066;&#x305D;&#x306E;&#x51E6;&#x7406;&#x30E6;&#x30D3;&#x30AD;&#x30C1;&#x30F3;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C6;&#x30A2;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x7D4C;&#x8DEF;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x898F;&#x5236;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x8EE2;&#x5199;&#x56E0;&#x5B50;&#x306E;&#x5C0F;&#x3055;&#x306A;&#x30BB;&#x30C3;&#x30C8;&#x3092;&#x7D50;&#x5408;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005; &#x306E;&#x7814;&#x7A76;&#x306F;&#x5149;&#x306E; PKA &#x306E;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316; Gli3 &#x51E6;&#x7406;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x6295;&#x3052;&#x304B;&#x3051;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3057;&#x3001;&#x3069;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306B;&#x7DDA;&#x91CF;&#x4F9D;&#x5B58;&#x51E6;&#x7406;&#x30CF;&#x30EA;&#x30CD;&#x30BA;&#x30DF;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x9054;&#x6210;&#x3055;&#x308C;&#x308B; Gli3 &#x306E;&#x30C1;&#x30E5;&#x30FC;&#x30CB;&#x30F3;&#x30B0;&#x5206;&#x6790;&#x306B;&#x5F79;&#x7ACB;&#x3061;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x30DE;&#x30EB;&#x30C1;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8; &#x30D7;&#x30ED;&#x30C6;&#x30A4;&#x30F3;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC; A &#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x30B0;&#x30EA;&#x30B3;&#x30FC;&#x30B2;&#x30F3;&#x5408;&#x6210;&#x9175;&#x7D20;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC; 3 &beta; &#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x30EA;&#x30FC;&#x30C9; Gli3 &#x30E6;&#x30D3;&#x30AD;&#x30C1;&#x30F3;&#x5316;&#x306B;&#x3088;&#x308B; SCFbetaTrCP &#x3078;&#x3002;

Gli3&#xC740; proteolytically &#xBD80;&#xC871; &#xD55C; C &#xD130;&#xBBF8;&#xB110; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778; &#xC798;&#xB9B0;&#xB41C; &#xC9C4;&#xC555;&#xC73C;&#xB85C; &#xCC98;&#xB9AC; &#xC544;&#xC5F0; &#xC190;&#xAC00;&#xB77D; &#xC804;&#xC0AC; &#xC694;&#xC18C; &#xC774;&#xB2E4;. Gli3 &#xCC98;&#xB9AC;&#xB294; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xD0A4; &#xB2C8; &#xC544; &#xC81C; A (PKA)&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC790;&#xADF9; &#xC774;&#xBA70; &#xACE0;&#xC2B4;&#xB3C4;&#xCE58; &#xC2E0;&#xD638;, &#xCC99;&#xCD94; &#xAC1C;&#xBC1C; &#xBC0F; &#xC9C8;&#xBCD1;&#xC758; &#xC8FC;&#xC694; &#xC2E0;&#xD638; &#xD1B5;&#xB85C; &#xC758;&#xD574; &#xC800;&#xD574;. &#xC6B0;&#xB9AC; &#xBCF4;&#xC5EC; &#xC5EC;&#xAE30; &#xADF8; multisite glycogen synthase &#xB2C8; 3beta (GSK3beta) &#xC778; &#xC0B0;&#xD654;&#xC640; SCFbetaTrCP, ubiquitination&#xB294; Gli3 &#xCC98;&#xB9AC; &#xD544;&#xC694;. PKA&#xC640; GSK3beta &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8; &#xBC0F; &#xCC98;&#xB9AC;&#xB97C; &#xC704;&#xD574; &#xD544;&#xC218;&#xC801;&#xC778; SCFbetaTrCP &#xB300;&#xC0C1; lysines&#xC640; &#xC5BD;&#xD600; Gli3, DSGX2-4S &#xBAA8;&#xD2F0;&#xBE0C;&#xC640; &#xAD00;&#xB828; &#xB41C; &#xC5EC;&#xB7EC; betaTrCP &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8; &#xC2DD;&#xBCC4; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xACB0;&#xACFC; PKA GSK3beta &#xBC0F; betaTrCP &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xC744; &#xC9C1;&#xC811; &#xB9AC;&#xB4DC; CK1 Gli3 &#xC778; &#xC0B0;&#xD654;&#xC640; Scfbetatrcp&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; ubiquitination&#xC758; &#xCE90;&#xC2A4;&#xCF00;&#xC774;&#xB4DC;&#xB97C; &#xC720;&#xBC1C; &#xD558;&#xB294; &#xADF8;&#xAC83;&#xC5D0; &#xC758;&#xD558;&#xC5EC; &#xAC04;&#xB2E8;&#xD55C; &#xBAA8;&#xB378;&#xC744; &#xC9C0;&#xC6D0; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. Betatrcp&#xB97C; Gli3 N &#xBC0F; C-&#xD130;&#xBBF8;&#xB110;&#xC758; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778; DSGX2 4S &#xAD00;&#xB828; &#xBAA8;&#xD2F0;&#xD504; &#xBD80;&#xC871;&#xB3C4; &#xAD00;&#xCC30; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;, &#xACE0;&#xC2B4;&#xB3C4;&#xCE58; &#xC2E0;&#xD638; Sufu &#xC885;&#xC591; &#xC5B5;&#xC81C;&#xAE30; &#xB4F1;&#xC758; &#xB2E4;&#xB978; &#xAD6C;&#xC131; &#xC694;&#xC18C;&#xB97C; &#xD1B5;&#xD574; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC744; &#xAC04;&#xC811; &#xBC18;&#xC601; &#xC218; &#xC788;&#xB294;. Gli3 &#xB530;&#xB77C;&#xC11C; &#xC804;&#xC0AC; &#xC778;&#xC790; &#xADF8; &#xCC98;&#xB9AC;&#xB294; &#xC720;&#xBE44;&#xD034;&#xD2F4;-&#xD504;&#xB85C;&#xD14C;&#xC544;&#xC880; &#xD1B5;&#xB85C; &#xC758;&#xD574; &#xADDC;&#xC81C;&#xC758; &#xC791;&#xC740; &#xC138;&#xD2B8;&#xB97C; &#xC870;&#xC778; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xC5F0;&#xAD6C; Gli3 &#xCC98;&#xB9AC;&#xC758; PKA &#xC778; &#xC0B0;&#xD654;&#xC758; &#xC5ED;&#xD560;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBE5B;&#xC774; &#xB098; &#xACE0; &#xC5B4;&#xB5BB;&#xAC8C; &#xBCF5;&#xC6A9;&#xB7C9;-&#xC758;&#xC874; &#xCC98;&#xB9AC; &#xACE0;&#xC2B4;&#xB3C4;&#xCE58; &#xC2E0;&#xD638;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xB2EC;&#xC131; &#xB41C;&#xB2E4; gli3&#xC758; &#xD29C;&#xB2DD; &#xBD84;&#xC11D; &#xD558;&#xB294; &#xB370; &#xB3C4;&#xC6C0;&#xC774; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Multisite &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xD0A4; &#xB2C8; &#xC544; &#xC81C; A&#xC640; glycogen synthase &#xB2C8; 3beta Gli3 ubiquitination Scfbetatrcp&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC778; &#xC0B0;&#xD654; &#xB9AC;&#xB4DC;.

Gli3 es un factor de transcripci&oacute;n de dedo de cinc proteolytically transformado en un represor truncado carecer de dominios de activaci&oacute;n del c-terminal. Gli3 procesamiento es estimulada por la prote&iacute;na quinasa A (PKA) e inhibida por erizo, se&ntilde;alizaci&oacute;n, una v&iacute;a de se&ntilde;alizaci&oacute;n m&aacute;s importante en el desarrollo de vertebrados y enfermedad. Aqu&iacute; mostramos multisitio de la gluc&oacute;geno sintasa quinasa 3beta fosforilaci&oacute;n (GSK3beta) y ubiquitinaci&oacute;n por SCFbetaTrCP son necesarios para el procesamiento de Gli3. Se identificaron varios sitios de Uni&oacute;n betaTrCP relacionados con el motivo de la DSGX2-4S en Gli3, que se entrelazan con sitios PKA y GSK3beta y lisinas de destino de SCFbetaTrCP que son esenciales para el proceso. Nuestros resultados apoyan un modelo simple por el PKA desencadena una cascada de fosforilaci&oacute;n de Gli3 GSK3beta y CK1 que conduce a la Uni&oacute;n de betaTrCP directa y ubiquitinaci&oacute;n por SCFbetaTrCP. De betaTrCP a Gli3 N - y c-terminal dominios falta DSGX2-4S-motivos tambi&eacute;n se observan, que podr&iacute;a reflejar la interacci&oacute;n indirecta a trav&eacute;s de otros componentes de se&ntilde;alizaci&oacute;n de erizo, tales como el supresor tumoral Sufu. Por lo tanto el Gli3 se une a un peque&ntilde;o conjunto de factores de transcripci&oacute;n, cuyo proceso est&aacute; regulado por la v&iacute;a de la ubiquitina-proteasoma. Nuestro estudio arroja luz sobre el papel de la fosforilaci&oacute;n de PKA en Gli3 procesamiento y ayudar&aacute; a analizar c&oacute;mo dose-dependent templar de Gli3 procesamiento se logra mediante se&ntilde;alizaci&oacute;n de erizo.

Kinase de prote&iacute;na multisitio A y gluc&oacute;geno sintasa quinasa 3beta fosforilaci&oacute;n conduce a Gli3 ubiquitinaci&oacute;n por SCFbetaTrCP.

&#x635F;&#x574F;&#x6240;&#x9009;&#x7684; DNA &#x5E8F;&#x5217;&#x7684;&#x5206;&#x5B50;&#x8BBE;&#x8BA1;&#x63D0;&#x4F9B;&#x4E86;&#x57FA;&#x7840;&#x548C;&#x5E94;&#x7528;&#x751F;&#x7269;&#x5B66;&#x7684;&#x5DE8;&#x5927;&#x673A;&#x4F1A;&#x3002;&#x4F8B;&#x5982;&#xFF0C;&#x8FD9;&#x79CD;&#x5206;&#x5B50;&#x63D0;&#x4F9B;&#x63A7;&#x5236;&#x64CD;&#x7EB5;&#x57FA;&#x56E0;&#x7EC4;&#x7684;&#x65B0;&#x7684;&#x524D;&#x666F;&#x3002;&#x5982;&#x805A;&#x9170;&#x80FA;&#x8BF1;&#x5BFC; DNA &#x635F;&#x4F24;&#x7684;&#x8BD5;&#x5242;&#x5BF9; DNA &#x4EE3;&#x7801;&#x8BFB;&#x5206;&#x5B50;&#x7684;&#x5171;&#x8F6D;&#x63D0;&#x4F9B;&#x65B9;&#x6CD5;&#x6765;&#x5B9E;&#x73B0;&#x8FD9;&#x4E00;&#x76EE;&#x6807;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x9879;&#x5DE5;&#x4F5C;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x8868;&#x660E;&#x805A;&#x9170;&#x80FA;&#x8054;&#x5421;&#x5576;&#x5171;&#x8F6D;&#x80FD;&#x591F;&#x8BF1;&#x4F7F;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x4E2D;&#x7684;&#x7279;&#x5B9A;&#x5E8F;&#x5217;&#x7684; DNA &#x65AD;&#x88C2;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x7EFC;&#x5408;&#x4E86;&#x57FA;&#x4E8E;&#x94FE;&#x63A5;&#x5230;&#x4F4D;&#x4E8E;&#x4E0D;&#x540C;&#x4F4D;&#x7F6E;&#x7684;&#x8054;&#x5421;&#x5576;&#x7684;&#x4E24;&#x4E2A;&#x805A;&#x9170;&#x80FA;&#x90E8;&#x4EF6;&#x7684;&#x5316;&#x5408;&#x7269;&#x3002;&#x8054;&#x5421;&#x5576;&#x590D;&#x5408;&#x7269;&#x7684;&#x805A;&#x9170;&#x80FA;&#x53D1;&#x73B0;&#x6709;&#x9AD8;&#x4EB2;&#x548C;&#x529B;&#x7684; DNA &#x76EE;&#x6807;&#xFF0C;&#x5176;&#x4E2D;&#x4E4B;&#x4E00;&#x4EA7;&#x751F;&#x5177;&#x4F53;&#x548C;&#x9AD8;&#x4EA7;&#x7684;&#x5288;&#x88C2;&#x4F53;&#x5916;&#x548C;&#x57F9;&#x517B;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x513F;&#xFF0C;&#x5B66;&#x4E60;&#x7684;&#x8054;&#x5421;&#x5576;&#x5171;&#x8F6D;&#x8FD8;&#x4ECB;&#x7ECD;&#x4E86;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x7A7F;&#x900F;&#x5C5E;&#x6027;&#x56E0;&#x4E3A;&#x5B83;&#x5904;&#x4E8E;&#x6D3B;&#x52A8;&#x72B6;&#x6001;&#x65F6;&#x76F4;&#x63A5;&#x6DFB;&#x52A0;&#x5230;&#x7EC6;&#x80DE;&#x57F9;&#x517B;&#x57FA;&#x3002;&#x5229;&#x7528; DNA &#x7834;&#x574F;&#x5206;&#x5B50;&#x8054;&#x5421;&#x5576;&#x5230;&#x9884;&#x5148;&#x786E;&#x5B9A;&#x7684;&#x57FA;&#x56E0;&#x7EC4;&#x7AD9;&#x70B9;&#xFF0C;&#x4F8B;&#x5982;&#xFF0C;&#x56E0;&#x4E3A;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#xFF0C;&#x5B9E;&#x73B0;&#x6709;&#x9488;&#x5BF9;&#x6027;&#x7684;&#x57FA;&#x56E0;&#x7EC4;&#x4FEE;&#x6539;&#x63D0;&#x4F9B;&#x6709;&#x5438;&#x5F15;&#x529B;&#x7684;&#x6218;&#x7565;&#x548C; DNA &#x4FEE;&#x590D;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x3002;

&#x8054;&#x5421;&#x5576;&#x805A;&#x9170;&#x80FA;&#x4ECB;&#x5BFC;&#x7684;&#x7279;&#x5B9A;&#x5E8F;&#x5217;&#x7684; DNA &#x88C2;&#x89E3;&#x5171;&#x8F6D;&#x3002;

The design of molecules that damage a selected DNA sequence provides a formidable opportunity for basic and applied biology. For example, such molecules offer new prospects for controlled manipulation of the genome. The conjugation of DNA-code reading molecules such as polyamides to reagents that induce DNA damages provides an approach to reach this goal. In this work, we showed that a bipyridine conjugate of polyamides was able to induce sequence-specific DNA breaks in cells. We synthesized compounds based on two polyamide parts linked to bipyridine at different positions. Bipyridine conjugates of polyamides were found to have a high affinity for the DNA target and one of them produced a specific and high-yield cleavage in vitro and in cultured cells. The bipyridine conjugate studied here, also presents cell penetrating properties since it is active when directly added to cell culture medium. Harnessing DNA damaging molecules such as bipyridine to predetermined genomic sites, as achieved here, provides an attractive strategy for targeted genome modification and DNA repair studies.

Sequence-specific DNA cleavage mediated by bipyridine polyamide conjugates.

La conception de mol&eacute;cules qui endommagent une s&eacute;quence d&#39;ADN s&eacute;lectionn&eacute;e offre une formidable opportunit&eacute; pour la biologie fondamentale et appliqu&eacute;e. Par exemple, ces mol&eacute;cules offrent de nouvelles perspectives pour contr&ocirc;l&eacute; manipulation du g&eacute;nome. La conjugaison de la lecture du code de l&#39;ADN des mol&eacute;cules telles que les polyamides aux r&eacute;actifs qui provoquent des dommages de l&#39;ADN offre une d&eacute;marche pour atteindre cet objectif. Dans ce travail, nous avons montr&eacute; qu&#39;un conjugu&eacute; de bipyridine de polyamides &eacute;tait capable d&#39;induire des cassures de l&#39;ADN dans des cellules sp&eacute;cifiques. Nous avons synth&eacute;tis&eacute; compos&eacute;s bas&eacute;s sur deux pi&egrave;ces de polyamide li&eacute;s &agrave; bipyridine &agrave; des positions diff&eacute;rentes. Bipyridine conjugu&eacute;s des polyamides ont eu une grande affinit&eacute; pour la cible de l&#39;ADN et l&#39;un d&#39;eux a produit un clivage sp&eacute;cifique et rendement &eacute;lev&eacute; in vitro et dans des cellules cultiv&eacute;es. Le conjugu&eacute; de bipyridine &eacute;tudi&eacute; ici, pr&eacute;sente &eacute;galement des propri&eacute;t&eacute;s de p&eacute;n&eacute;tration de cellule puisqu&#39;il est actif lorsqu&#39;ajout&eacute;s directement &agrave; un milieu de culture cellulaire. Harnessing ADN endommager les mol&eacute;cules telles que bipyridine aux sites g&eacute;nomiques pr&eacute;d&eacute;termin&eacute;s, comme r&eacute;alis&eacute; ici, est une strat&eacute;gie s&eacute;duisante pour modification du g&eacute;nome cibl&eacute;es et r&eacute;paration de l&#39;ADN des &eacute;tudes.

Clivage de l&#39;ADN s&eacute;quence sp&eacute;cifique m&eacute;di&eacute; par bipyridine polyamide conjugu&eacute;s.

Das Design von Molek&uuml;len, die Sch&auml;den an eine markierten DNA-Sequenz bietet eine gewaltige Chance f&uuml;r Grundlagenforschung und angewandter Biologie. Solche Molek&uuml;le bieten beispielsweise neue Perspektiven f&uuml;r kontrollierte Manipulation des Genoms. Die Konjugation der DNA-Code lesen Molek&uuml;le wie Polyamide, Reagenzien, die DNA-Sch&auml;den ausl&ouml;sen bietet einen Ansatz, um dieses Ziel zu erreichen. In dieser Arbeit haben wir gezeigt, dass eine konjugierte Bipyridine Polyamide Sequenz-spezifische DNA-Br&uuml;che in Zellen induzieren konnte. Wir synthetisiert Verbindungen basierend auf Polyamid-zweiteilig mit Bipyridine an verschiedenen Positionen verkn&uuml;pft. Bipyridine Konjugate von Polyamiden, haben eine hohe Affinit&auml;t f&uuml;r die Ziel-DNA gefunden wurden, und einer von ihnen eine spezifische und High-Yield-Spaltung in vitro und in kultivierten Zellen produziert. Bipyridine konjugierte studierte hier pr&auml;sentiert auch durchdringend Zelleigenschaften, da es ist aktiv, wenn direkt Zellkulturmedium hinzugef&uuml;gt. Nutzbarmachung DNA Molek&uuml;le wie Bipyridine vorgegebenen genomische Websites zu besch&auml;digen, da hier erreicht bietet eine attraktive Strategie f&uuml;r gezielte Genom &Auml;nderung und DNA-Reparatur-Studien.

Sequenz-spezifische DNA-Spaltung von Bipyridine Polyamid vermittelt konjugiert.

La progettazione di molecole che danneggiano una sequenza di DNA selezionata fornisce una formidabile opportunit&agrave; per la biologia di base ed applicata. Ad esempio, tali molecole offrono nuove prospettive per la manipolazione controllata del genoma. La coniugazione di lettura del codice DNA molecole quali poliammidi di reagenti che inducono danni del DNA fornisce un approccio per raggiungere questo obiettivo. In questo lavoro, ci ha mostrato che un coniugato bipiridina di poliammidi fu in grado di indurre la sequenza-specifiche interruzioni di DNA nelle cellule. Abbiamo sintetizzato composti basati sulle due parti di poliammide legati alla bipiridina in posizioni diverse. Bipiridina coniugati di poliammidi sono stati trovati per avere un&#39;elevata affinit&agrave; per il DNA bersaglio e uno di loro prodotto una scissione specifica e ad alto rendimento in vitro e in cellule in coltura. Il coniugato di bipiridina studiato qui, presenta anche propriet&agrave; penetrante della cella poich&eacute; &egrave; attivo quando aggiunto direttamente al mezzo di coltura cellulare. Sfruttando la DNA danneggiare molecole come bipiridina siti genomico predeterminato, come raggiunto qui, fornisce una strategia interessante per la modifica del genoma mirati e studi di riparazione del DNA.

Specifica sequenza DNA cleavage mediata da poliammide bipiridina coniugati.

&#x9078;&#x629E;&#x3057;&#x305F; DNA &#x30B7;&#x30FC;&#x30B1;&#x30F3;&#x30B9;&#x306B;&#x640D;&#x50B7;&#x3092;&#x4E0E;&#x3048;&#x308B;&#x5206;&#x5B50;&#x306E;&#x8A2D;&#x8A08;&#x57FA;&#x790E;&#x30FB;&#x5FDC;&#x7528;&#x751F;&#x7269;&#x5B66;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x624B;&#x3054;&#x308F;&#x3044;&#x6A5F;&#x4F1A;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x305F;&#x3068;&#x3048;&#x3070;&#x3001;&#x305D;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306A;&#x5206;&#x5B50;&#x306F;&#x30B2;&#x30CE;&#x30E0;&#x306E;&#x5236;&#x5FA1;&#x64CD;&#x4F5C;&#x306E;&#x65B0;&#x3057;&#x3044;&#x5C55;&#x671B;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30DD;&#x30EA;&#x30A2;&#x30DF;&#x30C9;&#x306B; DNA &#x640D;&#x50B7;&#x3092;&#x8A98;&#x767A;&#x3059;&#x308B;&#x8A66;&#x85AC;&#x306A;&#x3069;&#x306E; DNA &#x30B3;&#x30FC;&#x30C9;&#x306E;&#x8AAD;&#x66F8;&#x5206;&#x5B50;&#x306E;&#x5171;&#x5F79;&#x306F;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x76EE;&#x6A19;&#x3092;&#x9054;&#x6210;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x30A2;&#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30C1;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x4F5C;&#x696D;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x30D3;&#x30D4;&#x30EA;&#x30B8;&#x30F3;&#x5171;&#x5F79;&#x30DD;&#x30EA;&#x30A2;&#x30DF;&#x30C9;&#x306E;&#x30B7;&#x30FC;&#x30B1;&#x30F3;&#x30B9;&#x56FA;&#x6709;&#x306E; DNA &#x5207;&#x65AD;&#x7D30;&#x80DE;&#x3092;&#x8A98;&#x5C0E;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x305F;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x30D3;&#x30D4;&#x30EA;&#x30B8;&#x30F3;&#x4F4D;&#x7F6E;&#x5225;&#x306B;&#x30EA;&#x30F3;&#x30AF;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B; 2 &#x3064;&#x306E;&#x30DD;&#x30EA;&#x30A2;&#x30DF;&#x30C9;&#x90E8;&#x5206;&#x306B;&#x57FA;&#x3065;&#x3044;&#x3066;&#x5316;&#x5408;&#x7269;&#x3092;&#x5408;&#x6210;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x30D3;&#x30D4;&#x30EA;&#x30B8;&#x30F3;&#x62B1;&#x5408;&#x4F53;&#x30DD;&#x30EA;&#x30A2;&#x30DF;&#x30C9;&#x306E; DNA &#x30BF;&#x30FC;&#x30B2;&#x30C3;&#x30C8;&#x306E;&#x89AA;&#x548C;&#x6027;&#x306E;&#x9AD8;&#x3055;&#x306B;&#x3042;&#x3063;&#x305F;&#x3001;&#x305D;&#x308C;&#x3089;&#x306E; 1 &#x3064;&#x7279;&#x5B9A;&#x3068;&#x9AD8;&#x53CE;&#x7387;&#x306E;&#x8C37;&#x9593; in vitro &#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x57F9;&#x990A;&#x7D30;&#x80DE;&#x3067;&#x751F;&#x7523;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x52C9;&#x5F37;&#x3057;&#x305F;&#x30D3;&#x30D4;&#x30EA;&#x30B8;&#x30F3;&#x5171;&#x5F79;&#x7D30;&#x80DE;&#x57F9;&#x990A;&#x6DB2;&#x306B;&#x76F4;&#x63A5;&#x8FFD;&#x52A0;&#x3059;&#x308B;&#x3068;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6;&#x306B;&#x306A;&#x3063;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x306E;&#x3067;&#x8CAB;&#x901A;&#x306E;&#x30BB;&#x30EB; &#x30D7;&#x30ED;&#x30D1;&#x30C6;&#x30A3;&#x3082;&#x793A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x9054;&#x6210;&#x3068;&#x3057;&#x3066; DNA &#x5206;&#x5B50;&#x306A;&#x3069;&#x30D3;&#x30D4;&#x30EA;&#x30B8;&#x30F3;&#x6240;&#x5B9A;&#x306E;&#x30B2;&#x30CE;&#x30E0;&#x90E8;&#x4F4D;&#x306B;&#x640D;&#x50B7;&#x3092;&#x6D3B;&#x7528;&#x3059;&#x308B;&#x9B45;&#x529B;&#x7684;&#x306A;&#x6226;&#x7565;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x5BFE;&#x8C61;&#x3068;&#x306A;&#x308B;&#x30B2;&#x30CE;&#x30E0;&#x4FEE;&#x6B63;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x3001;DNA &#x4FEE;&#x5FA9;&#x7814;&#x7A76;&#x3002;

&#x30D3;&#x30D4;&#x30EA;&#x30B8;&#x30F3; &#x30DD;&#x30EA;&#x30A2;&#x30DF;&#x30C9;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x5A92;&#x4ECB;&#x30B7;&#x30FC;&#x30B1;&#x30F3;&#x30B9;&#x56FA;&#x6709;&#x306E; DNA &#x5207;&#x65AD;&#x62B1;&#x5408;&#x4F53;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#xC120;&#xD0DD; &#xB41C; DNA &#xC2DC;&#xD000;&#xC2A4;&#xB97C; &#xC190;&#xC0C1; &#xD558;&#xB294; &#xBD84;&#xC790;&#xC758; &#xC124;&#xACC4; &#xAE30;&#xCD08; &#xBC0F; &#xC751;&#xC6A9; &#xC0DD;&#xBB3C;&#xD559;&#xC744; &#xC704;&#xD55C; &#xAC15;&#xB825;&#xD55C; &#xAE30;&#xD68C;&#xB97C; &#xC81C;&#xACF5; &#xD55C;&#xB2E4;. &#xC608;&#xB97C; &#xB4E4;&#xC5B4;, &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xBD84;&#xC790; &#xAC8C;&#xB188;&#xC758; &#xC81C;&#xC5B4; &#xC870;&#xC791;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC0C8;&#xB85C;&#xC6B4; &#xC7A0;&#xC7AC; &#xACE0;&#xAC1D;&#xC744; &#xC81C;&#xACF5;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. DNA &#xCF54;&#xB4DC; &#xD310;&#xB3C5; &#xBD84;&#xC790; DNA &#xC190;&#xC0C1;&#xC744; &#xC720;&#xB3C4; &#xD558;&#xB294; &#xC2DC; &#xC57D;&#xC744; polyamides &#xB4F1;&#xC758; &#xD65C;&#xC6A9;&#xC774;&#xC774; &#xBAA9;&#xD45C;&#xC5D0; &#xB3C4;&#xB2EC; &#xD558;&#xB294; &#xBC29;&#xBC95;&#xC744; &#xC81C;&#xACF5; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774; &#xC791;&#xD488;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; polyamides bipyridine &#xCF24;&#xB808; &#xC140;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC2DC;&#xD000;&#xC2A4; &#xD2B9;&#xC815; DNA &#xB098;&#xB204;&#xAE30; &#xC720;&#xB3C4; &#xC218; &#xC788;&#xC5C8;&#xB2E4; &#xBCF4;&#xC600;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xB2E4;&#xB978; &#xC704;&#xCE58;&#xC5D0;&#xC11C; bipyridine&#xC5D0; &#xC5F0;&#xACB0; &#xB41C; &#xB450; &#xAC1C;&#xC758; &#xD3F4; &#xB9AC;&#xC544; &#xBBF8;&#xB4DC; &#xBD80;&#xBD84;&#xC744; &#xAE30;&#xBC18;&#xC73C;&#xB85C; &#xD654;&#xD569;&#xBB3C; &#xD569;&#xC131;. Polyamides&#xC758; Bipyridine conjugates DNA &#xB300;&#xC0C1;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xB192;&#xC740; &#xC120;&#xD638;&#xB3C4;&#xAC00;&#xC9C0;&#xACE0; &#xBC1C;&#xACAC; &#xD558; &#xACE0; &#xADF8;&#xB4E4; &#xC911; &#xD558;&#xB098; &#xAD6C;&#xCCB4;&#xC801;&#xC774; &#xACE0; &#xB192;&#xC740; &#xC218;&#xC775;&#xB960; &#xBD84;&#xC5F4; &#xCCB4; &#xC678; &#xBC0F; &#xBC30;&#xC591;&#xB41C; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC0DD;&#xC0B0;. &#xC5EC;&#xAE30;, &#xACF5;&#xBD80; bipyridine &#xACF5;&#xC561; &#xB610;&#xD55C; &#xC774;&#xD6C4; &#xC138;&#xD3EC; &#xBC30;&#xC591; &#xB9E4;&#xCCB4;&#xC5D0; &#xC9C1;&#xC811; &#xCD94;&#xAC00; &#xD558;&#xB294; &#xACBD;&#xC6B0; &#xD65C;&#xC131; &#xC140; &#xAD00;&#xD1B5; &#xC18D;&#xC131;&#xC744; &#xC120;&#xBB3C; &#xD55C;&#xB2E4;. &#xC5EC;&#xAE30;, &#xB2EC;&#xC131; &#xBBF8;&#xB9AC; &#xACB0;&#xC815; &#xB41C; &#xAC8C;&#xB188; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8;&#xB85C; bipyridine&#xACFC; &#xAC19;&#xC740; &#xBD84;&#xC790;&#xB97C; &#xC190;&#xC0C1; &#xD558;&#xB294; DNA&#xB97C; &#xD65C;&#xC6A9; &#xD55C; &#xB9E4;&#xB825;&#xC801;&#xC778; &#xC804;&#xB7B5; &#xD0C0;&#xAC9F;&#xB41C; &#xAC8C;&#xB188; &#xC218;&#xC815; &#xD558;&#xBA70; DNA &#xBCF5;&#xAD6C; &#xC5F0;&#xAD6C;.

Bipyridine &#xD3F4; &#xB9AC;&#xC544; &#xBBF8;&#xB4DC;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC911;&#xC7AC; &#xC2DC;&#xD000;&#xC2A4; &#xD2B9;&#xC815; DNA &#xBD84;&#xC5F4; &#xBCC0;&#xD654;.

El dise&ntilde;o de las mol&eacute;culas que da&ntilde;an una secuencia de ADN seleccionada proporciona una oportunidad formidable para la biolog&iacute;a b&aacute;sica y aplicada. Por ejemplo, estas mol&eacute;culas ofrecen nuevas perspectivas para la manipulaci&oacute;n controlada del genoma. La conjugaci&oacute;n de lectura de c&oacute;digo de ADN mol&eacute;culas tales como poliamidas reactivos que inducen da&ntilde;os de ADN proporciona un acercamiento para alcanzar esta meta. En este trabajo mostramos que un conjugado bipyridine de poliamidas fue capaz de inducir la secuencia espec&iacute;fica roturas del ADN en las c&eacute;lulas. Hemos sintetizado compuestos basados en dos piezas de poliamida vinculadas a bipyridine en diferentes posiciones. Bipyridine conjugados de poliamidas fueron encontrados para tener una alta afinidad para el destino de ADN y uno de ellos produjo un escote espec&iacute;fico y de alto rendimiento in vitro y en c&eacute;lulas cultivadas. El conjugado bipyridine estudiado aqu&iacute;, tambi&eacute;n presenta propiedades penetrantes celulares ya que es activa cuando se a&ntilde;ade directamente al medio de cultivo celular. Aprovechamiento de ADN da&ntilde;ar mol&eacute;culas como bipyridine a sitios gen&oacute;micos predeterminados, como aqu&iacute;, proporciona una estrategia atractiva para modificaci&oacute;n dirigida del genoma y estudios de reparaci&oacute;n del ADN.

Escote de ADN de secuencia espec&iacute;fica mediada por la poliamida bipyridine conjugados.

&#x4EE5;&#x7279;&#x5B9A;&#x987A;&#x5E8F;&#x7684;&#x65B9;&#x5F0F;&#x4E0E; DNA &#x5206;&#x5B50;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x7684;&#x5206;&#x5B50;&#x662F;&#x6709;&#x5438;&#x5F15;&#x529B;&#x5DE5;&#x5177;&#x64CD;&#x7EB5;&#x57FA;&#x56E0;&#x5E8F;&#x5217;&#x548C;&#x8868;&#x8FBE;&#x3002;&#x4F8B;&#x5982;&#xFF0C;&#x4E09;&#x7F38;&#x5F62;&#x6210;&#x5BE1; &#xFF08;&#x5B83;&#xFF09;&#xFF0C;&#x5176;&#x4E2D;&#x5C06;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x5230; oligopyrimidine.oligopurine &#x5E8F;&#x5217;&#x901A;&#x8FC7; Hoogsteen &#x6C22;&#x952E;&#xFF0C;&#x5DF2;&#x88AB;&#x7528;&#x6765;&#x6291;&#x5236;&#x4E00;&#x7EA7; DNA &#x4EE5;&#x53CA;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x5B9A;&#x5411;&#x7684;&#x7A81;&#x53D8;&#x6A21;&#x578B;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x4E2D;&#x7684;&#x57FA;&#x56E0;&#x8868;&#x8FBE;&#x3002;&#x5C06;&#x8BA8;&#x8BBA;&#x4E2D;&#x4F7F;&#x7528;&#x7684;&#x7279;&#x5B9A;&#x5E8F;&#x5217;&#x7684;&#x65B9;&#x5F0F;&#x5BE1;&#x6838;&#x82F7;&#x9178;&#x548C;&#x5230;&#x76EE;&#x6807; DNA &#x540C;&#x6E90;&#x5E8F;&#x5217;&#x7684;&#x6700;&#x65B0;&#x8FDB;&#x5C55;&#x3002;&#x5C24;&#x5176;&#x662F;&#xFF0C;&#x5B83;&#x7684;&#x5316;&#x5B66;&#x6539;&#x6027;&#x7528;&#x4E8E;&#x6539;&#x5584;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x5230;&#x5728;&#x6D3B;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E2D;&#x7684;&#x67D3;&#x8272;&#x4F53;&#x76EE;&#x6807;&#x5E8F;&#x5217;&#x3002;&#x5404;&#x79CD;&#x5BE1;&#x6838;&#x82F7;&#x9178;&#x7C7B;&#x4F3C;&#x7269;&#x4E5F;&#x53D1;&#x73B0;&#x4E86;&#x6269;&#x5927;&#x8303;&#x56F4;&#x7684;&#x5E8F;&#x5217;&#x6613;&#x4E8E;&#x64CD;&#x4F5C;&#xFF0C;&#x5305;&#x62EC;&#x6240;&#x8C13;&#x7684;&quot;&#x4F50;&#x7F57;&quot;&#x9501;&#x5B9A;&#x6838;&#x9178; (LNAs) &#x548C; pseudo-complementary &#x80BD;&#x6838;&#x9178; (pcPNAs)&#x3002;&#x6700;&#x540E;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x5C06;&#x6307;&#x5BFC;&#x9776;&#x5411;&#x6027;&#x7684;&#x57FA;&#x56E0;&#x5E8F;&#x5217;&#x4FEE;&#x6539;&#x5BA1;&#x67E5;&#x5B83;&#x7684;&#x6F5C;&#x529B;&#xFF0C;&#x5E76;&#x5EFA;&#x8BAE;&#x5408;&#x6210;&#x6838;&#x9178;&#xFF0C;&#x57FA;&#x4E8E;&#x5171;&#x8F6D;&#x7684;&#x7279;&#x5B9A;&#x5E8F;&#x5217;&#x7684; DNA &#x914D;&#x4F53; dna &#x7834;&#x574F;&#x5206;&#x5B50;&#xFF0C;&#x662F;&#x57FA;&#x4E8E;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x7684;&#x5185;&#x5207;&#x9176;&#x4E3A;&#x9776;&#x5411;&#x6027;&#x7684;&#x57FA;&#x56E0;&#x5E8F;&#x5217;&#x4FEE;&#x6539;&#x6709;&#x5E0C;&#x671B;&#x66FF;&#x4EE3;&#x3002;

&#x9488;&#x5BF9; DNA &#x7684;&#x4E09;&#x94FE;&#x5F62;&#x6210;&#x5BE1;&#x6838;&#x82F7;&#x9178;&#x8981;&#x4FEE;&#x6539;&#x57FA;&#x56E0;&#x5E8F;&#x5217;&#x3002;

Molecules that interact with DNA in a sequence-specific manner are attractive tools for manipulating gene sequence and expression. For example, triplex-forming oligonucleotides (TFOs), which bind to oligopyrimidine.oligopurine sequences via Hoogsteen hydrogen bonds, have been used to inhibit gene expression at the DNA level as well as to induce targeted mutagenesis in model systems. Recent advances in using oligonucleotides and analogs to target DNA in a sequence-specific manner will be discussed. In particular, chemical modification of TFOs has been used to improve binding to chromosomal target sequences in living cells. Various oligonucleotide analogs have also been found to expand the range of sequences amenable to manipulation, including so-called "Zorro" locked nucleic acids (LNAs) and pseudo-complementary peptide nucleic acids (pcPNAs). Finally, we will examine the potential of TFOs for directing targeted gene sequence modification and propose that synthetic nucleases, based on conjugation of sequence-specific DNA ligands to DNA damaging molecules, are a promising alternative to protein-based endonucleases for targeted gene sequence modification.

Targeting DNA with triplex-forming oligonucleotides to modify gene sequence.

Les mol&eacute;cules qui interagissent avec l&#39;ADN de fa&ccedil;on s&eacute;quence-sp&eacute;cifique sont des outils attrayants pour manipuler l&#39;expression et la s&eacute;quence du g&egrave;ne. Par exemple, les oligonucl&eacute;otides formant des plex (TFOs), qui se lient &agrave; des s&eacute;quences de oligopyrimidine.oligopurine par des liaisons hydrog&egrave;ne Hoogsteen, ont servi &agrave; inhiber l&#39;expression des g&egrave;nes dans l&#39;ADN ainsi quant &agrave; induire la mutagen&egrave;se cibl&eacute;e dans des syst&egrave;mes mod&egrave;les. On discutera des progr&egrave;s r&eacute;cents en utilisant des oligonucl&eacute;otides et analogues d&#39;ADN cible de fa&ccedil;on s&eacute;quence-sp&eacute;cifique. En particulier, la modification chimique des TFOs a &eacute;t&eacute; utilis&eacute;e pour am&eacute;liorer la liaison aux s&eacute;quences cibles chromosomiques dans les cellules vivantes. Divers analogues d&#39;oligonucl&eacute;otides ont &eacute;galement &eacute;t&eacute; trouv&eacute;es pour &eacute;largir la gamme des s&eacute;quences se pr&ecirc;tent &agrave; la manipulation, y compris ce qu&#39;on appelle &laquo; Zorro &raquo; enferm&eacute;s des acides nucl&eacute;iques (LNA) et des acides nucl&eacute;iques peptidiques pseudo-complementary (pcPNAs). Enfin, nous examinerons le potentiel de TFOs pour diriger la modification de s&eacute;quence de g&egrave;ne cibl&eacute; et proposer que les nucl&eacute;ases synth&eacute;tiques, bas&eacute;es sur la conjugaison des ligands ADN s&eacute;quence sp&eacute;cifique d&#39;ADN endommager les mol&eacute;cules, sont une alternative prometteuse &agrave; endonucl&eacute;ases bas&eacute;es sur les prot&eacute;ines pour la modification de s&eacute;quence de g&egrave;ne cibl&eacute;.

Ciblage ADN avec triplex formant des oligonucl&eacute;otides de modifier la s&eacute;quence du g&egrave;ne.

Molek&uuml;le, die Interaktion mit DNA-Sequenz-spezifische Weise sind attraktive Werkzeuge zum Bearbeiten der Gensequenz und Ausdruck. Beispielsweise wurden Triplex-bildenden Oligonukleotide (TFOs), die an oligopyrimidine.oligopurine Sequenzen &uuml;ber Hoogsteen Wasserstoffbr&uuml;ckenbindungen zu binden, eingesetzt, die Genexpression zu den DNA bemessen sowie gezielte Mutagenese in Modellsysteme ausl&ouml;sen, zu hemmen. J&uuml;ngste Fortschritte in der Verwendung von Oligonukleotide und Analoga zu Ziel DNA Sequenz-spezifische Weise werden diskutiert. Insbesondere wurde die chemische Modifikation von TFOs eingesetzt, zur Verbesserung der Bindung an chromosomalen Ziel Sequenzen in lebenden Zellen. Verschiedene Oligonukleotid-Analoga wurden auch gefunden zur Ausweitung der Sequenzen zur Manipulation, einschlie&szlig;lich der so genannten &quot;Zorro&quot; Sensationsberichterstattung Nukleins&auml;uren (LNAs) und pseudo-complementary Peptid-Nukleins&auml;uren (PcPNAs) gesperrt. Schlie&szlig;lich wir das Potenzial von TFOs f&uuml;r die Leitung der gezielte Gen-Sequenz-&Auml;nderung pr&uuml;fen und vorzuschlagen, dass synthetische Nukleasen, basierend auf Konjugation des Sequenz-spezifische DNA-Liganden an DNA sch&auml;digen Molek&uuml;le, eine vielversprechende Alternative zu proteinhaltige Endonucleases gezielte genetischer Sequenz Ver&auml;nderungen sind.

Targeting-DNA mit Triplex-bildenden Oligonukleotide Gensequenz zu &auml;ndern.

Molecole che interagiscono con il DNA in un modo specifico di sequenza sono interessanti strumenti per manipolare l&#39;espressione e la sequenza di geni. Ad esempio, formando triplex oligonucleotidi (TFOs), che si legano alle sequenze di oligopyrimidine.oligopurine tramite legami idrogeno Hoogsteen, sono stati utilizzati per inibire l&#39;espressione genica a livello di DNA cos&igrave; da indurre mutagenesi mirata in sistemi modello. I recenti progressi nell&#39;utilizzo di oligonucleotidi e analoghi al DNA bersaglio in maniera specifica sequenza saranno discusso. In particolare, modificazione chimica del TFOs &egrave; stato usato per migliorare il legame alle sequenze target cromosomiche nelle cellule viventi. Diversi analoghi del oligonucleotide sono stati trovati anche di ampliare la gamma delle sequenze assoggettabile alla manipolazione, compresi i cosiddetto &quot;Zorro&quot; bloccati gli acidi nucleici (LNAs) e gli acidi nucleici del peptide pseudo-complementary (pcPNAs). Infine, esamineremo le potenzialit&agrave; del TFOs per dirigere modifica sequenza genica mirata e proporre che le nucleasi sintetiche, basate sulla coniugazione di ligandi DNA sequenza-specifico al DNA, danneggiando le molecole, sono un&#39;alternativa promettente per endonucleases protein-based per la modifica di sequenza genica mirata.

Targeting del DNA con triplex-formando oligonucleotidi per modificare la sequenza di geni.

&#x30B7;&#x30FC;&#x30B1;&#x30F3;&#x30B9;&#x56FA;&#x6709;&#x306E;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3067; DNA &#x3068;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x306E;&#x5206;&#x5B50;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x30B7;&#x30FC;&#x30B1;&#x30F3;&#x30B9;&#x3068;&#x5F0F;&#x3092;&#x64CD;&#x4F5C;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x9B45;&#x529B;&#x7684;&#x306A;&#x30C4;&#x30FC;&#x30EB;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x305F;&#x3068;&#x3048;&#x3070;&#x3001;Hoogsteen &#x6C34;&#x7D20;&#x7D50;&#x5408;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x3066; oligopyrimidine.oligopurine &#x30B7;&#x30FC;&#x30B1;&#x30F3;&#x30B9;&#x3092;&#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C9;&#x3001;&#x4E09;&#x91CD;&#x9396;&#x5F62;&#x6210;&#x30AA;&#x30EA;&#x30B4;&#x30CC;&#x30AF;&#x30EC;&#x30AA;&#x30C1;&#x30C9; (TFOs) &#x30E2;&#x30C7;&#x30EB; &#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E0;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x5BFE;&#x8C61;&#x306E;&#x5909;&#x7570;&#x3092;&#x8A98;&#x767A;&#x3059;&#x308B; DNA &#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x3067;&#x540C;&#x69D8;&#x306E;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x767A;&#x73FE;&#x3092;&#x963B;&#x5BB3;&#x3059;&#x308B;&#x4F7F;&#x7528;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30AA;&#x30EA;&#x30B4;&#x30CC;&#x30AF;&#x30EC;&#x30AA;&#x30C1;&#x30C9;&#x3068;&#x985E;&#x4F3C;&#x4F53;&#x3092;&#x30BF;&#x30FC;&#x30B2;&#x30C3;&#x30C8; DNA &#x30B7;&#x30FC;&#x30B1;&#x30F3;&#x30B9;&#x306B;&#x56FA;&#x6709;&#x306E;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3067;&#x306E;&#x4F7F;&#x7528;&#x306E;&#x6700;&#x8FD1;&#x306E;&#x9032;&#x6B69;&#x3092;&#x8AAC;&#x660E;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x7279;&#x306B;&#x3001;TFOs &#x306E;&#x5316;&#x5B66;&#x4FEE;&#x98FE;&#x306F;&#x7D30;&#x80DE;&#x5185;&#x306E;&#x67D3;&#x8272;&#x4F53;&#x30BF;&#x30FC;&#x30B2;&#x30C3;&#x30C8; &#x30B7;&#x30FC;&#x30B1;&#x30F3;&#x30B9;&#x3078;&#x306E;&#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C9;&#x3092;&#x6539;&#x5584;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x4F7F;&#x7528;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x69D8;&#x3005; &#x306A;&#x30AA;&#x30EA;&#x30B4;&#x30CC;&#x30AF;&#x30EC;&#x30AA;&#x30C1;&#x30C9; &#x30A2;&#x30CA;&#x30ED;&#x30B0;&#x3082;&#x3044;&#x308F;&#x3086;&#x308B;&#x300C;&#x30BE;&#x30ED;&#x300D;&#x306A;&#x3069;&#x306E;&#x64CD;&#x4F5C;&#x306B;&#x306F;&#x3001;&#x5F93;&#x9806;&#x306E;&#x30B7;&#x30FC;&#x30B1;&#x30F3;&#x30B9;&#x306E;&#x7BC4;&#x56F2;&#x3092;&#x62E1;&#x5927;&#x3059;&#x308B;&#x6838;&#x9178; (Lna) &#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x64EC;&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C9;&#x6838;&#x9178; (pcPNAs) &#x30ED;&#x30C3;&#x30AF;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x767A;&#x898B;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6700;&#x5F8C;&#x306B;&#x3001;&#x76EE;&#x6A19;&#x3068;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x30B7;&#x30FC;&#x30B1;&#x30F3;&#x30B9;&#x306E;&#x5909;&#x66F4;&#x3092;&#x6307;&#x793A;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306E; TFOs &#x306E;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x3092;&#x691C;&#x8A0E;&#x3057;&#x3001;&#x5171;&#x5F79;&#x30B7;&#x30FC;&#x30B1;&#x30F3;&#x30B9;&#x56FA;&#x6709; DNA &#x914D;&#x4F4D;&#x5B50;&#x306E;&#x6709;&#x5BB3;&#x306A;&#x5206;&#x5B50;&#x3001;DNA &#x306B;&#x57FA;&#x3065;&#x304F;&#x5408;&#x6210;&#x306E;&#x6838;&#x9178;&#x5206;&#x89E3;&#x9175;&#x7D20;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x30D9;&#x30FC;&#x30B9;&#x306E;&#x30A8;&#x30F3;&#x30C9;&#x30CC;&#x30AF;&#x30EC;&#x30A2;&#x30FC;&#x30BC;&#x76EE;&#x6A19;&#x3068;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x30B7;&#x30FC;&#x30B1;&#x30F3;&#x30B9;&#x306E;&#x4FEE;&#x6B63;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x6709;&#x671B;&#x306A;&#x4EE3;&#x66FF;&#x624B;&#x6BB5;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x63D0;&#x6848;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

DNA &#x4E09;&#x91CD;&#x9396;&#x5F62;&#x6210;&#x3068;&#x30BF;&#x30FC;&#x30B2;&#x30C3;&#x30C8; &#x30AA;&#x30EA;&#x30B4;&#x30CC;&#x30AF;&#x30EC;&#x30AA;&#x30C1;&#x30C9;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x30B7;&#x30FC;&#x30B1;&#x30F3;&#x30B9;&#x3092;&#x5909;&#x66F4;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#xC2DC;&#xD000;&#xC2A4; &#xBCC4;&#xB85C; DNA&#xC640; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9; &#xD558;&#xB294; &#xBD84;&#xC790;&#xB294; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xC2DC;&#xD000;&#xC2A4;&#xC640; &#xC2DD; &#xC870;&#xC791; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD55C; &#xB9E4;&#xB825;&#xC801;&#xC778; &#xB3C4;&#xAD6C;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC608;&#xB97C; &#xB4E4;&#xC5B4;, &#xC0BC;&#xBC15;&#xC790; &#xD615;&#xC131; oligonucleotides (TFOs) Hoogsteen &#xC218;&#xC18C; &#xACB0;&#xD569;&#xC744; &#xD1B5;&#xD574; oligopyrimidine.oligopurine &#xC2DC;&#xD000;&#xC2A4;&#xC5D0; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xD558;&#xB294; &#xB610;&#xD55C; &#xD0C0;&#xAC9F;&#xB41C; mutagenesis &#xBAA8;&#xB378; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC720;&#xB3C4;&#xB85C; DNA &#xC218;&#xC900;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xBC1C;&#xD604;&#xC744; &#xC5B5;&#xC81C; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD574; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC2DC;&#xD000;&#xC2A4; &#xBCC4;&#xB85C; oligonucleotides &#xBC0F; &#xB300;&#xC0C1; DNA &#xC720;&#xC0AC; &#xCCB4;&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xCD5C;&#xADFC;&#xC758; &#xBC1C;&#xC804;&#xC744; &#xB17C;&#xC758; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xD2B9;&#xD788;, Tfos&#xC758; &#xD654;&#xD559; &#xC218;&#xC815; &#xC0B4;&#xC544;&#xC788;&#xB294; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC5FC;&#xC0C9;&#xCCB4; &#xB300;&#xC0C1; &#xC2DC;&#xD000;&#xC2A4;&#xC5D0; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xAC1C;&#xC120; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD574; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB2E4;&#xC591; &#xD55C; oligonucleotide &#xC720;&#xC0AC; &#xCCB4; &#xB610;&#xD55C; &#xC2DC;&#xD000;&#xC2A4; &#xC870;&#xC791;, &#xC18C;&#xC704; &quot;&#xC870;&#xB85C;&quot;&#xB97C; &#xD3EC;&#xD568; &#xD558; &#xC5EC; &#xC758;&#xBB34;&#xC758; &#xBC94;&#xC704;&#xB97C; &#xD655;&#xC7A5; &#xC7A0;&#xACA8; &#xD575; &#xC0B0; (Lna) &#xBC0F; pseudo-complementary &#xD3A9;&#xD0C0;&#xC774;&#xB4DC; &#xD575; &#xC0B0; (pcPNAs) &#xBC1C;&#xACAC; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB9C8;&#xC9C0;&#xB9C9;&#xC73C;&#xB85C;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; &#xD0C0;&#xAC9F;&#xB41C; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xC2DC;&#xD000;&#xC2A4; &#xC218;&#xC815; &#xC9C0;&#xC2DC; &#xD55C; Tfos&#xC758; &#xAC00;&#xB2A5;&#xC131;&#xC744; &#xAC80;&#xD1A0; &#xD558; &#xACE0; dna &#xBD84;&#xC790;&#xB97C; &#xC190;&#xC0C1; &#xC2DC; &#xD0A4; &#xC9C0; &#xC21C;&#xC11C; &#xD2B9;&#xC815; DNA ligands&#xC758; &#xD65C;&#xC6A9;&#xC5D0; &#xB530;&#xB77C; &#xD569;&#xC131; nucleases&#xB294; &#xD0C0;&#xAC9F;&#xB41C; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xC2DC;&#xD000;&#xC2A4; &#xC218;&#xC815;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; endonucleases &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xAE30;&#xBC18;&#xC5D0; &#xC720;&#xB9DD;&#xD55C; &#xB300;&#xC548;&#xC744; &#xC81C;&#xC548;.

&#xC0BC;&#xBC15;&#xC790; &#xD615;&#xC131; &#xB41C; DNA&#xB97C; &#xB300;&#xC0C1;&#xC73C;&#xB85C; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xC2DC;&#xD000;&#xC2A4;&#xB97C; &#xC218;&#xC815; &#xD558;&#xB824;&#xBA74; oligonucleotides.

Mol&eacute;culas que interact&uacute;an con el ADN de una manera espec&iacute;fica de secuencia son atractivas herramientas para manipular la expresi&oacute;n y la secuencia del gen. Por ejemplo, triplex-formando oligonucle&oacute;tidos (TFOs), que se unen a secuencias de oligopyrimidine.oligopurine v&iacute;a Hoogsteen enlaces del hidr&oacute;geno, se han utilizado para inhibir la expresi&oacute;n g&eacute;nica en el nivel de ADN, as&iacute; como para inducir mutag&eacute;nesis dirigida en sistemas modelo. Se discutir&aacute;n los avances recientes en el uso de oligonucle&oacute;tidos y an&aacute;logos a ADN diana de una manera espec&iacute;fica de secuencia. En particular, la modificaci&oacute;n qu&iacute;mica de TFOs se ha utilizado para mejorar la Uni&oacute;n a secuencias de Diana cromos&oacute;micas en las c&eacute;lulas vivas. Tambi&eacute;n se han encontrado varios an&aacute;logos de oligonucle&oacute;tidos ampliar la gama de secuencias susceptibles de manipulaci&oacute;n, como supuesto &quot;Zorro&quot; bloqueado los &aacute;cidos nucleicos (LNAs) y &aacute;cidos nucleicos de p&eacute;ptido pseudo-complementary (pcPNAs). Por &uacute;ltimo, vamos a examinar el potencial de TFOs para dirigir la modificaci&oacute;n de secuencia de genes espec&iacute;ficos y proponer que nucleasas sint&eacute;ticas, basadas en la conjugaci&oacute;n de ligandos de ADN de secuencia espec&iacute;fica para ADN, da&ntilde;ar las mol&eacute;culas, son una alternativa prometedora para Endonucleasas proteica para la modificaci&oacute;n de la secuencia de genes espec&iacute;ficos.

Dirigidas a ADN con triple-formando oligonucle&oacute;tidos para modificar la secuencia de genes.

&#x53EF;&#x4EE5;&#x901A;&#x8FC7;&#x5728;&#x76EE;&#x6807;&#x4E2D;&#x7684;&#x53CC;&#x94FE;&#x65AD;&#x88C2; (DSB) &#x5F15;&#x8FDB;&#x514B;&#x670D;&#x540C;&#x6E90;&#x91CD;&#x7EC4;&#x57FA;&#x56E0;&#x4FEE;&#x9970;&#x7684;&#x4F4E;&#x6548;&#x7387;&#x3002;&#x5DE5;&#x7A0B;&#x5185;&#x5207;&#x9176;&#x9700;&#x8981;&#xFF0C;&#x4F46;&#x662F;&#xFF0C;&#x4ECD;&#x7136;&#x662F;&#x6311;&#x6218;&#x6027;&#x7684;&#x4EFB;&#x52A1;&#xFF0C;&#x9650;&#x5236;&#x4E86;&#x9A71;&#x52A8;&#x6838;&#x9178;&#x9176;&#x57FA;&#x56E0;&#x4FEE;&#x9970;&#x7684;&#x5E7F;&#x6CDB;&#x5E94;&#x7528;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x6765;&#x8FD9;&#x91CC;&#x62A5;&#x5230;&#x7684;&#x5171;&#x8F6D;&#x7684;&#x90BB;&#x4E8C;&#x6C2E;&#x83F2; (OP) DNA &#x88C2;&#x89E3;&#x5206;&#x5B50;&#xFF0C;&#x548C;&#x4E09;&#x7F38;&#x5F62;&#x6210;&#x5BE1; &#xFF08;&#x5B83;&#xFF09;&#xFF0C;&#x5DF2;&#x77E5;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x7279;&#x5B9A;&#x7684; DNA &#x5E8F;&#x5217;&#xFF0C;&#x662F;&#x5408;&#x6210;&#x6838;&#x9178;&#x9176;&#x6709;&#x6548;&#x5730;&#x523A;&#x6FC0;&#x76EE;&#x6807;&#x57FA;&#x56E0;&#x7EC4;&#x4FEE;&#x6539;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x663E;&#x793A; OP &#x4FEE;&#x9970;&#x7684;&#x590D;&#x5408;&#x7269;&#x5728;&#x7EC6;&#x80DE;&#xFF0C;&#x8BF1;&#x4F7F;&#x76EE;&#x6807;&#x7684; DSBs&#x3002;OP-&#x4FEE;&#x9970;&#x7684;&#x552F;&#x4E00;&#x7684;&#x76EE;&#x6807;&#x662F;&#x9AD8;&#x6548;&#x7387;&#x3001; &#x548C;&#x76EE;&#x6807;&#x7AD9;&#x70B9;&#x4E0A;&#x7684;&#x7A81;&#x53D8;&#x88AB;&#x53D1;&#x73B0;&#x5728;&#x5927;&#x7EA6; 10%&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#xFF0C;&#x5305;&#x62EC;&#x5C0F;&#x5220;&#x9664;&#x90E8;&#x5206;&#x6700;&#x6709;&#x53EF;&#x80FD;&#x7531; nhej DSB &#x4FEE;&#x590D;&#x671F;&#x95F4;&#x4ECB;&#x7ECD;&#x3002;&#x91CD;&#x8981;&#x7684;&#x662F;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x53D1;&#x73B0;&#x5F53; DNA &#x540C;&#x6E90;&#x6350;&#x52A9; cotransfected &#x7684;&#x65F6;&#x5019;&#xFF0C;&#x6709;&#x9488;&#x5BF9;&#x6027;&#x7684;&#x57FA;&#x56E0;&#x4FEE;&#x9970;&#x53D1;&#x751F;&#x5728; &gt; 1.5%&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x3002;&#x56E0;&#x4E3A;&#x9891;&#x7E41;&#x7684;&#x4EBA;&#x7C7B;&#x548C;&#x5C0F;&#x9F20;&#x57FA;&#x56E0;&#xFF0C;OP &#x4FEE;&#x9970;&#x7684;&#x590D;&#x5408;&#x7269;&#x56E0;&#x6B64;&#x6784;&#x6210;&#x4E00;&#x7C7B;&#x91CD;&#x8981;&#x7684;&#x9776;&#x5411;&#x6027;&#x7684;&#x57FA;&#x56E0;&#x4FEE;&#x6539;&#x7279;&#x5B9A;&#x4E8E;&#x7AD9;&#x70B9;&#x6FF2;&#x4E09;&#x7F38;&#x5F62;&#x6210;&#x5E8F;&#x5217;&#x3002;&#x5229;&#x7528; DNA &#x7834;&#x574F;&#x5206;&#x5B50;&#x5230;&#x9884;&#x5148;&#x786E;&#x5B9A;&#x7684;&#x57FA;&#x56E0;&#x7EC4;&#x7AD9;&#x70B9;&#xFF0C;&#x7531;&#x4E8E;&#x5B9E;&#x73B0;&#x4E86;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#xFF0C;&#x8FD8;&#x5E94;&#x63D0;&#x4F9B;&#x6253;&#x5165; dna &#x635F;&#x4F24;&#x4FEE;&#x590D;&#x4E0E;&#x764C;&#x75C7;&#x7684;&#x673A;&#x5236;&#x3002;

&#x4E09;&#x94FE;&#x5F62;&#x6210;&#x5BE1;&#x6838;&#x82F7;&#x9178;&#x90BB;&#x4E8C;&#x6C2E;&#x83F2;&#x5171;&#x8F6D;&#x9AD8;&#x6548;&#x76EE;&#x6807;&#x57FA;&#x56E0;&#x7EC4;&#x4FEE;&#x6539;&#x3002;

The inefficiency of gene modification by homologous recombination can be overcome by the introduction of a double-strand break (DSB) in the target. Engineering the endonucleases needed, however, remains a challenging task that limits widespread application of nuclease-driven gene modification. We report here that conjugates of orthophenanthroline (OP), a DNA cleaving molecule, and triplex-forming oligonucleotides (TFOs), known to bind specific DNA sequences, are synthetic nucleases efficient at stimulating targeted genome modification. We show that in cultured cells, OP-TFO conjugates induce targeted DSBs. An OP-TFO with a unique target was highly efficient, and mutations at the target site were found in approximately 10% of treated cells, including small deletions most likely introduced during DSB repair by nonhomologous end joining. Importantly, we found that when homologous donor DNA was cotransfected, targeted gene modification took place in >1.5% of treated cells. Because triplex-forming sequences are frequent in human and mouse genes, OP-TFO conjugates therefore constitute an important class of site-specific nucleases for targeted gene modification. Harnessing DNA-damaging molecules to predetermined genomic sites, as achieved here, should also provide inroads into mechanisms of DNA repair and cancer.

Triplex-forming oligonucleotide-orthophenanthroline conjugates for efficient targeted genome modification.

L&#39;inefficacit&eacute; de la modification de g&egrave;ne par recombinaison homologue peut &ecirc;tre surmont&eacute;e par l&#39;introduction d&#39;une cassure double brin (DSB) dans la cible. Ing&eacute;nierie les endonucl&eacute;ases n&eacute;cessaires, mais reste une t&acirc;che difficile qui limite l&#39;application g&eacute;n&eacute;ralis&eacute;e de la modification g&eacute;n&eacute;tique ax&eacute;e sur la nucl&eacute;ase. Nous rapportons ici qui conjugue des orthoph&eacute;nantroline (OP), un clivage de la mol&eacute;cule, l&#39;ADN et oligonucl&eacute;otides formant des plex (TFOs), connues pour lier des s&eacute;quences d&#39;ADN sp&eacute;cifiques, sont efficaces &agrave; modification du g&eacute;nome cibl&eacute;es stimulant synth&eacute;tiques nucl&eacute;ases. Nous montrent que, dans des cellules cultiv&eacute;es, conjugu&eacute;s OP-TFO induisent DSBs cibl&eacute;es. Un OP-TFO avec une cible unique a &eacute;t&eacute; tr&egrave;s efficace, et des mutations sur le site cible trouv&eacute;es chez environ 10 % des cellules trait&eacute;es, y compris les petites suppressions vraisemblablement introduites au cours de la r&eacute;paration de l&#39;ORD en rejoignant non-homologues fin. Ce qui est important, nous avons constat&eacute; que lorsque les homologues donneur de l&#39;ADN a &eacute;t&eacute; cotransfect&eacute;, g&egrave;ne cibl&eacute; modification a eu lieu en &gt; 1,5 % des cellules trait&eacute;es. Parce que les s&eacute;quences formant des triplex sont fr&eacute;quents chez l&#39;homme et les g&egrave;nes de souris, conjugu&eacute;s OP-TFO constituent donc une classe importante de nucl&eacute;ases in sites pour la modification des g&egrave;nes cibl&eacute;s. Harnessing endommageant l&#39;ADN des mol&eacute;cules aux sites g&eacute;nomiques pr&eacute;d&eacute;termin&eacute;s, comme r&eacute;alis&eacute; ici, devrait &eacute;galement fournir des perc&eacute;es dans les m&eacute;canismes de r&eacute;paration de l&#39;ADN et le cancer.

Triplex formant oligonucl&eacute;otide-orthoph&eacute;nantroline conjugu&eacute;s pour la modification du g&eacute;nome cibl&eacute;e efficace.

Die Ineffizienz der genetischer Ver&auml;nderungen durch homologe Rekombination kann durch die Einf&uuml;hrung einer Doppel-Strang-Pause (DSB) im Ziel &uuml;berwunden werden. Technik der Endonucleases ben&ouml;tigt, bleibt aber eine anspruchsvolle Aufgabe, die weit verbreitete Anwendung der Nuklease-gesteuerte genetischer Ver&auml;nderungen begrenzt. Wir berichten hier, die konjugiert von Phenanthrolin (OP), ein DNA-Molek&uuml;l, Splei&szlig;en und Triplex-bildenden Oligonukleotide (TFOs), bekannt, dass bestimmte DNA-Sequenzen binden sind synthetische Nukleasen effizienter bei der anregenden gezielte Genom-&Auml;nderung. Wir zeigen, dass in kultivierten Zellen, OP-TFO Konjugaten gezielte DSBs ausl&ouml;sen. Ein OP-TFO mit einem eindeutigen Ziel war sehr effizient und Mutationen am Zielstandort fanden sich in etwa 10 % der behandelten Zellen, einschlie&szlig;lich kleine Deletionen am ehesten bei DSB-Reparatur von nonhomologous Ende Beitritt eingef&uuml;hrt. Wichtiger ist, wir fanden, dass als homologe Spender DNA cotransfected, gezielte genetischer Ver&auml;nderungen stattgefunden in hat &gt; 1,5 % der behandelten Zellen. Da Triplex-bildenden Sequenzen sind h&auml;ufig in Mensch und Maus Gene, OP-TFO Konjugaten stellen somit eine wichtige Klasse von standortspezifischen Nukleasen gezielte genetischer Ver&auml;nderungen. Nutzbarmachung von DNA-sch&auml;digenden Molek&uuml;le zu vorbestimmten genomische Websites, wie hier erreicht, sollte auch Einzug in die Mechanismen der DNA-Reparatur und Krebs bieten.

Triplex-bildenden Oligonukleotid-Phenanthrolin konjugiert f&uuml;r effiziente zielgerichtete Genom-&Auml;nderung.

L&#39;inefficienza della modificazione genetica di ricombinazione omologa pu&ograve; essere superato con l&#39;introduzione di un double-strand break (DSB) nella destinazione. Ingegneria endonucleases necessari, tuttavia, rimane un compito impegnativo che limita l&#39;applicazione generalizzata di modificazione genetica della nucleasi-driven. Segnaliamo qui che coniuga di orthophenanthroline (OP), un DNA fendendo la molecola, e formando triplex oligonucleotidi (TFOs), noti per associare specifiche sequenze di DNA, sono sintetici nucleases efficienti a stimolante modifiche mirate del genoma. Mostriamo che in cellule in coltura, coniugati OP-TFO inducono DSBs mirati. Un&#39;OP-TFO con un unico obiettivo era altamente efficiente, e mutazioni presso il sito di destinazione sono state trovate in circa il 10% delle cellule trattate, tra cui piccole delezioni probabilmente introdotte durante la riparazione DSB da unirsi nonhomologous fine. Soprattutto, abbiamo trovato che quando omologhe donatore del DNA era cotransfected, modificazione genetica mirata ha avvenuto &amp;gt; 1,5% di cellule trattate. Perch&eacute; triplex-formare sequenze sono frequenti nelle umane e geni del mouse, i coniugati OP-TFO pertanto costituiscono un&#39;importante classe di nucleases site-specific per la modificazione genetica mirata. Sfruttando molecole danneggiando DNA ai siti genomici predeterminati, come raggiunto qui, dovrebbe anche fornire incursioni in meccanismi di riparazione del DNA e il cancro.

Triplex-formatura del oligonucleotide-orthophenanthroline coniugati per modifica efficiente e mirata del genoma.

&#x76F8;&#x540C;&#x7D44;&#x63DB;&#x3048;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x4FEE;&#x98FE;&#x306E;&#x975E;&#x52B9;&#x7387;&#x6027;&#x306F;&#x3001;&#x30BF;&#x30FC;&#x30B2;&#x30C3;&#x30C8;&#x5185;&#x306E;&#x4E8C;&#x91CD;&#x9396;&#x5207;&#x65AD; &#xFF08;DSB&#xFF09; &#x306E;&#x5C0E;&#x5165;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x514B;&#x670D;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x5FC5;&#x8981;&#x3001;&#x9175;&#x7D20;&#x5DE5;&#x5B66;&#x3001;&#x30CC;&#x30AF;&#x30EC;&#x30A2;&#x30FC;&#x30BC;&#x99C6;&#x52D5;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x6539;&#x5909;&#x306E;&#x5E83;&#x7BC4;&#x306A;&#x9069;&#x7528;&#x3092;&#x5236;&#x9650;&#x3059;&#x308B;&#x3084;&#x308A;&#x304C;&#x3044;&#x306E;&#x3042;&#x308B;&#x4ED5;&#x4E8B;&#x305F;&#x3060;&#x3057;&#x3001;&#x307E;&#x307E;&#x306B;&#x306A;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005; &#x306F;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x5831;&#x544A;&#x306F;&#x3001;&#x62B1;&#x5408; orthophenanthroline (OP) DNA &#x306E;&#x5206;&#x5B50;&#x306F;&#x3001;&#x5272;&#x65AD;&#x3068; (TFOs)&#x3001;&#x4E09;&#x91CD;&#x9396;&#x5F62;&#x6210;&#x30AA;&#x30EA;&#x30B4;&#x30CC;&#x30AF;&#x30EC;&#x30AA;&#x30C1;&#x30C9;&#x306E;&#x7279;&#x5B9A;&#x306E; DNA &#x30B7;&#x30FC;&#x30B1;&#x30F3;&#x30B9;&#x3092;&#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C9;&#x3059;&#x308B;&#x77E5;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x5408;&#x6210;&#x6838;&#x9178;&#x523A;&#x6FC0;&#x306E;&#x6A19;&#x7684;&#x30B2;&#x30CE;&#x30E0;&#x4FEE;&#x6B63;&#x3067;&#x52B9;&#x7387;&#x7684;&#x3002;&#x57F9;&#x990A;&#x7D30;&#x80DE;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x30BF;&#x30FC;&#x30B2;&#x30C3;&#x30C8;&#x3092;&#x7D5E;&#x3063;&#x305F; Dsb OP &#x30C6;&#x30A3;&#x30A8;&#x30D5;&#x30AA;&#x30FC;&#x62B1;&#x5408;&#x4F53;&#x3092;&#x8A98;&#x767A;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;OP &#x30C6;&#x30A3;&#x30A8;&#x30D5;&#x30AA;&#x30FC;&#x4E00;&#x610F;&#x306E;&#x30BF;&#x30FC;&#x30B2;&#x30C3;&#x30C8;&#x3068;&#x9AD8;&#x52B9;&#x7387;&#x3068; DSB &#x306E;&#x4FEE;&#x5FA9;&#x4E2D;&#x306B;&#x975E;&#x76F8;&#x540C;&#x6027;&#x672B;&#x7AEF;&#x7D50;&#x5408;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x5C0E;&#x5165;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x5C0F;&#x3055;&#x306A;&#x524A;&#x9664;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x304C;&#x6700;&#x3082;&#x9AD8;&#x3044;&#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x6CBB;&#x7642;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x7D04; 10 &#xFF05; &#x3067;&#x3001;&#x30BF;&#x30FC;&#x30B2;&#x30C3;&#x30C8; &#x30FB; &#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x3067;&#x306E;&#x7A81;&#x7136;&#x5909;&#x7570;&#x304C;&#x898B;&#x3064;&#x304B;&#x308A;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x306F;&#x3001;&#x6211;&#x3005; &#x76F8;&#x540C;&#x30C9;&#x30CA;&#x30FC; DNA &#x306E; cotransfected &#x9803;&#x3001;&#x76EE;&#x6A19;&#x3068;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x6539;&#x5909;&#x5834;&#x6240;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x305F;&#x76EE;&#x6271;&#x308F;&#x308C;&#x305F;&#x30BB;&#x30EB;&#x306E; 1.5 &#xFF05;&#x3002;&#x4E09;&#x91CD;&#x9396;&#x5F62;&#x6210;&#x30B7;&#x30FC;&#x30B1;&#x30F3;&#x30B9;&#x306A;&#x306E;&#x3067;&#x4EBA;&#x9593;&#x306B;&#x983B;&#x7E41;&#x3057;&#x3001;OP &#x30C6;&#x30A3;&#x30A8;&#x30D5;&#x30AA;&#x30FC;&#x62B1;&#x5408;&#x4F53;&#x306E;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306F;&#x3001;&#x3057;&#x305F;&#x304C;&#x3063;&#x3066;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x56FA;&#x6709;&#x306E;&#x30CC;&#x30AF;&#x30EC;&#x30A2;&#x30FC;&#x30BC; &#x30BF;&#x30FC;&#x30B2;&#x30C3;&#x30C8;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x6539;&#x5909;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x30AF;&#x30E9;&#x30B9;&#x3092;&#x69CB;&#x6210;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x640D;&#x50B7; DNA &#x306E;&#x5206;&#x5B50;&#x6240;&#x5B9A;&#x306E;&#x30B2;&#x30CE;&#x30E0;&#x90E8;&#x4F4D;&#x306B;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x9054;&#x6210;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x6D3B;&#x7528;&#x3082;&#x9032;&#x51FA; DNA &#x4FEE;&#x5FA9;&#x3068;&#x304C;&#x3093;&#x306E;&#x30E1;&#x30AB;&#x30CB;&#x30BA;&#x30E0;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3057;&#x306A;&#x3051;&#x308C;&#x3070;&#x306A;&#x308A;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3002;

&#x4E09;&#x91CD;&#x9396;&#x5F62;&#x6210;&#x30AA;&#x30EA;&#x30B4;&#x30CC;&#x30AF;&#x30EC;&#x30AA;&#x30C1;&#x30C9; orthophenanthroline &#x52B9;&#x7387;&#x7684;&#x306A;&#x30BF;&#x30FC;&#x30B2;&#x30C3;&#x30C8;&#x3092;&#x7D5E;&#x3063;&#x305F;&#x30B2;&#x30CE;&#x30E0;&#x4FEE;&#x6B63;&#x306E;&#x62B1;&#x5408;&#x4F53;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#xB300;&#xC0C1;&#xC5D0; &#xC774;&#xC911; &#xAC00;&#xB2E5; &#xB098;&#xB204;&#xAE30; (DSB)&#xB97C; &#xB3C4;&#xC785; &#xD558; &#xC5EC; &#xB3D9;&#xC885; &#xC7AC;&#xC870;&#xD569; &#xD558; &#xC5EC; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xC870;&#xC791;&#xC758; &#xBE44;&#xD6A8;&#xC728;&#xC131;&#xC744; &#xADF9;&#xBCF5;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098;, &#xD544;&#xC694;&#xD55C;, endonucleases &#xACF5;&#xD559; nuclease &#xAE30;&#xBC18; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xC218;&#xC815; &#xAD11;&#xBC94;&#xC704; &#xD558; &#xAC8C; &#xC751;&#xC6A9; &#xD504;&#xB85C;&#xADF8;&#xB7A8;&#xC744; &#xC81C;&#xD55C; &#xD558;&#xB294; &#xB3C4;&#xC804; &#xACFC;&#xC81C; &#xB0A8;&#xC544; &#xC788;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; &#xC5EC;&#xAE30;&#xC5D0; &#xBCF4;&#xACE0; &#xD558;&#xB294; orthophenanthroline (OP), &#xBD84;&#xC790;, &#xACE0;&#xCC29; &#xD558;&#xB294; DNA&#xC758; &#xBCC0;&#xD654; &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; &#xC0BC;&#xBC15;&#xC790; &#xD615;&#xC131; oligonucleotides (TFOs), &#xD2B9;&#xC815; DNA &#xC2DC;&#xD000;&#xC2A4;&#xC5D0; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xD560; &#xC54C;&#xB824;&#xC9C4; &#xD569;&#xC131; nucleases &#xD6A8;&#xC728;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xC790;&#xADF9; &#xD0C0;&#xAC9F;&#xB41C; &#xAC8C;&#xB188; &#xC218;&#xC815;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xACBD;&#xC791;&#xB41C; &#xD55C; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0; OP TFO conjugates &#xD0C0;&#xAC9F;&#xB41C; DSBs &#xC720;&#xB3C4; &#xBCF4;&#xC5EC;. &#xACE0;&#xC720;&#xD55C; &#xB300;&#xC0C1;&#xC73C;&#xB85C; OP TFO&#xB294; &#xACE0;&#xD6A8;&#xC728;, &#xBC0F; &#xB300;&#xC0C1; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8;&#xC5D0;&#xC11C; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xC791;&#xC740; &#xC0AD;&#xC81C; &#xD655;&#xB960;&#xC774; DSB &#xC218;&#xB9AC; &#xD558;&#xB294; &#xB3D9;&#xC548; nonhomologous &#xB05D;&#xC5D0; &#xD569;&#xB958; &#xD558; &#xC5EC; &#xB3C4;&#xC785;&#xC744; &#xD3EC;&#xD568; &#xD55C; &#xCE58;&#xB8CC; &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xC57D; 10%&#xC5D0;&#xC11C; &#xBC1C;&#xACAC; &#xB410;&#xB2E4;. &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xAC83;&#xC740;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xB3D9;&#xC885; &#xAE30;&#xC99D;&#xC790; DNA cotransfected &#xB54C;, &#xD0C0;&#xAC9F;&#xB41C; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xC218;&#xC815;&#xC5D0; &#xC790;&#xB9AC;&#xB97C; &#xD588;&#xB2E4; &#xBC1C;&#xACAC; &amp;gt; &#xB300;&#xC6B0; &#xC140;&#xC758; 1.5%. &#xC2DC;&#xD000;&#xC2A4; &#xC0BC;&#xBC15;&#xC790;&#xB97C; &#xD615;&#xC131; &#xD558;&#xAE30; &#xB54C;&#xBB38;&#xC5D0; &#xC778;&#xAC04;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC790;&#xC8FC;&#xC640; &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4; &#xC720;&#xC804;&#xC790;, OP TFO conjugates &#xB530;&#xB77C;&#xC11C; &#xD0C0;&#xAC9F;&#xB41C; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xBCC0;&#xD615;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8;&#xBCC4; nucleases&#xC758; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xD074;&#xB798;&#xC2A4;&#xB97C; &#xAD6C;&#xC131; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC5EC;&#xAE30;, &#xB2EC;&#xC131;&#xC73C;&#xB85C; &#xBBF8;&#xB9AC; &#xACB0;&#xC815; &#xB41C; &#xAC8C;&#xB188; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8;&#xB85C; &#xBD84;&#xC790; DNA &#xC190;&#xC0C1; &#xD65C;&#xC6A9; &#xB610;&#xD55C; DNA &#xC218;&#xB9AC; &#xBC0F; &#xC554; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;&#xC73C;&#xB85C; &#xC9C4;&#xCD9C;&#xC744; &#xC81C;&#xACF5; &#xD574;&#xC57C; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xC0BC;&#xBC15;&#xC790; &#xD615;&#xC131; oligonucleotide orthophenanthroline &#xD6A8;&#xC728;&#xC801;&#xC778; &#xD0C0;&#xAC9F;&#xB41C; &#xAC8C;&#xB188; &#xC218;&#xC815;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xBCC0;&#xD654;.

La ineficiencia de la modificaci&oacute;n gen&eacute;tica por recombinaci&oacute;n hom&oacute;loga puede superarse por la introducci&oacute;n de una rotura de doble cadena (OSD) en el objetivo. Ingenier&iacute;a de las endonucleasas necesarias, sin embargo, sigue siendo una tarea dif&iacute;cil que limita la aplicaci&oacute;n generalizada de modificaci&oacute;n gen&eacute;tica basadas en la Nucleasa. Divulgamos aqu&iacute; que conjuga de ortofenantrolina (OP), ADN hendiendo la mol&eacute;cula, y triple-formando oligonucle&oacute;tidos (TFOs), conocidos para enlazar secuencias espec&iacute;ficas de ADN, son eficientes en estimulante modificaci&oacute;n dirigida del genoma sint&eacute;ticas nucleasas. Mostramos que en c&eacute;lulas cultivadas, conjugados de OP-TFO inducen los consejos escolares distritales. Un OP-TFO con un &uacute;nico objetivo era altamente eficiente, y se encontraron mutaciones en el sitio de destino en aproximadamente 10% de c&eacute;lulas tratadas, incluyendo peque&ntilde;as canceladuras probablemente introducidas durante la reparaci&oacute;n del OSD por nonhomologous end joining. Lo importante, encontramos que, cuando el donante hom&oacute;logo ADN era cotransfected, modificaci&oacute;n gen&eacute;tica dirigida tuvo lugar en &gt; 1.5% de c&eacute;lulas tratadas. Porque triplex-formando secuencias son frecuentes en humanos y genes de rat&oacute;n, conjugados de OP-TFO por lo tanto constituyen una clase importante de site-specific nucleasas modificaci&oacute;n gen&eacute;tica espec&iacute;fica. Aprovechamiento de mol&eacute;culas ADN-perjudicial a sitios gen&oacute;micos predeterminados, como aqu&iacute;, tambi&eacute;n debe proporcionar avances en los mecanismos de reparaci&oacute;n del ADN y c&aacute;ncer.

Triplex-formando oligonucle&oacute;tidos-ortofenantrolina conjuga para la modificaci&oacute;n del genoma espec&iacute;ficas eficiente.

&#x539F;&#x53D1;&#x6027;&#x7EA4;&#x6BDB;&#x662F;&#x611F;&#x5B98;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5668;&#xFF0C;&#x4ECE;&#x4E2D;&#x5FC3;&#x4F53;&#x9759;&#x6B62;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E2D;&#x751F;&#x6210;&#xFF0C;&#x5E76;&#x53D1;&#x73B0;&#x8868;&#x9762;&#x4E0A;&#x7684;&#x5927;&#x591A;&#x6570;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x7C7B;&#x578B;&#xFF0C;&#x4ECE;&#x5B83;&#x90A3;&#x91CC;&#x63A7;&#x5236;&#x91CD;&#x8981;&#x7684;&#x751F;&#x7406;&#x8FC7;&#x7A0B;&#x3002;&#x819C;&#x86CB;&#x767D;&#x53C2;&#x4E0E;&#x9065;&#x611F;&#x80DE;&#x5916;&#x73AF;&#x5883;&#x4E2D;&#x7684;&#x7279;&#x5B9A;&#x8BBE;&#x7F6E;&#x90FD;&#x96C6;&#x4E2D;&#x5728;&#x7EA4;&#x6BDB;&#xFF0C;&#x5305;&#x62EC; G &#x8026;&#x5408;&#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x53D7;&#x4F53; (GPCRs) &#x5185;&#x3002;&#x5927;&#x591A;&#x6570; GPCRs &#x53D7; &beta;-arrestins&#x3001; betaarr1 &#x548C; betaarr2&#xFF0C;&#x63A7;&#x5236;&#x5176;&#x4FE1;&#x53F7;&#x548C;&#x5185;&#x541E;&#x4F5C;&#x7528;&#xFF0C;&#x8FD9;&#x8868;&#x660E; betaarrs &#x4E5F;&#x53EF;&#x80FD;&#x5728;&#x539F;&#x53D1;&#x6027;&#x7EA4;&#x6BDB;&#x529F;&#x80FD;&#x3002;

&#x9488;&#x5BF9; &beta;-arrestin2 &#x7684;&#x4E2D;&#x5FC3;&#x4F53;&#x548C;&#x539F;&#x53D1;&#x6027;&#x7EA4;&#x6BDB;&#xFF1A; &#x63A7;&#x5236;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6269;&#x6563;&#x7684;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;

The primary cilium is a sensory organelle generated from the centrosome in quiescent cells and found at the surface of most cell types, from where it controls important physiological processes. Specific sets of membrane proteins involved in sensing the extracellular milieu are concentrated within cilia, including G protein coupled receptors (GPCRs). Most GPCRs are regulated by beta-arrestins, betaarr1 and betaarr2, which control both their signalling and endocytosis, suggesting that betaarrs may also function at primary cilium.

Targeting of beta-arrestin2 to the centrosome and primary cilium: role in cell proliferation control.

Le cil primaire est un organite sensoriels g&eacute;n&eacute;r&eacute; &agrave; partir du centrosome dans les cellules quiescentes et trouv&eacute; &agrave; la surface de la plupart des types de cellules, d&#39;o&ugrave; il contr&ocirc;le les processus physiologiques importants. Des ensembles sp&eacute;cifiques de prot&eacute;ines membranaires impliqu&eacute;s dans le milieu extracellulaire de d&eacute;tection sont concentr&eacute;s dans les cils, y compris les r&eacute;cepteurs G coupl&eacute;s aux prot&eacute;ines (RCPG). La plupart des RCPG sont r&eacute;glement&eacute;es par la b&ecirc;ta-arrestins, betaarr1 et betaarr2, qui contr&ocirc;lent leur signalisation et endocytose, sugg&eacute;rant que les betaarrs peuvent &eacute;galement fonctionner au cil primaire.

Ciblage des b&ecirc;ta-arrestin2 aux centrosomes et cil primaire : r&ocirc;le dans le contr&ocirc;le de la prolif&eacute;ration cellulaire.

Die prim&auml;re Zilie ist eine sensorische Organelle, die aus dem Zentrosom in Ruhezustand Zellen generiert und fand an der Oberfl&auml;che der meisten Zelltypen, von wo es wichtige physiologische Prozesse steuert. Bestimmte S&auml;tze von Membranproteinen, die Sensorik des extrazellul&auml;ren Milieus beteiligt sind innerhalb der Zilien, einschlie&szlig;lich G-Protein-gekoppelte Rezeptoren (GPCRs) konzentriert. Die meisten GPCRs werden geregelt durch Beta-Arrestins, betaarr1 und betaarr2, die Steuern ihrer Signalisierung und der Endozytose, darauf hindeutet, dass Betaarrs auch bei prim&auml;ren Zilie fungieren kann.

Ausrichtung der Beta-arrestin2 der Zentrosom und prim&auml;re Zilie: Rolle bei der Verbreitung Zellensteuerung.

Il cilio primario &egrave; un organello sensitivo generato da centrosoma nelle cellule quiescenti e trovati sulla superficie della maggior parte dei tipi di cellule, da dove si controlla importanti processi fisiologici. Set specifici di proteine di membrana coinvolte nel rilevamento del milieu extracellulare sono concentrati all&#39;interno di ciglia, tra cui i recettori accoppiati proteine G (GPCR). La maggior parte dei GPCR sono regolati da beta-arrestins, betaarr1 e betaarr2, che controllano sia la loro segnalazione ed endocitosi, suggerendo che betaarrs pu&ograve; funzionare anche a cilio primario.

Targeting di beta-arrestin2 il centrosoma e cilio primario: ruolo nel controllo di proliferazione cellulare.

&#x4E00;&#x6B21;&#x7E4A;&#x6BDB;&#x4F11;&#x6B62;&#x671F;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x4E2D;&#x5FC3;&#x4F53;&#x304B;&#x3089;&#x751F;&#x6210;&#x611F;&#x899A;&#x7D30;&#x80DE;&#x5C0F;&#x5668;&#x5B98;&#x3067;&#x3042;&#x308A;&#x3001;&#x305D;&#x308C;&#x306F;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x751F;&#x7406;&#x7684;&#x30D7;&#x30ED;&#x30BB;&#x30B9;&#x5236;&#x5FA1;&#x304B;&#x3089;&#x3001;&#x307B;&#x3068;&#x3093;&#x3069;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x30BF;&#x30A4;&#x30D7;&#x306E;&#x8868;&#x9762;&#x3067;&#x767A;&#x898B;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x7D30;&#x80DE;&#x5916;&#x7684;&#x74B0;&#x5883;&#x30BB;&#x30F3;&#x30B7;&#x30F3;&#x30B0;&#x306B;&#x95A2;&#x4E0E;&#x3059;&#x308B;&#x819C;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x7279;&#x5B9A;&#x306E;&#x30BB;&#x30C3;&#x30C8;&#x306F;&#x3001;G &#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x5171;&#x5F79;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53; &#xFF08;Gpcr&#xFF09; &#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x7E4A;&#x6BDB;&#x5185;&#x306B;&#x96C6;&#x4E2D;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x307B;&#x3068;&#x3093;&#x3069;&#x306E; Gpcr &#x4E21;&#x65B9;&#x306E;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#x3068;&#x30A8;&#x30F3;&#x30C9;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9;&#x3092;&#x5236;&#x5FA1;&#x3001;&beta; &#x30A2;&#x30EC;&#x30B9;&#x30C1;&#x30F3;&#x3001;betaarr1&#x3001;betaarr2&#x3001;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066; betaarrs &#x304C;&#x307E;&#x305F;&#x4E00;&#x6B21;&#x7E4A;&#x6BDB;&#x3067;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x5506;&#x3057;&#x3066;&#x898F;&#x5236;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&Beta;-arrestin2 &#x4E2D;&#x5FC3;&#x4F53;&#x3068;&#x4E00;&#x6B21;&#x7E4A;&#x6BDB;&#x306E;&#x30BF;&#x30FC;&#x30B2;&#x30C3;&#x30C8;&#xFF1A; &#x7D30;&#x80DE;&#x5897;&#x6B96;&#x5236;&#x5FA1;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x5F79;&#x5272;&#x3002;

&#xAE30;&#xBCF8; cilium &#xAC10;&#xAC01; &#xD2B8;&#xB294; centrosome &#xBB34;&#xBD80;&#xD558; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0;&#xC11C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC0DD;&#xC131; &#xB41C; &#xC774;&#xBA70;, &#xADF8;&#xAC83;&#xC740; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xC0DD;&#xB9AC; &#xC801; &#xACFC;&#xC815;&#xC744; &#xCEE8;&#xD2B8;&#xB864;&#xC5D0;&#xC11C; &#xB300;&#xBD80;&#xBD84;&#xC758; &#xC140; &#xC885;&#xB958;&#xC758; &#xD45C;&#xBA74;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBC1C;&#xACAC;. &#xBA64;&#xBE0C;&#xB808;&#xC778; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC138;&#xD3EC; &#xC678; &#xD658;&#xACBD; &#xAC10;&#xC9C0;&#xC5D0; &#xAD00;&#xB828; &#xB41C; &#xD2B9;&#xC815; &#xC9D1;&#xD569;&#xC740; &#xC18D;&#xB208;&#xC379;, G &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xACB0;&#xD569; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; (GPCRs) &#xB4F1;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC9D1;&#xC911;. &#xB300;&#xBD80;&#xBD84;&#xC758; Gpcrs&#xC740; betaarrs &#xAE30;&#xBCF8; cilium&#xC5D0; &#xB610;&#xD55C; &#xC791;&#xB3D9; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xC81C;&#xC548; &#xBAA8;&#xB450; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC758; &#xC2E0;&#xD638; &#xBC0F; &#xC81C;&#xC5B4; endocytosis, &#xBCA0;&#xD0C0;-arrestins, betaarr1 betaarr2, &#xC758;&#xD574; &#xADDC;&#xC81C; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Centrosome &#xBC0F; &#xAE30;&#xBCF8; cilium &#xBCA0;&#xD0C0;-arrestin2&#xC758; &#xB300;&#xC0C1;: &#xC140; &#xD655;&#xC0B0; &#xC81C;&#xC5B4;&#xC758; &#xC5ED;&#xD560;.

El cilio primario es un organelo sensorial generado a partir del centrosoma en las c&eacute;lulas quiescentes y en la superficie de la mayor&iacute;a de los tipos de c&eacute;lulas, desde donde controla importantes procesos fisiol&oacute;gicos. Conjuntos espec&iacute;ficos de membrana prote&iacute;nas implicadas en el medio extracelular de detecci&oacute;n se concentran en los cilios, incluyendo los receptores acoplados a prote&iacute;nas G (GPCRs). Mayor&iacute;a GPCRs son reguladas por beta-arrestins, betaarr1 y betaarr2, que controlan su se&ntilde;alizaci&oacute;n y endocitosis, sugiriendo que la betaarrs tambi&eacute;n puede funcionar en el cilio primario.

De beta-arrestin2 al centrosoma y cilio primario: papel en el control de la proliferaci&oacute;n celular.

&#x9000;&#x7F29;&#x7684; Cannata &#x7B49;&#x4EBA;&#xFF0C;&#x4E09;&#x94FE;&#x5F62;&#x6210;&#x5BE1;&#x6838;&#x82F7;&#x9178;&#x90BB;&#x4E8C;&#x6C2E;&#x83F2;&#x5171;&#x8F6D;&#x9AD8;&#x6548;&#x76EE;&#x6807;&#x57FA;&#x56E0;&#x7EC4;&#x4FEE;&#x6539;&#x3002;

Retraction for Cannata et al., Triplex-forming oligonucleotide-orthophenanthroline conjugates for efficient targeted genome modification.

R&eacute;traction de Cannata et coll., formant des Triplex oligonucl&eacute;otide-orthoph&eacute;nantroline conjugu&eacute;s pour modification du g&eacute;nome cibl&eacute;e efficace.

Retraktion f&uuml;r Cannata Et Al., konjugiert Triplex-bildenden Oligonukleotid-Phenanthrolin f&uuml;r effiziente zielgerichtete Genom-&Auml;nderung.

Retrazione per Cannata et al., Triplex-formatura del oligonucleotide-orthophenanthroline coniugati per modifica efficiente e mirata del genoma.

&#x30EA;&#x30C8;&#x30E9;&#x30AF;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x96C6;&#x3089;&#x3001;&#x4E09;&#x91CD;&#x9396;&#x5F62;&#x6210;&#x30AA;&#x30EA;&#x30B4;&#x30CC;&#x30AF;&#x30EC;&#x30AA;&#x30C1;&#x30C9; orthophenanthroline &#x52B9;&#x7387;&#x7684;&#x306A;&#x30BF;&#x30FC;&#x30B2;&#x30C3;&#x30C8;&#x3092;&#x7D5E;&#x3063;&#x305F;&#x30B2;&#x30CE;&#x30E0;&#x4FEE;&#x6B63;&#x306E;&#x62B1;&#x5408;&#x4F53;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

Cannata &#xADF8; &#xC678; &#xC5EC;&#xB7EC;&#xBD84;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC218; &#xCD95;&#xB825;, &#xC0BC;&#xBC15;&#xC790; &#xD615;&#xC131; oligonucleotide orthophenanthroline &#xD6A8;&#xC728;&#xC801;&#xC778; &#xD0C0;&#xAC9F;&#xB41C; &#xAC8C;&#xB188; &#xC218;&#xC815;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xBCC0;&#xD654;.

Retracci&oacute;n para Cannata et al., Triplex-formando oligonucle&oacute;tidos-ortofenantrolina conjuga para la modificaci&oacute;n del genoma espec&iacute;ficas eficiente.

SERPINA3 (&#x4E1D;&#x6C28;&#x9178;&#x86CB;&#x767D;&#x9176;&#x6291;&#x5236;&#x80BD;&#x9176;&#x6291;&#x5236;&#x5242;&#x514B;&#x62C9;&#x5FB7; A &#x6210;&#x5458; 3)&#xFF0C;&#x4E5F;&#x79F0;&#x4E3A; a1-&#x80F0;&#xFF0C;&#x662F;&#x6240;&#x6D89;&#x53CA;&#x7684;&#x8303;&#x56F4;&#x5E7F;&#x6CDB;&#x7684;&#x751F;&#x7269;&#x8FC7;&#x7A0B;&#x7684;&#x4E1D;&#x6C28;&#x9178;&#x86CB;&#x767D;&#x9176;&#x6291;&#x5236;&#x5242;&#x3002;&#x6700;&#x8FD1;&#xFF0C;&#x5B83;&#x8868;&#x660E;&#x8981;&#x5728;&#x4EBA;&#x7C7B;&#x80CE;&#x76D8;&#x75BE;&#x75C5;&#x4E2D;&#x534F;&#x4F1A;&#x4E0E;&#x7532;&#x57FA;&#x7684; 5&#39; &#x975E;&#x7F16;&#x7801;&#x533A;&#x57FA;&#x56E0;&#x7684;&#x4E0A;&#x8C03;&#x3002;&#x5728;&#x672C;&#x7814;&#x7A76;&#x4E2D;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x5C55;&#x793A;&#x7684; SERPINA3 &#x542F;&#x52A8;&#x5B50;&#x4ECB;&#x5BFC;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x4E09;&#x4E2A;&#x8F6C;&#x5F55;&#x56E0;&#x5B50; &#xFF08;TFs&#xFF09; &#xFF08;SP1&#x3001; MZF1 &#x548C; ZBTB7B&#xFF09;&#x3001; &#x4F4D;&#x4E8E;&#x5185;&#x90E8;&#x542F;&#x52A8;&#x5B50;&#xFF0C;&#x6B63;&#x5728;&#x4E00;&#x8D2F;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x5230;&#x8F83;&#x9AD8;&#x7EA7;&#x522B;&#x6BD4; G T &#x7B49;&#x4F4D;&#x57FA;&#x56E0;&#x6216;&#x65E0;&#x6DFB;&#x52A0; TFs &#x7684;&#x611F;&#x5E94;&#x53D6;&#x51B3;&#x4E8E; rs1884082 &#x5355;&#x6838;&#x82F7;&#x9178;&#x591A;&#x6001;&#x6027; (SNP) &#x7684;&#x6C34;&#x5E73;&#x3002;&#x5F53;&#x542F;&#x52A8;&#x5B50;&#x88AB;&#x7532;&#x57FA;&#x5316;&#x65F6;&#xFF0C;&#x5BF9; ZBTB7B &#x7684;&#x53CD;&#x5E94;&#x662F;&#x5177;&#x4F53; (G &#x7B49;&#x4F4D;&#x57FA;&#x56E0;&#x5F3A;&#x70C8;&#x8BF1;&#x5BFC;&#xFF0C;&#x867D;&#x7136; T &#x7B49;&#x4F4D;&#x57FA;&#x56E0;&#x662F;&#x5F3A;&#x70C8;&#x4E0B;&#x8C03;) &#x7B49;&#x4F4D;&#x57FA;&#x56E0;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x5EFA;&#x8BAE;&#x81EA;&#x9002;&#x5E94;&#x6A21;&#x578B;&#x6765;&#x89E3;&#x91CA;&#x89C4;&#x7A0B;&#x80CE;&#x76D8;&#x529F;&#x80FD;&#x548C;&#x7A33;&#x6001;&#x7684;&#x5174;&#x8DA3;&#x3002;SERPINA3 &#x5175;&#x56E2; 3 &#x4E2D;&#x7684;&#x8FC7;&#x5EA6;&#x8868;&#x8FBE;&#x7EC6;&#x80DE;&#xFF0C;&#x6ECB;&#x517B;&#x5C42;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6A21;&#x578B;&#xFF0C;&#x51CF;&#x5C11;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7C98;&#x9644;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5916;&#x57FA;&#x8D28;&#x548C;&#x76F8;&#x90BB;&#x7684;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#xFF0C;&#x4F46;&#x80FD;&#x591F;&#x4FDD;&#x62A4;&#x4ED6;&#x4EEC;&#x514D;&#x4E8E;&#x51CB;&#x4EA1;&#xFF0C;&#x8FD9;&#x8868;&#x660E;&#xFF0C;&#x8FD9;&#x4E00;&#x56E0;&#x7D20;&#x53EF;&#x80FD;&#x662F;&#x6709;&#x5BB3;&#x5728;&#x9AD8;&#x5242;&#x91CF;&#x7684;&#x4E00;&#x79CD;&#x65B9;&#x5F0F;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x5728;&#x4E0D;&#x540C;&#x7684;&#x4EBA;&#x7C7B;&#x79CD;&#x7FA4;&#x7684; T &#x7B49;&#x4F4D;&#x57FA;&#x56E0;&#x51FA;&#x73B0;&#x5BB9;&#x6613;&#x5BAB;&#x5185;&#x53D1;&#x80B2;&#x5230;&#x5185;&#x5B50;&#x5BAB;&#x589E;&#x957F;&#x9650;&#x5236; &#xFF08;&#x8FDF;&#x7F13;&#xFF09;&#xFF0C;&#x867D;&#x7136; G &#x7B49;&#x4F4D;&#x57FA;&#x56E0;&#x4F4D;&#x4E8E;&#x7B2C;&#x4E8C;&#x4E2A;&#x5916;&#x663E;&#x5B50; (rs4634) &#x7B2C;&#x4E8C;&#x4E2A;&#x5355;&#x6838;&#x82F7;&#x9178;&#x591A;&#x6001;&#x6027;&#x5728;&#x589E;&#x52A0;&#x5148;&#x5146;&#x5B50;&#x75EB;&#x7684;&#x5371;&#x9669;&#x4E2D;&#x663E;&#x793A;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x7ED3;&#x679C;&#x63D0;&#x4F9B;&#x673A;&#x68B0; SERPINA3 &#x53C2;&#x4E0E;&#x80CE;&#x76D8;&#x75BE;&#x75C5;&#xFF0C;&#x901A;&#x8FC7;&#x5176;&#x8C03;&#x63A7;&#x7684;&#x8868;&#x89C2;&#x9057;&#x4F20;&#x3001; &#x9057;&#x4F20;&#x7EC4;&#x5408;&#x548C; TF &#x4ECB;&#x5BFC;&#x7684;&#x89C4;&#x4F8B;&#x5185;&#x7684;&#x610F;&#x89C1;&#x3002;

&#x9057;&#x4F20;&#x548C;&#x8868;&#x89C2;&#x9057;&#x4F20;&#x673A;&#x5236;&#x534F;&#x4F5C;&#x63A7;&#x5236; SERPINA3 &#x8868;&#x8FBE;&#x548C;&#x5176;&#x4E0E;&#x80CE;&#x76D8;&#x75BE;&#x75C5;&#x7684;&#x5173;&#x8054;&#x3002;

SERPINA3 (Serpin peptidase inhibitor clade A member 3), also known as a1-antichymotrypsin, is a serine protease inhibitor involved in a wide range of biological processes. Recently, it has been shown to be up-regulated in human placental diseases in association with a hypomethylation of the 5' region of the gene. In the present study, we show that the promoter of SERPINA3 is transcriptionally activated by three transcription factors (TFs) (SP1, MZF1 and ZBTB7B), the level of induction being dependent on the rs1884082 single nucleotide polymorphism (SNP) located inside the promoter, the T allele being consistently induced to a higher level than the G, with or without added TFs. When the promoter was methylated, the response to ZBTB7B was allele specific (the G allele was strongly induced, while the T allele was strongly down-regulated). We propose an adaptive model to explain the interest of such a regulation for placental function and homeostasis. Overexpression of SERPINA3 in JEG-3 cells, a trophoblast cell model, decreased cell adhesion to the extracellular matrix and to neighboring cells, but protects them from apoptosis, suggesting a way by which this factor could be deleterious at high doses. In addition, we show in different human populations that the T allele appears to predispose to Intra Uterine Growth Restriction (IUGR), while a G allele at a second SNP located in the second exon (rs4634) increases the risk of preeclampsia. Our results provide mechanistic views inside the involvement of SERPINA3 in placental diseases, through its regulation by a combination of epigenetic, genetic and TF-mediated regulations.

Genetic and epigenetic mechanisms collaborate to control SERPINA3 expression and its association with placental diseases.

SERPINA3 Serpin peptidase inhibiteur du clade A membre (3), &eacute;galement connu sous le nom a1-antichymotrypsine, est un inhibiteur de prot&eacute;ase de s&eacute;rine impliqu&eacute; dans un large &eacute;ventail de processus biologiques. R&eacute;cemment, il s&#39;est av&eacute;r&eacute; &ecirc;tre r&eacute;gul&eacute;e dans les maladies placentaires humaines associ&eacute;e &agrave; une hypom&eacute;thylation de la r&eacute;gion 5&#39; du g&egrave;ne. Dans la pr&eacute;sente &eacute;tude, nous montrons que le promoteur de SERPINA3 est activ&eacute; transcription par trois facteurs de transcription (TFs) (SP1, MZF1 et ZBTB7B), le niveau d&#39;induction &eacute;tant &agrave; la charge sur le polymorphisme de nucl&eacute;otides rs1884082 (SNP) situ&eacute; &agrave; l&#39;int&eacute;rieur du promoteur, l&#39;all&egrave;le T &eacute;tant syst&eacute;matiquement induite &agrave; un niveau plus &eacute;lev&eacute; que le G, avec ou sans addition de TFs. Lorsque le promoteur a &eacute;t&eacute; m&eacute;thyl&eacute;, la r&eacute;ponse de ZBTB7B &eacute;tait all&egrave;le sp&eacute;cifique (l&#39;all&egrave;le G a &eacute;t&eacute; fortement induite, alors que l&#39;all&egrave;le T &eacute;tait fortement diminu&eacute;es). Nous proposons un mod&egrave;le adaptatif pour expliquer l&#39;int&eacute;r&ecirc;t d&#39;un tel r&egrave;glement pour la fonction placentaire et l&#39;hom&eacute;ostasie. La surexpression de SERPINA3 JEG-3 cellules, un mod&egrave;le de cellules trophoblastiques, diminue l&#39;adh&eacute;rence de cellules de la matrice extracellulaire et de cellules voisines, mais prot&egrave;ge contre l&#39;apoptose, ce qui sugg&egrave;re un moyen par lequel ce facteur pourrait &ecirc;tre nocive &agrave; fortes doses. En outre, nous montrons dans diff&eacute;rentes populations humaines que l&#39;all&egrave;le T semble pr&eacute;disposer &agrave; Intra ut&eacute;rine croissance Restriction (RCIU), alors qu&#39;un all&egrave;le de G &agrave; un deuxi&egrave;me SNP situ&eacute; dans le deuxi&egrave;me exon (rs4634) augmente le risque de pr&eacute;&eacute;clampsie. Nos r&eacute;sultats avec une vue m&eacute;caniste &agrave; l&#39;int&eacute;rieur de l&#39;implication des SERPINA3 dans les maladies placentaires, par le biais de son r&egrave;glement par une combinaison de l&#39;&eacute;pig&eacute;n&eacute;tique, g&eacute;n&eacute;tiques et de la r&eacute;glementation induite par le TF.

Les m&eacute;canismes g&eacute;n&eacute;tiques et &eacute;pig&eacute;n&eacute;tiques collaborent au contr&ocirc;le SERPINA3 expression et son association avec les maladies placentaires.

SERPINA3 (Serpin Peptidase-Hemmer Klade A Mitglied 3), auch bekannt als a1-Antichymotrypsin, ist eine Serin-Proteasen-Inhibitor, der eine Vielzahl von biologischen Prozessen beteiligt. Vor kurzem hat es gezeigt oben-geregelt in menschlichen Plazenta Krankheiten in Verbindung mit einer Hypomethylierung der 5&#39; Region des Gens sein. In der vorliegenden Studie zeigen wir, dass der Veranstalter der SERPINA3 wird durch drei Transkriptionsfaktoren (TFs) (SP1, MZF1 und ZBTB7B) transcriptionally aktiviert, das Niveau der Induktion, die Abh&auml;ngigkeit von der rs1884082 single Nucleotide Polymorphism (SNP) innerhalb der Projekttr&auml;ger, der T-Allel wird konsequent auf ein h&ouml;heres Niveau als die G, induziert, mit oder ohne hinzugef&uuml;gt TFs. Wenn der Projekttr&auml;ger methyliert war, war die Antwort auf ZBTB7B Allel-spezifische (G-Allel wurde stark ausgel&ouml;st, w&auml;hrend die T-Allel stark unten-geregelt war,). Wir schlagen eine adaptive Modell, um das Interesse einer solchen Verordnung f&uuml;r Plazenta-Funktion und Hom&ouml;ostase zu erkl&auml;ren. Eine &Uuml;berexpression von SERPINA3 JEG-3 Zellen, ein Trophoblast Zelle Modell, sank der Zelladh&auml;sion, der extrazellul&auml;ren Matrix und benachbarte Zellen, aber sch&uuml;tzt sie vor Apoptosis, schl&auml;gt eine M&ouml;glichkeit, die diesen Faktor sch&auml;dlichen in hohen Dosen werden k&ouml;nnte. Dar&uuml;ber hinaus zeigen wir in verschiedenen menschlichen Populationen, die die T-Allel zu Intra-Uterine Wachstum Beschr&auml;nkung (IUGR) zusammen, pr&auml;disponieren scheint, w&auml;hrend ein G-Allel an einem zweiten SNP befindet sich in der zweiten Exon (rs4634) das Risiko von Pr&auml;eklampsie erh&ouml;ht. Unsere Ergebnisse bieten mechanistische Ansichten innerhalb der Einbeziehung der SERPINA3 in Plazenta Krankheiten, durch seine Verordnung durch eine Kombination von epigenetischen, genetische und TF-vermittelte Regelungen.

Genetischen und epigenetische Mechanismen Arbeiten zur Kontrolle SERPINA3 Ausdruck und seine Verkn&uuml;pfung mit der Plazenta Krankheiten.

SERPINA3 (serpina peptidasi inibitore clade A membro 3), noto anche come a1-antichimotripsina, &egrave; un inibitore della serin proteasi coinvolto in un&#39;ampia gamma di processi biologici. Recentemente, &egrave; stato dimostrato essere up-regolate in malattie placentare umane in associazione con un&#39;ipometilazione della regione 5&#39; del gene. Nel presente studio, ci mostrano che il promotore del SERPINA3 &egrave; transcriptionally attivato da tre fattori di trascrizione (TFs) (SP1, MZF1 e ZBTB7B), il livello di induzione dipende rs1884082 single nucleotide polymorphism (SNP) situato all&#39;interno del promotore, l&#39;allele T costantemente essere indotto ad un livello superiore rispetto a G, con o senza aggiunta di TFs. Quando il promotore era metilato, la risposta al ZBTB7B era allele specifica (l&#39;allele G era fortemente indotta, mentre l&#39;allele T era fortemente gi&ugrave;-regolato). Vi proponiamo un modello adattivo per spiegare l&#39;interesse di tale regolamento per funzione placentare e l&#39;omeostasi. Sovraespressione di SERPINA3 JEG-3 celle, un modello di cella trofoblasto, diminuito di adesione delle cellule alla matrice extracellulare e a celle vicine, ma li protegge dall&#39;apoptosi, suggerendo un modo con cui questo fattore potrebbe essere deleterio a dosi elevate. Inoltre, vi mostriamo in diverse popolazioni umane che l&#39;allele T sembra predisporre a Intra uterino crescita restrizione (IUGR), mentre un allele G presso un SNP secondo situato nel secondo esone (rs4634) aumenta il rischio di preeclampsia. I nostri risultati forniscono viste meccanicistiche all&#39;interno il coinvolgimento degli SERPINA3 nelle malattie placentare, attraverso il suo regolamento da una combinazione di genetica, epigenetica e regolamenti TF-mediata.

Meccanismi genetici ed epigenetici collaborano al controllo espressione SERPINA3 e la sua associazione con malattie placentare.

SERPINA3 &#xFF08;&#x30BB;&#x30EB;&#x30D4;&#x30F3; &#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C0;&#x30FC;&#x30BC;&#x963B;&#x5BB3;&#x5264;&#x30AF;&#x30EC;&#x30FC;&#x30C9; A &#x4F1A;&#x54E1; 3&#xFF09;&#x3001;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x77E5;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x751F;&#x7269;&#x5B66;&#x7684;&#x30D7;&#x30ED;&#x30BB;&#x30B9;&#x306E;&#x5E83;&#x3044;&#x7BC4;&#x56F2;&#x3067;&#x95A2;&#x4E0E;&#x3059;&#x308B;&#x30BB;&#x30EA;&#x30F3; &#x30D7;&#x30ED;&#x30C6;&#x30A2;&#x30FC;&#x30BC;&#x963B;&#x5BB3; a1 antichymotrypsin &#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x6700;&#x8FD1;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x4EBA;&#x9593;&#x306E;&#x80CE;&#x76E4;&#x75BE;&#x60A3;&#x306B;&#x95A2;&#x9023;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x4F4E;&#x3044;&#x30E1;&#x30C1;&#x30EB;&#x5316;&#x306F;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E; 5&#39; &#x9818;&#x57DF;&#x304C;&#x8ABF;&#x6574;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x793A;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x672C;&#x7814;&#x7A76;&#x3067;&#x306F;, SERPINA3 &#x306E;&#x30D7;&#x30ED;&#x30E2;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x767A;&#x73FE;&#x8ABF;&#x7BC0; 3 &#x306E;&#x8EE2;&#x5199;&#x56E0;&#x5B50; (TFs) (SP1&#x3001;MZF1&#x3001;ZBTB7B) &#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6;&#x306B;&#x306A;&#x308B;&#x3001;rs1884082 &#x5358;&#x4E00;&#x30CC;&#x30AF;&#x30EC;&#x30AA;&#x30C1;&#x30C9;&#x591A;&#x578B; (SNP) &#x306B;&#x4F9D;&#x5B58;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x8A98;&#x5C0E;&#x306E;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x3068; G &#x3088;&#x308A;&#x9AD8;&#x3044;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x306B;&#x4E00;&#x8CAB;&#x3057;&#x3066;&#x8A98;&#x5C0E;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B; T &#x306E;&#x5BFE;&#x7ACB;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x30D7;&#x30ED;&#x30E2;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x306E;&#x5185;&#x5074;&#x306B;&#x3042;&#x308B;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x306A;&#x304F; TFs &#x3092;&#x8FFD;&#x52A0;&#x8868;&#x793A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;ZBTB7B &#x3078;&#x306E;&#x5FDC;&#x7B54; (T &#x30A2;&#x30EC;&#x30EB;&#x5F37;&#x304F;&#x30C0;&#x30A6;&#x30F3;&#x898F;&#x5236;&#x4E2D; G &#x30A2;&#x30EC;&#x30EB;&#x5F37;&#x304F;&#x3001;&#x8A98;&#x5C0E;&#x3055;&#x308C;&#x305F;) &#x7279;&#x5B9A;&#x306E;&#x5BFE;&#x7ACB;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x30D7;&#x30ED;&#x30E2;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC; &#x30E1;&#x30C1;&#x30EB;&#x5316;&#x3055;&#x308C;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306A;&#x898F;&#x5236;&#x80CE;&#x76E4;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3068;&#x6052;&#x5E38;&#x6027;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x8208;&#x5473;&#x3092;&#x8AAC;&#x660E;&#x3059;&#x308B;&#x9069;&#x5FDC;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x3092;&#x63D0;&#x6848;&#x3059;&#x308B;.&#x682A; 3 SERPINA3 &#x306E;&#x904E;&#x5270;&#x767A;&#x73FE;&#x7D30;&#x80DE;&#x3001;&#x6804;&#x990A;&#x819C;&#x7D30;&#x80DE;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x3001;&#x7D30;&#x80DE;&#x63A5;&#x7740;&#x3068;&#x7D30;&#x80DE;&#x5916;&#x30DE;&#x30C8;&#x30EA;&#x30C3;&#x30AF;&#x30B9;&#x3068;&#x96A3;&#x63A5;&#x30BB;&#x30EB;&#x306B;&#x6E1B;&#x5C11;&#x3057;&#x305F;&#x304C;&#x3001;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x3053;&#x306E;&#x8981;&#x56E0;&#x304C;&#x9AD8;&#x7528;&#x91CF;&#x3067;&#x6709;&#x5BB3;&#x304B;&#x3082;&#x3057;&#x308C;&#x306A;&#x3044;&#x65B9;&#x6CD5;&#x306E;&#x793A;&#x5506;&#x30A2;&#x30DD;&#x30C8;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9;&#x304B;&#x3089;&#x305D;&#x308C;&#x3089;&#x3092;&#x4FDD;&#x8B77;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x3001;&#x79C1;&#x9054;&#x306F; T &#x30A2;&#x30EC;&#x30EB; G &#x30A2;&#x30EA;&#x30EB; 2 &#x756A;&#x76EE;&#x306E;&#x30A8;&#x30AF;&#x30BD;&#x30F3; (rs4634) &#x306B;&#x3042;&#x308B; 2 &#x756A;&#x76EE;&#x306E; SNP &#x306F;&#x5B50;&#x7647;&#x524D;&#x75C7;&#x306E;&#x30EA;&#x30B9;&#x30AF;&#x304C;&#x5897;&#x52A0;&#x3057;&#x306A;&#x304C;&#x3089;&#x5185;&#x5B50;&#x5BAE;&#x306E;&#x6210;&#x9577;&#x5236;&#x9650; (IUGR) &#x3092;&#x3057;&#x5411;&#x3051;&#x308B;&#x306B;&#x8868;&#x793A;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x5225;&#x306E;&#x4EBA;&#x9593;&#x306E;&#x96C6;&#x56E3;&#x306B;&#x793A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005; &#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x306F;&#x3001;SERPINA3 &#x306E;&#x95A2;&#x4E0E;&#x3001;&#x30A8;&#x30D4;&#x30B8;&#x30A7;&#x30CD;&#x30C6;&#x30A3;&#x30C3;&#x30AF;&#x306A;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x7D44;&#x307F;&#x5408;&#x308F;&#x305B;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x898F;&#x5236;&#x3068; TF &#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x305F;&#x898F;&#x5236;&#x3092;&#x901A;&#x3058;&#x3066;&#x3001;&#x80CE;&#x76E4;&#x306E;&#x75BE;&#x60A3;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x5185;&#x90E8;&#x6A5F;&#x68B0;&#x7684;&#x306A;&#x30D3;&#x30E5;&#x30FC;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x907A;&#x4F1D;&#x7684;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x30A8;&#x30D4;&#x30B8;&#x30A7;&#x30CD;&#x30C6;&#x30A3;&#x30C3;&#x30AF;&#x306A;&#x6A5F;&#x69CB;&#x5236;&#x5FA1; SERPINA3 &#x5F0F;&#x3068;&#x305D;&#x306E;&#x80CE;&#x76E4;&#x75BE;&#x60A3;&#x5354;&#x4F1A;&#x306B;&#x5171;&#x540C;&#x4F5C;&#x696D;&#x3092;&#x884C;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

SERPINA3 (Serpin peptidase &#xC5B5;&#xC81C;&#xC81C; clade A &#xD68C;&#xC6D0; 3), &#xC77C;&#xCEEC;&#xC5B4; a1-antichymotrypsin&#xB294; &#xB5A0;&#xB4E4;&#xACE0; protease &#xC5B5;&#xC81C;&#xC81C; &#xB2E4;&#xC591; &#xD55C; &#xC0DD;&#xBB3C; &#xD559;&#xC801; &#xACFC;&#xC815;&#xC5D0;&#xC5D0;&#xC11C; &#xCC38;&#xC5EC;. &#xCD5C;&#xADFC;&#xC5D0;, &#xADF8;&#xAC83;&#xC740; &#xC778;&#xAC04;&#xC758; &#xD0DC; &#xBC18; &#xC9C8;&#xBCD1; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC758; 5&#39; &#xC601;&#xC5ED;&#xC744; hypomethylation&#xC640; &#xD568;&#xAED8; &#xD611;&#xD68C;&#xC758; &#xC5C5; &#xADDC;&#xC81C; &#xB418;&#xB3C4;&#xB85D; &#xD45C;&#xC2DC; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xD604;&#xC7AC;&#xC758; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; serpina3&#xC758; &#xBC1C;&#xAE30;&#xC778; 3 &#xB179;&#xC74C; &#xBC29;&#xC1A1; &#xC694;&#xC778; (TFs) (SP1, MZF1 &#xBC0F; ZBTB7B)&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; transcriptionally, &#xC720;&#xB3C4; rs1884082 &#xB2E8;&#xC77C; &#xC5FC;&#xAE30; &#xB2E4;&#xD615;&#xC131; (SNP)&#xC5D0; &#xC885;&#xC18D; &#xB418;&#xB294; &#xC218;&#xC900;&#xC758; &#xBC1C;&#xAE30;&#xC778; T &#xB300;&#xB9BD; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC640; G, &#xBCF4;&#xB2E4; &#xB192;&#xC740; &#xC218;&#xC900;&#xC73C;&#xB85C; &#xC720;&#xB3C4; &#xB41C; &#xC77C;&#xAD00; &#xB418; &#xACE0; &#xB0B4;&#xBD80;&#xC5D0; &#xC788;&#xB294; &#xB610;&#xB294; TFs &#xCD94;&#xAC00; &#xC5C6;&#xC774; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xBC1C;&#xAE30;&#xC778; &#xAC20;&#xB294; zbtb7b&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC751;&#xB2F5; &#xB300;&#xB9BD; &#xC720;&#xC804;&#xC790; (G &#xB300;&#xB9BD; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xB294; &#xAC15;&#xB825; &#xD558; &#xAC8C; &#xC720;&#xB3C4;, T &#xB300;&#xB9BD; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xB294; &#xAC15;&#xB825; &#xD558; &#xAC8C; &#xB2E4;&#xC6B4; &#xADDC;&#xC81C;) &#xD2B9;&#xC815; &#xD588;&#xB2E4;. &#xD0DC; &#xBC18; &#xAE30;&#xB2A5;&#xACFC; &#xD56D;&#xC0C1;&#xC131; &#xC704;&#xD574; &#xADDC;&#xC81C;&#xC758; &#xAD00;&#xC2EC;&#xC744; &#xC124;&#xBA85; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD574; &#xC801;&#xC751; &#xBAA8;&#xB378;&#xC744; &#xC81C;&#xC548; &#xD55C;&#xB2E4;. JEG-3&#xC5D0;&#xC11C; SERPINA3 overexpression &#xC138;&#xD3EC;, trophoblast &#xC140; &#xBAA8;&#xB378; &#xC138;&#xD3EC; &#xC811;&#xCC29; &#xC138;&#xD3EC; &#xC678; &#xB9E4;&#xD2B8;&#xB9AD;&#xC2A4;&#xC640; &#xC774;&#xC6C3; &#xC138;&#xD3EC; &#xAC10;&#xC18C; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; apoptosis, &#xC81C;&#xC548; &#xD558;&#xB294;&#xC774; &#xC694;&#xC778;&#xC740; &#xB192;&#xC740; &#xBCF5;&#xC6A9;&#xB7C9;&#xC5D0; &#xD574;&#xB85C;&#xC6B4; &#xC218; &#xC788;&#xB294; &#xBC29;&#xBC95;&#xC5D0;&#xC11C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC744; &#xBCF4;&#xD638;. &#xB610;&#xD55C;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; T &#xB300;&#xB9BD; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xB098;&#xD0C0;&#xB098;&#xB294; &#xB450; &#xBC88;&#xC9F8; &#xC5D1;&#xC190; (rs4634)&#xC5D0; &#xC788;&#xB294; &#xB450; &#xBC88;&#xC9F8; SNP&#xC5D0; G &#xB300;&#xB9BD; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xC790;&#xAC04; &#xC804; &#xC99D;&#xC758; &#xC704;&#xD5D8;&#xC744; &#xC99D;&#xAC00; &#xD558;&#xB294; &#xB3D9;&#xC548;&#xC5D0; &#xB0B4; &#xC790; &#xAD81; &#xC131;&#xC7A5; &#xAE08;&#xC9C0; (IUGR)&#xB97C; predispose &#xB2E4;&#xB978; &#xC778;&#xAC04;&#xC758; &#xC778;&#xAD6C;&#xC5D0; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xACB0;&#xACFC; epigenetic, &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC758; &#xC870;&#xD569;&#xC5D0;&#xC758; &#xD55C; &#xADDC;&#xC81C;&#xC640; TF &#xC911;&#xC7AC; &#xADDC;&#xC815;&#xC744; &#xD1B5;&#xD574; &#xD0DC; &#xBC18; &#xC9C8;&#xD658;&#xC5D0;&#xC11C; serpina3&#xC758; &#xAD00;&#xB828; &#xB0B4;&#xBD80; &#xAE30;&#xACC4; &#xD50C;&#xB808;&#xC774; &#xC81C;&#xACF5;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xC720;&#xC804;&#xACFC; &#xD6C4; &#xC131;&#xC801;&#xC778; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998; SERPINA3 &#xC2DD; &#xCEE8;&#xD2B8;&#xB864;&#xACFC; &#xC5F0;&#xAD00; placental &#xC9C8;&#xBCD1;&#xC744; &#xACF5;&#xB3D9; &#xC791;&#xC5C5;.

SERPINA3 (Serpin peptidasa inhibidor clade A miembro 3), tambi&eacute;n conocido como a1-antiquimotripsina, es un inhibidor de la proteasa de serina implicado en una amplia gama de procesos biol&oacute;gicos. Recientemente, se ha demostrado que para arriba-regulado en enfermedades humanas placentarias en asociaci&oacute;n con un hypomethylation de la regi&oacute;n 5&#39; del gen. En el presente estudio, mostramos que el promotor de SERPINA3 se activa transcripcionalmente por tres factores de transcripci&oacute;n (TFs) (SP1, MZF1 y ZBTB7B), el nivel de inducci&oacute;n depender el polimorfismo rs1884082 de un solo nucle&oacute;tido (SNP) hab&iacute;a situado en el interior el promotor, el alelo T constantemente ser inducido a un nivel m&aacute;s alto que el G, con o sin hab&iacute;a agregado de TFs. Cuando el promotor fue desnaturalizado, la respuesta a ZBTB7B fue alelo espec&iacute;fico (el alelo G fue fuertemente la inducida, mientras que el alelo T estaba fuertemente regulada por abajo). Proponemos un modelo adaptable para explicar el inter&eacute;s de este Reglamento para la funci&oacute;n placentaria y homeostasis. Sobreexpresi&oacute;n de SERPINA3 JEG-3 c&eacute;lulas, un modelo de celular del trofoblasto, disminuy&oacute; la adhesi&oacute;n celular a la matriz extracelular y a c&eacute;lulas vecinas, pero protege de apoptosis, sugiriendo un camino por el que este factor podr&iacute;a ser perjudicial a dosis elevadas. Adem&aacute;s, demostramos en diferentes poblaciones humanas que el alelo T parece predisponer a Intra uterino restricci&oacute;n crecimiento (IUGR), mientras que un alelo G en un SNP segundo ubicado en el segundo ex&oacute;n (rs4634) aumenta el riesgo de preeclampsia. Nuestros resultados ofrecen vistas mecanicistas dentro de la participaci&oacute;n de SERPINA3 en Enfermedades Placentarias, a trav&eacute;s de su regulaci&oacute;n por una combinaci&oacute;n de gen&eacute;tica, epigen&eacute;tica y regulaciones TF-mediada.

Mecanismos gen&eacute;ticos y epigen&eacute;ticos colaboran para control SERPINA3 de expresi&oacute;n y su asociaci&oacute;n con enfermedades placentarias.

Article	Year
Muscle electrotransfer as a tool for studying muscle fiber-specific and nerve-dependent activity of promoters. American journal of physiology. Cell physiology\| PubMed ID: 12839830	2003
Mouse muscle identity: the position-dependent and fast fiber-specific expression of a transgene in limb muscles is methylation-independent and cell-autonomous. Developmental dynamics : an official publication of the American Association of Anatomists\| PubMed ID: 14648836	2003
Targeted inactivation of serum response factor in the developing heart results in myocardial defects and embryonic lethality. Molecular and cellular biology\| PubMed ID: 15169892	2004
Six1 and Eya1 expression can reprogram adult muscle from the slow-twitch phenotype into the fast-twitch phenotype. Molecular and cellular biology\| PubMed ID: 15226428	2004
Stable transmission of targeted gene modification using single-stranded oligonucleotides with flanking LNAs. Nucleic acids research\| PubMed ID: 16002788	2005
Multisite protein kinase A and glycogen synthase kinase 3beta phosphorylation leads to Gli3 ubiquitination by SCFbetaTrCP. Molecular and cellular biology\| PubMed ID: 16705181	2006
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Triplex-forming oligonucleotide-orthophenanthroline conjugates for efficient targeted genome modification. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America\| PubMed ID: 18599454	2008
Targeting of beta-arrestin2 to the centrosome and primary cilium: role in cell proliferation control. PloS one\| PubMed ID: 19008961	2008
Retraction for Cannata et al., Triplex-forming oligonucleotide-orthophenanthroline conjugates for efficient targeted genome modification. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America\| PubMed ID: 20160072	2010
Genetic and epigenetic mechanisms collaborate to control SERPINA3 expression and its association with placental diseases. Human molecular genetics\| PubMed ID: 22246292	2012

Jean-Paul Concordet

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