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Determination of Molecular Structures of HIV Envelope Glycoproteins using Cryo-Electron Tomography and Automated Sub-tomogram Averaging

Since its discovery nearly 30 years ago, more than 60 million people have been infected with the human immunodeficiency virus (HIV) (www.usaid.gov). The ...

National Institutes of Health

&#x7EFC;&#x5408;&#x5F81; (HPS) &#x662F;&#x773C;&#x767D;&#x5316;&#x548C;&#x8840;&#x5C0F;&#x677F;&#x5C38;&#x4F53;&#x5BC6;&#x96C6;&#x7F3A;&#x5E2D;&#x5F15;&#x8D77;&#x5B58;&#x50A8;&#x6C60;&#x865A;&#x7EC4;&#x6210;&#x7684;&#x4E00;&#x79CD;&#x5E38;&#x67D3;&#x8272;&#x4F53;&#x663E;&#x6027;&#x9690;&#x6027;&#x75BE;&#x75C5;&#x3002;&#x57FA;&#x56E0;&#x5F02;&#x6784;&#x662F;&#x4E00;&#x7247;&#x6DF7;&#x4E71;&#x3002;&#x5927;&#x90E8;&#x5206;&#x7684;&#x75C5;&#x4EBA;&#xFF0C;&#x5305;&#x62EC;&#x6210;&#x5458;&#x5927;&#x7684;&#x9057;&#x4F20;&#x9694;&#x79BB;&#x5728;&#x897F;&#x5317;&#x6CE2;&#x591A;&#x9ECE;&#x5404;&#xFF0C;HPS1 &#x4E2D;&#x6709;&#x7A81;&#x53D8;&#x3002;&#x53E6;&#x4E00;&#x79CD;&#x57FA;&#x56E0;&#xFF0C;ADTB3A&#xFF0C;&#x8868;&#x660E;&#x662F;&#x5BFC;&#x81F4;&#x9AD8;&#x538B;&#x94A0;&#x706F; 2 &#x4E2D;&#x6709;&#x5141;&#x8BB8;&#x7684;&#x6B8B;&#x4F59;&#x7684;&#x57FA;&#x56E0;&#x4EA7;&#x7269;&#xFF0C;&#x9002;&#x914D;&#x5668;&#x590D;&#x6742;-3 (AP-3&#xFF09; &#x7B2C; beta3A &#x4E9A;&#x5355;&#x4F4D;&#x751F;&#x4EA7;&#x7684;&#x590D;&#x5408;&#x6742;&#x5408;&#x6027;&#x7A81;&#x53D8;&#x7684;&#x4E24;&#x4E2A;&#x5144;&#x5F1F;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E2A;&#x590D;&#x6742;&#x7684; heterotetrameric &#x4F5C;&#x4E3A;&#x5916;&#x5957;&#x86CB;&#x767D;&#x4ECB;&#x5BFC;&#x5F62;&#x6210;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5185;&#x56CA;&#x6CE1;&#xFF0C;&#x4F8B;&#x5982;&#x5C0F;&#x4F53;&#x548C;&#x8840;&#x5C0F;&#x677F;&#x5BC6;&#x8EAB;&#x4F53;&#xFF0C;&#x4ECE;&#x819C;&#x7684;&#x8DE8;&#x9AD8;&#x5C14;&#x57FA;&#x7F51;&#x7EDC;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x786E;&#x5B9A;&#x7684;&#x5185;&#x542B;&#x5B50;/&#x5916;&#x663E;&#x5B50;&#x8FB9;&#x754C;&#x7684; ADTB3A &#x57FA;&#x56E0;&#x7684;&#x57FA;&#x56E0;&#x7EC4;&#x7EC4;&#x7EC7;&#x548C;&#x63CF;&#x8FF0; beta3A &#x865A;&#x7684;&#x7B2C;&#x4E09;&#x4E2A;&#x75C5;&#x4EBA;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E2A; y 5 &#x5C81;&#x7537;&#x5B69;&#x6709;&#x4E24;&#x4E2A;&#x7A81;&#x53D8;&#xFF0C;C1578T (--&gt; X R) &#x548C; G2028T (E--&gt; X&#xFF09;&#xFF0C;&#x5176;&#x4E2D;&#x751F;&#x4EA7;&#x6CA1;&#x6709; ADTB3A mRNA &#x548C;&#x6CA1;&#x6709; beta3A &#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x3002;AP 3 &#x7B2C;&#x5173;&#x8054;&#x7684; mu3 &#x4E9A;&#x57FA;&#x4E5F;&#x662F;&#x5B8C;&#x5168;&#x6CA1;&#x6709;&#x3002;&#x5728;&#x6210;&#x7EA4;&#x7EF4;&#x7EC6;&#x80DE;&#x3001; &#x7EC6;&#x80DE;&#x751F;&#x7269;&#x5B66;&#x4F34;&#x968F;&#x800C;&#x6765;&#x7684;&#x8FD9;&#x4E00;&#x7F3A;&#x9677;&#x662F;&#x9C81;&#x68D2;&#x548C;&#x7578;&#x53D8;&#x8D29;&#x8FD0;&#x901A;&#x8FC7;&#x7EC6;&#x80DE;&#x819C;&#x7684;&#x706F;-3&#xFF0C;&#x901A;&#x5E38;&#x76F4;&#x63A5;&#x8F6C;&#x5165;&#x6EB6;&#x9176;&#x4F53;&#x79EF;&#x5206;&#x6EB6;&#x9176;&#x4F53;&#x7684;&#x819C;&#x86CB;&#x767D;&#x3002;&#x4E34;&#x5E8A;&#x968F;&#x4E4B;&#x800C;&#x6765;&#x7684;&#x662F;&#x9664;&#x4E86;&#x773C;&#x76AE;&#x80A4;&#x767D;&#x5316;&#x75C5;&#x548C;&#x8840;&#x5C0F;&#x677F;&#x5B58;&#x50A8;&#x6C60;&#x7F3A;&#x4E25;&#x91CD;&#x3001; G-CSF &#x53CD;&#x5E94;&#x7075;&#x654F;&#x7684;&#x7C92;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7F3A;&#x4E4F;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x7ED3;&#x679C;&#x5C55;&#x5F00;&#x9AD8;&#x538B;&#x94A0;&#x706F; 2 &#x7684;&#x5206;&#x5B50;&#x3001; &#x7EC6;&#x80DE;&#x3001; &#x548C;&#x4E34;&#x5E8A;&#x8C31;&#xFF0C;&#x5E76;&#x547C;&#x5401;&#x6000;&#x7591;&#x6B64;&#x8BCA;&#x65AD;&#x60A3;&#x8005;&#x4E3A;&#x7279;&#x8272;&#x7684;&#x767D;&#x5316;&#x75C5;&#x3001; &#x51FA;&#x8840;&#x3001; &#x548C;&#x4E2D;&#x6027;&#x7C92;&#x7EC6;&#x80DE;&#x51CF;&#x5C11;&#x589E;&#x52A0;&#x7D22;&#x5F15;&#x3002;

&#x9002;&#x914D;&#x5668;&#x590D;&#x6742; 3&#x3001; &#x91CD;&#x5EA6;&#x7EFC;&#x5408;&#x5F81;&#x7B2C; beta3A &#x4E9A;&#x57FA; ADTB3A &#x4E8B;&#x4E1A;&#x5B8C;&#x6210;&#x865A;&#x4E00;&#x6D3E;&#x80E1;&#x8A00;&#x7A81;&#x53D8;&#x952E;&#x5165; 2&#x3002;

Hermansky-Pudlak syndrome (HPS) is an autosomal recessive disease consisting of oculocutaneous albinism and a storage pool deficiency resulting from absent platelet dense bodies. The disorder is genetically heterogeneous. The majority of patients, including members of a large genetic isolate in northwest Puerto Rico, have mutations in HPS1. Another gene, ADTB3A, was shown to cause HPS-2 in two brothers having compound heterozygous mutations that allowed for residual production of the gene product, the beta3A subunit of adaptor complex-3 (AP-3). This heterotetrameric complex serves as a coat protein-mediating formation of intracellular vesicles, e.g. the melanosome and platelet dense body, from membranes of the trans-Golgi network. We determined the genomic organization of the human ADTB3A gene, with intron/exon boundaries, and describe a third patient with beta3A deficiency. This 5-y-old boy has two nonsense mutations, C1578T (R-->X) and G2028T (E-->X), which produce no ADTB3A mRNA and no beta3A protein. The associated mu3 subunit of AP-3 is also entirely absent. In fibroblasts, the cell biologic concomitant of this deficiency is robust and aberrant trafficking through the plasma membrane of LAMP-3, an integral lysosomal membrane protein normally carried directly to the lysosome. The clinical concomitant is a severe, G-CSF-responsive neutropenia in addition to oculocutaneous albinism and platelet storage pool deficiency. Our findings expand the molecular, cellular, and clinical spectrum of HPS-2 and call for an increased index of suspicion for this diagnosis among patients with features of albinism, bleeding, and neutropenia.

Nonsense mutations in ADTB3A cause complete deficiency of the beta3A subunit of adaptor complex-3 and severe Hermansky-Pudlak syndrome type 2.

Syndrome Hermansky-Pudlak (HPS) est une maladie autosomique r&eacute;cessive compos&eacute; d&#39;Albinisme oculo-cutan&eacute; et un d&eacute;ficit de pool de stockage r&eacute;sultant en l&#39;absence des corps denses de plaquettes. La maladie est g&eacute;n&eacute;tiquement h&eacute;t&eacute;rog&egrave;ne. La majorit&eacute; des patients, y compris les membres d&#39;une grande g&eacute;n&eacute;tiques isoler au nord-ouest de Porto Rico, ont des mutations dans HPS1. Un autre g&egrave;ne, ADTB3A, a &eacute;t&eacute; montr&eacute; pour causer des HPS-2 chez les deux fr&egrave;res ayant des mutations h&eacute;t&eacute;rozygotes compos&eacute;es permettant une production r&eacute;siduelle du produit du g&egrave;ne, la sous-unit&eacute; beta3A d&#39;adaptateur complexe-3 (AP-3). Ce complexe h&eacute;t&eacute;rot&eacute;tram&egrave;res sert une formation m&eacute;diation de prot&eacute;ine de manteau de v&eacute;sicules intracellulaires, par exemple le m&eacute;lanosomes et plaquettes corps dense, des membranes du r&eacute;seau trans-Golgi. Nous avons d&eacute;termin&eacute; l&#39;organisation g&eacute;nomique du g&egrave;ne humain ADTB3A, avec les limites de l&#39;intron/exon et d&eacute;crire un troisi&egrave;me patient pr&eacute;sentant un d&eacute;ficit en beta3A. Ce gar&ccedil;on de 5 ans a deux mutations non-sens, C1578T (R--&gt; X) et G2028T (E--&gt; X), qui produisent aucun ARNm ADTB3A et pas beta3A de prot&eacute;ines. La sous-unit&eacute; mu3 associ&eacute; d&#39;AP-3 est &eacute;galement totalement absent. Dans les fibroblastes, le concomitante biologique cellulaire de cette carence est robuste et aberrant de trafic &agrave; travers la membrane de plasma de lampe-3, une prot&eacute;ine int&eacute;grale de membrane lysosomale normalement transport&eacute;e directement vers les lysosomes. En m&ecirc;me temps que la clinique est une neutrop&eacute;nie s&eacute;v&egrave;re, d&eacute;clench&eacute; par G-CSF en plus de d&eacute;ficit albinisme albinisme et plaquettes storage pool en. Nos constatations &eacute;largir le spectre mol&eacute;culaire, cellulaire et clinique de HPS-2 et r&eacute;clament un augmentation indice de suspicion pour ce diagnostic chez les patients avec des caract&eacute;ristiques de l&#39;albinisme, saignements et neutrop&eacute;nie.

Mutations non-sens ADTB3A cause manque complet de la sous-unit&eacute; beta3A de syndrome adaptateur 3-complexe et grave Hermansky-Pudlak tapez 2.

Nonsense-Mutationen in ADTB3A verursachen vollst&#xE4;ndigen Mangel des beta3A Untereinheit von Komplex-Adapter-3 und schwere Hermansky-Pudlak-Syndrom Typ 2.

Sindrome di Hermansky-Pudlak (HPS) &egrave; una malattia autosomica recessiva, costituito da un deficit di pool storage derivanti dall&#39;assenza di corpi densi piastrinici e albinismo oculocutaneo. La patologia &egrave; geneticamente eterogenea. La maggior parte dei pazienti, compresi i membri di una grande genetici isolato a nord-ovest di Puerto Rico, hanno mutazioni in HPS1. Un altro gene, ADTB3A, ha dimostrato di provocare HPS-2 in due fratelli avendo mutazioni eterozigoti composte che ha permesso per la produzione di residui del prodotto del gene, la subunit&agrave; beta3A dell&#39;adattatore complesso-3 (AP-3). Questo complesso heterotetrameric serve come una formazione di cappotto della proteina-mediazione delle vescicole intracellulari, ad esempio il melanosoma e piastrine corpo denso, da membrane della rete trans-Golgi. Abbiamo determinato l&#39;organizzazione genomica del gene umano ADTB3A, con i confini esone/introne e descrivere un terzo paziente con deficit di beta3A. Questo 5-y-vecchio ragazzo ha due mutazioni nonsenso, C1578T (R--&gt; X) e G2028T (E--&gt; X), che produce mRNA no ADTB3A e no proteina della beta3a. La subunit&agrave; mu3 associato di AP-3 &egrave; inoltre totalmente assente. In fibroblasti, la concomitante biologica delle cellule di questo deficit &egrave; robusto e aberrante traffico attraverso la membrana plasmatica della lampada-3, una proteina integrale di membrana lisosomiale normalmente trasportata direttamente al lisosoma. La clinica concomitante &egrave; una neutropenia grave, G-CSF-reattiva oltre all&#39;albinismo albinismo e piastrine deficit di pool storage. I nostri risultati espandere lo spettro molecolare, cellulare e clinico di HPS-2 e chiamano per un maggiore indice di sospetto per questa diagnosi tra i pazienti con caratteristiche di albinismo, sanguinamento e neutropenia.

Mutazioni nonsenso in ADTB3A causa deficit completo della subunit&agrave; beta3A della sindrome di Hermansky-Pudlak grave e complesso-3 adattatore tipo 2.

&#x30CF;&#x30FC;&#x30DE;&#x30F3;&#x30B9;&#x30AD;&#x30FC;&#x30D1;&#x30C9; &#x30E9;&#x30C3;&#x30AF;&#x75C7;&#x5019;&#x7FA4; &#xFF08;HPS&#xFF09; &#x773C;&#x76AE;&#x819A;&#x767D;&#x76AE;&#x75C7;&#x30FB;&#x8840;&#x5C0F;&#x677F;&#x5BC6;&#x306A;&#x30DC;&#x30C7;&#x30A3;&#x306E;&#x4E0D;&#x5728;&#x304B;&#x3089;&#x751F;&#x3058;&#x308B;&#x30B9;&#x30C8;&#x30EC;&#x30FC;&#x30B8; &#x30D7;&#x30FC;&#x30EB;&#x6B20;&#x4E4F;&#x304B;&#x3089;&#x6210;&#x308B;&#x3001;&#x5E38;&#x67D3;&#x8272;&#x4F53;&#x52A3;&#x6027;&#x75BE;&#x60A3;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x969C;&#x5BB3;&#x306F;&#x907A;&#x4F1D;&#x7684;&#x306B;&#x4E0D;&#x5747;&#x4E00;&#x3067;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x907A;&#x4F1D;&#x306E;&#x5927;&#x898F;&#x6A21;&#x306A;&#x30E1;&#x30F3;&#x30D0;&#x30FC;&#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x60A3;&#x8005;&#x306E;&#x5927;&#x534A;&#x306F;&#x30D7;&#x30A8;&#x30EB;&#x30C8;&#x30EA;&#x30B3;&#x3067;&#x306F;&#x5317;&#x897F;&#x90E8;&#x3092;&#x5206;&#x96E2;&#x3001;&#x5909;&#x7570; HPS1 &#x3067;&#x6301;&#x3063;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x5225;&#x306E;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x3001;ADTB3A&#x3001;&#x30A2;&#x30C0;&#x30D7;&#x30BF;&#x30FC; &#x30B3;&#x30F3;&#x30D7;&#x30EC;&#x30C3;&#x30AF;&#x30B9;-3 &#xFF08;ap &#x901A;&#x4FE1;-3&#xFF09; &#x306E; beta3A &#x30B5;&#x30D6;&#x30E6;&#x30CB;&#x30C3;&#x30C8;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x7523;&#x7269;&#x306E;&#x6B8B;&#x7559;&#x306E;&#x751F;&#x7523;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x8A31;&#x53EF;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x5316;&#x5408;&#x7269;&#x306E;&#x30D8;&#x30C6;&#x30ED;&#x5909;&#x7570;&#x3092;&#x6301;&#x3064; 2 &#x3064;&#x306E;&#x5144;&#x5F1F;&#x306E; HPS 2 &#x3092;&#x5F15;&#x304D;&#x8D77;&#x3053;&#x3059;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x793A;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x306E; heterotetrameric &#x306E;&#x8907;&#x96D1;&#x306A;&#x30B3;&#x30FC;&#x30C8;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x3092;&#x4EF2;&#x4ECB;&#x3059;&#x308B;&#x5F62;&#x6210;&#x7D30;&#x80DE;&#x5185;&#x5C0F;&#x80DE;&#x306E;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x4F8B;&#x3048;&#x3070;&#x30E1;&#x30E9;&#x30CE;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x3068;&#x8840;&#x5C0F;&#x677F;&#x9AD8;&#x5BC6;&#x5EA6;&#x4F53;&#x819C;&#x306E;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30B4;&#x30EB;&#x30B8; &#x30CD;&#x30C3;&#x30C8;&#x30EF;&#x30FC;&#x30AF;&#x304B;&#x3089;&#x3002;&#x30A8;&#x30AD;&#x30BD;&#x30F3;/&#x30A4;&#x30F3;&#x30C8;&#x30ED;&#x30F3;&#x5883;&#x754C;&#x3068;&#x4EBA;&#x9593;&#x306E; ADTB3A &#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x30B2;&#x30CE;&#x30E0;&#x69CB;&#x9020;&#x3092;&#x6C7A;&#x5B9A;&#x3057;&#x3001;3 &#x756A;&#x76EE;&#x306E;&#x60A3;&#x8005; beta3A &#x6B20;&#x4E4F;&#x3092;&#x8A18;&#x8FF0;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x306E; 5 y &#x306E;&#x7537;&#x5150;&#x304C; 2 &#x3064;&#x306E;&#x30CA;&#x30F3;&#x30BB;&#x30F3;&#x30B9;&#x7A81;&#x7136;&#x5909;&#x7570; C1578T (X--&gt; R) &#x3068; G2028T (E--&gt; X) &#x304C;&#x306A;&#x3044; ADTB3A mRNA &#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x306A;&#x3044; beta3A &#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x3092;&#x4F5C;&#x308A;&#x51FA;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x307E;&#x305F; AP 3 &#x306E;&#x95A2;&#x9023; mu3 &#x30B5;&#x30D6;&#x30E6;&#x30CB;&#x30C3;&#x30C8;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x5B8C;&#x5168;&#x306B;&#x6B20;&#x5E2D;&#x3002;&#x7DDA;&#x7DAD;&#x82BD;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x751F;&#x7269;&#x5B66;&#x7684;&#x540C;&#x6642;&#x4F75;&#x7528;&#x3053;&#x306E;&#x6B20;&#x4E4F;&#x306E;&#x5805;&#x7262;&#x3067;&#x7570;&#x5E38;&#x30E9;&#x30F3;&#x30D7;-3&#x3001;&#x901A;&#x5E38;&#x76F4;&#x63A5;&#x30EA;&#x30BD;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x306B;&#x904B;&#x3070;&#x30EA;&#x30BD;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x819C;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x819C;&#x3092;&#x901A;&#x3057;&#x3066;&#x4EBA;&#x8EAB;&#x58F2;&#x8CB7;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x81E8;&#x5E8A;&#x306E;&#x4F75;&#x7528;&#x306F;&#x53B3;&#x3057;&#x3044;&#x3001;G CSF &#x5FDC;&#x7B54;&#x6027;&#x597D;&#x4E2D;&#x7403;&#x6E1B;&#x5C11;&#x773C;&#x76AE;&#x819A;&#x767D;&#x76AE;&#x75C7;&#x3001;&#x8840;&#x5C0F;&#x677F;&#x30B9;&#x30C8;&#x30EC;&#x30FC;&#x30B8; &#x30D7;&#x30FC;&#x30EB;&#x6B20;&#x4E4F;&#x306B;&#x52A0;&#x3048;&#x3066;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005; &#x306E;&#x8ABF;&#x67FB;&#x7D50;&#x679C;&#x306F;&#x3001;HPS 2 &#x306E;&#x5206;&#x5B50;&#x3001;&#x7D30;&#x80DE;&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x81E8;&#x5E8A;&#x30B9;&#x30DA;&#x30AF;&#x30C8;&#x30EB;&#x3092;&#x5C55;&#x958B;&#x3057;&#x3001;&#x5897;&#x52A0;&#x306E;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C7;&#x30C3;&#x30AF;&#x30B9;&#x306E;&#x7591;&#x3044;&#x3053;&#x306E;&#x8A3A;&#x65AD;&#x60A3;&#x8005;&#x306E;&#x9593;&#x3067;&#x767D;&#x5B50;&#x75C7;&#x3001;&#x51FA;&#x8840;&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x597D;&#x4E2D;&#x7403;&#x6E1B;&#x5C11;&#x75C7;&#x306E;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3092;&#x547C;&#x3073;&#x51FA;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

ADTB3A &#x539F;&#x56E0;&#x306E;&#x5B8C;&#x5168;&#x306A;&#x6B20;&#x4E4F;&#x306E;&#x30CA;&#x30F3;&#x30BB;&#x30F3;&#x30B9;&#x5909;&#x7570;&#x30A2;&#x30C0;&#x30D7;&#x30BF;&#x30FC; &#x30B3;&#x30F3;&#x30D7;&#x30EC;&#x30C3;&#x30AF;&#x30B9; 3 &#x3068;&#x91CD;&#x75C7;&#x30CF;&#x30FC;&#x30DE;&#x30F3;&#x30B9;&#x30AD;&#x30FC;&#x30D1;&#x30C9; &#x30E9;&#x30C3;&#x30AF;&#x75C7;&#x5019;&#x7FA4;&#x306E; beta3A &#x30B5;&#x30D6;&#x30E6;&#x30CB;&#x30C3;&#x30C8;&#x306E; 2 &#x3092;&#x5165;&#x529B;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

Hermansky Pudlak &#xC99D;&#xD6C4;&#xAD70; (HPS) oculocutaneous albinism &#xBC0F; &#xD608;&#xC18C;&#xD310; &#xC870;&#xBC00;&#xD55C; &#xBC14;&#xB514; &#xACB0; &#xC11D;&#xC5D0;&#xC11C; &#xACB0;&#xACFC; &#xC800;&#xC7A5;&#xC18C; &#xD480; &#xACB0;&#xD54D;&#xC73C;&#xB85C; &#xAD6C;&#xC131; &#xB41C; &#xC0C1; &#xC5FC;&#xC0C9;&#xCCB4; &#xC5F4;&#xC131; &#xC9C8;&#xD658;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC7A5;&#xC560;&#xB294; &#xC720;&#xC804;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xB2E4;&#xB978; &#xC720;&#xD615;&#xC758;. &#xD658;&#xC790;&#xC758; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC758; &#xD070; &#xBA64;&#xBC84;&#xB97C; &#xD3EC;&#xD568; &#xD558; &#xC5EC; &#xB300;&#xBD80;&#xBD84; &#xBD81; &#xC11C; &#xD478;&#xC5D0; &#xB974; &#xD1A0; &#xB9AC;&#xCF54;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBD84;&#xB9AC;, hps1&#xC5D0; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774;. &#xB2E4;&#xB978; &#xC720;&#xC804;&#xC790;, ADTB3A, HPS-2 &#xB450; &#xD615;&#xC81C;&#xB294; &#xBCF5;&#xD569; heterozygous &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xC5B4;&#xB311;&#xD130; &#xBCF5;&#xC7A1;-3 (ap &#xD1B5;&#xC2E0;-3) beta3A &#xC18C; &#xB2E8;&#xC704; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xC81C;&#xD488;&#xC758; &#xC794;&#xC5EC; &#xC0DD;&#xC0B0;&#xC744; &#xC704;&#xD574; &#xD5C8;&#xC6A9; &#xD558;&#xB294; &#xB370;&#xC5D0; &#xC6D0;&#xC778;&#xC774; &#xD45C;&#xC2DC; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC774; heterotetrameric&#xB294; &#xBCF5;&#xC7A1; &#xD55C; &#xC5ED;&#xD560; &#xC138;&#xD3EC;&#xB0B4; vesicles&#xC758; &#xC678; &#xD22C; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC744; &#xC911;&#xC7AC; &#xD615;&#xC131;&#xC744; &#xC608;&#xB97C; &#xB4E4;&#xBA74; melanosome &#xBC0F; &#xD608;&#xC18C;&#xD310; &#xC870;&#xBC00;&#xD55C; &#xBAB8;, &#xD2B8;&#xB79C;&#xC2A4; Golgi &#xB124;&#xD2B8;&#xC6CC;&#xD06C;&#xC758; &#xC138;&#xD3EC; &#xB9C9;&#xC5D0;&#xC11C;. &#xC6B0;&#xB9AC; intron/exon &#xACBD;&#xACC4;&#xC640; &#xC778;&#xAC04;&#xC758; ADTB3A &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC758; &#xAC8C;&#xB188; &#xC870;&#xC9C1;&#xC744; &#xACB0;&#xC815; &#xD558; &#xACE0; beta3A &#xACB0;&#xD54D;&#xACFC; &#xC138; &#xBC88;&#xC9F8; &#xD658;&#xC790;&#xB97C; &#xC124;&#xBA85; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774; 5 y &#xB41C; &#xC544;&#xC774; &#xB450; &#xB9D0;&#xB3C4; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774;, C1578T (X--&gt; R) &#xBC0F; G2028T (E--&gt; X) &#xC77C;&#xC744; &#xC544;&#xB2C8; ADTB3A Mrna&#xC640; &#xC544;&#xBB34; beta3A &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC0DD;&#xC0B0;. AP 3&#xC758; &#xAD00;&#xB828;&#xB41C; mu3 &#xC18C; &#xB2E8;&#xC704;&#xB294; &#xB610;&#xD55C; &#xC644;&#xC804;&#xD788; &#xACB0; &#xC11D;. &#xAC8C;&#xC7AC;,&#xC774; &#xBD80;&#xC871;&#xC758; &#xC140; &#xC0DD;&#xBB3C; &#xD559;&#xC801; &#xC218; &#xBC18;&#xD558;&#xB294; &#xAC15;&#xB825; &#xD558; &#xACE0; &#xD0C8; &#xC120; &#xB7A8;&#xD504;-3, &#xC77C;&#xBC18;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xB9AC;&#xC18C;&#xC880;&#xC5D0; &#xC9C1;&#xC811; &#xC2E4;&#xC2DC; &#xD544;&#xC218;&#xC801;&#xC778; lysosomal &#xB9C9; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xD50C;&#xB77C;&#xC988;&#xB9C8; &#xBA64;&#xBE0C;&#xB808;&#xC778;&#xC744; &#xD1B5;&#xD574; &#xC778;&#xC2E0; &#xB9E4;&#xB9E4;. &#xC784;&#xC0C1; &#xC218; &#xBC18;&#xD558;&#xB294; &#xD638; &#xC911;&#xAD6C; &#xAC10;&#xC18C;&#xB294; &#xC2EC;&#xD55C;, G-CSF-&#xBC18;&#xC751; &#xC99D; oculocutaneous albinism &#xBC0F; &#xD608;&#xC18C;&#xD310; &#xC800;&#xC7A5; &#xC218;&#xC601;&#xC7A5; &#xBD80;&#xC871; &#xC678;&#xC5D0;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xC5F0;&#xAD6C; &#xACB0;&#xACFC; HPS 2&#xC758; &#xBD84;&#xC790;, &#xC138;&#xD3EC;, &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; &#xC784;&#xC0C1; &#xC2A4;&#xD399;&#xD2B8;&#xB7FC;&#xC744; &#xD655;&#xC7A5; &#xD558; &#xACE0; albinism, &#xCD9C;&#xD608;, &#xD638; &#xC911;&#xAD6C; &#xAC10;&#xC18C; &#xC99D;&#xC758; &#xD2B9;&#xC9D5;&#xC744; &#xAC00;&#xC9C4; &#xD658;&#xC790; &#xB4E4;&#xC774; &#xC9C4;&#xB2E8;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC758;&#xD639;&#xC758; &#xC99D;&#xAC00; &#xC778;&#xB371;&#xC2A4;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC804;&#xD654;.

&#xC5B4;&#xB311;&#xD130; &#xBCF5;&#xC7A1; &#xD55C;-3&#xC640; &#xC2EC;&#xD55C; Hermansky Pudlak &#xC99D;&#xD6C4;&#xAD70;&#xC758; beta3A &#xC18C; &#xB2E8;&#xC704; ADTB3A &#xC6D0;&#xC778; &#xC644;&#xC804; &#xD55C; &#xACB0;&#xD54D;&#xC5D0; &#xB10C;&#xC13C;&#xC2A4; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; 2&#xB97C; &#xC785;&#xB825;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

S&iacute;ndrome de Hermansky-Pudlak (HPS) es una enfermedad autos&oacute;mica recesiva de albinismo oculocutaneous y una deficiencia de la piscina de almacenamiento resultantes de ausencia de cuerpos densos de la plaqueta. El trastorno es gen&eacute;tico heterog&eacute;neo. La mayor&iacute;a de los pacientes, incluyendo a miembros de una gran gen&eacute;ticos aislar en noroeste de Puerto Rico, tienen mutaciones en HPS1. Otro gen, ADTB3A, fue demostrada para causar HPS-2 en dos hermanos con mutaciones heterozig&oacute;ticas compuestas que permitieron la producci&oacute;n residual del producto del gen, la subunidad de beta3A del adaptador complex-3 (AP-3). Este complejo de heterotetram&eacute;rico sirve como una formaci&oacute;n de prote&iacute;na-mediaci&oacute;n de la capa de ves&iacute;culas intracelulares, por ejemplo el melanosoma y plaquetas cuerpo denso, de las membranas de la red de trans-Golgi. Determinamos la organizaci&oacute;n gen&oacute;mica del gen humano de ADTB3A, con l&iacute;mites del intr&oacute;n/del ex&oacute;n y describir a un tercer paciente con deficiencia de beta3A. Este muchacho de 5 y tiene dos mutaciones de absurdo, C1578T (R--&gt; X) y G2028T (E--&gt; X), que producen no ADTB3A mRNA y ninguna prote&iacute;na de beta3A. La subunidad mu3 asociado de AP-3 tambi&eacute;n est&aacute; totalmente ausente. En fibroblastos, concomitante biol&oacute;gico celular de esta deficiencia es robusta y aberrante de tr&aacute;fico a trav&eacute;s de la membrana plasm&aacute;tica de la l&aacute;mpara-3, una prote&iacute;na integral de la membrana lisosomal normalmente llevada directamente al lisosoma. La cl&iacute;nica concomitante es una neutropenia severa, G-CSF responden adem&aacute;s Oculocut&aacute;neo albinismo y plaquetas deficiencia pool de almacenamiento. Nuestros resultados ampl&iacute;an el espectro molecular, celular y cl&iacute;nico de HPS-2 y piden un mayor &iacute;ndice de la suspicacia para este diagn&oacute;stico en los pacientes con las caracter&iacute;sticas del albinismo, sangrado y neutropenia.

Las mutaciones de absurdo en ADTB3A causa deficiencia completa de la subunidad de beta3A del s&iacute;ndrome de Hermansky-Pudlak severa y complejo-3 adaptador tipo 2.

Syndrome Hermansky-Pudlak (HPS) est une maladie h&eacute;morragique h&eacute;r&eacute;ditaire affectant les granules denses de plaquettes des organites subcellulaires, les lysosomes et les m&eacute;lanosomes. Les g&egrave;nes de souris pour HPS, oreille p&acirc;le et pearl orthologues aux humains HPS1 et HPS2 (ADTB3A) g&egrave;nes, codent pour une prot&eacute;ine nouvelle fonction inconnue et la sous-unit&eacute; A de b&ecirc;ta (3) de l&#39;adaptateur AP-3 complexe, respectivement. Pour tester les interactions entre ces g&egrave;nes dans la production et la fonction des organites intracellulaires in vivo, souris doublement homozygotes pour les 2 g&egrave;nes mutants ont &eacute;t&eacute; produites par &eacute;levage appropri&eacute;. Coop&eacute;ration entre les deux g&egrave;nes dans la production de m&eacute;lanosomes &eacute;tait &eacute;vidente dans hypo pigmentation accrue de la couche de finition avec des modifications quantitatives et qualitatives dramatiques des m&eacute;lanosomes de l&#39;&eacute;pith&eacute;lium pigmentaire de la r&eacute;tine et la choro&iuml;de des souris mutantes doubles. Anomalies de granules denses lysosomal et plaquettes, y compris ant&eacute;hypophysaire des enzymes lysosomiaux des reins et la d&eacute;pression des concentrations de s&eacute;rotonine de granules denses plaquettaire &eacute;taient &eacute;galement plus s&eacute;v&egrave;res en double que les mutants simples. Aussi, les concentrations de l&#39;enzyme lysosomale &eacute;taient augment&eacute;es dans les poumons des souris mutantes doubles. Interaction entre les 2 g&egrave;nes est sp&eacute;cifique &agrave; cet effets sur les organites se limitaient &agrave; des m&eacute;lanosomes, lysosomes et des granules denses aux plaquettes. Ensemble, la preuve indique ces 2 fonction de g&egrave;nes HPS en grande partie ind&eacute;pendamment au niveau organisme entier d&#39;influer sur la production et fonction de tous les 3 organites. De plus, les niveaux de l&#39;enzyme lysosomale accrue dans les poumons des souris mutantes doubles semblent indiquer une cause d&#39;un probl&egrave;me clinique majeur de HPS, fibrose pulmonaire. Enfin, les souris doublement mutantes de HPS sont un mod&egrave;le de laboratoire utiles pour l&#39;analyse des ph&eacute;notypes HPS s&eacute;v&egrave;res.

Le syndrome Hermansky-Pudlak 1 (HPS1) et HPS2 g&egrave;nes contribuent ind&eacute;pendamment &agrave; la production et la fonction des plaquettes granules denses, m&eacute;lanosomes et lysosomes.

Die Hermansky-Pudlak Syndrom 1 (HPS 1) und HPS2 Gene unabh&#xE4;ngig f&#xFC;r die Produktion und Funktion von Blutpl&#xE4;ttchen Granula, Melanosomen und Lysosomen wirken.

&#x7EFC;&#x5408;&#x5F81; (HPS) &#x662F;&#x5F71;&#x54CD;&#x76F8;&#x5173;&#x7684;&#x4E9A;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5668;&#x8840;&#x5C0F;&#x677F;&#x81F4;&#x5BC6;&#x9897;&#x7C92;&#x3001; &#x6EB6;&#x9176;&#x4F53;&#x548C;&#x9ED1;&#x8272;&#x7D20;&#x7EC6;&#x80DE;&#x9057;&#x4F20;&#x51FA;&#x8840;&#x6027;&#x75BE;&#x75C5;&#x3002;&#x9AD8;&#x538B;&#x94A0;&#x706F;&#x3001; &#x82CD;&#x767D;&#x8033;&#x548C;&#x73CD;&#x73E0;&#x3001; &#x4EBA;&#x7C7B; HPS1 &#x548C; HPS2 orthologous &#x5C0F;&#x9F20;&#x57FA;&#x56E0; (ADTB3A) &#x7684;&#x57FA;&#x56E0;&#xFF0C;&#x5BF9;&#x672A;&#x77E5;&#x51FD;&#x6570;&#x7684;&#x4E00;&#x79CD;&#x65B0;&#x578B;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x548C;&#x590D;&#x6742;&#xFF0C;AP 3 &#x9002;&#x914D;&#x5668;&#x7684; beta &#xFF08;3&#xFF09; A &#x4E9A;&#x5206;&#x522B;&#x8FDB;&#x884C;&#x7F16;&#x7801;&#x3002;&#x82E5;&#x8981;&#x6D4B;&#x8BD5;&#x4F53;&#x5185;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x5728;&#x751F;&#x4EA7;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x57FA;&#x56E0;&#x548C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5185;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5668;&#x7684;&#x529F;&#x80FD;&#xFF0C;&#x901A;&#x8FC7;&#x9002;&#x5F53;&#x7684;&#x80B2;&#x79CD;&#x5236;&#x4F5C;&#x4E86;&#x53CC;&#x5408;&#x5B50; 2 &#x7A81;&#x53D8;&#x57FA;&#x56E0;&#x7684;&#x5C0F;&#x9F20;&#x3002;&#x9ED1;&#x8272;&#x7D20;&#x7684; 2 &#x57FA;&#x56E0;&#x4E4B;&#x95F4;&#x7684;&#x5408;&#x4F5C;&#x5F88;&#x660E;&#x663E;&#x589E;&#x52A0;&#x8272;&#x6591;&#x7684;&#x9ED1;&#x8272;&#x7D20;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x89C6;&#x7F51;&#x819C;&#x8272;&#x7D20;&#x4E0A;&#x76AE;&#x53CA;&#x8109;&#x7EDC;&#x819C;&#x7684;&#x53CC;&#x57FA;&#x56E0;&#x7A81;&#x53D8;&#x5C0F;&#x9F20;&#x620F;&#x5267;&#x6027;&#x7684;&#x5B9A;&#x91CF;&#x548C;&#x5B9A;&#x6027;&#x6539;&#x5EFA;&#x548C;&#x5916;&#x5957;&#x3002;Lysosomal &#x548C;&#x8840;&#x5C0F;&#x677F;&#x7684;&#x81F4;&#x5BC6;&#x9897;&#x7C92;&#x5F02;&#x5E38;&#xFF0C;&#x5305;&#x62EC;&#x4ECE;&#x80BE;&#x810F;&#x6EB6;&#x9176;&#x4F53;&#x7684;&#x9176; hyposecretion &#x548C;&#x6291;&#x90C1;&#x75C7;&#x7684; 5-&#x7F9F;&#x8272;&#x80FA;&#x6D53;&#x5EA6;&#x7684;&#x8840;&#x5C0F;&#x677F;&#x81F4;&#x5BC6;&#x9897;&#x7C92;&#x4E5F;&#x66F4;&#x4E25;&#x91CD;&#x53CC;&#x6BD4;&#x5355;&#x4E2A;&#x7A81;&#x53D8;&#x4F53;&#x4E2D;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;&#x6EB6;&#x9176;&#x4F53;&#x7684;&#x9176;&#x6D53;&#x5EA6;&#x5927;&#x5E45;&#x4E0A;&#x5347;&#x53CC;&#x57FA;&#x56E0;&#x7A81;&#x53D8;&#x5C0F;&#x9F20;&#x7684;&#x80BA;&#x90E8;&#x3002;2 &#x57FA;&#x56E0;&#x4E4B;&#x95F4;&#x7684;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x662F;&#x5177;&#x4F53;&#x7684;&#x8FD9;&#x5BF9;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5668;&#x7684;&#x5F71;&#x54CD;&#x5C40;&#x9650;&#x4E8E;&#x9ED1;&#x8272;&#x7D20;&#x7EC6;&#x80DE;&#x3001; &#x6EB6;&#x9176;&#x4F53;&#x3001; &#x548C;&#x8840;&#x5C0F;&#x677F;&#x81F4;&#x5BC6;&#x9897;&#x7C92;&#x3002;&#x5728;&#x4E00;&#x8D77;&#xFF0C;&#x6709;&#x8BC1;&#x636E;&#x8868;&#x660E;&#x8FD9;&#x4E9B; 2 &#x9AD8;&#x538B;&#x94A0;&#x706F;&#x57FA;&#x56E0;&#x529F;&#x80FD;&#x5F88;&#x5927;&#x7A0B;&#x5EA6;&#x4E0A;&#x72EC;&#x7ACB;&#x5730;&#x5728;&#x6574;&#x4E2A;&#x673A;&#x4F53;&#x4E00;&#x7EA7;&#x5F71;&#x54CD;&#x751F;&#x4EA7;&#x548C;&#x6240;&#x6709; 3 &#x7EC6;&#x80DE;&#x5668;&#x7684;&#x529F;&#x80FD;&#x3002;&#x66F4;&#x8FDB;&#x4E00;&#x6B65;&#xFF0C;&#x589E;&#x52A0;&#x6EB6;&#x9176;&#x4F53;&#x7684;&#x9176;&#x6C34;&#x5E73;&#x53CC;&#x7A81;&#x53D8;&#x5C0F;&#x9F20;&#x80BA;&#x5185;&#x5EFA;&#x8BAE;&#x4E3B;&#x8981;&#x4E34;&#x5E8A;&#x95EE;&#x9898;&#x7684;&#x6210;&#x56E0;&#x4E0E;&#x9AD8;&#x538B;&#x94A0;&#x706F;&#xFF0C;&#x80BA;&#x7EA4;&#x7EF4;&#x5316;&#x3002;&#x6700;&#x540E;&#xFF0C;&#x9AD8;&#x538B;&#x94A0;&#x706F;&#x53CC;&#x91CD;&#x7A81;&#x53D8;&#x5C0F;&#x9F20;&#x662F;&#x6709;&#x7528;&#x7684;&#x5B9E;&#x9A8C;&#x5BA4;&#x6A21;&#x578B;&#x5206;&#x6790;&#x7684;&#x8868;&#x578B;&#x9AD8;&#x538B;&#x94A0;&#x706F;&#x4E25;&#x91CD;&#x3002;

&#x7EFC;&#x5408;&#x5F81; 1 (HPS1) &#x548C; HPS2 &#x57FA;&#x56E0;&#x72EC;&#x7ACB;&#x751F;&#x4EA7;&#x548C;&#x4F5C;&#x51FA;&#x8D21;&#x732E;&#x7684;&#x8840;&#x5C0F;&#x677F;&#x81F4;&#x5BC6;&#x9897;&#x7C92;&#x3001; &#x9ED1;&#x8272;&#x7D20;&#x7EC6;&#x80DE;&#x548C;&#x6EB6;&#x9176;&#x4F53;&#x7684;&#x529F;&#x80FD;&#x3002;

Hermansky-Pudlak syndrome (HPS) is an inherited hemorrhagic disease affecting the related subcellular organelles platelet dense granules, lysosomes, and melanosomes. The mouse genes for HPS, pale ear and pearl, orthologous to the human HPS1 and HPS2 (ADTB3A) genes, encode a novel protein of unknown function and the beta(3)A subunit of the AP-3 adaptor complex, respectively. To test for in vivo interactions between these genes in the production and function of intracellular organelles, mice doubly homozygous for the 2 mutant genes were produced by appropriate breeding. Cooperation between the 2 genes in melanosome production was evident in increased hypopigmentation of the coat together with dramatic quantitative and qualitative alterations of melanosomes of the retinal pigment epithelium and choroid of double mutant mice. Lysosomal and platelet dense granule abnormalities, including hyposecretion of lysosomal enzymes from kidneys and depression of serotonin concentrations of platelet dense granules were likewise more severe in double than single mutants. Also, lysosomal enzyme concentrations were significantly increased in lungs of double mutant mice. Interaction between the 2 genes was specific in that effects on organelles were confined to melanosomes, lysosomes, and platelet dense granules. Together, the evidence indicates these 2 HPS genes function largely independently at the whole organism level to affect the production and function of all 3 organelles. Further, the increased lysosomal enzyme levels in lung of double mutant mice suggest a cause of a major clinical problem of HPS, lung fibrosis. Finally, doubly mutant HPS mice are a useful laboratory model for analysis of severe HPS phenotypes.

The Hermansky-Pudlak syndrome 1 (HPS1) and HPS2 genes independently contribute to the production and function of platelet dense granules, melanosomes, and lysosomes.

Sindrome di Hermansky-Pudlak (HPS) &egrave; una malattia emorragica ereditaria che colpisce i granuli densi correlati organelli sottocellulari piastrinica, lisosomi e melanosomi. I geni del mouse per HPS, orecchio pallido e perla, orthologous umano HPS1 e HPS2 geni (ADTB3A), codifica una proteina novella di funzione ignota e la subunit&agrave; A beta (3) dell&#39;AP-3 adattatore complesso, rispettivamente. Per verificare in vivo interazioni tra questi geni per la produzione e la funzione degli organelli intracellulari, topi doppiamente omozigoti per i geni mutanti 2 furono prodotti da allevamento appropriato. Cooperazione fra i 2 geni in produzione melanosoma era evidente in aumento ipopigmentazione del cappotto insieme drammatiche alterazioni quantitative e qualitative di melanosomi dell&#39;epitelio pigmentato della retina e coroide di topi mutanti doppi. Anomalie di granuli densi lysosomal e delle piastrine, compresi iposecrezione degli enzimi lisosomiali dai reni e depressione delle concentrazioni di serotonina di granuli densi piastrinici erano similarmente pi&ugrave; severe in matrimoniale pi&ugrave; singoli mutanti. Inoltre, concentrazioni di enzima lisosomiale erano notevolmente aumentati nei polmoni di topi mutanti doppi. Interazione tra i 2 geni era specifico, in effetti su organelli furono confinati a melanosomi, lisosomi e granuli densi piastrinici. Insieme, l&#39;evidenza indica questi 2 funzione geni HPS in gran parte indipendente a livello di tutto l&#39;organismo a influenzare la produzione e funzione degli organelli tutti 3. Ulteriormente, i livelli di enzima lisosomiale aumentato nel polmone di topi mutanti doppi suggeriscono una causa di un grave problema clinico di HPS, fibrosi polmonare. Infine, doppiamente mutanti HPS topi sono un modello di laboratorio utili per l&#39;analisi di gravi fenotipi HPS.

La sindrome di Hermansky-Pudlak 1 (HPS1) e HPS2 geni contribuiscono in modo indipendente per la produzione e la funzione dei granuli densi piastrinici, melanosomi e lisosomi.

&#x30CF;&#x30FC;&#x30DE;&#x30F3;&#x30B9;&#x30AD;&#x30FC;&#x30D1;&#x30C9; &#x30E9;&#x30C3;&#x30AF;&#x75C7;&#x5019;&#x7FA4; (HPS) &#x95A2;&#x9023;&#x7D30;&#x80DE;&#x5C0F;&#x5668;&#x5B98;&#x306E;&#x8840;&#x5C0F;&#x677F;&#x306E;&#x5BC6;&#x5EA6;&#x306E;&#x9AD8;&#x3044;&#x9846;&#x7C92;, &#x30EA;&#x30BD;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;, &#x3068;&#x30E1;&#x30E9;&#x30CE;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x306B;&#x5F71;&#x97FF;&#x3092;&#x4E0E;&#x3048;&#x308B;&#x907A;&#x4F1D;&#x6027;&#x51FA;&#x8840;&#x6027;&#x75BE;&#x60A3;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50; HPS&#x3001;&#x6DE1;&#x3044;&#x8033;&#x3068;&#x771F;&#x73E0;&#x3001;&#x4EBA;&#x9593;&#x306E; HPS1 &#x3068; HPS2 &#x306E;&#x30AA;&#x30FC;&#x30BD;&#x30ED;&#x30B0;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50; (ADTB3A)&#x3001;&#x30A8;&#x30F3;&#x30B3;&#x30FC;&#x30C9;&#x672A;&#x77E5;&#x95A2;&#x6570;&#x306E;&#x65B0;&#x898F;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x3068;&#x8907;&#x96D1;&#x306A; AP 3 &#x30A2;&#x30C0;&#x30D7;&#x30BF;&#x30FC;&#x306E;&#x30D9;&#x30FC;&#x30BF;&#x7248; (3) A &#x30B5;&#x30D6;&#x30E6;&#x30CB;&#x30C3;&#x30C8;&#x305D;&#x308C;&#x305E;&#x308C;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x751F;&#x7523;&#x3068;&#x7D30;&#x80DE;&#x5C0F;&#x5668;&#x5B98;&#x306E;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3068;&#x751F;&#x4F53;&#x5185;&#x3067;&#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x3092;&#x30C6;&#x30B9;&#x30C8;&#x3059;&#x308B;&#x306B;&#x306F;&#x3001;&#x4E8C;&#x91CD;&#x3001;2 &#x306E;&#x5909;&#x7570;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x30DB;&#x30E2;&#x63A5;&#x5408;&#x4F53;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x9069;&#x5207;&#x306A;&#x7E41;&#x6B96;&#x3092;&#x751F;&#x7523;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x30E1;&#x30E9;&#x30CE;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x751F;&#x7523;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B; 2 &#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x9593;&#x306E;&#x5354;&#x529B;&#x306F;&#x5897;&#x52A0;&#x8272;&#x7D20;&#x8131;&#x5931;&#x306E;&#x7DB2;&#x819C;&#x8272;&#x7D20;&#x4E0A;&#x76AE;&#x306E;&#x30E1;&#x30E9;&#x30CE;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x3068;&#x8108;&#x7D61;&#x819C;&#x306E;&#x4E8C;&#x91CD;&#x5909;&#x7570;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x306E;&#x5287;&#x7684;&#x306A;&#x91CF;&#x7684;&#x30FB;&#x8CEA;&#x7684;&#x5909;&#x5316;&#x3068;&#x4E00;&#x7DD2;&#x306B;&#x30B3;&#x30FC;&#x30C8;&#x3067;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x814E;&#x81D3;&#x304B;&#x3089;&#x306E;&#x30E9;&#x30A4;&#x30BD;&#x30BE;&#x30FC;&#x30E0;&#x9175;&#x7D20;&#x306E;&#x5206;&#x6CCC;&#x3068;&#x3046;&#x3064;&#x75C5;&#x30BB;&#x30ED;&#x30C8;&#x30CB;&#x30F3;&#x6FC3;&#x5EA6;&#x3068;&#x8840;&#x5C0F;&#x677F;&#x5BC6;&#x9846;&#x7C92;&#x3092;&#x542B;&#x3080; Lysosomal &#x3068;&#x8840;&#x5C0F;&#x677F;&#x306E;&#x5BC6;&#x5EA6;&#x306E;&#x9AD8;&#x3044;&#x9846;&#x7C92;&#x7570;&#x5E38;&#x3044;&#x305F;&#x540C;&#x69D8;&#x306B;&#x3088;&#x308A;&#x6DF1;&#x523B;&#x306A;&#x5358;&#x4E00;&#x306E;&#x5909;&#x7570;&#x3088;&#x308A;&#x3082;&#x30C0;&#x30D6;&#x30EB;&#x3067;&#x3002;&#x307E;&#x305F;&#x3001;&#x30EA;&#x30BD;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x9175;&#x7D20;&#x6FC3;&#x5EA6;&#x306F;&#x4E8C;&#x91CD;&#x5909;&#x7570;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x306E;&#x80BA;&#x3067;&#x6709;&#x610F;&#x306B;&#x5897;&#x52A0;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;2 &#x306E;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x9593;&#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x306F;&#x7D30;&#x80DE;&#x5C0F;&#x5668;&#x5B98;&#x306B;&#x53CA;&#x307C;&#x3059;&#x30E1;&#x30E9;&#x30CE;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x3001;&#x30EA;&#x30BD;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;, &#x8840;&#x5C0F;&#x677F;&#x5BC6;&#x9846;&#x7C92;&#x306B;&#x9650;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x305F;&#x3053;&#x3068;&#x7279;&#x5B9A;&#x3067;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x4E00;&#x7DD2;&#x306B;&#x3001;&#x8A3C;&#x62E0;&#x306F;&#x3001;&#x3053;&#x308C;&#x3089; 2 &#x306E; HPS &#x306E;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x6A5F;&#x80FD;&#x306E;&#x751F;&#x7523;&#x306B;&#x5F71;&#x97FF;&#x3059;&#x308B;&#x4E3B;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x72EC;&#x7ACB;&#x3057;&#x3066;&#x5168;&#x4F53;&#x306E;&#x751F;&#x7269;&#x306E;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x3067;&#x3001;&#x3059;&#x3079;&#x3066; 3 &#x7D30;&#x80DE;&#x5C0F;&#x5668;&#x5B98;&#x306E;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x3001;&#x5897;&#x52A0;&#x306E;&#x30E9;&#x30A4;&#x30BD;&#x30BE;&#x30FC;&#x30E0;&#x9175;&#x7D20;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x306E;&#x4E8C;&#x91CD;&#x5909;&#x7570;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x306E;&#x80BA;&#x306F; HPS&#x3001;&#x80BA;&#x7DDA;&#x7DAD;&#x75C7;&#x306E;&#x4E3B;&#x8981;&#x306A;&#x81E8;&#x5E8A;&#x7684;&#x554F;&#x984C;&#x306E;&#x539F;&#x56E0;&#x3092;&#x304A;&#x52E7;&#x3081;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6700;&#x5F8C;&#x306B;&#x3001;&#x4E8C;&#x91CD;&#x5909;&#x7570; HPS &#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x8868;&#x73FE;&#x578B; HPS &#x91CD;&#x5EA6;&#x306E;&#x89E3;&#x6790;&#x306E;&#x6709;&#x7528;&#x306A;&#x5B9F;&#x9A13;&#x5BA4;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x3067;&#x3059;&#x3002;

&#x30CF;&#x30FC;&#x30DE;&#x30F3;&#x30B9;&#x30AD;&#x30FC;&#x30D1;&#x30C9; &#x30E9;&#x30C3;&#x30AF;&#x75C7;&#x5019;&#x7FA4; 1 (HPS1) &#x3068; HPS2 &#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x304C;&#x72EC;&#x7ACB;&#x306B;&#x8CA2;&#x732E;&#x3057;&#x306A;&#x3044;&#x751F;&#x7523;&#x3068;&#x8840;&#x5C0F;&#x677F;&#x5BC6;&#x9846;&#x7C92;&#x3001;&#x30E1;&#x30E9;&#x30CE;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;, &#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x30EA;&#x30BD;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x306E;&#x95A2;&#x6570;&#x306B;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

Hermansky Pudlak &#xC99D;&#xD6C4;&#xAD70; (HPS)&#xC5D0; &#xC601;&#xD5A5;&#xC744; &#xBBF8;&#xCE58;&#xB294; &#xAD00;&#xB828;&#xB41C; subcellular organelles &#xD608;&#xC18C;&#xD310; &#xACE0;&#xBC00;&#xB3C4; &#xB9BD;, &#xB9AC;&#xC18C;&#xC880;, &#xBC0F; melanosomes &#xC0C1;&#xC18D; &#xB41C; &#xCD9C;&#xD608; &#xC131; &#xC9C8;&#xD658;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;. HPS, &#xCC3D;&#xBC31;&#xD55C; &#xADC0;&#xC640; &#xC9C4;&#xC8FC;, &#xC778;&#xAC04; HPS1 &#xBC0F; HPS2 orthologous &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4; &#xC720;&#xC804;&#xC790; (ADTB3A) &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xB294; &#xAC01;&#xAC01; &#xC54C; &#xC218; &#xC5C6;&#xB294; &#xD568;&#xC218; &#xC18C;&#xC124; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xACFC; &#xBCA0;&#xD0C0; (3) A &#xC18C; &#xB2E8;&#xC704; &#xBCF5;&#xC7A1; &#xD558; &#xACE0;, AP 3 &#xC5B4;&#xB311;&#xD130;&#xC758; &#xC778;&#xCF54;&#xB529;. &#xC0DD;&#xC0B0;&#xC5D0;&#xC774; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC640; &#xC138;&#xD3EC;&#xB0B4; organelles&#xC758; &#xAE30;&#xB2A5; &#xC0AC;&#xC774;&#xC758; vivo&#xC5D0;&#xC11C; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC744; &#xD14C;&#xC2A4;&#xD2B8; &#xD558;&#xB824;&#xBA74; &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4; 2 &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC774;&#xC911; homozygous &#xC801;&#xD569; &#xD55C; &#xBC88; &#xC2DD;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC0DD;&#xC0B0; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;. Melanosome &#xC0DD;&#xC0B0;&#xC5D0;&#xC11C; 2 &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xC0AC;&#xC774;&#xC758; &#xD611;&#xB825; melanosomes &#xB9DD;&#xB9C9; &#xC0C9;&#xC18C; &#xC0C1;&#xD53C;&#xC640; &#xB9E5;&#xB77D; &#xB9C9;&#xC758; &#xC774;&#xC911; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xC0DD;&#xC950;&#xC758; &#xADF9;&#xC801;&#xC778; &#xC591;&#xC801; &#xBC0F; &#xC9C8;&#xC801; &#xBCC0;&#xACBD; &#xD568;&#xAED8; &#xCF54;&#xD2B8;&#xC758; &#xC99D;&#xAC00; hypopigmentation&#xC5D0; &#xBD84;&#xBA85; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC2E0;&#xC7A5;&#xC5D0;&#xC11C; lysosomal &#xD6A8;&#xC18C;&#xC758; hyposecretion &#xB4F1; &#xD608;&#xC18C;&#xD310;&#xACFC; &#xB9BD; &#xBC00;&#xB3C4;&#xC758; &#xC138;&#xB85C;&#xD1A0;&#xB2CC; &#xB18D;&#xB3C4;&#xC758; &#xC6B0;&#xC6B8;&#xC99D; Lysosomal &#xBC0F; &#xD608;&#xC18C;&#xD310; &#xACE0;&#xBC00;&#xB3C4; &#xB9BD; &#xC774;&#xC0C1; &#xD588;&#xB2E4; &#xB9C8;&#xCC2C;&#xAC00;&#xC9C0;&#xB85C; &#xB354; &#xC2EC;&#xD55C; &#xB2E8;&#xC77C; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xBCF4;&#xB2E4; &#xB450;&#xC5D0;&#xC11C;. &#xB610;&#xD55C;, lysosomal &#xD6A8;&#xC18C; &#xB18D;&#xB3C4; &#xC774;&#xC911; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xC0DD;&#xC950;&#xC758; &#xD3D0;&#xC5D0; &#xD06C;&#xAC8C; &#xC99D;&#xAC00; &#xD588;&#xB2E4;. 2 &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xAC04;&#xC758; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC740; &#xADF8; organelles&#xC5D0; &#xD6A8;&#xACFC; melanosomes, &#xB9AC;&#xC18C;&#xC880;, &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; &#xD608;&#xC18C;&#xD310; &#xACE0;&#xBC00;&#xB3C4; &#xB9BD;&#xC5D0; &#xAD6D;&#xD55C; &#xB41C; &#xD2B9;&#xC815;. &#xD568;&#xAED8;, &#xC99D;&#xAC70; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; 2 &#xC0DD;&#xC0B0;&#xC5D0; &#xC601;&#xD5A5;&#xC744; &#xBBF8;&#xCE60; &#xC804;&#xCCB4; &#xC720;&#xAE30; &#xCCB4; &#xC218;&#xC900;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD06C;&#xAC8C; &#xB3C5;&#xB9BD;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; HPS &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xAE30;&#xB2A5; &#xBC0F; &#xBAA8;&#xB4E0; 3 organelles&#xC758; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC744; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0C5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB610;&#xD55C;, &#xC774;&#xC911; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xC0DD;&#xC950;&#xC758; &#xD3D0;&#xC5D0; &#xC99D;&#xAC00; lysosomal &#xD6A8;&#xC18C; &#xC218;&#xC900; HPS, &#xD3D0; &#xC12C;&#xC720; &#xC99D;&#xC758; &#xC8FC;&#xC694; &#xC784;&#xC0C1; &#xBB38;&#xC81C;&#xC758; &#xC6D0;&#xC778;&#xC744; &#xC81C;&#xC548;. &#xB9C8;&#xC9C0;&#xB9C9;&#xC73C;&#xB85C;, &#xC774;&#xC911; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; HPS &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4;&#xB294; &#xC2EC;&#xD55C; HPS &#xACE0;&#xAE30;&#xC758; &#xBD84;&#xC11D;&#xC744; &#xC704;&#xD55C; &#xC720;&#xC6A9;&#xD55C; &#xC2E4;&#xD5D8;&#xC2E4; &#xBAA8;&#xB378;.

Hermansky Pudlak &#xC99D;&#xD6C4;&#xAD70; 1 (HPS1) HPS2 &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xB97C; &#xB3C5;&#xB9BD;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xD558;&#xC9C0; &#xC0DD;&#xC0B0; &#xBC0F; &#xD608;&#xC18C;&#xD310; &#xACE0;&#xBC00;&#xB3C4; &#xB9BD;, melanosomes, &#xB9AC;&#xC18C;&#xC880;&#xC758; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC5D0; &#xAE30;&#xC5EC; &#xD558; &#xACE0; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

S&iacute;ndrome de Hermansky-Pudlak (HPS) es una enfermedad hemorr&aacute;gica hereditaria que afecta a los gr&aacute;nulos densos de la plaqueta de organelos subcelulares relacionados, lisosomas y melanosomas. Los genes de rat&oacute;n para HPS, o&iacute;do p&aacute;lido y perla, orthologous a los humanos HPS1 y HPS2 (ADTB3A) genes, codificar una nueva prote&iacute;na de funci&oacute;n desconocida y la subunidad beta (3) del adaptador AP-3 complejo, respectivamente. Para probar en vivo interacciones entre estos genes en la producci&oacute;n y funci&oacute;n de los organelos intracelulares, doblemente homocig&oacute;ticos para los genes mutantes 2 ratones fueron producidos por la crianza apropiada. Cooperaci&oacute;n entre los 2 genes en producci&oacute;n melanosome fue evidente en la creciente hipopigmentaci&oacute;n de la capa junto con dram&aacute;ticas alteraciones cuantitativas y cualitativas de los melanosomas del epitelio pigmentario de la retina y la coroides de ratones mutantes dobles. Anormalidades de gr&aacute;nulo denso lisosomal y plaquetas, incluyendo hiposecreci&oacute;n de enzimas lisosomales de los ri&ntilde;ones y la depresi&oacute;n de las concentraciones de serotonina de gr&aacute;nulos densos de la plaqueta adem&aacute;s eran m&aacute;s severas en doble que solo mutantes. Adem&aacute;s, las concentraciones de la enzima lisosomal aumentaron significativamente en pulmones de ratones mutantes dobles. Interacci&oacute;n entre los 2 genes fue espec&iacute;fico en que efectos en organelos se limitaron a melanosomas, lisosomas y gr&aacute;nulos densos de la plaqueta. Juntos, la evidencia indica que estos 2 funci&oacute;n de genes HPS en gran parte independientemente en el nivel del organismo entero para afectar la producci&oacute;n y funci&oacute;n de todos los 3 organelos. Adem&aacute;s, los niveles de enzimas lisosomales aumento en pulm&oacute;n de ratones mutantes dobles sugieren una causa de un problema cl&iacute;nico importante de HPS, fibrosis pulmonar. Finalmente, ratones HPS doblemente mutantes son un modelo de laboratorio &uacute;tiles para el an&aacute;lisis de fenotipos severos de HPS.

El s&iacute;ndrome de Hermansky-Pudlak 1 (HPS1) y HPS2 genes independientemente contribuyen a la producci&oacute;n y funci&oacute;n de los lisosomas, gr&aacute;nulos densos de la plaqueta y melanosomas.

The Eps15 homology (EH) domain-containing protein, EHD1, has recently been ascribed a role in the recycling of receptors internalized by clathrin-mediated endocytosis. A subset of plasma membrane proteins can undergo internalization by a clathrin-independent pathway regulated by the small GTP-binding protein ADP-ribosylation factor 6 (Arf6). Here, we report that endogenous EHD proteins, as well as transgenic tagged EHD1, are associated with long, membrane-bound tubules containing Arf6. EHD1 appears to induce tubule formation, which requires nucleotide cycling on Arf6 and intact microtubules. Mutations in the N-terminal P-loop domain or deletion of the C-terminal EH domain of EHD1 prevent association of EHD1 with tubules or induction of tubule formation. The EHD1 tubules contain internalized major histocompatibility complex class I (MHC-I) molecules that normally traffic through the Arf6 pathway. Recycling assays show that overexpression of EHD1 enhances MHC-I recycling. These observations suggest an additional function of EHD1 as a tubule-inducing factor in the Arf6 pathway for recycling of plasma membrane proteins internalized by clathrin-independent endocytosis.

A tubular EHD1-containing compartment involved in the recycling of major histocompatibility complex class I molecules to the plasma membrane.

&#x6700;&#x8FD1;&#x4E00;&#x76F4;&#x5728; Eps15 (EH) &#x540C;&#x6E90;&#x57DF;&#x5305;&#x542B;&#x86CB;&#x767D;&#xFF0C;EHD1&#xFF0C;&#x8D4B;&#x4E88;&#x4E86;&#x56DE;&#x6536;&#x7684;&#x5185;&#x5728;&#x5316;&#x7684;&#x7F51;&#x683C;&#x86CB;&#x767D;&#x4ECB;&#x5BFC;&#x7684;&#x5185;&#x541E;&#x4F5C;&#x7528;&#x7684;&#x53D7;&#x4F53;&#x7684;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;&#x7B49;&#x79BB;&#x5B50;&#x819C;&#x86CB;&#x767D;&#x7684;&#x4E00;&#x4E2A;&#x5B50;&#x96C6;&#x53EF;&#x4EE5;&#x7531;&#x72EC;&#x7ACB;&#x4E8E;&#x7F51;&#x683C;&#x86CB;&#x767D;&#x7684;&#x901A;&#x8DEF;&#xFF0C;&#x53D7;&#x5C0F; GTP &#x7ED3;&#x5408;&#x86CB;&#x767D; ADP &#x6838;&#x7CD6;&#x56E0;&#x5B50; 6 (Arf6) &#x63A5;&#x53D7;&#x5185;&#x90E8;&#x5316;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x62A5;&#x544A;&#x5185;&#x6E90;&#x6027; EHD &#x86CB;&#x767D;&#xFF0C;&#x4EE5;&#x53CA;&#x8F6C;&#x57FA;&#x56E0;&#x6807;&#x7B7E;&#x7684; EHD1&#xFF0C;&#x90FD;&#x4E0E;&#x5173;&#x8054;&#x957F;&#x3001; &#x819C;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x5305;&#x542B; Arf6 &#x7684;&#x80BE;&#x5C0F;&#x7BA1;&#x3002;EHD1 &#x51FA;&#x73B0;&#xFF0C;&#x4FC3;&#x4F7F;&#x8840;&#x7BA1;&#x7684;&#x5F62;&#x6210;&#xFF0C;&#x9700;&#x8981;&#x5FAA;&#x73AF;&#x5BF9; Arf6 &#x548C;&#x5B8C;&#x597D;&#x5FAE;&#x7BA1;&#x7684;&#x6838;&#x82F7;&#x9178;&#x3002;N &#x7EC8;&#x7AEF; P &#x73AF;&#x57DF;&#x6216;&#x5220;&#x9664; EHD1 &#x7684; C &#x7EC8;&#x7AEF; EH &#x57DF;&#x7684;&#x7A81;&#x53D8;&#x9632;&#x6B62;&#x534F;&#x4F1A; EHD1 &#x4E0E;&#x80BE;&#x5C0F;&#x7BA1;&#x6216;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x7684;&#x80BE;&#x5C0F;&#x7BA1;&#x5F62;&#x6210;&#x3002;EHD1 &#x80BE;&#x5C0F;&#x7BA1;&#x5305;&#x542B;&#x5185;&#x5728;&#x5316;&#x4E3B;&#x8981;&#x7EC4;&#x7EC7;&#x76F8;&#x5BB9;&#x6027;&#x590D;&#x5408;&#x7C7B;&#x6211; (MHC-&#x6211;&#xFF09; &#x901A;&#x5E38;&#x4EA4;&#x901A;&#x901A;&#x8FC7; Arf6 &#x901A;&#x8DEF;&#x7684;&#x5206;&#x5B50;&#x3002;&#x56DE;&#x6536;&#x5316;&#x9A8C;&#x663E;&#x793A;&#x8BE5;&#x8868;&#x8FBE;&#x7684; EHD1 &#x529F;&#x80FD;&#x589E;&#x5F3A;&#x4E86; MHC-&#x6211;&#x56DE;&#x6536;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x610F;&#x89C1;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x72EC;&#x7ACB;&#x7684;&#x7F51;&#x683C;&#x86CB;&#x767D;&#x5185;&#x541E;&#x4F5C;&#x7528;&#x7684;&#x5185;&#x5728;&#x5316;&#x7684;&#x8D28;&#x819C;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x7684;&#x56DE;&#x6536; Arf6 &#x901A;&#x8DEF;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x80BE;&#x5C0F;&#x7BA1;&#x56E0;&#x7D20;&#x8868;&#x660E; EHD1 &#x9644;&#x52A0;&#x529F;&#x80FD;&#x3002;

&#x94A2;&#x7BA1; EHD1 &#x542B;&#x8F66;&#x53A2;&#x53C2;&#x4E0E;&#x56DE;&#x6536;&#x7684;&#x4E3B;&#x8981;&#x7EC4;&#x7EC7;&#x76F8;&#x5BB9;&#x6027;&#x590D;&#x5408;&#x7C7B;&#x6211;&#x5230;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8D28;&#x819C;&#x7684;&#x5206;&#x5B50;&#x3002;

La prot&eacute;ine contenant du domaine d&#39;un homologie (EH) Eps15, EHD1, a r&eacute;cemment &eacute;t&eacute; attribu&eacute; un r&ocirc;le dans le recyclage des r&eacute;cepteurs internalis&eacute;s par endocytose clathrine. Un sous-ensemble des prot&eacute;ines de la membrane plasmique peut subir l&#39;internalisation par une voie ind&eacute;pendante de clathrine r&eacute;glement&eacute;e par le facteur d&#39;ADP-ribosylation de prot&eacute;ines liant le GTP petit 6 (Arf6). Nous rapportons ici que les prot&eacute;ines endog&egrave;nes de DHM, ainsi que EHD1 &eacute;tiquet&eacute; transg&eacute;nique, sont associ&eacute;s avec longs, li&eacute;e &agrave; la membrane des tubules contenant Arf6. EHD1 semble induire la formation de tubules, qui exige des nucl&eacute;otides cyclisme sur Arf6 et microtubules intacts. Des mutations dans le domaine de la boucle P N-terminal ou de la suppression du domaine C-terminal EH de EHD1 emp&ecirc;chent l&#39;association de EHD1 avec tubules ou induction de formation de tubules. Les tubules EHD1 contiennent la classe complexe majeur d&#39;histocompatibilit&eacute; int&eacute;rioris&eacute;e je (MHC-je) mol&eacute;cules que normalement le trafic &agrave; travers la voie Arf6. Recyclage des dosages spectacle que la surexpression de EHD1 am&eacute;liore la MHC-I recyclage. Ces observations sugg&egrave;rent une fonction suppl&eacute;mentaire de EHD1 comme un facteur inducteur de tubule dans la voie Arf6 pour le recyclage des prot&eacute;ines de la membrane plasmique internalis&eacute;s par endocytose clathrine ind&eacute;pendant.

Un tube contenant EHD1 compartiment impliqu&eacute; dans le recyclage de classe complexe majeur d&#39;histocompatibilit&eacute; j&#39;ai des mol&eacute;cules de la membrane plasmique.

Eine r&#xF6;hrenf&#xF6;rmige EHD1-enthaltenden Kompartiment in das Recycling von Haupthistokompatibilit&#xE4;tskomplex Klasse I-Molek&#xFC;le beteiligt an der Plasmamembran.

La proteina di dominio contenenti omologia (EH) di Eps15, EHD1, recentemente &egrave; stato attribuito un ruolo nel riciclaggio dei recettori interiorizzati attraverso l&#39;endocitosi Clatrina-mediata. Un sottoinsieme delle proteine di membrana del plasma pu&ograve; subire interiorizzazione di un percorso indipendente dalla Clatrina regolato dalla piccolo GTP-binding proteina ADP-ribosylation del fattore 6 (Arf6). Riportiamo qui, proteine EHD endogene, come pure EHD1 tagged transgenico, sono associati con tubuli lunghi, membrana-limiti contenente Arf6. EHD1 appare per indurre la formazione del tubulo, che richiede nucleotide ciclismo su Arf6 e microtubuli intatti. Mutazioni nel dominio N-terminale P-loop o eliminazione del dominio C-terminale EH di EHD1 evitare l&#39;associazione di EHD1 con tubuli o induzione della formazione del tubulo. I tubuli EHD1 contengono classe complesso maggiore di istocompatibilit&agrave; interiorizzato I (MHC-I) molecole che normalmente il traffico attraverso il pathway Arf6. Visualizza dosaggi di riciclaggio che sovraespressione di EHD1 migliora la MHC-io riciclo. Queste osservazioni suggeriscono una funzione aggiuntiva di EHD1 come un fattore che induce tubulo nella via della Arf6 per il riciclaggio delle proteine di membrana plasmatica interiorizzate attraverso l&#39;endocitosi clatrina-indipendente.

Un tubolare contenente EHD1 vano coinvolto nel riciclaggio della classe complesso maggiore di istocompatibilit&agrave; sono molecole di membrana del plasma.

Eps15 &#x76F8;&#x540C;&#x6027; (EH) &#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x3001;EHD1&#x3001;&#x6700;&#x8FD1;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x30EA;&#x30B5;&#x30A4;&#x30AF;&#x30EB; &#x30AF;&#x30E9;&#x30B9;&#x30EA;&#x30F3;&#x4ECB;&#x5728;&#x578B;&#x30A8;&#x30F3;&#x30C9;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x5185;&#x9762;&#x5316;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x306E;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x5E30;&#x3059;&#x308B;&#x3002;&#x30D7;&#x30E9;&#x30BA;&#x30DE;&#x819C;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x30B5;&#x30D6;&#x30BB;&#x30C3;&#x30C8;&#x5185;&#x5316; 6 (Arf6) &#x5C0F; GTP &#x7D50;&#x5408;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x306E; ADP &#x30EA;&#x30DC;&#x30B7;&#x30EB;&#x5316;&#x56E0;&#x5B50;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x5236;&#x5FA1;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x30AF;&#x30E9;&#x30B9;&#x30EA;&#x30F3;&#x4F9D;&#x5B58;&#x7D4C;&#x8DEF;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x3092;&#x53D7;&#x3051;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x5185;&#x56E0;&#x6027;&#x306E; EHD &#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x7D44;&#x63DB;&#x3048;&#x306E;&#x30BF;&#x30B0;&#x306E; EHD1 &#x3068; Arf6 &#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x306E;&#x9577;&#x3044;&#x3001;&#x819C;&#x7D50;&#x5408;&#x578B;&#x306E;&#x5C3F;&#x7D30;&#x7BA1;&#x304C;&#x95A2;&#x9023;&#x4ED8;&#x3051;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x5831;&#x544A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;EHD1 &#x30B5;&#x30A4;&#x30AF;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0; Arf6 &#x3068;&#x305D;&#x306E;&#x307E;&#x307E;&#x5FAE;&#x5C0F;&#x7BA1;&#x30CC;&#x30AF;&#x30EC;&#x30AA;&#x30C1;&#x30C9;&#x304C;&#x5FC5;&#x8981;&#x306A;&#x5C3F;&#x7D30;&#x7BA1;&#x5F62;&#x6210;&#x3092;&#x8A98;&#x5C0E;&#x3059;&#x308B;&#x304C;&#x8868;&#x793A;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;P-&#x30EB;&#x30FC;&#x30D7;&#x30D1;&#x30B9; N &#x672B;&#x7AEF;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x307E;&#x305F;&#x306F; EHD1 &#x306E; C &#x672B;&#x7AEF;&#x306E; EH &#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x306E;&#x524A;&#x9664;&#x306E;&#x5909;&#x7570;&#x7D30;&#x7BA1;&#x3068; EHD1 &#x306E;&#x5354;&#x4F1A;&#x3084;&#x5C3F;&#x7D30;&#x7BA1;&#x5F62;&#x6210;&#x306E;&#x8A98;&#x5C0E;&#x3092;&#x9632;&#x3050;&#x3002;EHD1 &#x7D30;&#x7BA1;&#x306B;&#x306F;&#x5185;&#x9762;&#x4E3B;&#x8981;&#x7D44;&#x7E54;&#x9069;&#x5408;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x8907;&#x5408;&#x4F53;&#x30AF;&#x30E9;&#x30B9;&#x304C;&#x542B;&#x307E;&#x308C;&#x3066;&#x79C1;&#x306F; &#xFF08;MHC-&#x79C1;&#x306F;&#xFF09; &#x901A;&#x5E38; Arf6 &#x7D4C;&#x8DEF;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x3066;&#x30C8;&#x30E9;&#x30D5;&#x30A3;&#x30C3;&#x30AF;&#x5206;&#x5B50;&#x3002;&#x30EA;&#x30B5;&#x30A4;&#x30AF;&#x30EB; &#x30A2;&#x30C3;&#x30BB;&#x30A4; &#x30B7;&#x30E7;&#x30FC; EHD1 &#x306E;&#x904E;&#x5270;&#x767A;&#x73FE;&#x3092;&#x9AD8;&#x3081;&#x308B; MHC-&#x79C1;&#x306F;&#x30EA;&#x30B5;&#x30A4;&#x30AF;&#x30EB;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x89B3;&#x5BDF;&#x306F;&#x30AF;&#x30E9;&#x30B9;&#x30EA;&#x30F3;&#x72EC;&#x7ACB;&#x30A8;&#x30F3;&#x30C9;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x5185;&#x9762;&#x5316;&#x30D7;&#x30E9;&#x30BA;&#x30DE;&#x819C;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x30EA;&#x30B5;&#x30A4;&#x30AF;&#x30EB;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x306F;&#x3001;Arf6 &#x7D4C;&#x8DEF;&#x306E;&#x7D30;&#x7BA1;&#x3092;&#x8A98;&#x767A;&#x3059;&#x308B;&#x8981;&#x56E0;&#x3068;&#x3057;&#x3066; EHD1 &#x306E;&#x4ED8;&#x52A0;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3092;&#x63D0;&#x6848;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x92FC;&#x7BA1; EHD1 &#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x30B3;&#x30F3;&#x30D1;&#x30FC;&#x30C8;&#x30E1;&#x30F3;&#x30C8; &#x30EA;&#x30B5;&#x30A4;&#x30AF;&#x30EB;&#x306E;&#x4E3B;&#x8981;&#x7D44;&#x7E54;&#x9069;&#x5408;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x8907;&#x5408;&#x4F53;&#x30AF;&#x30E9;&#x30B9;&#x79C1;&#x306F;&#x5206;&#x5B50;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x819C;&#x306B;&#x95A2;&#x4E0E;&#x3002;

EHD1, Eps15 homology (EH) &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778;&#xC5D0; &#xD3EC;&#xD568; &#xB41C; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC740; &#xCD5C;&#xADFC;&#xC5D0; endocytosis clathrin &#xC911;&#xC7AC; &#xD558; &#xC5EC; &#xB0B4; &#xBA74;&#xD654; &#xD558;&#xB294; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4;&#xC758; &#xC7AC;&#xC0DD;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xAD00;&#xCC30; &#xC791;&#xC6A9;. &#xD50C;&#xB77C;&#xC988;&#xB9C8; &#xBA64;&#xBE0C;&#xB808;&#xC778; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xBD80;&#xBD84; &#xC9D1;&#xD569; clathrin &#xB3C5;&#xB9BD;&#xC801;&#xC778; &#xD1B5;&#xB85C; &#xC791;&#xC740; GTP &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; ADP ribosylation &#xC694;&#xC18C; 6 (Arf6)&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xADDC;&#xC81C; &#xD558; &#xC5EC; &#xAD6D;&#xC81C;&#xD654;&#xB97C; &#xBC1B;&#xC744; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC5EC;&#xAE30;&#xC5D0;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xBCC0;&#xD615; &#xD0DC;&#xADF8; ehd1&#xB85C; &#xC0DD; EHD &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC5F0;&#xACB0; &#xB41C; arf6&#xB97C; &#xD3EC;&#xD568; &#xD558;&#xB294; &#xAE34;, &#xB9C9; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xB41C; tubules &#xBCF4;&#xACE0; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. EHD1 arf6&#xC5D0; &#xADF8;&#xB300;&#xB85C; microtubules &#xC0AC;&#xC774;&#xD074;&#xB9C1; &#xB274;&#xD074;&#xB808;&#xC624;&#xD2F0;&#xB4DC;&#xB97C; &#xC694;&#xAD6C; &#xD558;&#xB294; &#xAD00;&#xC758; &#xD615;&#xC131;&#xC744; &#xC720;&#xBC1C; &#xD558;&#xB294; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0A9;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xBCC0;&#xC774; N &#xB2E8;&#xC790; P &#xB8E8;&#xD504; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778; &#xB610;&#xB294; ehd1&#xC758; C-&#xD130;&#xBBF8;&#xB110; EH &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778;&#xC758; &#xC0AD;&#xC81C; &#xBC29;&#xC9C0; tubules&#xC640; ehd1&#xC758; &#xD611;&#xD68C; &#xB610;&#xB294; &#xAD00; &#xD615;&#xC131; &#xC720;&#xB3C4;. EHD1 tubules &#xB4E4;&#xC5B4; &#xB0B4; &#xBA74;&#xB41C; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xC870;&#xC9C1; &#xC801;&#xD569;&#xC131; &#xBCF5;&#xC7A1; &#xD55C; &#xD074;&#xB798;&#xC2A4; I (MHC-&#xB098;) Arf6 &#xD1B5;&#xB85C; &#xD1B5;&#xD574; &#xC815;&#xC0C1;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xAD50;&#xD1B5; &#xD558;&#xB294; &#xBD84;&#xC790;. &#xC7AC;&#xD65C;&#xC6A9; &#xBD84;&#xC11D; &#xC2E4;&#xD5D8; &#xC1FC;&#xB294; overexpression ehd1&#xC758; &#xAC15;&#xD654; MHC-&#xC7AC;&#xD65C;&#xC6A9; &#xB09C;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xAD00;&#xCE21; &#xD50C;&#xB77C;&#xC988;&#xB9C8; &#xBA64;&#xBE0C;&#xB808;&#xC778; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; clathrin &#xB3C5;&#xB9BD;&#xC801;&#xC778; endocytosis&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xB0B4; &#xBA74;&#xC758; &#xC7AC;&#xD65C;&#xC6A9;&#xC744; &#xC704;&#xD55C; Arf6 &#xD1B5;&#xB85C;&#xC5D0; &#xAD00; &#xC720;&#xBC1C; &#xC694;&#xC778;&#xC73C;&#xB85C; ehd1&#xC758; &#xCD94;&#xAC00; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC744; &#xC81C;&#xC548;.

&#xAD00; EHD1 &#xD3EC;&#xD568; &#xB41C; &#xAD6C;&#xD68D;&#xC758; &#xC7AC;&#xD65C;&#xC6A9; &#xC8FC;&#xC694; &#xC870;&#xC9C1; &#xC801;&#xD569;&#xC131; &#xBCF5;&#xC7A1; &#xD55C; &#xD074;&#xB798;&#xC2A4; &#xB098; &#xD50C;&#xB77C;&#xC988;&#xB9C8; &#xBA64;&#xBE0C;&#xB808;&#xC778; &#xBD84;&#xC790;&#xC5D0; &#xAD00;&#xC5EC;.

La prote&iacute;na Eps15 homolog&iacute;a (EH) que contiene el dominio, EHD1, recientemente ha sido atribuido un papel en el reciclaje de receptores internalizados por endocitosis mediada por clatrina. Un subconjunto de las prote&iacute;nas de la membrana plasm&aacute;tica puede someterse a la internalizaci&oacute;n por una v&iacute;a independiente de clatrina regulada por el factor de ribosilacion-la prote&iacute;na de uni&oacute;n a GTP peque&ntilde;o 6 (Arf6). Aqu&iacute;, Divulgamos que prote&iacute;nas end&oacute;genas de EHD, as&iacute; como EHD1 etiquetado de transg&eacute;nicos, se asocian con t&uacute;bulos largos, unida a la membrana que contiene Arf6. EHD1 parece inducir la formaci&oacute;n de t&uacute;bulos, que requiere de nucle&oacute;tido de Arf6 y microt&uacute;bulos intactos. Las mutaciones en el dominio N-terminal P-lazo o la eliminaci&oacute;n del dominio c-terminal EH de EHD1 evitar la Asociaci&oacute;n de EHD1 con t&uacute;bulos o la inducci&oacute;n de la formaci&oacute;n del t&uacute;bulo. Los t&uacute;bulos EHD1 contienen clase complejo de histocompatibilidad internalizada me (MHC-I) mol&eacute;culas que normalmente el tr&aacute;fico a trav&eacute;s de la v&iacute;a Arf6. Reciclaje ensayos Mostrar que la sobreexpresi&oacute;n de EHD1 mejora MHC-I reciclaje. Estas observaciones sugieren una funci&oacute;n adicional de EHD1 como un factor de t&uacute;bulo-inducci&oacute;n en el camino de Arf6 para el reciclaje de las prote&iacute;nas de la membrana plasm&aacute;tica internalizadas por endocitosis de clatrina-independiente.

Un tubular que contienen EHD1 compartimiento implicado en el reciclaje de clase complejo mayor de histocompatibilidad las mol&eacute;culas de la membrana plasm&aacute;tica.

&#x967D;&#x30A4;&#x30AA;&#x30F3;&#x72EC;&#x7ACB;&#x30DE;&#x30F3;&#x30CE;&#x30FC;&#x30B9; 6-&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53; (CI MPR) &#x30A8;&#x30F3;&#x30C9;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x3078; TGN &#x304B;&#x3089;&#x30E9;&#x30A4;&#x30BD;&#x30BE;&#x30FC;&#x30E0;&#x9175;&#x7D20;&#x524D;&#x99C6;&#x4F53;&#x306E;&#x30BD;&#x30FC;&#x30C8;&#x3092;&#x4EF2;&#x4ECB;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30A8;&#x30F3;&#x30C9;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x5185;&#x8154;&#x306B;&#x52A0;&#x6C34;&#x5206;&#x89E3;&#x9175;&#x7D20;&#x524D;&#x99C6;&#x4F53;&#x3092;&#x89E3;&#x653E;&#x3057;&#x305F;&#x5F8C;&#x3001;&#x7A7A;&#x3044;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53; TGN &#x306E;&#x4E26;&#x3079;&#x66FF;&#x3048;&#x306E;&#x3055;&#x3089;&#x306A;&#x308B;&#x30E9;&#x30A6;&#x30F3;&#x30C9;&#x3092;&#x8FD4;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x54FA;&#x4E73;&#x985E;&#x306E;&#x30EC;&#x30C8;&#x30ED;&#x30DE;&#x30FC;&#x8907;&#x5408;&#x4F53;&#x304C;&#x3053;&#x306E;&#x691C;&#x7D22;&#x7D4C;&#x8DEF;&#x3067;&#x53C2;&#x52A0;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30EC;&#x30C8;&#x30ED;&#x30DE;&#x30FC;&#x306E; hVps35 &#x30B5;&#x30D6;&#x30E6;&#x30CB;&#x30C3;&#x30C8; CI MPR &#x306E;&#x30BE;&#x30EB;&#x6027;&#x7D30;&#x80DE;&#x8CEA;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x3068;&#x5BFE;&#x8A71;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x306F;&#x3001;&#x304A;&#x305D;&#x3089;&#x304F;&#x3001;&#x30EC;&#x30C8;&#x30ED;&#x30DE;&#x30FC;&#x306E;&#x307B;&#x3068;&#x3093;&#x3069;&#x304C;&#x30ED;&#x30FC;&#x30AB;&#x30E9;&#x30A4;&#x30BA;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3001;&#x30A8;&#x30F3;&#x30C9;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0; &#x30B3;&#x30F3;&#x30D1;&#x30FC;&#x30C8;&#x30E1;&#x30F3;&#x30C8;&#x3067;&#x767A;&#x751F;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x7279;&#x306B;&#x3001;&#x30EC;&#x30C8;&#x30ED;&#x30DE;&#x30FC;&#x4E2D;&#x9593;&#x4F53;&#x3084;&#x521D;&#x671F;&#x30A8;&#x30F3;&#x30C9;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x304B;&#x3089;&#x524D;&#x671F; &#xFF5E; &#x5F8C;&#x671F;&#x30A8;&#x30F3;&#x30C9;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x304B;&#x3089;&#x6210;&#x719F;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x767A;&#x6563;&#x7BA1;&#x72B6;&#x5C0F;&#x80DE;&#x306E;&#x30D7;&#x30ED;&#x30D5;&#x30A1;&#x30A4;&#x30EB;&#x306B;&#x95A2;&#x9023;&#x4ED8;&#x3051;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;RNA &#x5E72;&#x6E09;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x30EC;&#x30C8;&#x30ED;&#x30DE;&#x30FC;&#x306E;&#x67AF;&#x6E07; CI MPR &#x306E;&#x30E9;&#x30A4;&#x30BD;&#x30BE;&#x30FC;&#x30E0;&#x306E;&#x58F2;&#x308A;&#x4E0A;&#x3052;&#x9AD8;&#x304C;&#x5897;&#x52A0;&#x3001;&#x30EA;&#x30BD;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x52A0;&#x6C34;&#x5206;&#x89E3;&#x9175;&#x7D20;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x3092;&#x6E1B;&#x5C11;&#x3055;&#x305B;&#x308B;&#x3001;&#x30EA;&#x30BD;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x306E;&#x816B;&#x308C;&#x3092;&#x5F15;&#x304D;&#x8D77;&#x3053;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x89B3;&#x5BDF;&#x3092;&#x793A;&#x3059;&#x30EC;&#x30C8;&#x30ED;&#x30DE;&#x30FC; &#x30EA;&#x30BD;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x3078;&#x306E; CI MPR &#x306E;&#x914D;&#x4FE1;&#x3092;&#x9632;&#x6B62;&#x3001;&#x304A;&#x305D;&#x3089;&#x304F;&#x30A8;&#x30F3;&#x30C9;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x6D3E;&#x751F;&#x7D30;&#x7BA1;&#x3069;&#x3053;&#x304B;&#x3089;&#x306B;&#x9694;&#x96E2;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x306B; TGN &#x3092;&#x8FD4;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x967D;&#x30A4;&#x30AA;&#x30F3;&#x72EC;&#x7ACB;&#x30DE;&#x30F3;&#x30CE;&#x30FC;&#x30B9; 6-&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x306E;&#x4E26;&#x3079;&#x66FF;&#x3048;&#x3067;&#x54FA;&#x4E73;&#x985E;&#x30EC;&#x30C8;&#x30ED;&#x30DE;&#x30FC;&#x306E;&#x5F79;&#x5272;&#x3002;

&#xC591;&#xC774;&#xC628; &#xB3C5;&#xB9BD;&#xC801;&#xC778; &#xC2A4; 6 &#xC778;&#xC0B0; &#xC5FC; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; (CI MPR) &#xC911;&#xC7AC;&#xB294; TGN&#xC5D0;&#xC11C; endosomes&#xC758; lysosomal &#xAC00;&#xC218;&#xBD84;&#xD574; &#xD6A8;&#xC18C; &#xC720;&#xB3C4;&#xCCB4;&#xC758; &#xC815;&#xB82C;. Endosomal &#xB8E8;&#xBA58;&#xC73C;&#xB85C; &#xAC00;&#xC218;&#xBD84;&#xD574; &#xD6A8;&#xC18C; &#xC720;&#xB3C4;&#xCCB4;&#xB97C; &#xBC29;&#xCD9C; &#xD6C4; &#xBE48;&#xB41C; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4;&#xB294; &#xC815;&#xB82C;&#xC758; &#xCD94;&#xAC00; &#xB77C;&#xC6B4;&#xB4DC; TGN &#xB3CC;&#xC544;&#xAC11;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC5EC;&#xAE30;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xBCF5;&#xC7A1; &#xD55C; &#xD3EC;&#xC720;&#xB958; retromer&#xC774; &#xAC80;&#xC0C9; &#xACBD;&#xB85C;&#xC5D0; &#xCC38;&#xC5EC; &#xD558; &#xACE0; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. Retromer&#xC758; hVps35 &#xC18C; &#xB2E8;&#xC704; CI MPR&#xC758; cytosolic &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC740; &#xC544;&#xB9C8; &#xB300;&#xBD80;&#xBD84;&#xC740; retromer&#xC758; &#xC9C0;&#xC5ED;&#xD654; &#xB41C; endosomal &#xAD6C;&#xD68D;&#xC5D0; &#xBC1C;&#xC0DD; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xD2B9;&#xD788;, retromer&#xB294; &#xC77C;&#xCC0D; &#xB2A6;&#xAC8C; endosomes&#xC5D0;&#xC11C; &#xC131;&#xC219;&#xC5D0; &#xC774;&#xB978; endosomes &#xB610;&#xB294; &#xC911;&#xAC04;&#xCCB4;&#xB97C; &#xC3D8;&#xC544; &#xB0B4;&#xB294; &#xAD00; &#xAE30;&#xACF5;&#xC744; &#xD504;&#xB85C;&#xD544;&#xC5D0; &#xC5F0;&#xACB0; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. RNA &#xAC04;&#xC12D;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; retromer&#xC758; &#xACE0;&#xAC08; CI MPR lysosomal &#xD68C;&#xC804;&#xC728; &#xC99D;&#xAC00; lysosomal hydrolases &#xC138;&#xD3EC; &#xC218;&#xC900;&#xC758; &#xC904;&#xC5B4;&#xB4E4;&#xACE0; &#xB9AC;&#xC18C;&#xC880;&#xC758; &#xBD93;&#xAE30;&#xC758; &#xC6D0;&#xC778;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xAD00;&#xCC30; retromer &#xB9AC;&#xC18C;&#xC880;&#xC744; CI MPR&#xB294; &#xBC30;&#xB2EC; &#xD558;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;, &#xC544;&#xB9C8;&#xB3C4; &#xC5B4;&#xB514;&#xC5D0;&#xC11C; endosome &#xD30C;&#xC0DD; tubules&#xC5D0; &#xACA9;&#xB9AC; &#xD558; &#xC5EC; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; &#xBC18;&#xD658; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4; TGN&#xC5D0; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0C5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xC591;&#xC774;&#xC628; &#xB3C5;&#xB9BD;&#xC801;&#xC778; &#xC2A4; 6 &#xC778;&#xC0B0; &#xC5FC; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4;&#xC758; &#xC815;&#xB82C;&#xC5D0; &#xD3EC;&#xC720;&#xB958; retromer&#xC758; &#xC5ED;&#xD560;.

&#x9633;&#x79BB;&#x5B50;&#x72EC;&#x7ACB;&#x7518;&#x9732;&#x7CD6; 6-&#x78F7;&#x9178;&#x53D7;&#x4F53; (CI MPR) &#x4ECB;&#x5BFC;&#x7684;&#x6EB6;&#x9176;&#x4F53;&#x6C34;&#x89E3;&#x9176;&#x524D;&#x4F53; TGN &#x4ECE; endosomes &#x5230;&#x6392;&#x5E8F;&#x3002;Endosomal &#x6D41;&#x660E;&#x5230;&#x91CA;&#x653E;&#x6C34;&#x89E3;&#x9176;&#x524D;&#x4F53;&#x540E;, &#x7F6E;&#x53D7;&#x4F53;&#x8FD4;&#x56DE;&#x5230;&#x66F4;&#x591A;&#x8F6E;&#x6392;&#x5E8F;&#x4E3A; TGN&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x663E;&#x793A;&#x590D;&#x6742;&#x7684;&#x54FA;&#x4E73;&#x52A8;&#x7269; retromer &#x53C2;&#x52A0;&#x6B64;&#x68C0;&#x7D22;&#x9014;&#x5F84;&#x3002;Retromer &#x7B2C; hVps35 &#x4E9A;&#x57FA;&#x4E0E; CI-MPR &#x80DE;&#x6D46;&#x57DF;&#x8FDB;&#x884C;&#x4EA4;&#x4E92;&#x3002;&#x8FD9;&#x79CD;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x53EF;&#x80FD;&#x53D1;&#x751F;&#x5728; endosomal &#x9694;&#x95F4;&#x91CC;&#xFF0C;&#x90A3;&#x91CC;&#x5927;&#x90E8;&#x5206;&#x7684; retromer &#x672C;&#x5730;&#x5316;&#x3002;&#x5C24;&#x5176;&#x662F;&#xFF0C;retromer &#x662F;&#x4E0E;&#x4EA7;&#x751F;&#x4ECE;&#x65E9;&#x671F; endosomes &#x6216;&#x4E2D;&#x95F4;&#x4F53;&#xFF0C;&#x4ECE;&#x65E9;&#x5230;&#x665A; endosomes &#x6210;&#x719F;&#x7684;&#x7BA1;&#x72B6;&#x6C34;&#x75B1;&#x914D;&#x7F6E;&#x6587;&#x4EF6;&#x76F8;&#x5173;&#x8054;&#x3002;Retromer RNA &#x5E72;&#x6270;&#x7684;&#x6D88;&#x8017;&#x589E;&#x52A0;&#x6EB6;&#x9176;&#x4F53;&#x8425;&#x4E1A;&#x989D;&#x7684; CI-MPR&#x3001; &#x51CF;&#x5C11;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x6EB6;&#x9176;&#x4F53;&#x6C34;&#x89E3;&#x9176;&#xFF0C;&#x6C34;&#x5E73;&#x548C;&#x5BFC;&#x81F4;&#x6EB6;&#x9176;&#x4F53;&#x80BF;&#x80C0;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x89C2;&#x5BDF;&#x7ED3;&#x679C;&#x8868;&#x660E;&#xFF0C;retromer &#x53EF;&#x9632;&#x6B62; CI-MPR &#x8FD0;&#x5F80;&#x6EB6;&#x9176;&#x4F53;&#xFF0C;&#x53EF;&#x80FD;&#x7531; endosome &#x6D3E;&#x751F;&#x80BE;&#x5C0F;&#x7BA1;&#x4ECE;&#x54EA;&#x91CC;&#x8FDB;&#x7684;&#x87AF;&#x5408;&#x4F5C;&#x7528;&#x53D7;&#x4F53;&#x8FD4;&#x56DE;&#x5230; TGN&#x3002;

&#x54FA;&#x4E73;&#x52A8;&#x7269; retromer &#x4E2D;&#x6392;&#x5E8F;&#x7684;&#x9633;&#x79BB;&#x5B50;&#x72EC;&#x7ACB;&#x7518;&#x9732;&#x7CD6; 6-&#x78F7;&#x9178;&#x53D7;&#x4F53;&#x7684;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;

The cation-independent mannose 6-phosphate receptor (CI-MPR) mediates sorting of lysosomal hydrolase precursors from the TGN to endosomes. After releasing the hydrolase precursors into the endosomal lumen, the unoccupied receptor returns to the TGN for further rounds of sorting. Here, we show that the mammalian retromer complex participates in this retrieval pathway. The hVps35 subunit of retromer interacts with the cytosolic domain of the CI-MPR. This interaction probably occurs in an endosomal compartment, where most of the retromer is localized. In particular, retromer is associated with tubular-vesicular profiles that emanate from early endosomes or from intermediates in the maturation from early to late endosomes. Depletion of retromer by RNA interference increases the lysosomal turnover of the CI-MPR, decreases cellular levels of lysosomal hydrolases, and causes swelling of lysosomes. These observations indicate that retromer prevents the delivery of the CI-MPR to lysosomes, probably by sequestration into endosome-derived tubules from where the receptor returns to the TGN.

Role of the mammalian retromer in sorting of the cation-independent mannose 6-phosphate receptor.

R&eacute;cepteur ind&eacute;pendante des cations mannose-6-phosphate (CI-MPR) intervient dans le tri des pr&eacute;curseurs de la TGN hydrolase lysosomiale endosomes. Apr&egrave;s avoir rel&acirc;ch&eacute; les pr&eacute;curseurs de l&#39;hydrolase dans la lumi&egrave;re des endosomes, le r&eacute;cepteur inoccup&eacute; retourne &agrave; la TGN pour un autre cycle de tri. Ici, nous montrons que le mammif&egrave;res retromer complexe participe &agrave; cette voie de r&eacute;cup&eacute;ration. La sous-unit&eacute; de hVps35 de retromer interagit avec le domaine cytosolique du CI-MPR. Cette interaction se produit probablement dans un compartiment endosomal, o&ugrave; la majeure partie de la retromer est localis&eacute;e. En particulier, retromer est associ&eacute; &agrave; des profils tubulaires-v&eacute;siculaires qui &eacute;manent d&#39;endosomes pr&eacute;coces ou d&#39;interm&eacute;diaires dans la maturation du d&eacute;but &agrave; la fin endosomes. Appauvrissement de la couche de retromer par l&#39;interf&eacute;rence d&#39;ARN augmente le chiffre d&#39;affaires lysosomale du CI-MPR, diminue les concentrations cellulaires des hydrolases lysosomales et provoque un gonflement des lysosomes. Ces observations indiquent que retromer emp&ecirc;che la remise du CI-MPR vers les lysosomes, probablement par s&eacute;questration dans les tubules endosome-d&eacute;riv&eacute; de l&#39;endroit o&ugrave; le r&eacute;cepteur retourne &agrave; la TGN.

R&ocirc;le de le retromer chez les mammif&egrave;res dans le tri du r&eacute;cepteur ind&eacute;pendante des cations mannose-6-phosphate.

Die Rolle der S&#xE4;uger Retromer in Sortierung des Kationen-unabh&#xE4;ngigen Mannose-6-Phosphat-Rezeptor.

Recettore indipendente dal catione mannosio-6-fosfato (CI-MPR) media l&#39;ordinamento dei precursori dell&#39;idrolasi lisosomiale dal TGN endosomes. Dopo aver rilasciato i precursori idrolasi nel lume endosomal, il recettore non occupato restituisce il TGN per ulteriori giri di ordinamento. Qui, ci mostra che il mammifero retromer complesso partecipa a questo percorso di recupero. La subunit&agrave; hVps35 di retromer interagisce con il dominio citosolico di CI-MPR. Questa interazione probabilmente si verifica in un vano endosomal, dove &egrave; localizzata la maggior parte del retromer. In particolare, retromer &egrave; associato con profili tubolari-vescicolari che emanano da early endosomes o da prodotti intermedi nella maturazione da presto per late endosomes. Esaurimento delle retromer di interferenza del RNA aumenta il fatturato lisosomiale di CI-MPR, diminuisce i livelli cellulari di idrolasi lisosomiale e provoca gonfiore dei lisosomi. Queste osservazioni indicano che retromer impedisce la consegna di CI-MPR ai lisosomi, probabilmente per il sequestro in tubuli endosoma derivato da dove il recettore torna al TGN.

Ruolo della retromer dei mammiferi nell&#39;ordinamento del recettore indipendente dal catione mannosio-6-fosfato.

Receptor independiente del cati&oacute;n manosa-6-fosfato (CI-MPR) media clasificaci&oacute;n de precursores de la hidrolasa lisosomal del TGN de endosomas. Despu&eacute;s de lanzar las precursoras de la hidrolasa en el lumen endosomal, el receptor desocupado regresa al TGN para m&aacute;s rondas de clasificaci&oacute;n. Aqu&iacute;, demostramos que el mam&iacute;fero retr&oacute;mero complejo participa en este camino de recuperaci&oacute;n. La subunidad hVps35 de retr&oacute;mero interact&uacute;a con el dominio citos&oacute;lico del CI-MPR. Esta interacci&oacute;n ocurre probablemente en un compartimento endosomal, donde se localiza la mayor parte de la retr&oacute;mero. En particular, retr&oacute;mero se asocia con perfiles tubulares-vesiculares que emanan de endosomas tempranos o de productos intermedios en la maduraci&oacute;n de endosomas temprano que tarde. Agotamiento del retr&oacute;mero por interferencia de ARN aumenta la facturaci&oacute;n lysosomal de la CI-MPR, disminuye los niveles celulares de hidrolasas lisosomales y causa hinchaz&oacute;n de lisosomas. Estas observaciones indican que retr&oacute;mero impide la entrega de la CI-MPR a lisosomas, probablemente por secuestro en t&uacute;bulos endosome derivados desde donde el receptor vuelve al TGN.

Papel de los mam&iacute;fero retr&oacute;mero en clasificaci&oacute;n del receptor independiente del cati&oacute;n manosa-6-fosfato.

&#x6211;&#x4EEC;&#x786E;&#x5B9A;&#x91CD;&#x8981;&#x7684;&#x529F;&#x80FD;&#x533A;&#x57DF;&#x5185;&#x9175;&#x6BCD; Arf1 Gea2p &#x4E0A;&#x6E38;&#x7684;&#x6D3B;&#x5316;&#x5242;&#x50AC;&#x5316; Sec7 &#x57DF;&#xFF0C;&#x7279;&#x70B9;&#x662F;&#x6E29;&#x5EA6;&#x654F;&#x611F; (ts) &#x7A81;&#x53D8;&#x4F53;&#x6C28;&#x57FA;&#x9178;&#x66FF;&#x6362;&#x8FD9;&#x4E00;&#x5730;&#x533A;&#x7684;&#x4E00;&#x5957;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B; gea2 ts &#x7A81;&#x53D8;&#x4F53;&#x963B;&#x6B62;&#x6216;&#x51CF;&#x7F13;&#x4ECE;&#x5185;&#x8D28;&#x7F51; (ER) &#x548C;&#x65E9;&#x671F;&#x7684;&#x9AD8;&#x5C14;&#x57FA;&#xFF0C;&#x904D;&#x5386;&#x5728;&#x51FA;&#x53E3;&#x5904;&#x7684;&#x5206;&#x6CCC;&#x901A;&#x8DEF;&#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#x7684;&#x8FD0;&#x8F93;&#x548C;&#x79EF;&#x7D2F; ER &#x548C;&#x65E9;&#x671F;&#x9AD8;&#x5C14;&#x57FA;&#x819C;&#x3002;&#x89C2;&#x5BDF;&#x5230;&#x4E24;&#x79CD;&#x7C7B;&#x578B;&#x7684;&#x9006;&#x884C;&#x8D29;&#x8FD0;&#x6392;&#x5E8F;&#x5316;&#x9A8C;&#x6CA1;&#x6709;&#x7F3A;&#x9677;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x53D1;&#x73B0;&#x5927;&#x91CF;&#x7684; COPI &#x662F;&#x5173;&#x8054;&#x9AD8;&#x5C14;&#x57FA;&#x819C; gea2 ts &#x7A81;&#x53D8;&#x4F53;&#xFF0C;&#x751A;&#x81F3;&#x540E;&#x957F;&#x671F;&#x6F5C;&#x4F0F;&#x5728; nonpermissive &#x7684;&#x6E29;&#x5EA6;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7A81;&#x53D8;&#x4F53; COPI &#x662F;&#x7531; brefeldin A&#xFF0C;&#x4E00;&#x79CD;&#x836F;&#x54C1;&#xFF0C;&#x5C06;&#x76F4;&#x63A5;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x5230; Gea2p&#xFF0C;&#x5E76;&#x963B;&#x6B62; Arf1 &#x6FC0;&#x6D3B;&#x4ECE;&#x9AD8;&#x5C14;&#x57FA;&#x819C;&#x4E2D;&#x91CA;&#x653E;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x7ED3;&#x679C;&#x8868;&#x660E; COPI &#x51FD;&#x6570;&#x4E2D;&#x81F3;&#x5C11;&#x4E09;&#x4E2A;&#x9006;&#x884C;&#x8D27;&#x7269;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x5185;&#x9AD8;&#x5C14;&#x57FA;&#x7684;&#x6392;&#x5E8F;&#x4E0D;&#x6270;&#x52A8;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7A81;&#x53D8;&#x4F53;&#xFF0C;&#x4F46;&#x8FDC;&#x671F;&#x8FD0;&#x8F93;&#x4E25;&#x91CD;&#x6291;&#x5236;&#x3002;&#x56E0;&#x6B64;&#x8FD9;&#x4E00;&#x533A;&#x57DF;&#x7684; Gea2p &#x4E0A;&#x6E38;&#x7684; Sec7 &#x57DF;&#x4E2D;&#x7684;&#x4F5C;&#x7528;&#x662F;&#x72EC;&#x7ACB;&#x4E8E;&#x5176;&#x4F5C;&#x7528;&#xFF0C;&#x81F3;&#x5C11;&#x9006;&#x884C;&#x8FD0;&#x8F93;&#xFF0C;&#x62DB;&#x52DF; COPI &#x7684;&#x987A;&#x884C;&#x8FD0;&#x8F93;&#x7684;&#x9AD8;&#x5C14;&#x57FA; ER &#x8D27;&#x7269;&#x7684;&#x4E00;&#x4E2A;&#x5B50;&#x96C6;&#x3002;

GEA2 Arf1p &#x6D3B;&#x5316;&#x5242;&#x4E2D;&#x4E00;&#x4E2A;&#x9AD8;&#x4FDD;&#x5B88;&#x7684;&#x533A;&#x57DF;&#x7A81;&#x53D8;&#x963B;&#x6B62;&#x987A;&#x884C;&#x9AD8;&#x5C14;&#x57FA;&#x8FD0;&#x8F93;&#x4F46;&#x4E0D;&#x662F; COPI &#x62DB;&#x52DF;&#x5230;&#x819C;&#x3002;

We have identified an important functional region of the yeast Arf1 activator Gea2p upstream of the catalytic Sec7 domain and characterized a set of temperature-sensitive (ts) mutants with amino acid substitutions in this region. These gea2-ts mutants block or slow transport of proteins traversing the secretory pathway at exit from the endoplasmic reticulum (ER) and the early Golgi, and accumulate both ER and early Golgi membranes. No defects in two types of retrograde trafficking/sorting assays were observed. We find that a substantial amount of COPI is associated with Golgi membranes in the gea2-ts mutants, even after prolonged incubation at the nonpermissive temperature. COPI in these mutants is released from Golgi membranes by brefeldin A, a drug that binds directly to Gea2p and blocks Arf1 activation. Our results demonstrate that COPI function in sorting of at least three retrograde cargo proteins within the Golgi is not perturbed in these mutants, but that forward transport is severely inhibited. Hence this region of Gea2p upstream of the Sec7 domain plays a role in anterograde transport that is independent of its role in recruiting COPI for retrograde transport, at least of a subset of Golgi-ER cargo.

Mutations in a highly conserved region of the Arf1p activator GEA2 block anterograde Golgi transport but not COPI recruitment to membranes.

Nous avons identifi&eacute; une importante r&eacute;gion fonctionnelle de l&#39;activateur de levure Arf1 Gea2p en amont du domaine catalytique Sec7 et caract&eacute;ris&eacute; une s&eacute;rie de mutants thermosensibles (ts) avec des substitutions d&#39;acides amin&eacute;s dans cette r&eacute;gion. Ces mutants gea2-ts bloquent ou ralentissent le transport des prot&eacute;ines qui traversent la voie de s&eacute;cr&eacute;tion &agrave; la sortie du r&eacute;ticulum endoplasmique (re) et l&#39;appareil de Golgi au d&eacute;but et accumulent les ER et les premi&egrave;res membranes golgiennes. Aucun d&eacute;faut dans deux types d&#39;analyses de trafic/tri r&eacute;trogrades ont &eacute;t&eacute; observ&eacute;s. Nous trouvons qu&#39;une quantit&eacute; substantielle de COPI est associ&eacute;e aux membranes golgiennes chez les mutants gea2-ts, m&ecirc;me apr&egrave;s une incubation prolong&eacute;e &agrave; la temp&eacute;rature non permissives. COPI chez ces mutants est lib&eacute;r&eacute; des membranes golgiennes par br&eacute;feldine A, un m&eacute;dicament qui se lie directement &agrave; Gea2p et bloque l&#39;activation Arf1. Nos r&eacute;sultats d&eacute;montrent que la fonction COPI dans le tri des prot&eacute;ines de cargaison r&eacute;trograde au moins trois au sein de l&#39;appareil de Golgi n&#39;est pas perturb&eacute;e chez ces mutants, mais que le transport vers l&#39;avant est fortement inhib&eacute;e. C&#39;est pourquoi cette r&eacute;gion de Gea2p en amont du domaine Sec7 joue un r&ocirc;le dans le transport ant&eacute;rograde qui est ind&eacute;pendant de son r&ocirc;le dans le recrutement de COPI pour transport r&eacute;trograde, au moins d&#39;un sous-ensemble de la cargaison de l&#39;appareil de Golgi-ER.

Mutations dans une r&eacute;gion hautement conserv&eacute;e de l&#39;activateur Arf1p GEA2 bloquent ant&eacute;rograde transport de l&#39;appareil de Golgi, mais pas de COPI recrutement aux membranes.

Mutationen in einer hochkonservierten Region des Arf1p Aktivator GEA2 Block anterograde Golgi Transport aber nicht COPI Einstellung auf Membranen.

Abbiamo identificato una regione funzionale importante dell&#39;attivatore di lievito Arf1 Gea2p a monte del dominio catalitico Sec7 e caratterizzato un insieme di mutanti sensibili alla temperatura (ts) con sostituzioni di aminoacidi in questa regione. Questi mutanti gea2-ts bloccano o rallentano il trasporto delle proteine che attraversano la via secretiva all&#39;uscita dal reticolo endoplasmatico (ER) e l&#39;inizio del Golgi e si accumulano sia ER e precoce delle membrane del Golgi. Sono stati osservati senza difetti in due tipi di analisi di traffico/smistamento retrograde. Troviamo che una notevole quantit&agrave; di COPI &egrave; associata con le membrane del Golgi i mutanti gea2-ts, anche dopo prolungata incubazione alla temperatura di nonpermissive. COPI in questi mutanti &egrave; rilasciato dalle membrane del Golgi da GBF1 A, un farmaco che si lega direttamente al Gea2p e blocca la attivazione Arf1. I nostri risultati dimostrano che COPI funzione nell&#39;ordinamento di almeno tre proteine retrograda carico all&#39;interno del Golgi non &egrave; perturbato in questi mutanti, ma che trasporto avanti &egrave; fortemente inibito. Quindi questa regione di Gea2p a monte del dominio Sec7 gioca un ruolo nel trasporto anterograda che &egrave; indipendente dal suo ruolo nel reclutamento COPI per trasporto retrogrado, almeno di un sottoinsieme di carico Golgi-ER.

Mutazioni in una regione altamente conservata dell&#39;attivatore Arf1p GEA2 bloccano anterograda trasporto Golgi ma non COPI reclutamento delle membrane.

&#x6211;&#x3005; &#x306F;&#x3001;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x6A5F;&#x80FD;&#x5730;&#x57DF;&#x89E6;&#x5A92;&#x306E; Sec7 &#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x306E;&#x9175;&#x6BCD; Arf1 &#x30A2;&#x30AF;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D9;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC; Gea2p &#x4E0A;&#x6D41;&#x306E;&#x8B58;&#x5225;&#x3001;&#x6E29;&#x5EA6;&#x611F;&#x53D7;&#x6027; (ts) &#x5909;&#x7570;&#x4F53;&#x306E;&#x3053;&#x306E;&#x9818;&#x57DF;&#x3067;&#x306E;&#x30A2;&#x30DF;&#x30CE;&#x9178;&#x7F6E;&#x63DB;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x4E00;&#x9023;&#x306E;&#x7279;&#x5FB4;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089; gea2 ts &#x5909;&#x7570;&#x4F53;&#x30D6;&#x30ED;&#x30C3;&#x30AF;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x5C0F;&#x80DE;&#x4F53; (ER) &#x3068;&#x521D;&#x671F;&#x306E;&#x30B4;&#x30EB;&#x30B8;&#x4F53;&#x304B;&#x3089;&#x5206;&#x6CCC;&#x7D4C;&#x8DEF;&#x306E;&#x51FA;&#x53E3;&#x3092;&#x901A;&#x904E;&#x3059;&#x308B;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x8F38;&#x9001;&#x3092;&#x3086;&#x3063;&#x304F;&#x308A;&#x3057;&#x3001;&#x5C0F;&#x80DE;&#x4F53;&#x3068;&#x30B4;&#x30EB;&#x30B8;&#x819C;&#x306E;&#x521D;&#x671F;&#x3092;&#x84C4;&#x7A4D;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x9006;&#x884C;&#x306E;&#x4EBA;&#x8EAB;&#x58F2;&#x8CB7;&#x4E26;&#x3079;&#x66FF;&#x3048;&#x306E;&#x8A66;&#x91D1;&#x306E; 2 &#x3064;&#x306E;&#x30BF;&#x30A4;&#x30D7;&#x306E;&#x6B20;&#x9665;&#x306F;&#x8A8D;&#x3081;&#x3089;&#x308C;&#x306A;&#x304B;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x30B3;&#x30D4;&#x306E;&#x5B9F;&#x8CEA;&#x7684;&#x306A;&#x91CF; nonpermissive &#x6E29;&#x5EA6;&#x3067;&#x9577;&#x671F;&#x30A4;&#x30F3;&#x30AD;&#x30E5;&#x30D9;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x5F8C;&#x3082;&#x30B4;&#x30EB;&#x30B8;&#x819C; gea2 ts &#x5909;&#x7570;&#x306B;&#x95A2;&#x9023;&#x4ED8;&#x3051;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x898B;&#x3064;&#x3051;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x5909;&#x7570;&#x306E;&#x30B3;&#x30D4; &#x30B4;&#x30EB;&#x30B8;&#x819C;&#x304B;&#x3089;&#x30D6;&#x30EC;&#x30D5;&#x30A7;&#x30EB;&#x30B8;&#x30F3; A&#x3001;Gea2p &#x306B;&#x76F4;&#x63A5;&#x7D50;&#x5408;&#x3057;&#x3001;Arf1 &#x30A2;&#x30AF;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D9;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3; &#x30D6;&#x30ED;&#x30C3;&#x30AF;&#x85AC;&#x7269;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x89E3;&#x653E;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005; &#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x306F;&#x3001;&#x30B4;&#x30EB;&#x30B8;&#x88C5;&#x7F6E;&#x5185;&#x306E;&#x5C11;&#x306A;&#x304F;&#x3068;&#x3082; 3 &#x3064;&#x306E;&#x9006;&#x884C;&#x6027;&#x8CA8;&#x7269;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x4E26;&#x3079;&#x66FF;&#x3048;&#x3067;&#x30B3;&#x30D4;&#x95A2;&#x6570;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x7A81;&#x7136;&#x5909;&#x7570;&#x4F53;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x6442;&#x306A;&#x3044;&#x304C;&#x524D;&#x65B9;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30DD;&#x30FC;&#x30C8;&#x53B3;&#x3057;&#x304F;&#x6291;&#x5236;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x4E0A;&#x6D41; Sec7 &#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x306E; Gea2p &#x306E;&#x3053;&#x306E;&#x5730;&#x57DF;&#x306F;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x679C;&#x305F;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x8F38;&#x9001;&#x306E;&#x30B3;&#x30D4;&#x9006;&#x884C;&#x6027;&#x8F38;&#x9001;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x3001;&#x5C11;&#x306A;&#x304F;&#x3068;&#x3082;&#x52DF;&#x96C6;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x305D;&#x306E;&#x5F79;&#x5272;&#x3068;&#x306F;&#x7121;&#x95A2;&#x4FC2;&#x306B;&#x3057;&#x305F;&#x304C;&#x3063;&#x3066;&#x30B4;&#x30EB;&#x30B8;&#x5C0F;&#x80DE;&#x4F53;&#x8CA8;&#x7269;&#x306E;&#x30B5;&#x30D6;&#x30BB;&#x30C3;&#x30C8;&#x3002;

&#x9AD8;&#x5EA6;&#x4FDD;&#x5B58;&#x9818;&#x57DF;&#x306E; Arf1p &#x6D3B;&#x6027;&#x5264; GEA2 &#x306E;&#x7A81;&#x7136;&#x5909;&#x7570;&#x306F;&#x524D;&#x5411;&#x6027;&#x30B4;&#x30EB;&#x30B8; &#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30DD;&#x30FC;&#x30C8;&#x304C;&#x819C;&#x306E;&#x306A;&#x3044;&#x30B3;&#x30D4;&#x52DF;&#x96C6;&#x3092;&#x30D6;&#x30ED;&#x30C3;&#x30AF;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#xC6B0;&#xB9AC; &#xD6A8; Arf1 &#xD65C;&#xC131; Gea2p &#xC0C1;&#xB958;&#xC758; &#xCD09;&#xB9E4; Sec7 &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778;&#xC758; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xAE30;&#xB2A5; &#xC601;&#xC5ED;&#xC744; &#xC2DD;&#xBCC4; &#xD558; &#xACE0;&#xC774; &#xC9C0;&#xC5ED;&#xC5D0; &#xC788;&#xB294; &#xC544;&#xBBF8;&#xB178;&#xB97C; &#xD568;&#xC720;&#xD55C; &#xC0B0; &#xC131; &#xB300;&#xCCB4;&#xC640; &#xC628;&#xB3C4; (ts)&#xC5D0; &#xBBFC;&#xAC10;&#xD55C; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xC9D1;&#xD569; &#xD2B9;&#xC9D5;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; gea2 ts &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xCC28;&#xB2E8; &#xB610;&#xB294; &#xCD08;&#xAE30; Golgi endoplasmic &#xADF8;&#xBB3C; (&#xC751;&#xAE09;&#xC2E4;)&#xC5D0;&#xC11C; &#xCD9C;&#xAD6C;&#xC5D0; &#xBD84; &#xD1B5;&#xB85C; &#xD1B5;&#xACFC; &#xD558;&#xB294; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xC804;&#xC1A1; &#xC18D;&#xB3C4; ER&#xC640; Golgi &#xB9C9; &#xCD08;&#xAE30; &#xCD95;&#xC801;. &#xC5ED;&#xD589; &#xB9E4;&#xB9E4;/&#xC815;&#xB82C; &#xBD84;&#xC11D; &#xC2E4;&#xD5D8;&#xC758; &#xB450; &#xAC00;&#xC9C0; &#xC720;&#xD615;&#xC5D0; &#xC544;&#xBB34; &#xACB0;&#xD568; &#xAD00;&#xCC30; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xC0C1;&#xB2F9;&#xD55C; &#xC591;&#xC758; COPI nonpermissive &#xC628;&#xB3C4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC7A5;&#xAE30;&#xAC04;&#xB41C; &#xBD80; &#xD654; &#xD6C4;&#xC5D0; gea2 ts &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774;&#xC5D0; Golgi &#xBA64;&#xBE0C;&#xB808;&#xC778;&#xACFC; &#xC5F0;&#xACB0; &#xB41C; &#xCC3E;&#xC744;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774;&#xC5D0; COPI brefeldin A, gea2p&#xC5D0; &#xC9C1;&#xC811; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xD558;&#xACE0; Arf1 &#xD65C;&#xC131;&#xD654;&#xB97C; &#xCC28;&#xB2E8; &#xD558;&#xB294; &#xC57D;&#xBB3C;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; Golgi &#xC138;&#xD3EC; &#xB9C9;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD574;&#xC81C; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xACB0;&#xACFC; &#xC785;&#xC99D; COPI &#xD568;&#xC218;&#xB294; Golgi &#xB0B4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xCD5C;&#xC18C;&#xD55C; 3 &#xAC1C;&#xC758; &#xD1F4;&#xD589; &#xC131; &#xD654;&#xBB3C; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xC815;&#xB82C;&#xC5D0; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774;&#xC5D0; &#xAD50;&#xB780; &#xB418;&#xC9C0; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xC55E;&#xC73C;&#xB85C; &#xAD50;&#xD1B5; &#xC800;&#xD574; &#xC2EC;&#xAC01;. &#xB530;&#xB77C;&#xC11C;&#xC774; &#xC9C0;&#xC5ED; &#xC0C1;&#xB958; Sec7 &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778;&#xC758; gea2p&#xC758; &#xC5ED;&#xD589; &#xC804;&#xC1A1; &#xC801;&#xC5B4;&#xB3C4; COPI &#xBAA8;&#xC9D1; &#xD558;&#xB294; &#xC5ED;&#xD560;&#xC758; &#xB3C5;&#xB9BD;&#xC801;&#xC778; anterograde &#xC804;&#xC1A1; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xD55C;&#xB2E4; Golgi ER &#xD654;&#xBB3C;&#xC758; &#xBD80;&#xBD84; &#xC9D1;&#xD569;&#xC758;.

GEA2 Arf1p &#xD65C;&#xC131;&#xC758; &#xB192;&#xC740; &#xBCF4;&#xC874;&#xB41C; &#xC9C0;&#xC5ED;&#xC5D0;&#xC11C; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xCC28;&#xB2E8; anterograde Golgi &#xC804;&#xC1A1; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xB9C9; COPI &#xBAA8;&#xC9D1; &#xC548;.

Hemos identificado una importante regi&oacute;n funcional del activador de la levadura Arf1 Gea2p aguas arriba del dominio catal&iacute;tico Sec7 y caracterizado un conjunto de mutantes termosensibles (ts) con sustituciones de amino&aacute;cidos en esta regi&oacute;n. Estos mutantes gea2-ts bloquean o lento transporte de prote&iacute;nas atravesar la v&iacute;a secretora en la salida desde el ret&iacute;culo endopl&aacute;smico (ER) y el Golgi temprano y acumulan tanto ER y membranas de Golgi tempranas. Se observaron sin defectos en dos tipos de an&aacute;lisis de tr&aacute;fico/clasificaci&oacute;n retr&oacute;grados. Encontramos que una cantidad sustancial de COPI est&aacute; asociada con las membranas de Golgi en los mutantes gea2-ts, incluso despu&eacute;s de la incubaci&oacute;n prolongado en la temperatura nonpermissive. COPI en estos mutantes se libera de las membranas de Golgi por Brefeldino A, un f&aacute;rmaco que se une directamente a Gea2p y bloquea la activaci&oacute;n Arf1. Nuestros resultados demuestran que la funci&oacute;n COPI en clasificaci&oacute;n de por lo menos tres prote&iacute;nas de carga retr&oacute;grada en el Golgi no es perturbada en estos mutantes, pero que transporte hacia adelante se inhibe severamente. Por lo tanto, esta regi&oacute;n de Gea2p, aguas arriba del dominio Sec7 desempe&ntilde;a un papel en el transporte anter&oacute;grada que es independiente de su papel en la selecci&oacute;n COPI de transporte retr&oacute;grado, por lo menos un subconjunto de la carga de Golgi-ER.

Las mutaciones en una regi&oacute;n altamente conservada del activador Arf1p GEA2 bloquean anter&oacute;grada transporte Golgi pero no COPI reclutamiento a las membranas.

&#xC138;&#xADE0;&#xC131; chemotaxis&#xC5D0; &#xC2E0;&#xD638; &#xC804;&#xB2EC; &#xC138;&#xD3EC; &#xC678; ligands &#xBA54; &#xD2F8; &#xC218;&#xB77D; chemoreceptor &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xD2B9;&#xBCC4; &#xD55C; &#xAC00;&#xC871;&#xC758; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC2DC;&#xC791; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. Chemoreceptors &#xC140; &#xBC0F; &#xD615;&#xD0DC; &#xC548;&#xC815;&#xC801; &#xC0BC;&#xD56D; &#xB2E8;&#xC9C0; &#xD788;&#xC2A4;&#xD2F0;&#xB518; autokinase Chea&#xC640; &#xC5B4;&#xB311;&#xD130; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC539;&#xC758; &#xBCC4;&#xAC1C;&#xC758; &#xC601;&#xC5ED;&#xC5D0; &#xD074;&#xB7EC;&#xC2A4;&#xD130;. &#xC5EC;&#xAE30; &#xC6B0;&#xB9AC; &#xACF3;&#xC744; &#xC54C;&#xC544;&#xB0B4;&#xB294;-&#xC804;&#xC790; &#xB2E8;&#xCE35; &#xCD2C;&#xC601; &#xBC0F; &#xC0DD; &#xD654; &#xD655; &#xC801;&#xC778; &#xAE30;&#xC220;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xC9C1;&#xC811; &#xC2DC;&#xAC01;&#xD654; &#xBC0F; &#xACF5;&#xAC04;&#xC801; &#xC870;&#xC9C1; chemoreceptor &#xBC30;&#xC5F4; &#xADF8;&#xB300;&#xB85C; &#xBCD1;&#xC6D0; &#xC131; &#xB300;&#xC7A5;&#xADE0; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0;&#xC11C;&#xC758; &#xBCF4;&#xACE0;. &#xC57C;&#xC0DD;-&#xD0C0;&#xC785; &#xC140; &#xC0BC;&#xD56D; &#xB2E8;&#xC9C0; &#xB610;&#xB294; &#xD06C;&#xAE30;&#xC640; &#xAC19;&#xC740; &#xC778;&#xAD6C;&#xC5D0; &#xC788;&#xB294; &#xC140; &#xC911; &#xD2B9;&#xC815; &#xC704;&#xCE58;&#xC5D0; &#xC0C1;&#xB2F9;&#xD55C; &#xBCC0;&#xC774; &#xAC00;&#xC9C4; &#xC815;&#xB82C; &#xB418;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC744; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xD655;&#xC7A5; &#xB41C; &#xACA9;&#xC790;&#xB85C; &#xC815;&#xB82C; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. CheA &#xACE0; &#xC539; &#xAE30;&#xC758; &#xBD80;&#xC7AC;, chemoreceptors &#xAD00;&#xCC30;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xB294; &#xD074;&#xB7EC;&#xC2A4;&#xD130;&#xB97C; &#xD615;&#xC131; &#xD558;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;&#xC640; &#xBE0C;&#xB7EC;&#xC2DC;&#xAC00; &#xC140; &#xADF9; &#xD654; &#xB41C;. &#xC5B4;&#xC6B8;&#xB9AC;&#xC9C0; &#xC54A;&#xAC8C; &#xB192;&#xC740; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; &#xC218;&#xC900;&#xC5D0; &#xC791;&#xB3D9; &#xD558;&#xC9C0; &#xC54A;&#xB294;&#xB97C; &#xD3EC;&#xD568; &#xD558;&#xB294; &#xB9C9; invaginations &#xCD95;&#xBC29;&#xD5A5; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; &#xC5B4;&#xC148;&#xBE14;&#xB9AC; &#xD615;&#xC131; &#xB41C;&#xB2E4;. &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098;, &#xAE30;&#xB2A5;&#xC801; chemoreceptor &#xBC30;&#xC5F4; CheA &#xACE0; &#xC539; &#xAE30;&#xC758; &#xC138;&#xD3EC; &#xB808;&#xBCA8;&#xC744; &#xC99D;&#xAC00; &#xD558; &#xC5EC; &#xB2E4;&#xC2DC; &#xC124;&#xC815; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xACB0;&#xACFC; &#xBCF4;&#xC5EC; &#xADF8; chemotaxis&#xC5D0; &#xB300;&#xC7A5;&#xADE0; &#xD544;&#xC694; chemoreceptor &#xBC30;&#xC5F4;&#xC758; &#xC874;&#xC7AC; &#xD558;&#xBA70; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xBC30;&#xC5F4; &#xD615;&#xC131; &#xD544;&#xC694; Chea&#xC640; &#xC539; &#xAE30; &#xC2E0;&#xD638; &#xBD84;&#xC790;&#xC758; &#xBE44; &#xACC4; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;.

&#xBCD1;&#xC6D0; &#xC131; &#xB300;&#xC7A5;&#xADE0; chemotaxis &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; &#xBC30;&#xC5F4; &#xACF3;&#xC744; &#xC54C;&#xC544;&#xB0B4;&#xB294;-&#xC804;&#xC790; &#xD604;&#xBBF8;&#xACBD;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xC9C1;&#xC811; &#xC2DC;&#xAC01;&#xD654;.

&#x7EC6;&#x83CC;&#x8D8B;&#x5316;&#x6027;&#x4FE1;&#x53F7;&#x8F6C;&#x5BFC;&#x662F;&#x7531;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x5230;&#x4E13;&#x95E8;&#x7684;&#x5BB6;&#x5EAD;&#x63A5;&#x53D7;&#x7532;&#x57FA;&#x7684;&#x5316;&#x5B66;&#x611F;&#x53D7;&#x5668;&#x86CB;&#x767D;&#x7684;&#x80DE;&#x5916;&#x914D;&#x4F53;&#x7684;&#x542F;&#x52A8;&#x3002;&#x5316;&#x5B66;&#x611F;&#x53D7;&#x5668;&#x5174;&#x594B;&#x4F20;&#x9012;&#x7FA4;&#x96C6;&#x5728;&#x4E0D;&#x540C;&#x533A;&#x57DF;&#x7684;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x548C;&#x7A97;&#x4F53;&#x7A33;&#x5B9A;&#x4E09;&#x5143;&#x914D;&#x5408;&#x7269;&#x7EC4;&#x6C28;&#x9178; autokinase &#x8C22;&#x548C;&#x9002;&#x914D;&#x5668;&#x86CB;&#x767D;&#x5480;&#x56BC;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#x6211;&#x4EEC;&#x62A5;&#x544A;&#x76F4;&#x63A5;&#x53EF;&#x89C6;&#x5316;&#x548C;&#x7A7A;&#x95F4;&#x7EC4;&#x7EC7;&#x7684;&#x5B8C;&#x597D;&#x5927;&#x80A0;&#x57C3;&#x5E0C;&#x6C0F;&#x5927;&#x80A0;&#x6746;&#x83CC;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5185;&#x7684;&#x5316;&#x5B66;&#x611F;&#x53D7;&#x5668;&#x9635;&#x5217;&#x6240;&#x7528;&#x4F4E;&#x6E29;&#x7535;&#x5B50;&#x5C42;&#x6790;&#x6210;&#x50CF;&#x6280;&#x672F;&#x548C;&#x751F;&#x5316;&#x6280;&#x672F;&#x3002;&#x5728;&#x91CE;&#x751F;&#x578B;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E09;&#x5143;&#x914D;&#x5408;&#x7269;&#x6392;&#x5217;&#x4E3A;&#x6269;&#x5C55;&#x683C;&#x5B50;&#x3001; &#x53EF;&#x80FD;&#x6216;&#x53EF;&#x80FD;&#x4E0D;&#x8BA2;&#x8D2D;&#xFF0C;&#x4E0E;&#x7684;&#x5927;&#x5C0F;&#x548C;&#x5177;&#x4F53;&#x4F4D;&#x7F6E;&#x76F8;&#x540C;&#x7684;&#x4EBA;&#x53E3;&#x4E2D;&#x7684;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x4E4B;&#x95F4;&#x7684;&#x91CD;&#x5927;&#x53D8;&#x5316;&#x3002;&#x8C22;&#x548C;&#x5480;&#x56BC;&#x7684;&#x7F3A;&#x5E2D;&#xFF0C;&#x5316;&#x5B66;&#x611F;&#x53D7;&#x5668;&#x5174;&#x594B;&#x4F20;&#x9012;&#x4E0D;&#x4F1A;&#x5F62;&#x6210;&#x53EF;&#x89C2;&#x5BDF;&#x5230;&#x7FA4;&#x96C6;&#x548C;&#x6F2B;&#x5DF2;&#x672C;&#x5730;&#x5316;&#x5230;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x6746;&#x3002;&#x5404;&#x7EA7;&#x6BD4;&#x4F8B;&#x8FC7;&#x9AD8;&#x7684;&#x53D7;&#x4F53;&#xFF0C;&#x819C; invaginations &#x5305;&#x542B;&#x65E0;&#x6CD5;&#x6B63;&#x5E38;&#x5DE5;&#x4F5C;&#xFF0C;&#x7A0B;&#x5E8F;&#x96C6;&#x53D7;&#x4F53;&#x8F74;&#x5411;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x5F62;&#x6210;&#x3002;&#x4F46;&#x662F;&#xFF0C;&#x53EF;&#x4EE5;&#x901A;&#x8FC7;&#x589E;&#x52A0;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6C34;&#x5E73;&#x7684;&#x8C22;&#x548C;&#x5480;&#x56BC;&#xFF0C;&#x91CD;&#x65B0;&#x5EFA;&#x7ACB;&#x529F;&#x80FD;&#x6027;&#x5316;&#x5B66;&#x611F;&#x53D7;&#x5668;&#x9635;&#x5217;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x7ED3;&#x679C;&#x8868;&#x660E;&#xFF0C;&#x8D8B;&#x5316;&#x6027;&#x5927;&#x80A0;&#x6746;&#x83CC;&#x9700;&#x8981;&#x5316;&#x5B66;&#x611F;&#x53D7;&#x5668;&#x9635;&#x5217;&#x7684;&#x5B58;&#x5728;&#x548C;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x9635;&#x5217;&#x7684;&#x5F62;&#x6210;&#x9700;&#x8981;&#x811A;&#x624B;&#x67B6;&#x8C22;&#x548C;&#x5480;&#x56BC;&#x7684;&#x4FE1;&#x53F7;&#x5206;&#x5B50;&#x7684;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;

&#x76F4;&#x63A5;&#x4F7F;&#x7528;&#x4F4E;&#x6E29;&#x7535;&#x5B50;&#x663E;&#x5FAE;&#x955C;&#x7684;&#x5927;&#x80A0;&#x57C3;&#x5E0C;&#x6C0F;&#x5927;&#x80A0;&#x6746;&#x83CC;&#x8D8B;&#x5316;&#x53D7;&#x4F53;&#x9635;&#x5217;&#x7684;&#x53EF;&#x89C6;&#x5316;&#x7684;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3002;

Signal transduction in bacterial chemotaxis is initiated by the binding of extracellular ligands to a specialized family of methyl-accepting chemoreceptor proteins. Chemoreceptors cluster at distinct regions of the cell and form stable ternary complexes with the histidine autokinase CheA and the adapter protein CheW. Here we report the direct visualization and spatial organization of chemoreceptor arrays in intact Escherichia coli cells by using cryo-electron tomography and biochemical techniques. In wild-type cells, ternary complexes are arranged as an extended lattice, which may or may not be ordered, with significant variations in the size and specific location among cells in the same population. In the absence of CheA and CheW, chemoreceptors do not form observable clusters and are diffusely localized to the cell pole. At disproportionately high receptor levels, membrane invaginations containing nonfunctional, axially interacting receptor assemblies are formed. However, functional chemoreceptor arrays can be reestablished by increasing cellular levels of CheA and CheW. Our results demonstrate that chemotaxis in E. coli requires the presence of chemoreceptor arrays and that the formation of these arrays requires the scaffolding interactions of the signaling molecules CheA and CheW.

Direct visualization of Escherichia coli chemotaxis receptor arrays using cryo-electron microscopy.

Transduction des signaux dans la chimiotaxie bact&#xE9;rienne est initi&#xE9;e par la liaison de ligands extracellulaires d&#x26;#39;une famille de prot&#xE9;ines sp&#xE9;cialis&#xE9;e ch&#xE9;mor&#xE9;cepteurs m&#xE9;thyl-acceptant. Ch&#xE9;mor&#xE9;cepteurs se regroupent au niveau des r&#xE9;gions distinctes de la cellule et forment des complexes ternaires stables avec l&#x26;#39;histidine autokinase Chea et la prot&#xE9;ine adaptatrice m&#xE2;cher. Nous rapportons ici la visualisation directe et de l&#x26;#39;organisation spatiale des tableaux ch&#xE9;mor&#xE9;cepteurs dans intactes les cellules d&#x26;#39;Escherichia coli en utilisant microscopie cryo-&#xE9;lectronique et des techniques biochimiques. En cellules de type sauvage, les complexes ternaires sont dispos&#xE9;s comme un r&#xE9;seau &#xE9;tendu, ce qui peut ou ne peut &#xEA;tre ordonn&#xE9;e, avec des variations importantes dans la taille et l&#x26;#39;emplacement sp&#xE9;cifique entre les cellules dans la m&#xEA;me population. En l&#x26;#39;absence de Chea et Chew, ch&#xE9;mor&#xE9;cepteurs ne forment des grappes sont observables et diffuse localis&#xE9;e au p&#xF4;le cellulaire. Au niveau des r&#xE9;cepteurs disproportionnellement &#xE9;lev&#xE9;, invaginations de la membrane contenant non fonctionnel, les assembl&#xE9;es des r&#xE9;cepteurs interagissent axialement sont form&#xE9;s. Cependant, les tableaux ch&#xE9;mor&#xE9;cepteurs fonctionnels peuvent &#xEA;tre r&#xE9;tabli en augmentant les niveaux cellulaires de Chea et &#xE0; m&#xE2;cher. Nos r&#xE9;sultats d&#xE9;montrent que la chimiotaxie chez E. coli n&#xE9;cessite la pr&#xE9;sence de tableaux ch&#xE9;mor&#xE9;cepteurs et que la formation de ces r&#xE9;seaux n&#xE9;cessite des interactions &#xE9;chafaudage des mol&#xE9;cules de signalisation Chea et Chew.

Visualisation directe de tableaux Escherichia Coli Chimiotactisme r&#xE9;cepteur en utilisant cryo-microscopie &#xE9;lectronique

Signaltransduktion in bakterielle Chemotaxis wird durch die Bindung des extrazellul&auml;ren Liganden eine spezialisierte Familie der Methyl-akzeptieren Chemorezeptor Proteine eingeleitet. Chemoreceptors cluster auf verschiedene Regionen der Zelle und bilden stabile tern&auml;re komplexe mit dem Histidin-Autokinase CheA und die Adapter-Proteine CheW. Hier berichten wir &uuml;ber die direkte Visualisierung und r&auml;umliche Organisation der Chemorezeptor-Arrays in intakten Escherichia coli Zellen durch Cryo-Elektron Tomographie und biochemische Techniken. In Wild-Typ-Zellen sind tern&auml;re komplexe als eine erweiterte Gitter angeordnet, die kann oder kann nicht bestellt werden, mit erheblichen Abweichungen in Gr&ouml;&szlig;e und spezifische Position zwischen den Zellen in derselben Grundgesamtheit. In Ermangelung von CheA und kauen Chemoreceptors bilden keine beobachtbare Clustern und sind diffus auf die Pole der Zelle lokalisiert. Unverh&auml;ltnism&auml;&szlig;ig hohe Rezeptor Ebenen werden Membrane Invaginationen, enth&auml;lt nicht funktionsf&auml;hig, axial interagierenden Rezeptor-Assemblys gebildet. Jedoch k&ouml;nnen funktionale Chemorezeptor-Arrays wiederhergestellt werden, durch die Erh&ouml;hung der zellul&auml;rer Ebenen CheA und kauen. Unsere Ergebnisse zeigen, dass Chemotaxis in E. Coli erfordert die Anwesenheit von Chemorezeptor-Arrays, und dass die Bildung dieser Arrays die Ger&uuml;stbau-Interaktionen der signalisierende Molek&uuml;le CheA und kauen erfordert.

Direkte Visualisierung von Escherichia coli Chemotaxis-Rezeptor-Arrays mit Kryo-Elektronenmikroskopie.

Trasduzione del segnale nella chemiotassi batterica viene avviata dall&#39;associazione dei ligandi extracellulari a una famiglia specializzata di metil-accettando chemoreceptor proteine. Chemocettori del cluster in regioni distinte della cella e forma complessi ternari stabili con l&#39;istidina autokinase CheA e la proteina adattatore CheW. Qui riportiamo la visualizzazione diretta e organizzazione spaziale delle matrici chemoreceptor nell&#39;intatte cellule di Escherichia coli mediante tecniche biochimiche e tomografia cryo-elettrone. Nelle cellule wild-type, complessi ternari sono disposti come un reticolo esteso, che pu&ograve; o non pu&ograve; essere ordinato, con significative variazioni nelle dimensioni e la posizione specifica tra cellule della stessa popolazione. In assenza di CheA e masticare, chemocettori non formano ammassi osservabili e diffusamente sono localizzate al Polo cell. A livelli di recettore sproporzionatamente elevato, invaginations membrana contenente non funzionali, assemblee del recettore assialmente interagenti sono formate. Tuttavia, matrici chemoreceptor funzionale possono essere ristabiliti da aumento dei livelli cellulari di CheA e masticare. I nostri risultati dimostrano che la chemiotassi in e. coli richiede la presenza di matrici chemoreceptor e che la formazione di queste matrici le interazioni di ponteggi di molecole di segnalazione CheA e masticare.

Visualizzazione diretta di Escherichia coli chemiotassi recettore matrici, utilizzando crio-microscopia elettronica.

&#x7D30;&#x83CC;&#x306E;&#x8D70;&#x5316;&#x6027;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#x306F;&#x3001;&#x30E1;&#x30C1;&#x30EB;&#x57FA;&#x53D7;&#x5BB9;&#x5316;&#x5B66;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x7279;&#x6B8A;&#x306A;&#x5BB6;&#x65CF;&#x3078;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x5916;&#x30EA;&#x30AC;&#x30F3;&#x30C9;&#x306E;&#x7D50;&#x5408;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x958B;&#x59CB;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x5316;&#x5B66;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x306F;&#x3001;&#x30D2;&#x30B9;&#x30C1;&#x30B8;&#x30F3;autokinase&#x30C1;&#x30A2;&#x3068;&#x30A2;&#x30C0;&#x30D7;&#x30BF;&#x30FC;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x565B;&#x3093;&#x3067;&#x30BB;&#x30EB;&#x3068;&#x30D5;&#x30A9;&#x30FC;&#x30E0;&#x306E;&#x5B89;&#x5B9A;&#x3057;&#x305F;&#x4E09;&#x5143;&#x8907;&#x5408;&#x4F53;&#x306E;&#x7570;&#x306A;&#x308B;&#x9818;&#x57DF;&#x3067;&#x30AF;&#x30E9;&#x30B9;&#x30BF;&#x5316;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x4F4E;&#x6E29;&#x96FB;&#x5B50;&#x65AD;&#x5C64;&#x64AE;&#x5F71;&#x6CD5;&#x3068;&#x751F;&#x5316;&#x5B66;&#x7684;&#x624B;&#x6CD5;&#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x3066;&#x7121;&#x50B7;&#x5927;&#x8178;&#x83CC;&#x7D30;&#x80DE;&#x5185;&#x306E;&#x5316;&#x5B66;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x306E;&#x914D;&#x5217;&#x306E;&#x76F4;&#x63A5;&#x53EF;&#x8996;&#x5316;&#x3068;&#x7A7A;&#x9593;&#x7684;&#x306A;&#x7D44;&#x7E54;&#x3092;&#x5831;&#x544A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x91CE;&#x751F;&#x578B;&#x7D30;&#x80DE;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x4E09;&#x5143;&#x8907;&#x5408;&#x4F53;&#x306F;&#x3001;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x30B5;&#x30A4;&#x30BA;&#x3068;&#x540C;&#x3058;&#x96C6;&#x56E3;&#x5185;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x9593;&#x306E;&#x7279;&#x5B9A;&#x306E;&#x5834;&#x6240;&#x306B;&#x3042;&#x308B;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x30D0;&#x30EA;&#x30A8;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x3067;&#x3001;&#x6CE8;&#x6587;&#x3067;&#x304D;&#x306A;&#x3044;&#x5834;&#x5408;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x62E1;&#x5F35;&#x683C;&#x5B50;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x914D;&#x7F6E;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30C1;&#x30A2;&#x3068;&#x30C1;&#x30E5;&#x30FC;&#x304C;&#x306A;&#x3044;&#x5834;&#x5408;&#x306B;&#x306F;&#x3001;&#x5316;&#x5B66;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x306F;&#x89B3;&#x5BDF;&#x30AF;&#x30E9;&#x30B9;&#x30BF;&#x30FC;&#x3092;&#x5F62;&#x6210;&#x305B;&#x305A;&#x3001;&#x3073;&#x307E;&#x3093;&#x6027;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x6975;&#x306B;&#x30ED;&#x30FC;&#x30AB;&#x30E9;&#x30A4;&#x30BA;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x4E0D;&#x91E3;&#x308A;&#x5408;&#x3044;&#x306B;&#x9AD8;&#x3044;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x3001;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3057;&#x306A;&#x3044;&#x542B;&#x3080;&#x819C;&#x9665;&#x5165;&#x6642;&#x306B;&#x3001;&#x8EF8;&#x65B9;&#x5411;&#x306B;&#x4F5C;&#x7528;&#x3059;&#x308B;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x30A2;&#x30BB;&#x30F3;&#x30D6;&#x30EA;&#x304C;&#x200B;&#x200B;&#x5F62;&#x6210;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x3057;&#x304B;&#x3057;&#x3001;&#x6A5F;&#x80FD;&#x5316;&#x5B66;&#x53D7;&#x5BB9;&#x5668;&#x30A2;&#x30EC;&#x30A4;&#x306F;&#x3001;&#x30C1;&#x30A2;&#x3068;&#x30C1;&#x30E5;&#x30FC;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x5185;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x3092;&#x5897;&#x52A0;&#x3055;&#x305B;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x518D;&#x78BA;&#x7ACB;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x306F;&#x3001;&#x5927;&#x8178;&#x83CC;&#x5185;&#x3067;&#x306E;&#x8D70;&#x5316;&#x6027;&#x306F;&#x3001;&#x5316;&#x5B66;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x306E;&#x914D;&#x5217;&#x306E;&#x5B58;&#x5728;&#x3092;&#x5FC5;&#x8981;&#x3068;&#x3059;&#x308B;&#x3068;&#x3001;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x914D;&#x5217;&#x306E;&#x5F62;&#x6210;&#x304C;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#x5206;&#x5B50;&#x306E;&#x30C1;&#x30A2;&#x3068;&#x30C1;&#x30E5;&#x30FC;&#x306E;&#x8DB3;&#x5834;&#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x304C;&#x5FC5;&#x8981;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x30AF;&#x30E9;&#x30A4;&#x30AA;&#x96FB;&#x5B50;&#x9855;&#x5FAE;&#x93E1;&#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x305F;&#x5927;&#x8178;&#x83CC;&#x8D70;&#x5316;&#x6027;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x914D;&#x5217;&#x306E;&#x76F4;&#x63A5;&#x53EF;&#x8996;&#x5316;

Transducci&#xF3;n de se&#xF1;al en la quimiotaxis bacteriana se inicia por la uni&#xF3;n de ligandos extracelulares a una familia de prote&#xED;nas especializado quimiorreceptoras aceptando-metilo. Quimiorreceptores se agrupan en distintas regiones de la c&#xE9;lula y forman complejos estables ternarios con la histidina autokinase Chea, y el adaptador de prote&#xED;nas CheW. Aqu&#xED; se presenta la visualizaci&#xF3;n directa y la organizaci&#xF3;n espacial de las matrices de quimiorreceptoras intactas en c&#xE9;lulas de Escherichia coli mediante el uso de la crio-tomograf&#xED;a electr&#xF3;nica y las t&#xE9;cnicas bioqu&#xED;micas. En c&#xE9;lulas de tipo salvaje, complejos ternarios se organizan como una red extendida, que puede o no puede ser ordenada, con variaciones significativas en el tama&#xF1;o y la ubicaci&#xF3;n espec&#xED;fica entre las c&#xE9;lulas en la misma poblaci&#xF3;n. En ausencia de CheA y CheW, quimiorreceptores no forman c&#xFA;mulos observables y se difusamente localizado en el polo de la c&#xE9;lula. En los niveles de los receptores desproporcionadamente alto, invaginaciones de membrana que contienen no funcional, axial que interact&#xFA;an las asambleas de los receptores se forman. Sin embargo, las matrices funcionales quimiorreceptoras puede ser restablecida mediante el aumento de los niveles celulares de Chea y masticar. Nuestros resultados demuestran que la quimiotaxis en E. coli requiere la presencia de matrices quimiorreceptoras y que la formaci&#xF3;n de estas matrices requiere que las interacciones de andamiaje de las mol&#xE9;culas de se&#xF1;alizaci&#xF3;n Chea y masticar.

Visualizaci&#xF3;n directa de las matrices de Escherichia coli receptor quimiotaxis mediante crio-microscop&#xED;a electr&#xF3;nica

&#x827E;&#x6ECB;&#x75C5;&#x6BD2; 1 &#x5305;&#x542B;&#x5185;&#x90E8;&#x8F66;&#x53A2;&#x968F;&#x65F6;&#x68C0;&#x6D4B;&#x56FE;&#x50CF;&#x7684;&#x8584;&#x7247;&#x4ECE;&#x4F7F;&#x7528;&#x5E38;&#x89C4;&#x900F;&#x5C04;&#x7535;&#x5B50;&#x663E;&#x5FAE;&#x955C;&#xFF0C;&#x51FA;&#x8EAB;&#x7684;&#x4F46;&#x53D7;&#x611F;&#x67D3;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E2D;&#x8FDE;&#x63A5;&#x6027;&#x548C; 3D &#x5206;&#x5E03;&#x7684;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x8F66;&#x53A2;&#x5185;&#x4E00;&#x76F4;&#x6709;&#x4E89;&#x8BAE;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x62A5;&#x544A; 3D &#x5206;&#x5E03;&#x7684;&#x75C5;&#x6BD2;&#x5728;&#x611F;&#x67D3;&#x827E;&#x6ECB;&#x75C5;&#x6BD2; 1 &#x4E3B;&#x4EBA;&#x5DE8;&#x566C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4F7F;&#x7528;&#x4F4E;&#x6E29;&#x7535;&#x5B50;&#x65AD;&#x5C42;&#x626B;&#x63CF;&#x548C;&#x79BB;&#x5B50;&#x78E8;&#x635F;&#x626B;&#x63CF;&#x7535;&#x955C; &#xFF08;IA-SEM&#xFF09;&#xFF0C;&#x4E00;&#x79CD;&#x6700;&#x8FD1;&#x5F00;&#x53D1;&#x7EB3;&#x7C73; 3D &#x6210;&#x50CF;&#x7684;&#x6574;&#x4E2A;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x7684;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x4F7F;&#x7528; IA-&#x626B;&#x63CF;&#x7535;&#x955C;&#xFF0C;&#x53D7;&#x611F;&#x67D3;&#x7684;&#x5DE8;&#x566C;&#x7EC6;&#x80DE;&#xFF0C;&#x4E0E;&#x5927;&#x7EA6; 150-200 &#x7EB3;&#x7C73;&#xFF0C;&#x76F4;&#x5F84;&#x548C;&#x957F;&#x5EA6;&#x7684;&#x6700;&#x5927;&#x7EA6; 5 microm &#x4ECE;&#x6C34;&#x75B1;&#x7684;&#x8F66;&#x53A2;&#x5185;&#x5305;&#x542B;&#x88C5;&#x914D;&#x827E;&#x6ECB;&#x75C5;&#x6BD2; 1 virions &#x6269;&#x5C55;&#x5230;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8868;&#x9762;&#x663E;&#x793A;&#x542B;&#x6709;&#x827E;&#x6ECB;&#x75C5;&#x6BD2; 1 &#x7684;&#x7BA1;&#x72B6;&#x8F66;&#x53A2;&#x5E7F;&#x6CDB;&#x7F51;&#x7EDC;&#x7684;&#x5B58;&#x5728;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7C7B;&#x578B;&#x7684;&#x8868;&#x9762;&#x8FDE;&#x63A5;&#x94A2;&#x7BA1;&#x8F66;&#x53A2;&#x5E76;&#x6CA1;&#x6709;&#x9075;&#x5B88;&#x5728; 29/31 &#x67EF; Gag &#x77E9;&#x9635;&#x7A81;&#x53D8;&#x75C5;&#x6BD2;&#x662F;&#x6709;&#x9488;&#x5BF9;&#x6027;&#x7684;&#x5411; multi-vesicular &#x673A;&#x6784;&#x4F55;&#x5730;&#x91CA;&#x653E;&#x5230;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5916;&#x7684;&#x4E2D;&#x671F;&#x611F;&#x67D3;&#x7684; T &#x7EC6;&#x80DE;&#x3002;IA-&#x626B;&#x63CF;&#x7535;&#x955C;&#x6210;&#x50CF;&#x8FD8;&#x5141;&#x8BB8;&#x4ECE;&#x5DE8;&#x566C;&#x7EC6;&#x80DE;&#xFF0C;&#x5176;&#x4E2D;&#x53EF;&#x80FD;&#x4F1A;&#x6298;&#x5F2F;&#x548C;&#x6298;&#x8BA9;&#x75C5;&#x6BD2;&#x6027;&#x8F66;&#x53A2;&#x548C;&#x75C5;&#x6BD2;&#x4F53;&#x886C;&#x6E20;&#x9053;&#x4E0D;&#x65AD;&#x521B;&#x9020;&#x7684;&#x8868;&#x9762;&#x5411;&#x5916;&#x5EF6;&#x4F38;&#x7684;&#x5927;&#x578B;&#x5DE5;&#x4F5C;&#x8868;&#x6837;&#x7ED3;&#x6784;&#x7684;&#x53EF;&#x89C6;&#x5316;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E00;&#x6F5C;&#x5728;&#x673A;&#x5236;&#x7684;&#x9AD8;&#x6548;&#x75C5;&#x6BD2;&#x8D29;&#x8FD0;&#x4E4B;&#x95F4;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8868;&#x9762;&#x548C;&#x5185;&#x90E8;&#x53EF;&#x80FD;&#x4EE3;&#x8868;&#x98A0;&#x8986;&#x7684;&#x9884;&#x5148;&#x5B58;&#x5728;&#x7684;&#x6C34;&#x75B1;&#x673A;&#x68B0;&#x7684;&#x6297;&#x539F;&#x6355;&#x83B7;&#x3001; &#x5904;&#x7406;&#x3001; &#x87AF;&#x5408;&#x548C;&#x6F14;&#x793A;&#x6587;&#x7A3F;&#x3002;

&#x79BB;&#x5B50;&#x78E8;&#x635F;&#x626B;&#x63CF;&#x7535;&#x5B50;&#x663E;&#x5FAE;&#x955C;&#x63ED;&#x793A;&#x4E86;&#x611F;&#x67D3;&#x827E;&#x6ECB;&#x75C5;&#x6BD2;&#x7684;&#x5DE8;&#x566C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8868;&#x9762;&#x8FDE;&#x63A5;&#x94A2;&#x7BA1;&#x7BA1;&#x9053;&#x3002;

HIV-1-containing internal compartments are readily detected in images of thin sections from infected cells using conventional transmission electron microscopy, but the origin, connectivity, and 3D distribution of these compartments has remained controversial. Here, we report the 3D distribution of viruses in HIV-1-infected primary human macrophages using cryo-electron tomography and ion-abrasion scanning electron microscopy (IA-SEM), a recently developed approach for nanoscale 3D imaging of whole cells. Using IA-SEM, we show the presence of an extensive network of HIV-1-containing tubular compartments in infected macrophages, with diameters of approximately 150-200 nm, and lengths of up to approximately 5 microm that extend to the cell surface from vesicular compartments that contain assembling HIV-1 virions. These types of surface-connected tubular compartments are not observed in T cells infected with the 29/31 KE Gag-matrix mutant where the virus is targeted to multi-vesicular bodies and released into the extracellular medium. IA-SEM imaging also allows visualization of large sheet-like structures that extend outward from the surfaces of macrophages, which may bend and fold back to allow continual creation of viral compartments and virion-lined channels. This potential mechanism for efficient virus trafficking between the cell surface and interior may represent a subversion of pre-existing vesicular machinery for antigen capture, processing, sequestration, and presentation.

Ion-abrasion scanning electron microscopy reveals surface-connected tubular conduits in HIV-infected macrophages.

VIH-1-contenant des compartiments internes sont facilement d&#xE9;tect&#xE9;s dans les images de lames minces de cellules infect&#xE9;es &#xE0; l&#x26;#39;aide conventionnelle microscopie &#xE9;lectronique &#xE0; transmission, mais l&#x26;#39;origine, la connectivit&#xE9;, et de la distribution 3D de ces compartiments est rest&#xE9;e controvers&#xE9;e. Ici, nous rapportons la distribution 3D de virus du VIH-1-infect&#xE9;s primaires des macrophages humains en utilisant la tomographie cryo-&#xE9;lectronique et de l&#x26;#39;ion-abrasion microscopie &#xE9;lectronique &#xE0; balayage (MEB-IA), une approche r&#xE9;cemment d&#xE9;velopp&#xE9;e pour l&#x26;#39;imagerie 3D nanom&#xE9;trique de cellules enti&#xE8;res. Utilisation IA-SEM, nous montrent la pr&#xE9;sence d&#x26;#39;un vaste r&#xE9;seau de VIH-1-contenant compartiments tubulaires dans les macrophages infect&#xE9;s, avec des diam&#xE8;tres d&#x26;#39;environ 150-200 nm et des longueurs allant jusqu&#x26;#39;&#xE0; environ 5 microm qui s&#x26;#39;&#xE9;tendent &#xE0; la surface cellulaire &#xE0; partir v&#xE9;siculaire compartiments qui contiennent l&#x26;#39;assemblage des virions VIH-1. Ces types de connect&#xE9; &#xE0; la surface des compartiments tubulaires ne sont pas observ&#xE9;s dans les cellules T infect&#xE9;es par le 29/31 KE Gag-matrice o&#xF9; le virus mutant est destin&#xE9; aux multi-v&#xE9;siculaires corps et lib&#xE9;r&#xE9;e dans le milieu extracellulaire. IA-SEM imagerie permet &#xE9;galement la visualisation de grandes feuilles comme structures qui s&#x26;#39;&#xE9;tendent vers l&#x26;#39;ext&#xE9;rieur depuis les surfaces de macrophages, qui peut plier et rabattre pour permettre la cr&#xE9;ation continue de compartiments virales et virion fourr&#xE9;es canaux. Ce m&#xE9;canisme potentiel pour le trafic de virus efficace entre la surface des cellules et de l&#x26;#39;int&#xE9;rieur peut repr&#xE9;senter une subversion de la machinerie v&#xE9;siculaire pr&#xE9;-existant de capture de l&#x26;#39;antig&#xE8;ne, le traitement, la s&#xE9;questration, et la pr&#xE9;sentation.

Ion-abrasion microscopie &#xE9;lectronique &#xE0; balayage r&#xE9;v&#xE8;le connect&#xE9; &#xE0; la surface des conduites tubulaires infect&#xE9;s par le VIH macrophages

VIH-1-contiene compartimentos internos se detectan f&#xE1;cilmente en las im&#xE1;genes de las secciones delgadas de las c&#xE9;lulas infectadas utilizando microscop&#xED;a electr&#xF3;nica de transmisi&#xF3;n convencional, pero el origen, la conectividad, y la distribuci&#xF3;n 3D de estos compartimientos se ha mantenido controvertido. Aqu&#xED;, se presenta la distribuci&#xF3;n 3D de los virus del VIH-1-infected macr&#xF3;fagos primarios humanos con la crio-tomograf&#xED;a electr&#xF3;nica y la abrasi&#xF3;n de iones de microscop&#xED;a electr&#xF3;nica de barrido (SEM-IA), un enfoque desarrollado recientemente para im&#xE1;genes a nanoescala en 3D de c&#xE9;lulas enteras. Utilizando IA-SEM, que muestran la presencia de una red extensa de VIH-1-contiene compartimientos tubulares en los macr&#xF3;fagos infectados, con di&#xE1;metros de aproximadamente 150-200 nm, y longitudes de hasta aproximadamente 5 micras, que se extienden a la superficie celular de vesicular compartimientos que contienen el montaje del VIH-1 viriones. Estos tipos de superficie conectados a los compartimientos tubulares no se observan en las c&#xE9;lulas T infectadas con el 29/31 KE Gag-matriz mutante donde se dirige el virus a varios cuerpos vesiculares y liberada en el medio extracelular. IA-SEM im&#xE1;genes tambi&#xE9;n permite la visualizaci&#xF3;n de gran tama&#xF1;o, como hoja de estructuras que se extienden hacia fuera desde las superficies de los macr&#xF3;fagos, que pueden doblarse y plegarse para permitir la creaci&#xF3;n continua de compartimentos virales y canales alineados viri&#xF3;n. Este mecanismo potencial para el tr&#xE1;fico eficiente del virus entre la superficie de la c&#xE9;lula y el interior puede representar una subversi&#xF3;n de la maquinaria vesicular preexistente para la captura de ant&#xED;geno, el procesamiento, el secuestro, y la presentaci&#xF3;n.

Ion-abrasi&#xF3;n microscop&#xED;a electr&#xF3;nica de barrido revela que la superficie conectados a conductos tubulares de los macr&#xF3;fagos infectados por el VIH

HIV-1-haltigen Innenf&auml;cher werden bereitwillig in Bildern von D&uuml;nnschliffen aus infizierten Zellen, die mit konventionellen Transmissionselektronenmikroskopie, aber der Ursprung erkannt, Konnektivit&auml;t und 3D Verteilung dieser F&auml;cher ist umstritten geblieben. Hier berichten wir die 3D Verteilung der Viren in HIV-1-infizierten prim&auml;ren menschlichen Makrophagen mit Cryo-Elektron Tomographie und Ion-Abrieb Rasterelektronenmikroskopie (IA-SEM), eine neu entwickelte Ansatz f&uuml;r nanoskalige 3D-Bildgebung ganzer Zellen. Mit IA-SEM, zeigen wir die Anwesenheit von ein ausgedehntes Netz von HIV-1-haltigen tubul&auml;re F&auml;cher in infizierten Makrophagen, mit einem Durchmesser von etwa 150-200 nm und L&auml;ngen von bis zu ca. 5 Microm, die an der Zelloberfl&auml;che von vesikul&auml;ren F&auml;cher zu erweitern, die Montage HIV-1-Virionen enthalten. Diese Art von Oberfl&auml;che verbundene schlauchf&ouml;rmige F&auml;cher werden nicht beobachtet, in T-Zellen, die mit der 29/31-KE Gag-Matrix-Mutant, wo das Virus gezielt an multi-vesicular stellen und in der extrazellul&auml;ren Medium freigesetzt, infiziert. IA-SEM Bildgebung erlaubt auch Visualisierung gro&szlig;er Blatt-wie Strukturen, die nach au&szlig;en von den Oberfl&auml;chen der Makrophagen, erweitern die biegen und Falten zur&uuml;ck, um kontinuierliche Erstellung von viralen F&auml;cher und Virion ges&auml;umten Kan&auml;len erm&ouml;glichen k&ouml;nnen. Dieser potenzielle Mechanismus zum effizienten Virus Menschenhandel zwischen der Zelloberfl&auml;che und inneren kann ein Zersetzung von pre-existing vesikul&auml;ren Maschinen f&uuml;r Antigen-Erfassung, Verarbeitung, Sequestrierung und Pr&auml;sentation darstellen.

Ion-Abrieb Rasterelektronenmikroskopie zeigt Oberfl&auml;che verbundene schlauchf&ouml;rmige Leitungen in HIV-infizierten Makrophagen.

Scomparti interni contenenti l&#39;HIV-1 sono prontamente rilevate nelle immagini delle sezioni sottili da cellule infettate mediante microscopia elettronica della trasmissione convenzionale, ma l&#39;origine, connettivit&agrave; e 3D distribuzione di questi compartimenti &egrave; rimasto controverso. Riportiamo la distribuzione 3D di virus in macrofagi umani primarie HIV-1-infected usando tomografia cryo-elettrone e ion-abrasione scanning electron microscopy (IA-SEM), un approccio recentemente sviluppato per l&#39;imaging 3D su scala nanometrica di cellule intere. Utilizzando IA-SEM, ci mostrano la presenza di un&#39;estesa rete di scomparti tubolari contenenti l&#39;HIV-1 in macrofagi infetti, con diametro di circa 150-200 nm e lunghezze fino a circa 5 microm che si estendono alla superficie delle cellule da compartimenti vescicolari che contengono montaggio virioni di HIV-1. Questi tipi di scomparti tubolari collegati in superficie non sono osservati in cellule T infettate con il mutante KE Gag-matrix 29/31, dove il virus &egrave; mirato a corpi multi-vesicular e rilasciato nel mezzo extracellulare. Imaging IA-SEM anche permette la visualizzazione di grandi dimensioni foglio-come le strutture che si estendono verso l&#39;esterno dalle superfici dei macrofagi, che possono piegare e piegare indietro per consentire la continua creazione di compartimenti virali e canali virione-allineato. Questo meccanismo potenziale per virus efficiente traffico tra la superficie della cellula e l&#39;interno pu&ograve; rappresentare una sovversione della preesistente vescicolare macchinari per la cattura dell&#39;antigene, elaborazione, sequestro e presentazione.

Ione-abrasione scanning electron microscopy rivela superficie collegato condotti tubolari in macrofagi infettati da HIV.

HIV-1&#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x5185;&#x90E8;&#x306E;&#x30B3;&#x30F3;&#x30D1;&#x30FC;&#x30C8;&#x30E1;&#x30F3;&#x30C8;&#x304C;&#x5BB9;&#x6613;&#x306B;&#x5F93;&#x6765;&#x306E;&#x900F;&#x904E;&#x578B;&#x96FB;&#x5B50;&#x9855;&#x5FAE;&#x93E1;&#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x3066;&#x611F;&#x67D3;&#x7D30;&#x80DE;&#x304B;&#x3089;&#x306E;&#x8584;&#x7247;&#x306E;&#x753B;&#x50CF;&#x3067;&#x691C;&#x51FA;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x304C;&#x3001;&#x8D77;&#x6E90;&#x3001;&#x63A5;&#x7D9A;&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x533A;&#x753B;&#x306E;3&#x6B21;&#x5143;&#x5206;&#x5E03;&#x304C;&#x8B70;&#x8AD6;&#x306E;&#x6B8B;&#x3063;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x4F4E;&#x6E29;&#x96FB;&#x5B50;&#x65AD;&#x5C64;&#x64AE;&#x5F71;&#x6CD5;&#x3001;&#x30A4;&#x30AA;&#x30F3;&#x6469;&#x8017;&#x8D70;&#x67FB;&#x578B;&#x96FB;&#x5B50;&#x9855;&#x5FAE;&#x93E1;&#xFF08;IA-SEM&#xFF09;&#x3001;&#x5168;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x30CA;&#x30CE;&#x30B9;&#x30B1;&#x30FC;&#x30EB;3D&#x30A4;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B8;&#x30F3;&#x30B0;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x6700;&#x8FD1;&#x958B;&#x767A;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x30A2;&#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30C1;&#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x3066;HIV-1&#x611F;&#x67D3;&#x521D;&#x4EE3;&#x30D2;&#x30C8;&#x30DE;&#x30AF;&#x30ED;&#x30D5;&#x30A1;&#x30FC;&#x30B8;&#x3067;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x306E;&#x4E09;&#x6B21;&#x5143;&#x5206;&#x5E03;&#x3092;&#x5831;&#x544A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002; IA-SEM&#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x3066;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306E;&#x5E83;&#x7BC4;&#x306A;&#x30CD;&#x30C3;&#x30C8;&#x30EF;&#x30FC;&#x30AF;&#x306E;&#x5B58;&#x5728;&#x3092;&#x793A;&#x3059;HIV-1&#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x5C0F;&#x80DE;&#x304B;&#x3089;&#x7D30;&#x80DE;&#x8868;&#x9762;&#x3078;&#x306E;&#x5EF6;&#x9577;&#x306F;&#x7D04;5&#x30DE;&#x30A4;&#x30AF;&#x30ED;&#x30E2;&#x30EB;&#x306B;&#x7BA1;&#x72B6;&#x306E;&#x7D04;150&#x304B;&#x3089;200 nm&#x306E;&#x76F4;&#x5F84;&#x3092;&#x3082;&#x3064;&#x611F;&#x67D3;&#x30DE;&#x30AF;&#x30ED;&#x30D5;&#x30A1;&#x30FC;&#x30B8;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x30B3;&#x30F3;&#x30D1;&#x30FC;&#x30C8;&#x30E1;&#x30F3;&#x30C8;&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x6700;&#x5927;&#x306E;&#x9577;&#x3055;&#x3092;HIV-1&#x30D3;&#x30EA;&#x30AA;&#x30F3;&#x3092;&#x7D44;&#x307F;&#x7ACB;&#x3066;&#x308B;&#x542B;&#x3080;&#x30B3;&#x30F3;&#x30D1;&#x30FC;&#x30C8;&#x30E1;&#x30F3;&#x30C8;&#x3002;&#x8868;&#x9762;&#x306B;&#x63A5;&#x7D9A;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x7B52;&#x72B6;&#x306E;&#x533A;&#x753B;&#x306E;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x30BF;&#x30A4;&#x30D7;&#x306E;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x304C;&#x591A;&#x5C0F;&#x80DE;&#x4F53;&#x3092;&#x6A19;&#x7684;&#x3068;&#x3057;&#x3001;&#x7D30;&#x80DE;&#x5916;&#x57F9;&#x5730;&#x4E2D;&#x306B;&#x653E;&#x51FA;&#x3055;&#x308C;&#x308B;31&#x5206;&#x306E;29 KE&#x30AE;&#x30E3;&#x30B0;&#x30DE;&#x30C8;&#x30EA;&#x30C3;&#x30AF;&#x30B9;&#x5909;&#x7570;&#x4F53;&#x306B;&#x611F;&#x67D3;&#x3057;&#x305F;T&#x7D30;&#x80DE;&#x3067;&#x89B3;&#x5BDF;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3002; IA-SEM&#x30A4;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B8;&#x30F3;&#x30B0;&#x306F;&#x200B;&#x200B;&#x307E;&#x305F;&#x3001;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x306E;&#x30B3;&#x30F3;&#x30D1;&#x30FC;&#x30C8;&#x30E1;&#x30F3;&#x30C8;&#x3068;&#x30D3;&#x30EA;&#x30AA;&#x30F3;&#x88CF;&#x5730;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x306E;&#x7D99;&#x7D9A;&#x7684;&#x306A;&#x5275;&#x51FA;&#x3092;&#x53EF;&#x80FD;&#x306B;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x66F2;&#x3052;&#x308B;&#x3068;&#x80CC;&#x9762;&#x6298;&#x308B;&#x304B;&#x3082;&#x3057;&#x308C;&#x306A;&#x3044;&#x30DE;&#x30AF;&#x30ED;&#x30D5;&#x30A1;&#x30FC;&#x30B8;&#x306E;&#x8868;&#x9762;&#x304B;&#x3089;&#x5916;&#x5074;&#x306B;&#x5EF6;&#x3073;&#x308B;&#x5927;&#x898F;&#x6A21;&#x306A;&#x30B7;&#x30FC;&#x30C8;&#x72B6;&#x306E;&#x69CB;&#x9020;&#x3092;&#x53EF;&#x8996;&#x5316;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x7D30;&#x80DE;&#x8868;&#x9762;&#x3068;&#x5185;&#x90E8;&#x3068;&#x306E;&#x9593;&#x306E;&#x52B9;&#x7387;&#x7684;&#x306A;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x306E;&#x4EBA;&#x8EAB;&#x58F2;&#x8CB7;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x3053;&#x306E;&#x6F5C;&#x5728;&#x7684;&#x306A;&#x30E1;&#x30AB;&#x30CB;&#x30BA;&#x30E0;&#x306F;&#x3001;&#x6297;&#x539F;&#x306E;&#x53D6;&#x308A;&#x8FBC;&#x307F;&#x3001;&#x51E6;&#x7406;&#x3001;&#x9694;&#x96E2;&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x30D7;&#x30EC;&#x30BC;&#x30F3;&#x30C6;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x65E2;&#x5B58;&#x306E;&#x5C0F;&#x80DE;&#x306E;&#x6A5F;&#x68B0;&#x306E;&#x8EE2;&#x8986;&#x3092;&#x8868;&#x3059;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x308B;&#x3002;

&#x30A4;&#x30AA;&#x30F3;&#x6469;&#x8017;&#x8D70;&#x67FB;&#x578B;&#x96FB;&#x5B50;&#x9855;&#x5FAE;&#x93E1;&#x306F;&#x3001;HIV&#x306B;&#x611F;&#x67D3;&#x3057;&#x305F;&#x30DE;&#x30AF;&#x30ED;&#x30D5;&#x30A1;&#x30FC;&#x30B8;&#x306E;&#x8868;&#x9762;&#x306B;&#x63A5;&#x7D9A;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x7BA1;&#x72B6;&#x306E;&#x30B3;&#x30F3;&#x30B8;&#x30C3;&#x30C8;&#x3092;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;

HIV 1 &#xD3EC;&#xD568; &#xB41C; &#xB0B4;&#xBD80; &#xAD6C;&#xD68D;&#xC740; &#xC27D;&#xAC8C; &#xC5F0;&#xACB0;&#xACFC; &#xC774;&#xB4E4;&#xC774; &#xAD6C;&#xD68D;&#xC758; 3 &#xCC28;&#xC6D0; &#xBD84;&#xD3EC; &#xB17C;&#xB780;&#xC774; &#xB0A8;&#xC544; &#xC788;&#xB2E4; &#xAE30;&#xC6D0;, &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xAE30;&#xC874;&#xC758; &#xC804;&#xC1A1; &#xC804;&#xC790; &#xD604;&#xBBF8;&#xACBD;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xAC10;&#xC5FC; &#xB41C; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC587;&#xC740; &#xC139;&#xC158;&#xC758; &#xC774;&#xBBF8;&#xC9C0;&#xC5D0;&#xC11C; &#xAC80;&#xC0C9; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC5EC;&#xAE30;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; &#xBCF4;&#xACE0;&#xC11C; &#xACF3;&#xC744; &#xC54C;&#xC544;&#xB0B4;&#xB294;-&#xC804;&#xC790; &#xB2E8;&#xCE35; &#xCD2C;&#xC601; &#xBC0F; &#xC774;&#xC628; &#xB9C8;&#xBAA8; &#xC2A4;&#xCE90;&#xB2DD; &#xC804;&#xC790; &#xD604;&#xBBF8;&#xACBD; (SEM &#xC544;&#xC774;&#xC624;&#xC640;), &#xC804;&#xCCB4; &#xC140;&#xC758; &#xB098;&#xB178; 3D &#xC601;&#xC0C1;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xCD5C;&#xADFC; &#xAC1C;&#xBC1C; &#xB41C; &#xC811;&#xADFC; &#xBC29;&#xC2DD; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xAE30;&#xBCF8;&#xC758; &#xC778;&#xAC04; &#xC138;&#xD3EC;&#xB97C; &#xC5D0;&#xC774;&#xC988;-1 &#xAC10;&#xC5FC;&#xC5D0; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4;&#xC758; 3D &#xBC30;&#xD3EC; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. IA SEM&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC;, &#xC6B0;&#xB9AC; &#xC57D; 150-200 nm&#xC758; &#xC9C1;&#xACBD; &#xBC0F; &#xC5B4;&#xC148;&#xBE14; HIV-1 virions&#xB97C; &#xD3EC;&#xD568; &#xD558;&#xB294; &#xAE30;&#xACF5;&#xC744; &#xAD6C;&#xD68D;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC140; &#xD45C;&#xBA74;&#xC5D0; &#xD655;&#xC7A5; &#xD558;&#xB294; &#xC57D; 5 microm &#xCD5C;&#xB300;&#xC758; &#xAE38;&#xC774; &#xD568;&#xAED8; &#xAC10;&#xC5FC; &#xB41C; &#xB300; &#xC2DD; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0;&#xC11C; HIV 1 &#xD3EC;&#xD568; &#xB41C; &#xAD00; &#xAD6C;&#xD68D;&#xC758; &#xAD11;&#xBC94;&#xC704; &#xD55C; &#xB124;&#xD2B8;&#xC6CC;&#xD06C;&#xC758; &#xC874;&#xC7AC;&#xB97C; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xC720;&#xD615;&#xC758; &#xD45C;&#xBA74;&#xC5D0; &#xC5F0;&#xACB0; &#xB41C; &#xAD00; &#xBAA8; &#xAD6C;&#xD68D;&#xC740; T &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0; &#xAC10;&#xC5FC; &#xB41C; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4;&#xB294; multi-vesicular &#xC2DC;&#xCCB4;&#xB97C; &#xB300;&#xC0C1;&#xC73C;&#xB85C; &#xD558; &#xACE0; &#xC138;&#xD3EC; &#xC678; &#xB9E4;&#xCCB4;&#xB85C; &#xCD9C;&#xC2DC; 29/31 &#xC560; &#xAC1C; &#xADF8; &#xB9E4;&#xD2B8;&#xB9AD;&#xC2A4; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774;&#xC5D0; &#xAD00;&#xCC30; &#xD558;&#xC9C0;. IA-sem&#xC758; &#xC601;&#xC0C1;&#xC5D0;&#xB294; &#xBCA4;&#xB4DC; &#xD558; &#xACE0; &#xB2E4;&#xC2DC; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; &#xC131; &#xAD6C;&#xD68D; &#xBC0F; virion &#xC904;&#xC9C0;&#xC5B4; &#xCC44;&#xB110;&#xC758; &#xC9C0;&#xC18D;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xC791;&#xC131;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xB3C4;&#xB85D; &#xC811;&#xC744; &#xC218; &#xC788;&#xB294; &#xB300; &#xC2DD; &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xD45C;&#xBA74;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBC14;&#xAE65;&#xCABD;&#xC73C;&#xB85C; &#xD655;&#xC7A5; &#xD558;&#xB294; &#xB300;&#xD615; &#xC2DC;&#xD2B8; &#xAC19;&#xC740; &#xAD6C;&#xC870;&#xC758; &#xC2DC;&#xAC01;&#xD654; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC138;&#xD3EC; &#xD45C;&#xBA74; &#xBC0F; &#xB0B4;&#xBD80; &#xAC04;&#xC758; &#xD6A8;&#xC728;&#xC801;&#xC778; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; &#xC778;&#xC2E0; &#xB9E4;&#xB9E4;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC7A0;&#xC7AC;&#xC801;&#xC778; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;&#xC774; &#xD56D; &#xC6D0; &#xCEA1;&#xCC98;, &#xCC98;&#xB9AC;, &#xACA9;&#xB9AC;, &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; &#xD504;&#xB808; &#xC820; &#xD14C;&#xC774; &#xC158;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xAE30;&#xC874; &#xAE30;&#xACF5;&#xC744; &#xAE30;&#xACC4; &#xD30C;&#xAD34;&#xB97C; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0BC; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xC2A4;&#xCE90;&#xB2DD; &#xC804;&#xC790; &#xD604;&#xBBF8;&#xACBD; &#xC774;&#xC628; &#xB9C8;&#xBAA8; HIV&#xC5D0; &#xAC10;&#xC5FC; &#xB41C; &#xB300; &#xC2DD; &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xD45C;&#xBA74;&#xC5D0; &#xC5F0;&#xACB0; &#xB41C; &#xAD00; &#xB3C4;&#xAD00;&#xC744; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC900;&#xB2E4;.

&#x611F;&#x67D3;&#x827E;&#x6ECB;&#x75C5;&#x6BD2;&#x7684;&#x6548;&#x7387;&#x663E;&#x8457;&#x63D0;&#x9AD8;&#xFF0C;&#x8FD9;&#x79CD;&#x75C5;&#x6BD2;&#x5728;&#x590D;&#x5408;&#x7269; CD4 + T &#x7EC6;&#x80DE;&#x548C;&#x5DE8;&#x566C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7B49;&#x542B;&#x75C5;&#x6BD2;&#x6297;&#x539F;&#x9012;&#x5448;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6216;&#x901A;&#x8FC7;&#x4E13;&#x95E8;&#x7684;&#x7ED3;&#x6784;&#xFF0C;&#x79F0;&#x4E3A;&#x75C5;&#x6BD2;&#x5B66;&#x7A81;&#x89E6;&#x7684;&#x6811;&#x7A81;&#x72B6;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E4B;&#x95F4;&#x4F20;&#x9012;&#x65F6;&#x3002;&#x4F7F;&#x7528;&#x79BB;&#x5B50;&#x78E8;&#x635F;&#x626B;&#x63CF;&#x7535;&#x955C;&#x3001; &#x7535;&#x5B50;&#x6210;&#x50CF;&#x548C;&#x8D85;&#x5206;&#x8FA8;&#x5149;&#x955C;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x5DF2;&#x7ECF;&#x5206;&#x6790;&#x4E86;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x63A5;&#x89E6;&#x7684;&#x7A7A;&#x95F4;&#x4F53;&#x7CFB;&#x7ED3;&#x6784;&#x548C;&#x5206;&#x5E03;&#x7684;&#x827E;&#x6ECB;&#x75C5;&#x6BD2; virions &#x5728;&#x75C5;&#x6BD2;&#x5B66;&#x7A81;&#x89E6;&#x5F62;&#x6210;&#x6210;&#x719F;&#x7684;&#x6811;&#x7A81;&#x72B6;&#x7EC6;&#x80DE;&#x548C; T &#x7EC6;&#x80DE;&#x4E4B;&#x95F4;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x8868;&#x73B0;&#x51FA;&#x60CA;&#x4EBA;&#x7684;&#x5305;&#x7EDC;&#x7684; T &#x7EC6;&#x80DE;&#x7531;&#x6210;&#x719F;&#x7684;&#x6811;&#x7A81;&#x72B6;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6765;&#x6E90;&#x7684;&#x8868;&#x6837;&#x819C;&#x6269;&#x5C55;&#x75C5;&#x6BD2;&#x5B66;&#x7A81;&#x89E6;&#x5F62;&#x6210;&#x5C4F;&#x853D;&#x533A;&#x57DF;&#x4E2D;&#x4EA7;&#x751F;&#x3002;&#x5185;&#x7A81;&#x89E6;&#x540E;&#xFF0C;&#x6240;&#x4EA7;&#x751F;&#x7684; CD4 + T &#x7EC6;&#x80DE;&#x7684; filopodial &#x6269;&#x5C55;&#x4F7F;&#x827E;&#x6ECB;&#x75C5;&#x6BD2;&#x63A5;&#x89E6; virions 3D &#x7F51;&#x7EDC;&#x4E2D;&#x7684;&#x6811;&#x7A81;&#x72B6;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8868;&#x9762;&#x53EF;&#x8BBF;&#x95EE;&#x8F66;&#x53A2;&#x5185;&#x6DF1;&#x56FA;&#x3002;&#x6811;&#x7A81;&#x72B6;&#x7EC6;&#x80DE;&#x548C; T &#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x819C;&#x8868;&#x9762;&#x5728;&#x68C0;&#x6D4B;&#x5230;&#x75C5;&#x6BD2;&#xFF0C;&#x4F46;&#x6CA1;&#x6709;&#x5728;&#x7A81;&#x89E6; &#xFF1B; &#x88AB;&#x52A8;&#x53D1;&#x5E03; virions&#x76F8;&#x53CD;&#xFF0C;&#x75C5;&#x6BD2;&#x8F6C;&#x8BA9;&#x9700;&#x8981;&#x7684; CD4 T &#x7EC6;&#x80DE;&#x53D7;&#x4F53;&#x7684;&#x53C2;&#x4E0E;&#x3002;T &#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5916;&#x73AF;&#x5883;&#x4E2D;&#x76F8;&#x5BF9;&#x9690;&#x9038;&#xFF0C;&#x57CB;&#x846C;&#x7684;&#x827E;&#x6ECB;&#x75C5;&#x6BD2;&#x7684;&#x7AD9;&#x70B9;&#x4F20;&#x8F93;&#x548C;&#x75C5;&#x6BD2;&#x4F53;&#x8F6C;&#x79FB;&#x7684; T &#x7EC6;&#x80DE;&#x53D7;&#x4F53;&#x4F9D;&#x8D56;&#x5F00;&#x59CB;&#x7A81;&#x51FA;&#x663E;&#x793A;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x827E;&#x6ECB;&#x75C5;&#x6BD2;&#x4F20;&#x64AD;&#x7684;&#x72EC;&#x6709;&#x65B9;&#x9762;&#x3002;

3D &#x53EF;&#x89C6;&#x5316;&#x7684;&#x827E;&#x6ECB;&#x75C5;&#x6BD2;&#x8F6C;&#x8BA9;&#x5728;&#x75C5;&#x6BD2;&#x5B66;&#x7684;&#x7A81;&#x89E6;&#x540E;&#x6811;&#x7A81;&#x72B6;&#x7EC6;&#x80DE;&#x548C; T &#x7EC6;&#x80DE;&#x4E4B;&#x95F4;&#x3002;

The efficiency of HIV infection is greatly enhanced when the virus is delivered at conjugates between CD4+ T cells and virus-bearing antigen-presenting cells such as macrophages or dendritic cells via specialized structures known as virological synapses. Using ion abrasion SEM, electron tomography, and superresolution light microscopy, we have analyzed the spatial architecture of cell-cell contacts and distribution of HIV virions at virological synapses formed between mature dendritic cells and T cells. We demonstrate the striking envelopment of T cells by sheet-like membrane extensions derived from mature dendritic cells, resulting in a shielded region for formation of virological synapses. Within the synapse, filopodial extensions emanating from CD4+ T cells make contact with HIV virions sequestered deep within a 3D network of surface-accessible compartments in the dendritic cell. Viruses are detected at the membrane surfaces of both dendritic cells and T cells, but virions are not released passively at the synapse; instead, virus transfer requires the engagement of T-cell CD4 receptors. The relative seclusion of T cells from the extracellular milieu, the burial of the site of HIV transfer, and the receptor-dependent initiation of virion transfer by T cells highlight unique aspects of cell-cell HIV transmission.

3D visualization of HIV transfer at the virological synapse between dendritic cells and T cells.

L&#x26;#39;efficacit&#xE9; de l&#x26;#39;infection &#xE0; VIH est grandement am&#xE9;lior&#xE9;e lorsque le virus est livr&#xE9; au conjugu&#xE9;s entre cellules T CD4 + et le virus porteurs cellules pr&#xE9;sentatrices d&#x26;#39;antig&#xE8;ne comme les macrophages ou les cellules dendritiques via des structures sp&#xE9;cialis&#xE9;es appel&#xE9;es synapses virologiques comme. Utilisation de l&#x26;#39;abrasion ionique SEM, la tomographie &#xE9;lectronique, et microscopie en lumi&#xE8;re superr&#xE9;solution, nous avons analys&#xE9; l&#x26;#39;architecture spatiale des contacts cellule-cellule et de distribution de virions VIH au niveau des synapses virologiques form&#xE9;es entre les cellules dendritiques matures et les cellules T. Nous d&#xE9;montrons l&#x26;#39;enveloppement frappant de cellules T par feuille comme des extensions membranaires d&#xE9;riv&#xE9;s de cellules dendritiques matures, r&#xE9;sultant dans une r&#xE9;gion blind&#xE9; pour la formation des synapses virologiques. Dans la synapse, les extensions filopodial &#xE9;manant de cellules T CD4 + en contact avec des virions VIH s&#xE9;questr&#xE9;s profonde dans un r&#xE9;seau 3D de la surface accessibles aux compartiments de la cellule dendritique. Les virus sont d&#xE9;tect&#xE9;s &#xE0; la surface des membranes des deux cellules dendritiques et les lymphocytes T, mais virions ne sont pas lib&#xE9;r&#xE9;s passivement &#xE0; la synapse; au lieu, le transfert du virus n&#xE9;cessite l&#x26;#39;engagement de r&#xE9;cepteurs CD4 des lymphocytes T. Le relatif isolement de cellules T &#xE0; partir du milieu extracellulaire, l&#x26;#39;enterrement du site du VIH transfert, et l&#x26;#39;initiation d&#xE9;pendante du r&#xE9;cepteur de transfert virion par les cellules T en &#xE9;vidence les aspects uniques de la cellule-cellule de transmission du VIH.

Visualisation 3D de transfert du VIH &#xE0; la synapse virologique entre les cellules dendritiques et les lymphocytes T

Die Effizienz der HIV-Infektion wird erheblich verbessert, wenn das Virus an Konjugate zwischen CD4 + T-Zellen und Virus-Antigen-pr&auml;sentierenden Zellen wie Makrophagen oder dendritische Zellen &uuml;ber spezialisierte Strukturen bekannt als virologischen Synapsen geliefert wird. Mit Ion Abrieb SEM, Elektronenstrahl-Tomographie und Superresolution Lichtmikroskopie, haben wir die r&auml;umliche Architektur der Zell-Zell-Kontakte und Verteilung von HIV Virionen am virologischen Synapsen zwischen Reifen dendritischen Zellen und T-Zellen gebildet analysiert. Wir demonstrieren die auff&auml;llige Umfassung von T-Zellen von Blatt-wie Membran Erweiterungen abgeleitet von Reifen dendritischen Zellen, was in einem abgeschirmten Bereich f&uuml;r Bildung der virologischen Synapsen. Innerhalb der Synapse, Filopodial Erweiterungen von CD4 + T-Zellen machen Kontakt mit HIV Virionen Kohlenstoff tief in einem 3D Oberfl&auml;che zug&auml;nglichen Depots in die dendritischen Zellen. Viren werden an der Membran-Oberfl&auml;chen von dendritischen Zellen und T-Zellen erkannt, aber Virionen sind nicht passiv an der Synapse freigegeben; Stattdessen erfordert Virus-&Uuml;bertragung das Engagement der T-Zellen CD4-Rezeptoren. Die relative Abgeschiedenheit der T-Zellen aus dem extrazellul&auml;ren Milieu, die Beerdigung von der Website von HIV &uuml;bertragen und Rezeptor-abh&auml;ngige Einleitung des Virion Transfer von T-Zellen werden einzigartige Aspekte der Zell-Zell-HIV-&Uuml;bertragung.

3D Visualisierung der HIV-&Uuml;bertragung bei der virologischen Synapse zwischen dendritische Zellen und T-Zellen.

L&#39;efficienza di infezione da HIV &egrave; notevolmente migliorato quando il virus &egrave; trasportato a coniugati tra cellule T CD4 + e cellule presentanti l&#39;antigene virus-cuscinetto come macrofagi o cellule dendritiche attraverso strutture specializzate, conosciuti come sinapsi virologiche. Utilizzando ioni abrasione SEM, tomografia elettronica e microscopia chiara sovrarisoluzione, abbiamo analizzato l&#39;architettura spaziale di contatti cellula-cellula e distribuzione dei virioni di HIV a sinapsi virologiche formate tra cellule T e cellule dendritiche mature. Dimostriamo il envelopment sorprendente delle cellule T da estensioni di foglio-come membrana derivate da cellule dendritiche mature, risultante in una regione schermata per la formazione delle sinapsi virologiche. All&#39;interno della sinapsi, le estensioni di filopodial proveniente da cellule T CD4 + mettersi in contatto con l&#39;HIV virioni sequestrati profondo all&#39;interno di una rete 3D di compartimenti superficie accessibile nella cellula dendritica. Virus vengono rilevati presso le superfici della membrana di cellule dendritiche e di cellule T, ma virioni non vengono rilasciate passivamente alle sinapsi; invece, il trasferimento di virus richiede il coinvolgimento dei recettori delle cellule T CD4. Il relativo isolamento delle cellule T dal milieu extracellulare, trasferire la sepoltura del sito di HIV, e l&#39;avvio del recettore-dipendente del virione trasferimento di cellule T evidenziare aspetti unici della trasmissione dell&#39;HIV cellula-cellula.

Visualizzazione 3D di trasferimento HIV presso la sinapsi virologica tra cellule dendritiche e cellule T.

&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x306F;CD4 + T&#x7D30;&#x80DE;&#x3084;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x5B66;&#x7684;&#x30B7;&#x30CA;&#x30D7;&#x30B9;&#x3068;&#x547C;&#x3070;&#x308C;&#x308B;&#x7279;&#x6B8A;&#x306A;&#x69CB;&#x9020;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x3066;&#x30DE;&#x30AF;&#x30ED;&#x30D5;&#x30A1;&#x30FC;&#x30B8;&#x3084;&#x6A39;&#x72B6;&#x7D30;&#x80DE;&#x306A;&#x3069;&#x306E;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x30D9;&#x30A2;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;&#x3001;&#x6297;&#x539F;&#x63D0;&#x793A;&#x7D30;&#x80DE;&#x3068;&#x306E;&#x9593;&#x306E;&#x8907;&#x5408;&#x4F53;&#x3067;&#x914D;&#x4FE1;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3068;&#x304D;&#x306B;HIV&#x611F;&#x67D3;&#x306E;&#x52B9;&#x7387;&#x304C;&#x5927;&#x5E45;&#x306B;&#x5F37;&#x5316;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30A4;&#x30AA;&#x30F3;&#x6469;&#x8017;SEM&#x3001;&#x96FB;&#x5B50;&#x7DDA;&#x30C8;&#x30E2;&#x30B0;&#x30E9;&#x30D5;&#x30A3;&#x30FC;&#x3068;&#x3001;&#x9AD8;&#x5206;&#x89E3;&#x80FD;&#x306A;&#x5149;&#x5B66;&#x9855;&#x5FAE;&#x93E1;&#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x3066;&#x3001;&#x7D30;&#x80DE;&#x9593;&#x306E;&#x9023;&#x7D61;&#x5148;&#x3084;&#x6210;&#x719F;&#x6A39;&#x72B6;&#x7D30;&#x80DE;&#x3068;T&#x7D30;&#x80DE;&#x3068;&#x306E;&#x9593;&#x306B;&#x5F62;&#x6210;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x5B66;&#x7684;&#x30B7;&#x30CA;&#x30D7;&#x30B9;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;HIV&#x306E;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x7C92;&#x5B50;&#x306E;&#x5206;&#x5E03;&#x306E;&#x7A7A;&#x9593;&#x7684;&#x306A;&#x30A2;&#x30FC;&#x30AD;&#x30C6;&#x30AF;&#x30C1;&#x30E3;&#x3092;&#x5206;&#x6790;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x5B66;&#x7684;&#x30B7;&#x30CA;&#x30D7;&#x30B9;&#x306E;&#x5F62;&#x6210;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x30B7;&#x30FC;&#x30EB;&#x30C9;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x9818;&#x57DF;&#x3067;&#x751F;&#x3058;&#x308B;&#x6210;&#x719F;&#x6A39;&#x72B6;&#x7D30;&#x80DE;&#x304B;&#x3089;&#x6D3E;&#x751F;&#x3057;&#x305F;&#x30B7;&#x30FC;&#x30C8;&#x72B6;&#x306E;&#x819C;&#x306E;&#x62E1;&#x5F35;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x3001;T&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x9855;&#x8457;&#x306A;&#x5305;&#x56F2;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30B7;&#x30CA;&#x30D7;&#x30B9;&#x5185;&#x200B;&#x200B;&#x3067;&#x306F;&#x3001;CD4&#x304B;&#x3089;&#x767A;&#x305B;filopodial&#x62E1;&#x5F35;&#x5B50;&#x306F;&#x3001;+ T&#x7D30;&#x80DE;&#x306F;&#x6A39;&#x72B6;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x8868;&#x9762;&#x306B;&#x30A2;&#x30AF;&#x30BB;&#x30B9;&#x53EF;&#x80FD;&#x306A;&#x533A;&#x753B;&#x306E;3&#x6B21;&#x5143;&#x30CD;&#x30C3;&#x30C8;&#x30EF;&#x30FC;&#x30AF;&#x306E;&#x5965;&#x6DF1;&#x304F;&#x306B;&#x9694;&#x96E2;HIV&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x7C92;&#x5B50;&#x3068;&#x63A5;&#x89E6;&#x3059;&#x308B;&#x3002;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x306F;&#x3001;&#x6A39;&#x72B6;&#x7D30;&#x80DE;&#x3068;T&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x4E21;&#x65B9;&#x306E;&#x819C;&#x9762;&#x3067;&#x691C;&#x51FA;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x304C;&#x3001;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x7C92;&#x5B50;&#x306F;&#x3001;&#x30B7;&#x30CA;&#x30D7;&#x30B9;&#x3067;&#x53D7;&#x52D5;&#x7684;&#x306B;&#x653E;&#x51FA;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3002;&#x4EE3;&#x308F;&#x308A;&#x306B;&#x3001;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x8EE2;&#x9001;&#x306F;T&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;CD4&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x306E;&#x95A2;&#x4E0E;&#x3092;&#x5FC5;&#x8981;&#x3068;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x7D30;&#x80DE;&#x5916;&#x74B0;&#x5883;&#x3001;HIV&#x4F1D;&#x9054;&#x306E;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x306E;&#x57CB;&#x846C;&#x3068;&#x3001;T&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x30D3;&#x30EA;&#x30AA;&#x30F3;&#x8EE2;&#x9001;&#x306E;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x4F9D;&#x5B58;&#x6027;&#x306E;&#x958B;&#x59CB;&#x304B;&#x3089;T&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x76F8;&#x5BFE;&#x7684;&#x306A;&#x9694;&#x96E2;&#x306F;&#x3001;&#x7D30;&#x80DE;&#x9593;&#x306E;HIV&#x611F;&#x67D3;&#x306E;&#x30E6;&#x30CB;&#x30FC;&#x30AF;&#x306A;&#x5074;&#x9762;&#x3092;&#x5F37;&#x8ABF;&#x8868;&#x793A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x6A39;&#x72B6;&#x7D30;&#x80DE;&#x3068;T&#x7D30;&#x80DE;&#x9593;&#x306E;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x5B66;&#x7684;&#x30B7;&#x30CA;&#x30D7;&#x30B9;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;HIV&#x4F1D;&#x9054;&#x306E;3&#x6B21;&#x5143;&#x53EF;&#x8996;&#x5316;

HIV &#xAC10;&#xC5FC;&#xC758; &#xD6A8;&#xC728;&#xC131;&#xC740; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; conjugates CD4 + T &#xC138;&#xD3EC;&#xC640; &#xB300; &#xC2DD; &#xC138;&#xD3EC;&#xC640; &#xAC19;&#xC740; &#xD56D; &#xC6D0; &#xC81C;&#xC2DC; &#xC138;&#xD3EC; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; &#xBCA0;&#xC5B4;&#xB9C1; &#xB610;&#xB294; virological &#xC2DC; &#xB0C5; &#xC2A4; &#xB77C;&#xACE0; &#xD558;&#xB294; &#xD2B9;&#xC218; &#xAD6C;&#xC870;&#xB97C; &#xD1B5;&#xD574; &#xC218;&#xC9C0;&#xC0C1; &#xC138;&#xD3EC; &#xC0AC;&#xC774; &#xC804;&#xB2EC; &#xB420; &#xB54C;&#xC5D0; &#xD06C;&#xAC8C; &#xD5A5;&#xC0C1; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774;&#xC628; &#xB9C8;&#xBAA8; SEM, &#xC804;&#xC790; &#xB2E8;&#xCE35; &#xCD2C;&#xC601;, &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; &#xC288;&#xD37C; &#xAC00;&#xBCBC;&#xC6B4; &#xD604;&#xBBF8;&#xACBD; &#xAC80;&#xC0AC; &#xBC95;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC;, &#xC6B0;&#xB9AC; &#xC140; &#xC5F0;&#xB77D;&#xCC98;&#xC758; &#xACF5;&#xAC04;&#xC801; &#xAC74;&#xCD95;&#xBB3C;&#xACFC; virological &#xB0C5; &#xC131;&#xC219; &#xC218;&#xC9C0;&#xC0C1; &#xC138;&#xD3EC;&#xC640; T &#xC138;&#xD3EC; &#xC0AC;&#xC774; &#xD615;&#xC131;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC5D0;&#xC774;&#xC988; virions&#xC758; &#xBD84;&#xD3EC;&#xB97C; &#xBD84;&#xC11D; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC; virological &#xC2DC; &#xB0C5; &#xC2A4;&#xC758; &#xD615;&#xC131;&#xC744; &#xC704;&#xD55C; &#xCC28;&#xD3D0; &#xB41C; &#xC9C0;&#xC5ED;&#xC5D0; &#xB530;&#xB978; &#xC131;&#xC219; &#xC218;&#xC9C0;&#xC0C1; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD30C;&#xC0DD; &#xB41C; &#xC2DC;&#xD2B8; &#xAC19;&#xC740; &#xB9C9; &#xD655;&#xC7A5; &#xD558; &#xC5EC; T &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xB208;&#xC5D0; &#xB744;&#xB294; &#xBD09;&#xD568;&#xC744; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB0C5;, &#xB0B4; filopodial &#xD655;&#xC7A5; CD4 + T &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC9D1;&#xC911;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xC5D0;&#xC774;&#xC988;&#xC640; &#xC811;&#xCD09; &#xD558;&#xB3C4;&#xB85D; &#xAE4A;&#xC740; &#xC218;&#xC9C0;&#xC0C1; &#xC138;&#xD3EC; &#xD45C;&#xBA74;&#xC5D0; &#xC561;&#xC138;&#xC2A4;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xB294; &#xAD6C;&#xD68D;&#xC758; 3 &#xCC28;&#xC6D0; &#xB124;&#xD2B8;&#xC6CC;&#xD06C; &#xB0B4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBD84;&#xB9AC; &#xB41C; virions. &#xC218;&#xC9C0;&#xC0C1; &#xC138;&#xD3EC;&#xC640; T &#xC138;&#xD3EC; &#xB9C9; &#xD45C;&#xBA74;&#xC5D0; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4;&#xB97C; &#xAC10;&#xC9C0; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; virions &#xB0C5;;&#xC5D0; &#xC218; &#xB3D9;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xD574;&#xC81C; &#xB418;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC740; &#xB300;&#xC2E0;, &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; &#xC804;&#xC1A1; CD4 T &#xC138;&#xD3EC; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4;&#xC758; &#xCC38;&#xC5EC;&#xAC00; &#xD544;&#xC694;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. T&#xC758; &#xC138;&#xD3EC; &#xC138;&#xD3EC; &#xC678; &#xD658;&#xACBD;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC0C1;&#xB300; &#xC740;&#xB454; &#xC5D0;&#xC774;&#xC988; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8;&#xC758; &#xB9E4;&#xC7A5; &#xC62E;&#xAE30;&#xACE0; virion &#xC774;&#xC804; T &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4;&#xC5D0; &#xC885;&#xC18D;&#xC801;&#xC778; &#xAC1C;&#xC2DC; &#xC140; HIV&#xC5D0; &#xC804;&#xC1A1;&#xC758; &#xB3C5;&#xD2B9;&#xD55C; &#xCE21;&#xBA74;&#xC744; &#xAC15;&#xC870;.

&#xC218;&#xC9C0;&#xC0C1; &#xC138;&#xD3EC;&#xC640; T &#xC138;&#xD3EC; &#xC0AC;&#xC774;&#xC758; virological &#xB0C5;&#xC5D0;&#xC11C; HIV &#xC804;&#xC1A1;&#xC758; 3D &#xC2DC;&#xAC01;&#xD654;.

La eficiencia de la infecci&#xF3;n por el VIH es mucho mayor cuando el virus se entrega en conjugados entre c&#xE9;lulas T CD4 + y el virus de rodamiento-c&#xE9;lulas presentadoras de ant&#xED;geno, como macr&#xF3;fagos o c&#xE9;lulas dendr&#xED;ticas a trav&#xE9;s de estructuras especializadas conocidas como sinapsis virol&#xF3;gicas. Uso de la abrasi&#xF3;n de iones de SEM, la tomograf&#xED;a de electrones, microscop&#xED;a de luz y de super-resoluci&#xF3;n, hemos analizado la estructura espacial de los contactos c&#xE9;lula-c&#xE9;lula y la distribuci&#xF3;n de viriones de VIH en las sinapsis virol&#xF3;gicas que se forman entre las c&#xE9;lulas dendr&#xED;ticas y las c&#xE9;lulas T maduras. Se demuestra la envolvente sorprendente de las c&#xE9;lulas T por hoja-como extensiones de membrana derivadas de c&#xE9;lulas dendr&#xED;ticas maduras, resultando en una regi&#xF3;n blindado para la formaci&#xF3;n de las sinapsis virol&#xF3;gicas. Dentro de la sinapsis, las extensiones de filopodial que emanan de c&#xE9;lulas T CD4 + en contacto con viriones de VIH secuestrados en lo profundo de una red en 3D de la superficie accesible, compartimientos de la c&#xE9;lula dendr&#xED;tica. Los virus se detecta en las superficies de las membranas de ambas c&#xE9;lulas dendr&#xED;ticas y las c&#xE9;lulas T, pero no se liberan viriones pasiva en la sinapsis, sino que la transmisi&#xF3;n del virus requiere la participaci&#xF3;n de los receptores de c&#xE9;lulas T CD4. El relativo aislamiento de las c&#xE9;lulas T del medio extracelular, el entierro de la sede de la transferencia del VIH, y el inicio dependiente del receptor de la transferencia de viriones por las c&#xE9;lulas T destacar los aspectos &#xFA;nicos de la transmisi&#xF3;n de c&#xE9;lula a c&#xE9;lula del VIH.

Visualizaci&#xF3;n 3D de la transferencia del VIH en la sinapsis virol&#xF3;gica entre las c&#xE9;lulas dendr&#xED;ticas y las c&#xE9;lulas T

&#xC120;&#xBB3C;&#xC774; &#xACF3;&#xC744; &#xC54C;&#xC544;&#xB0B4;&#xB294;-&#xC804;&#xC790; &#xB2E8;&#xCE35; &#xBD84;&#xC11D;&#xC740; &#xADF8;&#xB78C; &#xC74C;&#xC131;&#xC758; &#xBCC0;&#xD615;&#xC758; 3 &#xCC28;&#xC6D0; &#xAD6C;&#xC870;&#xC758; &#xBC15;&#xD14C;&#xB9AC;&#xC544; Bdellovibrio bacteriovorus &#xC0DD; MreB2 monomeric &#xCCAD;&#xB85D; &#xD615;&#xAD11; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; (mTFP)&#xB85C; &#xB300;&#xCCB4; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;-Mreb2&#xB97C; &#xD45C;&#xC2DC; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC8FC;&#xB85C; &#xC18C;&#xD615; &#xD575;&#xC591;&#xCCB4; &#xC601;&#xC5ED; &#xD45C;&#xC2DC;&#xB294; &#xC57C;&#xC0DD;-&#xD0C0;&#xC785; Bdellovibrio &#xC140; &#xB2EC;&#xB9AC; mTFP &#xD45C;&#xC2DC; &#xB41C; Mreb2&#xC744; &#xD45C;&#xD604; &#xD558;&#xB294; &#xC138;&#xD3EC;&#xB294; &#xD575;&#xC591;&#xCCB4;&#xC758; &#xAF2C;&#xC778;&#xB41C; &#xB098;&#xC120; &#xC870;&#xC9C1; &#xD45C;&#xC2DC;. MreB2-mTFP nucleoids &#xB354; &#xAC1C;&#xBC29; &#xAD6C;&#xC870;&#xB294; &#xD575;&#xC591;&#xCCB4; &#xC8FC;&#xBCC0;&#xC744; &#xC7A5;&#xC2DD; &#xD558;&#xB294; &#xB9AC;&#xBCF4;&#xC19C;&#xC758; &#xBA85;&#xD655;&#xD55C; &#xD604;&#xC7A5;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC2DC;&#xAC01;&#xD654;&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB9AC;&#xBCF4;&#xC19C;&#xC740; &#xB610;&#xD55C; &#xC57C;&#xC0DD;-&#xD0C0;&#xC785; &#xC140;&#xACFC; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0;&#xC11C; &#xB354; &#xB9CE;&#xC740; &#xC18C;&#xD615; nucleoids&#xC758; &#xAC00;&#xC7A5;&#xC790;&#xB9AC; &#xACBD;&#xACC4;. &#xB180;&#xB78D;&#xAC8C;&#xB3C4;, MreB2-mTFP &#xB098;&#xC120;&#xD615; &#xD575;&#xC591;&#xCCB4;&#xB294; &#xC138;&#xD3EC;&#xC9C8; &#xC0AC;&#xC774; &#xC778;&#xD130;&#xD398;&#xC774;&#xC2A4; &#xC9C0;&#xC5ED;&#xD654; &#xD575;&#xC591;&#xCCB4; &#xAC74;&#xCD95;&#xACFC; MreB &#xBC30;&#xC5F4; &#xC0AC;&#xC774;&#xC758; &#xCE5C;&#xBC00; &#xD55C; &#xC5F0;&#xACB0;&#xC744; &#xC81C;&#xC548; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB610;&#xD55C;, &#xC57C;&#xC0DD;-&#xD0C0;&#xC785; &#xC140;, &#xC5B4;&#xB514; &#xD558;&#xB098;&#xC758; &#xAF49; chemoreceptor &#xD074;&#xB7EC;&#xC2A4;&#xD130; &#xB2E8;&#xC77C; &#xD3F4;&#xB77C; &#xC2E0;&#xC124; &#xAC00;&#xAE4C;&#xC774; localizes, &#xB2EC;&#xB9AC; MreB2 mTFP &#xC140; &#xC885;&#xC885; &#xD45C;&#xC2DC; chemoreceptor &#xBC30;&#xC5F4;&#xC774; &#xD558;&#xB098; &#xB610;&#xB294; &#xB450; &#xAE30;&#xB465;&#xC5D0; &#xC874;&#xC7AC;&#xB97C; &#xD655;&#xC7A5; &#xD558; &#xACE0; &#xC5EC;&#xB7EC; &#xD45C;&#xC2DC; &#xB610;&#xB294; flagella&#xB97C; &#xC815;&#xD655; &#xD558; &#xAC8C; &#xC704;&#xCE58;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xC5F0;&#xAD6C; &#xACB0;&#xACFC; &#xC138;&#xADE0;&#xC131; &#xD575;&#xC591;&#xCCB4;&#xC758; &#xC2A4;&#xD30C;&#xC774;&#xB7F4; &#xC870;&#xC9C1;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC9C1;&#xC811;&#xC801;&#xC778; &#xAD6C;&#xC870; &#xC99D;&#xAC70; &#xBC0F; &#xD575;&#xC591;&#xCCB4; &#xC544;&#xD0A4;&#xD14D;&#xCC98;&#xC758; &#xADDC;&#xC815;&#xACFC; chemotaxis &#xAE30;&#xAD6C;&#xC758; &#xC9C0;&#xC5ED;&#xD654; &#xAC00;&#xB2A5;&#xD55C; &#xC5ED;&#xD560; Mreb&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC81C;&#xC548;.

Bdellovibrio bacteriovorus&#xC5D0;&#xC11C; &#xD575;&#xC591;&#xCCB4;&#xC758; &#xB098;&#xC120;&#xD615; &#xAD6C;&#xC870;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#x6211;&#x4EEC;&#x76EE;&#x524D;&#x4F4E;&#x6E29;&#x7535;&#x5B50;&#x5C42;&#x6790;&#x6210;&#x50CF;&#x5206;&#x6790;&#x4E09;&#x7EF4;&#x7ED3;&#x6784;&#x7684;&#x4E00;&#x682A;&#x9769;&#x5170;&#x9634;&#x6027;&#x83CC;&#x86ED;&#x7684;&#x5185;&#x6E90;&#x6027; MreB2 &#x88AB;&#x66FF;&#x6362;&#x4E3A;&#x5355;&#x4F53;&#x84DD;&#x7EFF;&#x8272;&#x8367;&#x5149;&#x86CB;&#x767D; &#xFF08;&#x591A;&#x5E74;&#x7B79;&#x8D44;&#x8BA1;&#x5212;&#x8BA1;&#x7B97;)-&#x6807;&#x8BB0;&#x4E3A; MreB2&#x3002;&#x4E3B;&#x8981;&#x88AB;&#x663E;&#x793A;&#x4E00;&#x4E2A;&#x7D27;&#x51D1;&#x7684; nucleoid &#x5730;&#x533A;&#x7684;&#x91CE;&#x751F;&#x578B;&#x86ED;&#x7EC6;&#x80DE;&#xFF0C;&#x4E0E;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8868;&#x8FBE;&#x591A;&#x5E74;&#x7B79;&#x8D44;&#x8BA1;&#x5212;&#x8BA1;&#x7B97;&#x6807;&#x8BB0; MreB2 &#x663E;&#x793A; nucleoid &#x626D;&#x7684;&#x87BA;&#x65CB;&#x7EC4;&#x7EC7;&#x3002;MreB2-&#x591A;&#x5E74;&#x7B79;&#x8D44;&#x8BA1;&#x5212;&#x8BA1;&#x7B97; nucleoids &#x7684;&#x66F4;&#x5F00;&#x653E;&#x7ED3;&#x6784;&#x542F;&#x7528;&#x88C5;&#x9970;&#x7684; nucleoid &#x5916;&#x56F4;&#x7684;&#x6838;&#x7CD6;&#x4F53;&#x7684;&#x660E;&#x786E;&#x539F;&#x4F4D;&#x53EF;&#x89C6;&#x5316;&#x3002;&#x6838;&#x7CD6;&#x4F53;&#x8FD8;&#x4E0E;&#x63A5;&#x58E4;&#x4ECE;&#x91CE;&#x751F;&#x578B;&#x7EC6;&#x80DE;&#x548C;&#x764C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7A81;&#x53D8;&#x66F4;&#x7D27;&#x51D1; nucleoids &#x7684;&#x8FB9;&#x7F18;&#x3002;&#x591A;&#x5E74;&#x7B79;&#x8D44;&#x8BA1;&#x5212;&#x4EE4;&#x4EBA;&#x60CA;&#x8BB6;&#x7684;&#x662F;&#xFF0C;MreB2-&#x8BA1;&#x7B97;&#x5230;&#x87BA;&#x65CB; nucleoid &#x4E0E;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8D28;&#x4E4B;&#x95F4;&#x7684;&#x63A5;&#x53E3;&#x8FDB;&#x884C;&#x672C;&#x5730;&#x5316;&#x6697;&#x793A; nucleoid &#x4F53;&#x7CFB;&#x7ED3;&#x6784;&#x4E0E; MreB &#x5B89;&#x6392;&#x4E4B;&#x95F4;&#x7684;&#x4EB2;&#x5BC6;&#x8054;&#x7CFB;&#x3002;&#x8FDB;&#x4E00;&#x6B65;&#xFF0C;&#x4E0E;&#x91CE;&#x751F;&#x578B;&#x7EC6;&#x80DE;&#xFF0C;&#x5176;&#x4E2D;&#x5355;&#x4E2A;&#x7D27;&#x5316;&#x5B66;&#x611F;&#x53D7;&#x5668;&#x7FA4;&#x96C6;&#x672C;&#x5730;&#x5316;&#x63A5;&#x8FD1;&#x5355;&#x6781;&#x6027;&#x97AD;&#x6BDB;&#xFF0C;MreB2-&#x591A;&#x5E74;&#x7B79;&#x8D44;&#x8BA1;&#x5212;&#x8BA1;&#x7B97;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x663E;&#x793A;&#x7684;&#x9891;&#x7387;&#x6269;&#x5C55;&#x5316;&#x5B66;&#x611F;&#x53D7;&#x5668;&#x9635;&#x5217;&#x51FA;&#x5E2D;&#x4E00;&#x4E2A;&#x6216;&#x4E24;&#x4E2A;&#x6781;&#x70B9;&#x548C;&#x663E;&#x793A;&#x591A;&#x4E2A;&#x6216;&#x4E0D;&#x51C6;&#x786E;&#x5730;&#x5B9A;&#x4F4D;&#x97AD;&#x6BDB;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x7ED3;&#x679C;&#x63D0;&#x4F9B;&#x7684;&#x7EC6;&#x83CC; nucleoid &#x87BA;&#x65CB;&#x7EC4;&#x7EC7;&#x7ED3;&#x6784;&#x76F4;&#x63A5;&#x8BC1;&#x636E;&#x548C;&#x5EFA;&#x8BAE; MreB nucleoid &#x4F53;&#x7CFB;&#x7ED3;&#x6784;&#x7684;&#x8C03;&#x8282;&#x548C;&#x5B9A;&#x4F4D;&#x7684;&#x8D8B;&#x5316;&#x6027;&#x5668;&#x5177;&#x4E2D;&#x53EF;&#x80FD;&#x53D1;&#x6325;&#x7684;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;

&#x5728;&#x86ED; nucleoid &#x7684;&#x87BA;&#x65CB;&#x7ED3;&#x6784;&#x3002;

We present a cryo-electron tomographic analysis of the three-dimensional architecture of a strain of the Gram-negative bacterium Bdellovibrio bacteriovorus in which endogenous MreB2 was replaced with monomeric teal fluorescent protein (mTFP)-labeled MreB2. In contrast to wild-type Bdellovibrio cells that predominantly displayed a compact nucleoid region, cells expressing mTFP-labeled MreB2 displayed a twisted spiral organization of the nucleoid. The more open structure of the MreB2-mTFP nucleoids enabled clear in situ visualization of ribosomes decorating the periphery of the nucleoid. Ribosomes also bordered the edges of more compact nucleoids from both wild-type cells and mutant cells. Surprisingly, MreB2-mTFP localized to the interface between the spiral nucleoid and the cytoplasm, suggesting an intimate connection between nucleoid architecture and MreB arrangement. Further, in contrast to wild-type cells, where a single tight chemoreceptor cluster localizes close to the single polar flagellum, MreB2-mTFP cells often displayed extended chemoreceptor arrays present at one or both poles and displayed multiple or inaccurately positioned flagella. Our findings provide direct structural evidence for spiral organization of the bacterial nucleoid and suggest a possible role for MreB in regulation of nucleoid architecture and localization of the chemotaxis apparatus.

Spiral architecture of the nucleoid in Bdellovibrio bacteriovorus.

On pr&#xE9;sente une analyse cryo-&#xE9;lectrons tomographique de l&#x26;#39;architecture tridimensionnelle d&#x26;#39;une souche des bacteriovorus Gram-n&#xE9;gatives Bdellovibrio bact&#xE9;rie dans lequel MreB2 endog&#xE8;ne a &#xE9;t&#xE9; remplac&#xE9; par une prot&#xE9;ine fluorescente monom&#xE8;re sarcelle (mTFP)-marqu&#xE9; MreB2. Contrairement aux cellules de type sauvage Bdellovibrio que majoritairement affich&#xE9;es une r&#xE9;gion compacte nucl&#xE9;o&#xEF;de, des cellules exprimant mTFP marqu&#xE9; MreB2 fait preuve d&#x26;#39;une organisation en spirale tordue du nucl&#xE9;o&#xEF;de. La structure plus ouverte des nucl&#xE9;o&#xEF;des MreB2-mTFP permis clair la visualisation in situ des ribosomes d&#xE9;coration de la p&#xE9;riph&#xE9;rie du nucl&#xE9;o&#xEF;de. Les ribosomes &#xE9;galement bord&#xE9; les bords de nucl&#xE9;o&#xEF;des plus compacts &#xE0; partir de deux cellules de type sauvage et les cellules mutantes. &#xC9;tonnamment, MreB2-mTFP localis&#xE9;e &#xE0; l&#x26;#39;interface entre le nucl&#xE9;o&#xEF;de spirale et le cytoplasme, ce qui sugg&#xE8;re une connexion intime entre une architecture et l&#x26;#39;agencement nucl&#xE9;o&#xEF;de MreB. En outre, contrairement &#xE0; cellules de type sauvage, o&#xF9; une grappe serr&#xE9;e chimior&#xE9;cepteurs unique localise &#xE0; proximit&#xE9; de la flagelle polaire unique, MreB2-mTFP cellules souvent affich&#xE9; des tableaux &#xE9;tendus ch&#xE9;mor&#xE9;cepteurs pr&#xE9;sents &#xE0; un ou deux poteaux et affich&#xE9; flagelles multiples ou mal positionn&#xE9;. Nos r&#xE9;sultats fournissent une preuve directe de structure pour l&#x26;#39;organisation en spirale du nucl&#xE9;o&#xEF;de bact&#xE9;rien et sugg&#xE8;rent un r&#xF4;le possible pour MreB dans la r&#xE9;gulation de l&#x26;#39;architecture nucl&#xE9;o&#xEF;de et la localisation de l&#x26;#39;appareil chimiotactisme.

L&#x26;#39;architecture en spirale du nucl&#xE9;o&#xEF;de dans Bdellovibrio bacteriovorus

Wir pr&auml;sentieren eine computertomographische Cryo-Elektron-Analyse der dreidimensionalen Architektur von einem Stamm von der gramnegativen Bakterium Bdellovibrio Bacteriovorus in der endogenen MreB2 mit Monomer blaugr&uuml;n fluoreszierende Protein (mTFP) ersetzt wurde-mit der Bezeichnung MreB2. Im Gegensatz zum Wildtyp Bdellovibrio Zellen, die &uuml;berwiegend eine kompakte Kern&auml;quivalent-Region angezeigt, angezeigt Zellen auszudr&uuml;cken mTFP-markierten MreB2 eine verdrehte Spiral-Organisation von der Kern&auml;quivalent. Die offenere Struktur der MreB2-mTFP Nucleoids aktiviert klar in-situ Visualisierung der Ribosomen Ortsrand der Kern&auml;quivalent dekorieren. Ribosomen grenzte auch die R&auml;nder der kompaktere Nucleoids aus Wildtyp Zellen und mutierten Zellen. &Uuml;berraschend, MreB2-mTFP lokalisiert an der Schnittstelle zwischen der Spirale Kern&auml;quivalent und Zytoplasma, was auf eine intime Verbindung zwischen Kern&auml;quivalent Architektur und MreB Anordnung. Weiter, im Gegensatz zu Wild-Typ-Zellen, wo ein einzigen engen Chemorezeptor-Cluster in der N&auml;he der einzigen polar Kutscherpeitschennatter lokalisiert, MreB2-mTFP Zellen h&auml;ufig angezeigt erweitert Chemorezeptor-Arrays anwesend an einem oder beiden Polen und mehrere angezeigt oder ungenau positioniert Flagellen. Unsere Ergebnisse bieten direkte strukturelle Beweise f&uuml;r Spiral-Organisation von der bakteriellen Kern&auml;quivalent und weisen eine m&ouml;gliche Rolle f&uuml;r MreB Verordnung Kern&auml;quivalent Architektur und Lokalisierung der Chemotaxis-Apparatur.

Spiral-Architektur von der Kern&auml;quivalent in Bdellovibrio Bacteriovorus.

Vi presentiamo un&#39;analisi tomografica cryo-elettrone dell&#39;architettura tridimensionale di un ceppo della gram-negativo batterio Bdellovibrio bacteriovorus in cui MreB2 endogeno &egrave; stato sostituito con proteina fluorescente monomerico teal (mTFP)-con l&#39;etichetta MreB2. In contrasto con il selvaggio-tipo celle Bdellovibrio visualizzati prevalentemente una regione compatta nucleoide, le cellule che esprimono MreB2 mTFP-etichetta visualizzata un&#39;organizzazione a spirale elicoidale del nucleoide. La struttura pi&ugrave; aperta della nucleoids MreB2-mTFP abilitato visualizzazione chiara in situ dei ribosomi decorando la periferia del nucleoide. I ribosomi delimitata anche i bordi del nucleoids pi&ugrave; compatto da cellule wild-type sia cellule mutanti. Sorprendentemente, MreB2-mTFP localizzate all&#39;interfaccia tra il nucleoide a spirale e il citoplasma, suggerendo un&#39;intima connessione tra architettura nucleoide e MreB disposizione. Ulteriormente, in contrasto con il selvaggio-tipo celle, dove un cluster singolo chemoreceptor stretto si localizza vicino il singolo flagello polare, MreB2-mTFP cellule appaiono spesso esteso matrici chemoreceptor presenti in uno o due poli e visualizzato multiple o inesatto posizionamento flagelli. I nostri risultati forniscono prove strutturali dirette per organizzazione a spirale del nucleoide batterico e suggeriscono un possibile ruolo per MreB nel regolamento dell&#39;architettura nucleoide e localizzazione dell&#39;apparato di chemiotassi.

Architettura a spirale del nucleoide in Bdellovibrio bacteriovorus.

&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;&#x5185;&#x56E0;&#x6027;&#x306E;MreB2&#x304C;&#x5358;&#x91CF;&#x4F53;&#x306E;&#x30C6;&#x30A3;&#x30FC;&#x30EB;&#x86CD;&#x5149;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#xFF08;mTFP&#xFF09;&#x6A19;&#x8B58;MreB2&#x306B;&#x7F6E;&#x304D;&#x63DB;&#x3048;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x30B0;&#x30E9;&#x30E0;&#x9670;&#x6027;&#x7D30;&#x83CC;Bdellovibrio&#x306E;bacteriovorus&#x306E;&#x6B6A;&#x307F;&#x306E;&#x4E09;&#x6B21;&#x5143;&#x69CB;&#x9020;&#x306E;&#x4F4E;&#x6E29;&#x96FB;&#x5B50;&#x30C8;&#x30E2;&#x30B0;&#x30E9;&#x30D5;&#x30A3;&#x30FC;&#x89E3;&#x6790;&#x3092;&#x63D0;&#x793A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x4E3B;&#x306B;&#x5C0F;&#x578B;&#x306E;&#x6838;&#x69D8;&#x4F53;&#x9818;&#x57DF;&#x3092;&#x8868;&#x793A;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x91CE;&#x751F;&#x578B;Bdellovibrio&#x7D30;&#x80DE;&#x3068;&#x306F;&#x5BFE;&#x7167;&#x7684;&#x306B;&#x3001;mTFP&#x6A19;&#x8B58;MreB2&#x3092;&#x767A;&#x73FE;&#x3059;&#x308B;&#x7D30;&#x80DE;&#x306F;&#x3001;&#x6838;&#x69D8;&#x4F53;&#x306E;&#x306D;&#x3058;&#x308C;&#x305F;&#x3089;&#x305B;&#x3093;&#x72B6;&#x306E;&#x7D44;&#x7E54;&#x304C;&#x8868;&#x793A;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002; MreB2-mTFP&#x6838;&#x69D8;&#x4F53;&#x306E;&#x3088;&#x308A;&#x30AA;&#x30FC;&#x30D7;&#x30F3;&#x306A;&#x69CB;&#x9020;&#x306F;&#x3001;&#x6838;&#x69D8;&#x4F53;&#x306E;&#x88C5;&#x98FE;&#x5468;&#x56F2;&#x30EA;&#x30DC;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x306E;in situ&#x53EF;&#x8996;&#x5316;&#x3067;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x6709;&#x52B9;&#x306B;&#x306A;&#x3063;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30EA;&#x30DC;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x306F;&#x307E;&#x305F;&#x3001;&#x91CE;&#x751F;&#x578B;&#x7D30;&#x80DE;&#x3068;&#x5909;&#x7570;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x4E21;&#x65B9;&#x304B;&#x3089;&#x3001;&#x3088;&#x308A;&#x30B3;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x30C8;&#x306A;&#x6838;&#x69D8;&#x4F53;&#x306E;&#x7AEF;&#x3092;&#x63A5;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x9A5A;&#x304F;&#x3079;&#x304D;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3001;MreB2-mTFP&#x306F;&#x3001;&#x6838;&#x69D8;&#x4F53;&#x306E;&#x30A2;&#x30FC;&#x30AD;&#x30C6;&#x30AF;&#x30C1;&#x30E3;&#x3068;MreB&#x306E;&#x914D;&#x7F6E;&#x306E;&#x9593;&#x306B;&#x89AA;&#x5BC6;&#x306A;&#x95A2;&#x4FC2;&#x3092;&#x793A;&#x5506;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x30B9;&#x30D1;&#x30A4;&#x30E9;&#x30EB;&#x6838;&#x69D8;&#x4F53;&#x3068;&#x7D30;&#x80DE;&#x8CEA;&#x9593;&#x306E;&#x754C;&#x9762;&#x306B;&#x5C40;&#x5728;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x305F;&#x3002;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x3001;&#x5358;&#x4E00;&#x306E;&#x30BF;&#x30A4;&#x30C8;&#x306A;&#x5316;&#x5B66;&#x53D7;&#x5BB9;&#x30AF;&#x30E9;&#x30B9;&#x30BF;&#x304C;&#x5358;&#x4E00;&#x306E;&#x6975;&#x97AD;&#x6BDB;&#x306E;&#x8FD1;&#x304F;&#x306B;&#x5C40;&#x5728;&#x3059;&#x308B;&#x91CE;&#x751F;&#x578B;&#x7D30;&#x80DE;&#x3068;&#x306F;&#x5BFE;&#x7167;&#x7684;&#x306B;&#x3001;MreB2-mTFP&#x7D30;&#x80DE;&#x306F;&#x3001;&#x3057;&#x3070;&#x3057;&#x3070;&#x3064;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x6975;&#x3068;&#x8868;&#x793A;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x8907;&#x6570;&#x306E;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x4E0D;&#x6B63;&#x78BA;&#x306B;&#x914D;&#x7F6E;&#x3055;&#x97AD;&#x306E;&#x4E21;&#x65B9;&#x306B;&#x5B58;&#x5728;&#x3059;&#x308B;&#x62E1;&#x5F35;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x5316;&#x5B66;&#x53D7;&#x5BB9;&#x5668;&#x30A2;&#x30EC;&#x30A4;&#x3092;&#x8868;&#x793A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x4ECA;&#x56DE;&#x306E;&#x77E5;&#x898B;&#x306F;&#x3001;&#x7D30;&#x83CC;&#x306E;&#x6838;&#x69D8;&#x4F53;&#x306E;&#x3089;&#x305B;&#x3093;&#x72B6;&#x306E;&#x7D44;&#x7E54;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x76F4;&#x63A5;&#x306E;&#x69CB;&#x9020;&#x7684;&#x8A3C;&#x62E0;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3057;&#x3001;&#x6838;&#x69D8;&#x4F53;&#x306E;&#x30A2;&#x30FC;&#x30AD;&#x30C6;&#x30AF;&#x30C1;&#x30E3;&#x3068;&#x8D70;&#x88C5;&#x7F6E;&#x306E;&#x5C40;&#x5728;&#x306E;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x306B;MreB&#x306E;&#x53EF;&#x80FD;&#x306A;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x793A;&#x5506;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;

Bdellovibrio Bacteriovorus&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x6838;&#x69D8;&#x4F53;&#x306E;&#x30B9;&#x30D1;&#x30A4;&#x30E9;&#x30EB;&#xB7;&#x30A2;&#x30FC;&#x30AD;&#x30C6;&#x30AF;&#x30C1;&#x30E3;

Se presenta un an&#xE1;lisis de la crio-electr&#xF3;n tomogr&#xE1;fico de la arquitectura tridimensional de una cepa de los bacteriovorus Bdellovibrio bacteria Gram-negativas en que se reemplaz&#xF3; MreB2 end&#xF3;geno con monom&#xE9;rico prote&#xED;na verde azulado fluorescente (mTFP)-etiquetados MreB2. En contraste con las c&#xE9;lulas Bdellovibrio de tipo salvaje que aparecen predominantemente en una regi&#xF3;n nucleoide compacto, las c&#xE9;lulas que expresan mTFP marcado MreB2 muestra una organizaci&#xF3;n en espiral retorcida del nucleoide. La estructura m&#xE1;s abierta de los nucleoides MreB2-mTFP habilitado clara en la visualizaci&#xF3;n in situ de los ribosomas decoraci&#xF3;n de la periferia del nucleoide. Los ribosomas tambi&#xE9;n limita los bordes de nucleoides m&#xE1;s compactos de ambas c&#xE9;lulas de tipo salvaje y las c&#xE9;lulas mutantes. Sorprendentemente, MreB2-mTFP localizado en la interfaz entre el nucleoide de caracol y el citoplasma, lo que sugiere una conexi&#xF3;n &#xED;ntima entre la arquitectura y la disposici&#xF3;n MreB nucleoide. Adem&#xE1;s, en contraste con c&#xE9;lulas de tipo salvaje, donde un solo grupo quimiorreceptores fuerte se localiza cerca del flagelo polar &#xFA;nico, MreB2-mTFP c&#xE9;lulas a menudo muestran las matrices ampliadas quimiorreceptoras presentes en uno o ambos postes y se muestran m&#xFA;ltiples flagelos o ubicados incorrectamente. Nuestros resultados proporcionan evidencia directa estructural para la organizaci&#xF3;n en espiral del nucleoide bacteriano y sugieren un posible papel de MreB en la regulaci&#xF3;n de la arquitectura nucleoide y la localizaci&#xF3;n del aparato de la quimiotaxis.

Espiral de Arquitectura de la nucleoid en Bdellovibrio bacteriovorus

&#x6211;&#x4EEC;&#x62A5;&#x544A;&#x6269;&#x5C55;&#x5F53;&#x524D;&#x7684;&#x79BB;&#x5B50;&#x78E8;&#x635F;&#x626B;&#x63CF;&#x7535;&#x5B50;&#x663E;&#x5FAE;&#x955C; (IA-SEM)&#xFF0C;&#x4E5F;&#x79F0;&#x4E3A;&#x805A;&#x7126;&#x79BB;&#x5B50;&#x675F;&#x626B;&#x63CF;&#x7535;&#x955C;&#x3001; &#x65B0;&#x5174;&#x6280;&#x672F;&#x7684;&#x5927;&#x578B;&#x751F;&#x7269;&#x6807;&#x672C;&#x4E2D; 3D &#x9AD8;&#x5206;&#x8FA8;&#x7387;&#x6210;&#x50CF;&#x529F;&#x80FD;&#x7684;&#x65B9;&#x6CD5;&#x5B66;&#x7814;&#x7A76;&#x8FDB;&#x5C55;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x5EFA;&#x7ACB;&#x534F;&#x8BAE;&#xFF0C;&#x5B83;&#x4F7F;&#x6574;&#x4E2A;&#x5851;&#x6599;&#x5D4C;&#x5165;&#x54FA;&#x4E73;&#x52A8;&#x7269;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684; IA &#x955C; &sim;10 20nm &#x5728;&#x9AD8;&#x5BF9;&#x6BD4;&#x5EA6;&#x548C;&#x805A;&#x7126;&#x7684;&#x79BB;&#x5B50;&#x675F;&#x6700;&#x5C0F;&#x5668;&#x7269;&#x4E0E;&#x5206;&#x8FA8;&#x7387;&#x7684; 3D &#x56FE;&#x50CF;&#x5806;&#x6808;&#x7684;&#x4F8B;&#x884C;&#x4EE3;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x901A;&#x8FC7;&#x63CF;&#x8FF0;&#x8FDB;&#x884C;&#x76F8;&#x5173;&#x6D3B;&#x5171;&#x805A;&#x7126;&#x663E;&#x5FAE;&#x955C;&#x548C; IA-&#x626B;&#x63CF;&#x7535;&#x955C;&#x4E0A;&#x7684;&#x540C;&#x4E00;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x7684;&#x8BE6;&#x7EC6;&#x7684;&#x529E;&#x6CD5;&#x57FA;&#x7840;&#x4E0A;&#x53D6;&#x5F97;&#x4E86;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x8FDB;&#x5C55;&#x3002;&#x6700;&#x540E;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x8BC1;&#x660E;&#x901A;&#x8FC7;&#x7ED3;&#x5408;&#x76F8;&#x5173;&#x6210;&#x50CF;&#x4E0E;&#x65B0;&#x5F00;&#x53D1;&#x7684;&#x5DE5;&#x5177;&#xFF0C;&#x7528;&#x4E8E;&#x81EA;&#x52A8;&#x5316;&#x7684;&#x56FE;&#x50CF;&#x5904;&#x7406;&#xFF0C;&#x53EF;&#x4EE5;&#x5728;&#x6574;&#x4E2A;&#x54FA;&#x4E73;&#x52A8;&#x7269;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x626B;&#x63CF;&#x7535;&#x955C;&#x56FE;&#x50CF;&#x5806;&#x6808;&#x4E2D;&#x672C;&#x5730;&#x5316;&#x5C0F; 100nm &#x5927;&#x5C0F;&#x7684;&#x5B9E;&#x4F53;&#xFF0C;&#x4F8B;&#x5982;&#x827E;&#x6ECB;&#x75C5;&#x6BD2; 1 &#x6216;&#x9EC4;&#x91D1;&#x73E0;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x9884;&#x671F;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x65B9;&#x6CD5;&#x5C06;&#x6DFB;&#x52A0;&#x5230;&#x963F;&#x68EE;&#x7EB3;&#x7684;&#x5DE5;&#x5177;&#x53EF;&#x7528;&#x4E8E;&#x8C03;&#x67E5;&#x5BC4;&#x4E3B;--&#x75C5;&#x539F;&#x4F53;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x548C;&#x66F4;&#x4E00;&#x822C;&#x5730;&#x8BF4;&#xFF0C;&#x54FA;&#x4E73;&#x52A8;&#x7269;&#x7EC6;&#x80DE;&#x548C;&#x7EC4;&#x7EC7;&#x7684; 3D &#x4E9A;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7ED3;&#x6784;&#x7684;&#x57FA;&#x672C;&#x673A;&#x5236;&#x3002;

&#x6574;&#x4E2A;&#x54FA;&#x4E73;&#x52A8;&#x7269;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x5149;&#x955C;&#x548C;&#x7535;&#x955C;&#x7684;&#x76F8;&#x5173; 3D &#x6210;&#x50CF;&#x3002;

We report methodological advances that extend the current capabilities of ion-abrasion scanning electron microscopy (IA-SEM), also known as focused ion beam scanning electron microscopy, a newly emerging technology for high resolution imaging of large biological specimens in 3D. We establish protocols that enable the routine generation of 3D image stacks of entire plastic-embedded mammalian cells by IA-SEM at resolutions of âˆ¼10-20nm at high contrast and with minimal artifacts from the focused ion beam. We build on these advances by describing a detailed approach for carrying out correlative live confocal microscopy and IA-SEM on the same cells. Finally, we demonstrate that by combining correlative imaging with newly developed tools for automated image processing, small 100nm-sized entities such as HIV-1 or gold beads can be localized in SEM image stacks of whole mammalian cells. We anticipate that these methods will add to the arsenal of tools available for investigating mechanisms underlying host-pathogen interactions, and more generally, the 3D subcellular architecture of mammalian cells and tissues.

Correlative 3D imaging of whole mammalian cells with light and electron microscopy.

Nous rapportons les avanc&#xE9;es m&#xE9;thodologiques qui &#xE9;tendent les capacit&#xE9;s actuelles de l&#x26;#39;ion-abrasion microscopie &#xE9;lectronique &#xE0; balayage (MEB-IA), &#xE9;galement connu sous le nom de faisceau d&#x26;#39;ions focalis&#xE9; microscopie &#xE9;lectronique &#xE0; balayage, une technologie &#xE9;mergente pour l&#x26;#39;imagerie haute r&#xE9;solution de grands sp&#xE9;cimens biologiques en 3D. Nous &#xE9;tablissons des protocoles qui permettent la g&#xE9;n&#xE9;ration de routine des piles d&#x26;#39;images 3D de l&#x26;#39;ensemble de plastique int&#xE9;gr&#xE9;s cellules de mammif&#xE8;res par IA-SEM &#xE0; des r&#xE9;solutions de ~ 10-20nm &#xE0; contraste &#xE9;lev&#xE9; et avec des artefacts minimaux &#xE0; partir du faisceau d&#x26;#39;ions focalis&#xE9;. Nous nous appuyons sur ces progr&#xE8;s en d&#xE9;crivant une approche d&#xE9;taill&#xE9;e pour la r&#xE9;alisation corr&#xE9;lative microscopie confocale en direct et IA-SEM sur les m&#xEA;mes cellules. Enfin, nous d&#xE9;montrons que, en combinant l&#x26;#39;imagerie en corr&#xE9;lation avec les nouveaux outils d&#xE9;velopp&#xE9;s pour le traitement automatique des images, des petites et moyennes entit&#xE9;s 100nm telles que le VIH-1 ou des billes d&#x26;#39;or peuvent &#xEA;tre localis&#xE9;s dans des piles d&#x26;#39;images au MEB de l&#x26;#39;ensemble des cellules de mammif&#xE8;res. Nous pr&#xE9;voyons que ces m&#xE9;thodes va ajouter &#xE0; l&#x26;#39;arsenal des outils disponibles pour l&#x26;#39;&#xE9;tude des m&#xE9;canismes sous-jacents interactions h&#xF4;te-pathog&#xE8;ne, et plus g&#xE9;n&#xE9;ralement, l&#x26;#39;architecture 3D subcellulaire des cellules de mammif&#xE8;res et de tissus.

Corr&#xE9;lative d&#x26;#39;imagerie 3D du enti&#xE8;res des cellules de mammif&#xE8;res en microscopie optique et &#xE9;lectronique

Wir berichten methodischen Fortschritte, die die aktuellen Funktionen von Ion-Abrieb Scan Elektronenmikroskopie (IA-SEM), auch bekannt als konzentriert-Ionenstrahl Rasterelektronenmikroskopie, eine neu entstehende Technologie f&uuml;r hochaufl&ouml;sende Bildgebung von gro&szlig;en biologischen Proben in 3D erweitern. Wir schaffen die Protokolle, die die Routine Generation von 3D Bildstapeln der gesamten Kunststoff eingebettete S&auml;ugetier-Zellen von IA-SEM bei Aufl&ouml;sungen von &sim;10-20nm mit hohem Kontrast und minimale Artefakte aus der focused Ion Beam zu erm&ouml;glichen. Wir bauen auf diese Fortschritte mit der Beschreibung eines detaillierten Ansatzes f&uuml;r die Durchf&uuml;hrung der Korrelative Leben confocal Mikroskopie und IA-SEM auf denselben Zellen. Schlie&szlig;lich zeigen wir, dass durch die Kombination Korrelative Bildgebung mit neu entwickelten Tools f&uuml;r automatisierte Bildverarbeitung, kleine 100nm gro&szlig;en Einheiten wie HIV-1 oder gold Perlen in SEM-Bildstapel der ganzen S&auml;ugetier-Zellen lokalisiert werden k&ouml;nnen. Wir erwarten, dass diese Methoden das Arsenal von Werkzeugen zur Verf&uuml;gung hinzuf&uuml;gen werden, f&uuml;r die Untersuchung von Mechanismen Host-Pathogen Interaktionen und ganz allgemein die 3D subzellulare Architektur der S&auml;ugetier-Zellen und Geweben.

Korrelative 3D-Bildgebung der ganzen S&auml;ugetier-Zellen mit Licht und Elektronenmikroskopie.

Registriamo progressi metodologici che estendono le funzionalit&agrave; corrente di ioni-abrasione scansione microscopia elettronica (IA-SEM), conosciuto anche come concentrato fascio ionico scanning electron microscopy, una nuova emergente tecnologia per l&#39;imaging ad alta risoluzione di grandi campioni biologici in 3D. Stabiliamo protocolli che consentono la generazione di routine di pile di immagini 3D di tutta plastica incorporato cellule di mammiferi da IA-SEM a risoluzioni di &sim;10-20nm a contrasto elevato e con minimi artefatti dal fascio ionico focalizzato. Costruiamo su questi progressi descrivendo un approccio dettagliato per lo svolgimento di correlativa vivo microscopia confocale e IA-SEM sulle cellule stesse. Infine, dimostreremo che combinando imaging correlativo con strumenti di nuova concezione per elaborazione automatizzata, piccole dimensioni 100nm entit&agrave; come l&#39;HIV-1 o perline oro pu&ograve; essere localizzato in pile immagine SEM di cellule di mammifero in tutto. Anticipiamo che questi metodi aggiunger&agrave; all&#39;arsenale di strumenti disponibili per indagare i meccanismi sottostanti le interazioni ospite-patogeno e pi&ugrave; in generale, il 3D architettura sottocellulare di cellule di mammifero e tessuti.

Correlativo imaging 3D delle intere cellule di mammiferi con luce e microscopia elettronica.

&#x307E;&#x305F;&#x3001;&#x96FB;&#x5B50;&#x9855;&#x5FAE;&#x93E1;&#x3001;3D&#x306E;&#x5927;&#x304D;&#x306A;&#x751F;&#x7269;&#x8A66;&#x6599;&#x306E;&#x9AD8;&#x5206;&#x89E3;&#x80FD;&#x30A4;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B8;&#x30F3;&#x30B0;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x65B0;&#x8208;&#x6280;&#x8853;&#x3092;&#x30B9;&#x30AD;&#x30E3;&#x30F3;&#x3057;&#x3066;&#x96C6;&#x675F;&#x30A4;&#x30AA;&#x30F3;&#x30D3;&#x30FC;&#x30E0;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x77E5;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x30A4;&#x30AA;&#x30F3;&#x6469;&#x8017;&#x8D70;&#x67FB;&#x578B;&#x96FB;&#x5B50;&#x9855;&#x5FAE;&#x93E1;&#xFF08;IA-SEM&#xFF09;&#x3001;&#x73FE;&#x5728;&#x306E;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3092;&#x62E1;&#x5F35;&#x3059;&#x308B;&#x65B9;&#x6CD5;&#x8AD6;&#x306E;&#x9032;&#x6B69;&#x3092;&#x5831;&#x544A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;&#x9AD8;&#x30B3;&#x30F3;&#x30C8;&#x30E9;&#x30B9;&#x30C8;&#x3067;&#x7D04;10-20nm&#x306E;&#x89E3;&#x50CF;&#x5EA6;&#x3067;&#x3068;&#x96C6;&#x675F;&#x30A4;&#x30AA;&#x30F3;&#x30D3;&#x30FC;&#x30E0;&#x304B;&#x3089;&#x6700;&#x5C0F;&#x9650;&#x306E;&#x30A2;&#x30FC;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D5;&#x30A1;&#x30AF;&#x30C8;&#x3068;IA-SEM&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x5168;&#x4F53;&#x306E;&#x30D7;&#x30E9;&#x30B9;&#x30C1;&#x30C3;&#x30AF;&#x306B;&#x57CB;&#x3081;&#x8FBC;&#x307E;&#x308C;&#x305F;&#x54FA;&#x4E73;&#x52D5;&#x7269;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;3D&#x753B;&#x50CF;&#x30B9;&#x30BF;&#x30C3;&#x30AF;&#x306E;&#x30EB;&#x30FC;&#x30C1;&#x30F3;&#x751F;&#x6210;&#x3092;&#x6709;&#x52B9;&#x306B;&#x3059;&#x308B;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C8;&#x30B3;&#x30EB;&#x3092;&#x78BA;&#x7ACB;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x540C;&#x3058;&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x76F8;&#x95A2;&#x30E9;&#x30A4;&#x30D6;&#x5171;&#x7126;&#x70B9;&#x9855;&#x5FAE;&#x93E1;&#x304A;&#x3088;&#x3073;IA-SEM&#x3092;&#x5B9F;&#x65BD;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x8A73;&#x7D30;&#x306A;&#x30A2;&#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30C1;&#x3092;&#x8A18;&#x8FF0;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3088;&#x308A;&#x3001;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x9032;&#x6B69;&#x4E0A;&#x306B;&#x69CB;&#x7BC9;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6700;&#x5F8C;&#x306B;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x81EA;&#x52D5;&#x5316;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x753B;&#x50CF;&#x51E6;&#x7406;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x65B0;&#x305F;&#x306B;&#x958B;&#x767A;&#x3057;&#x305F;&#x30C4;&#x30FC;&#x30EB;&#x3092;&#x4F7F;&#x3063;&#x3066;&#x76F8;&#x95A2;&#x30A4;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B8;&#x30F3;&#x30B0;&#x3092;&#x7D44;&#x307F;&#x5408;&#x308F;&#x305B;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3088;&#x308A;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306A;HIV-1&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x30B4;&#x30FC;&#x30EB;&#x30C9;&#x30D3;&#x30FC;&#x30BA;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306A;&#x5C0F;&#x3055;&#x306A;100nm&#x306E;&#x30B5;&#x30A4;&#x30BA;&#x306E;&#x30A8;&#x30F3;&#x30C6;&#x30A3;&#x30C6;&#x30A3;&#x304C;&#x5168;&#x4F53;&#x306E;&#x54FA;&#x4E73;&#x52D5;&#x7269;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;SEM&#x753B;&#x50CF;&#x30B9;&#x30BF;&#x30C3;&#x30AF;&#x306B;&#x5C40;&#x5728;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x30E1;&#x30BD;&#x30C3;&#x30C9;&#x306F;&#x3001;&#x3088;&#x308A;&#x4E00;&#x822C;&#x7684;&#x306B;&#x306F;&#x54FA;&#x4E73;&#x985E;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x3084;&#x7D44;&#x7E54;&#x306E;3&#x6B21;&#x5143;&#x7D30;&#x80DE;&#x5185;&#x30A2;&#x30FC;&#x30AD;&#x30C6;&#x30AF;&#x30C1;&#x30E3;&#x3092;&#x5BBF;&#x4E3B; - &#x75C5;&#x539F;&#x4F53;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x306E;&#x30E1;&#x30AB;&#x30CB;&#x30BA;&#x30E0;&#x3092;&#x8ABF;&#x67FB;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x4F7F;&#x7528;&#x3067;&#x304D;&#x308B;&#x30C4;&#x30FC;&#x30EB;&#x306E;&#x5175;&#x5668;&#x5EAB;&#x306B;&#x8FFD;&#x52A0;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x3068;&#x671F;&#x5F85;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

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&#xBE5B;&#xACFC; &#xC804;&#xC790; &#xD604;&#xBBF8;&#xACBD; &#xC804;&#xCCB4; &#xD3EC;&#xC720;&#xB958; &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xC0C1;&#xD638; 3D &#xC601;&#xC0C1;.

Se presentan los avances metodol&#xF3;gicos que ampl&#xED;an las capacidades actuales de i&#xF3;n-abrasi&#xF3;n microscop&#xED;a electr&#xF3;nica de barrido (SEM-IA), tambi&#xE9;n conocida como haz de iones enfocado microscop&#xED;a electr&#xF3;nica de barrido, una nueva tecnolog&#xED;a emergente para obtener im&#xE1;genes de alta resoluci&#xF3;n de las grandes muestras biol&#xF3;gicas en 3D. Se establecen protocolos que permiten la generaci&#xF3;n de rutina de pilas de im&#xE1;genes en 3D de todo el pl&#xE1;stico incrustadas c&#xE9;lulas de mam&#xED;fero por IA-SEM a las resoluciones de ~ 10-20nm de alto contraste y con los artefactos m&#xED;nimos del haz de iones enfocado. Nos basamos en estos avances mediante la descripci&#xF3;n de un enfoque detallado para la realizaci&#xF3;n de microscop&#xED;a correlativa en vivo confocal y SEM-IA en las mismas celdas. Por &#xFA;ltimo, se demuestra que mediante la combinaci&#xF3;n de im&#xE1;genes correlativas con las herramientas recientemente desarrolladas para el procesamiento automatizado de im&#xE1;genes, los peque&#xF1;os de 100 nm de tama&#xF1;o entidades tales como el VIH-1 o cuentas de oro se puede localizar en pilas de im&#xE1;genes de SEM de c&#xE9;lulas de mam&#xED;feros enteros. Anticipamos que estos m&#xE9;todos se sumar&#xE1; al arsenal de herramientas disponibles para la investigaci&#xF3;n de los mecanismos que subyacen a las interacciones hu&#xE9;sped-pat&#xF3;geno y, en general, la arquitectura 3D subcelular de las c&#xE9;lulas y tejidos de mam&#xED;feros.

Article	Year
Nonsense mutations in ADTB3A cause complete deficiency of the beta3A subunit of adaptor complex-3 and severe Hermansky-Pudlak syndrome type 2. Pediatric research\| PubMed ID: 11809908	2002
The Hermansky-Pudlak syndrome 1 (HPS1) and HPS2 genes independently contribute to the production and function of platelet dense granules, melanosomes, and lysosomes. Blood\| PubMed ID: 11861280	2002
A tubular EHD1-containing compartment involved in the recycling of major histocompatibility complex class I molecules to the plasma membrane. The EMBO journal\| PubMed ID: 12032069	2002
Role of the mammalian retromer in sorting of the cation-independent mannose 6-phosphate receptor. The Journal of cell biology\| PubMed ID: 15078903	2004
Mutations in a highly conserved region of the Arf1p activator GEA2 block anterograde Golgi transport but not COPI recruitment to membranes. Molecular biology of the cell\| PubMed ID: 15930122	2005
Direct visualization of Escherichia coli chemotaxis receptor arrays using cryo-electron microscopy. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America\| PubMed ID: 17360429	2007
Ion-abrasion scanning electron microscopy reveals surface-connected tubular conduits in HIV-infected macrophages. PLoS pathogens\| PubMed ID: 19779568	2009
3D visualization of HIV transfer at the virological synapse between dendritic cells and T cells. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America\| PubMed ID: 20624966	2010
Spiral architecture of the nucleoid in Bdellovibrio bacteriovorus. Journal of bacteriology\| PubMed ID: 21148724	2011
Correlative 3D imaging of whole mammalian cells with light and electron microscopy. Journal of structural biology\| PubMed ID: 21907806	2011

Lisa M. Hartnell

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