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Microsurgical Venous Pouch Arterial-Bifurcation Aneurysms in the Rabbit Model: Technical Aspects

For ruptured human cerebral aneurysms endovascular embolization has become an equivalent alternative to aneurysm clipping.1 However, large clinical trials ...

Hospital Rudolfstiftung

&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#xFF0C;&#x53D6;&#x81EA;&#x9AD3;&#x6838; (NP) &#x548C;&#x6240;&#x5141;&#x8BB8;&#x6269;&#x6563;&#x5728;&#x5355;&#x5C42;&#x6587;&#x5316;&#x4E2D;&#x5E38;&#x5E38;&#x8868;&#x73B0;&#x51FA;&#x5176;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x5F62;&#x6001;&#x548C;&#x57FA;&#x8D28;&#x86CB;&#x767D;&#x5408;&#x6210;&#x7684;&#x53D8;&#x5316;&#x3002;&#x4F46;&#x662F;&#xFF0C;&#x662F;&#x5426;&#x540C;&#x65F6;&#x6539;&#x5EFA;&#x53D1;&#x751F;&#x5728;&#x80F6;&#x539F;&#x53CA;&#x5176; mRNA &#x6C34;&#x5E73;&#x4E00; (CI)&#x3001; &#x4E8C; (CII) &#x80F6;&#x539F;&#x548C;&#x86CB;&#x767D;&#x805A;&#x7CD6; (&#x805A;&#x96C6;) &#x4E0D;&#x6E05;&#x695A;&#x3002;&#x5728;&#x6B64;&#x7814;&#x7A76;&#x4E2D;&#xFF0C;&#x4ECE; 7 &#x4E2A;&#x4EBA; NP &#x7EC6;&#x80DE;&#x57F9;&#x517B;&#x5355;&#x5206;&#x5B50;&#x819C;&#x548C;&#x5177;&#x4F53; mRNAs CI&#x3001; CII &#x548C;&#x805A;&#x96C6;&#x4E86;&#x91CF;&#x5316;&#x5B9E;&#x65F6;&#x805A;&#x5408;&#x9176;&#x94FE;&#x53CD;&#x5E94;&#x5728;&#x65B0;&#x9C9C; NP &#x7EC4;&#x7EC7;&#x548C;&#x671F;&#x95F4;&#x7684; NP &#x7EC6;&#x80DE;&#x57F9;&#x517B;&#x7684;&#x56DB;&#x4E2A;&#x901A;&#x9053;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;CI&#x3001; CII &#x548C;&#x805A;&#x96C6;&#x86CB;&#x767D;&#x7684;&#x5B58;&#x5728;&#x786E;&#x5B9A;&#x7684;&#x514D;&#x75AB;&#x8367;&#x5149;&#x67D3;&#x8272;&#x7684; NP &#x7684;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x627E;&#x5230;&#x7684;&#x8BCD;&#x3001; CII &#x548C;&#x805A;&#x96C6;&#x5927;&#x91CF;&#x51CF;&#x5C11; mRNA &#x540E;&#x5F00;&#x59CB;&#x5728; DMEM &#x6587;&#x5316;&#x4E0E;&#x65B0;&#x9C9C; NP &#x7EC4;&#x7EC7;&#x4E2D; mRNA &#x6C34;&#x5E73;&#x76F8;&#x6BD4;&#x3002;&#x5728;&#x901A;&#x9053; 2-4&#xFF0C;&#x671F;&#x95F4;&#x6709;&#x4EBA;&#x6307;&#x51FA; CII &#x548C;&#x805A;&#x96C6;&#x7684; mRNA &#x6C34;&#x5E73;&#x4E0D;&#x4F1A;&#x8FDB;&#x4E00;&#x6B65;&#x51CF;&#x5C11;&#x3002;CI &#x7684; mRNA &#x6C34;&#x5E73;&#x662F;&#x7528;&#x6587;&#x5316;&#x7684;&#x6301;&#x7EED;&#x65F6;&#x95F4;&#x5927;&#x5927;&#x51CF;&#x5C11;&#x3002;NP &#x7EC6;&#x80DE;&#x514D;&#x75AB;&#x8367;&#x5149;&#x67D3;&#x8272;&#x663E;&#x793A;&#x6574;&#x4E2A;&#x6587;&#x5316;&#x65F6;&#x671F; CI&#x3001; CII &#x548C;&#x805A;&#x96C6;&#x86CB;&#x767D;&#x7684;&#x8868;&#x8FBE;&#x3002;&#x56E0;&#x6B64;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x6570;&#x636E;&#x663E;&#x793A;&#x671F;&#x95F4;&#x7684; NP &#x7EC6;&#x80DE;&#x57F9;&#x517B;&#x542F;&#x52A8;&#x4F46;&#x7A33;&#x5B9A;&#x86CB;&#x767D;&#x8868;&#x8FBE;&#x7684;&#x5BC6;&#x94A5;&#x77E9;&#x9635;&#xFF0C;CII &#x548C;&#x805A;&#x96C6;&#xFF0C;&#x5728;&#x8FDB;&#x4E00;&#x6B65;&#x6269;&#x5C55;&#x7684;&#x5355;&#x5206;&#x5B50;&#x819C;&#xFF0C;&#x6697;&#x793A;&#x6CA1;&#x6709;&#x529F;&#x80FD;&#x7684;&#x53D8;&#x5316;&#x53D1;&#x751F;&#x5728; NP &#x7EC6;&#x80DE;&#x4E2D;&#x7684;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x4E3A;&#x57FA;&#x8D28;&#x86CB;&#x767D;&#x7684;&#x7279;&#x5F02;&#x6027; mRNA &#x7684;&#x51CF;&#x5C11;&#x3002;

&#x5B9A;&#x91CF;&#x7684;&#x80F6;&#x539F;&#x86CB;&#x767D; I&#x3001; II &#x578B;&#x80F6;&#x539F;&#x548C;&#x86CB;&#x767D;&#x805A;&#x7CD6; mRNA &#x548C;&#x4EBA;&#x7C7B;&#x9AD3;&#x6838;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5355;&#x5C42;&#x57F9;&#x517B;&#x76F8;&#x5E94;&#x86CB;&#x767D;&#x7684;&#x8868;&#x8FBE;&#x3002;

Cells that are taken from the nucleus pulposus (NP) and that are allowed to proliferate in monolayer cultures often exhibit changes in their cell morphology and matrix-protein synthesis. However, whether concomitant alterations occur with respect to their mRNA levels for collagen I (CI), collagen II (CII) and aggrecan (AGG) is unclear. In this study, human NP cells from seven individuals were cultured in monolayers and specific mRNAs for CI, CII and AGG were quantified by real-time polymerase chain reaction in fresh NP tissue and during four passages of NP-cell culture. In addition, the presence of CI, CII and AGG protein was determined by immunofluorescence staining of NP cells. We found a significant reduction of CI, CII and AGG mRNA after the initiation of culture in DMEM compared with mRNA levels in fresh NP tissue. During passages 2--4, no further reduction of mRNA levels for CII and AGG was observed. The mRNA level for CI was reduced significantly with duration of culture. Immunofluorescence staining of cultured NP cells revealed expression of CI, CII and AGG protein during the whole culture period. Our data thus demonstrate a reduction of specific mRNA for matrix proteins during the initiation of NP-cell culture but the stable expression of the key matrix proteins, CII and AGG, during further expansion of the cells in monolayers, suggesting no functional changes occur in cultured NP cells.

Quantitation of collagen I, collagen II and aggrecan mRNA and expression of the corresponding proteins in human nucleus pulposus cells in monolayer cultures.

Les cellules qui sont pr&eacute;lev&eacute;s dans le nucl&eacute;us pulposus (NP) et qui sont autoris&eacute;s &agrave; prolif&eacute;rer dans des cultures monocouches souvent pr&eacute;sentent des changements dans leur synth&egrave;se de morphologie et de la prot&eacute;ine de la matrice cellulaire. Toutefois, si des modifications concomitantes se produisent par rapport &agrave; leurs niveaux d&#39;ARNm de collag&egrave;ne, j&#39;ai (CI), le collag&egrave;ne II (CII) et AGGRECANE (AGG) n&#39;est pas clair. Dans cette &eacute;tude, les cellules humaines de NP de sept individus ont &eacute;t&eacute; cultiv&eacute;s en monocouches et ARNm sp&eacute;cifiques pour CI, CII et AGG ont &eacute;t&eacute; quantifi&eacute;s par r&eacute;action en cha&icirc;ne par polym&eacute;rase en temps r&eacute;el dans les tissus frais de NP et pendant les quatre passages de culture cellulaire-NP. En outre, la pr&eacute;sence de la prot&eacute;ine de CI, CII et AGG a &eacute;t&eacute; d&eacute;termin&eacute;e par immunofluorescence souillant des cellules NP. Nous avons constat&eacute; une r&eacute;duction significative de la CI, CII et AGG ARNm apr&egrave;s l&#39;initiation de la culture DMEM par rapport &agrave; des niveaux d&#39;ARNm dans les tissus frais de NP. Au cours de passages 2--4, aucune autre r&eacute;duction des taux d&#39;ARNm pour CII et AGG a &eacute;t&eacute; observ&eacute;e. Le niveau de l&#39;ARNm de CI a &eacute;t&eacute; r&eacute;duit consid&eacute;rablement avec la dur&eacute;e de la culture. Immunofluorescence souillant des cellules cultiv&eacute;es de NP a r&eacute;v&eacute;l&eacute; l&#39;expression de la prot&eacute;ine de CI, CII et AGG durant la p&eacute;riode enti&egrave;re de la culture. Nos donn&eacute;es montrent donc une r&eacute;duction de l&#39;ARNm sp&eacute;cifique pour les prot&eacute;ines de la matrice pendant l&#39;initiation de la culture de cellules NP mais l&#39;expression stable des prot&eacute;ines cl&eacute;s matrice, CII et AGG, au cours de l&#39;expansion des cellules en monocouches, sugg&eacute;rant que sans changements fonctionnels se produisent dans les cellules cultiv&eacute;es de NP.

Quantification du collag&egrave;ne I, collag&egrave;ne II et AGGRECANE ARNm et l&#39;expression des prot&eacute;ines correspondantes dans les cellules pulposus noyau humain dans des cultures monocouches.

Die Quantifizierung von Kollagen I, Kollagen II und Aggrecan mRNA und die Expression der entsprechenden Proteine &#x200B;&#x200B;in menschlichen Nucleus-pulposus-Zellen in Monolayer-Kulturen.

Le cellule che sono prese dal nucleo polposo (NP) e che sono autorizzati a proliferare in colture monostrato spesso manifestano cambiamenti nella loro cella morfologia e matrix la sintesi proteica. Tuttavia, se si verificano alterazioni concomitanti rispetto ai loro livelli di mRNA per collagene mi (CI), collagene II (CII) e aggrecan (AGG) &egrave; chiaro. In questo studio, le cellule umane NP da sette individui sono state coltivate in monostrati e specifici mRNA per CI, CII e AGG sono stati quantificati dalla reazione a catena della polimerasi in tempo reale in fresco tessuto NP e durante i quattro passaggi di cultura NP-cell. Inoltre, la presenza della proteina di CI, CII e AGG &egrave; stata determinata dall&#39;immunofluorescenza colorazione di cellule NP. Abbiamo trovato una significativa riduzione del CI, CII e AGG mRNA dopo l&#39;avvio della cultura in DMEM rispetto ai livelli di mRNA in fresco tessuto NP. Durante i passaggi 2 - 4, &egrave; stata osservata alcun ulteriore riduzione dei livelli di mRNA per CII e AGG. Il livello di mRNA per IC &egrave; stato ridotto in modo significativo con la durata della coltura. Immunofluorescenza colorazione delle cellule in coltura NP rivelato espressione della proteina di CI, CII e AGG durante il periodo di tutta la cultura. Cos&igrave; i nostri dati dimostrano una riduzione di specifici mRNA per le proteine di matrice durante l&#39;avvio della NP-cell culture, ma l&#39;espressione stabile delle proteine chiave matrix, CII e AGG, durante un&#39;ulteriore espansione delle cellule in monostrati, suggerendo che cambiamenti funzionale si verificano nelle cellule coltivate NP.

Quantificazione del collagene, collagene II e aggrecan mRNA e l&#39;espressione delle proteine corrispondenti nelle cellule di umana nucleo polposo in colture monostrato.

&#x9AC4;&#x6838;&#x304B;&#x3089; &#xFF08;NP&#xFF09; &#x3092;&#x53D6;&#x3089;&#x308C;&#x3001;&#x306F;&#x3001;&#x3057;&#x3070;&#x3057;&#x3070;&#x5358;&#x5C64;&#x57F9;&#x990A;&#x3067;&#x5897;&#x6B96;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306F;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x5F62;&#x614B;&#x3068;&#x30DE;&#x30C8;&#x30EA;&#x30C3;&#x30AF;&#x30B9;&#x86CB;&#x767D;&#x5408;&#x6210;&#x306E;&#x5909;&#x5316;&#x3092;&#x5C55;&#x793A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x305F;&#x3060;&#x3057;&#x3001;&#x4F75;&#x7528;&#x5909;&#x5316;&#x767A;&#x751F;&#x304B;&#x3069;&#x3046;&#x304B;&#x306B;&#x95A2;&#x3057;&#x3066;&#x305D;&#x306E;&#x30B3;&#x30E9;&#x30FC;&#x30B2;&#x30F3;&#x306E; mRNA &#x306E;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x306F; &#xFF08;CI&#xFF09;&#x3001;&#x30B3;&#x30E9;&#x30FC;&#x30B2;&#x30F3; II &#xFF08;CII&#xFF09;&#x3001;&#x30A2;&#x30B0;&#x30EA;&#x30AB;&#x30F3; (AGG) &#x3059;&#x308B;&#x306F;&#x3001;&#x660E;&#x78BA;&#x3067;&#x306F;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3002;&#x672C;&#x7814;&#x7A76;&#x306F;, &#x4EBA;&#x9593;&#x306E; NP &#x7D30;&#x80DE;&#x306E; 7 &#x4EBA;&#x304B;&#x3089;&#x5358;&#x5206;&#x5B50;&#x819C;&#x3067;&#x57F9;&#x990A;&#x3057;&#x305F;&#x3057;&#x3001;&#x7279;&#x5B9A;&#x306E; Mrna &#x306E; CI&#x3001;CII &#x304A;&#x3088;&#x3073; AGG &#x65B0;&#x9BAE;&#x306A; NP &#x7D44;&#x7E54;&#x3068; 4 &#x3064;&#x306E;&#x901A;&#x8DEF;&#x306E; NP &#x7D30;&#x80DE;&#x57F9;&#x990A;&#x4E2D;&#x306B;&#x30EA;&#x30A2;&#x30EB;&#x30BF;&#x30A4;&#x30E0;&#x306E;&#x30DD;&#x30EA;&#x30E1;&#x30E9;&#x30FC;&#x30BC;&#x9023;&#x9396;&#x53CD;&#x5FDC;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x5B9A;&#x91CF;&#x5316;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x3001;CI&#x3001;CII&#x3001;AGG &#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x5B58;&#x5728;&#x306F; NP &#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x87A2;&#x5149;&#x6297;&#x4F53;&#x306E;&#x6C5A;&#x640D;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x6C7A;&#x5B9A;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;CI&#x3001;CII&#x3001;AGG &#x306E;&#x5927;&#x5E45;&#x306A;&#x524A;&#x6E1B;&#x3092;&#x898B;&#x3064;&#x3051;&#x305F;&#x6587;&#x5316; DMEM &#x3067;&#x306E;&#x958B;&#x59CB;&#x306B;&#x65B0;&#x9BAE;&#x306A; NP &#x7D44;&#x7E54;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B; mRNA &#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x3068;&#x6BD4;&#x8F03;&#x3057;&#x305F;&#x5F8C; mRNA&#x3002;&#x901A;&#x8DEF;&#x4E2D;&#x306B; 2 &#x2015; 4&#x3001;CII &#x3068; AGG &#x306E; mRNA &#x306E;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x306E;&#x3055;&#x3089;&#x306A;&#x308B;&#x524A;&#x6E1B;&#x306F;&#x8A8D;&#x3081;&#x3089;&#x308C;&#x306A;&#x304B;&#x3063;&#x305F;&#x3002;CI &#x306E; mRNA &#x306E;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x306F;&#x3001;&#x6587;&#x5316;&#x306E;&#x671F;&#x9593;&#x3092;&#x6709;&#x610F;&#x306B;&#x6E1B;&#x5C11;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x514D;&#x75AB;&#x86CD;&#x5149;&#x67D3;&#x8272;&#x7D30;&#x80DE;&#x57F9;&#x990A; NP CI&#x3001;CII&#x3001;AGG &#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x767A;&#x73FE;&#x5168;&#x4F53;&#x306E;&#x6587;&#x5316;&#x671F;&#x9593;&#x4E2D;&#x306B;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x6211;&#x3005; &#x306E;&#x30C7;&#x30FC;&#x30BF;&#x306F;&#x3001;&#x3053;&#x3046;&#x3057;&#x3066; NP &#x7D30;&#x80DE;&#x57F9;&#x990A;&#x306E;&#x958B;&#x59CB;&#x304C;&#x30AD;&#x30FC; &#x30FB; &#x30DE;&#x30C8;&#x30EA;&#x30AF;&#x30B9;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x3001;CII &#x304A;&#x3088;&#x3073; AGG&#x3001;NP &#x306E;&#x57F9;&#x990A;&#x7D30;&#x80DE;&#x3067;&#x306E;&#x6A5F;&#x80FD;&#x5909;&#x66F4;&#x306F;&#x884C;&#x308F;&#x308C;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3092;&#x793A;&#x5506;&#x30E2;&#x30CE;&#x30EC;&#x30A4;&#x30E4;&#x30FC;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x3055;&#x3089;&#x306A;&#x308B;&#x62E1;&#x5927;&#x306B;&#x5B89;&#x5B9A;&#x767A;&#x73FE;&#x6642;&#x306E;&#x30DE;&#x30C8;&#x30EA;&#x30C3;&#x30AF;&#x30B9;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x7279;&#x5B9A;&#x306E; mRNA &#x306E;&#x524A;&#x6E1B;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x30B3;&#x30E9;&#x30FC;&#x30B2;&#x30F3;&#x306E;&#x5B9A;&#x91CF;&#x306F;, &#x30B3;&#x30E9;&#x30FC;&#x30B2;&#x30F3; II &#x3068;&#x30A2;&#x30B0;&#x30EA;&#x30AB;&#x30F3; mRNA &#x3068;&#x3072;&#x3068;&#x6838;&#x9AC4;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x5358;&#x5C64;&#x57F9;&#x990A;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x5BFE;&#x5FDC;&#x3059;&#x308B;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x767A;&#x73FE;&#x3002;

&#xC138;&#xD3EC; &#xD575; pulposus (NP)&#xC5D0;&#xC11C; &#xCD2C;&#xC601;&#xC744; &#xD558; &#xACE0; &#xC885;&#xC885; &#xB2E8;&#xCE35; &#xBB38;&#xD654;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD655;&#xC0B0;&#xC5D0; &#xD5C8;&#xC6A9; &#xB418;&#xB294; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC758; &#xC138;&#xD3EC; &#xD615;&#xD0DC;&#xD559; &#xBC0F; &#xB9E4;&#xD2B8;&#xB9AD;&#xC2A4; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xD569;&#xC131;&#xC5D0; &#xBCC0;&#xD654; &#xC804;&#xC2DC;. &#xC5EC;&#xBD80;&#xB97C; &#xC218; &#xBC18;&#xD558;&#xB294; &#xBCC0;&#xACBD; &#xCF5C;&#xB77C;&#xAC90;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC758; mRNA &#xC218;&#xC900;&#xC5D0; &#xB300;&#xD574; &#xBC1C;&#xC0DD; &#xD558;&#xB294; &#xB09C; (CI), &#xCF5C;&#xB77C;&#xAC90; II (CII) &#xBC0F; aggrecan (AGG) &#xD558;&#xB294; &#xAC83;&#xC740; &#xBD84;&#xBA85; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xC5D0;&#xC11C;&#xB294; 7 &#xAC1C;&#xC778;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC778;&#xAC04; NP &#xC140; monolayers&#xC5D0;&#xC11C; &#xACBD;&#xC791; &#xD588;&#xB2E4; &#xBC0F; CI, CII &#xBC0F; AGG&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xD2B9;&#xC815; mRNAs &#xC2E0;&#xC120;&#xD55C; NP &#xC870;&#xC9C1; &#xBC0F; NP-&#xC138;&#xD3EC; &#xBC30;&#xC591;&#xC758; 4 &#xAD6C;&#xC808; &#xC911; &#xC2E4;&#xC2DC;&#xAC04; &#xC911; &#xD569; &#xD6A8;&#xC18C; &#xC5F0;&#xC1C4; &#xBC18;&#xC751;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xACC4;&#xB7C9; &#xD588;&#xB2E4;. &#xB610;&#xD55C;, CI, CII &#xBC0F; AGG &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xC874;&#xC7AC;&#xB294; &#xBA74;&#xC5ED; &#xD615;&#xAD11; NP &#xC140;&#xC758; &#xCC29; &#xC0C9;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xACB0;&#xC815; &#xD588;&#xB2E4;. CI, CII AGG&#xC758; &#xC0C1;&#xB2F9;&#xD55C; &#xAC10;&#xC18C;&#xB97C; &#xCC3E;&#xC558;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. mRNA DMEM &#xBB38;&#xD654;&#xC758; &#xAC1C;&#xC2DC; &#xC2E0;&#xC120;&#xD55C; NP &#xC870;&#xC9C1;&#xC5D0;&#xC11C; mRNA &#xC218;&#xC900;&#xACFC; &#xBE44;&#xAD50; &#xD6C4;. &#xAD6C;&#xC808; 2-4 &#xC77C; &#xB3D9;&#xC548; CII &#xBC0F; AGG mRNA &#xC218;&#xC900;&#xC758; &#xCD94;&#xAC00; &#xAC10;&#xC18C; &#xAD00;&#xCC30; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;. CI&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; mRNA &#xC218;&#xC900; &#xBB38;&#xD654;&#xC758; &#xC9C0;&#xC18D; &#xC2DC;&#xAC04;&#xC774; &#xD06C;&#xAC8C; &#xAC10;&#xC18C; &#xD588;&#xB2E4;. &#xBA74;&#xC5ED; &#xD615;&#xAD11; &#xAC80;&#xC0AC; &#xAD50;&#xC591;&#xB41C; NP &#xC140;&#xC758; &#xC5BC;&#xB8E9; &#xC804;&#xCCB4; &#xBB38;&#xD654; &#xAE30;&#xAC04; &#xB3D9;&#xC548; CI, CII &#xBC0F; AGG &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xD45C;&#xD604;&#xC744; &#xACF5;&#xAC1C; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xB370;&#xC774;&#xD130;&#xB294; &#xB530;&#xB77C;&#xC11C; NP-&#xC138;&#xD3EC; &#xBC30;&#xC591;&#xC758; &#xAC1C;&#xC2DC; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xC81C;&#xC548; &#xAE30;&#xB2A5; &#xBCC0;&#xACBD; &#xC5C6;&#xC774; &#xACBD;&#xC791;&#xB41C; &#xD55C; NP &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBC1C;&#xC0DD; &#xD558;&#xB294; monolayers&#xC5D0; &#xC788;&#xB294; &#xC140;&#xC758; &#xCD94;&#xAC00; &#xD655;&#xC7A5; &#xC911; CII &#xBC0F; AGG, &#xD0A4; &#xB9E4;&#xD2B8;&#xB9AD;&#xC2A4; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xC548;&#xC815;&#xC801;&#xC778; &#xC2DD; &#xC911; &#xB9E4;&#xD2B8;&#xB9AD;&#xC2A4; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC744; &#xC704;&#xD55C; &#xD2B9;&#xC815; Mrna&#xC758; &#xAC10;&#xC18C;&#xB97C; &#xBCF4;&#xC5EC; &#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xCF5C;&#xB77C;&#xAC90;&#xC758; &#xC815;&#xB7C9; &#xB098; &#xCF5C;&#xB77C;&#xAC90; II&#xC640; aggrecan Mrna&#xC640; &#xB2E8;&#xCE35; &#xBB38;&#xD654;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC778;&#xAC04;&#xC758; &#xD575; pulposus &#xC140;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD574;&#xB2F9; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xD45C;&#xD604;.

Las c&eacute;lulas que se extraen el n&uacute;cleo pulposo (NP) y que pueden proliferar en las culturas de la monocapa a menudo exhiben cambios en su s&iacute;ntesis de morfolog&iacute;a y prote&iacute;na de la matriz celular. Sin embargo, si concomitantes alteraciones ocurren con respecto a sus niveles de mRNA de col&aacute;geno I (CI), col&aacute;geno II (CII) y aggrecan (AGG) es incierta. En este estudio, las c&eacute;lulas humanas de NP de siete individuos fueron cultivadas en monocapas y mRNAs espec&iacute;ficos para CI, CII y AGG fueron cuantificados mediante reacci&oacute;n en cadena de polimerasa en tiempo real en tejido fresco de NP y durante los cuatro pasajes de cultivo NP-celular. Adem&aacute;s, se determin&oacute; la presencia de la prote&iacute;na CI, CII y AGG por inmunofluorescencia la coloraci&oacute;n de las c&eacute;lulas de NP. Se encontr&oacute; una reducci&oacute;n significativa de la CI, CII y AGG mRNA despu&eacute;s de la iniciaci&oacute;n de la cultura en DMEM comparada con los niveles de mRNA en tejido fresco de NP. Durante los pasos 2 - 4, no se observ&oacute; reducir a&uacute;n m&aacute;s los niveles de mRNA de la CII y AGG. El nivel de mRNA de CI se redujo significativamente con la duraci&oacute;n de la cultura. Inmunofluorescencia tinci&oacute;n de las c&eacute;lulas cultivadas de NP revel&oacute; la expresi&oacute;n de la prote&iacute;na CI, CII y AGG durante el per&iacute;odo entero de la cultura. As&iacute;, nuestros datos demuestran una reducci&oacute;n del mARN espec&iacute;fico para las prote&iacute;nas de la matriz durante la iniciaci&oacute;n del cultivo celular de NP sino la expresi&oacute;n estable de las prote&iacute;nas clave de la matriz, CII y AGG, durante la expansi&oacute;n de las c&eacute;lulas en monocapas, sugiriendo que no hay cambios funcionales en c&eacute;lulas cultivadas de NP.

Cuantificaci&oacute;n de col&aacute;geno I, col&aacute;geno II y aggrecan mRNA y expresi&oacute;n de las correspondientes prote&iacute;nas en c&eacute;lulas de humanos n&uacute;cleo pulposo en culturas monocapa.

Guenther Kleinpeter

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