chromatin-immunoprecipitation-assay-for-tissue-specific-genes-using

Chromatin Immunoprecipitation Assay for Tissue-specific Genes using Early-stage Mouse Embryos

Chromatin immunoprecipitation (ChIP) is a powerful tool to identify protein:chromatin interactions that occur in the context of living cells 1-3. This ...

University of Massachusetts Medical School

Notch receptors are processed by gamma-secretase acting in synergy with T cell receptor signaling to sustain peripheral T cell activation. Activated CD4+ T cells differentiate into T helper type 1 (TH1) or TH2 subsets. Molecular cues directing TH1 differentiation include expression of the TH1-specific transcription factor T-bet, encoded by Tbx21. However, the regulation of Tbx21 remains incompletely defined. Here we report that Notch1 can directly regulate Tbx21 through complexes formed on the Tbx21 promoter. In vitro, gamma-secretase inhibitors extinguished expression of Notch, interferon-gamma and Tbx21 in TH1-polarized CD4+ cells, whereas ectopic expression of activated Notch1 restored Tbx21 transcription. In vivo, administration of gamma-secretase inhibitors substantially impeded TH1-mediated disease progression in the mouse experimental autoimmune encephalomyelitis model of multiple sclerosis. Thus, using gamma-secretase inhibitors to modulate Notch signaling may prove beneficial in treating TH1-mediated autoimmunity.

Inhibitors of gamma-secretase block in vivo and in vitro T helper type 1 polarization by preventing Notch upregulation of Tbx21.

&Gamma;-secretase &#x4EE3;&#x7406;&#x4E2D;&#x7684;&#x534F;&#x540C;&#x4F5C;&#x7528;&#x4E0E; T &#x7EC6;&#x80DE;&#x53D7;&#x4F53;&#x4FE1;&#x53F7;&#x6765;&#x7EF4;&#x6301;&#x5916;&#x5468;&#x8840; T &#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x6D3B;&#x5316;&#x5904;&#x7406;&#x69FD;&#x53E3;&#x53D7;&#x4F53;&#x3002;1 &#xFF08;TH1&#xFF09; &#x6216; TH2 &#x4E9A;&#x7FA4;&#xFF0C;&#x6D3B;&#x5316;&#x7684; CD4 + T &#x7EC6;&#x80DE;&#x5206;&#x5316;&#x4E3A; T &#x7684;&#x5E2E;&#x52A9;&#x5668;&#x7C7B;&#x578B;&#x3002;&#x5BFC;&#x6F14; TH1 &#x5206;&#x5316;&#x7684;&#x5206;&#x5B50;&#x7EBF;&#x7D22;&#x5305;&#x62EC; TH1 &#x7279;&#x5B9A;&#x8F6C;&#x5F55;&#x56E0;&#x5B50; T &#x6253;&#x8D4C;&#xFF0C;&#x7F16;&#x7801;&#x7684; Tbx21 &#x7684;&#x8868;&#x8FBE;&#x3002;&#x7136;&#x800C;&#xFF0C;Tbx21 &#x7684;&#x8C03;&#x63A7;&#x4ECD;&#x672A;&#x5B8C;&#x5168;&#x5B9A;&#x4E49;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#x6211;&#x4EEC;&#x62A5;&#x544A; Notch1 &#x53EF;&#x4EE5;&#x76F4;&#x63A5;&#x8C03;&#x8282;&#x901A;&#x8FC7;&#x914D;&#x5408;&#x7269;&#x5F62;&#x6210;&#x7684; Tbx21 &#x542F;&#x52A8;&#x5B50;&#x7684; Tbx21&#x3002;&#x4F53;&#x5916;&#xFF0C;&gamma;-secretase &#x6291;&#x5236;&#x5242;&#x6251;&#x706D;&#x69FD;&#x53E3;&#xFF0C;&#x5E72;&#x6270;&#x7D20;&#x548C; TH1 &#x6781;&#x5316; CD4 + &#x7EC6;&#x80DE;&#xFF0C;Tbx21 &#x7684;&#x8868;&#x8FBE;&#x800C;&#x6D3B;&#x5316; Notch1 &#x5F02;&#x4F4D;&#x8868;&#x8FBE;&#x6062;&#x590D; Tbx21 &#x8F6C;&#x5F55;&#x3002;&#x4F53;&#x5185;&#xFF0C;&gamma;-secretase &#x6291;&#x5236;&#x5242;&#x7BA1;&#x7406;&#x5927;&#x5927;&#x963B;&#x788D; TH1 &#x4ECB;&#x5BFC;&#x5C0F;&#x9F20;&#x5B9E;&#x9A8C;&#x6027;&#x81EA;&#x8EAB;&#x514D;&#x75AB;&#x6027;&#x8111;&#x810A;&#x9AD3;&#x708E;&#x6A21;&#x578B;&#x7684;&#x591A;&#x53D1;&#x6027;&#x786C;&#x5316;&#x75C7;&#x75C5;&#x60C5;&#x3002;&#x56E0;&#x6B64;&#xFF0C;&#x4F7F;&#x7528;&#x4F3D;&#x739B; secretase &#x6291;&#x5236;&#x5242;&#x8C03;&#x8282; Notch &#x4FE1;&#x53F7;&#x53EF;&#x80FD;&#x6709;&#x5229;&#x4E8E;&#x6CBB;&#x7597; TH1 &#x4ECB;&#x5BFC;&#x7684;&#x81EA;&#x8EAB;&#x514D;&#x75AB;&#x3002;

&#x6291;&#x5236;&#x5242; &gamma;-secretase &#x901A;&#x8FC7;&#x9632;&#x6B62; Tbx21 &#x69FD;&#x53E3;&#x4E0A;&#x8C03;&#x963B;&#x6B62;&#x4F53;&#x5185;&#x548C;&#x4F53;&#x5916; T &#x5E2E;&#x52A9;&#x5668;&#x7C7B;&#x578B; 1 &#x4E24;&#x6781;&#x5316;&#x3002;

R&eacute;cepteurs Notch sont trait&eacute;es par gamma-s&eacute;cr&eacute;tase agissent en synergie avec les r&eacute;cepteurs des lymphocytes T de signalisation maintenir l&#39;activation des cellules T p&eacute;riph&eacute;riques. Les lymphocytes T CD4 + activ&eacute;s diff&eacute;rencient en T helper type 1 (TH1) ou des sous-ensembles de TH2. Signaux mol&eacute;culaires diriger la diff&eacute;renciation TH1 contenir l&#39;expression du facteur de transcription sp&eacute;cifiques TH1 T-bet, cod&eacute;e par Tbx21. Toutefois, le r&egrave;glement de Tbx21 reste incompl&egrave;tement. Nous rapportons ici que Notch1 peut r&eacute;glementer directement les Tbx21 par l&#39;interm&eacute;diaire de complexes qui que se forment sur le promoteur de la Tbx21. In vitro, inhibiteurs de la gamma-s&eacute;cr&eacute;tase &eacute;teint l&#39;expression de la prot&eacute;ine Notch, interf&eacute;ron-gamma et Tbx21 dans les cellules CD4 + polarisation TH1, tandis que l&#39;expression ectopique de Notch1 activ&eacute;s restaur&eacute; Tbx21 transcription. In vivo, administration d&#39;inhibiteurs de la gamma-s&eacute;cr&eacute;tase consid&eacute;rablement entrav&eacute;e progression de la maladie v&eacute;hicul&eacute;e par TH1 enc&eacute;phalomy&eacute;lite allergique exp&eacute;rimentale chez la souris de la scl&eacute;rose en plaques. Ainsi, en utilisant des inhibiteurs de la gamma-s&eacute;cr&eacute;tase pour moduler la signalisation Notch peut-&ecirc;tre s&#39;av&eacute;rer b&eacute;n&eacute;fique dans le traitement d&#39;auto-immunit&eacute; induite par le TH1.

Inhibiteurs de la gamma-s&eacute;cr&eacute;tase bloquent in vivo et in vitro polarisation de type 1 de T helper en emp&ecirc;chant l&#39;encoche upregulation de Tbx21.

Inhibitoren der Gamma-Sekretase-Block in vivo und in vitro T-Helfer-Typ-1-Polarisation durch die Verhinderung Notch Hochregulation von Tbx21.

Recettori tacca vengono elaborati da gamma-secretasi che agiscono in sinergia con T cell receptor signaling di sostenere l&#39;attivazione di cellule T periferiche. Cellule T CD4 + attivate differenziano in tipo T helper 1 (TH1) o sottoinsiemi di TH2. Segnali molecolari dirigendo TH1 differenziazione includono espressione del fattore di trascrizione TH1 specifica T-bet, codificati da Tbx21. Tuttavia, il regolamento di Tbx21 rimane non completamente definito. Qui riportiamo che Notch1 pu&ograve; regolare direttamente Tbx21 attraverso complessi formati su promotore Tbx21. In vitro, inibitori della gamma-secretasi estinto espressione di Notch, interferone-gamma e Tbx21 in cellule TH1 polarizzato CD4 +, mentre l&#39;espressione ectopica di Notch1 attivato restaurato Tbx21 trascrizione. In vivo, la somministrazione di inibitori della gamma-secretasi ostacolata sostanzialmente la progressione della malattia mediata da TH1 nel modello del mouse di encefalomielite autoimmune sperimentale della sclerosi multipla. Cos&igrave;, usando inibitori della gamma-secretasi di modulare Notch segnalazione pu&ograve; rivelarsi benefico nel trattamento di autoimmunit&agrave; TH1-mediata.

Inibitori della gamma-secretasi bloccano in vivo e in vitro polarizzazione helper tipo 1 T prevenendo la sovraregolazione di tacca di Tbx21.

&#x30CE;&#x30C3;&#x30C1;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;&#x672B;&#x68A2;&#x6027; T &#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x3092;&#x7DAD;&#x6301;&#x3059;&#x308B; T &#x7D30;&#x80DE;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x3068;&#x306E;&#x76F8;&#x4E57;&#x52B9;&#x679C;&#x3067;&#x306E;&#x6F14;&#x6280; &gamma;-&#x30BB;&#x30AF;&#x30EC;&#x30BF;&#x30FC;&#x30BC;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x51E6;&#x7406;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316; cd4 &#x967D;&#x6027; T &#x7D30;&#x80DE;&#x306B; T &#x30D8;&#x30EB;&#x30D1;&#x30FC;&#x578B; 1 &#xFF08;th1 &#x7D30;&#x80DE;&#xFF09; &#x3084; th2 &#x7D30;&#x80DE;&#x30B5;&#x30D6;&#x30BB;&#x30C3;&#x30C8;&#x3092;&#x533A;&#x5225;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;Th1 &#x7D30;&#x80DE;&#x5206;&#x5316;&#x8A98;&#x5C0E;&#x5206;&#x5B50;&#x624B;&#x639B;&#x304B;&#x308A;&#x306B;&#x306F; TH1 &#x7279;&#x7570;&#x7684;&#x8EE2;&#x5199;&#x56E0;&#x5B50; t-bet Tbx21 &#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x30A8;&#x30F3;&#x30B3;&#x30FC;&#x30C9;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x5F0F;&#x304C;&#x542B;&#x307E;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3057;&#x304B;&#x3057;&#x3001;Tbx21 &#x306E;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x306F;&#x4E0D;&#x5B8C;&#x5168;&#x306B;&#x5B9A;&#x7FA9;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x307E;&#x307E;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x3053; notch1 &#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306F; Tbx21 &#x30D7;&#x30ED;&#x30E2;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x306B;&#x5F62;&#x6210;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x8907;&#x5408;&#x4F53;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x3066; Tbx21 &#x76F4;&#x63A5;&#x3092;&#x8ABF;&#x6574;&#x3067;&#x304D;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x5831;&#x544A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;Tbx21 &#x8EE2;&#x5199;&#x6D3B;&#x6027; notch1 &#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x7570;&#x6240;&#x6027;&#x767A;&#x73FE;&#x3092;&#x5FA9;&#x5143;&#x306B;&#x5BFE;&#x3057; in vitro &gamma; &#x30BB;&#x30AF;&#x30EC;&#x30BF;&#x30FC;&#x30BC;&#x963B;&#x5BB3;&#x5264;&#x306E;&#x30CE;&#x30C3;&#x30C1;&#x3001;&#x30A4;&#x30F3;&#x30BF;&#x30FC;&#x30D5;&#x30A7;&#x30ED;&#x30F3; &gamma; &#x3068; Tbx21 TH1 &#x504F;&#x5149; cd4 &#x7D30;&#x80DE;&#x3001;&#x767A;&#x73FE;&#x6D88;&#x6EC5;&#x3002;In vivo &gamma; &#x30BB;&#x30AF;&#x30EC;&#x30BF;&#x30FC;&#x30BC;&#x963B;&#x5BB3;&#x5264;&#x306E;&#x6295;&#x4E0E;&#x306F;&#x3001;&#x5B9F;&#x8CEA;&#x7684;&#x306B;&#x591A;&#x767A;&#x6027;&#x786C;&#x5316;&#x75C7;&#x306E;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x5B9F;&#x9A13;&#x7684;&#x81EA;&#x5DF1;&#x514D;&#x75AB;&#x6027;&#x8133;&#x810A;&#x9AC4;&#x708E;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x306E; th1 &#x7D30;&#x80DE;&#x5A92;&#x4ECB;&#x75BE;&#x60A3;&#x9032;&#x884C;&#x3092;&#x59A8;&#x3052;&#x3002;&#x3057;&#x305F;&#x304C;&#x3063;&#x3066;&#x3001;&#x30CE;&#x30C3;&#x30C1; &#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#x3092;&#x5909;&#x8ABF;&#x3059;&#x308B; &gamma; &#x30BB;&#x30AF;&#x30EC;&#x30BF;&#x30FC;&#x30BC;&#x963B;&#x5BB3;&#x5264;&#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x305F; th1 &#x7D30;&#x80DE;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x305F;&#x514D;&#x75AB;&#x6CBB;&#x7642;&#x306B;&#x6709;&#x76CA;&#x304B;&#x3082;&#x3057;&#x308C;&#x306A;&#x3044;&#x3002;

&Gamma;-&#x30BB;&#x30AF;&#x30EC;&#x30BF;&#x30FC;&#x30BC;&#x306E;&#x963B;&#x5BB3;&#x5264; in vivo &#x304A;&#x3088;&#x3073; in vitro T &#x30D8;&#x30EB;&#x30D1;&#x30FC; 1 &#x578B;&#x504F;&#x6CE2; Tbx21 &#x306E;&#x30CE;&#x30C3;&#x30C1;&#x306E;&#x30A2;&#x30C3;&#x30D7;&#x30EC;&#x30AE;&#x30E5;&#x30EC;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x3092;&#x9632;&#x6B62;&#x30D6;&#x30ED;&#x30C3;&#x30AF;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#xB178;&#xCE58; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4;&#xB294; &#xAC10;&#xB9C8;-secretase &#xC2DC;&#xB108;&#xC9C0; &#xD6A8;&#xACFC;&#xC5D0;&#xC11C; T &#xC138;&#xD3EC; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; &#xC2E0;&#xD638; &#xC8FC;&#xBCC0; &#xAE30;&#xAE30; T&#xB294; &#xC138;&#xD3EC; &#xD65C;&#xC131;&#xD654;&#xB97C; &#xC720;&#xC9C0; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD574; &#xD589;&#xB3D9;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xCC98;&#xB9AC; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. 1 (TH1) &#xB610;&#xB294; TH2 &#xD558;&#xC704; &#xC9D1;&#xD569; T &#xB3C4;&#xC6B0;&#xBBF8; &#xD0C0;&#xC785;&#xC73C;&#xB85C; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xB41C; CD4 + T &#xC138;&#xD3EC; &#xBD84;&#xD654;. TH1 &#xCC28;&#xBCC4;&#xD654; &#xAC10;&#xB3C5; &#xBD84;&#xC790; &#xC2E0;&#xD638; TH1 &#xD2B9;&#xC815; &#xC804;&#xC0AC; &#xC778;&#xC790; T-&#xB0B4;&#xAE30;, tbx21&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC778;&#xCF54;&#xB529;&#xB41C; &#xC2DD; &#xD3EC;&#xD568;. &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098;, tbx21&#xC758; &#xADDC;&#xC815;&#xC740; &#xBD88;&#xC644;&#xC804; &#xD558; &#xAC8C; &#xC815;&#xC758; &#xB41C; &#xC0C1;&#xD0DC;&#xB85C; &#xC720;&#xC9C0; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC5EC;&#xAE30; &#xC6B0;&#xB9AC; Notch1 Tbx21 &#xBC1C;&#xAE30;&#xC778;&#xC5D0; &#xD615;&#xC131; &#xB41C; &#xB2E8;&#xC9C0;&#xB97C; &#xD1B5;&#xD574; tbx21&#xB97C; &#xADDC;&#xC81C; &#xC9C1;&#xC811; &#xC218; &#xBCF4;&#xACE0; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xCCB4; &#xC678;, &#xAC10;&#xB9C8;-secretase &#xC5B5;&#xC81C;&#xC81C; &#xC18C;&#xBA78; &#xC2DD; &#xB178;&#xCE58;, &#xC778;&#xD130;&#xD398;&#xB860;-&#xAC10;&#xB9C8; &#xBC0F; TH1 &#xD3B8;&#xAD11; CD4 + &#xC138;&#xD3EC;, tbx21&#xC758; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xB41C; notch1&#xC758; &#xC18C;&#xC131; &#xC2DD; &#xBCF5;&#xC6D0; Tbx21 &#xC804;&#xC0AC; &#xBC18;&#xBA74;. Vivo&#xC5D0;&#xC11C; &#xAC10;&#xB9C8;-secretase &#xC5B5;&#xC81C;&#xC81C;&#xC758; &#xAD00;&#xB9AC;&#xB294; &#xC2E4;&#xC9C8;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xB2E4; &#xBC1C;&#xC131; &#xACBD;&#xD654; &#xC99D;&#xC758; &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4; &#xC2E4;&#xD5D8; &#xC790;&#xAC00; &#xBA74;&#xC5ED; encephalomyelitis &#xBAA8;&#xB378;&#xC5D0;&#xC11C; TH1 &#xC911;&#xC7AC; &#xC9C8;&#xBCD1; &#xC9C4;&#xD589; &#xC7A5;&#xC560;&#xAC00;. &#xB530;&#xB77C;&#xC11C;, &#xAC10;&#xB9C8;-secretase &#xC5B5;&#xC81C;&#xC81C;&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xB178;&#xCE58; &#xC2E0;&#xD638; &#xBCC0;&#xC870; autoimmunity TH1 &#xC911;&#xC7AC; &#xCE58;&#xB8CC;&#xC5D0; &#xB3C4;&#xC6C0;&#xC774; &#xC99D;&#xBA85;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xAC10;&#xB9C8;-secretase &#xC5B5;&#xC81C;&#xC81C; tbx21&#xC758; &#xB178;&#xCE58; upregulation &#xBC29;&#xC9C0; &#xD558; &#xC5EC; &#xC0DD;&#xCCB4; &#xC870;&#xAC74; &#xBC0F; &#xCCB4; &#xC678; T &#xB3C4;&#xC6B0;&#xBBF8; 1 &#xC591;&#xADF9; &#xD654;&#xB97C; &#xCC28;&#xB2E8; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Receptores Notch son procesados por la gama-secretasa act&uacute;an en sinergia con receptor de c&eacute;lulas T de se&ntilde;alizaci&oacute;n mantener la activaci&oacute;n de c&eacute;lulas T perif&eacute;ricas. Las c&eacute;lulas T CD4 + activadas diferencian en el tipo ayudante de T 1 (TH1) o subconjuntos de TH2. Se&ntilde;ales moleculares dirigir TH1 diferenciaci&oacute;n son expresi&oacute;n del factor de transcripci&oacute;n espec&iacute;fica TH1 T-bet, codificada por el Tbx21. Sin embargo, el Reglamento de Tbx21 sigue incompleto definido. Aqu&iacute; divulgamos que Notch1 puede regular directamente Tbx21 a trav&eacute;s de complejos formados en el promotor de la Tbx21. In vitro, inhibidores de la gama-secretasa extinguieron expresi&oacute;n de muesca, interfer&oacute;n-gamma y Tbx21 en las c&eacute;lulas TH1-polarizado CD4 +, mientras que la expresi&oacute;n ect&oacute;pica de Notch1 activado hab&iacute;a restaurado Tbx21 transcripci&oacute;n. In vivo, la administraci&oacute;n de inhibidores de la gama-secretasa hab&iacute;a impedido sustancialmente la progresi&oacute;n de la enfermedad mediada por TH1 en el modelo murino de encefalomielitis autoinmune experimental de esclerosis m&uacute;ltiple. As&iacute;, usando los inhibidores de gama-secretasa para modular la muesca se&ntilde;alizaci&oacute;n puede ser beneficiosa en el tratamiento de autoinmunidad TH1-mediada.

Inhibidores de gama-secretasa bloquean in vivo e in vitro polarizaci&oacute;n de tipo 1 de ayudante de T evitando upregulation muesca de Tbx21.

Notch1 specifically upregulates expression of the cytokine interferon-gamma in peripheral T cells through activation of NF-kappaB. However, how Notch mediates NF-kappaB activation remains unclear. Here, we examined the temporal relationship between Notch signaling and NF-kappaB induction during T-cell activation. NF-kappaB activation occurs within minutes of T-cell receptor (TCR) engagement and this activation is sustained for at least 48 h following TCR signaling. We used gamma-secretase inhibitor (GSI) to prevent the cleavage and subsequent activation of Notch family members. We demonstrate that GSI blocked the later, sustained NF-kappaB activation, but did not affect the initial activation of NF-kappaB. Using biochemical approaches, as well as confocal microscopy, we show that the intracellular domain of Notch1 (N1IC) directly interacts with NF-kappaB and competes with IkappaBalpha, leading to retention of NF-kappaB in the nucleus. Additionally, we show that N1IC can directly regulate IFN-gamma expression through complexes formed on the IFN-gamma promoter. Taken together, these data suggest that there are two 'waves' of NF-kappaB activation: an initial, Notch-independent phase, and a later, sustained activation of NF-kappaB, which is Notch dependent.

Notch1 augments NF-kappaB activity by facilitating its nuclear retention.

&#x901A;&#x8FC7;&#x6FC0;&#x6D3B; NF-&#x6D3B;&#x5316;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x5177;&#x4F53;&#x4E0A;&#x8C03;&#x8868;&#x8FBE;&#x7684;&#x5916;&#x5468;&#x8840; T &#x7EC6;&#x80DE;&#x56E0;&#x5B50;&#x5E72;&#x6270;&#x7D20; &gamma; &#x7684; Notch1&#x3002;&#x7136;&#x800C;&#xFF0C;&#x5982;&#x4F55;&#x69FD;&#x53E3;&#x4ECB;&#x5BFC;&#x9ECF;&#x6DB2;&#x4ECD;&#x4E0D;&#x6E05;&#x695A;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x5BA1;&#x67E5;&#x4E86; Notch &#x4FE1;&#x53F7;&#x4E0E; NF &#x6D3B;&#x5316;&#x8BF1;&#x5BFC; T &#x7EC6;&#x80DE;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x671F;&#x95F4;&#x7684;&#x65F6;&#x7A7A;&#x5173;&#x7CFB;&#x3002;NF &#x6D3B;&#x5316;&#x6FC0;&#x6D3B; T &#x7EC6;&#x80DE;&#x53D7;&#x4F53; (TCR) &#x53C2;&#x4E0E;&#x5206;&#x949F;&#x5185;&#x53D1;&#x751F;&#xFF0C;&#x6B64;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x6301;&#x7EED;&#x81F3;&#x5C11; 48 &#x5C0F;&#x65F6;&#x540E; TCR &#x4FE1;&#x53F7;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x7528;&#x4F3D;&#x739B; secretase &#x6291;&#x5236;&#x5242; (GSI) &#x6765;&#x9632;&#x6B62;&#x7684;&#x5288;&#x88C2;&#x548C;&#x69FD;&#x53E3;&#x5BB6;&#x5EAD;&#x6210;&#x5458;&#x4EE5;&#x540E;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x8BC1;&#x660E; GSI &#x963B;&#x6B62;&#x540E;&#xFF0C;&#x6301;&#x7EED;&#x9ECF;&#x6DB2;&#xFF0C;&#x4F46;&#x5E76;&#x672A;&#x5F71;&#x54CD; NF &#x6D3B;&#x5316;&#x521D;&#x59CB;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x4F7F;&#x7528;&#x751F;&#x5316;&#x7684;&#x529E;&#x6CD5;&#xFF0C;&#x4EE5;&#x53CA;&#x5171;&#x805A;&#x7126;&#x663E;&#x5FAE;&#x955C;&#xFF0C;&#x663E;&#x793A;&#x7684; Notch1 &#x80DE;&#x5185;&#x7684;&#x57DF; (N1IC) &#x76F4;&#x63A5;&#x4EA4;&#x4E92; NF &#x6D3B;&#x5316;&#x548C; IkappaBalpha&#xFF0C;&#x5BFC;&#x81F4; NF &#x6D3B;&#x5316;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6838;&#x4E2D;&#x4FDD;&#x7559;&#x4E0E;&#x4E4B;&#x7ADE;&#x4E89;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x663E;&#x793A; N1IC &#x53EF;&#x4EE5;&#x76F4;&#x63A5;&#x8C03;&#x8282;&#x5E72;&#x6270;&#x7D20; &gamma; &#x5E72;&#x6270;&#x7D20; &gamma; &#x542F;&#x52A8;&#x5B50;&#x4E0A;&#x5F62;&#x6210;&#x7684;&#x914D;&#x5408;&#x7269;&#x901A;&#x8FC7;&#x8868;&#x8FBE;&#x5F0F;&#x3002;&#x4E24;&#x8005;&#x5408;&#x8BA1;&#xFF0C;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x6570;&#x636E;&#x8868;&#x660E;&#x6709;&#x4E24;&#x4E2A; &#39;&#x6CE2;&#39; &#x7684;&#x9ECF;&#x6DB2;&#xFF1A; &#x521D;&#x6B21;&#x3001; &#x72EC;&#x7ACB;&#x7684;&#x69FD;&#x53E3;&#x7684;&#x9636;&#x6BB5;&#x548C;&#x4EE5;&#x540E;&#xFF0C;&#x6301;&#x7EED;&#x6FC0;&#x6D3B; NF-&#x6D3B;&#x5316;&#xFF0C;&#x662F;&#x4ECE;&#x5C5E;&#x7684;&#x69FD;&#x53E3;&#x3002;

Notch1 &#x8865;&#x5145; NF &#x6D3B;&#x5316;&#x6D3B;&#x52A8;&#x901A;&#x8FC7;&#x4FC3;&#x8FDB;&#x5176;&#x6838;&#x7684;&#x4FDD;&#x7559;&#x3002;

Notch1 sp&eacute;cifiquement augmente expression des cytokines interf&eacute;ron-gamma en T p&eacute;riph&eacute;rique cellules gr&acirc;ce &agrave; l&#39;activation de NF-kappaB. Cependant, comment Notch intervient dans l&#39;activation de NF-kappaB reste peu clair. Ici, nous avons examin&eacute; la relation temporelle entre la signalisation Notch et NF-kappaB induction au cours de l&#39;activation des lymphocytes T. Activation de NF-kappaB survient dans les minutes de l&#39;engagement de T-cell receptor (TCR) et que cette activation est maintenue pendant au moins 48 h apr&egrave;s le TCR de signalisation. Nous avons utilis&eacute; des gamma-s&eacute;cr&eacute;tase inhibiteur (GSI) afin d&#39;&eacute;viter le clivage et l&#39;activation subs&eacute;quente des membres de la famille Notch. Nous d&eacute;montrons que GSI bloqu&eacute; l&#39;activation de NF-kappaB plus tard, soutenue, mais n&#39;a pas affect&eacute; la premi&egrave;re activation de NF-kappaB. En utilisant des approches biochimiques, ainsi que la microscopie confocale, nous montrons que le domaine intracellulaire de Notch 1 (N1IC) directement interagit avec le NF-kappaB et rivalise avec IkappaBalpha, conduisant &agrave; la r&eacute;tention de NF-kappaB dans le noyau. En outre, nous montrons que les N1IC peuvent r&eacute;glementer directement expression d&#39;IFN-gamma par l&#39;interm&eacute;diaire de complexes qui que se forment sur le promoteur de l&#39;IFN-gamma. Pris ensemble, ces r&eacute;sultats sugg&egrave;rent qu&#39;il y a deux &laquo; vagues &raquo; de l&#39;activation de NF-kappaB : initiale, la phase ind&eacute;pendante du cran et un plus tard, subi l&#39;activation de NF-kappaB, qui est d&eacute;pendante de Notch.

Notch1 augmente l&#39;activit&eacute; de NF-kappaB en facilitant sa r&eacute;tention nucl&eacute;aire.

Notch1 speziell Upregulates Ausdruck das Zytokin Interferon-Gamma in peripheren T-durch Aktivierung von NF-KappaB Zellen. Wie Notch NF-KappaB Aktivierung vermittelt bleibt jedoch unklar. Hier haben wir das Zeitverh&auml;ltnis zwischen Notch Signalisierung und NF-KappaB Induktion bei der T-Zell-Aktivierung gepr&uuml;ft. NF-KappaB Aktivierung tritt innerhalb von Minuten von T-Zell-Rezeptor (TCR)-Engagement und diese Aktivierung ist gleichbleibend mindestens 48 h nach TCR signalisiert. Wir werden Gamma-Sekretase-Hemmer (GSI) die Spaltung und anschlie&szlig;ende Aktivierung des Notch Familienmitglieder verhindert. Wir zeigen, dass GSI die sp&auml;tere, nachhaltige Aktivierung von NF-KappaB blockiert, aber hatte keine Auswirkungen auf die erste Aktivierung des NF-KappaB. Mit biochemischen Ans&auml;tze sowie confocal Mikroskopie, wir zeigen, dass die intrazellul&auml;re Dom&auml;ne des Notch1 (N1IC) direkt interagiert mit NF-KappaB und konkurriert mit IkappaBalpha, zur Aufbewahrung von NF-KappaB in den Zellkern. Dar&uuml;ber hinaus zeigen wir, dass N1IC durch komplexe bildete sich die IFN-Gamma-Promotor IFN-Gamma-Ausdruck direkt regulieren k&ouml;nnen. Zusammen genommen, diese Daten zufolge gibt es zwei Wellen der NF-KappaB Aktivierung: eine erste Kerbe-unabh&auml;ngige Phase und eine sp&auml;tere, nachhaltige Aktivierung von NF-KappaB, die Kerbe abh&auml;ngig ist.

Notch1 erweitert die Aktivit&auml;t von NF-KappaB durch Erleichterung ihrer nuklearen Aufbewahrung.

NOTCH1 specificamente sopraregola le espressione della citochina interferone-gamma in T periferici cellule attraverso l&#39;attivazione di NF-kappaB. Tuttavia, rimane poco chiaro come tacca media attivazione di NF-kappaB. Qui, abbiamo esaminato la relazione temporale tra tacca di segnalazione e induzione di NF-kappaB durante l&#39;attivazione delle cellule T. NF-kappaB activation occurs in pochi minuti di impegno di T-cell receptor (TCR) e questa attivazione &egrave; sostenuta per almeno 48 h dopo la segnalazione di TCR. Abbiamo usato la gamma-secretasi inibitore (GSI) per evitare la scissione e la successiva attivazione dei membri della famiglia tacca. Dimostriamo che GSI bloccato l&#39;attivazione di NF-kappaB pi&ugrave; tardi, sostenuta, ma non intaccarono l&#39;attivazione iniziale di NF-kappaB. Utilizzando approcci biochimici, cos&igrave; come la microscopia confocale, ci mostrano che il dominio intracellulare di Notch1 (N1IC) direttamente interagisce con NF-kappaB e compete con IkappaBalpha, che porta a ritenzione di NF-kappaB nel nucleo. Inoltre, mostriamo che N1IC direttamente pu&ograve; regolare espressione di IFN-gamma attraverso complessi formati su promotore IFN-gamma. Presi insieme, questi dati suggeriscono che ci sono due &#39;onde&#39; di attivazione di NF-kappaB: iniziale, fase indipendente dalla tacca e, successivamente, sostenuta attivazione di NF-kappaB, che &egrave; dipendente dalla tacca.

NOTCH1 potenzia le attivit&agrave; di NF-kappaB facilitando la sua ritenzione nucleare.

NF-&kappa; b &#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x3066;&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x30AB;&#x30A4;&#x30F3;&#x306E;&#x30A4;&#x30F3;&#x30BF;&#x30FC;&#x30D5;&#x30A7;&#x30ED;&#x30F3;-&gamma; &#x672B;&#x68A2; T &#x3067;&#x5177;&#x4F53;&#x7684;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30D5;&#x30A9;&#x30FC;&#x30DF;&#x30F3;&#x30B0;&#x767A;&#x73FE; notch1 &#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x3002;&#x3057;&#x304B;&#x3057;&#x3001;&#x3069;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306B; NF &kappa; b &#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x30CE;&#x30C3;&#x30C1;&#x3092;&#x4EF2;&#x4ECB;&#x3059;&#x308B;&#x4E0D;&#x660E;&#x306E;&#x307E;&#x307E;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x3001;Notch &#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x3068; T &#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x4E2D;&#x306E; NF-&kappa; b &#x8A98;&#x5C0E;&#x306E;&#x6642;&#x9593;&#x7684;&#x95A2;&#x4FC2;&#x3092;&#x691C;&#x8A0E;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;NF &kappa; b &#x6D3B;&#x6027;&#x5316; T &#x7D30;&#x80DE;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53; &#xFF08;TCR&#xFF09; &#x5A5A;&#x7D04;&#x306E;&#x6570;&#x5206;&#x4EE5;&#x5185;&#x306B;&#x767A;&#x751F;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x306F;&#x5C11;&#x306A;&#x304F;&#x3068;&#x3082; 48 h &#x6B21;&#x306E; TCR &#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;&#x306E;&#x6301;&#x7D9A;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&Gamma;-&#x30BB;&#x30AF;&#x30EC;&#x30BF;&#x30FC;&#x30BC;&#x963B;&#x5BB3;&#x5264; (GSI) &#x80F8;&#x306E;&#x8C37;&#x9593;&#x3068;&#x30CE;&#x30C3;&#x30C1;&#x306E;&#x5BB6;&#x65CF;&#x306E;&#x30E1;&#x30F3;&#x30D0;&#x30FC;&#x306E;&#x5F8C;&#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x3092;&#x9632;&#x3050;&#x305F;&#x3081;&#x3002;&#x6211;&#x3005; &#x306F;&#x3001;GSI &#x5F8C;&#x3001;&#x6301;&#x7D9A;&#x7684;&#x306A;&#x306E; NF-&kappa; b &#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x3092;&#x30D6;&#x30ED;&#x30C3;&#x30AF;&#x304C; NF-&kappa; b &#x306E;&#x521D;&#x671F;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x306B;&#x5F71;&#x97FF;&#x3057;&#x306A;&#x304B;&#x3063;&#x305F;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x751F;&#x5316;&#x5B66;&#x7684;&#x30A2;&#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30C1;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x5171;&#x7126;&#x70B9;&#x9855;&#x5FAE;&#x93E1;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x6211;&#x3005; &#x306F; notch1 &#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x5185;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x8868;&#x793A; (N1IC) &#x306F;&#x76F4;&#x63A5; NF-&kappa; b &#x3068;&#x5BFE;&#x8A71;&#x3057;&#x3001;&#x6838;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B; NF-&kappa; b &#x306E;&#x4FDD;&#x6301;&#x306B;&#x3064;&#x306A;&#x304C;&#x308B; IkappaBalpha &#x3068;&#x7AF6;&#x5408;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x3001;N1IC &#x304C; IFN-&gamma; &#x5F0F; IFN-&gamma; &#x30D7;&#x30ED;&#x30E2;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x306B;&#x5F62;&#x6210;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x8907;&#x5408;&#x4F53;&#x3092;&#x901A;&#x3058;&#x3066;&#x76F4;&#x63A5;&#x3092;&#x8ABF;&#x6574;&#x3067;&#x304D;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x4E00;&#x7DD2;&#x306B;&#x53D6;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3001;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x30C7;&#x30FC;&#x30BF;&#x306F; NF &kappa; b &#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x306E; 2 &#x3064;&#x306E; &#39;&#x6CE2;&#39; &#x3092;&#x304A;&#x52E7;&#x3081;&#xFF1A; &#x521D;&#x671F;&#x3001;&#x30CE;&#x30C3;&#x30C1;&#x306B;&#x4F9D;&#x5B58;&#x3057;&#x306A;&#x3044;&#x4F4D;&#x76F8;&#x3068;&#x5F8C;&#x3067;&#x3001;Nf-kappab &#x4F9D;&#x5B58;&#x306E;&#x30CE;&#x30C3;&#x30C1;&#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x3092;&#x6301;&#x7D9A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

Notch1 nf-kappab &#x305D;&#x306E;&#x6838;&#x306E;&#x4FDD;&#x6301;&#x3092;&#x4FC3;&#x9032;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3067;&#x5F37;&#x5316;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

Notch1 &#xC8FC;&#xBCC0; t&#xC5D0;&#xC11C; &#xC0AC;&#xC774;&#xD1A0;&#xCE74;&#xC778; &#xC778;&#xD130;&#xD398;&#xB860;-&#xAC10;&#xB9C8;&#xC758; upregulates &#xC2DD; &#xD2B9;&#xD788; NF-Kappab&#xC758; &#xD65C;&#xC131;&#xD654;&#xB97C; &#xD1B5;&#xD574; &#xC140;. &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098;, &#xBD88;&#xBD84;&#xBA85; &#xB0A8;&#xC544; &#xB178;&#xCE58; NF kappaB &#xD65C;&#xC131;&#xD654;&#xB97C; &#xC911;&#xC7AC; &#xD558;&#xB294; &#xBC29;&#xBC95;. &#xC5EC;&#xAE30;, &#xC6B0;&#xB9AC; &#xB178;&#xCE58; &#xC2E0;&#xD638; &#xBC0F; T &#xC138;&#xD3EC; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xC911; NF-kappaB &#xC720;&#xB3C4; &#xC0AC;&#xC774;&#xC758; &#xC2DC;&#xAC04;&#xC801;&#xC778; &#xAD00;&#xACC4;&#xB97C; &#xC870;&#xC0AC; &#xD588;&#xB2E4;. NF kappaB &#xD65C;&#xC131;&#xD654; T &#xC138;&#xD3EC; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; (TCR) &#xD3EC;&#xC6A9;&#xC758; &#xBD84; &#xC774;&#xB0B4;&#xC5D0; &#xBC1C;&#xC0DD; &#xD558; &#xACE0;&#xC774; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; TCR &#xC2E0;&#xD638;&#xC5D0; &#xB530;&#xB77C; &#xC801;&#xC5B4;&#xB3C4; 48 &#xC2DC;&#xAC04; &#xC9C0;&#xC18D; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC808;&#xB2E8;, &#xB178;&#xCE58; &#xAC00;&#xC871; &#xAD6C;&#xC131;&#xC6D0;&#xC758; &#xD6C4;&#xC18D; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xD558;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC73C;&#xB824;&#xBA74; &#xAC10;&#xB9C8;-secretase &#xC5B5;&#xC81C;&#xC81C; (GSI)&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD588;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; &#xBCF4;&#xC5EC; GSI &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xB098;&#xC911;&#xC5D0;, &#xC9C0;&#xC18D;&#xC801;&#xC778; NF kappaB &#xD65C;&#xC131;&#xD654;&#xB97C; &#xCC28;&#xB2E8; &#xD558;&#xB294; NF-Kappab&#xC758; &#xCD08;&#xAE30; &#xC815;&#xD488; &#xC778;&#xC99D;&#xC5D0;&#xB294; &#xC601;&#xD5A5;&#xC744; &#xBBF8;&#xCE58;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC558;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; notch1&#xC758; &#xC138;&#xD3EC;&#xB0B4; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778; &#xD45C;&#xC2DC; confocal &#xD604;&#xBBF8;&#xACBD; &#xAC80;&#xC0AC; &#xBC95;&#xC73C;&#xB85C; &#xC0DD; &#xD654; &#xD655; &#xC801;&#xC778; &#xC811;&#xADFC;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; (N1IC) &#xC9C1;&#xC811; NF-kappaB &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9; &#xD558; &#xACE0; IkappaBalpha, &#xD575;&#xC5D0;&#xC11C; NF-Kappab&#xC758; &#xBCF4;&#xC874;&#xC744; &#xC120;&#xB3C4;&#xC640; &#xACBD;&#xC7C1; &#xD55C;&#xB2E4;. &#xB610;&#xD55C;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; N1IC IFN-&#xAC10;&#xB9C8; &#xBC1C;&#xAE30;&#xC778;&#xC5D0; &#xD615;&#xC131; &#xB41C; &#xB2E8;&#xC9C0;&#xB97C; &#xD1B5;&#xD574; IFN-&#xAC10;&#xB9C8; &#xC2DD; &#xADDC;&#xC81C; &#xC9C1;&#xC811; &#xC218; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xD568;&#xAED8; &#xCC0D;&#xC740;, &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xB370;&#xC774;&#xD130; NF kappaB &#xD65C;&#xC131;&#xD654;&#xC758; &#xB450; &#39;&#xD30C;&#39;&#xB294; &#xC81C;&#xC548;: &#xCD08;&#xAE30;, &#xB178;&#xCE58; &#xB3C5;&#xB9BD;&#xC801; &#xB2E8;&#xACC4; &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; &#xC774;&#xD6C4;, &#xC9C0;&#xC18D;&#xC801;&#xC778; NF-kappaB, &#xB178;&#xCE58; &#xC885;&#xC18D;&#xC758; &#xD65C;&#xC131;&#xD654;.

Notch1&#xC758; &#xD575; &#xBCF4;&#xC720;&#xB97C; &#xCD09;&#xC9C4; NF kappaB &#xD65C;&#xB3D9;&#xC744; &#xC99D;&#xB300; &#xC2DC;&#xD0B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Notch1 espec&iacute;ficamente estimula expresi&oacute;n de la citoquina interfer&oacute;n-gamma en T perif&eacute;rico las c&eacute;lulas a trav&eacute;s de la activaci&oacute;n de NF-kappaB. Sin embargo, queda claro c&oacute;mo muesca media la activaci&oacute;n de NF-kappaB. Aqu&iacute;, hemos examinado la relaci&oacute;n temporal entre la se&ntilde;alizaci&oacute;n Notch y la inducci&oacute;n de NF-kappaB durante la activaci&oacute;n de c&eacute;lulas T. Activaci&oacute;n de NF-kappaB ocurre dentro de minutos de contrataci&oacute;n del receptor (TCR) de c&eacute;lulas T y esta activaci&oacute;n se mantiene durante al menos 48 h despu&eacute;s de se&ntilde;alizaci&oacute;n de TCR. Utilizamos inhibidor (GSI) de la gama-secretasa para prevenir el escote y la subsecuente activaci&oacute;n de miembros de la familia muesca. Demostramos que GSI bloquea la activaci&oacute;n de NF-kappaB sostenida, m&aacute;s adelante, pero no afect&oacute; la primera activaci&oacute;n de NF-kappaB. Utilizando m&eacute;todos bioqu&iacute;micos, as&iacute; como la microscopia confocal, demostramos que el dominio intracelular de Notch1 (N1IC) directamente interact&uacute;a con NF-kappaB y compite con IkappaBalpha, conduce a la retenci&oacute;n de NF-kappaB en el n&uacute;cleo. Adem&aacute;s, mostramos que N1IC directamente puede regular la expresi&oacute;n de IFN-gamma a trav&eacute;s de complejos formados en el promotor de IFN-gamma. Tomados en conjunto, estos datos sugieren que hay dos &quot;olas&quot; de activaci&oacute;n de NF-kappaB: inicial, fase independiente de la muesca y despu&eacute;s, sostuvieron la activaci&oacute;n de NF-kappaB, que es dependiente de la muesca.

Notch1 aumenta la actividad de NF-kappaB facilitando su retenci&oacute;n nuclear.

&#x30CA;&#x30A4;&#x30FC;&#x30D6;&#x3060;&#x308D;&#x3046;&#x3053;&#x306E; T &#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x6210;&#x719F;&#x30A8;&#x30D5;&#x30A7;&#x30AF;&#x30BF;&#x30FC; Ctl &#x306B;&#x6A5F;&#x80FD;&#x7684;&#x9069;&#x5FDC;&#x514D;&#x75AB;&#x7CFB;&#x306E;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3067;&#x3059;&#x3002;Ctl &#x306E;&#x958B;&#x767A;&#x306F;&#x3001;&#x4E00;&#x90E8;&#x3001;&#x30D1;&#x30FC;&#x30D5;&#x30A9;&#x30EA;&#x30F3;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x30B0;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B6;&#x30A4;&#x30E0; B. &#x306E; 2 &#x3064;&#x306E;&#x30AD;&#x30FC;&#x306E;&#x30A8;&#x30D5;&#x30A7;&#x30AF;&#x30BF;&#x30FC;&#x5206;&#x5B50;&#x306E;&#x767A;&#x73FE;&#x3092;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x3059;&#x308B;&#x3068;&#x8003;&#x3048;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x8EE2;&#x5199;&#x5236;&#x5FA1;&#x56E0;&#x5B50; eomesodermin (EOMES) &#x306E;&#x767A;&#x73FE;&#x306B;&#x4F9D;&#x5B58;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;EOMES &#x30A8;&#x30D5;&#x30A7;&#x30AF;&#x30BF;&#x30FC; CTL &#x958B;&#x767A;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x91CD;&#x8981;&#x3067;&#x3059;&#x304C;&#x3001;&#x3060;&#x308D;&#x3046;&#x3053;&#x306E;&#x30A8;&#x30D5;&#x30A7;&#x30AF;&#x30BF;&#x30FC;&#x3092;&#x898F;&#x5236;&#x3059;&#x308B;&#x6B63;&#x78BA;&#x306A;&#x30E1;&#x30AB;&#x30CB;&#x30BA;&#x30E0;&#x306F;&#x3088;&#x304F;&#x308F;&#x304B;&#x3063;&#x3066;&#x6210;&#x719F;&#x307E;&#x307E;&#x3092;&#x30BB;&#x30EB;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x672C;&#x7814;&#x7A76;&#x3067;&#x306F;, notch1 &#x907A;&#x4F1D;&#x5B50; EOMES&#x3001;&#x30D1;&#x30FC;&#x30D5;&#x30A9;&#x30EA;&#x30F3;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x30B0;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B6;&#x30A4;&#x30E0; B &#x306E;&#x767A;&#x73FE;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x3066;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x30A8;&#x30D5;&#x30A7;&#x30AF;&#x30BF;&#x30FC;&#x5206;&#x5B50;&#x306E;&#x30D7;&#x30ED;&#x30E2;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x3078;&#x306E;&#x76F4;&#x63A5;&#x7D50;&#x5408;&#x3092;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;Notch &#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x3092;&#x5951;&#x7D04;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x3001;&#x751F;&#x5316;&#x5B66;&#x7684;&#x3068;&#x540C;&#x69D8;&#x3001;&#x4E21;&#x65B9;&#x907A;&#x4F1D;&#x7684;&#x306B;&#x3001;&#x6211;&#x3005; &#x306F;&#x30CE;&#x30C3;&#x30C1;&#x6D3B;&#x52D5; EOMES&#x3001;&#x30D1;&#x30FC;&#x30D5;&#x30A9;&#x30EA;&#x30F3;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x30B0;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B6;&#x30A4;&#x30E0; B. &#x306E;&#x76F4;&#x63A5;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x3066; CTL &#x6D3B;&#x52D5;&#x3092;&#x4EF2;&#x4ECB;&#x3059;&#x308B;&#x7DE0;&#x7D50;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x30CE;&#x30C3;&#x30C1; cd8 T &#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x7D30;&#x80DE;&#x50B7;&#x5BB3;&#x6027;&#x30A8;&#x30D5;&#x30A7;&#x30AF;&#x30BF;&#x30FC;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3092;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x5230;&#x6548;&#x5E94; Ctl &#x7684;&#x5929;&#x771F; CD8(+) T &#x7EC6;&#x80DE;&#x6210;&#x719F;&#x662F;&#x4E00;&#x4E2A;&#x529F;&#x80FD;&#x7684;&#x81EA;&#x9002;&#x5E94;&#x514D;&#x75AB;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x7684;&#x91CD;&#x8981;&#x529F;&#x80FD;&#x3002;Ctl &#x7684;&#x53D1;&#x5C55;&#x90E8;&#x5206;&#x5730;&#x53D6;&#x51B3;&#x4E8E;&#x8868;&#x8FBE;&#x7684;&#x8F6C;&#x5F55;&#x8C03;&#x8282;&#x5242; eomesodermin (EOMES)&#xFF0C;&#x5B83;&#x88AB;&#x8BA4;&#x4E3A;&#x7684;&#x4E24;&#x4E2A;&#x5173;&#x952E;&#x6548;&#x5E94;&#x5206;&#x5B50;&#xFF0C;&#x7A7F;&#x5B54;&#x7D20;&#x548C;&#x9897;&#x7C92;&#x9176; B.&#x8868;&#x8FBE;&#x7684;&#x8C03;&#x8282;&#x867D;&#x7136; EOMES &#x662F;&#x91CD;&#x8981;&#x7684;&#x6548;&#x5E94; CTL &#x53D1;&#x5C55;&#xFF0C;&#x8C03;&#x8282; CD8(+) &#x6548;&#x5E94;&#x7684;&#x786E;&#x5207;&#x673A;&#x5236;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6210;&#x719F;&#x4ECD;&#x7136;&#x4E0D;&#x751A;&#x4E86;&#x89E3;&#x3002;&#x5728;&#x6B64;&#x7814;&#x7A76;&#x4E2D;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x5C55;&#x793A; Notch1 &#x89C4;&#x5B9A;&#x7684; EOMES&#x3001; &#x7A7F;&#x5B54;&#x7D20;&#x3001; &#x9897;&#x7C92;&#x9176; B &#x8868;&#x8FBE;&#x4E86;&#x901A;&#x8FC7;&#x76F4;&#x63A5;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x5230;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x5173;&#x952E;&#x6548;&#x5E94;&#x5206;&#x5B50;&#x7684;&#x5021;&#x5BFC;&#x8005;&#x3002;&#x901A;&#x8FC7;&#x5E9F;&#x9664; Notch &#x4FE1;&#x53F7;&#xFF0C;&#x65E2;&#x751F;&#x5316;&#x4EE5;&#x53CA;&#x57FA;&#x56E0;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x5F97;&#x51FA;&#x7684;&#x7ED3;&#x8BBA;&#x69FD;&#x53E3;&#x6D3B;&#x52A8;&#x4ECB;&#x5BFC; CTL &#x6D3B;&#x6027;&#x901A;&#x8FC7; EOMES&#x3001; &#x7A7F;&#x5B54;&#x7D20;&#x3001; &#x9897;&#x7C92;&#x9176; B.&#x76F4;&#x63A5;&#x76D1;&#x7BA1;

&#x51F9;&#x69FD;&#x8C03;&#x8282;&#x6EB6;&#x6548;&#x5E94;&#x5728; CD8 + T &#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x529F;&#x80FD;&#x3002;

The maturation of naive CD8(+) T cells into effector CTLs is a critical feature of a functional adaptive immune system. Development of CTLs depends, in part, upon the expression of the transcriptional regulator eomesodermin (EOMES), which is thought to regulate expression of two key effector molecules, perforin and granzyme B. Although EOMES is important for effector CTL development, the precise mechanisms regulating CD8(+) effector cell maturation remains poorly understood. In this study, we show that Notch1 regulates the expression of EOMES, perforin, and granzyme B through direct binding to the promoters of these crucial effector molecules. By abrogating Notch signaling, both biochemically as well as genetically, we conclude that Notch activity mediates CTL activity through direct regulation of EOMES, perforin, and granzyme B.

Notch regulates cytolytic effector function in CD8+ T cells.

La maturation des cellules T CD8 na&iuml;ve dans effecteur CTL est une caract&eacute;ristique essentielle du syst&egrave;me immunitaire adaptatif fonctionnelle. D&eacute;veloppement de CTL d&eacute;pend, en partie, l&#39;expression de l&#39;eomesodermin r&eacute;gulateur transcriptionnel (laevis), qui est pens&eacute; pour r&eacute;guler l&#39;expression de deux mol&eacute;cules effectrices principales, perforine et granzyme B. Bien que laevis est important pour le d&eacute;veloppement de CTL effectrices, les m&eacute;canismes pr&eacute;cis qui r&eacute;gissent les CD8 effectrices cellulaire reste de maturation mal compris. Dans cette &eacute;tude, nous montrons que Notch1 r&eacute;gule l&#39;expression de laevis, perforine, granzyme B et via la liaison directe aux promoteurs de ces mol&eacute;cules effectrices crucial. En abrogeant la signalisation Notch, biochimiquement tant que g&eacute;n&eacute;tiquement, nous concluons que l&#39;activit&eacute; encoche m&eacute;die activit&eacute; CTL par le biais de la r&eacute;glementation directe des laevis, perforine, granzyme B.

Encoche r&eacute;gule la fonction effectrices cytotoxiques dans les cellules T CD8 +.

Die Reifung der naiven CD8(+) T-Zellen in Effektor CTLs ist eine kritische Funktion von einem funktionalen adaptive Immunsystem. Entwicklung der CTLs h&auml;ngt teilweise Ausdruck der transcriptional Regler-Eomesodermin (EOMES), dem angenommen wird, Ausdruck von zwei wichtigen Effektor-Molek&uuml;len, Perforin und Granzyme B. regulieren Obwohl EOMES f&uuml;r Effektor CTL Entwicklung wichtig ist, die Zelle der genauen Mechanismen, die zur Regelung CD8(+)-Effektor Reifung bleibt oft missverstanden. In dieser Studie zeigen wir, dass Notch1 den Ausdruck EOMES Perforin und Granzyme B durch direkte Bindung an die F&ouml;rderer dieser entscheidenden Effektor-Molek&uuml;le reguliert. Durch Aufhebung der Kerbe zu signalisieren, gilt sowohl biochemisch als auch genetisch, dass Notch Aktivit&auml;t CTL-Aktivit&auml;t durch direkte Regulierung EOMES Perforin und Granzyme B. vermittelt

Kerbe regelt CYTOLYTISCHE Effektor-Funktion in CD8 + T-Zellen.

La maturazione delle cellule cellule T naive in effettrici CTL &egrave; una caratteristica fondamentale di un funzionale sistema immunitario adattativo. Sviluppo di CTL dipende, in parte, l&#39;espressione del regolatore trascrizionale EOMES (EOMESODERMIN), che &egrave; pensato per regolare l&#39;espressione di due molecole effettrici chiave, perforina e granzyme B. Anche se EOMESODERMIN &egrave; importante per lo sviluppo di CTL effector, i meccanismi precisi che regolano cellule effettrici delle cellule resti di maturazione poco compresi. In questo studio, mostriamo che Notch1 regola l&#39;espressione di granzyme B, perforina ed EOMESODERMIN attraverso il binding diretto ai promotori di queste molecole effettrici cruciale. Di abrogare la tacca di segnalazione, sia biochimicamente cos&igrave; come geneticamente, concludiamo che attivit&agrave; tacca media attivit&agrave; CTL attraverso una regolamentazione diretta di granzyme b, perforina ed EOMESODERMIN

Tacca regola la funzione effector citolitica in cellule T CD8 +.

Effector Ctl&#xC5D0; &#xC21C;&#xC9C4;&#xD55C; CD8(+) T &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xC131;&#xC219; &#xAE30;&#xB2A5; &#xC801;&#xC751;&#xC131; &#xBA74;&#xC5ED; &#xCCB4;&#xACC4;&#xC758; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;. Ctl&#xC758; &#xAC1C;&#xBC1C;, &#xBD80;&#xBD84;&#xC5D0; &#xB530;&#xB77C; &#xB2EC;&#xB77C; &#xC9D1;&#xB2C8;&#xB2E4; perforin &#xBC0F; granzyme B. &#xB450; &#xC8FC;&#xC694; &#xC774;&#xD399;&#xD130; &#xBD84;&#xC790;&#xC758; &#xD45C;&#xD604;&#xC744; &#xADDC;&#xC81C;&#xB97C; &#xC0DD;&#xAC01; &#xD558;&#xB294; transcriptional &#xB808; &#xADE4; &#xB808;&#xC774; &#xD130; eomesodermin (EOMES)&#xC758; &#xD45C;&#xD604; EOMES effector CTL &#xAC1C;&#xBC1C;&#xC5D0; &#xC911;&#xC694; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; CD8(+) &#xC774;&#xD399;&#xD130;&#xB97C; &#xADDC;&#xC81C; &#xD558;&#xB294; &#xC815;&#xD655;&#xD55C; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998; &#xC138;&#xD3EC; &#xC131;&#xC219; &#xB0A8;&#xC544; &#xC11C; &#xD22C;&#xB974; &#xAC8C; &#xC774;&#xD574;. &#xC774; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; Notch1 EOMES, perforin, granzyme B&#xC758; &#xC2DD; &#xB808; &#xADE4; &#xB808;&#xC774;&#xD2B8; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xC774;&#xD399;&#xD130; &#xBD84;&#xC790;&#xC758; &#xBC1C;&#xAE30;&#xC778;&#xC744; &#xC9C1;&#xC811; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xC744; &#xD1B5;&#xD574; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB178;&#xCE58; &#xC2E0;&#xD638; abrogating&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xBAA8;&#xB450; &#xD654;&#xD559;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xC720;&#xC804;&#xC73C;&#xB85C;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xACB0;&#xB860; &#xB178;&#xCE58; &#xD65C;&#xB3D9; &#xC911;&#xC7AC; EOMES, perforin, granzyme B.&#xC758; &#xC9C1;&#xC811; &#xADDC;&#xC81C;&#xB97C; &#xD1B5;&#xD574; CTL &#xD65C;&#xB3D9;

&#xB178;&#xCE58; CD8 + T &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0;&#xC11C; cytolytic effector &#xAE30;&#xB2A5;&#xC744; &#xC870;&#xC808;.

La maduraci&oacute;n de las c&eacute;lulas T CD8 de ingenuos en efector CTLs es una caracter&iacute;stica fundamental de un funcional sistema inmune adaptante. Desarrollo de CTLs depende, en parte, la expresi&oacute;n de la eomesodermin del regulador transcripcional (EOMES), que se cree que regulan la expresi&oacute;n de dos mol&eacute;culas efectoras clave, perforina y granzima B. Aunque EOMES es importante para el desarrollo de CTL efectoras, los mecanismos precisos efectoras CD8 de regulaci&oacute;n celular restos de maduraci&oacute;n mal entendidas. En este estudio, mostramos que Notch1 regula la expresi&oacute;n de granzima B, perforina y EOMES mediante el enlace directo a los promotores de estas mol&eacute;culas efectoras crucial. Por abrogar se&ntilde;alizaci&oacute;n Notch, tanto bioqu&iacute;mico como gen&eacute;ticamente, concluimos que la actividad de la muesca media actividad CTL a trav&eacute;s de la regulaci&oacute;n directa de EOMES, perforina y granzima B.

Article	Year
Inhibitors of gamma-secretase block in vivo and in vitro T helper type 1 polarization by preventing Notch upregulation of Tbx21. Nature immunology\| PubMed ID: 15991363	2005
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Ok Hyun Cho

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