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Determination of Molecular Structures of HIV Envelope Glycoproteins using Cryo-Electron Tomography and Automated Sub-tomogram Averaging

Since its discovery nearly 30 years ago, more than 60 million people have been infected with the human immunodeficiency virus (HIV) (www.usaid.gov). The ...

National Institutes of Health

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&#x7535;&#x5B50; tomograms &#x7684;&#x5B9A;&#x91CF;&#x89E3;&#x91CA;&#x4E00;&#x4E2A;&#x57FA;&#x4E8E;&#x80FD;&#x91CF;&#x4E09;&#x7EF4;&#x5206;&#x5272;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3002;

Electron tomography allows for the determination of the three-dimensional structures of cells and tissues at resolutions significantly higher than that which is possible with optical microscopy. Electron tomograms contain, in principle, vast amounts of information on the locations and architectures of large numbers of subcellular assemblies and organelles. The development of reliable quantitative approaches for the analysis of features in tomograms is an important problem, and a challenging prospect due to the low signal-to-noise ratios that are inherent to biological electron microscopic images. This is, in part, a consequence of the tremendous complexity of biological specimens. We report on a new method for the automated segmentation of HIV particles and selected cellular compartments in electron tomograms recorded from fixed, plastic-embedded sections derived from HIV-infected human macrophages. Individual features in the tomogram are segmented using a novel robust algorithm that finds their boundaries as global minimal surfaces in a metric space defined by image features. The optimization is carried out in a transformed spherical domain with the center an interior point of the particle of interest, providing a proper setting for the fast and accurate minimization of the segmentation energy. This method provides tools for the semi-automated detection and statistical evaluation of HIV particles at different stages of assembly in the cells and presents opportunities for correlation with biochemical markers of HIV infection. The segmentation algorithm developed here forms the basis of the automated analysis of electron tomograms and will be especially useful given the rapid increases in the rate of data acquisition. It could also enable studies of much larger data sets, such as those which might be obtained from the tomographic analysis of HIV-infected cells from studies of large populations.

An energy-based three-dimensional segmentation approach for the quantitative interpretation of electron tomograms.

Tomographie &#xE9;lectronique permet la d&#xE9;termination des structures tridimensionnelles de cellules et de tissus &#xE0; des r&#xE9;solutions significativement sup&#xE9;rieur &#xE0; ce qui est possible avec la microscopie optique. Tomographies &#xE9;lectrons contiennent, en principe, de vastes quantit&#xE9;s de renseignements sur les endroits et les architectures d&#x26;#39;un grand nombre d&#x26;#39;assemblages subcellulaires et des organites. Le d&#xE9;veloppement de m&#xE9;thodes quantitatives fiables pour l&#x26;#39;analyse des caract&#xE9;ristiques de tomographies est un probl&#xE8;me important, et une perspective difficile &#xE0; cause des faibles rapports signal sur bruit qui sont inh&#xE9;rents &#xE0; &#xE9;lectrons biologiques des images microscopiques. C&#x26;#39;est, en partie, une cons&#xE9;quence de l&#x26;#39;&#xE9;norme complexit&#xE9; de sp&#xE9;cimens biologiques. Nous rapportons une nouvelle m&#xE9;thode pour la segmentation automatique de particules de VIH et de certains compartiments cellulaires dans tomogrammes &#xE9;lectrons enregistr&#xE9;s &#xE0; partir fixes, embarqu&#xE9;s en plastique-sections d&#xE9;riv&#xE9;es de macrophages infect&#xE9;s par le VIH de l&#x26;#39;homme. Caract&#xE9;ristiques individuelles de la tomographie sont segment&#xE9;s en utilisant un nouvel algorithme robuste qui trouve leurs limites globales des surfaces minimales dans un espace m&#xE9;trique d&#xE9;fini par des caract&#xE9;ristiques d&#x26;#39;image. L&#x26;#39;optimisation est effectu&#xE9;e dans un domaine transform&#xE9; sph&#xE9;rique avec le centre d&#x26;#39;un point int&#xE9;rieur de la particule d&#x26;#39;int&#xE9;r&#xEA;t, fournissant un r&#xE9;glage appropri&#xE9; pour la minimisation rapide et pr&#xE9;cise de l&#x26;#39;&#xE9;nergie de segmentation. Cette m&#xE9;thode fournit des outils pour la d&#xE9;tection semi-automatis&#xE9;e et l&#x26;#39;&#xE9;valuation statistique des particules de VIH &#xE0; diff&#xE9;rents stades d&#x26;#39;assemblage dans les cellules et possibilit&#xE9;s qu&#x26;#39;elle offre pour la corr&#xE9;lation avec les marqueurs biochimiques de l&#x26;#39;infection &#xE0; VIH. L&#x26;#39;algorithme de segmentation d&#xE9;velopp&#xE9; ici est &#xE0; la base de l&#x26;#39;analyse automatis&#xE9;e des tomographies d&#x26;#39;&#xE9;lectrons et sera particuli&#xE8;rement utile &#xE9;tant donn&#xE9; l&#x26;#39;augmentation rapide du taux d&#x26;#39;acquisition de donn&#xE9;es. Elle pourrait &#xE9;galement permettre des &#xE9;tudes d&#x26;#39;ensembles de donn&#xE9;es beaucoup plus importants, tels que ceux qui pourraient &#xEA;tre obtenus &#xE0; partir de l&#x26;#39;analyse tomographique de cellules infect&#xE9;es provenant d&#x26;#39;&#xE9;tudes de grandes populations.

Une approche &#xE9;nerg&#xE9;tique bas&#xE9;e sur la segmentation en trois dimensions pour l&#x26;#39;interpr&#xE9;tation quantitative des tomographies d&#x26;#39;&#xE9;lectrons

Elektronenstrahl-Tomographie kann zur Bestimmung der dreidimensionalen Strukturen von Zellen und Geweben bei deutlich h&ouml;her als die Aufl&ouml;sungen mit Lichtmikroskop m&ouml;glich ist. Elektron-Tomograms enthalten, grunds&auml;tzlich Unmengen an Informationen &uuml;ber die Standorte und Architekturen zahlreicher subzellulare Assemblys und Organellen. Die Entwicklung der zuverl&auml;ssige quantitative Ans&auml;tze zur Analyse von Funktionen in Tomograms ist ein wichtiges Problem und eine herausfordernde Perspektive aufgrund der Signal-Rausch-Verh&auml;ltnis klein, die auf biologische Elektron mikroskopische Bilder verbunden sind. Dies ist teilweise eine Folge der enormen Komplexit&auml;t des biologischen Proben. Wir Bericht &uuml;ber eine neue Methode f&uuml;r die automatische Segmentierung der HIV-Partikel und zellulare F&auml;chern im Elektron Tomograms registrate feste, Kunststoff eingebettete Abschnitte von HIV-infizierten Menschen Makrophagen abgeleitete ausgew&auml;hlt. Einzelne Funktionen in der Tomogram sind mit einem neuartigen robusten Algorithmus, der ihre Grenzen als globale minimale Oberfl&auml;chen in einem metrischen Raum definiert durch Bildfunktionen findet segmentiert. Die Optimierung erfolgt in einer transformierten sph&auml;rische Dom&auml;ne mit dem Zentrum einen inneren Punkt des Teilchens von Interesse, die eine richtige Einstellung f&uuml;r die schnelle und genaue Minimierung der Segmentierung Energie bereitstellen. Diese Methode bietet Werkzeuge f&uuml;r die semi-automatische Erkennung und statistische Auswertung der HIV-Partikel in den verschiedenen Phasen der Versammlung in den Zellen und er&ouml;ffnet Chancen f&uuml;r Korrelation mit biochemische Marker einer HIV-Infektion. Die hier entwickelten Segmentierungsalgorithmus bildet die Grundlage f&uuml;r die automatisierte Analyse von Elektron-Tomograms und werden besonders angesichts der raschen Zunahmen der Datenerfassung. Es kann auch Studien viel gr&ouml;&szlig;ere Datenmengen, wie Sie aktivieren, die von der tomographische Analyse von HIV-infizierten Zellen aus der gro&szlig;en Populationen bezogen werden k&ouml;nnte.

Dreidimensionale Segmentierung Energie basierenden Ansatz f&uuml;r die quantitative Interpretation der Elektron-Tomograms.

Tomografia elettrone permette la determinazione delle strutture tridimensionali di cellule e tessuti a risoluzioni significativamente superiore a quello che &egrave; possibile con microscopia ottica. Elettrone tomograms contengono, in linea di principio, grandi quantit&agrave; di informazioni sui luoghi e le architetture di un gran numero di assembly sottocellulare e organelli. Lo sviluppo di approcci quantitativi affidabili per l&#39;analisi delle caratteristiche di tomograms &egrave; un problema importante e una prospettiva difficile dovuto i rapporti segnale-rumore bassi che sono inerenti a immagini microscopiche biologiche elettrone. Questo &egrave;, in parte, una conseguenza della complessit&agrave; tremenda di campioni biologici. Abbiamo rapporto su un nuovo metodo per la segmentazione automatica di particelle di HIV e selezionato compartimenti cellulari in elettrone tomograms registrato da sezioni fisse, incorporati in plastica derivate da macrofagi umani infettati da HIV. Caratteristiche individuali nel tomogramma sono segmentate utilizzando un algoritmo robusto romanzo che rileva i loro confini superfici minime come globale in uno spazio metrico definito da caratteristiche dell&#39;immagine. L&#39;ottimizzazione viene eseguita in un dominio trasformato sferico con al centro un punto interno della particella di interesse, fornendo una corretta impostazione per la minimizzazione veloce e accurata dell&#39;energia segmentazione. Questo metodo fornisce strumenti per la rilevazione semi-automatizzate e valutazione statistica delle particelle di HIV nelle diverse fasi di assemblaggio nelle cellule e presenta le opportunit&agrave; per la correlazione con i marcatori biochimici dell&#39;infezione da HIV. L&#39;algoritmo di segmentazione sviluppato qui costituisce la base dell&#39;analisi automatizzata di elettrone tomograms e sar&agrave; particolarmente utile dato il rapido aumento del tasso di acquisizione dati. Potrebbero anche attivare studi di pi&ugrave; grandi insiemi di dati, come quelli che potrebbero essere ottenuti dall&#39;analisi tomografica delle cellule HIV-infettate da studi di grandi popolazioni.

Un approccio basato su energia tridimensionale segmentazione per l&#39;interpretazione quantitativa dell&#39;elettrone tomograms.

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&#xC804;&#xC790; &#xB2E8;&#xCE35; &#xCD2C;&#xC601; &#xAC00;&#xB2A5;&#xD55C; &#xAD11;&#xD559; &#xD604;&#xBBF8;&#xACBD;&#xC73C;&#xB85C; &#xC138;&#xD3EC;&#xC640; &#xC870;&#xC9C1; &#xBCF4;&#xB2E4; &#xD6E8;&#xC52C; &#xB354; &#xB192;&#xC740; &#xD574;&#xC0C1;&#xB3C4;&#xC5D0;&#xC11C; 3 &#xCC28;&#xC6D0; &#xAD6C;&#xC870; &#xACB0;&#xC815;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC804;&#xC790; tomograms &#xD3EC;&#xD568;, &#xC6D0;&#xCE59;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C;, &#xBC29;&#xB300;&#xD55C; &#xC704;&#xCE58; &#xC815;&#xBCF4; &#xBC0F; &#xB9CE;&#xC740; &#xC218;&#xC758; subcellular &#xC5B4;&#xC148;&#xBE14;&#xB9AC; &#xBC0F; organelles&#xC758; &#xC544;&#xD0A4;&#xD14D;&#xCC98;. Tomograms&#xC758; &#xAE30;&#xB2A5; &#xBD84;&#xC11D;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC2E0;&#xB8B0;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xB294; &#xC815;&#xB7C9;&#xC801; &#xC811;&#xADFC; &#xBC29;&#xBC95;&#xC758; &#xAC1C;&#xBC1C;&#xC740; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xBB38;&#xC81C;, &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; &#xC0DD;&#xBB3C; &#xD559;&#xC801; &#xC804;&#xC790; &#xD604;&#xBBF8;&#xACBD; &#xC774;&#xBBF8;&#xC9C0;&#xC5D0; &#xB0B4;&#xC7AC; &#xD558;&#xB294; &#xB0AE;&#xC740; &#xC2E0;&#xD638; &#xB300; &#xC7A1;&#xC74C; &#xBE44;&#xC728; &#xB54C;&#xBB38;&#xC5D0; &#xB3C4;&#xC804;&#xC801;&#xC778; &#xC804;&#xB9DD;. &#xC774; &#xBD80;&#xBD84;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC0DD;&#xBB3C; &#xD45C;&#xBCF8;&#xC758; &#xC5C4;&#xCCAD;&#xB09C; &#xBCF5;&#xC7A1;&#xC131;&#xC758; &#xACB0;&#xACFC; &#xC774;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; HIV &#xC785;&#xC790;&#xC758; &#xC790;&#xB3D9;&#xD654; &#xB41C; &#xC138;&#xADF8;&#xBA3C;&#xD2B8;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC0C8;&#xB85C;&#xC6B4; &#xBC29;&#xBC95;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xBCF4;&#xACE0;&#xC11C; &#xD558; &#xACE0; &#xC804;&#xC790; tomograms HIV&#xC5D0; &#xAC10;&#xC5FC; &#xB41C; &#xC778;&#xAC04; &#xB300; &#xC2DD; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD30C;&#xC0DD; &#xB41C; &#xACE0;&#xC815;, &#xD50C;&#xB77C;&#xC2A4;&#xD2F1; &#xD3EC;&#xD568; &#xC139;&#xC158;&#xC5D0;&#xC11C; &#xAE30;&#xB85D; &#xB41C; &#xC140;&#xB8F0;&#xB7EC; &#xAD6C;&#xD68D; &#xC120;&#xD0DD;. &#xAC1C;&#xBCC4; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC5D0;&#xB294; tomogram &#xC774;&#xBBF8;&#xC9C0; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC815;&#xC758; &#xB41C; &#xAC70;&#xB9AC; &#xACF5;&#xAC04;&#xC5D0; &#xC138;&#xACC4;&#xC801;&#xC778; &#xCD5C;&#xC18C; &#xD45C;&#xBA74; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC758; &#xACBD;&#xACC4;&#xB97C; &#xCC3E;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xC18C;&#xC124; &#xAC15;&#xB825;&#xD55C; &#xC54C;&#xACE0;&#xB9AC;&#xC998;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC138;&#xADF8;&#xBA3C;&#xD2B8;&#xB294;. &#xCD5C;&#xC801;&#xD654; &#xC13C;&#xD130; &#xC138;&#xBD84;&#xD654; &#xC5D0;&#xB108;&#xC9C0;&#xC758; &#xC2E0;&#xC18D; &#xD558; &#xACE0; &#xC815;&#xD655;&#xD55C; &#xCD5C;&#xC18C;&#xD654;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC801;&#xC808; &#xD55C; &#xC124;&#xC815;&#xC744; &#xC81C;&#xACF5; &#xD558;&#xB294; &#xAD00;&#xC2EC;&#xC758; &#xC785;&#xC790;&#xC758; &#xC778;&#xD14C;&#xB9AC;&#xC5B4; &#xD3EC;&#xC778;&#xD2B8; &#xBCC0;&#xD658; &#xB41C; &#xAD6C;&#xD615; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC218;&#xD589; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774; &#xBA54;&#xC11C;&#xB4DC;&#xC640; &#xBC18;&#xC790;&#xB3D9;&#xB41C; &#xD0D0;&#xC9C0; &#xBC0F; &#xC140;&#xC5D0;&#xB294; &#xC5B4;&#xC148;&#xBE14;&#xB9AC;&#xC758; &#xB2E4;&#xB978; &#xB2E8;&#xACC4;&#xC5D0;&#xC11C; HIV &#xC785;&#xC790;&#xC758; &#xD1B5;&#xACC4;&#xC801; &#xD3C9;&#xAC00; &#xC704;&#xD55C; &#xB3C4;&#xAD6C;&#xB97C; &#xC81C;&#xACF5; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4; HIV &#xAC10;&#xC5FC;&#xC758; &#xC0DD; &#xD654; &#xD559;&#xC801; &#xD45C;&#xC2DD;&#xC73C;&#xB85C; &#xC0C1;&#xAD00; &#xAD00;&#xACC4;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xAE30;&#xD68C;&#xB97C; &#xC120;&#xBB3C; &#xD55C;&#xB2E4;. &#xC138;&#xADF8;&#xBA3C;&#xD2B8;&#xD654; &#xC54C;&#xACE0;&#xB9AC;&#xC998; &#xAC1C;&#xBC1C; &#xC5EC;&#xAE30; &#xC804;&#xC790; tomograms&#xC758; &#xC790;&#xB3D9;&#xD654; &#xB41C; &#xBD84;&#xC11D;&#xC758; &#xAE30;&#xCD08;&#xB97C; &#xD615;&#xC131; &#xD558; &#xACE0; &#xB370;&#xC774;&#xD130; &#xC218;&#xC9D1;&#xC758; &#xBE44;&#xC728;&#xC5D0; &#xC788;&#xB294; &#xAE09;&#xC18D; &#xD55C; &#xC99D;&#xAC00; &#xAC10;&#xC548;&#xD560; &#xB54C; &#xD2B9;&#xD788; &#xB3C4;&#xC6C0;&#xC774; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB610;&#xD55C; &#xC5F0;&#xAD6C; &#xB4F1; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xC758; &#xD070; &#xC778;&#xAD6C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC5D0;&#xC774;&#xC988;&#xC5D0; &#xAC10;&#xC5FC; &#xB41C; &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xB2E8;&#xCE35; &#xBD84;&#xC11D;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC5BB;&#xC744; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xD6E8;&#xC52C; &#xB354; &#xD070; &#xB370;&#xC774;&#xD130; &#xC138;&#xD2B8;&#xC758; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xC804;&#xC790; tomograms&#xC758; &#xC815;&#xB7C9;&#xC801; &#xD574;&#xC11D;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC5D0;&#xB108;&#xC9C0; &#xAE30;&#xBC18; 3 &#xCC28;&#xC6D0; &#xC138;&#xBD84;&#xD654; &#xC811;&#xADFC;.

Tomograf&#xED;a de electrones permite la determinaci&#xF3;n de las estructuras tridimensionales de las c&#xE9;lulas y tejidos a resoluciones significativamente m&#xE1;s altos que el que es posible con microscop&#xED;a &#xF3;ptica. Tomograf&#xED;as de electrones contienen, en principio, una gran cantidad de informaci&#xF3;n sobre los lugares y las arquitecturas de un gran n&#xFA;mero de asambleas y org&#xE1;nulos subcelulares. El desarrollo de enfoques cuantitativos confiables para el an&#xE1;lisis de las caracter&#xED;sticas de las tomograf&#xED;as es un problema importante, y una perspectiva desafiante debido a los bajos de se&#xF1;al a ruido que son inherentes a las im&#xE1;genes biol&#xF3;gicas microsc&#xF3;picas de electrones. Esto es, en parte, una consecuencia de la enorme complejidad de espec&#xED;menes biol&#xF3;gicos. Se presenta en un nuevo m&#xE9;todo para la segmentaci&#xF3;n autom&#xE1;tica de part&#xED;culas de VIH y una selecci&#xF3;n de los compartimentos celulares en las tomograf&#xED;as de electrones registrados a partir de fijos, de pl&#xE1;stico embebidos en derivados de infectados por el VIH macr&#xF3;fagos humanos. Caracter&#xED;sticas individuales en la tomograf&#xED;a se segmentan utilizando un nuevo algoritmo robusto que encuentra sus l&#xED;mites globales de las superficies m&#xED;nimas en un espacio m&#xE9;trico definido por caracter&#xED;sticas de la imagen. La optimizaci&#xF3;n se lleva a cabo en un dominio transformado esf&#xE9;rica con el centro de un punto interior de la part&#xED;cula de inter&#xE9;s, proporcionando un ajuste apropiado para la minimizaci&#xF3;n r&#xE1;pida y precisa de la energ&#xED;a de segmentaci&#xF3;n. Este m&#xE9;todo proporciona herramientas para la detecci&#xF3;n semi-automatizado y evaluaci&#xF3;n estad&#xED;stica de part&#xED;culas de VIH en diferentes etapas de ensamblaje de las c&#xE9;lulas y las oportunidades que presenta para la correlaci&#xF3;n con los marcadores bioqu&#xED;micos de la infecci&#xF3;n por el VIH. El algoritmo de segmentaci&#xF3;n desarrollado aqu&#xED; es la base del an&#xE1;lisis automatizado de las tomograf&#xED;as de electrones y ser&#xE1; especialmente &#xFA;til dado el r&#xE1;pido incremento en la tasa de adquisici&#xF3;n de datos. Tambi&#xE9;n podr&#xED;a permitir estudios de conjuntos de datos mucho m&#xE1;s grandes, tales como las que podr&#xED;an obtenerse a partir del an&#xE1;lisis tomogr&#xE1;fico de c&#xE9;lulas infectadas por VIH de los estudios de grandes poblaciones.

Una basada en la energ&#xED;a tridimensional Segmentaci&#xF3;n enfoque para la interpretaci&#xF3;n cuantitativa de tomograf&#xED;as de electrones

&#x6162;&#x7684;&#x7075;&#x957F;&#x7C7B;&#x52A8;&#x7269;&#xFF0C;&#x5305;&#x62EC;&#x4EBA;&#x7C7B;&#x548C;&#x7334;&#x514D;&#x75AB;&#x7F3A;&#x9677;&#x75C5;&#x6BD2; &#xFF08;&#x827E;&#x6ECB;&#x75C5;&#x6BD2;&#x548C; SIV&#xFF09;&#xFF0C;&#x5305;&#x819C;&#x7CD6;&#x86CB;&#x767D;&#x662F; heterodimers &#x7684;&#x8DE8;&#x819C;&#x7CD6;&#x86CB;&#x767D; (&#x901A;&#x5E38; gp41) &#x548C;&#x8868;&#x9762;&#x7CD6;&#x86CB;&#x767D; (gp120) &#x5BF9;&#x76EE;&#x6807;&#x7EC6;&#x80DE; CD4 &#x7740;&#x624B;&#x75C5;&#x6BD2;&#x6027;&#x6761;&#x76EE;&#x6709;&#x7EA6;&#x675F;&#x529B;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x7528;&#x7535;&#x5B50;&#x65AD;&#x5C42;&#x626B;&#x63CF;&#x4EE5;&#x786E;&#x5B9A;&#x7EAF;&#x51C0; SIV virions &#x9694;&#x79BB;&#x548C; CD4 + &#x9776;&#x7EC6;&#x80DE;&#x63A5;&#x89E6;&#x7684;&#x4E09;&#x7EF4;&#x4F53;&#x7CFB;&#x7ED3;&#x6784;&#x3002;&#x5728;&#x4E09;&#x8054;&#x75C5;&#x6BD2;&#x4FE1;&#x5C01;&#x7CD6;&#x86CB;&#x767D;&#x8868;&#x9762;&#x5CF0;&#x503C;&#x662F;&#x5F02;&#x6784;&#x7684;&#x5916;&#x89C2;&#x548C;&#x901A;&#x5E38;&#x5927;&#x7EA6; 120 &#x957F;&#x548C;&#x5927;&#x7EA6; 120 A &#x5BBD;&#x5904;&#x8FDC;&#x7AEF;&#x3002;&#x901A;&#x8FC7;&#x9888;&#x5F62;&#x7684;&#x63A5;&#x89E6;&#x533A;&#x57DF;&#xFF0C;&#x5927;&#x7EA6; 400 A &#x5E7F;&#x9614;&#xFF0C;&#x4E00;&#x8D2F;&#x7531;&#x7EC4;&#x6210;&#x7684;&#x4E94;&#x81F3;&#x4E03;&#x6746;&#x5F62;&#x529F;&#x80FD;&#xFF0C;&#x6BCF;&#x4E2A;&#x5927;&#x7EA6; 100 A &#x5BC6;&#x7FA4;&#x96C6;&#x7684;&#x957F;&#x65F6;&#x95F4;&#x548C;&#x5927;&#x7EA6; 100 A T &#x7EC6;&#x80DE;&#x8868;&#x9762;&#x7684; SIV &#x6216;&#x827E;&#x6ECB;&#x75C5;&#x6BD2; 1 &#x5BF9;&#x63A5;&#x53D1;&#x751F;&#x8303;&#x56F4;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E00;&#x72EC;&#x7279;&#x7ED3;&#x6784;&#x4E0D;&#x89C2;&#x5BDF;&#x5230;&#x75C5;&#x6BD2;&#x65F6;&#x4E0E; T &#x6DCB;&#x5DF4;&#x7EC6;&#x80DE;&#x9762;&#x524D;&#x6297; CD4 &#x6297;&#x4F53;&#x3001; TAK779&#x3001; CCR5 &#x62EE;&#x6297;&#x5242;&#x6216;&#x80BD;&#x8FDB;&#x5165;&#x6291;&#x5236;&#x5242; SIVmac251 C34 &#x5B75;&#x5316;&#x3002;&#x4E3A;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x5230;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x7684; virions&#xFF0C;&#x51E0;&#x4E2A;&#x4E09;&#x805A;&#x4F53;&#x79BB;&#x6B64;&#x7FA4;&#x96C6;&#x5728;&#x75C5;&#x6BD2;&#x9897;&#x7C92;&#x7EC6;&#x80DE;&#x63A5;&#x53E3;&#xFF0C;&#x5373;&#x4F7F;&#x5728;&#x663E;&#x793A;&#x591A;&#x8FBE; 70 &#x4FE1;&#x5C01;&#x7CD6;&#x86CB;&#x767D;&#x4E09;&#x805A;&#x4F53;&#x6BCF;&#x4E2A;&#x75C5;&#x6BD2;&#x9897;&#x7C92;&#x7684;&#x75C5;&#x6BD2;&#x5236;&#x5242;&#x88AB;&#x4F7F;&#x7528;&#x7684;&#x60C5;&#x51B5;&#x4E0B;&#x89C2;&#x5BDF;&#x5230;&#x3002;&#x6B64;&#x8054;&#x7CFB;&#x4EBA;&#x7684;&#x533A;&#x57DF;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x79F0;&#x4E4B;&#x4E3A;&quot;&#x5165;&#x53E3;&#x722A;&quot;&#xFF0C;&#x63D0;&#x4F9B;&#x4E86;&#x7A7A;&#x95F4;&#x8303;&#x56F4;&#xFF0C;&#x4E86;&#x89E3;&#x75C5;&#x6BD2;&#x6027;&#x6761;&#x76EE;&#x7684;&#x5206;&#x5B50;&#x673A;&#x5236;&#x3002;&#x6D4B;&#x5B9A;&#x5206;&#x5B50;&#x7684;&#x7EC4;&#x6210;&#x548C;&#x7ED3;&#x6784;&#x7684;&#x6761;&#x76EE;&#x722A;&#x5C06;&#x6709;&#x52A9;&#x4E8E;&#x6539;&#x8FDB;&#x836F;&#x7269;&#x6291;&#x5236;&#x827E;&#x6ECB;&#x75C5;&#x6BD2; 1 &#x6761;&#x76EE;&#x7684;&#x8BC6;&#x522B;&#x3002;

&#x7535;&#x5B50;&#x65AD;&#x5C42;&#x626B;&#x63CF;&#x7684; T &#x7EC6;&#x80DE;&#x548C; SIV/&#x827E;&#x6ECB;&#x75C5;&#x6BD2;-1 &#x4E4B;&#x95F4;&#x7684;&#x63A5;&#x89E6;&#xFF1A; &#x5BF9;&#x75C5;&#x6BD2;&#x6027;&#x6761;&#x76EE;&#x7684;&#x5F71;&#x54CD;&#x3002;

The envelope glycoproteins of primate lentiviruses, including human and simian immunodeficiency viruses (HIV and SIV), are heterodimers of a transmembrane glycoprotein (usually gp41), and a surface glycoprotein (gp120), which binds CD4 on target cells to initiate viral entry. We have used electron tomography to determine the three-dimensional architectures of purified SIV virions in isolation and in contact with CD4+ target cells. The trimeric viral envelope glycoprotein surface spikes are heterogeneous in appearance and typically approximately 120 A long and approximately 120 A wide at the distal end. Docking of SIV or HIV-1 on the T cell surface occurs via a neck-shaped contact region that is approximately 400 A wide and consistently consists of a closely spaced cluster of five to seven rod-shaped features, each approximately 100 A long and approximately 100 A wide. This distinctive structure is not observed when viruses are incubated with T lymphocytes in the presence of anti-CD4 antibodies, the CCR5 antagonist TAK779, or the peptide entry inhibitor SIVmac251 C34. For virions bound to cells, few trimers were observed away from this cluster at the virion-cell interface, even in cases where virus preparations showing as many as 70 envelope glycoprotein trimers per virus particle were used. This contact zone, which we term the "entry claw", provides a spatial context to understand the molecular mechanisms of viral entry. Determination of the molecular composition and structure of the entry claw may facilitate the identification of improved drugs for the inhibition of HIV-1 entry.

Electron tomography of the contact between T cells and SIV/HIV-1: implications for viral entry.

Les glycoprot&#xE9;ines d&#x26;#39;enveloppe de lentivirus de primate, y compris l&#x26;#39;homme et simien virus de l&#x26;#39;immunod&#xE9;ficience (VIH et SIV), sont des h&#xE9;t&#xE9;rodim&#xE8;res de une glycoprot&#xE9;ine transmembranaire (gp41 g&#xE9;n&#xE9;ralement), et une glycoprot&#xE9;ine de surface (gp120), qui se lie CD4 sur les cellules cibles d&#x26;#39;ouvrir l&#x26;#39;entr&#xE9;e du virus. Nous avons utilis&#xE9; la tomographie &#xE9;lectronique pour d&#xE9;terminer les architectures tridimensionnelles des virions purifi&#xE9;s SIV dans l&#x26;#39;isolement et en contact avec les cellules CD4 + cibles. Les trim&#xE8;res virales pointes d&#x26;#39;enveloppe glycoprot&#xE9;ine de surface sont h&#xE9;t&#xE9;rog&#xE8;nes d&#x26;#39;aspect et g&#xE9;n&#xE9;ralement d&#x26;#39;environ 120 A. Long et environ 120 A large &#xE0; l&#x26;#39;extr&#xE9;mit&#xE9; distale Ancrage de SIV ou le HIV-1 sur la surface des cellules T se produit par l&#x26;#39;interm&#xE9;diaire d&#x26;#39;une r&#xE9;gion de contact en forme de col qui est d&#x26;#39;environ 400 A large et comprend uniform&#xE9;ment d&#x26;#39;une grappe &#xE9;troitement espac&#xE9;e de cinq &#xE0; sept &#xE9;l&#xE9;ments en forme de tige, chaque environ 100 A &#xE0; long et environ 100 A de large. Cette structure distinctive n&#x26;#39;est pas observ&#xE9;e lorsque les virus sont incub&#xE9;es avec les lymphocytes T en pr&#xE9;sence d&#x26;#39;anticorps anti-CD4, l&#x26;#39;antagoniste du CCR5 TAK779, ou l&#x26;#39;inhibiteur de l&#x26;#39;entr&#xE9;e peptide SIVmac251 C34. Pour virions li&#xE9;s &#xE0; des cellules, on observe peu de trim&#xE8;res loin de ce groupe &#xE0; l&#x26;#39;interface virion des cellules, m&#xEA;me dans les cas o&#xF9; des pr&#xE9;parations de virus pr&#xE9;sentant jusqu&#x26;#39;&#xE0; 70 trim&#xE8;res glycoprot&#xE9;ine d&#x26;#39;enveloppe par particule virale ont &#xE9;t&#xE9; utilis&#xE9;s. Cette zone de contact, que nous appelons la &#x26;quot;griffe d&#x26;#39;entr&#xE9;e&#xBB;, fournit un contexte spatial pour comprendre les m&#xE9;canismes mol&#xE9;culaires de l&#x26;#39;entr&#xE9;e virale. D&#xE9;termination de la composition mol&#xE9;culaire et la structure de la griffe d&#x26;#39;entr&#xE9;e peut faciliter l&#x26;#39;identification des m&#xE9;dicaments plus efficaces pour l&#x26;#39;inhibition de l&#x26;#39;entr&#xE9;e du VIH-1.

Tomographie &#xE9;lectronique du contact entre cellules T et SIV/HIV-1: Implications pour l&#x26;#39;entr&#xE9;e du virus

Die Umschlag-Glykoproteine der Primas Lentiviruses, einschlie&szlig;lich menschliche und Simianes Immundefizienz-Viren (HIV und SIV), sind Heterodimere ein Transmembran-Glykoprotein (in der Regel gp41) und ein Oberfl&auml;chen-Glykoprotein (gp120), die bindet CD4 auf Zielzellen, virale Eintrag zu initiieren. Wir haben Elektron Tomographie verwendet, um zu bestimmen, die dreidimensionalen Architekturen von gereinigtem SIV Virionen isoliert und bei Ber&uuml;hrung mit CD4 + Zielzellen. Die Oberfl&auml;che Trimere virale Umschlag-Glykoprotein-Spikes sind heterogen in Aussehen und in der Regel ca. 120 eine lange und etwa 120 A am distalen Ende breit. Andocken von SIV oder HIV-1 an der T-Zell-Oberfl&auml;che erfolgt &uuml;ber ein Hals-f&ouml;rmigen Kontakt-Bereich, ist etwa 400 A breit und konsequent besteht aus einem eng beieinander Cluster von f&uuml;nf bis sieben st&auml;bchenf&ouml;rmigen Funktionen, jede etwa 100 A lange, und rund 100 A weite. Diese unverwechselbaren Struktur wird nicht eingehalten, wenn Viren mit T-Lymphozyten in Anwesenheit von Anti-CD4 Antik&ouml;rper, der CCR5-Antagonist TAK779 oder der Peptid-Eintrag-Inhibitor SIVmac251 C34 inkubiert werden. F&uuml;r Virionen an Zellen gebunden wurden einige Trimere Weg von diesem Cluster an der Schnittstelle von Virion-Zelle, selbst in F&auml;llen beobachtet wo Virus Zubereitungen mit mehr als 70 Umschlag Glykoprotein Trimere pro Virus-Partikel verwendet wurden. Dieser Kontakt-Zone, die wir die &quot;Eintrag Kralle&quot; bezeichnen, bietet einen r&auml;umlichen Kontext um die molekularen Mechanismen der viralen Eintrag zu verstehen. Bestimmung der molekularen Zusammensetzung und Struktur von der Klaue Eintrag k&ouml;nnen die Identifizierung der verbesserte Medikamente zur Hemmung der HIV-1 Eintrag erleichtert werden.

Elektronenstrahl-Tomographie des Kontakts zwischen T-Zellen und SIV/HIV-1: Implikationen f&uuml;r virale Eintrag.

Le glicoproteine busta del primate lentiviruses, compresi i virus dell&#39;immunodeficienza umana e scimmiesca (HIV e SIV), sono eterodimeri di una glicoproteina transmembrana (solitamente gp41) e una superficie glicoproteina (gp120), che si lega CD4 su cellule bersaglio di avviare entrata virale. Abbiamo usato la tomografia elettrone per determinare le architetture tridimensionale dei virions SIV purificato in isolamento e a contatto con cellule bersaglio CD4 +. Le punte di superficie glicoproteina trimeric busta virale sono eterogenee in aspetto e in genere circa 120 A lungo e circa 120 A largo all&#39;estremit&agrave; distale. Aggancio della SIV o HIV-1 sulla superficie delle cellule T si verifica attraverso una regione di contatto a forma di collo che &egrave; di circa 400 A vasta e costantemente si compone di un cluster ravvicinato di cinque a sette caratteristiche a forma di bastoncello, ciascuno circa 100 A lungo e circa 100 A livello. Questa struttura distintiva non &egrave; osservata quando i virus vengono incubati con linfociti T in presenza di anticorpi anti-CD4, l&#39;antagonista del CCR5 TAK779 o con l&#39;inibitore di entrata del peptide SIVmac251 C34. Per virioni associati alle cellule, paio trimeri sono state osservate lontano da questo cluster all&#39;interfaccia virione-cella, anche nei casi in cui sono state utilizzate preparazioni di virus mostrando come 70 trimeri di glicoproteina busta per particella virale. Questa zona di contatto, che noi termine l&#39;artiglio&quot;entrata&quot;, fornisce un contesto spaziale per capire i meccanismi molecolari di entrata virale. Determinazione della composizione molecolare e struttura dell&#39;artiglio voce pu&ograve; facilitare l&#39;identificazione dei farmaci migliorate per l&#39;inibizione dell&#39;entrata HIV-1.

Tomografia elettrone del contatto tra cellule T e SIV/HIV-1: implicazioni per l&#39;entrata virale.

&#x30D2;&#x30C8;&#x3068;&#x30B5;&#x30EB;&#x514D;&#x75AB;&#x4E0D;&#x5168;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#xFF08;HIV&#x3068;SIV&#xFF09;&#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x970A;&#x9577;&#x985E;&#x30EC;&#x30F3;&#x30C1;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x306E;&#x30A8;&#x30F3;&#x30D9;&#x30ED;&#x30FC;&#x30D7;&#x7CD6;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306F;&#x3001;&#x819C;&#x8CAB;&#x901A;&#x7CD6;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#xFF08;&#x901A;&#x5E38;&#x306F;gp41&#x306E;&#xFF09;&#x3068;&#x3001;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x306E;&#x4FB5;&#x5165;&#x3092;&#x958B;&#x59CB;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x3001;&#x6A19;&#x7684;&#x7D30;&#x80DE;&#x4E0A;&#x306E;CD4&#x3092;&#x7D50;&#x5408;&#x3059;&#x308B;&#x8868;&#x9762;&#x7CD6;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#xFF08;gp120&#x306E;&#xFF09;&#x306E;&#x30D8;&#x30C6;&#x30ED;&#x30C0;&#x30A4;&#x30DE;&#x30FC;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x5206;&#x96E2;&#x3084;CD4 +&#x6A19;&#x7684;&#x7D30;&#x80DE;&#x3068;&#x63A5;&#x89E6;&#x3057;&#x3066;SIV&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x7C92;&#x5B50;&#x306E;&#x7CBE;&#x88FD;&#x4E09;&#x6B21;&#x5143;&#x306E;&#x30A2;&#x30FC;&#x30AD;&#x30C6;&#x30AF;&#x30C1;&#x30E3;&#x3092;&#x6C7A;&#x5B9A;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x96FB;&#x5B50;&#x7DDA;&#x30C8;&#x30E2;&#x30B0;&#x30E9;&#x30D5;&#x30A3;&#x30FC;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x4E09;&#x91CF;&#x4F53;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x306E;&#x30A8;&#x30F3;&#x30D9;&#x30ED;&#x30FC;&#x30D7;&#x7CD6;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x8868;&#x9762;&#x306E;&#x30B9;&#x30D1;&#x30A4;&#x30AF;&#x306F;&#x3001;&#x5916;&#x89B3;&#x3067;&#x7570;&#x8CEA;&#x3067;&#x3042;&#x308A;&#x3001;&#x5178;&#x578B;&#x7684;&#x306B;&#x7D04;120&#x9060;&#x4F4D;&#x7AEF;&#x306E;&#x9577;&#x3055;&#x7D04;120&#x5E45;&#x3002; T&#x7D30;&#x80DE;&#x8868;&#x9762;&#x4E0A;&#x306B;SIV&#x307E;&#x305F;&#x306F;HIV-1&#x306E;&#x30C9;&#x30C3;&#x30AD;&#x30F3;&#x30B0;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3067;&#x9996;&#x72B6;&#x306E;&#x30B3;&#x30F3;&#x30BF;&#x30AF;&#x30C8;&#x9818;&#x57DF;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x3066;&#x767A;&#x751F;&#x3057;&#x305F;&#x7D04;400&#x5E45;&#x3068;&#x4E00;&#x8CAB;&#x3057;&#x3066;&#x4E94;&#x304B;&#x3089;&#x4E03;&#x68D2;&#x72B6;&#x306E;&#x6A5F;&#x80FD;&#x306E;&#x5BC6;&#x306A;&#x30AF;&#x30E9;&#x30B9;&#x30BF;&#x306F;&#x3001;&#x305D;&#x308C;&#x305E;&#x308C;&#x7D04;100&#x304B;&#x3089;&#x69CB;&#x6210;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x9577;&#x200B;&#x200B;&#x3044;&#x3068;&#x7D04;&#x5E45;100&#x3002;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x306F;&#x3001;&#x6297;CD4&#x6297;&#x4F53;&#x3001;CCR5&#x62EE;&#x6297;&#x85AC;TAK779&#x3001;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C9;&#x30A8;&#x30F3;&#x30C8;&#x30EA;&#x963B;&#x5BB3;&#x5264;SIVmac251 C34&#x306E;&#x5B58;&#x5728;&#x4E0B;&#x3067;T&#x30EA;&#x30F3;&#x30D1;&#x7403;&#x3068;&#x30A4;&#x30F3;&#x30AD;&#x30E5;&#x30D9;&#x30FC;&#x30C8;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3068;&#x304D;&#x306F;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x72EC;&#x7279;&#x306E;&#x69CB;&#x9020;&#x304C;&#x89B3;&#x5BDF;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3002;&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x7D50;&#x5408;&#x3057;&#x305F;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x7C92;&#x5B50;&#x306B;&#x3064;&#x3044;&#x3066;&#x306F;&#x3001;&#x3044;&#x304F;&#x3064;&#x304B;&#x306E;&#x4E09;&#x91CF;&#x4F53;&#x3067;&#x3042;&#x3063;&#x3066;&#x3082;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x7C92;&#x5B50;&#x5F53;&#x305F;&#x308A;&#x3001;&#x591A;&#x304F;&#x306E;70&#x306E;&#x30A8;&#x30F3;&#x30D9;&#x30ED;&#x30FC;&#x30D7;&#x7CD6;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x4E09;&#x91CF;&#x4F53;&#x3092;&#x793A;&#x3059;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x88FD;&#x5264;&#x304C;&#x4F7F;&#x7528;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x5834;&#x5408;&#x306B;&#x306F;&#x3001;&#x30D3;&#x30EA;&#x30AA;&#x30F3;&#x30BB;&#x30EB;&#xB7;&#x30A4;&#x30F3;&#x30BF;&#x30D5;&#x30A7;&#x30FC;&#x30B9;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x30AF;&#x30E9;&#x30B9;&#x30BF;&#x304B;&#x3089;&#x96E2;&#x308C;&#x3066;&#x89B3;&#x5BDF;&#x3057;&#x305F;&#x3002; &#x26;quot;&#x30A8;&#x30F3;&#x30C8;&#x30EA;&#x306E;&#x722A;&#x26;quot;&#x3068;&#x3044;&#x3046;&#x8A00;&#x8449;&#x306F;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x63A5;&#x89E6;&#x9818;&#x57DF;&#x306F;&#x3001;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x306E;&#x4FB5;&#x5165;&#x306E;&#x5206;&#x5B50;&#x6A5F;&#x69CB;&#x3092;&#x7406;&#x89E3;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x7A7A;&#x9593;&#x7684;&#x306A;&#x30B3;&#x30F3;&#x30C6;&#x30AD;&#x30B9;&#x30C8;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30A8;&#x30F3;&#x30C8;&#x30EA;&#x306E;&#x722A;&#x306E;&#x5206;&#x5B50;&#x7D44;&#x6210;&#x3068;&#x69CB;&#x9020;&#x306E;&#x6C7A;&#x5B9A;&#x306F;&#x3001;HIV-1&#x306E;&#x30A8;&#x30F3;&#x30C8;&#x30EA;&#x306E;&#x6291;&#x5236;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x6539;&#x826F;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x85AC;&#x7269;&#x306E;&#x540C;&#x5B9A;&#x3092;&#x5BB9;&#x6613;&#x306B;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x308B;&#x3002;

T&#x7D30;&#x80DE;&#x3068;SIV/HIV-1&#x9593;&#x306E;&#x63A5;&#x89E6;&#x306E;&#x96FB;&#x5B50;&#x7DDA;&#x30C8;&#x30E2;&#x30B0;&#x30E9;&#x30D5;&#x30A3;&#x30FC;&#xFF1A;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x306E;&#x4FB5;&#x5165;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x542B;&#x610F;

&#xC778;&#xAC04;&#xACFC; &#xC720;&#xC778;&#xC6D0; &#xBA74;&#xC5ED; &#xACB0;&#xD54D; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; (HIV&#xC640; SIV)&#xC744; &#xD3EC;&#xD568; &#xD55C; &#xC601;&#xC7A5;&#xB958; lentiviruses&#xC758; &#xBD09;&#xD22C; glycoproteins&#xB294; &#xB9C9; &#xD6A1;&#xB2E8; &#xB2F9;&#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; (&#xBCF4;&#xD1B5; gp41) &#xBC0F; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; &#xC131; &#xD56D;&#xBAA9;&#xC744; &#xC2DC;&#xC791; &#xD558;&#xB824;&#xBA74; &#xB300;&#xC0C1; &#xC140;&#xC5D0; CD4 &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xD45C;&#xBA74; &#xB2F9;&#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; (gp120) heterodimers. &#xC6B0;&#xB9AC; &#xC815;&#xD654; SIV virions &#xC808;&#xC5F0; &#xBC0F; &#xC811;&#xCD09; CD4 + &#xB300;&#xC0C1; &#xC140;&#xC758; 3 &#xCC28;&#xC6D0; &#xAD6C;&#xC870;&#xB97C; &#xD655;&#xC778; &#xD558;&#xB824;&#xBA74; &#xC804;&#xC790; &#xB2E8;&#xCE35; &#xCD2C;&#xC601;&#xC744; &#xC774;&#xC6A9; &#xD588;&#xB2E4;. Trimeric &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; &#xC131; &#xBD09;&#xD22C; &#xB2F9;&#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xD45C;&#xBA74; &#xC2A4;&#xD30C;&#xC774;&#xD06C;&#xB294; &#xC774;&#xAE30;&#xC885; &#xBAA8;&#xC591;&#xACFC; &#xC77C;&#xBC18;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xC57D; 120 &#xAE38;&#xACE0; &#xC57D; 120 A &#xC2A4;&#xCF54;&#xD504; &#xB05D;&#xC5D0; &#xB113;&#xC740;. SIV &#xB610;&#xB294; h i V-1&#xC758; T &#xC138;&#xD3EC; &#xD45C;&#xBA74;&#xC5D0; &#xB3C4;&#xD0B9; &#xBAA9; &#xBAA8;&#xC591;&#xC758; &#xC5F0;&#xB77D;&#xCC98; &#xC9C0;&#xC5ED;&#xC5D0; &#xC57D; 400 A&#xB294; &#xC77C;&#xAD00; &#xB418; &#xAC8C; &#xC624;&#xB798; 5 ~ 7 &#xAC1C;&#xC758; &#xB9C9;&#xB300; &#xBAA8;&#xC591; &#xAE30;&#xB2A5;, &#xAC01; &#xC57D; 100 A&#xC758; &#xAC04;&#xACA9;&#xC774; &#xD074;&#xB7EC;&#xC2A4;&#xD130;&#xC758; &#xAD6C;&#xC131; &#xBC0F; &#xC57D; 100 A &#xD1B5;&#xD574; &#xBC1C;&#xC0DD; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xB113;&#xC740;. &#xC774; &#xB3C5;&#xD2B9;&#xD55C; &#xAD6C;&#xC870;&#xB294; &#xD558;&#xC9C0; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; T &#xC138;&#xD3EC; &#xC548;&#xD2F0; CD4 &#xD56D; &#xCCB4;&#xC758; &#xC874;&#xC7AC;, CCR5 &#xC801;&#xC5D0; &#xAC8C; TAK779, &#xB610;&#xB294; SIVmac251 C34 &#xD3A9; &#xD2F0; &#xB4DC; &#xD56D;&#xBAA9; &#xC5B5;&#xC81C;&#xC81C; &#xC778; &#xD050;&#xBCA0;&#xC774; &#xD305; &#xB54C; &#xAD00;&#xCC30; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. Virions &#xC140;&#xC5D0; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xB41C;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xBA87; &#xAC00;&#xC9C0; trimers virion &#xC140; &#xC778;&#xD130;&#xD398;&#xC774;&#xC2A4;&#xC758; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; &#xC900;&#xBE44; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC8FC;&#xB294; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; &#xC785;&#xC790; &#xB2F9; &#xB9CE;&#xAC8C;&#xB294; 70 &#xBD09;&#xD22C; &#xB2F9;&#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; trimers &#xC0AC;&#xC6A9; &#xB41C; &#xACBD;&#xC6B0;&#xC5D0;&#xB3C4;&#xC774; &#xD074;&#xB7EC;&#xC2A4;&#xD130;&#xC5D0;&#xC11C; &#xAD00;&#xCC30; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC; &#xC6A9;&#xC5B4; &quot;&#xD56D;&#xBAA9;&#xC758; &#xBC1C;&#xD1B1;&quot;,&#xC774; &#xC5F0;&#xB77D;&#xCC98; &#xC601;&#xC5ED; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; &#xD56D;&#xBAA9;&#xC758; &#xBD84;&#xC790; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;&#xC744; &#xC774;&#xD574; &#xD558; &#xACF5;&#xAC04; &#xCEE8;&#xD14D;&#xC2A4;&#xD2B8;&#xB97C; &#xC81C;&#xACF5; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xBD84;&#xC790; &#xAD6C;&#xC131;&#xC758; &#xACB0;&#xC815;&#xACFC; &#xAD6C;&#xC870; &#xD56D;&#xBAA9;&#xC758; &#xBC1C;&#xD1B1;&#xC758; HIV-1 &#xD56D;&#xBAA9;&#xC758; &#xC800;&#xD574;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xD5A5;&#xC0C1; &#xB41C; &#xC57D;&#xBB3C;&#xC758; &#xC2DD;&#xBCC4; &#xC6A9;&#xC774; &#xD558; &#xAC8C; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

T &#xC138;&#xD3EC;&#xC640; SIV/&#xC5D0;&#xC774;&#xC988;-1 &#xC0AC;&#xC774;&#xC758; &#xC811;&#xCD09;&#xC758; &#xC804;&#xC790; &#xB2E8;&#xCE35; &#xCD2C;&#xC601;: &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; &#xC131; &#xD56D;&#xBAA9;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC758;&#xBBF8;.

Las glicoprote&#xED;nas de la envoltura de los lentivirus de primates, incluidos los virus de la inmunodeficiencia humana y de simio (VIH y VIS), son heterod&#xED;meros de una glicoprote&#xED;na transmembrana (generalmente gp41), y una glicoprote&#xED;na de superficie (gp120), que se une CD4 sobre las c&#xE9;lulas diana para iniciar la entrada viral. Hemos utilizado tomograf&#xED;a electr&#xF3;nica para determinar las arquitecturas tridimensionales de viriones purificados SIV en aislamiento y en contacto con las c&#xE9;lulas CD4 + diana. Los trim&#xE9;ricas envoltura viral picos superficiales glicoprote&#xED;na son heterog&#xE9;neas en apariencia y t&#xED;picamente aproximadamente 120 A de largo y aproximadamente 120 ancho A en el extremo distal. Acoplamiento de SIV o el VIH-1 en la superficie de las c&#xE9;lulas T se produce a trav&#xE9;s de una regi&#xF3;n de contacto en forma de cuello que es de aproximadamente 400 A de ancho y consistentemente consiste en un grupo estrechamente espaciada de cinco a siete en forma de varilla caracter&#xED;sticas, cada uno aproximadamente 100 y aproximadamente un largo Un 100 de ancho. Esta peculiar estructura no se observa cuando los virus se incuban con linfocitos T en la presencia de anticuerpos anti-CD4, el antagonista de CCR5 TAK779, o el p&#xE9;ptido inhibidor de la entrada SIVmac251 C34. Para viriones unidos a las c&#xE9;lulas, tr&#xED;meros se observaron pocos lejos de este grupo en la interfase viri&#xF3;n de c&#xE9;lulas, incluso en los casos en preparaciones de virus que muestran tanto como 70 tr&#xED;meros glicoprote&#xED;na de la envoltura por part&#xED;cula de virus se utilizaron. Esta zona de contacto, lo que llamamos la &#x26;quot;u&#xF1;a de entrada&#x26;quot;, proporciona un contexto espacial para comprender los mecanismos moleculares de la entrada del virus. Determinaci&#xF3;n de la composici&#xF3;n molecular y la estructura de la u&#xF1;a de entrada puede facilitar la identificaci&#xF3;n de f&#xE1;rmacos mejorados para la inhibici&#xF3;n del VIH-1 de entrada.

Tomograf&#xED;a electr&#xF3;nica del contacto entre las c&#xE9;lulas T y SIV/HIV-1: Implicaciones para la entrada viral

Comprendre les architectures mol&#xE9;culaires de virus envelopp&#xE9;s et complexe est une fronti&#xE8;re difficile en biologie structurale. Dans ces virus, la variation structurale et compositionnelle d&#x26;#39;une particule virale &#xE0; l&#x26;#39;autre emp&#xEA;che g&#xE9;n&#xE9;ralement l&#x26;#39;utilisation de l&#x26;#39;image soit de cristallisation ou de moyenne proc&#xE9;dures qui ont &#xE9;t&#xE9; appliqu&#xE9;es avec succ&#xE8;s dans le pass&#xE9; pour les virus hautement sym&#xE9;triques. Si les progr&#xE8;s de cryo tomographie &#xE9;lectronique des sp&#xE9;cimens non color&#xE9;es offrent de nouvelles possibilit&#xE9;s pour l&#x26;#39;identification et moyenne mol&#xE9;culaire de sous-composantes telles que les pointes de glycoprot&#xE9;ine de surface sur les virus purifi&#xE9;s, tomographie &#xE9;lectronique des vitraux et plongez-congel&#xE9;s cellules est utilis&#xE9;e pour visualiser le contexte cellulaire de l&#x26;#39;entr&#xE9;e virale et la r&#xE9;plication. Ici, nous passons en revue les d&#xE9;veloppements r&#xE9;cents dans ces deux domaines qui ont trait &#xE0; notre compr&#xE9;hension de la biologie des virus h&#xE9;t&#xE9;rog&#xE8;nes et ple&#xEF;omorphe.

Tomographie &#xE9;lectronique des virus

Verst&auml;ndnis der molekularen Architekturen des umh&uuml;llten und komplexe Viren ist eine herausfordernde Grenze in Strukturbiologie. Diese Viren verhindert die strukturelle und kompositorische Variation aus einem Viruspartikel zu einem anderen im Allgemeinen die Verwendung von Kristallisation oder Bild durchschnittlich Verfahren, die in der Vergangenheit f&uuml;r sehr symmetrischen Viren erfolgreich umgesetzt wurden. W&auml;hrend Fortschritte in der Cryo-Elektron-Tomographie Ungef&auml;rbtes Exemplare neue M&ouml;glichkeiten f&uuml;r die Identifizierung bieten und Molekulare Mittelwert von einzelnen Unterkomponenten wie die Oberfl&auml;che Glykoprotein-Spikes auf gereinigten Viren, Elektronenstrahl-Tomographie gebeizt und Sprung-gefrorene Zellen verwendet wird, um zellulare Zusammenhang mit viralen Eintrag und Replikation zu visualisieren. Hier &uuml;berpr&uuml;fen wir den j&uuml;ngsten Entwicklungen in beiden Bereichen im Zusammenhang mit unserem Verst&auml;ndnis der Biologie der heterogenen und Pleiomorphic Viren.

Elektronenstrahl-Tomographie von Viren.

Le architetture molecolari del virus avvolto e complessa la comprensione &egrave; una frontiera stimolante in biologia strutturale. In questi virus, la variazione strutturale e compositiva, da una particella virale a altro generalmente preclude l&#39;uso di cristallizzazione o di immagine media delle procedure che sono state attuate con successo in passato per i virus altamente simmetrica. Mentre i progressi nella tomografia elettrone cryo di esemplari non marcate forniscono nuove opportunit&agrave; per l&#39;identificazione e molecolare con una media di singoli sottocomponenti come le punte di superficie glicoproteina su virus purificato, tomografia elettrone delle cellule colorate e tuffo-congelato viene utilizzata per visualizzare il contesto cellulare di entrata virale e replica. Qui, passiamo in rassegna gli sviluppi recenti in entrambe le aree si riferiscono alla nostra comprensione della biologia dell&#39;eterogeneo e pleiomorphic virus.

Tomografia di elettrone di virus.

&#x5305;&#x307E;&#x308C;&#x3001;&#x8907;&#x96D1;&#x306A;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x306E;&#x5206;&#x5B50;&#x69CB;&#x9020;&#x3092;&#x7406;&#x89E3;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306F;&#x69CB;&#x9020;&#x751F;&#x7269;&#x5B66;&#x306B;&#x6311;&#x6226;&#x7684;&#x306A;&#x30D5;&#x30ED;&#x30F3;&#x30C6;&#x30A3;&#x30A2;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x3042;&#x308B;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x7C92;&#x5B50;&#x304B;&#x3089;&#x5225;&#x306E;&#x69CB;&#x9020;&#x3068;&#x7D44;&#x6210;&#x5909;&#x5316;&#x306F;&#x3001;&#x4E00;&#x822C;&#x7684;&#x306B;&#x6210;&#x529F;&#x3057;&#x305F;&#x5BFE;&#x79F0;&#x6027;&#x306E;&#x9AD8;&#x3044;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x304C;&#x904E;&#x53BB;&#x306B;&#x5B9F;&#x88C5;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x624B;&#x9806;&#x3092;&#x5E73;&#x5747;&#x7D50;&#x6676;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x30A4;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B8;&#x306E;&#x3044;&#x305A;&#x308C;&#x304B;&#x306E;&#x4F7F;&#x7528;&#x3092;&#x6392;&#x9664;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x67D3;&#x8272;&#x6A19;&#x672C;&#x306E;&#x30AF;&#x30E9;&#x30A4;&#x30AA;&#x96FB;&#x5B50;&#x7DDA;&#x30C8;&#x30E2;&#x30B0;&#x30E9;&#x30D5;&#x30A3;&#x30FC;&#x306E;&#x9032;&#x6B69;&#x306F;&#x3001;&#x67D3;&#x8272;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3068;&#x30D7;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B8;&#x51CD;&#x7D50;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x96FB;&#x5B50;&#x7DDA;&#x30C8;&#x30E2;&#x30B0;&#x30E9;&#x30D5;&#x30A3;&#x30FC;&#x306F;&#x3001;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x306E;&#x4FB5;&#x5165;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x30B3;&#x30F3;&#x30C6;&#x30AD;&#x30B9;&#x30C8;&#x3092;&#x53EF;&#x8996;&#x5316;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x4F7F;&#x7528;&#x3055;&#x308C;&#x3001;&#x8B58;&#x5225;&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x305D;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306A;&#x7CBE;&#x88FD;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x306E;&#x8868;&#x9762;&#x7CD6;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x30B9;&#x30D1;&#x30A4;&#x30AF;&#x306A;&#x3069;&#x306E;&#x500B;&#x3005;&#x306E;&#x30B5;&#x30D6;&#x30B3;&#x30F3;&#x30DD;&#x30FC;&#x30CD;&#x30F3;&#x30C8;&#x306E;&#x5206;&#x5B50;&#x306E;&#x5E73;&#x5747;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x65B0;&#x3057;&#x3044;&#x6A5F;&#x4F1A;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3057;&#x306A;&#x304C;&#x3089;&#x3001;&#x3068;&#x30EC;&#x30D7;&#x30EA;&#x30B1;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x3002;&#x5F7C;&#x3089;&#x306F;&#x7570;&#x7A2E;&#x3068;pleiomorphic&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x306E;&#x751F;&#x7269;&#x5B66;&#x306E;&#x6211;&#x3005;&#x306E;&#x7406;&#x89E3;&#x306B;&#x95A2;&#x9023;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x4E21;&#x65B9;&#x306E;&#x5206;&#x91CE;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x6700;&#x8FD1;&#x306E;&#x9032;&#x5C55;&#x3092;&#x78BA;&#x8A8D;&#x3057;&#x3066;&#x304F;&#x3060;&#x3055;&#x3044;&#x3002;

&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x306E;&#x96FB;&#x5B50;&#x7DDA;&#x30C8;&#x30E2;&#x30B0;&#x30E9;&#x30D5;&#x30A3;&#x30FC;

&#xAD6C;&#xC870; &#xC0DD;&#xBB3C;&#xD559;&#xC5D0; &#xB3C4;&#xC804; &#xD504; &#xB7F0; &#xD2F0;&#xC5B4;&#xB294; &#xC5D4;&#xBC8C;&#xB85C;&#xD504;&#xB41C; &#xBC0F; &#xBCF5;&#xC7A1; &#xD55C; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4;&#xC758; &#xBD84;&#xC790; &#xAD6C;&#xC870;&#xB97C; &#xC774;&#xD574;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4;&#xC5D0; &#xB610; &#xB2E4;&#xB978; &#xD55C; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; &#xC131; &#xC785;&#xC790;&#xC5D0;&#xC11C; &#xAD6C;&#xC870; &#xBC0F; &#xC791;&#xACE1; &#xBCC0;&#xD615; &#xC77C;&#xBC18;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xACB0;&#xC815; &#xD654; &#xB610;&#xB294; &#xD3C9;&#xADE0; &#xC808;&#xCC28; &#xB9E4;&#xC6B0; &#xB300;&#xCE6D; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xACFC;&#xAC70;&#xC5D0; &#xC131;&#xACF5;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xAD6C;&#xD604; &#xB41C; &#xC774;&#xBBF8;&#xC9C0; &#xC0AC;&#xC6A9;&#xC744; &#xAC78;&#xB85C; &#xD558;&#xACA0;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xD760; &#xC5C6;&#xB294; &#xD45C;&#xBCF8;&#xC758; &#xACF3;&#xC744; &#xC54C;&#xC544;&#xB0B4;&#xB294; &#xC804;&#xC790; &#xB2E8;&#xCE35; &#xCD2C;&#xC601;&#xC758; &#xC9C4;&#xBCF4;&#xB294; &#xC2DD;&#xBCC4;&#xC744; &#xC704;&#xD55C; &#xC0C8;&#xB85C;&#xC6B4; &#xAE30;&#xD68C;&#xB97C; &#xC81C;&#xACF5; &#xD558;&#xB294; &#xB3D9;&#xC548; &#xBD84;&#xC790; &#xC815;&#xC81C; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4;&#xC758; &#xD45C;&#xBA74; &#xB2F9;&#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC2A4;&#xD30C;&#xC774;&#xD06C; &#xB4F1; &#xAC1C;&#xBCC4; &#xD558;&#xC704; &#xAD6C;&#xC131; &#xC694;&#xC18C;&#xC758; &#xD3C9;&#xADE0;, &#xC804;&#xC790; &#xB2E8;&#xCE35; &#xCD2C;&#xC601; &#xC2A4;&#xD14C;&#xC778;&#xB4DC;&#xACFC; &#xC2DD;&#xC774; &#xB3D9;&#xACB0; &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; &#xD56D;&#xBAA9; &#xBC0F; &#xBCF5;&#xC81C; &#xD734;&#xB300; &#xC804;&#xD654; &#xCEE8;&#xD14D;&#xC2A4;&#xD2B8;&#xB97C; &#xC2DC;&#xAC01;&#xD654; &#xD558; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xB418; &#xACE0;. &#xC5EC;&#xAE30;, &#xC774;&#xAE30;&#xC885;&#xC758; &#xC0DD;&#xBB3C;&#xD559; &#xBC0F; pleiomorphic &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4;&#xC758; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xC774;&#xD574;&#xC5D0; &#xAD00;&#xB828; &#xB41C; &#xB450; &#xC9C0;&#xC5ED;&#xC5D0;&#xC11C; &#xCD5C;&#xADFC; &#xAC1C;&#xBC1C; &#xAC80;&#xD1A0; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4;&#xC758; &#xC804;&#xC790; &#xB2E8;&#xCE35; &#xCD2C;&#xC601;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;.

La comprensi&#xF3;n de las arquitecturas moleculares de los virus con envoltura y complejo es una frontera dif&#xED;cil en la biolog&#xED;a estructural. En estos virus, la variaci&#xF3;n estructural y compositivo de una part&#xED;cula viral a otro por lo general impide el uso de cualquiera de cristalizaci&#xF3;n o la imagen promedio de los procedimientos que se han aplicado con &#xE9;xito en el pasado en busca de virus altamente sim&#xE9;tricas. Aunque los avances en tomograf&#xED;a electr&#xF3;nica criog&#xE9;nica de las muestras te&#xF1;idas proporcionan nuevas oportunidades para la identificaci&#xF3;n y el promedio molecular de subcomponentes individuales, tales como los picos de la superficie de la glicoprote&#xED;na de virus purificados, tomograf&#xED;a de electrones de las c&#xE9;lulas manchadas y congelados de inmersi&#xF3;n se utiliza para visualizar el contexto celular de la entrada del virus y la replicaci&#xF3;n. En este art&#xED;culo examinamos la evoluci&#xF3;n reciente de las dos &#xE1;reas que se relacionan con nuestra comprensi&#xF3;n de la biolog&#xED;a de los virus heterog&#xE9;neos y pleiomorphic.

Tomograf&#xED;a de electrones de los virus

&#x7406;&#x89E3;&#x7684;&#x5C01;&#x88C5;&#x548C;&#x590D;&#x6742;&#x75C5;&#x6BD2;&#x5206;&#x5B50;&#x4F53;&#x7CFB;&#x7ED3;&#x6784;&#x5728;&#x7ED3;&#x6784;&#x751F;&#x7269;&#x5B66;&#x4E2D;&#x662F;&#x5177;&#x6709;&#x6311;&#x6218;&#x6027;&#x7684;&#x524D;&#x6CBF;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x75C5;&#x6BD2;&#xFF0C;&#x4ECE;&#x4E00;&#x4E2A;&#x75C5;&#x6BD2;&#x7C92;&#x5B50;&#x4E3A;&#x53E6;&#x4E00;&#x79CD;&#x7684;&#x7ED3;&#x6784;&#x548C;&#x6210;&#x5206;&#x53D8;&#x5316;&#x4E00;&#x822C;&#x6392;&#x9664;&#x7ED3;&#x6676;&#x6216;&#x56FE;&#x50CF;&#x5E73;&#x5747;&#x9AD8;&#x5EA6;&#x5BF9;&#x79F0;&#x75C5;&#x6BD2;&#x8FC7;&#x53BB;&#x5DF2;&#x6210;&#x529F;&#x6267;&#x884C;&#x7684;&#x7A0B;&#x5E8F;&#x7684;&#x4F7F;&#x7528;&#x3002;&#x867D;&#x7136;&#x5BB6;&#x4EBA;&#x6E05;&#x6E05;&#x767D;&#x767D;&#x6807;&#x672C;&#x4F4E;&#x6E29;&#x7535;&#x5B50;&#x5C42;&#x6790;&#x6210;&#x50CF;&#x7814;&#x7A76;&#x8FDB;&#x5C55;&#x63D0;&#x4F9B;&#x9274;&#x5B9A;&#x548C;&#x5206;&#x5B50;&#x5E73;&#x5747;&#x7EAF;&#x5316;&#x75C5;&#x6BD2;&#x8868;&#x9762;&#x7684;&#x7CD6;&#x86CB;&#x767D;&#x523A;&#x7B49;&#x4E2A;&#x522B;&#x5B50;&#x7EC4;&#x4EF6;&#x7684;&#x65B0;&#x673A;&#x4F1A;&#xFF0C;&#x7535;&#x5B50;&#x65AD;&#x5C42;&#x626B;&#x63CF;&#x7684;&#x67D3;&#x8272;&#x548C;&#x66B4;&#x8DCC;&#x51BB;&#x7ED3;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x88AB;&#x7528;&#x4E8E;&#x53EF;&#x89C6;&#x5316;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5185;&#x75C5;&#x6BD2;&#x5165;&#x5883;&#x548C;&#x590D;&#x5236;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x68C0;&#x8BA8;&#x6700;&#x8FD1;&#x7684;&#x4E8B;&#x6001;&#x53D1;&#x5C55;&#xFF0C;&#x5728;&#x8FD9;&#x4E24;&#x4E2A;&#x9886;&#x57DF;&#xFF0C;&#x56E0;&#x4E3A;&#x4ED6;&#x4EEC;&#x5173;&#x7CFB;&#x5230;&#x6211;&#x4EEC;&#x7406;&#x89E3;&#x751F;&#x7269;&#x5B66;&#x7684;&#x5F02;&#x6784;&#x548C; pleiomorphic &#x75C5;&#x6BD2;&#x3002;

&#x7535;&#x5B50;&#x65AD;&#x5C42;&#x626B;&#x63CF;&#x75C5;&#x6BD2;&#x3002;

Understanding the molecular architectures of enveloped and complex viruses is a challenging frontier in structural biology. In these viruses, the structural and compositional variation from one viral particle to another generally precludes the use of either crystallization or image averaging procedures that have been successfully implemented in the past for highly symmetric viruses. While advances in cryo electron tomography of unstained specimens provide new opportunities for identification and molecular averaging of individual subcomponents such as the surface glycoprotein spikes on purified viruses, electron tomography of stained and plunge-frozen cells is being used to visualize the cellular context of viral entry and replication. Here, we review recent developments in both areas as they relate to our understanding of the biology of heterogeneous and pleiomorphic viruses.

Electron tomography of viruses.

&#x4EBA;&#x548C;&#x7334;&#x514D;&#x75AB;&#x7F3A;&#x9677;&#x75C5;&#x6BD2;&#x5305;&#x819C;&#x7CD6;&#x86CB;&#x767D; (Env) (&#x827E;&#x6ECB;&#x75C5;&#x6BD2;&#x548C; SIV&#xFF0C;&#x5206;&#x522B;&#xFF09; &#x8C03;&#x89E3;&#x53D7;&#x75C5;&#x6BD2;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8868;&#x9762;&#x4F53;&#x7ED3;&#x5408; CD4 &#x9776;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E0A;&#x7684;&#x8FDB;&#x884C;&#x611F;&#x67D3;&#x3002;Env &#x662F;&#x819C;&#x7684;&#x9ED1;&#x8179;&#x7684;&#x8DE8;&#x819C;&#x7CD6;&#x86CB;&#x767D; (gp41) &#x548C;&#x8868;&#x9762;&#x7684;&#x7CD6;&#x86CB;&#x767D; (gp120) &#x548C;&#x75C5;&#x6BD2;&#x6027;&#x8868;&#x9762;&#x5F62;&#x5F0F;&#x4E09;&#x805A;&#x4F53;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x4F7F;&#x7528;&#x4F4E;&#x6E29;&#x7535;&#x5B50;&#x65AD;&#x5C42;&#x626B;&#x63CF;&#x4E09;&#x7EF4;&#x56FE;&#x50CF;&#x5206;&#x7C7B;&#x548C;&#x5E73;&#x5747;&#x7ED3;&#x5408;&#x8D77;&#x6765;&#xFF0C;&#x62A5;&#x544A;&#x5BF9;&#x672C;&#x673A;&#x827E;&#x6ECB;&#x75C5;&#x6BD2;-1 unliganded &#x72B6;&#x6001;&#x3001; &#x590D;&#x6742;&#x4E0E;&#x5E7F;&#x6CDB;&#x4E2D;&#x548C;&#x6297;&#x4F53; b12 &#x548C;&#x4E09;&#x5143;&#x590D;&#x6570;&#x4E0E; CD4 &#x548C; 17b &#x6297;&#x4F53;&#x663E;&#x793A;&#x4E09;&#x8054; Env &#x7684;&#x4E09;&#x7EF4;&#x7ED3;&#x6784;&#x3002;&#x7531;&#x7BA1;&#x63A5;&#x5934;&#x4E2D;&#x7684; b12 &#x548C; CD4 17b &#x65F6;&#x9650;&#x6784;&#x8C61;&#x5230;&#x7535;&#x5B50;&#x65AD;&#x5C42;&#x6D3E;&#x751F;&#x7684;&#x5BC6;&#x5EA6;&#x5730;&#x56FE;&#x5355;&#x4F53; gp120 &#x6838;&#x5FC3;&#x7684;&#x5DF2;&#x77E5;&#x7684;&#x6676;&#x4F53;&#x7ED3;&#x6784;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x63A8;&#x5BFC;&#x51FA;&#x5728; unliganded &#x548C; CD4 &#x675F;&#x7F1A;&#x6001;&#x7684;&#x672C;&#x673A;&#x827E;&#x6ECB;&#x75C5;&#x6BD2; 1 gp120 &#x4E09;&#x805A;&#x5206;&#x5B50;&#x6A21;&#x578B;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x8BC1;&#x660E; CD4 &#x7ED1;&#x5B9A;&#x5728;&#x4E00;&#x6B21;&#x91CD;&#x5927;&#x6539;&#x7EC4;&#x7684; Env &#x4E09;&#x805A;&#x4F53;&#xFF0C;&#x7ED3;&#x679C;&#x9020;&#x6210;&#x5411;&#x5916;&#x65CB;&#x8F6C;&#x548C;&#x4F4D;&#x79FB;&#x7684;&#x6BCF;&#x4E2A; gp120 &#x5355;&#x4F53;&#x3002;&#x8FD9;&#x4F3C;&#x4E4E;&#x4F1A;&#x52A0;&#x4E0A;&#x91CD;&#x6392; gp41 &#x5730;&#x533A;&#x6CBF;&#x7740;&#x4E2D;&#x8F74;&#x7EBF;&#x7684;&#x4E09;&#x805A;&#x4F53;&#xFF0C;&#x5BFC;&#x81F4;&#x75C5;&#x6BD2;&#x6027;&#x4E0E;&#x76EE;&#x6807;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7EC6;&#x80DE;&#x819C;&#x4E4B;&#x95F4;&#x7684;&#x5BC6;&#x5207;&#x8054;&#x7CFB;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x7ED3;&#x679C;&#x9610;&#x660E;&#x7684;&#x7ED3;&#x6784;&#x548C;&#x6709;&#x5173;&#x7684;&#x4E2D;&#x548C;&#x6297;&#x4F53;&#x4E0E;&#x9776;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x9644;&#x4EF6;&#x4E09;&#x8054;&#x827E;&#x6ECB;&#x75C5;&#x6BD2; 1 gp120 &#x6784;&#x8C61;&#x53D8;&#x5316;&#x3002;

&#x672C;&#x673A;&#x827E;&#x6ECB;&#x75C5;&#x6BD2; 1 gp120 &#x4E09;&#x805A;&#x4F53;&#x7684;&#x5206;&#x5B50;&#x4F53;&#x7CFB;&#x7ED3;&#x6784;&#x3002;

The envelope glycoproteins (Env) of human and simian immunodeficiency viruses (HIV and SIV, respectively) mediate virus binding to the cell surface receptor CD4 on target cells to initiate infection. Env is a heterodimer of a transmembrane glycoprotein (gp41) and a surface glycoprotein (gp120), and forms trimers on the surface of the viral membrane. Using cryo-electron tomography combined with three-dimensional image classification and averaging, we report the three-dimensional structures of trimeric Env displayed on native HIV-1 in the unliganded state, in complex with the broadly neutralizing antibody b12 and in a ternary complex with CD4 and the 17b antibody. By fitting the known crystal structures of the monomeric gp120 core in the b12- and CD4/17b-bound conformations into the density maps derived by electron tomography, we derive molecular models for the native HIV-1 gp120 trimer in unliganded and CD4-bound states. We demonstrate that CD4 binding results in a major reorganization of the Env trimer, causing an outward rotation and displacement of each gp120 monomer. This appears to be coupled with a rearrangement of the gp41 region along the central axis of the trimer, leading to closer contact between the viral and target cell membranes. Our findings elucidate the structure and conformational changes of trimeric HIV-1 gp120 relevant to antibody neutralization and attachment to target cells.

Molecular architecture of native HIV-1 gp120 trimers.

Les glycoprot&#xE9;ines d&#x26;#39;enveloppe (env) de l&#x26;#39;homme et simien virus de l&#x26;#39;immunod&#xE9;ficience (VIH et SIV, respectivement) m&#xE9;diation virus de liaison &#xE0; CD4 de surface cellulaire sur des cellules cibles r&#xE9;cepteurs pour d&#xE9;clencher l&#x26;#39;infection. Env est un h&#xE9;t&#xE9;rodim&#xE8;re d&#x26;#39;une glycoprot&#xE9;ine transmembranaire (gp41) et une glycoprot&#xE9;ine de surface (gp120), et forme trim&#xE8;res sur la surface de la membrane virale. Utilisation de la tomographie cryo-&#xE9;lectronique combin&#xE9; avec la classification d&#x26;#39;images en trois dimensions et de la moyenne, nous pr&#xE9;sentons les structures tridimensionnelles de trim&#xE9;rique Env affich&#xE9; sur natif du VIH-1 dans l&#x26;#39;&#xE9;tat sans ligand, dans un complexe avec les anticorps neutralisants &#xE0; large spectre b12 et dans un complexe ternaire avec CD4 et l&#x26;#39;anticorps 17b. En ajustant les structures cristallines connues de la gp120 monom&#xE9;rique de base dans les conformations b12 et CD4/17b-bound dans les cartes de densit&#xE9; obtenues par tomographie &#xE9;lectronique, nous tirons des mod&#xE8;les mol&#xE9;culaires pour le natif du VIH-1 gp120 trim&#xE8;re dans les Etats sans ligand et CD4 li&#xE9; . Nous d&#xE9;montrons que CD4 liaison entra&#xEE;ne une r&#xE9;organisation majeure du trim&#xE8;re Env, provoquant une rotation vers l&#x26;#39;ext&#xE9;rieur et le d&#xE9;placement de chaque monom&#xE8;re gp120. Ce semble &#xEA;tre coupl&#xE9; avec un r&#xE9;arrangement de la r&#xE9;gion gp41 selon l&#x26;#39;axe central du trim&#xE8;re, conduisant &#xE0; un contact &#xE9;troit entre les membranes cellulaires et viraux cible. Nos r&#xE9;sultats &#xE9;lucider les changements de structure et de conformation de trim&#xE9;rique gp120 du VIH-1 pertinents pour la neutralisation des anticorps et l&#x26;#39;attachement aux cellules cibles.

Architecture des mol&#xE9;cules d&#x26;#39;autochtones VIH-1 gp120 trim&#xE8;res

Die Umschlag-Glykoproteine (Env) der menschlichen und Simianes Immundefizienz-Viren (HIV und SIV, beziehungsweise) vermitteln Virus Bindung an die Zelle Oberfl&auml;che Rezeptor CD4 auf Zielzellen um die Infektion zu initiieren. ENV ist ein Heterodimer ein Transmembran-Glykoprotein (gp41) ein Oberfl&auml;chen-Glykoprotein (gp120) und Formen Trimere auf der Oberfl&auml;che der viralen Membran. Mit Cryo-Elektron Tomographie kombiniert mit dreidimensionalen Bild Klassifizierung und Mittelung, berichten wir, dass die dreidimensionalen Strukturen der Trimere Env auf native HIV-1 im Unliganded Zustand, im Komplex mit der weitgehend neutralisierende Antik&ouml;rper-b12 und in einem tern&auml;ren Komplex mit CD4 und der 17b-Antik&ouml;rper angezeigt. Durch den Einbau der bekannten Kristallstrukturen der Monomer gp120-Core in die b12 und CD4/17b-gebundenen Konformationen in die Dichte-Karten durch Elektronenstrahl-Tomographie abgeleitet, leiten wir Molekulare Modelle f&uuml;r die native HIV-1 gp120 Trimer in Unliganded und CD4-gebundenen Staaten. Wir zeigen, dass eine gr&ouml;&szlig;ere Reorganisation der Env-Trimer, CD4-Bindung f&uuml;hrt verursacht eine &auml;u&szlig;ere Drehung und Verschiebung der einzelnen gp120-Monomer. Dies scheint mit eine Neuordnung des Gebietes gp41 entlang der Mittelachse des Trimer, was zu engeren Kontakt zwischen den Zellmembranen virale und Ziel gekoppelt werden. Unsere Einsch&auml;tzungen zu erhellen die Struktur und Konformationsver&auml;nderungen der Trimere HIV-1 gp120 f&uuml;r Antik&ouml;rper neutralisieren und Befestigung an Zielzellen relevant.

Molekulare Architektur der native HIV-1 gp120 Trimere.

Le glicoproteine busta (Env) del virus dell&#39;immunodeficienza umana e scimmiesca (HIV e SIV, rispettivamente) mediare associazione virus al recettore superficiale delle cellule CD4 su cellule bersaglio per avviare l&#39;infezione. Env &egrave; un eterodimero di una glicoproteina transmembrana (gp41), una glicoproteina di superficie (gp120) e trimeri forme sulla superficie della membrana virale. Utilizzando la tomografia cryo-elettrone combinata con classificazione di immagine tridimensionale e una media, si riportano che le strutture tridimensionali di Env trimeric visualizzati su HIV-1 nativo dello stato unliganded, nel complesso con la b12 anticorpo neutralizzante ampiamente e in un complesso ternario con CD4 e l&#39;anticorpo 17b. Montando le strutture di cristallo conosciuto del nucleo nella vitamina b12 - e CD4/17b-bound conformazioni nelle mappe di densit&agrave; derivate dalla tomografia elettrone gp120 monomerico, deriviamo modelli molecolari per l&#39;HIV-1 gp120 trimero nativo in unliganded e Stati associati a CD4. Dimostriamo che CD4 associazione si traduce in un&#39;importante riorganizzazione del trimero Env, causando una rotazione verso l&#39;esterno e lo spostamento di ogni monomero gp120. Questo sembra essere accoppiato con un riarrangiamento della regione gp41 lungo l&#39;asse centrale del trimero, portando a pi&ugrave; vicino contatto tra le membrane delle cellule bersaglio e virali. I nostri risultati delucidare la struttura e i cambiamenti conformazionali di trimeric HIV-1 gp120 pertinenti alla neutralizzazione dell&#39;anticorpo e l&#39;attaccamento alle cellule bersaglio.

Architettura molecolare del nativi dell&#39;HIV-1 gp120 trimeri.

&#x30D2;&#x30C8;&#x3068;&#x30B5;&#x30EB;&#x514D;&#x75AB;&#x4E0D;&#x5168;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#xFF08;HIV&#x3068;SIV&#x3001;&#x305D;&#x308C;&#x305E;&#x308C;&#xFF09;&#x306E;&#x30A8;&#x30F3;&#x30D9;&#x30ED;&#x30FC;&#x30D7;&#x7CD6;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#xFF08;ENV&#xFF09;&#x306F;&#x3001;&#x611F;&#x67D3;&#x3092;&#x958B;&#x59CB;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x3001;&#x6A19;&#x7684;&#x7D30;&#x80DE;&#x4E0A;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x8868;&#x9762;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;CD4&#x3078;&#x306E;&#x7D50;&#x5408;&#x3092;&#x5A92;&#x4ECB;&#x3059;&#x308B;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x3002; env&#x306F;&#x819C;&#x8CAB;&#x901A;&#x7CD6;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#xFF08;gp41&#xFF09;&#x3092;&#x3001;&#x8868;&#x9762;&#x306E;&#x7CD6;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#xFF08;gp120&#x306E;&#xFF09;&#x306E;&#x30D8;&#x30C6;&#x30ED;&#x30C0;&#x30A4;&#x30DE;&#x30FC;&#x3067;&#x3042;&#x308A;&#x3001;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x819C;&#x306E;&#x8868;&#x9762;&#x306B;&#x4E09;&#x91CF;&#x4F53;&#x3092;&#x5F62;&#x6210;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x4E09;&#x6B21;&#x5143;&#x753B;&#x50CF;&#x306E;&#x5206;&#x985E;&#x3068;&#x30A2;&#x30D9;&#x30EC;&#x30FC;&#x30B8;&#x30F3;&#x30B0;&#x3092;&#x7D44;&#x307F;&#x5408;&#x308F;&#x305B;&#x305F;&#x4F4E;&#x6E29;&#x96FB;&#x5B50;&#x65AD;&#x5C64;&#x64AE;&#x5F71;&#x6CD5;&#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x3066;&#x3001;&#x4E09;&#x91CF;&#x4F53;env&#x306E;&#x30EA;&#x30AC;&#x30F3;&#x30C9;&#x975E;&#x7D50;&#x5408;&#x72B6;&#x614B;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x5E83;&#x304F;&#x4E2D;&#x548C;&#x6297;&#x4F53;B12&#x3068;&#x306E;&#x8907;&#x5408;&#x4F53;&#x3068;&#x306E;&#x4E09;&#x5143;&#x8907;&#x5408;&#x4F53;&#x3067;&#x30CD;&#x30A4;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6;HIV-1&#x3067;&#x8868;&#x793A;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x4E09;&#x6B21;&#x5143;&#x69CB;&#x9020;&#x3092;&#x5831;&#x544A;&#x3059;&#x308B;CD4&#x304A;&#x3088;&#x3073;17b&#x6297;&#x4F53;&#x3002;&#x96FB;&#x5B50;&#x7DDA;&#x30C8;&#x30E2;&#x30B0;&#x30E9;&#x30D5;&#x30A3;&#x30FC;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x5F97;&#x5BC6;&#x5EA6;&#x30DE;&#x30C3;&#x30D7;&#x306B;&#x3067;&#x5358;&#x91CF;&#x4F53;&#x306E;gp120&#x30B3;&#x30A2;B12-&#x3068;CD4/17b-bound&#x30B3;&#x30F3;&#x30D5;&#x30A9;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x306E;&#x65E2;&#x77E5;&#x306E;&#x7D50;&#x6676;&#x69CB;&#x9020;&#x3092;&#x30D5;&#x30A3;&#x30C3;&#x30C6;&#x30A3;&#x30F3;&#x30B0;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3088;&#x308A;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x30EA;&#x30AC;&#x30F3;&#x30C9;&#x975E;&#x7D50;&#x5408;&#x3084;CD4&#x306B;&#x7D50;&#x5408;&#x3057;&#x305F;&#x72B6;&#x614B;&#x3067;&#x3001;&#x30CD;&#x30A4;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6;&#x306E;HIV-1&#x306E;gp120&#x4E09;&#x91CF;&#x4F53;&#x306E;&#x5206;&#x5B50;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x3092;&#x5C0E;&#x51FA;&#x3059;&#x308B;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;&#x5404;gp120&#x306E;&#x5358;&#x91CF;&#x4F53;&#x306E;&#x5916;&#x5074;&#x306B;&#x56DE;&#x8EE2;&#x3068;&#x5909;&#x4F4D;&#x3092;&#x5F15;&#x304D;&#x8D77;&#x3053;&#x3057;&#x3001;&#x305D;&#x306E;CD4&#x306E;Env&#x306E;&#x4E09;&#x91CF;&#x4F53;&#x306E;&#x4E3B;&#x306A;&#x518D;&#x7DE8;&#x306E;&#x7D50;&#x5408;&#x7D50;&#x679C;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x306F;&#x3001;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x3068;&#x6A19;&#x7684;&#x7D30;&#x80DE;&#x819C;&#x3068;&#x306E;&#x9593;&#x306E;&#x7DCA;&#x5BC6;&#x306A;&#x63A5;&#x89E6;&#x306B;&#x3064;&#x306A;&#x304C;&#x308B;&#x3001;&#x4E09;&#x91CF;&#x4F53;&#x306E;&#x4E2D;&#x5FC3;&#x8EF8;&#x306B;&#x6CBF;&#x3063;&#x3066;gp41&#x306E;&#x9818;&#x57DF;&#x306E;&#x518D;&#x914D;&#x7F6E;&#x3068;&#x7D50;&#x5408;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x3088;&#x3046;&#x306B;&#x8868;&#x793A;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306E;&#x8ABF;&#x67FB;&#x7D50;&#x679C;&#x306F;&#x3001;&#x69CB;&#x9020;&#x4F53;&#x3068;&#x4E09;&#x91CF;&#x4F53;HIV-1&#x6297;&#x4F53;&#x306E;&#x4E2D;&#x548C;&#x3068;&#x6A19;&#x7684;&#x7D30;&#x80DE;&#x3078;&#x306E;&#x4ED8;&#x7740;&#x306B;&#x95A2;&#x9023;&#x3057;&#x305F;gp120&#x306E;&#x7ACB;&#x4F53;&#x69CB;&#x9020;&#x5909;&#x5316;&#x3092;&#x89E3;&#x660E;&#x3059;&#x308B;&#x3002;

&#x30CD;&#x30A4;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6;&#x306E;HIV-1&#x306E;gp120&#x4E09;&#x91CF;&#x4F53;&#x306E;&#x5206;&#x5B50;&#x69CB;&#x9020;

&#xBD09;&#xD22C; glycoproteins (Env)&#xC758; &#xC778;&#xAC04;&#xACFC; &#xC720;&#xC778;&#xC6D0; &#xBA74;&#xC5ED; &#xACB0;&#xD54D; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; (HIV&#xC640; SIV, &#xAC01;&#xAC01;) &#xAC10;&#xC5FC; &#xC2DC;&#xC791; &#xD558; &#xC218;&#xC6A9; &#xC138;&#xD3EC; &#xD45C;&#xBA74; &#xCCB4; CD4 &#xB300;&#xC0C1; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0; &#xAC8C; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xC911;&#xC7AC;. &#xD658;&#xACBD;&#xC744; &#xB9C9; &#xD6A1;&#xB2E8; &#xB2F9;&#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; (gp41) &#xBC0F; &#xD45C;&#xBA74; &#xB2F9;&#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; (gp120), &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; &#xC131; &#xB9C9;&#xC758; &#xD45C;&#xBA74;&#xC5D0; &#xC591;&#xC2DD; trimers&#xC758; heterodimer&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC; trimeric &#xD658;&#xACBD; 3 &#xCC28;&#xC6D0; &#xAD6C;&#xC870;&#xC758; &#xAE30;&#xBCF8; HIV-1 c d 4&#xC640; 17b &#xD56D; &#xCCB4; 3 &#xC9C4; &#xBCF5;&#xC7A1; &#xD55C; &#xAD11;&#xBC94;&#xC704; &#xC911;&#xD654; &#xD56D; &#xCCB4; b 12&#xC640; &#xD568;&#xAED8; &#xBCF5;&#xC7A1; &#xD55C; &#xACE0; unliganded &#xC0C1;&#xD0DC; &#xD45C;&#xC2DC;&#xB97C; &#xBCF4;&#xACE0; &#xACF3;&#xC744; &#xC54C;&#xC544;&#xB0B4;&#xB294;-&#xC804;&#xC790; &#xB2E8;&#xCE35; &#xCD2C;&#xC601; &#xACB0;&#xD569; &#xB41C; 3 &#xCC28;&#xC6D0; &#xC774;&#xBBF8;&#xC9C0;&#xB97C; &#xBD84;&#xB958; &#xD558; &#xACE0; &#xD3C9;&#xADE0;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC;. B 12 &#xBC0F; &#xC804;&#xC790; &#xB2E8;&#xCE35; &#xCD2C;&#xC601;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xD30C;&#xC0DD; &#xB41C; &#xBC00;&#xB3C4; &#xC9C0;&#xB3C4;&#xC5D0; CD4/17b &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xB41C; conformations monomeric gp120 &#xCF54;&#xC5B4;&#xC758; &#xC54C;&#xB824;&#xC9C4;&#xB41C; &#xD06C;&#xB9AC;&#xC2A4;&#xD0C8; &#xAD6C;&#xC870;&#xB97C; &#xB9DE;&#xCD94;&#xC5B4; &#xC6B0;&#xB9AC; &#xBD84;&#xC790; &#xBAA8;&#xB378; unliganded&#xC640; CD4 &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xB41C; &#xC0C1;&#xD0DC;&#xC5D0;&#xC11C; &#xB124;&#xC774;&#xD2F0;&#xBE0C; HIV 1 gp120 &#xD2B8;&#xB9AC;&#xBA38;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xD30C;&#xC0DD; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. CD4 &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xBC14;&#xAE65;&#xCABD;&#xC73C;&#xB85C; &#xD68C;&#xC804; &#xBC0F; &#xAC01; gp120 &#xB2E8;&#xC704;&#xCCB4;&#xC758; &#xBCC0;&#xC704;&#xB97C; &#xC77C;&#xC73C;&#xD0A4;&#xB294; &#xD658;&#xACBD; &#xD2B8;&#xB9AC;&#xBA38;&#xC758; &#xC8FC;&#xC694; &#xAC1C;&#xD3B8;&#xC758; &#xACB0;&#xACFC; &#xBCF4;&#xC5EC; &#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774;&#xAC83;&#xC740; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; &#xC131; &#xBC0F; &#xBAA9;&#xD45C; &#xC138;&#xD3EC; &#xB9C9; &#xC0AC;&#xC774; &#xB354; &#xAC00;&#xAE4C;&#xC6B4; &#xC811;&#xCD09;&#xC744; &#xC120;&#xB3C4; &#xD2B8;&#xB9AC;&#xBA38;&#xC758; &#xC911;&#xC559; &#xCD95; gp41 &#xC601;&#xC5ED;&#xC758; &#xC7AC;&#xBC30;&#xCE58;&#xC640; &#xACB0;&#xD569; &#xB420; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0A9;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xC5F0;&#xAD6C; &#xACB0;&#xACFC; trimeric V 1 gp120 &#xC911;&#xD654; &#xD56D; &#xCCB4; &#xBC0F; &#xB300;&#xC0C1; &#xC140;&#xC5D0; &#xCCA8;&#xBD80; &#xD30C;&#xC77C; &#xAD00;&#xB828;&#xC758; &#xAD6C;&#xC870;&#xC801; &#xBCC0;&#xD654;&#xC640; &#xAD6C;&#xC870;&#xB97C; &#xBA85;&#xB8CC; &#xD558; &#xAC8C;.

&#xAE30;&#xBCF8; HIV 1 gp120 trimers&#xC758; &#xBD84;&#xC790; &#xAD6C;&#xC870;.

Las glicoprote&#xED;nas de la envoltura (Env) de virus de la inmunodeficiencia humana y de simio (VIH y VIS, respectivamente) median la uni&#xF3;n del virus a las c&#xE9;lulas CD4 del receptor de superficie celular en las c&#xE9;lulas diana para iniciar la infecci&#xF3;n. Env es un heterod&#xED;mero de una glicoprote&#xED;na transmembrana (gp41) y una glicoprote&#xED;na de superficie (gp120), y forma tr&#xED;meros en la superficie de la membrana viral. Utilizando la crio-tomograf&#xED;a electr&#xF3;nica combinada con la clasificaci&#xF3;n de la imagen tridimensional y promediado, se presenta las estructuras tridimensionales de trim&#xE9;rica Env nativo mostrado en VIH-1 en el estado unliganded, en el complejo con los anticuerpos ampliamente neutralizantes b12 y en un complejo ternario con CD4 y el anticuerpo 17b. Mediante el ajuste de las estructuras cristalinas conocidas de la gp120 monom&#xE9;ricas central en la conformaci&#xF3;n b12 y CD4/17b-bound en los mapas de densidad obtenidas por tomograf&#xED;a electr&#xF3;nica, que se derivan de modelos moleculares para el nativo de la gp120 del VIH-1 en los Estados tr&#xED;mero unliganded y CD4 determinado con el . Se demuestra que las c&#xE9;lulas CD4 uni&#xF3;n provoca una gran reorganizaci&#xF3;n de la tr&#xED;mero Env, provocando una rotaci&#xF3;n externa y el desplazamiento de cada mon&#xF3;mero gp120. Esto parece ser acoplado con un reordenamiento de la regi&#xF3;n gp41 lo largo del eje central del tr&#xED;mero, dando lugar a un contacto m&#xE1;s estrecho entre las membranas celulares virales y de destino. Nuestros resultados dilucidar los cambios en la estructura y conformaci&#xF3;n de trim&#xE9;rica gp120 del VIH-1 correspondiente a la neutralizaci&#xF3;n de anticuerpos y adhesi&#xF3;n a las c&#xE9;lulas diana.

Arquitectura molecular de los nativos del VIH-1 gp120 tr&#xED;meros

Die &uuml;berwiegende Mehrheit der Membran-Protein-komplexen von biologischem Interesse kann nicht zur Homogenit&auml;t gereinigt oder aus einem physiologisch relevanten Kontext ohne Verlust der Funktion entfernt werden. Es ist daher nicht m&ouml;glich, die dreidimensionale Strukturen dieser Protein-komplexe mit R&ouml;ntgenkristallographie oder herk&ouml;mmlichen Kryo-Elektronenmikroskopie leicht zu bestimmen. Neu, neue Methoden, die Cryo-Elektron Tomographie mit 3D-Bild Klassifikation zu kombinieren und mit durchschnittlich jedoch beginnen einzigartige M&ouml;glichkeiten f&uuml;r in-situ Bestimmung der Strukturen der Membrane Protein Assemblys in intakten Zellen und unsymmetrischen Viren bieten. Hier &uuml;berpr&uuml;fen wir die j&uuml;ngsten Fortschritte in diesem Bereich und das Potenzial dieser Methoden beschreiben die Konformation von Membranproteinen in ihrer eigenen Umgebung zu bewerten.

Membrane Protein-Struktur-Bestimmung mit Cryo-Elektron Tomographie und 3D-Bild mit durchschnittlich.

La stragrande maggioranza dei complessi della proteina di membrana di interesse biologico non pu&ograve; essere purificata per omogeneit&agrave;, o rimosso da un contesto fisiologicamente rilevante senza perdita di funzione. Pertanto, non &egrave; possibile determinare facilmente le strutture 3D di questi complessi di proteine utilizzando la cristallografia a raggi x o crio-microscopia convenzionale. Appena emergenti metodi che combinano la tomografia cryo-elettrone con classificazione di immagini 3D e una media, tuttavia, cominciano a fornire opportunit&agrave; uniche per la determinazione in situ delle strutture della membrana assembly della proteina nelle cellule intatte e il virus. Qui si rassegna recenti progressi in questo campo e valutare il potenziale di questi metodi per descrivere la conformazione delle proteine di membrana nel loro ambiente nativo.

Determinazione della struttura di membrana della proteina mediante tomografia cryo-elettrone e una media di immagini 3D.

&#x751F;&#x7269;&#x5B66;&#x7684;&#x8208;&#x5473;&#x306E;&#x819C;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x8907;&#x5408;&#x4F53;&#x306E;&#x5927;&#x534A;&#x306F;&#x5747;&#x4E00;&#x306B;&#x7CBE;&#x88FD;&#x3057;&#x3001;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x6A5F;&#x80FD;&#x306E;&#x640D;&#x5931;&#x306A;&#x3057;&#x306B;&#x751F;&#x7406;&#x5B66;&#x7684;&#x306B;&#x95A2;&#x9023;&#x3059;&#x308B;&#x30B3;&#x30F3;&#x30C6;&#x30AD;&#x30B9;&#x30C8;&#x304B;&#x3089;&#x524A;&#x9664;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306F;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x306F;&#x3001;&#x7C21;&#x5358;&#x306B;X&#x7DDA;&#x7D50;&#x6676;&#x69CB;&#x9020;&#x89E3;&#x6790;&#x3084;&#x5F93;&#x6765;&#x306E;&#x4F4E;&#x6E29;&#x96FB;&#x5B50;&#x9855;&#x5FAE;&#x93E1;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x8907;&#x5408;&#x4F53;&#x306E;&#x7ACB;&#x4F53;&#x69CB;&#x9020;&#x3092;&#x6C7A;&#x5B9A;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x53EF;&#x80FD;&#x3067;&#x306F;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3002; 3D&#x753B;&#x50CF;&#x306E;&#x5206;&#x985E;&#x3068;&#x30A2;&#x30D9;&#x30EC;&#x30FC;&#x30B8;&#x30F3;&#x30B0;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x4F4E;&#x6E29;&#x96FB;&#x5B50;&#x65AD;&#x5C64;&#x64AE;&#x5F71;&#x6CD5;&#x3092;&#x7D44;&#x307F;&#x5408;&#x308F;&#x305B;&#x305F;&#x65B0;&#x8208;&#x306E;&#x30E1;&#x30BD;&#x30C3;&#x30C9;&#x306F;&#x3001;&#x7121;&#x50B7;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x3068;&#x975E;&#x5BFE;&#x79F0;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x306E;&#x819C;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x30A2;&#x30BB;&#x30F3;&#x30D6;&#x30EA;&#x306E;&#x69CB;&#x9020;&#x306E;in situ&#x6E2C;&#x5B9A;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x30E6;&#x30CB;&#x30FC;&#x30AF;&#x306A;&#x6A5F;&#x4F1A;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3057;&#x59CB;&#x3081;&#x3066;&#x3001;&#x3057;&#x304B;&#x3057;&#x3001;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x5206;&#x91CE;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x6700;&#x8FD1;&#x306E;&#x9032;&#x5C55;&#x3092;&#x78BA;&#x8A8D;&#x3057;&#x3001;&#x305D;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x30CD;&#x30A4;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6;&#x74B0;&#x5883;&#x3067;&#x306E;&#x819C;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x7ACB;&#x4F53;&#x69CB;&#x9020;&#x3092;&#x8A18;&#x8FF0;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x3001;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x65B9;&#x6CD5;&#x306E;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x3092;&#x8A55;&#x4FA1;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x30AF;&#x30E9;&#x30A4;&#x30AA;&#x96FB;&#x5B50;&#x7DDA;&#x30C8;&#x30E2;&#x30B0;&#x30E9;&#x30D5;&#x30A3;&#x30FC;&#x3068;&#x4E09;&#x6B21;&#x5143;&#x753B;&#x50CF;&#x30A2;&#x30D9;&#x30EC;&#x30FC;&#x30B8;&#x30F3;&#x30B0;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x305F;&#x819C;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x69CB;&#x9020;&#x6C7A;&#x5B9A;

&#xB9C9; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xC0DD;&#xBB3C; &#xD559;&#xC801; &#xAD00;&#xC2EC; &#xB2E8;&#xC9C0;&#xC758; &#xB300;&#xB2E4;&#xC218;&#xB294; &#xB3D9;&#xC9C8;&#xC131;, &#xC815;&#xD654; &#xB610;&#xB294; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC758; &#xC190;&#xC2E4; &#xC5C6;&#xC774; &#xC21C;&#xC218; &#xAD00;&#xB828; &#xCEE8;&#xD14D;&#xC2A4;&#xD2B8;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC81C;&#xAC70;&#xD560; &#xC218; &#xC5C6;&#xB294;. &#xB530;&#xB77C;&#xC11C; x-&#xC120; &#xACB0;&#xC815;&#xD559; &#xC774;&#xB098; &#xC804;&#xD1B5;&#xC801;&#xC778; &#xACF3;&#xC744; &#xC54C;&#xC544;&#xB0B4;&#xB294;-&#xC804;&#xC790; &#xD604;&#xBBF8;&#xACBD;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xBCF5;&#xD569;&#xBB3C;&#xC758; 3 &#xCC28;&#xC6D0; &#xAD6C;&#xC870;&#xB97C; &#xC27D;&#xAC8C; &#xD655;&#xC778;&#xD560; &#xC218; &#xC5C6;&#xAE30;. &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098; &#xC0C8;&#xB85C; &#xC2E0;&#xD765; 3D &#xC774;&#xBBF8;&#xC9C0; &#xBD84;&#xB958;&#xC640; &#xACF3;&#xC744; &#xC54C;&#xC544;&#xB0B4;&#xB294;-&#xC804;&#xC790; &#xB2E8;&#xCE35; &#xCD2C;&#xC601;&#xC744; &#xACB0;&#xD569; &#xD558;&#xB294; &#xBC29;&#xBC95; &#xBC0F; &#xD3C9;&#xADE0;, &#xADF8;&#xB300;&#xB85C; &#xC140;&#xC5D0; nonsymmetric &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC5B4;&#xC148;&#xBE14;&#xB9AC; &#xB9C9; &#xAD6C;&#xC870;&#xC758; &#xC81C;&#xC790;&#xB9AC; &#xACB0;&#xC815;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xB3C5;&#xD2B9;&#xD55C; &#xAE30;&#xD68C;&#xB97C; &#xC81C;&#xACF5; &#xD558;&#xAE30; &#xC2DC;&#xC791;. &#xC774;&#xC5D0; &#xCD5C;&#xADFC; &#xC9C4;&#xD589; &#xC0C1;&#xD669;&#xC744; &#xAC80;&#xD1A0; &#xD558; &#xACE0; &#xC5EC;&#xAE30; &#xD544;&#xB4DC; &#xBC0F; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC758; &#xB124;&#xC774;&#xD2F0;&#xBE0C; &#xD658;&#xACBD;&#xC5D0;&#xC11C; &#xB9C9; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xAD6C;&#xC870;&#xB97C; &#xC124;&#xBA85; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD574; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xBC29;&#xBC95;&#xC758; &#xC7A0;&#xC7AC;&#xB825;&#xC744; &#xD3C9;&#xAC00; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xB9C9; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xAD6C;&#xC870; &#xACB0;&#xC815; &#xACF3;&#xC744; &#xC54C;&#xC544;&#xB0B4;&#xB294;-&#xC804;&#xC790; &#xB2E8;&#xCE35; &#xCD2C;&#xC601; &#xBC0F; 3D &#xC774;&#xBBF8;&#xC9C0; &#xD3C9;&#xADE0;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC;.

La gran mayor&#xED;a de los complejos de prote&#xED;nas de membrana de inter&#xE9;s biol&#xF3;gico no puede ser purificado hasta homogeneidad, o eliminado de un contexto fisiol&#xF3;gicamente relevantes sin p&#xE9;rdida de la funci&#xF3;n. Por tanto, no es posible determinar con facilidad las estructuras 3D de estos complejos de prote&#xED;nas utilizando cristalograf&#xED;a de rayos X o la microscop&#xED;a convencional de la crio-electr&#xF3;nica. Los m&#xE9;todos emergentes que combinan la crio-tomograf&#xED;a electr&#xF3;nica, con la clasificaci&#xF3;n de im&#xE1;genes en 3D y un promedio, sin embargo, empezando a ofrecer oportunidades &#xFA;nicas para la determinaci&#xF3;n in situ de las estructuras de conjuntos de prote&#xED;nas de membrana en las c&#xE9;lulas intactas y los virus no sim&#xE9;tricas. En este art&#xED;culo revisamos los &#xFA;ltimos avances en este campo y evaluar el potencial de estos m&#xE9;todos para describir la conformaci&#xF3;n de las prote&#xED;nas de membrana en su ambiente nativo.

Determinaci&#xF3;n de la estructura de prote&#xED;nas de membrana Uso de Cryo-tomograf&#xED;a electr&#xF3;nica y el promedio de la imagen 3D

&#x4E0D;&#x80FD;&#x51C0;&#x5316;&#x7684;&#x540C;&#x8D28;&#x6027;&#xFF0C;&#x6216;&#x4ECE;&#x751F;&#x7406;&#x76F8;&#x5173;&#x7684;&#x4E0A;&#x4E0B;&#x6587;&#x4E0D;&#x4F1A;&#x4E22;&#x5931;&#x529F;&#x80FD;&#x4E2D;&#x5220;&#x9664;&#x7EDD;&#x5927;&#x591A;&#x6570;&#x7684;&#x819C;&#x86CB;&#x767D;&#x590D;&#x5408;&#x4F53;&#x7684;&#x751F;&#x7269;&#x611F;&#x5174;&#x8DA3;&#x3002;&#x56E0;&#x6B64;&#x4E0D;&#x80FD;&#x5F88;&#x5BB9;&#x6613;&#x5730;&#x786E;&#x5B9A;&#x4F7F;&#x7528; x &#x5C04;&#x7EBF;&#x6676;&#x4F53;&#x5B66;&#x6216;&#x5E38;&#x89C4;&#x4F4E;&#x6E29;&#x7535;&#x955C;&#x6280;&#x672F;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x86CB;&#x767D;&#x590D;&#x5408;&#x7269;&#x7684;&#x4E09;&#x7EF4;&#x7ED3;&#x6784;&#x3002;&#x65B0;&#x65B0;&#x51FA;&#x73B0;&#x7684;&#x4F4E;&#x6E29;&#x7535;&#x5B50;&#x65AD;&#x5C42;&#x626B;&#x63CF;&#x7ED3;&#x5408; 3D &#x56FE;&#x50CF;&#x5206;&#x7C7B;&#x7684;&#x65B9;&#x6CD5;&#x548C;&#x5E73;&#x5747;&#xFF0C;&#x7136;&#x800C;&#xFF0C;&#x5F00;&#x59CB;&#x63D0;&#x4F9B;&#x72EC;&#x4E00;&#x65E0;&#x4E8C;&#x7684;&#x673A;&#x4F1A;&#xFF0C;&#x539F;&#x4F4D;&#x6D4B;&#x5B9A;&#x7ED3;&#x6784;&#x7684;&#x819C;&#x86CB;&#x767D;&#x5B8C;&#x6574;&#x7EC6;&#x80DE;&#x548C;&#x975E;&#x5BF9;&#x79F0;&#x75C5;&#x6BD2;&#x4E2D;&#x7684;&#x7A0B;&#x5E8F;&#x96C6;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#x6211;&#x4EEC;&#x68C0;&#x8BA8;&#x6700;&#x8FD1;&#x53D6;&#x5F97;&#x7684;&#x8FDB;&#x5C55;&#xFF0C;&#x5728;&#x8FD9;&#x573A;&#x548C;&#x8BC4;&#x4F30;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x65B9;&#x6CD5;&#x7684;&#x6F5C;&#x529B;&#x6765;&#x63CF;&#x8FF0;&#x5B83;&#x4EEC;&#x7684;&#x672C;&#x673A;&#x73AF;&#x5883;&#x4E2D;&#x7684;&#x819C;&#x86CB;&#x767D;&#x7684;&#x6784;&#x8C61;&#x3002;

&#x4F7F;&#x7528;&#x4F4E;&#x6E29;&#x7535;&#x5B50;&#x65AD;&#x5C42;&#x626B;&#x63CF;&#x53CA;&#x4E09;&#x7EF4;&#x56FE;&#x50CF;&#x663E;&#x793A;&#x5E73;&#x5747;&#x819C;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x7ED3;&#x6784;&#x6D4B;&#x5B9A;&#x3002;

The vast majority of membrane protein complexes of biological interest cannot be purified to homogeneity, or removed from a physiologically relevant context without loss of function. It is therefore not possible to easily determine the 3D structures of these protein complexes using X-ray crystallography or conventional cryo-electron microscopy. Newly emerging methods that combine cryo-electron tomography with 3D image classification and averaging are, however, beginning to provide unique opportunities for in situ determination of the structures of membrane protein assemblies in intact cells and nonsymmetric viruses. Here we review recent progress in this field and assess the potential of these methods to describe the conformation of membrane proteins in their native environment.

Membrane protein structure determination using cryo-electron tomography and 3D image averaging.

La grande majorit&#xE9; des complexes de prot&#xE9;ines membranaires d&#x26;#39;int&#xE9;r&#xEA;t biologique ne peut &#xEA;tre purifi&#xE9; &#xE0; l&#x26;#39;homog&#xE9;n&#xE9;it&#xE9;, ou supprim&#xE9;s &#xE0; partir d&#x26;#39;un contexte physiologiquement pertinents sans perte de fonction. Il n&#x26;#39;est donc pas possible de d&#xE9;terminer facilement les structures 3D de ces complexes prot&#xE9;iques en utilisant cristallographie aux rayons X ou conventionnelle cryo-microscopie &#xE9;lectronique. M&#xE9;thodes nouvellement &#xE9;mergents qui combinent microscopie cryo-&#xE9;lectronique avec la classification d&#x26;#39;images 3D et calcul de la moyenne sont, cependant, commencent &#xE0; offrir des opportunit&#xE9;s uniques pour la d&#xE9;termination in situ des structures des assemblages de prot&#xE9;ines membranaires dans les cellules intactes et les virus non sym&#xE9;triques. Ici nous passons en revue les progr&#xE8;s r&#xE9;cents dans ce domaine et d&#x26;#39;&#xE9;valuer le potentiel de ces m&#xE9;thodes pour d&#xE9;crire la conformation des prot&#xE9;ines membranaires dans leur environnement natif.

D&#xE9;termination de la structure des prot&#xE9;ines membranaires par cryo-tomographie &#xE9;lectronique et calcul de la moyenne d&#x26;#39;images 3D

&#x76EE;&#x6807;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x548C;&#x611F;&#x67D3;&#x7684;&#x4EBA;&#xFF0C;&#x5BC6;&#x5207;&#x76F8;&#x5173;&#x7684;&#x7334;&#x514D;&#x75AB;&#x7F3A;&#x9677;&#x75C5;&#x6BD2;&#x7684;&#x7B2C;&#x4E00;&#x6B65; &#xFF08;&#x827E;&#x6ECB;&#x75C5;&#x6BD2;&#x548C; SIV&#xFF0C;&#x5206;&#x522B;&#xFF09; &#x4E0E; heterodimers &#x7684;&#x75C5;&#x6BD2;&#x8DE8;&#x819C;&#x7CD6;&#x86CB;&#x767D; (gp41&#xFF09; &#x548C;&#x5230;&#x76EE;&#x6807; T &#x7EC6;&#x80DE;&#x8868;&#x9762;&#x7684;&#x7CD6;&#x86CB;&#x767D; (gp120) &#x7EC4;&#x6210;&#x7684;&#x4E09;&#x8054;&#x5305;&#x819C;&#x7CD6;&#x86CB;&#x767D; (Env) &#x7ED1;&#x5B9A;&#x65F6;&#x53D1;&#x751F;&#x3002;&#x4E09;&#x8054; Env &#x5206;&#x5B50;&#x5B8C;&#x6574;&#x7684;&#x75C5;&#x6BD2;&#x77E5;&#x8BC6;&#x662F;&#x7ED3;&#x6784;&#x7684;&#x7406;&#x89E3;&#x57FA;&#x672C;&#x75C5;&#x6BD2;&#x7EC6;&#x80DE;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x7684;&#x5206;&#x5B50;&#x673A;&#x5236;&#x548C;&#x6709;&#x6548;&#x7684;&#x57FA;&#x4E8E;&#x514D;&#x75AB;&#x539F;&#x7684;&#x75AB;&#x82D7;&#x7684;&#x8BBE;&#x8BA1;&#xFF0C;&#x4EE5;&#x9632;&#x6CBB;&#x827E;&#x6ECB;&#x75C5;&#x6BD2;/&#x827E;&#x6ECB;&#x75C5;&#x7684;&#x91CD;&#x8981;&#x3002;&#x4E09;&#x8054; Env &#x5728; unliganded &#x7ED3;&#x6784;&#x4E2D;&#x5DF2;&#x7ECF;&#x5BFC;&#x81F4;&#x4EE5;&#x524D;&#x7684;&#x5B8C;&#x6574;&#x827E;&#x6ECB;&#x75C5;&#x6BD2; 1 BaL virions &#x7684;&#x5206;&#x6790;&#x548C; CD4 liganded ~ 20 &#x2460; &#x5206;&#x8FA8;&#x7387;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x8868;&#x660E;&#x7684;&#x4E09;&#x8054; Env SIVmneE11S&#xFF0C;&#x4ECE;&#x4F53;&#x7CFB;&#x7ED3;&#x6784;&#x7684;&#x5206;&#x5B50; SIVmac239 &#x548C;&#x827E;&#x6ECB;&#x75C5;&#x6BD2; 1 R3A &#x682A;&#x662F;&#x5BC6;&#x5207;&#x76F8;&#x5AB2;&#x7F8E;&#xFF0C;&#x5148;&#x524D;&#x786E;&#x5B9A;&#x7684;&#x827E;&#x6ECB;&#x75C5;&#x6BD2; 1 BaL&#xFF0C;V1 &#x548C; V2 &#x53D8;&#x91CF;&#x5FAA;&#x73AF;&#x4F4D;&#x4E8E;&#x56FE;&#x6587;&#x573A;&#x4E2D;&#xFF0C;&#x63A5;&#x8FD1;&#x75C5;&#x6BD2;&#x4E0E;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x4E4B;&#x95F4;&#x7684;&#x63A5;&#x89E6;&#x533A;&#x57DF;&#x7684;&#x9876;&#x70B9;&#x3002;&#x5728;&#x4E09;&#x8054; Env V1/V2 &#x5FAA;&#x73AF;&#x7684;&#x4F4D;&#x7F6E;&#x660E;&#x786E;&#x8BC1;&#x5B9E;&#x4E86;&#x827E;&#x6ECB;&#x75C5;&#x6BD2; 1 R3A virions &#x5220;&#x9664;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x5FAA;&#x73AF;&#x4E0E;&#x5FEB;&#x9012; Env &#x57FA;&#x56E0;&#x4FEE;&#x9970;&#x7684;&#x7ED3;&#x6784;&#x5206;&#x6790;&#x3002;&#x5F15;&#x4EBA;&#x6CE8;&#x76EE;&#x7684;&#x662F;&#xFF0C;&#x5728; CD4 &#x72EC;&#x7ACB;&#x5E94;&#x53D8;&#xFF0C;SIV CP MAC &#x4E09;&#x8054; Env &#x5904;&#x4E8E;&#x4E00;&quot;&#x5F00;&#x653E;&quot;&#x7684;&#x6784;&#x8C61;&#x6709; gp120 &#x773C;&#x73E0;&#x7C7B;&#x4F3C;&#x4E8E;&#x89C1; Hiv-1 BaL &#x4E0E; sCD4 &#x548C; CD4i &#x6297;&#x4F53; 17b &#x7EDC;&#x5408;&#x65F6;&#x6784;&#x8C61;&#x4E2D;&#x7684;&#x4E09;&#x805A;&#x4F53;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x7ED3;&#x679C;&#x8868;&#x660E; CD4 &#x72EC;&#x7ACB;&#x75C5;&#x6BD2;&#x6027;&#x6761;&#x76EE;&#x7684;&#x5206;&#x5B50;&#x673A;&#x5236;&#x7ED3;&#x6784;&#x89E3;&#x91CA;&#x548C;&#x8FDB;&#x4E00;&#x6B65;&#x5EFA;&#x7ACB;&#x8BE5;&#x4F4E;&#x6E29;&#x7535;&#x5B50;&#x65AD;&#x5C42;&#x626B;&#x63CF;&#x53EF;&#x4EE5;&#x7528;&#x4E8E;&#x53D1;&#x73B0;&#x72EC;&#x7279;&#x3001; &#x529F;&#x80FD;&#x4E0A;&#x76F8;&#x5173;&#x7684;&#x7B2C;&#x56DB;&#x7EAA;&#x7ED3;&#x6784;&#x7684; Env &#x663E;&#x793A;&#x5B8C;&#x6574;&#x7684;&#x75C5;&#x6BD2;&#x3002;

&#x4E09;&#x8054; SIV &#x548C;&#x827E;&#x6ECB;&#x75C5;&#x6BD2; 1 &#x5305;&#x819C;&#x7CD6;&#x86CB;&#x767D;&#x5BF9;&#x5B8C;&#x6574;&#x75C5;&#x6BD2;&#x7684;&#x5206;&#x5B50;&#x4F53;&#x7CFB;&#x7ED3;&#x6784;&#xFF1A; &#x5728;&#x7B2C;&#x56DB;&#x7EAA;&#x7684;&#x7ED3;&#x6784;&#x4F9D;&#x8D56;&#x4E8E;&#x5E94;&#x53D8;&#x7684;&#x53D8;&#x5316;&#x3002;

The initial step in target cell infection by human, and the closely related simian immunodeficiency viruses (HIV and SIV, respectively) occurs with the binding of trimeric envelope glycoproteins (Env), composed of heterodimers of the viral transmembrane glycoprotein (gp41) and surface glycoprotein (gp120) to target T-cells. Knowledge of the molecular structure of trimeric Env on intact viruses is important both for understanding the molecular mechanisms underlying virus-cell interactions and for the design of effective immunogen-based vaccines to combat HIV/AIDS. Previous analyses of intact HIV-1 BaL virions have already resulted in structures of trimeric Env in unliganded and CD4-liganded states at ~20 Ã… resolution. Here, we show that the molecular architectures of trimeric Env from SIVmneE11S, SIVmac239 and HIV-1 R3A strains are closely comparable to that previously determined for HIV-1 BaL, with the V1 and V2 variable loops located at the apex of the spike, close to the contact zone between virus and cell. The location of the V1/V2 loops in trimeric Env was definitively confirmed by structural analysis of HIV-1 R3A virions engineered to express Env with deletion of these loops. Strikingly, in SIV CP-MAC, a CD4-independent strain, trimeric Env is in a constitutively "open" conformation with gp120 trimers splayed out in a conformation similar to that seen for HIV-1 BaL Env when it is complexed with sCD4 and the CD4i antibody 17b. Our findings suggest a structural explanation for the molecular mechanism of CD4-independent viral entry and further establish that cryo-electron tomography can be used to discover distinct, functionally relevant quaternary structures of Env displayed on intact viruses.

Molecular architectures of trimeric SIV and HIV-1 envelope glycoproteins on intact viruses: strain-dependent variation in quaternary structure.

L&#x26;#39;&#xE9;tape initiale de l&#x26;#39;infection des cellules cibles par les activit&#xE9;s humaines, et les simiens &#xE9;troitement li&#xE9;es virus de l&#x26;#39;immunod&#xE9;ficience (VIH et SIV, respectivement) se produit avec la liaison de glycoprot&#xE9;ines d&#x26;#39;enveloppe trim&#xE9;riques (Env), compos&#xE9;e d&#x26;#39;h&#xE9;t&#xE9;rodim&#xE8;res de la glycoprot&#xE9;ine transmembranaire virale (gp41) et la glycoprot&#xE9;ine de surface (gp120) pour cibler des cellules T. La connaissance de la structure mol&#xE9;culaire de trim&#xE9;rique Env sur les virus intactes est important tant pour la compr&#xE9;hension des m&#xE9;canismes mol&#xE9;culaires sous-jacents interactions virus-cellules et pour la conception de efficaces immunog&#xE8;ne des vaccins &#xE0; base de lutte contre le VIH / SIDA. Les analyses pr&#xE9;c&#xE9;dentes de intactes virions VIH-1 Bal ont d&#xE9;j&#xE0; abouti &#xE0; des structures de trim&#xE9;rique Env dans les Etats sans ligand et CD4-ligand&#xE9; &#xE0; ~ 20 &#xC5; de r&#xE9;solution. Ici, nous montrons que les architectures mol&#xE9;culaires de trim&#xE9;rique Env de SIVmneE11S, SIVmac239 et le VIH-1 souches R3A sont &#xE9;troitement comparable &#xE0; celle d&#xE9;termin&#xE9;e au pr&#xE9;alable pour le VIH-1 Bal, avec la variable V1 et V2 boucles situ&#xE9; &#xE0; l&#x26;#39;apex de la pointe, &#xE0; proximit&#xE9; &#xE0; la zone de contact entre le virus et des cellules. L&#x26;#39;emplacement des V1/V2 boucles dans trim&#xE9;rique Env a &#xE9;t&#xE9; d&#xE9;finitivement confirm&#xE9; par l&#x26;#39;analyse structurale des virions VIH-1 R3A modifi&#xE9;es pour exprimer Env avec la suppression de ces boucles. Il est frappant, dans SIV CP-MAC, une souche CD4-ind&#xE9;pendante, trim&#xE9;rique Env est dans un constitutivement conformation &#xAB;ouverte&#xBB; avec la gp120 trim&#xE8;res &#xE9;vas&#xE9;es dans une conformation similaire &#xE0; celle observ&#xE9;e pour le VIH-1 Env BaL quand il est complex&#xE9; avec sCD4 et le 17b anticorps CD4i. Nos r&#xE9;sultats sugg&#xE8;rent une explication structurelle pour le m&#xE9;canisme mol&#xE9;culaire de CD4-ind&#xE9;pendante l&#x26;#39;entr&#xE9;e du virus et en outre &#xE9;tablir que microscopie cryo-&#xE9;lectronique peut &#xEA;tre utilis&#xE9;e pour d&#xE9;couvrir distinctes et fonctionnellement pertinents structures quaternaires de Env affich&#xE9;es sur les virus intacts.

Architectures Mol&#xE9;culaires de trim&#xE8;re SIV et glycoprot&#xE9;ines d&#x26;#39;enveloppe du VIH-1 sur les virus intacts: la souche-d&#xE9;pendante variation de la structure quaternaire

Der erste Schritt in deiner Zelle Infektion von Menschen und die eng verwandten Simianes Immundefizienz-Viren (HIV und SIV, beziehungsweise) tritt bei der Bindung von Trimere Umschlag Glykoproteinen (Env), bestehend aus Heterodimere der viralen Transmembran-Glykoprotein (gp41) und Oberfl&auml;chen-Glykoprotein (gp120) in T-Zellen als Ziel. Wissen &uuml;ber die molekulare Struktur der Trimere Env auf intakte Viren ist wichtig f&uuml;r das Verst&auml;ndnis der molekularen Mechanismen Virus-Zell-Interaktionen sowohl f&uuml;r die Gestaltung der wirksame Immunogen-basierte Impfstoffe zur Bek&auml;mpfung von HIV/AIDS. Fr&uuml;here Analysen der intakten HIV-1 BaL Virionen f&uuml;hrten bereits Strukturen der Trimere Env in Unliganded und CD4-liganded Zust&auml;nde bei ~ 20 &Aring; Aufl&ouml;sung. Hier zeigen wir, dass die molekularen Architekturen der Trimere Env aus SIVmneE11S, SIVmac239 und HIV-1-R3A-St&auml;mme sind eng vergleichbar, die zuvor f&uuml;r HIV-1 BaL, mit der V1 und V2, die Variable Schleifen auf dem H&ouml;hepunkt der Spike, nahe an der Kontaktzone zwischen Virus und Zelle gelegen. Die Lage der V1/V2 Schleifen in Trimere Env best&auml;tigte endg&uuml;ltig Strukturanalyse von HIV-1-R3A Virionen konstruiert, ausdr&uuml;ckliche Env mit l&ouml;schen diese Schleifen. Auff&auml;llig ist, ist in der CP-MAC, einem CD4-unabh&auml;ngigen Stamm SIV, Trimere Env in eine konstitutiv &quot;offen&quot; Konformation mit gp120 Trimere gespreizten heraus in eine Konformation wie man f&uuml;r HIV-1 BaL Env, wenn es mit sCD4 und der CD4i-Antik&ouml;rper 17b komplexiert ist. Unsere Ergebnisse eine strukturelle Erkl&auml;rung f&uuml;r die molekularen Mechanismen der CD4-unabh&auml;ngigen Viren Eintrag vorschlagen und, dass Cryo-Elektron-Tomographie verwendet werden kann, um getrennte, funktionell relevante Quatern&auml;re Strukturen der Env angezeigt auf intakte Viren zu entdecken weiter aufzubauen.

Molekulare Architekturen der Trimere SIV und HIV-1 Umschlag-Glykoproteine auf intakte Viren: Stamm-abh&auml;ngigen Schwankungen der quart&auml;ren Struktur.

Il passo iniziale per infezione delle cellule bersaglio da umani e il virus dell&#39;immunodeficienza delle scimmie strettamente correlate (HIV e SIV, rispettivamente) si verifica con l&#39;associazione di glicoproteine busta trimeric (Env), composto da eterodimeri della glicoproteina transmembrana virale (gp41) e superficie glicoproteina (gp120) a bersaglio le cellule T. Conoscenza della struttura molecolare di Env trimeric su virus intatto &egrave; importante per comprendere i meccanismi molecolari sottostanti le interazioni virus-cellula e per la progettazione di vaccini basati su immunogen efficaci combattere l&#39;HIV/AIDS. Analisi precedenti di virioni di HIV-1 BaL intatte gi&agrave; hanno portato a strutture di Env trimeric in unliganded e CD4-liganded afferma a risoluzione &Aring; ~ 20. Qui, ci mostra che le architetture molecolari di Env trimeric da SIVmneE11S, SIVmac239 e l&#39;HIV-1 R3A ceppi sono strettamente paragonabili a quella determinata in precedenza per BaL di HIV-1, con la V1 e V2 cicli variabile si trovano all&#39;apice del picco, vicino alla zona di contatto tra virus e cellula. La posizione delle anse V1/V2 in Env trimeric fu definitivamente confermata dall&#39;analisi strutturale dei virioni di HIV-1 R3A ingegnerizzato di Env espressa con eliminazione di questi cicli. Sorprendentemente, in SIV CP-MAC, un ceppo di CD4-indipendente, Env trimeric &egrave; in una conformazione costitutivamente &quot;aperta&quot; con gp120 trimeri strombate in una conformazione simile a quello visto per Env di HIV-1 BaL quando &egrave; complessato con sCD4 e il CD4i anticorpo 17b. I nostri risultati suggeriscono una spiegazione strutturale per il meccanismo molecolare di entrata virale CD4-indipendente e ulteriormente stabilire che tomografia del cryo-elettrone pu&ograve; essere utilizzata per scoprire distinte, funzionalmente rilevanti strutture quaternarie di Env visualizzati su virus intatto.

Architetture molecolari di glicoproteine busta trimeric SIV e HIV-1 su virus intatto: ceppo-dipendente dalla variazione nella struttura quaternaria.

&#x4EBA;&#x9593;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x6A19;&#x7684;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x611F;&#x67D3;&#x306E;&#x6700;&#x521D;&#x306E;&#x30B9;&#x30C6;&#x30C3;&#x30D7;&#x3068;&#x3001;&#x5BC6;&#x63A5;&#x306B;&#x95A2;&#x9023;&#x3057;&#x305F;&#x30B5;&#x30EB;&#x514D;&#x75AB;&#x4E0D;&#x5168;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#xFF08;HIV&#x3068;SIV&#x3001;&#x305D;&#x308C;&#x305E;&#x308C;&#xFF09;&#x306F;&#x3001;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x306E;&#x819C;&#x8CAB;&#x901A;&#x7CD6;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#xFF08;gp41&#xFF09;&#x3092;&#x3001;&#x8868;&#x9762;&#x306E;&#x7CD6;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x30D8;&#x30C6;&#x30ED;&#x30C0;&#x30A4;&#x30DE;&#x30FC;&#x3067;&#x69CB;&#x6210;&#x3055;&#x308C;&#x3001;&#xFF08;ENV&#xFF09;&#x4E09;&#x91CF;&#x4F53;&#x306E;&#x30A8;&#x30F3;&#x30D9;&#x30ED;&#x30FC;&#x30D7;&#x7CD6;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x7D50;&#x5408;&#x3067;&#x767A;&#x751F;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002; &#xFF08;gp120&#x306E;&#xFF09;T-&#x7D30;&#x80DE;&#x3092;&#x6A19;&#x7684;&#x3068;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x7121;&#x50B7;&#x306E;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x3067;env&#x4E09;&#x91CF;&#x4F53;&#x306E;&#x5206;&#x5B50;&#x69CB;&#x9020;&#x306E;&#x77E5;&#x8B58;&#x306F;&#x3001;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x7D30;&#x80DE;&#x9593;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x306E;&#x5206;&#x5B50;&#x6A5F;&#x69CB;&#x3092;&#x7406;&#x89E3;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x3001;HIV /&#x30A8;&#x30A4;&#x30BA;&#x3068;&#x95D8;&#x3046;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x52B9;&#x679C;&#x7684;&#x306A;&#x514D;&#x75AB;&#x30D9;&#x30FC;&#x30B9;&#x306E;&#x30EF;&#x30AF;&#x30C1;&#x30F3;&#x306E;&#x8A2D;&#x8A08;&#x306E;&#x4E21;&#x65B9;&#x304C;&#x91CD;&#x8981;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3002;&#x7121;&#x50B7;&#x306E;HIV-1&#x30D3;&#x30EA;&#x30AA;&#x30F3;&#x306E;BAL&#x306E;&#x4EE5;&#x524D;&#x306E;&#x5206;&#x6790;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x65E2;&#x306B;&#x301C;20&#x212B;&#x306E;&#x5206;&#x89E3;&#x80FD;&#x3067;&#x30EA;&#x30AC;&#x30F3;&#x30C9;&#x975E;&#x7D50;&#x5408;&#x3084;CD4-&#x30EA;&#x30AC;&#x30F3;&#x30C9;&#x72B6;&#x614B;&#x3067;env&#x306E;&#x4E09;&#x91CF;&#x4F53;&#x306E;&#x69CB;&#x9020;&#x3092;&#x3082;&#x305F;&#x3089;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x3001;V1&#x3068;V2&#x306E;&#x5909;&#x6570;&#x304C;&#x8FD1;&#x304F;&#x3001;&#x30B9;&#x30D1;&#x30A4;&#x30AF;&#x306E;&#x9802;&#x70B9;&#x306B;&#x4F4D;&#x7F6E;&#x3059;&#x308B;&#x30EB;&#x30FC;&#x30D7;&#x3067;SIVmneE11S&#x3001;SIVmac239&#x3068;HIV-1 R3A&#x682A;&#x304B;&#x3089;env&#x306E;&#x4E09;&#x91CF;&#x4F53;&#x306E;&#x5206;&#x5B50;&#x30A2;&#x30FC;&#x30AD;&#x30C6;&#x30AF;&#x30C1;&#x30E3;&#x306F;&#x3001;&#x4EE5;&#x524D;&#x306B;BAL HIV-1&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x6C7A;&#x5B9A;&#x305D;&#x308C;&#x306B;&#x5BC6;&#x63A5;&#x306B;&#x540C;&#x7B49;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x3068;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x9593;&#x306E;&#x63A5;&#x89E6;&#x30BE;&#x30FC;&#x30F3;&#x3078;&#x3002;&#x4E09;&#x91CF;&#x4F53;Env&#x306E;&#x3067;V1/V2&#x30EB;&#x30FC;&#x30D7;&#x306E;&#x4F4D;&#x7F6E;&#x304C;&#x6C7A;&#x5B9A;&#x7684;&#x306B;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x30EB;&#x30FC;&#x30D7;&#x306E;&#x524A;&#x9664;&#x306B;env&#x3092;&#x767A;&#x73FE;&#x3059;&#x308B;&#x3088;&#x3046;&#x306B;&#x8A2D;&#x8A08;HIV-1 R3A&#x30D3;&#x30EA;&#x30AA;&#x30F3;&#x306E;&#x69CB;&#x9020;&#x89E3;&#x6790;&#x306B;&#x3088;&#x308A;&#x78BA;&#x8A8D;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3002;&#x9A5A;&#x304F;&#x3079;&#x304D;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3001;SIV CP-MAC&#x3001;CD4&#x975E;&#x4F9D;&#x5B58;&#x6027;&#x682A;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x4E09;&#x91CF;&#x4F53;Env&#x306E;&#x306F;&#x3001;&#x305D;&#x308C;&#x304C;sCD4&#x3068;&#x8907;&#x5408;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3068;&#x304D;&#x306B;HIV-1 Env&#x306E;BAL&#x306B;&#x898B;&#x3089;&#x308C;&#x308B;&#x305D;&#x308C;&#x3068;&#x540C;&#x69D8;&#x306E;&#x30B3;&#x30F3;&#x30D5;&#x30A9;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x4E2D;&#x3067;&#x30B9;&#x30D7;&#x30EC;&#x30FC;&#x306E;gp120&#x4E09;&#x91CF;&#x4F53;&#x3067;&#x69CB;&#x6210;&#x7684;&#x306B; &#x26;quot;&#x958B;&#x304B;&#x308C;&#x305F;&#x26;quot;&#x30B3;&#x30F3;&#x30D5;&#x30A9;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x3067;&#x3042;&#x308B;CD4i&#x6297;&#x4F53;17B&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306E;&#x8ABF;&#x67FB;&#x7D50;&#x679C;&#x306F;&#x3001;CD4&#x975E;&#x4F9D;&#x5B58;&#x6027;&#x306E;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x306E;&#x4FB5;&#x5165;&#x306E;&#x5206;&#x5B50;&#x6A5F;&#x69CB;&#x306E;&#x69CB;&#x9020;&#x7684;&#x306A;&#x8AAC;&#x660E;&#x3092;&#x63D0;&#x6848;&#x3057;&#x3001;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x4F4E;&#x6E29;&#x96FB;&#x5B50;&#x65AD;&#x5C64;&#x64AE;&#x5F71;&#x6CD5;&#x306F;&#x305D;&#x306E;&#x307E;&#x307E;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x306B;&#x8868;&#x793A;&#x3055;&#x308C;&#x305F;Env&#x306E;&#x7570;&#x306A;&#x308B;&#x3001;&#x6A5F;&#x80FD;&#x7684;&#x306B;&#x95A2;&#x9023;&#x3059;&#x308B;&#x56DB;&#x6B21;&#x69CB;&#x9020;&#x3092;&#x767A;&#x898B;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x4F7F;&#x7528;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x898F;&#x5B9A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x56DB;&#x6B21;&#x69CB;&#x9020;&#x306E;&#x3072;&#x305A;&#x307F;&#x4F9D;&#x5B58;&#x6027;&#x306E;&#x5909;&#x5316;&#xFF1A;&#x7121;&#x50B7;&#x306E;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x3067;&#x4E09;&#x91CF;&#x4F53;SIV&#x3068;HIV-1&#x30A8;&#x30F3;&#x30D9;&#x30ED;&#x30FC;&#x30D7;&#x7CD6;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x5206;&#x5B50;&#x69CB;&#x9020;

&#xB300;&#xC0C1; &#xC140; &#xC778;&#xAC04;&#xACFC; &#xBC00;&#xC811; &#xD558; &#xAC8C; &#xAD00;&#xB828; &#xB41C; &#xC720;&#xC778;&#xC6D0; &#xBA74;&#xC5ED; &#xACB0;&#xD54D; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xAC10;&#xC5FC;&#xC758; &#xCD08;&#xAE30; &#xB2E8;&#xACC4; (&#xC5D0;&#xC774;&#xC988;&#xC640; SIV, &#xAC01;&#xAC01;) trimeric &#xBD09;&#xD22C; glycoproteins (Env)&#xC758; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; &#xC131; &#xB9C9; &#xD6A1;&#xB2E8; &#xB2F9;&#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; (gp41) &#xBC0F; &#xD45C;&#xBA74; &#xB2F9;&#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; (gp120) &#xB300;&#xC0C1; T-&#xC140;&#xC758; heterodimers&#xC758; &#xAD6C;&#xC131;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBC1C;&#xC0DD; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC9C0;&#xC2DD;&#xC758; &#xBD84;&#xC790; &#xAD6C;&#xC870;&#xC758; trimeric &#xD658;&#xACBD; &#xADF8;&#xB300;&#xB85C; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; &#xAE30;&#xBCF8; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; &#xC138;&#xD3EC; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9; &#xD558;&#xB294; &#xBD84;&#xC790; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;&#xC744; &#xC774;&#xD574; &#xD558;&#xB294; &#xAC83;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xBC0F; HIV/&#xC5D0;&#xC774;&#xC988;&#xB97C; &#xBC29;&#xC9C0; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD574; &#xD6A8;&#xACFC;&#xC801;&#xC778; immunogen &#xAE30;&#xBC18; &#xBC31;&#xC2E0;&#xC758; &#xC124;&#xACC4;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC911;&#xC694; &#xD558;&#xB2E4;. Unliganded trimeric &#xD658;&#xACBD;&#xC758; &#xAD6C;&#xC870; &#xADF8;&#xB300;&#xB85C; HIV 1 &#xBC1C; virions&#xC758; &#xC774;&#xC804; &#xBD84;&#xC11D; &#xACB0;&#xACFC;&#xAC00; &#xC774;&#xBBF8;&#xC640; CD4 liganded &#xC0C1;&#xD0DC; ~ 20 &Aring; &#xD574;&#xC0C1;&#xB3C4;&#xC5D0;&#xC11C;. &#xC5EC;&#xAE30;, SIVmac239 &#xBC0F; V 1 R3A &#xC885;&#xC790; V1 &#xBC0F; v 2&#xB97C; &#xAC00;&#xBCC0; &#xB8E8;&#xD504; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4;&#xC640; &#xC138;&#xD3EC; &#xC0AC;&#xC774;&#xC758; &#xC811;&#xCD09; &#xC601;&#xC5ED;&#xC5D0; &#xAC00;&#xAE4C;&#xC6B4; &#xC2A4;&#xD30C;&#xC774;&#xD06C;&#xC758; &#xAF2D;&#xB300;&#xAE30;&#xC5D0; &#xC788;&#xB294; &#xC5D0;&#xC774;&#xC988;-1 &#xBC1C;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xACB0;&#xC815; &#xC774;&#xC804;&#xC5D0; &#xBC00;&#xC811; &#xD558; &#xAC8C; &#xC720;&#xC0AC;&#xD55C; &#xD558; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; SIVmneE11S&#xC5D0;&#xC11C; trimeric &#xD658;&#xACBD;&#xC758; &#xBD84;&#xC790; &#xAD6C;&#xC870;&#xB97C; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. Trimeric &#xD658;&#xACBD; V1/V2 &#xB8E8;&#xD504;&#xC758; &#xC704;&#xCE58;&#xB294; &#xACB0;&#xC815;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; HIV 1 R3A virions &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xB8E8;&#xD504;&#xC758; &#xC0AD;&#xC81C;&#xC640; &#xC775;&#xC2A4;&#xD504;&#xB808;&#xC2A4; &#xD658;&#xACBD;&#xC744; &#xC704;&#xD558;&#xC5EC; &#xC124;&#xACC4; &#xAD6C;&#xC870; &#xBD84;&#xC11D;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xD655;&#xC778; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xAE30; &#xB9C9;&#xD788;&#xAC8C;, SIV CP-&#xB9E5;, CD4 &#xB3C5;&#xB9BD;&#xC801;&#xC778; &#xC2A4;&#xD2B8;&#xB808;&#xC778; trimeric &#xD658;&#xACBD;&#xC744; &#xC774;&#xB2E4; constitutively &quot;&#xC5F4;&#xAE30;&quot; &#xB098; &#xB780;&#xC5D0; gp120 trimers &#xB54C; Scd4&#xC640; CD4i &#xD56D; &#xCCB4; 17b complexed &#xC5D0;&#xC774;&#xC988; 1 &#xBC1C; &#xD658;&#xACBD;&#xC744; &#xC704;&#xD574; &#xBCF8; &#xBE44;&#xC2B7;&#xD55C; &#xB098; &#xB780;&#xC5D0; &#xD3BC;&#xCCD0;&#xC838; &#xC788;&#xB294;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xC5F0;&#xAD6C; &#xACB0;&#xACFC; CD4 &#xB3C5;&#xB9BD;&#xC801;&#xC778; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; &#xD56D;&#xBAA9;&#xC758; &#xBD84;&#xC790; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xAD6C;&#xC870;&#xC801; &#xC124;&#xBA85;&#xC744; &#xC81C;&#xC548; &#xD558; &#xACE0; &#xADF8; &#xACF3;&#xC744; &#xC54C;&#xC544;&#xB0B4;&#xB294;-&#xC804;&#xC790; &#xB2E8;&#xCE35; &#xCD2C;&#xC601; &#xD658;&#xACBD; &#xADF8;&#xB300;&#xB85C; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4;&#xC5D0; &#xD45C;&#xC2DC;&#xC758; &#xACE0;&#xC720;&#xD55C; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xAD00;&#xB828; &#xC81C; &#xC0AC;&#xAE30; &#xAD6C;&#xC870;&#xB97C; &#xBC1C;&#xACAC; &#xD558;&#xB294; &#xC124;&#xC815; &#xCD94;&#xAC00;.

&#xADF8;&#xB300;&#xB85C; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4;&#xC5D0; trimeric SIV&#xC640; &#xC5D0;&#xC774;&#xC988;-1 &#xBD09;&#xD22C; glycoproteins&#xC758; &#xBD84;&#xC790; &#xAD6C;&#xC870;: &#xC81C; &#xC0AC;&#xAE30; &#xAD6C;&#xC870;&#xC758; &#xC2A4;&#xD2B8;&#xB808;&#xC778; &#xC885;&#xC18D; &#xBCC0;&#xD615;.

El paso inicial en la infecci&#xF3;n de c&#xE9;lulas objetivo por humano, y los estrechamente relacionados con los virus de inmunodeficiencia de simios (VIH y VIS, respectivamente) se produce con la uni&#xF3;n de glicoprote&#xED;nas de la envoltura trim&#xE9;ricas (ENV), compuesta de heterod&#xED;meros de la glicoprote&#xED;na transmembrana viral (gp41) y glicoprote&#xED;na de superficie (gp120) para orientar las c&#xE9;lulas T. El conocimiento de la estructura molecular de trim&#xE9;rica Env el virus intactos es importante tanto para la comprensi&#xF3;n de los mecanismos moleculares que subyacen a la interacci&#xF3;n virus-c&#xE9;lula y para el dise&#xF1;o de eficaces basados &#x200B;&#x200B;en inmun&#xF3;geno las vacunas para combatir el VIH / SIDA. Previo an&#xE1;lisis de VIH-1 intactas viriones Bal ya han dado lugar a estructuras de trim&#xE9;rica Env en los estados unliganded y CD4 liganded-en ~ 20 &#xC5; de resoluci&#xF3;n. Aqu&#xED;, se muestra que las arquitecturas moleculares de trim&#xE9;rica Env de SIVmneE11S, SIVmac239 y el VIH-1 cepas R3A est&#xE1;n estrechamente comparable a la que previamente determinada para el VIH-1 Bal, con la variable V1 y V2 bucles situados en el &#xE1;pice de la espiga, cerca a la zona de contacto entre el virus y de c&#xE9;lulas. La ubicaci&#xF3;n de los bucles en V1/V2 trim&#xE9;rica Env fue confirmada definitivamente por an&#xE1;lisis estructural de VIH-1 viriones R3A ingenier&#xED;a gen&#xE9;tica para expresar Env con supresi&#xF3;n de estos bucles. Sorprendentemente, en SIV CP-MAC, una cepa de c&#xE9;lulas CD4-independiente, trim&#xE9;rica Env es en un constitutivamente &#x26;quot;abierta&#x26;quot; conformaci&#xF3;n con gp120 tr&#xED;meros abocinadas hacia fuera en una conformaci&#xF3;n similar a la observada para el VIH-1 Env BaL cuando se compleja con sCD4 y el CD4i 17b anticuerpos. Nuestros hallazgos sugieren una explicaci&#xF3;n estructural para el mecanismo molecular de las c&#xE9;lulas CD4-independiente de la entrada del virus y establecer adem&#xE1;s que la crio-tomograf&#xED;a electr&#xF3;nica se puede utilizar para descubrir distintas, funcionalmente las estructuras pertinentes cuaternarios de Env se muestran en los virus intactos.

Arquitecturas moleculares de trim&#xE9;rica SIV y el VIH-1 sobre las glicoprote&#xED;nas de virus intactos: la cepa-dependiente de variaci&#xF3;n en la estructura cuaternaria

Hiv-1 &#x611F;&#x67D3;&#x7684;&#x7B2C;&#x4E00;&#x6B65;&#x53D1;&#x751F;&#x4E0E;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8868;&#x9762;&#x7684; CD4 &#x5411;&#x4E09;&#x8054;&#x827E;&#x6ECB;&#x75C5;&#x6BD2; 1 &#x5305;&#x819C;&#x7CD6;&#x86CB;&#x767D; (Env) &#x9ED1;&#x8179;&#x7684;&#x8DE8;&#x819C;&#x7CD6;&#x86CB;&#x767D; (gp41) &#x548C;&#x8868;&#x9762;&#x7684;&#x7CD6;&#x86CB;&#x767D; (gp120) &#x7ED1;&#x5B9A;&#x3002;&#x53EF;&#x6EB6;&#x6027;&#x7248;&#x672C;&#x7684;&#x4E09;&#x8054; Env &#x4E0A;&#x5B8C;&#x6574;&#x75C5;&#x6BD2;&#x663E;&#x793A;&#x7C7B;&#x4F3C;&#x4E8E;&#x89C2;&#x5BDF;&#x5230;&#x7684;&#x7ED3;&#x6784;&#x548C;&#x529F;&#x80FD;&#x7279;&#x6027;&#x7684;&#x8BBE;&#x8BA1;&#x662F;&#x975E;&#x5E38;&#x53EF;&#x53D6;&#x7684;&#x8BBE;&#x8BA1;&#x53EF;&#x80FD;&#x662F;&#x6709;&#x6548;&#x7684;&#x9632;&#x6CBB;&#x827E;&#x6ECB;&#x75C5;&#x6BD2;/&#x827E;&#x6ECB;&#x75C5;&#x75AB;&#x82D7;&#x7684;&#x6297;&#x539F;&#x89C6;&#x89D2;&#x3002;&#x4F7F;&#x7528; cryoelectron &#x5C42;&#x6790;&#x6210;&#x50CF;&#x7ED3;&#x5408;&#x5B50;&#x5B97;&#x5377;&#x5E73;&#x5747;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x5DF2;&#x7ECF;&#x5206;&#x6790;&#x4E86;&#x7ED3;&#x6784;&#x7684; SOSIP gp140 &#x4E09;&#x805A;&#x4F53;&#xFF0C;&#x5176;&#x4E2D;&#x88AB;&#x5206;&#x89E3;&#x3001; &#x589E;&#x6EB6;&#x80DE;&#x5916;&#x533A;&#x7684;&#x4E09;&#x8054; Hiv-1 &#x7684;&#x7248;&#x672C;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x663E;&#x793A; unliganded gp140 &#x4E09;&#x805A;&#x4F53;&#x91C7;&#x7528;&#x7C7B;&#x4F3C;&#x4E8E;&#x7531;&#x672C;&#x673A; unliganded &#x4E09;&#x805A;&#x4F53;&#x5B8C;&#x597D;&#x65E0;&#x635F;&#x7684;&#x827E;&#x6ECB;&#x75C5;&#x6BD2; 1 virions &#x8868;&#x9762;&#x4E0A;&#x663E;&#x793A;&#x7684;&#x7B2C;&#x56DB;&#x7EAA;&#x5B89;&#x6392;&#x3002;&#x5F53;&#x4E0E;&#x53EF;&#x6EB6;&#x6027; CD4&#xFF0C;Fab 17b&#xFF0C;&#x5C06;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x5230;&#x5728;&#x5176;&#x8D8B;&#x5316;&#x56E0;&#x5B50; hiv &#x611F;&#x67D3;&#x6291;&#x5236;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x7AD9;&#x70B9;&#xFF0C;&#x6216;&#x65E2;&#x662F;&#x53EF;&#x6EB6;&#x6027; CD4 gp120 &#x548C; 17b Fab &#x7EDC;&#x5408;&#x65F6;&#xFF0C;gp140 &#x4E09;&#x805A;&#x4F53;&#x663E;&#x793A;&#x6253;&#x5F00;&#x6784;&#x8C61;&#xFF0C;&#x5176;&#x4E2D;&#x6709;&#x4E00;&#x4E2A;&#x5411;&#x5916;&#x65CB;&#x8F6C;&#x548C;&#x4F4D;&#x79FB;&#x7684;&#x6BCF;&#x4E2A; gp120 protomer&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x8BC1;&#x660E;&#x5728;&#x5C01;&#x95ED;&#x5F0F;&#x548C;&#x5F00;&#x653E;&#x5F0F;&#x6784;&#x8C61;&#x7684;&#x53EF;&#x6EB6;&#x6027;&#x4E09;&#x805A;&#x4F53;&#x4E09;&#x805A;&#x4F53;&#x76F8;&#x540C;&#xFF0C;&#x89C2;&#x5BDF;&#x7684;&#x5C01;&#x95ED;&#x4E0E;&#x5F00;&#x653E;&#x7684;&#x56FD;&#x5BB6;&#xFF0C;&#x5206;&#x522B;&#x4E0A;&#x5B8C;&#x597D;&#x7684;&#x827E;&#x6ECB;&#x75C5;&#x6BD2; 1 BaL virions&#xFF0C;&#x4E09;&#x8054; gp120 &#x7684;&#x5EFA;&#x7ACB;&#x53EF;&#x6EB6;&#x6027; gp140 &#x4E09;&#x805A;&#x4F53;&#x53EF;&#x4EE5;&#x4E3A;&#x4E86;&#x6A21;&#x4EFF;&#x7684;&#x7B2C;&#x56DB;&#x7EAA;&#x7684;&#x7ED3;&#x6784;&#x8F6C;&#x6362;&#x7684; gp120 &#x7684;&#x5206;&#x5B50;&#x5B89;&#x6392;&#x663E;&#x793A;&#x7531;&#x672C;&#x673A;&#x4E09;&#x8054; Env&#x3002;

&#x4E09;&#x8054;&#x827E;&#x6ECB;&#x75C5;&#x6BD2; 1 &#x7CD6;&#x86CB;&#x767D; gp140 &#x6297;&#x539F;&#x548C;&#x672C;&#x673A;&#x827E;&#x6ECB;&#x75C5;&#x6BD2; 1 &#x5305;&#x819C;&#x7CD6;&#x86CB;&#x767D;&#x663E;&#x793A;&#x76F8;&#x540C;&#x7684;&#x5173;&#x95ED;&#x548C;&#x6253;&#x5F00;&#x7B2C;&#x56DB;&#x7EAA;&#x5206;&#x5B50;&#x4F53;&#x7CFB;&#x7ED3;&#x6784;&#x3002;

The initial step in HIV-1 infection occurs with the binding of cell surface CD4 to trimeric HIV-1 envelope glycoproteins (Env), a heterodimer of a transmembrane glycoprotein (gp41) and a surface glycoprotein (gp120). The design of soluble versions of trimeric Env that display structural and functional properties similar to those observed on intact viruses is highly desirable from the viewpoint of designing immunogens that could be effective as vaccines against HIV/AIDS. Using cryoelectron tomography combined with subvolume averaging, we have analyzed the structure of SOSIP gp140 trimers, which are cleaved, solubilized versions of the ectodomain of trimeric HIV-1 Env. We show that unliganded gp140 trimers adopt a quaternary arrangement similar to that displayed by native unliganded trimers on the surface of intact HIV-1 virions. When complexed with soluble CD4, Fab 17b, which binds to gp120 at its chemokine coreceptor binding site, or both soluble CD4 and 17b Fab, gp140 trimers display an open conformation in which there is an outward rotation and displacement of each gp120 protomer. We demonstrate that the molecular arrangements of gp120 trimers in the closed and open conformations of the soluble trimer are the same as those observed for the closed and open states, respectively, of trimeric gp120 on intact HIV-1 BaL virions, establishing that soluble gp140 trimers can be designed to mimic the quaternary structural transitions displayed by native trimeric Env.

Trimeric HIV-1 glycoprotein gp140 immunogens and native HIV-1 envelope glycoproteins display the same closed and open quaternary molecular architectures.

L&#x26;#39;&#xE9;tape initiale de l&#x26;#39;infection &#xE0; VIH-1 se produit avec la liaison de CD4 de la surface cellulaire &#xE0; trim&#xE8;res glycoprot&#xE9;ines de HIV-1 d&#x26;#39;enveloppe (ENV), un h&#xE9;t&#xE9;rodim&#xE8;re d&#x26;#39;une glycoprot&#xE9;ine transmembranaire (gp41) et une glycoprot&#xE9;ine de surface (gp120). La conception des versions solubles de trim&#xE9;rique Env qui affichent des propri&#xE9;t&#xE9;s structurales et fonctionnelles similaires &#xE0; celles observ&#xE9;es sur les virus intactes est hautement souhaitable du point de vue de la conception des immunog&#xE8;nes qui pourraient &#xEA;tre efficaces que les vaccins contre le VIH / SIDA. Utilisation de la tomographie par cryo&#xE9;lectronique combin&#xE9;e avec &#xE9;talement du sous-volume, nous avons analys&#xE9; la structure de SOSIP GP140 trim&#xE8;res, qui sont fendues, les versions solubilis&#xE9;es de l&#x26;#39;ectodomaine de trim&#xE9;rique VIH-1 Env. On montre que sans ligand gp140 trim&#xE8;res adopter un agencement quaternaire similaire &#xE0; celle affich&#xE9;e par natives trim&#xE8;res sans ligand sur la surface de intactes virions VIH-1. Lorsqu&#x26;#39;il est complex&#xE9; avec du CD4 soluble, Fab 17b, qui se lie &#xE0; gp120 de son site de co-r&#xE9;cepteur de chimiokine liaison, ou les deux CD4 soluble et Fab 17b, des trim&#xE8;res gp140 afficher une conformation ouverte dans laquelle il ya une rotation vers l&#x26;#39;ext&#xE9;rieur et le d&#xE9;placement de chaque protom&#xE8;re gp120. Nous d&#xE9;montrons que les arrangements mol&#xE9;culaires de gp120 trim&#xE8;res dans des conformations ferm&#xE9;es et ouvertes de la trim&#xE8;re soluble sont les m&#xEA;mes que celles observ&#xE9;es pour les &#xE9;tats ferm&#xE9; et ouvert, respectivement, de la gp120 trim&#xE9;rique sur virions VIH-1 intactes Bal, &#xE9;tablissant que les gp140 solubles trim&#xE8;res peut &#xEA;tre con&#xE7;u pour imiter les transitions structurelles quaternaires affich&#xE9;es par trim&#xE9;rique native Env.

Trim&#xE8;res VIH-1 glycoprot&#xE9;ine gp140 immunog&#xE8;nes et autochtones Glycoprot&#xE9;ines d&#x26;#39;enveloppe du VIH-1 afficher la m&#xEA;me ferm&#xE9;s et ouverts quaternaires Architectures Mol&#xE9;culaires

Der erste Schritt in der HIV-1-Infektion tritt bei der Bindung der Zelloberfl&auml;che CD4, Trimere HIV-1 Umschlag Glykoproteine (Env), ein Heterodimer ein Transmembran-Glykoprotein (gp41) und eine Oberfl&auml;che Glykoprotein (gp120). Das Design des l&ouml;slichen Trimere Env-Versionen, die strukturelle und funktionelle Eigenschaften &auml;hnlich auf intakte Viren anzeigen ist sehr w&uuml;nschenswert, aus der Sicht der Gestaltung von Immunogenen, die als Impfstoffe gegen HIV/AIDS wirksam werden k&ouml;nnten. Cryoelectron Tomographie kombiniert mit Subvolume mit durchschnittlich verwenden, haben wir die Struktur der SOSIP gp140 Trimere, die werden zerspaltet, solubilized Versionen von den APPs&alpha; der Trimere HIV-1-Env analysiert. Wir zeigen, dass Unliganded gp140 Trimere eine quart&auml;re Anordnung von native Unliganded Trimere auf der Oberfl&auml;che des intakten HIV-1-Virionen angezeigt &auml;hnlich erlassen. Wenn komplexiert mit l&ouml;slichen CD4, Fab 17b, die an gp120 an seine Chemokine Coreceptor Bindungsstelle, oder beiden l&ouml;sliche CD4 bindet und 17b Fab, zeigen gp140 Trimere eine offene Konformation, in denen besteht ein nach au&szlig;en Drehung und Verschiebung der einzelnen gp120 Protomer. Wir zeigen, dass die molekulare Arrangements von gp120, die Trimere in die geschlossenen und offenen Konformationen von l&ouml;slichen Trimer identisch mit denen beobachtet f&uuml;r den geschlossenen und offenen Staaten bzw. der Trimere gp120 auf intakte HIV-1 BaL Virionen, herstellen, dass l&ouml;sliche gp140 Trimere entworfen werden k&ouml;nnen, um die quart&auml;re strukturelle &Uuml;berg&auml;nge zu imitieren von native Trimere Env angezeigt.

Trimere HIV-1 Glykoprotein gp140 Immunogenen und native HIV-1 Umschlag-Glykoproteine zeigt dasselbe geschlossen und quart&auml;re Molekulare Architekturen zu &ouml;ffnen.

Il primo passo nell&#39;infezione da HIV-1 si verifica con l&#39;associazione di superficie delle cellule CD4 a trimeric delle glicoproteine busta HIV-1 (Env), un eterodimero di una glicoproteina transmembrana (gp41) e una superficie glicoproteina (gp120). Il design delle versioni solubili di Env trimeric che visualizzano le propriet&agrave; strutturali e funzionali simili a quelli osservati sul virus intatto &egrave; altamente auspicabile dal punto di vista della progettazione immunogeni che potrebbero essere efficace come i vaccini contro l&#39;HIV/AIDS. Mediante tomografia cryoelectron combinata con subvolume media, abbiamo analizzato la struttura dei trimeri gp140 SOSIP, che sono scissi, solubilizzato versioni del ectodomain di trimeric Env di HIV-1. Mostriamo che unliganded gp140 trimeri adottano una disposizione quaternaria simile a quello visualizzato dal nativo unliganded trimeri sulla superficie dei virioni di HIV-1 intatti. Quando complessato con CD4 solubile, 17b Fab, che associa alla gp120 al suo sito di legame delle chemochine coreceptor, o sia solubile CD4 e 17b Fab, trimeri gp140 visualizzano una conformazione aperta in cui c&#39;&egrave; una rotazione verso l&#39;esterno e lo spostamento di ogni protomer gp120. Dimostriamo che il regime molecolare di gp120 trimeri nelle conformazioni aperte e chiuse di trimero solubile sono le stesse di quelle osservate per gli stati aperti e chiusi, rispettivamente, di gp120 trimeric su intatti virioni di HIV-1 BaL, stabilendo che trimeri gp140 solubile possono essere progettati per imitare le transizioni strutturali quaternarie visualizzati dal nativo trimeric Env.

Trimeric HIV-1 glicoproteina gp140 immunogeni e nativo dell&#39;HIV-1 busta glicoproteine Visualizza lo stesso chiuso e aperto quaternarie architetture molecolari.

HIV-1&#x611F;&#x67D3;&#x306E;&#x6700;&#x521D;&#x306E;&#x30B9;&#x30C6;&#x30C3;&#x30D7;&#x306F;&#x3001;&#x4E09;&#x91CF;&#x4F53;HIV-1&#x30A8;&#x30F3;&#x30D9;&#x30ED;&#x30FC;&#x30D7;&#x7CD6;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#xFF08;ENV&#xFF09;&#x3001;&#x819C;&#x8CAB;&#x901A;&#x578B;&#x7CD6;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#xFF08;gp41&#x306E;&#xFF09;&#x306E;&#x30D8;&#x30C6;&#x30ED;&#x30C0;&#x30A4;&#x30DE;&#x30FC;&#x3068;&#x8868;&#x9762;&#x7CD6;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#xFF08;gp120&#x306E;&#xFF09;&#x3078;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x8868;&#x9762;&#x306E;CD4&#x306E;&#x7D50;&#x5408;&#x3067;&#x767A;&#x751F;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x7121;&#x50B7;&#x306E;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x3067;&#x89B3;&#x5BDF;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3082;&#x306E;&#x3068;&#x540C;&#x69D8;&#x306E;&#x69CB;&#x9020;&#x3068;&#x6A5F;&#x80FD;&#x306E;&#x30D7;&#x30ED;&#x30D1;&#x30C6;&#x30A3;&#x3092;&#x8868;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x4E09;&#x91CF;&#x4F53;Env&#x306E;&#x53EF;&#x6EB6;&#x6027;&#x30D0;&#x30FC;&#x30B8;&#x30E7;&#x30F3;&#x306E;&#x30C7;&#x30B6;&#x30A4;&#x30F3;&#x306F;&#x3001;HIV /&#x30A8;&#x30A4;&#x30BA;&#x306B;&#x5BFE;&#x3059;&#x308B;&#x30EF;&#x30AF;&#x30C1;&#x30F3;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x6709;&#x52B9;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3068;&#x8003;&#x3048;&#x3089;&#x308C;&#x308B;&#x514D;&#x75AB;&#x539F;&#x3092;&#x8A2D;&#x8A08;&#x306E;&#x89B3;&#x70B9;&#x304B;&#x3089;&#x975E;&#x5E38;&#x306B;&#x671B;&#x307E;&#x3057;&#x3044;&#x3002;&#x30B5;&#x30D6;&#x30DC;&#x30EA;&#x30E5;&#x30FC;&#x30E0;&#x306E;&#x5E73;&#x5747;&#x5316;&#x3068;&#x7D44;&#x307F;&#x5408;&#x308F;&#x305B;&#x3066;&#x4F4E;&#x6E29;&#x96FB;&#x5B50;&#x65AD;&#x5C64;&#x64AE;&#x5F71;&#x6CD5;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x4E09;&#x91CF;&#x4F53;HIV-1 Env&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x5916;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x306E;&#x5207;&#x65AD;&#x3055;&#x308C;&#x3001;&#x53EF;&#x6EB6;&#x5316;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x30D0;&#x30FC;&#x30B8;&#x30E7;&#x30F3;&#x3067;&#x3059;SOSIP gp140&#x4E09;&#x91CF;&#x4F53;&#x306E;&#x69CB;&#x9020;&#x3092;&#x5206;&#x6790;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x30EA;&#x30AC;&#x30F3;&#x30C9;&#x975E;&#x7D50;&#x5408;gp140&#x4E09;&#x91CF;&#x4F53;&#x306F;&#x305D;&#x306E;&#x307E;&#x307E;HIV-1&#x30D3;&#x30EA;&#x30AA;&#x30F3;&#x306E;&#x8868;&#x9762;&#x4E0A;&#x306E;&#x30EA;&#x30AC;&#x30F3;&#x30C9;&#x975E;&#x30CD;&#x30A4;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6;&#x30C8;&#x30EA;&#x30DE;&#x30FC;&#x3067;&#x8868;&#x793A;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x4F3C;&#x3066;&#x56DB;&#x914D;&#x7F6E;&#x3092;&#x63A1;&#x7528;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x53EF;&#x6EB6;&#x6027;CD4&#x3001;&#x305D;&#x306E;&#x30B1;&#x30E2;&#x30AB;&#x30A4;&#x30F3;&#x30EC;&#x30BB;&#x30D7;&#x30BF;&#x30FC;&#x7D50;&#x5408;&#x90E8;&#x4F4D;&#x3067;&#x306E;gp120&#x306B;&#x7D50;&#x5408;&#x3057;&#x305F;Fab 17B&#x3001;&#x3042;&#x308B;&#x3044;&#x306F;&#x305D;&#x306E;&#x4E21;&#x65B9;&#x53EF;&#x6EB6;&#x6027;CD4&#x304A;&#x3088;&#x3073;17b&#x306E;Fab&#x3068;&#x306E;&#x8907;&#x5408;&#x3059;&#x308B;&#x5834;&#x5408;&#x306F;&#x3001;gp140&#x4E09;&#x91CF;&#x4F53;&#x306F;&#x3001;&#x305D;&#x308C;&#x305E;&#x308C;&#x306E;gp120&#x306E;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C8;&#x30DE;&#x30FC;&#x306E;&#x5916;&#x5074;&#x306B;&#x56DE;&#x8EE2;&#x3068;&#x305A;&#x308C;&#x304C;&#x3042;&#x308B;&#x3068;&#x3057;&#x305F;&#x30AA;&#x30FC;&#x30D7;&#x30F3;&#x69CB;&#x9020;&#x3092;&#x8868;&#x793A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;&#x53EF;&#x6EB6;&#x6027;&#x4E09;&#x91CF;&#x4F53;&#x306E;&#x9589;&#x3058;&#x305F;&#x200B;&#x200B;&#x72B6;&#x614B;&#x3068;&#x958B;&#x3044;&#x305F;&#x30B3;&#x30F3;&#x30D5;&#x30A9;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;gp120&#x306E;&#x4E09;&#x91CF;&#x4F53;&#x306E;&#x5206;&#x5B50;&#x914D;&#x5217;&#x306F;&#x3001;&#x53EF;&#x6EB6;&#x6027;gp140&#x4E09;&#x91CF;&#x4F53;&#x3092;&#x78BA;&#x7ACB;&#x3057;&#x3001;&#x7121;&#x50B7;&#x306E;HIV-1&#x30D3;&#x30EA;&#x30AA;&#x30F3;&#x306E;BAL&#x3067;&#x4E09;&#x91CF;&#x4F53;gp120&#x306E;&#x3001;&#x305D;&#x308C;&#x305E;&#x308C;&#x3001;&#x9589;&#x3058;&#x305F;&#x72B6;&#x614B;&#x3068;&#x958B;&#x3044;&#x305F;&#x72B6;&#x614B;&#x3092;&#x89B3;&#x5BDF;&#x3057;&#x305F;&#x3082;&#x306E;&#x3068;&#x540C;&#x3058;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x30CD;&#x30A4;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6;&#x4E09;&#x91CF;&#x4F53;Env&#x306E;&#x3067;&#x8868;&#x793A;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x7B2C;&#x56DB;&#x7D1A;&#x30A2;&#x30F3;&#x30E2;&#x30CB;&#x30A6;&#x30E0;&#x69CB;&#x9020;&#x8EE2;&#x79FB;&#x3092;&#x6A21;&#x5023;&#x3059;&#x308B;&#x3088;&#x3046;&#x306B;&#x8A2D;&#x8A08;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x4E09;&#x91CF;&#x4F53;HIV-1&#x7CD6;Gp140&#x514D;&#x75AB;&#x539F;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x30CD;&#x30A4;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6;HIV-1&#x30A8;&#x30F3;&#x30D9;&#x30ED;&#x30FC;&#x30D7;&#x7CD6;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306F;&#x540C;&#x3058;&#x9589;&#x3058;&#x305F;&#x72B6;&#x614B;&#x3068;&#x958B;&#x3044;&#x305F;&#x7B2C;&#x56DB;&#x7D00;&#x306E;&#x5206;&#x5B50;&#x69CB;&#x9020;&#x3092;&#x8868;&#x793A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#xC5D0;&#xC774;&#xC988;-1 &#xAC10;&#xC5FC;&#xC758; &#xCD08;&#xAE30; &#xB2E8;&#xACC4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC138;&#xD3EC; &#xD45C;&#xBA74; CD4 trimeric V 1 &#xBD09;&#xD22C; glycoproteins (Env)&#xB97C; &#xB9C9; &#xD6A1;&#xB2E8; &#xB2F9;&#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; (gp41) &#xBC0F; &#xD45C;&#xBA74; &#xB2F9;&#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; (gp120) heterodimer&#xC758; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xC744; &#xBC1C;&#xC0DD;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xADF8;&#xB300;&#xB85C; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4;&#xC5D0; &#xAD00;&#xCC30; &#xB41C; &#xAC83;&#xACFC; &#xC720;&#xC0AC;&#xD55C; &#xAD6C;&#xC870; &#xBC0F; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC5D0; &#xD574;&#xB2F9; &#xD558;&#xB294; &#xC18D;&#xC131;&#xC744; &#xD45C;&#xC2DC; &#xD558;&#xB294; trimeric &#xD658;&#xACBD; &#xC218;&#xC6A9; &#xC131; &#xBC84;&#xC804;&#xC758; &#xB514;&#xC790;&#xC778; immunogens HIV/&#xC5D0;&#xC774;&#xC988;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xBC31;&#xC2E0;&#xC73C;&#xB85C; &#xD6A8;&#xACFC;&#xC801;&#xC77C; &#xC218; &#xC788;&#xB294; &#xB514;&#xC790;&#xC778;&#xC758; &#xAD00;&#xC810;&#xC5D0;&#xC11C; &#xB9E4;&#xC6B0; &#xBC14;&#xB78C;&#xC9C1;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xD3C9;&#xADE0; subvolume&#xC640; &#xD568;&#xAED8; cryoelectron &#xB2E8;&#xCE35; &#xCD2C;&#xC601;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xD2B9;&#xD788;, trimeric V 1 &#xD658;&#xACBD;&#xC744; ectodomain&#xC758; &#xBC84;&#xC804; solubilized SOSIP gp140 trimers&#xC758; &#xAD6C;&#xC870;&#xB97C; &#xBD84;&#xC11D; &#xD588;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC; unliganded gp140 trimers &#xCC44;&#xD0DD; &#xC81C; &#xC0AC;&#xAE30; &#xBC30;&#xC5F4;&#xC744; &#xADF8;&#xB300;&#xB85C; HIV-1 virions&#xC758; &#xD45C;&#xBA74;&#xC5D0; &#xB124;&#xC774;&#xD2F0;&#xBE0C; unliganded trimers&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xD45C;&#xC2DC;&#xC640; &#xBE44;&#xC2B7;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xBCF4;&#xC5EC; &#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC218;&#xC6A9; &#xC131; CD4, &#xC790;&#xC0AC;&#xC758; chemokine coreceptor &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8;, &#xB610;&#xB294; &#xBAA8;&#xB450; &#xC218;&#xC6A9; &#xC131; c d 4&#xC5D0;&#xB294; gp120 &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xD339; 17b&#xC640; 17b &#xD339; complexed gp140 trimers&#xC5D0;&#xB294; &#xBC14;&#xAE65;&#xCABD;&#xC73C;&#xB85C; &#xD68C;&#xC804; &#xBC0F; &#xBCC0;&#xC704; &#xAC01; gp120 protomer&#xC758; &#xC624;&#xD508; &#xD615;&#xD0DC; &#xD45C;&#xC2DC;. &#xC6B0;&#xB9AC; gp120 &#xB179;&#xB294; &#xD2B8;&#xB9AC;&#xBA38;&#xC758; &#xD3D0;&#xC1C4; &#xBC0F; &#xC624;&#xD508; conformations&#xC5D0;&#xC11C; trimers&#xC640; &#xB3D9;&#xC77C; &#xADF8;&#xB300;&#xB85C; HIV-1 &#xBCA8; virions&#xC5D0; trimeric gp120&#xC758; &#xAC01;&#xAC01; &#xD3D0;&#xC1C4; &#xBC0F; &#xC624;&#xD508; &#xC0C1;&#xD0DC;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xAD00;&#xCC30; &#xC124;&#xC815; &#xD558;&#xB294; &#xC218;&#xC6A9; &#xC131; gp140 trimers &#xC81C; &#xC0AC;&#xAE30; &#xAD6C;&#xC870; &#xC804;&#xD658; &#xBAA8;&#xBC29; &#xD558;&#xB3C4;&#xB85D; &#xB514;&#xC790;&#xC778;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;&#xC758; &#xBD84;&#xC790; &#xBC30;&#xC5F4;&#xC744; &#xB124;&#xC774;&#xD2F0;&#xBE0C; trimeric &#xD658;&#xACBD;&#xC744; &#xD558; &#xC5EC; &#xD45C;&#xC2DC; &#xC124;&#xBA85;.

Trimeric V 1 &#xB2F9;&#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; gp140 immunogens &#xBC0F; &#xB124;&#xC774;&#xD2F0;&#xBE0C; HIV 1 &#xBD09;&#xD22C; glycoproteins &#xAC19;&#xC740; &#xD3D0;&#xC1C4; &#xD45C;&#xC2DC; &#xC81C; &#xC0AC;&#xAE30; &#xBD84;&#xC790; &#xAD6C;&#xC870;&#xB97C; &#xC5FD;&#xB2C8;&#xB2E4;.

El paso inicial en la infecci&#xF3;n por VIH-1 se produce con la uni&#xF3;n de CD4 de la superficie celular a trim&#xE9;ricas glucoprote&#xED;nas del VIH-1 envoltura (ENV), un heterod&#xED;mero de una glicoprote&#xED;na transmembrana (gp41) y una glicoprote&#xED;na de superficie (gp120). El dise&#xF1;o de las versiones solubles de trim&#xE9;rica Env que mostrar las propiedades estructurales y funcionales similares a los observados en los virus intactos es muy deseable desde el punto de vista de dise&#xF1;ar inmun&#xF3;genos que podr&#xED;an ser eficaces como vacunas contra el VIH / SIDA. Usando la tomograf&#xED;a criomicroscop&#xED;a electr&#xF3;nica combinada con un promedio de volumen secundario, hemos analizado la estructura de la gp140 SOSIP tr&#xED;meros, que son versiones troceados, solubilizados de la ectodominio de trim&#xE9;rica Env del VIH-1. Se demuestra que unliganded gp140 tr&#xED;meros adoptar una disposici&#xF3;n similar a cuaternario que aparece por nativos tr&#xED;meros unliganded en la superficie de intactas VIH-1 viriones. Cuando complejado con CD4 soluble, Fab 17b, que se une a la gp120 en su sitio correceptor quimioquinas uni&#xF3;n, o ambos CD4 soluble y Fab 17b, la gp140 tr&#xED;meros mostrar una conformaci&#xF3;n abierta en la que hay una rotaci&#xF3;n hacia afuera y el desplazamiento de cada prot&#xF3;mero gp120. Se demuestra que los mecanismos moleculares de gp120 tr&#xED;meros en las conformaciones cerradas y abiertas del tr&#xED;mero solubles son los mismos que los observados para los estados abiertos y cerrados, respectivamente, de la gp120 trim&#xE9;rica sobre intactas viriones de VIH-1 BAL, se establece que los solubles gp140 tr&#xED;meros puede ser dise&#xF1;ado para simular las transiciones cuaternario estructurales de trim&#xE9;rica nativo Env.

Trim&#xE9;rica del VIH-1 glicoprote&#xED;na gp140 inmun&#xF3;genos nativos y glucoprote&#xED;nas del VIH-1 sobre de mostrar la misma abiertas y cerradas arquitecturas moleculares del Cuaternario

Le punte di glicoproteina (Env) trimeric busta visualizzate sulla superficie del virus dell&#39;immunodeficienza delle scimmie (SIV) e virus dell&#39;immunodeficienza umana di tipo 1 (HIV-1) virioni sono composte da tre eterodimeri di glicoproteine virali gp120 e gp41. Anche se il legame di gp120 di cellule CD4 superficiale e un recettore delle chemochine &egrave; noto per provocare alterazioni conformazionali gp120 e gp41, cambiamenti nella struttura quaternaria di trimero solo di recente sono state chiarite. Per isolare il BaL di HIV-1, CD4 attaccamento provoca un riarrangiamento colpisce il trimero da un &quot;chiuso&quot; ad una conformazione &quot;aperta&quot;. L&#39;effetto di CD4 su trimeri SIV, tuttavia, non &egrave; stata descritta. Utilizzando la tomografia cryo-elettrone, ora abbiamo determinato architetture molecolari del CD4 solubile (sCD4)-Stati di SIV Env trimeri per tre diversi ceppi (SIVmneE11S, SIVmac239 e SIV CP-MAC) legati. In netto contrasto con l&#39;HIV-1 BaL, SIVmneE11S e SIVmac239 Env ha mostrato solo lievi cambiamenti conformazionali seguendo sCD4 associazione. In SIV CP-MAC, dove Env trimeric Visualizza una conformazione costitutivamente &quot;aperta&quot; simile a quello visto per Env di HIV-1 BaL nello stato sCD4-complessato, ci mostra che non ci sono cambiamenti significativi ulteriori nella conformazione dell&#39;associazione del sCD4 o 7 3 anticorpo. Le mappe di densit&agrave; mostrano anche che gli anticorpi 3 7 e 17b target epitopi su gp120 che sono su lati opposti del sito Associazione coreceptor. Questi risultati forniscono nuove intuizioni della diversit&agrave; strutturale di SIV Env e mostrano che ci sono dipendenti dal ceppo variazioni nell&#39;orientamento di sCD4 associato a trimeric SIV Env.

Strutture tridimensionali degli Stati associati a CD4 solubili di glicoproteine di busta del virus dell&#39;immunodeficienza delle scimmie trimeric determinate mediante tomografia computerizzata cryo-elettrone.

&#x663E;&#x793A;&#x5728;&#x4E09;&#x8054;&#x7684;&#x4FE1;&#x5C01;&#x7CD6;&#x86CB;&#x767D; (Env) &#x5CF0;&#x503C;&#x7334;&#x514D;&#x75AB;&#x7F3A;&#x9677;&#x75C5;&#x6BD2; (SIV) &#x548C;&#x4EBA;&#x7C7B;&#x514D;&#x75AB;&#x7F3A;&#x9677;&#x75C5;&#x6BD2;&#x7C7B;&#x578B;&#x7684;&#x66F2;&#x9762;&#x4E0A; 1 &#xFF08;&#x827E;&#x6ECB;&#x75C5;&#x6BD2;-1&#xFF09; virions &#x7531;&#x7EC4;&#x6210;&#x4E09;&#x4E2A; heterodimers &#x7684;&#x75C5;&#x6BD2;&#x7CD6;&#x86CB;&#x767D; gp120 &#x548C; gp41&#x3002;&#x867D;&#x7136; gp120 &#x7ED1;&#x5B9A;&#x4EE5;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8868;&#x9762;&#x7684; CD4 &#x548C;&#x8D8B;&#x5316;&#x56E0;&#x5B50;&#x53D7;&#x4F53;&#x5DF2;&#x77E5;&#x5F81;&#x6C42; gp120 &#x548C; gp41 &#x7684;&#x6784;&#x8C61;&#x53D8;&#x5316;&#xFF0C;&#x53EA;&#x662F;&#x6700;&#x8FD1;&#x624D;&#x9610;&#x660E;&#x7B2C;&#x56DB;&#x7EAA;&#x7684;&#x4E09;&#x805A;&#x4F53;&#x7ED3;&#x6784;&#x7684;&#x53D8;&#x5316;&#x3002;&#x56E0;&#x4E3A;&#x827E;&#x6ECB;&#x75C5;&#x6BD2; 1 BaL &#x9694;&#x79BB;&#xFF0C;CD4 &#x9644;&#x4EF6;&#x7ED3;&#x679C;&#x60CA;&#x4EBA;&#x91CD;&#x6392;&#x53CD;&#x5E94;&#x4ECE;&quot;&#x5C01;&#x95ED;&quot;&#x5230;&quot;&#x5F00;&#x653E;&quot;&#x6784;&#x8C61;&#x4E09;&#x805A;&#x4F53;&#x3002;&#x7136;&#x800C;&#xFF0C;&#x5BF9; SIV&#xFF0C;&#x4E09;&#x805A;&#x4F53;&#x7684; CD4 &#x5F71;&#x54CD;&#x4E0D;&#x88AB;&#x63CF;&#x8FF0;&#x3002;&#x4F7F;&#x7528;&#x4F4E;&#x6E29;&#x7535;&#x5B50;&#x65AD;&#x5C42;&#x626B;&#x63CF;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x73B0;&#x5728;&#x5DF2;&#x7ECF;&#x786E;&#x5B9A;&#x7684;&#x53EF;&#x6EB6;&#x6027; CD4 &#x5206;&#x5B50;&#x4F53;&#x7CFB;&#x7ED3;&#x6784; (sCD4)-&#x7ED1;&#x5B9A;&#x7684; SIV Env &#x4E09;&#x805A;&#x4F53;&#x4E3A;&#x4E09;&#x4E2A;&#x4E0D;&#x540C;&#x54C1;&#x7CFB; &#xFF08;SIVmneE11S&#xFF0C;SIVmac239 &#x548C; SIV CP MAC&#xFF09; &#x7684;&#x56FD;&#x5BB6;&#x3002;&#x4E0E;&#x827E;&#x6ECB;&#x75C5;&#x6BD2; 1 &#x535A;&#x8054;&#x516C;&#x53F8;&#x5F62;&#x6210;&#x4E86;&#x9C9C;&#x660E;&#x7684;&#x5BF9;&#x6BD4;&#xFF0C;SIVmneE11S &#x548C; SIVmac239 Env &#x8868;&#x660E;&#x53EA;&#x6709;&#x8F7B;&#x5FAE;&#x7684;&#x6784;&#x8C61;&#x53D8;&#x5316;&#x540E; sCD4 &#x7ED1;&#x5B9A;&#x3002;&#x5728; SIV CP-MAC&#xFF0C;&#x4E09;&#x8054; Env &#x4E00;&quot;&#x5F00;&#x653E;&quot;&#x6784;&#x8C61;&#x7C7B;&#x4F3C;&#x4E8E;&#x89C1; Hiv-1 BaL sCD4 &#x7EDC;&#x5408;&#x72B6;&#x6001;&#x7684;&#x663E;&#x793A;&#x4F4D;&#x7F6E;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x663E;&#x793A;&#x7684; sCD4 &#x6216; 7 3 &#x7ED1;&#x5B9A;&#x540E;&#x6784;&#x8C61;&#x6709;&#x6CA1;&#x6709;&#x53D1;&#x751F;&#x91CD;&#x5927;&#x7684;&#x8FDB;&#x4E00;&#x6B65;&#x53D8;&#x5316;&#x6297;&#x4F53;&#x3002;&#x5BC6;&#x5EA6;&#x56FE;&#x8FD8;&#x663E;&#x793A; 7 3 &#x548C; 17b &#x6297;&#x4F53;&#x9488;&#x5BF9;&#x6297;&#x539F;&#x8868;&#x4F4D;&#x5728; gp120 &#x5BF9;&#x7ACB;&#x53CC;&#x65B9;&#x7684; hiv &#x611F;&#x67D3;&#x6291;&#x5236;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x7AD9;&#x70B9;&#x4E0A;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7ED3;&#x679C;&#x63D0;&#x4F9B;&#x65B0;&#x7684;&#x89C1;&#x89E3;&#x7684; SIV Env &#x7ED3;&#x6784;&#x7684;&#x591A;&#x6837;&#x6027;&#xFF0C;&#x5E76;&#x663E;&#x793A;&#x6709;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x5230;&#x4E09;&#x8054; SIV Env sCD4 &#x7684;&#x65B9;&#x5411;&#x4F9D;&#x8D56;&#x5E94;&#x53D8;&#x7684;&#x53D8;&#x5316;&#x3002;

&#x53EF;&#x6EB6;&#x6027; CD4 &#x7ED1;&#x5B9A;&#x56FD;&#x5BB6;&#x7684;&#x4F7F;&#x7528;&#x4F4E;&#x6E29;&#x7535;&#x5B50;&#x65AD;&#x5C42;&#x626B;&#x63CF;&#x786E;&#x5B9A;&#x7684;&#x4E09;&#x8054;&#x7334;&#x514D;&#x75AB;&#x7F3A;&#x9677;&#x75C5;&#x6BD2;&#x5305;&#x819C;&#x7CD6;&#x86CB;&#x767D;&#x7684;&#x4E09;&#x7EF4;&#x7ED3;&#x6784;&#x3002;

The trimeric envelope glycoprotein (Env) spikes displayed on the surfaces of simian immunodeficiency virus (SIV) and human immunodeficiency virus type 1 (HIV-1) virions are composed of three heterodimers of the viral glycoproteins gp120 and gp41. Although binding of gp120 to cell surface CD4 and a chemokine receptor is known to elicit conformational changes in gp120 and gp41, changes in quaternary structure of the trimer have only recently been elucidated. For the HIV-1 BaL isolate, CD4 attachment results in a striking rearrangement of the trimer from a "closed" to an "open" conformation. The effect of CD4 on SIV trimers, however, has not been described. Using cryo-electron tomography, we have now determined molecular architectures of the soluble CD4 (sCD4)-bound states of SIV Env trimers for three different strains (SIVmneE11S, SIVmac239, and SIV CP-MAC). In marked contrast to HIV-1 BaL, SIVmneE11S and SIVmac239 Env showed only minor conformational changes following sCD4 binding. In SIV CP-MAC, where trimeric Env displays a constitutively "open" conformation similar to that seen for HIV-1 BaL Env in the sCD4-complexed state, we show that there are no significant further changes in conformation upon the binding of either sCD4 or 7D3 antibody. The density maps also show that 7D3 and 17b antibodies target epitopes on gp120 that are on opposites sides of the coreceptor binding site. These results provide new insights into the structural diversity of SIV Env and show that there are strain-dependent variations in the orientation of sCD4 bound to trimeric SIV Env.

Three-dimensional structures of soluble CD4-bound states of trimeric simian immunodeficiency virus envelope glycoproteins determined by using cryo-electron tomography.

Les trim&#xE8;res d&#x26;#39;enveloppe glycoprot&#xE9;ine (Env) pointes affich&#xE9;e sur les surfaces des virus de l&#x26;#39;immunod&#xE9;ficience simienne (SIV) et humaine de type virus de l&#x26;#39;immunod&#xE9;ficience 1 (VIH-1) virions sont compos&#xE9;s de trois h&#xE9;t&#xE9;rodim&#xE8;res des glycoprot&#xE9;ines virales gp120 et gp41. Bien que la liaison de la gp120 au CD4 de la surface cellulaire et un r&#xE9;cepteur de chimiokine est connu pour induire des changements conformationnels dans la gp120 et gp41, changements dans la structure quaternaire de la trim&#xE8;re n&#x26;#39;ont que r&#xE9;cemment &#xE9;t&#xE9; &#xE9;lucid&#xE9;. Pour le VIH-1 BaL isoler, les r&#xE9;sultats de CD4 de fixation dans un r&#xE9;arrangement de frappe du trim&#xE8;re d&#x26;#39;un &#xAB;ferm&#xE9;&#xBB; &#xE0; une conformation &#xAB;ouverte&#xBB;. L&#x26;#39;effet de CD4 sur trim&#xE8;res SIV, cependant, n&#x26;#39;a pas &#xE9;t&#xE9; d&#xE9;crite. Utilisation de la tomographie cryo-&#xE9;lectronique, nous avons maintenant d&#xE9;termin&#xE9; architectures mol&#xE9;culaires des CD4 soluble (sCD4) des &#xE9;tats li&#xE9;s de trim&#xE8;res Env SIV pour trois souches diff&#xE9;rentes (SIVmneE11S, SIVmac239, et SIV CP-MAC). En contraste marqu&#xE9; avec le VIH-1 Bal, SIVmneE11S et SIVmac239 Env montr&#xE9; que de faibles changements conformationnels qui suivent sCD4 contraignant. En SIV CP-MAC, o&#xF9; trim&#xE9;rique Env affiche un constitutivement conformation &#xAB;ouverte&#xBB; similaire &#xE0; celui observ&#xE9; pour le VIH-1 BaL Env dans l&#x26;#39;&#xE9;tat sCD4 complex&#xE9;, nous montrons qu&#x26;#39;il n&#x26;#39;y a pas d&#x26;#39;autres changements importants dans la conformation sur la liaison de l&#x26;#39;une des sCD4 ou 7D3 anticorps. Les cartes de densit&#xE9; montrent &#xE9;galement que 7D3 et 17b &#xE9;pitopes cibles des anticorps sur la gp120 qui sont sur les c&#xF4;t&#xE9;s oppos&#xE9;s du site cor&#xE9;cepteur contraignant. Ces r&#xE9;sultats fournissent de nouveaux aper&#xE7;us sur la diversit&#xE9; structurelle des SIV Env et de montrer qu&#x26;#39;il ya souche-d&#xE9;pendants des variations de l&#x26;#39;orientation de sCD4 li&#xE9;s &#xE0; trim&#xE9;rique SIV Env.

Les structures tridimensionnelles de CD4 soluble assortis &#xC9;tats de trim&#xE8;res de l&#x26;#39;immunod&#xE9;ficience simienne glycoprot&#xE9;ines d&#x26;#39;enveloppe de virus d&#xE9;termin&#xE9;e en utilisant microscopie cryo-&#xE9;lectronique

Die Trimere Umschlag Glykoprotein (Env) Spikes angezeigt auf den Oberfl&auml;chen der Simianes Immundefizienz-Virus (SIV) und humanen Immundefizienz-Virustyp 1 (HIV-1) Virionen bestehen aus drei Heterodimere der viralen Glykoproteinen gp120 und gp41. Bindung von gp120 an CD4 Oberfl&auml;che und ein Chemokin-Rezeptor Zellen zu Konformationsver&auml;nderungen in gp120 und gp41 entlocken bekannt, haben &Auml;nderungen in quart&auml;ren das Trimer erst k&uuml;rzlich gekl&auml;rt. F&uuml;r die HIV-1-BaL zu isolieren, f&uuml;hrt eine auffallende Neuordnung der Trimer aus einer &quot;geschlossenen&quot; zu einer &quot;offenen&quot; Konformation CD4-Anlage. Die Wirkung von CD4 auf SIV Trimere, wurde jedoch nicht beschrieben. Mit Cryo-Elektron Tomographie, wir haben jetzt bestimmt Molekulare Architekturen von l&ouml;slichen CD4 (sCD4)-Staaten von SIV Env Trimere f&uuml;r drei verschiedene St&auml;mme (SIVmneE11S, SIVmac239 und SIV CP-MAC) gebunden. Im Gegensatz zu HIV-1-BaL zeigte SIVmneE11S und SIVmac239 Env nur geringf&uuml;gige Konformationsver&auml;nderungen nach sCD4 Bindung. In SIV CP-MAC, wo Trimere Env eine konstitutiv &quot;offene&quot; f&uuml;r HIV-1 BaL Env im sCD4-komplexiert Zustand &auml;hnlich Konformation zeigt, wir zeigen, dass in Konformation auf die Bindung von sCD4 oder 7 3 gibt es keine weiteren wesentlichen &Auml;nderungen Antik&ouml;rper. Die Dichte-Karten zeigen auch, dass 7 3 und 17 b Antik&ouml;rper Ziel Epitopes auf gp120, die sich auf Gegens&auml;tze Seiten des Coreceptor-Bindungsstelle. Diese Ergebnisse erlauben neue Einblicke in die strukturelle Vielfalt der SIV Env und zeigen, dass es Stamm-abh&auml;ngige Unterschiede in der Ausrichtung des sCD4 an Trimere SIV Env gebunden.

Dreidimensionale Strukturen der l&ouml;slichen CD4-gebundenen Staaten Trimere Simianes Immundefizienz-Virus Umschlag Glykoproteine mit Cryo-Elektron Tomographie ermittelt.

&#x30B5;&#x30EB;&#x514D;&#x75AB;&#x4E0D;&#x5168;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x306E;&#x8868;&#x9762;&#x306B;&#x8868;&#x793A;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x4E09;&#x91CF;&#x4F53;&#x306E;&#x30A8;&#x30F3;&#x30D9;&#x30ED;&#x30FC;&#x30D7;&#x7CD6;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#xFF08;Env&#xFF09;&#x306E;&#x30B9;&#x30D1;&#x30A4;&#x30AF;&#xFF08;SIV&#xFF09;&#x3068;&#x30D2;&#x30C8;&#x514D;&#x75AB;&#x4E0D;&#x5168;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;1&#x578B;&#xFF08;HIV-1&#xFF09;&#x30D3;&#x30EA;&#x30AA;&#x30F3;&#x3001;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x7CD6;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;gp120&#x304A;&#x3088;&#x3073;gp41&#x306E;3&#x30D8;&#x30C6;&#x30ED;&#x3067;&#x69CB;&#x6210;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002; gp120&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x8868;&#x9762;&#x306E;CD4&#x3068;&#x30B1;&#x30E2;&#x30AB;&#x30A4;&#x30F3;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x3078;&#x306E;&#x7D50;&#x5408;&#x304C;gp120&#x304A;&#x3088;&#x3073;gp41&#x306E;&#x7ACB;&#x4F53;&#x69CB;&#x9020;&#x5909;&#x5316;&#x3092;&#x8A98;&#x767A;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x77E5;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x304C;&#x3001;&#x4E09;&#x91CF;&#x4F53;&#x306E;&#x56DB;&#x6B21;&#x69CB;&#x9020;&#x306E;&#x5909;&#x5316;&#x306F;&#x3054;&#x304F;&#x6700;&#x8FD1;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002; HIV-1 BAL&#x306E;&#x5834;&#x5408;&#x306F;&#x3001; &#x26;quot;&#x958B;&#x3044;&#x305F;&#x26;quot;&#x30B3;&#x30F3;&#x30D5;&#x30A9;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x306B; &#x26;quot;&#x9589;&#x26;quot;&#x304B;&#x3089;&#x4E09;&#x91CF;&#x4F53;&#x306E;&#x9855;&#x8457;&#x306A;&#x8EE2;&#x4F4D;&#x3067;CD4&#x6DFB;&#x4ED8;&#x30D5;&#x30A1;&#x30A4;&#x30EB;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x3092;&#x5206;&#x96E2;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002; SIV&#x30C8;&#x30EA;&#x30DE;&#x30FC;&#x3067;CD4&#x306E;&#x52B9;&#x679C;&#x306F;&#x3001;&#x3057;&#x304B;&#x3057;&#x3001;&#x8A18;&#x8F09;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x306A;&#x3044;&#x3002;&#x4F4E;&#x6E29;&#x96FB;&#x5B50;&#x65AD;&#x5C64;&#x64AE;&#x5F71;&#x6CD5;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x4ECA;&#x3001;&#x53EF;&#x6EB6;&#x6027;CD4&#xFF08;sCD4&#xFF09;&#x30D0;&#x30A6;&#x30F3;&#x30C9;&#x3064;&#x306E;&#x7570;&#x306A;&#x308B;&#x682A;&#xFF08;SIVmneE11S&#x3001;SIVmac239&#x3001;&#x53CA;&#x3073;SIV CP-MAC&#xFF09;&#x306E;SIV&#x306E;Env&#x4E09;&#x91CF;&#x4F53;&#x306E;&#x72B6;&#x614B;&#x306E;&#x5206;&#x5B50;&#x69CB;&#x9020;&#x3092;&#x6C7A;&#x5B9A;&#x3057;&#x305F;&#x3002; HIV-1 BAL&#x3001;SIVmneE11S&#x3068;SIVmac239 env&#x306B;&#x30DE;&#x30FC;&#x30AF;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x5BFE;&#x7167;&#x7684;&#x306B;sCD4&#x7D50;&#x5408;&#x5F8C;&#x306E;&#x308F;&#x305A;&#x304B;&#x306A;&#x30B3;&#x30F3;&#x30D5;&#x30A9;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x5909;&#x5316;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x4E09;&#x91CF;&#x4F53;env&#x304C;sCD4-&#x8907;&#x5408;&#x72B6;&#x614B;&#x306E;env HIV-1 BAL&#x3067;&#x898B;&#x3089;&#x308C;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3069;&#x3061;&#x3089;sCD4&#x306E;&#x7D50;&#x5408;&#x6642;&#x306B;&#x30B3;&#x30F3;&#x30D5;&#x30A9;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x306B;&#x6709;&#x610F;&#x3055;&#x3089;&#x306A;&#x308B;&#x5909;&#x5316;&#x304C;&#x306A;&#x3044;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3059;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x4F3C;&#x3066;&#x6052;&#x5E38;&#x7684;&#x306B; &#x26;quot;&#x30AA;&#x30FC;&#x30D7;&#x30F3;&#x26;quot;&#x30B3;&#x30F3;&#x30D5;&#x30A9;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x304C;&#x8868;&#x793A;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;SIV CP-MAC&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x6297;&#x4F53;7D3&#x3002;&#x5BC6;&#x5EA6;&#x30DE;&#x30C3;&#x30D7;&#x306F;&#x3001;&#x30EC;&#x30BB;&#x30D7;&#x30BF;&#x30FC;&#x7D50;&#x5408;&#x90E8;&#x4F4D;&#x306E;&#x53CD;&#x5BFE;&#x5074;&#x306B;&#x3042;&#x308B;gp120&#x306E;&#x4E0A;&#x3067;&#x305D;&#x306E;7D3&#x304A;&#x3088;&#x3073;17b&#x6297;&#x4F53;&#x6A19;&#x7684;&#x30A8;&#x30D4;&#x30C8;&#x30FC;&#x30D7;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x306F;&#x3001;SIV Env&#x306E;&#x69CB;&#x9020;&#x306E;&#x591A;&#x69D8;&#x6027;&#x306B;&#x65B0;&#x305F;&#x306A;&#x6D1E;&#x5BDF;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3057;&#x3001;&#x4E09;&#x91CF;&#x4F53;SIV Env&#x306E;&#x306B;&#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C9;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;sCD4&#x306E;&#x5411;&#x304D;&#x306E;&#x6B6A;&#x307F;&#x4F9D;&#x5B58;&#x6027;&#x306E;&#x30D0;&#x30EA;&#x30A8;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x304C;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;

&#x30AF;&#x30E9;&#x30A4;&#x30AA;&#x96FB;&#x5B50;&#x7DDA;&#x30C8;&#x30E2;&#x30B0;&#x30E9;&#x30D5;&#x30A3;&#x30FC;&#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x3066;&#x6C7A;&#x5B9A;&#x4E09;&#x91CF;&#x4F53;&#x30B5;&#x30EB;&#x514D;&#x75AB;&#x4E0D;&#x5168;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x30A8;&#x30F3;&#x30D9;&#x30ED;&#x30FC;&#x30D7;&#x7CD6;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x53EF;&#x6EB6;&#x6027;CD4&#x306B;&#x7D50;&#x5408;&#x3057;&#x305F;&#x7C73;&#x56FD;&#x306E;&#x4E09;&#x6B21;&#x5143;&#x69CB;&#x9020;

&#xD45C;&#xC2DC; &#xB41C; trimeric &#xBD09;&#xD22C; &#xB2F9;&#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; (Env) &#xC2A4;&#xD30C;&#xC774;&#xD06C; &#xC720;&#xC778;&#xC6D0; &#xBA74;&#xC5ED; &#xACB0;&#xD54D; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; (SIV)&#xC640; &#xC778;&#xAC04; &#xBA74;&#xC5ED; &#xACB0;&#xD54D; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; &#xC885;&#xB958;&#xC758; &#xD45C;&#xBA74;&#xC5D0; 1 (hiv-1) virions &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; &#xC131; glycoproteins gp120&#xC640; gp41 3 heterodimers &#xAD6C;&#xC131; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xBC14;&#xC778;&#xB529; gp120&#xC758; &#xC138;&#xD3EC; &#xD45C;&#xBA74; CD4 &#xBC0F; chemokine &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4;&#xC5D0;&#xB294; gp120&#xC640; gp41&#xC758; &#xAD6C;&#xC870;&#xC801; &#xBCC0;&#xD654;&#xB97C; &#xC720;&#xB3C4; &#xD558; &#xBE44;&#xB85D;, &#xC81C; &#xC0AC;&#xAE30; &#xAD6C;&#xC870;&#xB294; &#xD2B8;&#xB9AC;&#xBA38;&#xC758; &#xD574;&#xBA85; &#xCD5C;&#xADFC;&#xC5D0; &#xAC83;. HIV 1 &#xBC1C; &#xACA9;&#xB9AC;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; CD4 &#xCCA8;&#xBD80; &#xD30C;&#xC77C;&#xC5D0;&#xC11C; &quot;&#xD3D0;&#xC1C4;&quot;&#xB97C; &quot;&#xC5F4;&#xAE30;&quot; &#xB098; &#xB780; &#xD2B8;&#xB9AC;&#xBA38;&#xC758; &#xB208;&#xC5D0; &#xB744;&#xB294; &#xC7AC;&#xBC30;&#xCE58; &#xBC1C;&#xC0DD; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098; SIV trimers&#xC5D0; c d 4&#xC758; &#xC601;&#xD5A5; &#xD558;&#xC9C0; &#xC124;&#xBA85; &#xD558;&#xACE0;&#xC788;&#xB2E4;. &#xACF3;&#xC744; &#xC54C;&#xC544;&#xB0B4;&#xB294;-&#xC804;&#xC790; &#xB2E8;&#xCE35; &#xCD2C;&#xC601;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xC9C0;&#xAE08; &#xACB0;&#xC815; &#xC218;&#xC6A9; &#xC131; c d 4&#xC758; &#xBD84;&#xC790; &#xAD6C;&#xC870; (sCD4)-&#xC138; &#xAC00;&#xC9C0; &#xBCC0;&#xC885; (SIVmneE11S, SIVmac239, &#xBC0F; SIV CP &#xB9E5;)&#xC758; SIV &#xD658;&#xACBD;&#xC744; trimers&#xC758; &#xC0C1;&#xD0DC; &#xBC14;&#xC6B4;&#xB4DC;. &#xC5D0;&#xC774;&#xC988;-1 &#xBCA8;&#xC5D0; &#xD45C;&#xC2DC; &#xB41C; &#xBC18;&#xBA74;, Sivmnee11s&#xC640; SIVmac239 &#xD658;&#xACBD;&#xC744; sCD4 &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xB2E4;&#xC74C;&#xB9CC; &#xC0AC;&#xC18C;&#xD55C; &#xAD6C;&#xC870;&#xC801; &#xBCC0;&#xD654; &#xD588;&#xB2E4;. SIV CP-&#xB9E5;&#xC5D0; &#xD558; trimeric &#xD658;&#xACBD;&#xC744; &#xD45C;&#xC2DC; constitutively &quot;&#xC5F4;&#xAE30;&quot; &#xB098; &#xB780; sCD4 complexed &#xC0C1;&#xD0DC;&#xC5D0; &#xC788;&#xB294; &#xC5D0;&#xC774;&#xC988;-1 &#xBC1C; &#xD658;&#xACBD;&#xC744; &#xC704;&#xD574; &#xBCF8; &#xBE44;&#xC2B7;&#xD55C; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; sCD4 &#xB610;&#xB294; 7D 3&#xC758; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xC5D0; &#xB530;&#xB77C; &#xB098; &#xB780;&#xC5D0; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xCD94;&#xAC00; &#xBCC0;&#xACBD; &#xC1FC; &#xD56D; &#xCCB4;. &#xBC00;&#xB3C4; &#xC9C0;&#xB3C4; &#xB610;&#xD55C; 7D 3, 17b &#xD56D; &#xCCB4; coreceptor &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8;&#xC758; &#xC5B4;&#xB290; &#xCABD; &#xCE21;&#xBA74;&#xC5D0;&#xB294; gp120&#xC5D0; epitopes &#xB300;&#xC0C1; &#xBCF4;&#xC5EC; &#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xACB0;&#xACFC; SIV &#xD658;&#xACBD;&#xC744; &#xAD6C;&#xC870;&#xC801; &#xB2E4;&#xC591;&#xC131;&#xC5D0; &#xC0C8;&#xB85C;&#xC6B4; &#xD1B5;&#xCC30;&#xB825;&#xC744; &#xC81C;&#xACF5; &#xD558; &#xACE0; sCD4 trimeric SIV &#xD658;&#xACBD;&#xC744; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xD560; &#xBC29;&#xD5A5;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC2A4;&#xD2B8;&#xB808;&#xC778;&#xC5D0; &#xC885;&#xC18D;&#xC801;&#xC778; &#xBCC0;&#xD654;&#xB294; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC900;&#xB2E4;.

&#xC218;&#xC6A9; &#xC131; CD4 &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xB41C; &#xC0C1;&#xD0DC; trimeric &#xC720;&#xC778;&#xC6D0; &#xBA74;&#xC5ED; &#xACB0;&#xD54D; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; &#xBD09;&#xD22C; glycoproteins &#xACF3;&#xC744; &#xC54C;&#xC544;&#xB0B4;&#xB294;-&#xC804;&#xC790; &#xB2E8;&#xCE35; &#xCD2C;&#xC601;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xACB0;&#xC815;&#xC758; 3 &#xCC28;&#xC6D0; &#xAD6C;&#xC870;.

Los trim&#xE9;ricas envoltura glicoprote&#xED;na (Env) espigas muestra en las superficies de virus de inmunodeficiencia de simios (SIV) y virus de inmunodeficiencia humana tipo 1 (VIH-1) viriones se componen de tres heterod&#xED;meros de las glicoprote&#xED;nas virales gp120 y gp41. Aunque la uni&#xF3;n de gp120 a CD4 de la superficie celular y un receptor de quimioquinas se conoce para provocar cambios conformacionales en la gp120 y gp41, cambios en la estructura cuaternaria de la tr&#xED;mero s&#xF3;lo recientemente se han dilucidado. Para el VIH-1 BaL aislar, los resultados de CD4 de fijaci&#xF3;n en una reordenaci&#xF3;n notable de la trimer de una &#x26;quot;cerrada&#x26;quot; a una &#x26;quot;abierta&#x26;quot; la conformaci&#xF3;n. El efecto de CD4 en tr&#xED;meros SIV, sin embargo, no se ha descrito. Uso de la crio-tomograf&#xED;a electr&#xF3;nica, hemos determinado arquitecturas moleculares de los CD4 soluble (sCD4) enlazados a los estados de SIV tr&#xED;meros Env para tres cepas diferentes (SIVmneE11S, SIVmac239, y SIV CP-MAC). En marcado contraste con el VIH-1 Bal, SIVmneE11S y Env SIVmac239 mostr&#xF3; cambios conformacionales de poca importancia despu&#xE9;s de sCD4 vinculante. En SIV CP-MAC, donde trim&#xE9;rica Env muestra un constitutivamente &#x26;quot;abierta&#x26;quot; la conformaci&#xF3;n similar a la observada para el VIH-1 Env BaL en el estado sCD4 de complejo, nos muestran que no hay cambios significativos en la conformaci&#xF3;n de m&#xE1;s sobre el enlace de cualquiera de las sCD4 o 7D3 anticuerpo. Los mapas tambi&#xE9;n muestran que la densidad de ep&#xED;topos anticuerpos 7D3 y 17b de destino en la gp120 que se encuentran en lados opuestos del sitio co-receptor vinculante. Estos resultados aportan nuevos conocimientos sobre la diversidad estructural de SIV Env y demostrar que hay tensi&#xF3;n dependientes de las variaciones en la orientaci&#xF3;n de sCD4 obligados a trim&#xE9;rica Env SIV.

Estructuras tridimensionales de c&#xE9;lulas CD4 solubles con destino Estados trim&#xE9;rica de la inmunodeficiencia s&#xED;mica las glicoprote&#xED;nas del virus de sobres determin&#xF3; mediante el uso de Cryo-tomograf&#xED;a electr&#xF3;nica

&#x6211;&#x4EEC;&#x4EE5;&#x524D;&#x90FD;&#x7528;&#x4E0E;&#x5206;&#x5377;&#x5E73;&#x5747;&#x548C;&#x5206;&#x7C7B;&#x76F8;&#x7ED3;&#x5408;&#x7684;&#x4F4E;&#x6E29;&#x7535;&#x5B50;&#x65AD;&#x5C42;&#x626B;&#x63CF;&#x4EE5;&#x83B7;&#x5F97;&#x751F;&#x7269;&#x5927;&#x5206;&#x5B50;&#x4E2D;&#x7684;&#x7A0B;&#x5E8F;&#x96C6;&#x7684;&#x60C5;&#x51B5;&#x4E0B;&#x5355;&#x4E00;&#x7684;&#x4F18;&#x52BF;&#x7269;&#x79CD;&#x5728;&#x573A;&#xFF0C;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x65B9;&#x6CD5;&#x9002;&#x7528;&#x4E8E;&#x5404;&#x79CD;&#x4E09;&#x8054;&#x827E;&#x6ECB;&#x75C5;&#x6BD2; 1 &#x548C; SIV &#x5305;&#x819C;&#x7CD6;&#x86CB;&#x767D; (Env) &#x5206;&#x6790;&#x7684; 3D &#x7ED3;&#x6784;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x6269;&#x5C55;&#x81EA;&#x52A8;&#x5316;&#x3001; &#x8FED;&#x4EE3;&#xFF0C;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7814;&#x7A76;&#x8868;&#x660E;&#x7F3A;&#x5C11;&#x6954;&#x66F4;&#x6B63;&#x7684; 3D &#x56FE;&#x50CF;&#x7684;&#x5BF9;&#x9F50;&#x65B9;&#x5F0F;&#x548C;&#x5206;&#x7C7B;&#x65B9;&#x6CD5;&#x6765;&#x533A;&#x5206;&#x591A;&#x4E2A;&#x6784;&#x8C61;&#xFF0C;&#x90FD;&#x540C;&#x65F6;&#x5B58;&#x5728;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x76EE;&#x524D;&#x4EE3;&#x8868;&#x4E0D;&#x540C;&#x6784;&#x8C61;&#x56FD;&#x5BB6;&#x7684; Env &#x5411;&#x91CF;&#x5143;&#x7D20;&#x7684;&#x7A7A;&#x95F4;&#x5206;&#x5E03;&#x6D4B;&#x91CF;&#x7684;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x786E;&#x5B9A;&#x6570;&#x636E;&#x5904;&#x7406;&#x7B56;&#x7565;&#x5141;&#x8BB8;&#x660E;&#x786E;&#x5206;&#x79BB;&#x4EE5;&#x524D;&#x4E3A;&#x7279;&#x5F81;&#x7684;&#x5173;&#x95ED;&#x548C;&#x6253;&#x5F00;&#x6784;&#x8C61;&#xFF0C;&#x4EE5;&#x53CA; unliganded &#x548C; Env &#x5B83;&#x4EEC;&#x65F6;&#x7684;&#x6297;&#x4F53; liganded &#x56FD;&#x5BB6;&#x76EE;&#x524D;&#x7684;&#x6DF7;&#x5408;&#x7269;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x8868;&#x660E;&#x8BC6;&#x522B;&#x5E76;&#x5220;&#x9664;&#x5CF0;&#x503C;&#x6700;&#x4F4E;&#x4FE1;&#x53F7;&#x7684;&#x4FE1;&#x566A;&#x6BD4;&#x63D0;&#x9AD8;&#x603B;&#x4F53;&#x51C6;&#x786E;&#x6027;&#x7684;&#x4E2A;&#x522B; Env sub-volumes&#xFF0C;&#x4E4B;&#x95F4;&#x7684;&#x5BF9;&#x9F50;&#x65B9;&#x5F0F;&#xFF0C;&#x8BE5;&#x5BF9;&#x9F50;&#x65B9;&#x5F0F;&#x7684;&#x51C6;&#x786E;&#x6027;&#xFF0C;&#x53CD;&#x8FC7;&#x6765;&#xFF0C;&#x786E;&#x5B9A;&#x56FE;&#x50CF;&#x5206;&#x7C7B;&#x8BC4;&#x4F30;&#x6784;&#x8C61;&#x5F02;&#x6784;&#x6DF7;&#x5408;&#x7269;&#x4E2D;&#x7684;&#x5F02;&#x8D28;&#x6027;&#x7684;&#x6210;&#x529F;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x6210;&#x529F;&#x5730;&#x5206;&#x79BB;&#x548C;&#x91CD;&#x6784;&#x72EC;&#x7279;&#x7684; 3D &#x7ED3;&#x6784;&#x7684; unliganded &#x548C;&#x6297;&#x4F53; liganded&#xFF0C;&#x4EE5;&#x53CA;&#x6253;&#x5F00;&#x548C;&#x5173;&#x95ED;&#x7684;&#x6784;&#x8C61;&#x7684; Env &#x76EE;&#x524D;&#x540C;&#x65F6;&#x5728;&#x6DF7;&#x5408;&#x7269;&#x901A;&#x8FC7;&#x9A8C;&#x8BC1;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x5206;&#x79BB;&#x8FC7;&#x7A0B;&#x7684;&#x8BA1;&#x7B97;&#x3002;

&#x4F7F;&#x7528;&#x4F4E;&#x6E29;&#x7535;&#x5B50;&#x65AD;&#x5C42;&#x626B;&#x63CF;&#x548C; 3D &#x5206;&#x5377;&#x5E73;&#x5747;&#x6784;&#x8C61;&#x975E;&#x5747;&#x8D28;&#x6027;&#x7684;&#x8BA1;&#x7B97;&#x5206;&#x79BB;&#x3002;

We have previously used cryo-electron tomography combined with sub-volume averaging and classification to obtain 3D structures of macromolecular assemblies in cases where a single dominant species was present, and applied these methods to the analysis of a variety of trimeric HIV-1 and SIV envelope glycoproteins (Env). Here, we extend these studies by demonstrating automated, iterative, missing wedge-corrected 3D image alignment and classification methods to distinguish multiple conformations that are present simultaneously. We present a method for measuring the spatial distribution of the vector elements representing distinct conformational states of Env. We identify data processing strategies that allow clear separation of the previously characterized closed and open conformations, as well as unliganded and antibody-liganded states of Env when they are present in mixtures. We show that identifying and removing spikes with the lowest signal-to-noise ratios improves the overall accuracy of alignment between individual Env sub-volumes, and that alignment accuracy, in turn, determines the success of image classification in assessing conformational heterogeneity in heterogeneous mixtures. We validate these procedures for computational separation by successfully separating and reconstructing distinct 3D structures for unliganded and antibody-liganded as well as open and closed conformations of Env present simultaneously in mixtures.

Computational separation of conformational heterogeneity using cryo-electron tomography and 3D sub-volume averaging.

Nous avons d&#xE9;j&#xE0; utilis&#xE9; la tomographie cryo-&#xE9;lectronique combin&#xE9; avec sous-volume moyenne et la classification d&#x26;#39;obtenir des structures 3D des assemblages macromol&#xE9;culaires dans les cas o&#xF9; une seule esp&#xE8;ce dominante &#xE9;tait pr&#xE9;sent, et a appliqu&#xE9; ces m&#xE9;thodes &#xE0; l&#x26;#39;analyse d&#x26;#39;une vari&#xE9;t&#xE9; de trim&#xE9;rique VIH-1 et SIV glycoprot&#xE9;ines d&#x26;#39;enveloppe (ENV). Ici, nous &#xE9;tendons ces &#xE9;tudes en d&#xE9;montrant automatis&#xE9;, it&#xE9;rative, manquant de coin corrig&#xE9;e alignement de l&#x26;#39;image 3D et les m&#xE9;thodes de classification pour distinguer plusieurs conformations qui sont pr&#xE9;sents simultan&#xE9;ment. Nous pr&#xE9;sentons une m&#xE9;thode pour mesurer la distribution spatiale des &#xE9;l&#xE9;ments vectoriels repr&#xE9;sentant distinctes &#xE9;tats conformationnels de Env. Nous identifions le traitement des donn&#xE9;es des strat&#xE9;gies qui permettent une s&#xE9;paration claire des conformations d&#xE9;j&#xE0; caract&#xE9;ris&#xE9;s ferm&#xE9;es et ouvertes, ainsi que les Etats sans ligand et l&#x26;#39;anticorps-ligand&#xE9; de Env quand ils sont pr&#xE9;sents dans les m&#xE9;langes. Nous montrons que l&#x26;#39;identification et &#xE0; &#xE9;liminer des cr&#xEA;tes avec les plus faibles du signal sur bruit am&#xE9;liore la pr&#xE9;cision globale de l&#x26;#39;alignement entre les diff&#xE9;rents sous-Env volumes, et que la pr&#xE9;cision d&#x26;#39;alignement, &#xE0; son tour, d&#xE9;termine le succ&#xE8;s de la classification d&#x26;#39;images dans l&#x26;#39;&#xE9;valuation de l&#x26;#39;h&#xE9;t&#xE9;rog&#xE9;n&#xE9;it&#xE9; conformationnelle dans des m&#xE9;langes h&#xE9;t&#xE9;rog&#xE8;nes . On valider ces proc&#xE9;dures de s&#xE9;paration de calcul par succ&#xE8;s de s&#xE9;paration et la reconstruction des structures distinctes 3D pour conformations sans ligand et un anticorps-ligand&#xE9; et ouverte et ferm&#xE9;e de Env pr&#xE9;sents simultan&#xE9;ment dans des m&#xE9;langes.

S&#xE9;paration de calcul de l&#x26;#39;h&#xE9;t&#xE9;rog&#xE9;n&#xE9;it&#xE9; conformationnelle de microscopie cryo-&#xE9;lectronique et 3D Sous-volume de calcul de la moyenne

Wir haben zuvor Cryo-Elektron Tomographie kombiniert mit Sub-volume mit durchschnittlich und Klassifikation verwendet, 3D Strukturen der makromolekularen Versammlungen in F&auml;llen zu erhalten, wo eine dominante Art anwesend war, und diese Methoden auf die Analyse einer Vielzahl von Trimere HIV-1 und SIV Umschlag Glykoproteine (Env) angewendet. Hier erweitern wir diese Untersuchungen durch den Nachweis der automatisierten, iterative, fehlende 3D-Bild Keil-korrigierte Ausrichtung und Klassifizierung Methoden um mehrere Konformationen unterscheiden, die gleichzeitig vorhanden sind. Wir stellen eine Methode zur Messung der r&auml;umlichen Verteilungs der Vektor-Elemente, die unterschiedliche Konformations&auml;nderungen vertreten, der Env. Wir identifizieren Datenverarbeitung-Strategien, mit denen klar, dass die Trennung von der zuvor gekennzeichneten geschlossen und &ouml;ffnen Konformationen, sowie Unliganded und Antik&ouml;rper-liganded Staaten von Env Wenn sie sind in Mischungen. Wir zeigen, dass die Identifizierung und Beseitigung von Spikes mit der niedrigsten Signal-Rausch-Verh&auml;ltnis die Genauigkeit der Ausrichtung zwischen einzelnen Env Subvolumes verbessert und dass Ausrichtungsgenauigkeit wiederum entscheidet &uuml;ber den Erfolg der Bild-Klassifikation bei der Beurteilung der Konformations&auml;nderungen Heterogenit&auml;t in heterogene Mischungen. Wir &uuml;berpr&uuml;fen diese Verfahren f&uuml;r computational Trennung erfolgreich trennen und unterschiedliche 3D Strukturen f&uuml;r Unliganded und Antik&ouml;rper-liganded sowie offene und geschlossene Konformationen von Env anwesend gleichzeitig in Mischungen zu rekonstruieren.

Computational Trennung von Konformations&auml;nderungen Heterogenit&auml;t mit Cryo-Elektron Tomographie und 3D Sub-volume mit durchschnittlich.

In precedenza abbiamo usato tomografia cryo-elettrone, combinata con una media di sub-volume e classificazione per ottenere strutture 3D delle assemblee macromolecolare in casi dove era presente una sola specie dominante e applicato questi metodi per l&#39;analisi di una variet&agrave; di trimeric HIV-1 e SIV busta glicoproteine (Env). Qui, noi estendere questi studi dimostrando automatizzati, iterativi, manca di metodi di allineamento e classificazione Cuneo-correzione immagine 3D per distinguere molteplici conformazioni che sono presenti contemporaneamente. Vi presentiamo un metodo per misurare la distribuzione spaziale degli elementi vettoriali che rappresentano stati conformazionali distinti di Env. Noi identificare strategie di elaborazione dei dati che permettono di chiare separazione di precedentemente caratterizzato chiuso e aprire conformazioni, come pure unliganded e anticorpo-liganded stati di Env quando sono presentano in miscele. Mostriamo identificazione e rimozione di picchi con il pi&ugrave; basso rapporto segnale-rumore migliora l&#39;accuratezza complessiva di allineamento tra i singoli sub-volumi Env, che tale precisione di allineamento, a sua volta, determina il successo di classificazione di immagine nel valutare conformazionali eterogeneit&agrave; nei miscugli eterogenei. Noi convalidare queste procedure per separazione computazionale con successo separando e ricostruendo distinte strutture 3D per unliganded e anticorpo-liganded, come pure le conformazioni aperte e chiuse di Env presenti simultaneamente in miscele.

Separazione computazionale di eterogeneit&agrave; conformazionale mediante tomografia cryo-elettrone e sub-volume 3D in media.

&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x4EE5;&#x524D;&#x3001;&#x5358;&#x4E00;&#x306E;&#x512A;&#x5360;&#x7A2E;&#x304C;&#x5B58;&#x5728;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x305F;&#x5834;&#x5408;&#x306B;&#x306F;&#x3001;&#x9AD8;&#x5206;&#x5B50;&#x96C6;&#x5408;&#x4F53;&#x306E;&#x7ACB;&#x4F53;&#x69CB;&#x9020;&#x3092;&#x5F97;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x30B5;&#x30D6;&#x30DC;&#x30EA;&#x30E5;&#x30FC;&#x30E0;&#x306E;&#x5E73;&#x5747;&#x5316;&#x3068;&#x5206;&#x985E;&#x3092;&#x7D44;&#x307F;&#x5408;&#x308F;&#x305B;&#x305F;&#x4F4E;&#x6E29;&#x96FB;&#x5B50;&#x65AD;&#x5C64;&#x64AE;&#x5F71;&#x6CD5;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3001;&#x4E09;&#x91CF;&#x4F53;HIV-1&#x3068;SIV&#x306E;&#x69D8;&#x3005;&#x306A;&#x89E3;&#x6790;&#x306B;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x30E1;&#x30BD;&#x30C3;&#x30C9;&#x3092;&#x9069;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x30A8;&#x30F3;&#x30D9;&#x30ED;&#x30FC;&#x30D7;&#x7CD6;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#xFF08;ENV&#xFF09;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x540C;&#x6642;&#x306B;&#x5B58;&#x5728;&#x3059;&#x308B;&#x8907;&#x6570;&#x306E;&#x7ACB;&#x4F53;&#x914D;&#x5EA7;&#x3092;&#x533A;&#x5225;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x304F;&#x3055;&#x3073;&#x88DC;&#x6B63;3D&#x753B;&#x50CF;&#x306E;&#x914D;&#x7F6E;&#x3068;&#x5206;&#x985E;&#x65B9;&#x6CD5;&#x304C;&#x898B;&#x3064;&#x304B;&#x3089;&#x306A;&#x3044;&#x3001;&#x53CD;&#x5FA9;&#x3001;&#x81EA;&#x52D5;&#x5316;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x793A;&#x3059;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x3001;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x7814;&#x7A76;&#x3092;&#x62E1;&#x5F35;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;Env&#x306E;&#x7570;&#x306A;&#x308B;&#x30B3;&#x30F3;&#x30D5;&#x30A9;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x306E;&#x72B6;&#x614B;&#x3092;&#x8868;&#x3059;&#x30D9;&#x30AF;&#x30C8;&#x30EB;&#x306E;&#x8981;&#x7D20;&#x306E;&#x7A7A;&#x9593;&#x5206;&#x5E03;&#x3092;&#x6E2C;&#x5B9A;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x624B;&#x6CD5;&#x3092;&#x63D0;&#x6848;&#x3059;&#x308B;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;&#x5F7C;&#x3089;&#x304C;&#x6DF7;&#x5408;&#x7269;&#x4E2D;&#x306B;&#x5B58;&#x5728;&#x3059;&#x308B;&#x5834;&#x5408;&#x3001;&#x4EE5;&#x524D;&#x306B;&#x7279;&#x5FB4;&#x4ED8;&#x3051;&#x9589;&#x3058;&#x305F;&#x72B6;&#x614B;&#x3068;&#x958B;&#x3044;&#x305F;&#x30B3;&#x30F3;&#x30D5;&#x30A9;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x3068;&#x540C;&#x69D8;&#x306B;&#x3001;Env&#x306E;&#x30EA;&#x30AC;&#x30F3;&#x30C9;&#x975E;&#x7D50;&#x5408;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x6297;&#x4F53; - &#x30EA;&#x30AC;&#x30F3;&#x30C9;&#x306E;&#x72B6;&#x614B;&#x306E;&#x660E;&#x78BA;&#x306A;&#x5206;&#x96E2;&#x3092;&#x53EF;&#x80FD;&#x306B;&#x3059;&#x308B;&#x6226;&#x7565;&#x3092;&#x51E6;&#x7406;&#x3059;&#x308B;&#x30C7;&#x30FC;&#x30BF;&#x3092;&#x8B58;&#x5225;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;&#x6700;&#x3082;&#x4F4E;&#x3044;&#x4FE1;&#x53F7;&#x5BFE;&#x96D1;&#x97F3;&#x6BD4;&#x306E;&#x30B9;&#x30D1;&#x30A4;&#x30AF;&#x3092;&#x8B58;&#x5225;&#x3057;&#x3001;&#x524A;&#x9664;&#x3059;&#x308B;&#x3068;&#x3001;&#x500B;&#x3005;&#x306E;Env&#x306E;&#x30B5;&#x30D6;&#x30DC;&#x30EA;&#x30E5;&#x30FC;&#x30E0;&#x3068;&#x3001;&#x305D;&#x306E;&#x30A2;&#x30E9;&#x30A4;&#x30E1;&#x30F3;&#x30C8;&#x7CBE;&#x5EA6;&#x306E;&#x9593;&#x306E;&#x30A2;&#x30E9;&#x30A4;&#x30E1;&#x30F3;&#x30C8;&#x306E;&#x5168;&#x4F53;&#x306E;&#x7CBE;&#x5EA6;&#x3092;&#x5411;&#x4E0A;&#x3055;&#x305B;&#x3001;&#x9806;&#x756A;&#x306B;&#x3001;&#x7570;&#x7A2E;&#x306E;&#x6DF7;&#x5408;&#x7269;&#x4E2D;&#x3067;&#x306E;&#x7ACB;&#x4F53;&#x69CB;&#x9020;&#x306E;&#x4E0D;&#x5747;&#x4E00;&#x6027;&#x3092;&#x8A55;&#x4FA1;&#x3059;&#x308B;&#x969B;&#x306B;&#x753B;&#x50CF;&#x5206;&#x985E;&#x306E;&#x6210;&#x529F;&#x3092;&#x6C7A;&#x5B9A;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x6B63;&#x5E38;Env&#x306E;&#x30EA;&#x30AC;&#x30F3;&#x30C9;&#x975E;&#x7D50;&#x5408;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x6297;&#x4F53; - &#x30EA;&#x30AC;&#x30F3;&#x30C9;&#x3068;&#x540C;&#x69D8;&#x306B;&#x30AA;&#x30FC;&#x30D7;&#x30F3;&#x3068;&#x30AF;&#x30ED;&#x30FC;&#x30BA;&#x306E;&#x30B3;&#x30F3;&#x30D5;&#x30A9;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x7570;&#x306A;&#x308B;&#x7ACB;&#x4F53;&#x69CB;&#x9020;&#x3092;&#x5206;&#x96E2;&#x3057;&#x3001;&#x518D;&#x69CB;&#x7BC9;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x8A08;&#x7B97;&#x306E;&#x5206;&#x96E2;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x624B;&#x9806;&#x3092;&#x691C;&#x8A3C;&#x3059;&#x308B;&#x6DF7;&#x5408;&#x7269;&#x3092;&#x540C;&#x6642;&#x306B;&#x63D0;&#x793A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x30AF;&#x30E9;&#x30A4;&#x30AA;&#x96FB;&#x5B50;&#x7DDA;&#x30C8;&#x30E2;&#x30B0;&#x30E9;&#x30D5;&#x30A3;&#x30FC;&#x3068;&#x4E09;&#x6B21;&#x5143;&#x30B5;&#x30D6;&#x30DC;&#x30EA;&#x30E5;&#x30FC;&#x30E0;&#xB7;&#x30A2;&#x30D9;&#x30EC;&#x30FC;&#x30B8;&#x30F3;&#x30B0;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x305F;&#x30B3;&#x30F3;&#x30D5;&#x30A9;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x4E0D;&#x5747;&#x4E00;&#x6027;&#x306E;&#x8A08;&#x7B97;&#x306E;&#x5206;&#x96E2;

&#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; &#xC774;&#xC804;&#xC5D0; &#xD558;&#xB098;&#xC758; &#xC9C0;&#xBC30;&#xC801;&#xC778; &#xC885; &#xC874;&#xC7AC;, &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; &#xB2E4;&#xC591; &#xD55C; trimeric h i V-1&#xC640; SIV &#xBD09;&#xD22C; glycoproteins (Env)&#xC758; &#xBD84;&#xC11D;&#xC5D0; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xBC29;&#xBC95;&#xC744; &#xC801;&#xC6A9;&#xC758; &#xACBD;&#xC6B0; &#xACE0;&#xBD84;&#xC790; &#xC5B4;&#xC148;&#xBE14;&#xB9AC;&#xC758; 3 &#xCC28;&#xC6D0; &#xAD6C;&#xC870;&#xB97C; &#xC11C;&#xBE0C; &#xBCFC;&#xB968; &#xD3C9;&#xADE0; &#xBC0F; &#xBD84;&#xB958;&#xC640; &#xD568;&#xAED8; &#xD558;&#xB294; &#xACF3;&#xC744; &#xC54C;&#xC544;&#xB0B4;&#xB294;-&#xC804;&#xC790; &#xB2E8;&#xCE35; &#xCD2C;&#xC601;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xACE0;. &#xC5EC;&#xAE30;, &#xC6B0;&#xB9AC; &#xB3D9;&#xC2DC;&#xC5D0; &#xC874;&#xC7AC; &#xD558;&#xB294; &#xC5EC;&#xB7EC; conformations &#xAD6C;&#xBCC4; &#xC410;&#xAE30; &#xC218;&#xC815; 3D &#xC774;&#xBBF8;&#xC9C0; &#xC815;&#xB82C; &#xBC0F; &#xBD84;&#xB958; &#xBC29;&#xBC95; &#xB204;&#xB77D; &#xC790;&#xB3D9;&#xD654;, &#xBC18;&#xBCF5;, &#xC2DC;&#xC5F0; &#xD558; &#xC5EC; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xC5F0;&#xAD6C; &#xD655;&#xC7A5;. Env&#xC758; &#xAC00;&#xC9C0; &#xAD6C;&#xC870;&#xC801; &#xC0C1;&#xD0DC;&#xB97C; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0B4;&#xB294; &#xBCA1;&#xD130; &#xC694;&#xC18C;&#xC758; &#xACF5;&#xAC04;&#xC801; &#xBD84;&#xD3EC;&#xB97C; &#xCE21;&#xC815; &#xD558;&#xB294; &#xBC29;&#xBC95;&#xC744; &#xC18C;&#xAC1C; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC; &#xBD84;&#xBA85; &#xBD84;&#xB9AC; &#xC774;&#xC804;&#xC5D0; &#xD2B9;&#xC9D5;&#xC774; &#xD3D0;&#xC1C4; &#xC218; &#xC788;&#xB294; &#xB370;&#xC774;&#xD130; &#xCC98;&#xB9AC; &#xC804;&#xB7B5;&#xC744; &#xC2DD;&#xBCC4; conformations, unliganded&#xB97C; &#xC5F4; &#xBC0F; &#xD56D; &#xCCB4; liganded &#xC0C1;&#xD0DC; &#xD658;&#xACBD; &#xB54C;&#xC758; &#xD63C;&#xD569;&#xBB3C;&#xC5D0; &#xC874;&#xC7AC;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xC2DD;&#xBCC4; &#xBC0F; &#xAC00;&#xC7A5; &#xB0AE;&#xC740; &#xC2E0;&#xD638; &#xB300; &#xC7A1;&#xC74C; &#xBE44;&#xC728; &#xC2A4;&#xD30C;&#xC774;&#xD06C; &#xC81C;&#xAC70; &#xAC1C;&#xBCC4; &#xD658;&#xACBD; sub-volumes &#xC0AC;&#xC774;&#xC758; &#xC815;&#xB82C;&#xC758; &#xC804;&#xBC18;&#xC801;&#xC778; &#xC815;&#xD655;&#xB3C4; &#xD5A5;&#xC0C1; &#xADF8; &#xC815;&#xB82C; &#xC815;&#xD655;&#xB3C4;, &#xC774;&#xBBF8;&#xC9C0; &#xBD84;&#xB958; &#xC720;&#xD615;&#xC774; &#xB2E4;&#xB978; &#xD63C;&#xD569;&#xBB3C;&#xC5D0; &#xAD6C;&#xC870;&#xC801;&#xC774; &#xC9C8; &#xD3C9;&#xAC00; &#xC131;&#xACF5;&#xC744; &#xACB0;&#xC815; &#xD45C;&#xC2DC;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; &#xC131;&#xACF5;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xBD84;&#xB9AC; &#xD558; &#xACE0; &#xD658;&#xACBD; &#xB3D9;&#xC2DC;&#xC5D0; &#xD63C;&#xD569;&#xBB3C;&#xC5D0;&#xC758; &#xAC1C;&#xBC29; &#xBC0F; &#xD3D0;&#xC1C4; conformations&#xB85C; unliganded&#xC640; liganded &#xD56D; &#xCCB4; &#xACE0;&#xC720; 3D &#xAD6C;&#xC870;&#xB97C; &#xC7AC;&#xAD6C;&#xC131; &#xD558; &#xC5EC; &#xC804;&#xC0B0; &#xBD84;&#xB9AC;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xC808;&#xCC28;&#xC758; &#xC720;&#xD6A8;&#xC131;&#xC744; &#xAC80;&#xC0AC; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xACF3;&#xC744; &#xC54C;&#xC544;&#xB0B4;&#xB294;-&#xC804;&#xC790; &#xB2E8;&#xCE35; &#xCD2C;&#xC601; &#xBC0F; 3D &#xC11C;&#xBE0C; &#xBCFC;&#xB968;&#xC744; &#xD3C9;&#xADE0;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xAD6C;&#xC870;&#xC801; &#xC774;&#xC885;&#xC758; &#xC804;&#xC0B0; &#xBD84;&#xB9AC;.

Hemos utilizado anteriormente crio-tomograf&#xED;a electr&#xF3;nica combinada con sub-volumen promediado y clasificaci&#xF3;n para obtener estructuras 3D de ensamblados macromoleculares en los casos en que una especie dominante individuales estaba presente, y aplica estos m&#xE9;todos para el an&#xE1;lisis de una variedad de trim&#xE9;rica VIH-1 y SIV glicoprote&#xED;nas de la envoltura (env). En este sentido, extender estos estudios al demostrar automatizado y repetitivo, la falta de cu&#xF1;a corregir la alineaci&#xF3;n de im&#xE1;genes en 3D y los m&#xE9;todos de clasificaci&#xF3;n para distinguir m&#xFA;ltiples conformaciones que est&#xE1;n presentes de forma simult&#xE1;nea. Se presenta un m&#xE9;todo para medir la distribuci&#xF3;n espacial de los elementos vectoriales que representan distintos estados conformacionales de Env. Identificamos las estrategias de procesamiento de datos que permiten una separaci&#xF3;n clara de las conformaciones previamente caracterizadas cerrados y abiertos, as&#xED; como los estados y el anticuerpo unliganded liganded de Env-cuando est&#xE1;n presentes en las mezclas. Se demuestra que la identificaci&#xF3;n y eliminaci&#xF3;n de los picos m&#xE1;s bajos con los de se&#xF1;al a ruido mejora la precisi&#xF3;n global de armonizaci&#xF3;n entre los distintos Env sub-vol&#xFA;menes, y que la exactitud de la alineaci&#xF3;n, a su vez, determina el &#xE9;xito de la clasificaci&#xF3;n de im&#xE1;genes en la evaluaci&#xF3;n de la heterogeneidad conformacional en mezclas heterog&#xE9;neas . Nos validar estos procedimientos para la separaci&#xF3;n de c&#xF3;mputo con &#xE9;xito la separaci&#xF3;n y reconstrucci&#xF3;n de las distintas estructuras en 3D de las conformaciones unliganded y el anticuerpo liganded, as&#xED; como apertura y cierre de Env presentar simult&#xE1;neamente en las mezclas.

Article	Year
An energy-based three-dimensional segmentation approach for the quantitative interpretation of electron tomograms. IEEE transactions on image processing : a publication of the IEEE Signal Processing Society\| PubMed ID: 16190467	2005
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Membrane protein structure determination using cryo-electron tomography and 3D image averaging. Current opinion in structural biology\| PubMed ID: 19646859	2009
Molecular architectures of trimeric SIV and HIV-1 envelope glycoproteins on intact viruses: strain-dependent variation in quaternary structure. PLoS pathogens\| PubMed ID: 21203482	2010
Trimeric HIV-1 glycoprotein gp140 immunogens and native HIV-1 envelope glycoproteins display the same closed and open quaternary molecular architectures. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America\| PubMed ID: 21709254	2011
Three-dimensional structures of soluble CD4-bound states of trimeric simian immunodeficiency virus envelope glycoproteins determined by using cryo-electron tomography. Journal of virology\| PubMed ID: 21937655	2011
Computational separation of conformational heterogeneity using cryo-electron tomography and 3D sub-volume averaging. Journal of structural biology\| PubMed ID: 22248450	2012

Alberto Bartesaghi

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