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Visualization of MG53-mediated Cell Membrane Repair Using <em>in vivo</em> and <em>in vitro</em> Systems

Repair of acute injury to the cell membrane is an elemental process of normal cellular physiology, and defective membrane repair has been linked to many ...

Robert Wood Johnson Medical School 

&#x5E97;&#x9762;&#x5F0F;&#x7ECF;&#x8425;&#x7ECF;&#x6761;&#x76EE; (&#x8D5B;) &#x6700;&#x8FD1;&#x5DF2;&#x7ECF;&#x8868;&#x73B0;&#x51FA;&#x5728;&#x5FC3;&#x91CC;&#xFF0C;&#x5C24;&#x5176;&#x662F;&#x5FC3;&#x808C;&#x80A5;&#x5927;&#x8FC7;&#x7A0B;&#x4E2D;&#x7684;&#x91CD;&#x8981;&#x751F;&#x7406;&#x548C;&#x75C5;&#x7406;&#x3002;&#x4E0D;&#x8FC7;&#xFF0C;&#x5728;&#x8D5B;&#x671F;&#x95F4;&#x6D4B;&#x91CF;&#x7ECF;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5185;&#x7684;&#x53D8;&#x5316;&#x662F;&#x5F88;&#x96BE;&#x5728;&#x6210;&#x4EBA;&#x539F;&#x53D1;&#x6027;&#x5FC3;&#x808C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x3002;&#x56E0;&#x6B64;&#x6709;&#x5FC5;&#x8981;&#x4E3A;&#x8D5B;&#x53EF;&#x4EE5;&#x7528;&#x4E8E;&#x6D4B;&#x8BD5;&#x5FC3;&#x810F;&#x836F;&#x7269;&#x548C;&#x8C03;&#x67E5;&#x5728;&#x5FC3;&#x810F;&#x75C5;&#x7406;&#x5B66;&#x7684;&#x8D5B;&#x4F5C;&#x7528;&#x7A33;&#x5B9A;&#x3001; &#x53EF;&#x9760;&#x7684;&#x4F53;&#x5916;&#x6A21;&#x578B;&#x3002;HL-1 &#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x662F;&#x53EA;&#x6709;&#x4E0D;&#x673D;&#x5FC3;&#x808C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7CFB;&#x53EF;&#x7528;&#x4E0D;&#x65AD;&#x5206;&#x88C2;&#x548C;&#x81EA;&#x53D1;&#x6027;&#x5408;&#x540C;&#x540C;&#x65F6;&#x4FDD;&#x6301;&#x6210;&#x4EBA;&#x5FC3;&#x808C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x8868;&#x578B;&#x7279;&#x5F81;&#x3002;&#x5230;&#x76EE;&#x524D;&#x4E3A;&#x6B62;&#x7684;&#x8D5B;&#x4F5C;&#x7528;&#x5DF2;&#x5C1A;&#x672A;&#x8C03;&#x67E5; HL 1 &#x5FC3;&#x808C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x884C;&#x4E2D;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x62A5;&#x544A;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8868;&#x8FBE;&#x57FA;&#x8D28;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x5206;&#x5B50;&#x7684;&#x9996;&#x6B21; 1 (STIM1) &#x548C;&#x7ECF;&#x91CA;&#x653E;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x7ECF; (&#x5143;) &#x4FE1;&#x9053; Orai1&#xFF0C;&#x8FD9;&#x662F;&#x8D5B;&#x673A;&#x68B0;&#x7684;&#x91CD;&#x8981;&#x7EC4;&#x6210;&#x90E8;&#x5206;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;&#x8D5B;&#x7D27;&#x5BC6;&#x8026;&#x5408;&#x5230;&#x808C;&#x6D46;&#x7F51; (SR)-Ca(2+) &#x91CA;&#x653E; HL-1 &#x7684;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#xFF0C;&#x548C;&#x8FD9;&#x79CD;&#x53CD;&#x5E94;&#x662F;&#x4E0D;&#x53D7;&#x635F;&#x7535;&#x538B;&#x4F9D;&#x8D56;&#x7ECF;&#x6E20;&#x9053; &#xFF08;L &#x578B;&#x548C; T &#x578B;&#x901A;&#x9053;&#xFF09; &#x6216;&#x53CD;&#x8F6C;&#x6A21;&#x5F0F; Na(+)/Ca(2+) &#x6362;&#x70ED;&#x5668; &#xFF08;NCX) &#x6291;&#x5236;&#x5242;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x5F97;&#x4EE5;&#x5E9F;&#x9664;&#x8D5B;&#x54CD;&#x5E94;&#x5DF2;&#x77E5;&#x8D5B;&#x6291;&#x5236;&#x5242; (BTP 2 &#x548C; SKF 96365) &#x548C;&#x901A;&#x8FC7;&#x6709;&#x9488;&#x5BF9;&#x6027;&#x7684; Orai1 &#x4E0E; RNAi &#x7EC4;&#x5408;&#x5F0F;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;Orai1 &#x7EC4;&#x5408;&#x5F0F;&#x5BFC;&#x81F4;&#x4F4E;&#x57FA;&#x7EBF;&#x7ECF;&#x548C;&#x51CF;&#x6BD2;&#x7684;&#x5E94;&#x5BF9; thapsigargin (TG) &#x548C;&#x5496;&#x5561;&#x56E0;&#xFF0C;&#x6307;&#x793A;&#x8D5B;&#x53EF;&#x80FD;&#x5728;&#x5FC3;&#x808C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E2D;&#x7684;&#x8F7B;&#x58F0;&#x6761;&#x4EF6;&#x7ECF;&#x7A33;&#x6001;&#x4E2D;&#x53D1;&#x6325;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;&#x76EE;&#x524D;&#xFF0C;&#x6709;&#x5FC3;&#x808C;&#x7EC6;&#x80DE;&#xFF0C;&#x8D5B;&#x7684;&#x4E00;&#x70B9;&#x8BA4;&#x8BC6;&#xFF0C;&#x672C;&#x7814;&#x7A76;&#x7ED3;&#x679C;&#x8868;&#x660E; HL-1 &#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x5C06;&#x5728;&#x8C03;&#x67E5;&#x4E2D;&#x5FC3;&#x810F;&#x7684;&#x8D5B;&#x6240;&#x626E;&#x6F14;&#x7684;&#x89D2;&#x8272;&#x5927;&#x6709;&#x7528;&#x5904;&#x3002;

&#x5E97;&#x9762;&#x5F0F;&#x7ECF;&#x8425;&#x9499;&#x6761;&#x76EE;&#x662F; HL 1 &#x5FC3;&#x808C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E2D;&#x5B58;&#x5728;&#xFF0C;&#x5E76;&#x6709;&#x52A9;&#x4E8E;&#x9759;&#x606F;&#x9499;&#x3002;

Store-operated Ca(2+) entry (SOCE) has recently been shown to be of physiological and pathological importance in the heart, particularly during cardiac hypertrophy. However, measuring changes in intracellular Ca(2+) during SOCE is very difficult to study in adult primary cardiomyocytes. As a result there is a need for a stable and reliable in vitro model of SOCE which can be used to test cardiac drugs and investigate the role of SOCE in cardiac pathology. HL-1 cells are the only immortal cardiomyocyte cell line available that continuously divides and spontaneously contracts while maintaining phenotypic characteristics of the adult cardiomyocyte. To date the role of SOCE has not yet been investigated in the HL-1 cardiac cell line. We report for the first time that these cells expressed stromal interaction molecule 1 (STIM1) and the Ca(2+) release-activated Ca(2+) (CRAC) channel Orai1, which are essential components of the SOCE machinery. In addition, SOCE was tightly coupled to sarcoplasmic reticulum (SR)-Ca(2+) release in HL-1 cells, and such response was not impaired in the presence of voltage dependent Ca(2+) channels (L-type and T-type channels) or reverse mode Na(+)/Ca(2+) exchanger (NCX) inhibitors. We were able to abolish the SOCE response with known SOCE inhibitors (BTP-2 and SKF-96365) and by targeted knockdown of Orai1 with RNAi. In addition, knockdown of Orai1 resulted in lower baseline Ca(2+) and an attenuated response to thapsigargin (TG) and caffeine, indicating that SOCE may play a role in Ca(2+) homeostasis during unstressed conditions in cardiomyocytes. Currently, there is little knowledge about SOCE in cardiomyocytes, and the present results suggest that HL-1 cells will be of great utility in investigating the role of SOCE in the heart.

Store-operated calcium entry is present in HL-1 cardiomyocytes and contributes to resting calcium.

Store-exploit&#xE9; Ca (2 +) entr&#xE9;e (SOCE) a r&#xE9;cemment &#xE9;t&#xE9; montr&#xE9; &#xEA;tre d&#x26;#39;une importance physiologique et pathologique dans le c&#x153;ur, en particulier pendant l&#x26;#39;hypertrophie cardiaque. Toutefois, la mesure des variations intracellulaire de Ca (2 +) pendant SOCE est tr&#xE8;s difficile &#xE0; &#xE9;tudier chez l&#x26;#39;adulte cardiomyocytes primaires. En cons&#xE9;quence, il est n&#xE9;cessaire pour un mod&#xE8;le stable et fiable in vitro de SOCE qui peut &#xEA;tre utilis&#xE9; pour tester des m&#xE9;dicaments cardiaques et d&#x26;#39;enqu&#xEA;ter sur le r&#xF4;le de SOCE en pathologie cardiaque. HL-1 des cellules sont la seule ligne de cellules immortelles cardiomyocytes disponibles qui divise continue et spontan&#xE9;e des contrats tout en pr&#xE9;servant les caract&#xE9;ristiques ph&#xE9;notypiques de la cardiomyocytes adultes. &#xC0; ce jour, le r&#xF4;le de SOCE n&#x26;#39;a pas encore &#xE9;t&#xE9; &#xE9;tudi&#xE9;e dans le HL-1 lign&#xE9;e cellulaire cardiaque. Nous rapportons pour la premi&#xE8;re fois que ces cellules expriment l&#x26;#39;interaction mol&#xE9;cule stromale 1 (STIM1) et le Ca (2 +) &#xE0; lib&#xE9;ration activ&#xE9; Ca (2 +) (CRAC) de canal Orai1, qui sont des composantes essentielles de la machine SOCE. En outre, SOCE a &#xE9;t&#xE9; &#xE9;troitement associ&#xE9;e &#xE0; r&#xE9;ticulum sarcoplasmique (RS)-Ca (2 +) sortie en HL-1 des cellules, et une telle r&#xE9;ponse n&#x26;#39;a pas &#xE9;t&#xE9; alt&#xE9;r&#xE9;e en pr&#xE9;sence de la tension d&#xE9;pend de Ca (2 +) des canaux (de type L et T les canaux de type) ou en mode inverse Na (+) / Ca (2 +) &#xE9;changeur (NCX) inhibiteurs. Nous avons r&#xE9;ussi &#xE0; abolir la r&#xE9;ponse SOCE avec des inhibiteurs connus Soc&#xE9;s (BTP-2 et SKF-96365) et par effet de choc cibl&#xE9;e de Orai1 avec l&#x26;#39;ARNi. En outre, knockdown de Orai1 entra&#xEE;n&#xE9; une baisse de base Ca (2 +) et une r&#xE9;ponse att&#xE9;nu&#xE9;e &#xE0; la thapsigargine (TG) et de la caf&#xE9;ine, ce qui indique que SOCE peut jouer un r&#xF4;le dans Ca (2 +) l&#x26;#39;hom&#xE9;ostasie dans des conditions non stress&#xE9;es dans les cardiomyocytes. Actuellement, il ya peu de connaissances sur SOCE dans les cardiomyocytes, et les pr&#xE9;sents r&#xE9;sultats sugg&#xE8;rent que les cellules HL-1 sera d&#x26;#39;une grande utilit&#xE9; dans les enqu&#xEA;tes sur le r&#xF4;le de SOCE dans le c&#x153;ur.

L&#x26;#39;entr&#xE9;e du calcium magasin fonctionnant est pr&#xE9;sent dans HL-1 cardiomyocytes et contribue &#xE0; repos de calcium

Speicher zu bet&auml;tigende Ca(2+) Eintrag (SOCE) hat k&uuml;rzlich gezeigt, physiologischer und pathologischer Bedeutung im Herzen, besonders w&auml;hrend der Herzhypertrophie. Messung von Ver&auml;nderungen im intrazellul&auml;ren Ca(2+) w&auml;hrend SOCE ist jedoch sehr schwierig, in den Erwachsenen prim&auml;re Cardiomyocytes zu studieren. Infolgedessen gibt es eine Notwendigkeit f&uuml;r eine stabile und zuverl&auml;ssige in vitro Modell der SOCE die kardiale Drogen zu testen und untersuchen die Rolle der SOCE in kardialen Pathologie verwendet werden kann. HL-1-Zellen sind die nur unsterblich Cardiomyocyte Zelllinie zur Verf&uuml;gung, die kontinuierlich dividiert und spontan Vertr&auml;ge unter Beibehaltung der ph&auml;notypische Eigenschaften von den Erwachsenen Cardiomyocyte. Die Rolle der SOCE bis heute ist nicht noch in der HL-1 Herzzelle Linie untersucht worden. Wir Berichten f&uuml;r das erste Mal, dass diese Zellen stromal Interaktion Molek&uuml;l ausgedr&uuml;ckt 1 (STIM1) und der Ca(2+) Freigabe aktiviert Ca(2+) (CRAC) Kanal-Orai1, die wesentlichen Komponenten der SOCE-Maschinen sind. Dar&uuml;ber hinaus SOCE war eng gekoppelt an sarkoplasmatischen Retikulum (SR)-Ca(2+) Ver&ouml;ffentlichung in HL-1-Zellen, und eine solche Reaktion war nicht in Gegenwart von Spannung abh&auml;ngige Ca(2+) (Kan&auml;le L- und T-Typ) oder umgekehrte Modus Na(+)/Ca(2+) W&auml;rmetauscher (NCX) Hemmer beeintr&auml;chtigt. Wir konnten die SOCE-Reaktion mit bekannten SOCE-Inhibitoren (BTP-2 und SKF 96365) und durch gezielte Niederschlag von Orai1 mit RNAi abzuschaffen. Dar&uuml;ber hinaus f&uuml;hrte Niederschlag des Orai1 untere Grundlinie Ca(2+) und einer abgeschw&auml;chten Reaktion auf Thapsigargin (TG) und Koffein, darauf hinweist, dass SOCE in Ca(2+) Hom&ouml;ostase w&auml;hrend unbetontes Bedingungen in den Cardiomyocytes eine Rolle spielen kann. Derzeit gibt es wenig Kenntnisse &uuml;ber SOCE in den Cardiomyocytes, und die vorliegenden Ergebnisse legen nahe, dass HL-1 Zellen von gro&szlig;em Nutzen bei der Untersuchung der Rolle der SOCE im Herzen sein werden.

Shop-betrieben Kalzium-Eintrag ist vorhanden in den HL-1 Cardiomyocytes und tr&auml;gt zur Ruhelosigkeit Kalzium.

Negozio gestito Ca(2+) voce (SOCE) ha recentemente dimostrato di essere di importanza fisiologica e patologica nel cuore, particolarmente durante l&#39;ipertrofia cardiaca. Tuttavia, misurare i cambiamenti Ca(2+) intracellulare durante SOCE &egrave; molto difficile da studiare nei cardiomyocytes primaria degli adulti. Di conseguenza c&#39;&egrave; la necessit&agrave; di un modello affidabile e stabile in vitro dei SOCE che pu&ograve; essere utilizzato per testare farmaci cardiaci e indagare il ruolo dei SOCE in patologia cardiaca. HL-1 cellule sono il solo immortale cardiomyocyte linea cellulare disponibile che continuamente si divide e si contrae spontaneamente mantenendo caratteristiche fenotipiche dell&#39;adulto cardiomyocyte. Ad oggi il ruolo dei SOCE &egrave; non ancora stato studiato nella linea HL-1 delle cellule cardiache. Riportiamo per la prima volta che queste cellule espresso molecola stromale interazione 1 (STIM1) e il canale Ca(2+) (CRAC) attivato dal rilascio di Ca(2+) Orai1, che sono componenti essenziali della macchina SOCE. Inoltre, SOCE era strettamente collegati a reticolo sarcoplasmico (SR)-Ca(2+) rilascio di cellule HL-1 e tale risposta non &egrave; stata alterata in presenza di tensione dipendente Ca(2+) canali (tipo L e T-tipo) o inibitori di modalit&agrave; reverse Na(+)/Ca(2+) scambiatore (NCX). Siamo stati in grado di abolire la risposta SOCE con noti inibitori SOCE (BTP-2 e SKF-96365) e di atterramento mirato di Orai1 con RNAi. Inoltre, atterramento di Orai1 ha portato nella base inferiore Ca(2+) e una risposta attenuata thapsigargin (TG) e caffeina, che indica che SOCE pu&ograve; svolgere un ruolo nell&#39;omeostasi Ca(2+) durante condizioni atone nei cardiomyocytes. Attualmente, ci &egrave; poca conoscenza circa SOCE nei cardiomyocytes, e i presenti risultati suggeriscono che le cellule HL-1 sar&agrave; di grande utilit&agrave; ad indagare il ruolo dei SOCE nel cuore.

Ingresso operato Store calcio &egrave; presente nei cardiomyocytes HL-1 e contribuisce al calcio di riposo.

&#x30B9;&#x30C8;&#x30A2;&#x4F5C;&#x52D5;&#x6027;Ca&#xFF08;2 +&#xFF09;&#x30A8;&#x30F3;&#x30C8;&#x30EA;&#xFF08;SOCE&#xFF09;&#x306F;&#x6700;&#x8FD1;&#x3001;&#x7279;&#x306B;&#x5FC3;&#x81D3;&#x80A5;&#x5927;&#x306E;&#x9593;&#x306B;&#x3001;&#x5FC3;&#x81D3;&#x306E;&#x751F;&#x7406;&#x5B66;&#x7684;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x75C5;&#x7406;&#x5B66;&#x7684;&#x306B;&#x91CD;&#x8981;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x793A;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x3057;&#x304B;&#x3057;&#x3001;SOCE&#x4E2D;&#x306B;&#x7D30;&#x80DE;&#x5185;Ca&#x306E;&#x5909;&#x5316;&#xFF08;2 +&#xFF09;&#x3092;&#x6E2C;&#x5B9A;&#x3059;&#x308B;&#x3068;&#x3001;&#x6210;&#x4EBA;&#x539F;&#x767A;&#x6027;&#x5FC3;&#x7B4B;&#x7D30;&#x80DE;&#x3067;&#x52C9;&#x5F37;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306F;&#x975E;&#x5E38;&#x306B;&#x56F0;&#x96E3;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3002;&#x305D;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x3001;&#x5FC3;&#x81D3;&#x306E;&#x85AC;&#x3092;&#x30C6;&#x30B9;&#x30C8;&#x3057;&#x3001;&#x5FC3;&#x81D3;&#x306E;&#x75C5;&#x7406;&#x5B66;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;SOCE&#x306E;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x8ABF;&#x3079;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x4F7F;&#x7528;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;SOCE&#x306E;in vitro&#x3067;&#x306E;&#x5B89;&#x5B9A;&#x6027;&#x3068;&#x4FE1;&#x983C;&#x6027;&#x306E;&#x9AD8;&#x3044;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x304C;&#x5FC5;&#x8981;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3002; HL-1&#x7D30;&#x80DE;&#x306F;&#x3001;&#x6210;&#x4F53;&#x5FC3;&#x7B4B;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x8868;&#x73FE;&#x578B;&#x7279;&#x6027;&#x3092;&#x7DAD;&#x6301;&#x3057;&#x306A;&#x304C;&#x3089;&#x7D99;&#x7D9A;&#x7684;&#x306B;&#x5206;&#x5272;&#x3057;&#x3001;&#x81EA;&#x767A;&#x7684;&#x306B;&#x5951;&#x7D04;&#x53EF;&#x80FD;&#x306A;&#x552F;&#x4E00;&#x306E;&#x4E0D;&#x6B7B;&#x306E;&#x5FC3;&#x7B4B;&#x7D30;&#x80DE;&#x682A;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3002; SOCE&#x306E;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x3053;&#x308C;&#x307E;&#x3067;&#x306B;&#x307E;&#x3060;HL-1&#x5FC3;&#x7B4B;&#x7D30;&#x80DE;&#x682A;&#x3067;&#x691C;&#x8A0E;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x304C;&#x9593;&#x8CEA;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x306E;&#x5206;&#x5B50;1&#xFF08;STIM1&#xFF09;&#x304A;&#x3088;&#x3073;Ca&#xFF08;2 +&#xFF09;SOCE&#x6A5F;&#x68B0;&#x306E;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x30B3;&#x30F3;&#x30DD;&#x30FC;&#x30CD;&#x30F3;&#x30C8;&#x3067;&#x3042;&#x308A;&#x3001;&#x653E;&#x51FA;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;&#xFF08;2 +&#xFF09;&#xFF08;CRAC&#xFF09;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;Orai1&#x3092;&#x8868;&#x660E;&#x3057;&#x305F;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x521D;&#x3081;&#x3066;&#x5831;&#x544A;&#x3057;&#x305F;&#x3002; HL-1&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x307B;&#x304B;&#x306B;&#x3001;SOCE&#x304C;&#x3057;&#x3063;&#x304B;&#x308A;&#xFF08;SR&#xFF09;&#x7B4B;&#x5C0F;&#x80DE;&#x4F53;&#x306B;&#x7D50;&#x5408;&#x3057;&#x305F;-Ca&#xFF08;2 +&#xFF09;&#x306E;&#x30EA;&#x30EA;&#x30FC;&#x30B9;&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x305D;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306A;&#x5FDC;&#x7B54;&#x306F;&#x3001;&#x96FB;&#x5727;&#x4F9D;&#x5B58;&#x6027;Ca&#xFF08;2 +&#xFF09;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#xFF08;L&#x578B;&#x304A;&#x3088;&#x3073;T&#x306E;&#x5B58;&#x5728;&#x4E0B;&#x3067;&#x640D;&#x306A;&#x308F;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x306A;&#x3044;&#x30BF;&#x30A4;&#x30D7;&#x306E;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#xFF09;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x9006;&#x65B9;&#x5411;&#x30E2;&#x30FC;&#x30C9;&#x306E;Na&#xFF08;+&#xFF09;/ Ca&#xFF08;2 +&#xFF09;&#x306E;&#x4EA4;&#x63DB;&#xFF08;NCX&#xFF09;&#x963B;&#x5BB3;&#x5264;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;&#x65E2;&#x77E5;&#x306E;SOCE&#x963B;&#x5BB3;&#x5264;&#xFF08;BTP-2&#x304A;&#x3088;&#x3073;SKF-96365&#xFF09;&#x3092;&#x6301;&#x3064;&#x3068;RNAi&#x3068;Orai1&#x306E;&#x6A19;&#x7684;&#x30CE;&#x30C3;&#x30AF;&#x30C0;&#x30A6;&#x30F3;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;SOCE&#x5FDC;&#x7B54;&#x3092;&#x5EC3;&#x6B62;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x3001;Orai1&#x306E;&#x30CE;&#x30C3;&#x30AF;&#x30C0;&#x30A6;&#x30F3;&#x306F;SOCE&#x306F;&#x3001;&#x5FC3;&#x7B4B;&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x30B9;&#x30C8;&#x30EC;&#x30B9;&#x306E;&#x306A;&#x3044;&#x72B6;&#x614B;&#x306E;&#x9593;&#xFF08;2 +&#xFF09;&#x6052;&#x5E38;&#x6027;&#x306E;Ca&#x306E;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x679C;&#x305F;&#x3059;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x304C;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3001;&#x4F4E;&#x3044;&#x30D9;&#x30FC;&#x30B9;&#x30E9;&#x30A4;&#x30F3;&#x306E;Ca&#xFF08;2 +&#xFF09;&#x3068;&#x30BF;&#x30D7;&#x30B7;&#x30AC;&#x30EB;&#x30AE;&#x30F3;&#x306B;&#x6E1B;&#x8870;&#x5FDC;&#x7B54;&#xFF08;TG&#xFF09;&#x3068;&#x30AB;&#x30D5;&#x30A7;&#x30A4;&#x30F3;&#x3068;&#x306A;&#x308A;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x73FE;&#x5728;&#x306E;&#x3068;&#x3053;&#x308D;&#x3001;&#x5FC3;&#x7B4B;&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;SOCE&#x306B;&#x3064;&#x3044;&#x3066;&#x5C11;&#x3057;&#x77E5;&#x8B58;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x3001;&#x672C;&#x7D50;&#x679C;&#x306F;&#x3001;HL-1&#x7D30;&#x80DE;&#x306F;&#x3001;&#x5FC3;&#x81D3;&#x306B;SOCE&#x306E;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x8ABF;&#x67FB;&#x3059;&#x308B;&#x5049;&#x5927;&#x306A;&#x30E6;&#x30FC;&#x30C6;&#x30A3;&#x30EA;&#x30C6;&#x30A3;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x5506;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;

&#x30B9;&#x30C8;&#x30A2;&#x4F5C;&#x52D5;&#x6027;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;&#x30A8;&#x30F3;&#x30C8;&#x30EA;&#x306F;HL-1&#x5FC3;&#x7B4B;&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x5B58;&#x5728;&#x3057;&#x3001;&#x4E00;&#x4F11;&#x307F;&#x3059;&#x308B;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;&#x306B;&#x8CA2;&#x732E;

Ca(2+) &#xD56D;&#xBAA9; &#xC800;&#xC7A5;&#xC18C; &#xC6B4;&#xC601; (SOCE) &#xCD5C;&#xADFC; &#xC2EC;&#xC7A5; &#xBE44; &#xB300; &#xC911; &#xD2B9;&#xD788; &#xC2EC;&#xC7A5;, &#xC0DD;&#xB9AC; &#xC801; &#xBC0F; &#xBCD1; &#xC801;&#xC778; &#xC911;&#xC694;&#xC131;&#xC744; &#xBCF4;&#xC600;&#xB2E4;. &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098;, &#xC131;&#xC778; &#xAE30;&#xBCF8; cardiomyocytes&#xC5D0; &#xACF5;&#xBD80;&#xB97C; &#xB9E4;&#xC6B0; &#xC5B4;&#xB835;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; SOCE &#xC911; Ca(2+) &#xC138;&#xD3EC;&#xB0B4;&#xC758; &#xBCC0;&#xD654;&#xB97C; &#xCE21;&#xC815; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xACB0;&#xACFC;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xC2EC;&#xC7A5; &#xBCD1; &#xB9AC;&#xC5D0; SOCE&#xC758; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xC870;&#xC0AC; &#xD558; &#xACE0; &#xC2EC;&#xC7A5; &#xC57D;&#xBB3C; &#xD14C;&#xC2A4;&#xD2B8;&#xC5D0; &#xC0AC;&#xC6A9;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xB294; SOCE&#xC758; &#xC548;&#xC815;&#xC801;&#xC774; &#xACE0; &#xC2E0;&#xB8B0;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xB294; &#xCCB4; &#xC678; &#xBAA8;&#xB378;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xD544;&#xC694;&#xAC00; &#xC788;&#xB2E4;. HL-1 &#xC138;&#xD3EC;&#xAC00; &#xC9C0;&#xC18D;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xB098;&#xB204;&#xACE0; &#xC790;&#xBC1C;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xC131;&#xC778; cardiomyocyte phenotypic &#xD2B9;&#xC131;&#xC744; &#xC720;&#xC9C0; &#xD558;&#xBA74;&#xC11C; &#xACC4;&#xC57D; &#xD558;&#xB294; &#xBD88;&#xC0AC; cardiomyocyte &#xC140; &#xC904; &#xC0AC;&#xC6A9;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. SOCE&#xC758; &#xC5ED;&#xD560;&#xAE4C;&#xC9C0;&#xAC00;&#xC9C0;&#xACE0; &#xD558;&#xC9C0; &#xC544;&#xC9C1; &#xC870;&#xC0AC; HL-1 &#xC2EC;&#xC7A5; &#xC138;&#xD3EC; &#xB77C;&#xC778;. &#xC6B0;&#xB9AC; &#xBCF4;&#xACE0; &#xCC98;&#xC74C;&#xC73C;&#xB85C;&#xC774; &#xC138;&#xD3EC; &#xAE30;&#xC9C8; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9; &#xBD84;&#xC790; &#xD45C;&#xD604; 1 (STIM1)&#xC640; Ca(2+) &#xCD9C;&#xC2DC; &#xD65C;&#xC131; Ca(2+) (CRAC) &#xCC44;&#xB110; Orai1, SOCE &#xAE30;&#xACC4;&#xC758; &#xD544;&#xC218;&#xC801;&#xC778; &#xAD6C;&#xC131; &#xC694;&#xC18C;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB610;&#xD55C;, SOCE&#xB294; &#xBC00;&#xC811; &#xD558; &#xAC8C; &#xACB0;&#xD569; sarcoplasmic &#xADF8;&#xBB3C; (HL-1 &#xC138;&#xD3EC;&#xC640; &#xAC19;&#xC740; &#xC751;&#xB2F5;&#xC5D0; SR)-Ca(2+) &#xB9B4;&#xB9AC;&#xC2A4; &#xC7A5;&#xC560;&#xC778; &#xC804;&#xC555; &#xC885;&#xC18D; Ca(2+) &#xCC44;&#xB110; (L &#xD615; &#xBC0F; T-&#xD0C0;&#xC785; &#xCC44;&#xB110;) &#xB610;&#xB294; &#xC5ED;&#xBC29;&#xD5A5; &#xBAA8;&#xB4DC; Na(+)/Ca(2+) &#xAD50;&#xD658;&#xAE30; (NCX) &#xC5B5;&#xC81C;&#xC81C; &#xC874;&#xC7AC; &#xD588;&#xB2E4;. SOCE &#xC751;&#xB2F5; &#xC54C;&#xB824;&#xC9C4;&#xB41C; SOCE &#xC800; &#xD574;&#xC81C; (BTP 2 &#xBC0F; SKF-96365) &#xACE0; Rnai&#xC640; orai1&#xC758; &#xD0C0;&#xAC9F;&#xB41C; &#xCD5C;&#xC800;&#xC758; &#xD568;&#xC73C;&#xB85C;&#xC368; &#xD3D0;&#xC9C0; &#xC218; &#xC788;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB610;&#xD55C;, &#xCD5C;&#xC800; orai1&#xC758; &#xB354; &#xB0AE;&#xC740; &#xCD08;&#xAE30; Ca(2+) &#xBC0F; thapsigargin (TG)&#xC640; &#xCE74;&#xD398;&#xC778;, SOCE cardiomyocytes&#xC5D0; &#xAC15;&#xC138;&#xAC00; &#xC5C6;&#xB294; &#xC0C1;&#xD0DC;&#xC5D0; &#xC788;&#xB294; &#xB3D9;&#xC548; Ca(2+) &#xD56D;&#xC0C1;&#xC131;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xB294;&#xC9C0;&#xB97C; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0B4;&#xB294; &#xAC10;&#xC1E0; &#xC751;&#xB2F5; &#xACB0;&#xACFC;. &#xD604;&#xC7AC;, cardiomyocytes&#xC5D0; SOCE&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC57D;&#xAC04;&#xC758; &#xC9C0;&#xC2DD;&#xC744; &#xC774;&#xBA70; &#xD604;&#xC7AC;&#xC758; &#xACB0;&#xACFC; HL-1 &#xC140; &#xC911;&#xC2EC;&#xBD80;&#xC5D0; SOCE&#xC758; &#xC5ED;&#xD560; &#xC870;&#xC0AC;&#xC5D0; &#xD6CC;&#xB96D;&#xD55C; &#xC720;&#xD2F8;&#xB9AC;&#xD2F0;&#xC758; &#xC788;&#xC744; &#xAC83;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xAC83;&#xC774; &#xC88B;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xC2A4;&#xD1A0;&#xC5B4; &#xC6B4;&#xC601; &#xCE7C;&#xC298; &#xD56D;&#xBAA9;&#xACFC; HL-1 cardiomyocytes&#xC5D0; &#xC874;&#xC7AC; &#xD558;&#xB294; &#xCE7C;&#xC298; &#xD734;&#xC2DD;&#xC5D0; &#xAE30;&#xC5EC; &#xD55C;&#xB2E4;.

Tienda operada por Ca (2 +) entrada (SOCE) ha sido recientemente demostrado ser de importancia fisiol&#xF3;gica y patol&#xF3;gica en el coraz&#xF3;n, especialmente durante la hipertrofia card&#xED;aca. Sin embargo, la medici&#xF3;n de los cambios en intracelular de Ca (2 +) durante SOCE es muy dif&#xED;cil de estudiar en los cardiomiocitos adultos primarios. Como resultado existe una necesidad de un modelo estable y fiable in vitro de SOCE que puede ser usado para probar f&#xE1;rmacos card&#xED;acos e investigar el papel de SOCE en patolog&#xED;a card&#xED;aca. HL-1 en las c&#xE9;lulas son la &#xFA;nica l&#xED;nea celular inmortal cardiomiocitos disponible que se divide de forma continua y espont&#xE1;neamente los contratos, mientras que el mantenimiento de las caracter&#xED;sticas fenot&#xED;picas de los cardiomiocitos adultos. Hasta la fecha el papel de SOCE todav&#xED;a no se ha investigado en la HL-1 l&#xED;nea celular card&#xED;aca. Se presenta por primera vez que estas c&#xE9;lulas expresan mol&#xE9;cula de la interacci&#xF3;n del estroma 1 (STIM1) y el Ca (2 +) de liberaci&#xF3;n activados por Ca (2 +) (CRAC) del canal Orai1, que son componentes esenciales de la maquinaria SOCE. Adem&#xE1;s, SOCE se acopl&#xF3; bien a la ret&#xED;culo sarcopl&#xE1;smico (SR)-Ca (2 +) en la liberaci&#xF3;n de HL-1 en las c&#xE9;lulas, y esa respuesta no se altera en presencia de tensi&#xF3;n dependiente de Ca (2 +) canales (tipo L y T canales de tipo inverso) o el modo de Na (+) / Ca (2 +) (NCX) inhibidores. Hemos sido capaces de suprimir la respuesta SOCE con inhibidores de la Soce conocidos (BTP-2 y SKF-96365) y por el derribo selectivo de Orai1 con RNAi. Adem&#xE1;s, desmontables de Orai1 result&#xF3; en l&#xED;nea de base inferior de Ca (2 +) y una respuesta atenuada a thapsigargin (TG) y cafe&#xED;na, lo que indica que SOCE puede jugar un papel en Ca (2 +) durante la homeostasis condiciones &#xE1;tonas en cardiomiocitos. En la actualidad, hay poco conocimiento sobre SOCE en los cardiomiocitos, y los resultados actuales sugieren que HL-1 en las c&#xE9;lulas ser&#xE1; de gran utilidad en la investigaci&#xF3;n del papel de SOCE en el coraz&#xF3;n.

Matthew Orange

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