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Modified Annexin V/Propidium Iodide Apoptosis Assay For Accurate Assessment of Cell Death

Studies of cellular apoptosis have been significantly impacted since the introduction of flow cytometry-based methods. Propidium iodide (PI) is widely ...

University of Alberta

&#x9ECF;&#x9ECF;&#x86CB;&#x767D; 1&#xFF0C;&#x91CD;&#x8981;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x7684;&#x4E0A;&#x76AE;&#x7EC6;&#x80DE;&#x548C;&#x4E0A;&#x76AE;&#x6E90;&#x6027;&#x80BF;&#x7624;&#xFF0C;&#x8FD8;&#x8868;&#x793A;&#x5BF9;&#x6D3B;&#x5316; T &#x7EC6;&#x80DE;&#xFF0C;&#x663E;&#x793A;&#x6B63;&#x9762;&#x548C;&#x8D1F;&#x9762;&#x7684;&#x76D1;&#x7BA1;&#x804C;&#x80FD;&#x3002;&#x9ECF;&#x86CB;&#x767D; 1 &#x662F;&#x5426;&#x771F;&#x6B63;&#x7684;&#x8C03;&#x63A7;&#x86CB;&#x767D;&#x7684; T &#x7EC6;&#x80DE;&#x548C;&#x6761;&#x4EF6;&#x5BFC;&#x81F4;&#x9ECF;&#x86CB;&#x767D; 1 &#x8F85;&#x4E0E; co-inhibition&#xFF0C;&#x5B83;&#x662F;&#x76EE;&#x524D;&#x672A;&#x77E5;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x53D1;&#x73B0;&#x5BF9; T &#x8C03;&#x8282;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x5927;&#x591A;&#x6570;&#x8868;&#x793A;&#x9ECF;&#x86CB;&#x767D; 1 (&#x5728;&#x4EBA;&#x7C7B;&#x4E2D;&#x7684; CD4(+)/CD25(+)/FoxP3(+)) (&gt; 90%) &#x548C; CD3/&#x9ECF;&#x86CB;&#x767D; 1 &#x8F85;&#x5BFC;&#x81F4; T &#x8C03;&#x8282;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x6570;&#x76EE;&#x589E;&#x52A0;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x8FD8;&#x53D1;&#x73B0;&#x514D;&#x75AB;&#x8C03;&#x8282;&#x529F;&#x80FD;&#x662F;&#x53D6;&#x51B3;&#x4E8E;&#x9644;&#x4EF6;&#x7684;&#x6570;&#x91CF; &#xFF08;CD3(-)) &#x7EC6;&#x80DE;&#x76EE;&#x524D;&#xFF0C;&#x4E0E; co-inhibition &#x53D1;&#x751F;&#x4E0E; &lt; 5-10%&#x8F85;&#x52A9;&#x7EC6;&#x80DE;&#x867D;&#x7136;&#x8F85;&#x5F00;&#x5934;&#x7684; ~ 50%&#x8F85;&#x52A9;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x91CD;&#x7EC4;&#x3002;Co-inhibition &#x8FD8;&#x53D1;&#x73B0;&#x4E0D;&#x4F1A;&#x51CB;&#x4EA1;&#xFF0C;&#x4F46;&#x5355;&#x72EC;&#x548C;&#x672A;&#x77E5;&#x7684;&#x901A;&#x8DEF;&#x7684;&#x7ED3;&#x679C;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E00;&#x6570;&#x636E;&#x8FDB;&#x4E00;&#x6B65;&#x6982;&#x62EC;&#x4E3A;&#x80FD;&#x591F;&#x7ED9;&#x4E88;&#x6B63;&#x9762;&#x6216;&#x8D1F;&#x9762;&#x7684;&#x523A;&#x6FC0; T &#x7EC6;&#x80DE;&#x514D;&#x75AB;&#x8C03;&#x8282;&#x86CB;&#x767D;&#x9ECF;&#x86CB;&#x767D; 1&#x3002;

&#x9ECF;&#x9ECF;&#x86CB;&#x767D; 1 &#x5BF9; T &#x8C03;&#x8282;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8868;&#x793A;&#xFF1A; &#x5728;&#x8F85;&#x548C; co-inhibition &#x7684;&#x529F;&#x80FD;&#x3002;

MUC1 mucin, an important protein of epithelial cells and epithelial-derived carcinomas, is also expressed on activated T cells, showing both positive and negative regulatory functions. It is currently unknown whether MUC1 is a true regulatory protein of T cells and what conditions lead to MUC1 co-stimulation versus co-inhibition. We have found that MUC1 is expressed on the majority of T-regulatory cells (CD4(+)/CD25(+)/FoxP3(+)) in humans (>90%) and that CD3/MUC1 co-stimulation leads to an increased number of T-regulatory cells. We also discovered that the immunoregulatory function is dependent upon the number of accessory (CD3(-)) cells present, with co-inhibition occurring with <5-10% accessory cells while co-stimulation begins with a reconstitution of ~50% accessory cells. Co-inhibition was also found to not be the result of the apoptosis but a separate and unknown pathway. This data further characterizes MUC1 as an immunoregulatory protein of T cells capable of giving a positive or negative stimulus.

MUC1 mucin is expressed on human T-regulatory cells: function in both co-stimulation and co-inhibition.

Mucine MUC1, une prot&eacute;ine importante des cellules &eacute;pith&eacute;liales et des carcinomes &eacute;pith&eacute;liaux d&eacute;riv&eacute;, est &eacute;galement exprim&eacute;e sur les lymphocytes T activ&eacute;s, montrant les fonctions r&eacute;glementaires tant positives que n&eacute;gatives. On ignore actuellement si MUC1 est une vraie prot&eacute;ine r&eacute;gulatrice des cellules T et ce que les conditions conduisent &agrave; MUC1 co-stimulation contre co-inhibition. Nous avons trouv&eacute; que MUC1 est exprim&eacute; sur la majorit&eacute; des cellules T r&eacute;gulatrices (CD4(+)/CD25(+)/FoxP3(+)) chez l&#39;humain (&gt; 90 %) CD3/MUC1 co-stimulation qui provoque un augmentation du nombre de cellules T-r&eacute;gulatrices. Nous avons aussi d&eacute;couvert que la fonction immunor&eacute;gulatrices d&eacute;pend du nombre d&#39;accessoire (CD3(-)) cellules pr&eacute;sentes, avec co-inhibition qui se produisent avec &lt; cellules accessoires de 5 &agrave; 10 % alors que la co-stimulation commence par une reconstitution des cellules accessoires environ 50 %. Co-inhibition s&#39;est av&eacute;r&eacute; &eacute;galement pour ne pas &ecirc;tre le r&eacute;sultat de l&#39;apoptose, mais une voie distincte et inconnue. Ces donn&eacute;es suppl&eacute;mentaires MUC1 qualifie d&#39;une prot&eacute;ine immunor&eacute;gulatrices des cellules T capables de donner une impulsion positive ou n&eacute;gative.

La mucine MUC1 est exprim&eacute;e sur les cellules humaines T r&eacute;gulateurs : fonction co-stimulation et co-inhibition.

MUC1 Mucin, ein wichtiges Protein von Epithelzellen und epitheliale abgeleiteten Karzinomen, dr&uuml;ckt sich auch auf aktivierten T-Zellen, sowohl positive als auch negative regulatorische Funktionen anzeigen. Es ist unbekannt, ob MUC1 ist eine wahre regelndes Protein von T-Zellen und was Bedingungen zu MUC1-Co-stimulation im Vergleich zu Co-inhibition f&uuml;hren. Wir haben festgestellt, dass in der Mehrzahl der regulatorischen T Zellen MUC1 ausgedr&uuml;ckt wird (CD4(+)/CD25(+)/FoxP3(+)) beim Menschen (&gt; 90 %) und dass CD3/MUC1 Co-stimulation zu einem Anstieg der regulatorischen T Zellen f&uuml;hrt. Wir entdeckten auch, dass die immunregulatorische Funktion abh&auml;ngig von der Anzahl der Zubeh&ouml;r (CD3(-)) Zellen pr&auml;sentieren, mit Co-inhibition, die mit &lt; 5 &ndash; 10 % Zubeh&ouml;r Zellen w&auml;hrend Co-stimulation mit eine Rekonstitution von ~ 50 % Zubeh&ouml;r Zellen beginnt. Co-Inhibition wurde auch gefunden, um nicht das Ergebnis der Apoptose, sondern einen separaten und unbekannten Weg sein. Diese Daten weiter charakterisiert MUC1 als eine immunregulatorische Protein von T-Zellen zu positiven oder negativen Impulse zu geben vermag.

MUC1 Mucin dr&uuml;ckt sich auf menschliche regulatorischen T Zellen: Funktion in Co-stimulation und Co-inhibition.

La mucina MUC1, un&#39;importante proteina delle cellule epiteliali e carcinomi epiteliali derivate, &egrave; anche espressa su cellule T attivate, mostrando le funzioni di regolamentazione sia positive che negative. &Egrave; attualmente sconosciuto se MUC1 &egrave; una vera regolamentazione proteina delle cellule T e cosa portano condizioni di MUC1 co-stimulation versus co-inhibition. Abbiamo trovato che MUC1 &egrave; espresso nella maggior parte delle cellule T regolatorie (CD4(+)/CD25(+)/FoxP3(+)) negli esseri umani (&amp;gt; 90%) e che co-stimulation CD3/MUC1 porta ad un aumento del numero di cellule T regolatorie. Abbiamo anche scoperto che la funzione immunoregulatory &egrave; dipendente al numero di accessori (presentano cellule CD3(-)), con co-inhibition che si verificano con &lt; 5-10% di cellule accessorio mentre co-stimulation comincia con una ricostituzione delle cellule accessorio ~ 50%. Co-inhibition &egrave; stato anche trovato per non essere il risultato dell&#39;apoptosi, ma un percorso separato e sconosciuto. Questo dati ulteriormente caratterizzano MUC1 come una proteina immunoregulatory di cellule T in grado di dare uno stimolo positivo o negativo.

La mucina MUC1 &egrave; espresso sulle cellule T-regolatorie umane: funzione sia co-stimulation che co-inhibition.

MUC1 &#x30E0;&#x30C1;&#x30F3;&#x3001;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x4E0A;&#x76AE;&#x7D30;&#x80DE;&#x3068;&#x4E0A;&#x76AE;&#x7531;&#x6765;&#x764C;&#x306F;&#x6B63;&#x3068;&#x8CA0;&#x306E;&#x4E21;&#x65B9;&#x306E;&#x898F;&#x5B9A;&#x3059;&#x308B;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3092;&#x793A;&#x3059;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316; T &#x7D30;&#x80DE;&#x4E0A;&#x3001;&#x307E;&#x305F;&#x8868;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;MUC1 &#x771F;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E; T &#x7D30;&#x80DE;&#x3068;&#x4F55; co-inhibition &#x5BFE; MUC1 co-stimulation &#x6761;&#x4EF6;&#x306B;&#x3064;&#x306A;&#x304C;&#x308B;&#x304B;&#x3069;&#x3046;&#x304B;&#x3001;&#x305D;&#x308C;&#x306F;&#x73FE;&#x5728;&#x77E5;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3067;&#x3059;&#x3002;MUC1 &#x5236;&#x5FA1; T &#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x5927;&#x534A;&#x306B;&#x8868;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x767A;&#x898B;&#x3057;&#x305F; &#xFF08;&#x4EBA;&#x9593;&#x3067; CD4(+)/CD25(+)/FoxP3(+)) (&#x76EE; 90%) &#x3068; CD3/MUC1 co-stimulation &#x5236;&#x5FA1; T &#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x5897;&#x52A0;&#x306B;&#x3064;&#x306A;&#x304C;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3002;&#x6211;&#x3005; &#x3082;&#x514D;&#x75AB;&#x5236;&#x5FA1;&#x95A2;&#x6570;&#x304C;&#x30A2;&#x30AF;&#x30BB;&#x30B5;&#x30EA;&#x30FC;&#x306E;&#x6570;&#x306B;&#x4F9D;&#x5B58;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x767A;&#x898B; &#xFF08;CD3(-)) &#x7D30;&#x80DE;&#x3092;&#x63D0;&#x793A;&#x3001;co-inhibition &#x306E;&#x767A;&#x751F;&#x3068; &lt; 5-10% &#x30A2;&#x30AF;&#x30BB;&#x30B5;&#x30EA;&#x30FC; co-stimulation ~ 50% &#x30A2;&#x30AF;&#x30BB;&#x30B5;&#x30EA;&#x30FC;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x6EB6;&#x89E3;&#x3092;&#x958B;&#x59CB;&#x4E2D;&#x7D30;&#x80DE;&#x3002;Co-inhibition &#x3082;&#x30A2;&#x30DD;&#x30C8;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9;&#x304C;&#x7D4C;&#x8DEF;&#x5225;&#x3068;&#x672A;&#x77E5;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x3067;&#x306A;&#x3044;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x308F;&#x304B;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x3053;&#x306E;&#x30C7;&#x30FC;&#x30BF;&#x306F;&#x6B63;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x8CA0;&#x306E;&#x523A;&#x6FC0;&#x3092;&#x4E0E;&#x3048;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306E; T &#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x514D;&#x75AB;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x3068;&#x3057;&#x3066; MUC1 &#x3092;&#x7279;&#x5FB4;&#x3065;&#x3051;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

MUC1 &#x30E0;&#x30C1;&#x30F3;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x30D2;&#x30C8; T &#x898F;&#x5236;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x8868;&#x73FE;: co-stimulation &#x3068; co-inhibition &#x306E;&#x4E21;&#x65B9;&#x3067;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3002;

MUC1 mucin, &#xC0C1;&#xD53C; &#xC138;&#xD3EC; &#xBC0F; &#xC0C1;&#xD53C; &#xD30C;&#xC0DD; carcinomas, &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC740; &#xAE0D;&#xC815;&#xC801;&#xC774; &#xACE0; &#xBD80;&#xC815;&#xC801;&#xC778; &#xADDC;&#xC815; &#xD558;&#xB294; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC744; &#xD45C;&#xC2DC; &#xD558;&#xB294; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xB41C; T &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0;&#xB3C4; &#xD45C;&#xD604; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. MUC1 T &#xC138;&#xD3EC;&#xC640; MUC1 co-stimulation co-inhibition &#xB300;&#xB97C; &#xC774;&#xC5B4;&#xC9C8; &#xC0C1;&#xD669;&#xC758; &#xC9C4;&#xC815;&#xD55C; &#xADDC;&#xC81C; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC778;&#xC9C0; &#xD604;&#xC7AC;&#xAE4C;&#xC9C0; &#xC54C;&#xB824;&#xC9C4; &#xC544;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; &#xCC3E;&#xC740; MUC1 &#xADDC;&#xC81C; T &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xB300;&#xBD80;&#xBD84;&#xC758; &#xD45C;&#xD604; (&#xC778;&#xAC04;&#xC5D0;&#xC11C; CD4(+)/CD25(+)/FoxP3(+)) (&amp;gt; 90%) CD3/MUC1 co-stimulation &#xADDC;&#xC81C; T &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xC99D;&#xAC00; &#xC218;&#xB97C; &#xC9C0;&#xB3C4; &#xD558; &#xACE0;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xB610;&#xD55C; immunoregulatory &#xD568;&#xC218;&#xB294; &#xC561;&#xC138;&#xC11C;&#xB9AC;&#xC758; &#xC218;&#xC5D0; &#xB530;&#xB77C; &#xB2E4;&#xB985;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xBC1C;&#xACAC; (CD3(-)) &#xC140; &#xC81C;&#xC2DC;&#xC640; &#xD568;&#xAED8; &#xBC1C;&#xC0DD; &#xD558;&#xB294; co-inhibition&#xC640; &#xD568;&#xAED8; &lt; 5-10% &#xC561;&#xC138;&#xC11C;&#xB9AC; &#xC140; co-stimulation ~ 50% &#xC561;&#xC138;&#xC11C;&#xB9AC; &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xC7AC;&#xAD6C;&#xC131;&#xC73C;&#xB85C; &#xC2DC;&#xC791; &#xD558;&#xB294; &#xB3D9;&#xC548;. Co-inhibition&#xB294; &#xB610;&#xD55C; apoptosis&#xB294; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xBCC4;&#xB3C4; &#xBC0F; &#xC54C; &#xC218; &#xC5C6;&#xB294; &#xD1B5;&#xB85C;&#xC758; &#xACB0;&#xACFC; &#xB418;&#xC9C0; &#xBC1C;&#xACAC; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774; &#xB370;&#xC774;&#xD130;&#xB294; &#xAE0D;&#xC815;&#xC801; &#xC774;&#xAC70;&#xB098; &#xBD80;&#xC815;&#xC801;&#xC778; &#xC790;&#xADF9;&#xC744; &#xC8FC;&#xB294; &#xC218; &#xC788;&#xB294; T &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; immunoregulatory &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC73C;&#xB85C; MUC1 &#xD2B9;&#xC9D5;.

MUC1 mucin &#xC778;&#xAC04;&#xC758; &#xADDC;&#xC81C; T &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0; &#xD45C;&#xD604; &#xB41C;&#xB2E4;: co-stimulation &#xBC0F; co-inhibition &#xD568;&#xC218;.

Mucina MUC1, una importante prote&iacute;na de las c&eacute;lulas epiteliales y carcinomas epiteliales derivadas, tambi&eacute;n se expresa en las c&eacute;lulas T activadas, mostrando las funciones reguladoras tanto positivas como negativas. Se desconoce actualmente MUC1 sea una verdadera prote&iacute;na reguladora de c&eacute;lulas T y lo que las condiciones permitan MUC1 co-stimulation frente a co-inhibition. Hemos encontrado que MUC1 se expresa en la mayor&iacute;a de las c&eacute;lulas T reguladoras (CD4(+)/CD25(+)/FoxP3(+)) en los seres humanos (&gt; 90%) y que co-stimulation CD3/MUC1 conduce a un mayor n&uacute;mero de c&eacute;lulas T reguladoras. Tambi&eacute;n descubrimos que la funci&oacute;n inmunoregulador depende de la cantidad de accesorios (c&eacute;lulas CD3(-)) presentan, con co-inhibition que ocurre con &lt; c&eacute;lulas accesorias de 5-10% mientras que el co-stimulation comienza con una reconstituci&oacute;n de c&eacute;lulas accesorias de ~ 50%. Co-inhibition tambi&eacute;n fue encontrado para no ser el resultado de la apoptosis pero un camino independiente y desconocido. Estos datos m&aacute;s caracterizan MUC1 como una prote&iacute;na inmunoregulador de c&eacute;lulas T capaces de dar un est&iacute;mulo positivo o negativo.

Jeffrey D. Konowalchuk

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