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Determination of Molecular Structures of HIV Envelope Glycoproteins using Cryo-Electron Tomography and Automated Sub-tomogram Averaging

Since its discovery nearly 30 years ago, more than 60 million people have been infected with the human immunodeficiency virus (HIV) (www.usaid.gov). The ...

National Institutes of Health

Tomographie &#xE9;lectronique est une m&#xE9;thode puissante pour la d&#xE9;termination des structures tridimensionnelles de grandes assemblages macromol&#xE9;culaires, comme les cellules, les organites, et des complexes multiprot&#xE9;iques, lorsque cristallographiques m&#xE9;thodes moyenne ne sont pas applicables. Ici nous avons utilis&#xE9; l&#x26;#39;imagerie tomographique d&#x26;#39;&#xE9;lectrons afin de d&#xE9;terminer l&#x26;#39;architecture mol&#xE9;culaire des cellules d&#x26;#39;Escherichia coli modifi&#xE9;es pour surproduire la TSR chimiotaxie bact&#xE9;rienne r&#xE9;cepteur. Tomographies construits &#xE0; partir de cellules fixes, cryosectioned r&#xE9;v&#xE9;l&#xE9; que la surproduction de la TSR a conduit &#xE0; la formation d&#x26;#39;un r&#xE9;seau &#xE9;tendu compos&#xE9; membrane interne de piles et de longues structures tubulaires. Nous pr&#xE9;sentons une interpr&#xE9;tation de la tomographie en termes de l&#x26;#39;arrangement d&#x26;#39;emballage de la TSR en utilisant des contraintes d&#xE9;riv&#xE9;es de pr&#xE9;c&#xE9;dentes &#xE9;tudes de rayons X et d&#x26;#39;&#xE9;lectrons-cristallographique de amas de r&#xE9;cepteurs. Nos r&#xE9;sultats impliquent que l&#x26;#39;interaction entre les extr&#xE9;mit&#xE9;s cytoplasmiques de la TSR est susceptible de stabiliser la pr&#xE9;sence des r&#xE9;seaux membranaires dans les cellules Tsr surproduction. Nous proposons que invaginations de la membrane qui sont potentiellement capables de favoriser les interactions entre les amas de r&#xE9;cepteurs axiales en apposant membranes pourrait &#xE9;galement &#xEA;tre pr&#xE9;sent dans E. coli de type sauvage et que les agr&#xE9;gats de r&#xE9;cepteurs tels pourraient jouer un r&#xF4;le important dans la transduction du signal lors de la chimiotaxie bact&#xE9;rienne.

L&#x26;#39;imagerie tridimensionnelle en microscopie &#xE9;lectronique des invaginations de la membrane dans Escherichia Coli surproduisant la TSR Receptor chimiotactisme

Dreidimensionale elektronenmikroskopische Abbildung von Membran-Einst&#xFC;lpungen in Escherichia coli &#xFC;berproduziert die Chemotaxis Rezeptor TSR.

&#x7535;&#x5B50;&#x65AD;&#x5C42;&#x626B;&#x63CF;&#x662F;&#x5F3A;&#x5927;&#x7684;&#x786E;&#x5B9A;&#x65B9;&#x6CD5;&#x7684;&#x4E09;&#x7EF4;&#x7ED3;&#x6784;&#x7684;&#x5927;&#x578B;&#x751F;&#x7269;&#x5927;&#x5206;&#x5B50;&#x7684;&#x7A0B;&#x5E8F;&#x96C6;&#xFF0C;&#x5982;&#x7EC6;&#x80DE;&#x3001; &#x7EC6;&#x80DE;&#x5668;&#xFF0C;&#x4E0E; multiprotein &#x914D;&#x5408;&#x7269;&#xFF0C;&#x5F53;&#x6676;&#x4F53;&#x5E73;&#x5747;&#x65B9;&#x6CD5;&#x5E76;&#x4E0D;&#x9002;&#x7528;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#x6211;&#x4EEC;&#x7528;&#x7535;&#x5B50;&#x5C42;&#x6790;&#x6210;&#x50CF;&#x6765;&#x786E;&#x5B9A;&#x5DE5;&#x7A0B; albert Tsr&#x3002; Tomograms &#x6784;&#x9020;&#x4ECE;&#x56FA;&#x5B9A;&#xFF0C;cryosectioned &#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x7EC6;&#x83CC;&#x8D8B;&#x5316;&#x6027;&#x53D7;&#x4F53;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x900F;&#x9732;&#xFF0C;&#x751F;&#x4EA7;&#x8FC7;&#x5269;&#x5BFC;&#x81F4;&#x6269;&#x5C55;&#x5185;&#x90E8;&#x819C;&#x7F51;&#x7EDC;&#x5F62;&#x6210;&#x7684; Tsr &#x7684;&#x5927;&#x80A0;&#x57C3;&#x5E0C;&#x6C0F;&#x5927;&#x80A0;&#x6746;&#x83CC;&#x7684;&#x5206;&#x5B50;&#x4F53;&#x7CFB;&#x7ED3;&#x6784;&#x7EC4;&#x6210;&#x7684;&#x5806;&#x6808;&#x548C;&#x6269;&#x5C55;&#x7684;&#x7BA1;&#x72B6;&#x7ED3;&#x6784;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x76EE;&#x524D;&#x89E3;&#x91CA;&#x65AD;&#x5C42;&#x626B;&#x63CF;&#x7684; Tsr &#x5305;&#x88C5;&#x5B89;&#x6392;&#x4F7F;&#x7528;&#x6765;&#x81EA;&#x4EE5;&#x524D;&#x7684; x &#x5C04;&#x7EBF;&#x548C;&#x7535;&#x5B50;&#x6676;&#x4F53;&#x5B66;&#x7814;&#x7A76;&#x53D7;&#x4F53;&#x96C6;&#x7FA4;&#x7684;&#x7EA6;&#x675F;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x7ED3;&#x679C;&#x6697;&#x793A; Tsr &#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8D28;&#x4E24;&#x7AEF;&#x4E4B;&#x95F4;&#x7684;&#x4E92;&#x52A8;&#x624D;&#x6709;&#x53EF;&#x80FD;&#x7A33;&#x5B9A;&#x9AD8;&#x4EA7; Tsr &#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x819C;&#x7F51;&#x7EDC;&#x7684;&#x5B58;&#x5728;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x5EFA;&#x8BAE;&#x53EF;&#x80FD;&#x80FD;&#x591F;&#x652F;&#x6301;&#x7684;&#x8F74;&#x5411;&#x4E92;&#x52A8;&#x4E2D; apposing &#x819C;&#x53D7;&#x4F53;&#x7C07;&#x4E4B;&#x95F4;&#x7684;&#x819C; invaginations &#x4E5F;&#x53EF;&#x4EE5;&#x672C;&#x5728;&#x91CE;&#x751F;&#x578B;&#x5927;&#x80A0;&#x6746;&#x83CC;&#x4E2D;&#x548C;&#x8FD9;&#x79CD;&#x53D7;&#x4F53;&#x805A;&#x5408;&#x53EF;&#x4EE5;&#x53D1;&#x6325;&#x91CD;&#x8981;&#x4F5C;&#x7528;&#xFF0C;&#x5728;&#x4FE1;&#x53F7;&#x8F6C;&#x5BFC;&#x8FC7;&#x7A0B;&#x7EC6;&#x83CC;&#x8D8B;&#x5316;&#x6027;&#x3002;

&#x5728;&#x9AD8;&#x4EA7; Tsr &#x8D8B;&#x5316;&#x6027;&#x53D7;&#x4F53;&#x7684;&#x5927;&#x80A0;&#x57C3;&#x5E0C;&#x6C0F;&#x5927;&#x80A0;&#x6746;&#x83CC;&#x819C; invaginations &#x7684;&#x4E09;&#x7EF4;&#x7535;&#x5B50;&#x663E;&#x5FAE;&#x6210;&#x50CF;&#x3002;

Electron tomography is a powerful method for determining the three-dimensional structures of large macromolecular assemblies, such as cells, organelles, and multiprotein complexes, when crystallographic averaging methods are not applicable. Here we used electron tomographic imaging to determine the molecular architecture of Escherichia coli cells engineered to overproduce the bacterial chemotaxis receptor Tsr. Tomograms constructed from fixed, cryosectioned cells revealed that overproduction of Tsr led to formation of an extended internal membrane network composed of stacks and extended tubular structures. We present an interpretation of the tomogram in terms of the packing arrangement of Tsr using constraints derived from previous X-ray and electron-crystallographic studies of receptor clusters. Our results imply that the interaction between the cytoplasmic ends of Tsr is likely to stabilize the presence of the membrane networks in cells overproducing Tsr. We propose that membrane invaginations that are potentially capable of supporting axial interactions between receptor clusters in apposing membranes could also be present in wild-type E. coli and that such receptor aggregates could play an important role in signal transduction during bacterial chemotaxis.

Three-dimensional electron microscopic imaging of membrane invaginations in Escherichia coli overproducing the chemotaxis receptor Tsr.

Tomografia di elettroni &egrave; un potente metodo per determinare le strutture tridimensionali di grandi assiemi macromolecolare, come le cellule, gli organelli, e complessi multiproteici, quando cristallografica mediando i metodi non sono applicabili. Qui abbiamo usato elettrone tomografica di imaging per determinare l&#39;architettura molecolare di Escherichia coli cellule ingegnerizzate per sovrapproduzione recettore della chemiotassi batterica Tsr. Tomograms costruito da cellule cryosectioned fisso, ha rivelato che la sovrapproduzione di Tsr ha portato alla formazione di una rete estesa di membrana interna composta da pile ed estese strutture tubolari. Vi presentiamo un&#39;interpretazione del tomogramma in termini la disposizione di imballaggio del Tsr utilizzando vincoli derivati dal precedente radiografia ed elettroni-cristallografici studi degli ammassi di recettore. I nostri risultati implicano che l&#39;interazione tra le estremit&agrave; citoplasmatiche della Tsr &egrave; probabile che stabilizzare la presenza delle reti di membrana in cellule sovrapproduzione Tsr. Noi proponiamo che invaginations membrana che sono potenzialmente in grado di supportare le interazioni assiale tra cluster del recettore in apposite membrane potrebbero essere presenti anche in wild-type e. coli e che tali aggregazioni recettore potrebbero svolgere un ruolo importante nella trasduzione del segnale durante la chemiotassi batterica.

Microscopiche imaging tridimensionale elettrone invaginations membrana in Escherichia coli sovrapproduzione recettore della chemiotassi Tsr.

&#x96FB;&#x5B50;&#x7DDA;&#x30C8;&#x30E2;&#x30B0;&#x30E9;&#x30D5;&#x30A3;&#x30FC;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x7D50;&#x6676;&#x306E;&#x5E73;&#x5747;&#x5316;&#x65B9;&#x6CD5;&#x304C;&#x9069;&#x7528;&#x3055;&#x308C;&#x306A;&#x3044;&#x3088;&#x3046;&#x306A;&#x7D30;&#x80DE;&#x3001;&#x5668;&#x5B98;&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x591A;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x8907;&#x5408;&#x4F53;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306A;&#x5DE8;&#x5927;&#x5206;&#x5B50;&#x30A2;&#x30BB;&#x30F3;&#x30D6;&#x30EA;&#x3001;&#x306E;&#x4E09;&#x6B21;&#x5143;&#x69CB;&#x9020;&#x3092;&#x6C7A;&#x5B9A;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x5F37;&#x529B;&#x306A;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x7D30;&#x83CC;&#x306E;&#x8D70;&#x5316;&#x6027;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x306E;TSR&#x3092;&#x904E;&#x5270;&#x306B;&#x8A2D;&#x8A08;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x5927;&#x8178;&#x83CC;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x5206;&#x5B50;&#x69CB;&#x9020;&#x3092;&#x6C7A;&#x5B9A;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x96FB;&#x5B50;&#x65AD;&#x5C64;&#x30A4;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B8;&#x30F3;&#x30B0;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x56FA;&#x5B9A;&#x3001;&#x51CD;&#x7D50;&#x5207;&#x7247;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x304B;&#x3089;&#x69CB;&#x6210;&#x65AD;&#x5C64;&#x306F;&#x3001;TSR&#x306E;&#x904E;&#x5270;&#x7523;&#x751F;&#x306F;&#x3001;&#x30B9;&#x30BF;&#x30C3;&#x30AF;&#x3068;&#x62E1;&#x5F35;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x7BA1;&#x72B6;&#x69CB;&#x9020;&#x3067;&#x69CB;&#x6210;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x62E1;&#x5F35;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x5185;&#x90E8;&#x306E;&#x819C;&#x30CD;&#x30C3;&#x30C8;&#x30EF;&#x30FC;&#x30AF;&#x306E;&#x5F62;&#x6210;&#x306B;&#x3064;&#x306A;&#x304C;&#x3063;&#x305F;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x30AF;&#x30E9;&#x30B9;&#x30BF;&#x30FC;&#x306E;&#x524D;&#x306E;X&#x7DDA;&#x200B;&#x200B;&#x3068;&#x96FB;&#x5B50;&#x306E;&#x7D50;&#x6676;&#x306E;&#x7814;&#x7A76;&#x304B;&#x3089;&#x6D3E;&#x751F;&#x3057;&#x305F;&#x5236;&#x7D04;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x3001;TSR&#x306E;&#x30D1;&#x30C3;&#x30AD;&#x30F3;&#x306E;&#x914D;&#x7F6E;&#x306E;&#x9762;&#x3067;&#x65AD;&#x5C64;&#x50CF;&#x306E;&#x89E3;&#x91C8;&#x3092;&#x63D0;&#x793A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x306F;&#x3001;TSR&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x4E21;&#x7AEF;&#x9593;&#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x304C;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x904E;&#x5270;T&#x200B;&#x200B;SR&#x306E;&#x819C;&#x30CD;&#x30C3;&#x30C8;&#x30EF;&#x30FC;&#x30AF;&#x306E;&#x5B58;&#x5728;&#x3092;&#x5B89;&#x5B9A;&#x5316;&#x3055;&#x305B;&#x308B;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x304C;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x5506;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x79C1;&#x305F;&#x3061;&#x306F;&#x3001;&#x7D30;&#x83CC;&#x306E;&#x8D70;&#x5316;&#x6027;&#x306E;&#x9593;&#x306E;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#x306B;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x679C;&#x305F;&#x3059;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x308B;&#x819C;&#x3092;apposing&#x3067;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x306E;&#x30AF;&#x30E9;&#x30B9;&#x30BF;&#x30FC;&#x9593;&#x306E;&#x8EF8;&#x65B9;&#x5411;&#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x3092;&#x652F;&#x63F4;&#x3059;&#x308B;&#x6F5C;&#x5728;&#x7684;&#x53EF;&#x80FD;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x819C;&#x306E;&#x9665;&#x5165;&#x306F;&#x3001;&#x91CE;&#x751F;&#x578B;&#x5927;&#x8178;&#x83CC;&#x3084;&#x305D;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306A;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x306E;&#x51DD;&#x96C6;&#x4F53;&#x3067;&#x5B58;&#x5728;&#x3059;&#x308B;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x304C;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x63D0;&#x6848;&#x3059;&#x308B;&#x3002;

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&#xC804;&#xC790; &#xB2E8;&#xCE35; &#xCD2C;&#xC601; organelles, &#xC138;&#xD3EC; &#xB4F1;&#xC758; &#xD070; &#xACE0;&#xBD84;&#xC790; &#xC5B4;&#xC148;&#xBE14;&#xB9AC;&#xC758; 3 &#xCC28;&#xC6D0; &#xAD6C;&#xC870;&#xB97C; &#xD655;&#xC778; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD55C; &#xAC15;&#xB825;&#xD55C; &#xBC29;&#xBC95; &#xC774;&#xBA70; multiprotein &#xB2E8;&#xC9C0;, crystallographic &#xBA54;&#xC11C;&#xB4DC;&#xB97C; &#xD3C9;&#xADE0; &#xD558;&#xB294; &#xACBD;&#xC6B0; &#xC801;&#xC6A9; &#xB418;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC5EC;&#xAE30; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xC804;&#xC790; &#xB2E8;&#xCE35; &#xC774;&#xBBF8;&#xC9D5; &#xC2A4;&#xD0DD; &#xBC0F; &#xD655;&#xC7A5;&#xB41C; &#xAD00; &#xAD6C;&#xC870; &#xAD6C;&#xC131; &#xB41C; &#xB300;&#xC7A5;&#xADE0; &#xC138;&#xD3EC; &#xC138;&#xADE0; chemotaxis &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; &#xACE0;&#xC815;&#xB41C;, cryosectioned &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC0DD;&#xC131; &#xB41C; Tsr. Tomograms &#xB2F9;&#xC2E0;&#xACFC; &#xC124;&#xACC4; &#xACF5;&#xAC1C; &#xD655;&#xC7A5;&#xB41C; &#xB0B4;&#xBD80; &#xB9C9; &#xB124;&#xD2B8;&#xC6CC;&#xD06C;&#xC758; &#xD615;&#xC131;&#xC744; &#xC8FC;&#xB3C4; &#xD558;&#xB294; Tsr&#xC758; &#xADF8; &#xACFC;&#xC789;&#xC758; &#xBD84;&#xC790; &#xAD6C;&#xC870; &#xACB0;&#xC815;. &#xC6B0;&#xB9AC; &#xC774;&#xC804; x-&#xC120; &#xBC0F; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; &#xD074;&#xB7EC;&#xC2A4;&#xD130;&#xC758; &#xC804;&#xC790; crystallographic &#xC5F0;&#xAD6C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD30C;&#xC0DD; &#xB41C; &#xC81C;&#xC57D; &#xC870;&#xAC74;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; Tsr&#xC758; &#xD3EC;&#xC7A5; &#xBC30;&#xCE58; &#xBA74;&#xC5D0;&#xC11C; tomogram&#xC758; &#xD574;&#xC11D; &#xC81C;&#xC2DC;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xACB0;&#xACFC; Tsr&#xC758; &#xC138;&#xD3EC;&#xC9C8; &#xB05D; &#xC0AC;&#xC774;&#xC758; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC740; Tsr overproducing &#xC140;&#xC5D0; &#xB9C9; &#xB124;&#xD2B8;&#xC6CC;&#xD06C;&#xC758; &#xC874;&#xC7AC;&#xB97C; &#xC548;&#xC815; &#xC2DC;&#xD0AC; &#xAC00;&#xB2A5;&#xC131;&#xC774; &#xC758;&#xBBF8;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xC7A0;&#xC7AC;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; apposing &#xC138;&#xD3EC; &#xB9C9;&#xC758; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; &#xD074;&#xB7EC;&#xC2A4;&#xD130; &#xAC04; &#xCD95; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC744; &#xC9C0;&#xC6D0;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xB294; &#xBA64;&#xBE0C;&#xB808;&#xC778; invaginations &#xB610;&#xD55C; &#xC57C;&#xC0DD;-&#xD0C0;&#xC785; &#xB300;&#xC7A5;&#xADE0;&#xC5D0; &#xC874;&#xC7AC; &#xB420; &#xC218; &#xC788;&#xACE0; &#xADF8;&#xB7EC;&#xD55C; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; &#xC9D1;&#xACC4; &#xC138;&#xADE0;&#xC131; chemotaxis &#xB3D9;&#xC548; &#xC2E0;&#xD638; &#xC804;&#xB2EC;&#xC5D0; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xC7AC;&#xC0DD;&#xD560; &#xC218; &#xC81C;&#xC548; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xBA64;&#xBE0C;&#xB808;&#xC778; invaginations chemotaxis &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; Tsr overproducing &#xB300;&#xC7A5;&#xADE0;&#xC5D0;&#xC11C;&#xC758; 3 &#xCC28;&#xC6D0; &#xC804;&#xC790; &#xD604;&#xBBF8;&#xACBD; &#xC601;&#xC0C1;.

La tomograf&#xED;a de electrones es un poderoso m&#xE9;todo para determinar las estructuras tridimensionales de macromol&#xE9;culas asambleas grandes, como las c&#xE9;lulas, org&#xE1;nulos, y complejos multiproteicos, cuando los m&#xE9;todos cristalogr&#xE1;ficos promedio no son aplicables. Aqu&#xED; hemos utilizado im&#xE1;genes de tomograf&#xED;a de electrones para determinar la arquitectura molecular de las c&#xE9;lulas de E. coli modificadas para producir en exceso el TSR receptor de la quimiotaxis bacteriana. Tomograf&#xED;as construidos a partir de c&#xE9;lulas fijas, cryosectioned revel&#xF3; que la sobreproducci&#xF3;n de Tsr condujo a la formaci&#xF3;n de una red de membrana extendido interna compuesta de pilas y extendidas estructuras tubulares. Se presenta una interpretaci&#xF3;n de la tomograf&#xED;a en cuanto a la disposici&#xF3;n de embalaje de TSR con las limitaciones derivadas de los anteriores estudios de rayos X y un electr&#xF3;n-cristalogr&#xE1;fica de las agrupaciones de los receptores. Nuestros resultados implican que la interacci&#xF3;n entre los extremos citopl&#xE1;smicos de Tsr es probable que se estabilice la presencia de las redes de membrana en las c&#xE9;lulas Tsr sobreproducci&#xF3;n. Proponemos que invaginaciones de membrana que son potencialmente capaces de apoyar las interacciones entre los grupos axiales de los receptores en las membranas apposing tambi&#xE9;n podr&#xED;an estar presentes en el medio silvestre de tipo E. coli y que los agregados de los receptores tipo podr&#xED;a desempe&#xF1;ar un importante papel en la transducci&#xF3;n de la se&#xF1;al durante la quimiotaxis bacteriana.

Las im&#xE1;genes tridimensionales microscopio electr&#xF3;nico de invaginaciones de la membrana en Escherichia Coli sobreproducci&#xF3;n de la quimiotaxis Tsr receptor

&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x5EFA;&#x7B51;&#x662F;&#x5B89;&#x5168;&#x7684;&#x5417;&#xFF1F;

Are our buildings safe?

Nos b&acirc;timents sont s&ucirc;rs ?

Sind unsere Geb&#xE4;ude sicher?

Nostri edifici sono sicuri?

&#x79C1;&#x305F;&#x3061;&#x306E;&#x5EFA;&#x7269;&#x306F;&#x5B89;&#x5168;&#x3067;&#x3059;&#x304B;&#xFF1F;

&#xC6B0;&#xB9AC; &#xAC74;&#xBB3C;&#xC740; &#xC548;&#xC804; &#xD55C;&#xAC00;&#xC694;?

&iquest;Son seguros los edificios?

&#x786E;&#x5B9A;&#x4EBA;&#x4F53;&#x514D;&#x75AB;&#x7F3A;&#x9677;&#x75C5;&#x6BD2; (HIV) &#x4E2D;&#x548C;&#x7ED3;&#x6784;&#x6027;&#x7684;&#x51B3;&#x5B9A;&#x6027;&#x56E0;&#x7D20;&#x662F;&#x836F;&#x7269;&#x548C;&#x75AB;&#x82D7;&#x7684;&#x5408;&#x7406;&#x8BBE;&#x8BA1;&#x7684;&#x4E00;&#x4E2A;&#x91CD;&#x8981;&#x7EC4;&#x6210;&#x90E8;&#x5206;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x4F7F;&#x7528; cryoelectron &#x5C42;&#x6790;&#x6210;&#x50CF;&#x548C;&#x539F;&#x5B50;&#x529B;&#x663E;&#x5FAE;&#x955C;&#x7684;&#x5A01;&#x529B;&#x6781;&#x5927;&#x7684;&#x6291;&#x5236;&#x827E;&#x6ECB;&#x75C5;&#x6BD2;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x3001; D1D2 Ig alpha tp &#xFF08;&#x7F29;&#x5199;&#x4E3A; D1D2 IgP)&#x3001; &#x4E00;&#x79CD;&#x4EE3;&#x66FF;&#x7684; Fab &#x5730;&#x533A;&#x5448;&#x73B0; dodecameric CD4 &#x7684;&#x591A;&#x4EF7;&#x6297;&#x4F53;&#x6784;&#x9020;&#x7ED3;&#x6784;&#x7684;&#x7279;&#x70B9;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x663E;&#x793A; D1D2 IgP &#x5177;&#x6709;&#x7ED3;&#x6784;&#x65B0;&#x9896;&#x3001; &#x663E;&#x793A;&#x5176;&#x6297;&#x4F53;&#x6B66;&#x5668;&#x5BC6;&#x5207;&#x76F8;&#x5173;&#x7684; IgM &#x6BD4;&#x66F4;&#x5927;&#x7684;&#x7075;&#x6D3B;&#x6027;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x4F7F;&#x7528;&#x4E2D; D1D2 IgP &#x4E0E;&#x590D;&#x6742;&#x7684;&#x7334;&#x514D;&#x75AB;&#x7F3A;&#x9677;&#x75C5;&#x6BD2;&#xFF0C;&#x76EE;&#x524D; D1D2 IgP &#x53EF;&#x4EE5;&#x9489;&#x4E0A;&#x76F8;&#x540C;&#x7684;&#x75C5;&#x6BD2;&#x548C;&#x5BF9;&#x90BB;&#x8FD1;&#x75C5;&#x6BD2;&#x8868;&#x9762;&#x5CF0;&#x503C;&#x7684;&#x660E;&#x786E;&#x8BC1;&#x636E;&#x3002;&#x89C2;&#x5BDF;&#x5230;&#x7684;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x5230;&#x5728;&#x75C5;&#x6BD2;&#x4FE1;&#x5C01;&#x5CF0;&#x503C;&#x662F;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x7684;&#x7279;&#x5F02;&#x6027; CD4-gp120&#xFF0C;&#x7ED3;&#x679C;&#x56E0;&#x4E3A;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x672A;&#x770B;&#x5230;&#x4E91;&#x6BCD;-IgP&#xFF0C;&#x4E00;&#x79CD;&#x6784;&#x9020;&#xFF0C;&#x7B49;&#x540C;&#x4E8E; D1D2 IgP &#x9664;&#x5916;&#xFF0C;&#x4E3B;&#x8981;&#x7EC4;&#x7EC7;&#x76F8;&#x5BB9;&#x6027;&#x590D;&#x5408;&#x7C7B;-&#x76F8;&#x5173;&#x94FE; A (&#x4E91;&#x6BCD;) &#x66FF;&#x6362;&#x4E0E; CD4 &#x7ED3;&#x6784;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#x4E0E;&#x7834;&#x88C2;&#x75C5;&#x6BD2;&#x5927;&#x5927;&#x63D0;&#x5347;&#x6BD4;&#x4F8B;&#x5173;&#x8054;&#x4ECB;&#x5BFC; CD4 &#x7684;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x3002;&#x6BD4;&#x706D;&#x6D3B; CD4 liganded gp120 gp41 &#x5CF0;&#x503C;&#x591A;&#x53EF;&#x5927;&#x4E8E; 1&#xFF1A; 1&#xFF0C;&#x56E0;&#x4E3A;&#x6240;&#x6709; gp120 gp41 &#x5CF0;&#x503C;&#x5BC6;&#x5207;&#x5E76;&#x5217;&#x7684;&#x4EA4;&#x8054;&#x75C5;&#x6BD2;&#x8868;&#x9762;&#x4E0A;&#x5E94;&#x8BE5;&#x90FD;&#x662F;&#x4E0D;&#x80FD;&#x8BBF;&#x95EE;&#x76EE;&#x6807;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8868;&#x9762;&#x548C;&#x8C03;&#x89E3;&#x6761;&#x76EE;&#xFF0C;&#x7531;&#x4E8E; inter-virus &#x7A57;&#x4EA4;&#x8054;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7ED3;&#x679C;&#x7275;&#x8FDE;&#x7684;&#x7075;&#x6D3B;&#x6027;&#x800C;&#x4E0D;&#x662F;&#x7A7A;&#x95F4;&#x4F4D;&#x963B;&#x5927;&#x5BB9;&#x91CF;&#x6216;&#x5177;&#x6709;&#x591A;&#x79CD;&#x4EF7;&#x503C;&#x672C;&#x8EAB;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x6BD2;&#x6DB2; D1D2 IgP &#x7684;&#x7ED3;&#x6784;&#x6027;&#x89E3;&#x91CA;&#xFF0C;&#x56E0;&#x6B64;&#x5EFA;&#x8BAE;&#x5177;&#x6709;&#x591A;&#x79CD;&#x4EF7;&#x503C;&#x63D0;&#x51FA;&#x7075;&#x6D3B;&#x7684;&#x652F;&#x67B6;&#x4E0A;&#xFF0C;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x5C0F;&#x5206;&#x5B50; HIV &#x8FDB;&#x5165;&#x6291;&#x5236;&#x5242;&#x7684;&#x5173;&#x952E;&#x8BBE;&#x8BA1;&#x6807;&#x51C6;&#x3002;

Cryoelectron &#x4E2D;&#x827E;&#x6ECB;&#x75C5;&#x6BD2;&#x548C;&#x86CB;&#x767D;&#x548C;&#x5176;&#x4E0E;&#x672C;&#x673A;&#x75C5;&#x6BD2; gp120 &#x7684;&#x590D;&#x6742;&#x7684;&#x5C42;&#x6790;&#x6210;&#x50CF;&#x5206;&#x6790;&#x3002;

Identifying structural determinants of human immunodeficiency virus (HIV) neutralization is an important component of rational drug and vaccine design. We used cryoelectron tomography and atomic force microscopy to characterize the structure of an extremely potent HIV-neutralizing protein, D1D2-Ig alpha tp (abbreviated as D1D2-IgP), a polyvalent antibody construct that presents dodecameric CD4 in place of the Fab regions. We show that D1D2-IgP has a novel structure, displaying greater flexibility of its antibody arms than the closely related IgM. Using simian immunodeficiency virus in complex with D1D2-IgP, we present unequivocal evidence that D1D2-IgP can cross-link surface spikes on the same virus and on neighboring viruses. The observed binding to the viral envelope spikes is the result of specific CD4-gp120 interaction, because binding was not observed with MICA-IgP, a construct that is identical to D1D2-IgP except that major histocompatibility complex Class I-related Chain A (MICA) replaces the CD4 moiety. CD4-mediated binding was also associated with a significantly elevated proportion of ruptured viruses. The ratio of inactivated to CD4-liganded gp120-gp41 spikes can be much greater than 1:1, because all gp120-gp41 spikes on the closely apposed surfaces of cross-linked viruses should be incapable of accessing the target cell surface and mediating entry, as a result of inter-virus spike cross-linking. These results implicate flexibility rather than steric bulk or polyvalence per se as a structural explanation for the extreme potency of D1D2-IgP and thus suggest polyvalence presented on a flexible scaffold as a key design criterion for small molecule HIV entry inhibitors.

Cryoelectron tomographic analysis of an HIV-neutralizing protein and its complex with native viral gp120.

Identifier les d&#xE9;terminants structurels de virus de l&#x26;#39;immunod&#xE9;ficience humaine (VIH) de neutralisation est une composante importante de la conception rationnelle des m&#xE9;dicaments et vaccins. Nous avons utilis&#xE9; la tomographie par cryo&#xE9;lectronique et microscopie &#xE0; force atomique pour caract&#xE9;riser la structure d&#x26;#39;un tr&#xE8;s puissant VIH-neutralisation des prot&#xE9;ines, D1D2-Ig alpha tp (en abr&#xE9;g&#xE9; D1D2-IGP), une construction d&#x26;#39;anticorps polyvalent qui pr&#xE9;sente CD4 dodecameric en place des r&#xE9;gions Fab. Nous montrons que D1D2-IGP a une nouvelle structure, l&#x26;#39;affichage plus grande flexibilit&#xE9; de ses bras d&#x26;#39;anticorps IgM que la &#xE9;troitement li&#xE9;. Utilisation de virus d&#x26;#39;immunod&#xE9;ficience simienne en complexe avec D1D2-IGP, nous pr&#xE9;sentons des preuves sans &#xE9;quivoque que D1D2-IGP peut pointes de surface contre-lien sur le m&#xEA;me virus et sur les virus voisins. La liaison observ&#xE9;e aux pointes d&#x26;#39;enveloppe virale est le r&#xE9;sultat d&#x26;#39;sp&#xE9;cifique de CD4-gp120 interaction, en raison de liaison n&#x26;#39;a pas &#xE9;t&#xE9; observ&#xE9;e avec MICA-IgP, une construction qui est identique &#xE0; D1D2-IgP sauf que complexe majeur d&#x26;#39;histocompatibilit&#xE9; de classe I li&#xE9;e cha&#xEE;ne un mica ( ) remplace le fragment de CD4. CD4-m&#xE9;diation de liaison a &#xE9;t&#xE9; &#xE9;galement associ&#xE9;e &#xE0; une proportion significativement plus &#xE9;lev&#xE9;e de virus rompus. Le ratio des CD4 inactiv&#xE9;s &#xE0;-ligand&#xE9; gp120-gp41 pointes peuvent &#xEA;tre beaucoup plus grande que 1:1, parce que toutes les pointes gp120-gp41 sur les surfaces de pr&#xE8;s de appos&#xE9;es r&#xE9;ticul&#xE9;s virus doit &#xEA;tre incapable d&#x26;#39;acc&#xE9;der &#xE0; la surface des cellules cibles et de m&#xE9;diation d&#x26;#39;entr&#xE9;e, &#xE0; la suite de virus de pic entre r&#xE9;ticulation. Ces r&#xE9;sultats impliquent la flexibilit&#xE9; plut&#xF4;t que encombrement st&#xE9;rique ou polyvalence en soi comme une explication structurelle de l&#x26;#39;extr&#xEA;me puissance de D1D2-IGP et sugg&#xE8;rent donc polyvalence pr&#xE9;sent&#xE9; sur un &#xE9;chafaudage souple comme un crit&#xE8;re cl&#xE9; de la conception d&#x26;#39;inhibiteurs de petites mol&#xE9;cules d&#x26;#39;entr&#xE9;e du VIH.

Cryo&#xE9;lectronique analyse tomographique d&#x26;#39;une prot&#xE9;ine du VIH-neutralisation et de son complexe avec Gp120 virale maternelle

Ermittlung der strukturelle Determinanten der Neutralisierung der Human-Immunodeficiency-Virus (HIV) ist ein wichtiger Bestandteil der rationalen Drogen- und Impfstoff-Design. Wir haben Cryoelectron Tomographie und Rasterkraftmikroskopie charakterisieren die Struktur einer extrem starken Neutralisierung der HIV-Protein, alpha D1D2-Ig-Tp (abgek&uuml;rzt D1D2-IgP), ein polyvalenter Antik&ouml;rper-Konstrukt, das Dodecameric CD4 anstelle der Fab Regionen pr&auml;sentiert. Wir zeigen, dass D1D2-IgP eine neuartige Struktur, gr&ouml;&szlig;eren Flexibilit&auml;t der Antik&ouml;rper-Waffen als die eng verwandten IgM anzeigen. Mit simian Immunodeficiency Virus im Komplex mit D1D2-IgP, pr&auml;sentieren wir eindeutige Beweise daf&uuml;r, dass D1D2-IgP Oberfl&auml;che Spitzen auf denselben Virus und auf das benachbarte Viren sich vernetzen kann. Die beobachtete Bindung an die virale Umschlag-Spikes ist das Ergebnis bestimmter CD4-gp120 Interaktion, da Bindung nicht beobachtet wurde mit Glimmer-IgP, ein Konstrukt, das identisch mit D1D2-IgP au&szlig;er, dass major Histocompatibility komplexe Klasse ich-bezogenen Kette A (MICA) ersetzt die CD4-Teil. CD4-vermittelte Bindung war auch verbunden mit einem deutlich erh&ouml;hten Anteil an geplatzten Viren. Das Verh&auml;ltnis der zu CD4-liganded gp120-gp41 Spitzen inaktiviert werden kann viel gr&ouml;&szlig;er als 1:1, weil alle gp120-gp41 Stacheln auf den eng adaptiert Fl&auml;chen von vernetztem Viren, unf&auml;hig sein sollte, den Zugriff auf die Zieloberfl&auml;che Zelle und Eintrag, infolge inter-virus Spitze Vernetzung zu schlichten. Diese Ergebnisse implizieren Flexibilit&auml;t statt sterische Hauptteil oder Unternehmers per se als eine strukturelle Erkl&auml;rung f&uuml;r die extremen Potenz D1D2-IgP und somit schlagen Unternehmers auf flexible Leske als Kriterium f&uuml;r die niedermolekularen HIV-Eintrag-Inhibitoren wichtigsten Design dargestellt.

Cryoelectron tomographische Analyse eine Neutralisierung der HIV-Protein und seine Anlage mit native virale gp120.

Identificazione dei determinanti strutturali di neutralizzazione del virus dell&#39;immunodeficienza umana (HIV) &egrave; un componente importante del design razionale di farmaci e vaccini. Abbiamo usato cryoelectron tomografia e microscopia a forza atomica per caratterizzare la struttura di una proteina HIV-neutralizzante estremamente potente, tp alfa D1D2-Ig (abbreviato come D1D2-IgP), un costrutto polivalente anticorpo che presenta dodecameric CD4 al posto delle regioni Fab. Mostriamo che D1D2-IgP ha una struttura del romanzo, mostrando una maggiore flessibilit&agrave; delle sue braccia anticorpo rispetto l&#39;IgM strettamente correlati. Utilizzando virus dell&#39;immunodeficienza delle scimmie in complesso con D1D2-IgP, vi presentiamo la prova inequivocabile che D1D2-IgP possono cross-link superficie picchi sul virus stesso e sulla vicina virus. L&#39;associazione osservata alle spighe busta virale &egrave; il risultato dell&#39;interazione di CD4-gp120 specifico, perch&eacute; associazione non &egrave; stata osservata con MICA-IgP, un costrutto che &egrave; identico all&#39;IgP D1D2 tranne quello di istocompatibilit&agrave; complesso classe I relativi A catena (MICA) sostituisce il moiety CD4. CD4-mediate associazione era anche associato con una percentuale significativamente elevata di rottura virus. Il rapporto di inattivati a picchi di gp120 gp41 CD4-liganded pu&ograve; essere molto maggiore di 1:1, perch&eacute; tutti i picchi di gp120 gp41 sulle superfici strettamente apposed del reticolato virus dovrebbero essere incapaci di accedere alla superficie della cellula bersaglio e mediazione della voce, a seguito di spike inter-virus cross-linking. Questi risultati implicano flessibilit&agrave; piuttosto che massa sterica o polivalenza per s&eacute; come una spiegazione strutturale per l&#39;estrema potenza di D1D2-IgP e suggeriscono cos&igrave; polivalenza presentato su un&#39;impalcatura flessibile come un criterio chiave di design per piccole molecole inibitori della voce HIV.

Cryoelectron analisi tomografica di una proteina HIV-neutralizzante e relativo complesso con nativo virale gp120.

&#x30D2;&#x30C8;&#x514D;&#x75AB;&#x4E0D;&#x5168;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#xFF08;HIV&#xFF09;&#x4E2D;&#x548C;&#x306E;&#x69CB;&#x9020;&#x6C7A;&#x5B9A;&#x8981;&#x56E0;&#x3092;&#x7279;&#x5B9A;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306F;&#x5408;&#x7406;&#x7684;&#x306A;&#x85AC;&#x7269;&#x3068;&#x30EF;&#x30AF;&#x30C1;&#x30F3;&#x8A2D;&#x8A08;&#x306E;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x30B3;&#x30F3;&#x30DD;&#x30FC;&#x30CD;&#x30F3;&#x30C8;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x975E;&#x5E38;&#x306B;&#x5F37;&#x529B;&#x306A;HIV-&#x4E2D;&#x548C;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x3001;D1D2-Ig&#x306F;&#x30A2;&#x30EB;&#x30D5;&#x30A1;TP&#xFF08;D1D2-IGP&#x3068;&#x7565;&#x8A18;&#xFF09;&#x3001;Fab&#x9818;&#x57DF;&#x306E;&#x4EE3;&#x308F;&#x308A;&#x306B;dodecameric CD4&#x3092;&#x63D0;&#x793A;&#x3059;&#x308B;&#x591A;&#x4FA1;&#x6297;&#x4F53;&#x69CB;&#x7BC9;&#x7269;&#x306E;&#x69CB;&#x9020;&#x3092;&#x7279;&#x5FB4;&#x4ED8;&#x3051;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x4F4E;&#x6E29;&#x96FB;&#x5B50;&#x65AD;&#x5C64;&#x64AE;&#x5F71;&#x6CD5;&#x3068;&#x539F;&#x5B50;&#x9593;&#x529B;&#x9855;&#x5FAE;&#x93E1;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;D1D2-IGP&#x304C;&#x5BC6;&#x63A5;&#x306B;&#x95A2;&#x9023;&#x3057;&#x305F;IgM&#x6297;&#x4F53;&#x3088;&#x308A;&#x3082;&#x3001;&#x305D;&#x306E;&#x6297;&#x4F53;&#x306E;&#x8155;&#x306E;&#x67D4;&#x8EDF;&#x6027;&#x3092;&#x8868;&#x793A;&#x3059;&#x308B;&#x3001;&#x65B0;&#x898F;&#x306A;&#x69CB;&#x9020;&#x3092;&#x6301;&#x3063;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002; D1D2-IGP&#x3068;&#x306E;&#x8907;&#x5408;&#x4F53;&#x3067;&#x30B5;&#x30EB;&#x514D;&#x75AB;&#x4E0D;&#x5168;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306F;D1D2-IGP&#x306F;&#x3001;&#x540C;&#x3058;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x3067;&#x3001;&#x96A3;&#x63A5;&#x3059;&#x308B;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x8868;&#x9762;&#x306E;&#x30B9;&#x30D1;&#x30A4;&#x30AF;&#x30EA;&#x30F3;&#x30AF;&#x6E21;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x308B;&#x660E;&#x78BA;&#x306A;&#x8A3C;&#x62E0;&#x3092;&#x63D0;&#x793A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C7;&#x30A3;&#x30F3;&#x30B0;&#x306F;MICA-IGP&#x3001;&#x305D;&#x306E;&#x4E3B;&#x8981;&#x7D44;&#x7E54;&#x9069;&#x5408;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x8907;&#x5408;&#x4F53;&#x30AF;&#x30E9;&#x30B9;I&#x95A2;&#x9023;&#x9396;&#x3092;&#x9664;&#x3044;&#x3066;D1D2-IGP&#x3068;&#x540C;&#x4E00;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x69CB;&#x9020;&#xFF08;MICA&#x3067;&#x89B3;&#x5BDF;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x306A;&#x3044;&#x305F;&#x3081;&#x3001;&#x7279;&#x5B9A;&#x306E;CD4-gp120&#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x306E;&#x30A8;&#x30F3;&#x30D9;&#x30ED;&#x30FC;&#x30D7;&#x306E;&#x30B9;&#x30D1;&#x30A4;&#x30AF;&#x3078;&#x306E;&#x7D50;&#x5408;&#x304C;&#x89B3;&#x5BDF;&#xFF09;CD4&#x90E8;&#x5206;&#x3092;&#x7F6E;&#x304D;&#x63DB;&#x3048;&#x307E;&#x3059;&#x3002; CD4&#x5A92;&#x4ECB;&#x7D50;&#x5408;&#x306F;&#x307E;&#x305F;&#x3001;&#x7834;&#x88C2;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x306E;&#x5272;&#x5408;&#x304C;&#x6709;&#x610F;&#x306B;&#x4E0A;&#x6607;&#x3068;&#x95A2;&#x9023;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x305F;&#x3002;&#x67B6;&#x6A4B;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x306E;&#x5BC6;&#x63A5;&#x306A;&#x4E26;&#x7F6E;&#x306E;&#x8868;&#x9762;&#x4E0A;&#x306E;&#x3059;&#x3079;&#x3066;&#x306E;gp120-gp41&#x306E;&#x30B9;&#x30D1;&#x30A4;&#x30AF;&#x306F;&#x3001;&#x6A19;&#x7684;&#x7D30;&#x80DE;&#x8868;&#x9762;&#x306B;&#x30A2;&#x30AF;&#x30BB;&#x30B9;&#x3057;&#x3066;&#x30A8;&#x30F3;&#x30C8;&#x30EA;&#x3092;&#x5A92;&#x4ECB;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x306A;&#x3044;&#x3067;&#x306A;&#x3051;&#x308C;&#x3070;&#x306A;&#x3089;&#x306A;&#x3044;&#x306E;&#x3067;&#x3001;CD4-&#x30EA;&#x30AC;&#x30F3;&#x30C9;&#x306E;&#x4E0D;&#x6D3B;&#x5316;&#x3057;&#x305F;gp120-gp41&#x306E;&#x30B9;&#x30D1;&#x30A4;&#x30AF;&#x306E;&#x6BD4;&#x7387;&#x306F;&#x3001;1:1&#x3088;&#x308A;&#x3082;&#x306F;&#x308B;&#x304B;&#x306B;&#x5927;&#x304D;&#x304F;&#x306A;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x9593;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x30B9;&#x30D1;&#x30A4;&#x30AF;&#x200B;&#x200B;&#x67B6;&#x6A4B;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x306F;&#x3001;&#x3080;&#x3057;&#x308D;D1D2-IGP&#x306E;&#x6975;&#x7AEF;&#x306A;&#x52B9;&#x529B;&#x306E;&#x69CB;&#x9020;&#x306E;&#x8AAC;&#x660E;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x305D;&#x308C;&#x81EA;&#x4F53;&#x304C;&#x7ACB;&#x4F53;&#x7684;&#x306A;&#x30D0;&#x30EB;&#x30AF;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x591A;&#x539F;&#x5B50;&#x4FA1;&#x3088;&#x308A;&#x67D4;&#x8EDF;&#x6027;&#x3092;&#x5DFB;&#x304D;&#x8FBC;&#x3080;&#x305F;&#x3081;&#x3001;&#x5C0F;&#x5206;&#x5B50;HIV&#x4FB5;&#x5165;&#x963B;&#x5BB3;&#x5264;&#x306E;&#x4E3B;&#x8981;&#x306A;&#x8A2D;&#x8A08;&#x57FA;&#x6E96;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x67D4;&#x8EDF;&#x306A;&#x8DB3;&#x5834;&#x4E0A;&#x306B;&#x63D0;&#x793A;&#x591A;&#x539F;&#x5B50;&#x4FA1;&#x3092;&#x793A;&#x5506;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;

&#x5929;&#x7136;&#x306E;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x306E;gp120&#x3068;&#x3001;HIV-&#x4E2D;&#x548C;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x305D;&#x306E;&#x8907;&#x5408;&#x4F53;&#x306E;&#x4F4E;&#x6E29;&#x96FB;&#x5B50;&#x30C8;&#x30E2;&#x30B0;&#x30E9;&#x30D5;&#x30A3;&#x30FC;&#x89E3;&#x6790;

&#xC778;&#xAC04; &#xBA74;&#xC5ED; &#xACB0;&#xD54D; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; (HIV) &#xC911;&#xD654;&#xC758; &#xAD6C;&#xC870;&#xC801; &#xACB0;&#xC815; &#xC694;&#xC778; &#xC2DD;&#xBCC4; &#xD569;&#xB9AC;&#xC801;&#xC778; &#xC57D;&#xBB3C; &#xBC0F; &#xBC31;&#xC2E0; &#xB514;&#xC790;&#xC778;&#xC758; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xC694;&#xC18C;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB9E4;&#xC6B0; &#xAC15;&#xB825;&#xD55C; HIV &#xC911;&#xD654; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;, D1D2 Ig &#xC54C;&#xD30C; &#xD30C; &#xB2C8; (D1D2 Igp&#xB85C; &#xCD95;&#xC57D; &#xD574; &#xC11C;), Fab &#xC601;&#xC5ED; &#xB300;&#xC2E0; dodecameric CD4 &#xC120;&#xBB3C; &#xC11E;&#xC740; &#xD56D; &#xCCB4; &#xAD6C;&#xC131;&#xC758; &#xAD6C;&#xC870; &#xD2B9;&#xC131;&#xC744; cryoelectron &#xB2E8;&#xCE35; &#xCD2C;&#xC601; &#xBC0F; &#xC6D0;&#xC790; &#xD798; &#xD604;&#xBBF8;&#xACBD;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD588;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; D1D2 Igp&#xAC00; &#xC18C;&#xC124; &#xAD6C;&#xC870; &#xD45C;&#xC2DC; &#xBCF4;&#xB2E4; &#xBC00;&#xC811; &#xD558; &#xAC8C; &#xAD00;&#xB828;&#xB41C; Igm&#xC758; &#xD56D; &#xCCB4; &#xD314;&#xC758; &#xC720;&#xC5F0;&#xC131;&#xC744; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC720;&#xC778;&#xC6D0; &#xBA74;&#xC5ED; &#xACB0;&#xD54D; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4;&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; D1D2 Igp&#xC640; &#xBCF5;&#xC7A1; &#xD55C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC120;&#xBB3C;&#xC774; &#xB2E8;&#xD638;&#xD55C; &#xC5B4;&#xC870;&#xB85C; &#xC99D;&#xAC70; D1D2 IgP &#xD45C;&#xBA74; &#xC2A4;&#xD30C;&#xC774;&#xD06C; &#xC778;&#xC811; &#xD55C; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4;&#xC640; &#xB3D9;&#xC77C;&#xD55C; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4;&#xC5D0; &#xAD50;&#xCC28; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; &#xC131; &#xBD09;&#xD22C; &#xC2A4;&#xD30C;&#xC774;&#xD06C;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xAD00;&#xCC30; &#xB41C; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xD558;&#xC9C0; &#xAD00;&#xCC30; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4; &#xADF8; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xC870;&#xC9C1; &#xC801;&#xD569;&#xC131; &#xBCF5;&#xC7A1; &#xD55C; &#xD074;&#xB798;&#xC2A4; &#xB098; &#xAD00;&#xB828; &#xCCB4;&#xC778; A (&#xC6B4; &#xBAA8;) &#xB300;&#xCCB4;&#xB97C; &#xC81C;&#xC678; &#xD558; &#xACE0; D1D2 Igp&#xC640; &#xB3D9;&#xC77C;&#xD55C; &#xAD6C;&#xBB38; &#xC6B4; &#xBAA8; Igp&#xC640; CD4 moiety &#xB54C;&#xBB38;&#xC5D0; &#xD2B9;&#xC815; CD4 gp120 &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC758; &#xACB0;&#xACFC; &#xC774;&#xB2E4;. CD4-&#xC911;&#xC7AC; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xD30C;&#xC5F4;&#xB41C; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4;&#xC758; &#xD6E8;&#xC52C; &#xB192;&#xC740; &#xBE44;&#xC728; &#xC5F0;&#xAD00;&#xB3C4; &#xD588;&#xB2E4;. &#xBE44;&#xC728;&#xC774; &#xB9CE;&#xC740; &#xC218; CD4 liganded gp120 gp41 &#xC2A4;&#xD30C;&#xC774;&#xD06C; inactivated &#xBCF5;&#xC0AC;&#xD574;&#xC62C;&#xB41C; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4;&#xC758; &#xBC00;&#xC811; &#xD558; &#xAC8C; apposed &#xD45C;&#xBA74;&#xC5D0; &#xBAA8;&#xB4E0; gp120 gp41 &#xC2A4;&#xD30C;&#xC774;&#xD06C; &#xB300;&#xC0C1; &#xC140; &#xD45C;&#xBA74;&#xC5D0; &#xC561;&#xC138;&#xC2A4; &#xD558; &#xACE0; inter-virus &#xC2A4;&#xD30C;&#xC774;&#xD06C; &#xC2ED;&#xC790;&#xAC00; &#xACB0;&#xACFC; &#xD56D;&#xBAA9;&#xC744; &#xC911;&#xC7AC; &#xD574;&#xC57C; &#xD558;&#xAE30; &#xB54C;&#xBB38;&#xC5D0; 1:1 &#xBCF4;&#xB2E4; &#xD070;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xACB0;&#xACFC; &#xC720;&#xC5F0;&#xC131; &#xBCF4;&#xB2E4;&#xB294; &#xC785;&#xCCB4;&#xC801; &#xB300;&#xB7C9; &#xB610;&#xB294; polyvalence D1D2 Igp&#xC758; &#xADF9;&#xB2E8;&#xC801;&#xC778; &#xD798;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xAD6C;&#xC870;&#xC801; &#xC124;&#xBA85; &#xBCF8;&#xC9C8;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xB0B4;&#xD3EC; &#xD558; &#xACE0; &#xB530;&#xB77C;&#xC11C; polyvalence &#xC791;&#xC740; &#xBD84;&#xC790; HIV &#xD56D;&#xBAA9; &#xC5B5;&#xC81C;&#xC81C;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC8FC;&#xC694; &#xC124;&#xACC4; &#xC870;&#xAC74;&#xC73C;&#xB85C; &#xC720;&#xC5F0;&#xD55C; &#xBE44; &#xACC4;&#xC5D0; &#xC5EC;&#xB294; &#xAC83;&#xC774; &#xC88B;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

HIV &#xC911;&#xD654; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xACFC; &#xADF8;&#xAC83;&#xC758; &#xBCF5;&#xC7A1; &#xD55C; &#xB124;&#xC774;&#xD2F0;&#xBE0C; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; gp120 Cryoelectron &#xB2E8;&#xCE35; &#xBD84;&#xC11D;.

La identificaci&#xF3;n de los determinantes estructurales del virus de inmunodeficiencia humana (VIH) de neutralizaci&#xF3;n es un componente importante de racional de los medicamentos y el dise&#xF1;o de vacunas. Se utiliz&#xF3; la tomograf&#xED;a criomicroscop&#xED;a electr&#xF3;nica y microscop&#xED;a de fuerza at&#xF3;mica para caracterizar la estructura de una extremadamente potente VIH-neutralizante prote&#xED;na, D1D2-Ig alfa TP (abreviado como D1D2-IGP), un constructo anticuerpo polivalente que presenta CD4 dodecameric en lugar de las regiones Fab. Se demuestra que D1D2-IGP tiene una nueva estructura, que muestra una mayor flexibilidad de sus brazos de anticuerpos IgM que la estrechamente relacionada. Uso de virus de la inmunodeficiencia simia en el complejo con D1D2-IGP, se presentan pruebas inequ&#xED;vocas de que D1D2-IGP puede reticular picos de superficie en el mismo virus y el virus de vecinos. La uni&#xF3;n observado que los picos de la envoltura viral es el resultado de espec&#xED;fica CD4-gp120 interacci&#xF3;n, porque la uni&#xF3;n no se observ&#xF3; con MICA-IGP, un constructo que es id&#xE9;ntica a D1D2-IGP excepto que complejo mayor de histocompatibilidad de clase I-relacionada cadena una mica ( ) sustituye el resto CD4. CD4 mediadas vinculantes tambi&#xE9;n se asoci&#xF3; con una proporci&#xF3;n significativamente m&#xE1;s elevada de los virus de la ruptura. La relaci&#xF3;n de inactivadas a CD4-gp120-gp41 liganded picos puede ser mucho mayor que 1:1, ya que todos los picos de la gp120-gp41 en las superficies estrechamente aposici&#xF3;n de reticulados virus debe ser incapaz de acceder a la superficie de la c&#xE9;lula diana y mediar entrada, como resultado de la inter-virus de la espiga de reticulaci&#xF3;n. Estos resultados implican flexibilidad en lugar de volumen est&#xE9;rico o polivalencia per se como una explicaci&#xF3;n estructural para la potencia extrema de D1D2-IGP y por lo tanto sugieren polivalencia presentado en un andamio flexible como un criterio de dise&#xF1;o clave para los inhibidores de mol&#xE9;culas peque&#xF1;as de entrada del VIH.

Criomicroscop&#xED;a electr&#xF3;nica An&#xE1;lisis tomogr&#xE1;fico de una prote&#xED;na del VIH-neutralizaci&#xF3;n y su complejo con gp120 viral nativo

Understanding the hierarchical organization of molecules and organelles within the interior of large eukaryotic cells is a challenge of fundamental interest in cell biology. We are using ion-abrasion scanning electron microscopy (IA-SEM) to visualize this hierarchical organization in an approach that combines focused ion-beam milling with scanning electron microscopy. Here, we extend our previous studies on imaging yeast cells to image subcellular architecture in human melanoma cells and melanocytes at resolutions as high as approximately 6 and approximately 20 nm in the directions parallel and perpendicular, respectively, to the direction of ion-beam milling. The 3D images demonstrate the striking spatial relationships between specific organelles such as mitochondria and membranes of the endoplasmic reticulum, and the distribution of unique cellular components such as melanosomes. We also show that 10nm-sized gold particles and quantum dot particles with 7 nm-sized cores can be detected in single cross-sectional images. IA-SEM is thus a useful tool for imaging large mammalian cells in their entirety at resolutions in the nanometer range.

3D imaging of mammalian cells with ion-abrasion scanning electron microscopy.

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Comprendre l&#x26;#39;organisation hi&#xE9;rarchique des mol&#xE9;cules et des organites au sein de l&#x26;#39;int&#xE9;rieur de grandes cellules eucaryotes est un d&#xE9;fi d&#x26;#39;un int&#xE9;r&#xEA;t fondamental en biologie cellulaire. Nous utilisons d&#x26;#39;ions &#xE0; l&#x26;#39;abrasion microscopie &#xE9;lectronique &#xE0; balayage (MEB-IA) pour visualiser cette organisation hi&#xE9;rarchique dans une approche qui combine port&#xE9; par faisceau d&#x26;#39;ions de fraisage avec microscopie &#xE9;lectronique &#xE0; balayage. Ici, nous &#xE9;tendons nos &#xE9;tudes pr&#xE9;c&#xE9;dentes sur les cellules de levure &#xE0; l&#x26;#39;architecture d&#x26;#39;imagerie subcellulaire l&#x26;#39;image dans les cellules de m&#xE9;lanome humain et les m&#xE9;lanocytes &#xE0; des r&#xE9;solutions aussi &#xE9;lev&#xE9;es que d&#x26;#39;environ 6 et environ 20 nm dans les directions parall&#xE8;les et perpendiculaires, respectivement, &#xE0; la direction de faisceau d&#x26;#39;ions de fraisage. Les images 3D en &#xE9;vidence les relations spatiales entre les gr&#xE9;vistes organites sp&#xE9;cifiques tels que les mitochondries et les membranes du r&#xE9;ticulum endoplasmique et la distribution de composants uniques cellulaires tels que les m&#xE9;lanosomes. Nous montrons &#xE9;galement que les particules d&#x26;#39;or de 10 nm de taille et quantiques des particules de points avec 7 nm de taille des noyaux peuvent &#xEA;tre d&#xE9;tect&#xE9;s dans simples images en coupe transversale. IA-SEM est donc un outil utile pour l&#x26;#39;imagerie de grandes cellules de mammif&#xE8;res dans leur int&#xE9;gralit&#xE9;, &#xE0; des r&#xE9;solutions de l&#x26;#39;ordre du nanom&#xE8;tre.

Imagerie 3D des cellules de mammif&#xE8;res avec Ion-abrasion microscopie &#xE9;lectronique &#xE0; balayage

Die hierarchische Organisation von Molek&uuml;len und Organellen in das Innere des gro&szlig;en eukaryotic Zellen zu verstehen ist eine Herausforderung der Zellbiologie von grundlegendem Interesse. Wir verwenden Ion-Abrieb Rasterelektronenmikroskopie (IA-SEM), um diese hierarchische Organisation in einem Ansatz zu visualisieren, die fokussierten Ionenstrahl Fr&auml;sen mit Rasterelektronenmikroskopie kombiniert. Hier erweitern wir unsere fr&uuml;heren Studien &uuml;ber imaging, Hefezellen Bild subzellulare Architektur im menschlichen Melanomzellen und Melanozyten mit Aufl&ouml;sungen bis zu ca. 6 und ca. 20 nm in den Richtungen parallel und senkrecht, bzw., um die Richtung der Ionenstrahl Fr&auml;sen. Die 3D Bilder zeigen die markanten r&auml;umlichen Beziehungen zwischen bestimmten Organellen wie Mitochondrien und Membranen von dem Endoplasmatischen Retikulum und die Verteilung der einzigartigen Zellbestandteilen wie Melanosomes. Wir zeigen auch, dass 10nm mittlere Goldpartikeln und Quantenteilchen Punkt mit 7 nm Gr&ouml;&szlig;e Kernen im Querschnitt Einzelbilder erkannt werden k&ouml;nnen. IA-SEM ist somit ein n&uuml;tzliches Werkzeug f&uuml;r imaging gro&szlig;e S&auml;ugetier-Zellen in ihrer Gesamtheit mit einer Aufl&ouml;sung im Nanometerbereich.

3D-Bildgebung der S&auml;ugetier-Zellen mit Ionen-Abrieb Rasterelektronenmikroskopie.

Comprendere l&#39;organizzazione gerarchica di molecole e di organelli all&#39;interno di grandi cellule eucariotiche &egrave; una sfida di fondamentale interesse per la biologia cellulare. Stiamo usando ioni-abrasione scanning electron microscopy (IA-SEM) per visualizzare questa organizzazione gerarchica in un approccio che unisce la macinazione del fascio ionico focalizzato con microscopia elettronica a scansione. Qui, estendiamo il nostro precedenti studi sull&#39;imaging delle cellule di lievito architettura sottocellulare immagine in cellule di melanoma umano e melanociti a risoluzioni alti come circa 6 e circa 20 nm in direzioni parallele e perpendicolari, rispettivamente, alla direzione di macinazione del fascio ionico. Le immagini 3D dimostrano la sorprendente relazioni spaziali tra specifici organelli come i mitocondri e le membrane del reticolo endoplasmatico e la distribuzione di componenti cellulari unici come melanosomi. Mostriamo anche che 10 nm e medie particelle d&#39;oro e quantum dot particelle con 7 nm-dimensioni core possono essere rilevate in singole immagini della sezione trasversale. IA-SEM &egrave; quindi uno strumento utile per l&#39;imaging di grandi cellule di mammiferi nella loro interezza a risoluzioni nel campo del nanometro.

3D imaging delle cellule di mammiferi con ioni-abrasione scanning electron microscopy.

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&#xC2A4;&#xCE90;&#xB2DD; &#xC804;&#xC790; &#xD604;&#xBBF8;&#xACBD; &#xC774;&#xC628; &#xB9C8;&#xBAA8; &#xB41C; &#xD3EC;&#xC720;&#xB958; &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; 3 &#xCC28;&#xC6D0; &#xC601;&#xC0C1;.

Comprender la organizaci&#xF3;n jer&#xE1;rquica de las mol&#xE9;culas y org&#xE1;nulos en el interior de grandes c&#xE9;lulas eucariotas es un reto de fundamental inter&#xE9;s en la biolog&#xED;a celular. Estamos utilizando iones de la abrasi&#xF3;n de microscop&#xED;a electr&#xF3;nica de barrido (SEM-IA) para visualizar esta organizaci&#xF3;n jer&#xE1;rquica en un enfoque que combina centrado del haz i&#xF3;nico y de fresado con microscop&#xED;a electr&#xF3;nica de barrido. En este sentido, extender nuestros estudios anteriores sobre las c&#xE9;lulas de levadura de imagen a la arquitectura de la imagen subcelular en c&#xE9;lulas de melanoma humano y melanocitos a resoluciones tan altas como aproximadamente 6 y aproximadamente 20 nm en las direcciones paralelas y perpendiculares, respectivamente, a la direcci&#xF3;n de la molienda del haz i&#xF3;nico. Las im&#xE1;genes en 3D muestran las relaciones espaciales entre los huelguistas org&#xE1;nulos espec&#xED;ficos, tales como las mitocondrias y las membranas del ret&#xED;culo endoplasm&#xE1;tico, y la distribuci&#xF3;n de los &#xFA;nicos componentes celulares, tales como los melanosomas. Tambi&#xE9;n muestran que las part&#xED;culas de oro de 10 nm de tama&#xF1;o y las part&#xED;culas de puntos cu&#xE1;nticos con 7 nm de tama&#xF1;o n&#xFA;cleos se pueden detectar en un solo im&#xE1;genes de cortes transversales. IA-SEM es una herramienta &#xFA;til para obtener im&#xE1;genes de c&#xE9;lulas de mam&#xED;feros grandes en su totalidad en las resoluciones en el rango nanom&#xE9;trico.

Im&#xE1;genes en 3D de c&#xE9;lulas de mam&#xED;feros con Ion-abrasi&#xF3;n Microscop&#xED;a Electr&#xF3;nica de Barrido

&#x827E;&#x6ECB;&#x75C5;&#x6BD2; 1 &#x5305;&#x542B;&#x5185;&#x90E8;&#x8F66;&#x53A2;&#x968F;&#x65F6;&#x68C0;&#x6D4B;&#x56FE;&#x50CF;&#x7684;&#x8584;&#x7247;&#x4ECE;&#x4F7F;&#x7528;&#x5E38;&#x89C4;&#x900F;&#x5C04;&#x7535;&#x5B50;&#x663E;&#x5FAE;&#x955C;&#xFF0C;&#x51FA;&#x8EAB;&#x7684;&#x4F46;&#x53D7;&#x611F;&#x67D3;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E2D;&#x8FDE;&#x63A5;&#x6027;&#x548C; 3D &#x5206;&#x5E03;&#x7684;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x8F66;&#x53A2;&#x5185;&#x4E00;&#x76F4;&#x6709;&#x4E89;&#x8BAE;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x62A5;&#x544A; 3D &#x5206;&#x5E03;&#x7684;&#x75C5;&#x6BD2;&#x5728;&#x611F;&#x67D3;&#x827E;&#x6ECB;&#x75C5;&#x6BD2; 1 &#x4E3B;&#x4EBA;&#x5DE8;&#x566C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4F7F;&#x7528;&#x4F4E;&#x6E29;&#x7535;&#x5B50;&#x65AD;&#x5C42;&#x626B;&#x63CF;&#x548C;&#x79BB;&#x5B50;&#x78E8;&#x635F;&#x626B;&#x63CF;&#x7535;&#x955C; &#xFF08;IA-SEM&#xFF09;&#xFF0C;&#x4E00;&#x79CD;&#x6700;&#x8FD1;&#x5F00;&#x53D1;&#x7EB3;&#x7C73; 3D &#x6210;&#x50CF;&#x7684;&#x6574;&#x4E2A;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x7684;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x4F7F;&#x7528; IA-&#x626B;&#x63CF;&#x7535;&#x955C;&#xFF0C;&#x53D7;&#x611F;&#x67D3;&#x7684;&#x5DE8;&#x566C;&#x7EC6;&#x80DE;&#xFF0C;&#x4E0E;&#x5927;&#x7EA6; 150-200 &#x7EB3;&#x7C73;&#xFF0C;&#x76F4;&#x5F84;&#x548C;&#x957F;&#x5EA6;&#x7684;&#x6700;&#x5927;&#x7EA6; 5 microm &#x4ECE;&#x6C34;&#x75B1;&#x7684;&#x8F66;&#x53A2;&#x5185;&#x5305;&#x542B;&#x88C5;&#x914D;&#x827E;&#x6ECB;&#x75C5;&#x6BD2; 1 virions &#x6269;&#x5C55;&#x5230;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8868;&#x9762;&#x663E;&#x793A;&#x542B;&#x6709;&#x827E;&#x6ECB;&#x75C5;&#x6BD2; 1 &#x7684;&#x7BA1;&#x72B6;&#x8F66;&#x53A2;&#x5E7F;&#x6CDB;&#x7F51;&#x7EDC;&#x7684;&#x5B58;&#x5728;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7C7B;&#x578B;&#x7684;&#x8868;&#x9762;&#x8FDE;&#x63A5;&#x94A2;&#x7BA1;&#x8F66;&#x53A2;&#x5E76;&#x6CA1;&#x6709;&#x9075;&#x5B88;&#x5728; 29/31 &#x67EF; Gag &#x77E9;&#x9635;&#x7A81;&#x53D8;&#x75C5;&#x6BD2;&#x662F;&#x6709;&#x9488;&#x5BF9;&#x6027;&#x7684;&#x5411; multi-vesicular &#x673A;&#x6784;&#x4F55;&#x5730;&#x91CA;&#x653E;&#x5230;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5916;&#x7684;&#x4E2D;&#x671F;&#x611F;&#x67D3;&#x7684; T &#x7EC6;&#x80DE;&#x3002;IA-&#x626B;&#x63CF;&#x7535;&#x955C;&#x6210;&#x50CF;&#x8FD8;&#x5141;&#x8BB8;&#x4ECE;&#x5DE8;&#x566C;&#x7EC6;&#x80DE;&#xFF0C;&#x5176;&#x4E2D;&#x53EF;&#x80FD;&#x4F1A;&#x6298;&#x5F2F;&#x548C;&#x6298;&#x8BA9;&#x75C5;&#x6BD2;&#x6027;&#x8F66;&#x53A2;&#x548C;&#x75C5;&#x6BD2;&#x4F53;&#x886C;&#x6E20;&#x9053;&#x4E0D;&#x65AD;&#x521B;&#x9020;&#x7684;&#x8868;&#x9762;&#x5411;&#x5916;&#x5EF6;&#x4F38;&#x7684;&#x5927;&#x578B;&#x5DE5;&#x4F5C;&#x8868;&#x6837;&#x7ED3;&#x6784;&#x7684;&#x53EF;&#x89C6;&#x5316;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E00;&#x6F5C;&#x5728;&#x673A;&#x5236;&#x7684;&#x9AD8;&#x6548;&#x75C5;&#x6BD2;&#x8D29;&#x8FD0;&#x4E4B;&#x95F4;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8868;&#x9762;&#x548C;&#x5185;&#x90E8;&#x53EF;&#x80FD;&#x4EE3;&#x8868;&#x98A0;&#x8986;&#x7684;&#x9884;&#x5148;&#x5B58;&#x5728;&#x7684;&#x6C34;&#x75B1;&#x673A;&#x68B0;&#x7684;&#x6297;&#x539F;&#x6355;&#x83B7;&#x3001; &#x5904;&#x7406;&#x3001; &#x87AF;&#x5408;&#x548C;&#x6F14;&#x793A;&#x6587;&#x7A3F;&#x3002;

&#x79BB;&#x5B50;&#x78E8;&#x635F;&#x626B;&#x63CF;&#x7535;&#x5B50;&#x663E;&#x5FAE;&#x955C;&#x63ED;&#x793A;&#x4E86;&#x611F;&#x67D3;&#x827E;&#x6ECB;&#x75C5;&#x6BD2;&#x7684;&#x5DE8;&#x566C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8868;&#x9762;&#x8FDE;&#x63A5;&#x94A2;&#x7BA1;&#x7BA1;&#x9053;&#x3002;

HIV-1-containing internal compartments are readily detected in images of thin sections from infected cells using conventional transmission electron microscopy, but the origin, connectivity, and 3D distribution of these compartments has remained controversial. Here, we report the 3D distribution of viruses in HIV-1-infected primary human macrophages using cryo-electron tomography and ion-abrasion scanning electron microscopy (IA-SEM), a recently developed approach for nanoscale 3D imaging of whole cells. Using IA-SEM, we show the presence of an extensive network of HIV-1-containing tubular compartments in infected macrophages, with diameters of approximately 150-200 nm, and lengths of up to approximately 5 microm that extend to the cell surface from vesicular compartments that contain assembling HIV-1 virions. These types of surface-connected tubular compartments are not observed in T cells infected with the 29/31 KE Gag-matrix mutant where the virus is targeted to multi-vesicular bodies and released into the extracellular medium. IA-SEM imaging also allows visualization of large sheet-like structures that extend outward from the surfaces of macrophages, which may bend and fold back to allow continual creation of viral compartments and virion-lined channels. This potential mechanism for efficient virus trafficking between the cell surface and interior may represent a subversion of pre-existing vesicular machinery for antigen capture, processing, sequestration, and presentation.

Ion-abrasion scanning electron microscopy reveals surface-connected tubular conduits in HIV-infected macrophages.

VIH-1-contenant des compartiments internes sont facilement d&#xE9;tect&#xE9;s dans les images de lames minces de cellules infect&#xE9;es &#xE0; l&#x26;#39;aide conventionnelle microscopie &#xE9;lectronique &#xE0; transmission, mais l&#x26;#39;origine, la connectivit&#xE9;, et de la distribution 3D de ces compartiments est rest&#xE9;e controvers&#xE9;e. Ici, nous rapportons la distribution 3D de virus du VIH-1-infect&#xE9;s primaires des macrophages humains en utilisant la tomographie cryo-&#xE9;lectronique et de l&#x26;#39;ion-abrasion microscopie &#xE9;lectronique &#xE0; balayage (MEB-IA), une approche r&#xE9;cemment d&#xE9;velopp&#xE9;e pour l&#x26;#39;imagerie 3D nanom&#xE9;trique de cellules enti&#xE8;res. Utilisation IA-SEM, nous montrent la pr&#xE9;sence d&#x26;#39;un vaste r&#xE9;seau de VIH-1-contenant compartiments tubulaires dans les macrophages infect&#xE9;s, avec des diam&#xE8;tres d&#x26;#39;environ 150-200 nm et des longueurs allant jusqu&#x26;#39;&#xE0; environ 5 microm qui s&#x26;#39;&#xE9;tendent &#xE0; la surface cellulaire &#xE0; partir v&#xE9;siculaire compartiments qui contiennent l&#x26;#39;assemblage des virions VIH-1. Ces types de connect&#xE9; &#xE0; la surface des compartiments tubulaires ne sont pas observ&#xE9;s dans les cellules T infect&#xE9;es par le 29/31 KE Gag-matrice o&#xF9; le virus mutant est destin&#xE9; aux multi-v&#xE9;siculaires corps et lib&#xE9;r&#xE9;e dans le milieu extracellulaire. IA-SEM imagerie permet &#xE9;galement la visualisation de grandes feuilles comme structures qui s&#x26;#39;&#xE9;tendent vers l&#x26;#39;ext&#xE9;rieur depuis les surfaces de macrophages, qui peut plier et rabattre pour permettre la cr&#xE9;ation continue de compartiments virales et virion fourr&#xE9;es canaux. Ce m&#xE9;canisme potentiel pour le trafic de virus efficace entre la surface des cellules et de l&#x26;#39;int&#xE9;rieur peut repr&#xE9;senter une subversion de la machinerie v&#xE9;siculaire pr&#xE9;-existant de capture de l&#x26;#39;antig&#xE8;ne, le traitement, la s&#xE9;questration, et la pr&#xE9;sentation.

Ion-abrasion microscopie &#xE9;lectronique &#xE0; balayage r&#xE9;v&#xE8;le connect&#xE9; &#xE0; la surface des conduites tubulaires infect&#xE9;s par le VIH macrophages

VIH-1-contiene compartimentos internos se detectan f&#xE1;cilmente en las im&#xE1;genes de las secciones delgadas de las c&#xE9;lulas infectadas utilizando microscop&#xED;a electr&#xF3;nica de transmisi&#xF3;n convencional, pero el origen, la conectividad, y la distribuci&#xF3;n 3D de estos compartimientos se ha mantenido controvertido. Aqu&#xED;, se presenta la distribuci&#xF3;n 3D de los virus del VIH-1-infected macr&#xF3;fagos primarios humanos con la crio-tomograf&#xED;a electr&#xF3;nica y la abrasi&#xF3;n de iones de microscop&#xED;a electr&#xF3;nica de barrido (SEM-IA), un enfoque desarrollado recientemente para im&#xE1;genes a nanoescala en 3D de c&#xE9;lulas enteras. Utilizando IA-SEM, que muestran la presencia de una red extensa de VIH-1-contiene compartimientos tubulares en los macr&#xF3;fagos infectados, con di&#xE1;metros de aproximadamente 150-200 nm, y longitudes de hasta aproximadamente 5 micras, que se extienden a la superficie celular de vesicular compartimientos que contienen el montaje del VIH-1 viriones. Estos tipos de superficie conectados a los compartimientos tubulares no se observan en las c&#xE9;lulas T infectadas con el 29/31 KE Gag-matriz mutante donde se dirige el virus a varios cuerpos vesiculares y liberada en el medio extracelular. IA-SEM im&#xE1;genes tambi&#xE9;n permite la visualizaci&#xF3;n de gran tama&#xF1;o, como hoja de estructuras que se extienden hacia fuera desde las superficies de los macr&#xF3;fagos, que pueden doblarse y plegarse para permitir la creaci&#xF3;n continua de compartimentos virales y canales alineados viri&#xF3;n. Este mecanismo potencial para el tr&#xE1;fico eficiente del virus entre la superficie de la c&#xE9;lula y el interior puede representar una subversi&#xF3;n de la maquinaria vesicular preexistente para la captura de ant&#xED;geno, el procesamiento, el secuestro, y la presentaci&#xF3;n.

Ion-abrasi&#xF3;n microscop&#xED;a electr&#xF3;nica de barrido revela que la superficie conectados a conductos tubulares de los macr&#xF3;fagos infectados por el VIH

HIV-1-haltigen Innenf&auml;cher werden bereitwillig in Bildern von D&uuml;nnschliffen aus infizierten Zellen, die mit konventionellen Transmissionselektronenmikroskopie, aber der Ursprung erkannt, Konnektivit&auml;t und 3D Verteilung dieser F&auml;cher ist umstritten geblieben. Hier berichten wir die 3D Verteilung der Viren in HIV-1-infizierten prim&auml;ren menschlichen Makrophagen mit Cryo-Elektron Tomographie und Ion-Abrieb Rasterelektronenmikroskopie (IA-SEM), eine neu entwickelte Ansatz f&uuml;r nanoskalige 3D-Bildgebung ganzer Zellen. Mit IA-SEM, zeigen wir die Anwesenheit von ein ausgedehntes Netz von HIV-1-haltigen tubul&auml;re F&auml;cher in infizierten Makrophagen, mit einem Durchmesser von etwa 150-200 nm und L&auml;ngen von bis zu ca. 5 Microm, die an der Zelloberfl&auml;che von vesikul&auml;ren F&auml;cher zu erweitern, die Montage HIV-1-Virionen enthalten. Diese Art von Oberfl&auml;che verbundene schlauchf&ouml;rmige F&auml;cher werden nicht beobachtet, in T-Zellen, die mit der 29/31-KE Gag-Matrix-Mutant, wo das Virus gezielt an multi-vesicular stellen und in der extrazellul&auml;ren Medium freigesetzt, infiziert. IA-SEM Bildgebung erlaubt auch Visualisierung gro&szlig;er Blatt-wie Strukturen, die nach au&szlig;en von den Oberfl&auml;chen der Makrophagen, erweitern die biegen und Falten zur&uuml;ck, um kontinuierliche Erstellung von viralen F&auml;cher und Virion ges&auml;umten Kan&auml;len erm&ouml;glichen k&ouml;nnen. Dieser potenzielle Mechanismus zum effizienten Virus Menschenhandel zwischen der Zelloberfl&auml;che und inneren kann ein Zersetzung von pre-existing vesikul&auml;ren Maschinen f&uuml;r Antigen-Erfassung, Verarbeitung, Sequestrierung und Pr&auml;sentation darstellen.

Ion-Abrieb Rasterelektronenmikroskopie zeigt Oberfl&auml;che verbundene schlauchf&ouml;rmige Leitungen in HIV-infizierten Makrophagen.

Scomparti interni contenenti l&#39;HIV-1 sono prontamente rilevate nelle immagini delle sezioni sottili da cellule infettate mediante microscopia elettronica della trasmissione convenzionale, ma l&#39;origine, connettivit&agrave; e 3D distribuzione di questi compartimenti &egrave; rimasto controverso. Riportiamo la distribuzione 3D di virus in macrofagi umani primarie HIV-1-infected usando tomografia cryo-elettrone e ion-abrasione scanning electron microscopy (IA-SEM), un approccio recentemente sviluppato per l&#39;imaging 3D su scala nanometrica di cellule intere. Utilizzando IA-SEM, ci mostrano la presenza di un&#39;estesa rete di scomparti tubolari contenenti l&#39;HIV-1 in macrofagi infetti, con diametro di circa 150-200 nm e lunghezze fino a circa 5 microm che si estendono alla superficie delle cellule da compartimenti vescicolari che contengono montaggio virioni di HIV-1. Questi tipi di scomparti tubolari collegati in superficie non sono osservati in cellule T infettate con il mutante KE Gag-matrix 29/31, dove il virus &egrave; mirato a corpi multi-vesicular e rilasciato nel mezzo extracellulare. Imaging IA-SEM anche permette la visualizzazione di grandi dimensioni foglio-come le strutture che si estendono verso l&#39;esterno dalle superfici dei macrofagi, che possono piegare e piegare indietro per consentire la continua creazione di compartimenti virali e canali virione-allineato. Questo meccanismo potenziale per virus efficiente traffico tra la superficie della cellula e l&#39;interno pu&ograve; rappresentare una sovversione della preesistente vescicolare macchinari per la cattura dell&#39;antigene, elaborazione, sequestro e presentazione.

Ione-abrasione scanning electron microscopy rivela superficie collegato condotti tubolari in macrofagi infettati da HIV.

HIV-1&#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x5185;&#x90E8;&#x306E;&#x30B3;&#x30F3;&#x30D1;&#x30FC;&#x30C8;&#x30E1;&#x30F3;&#x30C8;&#x304C;&#x5BB9;&#x6613;&#x306B;&#x5F93;&#x6765;&#x306E;&#x900F;&#x904E;&#x578B;&#x96FB;&#x5B50;&#x9855;&#x5FAE;&#x93E1;&#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x3066;&#x611F;&#x67D3;&#x7D30;&#x80DE;&#x304B;&#x3089;&#x306E;&#x8584;&#x7247;&#x306E;&#x753B;&#x50CF;&#x3067;&#x691C;&#x51FA;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x304C;&#x3001;&#x8D77;&#x6E90;&#x3001;&#x63A5;&#x7D9A;&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x533A;&#x753B;&#x306E;3&#x6B21;&#x5143;&#x5206;&#x5E03;&#x304C;&#x8B70;&#x8AD6;&#x306E;&#x6B8B;&#x3063;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x4F4E;&#x6E29;&#x96FB;&#x5B50;&#x65AD;&#x5C64;&#x64AE;&#x5F71;&#x6CD5;&#x3001;&#x30A4;&#x30AA;&#x30F3;&#x6469;&#x8017;&#x8D70;&#x67FB;&#x578B;&#x96FB;&#x5B50;&#x9855;&#x5FAE;&#x93E1;&#xFF08;IA-SEM&#xFF09;&#x3001;&#x5168;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x30CA;&#x30CE;&#x30B9;&#x30B1;&#x30FC;&#x30EB;3D&#x30A4;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B8;&#x30F3;&#x30B0;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x6700;&#x8FD1;&#x958B;&#x767A;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x30A2;&#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30C1;&#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x3066;HIV-1&#x611F;&#x67D3;&#x521D;&#x4EE3;&#x30D2;&#x30C8;&#x30DE;&#x30AF;&#x30ED;&#x30D5;&#x30A1;&#x30FC;&#x30B8;&#x3067;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x306E;&#x4E09;&#x6B21;&#x5143;&#x5206;&#x5E03;&#x3092;&#x5831;&#x544A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002; IA-SEM&#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x3066;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306E;&#x5E83;&#x7BC4;&#x306A;&#x30CD;&#x30C3;&#x30C8;&#x30EF;&#x30FC;&#x30AF;&#x306E;&#x5B58;&#x5728;&#x3092;&#x793A;&#x3059;HIV-1&#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x5C0F;&#x80DE;&#x304B;&#x3089;&#x7D30;&#x80DE;&#x8868;&#x9762;&#x3078;&#x306E;&#x5EF6;&#x9577;&#x306F;&#x7D04;5&#x30DE;&#x30A4;&#x30AF;&#x30ED;&#x30E2;&#x30EB;&#x306B;&#x7BA1;&#x72B6;&#x306E;&#x7D04;150&#x304B;&#x3089;200 nm&#x306E;&#x76F4;&#x5F84;&#x3092;&#x3082;&#x3064;&#x611F;&#x67D3;&#x30DE;&#x30AF;&#x30ED;&#x30D5;&#x30A1;&#x30FC;&#x30B8;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x30B3;&#x30F3;&#x30D1;&#x30FC;&#x30C8;&#x30E1;&#x30F3;&#x30C8;&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x6700;&#x5927;&#x306E;&#x9577;&#x3055;&#x3092;HIV-1&#x30D3;&#x30EA;&#x30AA;&#x30F3;&#x3092;&#x7D44;&#x307F;&#x7ACB;&#x3066;&#x308B;&#x542B;&#x3080;&#x30B3;&#x30F3;&#x30D1;&#x30FC;&#x30C8;&#x30E1;&#x30F3;&#x30C8;&#x3002;&#x8868;&#x9762;&#x306B;&#x63A5;&#x7D9A;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x7B52;&#x72B6;&#x306E;&#x533A;&#x753B;&#x306E;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x30BF;&#x30A4;&#x30D7;&#x306E;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x304C;&#x591A;&#x5C0F;&#x80DE;&#x4F53;&#x3092;&#x6A19;&#x7684;&#x3068;&#x3057;&#x3001;&#x7D30;&#x80DE;&#x5916;&#x57F9;&#x5730;&#x4E2D;&#x306B;&#x653E;&#x51FA;&#x3055;&#x308C;&#x308B;31&#x5206;&#x306E;29 KE&#x30AE;&#x30E3;&#x30B0;&#x30DE;&#x30C8;&#x30EA;&#x30C3;&#x30AF;&#x30B9;&#x5909;&#x7570;&#x4F53;&#x306B;&#x611F;&#x67D3;&#x3057;&#x305F;T&#x7D30;&#x80DE;&#x3067;&#x89B3;&#x5BDF;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3002; IA-SEM&#x30A4;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B8;&#x30F3;&#x30B0;&#x306F;&#x200B;&#x200B;&#x307E;&#x305F;&#x3001;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x306E;&#x30B3;&#x30F3;&#x30D1;&#x30FC;&#x30C8;&#x30E1;&#x30F3;&#x30C8;&#x3068;&#x30D3;&#x30EA;&#x30AA;&#x30F3;&#x88CF;&#x5730;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x306E;&#x7D99;&#x7D9A;&#x7684;&#x306A;&#x5275;&#x51FA;&#x3092;&#x53EF;&#x80FD;&#x306B;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x66F2;&#x3052;&#x308B;&#x3068;&#x80CC;&#x9762;&#x6298;&#x308B;&#x304B;&#x3082;&#x3057;&#x308C;&#x306A;&#x3044;&#x30DE;&#x30AF;&#x30ED;&#x30D5;&#x30A1;&#x30FC;&#x30B8;&#x306E;&#x8868;&#x9762;&#x304B;&#x3089;&#x5916;&#x5074;&#x306B;&#x5EF6;&#x3073;&#x308B;&#x5927;&#x898F;&#x6A21;&#x306A;&#x30B7;&#x30FC;&#x30C8;&#x72B6;&#x306E;&#x69CB;&#x9020;&#x3092;&#x53EF;&#x8996;&#x5316;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x7D30;&#x80DE;&#x8868;&#x9762;&#x3068;&#x5185;&#x90E8;&#x3068;&#x306E;&#x9593;&#x306E;&#x52B9;&#x7387;&#x7684;&#x306A;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x306E;&#x4EBA;&#x8EAB;&#x58F2;&#x8CB7;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x3053;&#x306E;&#x6F5C;&#x5728;&#x7684;&#x306A;&#x30E1;&#x30AB;&#x30CB;&#x30BA;&#x30E0;&#x306F;&#x3001;&#x6297;&#x539F;&#x306E;&#x53D6;&#x308A;&#x8FBC;&#x307F;&#x3001;&#x51E6;&#x7406;&#x3001;&#x9694;&#x96E2;&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x30D7;&#x30EC;&#x30BC;&#x30F3;&#x30C6;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x65E2;&#x5B58;&#x306E;&#x5C0F;&#x80DE;&#x306E;&#x6A5F;&#x68B0;&#x306E;&#x8EE2;&#x8986;&#x3092;&#x8868;&#x3059;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x308B;&#x3002;

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HIV 1 &#xD3EC;&#xD568; &#xB41C; &#xB0B4;&#xBD80; &#xAD6C;&#xD68D;&#xC740; &#xC27D;&#xAC8C; &#xC5F0;&#xACB0;&#xACFC; &#xC774;&#xB4E4;&#xC774; &#xAD6C;&#xD68D;&#xC758; 3 &#xCC28;&#xC6D0; &#xBD84;&#xD3EC; &#xB17C;&#xB780;&#xC774; &#xB0A8;&#xC544; &#xC788;&#xB2E4; &#xAE30;&#xC6D0;, &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xAE30;&#xC874;&#xC758; &#xC804;&#xC1A1; &#xC804;&#xC790; &#xD604;&#xBBF8;&#xACBD;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xAC10;&#xC5FC; &#xB41C; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC587;&#xC740; &#xC139;&#xC158;&#xC758; &#xC774;&#xBBF8;&#xC9C0;&#xC5D0;&#xC11C; &#xAC80;&#xC0C9; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC5EC;&#xAE30;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; &#xBCF4;&#xACE0;&#xC11C; &#xACF3;&#xC744; &#xC54C;&#xC544;&#xB0B4;&#xB294;-&#xC804;&#xC790; &#xB2E8;&#xCE35; &#xCD2C;&#xC601; &#xBC0F; &#xC774;&#xC628; &#xB9C8;&#xBAA8; &#xC2A4;&#xCE90;&#xB2DD; &#xC804;&#xC790; &#xD604;&#xBBF8;&#xACBD; (SEM &#xC544;&#xC774;&#xC624;&#xC640;), &#xC804;&#xCCB4; &#xC140;&#xC758; &#xB098;&#xB178; 3D &#xC601;&#xC0C1;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xCD5C;&#xADFC; &#xAC1C;&#xBC1C; &#xB41C; &#xC811;&#xADFC; &#xBC29;&#xC2DD; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xAE30;&#xBCF8;&#xC758; &#xC778;&#xAC04; &#xC138;&#xD3EC;&#xB97C; &#xC5D0;&#xC774;&#xC988;-1 &#xAC10;&#xC5FC;&#xC5D0; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4;&#xC758; 3D &#xBC30;&#xD3EC; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. IA SEM&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC;, &#xC6B0;&#xB9AC; &#xC57D; 150-200 nm&#xC758; &#xC9C1;&#xACBD; &#xBC0F; &#xC5B4;&#xC148;&#xBE14; HIV-1 virions&#xB97C; &#xD3EC;&#xD568; &#xD558;&#xB294; &#xAE30;&#xACF5;&#xC744; &#xAD6C;&#xD68D;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC140; &#xD45C;&#xBA74;&#xC5D0; &#xD655;&#xC7A5; &#xD558;&#xB294; &#xC57D; 5 microm &#xCD5C;&#xB300;&#xC758; &#xAE38;&#xC774; &#xD568;&#xAED8; &#xAC10;&#xC5FC; &#xB41C; &#xB300; &#xC2DD; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0;&#xC11C; HIV 1 &#xD3EC;&#xD568; &#xB41C; &#xAD00; &#xAD6C;&#xD68D;&#xC758; &#xAD11;&#xBC94;&#xC704; &#xD55C; &#xB124;&#xD2B8;&#xC6CC;&#xD06C;&#xC758; &#xC874;&#xC7AC;&#xB97C; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xC720;&#xD615;&#xC758; &#xD45C;&#xBA74;&#xC5D0; &#xC5F0;&#xACB0; &#xB41C; &#xAD00; &#xBAA8; &#xAD6C;&#xD68D;&#xC740; T &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0; &#xAC10;&#xC5FC; &#xB41C; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4;&#xB294; multi-vesicular &#xC2DC;&#xCCB4;&#xB97C; &#xB300;&#xC0C1;&#xC73C;&#xB85C; &#xD558; &#xACE0; &#xC138;&#xD3EC; &#xC678; &#xB9E4;&#xCCB4;&#xB85C; &#xCD9C;&#xC2DC; 29/31 &#xC560; &#xAC1C; &#xADF8; &#xB9E4;&#xD2B8;&#xB9AD;&#xC2A4; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774;&#xC5D0; &#xAD00;&#xCC30; &#xD558;&#xC9C0;. IA-sem&#xC758; &#xC601;&#xC0C1;&#xC5D0;&#xB294; &#xBCA4;&#xB4DC; &#xD558; &#xACE0; &#xB2E4;&#xC2DC; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; &#xC131; &#xAD6C;&#xD68D; &#xBC0F; virion &#xC904;&#xC9C0;&#xC5B4; &#xCC44;&#xB110;&#xC758; &#xC9C0;&#xC18D;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xC791;&#xC131;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xB3C4;&#xB85D; &#xC811;&#xC744; &#xC218; &#xC788;&#xB294; &#xB300; &#xC2DD; &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xD45C;&#xBA74;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBC14;&#xAE65;&#xCABD;&#xC73C;&#xB85C; &#xD655;&#xC7A5; &#xD558;&#xB294; &#xB300;&#xD615; &#xC2DC;&#xD2B8; &#xAC19;&#xC740; &#xAD6C;&#xC870;&#xC758; &#xC2DC;&#xAC01;&#xD654; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC138;&#xD3EC; &#xD45C;&#xBA74; &#xBC0F; &#xB0B4;&#xBD80; &#xAC04;&#xC758; &#xD6A8;&#xC728;&#xC801;&#xC778; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; &#xC778;&#xC2E0; &#xB9E4;&#xB9E4;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC7A0;&#xC7AC;&#xC801;&#xC778; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;&#xC774; &#xD56D; &#xC6D0; &#xCEA1;&#xCC98;, &#xCC98;&#xB9AC;, &#xACA9;&#xB9AC;, &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; &#xD504;&#xB808; &#xC820; &#xD14C;&#xC774; &#xC158;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xAE30;&#xC874; &#xAE30;&#xACF5;&#xC744; &#xAE30;&#xACC4; &#xD30C;&#xAD34;&#xB97C; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0BC; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xC2A4;&#xCE90;&#xB2DD; &#xC804;&#xC790; &#xD604;&#xBBF8;&#xACBD; &#xC774;&#xC628; &#xB9C8;&#xBAA8; HIV&#xC5D0; &#xAC10;&#xC5FC; &#xB41C; &#xB300; &#xC2DD; &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xD45C;&#xBA74;&#xC5D0; &#xC5F0;&#xACB0; &#xB41C; &#xAD00; &#xB3C4;&#xAD00;&#xC744; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC900;&#xB2E4;.

&#x611F;&#x67D3;&#x827E;&#x6ECB;&#x75C5;&#x6BD2;&#x7684;&#x6548;&#x7387;&#x663E;&#x8457;&#x63D0;&#x9AD8;&#xFF0C;&#x8FD9;&#x79CD;&#x75C5;&#x6BD2;&#x5728;&#x590D;&#x5408;&#x7269; CD4 + T &#x7EC6;&#x80DE;&#x548C;&#x5DE8;&#x566C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7B49;&#x542B;&#x75C5;&#x6BD2;&#x6297;&#x539F;&#x9012;&#x5448;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6216;&#x901A;&#x8FC7;&#x4E13;&#x95E8;&#x7684;&#x7ED3;&#x6784;&#xFF0C;&#x79F0;&#x4E3A;&#x75C5;&#x6BD2;&#x5B66;&#x7A81;&#x89E6;&#x7684;&#x6811;&#x7A81;&#x72B6;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E4B;&#x95F4;&#x4F20;&#x9012;&#x65F6;&#x3002;&#x4F7F;&#x7528;&#x79BB;&#x5B50;&#x78E8;&#x635F;&#x626B;&#x63CF;&#x7535;&#x955C;&#x3001; &#x7535;&#x5B50;&#x6210;&#x50CF;&#x548C;&#x8D85;&#x5206;&#x8FA8;&#x5149;&#x955C;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x5DF2;&#x7ECF;&#x5206;&#x6790;&#x4E86;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x63A5;&#x89E6;&#x7684;&#x7A7A;&#x95F4;&#x4F53;&#x7CFB;&#x7ED3;&#x6784;&#x548C;&#x5206;&#x5E03;&#x7684;&#x827E;&#x6ECB;&#x75C5;&#x6BD2; virions &#x5728;&#x75C5;&#x6BD2;&#x5B66;&#x7A81;&#x89E6;&#x5F62;&#x6210;&#x6210;&#x719F;&#x7684;&#x6811;&#x7A81;&#x72B6;&#x7EC6;&#x80DE;&#x548C; T &#x7EC6;&#x80DE;&#x4E4B;&#x95F4;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x8868;&#x73B0;&#x51FA;&#x60CA;&#x4EBA;&#x7684;&#x5305;&#x7EDC;&#x7684; T &#x7EC6;&#x80DE;&#x7531;&#x6210;&#x719F;&#x7684;&#x6811;&#x7A81;&#x72B6;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6765;&#x6E90;&#x7684;&#x8868;&#x6837;&#x819C;&#x6269;&#x5C55;&#x75C5;&#x6BD2;&#x5B66;&#x7A81;&#x89E6;&#x5F62;&#x6210;&#x5C4F;&#x853D;&#x533A;&#x57DF;&#x4E2D;&#x4EA7;&#x751F;&#x3002;&#x5185;&#x7A81;&#x89E6;&#x540E;&#xFF0C;&#x6240;&#x4EA7;&#x751F;&#x7684; CD4 + T &#x7EC6;&#x80DE;&#x7684; filopodial &#x6269;&#x5C55;&#x4F7F;&#x827E;&#x6ECB;&#x75C5;&#x6BD2;&#x63A5;&#x89E6; virions 3D &#x7F51;&#x7EDC;&#x4E2D;&#x7684;&#x6811;&#x7A81;&#x72B6;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8868;&#x9762;&#x53EF;&#x8BBF;&#x95EE;&#x8F66;&#x53A2;&#x5185;&#x6DF1;&#x56FA;&#x3002;&#x6811;&#x7A81;&#x72B6;&#x7EC6;&#x80DE;&#x548C; T &#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x819C;&#x8868;&#x9762;&#x5728;&#x68C0;&#x6D4B;&#x5230;&#x75C5;&#x6BD2;&#xFF0C;&#x4F46;&#x6CA1;&#x6709;&#x5728;&#x7A81;&#x89E6; &#xFF1B; &#x88AB;&#x52A8;&#x53D1;&#x5E03; virions&#x76F8;&#x53CD;&#xFF0C;&#x75C5;&#x6BD2;&#x8F6C;&#x8BA9;&#x9700;&#x8981;&#x7684; CD4 T &#x7EC6;&#x80DE;&#x53D7;&#x4F53;&#x7684;&#x53C2;&#x4E0E;&#x3002;T &#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5916;&#x73AF;&#x5883;&#x4E2D;&#x76F8;&#x5BF9;&#x9690;&#x9038;&#xFF0C;&#x57CB;&#x846C;&#x7684;&#x827E;&#x6ECB;&#x75C5;&#x6BD2;&#x7684;&#x7AD9;&#x70B9;&#x4F20;&#x8F93;&#x548C;&#x75C5;&#x6BD2;&#x4F53;&#x8F6C;&#x79FB;&#x7684; T &#x7EC6;&#x80DE;&#x53D7;&#x4F53;&#x4F9D;&#x8D56;&#x5F00;&#x59CB;&#x7A81;&#x51FA;&#x663E;&#x793A;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x827E;&#x6ECB;&#x75C5;&#x6BD2;&#x4F20;&#x64AD;&#x7684;&#x72EC;&#x6709;&#x65B9;&#x9762;&#x3002;

3D &#x53EF;&#x89C6;&#x5316;&#x7684;&#x827E;&#x6ECB;&#x75C5;&#x6BD2;&#x8F6C;&#x8BA9;&#x5728;&#x75C5;&#x6BD2;&#x5B66;&#x7684;&#x7A81;&#x89E6;&#x540E;&#x6811;&#x7A81;&#x72B6;&#x7EC6;&#x80DE;&#x548C; T &#x7EC6;&#x80DE;&#x4E4B;&#x95F4;&#x3002;

The efficiency of HIV infection is greatly enhanced when the virus is delivered at conjugates between CD4+ T cells and virus-bearing antigen-presenting cells such as macrophages or dendritic cells via specialized structures known as virological synapses. Using ion abrasion SEM, electron tomography, and superresolution light microscopy, we have analyzed the spatial architecture of cell-cell contacts and distribution of HIV virions at virological synapses formed between mature dendritic cells and T cells. We demonstrate the striking envelopment of T cells by sheet-like membrane extensions derived from mature dendritic cells, resulting in a shielded region for formation of virological synapses. Within the synapse, filopodial extensions emanating from CD4+ T cells make contact with HIV virions sequestered deep within a 3D network of surface-accessible compartments in the dendritic cell. Viruses are detected at the membrane surfaces of both dendritic cells and T cells, but virions are not released passively at the synapse; instead, virus transfer requires the engagement of T-cell CD4 receptors. The relative seclusion of T cells from the extracellular milieu, the burial of the site of HIV transfer, and the receptor-dependent initiation of virion transfer by T cells highlight unique aspects of cell-cell HIV transmission.

3D visualization of HIV transfer at the virological synapse between dendritic cells and T cells.

L&#x26;#39;efficacit&#xE9; de l&#x26;#39;infection &#xE0; VIH est grandement am&#xE9;lior&#xE9;e lorsque le virus est livr&#xE9; au conjugu&#xE9;s entre cellules T CD4 + et le virus porteurs cellules pr&#xE9;sentatrices d&#x26;#39;antig&#xE8;ne comme les macrophages ou les cellules dendritiques via des structures sp&#xE9;cialis&#xE9;es appel&#xE9;es synapses virologiques comme. Utilisation de l&#x26;#39;abrasion ionique SEM, la tomographie &#xE9;lectronique, et microscopie en lumi&#xE8;re superr&#xE9;solution, nous avons analys&#xE9; l&#x26;#39;architecture spatiale des contacts cellule-cellule et de distribution de virions VIH au niveau des synapses virologiques form&#xE9;es entre les cellules dendritiques matures et les cellules T. Nous d&#xE9;montrons l&#x26;#39;enveloppement frappant de cellules T par feuille comme des extensions membranaires d&#xE9;riv&#xE9;s de cellules dendritiques matures, r&#xE9;sultant dans une r&#xE9;gion blind&#xE9; pour la formation des synapses virologiques. Dans la synapse, les extensions filopodial &#xE9;manant de cellules T CD4 + en contact avec des virions VIH s&#xE9;questr&#xE9;s profonde dans un r&#xE9;seau 3D de la surface accessibles aux compartiments de la cellule dendritique. Les virus sont d&#xE9;tect&#xE9;s &#xE0; la surface des membranes des deux cellules dendritiques et les lymphocytes T, mais virions ne sont pas lib&#xE9;r&#xE9;s passivement &#xE0; la synapse; au lieu, le transfert du virus n&#xE9;cessite l&#x26;#39;engagement de r&#xE9;cepteurs CD4 des lymphocytes T. Le relatif isolement de cellules T &#xE0; partir du milieu extracellulaire, l&#x26;#39;enterrement du site du VIH transfert, et l&#x26;#39;initiation d&#xE9;pendante du r&#xE9;cepteur de transfert virion par les cellules T en &#xE9;vidence les aspects uniques de la cellule-cellule de transmission du VIH.

Visualisation 3D de transfert du VIH &#xE0; la synapse virologique entre les cellules dendritiques et les lymphocytes T

Die Effizienz der HIV-Infektion wird erheblich verbessert, wenn das Virus an Konjugate zwischen CD4 + T-Zellen und Virus-Antigen-pr&auml;sentierenden Zellen wie Makrophagen oder dendritische Zellen &uuml;ber spezialisierte Strukturen bekannt als virologischen Synapsen geliefert wird. Mit Ion Abrieb SEM, Elektronenstrahl-Tomographie und Superresolution Lichtmikroskopie, haben wir die r&auml;umliche Architektur der Zell-Zell-Kontakte und Verteilung von HIV Virionen am virologischen Synapsen zwischen Reifen dendritischen Zellen und T-Zellen gebildet analysiert. Wir demonstrieren die auff&auml;llige Umfassung von T-Zellen von Blatt-wie Membran Erweiterungen abgeleitet von Reifen dendritischen Zellen, was in einem abgeschirmten Bereich f&uuml;r Bildung der virologischen Synapsen. Innerhalb der Synapse, Filopodial Erweiterungen von CD4 + T-Zellen machen Kontakt mit HIV Virionen Kohlenstoff tief in einem 3D Oberfl&auml;che zug&auml;nglichen Depots in die dendritischen Zellen. Viren werden an der Membran-Oberfl&auml;chen von dendritischen Zellen und T-Zellen erkannt, aber Virionen sind nicht passiv an der Synapse freigegeben; Stattdessen erfordert Virus-&Uuml;bertragung das Engagement der T-Zellen CD4-Rezeptoren. Die relative Abgeschiedenheit der T-Zellen aus dem extrazellul&auml;ren Milieu, die Beerdigung von der Website von HIV &uuml;bertragen und Rezeptor-abh&auml;ngige Einleitung des Virion Transfer von T-Zellen werden einzigartige Aspekte der Zell-Zell-HIV-&Uuml;bertragung.

3D Visualisierung der HIV-&Uuml;bertragung bei der virologischen Synapse zwischen dendritische Zellen und T-Zellen.

L&#39;efficienza di infezione da HIV &egrave; notevolmente migliorato quando il virus &egrave; trasportato a coniugati tra cellule T CD4 + e cellule presentanti l&#39;antigene virus-cuscinetto come macrofagi o cellule dendritiche attraverso strutture specializzate, conosciuti come sinapsi virologiche. Utilizzando ioni abrasione SEM, tomografia elettronica e microscopia chiara sovrarisoluzione, abbiamo analizzato l&#39;architettura spaziale di contatti cellula-cellula e distribuzione dei virioni di HIV a sinapsi virologiche formate tra cellule T e cellule dendritiche mature. Dimostriamo il envelopment sorprendente delle cellule T da estensioni di foglio-come membrana derivate da cellule dendritiche mature, risultante in una regione schermata per la formazione delle sinapsi virologiche. All&#39;interno della sinapsi, le estensioni di filopodial proveniente da cellule T CD4 + mettersi in contatto con l&#39;HIV virioni sequestrati profondo all&#39;interno di una rete 3D di compartimenti superficie accessibile nella cellula dendritica. Virus vengono rilevati presso le superfici della membrana di cellule dendritiche e di cellule T, ma virioni non vengono rilasciate passivamente alle sinapsi; invece, il trasferimento di virus richiede il coinvolgimento dei recettori delle cellule T CD4. Il relativo isolamento delle cellule T dal milieu extracellulare, trasferire la sepoltura del sito di HIV, e l&#39;avvio del recettore-dipendente del virione trasferimento di cellule T evidenziare aspetti unici della trasmissione dell&#39;HIV cellula-cellula.

Visualizzazione 3D di trasferimento HIV presso la sinapsi virologica tra cellule dendritiche e cellule T.

&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x306F;CD4 + T&#x7D30;&#x80DE;&#x3084;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x5B66;&#x7684;&#x30B7;&#x30CA;&#x30D7;&#x30B9;&#x3068;&#x547C;&#x3070;&#x308C;&#x308B;&#x7279;&#x6B8A;&#x306A;&#x69CB;&#x9020;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x3066;&#x30DE;&#x30AF;&#x30ED;&#x30D5;&#x30A1;&#x30FC;&#x30B8;&#x3084;&#x6A39;&#x72B6;&#x7D30;&#x80DE;&#x306A;&#x3069;&#x306E;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x30D9;&#x30A2;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;&#x3001;&#x6297;&#x539F;&#x63D0;&#x793A;&#x7D30;&#x80DE;&#x3068;&#x306E;&#x9593;&#x306E;&#x8907;&#x5408;&#x4F53;&#x3067;&#x914D;&#x4FE1;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3068;&#x304D;&#x306B;HIV&#x611F;&#x67D3;&#x306E;&#x52B9;&#x7387;&#x304C;&#x5927;&#x5E45;&#x306B;&#x5F37;&#x5316;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30A4;&#x30AA;&#x30F3;&#x6469;&#x8017;SEM&#x3001;&#x96FB;&#x5B50;&#x7DDA;&#x30C8;&#x30E2;&#x30B0;&#x30E9;&#x30D5;&#x30A3;&#x30FC;&#x3068;&#x3001;&#x9AD8;&#x5206;&#x89E3;&#x80FD;&#x306A;&#x5149;&#x5B66;&#x9855;&#x5FAE;&#x93E1;&#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x3066;&#x3001;&#x7D30;&#x80DE;&#x9593;&#x306E;&#x9023;&#x7D61;&#x5148;&#x3084;&#x6210;&#x719F;&#x6A39;&#x72B6;&#x7D30;&#x80DE;&#x3068;T&#x7D30;&#x80DE;&#x3068;&#x306E;&#x9593;&#x306B;&#x5F62;&#x6210;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x5B66;&#x7684;&#x30B7;&#x30CA;&#x30D7;&#x30B9;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;HIV&#x306E;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x7C92;&#x5B50;&#x306E;&#x5206;&#x5E03;&#x306E;&#x7A7A;&#x9593;&#x7684;&#x306A;&#x30A2;&#x30FC;&#x30AD;&#x30C6;&#x30AF;&#x30C1;&#x30E3;&#x3092;&#x5206;&#x6790;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x5B66;&#x7684;&#x30B7;&#x30CA;&#x30D7;&#x30B9;&#x306E;&#x5F62;&#x6210;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x30B7;&#x30FC;&#x30EB;&#x30C9;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x9818;&#x57DF;&#x3067;&#x751F;&#x3058;&#x308B;&#x6210;&#x719F;&#x6A39;&#x72B6;&#x7D30;&#x80DE;&#x304B;&#x3089;&#x6D3E;&#x751F;&#x3057;&#x305F;&#x30B7;&#x30FC;&#x30C8;&#x72B6;&#x306E;&#x819C;&#x306E;&#x62E1;&#x5F35;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x3001;T&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x9855;&#x8457;&#x306A;&#x5305;&#x56F2;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30B7;&#x30CA;&#x30D7;&#x30B9;&#x5185;&#x200B;&#x200B;&#x3067;&#x306F;&#x3001;CD4&#x304B;&#x3089;&#x767A;&#x305B;filopodial&#x62E1;&#x5F35;&#x5B50;&#x306F;&#x3001;+ T&#x7D30;&#x80DE;&#x306F;&#x6A39;&#x72B6;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x8868;&#x9762;&#x306B;&#x30A2;&#x30AF;&#x30BB;&#x30B9;&#x53EF;&#x80FD;&#x306A;&#x533A;&#x753B;&#x306E;3&#x6B21;&#x5143;&#x30CD;&#x30C3;&#x30C8;&#x30EF;&#x30FC;&#x30AF;&#x306E;&#x5965;&#x6DF1;&#x304F;&#x306B;&#x9694;&#x96E2;HIV&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x7C92;&#x5B50;&#x3068;&#x63A5;&#x89E6;&#x3059;&#x308B;&#x3002;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x306F;&#x3001;&#x6A39;&#x72B6;&#x7D30;&#x80DE;&#x3068;T&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x4E21;&#x65B9;&#x306E;&#x819C;&#x9762;&#x3067;&#x691C;&#x51FA;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x304C;&#x3001;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x7C92;&#x5B50;&#x306F;&#x3001;&#x30B7;&#x30CA;&#x30D7;&#x30B9;&#x3067;&#x53D7;&#x52D5;&#x7684;&#x306B;&#x653E;&#x51FA;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3002;&#x4EE3;&#x308F;&#x308A;&#x306B;&#x3001;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x8EE2;&#x9001;&#x306F;T&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;CD4&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x306E;&#x95A2;&#x4E0E;&#x3092;&#x5FC5;&#x8981;&#x3068;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x7D30;&#x80DE;&#x5916;&#x74B0;&#x5883;&#x3001;HIV&#x4F1D;&#x9054;&#x306E;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x306E;&#x57CB;&#x846C;&#x3068;&#x3001;T&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x30D3;&#x30EA;&#x30AA;&#x30F3;&#x8EE2;&#x9001;&#x306E;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x4F9D;&#x5B58;&#x6027;&#x306E;&#x958B;&#x59CB;&#x304B;&#x3089;T&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x76F8;&#x5BFE;&#x7684;&#x306A;&#x9694;&#x96E2;&#x306F;&#x3001;&#x7D30;&#x80DE;&#x9593;&#x306E;HIV&#x611F;&#x67D3;&#x306E;&#x30E6;&#x30CB;&#x30FC;&#x30AF;&#x306A;&#x5074;&#x9762;&#x3092;&#x5F37;&#x8ABF;&#x8868;&#x793A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x6A39;&#x72B6;&#x7D30;&#x80DE;&#x3068;T&#x7D30;&#x80DE;&#x9593;&#x306E;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x5B66;&#x7684;&#x30B7;&#x30CA;&#x30D7;&#x30B9;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;HIV&#x4F1D;&#x9054;&#x306E;3&#x6B21;&#x5143;&#x53EF;&#x8996;&#x5316;

HIV &#xAC10;&#xC5FC;&#xC758; &#xD6A8;&#xC728;&#xC131;&#xC740; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; conjugates CD4 + T &#xC138;&#xD3EC;&#xC640; &#xB300; &#xC2DD; &#xC138;&#xD3EC;&#xC640; &#xAC19;&#xC740; &#xD56D; &#xC6D0; &#xC81C;&#xC2DC; &#xC138;&#xD3EC; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; &#xBCA0;&#xC5B4;&#xB9C1; &#xB610;&#xB294; virological &#xC2DC; &#xB0C5; &#xC2A4; &#xB77C;&#xACE0; &#xD558;&#xB294; &#xD2B9;&#xC218; &#xAD6C;&#xC870;&#xB97C; &#xD1B5;&#xD574; &#xC218;&#xC9C0;&#xC0C1; &#xC138;&#xD3EC; &#xC0AC;&#xC774; &#xC804;&#xB2EC; &#xB420; &#xB54C;&#xC5D0; &#xD06C;&#xAC8C; &#xD5A5;&#xC0C1; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774;&#xC628; &#xB9C8;&#xBAA8; SEM, &#xC804;&#xC790; &#xB2E8;&#xCE35; &#xCD2C;&#xC601;, &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; &#xC288;&#xD37C; &#xAC00;&#xBCBC;&#xC6B4; &#xD604;&#xBBF8;&#xACBD; &#xAC80;&#xC0AC; &#xBC95;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC;, &#xC6B0;&#xB9AC; &#xC140; &#xC5F0;&#xB77D;&#xCC98;&#xC758; &#xACF5;&#xAC04;&#xC801; &#xAC74;&#xCD95;&#xBB3C;&#xACFC; virological &#xB0C5; &#xC131;&#xC219; &#xC218;&#xC9C0;&#xC0C1; &#xC138;&#xD3EC;&#xC640; T &#xC138;&#xD3EC; &#xC0AC;&#xC774; &#xD615;&#xC131;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC5D0;&#xC774;&#xC988; virions&#xC758; &#xBD84;&#xD3EC;&#xB97C; &#xBD84;&#xC11D; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC; virological &#xC2DC; &#xB0C5; &#xC2A4;&#xC758; &#xD615;&#xC131;&#xC744; &#xC704;&#xD55C; &#xCC28;&#xD3D0; &#xB41C; &#xC9C0;&#xC5ED;&#xC5D0; &#xB530;&#xB978; &#xC131;&#xC219; &#xC218;&#xC9C0;&#xC0C1; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD30C;&#xC0DD; &#xB41C; &#xC2DC;&#xD2B8; &#xAC19;&#xC740; &#xB9C9; &#xD655;&#xC7A5; &#xD558; &#xC5EC; T &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xB208;&#xC5D0; &#xB744;&#xB294; &#xBD09;&#xD568;&#xC744; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB0C5;, &#xB0B4; filopodial &#xD655;&#xC7A5; CD4 + T &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC9D1;&#xC911;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xC5D0;&#xC774;&#xC988;&#xC640; &#xC811;&#xCD09; &#xD558;&#xB3C4;&#xB85D; &#xAE4A;&#xC740; &#xC218;&#xC9C0;&#xC0C1; &#xC138;&#xD3EC; &#xD45C;&#xBA74;&#xC5D0; &#xC561;&#xC138;&#xC2A4;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xB294; &#xAD6C;&#xD68D;&#xC758; 3 &#xCC28;&#xC6D0; &#xB124;&#xD2B8;&#xC6CC;&#xD06C; &#xB0B4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBD84;&#xB9AC; &#xB41C; virions. &#xC218;&#xC9C0;&#xC0C1; &#xC138;&#xD3EC;&#xC640; T &#xC138;&#xD3EC; &#xB9C9; &#xD45C;&#xBA74;&#xC5D0; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4;&#xB97C; &#xAC10;&#xC9C0; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; virions &#xB0C5;;&#xC5D0; &#xC218; &#xB3D9;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xD574;&#xC81C; &#xB418;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC740; &#xB300;&#xC2E0;, &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; &#xC804;&#xC1A1; CD4 T &#xC138;&#xD3EC; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4;&#xC758; &#xCC38;&#xC5EC;&#xAC00; &#xD544;&#xC694;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. T&#xC758; &#xC138;&#xD3EC; &#xC138;&#xD3EC; &#xC678; &#xD658;&#xACBD;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC0C1;&#xB300; &#xC740;&#xB454; &#xC5D0;&#xC774;&#xC988; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8;&#xC758; &#xB9E4;&#xC7A5; &#xC62E;&#xAE30;&#xACE0; virion &#xC774;&#xC804; T &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4;&#xC5D0; &#xC885;&#xC18D;&#xC801;&#xC778; &#xAC1C;&#xC2DC; &#xC140; HIV&#xC5D0; &#xC804;&#xC1A1;&#xC758; &#xB3C5;&#xD2B9;&#xD55C; &#xCE21;&#xBA74;&#xC744; &#xAC15;&#xC870;.

&#xC218;&#xC9C0;&#xC0C1; &#xC138;&#xD3EC;&#xC640; T &#xC138;&#xD3EC; &#xC0AC;&#xC774;&#xC758; virological &#xB0C5;&#xC5D0;&#xC11C; HIV &#xC804;&#xC1A1;&#xC758; 3D &#xC2DC;&#xAC01;&#xD654;.

La eficiencia de la infecci&#xF3;n por el VIH es mucho mayor cuando el virus se entrega en conjugados entre c&#xE9;lulas T CD4 + y el virus de rodamiento-c&#xE9;lulas presentadoras de ant&#xED;geno, como macr&#xF3;fagos o c&#xE9;lulas dendr&#xED;ticas a trav&#xE9;s de estructuras especializadas conocidas como sinapsis virol&#xF3;gicas. Uso de la abrasi&#xF3;n de iones de SEM, la tomograf&#xED;a de electrones, microscop&#xED;a de luz y de super-resoluci&#xF3;n, hemos analizado la estructura espacial de los contactos c&#xE9;lula-c&#xE9;lula y la distribuci&#xF3;n de viriones de VIH en las sinapsis virol&#xF3;gicas que se forman entre las c&#xE9;lulas dendr&#xED;ticas y las c&#xE9;lulas T maduras. Se demuestra la envolvente sorprendente de las c&#xE9;lulas T por hoja-como extensiones de membrana derivadas de c&#xE9;lulas dendr&#xED;ticas maduras, resultando en una regi&#xF3;n blindado para la formaci&#xF3;n de las sinapsis virol&#xF3;gicas. Dentro de la sinapsis, las extensiones de filopodial que emanan de c&#xE9;lulas T CD4 + en contacto con viriones de VIH secuestrados en lo profundo de una red en 3D de la superficie accesible, compartimientos de la c&#xE9;lula dendr&#xED;tica. Los virus se detecta en las superficies de las membranas de ambas c&#xE9;lulas dendr&#xED;ticas y las c&#xE9;lulas T, pero no se liberan viriones pasiva en la sinapsis, sino que la transmisi&#xF3;n del virus requiere la participaci&#xF3;n de los receptores de c&#xE9;lulas T CD4. El relativo aislamiento de las c&#xE9;lulas T del medio extracelular, el entierro de la sede de la transferencia del VIH, y el inicio dependiente del receptor de la transferencia de viriones por las c&#xE9;lulas T destacar los aspectos &#xFA;nicos de la transmisi&#xF3;n de c&#xE9;lula a c&#xE9;lula del VIH.

Visualizaci&#xF3;n 3D de la transferencia del VIH en la sinapsis virol&#xF3;gica entre las c&#xE9;lulas dendr&#xED;ticas y las c&#xE9;lulas T

We present a cryo-electron tomographic analysis of the three-dimensional architecture of a strain of the Gram-negative bacterium Bdellovibrio bacteriovorus in which endogenous MreB2 was replaced with monomeric teal fluorescent protein (mTFP)-labeled MreB2. In contrast to wild-type Bdellovibrio cells that predominantly displayed a compact nucleoid region, cells expressing mTFP-labeled MreB2 displayed a twisted spiral organization of the nucleoid. The more open structure of the MreB2-mTFP nucleoids enabled clear in situ visualization of ribosomes decorating the periphery of the nucleoid. Ribosomes also bordered the edges of more compact nucleoids from both wild-type cells and mutant cells. Surprisingly, MreB2-mTFP localized to the interface between the spiral nucleoid and the cytoplasm, suggesting an intimate connection between nucleoid architecture and MreB arrangement. Further, in contrast to wild-type cells, where a single tight chemoreceptor cluster localizes close to the single polar flagellum, MreB2-mTFP cells often displayed extended chemoreceptor arrays present at one or both poles and displayed multiple or inaccurately positioned flagella. Our findings provide direct structural evidence for spiral organization of the bacterial nucleoid and suggest a possible role for MreB in regulation of nucleoid architecture and localization of the chemotaxis apparatus.

Spiral architecture of the nucleoid in Bdellovibrio bacteriovorus.

&#x6211;&#x4EEC;&#x76EE;&#x524D;&#x4F4E;&#x6E29;&#x7535;&#x5B50;&#x5C42;&#x6790;&#x6210;&#x50CF;&#x5206;&#x6790;&#x4E09;&#x7EF4;&#x7ED3;&#x6784;&#x7684;&#x4E00;&#x682A;&#x9769;&#x5170;&#x9634;&#x6027;&#x83CC;&#x86ED;&#x7684;&#x5185;&#x6E90;&#x6027; MreB2 &#x88AB;&#x66FF;&#x6362;&#x4E3A;&#x5355;&#x4F53;&#x84DD;&#x7EFF;&#x8272;&#x8367;&#x5149;&#x86CB;&#x767D; &#xFF08;&#x591A;&#x5E74;&#x7B79;&#x8D44;&#x8BA1;&#x5212;&#x8BA1;&#x7B97;)-&#x6807;&#x8BB0;&#x4E3A; MreB2&#x3002;&#x4E3B;&#x8981;&#x88AB;&#x663E;&#x793A;&#x4E00;&#x4E2A;&#x7D27;&#x51D1;&#x7684; nucleoid &#x5730;&#x533A;&#x7684;&#x91CE;&#x751F;&#x578B;&#x86ED;&#x7EC6;&#x80DE;&#xFF0C;&#x4E0E;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8868;&#x8FBE;&#x591A;&#x5E74;&#x7B79;&#x8D44;&#x8BA1;&#x5212;&#x8BA1;&#x7B97;&#x6807;&#x8BB0; MreB2 &#x663E;&#x793A; nucleoid &#x626D;&#x7684;&#x87BA;&#x65CB;&#x7EC4;&#x7EC7;&#x3002;MreB2-&#x591A;&#x5E74;&#x7B79;&#x8D44;&#x8BA1;&#x5212;&#x8BA1;&#x7B97; nucleoids &#x7684;&#x66F4;&#x5F00;&#x653E;&#x7ED3;&#x6784;&#x542F;&#x7528;&#x88C5;&#x9970;&#x7684; nucleoid &#x5916;&#x56F4;&#x7684;&#x6838;&#x7CD6;&#x4F53;&#x7684;&#x660E;&#x786E;&#x539F;&#x4F4D;&#x53EF;&#x89C6;&#x5316;&#x3002;&#x6838;&#x7CD6;&#x4F53;&#x8FD8;&#x4E0E;&#x63A5;&#x58E4;&#x4ECE;&#x91CE;&#x751F;&#x578B;&#x7EC6;&#x80DE;&#x548C;&#x764C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7A81;&#x53D8;&#x66F4;&#x7D27;&#x51D1; nucleoids &#x7684;&#x8FB9;&#x7F18;&#x3002;&#x591A;&#x5E74;&#x7B79;&#x8D44;&#x8BA1;&#x5212;&#x4EE4;&#x4EBA;&#x60CA;&#x8BB6;&#x7684;&#x662F;&#xFF0C;MreB2-&#x8BA1;&#x7B97;&#x5230;&#x87BA;&#x65CB; nucleoid &#x4E0E;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8D28;&#x4E4B;&#x95F4;&#x7684;&#x63A5;&#x53E3;&#x8FDB;&#x884C;&#x672C;&#x5730;&#x5316;&#x6697;&#x793A; nucleoid &#x4F53;&#x7CFB;&#x7ED3;&#x6784;&#x4E0E; MreB &#x5B89;&#x6392;&#x4E4B;&#x95F4;&#x7684;&#x4EB2;&#x5BC6;&#x8054;&#x7CFB;&#x3002;&#x8FDB;&#x4E00;&#x6B65;&#xFF0C;&#x4E0E;&#x91CE;&#x751F;&#x578B;&#x7EC6;&#x80DE;&#xFF0C;&#x5176;&#x4E2D;&#x5355;&#x4E2A;&#x7D27;&#x5316;&#x5B66;&#x611F;&#x53D7;&#x5668;&#x7FA4;&#x96C6;&#x672C;&#x5730;&#x5316;&#x63A5;&#x8FD1;&#x5355;&#x6781;&#x6027;&#x97AD;&#x6BDB;&#xFF0C;MreB2-&#x591A;&#x5E74;&#x7B79;&#x8D44;&#x8BA1;&#x5212;&#x8BA1;&#x7B97;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x663E;&#x793A;&#x7684;&#x9891;&#x7387;&#x6269;&#x5C55;&#x5316;&#x5B66;&#x611F;&#x53D7;&#x5668;&#x9635;&#x5217;&#x51FA;&#x5E2D;&#x4E00;&#x4E2A;&#x6216;&#x4E24;&#x4E2A;&#x6781;&#x70B9;&#x548C;&#x663E;&#x793A;&#x591A;&#x4E2A;&#x6216;&#x4E0D;&#x51C6;&#x786E;&#x5730;&#x5B9A;&#x4F4D;&#x97AD;&#x6BDB;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x7ED3;&#x679C;&#x63D0;&#x4F9B;&#x7684;&#x7EC6;&#x83CC; nucleoid &#x87BA;&#x65CB;&#x7EC4;&#x7EC7;&#x7ED3;&#x6784;&#x76F4;&#x63A5;&#x8BC1;&#x636E;&#x548C;&#x5EFA;&#x8BAE; MreB nucleoid &#x4F53;&#x7CFB;&#x7ED3;&#x6784;&#x7684;&#x8C03;&#x8282;&#x548C;&#x5B9A;&#x4F4D;&#x7684;&#x8D8B;&#x5316;&#x6027;&#x5668;&#x5177;&#x4E2D;&#x53EF;&#x80FD;&#x53D1;&#x6325;&#x7684;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;

&#x5728;&#x86ED; nucleoid &#x7684;&#x87BA;&#x65CB;&#x7ED3;&#x6784;&#x3002;

On pr&#xE9;sente une analyse cryo-&#xE9;lectrons tomographique de l&#x26;#39;architecture tridimensionnelle d&#x26;#39;une souche des bacteriovorus Gram-n&#xE9;gatives Bdellovibrio bact&#xE9;rie dans lequel MreB2 endog&#xE8;ne a &#xE9;t&#xE9; remplac&#xE9; par une prot&#xE9;ine fluorescente monom&#xE8;re sarcelle (mTFP)-marqu&#xE9; MreB2. Contrairement aux cellules de type sauvage Bdellovibrio que majoritairement affich&#xE9;es une r&#xE9;gion compacte nucl&#xE9;o&#xEF;de, des cellules exprimant mTFP marqu&#xE9; MreB2 fait preuve d&#x26;#39;une organisation en spirale tordue du nucl&#xE9;o&#xEF;de. La structure plus ouverte des nucl&#xE9;o&#xEF;des MreB2-mTFP permis clair la visualisation in situ des ribosomes d&#xE9;coration de la p&#xE9;riph&#xE9;rie du nucl&#xE9;o&#xEF;de. Les ribosomes &#xE9;galement bord&#xE9; les bords de nucl&#xE9;o&#xEF;des plus compacts &#xE0; partir de deux cellules de type sauvage et les cellules mutantes. &#xC9;tonnamment, MreB2-mTFP localis&#xE9;e &#xE0; l&#x26;#39;interface entre le nucl&#xE9;o&#xEF;de spirale et le cytoplasme, ce qui sugg&#xE8;re une connexion intime entre une architecture et l&#x26;#39;agencement nucl&#xE9;o&#xEF;de MreB. En outre, contrairement &#xE0; cellules de type sauvage, o&#xF9; une grappe serr&#xE9;e chimior&#xE9;cepteurs unique localise &#xE0; proximit&#xE9; de la flagelle polaire unique, MreB2-mTFP cellules souvent affich&#xE9; des tableaux &#xE9;tendus ch&#xE9;mor&#xE9;cepteurs pr&#xE9;sents &#xE0; un ou deux poteaux et affich&#xE9; flagelles multiples ou mal positionn&#xE9;. Nos r&#xE9;sultats fournissent une preuve directe de structure pour l&#x26;#39;organisation en spirale du nucl&#xE9;o&#xEF;de bact&#xE9;rien et sugg&#xE8;rent un r&#xF4;le possible pour MreB dans la r&#xE9;gulation de l&#x26;#39;architecture nucl&#xE9;o&#xEF;de et la localisation de l&#x26;#39;appareil chimiotactisme.

L&#x26;#39;architecture en spirale du nucl&#xE9;o&#xEF;de dans Bdellovibrio bacteriovorus

Wir pr&auml;sentieren eine computertomographische Cryo-Elektron-Analyse der dreidimensionalen Architektur von einem Stamm von der gramnegativen Bakterium Bdellovibrio Bacteriovorus in der endogenen MreB2 mit Monomer blaugr&uuml;n fluoreszierende Protein (mTFP) ersetzt wurde-mit der Bezeichnung MreB2. Im Gegensatz zum Wildtyp Bdellovibrio Zellen, die &uuml;berwiegend eine kompakte Kern&auml;quivalent-Region angezeigt, angezeigt Zellen auszudr&uuml;cken mTFP-markierten MreB2 eine verdrehte Spiral-Organisation von der Kern&auml;quivalent. Die offenere Struktur der MreB2-mTFP Nucleoids aktiviert klar in-situ Visualisierung der Ribosomen Ortsrand der Kern&auml;quivalent dekorieren. Ribosomen grenzte auch die R&auml;nder der kompaktere Nucleoids aus Wildtyp Zellen und mutierten Zellen. &Uuml;berraschend, MreB2-mTFP lokalisiert an der Schnittstelle zwischen der Spirale Kern&auml;quivalent und Zytoplasma, was auf eine intime Verbindung zwischen Kern&auml;quivalent Architektur und MreB Anordnung. Weiter, im Gegensatz zu Wild-Typ-Zellen, wo ein einzigen engen Chemorezeptor-Cluster in der N&auml;he der einzigen polar Kutscherpeitschennatter lokalisiert, MreB2-mTFP Zellen h&auml;ufig angezeigt erweitert Chemorezeptor-Arrays anwesend an einem oder beiden Polen und mehrere angezeigt oder ungenau positioniert Flagellen. Unsere Ergebnisse bieten direkte strukturelle Beweise f&uuml;r Spiral-Organisation von der bakteriellen Kern&auml;quivalent und weisen eine m&ouml;gliche Rolle f&uuml;r MreB Verordnung Kern&auml;quivalent Architektur und Lokalisierung der Chemotaxis-Apparatur.

Spiral-Architektur von der Kern&auml;quivalent in Bdellovibrio Bacteriovorus.

Vi presentiamo un&#39;analisi tomografica cryo-elettrone dell&#39;architettura tridimensionale di un ceppo della gram-negativo batterio Bdellovibrio bacteriovorus in cui MreB2 endogeno &egrave; stato sostituito con proteina fluorescente monomerico teal (mTFP)-con l&#39;etichetta MreB2. In contrasto con il selvaggio-tipo celle Bdellovibrio visualizzati prevalentemente una regione compatta nucleoide, le cellule che esprimono MreB2 mTFP-etichetta visualizzata un&#39;organizzazione a spirale elicoidale del nucleoide. La struttura pi&ugrave; aperta della nucleoids MreB2-mTFP abilitato visualizzazione chiara in situ dei ribosomi decorando la periferia del nucleoide. I ribosomi delimitata anche i bordi del nucleoids pi&ugrave; compatto da cellule wild-type sia cellule mutanti. Sorprendentemente, MreB2-mTFP localizzate all&#39;interfaccia tra il nucleoide a spirale e il citoplasma, suggerendo un&#39;intima connessione tra architettura nucleoide e MreB disposizione. Ulteriormente, in contrasto con il selvaggio-tipo celle, dove un cluster singolo chemoreceptor stretto si localizza vicino il singolo flagello polare, MreB2-mTFP cellule appaiono spesso esteso matrici chemoreceptor presenti in uno o due poli e visualizzato multiple o inesatto posizionamento flagelli. I nostri risultati forniscono prove strutturali dirette per organizzazione a spirale del nucleoide batterico e suggeriscono un possibile ruolo per MreB nel regolamento dell&#39;architettura nucleoide e localizzazione dell&#39;apparato di chemiotassi.

Architettura a spirale del nucleoide in Bdellovibrio bacteriovorus.

&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;&#x5185;&#x56E0;&#x6027;&#x306E;MreB2&#x304C;&#x5358;&#x91CF;&#x4F53;&#x306E;&#x30C6;&#x30A3;&#x30FC;&#x30EB;&#x86CD;&#x5149;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#xFF08;mTFP&#xFF09;&#x6A19;&#x8B58;MreB2&#x306B;&#x7F6E;&#x304D;&#x63DB;&#x3048;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x30B0;&#x30E9;&#x30E0;&#x9670;&#x6027;&#x7D30;&#x83CC;Bdellovibrio&#x306E;bacteriovorus&#x306E;&#x6B6A;&#x307F;&#x306E;&#x4E09;&#x6B21;&#x5143;&#x69CB;&#x9020;&#x306E;&#x4F4E;&#x6E29;&#x96FB;&#x5B50;&#x30C8;&#x30E2;&#x30B0;&#x30E9;&#x30D5;&#x30A3;&#x30FC;&#x89E3;&#x6790;&#x3092;&#x63D0;&#x793A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x4E3B;&#x306B;&#x5C0F;&#x578B;&#x306E;&#x6838;&#x69D8;&#x4F53;&#x9818;&#x57DF;&#x3092;&#x8868;&#x793A;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x91CE;&#x751F;&#x578B;Bdellovibrio&#x7D30;&#x80DE;&#x3068;&#x306F;&#x5BFE;&#x7167;&#x7684;&#x306B;&#x3001;mTFP&#x6A19;&#x8B58;MreB2&#x3092;&#x767A;&#x73FE;&#x3059;&#x308B;&#x7D30;&#x80DE;&#x306F;&#x3001;&#x6838;&#x69D8;&#x4F53;&#x306E;&#x306D;&#x3058;&#x308C;&#x305F;&#x3089;&#x305B;&#x3093;&#x72B6;&#x306E;&#x7D44;&#x7E54;&#x304C;&#x8868;&#x793A;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002; MreB2-mTFP&#x6838;&#x69D8;&#x4F53;&#x306E;&#x3088;&#x308A;&#x30AA;&#x30FC;&#x30D7;&#x30F3;&#x306A;&#x69CB;&#x9020;&#x306F;&#x3001;&#x6838;&#x69D8;&#x4F53;&#x306E;&#x88C5;&#x98FE;&#x5468;&#x56F2;&#x30EA;&#x30DC;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x306E;in situ&#x53EF;&#x8996;&#x5316;&#x3067;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x6709;&#x52B9;&#x306B;&#x306A;&#x3063;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30EA;&#x30DC;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x306F;&#x307E;&#x305F;&#x3001;&#x91CE;&#x751F;&#x578B;&#x7D30;&#x80DE;&#x3068;&#x5909;&#x7570;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x4E21;&#x65B9;&#x304B;&#x3089;&#x3001;&#x3088;&#x308A;&#x30B3;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x30C8;&#x306A;&#x6838;&#x69D8;&#x4F53;&#x306E;&#x7AEF;&#x3092;&#x63A5;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x9A5A;&#x304F;&#x3079;&#x304D;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3001;MreB2-mTFP&#x306F;&#x3001;&#x6838;&#x69D8;&#x4F53;&#x306E;&#x30A2;&#x30FC;&#x30AD;&#x30C6;&#x30AF;&#x30C1;&#x30E3;&#x3068;MreB&#x306E;&#x914D;&#x7F6E;&#x306E;&#x9593;&#x306B;&#x89AA;&#x5BC6;&#x306A;&#x95A2;&#x4FC2;&#x3092;&#x793A;&#x5506;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x30B9;&#x30D1;&#x30A4;&#x30E9;&#x30EB;&#x6838;&#x69D8;&#x4F53;&#x3068;&#x7D30;&#x80DE;&#x8CEA;&#x9593;&#x306E;&#x754C;&#x9762;&#x306B;&#x5C40;&#x5728;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x305F;&#x3002;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x3001;&#x5358;&#x4E00;&#x306E;&#x30BF;&#x30A4;&#x30C8;&#x306A;&#x5316;&#x5B66;&#x53D7;&#x5BB9;&#x30AF;&#x30E9;&#x30B9;&#x30BF;&#x304C;&#x5358;&#x4E00;&#x306E;&#x6975;&#x97AD;&#x6BDB;&#x306E;&#x8FD1;&#x304F;&#x306B;&#x5C40;&#x5728;&#x3059;&#x308B;&#x91CE;&#x751F;&#x578B;&#x7D30;&#x80DE;&#x3068;&#x306F;&#x5BFE;&#x7167;&#x7684;&#x306B;&#x3001;MreB2-mTFP&#x7D30;&#x80DE;&#x306F;&#x3001;&#x3057;&#x3070;&#x3057;&#x3070;&#x3064;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x6975;&#x3068;&#x8868;&#x793A;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x8907;&#x6570;&#x306E;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x4E0D;&#x6B63;&#x78BA;&#x306B;&#x914D;&#x7F6E;&#x3055;&#x97AD;&#x306E;&#x4E21;&#x65B9;&#x306B;&#x5B58;&#x5728;&#x3059;&#x308B;&#x62E1;&#x5F35;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x5316;&#x5B66;&#x53D7;&#x5BB9;&#x5668;&#x30A2;&#x30EC;&#x30A4;&#x3092;&#x8868;&#x793A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x4ECA;&#x56DE;&#x306E;&#x77E5;&#x898B;&#x306F;&#x3001;&#x7D30;&#x83CC;&#x306E;&#x6838;&#x69D8;&#x4F53;&#x306E;&#x3089;&#x305B;&#x3093;&#x72B6;&#x306E;&#x7D44;&#x7E54;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x76F4;&#x63A5;&#x306E;&#x69CB;&#x9020;&#x7684;&#x8A3C;&#x62E0;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3057;&#x3001;&#x6838;&#x69D8;&#x4F53;&#x306E;&#x30A2;&#x30FC;&#x30AD;&#x30C6;&#x30AF;&#x30C1;&#x30E3;&#x3068;&#x8D70;&#x88C5;&#x7F6E;&#x306E;&#x5C40;&#x5728;&#x306E;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x306B;MreB&#x306E;&#x53EF;&#x80FD;&#x306A;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x793A;&#x5506;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;

Bdellovibrio Bacteriovorus&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x6838;&#x69D8;&#x4F53;&#x306E;&#x30B9;&#x30D1;&#x30A4;&#x30E9;&#x30EB;&#xB7;&#x30A2;&#x30FC;&#x30AD;&#x30C6;&#x30AF;&#x30C1;&#x30E3;

&#xC120;&#xBB3C;&#xC774; &#xACF3;&#xC744; &#xC54C;&#xC544;&#xB0B4;&#xB294;-&#xC804;&#xC790; &#xB2E8;&#xCE35; &#xBD84;&#xC11D;&#xC740; &#xADF8;&#xB78C; &#xC74C;&#xC131;&#xC758; &#xBCC0;&#xD615;&#xC758; 3 &#xCC28;&#xC6D0; &#xAD6C;&#xC870;&#xC758; &#xBC15;&#xD14C;&#xB9AC;&#xC544; Bdellovibrio bacteriovorus &#xC0DD; MreB2 monomeric &#xCCAD;&#xB85D; &#xD615;&#xAD11; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; (mTFP)&#xB85C; &#xB300;&#xCCB4; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;-Mreb2&#xB97C; &#xD45C;&#xC2DC; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC8FC;&#xB85C; &#xC18C;&#xD615; &#xD575;&#xC591;&#xCCB4; &#xC601;&#xC5ED; &#xD45C;&#xC2DC;&#xB294; &#xC57C;&#xC0DD;-&#xD0C0;&#xC785; Bdellovibrio &#xC140; &#xB2EC;&#xB9AC; mTFP &#xD45C;&#xC2DC; &#xB41C; Mreb2&#xC744; &#xD45C;&#xD604; &#xD558;&#xB294; &#xC138;&#xD3EC;&#xB294; &#xD575;&#xC591;&#xCCB4;&#xC758; &#xAF2C;&#xC778;&#xB41C; &#xB098;&#xC120; &#xC870;&#xC9C1; &#xD45C;&#xC2DC;. MreB2-mTFP nucleoids &#xB354; &#xAC1C;&#xBC29; &#xAD6C;&#xC870;&#xB294; &#xD575;&#xC591;&#xCCB4; &#xC8FC;&#xBCC0;&#xC744; &#xC7A5;&#xC2DD; &#xD558;&#xB294; &#xB9AC;&#xBCF4;&#xC19C;&#xC758; &#xBA85;&#xD655;&#xD55C; &#xD604;&#xC7A5;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC2DC;&#xAC01;&#xD654;&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB9AC;&#xBCF4;&#xC19C;&#xC740; &#xB610;&#xD55C; &#xC57C;&#xC0DD;-&#xD0C0;&#xC785; &#xC140;&#xACFC; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0;&#xC11C; &#xB354; &#xB9CE;&#xC740; &#xC18C;&#xD615; nucleoids&#xC758; &#xAC00;&#xC7A5;&#xC790;&#xB9AC; &#xACBD;&#xACC4;. &#xB180;&#xB78D;&#xAC8C;&#xB3C4;, MreB2-mTFP &#xB098;&#xC120;&#xD615; &#xD575;&#xC591;&#xCCB4;&#xB294; &#xC138;&#xD3EC;&#xC9C8; &#xC0AC;&#xC774; &#xC778;&#xD130;&#xD398;&#xC774;&#xC2A4; &#xC9C0;&#xC5ED;&#xD654; &#xD575;&#xC591;&#xCCB4; &#xAC74;&#xCD95;&#xACFC; MreB &#xBC30;&#xC5F4; &#xC0AC;&#xC774;&#xC758; &#xCE5C;&#xBC00; &#xD55C; &#xC5F0;&#xACB0;&#xC744; &#xC81C;&#xC548; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB610;&#xD55C;, &#xC57C;&#xC0DD;-&#xD0C0;&#xC785; &#xC140;, &#xC5B4;&#xB514; &#xD558;&#xB098;&#xC758; &#xAF49; chemoreceptor &#xD074;&#xB7EC;&#xC2A4;&#xD130; &#xB2E8;&#xC77C; &#xD3F4;&#xB77C; &#xC2E0;&#xC124; &#xAC00;&#xAE4C;&#xC774; localizes, &#xB2EC;&#xB9AC; MreB2 mTFP &#xC140; &#xC885;&#xC885; &#xD45C;&#xC2DC; chemoreceptor &#xBC30;&#xC5F4;&#xC774; &#xD558;&#xB098; &#xB610;&#xB294; &#xB450; &#xAE30;&#xB465;&#xC5D0; &#xC874;&#xC7AC;&#xB97C; &#xD655;&#xC7A5; &#xD558; &#xACE0; &#xC5EC;&#xB7EC; &#xD45C;&#xC2DC; &#xB610;&#xB294; flagella&#xB97C; &#xC815;&#xD655; &#xD558; &#xAC8C; &#xC704;&#xCE58;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xC5F0;&#xAD6C; &#xACB0;&#xACFC; &#xC138;&#xADE0;&#xC131; &#xD575;&#xC591;&#xCCB4;&#xC758; &#xC2A4;&#xD30C;&#xC774;&#xB7F4; &#xC870;&#xC9C1;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC9C1;&#xC811;&#xC801;&#xC778; &#xAD6C;&#xC870; &#xC99D;&#xAC70; &#xBC0F; &#xD575;&#xC591;&#xCCB4; &#xC544;&#xD0A4;&#xD14D;&#xCC98;&#xC758; &#xADDC;&#xC815;&#xACFC; chemotaxis &#xAE30;&#xAD6C;&#xC758; &#xC9C0;&#xC5ED;&#xD654; &#xAC00;&#xB2A5;&#xD55C; &#xC5ED;&#xD560; Mreb&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC81C;&#xC548;.

Bdellovibrio bacteriovorus&#xC5D0;&#xC11C; &#xD575;&#xC591;&#xCCB4;&#xC758; &#xB098;&#xC120;&#xD615; &#xAD6C;&#xC870;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Se presenta un an&#xE1;lisis de la crio-electr&#xF3;n tomogr&#xE1;fico de la arquitectura tridimensional de una cepa de los bacteriovorus Bdellovibrio bacteria Gram-negativas en que se reemplaz&#xF3; MreB2 end&#xF3;geno con monom&#xE9;rico prote&#xED;na verde azulado fluorescente (mTFP)-etiquetados MreB2. En contraste con las c&#xE9;lulas Bdellovibrio de tipo salvaje que aparecen predominantemente en una regi&#xF3;n nucleoide compacto, las c&#xE9;lulas que expresan mTFP marcado MreB2 muestra una organizaci&#xF3;n en espiral retorcida del nucleoide. La estructura m&#xE1;s abierta de los nucleoides MreB2-mTFP habilitado clara en la visualizaci&#xF3;n in situ de los ribosomas decoraci&#xF3;n de la periferia del nucleoide. Los ribosomas tambi&#xE9;n limita los bordes de nucleoides m&#xE1;s compactos de ambas c&#xE9;lulas de tipo salvaje y las c&#xE9;lulas mutantes. Sorprendentemente, MreB2-mTFP localizado en la interfaz entre el nucleoide de caracol y el citoplasma, lo que sugiere una conexi&#xF3;n &#xED;ntima entre la arquitectura y la disposici&#xF3;n MreB nucleoide. Adem&#xE1;s, en contraste con c&#xE9;lulas de tipo salvaje, donde un solo grupo quimiorreceptores fuerte se localiza cerca del flagelo polar &#xFA;nico, MreB2-mTFP c&#xE9;lulas a menudo muestran las matrices ampliadas quimiorreceptoras presentes en uno o ambos postes y se muestran m&#xFA;ltiples flagelos o ubicados incorrectamente. Nuestros resultados proporcionan evidencia directa estructural para la organizaci&#xF3;n en espiral del nucleoide bacteriano y sugieren un posible papel de MreB en la regulaci&#xF3;n de la arquitectura nucleoide y la localizaci&#xF3;n del aparato de la quimiotaxis.

Article	Year
Three-dimensional electron microscopic imaging of membrane invaginations in Escherichia coli overproducing the chemotaxis receptor Tsr. Journal of bacteriology\| PubMed ID: 15262942	2004
Are our buildings safe? Occupational health & safety (Waco, Tex.)\| PubMed ID: 15773686	2005
Cryoelectron tomographic analysis of an HIV-neutralizing protein and its complex with native viral gp120. The Journal of biological chemistry\| PubMed ID: 17599917	2007
3D imaging of mammalian cells with ion-abrasion scanning electron microscopy. Journal of structural biology\| PubMed ID: 19116171	2009
Ion-abrasion scanning electron microscopy reveals surface-connected tubular conduits in HIV-infected macrophages. PLoS pathogens\| PubMed ID: 19779568	2009
3D visualization of HIV transfer at the virological synapse between dendritic cells and T cells. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America\| PubMed ID: 20624966	2010
Spiral architecture of the nucleoid in Bdellovibrio bacteriovorus. Journal of bacteriology\| PubMed ID: 21148724	2011

Donald Bliss

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