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High-Efficiency Transduction of Liver Cancer Cells by Recombinant Adeno-Associated Virus Serotype 3 Vectors 

Recombinant vectors based on a non-pathogenic human parvovirus, the adeno-associated virus 2 (AAV2) have been developed, and are currently in use in a ...

University of Florida

&#x81EA;&#x6211;&#x8865;&#x5145;&#x817A;&#x76F8;&#x5173;&#x75C5;&#x6BD2; (scAAV) &#x8F7D;&#x4F53;&#x7684;&#x65C1;&#x8DEF;&#x75C5;&#x6BD2;&#x6027;&#x4E8C;&#x80A1; DNA &#x5408;&#x6210;&#xFF0C;&#x4F46;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x5411;&#x91CF; &#xFF08;&#x5927;&#x7EA6; 2.4 kb&#xFF09; &#x7684;&#x5305;&#x88C5;&#x80FD;&#x529B;&#x7684;&#x8981;&#x6C42;&#x662F;&#x8981;&#x5C0F;&#x5F97;&#x591A;&#x7684;&#x5E38;&#x89C4;&#x817A;&#x76F8;&#x5173;&#x75C5;&#x6BD2;&#x8F7D;&#x4F53; (&#x7EA6; 4.8 kb)&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x5EFA;&#x9020;&#x4EBA;&#x7C7B;&#x91CD;&#x7EC4;&#x7EFF;&#x8272;&#x8367;&#x5149;&#x86CB;&#x767D; (hrGFP) &#x8868;&#x8FBE;&#x76D2;&#x4ECE; 2.3 &#x5230; 4.1 kb&#x3002;&#x6BCF;&#x4E2A;&#x77E2;&#x91CF;&#x662F;&#x751F;&#x7269;&#x6D3B;&#x6027;&#xFF0C;&#x4F46;&#x8F7D;&#x4F53;&#x8F6C;&#x5BFC;&#x6548;&#x7387; &lt; 3.3 kb &#x57FA;&#x56E0;&#x7EC4;&#x662F;&#x5927;&#x5927;&#x9AD8;&#x4E8E;&#x90A3;&#x4E9B;&#x542B;&#x6709;&#x57FA;&#x56E0;&#x7EC4; 3.5 kb &#x6216;&#x66F4;&#x5927;&#x3002;&#x7136;&#x800C;&#xFF0C;scAAV &#x5411;&#x91CF;&#x6700;&#x591A;&#x5305;&#x542B;&#x5927;&#x7EA6; 3.3 kb &#x57FA;&#x56E0;&#x7EC4;&#x4E5F;&#x8F7D;&#x5355;&#x7EDE;&#x7684;&#x57FA;&#x56E0;&#x7EC4;&#x548C; 3.5 kb &#x548C;&#x66F4;&#x5927;&#x7684;&#x57FA;&#x56E0;&#x7EC4;&#x88AB;&#x6253;&#x5305;&#x53EA;&#x4E3A;&#x5355;&#x94FE; DNA&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x6570;&#x636E;&#x8868;&#x660E; scAAV &#x5411;&#x91CF;&#x7684;&#x6700;&#x5927;&#x5305;&#x88C5;&#x80FD;&#x529B;&#x7EA6; 3.3 kb&#x3002;&#x751F;&#x4EA7;&#x7684;&#x5355;&#x94FE;&#x57FA;&#x56E0;&#x7EC4;&#x4E0D;&#x9002;&#x5F53;&#x4FEE;&#x590D;&#x7684;&#x7EC8;&#x7AEF;&#x51B3;&#x8BAE;&#x7F51;&#x7AD9; &#xFF08;trs&#xFF09; &#x5728;&#x5012;&#x7ACB;&#x7EC8;&#x7AEF;&#x91CD;&#x590D;&#x5E8F;&#x5217;&#x4E2D;&#x7684;&#x817A;&#x76F8;&#x5173;&#x75C5;&#x6BD2;&#x57FA;&#x56E0;&#x7EC4;&#x4E2D;&#xFF0C;&#x4F46;&#x76F8;&#x5F53;&#x90E8;&#x5206;&#x662F;&#x7531;&#x4E8E;&#x4F7F;&#x7528;&#x7684;&#x817A;&#x76F8;&#x5173;&#x75C5;&#x6BD2;&#x5E2E;&#x52A9;&#x5668;&#x8D28;&#x7C92;&#xFF0C;&#x5DF2;&#x77E5;&#x5BFC;&#x81F4;&#x66F4;&#x9AD8;&#x6C34;&#x5E73;&#x7684; Rep &#x86CB;&#x767D;&#x7684;&#x8868;&#x8FBE;&#x3002;&#x5DF2;&#x77E5;&#x7684; Rep &#x86CB;&#x767D;&#x6C34;&#x5E73;&#x4E0B;&#x964D;&#x5BFC;&#x81F4;&#x5E2E;&#x52A9;&#x5668;&#x8D28;&#x7C92;&#x7684;&#x4F7F;&#x7528;&#x5BFC;&#x81F4; scAAV &#x5411;&#x91CF;&#x5305;&#x542B;&#x5927;&#x7EA6; 90%&#x7684;&#x75C5;&#x6BD2;&#x57FA;&#x56E0;&#x7EC4;&#x4E2D;&#x53CC;&#x94FE;&#x5F62;&#x5F0F;&#x7684;&#x4EA7;&#x751F;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7814;&#x7A76;&#x8BC1;&#x660E;&#x5230; scAAV &#x5411;&#x91CF;&#x6BD4;&#x539F;&#x6765;&#xFF0C;&#x6709;&#x4EBA;&#x5EFA;&#x8BAE;&#x5B9E;&#x73B0;&#x8863;&#x58F3;&#x57FA;&#x56E0;&#x7EC4;&#x8F83;&#x5927;&#x7684;&#x53EF;&#x884C;&#x6027;&#xFF0C;&#x4F46;&#x5F3A;&#x8C03;&#xFF0C;&#x9700;&#x8981;&#x8C28;&#x614E;&#x4F7F;&#x7528;&#x7684;&#x9002;&#x5F53;&#x7684;&#x5E2E;&#x52A9;&#x5668;&#x8D28;&#x7C92;&#x751F;&#x6210; scAAV &#x80A1;&#x7968;&#x80FD;&#x591F;&#x9AD8;&#x6548;&#x7387;&#x8F6C;&#x5BFC;&#x662F;&#x76F8;&#x5BF9;&#x81EA;&#x7531;&#x7684;&#x5355;&#x94FE; DNA &#x5305;&#x542B;&#x5411;&#x91CF;&#x3002;

&#x81EA;&#x6211;&#x4E92;&#x8865;&#x91CD;&#x7EC4;&#x817A;&#x76F8;&#x5173;&#x75C5;&#x6BD2;&#x8F7D;&#x4F53;&#xFF1A; &#x77E2;&#x91CF;&#x7EAF;&#x5EA6;&#x5305;&#x88C5;&#x80FD;&#x529B;&#x548C; rep &#x86CB;&#x767D;&#x7684;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;

Self-complementary adeno-associated viral (scAAV) vectors bypass the requirement for viral second-strand DNA synthesis, but the packaging capacity of these vectors ( approximately 2.4 kb) is significantly smaller than that of conventional AAV vectors ( approximately 4.8 kb). We constructed human recombinant green fluorescent protein (hrGFP) expression cassettes ranging from 2.3 to 4.1 kb. Each vector was biologically active, but the transduction efficiency of vectors containing <3.3-kb genomes was significantly higher than those containing 3.5-kb genomes or larger. However, scAAV vectors containing up to approximately 3.3-kb genomes also contained single-stranded genomes, and 3.5-kb and larger genomes were packaged only as single-stranded DNA. These data suggest that the maximum packaging capacity of scAAV vectors is approximately 3.3 kb. The production of single-stranded genomes was not due to repair of the terminal resolution site (trs) in the inverted terminal repeats in the AAV genome, but rather was partly due to the use of AAV helper plasmid, known to lead to higher levels of expression of Rep proteins. The use of a helper plasmid known to lead to reduced levels of Rep proteins led to the generation of scAAV vectors that contained approximately 90% of the viral genomes in double-stranded forms. These studies demonstrate the feasibility of achieving encapsidation of larger genomes into scAAV vectors than was suggested originally, but underscore the need to exercise caution in using the appropriate helper plasmid to generate scAAV stocks capable of high-efficiency transduction that are relatively free of single-stranded DNA-containing vectors.

Self-complementary recombinant adeno-associated viral vectors: packaging capacity and the role of rep proteins in vector purity.

Auto-compl&#xE9;mentaire viraux ad&#xE9;no-associ&#xE9; (scAAV) vecteurs contourner l&#x26;#39;exigence de synth&#xE8;se d&#x26;#39;ADN viral second brin, mais la capacit&#xE9; de conditionnement de ces vecteurs (environ 2,4 kb) est sensiblement plus petite que celle de vecteurs AAV classiques (environ 4,8 kb). Nous avons construit recombinantes humaines verts fluorescents cassettes d&#x26;#39;expression de prot&#xE9;ines (hrGFP) allant de 2,3 &#xE0; 4,1 kb. Chaque vecteur est biologiquement active, mais l&#x26;#39;efficacit&#xE9; de transduction des vecteurs contenant moins de 3,3 kb g&#xE9;nomes &#xE9;tait significativement plus &#xE9;lev&#xE9; que ceux contenant de 3,5 kb g&#xE9;nomes ou plus. Cependant, les vecteurs scAAV contenant jusqu&#x26;#39;&#xE0; environ 3,3 kb g&#xE9;nomes contenaient &#xE9;galement simple brin g&#xE9;nomes, et de 3,5 kb et de plus grands g&#xE9;nomes ont &#xE9;t&#xE9; emball&#xE9;s seulement comme l&#x26;#39;ADN simple brin. Ces donn&#xE9;es sugg&#xE8;rent que la capacit&#xE9; de conditionnement maximal de vecteurs scAAV est d&#x26;#39;environ 3,3 kb. La production de mono-brin g&#xE9;nomes n&#x26;#39;&#xE9;tait pas due &#xE0; la r&#xE9;paration de la r&#xE9;solution sur le site de terminal (TRS) dans les r&#xE9;p&#xE9;titions terminales invers&#xE9;es dans le g&#xE9;nome de l&#x26;#39;AAV, mais plut&#xF4;t &#xE9;tait en partie due &#xE0; l&#x26;#39;utilisation de l&#x26;#39;AAV plasmide auxiliaire, connue pour mener &#xE0; des niveaux plus &#xE9;lev&#xE9;s de expression de prot&#xE9;ines Rep. Utilisation d&#x26;#39;un plasmide auxiliaire connue pour mener &#xE0; des niveaux r&#xE9;duits de prot&#xE9;ines Rep conduit &#xE0; la g&#xE9;n&#xE9;ration de vecteurs scAAV que contenues environ 90% des g&#xE9;nomes viraux dans double brin formes. Ces &#xE9;tudes d&#xE9;montrent la faisabilit&#xE9; de la r&#xE9;alisation d&#x26;#39;encapsidation de g&#xE9;nomes plus grands dans des vecteurs scAAV que ce qui &#xE9;tait propos&#xE9; &#xE0; l&#x26;#39;origine, mais soulignent la n&#xE9;cessit&#xE9; de faire preuve de prudence dans l&#x26;#39;utilisation de l&#x26;#39;assistant plasmide appropri&#xE9; pour g&#xE9;n&#xE9;rer des stocks scAAV capables de haute efficacit&#xE9; de transduction qui sont relativement libres de simple brin ADN contenant vecteurs.

Auto-compl&#xE9;mentaires ad&#xE9;no-associ&#xE9; recombinant Vecteurs viraux: la capacit&#xE9; de conditionnement et le r&#xF4;le des prot&#xE9;ines Rep dans la puret&#xE9; Vecteur

Selbst-erg&auml;nzende Adeno-assoziierte Viren (ScAAV) Vektoren umgehen, die die Voraussetzung f&uuml;r virale Sekunde-Strang-DNA-Synthese, aber die Verpackung-Kapazit&auml;t dieser Vektoren (ca. 2,4 kb) erheblich kleiner als ist, die von konventionellen AAV Vektoren (ca. 4,8 kb). Konstruierten wir menschlichen rekombinanten gr&uuml;n fluoreszierendes Protein (HrGFP) Ausdruck Kassetten von 2,3 bis hin zu 4.1 kb. Jeder Vektor war biologisch aktiv, aber die Effizienz der Transduktion von Vektoren mit &lt; 3.3-kb-Genome lag deutlich h&ouml;her als die mit 3.5-kb-Genome oder gr&ouml;&szlig;er. Jedoch einzeln-angeschwemmte ScAAV Vektoren mit bis zu ca. 3,3-kb-Genome enthalten auch einzeln-angeschwemmte Genome und 3.5-kb und gr&ouml;&szlig;ere Genome wurden gepackt, nur als DNA. Diese Daten zeigen, dass die maximale Verpackung-Kapazit&auml;t ScAAV Vektoren ca. 3,3 kb ist. Herstellung von einzeln-angeschwemmte Genome war nicht in der invertierten terminal Wiederholungen im AAV Genom des Standortes terminal Aufl&ouml;sung (Trs) zu reparieren, aber eher war teilweise auf die Verwendung von AAV Helfer Plasmid, f&uuml;hren zu h&ouml;heren Ebenen des Ausdrucks Rep Proteine bekannt. Die Verwendung von einem Helfer-Plasmid zu reduzierten Rep Proteine f&uuml;hren bekannterma&szlig;en f&uuml;hrte zu der Generation von ScAAV Vektoren, die etwa 90 % der virale Genome in Doppelstrang-Formulare enthalten. Diese Studien zeigen die Machbarkeit der Erreichung Encapsidation gr&ouml;&szlig;ere Genome in ScAAV Vektoren als urspr&uuml;nglich vorgeschlagen wurde, aber unterstreichen die Notwendigkeit, seien Sie vorsichtig im Umgang mit den entsprechenden Helfer-Plasmid ScAAV Best&auml;nde der hocheffizienten Transduktion zu generieren, die relativ frei von einzeln-angeschwemmte DNA-haltigen Vektoren sind.

Selbst-erg&auml;nzende rekombinante Adeno-assoziierter viraler Vektoren: Verpackung Kapazit&auml;t und die Rolle der Rep Proteine in Vektor Reinheit.

Auto-complementare adeno-associati virale (scAAV) di vettori bypass che il requisito per la sintesi di DNA virale secondo-filo, ma la capacit&agrave; di confezionamento di questi vettori (approssimativamente 2.4 kb) &egrave; significativamente minore che di convenzionale AAV vettori (circa 4,8 kb). Abbiamo costruito cassette di espressione umana ricombinante proteina fluorescente verde (hrGFP) che variano da 2,3 a 4.1 kb. Ogni vettore &egrave; stato biologicamente attivo, ma l&#39;efficienza di trasduzione di vettori contenenti &lt; 3.3 kb genomi &egrave; stato significativamente superiori a quelli contenenti genomi 3.5 kb o pi&ugrave; grande. Tuttavia, scAAV vettori contenenti fino a circa 3.3-kb genomi contenevano anche single-stranded genomi e genomi 3.5 kb e pi&ugrave; grandi sono stati confezionati solo come single-stranded del DNA. Questi dati suggeriscono che la capacit&agrave; massima imballaggi di scAAV vettori &egrave; circa 3,3 kb. La produzione di single-stranded genomi non era dovuta alla riparazione del sito risoluzione terminale (trs) nelle ripetizioni terminali rovesciate nel genoma dell&#39;AAV, ma piuttosto era in parte dovuto all&#39;uso del plasmide helper AAV, noto per condurre a pi&ugrave; alti livelli di espressione delle proteine Rep. L&#39;uso di un plasmide helper noto per portare a livelli ridotti di proteine Rep ha condotto alla generazione di vettori scAAV che conteneva circa il 90% del genoma virale in forme double-stranded. Questi studi dimostrano la fattibilit&agrave; di realizzare encapsidation di genomi pi&ugrave; grandi nei vettori scAAV che fu originariamente suggerito, ma sottolineano la necessit&agrave; di usare cautela nell&#39;uso del plasmide helper appropriato per generare stock scAAV capace di trasduzione ad alta efficienza che sono relativamente liberi di vettori contenenti DNA single-stranded.

Self-complementari recombinant vettori virali adeno-associati: capacit&agrave; di imballaggio e il ruolo delle proteine rep in vector purezza.

&#x81EA;&#x5DF1;&#x76F8;&#x88DC;&#x7684;&#x306A;&#x30A2;&#x30C7;&#x30CE;&#x968F;&#x4F34;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#xFF08;scAAV&#xFF09;&#x30D9;&#x30AF;&#x30BF;&#x30FC;&#x306F;&#x3001;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x4E8C;&#x672C;&#x9396;DNA&#x5408;&#x6210;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x8981;&#x4EF6;&#x3092;&#x30D0;&#x30A4;&#x30D1;&#x30B9;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x304C;&#x3001;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x30D9;&#x30AF;&#x30BF;&#x30FC;&#x306E;&#x30D1;&#x30C3;&#x30B1;&#x30FC;&#x30B8;&#x30F3;&#x30B0;&#x5BB9;&#x91CF;&#xFF08;&#x7D04;2.4&#x30AD;&#x30ED;&#x30D0;&#x30A4;&#x30C8;&#xFF09;&#x306F;&#x3001;&#x5F93;&#x6765;&#x306E;AAV&#x30D9;&#x30AF;&#x30BF;&#x30FC;&#xFF08;&#x7D04;4.8&#x30AD;&#x30ED;&#x30D0;&#x30A4;&#x30C8;&#xFF09;&#x3088;&#x308A;&#x3082;&#x6709;&#x610F;&#x306B;&#x5C0F;&#x3055;&#x304F;&#x306A;&#x3063;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;2.3&#x304B;&#x3089;4.1&#x30AD;&#x30ED;&#x30D0;&#x30A4;&#x30C8;&#x307E;&#x3067;&#x306E;&#x30D2;&#x30C8;&#x7D44;&#x63DB;&#x3048;&#x7DD1;&#x8272;&#x86CD;&#x5149;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#xFF08;hrGFP&#xFF09;&#x767A;&#x73FE;&#x30AB;&#x30BB;&#x30C3;&#x30C8;&#x3092;&#x69CB;&#x7BC9;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x5404;&#x30D9;&#x30AF;&#x30C8;&#x30EB;&#x306F;&#x3001;&#x751F;&#x7269;&#x5B66;&#x7684;&#x306B;&#x6D3B;&#x6027;&#x3067;&#x3042;&#x3063;&#x305F;&#x304C;&#x3001;&#x26;lt;3.3-kb&#x306E;&#x30B2;&#x30CE;&#x30E0;&#x3092;&#x542B;&#x6709;&#x3059;&#x308B;&#x30D9;&#x30AF;&#x30BF;&#x30FC;&#x306E;&#x5C0E;&#x5165;&#x52B9;&#x7387;&#x306F;&#x3001;3.5-kb&#x306E;&#x30B2;&#x30CE;&#x30E0;&#x4EE5;&#x4E0A;&#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x3082;&#x306E;&#x3088;&#x308A;&#x3082;&#x6709;&#x610F;&#x306B;&#x9AD8;&#x304B;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x3057;&#x304B;&#x3057;&#x3001;&#x307E;&#x305F;&#x3001;&#x4E00;&#x672C;&#x9396;&#x30B2;&#x30CE;&#x30E0;&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073;3.5-kb&#x3068;&#x5927;&#x304D;&#x306A;&#x30B2;&#x30CE;&#x30E0;&#x3092;&#x542B;&#x3093;&#x3067;&#x3044;&#x305F;&#x7D04;3.3-kb&#x306E;&#x30B2;&#x30CE;&#x30E0;&#x307E;&#x3067;&#x3092;&#x542B;&#x3080;scAAV&#x30D9;&#x30AF;&#x30C8;&#x30EB;&#x306F;&#x3001;&#x4E00;&#x672C;&#x9396;DNA&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x30D1;&#x30C3;&#x30B1;&#x30FC;&#x30B8;&#x5316;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x30C7;&#x30FC;&#x30BF;&#x306F;scAAV&#x30D9;&#x30AF;&#x30C8;&#x30EB;&#x306E;&#x6700;&#x5927;&#x5305;&#x88C5;&#x5BB9;&#x91CF;&#x306F;&#x7D04;3.3&#x30AD;&#x30ED;&#x30D0;&#x30A4;&#x30C8;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x5506;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x4E00;&#x672C;&#x9396;&#x30B2;&#x30CE;&#x30E0;&#x306E;&#x751F;&#x7523;&#x306F;&#x3001;AAV&#x30B2;&#x30CE;&#x30E0;&#x306E;&#x9006;&#x65B9;&#x5411;&#x672B;&#x7AEF;&#x53CD;&#x5FA9;&#x3067;&#x7AEF;&#x672B;&#x306E;&#x89E3;&#x6C7A;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#xFF08;TRS&#xFF09;&#x306E;&#x4FEE;&#x7406;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x3082;&#x306E;&#x3067;&#x306F;&#x306A;&#x304B;&#x3063;&#x305F;&#x306E;&#x3067;&#x306F;&#x306A;&#x304F;&#x3001;&#x4E00;&#x90E8;&#x306F;&#x3088;&#x308A;&#x9AD8;&#x3044;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x306B;&#x3064;&#x306A;&#x304C;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x77E5;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;AAV&#x30D8;&#x30EB;&#x30D1;&#x30FC;&#x30D7;&#x30E9;&#x30B9;&#x30DF;&#x30C9;&#x306E;&#x4F7F;&#x7528;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x3082;&#x306E;&#x3067;&#x3042;&#x3063;&#x305F;rep&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x767A;&#x73FE;&#x3002; rep&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x306E;&#x6E1B;&#x5C11;&#x306B;&#x3064;&#x306A;&#x304C;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x77E5;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x30D8;&#x30EB;&#x30D1;&#x30FC;&#x30D7;&#x30E9;&#x30B9;&#x30DF;&#x30C9;&#x306E;&#x4F7F;&#x7528;&#x306F;&#x3001;&#x4E8C;&#x672C;&#x9396;&#x306E;&#x5F62;&#x614B;&#x306E;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x30B2;&#x30CE;&#x30E0;&#x306E;&#x7D04;90&#xFF05;&#x304C;&#x542B;&#x307E;&#x308C;&#x3066;&#x3044;scAAV&#x30D9;&#x30AF;&#x30C8;&#x30EB;&#x306E;&#x751F;&#x6210;&#x306B;&#x3064;&#x306A;&#x304C;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x7814;&#x7A76;&#x306F;&#x3001;&#x5F53;&#x521D;&#x793A;&#x5506;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3088;&#x308A;&#x3082;scAAV&#x30D9;&#x30AF;&#x30BF;&#x30FC;&#x3078;&#x306E;&#x5927;&#x898F;&#x6A21;&#x306A;&#x30B2;&#x30CE;&#x30E0;&#x306E;&#x30AB;&#x30D7;&#x30B7;&#x30C9;&#x3092;&#x9054;&#x6210;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x5B9F;&#x73FE;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x3092;&#x5B9F;&#x8A3C;&#x3059;&#x308B;&#x304C;&#x3001;&#x4E00;&#x672C;&#x9396;&#x306E;&#x6BD4;&#x8F03;&#x7684;&#x81EA;&#x7531;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x9AD8;&#x52B9;&#x7387;&#x306A;&#x4F1D;&#x9054;&#x304C;&#x53EF;&#x80FD;&#x306A;scAAV&#x682A;&#x3092;&#x751F;&#x6210;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x30D7;&#x30E9;&#x30B9;&#x30DF;&#x30C9;&#x9069;&#x5207;&#x306A;&#x30D8;&#x30EB;&#x30D1;&#x30FC;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x6CE8;&#x610F;&#x3092;&#x884C;&#x4F7F;&#x3059;&#x308B;&#x5FC5;&#x8981;&#x6027;&#x3092;&#x5F37;&#x8ABF;DNA&#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x30D9;&#x30AF;&#x30BF;&#x30FC;&#x3092;&#x3002;

&#x81EA;&#x5DF1;&#x76F8;&#x88DC;&#x7684;&#x306A;&#x7D44;&#x63DB;&#x3048;&#x30A2;&#x30C7;&#x30CE;&#x968F;&#x4F34;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x30D9;&#x30AF;&#x30BF;&#x30FC;&#xFF1A;&#x30D1;&#x30C3;&#x30B1;&#x30FC;&#x30B8;&#x5BB9;&#x91CF;&#x3068;&#x30D9;&#x30AF;&#x30C8;&#x30EB;&#x7D14;&#x5EA6;&#x306E;&#x62C5;&#x5F53;&#x8005;&#x306E;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x5F79;&#x5272;

&#xC790;&#xCCB4; &#xBCF4;&#xC644; adeno &#xC81C;&#xD734;&#xD574; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; (scAAV) &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; &#xC131; 2 &#xAC00;&#xB2E5; DNA &#xD569;&#xC131;, &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xBCA1;&#xD130; (&#xC57D; 2.4 kb)&#xC758; &#xD3EC;&#xC7A5; &#xC6A9;&#xB7C9;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC694;&#xAD6C;&#xB294; &#xBCF4;&#xB2E4; &#xD6E8;&#xC52C; &#xC791;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;&#xB294; &#xAE30;&#xC874;&#xC758; AAV &#xBCA1;&#xD130; (&#xC57D; 4.8 kb) &#xBC14;&#xC774;&#xD328;&#xC2A4; &#xBCA1;&#xD130;. &#xC6B0;&#xB9AC; &#xC778;&#xAC04;&#xC758; &#xC7AC;&#xC870;&#xD569; &#xB179;&#xC0C9; &#xD615;&#xAD11; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; (hrGFP) &#xC2DD; &#xCE74;&#xC138;&#xD2B8; 2.3&#xC5D0;&#xC11C; 4.1 kb&#xC5D0; &#xC774;&#xB974;&#xAE30;&#xAE4C;&#xC9C0; &#xAC74;&#xC124;. &#xAC01; &#xBCA1;&#xD130;&#xB294; &#xC0DD;&#xBB3C;&#xD559;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xD65C;&#xC131;&#xC744; &#xD3EC;&#xD568; &#xD558;&#xB294; &#xBCA1;&#xD130;&#xC758; &#xBCC0;&#xD658; &#xD6A8;&#xC728; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; &lt; 3.3 kb &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xB294; &#xD06C;&#xAC8C; 3.5 kb &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xB97C; &#xD3EC;&#xD568; &#xD558;&#xB294; &#xAC83; &#xBCF4;&#xB2E4; &#xB354; &#xB192;&#xC740; &#xB610;&#xB294; &#xB354; &#xD070;. &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098;, &#xC57D; 3.3 kb &#xAC8C;&#xB188;&#xC740; &#xB610;&#xD55C; &#xB2E8;&#xC77C; &#xAC00;&#xB2E5; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xD3EC;&#xD568;&#xAE4C;&#xC9C0; &#xD3EC;&#xD568; &#xD558; &#xACE0; 3.5 kb &#xBC0F; &#xD070; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xB85C;&#xB9CC; &#xD3EC;&#xC7A5; &#xD588;&#xB2E4; scAAV &#xBCA1;&#xD130; &#xB2E8;&#xC77C; &#xAC00;&#xB2E5; DNA. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xB370;&#xC774;&#xD130; scAAV &#xBCA1;&#xD130;&#xC758; &#xCD5C;&#xB300; &#xD3EC;&#xC7A5; &#xC6A9;&#xB7C9; &#xC57D; 3.3 kb&#xB294; &#xAC83;&#xC774; &#xC88B;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB2E8;&#xC77C; &#xAC00;&#xB2E5; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC758; &#xC0DD;&#xC0B0; AAV &#xAC8C;&#xB188;&#xC5D0;&#xC11C; &#xAC70;&#xAFB8;&#xB85C; &#xD130;&#xBBF8;&#xB110; &#xBC18;&#xBCF5;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD130;&#xBBF8;&#xB110; &#xD655;&#xC778; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8; (trs)&#xC758; &#xBCF5;&#xAD6C; &#xC608;&#xC815; &#xC774;&#xC5C8;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xC624;&#xD788;&#xB824; &#xB2F4;&#xB2F9;&#xC790; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xD45C;&#xD604;&#xC758; &#xB192;&#xC740; &#xC218;&#xC900;&#xC73C;&#xB85C;&#xC774; &#xB04C; &#xAC83;&#xC73C;&#xB85C; &#xC54C;&#xB824;&#xC9C4; AAV &#xB3C4;&#xC6B0;&#xBBF8; &#xD50C;&#xB77C;&#xC2A4; &#xBBF8;&#xB4DC;&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xBD80;&#xBD84;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C;. &#xB2F4;&#xB2F9;&#xC790; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xAC10;&#xC18C; &#xC218;&#xC900;&#xC73C;&#xB85C;&#xC774; &#xB04C; &#xAC83;&#xC73C;&#xB85C; &#xC54C;&#xB824;&#xC9C4; &#xB3C4;&#xC6B0;&#xBBF8; &#xD50C;&#xB77C;&#xC2A4; &#xBBF8;&#xB4DC;&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xD3EC;&#xD568; &#xB41C; &#xB354;&#xBE14;-&#xC88C;&#xCD08; &#xD615;&#xD0DC;&#xB85C; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; &#xC131; &#xAC8C;&#xB188;&#xC758; &#xC57D; 90%&#xB294; scAAV &#xBCA1;&#xD130;&#xC758; &#xC138;&#xB300; &#xC8FC;&#xB3C4;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xC5D0; scAAV &#xBCA1;&#xD130; &#xC6D0;&#xB798; &#xC81C;&#xC548; &#xB41C; &#xBCF4;&#xB2E4; &#xB354; &#xD070; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC758; encapsidation &#xB2EC;&#xC131;&#xC758; &#xD0C0;&#xB2F9;&#xC131;&#xC744; &#xC785;&#xC99D; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xC801;&#xC808; &#xD55C; &#xB3C4;&#xC6B0;&#xBBF8; &#xD50C;&#xB77C;&#xC2A4; &#xBBF8;&#xB4DC;&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xC0DD;&#xC131; scAAV &#xC8FC;&#xC2DD; &#xACE0;&#xD6A8;&#xC728; &#xBCC0;&#xD658; &#xB2A5;&#xB825;&#xC774; &#xC0C1;&#xB300;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xB2E8;&#xC77C; &#xAC00;&#xB2E5; DNA &#xD3EC;&#xD568; &#xB41C; &#xBCA1;&#xD130;&#xC758; &#xC790;&#xC720;&#xC5D0; &#xC8FC;&#xC758; &#xD558;&#xB294; &#xD544;&#xC694;&#xB97C; &#xBC11;&#xC904;.

&#xC790;&#xCCB4; &#xBCF4;&#xC644; &#xC7AC;&#xC870;&#xD569; adeno &#xC81C;&#xD734;&#xD574; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; &#xC131; &#xBCA1;&#xD130;: &#xD3EC;&#xC7A5; &#xC6A9;&#xB7C9; &#xBC0F; &#xB2F4;&#xB2F9;&#xC790; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xC5ED;&#xD560; &#xBCA1;&#xD130; &#xC21C;&#xB3C4;.

Auto-complementaria adeno-asociado virales (scAAV) vectores omitir el requisito para la s&#xED;ntesis de ADN viral segunda hebra, pero la capacidad de envasado de estos vectores (aproximadamente 2,4 kb) es significativamente menor que el de vectores AAV convencionales (aproximadamente 4,8 kb). Hemos construido humanos recombinantes prote&#xED;na verde fluorescente (hrGFP) casetes de expresi&#xF3;n que van desde 2,3 a 4,1 kb. Cada vector era biol&#xF3;gicamente activo, pero la eficacia de transducci&#xF3;n de los vectores que contienen &#x26;lt;3,3-kb genomas fue significativamente mayor que los que contienen 3,5-kb genomas o m&#xE1;s grandes. Sin embargo, los vectores scAAV que contienen hasta aproximadamente 3,3 kb-genomas tambi&#xE9;n conten&#xED;a monocatenario genomas y 3,5 kb-y grandes genomas fueron empaquetados s&#xF3;lo como una sola cadena de ADN. Estos datos sugieren que la capacidad de envasado m&#xE1;ximo de vectores scAAV es de aproximadamente 3,3 kb. La producci&#xF3;n de cadena simple genomas no era debido a una reparaci&#xF3;n del sitio de resoluci&#xF3;n terminal (TRS) en las repeticiones terminales invertidas en el genoma AAV, sino m&#xE1;s bien se debe en parte a la utilizaci&#xF3;n de ayudante de AAV pl&#xE1;smido, sabe que conducen a niveles m&#xE1;s altos de expresi&#xF3;n de las prote&#xED;nas Rep. El uso de un pl&#xE1;smido auxiliar conocido para llevar a niveles reducidos de prote&#xED;nas Rep conducido a la generaci&#xF3;n de vectores scAAV que conten&#xED;an aproximadamente 90% de los genomas virales en doble cadena formas. Estos estudios demuestran la factibilidad de lograr la encapsidaci&#xF3;n de genomas m&#xE1;s grandes en vectores scAAV de lo que se sugiri&#xF3; inicialmente, pero subrayan la necesidad de extremar las precauciones en el uso del pl&#xE1;smido auxiliar apropiado para generar acciones scAAV capaces de transducci&#xF3;n de alta eficiencia que son relativamente libres de una sola cadena ADN que contienen vectores.

Auto-complementarios recombinantes adeno-asociados vectores virales: Capacidad de embalaje y papel de la Rep prote&#xED;nas en Pureza Vector

Virus adeno-asociado 2 (AAV2) transduce fibroblastos vectores y c&#xE9;lulas madre mesenquimales (MSC) ineficiente, lo que limita su potencial de aplicaci&#xF3;n general en el gen de combinatoria y la terapia celular. Nos han informado de que AAV2 vectores no al tr&#xE1;fico de manera eficiente al n&#xFA;cleo de los fibroblastos de rat&#xF3;n. Se han reportado tambi&#xE9;n que mutag&#xE9;nesis dirigida al sitio de la superficie expuesta residuos de tirosina en c&#xE1;psidas v&#xED;ricas conduce a la mejora tr&#xE1;fico intracelular de los vectores de mutantes, y la eficacia de transducci&#xF3;n de las individuales tirosina-mutantes vectores es de ~ 10-veces mayor en las c&#xE9;lulas humanas. En los estudios actuales, se evalu&#xF3; la eficacia de transducci&#xF3;n de individuales, as&#xED; como m&#xFA;ltiples tirosina-mutantes AAV2 vectores en los fibroblastos de rat&#xF3;n. Nuestros resultados indican que los vectores Y444F mutantes transducir estas c&#xE9;lulas m&#xE1;s eficientemente entre los siete solo mutantes vectores, con&#x26;gt; 30-veces mayor en la expresi&#xF3;n del transg&#xE9;n en comparaci&#xF3;n con los vectores de tipo salvaje. Cuando la mutaci&#xF3;n Y444F se combina con mutaciones adicionales (Y500F y Y730F), la eficacia de transducci&#xF3;n de los vectores de triple mutantes se aument&#xF3; ~ 130-veces y el tr&#xE1;fico intracelular viral es tambi&#xE9;n significativa mejorado. De manera similar, los vectores de triple mutantes son capaces de transducir hasta 80-90% de la m&#xE9;dula &#xF3;sea derivado murino primario, as&#xED; como MSC humano. Por lo tanto, de alta eficiencia de transducci&#xF3;n de los fibroblastos con la reprogramaci&#xF3;n de los genes para generar c&#xE9;lulas madre pluripotentes inducidas, y el MSC para la entrega de los genes terap&#xE9;uticos, ahora deber&#xED;a ser posible con los vectores de la tirosina-mutantes AAV.

Alta eficiencia de transducci&#xF3;n de fibroblastos y c&#xE9;lulas madre mesenquimales de la tirosina-mutantes AAV2 vectores para su posible uso en terapia celular

Virus ad&#xE9;no-associ&#xE9; 2 (AAV2) fibroblastes vecteurs transduisent et les cellules souches m&#xE9;senchymateuses (CSM) inefficace, ce qui limite leur potentiel d&#x26;#39;application g&#xE9;n&#xE9;ralis&#xE9;e dans le g&#xE8;ne combinatoire et la th&#xE9;rapie cellulaire. Nous avons rapport&#xE9; que AAV2 vecteurs ne parviennent pas &#xE0; la circulation efficace dans le noyau de fibroblastes murins. Nous avons &#xE9;galement signal&#xE9; que la mutagen&#xE8;se dirig&#xE9;e de la surface expos&#xE9;e au r&#xE9;sidus tyrosine sur des capsides virales conduit &#xE0; l&#x26;#39;am&#xE9;lioration trafic intracellulaire des vecteurs mutants, et l&#x26;#39;efficacit&#xE9; de transduction des simples mutants tyrosine-vecteurs est ~ 10 fois plus &#xE9;lev&#xE9;e dans les cellules humaines. Dans les &#xE9;tudes actuelles, nous avons &#xE9;valu&#xE9; l&#x26;#39;efficacit&#xE9; de la transduction des simples, ainsi que plusieurs tyrosine-mutantes AAV2 vecteurs dans les fibroblastes murins. Nos r&#xE9;sultats indiquent que les vecteurs Y444F mutantes transduire ces cellules le plus efficacement possible parmi les sept seule-mutants vecteurs, avec&#x26;gt; 30 fois plus &#xE9;lev&#xE9;e dans l&#x26;#39;expression du transg&#xE8;ne par rapport aux vecteurs de type sauvage. Lorsque la mutation Y444F est combin&#xE9; avec d&#x26;#39;autres mutations (Y500F et Y730F), l&#x26;#39;efficacit&#xE9; de transduction des vecteurs triple mutants est augment&#xE9; de ~ 130 fois et le trafic viral intracellulaire est &#xE9;galement significatif am&#xE9;lior&#xE9;e. De m&#xEA;me, les vecteurs triple mutants sont capables de transduire jusqu&#x26;#39;&#xE0; 80-90% de la moelle osseuse murine d&#xE9;riv&#xE9; primaire ainsi que MSC humaines. Ainsi, &#xE0; haute efficacit&#xE9; de la transduction des fibroblastes avec la reprogrammation des g&#xE8;nes pour produire des cellules souches pluripotentes induites, et le MSC pour d&#xE9;livrer des g&#xE8;nes th&#xE9;rapeutiques, devrait maintenant &#xEA;tre possible avec les vecteurs AAV tyrosine-mutantes.

Haute-efficacit&#xE9; de la transduction des fibroblastes et des cellules souches m&#xE9;senchymateuses par Tyrosine-mutantes AAV2 Vecteurs pour leur utilisation potentielle en th&#xE9;rapie cellulaire

&#x817A;&#x76F8;&#x5173;&#x75C5;&#x6BD2; &#xFF08;AAV2&#xFF09; 2 &#x6362;&#x80FD;&#x5411;&#x91CF;&#x5668;&#x6210;&#x7EA4;&#x7EF4;&#x7EC6;&#x80DE;&#x548C;&#x95F4;&#x5145;&#x8D28;&#x5E72;&#x7EC6;&#x80DE; (MSCs) &#x6548;&#x7387;&#x4F4E;&#x4E0B;&#xFF0C;&#x8FD9;&#x5C31;&#x9650;&#x5236;&#x4E86;&#x5176;&#x6F5C;&#x5728;&#x7684;&#x666E;&#x904D;&#x9002;&#x7528;&#x6027;&#xFF0C;&#x7EC4;&#x5408;&#x57FA;&#x56E0;&#x548C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6CBB;&#x7597;&#x4E2D;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x5DF2;&#x62A5;&#x9053; AAV2 &#x8F7D;&#x4F53;&#x4E0D;&#x80FD;&#x9AD8;&#x6548;&#x5730;&#x5411;&#x6838;&#x4EA4;&#x901A;&#x5C0F;&#x9F20;&#x6210;&#x7EA4;&#x7EF4;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E2D;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x8FD8;&#x62A5;&#x544A;&#x8BF4;&#x8868;&#x9762;&#x66B4;&#x9732;&#x7684;&#x916A;&#x6C28;&#x9178;&#x6B8B;&#x57FA;&#x4E0A;&#x75C5;&#x6BD2;&#x6027; capsids &#x5B9A;&#x70B9;&#x7A81;&#x53D8;&#x5BFC;&#x81F4;&#x7A81;&#x53D8;&#x7684;&#x8F7D;&#x4F53;&#xFF0C;&#x6539;&#x8FDB;&#x80DE;&#x5185;&#x8D29;&#x5356;&#x548C;&#x5355;&#x4E00;&#x7684;&#x916A;&#x6C28;&#x9178;&#x7A81;&#x53D8;&#x8F7D;&#x4F53;&#x8F6C;&#x5BFC;&#x6548;&#x7387;&#x662F; &sim;10-&#x8936;&#x76B1;&#x66F4;&#x9AD8;&#x7684;&#x4EBA;&#x7C7B;&#x7EC6;&#x80DE;&#x3002;&#x5728;&#x5F53;&#x524D;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x4E2D;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x8BA1;&#x7B97;&#x5355;&#x4E2A;&#x548C;&#x591A;&#x4E2A;&#x916A;&#x6C28;&#x9178;&#x7A81;&#x53D8; AAV2 &#x8F7D;&#x4F53;&#x5728;&#x5C0F;&#x9F20;&#x6210;&#x7EA4;&#x7EF4;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8F6C;&#x5BFC;&#x7684;&#x6548;&#x7387;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x7ED3;&#x679C;&#x8868;&#x660E; Y444F &#x7A81;&#x53D8;&#x8F7D;&#x4F53;&#x4E0E;&#x6362;&#x80FD;&#x5668;&#x6700;&#x6709;&#x6548;&#x5730;&#x4E4B;&#x95F4;&#x4E03;&#x5355;&#x7A81;&#x53D8;&#x8F7D;&#x4F53;&#xFF0C;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7EC6;&#x80DE; &gt; 30-fold &#x8F6C;&#x57FA;&#x56E0;&#x8868;&#x8FBE;&#x8F83;&#x91CE;&#x751F;&#x578B;&#x8F7D;&#x4F53;&#x3002;&#x5F53; Y444F &#x7A81;&#x53D8;&#x7ED3;&#x5408;&#x5176;&#x4ED6;&#x7A81;&#x53D8; &#xFF08;Y500F &#x548C; Y730F&#xFF09;&#x3001; &#x4E09;&#x91CD;&#x7A81;&#x53D8;&#x8F7D;&#x4F53;&#x8F6C;&#x5BFC;&#x6548;&#x7387;&#x589E;&#x52A0; &sim;130 &#x500D;&#x548C;&#x75C5;&#x6BD2;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5185;&#x8D29;&#x5356;&#x4E5F;&#x662F;&#x91CD;&#x8981;&#x7684;&#x6539;&#x8FDB;&#x3002;&#x540C;&#x6837;&#xFF0C;&#x4E09;&#x91CD;&#x7A81;&#x53D8;&#x8F7D;&#x4F53;&#x90FD;&#x80FD;&#x591F;&#x6C19;&#x6C14;&#x9AA8;&#x9AD3;&#x4E3B;&#x5C0F;&#x9F20;&#x4EE5;&#x53CA;&#x4EBA;&#x7C7B; MSCs &#x7684; 80-90%&#x3002;&#x56E0;&#x6B64;&#xFF0C;&#x9AD8;&#x6548;&#x7387;&#x7684;&#x6210;&#x7EA4;&#x7EF4;&#x7EC6;&#x80DE;&#x91CD;&#x7F16;&#x7A0B;&#x751F;&#x6210;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x591A;&#x80FD;&#x5E72;&#x7EC6;&#x80DE;&#x548C;&#x63D0;&#x4F9B;&#x6CBB;&#x7597;&#x4F5C;&#x7528;&#x7684;&#x57FA;&#x56E0;&#xFF0C;MSCs &#x7684;&#x57FA;&#x56E0;&#x8F6C;&#x5BFC;&#x73B0;&#x5728;&#x5E94;&#x8BE5;&#x53EF;&#x884C;&#x4E0E;&#x916A;&#x6C28;&#x9178;&#x7A81;&#x53D8;&#x57FA;&#x56E0;&#x817A;&#x76F8;&#x5173;&#x75C5;&#x6BD2;&#x8F7D;&#x4F53;&#x3002;

&#x9AD8;&#x6548;&#x7387;&#x7684;&#x6210;&#x7EA4;&#x7EF4;&#x7EC6;&#x80DE;&#x548C;&#x95F4;&#x5145;&#x8D28;&#x5E72;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x916A;&#x6C28;&#x9178;&#x7A81;&#x53D8; AAV2 &#x8F7D;&#x4F53;&#x4F9B;&#x5176;&#x5728;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7597;&#x6CD5;&#x7684;&#x6F5C;&#x5728;&#x4F7F;&#x7528;&#x7684;&#x4F20;&#x5BFC;&#x3002;

Adeno-associated virus 2 (AAV2) vectors transduce fibroblasts and mesenchymal stem cells (MSCs) inefficiently, which limits their potential widespread applicability in combinatorial gene and cell therapy. We have reported that AAV2 vectors fail to traffic efficiently to the nucleus in murine fibroblasts. We have also reported that site-directed mutagenesis of surface-exposed tyrosine residues on viral capsids leads to improved intracellular trafficking of the mutant vectors, and the transduction efficiency of the single tyrosine-mutant vectors is âˆ¼10-fold higher in human cells. In the current studies, we evaluated the transduction efficiency of single as well as multiple tyrosine-mutant AAV2 vectors in murine fibroblasts. Our results indicate that the Y444F mutant vectors transduce these cells most efficiently among the seven single-mutant vectors, with >30-fold increase in transgene expression compared with the wild-type vectors. When the Y444F mutation is combined with additional mutations (Y500F and Y730F), the transduction efficiency of the triple-mutant vectors is increased by âˆ¼130-fold and the viral intracellular trafficking is also significant improved. Similarly, the triple-mutant vectors are capable of transducing up to 80-90% of bone marrow-derived primary murine as well as human MSCs. Thus, high-efficiency transduction of fibroblasts with reprogramming genes to generate induced pluripotent stem cells, and the MSCs for delivering therapeutic genes, should now be feasible with the tyrosine-mutant AAV vectors.

High-efficiency transduction of fibroblasts and mesenchymal stem cells by tyrosine-mutant AAV2 vectors for their potential use in cellular therapy.

Adeno-assoziierte Virus 2 (AAV2) Vektoren zur&uuml;ckwirken Fibroblasten und mesenchymale Stammzellen (MSCs) ineffizient, welche Grenzen ihre potenziellen weit verbreiteten Anwendbarkeit in der kombinatorischen gen- und Therapie. Wir haben berichtet, dass AAV2 Vektoren nicht effizient Verkehr zum Kern in murine Fibroblasten. Wir haben auch berichtet, dass Site-verwiesene Mutagenese Oberfl&auml;che exponierten Tyrosin R&uuml;ckst&auml;nde auf viralen Capsids f&uuml;hrt zu verbesserten intrazellul&auml;re Menschenhandel der Mutanten Vektoren und die Transduktion Effizienz der einzelnen Tyrosin-Mutant Vektoren &sim;10-fach h&ouml;her in den menschlichen Zellen. In aktuellen Studien werteten wir die Transduktion Effizienz der einzelne als auch mehrere Tyrosin-Mutant AAV2 Vektoren in murine Fibroblasten. Unsere Ergebnisse zeigen, dass die Y444F-Mutanten-Vektoren dieser Zellen am effizientesten unter den sieben Einzel-Mutant-Vektoren mit zur&uuml;ckwirken &gt; 30-fold Anstieg Transgenexpression im Vergleich mit den Wildtyp-Vektoren. Wenn die Y444F-Mutation mit zus&auml;tzlichen Mutationen (Y500F und Y730F kombiniert wird), die Transduktion Effizienz der Dreifach-Mutant Vektoren sich um &sim;130-fach erh&ouml;ht und virale intrazellul&auml;re Menschenhandel auch erhebliche ist verbesserte. Ebenso k&ouml;nnen die Dreifach-Mutant-Vektoren transducing bis zu 80-90 % der Knochenmark-abgeleitete prim&auml;ren murinen sowie menschliche MSCs. Daher sollten hocheffiziente Transduktion von Fibroblasten mit Umprogrammierung Gene zum Generieren von induzierten pluripotenten Stammzellen und die MSCs f&uuml;r die Bereitstellung von therapeutischen Gene, jetzt bei der Tyrosin-Mutant-AAV-Vektoren durchf&uuml;hrbar.

Hocheffiziente Transduktion von Fibroblasten und mesenchymalen Stammzellen durch Tyrosin-Mutant AAV2 Vektoren auf ihre m&ouml;gliche Verwendung bei Zelltherapie.

Virus adeno-associati 2 (AAV2) vettori trasducono fibroblasti e cellule staminali mesenchimali (MSCs) in modo inefficiente, che limita il loro potenziale applicabilit&agrave; diffusa nella combinatoria terapia genica e cellulare. Abbiamo segnalato che AAV2 vettori non efficiente del traffico nel nucleo in fibroblasti murini. Abbiamo anche segnalato che mutagenesi luogo-diretta dei residui di tirosina superficie esposta su capsidi virali conduce a maggiore traffico intracellulare dei vettori del mutanti e l&#39;efficienza di trasduzione dei singoli vettori tirosina-mutante &egrave; &sim;10 volte pi&ugrave; elevati nelle cellule umane. Negli studi attuali, abbiamo valutato l&#39;efficienza di trasduzione del singolo cos&igrave; come molteplici vettori di AAV2 tirosina-mutante in fibroblasti murini. I nostri risultati indicano che i vettori mutanti Y444F trasducono queste cellule in modo pi&ugrave; efficiente tra i sette vettori single-mutante, con &amp;gt; 30-fold aumento di espressione del transgene confrontato con i vettori di tipo selvatico. Quando la mutazione Y444F &egrave; combinata con altre mutazioni (Y500F e Y730F), l&#39;efficienza di trasduzione dei vettori triple-mutante &egrave; aumentato da &sim;130-piega e il traffico virale intracellulare &egrave; anche significativo miglioramento. Analogamente, i vettori di triple-mutante sono capaci di transducing fino a 80-90% delle derivate da midollo osseo primario murino cos&igrave; come umana MSCs. Cos&igrave;, ad alta efficienza trasduzione dei fibroblasti con riprogrammazione geni per generare cellule staminali pluripotenti indotte e MSCs per la consegna di geni terapeutici, ora dovrebbe essere fattibile con i vettori AAV tirosina-mutante.

Ad alta efficienza trasduzione di fibroblasti e cellule staminali mesenchimali da vettori AAV2 tirosina-mutante per il loro potenziale utilizzo in terapia cellulare.

&#x30A2;&#x30C7;&#x30CE;&#x968F;&#x4F34;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;2&#xFF08;AAV2&#xFF09;&#x30D9;&#x30AF;&#x30BF;&#x30FC;&#x306F;&#x3001;&#x7D44;&#x307F;&#x5408;&#x308F;&#x305B;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x7D30;&#x80DE;&#x6CBB;&#x7642;&#x306B;&#x6F5C;&#x5728;&#x7684;&#x306A;&#x5E83;&#x7BC4;&#x306A;&#x9069;&#x7528;&#x6027;&#x3092;&#x5236;&#x9650;&#x3057;&#x3001;&#x975E;&#x52B9;&#x7387;&#x7684;&#x306B;&#xFF08;MSC&#xFF09;&#x306E;&#x7DDA;&#x7DAD;&#x82BD;&#x7D30;&#x80DE;&#x3068;&#x9593;&#x8449;&#x7CFB;&#x5E79;&#x7D30;&#x80DE;&#x3092;&#x5F62;&#x8CEA;&#x5C0E;&#x5165;&#x3059;&#x308B;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;AAV2&#x30D9;&#x30AF;&#x30BF;&#x30FC;&#x306F;&#x3001;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x7DDA;&#x7DAD;&#x82BD;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x6838;&#x306B;&#x52B9;&#x7387;&#x7684;&#x306B;&#x30C8;&#x30E9;&#x30D5;&#x30A3;&#x30C3;&#x30AF;&#x306B;&#x5931;&#x6557;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x5831;&#x544A;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x307E;&#x305F;&#x3001;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x30AB;&#x30D7;&#x30B7;&#x30C9;&#x306E;&#x8868;&#x9762;&#x306B;&#x9732;&#x51FA;&#x306E;&#x30C1;&#x30ED;&#x30B7;&#x30F3;&#x6B8B;&#x57FA;&#x306E;&#x90E8;&#x4F4D;&#x7279;&#x7570;&#x7684;&#x7A81;&#x7136;&#x5909;&#x7570;&#x8A98;&#x767A;&#x6CD5;&#x306F;&#x3001;&#x5909;&#x7570;&#x4F53;&#x30D9;&#x30AF;&#x30BF;&#x30FC;&#x306E;&#x6539;&#x826F;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x7D30;&#x80DE;&#x5185;&#x8F38;&#x9001;&#x306B;&#x3064;&#x306A;&#x304C;&#x308B;&#x3057;&#x3001;&#x5358;&#x4E00;&#x306E;&#x30C1;&#x30ED;&#x30B7;&#x30F3;&#x5909;&#x7570;&#x4F53;&#x30D9;&#x30AF;&#x30BF;&#x30FC;&#x306E;&#x5C0E;&#x5165;&#x52B9;&#x7387;&#x306F;&#x3001;&#x30D2;&#x30C8;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x3067;&#x7D04;10&#x500D;&#x4EE5;&#x4E0A;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3002;&#x5831;&#x544A;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x73FE;&#x5728;&#x306E;&#x7814;&#x7A76;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x7DDA;&#x7DAD;&#x82BD;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x5358;&#x4E00;&#x306A;&#x3089;&#x3073;&#x306B;&#x8907;&#x6570;&#x306E;&#x30C1;&#x30ED;&#x30B7;&#x30F3;&#x5909;&#x7570;AAV2&#x30D9;&#x30AF;&#x30BF;&#x30FC;&#x306E;&#x5C0E;&#x5165;&#x52B9;&#x7387;&#x3092;&#x8A55;&#x4FA1;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x306F;&#x3001;Y444F&#x5909;&#x7570;&#x4F53;&#x30D9;&#x30AF;&#x30BF;&#x30FC;&#x306F;&#x3001;&#x91CE;&#x751F;&#x578B;&#x306E;&#x30D9;&#x30AF;&#x30BF;&#x30FC;&#x3068;&#x6BD4;&#x8F03;&#x3057;&#x3066;&#x5C0E;&#x5165;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x767A;&#x73FE;&#x306E;&#x26;gt; 30&#x500D;&#x306E;&#x5897;&#x52A0;&#x3068;&#x3001;7&#x3064;&#x306E;&#x5909;&#x7570;&#x4F53;&#x306E;&#x30D9;&#x30AF;&#x30C8;&#x30EB;&#x306E;&#x4E2D;&#x3067;&#x6700;&#x3082;&#x52B9;&#x7387;&#x7684;&#x306B;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x3092;&#x5F62;&#x8CEA;&#x5C0E;&#x5165;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002; Y444F&#x306E;&#x5909;&#x7570;&#x306F;&#x3001;&#x8FFD;&#x52A0;&#x306E;&#x5909;&#x7570;&#xFF08;Y500F&#x3068;Y730F&#xFF09;&#x3068;&#x7D44;&#x307F;&#x5408;&#x308F;&#x305B;&#x308B;&#x3068;&#x3001;&#x30C8;&#x30EA;&#x30D7;&#x30EB;&#x5909;&#x7570;&#x4F53;&#x30D9;&#x30AF;&#x30BF;&#x30FC;&#x306E;&#x5C0E;&#x5165;&#x52B9;&#x7387;&#x304C;&#x301C;130&#x500D;&#x306B;&#x5897;&#x52A0;&#x3057;&#x3001;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x5185;&#x8F38;&#x9001;&#x306F;&#x6539;&#x5584;&#x3082;&#x91CD;&#x8981;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x540C;&#x69D8;&#x306B;&#x3001;&#x30C8;&#x30EA;&#x30D7;&#x30EB;&#x5909;&#x7570;&#x4F53;&#x30D9;&#x30AF;&#x30BF;&#x30FC;&#x306F;&#x3001;&#x9AA8;&#x9AC4;&#x7531;&#x6765;&#x306E;&#x4E3B;&#x8981;&#x306A;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x3068;&#x540C;&#x69D8;&#x306B;&#x30D2;&#x30C8;MSC&#x306E;80-90&#xFF05;&#x307E;&#x3067;&#x4F1D;&#x9054;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x53EF;&#x80FD;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3002;&#x3057;&#x305F;&#x304C;&#x3063;&#x3066;&#x3001;&#x6CBB;&#x7642;&#x7528;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x9AD8;&#x52B9;&#x7387;&#x8A98;&#x5C0E;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x591A;&#x80FD;&#x6027;&#x5E79;&#x7D30;&#x80DE;&#x3092;&#x751F;&#x6210;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x3092;&#x518D;&#x30D7;&#x30ED;&#x30B0;&#x30E9;&#x30DF;&#x30F3;&#x30B0;&#x3057;&#x305F;&#x7DDA;&#x7DAD;&#x82BD;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x60C5;&#x5831;&#x4F1D;&#x9054;&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073;MSC&#x306F;&#x73FE;&#x5728;&#x3001;&#x30C1;&#x30ED;&#x30B7;&#x30F3;&#x5909;&#x7570;&#x4F53;AAV&#x30D9;&#x30AF;&#x30BF;&#x30FC;&#x3067;&#x53EF;&#x80FD;&#x3067;&#x306A;&#x3051;&#x308C;&#x3070;&#x306A;&#x308A;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3002;

&#x7D30;&#x80DE;&#x7642;&#x6CD5;&#x306E;&#x6F5C;&#x5728;&#x7684;&#x306A;&#x4F7F;&#x7528;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x30C1;&#x30ED;&#x30B7;&#x30F3;&#x5909;&#x7570;AAV2&#x30D9;&#x30AF;&#x30BF;&#x30FC;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x7DDA;&#x7DAD;&#x82BD;&#x7D30;&#x80DE;&#x3068;&#x9593;&#x8449;&#x7CFB;&#x5E79;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x9AD8;&#x52B9;&#x7387;&#x4F1D;&#x9054;

Adeno &#xC81C;&#xD734;&#xD574; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; 2 (AAV2) &#xBCA1;&#xD130; transduce &#xC12C;&#xC720; &#xC544; &#xC138;&#xD3EC;&#xC640; &#xC911;&#xAC04; &#xC5FD; &#xC904;&#xAE30; &#xC138;&#xD3EC; (MSCs) &#xBE44;&#xD6A8;&#xC728;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C;, &#xC870;&#xD569; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xBC0F; &#xC138;&#xD3EC; &#xCE58;&#xB8CC;&#xC5D0; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC758; &#xC7A0;&#xC7AC;&#xC801;&#xC778; &#xAD11;&#xBC94;&#xC704; &#xD55C; &#xC801;&#xC6A9; &#xAC00;&#xB2A5;&#xC131; &#xC81C;&#xD55C; &#xD558;&#xB294;. &#xC6B0;&#xB9AC; AAV2 &#xBCA1;&#xD130; murine &#xC12C;&#xC720; &#xC544; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD575;&#xC744; &#xD6A8;&#xC728;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xAD50;&#xD1B5; &#xD558;&#xC9C0; &#xBABB;&#xD558;&#xB294; &#xAC83;&#xC744; &#xBCF4;&#xACE0; &#xC788;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xB610;&#xD55C; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; &#xC131; capsids&#xC5D0; &#xD45C;&#xBA74;&#xC5D0; &#xB178;&#xCD9C; &#xB41C; &#xD2F0;&#xB85C;&#xC2E0; &#xC794;&#xB958;&#xBB3C;&#xC758; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8; &#xAC10;&#xB3C5; mutagenesis &#xB9AC;&#xB4DC; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xBCA1;&#xD130;&#xC758; &#xD5A5;&#xC0C1; &#xB41C; &#xC138;&#xD3EC;&#xB0B4; &#xBC00;&#xB9E4; &#xD558; &#xACE0; &#xB2E8;&#xC77C; &#xD2F0;&#xB85C;&#xC2E0; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xBCA1;&#xD130;&#xC758; &#xBCC0;&#xD658; &#xD6A8;&#xC728;&#xC740; &#xC778;&#xAC04;&#xC758; &#xC138;&#xD3EC;&#xB97C; &#xB354; &#xB192;&#xC740; &sim;10-&#xBC30; &#xBCF4;&#xACE0;. &#xD604;&#xC7AC; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; murine &#xC12C;&#xC720; &#xC544; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC5EC;&#xB7EC; &#xD2F0;&#xB85C;&#xC2E0; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; AAV2 &#xBCA1;&#xD130; &#xBFD0;&#xB9CC; &#xC544;&#xB2C8;&#xB77C; &#xB2E8;&#xC77C;&#xC758; &#xBCC0;&#xD658; &#xD6A8;&#xC728;&#xC131; &#xD3C9;&#xAC00;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xACB0;&#xACFC; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0B4;&#xB294; Y444F &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xBCA1;&#xD130;&#xC640; 7 &#xAC1C;&#xC758; &#xB2E8;&#xC77C; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xBCA1;&#xD130; &#xC911;&#xC5D0;&#xC11C; &#xAC00;&#xC7A5; &#xD6A8;&#xC728;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xC140;&#xC744; transduce &amp;gt; transgene &#xC2DD; 30-fold &#xC99D;&#xAC00; &#xBE44;&#xD574; &#xC57C;&#xC0DD;-&#xD0C0;&#xC785; &#xBCA1;&#xD130;. Y444F &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xCD94;&#xAC00; &#xBCC0;&#xC774; (Y500F &#xBC0F; Y730F)&#xC640; &#xD568;&#xAED8; &#xD2B8;&#xB9AC;&#xD50C; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xBCA1;&#xD130;&#xC758; &#xBCC0;&#xD658; &#xD6A8;&#xC728;&#xC740; &sim;130 &#xBC30; &#xC99D;&#xAC00; &#xD558; &#xACE0; &#xC138;&#xD3EC;&#xB0B4; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; &#xC131; &#xB9E4;&#xB9E4;&#xB294; &#xB610;&#xD55C; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xAC1C;&#xC120;. &#xB9C8;&#xCC2C;&#xAC00;&#xC9C0;&#xB85C;, &#xD2B8;&#xB9AC;&#xD50C; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xBCA1;&#xD130; transducing &#xACE8; &#xC218; &#xD30C;&#xC0DD; &#xB41C; &#xAE30;&#xBCF8; murine &#xBFD0;&#xB9CC; &#xC544;&#xB2C8;&#xB77C; &#xC778;&#xAC04;&#xC758; Mscs&#xC758; 80-90%&#xAE4C;&#xC9C0; &#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xB2E4;. &#xB530;&#xB77C;&#xC11C;, &#xC720;&#xB3C4; &#xB9CC;&#xB2A5; &#xC904;&#xAE30; &#xC138;&#xD3EC;&#xC640; &#xCE58;&#xB8CC; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xB97C; &#xC804;&#xB2EC; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD55C; Mscs&#xB97C; &#xC0DD;&#xC131; &#xD558;&#xB294; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xC7AC;&#xD504;&#xB85C;&#xADF8;&#xB798;&#xBC0D; &#xB41C; &#xC12C;&#xC720; &#xC544; &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xACE0;&#xD6A8;&#xC728; &#xBCC0;&#xD658; &#xC774;&#xC81C; &#xD2F0;&#xB85C;&#xC2E0; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; AAV &#xBCA1;&#xD130;&#xC640; &#xC2E4;&#xD604; &#xB418;&#xC5B4;&#xC57C; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xC12C;&#xC720; &#xC544; &#xC138;&#xD3EC; &#xBC0F; &#xC138;&#xD3EC; &#xCE58;&#xB8CC;&#xC5D0; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC758; &#xC7A0;&#xC7AC;&#xC801;&#xC778; &#xC0AC;&#xC6A9;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xD2F0;&#xB85C;&#xC2E0; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; AAV2 &#xBCA1;&#xD130;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC911;&#xAC04; &#xC5FD; &#xC904;&#xAE30; &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xACE0;&#xD6A8;&#xC728; &#xBCC0;&#xD658;.

&#x817A;&#x76F8;&#x5173;&#x75C5;&#x6BD2; (AAVs) &#x4F7F;&#x7528;&#x5404;&#x79CD;&#x5404;&#x6837;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x53D7;&#x4F53;/&#x8F85;&#x52A9;&#x53D7;&#x4F53;&#x8FDB;&#x5165;&#x7EC6;&#x80DE;&#x3002;&#x5927;&#x91CF;&#x7684;&#x817A;&#x76F8;&#x5173;&#x75C5;&#x6BD2;&#x8840;&#x6E05;&#x578B;&#x73B0;&#x5728;&#x53EF;&#x7528;&#xFF0C;&#x4EE5;&#x53CA;&#x8F85;&#x52A9;&#x53D7;&#x540C;&#x6E90;&#x53D7;&#x4F53;/&#x4F53;&#x662F;&#x5C48;&#x6307;&#x53EF;&#x6570;&#x7684;&#x90A3;&#x4E9B;&#x8FC4;&#x4ECA;&#x5DF2;&#x786E;&#x5B9A;&#x3002;10 &#x79CD;&#x5E38;&#x7528;&#x817A;&#x76F8;&#x5173;&#x75C5;&#x6BD2;&#x8840;&#x6E05;&#x578B;&#x4E2D;&#xFF0C;AAV3 &#x662F;&#x5230;&#x76EE;&#x524D;&#x4E3A;&#x6B62;&#x81F3;&#x5C11;&#x6709;&#x6548;&#x5730;&#x4E00;&#x822C;&#x6C19;&#x6C14;&#x7684;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x3002;&#x7136;&#x800C;&#xFF0C;&#x5728;&#x6211;&#x4EEC;&#x6700;&#x8FD1;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x4E2D;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x89C2;&#x5BDF;&#x5230; AAV3 &#x8F7D;&#x4F53;&#x8F6C;&#x5BFC;&#x4EBA;&#x809D;&#x764C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x51FA;&#x8272;&#xFF0C;&#x8FD9;&#x5BFC;&#x81F4;&#x4E86; AAV3 &#x4F7F;&#x7528;&#x809D;&#x7EC6;&#x80DE;&#x751F;&#x957F;&#x56E0;&#x5B50;&#x53D7;&#x4F53; (HGFR) &#x7684;&#x5047;&#x8BBE;&#x4F5C;&#x4E3A; hiv &#x75C5;&#x6BD2;&#x8FDB;&#x5165;&#x7EC6;&#x80DE;&#x611F;&#x67D3;&#x6291;&#x5236;&#x3002;AAV3 &#x611F;&#x67D3;&#x4EBA;&#x809D;&#x764C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7CFB;&#x662F;&#x5F3A;&#x70C8;&#x6291;&#x5236;&#x809D;&#x7EC6;&#x80DE;&#x751F;&#x957F;&#x56E0;&#x5B50;&#x3001; &#x7279;&#x5B9A;&#x4E8E; HGFR &#x7684;&#x5C0F;&#x5206;&#x5B50;&#x5E72;&#x6270; RNA &#x548C;&#x6297; HGFR &#x6297;&#x4F53;&#xFF0C;&#x8FD9;&#x8BC1;&#x5B9E;&#x4E86;&#x8FD9;&#x4E00;&#x5047;&#x8BBE;&#x3002;&#x7136;&#x800C;&#xFF0C;AAV3 &#x5411;&#x91CF;&#x672A;&#x80FD;&#x6362;&#x80FD;&#x5668;&#x5C0F;&#x9F20;&#x809D;&#x7EC6;&#x80DE;&#xFF0C;&#x5728;&#x4F53;&#x5916;&#x548C;&#x4F53;&#x5185;&#xFF0C;&#x8FD9;&#x8868;&#x660E; AAV3 &#x4E13;&#x95E8;&#x4F7F;&#x7528;&#x4EBA;&#x7C7B;&#x7684; HGFR&#xFF0C;&#x4F46;&#x4E0D;&#x662F;&#x5C0F;&#x9F20; HGFR&#xFF0C;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x4E3A;&#x8F6C;&#x5BFC;&#x7EC6;&#x80DE; hiv &#x611F;&#x67D3;&#x7684;&#x6291;&#x5236;&#x3002;AAV3 &#x53EF;&#x80FD;&#x662F;&#x9488;&#x5BF9;&#x6F5C;&#x5728;&#x7684;&#x57FA;&#x56E0;&#x6CBB;&#x7597;&#x4EBA;&#x7C7B;&#x809D;&#x764C;&#x75C7;&#x6709;&#x7528;&#x5411;&#x91CF;&#x3002;

&#x4EBA;&#x809D;&#x7EC6;&#x80DE;&#x751F;&#x957F;&#x56E0;&#x5B50;&#x53D7;&#x4F53;&#x662F;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684; hiv &#x611F;&#x67D3;&#x6291;&#x5236;&#x817A;&#x76F8;&#x5173;&#x75C5;&#x6BD2;&#x8840;&#x6E05;&#x578B; 3 &#x5BF9;&#x3002;

Adeno-associated viruses (AAVs) use a variety of cellular receptors/coreceptors to gain entry into cells. A number of AAV serotypes are now available, and the cognate receptors/coreceptors for only a handful of those have been identified thus far. Of the 10 commonly used AAV serotypes, AAV3 is by far the least efficient in transducing cells in general. However, in our more recent studies, we observed that AAV3 vectors transduced human liver cancer cells remarkably well, which led to the hypothesis that AAV3 uses hepatocyte growth factor receptor (HGFR) as a cellular coreceptor for viral entry. AAV3 infection of human liver cancer cell lines was strongly inhibited by hepatocyte growth factor, HGFR-specific small interfering RNA, and anti-HGFR antibody, which corroborated this hypothesis. However, AAV3 vectors failed to transduce murine hepatocytes, both in vitro and in vivo, suggesting that AAV3 specifically uses human HGFR, but not murine HGFR, as a cellular coreceptor for transduction. AAV3 may prove to be a useful vector for targeting human liver cancers for the potential gene therapy.

Human hepatocyte growth factor receptor is a cellular coreceptor for adeno-associated virus serotype 3.

Virus adeno-asociados (AAV) utilizan una variedad de receptores celulares o correceptores para poder entrar en las c&#xE9;lulas. Un n&#xFA;mero de serotipos de AAV ya est&#xE1;n disponibles, y los receptores afines o correceptores para s&#xF3;lo un pu&#xF1;ado de ellos han sido identificados hasta el momento. De los 10 serotipos de AAV de uso com&#xFA;n, AAV3 es por lejos el menos eficiente en la transducci&#xF3;n de las c&#xE9;lulas en general. Sin embargo, en nuestros estudios m&#xE1;s recientes, se observ&#xF3; que AAV3 vectores transduced c&#xE9;lulas humanas de c&#xE1;ncer de h&#xED;gado muy bien, lo que condujo a la hip&#xF3;tesis de que AAV3 utiliza receptor de factor de crecimiento de hepatocitos (HGFR) como un co-receptor celular para la entrada del virus. AAV3 infecci&#xF3;n de l&#xED;neas celulares de c&#xE1;ncer de h&#xED;gado humano fue mucho m&#xE1;s inhibida por el factor de crecimiento de hepatocitos, HGFR espec&#xED;ficas de ARN peque&#xF1;os de interferencia, y el anticuerpo anti-HGFR, lo que corrobora esta hip&#xF3;tesis. Sin embargo, no AAV3 vectores para transducir hepatocitos murinos, tanto in vitro como in vivo, lo que sugiere que AAV3 utiliza espec&#xED;ficamente HGFR humana, pero no HGFR murino, como un co-receptor celular para la transducci&#xF3;n. AAV3 puede llegar a ser un vector &#xFA;til para la focalizaci&#xF3;n c&#xE1;nceres de h&#xED;gado humano para la terapia g&#xE9;nica potencial.

Humanos del receptor del factor de crecimiento de hepatocitos es un correceptor celular de virus adeno-asociado serotipo 3

Virus ad&#xE9;no-associ&#xE9;s (AAV) utilisent une vari&#xE9;t&#xE9; de r&#xE9;cepteurs cellulaires ou cor&#xE9;cepteurs pour entrer dans les cellules. Un certain nombre de s&#xE9;rotypes d&#x26;#39;AAV sont maintenant disponibles, et les r&#xE9;cepteurs apparent&#xE9;s ou cor&#xE9;cepteurs pour seulement une poign&#xE9;e de ceux qui ont &#xE9;t&#xE9; identifi&#xE9;es &#xE0; ce jour. Parmi les 10 s&#xE9;rotypes d&#x26;#39;AAV couramment utilis&#xE9;s, AAV3 est de loin la moins efficace dans la transduction des cellules en g&#xE9;n&#xE9;ral. Cependant, dans nos &#xE9;tudes les plus r&#xE9;centes, nous avons observ&#xE9; que AAV3 vecteurs transduites cellules humaines de cancer du foie remarquablement bien, qui a conduit &#xE0; l&#x26;#39;hypoth&#xE8;se selon laquelle AAV3 utilise des h&#xE9;patocytes r&#xE9;cepteur du facteur de croissance (HGFR) comme un cor&#xE9;cepteur cellulaire pour l&#x26;#39;entr&#xE9;e virale. AAV3 infection de lignes de foie de cellules canc&#xE9;reuses humaines a &#xE9;t&#xE9; fortement inhib&#xE9;e par le facteur de croissance des h&#xE9;patocytes, HGFR-petits ARN interf&#xE9;rents sp&#xE9;cifiques, et anti-HGFR anticorps, ce qui corrobore cette hypoth&#xE8;se. Toutefois, AAV3 vecteurs &#xE9;chou&#xE9; &#xE0; transduire les h&#xE9;patocytes murins, &#xE0; la fois in vitro et in vivo, ce qui sugg&#xE8;re que AAV3 utilise sp&#xE9;cifiquement HGFR humaine, mais pas HGFR murin, comme un cor&#xE9;cepteur cellulaire pour la transduction. AAV3 peut se r&#xE9;v&#xE9;ler &#xEA;tre un vecteur utile pour le ciblage cancers du foie de l&#x26;#39;homme pour la th&#xE9;rapie g&#xE9;nique potentiel.

R&#xE9;cepteur humain du facteur de croissance des h&#xE9;patocytes est un cor&#xE9;cepteur cellulaire pour virus ad&#xE9;no-associ&#xE9; s&#xE9;rotype 3

Adeno-assoziierte Viren (AAVs) verwenden eine Vielzahl von zellul&auml;ren Rezeptoren/Corezeptors Eintrag in die Zellen zu gewinnen. Eine Reihe von AAV-Serotypen sind jetzt verf&uuml;gbar, und die verwandten Rezeptoren/Corezeptors f&uuml;r nur eine Handvoll davon wurden bisher identifiziert. Die 10 h&auml;ufigsten verwendeten AAV-Serotypen ist AAV3 bei weitem die wenigsten effiziente in transducing Zellen im Allgemeinen. Jedoch in unseren neueren Studien beobachteten wir, dass AAV3 Vektoren menschlicher Leberkrebs Zellen bemerkenswert gut gef&uuml;hrt zu die Hypothese transduzierten, dass AAV3 Hepatozyten-Wachstumsfaktor-Rezeptor (HGFR) verwendet als eine zellul&auml;re Coreceptor f&uuml;r virale Eintrag. AAV3 Infektion der menschlichen Leber Krebszelllinien war stark gehemmt, von Hepatozyten-Wachstumsfaktor, HGFR-spezifische small interfering RNA und Anti-HGFR-Antik&ouml;rper, die diese Hypothese best&auml;tigt. Allerdings gelang es AAV3 Vektoren, zur&uuml;ckwirken murine Hepatozyten, in vitro und in vivo darauf hindeutet, dass AAV3 speziell menschliche HGFR, aber nicht murinen HGFR, als eine zellul&auml;re Coreceptor f&uuml;r Transduktion verwendet. AAV3 k&ouml;nnte sich als n&uuml;tzlich Vektor f&uuml;r die Ausrichtung der menschlichen Leber Krebs f&uuml;r die m&ouml;gliche Gentherapie.

Menschliche Hepatozyten-Wachstumsfaktor-Rezeptor ist ein zellul&auml;rer Coreceptor f&uuml;r Adeno-assoziierte Virus Serotyp 3.

Virus adeno-associati (AAVs) utilizzare una variet&agrave; di recettori cellulari/coreceptors per ottenere l&#39;ingresso nelle cellule. Un certo numero di sierotipi AAV &egrave; ora disponibile, e le cognate recettori/coreceptors per solo una manciata di quelli sono stati identificati finora. 10 Sierotipi AAV comunemente usati, AAV3 &egrave; di gran lunga il meno efficiente in transducing cellule in generale. Tuttavia, nei nostri studi pi&ugrave; recenti, abbiamo osservato che AAV3 vettori transduced cellule di cancro del fegato umano straordinariamente bene, che ha condotto all&#39;ipotesi che AAV3 USA del hepatocyte growth factor receptor (HGFR) come un cellulare coreceptor per entrata virale. AAV3 infezione di linee di cellule di cancro del fegato umano &egrave; stato fortemente inibito da fattore di crescita degli epatociti e piccolo RNA interferente HGFR specifico anticorpo anti-HGFR, che ha corroborato questa ipotesi. Tuttavia, AAV3 vettori non &egrave; riuscito a trasdurre epatociti murini sia in vitro che in vivo, suggerendo che AAV3 in particolare utilizza umano HGFR, ma HGFR non murino, come un cellulare coreceptor per la trasduzione. AAV3 pu&ograve; rivelarsi un utile vettore per il targeting tumori epatici umani per la terapia genica potenziali.

Recettore del fattore di crescita degli epatociti umani &egrave; un cellulare coreceptor per sierotipo del virus adeno-associati 3.

&#x30A2;&#x30C7;&#x30CE;&#x968F;&#x4F34;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#xFF08;AAV&#x306E;&#xFF09;&#x306F;&#x3001;&#x7D30;&#x80DE;&#x5185;&#x306B;&#x30A8;&#x30F3;&#x30C8;&#x30EA;&#x3092;&#x5F97;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x3001;&#x7D30;&#x80DE;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;/&#x5171;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x306E;&#x3055;&#x307E;&#x3056;&#x307E;&#x306A;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002; AAV&#x8840;&#x6E05;&#x578B;&#x306E;&#x6570;&#x304C;&#x5229;&#x7528;&#x53EF;&#x80FD;&#x306B;&#x306A;&#x308A;&#x3001;&#x305D;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x307B;&#x3093;&#x306E;&#x4E00;&#x63E1;&#x308A;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x540C;&#x65CF;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;/&#x5171;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x306F;&#x3001;&#x3053;&#x308C;&#x307E;&#x3067;&#x540C;&#x5B9A;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002; 10&#x4E00;&#x822C;&#x7684;&#x306B;&#x4F7F;&#x7528;&#x3055;&#x308C;&#x308B;AAV&#x8840;&#x6E05;&#x578B;&#x306E;&#x3046;&#x3061;&#x3001;AAV3&#x306F;&#x306F;&#x308B;&#x304B;&#x306B;&#x6700;&#x3082;&#x975E;&#x52B9;&#x7387;&#x7684;&#x3001;&#x4E00;&#x822C;&#x7684;&#x306B;&#x7D30;&#x80DE;&#x3092;&#x5F62;&#x8CEA;&#x5C0E;&#x5165;&#x306E;&#x3053;&#x3068;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x3057;&#x304B;&#x3057;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306E;&#x6700;&#x8FD1;&#x306E;&#x7814;&#x7A76;&#x3067;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306F;AAV3&#x30D9;&#x30AF;&#x30C8;&#x30EB;&#x306F;AAV3&#x306F;&#x3001;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x306E;&#x4FB5;&#x5165;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x30B3;&#x30EC;&#x30BB;&#x30D7;&#x30BF;&#x30FC;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x809D;&#x7D30;&#x80DE;&#x5897;&#x6B96;&#x56E0;&#x5B50;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#xFF08;HGFR&#xFF09;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3068;&#x3044;&#x3046;&#x4EEE;&#x8AAC;&#x306B;&#x3064;&#x306A;&#x304C;&#x3063;&#x305F;&#x3001;&#x975E;&#x5E38;&#x306B;&#x3088;&#x304F;&#x30D2;&#x30C8;&#x809D;&#x764C;&#x7D30;&#x80DE;&#x3092;&#x5F62;&#x8CEA;&#x5C0E;&#x5165;&#x3057;&#x305F;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x89B3;&#x5BDF;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x30D2;&#x30C8;&#x809D;&#x764C;&#x7D30;&#x80DE;&#x682A;&#x306E;AAV3&#x611F;&#x67D3;&#x304C;&#x5F37;&#x304F;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x4EEE;&#x8AAC;&#x3092;&#x88CF;&#x4ED8;&#x3051;&#x809D;&#x7D30;&#x80DE;&#x5897;&#x6B96;&#x56E0;&#x5B50;&#x3001;HGFR&#x56FA;&#x6709;&#x306E;&#x4F4E;&#x5206;&#x5B50;&#x5E72;&#x6E09;RNA&#x3001;&#x30A2;&#x30F3;&#x30C1;HGFR&#x6297;&#x4F53;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x963B;&#x5BB3;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3002;&#x3057;&#x304B;&#x3057;&#x3001;AAV3&#x30D9;&#x30AF;&#x30C8;&#x30EB;&#x306F;AAV3&#x306F;&#x3001;&#x7279;&#x306B;&#x60C5;&#x5831;&#x4F1D;&#x9054;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x30B3;&#x30EC;&#x30BB;&#x30D7;&#x30BF;&#x30FC;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;HGFR&#x4EBA;&#x9593;&#x306E;HGFR&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x304C;&#x3001;&#x306A;&#x3044;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x5506;&#x3057;&#x3001;in vitro&#x304A;&#x3088;&#x3073;in vivo&#x306E;&#x4E21;&#x65B9;&#x3067;&#x3001;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x809D;&#x7D30;&#x80DE;&#x3092;&#x5F62;&#x8CEA;&#x5C0E;&#x5165;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3067;&#x3057;&#x305F;&#x3002; AAV3&#x306F;&#x3001;&#x6F5C;&#x5728;&#x7684;&#x306A;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x6CBB;&#x7642;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x30D2;&#x30C8;&#x809D;&#x764C;&#x3092;&#x6A19;&#x7684;&#x3068;&#x3059;&#x308B;&#x6709;&#x7528;&#x306A;&#x30D9;&#x30AF;&#x30BF;&#x30FC;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x8A3C;&#x660E;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x30D2;&#x30C8;&#x809D;&#x7D30;&#x80DE;&#x5897;&#x6B96;&#x56E0;&#x5B50;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x306F;&#x3001;&#x30A2;&#x30C7;&#x30CE;&#x968F;&#x4F34;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x8840;&#x6E05;&#x578B;3&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x30B3;&#x30EC;&#x30BB;&#x30D7;&#x30BF;&#x30FC;&#x3067;&#x3042;&#x308B;

Adeno &#xC81C;&#xD734;&#xD574; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; (AAVs) &#xC140;&#xC5D0; &#xB2E4;&#xC591; &#xD55C; &#xC138;&#xD3EC; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4;/coreceptors&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. AAV serotypes &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xC9C0;&#xAE08; &#xD558; &#xACE0; &#xADF8; &#xC911; &#xC18C;&#xC218;&#xB9CC; &#xC704;&#xD55C; &#xB3D9;&#xC871; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4;/coreceptors&#xAE4C;&#xC9C0; &#xD655;&#xC778; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. 10 &#xC790;&#xC8FC; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xB418;&#xB294; AAV serotypes&#xC758; AAV3 &#xC9C0;&#xAE08;&#xAE4C;&#xC9C0; &#xC801;&#xC5B4;&#xB3C4; &#xC77C;&#xBC18;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xC140;&#xC744; transducing&#xC5D0; &#xD6A8;&#xC728;&#xC801;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xB354; &#xCD5C;&#xADFC;&#xC758; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xAD00;&#xCC30; &#xADF8; AAV3 &#xBCA1;&#xD130; &#xBD88;&#xB9AC;&#xACE0; &#xC778;&#xAC04; &#xAC04; &#xC554; &#xC138;&#xD3EC; &#xB108;&#xBB34;&#xB098; &#xC798; AAV3 hepatocyte &#xC131;&#xC7A5; &#xC778;&#xC790; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; (HGFR)&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xAC00;&#xC124;&#xC744; &#xC8FC;&#xB3C4; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; &#xC131; &#xD56D;&#xBAA9;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xD734;&#xB300; &#xC804;&#xD654; coreceptor&#xB85C; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC778;&#xAC04; &#xAC04; &#xC554; &#xC138;&#xD3EC; &#xB77C;&#xC778;&#xC758; AAV3 &#xAC10;&#xC5FC;&#xC740; hepatocyte &#xC131;&#xC7A5; &#xC778;&#xC790;, HGFR &#xAD00;&#xB828; &#xC791;&#xC740; &#xAC04;&#xC12D; RNA &#xBC0F;&#xC774; &#xAC00;&#xC124;&#xC744; &#xB4B7;&#xBC1B;&#xCE68; &#xD558;&#xB294; &#xC548;&#xD2F0;-HGFR &#xD56D; &#xCCB4;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xAC15;&#xB825; &#xD558; &#xAC8C; &#xC5B5;&#xC81C; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098;, AAV3 &#xBCA1;&#xD130; transduce murine hepatocytes, &#xC0DD;&#xCCB4; &#xC678; &#xBC0F; &#xC0DD;&#xCCB4; &#xC870;&#xAC74;, AAV3 &#xD2B9;&#xBCC4;&#xD788;&#xC5D0;&#xC11C;&#xB294; &#xC778;&#xAC04;&#xC758; HGFR &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xD558;&#xC9C0; murine HGFR &#xBCC0;&#xD658;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xD734;&#xB300; &#xC804;&#xD654; coreceptor&#xB85C; &#xC81C;&#xC548; &#xD558;&#xC9C0; &#xBABB;&#xD588;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. AAV3 &#xB300;&#xC0C1;&#xC73C;&#xB85C; &#xC7A0;&#xC7AC;&#xC801;&#xC778; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xCE58;&#xB8CC;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC778;&#xAC04;&#xC758; &#xAC04; &#xC554;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC720;&#xC6A9;&#xD55C; &#xBCA1;&#xD130; &#xC99D;&#xBA85;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xC778;&#xAC04;&#xC758; hepatocyte &#xC131;&#xC7A5; &#xC778;&#xC790; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; adeno &#xC81C;&#xD734;&#xD574; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; serotype 3&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xD734;&#xB300; &#xC804;&#xD654; coreceptor&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#x6D88;&#x9664;&#x7279;&#x5B9A;&#x8868;&#x9762;&#x66B4;&#x9732;&#x5355;&#x4E2A;&#x916A;&#x6C28;&#x9178; (Y) &#x6B8B;&#x7559;&#x7269;&#x53EF;&#x663E;&#x8457;&#x63D0;&#x9AD8;&#x809D;&#x57FA;&#x56E0;&#x8F6C;&#x79FB;&#x4E0E;&#x817A;&#x76F8;&#x5173;&#x75C5;&#x6BD2;&#x7C7B;&#x578B; 2 &#xFF08;AAV2&#xFF09; &#x8F7D;&#x4F53;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#xFF0C;&#x8FDB;&#x4E00;&#x6B65;&#x5F3A;&#x5316;&#x8F6C;&#x5BFC;&#x6548;&#x7387;&#x8BC4;&#x4EF7;&#x4E86;&#x7A81;&#x53D8;&#x4E2D;&#x7684;&#x4E03;&#x4E2A;&#x6F5C;&#x5728;&#x7684;&#x76F8;&#x5173; Y &#x6B8B;&#x7559;&#x7684;&#x7EC4;&#x5408;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7A81;&#x53D8;&#x4F53; capsids &#x6253;&#x5305;&#x5230;&#x7C7B;&#x4F3C;&#x6548;&#x4EF7;&#x75C5;&#x6BD2;&#x57FA;&#x56E0;&#x7EC4;&#x548C;&#x4FDD;&#x7559;&#x611F;&#x67D3;&#x529B;&#x3002;&#x4E09;&#x91CD;&#x7A81;&#x53D8; (Y444 + 500 + 730F&#xFF09; &#x77E2;&#x91CF;&#x4E00;&#x8D2F;&#x6709;&#x4F53;&#x5185;&#x57FA;&#x56E0;&#x8F6C;&#x67D3;&#x5BF9;&#x5C0F;&#x9F20;&#x809D;&#x7EC6;&#x80DE;&#xFF0C;&#x6BD4;&#x6700;&#x4F73;&#x5355;-&#x7A81;&#x53D8;&#x548C; ~ 30-80 &#x500D;&#x9AD8;&#x4E0E;&#x91CE;&#x751F;&#x578B; (WT) AAV2 capsids &#x76F8;&#x6BD4;&#x5927;&#x7EA6;&#x4E09;&#x500D;&#x66F4;&#x6709;&#x6548;&#x7684;&#x6700;&#x9AD8;&#x6C34;&#x5E73;&#x3002;&#x57FA;&#x56E0;&#x8F6C;&#x79FB;&#x7684;&#x6539;&#x8FDB;&#x662F;&#x7C7B;&#x4F3C;&#x5355;&#x7EDE;&#x57FA;&#x56E0;&#x817A;&#x76F8;&#x5173;&#x75C5;&#x6BD2; (ssAAV) &#x548C;&#x81EA;&#x6211;&#x8865;&#x5145;&#x7684;&#x817A;&#x76F8;&#x5173;&#x75C5;&#x6BD2; (scAAV) &#x5411;&#x91CF;&#xFF0C;&#x6307;&#x793A;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x5F71;&#x54CD;&#x72EC;&#x7ACB;&#x7684;&#x75C5;&#x6BD2;&#x6027;&#x4E8C;&#x80A1; DNA &#x5408;&#x6210;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;Y730F &#x548C;&#x4E09;&#x7EA7;&#x8DF3;&#x8FDC;&#x7A81;&#x53D8;&#x8F7D;&#x4F53;&#x63D0;&#x4F9B;&#x4EBA;&#x7C7B;&#x56E0;&#x5B50; IX (hF.IX) &#x5728;&#x8840;&#x53CB;&#x75C5; B (HB) &#x5C0F;&#x9F20;&#x4E2D;&#x7684;&#x957F;&#x671F;&#x7597;&#x6548;&#x548C;&#x8010;&#x53D7;&#x8868;&#x8FBE;&#x5F0F;&#x540E;&#x7BA1;&#x7406;&#x4E00;&#x4E2A;&#x5411;&#x91CF;&#x7684;&#x5242;&#x91CF;&#x4E0E; WT AAV2 encapsidated &#x5411;&#x91CF;&#x7684;&#x5408;&#x6210;&#x548C;&#x77AC;&#x6001;&#x8868;&#x8FBE;&#x5F0F;&#x4E2D;&#x7684;&#x552F;&#x4E00;&#x7ED3;&#x679C;&#x3002;&#x603B;&#x4E4B;&#xFF0C;&#x5728;&#x4EA7;&#x91CF;&#x81F3;&#x5C11; 30-fold &#x6539;&#x8FDB;&#x7684;&#x8F6C;&#x57FA;&#x56E0;&#x8868;&#x8FBE;&#x7684;&#x8F7D;&#x4F53; AAV2 &#x8863;&#x58F3;&#x7ED3;&#x679C;&#x591A;&#x4E2A;&#x916A;&#x6C28;&#x9178;&#x7A81;&#x53D8;&#x5F15;&#x5165;&#x4ECE;&#x800C;&#x964D;&#x4F4E;&#x6240;&#x9700;&#x7684;&#x6CBB;&#x7597;&#x5242;&#x91CF;&#x548C;&#x53EF;&#x80FD;&#x4E0E;&#x5411;&#x91CF;&#x76F8;&#x5173;&#x7684;&#x514D;&#x75AB;&#x539F;&#x6027;&#x3002;&#x8FD9;&#x79CD;&#x8F7D;&#x4F53;&#x5E94;&#x5177;&#x5438;&#x5F15;&#x529B;&#x6CBB;&#x7597;&#x8840;&#x53CB;&#x75C5;&#x53CA;&#x5176;&#x4ED6;&#x9057;&#x4F20;&#x75BE;&#x75C5;&#x3002;

&#x9AD8;&#x6548;&#x7387;&#x8F6C;&#x5BFC;&#x548C;&#x6821;&#x6B63;&#x7684;&#x5C0F;&#x9F20;&#x8840;&#x53CB;&#x75C5; B &#x4F7F;&#x7528;&#x6CA1;&#x6709;&#x591A;&#x4E2A;&#x8868;&#x9762;&#x66B4;&#x9732;&#x916A;&#x6C28;&#x9178; AAV2 &#x8F7D;&#x4F53;&#x3002;

Elimination of specific surface-exposed single tyrosine (Y) residues substantially improves hepatic gene transfer with adeno-associated virus type 2 (AAV2) vectors. Here, combinations of mutations in the seven potentially relevant Y residues were evaluated for further augmentation of transduction efficiency. These mutant capsids packaged viral genomes to similar titers and retained infectivity. A triple-mutant (Y444+500+730F) vector consistently had the highest level of in vivo gene transfer to murine hepatocytes, approximately threefold more efficient than the best single-mutants, and ~30-80-fold higher compared with the wild-type (WT) AAV2 capsids. Improvement of gene transfer was similar for both single-stranded AAV (ssAAV) and self-complementary AAV (scAAV) vectors, indicating that these effects are independent of viral second-strand DNA synthesis. Furthermore, Y730F and triple-mutant vectors provided a long-term therapeutic and tolerogenic expression of human factor IX (hF.IX) in hemophilia B (HB) mice after administration of a vector dose that only results in subtherapeutic and transient expression with WT AAV2 encapsidated vectors. In summary, introduction of multiple tyrosine-mutations into the AAV2 capsid results in vectors that yield at least 30-fold improvement of transgene expression, thereby lowering the required therapeutic dose and potentially vector-related immunogenicity. Such vectors should be attractive for treatment of hemophilia and other genetic diseases.

High-efficiency transduction and correction of murine hemophilia B using AAV2 vectors devoid of multiple surface-exposed tyrosines.

&#xC9;limination de sp&#xE9;cifiques expos&#xE9; en surface tyrosine seule (Y) sensiblement r&#xE9;sidus am&#xE9;liore le transfert de g&#xE8;nes de type h&#xE9;patique avec le virus ad&#xE9;no-associ&#xE9; 2 (AAV2) vecteurs. Ici, les combinaisons de mutations dans les sept r&#xE9;sidus Y potentiellement pertinents ont &#xE9;t&#xE9; &#xE9;valu&#xE9;s pour l&#x26;#39;extension de l&#x26;#39;efficacit&#xE9; de transduction. Ces mutants capsides emball&#xE9; g&#xE9;nomes viraux &#xE0; des titres d&#x26;#39;infectivit&#xE9; et similaires conserv&#xE9;s. Un triple-mutant (Y444 500 730 F) vecteur toujours eu le plus haut niveau de transfert de g&#xE8;ne in vivo &#xE0; des h&#xE9;patocytes murins, environ trois fois plus efficace que les meilleurs single-mutants, et ~ 30 &#xE0; 80 fois plus &#xE9;lev&#xE9;e par rapport &#xE0; la Nature (WT) capsides AAV2. Am&#xE9;lioration du transfert de g&#xE8;nes a &#xE9;t&#xE9; similaire pour les deux monocat&#xE9;naire AAV (ssAAV) et l&#x26;#39;auto-compl&#xE9;mentaires (AAV scAAV) vecteurs, ce qui indique que ces effets sont ind&#xE9;pendants de la synth&#xE8;se de l&#x26;#39;ADN viral second brin. En outre, Y730F et triple-mutants vecteurs fourni une expression th&#xE9;rapeutique &#xE0; long terme et tol&#xE9;rog&#xE8;ne du facteur IX humain (hF.IX) dans l&#x26;#39;h&#xE9;mophilie B (HB) des souris apr&#xE8;s l&#x26;#39;administration d&#x26;#39;une dose de vecteur que seuls les r&#xE9;sultats de l&#x26;#39;expression sous-th&#xE9;rapeutique et transitoires avec WT AAV2 vecteurs encapsid&#xE9;s. En r&#xE9;sum&#xE9;, l&#x26;#39;introduction de plusieurs tyrosine-mutations dans les r&#xE9;sultats AAV2 capside dans des vecteurs qui donnent au moins 30 fois l&#x26;#39;am&#xE9;lioration de l&#x26;#39;expression du transg&#xE8;ne, ce qui diminue la dose th&#xE9;rapeutique n&#xE9;cessaire et l&#x26;#39;immunog&#xE9;nicit&#xE9; potentiellement vecteur li&#xE9;. De tels vecteurs doivent &#xEA;tre attrayants pour le traitement de l&#x26;#39;h&#xE9;mophilie et d&#x26;#39;autres maladies g&#xE9;n&#xE9;tiques.

Haute-efficacit&#xE9; de la transduction et la correction de l&#x26;#39;h&#xE9;mophilie B murin utilisant AAV2 Vecteurs d&#xE9;pourvus de multiples expos&#xE9;s en surface tyrosines

Eliminaci&#xF3;n de la tirosina espec&#xED;ficos de superficie expuesta (Y) los residuos de mejora sustancialmente la transferencia g&#xE9;nica hep&#xE1;tica con el tipo de virus adeno-asociado 2 (AAV2) vectores. Aqu&#xED;, las combinaciones de mutaciones en los siete residuos Y potencialmente relevantes fueron evaluados para el aumento en la eficiencia de la transducci&#xF3;n. Estos mutantes c&#xE1;psidas envasados &#x200B;&#x200B;genomas virales a t&#xED;tulos similares y su infectividad retenido. Un triple mutante (Y444 500 730 F) de vectores tenido constantemente el mayor nivel de transferencia g&#xE9;nica in vivo de los hepatocitos de rat&#xF3;n, aproximadamente tres veces m&#xE1;s eficiente que la mejor medida &#xFA;nica mutantes, y ~ 30 a 80 veces mayor en comparaci&#xF3;n con su h&#xE1;bitat type (WT) AAV2 c&#xE1;psides. Mejora de la transferencia de genes es similar tanto para una sola cadena AAV (ssAAV) y la auto-complementarios vectores AAV (scAAV), lo que indica que estos efectos son independientes de la s&#xED;ntesis de ADN viral del segundo cap&#xED;tulo. Por otra parte, Y730F y los vectores de tres mutantes siempre una expresi&#xF3;n a largo plazo terap&#xE9;utico y tolerog&#xE9;nico de factor IX humano (hF.IX) en la hemofilia B (HB) en ratones despu&#xE9;s de la administraci&#xF3;n de una dosis de vector que s&#xF3;lo los resultados en la expresi&#xF3;n subterap&#xE9;uticas y transitorios con WT AAV2 vectores encapsulados. En resumen, la introducci&#xF3;n de m&#xFA;ltiples tirosina-mutaciones en los resultados AAV2 c&#xE1;pside en vectores que producen al menos 30 veces la mejora de la expresi&#xF3;n del transg&#xE9;n, reduciendo as&#xED; la dosis necesaria terap&#xE9;utico e inmunogenicidad potencialmente vectores relacionados. Tales vectores debe ser atractivo para el tratamiento de la hemofilia y otras enfermedades gen&#xE9;ticas.

Alta eficiencia de transducci&#xF3;n y correcci&#xF3;n de la hemofilia B murino Con AAV2 Vectores carentes de m&#xFA;ltiples expuestas en superficie tirosinas

Beseitigung der R&uuml;ckst&auml;nde der spezifischen Oberfl&auml;che exponierten einzelne Tyrosin (Y) verbessert deutlich die hepatische Gentransfer mit Adeno-assoziierte Virus Typ 2 (AAV2) Vektoren. Hier wurden Kombinationen von Mutationen in den sieben potenziell relevante Y-R&uuml;ckst&auml;nde f&uuml;r weitere Vermehrung des Transduktion Effizienz bewertet. Diese mutierten Capsids verpackt virale Genome, &auml;hnliche Titer und Infektiosit&auml;t beibehalten. Ein dreifach-Mutant (Y444 + 500 + 730F) Vektor hatte konsequent h&ouml;chste in-vivo Gentransfer in murinen Hepatozyten, etwa dreifach effizienter als die besten Einzel-Mutanten und ~ 30-80-Fach h&ouml;her gegen&uuml;ber dem Wildtyp (WT) AAV2 Capsids. Verbesserung des Gentransfers war bei einstr&auml;ngiger AAV (SsAAV) und selbst-erg&auml;nzende AAV (ScAAV)-Vektoren, die darauf hinweist, dass diese Effekte unabh&auml;ngig von viralen Sekunde-Strang-DNA-Synthese sind &auml;hnlich. Dar&uuml;ber hinaus zur Y730F und dreifach-Mutant Vektoren einen langfristigen therapeutischen und Tolerogenic Ausdruck der menschlichen Faktor IX (hF.IX) in H&auml;mophilie B (HB) M&auml;use, nachdem die Verwaltung eines Vektors Dosis, die nur Ergebnisse in subtherapeutic und vor&uuml;bergehende Ausdruck mit WT AAV2 Encapsidated Vektoren. Zusammenfassend, Einf&uuml;hrung von mehrere Tyrosin-Mutationen in der AAV2 Kapsid Ergebnisse in Vektoren, die mindestens 30-fold Verbesserung der Transgenexpression, ergeben senken somit die erforderlichen therapeutischen Dosis und potenziell Vektor-bezogene Immunogenit&auml;t. Solche Vektoren sollten zur Behandlung der H&auml;mophilie und andere Erbkrankheiten attraktiv sein.

Hocheffiziente Transduktion und Korrektur von murinen H&auml;mophilie B mit AAV2 Vektoren mehrere Oberfl&auml;che exponierten Tyrosines.

Eliminazione dei residui di tirosina singola superficie esposta specifico (Y) migliora sostanzialmente il trasferimento genico epatica con virus adeno-associati di tipo 2 (AAV2) vettori. Qui, combinazioni di mutazioni nei sette residui potenzialmente rilevanti Y sono state valutate per ulteriore aumento dell&#39;efficienza di trasduzione. Questi mutanti capsidi confezionato genomi virali per simili titoli e mantenuto infettivit&agrave;. Un vettore di triple-mutante (Y444 + 730F 500++) aveva costantemente il massimo livello di trasferimento genico in vivo di epatociti murini, circa triplice pi&ugrave; efficienti rispetto al miglior singolo-mutanti e ~ 30-80 volte superiore rispetto i capsidi AAV2 (WT) wild-type. Miglioramento del trasferimento del gene &egrave; stata simile per auto-complementare vettori di AAV (scAAV), che indica che questi effetti sono indipendenti della sintesi di DNA virale secondo-filo e single-stranded AAV (ssAAV). Inoltre, Y730F e triple-mutante vettori fornito un&#39;espressione terapeutica e tollerogenico a lungo termine di fattore IX (hF.IX) in topi di emofilia B (HB) dopo somministrazione di un vettore di dose che risultati solo nell&#39;espressione subterapeutiche e transitorio con WT AAV2 incapsidato vettori. In sintesi, introduzione di tirosina-mutazioni multiple nei risultati del capside AAV2 nei vettori che producono almeno 30-fold miglioramento dell&#39;espressione del transgene, quindi abbassare la dose terapeutica necessaria e potenzialmente correlati a vector immunogenicit&agrave;. Tali vettori dovrebbero essere attraente per il trattamento dell&#39;emofilia e altre malattie genetiche.

Ad alta efficienza trasduzione e correzione di murino emofilia B utilizzando vettori AAV2 privo di tirosine pi&ugrave; superficie esposta.

&#x7279;&#x5B9A;&#x306E;&#x8868;&#x9762;&#x306B;&#x9732;&#x51FA;&#x3057;&#x305F;&#x3001;&#x5358;&#x4E00;&#x306E;&#x30C1;&#x30ED;&#x30B7;&#x30F3;&#xFF08;Y&#xFF09;&#x6B8B;&#x57FA;&#x306E;&#x9664;&#x53BB;&#x306F;&#x5B9F;&#x8CEA;&#x7684;&#x306B;&#x30A2;&#x30C7;&#x30CE;&#x968F;&#x4F34;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;2&#x578B;&#xFF08;AAV2&#xFF09;&#x30D9;&#x30AF;&#x30BF;&#x30FC;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x809D;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x5C0E;&#x5165;&#x3092;&#x5411;&#x4E0A;&#x3055;&#x305B;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x3001;7&#x95A2;&#x9023;&#x3059;&#x308B;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x306E;&#x3042;&#x308B;Y&#x6B8B;&#x57FA;&#x306E;&#x5909;&#x7570;&#x306E;&#x7D44;&#x307F;&#x5408;&#x308F;&#x305B;&#x306F;&#x3001;&#x5C0E;&#x5165;&#x52B9;&#x7387;&#x306E;&#x66F4;&#x306A;&#x308B;&#x5897;&#x5F37;&#x3092;&#x8A55;&#x4FA1;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x5909;&#x7570;&#x30AD;&#x30E3;&#x30D7;&#x30B7;&#x30C9;&#x306F;&#x3001;&#x540C;&#x69D8;&#x306E;&#x529B;&#x4FA1;&#x3068;&#x4FDD;&#x6301;&#x3055;&#x308C;&#x611F;&#x67D3;&#x3059;&#x308B;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x306E;&#x30B2;&#x30CE;&#x30E0;&#x3092;&#x30D1;&#x30C3;&#x30B1;&#x30FC;&#x30B8;&#x30F3;&#x30B0;&#x3002;&#x4E09;&#x91CD;&#x5909;&#x7570;&#x4F53;&#xFF08;Y444 500 730 F&#xFF09;&#x30D9;&#x30AF;&#x30C8;&#x30EB;&#x306F;&#x4E00;&#x8CAB;&#x3057;&#x3066;&#x7D04;3&#x500D;&#x3001;&#x3088;&#x308A;&#x52B9;&#x7387;&#x7684;&#x306A;&#x6700;&#x9AD8;&#x306E;&#x30B7;&#x30F3;&#x30B0;&#x30EB;&#x5909;&#x7570;&#x4F53;&#x3067;&#x306F;&#x306A;&#x304F;&#x3001;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x809D;&#x7D30;&#x80DE;&#x3078;&#x306E;in vivo&#x3067;&#x306E;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x5C0E;&#x5165;&#x3067;&#x306E;&#x6700;&#x9AD8;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x3092;&#x6301;&#x3063;&#x3066;&#x3044;&#x3066;&#x3001;&#x301C;30&#x304B;&#x3089;80&#x500D;&#x9AD8;&#x3044;&#x91CE;&#x751F;&#x578B;&#x3068;&#x6BD4;&#x8F03;&#x3057;&#x3066;&#x578B;&#xFF08;WT&#xFF09;AAV2&#x30AD;&#x30E3;&#x30D7;&#x30B7;&#x30C9;&#x3002;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x5C0E;&#x5165;&#x306E;&#x6539;&#x5584;&#x306F;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x52B9;&#x679C;&#x306F;&#x3001;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x4E8C;&#x672C;&#x9396;DNA&#x5408;&#x6210;&#x306E;&#x72EC;&#x7ACB;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3001;&#x4E00;&#x672C;&#x9396;AAV&#xFF08;ssAAV&#xFF09;&#x3068;&#x81EA;&#x5DF1;&#x76F8;&#x88DC;&#x7684;AAV&#xFF08;scAAV&#xFF09;&#x30D9;&#x30AF;&#x30BF;&#x30FC;&#x306E;&#x4E21;&#x65B9;&#x306B;&#x985E;&#x4F3C;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x305F;&#x3002;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x3001;Y730F&#x3001;&#x30C8;&#x30EA;&#x30D7;&#x30EB;&#x5909;&#x7570;&#x30D9;&#x30AF;&#x30C8;&#x30EB;&#x306F;&#x3001;&#x30D9;&#x30AF;&#x30C8;&#x30EB;&#xB7;&#x7528;&#x91CF;&#x306E;&#x6295;&#x4E0E;&#x5F8C;&#x3001;&#x8840;&#x53CB;&#x75C5;B&#xFF08;HB&#xFF09;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x30D2;&#x30C8;&#x7B2C;IX&#x56E0;&#x5B50;&#xFF08;hF.IX&#xFF09;&#x306E;&#x9577;&#x671F;&#x6CBB;&#x7642;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x514D;&#x75AB;&#x5BDB;&#x5BB9;&#x306E;&#x767A;&#x73FE;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3057;&#x305F;WT AAV2&#x306E;&#x6CBB;&#x7642;&#x91CF;&#x4EE5;&#x4E0B;&#x306E;&#x3068;&#x4E00;&#x904E;&#x6027;&#x767A;&#x73FE;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x306E;&#x307F;&#x30AB;&#x30D7;&#x30B7;&#x30C9;&#x30D9;&#x30AF;&#x30C8;&#x30EB;&#x3002;&#x6982;&#x8981;&#x3001;&#x5C0E;&#x5165;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x767A;&#x73FE;&#x306E;&#x5C11;&#x306A;&#x304F;&#x3068;&#x3082;30&#x500D;&#x306E;&#x6539;&#x5584;&#x304C;&#x5F97;&#x3089;&#x308C;&#x308B;&#x30D9;&#x30AF;&#x30BF;&#x30FC;&#x306B;AAV2&#x30AD;&#x30E3;&#x30D7;&#x30B7;&#x30C9;&#x7D50;&#x679C;&#x306B;&#x8907;&#x6570;&#x306E;&#x30C1;&#x30ED;&#x30B7;&#x30F3;&#x5909;&#x7570;&#x3092;&#x5C0E;&#x5165;&#x3057;&#x3001;&#x305D;&#x308C;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x5FC5;&#x8981;&#x306A;&#x6CBB;&#x7642;&#x7528;&#x91CF;&#x3092;&#x524A;&#x6E1B;&#x3057;&#x3001;&#x6F5C;&#x5728;&#x7684;&#x30D9;&#x30AF;&#x30BF;&#x95A2;&#x9023;&#x514D;&#x75AB;&#x539F;&#x6027;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3002;&#x305D;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306A;&#x30D9;&#x30AF;&#x30BF;&#x30FC;&#x306F;&#x3001;&#x8840;&#x53CB;&#x75C5;&#x3084;&#x305D;&#x306E;&#x4ED6;&#x306E;&#x907A;&#x4F1D;&#x6027;&#x75BE;&#x60A3;&#x306E;&#x6CBB;&#x7642;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x9B45;&#x529B;&#x7684;&#x3067;&#x306A;&#x3051;&#x308C;&#x3070;&#x306A;&#x308A;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3002;

&#x8907;&#x6570;&#x306E;&#x8868;&#x9762;&#x306B;&#x9732;&#x51FA;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x30C1;&#x30ED;&#x30B7;&#x30F3;&#x3092;&#x6B20;&#x3044;AAV2&#x30D9;&#x30AF;&#x30C8;&#x30EB;&#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x305F;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x8840;&#x53CB;&#x75C5;B&#x306E;&#x9AD8;&#x52B9;&#x7387;&#x4F1D;&#x9054;&#x3068;&#x8A02;&#x6B63;

&#xD2B9;&#xC815; &#xD45C;&#xBA74;&#xC5D0; &#xB178;&#xCD9C; &#xB41C; &#xB2E8;&#xC77C; &#xD2F0;&#xB85C;&#xC2E0; (Y) &#xC794;&#xB958;&#xBB3C;&#xC758; &#xC81C;&#xAC70;&#xB294; &#xC2E4;&#xC9C8;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xAC04;&#xC7A5; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xC804;&#xC1A1;&#xC744; &#xD5A5;&#xC0C1; adeno &#xC81C;&#xD734;&#xD574; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; 2 (AAV2) &#xACBD;&#xB85C; &#xC785;&#xB825; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC5EC;&#xAE30;, 7 &#xAC1C;&#xC758; &#xC7A0;&#xC7AC;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xAD00;&#xB828; &#xB41C; Y &#xC794;&#xB958;&#xBB3C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774;&#xC758; &#xC870;&#xD569; &#xBCC0;&#xD658; &#xD6A8;&#xC728;&#xC758; &#xCD94;&#xAC00; &#xD655;&#xB300;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xD3C9;&#xAC00; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; capsids &#xBE44;&#xC2B7;&#xD55C; titers&#xC5D0; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; &#xC131; &#xAC8C;&#xB188; &#xB418;&#xBA70; infectivity &#xC720;&#xC9C0;. &#xD2B8;&#xB9AC;&#xD50C;-&#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; (Y444 + 500 + 730F) &#xBCA1;&#xD130;&#xB294; &#xC77C;&#xAD00; &#xB418; &#xAC8C; murine hepatocytes, &#xC57D; &#xC0BC; &#xBC30; &#xB354; &#xCD5C;&#xACE0;&#xC758; &#xB2E8;&#xC77C; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; ~ 30-80 &#xBC30; &#xB354; &#xB192;&#xC740; &#xC57C;&#xC0DD;-&#xD0C0;&#xC785; (WT) AAV2 capsids&#xC5D0; &#xBE44;&#xD574; &#xBCF4;&#xB2E4; &#xD6A8;&#xC728;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; in vivo &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xC774;&#xB3D9;&#xC758; &#xAC00;&#xC7A5; &#xB192;&#xC740; &#xC218;&#xC900;&#xC744; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xC774;&#xB3D9;&#xC758; &#xB2E8;&#xC77C; &#xAC00;&#xB2E5; AAV (ssAAV)&#xC640; &#xC790;&#xCCB4; &#xBCF4;&#xC644; AAV (scAAV) &#xBCA1;&#xD130;, &#xB098;&#xD0C0;&#xB0B4;&#xB294; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xD6A8;&#xACFC; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; &#xC131; 2 &#xAC00;&#xB2E5; DNA &#xD569;&#xC131;&#xC5D0; &#xAD00;&#xACC4; &#xC5C6;&#xC774; &#xBAA8;&#xB450; &#xBE44;&#xC2B7; &#xD588;&#xB2E4;. &#xB610;&#xD55C;, Y730F &#xBC0F; &#xD2B8;&#xB9AC;&#xD50C; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xBCA1;&#xD130; &#xBCA1;&#xD130;&#xC758; &#xBCF5;&#xC6A9;&#xB7C9; WT AAV2 encapsidated &#xBCA1;&#xD130;&#xC640; subtherapeutic &#xBC0F; &#xACFC;&#xB3C4; &#xC2DD;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC720;&#xC77C;&#xD55C; &#xACB0;&#xACFC; &#xADF8; &#xD6C4; &#xD608;&#xC6B0;&#xBCD1; B (HB) &#xC0DD;&#xC950;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC778;&#xAC04; &#xC778;&#xC790; IX (hF.IX)&#xC758; &#xC7A5;&#xAE30;&#xC801;&#xC778; &#xCE58;&#xB8CC;&#xC640; tolerogenic &#xC2DD;&#xC5D0; &#xC81C;&#xACF5;. &#xC694;&#xC57D; &#xD558;&#xC790;&#xBA74;, &#xC801;&#xC5B4;&#xB3C4; 30-fold &#xAC1C;&#xC120; transgene &#xC2DD;&#xC758; &#xC591;&#xBCF4;&#xB294; &#xBCA1;&#xD130;&#xB97C; AAV2 capsid &#xACB0;&#xACFC;&#xC5D0; &#xC5EC;&#xB7EC; &#xD2F0;&#xB85C;&#xC2E0;-&#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774;&#xC758; &#xB3C4;&#xC785; &#xD568;&#xC73C;&#xB85C;&#xC368; &#xD544;&#xC694;&#xD55C; &#xCE58;&#xB8CC; &#xBCF5;&#xC6A9;&#xB7C9; &#xBC0F; &#xC7A0;&#xC7AC;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xBCA1;&#xD130; &#xAD00;&#xB828; immunogenicity &#xB0AE;&#xCD94;&#xB294;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xBCA1;&#xD130; &#xD608;&#xC6B0;&#xBCD1;&#xACFC; &#xB2E4;&#xB978; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xC9C8;&#xD658;&#xC758; &#xCE58;&#xB8CC;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xB9E4;&#xB825;&#xC774; &#xC788;&#xC5B4;&#xC57C; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xACE0;&#xD6A8;&#xC728; &#xBCC0;&#xD658; &#xBC0F; murine &#xD608;&#xC6B0;&#xBCD1; B&#xC758; &#xAD50;&#xC815; &#xC5C6;&#xB294; &#xC5EC;&#xB7EC; &#xD45C;&#xBA74; &#xB178;&#xCD9C; tyrosines AAV2 &#xBCA1;&#xD130;&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC;.

&#xC6B0;&#xB9AC; &#xCD5C;&#xADFC; &#xAE30;&#xC874;&#xC758; &#xB2E8;&#xC77C; &#xAC00;&#xB2E5; adeno &#xAD00;&#xB828; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4;&#xC758; &#xADF8; co-administration&#xC744; 2 (ssAAV2) &#xBCA1;&#xD130; &#xD45C;&#xC2DC; &#xD558;&#xB294; &#xC790;&#xCCB4; &#xBCF4;&#xC644; (sc) AAV2-&#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC778;&#xC0B0; &#xAC00;&#xC218;&#xBD84;&#xD574; &#xD6A8;&#xC18C; 5 (PP5) &#xBCA1;&#xD130; &#xB9AC;&#xB4DC; &#xD06C;&#xAC8C; &#xC99D;&#xAC00;&#xB97C; &#xC778;&#xAC04;&#xC758; &#xC138;&#xD3EC;&#xB97C; &#xCCB4; &#xC678;&#xC5D0;&#xC11C; ssAAV2 &#xBCA1;&#xD130;&#xC758; &#xBCC0;&#xD658; &#xD6A8;&#xC728;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBFD0;&#xB9CC; murine hepatocytes in vivo&#xC5D0;&#xC11C;. &#xD604;&#xC7AC;&#xC758; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xC5D0;&#xC774; &#xC804;&#xB7B5;&#xC744; &#xB354; ssAAV2 EGFP&#xC758; &#xD63C;&#xD569; &#xB41C; &#xC778;&#xAD6C;&#xB97C; &#xC0DD;&#xC131; &#xD558; &#xC5EC; &#xCD5C;&#xC801;&#xD654; &#xB41C; &#xD558; &#xACE0; &#xB2EC;&#xC131; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD574; 10:1 &#xBE44;&#xC728;&#xB85C; scAAV2 PP5 &#xBCA1;&#xD130; &#xAC15;&#xD654; &#xC57D; 5-&#xC5D0; 10 &#xBC30; &#xB354; &#xB192;&#xC740; &#xD6A8;&#xC728;, &#xC0DD;&#xCCB4; &#xC678; &#xBC0F; &#xC0DD;&#xCCB4; &#xC870;&#xAC74;&#xC5D0;&#xC11C; &#xB179;&#xC0C9; &#xD615;&#xAD11; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; (EGFP) transgene &#xC2DD;. &#xC774; &#xAC04;&#xB2E8;&#xD55C; &#xD504;&#xB80C;&#xC988; &#xBA54;&#xC11C;&#xB4DC; transgene &#xCE74;&#xC138;&#xD2B8; &#xB108;&#xBB34; &#xCEE4;&#xC11C; &#xC218; encapsidated scAAV &#xBCA1;&#xD130;&#xC5D0; &#xD3EC;&#xD568; &#xB41C; &#xBAA8;&#xB4E0; ssAAV serotype &#xBCA1;&#xD130;&#xC5D0; &#xC801;&#xC751;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC5B4;&#xC57C; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xC0DD;&#xCCB4; &#xC678; &#xBC0F; &#xC0DD;&#xCCB4; &#xC870;&#xAC74; &#xB2E8;&#xC77C; &#xAC00;&#xB2E5; adeno &#xC81C;&#xD734;&#xD574; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; &#xBCA1;&#xD130;&#xC758; &#xBCC0;&#xD658; &#xD6A8;&#xC728;&#xC744; &#xC99D;&#xAC00; &#xD558;&#xB294; &#xAC04;&#xB2E8;&#xD55C; &#xBC29;&#xBC95;.

Recientemente hemos demostrado que la co-administraci&#xF3;n de una sola cadena convencional de virus adeno-asociado 2 (ssAAV2) con auto-vectores complementarios (sc) AAV2-prote&#xED;na fosfatasa vectores 5 (PP5) conduce a un aumento significativo en la eficiencia de transducci&#xF3;n de los vectores ssAAV2 en c&#xE9;lulas humanas in vitro, as&#xED; como en los hepatocitos murinos in vivo. En el presente estudio, esta estrategia ha sido optimizado mediante la generaci&#xF3;n de una poblaci&#xF3;n mixta de ssAAV2-EGFP y vectores scAAV2 PP5-en una proporci&#xF3;n de 10:01 para lograr una mayor prote&#xED;na verde fluorescente (EGFP) la expresi&#xF3;n del transgen en aproximadamente 5 - a 10 veces una mayor eficiencia, tanto in vitro como in vivo. Este m&#xE9;todo simple de coproducci&#xF3;n deben ser adaptables a cualquier vector de serotipo ssAAV contiene casetes transg&#xE9;nicos que son demasiado grandes para ser encapsulados en vectores scAAV.

Un m&#xE9;todo simple para aumentar la eficiencia de transducci&#xF3;n de un solo hundidos vectores de virus adeno-asociados in vitro e in vivo

&#x6211;&#x4EEC;&#x6700;&#x8FD1;&#x663E;&#x793A;&#x7684;&#x5171;&#x7BA1;&#x7684;&#x5E38;&#x89C4;&#x5355;&#x7EDE;&#x817A;&#x76F8;&#x5173;&#x75C5;&#x6BD2; 2 (ssAAV2) &#x5411;&#x91CF;&#x4E0E;&#x81EA;&#x6211;&#x8865;&#x5145; (sc) AAV2 &#x86CB;&#x767D;&#x78F7;&#x9178;&#x9176; (PP5) 5 &#x8F7D;&#x4F53;&#x5BFC;&#x81F4;&#x5927;&#x5E45;&#x5EA6;&#x589E;&#x52A0;&#x7684; ssAAV2 &#x5A92;&#x4ECB;&#x5728;&#x4EBA;&#x7C7B;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8F6C;&#x5BFC;&#x6548;&#x7387;&#x4EE5;&#x53CA;&#x5728;&#x5C0F;&#x9F20;&#x809D;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4F53;&#x5185;&#x3002;&#x5728;&#x672C;&#x7814;&#x7A76;&#x4E2D;&#xFF0C;&#x8FD9;&#x4E00;&#x6218;&#x7565;&#x5DF2;&#x8FDB;&#x884C;&#x4E86;&#x8FDB;&#x4E00;&#x6B65;&#x4F18;&#x5316;&#x6240;&#x751F;&#x6210;&#x7684; ssAAV2 &#x4E0E;&#x7EFF;&#x8272;&#x8367;&#x5149;&#x86CB;&#x767D;&#x7684;&#x6DF7;&#x5408;&#x7684;&#x4EBA;&#x53E3;&#x548C; scAAV2 PP5 &#x8F7D;&#x4F53;&#x5728; 10:1 &#x7684;&#x6BD4;&#x4F8B;&#xFF0C;&#x4EE5;&#x8FBE;&#x5230;&#x589E;&#x5F3A;&#x7EFF;&#x8272;&#x8367;&#x5149;&#x86CB;&#x767D; (EGFP) &#x8F6C;&#x57FA;&#x56E0;&#x8868;&#x8FBE;&#x5728;&#x5927;&#x7EA6; 5-&#x5230; 10 &#x500D;&#x66F4;&#x9AD8;&#x6548;&#x7387;&#xFF0C;&#x5728;&#x4F53;&#x5916;&#x548C;&#x4F53;&#x5185;&#x3002;&#x6B64;&#x7B80;&#x5355;&#x5408;&#x62CD;&#x65B9;&#x6CD5;&#x5E94;&#x8BE5;&#x9002;&#x5E94;&#x4EFB;&#x4F55;&#x8F6C;&#x57FA;&#x56E0;&#x5F55;&#x97F3;&#x5E26;&#xFF0C;&#x662F;&#x592A;&#x5927;&#xFF0C;&#x65E0;&#x6CD5;&#x5728; scAAV &#x8F7D;&#x4F53; encapsidated &#x7684; ssAAV &#x8840;&#x6E05;&#x578B;&#x8F7D;&#x4F53;&#x3002;

&#x7B80;&#x5355;&#x7684;&#x65B9;&#x6CD5;&#x6765;&#x63D0;&#x9AD8;&#x5355;&#x7EDE;&#x817A;&#x76F8;&#x5173;&#x75C5;&#x6BD2;&#x8F7D;&#x4F53;&#x4F53;&#x5916;&#x548C;&#x4F53;&#x5185;&#x7684;&#x4F20;&#x5BFC;&#x6548;&#x7387;&#x3002;

We have recently shown that co-administration of conventional single-stranded adeno-associated virus 2 (ssAAV2) vectors with self-complementary (sc) AAV2-protein phosphatase 5 (PP5) vectors leads to a significant increase in the transduction efficiency of ssAAV2 vectors in human cells in vitro as well as in murine hepatocytes in vivo. In the present study, this strategy has been further optimized by generating a mixed population of ssAAV2-EGFP and scAAV2-PP5 vectors at a 10:1 ratio to achieve enhanced green fluorescent protein (EGFP) transgene expression at approximately 5- to 10-fold higher efficiency, both in vitro and in vivo. This simple coproduction method should be adaptable to any ssAAV serotype vector containing transgene cassettes that are too large to be encapsidated in scAAV vectors.

A simple method to increase the transduction efficiency of single-stranded adeno-associated virus vectors in vitro and in vivo.

Nous avons r&#xE9;cemment montr&#xE9; que la co-administration de classique simple brin virus ad&#xE9;no-associ&#xE9; 2 (ssAAV2) vecteurs avec l&#x26;#39;auto-compl&#xE9;mentaires (sc) vecteurs phosphatase 5 (PP5) AAV2-prot&#xE9;ine conduit &#xE0; une augmentation significative de l&#x26;#39;efficacit&#xE9; de transduction des vecteurs ssAAV2 dans les cellules humaines in vitro ainsi que dans les h&#xE9;patocytes murins in vivo. Dans la pr&#xE9;sente &#xE9;tude, cette strat&#xE9;gie a &#xE9;t&#xE9; encore optimis&#xE9; en g&#xE9;n&#xE9;rant une population mixte de ssAAV2-EGFP et scAAV2-PP5 vecteurs &#xE0; un ratio de 10:1 am&#xE9;lior&#xE9; pour atteindre verte fluorescente expression du transg&#xE8;ne prot&#xE9;ines (EGFP) &#xE0; environ 5 - &#xE0; 10 fois une plus grande efficacit&#xE9;, &#xE0; la fois in vitro et in vivo. Cette m&#xE9;thode simple, coproduction doit &#xEA;tre adaptable &#xE0; n&#x26;#39;importe quel vecteur s&#xE9;rotype ssAAV contenant des transg&#xE8;nes cassettes qui sont trop volumineux pour &#xEA;tre encapsid&#xE9; dans des vecteurs scAAV.

Une m&#xE9;thode simple pour augmenter l&#x26;#39;efficacit&#xE9; de la transduction du simple brin des vecteurs viraux ad&#xE9;no-associ&#xE9;s in vitro et in vivo

Wir haben k&uuml;rzlich gezeigt, dass gleichzeitige Gabe von konventionellen einzelstr&auml;ngige Adeno-assoziierte Virus 2 (ssAAV2) Vektoren mit selbst-erg&auml;nzende (sc) AAV2-Protein Phosphatase 5 (PP5) Vektoren f&uuml;hrt zu einem signifikanten Anstieg der Transduktion Effizienz der ssAAV2 Vektoren in menschlichen Zellen in vitro als auch in murinen Hepatozyten in-vivo. In der vorliegenden Studie wurde diese Strategie durch generieren eine gemischte Bev&ouml;lkerung von ssAAV2-EGFP weiter optimiert, und scAAV2-PP5 Vektoren im Verh&auml;ltnis 10:1 zu erreichen verbesserte gr&uuml;n fluoreszierendes Protein (EGFP) Transgenexpression bei ca. 5 - bis 10 - 8-fach h&ouml;here Effizienz, in vitro und in-vivo. Diese einfache Koproduktion-Methode sollte an jeder SsAAV-Serotyp-Vektor mit Transgene-Kassetten, die zu gro&szlig; werden Encapsidated in ScAAV-Vektoren sind anpassbar.

Eine einfache Methode zur Steigerung der Effizienz der Transduktion einzelstr&auml;ngige Adeno-assoziierte Virus-Vektoren in vitro und in vivo.

Abbiamo recentemente dimostrato che co-somministrazione di virus adeno-associati single-stranded convenzionale 2 vettori (ssAAV2) con fosfatasi self-complementari (sc) AAV2-proteina 5 (PP5) vettori conduce ad un significativo aumento dell&#39;efficienza di trasduzione dei vettori ssAAV2 nelle cellule umane in vitro cos&igrave; come in murini epatociti in vivo. Nel presente studio, questa strategia &egrave; stata ulteriormente ottimizzata generando una popolazione mista di ssAAV2-EGFP e scAAV2-PP5 vettori in un rapporto di 10:1 per ottenere maggiore espressione del transgene green fluorescent protein (EGFP) a circa 5 a 10 volte maggiore efficienza sia in vitro che in vivo. Questo metodo semplice coproduzione dovrebbe essere adattabile a qualsiasi vettore sierotipo ssAAV contenente cassette transgene che sono troppo grandi per essere incapsidato in scAAV vettori.

Un metodo semplice per aumentare l&#39;efficienza di trasduzione dei vettori single-stranded virus adeno-associati in vitro e in vivo.

&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x6700;&#x8FD1;&#x3001;&#x5F93;&#x6765;&#x306E;&#x4E00;&#x672C;&#x9396;&#x306E;&#x30A2;&#x30C7;&#x30CE;&#x968F;&#x4F34;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;2&#xFF08;ssAAV2&#xFF09;&#x81EA;&#x5DF1;&#x76F8;&#x88DC;&#x7684;&#x306A;&#xFF08;SC&#xFF09;AAV2-&#x30D7;&#x30ED;&#x30C6;&#x30A4;&#x30F3;&#x30DB;&#x30B9;&#x30D5;&#x30A1;&#x30BF;&#x30FC;&#x30BC;5&#xFF08;PP5&#xFF09;&#x30D9;&#x30AF;&#x30C8;&#x30EB;&#x3068;&#x30D9;&#x30AF;&#x30C8;&#x30EB;&#x306E;&#x5171;&#x6295;&#x4E0E;&#x306F;ssAAV2&#x30D9;&#x30AF;&#x30C8;&#x30EB;&#x306E;&#x5C0E;&#x5165;&#x52B9;&#x7387;&#x306E;&#x5927;&#x5E45;&#x306A;&#x5897;&#x52A0;&#x306B;&#x3064;&#x306A;&#x304C;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x793A;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;in vitro&#x3067;&#x306E;&#x30D2;&#x30C8;&#x7D30;&#x80DE;&#x3067;&#x3082;in vivo&#x3067;&#x306E;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x306E;&#x809D;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306B;&#x3002;&#x672C;&#x7814;&#x7A76;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x6226;&#x7565;&#x306F;&#x3001;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x7D04;5&#x3067;&#x5F37;&#x5316;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x7DD1;&#x8272;&#x86CD;&#x5149;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#xFF08;EGFP&#xFF09;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x767A;&#x73FE;&#x3092;&#x9054;&#x6210;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x3001;10:1&#x306E;&#x6BD4;&#x7387;&#x3067;ssAAV2-EGFP&#x3068;scAAV2-PP5&#x30D9;&#x30AF;&#x30C8;&#x30EB;&#x306E;&#x6DF7;&#x5408;&#x96C6;&#x56E3;&#x3092;&#x751F;&#x6210;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x6700;&#x9069;&#x5316;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059; -  10&#x500D;&#x306B;in vitro&#x304A;&#x3088;&#x3073;in vivo&#x306E;&#x4E21;&#x65B9;&#x3067;&#x52B9;&#x7387;&#x304C;&#x9AD8;&#x304F;&#x3001;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x5358;&#x7D14;&#x306A;&#x5171;&#x540C;&#x5236;&#x4F5C;&#x65B9;&#x6CD5;&#x306F;&#x3001;scAAV&#x30D9;&#x30AF;&#x30C8;&#x30EB;&#x306B;&#x5305;&#x307E;&#x308C;&#x308B;&#x306B;&#x306F;&#x5927;&#x304D;&#x3059;&#x304E;&#x308B;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x30AB;&#x30BB;&#x30C3;&#x30C8;&#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x4EFB;&#x610F;&#x306E;ssAAV&#x8840;&#x6E05;&#x578B;&#x30D9;&#x30AF;&#x30C8;&#x30EB;&#x306B;&#x9069;&#x5FDC;&#x53EF;&#x80FD;&#x3067;&#x306A;&#x3051;&#x308C;&#x3070;&#x306A;&#x308A;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3002;

in vitro&#x304A;&#x3088;&#x3073;in vivo&#x3067;&#x306E;&#x4E00;&#x672C;&#x9396;&#x30A2;&#x30C7;&#x30CE;&#x968F;&#x4F34;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x30D9;&#x30AF;&#x30BF;&#x30FC;&#x306E;&#x5C0E;&#x5165;&#x52B9;&#x7387;&#x3092;&#x5411;&#x4E0A;&#x3055;&#x305B;&#x308B;&#x7C21;&#x5358;&#x306A;&#x65B9;&#x6CD5;

Article	Year
Self-complementary recombinant adeno-associated viral vectors: packaging capacity and the role of rep proteins in vector purity. Human gene therapy\| PubMed ID: 17328683	2007
High-efficiency transduction of fibroblasts and mesenchymal stem cells by tyrosine-mutant AAV2 vectors for their potential use in cellular therapy. Human gene therapy\| PubMed ID: 20507237	2010
Human hepatocyte growth factor receptor is a cellular coreceptor for adeno-associated virus serotype 3. Human gene therapy\| PubMed ID: 20545554	2010
High-efficiency transduction and correction of murine hemophilia B using AAV2 vectors devoid of multiple surface-exposed tyrosines. Molecular therapy : the journal of the American Society of Gene Therapy\| PubMed ID: 20736929	2010
A simple method to increase the transduction efficiency of single-stranded adeno-associated virus vectors in vitro and in vivo. Human gene therapy\| PubMed ID: 21219084	2011

Wenqin Ma

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