in-vitro-trna-methylation-assay-with-entamoeba-histolytica-dna-trna

<em>In vitro</em> tRNA Methylation Assay with the <em>Entamoeba histolytica</em> DNA and tRNA Methyltransferase Dnmt2 (Ehmeth) Enzyme

Protozoan parasites are among the most devastating infectious agents of humans responsible for a variety of diseases including amebiasis, which is one of ...

Johannes Gutenberg University

&#x5047;&#x5C3F;&#x82F7;&#x662F;&#x6700;&#x4E30;&#x5BCC;&#x7684; 100 &#x591A;&#x4E2A;&#x5316;&#x5B66;&#x72EC;&#x7279;&#x81EA;&#x7136;&#x6838;&#x82F7;&#x9178;&#x4FEE;&#x6539;&#x3002;&#x5176;&#x5408;&#x6210;&#x7684;&#x5F02;&#x6784;&#x5316;&#x53CD;&#x5E94;&#x4E2D;&#x7684; RNA &#x94FE;&#x5C3F;&#x82F7;&#x6B8B;&#x7559;&#x7684;&#x7EC4;&#x6210;&#x548C;&#x5047;&#x5C3F;&#x82F7;&#x5408;&#x9176;&#x50AC;&#x5316;&#x3002;&#x4E0D;&#x5BFB;&#x5E38;&#x7684;&#x53CD;&#x5E94;&#x673A;&#x5236;&#x5DF2;&#x6210;&#x4E3A;&#x5BF9;&#x8C61;&#x91CD;&#x65B0;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x5DE5;&#x4F5C;&#xFF0C;&#x7ECF;&#x5E38;&#x6D89;&#x53CA;&#x66F4;&#x6362;&#x57FA;&#x677F;&#x5364;&#x5316;&#x8FC7;&#x7A0B;&#x4E0E; 5-&#x6C1F;&#x5C3F;&#x5627;&#x5576; (f(5)U)&#x3002;f (5) U &#x5DF2;&#x77E5;&#x7684;&#x5047;&#x5C3F;&#x82F7;&#x5408;&#x9176;&#x6D3B;&#x6027;&#xFF0C;&#x6709;&#x6548;&#x6291;&#x5236;&#x5242;&#xFF0C;&#x4F46;&#x5728;&#x76EE;&#x6807;&#x5047;&#x5C3F;&#x82F7;&#x5408;&#x9176;&#x4E4B;&#x95F4;&#x4E0D;&#x540C;&#x7684;&#x5F71;&#x54CD;&#x3002;&#x884D;&#x751F;&#x54C1;&#x7684; f (5) &#x4F60;&#x4EE5;&#x524D;&#x88AB;&#x68C0;&#x6D4B;&#x5230;&#xFF0C;&#x54EA;&#x4E9B;&#x601D;&#x60F3;&#x662F;&#x8981;&#x4E48;&#x6C34;&#x89E3;&#x4EA7;&#x7269;&#x7684;&#x5171;&#x4EF7;&#x952E;&#x9176; RNA &#x52A0;&#x5408;&#x7269;&#x6216;&#x5F02;&#x6784;&#x5316;&#x4E2D;&#x95F4;&#x4F53;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#x6211;&#x4EEC;&#x63CF;&#x8FF0;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x7684;&#x5047;&#x5C3F;&#x82F7;&#x5408;&#x9176; 1 (Pus1p) &#x4E0E; f (5) U &#x5305;&#x542B; tRNA&#x3002;&#x6240;&#x8FF0;&#x7684;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x662F;&#x7279;&#x5B9A;&#x4E8E; Pus1p &#x548C;&#x4F4D;&#x7F6E; 27 &#x4E2D; tRNA &#x7684;&#x53CD;&#x5BC6;&#x7801;&#x5B50;&#x5E72;&#xFF0C;&#x4F46;&#x9176;&#x5F62;&#x6210;&#x5171;&#x4EF7;&#x52A0;&#x5408;&#x7269;&#x65E2;&#x6863;&#x5728;&#x4EE5;&#x524D;&#x786E;&#x5B9A;&#x7684;&#x53CD;&#x5E94;&#x4E2D;&#x95F4;&#x4F53; f (5) &#x7F8E;&#x56FD;F (5) U27 &#x6B8B;&#x7559;&#xFF0C;&#x5982;&#x6309;&#x4F7F;&#x7528;&#x8584;&#x5C42;&#x8272;&#x8C31;&#x548C;&#x8D28;&#x8C31;&#x5206;&#x6790;&#x6CD5;&#xFF0C;&#x4E00;&#x79CD;&#x57FA;&#x4E8E;&#x8131;&#x6C27;&#x7684;&#x68C0;&#x6D4B;&#x65B9;&#x6CD5;&#x5206;&#x6790;&#x663E;&#x793A;&#x7406;&#x5316;&#x6027;&#x8D28;&#x4E0D;&#x53D8;&#x7684;&#x53EF;&#x9006;&#x4E0E; Pus1p &#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;&#x56E0;&#x6B64;&#xFF0C;Pus1p &#x7ED1;&#x5B9A; (5) f U &#x542B;&#x886C;&#x5E95;&#xFF0C;&#x4F46;&#x662F;&#xFF0C;&#x76F8;&#x6BD4;&#x4E4B;&#x4E0B;&#x5176;&#x4ED6;&#x5047;&#x5C3F;&#x82F7;&#x5408;&#x5230;&#x53F6; f (5) U &#x4E0D;&#x53D8;&#x7684;&#x5316;&#x5B66;&#x7ED3;&#x6784;&#x3002;&#x5177;&#x4F53;&#xFF0C;&#x4F46; nonproductive&#xFF0C;&#x4E92;&#x52A8;&#x8868;&#x660E;&#x8FD9;&#x91CC;&#x56E0;&#x800C;&#x6784;&#x6210;&#x4E2D;&#x95F4;&#x4F53;&#x8113;&#x8425;&#x4E1A;&#x989D;&#xFF0C;&#x505C;&#x6EDE;&#x5728;&#x50AC;&#x5316;&#x65E9;&#x671F;&#x72B6;&#x6001; &#xFF08;5&#xFF09; U f &#x7684;&#x5B58;&#x5728;&#x3002;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x7684;&#x8367;&#x5149;&#x6807;&#x8BB0;&#x7684;&#x8367;&#x5149;&#x5404;&#x5411;&#x5F02;&#x6027;&#x5B9E;&#x65F6;&#x8BFB;&#x51FA;&#x7684; tRNA &#x4E0E;&#x97F3;&#x54C1; Pus1p &#x89C2;&#x5BDF;&#x53D1;&#x73B0;&#x91CD;&#x5927;&#x7ED3;&#x6784;&#x7578;&#x53D8;&#x7684; f (5) U tRNA &#x7ED3;&#x6784;&#x4E2D;&#x7684;&#x5047;&#x5C3F;&#x82F7;&#x50AC;&#x5316;&#x505C;&#x6EDE;&#x4E0D;&#x524D;&#x7684;&#x4E2D;&#x95F4;&#x72B6;&#x6001;&#x3002;

&#x505C;&#x6EDE;&#x4E0D;&#x524D;&#x7684;&#x65E9;&#x671F;&#x4E2D;&#x95F4;&#x4F53;&#x76D1;&#x6D4B;&#x5B9E;&#x65F6;&#x97F3;&#x54C1;&#x7684;&#x5047;&#x5C3F;&#x82F7;&#x5408;&#x6210;&#x7684;&#x5F62;&#x6210;&#x3002;

Pseudouridine is the most abundant of more than 100 chemically distinct natural ribonucleotide modifications. Its synthesis consists of an isomerization reaction of a uridine residue in the RNA chain and is catalyzed by pseudouridine synthases. The unusual reaction mechanism has become the object of renewed research effort, frequently involving replacement of the substrate uridines with 5-fluorouracil (f(5)U). f(5)U is known to be a potent inhibitor of pseudouridine synthase activity, but the effect varies among the target pseudouridine synthases. Derivatives of f(5)U have previously been detected, which are thought to be either hydrolysis products of covalent enzyme-RNA adducts, or isomerization intermediates. Here we describe the interaction of pseudouridine synthase 1 (Pus1p) with f(5)U-containing tRNA. The interaction described is specific to Pus1p and position 27 in the tRNA anticodon stem, but the enzyme neither forms a covalent adduct nor stalls at a previously identified reaction intermediate of f(5)U. The f(5)U27 residue, as analyzed by a DNAzyme-based assay using TLC and mass spectrometry, displayed physicochemical properties unaltered by the reversible interaction with Pus1p. Thus, Pus1p binds an f(5)U-containing substrate, but, in contrast to other pseudouridine synthases, leaves the chemical structure of f(5)U unchanged. The specific, but nonproductive, interaction demonstrated here thus constitutes an intermediate of Pus turnover, stalled by the presence of f(5)U in an early state of catalysis. Observation of the interaction of Pus1p with fluorescence-labeled tRNA by a real-time readout of fluorescence anisotropy and FRET revealed significant structural distortion of f(5)U-tRNA structure in the stalled intermediate state of pseudouridine catalysis.

Formation of a stalled early intermediate of pseudouridine synthesis monitored by real-time FRET.

Pseudouridine est le plus abondant de plus de 100 modifications de ribonucl&eacute;otide naturel chimiquement distinctes. Sa synth&egrave;se est constitu&eacute; d&#39;une r&eacute;action d&#39;isom&eacute;risation d&#39;un r&eacute;sidu de l&#39;uridine dans la cha&icirc;ne de RNA et est catalys&eacute;e par la pseudouridine synthases. Le m&eacute;canisme de r&eacute;action inhabituelle est devenu l&#39;objet d&#39;une recherche renouvel&eacute;e, mettant en jeu le remplacement des uridines substrat avec le 5-fluorouracile (f(5)U). f (5) U est connu pour &ecirc;tre un puissant inhibiteur de l&#39;activit&eacute; pseudouridine synthase, mais l&#39;effet varie entre les cible pseudouridine synthases. D&eacute;riv&eacute;s de f (5), que vous avez d&eacute;j&agrave; &eacute;t&eacute; d&eacute;tect&eacute;, qui est pens&eacute;e pour &ecirc;tre soit produits d&#39;hydrolyse de l&#39;ARN-enzyme covalent adduits ou interm&eacute;diaires de l&#39;isom&eacute;risation. Nous d&eacute;crivons ici l&#39;interaction de la pseudouridine synthase 1 (Pus1p) avec f (5) contenant U ARNt. L&#39;interaction d&eacute;crite est sp&eacute;cifique aux Pus1p et position 27 dans la tige d&#39;anticodon des ARNt, mais l&#39;enzyme forme un adduit covalent ni au niveau d&#39;un interm&eacute;diaire de r&eacute;action pr&eacute;c&eacute;demment identifi&eacute;s d&#39;u. f (5) Le r&eacute;sidu de U27 f (5), telle qu&#39;analys&eacute;e par un test ADNzyme &agrave; l&#39;aide de TLC et spectrom&eacute;trie de masse, affiche les propri&eacute;t&eacute;s physicochimiques alt&eacute;r&eacute;es par l&#39;interaction r&eacute;versible avec Pus1p. Ainsi, Pus1p lie un substrat contenant U de f (5), mais, en revanche, d&#39;autres pseudouridine synthases, quitte la structure chimique de f (5) U inchang&eacute;. Les sp&eacute;cifiques, mais la non-production, interaction d&eacute;montr&eacute;e ici constitue donc un interm&eacute;diaire du chiffre d&#39;affaires de Pus, bloqu&eacute; par la pr&eacute;sence de f (5) U dans un &eacute;tat pr&eacute;coce de la catalyse. Observation de l&#39;interaction de Pus1p avec le tRNA marqu&eacute;s par fluorescence par une lecture en temps r&eacute;el de l&#39;anisotropie de la fluorescence et la frette a r&eacute;v&eacute;l&eacute; une distorsion structurelle importante de structure U-tRNA f (5) dans l&#39;&eacute;tat interm&eacute;diaire impasse de catalyse pseudouridine.

Formation d&#39;un interm&eacute;diaire d&eacute;but impasse de synth&egrave;se pseudouridine surveill&eacute; par FRET en temps r&eacute;el.

Pseudouridin ist die h&auml;ufigste von mehr als 100 chemisch unterschiedliche nat&uuml;rliche RIBONUKLEOTID-&Auml;nderungen. Seine Synthese besteht aus einer Isomerisierung Reaktion ein Uridin-R&uuml;ckst&auml;nde in der RNA-Kette und ist katalysiert durch Pseudouridin-Synthasen. Der ungew&ouml;hnliche Reaktionsmechanismus geworden das Objekt des erneuerten Forschungsanstrengungen, bei denen es Ersatz f&uuml;r die Substrat-Uridines mit 5-Fluorouracil (f(5)U). f (5) U bekannt ist ein potenter Inhibitor der Pseudouridin-Synthase-Aktivit&auml;t, aber der Effekt variiert unter den Ziel Pseudouridin-Synthasen. Zuvor wurden noch Ableitungen von f (5) U nachgewiesen, sind Gedanken werden entweder Hydrolyseprodukte von Enzym-RNA-kovalente Addukte oder Isomerisierung Zwischenprodukte. Hier beschreiben wir das Zusammenspiel von Pseudouridin-Synthase 1 (Pus1p) mit f (5) U-haltigen tRNA. Die Interaktion beschrieben ist spezifisch f&uuml;r Pus1p und Position 27 in der tRNA Anticodon St&auml;ngel, aber das Enzym weder bildet eine kovalente Addukts noch St&auml;nden ein zuvor identifizierten Reaktion Intermediate von f (5) U. F (5) U27 R&uuml;ckstands, angezeigt, wie durch eine DNAzyme-gegr&uuml;ndeten Probe mit TLC und Massenspektrometrie analysiert, physikalisch-chemischen Eigenschaften unver&auml;ndert durch die reversible Interaktion mit Pus1p. So Pus1p ein f (5) U-haltige Substrat bindet, aber, im Gegensatz zu anderen Pseudouridin-Synthasen, verl&auml;sst die chemische Struktur von f (5) U unver&auml;ndert. Die spezifische, aber Nonproductive, Wechselwirkung gezeigt werden, dass hier stellt damit ein Zwischenprodukt der Eiter Umsatz, ins Stocken geraten durch die Anwesenheit von f (5) U in einem fr&uuml;hen Zustand der Katalyse. Beobachtung der Interaktion von Pus1p mit Fluoreszenz-markierten tRNA durch eine Echtzeit-Auslesung der Fluoreszenz-Anisotropie und FRET offenbart erhebliche strukturelle Verzerrung f (5) U-tRNA-Struktur in den steckengebliebenen Zwischenzustand Pseudouridin Katalyse.

Bildung einer festgeklemmten fr&uuml;hen Intermediate Pseudouridin Synthese von Echtzeit-Bund &uuml;berwacht.

Pseudouridine &egrave; il pi&ugrave; abbondante di pi&ugrave; di 100 modifiche ribonucleotide naturali chimicamente distinti. La sintesi consiste in una reazione di isomerizzazione di un residuo di uridina nella catena di RNA ed &egrave; catalizzata da pseudouridine synthases. Il meccanismo di reazione insolita &egrave; diventato oggetto di impegno di ricerca rinnovato, frequentemente coinvolgendo sostituzione dell&#39;uridines di substrato con 5-fluorouracile (f(5)U). f (5) U &egrave; noto per essere un potente inibitore dell&#39;attivit&agrave; di pseudouridine synthase, ma l&#39;effetto varia tra la destinazione pseudouridine synthases. Sono stati rilevati in precedenza derivate di f (5) U, che sono il pensiero di essere addotti o prodotti di idrolisi di covalente enzima-RNA, o isomerizzazione intermedi. Qui descriviamo l&#39;interazione di pseudouridine synthase 1 (Pus1p) con f (5) U contenenti tRNA. L&#39;interazione descritta &egrave; specifico per Pus1p e posizione 27 nel gambo anticodone di tRNA, ma l&#39;enzima forma un addotto covalente n&eacute; bancarelle presso un intermedio di reazione precedentemente identificati di U. f (5) Il residuo di U27 f (5), come analizzato da un dosaggio basato su DNAzyme utilizzando TLC e spettrometria di massa, visualizzato propriet&agrave; chimico-fisiche inalterate dall&#39;interazione reversibile con Pus1p. Cos&igrave;, Pus1p associa un substrato contenente U f (5), ma, al contrario di altri synthases pseudouridine, lascia la struttura chimica di f (5) U invariato. Le specifiche, ma nonproductive, interazione dimostrato qui cos&igrave; costituisce un intermedio del fatturato di Pus, bloccato dalla presenza di f (5) U in uno stato precoce di catalisi. Osservazione dell&#39;interazione di Pus1p con tRNA fluorescenza-contrassegnati da una lettura in tempo reale di anisotropia di fluorescenza e FRET rivelato significativa distorsione strutturale della struttura U-tRNA f (5) nello stato intermedio in stallo di catalisi pseudouridine.

Formazione di un intermedio precoce in stallo di sintesi pseudouridine monitorati da FRET in tempo reale.

Pseudouridine &#x306F;&#x3001;100 &#x4EE5;&#x4E0A;&#x306E;&#x5316;&#x5B66;&#x7684;&#x306B;&#x7570;&#x306A;&#x308B;&#x81EA;&#x7136;&#x30EA;&#x30DC;&#x30CC;&#x30AF;&#x30EC;&#x30AA;&#x30C1;&#x30C9;&#x5909;&#x66F4;&#x306E;&#x4E2D;&#x3067;&#x6700;&#x3082;&#x8C4A;&#x5BCC;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x305D;&#x306E;&#x5408;&#x6210;&#x306B;&#x7570;&#x6027;&#x5316;&#x53CD;&#x5FDC;&#x306E; RNA &#x9396;&#x30A6;&#x30EA;&#x30B8;&#x30F3;&#x6B8B;&#x57FA;&#x3067;&#x69CB;&#x6210;&#x3055;&#x308C;&#x3001;pseudouridine &#x5408;&#x6210;&#x9175;&#x7D20;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x89E6;&#x5A92;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x7570;&#x5E38;&#x306A;&#x53CD;&#x5FDC;&#x6A5F;&#x69CB;&#x306F;&#x3001;&#x983B;&#x7E41;&#x306B;&#x4EA4;&#x63DB;&#x7528;&#x306E;&#x57FA;&#x677F;&#x306E; uridines &#x3068; 5-&#x30D5;&#x30EB;&#x30AA;&#x30ED;&#x30A6;&#x30E9;&#x30B7;&#x30EB; (f(5)U)&#x3002; &#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x3001;&#x65B0;&#x305F;&#x306A;&#x7814;&#x7A76;&#x52AA;&#x529B;&#x306E;&#x5BFE;&#x8C61;&#x3068;&#x306A;&#x3063;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;f (5) U pseudouridine &#x5408;&#x6210;&#x9175;&#x7D20;&#x6D3B;&#x6027;&#x306E;&#x5F37;&#x529B;&#x306A;&#x963B;&#x5BB3;&#x5264;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x77E5;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x304C;&#x3001;&#x52B9;&#x679C;&#x306F;&#x3001;&#x30BF;&#x30FC;&#x30B2;&#x30C3;&#x30C8; pseudouridine &#x5408;&#x6210;&#x9175;&#x7D20;&#x9593;&#x3067;&#x7570;&#x306A;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;F (5) U &#x306E;&#x5C0E;&#x95A2;&#x6570;&#x306F;&#x3001;&#x4EE5;&#x524D;&#x306F;&#x3069;&#x3061;&#x3089;&#x304B;&#x52A0;&#x6C34;&#x5206;&#x89E3;&#x7269;&#x306E;&#x5171;&#x6709;&#x7D50;&#x5408;&#x9175;&#x7D20;&#x304C; RNA &#x4ED8;&#x52A0;&#x4F53;&#x306E;&#x3063;&#x3066;&#x601D;&#x3044;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3084;&#x7570;&#x6027;&#x5316;&#x53CD;&#x5FDC;&#x306E;&#x4E2D;&#x9593;&#x4F53;&#x3067;&#x306F;&#x691C;&#x51FA;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F; f (5) (Pus1p) pseudouridine &#x5408;&#x6210;&#x9175;&#x7D20; 1 &#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x3092;&#x8AAC;&#x660E; tRNA &#x306E; U &#x3092;&#x542B;&#x307F;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x8AAC;&#x660E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528; Pus1p &#x3068;&#x4F4D;&#x7F6E; 27 tRNA &#x306E;&#x30A2;&#x30F3;&#x30C1;&#x30B3;&#x30C9;&#x30F3;&#x830E;&#x306B;&#x56FA;&#x6709;&#x3067;&#x3059;&#x304C;&#x3001;&#x9175;&#x7D20;&#x3082;&#x5171;&#x6709;&#x7D50;&#x5408;&#x4ED8;&#x52A0;&#x7269;&#x306E;&#x5F62;&#x6210;&#x3082; f (5) U &#x306E;&#x4EE5;&#x524D;&#x306B;&#x8B58;&#x5225;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x53CD;&#x5FDC;&#x4E2D;&#x9593;&#x4F53;&#x3067;&#x306E;&#x5C4B;&#x53F0;F (5) U27 &#x6B8B;&#x6E23; TLC &#x53CA;&#x3073;&#x8CEA;&#x91CF;&#x5206;&#x6790;&#x306B;&#x3088;&#x308B; DNAzyme &#x30D9;&#x30FC;&#x30B9;&#x306E;&#x30A2;&#x30C3;&#x30BB;&#x30A4;&#x3067;&#x5206;&#x6790;&#x3057;&#x305F;&#x3088;&#x3046;&#x306B; Pus1p &#x3068;&#x53EF;&#x9006;&#x7684;&#x306A;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x4E0D;&#x5909;&#x306E;&#x7269;&#x7406;&#x5316;&#x5B66;&#x7684;&#x6027;&#x8CEA;&#x3092;&#x8868;&#x793A;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3057;&#x305F;&#x304C;&#x3063;&#x3066;&#x3001;Pus1p &#x306F; U &#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x3001;f (5) &#x57FA;&#x677F;&#x3092;&#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C9;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x304C;&#x3001;&#x5BFE;&#x7167;&#x7684;&#x306B;&#x4ED6; pseudouridine &#x5408;&#x6210;&#x9175;&#x7D20;&#x306B;&#x5909;&#x308F;&#x3089;&#x305A; f (5) U &#x306E;&#x5316;&#x5B66;&#x69CB;&#x9020;&#x306E;&#x307E;&#x307E;&#x3002;&#x7279;&#x5B9A;&#x306E;&#x3057;&#x304B;&#x3057; nonproductive&#x3001;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x3053;&#x3046;&#x3057;&#x3066;&#x69CB;&#x6210;&#x81BF;&#x306E;&#x58F2;&#x308A;&#x4E0A;&#x3052;&#x9AD8;&#x3001;f (5) U &#x89E6;&#x5A92;&#x306E;&#x521D;&#x671F;&#x72B6;&#x614B;&#x306E;&#x5B58;&#x5728;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x5931;&#x901F;&#x306E;&#x4E2D;&#x9593;&#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x305F;&#x3002;TRNA &#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x30EA;&#x30A2;&#x30EB;&#x30BF;&#x30A4;&#x30E0;&#x306E;&#x8AAD;&#x307F;&#x51FA;&#x3057;&#x86CD;&#x5149;&#x7570;&#x65B9;&#x6027;&#x306E;&#x86CD;&#x5149;&#x6A19;&#x8B58;&#x3068;&#x30D5;&#x30EC;&#x30C3;&#x30C8;&#x3068; Pus1p &#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x306E;&#x89B3;&#x6E2C; pseudouridine &#x89E6;&#x5A92;&#x306E;&#x5931;&#x901F;&#x306E;&#x4E2D;&#x9593;&#x72B6;&#x614B;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B; f (5) U tRNA &#x69CB;&#x9020;&#x306E;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x69CB;&#x9020;&#x6B6A;&#x307F;&#x3092;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;

&#x30EA;&#x30A2;&#x30EB;&#x30BF;&#x30A4;&#x30E0;&#x306E;&#x30D5;&#x30EC;&#x30C3;&#x30C8;&#x3067;&#x76E3;&#x8996; pseudouridine &#x5408;&#x6210;&#x306E;&#x5931;&#x901F;&#x3057;&#x305F;&#x521D;&#x671F;&#x4E2D;&#x9593;&#x4F53;&#x306E;&#x5F62;&#x6210;&#x3002;

Pseudouridine&#xC740; &#xAC00;&#xC7A5; &#xD48D;&#xBD80;&#xD55C; 100 &#xAC1C; &#xC774;&#xC0C1;&#xC758; &#xD654;&#xD559;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xB69C;&#xB837;&#xD55C; &#xC790;&#xC5F0; ribonucleotide &#xC218;&#xC815;. &#xADF8; &#xD569;&#xC131; RNA &#xC0AC;&#xC2AC;&#xC5D0; uridine &#xC794;&#xB958;&#xBB3C;&#xC758; &#xC218; &#xBC18;&#xC751;&#xC758; &#xAD6C;&#xC131; &#xB418;&#xC5B4; &#xC788;&#xC73C;&#xBA70; pseudouridine synthases&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xCD09;&#xB9E4;. &#xD2B9;&#xC774; &#xD55C; &#xBC18;&#xC751; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998; &#xC790;&#xC8FC; 5 fluorouracil (f(5)u)&#xC640; &#xAE30;&#xD310; uridines&#xC758; &#xAD50;&#xCCB4;&#xB97C; &#xD3EC;&#xD568; &#xD558;&#xB294; &#xC0C8;&#xB86D;&#xAC8C; &#xC5F0;&#xAD6C; &#xB178;&#xB825;&#xC758; &#xB300;&#xC0C1;&#xC774; &#xB418;. f (5) U pseudouridine synthase &#xD65C;&#xB3D9;&#xC758; &#xAC15;&#xB825;&#xD55C; &#xC5B5;&#xC81C;&#xC81C;&#xB85C; &#xC54C;&#xB824;&#xC838; &#xC788;&#xB2E4; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xD6A8;&#xACFC; &#xB300;&#xC0C1; pseudouridine synthases &#xB530;&#xB77C; &#xB2E4;&#xB985;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC0DD;&#xAC01; &#xACF5;&#xC720; &#xD6A8;&#xC18C; RNA&#xC758; &#xAC00;&#xC218;&#xBD84;&#xD574; &#xC81C;&#xD488; &#xC911; &#xC0DD;&#xC131;&#xBB3C;, &#xC218; &#xB610;&#xB294; &#xC218; &#xC911;&#xAC04;&#xCCB4; f (5)&#xB97C; &#xC774;&#xC804;&#xC5D0; &#xAC80;&#xC0C9; &#xB41C;, &#xD30C;&#xC0DD;. F (5)&#xC640; (Pus1p) pseudouridine synthase 1&#xC758; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC744; &#xC124;&#xBA85; &#xD558;&#xB294; &#xC5EC;&#xAE30; tRNA U&#xB97C; &#xD3EC;&#xD568; &#xD558;. &#xC124;&#xBA85; &#xD558;&#xB294; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC740; Pus1p &#xBC0F; 27 tRNA anticodon &#xC904;&#xAE30;&#xC5D0; &#xC704;&#xCE58; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xD6A8;&#xC18C;&#xB3C4; &#xACF5;&#xC720; adduct &#xD615;&#xC131;&#xB3C4; f (5) u &#xC774;&#xC804;&#xC5D0; &#xD655;&#xC778; &#xB41C; &#xBC18;&#xC751; &#xC911;&#xAC04;&#xC5D0; &#xD3EC;&#xC7A5; &#xB9C8;&#xCC28; F (5) U27 &#xC794;&#xB958;&#xBB3C; TLC&#xC640; &#xC9C8;&#xB7C9; &#xBD84;&#xC11D;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; DNAzyme &#xAE30;&#xBC18; &#xBD84;&#xC11D; &#xACB0;&#xACFC; &#xC758;&#xD574; &#xBD84;&#xC11D; &#xAC00;&#xC5ED; &#xC0C1;&#xD638; pus1p&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xBD88;&#xBCC0; &#xD558;&#xB294; &#xBB3C;&#xB9AC; &#xD654;&#xD559;&#xC801; &#xC18D;&#xC131; &#xD45C;&#xC2DC;. &#xB530;&#xB77C;&#xC11C;, Pus1p f (5) U &#xD3EC;&#xD568; &#xB41C; &#xAE30;&#xD310;&#xC5D0; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xB418;&#xC9C0;&#xB9CC;, &#xBC18;&#xBA74;&#xC5D0; &#xB2E4;&#xB978; pseudouridine synthases&#xC744; f (5) U &#xADF8;&#xB300;&#xB85C;&#xC758; &#xD654;&#xD559; &#xAD6C;&#xC870;. &#xD2B9;&#xC815;, &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; nonproductive &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9; &#xC5EC;&#xAE30; &#xC774;&#xB807;&#xAC8C; &#xAD6C;&#xC131; &#xD558;&#xB294; &#xCD09;&#xB9E4;&#xC758; &#xCD08;&#xAE30; &#xC0C1;&#xD0DC;&#xC5D0;&#xC11C; (5) U f&#xC758; &#xC874;&#xC7AC;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xBA48;&#xCD98; &#xACE0;&#xB984; &#xD68C;&#xC804;&#xC728;&#xC758; &#xC911;&#xAC04;&#xC744; &#xC2DC;&#xC5F0; &#xD588;&#xB2E4;. Pus1p &#xD615;&#xAD11; &#xC774;&#xBC29;&#xC131;&#xC758; &#xC2E4;&#xC2DC;&#xAC04; &#xD310;&#xB3C5;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xD615;&#xAD11; &#xD45C;&#xC2DC; &#xB41C; Trna&#xC640; &#xBB34;&#xC11C; &#xC6CC;&#xC758; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC758; &#xAD00;&#xCC30; pseudouridine &#xCD09;&#xB9E4;&#xC758; &#xC2E4;&#xC18D;&#xB41C; &#xC911;&#xAC04; &#xC0C1;&#xD0DC;&#xC5D0;&#xC11C; f (5) U-tRNA &#xAD6C;&#xC870;&#xC758; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xAD6C;&#xC870;&#xC801; &#xC65C;&#xACE1;&#xC744; &#xACF5;&#xAC1C; &#xD588;&#xB2E4;.

Pseudouridine &#xC885;&#xD569; &#xC2E4;&#xC2DC;&#xAC04; &#xBB34;&#xC11C; &#xC6CC; &#xD558; &#xC5EC; &#xBAA8;&#xB2C8;&#xD130;&#xB9C1;&#xC758; &#xC2E4;&#xC18D;&#xB41C; &#xCD08; &#xC911;&#xAE09;&#xC758; &#xD615;&#xC131;.

Pseudouridina es el m&aacute;s abundante de m&aacute;s de 100 modificaciones ribonucle&oacute;tido natural qu&iacute;micamente distintas. Su s&iacute;ntesis consiste en una reacci&oacute;n de isomerizaci&oacute;n de un residuo de la uridina en la cadena de RNA y es catalizada por pseudouridina Sintasas. El mecanismo de reacci&oacute;n inusual se ha convertido en el objeto del esfuerzo de investigaci&oacute;n renovada, con frecuencia con el reemplazo de las uridinas del sustrato con 5-fluorouracilo (f(5)U). f (5) U es conocido por ser un potente inhibidor de la actividad de la sintasa de pseudouridina, pero el efecto var&iacute;a entre los blanco pseudouridina Sintasas. Previamente se han detectado derivados de f (5) U, que son probablemente sea productos de la hidr&oacute;lisis de la enzima covalente-RNA aductos o intermedios de isomerizaci&oacute;n. Aqu&iacute; describimos la interacci&oacute;n de pseudouridina synthase 1 (Pus1p) con f (5) que contengan U tRNA. La interacci&oacute;n descrita es espec&iacute;fica para la posici&oacute;n 27 en el v&aacute;stago del anticod&oacute;n de ARNt y Pus1p, pero la enzima forma un aducto covalente ni se detiene en un intermedio de reacci&oacute;n previamente identificadas de U. f (5) El residuo de U27 f (5), como se analizaron mediante un an&aacute;lisis basado en DNAzyme con el TLC y espectrometr&iacute;a de masas, muestra propiedades fisicoqu&iacute;micas inalteradas por la interacci&oacute;n reversible con Pus1p. As&iacute;, Pus1p se une un sustrato de que contienen U f (5), pero, en cambio a otros Sintasas pseudouridina, deja la estructura qu&iacute;mica de f (5) U sin cambios. La espec&iacute;fica, pero improductiva, interacci&oacute;n demostrado aqu&iacute; as&iacute; constituye un intermediario de la facturaci&oacute;n de Pus, estancado por la presencia de f (5) U en un estado temprano de la cat&aacute;lisis. La observaci&oacute;n de la interacci&oacute;n de Pus1p con marcados con fluorescencia tRNA por una lectura en tiempo real de la anisotrop&iacute;a de la fluorescencia y traste revel&oacute; significativa distorsi&oacute;n estructural de estructura de U-tRNA f (5) en el estado intermedio estancado de cat&aacute;lisis pseudouridina.

Formaci&oacute;n de un intermedio temprano estancado de s&iacute;ntesis pseudouridina supervisado por traste en tiempo real.

&#x6838;&#x56E0;&#x5B50;&#x7684;&#x6D3B;&#x6027; T &#x7EC6;&#x80DE; (NFAT) &#x7EC4;&#x6210;&#x4E00;&#x4E2A;&#x5BB6;&#x5EAD;&#x7684;&#x8C03;&#x8282; T &#x7EC6;&#x80DE;&#x53D1;&#x80B2;&#x3001; &#x6D3B;&#x5316;&#x548C;&#x5206;&#x5316;&#x7684;&#x8F6C;&#x5F55;&#x56E0;&#x5B50;&#x3002;NFAT &#x4FE1;&#x53F7;&#x8FD8;&#x53EF;&#x4EE5;&#x8C03;&#x89E3;&#x7C92;&#x7EC6;&#x80DE;&#x548C;&#x6811;&#x7A81;&#x72B6;&#x7EC6;&#x80DE; (DC) &#x7684;&#x6FC0;&#x6D3B;&#xFF0C;&#x4F46;&#x5B83;&#x672A;&#x77E5; NFAT &#x662F;&#x5426;&#x5F71;&#x54CD;&#x5176;&#x4ECE;&#x7956;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x53D1;&#x5C55;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x62A5;&#x544A;&#x65B0;&#x578B;&#x9499;&#x8C03;&#x795E;&#x7ECF;&#x78F7;&#x9178;/NFAT &#x4FE1;&#x53F7;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x9AD3;&#x6027;&#x9020;&#x8840;&#x8D1F;&#x8C03;&#x8282;&#x5668;&#x7684;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;&#x91CD;&#x7EC4;&#x81F4;&#x6B7B;&#x8F90;&#x7167;&#x540E;&#x5C0F;&#x9F20;&#x9020;&#x8840;&#x5E72;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8868;&#x8FBE; NFAT &#x6291;&#x5236;&#x80BD;&#x5BFC;&#x81F4;&#x9AD3;&#x8F66;&#x53A2;&#x5185;&#x589E;&#x5F3A;&#x53D1;&#x5C55;&#x3002;&#x5728;&#x5A92;&#x4F53;&#x4E2D;&#x7684;&#x9AA8;&#x9AD3;&#x7EC6;&#x80DE;&#x57F9;&#x517B;&#x8F85;&#x4EE5; Flt3 L &#x9499;&#x8C03;&#x795E;&#x7ECF;&#x78F7;&#x9178;/NFAT &#x6291;&#x5236;&#x73AF;&#x5B62;&#x7D20;&#x5B58;&#x5728;&#x4EBA;&#x6570;&#x589E;&#x52A0;&#x6709;&#x533A;&#x522B;&#x76F4;&#x6D41;&#x3002;&#x672A;&#x7ECF;&#x5904;&#x7406;&#x7684; DC &#x548C; NFAT &#x6291;&#x5236; DC &#x5168;&#x7403;&#x57FA;&#x56E0;&#x8868;&#x8FBE;&#x5206;&#x6790;&#x663E;&#x793A;&#x5DEE;&#x5F02;&#x8868;&#x8FBE;&#x7684;&#x8C03;&#x8282;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5468;&#x671F;&#x548C;&#x51CB;&#x4EA1;&#x7684;&#x6210;&#x7EE9;&#x5355;&#x3002;&#x603B;&#x4E4B;&#xFF0C;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7ED3;&#x679C;&#x63D0;&#x4F9B;&#x4E86;&#x8BC1;&#x636E;&#x4E0D;&#x5229;&#x9499;&#x8C03;&#x795E;&#x7ECF;&#x78F7;&#x9178;/NFAT &#x4FE1;&#x53F7;&#x8C03;&#x8282;&#x9AD3;&#x7CFB;&#x6CBF;&#x88AD;&#x53D1;&#x5C55;&#x3002;&#x53D1;&#x73B0;&#x6291;&#x5236; NFAT &#x589E;&#x5F3A;&#x9AD3;&#x7CFB;&#x53D1;&#x5C55;&#x63D0;&#x4F9B;&#x4E86;&#x89E3;&#x5982;&#x4F55;&#x6CBB;&#x7597;&#x836F;&#x7269;&#x9776;&#x5411;&#x9499;&#x8C03;&#x795E;&#x7ECF;&#x78F7;&#x9178;/NFAT &#x4FE1;&#x53F7;&#x5F71;&#x54CD;&#x5148;&#x5929;&#x514D;&#x75AB;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x7684;&#x7A33;&#x6001;&#x7684;&#x65B0;&#x578B;&#x6D1E;&#x5BDF;&#x3002;

&#x9499;&#x8C03;&#x795E;&#x7ECF;&#x78F7;&#x9178;/NFAT &#x4FE1;&#x53F7;&#x6291;&#x5236;&#x9AA8;&#x9AD3;&#x9020;&#x8840;&#x3002;

Nuclear factor of activated T cells (NFAT) comprises a family of transcription factors that regulate T cell development, activation and differentiation. NFAT signalling can also mediate granulocyte and dendritic cell (DC) activation, but it is unknown whether NFAT influences their development from progenitors. Here, we report a novel role for calcineurin/NFAT signalling as a negative regulator of myeloid haematopoiesis. Reconstituting lethally irradiated mice with haematopoietic stem cells expressing an NFAT-inhibitory peptide resulted in enhanced development of the myeloid compartment. Culturing bone marrow cells in media supplemented with Flt3-L in the presence of the calcineurin/NFAT inhibitor Cyclosporin A increased numbers of differentiated DC. Global gene expression analysis of untreated DC and NFAT-inhibited DC revealed differential expression of transcripts that regulate cell cycle and apoptosis. In conclusion, these results provide evidence that calcineurin/NFAT signalling negatively regulates myeloid lineage development. The finding that inhibition of NFAT enhances myeloid development provides a novel insight into understanding how the treatment with drugs targeting calcineurin/NFAT signalling influence the homeostasis of the innate immune system.

Calcineurin/NFAT signalling inhibits myeloid haematopoiesis.

Facteur nucl&eacute;aire des lymphocytes T activ&eacute;s (NFAT) comprend une famille de facteurs de transcription qui r&eacute;gulent le d&eacute;veloppement des lymphocytes T, l&#39;activation et la diff&eacute;renciation. NFAT signalisation peut &eacute;galement n&eacute;gocier granulocytes et activation des cellules dendritiques (DC), mais on ne sait pas si NFAT influence leur d&eacute;veloppement de cellules souches. Nous rapportons ici un nouveau r&ocirc;le pour la signalisation de la calcineurine/NFAT comme un r&eacute;gulateur n&eacute;gatif de l&#39;h&eacute;matopo&iuml;&egrave;se my&eacute;lo&iuml;de. Reconstitution mortellement irradi&eacute;s souris avec h&eacute;matopo&iuml;&eacute;tiques, cellules souches exprimant un peptide inhibiteur NFAT aboutis &agrave; renforcer le d&eacute;veloppement du compartiment my&eacute;lo&iuml;de. Mise en culture des cellules de moelle osseuse dans les m&eacute;dias additionn&eacute; Flt3-L en pr&eacute;sence de l&#39;inhibiteur de la calcineurine/NFAT cyclosporine un nombre accru de DC diff&eacute;renci&eacute;e. Global gene expression analysis of DC non trait&eacute;e et inhib&eacute;s NFAT DC a r&eacute;v&eacute;l&eacute; une expression diff&eacute;rentielle de transcriptions qui r&eacute;gulent le cycle cellulaire et l&#39;apoptose. En conclusion, ces r&eacute;sultats d&eacute;montrent que la calcineurine/NFAT signalisation r&eacute;gule n&eacute;gativement le d&eacute;veloppement de la lign&eacute;e my&eacute;lo&iuml;de. La constatation que l&#39;inhibition de NFAT am&eacute;liore le d&eacute;veloppement my&eacute;lo&iuml;de jette un regard nouveau sur comprendre comment le traitement avec des m&eacute;dicaments ciblant la calcineurine/NFAT signalisation influence l&#39;hom&eacute;ostasie du syst&egrave;me immunitaire inn&eacute;.

Signalisation de la calcineurine/NFAT inhibe l&#39;h&eacute;matopo&iuml;&egrave;se my&eacute;lo&iuml;de.

Nuklearer Faktor von aktivierten T-Zellen (NFAT) umfasst eine Familie von Transkriptionsfaktoren, die T-Zell-Entwicklung, Aktivierung und Differenzierung regulieren. NFAT signalisieren kann auch vermitteln, Granulozyten und dendritischen Zellen (DC)-Aktivierung, aber es ist nicht bekannt, ob NFAT ihre Entwicklung aus Vorl&auml;uferzellen beeinflusst. Hier berichten wir &uuml;ber eine neue Rolle f&uuml;r Calcineurin/NFAT Signalisierung als einen negativen Regulator der myeloische Blutbildung. Rekonstituierung der lethally bestrahlter M&auml;use mit h&auml;matopoetischen, die Stammzellen, die Ausdruck einer NFAT-hemmenden Peptid verst&auml;rkte Entwicklung der myeloid Fach gef&uuml;hrt. Die Z&uuml;chtung von Knochenmarkzellen in Medien erg&auml;nzt mit Flt3-L in Anwesenheit der Calcineurin/NFAT-Inhibitor Cyclosporin einer gr&ouml;&szlig;eren Zahl von differenzierten DC. Globale Genexpressionsanalyse von unbehandelten DC und DC NFAT-gehemmt offenbart differentielle Ausdruck der Transkripte, die Zellzyklus und Apoptose regulieren. Abschlie&szlig;end belegen diese Ergebnisse, dass myeloid Abstammung Entwicklung signalisieren von Calcineurin/NFAT negativ reguliert werden. Die Feststellung, dass die Hemmung der NFAT myeloischen Entwicklung verbessert bietet einen neuartigen Einblick in Verst&auml;ndnis, wie die Behandlung mit Medikamenten gezielt Calcineurin/NFAT Signalgebung Einfluss der Hom&ouml;ostase des angeborenen Immunsystems.

Signalisieren von Calcineurin/NFAT hemmt myeloische Blutbildung.

Fattore nucleare delle cellule T attivate (NFAT) comprende una famiglia di fattori di trascrizione che regolano la differenziazione, attivazione e lo sviluppo delle cellule T. NFAT segnalazione pu&ograve; anche mediare granulociti e attivazione delle cellule dendritiche (DC), ma non si sa se NFAT influenze il loro sviluppo da progenitori. Riportiamo un romanzo ruolo per la segnalazione di calcineurina/NFAT come regolatore negativo dell&#39;emopoiesi mieloide. Ricostitutivo lethally irradiati topi con ematopoietiche staminali cellule che esprimono un peptide inibitorio NFAT ha provocate lo sviluppo avanzato del compartimento mieloide. Coltura di cellule del midollo osseo nei media integrato con Flt3-L in presenza dell&#39;inibitore della calcineurina/NFAT ciclosporina un aumento del numero di DC differenziato. Analisi di espressione genica globale di NFAT-inibito DC e DC non trattata ha rivelato l&#39;espressione differenziale delle trascrizioni che regolano il ciclo cellulare e apoptosi. In conclusione, questi risultati forniscono la prova che calcineurina/NFAT segnalazione regola negativamente lo sviluppo lineage mieloide. La constatazione che l&#39;inibizione di NFAT migliora mieloide sviluppo fornisce un romanzo spaccato di comprendere come il trattamento con farmaci targeting calcineurina/NFAT segnalazione influenza l&#39;omeostasi del sistema immunitario innato.

Segnalazione della calcineurina/NFAT inibisce emopoiesi mieloide.

&#x6838;&#x56E0;&#x5B50;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316; T &#x7D30;&#x80DE; (NFAT&#xFF09; &#x306E; T &#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x5206;&#x5316;&#x3001;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x3068;&#x5206;&#x5316;&#x3092;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x3059;&#x308B;&#x8EE2;&#x5199;&#x56E0;&#x5B50;&#x306E;&#x5BB6;&#x65CF;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;NFAT &#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;&#x306B;&#x3088;&#x308A;&#x9846;&#x7C92;&#x7403;&#x3068;&#x6A39;&#x72B6;&#x7D30;&#x80DE; (DC) &#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x304C;&#x307E;&#x305F;&#x8ABF;&#x505C;&#x3067;&#x304D;&#x308B;&#x304C; NFAT &#x524D;&#x99C6;&#x7D30;&#x80DE;&#x304B;&#x3089;&#x305D;&#x306E;&#x958B;&#x767A;&#x306B;&#x5F71;&#x97FF;&#x3092;&#x4E0E;&#x3048;&#x308B;&#x304B;&#x3069;&#x3046;&#x304B;&#x306F;&#x4E0D;&#x660E;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30CB;&#x30E5;&#x30FC;&#x30EA;&#x30F3;/NFAT &#x9AA8;&#x9AC4;&#x9020;&#x8840;&#x7CFB;&#x306E;&#x8CA0;&#x30EC;&#x30AE;&#x30E5;&#x30EC;&#x30FC;&#x30BF;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;&#x7528;&#x65B0;&#x898F;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x5831;&#x544A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x81F4;&#x6B7B;&#x306E;&#x518D;&#x69CB;&#x6210;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x9020;&#x8840;&#x5E79; NFAT &#x963B;&#x5BB3;&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C9;&#x3092;&#x767A;&#x73FE;&#x3059;&#x308B;&#x7D30;&#x80DE;&#x9AA8;&#x9AC4;&#x30B3;&#x30F3;&#x30D1;&#x30FC;&#x30C8;&#x30E1;&#x30F3;&#x30C8;&#x306E;&#x62E1;&#x5F35;&#x306E;&#x958B;&#x767A;&#x306B;&#x3064;&#x306A;&#x304C;&#x3063;&#x305F;&#x306B;&#x7167;&#x5C04;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x30E1;&#x30C7;&#x30A3;&#x30A2;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x9AA8;&#x9AC4;&#x7D30;&#x80DE;&#x57F9;&#x990A; Flt3-L &#x3068;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30CB;&#x30E5;&#x30FC;&#x30EA;&#x30F3;/NFAT &#x963B;&#x5BB3;&#x5264;&#x30B5;&#x30A4;&#x30AF;&#x30ED;&#x30B9;&#x30DD;&#x30EA;&#x30F3;&#x3067;&#x5DEE;&#x5225;&#x5316;&#x3055;&#x308C;&#x305F; DC &#x306E;&#x5897;&#x52A0;&#x6570;&#x3092;&#x88DC;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x672A;&#x51E6;&#x7406;&#x306E; DC&#x3001;DC NFAT &#x963B;&#x5BB3;&#x306E;&#x4E16;&#x754C;&#x7684;&#x306A;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x767A;&#x73FE;&#x89E3;&#x6790;&#x7D30;&#x80DE;&#x5468;&#x671F;&#x3001;&#x30A2;&#x30DD;&#x30C8;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9;&#x3092;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x3059;&#x308B;&#x8EE2;&#x5199;&#x7523;&#x7269;&#x306E;&#x767A;&#x73FE;&#x3092;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x7D50;&#x8AD6;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x306F;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30CB;&#x30E5;&#x30FC;&#x30EA;&#x30F3;/NFAT &#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;&#x9AA8;&#x9AC4;&#x7CFB;&#x958B;&#x767A;&#x306B;&#x60AA;&#x5F71;&#x97FF;&#x3092;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x3053;&#x3068;&#x8A3C;&#x62E0;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;NFAT &#x963B;&#x5BB3;&#x9AA8;&#x9AC4;&#x6027;&#x306E;&#x958B;&#x767A;&#x3092;&#x9AD8;&#x3081;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x898B;&#x3064;&#x3051;&#x308B;&#x3068;&#x6CBB;&#x7642;&#x85AC;&#x306E;&#x30BF;&#x30FC;&#x30B2;&#x30C3;&#x30C8; &#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30CB;&#x30E5;&#x30FC;&#x30EA;&#x30F3;/NFAT &#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;&#x5F71;&#x97FF;&#x751F;&#x5F97;&#x306E;&#x514D;&#x75AB;&#x7CFB;&#x306E;&#x6052;&#x5E38;&#x6027;&#x306E;&#x7406;&#x89E3;&#x306B;&#x5C0F;&#x8AAC;&#x306E;&#x6D1E;&#x5BDF;&#x529B;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30CB;&#x30E5;&#x30FC;&#x30EA;&#x30F3;/NFAT &#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;&#x9AA8;&#x9AC4;&#x9020;&#x8840;&#x7CFB;&#x3092;&#x963B;&#x5BB3;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xB41C; T &#xC138;&#xD3EC; (NFAT) &#xD575; &#xC778;&#xC790; T &#xC140; &#xAC1C;&#xBC1C;, &#xD65C;&#xC131;&#xD654;, &#xBD84;&#xD654;&#xB97C; &#xC870;&#xC808; &#xD558;&#xB294; &#xC804;&#xC0AC; &#xC778;&#xC790; &#xAC00;&#xC871; &#xAD6C;&#xC131; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. Granulocyte &#xBC0F; &#xC218;&#xC9C0;&#xC0C1; &#xC138;&#xD3EC; (DC) &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xB610;&#xD55C; &#xC911;&#xC7AC;&#xD560; &#xC218; NFAT &#xC2E0;&#xD638; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xADF8;&#xAC83;&#xC774; &#xC54C;&#xB824;&#xC9C4; &#xC5EC;&#xBD80; NFAT progenitors&#xC5D0;&#xC11C; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC758; &#xBC1C;&#xC804;&#xC5D0; &#xC601;&#xD5A5;&#xC744; &#xBBF8;&#xCE69;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC5EC;&#xAE30;, &#xC6B0;&#xB9AC; calcineurin/NFAT &#xACE8;&#xC218;&#xC131; haematopoiesis&#xC758; &#xBD80;&#xC815;&#xC801;&#xC778; &#xB808; &#xADE4; &#xB808;&#xC774; &#xD130;&#xB85C; &#xC2E0;&#xD638;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC0C8;&#xB85C;&#xC6B4; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xBCF4;&#xACE0; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. Haematopoietic &#xACE8;&#xC218;&#xC131; &#xAD6C;&#xD68D;&#xC758; &#xD5A5;&#xC0C1; &#xB41C; &#xAC1C;&#xBC1C; &#xADC0;&#xCC29;&#xB418; &#xC5C8; &#xB2E4; NFAT &#xAE08;&#xC9C0; &#xD3A9; &#xD2F0; &#xB4DC;&#xB97C; &#xD45C;&#xD604; &#xD558;&#xB294; &#xC904;&#xAE30; &#xC138;&#xD3EC;&#xB85C; &#xC950; &#xBC18;&#xAD6C; lethally &#xC7AC;&#xAD6C;&#xC131;. &#xBBF8;&#xB514;&#xC5B4;&#xC5D0; &#xC788;&#xB294; &#xACE8; &#xC218; &#xC138;&#xD3EC; &#xBC30;&#xC591;&#xC73C;&#xB85C; &#xBCF4;&#xCDA9; Flt3 L calcineurin/NFAT &#xC5B5;&#xC81C;&#xC81C; Cyclosporin&#xC758; &#xC874;&#xC7AC; &#xCC28;&#xBCC4;&#xD654; &#xB41C; DC&#xC758; &#xC99D;&#xAC00; &#xC22B;&#xC790;. &#xAE00;&#xB85C;&#xBC8C; &#xC9C4; &#xC2DD; &#xBD84;&#xC11D; &#xCE58;&#xB8CC; DC &#xBC0F; NFAT &#xC800;&#xD574; DC apoptosis &#xBC0F; &#xC138;&#xD3EC; &#xC8FC;&#xAE30;&#xB97C; &#xC870;&#xC808; &#xD558;&#xB294; &#xC131;&#xC801; &#xC99D;&#xBA85;&#xC11C;&#xC758; &#xCC28;&#xB3D9; &#xC2DD;&#xC744; &#xACF5;&#xAC1C; &#xD588;&#xB2E4;. &#xACB0;&#xB860;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C;, &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xACB0;&#xACFC; &#xACE8;&#xC218;&#xC131; &#xB9AC;&#xB2C8;&#xC9C0; &#xAC1C;&#xBC1C;&#xC5D0; &#xBD80;&#xC815;&#xC801;&#xC778; &#xB808; &#xADE4; &#xB808;&#xC774;&#xD2B8; calcineurin/NFAT &#xC2E0;&#xD638; &#xC99D;&#xAC70;&#xB97C; &#xC81C;&#xACF5; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. NFAT&#xC758; &#xC800;&#xD574; &#xACE8;&#xC218;&#xC131; &#xAC1C;&#xBC1C; &#xD5A5;&#xC0C1; &#xCC3E;&#xB294;&#xC640; &#xCE58;&#xB8CC; &#xB300;&#xC0C1; calcineurin/NFAT &#xC2E0;&#xD638; &#xC601;&#xD5A5; &#xD0C0;&#xACE0; &#xB09C; &#xBA74;&#xC5ED; &#xCCB4;&#xACC4;&#xC758; &#xD56D;&#xC0C1;&#xC131; &#xB9C8;&#xC57D;&#xC744; &#xC5B4;&#xB5BB;&#xAC8C; &#xC774;&#xD574;&#xC5D0; &#xC0C8;&#xB85C;&#xC6B4; &#xD1B5;&#xCC30;&#xB825;&#xC744; &#xC81C;&#xACF5; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Calcineurin/NFAT &#xC2E0;&#xD638; &#xACE8;&#xC218;&#xC131; haematopoiesis&#xC744; &#xC5B5;&#xC81C; &#xD55C;&#xB2E4;.

Factor nuclear de c&eacute;lulas T activadas (NFAT) comprende una familia de factores de transcripci&oacute;n que regulan la diferenciaci&oacute;n, la activaci&oacute;n y el desarrollo de las c&eacute;lulas T. Se&ntilde;alizaci&oacute;n de NFAT puede mediar tambi&eacute;n granulocitos y activaci&oacute;n de las c&eacute;lulas dendr&iacute;ticas (DC), pero se desconoce si NFAT influye en su desarrollo de progenitores. Presentamos un nuevo papel de calcineurina/NFAT se&ntilde;alizaci&oacute;n como un regulador negativo de la hematopoyesis mieloide. Reconstituir letalmente irradiado ratones con hematopoy&eacute;ticas c&eacute;lulas expresando un p&eacute;ptido inhibitorio de NFAT result&oacute; en mayor desarrollo del compartimiento mieloide. Las c&eacute;lulas de la m&eacute;dula en medios de cultivo hab&iacute;a suplementado con Flt3-L en presencia del inhibidor de la calcineurina/NFAT ciclosporina un aumento en el n&uacute;mero de DC diferenciado. An&aacute;lisis de expresi&oacute;n g&eacute;nica global de DC no tratada y DC inhibida por NFAT revelaron la expresi&oacute;n diferencial de las transcripciones que regulan el ciclo celular y apoptosis. En conclusi&oacute;n, estos resultados proporcionan evidencia que se&ntilde;alizaci&oacute;n calcineurina/NFAT regula negativamente el desarrollo del linaje mieloide. El hallazgo de que la inhibici&oacute;n de NFAT mejora desarrollo mieloide ofrece una visi&oacute;n novedosa de entender c&oacute;mo el tratamiento con f&aacute;rmacos dirigidos a influencia de se&ntilde;alizaci&oacute;n calcineurina/NFAT la homeostasis del sistema inmune innato.

Article	Year
Formation of a stalled early intermediate of pseudouridine synthesis monitored by real-time FRET. RNA (New York, N.Y.)\| PubMed ID: 20106954	2010
Calcineurin/NFAT signalling inhibits myeloid haematopoiesis. EMBO molecular medicine\| PubMed ID: 22311511	2012

Benjamin Hofmann

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