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Isolation of Translating Ribosomes Containing Peptidyl-tRNAs for Functional and Structural Analyses

Recently, structural and biochemical studies have detailed many of the molecular events that occur in the ribosome during inhibition of protein synthesis ...

University of Alabama Huntsville

Minigenes &#x7F16;&#x7801; Met-Arg-Arg &#x80BD;&#x5DF2;&#x7528;&#x4E8E; AGA &#x5BC6;&#x7801;&#x5B50;&#x8FD1;&#x7AEF;&#x5230;&#x8D77;&#x59CB;&#x6216;&#x4E4B;&#x524D;&#x7EC8;&#x6B62;&#x5BC6;&#x7801;&#x5B50;&#x4E2D;&#x7EC6;&#x83CC;&#x7684;&#x6BD2;&#x6027;&#x673A;&#x7406;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x3002;&#x5BC6;&#x7801;&#x5B50;&#x5E8F;&#x5217;&#x7684; &#39; &#x8FF7;&#x4F60;-ORFs&#39; &#x96C7;&#x7528;&#x4E86;&#x542F;&#x52A8;&#x5668;&#xFF0C;aga &#x516C;&#x53F8;&#x548C; CGA &#x548C;&#x7EC8;&#x7ED3;&#x5668;&#x7684;&#x7EC4;&#x5408;&#x3002;Aga &#x516C;&#x53F8;&#x548C; CGA &#x90FD;&#x5728;&#x5927;&#x80A0;&#x6746;&#x83CC; ORFs &#x4E2D;&#x4F7F;&#x7528;&#x7387;&#x8F83;&#x4F4E;&#x7684; Arg &#x5BC6;&#x7801;&#x5B50;&#xFF0C;&#x4F46;&#x867D;&#x7136; aga &#x516C;&#x53F8;&#x7531;&#x7A00;&#x7F3A;&#x7684; tRNA(Arg4) &#x7FFB;&#x8BD1;&#xFF0C;CGA &#x8BC6;&#x522B;&#x4E30;&#x5BCC;&#x7684; tRNA(Arg2)&#x3002;&#x8868;&#x8FBE;&#x7684;&#x7A9D;&#x85CF;&#x5728;&#x65C1;&#x8FB9;&#x7EC8;&#x6B62;&#x5BC6;&#x7801;&#x5B50;&#x7684;&#x7B2C;&#x4E09;&#x4F4D;&#xFF0C;AGA minigenes &#x662F;&#x6709;&#x5BB3;&#x7684;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#xFF0C;&#x5BFC;&#x81F4;&#x79EF;&#x7D2F;&#x548C;&#x524D;&#x9762;&#x7684; CGA &#x6216; AGA Arg &#x4E09;&#x80DE;&#x80CE;&#x9170; tRNA &#x540C;&#x6E90;&#x7684; peptidyl-tRNA(Arg4)&#x3002;&#x6267;&#x884C;&#x7B2C;&#x4E09;&#x4E2A;&#x4F4D;&#x7F6E;&#x4E2D;&#x7684; CGA &#x7684; minigenes &#x5E76;&#x4E0D;&#x662F;&#x6709;&#x6BD2;&#x7684;&#x3002;&#x5FAE;&#x5C0F;&#x4ECB;&#x5BFC;&#x7684;&#x6BD2;&#x6027;&#x548C;&#x9170; tRNA &#x79EF;&#x7D2F;&#x4E86;&#x538B;&#x5236; tRNA(Arg4) &#x751F;&#x4EA7;&#x8FC7;&#x5269;&#x800C;&#x4E0D;&#x662F;&#x6C34;&#x89E3;&#x9176;&#x9170; tRNA&#xFF0C;&#x624D;&#x5904;&#x4E8E;&#x6D3B;&#x52A8;&#x72B6;&#x6001;&#xFF0C;&#x5DF2;&#x88AB;&#x91CA;&#x653E;&#xFF0C;&#x6838;&#x7CD6;&#x4F53;&#x7684;&#x886C;&#x5E95;&#x4E0A;&#x7684;&#x9176;&#x7684;&#x751F;&#x4EA7;&#x8FC7;&#x5269;&#x3002;&#x6309;&#x7167;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x8C03;&#x67E5;&#x7ED3;&#x679C;&#xFF0C;peptidyl-tRNA(Arg4) &#x88AB;&#x786E;&#x5B9A;&#x8981;&#x4E0E;&#x6838;&#x7CD6;&#x4F53;&#x5728;&#x5F85;&#x547D;&#x590D;&#x6742;&#x4E3B;&#x8981;&#x5173;&#x8054;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x4E0E;&#x4EE5;&#x524D;&#x7684;&#x7ED3;&#x679C;&#x652F;&#x6301; AGA &#x4E09;&#x80DE;&#x80CE; pth + &#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x5408;&#x6210;&#x7684;&#x6291;&#x5236;&#x4F5C;&#x7528;&#x7684;&#x4E3B;&#x8981;&#x673A;&#x5236;&#x6D89;&#x53CA;&#x87AF;&#x5408;&#x7684; chin &#x5982;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x9170;-tRNA &#x4E0A;&#x505C;&#x6EDE;&#x4E0D;&#x524D;&#x7684;&#x6838;&#x7CD6;&#x4F53;&#x7684;&#x5047;&#x8BF4;&#x3002;

&#x6838;&#x7CD6;&#x4F53;&#x5931;&#x901F;&#x548C;&#x9170; tRNA &#x843D;&#x5728; AGA &#x5BC6;&#x7801;&#x5B50;&#x5728;&#x5E73;&#x79FB;&#x5EF6;&#x8FDF;&#x671F;&#x95F4;&#x3002;

Minigenes encoding the peptide Met-Arg-Arg have been used to study the mechanism of toxicity of AGA codons proximal to the start codon or prior to the termination codon in bacteria. The codon sequences of the 'mini-ORFs' employed were initiator, combinations of AGA and CGA, and terminator. Both, AGA and CGA are low-usage Arg codons in ORFs of Escherichia coli but, whilst AGA is translated by the scarce tRNA(Arg4), CGA is recognized by the abundant tRNA(Arg2). Overexpression of minigenes harbouring AGA in the third position, next to a termination codon, was deleterious to the cell and led to the accumulation of peptidyl-tRNA(Arg4) and of the peptidyl-tRNA cognate to the preceding CGA or AGA Arg triplet. The minigenes carrying CGA in the third position were not toxic. Minigene-mediated toxicity and peptidyl-tRNA accumulation were suppressed by overproduction of tRNA(Arg4) but not by overproduction of peptidyl-tRNA hydrolase, an enzyme that is only active on substrates that have been released from the ribosome. Consistent with these findings, peptidyl-tRNA(Arg4) was identified to be mainly associated with ribosomes in a stand-by complex. These and previous results support the hypothesis that the primary mechanism of inhibition of protein synthesis by AGA triplets in pth+ cells involves sequestration of tRNAs as peptidyl-tRNA on the stalled ribosome.

Ribosome stalling and peptidyl-tRNA drop-off during translational delay at AGA codons.

Minig&#xE8;nes codant pour le peptide Met-Arg-Arg ont &#xE9;t&#xE9; utilis&#xE9;s pour &#xE9;tudier le m&#xE9;canisme de la toxicit&#xE9; de l&#x26;#39;AGA codons proximale au codon d&#x26;#39;initiation ou avant le codon de terminaison dans les bact&#xE9;ries. Les s&#xE9;quences de codons de la &#xAB;mini-ORF &#x26;#39;emploi ont &#xE9;t&#xE9; l&#x26;#39;initiateur, des combinaisons de l&#x26;#39;AGA et CGA, et le terminateur. Les deux, AGA et CGA sont des codons Arg faible utilisation dans les ORF de Escherichia coli, mais, tandis que l&#x26;#39;AGA se traduit par l&#x26;#39;ARNt rares (Arg4), CGA est reconnu par l&#x26;#39;abondante ARNt (Arg2). La surexpression de minig&#xE8;nes h&#xE9;bergeant AGA en troisi&#xE8;me position, &#xE0; c&#xF4;t&#xE9; d&#x26;#39;un codon de terminaison, &#xE9;tait nocive pour la cellule et conduit &#xE0; l&#x26;#39;accumulation du peptidyl-ARNt (Arg4) et de la peptidyl-ARNt apparent&#xE9; au pr&#xE9;c&#xE9;dent CGA ou AGA Arg triplet. Les porteurs de minig&#xE8;nes CGA dans la troisi&#xE8;me position ne sont pas toxiques. Minig&#xE8;ne m&#xE9;di&#xE9;e par la toxicit&#xE9; et l&#x26;#39;accumulation de peptidyl-ARNt ont &#xE9;t&#xE9; supprim&#xE9;es par la surproduction de l&#x26;#39;ARNt (Arg4) mais pas par la surproduction du peptidyl-ARNt hydrolase, une enzyme qui n&#x26;#39;est active que sur des substrats qui ont &#xE9;t&#xE9; lib&#xE9;r&#xE9;s par le ribosome. Conform&#xE9;ment &#xE0; ces conclusions, peptidyl-ARNt (Arg4) a &#xE9;t&#xE9; identifi&#xE9; pour &#xEA;tre principalement associ&#xE9;e aux ribosomes dans un complexe de stand-by. Ces r&#xE9;sultats et les pr&#xE9;c&#xE9;dentes soutiennent l&#x26;#39;hypoth&#xE8;se que le principal m&#xE9;canisme d&#x26;#39;inhibition de la synth&#xE8;se des prot&#xE9;ines par des triplets AGA de la PTH + de cellules implique la s&#xE9;questration d&#x26;#39;ARNt que peptidyl-ARNt sur le ribosome bloqu&#xE9;.

Ribosome Stalling et peptidyl-ARNt Drop-off durant le d&#xE9;lai de translation au niveau des codons AGA

Ribosomen Abw&#xFC;rgen und Peptidyl-tRNA Drop-off w&#xE4;hrend translationale Verz&#xF6;gerung bei AGA-Codons.

Minigenes codifica il peptide Met-Arg-Arg sono stati usati per studiare il meccanismo di tossicit&agrave; dei codoni AGA prossimale per il codone di inizio o prima il codone di terminazione nei batteri. Sequenze codone di &#39;mini-ORFs&#39; impiegati erano iniziatore, combinazioni di AGA e CGA e terminator. Entrambi, AGA e CGA sono codoni Arg scarso utilizzo in ORFs di Escherichia coli, ma mentre AGA &egrave; tradotto dalla tRNA(Arg4) scarse, CGA &egrave; riconosciuto dal tRNA(Arg2) abbondante. Sovraespressione di minigenes che ospita AGA in terza posizione, accanto a un codone di terminazione, &egrave; stato deleterio per la cella e ha portato all&#39;accumulo di peptidyl-tRNA(Arg4) e le cognate peptidilica-tRNA per la terzina precedente CGA o AGA Arg. Il minigenes che trasportano CGA in terza posizione non erano tossici. Tossicit&agrave; mediata minigene e accumulo peptidilica-tRNA erano soppressa da una sovrapproduzione di tRNA(Arg4) ma non da una sovrapproduzione di peptidilica-tRNA idrolasi, un enzima che &egrave; attivo su substrati che sono stati rilasciati dal ribosoma solo. Coerentemente con questi risultati, peptidyl-tRNA(Arg4) &egrave; stato identificato per essere principalmente associato con i ribosomi in un complesso di stand-by. Questi e i risultati precedenti supportano l&#39;ipotesi che il principale meccanismo di inibizione della sintesi della proteina da triplette AGA in pth + cellule comporta il sequestro del tRNA come peptidilica-tRNA sul ribosoma in stallo.

Ribosoma stallo e peptidilica-tRNA consegna durante il ritardo traslazionale presso i codoni AGA.

&#x30E1;&#x30C3;&#x30C8; - &#x306E;Arg-Arg&#x306F;AGA&#x306E;&#x6BD2;&#x6027;&#x306E;&#x30E1;&#x30AB;&#x30CB;&#x30BA;&#x30E0;&#x3092;&#x7814;&#x7A76;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x4F7F;&#x7528;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C9;&#x3092;&#x30B3;&#x30FC;&#x30C9;&#x3059;&#x308B;Minigenes&#x306F;&#x4E8B;&#x524D;&#x306E;&#x7D30;&#x83CC;&#x306E;&#x7D42;&#x6B62;&#x30B3;&#x30C9;&#x30F3;&#x306B;&#x958B;&#x59CB;&#x30B3;&#x30C9;&#x30F3;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x8FD1;&#x4F4D;&#x306E;&#x30B3;&#x30C9;&#x30F3;&#x3002; &#x26;quot;&#x30DF;&#x30CB;ORF&#x306E;&#x26;quot;&#x96C7;&#x7528;&#x306E;&#x30B3;&#x30C9;&#x30F3;&#x914D;&#x5217;&#x304C;&#x30A4;&#x30CB;&#x30B7;&#x30A8;&#x30FC;&#x30BF;&#x3001;AGA&#x304A;&#x3088;&#x3073;CGA&#x306E;&#x7D44;&#x307F;&#x5408;&#x308F;&#x305B;&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x30BF;&#x30FC;&#x30DF;&#x30CD;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x3067;&#x3042;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x4E21;&#x65B9;&#x3068;&#x3082;&#x3001;AGA&#x304A;&#x3088;&#x3073;CGA&#x304C;&#x5927;&#x8178;&#x83CC;&#x306E;ORF&#x306E;&#x4F4E;&#x5229;&#x7528;&#x306E;Arg&#x306E;&#x30B3;&#x30C9;&#x30F3;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x304C;&#x3001;&#x3057;&#x306A;&#x304C;&#x3089;&#x3001;AGA&#x304C;&#x4E4F;&#x3057;&#x3044;&#x306E;tRNA&#xFF08;ARG4&#xFF09;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x5909;&#x63DB;&#x3055;&#x308C;&#x3001;CGA&#x306F;&#x3001;&#x8C4A;&#x5BCC;&#x306A;tRNA&#x306E;&#xFF08;ARG2&#xFF09;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x8A8D;&#x8B58;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x7D42;&#x6B62;&#x30B3;&#x30C9;&#x30F3;&#x306E;&#x96A3;&#x306B;&#x3042;&#x308B;&#x7B2C;&#x4E09;&#x306E;&#x4F4D;&#x7F6E;&#x306B;AGA&#x3092;&#x4FDD;&#x6709;minigenes&#x306E;&#x904E;&#x5270;&#x767A;&#x73FE;&#x306F;&#x3001;&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x6709;&#x5BB3;&#x3067;&#x3042;&#x3063;&#x305F;&#x3068;&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30B8;&#x30EB;-tRNA&#x306E;&#x84C4;&#x7A4D;&#xFF08;ARG4&#xFF09;&#x3078;&#x3068;&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30B8;&#x30EB;-tRNA&#x306E;&#x540C;&#x65CF;&#x306E;&#x524D;&#x306E;CGA&#x307E;&#x305F;&#x306F;AGA&#x306E;Arg&#x30C8;&#x30EA;&#x30D7;&#x30EC;&#x30C3;&#x30C8;&#x306B;&#x3064;&#x306A;&#x304C;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x7B2C;&#x4E09;&#x306E;&#x4F4D;&#x7F6E;&#x306B;CGA&#x3092;&#x904B;&#x3076;minigenes&#x306F;&#x6709;&#x6BD2;&#x3067;&#x306F;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3067;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x30DF;&#x30CB;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x4ECB;&#x5728;&#x6BD2;&#x6027;&#x3068;&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30B8;&#x30EB;-tRNA&#x306E;&#x84C4;&#x7A4D;&#x304C;&#x306A;&#x304F;&#x3001;&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30B8;&#x30EB;-tRNA&#x306E;&#x52A0;&#x6C34;&#x5206;&#x89E3;&#x9175;&#x7D20;&#x3001;&#x30EA;&#x30DC;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x304B;&#x3089;&#x653E;&#x51FA;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x57FA;&#x677F;&#x4E0A;&#x3067;&#x306E;&#x307F;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x9175;&#x7D20;&#x306E;&#x904E;&#x5270;&#x7523;&#x751F;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;tRNA&#xFF08;ARG4&#xFF09;&#x306E;&#x904E;&#x5270;&#x7523;&#x751F;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x6291;&#x5236;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x77E5;&#x898B;&#x3068;&#x4E00;&#x81F4;&#x3057;&#x3001;&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30B8;&#x30EB;-tRNA&#x3092;&#xFF08;ARG4&#xFF09;&#x306F;&#x3001;&#x4E3B;&#x306B;&#x30B9;&#x30BF;&#x30F3;&#x30C9;&#x30D0;&#x30A4;&#x8907;&#x5408;&#x4F53;&#x306E;&#x30EA;&#x30DC;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x306B;&#x95A2;&#x9023;&#x4ED8;&#x3051;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x78BA;&#x8A8D;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x3068;&#x3001;&#x4EE5;&#x524D;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x306F;&#x3001;PTH +&#x7D30;&#x80DE;&#x3067;AGA&#x30C8;&#x30EA;&#x30D7;&#x30EC;&#x30C3;&#x30C8;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x5408;&#x6210;&#x306E;&#x963B;&#x5BB3;&#x306E;&#x4E3B;&#x306A;&#x30E1;&#x30AB;&#x30CB;&#x30BA;&#x30E0;&#x306F;&#x505C;&#x6B62;&#x3057;&#x3066;&#x30EA;&#x30DC;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x4E0A;&#x3067;&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30B8;&#x30EB;-tRNA&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306B;tRNA&#x306E;&#x9694;&#x96E2;&#x3092;&#x4F34;&#x3046;&#x3068;&#x3044;&#x3046;&#x4EEE;&#x8AAC;&#x3092;&#x652F;&#x6301;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;

AGA&#x30B3;&#x30C9;&#x30F3;&#x3067;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30EC;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30CA;&#x30EB;&#x9045;&#x5EF6;&#x306E;&#x9593;&#x306B;&#x30C9;&#x30ED;&#x30C3;&#x30D7;&#x30AA;&#x30D5;&#x30B9;&#x30C8;&#x30FC;&#x30EB;&#x30EA;&#x30DC;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x3068;&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30B8;&#x30EB;-tRNA&#x304C;

Minigenes &#xC778;&#xCF54;&#xB529; &#xD3A9; &#xD2F0; &#xB4DC; &#xBA54;&#xD2B8;&#xB85C; Arg Arg AGA codons &#xC2DC;&#xC791; codon&#xC5D0; &#xB610;&#xB294; &#xC774;&#xC804;&#xC5D0; &#xBC15;&#xD14C;&#xB9AC;&#xC544;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC885;&#xB8CC; codon &#xADFC;&#xC758; &#xB3C5;&#xC131;&#xC758; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998; &#xC5F0;&#xAD6C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. Codon &#xC2DC;&#xD000;&#xC2A4;&#xB294; &#39; &#xBBF8;&#xB2C8;-ORFs&#39; &#xACE0;&#xC6A9;&#xC758; &#xCC3D;&#xC2DC;&#xC790;, &#xC544;&#xAC00; CGA, &#xBC0F; &#xC885;&#xACB0;&#xC790;&#xC758; &#xC870;&#xD569; &#xD588;&#xB2E4;. &#xBAA8;&#xB450;, &#xC544;&#xAC00; CGA&#xB294; &#xB300;&#xC7A5;&#xADE0; Orfs&#xC5D0;&#xC11C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xB0AE;&#xC740; &#xC0AC;&#xC6A9; Arg codons &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xC544;&#xAC00; &#xBD80;&#xC871; &#xD55C; Trna(arg4)&#xC5D0; &#xC758;&#xD574;, &#xBC88;&#xC5ED; &#xD558;&#xB294; &#xB3D9;&#xC548; CGA &#xD48D;&#xBD80;&#xD55C; Trna(arg2)&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC778;&#xC2DD; &#xB41C;&#xB2E4;. &#xC885;&#xB8CC; codon &#xC606; &#xC138; &#xBC88;&#xC9F8; &#xC704;&#xCE58;&#xC5D0; &#xC544;&#xAC00; &#xB9E4;&#xC7A5; minigenes&#xC758; overexpression &#xC140;&#xC5D0; &#xD574;&#xB85C;&#xC6B4;&#xB294; &#xACE0; &#xC704;&#xC758; CGA &#xB610;&#xB294; &#xC544;&#xAC00; Arg &#xC138; &#xAC1C;&#xB97C; peptidyl-tRNA &#xB3D9;&#xACC4;&#xC5B4;&#xC640; Peptidyl-trna(arg4)&#xC758; &#xCD95;&#xC801;. &#xC138; &#xBC88;&#xC9F8; &#xC704;&#xCE58;&#xC5D0; CGA&#xB97C; &#xC6B4;&#xBC18; minigenes &#xB3C5;&#xC131;&#xC774; &#xC5C6;&#xC5C8;&#xB2E4;. Minigene &#xC911;&#xC7AC; &#xB3C5;&#xC131; &#xBC0F; peptidyl-tRNA &#xCD95;&#xC801; &#xACFC;&#xC789; peptidyl tRNA &#xAC00;&#xC218;&#xBD84;&#xD574; &#xD6A8;&#xC18C;, &#xD6A8;&#xC18C;&#xB294; &#xB9AC;&#xBCF4;&#xC19C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xB9B4;&#xB9AC;&#xC2A4;&#xB41C; &#xAE30;&#xD310;&#xC5D0; &#xD65C;&#xC131;&#xD654;&#xB9CC; &#xC544;&#xB2C8;&#xB77C; Trna(arg4)&#xC758; &#xACFC;&#xC789;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC5B5;&#xC81C; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xACB0;&#xACFC;&#xC640; &#xC77C;&#xCE58;, Peptidyl-trna(arg4)&#xB294; &#xBCF5;&#xC7A1; &#xD55C; &#xB300;&#xAE30;&#xC911;&#xC5D0; &#xB9AC;&#xBCF4;&#xC19C;&#xACFC; &#xC8FC;&#xB85C; &#xAD00;&#xB828; &#xB41C; &#xAC83;&#xC73C;&#xB85C; &#xD655;&#xC778; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xC774;&#xC804; &#xACB0;&#xACFC; &#xC544;&#xAC00; &#xC138; &#xC30D;&#xB465;&#xC774; pth + &#xC140;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xD569;&#xC131;&#xC758; &#xC800;&#xD574; &#xD558;&#xB294; &#xAE30;&#xBCF8; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998; &#xC2E4;&#xC18D;&#xB41C; &#xB9AC;&#xBCF4;&#xC19C;&#xC5D0; peptidyl-Trna&#xB85C; Trnas&#xC758; &#xACA9;&#xB9AC;&#xB97C; &#xD3EC;&#xD568; &#xD558;&#xB294; &#xAC00;&#xC124;&#xC744; &#xC9C0;&#xC6D0; &#xD558; &#xACE0; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

AGA codons&#xC5D0;&#xC11C; &#xBCC0;&#xD658; &#xC9C0;&#xC5F0; &#xC2DC;&#xAC04; &#xB3D9;&#xC548; &#xC5F0;&#xAE30; &#xBC0F; peptidyl-tRNA &#xC774;&#xD0C8; &#xB9AC;&#xBCF4;&#xC19C;.

Minigenes que codifican el p&#xE9;ptido Met-Arg-Arg se han utilizado para estudiar el mecanismo de toxicidad de la AGA codones proximal al cod&#xF3;n de inicio o antes del cod&#xF3;n de terminaci&#xF3;n en las bacterias. Las secuencias de codones de la &#x26;quot;mini-ORF &#x26;#39;empleados fueron iniciador, las combinaciones de la AGA y CGA, y el terminador. Tanto, AGA y CGA son de bajo uso de los codones Arg en la ORF de Escherichia coli, pero, mientras que AGA se traduce en la escasez de tRNA (Arg4), CGA es reconocida por la abundancia de tRNA (arg2). La sobreexpresi&#xF3;n de minigenes albergan AGA en la tercera posici&#xF3;n, junto a un cod&#xF3;n de terminaci&#xF3;n, era perjudicial para la c&#xE9;lula y condujo a la acumulaci&#xF3;n de peptidil-ARNt (ARG4) y de la cognado peptidil-ARNt a la anterior CGA o triplete AGA Arg. Los que llevan minigenes CGA en la tercera posici&#xF3;n no era t&#xF3;xico. Minigene la toxicidad mediada por la acumulaci&#xF3;n y el peptidil-tRNA fueron reprimidas por la sobreproducci&#xF3;n de tRNA (Arg4), pero no por la sobreproducci&#xF3;n de peptidil-tRNA hidrolasa, una enzima que s&#xF3;lo est&#xE1; activo en los sustratos que se han liberado del ribosoma. De acuerdo con estos hallazgos, peptidil-tRNA (Arg4) se identific&#xF3; que se asocia principalmente con los ribosomas en un complejo de stand-by. Estos resultados y los anteriores apoyan la hip&#xF3;tesis de que el principal mecanismo de la inhibici&#xF3;n de la s&#xED;ntesis de prote&#xED;nas por tripletes AGA de la PTH + en las c&#xE9;lulas involucra el secuestro de los tRNAs como peptidil-ARNt en el ribosoma se estanc&#xF3;.

Ribosoma Stalling y peptidil-tRNA Entrega-Durante el tiempo de Traslacional en los codones AGA

&#x5185;&#x6838;&#x7CD6;&#x4F53;&#x9000;&#x51FA;&#x96A7;&#x9053;&#xFF0C;&#x5F53;&#x67D0;&#x4E9B;&#x65B0;&#x751F;&#x80BD;&#x5E8F;&#x5217;&#xFF0C;&#x53EF;&#x4EE5;&#x6291;&#x5236;&#x7FFB;&#x8BD1;&#x7EC8;&#x6B62;&#x3001; &#x80BD;&#x5EF6;&#x4F38;&#x7387;&#x3002;24 &#x6B8B;&#x7559;&#x9886;&#x8896;&#x9170; tRNA &#x7684; tna &#x64CD;&#x7EB5;&#x5B50;&#x7684;&#x5927;&#x80A0;&#x6746;&#x83CC;&#xFF0C;TnaC-tRNA(Pro)&#xFF0C;&#x5B58;&#x5728;&#x8FC7;&#x5269;&#x7684;&#x8272;&#x6C28;&#x9178;&#xFF0C;&#x6297;&#x62D2;&#x5288;&#x5728; tnaC &#x7EC8;&#x6B62;&#x5BC6;&#x7801;&#x3002;TnaC &#x6B8B;&#x7559; Trp12 &#x5BF9;&#x6B64;&#x6291;&#x5236;&#x4F5C;&#x7528;&#x81F3;&#x5173;&#x91CD;&#x8981;&#x3002;Trp12 &#x5728;&#x9000;&#x51FA;&#x96A7;&#x9053;&#x4E2D;&#x7684;&#x8FD1;&#x4F3C;&#x4F4D;&#x7F6E;&#x662F;&#x7531;&#x4EA4;&#x8054; Lys11 TnaC-tRNA(Pro) &#x7684; 23 &#x578B;&#x98DE;&#x673A; rRNA &#x6838;&#x82F7;&#x9178; A750 &#x5230;&#x786E;&#x5B9A;&#x7684;&#x3002;&#x7532;&#x57FA;&#x5316;&#x7684; 23 &#x578B;&#x98DE;&#x673A; rRNA &#x6838;&#x82F7;&#x9178; A788 &#x51CF;&#x5C11;&#x4E86; Trp12 TnaC-tRNA(Pro)&#xFF0C;&#x8FD9;&#x610F;&#x5473;&#x7740; A788 &#x4F4D;&#x79FB;&#x4E2D;&#x7684;&#x5B58;&#x5728;&#x3002;751&#xFF0C;&#x4F4D;&#x7F6E;&#x63D2;&#x5165;&#x817A;&#x82F7;&#x9178;&#x6216;&#x5F15;&#x5165;&#x53D8;&#x5316;&#x4E2D; 23 &#x578B;&#x98DE;&#x673A; rRNA U2609C &#x6216; K90H &#x6216; K90W &#x6838;&#x7CD6;&#x4F53;&#x86CB;&#x767D;&#x5E38;&#x67F4; L22 &#x7684;&#x53D8;&#x5316;&#xFF0C;&#x51E0;&#x4E4E;&#x6D88;&#x706D;&#x4E86;&#x8272;&#x6C28;&#x9178;&#x611F;&#x5E94;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x4FEE;&#x6539;&#x548C;&#x7A81;&#x53D8;&#x7684;&#x5730;&#x533A;&#x4E3B;&#x8981;&#x4F4D;&#x4E8E;&#x88AB;&#x5360;&#x9886;&#x7684; Trp12 TnaC-tRNA(Pro) &#x7684;&#x63A8;&#x5B9A;&#x5730;&#x70B9;&#x9644;&#x8FD1;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7814;&#x7A76;&#x7ED3;&#x679C;&#x8BC6;&#x522B;&#x7279;&#x70B9;&#x7684;&#x6838;&#x7CD6;&#x4F53;&#x9000;&#x51FA;&#x96A7;&#x9053; tna &#x64CD;&#x7EB5;&#x5B50;&#x611F;&#x5E94;&#x7684;&#x5FC5;&#x8981;&#x6761;&#x4EF6;&#x3002;

&#x6838;&#x7CD6;&#x4F53;-&#x9170;-tRNA &#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x8272;&#x6C28;&#x9178;&#x611F;&#x5E94; tna &#x64CD;&#x7EB5;&#x5B50;&#x8868;&#x8FBE;&#x5F0F;&#x7684;&#x57FA;&#x672C;&#x7279;&#x5F81;&#x3002;

Certain nascent peptide sequences, when within the ribosomal exit tunnel, can inhibit translation termination and/or peptide elongation. The 24 residue leader peptidyl-tRNA of the tna operon of E. coli, TnaC-tRNA(Pro), in the presence of excess tryptophan, resists cleavage at the tnaC stop codon. TnaC residue Trp12 is crucial for this inhibition. The approximate location of Trp12 in the exit tunnel was determined by crosslinking Lys11 of TnaC-tRNA(Pro) to nucleotide A750 of 23S rRNA. Methylation of nucleotide A788 of 23S rRNA was reduced by the presence of Trp12 in TnaC-tRNA(Pro), implying A788 displacement. Inserting an adenylate at position 751, or introducing the change U2609C in 23S rRNA or the change K90H or K90W in ribosomal protein L22, virtually eliminated tryptophan induction. These modified and mutated regions are mostly located near the putative site occupied by Trp12 of TnaC-tRNA(Pro). These findings identify features of the ribosomal exit tunnel essential for tna operon induction.

Features of ribosome-peptidyl-tRNA interactions essential for tryptophan induction of tna operon expression.

Certaines s&#xE9;quences peptidiques naissantes, quand dans le tunnel de sortie du ribosome, peuvent inhiber la terminaison de traduction et / ou l&#x26;#39;allongement de peptide. Le leader r&#xE9;sidu 24 peptidyl-ARNt de l&#x26;#39;op&#xE9;ron tna de E. coli, d&#x26;#39;ARNt TNAC-(Pro), en pr&#xE9;sence d&#x26;#39;exc&#xE8;s de tryptophane, r&#xE9;siste clivage au niveau du codon d&#x26;#39;arr&#xEA;t TNAC. R&#xE9;sidus Trp12 CCNT est crucial pour cette inhibition. L&#x26;#39;emplacement approximatif de Trp12 dans le tunnel de sortie a &#xE9;t&#xE9; d&#xE9;termin&#xE9;e par r&#xE9;ticulation de Lys 11 CCNT-ARNt (Pro) pour A750 de nucl&#xE9;otides de l&#x26;#39;ARNr 23S. La m&#xE9;thylation de A788 nucl&#xE9;otidiques de l&#x26;#39;ARNr 23S a &#xE9;t&#xE9; r&#xE9;duite par la pr&#xE9;sence de Trp12 dans CCNT-ARNt (Pro), ce qui implique le d&#xE9;placement A788. Insertion d&#x26;#39;une cyclase &#xE0; la position 751, ou l&#x26;#39;introduction de la U2609C changement dans l&#x26;#39;ARNr 23S ou le changement ou K90H K90W en prot&#xE9;ine ribosomique L22, l&#x26;#39;induction tryptophane pratiquement &#xE9;limin&#xE9;. Ces r&#xE9;gions modifi&#xE9;s et mut&#xE9; sont principalement situ&#xE9;es &#xE0; proximit&#xE9; du site putatif occup&#xE9; par Trp12 de CCNT-ARNt (Pro). Ces r&#xE9;sultats permettent d&#x26;#39;identifier les caract&#xE9;ristiques du tunnel de sortie du ribosome essentiel pour tna op&#xE9;ron induction.

Caract&#xE9;ristiques du ribosome-peptidyl-ARNt interactions essentielles pour l&#x26;#39;induction de tryptophane de la TNA Operon Expression

Merkmale der Ribosomen-Peptidyl-tRNA-Wechselwirkungen essentiell f&#xFC;r die Induktion der Tryptophan-Operon TNA Ausdruck.

Alcune sequenze del peptide nascente, quando all&#39;interno del tunnel di uscita ribosomiale, possono inibire traduzione denuncia e/o allungamento del peptide. Il 24 residuo leader peptidilica-tRNA dell&#39;operone tna di e. coli, TnaC-tRNA(Pro), in presenza di triptofano in eccesso, resiste alla scissione presso il codone di stop tnaC. TnaC residuo Trp12 &egrave; fondamentale per questa inibizione. La posizione approssimativa di Trp12 nel tunnel di uscita &egrave; stata determinata dalla reticolazione Lys11 di TnaC-tRNA(Pro) al nucleotide A750 di 23S rRNA. La metilazione del nucleotide A788 di 23S rRNA &egrave; stato ridotto dalla presenza di Trp12 in TnaC-tRNA(Pro), implicando A788 cilindrata. Inserendo un adenilato alla posizione 751, o introducendo il U2609C in 23S rRNA la modifica o K90H o K90W in proteina ribosomiale L22, praticamente eliminato induzione di triptofano. Queste regioni modificate e mutate sono principalmente situate vicino putativo sito occupato dalla Trp12 di TnaC-tRNA(Pro). Questi risultati identificano caratteristiche del tunnel exit ribosomiale essenziale per l&#39;induzione dell&#39;operone tna.

Caratteristiche del ribosoma-peptidilica-tRNA interazioni essenziali per l&#39;induzione del triptofano del tna espressione operone.

&#x30EA;&#x30DC;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x51FA;&#x53E3;&#x30C8;&#x30F3;&#x30CD;&#x30EB;&#x5185;&#x306E;&#x7279;&#x5B9A;&#x306E;&#x65B0;&#x751F;&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C9;&#x914D;&#x5217;&#x306F;&#x3001;&#x7FFB;&#x8A33;&#x7D42;&#x6B62;&#x53CA;&#x3073;/&#x53C8;&#x306F;&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C9;&#x4F38;&#x9577;&#x3092;&#x963B;&#x5BB3;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x308B;&#x3002; 24&#x6B8B;&#x57FA;&#x306E;&#x30EA;&#x30FC;&#x30C0;&#x30FC;&#x904E;&#x5270;&#x30C8;&#x30EA;&#x30D7;&#x30C8;&#x30D5;&#x30A1;&#x30F3;&#x306E;&#x5B58;&#x5728;&#x4E0B;&#x3067;&#x5927;&#x8178;&#x83CC;&#x306E;&#x30AA;&#x30DA;&#x30ED;&#x30F3;TNA&#x3001;TnaC-tRNA&#x306E;&#xFF08;&#x30D7;&#x30ED;&#xFF09;&#x306E;&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30B8;&#x30EB;-tRNA&#x306F;&#x3001;tnaC&#x7D42;&#x6B62;&#x30B3;&#x30C9;&#x30F3;&#x3067;&#x306E;&#x5207;&#x65AD;&#x306B;&#x62B5;&#x6297;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002; TnaC&#x6B8B;Trp12&#x306F;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x6291;&#x5236;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x91CD;&#x8981;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3002;&#x51FA;&#x53E3;&#x30C8;&#x30F3;&#x30CD;&#x30EB;&#x5185;Trp12&#x306E;&#x304A;&#x304A;&#x3088;&#x305D;&#x306E;&#x4F4D;&#x7F6E;&#x306F;&#x3001;23S rRNA&#x306E;&#x5869;&#x57FA;A750&#x306B;TnaC-tRNA&#x306E;&#xFF08;&#x30D7;&#x30ED;&#xFF09;&#x306E;&#x67B6;&#x6A4B;Lys11&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x6C7A;&#x5B9A;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3002; 23S rRNA&#x306E;&#x5869;&#x57FA;A788&#x306E;&#x30E1;&#x30C1;&#x30EB;&#x5316;&#x306F;A788&#x5909;&#x4F4D;&#x3092;&#x610F;&#x5473;&#x3059;&#x308B;&#x3001;TnaC-tRNA&#x306E;&#xFF08;&#x30D7;&#x30ED;&#xFF09;&#x306E;Trp12&#x306E;&#x5B58;&#x5728;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x6E1B;&#x5C11;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x4F4D;&#x7F6E;751&#x3067;&#x30A2;&#x30C7;&#x30CB;&#x30EB;&#x9178;&#x3092;&#x633F;&#x5165;&#x3057;&#x305F;&#x308A;&#x3001;23S rRNA&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x5909;&#x5316;&#x306E;U2609C&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x30EA;&#x30DC;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;L22&#x3067;&#x5909;&#x66F4;K90H&#x307E;&#x305F;&#x306F;K90W&#x3092;&#x5C0E;&#x5165;&#x3057;&#x3001;&#x5B9F;&#x8CEA;&#x7684;&#x306B;&#x9664;&#x53BB;&#x30C8;&#x30EA;&#x30D7;&#x30C8;&#x30D5;&#x30A1;&#x30F3;&#x8A98;&#x5C0E;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x4FEE;&#x98FE;&#x3068;&#x5909;&#x7570;&#x9818;&#x57DF;&#x306F;&#x4E3B;&#x306B;TnaC-tRNA&#x306E;&#xFF08;&#x30D7;&#x30ED;&#xFF09;&#x306E;Trp12&#x304C;&#x5360;&#x6709;&#x3057;&#x3066;&#x63A8;&#x5B9A;&#x90E8;&#x4F4D;&#x306E;&#x8FD1;&#x304F;&#x306B;&#x4F4D;&#x7F6E;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x77E5;&#x898B;&#x306F;&#x3001;TNA&#x30AA;&#x30DA;&#x30ED;&#x30F3;&#x306E;&#x8A98;&#x5C0E;&#x306B;&#x5FC5;&#x9808;&#x306E;&#x30EA;&#x30DC;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x51FA;&#x53E3;&#x30C8;&#x30F3;&#x30CD;&#x30EB;&#x306E;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3092;&#x8B58;&#x5225;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

TNA&#x30AA;&#x30DA;&#x30ED;&#x30F3;&#x767A;&#x73FE;&#x306E;&#x30C8;&#x30EA;&#x30D7;&#x30C8;&#x30D5;&#x30A1;&#x30F3;&#x8A98;&#x5C0E;&#x306B;&#x5FC5;&#x9808;&#x30EA;&#x30DC;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;-&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30B8;&#x30EB;-tRNA&#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x306E;&#x7279;&#x5FB4;

&#xD2B9;&#xC815; &#xD55C; &#xCD08;&#xAE30; &#xD3A9; &#xD2F0; &#xB4DC; &#xC2DC;&#xD000;&#xC2A4;, ribosomal &#xCD9C;&#xAD6C; &#xD130;&#xB110; &#xB0B4; &#xC5B5;&#xC81C;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xB294; &#xBC88;&#xC5ED; &#xC885;&#xB8CC; &#xBC0F; &#xD3A9; &#xD2F0; &#xB4DC; &#xC5F0;&#xC2E0; &#xC728;. 24 &#xC794;&#xB958;&#xBB3C; &#xB9AC;&#xB354; peptidyl-tRNA E. &#xB300;&#xC7A5;&#xADE0;, TnaC-tRNA(Pro), &#xCD08;&#xACFC; &#xD2B8;&#xB9BD;&#xD1A0;&#xD310;&#xC758; &#xC874;&#xC7AC;&#xC758; &#xBC29;&#xCF55; &#xC624; &#xD398;&#xB860;&#xC758; &#xC800;&#xD56D; tnaC &#xC815;&#xC9C0; codon&#xC5D0; &#xBD84;&#xC5F4;. TnaC &#xCC0C; &#xAEBC; &#xAE30; trp12&#xC774;&#xC774; &#xC800;&#xD574;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xACB0;&#xC815;&#xC801; &#xC774;&#xB2E4;. &#xCD9C;&#xAD6C; &#xD130;&#xB110;&#xC5D0;&#xC11C; trp12&#xC758; &#xB300;&#xB7B5;&#xC801;&#xC778; &#xC704;&#xCE58;&#xB294; &#xAC00;&#xAD50; TnaC-tRNA(Pro) Lys11 A750 23S Rrna&#xC758; &#xC5FC;&#xAE30;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xACB0;&#xC815; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;. 23S Rrna&#xC758; A788 &#xB274;&#xD074;&#xB808;&#xC624;&#xD2F0;&#xB4DC;&#xC758; &#xBA54; &#xD2F8; &#xD654; Trp12 TnaC-tRNA(Pro), A788 &#xBCC0;&#xC704; &#xC554;&#xC2DC;&#xC5D0; &#xC874;&#xC7AC;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xAC10;&#xC18C; &#xD588;&#xB2E4;. 751, &#xC704;&#xCE58;&#xC5D0;&#xB294; adenylate&#xB97C; &#xC0BD;&#xC785; &#xB610;&#xB294; &#xBCC0;&#xACBD; 23S Rrna&#xC758; U2609C ribosomal &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; L22 &#xBCC0;&#xACBD; K90H &#xB610;&#xB294; k90w&#xB97C; &#xB3C4;&#xC785;, &#xD2B8;&#xB9BD;&#xD1A0;&#xD310; &#xC720;&#xB3C4; &#xAC70;&#xC758; &#xD0C8;&#xB77D;. &#xC774; &#xC218;&#xC815; &#xBC0F; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xC9C0;&#xAD6C;&#xB294; &#xB300;&#xBD80;&#xBD84; &#xC0C1; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8; TnaC-tRNA(Pro) trp12&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC810;&#xB839; &#xBD80;&#xADFC;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xC5F0;&#xAD6C; &#xACB0;&#xACFC; &#xBC29;&#xCF55; &#xC624; &#xD398;&#xB860; &#xC720;&#xB3C4; &#xC704;&#xD55C; &#xD544;&#xC218;&#xC801;&#xC778; ribosomal &#xCD9C;&#xAD6C; &#xD130;&#xB110;&#xC758; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC744; &#xC2DD;&#xBCC4;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xB9AC;&#xBCF4;&#xC19C;-peptidyl-tRNA &#xC0C1;&#xD638; &#xBC29;&#xCF55; &#xC624; &#xD398;&#xB860; &#xC2DD;&#xC758; &#xD2B8;&#xB9BD;&#xD1A0;&#xD310; &#xC720;&#xB3C4; &#xC704;&#xD55C; &#xD544;&#xC218; &#xAE30;&#xB2A5;.

Ciertas secuencias de p&#xE9;ptidos nacientes, cuando dentro del t&#xFA;nel de salida ribos&#xF3;mico, pueden inhibir la terminaci&#xF3;n de la traducci&#xF3;n y / o alargamiento p&#xE9;ptido. El l&#xED;der residuo 24 peptidil-ARNt del oper&#xF3;n TNA de E. coli, TnaC-ARNt (Pro), en presencia de tript&#xF3;fano en exceso, se resiste a la escisi&#xF3;n en el cod&#xF3;n de parada tnaC. Residuos TnaC Trp12 es crucial para esta inhibici&#xF3;n. La localizaci&#xF3;n aproximada de Trp12 en el t&#xFA;nel de salida se determin&#xF3; por reticulaci&#xF3;n Lys11 de TnaC-ARNt (Pro) para A750 de nucle&#xF3;tidos de 23S ARNr. La metilaci&#xF3;n del A788 de nucle&#xF3;tidos de 23S rRNA se redujo por la presencia de Trp12 en TnaC-tRNA (Pro), lo que implica el desplazamiento A788. Inserci&#xF3;n de una adenilato en la posici&#xF3;n 751, o introducir el cambio en U2609C 23S rRNA o el cambio o K90H K90W de la prote&#xED;na ribosomal L22, la inducci&#xF3;n virtualmente eliminado tript&#xF3;fano. Estas regiones modificados y mutados se encuentran principalmente cerca del lugar ocupado por supuesto Trp12 de TnaC-tRNA (Pro). Estos hallazgos identifican las caracter&#xED;sticas de la salida del t&#xFA;nel ribosomal esencial para la inducci&#xF3;n del oper&#xF3;n tna.

Caracter&#xED;sticas de los ribosomas-peptidil-tRNA interacciones esenciales para la inducci&#xF3;n de tript&#xF3;fano de la TNA la expresi&#xF3;n del oper&#xF3;n

&#x4F53;&#x5916;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x5DF2;&#x786E;&#x7ACB;&#xFF0C;&#x6E38;&#x79BB;&#x7684;&#x8272;&#x6C28;&#x9178;&#x8BF1;&#x5BFC; tna &#x64CD;&#x7EB5;&#x5B50;&#x8868;&#x8FBE;&#x5F0F;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x5230;&#x521A;&#x521A;&#x5B8C;&#x6210;&#x7684; TnaC-tRNA(Pro)&#xFF0C;&#x8FD9;&#x4E2A;&#x64CD;&#x7EB5;&#x5B50;&#x7684;&#x9886;&#x8896;&#x80BD;&#x9170; tRNA &#x524D;&#x4F53;&#x5408;&#x6210;&#x7684;&#x6838;&#x7CD6;&#x4F53;&#x3002;&#x8272;&#x6C28;&#x9178;&#x884C;&#x4E3A;&#x901A;&#x8FC7;&#x6291;&#x5236;&#x91CA;&#x653E;&#x56E0;&#x5B50; 2 &#x4ECB;&#x5BFC;&#x7684; tnaC &#x7EC8;&#x6B62;&#x5BC6;&#x7801;&#x5728;&#x6B64;&#x9170; tRNA &#x5288;&#x88C2;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#x6211;&#x4EEC;&#x5206;&#x6790;&#x6838;&#x7CD6;&#x4F53;&#x4F4D;&#x7F6E;&#x7684;&#x6E38;&#x79BB;&#x8272;&#x6C28;&#x9178;&#xFF0C;&#x5B83;&#x5728;&#x6838;&#x7CD6;&#x4F53;&#x4E2D;&#x4EA7;&#x751F;&#x7684;&#x53D8;&#x5316;&#x548C;&#x5728;&#x4FC3;&#x8FDB;&#x8272;&#x6C28;&#x9178;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x548C;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x7684;&#x65B0;&#x751F; TnaC-tRNA(Pro) &#x80BD;&#x7684;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;&#x901A;&#x8FC7;&#x4F7F;&#x7528;&#x7532;&#x57FA;&#x5316;&#x4FDD;&#x62A4;&#x548C;&#x7ED1;&#x5B9A;/&#x7ADE;&#x4E89;&#x5316;&#x9A8C;&#x68C0;&#x6D4B;&#x5230; 23 &#x578B;&#x98DE;&#x673A; rRNA &#x6838;&#x82F7;&#x9178;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x8FC7;&#x7A0B;&#x4E2D;&#x53D1;&#x751F;&#x7684;&#x4F4D;&#x7F6E;&#x53D8;&#x5316;&#x3002;&#x5206;&#x6790; ribosome-TnaC-tRNA(Pro) &#x914D;&#x5408;&#x7269;&#x7EC4;&#x6210;&#x4E86;&#x4F53;&#x5916; &#xFF1B;&#x4ED6;&#x4EEC;&#x6240;&#x8F7D;&#x91CE;&#x751F;&#x578B; TnaC-tRNA(Pro) &#x6216;&#x5176;&#x65E0;&#x6CD5;&#x6B63;&#x5E38;&#x5DE5;&#x4F5C;&#x7684;&#x66FF;&#x4EE3;&#xFF0C;TnaC(W12R)-tRNA(Pro)&#x3002;&#x6BD4;&#x8F83;&#x8FD9;&#x4E24;&#x4E2A;&#x9170;-tRNA-&#x6838;&#x7CD6;&#x4F53;&#x914D;&#x5408;&#x7269;&#xFF0C;&#x514D;&#x8D39;&#x8272;&#x6C28;&#x9178;&#x641C;&#x6765;&#x963B;&#x6B62;&#x7532;&#x57FA;&#x5316;&#x6838;&#x82F7;&#x9178; A2572 &#x91CE;&#x751F;&#x578B; ribosome-TnaC-tRNA(Pro) &#x914D;&#x5408;&#x7269;&#x800C;&#x4E0D;&#x662F; ribosome-TnaC(W12R)-tRNA(Pro) &#x914D;&#x5408;&#x7269;&#x3002;&#x6838;&#x82F7;&#x9178; A2572 &#x662F;&#x5728;&#x6838;&#x7CD6;&#x4F53;&#x9170;&#x8F6C;&#x79FB;&#x9176;&#x4E2D;&#x5FC3;&#x3002;Tryptophanol&#xFF0C;noninducing &#x7684;&#x7ADE;&#x4E89;&#x5BF9;&#x624B;&#xFF0C;&#x662F;&#x8272;&#x6C28;&#x9178;&#x7684;&#x80FD;&#x6709;&#x6548;&#x5730;&#x963B;&#x6B62; A2572 &#x7532;&#x57FA;&#x5316; &#xFF1B;&#x4F46;&#x662F;&#xFF0C;&#x5B83;&#x5E76;&#x672A;&#x626D;&#x8F6C;&#x8272;&#x6C28;&#x9178;&#x7684;&#x4FDD;&#x62A4;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;&#x514D;&#x8D39;&#x7684;&#x8272;&#x6C28;&#x9178;&#x6291;&#x5236;&#x560C;&#x5464;&#x5288;&#x88C2;&#x7684; TnaC-tRNA(Pro) &#xFF1B;&#x5B83;&#x8FD8;&#x6291;&#x5236;&#x6297;&#x751F;&#x7D20;&#x7684; sparsomycin &#x7684;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x3002;TnaC(W12R)-tRNA(Pro) &#x7A81;&#x53D8;&#x4F53;&#x914D;&#x5408;&#x4E0D;&#x89C2;&#x5BDF;&#x5230;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x6548;&#x679C;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7814;&#x7A76;&#x7ED3;&#x679C;&#x5EFA;&#x7ACB;&#x8DE8;&#x56FD;&#x6FC0;&#x8FDB;&#x515A;-12 &#x7684; TnaC-tRNA(Pro) &#x662F;&#x9700;&#x8981;&#x5F15;&#x5165;&#x9170;&#x8F6C;&#x79FB;&#x9176;&#x4E2D;&#x5FC3;&#x7684;&#x6838;&#x7CD6;&#x4F53;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x514D;&#x8D39;&#x8272;&#x6C28;&#x9178;&#x7ED1;&#x5B9A;&#xFF0C;&#x5BFC;&#x81F4;&#x9170;&#x8F6C;&#x79FB;&#x9176;&#x6291;&#x5236;&#x7684;&#x7279;&#x5B9A;&#x66F4;&#x6539;&#x3002;&#x514D;&#x8D39;&#x7684;&#x8272;&#x6C28;&#x9178;&#x4F3C;&#x4E4E;&#x884C;&#x4E8B;&#x6216;&#x9644;&#x8FD1;&#x9170;&#x8F6C;&#x79FB;&#x9176;&#x4E2D;&#x5FC3;&#x4E2D;&#x7684;&#x51E0;&#x79CD;&#x6297;&#x751F;&#x7D20;&#x7684;&#x7ED3;&#x5408;&#x70B9;&#x3002;

&#x5728;&#x6838;&#x7CD6;&#x4F53;&#x9170;&#x8F6C;&#x79FB;&#x9176;&#x4E2D;&#x5FC3; TnaC&#xFF0C;&#x65B0;&#x751F;&#x9886;&#x8896;&#x80BD;&#x54CD;&#x5E94;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x8272;&#x6C28;&#x9178;&#x4EA7;&#x751F;&#x7684;&#x53D8;&#x5316;&#x3002;

Studies in vitro have established that free tryptophan induces tna operon expression by binding to the ribosome that has just completed synthesis of TnaC-tRNA(Pro), the peptidyl-tRNA precursor of the leader peptide of this operon. Tryptophan acts by inhibiting Release Factor 2-mediated cleavage of this peptidyl-tRNA at the tnaC stop codon. Here we analyze the ribosomal location of free tryptophan, the changes it produces in the ribosome, and the role of the nascent TnaC-tRNA(Pro) peptide in facilitating tryptophan binding and induction. The positional changes of 23S rRNA nucleotides that occur during induction were detected by using methylation protection and binding/competition assays. The ribosome-TnaC-tRNA(Pro) complexes analyzed were formed in vitro; they contained either wild-type TnaC-tRNA(Pro) or its nonfunctional substitute, TnaC(W12R)-tRNA(Pro). Upon comparing these two peptidyl-tRNA-ribosome complexes, free tryptophan was found to block methylation of nucleotide A2572 of wild-type ribosome-TnaC-tRNA(Pro) complexes but not of ribosome-TnaC(W12R)-tRNA(Pro) complexes. Nucleotide A2572 is in the ribosomal peptidyl transferase center. Tryptophanol, a noninducing competitor of tryptophan, was ineffective in blocking A2572 methylation; however, it did reverse the protective effect of tryptophan. Free tryptophan inhibited puromycin cleavage of TnaC-tRNA(Pro); it also inhibited binding of the antibiotic sparsomycin. These effects were not observed with TnaC(W12R)-tRNA(Pro) mutant complexes. These findings establish that Trp-12 of TnaC-tRNA(Pro) is required for introducing specific changes in the peptidyl transferase center of the ribosome that activate free tryptophan binding, resulting in peptidyl transferase inhibition. Free tryptophan appears to act at or near the binding sites of several antibiotics in the peptidyl transferase center.

Changes produced by bound tryptophan in the ribosome peptidyl transferase center in response to TnaC, a nascent leader peptide.

Des &#xE9;tudes in vitro ont &#xE9;tabli que tryptophane libre induit tna op&#xE9;ron expression en se liant au ribosome qui vient de terminer la synth&#xE8;se de CCNT-ARNt (Pro), le pr&#xE9;curseur de peptidyl-ARNt du peptide leader de cet op&#xE9;ron. Le tryptophane agit en inhibant la lib&#xE9;ration du facteur 2-clivage m&#xE9;di&#xE9; de cette peptidyl-ARNt au niveau du codon d&#x26;#39;arr&#xEA;t du CCNT. Ici, nous analysons l&#x26;#39;emplacement ribosomique de tryptophane libre, les changements qu&#x26;#39;il produit dans le ribosome, et le r&#xF4;le de la naissante CCNT-ARNt (Pro) peptide dans la facilitation de liaison du tryptophane et de l&#x26;#39;induction. Les changements de position de nucl&#xE9;otides ARNr 23S qui se produisent lors de l&#x26;#39;induction ont &#xE9;t&#xE9; d&#xE9;tect&#xE9;s en utilisant la protection et la m&#xE9;thylation de liaison / de la concurrence des dosages. Le ribosome-CCNT-ARNt (Pro) complexes analys&#xE9;s ont &#xE9;t&#xE9; form&#xE9;s in vitro, ils contenaient soit de type sauvage CCNT-ARNt (Pro) ou de son substitut non fonctionnel, le CCNT (W12R)-ARNt (Pro). En comparant ces deux peptidyl-ARNt-ribosome complexes, tryptophane libre a &#xE9;t&#xE9; trouv&#xE9;e pour bloquer la m&#xE9;thylation de A2572 nucl&#xE9;otidique de type sauvage de ribosomes de TNAC-ARNt (Pro) des complexes mais pas de ribosomes TNAC (W12R)-ARNt (Pro) complexes. A2572 nucl&#xE9;otidique est au centre ribosomal transf&#xE9;rase peptidylique. Tryptophanol, un concurrent noninducing du tryptophane, a &#xE9;t&#xE9; inefficace dans le blocage de la m&#xE9;thylation A2572, mais il l&#x26;#39;a fait inverser l&#x26;#39;effet protecteur du tryptophane. Tryptophane libre inhib&#xE9;e clivage puromycine de CCNT-ARNt (Pro), il a &#xE9;galement inhib&#xE9; la liaison de l&#x26;#39;sparsomycine antibiotique. Ces effets n&#x26;#39;ont pas &#xE9;t&#xE9; observ&#xE9;s avec CCNT (W12R)-ARNt (Pro) complexes mutantes. Ces r&#xE9;sultats &#xE9;tablissent que Trp-12 de la CCNT-ARNt (Pro) est n&#xE9;cessaire pour introduire des changements sp&#xE9;cifiques dans le centre peptidyl transf&#xE9;rase du ribosome qui activent sans liaison du tryptophane, r&#xE9;sultant en une inhibition transf&#xE9;rase peptidylique. Gratuit tryptophane semble agir au niveau ou &#xE0; proximit&#xE9; des sites de liaison de plusieurs antibiotiques dans le centre peptidyl transf&#xE9;rase.

Changements produits par le tryptophane li&#xE9; au Centre Peptidyl Ribosome transf&#xE9;rase en r&#xE9;ponse &#xE0; TNAC, un peptide leader Nascent

In-vitro-Studien haben etabliert, dass freiem Tryptophan Tna Operon Ausdruck durch Bindung an das Ribosom veranlasst, die Synthese von TnaC-tRNA(Pro), der konvertierende-tRNA-Vorl&auml;ufer des Peptids F&uuml;hrer von diesem Operon gerade abgeschlossen hat. Tryptophan wirkt durch die Hemmung der Release-Faktor-2-vermittelte Spaltung dieser konvertierende-tRNA an die TnaC-Stop-Codon. Hier analysieren wir die ribosomal Lage von freiem Tryptophan, die &Auml;nderungen, die sie in das Ribosom produziert und die Rolle des entstehenden TnaC-tRNA(Pro) Peptids Tryptophan Bindung und Induktion zu erleichtern. Die Positions&auml;nderungen 23S rRNA-Nukleotide, die auftreten, w&auml;hrend der Induktion wurden mithilfe von Methylierung Schutz und Bindung/Wettbewerb Assays erkannt. Die ribosome-TnaC-tRNA(Pro)-komplexe, die analysiert wurden in-vitro gebildet; Sie enthalten entweder Wildtyp TnaC-tRNA(Pro) oder seine nicht funktionsf&auml;higen Ersatz, TnaC(W12R)-tRNA(Pro). Beim Vergleich dieser beiden konvertierende-tRNA-Ribosom-komplexe, fand sich freiem Tryptophan Methylierung von Nukleotid A2572 der Wildtyp ribosome-TnaC-tRNA(Pro) komplexe, aber nicht der ribosome-TnaC(W12R)-tRNA(Pro)-komplexe zu blockieren. Nukleotid-A2572 ist in der ribosomal konvertierende-Transferase-Zentrum. Tryptophanol, ein noninducing Konkurrent von Tryptophan, war bei Blockierung A2572 Methylierung unwirksam; jedoch es die sch&uuml;tzende Wirkung von Tryptophan umkehren. Freiem Tryptophan gehemmt Puromycin Spaltung von TnaC-tRNA(Pro); Es hemmte auch Bindung die antibiotische Sparsomycin. Diese Effekte wurden mit TnaC(W12R)-tRNA(Pro)-mutant-komplexe nicht beobachtet. Diese Erkenntnisse belegen, dass die Trp-12 von TnaC-tRNA(Pro) ist erforderlich f&uuml;r die Einf&uuml;hrung von spezifischer &Auml;nderungen in der konvertierende Transferase Mitte des Ribosoms, die freiem Tryptophan-Bindung, die zu konvertierende Transferase Hemmung zu aktivieren. Freiem Tryptophan scheint an oder nahe der Bindungsstellen von mehreren Antibiotika in das konvertierende-Transferase-Zentrum zu handeln.

&Auml;nderungen von gebundenen Tryptophan in das Ribosom konvertierende Transferase Center in Reaktion auf TnaC, ein Peptid entstehende F&uuml;hrer produziert.

Studi in vitro hanno stabilito che triptofano libero induce espressione operone tna legandosi ai ribosomi che ha appena completato la sintesi di TnaC-tRNA(Pro), precursore del peptide leader di questo operone peptidilica-tRNA. Triptofano agisce inibendo il rilascio fattore 2-mediata scissione di questa peptidilica-tRNA presso il codone di stop tnaC. Qui analizziamo la posizione ribosomal del triptofano libero, i cambiamenti che produce nel ribosoma e il ruolo del peptide nascente TnaC-tRNA(Pro) nel facilitare l&#39;induzione e l&#39;associazione di triptofano. I cambiamenti posizionali di nucleotidi rRNA 23S che si verificano durante l&#39;induzione sono stati rilevati utilizzando protezione metilazione e dosaggi di associazione/concorso. I ribosome-TnaC-tRNA(Pro) complessi analizzati sono stati formati in vitro; essi contenute selvaggio-tipo TnaC-tRNA(Pro) o suo sostituto non funzionante, TnaC(W12R)-tRNA(Pro). Al confronto tra questi due complessi peptidilica-tRNA-ribosoma, triptofano libero &egrave; stato trovato per bloccare la metilazione del nucleotide A2572 del selvaggio-tipo ribosome-TnaC-tRNA(Pro) complessi, ma non di complessi ribosome-TnaC(W12R)-tRNA(Pro). Nucleotide A2572 &egrave; al centro di transferasi peptidilica ribosomiale. Tryptophanol, un concorrente noninducing di triptofano, &egrave; stato inefficace nel bloccare la metilazione A2572; Tuttavia, esso ha fatto invertire l&#39;effetto protettivo di triptofano. Triptofano libero inibito clivaggio con puromicina di TnaC-tRNA(Pro); inibisce anche associazione dell&#39;antibiotico sparsomycin. Questi effetti non sono stati osservati con complessi mutante TnaC(W12R)-tRNA(Pro). Queste scoperte stabiliscono che Trp-12 di TnaC-tRNA(Pro) &egrave; necessaria per l&#39;introduzione di cambiamenti specifici nel centro della transferasi peptidilica del ribosoma che attiva associazione di triptofano libero, con conseguente inibizione transferasi peptidilica. Triptofano libero sembra agire presso o vicino i siti di legame dei vari antibiotici nel centro della transferasi peptidilica.

Modifiche al prodotto da triptofano associato al centro di transferasi peptidilica ribosoma in risposta a TnaC, un peptide nascente leader.

in vitro&#x3067;&#x306E;&#x7814;&#x7A76;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x7121;&#x6599;&#x306E;&#x30C8;&#x30EA;&#x30D7;&#x30C8;&#x30D5;&#x30A1;&#x30F3;&#x3060;&#x3051;TnaC-tRNA&#x3092;&#xFF08;Pro&#xFF09;&#x306F;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x30AA;&#x30DA;&#x30ED;&#x30F3;&#x306E;&#x30EA;&#x30FC;&#x30C0;&#x30FC;&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C9;&#x306E;&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30B8;&#x30EB;-tRNA&#x306E;&#x524D;&#x99C6;&#x4F53;&#x306E;&#x5408;&#x6210;&#x3092;&#x5B8C;&#x4E86;&#x3057;&#x305F;&#x30EA;&#x30DC;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x306B;&#x7D50;&#x5408;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3088;&#x308A;&#x3001;TNA&#x30AA;&#x30DA;&#x30ED;&#x30F3;&#x306E;&#x767A;&#x73FE;&#x3092;&#x8A98;&#x5C0E;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x78BA;&#x7ACB;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30C8;&#x30EA;&#x30D7;&#x30C8;&#x30D5;&#x30A1;&#x30F3;&#x306F;tnaC&#x7D42;&#x6B62;&#x30B3;&#x30C9;&#x30F3;&#x3067;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30B8;&#x30EB;-tRNA&#x306E;&#x653E;&#x51FA;&#x3092;&#x6291;&#x5236;&#x3059;&#x308B;&#x56E0;&#x5B50;2&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x305F;&#x5207;&#x65AD;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x904A;&#x96E2;&#x30C8;&#x30EA;&#x30D7;&#x30C8;&#x30D5;&#x30A1;&#x30F3;&#x306E;&#x30EA;&#x30DC;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x5834;&#x6240;&#x3001;&#x305D;&#x308C;&#x304C;&#x30EA;&#x30DC;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x3067;&#x751F;&#x6210;&#x5909;&#x5316;&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x30C8;&#x30EA;&#x30D7;&#x30C8;&#x30D5;&#x30A1;&#x30F3;&#x7D50;&#x5408;&#x3084;&#x8A98;&#x5C0E;&#x3092;&#x5BB9;&#x6613;&#x306B;&#x65B0;&#x751F;TnaC-tRNA&#x3092;&#xFF08;Pro&#xFF09;&#x306F;&#x3001;&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C9;&#x306E;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x5206;&#x6790;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x8A98;&#x5C0E;&#x4E2D;&#x306B;&#x767A;&#x751F;&#x3057;&#x305F;23S rRNA&#x306E;&#x5869;&#x57FA;&#x306E;&#x4F4D;&#x7F6E;&#x306E;&#x5909;&#x66F4;&#x306F;&#x3001;&#x30E1;&#x30C1;&#x30EB;&#x5316;&#x4FDD;&#x8B77;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x7D50;&#x5408;/&#x7AF6;&#x4E89;&#x30A2;&#x30C3;&#x30BB;&#x30A4;&#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x3066;&#x691C;&#x51FA;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x5206;&#x6790;&#x3057;&#x305F;&#x30EA;&#x30DC;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;TnaC-tRNA&#x306E;&#xFF08;&#x30D7;&#x30ED;&#xFF09;&#x932F;&#x4F53;&#x306F;&#x3001;in vitro&#x3067;&#x5F62;&#x6210;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3001;&#x5F7C;&#x3089;&#x306F;&#x3001;&#x91CE;&#x751F;&#x578B;TnaC-tRNA&#x306E;&#xFF08;&#x30D7;&#x30ED;&#xFF09;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x305D;&#x306E;&#x4EE3;&#x66FF;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3057;&#x306A;&#x3044;&#x3001;TnaC&#xFF08;W12R&#xFF09;-tRNA&#x306E;&#xFF08;&#x30D7;&#x30ED;&#xFF09;&#x306E;&#x3044;&#x305A;&#x308C;&#x304B;&#x304C;&#x542B;&#x307E;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x4E8C;&#x3064;&#x306E;&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30B8;&#x30EB;-tRNA&#x3092;-&#x30EA;&#x30DC;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x8907;&#x5408;&#x4F53;&#x3092;&#x6BD4;&#x8F03;&#x3059;&#x308B;&#x3068;&#x3001;&#x7121;&#x6599;&#x306E;&#x30C8;&#x30EA;&#x30D7;&#x30C8;&#x30D5;&#x30A1;&#x30F3;&#x306F;&#x3001;&#x91CE;&#x751F;&#x578B;&#x30EA;&#x30DC;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;TnaC-tRNA&#x306E;&#xFF08;&#x30D7;&#x30ED;&#xFF09;&#x306E;&#x8907;&#x5408;&#x4F53;&#x3067;&#x306F;&#x306A;&#x304F;&#x30EA;&#x30DC;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;TnaC&#xFF08;W12R&#xFF09;-tRNA&#x306E;&#x5869;&#x57FA;A2572&#xFF08;&#x30D7;&#x30ED;&#xFF09;&#x932F;&#x4F53;&#x306E;&#x30E1;&#x30C1;&#x30EB;&#x5316;&#x3092;&#x30D6;&#x30ED;&#x30C3;&#x30AF;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x5224;&#x660E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x30CC;&#x30AF;&#x30EC;&#x30AA;&#x30C1;&#x30C9;A2572&#x306F;&#x3001;&#x30EA;&#x30DC;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30B8;&#x30EB;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30D5;&#x30A7;&#x30E9;&#x30FC;&#x30BC;&#x4E2D;&#x5FC3;&#x90E8;&#x306B;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002; Tryptophanol&#x3001;&#x30C8;&#x30EA;&#x30D7;&#x30C8;&#x30D5;&#x30A1;&#x30F3;&#x306E;noninducing&#x7AF6;&#x6280;&#x8005;&#x306F;&#x3001;A2572&#x30E1;&#x30C1;&#x30EB;&#x5316;&#x3092;&#x30D6;&#x30ED;&#x30C3;&#x30AF;&#x3059;&#x308B;&#x306E;&#x306B;&#x52B9;&#x679C;&#x304C;&#x3042;&#x3063;&#x305F;&#x304C;&#x3001;&#x305D;&#x308C;&#x306F;&#x30C8;&#x30EA;&#x30D7;&#x30C8;&#x30D5;&#x30A1;&#x30F3;&#x306E;&#x4FDD;&#x8B77;&#x52B9;&#x679C;&#x3092;&#x9006;&#x8EE2;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x30D5;&#x30EA;&#x30FC;&#x30C8;&#x30EA;&#x30D7;&#x30C8;&#x30D5;&#x30A1;&#x30F3;&#x306F;TnaC-tRNA&#x306E;&#xFF08;&#x30D7;&#x30ED;&#xFF09;&#x306E;&#x30D4;&#x30E5;&#x30FC;&#x30ED;&#x30DE;&#x30A4;&#x30B7;&#x30F3;&#x306E;&#x5207;&#x65AD;&#x3092;&#x963B;&#x5BB3;&#x3057;&#x3001;&#x305D;&#x308C;&#x306F;&#x307E;&#x305F;&#x3001;&#x6297;&#x751F;&#x7269;&#x8CEA;sparsomycin&#x306E;&#x7D50;&#x5408;&#x963B;&#x5BB3;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x52B9;&#x679C;&#x306F;TnaC&#xFF08;W12R&#xFF09;-tRNA&#x306E;&#xFF08;&#x30D7;&#x30ED;&#xFF09;&#x5909;&#x7570;&#x4F53;&#x306E;&#x8907;&#x5408;&#x4F53;&#x3067;&#x89B3;&#x5BDF;&#x3055;&#x308C;&#x306A;&#x304B;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x77E5;&#x898B;&#x306F;&#x3001;TnaC-tRNA&#x306E;&#xFF08;&#x30D7;&#x30ED;&#xFF09;&#x306E;TRP-12&#x306F;&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30B8;&#x30EB;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30D5;&#x30A7;&#x30E9;&#x30FC;&#x30BC;&#x963B;&#x5BB3;&#x3055;&#x308C;&#x3001;&#x305D;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x3001;&#x904A;&#x96E2;&#x30C8;&#x30EA;&#x30D7;&#x30C8;&#x30D5;&#x30A1;&#x30F3;&#x306E;&#x7D50;&#x5408;&#x3092;&#x6709;&#x52B9;&#x306B;&#x30EA;&#x30DC;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x306E;&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30B8;&#x30EB;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30D5;&#x30A7;&#x30E9;&#x30FC;&#x30BC;&#x4E2D;&#x5FC3;&#x90E8;&#x306B;&#x3042;&#x308B;&#x7279;&#x5B9A;&#x306E;&#x5909;&#x66F4;&#x3092;&#x5C0E;&#x5165;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x5FC5;&#x8981;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x78BA;&#x7ACB;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x7121;&#x6599;&#x306E;&#x30C8;&#x30EA;&#x30D7;&#x30C8;&#x30D5;&#x30A1;&#x30F3;&#x306F;&#x3001;&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30B8;&#x30EB;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30D5;&#x30A7;&#x30E9;&#x30FC;&#x30BC;&#x4E2D;&#x5FC3;&#x306B;&#x3044;&#x304F;&#x3064;&#x304B;&#x306E;&#x6297;&#x751F;&#x7269;&#x8CEA;&#x306E;&#x7D50;&#x5408;&#x90E8;&#x4F4D;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x305D;&#x306E;&#x8FD1;&#x304F;&#x306B;&#x884C;&#x52D5;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x8868;&#x793A;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

TnaC&#x306B;&#x5FDC;&#x7B54;&#x3057;&#x305F;&#x30EA;&#x30DC;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30B8;&#x30EB;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30D5;&#x30A7;&#x30E9;&#x30FC;&#x30BC;&#x30BB;&#x30F3;&#x30BF;&#x30FC;&#x306B;&#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C9;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x30C8;&#x30EA;&#x30D7;&#x30C8;&#x30D5;&#x30A1;&#x30F3;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x751F;&#x6210;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x5909;&#x66F4;&#x3001;&#x65B0;&#x751F;&#x30EA;&#x30FC;&#x30C0;&#x30FC;&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C9;

&#xC0DD;&#xCCB4; &#xC678;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC5F0;&#xAD6C; &#xADF8; &#xBB34;&#xB8CC; &#xD2B8;&#xB9BD;&#xD1A0;&#xD310; &#xC720;&#xB3C4; &#xBC29;&#xCF55; &#xC624; &#xD398;&#xB860; &#xC2DD; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; TnaC-tRNA(Pro),&#xC774; &#xC624; &#xD398;&#xB860;&#xC758; &#xC120;&#xB450; &#xC8FC;&#xC790; &#xD3A9; &#xD2F0; &#xB4DC;&#xC758; peptidyl-tRNA &#xC804;&#xC870;&#xC758; &#xD569;&#xC131; &#xC644;&#xB8CC; &#xD588;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xB9AC;&#xBCF4;&#xC19C;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC124;&#xB9BD; &#xD588;&#xB2E4;. &#xD2B8;&#xB9BD;&#xD1A0;&#xD310;&#xC740; tnaC &#xC815;&#xC9C0; codon&#xC5D0;&#xC774; peptidyl Trna&#xC758; &#xB9B4;&#xB9AC;&#xC2A4; &#xC694;&#xC18C; 2 &#xC911;&#xC7AC; &#xBD84;&#xC5F4;&#xC744; &#xC5B5;&#xC81C; &#xD568;&#xC73C;&#xB85C;&#xC368; &#xD589;&#xB3D9; &#xD55C;&#xB2E4;. &#xC5EC;&#xAE30;&#xC5D0; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; &#xBB34;&#xB8CC;&#xB85C; &#xD2B8;&#xB9BD;&#xD1A0;&#xD310;, &#xBCC0;&#xD654;&#xB294; &#xB9AC;&#xBCF4;&#xC19C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC0DD;&#xC131; ribosomal &#xC704;&#xCE58;&#xC640; &#xD2B8;&#xB9BD;&#xD1A0;&#xD310; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xBC0F; &#xC720;&#xB3C4; &#xCD09;&#xC9C4;&#xC5D0; &#xCD08;&#xAE30; TnaC-tRNA(Pro) &#xD3A9; &#xD2F0; &#xB4DC;&#xC758; &#xC5ED;&#xD560; &#xBD84;&#xC11D;. &#xC720;&#xB3C4; &#xD558;&#xB294; &#xB3D9;&#xC548; &#xBC1C;&#xC0DD; &#xD558;&#xB294; 23S rRNA &#xB274;&#xD074;&#xB808;&#xC624;&#xD2F0;&#xB4DC;&#xC758; &#xC704;&#xCE58; &#xBCC0;&#xD654;&#xB294; &#xBA54; &#xD2F8; &#xD654; &#xBCF4;&#xD638; &#xBC0F; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;/&#xACBD;&#xC7C1; &#xBD84;&#xC11D; &#xC2E4;&#xD5D8;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xBC1C;&#xACAC; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xBD84;&#xC11D; ribosome-TnaC-tRNA(Pro) &#xB2E8;&#xC9C0; &#xCCB4; &#xC678;; &#xD615;&#xC131; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC740; &#xC57C;&#xC0DD;-&#xD0C0;&#xC785; TnaC-tRNA(Pro) &#xB610;&#xB294; &#xADF8;&#xAC83;&#xC758; &#xC791;&#xB3D9; &#xD558;&#xC9C0; &#xC54A;&#xB294; &#xB300;&#xC2E0;, TnaC(W12R)-tRNA(Pro) &#xD3EC;&#xD568;. &#xC774; &#xB450; peptidyl tRNA &#xB9AC;&#xBCF4;&#xC19C; &#xB2E8;&#xC9C0; &#xBE44;&#xAD50; &#xC2DC; &#xBB34;&#xB8CC; &#xD2B8;&#xB9BD;&#xD1A0;&#xD310; A2572 ribosome-TnaC(W12R)-tRNA(Pro) &#xB2E8;&#xC9C0; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xC57C;&#xC0DD;-&#xD0C0;&#xC785; ribosome-TnaC-tRNA(Pro) &#xB2E8;&#xC9C0;&#xC758; &#xB274;&#xD074;&#xB808;&#xC624;&#xD2F0;&#xB4DC;&#xC758; &#xBA54; &#xD2F8; &#xD654; &#xCC28;&#xB2E8; &#xBC1C;&#xACAC; &#xB410;&#xB2E4;. &#xB274;&#xD074;&#xB808;&#xC624;&#xD2F0;&#xB4DC; A2572 ribosomal peptidyl&#xACFC; &#xC13C;&#xD130;&#xC5D0;&#xC11C;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;. Tryptophanol, &#xD2B8;&#xB9BD;&#xD1A0;&#xD310;&#xC758; noninducing &#xACBD;&#xC7C1; &#xC5C5;&#xCCB4;&#xB294; A2572 &#xBA54; &#xD2F8;; &#xCC28;&#xB2E8;&#xC5D0; &#xD6A8;&#xACFC;&#xC801; &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098;, &#xADF8;&#xAC83;&#xC740; &#xD2B8;&#xB9BD;&#xD1A0;&#xD310;&#xC758; &#xBCF4;&#xD638; &#xD6A8;&#xACFC; &#xBC18;&#xB300;&#xB85C; &#xC54A;&#xC558;&#xB2E4;. &#xBB34;&#xB8CC; &#xD2B8;&#xB9BD;&#xD1A0;&#xD310; puromycin &#xCABC;&#xAC1C; &#xC9D0; TnaC-tRNA(Pro);&#xC758; &#xC800;&#xD574; &#xB610;&#xD55C; &#xD56D;&#xC0DD;&#xC81C; sparsomycin&#xC758; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xC744; &#xC5B5;&#xC81C;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xD6A8;&#xACFC; TnaC(W12R)-tRNA(Pro) &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xB2E8;&#xC9C0; &#xBC1C;&#xACAC; &#xD558;&#xC9C0;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xC5F0;&#xAD6C; &#xACB0;&#xACFC; Tnac-trna(pro)&#xC758; Trp-12 peptidyl &#xC804;&#xC774; &#xC5B5;&#xC81C;&#xC5D0; &#xB530;&#xB978; &#xBB34;&#xB8CC; &#xD2B8;&#xB9BD;&#xD1A0;&#xD310; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xD65C;&#xC131;&#xD654;&#xB294; &#xB9AC;&#xBCF4;&#xC19C;&#xC758; peptidyl&#xACFC; &#xC13C;&#xD130;&#xC5D0;&#xC11C; &#xAD6C;&#xCCB4;&#xC801;&#xC778; &#xBCC0;&#xD654;&#xB97C; &#xC18C;&#xAC1C; &#xD558;&#xB294; &#xB370; &#xD544;&#xC694;&#xD55C; &#xC124;&#xC815;. &#xBB34;&#xB8CC; &#xD2B8;&#xB9BD;&#xD1A0;&#xD310; &#xB610;&#xB294; peptidyl&#xACFC; &#xC13C;&#xD130;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC5EC;&#xB7EC; &#xAC00;&#xC9C0; &#xD56D;&#xC0DD;&#xC81C;&#xC758; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8; &#xADFC;&#xCC98;&#xC5D0; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0A9;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xBCC0;&#xACBD; &#xB9AC;&#xBCF4;&#xC19C; peptidyl&#xACFC; &#xC13C;&#xD130; TnaC, &#xCD08;&#xAE30; &#xC9C0;&#xB3C4;&#xC790; &#xD3A9; &#xD2F0; &#xB4DC;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC751;&#xB2F5;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xB41C; &#xD2B8;&#xB9BD;&#xD1A0;&#xD310;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC81C;&#xC791;.

Estudios in vitro han demostrado que tript&#xF3;fano libre induce la expresi&#xF3;n del oper&#xF3;n TNA por su uni&#xF3;n al ribosoma que acaba de completar la s&#xED;ntesis de TnaC-ARNt (Pro), el precursor de peptidil-ARNt del p&#xE9;ptido l&#xED;der de este oper&#xF3;n. El tript&#xF3;fano act&#xFA;a por inhibici&#xF3;n de la liberaci&#xF3;n de factor 2-mediada por la escisi&#xF3;n de este peptidil-ARNt en el cod&#xF3;n de parada tnaC. Aqu&#xED; se analiza la ubicaci&#xF3;n ribosomal de tript&#xF3;fano libre, los cambios que produce en los ribosomas, y el papel de la naciente TnaC-tRNA (Pro) para facilitar la uni&#xF3;n del p&#xE9;ptido tript&#xF3;fano y la inducci&#xF3;n. Los cambios de posici&#xF3;n de los nucle&#xF3;tidos 23S rRNA que se producen durante la inducci&#xF3;n se detectaron mediante el uso de la protecci&#xF3;n de la metilaci&#xF3;n y los ensayos de uni&#xF3;n / competencia. El ribosoma-TnaC-tRNA (Pro) complejos analizados fueron formados in vitro; que conten&#xED;an ya sea de tipo salvaje TnaC-ARNt (Pro), o su sustituto no funcional, TnaC (W12R)-ARNt (Pro). Al comparar estos dos peptidil-tRNA-ribosoma complejos, tript&#xF3;fano libre se encontr&#xF3; para bloquear la metilaci&#xF3;n del A2572 de nucle&#xF3;tidos de tipo salvaje ribosomas TnaC-ARNt (Pro), los complejos, pero no de ribosomas (TnaC W12R)-ARNt (Pro) complejos. A2572 nucle&#xF3;tidos se encuentra en el centro de la peptidil transferasa ribos&#xF3;mica. Tryptophanol, un competidor noninducing de tript&#xF3;fano, fue ineficaz en el bloqueo de metilaci&#xF3;n A2572, sin embargo, lo hizo invertir el efecto protector de tript&#xF3;fano. Tript&#xF3;fano libre inhibe la escisi&#xF3;n de la puromicina TnaC-tRNA (Pro), sino que tambi&#xE9;n inhibe la uni&#xF3;n de la sparsomycin antibi&#xF3;tico. Estos efectos no se observaron con TnaC (W12R)-tRNA (Pro), los complejos de mutantes. Estos resultados establecen que el Trp-12 de TnaC-tRNA (Pro) es necesario para la introducci&#xF3;n de cambios espec&#xED;ficos en el centro peptidil transferasa del ribosoma que activan la uni&#xF3;n libre tript&#xF3;fano, lo que resulta en la inhibici&#xF3;n de la peptidil transferasa. Tript&#xF3;fano libre parece actuar en o cerca de los sitios de uni&#xF3;n de varios antibi&#xF3;ticos en el centro de la peptidil transferasa.

Cambios producidos por triptofano unido en el ribosoma Centro peptidil transferasa en respuesta a la TnaC, un p&#xE9;ptido l&#xED;der naciente

&#x5728;&#x5236;&#x6B62;&#xFF0C;&#x4ECB;&#x5BFC;&#x7684; tRNA(Lys)&#xFF0C;&#x6E29;&#x5728;&#x5927;&#x80A0;&#x57C3;&#x5E0C;&#x6C0F;&#x5927;&#x80A0;&#x6746;&#x83CC;&#x83CC;&#x682A; AA7852 &#x9170; tRNA &#x6C34;&#x89E3;&#x9176; (Pth) &#x7F16;&#x7801;&#x7684; pth(Ts) &#x57FA;&#x56E0;&#x4E2D;&#x643A;&#x5E26;&#x7A81;&#x53D8;&#x7684;&#x751F;&#x4EA7;&#x8FC7;&#x5269;&#x671F;&#x95F4;&#x76D1;&#x6D4B;&#x4E86;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x6539;&#x53D8;&#x3002;&#x5728; AA7852 &#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x8D28;&#x7C92;&#x8F74;&#x627F;&#x97ED;&#x57FA;&#x56E0;&#x7684;&#x5B58;&#x5728;&#x6709;&#x52A9;&#x4E8E;&#x4FDD;&#x6301;&#x4F4E;&#x6C34;&#x5E73;&#x7684;&#x4E0D;&#x7A33;&#x5B9A;&#x7684; Pth(Ts) &#x86CB;&#x767D;&#x548C;&#x8F74;&#x627F;&#x5176;&#x4ED6; tRNA &#x57FA;&#x56E0;&#x7684;&#x8D28;&#x7C92;&#x662F;&#x65E0;&#x6548;&#x800C;&#x4FDD;&#x6301;&#x5728; 41 &#x6444;&#x6C0F;&#x5EA6;&#x7684;&#x7A81;&#x53D8;&#x7EBF;&#x7684;&#x53EF;&#x884C;&#x6027;&#x3002;&#x5728; 32 &#x5EA6; C tRNA(Lys) &#x7684;&#x8FC7;&#x5269;&#x5E76;&#x6CA1;&#x6709;&#x6539;&#x53D8;&#x7684;&#x767E;&#x5206;&#x6BD4;&#x7684;&#x81EA;&#x7531;-&#x88AB;&#x843D;&#x6848;&#x63A7;-&#x6216; peptidyl-tRNA(Lys) &#x7269;&#x79CD;&#x76F8;&#x6BD4;&#x4E0D;&#x6CA1;&#x6709;&#x9057;&#x4F20;&#x6027; tRNA(Lys) &#x7684;&#x83CC;&#x682A;&#x4E2D;&#x627E;&#x5230;&#x3002;&#x5728; 41 &#x6444;&#x6C0F;&#x5EA6;&#xFF0C;&#x7136;&#x800C;&#xFF0C;&#x5C3D;&#x7BA1;&#x6C34;&#x5E73;&#x7684; peptidyl-tRNA(Lys)&#xFF0C;&#x589E;&#x52A0;&#x591A;&#x4F59;&#x7684; tRNA(Lys) &#x6709;&#x52A9;&#x4E8E;&#x4FDD;&#x6301;&#x4E00;&#x7EA7; charged-tRNA(Lys) &#x7684;&#x542B;&#x91CF;&#x4E0E;&#x5728;&#x975E; overproducer &#x7EC6;&#x80DE;&#x751F;&#x957F;&#x7684;&#x8BB8;&#x53EF;&#x7684;&#x6E29;&#x5EA6;&#x4E2D;&#x627E;&#x5230;&#x7684;&#x76F8;&#x5AB2;&#x7F8E;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;&#x5728; 41 &#x6444;&#x6C0F;&#x5EA6;&#x7684;&#x8FC7;&#x5269; tRNA(Lys) &#x5F15;&#x8D77;&#x7684; chin &#x5404;&#x79CD;&#x80BD;&#x7C7B;-&#x5982;&#xFF0C;&#x901A;&#x5E38;&#x5728; pth(Ts) &#x7EC6;&#x80DE;&#x4E0D;&#x65AD;&#x5730;&#x79EF;&#x7D2F;&#xFF0C;&#x6D53;&#x5EA6;&#x51CF;&#x5C11;&#x548C;&#x6D53;&#x5EA6;&#x7684;&#x6C28;&#x57FA;&#x9170;-chin &#x5982;&#x76F8;&#x5E94;&#x6BD4;&#x4F8B;&#x589E;&#x52A0;&#x3002;&#x88AB;&#x8BA4;&#x4E3A;&#x662F;&#x7531;&#x4E8E;&#x8868;&#x8FBE;&#x7684; tRNA(Lys) &#x548C; tRNA(Lys) pth(Ts) &#x682A;&#x79CD;&#x690D;&#x5728;&#x975E;&#x8BB8;&#x53EF;&#x6E29;&#x5EA6;&#x4E0B;&#x9965;&#x997F;&#x7684;&#x539F;&#x56E0;&#x6551;&#x63F4;&#x7684;&#x53EF;&#x80FD;&#x673A;&#x5236;&#x3002;

&#x8FC7;&#x91CF;&#x7684;&#x5E26;&#x7535; tRNALys &#x7EF4;&#x62A4;&#x9170; tRNA &#x6C34;&#x89E3;&#x9176; pth(Ts) &#x7A81;&#x53D8;&#x4F53;&#x5728;&#x975E;&#x8BB8;&#x53EF;&#x7684;&#x6E29;&#x5EA6;&#x5F88;&#x4F4E;&#x3002;

Cellular changes have been monitored during the suppression, mediated by the overproduction of tRNA(Lys), of thermosensitivity in Escherichia coli strain AA7852 carrying a mutation in peptidyl-tRNA hydrolase (Pth) encoded by the pth(Ts) gene. The presence in AA7852 cells of a plasmid bearing lysV gene helped to maintain low levels of the unstable Pth(Ts) protein and to preserve the viability of the mutant line at 41 degrees C whereas plasmids bearing other tRNA genes were ineffective. At 32 degrees C the excess of tRNA(Lys) did not alter the percentages of the free-, charged- or peptidyl-tRNA(Lys) species compared with those found in strains that did not overproduce tRNA(Lys). At 41 degrees C, however, despite increases in the level of peptidyl-tRNA(Lys), the excess tRNA(Lys) helped to maintain the concentration of charged-tRNA(Lys) at a level comparable with that found in non-overproducer cells grown at a permissive temperature. In addition, the excess tRNA(Lys) at 41 degrees C provoked a reduction in the concentrations of various peptidyl-tRNAs, which normally accumulate in pth(Ts) cells, and a proportional increase in the concentrations of the corresponding aminoacyl-tRNAs. The possible mechanism of rescue due to the overexpression of tRNA(Lys) and the causes of tRNA(Lys) starvation in pth(Ts) strains grown at non-permissive temperatures are considered.

Excess of charged tRNALys maintains low levels of peptidyl-tRNA hydrolase in pth(Ts) mutants at a non-permissive temperature.

Changements cellulaires ont &#xE9;t&#xE9; suivis lors de la r&#xE9;pression, m&#xE9;di&#xE9;e par la surproduction de l&#x26;#39;ARNt (Lys), de la thermosensibilit&#xE9; de souche d&#x26;#39;Escherichia coli AA7852 porteur d&#x26;#39;une mutation dans le peptidyl-ARNt hydrolase (Pth) cod&#xE9;e par la PTH (Ts) du g&#xE8;ne. La pr&#xE9;sence dans les cellules AA7852 d&#x26;#39;un g&#xE8;ne lysV plasmide portant contribu&#xE9; &#xE0; maintenir de faibles niveaux de l&#x26;#39;instabilit&#xE9; Pth (Ts) de prot&#xE9;ines et de pr&#xE9;server la viabilit&#xE9; de la lign&#xE9;e mutante &#xE0; 41 degr&#xE9;s C alors que les plasmides portant les g&#xE8;nes d&#x26;#39;ARNt d&#x26;#39;autres ont &#xE9;t&#xE9; inefficaces. A 32 &#xB0; C l&#x26;#39;exc&#xE9;dent de l&#x26;#39;ARNt (Lys) ne modifie pas les pourcentages de la libre, charg&#xE9; ou peptidyl-ARNt (Lys) esp&#xE8;ces par rapport &#xE0; ceux trouv&#xE9;s dans des souches qui n&#x26;#39;ont pas la surproduction ARNt (Lys). A 41 degr&#xE9;s C, cependant, malgr&#xE9; l&#x26;#39;augmentation du niveau de peptidyl-ARNt (Lys), l&#x26;#39;exc&#xE9;dent ARNt (Lys) a contribu&#xE9; &#xE0; maintenir la concentration de particules charg&#xE9;es-ARNt (Lys) &#xE0; un niveau comparable &#xE0; celui trouv&#xE9; dans les cellules non-surproducteur cultiv&#xE9; &#xE0; une temp&#xE9;rature permissive. En outre, l&#x26;#39;exc&#xE9;dent ARNt (Lys) &#xE0; 41 &#xB0; C a provoqu&#xE9; une r&#xE9;duction des concentrations des diff&#xE9;rents peptidyl-ARNt, qui, normalement, s&#x26;#39;accumulent dans la PTH (Ts) des cellules, et une augmentation proportionnelle des concentrations des correspondants aminoacyl-ARNt. Le m&#xE9;canisme possible de sauvetage en raison de la surexpression de l&#x26;#39;ARNt (Lys) et les causes de l&#x26;#39;ARNt (Lys) la famine dans la PTH (Ts) souches cultiv&#xE9;es &#xE0; des temp&#xE9;ratures non permissives sont pris en compte.

Exc&#xE9;dent des TRNALys Charged maintient des niveaux faibles du peptidyl-ARNt hydrolase dans la PTH (Ts) Mutants &#xE0; une temp&#xE9;rature non permissive

Zellul&auml;re Ver&auml;nderungen wurden w&auml;hrend der Unterdr&uuml;ckung, vermittelt durch die &Uuml;berproduktion von tRNA(Lys), von Thermosensitivity in Escherichia coli Stamm AA7852 tragen eine Mutation im pth(Ts)-Gen codiert konvertierende-tRNA-Hydrolase (Pth) beobachtet. Die Pr&auml;senz in den AA7852 Zellen ein Plasmid-Lager-LysV-gen half niedrigen Niveau des unstable Pth(Ts) Proteins zu pflegen und die Lebensf&auml;higkeit der mutant Linie bei 41 Grad C zu bewahren, w&auml;hrend Plasmide mit anderen tRNA-Gene unwirksam waren. Bei 32 Grad C die &Uuml;berschreitung des tRNA(Lys) nicht ver&auml;ndern die Prozents&auml;tze der freien-, aufgeladene- oder peptidyl-tRNA(Lys)-Arten, die im Vergleich zu denen in St&auml;mme, die nicht tRNA(Lys) &Uuml;berproduktion. Bei 41 Grad C half jedoch trotz Anstiegs der Ebene der peptidyl-tRNA(Lys), die &uuml;bersch&uuml;ssige tRNA(Lys), die Konzentration der charged-tRNA(Lys) auf einem Niveau vergleichbar mit gefunden in nicht-Overproducer Zellen, die bei einer freiz&uuml;gigen Temperatur beizubehalten. Au&szlig;erdem provoziert die &uuml;bersch&uuml;ssige tRNA(Lys) bei 41 Grad C eine Verringerung der Konzentrationen von verschiedenen konvertierende-tRNAs, die normalerweise in den pth(Ts) Zellen ansammeln und eine proportionale Zunahme der Konzentrationen von den entsprechenden Aminoacyl-tRNAs. Der m&ouml;gliche Mechanismus der Rettung durch die &Uuml;berexpression des tRNA(Lys) und die Ursachen des tRNA(Lys) Hunger in pth(Ts)-St&auml;mme, die bei nicht-freiz&uuml;gigen Temperaturen angebaut werden ber&uuml;cksichtigt.

&Uuml;berschuss an aufgeladenen tRNALys unterh&auml;lt niedrige konvertierende-tRNA-Hydrolase in pth(Ts) Mutanten bei einer nicht-freiz&uuml;gigen Temperatur.

Cambiamenti cellulari sono stati monitorati durante la soppressione, mediata dalla sovrapproduzione di tRNA(Lys), di termosensibilit&agrave; nel ceppo di coli Escherichia AA7852 che trasportano una mutazione in peptidilica-tRNA idrolasi (Pth) codificata dal gene pth(Ts). La presenza nelle cellule AA7852 del gene plasmidico cuscinetto lysV aiutato a mantenere bassi livelli della proteina Pth(Ts) instabile e per preservare la redditivit&agrave; della linea mutante a 41 gradi C considerando che plasmidi recanti altri geni tRNA sono stati inefficaci. A 32 gradi C, l&#39;eccesso di tRNA(Lys) non ha modificato le percentuali dei liberi-, carica- o specie di peptidyl-tRNA(Lys) rispetto a quelli trovati in ceppi che non ha fatto sovrapproduzione tRNA(Lys). A 41 gradi C, tuttavia, nonostante l&#39;aumento del livello di peptidyl-tRNA(Lys), la tRNA(Lys) in eccesso ha contribuito a mantenere la concentrazione di charged-tRNA(Lys) a un livello paragonabile a quello trovato in non-overproducer cellule coltivate a una temperatura permissiva. Inoltre, la tRNA(Lys) a 41 gradi C in eccesso ha provocato una riduzione della concentrazione di vari peptidilica-tRNA, che normalmente si accumula nelle cellule pth(Ts) e un proporzionale aumento della concentrazione delle amminoacil-tRNA corrispondenti. Sono considerati il possibile meccanismo di salvataggio a causa l&#39;iperespressione di tRNA(Lys) e le cause della fame tRNA(Lys) in ceppi di pth(Ts) coltivato a temperature non permissive.

Eccesso di tRNA carico mantiene bassi livelli di idrolasi peptidilica-tRNA in mutanti di pth(Ts) ad una temperatura non permissiva.

&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x5909;&#x5316;&#x306F;&#x3001;PTH&#xFF08;TS&#xFF09;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x30B3;&#x30FC;&#x30C9;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30B8;&#x30EB;-tRNA&#x306E;&#x52A0;&#x6C34;&#x5206;&#x89E3;&#x9175;&#x7D20;&#xFF08;PTH&#xFF09;&#x306B;&#x5909;&#x7570;&#x3092;&#x6709;&#x3059;&#x308B;&#x5927;&#x8178;&#x83CC;&#x682A;AA7852&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x611F;&#x6E29;&#x7279;&#x6027;&#x306E;tRNA&#xFF08;Lys&#xFF09;&#x3092;&#x3001;&#x904E;&#x5270;&#x7523;&#x751F;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x5A92;&#x4ECB;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x3001;&#x6291;&#x5236;&#x4E2D;&#x306B;&#x76E3;&#x8996;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30D7;&#x30E9;&#x30B9;&#x30DF;&#x30C9;&#x30D9;&#x30A2;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;&#x591A;&#x6570;&#x8A8D;&#x3081;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;AA7852&#x7D30;&#x80DE;&#x5185;&#x306E;&#x5B58;&#x5728;&#x304C;&#x4E0D;&#x5B89;&#x5B9A;&#x306A;PTH&#xFF08;Ts&#xFF09;&#x306E;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x4F4E;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x3092;&#x7DAD;&#x6301;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x3001;&#x4ED6;&#x306E;tRNA&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x3092;&#x62C5;&#x6301;&#x3059;&#x308B;&#x30D7;&#x30E9;&#x30B9;&#x30DF;&#x30C9;&#x306F;&#x52B9;&#x679C;&#x304C;&#x306A;&#x304B;&#x3063;&#x305F;&#x306E;&#x306B;&#x5BFE;&#x3057;&#x3001;41&#x5EA6;C&#x306B;&#x5909;&#x7570;&#x30E9;&#x30A4;&#x30F3;&#x306E;&#x751F;&#x5B58;&#x3092;&#x7DAD;&#x6301;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002; 32&#x5EA6;&#x3067;&#x306E;tRNA&#x306E;C&#x904E;&#x5270;&#xFF08;LYS&#xFF09;&#x306F;&#x5272;&#x5408;&#x3092;&#x5909;&#x5316;&#x3055;&#x305B;&#x306A;&#x304B;&#x3063;&#x305F;&#x81EA;&#x7531;&#x3092;&#x3001;tRNA&#x306E;&#xFF08;LYS&#xFF09;&#x3092;&#x904E;&#x5270;&#x306B;&#x3057;&#x306A;&#x304B;&#x3063;&#x305F;&#x682A;&#x306B;&#x898B;&#x3089;&#x308C;&#x308B;&#x3082;&#x306E;&#x3068;&#x6BD4;&#x8F03;&#x3057;&#x3066;&#x5145;&#x96FB;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30B8;&#x30EB;-tRNA&#x304C;&#xFF08;Lys&#xFF09;&#x306E;&#x7A2E;&#x3002; 41&#x5EA6;C&#x3067;&#x3001;&#x3057;&#x304B;&#x3057;&#x3001;&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30B8;&#x30EB;-tRNA&#x3092;&#xFF08;LYS&#xFF09;&#x306E;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x306E;&#x5897;&#x52A0;&#x306B;&#x3082;&#x304B;&#x304B;&#x308F;&#x3089;&#x305A;&#x3001;&#x904E;&#x5270;&#x306E;tRNA&#xFF08;LYS&#xFF09;&#x306F;&#x3001;&#x975E;&#x904E;&#x5270;&#x751F;&#x7523;&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x898B;&#x3089;&#x308C;&#x308B;&#x306B;&#x5339;&#x6575;&#x3059;&#x308B;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x3067;&#x306E;&#x8377;&#x96FB;tRNA&#x306E;&#x6FC3;&#x5EA6;&#xFF08;LYS&#xFF09;&#x3092;&#x7DAD;&#x6301;&#x3059;&#x308B;&#x52A9;&#x3051;&#x8A31;&#x5BB9;&#x6E29;&#x5EA6;&#x3067;&#x6210;&#x9577;&#x3055;&#x305B;&#x305F;&#x3002;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x3001;41&#x2103;&#x3067;&#x904E;&#x5270;&#x306E;tRNA&#xFF08;Lys&#x306F;&#xFF09;C&#x306F;&#x3001;&#x901A;&#x5E38;&#x3001;PTH&#xFF08;TS&#xFF09;&#x7D30;&#x80DE;&#x5185;&#x306B;&#x84C4;&#x7A4D;&#x3059;&#x308B;&#x69D8;&#x3005;&#x306A;&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30B8;&#x30EB;-tRNA&#x306E;&#x6FC3;&#x5EA6;&#x306E;&#x6E1B;&#x5C11;&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x5BFE;&#x5FDC;&#x3059;&#x308B;&#x30A2;&#x30DF;&#x30CE;&#x30A2;&#x30B7;&#x30EB;-tRNA&#x306E;&#x6FC3;&#x5EA6;&#x306B;&#x6BD4;&#x4F8B;&#x3057;&#x5897;&#x52A0;&#x3092;&#x5F15;&#x304D;&#x8D77;&#x3053;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x306E;tRNA&#xFF08;Lys&#xFF09;&#x3092;&#x904E;&#x5270;&#x767A;&#x73FE;&#x3057;&#x3001;&#x975E;&#x8A31;&#x5BB9;&#x6E29;&#x5EA6;&#x3067;&#x6210;&#x9577;&#x3057;&#x305F;PTH&#xFF08;Ts&#xFF09;&#x306E;&#x682A;&#x306E;tRNA&#xFF08;Lys&#xFF09;&#x306E;&#x98E2;&#x9913;&#x306E;&#x539F;&#x56E0;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x6551;&#x6E08;&#x306E;&#x53EF;&#x80FD;&#x306A;&#x30E1;&#x30AB;&#x30CB;&#x30BA;&#x30E0;&#x304C;&#x8003;&#x616E;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x8377;&#x96FB;TRNALys&#x904E;&#x5270;&#x306E;&#x975E;&#x8A31;&#x5BB9;&#x6E29;&#x5EA6;&#x3067;PTH&#xFF08;Ts&#xFF09;&#x306E;&#x5909;&#x7570;&#x4F53;&#x3067;&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30B8;&#x30EB;-tRNA&#x306E;&#x52A0;&#x6C34;&#x5206;&#x89E3;&#x9175;&#x7D20;&#x306E;&#x4F4E;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x3092;&#x7DAD;&#x6301;

&#xC140;&#xB8F0;&#xB7EC; &#xBCC0;&#xACBD; &#xC5B5;&#xC81C;, &#xBCD1;&#xC6D0; &#xC131; &#xB300;&#xC7A5;&#xADE0;&#xC774; &#xD53C;&#xB85C; AA7852 peptidyl tRNA &#xAC00;&#xC218;&#xBD84;&#xD574; &#xD6A8;&#xC18C; (Pth) &#xC778;&#xCF54;&#xB529;&#xB41C; pth(Ts) &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC5D0; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xB4E4;&#xACE0; thermosensitivity&#xC758; Trna(lys)&#xC758; &#xACFC;&#xC789;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC911;&#xC7AC; &#xB3D9;&#xC548; &#xBAA8;&#xB2C8;&#xD130;&#xB9C1; &#xB418; &#xACE0; &#xC788;&#xB2E4;. &#xD50C;&#xB77C;&#xC2A4; &#xBBF8;&#xB4DC; &#xBCA0;&#xC5B4;&#xB9C1; lysV &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC758; AA7852 &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0; &#xC874;&#xC7AC; &#xBD88;&#xC548;&#xC815; &#xD55C; Pth(Ts) &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xB0AE;&#xC740; &#xC218;&#xC900;&#xC744; &#xC720;&#xC9C0; &#xD558; &#xACE0; &#xD50C;&#xB77C;&#xC2A4; &#xBBF8;&#xB4DC; &#xB2E4;&#xB978; tRNA &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xBCA0;&#xC5B4;&#xB9C1;&#xC740; &#xD6A8;&#xACFC;&#xC801;&#xC778; &#xBC18;&#xBA74; 41&#xB3C4; C&#xC5D0;&#xC11C; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xB77C;&#xC778;&#xC758; &#xC0DD;&#xC874; &#xB2A5;&#xB825;&#xC744; &#xC720;&#xC9C0; &#xB3C4;&#xC6C0;&#xC774;. &#xC12D;&#xC528; 32&#xB3C4;&#xC5D0;&#xC11C; tRNA(Lys) &#xCD08;&#xACFC; &#xC790;&#xC720;&#xC758; &#xBE44;&#xC728;&#xC744; &#xBCC0;&#xACBD; &#xD558;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC558;&#xB2E4;-, &#xCCAD;&#xAD6C;-&#xB610;&#xB294; peptidyl-tRNA(Lys) &#xC885; tRNA(Lys) &#xB2F9;&#xC2E0;&#xACFC; &#xD558;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC740; &#xAE34;&#xC7A5;&#xC5D0; &#xC788;&#xB294; &#xADF8;&#xC640; &#xBE44;&#xAD50;. &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098; 41 &#xC12D;&#xC528;,, peptidyl-tRNA(Lys)&#xC758; &#xC218;&#xC900;&#xC5D0; &#xC788;&#xB294; &#xC99D;&#xAC00;&#xB3C4; &#xBD88;&#xAD6C; &#xD558; &#xACE0; &#xCD08;&#xACFC; tRNA(Lys) &#xB3C4;&#xC6C0;&#xC774; &#xD5C8;&#xC6A9; &#xC628;&#xB3C4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC790;&#xB780; &#xBE44; overproducer &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBC1C;&#xACAC; &#xB41C; &#xB300; &#xC218;&#xC900;&#xC5D0;&#xC11C; Charged-trna(lys)&#xC758; &#xB18D;&#xB3C4; &#xC720;&#xC9C0; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD574;. &#xB610;&#xD55C;, 41&#xB3C4; C&#xC5D0;&#xC11C; &#xCD08;&#xACFC; tRNA(Lys) &#xB2E4;&#xC591; &#xD55C; peptidyl-tRNAs, pth(Ts) &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0; &#xCD95;&#xC801; &#xC77C;&#xBC18;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xB18D;&#xB3C4;&#xC758; &#xAC10;&#xC18C; &#xBC0F; &#xD574;&#xB2F9; aminoacyl Trnas&#xC758; &#xB18D;&#xB3C4;&#xC5D0; &#xBE44;&#xB840; &#xC99D;&#xAC00; &#xC790;&#xADF9;. Trna(lys)&#xC758; overexpression &#xBC0F; tRNA(Lys) &#xAE30;&#xC544; &#xBE44; &#xD5C8;&#xC6A9; &#xC628;&#xB3C4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC131;&#xC7A5; &#xD558;&#xB294; pth(Ts) &#xAE34;&#xC7A5;&#xC758; &#xC6D0;&#xC778; &#xAD6C;&#xC870;&#xC758; &#xAC00;&#xB2A5;&#xD55C; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998; &#xC774;&#xB77C;&#xACE0; &#xC5EC;&#xACA8;&#xC9C4;&#xB2E4;.

&#xACFC;&#xB3C4; &#xD55C; &#xAE34;&#xC7A5;&#xB41C; tRNALys peptidyl tRNA &#xAC00;&#xC218;&#xBD84;&#xD574; &#xD6A8;&#xC18C; pth(Ts) &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774;-&#xD5C8;&#xC6A9; &#xC628;&#xB3C4; &#xB0AE;&#xC740; &#xC218;&#xC900;&#xC758; &#xC720;&#xC9C0; &#xAD00;&#xB9AC;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Cambios celulares han sido controlados durante la represi&#xF3;n, mediada por la sobreproducci&#xF3;n de tRNA (Lys), de termosensibilidad en Escherichia coli cepa AA7852 lleva una mutaci&#xF3;n en peptidil-tRNA hidrolasa (PTH) codificada por el PTH (Ts) de genes. La presencia de AA7852 c&#xE9;lulas de un pl&#xE1;smido que lleva gen lysV ayudado a mantener bajos niveles de la inestable PTH (Ts) de prote&#xED;nas y para preservar la viabilidad de la l&#xED;nea mutante en 41 grados C, mientras que los pl&#xE1;smidos que llevan otros genes de ARNt no fueron efectivos. A 32 grados C, el exceso de tRNA (Lys), no modifican los porcentajes de la libre, con cargo o peptidil-tRNA (Lys) en comparaci&#xF3;n con las especies que se encuentran en cepas que no sobreproducci&#xF3;n de tRNA (Lys). A los 41 grados C, sin embargo, a pesar del aumento en el nivel de peptidil-tRNA (Lys), el exceso de tRNA (Lys) ayud&#xF3; a mantener la concentraci&#xF3;n de carga-ARNt (Lys) en un nivel comparable con la que se encuentra en c&#xE9;lulas no overproducer crecido a una temperatura permisiva. Adem&#xE1;s, el exceso de tRNA (Lys) a 41 grados C provoc&#xF3; una reducci&#xF3;n en las concentraciones de diversos peptidil-ARNt, que normalmente se acumulan en PTH (Ts) c&#xE9;lulas, y un aumento proporcional en las concentraciones de los correspondientes aminoacil-ARNt. El posible mecanismo de rescate debido a la sobreexpresi&#xF3;n del tRNA (Lys) y las causas de tRNA (Lys) el hambre de la PTH (TS) de las cepas cultivadas a temperaturas no permisivas son consideradas.

El exceso de TRNALys cargadas Mantiene los niveles bajos de peptidil-tRNA hidrolasa de la PTH (Ts) mutantes a una temperatura no permisiva

&#x8272;&#x6C28;&#x9178;&#x7684; tna &#x64CD;&#x7EB5;&#x5B50;&#x8868;&#x8FBE;&#x5F0F;&#x5728;&#x5927;&#x80A0;&#x6746;&#x83CC;&#x4E2D;&#x7684;&#x8BF1;&#x5BFC;&#xFF0C;&#x5BF9;&#x9886;&#x5BFC;&#x8005;&#x9170;-tRNA&#xFF0C;TnaC-tRNA(2)(Pro)&#xFF0C;&#x6297;&#x62D2;&#x5288;&#x88C2;&#xFF0C;&#x5BFC;&#x81F4;&#x6838;&#x7CD6;&#x4F53;&#x505C;&#x6EDE;&#x5728; tnaC &#x7EC8;&#x6B62;&#x5BC6;&#x7801;&#x3002;&#x8FD9;&#x79CD;&#x505C;&#x6EDE;&#x4E0D;&#x524D;&#x7684;&#x6838;&#x7CD6;&#x4F53;&#x963B;&#x6B62; Rho &#x56E0;&#x5B50;&#x5177;&#x6709;&#x7EA6;&#x675F;&#x529B;&#x5E76;&#x91C7;&#x53D6;&#x884C;&#x52A8;&#xFF0C;&#x9632;&#x6B62;&#x9886;&#x5BFC;&#x8005;&#x5730;&#x533A; tna &#x64CD;&#x7EB5;&#x5B50;&#x7684;&#x8F6C;&#x5F55;&#x7EC8;&#x6B62;&#x3002;&#x8D28;&#x7C92;&#x4ECB;&#x5BFC;&#x7684; tnaC &#x9AD8;&#x6548;&#x8868;&#x8FBE;&#x4EE5;&#x524D;&#x6240;&#x793A;&#xFF0C;&#x901A;&#x8FC7;&#x51CF;&#x5C11;&#x672A;&#x5145;&#x7535;&#x7684; tRNA(2)(Pro) &#x6291;&#x5236;&#x7EC6;&#x80DE;&#x751F;&#x957F;&#x7684;&#x53EF;&#x7528;&#x6027;&#x3002;&#x5F53;&#x524D;&#x7814;&#x7A76;&#x4E2D;&#x8BA8;&#x8BBA;&#x4E86;&#x54EA;&#x4E9B;&#x56E0;&#x7D20;&#x51CF;&#x8F7B;&#x6838;&#x7CD6;&#x4F53;&#x5931;&#x901F;&#x3001; &#x4FBF;&#x5229; TnaC-tRNA(2)(Pro) &#x7684;&#x4E73;&#x6C9F;&#x91CC;&#xFF0C;&#x548C;&#x51CF;&#x8F7B;&#x751F;&#x957F;&#x7684;&#x6291;&#x5236;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;&#x682A;&#x542B;&#x67D3;&#x8272;&#x4F53; tna &#x64CD;&#x7EB5;&#x5B50;&#x548C;&#x7F3A;&#x4E4F; tnaC &#x8D28;&#x7C92;&#xFF0C;&#x751F;&#x4EA7;&#x8FC7;&#x5269;&#x7684;&#x6838;&#x7CD6;&#x4F53;&#x5FAA;&#x73AF;&#x56E0;&#x5B50; (RRF) &#x548C;&#x91CA;&#x653E;&#x56E0;&#x5B50; 3 (RF3) &#x51CF;&#x5C11; tna &#x64CD;&#x7EB5;&#x5B50;&#x8868;&#x8FBE;&#x5F0F;&#x3002;&#x4ED6;&#x4EEC;&#x4F53;&#x5185;&#x7684;&#x751F;&#x4EA7;&#x8FC7;&#x5269;&#x4E5F;&#x589E;&#x52A0;&#x5F00;&#x88C2;&#x7684; TnaC-tRNA(2)(Pro)&#xFF0C;&#x7F13;&#x89E3;&#x4E0E;&#x9AD8;&#x6548;&#x8868;&#x8FBE;&#x8D28;&#x7C92;&#x4ECB;&#x5BFC; tnaC &#x5173;&#x8054;&#x7684;&#x751F;&#x957F;&#x6291;&#x5236;&#x7387;&#x3002;&#x4F38;&#x957F;&#x7387;&#x7CFB;&#x6570; G &#x6216;&#x542F;&#x52A8;&#x56E0;&#x5B50; 3 &#x751F;&#x4EA7;&#x8FC7;&#x5269;&#x5E76;&#x6CA1;&#x6709;&#x53EF;&#x6BD4;&#x6027;&#x7684;&#x5F71;&#x54CD;&#xFF0C;&#x548C; tmRNA &#x4E0D;&#x80FD;&#x505C;&#x6EDE;&#x4E0D;&#x524D;&#x7684;&#x6838;&#x7CD6;&#x4F53;&#x914D;&#x5408;&#x8FDB;&#x653B; TnaC-tRNA(2)(Pro)&#x3002;TnaC-tRNA(2)(Pro) &#x7684;&#x7A33;&#x5B9A;&#x6027;&#x662F;&#x682A; RRF &#x548C; RF3 &#x4E0D;&#x8DB3;&#x6216;&#x7F3A;&#x4E4F;&#x9170; tRNA &#x6C34;&#x89E3;&#x9176;&#x663E;&#x8457;&#x589E;&#x52A0;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7814;&#x7A76;&#x7ED3;&#x679C;&#x63ED;&#x793A;&#x81EA;&#x7136;&#x673A;&#x5236;&#x7684;&#x5B58;&#x5728;&#x5373;&#x6C28;&#x57FA;&#x9178;&#x7684;&#x9178;&#xFF0C;&#x8272;&#x6C28;&#x9178;&#xFF0C;&#x5C06;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x5230;&#x521A;&#x5B8C;&#x6210;&#x7684; TnaC-tRNA(2)(Pro) &#x5408;&#x6210;&#x7684;&#x6838;&#x7CD6;&#x4F53;&#x3002;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x7684;&#x8272;&#x6C28;&#x9178;&#x6291;&#x5236; RF2 &#x4ECB;&#x5BFC;&#x5288;&#x88C2;&#x7684; TnaC-tRNA(2)(Pro)&#xFF0C;&#x4ECE;&#x800C;&#x5BFC;&#x81F4;&#x62D6;&#x5EF6;&#x7FFB;&#x8BD1; tnaC &#x7684;&#x6838;&#x7CD6;&#x4F53; mRNA&#x3002;&#x6B64;&#x62D6;&#x5EF6;&#x5BFC;&#x81F4;&#x589E;&#x52A0;&#x7684; tna &#x64CD;&#x7EB5;&#x5B50;&#x7ED3;&#x6784;&#x57FA;&#x56E0;&#x7684;&#x8F6C;&#x5F55;&#x3002;&#x7136;&#x540E;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x5230;&#x6B64;&#x505C;&#x6EDE;&#x4E0D;&#x524D;&#x7684;&#x6838;&#x7CD6;&#x4F53;&#x590D;&#x6742;&#x7684; RRF &#x548C; RF3 &#x7F13;&#x6162;&#x91CA;&#x653E; TnaC-tRNA(2)(Pro)&#x3002;&#x6B64;&#x7248;&#x672C;&#x5141;&#x8BB8;&#x6838;&#x7CD6;&#x4F53;&#x5FAA;&#x73AF;&#x548C;&#x8BB8;&#x53EF;&#x8BC1; TnaC-tRNA(2)(Pro) &#x7531;&#x9170; tRNA &#x6C34;&#x89E3;&#x9176;&#x88C2;&#x89E3;&#x3002;

&#x6838;&#x7CD6;&#x4F53;&#x5FAA;&#x73AF;&#x56E0;&#x5B50;&#x548C;&#x91CA;&#x653E;&#x56E0;&#x5B50; 3 &#x884C;&#x52A8;&#x4FC3;&#x8FDB; TnaC-&#x9170;-tRNA &#x697C;&#x76D8;&#xFF0C;&#x4EE5;&#x53CA;&#x7EBE;&#x7F13;&#x6838;&#x7CD6;&#x4F53; tna &#x64CD;&#x7EB5;&#x5B50;&#x8868;&#x8FBE;&#x5F0F;&#x5728;&#x5927;&#x80A0;&#x6746;&#x83CC;&#x4E2D;&#x7684;&#x8272;&#x6C28;&#x9178;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x671F;&#x62D6;&#x5EF6;&#x3002;

Upon tryptophan induction of tna operon expression in Escherichia coli, the leader peptidyl-tRNA, TnaC-tRNA(2)(Pro), resists cleavage, resulting in ribosome stalling at the tnaC stop codon. This stalled ribosome blocks Rho factor binding and action, preventing transcription termination in the tna operon's leader region. Plasmid-mediated overexpression of tnaC was previously shown to inhibit cell growth by reducing uncharged tRNA(2)(Pro) availability. Which factors relieve ribosome stalling, facilitate TnaC-tRNA(2)(Pro) cleavage, and relieve growth inhibition were addressed in the current study. In strains containing the chromosomal tna operon and lacking a tnaC plasmid, the overproduction of ribosome recycling factor (RRF) and release factor 3 (RF3) reduced tna operon expression. Their overproduction in vivo also increased the rate of cleavage of TnaC-tRNA(2)(Pro), relieving the growth inhibition associated with plasmid-mediated tnaC overexpression. The overproduction of elongation factor G or initiation factor 3 did not have comparable effects, and tmRNA was incapable of attacking TnaC-tRNA(2)(Pro) in stalled ribosome complexes. The stability of TnaC-tRNA(2)(Pro) was increased appreciably in strains deficient in RRF and RF3 or deficient in peptidyl-tRNA hydrolase. These findings reveal the existence of a natural mechanism whereby an amino acid, tryptophan, binds to ribosomes that have just completed the synthesis of TnaC-tRNA(2)(Pro). Bound tryptophan inhibits RF2-mediated cleavage of TnaC-tRNA(2)(Pro), resulting in the stalling of the ribosome translating tnaC mRNA. This stalling results in increased transcription of the structural genes of the tna operon. RRF and RF3 then bind to this stalled ribosome complex and slowly release TnaC-tRNA(2)(Pro). This release allows ribosome recycling and permits the cleavage of TnaC-tRNA(2)(Pro) by peptidyl-tRNA hydrolase.

Ribosome recycling factor and release factor 3 action promotes TnaC-peptidyl-tRNA Dropoff and relieves ribosome stalling during tryptophan induction of tna operon expression in Escherichia coli.

Apr&#xE8;s induction de la tryptophane tna op&#xE9;ron expression dans Escherichia coli, le leader peptidyl-ARNt, CCNT-ARNt (2) (Pro), r&#xE9;siste &#xE0; un clivage, ce qui entra&#xEE;ne des ribosomes d&#xE9;crochage au niveau du codon d&#x26;#39;arr&#xEA;t du CCNT. Cette impasse blocs de liaison du ribosome facteur Rho et de l&#x26;#39;action, la pr&#xE9;vention de terminaison de la transcription dans la r&#xE9;gion de chef de file de l&#x26;#39;op&#xE9;ron tna de. Plasmidique surexpression de TNAC a &#xE9;t&#xE9; pr&#xE9;c&#xE9;demment indiqu&#xE9; pour inhiber la croissance cellulaire en r&#xE9;duisant non charg&#xE9; ARNt (2) (Pro) la disponibilit&#xE9;. Quels sont les facteurs de soulager ribosome d&#xE9;crochage, de faciliter CCNT-ARNt (2) (Pro) le clivage, et de soulager inhibition de la croissance ont &#xE9;t&#xE9; abord&#xE9;es dans l&#x26;#39;&#xE9;tude actuelle. Dans les souches contenant l&#x26;#39;op&#xE9;ron chromosomique tna et d&#xE9;pourvu d&#x26;#39;un plasmide CCNT, la surproduction du facteur de recyclage du ribosome (RRF) et 3 facteur de lib&#xE9;ration (RF3) a r&#xE9;duit tna op&#xE9;ron expression. Leur surproduction in vivo ont &#xE9;galement augment&#xE9; le taux de clivage de CCNT-ARNt (2) (Pro), soulageant l&#x26;#39;inhibition de croissance associ&#xE9; &#xE0; une surexpression du CCNT plasmidique. La surproduction du facteur d&#x26;#39;&#xE9;longation G ou facteur d&#x26;#39;initiation de 3 n&#x26;#39;a pas d&#x26;#39;effets comparables, et tmRNA &#xE9;tait incapable d&#x26;#39;attaquer CCNT-ARNt (2) (Pro) dans l&#x26;#39;impasse complexes ribosome. La stabilit&#xE9; de TNAC-ARNt (2) (Pro) est augment&#xE9; sensiblement dans les souches d&#xE9;ficientes RRF et RF3 dans ou d&#xE9;ficient en peptidyl-ARNt hydrolase. Ces r&#xE9;sultats r&#xE9;v&#xE8;lent l&#x26;#39;existence d&#x26;#39;un m&#xE9;canisme naturel par lequel un acide amin&#xE9;, le tryptophane, se lie aux ribosomes qui viennent de terminer la synth&#xE8;se de CCNT-ARNt (2) (Pro). Tryptophane Bound inhibe RF2 clivage m&#xE9;di&#xE9; par des CCNT-ARNt (2) (Pro), ce qui entra&#xEE;ne le blocage de l&#x26;#39;ARNm du CCNT traduire ribosome. Ce d&#xE9;crochage entra&#xEE;ne une transcription accrue des g&#xE8;nes de structure de l&#x26;#39;op&#xE9;ron tna. RRF et RF3 alors se lier &#xE0; ce complexe au point mort du ribosome et rel&#xE2;chez lentement CCNT-ARNt (2) (Pro). Cette lib&#xE9;ration permet de recyclage du ribosome et permet le clivage de TNAC-ARNt (2) (Pro) par peptidyl-ARNt hydrolase.

Facteur recyclage du ribosome et la lib&#xE9;ration du facteur 3 Action Favorise la CCNT-peptidyl-ARNt Dropoff et Soulage Ribosome Stalling cours de l&#x26;#39;induction de la tryptophane Tna Operon expression dans Escherichia coli

Beim Tryptophan-Induktion von Tna Operon Ausdruck in Escherichia coli widersteht F&uuml;hrer konvertierende-tRNA, TnaC-tRNA(2)(Pro), Spaltbarkeit, wodurch Ribosom abw&uuml;rgen an der TnaC-Stop-Codon. Diese festgeklemmten Ribosom blockiert Rho-Faktor-Bindung und Aktion, Transkription Terminierung in der Tna-Operon Leader Region zu verhindern. Plasmid-vermittelte &Uuml;berexpression von TnaC war zuvor gezeigt, Zelle Wachstum zu hemmen, durch Verringerung von ungeladenen tRNA(2)(Pro) Verf&uuml;gbarkeit. Welche Faktoren zu entlasten, Ribosom abw&uuml;rgen, erleichtern TnaC-tRNA(2)(Pro) Spaltbarkeit und Wachstum Hemmung zu entlasten, wurden in der aktuellen Studie behandelt. Bei den St&auml;mmen, enth&auml;lt die Chromosomen Tna-Operon und fehlt eine TnaC Plasmid, die &Uuml;berproduktion von Ribosom recycling Faktor (RRF) und lassen Sie Faktor 3 (RF3) reduziert Tna Operon Ausdruck. Ihre &Uuml;berproduktion in-vivo erh&ouml;ht auch die Rate der Spaltung von TnaC-tRNA(2)(Pro), entlastet die Hemmung des Wachstums Plasmid-vermittelte TnaC &Uuml;berexpression zugeordnet. Die &Uuml;berproduktion von Dehnung Faktor G oder Einleitung Faktor 3 hatten keine vergleichbare Wirkungen und TmRNA war unf&auml;hig, f&uuml;r den Angriff auf TnaC-tRNA(2)(Pro) in steckengebliebenen Ribosom-komplexen. Die Stabilit&auml;t der TnaC-tRNA(2)(Pro) wurde bei den St&auml;mmen in RRF und RF3 mangelhaft oder einen Mangel an konvertierende-tRNA-Hydrolase sp&uuml;rbar erh&ouml;ht. Diese Ergebnisse zeigen der Existenz eines nat&uuml;rlichen Mechanismus, wobei eine amino Acid, Tryptophan, Bindung an Ribosomen, die gerade die Synthese von TnaC-tRNA(2)(Pro) abgeschlossen haben. Gebundenen Tryptophan hemmt RF2-vermittelte Spaltung der TnaC-tRNA(2)(Pro), wodurch das abw&uuml;rgen des Ribosoms TnaC &uuml;bersetzen mRNA. Diese Stocken f&uuml;hrt zu erh&ouml;hter Transkription der strukturelle Gene von der Tna-Operon. RRF und RF3 dann an diese komplexe festgeklemmten Ribosom binden und langsam ablassen TnaC-tRNA(2)(Pro). Diese Version erm&ouml;glicht es Verwertung Ribosom und erm&ouml;glicht die Spaltung des TnaC-tRNA(2)(Pro) durch konvertierende-tRNA-Hydrolase.

Ribosom Wiederverwertung Faktor und Release-Faktor 3-Aktion f&ouml;rdert TnaC-konvertierende-tRNA Dropoff und entlastet Ribosom w&auml;hrend Tryptophan Induktion von Tna Operon Ausdruck in Escherichia coli abw&uuml;rgen.

All&#39;induzione di triptofano dell&#39;espressione operone tna in Escherichia coli, il leader peptidilica-tRNA, TnaC-tRNA(2)(Pro), resiste a fenditura, con conseguente stallo presso il codone di stop tnaC ribosoma. Questo stallo ribosoma blocca associazione fattore Rho e azione, impedendo la terminazione trascrizione nella regione leader dell&#39;operone tna. Plasmide-mediata sovraespressione di tnaC precedentemente &egrave; stato indicato per inibire la crescita cellulare riducendo uncharged tRNA(2)(Pro) disponibilit&agrave;. Quali fattori alleviare fermando il ribosoma, facilitano la scissione TnaC-tRNA(2)(Pro) e alleviare l&#39;inibizione della crescita sono stati affrontati nello studio corrente. In ceppi contenenti l&#39;operone tna cromosomiche e manca un plasmide tnaC, la sovrapproduzione di riciclaggio ribosoma fattore (RRF) e rilasciare il fattore 3 (RF3) ridotto tna operone espressione. Loro sovrapproduzione in vivo anche aumentato il tasso di clivaggio del TnaC-tRNA(2)(Pro), l&#39;inibizione della crescita associato a plasmide-mediata tnaC sovraespressione di alleviare. La sovrapproduzione di fattore di allungamento G o fattore di iniziazione 3 non hanno effetti comparabili, e tmRNA era incapace di attaccare TnaC-tRNA(2)(Pro) in complessi ribosoma in stallo. La stabilit&agrave; del TnaC-tRNA(2)(Pro) era aumentata sensibilmente in ceppi carenti di RRF e RF3 o carenti di idrolasi peptidilica-tRNA. Questi risultati rivelano l&#39;esistenza di un meccanismo naturale per cui un amino acido, triptofano, si lega ai ribosomi che avete appena completato la sintesi di TnaC-tRNA(2)(Pro). Associato triptofano inibisce RF2-mediata scissione di TnaC-tRNA(2)(Pro), con conseguente stallo del ribosoma tradurre tnaC mRNA. Questo stallo si traduce in maggiore trascrizione dei geni strutturali dell&#39;operone tna. RRF e RF3 quindi associare a questo stallo ribosoma complesso e rilasciare lentamente TnaC-tRNA(2)(Pro). Questa release ribosoma riciclaggio e permette la scissione delle TnaC-tRNA(2)(Pro) di idrolasi peptidilica-tRNA.

Ribosoma riciclaggio azione fattore 3 fattore e rilascio promuove Dropoff TnaC-peptidilica-tRNA e allevia il ribosoma stallo durante l&#39;induzione di triptofano dell&#39;espressione operone tna in Escherichia coli.

&#x5927;&#x8178;&#x83CC;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;TNA&#x30AA;&#x30DA;&#x30ED;&#x30F3;&#x767A;&#x73FE;&#x306E;&#x30C8;&#x30EA;&#x30D7;&#x30C8;&#x30D5;&#x30A1;&#x30F3;&#x8A98;&#x5C0E;&#x6642;&#x306B;&#x3001;&#x30EA;&#x30FC;&#x30C0;&#x30FC;&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30B8;&#x30EB;-tRNA&#x3092;&#x3001;TnaC-tRNA&#x3092;&#xFF08;2&#xFF09;&#xFF08;Pro&#xFF09;&#x306F;&#x3001;tnaC&#x7D42;&#x6B62;&#x30B3;&#x30C9;&#x30F3;&#x3067;&#x5931;&#x901F;&#x30EA;&#x30DC;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x3001;&#x305D;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x3001;&#x5207;&#x65AD;&#x306B;&#x62B5;&#x6297;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x306F;&#x3001;TNA&#x30AA;&#x30DA;&#x30ED;&#x30F3;&#x306E;&#x30EA;&#x30FC;&#x30C0;&#x30FC;&#x9818;&#x57DF;&#x306B;&#x8EE2;&#x5199;&#x7D42;&#x7D50;&#x3092;&#x9632;&#x3050;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x3001;&#x30EA;&#x30DC;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x30D6;&#x30ED;&#x30C3;&#x30AF;&#x306E;Rho&#x56E0;&#x5B50;&#x306E;&#x7D50;&#x5408;&#x3068;&#x30A2;&#x30AF;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x3092;&#x505C;&#x6B62;&#x3057;&#x305F;&#x3002; tnaC&#x306E;&#x30D7;&#x30E9;&#x30B9;&#x30DF;&#x30C9;&#x5A92;&#x4ECB;&#x6027;&#x306E;&#x904E;&#x5270;&#x767A;&#x73FE;&#x306F;&#x3001;&#x4EE5;&#x524D;&#x306B;&#x8377;&#x96FB;tRNA&#x306E;&#xFF08;2&#xFF09;&#xFF08;Pro&#xFF09;&#x306E;&#x53EF;&#x7528;&#x6027;&#x3092;&#x6E1B;&#x5C11;&#x3055;&#x305B;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x7D30;&#x80DE;&#x5897;&#x6B96;&#x3092;&#x963B;&#x5BB3;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x793A;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3002;&#x3069;&#x306E;&#x8981;&#x56E0;&#x3001;&#x5931;&#x901F;&#x30EA;&#x30DC;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x3092;&#x548C;&#x3089;&#x3052;&#x308B;TnaC-tRNA&#x3092;&#xFF08;2&#xFF09;&#xFF08;Pro&#xFF09;&#x306E;&#x958B;&#x88C2;&#x3092;&#x4FC3;&#x9032;&#x3057;&#x3001;&#x6210;&#x9577;&#x963B;&#x5BB3;&#x3092;&#x7DE9;&#x548C;&#x3059;&#x308B;&#x306B;&#x306F;&#x3001;&#x73FE;&#x5728;&#x306E;&#x7814;&#x7A76;&#x3067;&#x6271;&#x308F;&#x308C;&#x305F;&#x3002;&#x67D3;&#x8272;&#x4F53;&#x306E;TNA&#x30AA;&#x30DA;&#x30ED;&#x30F3;&#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x3001;&#x30D7;&#x30E9;&#x30B9;&#x30DF;&#x30C9;tnaC&#x3092;&#x6B20;&#x3044;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x682A;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x30EA;&#x30DC;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x30EA;&#x30B5;&#x30A4;&#x30AF;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;&#x56E0;&#x5B50;&#xFF08;RRF&#xFF09;&#x3068;&#x30EA;&#x30EA;&#x30FC;&#x30B9;&#x56E0;&#x5B50;3&#xFF08;RF3&#xFF09;&#x306E;&#x904E;&#x5270;&#x7523;&#x751F;&#x306F;&#x3001;TNA&#x30AA;&#x30DA;&#x30ED;&#x30F3;&#x306E;&#x767A;&#x73FE;&#x3092;&#x6E1B;&#x5C11;&#x3055;&#x305B;&#x305F;&#x3002;&#x751F;&#x4F53;&#x5185;&#x3067;&#x904E;&#x5270;&#x306B;&#x3082;&#x30D7;&#x30E9;&#x30B9;&#x30DF;&#x30C9;&#x5A92;&#x4ECB;tnaC&#x306E;&#x904E;&#x5270;&#x767A;&#x73FE;&#x306B;&#x95A2;&#x9023;&#x4ED8;&#x3051;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x6210;&#x9577;&#x963B;&#x5BB3;&#x3092;&#x7DE9;&#x548C;&#x3059;&#x308B;&#x3001;TnaC-tRNA&#x3092;&#xFF08;2&#xFF09;&#xFF08;&#x30D7;&#x30ED;&#xFF09;&#x306E;&#x5207;&#x65AD;&#x7387;&#x3092;&#x5897;&#x52A0;&#x3055;&#x305B;&#x305F;&#x3002;&#x4F38;&#x9577;&#x56E0;&#x5B50;G&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x958B;&#x59CB;&#x56E0;&#x5B50;3&#x306E;&#x904E;&#x5270;&#x7523;&#x751F;&#x306F;&#x3001;&#x540C;&#x7B49;&#x306E;&#x52B9;&#x679C;&#x3092;&#x6301;&#x3063;&#x3066;&#x3044;&#x306A;&#x304B;&#x3063;&#x305F;&#x3057;&#x3001;tmRNA&#x304C;&#x505C;&#x6B62;&#x30EA;&#x30DC;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x8907;&#x5408;&#x4F53;&#x306B;TnaC-tRNA&#x3092;&#xFF08;2&#xFF09;&#xFF08;Pro&#xFF09;&#x3092;&#x653B;&#x6483;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x306A;&#x304B;&#x3063;&#x305F;&#x3002; TnaC-tRNA&#x306E;&#x5B89;&#x5B9A;&#x6027;&#xFF08;2&#xFF09;&#xFF08;&#x30D7;&#x30ED;&#xFF09;&#x306F;RRF&#x3068;RF3&#x306E;&#x6B20;&#x640D;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30B8;&#x30EB;-tRNA&#x306E;&#x52A0;&#x6C34;&#x5206;&#x89E3;&#x9175;&#x7D20;&#x306E;&#x6B20;&#x640D;&#x682A;&#x3067;&#x306F;&#x304B;&#x306A;&#x308A;&#x5897;&#x52A0;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x77E5;&#x898B;&#x306F;&#x3001;&#x30A2;&#x30DF;&#x30CE;&#x9178;&#x3001;&#x30C8;&#x30EA;&#x30D7;&#x30C8;&#x30D5;&#x30A1;&#x30F3;&#x3001;&#x3061;&#x3087;&#x3046;&#x3069;TnaC-tRNA&#x3092;&#xFF08;2&#xFF09;&#xFF08;&#x30D7;&#x30ED;&#xFF09;&#x306E;&#x5408;&#x6210;&#x3092;&#x5B8C;&#x4E86;&#x3057;&#x305F;&#x30EA;&#x30DC;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x306B;&#x7D50;&#x5408;&#x3057;&#x3001;&#x305D;&#x308C;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x81EA;&#x7136;&#x306E;&#x30E1;&#x30AB;&#x30CB;&#x30BA;&#x30E0;&#x306E;&#x5B58;&#x5728;&#x3092;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C9;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x30C8;&#x30EA;&#x30D7;&#x30C8;&#x30D5;&#x30A1;&#x30F3;&#x306F;&#x3001;&#x30EA;&#x30DC;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x7FFB;&#x8A33;tnaC mRNA&#x306E;&#x5931;&#x901F;&#x3001;&#x305D;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x3001;TnaC-tRNA&#x3092;&#xFF08;2&#xFF09;&#xFF08;&#x30D7;&#x30ED;&#xFF09;&#x306E;R&#x200B;&#x200B;F2&#x5A92;&#x4ECB;&#x5207;&#x65AD;&#x3092;&#x963B;&#x5BB3;&#x3059;&#x308B;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x306F;&#x3001;TNA&#x30AA;&#x30DA;&#x30ED;&#x30F3;&#x306E;&#x69CB;&#x9020;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x8EE2;&#x5199;&#x306E;&#x5897;&#x52A0;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x3092;&#x5931;&#x901F;&#x3002; RRF&#x3068;RF3&#x306F;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x505C;&#x6B62;&#x30EA;&#x30DC;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x8907;&#x5408;&#x4F53;&#x306B;&#x7D50;&#x5408;&#x3057;&#x3001;&#x5F90;&#x3005;&#x306B;TnaC-tRNA&#x3092;&#xFF08;2&#xFF09;&#xFF08;Pro&#xFF09;&#x3092;&#x89E3;&#x653E;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x30EA;&#x30EA;&#x30FC;&#x30B9;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x30EA;&#x30DC;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x30EA;&#x30B5;&#x30A4;&#x30AF;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;&#x3092;&#x53EF;&#x80FD;&#x3068;&#x3057;&#x3001;&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30B8;&#x30EB;-tRNA&#x306E;&#x52A0;&#x6C34;&#x5206;&#x89E3;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;TnaC-tRNA&#x306E;&#x5207;&#x65AD;&#xFF08;2&#xFF09;&#xFF08;Pro&#xFF09;&#x3092;&#x8A31;&#x53EF;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x30EA;&#x30DC;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x30EA;&#x30B5;&#x30A4;&#x30AF;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;&#x56E0;&#x5B50;&#x3068;&#x30EA;&#x30EA;&#x30FC;&#x30B9;&#x30D5;&#x30A1;&#x30AF;&#x30BF;&#x30FC;3&#x30A2;&#x30AF;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;TnaC-&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30B8;&#x30EB;-tRNA&#x306E;&#x30C9;&#x30ED;&#x30C3;&#x30D7;&#x30AA;&#x30D5;&#x3092;&#x4FC3;&#x9032;&#x3057;&#x3001;&#x5927;&#x8178;&#x83CC;&#x3067;TNA&#x30AA;&#x30DA;&#x30ED;&#x30F3;&#x767A;&#x73FE;&#x306E;&#x30C8;&#x30EA;&#x30D7;&#x30C8;&#x30D5;&#x30A1;&#x30F3;&#x8A98;&#x5C0E;&#x6642;&#x306E;&#x30B9;&#x30C8;&#x30FC;&#x30EB;&#x30EA;&#x30DC;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x3092;&#x548C;&#x3089;&#x3052;

&#xBC29;&#xCF55; &#xC624; &#xD398;&#xB860; &#xC2DD; &#xB300;&#xC7A5;&#xADE0;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD2B8;&#xB9BD;&#xD1A0;&#xD310; &#xC720;&#xB3C4; &#xB530;&#xB77C; &#xB9AC;&#xB354; peptidyl-tRNA, TnaC-tRNA(2)(Pro), &#xCABC;&#xAC1C; &#xC9D0;, &#xB9AC;&#xBCF4;&#xC19C; tnaC &#xC815;&#xC9C0; codon&#xC5D0; &#xC5F0;&#xAE30;&#xC5D0; &#xB530;&#xB978; &#xC800;&#xD56D;. &#xC2E4;&#xC18D;&#xB41C; &#xB9AC;&#xBCF4;&#xC19C;&#xC774; Rho &#xC694;&#xC18C; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xBC0F; &#xBC29;&#xCF55; &#xC624; &#xD398;&#xB860;&#xC758; &#xC9C0;&#xB3C4;&#xC790; &#xC9C0;&#xC5ED;&#xC5D0;&#xC11C; &#xB179;&#xC74C; &#xC885;&#xB8CC;&#xB97C; &#xBC29;&#xC9C0; &#xD558;&#xB294; &#xC791;&#xC5C5;&#xC744; &#xCC28;&#xB2E8; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. Tnac&#xC758; &#xD50C;&#xB77C;&#xC2A4; &#xBBF8;&#xB4DC; &#xC911;&#xC7AC; overexpression uncharged Trna(2)(pro)&#xC744; &#xC904;&#xC5EC; &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xC131;&#xC7A5;&#xC744; &#xC5B5;&#xC81C; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD574; &#xC774;&#xC804;&#xC5D0; &#xC92C;&#xB358; &#xAC00;&#xC6A9;&#xC131;. &#xD604;&#xC7AC; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC5B4;&#xB5A4; &#xC694;&#xC18C;&#xAC00; &#xB9AC;&#xBCF4;&#xC19C; &#xC5F0;&#xAE30; &#xD574;&#xC18C;, TnaC-tRNA(2)(Pro) &#xBD84;&#xC5F4;&#xC744; &#xCD09;&#xC9C4; &#xD558; &#xACE0; &#xC131;&#xC7A5; &#xC800;&#xD574;&#xB97C; &#xD574;&#xC18C; &#xD574;&#xACB0; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC885;&#xC790;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC5FC;&#xC0C9;&#xCCB4; &#xBC29;&#xCF55; &#xC624; &#xD398;&#xB860;&#xC744; &#xD3EC;&#xD568; &#xD558; &#xACE0; tnaC &#xD50C;&#xB77C;&#xC2A4; &#xBBF8;&#xB4DC;, &#xACFC;&#xC789; &#xBD80;&#xC871; &#xB9AC;&#xBCF4;&#xC19C; &#xC7AC;&#xD65C;&#xC6A9;&#xC758; &#xC694;&#xC18C; (RRF) &#xAC10;&#xC18C; &#xC694;&#xC778; 3 (RF3) &#xBC29;&#xCF55; &#xC624; &#xD398;&#xB860; &#xC2DD; &#xCD9C;&#xC2DC;. Vivo&#xC5D0;&#xC11C; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC758; &#xACFC;&#xC789;&#xB3C4; &#xD50C;&#xB77C;&#xC2A4; &#xBBF8;&#xB4DC; &#xC911;&#xC7AC; tnaC overexpression&#xC640; &#xAD00;&#xB828; &#xB41C; &#xC131;&#xC7A5; &#xC5B5;&#xC81C;&#xB97C; &#xC644;&#xD654; &#xD558;&#xB294; Tnac-trna(2)(pro)&#xC758; &#xCABC;&#xAC1C; &#xC9D0;&#xC758; &#xC18D;&#xB3C4; &#xC99D;&#xAC00; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC2E0;&#xC7A5; &#xC778;&#xC790; G &#xB610;&#xB294; &#xAC1C;&#xC2DC; &#xC778;&#xC790; 3 &#xACFC;&#xC789; &#xBE44;&#xAD50; &#xD6A8;&#xACFC; &#xC5C6;&#xB294; &#xBC0F; tmRNA TnaC-tRNA(2)(Pro) &#xC2E4;&#xC18D;&#xB41C; &#xB9AC;&#xBCF4;&#xC19C; &#xB2E8;&#xC9C0;&#xC5D0;&#xC11C; &#xACF5;&#xACA9; &#xAC00;&#xB2A5; &#xD588;&#xB2E4;. TnaC-tRNA(2)(Pro) &#xC548;&#xC815;&#xC131; &#xBCC0;&#xC885; RRF&#xC5D0; RF3 &#xACB0;&#xD54D; &#xB610;&#xB294; peptidyl-tRNA &#xAC00;&#xC218;&#xBD84;&#xD574; &#xD6A8;&#xC18C;&#xC758; &#xACB0;&#xD54D;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBD84;&#xBA85; &#xD558; &#xAC8C; &#xC99D;&#xAC00; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xC5F0;&#xAD6C; &#xACB0;&#xACFC; &#xACF5;&#xAC1C; &#xC790;&#xC5F0; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;&#xC758; &#xC874;&#xC7AC; &#xADF8;&#xAC83;&#xC5D0; &#xC758;&#xD558;&#xC5EC; &#xC544;&#xBBF8;&#xB178; &#xC0B0;, &#xD2B8;&#xB9BD;&#xD1A0;&#xD310;, Tnac-trna(2)(pro)&#xC758; &#xD569;&#xC131; &#xC644;&#xB8CC; &#xB2E8;&#xC9C0; &#xB9AC;&#xBCF4;&#xC19C;&#xC5D0; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;. &#xBC14;&#xC6B4;&#xB4DC; &#xD2B8;&#xB9BD;&#xD1A0;&#xD310; &#xC5B5;&#xC81C;&#xC758; TnaC-tRNA(2)(Pro), Tnac&#xB97C; &#xBC88;&#xC5ED; &#xD558;&#xB294; &#xB9AC;&#xBCF4;&#xC19C;&#xC758; &#xC5F0;&#xAE30;&#xC5D0; &#xB530;&#xB978; &#xBD84;&#xC5F4; RF2 &#xC911;&#xC7AC; mRNA. &#xBC29;&#xCF55; &#xC624; &#xD398;&#xB860;&#xC758; &#xAD6C;&#xC870; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC758; &#xC804;&#xC0AC;&#xB97C; &#xC99D;&#xAC00; &#xD558;&#xBA74;&#xC774; &#xC5F0;&#xAE30;. RRF &#xACE0; RF3 &#xBCF5;&#xC7A1; &#xD55C; &#xC2E4;&#xC18D;&#xB41C; &#xB9AC;&#xBCF4;&#xC19C;&#xC774; &#xB2E4;&#xC74C; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xD560; &#xCC9C;&#xCC9C;&#xD788; Tnac-trna(2)(pro)&#xB97C; &#xCD9C;&#xC2DC;. &#xC774; &#xB9B4;&#xB9AC;&#xC2A4;&#xB294; &#xB9AC;&#xBCF4;&#xC19C; &#xC7AC;&#xD65C;&#xC6A9; &#xD5C8;&#xC6A9; &#xD558; &#xACE0; peptidyl-tRNA &#xAC00;&#xC218;&#xBD84;&#xD574; &#xD6A8;&#xC18C;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; Tnac-trna(2)(pro)&#xC758; &#xC720; &#xBC29; &#xC0AC;&#xC774;&#xC758; &#xACE8;&#xC9DC;&#xAE30;&#xB97C; &#xD5C8;&#xC6A9;.

&#xB9AC;&#xBCF4;&#xC19C; &#xC7AC;&#xD65C;&#xC6A9; &#xC694;&#xC18C; &#xBC0F; &#xB9B4;&#xB9AC;&#xC2A4; &#xC694;&#xC18C; 3 &#xC561;&#xC158; TnaC-peptidyl-tRNA &#xC774;&#xD0C8; &#xC62C;&#xB9AC;&#xACE0; &#xB35C;&#xC5B4; &#xB9AC;&#xBCF4;&#xC19C; &#xBC29;&#xCF55; &#xC624; &#xD398;&#xB860; &#xC2DD; &#xB300;&#xC7A5;&#xADE0;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD2B8;&#xB9BD;&#xD1A0;&#xD310; &#xC720;&#xB3C4; &#xD558;&#xB294; &#xB3D9;&#xC548; &#xC5F0;&#xAE30; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Tras la inducci&#xF3;n de tript&#xF3;fano de TNA expresi&#xF3;n oper&#xF3;n en E. coli, el l&#xED;der peptidil-ARNt, TnaC-ARNt (2) (Pro), resiste la escisi&#xF3;n, resultando en ribosoma estancamiento en el cod&#xF3;n de parada tnaC. Este estancamiento bloques de uni&#xF3;n a ribosomas Rho factor y la acci&#xF3;n, la prevenci&#xF3;n de terminaci&#xF3;n de la transcripci&#xF3;n en la regi&#xF3;n l&#xED;der del oper&#xF3;n de TNA. El pl&#xE1;smido mediada por la sobreexpresi&#xF3;n de tnaC se hab&#xED;a demostrado que inhiben el crecimiento celular mediante la reducci&#xF3;n de ARNt sin carga (2) (Pro), disponibilidad. &#xBF;Qu&#xE9; factores aliviar el ribosoma estancamiento, facilitar TnaC-tRNA (2) (Pro), la escisi&#xF3;n, y aliviar la inhibici&#xF3;n del crecimiento se abordaron en el estudio actual. En las cepas que contienen el cromosoma oper&#xF3;n tna y carente de un tnaC pl&#xE1;smido, la sobreproducci&#xF3;n de factor de reciclaje del ribosoma (RRF) y el factor de liberaci&#xF3;n de 3 (RF3) reduce la expresi&#xF3;n del oper&#xF3;n tna. Su exceso de producci&#xF3;n en vivo, tambi&#xE9;n aument&#xF3; la tasa de corte de TnaC-tRNA (2) (Pro), el alivio de la inhibici&#xF3;n del crecimiento asociado con la sobreexpresi&#xF3;n tnaC mediada por pl&#xE1;smidos. La sobreproducci&#xF3;n del factor de elongaci&#xF3;n G o 3 del factor de iniciaci&#xF3;n no tienen efectos comparables, y tmRNA fue incapaz de atacar a TnaC-tRNA (2) (Pro), en las estancadas complejos ribosoma. La estabilidad de TnaC-tRNA (2) (Pro) se increment&#xF3; notablemente en cepas deficientes en FRR y RF3 o deficiente en el peptidil-tRNA hidrolasa. Estos resultados revelan la existencia de un mecanismo natural mediante el cual un amino&#xE1;cido, el tript&#xF3;fano, se une a los ribosomas que acaba de realizar la s&#xED;ntesis de TnaC-ARNt (2) (Pro). Triptofano unido inhibe RF2 mediada por divisi&#xF3;n de TnaC-tRNA (2) (Pro), lo que resulta en el estancamiento del ARNm tnaC ribosoma traduce. Este estancamiento resulta en aumento de la transcripci&#xF3;n de los genes estructurales del oper&#xF3;n TNA. RRF y RF3 luego se unen a este complejo estancado ribosoma y liberan lentamente TnaC-tRNA (2) (Pro). Esta versi&#xF3;n permite el reciclaje del ribosoma y permite la divisi&#xF3;n de TnaC-tRNA (2) (Pro) por el peptidil-tRNA hidrolasa.

Factor de reciclaje de los ribosomas y la liberaci&#xF3;n del factor 3 de Acci&#xF3;n promueve TnaC-peptidil-tRNA Devoluci&#xF3;n y Alivia el ribosoma Stalling durante la inducci&#xF3;n de tript&#xF3;fano de la TNA la expresi&#xF3;n del oper&#xF3;n en E. coli

&#x7FFB;&#x8BD1;&#x7684;&#x6838;&#x7CD6;&#x4F53;&#x8BC6;&#x522B;&#x529F;&#x80FD;&#x7684; TnaC &#x65B0;&#x751F;&#x80BD;&#x7684;&#x6C28;&#x57FA;&#x9178;&#x5E8F;&#x5217;&#x3002;&#x8BC6;&#x522B;&#x5BFC;&#x81F4;&#x8272;&#x6C28;&#x9178;&#x7FFB;&#x8BD1;&#x7684;&#x6838;&#x7CD6;&#x4F53;&#x5185;&#x5177;&#x6709;&#x7EA6;&#x675F;&#x529B;&#xFF0C;&#x6291;&#x5236; tnaC &#x7FFB;&#x8BD1;&#x7EC8;&#x6B62;&#xFF0C;&#x9632;&#x6B62; tna &#x64CD;&#x7EB5;&#x5B50;&#x7684;&#x9886;&#x5BFC;&#x8005;&#x5730;&#x533A;&#x4F9D;&#x8D56; Rho &#x7684;&#x8F6C;&#x5F55;&#x7EC8;&#x6B62;&#x3002;&#x6B64;&#x524D;&#x5DF2;&#x663E;&#x793A;&#x6838;&#x7CD6;&#x4F53;&#x86CB;&#x767D;&#x5E38;&#x67F4; L22 &#x7F6E;&#x6362; 751 &#x4F4D;&#x7F6E;&#x6216;&#x5F15;&#x8FDB; 23 &#x578B;&#x98DE;&#x673A; rRNA U2609C &#x6539;&#x53D8;&#x6216;&#x5F15;&#x8FDB; K90W &#x63D2;&#x5165;&#x817A;&#x560C;&#x5464;&#x6B8B;&#x7559;&#x59A8;&#x788D;&#x8272;&#x6C28;&#x9178;&#x611F;&#x5E94;&#x7684; tna &#x64CD;&#x7EB5;&#x5B50;&#x8868;&#x8FBE;&#x5F0F;&#x3002;&#x4E5F;&#x6709;&#x4EBA;&#x817A;&#x560C;&#x5464;&#x7684; 23 &#x578B;&#x98DE;&#x673A; rRNA 752 &#x4F4D;&#x7F6E;&#x662F;&#x611F;&#x5E94;&#x7684;&#x5FC5;&#x8981;&#x6761;&#x4EF6;&#x3002;&#x5728;&#x5F53;&#x524D;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x4E2D;&#xFF0C;&#x7F3A;&#x4E4F;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x6539;&#x53D8;&#x7684;&#x6838;&#x7CD6;&#x4F53;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x7684;&#x89E3;&#x91CA;&#x8FDB;&#x884C;&#x4E86;&#x8C03;&#x67E5;&#x3002;&#x4F7F;&#x7528;&#x9694;&#x79BB;&#x7684; TnaC &#x6838;&#x7CD6;&#x4F53;&#x590D;&#x5408;&#x7269;&#xFF0C;&#x5B83;&#x8868;&#x660E;&#x867D;&#x7136;&#x8272;&#x6C28;&#x9178;&#x6291;&#x5236;&#x560C;&#x5464;&#x5288;&#x88C2;&#x7684; TnaC-tRNA(Pro) &#x7684;&#x91CE;&#x751F;&#x578B;&#x6838;&#x7CD6;&#x4F53;&#x914D;&#x5408;&#x7269;&#xFF0C;&#x5B83;&#x4E0D;&#x4F1A;&#x4E0D;&#x6291;&#x5236;&#x5288;&#x88C2;&#x7684;&#x5BA1;&#x67E5;&#x7684;&#x56DB;&#x4E2A;&#x7A81;&#x53D8;&#x4F53;&#x6838;&#x7CD6;&#x4F53;&#x914D;&#x5408;&#x7269;&#x3002;&#x540C;&#x6837;&#xFF0C;&#x8272;&#x6C28;&#x9178;&#x53EF;&#x9632;&#x6B62; sparsomycin &#x7684; TnaC-tRNA(Pro) &#x5288;&#x88C2;&#x7684;&#x91CE;&#x751F;&#x578B;&#x6838;&#x7CD6;&#x4F53;&#x914D;&#x5408;&#x7269;&#xFF0C;&#x4F46;&#x4E0D;&#x662F;&#x4E0E;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7A81;&#x53D8;&#x4F53;&#x6838;&#x7CD6;&#x4F53;&#x914D;&#x5408;&#x7269;&#x7684;&#x6291;&#x5236;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;&#x6838;&#x82F7;&#x9178;&#x9760;&#x8FD1;&#x9170;&#x8F6C;&#x79FB;&#x9176;&#x4E2D;&#x5FC3;&#xFF0C;A2572&#xFF0C;&#x4ECE;&#x7532;&#x57FA;&#x5316;&#x4E0E;&#x91CE;&#x751F;&#x578B;&#x6838;&#x7CD6;&#x4F53;&#x914D;&#x5408;&#x8272;&#x6C28;&#x9178;&#x53D7;&#x4FDD;&#x62A4;&#xFF0C;&#x4E0D;&#x53D7;&#x4FDD;&#x62A4;&#x7684;&#x7A81;&#x53D8;&#x4F53;&#x6838;&#x7CD6;&#x4F53;&#x914D;&#x5408;&#x7269;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7814;&#x7A76;&#x7ED3;&#x679C;&#x786E;&#x5B9A;&#x7279;&#x5B9A;&#x8BC6;&#x522B;&#x529F;&#x80FD;&#x7684; TnaC &#x80BD;&#x7684;&#x6838;&#x7CD6;&#x4F53;&#x6B8B;&#x7559;&#x4F4D;&#x4E8E;&#x6838;&#x7CD6;&#x4F53;&#x9000;&#x51FA;&#x96A7;&#x9053;&#x3002;&#x8FD9;&#x79CD;&#x8BA4;&#x8BC6;&#x5728;&#x90A3;&#x91CC;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x7684;&#x8272;&#x6C28;&#x9178;&#x6291;&#x5236;&#x9170;&#x8F6C;&#x79FB;&#x9176;&#x6D3B;&#x6027;&#x7684;&#x9170;&#x8F6C;&#x79FB;&#x9176;&#x4E2D;&#x5FC3;&#x521B;&#x5EFA;&#x4E00;&#x4E2A;&#x514D;&#x8D39;&#x7684;&#x8272;&#x6C28;&#x9178;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x7F51;&#x7AD9;&#x3002;

&#x6838;&#x7CD6;&#x4F53;&#x529F;&#x80FD; tna &#x64CD;&#x7EB5;&#x5B50;&#x611F;&#x5E94;&#x7684;&#x5FC5;&#x8981;&#x6761;&#x4EF6;&#xFF1A; &#x8272;&#x6C28;&#x9178;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x9170;&#x8F6C;&#x79FB;&#x9176;&#x4E2D;&#x5FC3;&#x3002;

Features of the amino acid sequence of the TnaC nascent peptide are recognized by the translating ribosome. Recognition leads to tryptophan binding within the translating ribosome, inhibiting the termination of tnaC translation and preventing Rho-dependent transcription termination in the tna operon leader region. It was previously shown that inserting an adenine residue at position 751 or introducing the U2609C change in 23S rRNA or introducing the K90W replacement in ribosomal protein L22 prevented tryptophan induction of tna operon expression. It was also observed that an adenine at position 752 of 23S rRNA was required for induction. In the current study, the explanation for the lack of induction by these altered ribosomes was investigated. Using isolated TnaC-ribosome complexes, it was shown that although tryptophan inhibits puromycin cleavage of TnaC-tRNA(Pro) with wild-type ribosome complexes, it does not inhibit cleavage with the four mutant ribosome complexes examined. Similarly, tryptophan prevents sparsomycin inhibition of TnaC-tRNA(Pro) cleavage with wild-type ribosome complexes but not with these mutant ribosome complexes. Additionally, a nucleotide located close to the peptidyl transferase center, A2572, which was protected from methylation by tryptophan with wild-type ribosome complexes, was not protected with mutant ribosome complexes. These findings identify specific ribosomal residues located in the ribosome exit tunnel that recognize features of the TnaC peptide. This recognition creates a free tryptophan-binding site in the peptidyl transferase center, where bound tryptophan inhibits peptidyl transferase activity.

Ribosomal features essential for tna operon induction: tryptophan binding at the peptidyl transferase center.

Caract&#xE9;ristiques de la s&#xE9;quence d&#x26;#39;acides amin&#xE9;s du peptide TNAC naissante sont reconnus par le ribosome traduire. Reconnaissance conduit &#xE0; tryptophane contraignant au sein de la traduction du ribosome, l&#x26;#39;inhibition de la terminaison de la traduction et la pr&#xE9;vention du CCNT de terminaison de transcription Rho-d&#xE9;pendante dans la r&#xE9;gion chef de file tna op&#xE9;ron. Il a &#xE9;t&#xE9; montr&#xE9; pr&#xE9;c&#xE9;demment que l&#x26;#39;insertion d&#x26;#39;un r&#xE9;sidu d&#x26;#39;ad&#xE9;nine &#xE0; la position 751 ou introduire le changement dans U2609C ARNr 23S ou d&#x26;#39;introduire le remplacement K90W en prot&#xE9;ine ribosomique L22 emp&#xEA;ch&#xE9; l&#x26;#39;induction de la tryptophane tna op&#xE9;ron expression. Il a &#xE9;galement &#xE9;t&#xE9; observ&#xE9; que l&#x26;#39;ad&#xE9;nine &#xE0; la position 752 de l&#x26;#39;ARNr 23S a &#xE9;t&#xE9; n&#xE9;cessaire pour l&#x26;#39;induction. Dans l&#x26;#39;&#xE9;tude actuelle, l&#x26;#39;explication de l&#x26;#39;absence d&#x26;#39;induction par ces ribosomes modifi&#xE9;s a &#xE9;t&#xE9; &#xE9;tudi&#xE9;e. Utilisation isol&#xE9;s CCNT-ribosome complexes, il a &#xE9;t&#xE9; montr&#xE9; que, bien que le tryptophane puromycine inhibe le clivage de la CCNT-ARNt (Pro) de type sauvage complexes ribosome, elle n&#x26;#39;emp&#xEA;che pas de clivage avec les quatre mutants complexes ribosome examin&#xE9;s. De m&#xEA;me, le tryptophane emp&#xEA;che l&#x26;#39;inhibition de la CCNT sparsomycine-ARNt (Pro) avec un clivage de type sauvage complexes ribosome, mais pas avec ces complexes mutantes ribosome. En outre, un nucl&#xE9;otide situ&#xE9; &#xE0; proximit&#xE9; du centre peptidyl transf&#xE9;rase, A2572, qui a &#xE9;t&#xE9; prot&#xE9;g&#xE9; de la m&#xE9;thylation par le tryptophane de type sauvage complexes ribosome, n&#x26;#39;a pas &#xE9;t&#xE9; prot&#xE9;g&#xE9; par mutantes complexes ribosome. Ces r&#xE9;sultats permettent d&#x26;#39;identifier les r&#xE9;sidus sp&#xE9;cifiques ribosomal situ&#xE9;s dans le tunnel de sortie du ribosome qui reconnaissent les caract&#xE9;ristiques du peptide CCNT. Cette reconnaissance cr&#xE9;e un tryptophane libre-site de liaison dans le centre peptidyl transf&#xE9;rase, o&#xF9; le tryptophane li&#xE9; inhibe l&#x26;#39;activit&#xE9; peptidyl transf&#xE9;rase.

Caract&#xE9;ristiques essentielles ribosomique pour Tna Operon induction: Reliure tryptophane au Centre peptidyl transf&#xE9;rase

Merkmale der Aminos&auml;ure-Sequenz des entstehenden Peptids TnaC werden von dem &Uuml;bersetzen Ribosom erkannt. Anerkennung f&uuml;hrt zu Tryptophan Bindung innerhalb der &uuml;bersetzen Ribosom, Hemmung der Beendigung der TnaC &Uuml;bersetzung und Rho-abh&auml;ngige Transkription Beendigung der Tna-Operon-F&uuml;hrer-Region zu verhindern. Es wurde zuvor gezeigt, dass ein Adenin-R&uuml;ckstand auf Position 751 oder Einf&uuml;hrung in die U2609C Ver&auml;nderung 23S rRNA oder Einf&uuml;hrung in die K90W einf&uuml;gen Ersatz in Proteinschmelzverfahrens L22 Tryptophan Induktion von Tna Operon Ausdruck verhindert. Es wurde auch beobachtet, dass ein Adenin an Position 752 des 23S rRNA f&uuml;r Induktion erforderlich war. In der aktuellen Studie wurde die Erkl&auml;rung f&uuml;r das Fehlen der Induktion durch diese ver&auml;nderten Ribosomen untersucht. Mit isolierten TnaC-Ribosom-komplexe, wurde gezeigt, dass obwohl Tryptophan Puromycin Spaltung von TnaC-tRNA(Pro) mit Wildtyp Ribosom-komplexe hemmt, es nicht Spaltung mit der vier mutant Ribosom komplexe untersucht hemmen wird. Ebenso verhindert Tryptophan Sparsomycin Hemmung der TnaC-tRNA(Pro) Spaltung mit Wildtyp Ribosom-komplexe, aber nicht mit dieser mutant Ribosom-komplexe. Dar&uuml;ber hinaus wurde ein Nukleotid in der N&auml;he des konvertierende-Transferase-Zentrum, A2572, die von Methylierung von Tryptophan mit Wildtyp Ribosom-komplexe gesch&uuml;tzt war, nicht mit mutant Ribosom-komplexe gesch&uuml;tzt. Diese Erkenntnisse identifizieren bestimmte ribosomal R&uuml;ckst&auml;nde befindet sich im Tunnel Ausfahrt Ribosom, die Funktionen des Peptids TnaC erkennen. Diese Anerkennung erstellt eine kostenlose Tryptophan-Bindungsstelle im konvertierende Transferase Center, wo gebundenen Tryptophan konvertierende-Transferase-Aktivit&auml;t hemmt.

Ribosomal Funktionen f&uuml;r Tna Operon Induktion: Tryptophan-Bindung an das konvertierende-Transferase-Zentrum.

Caratteristiche della sequenza dell&#39;amminoacido del peptide nascente TnaC sono riconosciuti dal ribosoma traducendo. Riconoscimento porta a triptofano vincolante all&#39;interno del ribosoma traducendo, inibendo la terminazione della traduzione tnaC e prevenire la terminazione trascrizione Rho-dipendente della regione tna operon leader. Precedentemente &egrave; stato indicato che inserendo un residuo di adenina in posizione 751 o introdurre il cambiamento U2609C 23S rRNA o introducendo il K90W sostituzione nella proteina ribosomiale L22 impedito ad induzione di triptofano dell&#39;espressione operone tna. &Egrave; stato anche osservato che un&#39;adenina in posizione 752 di 23S rRNA &egrave; stato richiesto per induzione. In questo studio, &egrave; stata studiata la spiegazione per la mancanza di induzione da questi ribosomi alterati. Utilizzando complessi TnaC-ribosoma isolati, &egrave; stato dimostrato che sebbene triptofano inibisce la scissione con puromicina di TnaC-tRNA(Pro) con complessi di selvaggio-tipo ribosoma, esso non inibire clivaggio con quattro complessi ribosoma mutante esaminati. Analogamente, triptofano impedisce sparsomycin inibizione della scollatura TnaC-tRNA(Pro) con complessi di selvaggio-tipo ribosoma, ma non con questi complessi ribosoma mutante. Inoltre, un nucleotide che si trova vicino al centro della transferasi peptidilica, A2572, che era protetto da metilazione di triptofano con complessi ribosoma wild-type, non era protetta con complessi ribosoma mutante. Questi risultati identificano specifici residui ribosomiali situati nel tunnel di uscita del ribosoma che riconoscono le funzionalit&agrave; del peptide TnaC. Questo riconoscimento crea un sito di legame triptofano libero nel centro transferasi peptidilica, dove associato triptofano inibisce l&#39;attivit&agrave; transferasi peptidilica.

Ribosomiale caratteristiche essenziali per l&#39;induzione dell&#39;operone tna: associazione di triptofano al centro transferasi peptidilica.

TnaC&#x65B0;&#x751F;&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C9;&#x306E;&#x30A2;&#x30DF;&#x30CE;&#x9178;&#x914D;&#x5217;&#x306E;&#x6A5F;&#x80FD;&#x306F;&#x3001;&#x7FFB;&#x8A33;&#x30EA;&#x30DC;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x8A8D;&#x8B58;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x8A8D;&#x8B58;&#x306F;&#x3001;&#x7FFB;&#x8A33;&#x30EA;&#x30DC;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x5185;&#x3067;&#x7D50;&#x5408;&#x30C8;&#x30EA;&#x30D7;&#x30C8;&#x30D5;&#x30A1;&#x30F3;&#x306B;&#x3064;&#x306A;&#x304C;&#x308B;tnaC&#x7FFB;&#x8A33;&#x306E;&#x963B;&#x5BB3;&#x7D42;&#x4E86;&#x3068;TNA&#x30AA;&#x30DA;&#x30ED;&#x30F3;&#x30EA;&#x30FC;&#x30C0;&#x30FC;&#x9818;&#x57DF;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;Rho&#x4F9D;&#x5B58;&#x6027;&#x8EE2;&#x5199;&#x306E;&#x7D42;&#x4E86;&#x3092;&#x9632;&#x3050;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x306F;&#x3001;&#x4EE5;&#x524D;&#x306F;&#x6B21;&#x306E;&#x4F4D;&#x7F6E;751&#x3067;&#x306E;&#x30A2;&#x30C7;&#x30CB;&#x30F3;&#x6B8B;&#x57FA;&#x3092;&#x633F;&#x5165;&#x3057;&#x305F;&#x308A;&#x3001;23S rRNA&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;U2609C&#x306E;&#x5909;&#x66F4;&#x3092;&#x5C0E;&#x5165;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x30EA;&#x30DC;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;L22&#x306E;K90W&#x4EA4;&#x63DB;&#x304C;TNA&#x30AA;&#x30DA;&#x30ED;&#x30F3;&#x767A;&#x73FE;&#x306E;&#x30C8;&#x30EA;&#x30D7;&#x30C8;&#x30D5;&#x30A1;&#x30F3;&#x8A98;&#x5C0E;&#x3092;&#x9632;&#x6B62;&#x3057;&#x5C0E;&#x5165;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x793A;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3002;&#x307E;&#x305F;&#x3001;23S rRNA&#x306E;&#x4F4D;&#x7F6E;752&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x30A2;&#x30C7;&#x30CB;&#x30F3;&#x3001;&#x8A98;&#x5C0E;&#x306B;&#x5FC5;&#x8981;&#x3067;&#x3042;&#x3063;&#x305F;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x89B3;&#x5BDF;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3002;&#x73FE;&#x5728;&#x306E;&#x7814;&#x7A76;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x5909;&#x5316;&#x3057;&#x305F;&#x30EA;&#x30DC;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x8A98;&#x5C0E;&#x306E;&#x6B20;&#x5982;&#x306B;&#x3064;&#x3044;&#x3066;&#x306E;&#x8AAC;&#x660E;&#x3092;&#x691C;&#x8A0E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x5B64;&#x7ACB;TnaC-&#x30EA;&#x30DC;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x8907;&#x5408;&#x4F53;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x305D;&#x308C;&#x306F;&#x30C8;&#x30EA;&#x30D7;&#x30C8;&#x30D5;&#x30A1;&#x30F3;&#x306F;&#x3001;&#x91CE;&#x751F;&#x578B;&#x30EA;&#x30DC;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x8907;&#x5408;&#x4F53;&#x3068;TnaC-tRNA&#x306E;&#xFF08;&#x30D7;&#x30ED;&#xFF09;&#x306E;&#x30D4;&#x30E5;&#x30FC;&#x30ED;&#x30DE;&#x30A4;&#x30B7;&#x30F3;&#x5207;&#x65AD;&#x3092;&#x963B;&#x5BB3;&#x3059;&#x308B;&#x304C;&#x3001;&#x305D;&#x308C;&#x306F;&#x691C;&#x8A0E;4&#x5909;&#x7570;&#x4F53;&#x30EA;&#x30DC;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x8907;&#x5408;&#x4F53;&#x3068;&#x5207;&#x65AD;&#x3092;&#x963B;&#x5BB3;&#x3057;&#x306A;&#x3044;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x793A;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3002;&#x540C;&#x69D8;&#x306B;&#x3001;&#x30C8;&#x30EA;&#x30D7;&#x30C8;&#x30D5;&#x30A1;&#x30F3;&#x306F;&#x306A;&#x304F;&#x3001;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x5909;&#x7570;&#x4F53;&#x30EA;&#x30DC;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x8907;&#x5408;&#x4F53;&#x3068;&#x91CE;&#x751F;&#x578B;&#x306E;&#x30EA;&#x30DC;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x8907;&#x5408;&#x4F53;&#x3068;TnaC-tRNA&#x306E;sparsomycin&#x963B;&#x5BB3;&#xFF08;Pro&#xFF09;&#x306E;&#x5207;&#x65AD;&#x3092;&#x9632;&#x3050;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x3001;&#x30CC;&#x30AF;&#x30EC;&#x30AA;&#x30C1;&#x30C9;&#x3001;&#x91CE;&#x751F;&#x578B;&#x30EA;&#x30DC;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x8907;&#x5408;&#x4F53;&#x3068;&#x30C8;&#x30EA;&#x30D7;&#x30C8;&#x30D5;&#x30A1;&#x30F3;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x30E1;&#x30C1;&#x30EB;&#x5316;&#x304B;&#x3089;&#x4FDD;&#x8B77;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30B8;&#x30EB;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30D5;&#x30A7;&#x30E9;&#x30FC;&#x30BC;&#x30BB;&#x30F3;&#x30BF;&#x30FC;&#x3001;A2572&#x3001;&#x8FD1;&#x304F;&#x306B;&#x4F4D;&#x7F6E;&#x3057;&#x3066;&#x5909;&#x7570;&#x4F53;&#x30EA;&#x30DC;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x8907;&#x5408;&#x4F53;&#x3067;&#x4FDD;&#x8B77;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3067;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x77E5;&#x898B;&#x306F;&#x3001;TnaC&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C9;&#x306E;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3092;&#x8A8D;&#x8B58;&#x3057;&#x3066;&#x30EA;&#x30DC;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x51FA;&#x53E3;&#x30C8;&#x30F3;&#x30CD;&#x30EB;&#x306B;&#x3042;&#x308B;&#x7279;&#x5B9A;&#x306E;&#x30EA;&#x30DC;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x306E;&#x6B8B;&#x57FA;&#x3092;&#x540C;&#x5B9A;&#x3059;&#x308B;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306A;&#x8A8D;&#x8B58;&#x306F;&#x3001;&#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C9;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x30C8;&#x30EA;&#x30D7;&#x30C8;&#x30D5;&#x30A1;&#x30F3;&#x306F;&#x3001;&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30B8;&#x30EB;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30D5;&#x30A7;&#x30E9;&#x30FC;&#x30BC;&#x6D3B;&#x6027;&#x3092;&#x963B;&#x5BB3;&#x3059;&#x308B;&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30B8;&#x30EB;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30D5;&#x30A7;&#x30E9;&#x30FC;&#x30BC;&#x30BB;&#x30F3;&#x30BF;&#x30FC;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x7121;&#x6599;&#x306E;&#x30C8;&#x30EA;&#x30D7;&#x30C8;&#x30D5;&#x30A1;&#x30F3;&#x7D50;&#x5408;&#x90E8;&#x4F4D;&#x3092;&#x4F5C;&#x6210;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

TNA&#x30AA;&#x30DA;&#x30ED;&#x30F3;&#x306E;&#x8A98;&#x5C0E;&#x306B;&#x5FC5;&#x9808;&#x306E;&#x30EA;&#x30DC;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x306E;&#x6A5F;&#x80FD;&#xFF1A;&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30B8;&#x30EB;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30D5;&#x30A7;&#x30E9;&#x30FC;&#x30BC;&#x30BB;&#x30F3;&#x30BF;&#x30FC;&#x30C8;&#x30EA;&#x30D7;&#x30C8;&#x30D5;&#x30A1;&#x30F3;&#x7D50;&#x5408;

TnaC &#xCD08;&#xAE30; &#xD3A9; &#xD2F0; &#xB4DC;&#xC758; &#xC544;&#xBBF8;&#xB178;&#xC0B0; &#xC2DC;&#xD000;&#xC2A4;&#xC758; &#xAE30;&#xB2A5; &#xBC88;&#xC5ED; &#xB9AC;&#xBCF4;&#xC19C;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC778;&#xC2DD; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC778;&#xC2DD; &#xBC88;&#xC5ED; &#xB9AC;&#xBCF4;&#xC19C; &#xB0B4;&#xC758; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; tnaC &#xBC88;&#xC5ED;&#xC758; &#xC885;&#xB8CC;&#xB97C; &#xC5B5;&#xC81C; &#xD558; &#xACE0; &#xBC29;&#xCF55; &#xC624; &#xD398;&#xB860; &#xB9AC;&#xB354; &#xC601;&#xC5ED;&#xC5D0; Rho &#xC885;&#xC18D; &#xB179;&#xC74C; &#xC885;&#xB8CC;&#xB97C; &#xBC29;&#xC9C0; &#xD558;&#xB294; &#xD2B8;&#xB9BD;&#xD1A0;&#xD310;&#xC774; &#xB048;&#xB2E4;. &#xC704;&#xCE58; 751 23S Rrna&#xC758; U2609C &#xBCC0;&#xD654;&#xB97C; &#xB3C4;&#xC785; &#xD558;&#xAC70;&#xB098; &#xC18C;&#xAC1C; &#xD558;&#xB294; k90w&#xC5D0;&#xC11C; &#xC544;&#xB370;&#xB2CC; &#xC794;&#xB958;&#xBB3C;&#xC744; &#xC0BD;&#xC785; &#xADF8; ribosomal &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; L22 &#xAD50;&#xCCB4; &#xBC29;&#xCF55; &#xC624; &#xD398;&#xB860; &#xC2DD;&#xC758; &#xD2B8;&#xB9BD;&#xD1A0;&#xD310; &#xC720;&#xB3C4; &#xBC29;&#xD574; &#xAC83;&#xC774; &#xC774;&#xC804;&#xC5D0; &#xBCF4;&#xC600;&#xB2E4;. &#xADF8;&#xAC83;&#xC740; &#xB610;&#xD55C; 752 23S Rrna&#xC758; &#xC704;&#xCE58;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC544;&#xB370;&#xB2CC; &#xC720;&#xB3C4; &#xD544;&#xC694; &#xD588;&#xB2E4; &#xAD00;&#xCC30; &#xD588;&#xB2E4;. &#xD604;&#xC7AC; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xBCC0;&#xACBD; &#xB41C; &#xB9AC;&#xBCF4;&#xC19C;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC720;&#xB3C4;&#xC758; &#xBD80;&#xC871;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC124;&#xBA85; &#xC870;&#xC0AC; &#xD588;&#xB2E4;. &#xACA9;&#xB9AC; &#xB41C; TnaC &#xB9AC;&#xBCF4;&#xC19C; &#xB2E8;&#xC9C0;&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558;&#xB294; &#xD2B8;&#xB9BD;&#xD1A0;&#xD310; &#xC57C;&#xC0DD;-&#xD0C0;&#xC785; &#xB9AC;&#xBCF4;&#xC19C; &#xB2E8;&#xC9C0;&#xC640; Tnac-trna(pro)&#xC758; puromycin &#xBD84;&#xC5F4; &#xC5B5;&#xC81C;, &#xBE44;&#xB85D; &#xADF8;&#xAC83; &#xC54A;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xC5B5;&#xC81C; &#xD558;&#xC9C0; &#xCABC;&#xAC1C; &#xC9D0; &#xAC80;&#xC0AC;&#xB97C; 4 &#xAC1C;&#xC758; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xCCB4; &#xB9AC;&#xBCF4;&#xC19C; &#xB2E8;&#xC9C0;&#xC640; &#xD568;&#xAED8; &#xD45C;&#xC2DC; &#xD588;&#xB2E4;. &#xB9C8;&#xCC2C;&#xAC00;&#xC9C0;&#xB85C;, &#xD2B8;&#xB9BD;&#xD1A0;&#xD310; &#xC57C;&#xC0DD;-&#xD0C0;&#xC785; &#xB9AC;&#xBCF4;&#xC19C; &#xB2E8;&#xC9C0;&#xC640; &#xD568;&#xAED8; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC;&#xC774; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xCCB4; &#xB9AC;&#xBCF4;&#xC19C; &#xB2E8;&#xC9C0; TnaC-tRNA(Pro) &#xBD84;&#xC5F4;&#xC758; sparsomycin &#xC800;&#xD574;&#xB97C; &#xBC29;&#xC9C0;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB610;&#xD55C;, &#xC57C;&#xC0DD;-&#xD0C0;&#xC785; &#xB9AC;&#xBCF4;&#xC19C; &#xB2E8;&#xC9C0;&#xC640; &#xD2B8;&#xB9BD;&#xD1A0;&#xD310;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xBA54; &#xD2F8; &#xD654;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBCF4;&#xD638; &#xB41C; A2572 peptidyl&#xACFC; &#xC13C;&#xD130; &#xAC00;&#xAE4C;&#xC774; &#xC788;&#xB294; &#xB274;&#xD074;&#xB808;&#xC624;&#xD2F0;&#xB4DC;&#xB294; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xCCB4; &#xB9AC;&#xBCF4;&#xC19C; &#xB2E8;&#xC9C0; &#xBCF4;&#xD638; &#xB418;&#xC9C0;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xC5F0;&#xAD6C; &#xACB0;&#xACFC; &#xD2B9;&#xC815; ribosomal &#xC794;&#xB958;&#xBB3C; &#xB9AC;&#xBCF4;&#xC19C; &#xCD9C;&#xAD6C; &#xD130;&#xB110;&#xC5D0; &#xC788;&#xB294; TnaC &#xD3A9; &#xD2F0; &#xB4DC;&#xC758; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC744; &#xC778;&#xC2DD; &#xD558;&#xB294; &#xD655;&#xC778; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774; &#xC778;&#xC2DD; &#xBC14;&#xC6B4;&#xB4DC; &#xD2B8;&#xB9BD;&#xD1A0;&#xD310; peptidyl&#xACFC; &#xD65C;&#xB3D9;&#xC744; &#xC5B5;&#xC81C; &#xD558;&#xB294; peptidyl&#xACFC; &#xC13C;&#xD130;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBB34;&#xB8CC; &#xD2B8;&#xB9BD;&#xD1A0;&#xD310; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8;&#xB97C; &#xB9CC;&#xB4ED;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xBC29;&#xCF55; &#xC624; &#xD398;&#xB860; &#xC720;&#xB3C4;&#xC5D0; &#xD544;&#xC218;&#xC801;&#xC778; ribosomal &#xAE30;&#xB2A5;: peptidyl&#xACFC; &#xC13C;&#xD130;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD2B8;&#xB9BD;&#xD1A0;&#xD310; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;.

Caracter&#xED;sticas de la secuencia de amino&#xE1;cidos del p&#xE9;ptido naciente TnaC son reconocidos por los ribosomas traducir. El reconocimiento lleva a la tript&#xF3;fano vinculante dentro de la traducci&#xF3;n del ribosoma, inhibiendo la terminaci&#xF3;n de la traducci&#xF3;n y la prevenci&#xF3;n de tnaC Rho dependiente de la terminaci&#xF3;n de la transcripci&#xF3;n en la regi&#xF3;n l&#xED;der del oper&#xF3;n tna. Se ha demostrado previamente que la inserci&#xF3;n de un residuo de adenina en la posici&#xF3;n 751 o introducir el cambio en el U2609C 23S rRNA o la introducci&#xF3;n de la sustituci&#xF3;n K90W de la prote&#xED;na ribosomal L22 evitar la inducci&#xF3;n de tript&#xF3;fano de la expresi&#xF3;n del oper&#xF3;n tna. Tambi&#xE9;n se observ&#xF3; que una adenina en la posici&#xF3;n 752 de 23S rRNA se requiere para la inducci&#xF3;n. En el presente estudio, la explicaci&#xF3;n de la falta de inducci&#xF3;n de estos ribosomas alterados fue investigado. Usando aislados TnaC-ribosoma complejos, se demostr&#xF3; que, aunque el tript&#xF3;fano inhibe la escisi&#xF3;n de puromicina TnaC-ARNt (Pro) con los de tipo salvaje complejos ribosoma, que no inhibe la escisi&#xF3;n con los cuatro mutantes complejos ribosoma examinados. Del mismo modo, el tript&#xF3;fano impide la inhibici&#xF3;n de la sparsomycin TnaC-tRNA (Pro), con la escisi&#xF3;n de tipo salvaje complejos ribosoma, pero no con estos complejos ribosoma mutante. Adem&#xE1;s, un nucle&#xF3;tido situado cerca del centro de peptidil transferasa, A2572, que se protegi&#xF3; de la metilaci&#xF3;n de tript&#xF3;fano con complejos de tipo salvaje ribosoma, no fue protegido con mutantes complejos ribosoma. Estos hallazgos identificar residuos espec&#xED;ficos ribos&#xF3;mico situados en la salida del t&#xFA;nel ribosoma que reconocen las caracter&#xED;sticas del p&#xE9;ptido TnaC. Este reconocimiento crea un tript&#xF3;fano libre sitio de uni&#xF3;n en el centro peptidil transferasa, que inhibe la actividad de triptofano unido peptidil transferasa.

Caracter&#xED;sticas esenciales para TNA Ribosomal inducci&#xF3;n Operon: Encuadernaci&#xF3;n tript&#xF3;fano en el centro peptidiltransferasa

&#x52AA;&#x529B;&#x6539;&#x5584;&#x6709;&#x5173;&#x7684;&#x89C4;&#x5219;&#xFF0C;&#x76F4;&#x63A5;&#x5BF9;&#x7FFB;&#x8BD1;&#x6548;&#x7387;&#x7684;&#x65E9;&#x671F;&#x7684;&#x8113;&#x75B1;&#x5E8F;&#x5217;&#x5F71;&#x54CD;&#x7684;&#x77E5;&#x8BC6;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x5DF2;&#x5206;&#x6790;&#x4E86;&#x5BF9;&#x7B2C;&#x4E8C;&#x548C;&#x7B2C;&#x4E09;&#x4E2A;&#x9635;&#x5730;&#x4E0A;&#x8868;&#x8FBE;&#x7684; lacZ &#x53D8;&#x79CD;&#x7684;&#x516D;&#x4E2A;&#x7CBE;&#x6C28;&#x9178;&#x5BC6;&#x7801;&#x5B50;&#x7684;&#x6548;&#x679C;&#x3002;&#x800C;&#x76F8;&#x540C; AGA &#x6216;&#x805A;&#x96C6;&#x5BC6;&#x7801;&#x5B50;&#x524D;&#x540E;&#x78B1;&#x57FA;&#x5BF9;&#x4EBA;&#x6709;&#x5229;&#x7684;&#x57FA;&#x56E0;&#x8868;&#x8FBE;&#xFF0C;&#x6210;&#x5BF9;&#x7684;&#x6BCF;&#x56DB;&#x4E2A;&#x80BE;&#x708E;&#x5BC6;&#x7801;&#x5B50;&#x662F;&#x975E;&#x5E38;&#x4F4E;&#x6548;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E00;&#x7ED3;&#x679C;&#x662F;&#x610F;&#x5916;&#xFF0C;&#x56E0;&#x4E3A; AGA &#x6216;&#x805A;&#x96C6;&#x66F4;&#x591A;&#x7684;&#x5185;&#x90E8;&#x57FA;&#x56E0;&#x4F4D;&#x7F6E;&#x4F4D;&#x4E8E;&#x7684;&#x5BC6;&#x7801;&#x5B50;&#x7684;&#x6C47;&#x63A5;&#x6311;&#x8D77;&#x4E0D;&#x8DB3;&#x8868;&#x8FBE;&#x800C;&#x5185;&#x90E8;&#x4F4D;&#x4E8E;&#x603B;&#x7EDF;&#x5E9C;&#x548C; CGC &#x6700;&#x4E30;&#x5BCC;&#x548C;&#x6709;&#x6548;&#x5730;&#x7FFB;&#x8BD1;&#x7CBE;&#x6C28;&#x9178;&#x5BC6;&#x7801;&#x5B50;&#x3002;AGA &#x7684;&#x6DF7;&#x5408;&#x7684;&#x7EC4;&#x5408;&#x548C;&#x80BE;&#x708E;&#x5BC6;&#x7801;&#x5B50;&#x7684;&#x6BCF;&#x4E2A;&#x901A;&#x5E38;&#x5BFC;&#x81F4; lacZ &#x8868;&#x8FBE;&#x9170; tRNA &#x503E;&#x5411;&#x6E38;&#x79BB;&#x6838;&#x7CD6;&#x4F53;&#x4ECE;&#x72EC;&#x7ACB;&#x9AD8;&#x6548;&#x7387;&#x3002;&#x56E0;&#x6B64;&#xFF0C;&#x6709;&#x4EBA;&#x8868;&#x793A;&#x7A9D;&#x85CF; AGA &#x5BC6;&#x7801;&#x5B50;&#x524D;&#x540E;&#x78B1;&#x57FA;&#x5BF9;&#x7684;&#x53D8;&#x4F53;&#xFF0C;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x6709;&#x6548;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x643A;&#x5E26; AAA &#x5BC6;&#x7801;&#x5B50;&#x5728;&#x76F8;&#x540C;&#x4F4D;&#x7F6E;&#x4E0A;&#xFF0C;&#x4E00;&#x5BF9;&#x53D8;&#x91CF;&#x914D;&#x7F6E;&#x62A5;&#x544A;&#x4E3A;&#x4E00;&#x4F53;&#x7684;&#x6700;&#x5E38;&#x89C1;&#x548C;&#x6700;&#x9AD8;&#x6548;&#x7684;&#x57FA;&#x56E0;&#x8868;&#x8FBE;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x5C06;&#x89E3;&#x91CA;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7ED3;&#x679C;&#x5047;&#x5B9A;&#x7684; adenines &#x5728;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x65E9;&#x671F;&#x7684;&#x4F4D;&#x7F6E;&#x5B58;&#x5728;&#x589E;&#x5F3A;&#x57FA;&#x56E0;&#x7684;&#x8868;&#x8FBE;&#x3002;&#x4E0D;&#x51FA;&#x6240;&#x6599;&#xFF0C;&#x7279;&#x5B9A; mRNA &#x6C34;&#x5E73;&#x4E0E; lacZ &#x8868;&#x8FBE;&#x5F0F;&#x7684;&#x6BCF;&#x4E2A;&#x53D8;&#x4F53;&#x5F3A;&#x5EA6;&#x76F8;&#x5173;&#x3002;&#x4E0D;&#x8FC7;&#xFF0C;lacZ AGA AGA pth &#x7EC6;&#x80DE;&#x4E2D;&#x7684;&#x57FA;&#x56E0;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x7D2F;&#x79EF; peptidyl-tRNA(Arg4)&#xFF0C;&#x4EE5;&#x53CA;&#x8868;&#x660E;&#x7531;&#x4E8E;&#x6D88;&#x8017; aminoacylated-tRNA(Arg4) &#x5931;&#x901F;&#x7684;&#x6838;&#x7CD6;&#x4F53;&#x7684;&#x77ED; 5&#39;-&#x8FD1;&#x7AEF; lacZ mRNA &#x7247;&#x6BB5;&#x3002;

&#x6D77;&#x6E2F; AGA &#x5BC6;&#x7801;&#x5B50;&#x65C1;&#x8FB9;&#x542F;&#x52A8;&#x5B50;&#x7684;&#x57FA;&#x56E0;&#x53D8;&#x5F02;&#x7684;&#x9AD8;&#x6548;&#x8868;&#x8FBE;&#x3002;

In an effort to improve the knowledge about the rules which direct the effect of the early ORF sequences on translation efficiency, we have analyzed the effect of pairs of the six arginine codons at the second and third positions on the expression of lacZ variants. Whereas the pairs of identical AGA or AGG codons were favorable for the gene expression, identical pairs of each of the four CGN codons were very inefficient. This result was unexpected because tandems of AGA or AGG codons located in more internal gene positions provoke deficient expression whilst internally located CGU and CGC are the most abundant and efficiently translated arginine codons. The mixed combinations of AGA and each of the CGN codons usually resulted in efficient rates of lacZ expression independently of the peptidyl-tRNA propensity to dissociate from the ribosome. Thus, the variant harboring the pair of AGA codons was expressed as efficiently as the variant carrying a pair of AAA codons in the same positions, a configuration reported as one of the most common and efficient for gene expression. We explain these results assuming that the presence of adenines in these early positions enhance gene expression. As expected, specific mRNA levels correlated with the intensity of lacZ expression for each variant. However, the induction of lacZ AGA AGA gene in pth cells accumulated peptidyl-tRNA(Arg4) as well as a short 5'-proximal lacZ mRNA fragment suggesting ribosome stalling due to depletion of aminoacylated-tRNA(Arg4).

Efficient expression of gene variants that harbour AGA codons next to the initiation codon.

Dans un effort visant &#xE0; am&#xE9;liorer les connaissances sur les r&#xE8;gles qui dirigent l&#x26;#39;effet des s&#xE9;quences ORF d&#xE9;but sur l&#x26;#39;efficacit&#xE9; de traduction, nous avons analys&#xE9; l&#x26;#39;effet de paires des six codons arginine &#xE0; la deuxi&#xE8;me et troisi&#xE8;me positions sur l&#x26;#39;expression de lacZ variantes. Alors que les paires de codons AGA ou AGG identiques ont &#xE9;t&#xE9; favorables &#xE0; l&#x26;#39;expression des g&#xE8;nes, des paires identiques de chacun des codons CGN quatre &#xE9;taient tr&#xE8;s inefficace. Ce r&#xE9;sultat &#xE9;tait inattendu car les tandems de codons AGA ou AGG situ&#xE9; dans le g&#xE8;ne d&#x26;#39;expression des positions plus provoquent interne d&#xE9;ficiente tandis que l&#x26;#39;int&#xE9;rieur situ&#xE9; UGT et de la CCG sont les codons les plus abondantes et efficacement traduits arginine. Les combinaisons mixtes de AGA et chacun des codons CGN g&#xE9;n&#xE9;ralement entra&#xEE;n&#xE9; taux efficaces d&#x26;#39;expression lacZ ind&#xE9;pendamment de la propension peptidyl-ARNt de se dissocier du ribosome. Ainsi, la variante abriter la paire de codons AGA a &#xE9;t&#xE9; exprim&#xE9; de mani&#xE8;re aussi efficace que la variante portant une paire de codons AAA dans les m&#xEA;mes positions, une configuration consid&#xE9;r&#xE9;e comme l&#x26;#39;un des plus commune et efficace pour l&#x26;#39;expression des g&#xE8;nes. Expliquer ces r&#xE9;sultats en supposant que la pr&#xE9;sence de ad&#xE9;nines dans ces positions d&#xE9;but augmenter l&#x26;#39;expression g&#xE9;nique. Comme pr&#xE9;vu, le taux d&#x26;#39;ARNm sp&#xE9;cifiques en corr&#xE9;lation avec l&#x26;#39;intensit&#xE9; d&#x26;#39;expression pour chaque variante lacZ. Cependant, l&#x26;#39;induction de lacZ AGA g&#xE8;ne dans des cellules p-i&#xE8;mes accumul&#xE9;e peptidyl-ARNt (Arg4) ainsi qu&#x26;#39;un court-5&#x26;#39;proximale fragment d&#x26;#39;ARNm lacZ sugg&#xE9;rant ribosome mort en raison de l&#x26;#39;&#xE9;puisement de aminoacyle-ARNt (Arg4).

L&#x26;#39;expression efficace de variantes g&#xE9;n&#xE9;tiques qui Harbour AGA codons Suivant au codon d&#x26;#39;initiation

In dem Bem&uuml;hen, das Wissen um die Regeln zu verbessern, die die Wirkung der fr&uuml;hen ORF Sequenzen auf &Uuml;bersetzung Effizienz zu leiten, haben wir den Effekt der Paare von den sechs Arginin Codons die zweite und dritte Pl&auml;tze &uuml;ber die Expression des LacZ Varianten analysiert. W&auml;hrend die Paare von identischen AGA oder AGG Codons f&uuml;r die Genexpression g&uuml;nstig waren, wurden identische Paare von jedem der vier CGN-Codons sehr ineffizient. Dieses Ergebnis war unerwartet, Tandems der AGA oder AGG Codons befindet sich in weitere interne gen Positionen mangelhafte Ausdruck hervorrufen, w&auml;hrend intern befindet sich CGU und CGC die am h&auml;ufigsten vorkommenden sind und effizient &uuml;bersetzt Arginin Codons. Die Kombinationen der AGA und jedem der CGN-Codons f&uuml;hrte in der Regel effiziente Preise von LacZ Ausdruck unabh&auml;ngig von der konvertierende-tRNA-Neigung zu distanzieren von dem Ribosom. Daher wurde die Variante beherbergen das Paar von AGA Codons ausgedr&uuml;ckt so effizient wie die Variante mit ein paar AAA-Codons in den gleichen Positionen, eine Konfiguration als einer der die h&auml;ufigsten und effizient bei der Genexpression gemeldet. Wir erkl&auml;ren diese Ergebnisse, wenn man davon ausgeht, dass das Vorhandensein von Adenines in diesen fr&uuml;hen Positionen verbessern Genexpression. Erwartungsgem&auml;&szlig; korreliert die spezifischen mRNA-Stufen mit der Intensit&auml;t des LacZ Ausdruck f&uuml;r jede Variante. Die Induktion von LacZ-AGA-AGA-gen in pth Zellen angesammelt jedoch peptidyl-tRNA(Arg4) sowie eine kurze 5&#39;-proximale LacZ mRNA Fragment Ribosom abw&uuml;rgen wegen Ersch&ouml;pfung der aminoacylated-tRNA(Arg4) vorschlagen.

Effiziente Ausdruck von Genvarianten, die AGA Codons neben der Einleitung-Codon Hafen.

Nel tentativo di migliorare le conoscenze sulle regole che l&#39;effetto delle prime sequenze ORF sull&#39;efficienza di traduzione diretto, abbiamo analizzato l&#39;effetto di coppie i codoni di arginina sei presso la seconda e terza posizione sull&#39;espressione di varianti lacZ. Considerando che le coppie identiche AGA o AGG codoni furono favorevoli per l&#39;espressione del gene, coppie identiche di ognuna della quattro codoni CGN erano molto inefficienti. Questo risultato &egrave; stato inaspettato perch&eacute; tandem AGA o AGG codoni situato in pi&ugrave; posizioni interne gene provocano espressione carente mentre internamente situato CGU e CGC sono pi&ugrave; abbondanti e tradotto in modo efficiente i codoni di arginina. Le combinazioni miste di AGA e ognuno i codoni CGN ha provocato solitamente tariffe efficienti di lacZ espressione indipendentemente la propensione peptidilica-tRNA a dissociarsi dal ribosoma. Cos&igrave;, la variante harboring la coppia di codoni AGA &egrave; stata espressa come efficiente come la variante portando una coppia di codoni AAA nelle stesse posizioni, una configurazione segnalato come uno dei pi&ugrave; comuni ed efficienti per l&#39;espressione del gene. Spiegare questi risultati ipotizzando che la presenza di adenine in queste prime posizioni migliorare l&#39;espressione genica. Come previsto, livelli di mRNA specifici correlati con l&#39;intensit&agrave; di espressione lacZ per ogni variante. Tuttavia, l&#39;induzione del gene lacZ AGA AGA in cellule di pth accumulato peptidyl-tRNA(Arg4) cos&igrave; come un breve 5&#39;-frammento di mRNA prossimale lacZ suggerendo ribosoma stallo a causa della deplezione di aminoacylated-tRNA(Arg4).

Efficiente espressione delle varianti del gene che porto codoni AGA accanto al codone di avvio.

&#x7FFB;&#x8A33;&#x52B9;&#x7387;&#x306E;&#x65E9;&#x671F;ORF&#x914D;&#x5217;&#x306E;&#x52B9;&#x679C;&#x3092;&#x5C0E;&#x304F;&#x30EB;&#x30FC;&#x30EB;&#x306B;&#x3064;&#x3044;&#x3066;&#x306E;&#x77E5;&#x8B58;&#x3092;&#x5411;&#x4E0A;&#x3055;&#x305B;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x52AA;&#x529B;&#x3067;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306F;lacZ&#x5909;&#x7570;&#x4F53;&#x306E;&#x767A;&#x73FE;&#x306B;2&#x756A;&#x76EE;&#x3068;3&#x756A;&#x76EE;&#x306E;&#x4F4D;&#x7F6E;&#x3067;6&#x30A2;&#x30EB;&#x30AE;&#x30CB;&#x30F3;&#x306E;&#x30B3;&#x30C9;&#x30F3;&#x306E;&#x30DA;&#x30A2;&#x306E;&#x52B9;&#x679C;&#x3092;&#x5206;&#x6790;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x540C;&#x3058;AGA&#x3084;AGG&#x30B3;&#x30C9;&#x30F3;&#x306E;&#x30DA;&#x30A2;&#x306F;&#x3001;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x767A;&#x73FE;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x826F;&#x597D;&#x3067;&#x3042;&#x3063;&#x305F;&#x306E;&#x306B;&#x5BFE;&#x3057;&#x3001;4&#x3064;&#x306E;CGN&#x30B3;&#x30C9;&#x30F3;&#x306E;&#x305D;&#x308C;&#x305E;&#x308C;&#x306E;&#x540C;&#x4E00;&#x306E;&#x30DA;&#x30A2;&#x306F;&#x975E;&#x5E38;&#x306B;&#x975E;&#x52B9;&#x7387;&#x7684;&#x3067;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x4EE5;&#x4E0A;&#x306E;&#x5185;&#x90E8;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x4F4D;&#x7F6E;&#x306B;&#x914D;&#x7F6E;AGA&#x3084;AGG&#x30B3;&#x30C9;&#x30F3;&#x306E;&#x30BF;&#x30F3;&#x30C7;&#x30E0;&#x306F;&#x3001;&#x5185;&#x90E8;&#x306B;&#x4F4D;&#x7F6E;CGU&#x3068;CGC&#x306A;&#x304C;&#x3089;&#x6B20;&#x640D;&#x306E;&#x767A;&#x73FE;&#x3092;&#x8A98;&#x767A;&#x3059;&#x308B;&#x306E;&#x3067;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x306F;&#x4E88;&#x60F3;&#x5916;&#x3067;&#x3042;&#x3063;&#x305F;&#x6700;&#x3082;&#x8C4A;&#x5BCC;&#x304B;&#x3064;&#x52B9;&#x7387;&#x7684;&#x306B;&#x7FFB;&#x8A33;&#x30A2;&#x30EB;&#x30AE;&#x30CB;&#x30F3;&#x30B3;&#x30C9;&#x30F3;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3002; AGA&#x3068;CGN&#x306E;&#x305D;&#x308C;&#x305E;&#x308C;&#x306E;&#x6DF7;&#x5408;&#x306E;&#x7D44;&#x307F;&#x5408;&#x308F;&#x305B;&#x306F;&#x3001;&#x901A;&#x5E38;&#x3001;&#x72EC;&#x7ACB;&#x3057;&#x3066;&#x30EA;&#x30DC;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x304B;&#x3089;&#x89E3;&#x96E2;&#x3059;&#x308B;&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30B8;&#x30EB;-tRNA&#x306E;&#x50BE;&#x5411;&#x306E;lacZ&#x767A;&#x73FE;&#x306E;&#x52B9;&#x7387;&#x7684;&#x306A;&#x6599;&#x91D1;&#x3067;&#x7D50;&#x679C;&#x30B3;&#x30C9;&#x30F3;&#x3002;&#x3057;&#x305F;&#x304C;&#x3063;&#x3066;&#x3001;AGA&#x30B3;&#x30C9;&#x30F3;&#x306E;&#x30DA;&#x30A2;&#x3092;&#x4FDD;&#x6709;&#x3059;&#x308B;&#x30D0;&#x30EA;&#x30A2;&#x30F3;&#x30C8;&#x3092;&#x52B9;&#x7387;&#x7684;&#x306B;&#x540C;&#x3058;&#x4F4D;&#x7F6E;&#x306B;AAA&#x30B3;&#x30C9;&#x30F3;&#x306E;&#x30DA;&#x30A2;&#x3092;&#x904B;&#x3076;&#x30D0;&#x30EA;&#x30A2;&#x30F3;&#x30C8;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x8868;&#x73FE;&#x3055;&#x200B;&#x200B;&#x308C;&#x3001;&#x30B3;&#x30F3;&#x30D5;&#x30A3;&#x30AE;&#x30E5;&#x30EC;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x306F;&#x3001;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x767A;&#x73FE;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x6700;&#x3082;&#x4E00;&#x822C;&#x7684;&#x304B;&#x3064;&#x52B9;&#x7387;&#x7684;&#x306A;&#x306E;&#x4E00;&#x3064;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x5831;&#x544A;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x521D;&#x671F;&#x306E;&#x4F4D;&#x7F6E;&#x306B;&#x30A2;&#x30C7;&#x30CB;&#x30F3;&#x306E;&#x5B58;&#x5728;&#x304C;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x767A;&#x73FE;&#x3092;&#x5411;&#x4E0A;&#x3055;&#x305B;&#x308B;&#x3068;&#x4EEE;&#x5B9A;&#x3057;&#x3066;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x3092;&#x8AAC;&#x660E;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x4E88;&#x60F3;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x3088;&#x3046;&#x306B;&#x3001;&#x7279;&#x5B9A;&#x306E;mRNA&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x306F;&#x3001;&#x5404;&#x30D0;&#x30EA;&#x30A2;&#x30F3;&#x30C8;&#x306E;lacZ&#x767A;&#x73FE;&#x306E;&#x5F37;&#x3055;&#x3068;&#x76F8;&#x95A2;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x305F;&#x3002;&#x3057;&#x304B;&#x3057;&#x3001;&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30B8;&#x30EB;-tRNA&#x304C;&#x84C4;&#x7A4D;&#x3055;&#x308C;&#x305F;PTH&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;lacZ AGA AGA&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#xFF08;ARG4&#xFF09;&#x306E;&#x8A98;&#x5C0E;&#x3068;&#x540C;&#x69D8;&#x306B;&#x77ED;&#x3044;5&#x26;#39;-&#x8FD1;lacZ&#x306E;mRNA&#x306E;&#x65AD;&#x7247;&#x3092;&#x793A;&#x5506;&#x30EA;&#x30DC;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x306F;&#x3001;&#x30A2;&#x30DF;&#x30CE;&#x30A2;&#x30B7;&#x30EB;-tRNA&#x306E;&#x67AF;&#x6E07;&#xFF08;ARG4&#xFF09;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x5931;&#x901F;&#x3002;

&#x30CF;&#x30FC;&#x30D0;&#x30FC;AGA&#x306F;&#x3001;&#x958B;&#x59CB;&#x30B3;&#x30C9;&#x30F3;&#x306E;&#x96A3;&#x306E;&#x30B3;&#x30C9;&#x30F3;&#x306F;&#x3001;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x5909;&#x7570;&#x306E;&#x52B9;&#x7387;&#x7684;&#x306A;&#x767A;&#x73FE;

&#xBC88;&#xC5ED; &#xD6A8;&#xC728;&#xC5D0; &#xCD08;&#xAE30; ORF &#xC2DC;&#xD000;&#xC2A4;&#xC758; &#xD6A8;&#xACFC; &#xC9C1;&#xC811; &#xD558;&#xB294; &#xADDC;&#xCE59;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC9C0;&#xC2DD;&#xC744; &#xD5A5;&#xC0C1; &#xC2DC;&#xD0A4;&#xAE30; &#xC704;&#xD574;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; lacZ &#xBCC0;&#xC885; &#xC2DD;&#xC5D0;&#xC11C; &#xB450; &#xBC88;&#xC9F8; &#xBC0F; &#xC138; &#xBC88;&#xC9F8; &#xC704;&#xCE58;&#xC5D0; 6 &#xAC1C;&#xC758; &#xC544;&#xB974;&#xAE30;&#xB2CC; codons &#xC30D;&#xC758; &#xD6A8;&#xACFC; &#xBD84;&#xC11D;. &#xB3D9;&#xC77C;&#xD55C; AGA &#xB610;&#xB294; AGG codons &#xC30D; &#xD588;&#xB2E4; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xBC1C;&#xD604;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC720;&#xB9AC;&#xD55C; &#xBC18;&#xBA74; &#xAC01; 4 CGN codons&#xC758; &#xB3D9;&#xC77C;&#xD55C; &#xC30D; &#xB9E4;&#xC6B0; &#xD6A8;&#xC728;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xB418;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC558;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774; &#xACB0;&#xACFC; &#xC608;&#xC0C1; &#xB418;&#xB294; &#xB54C;&#xBB38;&#xC5D0; &#xB354; &#xB9CE;&#xC740; &#xB0B4;&#xBD80; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xC704;&#xCE58;&#xC5D0; &#xC788;&#xB294; AGA &#xB610;&#xB294; AGG codons &#xD0E0;&#xB364; &#xC790;&#xADF9; &#xACB0;&#xD54D; &#xC2DD; &#xB3D9;&#xC548; &#xB0B4;&#xBD80;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xC704;&#xCE58;&#xD55C; &#xACF3;&#xACFC; CGC &#xAC00;&#xC7A5; &#xD48D;&#xBD80;&#xD55C; &#xD558; &#xACE0; &#xD6A8;&#xC728;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xC544;&#xB974;&#xAE30;&#xB2CC; codons &#xBC88;&#xC5ED;. AGA&#xC758; &#xD63C;&#xD569;&#xB41C; &#xC870;&#xD569; &#xBC0F; &#xAC01; CGN codons peptidyl Trna&#xB294; &#xB9AC;&#xBCF4;&#xC19C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD574;&#xB9AC; &#xACBD;&#xD5A5;&#xC774; &#xBCC4;&#xB3C4;&#xB85C; lacZ &#xC2DD;&#xC758; &#xD6A8;&#xC728;&#xC801;&#xC778; &#xC18D;&#xB3C4; &#xACB0;&#xACFC; &#xC77C;&#xBC18;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C;. &#xB530;&#xB77C;&#xC11C;, AGA codons &#xC30D; &#xC740;&#xB2C9; &#xBCC0;&#xD615; &#xAD6C;&#xC131; &#xC911; &#xAC00;&#xC7A5; &#xC77C;&#xBC18;&#xC801;&#xC774; &#xACE0; &#xD6A8;&#xC728;&#xC801;&#xC778; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xBC1C;&#xD604;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xAC83;&#xC73C;&#xB85C; &#xBCF4;&#xACE0; &#xB3D9;&#xC77C;&#xD55C; &#xC704;&#xCE58;&#xC5D0;&#xC11C; AAA codons &#xCF24;&#xB808; &#xB4E4;&#xACE0; &#xBCC0;&#xD615;&#xC73C;&#xB85C; &#xD6A8;&#xC728;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xD45C;&#xD604; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xACB0;&#xACFC; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xCD08;&#xAE30; &#xC704;&#xCE58;&#xC5D0;&#xC11C; adenines&#xC758; &#xC874;&#xC7AC; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xBC1C;&#xD604;&#xC744; &#xD5A5;&#xC0C1; &#xC124;&#xBA85;. &#xC608;&#xC0C1; &#xB300;&#xB85C;, &#xAC01; &#xBCC0;&#xD615;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; lacZ &#xD45C;&#xD604;&#xC758; &#xAC15;&#xB3C4;&#xC640; &#xD2B9;&#xC815; mRNA &#xC218;&#xC900; &#xC0C1;&#xAD00; &#xB41C;&#xB2E4;. &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098;, pth &#xC140;&#xC5D0; &#xC788;&#xB294; lacZ AGA AGA &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xC720;&#xB3C4; &#xCD95;&#xC801; &#xB9AC;&#xBCF4;&#xC19C; Aminoacylated-trna(arg4)&#xC758; &#xACE0;&#xAC08;&#xC73C;&#xB85C; &#xC778;&#xD574; &#xC5F0;&#xAE30; &#xC81C;&#xC548; &#xC9E7;&#xC740; 5&#39;-&#xADFC; lacZ mRNA &#xC870;&#xAC01;&#xC73C;&#xB85C; peptidyl-tRNA(Arg4).

&#xD6A8;&#xC728;&#xC801;&#xC778; &#xD558;&#xBC84; &#xAC1C;&#xC2DC; codon &#xC606; AGA codons &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xBCC0;&#xD615; &#xC2DD;.

En un esfuerzo por mejorar el conocimiento de las reglas que dirigen el efecto de las primeras secuencias de ORF en la eficiencia de la traducci&#xF3;n, hemos analizado el efecto de los pares de los seis codones de arginina en las posiciones segunda y tercera en la expresi&#xF3;n de las variantes lacZ. Considerando que los pares de codones id&#xE9;nticos AGA o AGG fueron favorables para la expresi&#xF3;n de genes, pares id&#xE9;nticos de cada uno de los cuatro codones CGN eran muy ineficiente. Este resultado fue inesperado porque t&#xE1;ndems de codones AGA o AGG localizado en posiciones m&#xE1;s gen interno expresi&#xF3;n provocan deficiente mientras internamente situado UGE y CGC son los codones de arginina m&#xE1;s abundantes y traducido eficientemente. Las combinaciones mixtas de AGA y cada una de la CGN codones generalmente como resultado tasas eficientes de expresi&#xF3;n de lacZ independientemente de la propensi&#xF3;n peptidil-ARNt para disociar del ribosoma. As&#xED;, la variante que alberga el par de codones AGA se expres&#xF3; tan eficientemente como la variante que lleva un par de codones AAA en las mismas posiciones, una configuraci&#xF3;n reportado como uno de los m&#xE1;s comunes y eficiente para la expresi&#xF3;n g&#xE9;nica. Se explica estos resultados suponiendo que la presencia de adeninas en estas posiciones iniciales potenciar la expresi&#xF3;n g&#xE9;nica. Como era de esperar, los niveles de mRNA espec&#xED;ficos correlacionados con la intensidad de expresi&#xF3;n de lacZ de cada variante. Sin embargo, la inducci&#xF3;n de lacZ AGA AGA gen en las c&#xE9;lulas Pth acumulado peptidil-ARNt (ARG4) as&#xED; como un corto 5&#x26;#39;-proximal fragmento ARNm lacZ sugiriendo ribosoma atascado debido al agotamiento de aminoacylated-ARNt (ARG4).

La expresi&#xF3;n eficaz de variantes gen&#xE9;ticas que Harbour AGA codones Junto al cod&#xF3;n de iniciaci&#xF3;n

&#x82BD;&#x5B62;&#x6746;&#x83CC;&#x67AF;&#x8349;&#x9632;&#x9A97;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x53EF;&#x8C03;&#x8282;&#x7684;&#x8272;&#x6C28;&#x9178;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x9677;&#x9631;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x5C06;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x5230;&#x8DE8;&#x56FD;&#x6FC0;&#x8FDB;&#x515A;&#x64CD;&#x7EB5;&#x5B50;&#x9886;&#x8896; RNA &#x548C;&#x4FC3;&#x8FDB;&#x8F6C;&#x5F55;&#x7EC8;&#x6B62;&#x7684;&#x80FD;&#x529B;&#x3002;&#x5728;&#x5408;&#x6210;&#x53D7;&#x4ECB;&#x5BFC;&#x548C;&#x7FFB;&#x8BD1;&#x90FD;&#x672A;&#x5145;&#x7535; tRNA(Trp)&#x3002;&#x5728;&#x6B64;&#x7814;&#x7A76;&#x4E2D;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x63A2;&#x8BA8;&#x4E86;&#x5728;&#x5408;&#x6210;&#x548C; tRNA(Trp) &#x5145;&#x7535;&#x8C03;&#x89E3;&#x5BF9;&#x8272;&#x6C28;&#x9178;&#x9965;&#x997F;&#x7684;&#x751F;&#x7406;&#x53CD;&#x5E94;&#x4E2D;&#x7684;&#x89D2;&#x8272;&#x3002;&#x91CE;&#x751F;&#x578B;&#x6587;&#x5316;&#x4E2D;&#x52A0;&#x5165;&#x8FC7;&#x91CF;&#x7684;&#x82EF;&#x4E19;&#x6C28;&#x9178;&#x5E26;&#x7535;&#x7684; tRNA(Trp) &#x6C34;&#x5E73; 80%&#x51CF;&#x81F3; 40%&#xFF1B;&#x6536;&#x8D39;&#x7684;&#x6C34;&#x5E73;&#x8FDB;&#x4E00;&#x6B65;&#xFF0C;&#x964D;&#x4F4E;&#x81F3; 25%&#xFF0C;&#x5728;&#x7F3A;&#x9677;&#x7A81;&#x53D8;&#x4F53;&#x3002;&#x6DFB;&#x52A0;&#x4E0E;&#x82EF;&#x4E19;&#x6C28;&#x9178;&#x8272;&#x6C28;&#x9178;&#x589E;&#x52A0;&#x5E26;&#x7535;&#x7684; tRNA(Trp) &#x6C34;&#x5E73;&#xFF0C;&#x72EC;&#x81EA;&#xFF0C;&#x6DFB;&#x52A0;&#x65F6;&#x6697;&#x793A;&#xFF0C;&#x82EF;&#x4E19;&#x6C28;&#x9178;&#x3001; &#x8272;&#x6C28;&#x9178; tRNA(Trp) &#x5145;&#x7535;&#x4F9B;&#x5E94;&#x51CF;&#x5C11;&#x3002;&#x5E26;&#x7535;&#x7684; tRNA(Trp) &#x6C34;&#x5E73;&#x5728;&#x589E;&#x957F;&#x4E0E;&#x6DFB;&#x52A0;&#x82EF;&#x4E19;&#x6C28;&#x9178;&#x671F;&#x95F4;&#x89C2;&#x5BDF;&#x5230;&#x7684;&#x53D8;&#x5316;&#x662F;&#x589E;&#x52A0;&#x8272;&#x6C28;&#x9178;&#x4EE3;&#x8C22;&#x7684;&#x57FA;&#x56E0;&#x7684;&#x8F6C;&#x5F55;&#x4E0E;&#x76F8;&#x5173;&#x8054;&#x3002;&#x8425;&#x517B;&#x8F6C;&#x53D8;&#x5B9E;&#x9A8C;&#xFF0C;&#x4ECE;&#x5A92;&#x4F53;&#x5305;&#x542B;&#x5230;&#x4ECB;&#x8D28;&#x4E0E;&#x82EF;&#x4E19;&#x6C28;&#x9178;&#x548C;&#x916A;&#x6C28;&#x9178;&#x3001; &#x8272;&#x6C28;&#x9178;&#x8868;&#x660E;&#x91CE;&#x751F;&#x578B;&#x6587;&#x5316;&#x9010;&#x6E10;&#x51CF;&#x5C11;&#x5176;&#x5E26;&#x7535;&#x7684; tRNA(Trp) &#x6C34;&#x5E73;&#x3002;&#x5F53;&#x8FD9;&#x79CD;&#x8F6C;&#x53D8;&#x6267;&#x884C;&#x4E0E;&#x5728;&#x7F3A;&#x9677;&#x7A81;&#x53D8;&#x4F53;&#x65F6;&#xFF0C;&#x5E26;&#x7535;&#x7684; tRNA(Trp) &#x6C34;&#x5E73;&#x751A;&#x81F3;&#x8FDB;&#x4E00;&#x6B65;&#x964D;&#x4F4E;&#x3002;&#x589E;&#x957F;&#x7387;&#x7684;&#x91CE;&#x751F;&#x578B;&#x548C;&#x7A81;&#x53D8;&#x682A;&#x4E0A;&#x6709;&#x4E0D;&#x8DB3;&#x4E4B;&#x5904;&#x6216;&#x9677;&#x9631;&#x6216;&#x9057;&#x4F20;&#x6027; AT &#x5728;&#x5404;&#x79CD;&#x5A92;&#x4F53;&#x8FDB;&#x884C;&#x4E86;&#x5BF9;&#x6BD4;&#x3002;&#x9677;&#x9631;&#x7F3A;&#x4E4F;&#x6216; AT &#x751F;&#x4EA7;&#x8FC7;&#x5269;&#x5BFC;&#x81F4;&#x82EF;&#x4E19;&#x6C28;&#x9178;&#x6B63;&#x5728;&#x589E;&#x957F;&#x6240;&#x9700;&#x7684;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7814;&#x7A76;&#x7ED3;&#x679C;&#x63ED;&#x793A; AT &#x7684;&#x91CD;&#x8981;&#x6027;&#x5728;&#x4E0E;&#x5E26;&#x7535; tRNA(Trp) &#x4F5C;&#x4E3A;&#x5173;&#x952E;&#x4FE1;&#x53F7;&#x8C03;&#x8282;&#x751F;&#x4EA7;&#x6C34;&#x5E73;&#x7684;&#x82EF;&#x4E19;&#x6C28;&#x9178;&#x5408;&#x6210;&#x8272;&#x6C28;&#x9178;&#x7684;&#x5408;&#x6210;&#x4E4B;&#x95F4;&#x4FDD;&#x6301;&#x5E73;&#x8861;&#x3002;

&#x9632;&#x9A97;&#x86CB;&#x767D;&#x6D3B;&#x6027;&#x548C; tRNA(Trp) &#x5145;&#x7535;&#x5BF9;&#x8DE8;&#x56FD;&#x6FC0;&#x8FDB;&#x515A;&#x64CD;&#x7EB5;&#x5B50;&#x8868;&#x8FBE;&#x7684;&#x67AF;&#x8349;&#x82BD;&#x5B62;&#x6746;&#x83CC;&#x7684;&#x751F;&#x7406;&#x6548;&#x5E94;&#x3002;

The Bacillus subtilis anti-TRAP protein regulates the ability of the tryptophan-activated TRAP protein to bind to trp operon leader RNA and promote transcription termination. AT synthesis is regulated both transcriptionally and translationally by uncharged tRNA(Trp). In this study, we examined the roles of AT synthesis and tRNA(Trp) charging in mediating physiological responses to tryptophan starvation. Adding excess phenylalanine to wild-type cultures reduced the charged tRNA(Trp) level from 80% to 40%; the charged level decreased further, to 25%, in an AT-deficient mutant. Adding tryptophan with phenylalanine increased the charged tRNA(Trp) level, implying that phenylalanine, when added alone, reduces the availability of tryptophan for tRNA(Trp) charging. Changes in the charged tRNA(Trp) level observed during growth with added phenylalanine were associated with increased transcription of the genes of tryptophan metabolism. Nutritional shift experiments, from a medium containing tryptophan to a medium with phenylalanine and tyrosine, showed that wild-type cultures gradually reduced their charged tRNA(Trp) level. When this shift was performed with an AT-deficient mutant, the charged tRNA(Trp) level decreased even further. Growth rates for wild-type and mutant strains deficient in AT or TRAP or that overproduce AT were compared in various media. A lack of TRAP or overproduction of AT resulted in phenylalanine being required for growth. These findings reveal the importance of AT in maintaining a balance between the synthesis of tryptophan versus the synthesis of phenylalanine, with the level of charged tRNA(Trp) acting as the crucial signal regulating AT production.

Physiological effects of anti-TRAP protein activity and tRNA(Trp) charging on trp operon expression in Bacillus subtilis.

Bacillus subtilis anti-pincement prot&#xE9;ine r&#xE9;gule la capacit&#xE9; de la prot&#xE9;ine TRAP tryptophane-activ&#xE9; pour se lier &#xE0; l&#x26;#39;ARN op&#xE9;ron trp leader et de promouvoir de terminaison de transcription. &#xC0; la synth&#xE8;se est r&#xE9;gul&#xE9;e &#xE0; la fois la transcription et de translation par non charg&#xE9; ARNt (Trp). Dans cette &#xE9;tude, nous avons examin&#xE9; les r&#xF4;les d&#x26;#39;AT synth&#xE8;se et ARNt (Trp) de charge dans la m&#xE9;diation des r&#xE9;ponses physiologiques &#xE0; la famine tryptophane. Ajout ph&#xE9;nylalanine en exc&#xE8;s de type sauvage cultures r&#xE9;duit la charge ARNt (Trp) au niveau de 80% &#xE0; 40%, le niveau de charge a encore diminu&#xE9;, &#xE0; 25%, dans un mutant AT-d&#xE9;ficient. Ajout du tryptophane avec la ph&#xE9;nylalanine augment&#xE9; la charge ARNt (Trp) niveau, ce qui implique que la ph&#xE9;nylalanine, lorsqu&#x26;#39;il est ajout&#xE9; seul, r&#xE9;duit la disponibilit&#xE9; du tryptophane pour ARNt (Trp) de charge. Les variations de la charge ARNt (Trp) niveau observ&#xE9; pendant la croissance avec la ph&#xE9;nylalanine ajout&#xE9; ont &#xE9;t&#xE9; associ&#xE9;s &#xE0; une transcription accrue des g&#xE8;nes du m&#xE9;tabolisme du tryptophane. Exp&#xE9;riences de retard sur nutritionnels, d&#x26;#39;un milieu contenant du tryptophane dans un milieu avec la ph&#xE9;nylalanine et la tyrosine, a montr&#xE9; que les cultures de type sauvage progressivement r&#xE9;duit leur charge ARNt (Trp) niveau. Lorsque ce changement a &#xE9;t&#xE9; effectu&#xE9; avec un mutant AT-d&#xE9;ficient, la charg&#xE9;e ARNt (Trp) baisse du niveau encore plus loin. Les taux de croissance des souches de type sauvage et mutant d&#xE9;ficient en AT ou TRAP ou que la surproduction AT ont &#xE9;t&#xE9; compar&#xE9;s dans divers m&#xE9;dias. Un manque de TRAP ou de surproduction d&#x26;#39;AT a entra&#xEE;n&#xE9; en ph&#xE9;nylalanine &#xE9;tant n&#xE9;cessaire &#xE0; la croissance. Ces r&#xE9;sultats r&#xE9;v&#xE8;lent l&#x26;#39;importance de l&#x26;#39;AT dans le maintien d&#x26;#39;un &#xE9;quilibre entre la synth&#xE8;se du tryptophane par rapport &#xE0; la synth&#xE8;se de ph&#xE9;nylalanine, avec le niveau de charge ARNt (Trp) agissant en tant que le signal de r&#xE9;gulation essentiel &#xE0; la production.

Effets physiologiques de l&#x26;#39;activit&#xE9; anti-prot&#xE9;ine TRAP et ARNT (Trp) Charge sur op&#xE9;ron trp expression dans Bacillus subtilis

Das Bacillus Subtilis anti-TRAP Protein reguliert die F&auml;higkeit des Proteins TRAP Tryptophan aktivierten Trp Operon F&uuml;hrer RNA binden und f&ouml;rdern Transkription K&uuml;ndigung. Synthese ist transcriptionally und translationally ungeladenen tRNA(Trp) geregelt. In dieser Studie wurden die Rollen von Synthese und tRNA(Trp) bei der Vermittlung von physiologischer Reaktionen, die zu einer Hungersnot Tryptophan aufladen. Hinzuf&uuml;gen von &uuml;bersch&uuml;ssigen Phenylalanin zu Wildtyp Kulturen reduziert die geladenen tRNA(Trp)-Ebene von 80 % auf 40 %; die aufgeladene Ebene ging weiter, auf 25 %, in einen AT-Mangel-Mutant. Hinzuf&uuml;gen, dass Tryptophan mit Phenylalanin die aufgeladene tRNA(Trp) erh&ouml;ht, reduziert was impliziert, dass Phenylalanin, wenn allein hinzugef&uuml;gt die Verf&uuml;gbarkeit von Tryptophan f&uuml;r die Erhebung von tRNA(Trp). Ver&auml;nderungen des aufgeladenen tRNA(Trp) w&auml;hrend des Wachstums mit zus&auml;tzlichen Phenylalanin beobachtet wurden mit erh&ouml;hter Transkription der Gene des Tryptophan-Stoffwechsel. Ern&auml;hrungs-UMSCHALT-Experimente, von einem Medium auf ein Medium mit Phenylalanin und Tyrosin, Tryptophan enthalten zeigten, dass Wildtyp Kulturen allm&auml;hlich ihre geladenen tRNA(Trp)-Ebene. Wenn diese Verschiebung mit einer AT-Mangel-Mutant durchgef&uuml;hrt wurde, verringert die geladenen tRNA(Trp)-Ebene noch weiter. Wachstumsraten f&uuml;r Wildtyp und Mutanten St&auml;mme einen Mangel an AT oder TRAP oder die &Uuml;berproduktion AT wurden in verschiedenen Medien verglichen. Mangelnde TRAP oder &Uuml;berproduktion von AT f&uuml;hrte Phenylalanin wird ben&ouml;tigt f&uuml;r Wachstum. Diese Ergebnisse zeigen die Bedeutung des AT in der Aufrechterhaltung eines Gleichgewichts zwischen der Synthese von Tryptophan gegen die Synthese von Phenylalanin, mit dem aufgeladenen tRNA(Trp) als das entscheidende Signal zur Regelung bei Produktion.

Physiologische Wirkung von anti-TRAP Protein Aktivit&auml;t und tRNA(Trp), die Erhebung auf Trp Operon Ausdruck in Bacillus Subtilis.

La proteina anti-trappola di Bacillus subtilis regola la capacit&agrave; della proteina TRAP attivati dal triptofano per associare al leader di Operone trp RNA e promuovere la terminazione della trascrizione. IN sintesi sono regolata sia transcriptionally e translationally da tRNA(Trp) uncharged. In questo studio, abbiamo esaminato il ruolo di sintesi e tRNA(Trp) di ricarica nella mediazione di risposte fisiologiche alla fame di triptofano. Aggiunta di fenilalanina in eccesso al wild-type culture ridotto il livello di carica tRNA(Trp) dall&#39;80% al 40%; il livello di caricato &egrave; diminuito ulteriormente, al 25%, in un mutante AT-carenti. Aggiunta di triptofano con fenilalanina aumentato il livello di carica tRNA(Trp), implicando che fenilalanina, quando aggiunto da solo, riduce la disponibilit&agrave; di triptofano per la carica di tRNA(Trp). Modifiche del livello di carica tRNA(Trp) osservati durante la crescita con aggiunta fenilalanina sono state associate con aumento trascrizione dei geni del metabolismo del triptofano. Esperimenti nutrizionali MAIUSC, da un mezzo contenente triptofano a un mezzo con fenilalanina e tirosina, ha mostrato che wild-type culture gradualmente ridotto il livello di carica tRNA(Trp). Quando questo spostamento &egrave; stato eseguito con un mutante AT-carenti, il livello di carica tRNA(Trp) &egrave; diminuito ulteriormente. Tassi di crescita per ceppi wild-type e mutanti carente in AT o trappola o che sovrapproduzione AT sono stati confrontati in vari media. Una mancanza di trappola o sovrapproduzione di AT portato in fenilalanina essendo necessaria per la crescita. Questi risultati rivelano l&#39;importanza di AT nel mantenere un equilibrio tra la sintesi del triptofano versus la sintesi di fenilalanina, con il livello di carica tRNA(Trp) che agisce come segnale cruciale che regolano in produzione.

Effetti fisiologici dell&#39;attivit&agrave; della proteina anti-trappola e tRNA(Trp) ricarica su espressione Operone trp in Bacillus subtilis.

&#x67AF;&#x8349;&#x83CC;&#x3001;&#x6297;TRAP&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306F;&#x3001;trp&#x30AA;&#x30DA;&#x30ED;&#x30F3;&#x30EA;&#x30FC;&#x30C0;&#x30FC;RNA&#x306B;&#x7D50;&#x5408;&#x3057;&#x3001;&#x8EE2;&#x5199;&#x7D42;&#x7D50;&#x3092;&#x4FC3;&#x9032;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x30C8;&#x30EA;&#x30D7;&#x30C8;&#x30D5;&#x30A1;&#x30F3;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;TRAP&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x80FD;&#x529B;&#x3092;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x3059;&#x308B;&#x3002;&#x8AD6;&#x7406;&#x5408;&#x6210;&#x6642;&#x306B;&#x306F;&#x8377;&#x96FB;tRNA&#x306F;&#xFF08;TRP&#xFF09;&#x306B;&#x3088;&#x308A;&#x3001;&#x4E21;&#x65B9;&#x306E;&#x8EE2;&#x5199;&#x3068;&#x7FFB;&#x8A33;&#x5F8C;&#x898F;&#x5236;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x672C;&#x7814;&#x7A76;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x30C8;&#x30EA;&#x30D7;&#x30C8;&#x30D5;&#x30A1;&#x30F3;&#x98E2;&#x9913;&#x306B;&#x751F;&#x7406;&#x5B66;&#x7684;&#x53CD;&#x5FDC;&#x3092;&#x5A92;&#x4ECB;&#x3059;&#x308B;&#x5145;&#x96FB;&#xFF08;TRP&#xFF09;&#x306E;&#x5408;&#x6210;&#x3068;tRNA AT&#x306E;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x691C;&#x8A0E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x91CE;&#x751F;&#x578B;&#x57F9;&#x990A;&#x6DB2;&#x306B;&#x904E;&#x5270;&#x306A;&#x30D5;&#x30A7;&#x30CB;&#x30EB;&#x30A2;&#x30E9;&#x30CB;&#x30F3;&#x3092;&#x8FFD;&#x52A0;&#x3059;&#x308B;&#x3068;&#x3001;80&#xFF05;&#x304B;&#x3089;40&#xFF05;&#x306B;&#x5145;&#x96FB;&#x306E;tRNA&#xFF08;Trp&#xFF09;&#x306E;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x3092;&#x6E1B;&#x5C11;&#x3055;&#x305B;&#x3001;&#x5145;&#x96FB;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x306F;&#x3001;AT-&#x6B20;&#x640D;&#x5909;&#x7570;&#x4F53;&#x3067;&#x3001;25&#xFF05;&#x306B;&#x3001;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x6E1B;&#x5C11;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x30D5;&#x30A7;&#x30CB;&#x30EB;&#x30A2;&#x30E9;&#x30CB;&#x30F3;&#x3068;&#x30C8;&#x30EA;&#x30D7;&#x30C8;&#x30D5;&#x30A1;&#x30F3;&#x3092;&#x8FFD;&#x52A0;&#x3059;&#x308B;&#x3068;&#x3001;&#x30D5;&#x30A7;&#x30CB;&#x30EB;&#x30A2;&#x30E9;&#x30CB;&#x30F3;&#x3001;&#x5358;&#x72EC;&#x3067;&#x8FFD;&#x52A0;&#x3057;&#x305F;&#x3068;&#x304D;&#x306B;&#x3001;&#x5145;&#x96FB;&#x306E;tRNA&#xFF08;TRP&#xFF09;&#x306F;&#x30C8;&#x30EA;&#x30D7;&#x30C8;&#x30D5;&#x30A1;&#x30F3;&#x306E;&#x6709;&#x7528;&#x6027;&#x3092;&#x6E1B;&#x5C11;&#x3055;&#x305B;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x610F;&#x5473;&#x3057;&#x3001;&#x5145;&#x96FB;&#x306E;tRNA&#xFF08;Trp&#xFF09;&#x306E;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x3092;&#x5897;&#x52A0;&#x3055;&#x305B;&#x305F;&#x3002;&#x8FFD;&#x52A0;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x30D5;&#x30A7;&#x30CB;&#x30EB;&#x30A2;&#x30E9;&#x30CB;&#x30F3;&#x306E;&#x6210;&#x9577;&#x4E2D;&#x306B;&#x89B3;&#x5BDF;&#x3055;&#x8377;&#x96FB;tRNA&#x304C;&#xFF08;Trp&#xFF09;&#x306E;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x306E;&#x5909;&#x5316;&#x306F;&#x3001;&#x30C8;&#x30EA;&#x30D7;&#x30C8;&#x30D5;&#x30A1;&#x30F3;&#x4EE3;&#x8B1D;&#x306E;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x8EE2;&#x5199;&#x306E;&#x5897;&#x52A0;&#x3068;&#x95A2;&#x9023;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x305F;&#x3002;&#x30D5;&#x30A7;&#x30CB;&#x30EB;&#x30A2;&#x30E9;&#x30CB;&#x30F3;&#x3068;&#x30C1;&#x30ED;&#x30B7;&#x30F3;&#x3092;&#x57F9;&#x5730;&#x306B;&#x30C8;&#x30EA;&#x30D7;&#x30C8;&#x30D5;&#x30A1;&#x30F3;&#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x57F9;&#x5730;&#x304B;&#x3089;&#x6804;&#x990A;&#x306E;&#x30B7;&#x30D5;&#x30C8;&#x306E;&#x5B9F;&#x9A13;&#x306F;&#x3001;&#x305D;&#x306E;&#x91CE;&#x751F;&#x578B;&#x306E;&#x6587;&#x5316;&#x304C;&#x5F90;&#x3005;&#x306B;&#x5145;&#x96FB;&#x306E;tRNA&#xFF08;Trp&#xFF09;&#x306E;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x304C;&#x6E1B;&#x5C11;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x30B7;&#x30D5;&#x30C8;&#x306F;AT-&#x6B20;&#x640D;&#x5909;&#x7570;&#x4F53;&#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x3066;&#x884C;&#x3063;&#x305F;&#x6642;&#x3001;&#x8AB2;&#x91D1;&#x306E;tRNA&#xFF08;Trp&#xFF09;&#x306E;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x306F;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x4F4E;&#x4E0B;&#x3057;&#x305F;&#x3002; AT&#x307E;&#x305F;&#x306F;TRAP&#x307E;&#x305F;&#x306F;AT&#x305D;&#x306E;&#x904E;&#x5270;&#x6B20;&#x640D;&#x91CE;&#x751F;&#x578B;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x5909;&#x7570;&#x682A;&#x306E;&#x6210;&#x9577;&#x7387;&#x306F;&#x69D8;&#x3005;&#x306A;&#x30E1;&#x30C7;&#x30A3;&#x30A2;&#x3067;&#x6BD4;&#x8F03;&#x3057;&#x305F;&#x3002; TRAP&#x307E;&#x305F;&#x306F;AT&#x306E;&#x904E;&#x5270;&#x7523;&#x751F;&#x306E;&#x6B20;&#x5982;&#x304C;&#x6210;&#x9577;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x5FC5;&#x8981;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x30D5;&#x30A7;&#x30CB;&#x30EB;&#x30A2;&#x30E9;&#x30CB;&#x30F3;&#x3092;&#x3082;&#x305F;&#x3089;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x77E5;&#x898B;&#x306F;&#x3001;&#x88FD;&#x9020;&#x6642;&#x306B;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x3059;&#x308B;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x4F5C;&#x7528;&#x3059;&#x308B;&#x8377;&#x96FB;tRNA&#x304C;&#xFF08;TRP&#xFF09;&#x306E;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x3067;&#x3001;&#x30D5;&#x30A7;&#x30CB;&#x30EB;&#x30A2;&#x30E9;&#x30CB;&#x30F3;&#x306E;&#x5408;&#x6210;&#x306B;&#x5BFE;&#x3059;&#x308B;&#x30C8;&#x30EA;&#x30D7;&#x30C8;&#x30D5;&#x30A1;&#x30F3;&#x306E;&#x5408;&#x6210;&#x306E;&#x30D0;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x3092;&#x7DAD;&#x6301;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;AT&#x306E;&#x91CD;&#x8981;&#x6027;&#x3092;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x3057;&#x305F;&#x3002;

&#x67AF;&#x8349;&#x83CC;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;trp&#x30AA;&#x30DA;&#x30ED;&#x30F3;&#x306E;&#x767A;&#x73FE;&#x306B;&#x5145;&#x96FB;&#x751F;&#x7406;&#x7684;&#x6297;TRAP&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x306B;&#x53CA;&#x307C;&#x3059;&#x5F71;&#x97FF;&#x3068;tRNA&#xFF08;TRP&#xFF09;

&#xC0C8; &#xADE0;&#xC758; subtilis &#xC548;&#xD2F0; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; trp &#xC624; &#xD398;&#xB860; &#xC9C0;&#xB3C4;&#xC790; RNA&#xC5D0; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xD558;&#xACE0; &#xD64D;&#xBCF4; &#xB179;&#xC74C; &#xC885;&#xB8CC; &#xD2B8;&#xB9BD;&#xD1A0;&#xD310; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xD2B8;&#xB7A9; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xB2A5;&#xB825;&#xC744; &#xC870;&#xC808; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xD569;&#xC131;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xADDC;&#xC81C; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4; transcriptionally &#xBC0F; translationally uncharged tRNA(Trp). &#xC774; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xD569;&#xC131; &#xBC0F; &#xD2B8;&#xB9BD;&#xD1A0;&#xD310; &#xAE30;&#xC544; &#xC0DD;&#xB9AC; &#xC751;&#xB2F5; &#xC911;&#xC7AC;&#xC5D0; &#xCDA9;&#xC804; &#xD558;&#xB294; Trna(trp)&#xC758; &#xC5ED;&#xD560; &#xAC80;&#xC0AC;. &#xCDA9;&#xC804;&#xB41C; tRNA(Trp) &#xC218;&#xC900; 80%&#xC5D0;&#xC11C; 40%; &#xAC10;&#xC18C; &#xCD08;&#xACFC; &#xD398;&#xB2D0;&#xC54C;&#xB77C;&#xB2CC; &#xC57C;&#xC0DD; &#xD615; &#xBB38;&#xD654;&#xC5D0; &#xCD94;&#xAC00; &#xCDA9;&#xC804;&#xB41C; &#xB808;&#xBCA8; &#xCD94;&#xAC00;, AT &#xBD88;&#xCDA9;&#xBD84; &#xD55C; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774;&#xC5D0;&#xC11C; 25%&#xB85C; &#xAC10;&#xC18C;. &#xD398;&#xB2D0;&#xC54C;&#xB77C;&#xB2CC;&#xACFC; &#xD2B8;&#xB9BD;&#xD1A0;&#xD310; &#xC99D;&#xAC00; &#xAE34;&#xC7A5;&#xB41C; tRNA(Trp) &#xB808;&#xBCA8; &#xCD94;&#xAC00;, tRNA(Trp) &#xCDA9;&#xC804; &#xD2B8;&#xB9BD;&#xD1A0;&#xD310;&#xC758; &#xAC00;&#xC6A9;&#xC131; &#xAC10;&#xC18C;, &#xCD94;&#xAC00; &#xB420; &#xB54C; &#xADF8; &#xD398;&#xB2D0;&#xC54C;&#xB77C;&#xB2CC;&#xC744; &#xC554;&#xC2DC;. &#xCD94;&#xAC00; &#xB41C; &#xD398;&#xB2D0;&#xC54C;&#xB77C;&#xB2CC; &#xD568;&#xAED8; &#xC131;&#xC7A5; &#xD558;&#xB294; &#xB3D9;&#xC548; &#xAD00;&#xCC30; &#xB41C; &#xCDA9;&#xC804;&#xB41C; tRNA(Trp) &#xB808;&#xBCA8;&#xC758; &#xBCC0;&#xD654; &#xD2B8;&#xB9BD;&#xD1A0;&#xD310; &#xBB3C;&#xC9C8; &#xB300;&#xC0AC; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC758; &#xC804;&#xC0AC;&#xB97C; &#xC99D;&#xAC00;&#xC640; &#xAD00;&#xB828; &#xB41C; &#xD588;&#xB2E4;. &#xBCF4;&#xD1B5; &#xD398;&#xB2D0;&#xC54C;&#xB77C;&#xB2CC;&#xACFC; &#xD2F0;&#xB85C;&#xC2E0;, &#xD2B8;&#xB9BD;&#xD1A0;&#xD310;&#xC744; &#xD3EC;&#xD568; &#xD558;&#xB294; &#xC911;&#xAC04;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC601;&#xC591; &#xBCC0;&#xD654; &#xC2E4;&#xD5D8; &#xC57C;&#xC0DD;-&#xD0C0;&#xC785; &#xBB38;&#xD654;&#xAC00; &#xC810;&#xCC28; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC758; &#xCDA9;&#xC804;&#xB41C; tRNA(Trp) &#xC218;&#xC900; &#xAC10;&#xC18C; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC774; &#xBCC0;&#xD654;&#xB294; AT &#xBD88;&#xCDA9;&#xBD84; &#xD55C; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xD568;&#xAED8; &#xC218;&#xD589; &#xD558;&#xBA74; &#xCDA9;&#xC804;&#xB41C; tRNA(Trp) &#xC218;&#xC900; &#xB354;&#xC6B1; &#xAC10;&#xC18C; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC131;&#xC7A5; &#xACB0;&#xD54D;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC57C;&#xC0DD; &#xD615; &#xBC0F; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xCCB4; &#xAE34;&#xC7A5;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC694;&#xAE08; &#xB610;&#xB294; &#xD2B8;&#xB7A9; &#xB610;&#xB294; &#xB2F9;&#xC2E0;&#xACFC; AT &#xB2E4;&#xC591; &#xD55C; &#xBBF8;&#xB514;&#xC5B4;&#xC5D0; &#xBE44;&#xAD50; &#xD588;&#xB2E4;. &#xD2B8;&#xB7A9;&#xC758; &#xBD80;&#xC871; &#xB610;&#xB294; &#xACFC;&#xC789;&#xC758; &#xC131;&#xC7A5;&#xC744; &#xC704;&#xD574; &#xD544;&#xC694;&#xD55C; &#xB418; &#xACE0; &#xD398;&#xB2D0;&#xC54C;&#xB77C;&#xB2CC; &#xADC0;&#xCC29;&#xB418; &#xC5C8; &#xB2E4;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xC5F0;&#xAD6C; &#xACB0;&#xACFC; &#xC0DD;&#xC0B0;&#xC5D0; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xC2E0;&#xD638; &#xC870;&#xC808; &#xC5ED;&#xD560; &#xAE34;&#xC7A5;&#xB41C; tRNA(Trp) &#xC218;&#xC900;&#xC73C;&#xB85C; &#xD398;&#xB2D0;&#xC54C;&#xB77C;&#xB2CC;, &#xD569;&#xC131; &#xB300; &#xD2B8;&#xB9BD;&#xD1A0;&#xD310;&#xC758; &#xD569;&#xC131; &#xC0AC;&#xC774;&#xC758; &#xADE0;&#xD615; &#xC720;&#xC9C0;&#xC5D0; AT&#xC758; &#xC911;&#xC694;&#xC131; &#xACF5;&#xAC1C;.

&#xC548;&#xD2F0; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xD65C;&#xB3D9; &#xBC0F; tRNA(Trp) trp &#xC624; &#xD398;&#xB860; &#xC2DD; &#xC0C8; &#xADE0;&#xC758; subtilis&#xC5D0; &#xCDA9;&#xC804;&#xC758; &#xC0DD;&#xB9AC; &#xD6A8;&#xACFC;.

El Bacillus subtilis antipinzamiento prote&#xED;na regula la capacidad de la prote&#xED;na TRAP tript&#xF3;fano activado para unirse a trp oper&#xF3;n l&#xED;der ARN y promover terminaci&#xF3;n de la transcripci&#xF3;n. De s&#xED;ntesis est&#xE1; regulada tanto por la transcripci&#xF3;n y la traslaci&#xF3;n sin carga tRNA (PRT). En este estudio, hemos examinado el papel de los de s&#xED;ntesis y tRNA (Trp) de carga en la mediaci&#xF3;n de las respuestas fisiol&#xF3;gicas a la inanici&#xF3;n tript&#xF3;fano. Adici&#xF3;n de fenilalanina exceso de tipo salvaje cultivos redujo la carga ARNt (Trp) nivel del 80% al 40%; el nivel cargado se redujo a&#xFA;n m&#xE1;s, a 25%, en un mutante deficiente en AT. Adici&#xF3;n de tript&#xF3;fano con fenilalanina aument&#xF3; la carga ARNt (Trp) nivel, lo que implica que la fenilalanina, cuando se a&#xF1;ade solo, reduce la disponibilidad de tript&#xF3;fano para ARNt (Trp) de carga. Los cambios en la carga ARNt (Trp) nivel observado durante el crecimiento con fenilalanina se a&#xF1;adieron asociado con aumento de la transcripci&#xF3;n de los genes del metabolismo de tript&#xF3;fano. Experimentos nutricionales de desplazamiento, de un medio que contiene tript&#xF3;fano a un medio con fenilalanina y tirosina, mostr&#xF3; que de tipo salvaje cultivos reduce gradualmente su carga ARNt (Trp) nivel. Cuando este cambio se realiz&#xF3; con un mutante AT-deficiente, el ARNt cargado (Trp) nivel reducido a&#xFA;n m&#xE1;s. Las tasas de crecimiento de las cepas de tipo salvaje y mutantes deficientes en AT o trampa o que la sobreproducci&#xF3;n de AT fueron comparados en varios medios de comunicaci&#xF3;n. La falta de TRAP o sobreproducci&#xF3;n de AT result&#xF3; en fenilalanina que se requiere para el crecimiento. Estos resultados revelan la importancia de AT en el mantenimiento de un equilibrio entre la s&#xED;ntesis de tript&#xF3;fano frente a la s&#xED;ntesis de fenilalanina, con el nivel de carga ARNt (Trp) que act&#xFA;a como la se&#xF1;al de regulaci&#xF3;n fundamental en la producci&#xF3;n.

Efectos fisiol&#xF3;gicos de la actividad de la prote&#xED;na anti-TRAP y tRNA (Trp) de carga en la expresi&#xF3;n del oper&#xF3;n Trp en Bacillus subtilis

&#x5927;&#x80A0;&#x57C3;&#x5E0C;&#x6C0F;&#x5927;&#x80A0;&#x6746;&#x83CC;&#x4E2D;&#x65B0;&#x751F; TnaC-tRNA(Pro) &#x9170;-tRNA &#x4E0E;&#x7FFB;&#x8BD1;&#x7684;&#x6838;&#x7CD6;&#x4F53;&#x4E4B;&#x95F4;&#x7684;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x521B;&#x5EFA;&#x8272;&#x6C28;&#x9178;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x7F51;&#x7AD9;&#x5728;&#x6838;&#x7CD6;&#x4F53;&#x4E2D;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x7684;&#x8272;&#x6C28;&#x9178;&#x6291;&#x5236; TnaC-tRNA(Pro) &#x5288;&#x88C2;&#x7684;&#x5730;&#x65B9;&#x3002;&#x6B64;&#x6291;&#x5236;&#x5EF6;&#x8FDF;&#x6838;&#x7CD6;&#x4F53;&#x91CA;&#x653E;&#xFF0C;&#x4ECE;&#x800C;&#x6291;&#x5236; Rho &#x56E0;&#x5B50;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x548C;&#x884C;&#x52A8;&#xFF0C;&#x4ECE;&#x800C;&#x589E;&#x52A0;&#x7684; tna &#x64CD;&#x7EB5;&#x5B50;&#x8F6C;&#x5F55;&#x3002;Trp12 TnaC &#x66FF;&#x6362;&#x4EFB;&#x4F55;&#x5176;&#x4ED6;&#x6C28;&#x57FA;&#x9178;&#x6B8B;&#x57FA;&#x6B64;&#x524D;&#x5DF2;&#x663E;&#x793A;&#xFF0C;&#x9632;&#x6B62;&#x8272;&#x6C28;&#x9178;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x548C;&#x611F;&#x5E94;&#x7684; tna &#x64CD;&#x7EB5;&#x5B50;&#x8868;&#x8FBE;&#x5F0F;&#x3002;TnaC &#x6C28;&#x57FA;&#x9178;&#x5E8F;&#x5217;&#x7684;&#x5168;&#x57FA;&#x56E0;&#x7EC4;&#x6BD4;&#x8F83;&#x786E;&#x5B9A; Asp16 &#x548C; Pro24&#xFF0C;&#x4EE5;&#x53CA; Trp12&#xFF0C;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x9AD8;&#x4FDD;&#x5B88; TnaC &#x6B8B;&#x7559;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x6B8B;&#x7559;&#x7269;&#x66FF;&#x6362;&#x5176;&#x4ED6;&#x6B8B;&#x7559;&#x6B64;&#x524D;&#x5DF2;&#x663E;&#x793A;&#x5F71;&#x54CD;&#x8272;&#x6C28;&#x9178;&#x611F;&#x5E94;&#x7684; tna &#x64CD;&#x7EB5;&#x5B50;&#x8868;&#x8FBE;&#x5F0F;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x9879;&#x7814;&#x7A76;&#xFF0C;&#x8FDB;&#x884C;&#x4E86;&#x4F53;&#x5916;&#x5206;&#x6790;&#x4E00;&#x4E0B; Asp16 &#x548C; Pro24 &#x7684; tna &#x64CD;&#x7EB5;&#x5B50;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x7684;&#x6F5C;&#x5728;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;E.TnaC Pro24 &#x6216; Asp16 &#x5927;&#x80A0;&#x6746;&#x83CC;&#x66FF;&#x6362;&#x5176;&#x4ED6;&#x6C28;&#x57FA;&#x9178;&#x8BBE;&#x7ACB;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x6B8B;&#x7559;&#x7269;&#x662F;&#x6E38;&#x79BB;&#x8272;&#x6C28;&#x9178;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x548C;&#x9170;&#x8F6C;&#x79FB;&#x9176;&#x4E2D;&#x5FC3; TnaC-tRNA(Pro) &#x5288;&#x88C2;&#x7684;&#x6291;&#x5236;&#x4F5C;&#x7528;&#x7684;&#x5FC5;&#x8981;&#x6761;&#x4EF6;&#x3002;&#x5B9E;&#x9645;&#x4E0A;&#x5728;&#x7A7A;&#x95F4;&#x4F4D;&#x7F6E;&#x5BF9;&#x5E94;&#x4E8E;&#x5173;&#x952E;&#x6B8B;&#x7559;&#x7684;&#x4ED6;&#x8BF4;&#xFF0C;&#x53E6;&#x4E00;&#x4E2A;&#x6838;&#x7CD6;&#x4F53;&#x76D1;&#x7BA1;&#x80BD;&#x4F4D;&#x4E8E; Asp16 &#x548C; Pro24&#x3002;Sparsomycin-&#x7532;&#x57FA;&#x5316;&#x4FDD;&#x62A4;&#x7814;&#x7A76;&#x8FDB;&#x4E00;&#x6B65;&#x5EFA;&#x8BAE; 23 &#x578B;&#x98DE;&#x673A; RNA &#x7247;&#x6BB5;&#x5728;&#x6838;&#x7CD6;&#x4F53;&#x8F74;&#x627F; TnaCs &#x4E0E; Asp16Ala &#x6216; Pro24Ala &#x66F4;&#x6539;&#x6392;&#x5217;&#x65B9;&#x5F0F;&#x7684;&#x4E0D;&#x540C;&#x3002;&#x56E0;&#x6B64;&#xFF0C;&#x6C28;&#x57FA;&#x9178;&#x5E8F;&#x5217;&#x7684; TnaC &#x7684; Trp12&#xFF0C;&#x5B58;&#x5728;&#x9664;&#x4E86;&#x65B0;&#x751F; TnaC-tRNA(Pro) &#x9170;-tRNA&#xFF0C;&#x529F;&#x80FD;&#x662F;&#x5FC5;&#x8981;&#x7684;&#x65B0;&#x751F;&#x80BD;&#x7FFB;&#x8BD1;&#x7684;&#x6838;&#x7CD6;&#x4F53;&#x5728;&#x521B;&#x5EFA;&#x8272;&#x6C28;&#x9178;&#x7ED1;&#x5B9A;/&#x6291;&#x5236;&#x7F51;&#x7AD9;&#x3002;

&#x5B88;&#x6052;&#x7684;&#x6B8B;&#x7559; Asp16 &#x548C; Pro24 &#x7684; TnaC tRNAPro &#x53C2;&#x4E0E;&#x8272;&#x6C28;&#x9178;&#x611F;&#x5E94;&#x7684; Tna &#x64CD;&#x7EB5;&#x5B50;&#x8868;&#x8FBE;&#x5F0F;&#x3002;

In Escherichia coli, interactions between the nascent TnaC-tRNA(Pro) peptidyl-tRNA and the translating ribosome create a tryptophan binding site in the ribosome where bound tryptophan inhibits TnaC-tRNA(Pro) cleavage. This inhibition delays ribosome release, thereby inhibiting Rho factor binding and action, resulting in increased tna operon transcription. Replacing Trp12 of TnaC with any other amino acid residue was previously shown to prevent tryptophan binding and induction of tna operon expression. Genome-wide comparisons of TnaC amino acid sequences identify Asp16 and Pro24, as well as Trp12, as highly conserved TnaC residues. Replacing these residues with other residues was previously shown to influence tryptophan induction of tna operon expression. In this study, in vitro analyses were performed to examine the potential roles of Asp16 and Pro24 in tna operon induction. Replacing Asp16 or Pro24 of TnaC of E. coli with other amino acids established that these residues are essential for free tryptophan binding and inhibition of TnaC-tRNA(Pro) cleavage at the peptidyl transferase center. Asp16 and Pro24 are in fact located in spatial positions corresponding to critical residues of AAP, another ribosome regulatory peptide. Sparsomycin-methylation protection studies further suggested that segments of 23S RNA were arranged differently in ribosomes bearing TnaCs with either the Asp16Ala or the Pro24Ala change. Thus, features of the amino acid sequence of TnaC of the nascent TnaC-tRNA(Pro) peptidyl-tRNA, in addition to the presence of Trp12, are necessary for the nascent peptide to create a tryptophan binding/inhibition site in the translating ribosome.

Conserved residues Asp16 and Pro24 of TnaC-tRNAPro participate in tryptophan induction of Tna operon expression.

Chez Escherichia coli, les interactions entre le secteur naissant du CCNT-ARNt (Pro) peptidyl-ARNt et du ribosome traduisant cr&#xE9;er un site de liaison du tryptophane dans le ribosome, o&#xF9; le tryptophane li&#xE9; inhibe CCNT-ARNt (Pro) clivage. Cette inhibition retarde la lib&#xE9;ration du ribosome, inhibant ainsi la liaison facteur Rho et de l&#x26;#39;action, r&#xE9;sultant en augmentation tna op&#xE9;ron de la transcription. Le remplacement de Trp12 TNAC avec tout r&#xE9;sidu d&#x26;#39;acide amin&#xE9; autre a &#xE9;t&#xE9; pr&#xE9;c&#xE9;demment indiqu&#xE9; pour emp&#xEA;cher la liaison du tryptophane et l&#x26;#39;induction de l&#x26;#39;expression tna op&#xE9;ron. L&#x26;#39;ensemble du g&#xE9;nome comparaisons de s&#xE9;quences d&#x26;#39;acides amin&#xE9;s TNAC identifier Asp16 et PRO24, ainsi que, en tant que r&#xE9;sidus Trp12 TNAC hautement conserv&#xE9;es. Le remplacement de ces r&#xE9;sidus avec d&#x26;#39;autres r&#xE9;sidus &#xE9;tait d&#xE9;j&#xE0; montr&#xE9; &#xE0; influencer l&#x26;#39;induction de la tryptophane tna op&#xE9;ron expression. Dans cette &#xE9;tude, dans les analyses in vitro ont &#xE9;t&#xE9; r&#xE9;alis&#xE9;es afin d&#x26;#39;&#xE9;tudier les r&#xF4;les potentiels de Asp16 et PRO24 &#xE0; la TNA op&#xE9;ron induction. Le remplacement ou Asp16 PRO24 de TNAC de E. coli avec d&#x26;#39;autres acides amin&#xE9;s &#xE9;tablies que ces r&#xE9;sidus sont essentiels pour la liaison sans tryptophane et l&#x26;#39;inhibition de TNAC-ARNt (Pro) clivage au niveau du centre de la peptidyl-transf&#xE9;rase. Asp16 et PRO24 sont en fait situ&#xE9;s dans des positions spatiales correspondant aux r&#xE9;sidus critiques de PAA, un autre peptide ribosome r&#xE9;glementaire. &#xC9;tudes sur la protection sparsomycine-m&#xE9;thylation en outre sugg&#xE9;r&#xE9; que les segments de 23S ARN ont &#xE9;t&#xE9; dispos&#xE9;s diff&#xE9;remment dans les ribosomes portant TnaCs avec soit l&#x26;#39;Asp16Ala ou le changement Pro24Ala. Ainsi, caract&#xE9;ristiques de la s&#xE9;quence d&#x26;#39;acides amin&#xE9;s de la CCNT naissante TNAC-ARNt (Pro) peptidyl-ARNt, en plus de la pr&#xE9;sence de Trp12 sont n&#xE9;cessaires pour le peptide naissante pour cr&#xE9;er une liaison tryptophane / site de l&#x26;#39;inhibition de la traduction du ribosome.

R&#xE9;sidus conserv&#xE9;s Asp16 et PRO24 de CCNT-tRNAPro Participer &#xE0; induction tryptophane de la TNA Operon Expression

Erstellen Sie in Escherichia coli Interaktionen zwischen den entstehenden TnaC-tRNA(Pro) konvertierende-tRNA und dem &Uuml;bersetzen Ribosom eine Tryptophan-Bindungsstelle in das Ribosom in dem gebundenen Tryptophan hemmt die TnaC-tRNA(Pro) Spaltung. Diese Hemmung verz&ouml;gert Ribosom Freigabe, was wiederum behindert Rho-Faktor-Bindung und Aktion, was zu erh&ouml;hten Tna Operon Transkription. Ersetzen alle andere Aminos&auml;ure-R&uuml;ckst&auml;nde Trp12 TnaC war zuvor gezeigt, Tryptophan-Bindung und Induktion von Tna Operon Ausdruck zu verhindern. Genomweiten Vergleiche der Aminos&auml;uresequenzen TnaC identifizieren Asp16 sowie Pro24 und Trp12, als stark konservierten TnaC R&uuml;ckst&auml;nde. Diese R&uuml;ckst&auml;nde durch andere R&uuml;ckst&auml;nde zu ersetzen war zuvor gezeigt, Tryptophan Induktion von Tna Operon Ausdruck zu beeinflussen. In dieser Studie wurden in-vitro-Analysen durchgef&uuml;hrt, um die potenzielle Rolle von Asp16 und Pro24 in Tna Operon Induktion zu pr&uuml;fen. Asp16 oder Pro24 TnaC von E. coli durch andere Aminos&auml;uren zu ersetzen, festgestellt, dass diese R&uuml;ckst&auml;nde f&uuml;r die Bindung von freiem Tryptophan und Hemmung der TnaC-tRNA(Pro) Spaltung der konvertierende-Transferase-Zentrum unverzichtbar sind. Asp16 und Pro24 befinden sich in der Tat in r&auml;umlichen Positionen, kritische R&uuml;ckst&auml;nde von AAP, ein weiteres Ribosom regulatorischen Peptid entspricht. Sparsomycin-Methylierung Schutz Studien vorgeschlagen weiter, dass Segmente 23S RNA Ribosomen mit TnaCs mit der Asp16Ala oder die Pro24Ala-&Auml;nderung anders angeordnet waren. So sind Funktionen einer Aminos&auml;ure-Sequenz von TnaC von tRNA-entstehende TnaC-tRNA(Pro) konvertierende, neben dem Vorhandensein von Trp12, notwendig f&uuml;r das entstehende Peptid eine Tryptophan-Bindung/Hemmung-Website in dem &Uuml;bersetzen Ribosom zu erstellen.

Konservierte R&uuml;ckst&auml;nde von Asp16 und Pro24 von TnaC-tRNAPro Teilnahme an Tryptophan Induktion von Tna Operon Ausdruck.

In Escherichia coli, le interazioni tra il nascente TnaC-tRNA(Pro) peptidilica-tRNA e ribosomi traduzioni creare un sito di legame del triptofano nel ribosoma dove associato triptofano inibisce la scissione TnaC-tRNA(Pro). Questa inibizione consente di ritardare il rilascio del ribosoma, inibendo associazione fattore Rho e azione, con conseguente aumento tna trascrizione operone. Sostituzione Trp12 di TnaC con eventuali altri residui dell&#39;amminoacido precedentemente &egrave; stata indicata per prevenire l&#39;associazione triptofano e induzione dell&#39;espressione di tna operone. Genome-wide confronti delle sequenze dell&#39;amminoacido TnaC identificano Asp16 e Pro24, come pure Trp12, come residui TnaC altamente conservati. Sostituzione di questi residui con altri residui precedentemente &egrave; stata indicata per influenzare l&#39;induzione di triptofano dell&#39;espressione operone tna. In questo studio, sono state eseguite analisi in vitro per esaminare il ruolo potenziale di Asp16 e Pro24 in tna induzione operone. Sostituzione Asp16 o Pro24 di TnaC di E. coli con altri amminoacidi stabilito che tali residui sono essenziali per l&#39;associazione di triptofano libero e inibizione della scollatura TnaC-tRNA(Pro) presso il centro di transferasi peptidilica. Asp16 e Pro24 infatti si trovano in posizioni spaziali corrispondenti ai residui critici dell&#39;AAP, un altro peptide normativo ribosoma. Gli studi di protezione Sparsomycin-metilazione inoltre suggerito che segmenti di RNA 23S erano disposti in modo diverso in ribosomi cuscinetto TnaCs con la Asp16Ala o la modifica di Pro24Ala. Cos&igrave;, le caratteristiche della sequenza dell&#39;amminoacido di TnaC della nascente TnaC-tRNA(Pro) peptidilica-tRNA, oltre alla presenza di Trp12, sono necessarie per il peptide nascente creare un sito di associazione/inibizione del triptofano nel ribosoma traducendo.

Residui conservati Asp16 e Pro24 di TnaC-tRNAPro partecipano ad induzione di triptofano dell&#39;espressione operone Tna.

&#x5927;&#x8178;&#x83CC;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x65B0;&#x751F;TnaC-tRNA&#x306E;&#xFF08;&#x30D7;&#x30ED;&#xFF09;&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30B8;&#x30EB;-tRNA&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x7FFB;&#x8A33;&#x3059;&#x308B;&#x30EA;&#x30DC;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x3068;&#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x304C;&#x7D50;&#x5408;&#x3057;&#x305F;&#x30C8;&#x30EA;&#x30D7;&#x30C8;&#x30D5;&#x30A1;&#x30F3;&#x304C;TnaC-tRNA&#x3092;&#xFF08;Pro&#xFF09;&#x306E;&#x5207;&#x65AD;&#x3092;&#x963B;&#x5BB3;&#x3059;&#x308B;&#x30EA;&#x30DC;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x306E;&#x30C8;&#x30EA;&#x30D7;&#x30C8;&#x30D5;&#x30A1;&#x30F3;&#x7D50;&#x5408;&#x90E8;&#x4F4D;&#x3092;&#x4F5C;&#x6210;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x963B;&#x5BB3;&#x306F;&#x5897;&#x52A0;&#x3057;&#x305F;TNA&#x30AA;&#x30DA;&#x30ED;&#x30F3;&#x306E;&#x8EE2;&#x5199;&#x304C;&#x5F97;&#x30EA;&#x30DC;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x30EA;&#x30EA;&#x30FC;&#x30B9;&#x3092;&#x963B;&#x5BB3;&#x30ED;&#x30FC;&#x56E0;&#x5B50;&#x306E;&#x7D50;&#x5408;&#x3068;&#x30A2;&#x30AF;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x3092;&#x9045;&#x3089;&#x305B;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x4ED6;&#x306E;&#x30A2;&#x30DF;&#x30CE;&#x9178;&#x6B8B;&#x57FA;&#x3067;TnaC&#x306E;Trp12&#x3092;&#x4EA4;&#x63DB;&#x3059;&#x308B;&#x524D;&#x306B;TNA&#x30AA;&#x30DA;&#x30ED;&#x30F3;&#x767A;&#x73FE;&#x306E;&#x30C8;&#x30EA;&#x30D7;&#x30C8;&#x30D5;&#x30A1;&#x30F3;&#x7D50;&#x5408;&#x3068;&#x8A98;&#x5C0E;&#x3092;&#x9632;&#x6B62;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x793A;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3002; TnaC&#x30A2;&#x30DF;&#x30CE;&#x9178;&#x914D;&#x5217;&#x306E;&#x30B2;&#x30CE;&#x30E0;&#x30EF;&#x30A4;&#x30C9;&#x306A;&#x6BD4;&#x8F03;&#x306F;&#x9AD8;&#x5EA6;&#x306B;&#x4FDD;&#x5B58;&#x3055;&#x308C;TnaC&#x6B8B;&#x57FA;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x3001;Asp16&#x3068;Pro24&#x3068;&#x540C;&#x69D8;&#x306B;&#x3001;Trp12&#x3092;&#x8B58;&#x5225;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x4ED6;&#x306E;&#x6B8B;&#x57FA;&#x3067;&#x3001;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x6B8B;&#x57FA;&#x3092;&#x4EA4;&#x63DB;&#x3059;&#x308B;&#x3068;&#x3001;&#x4EE5;&#x524D;&#x306B;TNA&#x30AA;&#x30DA;&#x30ED;&#x30F3;&#x767A;&#x73FE;&#x306E;&#x30C8;&#x30EA;&#x30D7;&#x30C8;&#x30D5;&#x30A1;&#x30F3;&#x8A98;&#x5C0E;&#x306B;&#x5F71;&#x97FF;&#x3092;&#x4E0E;&#x3048;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x793A;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3002;&#x672C;&#x7814;&#x7A76;&#x3067;&#x306F;&#x3001;in vitro&#x3067;&#x306E;&#x89E3;&#x6790;&#x3067;&#x306F;TNA&#x30AA;&#x30DA;&#x30ED;&#x30F3;&#x306E;&#x8A98;&#x5C0E;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;Asp16&#x3068;Pro24&#x306E;&#x6F5C;&#x5728;&#x7684;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x8ABF;&#x3079;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x884C;&#x308F;&#x308C;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x6B8B;&#x57FA;&#x304C;&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30B8;&#x30EB;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30D5;&#x30A7;&#x30E9;&#x30FC;&#x30BC;&#x4E2D;&#x5FC3;&#x306B;TnaC-tRNA&#x306E;&#x904A;&#x96E2;&#x30C8;&#x30EA;&#x30D7;&#x30C8;&#x30D5;&#x30A1;&#x30F3;&#x7D50;&#x5408;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x963B;&#x5BB3;&#xFF08;Pro&#xFF09;&#x306F;&#x5207;&#x65AD;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x4E0D;&#x53EF;&#x6B20;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x78BA;&#x7ACB;&#x3057;&#x3001;&#x4ED6;&#x306E;&#x30A2;&#x30DF;&#x30CE;&#x9178;&#x3068;&#x5927;&#x8178;&#x83CC;&#x306E;TnaC&#x306E;Asp16&#x307E;&#x305F;&#x306F;Pro24&#x3092;&#x7F6E;&#x304D;&#x63DB;&#x3048;&#x307E;&#x3059;&#x3002; Asp16&#x3068;Pro24&#x306F;&#x3001;&#x5B9F;&#x969B;&#x306B;&#x306F;AAP&#x3001;&#x5225;&#x306E;&#x30EA;&#x30DC;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C9;&#x306E;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x6B8B;&#x57FA;&#x306B;&#x5BFE;&#x5FDC;&#x3059;&#x308B;&#x7A7A;&#x9593;&#x4F4D;&#x7F6E;&#x306B;&#x914D;&#x7F6E;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002; Sparsomycin-&#x30E1;&#x30C1;&#x30EB;&#x4FDD;&#x8B77;&#x306E;&#x7814;&#x7A76;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x3055;&#x3089;&#x306B;23S RNA&#x306E;&#x30BB;&#x30B0;&#x30E1;&#x30F3;&#x30C8;&#x306F;Asp16Ala&#x307E;&#x305F;&#x306F;Pro24Ala&#x306E;&#x5909;&#x66F4;&#x306E;&#x3044;&#x305A;&#x308C;&#x304B;&#x3067;TnaCs&#x3092;&#x51A0;&#x3057;&#x305F;&#x30EA;&#x30DC;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x3067;&#x306F;&#x7570;&#x306A;&#x3063;&#x3066;&#x914D;&#x7F6E;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x5506;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x3057;&#x305F;&#x304C;&#x3063;&#x3066;&#x3001;&#x65B0;&#x751F;TnaC-tRNA&#x306E;&#xFF08;&#x30D7;&#x30ED;&#xFF09;&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30B8;&#x30EB;-tRNA&#x306E;TnaC&#x306E;&#x30A2;&#x30DF;&#x30CE;&#x9178;&#x914D;&#x5217;&#x306E;&#x7279;&#x5FB4;&#x306F;&#x3001;Trp12&#x306E;&#x5B58;&#x5728;&#x306B;&#x52A0;&#x3048;&#x3066;&#x3001;&#x7FFB;&#x8A33;&#x306B;&#x30EA;&#x30DC;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x30C8;&#x30EA;&#x30D7;&#x30C8;&#x30D5;&#x30A1;&#x30F3;&#x7D50;&#x5408;/&#x963B;&#x5BB3;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x3092;&#x4F5C;&#x6210;&#x3059;&#x308B;&#x65B0;&#x751F;&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C9;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x5FC5;&#x8981;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3002;

TnaC-tRNAPro&#x306E;&#x4FDD;&#x5B58;&#x6B8B;&#x57FA;Asp16&#x3068;Pro24&#x306F;TNA&#x30AA;&#x30DA;&#x30ED;&#x30F3;&#x767A;&#x73FE;&#x306E;&#x30C8;&#x30EA;&#x30D7;&#x30C8;&#x30D5;&#x30A1;&#x30F3;&#x8A98;&#x5C0E;&#x306B;&#x53C2;&#x52A0;

&#xB300;&#xC7A5;&#xADE0;, &#xCD08;&#xAE30; TnaC-tRNA(Pro) peptidyl-Trna&#xC640; &#xBC88;&#xC5ED; &#xB9AC;&#xBCF4;&#xC19C; &#xAC04;&#xC758; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9; &#xBC14;&#xC6B4;&#xB4DC; &#xD2B8;&#xB9BD;&#xD1A0;&#xD310; TnaC-tRNA(Pro) &#xBD84;&#xC5F4;&#xC744; &#xC5B5;&#xC81C;&#xB294; &#xB9AC;&#xBCF4;&#xC19C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD2B8;&#xB9BD;&#xD1A0;&#xD310; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8;&#xB97C; &#xB9CC;&#xB4ED;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774; &#xC800;&#xD574; &#xB9AC;&#xBCF4;&#xC19C; &#xB9B4;&#xB9AC;&#xC2A4;, Rho &#xC694;&#xC18C; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xBC0F; &#xC99D;&#xAC00; &#xBC29;&#xCF55; &#xC624; &#xD398;&#xB860;&#xC758; &#xC804;&#xC0AC;&#xC5D0; &#xB530;&#xB978; &#xD589;&#xB3D9;&#xC744; &#xC5B5;&#xC81C; &#xD568;&#xC73C;&#xB85C;&#xC368; &#xC9C0;&#xC5F0;. &#xB2E4;&#xB978; &#xC544;&#xBBF8;&#xB178;&#xC0B0; &#xC794;&#xB958;&#xBB3C; TnaC Trp12 &#xAD50;&#xCCB4; &#xD558;&#xB294; &#xD2B8;&#xB9BD;&#xD1A0;&#xD310; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xBC0F; &#xBC29;&#xCF55; &#xC624; &#xD398;&#xB860; &#xC2DD;&#xC758; &#xC720;&#xB3C4; &#xBC29;&#xC9C0; &#xC774;&#xC804;&#xC5D0; &#xD45C;&#xC2DC; &#xD588;&#xB2E4;. TnaC &#xC544;&#xBBF8;&#xB178;&#xC0B0; &#xC2DC;&#xD000;&#xC2A4;&#xC758; &#xAC8C;&#xB188; &#xB113;&#xC740; &#xBE44;&#xAD50; &#xBFD0;&#xB9CC; &#xC544;&#xB2C8;&#xB77C; Trp12, Asp16 &#xBC0F; Pro24, &#xACE0;&#xB3C4;&#xB85C; &#xBCF4;&#xC874;&#xB41C; TnaC &#xC794;&#xB958;&#xBB3C;&#xC73C;&#xB85C; &#xC2DD;&#xBCC4;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB2E4;&#xB978; &#xC794;&#xB958;&#xBB3C;&#xC774;&#xC774; &#xC794;&#xB958;&#xBB3C; &#xAD50;&#xCCB4; &#xC774;&#xC804;&#xC5D0; &#xBC29;&#xCF55; &#xC624; &#xD398;&#xB860; &#xC2DD;&#xC758; &#xD2B8;&#xB9BD;&#xD1A0;&#xD310; &#xC720;&#xB3C4; &#xC601;&#xD5A5;&#xC744; &#xD45C;&#xC2DC; &#xD588;&#xB2E4;. &#xBCF8;&#xC774; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xC5D0;&#xC11C;&#xB294; &#xC0DD;&#xCCB4; &#xC678; &#xBD84;&#xC11D; &#xBC29;&#xCF55; &#xC624; &#xD398;&#xB860; &#xC720;&#xB3C4;&#xC5D0;&#xC11C; Asp16 &#xBC0F; pro24&#xC758; &#xC7A0;&#xC7AC;&#xC801;&#xC778; &#xC5ED;&#xD560; &#xAC80;&#xC0AC;&#xB97C; &#xC218;&#xD589; &#xD588;&#xB2E4;. Asp16 &#xB610;&#xB294; pro24&#xC758; Tnac&#xC758; E. &#xCF5C;&#xB77C;&#xAC00; &#xB2E4;&#xB978; &#xC544;&#xBBF8;&#xB178;&#xC0B0;&#xC73C;&#xB85C; &#xB300;&#xCCB4; &#xC124;&#xB9BD; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xC794;&#xB958;&#xBB3C; &#xBB34;&#xB8CC; &#xD2B8;&#xB9BD;&#xD1A0;&#xD310; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xBC0F; peptidyl&#xACFC; &#xC13C;&#xD130; TnaC-tRNA(Pro) &#xBD84;&#xC5F4;&#xC758; &#xC800;&#xD574;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xD544;&#xC218;&#xC801;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;. Asp16 &#xBC0F; Pro24 &#xC555; &#xD558; &#xACE0;, &#xB610; &#xB2E4;&#xB978; &#xB9AC;&#xBCF4;&#xC19C; &#xADDC;&#xC81C; &#xD3A9; &#xD2F0; &#xB4DC;&#xC758; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xC794;&#xB958;&#xBB3C;&#xC5D0; &#xD574;&#xB2F9; &#xD558;&#xB294; &#xACF5;&#xAC04; &#xC704;&#xCE58;&#xC5D0; &#xC788;&#xB294; &#xC0AC;&#xC2E4;. Sparsomycin-&#xBA54; &#xD2F8; &#xBCF4;&#xD638; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xB294; &#xCD94;&#xAC00; 23S RNA&#xC758; &#xC138;&#xADF8;&#xBA3C;&#xD2B8;&#xB294; Asp16Ala &#xB610;&#xB294; Pro24Ala &#xBCC0;&#xACBD; TnaCs &#xBCA0;&#xC5B4;&#xB9C1; &#xB9AC;&#xBCF4;&#xC19C;&#xC5D0; &#xB2E4;&#xB974;&#xAC8C; &#xBC30;&#xCE58; &#xD588;&#xB2E4; &#xC81C;&#xC548; &#xD588;&#xB2E4;. &#xB530;&#xB77C;&#xC11C;, Trp12&#xC758; &#xC874;&#xC7AC; &#xC774;&#xC678;&#xC5D0; &#xCD08;&#xAE30; TnaC-tRNA(Pro) peptidyl-tRNA, Tnac&#xC758; &#xC544;&#xBBF8;&#xB178;&#xC0B0; &#xC2DC;&#xD000;&#xC2A4;&#xC758; &#xD2B9;&#xC9D5;&#xC740; &#xCD08;&#xAE30; &#xD3A9;&#xD0C0;&#xC774;&#xB4DC; &#xBC88;&#xC5ED; &#xB9AC;&#xBCF4;&#xC19C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD2B8;&#xB9BD;&#xD1A0;&#xD310; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;/&#xC800;&#xD574; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8;&#xB97C; &#xD544;&#xC694; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Asp16&#xC640; TnaC-tRNAPro Pro24 &#xBCF4;&#xC874;&#xB41C; &#xC794;&#xB958;&#xBB3C; &#xBC29;&#xCF55; &#xC624; &#xD398;&#xB860; &#xC2DD;&#xC758; &#xD2B8;&#xB9BD;&#xD1A0;&#xD310; &#xC720;&#xB3C4;&#xC5D0; &#xCC38;&#xC5EC;.

En Escherichia coli, las interacciones entre la naciente TnaC-tRNA (Pro) peptidil-tRNA y el ribosoma traduce crear un sitio de uni&#xF3;n de tript&#xF3;fano en el ribosoma, donde la envolvente tript&#xF3;fano inhibe TnaC-tRNA (Pro) escote. Esta inhibici&#xF3;n retrasa la liberaci&#xF3;n del ribosoma, factor de uni&#xF3;n Rho inhibiendo de este modo y la acci&#xF3;n, lo que resulta en un aumento de la transcripci&#xF3;n del oper&#xF3;n tna. Sustituci&#xF3;n de Trp12 TnaC con cualquier otro residuo de amino&#xE1;cido fue demostrado previamente para impedir la uni&#xF3;n tript&#xF3;fano y la inducci&#xF3;n de la expresi&#xF3;n del oper&#xF3;n TNA. Genoma-comparaciones de secuencias de amino&#xE1;cidos TnaC identificar Asp16 y Pro24, as&#xED; como Trp12, como altamente conservadas residuos TnaC. Sustituci&#xF3;n de estos residuos con los residuos de otros fue demostrado previamente para influir en la inducci&#xF3;n de tript&#xF3;fano de la expresi&#xF3;n del oper&#xF3;n tna. En este estudio, an&#xE1;lisis in vitro se llevaron a cabo para examinar las funciones potenciales de Asp16 y el Pro24 en TNA de inducci&#xF3;n del oper&#xF3;n. Sustituci&#xF3;n Asp16 o Pro24 de TnaC de E. coli con otros amino&#xE1;cidos establecidos que estos residuos son esenciales para la uni&#xF3;n tript&#xF3;fano libre y la inhibici&#xF3;n de TnaC-ARNt (Pro), la escisi&#xF3;n en el centro peptidil transferasa. Asp16 y el Pro24, de hecho, se encuentra en posiciones espaciales correspondientes a los residuos cr&#xED;ticos de la AAP, otro p&#xE9;ptido regulador ribosoma. Metilaci&#xF3;n Sparsomycin estudios de protecci&#xF3;n sugiri&#xF3; adem&#xE1;s que los segmentos de ARN 23S fueron dispuestos de manera diferente en los ribosomas que llevan TnaCs ya sea con el Asp16Ala o el cambio Pro24Ala. As&#xED;, las caracter&#xED;sticas de la secuencia de amino&#xE1;cidos de TnaC de la naciente TnaC-ARNt (Pro) peptidil-ARNt, adem&#xE1;s de la presencia de Trp12, son necesarios para el p&#xE9;ptido naciente para crear una uni&#xF3;n tript&#xF3;fano / sitio de inhibici&#xF3;n en los ribosomas traducir.

Los residuos conservados Asp16 y Pro24 de TnaC tRNAPro-Participar en la inducci&#xF3;n de tript&#xF3;fano de la TNA la expresi&#xF3;n del oper&#xF3;n

&#x7279;&#x70B9; &mdash; &mdash; &#x6838;&#x7CD6;&#x4F53;&#x80BD;&#x9000;&#x51FA;&#x96A7;&#x9053;&#x5DF2;&#x77E5;&#x4E3A;&#x7279;&#x5B9A;&#x6C28;&#x57FA;&#x9178;&#x7684;&#x65B0;&#x751F;&#x9170; tRNA &#x8BC6;&#x522B;&#x7684;&#x5FC5;&#x8981;&#x6761;&#x4EF6;&#x3002;&#x56E0;&#x6B64;&#xFF0C;&#x8272;&#x6C28;&#x9178;&#x6B8B;&#x7559;&#x7684;&#x9170; tRNA TnaC-tRNA(Pro) &#x7EBF;&#x7D22;&#x5230;&#x54EA;&#x4E2A;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x8272;&#x6C28;&#x9178;&#x5728;&#x6838;&#x7CD6;&#x4F53;&#x5185;&#x6E38;&#x79BB;&#x8272;&#x6C28;&#x9178;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x7AD9;&#x70B9;&#x7684;&#x521B;&#x5EFA;&#x4F4D;&#x7F6E; 12 &#x6291;&#x5236;&#x6B63;&#x5E38;&#x6838;&#x7CD6;&#x4F53;&#x529F;&#x80FD;&#x3002;&#x6C34;&#x89E3;&#x91CA;&#x653E;&#x56E0;&#x5B50; 2 TnaC-tRNA(Pro) &#x548C; TnaC &#x7684; TnaC-tRNA(Pro) &#x5411;&#x560C;&#x5464;&#x7684;&#x80BD;&#x7C7B;&#x8F6C;&#x8BA9;&#x7684;&#x6838;&#x7CD6;&#x4F53;&#x7684;&#x8FC7;&#x7A0B;&#xFF0C;&#x5747;&#x6709;&#x6291;&#x5236;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x4E8B;&#x4EF6;&#x901A;&#x5E38;&#x5728;&#x6838;&#x7CD6;&#x4F53;&#x9170;&#x8F6C;&#x79FB;&#x9176;&#x4E2D;&#x5FC3;&#x6267;&#x884C;&#x3002;&#x5728;&#x672C;&#x7814;&#x7A76;&#x4E2D;&#xFF0C;23 &#x578B;&#x98DE;&#x673A; rRNA &#x6838;&#x82F7;&#x9178;&#x9170;&#x8F6C;&#x79FB;&#x9176;&#x4E2D;&#x5FC3;&#xFF0C;G2583A &#x548C; U2584C&#xFF0C;&#x8BE5;&#x7535;&#x8BDD; 2585&#x5E74;&#x5730;&#x533A;&#x7684;&#x53D8;&#x5316;&#x5374;&#x4E0D;&#x9075;&#x5B88;&#x4EE5;&#x51CF;&#x5C11; tna &#x64CD;&#x7EB5;&#x5B50;&#x8868;&#x8FBE;&#x5F0F;&#x7684;&#x6700;&#x5927;&#x611F;&#x5E94;&#x8272;&#x6C28;&#x9178;&#x4F53;&#x5185;&#x800C;&#x4E0D;&#x4F1A;&#x5F71;&#x54CD;&#x9700;&#x8981;&#x83B7;&#x5F97; 50%&#x611F;&#x5E94;&#x8272;&#x6C28;&#x9178;&#x7684;&#x6D53;&#x5EA6;&#x3002;&#x682A;&#x4E0E;&#x6838;&#x7CD6;&#x4F53;&#x4E0E;&#x4EFB;&#x4E00;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x53D8;&#x5316;&#x7684;&#x589E;&#x957F;&#x7387;&#x660E;&#x663E;&#x6CA1;&#x6709;&#x88AB;&#x7BE1;&#x6539;&#x3002;&#x7A81;&#x53D8;&#x4F53;&#x6838;&#x7CD6;&#x4F53;&#x4E0E;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x53D8;&#x5316;&#x4E0E;&#x4F53;&#x5916;&#x5206;&#x6790;&#x8868;&#x660E;&#xFF0C;&#x8272;&#x6C28;&#x9178;&#x5E76;&#x4E0D;&#x540C;&#x6837;&#x80FD;&#x591F;&#x6709;&#x6548;&#x4FDD;&#x62A4; TnaC-tRNA(Pro) &#x4ECE;&#x91CE;&#x751F;&#x578B;&#x6838;&#x7CD6;&#x4F53;&#x7684;&#x560C;&#x5464;&#x884C;&#x52A8;&#x3002;&#x4F46;&#x662F;&#xFF0C;&#x6DFB;&#x52A0;&#x7684;&#x8272;&#x6C28;&#x9178;&#x5E76;&#x672A;&#x963B;&#x6B62; sparsomycin &#x884C;&#x52A8;&#xFF0C;&#x50CF;&#x5F80;&#x5E38;&#x4E00;&#x6837;&#x4E0E;&#x91CE;&#x751F;&#x578B;&#x6838;&#x7CD6;&#x4F53;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7814;&#x7A76;&#x7ED3;&#x679C;&#x8868;&#x660E;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x4E24;&#x4E2A;&#x7A81;&#x53D8;&#x6539;&#x53D8;&#x884C;&#x4E8B;&#x901A;&#x8FC7;&#x51CF;&#x5C11;&#x9170;&#x8F6C;&#x79FB;&#x9176;&#x6D3B;&#x6027;&#x6291;&#x5236;&#x6838;&#x7CD6;&#x4F53;&#x8272;&#x6C28;&#x9178;&#x7684;&#x80FD;&#x529B;&#xFF0C;&#x800C;&#x4E0D;&#x662F;&#x901A;&#x8FC7;&#x51CF;&#x5C11;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x8272;&#x6C28;&#x9178;&#xFF0C;&#x6838;&#x7CD6;&#x4F53;&#x7684;&#x80FD;&#x529B;&#x3002;&#x56E0;&#x6B64;&#xFF0C;&#x672C;&#x7814;&#x7A76;&#x62A5;&#x544A;&#x6807;&#x8BC6;&#x6838;&#x7CD6;&#x4F53;&#x9170;&#x8F6C;&#x79FB;&#x9176;&#x4E2D;&#x5FC3;&#x5185;&#x51FA;&#x73B0;&#xFF0C;&#x5FC5;&#x987B;&#x6709;&#x6548;&#x8272;&#x6C28;&#x9178;&#x611F;&#x5E94;&#x7684; tna &#x64CD;&#x7EB5;&#x5B50;&#x8868;&#x8FBE;&#x5F0F;&#x7684;&#x7279;&#x5B9A;&#x6838;&#x82F7;&#x9178;&#x3002;

23 &#x578B;&#x98DE;&#x673A; rRNA &#x6838;&#x82F7;&#x9178;&#x9170;&#x8F6C;&#x79FB;&#x9176;&#x4E2D;&#x5FC3;&#x5BF9;&#x8272;&#x6C28;&#x9178;&#x64CD;&#x7EB5;&#x5B50;&#x611F;&#x5E94;&#x81F3;&#x5173;&#x91CD;&#x8981;&#x3002;

Distinct features of the ribosomal peptide exit tunnel are known to be essential for recognition of specific amino acids of a nascent peptidyl-tRNA. Thus, a tryptophan residue at position 12 of the peptidyl-tRNA TnaC-tRNA(Pro) leads to the creation of a free tryptophan binding site within the ribosome at which bound tryptophan inhibits normal ribosome functions. The ribosomal processes that are inhibited are hydrolysis of TnaC-tRNA(Pro) by release factor 2 and peptidyl transfer of TnaC of TnaC-tRNA(Pro) to puromycin. These events are normally performed in the ribosomal peptidyl transferase center. In the present study, changes of 23S rRNA nucleotides in the 2585 region of the peptidyl transferase center, G2583A and U2584C, were observed to reduce maximum induction of tna operon expression by tryptophan in vivo without affecting the concentration of tryptophan necessary to obtain 50% induction. The growth rate of strains with ribosomes with either of these changes was not altered appreciably. In vitro analyses with mutant ribosomes with these changes showed that tryptophan was not as efficient in protecting TnaC-tRNA(Pro) from puromycin action as wild-type ribosomes. However, added tryptophan did prevent sparsomycin action as it normally does with wild-type ribosomes. These findings suggest that these two mutational changes act by reducing the ability of ribosome-bound tryptophan to inhibit peptidyl transferase activity rather than by reducing the ability of the ribosome to bind tryptophan. Thus, the present study identifies specific nucleotides within the ribosomal peptidyl transferase center that appear to be essential for effective tryptophan induction of tna operon expression.

23S rRNA nucleotides in the peptidyl transferase center are essential for tryptophanase operon induction.

Caract&#xE9;ristiques distinctes du tunnel de sortie peptide ribosomique sont connues pour &#xEA;tre essentielles pour la reconnaissance de certains acides amin&#xE9;s d&#x26;#39;une naissante peptidyl-ARNt. Ainsi, un r&#xE9;sidu de tryptophane en position 12 de la peptidyl-ARNt TNAC-ARNt (Pro) conduit &#xE0; la cr&#xE9;ation d&#x26;#39;un site de liaison libre tryptophane dans le ribosome li&#xE9; &#xE0; laquelle le tryptophane inhibe les fonctions normales ribosome. Les processus ribosomal qui sont inhib&#xE9;s sont l&#x26;#39;hydrolyse de la CCNT-ARNt (Pro) par 2 facteur de lib&#xE9;ration et le transfert de peptidyl CCNT CCNT de-ARNt (Pro) &#xE0; la puromycine. Ces &#xE9;v&#xE9;nements sont normalement effectu&#xE9;es dans le centre ribosomal transf&#xE9;rase peptidylique. Dans la pr&#xE9;sente &#xE9;tude, les changements de nucl&#xE9;otides ARNr 23S dans la r&#xE9;gion 2585 du centre peptidyl transf&#xE9;rase, G2583A et U2584C, ont &#xE9;t&#xE9; observ&#xE9;s pour r&#xE9;duire l&#x26;#39;induction maximum de tna op&#xE9;ron expression par le tryptophane in vivo, sans affecter la concentration de tryptophane n&#xE9;cessaire pour obtenir l&#x26;#39;induction de 50% . Le taux de croissance des souches avec des ribosomes avec l&#x26;#39;une de ces changements n&#x26;#39;a pas &#xE9;t&#xE9; sensiblement modifi&#xE9;e. Analyses in vitro avec les ribosomes mutants avec ces changements ont montr&#xE9; que le tryptophane n&#x26;#39;&#xE9;tait pas aussi efficace dans la protection du CCNT-ARNt (Pro) de l&#x26;#39;action que la puromycine de type sauvage ribosomes. Toutefois, a ajout&#xE9; le tryptophane n&#x26;#39;a d&#x26;#39;emp&#xEA;cher une action sparsomycine comme il le fait normalement avec des ribosomes de type sauvage. Ces r&#xE9;sultats sugg&#xE8;rent que ces deux changements mutationnels agissent en r&#xE9;duisant la capacit&#xE9; du ribosome li&#xE9; tryptophane pour inhiber l&#x26;#39;activit&#xE9; peptidyl transf&#xE9;rase, plut&#xF4;t que par la r&#xE9;duction de la capacit&#xE9; du ribosome de lier le tryptophane. Ainsi, la pr&#xE9;sente &#xE9;tude identifie nucl&#xE9;otides sp&#xE9;cifiques au sein du centre ribosomal transf&#xE9;rase peptidylique qui semblent &#xEA;tre essentiel pour l&#x26;#39;induction du tryptophane efficace de tna op&#xE9;ron expression.

23S ARNr nucl&#xE9;otides dans le centre de peptidyl transf&#xE9;rase sont essentiels pour la tryptophanase Operon induction

Grundlegende Merkmale des ribosomal Peptid Ausfahrt Tunnels sind bekannterma&szlig;en entscheidend f&uuml;r die Anerkennung der spezifischen Aminos&auml;uren von einem entstehenden konvertierende-tRNA. Tryptophan R&uuml;ckst&auml;nde an Position 12 der konvertierende-tRNA TnaC-tRNA(Pro) f&uuml;hrt zur Schaffung einer freiem Tryptophan-Bindungsstelle in das Ribosom an die gebundenen Tryptophan hemmt somit normalen Ribosom Funktionen. Die ribosomale Prozesse gehemmt sind sind Hydrolyse von TnaC-tRNA(Pro) durch Freisetzung Faktor 2 und TnaC von TnaC-tRNA(Pro) auf Puromycin konvertierende &uuml;bertragen. Diese Ereignisse sind in der Regel in der ribosomal konvertierende-Transferase-Mitte durchgef&uuml;hrt. In der vorliegenden Studie wurden &Auml;nderungen der 23S rRNA Nukleotide in der Region 2585 konvertierende Transferase Mitte, G2583A und U2584C, beobachtet maximale Induktion von Tna Operon Ausdruck reduzieren von Tryptophan in-vivo ohne Auswirkungen auf die Konzentration von Tryptophan notwendig, 50 % Induktion zu erhalten. Die Wachstumsrate der St&auml;mme mit Ribosomen entweder dieser Ver&auml;nderungen war nicht sp&uuml;rbar ver&auml;ndert. In-vitro-Analysen mit mutant Ribosomen mit diesen Ver&auml;nderungen zeigte, dass Tryptophan war nicht so effizient TnaC-tRNA(Pro) vor Puromycin Aktion als Wildtyp Ribosomen zu sch&uuml;tzen. Zus&auml;tzliche Tryptophan verhinderte jedoch Sparsomycin Ma&szlig;nahmen wie normalerweise mit Wildtyp Ribosomen. Diese Forschungsergebnisse legen nahe, dass diese beiden teilhabende &Auml;nderungen handeln reduzieren die F&auml;higkeit der Ribosom gebundene Tryptophan zu konvertierende-Transferase-Aktivit&auml;t hemmen und nicht durch eine Verringerung der F&auml;higkeit des Ribosoms, Tryptophan zu binden. Die vorliegende Studie identifiziert so spezifische Nukleotiden innerhalb der ribosomal konvertierende-Transferase-Zentrum, die scheinbar f&uuml;r effektive Tryptophan Induktion von Tna Operon Ausdruck.

23S rRNA Nukleotide in der konvertierende-Transferase-Mitte sind essentiell f&uuml;r Tryptophanase Operon Induktion.

Distinte caratteristiche del tunnel di uscita ribosomal peptide sono noti per essere essenziale per il riconoscimento di specifici amminoacidi di una nascente peptidilica-tRNA. Cos&igrave;, un residuo di triptofano in posizione 12 del peptidilica-tRNA TnaC-tRNA(Pro) porta alla creazione di un sito di legame di triptofano libero all&#39;interno del ribosoma al quale associato triptofano inibisce le funzioni normali del ribosoma. I processi ribosomiali che sono inibiti sono idrolisi del TnaC-tRNA(Pro) dal fattore di rilascio 2 e trasferimento peptidilica di TnaC di TnaC-tRNA(Pro) con puromicina. Questi eventi vengono normalmente eseguiti nel centro della transferasi peptidilica ribosomiale. Nel presente studio, di nucleotidi rRNA 23S della regione 2585 del centro transferasi peptidilica, G2583A e U2584C, sono stati osservati cambiamenti per ridurre l&#39;induzione massima di espressione operone tna di triptofano in vivo senza alterare la concentrazione di triptofano necessario per ottenere il 50% ad induzione. Il tasso di crescita di ceppi con ribosomi con uno di questi cambiamenti non &egrave; stato alterato sensibilmente. Analisi in vitro con ribosomi mutanti con questi cambiamenti hanno mostrato che triptofano non era come efficace nel proteggere TnaC-tRNA(Pro) da azione con puromicina come wild-type ribosomi. Tuttavia, aggiunto triptofano ha impedito sparsomycin azione come fa normalmente con i ribosomi wild-type. Questi risultati suggeriscono che questi due cambiamenti mutazionali agiscono riducendo la capacit&agrave; di inibire l&#39;attivit&agrave; transferasi peptidilica ribosoma associato triptofano piuttosto che riducendo la capacit&agrave; del ribosoma per associare il triptofano. Pertanto, il presente studio identifica specifici nucleotidi all&#39;interno del centro di transferasi peptidilica ribosomiale che sembrano essere essenziali per l&#39;induzione di triptofano efficace di espressione operone tna.

Nucleotidi rRNA 23s nel centro della transferasi peptidilica sono essenziali per l&#39;induzione dell&#39;operone di tryptophanase.

&#x30EA;&#x30DC;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C9;&#x51FA;&#x53E3;&#x30C8;&#x30F3;&#x30CD;&#x30EB;&#x306E;&#x7570;&#x306A;&#x308B;&#x6A5F;&#x80FD;&#x306F;&#x3001;&#x521D;&#x671F;&#x306E;&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30B8;&#x30EB;-tRNA&#x306E;&#x7279;&#x5B9A;&#x306E;&#x30A2;&#x30DF;&#x30CE;&#x9178;&#x3092;&#x8A8D;&#x8B58;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x4E0D;&#x53EF;&#x6B20;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x77E5;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x3057;&#x305F;&#x304C;&#x3063;&#x3066;&#x3001;&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30B8;&#x30EB;-tRNA&#x3092;TnaC-tRNA&#x306E;&#xFF08;&#x30D7;&#x30ED;&#xFF09;&#x306E;&#x4F4D;&#x7F6E;12&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x30C8;&#x30EA;&#x30D7;&#x30C8;&#x30D5;&#x30A1;&#x30F3;&#x6B8B;&#x57FA;&#x304C;&#x7D50;&#x5408;&#x3057;&#x305F;&#x30C8;&#x30EA;&#x30D7;&#x30C8;&#x30D5;&#x30A1;&#x30F3;&#x306F;&#x3001;&#x901A;&#x5E38;&#x306E;&#x30EA;&#x30DC;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x306E;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3092;&#x963B;&#x5BB3;&#x3059;&#x308B;&#x3067;&#x30EA;&#x30DC;&#x30BD;&#x200B;&#x200B;&#x30FC;&#x30E0;&#x5185;&#x306E;&#x7A7A;&#x304D;&#x30C8;&#x30EA;&#x30D7;&#x30C8;&#x30D5;&#x30A1;&#x30F3;&#x7D50;&#x5408;&#x90E8;&#x4F4D;&#x306E;&#x5275;&#x9020;&#x306B;&#x3064;&#x306A;&#x304C;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x7981;&#x6B62;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x30EA;&#x30DC;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x306E;&#x30D7;&#x30ED;&#x30BB;&#x30B9;&#x304C;&#x30EA;&#x30EA;&#x30FC;&#x30B9;&#x56E0;&#x5B50;2&#x3068;TnaC-tRNA&#x306E;TnaC&#xFF08;&#x30D7;&#x30ED;&#xFF09;&#x306E;&#x30D4;&#x30E5;&#x30FC;&#x30ED;&#x30DE;&#x30A4;&#x30B7;&#x30F3;&#x306E;&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30B8;&#x30EB;&#x8EE2;&#x9001;&#x306B;&#x3088;&#x308B;TnaC-tRNA&#x306E;&#xFF08;&#x30D7;&#x30ED;&#xFF09;&#x306E;&#x52A0;&#x6C34;&#x5206;&#x89E3;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x30A4;&#x30D9;&#x30F3;&#x30C8;&#x306F;&#x3001;&#x901A;&#x5E38;&#x3001;&#x30EA;&#x30DC;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x306E;&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30B8;&#x30EB;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30D5;&#x30A7;&#x30E9;&#x30FC;&#x30BC;&#x4E2D;&#x5FC3;&#x306B;&#x884C;&#x308F;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x672C;&#x7814;&#x7A76;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30B8;&#x30EB;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30D5;&#x30A7;&#x30E9;&#x30FC;&#x30BC;&#x4E2D;&#x5FC3;&#x3001;G2583A&#x3068;U2584C&#x306E;2585&#x5730;&#x57DF;&#x306E;23S rRNA&#x306E;&#x30CC;&#x30AF;&#x30EC;&#x30AA;&#x30C1;&#x30C9;&#x306E;&#x5909;&#x5316;&#x306F;&#x3001;50&#xFF05;&#x306E;&#x8A98;&#x5C0E;&#x3092;&#x53D6;&#x5F97;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x5FC5;&#x8981;&#x306A;&#x30C8;&#x30EA;&#x30D7;&#x30C8;&#x30D5;&#x30A1;&#x30F3;&#x306E;&#x6FC3;&#x5EA6;&#x306B;&#x5F71;&#x97FF;&#x3092;&#x4E0E;&#x3048;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306A;&#x304F;&#x3001;&#x751F;&#x4F53;&#x5185;&#x3067;&#x30C8;&#x30EA;&#x30D7;&#x30C8;&#x30D5;&#x30A1;&#x30F3;&#x304B;&#x3089;TNA&#x30AA;&#x30DA;&#x30ED;&#x30F3;&#x767A;&#x73FE;&#x306E;&#x6700;&#x5927;&#x8A98;&#x5C0E;&#x3092;&#x6E1B;&#x3089;&#x3059;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x89B3;&#x5BDF;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x5909;&#x66F4;&#x306E;&#x3069;&#x3061;&#x3089;&#x304B;&#x3068;&#x30EA;&#x30DC;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x3068;&#x306E;&#x682A;&#x306E;&#x6210;&#x9577;&#x7387;&#x304C;&#x304B;&#x306A;&#x308A;&#x5909;&#x66F4;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3002; in vitro&#x3067;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x5909;&#x66F4;&#x3092;&#x6709;&#x3059;&#x308B;&#x5909;&#x7570;&#x4F53;&#x30EA;&#x30DC;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x306E;&#x5206;&#x6790;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x30C8;&#x30EA;&#x30D7;&#x30C8;&#x30D5;&#x30A1;&#x30F3;&#x306F;&#x3001;&#x91CE;&#x751F;&#x578B;&#x30EA;&#x30DC;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x30D4;&#x30E5;&#x30FC;&#x30ED;&#x30DE;&#x30A4;&#x30B7;&#x30F3;&#x30A2;&#x30AF;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x304B;&#x3089;TnaC-tRNA&#x3092;&#xFF08;&#x30D7;&#x30ED;&#xFF09;&#x306E;&#x4FDD;&#x8B77;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306B;&#x52B9;&#x7387;&#x7684;&#x3067;&#x306F;&#x306A;&#x3044;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3057;&#x304B;&#x3057;&#x3001;&#x901A;&#x5E38;&#x306F;&#x91CE;&#x751F;&#x578B;&#x30EA;&#x30DC;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x3067;&#x3084;&#x3063;&#x305F;&#x3088;&#x3046;&#x306B;&#x30C8;&#x30EA;&#x30D7;&#x30C8;&#x30D5;&#x30A1;&#x30F3;&#x304C;sparsomycin&#x306E;&#x30A2;&#x30AF;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x3092;&#x9632;&#x3050;&#x305F;&#x3081;&#x3067;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x77E5;&#x898B;&#x306F;&#x3001;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;2&#x3064;&#x306E;&#x7A81;&#x7136;&#x5909;&#x7570;&#x306E;&#x5909;&#x66F4;&#x306F;&#x30C8;&#x30EA;&#x30D7;&#x30C8;&#x30D5;&#x30A1;&#x30F3;&#x3092;&#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C9;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x30EA;&#x30DC;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x306E;&#x80FD;&#x529B;&#x3092;&#x6E1B;&#x5C11;&#x3055;&#x305B;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x3067;&#x306F;&#x306A;&#x304F;&#x3001;&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30B8;&#x30EB;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30D5;&#x30A7;&#x30E9;&#x30FC;&#x30BC;&#x6D3B;&#x6027;&#x3092;&#x963B;&#x5BB3;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x30EA;&#x30DC;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x306B;&#x7D50;&#x5408;&#x3057;&#x305F;&#x30C8;&#x30EA;&#x30D7;&#x30C8;&#x30D5;&#x30A1;&#x30F3;&#x306E;&#x80FD;&#x529B;&#x3092;&#x6E1B;&#x5C11;&#x3055;&#x305B;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x884C;&#x52D5;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x5506;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x3057;&#x305F;&#x304C;&#x3063;&#x3066;&#x3001;&#x672C;&#x7814;&#x7A76;&#x3067;&#x306F;&#x3001;TNA&#x30AA;&#x30DA;&#x30ED;&#x30F3;&#x306E;&#x767A;&#x73FE;&#x3092;&#x52B9;&#x679C;&#x7684;&#x306B;&#x30C8;&#x30EA;&#x30D7;&#x30C8;&#x30D5;&#x30A1;&#x30F3;&#x8A98;&#x5C0E;&#x306B;&#x5FC5;&#x9808;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3088;&#x3046;&#x306B;&#x898B;&#x3048;&#x308B;&#x30EA;&#x30DC;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30B8;&#x30EB;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30D5;&#x30A7;&#x30E9;&#x30FC;&#x30BC;&#x30BB;&#x30F3;&#x30BF;&#x30FC;&#x5185;&#x306E;&#x7279;&#x5B9A;&#x306E;&#x30CC;&#x30AF;&#x30EC;&#x30AA;&#x30C1;&#x30C9;&#x3092;&#x200B;&#x200B;&#x8B58;&#x5225;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30B8;&#x30EB;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30D5;&#x30A7;&#x30E9;&#x30FC;&#x30BC;&#x30BB;&#x30F3;&#x30BF;&#x30FC;&#x306E;23S rRNA&#x306E;&#x30CC;&#x30AF;&#x30EC;&#x30AA;&#x30C1;&#x30C9;&#x306F;&#x3001;&#x30C8;&#x30EA;&#x30D7;&#x30C8;&#x30D5;&#x30A1;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x30AA;&#x30DA;&#x30ED;&#x30F3;&#x306E;&#x8A98;&#x5C0E;&#x306B;&#x4E0D;&#x53EF;&#x6B20;&#x3067;&#x3042;&#x308B;

Ribosomal &#xD3A9; &#xD2F0; &#xB4DC; &#xCD9C;&#xAD6C; &#xD130;&#xB110;&#xC758; &#xACE0;&#xC720; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC778; &#xCD08;&#xAE30; peptidyl Trna&#xC758; &#xD2B9;&#xC815; &#xC544;&#xBBF8;&#xB178;&#xC0B0;&#xC758; &#xC778;&#xC2DD;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xD544;&#xC218;&#xC801;&#xC778; &#xAC83;&#xC73C;&#xB85C; &#xC54C;&#xB824;&#xC838; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB530;&#xB77C;&#xC11C;, &#xC704;&#xCE58; 12 peptidyl-tRNA TnaC-tRNA(Pro) &#xB9AC;&#xB4DC;&#xB294; &#xBC14;&#xC6B4;&#xB4DC; &#xD2B8;&#xB9BD;&#xD1A0;&#xD310;&#xC5D0;&#xC11C; &#xB9AC;&#xBCF4;&#xC19C; &#xB0B4; &#xBB34;&#xB8CC; &#xD2B8;&#xB9BD;&#xD1A0;&#xD310; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8;&#xC758; &#xCC3D;&#xC870;&#xC758; &#xD2B8;&#xB9BD;&#xD1A0;&#xD310; &#xC794;&#xB958;&#xBB3C; &#xC815;&#xC0C1;&#xC801;&#xC778; &#xB9AC;&#xBCF4;&#xC19C; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC744; &#xC5B5;&#xC81C; &#xD55C;&#xB2E4;. &#xC800;&#xD574;&#xB294; ribosomal &#xD504;&#xB85C;&#xC138;&#xC2A4;&#xB294; &#xB9B4;&#xB9AC;&#xC2A4; &#xC694;&#xC778; 2&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; Tnac-trna(pro)&#xC758; &#xAC00;&#xC218;&#xBD84;&#xD574;&#xC640; puromycin TnaC-tRNA(Pro) Tnac&#xC758; peptidyl &#xC804;&#xC1A1;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xC774;&#xBCA4;&#xD2B8;&#xB294; &#xC77C;&#xBC18;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; ribosomal peptidyl&#xACFC; &#xC13C;&#xD130;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC218;&#xD589; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xD604;&#xC7AC;&#xC758; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xC5D0;&#xC11C; G2583A &#xBC0F; U2584C, peptidyl&#xACFC; &#xC13C;&#xD130;&#xC758; 2585 &#xC601;&#xC5ED;&#xC758; 23S rRNA &#xB274;&#xD074;&#xB808;&#xC624;&#xD2F0;&#xB4DC;&#xC758; &#xBCC0;&#xD654; &#xAD00;&#xCC30; &#xD588;&#xB2E4; &#xBC29;&#xCF55; &#xC624; &#xD398;&#xB860; &#xC2DD;&#xC758; &#xCD5C;&#xB300; &#xBC29;&#xCD9C;&#xC744; &#xAC10;&#xC18C; &#xC2DC;&#xD0A4;&#xAE30; &#xC704;&#xD574; &#xD2B8;&#xB9BD;&#xD1A0;&#xD310;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; vivo&#xC5D0;&#xC11C; 50% &#xC720;&#xB3C4; &#xC5BB;&#xAE30; &#xC704;&#xD574; &#xD544;&#xC694;&#xD55C; &#xD2B8;&#xB9BD;&#xD1A0;&#xD310;&#xC758; &#xB18D;&#xB3C4; &#xC601;&#xD5A5;&#xC744; &#xC8FC;&#xC9C0; &#xC54A;&#xACE0;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xBCC0;&#xD654; &#xC911; &#xD558;&#xB098;&#xAC00; &#xB9AC;&#xBCF4;&#xC19C;&#xACFC; &#xC885;&#xC790;&#xC758; &#xC131;&#xC7A5; &#xC18D;&#xB3C4; &#xBD84;&#xBA85; &#xBCC0;&#xACBD; &#xB418;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xBCC0;&#xD654;&#xC640; &#xD568;&#xAED8; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xCCB4; &#xB9AC;&#xBCF4;&#xC19C;&#xACFC; &#xC0DD;&#xCCB4; &#xC678; &#xBD84;&#xC11D; &#xADF8; &#xD2B8;&#xB9BD;&#xD1A0;&#xD310;&#xC740; &#xC57C;&#xC0DD; &#xD615; &#xB9AC;&#xBCF4;&#xC19C;&#xC73C;&#xB85C; puromycin &#xC791;&#xC5C5;&#xC5D0;&#xC11C; TnaC-tRNA(Pro) &#xBCF4;&#xD638;&#xC5D0; &#xD6A8;&#xC728;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC8FC;&#xC5C8;&#xB2E4;. &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098;, &#xC77C;&#xBC18;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xC57C;&#xC0DD;-&#xD0C0;&#xC785; &#xB9AC;&#xBCF4;&#xC19C;&#xACFC; &#xB9C8;&#xCC2C;&#xAC00;&#xC9C0;&#xB85C; &#xCD94;&#xAC00; &#xD2B8;&#xB9BD;&#xD1A0;&#xD310; sparsomycin &#xB3D9;&#xC791;&#xC744; &#xBC29;&#xC9C0; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xC5F0;&#xAD6C; &#xACB0;&#xACFC; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xB450; mutational &#xBCC0;&#xD654; &#xD589;&#xB3D9; peptidyl&#xACFC; &#xD65C;&#xB3D9;&#xC744; &#xC5B5;&#xC81C; &#xD558;&#xB294; &#xB9AC;&#xBCF4;&#xC19C; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xB41C; &#xD2B8;&#xB9BD;&#xD1A0;&#xD310;&#xC758; &#xB2A5;&#xB825;&#xC744; &#xAC10;&#xC18C; &#xC2DC;&#xCF1C; &#xBCF4;&#xB2E4;&#xB294; &#xD2B8;&#xB9BD;&#xD1A0;&#xD310;&#xC5D0; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xD558;&#xB294; &#xB9AC;&#xBCF4;&#xC19C;&#xC758; &#xB2A5;&#xB825;&#xC744; &#xC904;&#xC774;&#xB294; &#xAC83;&#xC774; &#xC88B;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB530;&#xB77C;&#xC11C;, &#xD604;&#xC7AC;&#xC758; &#xC5F0;&#xAD6C; &#xBC29;&#xCF55; &#xC624; &#xD398;&#xB860; &#xC2DD;&#xC758; &#xD6A8;&#xACFC;&#xC801;&#xC778; &#xD2B8;&#xB9BD;&#xD1A0;&#xD310; &#xC720;&#xB3C4; &#xC704;&#xD55C; &#xD544;&#xC218;&#xC801;&#xC778; &#xAC83;&#xC73C;&#xB85C; &#xB098;&#xD0C0;&#xB098;&#xB294; ribosomal peptidyl&#xACFC; &#xC13C;&#xD130; &#xB0B4; &#xD2B9;&#xC815; &#xB274;&#xD074;&#xB808;&#xC624;&#xD2F0;&#xB4DC;&#xB97C; &#xC2DD;&#xBCC4; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Peptidyl&#xACFC; &#xC13C;&#xD130;&#xC5D0;&#xC11C;&#xC758; 23S rRNA &#xB274;&#xD074;&#xB808;&#xC624;&#xD2F0;&#xB4DC; tryptophanase &#xC624; &#xD398;&#xB860; &#xC720;&#xB3C4; &#xB300; &#xD55C; &#xD544;&#xC218;&#xC801;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Rasgos distintivos de la salida del t&#xFA;nel p&#xE9;ptido ribos&#xF3;mico se sabe que son esenciales para el reconocimiento de amino&#xE1;cidos espec&#xED;ficos de un naciente peptidil-tRNA. As&#xED;, un residuo de tript&#xF3;fano en la posici&#xF3;n 12 de la peptidil-ARNt TnaC-ARNt (Pro), lleva a la creaci&#xF3;n de un sitio libre tript&#xF3;fano uni&#xF3;n dentro del ribosoma en la que la envolvente tript&#xF3;fano inhibe las funciones normales del ribosoma. Los procesos ribosomales que son inhibidos son la hidr&#xF3;lisis de TnaC-tRNA (Pro) por el factor de la versi&#xF3;n 2 y la transferencia de la peptidil TnaC de TnaC-tRNA (Pro) a la puromicina. Estos eventos se realizan normalmente en el centro de la peptidil transferasa ribos&#xF3;mica. En el presente estudio, los cambios de nucle&#xF3;tidos 23S rRNA de la regi&#xF3;n 2585 del centro peptidil transferasa, G2583A y U2584C, se observaron para reducir la inducci&#xF3;n m&#xE1;xima de TNA expresi&#xF3;n oper&#xF3;n tript&#xF3;fano por in vivo sin afectar a la concentraci&#xF3;n de tript&#xF3;fano necesario para obtener 50% de inducci&#xF3;n . La tasa de crecimiento de las cepas con los ribosomas con cualquiera de estos cambios no se alter&#xF3; sensiblemente. En los an&#xE1;lisis in vitro con los ribosomas mutantes con estos cambios muestran que el tript&#xF3;fano no fue tan eficiente en la protecci&#xF3;n de TnaC-tRNA (Pro) de la acci&#xF3;n puromicina como de tipo salvaje ribosomas. Sin embargo, a&#xF1;adi&#xF3; tript&#xF3;fano impidi&#xF3; la acci&#xF3;n sparsomycin como lo hace normalmente con el tipo salvaje ribosomas. Estos hallazgos sugieren que estos dos cambios mutacionales actuar reduciendo la capacidad de ribosoma enlazado tript&#xF3;fano para inhibir la actividad de transferasa peptidil en lugar de mediante la reducci&#xF3;n de la capacidad del ribosoma para enlazar tript&#xF3;fano. Por lo tanto, el presente estudio identifica los nucle&#xF3;tidos espec&#xED;ficas en el centro de la peptidil transferasa ribos&#xF3;mica que parecen ser esenciales para la inducci&#xF3;n de tript&#xF3;fano efectiva de la expresi&#xF3;n del oper&#xF3;n tna.

23S rRNA nucle&#xF3;tidos en el centro peptidiltransferasa son esenciales para la inducci&#xF3;n triptofanasa Operon

Tna &#x64CD;&#x7EB5;&#x5B50;&#x7684;&#x5927;&#x80A0;&#x57C3;&#x5E0C;&#x6C0F;&#x5927;&#x80A0;&#x6746;&#x83CC;&#x548C;&#x53D8;&#x5F62;&#x6746;&#x83CC;&#x67CF;&#x7684;&#x8868;&#x8FBE;&#x88AB;&#x8BF1;&#x5BFC; L-&#x8272;&#x6C28;&#x9178;&#x3002;&#x5728;&#x5927;&#x80A0;&#x6746;&#x83CC;&#x3001; &#x8272;&#x6C28;&#x9178;&#x7684;&#x884C;&#x52A8;&#x662F;&#x53D6;&#x51B3;&#x4E8E;&#x51E0;&#x4E2A;&#x5173;&#x952E;&#x6B8B;&#x7559;&#x5728;&#x65B0;&#x5408;&#x6210;&#x7684; TnaC &#x9886;&#x8896;&#x80BD;&#xFF0C;WFNIDXXL/IXXXXP &#xFF08;&#x4E0B;&#x5212;&#x7EBF;&#x90E8;&#x5206;&#xFF09; &#x7684;&#x5B58;&#x5728;&#x3002;P.TnaC &#x5BFB;&#x5E38;&#x578B;&#x548C;&#x5176;&#x4ED6;&#x7EC6;&#x83CC;&#x7684;&#x79CD;&#x7C7B;&#xFF0C;&#x5747;&#x53D7;&#x5230;&#x4FDD;&#x80B2;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x6B8B;&#x7559;&#x7269;&#x3002;P.TnaC &#x67CF;&#x5177;&#x6709;&#x4E00;&#x4E2A;&#x989D;&#x5916;&#x529F;&#x80FD;&#xFF0C;&#x533A;&#x5206;&#x5F00;&#x6765;&#x5927;&#x80A0;&#x6746;&#x83CC; TnaC &#xFF1B;&#x5B83;&#x5305;&#x542B;&#x4E24;&#x4E2A; C &#x7EC8;&#x7AEF;&#x8D56;&#x6C28;&#x9178;&#x6B8B;&#x7559;&#x4E4B;&#x540E;&#x5B88;&#x6052;&#x7684;&#x812F;&#x6C28;&#x9178;&#x6B8B;&#x7559;&#x3002;&#x5728;&#x672C;&#x7814;&#x7A76;&#x4E2D;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x8C03;&#x67E5;&#x4F53;&#x80B2;&#x5BFB;&#x5E38;&#x578B; tna &#x64CD;&#x7EB5;&#x5B50;&#xFF0C;&#x8F6C;&#x79FB;&#x5230;&#x5927;&#x80A0;&#x6746;&#x83CC;&#x8D28;&#x7C92;&#x7684; L-&#x8272;&#x6C28;&#x9178;&#x7684;&#x611F;&#x5E94;&#x3002;L-&#x8272;&#x6C28;&#x9178;&#x611F;&#x5E94;&#x8868;&#x660E;&#x662F;&#x4F9D;&#x8D56; &#xFF1B;&#x4F46;&#x662F;&#x8303;&#x56F4;&#x662F;&#x611F;&#x5E94;&#x7684;&#x5C0F;&#x4E8E;&#x6240;&#x9075;&#x5B88;&#x7684;&#x5927;&#x80A0;&#x6746;&#x83CC; tna &#x64CD;&#x7EB5;&#x5B50;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x6BD4;&#x8F83;&#x9057;&#x4F20;&#x7EC4;&#x7EC7; operons &#x548C;&#x5B83;&#x4EEC;&#x5404;&#x81EA;&#x7684;&#x9886;&#x8896; mRNA &#x6BB5;&#x9884;&#x6D4B;&#x7C7B;&#x4F3C;&#x6298;&#x53E0;&#x6A21;&#x5F0F;&#x3002;&#x7136;&#x800C;&#xFF0C;&#x66F4;&#x591A;&#x7684;&#x5206;&#x6790;&#x8868;&#x660E;&#x4F53;&#x80B2;&#x5BFB;&#x5E38;&#x578B; tna &#x64CD;&#x7EB5;&#x5B50;&#x4E2D;&#x7684; L-&#x8272;&#x6C28;&#x9178;&#x884C;&#x52A8;&#x6D89;&#x53CA;&#x4EE5;&#x4E0B;&#x589E;&#x52A0;&#x7684;&#x812F;&#x6C28;&#x9178;&#xFF0C;&#x800C;&#x4E0D;&#x662F;&#x9886;&#x5BFC;&#x8005;&#x80BD;&#x7EC8;&#x6B62;&#x6291;&#x5236; TnaC &#x65AD;&#x88C2;&#x4F38;&#x957F;&#x7387;&#x7684;&#x6291;&#x5236;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x7ED3;&#x679C;&#x4E5F;&#x5EFA;&#x7ACB; P.TnaC &#x5BFB;&#x5E38;&#x578B;&#x5B88;&#x6052;&#x6B8B;&#x7559;&#x7269;&#x662F;&#x4E0D;&#x53EF;&#x6216;&#x7F3A;&#x7684; L-&#x8272;&#x6C28;&#x9178;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x548C;&#x6291;&#x5236;&#x4F5C;&#x7528;&#x7684;&#x591A;&#x80BD;&#x4F38;&#x957F;&#x3002;&#x56E0;&#x6B64;&#xFF0C;TnaC &#x5408;&#x6210;&#x662F;&#x4F18;&#x79C0;&#x6A21;&#x578B;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x7814;&#x7A76;&#x8C03;&#x8282;&#x80BD;&#x7EC8;&#x6B62;&#x4E0E;&#x80BD;&#x4F38;&#x957F;&#x548C;&#x6838;&#x7CD6;&#x4F53;&#x8BC6;&#x522B;&#x7279;&#x5F81;&#x7684;&#x65B0;&#x751F;&#x80BD;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x3002;

&#x8272;&#x6C28;&#x9178;&#x6291;&#x5236;&#x6746;&#x83CC; TnaC &#x9886;&#x8896;&#x80BD;&#x4F38;&#x957F;&#xFF0C;&#x6FC0;&#x6D3B; tna &#x64CD;&#x7EB5;&#x5B50;&#x8868;&#x8FBE;&#x5F0F;&#x3002;

Expression of the tna operon of Escherichia coli and of Proteus vulgaris is induced by L-tryptophan. In E. coli, tryptophan action is dependent on the presence of several critical residues (underlined) in the newly synthesized TnaC leader peptide, WFNIDXXL/IXXXXP. These residues are conserved in TnaC of P. vulgaris and of other bacterial species. TnaC of P. vulgaris has one additional feature, distinguishing it from TnaC of E. coli; it contains two C-terminal lysine residues following the conserved proline residue. In the present study, we investigated L-tryptophan induction of the P. vulgaris tna operon, transferred on a plasmid into E. coli. Induction was shown to be L-tryptophan dependent; however, the range of induction was less than that observed for the E. coli tna operon. We compared the genetic organization of both operons and predicted similar folding patterns for their respective leader mRNA segments. However, additional analyses revealed that L-tryptophan action in the P. vulgaris tna operon involves inhibition of TnaC elongation, following addition of proline, rather than inhibition of leader peptide termination. Our findings also establish that the conserved residues in TnaC of P. vulgaris are essential for L-tryptophan induction, and for inhibition of peptide elongation. TnaC synthesis is thus an excellent model system for studies of regulation of both peptide termination and peptide elongation, and for studies of ribosome recognition of the features of a nascent peptide.

Tryptophan inhibits Proteus vulgaris TnaC leader peptide elongation, activating tna operon expression.

L&#x26;#39;expression de l&#x26;#39;op&#xE9;ron tna d&#x26;#39;Escherichia coli et de Proteus vulgaris est induite par la L-tryptophane. Dans E. coli, l&#x26;#39;action du tryptophane est d&#xE9;pendante de la pr&#xE9;sence de plusieurs r&#xE9;sidus critiques (soulign&#xE9;) dans le peptide de t&#xEA;te TNAC nouvellement synth&#xE9;tis&#xE9;, WFNIDXXL / IXXXXP. Ces r&#xE9;sidus sont conserv&#xE9;s dans les CCNT de P. vulgaris et d&#x26;#39;autres esp&#xE8;ces bact&#xE9;riennes. CCNT de P. vulgaris a une caract&#xE9;ristique suppl&#xE9;mentaire, le distinguant de CCNT de E. coli, il contient deux r&#xE9;sidus C-terminaux qui suivent la lysine r&#xE9;sidu conserv&#xE9; proline. Dans la pr&#xE9;sente &#xE9;tude, nous avons &#xE9;tudi&#xE9; le L-tryptophane induction de l&#x26;#39;op&#xE9;ron tna P. vulgaris, transf&#xE9;r&#xE9;es sur un plasmide dans E. coli. Induction a &#xE9;t&#xE9; d&#xE9;montr&#xE9; que le L-tryptophane &#xE0; charge; toutefois, la gamme de l&#x26;#39;induction a &#xE9;t&#xE9; inf&#xE9;rieur &#xE0; celui observ&#xE9; pour le E. coli tna op&#xE9;ron. Nous avons compar&#xE9; l&#x26;#39;organisation g&#xE9;n&#xE9;tique de deux op&#xE9;rons et pr&#xE9;dit similaires modes de pliage pour leurs segments respectifs d&#x26;#39;ARNm leader. Cependant, des analyses suppl&#xE9;mentaires ont r&#xE9;v&#xE9;l&#xE9; que le L-tryptophane action dans le P. vulgaris tna op&#xE9;ron implique l&#x26;#39;inhibition de l&#x26;#39;&#xE9;longation du CCNT, outre la suite de la proline, plut&#xF4;t que l&#x26;#39;inhibition de la r&#xE9;siliation peptide leader. Nos r&#xE9;sultats &#xE9;tablissent &#xE9;galement que les r&#xE9;sidus conserv&#xE9;s dans CCNT de P. vulgaris sont essentiels pour le L-tryptophane par induction, et pour l&#x26;#39;inhibition de l&#x26;#39;&#xE9;longation peptidique. Synth&#xE8;se CCNT est donc un excellent mod&#xE8;le pour les &#xE9;tudes de la r&#xE9;glementation &#xE0; la fois de la r&#xE9;siliation et l&#x26;#39;allongement peptide peptide, et pour les &#xE9;tudes de reconnaissance du ribosome des caract&#xE9;ristiques d&#x26;#39;un peptide naissant.

Le tryptophane Inhibe Proteus vulgaris CCNT chef Allongement Peptide Activation Tna Operon Expression

Ausdruck der Tna-Operon von Escherichia coli und Proteus Vulgaris wird durch L-Tryptophan ausgel&ouml;st. In E. Coli ist Tryptophan Aktion mehrere kritische R&uuml;ckst&auml;nde (unterstrichen), in das neugebildete TnaC F&uuml;hrer Peptid, WFNIDXXL/IXXXXP abh&auml;ngig. Diese R&uuml;ckst&auml;nde sind in TnaC von s. Vulgaris und andere bakterielle Arten konserviert. TnaC von s. Vulgaris hat eine zus&auml;tzliche Option, die es von TnaC von E. coli zu unterscheiden; Es enth&auml;lt zwei C-terminalen Lysin R&uuml;ckst&auml;nde nach den konservierten Prolin-R&uuml;ckstand. In der vorliegenden Studie untersuchten wir L-Tryptophan Induktion von p. Vulgaris Tna-Operon, &uuml;bertragen auf einem Plasmid in Escherichia Coli. Induktion wurde gezeigt, dass L-Tryptophan angewiesen; die Palette der Induktion war jedoch kleiner als die f&uuml;r die E. Coli-Tna-Operon beobachtet. Wir verglichen die genetische Organisation der Operone und vorhergesagten &auml;hnliche faltende Muster f&uuml;r ihre jeweiligen F&uuml;hrer mRNA Segmente. Zus&auml;tzliche Analysen ergab jedoch, da&szlig; L-Tryptophan-Aktion in der p. Vulgaris-Tna-Operon Hemmung der TnaC Dehnung, folgenden Zusatz von Prolin und nicht Hemmung der Anf&uuml;hrer Peptid K&uuml;ndigung verbunden. Unsere Sachaufkl&auml;rung auch, dass die konservierten R&uuml;ckst&auml;nde in TnaC von s. Vulgaris wesentlich f&uuml;r L-Tryptophan-Induktion und Hemmung der Peptid-Dehnung. TnaC-Synthese ist somit ein hervorragendes Modell-System f&uuml;r Studien der Regulierung der Peptid-K&uuml;ndigung und Peptid-Dehnung und Studien der Ribosom Anerkennung der Eigenschaften des entstehenden Peptid.

Tryptophan hemmt Proteus Vulgaris TnaC F&uuml;hrer Peptid Dehnung, Tna Operon Ausdruck zu aktivieren.

Espressione dell&#39;operone tna di Escherichia coli e Proteus vulgaris &egrave; indotta da L-triptofano. E. coli, azione di triptofano &egrave; dipendente dalla presenza di diversi residui critici (sottolineato) in recentemente sintetizzato peptide leader TnaC, WFNIDXXL/IXXXXP. Questi residui sono conservate in TnaC di P. vulgaris e di altre specie batteriche. TnaC di P. vulgaris ha una caratteristica aggiuntiva, distinguendolo da TnaC di E. coli; esso contiene due residui di lisina C-terminale seguendo i residui di prolina conservata. Nel presente studio, abbiamo studiato ad induzione di L-triptofano dell&#39;operone tna p. vulgaris, trasferito su un plasmide in e. coli. Induzione &egrave; stato indicato per essere L-triptofano dipendenti; Tuttavia, la gamma di induzione &egrave; stata inferiore a quella osservata per l&#39;e. coli tna operone. Abbiamo confrontato l&#39;organizzazione genetica di operoni sia previsti simili modelli pieghevoli per segmenti di mRNA loro rispettivi leader. Tuttavia, ulteriori analisi hanno rivelato che azione di L-triptofano in tna operone p. vulgaris comporta l&#39;inibizione di TnaC allungamento, nell&#39;aggiunta di prolina, piuttosto che l&#39;inibizione della terminazione del peptide leader. I nostri risultati anche stabiliscono che i residui conservati TnaC di P. vulgaris sono essenziali per l&#39;induzione di L-triptofano e per inibizione dell&#39;allungamento del peptide. TnaC sintesi sono quindi un sistema eccellente modello per gli studi del regolamento di terminazione del peptide e di allungamento del peptide e per gli studi di riconoscimento del ribosoma delle caratteristiche di un peptide nascente.

Triptofano inibisce Proteus vulgaris allungamento di peptide leader TnaC, attivando l&#39;espressione operone tna.

&#x5927;&#x8178;&#x83CC;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C6;&#x30A6;&#x30B9;&#xB7;&#x30D6;&#x30EB;&#x30AC;&#x30EA;&#x30B9;&#x306E;TNA&#x30AA;&#x30DA;&#x30ED;&#x30F3;&#x306E;&#x767A;&#x73FE;&#x306F;&#x3001;L-&#x30C8;&#x30EA;&#x30D7;&#x30C8;&#x30D5;&#x30A1;&#x30F3;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x8A98;&#x5C0E;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x3002;&#x5927;&#x8178;&#x83CC;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x30C8;&#x30EA;&#x30D7;&#x30C8;&#x30D5;&#x30A1;&#x30F3;&#x306E;&#x30A2;&#x30AF;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x306F;&#x3001;&#x65B0;&#x305F;&#x306B;&#x5408;&#x6210;&#x3055;&#x308C;&#x305F;TnaC&#x30EA;&#x30FC;&#x30C0;&#x30FC;&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C9;&#x306E;&#x3044;&#x304F;&#x3064;&#x304B;&#x306E;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x6B8B;&#x57FA;&#xFF08;&#x4E0B;&#x7DDA;&#xFF09;&#x3001;WFNIDXXL / IXXXXP&#x306E;&#x5B58;&#x5728;&#x306B;&#x4F9D;&#x5B58;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x6B8B;&#x57FA;&#x306F;&#x3001;P. vulgaris&#x306E;TnaC&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x4ED6;&#x306E;&#x7D30;&#x83CC;&#x7A2E;&#x306E;&#x4FDD;&#x5B58;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002; P. vulgaris&#x306E;TnaC&#x306F;&#x3001;&#x5927;&#x8178;&#x83CC;&#x306E;TnaC&#x3068;&#x533A;&#x5225;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x3001;1&#x3064;&#x306E;&#x8FFD;&#x52A0;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3092;&#x6301;&#x3063;&#x3066;&#x3001;&#x305D;&#x308C;&#x306F;&#x4FDD;&#x5B58;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x30D7;&#x30ED;&#x30EA;&#x30F3;&#x6B8B;&#x57FA;&#x306B;&#x7D9A;&#x304F;2&#x3064;&#x306E;C&#x672B;&#x7AEF;&#x306E;&#x30EA;&#x30B8;&#x30F3;&#x6B8B;&#x57FA;&#x3092;&#x542B;&#x3093;&#x3067;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x672C;&#x7814;&#x7A76;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x5927;&#x8178;&#x83CC;&#x306B;&#x30D7;&#x30E9;&#x30B9;&#x30DF;&#x30C9;&#x4E0A;&#x3067;&#x8EE2;&#x9001;&#x3055;&#x308C;&#x308B;P.&#x5C0B;&#x5E38;TNA&#x30AA;&#x30DA;&#x30ED;&#x30F3;&#x306E;L-&#x30C8;&#x30EA;&#x30D7;&#x30C8;&#x30D5;&#x30A1;&#x30F3;&#x306E;&#x8A98;&#x5C0E;&#x3092;&#x691C;&#x8A0E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x8A98;&#x5C0E;&#x306F;&#x3001;L-&#x30C8;&#x30EA;&#x30D7;&#x30C8;&#x30D5;&#x30A1;&#x30F3;&#x4F9D;&#x5B58;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x793A;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x304C;&#x3001;&#x8A98;&#x5C0E;&#x306E;&#x7BC4;&#x56F2;&#x306F;&#x3001;&#x5927;&#x8178;&#x83CC;&#x30AA;&#x30DA;&#x30ED;&#x30F3;TNA&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x89B3;&#x5BDF;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3082;&#x306E;&#x3088;&#x308A;&#x3082;&#x5C11;&#x306A;&#x304B;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x4E21;&#x65B9;&#x306E;&#x30AA;&#x30DA;&#x30ED;&#x30F3;&#x306E;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x69CB;&#x6210;&#x3092;&#x6BD4;&#x8F03;&#x3057;&#x3001;&#x305D;&#x308C;&#x305E;&#x308C;&#x306E;&#x30EA;&#x30FC;&#x30C0;&#x30FC;&#x306E;mRNA&#x306E;&#x30BB;&#x30B0;&#x30E1;&#x30F3;&#x30C8;&#x306B;&#x5BFE;&#x3057;&#x3066;&#x540C;&#x69D8;&#x306E;&#x6298;&#x308A;&#x7573;&#x307F;&#x30D1;&#x30BF;&#x30FC;&#x30F3;&#x3092;&#x4E88;&#x6E2C;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x305F;&#x3060;&#x3057;&#x3001;&#x8FFD;&#x52A0;&#x306E;&#x5206;&#x6790;&#x306F;&#x3001;P.&#x5C0B;&#x5E38;TNA&#x30AA;&#x30DA;&#x30ED;&#x30F3;&#x4E2D;&#x306E;L-&#x30C8;&#x30EA;&#x30D7;&#x30C8;&#x30D5;&#x30A1;&#x30F3;&#x306E;&#x30A2;&#x30AF;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x304C;TnaC&#x306E;&#x4F38;&#x9577;&#x963B;&#x5BB3;&#x3001;&#x30D7;&#x30ED;&#x30EA;&#x30F3;&#x306E;&#x5F8C;&#x306B;&#x52A0;&#x3048;&#x3066;&#x3067;&#x306F;&#x306A;&#x304F;&#x3001;&#x30EA;&#x30FC;&#x30C0;&#x30FC;&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C9;&#x7D42;&#x7AEF;&#x306E;&#x963B;&#x5BB3;&#x3092;&#x4F34;&#x3046;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306E;&#x8ABF;&#x67FB;&#x7D50;&#x679C;&#x306F;&#x307E;&#x305F;&#x3001;P. vulgaris&#x306E;TnaC&#x306B;&#x4FDD;&#x5B58;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x6B8B;&#x57FA;&#x306F;&#x3001;L-&#x30C8;&#x30EA;&#x30D7;&#x30C8;&#x30D5;&#x30A1;&#x30F3;&#x306E;&#x8A98;&#x5C0E;&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C9;&#x4F38;&#x9577;&#x306E;&#x6291;&#x5236;&#x306B;&#x5FC5;&#x9808;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x898F;&#x5B9A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002; TnaC&#x5408;&#x6210;&#x306F;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306B;&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C9;&#x306E;&#x7D42;&#x7AEF;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C9;&#x4F38;&#x9577;&#x306E;&#x4E21;&#x65B9;&#x306E;&#x898F;&#x5236;&#x306E;&#x7814;&#x7A76;&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x65B0;&#x751F;&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C9;&#x306E;&#x6A5F;&#x80FD;&#x306E;&#x30EA;&#x30DC;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x8A8D;&#x8B58;&#x306E;&#x7814;&#x7A76;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x512A;&#x308C;&#x305F;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E0;&#x3067;&#x3059;&#x3002;

&#x30C8;&#x30EA;&#x30D7;&#x30C8;&#x30D5;&#x30A1;&#x30F3;&#x306F;&#x3001;TNA&#x30AA;&#x30DA;&#x30ED;&#x30F3;&#x767A;&#x73FE;&#x3092;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x3001;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C6;&#x30A6;&#x30B9;&#xB7;&#x30D6;&#x30EB;&#x30AC;&#x30EA;&#x30B9;TnaC&#x30EA;&#x30FC;&#x30C0;&#x30FC;&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C9;&#x306E;&#x4F38;&#x9577;&#x3092;&#x963B;&#x5BB3;

&#xB300;&#xC7A5;&#xADE0; &#xBC0F; &#xD504;&#xB85C;&#xD14C;&#xC6B0;&#xC2A4; vulgaris &#xBC29;&#xCF55; &#xC624; &#xD398;&#xB860; &#xC2DD; L-&#xD2B8;&#xB9BD;&#xD1A0;&#xD310;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC720;&#xBC1C; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB300;&#xC7A5;&#xADE0;, &#xD2B8;&#xB9BD;&#xD1A0;&#xD310; &#xC791;&#xC5C5; (&#xBC11;&#xC904;) &#xC0C8;&#xB85C; &#xD569;&#xC131; &#xB41C; TnaC &#xC9C0;&#xB3C4;&#xC790; &#xD3A9;&#xD0C0;&#xC774;&#xB4DC;, WFNIDXXL/IXXXXP&#xC5D0;&#xC11C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBA87; &#xAC00;&#xC9C0; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xC794;&#xB958;&#xBB3C;&#xC758; &#xC874;&#xC7AC;&#xC5D0; &#xC885;&#xC18D; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xC794;&#xB958;&#xBB3C; P. TnaC vulgaris &#xBC0F; &#xAE30;&#xD0C0; &#xC138;&#xADE0;&#xC131; &#xC885;&#xC758; &#xBCF4;&#xC874; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. P. TnaC vulgaris&#xB294; Tnac&#xC758; E. &#xCF5C;&#xB77C;&#xAC00;;&#xC5D0;&#xC11C; &#xAD6C;&#xBCC4; &#xD558;&#xB098; &#xCD94;&#xAC00; &#xAE30;&#xB2A5; &#xB450; &#xB2E8;&#xC790; lysine &#xC794;&#xB958;&#xBB3C; &#xBCF4;&#xC874;&#xB41C; &#xD504;&#xB864;&#xB9B0; &#xCC0C; &#xAEBC; &#xAE30;&#xC5D0; &#xB530;&#xB77C; &#xD3EC;&#xD568; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xD604;&#xC7AC;&#xC758; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; P. vulgaris &#xBC29;&#xCF55; &#xC624; &#xD398;&#xB860;, &#xB300;&#xC7A5;&#xADE0;&#xC5D0;&#xB294; &#xD50C;&#xB77C;&#xC2A4; &#xBBF8;&#xB4DC;&#xC5D0; &#xC804;&#xC1A1;&#xC758; L-&#xD2B8;&#xB9BD;&#xD1A0;&#xD310; &#xC720;&#xB3C4; &#xC870;&#xC0AC;. &#xC720;&#xB3C4; L-&#xD2B8;&#xB9BD;&#xD1A0;&#xD310; &#xD45C;&#xC2DC; &#xC885;&#xC18D;; &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098;, &#xC720;&#xB3C4;&#xC758; &#xBC94;&#xC704;&#xB294; &#xB300;&#xC7A5;&#xADE0; &#xBC29;&#xCF55; &#xC624; &#xD398;&#xB860;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xAD00;&#xCC30; &#xBCF4;&#xB2E4;&#xB294; &#xB354; &#xC801;&#xC740;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; operons &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC758; &#xAC01;&#xAC01; &#xC9C0;&#xB3C4;&#xC790; mRNA &#xC138;&#xADF8;&#xBA3C;&#xD2B8;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC608;&#xCE21;&#xB41C; &#xBE44;&#xC2B7;&#xD55C; &#xC811;&#xB294; &#xD328;&#xD134;&#xC758; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xC870;&#xC9C1; &#xBE44;&#xAD50;. &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098;, &#xCD94;&#xAC00; &#xBD84;&#xC11D; P. vulgaris &#xBC29;&#xCF55; &#xC624; &#xD398;&#xB860;&#xC5D0;&#xC11C; L-&#xD2B8;&#xB9BD;&#xD1A0;&#xD310; &#xC791;&#xC5C5; &#xD3EC;&#xD568; TnaC &#xC5F0;&#xC2E0; &#xC728;, &#xD504;&#xB864;&#xB9B0;, &#xB2E4;&#xC74C; &#xCD94;&#xAC00; &#xC544;&#xB2CC; &#xC9C0;&#xB3C4;&#xC790; &#xD3A9; &#xD2F0; &#xB4DC; &#xC885;&#xB2E8;&#xC758; &#xC800;&#xD574;&#xB97C; &#xC5B5;&#xC81C; &#xBC1D;&#xD600;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xC5F0;&#xAD6C; &#xACB0;&#xACFC; &#xD53C; TnaC vulgaris&#xC5D0; &#xBCF4;&#xC874;&#xB41C; &#xC794;&#xB958;&#xBB3C;&#xC740; L-&#xD2B8;&#xB9BD;&#xD1A0;&#xD310; &#xC720;&#xB3C4; &#xBC0F; &#xC5B5;&#xC81C; &#xD3A9; &#xD2F0; &#xB4DC; &#xC5F0;&#xC2E0; &#xC728;&#xC758; &#xD544;&#xC218; &#xC124;&#xC815;. TnaC &#xD569;&#xC131; &#xB530;&#xB77C;&#xC11C; &#xD3A9; &#xD2F0; &#xB4DC; &#xC885;&#xB8CC; &#xBC0F; &#xD3A9; &#xD2F0; &#xB4DC; &#xC5F0;&#xC2E0; &#xC728;&#xC758; &#xADDC;&#xC81C;&#xC758; &#xC5F0;&#xAD6C; &#xBC0F; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xC758; &#xCD08;&#xAE30; &#xD3A9; &#xD2F0; &#xB4DC;&#xC758; &#xAE30;&#xB2A5; &#xB9AC;&#xBCF4;&#xC19C; &#xC778;&#xC2DD;&#xC758; &#xC6B0;&#xC218;&#xD55C; &#xBAA8;&#xB378; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xD2B8;&#xB9BD;&#xD1A0;&#xD310; Proteus vulgaris&#xB97C; TnaC &#xB9AC;&#xB354; &#xD3A9; &#xD2F0; &#xB4DC; &#xC5F0;&#xC2E0; &#xC728;, &#xBC29;&#xCF55; &#xC624; &#xD398;&#xB860; &#xC2DD; &#xD65C;&#xC131;&#xD654;&#xB97C; &#xC5B5;&#xC81C; &#xD55C;&#xB2E4;.

Expresi&#xF3;n del oper&#xF3;n TNA de Escherichia coli y de Proteus vulgaris es inducida por L-tript&#xF3;fano. En E. coli, la acci&#xF3;n tript&#xF3;fano es dependiente de la presencia de varios residuos cr&#xED;ticos (subrayado) en el p&#xE9;ptido l&#xED;der reci&#xE9;n sintetizado TnaC, WFNIDXXL / IXXXXP. Estos residuos se conservan en TnaC de P. vulgaris y de otras especies bacterianas. TnaC de P. vulgaris tiene una caracter&#xED;stica adicional, que la distingue de TnaC de E. coli, que contiene dos C-terminal de los residuos de lisina tras el residuo de prolina conservado. En el presente estudio, se investig&#xF3; la L-tript&#xF3;fano inducci&#xF3;n de la P. vulgaris oper&#xF3;n TNA, transferidos sobre un pl&#xE1;smido en E. coli. La inducci&#xF3;n se demostr&#xF3; que era dependiente de L-tript&#xF3;fano, sin embargo, la gama de inducci&#xF3;n fue menor que la observada para el E. coli oper&#xF3;n TNA. Se compar&#xF3; la organizaci&#xF3;n gen&#xE9;tica de ambos operones y predijo similares patrones de plegado en sus respectivos segmentos l&#xED;der de mRNA. Sin embargo, los an&#xE1;lisis adicionales revelaron que la L-tript&#xF3;fano acci&#xF3;n en el P. vulgaris oper&#xF3;n TNA implica la inhibici&#xF3;n de la elongaci&#xF3;n TnaC, tras la adici&#xF3;n de prolina, en lugar de la inhibici&#xF3;n de la terminaci&#xF3;n p&#xE9;ptido l&#xED;der. Nuestros resultados tambi&#xE9;n establecen que los residuos conservados en TnaC de P. vulgaris son esenciales para L-tript&#xF3;fano de inducci&#xF3;n, y para la inhibici&#xF3;n de la elongaci&#xF3;n de p&#xE9;ptidos. S&#xED;ntesis TnaC tanto, es un excelente sistema modelo para estudios de regulaci&#xF3;n de ambos terminaci&#xF3;n p&#xE9;ptido y la elongaci&#xF3;n de p&#xE9;ptidos, y para estudios de reconocimiento ribosoma de las caracter&#xED;sticas de un p&#xE9;ptido naciente.

El tript&#xF3;fano inhibe Proteus vulgaris TnaC L&#xED;der elongaci&#xF3;n del p&#xE9;ptido, la activaci&#xF3;n de la expresi&#xF3;n del oper&#xF3;n Tna

&#x6838;&#x7CD6;&#x4F53;&#x50AC;&#x5316;&#x4F7F;&#x7528;&#x8F6C;&#x79FB; Rna &#x548C;&#x8F85;&#x52A9;&#x86CB;&#x767D;&#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x5408;&#x6210;&#x3002;&#x4ECE;&#x5386;&#x53F2;&#x4E0A;&#x770B;&#xFF0C;&#x6838;&#x7CD6;&#x4F53;&#x88AB;&#x89C6;&#x4E3A;&#x975E;&#x7279;&#x5F02;&#x6027;&#x5E73;&#x79FB;&#x673A;&#x3001; &#x6709;&#x65E0;&#x76D1;&#x7BA1;&#x7684;&#x804C;&#x80FD;&#x3002;&#x7136;&#x800C;&#xFF0C;&#x4E00;&#x7C7B;&#x65B0;&#x7684;&#x89C4;&#x7BA1;&#x673A;&#x5236;&#x53D1;&#x73B0;&#xFF0C;&#x57FA;&#x4E8E;&#x6838;&#x7CD6;&#x4F53;&#x80BD;&#x9000;&#x51FA;&#x96A7;&#x9053;&#x5185;&#x53D1;&#x751F;&#x7684;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x5BFC;&#x81F4;&#x6838;&#x7CD6;&#x4F53;&#x505C;&#x6EDE;&#x671F;&#x95F4;&#x9002;&#x5F53;&#x7684; mRNA &#x90E8;&#x5206;&#x7684;&#x7FFB;&#x8BD1;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x53D1;&#x73B0;&#x8868;&#x660E;&#xFF0C;&#x5728;&#x610F;&#x5916;&#x52A8;&#x6001;&#x6838;&#x7CD6;&#x4F53;&#x4E2D;&#x4F5C;&#x7528;&#x8C03;&#x8282;&#x81EA;&#x5DF1;&#x7684;&#x6D3B;&#x52A8;&#x3002;&#x901A;&#x8FC7;&#x4F7F;&#x7528;&#x65B0;&#x751F;&#x9886;&#x8896;&#x80BD;&#x4E0E;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x7279;&#x5B9A;&#x6C28;&#x57FA;&#x9178;&#x6216;&#x6297;&#x751F;&#x7D20;&#x7ED3;&#x5408;&#xFF0C;&#x53EF;&#x4EE5;&#x6539;&#x53D8;&#x6838;&#x7CD6;&#x4F53;&#x529F;&#x80FD;&#x5927;&#x5927;&#x5BFC;&#x81F4;&#x4E0B;&#x6E38;&#x7684;&#x7F16;&#x7801;&#x533A;&#x57DF;&#x7684;&#x8C03;&#x8282;&#x8868;&#x8FBE;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E00;&#x5BA1;&#x67E5;&#x603B;&#x7ED3;&#x4E86;&#x6709;&#x5173;&#x7684;&#x8C03;&#x67E5;&#x7ED3;&#x679C;&#xFF0C;&#x5728;&#x6700;&#x8FD1;&#x7684;&#x6587;&#x7AE0;&#xFF0C;&#x5E76;&#x6982;&#x8FF0;&#x4E86;&#x6211;&#x4EEC;&#x5F53;&#x524D;&#x7684;&#x505C;&#x6EDE;&#x5728;&#x57FA;&#x56E0;&#x8868;&#x8FBE;&#x8C03;&#x63A7;&#x7684;&#x65B0;&#x751F;&#x80BD;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x6838;&#x7CD6;&#x4F53;&#x7406;&#x89E3;&#x3002;

&#x5F71;&#x54CD;&#x6838;&#x7CD6;&#x4F53;&#x529F;&#x80FD;&#x7684;&#x65B0;&#x751F;&#x591A;&#x80BD;&#x5E8F;&#x5217;&#x3002;

Ribosomes catalyze protein synthesis using transfer RNAs and auxiliary proteins. Historically, ribosomes have been considered nonspecific translational machines, having no regulatory functions. However, a new class of regulatory mechanisms has been discovered that is based on interactions occurring within the ribosomal peptide exit tunnel that result in ribosome stalling during translation of an appropriate mRNA segment. These discoveries reveal an unexpectedly dynamic role ribosomes play in regulating their own activity. By using nascent leader peptides in combination with bound specific amino acids or antibiotics, ribosome functions can be altered significantly resulting in regulated expression of downstream coding regions. This review summarizes relevant findings in recent articles and outlines our current understanding of nascent peptide-induced ribosome stalling in regulating gene expression.

Nascent polypeptide sequences that influence ribosome function.

Ribosomes catalyser la synth&#xE8;se des prot&#xE9;ines en utilisant ARN de transfert et des prot&#xE9;ines auxiliaires. Historiquement, les ribosomes ont &#xE9;t&#xE9; consid&#xE9;r&#xE9;es comme non sp&#xE9;cifiques des machines de translation, n&#x26;#39;ayant pas de fonctions de r&#xE9;glementation. Toutefois, une nouvelle classe de m&#xE9;canismes de r&#xE9;gulation a &#xE9;t&#xE9; d&#xE9;couvert qui est bas&#xE9;e sur les interactions qui se produisent dans le tunnel de sortie du ribosome peptide qui se traduisent par des ribosomes d&#xE9;crochage lors de la traduction d&#x26;#39;un segment d&#x26;#39;ARNm appropri&#xE9;e. Ces d&#xE9;couvertes r&#xE9;v&#xE8;lent un r&#xF4;le ribosomes inattendue dynamiques jouent dans la r&#xE9;gulation de leur propre activit&#xE9;. En utilisant des peptides leaders naissants en combinaison avec des acides amin&#xE9;s sp&#xE9;cifiques li&#xE9;s ou des antibiotiques, les fonctions des ribosomes peuvent &#xEA;tre modifi&#xE9;es de mani&#xE8;re significative entra&#xEE;nant une expression r&#xE9;gul&#xE9;e en aval des r&#xE9;gions codantes. Cette revue r&#xE9;sume les conclusions pertinentes dans des articles r&#xE9;cents et expose notre compr&#xE9;hension actuelle de la naissante induite par le peptide ribosome d&#xE9;crochage dans la r&#xE9;gulation de l&#x26;#39;expression des g&#xE8;nes.

Naissantes s&#xE9;quences polypeptidiques qui influencent la fonction des ribosomes

Ribosomen Proteinsynthese mit Transfer-RNAs und zus&auml;tzliche Proteine zu katalysieren. In der Vergangenheit wurden Ribosomen unspezifische translationale Maschinen, haben keine regulatorischen Funktionen ber&uuml;cksichtigt. Jedoch wurde eine neue Klasse von Regelungsmechanismen entdeckt, die Interaktionen innerhalb des ribosomal Peptid-Tunnels Ausfahrt zugrunde liegt, die Ribosom stagniert bei der &Uuml;bersetzung von einem entsprechenden mRNA-Segment f&uuml;hren. Diese Entdeckungen offenbaren eine unerwartet dynamische Rolle Ribosomen spielen bei der Regulierung ihrer eigenen T&auml;tigkeit. Durch die Verwendung entstehenden F&uuml;hrer Peptide in Kombination mit gebundenen spezifischen Aminos&auml;uren oder Antibiotika, k&ouml;nnen Ribosom Funktionen deutlich was zu regulierten Ausdruck der nachgeschalteten proteinkodierenden Regionen ge&auml;ndert werden. Diesen Bericht fasst die relevanten Ergebnisse in den letzten Artikeln zusammen und skizziert unser gegenw&auml;rtige Verst&auml;ndnis der entstehenden Peptid-induzierte Ribosom stagniert bei der Regulierung der Genexpression.

Polypeptid-Sequenzen, die Ribosom Funktion zu beeinflussen.

I ribosomi catalizzano sintesi proteica mediante trasferimento RNA e proteine ausiliarie. Storicamente, i ribosomi sono stati considerati macchine traslazionale aspecifici, non avendo funzioni di regolamentazione. Tuttavia, &egrave; stata scoperta una nuova classe di meccanismi regolatori che si basa sulle interazioni che si verificano all&#39;interno del tunnel di uscita ribosomal peptide che si traducono in ribosoma stallo durante la traduzione di un segmento di mRNA appropriato. Queste scoperte rivelano un ruolo inaspettatamente dinamico ribosomi giocare nel regolare le proprie attivit&agrave;. Usando peptidi leader nascente in combinazione con aminoacidi specifici associati o antibiotici, funzioni del ribosoma possono essere alterate significativamente con conseguente espressione regolamentato delle regioni codificanti a valle. Questa recensione riassume i risultati pertinenti in recenti articoli e delinea la nostra attuale comprensione della nascente ribosoma indotta dal peptide stallo nella regolazione della espressione genica.

Sequenze di polipeptide nascente che influenzano la funzione del ribosoma.

&#x30EA;&#x30DC;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x306F;&#x3001;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30D5;&#x30A1;&#x30FC;RNA&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x88DC;&#x52A9;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x305F;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x5408;&#x6210;&#x3092;&#x89E6;&#x5A92;&#x3059;&#x308B;&#x3002;&#x6B74;&#x53F2;&#x7684;&#x306B;&#x3001;&#x30EA;&#x30DC;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x306F;&#x306A;&#x304F;&#x898F;&#x5236;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3092;&#x6709;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x306A;&#x3044;&#x3001;&#x975E;&#x7279;&#x7570;&#x7684;&#x306A;&#x7FFB;&#x8A33;&#x6A5F;&#x3068;&#x8003;&#x3048;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x304D;&#x305F;&#x3002;&#x3057;&#x304B;&#x3057;&#x3001;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x6A5F;&#x69CB;&#x306E;&#x65B0;&#x3057;&#x3044;&#x30AF;&#x30E9;&#x30B9;&#x306F;&#x3001;&#x30EA;&#x30DC;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x304C;&#x9069;&#x5207;&#x306A;mRNA&#x306E;&#x30BB;&#x30B0;&#x30E1;&#x30F3;&#x30C8;&#x306E;&#x5909;&#x63DB;&#x6642;&#x306B;&#x5931;&#x901F;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x30EA;&#x30DC;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C9;&#x51FA;&#x53E3;&#x30C8;&#x30F3;&#x30CD;&#x30EB;&#x5185;&#x3067;&#x767A;&#x751F;&#x3059;&#x308B;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x306B;&#x57FA;&#x3065;&#x3044;&#x3066;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x767A;&#x898B;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x767A;&#x898B;&#x306F;&#x3001;&#x72EC;&#x81EA;&#x306E;&#x6D3B;&#x52D5;&#x3092;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x3059;&#x308B;&#x306E;&#x306B;&#x4E88;&#x671F;&#x305B;&#x305A;&#x3001;&#x52D5;&#x7684;&#x30ED;&#x30FC;&#x30EB;&#x30EA;&#x30DC;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x30D7;&#x30EC;&#x30A4;&#x3092;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C9;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x7279;&#x5B9A;&#x306E;&#x30A2;&#x30DF;&#x30CE;&#x9178;&#x3084;&#x6297;&#x751F;&#x7269;&#x8CEA;&#x3068;&#x7D44;&#x307F;&#x5408;&#x308F;&#x305B;&#x3066;&#x3001;&#x65B0;&#x751F;&#x30EA;&#x30FC;&#x30C0;&#x30FC;&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C9;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3088;&#x308A;&#x3001;&#x30EA;&#x30DC;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x306E;&#x6A5F;&#x80FD;&#x304C;&#x5927;&#x5E45;&#x306B;&#x30B3;&#x30FC;&#x30C7;&#x30A3;&#x30F3;&#x30B0;&#x9818;&#x57DF;&#x306E;&#x4E0B;&#x6D41;&#x306B;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x767A;&#x73FE;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x3092;&#x5909;&#x66F4;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x30EC;&#x30D3;&#x30E5;&#x30FC;&#x306F;&#x3001;&#x6700;&#x8FD1;&#x306E;&#x8A18;&#x4E8B;&#x306B;&#x95A2;&#x9023;&#x3059;&#x308B;&#x8ABF;&#x67FB;&#x7D50;&#x679C;&#x3092;&#x8981;&#x7D04;&#x3057;&#x3001;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x767A;&#x73FE;&#x306E;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x306B;&#x5931;&#x901F;&#x65B0;&#x751F;&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C9;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x8A98;&#x5C0E;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x30EA;&#x30DC;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x306E;&#x79C1;&#x9054;&#x306E;&#x73FE;&#x5728;&#x306E;&#x7406;&#x89E3;&#x3092;&#x6982;&#x8AAC;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x30EA;&#x30DC;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x6A5F;&#x80FD;&#x306B;&#x5F71;&#x97FF;&#x3092;&#x4E0E;&#x3048;&#x308B;&#x65B0;&#x751F;&#x30DD;&#x30EA;&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C9;&#x914D;&#x5217;

&#xB9AC;&#xBCF4;&#xC19C; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xD569;&#xC131; &#xC804;&#xC1A1; RNAs &#xBCF4;&#xC870; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xCD09;&#xB9E4;. &#xC5ED;&#xC0AC;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C;, &#xB9AC;&#xBCF4;&#xC19C; &#xC5C6;&#xC74C; &#xADDC;&#xC815; &#xD558;&#xB294; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC744; &#xAC16;&#xB294; &#xC77C;&#xBC18; &#xBCC0;&#xD658; &#xAE30;&#xACC4; &#xAC04;&#xC8FC; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098;, &#xADDC;&#xC81C; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;&#xC758; &#xC0C8; &#xD074;&#xB798;&#xC2A4; &#xB9AC;&#xBCF4;&#xC19C; &#xC801;&#xC808; &#xD55C; mRNA &#xC138;&#xADF8;&#xBA3C;&#xD2B8;&#xC758; &#xBC88;&#xC5ED; &#xD558;&#xB294; &#xB3D9;&#xC548; &#xC5F0;&#xAE30; &#xADC0; &#xCC29;&#xB420; ribosomal &#xD3A9; &#xD2F0; &#xB4DC; &#xCD9C;&#xAD6C; &#xD130;&#xB110; &#xB0B4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBC1C;&#xC0DD; &#xD558;&#xB294; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC744; &#xAE30;&#xBC18;&#xC73C;&#xB85C; &#xD558; &#xACE0; &#xC788;&#xB294; &#xBC1C;&#xACAC; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xBC1C;&#xACAC; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC758; &#xD65C;&#xB3D9;&#xC744; &#xC870;&#xC808;&#xC5D0; &#xC608;&#xAE30;&#xCE58; &#xC54A;&#xAC8C; &#xB3D9;&#xC801; &#xC5ED;&#xD560; &#xB9AC;&#xBCF4;&#xC19C; &#xD50C;&#xB808;&#xC774; &#xACF5;&#xAC1C; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xB41C; &#xD2B9;&#xC815; &#xC544;&#xBBF8;&#xB178;&#xC0B0; &#xC774;&#xB098; &#xD56D;&#xC0DD;&#xC81C;&#xC640; &#xD568;&#xAED8;&#xC5D0;&#xC11C; &#xCD08;&#xAE30; &#xC9C0;&#xB3C4;&#xC790; &#xD3A9; &#xD2F0; &#xB4DC;&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xB2E4;&#xC6B4;&#xC2A4;&#xD2B8;&#xB9BC; &#xCF54;&#xB529; &#xC601;&#xC5ED;&#xC758; &#xB808; &#xADE4; &#xB808;&#xC774;&#xD2B8; &#xB41C; &#xC2DD;&#xC758; &#xACB0;&#xACFC;&#xB85C; &#xD06C;&#xAC8C; &#xB9AC;&#xBCF4;&#xC19C; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC744; &#xBCC0;&#xACBD;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774; &#xAC80;&#xD1A0; &#xCD5C;&#xADFC; &#xAE30;&#xC0AC;&#xC5D0; &#xAD00;&#xB828; &#xC5F0;&#xAD6C; &#xACB0;&#xACFC; &#xC694;&#xC57D; &#xD558; &#xACE0; &#xCD08;&#xAE30; &#xD3A9;&#xD0C0;&#xC774;&#xB4DC;-&#xC720;&#xB3C4; &#xB41C; &#xB9AC;&#xBCF4;&#xC19C; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xBC1C;&#xD604; &#xC870;&#xC808;&#xC5D0; &#xC5F0;&#xAE30;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xD604;&#xC7AC; &#xC774;&#xD574; &#xC124;&#xBA85;.

&#xB9AC;&#xBCF4;&#xC19C; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC744; &#xC601;&#xD5A5;&#xC744; &#xBBF8;&#xCE58;&#xB294; &#xCD08;&#xAE30; polypeptide &#xC2DC;&#xD000;&#xC2A4;.

Ribosomas catalizar la s&#xED;ntesis de prote&#xED;nas utilizando ARN de transferencia y las prote&#xED;nas auxiliares. Hist&#xF3;ricamente, los ribosomas se han considerado no espec&#xED;ficos m&#xE1;quinas de traslaci&#xF3;n, al no tener funciones reguladoras. Sin embargo, una nueva clase de mecanismos de regulaci&#xF3;n que se ha descubierto que se basa en las interacciones que ocurren dentro del t&#xFA;nel p&#xE9;ptido salida ribos&#xF3;mico que resultan en estancamiento ribosoma durante la traducci&#xF3;n de un segmento del ARNm correspondiente. Estos descubrimientos revelan un papel inesperado ribosomas din&#xE1;micos juegan en la regulaci&#xF3;n de su propia actividad. Mediante el uso de p&#xE9;ptidos nacientes l&#xED;deres en combinaci&#xF3;n con enlazados amino&#xE1;cidos espec&#xED;ficos o antibi&#xF3;ticos, las funciones de ribosoma se puede alterar significativamente resultante en la expresi&#xF3;n regulada de aguas abajo regiones codificantes. Esta revisi&#xF3;n resume los resultados pertinentes en los art&#xED;culos recientes y describe nuestra comprensi&#xF3;n actual de la naciente p&#xE9;ptido inducida por los ribosomas estancamiento en la regulaci&#xF3;n de la expresi&#xF3;n g&#xE9;nica.

Nacientes secuencias de polip&#xE9;ptidos que influyen en funci&#xF3;n del ribosoma

TnaC &#x65B0;&#x751F;&#x80BD;&#x7684;&#x7FFB;&#x8BD1;&#x6291;&#x5236;&#x6838;&#x7CD6;&#x4F53;&#x6D3B;&#x52A8;&#x5B58;&#x5728;&#x8BF1;&#x5BFC; tnaCAB &#x57FA;&#x56E0;&#x5728;&#x5927;&#x80A0;&#x6746;&#x83CC;&#x4E2D;&#x8868;&#x8FBE;&#x7684; l-&#x8272;&#x6C28;&#x9178;&#x3002;&#x8FD9;&#x9879;&#x5DE5;&#x4F5C;&#x4F7F;&#x7528;&#x5316;&#x5B66;&#x7532;&#x57FA;&#x5316;&#xFF0C;&#x63ED;&#x793A;&#x4E86; TnaC &#x4E0E;&#x6838;&#x7CD6;&#x4F53;&#x4E4B;&#x95F4;&#x7684;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x5982;&#x4F55;&#x53D7;&#x5230;&#x8FD9;&#x4E24;&#x79CD;&#x5206;&#x5B50;&#x4E2D;&#x7684;&#x7A81;&#x53D8;&#x3002;TnaC-tRNA(Pro) &#x9170;-tRNA &#x5185;&#x6838;&#x7CD6;&#x4F53;&#x5B58;&#x5728;&#x4FDD;&#x62A4; 23 &#x578B;&#x98DE;&#x673A; rRNA &#x6838;&#x82F7;&#x9178; U2609 &#x5BF9;&#x5316;&#x5B66;&#x7684;&#x7532;&#x57FA;&#x5316;&#x3002;&#x5305;&#x542B; 23 &#x578B;&#x98DE;&#x673A; rRNA &#x6838;&#x82F7;&#x9178;&#x7684; A748 A752 &#x533A;&#x57DF;&#x7684;&#x53D8;&#x5316;&#x7684;&#x7A81;&#x53D8;&#x4F53;&#x6838;&#x7CD6;&#x4F53;&#x4E0D;&#x8BF4;&#xFF0C;&#x8FD9;&#x79CD;&#x4FDD;&#x62A4;&#x3002;&#x6838;&#x82F7;&#x9178; A752 &#x548C; U2609 &#x5EFA;&#x7ACB;&#x4E00;&#x4E2A;&#x78B1;&#x57FA;&#x5BF9;&#x4E92;&#x52A8;&#x3002;A752 &#x6216; U2609 &#x7684;&#x5927;&#x591A;&#x6570;&#x66F4;&#x6362;&#x53D7;&#x5F71;&#x54CD;&#x8DE8;&#x56FD;&#x6FC0;&#x8FDB;&#x515A;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x7684; TnaC &#x8C03;&#x8282; LacZ &#x8BB0;&#x8005;&#x3002;&#x4F46;&#x662F;&#xFF0C;&#x5355;&#x4E00;&#x7684;&#x66F4;&#x6539; A752G &#x6216;&#x53CC;&#x66FF;&#x6362; A752G &#x548C; U2609C&#xFF0C;&#x7EF4;&#x6301;&#x8DE8;&#x56FD;&#x6FC0;&#x8FDB;&#x515A;&#x611F;&#x5E94;&#x3002;&#x66F4;&#x6362;&#x5B88;&#x6052;&#x7684; W12 &#x548C; D16 TnaC &#x6B8B;&#x7559;&#x7269;&#x4E5F;&#x5E9F;&#x9664;&#x7531; TnaC-tRNA(Pro) U2609 &#x9632;&#x62A4;&#x5316;&#x5B66;&#x7532;&#x57FA;&#x5316;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x6570;&#x636E;&#x8868;&#x660E;&#x6838;&#x7CD6;&#x4F53;&#x9000;&#x51FA;&#x96A7;&#x9053;&#x7684;&#x65B0;&#x751F;&#x80BD; TnaC &#x4E0E; U2609 &#x6838;&#x82F7;&#x9178;&#x4EA4;&#x4E92;&#x65F6;&#xFF0C;&#x6838;&#x7CD6;&#x4F53;&#x662F;&#x8DE8;&#x56FD;&#x6FC0;&#x8FDB;&#x515A;&#x4F5C;&#x51FA;&#x53CD;&#x5E94;&#x3002;&#x8FD9;&#x79CD;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x88AB;&#x53D7;&#x7A81;&#x53D8;&#x5728;&#x9000;&#x51FA;&#x96A7;&#x9053;&#x6838;&#x82F7;&#x9178;&#x7684; rRNA 23 &#x578B;&#x98DE;&#x673A;&#xFF0C;&#x4EE5;&#x53CA;&#x5728;&#x5B88;&#x6052; TnaC &#x6B8B;&#x7559;&#xFF0C;&#x6697;&#x793A;&#x4ED6;&#x4EEC;&#x5F71;&#x54CD;&#x9000;&#x51FA;&#x96A7;&#x9053;&#x548C; &#xFF08;&#x6216;&#xFF09;&#xFF0C;&#x96A7;&#x9053;&#x5185;&#x7684;&#x65B0;&#x751F;&#x80BD;&#x914D;&#x7F6E;&#x7ED3;&#x6784;&#x7684;&#x53D8;&#x5316;&#x3002;

&#x4FDD;&#x6301;&#x76D1;&#x7BA1; TnaC &#x80BD;&#x4E0E;&#x6838;&#x7CD6;&#x4F53;&#x9000;&#x51FA;&#x96A7;&#x9053;&#x4E4B;&#x95F4;&#x7684;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x8D1F;&#x8D23;&#x8DE8;&#x56FD;&#x6FC0;&#x8FDB;&#x515A;&#x7684;&#x6838;&#x7CD6;&#x4F53;&#x529F;&#x80FD;&#x7684;&#x6291;&#x5236;&#x4F5C;&#x7528;&#x7684;&#x5173;&#x952E;&#x56E0;&#x7D20;&#x3002;

Translation of the TnaC nascent peptide inhibits ribosomal activity in the presence of l-tryptophan, inducing expression of the tnaCAB operon in Escherichia coli. Using chemical methylation, this work reveals how interactions between TnaC and the ribosome are affected by mutations in both molecules. The presence of the TnaC-tRNA(Pro) peptidyl-tRNA within the ribosome protects the 23S rRNA nucleotide U2609 against chemical methylation. Such protection was not observed in mutant ribosomes containing changes in 23S rRNA nucleotides of the A748-A752 region. Nucleotides A752 and U2609 establish a base-pair interaction. Most replacements of either A752 or U2609 affected Trp induction of a TnaC-regulated LacZ reporter. However, the single change A752G, or the dual replacements A752G and U2609C, maintained Trp induction. Replacements at the conserved TnaC residues W12 and D16 also abolished the protection of U2609 by TnaC-tRNA(Pro) against chemical methylation. These data indicate that the TnaC nascent peptide in the ribosome exit tunnel interacts with the U2609 nucleotide when the ribosome is Trp responsive. This interaction is affected by mutational changes in exit tunnel nucleotides of 23S rRNA, as well as in conserved TnaC residues, suggesting that they affect the structure of the exit tunnel and/or the nascent peptide configuration in the tunnel.

Crucial elements that maintain the interactions between the regulatory TnaC peptide and the ribosome exit tunnel responsible for Trp inhibition of ribosome function.

Traduction du peptide TNAC naissante inhibe l&#x26;#39;activit&#xE9; ribosomique en pr&#xE9;sence de L-tryptophane, induire l&#x26;#39;expression de l&#x26;#39;op&#xE9;ron tnaCAB dans Escherichia coli. Utilisation de m&#xE9;thylation chimique, ce travail r&#xE9;v&#xE8;le comment les interactions entre CCNT et le ribosome sont affect&#xE9;s par des mutations dans les deux mol&#xE9;cules. La pr&#xE9;sence de la CCNT-ARNt (Pro) peptidyl-ARNt dans le ribosome prot&#xE8;ge les U2609 ARNr 23S nucl&#xE9;otidiques contre m&#xE9;thylation chimique. Cette protection n&#x26;#39;a pas &#xE9;t&#xE9; observ&#xE9; dans les ribosomes mutants contenant des changements dans nucl&#xE9;otides ARNr 23S de la r&#xE9;gion A748-A752. Nucl&#xE9;otides A752 et U2609 &#xE0; &#xE9;tablir une interaction de paires de bases. La plupart des remplacements de deux A752 ou U2609 affect&#xE9;s &#xE0; induction Trp d&#x26;#39;un journaliste du CCNT-r&#xE9;glement&#xE9; LacZ. Toutefois, l&#x26;#39;A752G seul changement, ou la double remplacements A752G et U2609C, maintenu par induction Trp. Remplacements &#xE0; des r&#xE9;sidus conserv&#xE9;s CCNT W12 et D16 a &#xE9;galement aboli la protection des U2609 par CCNT-ARNt (Pro) contre la m&#xE9;thylation chimique. Ces donn&#xE9;es indiquent que le peptide CCNT naissante dans le tunnel de sortie du ribosome interagit avec le nucl&#xE9;otide U2609 lorsque le ribosome est Trp sensibles. Cette interaction est affect&#xE9;e par les changements mutationnels dans nucl&#xE9;otides tunnel de sortie de l&#x26;#39;ARNr 23S, ainsi que dans les r&#xE9;sidus CCNT conserv&#xE9;es, ce qui sugg&#xE8;re que leur incidence sur la structure du tunnel de sortie et / ou la configuration peptide naissant dans le tunnel.

&#xC9;l&#xE9;ments cruciaux qui maintiennent les interactions entre le peptide CCNT de la r&#xE9;glementation et le tunnel de sortie du ribosome responsable de l&#x26;#39;inhibition de la fonction des ribosomes Trp

&Uuml;bersetzung des entstehenden Peptids TnaC hemmt ribosomal Aktivit&auml;t in Anwesenheit von l-Tryptophan, induzierende Ausdruck der TnaCAB-Operon in Escherichia coli. Verwenden chemische Methylierung, zeigt diese Arbeit wie die Wechselwirkungen zwischen TnaC und dem Ribosom durch Mutationen in beiden Molek&uuml;le betroffen sind. Das Vorhandensein von TnaC-tRNA(Pro) konvertierende-tRNA innerhalb der Ribosom sch&uuml;tzt die 23S rRNA Nukleotid U2609 gegen chemische Methylierung. Dieser Schutz wurde nicht in mutant Ribosomen mit &Auml;nderungen in 23S rRNA Nukleotide der Region A748-A752 beobachtet. Nukleotide A752 und U2609 Gr&uuml;nden eine Basenpaar Interaktion. Die meisten Ersetzungen A752 oder U2609 betroffen Trp Induktion von TnaC regulierte LacZ Reporter. Jedoch beibehalten, die einzelne &Auml;nderung A752G oder die dualen Ersetzungen, A752G und U2609C, Trp-Induktion. Ersatz bei konservierten TnaC R&uuml;ckst&auml;nde W12 und D16 abgeschafft auch den Schutz der U2609 von TnaC-tRNA(Pro) gegen chemische Methylierung. Diese Daten zeigen, dass die U2609 Nukleotid TnaC entstehenden Peptids im Tunnel Ausfahrt Ribosom interagiert, wenn das Ribosom Trp reaktionsf&auml;hig ist. Diese Interaktion wird durch teilhabende &Auml;nderungen in Ausfahrt Tunnel Nukleotide der 23S rRNA sowie in konservierten TnaC R&uuml;ckst&auml;nde, was darauf hindeutet, dass sie die Struktur der Ausfahrt Tunnel bzw. die entstehenden Peptid-Konfiguration im Tunnel beeinflussen beeinflusst.

Wesentliche Elemente, die die Interaktionen zwischen den regulatorischen TnaC-Peptid und das Ribosom Ausfahrt Tunnel verantwortlich f&uuml;r Trp Hemmung der Ribosom Funktion beibehalten.

Article	Year
Ribosome stalling and peptidyl-tRNA drop-off during translational delay at AGA codons. Nucleic acids research\| PubMed ID: 15317870	2004
Features of ribosome-peptidyl-tRNA interactions essential for tryptophan induction of tna operon expression. Molecular cell\| PubMed ID: 16061180	2005
Changes produced by bound tryptophan in the ribosome peptidyl transferase center in response to TnaC, a nascent leader peptide. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America\| PubMed ID: 16505360	2006
Excess of charged tRNALys maintains low levels of peptidyl-tRNA hydrolase in pth(Ts) mutants at a non-permissive temperature. Nucleic acids research\| PubMed ID: 16540595	2006
Ribosome recycling factor and release factor 3 action promotes TnaC-peptidyl-tRNA Dropoff and relieves ribosome stalling during tryptophan induction of tna operon expression in Escherichia c... Journal of bacteriology\| PubMed ID: 17293419	2007
Ribosomal features essential for tna operon induction: tryptophan binding at the peptidyl transferase center. Journal of bacteriology\| PubMed ID: 17293420	2007
Efficient expression of gene variants that harbour AGA codons next to the initiation codon. Nucleic acids research\| PubMed ID: 17726048	2007
Physiological effects of anti-TRAP protein activity and tRNA(Trp) charging on trp operon expression in Bacillus subtilis. Journal of bacteriology\| PubMed ID: 18178730	2008
Conserved residues Asp16 and Pro24 of TnaC-tRNAPro participate in tryptophan induction of Tna operon expression. Journal of bacteriology\| PubMed ID: 18424524	2008
23S rRNA nucleotides in the peptidyl transferase center are essential for tryptophanase operon induction. Journal of bacteriology\| PubMed ID: 19329641	2009
Tryptophan inhibits Proteus vulgaris TnaC leader peptide elongation, activating tna operon expression. Journal of bacteriology\| PubMed ID: 19767424	2009
Nascent polypeptide sequences that influence ribosome function. Current opinion in microbiology\| PubMed ID: 21342782	2011
Crucial elements that maintain the interactions between the regulatory TnaC peptide and the ribosome exit tunnel responsible for Trp inhibition of ribosome function. Nucleic acids research\| PubMed ID: 22110039	2011
Peptidyl-tRNA hydrolase screening combined with molecular docking reveals the antibiotic potential of Syzygium johnsonii bark extract. Natural product communications\| PubMed ID: 22164773	2011

Luis Cruz-Vera

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