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Modified ES / OP9 Co-Culture Protocol Provides Enhanced Characterization of Hematopoietic Progeny

The in vitro differentiation of ES cells towards a hematopoietic cell fate is useful when studying cell populations that are difficult to access in vivo ...

University of California, Los Angeles

AAV2&#xFF08;rAAV2&#xFF09;HIV-1&#x8EE2;&#x5199;&#x4FC3;&#x9032;&#x9818;&#x57DF;&#xFF08;TAR&#xFF09;&#x3078;&#x306E;&#x30D9;&#x30AF;&#x30C8;&#x30EB;&#x7B26;&#x53F7;&#x5316;&#x30A2;&#x30F3;&#x30C1;&#x30BB;&#x30F3;&#x30B9;RNA&#x7D44;&#x63DB;&#x3048;&#x4F53;&#x306F;&#x3001;&#x30D2;&#x30C8;&#x81CD;&#x5E2F;&#x8840;CD34 + CD38-&#x9020;&#x8840;&#x5E79;&#x80A5;&#x6E80;&#x7CD6;&#x5C3F;&#x75C5;&#x306E;&#x30B7;&#x30EA;&#x30A2;&#x30EB;&#x79FB;&#x690D;&#x53EF;&#x80FD;&#x306A;&#x7D30;&#x80DE;&#xFF08;HSC&#xFF09;&#xFF08;NOD&#xFF09;/&#x91CD;&#x75C7;&#x8907;&#x5408;&#x306E;&#x5C0E;&#x5165;&#x3092;&#x8A55;&#x4FA1;&#x3057;&#x305F;&#x514D;&#x75AB;&#x4E0D;&#x5168;&#xFF08;SCID&#xFF09;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x3002;&#x7D50;&#x679C;&#x306F;&#x3001;&#x30D7;&#x30E9;&#x30A4;&#x30DE;&#x30EA;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x30BB;&#x30AB;&#x30F3;&#x30C0;&#x30EA;&#x306E;&#x53D7;&#x4FE1;&#x8005;&#x306B;&#x30DE;&#x30FC;&#x30AD;&#x30F3;&#x30B0;&#x9577;&#x671F;&#x7684;&#x591A;&#x7CFB;&#x7D71;&#x3092;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x3057;&#x3001;&#x5927;&#x5E45;&#x306E;&#x6FC3;&#x7E2E;&#x306F;&#x591A;&#x80FD;&#x6027;&#x81EA;&#x5DF1;&#x518D;&#x751F;HSC&#x306E;&#x52B9;&#x7387;&#x7684;&#x306A;&#x5F62;&#x8CEA;&#x3092;&#x793A;&#x3059;&#x3001;&#x4E8C;&#x6B21;&#x30DB;&#x30B9;&#x30C8;&#x3067;&#x7D30;&#x80DE;&#x3092;&#x5F62;&#x8CEA;&#x5C0E;&#x5165;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x306F;&#x3001;&#x53D7;&#x4FE1;&#x8005;&#x306E;&#x9AA8;&#x9AC4;&#x306E;&#x30B7;&#x30EA;&#x30A2;&#x30EB;&#x89E3;&#x6790;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x30AF;&#x30ED;&#x30FC;&#x30F3;&#x539F;&#x6027;&#x524D;&#x99C6;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;rAAV&#x306E;&#x30DE;&#x30FC;&#x30AD;&#x30F3;&#x30B0;&#x306E;&#x6301;&#x7D9A;&#x6027;&#x306B;&#x3088;&#x308A;&#x78BA;&#x8A8D;&#x3057;&#x305F;&#x3002; HIV-1&#x30C1;&#x30E3;&#x30EC;&#x30F3;&#x30B8;&#x3059;&#x308B;&#x3068;&#x3001;&#x5F62;&#x8CEA;CD34 +&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x30DE;&#x30AF;&#x30ED;&#x30D5;&#x30A1;&#x30FC;&#x30B8;&#x306E;&#x5B50;&#x5B6B;&#x306F;&#x3001;&#x30A2;&#x30F3;&#x30C1;&#x30BB;&#x30F3;&#x30B9;RNA&#x3092;&#x767A;&#x73FE;&#x3057;&#x3001;&#x9078;&#x629E;&#x5727;&#x306A;&#x3057;&#x3067;&#x3001;&#x30C6;&#x30B9;&#x30C8;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3059;&#x3079;&#x3066;&#x306E;&#x30C9;&#x30CA;&#x30FC;&#x306E;&#x30B3;&#x30F3;&#x30C8;&#x30ED;&#x30FC;&#x30EB;&#x3068;&#x6BD4;&#x8F03;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x8907;&#x88FD;&#x306E;&#x7DAD;&#x6301;&#x3068;&#x5927;&#x5E45;&#x306A;&#x6291;&#x5236;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x7814;&#x7A76;&#x306F;&#x3001;&#x30D2;&#x30C8;HSC&#x306E;&#x52B9;&#x7387;&#x7684;&#x306A;rAAV2&#x4F1D;&#x9054;&#x306E;in vivo&#x3067;&#x306E;&#x30C7;&#x30E2;&#x30F3;&#x30B9;&#x30C8;&#x30EC;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x3067;&#x660E;&#x78BA;&#x306B;&#x8868;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x514D;&#x75AB;&#x6B20;&#x640D;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x306E;&#x30B7;&#x30EA;&#x30A2;&#x30EB;&#x751F;&#x7740;&#x304C;&#x53EF;&#x80FD;&#x306A;&#x30D7;&#x30EA;&#x30DF;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6;&#x30D2;&#x30C8;&#x9020;&#x8840;&#x5E79;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x7D44;&#x63DB;&#x3048;AAV2&#x4F1D;&#x9054;

&#xC7AC;&#xC870;&#xD569; AAV2 &#xC778;&#xCF54;&#xB529; &#xC5D0;&#xC774;&#xC988;-1 transactivating &#xC9C0;&#xC5ED; (&#xD0C0;&#xB974;) &#xC13C;&#xC2A4; RNA (rAAV2) &#xBCA1;&#xD130; &#xC778;&#xAC04; &#xD0EF; &#xC904; &#xD608;&#xC561; CD34 + cd38&#xC758; &#xBCC0;&#xD658;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xD3C9;&#xAC00;-&#xC870; &#xD608; &#xC904;&#xAE30; &#xC138;&#xD3EC; (HSC) nonobese &#xB2F9;&#xB1E8;&#xBCD1; (&#xB044; &#xB355;) &#xC9C1;&#xB82C; engraftment&#xC758; &#xC2EC;&#xD55C; &#xACB0;&#xD569; immunodeficient (SCID) &#xC950; /. &#xACB0;&#xACFC; &#xAE30;&#xBCF8; &#xBC0F; &#xBCF4;&#xC870; &#xBC1B;&#xB294; &#xC0AC;&#xB78C; &#xD558; &#xACE0; &#xD06C;&#xAC8C;, HSC self-renewing multipotential&#xC758; &#xD6A8;&#xC728;&#xC801;&#xC778; &#xBCC0;&#xD658; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0B4;&#xB294; &#xBCF4;&#xC870; &#xD638;&#xC2A4;&#xD2B8;&#xC5D0;&#xC11C; transduced &#xC140;&#xC758; &#xB18D;&#xCD95;&#xC5D0; &#xB9C8;&#xD0B9; &#xD558;&#xB294; &#xC7A5;&#xAE30; multilineage&#xB97C; &#xBC1D;&#xD614;&#xB2E4;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xACB0;&#xACFC; rAAV &#xD45C;&#xC2DC; clonogenic progenitors &#xBC1B;&#xB294; &#xC0AC;&#xB78C; &#xACE8; &#xC218;&#xC758; &#xC9C1;&#xB82C; &#xBD84;&#xC11D;&#xC5D0;&#xC11C;&#xC758; &#xC9C0; &#xC18D;&#xC131;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xD655;&#xC778; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;. &#xC5D0;&#xC774;&#xC988;-1 &#xB3C4;&#xC804; &#xC2DC; transduced CD34 + &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; macrophage &#xC790;&#xC190; &#xC13C;&#xC2A4; RNA &#xD45C;&#xD604;&#xACFC; &#xC120;&#xD0DD;&#xC801; &#xC555;&#xB825; &#xC5C6;&#xC774; &#xD14C;&#xC2A4;&#xD2B8; &#xBAA8;&#xB4E0; &#xAE30;&#xC99D;&#xC790;&#xC758; &#xCEE8;&#xD2B8;&#xB864;&#xC5D0; &#xBE44;&#xD574; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; &#xBCF5;&#xC81C;&#xC758; &#xC9C0;&#xC18D;&#xC801;&#xC774; &#xACE0; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xC800;&#xD574; &#xC804;&#xC2DC;. &#xC774; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xB294; &#xC778;&#xAC04;&#xC758; HSC&#xC758; &#xD6A8;&#xC728;&#xC801;&#xC778; rAAV2 &#xBCC0;&#xD658;&#xC758; &#xBA85;&#xD655;&#xD55C; vivo&#xC5D0;&#xC11C; &#xB370;&#xBAA8;&#xB97C; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0C5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xC6D0;&#xC2DC;&#xC801;&#xC778; &#xC778;&#xAC04;&#xC758; &#xC870; &#xD608; &#xC904;&#xAE30; &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xBA74;&#xC5ED; &#xACB0;&#xD54D; &#xC0DD;&#xC950;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC9C1;&#xB82C; engraftment &#xC218; &#xC788;&#xB294; &#xC7AC;&#xC870;&#xD569; AAV2 &#xBCC0;&#xD658;.

Un recombinante AAV2 (rAAV2) vector de codificaci&#xF3;n de ARN antisentido con el VIH-1 regi&#xF3;n de transactivaci&#xF3;n (TAR) se evalu&#xF3; para la transducci&#xF3;n de la sangre del cord&#xF3;n umbilical humano CD34 + CD38-c&#xE9;lulas madre hematopoy&#xE9;ticas (HSC), capaces de injerto de serie en diab&#xE9;ticos no obesos (NOD) / severa combinada inmunodeficientes (SCID) los ratones. Los resultados revelaron a largo plazo multilinaje marcado en los receptores de primaria y secundaria, y significativamente, un enriquecimiento de las c&#xE9;lulas transducidas en hu&#xE9;spedes secundarios, lo que indica la transducci&#xF3;n eficiente de auto-renovaci&#xF3;n multipotencial HSC. Estos resultados fueron confirmados por la persistencia de rAAV marcado de los progenitores clonog&#xE9;nicos en los an&#xE1;lisis de serie de la m&#xE9;dula destinatario. Tras el VIH-1 reto, la progenie de macr&#xF3;fagos de c&#xE9;lulas CD34 + transducidas expresan ARN antisentido y exhibi&#xF3; la inhibici&#xF3;n sostenida y significativa de la replicaci&#xF3;n del virus en comparaci&#xF3;n con los controles en cada donante comprobado, sin presi&#xF3;n selectiva. Este estudio representa una clara demostraci&#xF3;n en vivo de transducci&#xF3;n eficiente rAAV2 de HSC humana.

Transducci&#xF3;n AAV2 recombinante de c&#xE9;lulas primitivas hematopoy&#xE9;ticas troncales humanas capaces de recuperarse de serie en ratones inmunodeficientes

&#x91CD;&#x7EC4; AAV2 (rAAV2) &#x77E2;&#x91CF;&#x7F16;&#x7801;&#x53CD;&#x4E49; RNA &#x5BF9;&#x827E;&#x6ECB;&#x75C5;&#x6BD2; 1 &#x77ED;&#x533A;&#x57DF; (TAR) &#x88AB;&#x8BC4;&#x4F30;&#x4EBA;&#x8110;&#x8840; CD34 + CD38 &#x8F6C;&#x5BFC;-&#x9020;&#x8840;&#x5E72;&#x7EC6;&#x80DE; &#xFF08;HSC&#xFF09; &#x80FD;&#x591F;&#x5728;&#x80A5;&#x80D6;&#x578B;&#x7CD6;&#x5C3F;&#x75C5; &#xFF08;&#x70B9;&#x5934;&#xFF09; &#x4E32;&#x884C;&#x690D;&#x5165; / &#x4E25;&#x91CD;&#x8054;&#x5408;&#x514D;&#x75AB;&#x7F3A;&#x9677; (SCID) &#x5C0F;&#x9F20;&#x3002;&#x7ED3;&#x679C;&#x663E;&#x793A;&#xFF0C;&#x957F;&#x671F;&#x7684; multilineage&#xFF0C;&#x5728;&#x5C0F;&#x5B66;&#x548C;&#x4E2D;&#x5B66;&#x7684;&#x53D7;&#x52A9;&#x4EBA;&#xFF0C;&#x548C;&#x5927;&#x5927;&#xFF0C;&#x6D53;&#x7F29;&#x5728;&#x8F85;&#x52A9;&#x4E3B;&#x673A;&#x4E2D;&#xFF0C;&#x8BE5;&#x503C;&#x6307;&#x793A;&#x591A;&#x80FD;&#x81EA;&#x6211;&#x66F4;&#x65B0; HSC &#x7684;&#x9AD8;&#x6548;&#x8F6C;&#x5BFC;&#x8F6C;&#x5BFC;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x6807;&#x8BB0;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7ED3;&#x679C;&#x8BC1;&#x5B9E;&#x4E86;&#x817A;&#x76F8;&#x5173;&#x75C5;&#x6BD2;&#x6807;&#x8BB0;&#x7684;&#x514B;&#x9686;&#x7956;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5728;&#x6536;&#x4EF6;&#x4EBA;&#x9AA8;&#x9AD3;&#x7684;&#x4E32;&#x884C;&#x5206;&#x6790;&#x4E2D;&#x6301;&#x7EED;&#x5B58;&#x5728;&#x3002;&#x540E;&#x827E;&#x6ECB;&#x75C5;&#x6BD2; 1 &#x6311;&#x6218;&#x5DE8;&#x566C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8F6C;&#x5BFC; /cd34 + &#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x540E;&#x4EE3;&#x8868;&#x793A;&#x53CD;&#x4E49; RNA &#x548C;&#x5C55;&#x51FA;&#x6301;&#x7EED;&#x3001; &#x5927;&#x5E45;&#x5EA6;&#x6291;&#x5236;&#x75C5;&#x6BD2;&#x590D;&#x5236;&#x4E0E;&#x6BCF;&#x4F4D;&#x6350;&#x732E;&#x8005;&#xFF0C;&#x7ECF;&#x8FC7;&#x6D4B;&#x8BD5;&#xFF0C;&#x6CA1;&#x6709;&#x9009;&#x62E9;&#x6027;&#x538B;&#x529B;&#x4E2D;&#x7684;&#x63A7;&#x4EF6;&#x3002;&#x8FD9;&#x9879;&#x7814;&#x7A76;&#x8868;&#x793A;&#x6E05;&#x9664;&#x4F53;&#x5185;&#x7684;&#x9AD8;&#x6548; rAAV2 &#x8F6C;&#x5BFC;&#x4EBA; HSC &#x7684;&#x793A;&#x8303;&#x3002;

&#x91CD;&#x7EC4; AAV2 &#x8F6C;&#x5BFC;&#x7684;&#x539F;&#x59CB;&#x4EBA;&#x7C7B;&#x9020;&#x8840;&#x5E72;&#x7EC6;&#x80DE;&#x514D;&#x75AB;&#x7F3A;&#x9677;&#x5C0F;&#x9F20;&#x7684;&#x4E32;&#x884C;&#x690D;&#x5165;&#x72B6;&#x6001;&#x7684;&#x80FD;&#x529B;&#x3002;

A recombinant AAV2 (rAAV2) vector encoding antisense RNA to HIV-1 transactivating region (TAR) was evaluated for transduction of human cord blood CD34+CD38- hematopoietic stem cells (HSC) capable of serial engraftment in nonobese diabetic (NOD)/severe combined immunodeficient (SCID) mice. Results revealed long-term multilineage marking in primary and secondary recipients, and significantly, an enrichment of transduced cells in secondary hosts, indicating efficient transduction of multipotential self-renewing HSC. These results were confirmed by the persistence of rAAV marking of clonogenic progenitors in serial analyses of recipient marrow. Upon HIV-1 challenge, the macrophage progeny of transduced CD34+ cells expressed antisense RNA and exhibited sustained and significant inhibition of virus replication as compared with controls in every donor tested, without selective pressure. This study represents a clear in vivo demonstration of efficient rAAV2 transduction of human HSC.

Recombinant AAV2 transduction of primitive human hematopoietic stem cells capable of serial engraftment in immune-deficient mice.

Un recombinant AAV2 (rAAV2) vecteur d&#x26;#39;encodage de l&#x26;#39;ARN antisens contre le VIH-1 r&#xE9;gion transactivatrice (TAR) a &#xE9;t&#xE9; &#xE9;valu&#xE9;e pour la transduction du sang de cordon humain de cellules CD34 + CD38-souches h&#xE9;matopo&#xEF;&#xE9;tiques (CSH) capables de prise de greffe de s&#xE9;rie chez les diab&#xE9;tiques non ob&#xE8;ses (NOD) / combin&#xE9; s&#xE9;v&#xE8;re immunod&#xE9;ficientes (SCID). Les r&#xE9;sultats ont r&#xE9;v&#xE9;l&#xE9; &#xE0; long terme chez les receveurs de marquage multilign&#xE9;e primaires et secondaires, et de mani&#xE8;re significative, un enrichissement des cellules transduites dans des h&#xF4;tes secondaires, indiquant une transduction efficace de multipotentielle auto-renouvellement HSC. Ces r&#xE9;sultats ont &#xE9;t&#xE9; confirm&#xE9;s par la persistance de rAAV marquage des prog&#xE9;niteurs clonog&#xE9;niques dans les analyses de s&#xE9;rie de la moelle destinataire. Sur le VIH-1 d&#xE9;fi, la descendance des macrophages de cellules CD34 + transduites exprim&#xE9; ARN antisens et ont pr&#xE9;sent&#xE9; une inhibition soutenue et significative de la r&#xE9;plication du virus par rapport aux t&#xE9;moins dans tous les bailleurs de fonds test&#xE9;, sans pression de s&#xE9;lection. Cette &#xE9;tude repr&#xE9;sente une nette d&#xE9;monstration in vivo de la transduction du rAAV2 efficace de HSC humaine.

Recombinant Transduction AAV2 des primitifs de l&#x26;#39;homme des cellules souches h&#xE9;matopo&#xEF;&#xE9;tiques capables de prise de greffe de s&#xE9;rie dans souris immunod&#xE9;ficientes

Rekombinante AAV2 Transduktion der primitiven menschlichen h&#xE4;matopoetischen Stammzellen in der Lage serielle Transplantation in immun-defizienten M&#xE4;usen.

Un ricombinante AAV2 vettoriale (rAAV2) codifica regione transactivating (TAR) di HIV-1 RNA antisenso &egrave; stata valutata per la trasduzione del sangue del cordone ombelicale umano CD34 + CD38-cellule di staminali ematopoietiche (HSC) in grado di attecchimento seriale in nonobese diabetico (NOD) / grave combinato immunodeficienti topi (SCID). Risultati hanno rivelato a lungo termine multilineage marcatura in destinatari primari e secondari e significativamente, un arricchimento delle cellule trasdotte in host secondario, che indica la trasduzione efficiente di multipotential direttamente HSC. Questi risultati sono stati confermati dalla persistenza di rAAV marcatura dei progenitori clonogenica nelle analisi seriale del destinatario del midollo. Sulla sfida di HIV-1, la progenie dei macrofagi di cellule CD34 + trasdotte espresso RNA antisenso ed esposta sostenuta e significativa inibizione della replicazione del virus rispetto ai controlli in ogni donatore testato, senza pressione selettiva. Questo studio rappresenta una dimostrazione chiara in vivo di trasduzione efficiente rAAV2 di HSC umane.

Ricombinante AAV2 trasduzione della primitive umane cellule staminali in grado di attecchimento seriale nei topi con deficit immunitario.

&#x6211;&#x4EEC;&#x4EE5;&#x524D;&#x8868;&#x660E;&#x91CD;&#x7EC4;&#x817A;&#x76F8;&#x5173;&#x75C5;&#x6BD2; (rAAV&#xFF09; &#x8F6C;&#x5BFC; CD34(+) &#x9020;&#x8840;&#x5E72;&#x7EC6;&#x80DE; (&#x661F;) &#x80FD;&#x591F;&#x4E32;&#x884C;&#x690D;&#x5165;&#x4F53;&#x5185;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#x6211;&#x4EEC;&#x8BC4;&#x4F30; rAAV2 &#x8C03;&#x89E3;&#x57FA;&#x56E0;&#x8F6C;&#x79FB;&#x5230;&#x7EC8;&#x672B;&#x5206;&#x5316;&#x7684;&#x3001; &#x9759;&#x6B62;&#x7684;&#x3001; &#x539F;&#x59CB;&#x7684; CD34(+) &#x7EC6;&#x80DE;&#x4EE3;&#x8C22;&#x3001; &#x6709;&#x4E1D;&#x5206;&#x88C2;&#xFF0C;&#x548C;&#x8868;&#x578B;&#x5C5E;&#x6027;&#x7684;&#x57FA;&#x7840;&#x4E0A;&#x7EC6;&#x5206;&#x7684;&#x80FD;&#x529B;&#x3002;&#x7ED3;&#x679C;&#x663E;&#x793A; CD34(+)CD38() &#x9AA8;&#x9AD3;&#x7EC6;&#x80DE;&#x90FD;&#x662F;&#x6700;&#x9759;&#x6B62;&#x3001; &#x4E3B;&#x8981;&#x662F;&#x5728; G(0) &#x5728;&#x9694;&#x79BB;&#x4E2D;&#x5B58;&#x5728;&#xFF0C;&#x53EA;&#x6709;&#x4EBA;&#x53E3;&#x5728;&#x6574;&#x4E2A;&#x66B4;&#x9732;&#x4E8E;&#x514D;&#x8D39; rAAV &#x671F;&#x95F4;&#x4FDD;&#x6301;&#x7EC8;&#x672B;&#x5206;&#x5316;&#x3002;&#x817A;&#x76F8;&#x5173;&#x75C5;&#x6BD2;&#x6807;&#x5FD7;&#x7684;&#x6B96;&#x6C11;&#x5730;&#x6765;&#x81EA;&#x539F;&#x59CB;&#x7956;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x9891;&#x7387;&#x5374;&#x57FA;&#x8D28;&#x6587;&#x5316; CD34(+) &#x4E9A;&#x7FA4;&#x7684;&#x6269;&#x5C55;&#x7684;&#x514B;&#x9686;&#x80FD;&#x529B;&#x7684;&#x663E;&#x8457;&#x5DEE;&#x5F02;&#xFF0C;&#x7C7B;&#x4F3C;&#x6240;&#x6709;&#x4E09;&#x4E2A;&#x7FA4;&#x4F53;&#xFF0C;&#x8868;&#x660E;&#x539F;&#x59CB;&#x7684;&#x548C;&#x66F4;&#x6709;&#x533A;&#x522B;&#x7684;&#x7956;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6700;&#x521D;&#x8F6C;&#x5BFC;&#x5728;&#x540C;&#x7B49;&#x6C34;&#x5E73;&#x3002;&#x540E;&#x8F6C;&#x5BFC;&#xFF0C;episomal &#x548C;&#x96C6;&#x6210;&#x7684;&#x817A;&#x76F8;&#x5173;&#x75C5;&#x6BD2;&#x57FA;&#x56E0;&#x7EC4;&#x4E2D;&#x6240;&#x6709; CD34(+) &#x4E9A;&#x7FA4;&#x68C0;&#x6D4B;&#x5230;&#x3002;&#x4F46;&#x662F;&#xFF0C;&#x66F4;&#x9759;&#x6B62;&#x7684;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x663E;&#x793A;&#x6BD4;&#x8FC5;&#x901F;&#x5212;&#x5206;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x66F4;&#x9AD8;&#x6C34;&#x5E73;&#x7684;&#x7EFC;&#x5408;&#x817A;&#x76F8;&#x5173;&#x75C5;&#x6BD2;&#x3002;&#x91CD;&#x8981;&#x7684;&#x662F;&#xFF0C;&#x7A33;&#x5B9A;&#x957F;&#x671F;&#x4E00;&#x4F53;&#x5316;&#x6307;&#x51FA;&#x53EA;&#x6709;&#x5728;&#x6700;&#x539F;&#x59CB;&#x7684;&#x3001; &#x9759;&#x6B62;&#x7684; CD34(+)CD38(-) &#x5B50;&#x96C6;&#xFF0C;&#x8BE5;&#x503C;&#x6307;&#x793A;&#x6B64; HSC &#x8F66;&#x53A2;&#x7EC4;&#x6210;&#x7684;&#x7A33;&#x5B9A; rAAV2 &#x8F6C;&#x5BFC;&#x7684;&#x9996;&#x9009;&#x886C;&#x5E95;&#x3002;&#x524D;&#x9762;&#x6240;&#x8FF0;&#x8F6C;&#x57FA;&#x56E0;&#x8868;&#x8FBE;&#x7684;&#x5C40;&#x9650;&#x6027;&#x8F6C;&#x5BFC; CD34(+) &#x7EC6;&#x80DE;&#x4E2D;&#x89C2;&#x5BDF;&#x5230;&#xFF0C;&#x53EF;&#x4EE5;&#x514B;&#x670D;&#x7531; tyrphostin &#x9884;&#x5904;&#x7406;&#xFF0C;&#x5BFC;&#x81F4;&#x589E;&#x5F3A;&#x7B2C;&#x4E8C;&#x94FE;&#x5408;&#x6210;&#x7387;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7ED3;&#x679C;&#x8868;&#x793A;&#x9996;&#x6B21;&#x5C55;&#x793A;&#x7684;&#x817A;&#x76F8;&#x5173;&#x75C5;&#x6BD2;&#x4ECB;&#x5BFC;&#x7684;&#x57FA;&#x56E0;&#x8F6C;&#x79FB;&#x5230;&#x539F;&#x59CB;&#x3001; &#x9759;&#x6B62; CD34(+)CD38(-) &#x5E72;&#x7EC6;&#x80DE;&#xFF0C;&#x5E76;&#x63ED;&#x793A;&#x7EC8;&#x672B;&#x5206;&#x5316; CD34(+)CD38(-) &#x661F;&#x662F;&#x817A;&#x76F8;&#x5173;&#x75C5;&#x6BD2;&#x8F6C;&#x5BFC; CD34(+) &#x7684;&#x6700;&#x4F73;&#x76EE;&#x6807;&#x3002;

&#x9759;&#x6B62;&#x7684; CD34 &#x9633;&#x6027;&#x9020;&#x8840;&#x5E72;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E9A;&#x7FA4;&#x662F;&#x7A33;&#x5B9A;&#x91CD;&#x7EC4;&#x817A;&#x76F8;&#x5173;&#x75C5;&#x6BD2; 2 &#x578B;&#x8F6C;&#x5BFC;&#x7684;&#x9996;&#x9009;&#x7684;&#x76EE;&#x6807;&#x3002;

We have previously demonstrated recombinant adeno-associated viral (rAAV) transduction of human CD34(+) hematopoietic stem cells (HSCs) capable of serial engraftment in vivo. Here we evaluated the capacity of rAAV2 to mediate gene transfer into nondividing, quiescent, primitive CD34(+) cells subdivided on the basis of metabolic, mitotic, and phenotypic properties. Results revealed that CD34(+)CD38() marrow cells are the most quiescent, exist primarily in G(0) at isolation and are the only population to remain nondividing during the entire exposure to free rAAV. Despite significant differences in the extended clonogenic capacities of CD34(+) subsets in stromal cultures, the frequency of rAAV marking of colonies derived from primitive progenitors was similar in all three populations, suggesting that both primitive and more differentiated progenitors were initially transduced at equal levels. After transduction, episomal and integrated rAAV genomes were detected in all CD34(+) subsets. However, the more quiescent cells displayed higher levels of integrated rAAV than did rapidly dividing cells. Importantly, stable long-term integration was observed only in the most primitive, quiescent CD34(+)CD38(-) subset, indicating that this HSC compartment comprises the preferred substrate for stable rAAV2 transduction. Previously described rate limitations to transgene expression were observed in transduced CD34(+) cells and could be overcome by tyrphostin pretreatment, which resulted in augmented second-strand synthesis. These results represent the first demonstration of rAAV-mediated gene transfer to primitive, quiescent human CD34(+)CD38(-) stem cells and reveal that nondividing CD34(+)CD38(-) HSCs are the optimal CD34(+) targets for rAAV transduction.

Quiescent subpopulations of human CD34-positive hematopoietic stem cells are preferred targets for stable recombinant adeno-associated virus type 2 transduction.

Nous avons d&#xE9;j&#xE0; d&#xE9;montr&#xE9; recombinant viral ad&#xE9;no-associ&#xE9; (rAAV) transduction des ressources humaines CD34 (+) des cellules souches h&#xE9;matopo&#xEF;&#xE9;tiques (CSH) capables de prise de greffe de s&#xE9;rie in vivo. Ici, nous avons &#xE9;valu&#xE9; la capacit&#xE9; de rAAV2 &#xE0; la m&#xE9;diation ne se divisant pas transfert de g&#xE8;ne dans, au repos, primitive CD34 (+) des cellules subdivis&#xE9;es sur la base de troubles m&#xE9;taboliques, mitotique, et les propri&#xE9;t&#xE9;s ph&#xE9;notypiques. Les r&#xE9;sultats ont r&#xE9;v&#xE9;l&#xE9; que CD34 (+) des cellules de moelle CD38 () sont les plus de repos, il existe principalement dans G (0) &#xE0; l&#x26;#39;isolement et sont la seule population de rester ne se divisant pas lors de l&#x26;#39;exposition enti&#xE8;re &#xE0; la libre rAAV. Malgr&#xE9; des diff&#xE9;rences significatives dans les capacit&#xE9;s clonog&#xE9;niques de longues CD34 (+) sous-ensembles dans les cultures stromales, la fr&#xE9;quence de rAAV marquage des colonies issues de prog&#xE9;niteurs primitifs &#xE9;tait similaire dans les trois populations, ce qui sugg&#xE8;re que les deux prog&#xE9;niteurs primitifs et plus diff&#xE9;renci&#xE9;e ont &#xE9;t&#xE9; initialement transduites &#xE0; des niveaux &#xE9;gaux . Apr&#xE8;s transduction, &#xE9;pisomiques et int&#xE9;gr&#xE9;e g&#xE9;nomes rAAV ont &#xE9;t&#xE9; d&#xE9;tect&#xE9;s dans tous les CD34 (+) sous-ensembles. Cependant, les cellules quiescentes plus affich&#xE9; des niveaux plus &#xE9;lev&#xE9;s de la gestion int&#xE9;gr&#xE9;e rAAV que les cellules se divisent rapidement. Il est important, stable et &#xE0; long terme d&#x26;#39;int&#xE9;gration a &#xE9;t&#xE9; observ&#xE9;e uniquement dans le plus primitif, de repos CD34 (+) CD38 (-) sous-ensemble, ce qui indique que ce compartiment HSC comprend le substrat pr&#xE9;f&#xE9;r&#xE9; pour la stabilit&#xE9; de rAAV2 transduction. Des limitations de d&#xE9;bit d&#xE9;crit pr&#xE9;c&#xE9;demment pour l&#x26;#39;expression du transg&#xE8;ne ont &#xE9;t&#xE9; observ&#xE9;es dans transduites CD34 (+) des cellules et pourrait &#xEA;tre surmont&#xE9; par un pr&#xE9;traitement tyrphostine, qui a abouti &#xE0; seconde augment&#xE9;e brin de synth&#xE8;se. Ces r&#xE9;sultats repr&#xE9;sentent la premi&#xE8;re d&#xE9;monstration de transfert de g&#xE8;nes &#xE0; m&#xE9;diation rAAV primitifs, l&#x26;#39;homme au repos CD34 (+) CD38 (-) les cellules souches et r&#xE9;v&#xE8;lent que ne se divisant pas CD34 (+) CD38 (-) CSH CD34 sont optimales (+) des objectifs pour rAAV transduction.

Les sous-populations de repos de l&#x26;#39;homme CD34-positives cellules souches h&#xE9;matopo&#xEF;&#xE9;tiques sont des cibles privil&#xE9;gi&#xE9;es pour Stable ad&#xE9;no-associ&#xE9; recombinant virus type 2 Transduction

Wir haben zuvor rekombinante Adeno-assoziierte Viren (rAAV) Transduktion menschlicher CD34(+) h&auml;matopoetische Stammzellen (HSCs) Lage, in-vivo serielle Verteilung bewiesen. Hier werteten wir die Kapazit&auml;t des rAAV2 Gentransfer in nondividing, Ruhezustand, primitive CD34(+) Zellen unterteilt, die auf der Grundlage der metabolischen mitotische und ph&auml;notypische Eigenschaften zu vermitteln. Ergebnisse zeigten, dass CD34(+)CD38() Knochenmark Zellen der meisten Ruhezustand, es haupts&auml;chlich in G(0) bei Isolierung gibt und sind die einzige Bev&ouml;lkerung w&auml;hrend der gesamten Exposition gegen&uuml;ber freien rAAV nondividing bleiben. Trotz erheblichen Unterschiede in den erweiterten Clonogenic Kapazit&auml;ten der CD34(+) Untergruppen in stromal Kulturen war die H&auml;ufigkeit der rAAV-Kennzeichnung der Kolonien von primitiver Vorfahre abgeleitet &auml;hnlich in allen drei Populationen, was darauf hindeutet, dass sowohl primitive und differenziertere Vorl&auml;uferzellen zun&auml;chst auf gleicher Ebene ausgestrahlt wurden. Nach Transduktion wurden episomale und integrierte rAAV Genome in alle CD34(+) Teilmengen festgestellt. Jedoch angezeigt mehr Ruhezustand Zellen h&ouml;herer integrierte rAAV als sich schnell teilende Zellen Tat. Wichtig ist, wurde stabile langfristige Integration beobachtet, nur in der primitivsten, ruhige CD34(+)CD38(-) Teilmenge, darauf hinweist, dass diese HSC Fach das bevorzugte Substrat f&uuml;r stabile rAAV2 Transduktion umfasst. Zuvor beschriebenen Einschr&auml;nkungen Transgenexpression in transduzierten CD34(+) Zellen beobachtet wurden und durch Tyrphostin Vorbehandlung, die erweiterte zweite-Strang-Synthese gef&uuml;hrt &uuml;berwunden werden konnte. Diese Ergebnisse die erste Demonstration von rAAV-vermittelte Gentransfer f&uuml;r primitive, ruhige CD34(+)CD38(-) Stammzellen darstellen und zeigen, dass nondividing CD34(+)CD38(-) HSCs die optimale CD34(+)-Ziele f&uuml;r rAAV Transduktion sind.

Ruhezustand Unterpopulationen menschlicher CD34-positiven h&auml;matopoetischen Stammzellen sind bevorzugte Ziele f&uuml;r stabile rekombinante Adeno-assoziierte Virus Typ 2 Transduktion.

In precedenza abbiamo dimostrato ricombinante adeno-associati virale (rAAV) trasduzione della umane CD34(+) cellule staminali ematopoietiche (HSCs) in grado di seriale attecchimento in vivo. Qui abbiamo valutato la capacit&agrave; del rAAV2 di mediare il trasferimento genico in cellule CD34(+) nondividing, quiescente, primitive suddiviso in base alle propriet&agrave; metaboliche, mitotica e fenotipica. Risultati hanno rivelato che le cellule del midollo CD34(+)CD38() sono i pi&ugrave; tranquilli, esistono principalmente in g all&#39;isolamento e sono l&#39;unica popolazione di rimanere nondividing durante l&#39;intera esposizione al libero rAAV. Nonostante le differenze significative nella capacit&agrave; clonogenica esteso di sottoinsiemi CD34(+) in culture stromale, la frequenza di rAAV marcatura delle colonie derivate da progenitori primitivi era simile in tutti i tre popolazioni, suggerendo che progenitori primitivi e pi&ugrave; differenziati erano inizialmente transduced a livelli uguali. Dopo la trasduzione, episomal e integrato rAAV genomi sono stati rilevati in tutti i sottoinsiemi CD34(+). Tuttavia, le cellule pi&ugrave; tranquille visualizzato livelli pi&ugrave; elevati di rAAV integrato di fatto rapida divisione delle cellule. Soprattutto, integrazione stabile a lungo termine &egrave; stata osservata solo nel sottoinsieme CD34(+)CD38(-) pi&ugrave; primitivo, quiescente, che indica che questo vano HSC comprende il substrato preferito per trasduzione rAAV2 stabile. Precedentemente descritto tasso limitazioni di espressione del transgene sono stati osservati in cellule trasdotte CD34(+) e potrebbero essere superati dal pretrattamento tyrphostin, che ha portato in sintesi aumentata di secondo-filo. Questi risultati rappresentano la prima dimostrazione di trasferimento genico mediato rAAV al primitive, quiescente CD34(+)CD38(-) cellule staminali e rivelano che nondividing CD34(+)CD38(-) HSCs sono le destinazioni CD34(+) ottimale per rAAV trasduzione.

Quiescente sottopopolazioni di cellule staminali ematopoietiche CD34-positivi umane sono destinazioni preferite per la trasduzione del tipo 2 stabile recombinant virus adeno-associati.

&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x4EE5;&#x524D;&#x3001;&#x30D2;&#x30C8;CD34&#x306E;&#x7D44;&#x63DB;&#x3048;&#x30A2;&#x30C7;&#x30CE;&#x968F;&#x4F34;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#xFF08;rAAV&#x306E;&#xFF09;&#x4F1D;&#x9054;&#xFF08;+&#xFF09;in vivo&#x3067;&#x306E;&#x30B7;&#x30EA;&#x30A2;&#x30EB;&#x79FB;&#x690D;&#x304C;&#x53EF;&#x80FD;&#x306A;&#x9020;&#x8840;&#x5E79;&#x7D30;&#x80DE;&#xFF08;HSC&#xFF09;&#x306B;&#x793A;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x4EE3;&#x8B1D;&#x3001;&#x7D30;&#x80DE;&#x5206;&#x88C2;&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x8868;&#x73FE;&#x578B;&#x306E;&#x7279;&#x6027;&#x306B;&#x57FA;&#x3065;&#x3044;&#x3066;&#x7D30;&#x5206;&#x5316;&#x3057;&#x3001;&#x9759;&#x6B62;&#x3001;&#x30D7;&#x30EA;&#x30DF;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6;CD34&#xFF08;+&#xFF09;&#x7D30;&#x80DE;&#x3092;&#x5206;&#x88C2;&#x3078;&#x306E;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x4F1D;&#x9054;&#x3092;&#x4EF2;&#x4ECB;&#x3059;&#x308B;rAAV2&#x306E;&#x80FD;&#x529B;&#x3092;&#x8A55;&#x4FA1;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x7D50;&#x679C;&#x306F;&#x3001;CD34&#xFF08;+&#xFF09;CD38&#xFF08;&#xFF09;&#x9AA8;&#x9AC4;&#x7D30;&#x80DE;&#x304C;&#x4E3B;&#x306B;&#x5206;&#x96E2;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;G&#xFF08;0&#xFF09;&#x306E;&#x4E2D;&#x3067;&#x6700;&#x3082;&#x6D88;&#x8CBB;&#x96FB;&#x6D41;&#x304C;&#x5B58;&#x5728;&#x3057;&#x3066;&#x304A;&#x308A;&#x3001;&#x7121;&#x6599;&#x306E;rAAV&#x306E;&#x5168;&#x4F53;&#x9732;&#x5149;&#x4E2D;&#x306B;&#x5206;&#x88C2;&#x3057;&#x306A;&#x3044;&#x307E;&#x307E;&#x306B;&#x3059;&#x308B;&#x552F;&#x4E00;&#x306E;&#x96C6;&#x56E3;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x3057;&#x305F;&#x3002; CD34&#xFF08;+&#xFF09;&#x9593;&#x8CEA;&#x57F9;&#x990A;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x30B5;&#x30D6;&#x30BB;&#x30C3;&#x30C8;&#x3001;&#x3059;&#x3079;&#x3066;&#x306E;3&#x3064;&#x306E;&#x500B;&#x4F53;&#x7FA4;&#x3067;&#x540C;&#x69D8;&#x3067;&#x3042;&#x3063;&#x305F;&#x539F;&#x59CB;&#x524D;&#x99C6;&#x7D30;&#x80DE;&#x304B;&#x3089;&#x6D3E;&#x751F;&#x3057;&#x305F;&#x30B3;&#x30ED;&#x30CB;&#x30FC;&#x306E;&#x30DE;&#x30FC;&#x30AD;&#x30F3;&#x30B0;rAAV&#x306E;&#x5468;&#x6CE2;&#x6570;&#x306F;&#x3001;&#x4E21;&#x65B9;&#x306E;&#x30D7;&#x30EA;&#x30DF;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6;&#x3068;&#x3088;&#x308A;&#x5206;&#x5316;&#x3057;&#x305F;&#x524D;&#x99C6;&#x7D30;&#x80DE;&#x304C;&#x6700;&#x521D;&#x306B;&#x7B49;&#x3057;&#x3044;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x3067;&#x5C0E;&#x5165;&#x3057;&#x305F;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x5506;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x306E;&#x62E1;&#x5F35;&#x30AF;&#x30ED;&#x30FC;&#x30F3;&#x5BB9;&#x91CF;&#x306E;&#x5927;&#x5E45;&#x306A;&#x9055;&#x3044;&#x306B;&#x3082;&#x304B;&#x304B;&#x308F;&#x3089;&#x305A;&#x3002;&#x5C0E;&#x5165;&#x5F8C;&#x3001;&#x30A8;&#x30D4;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x7D71;&#x5408;&#x3055;&#x308C;&#x305F;rAAV&#x306E;&#x30B2;&#x30CE;&#x30E0;&#x306F;&#x3001;&#x3059;&#x3079;&#x3066;CD34&#xFF08;+&#xFF09;&#x306E;&#x30B5;&#x30D6;&#x30BB;&#x30C3;&#x30C8;&#x3067;&#x691C;&#x51FA;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3002;&#x3057;&#x304B;&#x3057;&#x3001;&#x3088;&#x308A;&#x9759;&#x6B62;&#x671F;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x306F;&#x6025;&#x901F;&#x306B;&#x5206;&#x88C2;&#x3057;&#x305F;&#x7D30;&#x80DE;&#x3088;&#x308A;&#x3082;&#x7D71;&#x5408;&#x3055;&#x308C;&#x305F;rAAV&#x306E;&#x9AD8;&#x3044;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x3092;&#x8868;&#x793A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002; &#xFF08; - &#xFF09;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x306E;&#x306F;&#x3001;&#x5B89;&#x5B9A;&#x3057;&#x305F;&#x9577;&#x671F;&#x7684;&#x306A;&#x7D71;&#x5408;&#x306F;&#x3001;&#x9759;&#x6B62;&#x3001;&#x6700;&#x3082;&#x539F;&#x59CB;&#x7684;&#x306A;CD34&#xFF08;+&#xFF09;CD38&#x306B;&#x306E;&#x307F;&#x89B3;&#x5BDF;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x30B5;&#x30D6;&#x30BB;&#x30C3;&#x30C8;&#x306F;&#x3001;&#x3053;&#x306E;HSC&#x30B3;&#x30F3;&#x30D1;&#x30FC;&#x30C8;&#x30E1;&#x30F3;&#x30C8;&#x304C;&#x5B89;&#x5B9A;&#x3057;&#x3066;rAAV2&#x4F1D;&#x9054;&#x306B;&#x9069;&#x3057;&#x305F;&#x57FA;&#x677F;&#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x5C0E;&#x5165;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x767A;&#x73FE;&#x306B;&#x524D;&#x8FF0;&#x306E;&#x30EC;&#x30FC;&#x30C8;&#x5236;&#x9650;&#x306F;&#x3001;CD34&#xFF08;+&#xFF09;&#x7D30;&#x80DE;&#x3092;&#x5F62;&#x8CEA;&#x5C0E;&#x5165;&#x3067;&#x89B3;&#x5BDF;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3068;&#x5897;&#x88DC;&#x7B2C;&#x4E8C;&#x9396;&#x306E;&#x5408;&#x6210;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x30C1;&#x30ED;&#x30DB;&#x30B9;&#x30C1;&#x30F3;&#x524D;&#x51E6;&#x7406;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x514B;&#x670D;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3002; &#xFF08; - &#xFF09;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x306F;&#x3001;&#x539F;&#x59CB;&#x7684;&#x306A;&#x3001;&#x9759;&#x6B62;&#x30D2;&#x30C8;CD34&#xFF08;+&#xFF09;CD38&#x306B;rAAV&#x306E;&#x5A92;&#x4ECB;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x8EE2;&#x9001;&#x306E;&#x6700;&#x521D;&#x306E;&#x30C7;&#x30E2;&#x30F3;&#x30B9;&#x30C8;&#x30EC;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x3092;&#x8868;&#x3059;&#x5E79;&#x7D30;&#x80DE;&#x3068;CD34&#xFF08;+&#xFF09;CD38&#x5206;&#x88C2;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x3057;&#x305F;&#xFF08; - &#xFF09;&#x3092;&#x9020;&#x8840;&#x5E79;&#x7D30;&#x80DE;&#x306F;&#x3001;&#x6700;&#x9069;&#x306A;CD34&#xFF08;+&#xFF09;rAAV&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x30BF;&#x30FC;&#x30B2;&#x30C3;&#x30C8;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x4F1D;&#x9054;&#x3002;

&#x30D2;&#x30C8;CD34&#x967D;&#x6027;&#x9020;&#x8840;&#x5E79;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x9759;&#x6B62;&#x30B5;&#x30D6;&#x30DD;&#x30D4;&#x30E5;&#x30EC;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x306F;&#x3001;&#x5B89;&#x5B9A;&#x3057;&#x305F;&#x7D44;&#x63DB;&#x3048;&#x30A2;&#x30C7;&#x30CE;&#x968F;&#x4F34;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;2&#x578B;&#x4F1D;&#x9054;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x597D;&#x307E;&#x3057;&#x3044;&#x6A19;&#x7684;&#x3067;&#x3042;&#x308B;

&#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xC774;&#xC804;&#xC5D0; &#xC778;&#xAC04;&#xC758; CD34(+) &#xC870; &#xD608; &#xC904;&#xAE30; &#xC138;&#xD3EC; (HSCs) &#xC9C1;&#xB82C; engraftment &#xC0DD;&#xCCB4; &#xC870;&#xAC74; &#xC218;&#xC758; &#xC7AC;&#xC870;&#xD569; adeno &#xC81C;&#xD734;&#xD574; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; (rAAV) &#xBCC0;&#xD658;&#xC744; &#xC99D;&#xBA85; &#xD558;&#xACE0;&#xC788;&#xB2E4;. &#xC5EC;&#xAE30; Raav2&#xC758; &#xC6A9;&#xB7C9; nondividing, &#xBB34;&#xBD80;&#xD558;, &#xC6D0;&#xC2DC;&#xC801;&#xC778; CD34(+) &#xC138;&#xD3EC; &#xC2E0;&#xC9C4; &#xB300;&#xC0AC;, mitotic, phenotypic &#xC18D;&#xC131;&#xC5D0; &#xAE30;&#xCD08; &#xD558; &#xC5EC; &#xC138;&#xBD84;&#xD654;&#xB85C; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xC804;&#xC1A1;&#xC744; &#xC911;&#xC7AC;&#xB97C; &#xD3C9;&#xAC00; &#xD588;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xACB0;&#xACFC; CD34(+)CD38() &#xACE8; &#xC218; &#xC138;&#xD3EC;&#xB294; &#xAC00;&#xC7A5; &#xBB34;&#xBD80;&#xD558; &#xACA9;&#xB9AC;&#xC5D0;&#xC11C; G(0)&#xC5D0; &#xC8FC;&#xB85C; &#xC874;&#xC7AC; &#xD558; &#xACE0; &#xBB34;&#xB8CC; Raav&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC804;&#xCCB4; &#xB178;&#xCD9C;&#xC744; &#xD558;&#xB294; &#xB3D9;&#xC548; nondividing&#xC744; &#xC720;&#xC9C0; &#xD558;&#xB294; &#xC720;&#xC77C;&#xD55C; &#xC778;&#xAD6C;&#xB294; &#xBC1D;&#xD614;&#xB2E4;. Stromal &#xBB38;&#xD654;&#xAD8C;&#xC5D0;&#xC11C;&#xB294; CD34(+) &#xD558;&#xC704; &#xC9D1;&#xD569;&#xC758; &#xD655;&#xC7A5;&#xB41C; clonogenic &#xC6A9;&#xB7C9;&#xC5D0; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xCC28;&#xC774;&#xB3C4; &#xBD88;&#xAD6C; &#xD558; &#xACE0; &#xC6D0;&#xC2DC; progenitors&#xC5D0;&#xC11C; &#xD30C;&#xC0DD; &#xB41C; &#xC2DD;&#xBBFC;&#xC9C0;&#xC758; rAAV &#xD45C;&#xC2DC; &#xC8FC;&#xD30C;&#xC218; &#xC6D0;&#xC2DC;&#xC801;&#xC774; &#xACE0; &#xB354; &#xCC28;&#xBCC4;&#xD654; &#xB41C; progenitors &#xAC19;&#xC740; &#xC218;&#xC900;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBD88;&#xB9AC;&#xACE0; &#xCC98;&#xC74C; &#xD588;&#xB2E4; &#xC81C;&#xC548; &#xBAA8;&#xB4E0; &#xC138; &#xC778;&#xAD6C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBE44;&#xC2B7; &#xD588;&#xB2E4;. &#xBCC0;&#xD658;, &#xD6C4; episomal &#xBC0F; &#xD1B5;&#xD569; rAAV &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xB294; &#xBAA8;&#xB4E0; CD34(+) &#xD558;&#xC704; &#xC9D1;&#xD569;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBC1C;&#xACAC; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098;, &#xB354; &#xBB34;&#xBD80;&#xD558; &#xC140; &#xD1B5;&#xD569;&#xB41C; rAAV &#xC138;&#xD3EC;&#xB97C; &#xC2E0;&#xC18D; &#xD558; &#xAC8C; &#xBD84;&#xD560; &#xD55C; &#xAC83; &#xBCF4;&#xB2E4; &#xB354; &#xB192;&#xC740; &#xC218;&#xC900;&#xC758; &#xD45C;&#xC2DC; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xAC83;&#xC740;, &#xC548;&#xC815;&#xC801;&#xC778; &#xC7A5;&#xAE30; &#xD1B5;&#xD569;&#xC774; HSC &#xAD6C;&#xD68D; &#xAD6C;&#xC131; &#xC548;&#xC815;&#xC801;&#xC778; rAAV2 &#xBCC0;&#xD658;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xAE30;&#xBCF8; &#xAE30;&#xD310; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0B4;&#xB294; &#xAC00;&#xC7A5; &#xC6D0;&#xC2DC;&#xC801;&#xC778;, &#xBB34;&#xBD80;&#xD558; CD34(+)CD38(-) &#xD558;&#xC704;&#xC5D0;&#xB9CC; &#xAD00;&#xCC30; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;. &#xC774;&#xC804;&#xC5D0; transduced CD34(+) &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0;&#xC11C; &#xAD00;&#xCC30; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4; transgene &#xC2DD; &#xC81C;&#xD55C; &#xC18D;&#xB3C4; &#xC99D;&#xAC15;&#xB41C; 2 &#xAC00;&#xB2E5; &#xD569;&#xC131; &#xACB0;&#xACFC; tyrphostin &#xC804;&#xCC98;&#xB9AC;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xADF9;&#xBCF5; &#xB420; &#xC218; &#xC124;&#xBA85;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xACB0;&#xACFC; &#xC778;&#xAC04; CD34(+)CD38(-) &#xC904;&#xAE30; &#xC138;&#xD3EC;&#xB97C; &#xC6D0;&#xC2DC;, &#xBB34;&#xBD80;&#xD558; rAAV &#xC911;&#xC7AC; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xC774;&#xB3D9;&#xC758; &#xCCAB; &#xBC88;&#xC9F8; &#xB370;&#xBAA8;&#xB97C; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0B4;&#xACE0; nondividing CD34(+)CD38(-) HSCs rAAV &#xBCC0;&#xD658;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xCD5C;&#xC801;&#xC758; CD34(+) &#xBAA9;&#xD45C;&#xB294; &#xACF5;&#xAC1C;.

&#xC778;&#xAC04;&#xC758; CD34 &#xC591;&#xC131; &#xC870; &#xD608; &#xC904;&#xAE30; &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xBB34;&#xBD80;&#xD558; &#xC9D1;&#xB2E8;&#xAC04; &#xC548;&#xC815;&#xC801;&#xC778; &#xC7AC;&#xC870;&#xD569; adeno &#xC81C;&#xD734;&#xD574; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; 2 &#xD615; &#xBCC0;&#xD658;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC120;&#xD638; &#xB300;&#xC0C1;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Hemos demostrado anteriormente recombinante viral adeno-asociado (rAAV) transducci&#xF3;n de recursos humanos CD34 (+) las c&#xE9;lulas madre hematopoy&#xE9;ticas (HSC), capaces de injerto de serie en vivo. Aqu&#xED; se eval&#xFA;a la capacidad de rAAV2 para mediar en la transferencia de genes en la que no se dividen, en reposo, primitiva CD34 (+) las c&#xE9;lulas subdivididas sobre la base de las enfermedades metab&#xF3;licas, mit&#xF3;tico, y las propiedades fenot&#xED;picas. Los resultados revelaron que CD34 (+) c&#xE9;lulas de la m&#xE9;dula CD38 () son los m&#xE1;s latente, existen principalmente en G (0) en forma aislada y es la &#xFA;nica poblaci&#xF3;n que no se dividen a permanecer durante toda la exposici&#xF3;n a la libre rAAV. A pesar de diferencias significativas en las extensas capacidades clonog&#xE9;nicos de CD34 (+) subconjuntos en las culturas del estroma, la frecuencia de rAAV marcado de colonias derivadas de progenitores primitivos fue similar en las tres poblaciones, lo que sugiere que ambos progenitores primitivos y m&#xE1;s diferenciada fueron inicialmente transducidas a niveles iguales . Despu&#xE9;s de transducci&#xF3;n, los genomas rAAV episomal e integrado fueron detectados en todas las c&#xE9;lulas CD34 (+) subconjuntos. Sin embargo, las c&#xE9;lulas m&#xE1;s quiescentes muestran niveles m&#xE1;s altos de rAAV integrado que hicieron las c&#xE9;lulas que se dividen r&#xE1;pidamente. Es importante destacar que, estable a largo plazo la integraci&#xF3;n s&#xF3;lo se observ&#xF3; en el m&#xE1;s primitivo, en reposo CD34 (+) CD38 (-) subconjunto, lo que indica que este compartimiento HSC cuenta con el sustrato preferido para la transducci&#xF3;n de rAAV2 estable. Anteriormente se describen limitaciones tasa a la expresi&#xF3;n del transg&#xE9;n se observaron en transducidas CD34 (+) y las c&#xE9;lulas podr&#xED;a ser superado por el pretratamiento tyrphostin, lo que result&#xF3; en aumentada segunda l&#xED;nea de s&#xED;ntesis. Estos resultados representan la primera demostraci&#xF3;n de la transferencia de genes rAAV mediada por primitivos, en reposo humanos CD34 (+) CD38 (-) las c&#xE9;lulas madre y ponen de manifiesto que no se dividen CD34 (+) CD38 (-) Las HSC son el &#xF3;ptimo CD34 (+) objetivos para rAAV transducci&#xF3;n.

Las subpoblaciones de reposo de humanos CD34-positivas las c&#xE9;lulas madre hematopoy&#xE9;ticas son blancos preferidos para recombinante estable adeno-asociado virus de tipo 2 Transducci&#xF3;n

Die Entwicklung und Entstehung der h&auml;matopoetischen Stammzellen umfasst eine Reihe von streng geregelte molekularen Ereignisse, die nicht gut charakterisiert sind. Gens hematopoietically exprimierten Homeobox (Hhex), ein Mitglied der Familie Homeobox gen, ist ein wesentlicher Regulator der Embryogenese und der Entwicklung von h&auml;matopoetischen Vorl&auml;uferzellen. Um zu untersuchen, die Rolle des Hhex bei Blutbildung angepasst wir einem murinen embryonalen Stammzellen (ES) Zelle Coculture System, in welchem ES Zellen in CD41(+) und CD45(+) in-vitro-h&auml;matopoetische Vorl&auml;uferzellen differenzieren k&ouml;nnen. Unsere Ergebnisse zeigen, dass neben der verz&ouml;gerten H&auml;mangioblast Entwicklung, Hhex(-/-) ES abgeleitete Nachkommenschaft als CD41(+) und CD41(+)c-kit(+) Zellen oder die fr&uuml;hesten definitiven h&auml;matopoetischen Vorl&auml;uferzellen ansammeln. Dar&uuml;ber hinaus zeigen Hhex(-/-) ES abgeleitete Nachkommen eine deutlich verringerte F&auml;higkeit zu Reifen CD45(+) h&auml;matopoetischen Zellen entwickeln. Der beobachtete R&uuml;ckgang der h&auml;matopoetischen Reifung begleitete geringere Verbreitung, weil Hhex(-/-) CD41(+)CD45(-)c-kit(+) h&auml;matopoetische Vorl&auml;uferzellen in der Fassung-Phase des Zellzyklus angesammelt. So Hhex ist ein wichtiger Regulator der h&auml;matopoetischen Entwicklung und ist notwendig f&uuml;r die Reifung und Proliferation von den fr&uuml;hesten definitiven h&auml;matopoetischen Vorl&auml;uferzellen.

Das Homeobox gen Hhex regelt die fr&uuml;hesten Stadien der endg&uuml;ltigen Blutbildung.

Lo sviluppo e l&#39;emergere delle cellule staminali ematopoietiche comporta una serie di eventi molecolari strettamente regolamentati che non sono ben caratterizzati. Il gene homeobox hematopoietically espresso (Hhex), un membro della famiglia del gene homeobox, &egrave; un regolatore essenziale dell&#39;embriogenesi e sviluppo progenitrici ematopoietiche. Per indagare il ruolo di Hhex nell&#39;ematopoiesi abbiamo adattato un sistema di coculture cell staminali embrionali murini (ES), in cui ES cellule possono differenziarsi in CD41(+) e CD45(+) progenitori ematopoietici in vitro. I nostri risultati mostrano che oltre a sviluppo ritardato hemangioblast, progenie derivata da Hhex(-/-) ES si accumulano come cellule CD41(+) e CD41(+)c-kit(+), o pi&ugrave; antichi progenitori ematopoietici definitivi. Inoltre, progenie derivata ES Hhex(-/-) visualizzare una significativamente ridotta capacit&agrave; di trasformarsi in cellule emopoietiche mature CD45(+). La riduzione osservata nella maturazione ematopoietiche era accompagnata da proliferazione ridotta, perch&eacute; Hhex(-/-) CD41(+)CD45(-)c-kit(+) progenitori ematopoietici accumulato nella fase 05 del ciclo cellulare. Cos&igrave;, Hhex &egrave; un regolatore critico dello sviluppo ematopoietico ed &egrave; necessario per la maturazione e la proliferazione dei primi progenitori ematopoietici definitivi.

Il gene homeobox Hhex regola i primi stadi dell&#39;emopoiesi definitiva.

&#x9020;&#x8840;&#x5E79;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x958B;&#x767A;&#x3068;&#x51FA;&#x73FE;&#x306F;&#x5341;&#x5206;&#x306B;&#x7279;&#x5FB4;&#x4ED8;&#x3051;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x53B3;&#x5BC6;&#x306B;&#x5236;&#x5FA1;&#x5206;&#x5B50;&#x306E;&#x4E00;&#x9023;&#x306E;&#x30A4;&#x30D9;&#x30F3;&#x30C8;&#x304C;&#x542B;&#x307E;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002; hematopoietically&#x8868;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x30DB;&#x30E1;&#x30AA;&#x30DC;&#x30C3;&#x30AF;&#x30B9;&#xFF08;Hhex&#xFF09;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x3001;&#x30DB;&#x30E1;&#x30AA;&#x30DC;&#x30C3;&#x30AF;&#x30B9;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x30D5;&#x30A1;&#x30DF;&#x30EA;&#x30FC;&#x306E;&#x30E1;&#x30F3;&#x30D0;&#x30FC;&#x306F;&#x3001;&#x80DA;&#x5F62;&#x6210;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x9020;&#x8840;&#x524D;&#x99C6;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x958B;&#x767A;&#x306E;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x56E0;&#x5B50;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3002;&#x9020;&#x8840;&#x306B;Hhex&#x306E;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x8ABF;&#x3079;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306F;ES&#x7D30;&#x80DE;&#x304C;CD41&#xFF08;+&#xFF09;&#x3068;CD45&#xFF08;+&#xFF09;&#x3092;in vitro&#x3067;&#x9020;&#x8840;&#x524D;&#x99C6;&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x5206;&#x5316;&#x3067;&#x304D;&#x308B;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x306E;&#x80DA;&#x6027;&#x5E79;&#xFF08;ES&#xFF09;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x5171;&#x57F9;&#x990A;&#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E0;&#x3092;&#x9069;&#x5FDC;&#x3057;&#x305F;&#x3002; &#xFF08; -  /  - &#xFF09;ES&#x7531;&#x6765;&#x306E;&#x5B50;&#x5B6B;CD41&#xFF08;+&#xFF09;&#x3068;CD41&#xFF08;+&#xFF09;&#x306F;c-kit&#xFF08;+&#xFF09;&#x7D30;&#x80DE;&#x3001;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x521D;&#x671F;&#x306E;&#x6C7A;&#x5B9A;&#x7684;&#x306A;&#x9020;&#x8840;&#x524D;&#x99C6;&#x7D30;&#x80DE;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x84C4;&#x7A4D;&#x6211;&#x3005;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x306F;&#x3001;&#x9045;&#x5EF6;&#x8840;&#x7BA1;&#x82BD;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x958B;&#x767A;&#x306B;&#x52A0;&#x3048;&#x3066;&#x3001;Hhex&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3059;&#x3002;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x3001;Hhex&#xFF08; -  /  - &#xFF09;ES&#x7531;&#x6765;&#x306E;&#x5B50;&#x5B6B;&#x306F;&#x3001;&#xFF08;+&#xFF09;CD45&#x6210;&#x719F;&#x9020;&#x8840;&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x767A;&#x5C55;&#x3059;&#x308B;&#x80FD;&#x529B;&#x304C;&#x5927;&#x5E45;&#x306B;&#x6E1B;&#x5C11;&#x3092;&#x8868;&#x793A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002; &#xFF08; -  /  - &#xFF09;CD41&#xFF08;+&#xFF09;CD45&#xFF08; - &#xFF09;&#x7D30;&#x80DE;&#x5468;&#x671F;&#x306E;G&#xFF08;2&#xFF09;&#x306E;&#x6BB5;&#x968E;&#x3067;&#x84C4;&#x7A4D;&#x3055;&#x308C;&#x305F;c-kit&#x306E;&#xFF08;+&#xFF09;&#x9020;&#x8840;&#x524D;&#x99C6;&#x7D30;&#x80DE;&#x3001;&#x9020;&#x8840;&#x306E;&#x6210;&#x719F;&#x3067;&#x89B3;&#x5BDF;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x524A;&#x6E1B;&#x304C;Hhex&#x306E;&#x3067;&#x3001;&#x6E1B;&#x5C11;&#x3057;&#x5897;&#x6B96;&#x3092;&#x4F34;&#x3063;&#x3066;&#x3044;&#x305F;&#x3002;&#x3057;&#x305F;&#x304C;&#x3063;&#x3066;&#x3001;Hhex&#x306F;&#x3001;&#x9020;&#x8840;&#x958B;&#x767A;&#x306E;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x56E0;&#x5B50;&#x3067;&#x3042;&#x308A;&#x3001;&#x6700;&#x53E4;&#x306E;&#x6C7A;&#x5B9A;&#x7684;&#x306A;&#x9020;&#x8840;&#x524D;&#x99C6;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x6210;&#x719F;&#x3068;&#x5897;&#x6B96;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x5FC5;&#x8981;&#x3067;&#x3059;&#x3002;

&#x30DB;&#x30E1;&#x30AA;&#x30DC;&#x30C3;&#x30AF;&#x30B9;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;Hhex&#x306F;&#x6C7A;&#x5B9A;&#x7684;&#x9020;&#x8840;&#x306E;&#x521D;&#x671F;&#x6BB5;&#x968E;&#x3092;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x3059;&#x308B;

&#xAC1C;&#xBC1C; &#xBC0F; &#xC870; &#xD608; &#xC904;&#xAE30; &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xCD9C;&#xD604; &#xC798; &#xD2B9;&#xC9D5; &#xB418;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xC5C4;&#xACA9; &#xD558; &#xAC8C; &#xADDC;&#xC81C; &#xBD84;&#xC790; &#xC774;&#xBCA4;&#xD2B8;&#xC758; &#xC77C;&#xB828;&#xC744; &#xD3EC;&#xD568; &#xD55C;&#xB2E4;. Homeobox &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xAC00;&#xC871;&#xC758; &#xC77C;&#xC6D0; (Hhex) hematopoietically &#xD45C;&#xD604;&#xB41C; homeobox &#xC720;&#xC804;&#xC790; embryogenesis &#xBC0F; &#xC870; &#xD608; &#xC2DC; &#xC870; &#xAC1C;&#xBC1C;&#xC758; &#xD544;&#xC218; &#xB808; &#xADE4; &#xB808;&#xC774; &#xD130; &#xC774;&#xB2E4;. &#xC870;&#xC5D0; Hhex&#xC758; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xC870;&#xC0AC; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD574; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; ES &#xC138;&#xD3EC; &#xC0DD;&#xCCB4; &#xC678;&#xC5D0;&#xC11C; CD41(+) &#xBC0F; CD45(+) &#xC870; &#xD608; progenitors&#xB85C; &#xAD6C;&#xBCC4;&#xD560; &#xC218; murine &#xBC30;&#xC544; &#xC904;&#xAE30; (ES&#xC758;) &#xC138;&#xD3EC; coculture &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C;&#xC744; &#xC801;&#xC751;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xACB0;&#xACFC; &#xC9C0;&#xC5F0;&#xB41C; hemangioblast &#xAC1C;&#xBC1C; &#xBFD0;&#xB9CC; &#xC544;&#xB2C8;&#xB77C; &#xC790;&#xC190; Hhex(-/-) ES &#xD30C;&#xC0DD; &#xB41C; CD41(+) &#xBC0F; CD41(+)c-kit(+) &#xC140; &#xB610;&#xB294; &#xCD08;&#xAE30; &#xD655;&#xC2E4; &#xD55C; &#xC870; &#xD608; progenitors &#xCD95;&#xC801;&#xC744; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC900;&#xB2E4;. &#xB610;&#xD55C;, Hhex(-/-) ES &#xD30C;&#xC0DD; &#xB41C; &#xC790;&#xC190; &#xC131;&#xC219; CD45(+) &#xC870; &#xD608; &#xC138;&#xD3EC;&#xB85C; &#xAC1C;&#xBC1C; &#xD558;&#xB294; &#xD604;&#xC800; &#xD558; &#xAC8C; &#xAC10;&#xC18C; &#xB41C; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC744; &#xD45C;&#xC2DC; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB54C;&#xBB38;&#xC5D0; &#xC870; &#xD608; progenitors Hhex(-/-) CD41(+)CD45(-)c-kit(+) &#xC138;&#xD3EC; &#xC8FC;&#xAE30;&#xC758; G(2) &#xB2E8;&#xACC4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xCD95;&#xC801; &#xB41C; &#xC870; &#xD608; &#xC131;&#xC219;&#xC5D0;&#xC11C; &#xAD00;&#xCC30; &#xB41C; &#xAC10;&#xC18C; &#xAC10;&#xC18C; &#xD655;&#xC0B0;&#xC5D0; &#xB3D9;&#xD589; &#xD588;&#xB2E4;. &#xB530;&#xB77C;&#xC11C;, Hhex hematopoietic &#xAC1C;&#xBC1C;&#xC758; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xB808; &#xADE4; &#xB808;&#xC774; &#xD130; &#xC774;&#xBA70; &#xC131;&#xC219; &#xBC0F; &#xCD08;&#xAE30; &#xD655;&#xC2E4; &#xD55C; &#xC870; &#xD608; progenitors&#xC758; &#xD655;&#xC0B0;&#xC744; &#xC704;&#xD574; &#xD544;&#xC694; &#xD558;&#xB2E4;.

Hhex homeobox &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xC870;&#xC808; &#xD655;&#xC2E4; &#xD55C; &#xC870;&#xC758; &#xCD08;&#xAE30; &#xB2E8;&#xACC4;.

Le d&#xE9;veloppement et l&#x26;#39;&#xE9;mergence de la cellule souche h&#xE9;matopo&#xEF;&#xE9;tique implique une s&#xE9;rie de strictement r&#xE9;glement&#xE9;s &#xE9;v&#xE9;nements mol&#xE9;culaires qui ne sont pas bien caract&#xE9;ris&#xE9;es. Le hematopoietically exprim&#xE9; hom&#xE9;obo&#xEE;te (HHEX) g&#xE8;ne, un membre de la famille des g&#xE8;nes &#xE0; hom&#xE9;obo&#xEE;te, est un r&#xE9;gulateur essentiel de l&#x26;#39;embryogen&#xE8;se et le d&#xE9;veloppement prog&#xE9;niteurs h&#xE9;matopo&#xEF;&#xE9;tiques. Pour &#xE9;tudier le r&#xF4;le des HHEX dans l&#x26;#39;h&#xE9;matopo&#xEF;&#xE8;se nous avons adapt&#xE9; une murin souches embryonnaires (ES) syst&#xE8;me de coculture cellulaire, dans lequel des cellules souches embryonnaires peuvent se diff&#xE9;rencier en cellules CD41 (+) et CD45 (+) prog&#xE9;niteurs h&#xE9;matopo&#xEF;&#xE9;tiques in vitro. Nos r&#xE9;sultats montrent que, en plus au d&#xE9;veloppement h&#xE9;mangioblaste retard&#xE9;e, HHEX (- / -) ES-d&#xE9;riv&#xE9;e descendance s&#x26;#39;accumulent sous forme de CD41 (+) et CD41 (+) de c-kit (+) des cellules, ou les premiers prog&#xE9;niteurs h&#xE9;matopo&#xEF;&#xE9;tiques d&#xE9;finitifs. En outre, HHEX (- / -)-ES d&#xE9;riv&#xE9;e descendance afficher une capacit&#xE9; sensiblement r&#xE9;duite &#xE0; se d&#xE9;velopper en CD45 matures (+) des cellules h&#xE9;matopo&#xEF;&#xE9;tiques. La r&#xE9;duction observ&#xE9;e dans la maturation h&#xE9;matopo&#xEF;&#xE9;tique a &#xE9;t&#xE9; accompagn&#xE9;e par une prolif&#xE9;ration r&#xE9;duite, parce que HHEX (- / -) CD41 (+) CD45 (-) c-kit (+) prog&#xE9;niteurs h&#xE9;matopo&#xEF;&#xE9;tiques accumul&#xE9;s dans le G (2) la phase du cycle cellulaire. Ainsi, HHEX est un r&#xE9;gulateur essentiel du d&#xE9;veloppement h&#xE9;matopo&#xEF;&#xE9;tique et est n&#xE9;cessaire pour la maturation et la prolif&#xE9;ration des premiers prog&#xE9;niteurs h&#xE9;matopo&#xEF;&#xE9;tiques d&#xE9;finitifs.

Le g&#xE8;ne hom&#xE9;otique HHEX R&#xE9;glemente les premi&#xE8;res &#xE9;tapes de l&#x26;#39;h&#xE9;matopo&#xEF;&#xE8;se d&#xE9;finitive

&#x9020;&#x8840;&#x5E72;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x51FA;&#x73B0;&#x4E0E;&#x53D1;&#x5C55;&#x6D89;&#x53CA;&#x4E00;&#x7CFB;&#x5217;&#x7684;&#x76D1;&#x7BA1;&#x4E25;&#x683C;&#x7684;&#x5206;&#x5B50;&#x4E8B;&#x4EF6;&#x7684;&#x4E0D;&#x597D;&#x7684;&#x7279;&#x70B9;&#x3002;Hematopoietically &#x8868;&#x793A;&#x540C;&#x6E90;&#x76D2;&#x57FA;&#x56E0; (Hhex) &#x57FA;&#x56E0;&#x7684;&#x540C;&#x6E90;&#x76D2;&#x57FA;&#x56E0;&#x5BB6;&#x65CF;&#xFF0C;&#x6210;&#x5458;&#x662F;&#x80DA;&#x80CE;&#x53D1;&#x751F;&#x4E0E;&#x9020;&#x8840;&#x7956;&#x53D1;&#x5C55;&#x5FC5;&#x4E0D;&#x53EF;&#x5C11;&#x7684;&#x76D1;&#x7BA1;&#x673A;&#x6784;&#x3002;&#x8C03;&#x67E5;&#x5728;&#x9020;&#x8840;&#x529F;&#x80FD;&#x4E2D; Hhex &#x7684;&#x4F5C;&#x7528;&#x6211;&#x4EEC;&#x8C03;&#x6574;&#x4E2D;&#x7684; ES &#x7EC6;&#x80DE;&#x53EF;&#x4EE5;&#x5206;&#x5316;&#x4E3A; CD41(+) &#x548C; CD45(+) &#x9020;&#x8840;&#x7956;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4F53;&#x5916; (ES) &#x7684;&#x5C0F;&#x9F20;&#x80DA;&#x80CE;&#x5E72;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5171;&#x57F9;&#x517B;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x7ED3;&#x679C;&#x663E;&#x793A;&#x5EF6;&#x8FDF;&#x7684; hemangioblast &#x53D1;&#x5C55; Hhex(-/-) ES &#x6E90;&#x6027;&#x540E;&#x4EE3;&#x79EF;&#x7D2F;&#x4E3A; CD41(+) &#x548C; CD41(+)c-kit(+) &#x7684;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x6216;&#x6700;&#x65E9;&#x660E;&#x786E;&#x9020;&#x8840;&#x7956;&#x7EC6;&#x80DE;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;Hhex(-/-) ES &#x6E90;&#x6027;&#x540E;&#x4EE3;&#x663E;&#x793A;&#x53D1;&#x5C55;&#x6210;&#x4E3A;&#x6210;&#x719F;&#x7684; CD45(+) &#x9020;&#x8840;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x80FD;&#x529B;&#x5927;&#x5927;&#x964D;&#x4F4E;&#x3002;&#x89C2;&#x5BDF;&#x5230;&#x7684;&#x51CF;&#x5C11;&#x9020;&#x8840;&#x6210;&#x719F;&#x966A;&#x540C;&#x51CF;&#x5C11;&#x6269;&#x6563;&#xFF0C;&#x56E0;&#x4E3A; Hhex(-/-) CD41(+)CD45(-)c-kit(+) &#x9020;&#x8840;&#x7956;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5728;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5468;&#x671F;&#x7684; G(2) &#x9636;&#x6BB5;&#x79EF;&#x7D2F;&#x3002;&#x56E0;&#x6B64;&#xFF0C;Hhex &#x662F;&#x9020;&#x8840;&#x7EC6;&#x80DE;&#x53D1;&#x80B2;&#x7684;&#x5173;&#x952E;&#x8C03;&#x8282;&#x5668;&#xFF0C;&#x662F;&#x6700;&#x65E9;&#x660E;&#x786E;&#x9020;&#x8840;&#x7956;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x589E;&#x6B96;&#x4E0E;&#x6210;&#x719F;&#x7684;&#x5FC5;&#x8981;&#x6761;&#x4EF6;&#x3002;

&#x540C;&#x6E90;&#x76D2;&#x57FA;&#x56E0; Hhex &#x89C4;&#x5B9A;&#x4E86;&#x660E;&#x786E;&#x7684;&#x9020;&#x8840;&#x529F;&#x80FD;&#x7684;&#x6700;&#x65E9;&#x9636;&#x6BB5;&#x3002;

The development and emergence of the hematopoietic stem cell involves a series of tightly regulated molecular events that are not well characterized. The hematopoietically expressed homeobox (Hhex) gene, a member of the homeobox gene family, is an essential regulator of embryogenesis and hematopoietic progenitor development. To investigate the role of Hhex in hematopoiesis we adapted a murine embryonic stem (ES) cell coculture system, in which ES cells can differentiate into CD41(+) and CD45(+) hematopoietic progenitors in vitro. Our results show that in addition to delayed hemangioblast development, Hhex(-/-) ES-derived progeny accumulate as CD41(+) and CD41(+)c-kit(+) cells, or the earliest definitive hematopoietic progenitors. In addition, Hhex(-/-) ES-derived progeny display a significantly reduced ability to develop into mature CD45(+) hematopoietic cells. The observed reduction in hematopoietic maturation was accompanied by reduced proliferation, because Hhex(-/-) CD41(+)CD45(-)c-kit(+) hematopoietic progenitors accumulated in the G(2) phase of the cell cycle. Thus, Hhex is a critical regulator of hematopoietic development and is necessary for the maturation and proliferation of the earliest definitive hematopoietic progenitors.

The homeobox gene Hhex regulates the earliest stages of definitive hematopoiesis.

El desarrollo y la aparici&#xF3;n de las c&#xE9;lulas madres hematopoy&#xE9;ticas implica una serie de eventos moleculares estrictamente regulados que no est&#xE1;n bien caracterizados. El hematopoietically expres&#xF3; homeobox (HHEX) de genes, un miembro de la familia de genes homeobox, es un regulador esencial de la embriog&#xE9;nesis y el desarrollo de c&#xE9;lulas progenitoras hematopoy&#xE9;ticas. Para investigar el papel de HHEX en la hematopoyesis hemos adaptado un rat&#xF3;n c&#xE9;lulas madre embrionarias (ES) sistema de co-cultivo de c&#xE9;lulas, en la que las c&#xE9;lulas madre embrionarias pueden diferenciarse en CD41 (+) y CD45 (+) progenitores hematopoy&#xE9;ticos in vitro. Nuestros resultados muestran que adem&#xE1;s del desarrollo hemangioblasto retraso, HHEX (- / -) ES derivada de la progenie se acumulan como CD41 (+) y CD41 (+) las c&#xE9;lulas c-kit (+), o los primeros progenitores hematopoy&#xE9;ticos definitivas. Adem&#xE1;s, HHEX (- / -) ES-derivado progenie mostrar una capacidad significativamente reducida a convertirse en madura CD45 (+) las c&#xE9;lulas hematopoy&#xE9;ticas. La reducci&#xF3;n observada en la maduraci&#xF3;n hematopoy&#xE9;tica fue acompa&#xF1;ado por una proliferaci&#xF3;n reducida, porque HHEX (- / -) CD41 (+) CD45 (-) de c-kit (+) progenitores hematopoy&#xE9;ticos acumulados en el G (2) la fase del ciclo celular. As&#xED;, HHEX es un regulador cr&#xED;tico del desarrollo hematopoy&#xE9;tico y es necesario para la maduraci&#xF3;n y proliferaci&#xF3;n de los primeros progenitores hematopoy&#xE9;ticos definitivas.

Article	Year
Recombinant AAV2 transduction of primitive human hematopoietic stem cells capable of serial engraftment in immune-deficient mice. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America\| PubMed ID: 16043711	2005
Quiescent subpopulations of human CD34-positive hematopoietic stem cells are preferred targets for stable recombinant adeno-associated virus type 2 transduction. Human gene therapy\| PubMed ID: 17638572	2007
The homeobox gene Hhex regulates the earliest stages of definitive hematopoiesis. Blood\| PubMed ID: 20472829	2010

Helicia Paz

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