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Assessment of Motor Balance and Coordination in Mice using the Balance Beam

Brain injury, genetic manipulations, and pharmacological treatments can result in alterations of motor skills in mice.  Fine motor coordination and ...

California Institute of Technology

&#x63CF;&#x8FF0;&#x8BBE;&#x8BA1;&#x3001; &#x5408;&#x6210;&#x3001; &#x548C;&#x4F53;&#x5916;&#x7684;&#x5F3A;&#x5927;&#x548C;&#x9009;&#x62E9;&#x6027;&#x5C0F;&#x5206;&#x5B50;&#x6291;&#x5236;&#x5242;&#x534A;&#x80F1;&#x6C28;&#x9178;&#x86CB;&#x767D;&#x9176;-3 &#x7684;&#x4E00;&#x7CFB;&#x5217;&#x6D3B;&#x52A8;&#x3002;&#x4ECE;&#x6269;&#x5C55;&#x7684;&#x4E2D;&#x7EE7;&#xFF0C;&#x6C34;&#x6768;&#x9178;&#x7247;&#x6BB5;&#x88AB;&#x8BA4;&#x5B9A;&#x6709;&#x534A;&#x80F1;&#x6C28;&#x9178;&#x86CB;&#x767D;&#x9176;-3 &#x7684; S(4) &#x53E3;&#x888B;&#x7684;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x4EB2;&#x548C;&#x529B;&#x3002;X &#x5C04;&#x7EBF;&#x7ED3;&#x6676;&#x5B66;&#x548C;&#x5206;&#x5B50;&#x6A21;&#x578B;&#x7684;&#x521D;&#x59CB;&#x8BA9;&#x547D;&#x4E2D;&#x5BFC;&#x81F4;&#x5408;&#x6210;&#x7684; 4&#xFF0C;&#x5176;&#x4E2D;&#x53EF;&#x9006;&#x6291;&#x5236;&#x534A;&#x80F1;&#x6C28;&#x9178;&#x86CB;&#x767D;&#x9176;-3 &#x7684; K(i) = 40 nM&#x3002;&#x8FDB;&#x4E00;&#x6B65;&#x4F18;&#x5316;&#x5BFC;&#x81F4;&#x4E86;&#x4E00;&#x7CFB;&#x5217;&#x7684; K(i) &#x503C;&#x5728; 20-50 nM &#x8303;&#x56F4;&#x7684;&#x5F3A;&#x5927;&#x548C;&#x9009;&#x62E9;&#x6027;&#x6291;&#x5236;&#x5242;&#x7684;&#x9274;&#x5B9A;&#x3002;&#x5728;&#x6B64;&#x7CFB;&#x5217;&#x4E2D;&#xFF0C;66b&#xFF0C;&#x6700;&#x6709;&#x529B;&#x7684;&#x5316;&#x5408;&#x7269;&#x4E4B;&#x4E00;&#x6291;&#x5236;&#x534A;&#x80F1;&#x6C28;&#x9178;&#x86CB;&#x767D;&#x9176;-3 &#x7684; K(i) = 20 nM &#x548C;&#x9009;&#x62E9;&#x6027;&#x7684;&#x534A;&#x80F1;&#x6C28;&#x9178;&#x86CB;&#x767D;&#x9176;-3 vs 8 500 &#x500D;&#x7684;&#x4E00;&#x4E2A;&#x5C0F;&#x7EC4;&#xFF0C;&#x4E03;&#x4E2A;&#x534A;&#x80F1;&#x6C28;&#x9178;&#x86CB;&#x767D;&#x9176; (1&#x3001; 2 &#x548C; 4-8)&#x3002;4 &#x548C; 66b &#x7684;&#x9AD8;&#x5206;&#x8FA8;&#x7387; x &#x5C04;&#x7EBF;&#x5171;&#x7ED3;&#x6676;&#x7ED3;&#x6784;&#x652F;&#x6301;&#x6211;&#x4EEC;&#x4E0E;&#x534A;&#x80F1;&#x6C28;&#x9178;&#x86CB;&#x767D;&#x9176;-3 &#x7684;&#x5316;&#x5408;&#x7269;&#x7684;&#x9884;&#x6D4B;&#x7684;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x6A21;&#x5F0F;&#x3002;

&#x901A;&#x8FC7;&#x4F7F;&#x7528;&#x6269;&#x5C55;&#x4E2D;&#x7EE7;&#x548C;&#x57FA;&#x4E8E;&#x7ED3;&#x6784;&#x7684;&#x836F;&#x7269;&#x8BBE;&#x8BA1;&#x7684;&#x534A;&#x80F1;&#x6C28;&#x9178;&#x86CB;&#x767D;&#x9176;-3 &#x7684;&#x5F3A;&#x5927;&#x548C;&#x9009;&#x62E9;&#x6027;&#x5C0F;&#x5206;&#x5B50;&#x6291;&#x5236;&#x5242;&#x7684;&#x6807;&#x8BC6;&#x3002;

The design, synthesis, and in vitro activities of a series of potent and selective small-molecule inhibitors of caspase-3 are described. From extended tethering, a salicylic acid fragment was identified as having binding affinity for the S(4) pocket of caspase-3. X-ray crystallography and molecular modeling of the initial tethering hit resulted in the synthesis of 4, which reversibly inhibited caspase-3 with a K(i) = 40 nM. Further optimization led to the identification of a series of potent and selective inhibitors with K(i) values in the 20-50 nM range. One of the most potent compounds in this series, 66b, inhibited caspase-3 with a K(i) = 20 nM and selectivity of 8-500-fold for caspase-3 vs a panel of seven caspases (1, 2, and 4-8). A high-resolution X-ray cocrystal structure of 4 and 66b supports the predicted binding modes of our compounds with caspase-3.

Identification of potent and selective small-molecule inhibitors of caspase-3 through the use of extended tethering and structure-based drug design.

Nous d&eacute;crivons la conception, la synth&egrave;se et les activit&eacute;s in vitro d&#39;une s&eacute;rie d&#39;inhibiteurs de petites mol&eacute;cules puissants et s&eacute;lectifs de la caspase-3. De tethering prolong&eacute;e, un fragment de l&#39;acide salicylique a &eacute;t&eacute; identifi&eacute; comme ayant une affinit&eacute; de liaison pour la poche S(4) de la caspase-3. Cristallographie aux rayons x et mod&eacute;lisation mol&eacute;culaire du hit attachement initial a permis la synth&egrave;se de 4, qui a inhib&eacute; de mani&egrave;re r&eacute;versible caspase-3 avec un k = 40 nM. Optimisation suppl&eacute;mentaire a conduit &agrave; l&#39;identification d&#39;une s&eacute;rie d&#39;inhibiteurs puissants et s&eacute;lectifs avec des valeurs de k dans les 20-50 nM. L&#39;un des plus puissants compos&eacute;s de cette s&eacute;rie, 66 b, inhibe la caspase-3 avec un k = 20 nM et la s&eacute;lectivit&eacute; de 8 &agrave; 500 fois de caspase-3 contre un groupe de sept caspases (1, 2 et 4-8). Une structure de cocrystal de rayons x &agrave; haute r&eacute;solution de 4 et 66 b prend en charge les modes de liaison pr&eacute;dite de nos compos&eacute;s avec la caspase-3.

Identification des inhibiteurs de petites mol&eacute;cules puissants et s&eacute;lectifs de la caspase-3 gr&acirc;ce &agrave; l&#39;utilisation prolong&eacute;e de modem et de la conception de m&eacute;dicaments bas&eacute;e sur la structure.

Identifizierung von potenten und selektiven niedermolekularen Inhibitoren von Caspase-3 durch den Einsatz von erweiterten Tethering und Struktur-basiertes Drug Design.

La progettazione, sintesi e attivit&agrave; in vitro di una serie di potente e selettivi inibitori della piccolo-molecola di caspase-3 sono descritti. Da estesa tethering, un frammento di acido salicilico &egrave; stato identificato come avendo affinit&agrave; di legame per la tasca S(4) di caspase-3. Cristallografia a raggi x e modellistica molecolare della hit tethering iniziale ha provocato la sintesi di 4, che inibisce reversibilmente caspase-3 con un K(i) = 40 nM. Ulteriore ottimizzazione ha portato all&#39;identificazione di una serie di inibitori potenti e selettivi con K(i) i valori nell&#39;intervallo 20-50 nM. Uno dei pi&ugrave; potenti composti in questa serie, 66b, inibito caspase-3 con un K(i) = 20 nM e selettivit&agrave; di 8-500-fold per caspase-3 vs un pannello dei sette caspases (1, 2 e 4-8). Una struttura di cocrystal a raggi x ad alta risoluzione di 4 e 66b supporta le modalit&agrave; di associazione previsto dei nostri composti con caspase-3.

Identificazione del potente e selettivi inibitori della piccolo-molecola di caspase-3 attraverso l&#39;uso esteso tethering e disegno della droga basata sulla struttura.

&#x8A2D;&#x8A08;&#x3001;&#x5408;&#x6210;&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x4E00;&#x9023;&#x306E;&#x30AB;&#x30B9;&#x30D1;&#x30FC;&#x30BC; 3 &#x306E;&#x5F37;&#x529B;&#x306A;&#x9078;&#x629E;&#x7684;&#x306A;&#x5C0F;&#x5206;&#x5B50;&#x963B;&#x5BB3;&#x5264;&#x306E; in vitro &#x6D3B;&#x6027;&#x3092;&#x8AAC;&#x660E;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x62E1;&#x5F35;&#x30C6;&#x30B6;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;&#x304B;&#x3089;&#x30B5;&#x30EA;&#x30C1;&#x30EB;&#x9178;&#x30D5;&#x30E9;&#x30B0;&#x30E1;&#x30F3;&#x30C8;&#x306F;&#x30AB;&#x30B9;&#x30D1;&#x30FC;&#x30BC; 3 &#x306E; S(4) &#x306E;&#x30DD;&#x30B1;&#x30C3;&#x30C8;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x7D50;&#x5408;&#x89AA;&#x548C;&#x6027;&#x3092;&#x6301;&#x3064;&#x3082;&#x306E;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x8B58;&#x5225;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;X &#x7DDA;&#x7D50;&#x6676;&#x69CB;&#x9020;&#x89E3;&#x6790;&#x3068;&#x5206;&#x5B50;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;&#x521D;&#x671F;&#x30C6;&#x30B6;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0; &#x30D2;&#x30C3;&#x30C8;&#x306E;&#x53EF;&#x9006;&#x7684;&#x963B;&#x5BB3;&#x30AB;&#x30B9;&#x30D1;&#x30FC;&#x30BC;-3&#x3001;K(i) &#x3068; 4 &#x306E;&#x5408;&#x6210;&#x306B;&#x3088;&#x308A;&#x5897;&#x53CE; = 40 nM&#x3002;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x6700;&#x9069;&#x5316;&#x306F;&#x3001;&#x4E00;&#x9023;&#x306E; 20-50 nM &#x306E;&#x7BC4;&#x56F2;&#x3067; K(i) &#x5024;&#x3092;&#x6301;&#x3064;&#x5F37;&#x529B;&#x306A;&#x9078;&#x629E;&#x7684;&#x963B;&#x5BB3;&#x7269;&#x8CEA;&#x306E;&#x540C;&#x5B9A;&#x306B;&#x3064;&#x306A;&#x304C;&#x3063;&#x305F;&#x3002;66B&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x30B7;&#x30EA;&#x30FC;&#x30BA;&#x3067;&#x6700;&#x3082;&#x5F37;&#x529B;&#x306A;&#x5316;&#x5408;&#x7269;&#x306E;&#x963B;&#x5BB3;&#x30AB;&#x30B9;&#x30D1;&#x30FC;&#x30BC;-3 &#x306F; K(i) &#x3092; 20 nM &#x3068;&#x9078;&#x629E;&#x6027;&#x306E; 8 &#x301C; 500 &#x500D;&#x306E;&#x30AB;&#x30B9;&#x30D1;&#x30FC;&#x30BC; 3 &#x5BFE; 7 &#x30AB;&#x30B9;&#x30D1;&#x30FC;&#x30BC; (1&#x3001;2&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073; 4-8&#xFF09; &#x306E;&#x30D1;&#x30CD;&#x30EB;&#x3092; =&#x3002;4 &#x3068; 66b &#x306E;&#x9AD8;&#x5206;&#x89E3;&#x80FD; x &#x7DDA; cocrystal &#x69CB;&#x9020;&#x79C1;&#x305F;&#x3061;&#x30AB;&#x30B9;&#x30D1;&#x30FC;&#x30BC; 3 &#x3092;&#x3082;&#x3064;&#x5316;&#x5408;&#x7269;&#x306E;&#x4E88;&#x6E2C;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C7;&#x30A3;&#x30F3;&#x30B0; &#x30E2;&#x30FC;&#x30C9;&#x3092;&#x30B5;&#x30DD;&#x30FC;&#x30C8;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x30AB;&#x30B9;&#x30D1;&#x30FC;&#x30BC;-3 &#x62E1;&#x5F35;&#x30C6;&#x30B6;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;&#x3068;&#x69CB;&#x9020;&#x306B;&#x57FA;&#x3065;&#x304F;&#x85AC;&#x7269;&#x8A2D;&#x8A08;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x306E;&#x5F37;&#x529B;&#x306A;&#x9078;&#x629E;&#x7684;&#x306A;&#x5C0F;&#x5206;&#x5B50;&#x963B;&#x5BB3;&#x5264;&#x306E;&#x540C;&#x5B9A;

&#xC124;&#xACC4;, &#xD569;&#xC131;, &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; &#xAC15;&#xB825; &#xD558; &#xACE0; &#xC120;&#xD0DD;&#xC801;&#xC778; &#xC791;&#xC740; &#xBD84;&#xC790; &#xC5B5;&#xC81C;&#xC81C; caspase 3 &#xC2DC;&#xB9AC;&#xC988;&#xC758; &#xC0DD;&#xCCB4; &#xC678;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD65C;&#xB3D9; &#xD558;&#xB294; &#xC124;&#xBA85; &#xB418;&#xC5B4; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xD655;&#xC7A5; &#xB41C; &#xBC27;&#xC904;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC0B4;&#xB9AC;&#xC2E4;&#xC0B0; &#xC870;&#xAC01; caspase 3&#xC758; S(4) &#xD3EC;&#xCF13;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xC120;&#xD638;&#xB3C4; &#xAC00;&#xC9C4; &#xAC83;&#xC73C;&#xB85C; &#xD655;&#xC778; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;. X-&#xC120; &#xACB0;&#xC815;&#xD559; &#xBC0F; &#xCD08;&#xAE30; tethering &#xD788;&#xD2B8;&#xC758; &#xBD84;&#xC790; &#xBAA8;&#xB378;&#xB9C1; &#xACB0;&#xACFC; &#xC5ED; &#xC800;&#xD574; caspase 3&#xB294; k(i)&#xC640; 4&#xC758; &#xD569;&#xC131; = 40 nM. &#xCD94;&#xAC00; &#xCD5C;&#xC801;&#xD654; 20-50 nM &#xBC94;&#xC704;&#xC5D0;&#xC11C; K(i) &#xAC12;&#xC744; &#xAC00;&#xC9C4; &#xAC15;&#xB825; &#xD558; &#xACE0; &#xC120;&#xD0DD;&#xC801;&#xC778; &#xC800; &#xD574;&#xC81C; &#xACC4;&#xC5F4;&#xC758; &#xC2DD;&#xBCC4; &#xC774;&#xB04C;&#xC5B4; &#xB0C8;&#xB2E4;. 66B,&#xC774; &#xC2DC;&#xB9AC;&#xC988;&#xC5D0;&#xC11C; &#xAC00;&#xC7A5; &#xAC15;&#xB825;&#xD55C; &#xD654;&#xD569;&#xBB3C; &#xC911; &#xD558;&#xB098;&#xB294; k(i)&#xB85C; caspase 3 &#xC800;&#xD574; = 20 nM &#xBC0F; caspase 3 &#xB300;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; 8 500 &#xBC30;&#xC758; &#xC120;&#xD0DD;&#xB3C4; (1, 2, &#xBC0F; 4-8) 7 caspases&#xC758; &#xD328;&#xB110;. 4 66B&#xC758; &#xACE0;&#xD574;&#xC0C1;&#xB3C4; x-&#xC120; cocrystal &#xAD6C;&#xC870; caspase 3 &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xD654;&#xD569;&#xBB3C;&#xC758; &#xC608;&#xCE21; &#xB41C; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xBAA8;&#xB4DC;&#xB97C; &#xC9C0;&#xC6D0;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Caspase 3 &#xD655;&#xC7A5; &#xB9E4;&#xC640; &#xAD6C;&#xC870; &#xAE30;&#xBC18; &#xC57D;&#xBB3C; &#xC124;&#xACC4;&#xB97C; &#xD1B5;&#xD574; &#xAC15;&#xB825; &#xD558; &#xACE0; &#xC120;&#xD0DD;&#xC801;&#xC778; &#xC791;&#xC740; &#xBD84;&#xC790; &#xC5B5;&#xC81C;&#xC81C;&#xC758; &#xC2DD;&#xBCC4;.

Se describen el dise&ntilde;o, s&iacute;ntesis y actividades in vitro de una serie de potentes y selectivos inhibidores de mol&eacute;culas peque&ntilde;as de caspasa-3. De inmovilizaci&oacute;n extendida, un fragmento de &aacute;cido salic&iacute;lico fue identificado como teniendo afinidad para el bolsillo de la S(4) de caspasa-3. Cristalograf&iacute;a de rayos x y modelado molecular del golpe inicial tethering dio lugar a la s&iacute;ntesis de 4, que inhibe reversiblemente caspasa-3 con un K(i) = 40 nM. Otra optimizaci&oacute;n condujeron a la identificaci&oacute;n de una serie de inhibidores potentes y selectivos con K(i) valores en el rango de 20-50 nM. Uno de los compuestos m&aacute;s potentes en esta serie, 66b, inhibe la caspasa-3 con un K(i) = 20 nM y selectividad del 8-500-doblez de caspasa-3 vs un panel de siete caspasas (1, 2 y 4-8). Una estructura de cocrystal de rayos x alta resoluci&oacute;n de 4 y 66b soporta los modos de enlace previsto de nuestros compuestos con caspasa-3.

Identificaci&oacute;n de inhibidores de mol&eacute;culas peque&ntilde;as de potentes y selectivos de caspasa-3 mediante el uso extendido de inmovilizaci&oacute;n y dise&ntilde;o de f&aacute;rmacos basado en estructura.

&#x516D;&#x4E2A;&#x7A81;&#x53D8;&#xFF0C;&#x79F0;&#x4E3A;&#x5341;&#x516D;&#x8FDB;&#x5236;&#x7A81;&#x53D8;&#xFF0C;&#x5728;&#x4E00;&#x8D77;&#x5DF2;&#x88AB;&#x8BC1;&#x660E;&#x8981;&#x8F6C;&#x6362;&#x5927;&#x80A0;&#x57C3;&#x5E0C;&#x6C0F;&#x5927;&#x80A0;&#x6746;&#x83CC;&#x95E8;&#x51AC;&#x6C28;&#x9178;&#x6C28;&#x57FA;&#x8F6C;&#x79FB;&#x9176; (AATase) &#x7279;&#x5F02;&#x6027;&#x8981;&#x5927;&#x5927;&#x50CF;&#x5927;&#x80A0;&#x6746;&#x83CC;&#x7684;&#x916A;&#x6C28;&#x9178;&#x8F6C;&#x6C28;&#x9176; (TATase) &#x89E3;&#x5256;&#x5206;&#x6210;&#x4E24;&#x7EC4;&#xFF0C;&#xFF08;T109S/N297S&#xFF09; &#x548C; &#xFF08;V39L/K41Y/T47I/N69L&#xFF09;&#x3002;&#x5728;&#x5DE6;&#x4FA7;&#x548C;&#x53F3;&#x4FA7;&#x7684;&#x6570;&#x5B57;&#x5B57;&#x6BCD;&#x5206;&#x522B;&#x6307;&#x5B9A; AATase &#x548C; TATase &#x7684;&#x6B8B;&#x7559;&#x7269;&#x3002;T109S/N297S &#x5BF9;&#x4EE5;&#x524D;&#x5DF2;&#x8FDB;&#x884C;&#x8C03;&#x67E5;&#x3002;&#x540E;&#x4E00;&#x7EC4;&#xFF0C;&#x8BBE;&#x7F6E;&#x4E86;&quot;&#x6CB9;&#x8102;&quot;&#xFF0C;&#x73B0;&#x5728;&#x653E;&#x5728; AATase &#x6846;&#x67B6;&#xFF0C;&#x548C; retroGrease &#x5957; (L39V/Y41K/I47T/L69N&#xFF09; &#x66FF;&#x6362;&#x5230; TATase&#x3002;AATase &#x6846;&#x67B6;&#x4E2D;&#x7684;&#x6CB9;&#x8102;&#x7A81;&#x53D8;&#x53D1;&#x73B0;&#x4E3B;&#x8981;&#x662F;&#x4E3A;&#x4E86;&#x964D;&#x4F4E;&#x82B3;&#x9999;&#x548C;&#x4E8C;&#x5143;&#x57FA;&#x5E95;&#x7684; K (M) s&#x3002;&#x76F8;&#x6BD4;&#x4E4B;&#x4E0B;&#xFF0C;retroGrease TATase &#x5C55;&#x54C1;&#x964D;&#x4F4E;&#x8FD9;&#x4E24;&#x79CD;&#x886C;&#x5E95;&#x7684; k (cat) s&#x3002;&#x516D; retroHex &#x7A81;&#x53D8;&#xFF0C;&#x7ED3;&#x5408; retroGrease &#x548C; S109T/S297N&#xFF0C;&#x88AB;&#x53D1;&#x73B0;&#x4EE5;&#x53CD;&#x8F6C;&#x7684;&#x5E95;&#x7269;&#x4E13;&#x4E00;&#x6027;&#x7684; TATase&#xFF0C;&#x521B;&#x5EFA;&#x4E00;&#x79CD;&#x9176;&#x4E0E;&#x8FD1; 9 &#x500D;&#x7684;&#x504F;&#x597D; &#xFF08;&#x5929;&#x51AC;&#x6C28;&#x9178;&#x82EF;&#x4E19;&#x6C28;&#x9178;&#x8D85;&#x8FC7; k(cat)/K(M))&#x3002;RetroHex &#x7A81;&#x53D8;&#x5E72;&#x6270;&#x5421;&#x54C6;&#x919B;&#x78F7;&#x9178;&#x8F85;&#x9176;&#xFF0C;&#x9759;&#x7535;&#x73AF;&#x5883;&#x5185;&#x90E8;&#x7684;&#x4E00;&#xFF0C;&#x552F;&#x4E00;&#x663E;&#x793A;&#x4E24;&#x4E2A; pK (a) s&#x3001; 6.1 &#x548C; 9.1 &#x5206;&#x5149;&#x5149;&#x5EA6;&#x6EF4;&#x5B9A;&#x6CD5;&#x5C31;&#x53EF;&#x4EE5;&#x770B;&#x51FA;&#x3002;RetroHex &#x4E5F;&#x88AB;&#x53D1;&#x73B0;&#x6709;&#x53D7;&#x635F;&#x4E8C;&#x805A;&#x4F53;&#x7684;&#x7A33;&#x5B9A;&#x6027;&#xFF0C;K(D) &#x4E3A;&#x4E8C;&#x805A;&#x4F53;&#x5206;&#x79BB;&#x7684; 350 nM &#x76F8;&#x6BD4;&#x91CE;&#x751F;&#x578B; 4 K(D) nM&#x3002;&#x4E0A;&#x4E0B;&#x6587;&#x4F9D;&#x8D56;&#x548C;&#x53EF;&#x52A0;&#x5206;&#x6790;&#x8868;&#x660E;&#x7279;&#x522B;&#x662F;&#x4E0E;&#x5468;&#x8FB9;&#x86CB;&#x767D;&#x4E2D;&#x7684; AATase &#x548C; TATase &#x7684;&#x60C5;&#x51B5;&#x4E0B;&#xFF0C;&#x6846;&#x67B6;&#x548C;&#x6B8B;&#x7559; 109 &#x548C; 297 &#x6CB9;&#x8102;&#x6B8B;&#x7559;&#x7684;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x7684;&#x91CD;&#x8981;&#x6027;&#x3002;&#x4E0A;&#x4E0B;&#x6587;&#x4F9D;&#x8D56;&#x548C;&#x4F9D;&#x4ECE;&#x662F;&#x5728; k(cat)/K(M)(Asp) &#x4E0A;&#x7684;&#x7A81;&#x53D8;&#x7684;&#x5F71;&#x54CD;&#x5C24;&#x4E3A;&#x660E;&#x663E;&#x3002;&#x5BF9; k(cat)/K(M)(Phe) &#x7684;&#x5F71;&#x54CD;&#x662F;&#x66F4;&#x8FD1;&#x6DFB;&#x52A0;&#x5242;&#x548C;&#x72EC;&#x7ACB;&#x7684;&#x4E0A;&#x4E0B;&#x6587;&#x3002;

&#x5C06;&#x5927;&#x80A0;&#x57C3;&#x5E0C;&#x6C0F;&#x5927;&#x80A0;&#x6746;&#x83CC;&#x95E8;&#x51AC;&#x6C28;&#x9178;&#x916A;&#x6C28;&#x9178;&#x8F6C;&#x6C28;&#x9176;&#x4E0E;&#x533A;&#x5206;&#x5F00;&#x6765;&#x7684;&#x516D;&#x79CD;&#x7279;&#x5F02;&#x6027;&#x51B3;&#x5B9A;&#x56E0;&#x7D20;&#x7684;&#x5B9A;&#x91CF;&#x5D4C;&#x5408;&#x4F53;&#x5206;&#x6790;&#x3002;

The six mutations, referred to as the Hex mutations, that together have been shown to convert Escherichia coli aspartate aminotransferase (AATase) specificity to be substantially like that of E. coli tyrosine aminotransferase (TATase) are dissected into two groups, (T109S/N297S) and (V39L/K41Y/T47I/N69L). The letters on the left and right of the numbers designate AATase and TATase residues, respectively. The T109S/N297S pair has been investigated previously. The latter group, the "Grease" set, is now placed in the AATase framework, and the retroGrease set (L39V/Y41K/I47T/L69N) is substituted into TATase. The Grease mutations in the AATase framework were found primarily to lower K(M)s for both aromatic and dicarboxylic substrates. In contrast, retroGrease TATase exhibits lowered k(cat)s for both substrates. The six retroHex mutations, combining retroGrease and S109T/S297N, were found to invert the substrate specificity of TATase, creating an enzyme with a nearly ninefold preference (k(cat)/K(M)) for aspartate over phenylalanine. The retroHex mutations perturb the electrostatic environment of the pyridoxal phosphate cofactor, as evidenced by a spectrophotometric titration of the internal aldimine, which uniquely shows two pK(a)s, 6.1 and 9.1. RetroHex was also found to have impaired dimer stability, with a K(D) for dimer dissociation of 350 nM compared with the wild type K(D) of 4 nM. Context dependence and additivity analyses demonstrate the importance of interactions of the Grease residues with the surrounding protein framework in both the AATase and TATase contexts, and with residues 109 and 297 in particular. Context dependence and cooperativity are particularly evident in the effects of mutations on k(cat)/K(M)(Asp). Effects on k(cat)/K(M)(Phe) are more nearly additive and context independent.

Quantitative chimeric analysis of six specificity determinants that differentiate Escherichia coli aspartate from tyrosine aminotransferase.

Les six mutations, d&eacute;nomm&eacute; les mutations de l&#39;hexagone, qui ensemble ont &eacute;t&eacute; montr&eacute;es pour convertir la sp&eacute;cificit&eacute; d&#39;aminotransf&eacute;rase (AATase) d&#39;aspartate Escherichia coli pour &ecirc;tre sensiblement comme que des e. coli tyrosine aminotransf&eacute;rase (TATase) sont diss&eacute;qu&eacute;s en deux groupes, (T109S/N297S) et (V39L/K41Y/T47I/N69L). Les lettres &agrave; gauche et &agrave; droite des nombres d&eacute;signent les r&eacute;sidus AATase et TATase, respectivement. La paire T109S/N297S a &eacute;t&eacute; &eacute;tudi&eacute;e pr&eacute;c&eacute;demment. Ce dernier groupe, le jeu de &laquo; Grease &raquo;, est maintenant plac&eacute; dans le cadre de AATase, et l&#39;ensemble retroGrease (L39V/Y41K/I47T/L69N) est substitu&eacute;e dans TATase. Les mutations de la graisse dans le cadre de AATase trouv&eacute;es principalement &agrave; abaisser s K (M) pour les substrats dicarboxyliques et aromatiques. En revanche, retroGrease que tatase pi&egrave;ces abaiss&eacute; s k (chat) pour les deux substrats. Les six mutations retroHex, combinaison de retroGrease et S109T/S297N, ont &eacute;t&eacute; trouv&eacute;es pour inverser la sp&eacute;cificit&eacute; de substrat de TATase, cr&eacute;ant une enzyme avec une pr&eacute;f&eacute;rence presque neuf fois (k(cat)/K(M)) pour l&#39;aspartate au fil de la ph&eacute;nylalanine. Les mutations retroHex perturbent l&#39;environnement &eacute;lectrostatique du cofacteur de phosphate de pyridoxal, comme en t&eacute;moigne un titrage spectrophotom&eacute;trique de l&#39;aldimine interne, qui montre uniquement deux pK (a) s, 6.1 et 9.1. RetroHex s&#39;est aussi r&eacute;v&eacute;l&eacute; avoir vici&eacute; la stabilit&eacute; du dim&egrave;re, avec un K(D) pour la dissociation du dim&egrave;re de 350 nM par rapport &agrave; la souche sauvage K(D) de 4 nM. D&eacute;pendance de contexte et d&#39;additivit&eacute; analyses d&eacute;montrent l&#39;importance des interactions entre les r&eacute;sidus de graisse avec le cadre environnant de prot&eacute;ine dans des contextes AATase tant TATase et avec les r&eacute;sidus de 109 et 297 en particulier. Coop&eacute;rativit&eacute; et d&eacute;pendance de contexte sont particuli&egrave;rement &eacute;videntes dans les effets de mutations sur k(cat)/K(M)(Asp). Effets sur les k(cat)/K(M)(Phe) sont plus pr&egrave;s additif et contexte ind&eacute;pendant.

Analyse quantitative de chim&eacute;rique des six d&eacute;terminants de la sp&eacute;cificit&eacute; qui diff&eacute;rencient aspartate de Escherichia coli de tyrosine aminotransf&eacute;rase.

Quantitative Analyse von sechs chim&#xE4;ren Spezifit&#xE4;tsdeterminanten Escherichia coli, die Aspartat-Aminotransferase aus Tyrosin differenzieren.

Sei mutazioni, indicato come le mutazioni Hex, che insieme hanno dimostrate di convertire Escherichia coli aspartato aminotransferasi (AATase) specificit&agrave; per essere sostanzialmente simile che di e. coli tirosina aminotransferasi (TATase) vengono sezionate in due gruppi, (T109S/N297S) e (V39L, K41Y, T47I, N69L). Le lettere a sinistra e a destra dei numeri di designano i residui AATase e TATase, rispettivamente. La coppia T109S/N297S &egrave; stata studiata in precedenza. Quest&#39;ultimo gruppo, il set di &quot;Grease&quot;, &egrave; ora collocato nell&#39;ambito AATase, e il set di retroGrease (L39V, Y41K, I47T, L69N) viene sostituito in TATase. Le mutazioni di grasso nel quadro AATase sono state trovate principalmente per abbassare il K (M) s per substrati aromatici e bicarbossilici. Al contrario, retroGrease che tatase esibisce abbassato s k (cat) per entrambi i substrati. Sei mutazioni retroHex, combinazione di retroGrease e S109T/S297N, sono state trovate per invertire la specificit&agrave; di substrato della TATase, creando un enzima con una preferenza quasi ninefold (k(cat)/K(M)) per aspartato di fenilalanina. Le mutazioni retroHex perturbare l&#39;ambiente elettrostatico del cofattore piridossal fosfato, come evidenziato da una titolazione spettrofotometrica dell&#39;aldimina interna, che mostra unicamente due pK (a) s, 6.1 e 9.1. RetroHex inoltre &egrave; stato trovato per avere compromessa la stabilit&agrave; dimero, con un K(D) di dissociazione del dimero di 350 nM rispetto al wild type K(D) di 4 nM. Dipendenza dal contesto e analisi di additivit&agrave; dimostrano l&#39;importanza delle interazioni dei residui di grasso circostante quadro proteico in contesti sia la AATase e TATase e con residui 109 e 297 in particolare. Cooperativit&agrave; e dipendenza dal contesto sono particolarmente evidenti negli effetti delle mutazioni su k(cat)/K(M)(Asp). Effetti su k(cat)/K(M)(Phe) sono quasi pi&ugrave; additivo e contesto indipendente.

Analisi quantitativa chimerico di sei fattori determinanti di specificit&agrave; che differenziano aspartato di Escherichia coli da tirosina aminotransferasi.

&#x516D;&#x3064;&#x306E;&#x7A81;&#x7136;&#x5909;&#x7570;&#x306F;&#x3001;&#x4E00;&#x7DD2;&#x306B;&#x5927;&#x8178;&#x83CC;&#x5927;&#x8178;&#x83CC;&#x30A2;&#x30B9;&#x30D1;&#x30E9;&#x30AE;&#x30F3;&#x9178;&#x30A2;&#x30DF;&#x30CE;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30D5;&#x30A7;&#x30E9;&#x30FC;&#x30BC; (AATase) &#x7279;&#x7570;&#x5927;&#x8178;&#x83CC;&#x306E;&#x30C1;&#x30ED;&#x30B7;&#x30F3;&#x30A2;&#x30DF;&#x30CE;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30D5;&#x30A7;&#x30E9;&#x30FC;&#x30BC; &#xFF08;TATase&#xFF09; &#x3068;&#x3044;&#x3046; 2 &#x3064;&#x306E;&#x30B0;&#x30EB;&#x30FC;&#x30D7;&#x306B;&#x306F;&#x3001;(T109S/N297S) &#x304C;&#x89E3;&#x5256;&#x306F;&#x5927;&#x5E45;&#x306B;&#x3088;&#x3046;&#x306B;&#x5909;&#x63DB;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x793A;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B; 16 &#x9032;&#x6570;&#x306E;&#x5909;&#x7570;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x53C2;&#x7167;&#x3057;&#x3001;(V39L&#x3001;K41Y&#x3001;T47I&#x3001;N69L&#xFF09;&#x3002;&#x5DE6;&#x3068;&#x53F3;&#x306E;&#x6570;&#x5B57;&#x306E;&#x6587;&#x5B57; AATase &#x3068; TATase &#x6B8B;&#x57FA;&#x3092;&#x305D;&#x308C;&#x305E;&#x308C;&#x6307;&#x5B9A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;T109S/N297S &#x30DA;&#x30A2;&#x306F;&#x4EE5;&#x524D;&#x884C;&#x308F;&#x308C;&#x3066;&#x304D;&#x305F;.&#x5F8C;&#x8005;&#x306E;&#x30B0;&#x30EB;&#x30FC;&#x30D7;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x300C;&#x30B0;&#x30EA;&#x30FC;&#x30B9;&#x300D;&#x30BB;&#x30C3;&#x30C8;&#x306F;&#x4ECA; AATase framework &#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x914D;&#x7F6E;&#x3055;&#x308C;&#x3001;retroGrease &#x30BB;&#x30C3;&#x30C8; (L39V&#x3001;Y41K&#x3001;I47T&#x3001;L69N&#xFF09; &#x304C; TATase &#x306B;&#x7F6E;&#x304D;&#x63DB;&#x3048;&#x3089;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;AATase &#x30D5;&#x30EC;&#x30FC;&#x30E0;&#x30EF;&#x30FC;&#x30AF;&#x306E;&#x30B0;&#x30EA;&#x30FC;&#x30B9;&#x5909;&#x7570; K (M) s &#x82B3;&#x9999;&#x65CF;&#x3068;&#x30B8;&#x30AB;&#x30EB;&#x30DC;&#x30F3;&#x57FA;&#x677F;&#x7528;&#x3092;&#x4E3B;&#x306B;&#x4E0B;&#x3052;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x898B;&#x3064;&#x304B;&#x308A;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x5BFE;&#x7167;&#x7684;&#x306B;&#x3001;TATase &#x306E;&#x5C55;&#x793A; retroGrease k &#xFF08;&#x732B;&#xFF09; s &#x306F;&#x3001;&#x4E21;&#x65B9;&#x306E;&#x57FA;&#x677F;&#x3092;&#x4E0B;&#x3052;&#x305F;&#x3002;6 RetroHex &#x306E;&#x7A81;&#x7136;&#x5909;&#x7570;&#x306F;&#x3001;retroGrease &#x3068; S109T/S297N &#x3092;&#x7D44;&#x307F;&#x5408;&#x308F;&#x305B;&#x305F; TATase&#x3001;&#x57FA;&#x8CEA;&#x7279;&#x7570;&#x6027;&#x3092;&#x53CD;&#x8EE2;&#x3059;&#x308B;&#x9175;&#x7D20;&#x307B;&#x307C; 9 &#x500D;&#x306B;&#x9054;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x597D;&#x307F; (&#x30A2;&#x30B9;&#x30D1;&#x30E9;&#x30AE;&#x30F3;&#x9178;&#x30D5;&#x30A7;&#x30CB;&#x30EB;&#x30A2;&#x30E9;&#x30CB;&#x30F3;&#x4E0A;&#x306E; k(cat)/K(M)). &#x3092;&#x4F5C;&#x6210;&#x3059;&#x308B;&#x304C;&#x898B;&#x3064;&#x304B;&#x308A;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3067;&#x3057;&#x305F;&#x3002;RetroHex &#x5909;&#x7570;&#x30D4;&#x30EA;&#x30C9;&#x30AD;&#x30B5;&#x30FC;&#x30EB;&#x71D0;&#x9178;&#x56E0;&#x5B50;&#x306E;&#x9759;&#x96FB;&#x74B0;&#x5883; hat-p-1b &#x306F; 2 pK &#xFF08;a&#xFF09; &#x306E; s &#x306F;&#x3001;6.1 &#x3068; 9.1 &#x3092;&#x4E00;&#x610F;&#x306B;&#x793A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3001;&#x5185;&#x90E8;&#x306E;&#x30A2;&#x30EB;&#x30B8;&#x30DF;&#x30F3;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x5438;&#x5149;&#x5149;&#x5EA6;&#x6EF4;&#x5B9A;&#x3092;&#x6DF7;&#x4E71;&#x3055;&#x305B;&#x307E;&#x3059;&#x3002;RetroHex &#x30C0;&#x30A4;&#x30DE;&#x30FC;&#x5B89;&#x5B9A;&#x6027;&#x4E8C;&#x91CF;&#x4F53;&#x306E;&#x89E3;&#x96E2; 350 &#x306E; K(D) &#x3092;&#x969C;&#x5BB3;&#x304C;&#x3042;&#x308B;&#x306B;&#x767A;&#x898B;&#x3055;&#x308C;&#x305F; nM &#x306B;&#x6BD4;&#x3079;&#x3066;&#x3001;&#x91CE;&#x751F;&#x578B; 4 &#x306E; K(D) nM&#x3002;AATase &#x3068; TATase &#x306E;&#x4E21;&#x65B9;&#x306E;&#x30B3;&#x30F3;&#x30C6;&#x30AD;&#x30B9;&#x30C8;&#x3067;&#x5468;&#x56F2;&#x306E;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x30D5;&#x30EC;&#x30FC;&#x30E0;&#x30EF;&#x30FC;&#x30AF;&#x3068;&#x6B8B;&#x57FA; 109 &#x3068; 297 &#x30B0;&#x30EA;&#x30FC;&#x30B9;&#x306E;&#x6B8B;&#x7559;&#x7269;&#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x306E;&#x91CD;&#x8981;&#x6027;&#x306F;&#x30B3;&#x30F3;&#x30C6;&#x30AD;&#x30B9;&#x30C8;&#x4F9D;&#x5B58;&#x6027;&#x3068;&#x52A0;&#x6CD5;&#x6027;&#x89E3;&#x6790;&#x306B;&#x7279;&#x306B;&#x3092;&#x30C7;&#x30E2;&#x30F3;&#x30B9;&#x30C8;&#x30EC;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30B3;&#x30F3;&#x30C6;&#x30AD;&#x30B9;&#x30C8;&#x4F9D;&#x5B58;&#x6027;&#x3068;&#x5354;&#x540C;&#x6027; k(cat)/K(M)(Asp) &#x306E;&#x7A81;&#x7136;&#x5909;&#x7570;&#x306E;&#x52B9;&#x679C;&#x3067;&#x7279;&#x306B;&#x9855;&#x8457;&#x3067;&#x3059;&#x3002;K(cat)/K(M)(Phe) &#x306B;&#x53CA;&#x307C;&#x3059;&#x5F71;&#x97FF;&#x306F;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x8FD1;&#x304F;&#x6DFB;&#x52A0;&#x5264;&#x3068;&#x72EC;&#x7ACB;&#x3057;&#x305F;&#x30B3;&#x30F3;&#x30C6;&#x30AD;&#x30B9;&#x30C8;&#x3002;

&#x5927;&#x8178;&#x83CC;&#x5927;&#x8178;&#x83CC;&#x30A2;&#x30B9;&#x30D1;&#x30E9;&#x30AE;&#x30F3;&#x9178;&#x30A2;&#x30DF;&#x30CE;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30D5;&#x30A7;&#x30E9;&#x30FC;&#x30BC;&#x306E;&#x30C1;&#x30ED;&#x30B7;&#x30F3;&#x3092;&#x533A;&#x5225;&#x516D;&#x3064;&#x306E;&#x7279;&#x7570;&#x6027;&#x6C7A;&#x5B9A;&#x56E0;&#x5B50;&#x306E;&#x5B9A;&#x91CF;&#x7684;&#x30AD;&#x30E1;&#x30E9;&#x5206;&#x6790;&#x3002;

6 &#xAC1C;&#xC758; &#xBCC0;&#xC774; 16 &#xC9C4;&#xC218; &#xBCC0;&#xC774; &#xD568;&#xAED8; &#xBCD1;&#xC6D0; &#xC131; &#xB300;&#xC7A5;&#xADE0; aspartate aminotransferase (AATase) &#xD2B9;&#xC774;&#xC131; &#xB300;&#xC7A5;&#xADE0;&#xC758; &#xD2F0;&#xB85C;&#xC2E0; aminotransferase (TATase)&#xB294; &#xB450; &#xAC1C;&#xC758; &#xADF8;&#xB8F9; (T109S/N297S)&#xC73C;&#xB85C; &#xBD80;&#xB294; &#xC2E4;&#xC9C8;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xAC19;&#xC740; &#xAC83;&#xC73C;&#xB85C; &#xBCC0;&#xD658;&#xD560; &#xD45C;&#xC2DC; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xB77C;&#xACE0; &#xD558; &#xACE0; (V39L/K41Y/T47I/N69L). &#xBB38;&#xC790; &#xBC0F; &#xC22B;&#xC790;&#xC758; &#xC624;&#xB978;&#xCABD; &#xC67C;&#xCABD;&#xC5D0; &#xAC01;&#xAC01; AATase &#xBC0F; TATase &#xC794;&#xB958;&#xBB3C;&#xC744; &#xC9C0;&#xC815;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. T109S/N297S &#xC30D; &#xC774;&#xC804;&#xC5D0; &#xC870;&#xC0AC; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC774;&#xC81C; &#xD6C4;&#xC790; &#xADF8;&#xB8F9;, &quot;&#xADF8;&#xB9AC;&#xC2A4;&quot; &#xC9D1;&#xD569; AATase &#xD504;&#xB808;&#xC784; &#xC6CC;&#xD06C;&#xC5D0; &#xB193;&#xC774;&#xACE0; retroGrease &#xC138;&#xD2B8; (L39V/Y41K/I47T/L69N)&#xC740; Tatase&#xB85C; &#xB300;&#xCCB4; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. AATase &#xD504;&#xB808;&#xC784; &#xC6CC;&#xD06C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xADF8;&#xB9AC;&#xC2A4; &#xBCC0;&#xC774; &#xC8FC;&#xB85C; &#xB0AE;&#xC740; &#xBC29;&#xD5A5;&#xC871; &#xBC0F; dicarboxylic &#xAE30;&#xD310;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; s K (M)&#xC744; &#xBC1C;&#xACAC; &#xD588;&#xB2E4;. &#xBC18;&#xBA74;, retroGrease TATase &#xC804;&#xC2DC; &#xB450; &#xAE30;&#xD310;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; s&#xB97C; k (&#xACE0;&#xC591;&#xC774;)&#xC744; &#xB0AE; &#xCDC4; &#xB2E4;. Retrogrease&#xC640; S109T/S297N 6 retroHex &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xAC70;&#xC758; ninefold &#xAE30;&#xBCF8; &#xC124;&#xC815; (&#xD398;&#xB2D0;&#xC54C;&#xB77C;&#xB2CC;&#xC5D0; aspartate k(cat)/K(M)) &#xD6A8;&#xC18C;&#xB97C; &#xB9CC;&#xB4DC;&#xB294; &#xBC18;&#xC804; TATase, &#xAE30;&#xC9C8; &#xD2B9;&#xC774;&#xC131;&#xC744; &#xBC1C;&#xACAC; &#xD588;&#xB2E4;. RetroHex &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xACE0;&#xC720; &#xD558; &#xAC8C; &#xB450; &#xAC1C;&#xC758; pK (a) s 6.1&#xACFC; 9.1&#xC744; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xB0B4;&#xBD80; aldimine&#xC758; spectrophotometric &#xC801;&#xC815;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC785;&#xC99D; pyridoxal &#xC778;&#xC0B0; &#xC5FC; cofactor&#xC758; &#xC815;&#xC804;&#xAE30; &#xD658;&#xACBD; &#xAD50;&#xB780;. Retrohex&#xB294; &#xB610;&#xD55C; 350&#xC758; dimer &#xBD84;&#xB9AC;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; K(D)&#xC640; &#xC774;&#xD569;&#xCCB4; &#xC548;&#xC815;&#xC131; &#xC7A5;&#xC560;&#xAC00; &#xC788;&#xB2E4; &#xBC1C;&#xACAC; Nm&#xC5D0; &#xBE44;&#xD574; &#xC57C;&#xC0DD; &#xD0C0;&#xC785; 4&#xC758; K(D) nM. &#xCEE8;&#xD14D;&#xC2A4;&#xD2B8; &#xC758;&#xC874; &#xBC0F; &#xAC00;&#xC0B0; &#xBD84;&#xC11D; &#xD2B9;&#xD788; &#xC794;&#xB958;&#xBB3C; 109&#xC640; 297 AATase &#xBC0F; TATase &#xCEE8;&#xD14D;&#xC2A4;&#xD2B8;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC8FC;&#xBCC0; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xD504;&#xB808;&#xC784; &#xC6CC;&#xD06C;&#xC640; &#xAE30;&#xB984; &#xC794;&#xB958;&#xBB3C;&#xC758; &#xC0C1;&#xD638;&#xC791;&#xC6A9;&#xC758; &#xC911;&#xC694;&#xC131;&#xC744; &#xBCF4;&#xC5EC; &#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xCEE8;&#xD14D;&#xC2A4;&#xD2B8; &#xC758;&#xC874; &#xBC0F; cooperativity&#xB294; k(cat)/k(m)(asp)&#xC5D0; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774;&#xC758; &#xD6A8;&#xACFC;&#xC5D0; &#xD2B9;&#xD788; &#xBD84;&#xBA85; &#xD558;&#xB2E4;. K(cat)/k(m)(phe)&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xD6A8;&#xACFC; &#xAC70;&#xC758; &#xB354; &#xCCA8;&#xAC00;&#xC81C; &#xBC0F; &#xCEE8;&#xD14D;&#xC2A4;&#xD2B8; &#xB3C5;&#xB9BD;.

&#xD2F0;&#xB85C;&#xC2E0; aminotransferase&#xC5D0;&#xC11C; &#xBCD1;&#xC6D0; &#xC131; &#xB300;&#xC7A5;&#xADE0; aspartate &#xCC28;&#xBCC4;&#xD654; 6 &#xD2B9;&#xC774;&#xC131; &#xACB0;&#xC815; &#xC694;&#xC778;&#xC758; &#xC815;&#xB7C9;&#xC801; chimeric &#xBD84;&#xC11D;.

Las seis mutaciones, contemplados como las mutaciones del hexagonal, que juntos han demostrado para convertir la especificidad de aminotransferasa (AATase) de aspartato Escherichia coli para ser substancialmente como que de e. coli se disecan tirosina transaminasa (TATase) en dos grupos, (T109S/N297S) y (V39L/K41Y/T47I/N69L). Las letras a la izquierda y derecha de los n&uacute;meros designan residuos AATase y TATase, respectivamente. El par de T109S/N297S se ha investigado anteriormente. Este &uacute;ltimo grupo, el conjunto de &quot;Grease&quot;, ahora se coloca en el marco de la AATase, y se sustituye el conjunto retroGrease (L39V/Y41K/I47T/L69N) en TATase. Las mutaciones de la grasa en el marco de la AATase se encontraron principalmente para bajar K (M) s para sustratos dicarbox&iacute;licos y arom&aacute;ticos. En cambio, retroGrease que tatase exhibe baja (gato) s para ambos sustratos. Las seis mutaciones retroHex, combinaci&oacute;n de retroGrease y S109T/S297N, se encontraron para invertir la especificidad de sustrato de TATase, creando una enzima con una preferencia casi del ninefold (k(cat)/K(M)) de aspartato en fenilalanina. Las mutaciones retroHex perturban el ambiente electrost&aacute;tico del cofactor de fosfato de piridoxal, evidenciada por una valoraci&oacute;n espectrofotom&eacute;trica de la aldimine interna, que muestra &uacute;nicamente dos pK (a) s, 6.1 y 9.1. RetroHex tambi&eacute;n se encontr&oacute; que han deteriorado la estabilidad del d&iacute;mero, con un K(D) para la disociaci&oacute;n del d&iacute;mero de 350 nM en comparaci&oacute;n con el tipo salvaje K(D) de 4 nM. Dependencia del contexto y an&aacute;lisis de aditividad demuestran la importancia de las interacciones de los residuos de grasa con el marco circundante de prote&iacute;na en contextos tanto el AATase y el TATase y con residuos de 109 y 297 en particular. Cooperatividad y dependencia del contexto son particularmente evidentes en los efectos de las mutaciones en k(cat)/K(M)(Asp). Efectos de k(cat)/K(M)(Phe) son casi m&aacute;s aditivo y contexto independiente.

An&aacute;lisis cuantitativo quim&eacute;rica de seis determinantes de especificidad que diferenciarse tirosina aminotransferasa de aspartato de Escherichia coli.

&#x534A;&#x80F1;&#x6C28;&#x9178;&#x5929;&#x51AC;&#x6C28;&#x9178;&#x86CB;&#x767D;&#x9176;-3 (&#x534A;&#x80F1;&#x6C28;&#x9178;&#x86CB;&#x767D;&#x9176;-3&#xFF09; &#x662F;&#x8C03;&#x89E3;&#x4EBA;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x51CB;&#x4EA1;&#x548C;&#x9776;&#x70B9;&#x6CBB;&#x7597;&#x591A;&#x79CD;&#x75BE;&#x75C5;&#x3002;&#x4F7F;&#x7528;&#x52A8;&#x6001;&#x7EC4;&#x5408;&#x6280;&#x672F; &#39;&#x6269;&#x5C55;&#x4E2D;&#x7EE7;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x786E;&#x5B9A;&#x4E86;&#x72EC;&#x7279;&#x7684; nonpeptidic &#x6291;&#x5236;&#x5242;&#x8FD9;&#x79CD;&#x9176;&#x3002;&#x6269;&#x5C55;&#x4E2D;&#x7EE7;&#x5141;&#x8BB8;&#x5C06;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x5230;&#x79BB;&#x6563;&#x533A;&#x57DF;&#x7684;&#x534A;&#x80F1;&#x6C28;&#x9178;&#x86CB;&#x767D;&#x9176;-3 &#x548C;&#x4E5F;&#x5E2E;&#x52A9;&#x76F4;&#x63A5;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x914D;&#x4F53;&#x88C5;&#x914D;&#x6210;&#x5C0F;&#x5206;&#x5B50;&#x6291;&#x5236;&#x5242;&#x7684;&#x914D;&#x4F53;&#x7684;&#x9274;&#x5B9A;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x9996;&#x5148;&#x8BBE;&#x8BA1;&#x4E00;&#x4E2A;&#x5C0F;&#x5206;&#x5B50;&#x6269;&#x5C55;&#x7A0B;&#x5E8F;&#x4E0D;&#x53EF;&#x9006;&#x8F6C;&#x5730; alkylates &#x7684;&#x534A;&#x80F1;&#x6C28;&#x9178;&#x86CB;&#x767D;&#x9176;-3 &#x7684;&#x534A;&#x80F1;&#x6C28;&#x9178;&#x6B8B;&#x7559;&#x3001; &#x8FD8;&#x5305;&#x542B;&#x5DEF;&#x57FA;&#x7EC4;&#x3002;&#x9488;&#x5BF9;&#x4E8C;&#x786B;&#x5316;&#x542B;&#x5C0F;&#x5206;&#x5B50;&#x7247;&#x6BB5;&#x7684;&#x5E93;&#xFF0C;&#x7136;&#x540E;&#x653E;&#x6620;&#x4E86;&#x6539;&#x6027;&#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#x3002;&#x8D28;&#x8C31;&#x6CD5;&#x7528;&#x6765;&#x6807;&#x8BC6;&#x914D;&#x4F53;&#x4E0A;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x5230;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#xFF0C;&#x4E5F;&#x5F62;&#x6210;&#x4E0E;&#x6269;&#x5C55;&#x5668;&#x7684;&#x4E8C;&#x786B;&#x5316;&#x8054;&#x7CFB;&#x3002;&#x94FE;&#x63A5;&#x4E0E;&#x6269;&#x5C55;&#x7A0B;&#x5E8F;&#x4ECE;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x5143;&#x7D20;&#xFF0C;&#x6240;&#x9009;&#x7684;&#x7247;&#x6BB5;&#x751F;&#x6210; druglike &#x548C;&#x6709;&#x522B;&#x4E8E;&#x5DF2;&#x77E5;&#x6291;&#x5236;&#x5242;&#x7684;&#x53EF;&#x9006;&#x3001; &#x7D27;&#x675F;&#x7F1A;&#x5206;&#x5B50;&#x3002;&#x4ECE;&#x8FD9;&#x4E2A;&#x529E;&#x6CD5;&#x6291;&#x5236;&#x7EC6;&#x80DE;&#x51CB;&#x4EA1;&#x7684;&#x6D3E;&#x751F;&#x7684;&#x4E00;&#x5206;&#x5B50;&#x3002;

&#x9176;&#x6291;&#x5236;&#x5242;&#x4F7F;&#x7528;&#x7684;&#x539F;&#x4F4D;&#x5927;&#x4F1A;&#x5EF6;&#x957F;&#x4E2D;&#x7EE7;&#x3002;

Cysteine aspartyl protease-3 (caspase-3) is a mediator of apoptosis and a therapeutic target for a wide range of diseases. Using a dynamic combinatorial technology, 'extended tethering', we identified unique nonpeptidic inhibitors for this enzyme. Extended tethering allowed the identification of ligands that bind to discrete regions of caspase-3 and also helped direct the assembly of these ligands into small-molecule inhibitors. We first designed a small-molecule 'extender' that irreversibly alkylates the cysteine residue of caspase-3 and also contains a thiol group. The modified protein was then screened against a library of disulfide-containing small-molecule fragments. Mass-spectrometry was used to identify ligands that bind noncovalently to the protein and that also form a disulfide linkage with the extender. Linking the selected fragments with binding elements from the extenders generates reversible, tight-binding molecules that are druglike and distinct from known inhibitors. One molecule derived from this approach inhibited apoptosis in cells.

In situ assembly of enzyme inhibitors using extended tethering.

Cyst&eacute;ine aspartyl prot&eacute;ase-3 (caspase-3) est un m&eacute;diateur de l&#39;apoptose et une cible th&eacute;rapeutique pour un large &eacute;ventail de maladies. &Agrave; l&#39;aide d&#39;une technologie combinatoire dynamique, &laquo; &eacute;largie tethering &raquo;, nous avons relev&eacute; uniques non inhibiteurs de cette enzyme. Tethering prolong&eacute;e a permis l&#39;identification de ligands qui lient aux r&eacute;gions discr&egrave;tes de caspase-3 et a &eacute;galement aid&eacute; directement l&#39;Assembl&eacute;e de ces ligands en inhibiteurs de petites mol&eacute;cules. Tout d&#39;abord, nous avons con&ccedil;u une petite mol&eacute;cule &laquo; extender &raquo; alkyle irr&eacute;versiblement le r&eacute;sidu de cyst&eacute;ine de la caspase-3 qui contient &eacute;galement un groupe thiol. La prot&eacute;ine modifi&eacute;e est ensuite projet&eacute;e contre une biblioth&egrave;que avec des fragments de petites mol&eacute;cules contenant du disulfure. Spectrom&eacute;trie de masse a &eacute;t&eacute; utilis&eacute;e pour identifier les ligands qui se lient de fa&ccedil;on non covalente &agrave; la prot&eacute;ine et qui forment une liaison disulfure avec le prolongateur. Relier les fragments choisis avec &eacute;l&eacute;ments de liaison d&#39;extendeurs g&eacute;n&egrave;re r&eacute;versibles, de liaisons des mol&eacute;cules qui sont druglike et distincte des inhibiteurs connus. Une mol&eacute;cule d&eacute;riv&eacute;e de cette apoptose approche inhib&eacute;e dans les cellules.

Assemblage in situ des inhibiteurs de l&#39;enzyme &agrave; l&#39;aide &eacute;tendue attachant.

In-situ-Montage von Enzyminhibitoren Verwendung erweiterter Anbindehaltung.

Aspartyl cisteina proteasi-3 (caspase-3) &egrave; un mediatore dell&#39;apoptosi e un obiettivo terapeutico per una vasta gamma di malattie. Utilizzando una tecnologia dinamica combinatoria, &#39;esteso tethering&#39;, abbiamo identificato unici nonpeptidic inibitori di questo enzima. Tethering estesa, ha permesso l&#39;identificazione di ligandi che si legano a regioni discreti di caspase-3 e anche aiutato il diretto l&#39;assemblaggio di questi ligandi in inibitori della piccolo-molecola. In primo luogo abbiamo progettato una piccolo-molecola &#39;extender&#39; alchilazione irreversibilmente i residui di cisteina di caspase-3, che contiene anche un gruppo tiolico. La proteina modificata &egrave; stato poi proiettata contro una libreria di frammenti di piccole molecole contenenti disolfuro. Spettrometria di massa &egrave; stata utilizzata per identificare i ligandi che si legano noncovalently alla proteina e che inoltre formano un legame disolfuro con l&#39;extender. Collegando i frammenti selezionati con gli elementi di associazione da Extender genera molecole reversibile, tight-binding che sono distinte da noti inibitori e druglike. Una molecola derivata da questo approccio inibito apoptosi nelle cellule.

Montaggio in situ di inibitori enzimatici utilizzo esteso tethering.

&#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30A4;&#x30F3; &#x30A2;&#x30B9;&#x30D1;&#x30EB;&#x30C1;&#x30EB; &#x30D7;&#x30ED;&#x30C6;&#x30A2;&#x30FC;&#x30BC; 3 (&#x30AB;&#x30B9;&#x30D1;&#x30FC;&#x30BC;-3&#xFF09; &#x30A2;&#x30DD;&#x30C8;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9;&#x3068;&#x75C5;&#x6C17;&#x306E;&#x5E83;&#x3044;&#x7BC4;&#x56F2;&#x306E;&#x6CBB;&#x7642;&#x4E0A;&#x306E;&#x30BF;&#x30FC;&#x30B2;&#x30C3;&#x30C8;&#x306F;&#x3001;&#x8ABF;&#x505C;&#x8005;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x52D5;&#x7684;&#x30B3;&#x30F3;&#x30D3;&#x30CA;&#x30C8;&#x30EA;&#x30A2;&#x30EB;&#x6280;&#x8853;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066; &#39;&#x62E1;&#x5F35;&#x30C6;&#x30B6;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;&#39;&#x3001;&#x6211;&#x3005; &#x76F8;&#x4E57;&#x4F5C;&#x7528;&#x3053;&#x306E;&#x9175;&#x7D20;&#x306E;&#x963B;&#x5BB3;&#x5264;&#x304C;&#x30E6;&#x30CB;&#x30FC;&#x30AF;&#x306A;&#x8B58;&#x5225;&#x3002;&#x62E1;&#x5F35;&#x30C6;&#x30B6;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;&#x3001;&#x76F4;&#x63A5;&#x30AB;&#x30B9;&#x30D1;&#x30FC;&#x30BC; 3 &#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x307E;&#x305F;&#x52A9;&#x3051;&#x306E;&#x4E0D;&#x9023;&#x7D9A;&#x306A;&#x9818;&#x57DF;&#x306B;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x914D;&#x4F4D;&#x5B50;&#x306E;&#x30A2;&#x30BB;&#x30F3;&#x30D6;&#x30EA; &#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C9;&#x5C0F;&#x5206;&#x5B50;&#x963B;&#x5BB3;&#x5264;&#x306B;&#x914D;&#x4F4D;&#x5B50;&#x306E;&#x540C;&#x5B9A;&#x3092;&#x8A31;&#x53EF;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x6211;&#x3005; &#x306F;&#x307E;&#x305A;&#x5C0F;&#x5206;&#x5B50; &#39;&#x4E0D;&#x53EF;&#x9006;&#x7684;&#x30AB;&#x30B9;&#x30D1;&#x30FC;&#x30BC; 3 &#x306E;&#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30A4;&#x30F3;&#x6B8B;&#x57FA;&#x3092; alkylates &#x3057;&#x3001;&#x307E;&#x305F;&#x30C1;&#x30AA;&#x30FC;&#x30EB; &#x30B0;&#x30EB;&#x30FC;&#x30D7;&#x304C;&#x542B;&#x307E;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x30A8;&#x30AF;&#x30B9;&#x30C6;&#x30F3;&#x30C0;&#x30FC;&#39; &#x3092;&#x8A2D;&#x8A08;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x4FEE;&#x98FE;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x3001;&#x30B8;&#x30B9;&#x30EB;&#x30D5;&#x30A3;&#x30C9;&#x7D50;&#x5408;&#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x5C0F;&#x5206;&#x5B50;&#x30D5;&#x30E9;&#x30B0;&#x30E1;&#x30F3;&#x30C8;&#x306E;&#x30E9;&#x30A4;&#x30D6;&#x30E9;&#x30EA;&#x306B;&#x5BFE;&#x3057;&#x3066;&#x30B9;&#x30AF;&#x30EA;&#x30FC;&#x30CB;&#x30F3;&#x30B0;&#x3092;&#x884C;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x8CEA;&#x91CF;&#x5206;&#x6790;&#x6CD5;&#x306F;&#x975E;&#x5171;&#x6709;&#x3059;&#x308B;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x3092;&#x7D50;&#x5408;&#x3057;&#x3001;&#x307E;&#x305F;&#x5F62;&#x6210;&#x4E8C;&#x786B;&#x5316;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B1;&#x30FC;&#x30B8;&#x306B;&#x30A8;&#x30AF;&#x30B9;&#x30C6;&#x30F3;&#x30C0;&#x30FC;&#x3068;&#x914D;&#x4F4D;&#x5B50;&#x3092;&#x8B58;&#x5225;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x4F7F;&#x7528;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x30A8;&#x30AF;&#x30B9;&#x30C6;&#x30F3;&#x30C0;&#x30FC;&#x304B;&#x3089;&#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C7;&#x30A3;&#x30F3;&#x30B0;&#x8981;&#x7D20;&#x3092;&#x9078;&#x629E;&#x3057;&#x305F;&#x30D5;&#x30E9;&#x30B0;&#x30E1;&#x30F3;&#x30C8;&#x3092;&#x30EA;&#x30F3;&#x30AF; druglike &#x3068;&#x65E2;&#x77E5;&#x306E;&#x963B;&#x5BB3;&#x5264;&#x306F;&#x7570;&#x306A;&#x308B;&#x30EA;&#x30D0;&#x30FC;&#x30B7;&#x30D6;&#x30EB;&#x3001;&#x30BF;&#x30A4;&#x30C8;&#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C7;&#x30A3;&#x30F3;&#x30B0;&#x5206;&#x5B50;&#x304C;&#x751F;&#x6210;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;1 &#x3064;&#x306E;&#x5206;&#x5B50;&#x306F;&#x3053;&#x306E;&#x6291;&#x5236;&#x30A2;&#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30C1; &#x30A2;&#x30DD;&#x30C8;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9;&#x7D30;&#x80DE;&#x304B;&#x3089;&#x6D3E;&#x751F;&#x3002;

In situ &#x306E;&#x30A2;&#x30BB;&#x30F3;&#x30D6;&#x30EA;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x9175;&#x7D20;&#x963B;&#x5BB3;&#x5264;&#x306E;&#x30C6;&#x30B6;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;&#x3092;&#x62E1;&#x5F35;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;

&#xC2DC;&#xC2A4;&#xD14C;&#xC778; aspartyl &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;-3 (caspase 3) apoptosis&#xC640; &#xB2E4;&#xC591; &#xD55C; &#xC9C8;&#xBCD1;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xCE58;&#xB8CC; &#xB300;&#xC0C1;&#xC758; &#xC911;&#xC7AC;&#xC790;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB3D9;&#xC801; &#xC870;&#xD569; &#xAE30;&#xC220;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#39;&#xD655;&#xC7A5; &#xBC27;&#xC904;&#xB85C; &#xB9E4;&#xAE30;&#39;,&#xC774; &#xD6A8;&#xC18C;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xB3C5;&#xD2B9;&#xD55C; nonpeptidic &#xC5B5;&#xC81C;&#xC81C; &#xC2DD;&#xBCC4; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xD655;&#xC7A5; tethering &#xD5C8;&#xC6A9; &#xC791;&#xC740; &#xBD84;&#xC790; &#xC5B5;&#xC81C;&#xC81C;&#xB85C; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; ligands&#xC758; &#xC5B4;&#xC148;&#xBE14;&#xB9AC; caspase 3 &#xD558; &#xACE0; &#xB610;&#xD55C; &#xB3C4;&#xC6C0;&#xC774; &#xC9C1;&#xC811; &#xAC1C;&#xBCC4; &#xC601;&#xC5ED;&#xC5D0; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xD560; ligands&#xC758; &#xC2DD;&#xBCC4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; &#xBA3C;&#xC800; &#xC791;&#xC740; &#xBD84;&#xC790; &#39;&#xC775;&#xC2A4;&#xD150;&#xB354;&#39; irreversibly caspase 3 &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD14C;&#xC778; &#xC794;&#xB958;&#xBB3C;&#xC744; alkylates &#xD558; &#xACE0; &#xB610;&#xD55C; thiol &#xADF8;&#xB8F9;&#xC744; &#xD3EC;&#xD568; &#xD558;&#xB294; &#xC124;&#xACC4; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC218;&#xC815;&#xB41C; &#xB41C; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC774;&#xD669;&#xD654; &#xD3EC;&#xD568; &#xB41C; &#xC791;&#xC740; &#xBD84;&#xC790; &#xC870;&#xAC01;&#xC758; &#xB77C;&#xC774;&#xBE0C;&#xB7EC;&#xB9AC;&#xC5D0; &#xB300;&#xD574; &#xB2E4;&#xC74C; &#xC0C1;&#xC601; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;. &#xC9C8;&#xB7C9; &#xBD84;&#xC11D; ligands noncovalently &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC5D0; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xD558;&#xACE0; &#xB610;&#xD55C; &#xD655;&#xC7A5;&#xAE30; &#xC774;&#xD669;&#xD654; &#xACB0;&#xD569;&#xC744; &#xD615;&#xC131; &#xD558;&#xB294; &#xC2DD;&#xBCC4; &#xD558;&#xB294; &#xB370; &#xC0AC;&#xC6A9;&#xD55C;. &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xC694;&#xC18C;&#xB294; extender&#xC5D0;&#xC11C; &#xD568;&#xAED8; &#xC120;&#xD0DD; &#xB41C; &#xC870;&#xAC01; &#xC5F0;&#xACB0; druglike&#xC640; &#xB2E4;&#xB978; &#xC54C;&#xB824;&#xC9C4;&#xB41C; &#xC5B5;&#xC81C;&#xC81C;&#xB294; &#xAC00;&#xC5ED;, &#xAF49; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xBD84;&#xC790;&#xB97C; &#xC0DD;&#xC131; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xD55C; &#xBD84;&#xC790; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0; &#xC811;&#xADFC; &#xC800;&#xD574; apoptosis&#xC774;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD30C;&#xC0DD; &#xB41C;.

&#xD6A8;&#xC18C; &#xC5B5;&#xC81C;&#xC81C;&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xD604;&#xC7A5;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC870;&#xB9BD; &#xD655;&#xC7A5; &#xBC27;&#xC904;&#xB85C; &#xB9E4;&#xAE30;.

Ciste&iacute;na aspartil proteasa-3 (caspasa-3) es un mediador de la apoptosis y una diana terap&eacute;utica para una amplia gama de enfermedades. Usando una tecnolog&iacute;a din&aacute;mica combinatoria, &quot;extended atar&quot;, se identificaron &uacute;nicos nonpeptidic inhibidores de esta enzima. Inmovilizaci&oacute;n prolongado permiti&oacute; la identificaci&oacute;n de los ligandos que se unen a regiones discretas de caspasa-3 y tambi&eacute;n ayud&oacute; a dirigir el montaje de estos ligandos en inhibidores de mol&eacute;culas peque&ntilde;as. En primer lugar, hemos dise&ntilde;ado una mol&eacute;cula peque&ntilde;a &#39;extensor&#39; que alkylates irreversiblemente los residuos de ciste&iacute;na de la caspasa-3 y tambi&eacute;n contiene un grupo tiol. La prote&iacute;na modificada luego se proyect&oacute; contra una biblioteca de fragmentos de mol&eacute;culas peque&ntilde;as que contienen disulfuro. Espectrometr&iacute;a de masa se utiliza para identificar ligandos que subunidades se unen a la prote&iacute;na y que tambi&eacute;n forman un enlace de disulfuro con el extensor. Une los fragmentos seleccionados con elementos de uni&oacute;n de los extensores genera mol&eacute;culas reversibles, estrecha uni&oacute;n druglike y distinto de los inhibidores conocidos. Una mol&eacute;cula derivada de este enfoque inhibida apoptosis en las c&eacute;lulas.

Montaje in situ de inhibidores de la enzima usando hab&iacute;a extendido tethering.

&#x7ED1;&#x5B9A;&#x5728;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;-&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x63A5;&#x53E3;&#x5C5E;&#x6027;&#x7684;&#x4E86;&#x89E3;&#x4EC5;&#x9650;&#x4E8E;&#x81EA;&#x7136;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x4F19;&#x4F34;&#x6216;&#x786E;&#x5B9A;&#x7684;&#x566C;&#x83CC;&#x4F53;&#x663E;&#x793A;&#x7684;&#x5C0F;&#x5206;&#x5B50;&#x591A;&#x80BD;&#x7684;&#x7ED3;&#x6784;&#x548C;&#x7A81;&#x53D8;&#x5206;&#x6790;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x63D0;&#x51FA;&#x4E86;&#x9AD8;&#x5206;&#x8FA8;&#x7387;&#x7684; nonpeptidyl &#x5C0F;&#x5206;&#x5B50;&#xFF0C;&#x4EE5;&#x524D;&#x53D1;&#x73B0;&#x7684;&#x836F;&#x7528;&#x5316;&#x5B66;&#x5206;&#x6790; [&#x8482;&#x5229;&#x3001; J.W.(1997 &#x5E74;) &#x4E2D;&#x5357;&#x5DE5;&#x4E1A;&#x5927;&#x5B66; J.&#x54EA;&#x91CC;&#x5316;&#x5DE5;&#x5382;&#x56FD;&#x5BB6;&#x77F3;&#x6CB9;&#x516C;&#x53F8; 119&#xFF0C;7589 7590]&#xFF0C;&#x5176;&#x4E2D;&#x5C06;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x5230;&#x7EC6;&#x80DE;&#x56E0;&#x5B50;&#x767D;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4ECB;&#x7D20;-2&#x3002;&#x5C0F;&#x5206;&#x5B50;&#x5C06;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x5230;&#x76F8;&#x540C;&#x7684;&#x7AD9;&#x70B9;&#xFF0C;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x767D;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4ECB;&#x7D20;-2 &alpha; &#x53D7;&#x4F53;&#x548C;&#x767D;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4ECB;&#x7D20;-2 &#x7684;&#x514D;&#x8D39;&#x7ED3;&#x6784;&#x4E2D;&#x6CA1;&#x6709;&#x770B;&#x5230;&#x51F9;&#x69FD;&#x57CB;&#x3002;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x4E0E;&#x51E0;&#x79CD;&#x65E0;&#x7ED3;&#x6784;&#x7684;&#x6BD4;&#x8F83;&#x663E;&#x793A;&#x6B64;&#x7F51;&#x7AD9;&#x7684;&#x4E24;&#x4E2A;&#x5B50;&#x7F51;&#x7AD9;&#x7EC4;&#x6210;&#xFF1A; &#x4E00;&#x4E2A;&#x662F;&#x521A;&#x6027;&#xFF0C;&#x548C;&#x53E6;&#x4E00;&#x79CD;&#x662F;&#x9AD8;&#x5EA6;&#x81EA;&#x9002;&#x5E94;&#x3002;&#x70ED;&#x529B;&#x5B66;&#x6570;&#x636E;&#x8868;&#x660E;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x6784;&#x8C61;&#x4E4B;&#x95F4;&#x7684;&#x80FD;&#x91CF;&#x58C1;&#x5792;&#x8F83;&#x4F4E;&#x3002;&#x5B50;&#x7F51;&#x7AD9;&#x662F;&#x901A;&#x8FC7;&#x4F7F;&#x7528;&#x7F51;&#x7AD9;&#x5B9A;&#x5411;&#x7B5B;&#x9009;&#x65B9;&#x6CD5;&#x79F0;&#x4E3A;&#x4E2D;&#x7EE7;&#xFF0C;&#x5176;&#x4E2D;&#x5C0F;&#x7247;&#x6BB5;&#x88AB;&#x4FD8;&#x864F;&#x4E8C;&#x786B;&#x5316;&#x4EA4;&#x6C47;&#x5904;&#x4E0E;&#x5468;&#x56F4;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x5B50;&#x7F51;&#x7AD9;&#x5F15;&#x5165; IL-2 &#x7684;&#x534A;&#x80F1;&#x6C28;&#x9178;&#xFF0C;&#x89E3;&#x5256;&#x3002;X &#x5C04;&#x7EBF;&#x7ED3;&#x6784;&#x7684;&#x6813;&#x7CFB;&#x7684;&#x7247;&#x6BB5;&#x663E;&#x793A;&#x5B50;&#x7F51;&#x7AD9;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x7684;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x662F;&#x7C7B;&#x4F3C;&#x4E8E;&#x89C2;&#x5BDF;&#x5230;&#x4E0E;&#x539F;&#x59CB;&#x7684;&#x5C0F;&#x5206;&#x5B50;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;&#x81EA;&#x9002;&#x5E94;&#x5B50;&#x62F4;&#x8BB8;&#x591A;&#x66F4;&#x591A;&#x5316;&#x5408;&#x7269;&#x6BD4;&#x521A;&#x6027;&#x7684;&#x4E00;&#x4E2A;&#x3002;&#x56E0;&#x6B64;&#xFF0C;&#x81EA;&#x9002;&#x5E94;&#x6027;&#x8D28;&#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;-&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x63A5;&#x53E3;&#x63D0;&#x4F9B;&#x5C0F;&#x5206;&#x5B50;&#x8981;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x7684;&#x7AD9;&#x70B9;&#xFF0C;&#x5E76;&#x5F3A;&#x8C03;&#x5E94;&#x7528;&#x57FA;&#x4E8E;&#x7ED3;&#x6784;&#x7684;&#x8BBE;&#x8BA1;&#x6218;&#x7565;&#xFF0C;&#x4E0D;&#x80FD;&#x51C6;&#x786E;&#x9884;&#x6D4B;&#x52A8;&#x6001;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x8868;&#x9762;&#x7684;&#x6311;&#x6218;&#x3002;

&#x7ED1;&#x5B9A;&#x5230;&#x81EA;&#x9002;&#x5E94;&#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;-&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x63A5;&#x53E3;&#x7684;&#x5C0F;&#x5206;&#x5B50;&#x3002;

Understanding binding properties at protein-protein interfaces has been limited to structural and mutational analyses of natural binding partners or small peptides identified by phage display. Here, we present a high-resolution analysis of a nonpeptidyl small molecule, previously discovered by medicinal chemistry [Tilley, J. W., et al. (1997) J. Am. Chem. Soc. 119, 7589-7590], which binds to the cytokine IL-2. The small molecule binds to the same site that binds the IL-2 alpha receptor and buries into a groove not seen in the free structure of IL-2. Comparison of the bound and several free structures shows this site to be composed of two subsites: one is rigid, and the other is highly adaptive. Thermodynamic data suggest the energy barriers between these conformations are low. The subsites were dissected by using a site-directed screening method called tethering, in which small fragments were captured by disulfide interchange with cysteines introduced into IL-2 around these subsites. X-ray structures with the tethered fragments show that the subsite-binding interactions are similar to those observed with the original small molecule. Moreover, the adaptive subsite tethered many more compounds than did the rigid one. Thus, the adaptive nature of a protein-protein interface provides sites for small molecules to bind and underscores the challenge of applying structure-based design strategies that cannot accurately predict a dynamic protein surface.

Binding of small molecules to an adaptive protein-protein interface.

Comprendre les propri&eacute;t&eacute;s aux interfaces des prot&eacute;ines de liaison a &eacute;t&eacute; limit&eacute;e &agrave; des analyses structurelles et mutationnelles des partenaires de liaison naturelle ou petits peptides identifi&eacute;s par le phage display. Ici, nous pr&eacute;sentons une analyse &agrave; haute r&eacute;solution d&#39;une petite mol&eacute;cule de coiffes, d&eacute;couverte pr&eacute;c&eacute;demment par chimie m&eacute;dicinale [Tilley, W., et coll. (1997) J. mod. chim. SOC. 119, 7589-7590], qui se lie &agrave; la cytokine IL-2. La petite mol&eacute;cule se lie sur le site qui lie le r&eacute;cepteur alpha IL-2 et enterre dans une rainure ne pas vue dans la structure libre de IL-2. Comparaison de la limite et plusieurs structures libres montre ce site se compose de deux sous-sites : on est rigide, et l&#39;autre est tr&egrave;s adaptable. Donn&eacute;es thermodynamiques sugg&egrave;rent que les barri&egrave;res d&#39;&eacute;nergie entre ces conformations sont faibles. Les sous-sites ont &eacute;t&eacute; diss&eacute;qu&eacute;s en utilisant une m&eacute;thode de d&eacute;pistage dirig&eacute;e appel&eacute;e attachant, dans lequel les petits fragments furent captur&eacute;s par &eacute;change disulfure avec cyst&eacute;ines introduits dans IL-2 autour de ces sous-sites. Structures de rayons x avec les fragments captifs montrent que les interactions de liaison de sous-site sont semblables &agrave; celles observ&eacute;es avec la petite mol&eacute;cule originale. En outre, le sous-site adaptatif attach&eacute; compos&eacute;s plus nombreux que celui rigide. Ainsi, la nature adaptative d&#39;une interface de prot&eacute;ine-prot&eacute;ine fournit des sites pour les petites mol&eacute;cules lier et met en &eacute;vidence le d&eacute;fi de l&#39;application des strat&eacute;gies de conception bas&eacute;e sur la structure qui ne peut pas pr&eacute;dire avec pr&eacute;cision une surface dynamique de prot&eacute;ine.

Liaison de petites mol&eacute;cules en une interface adaptative de prot&eacute;ine-prot&eacute;ine.

Die Bindung von kleinen Molek&#xFC;len mit einem adaptiven Protein-Protein-Schnittstelle.

Comprensione associazione delle propriet&agrave; alle interfacce proteina-proteina &egrave; stata limitata alle analisi strutturali e mutazionale di associazione naturale partner o piccoli peptidi identificati dai display dei fagi. Presentiamo qui, un&#39;analisi ad alta risoluzione di una piccola molecola di nonpeptidyl, scoperta in precedenza da chimica farmaceutica [Tilley, J. W., et al (1997) J. em. Chem. Soc. 119, 7589-7590], che si associa a citochine IL-2. La piccola molecola si lega al sito stesso che si lega al recettore il-2 alfa e la seppellisce in un solco non visto nella struttura libera del IL-2. Confronto tra il limite e diverse strutture gratis mostra questo sito per essere composto da due siti secondari: uno &egrave; rigido, e l&#39;altro &egrave; altamente adattabile. Dati termodinamici suggeriscono che le barriere di energia tra queste conformazioni sono basse. I siti secondari sono stati sezionati utilizzando un metodo di screening diretto sito chiamato tethering, in cui piccoli frammenti sono stati catturati da disolfuro interscambio con cisteine introdotte in IL-2 intorno a questi siti secondari. Strutture a raggi x con i tethered frammenti mostrano che le interazioni di secondario-associazione sono simili a quelli osservati con la piccola molecola originale. Inoltre, il sito secondario adattivo legato molti composti pi&ugrave; di fatto quella rigida. Cos&igrave;, la natura adattativa di un interfaccia proteina-proteina fornisce siti per piccole molecole di legarsi e sottolinea la sfida di applicare strategie di progettazione basata sulla struttura che non &egrave; possibile prevedere con precisione una superficie dinamica della proteina.

Associazione di piccole molecole per un&#39;interfaccia adattivo della proteina-proteina.

&#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C7;&#x30A3;&#x30F3;&#x30B0; &#x30D7;&#x30ED;&#x30D1;&#x30C6;&#x30A3; &#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x754C;&#x9762;&#x3067;&#x306E;&#x7406;&#x89E3;&#x306F;&#x81EA;&#x7136;&#x7D50;&#x5408;&#x30D1;&#x30FC;&#x30C8;&#x30CA;&#x30FC;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x5C0F;&#x3055;&#x306A;&#x30D5;&#x30A1;&#x30FC;&#x30B8;&#x30C7;&#x30A3;&#x30B9;&#x30D7;&#x30EC;&#x30A4;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C9;&#x306E;&#x69CB;&#x9020;&#x3068;&#x5909;&#x7570;&#x89E3;&#x6790;&#x306B;&#x5236;&#x9650;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x3001;&#x4EE5;&#x524D;&#x306B;&#x691C;&#x51FA;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x533B;&#x85AC;&#x54C1;&#x5316;&#x5B66;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066; nonpeptidyl &#x5C0F;&#x3055;&#x306A;&#x5206;&#x5B50;&#x306E;&#x9AD8;&#x5206;&#x89E3;&#x80FD;&#x89E3;&#x6790;&#x3092;&#x7D39;&#x4ECB; [&#x30C6;&#x30A3;&#x30EA;&#x30FC;&#x306F;&#x3001;j. w., et al. (1997) J. &#x5348;&#x524D;&#x5316;&#x5B66;&#x5DE5;&#x5B66;&#x4F1A;&#x8A8C; 119&#x3001;7589 7590]&#x3001;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x30AB;&#x30A4;&#x30F3; IL-2 &#x306B;&#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C9;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x5C0F;&#x3055;&#x306A;&#x5206;&#x5B50;&#x306F; IL-2 &alpha; &#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x7D50;&#x5408;&#x3057;&#x3001;IL-2 &#x306E;&#x7121;&#x6599;&#x69CB;&#x9020;&#x3067;&#x898B;&#x305F;&#x3053;&#x3068;&#x306A;&#x3044;&#x304C;&#x6E9D;&#x3092;&#x57CB;&#x3081;&#x3001;&#x540C;&#x3058;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x3092;&#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C9;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C9;&#x3068;&#x3044;&#x304F;&#x3064;&#x304B;&#x306E;&#x7121;&#x6599;&#x306E;&#x69CB;&#x9020;&#x306E;&#x6BD4;&#x8F03;&#x306E; 2 &#x3064;&#x306E;&#x30B5;&#x30D6;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x3067;&#x69CB;&#x6210;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x3053;&#x306E;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#xFF1A; 1 &#x3064;&#x306F;&#x5805;&#x3044;&#x3068;&#x4ED6;&#x306E;&#x975E;&#x5E38;&#x306B;&#x9069;&#x5FDC;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x71B1;&#x529B;&#x5B66;&#x30C7;&#x30FC;&#x30BF;&#x306F;&#x3001;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x30B3;&#x30F3;&#x30DB;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x306E;&#x9593;&#x306E;&#x30A8;&#x30CD;&#x30EB;&#x30AE;&#x30FC;&#x969C;&#x58C1;&#x304C;&#x4F4E;&#x3044;&#x3067;&#x3059;&#x304A;&#x52E7;&#x3081;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30B5;&#x30D6;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x3067;&#x5C0F;&#x3055;&#x306A;&#x65AD;&#x7247;&#x30B8;&#x30B9;&#x30EB;&#x30D5;&#x30A3;&#x30C9;&#x4EA4;&#x63DB;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30A4;&#x30F3; IL-2 &#x306B;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x30B5;&#x30D6;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x5468;&#x308A;&#x5C0E;&#x5165;&#x3067;&#x6355;&#x7372;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x30C6;&#x30B6;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;&#x3068;&#x547C;&#x3070;&#x308C;&#x308B;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x6307;&#x793A;&#x30B9;&#x30AF;&#x30EA;&#x30FC;&#x30CB;&#x30F3;&#x30B0;&#x306E;&#x30E1;&#x30BD;&#x30C3;&#x30C9;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x89E3;&#x5256;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;X &#x7DDA;&#x69CB;&#x9020;&#x306E;&#x30C6;&#x30B6;&#x30FC;&#x306E;&#x65AD;&#x7247;&#x3067;&#x30B5;&#x30D6;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8; &#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C7;&#x30A3;&#x30F3;&#x30B0;&#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x304C;&#x5143;&#x306E;&#x5C0F;&#x5206;&#x5B50;&#x306E;&#x89B3;&#x5BDF;&#x3068;&#x540C;&#x69D8;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x307E;&#x305F;&#x3001;&#x591A;&#x304F;&#x306E;&#x3088;&#x308A;&#x591A;&#x304F;&#x306E;&#x5316;&#x5408;&#x7269;&#x9069;&#x5FDC;&#x30B5;&#x30D6;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x3092;&#x30C6;&#x30B6;&#x30FC;&#x5805;&#x3044; 1 &#x3064;&#x3088;&#x308A;&#x3082;&#x3002;&#x3057;&#x305F;&#x304C;&#x3063;&#x3066;&#x3001;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x30A4;&#x30F3;&#x30BF;&#x30FC;&#x30D5;&#x30A7;&#x30A4;&#x30B9;&#x306E;&#x9069;&#x5FDC;&#x6027;&#x8CEA;&#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C9;&#x3059;&#x308B;&#x5C0F;&#x5206;&#x5B50;&#x306E;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3057;&#x3001;&#x52D5;&#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x306E;&#x8868;&#x9762;&#x3092;&#x6B63;&#x78BA;&#x306B;&#x4E88;&#x6E2C;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306F;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x69CB;&#x9020;&#x30D9;&#x30FC;&#x30B9;&#x306E;&#x30C7;&#x30B6;&#x30A4;&#x30F3;&#x6226;&#x7565;&#x3092;&#x9069;&#x7528;&#x3059;&#x308B;&#x6311;&#x6226;&#x3092;&#x5F37;&#x8ABF;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x5C0F;&#x5206;&#x5B50;&#x9069;&#x5FDC;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x30A4;&#x30F3;&#x30BF;&#x30FC;&#x30D5;&#x30A7;&#x30A4;&#x30B9;&#x3078;&#x306E;&#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C9;&#x3002;

&#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;-&#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC778;&#xD130;&#xD398;&#xC774;&#xC2A4;&#xC5D0; &#xC18D;&#xC131;&#xC744; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xC774;&#xD574; &#xC790;&#xC5F0; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xD30C;&#xD2B8;&#xB108; &#xB610;&#xB294; &#xC0B4; &#xADE0; &#xC18C; &#xC804;&#xC2DC;&#xB85C; &#xC2DD;&#xBCC4; &#xD558;&#xB294; &#xC791;&#xC740; &#xD3A9; &#xD2F0; &#xB4DC;&#xC758; &#xAD6C;&#xC870; &#xBC0F; mutational &#xBD84;&#xC11D;&#xC73C;&#xB85C; &#xC81C;&#xD55C; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC5EC;&#xAE30;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xC57D; &#xD654;&#xD559;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC774;&#xC804;&#xC5D0; &#xBC1C;&#xACAC; &#xB41C; nonpeptidyl &#xC791;&#xC740; &#xBD84;&#xC790;&#xC758; &#xACE0;&#xD574;&#xC0C1;&#xB3C4; &#xBD84;&#xC11D; &#xC81C;&#xC2DC; [&#xD2F8; &#xB9AC;, J. W. &#xC678;. (1997) &#xC81C;&#xC774; &#xC774;&#xC5D0;&#xC694; &#xD654;&#xD559; soc. 119, 7589-7590], &#xD558;&#xB294; cytokine &#xC77C;&#xB9AC;&#xB178;&#xC774;-2 &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC791;&#xC740; &#xBD84;&#xC790; &#xC77C;&#xB9AC;&#xB178;&#xC774;-2 &#xC54C;&#xD30C; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4;&#xC5D0; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xD558;&#xACE0; &#xC77C;&#xB9AC;&#xB178;&#xC774;-2 &#xBB34;&#xB8CC; &#xAD6C;&#xC870;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBCFC; &#xC218; &#xC5C6;&#xB294; &#xD648;&#xC5D0; &#xC228; &#xACBC; &#xC5B4; &#xC694;&#xB294; &#xAC19;&#xC740; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8;&#xC5D0; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB41C; &#xC5EC;&#xB7EC; &#xBB34;&#xB8CC; &#xAD6C;&#xC870; &#xBE44;&#xAD50; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;&#xC774; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8;&#xC758; &#xB450; &#xD558;&#xC704; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8;: &#xD558;&#xB098;&#xB294; &#xC5C4;&#xACA9;&#xD55C;, &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; &#xB2E4;&#xB978; &#xB192;&#xC740; &#xC801;&#xC751;&#xB825;. &#xC5F4;&#xC5ED;&#xD559;&#xC801; &#xB370;&#xC774;&#xD130; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; conformations &#xC0AC;&#xC774;&#xC758; &#xC5D0;&#xB108;&#xC9C0; &#xC7A5;&#xBCBD;&#xC744; &#xB0AE;&#xC740; &#xAC83;&#xC774; &#xC88B;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xD558;&#xC704; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8;&#xB294; &#xC791;&#xC740; &#xC870;&#xAC01; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD14C;&#xC778;&#xC774; &#xD558;&#xC704;&#xC774; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8; &#xC8FC;&#xC704; &#xC77C;&#xB9AC;&#xB178;&#xC774;-2&#xC5D0; &#xB3C4;&#xC785; &#xB41C; &#xC774;&#xD669;&#xD654; &#xAD50;&#xD658;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC810;&#xB839; &#xD588;&#xB2E4; &#xB9E4;, &#xB77C;&#xB294; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8; &#xAC10;&#xB3C5; &#xC2EC;&#xC0AC; &#xBA54;&#xC11C;&#xB4DC;&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xD574; &#xBD80; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC18D;&#xBC15; &#xB418; &#xD30C;&#xD3B8; x-&#xC120; &#xAD6C;&#xC870; &#xD558;&#xC704; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC740; &#xC6D0;&#xB798; &#xC791;&#xC740; &#xBD84;&#xC790;&#xC640; &#xD568;&#xAED8; &#xAD00;&#xCC30; &#xADF8; &#xBE44;&#xC2B7;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xBCF4;&#xC5EC; &#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xAC8C;&#xB2E4;&#xAC00;, &#xB9CE;&#xC740; &#xB354; &#xB9CE;&#xC740; &#xD654;&#xD569;&#xBB3C; &#xACC1;&#xC5D0; &#xC801;&#xC751; &#xD558;&#xC704; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8; &#xBCF4;&#xB2E4; &#xB2E8;&#xB2E8;&#xD55C; &#xD55C;. &#xB530;&#xB77C;&#xC11C;, &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;-&#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC778;&#xD130;&#xD398;&#xC774;&#xC2A4;&#xC758; &#xC801;&#xC751;&#xD615; &#xC790;&#xC5F0; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xD560; &#xC791;&#xC740; &#xBD84;&#xC790;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8;&#xB97C; &#xC81C;&#xACF5; &#xD558; &#xACE0; &#xBC11;&#xC904; &#xB3D9;&#xC801; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xD45C;&#xBA74; &#xC815;&#xD655; &#xD558; &#xAC8C; &#xC608;&#xCE21;&#xD560; &#xC218; &#xC5C6;&#xB294; &#xAD6C;&#xC870; &#xAE30;&#xBC18; &#xB514;&#xC790;&#xC778; &#xC804;&#xB7B5;&#xC744; &#xC801;&#xC6A9; &#xD558;&#xB294; &#xB3C4;&#xC804;.

&#xC801;&#xC751;&#xD615; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;-&#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC778;&#xD130;&#xD398;&#xC774;&#xC2A4;&#xB97C; &#xC791;&#xC740; &#xBD84;&#xC790;&#xC758; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;.

Comprensi&oacute;n vinculante propiedades en interfaces de prote&iacute;nas se ha limitado a an&aacute;lisis estructurales y mutacionales de socios de la Uni&oacute;n natural o peque&ntilde;os p&eacute;ptidos identificados por phage display. Aqu&iacute;, presentamos un an&aacute;lisis de alta resoluci&oacute;n de una mol&eacute;cula peque&ntilde;a de nonpeptidyl, descubierto anteriormente por la qu&iacute;mica medicinal [Tilley, W., et al (1997) j am Chem Soc. 119, 7589-7590], que se une a la citocina IL-2. La mol&eacute;cula peque&ntilde;a se une al mismo sitio que se une al receptor de IL-2 alfa y entierra en un surco no visto en la estructura libre de IL-2. Comparaci&oacute;n entre el l&iacute;mite y varias estructuras libres muestra este sitio para ser compuesto de dos subsitios: uno es r&iacute;gida, y el otro es altamente adaptable. Datos termodin&aacute;micos sugieren que las barreras de energ&iacute;a entre estas conformaciones son bajas. Los subsitios se disectaron mediante un m&eacute;todo de proyecci&oacute;n dirigida llamado inmovilizaci&oacute;n, en el que peque&ntilde;os fragmentos fueron capturados por intercambio de disulfuro con ciste&iacute;nas introducidos en IL-2 alrededor de estos subsitios. Estructuras de rayos x con los fragmentos atadas muestran que las interacciones de Uni&oacute;n subsitio son similares a los observados con la peque&ntilde;a mol&eacute;cula original. Por otra parte, el subsitio adaptativo atado muchos m&aacute;s compuestos que hicieron una r&iacute;gida. As&iacute;, la naturaleza adaptativa de una interfaz de prote&iacute;nas proporciona sitios para mol&eacute;culas peque&ntilde;as enlazar y pone de manifiesto el desaf&iacute;o de aplicar estrategias de dise&ntilde;o basadas en la estructura que no pueden predecir con precisi&oacute;n una superficie din&aacute;mica de la prote&iacute;na.

Uni&oacute;n de peque&ntilde;as mol&eacute;culas en una interfaz adaptable prote&iacute;na-prote&iacute;na.

Densin &#x662F;&#x4E30;&#x5BCC;&#x652F;&#x67B6;&#x86CB;&#x767D;&#x5F62;&#x6210; &alpha;-actinin &#x4E0E; &alpha;CaMKII &#x7684;&#x9AD8;&#x4EB2;&#x548C;&#x590D;&#x6742;&#x7684;&#x7A81;&#x89E6;&#x540E;&#x5BC6;&#x5EA6; (PSD)&#x3002;&#x4E3A;&#x4E86;&#x8BC4;&#x4F30;&#x7684; densin &#x51FD;&#x6570;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x521B;&#x5EFA;&#x9F20;&#x6807;&#x7EBF;&#x7A7A;&#x5B83; (LRRC7) &#x8FDB;&#x884C;&#x7F16;&#x7801;&#x7684;&#x57FA;&#x56E0;&#x7A81;&#x53D8;&#x3002;&#x7EAF;&#x5408;&#x57FA;&#x56E0;&#x6572;&#x9664;&#x9F20;&#x663E;&#x793A;&#x5404;&#x79CD;&#x5404;&#x6837;&#x7684;&#x901A;&#x5E38;&#x88AB;&#x8BA4;&#x4E3A;&#x662F; endophenotypes &#x7684;&#x7CBE;&#x795E;&#x5206;&#x88C2;&#x75C7;&#x548C;&#x81EA;&#x95ED;&#x75C7;&#x8C31;&#x7CFB;&#x969C;&#x788D;&#x7684;&#x5F02;&#x5E38;&#x884C;&#x4E3A;&#x3002;&#x5728;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5C42;&#x9762;&#xFF0C;&#x635F;&#x5931; densin &#x7ED3;&#x679C;&#x5728;&#x5927;&#x8111;&#x4E2D;&#x7684; &alpha;-actinin &#x548C; mGluR5 &#x7684;&#x672C;&#x5730;&#x5316;&#x9009;&#x62E9;&#x6027;&#x51CF;&#x5C11;&#x548C;&#x5728; PSD &#x5206;&#x6570;&#xFF0C;DISC1 &#x6C34;&#x5E73;&#x4E0B;&#x964D;&#x79BB;&#x5B50;&#x578B;&#x8C37;&#x6C28;&#x9178;&#x53D7;&#x4F53;&#x7684;&#x6570;&#x91CF;&#x548C;&#x5176;&#x4ED6;&#x8457;&#x540D;&#x7684; PSD &#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x5219;&#x7EF4;&#x6301;&#x4E0D;&#x53D8;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;&#x5220;&#x9664; densin &#x7ED3;&#x679C;&#x5728;&#x635F;&#x5BB3;&#x4E2D;&#x7684;&#x4F5C;&#x7528;&#x548C; NMDA &#x53D7;&#x4F53;&#x4F9D;&#x8D56;&#x5F62;&#x5F0F;&#x7684;&#x957F;&#x671F;&#x6291;&#x90C1;&#xFF0C;&#x6539;&#x53D8; CaMKII NMDA &#x578B;&#x8C37;&#x6C28;&#x9178;&#x53D7;&#x4F53;&#xFF0C;&#x901A;&#x8FC7;&#x8C03;&#x8282;&#x7684;&#x65E9;&#x671F;&#x52A8;&#x6001;&#xFF0C;&#x5E76;&#x751F;&#x6210;&#x810A;&#x690E;&#x5F62;&#x6001;&#x5B66;&#x7684;&#x53D8;&#x5316;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7ED3;&#x679C;&#x8868;&#x660E; densin &#x5F71;&#x54CD;&#x7684; mGluRs &#x51FD;&#x6570;&#x548C; CaMKII &#x5728;&#x7A81;&#x89E6;&#xFF0C;&#x5E76;&#x6709;&#x52A9;&#x4E8E;&#x5728; PSD &#x5206;&#x6570;&#x4E2D;&#x7684; mGluR5 &#x548C; DISC1 &#x672C;&#x5730;&#x5316;&#x3002;&#x4ED6;&#x4EEC;&#x90FD;&#x7B26;&#x5408;&#x7834;&#x574F;&#x7684;&#x7EC4;&#x7EC7;&#x548C;/&#x6216;&#x7A81;&#x89E6;&#x540E;&#x4FE1;&#x53F7;&#x8F6C;&#x5BFC;&#x590D;&#x5408;&#x4F53;&#x5174;&#x594B;&#x6027;&#x7A81;&#x89E6;&#x52A8;&#x529B;&#x5B66;&#x7684;&#x7A81;&#x53D8;&#x53EF;&#x80FD;&#x4F1A;&#x5BFC;&#x81F4;&#x884C;&#x4E3A;&#x7684;&#x7CBE;&#x795E;&#x75BE;&#x75C5; endophenotypes &#x7684;&#x5047;&#x8BF4;&#x3002;

Densin-180 &#x5220;&#x9664;&#x7ED3;&#x679C;&#x4E2D;&#x4E0E;&#x7CBE;&#x795E;&#x75BE;&#x75C5;&#x76F8;&#x5173;&#x7684;&#x5F02;&#x5E38;&#x884C;&#x4E3A;&#xFF0C;&#x5E76;&#x964D;&#x4F4E; mGluR5 &#x548C; DISC1 &#x5728;&#x7A81;&#x89E6;&#x540E;&#x5BC6;&#x5EA6;&#x5206;&#x6570;&#x4E2D;&#x3002;

Densin is an abundant scaffold protein in the postsynaptic density (PSD) that forms a high-affinity complex with Î±CaMKII and Î±-actinin. To assess the function of densin, we created a mouse line with a null mutation in the gene encoding it (LRRC7). Homozygous knock-out mice display a wide variety of abnormal behaviors that are often considered endophenotypes of schizophrenia and autism spectrum disorders. At the cellular level, loss of densin results in reduced levels of Î±-actinin in the brain and selective reduction in the localization of mGluR5 and DISC1 in the PSD fraction, whereas the amounts of ionotropic glutamate receptors and other prominent PSD proteins are unchanged. In addition, deletion of densin results in impairment of mGluR- and NMDA receptor-dependent forms of long-term depression, alters the early dynamics of regulation of CaMKII by NMDA-type glutamate receptors, and produces a change in spine morphology. These results indicate that densin influences the function of mGluRs and CaMKII at synapses and contributes to localization of mGluR5 and DISC1 in the PSD fraction. They are consistent with the hypothesis that mutations that disrupt the organization and/or dynamics of postsynaptic signaling complexes in excitatory synapses can cause behavioral endophenotypes of mental illness.

Deletion of densin-180 results in abnormal behaviors associated with mental illness and reduces mGluR5 and DISC1 in the postsynaptic density fraction.

Densin est une prot&#xE9;ine riche &#xE9;chafaudage de la densit&#xE9; post-synaptique (PSD) qui forme un complexe de haute affinit&#xE9; avec &#x3B1;CaMKII et &#x3B1;-actinine. Afin d&#x26;#39;&#xE9;valuer la fonction de densin, nous avons cr&#xE9;&#xE9; une lign&#xE9;e de souris avec une mutation nulle dans le g&#xE8;ne codant pour celle-ci (LRRC7). Homozygotes souris knock-out afficher une grande vari&#xE9;t&#xE9; de comportements anormaux qui sont souvent consid&#xE9;r&#xE9;s endoph&#xE9;notypes de schizophr&#xE9;nie et de troubles du spectre autistique. Au niveau cellulaire, la perte des r&#xE9;sultats densin des niveaux r&#xE9;duits de &#x3B1;-actinine dans le cerveau et la r&#xE9;duction s&#xE9;lective de la localisation de mGluR5 et DISC1 dans la fraction du PSD, alors que les quantit&#xE9;s de r&#xE9;cepteurs ionotropiques du glutamate et d&#x26;#39;autres &#xE9;minents prot&#xE9;ines PSD sont inchang&#xE9;s. En outre, la d&#xE9;l&#xE9;tion de r&#xE9;sultats densin en cas d&#x26;#39;insuffisance de mGluR et NMDA r&#xE9;cepteur-d&#xE9;pendants formes de d&#xE9;pression &#xE0; long terme, modifie la dynamique d&#xE9;but de la r&#xE9;gulation de la CaMKII par les r&#xE9;cepteurs du glutamate de type NMDA, et produit un changement de la morphologie du rachis. Ces r&#xE9;sultats indiquent que densin influe sur la fonction de mGluR et CaMKII au niveau des synapses et contribue &#xE0; la localisation de mGluR5 et DISC1 dans la fraction du PSD. Ils sont compatibles avec l&#x26;#39;hypoth&#xE8;se que les mutations qui perturbent l&#x26;#39;organisation et / ou la dynamique de post-synaptiques complexes de signalisation dans les synapses excitatrices peut causer endoph&#xE9;notypes comportementales de la maladie mentale.

Suppression de Densin-180 R&#xE9;sultats par des comportements anormaux li&#xE9;s &#xE0; la maladie mentale et r&#xE9;duit les mGluR5 et DISC1 dans la fraction de densit&#xE9; postsynaptique

Densin ist ein reichlich Ger&uuml;st-Protein in die postsynaptisches Dichte (PSD), die einen hoher Affinit&auml;t-Komplex mit &alpha;CaMKII und &alpha;-Actinin bildet. Um die Funktion des Densin zu beurteilen, erstellten wir eine Maus-Linie eine null-Mutation im Gen f&uuml;r es (LRRC7). Homozygote Knock-out-M&auml;use zeigen eine Vielzahl von abnormen Verhaltensweisen, die h&auml;ufig Endophenotypes Schizophrenie und Autismus-Spektrum-St&ouml;rungen betrachtet werden. Auf zellul&auml;rer Ebene f&uuml;hrt zu Verlust von Densin verminderter H&auml;ufigkeit der &alpha;-Actinin im Gehirn und selektive Reduktion bei der Lokalisierung von mGluR5 und DISC1 in PSD Bruch, w&auml;hrend das Volumen des ionotrope Glutamatrezeptoren und andere prominente PSD-Proteine unver&auml;ndert sind. Dar&uuml;ber hinaus L&ouml;schen von Densin Ergebnisse Beeintr&auml;chtigung der mGluR- und NMDA-Rezeptor-abh&auml;ngigen Formen der langfristigen Depression ver&auml;ndert die fr&uuml;hen Dynamik Verordnung von CaMKII durch NMDA-Typ Glutamat-Rezeptoren und bewirkt eine &Auml;nderung der Wirbels&auml;ule Morphologie. Diese Ergebnisse zeigen, dass Densin die Funktion der mGluRs beeinflusst und CaMKII an Synapsen und tr&auml;gt zur Lokalisierung von mGluR5 und DISC1 in den PSD-Bruch. Sie stehen im Einklang mit der Hypothese, dass Mutationen, die die Organisation bzw. die Dynamik des postsynaptisches Signalling-komplexen in exzitatorischen Synapsen st&ouml;ren verhaltensbasierten Endophenotypes psychischer Erkrankungen verursachen k&ouml;nnen.

L&ouml;schen von Densin-180 Ergebnisse in abnorme Verhaltensweisen verbunden mit psychischen Erkrankungen und reduziert mGluR5 und DISC1 in den Bruch postsynaptisches Dichte.

Densin &egrave; una proteina dell&#39;impalcatura abbondanti nella densit&agrave; postsinaptica (PSD) che forma un complesso ad alta affinit&agrave; con &alpha;CaMKII e &alpha;-actinina. Per valutare la funzione di densin, abbiamo creato una linea di mouse con una mutazione nel gene che codifica per esso (LRRC7) null. Topi knock-out omozigoti visualizzare una vasta gamma di comportamenti anomali che sono spesso considerati endofenotipi dei disordini di spettro di schizofrenia e autismo. A livello cellulare, perdita di densin risultati nella riduzione dei livelli di &alpha;-actinina nel cervello e riduzione selettiva nella localizzazione di mGluR5 e Disco1 nella frazione PSD, considerando la quantit&agrave; di recettori del glutammato ionotropici e altre importanti proteine PSD restano invariati. In aggiunta, eliminazione dei risultati densin in danno di mGluR e forme dipendente dal recettore NMDA della depressione a lungo termine, altera la dinamica precoce del regolamento di CaMKII dai recettori glutammato tipo NMDA e produce un cambiamento nella morfologia della colonna vertebrale. Questi risultati indicano che densin influenza la funzione di mGluRs e CaMKII alla sinapsi e contribuisce alla localizzazione di mGluR5 e Disco1 nella frazione PSD. Essi sono coerenti con l&#39;ipotesi che le mutazioni che interrompono l&#39;organizzazione e/o dinamica dei complessi segnalazione sinaptica nella sinapsi eccitatorie possono causare endofenotipi comportamentale della malattia mentale.

Eliminazione del densin-180 risultati anormali comportamenti associati con la malattia mentale e riduce mGluR5 e Disco1 nella frazione densit&agrave; postsinaptica.

Densin&#x306F;&#x3B1;CaMKII&#x3068;&#x3B1;-&#x30A2;&#x30AF;&#x30C1;&#x30CB;&#x30F3;&#x3068;&#x9AD8;&#x89AA;&#x548C;&#x6027;&#x8907;&#x5408;&#x4F53;&#x3092;&#x5F62;&#x6210;&#x3057;&#x3001;&#x30B7;&#x30CA;&#x30D7;&#x30B9;&#x5F8C;&#x5BC6;&#x5EA6;&#xFF08;PSD&#xFF09;&#x306E;&#x8C4A;&#x5BCC;&#x306A;&#x8DB3;&#x5834;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3002; densin&#x306E;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3092;&#x8A55;&#x4FA1;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x30B3;&#x30FC;&#x30C9;&#x3059;&#x308B;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x305D;&#x308C;&#xFF08;LRRC7&#xFF09;&#x306E;&#x30CC;&#x30EB;&#x5909;&#x7570;&#x3092;&#x6301;&#x3064;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x30E9;&#x30A4;&#x30F3;&#x3092;&#x4F5C;&#x6210;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x30DB;&#x30E2;&#x63A5;&#x5408;&#x4F53;&#x30CE;&#x30C3;&#x30AF;&#x30A2;&#x30A6;&#x30C8;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x306F;&#x3001;&#x3057;&#x3070;&#x3057;&#x3070;&#x7D71;&#x5408;&#x5931;&#x8ABF;&#x75C7;&#x3068;&#x81EA;&#x9589;&#x75C7;&#x30B9;&#x30DA;&#x30AF;&#x30C8;&#x30E9;&#x30E0;&#x969C;&#x5BB3;&#x306E;endophenotypes&#x8003;&#x3048;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x7570;&#x5E38;&#x884C;&#x52D5;&#x306E;&#x3055;&#x307E;&#x3056;&#x307E;&#x306A;&#x3092;&#x8868;&#x793A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30A4;&#x30AA;&#x30F3;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x578B;&#x30B0;&#x30EB;&#x30BF;&#x30DF;&#x30F3;&#x9178;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x3084;&#x4ED6;&#x306E;&#x8457;&#x540D;&#x306A;PSD&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x306E;&#x91CF;&#x306F;&#x5909;&#x308F;&#x3089;&#x306A;&#x3044;&#x306E;&#x306B;&#x5BFE;&#x3057;&#x3001;&#x8133;&#x3084;PSD&#x753B;&#x5206;&#x306B;&#x4F53;mGluR5&#x3068;DISC1&#x306E;&#x5C40;&#x5728;&#x306E;&#x9078;&#x629E;&#x7684;&#x9084;&#x5143;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x3B1;-&#x30A2;&#x30AF;&#x30C1;&#x30CB;&#x30F3;&#x306E;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x4F4E;&#x4E0B;&#x306B;densin&#x7D50;&#x679C;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x3067;&#x3001;&#x640D;&#x5931;&#x3001;&#x3002;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x3001;&#x969C;&#x5BB3;mGluR&#x306E;&#x7684;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x9577;&#x671F;&#x7684;&#x306A;&#x4E0D;&#x6CC1;&#x306E;NMDA&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x4F9D;&#x5B58;&#x6027;&#x306E;&#x5F62;&#x3067;densin&#x7D50;&#x679C;&#x306E;&#x524A;&#x9664;&#x306F;&#x3001;NMDA&#x578B;&#x30B0;&#x30EB;&#x30BF;&#x30DF;&#x30F3;&#x9178;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x306B;&#x3088;&#x308B;CaMKII&#x306E;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x306E;&#x521D;&#x671F;&#x30C0;&#x30A4;&#x30CA;&#x30DF;&#x30AF;&#x30B9;&#x3092;&#x5909;&#x5316;&#x3055;&#x305B;&#x308B;&#x3001;&#x3068;&#x30B9;&#x30D1;&#x30A4;&#x30F3;&#x5F62;&#x614B;&#x306E;&#x5909;&#x5316;&#x3092;&#x751F;&#x6210;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x306F;densin&#x306F;&#x3001;&#x30B7;&#x30CA;&#x30D7;&#x30B9;&#x3067;mGluRs&#x3068;CaMKII&#x306E;&#x6A5F;&#x80FD;&#x306B;&#x5F71;&#x97FF;&#x3092;&#x4E0E;&#x3048;&#x3001;PSD&#x753B;&#x5206;&#x306B;&#x4F53;mGluR5&#x3068;DISC1&#x306E;&#x5C40;&#x5728;&#x5316;&#x306B;&#x5BC4;&#x4E0E;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x5F7C;&#x3089;&#x306F;&#x3001;&#x7D44;&#x7E54;&#x304A;&#x3088;&#x3073;/&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x8208;&#x596E;&#x6027;&#x30B7;&#x30CA;&#x30D7;&#x30B9;&#x306E;&#x30B7;&#x30CA;&#x30D7;&#x30B9;&#x5F8C;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#x8907;&#x5408;&#x4F53;&#x306E;&#x30C0;&#x30A4;&#x30CA;&#x30DF;&#x30AF;&#x30B9;&#x3092;&#x6DF7;&#x4E71;&#x3055;&#x305B;&#x308B;&#x5909;&#x7570;&#x306F;&#x3001;&#x7CBE;&#x795E;&#x75BE;&#x60A3;&#x306E;&#x884C;&#x52D5;endophenotypes&#x3092;&#x5F15;&#x304D;&#x8D77;&#x3053;&#x3059;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x304C;&#x3042;&#x308B;&#x3068;&#x3044;&#x3046;&#x4EEE;&#x8AAC;&#x3068;&#x6574;&#x5408;&#x7684;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3002;

&#x7CBE;&#x795E;&#x75BE;&#x60A3;&#x306B;&#x4F34;&#x3046;&#x7570;&#x5E38;&#x884C;&#x52D5;&#x306E;Densin-180&#x7D50;&#x679C;&#x306E;&#x524A;&#x9664;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x30B7;&#x30CA;&#x30D7;&#x30B9;&#x5F8C;&#x5BC6;&#x5EA6;&#x753B;&#x5206;&#x306B;&#x4F53;mGluR5&#x3068;DISC1&#x3092;&#x524A;&#x6E1B;

Densin postsynaptic &#xBC00;&#xB3C4; (PSD) &Alpha;camkii&#xC640; &alpha;-actinin &#xC120;&#xD638;&#xB3C4; &#xB192;&#xC740; &#xB2E8;&#xC9C0;&#xB97C; &#xD615;&#xC131; &#xD558;&#xB294; &#xD48D;&#xBD80;&#xD55C; &#xBE44; &#xACC4; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC774;&#xB2E4;. Densin&#xC758; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC744; &#xD3C9;&#xAC00; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD574; &#xC778;&#xCF54;&#xB529; (LRRC7) &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC5D0;&#xC11C; null &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774;&#xC640; &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4; &#xB77C;&#xC778;&#xC744; &#xB9CC;&#xB4E4;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. Homozygous &#xB178;&#xD06C; &#xC544;&#xC6C3; &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4; &#xD45C;&#xC2DC; &#xB2E4;&#xC591; &#xD55C; &#xBE44;&#xC815;&#xC0C1;&#xC801;&#xC778; &#xD589;&#xB3D9;&#xC744; &#xC885;&#xC885; &#xC815;&#xC2E0; &#xBD84;&#xC5F4; &#xC99D;&#xACFC; &#xC790;&#xD3D0;&#xC99D; &#xC2A4;&#xD399;&#xD2B8;&#xB7FC; &#xC7A5;&#xC560;&#xC758; endophenotypes &#xC774;&#xB77C;&#xACE0; &#xC5EC;&#xACA8;&#xC9C4;&#xB2E4;. &#xC138;&#xD3EC; &#xC218;&#xC900;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC190;&#xC2E4; densin ionotropic glutamate &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; &#xAE08;&#xC561;&#xACFC; &#xB2E4;&#xB978; &#xB208;&#xC5D0; &#xB744;&#xB294; PSD &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xBCC0;&#xACBD; &#xB418;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xBC18;&#xBA74; &#xB1CC;&#xC5D0;&#xC11C; &alpha;-actinin &#xBC0F; Mglur5&#xC758; &#xC9C0;&#xC5ED;&#xD654;&#xC5D0; &#xC120;&#xD0DD;&#xC801; &#xAC10;&#xC18C;&#xC640; PSD &#xBD84;&#xC218;&#xC5D0;&#xC11C; DISC1 &#xAC10;&#xC18C; &#xC218;&#xC900;&#xC5D0;&#xC11C; &#xACB0;&#xACFC;. &#xB610;&#xD55C;, mGluR &#xBC0F; NMDA &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4;&#xC5D0; &#xC885;&#xC18D;&#xC801;&#xC778; &#xD615;&#xD0DC;&#xC758; &#xC7A5;&#xAE30; &#xBD88;&#xD669;&#xC758; &#xC7A5;&#xC560;&#xC5D0;&#xC11C; densin &#xACB0;&#xACFC;&#xC758; &#xC0AD;&#xC81C; NMDA &#xD615; glutamate &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4;&#xC5D0;&#xC758; &#xD55C; Camkii&#xC758; &#xADDC;&#xC81C;&#xC758; &#xCD08;&#xAE30; &#xC5ED;&#xD559;&#xC744; &#xBCC0;&#xACBD; &#xD558;&#xBA70; &#xCC99;&#xCD94; &#xD615;&#xD0DC;&#xC5D0; &#xBCC0;&#xD654;&#xB97C; &#xC0DD;&#xC131; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xACB0;&#xACFC; densin Mglurs&#xC758; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC5D0; &#xC601;&#xD5A5;&#xC744; &#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xBC0F; Camkii&#xC5D0;&#xC11C; synapses PSD &#xBD84;&#xC218;&#xC5D0;&#xC11C; mGluR5 &#xBC0F; DISC1 &#xD604;&#xC9C0;&#xD654;&#xC5D0; &#xAE30;&#xC5EC; &#xD558; &#xACE0; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0C5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xADF8;&#xB4E4;&#xC740; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xC870;&#xC9C1; &#xB610;&#xB294; postsynaptic &#xC2E0;&#xD638; &#xB2E8;&#xC9C0; &#xD765;&#xBD84; &#xC131;&#xC758; &#xB0C5;&#xC758; &#xC5ED;&#xB3D9;&#xC131;&#xC744; &#xBC29;&#xD574; &#xD558;&#xB294; &#xC815;&#xC2E0; &#xC9C8;&#xD658;&#xC758; &#xD589;&#xB3D9; endophenotypes &#xD558;&#xBA74; &#xAC00;&#xC124;&#xACFC; &#xC77C;&#xCE58; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Densin-180&#xC758; &#xC0AD;&#xC81C; &#xC815;&#xC2E0; &#xC9C8;&#xD658;&#xACFC; &#xAD00;&#xB828; &#xB41C; &#xBE44;&#xC815;&#xC0C1;&#xC801;&#xC778; &#xB3D9;&#xC791; &#xBC1C;&#xC0DD; &#xBC0F; postsynaptic &#xBC00;&#xB3C4; &#xBD84;&#xC218;&#xC5D0;&#xC11C; mGluR5 &#xBC0F; DISC1 &#xAC10;&#xC18C;.

Densin es una abundancia de prote&#xED;nas andamio en la densidad postsin&#xE1;ptica (PSD), que forma un complejo de alta afinidad con &#x3B1;CaMKII y &#x3B1;-actinina. Para evaluar la funci&#xF3;n de densin, hemos creado una l&#xED;nea de ratones con una mutaci&#xF3;n nula en el gen que codifica para &#xE9;l (LRRC7). Homocigotos ratones knock-out mostrar una amplia variedad de comportamientos anormales que suelen considerarse endofenotipos de la esquizofrenia y los trastornos del espectro autista. En el nivel celular, la p&#xE9;rdida de los resultados densin en niveles reducidos de &#x3B1;-actinina en el cerebro y la reducci&#xF3;n selectiva en la localizaci&#xF3;n de mGluR5 y DISC1 en la fracci&#xF3;n del PSD, mientras que las cantidades de receptores de glutamato ionotr&#xF3;picos y otras prote&#xED;nas PSD prominentes son sin cambios. En adici&#xF3;n, supresi&#xF3;n de los resultados densin en menoscabo de mGluR-NMDA y dependientes receptor formas de depresi&#xF3;n a largo plazo, altera la din&#xE1;mica tempranas de regulaci&#xF3;n de CaMKII por los receptores de glutamato NMDA tipo, y produce un cambio en la morfolog&#xED;a de la columna vertebral. Estos resultados indican que densin influye en la funci&#xF3;n de mGluRs y CaMKII en las sinapsis y contribuye a la localizaci&#xF3;n de mGluR5 y DISC1 en la fracci&#xF3;n del PSD. Son consistentes con la hip&#xF3;tesis de que las mutaciones que alteran la organizaci&#xF3;n y / o din&#xE1;mica de postsin&#xE1;pticos complejos de se&#xF1;alizaci&#xF3;n en las sinapsis excitadoras puede causar endofenotipos comportamiento de la enfermedad mental.

La eliminaci&#xF3;n de Densin-180 Resultados de conductas anormales relacionadas con la enfermedad mental y reduce el mGluR5 y DISC1 en la Fracci&#xF3;n densidad postsin&#xE1;ptica

Article	Year
Identification of potent and selective small-molecule inhibitors of caspase-3 through the use of extended tethering and structure-based drug design. Journal of medicinal chemistry\| PubMed ID: 12408711	2002
Quantitative chimeric analysis of six specificity determinants that differentiate Escherichia coli aspartate from tyrosine aminotransferase. Protein science : a publication of the Protein Society\| PubMed ID: 12441383	2002
In situ assembly of enzyme inhibitors using extended tethering. Nature biotechnology\| PubMed ID: 12563278	2003
Binding of small molecules to an adaptive protein-protein interface. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America\| PubMed ID: 12582206	2003
Deletion of densin-180 results in abnormal behaviors associated with mental illness and reduces mGluR5 and DISC1 in the postsynaptic density fraction. The Journal of neuroscience : the official journal of the Society for Neuroscience\| PubMed ID: 22072671	2011

Tinh N. Luong

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