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Determination of Molecular Structures of HIV Envelope Glycoproteins using Cryo-Electron Tomography and Automated Sub-tomogram Averaging

Since its discovery nearly 30 years ago, more than 60 million people have been infected with the human immunodeficiency virus (HIV) (www.usaid.gov). The ...

National Institutes of Health

Agents th&eacute;rapeutiques brequinar sodium et le l&eacute;flunomide (Arava) fonctionnent en se liant &agrave; un tunnel hydrophobe form&eacute; par une extr&eacute;mit&eacute; N-terminale tr&egrave;s variable de d&eacute;shydrog&eacute;nase de dihydroorotate famille 2 (DHODH). La structure cristallographique d&#39;un analogue de brequinar li&eacute; &agrave; DHODH humaine a &eacute;t&eacute; d&eacute;termin&eacute;e. In silico, criblage de des compos&eacute;s a sugg&eacute;r&eacute; un autre sous-ensemble des brequinar analogues qui n&#39;inhibent pas la DHODH humaine en tant qu&#39;inhibiteurs potentiellement efficaces de Plasmodium falciparum DHODH.

D&eacute;riv&eacute;s de Brequinar et conception des m&eacute;dicaments sp&eacute;cifiques &agrave; l&#39;esp&egrave;ce de d&eacute;shydrog&eacute;nase de dihydroorotate.

Therapeutika Brequinar Natrium und leflunomid (Arava) arbeiten durch Bindung in einem hydrophoben Tunnel durch eine sehr Variable N-Terminus Familie 2-Dihydroorotate-Dehydrogenase (DHODH) gebildet. Die x-ray kristallographische Struktur der ein analoges Brequinar an menschlichen DHODH gebunden wurde ermittelt. In Silico schlug Screening von einer Bibliothek Verbindungen eine andere Teilmenge der Brequinar-Analoga, die nicht menschliche DHODH als potenziell wirksame Inhibitoren von Plasmodium Falciparum DHODH hemmen.

Brequinar-Derivate und artspezifische Drug Design f&uuml;r Dihydroorotate-Dehydrogenase.

Sodio brequinar agenti terapeutici e leflunomide (Arava) lavoro di associazione in un tunnel idrofobico formato da un N-terminus altamente variabile di diidroorotato deidrogenasi a famiglia 2 (DHODH). La struttura cristallografica ai raggi x di un analogo del brequinar associato a DHODH umano era determinata. In silico lo screening di una libreria di composti ha suggerito un altro sottoinsieme di brequinar analoghi che non inibiscono DHODH umano come potenzialmente efficaci inibitori del Plasmodium falciparum DHODH.

Brequinar derivati e apetti drug design per diidroorotato deidrogenasi.

&#x6CBB;&#x7597;&#x5242; brequinar &#x94A0;&#x548C;&#x6765;&#x6C1F;&#x7C73;&#x7279; &#xFF08;&#x963F;&#x62C9;&#x74E6;) &#x5DE5;&#x4F5C;&#x6240;&#x5F62;&#x6210;&#x7684;&#x5BB6;&#x5EAD; 2 dihydroorotate &#x8131;&#x6C22;&#x9176; (DHODH) &#x7684;&#x9AD8;&#x5EA6;&#x53EF;&#x53D8; N-&#x603B;&#x7AD9;&#x758F;&#x6C34;&#x96A7;&#x9053;&#x4E2D;&#x7684;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x3002;X &#x5C04;&#x7EBF;&#x6676;&#x4F53;&#x5B66;&#x7ED3;&#x6784;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x5230;&#x4EBA;&#x7C7B; DHODH brequinar &#x7684;&#x6A21;&#x62DF;&#x7684;&#x51B3;&#x5FC3;&#x3002;&#x5728;&#x7845;&#x5316;&#x5408;&#x7269;&#x6587;&#x5E93;&#x7B5B;&#x9009;&#x5EFA;&#x8BAE;&#x53E6;&#x4E00;&#x4E2A;&#x5B50;&#x96C6;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x6F5C;&#x5728;&#x6709;&#x6548;&#x6291;&#x5236;&#x6076;&#x6027;&#x759F;&#x539F;&#x866B; DHODH &#x4E0D;&#x4F1A;&#x59A8;&#x788D;&#x4EFB;&#x4F55;&#x4EBA;&#x7684; DHODH &#x7684; brequinar &#x7C7B;&#x4F3C;&#x7269;&#x3002;

Brequinar &#x884D;&#x751F;&#x54C1;&#x548C;&#x8131;&#x6C22;&#x9176; dihydroorotate &#x7684;&#x7269;&#x79CD;&#x7279;&#x5F02;&#x6027;&#x7684;&#x836F;&#x7269;&#x8BBE;&#x8BA1;&#x3002;

Therapeutic agents brequinar sodium and leflunomide (Arava) work by binding in a hydrophobic tunnel formed by a highly variable N-terminus of family 2 dihydroorotate dehydrogenase (DHODH). The X-ray crystallographic structure of an analog of brequinar bound to human DHODH was determined. In silico screening of a library of compounds suggested another subset of brequinar analogs that do not inhibit human DHODH as potentially effective inhibitors of Plasmodium falciparum DHODH.

Brequinar derivatives and species-specific drug design for dihydroorotate dehydrogenase.

&#x6CBB;&#x7642;&#x85AC; brequinar &#x306E;&#x30CA;&#x30C8;&#x30EA;&#x30A6;&#x30E0;&#x3068;&#x30EC;&#x30D5;&#x30EB;&#x30CE;&#x30DF;&#x30C9; (Arava&#xFF09; &#x306F;&#x975E;&#x5E38;&#x306B;&#x5909;&#x6570;&#x306E; N &#x672B;&#x7AEF;&#x3067;&#x5BB6;&#x65CF; 2 &#x30B8;&#x30D2;&#x30C9;&#x30ED;&#x30AA;&#x30ED;&#x30C8; (DHODH) &#x3092;&#x5F62;&#x6210;&#x3059;&#x308B;&#x758E;&#x6C34;&#x6027;&#x30C8;&#x30F3;&#x30CD;&#x30EB;&#x3067;&#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C7;&#x30A3;&#x30F3;&#x30B0;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x50CD;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x4EBA;&#x9593;&#x306E; DHODH &#x306B;&#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C9;&#x3055;&#x308C;&#x3066; brequinar &#x306E;&#x30A2;&#x30CA;&#x30ED;&#x30B0;&#x306E; x &#x7DDA;&#x7D50;&#x6676;&#x69CB;&#x9020;&#x304C;&#x6C7A;&#x5B9A;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x30A4;&#x30F3;&#x30B7;&#x30EA;&#x30B3;&#x5316;&#x5408;&#x7269;&#x30E9;&#x30A4;&#x30D6;&#x30E9;&#x30EA;&#x306E;&#x30B9;&#x30AF;&#x30EA;&#x30FC;&#x30CB;&#x30F3;&#x30B0;&#x4EBA;&#x9593; DHODH &#x71B1;&#x5E2F;&#x71B1;&#x30DE;&#x30E9;&#x30EA;&#x30A2;&#x539F;&#x866B; DHODH &#x6F5C;&#x5728;&#x7684;&#x52B9;&#x679C;&#x7684;&#x306A;&#x963B;&#x5BB3;&#x5264;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x3092;&#x6291;&#x5236;&#x3057;&#x306A;&#x3044; brequinar &#x985E;&#x7E01;&#x4F53;&#x306E;&#x5225;&#x306E;&#x30B5;&#x30D6;&#x30BB;&#x30C3;&#x30C8;&#x3092;&#x63D0;&#x6848;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;

Brequinar &#x8A98;&#x5C0E;&#x4F53;&#x3068;&#x7A2E;&#x7279;&#x7570;&#x7684;&#x85AC;&#x7269;&#x8A2D;&#x8A08;&#x30B8;&#x30D2;&#x30C9;&#x30ED;&#x30AA;&#x30ED;&#x30C8;&#x3002;

&#xCE58;&#xB8CC;&#xC81C; brequinar &#xB098;&#xD2B8;&#xB968; &#xBC0F; leflunomide (&#xB77C;&#xBC14;) &#xAC00;&#xC871; 2 dihydroorotate &#xD6A8;&#xC18C; (DHODH)&#xC758; &#xB192;&#xC740; &#xBCC0;&#xC218; N &#xB9D0;&#xB2E8;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xD615;&#xC131; &#xB41C; &#xC18C;&#xC218; &#xC131; &#xD130;&#xB110;&#xC5D0; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC791;&#xB3D9; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. Brequinar &#xC778;&#xAC04; DHODH&#xC5D0; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xB41C;&#xC758; &#xC544;&#xB0A0;&#xB85C;&#xADF8; crystallographic x-&#xC120; &#xAD6C;&#xC870; &#xACB0;&#xC815; &#xD588;&#xB2E4;. Silico&#xC5D0;&#xC11C; &#xD654;&#xD569;&#xBB3C;&#xC758; &#xB77C;&#xC774;&#xBE0C;&#xB7EC;&#xB9AC;&#xC758; &#xC2EC;&#xC0AC; Plasmodium falciparum DHODH&#xC758; &#xC7A0;&#xC7AC;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xD6A8;&#xACFC;&#xC801;&#xC778; &#xC5B5;&#xC81C;&#xC81C;&#xB85C; &#xC778;&#xAC04;&#xC758; DHODH&#xB97C; &#xC5B5;&#xC81C; &#xD558;&#xC9C0; &#xC54A;&#xB294; brequinar &#xC720;&#xC0AC; &#xCCB4;&#xC758; &#xB2E4;&#xB978; &#xD558;&#xC704; &#xC9D1;&#xD569;&#xC744; &#xC81C;&#xC548; &#xD588;&#xB2E4;.

Brequinar &#xD30C;&#xC0DD; &#xC0C1;&#xD488; &#xBC0F; &#xC885;&#xC758; &#xC57D;&#xBB3C; dihydroorotate &#xD6A8;&#xC18C;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xB514;&#xC790;&#xC778;.

Brequinar s&oacute;dico de agentes terap&eacute;uticos y leflunomida (Arava) funcionan uni&eacute;ndose en un t&uacute;nel hidrof&oacute;bico formado por una extremo N-terminal altamente variable de la deshidrogenasa de Dihidroorotato familia 2 (DHODH). Se determin&oacute; la estructura cristalogr&aacute;fica de la radiograf&iacute;a de un an&aacute;logo de brequinar a DHODH humano. Proyecci&oacute;n de una biblioteca de compuestos silico sugiri&oacute; otro subconjunto de brequinar an&aacute;logos que no inhiban DHODH humano como potencialmente eficaces inhibidores de Plasmodium falciparum DHODH.

Brequinar derivados y el dise&ntilde;o de f&aacute;rmacos espec&iacute;ficos para Dihidroorotato deshidrogenasa.

&#x819C;&#x5173;&#x8054; dihydroorotate &#x8131;&#x6C22;&#x9176; (DHODH) &#x662F;&#x6CA1;&#x6709;&#x6709;&#x6548;&#x7684;&#x6291;&#x5236;&#x5242;&#x7684;&#x6297;&#x759F;&#x6CBB;&#x7597;&#x76EE;&#x6807;&#x3002;&#x7814;&#x7A76;&#x4EBA;&#x7C7B; DHODH (HsDHODH) &#x5BFC;&#x81F4;&#x547C;&#x5438;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x918C;&#x7C7B;&#x96A7;&#x9053;&#x4E2D;&#x7684;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x7ED3;&#x6784;&#x673A;&#x68B0;&#x6A21;&#x578B;&#x7531;&#x9AD8;&#x5EA6;&#x53EF;&#x53D8; N-&#x603B;&#x7AD9;&#xFF0C;&#x901A;&#x5F80;&#x7684;&#x9EC4;&#x7D20;&#x5355;&#x6838;&#x82F7;&#x9178;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x7AD9;&#x70B9;&#x7EC4;&#x6210;&#x3002;&#x6765;&#x6C1F;&#x7C73;&#x7279;&#x6CBB;&#x7597;&#x5242; &#xFF08;&#x963F;&#x62C9;&#x74E6;) &#x548C; brequinar &#x94A0;&#x6291;&#x5236; HsDHODH &#x901A;&#x8FC7;&#x8FD9;&#x6761;&#x96A7;&#x9053;&#x4E2D;&#x7684;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x3002;&#x6076;&#x6027;&#x759F;&#x539F;&#x866B; (PfDHODH) DHODH &#x548C; HsDHODH &#x6709;&#x660E;&#x663E;&#x4E0D;&#x540C;&#x7684;&#x4E24;&#x79CD;&#x836F;&#x7269;&#x7684;&#x654F;&#x611F;&#x6027;&#x3002;&#x8981;&#x4E86;&#x89E3;&#x8FD9;&#x79CD;&#x5DEE;&#x5F02;&#x654F;&#x611F;&#x7684;&#x7ED3;&#x6784;&#x6027;&#x57FA;&#x7840;&#x5E76;&#x5F00;&#x59CB; PfDHODH &#x6291;&#x5236;&#x5242;&#xFF0C;&#x4E09;&#x7EF4;&#x7ED3;&#x6784;&#x7684;&#x57FA;&#x4E8E;&#x7ED3;&#x6784;&#x7684;&#x836F;&#x7269;&#x8BBE;&#x8BA1;&#x5468;&#x671F; (2.4 &#x57C3;&#xFF0C;R = 20.1%) &#x7684; PfDHODH &#x7ED1;&#x5B9A;&#x5230;&#x7684;&#x6765;&#x6C1F;&#x7C73;&#x7279;&#x7684;&#x6D3B;&#x6027;&#x4EE3;&#x8C22;&#x7269;&#x7531; x &#x5C04;&#x7EBF;&#x6676;&#x4F53;&#x5B66;&#x3002;HsDHODH &#x548C; PfDHODH &#x7ED3;&#x6784;&#x7684;&#x6BD4;&#x8F83;&#x7814;&#x7A76;&#x63ED;&#x793A;&#x4E86;&#x4E00;&#x79CD;&#x5B8C;&#x5168;&#x4E0D;&#x540C;&#x7684;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x6A21;&#x5F0F;&#x540C;&#x6837;&#x5728;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x4E24;&#x4E2A;&#x76F8;&#x540C;&#x50AC;&#x5316;&#x9176;&#x6291;&#x5236;&#x5242;&#xFF0C;&#x5E76;&#x89E3;&#x91CA;&#x4E86;&#x4EE5;&#x524D;&#x89C2;&#x5BDF;&#x5230;&#x7684;&#x7269;&#x79CD;&#x7279;&#x5F02;&#x6027;&#x7684;&#x4F18;&#x60E0;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x3002;&#x56E0;&#x4E3A;&#x6CA1;&#x6709;&#x6709;&#x6548;&#x7684;&#x6291;&#x5236;&#x5242;&#x5DF2;&#x88AB;&#x63CF;&#x8FF0;&#x4E3A; PfDHODH&#xFF0C;&#x8FD9;&#x79CD;&#x7ED3;&#x6784;&#xFF0C;&#x4E3A;&#x6F5C;&#x5728;&#x6297;&#x759F;&#x836F;&#x7269;&#x7684;&#x8BBE;&#x8BA1;&#x63D0;&#x4F9B;&#x5173;&#x952E;&#x7684;&#x6D1E;&#x5BDF;&#x529B;&#x3002;

&#x6076;&#x6027;&#x759F;&#x539F;&#x866B;&#x8131;&#x6C22; dihydroorotate &#x9176;&#x4E0E;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x7684;&#x6291;&#x5236;&#x5242;&#x7684;&#x7ED3;&#x6784;&#x3002;

Membrane-associated dihydroorotate dehydrogenase (DHODH) is an antimalarial therapeutic target without an effective inhibitor. Studies on human DHODH (HsDHODH) led to a structural mechanistic model in which respiratory quinones bind in a tunnel formed by the highly variable N-terminus that leads to the flavin mononucleotide-binding site. The therapeutic agents leflunomide (Arava) and brequinar sodium inhibit HsDHODH by binding in this tunnel. Plasmodium falciparum DHODH (PfDHODH) and HsDHODH have markedly different sensitivities to the two drugs. To understand the structural basis of this differential sensitivity and begin a structure-based drug-design cycle for PfDHODH inhibitors, the three-dimensional structure (2.4 Angstroms, R = 20.1%) of PfDHODH bound to the active metabolite of leflunomide was determined by X-ray crystallography. Comparison of the structures of HsDHODH and PfDHODH reveals a completely different binding mode for the same inhibitor in these two catalytically identical enzymes and explains the previously observed species-specific preferential binding. Because no effective inhibitors have been described for PfDHODH, this structure provides critical insight for the design of potential antimalarials.

Structure of Plasmodium falciparum dihydroorotate dehydrogenase with a bound inhibitor.

Asociada a membrana Dihidroorotato deshidrogenasa (DHODH) es una diana terap&eacute;utica contra la malaria sin un inhibidor eficaz. Estudios en humano DHODH (HsDHODH) conducidos a un modelo mecanicista estructural en el cual quinonas respiratorias se unen en un t&uacute;nel formado por altamente variable N-terminal que lleva hasta el sitio de flavina-Uni&oacute;n. Los agentes terap&eacute;uticos leflunomida (Arava) y brequinar s&oacute;dico inhiben HsDHODH atando en este t&uacute;nel. Plasmodium falciparum DHODH (PfDHODH) y HsDHODH tienen sensibilidades marcadamente diferentes a los dos f&aacute;rmacos. Para entender la base estructural de esta sensibilidad diferencial y comenzar un ciclo de dise&ntilde;o de f&aacute;rmacos basado en estructura de inhibidores de la PfDHODH, la estructura tridimensional (2.4 Angstroms, R = 20,1%) de PfDHODH limite para el metabolito activo de la leflunomida se determin&oacute; mediante cristalograf&iacute;a de rayos x. Comparaci&oacute;n de las estructuras de HsDHODH y PfDHODH revela un modo completamente diferente para el mismo inhibidor en estas dos enzimas catal&iacute;tico id&eacute;nticos y explica el atascamiento preferencial espec&iacute;ficos previamente observado. Porque no inhibidores eficaces se han descrito para PfDHODH, esta estructura proporciona visi&oacute;n cr&iacute;tica para el dise&ntilde;o de los potenciales medicamentos antimal&aacute;ricos.

Estructura de la deshidrogenasa de Dihidroorotato Plasmodium falciparum con un inhibidor de encuadernado.

D&eacute;shydrog&eacute;nase de dihydroorotate associ&eacute;es aux membranes (DHODH) est une cible th&eacute;rapeutique antipalud&eacute;enne sans un inhibiteur efficace. &Eacute;tudes sur l&#39;humain DHODH (HsDHODH) a conduit &agrave; un mod&egrave;le m&eacute;caniste structurel dans lequel quinones respiratoires se coincer dans un tunnel form&eacute; par N-terminal tr&egrave;s variable qui m&egrave;ne vers le site de la flavine mononucl&eacute;otide-liaison. Les agents th&eacute;rapeutiques l&eacute;flunomide (Arava) et brequinar sodium inhibent HsDHODH par liaison dans ce tunnel. Plasmodium falciparum DHODH (PfDHODH) et HsDHODH ont une sensibilit&eacute; nettement diff&eacute;rente pour les deux m&eacute;dicaments. Pour comprendre la base structurelle de cette diff&eacute;rence de sensibilit&eacute; et de lancer un cycle de conception de m&eacute;dicaments bas&eacute;e sur la structure d&#39;inhibiteurs de le PfDHODH, la structure tridimensionnelle (2,4 angstr&ouml;ms, R = 20,1 %) de PfDHODH limite pour le m&eacute;tabolite actif du l&eacute;flunomide a &eacute;t&eacute; d&eacute;termin&eacute;e par cristallographie aux rayons x. Comparaison des structures de HsDHODH et de PfDHODH r&eacute;v&egrave;le un mode de liaison compl&egrave;tement diff&eacute;rente pour l&#39;inhibiteur m&ecirc;me dans ces deux enzymes catalytiquement identiques et explique la liaison pr&eacute;f&eacute;rentielle sp&eacute;cifiques &agrave; l&#39;esp&egrave;ce observ&eacute;e pr&eacute;c&eacute;demment. Parce qu&#39;aucun des inhibiteurs efficaces n&#39;ont &eacute;t&eacute; d&eacute;crites pour PfDHODH, cette structure fournit un aper&ccedil;u critique pour la conception d&#39;antipalud&eacute;ens potentiels.

Structure du Plasmodium falciparum dihydroorotate d&eacute;shydrog&eacute;nase avec un inhibiteur li&eacute;.

Membran-assoziierte Dihydroorotate-Dehydrogenase (DHODH) ist ein gegen Malaria therapeutisches Ziel ohne einen wirksamen Inhibitor. Studien zur menschlichen DHODH (HsDHODH) f&uuml;hrte zu ein strukturelles mechanistisches Modell in dem Atemwege Chinone in einem Tunnel binden durch die sehr Variable Amino-Terminus, die zu der Flavin-Mononucleotide-Bindungsstelle f&uuml;hrt gebildet. Die Therapeutika leflunomid (Arava) und Brequinar-Natrium hemmen HsDHODH durch Bindung in diesem Tunnel. Plasmodium Falciparum DHODH (PfDHODH) und HsDHODH haben deutlich unterschiedliche Empfindlichkeiten gegen&uuml;ber den zwei Medikamente. Verstehen die strukturelle Grundlage f&uuml;r diese differenzielle Empfindlichkeit und beginnen einen Struktur-basiertes Wirkstoffdesign-Zyklus f&uuml;r PfDHODH-Inhibitoren, die dreidimensionale Struktur (2,4 Angstr&ouml;m, R = 20,1 %) des PfDHODH gebunden sein, der aktive Metabolit von leflunomid wurde durch Kristallstrukturanalyse bestimmt. Vergleich der Strukturen von HsDHODH und PfDHODH offenbart eine v&ouml;llig andere Bindungsmodus f&uuml;r die gleichen Inhibitor in diese zwei Enzyme, die katalytisch identisch und erkl&auml;rt die zuvor beobachtete artspezifische bevorzugte Bindung. Da keine wirksamen Inhibitoren f&uuml;r PfDHODH beschrieben wurden, bietet diese Struktur kritische Einsicht f&uuml;r die Gestaltung von potenziellen Malariamittel.

Struktur der Plasmodium Falciparum Dihydroorotate Dehydrogenase mit einem gebundenen Inhibitor.

Associata di membrana diidroorotato deidrogenasi (DHODH) sono un obiettivo terapeutico antimalarico senza un efficacia inibitore. Studi su DHODH umano (HsDHODH) ha portati a un modello meccanicistico strutturale in cui chinoni respiratorie si legano in un tunnel formato dal N-terminus altamente variabile che conduce al sito flavina mononucleotide-associazione. Il brequinar sodio e agenti terapeutici leflunomide (Arava) inibiscono HsDHODH legandosi in questo tunnel. Plasmodium falciparum DHODH (PfDHODH) e HsDHODH sono marcatamente diverse sensibilit&agrave; per i due farmaci. Per capire la base strutturale di questa sensibilit&agrave; differenziale e iniziare un ciclo di droga-progettazione basata sulla struttura per PfDHODH inibitori, la struttura tridimensionale (2,4 Angstrom, R = 20,1%) di PfDHODH associati per il metabolita attivo di leflunomide &egrave; stato determinato mediante cristallografia a raggi x. Confronto tra le strutture di HsDHODH e PfDHODH rivela una modalit&agrave; di associazione completamente diversa per la stessa inibitore in questi due enzimi cataliticamente identici e spiega il legame preferenziale apetti precedentemente osservato. Perch&eacute; inibitori efficaci non sono state descritte per PfDHODH, questa struttura offre comprensione critica per la progettazione di potenziali antimalarici.

Struttura della deidrogenasi di diidroorotato Plasmodium falciparum con un inibitore associato.

&#x819C;&#x306B;&#x95A2;&#x9023;&#x4ED8;&#x3051;&#x3089;&#x308C;&#x305F;&#x30B8;&#x30D2;&#x30C9;&#x30ED;&#x30AA;&#x30ED;&#x30C8; &#xFF08;DHODH&#xFF09;&#x3001;&#x6297;&#x30DE;&#x30E9;&#x30EA;&#x30A2;&#x306E;&#x6CBB;&#x7642;&#x4E0A;&#x306E;&#x30BF;&#x30FC;&#x30B2;&#x30C3;&#x30C8;&#x306A;&#x304F;&#x52B9;&#x679C;&#x7684;&#x306A;&#x963B;&#x5BB3;&#x5264;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x3064;&#x306A;&#x304C;&#x3063;&#x305F;&#x7814;&#x7A76;&#x4EBA;&#x9593; DHODH (HsDHODH) &#x547C;&#x5438;&#x9396;&#x30AD;&#x30CE;&#x30F3;&#x306E;&#x30C8;&#x30F3;&#x30CD;&#x30EB;&#x3092;&#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C9;&#x69CB;&#x9020;&#x30E1;&#x30AB;&#x30CB;&#x30B9;&#x30C6;&#x30A3;&#x30C3;&#x30AF; &#x30E2;&#x30C7;&#x30EB; &#x30D5;&#x30E9;&#x30D3;&#x30F3;&#x30E2;&#x30CE;&#x30CC;&#x30AF;&#x30EC;&#x30AA;&#x30C1;&#x30C9;&#x7D50;&#x5408;&#x90E8;&#x4F4D;&#x306B;&#x3064;&#x306A;&#x304C;&#x308B;&#x975E;&#x5E38;&#x306B;&#x5909;&#x6570; N &#x672B;&#x7AEF;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x5F62;&#x6210;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6CBB;&#x7642;&#x85AC;&#x30EC;&#x30D5;&#x30EB;&#x30CE;&#x30DF;&#x30C9; (Arava&#xFF09; &#x3068; brequinar &#x30CA;&#x30C8;&#x30EA;&#x30A6;&#x30E0; HsDHODH &#x3053;&#x306E;&#x30C8;&#x30F3;&#x30CD;&#x30EB;&#x3067;&#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C7;&#x30A3;&#x30F3;&#x30B0;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x6291;&#x5236;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30DE;&#x30E9;&#x30EA;&#x30A2;&#x539F;&#x866B; DHODH &#xFF08;PfDHODH&#xFF09; &#x3068; HsDHODH 2 &#x3064;&#x306E;&#x85AC;&#x306B;&#x8457;&#x3057;&#x304F;&#x7570;&#x306A;&#x3063;&#x305F;&#x611F;&#x53D7;&#x6027;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x5DEE;&#x52D5;&#x611F;&#x5EA6;&#x306E;&#x69CB;&#x9020;&#x7684;&#x57FA;&#x76E4;&#x3092;&#x7406;&#x89E3;&#x3057;&#x3001;&#x7ACB;&#x4F53;&#x69CB;&#x9020; PfDHODH &#x963B;&#x5BB3;&#x5264;&#x306E;&#x69CB;&#x9020;&#x306B;&#x57FA;&#x3065;&#x304F;&#x85AC;&#x7269;&#x8A2D;&#x8A08;&#x30B5;&#x30A4;&#x30AF;&#x30EB;&#x304C;&#x958B;&#x59CB;&#x3059;&#x308B; (2.4 &#x30AA;&#x30F3;&#x30B0;&#x30B9;&#x30C8;&#x30ED;&#x30FC;&#x30E0;&#x3001;R = 20.1%) &#x306E; PfDHODH &#x30EC;&#x30D5;&#x30EB;&#x30CE;&#x30DF;&#x30C9;&#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x4EE3;&#x8B1D;&#x7269;&#x306B;&#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C9;&#x3055;&#x308C;&#x305F; x &#x7DDA;&#x306E;&#x7D50;&#x6676;&#x5B66;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x6C7A;&#x5B9A;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;HsDHODH &#x3068; PfDHODH &#x306E;&#x69CB;&#x9020;&#x306E;&#x6BD4;&#x8F03;&#x306F;&#x5B8C;&#x5168;&#x306B;&#x7570;&#x306A;&#x308B;&#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C9; &#x30E2;&#x30FC;&#x30C9;&#x3067;&#x3053;&#x308C;&#x3089; 2 &#x3064;&#x306E;&#x540C;&#x4E00;&#x306E;&#x89E6;&#x5A92;&#x9175;&#x7D20;&#x540C;&#x3058;&#x963B;&#x5BB3;&#x5264;&#x3092;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x3057;&#x3066;&#x4EE5;&#x524D;&#x89B3;&#x6E2C;&#x306E;&#x7A2E;&#x7279;&#x7570;&#x7684;&#x512A;&#x9047;&#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C7;&#x30A3;&#x30F3;&#x30B0;&#x306B;&#x3064;&#x3044;&#x3066;&#x8AAC;&#x660E;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x52B9;&#x679C;&#x7684;&#x306A;&#x963B;&#x5BB3;&#x5264; PfDHODH &#x306E;&#x8A18;&#x8F09;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x306A;&#x3044;&#x305F;&#x3081;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x69CB;&#x9020;&#x4F53;&#x306E;&#x6F5C;&#x5728;&#x7684;&#x306A;&#x6297;&#x30DE;&#x30E9;&#x30EA;&#x30A2;&#x85AC;&#x306E;&#x8A2D;&#x8A08;&#x91CD;&#x5927;&#x306A;&#x6D1E;&#x5BDF;&#x529B;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x30DE;&#x30E9;&#x30EA;&#x30A2;&#x539F;&#x866B;&#x71B1;&#x5E2F;&#x71B1;&#x30DE;&#x30E9;&#x30EA;&#x30A2;&#x539F;&#x866B;&#x30B8;&#x30D2;&#x30C9;&#x30ED;&#x30AA;&#x30ED;&#x30C8; &#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C9;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x963B;&#x5BB3;&#x5264;&#x306E;&#x69CB;&#x9020;&#x3002;

Dihydroorotate &#xB9C9; &#xAD00;&#xB828; &#xD6A8;&#xC18C; (DHODH) &#xD6A8;&#xACFC;&#xC801;&#xC778; &#xC5B5;&#xC81C;&#xC81C; &#xC5C6;&#xC774; &#xB9D0;&#xB77C;&#xB9AC;&#xC544; &#xCE58;&#xB8CC; &#xB300;&#xC0C1; &#xC774;&#xB2E4;. &#xC778;&#xAC04; DHODH (HsDHODH)&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xB97C; &#xC8FC;&#xB3C4; &#xD638;&#xD761;&#xAE30; &#xD034; &#xD130;&#xB110;&#xC5D0; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xD560; &#xAD6C;&#xC870; &#xAE30;&#xACC4; &#xBAA8;&#xB378; &#xD50C; &#xB77C;&#xBE48; mononucleotide &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8;&#xC5D0; &#xC788;&#xB294; &#xB9E4;&#xC6B0; &#xBCC0;&#xC218; N-&#xB9D0;&#xB2E8;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xD615;&#xC131;. &#xCE58;&#xB8CC;&#xC81C; leflunomide (&#xB77C;&#xBC14;) &#xBC0F; brequinar &#xB098;&#xD2B8;&#xB968;&#xC774;&#xC774; &#xD130;&#xB110;&#xC5D0; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xD558;&#xC5EC; Hsdhodh&#xB97C; &#xC5B5;&#xC81C;. Plasmodium falciparum DHODH (PfDHODH)&#xC640; HsDHODH &#xB450; &#xC57D;&#xBB3C;&#xC744; &#xB208;&#xC5D0; &#xB744;&#xAC8C; &#xB2E4;&#xB978; &#xAC10;&#xB3C4; &#xC788;&#xB2E4;. &#xC774; &#xCC28;&#xB3D9; &#xAC10;&#xB3C4;&#xC758; &#xAD6C;&#xC870;&#xC801; &#xAE30;&#xCD08;&#xB97C; &#xC774;&#xD574; &#xD558; &#xACE0; PfDHODH &#xC800; &#xD574;&#xC81C;, 3 &#xCC28;&#xC6D0; &#xAD6C;&#xC870;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xAD6C;&#xC870; &#xAE30;&#xBC18; &#xC57D;&#xBB3C; &#xC124;&#xACC4; &#xC8FC;&#xAE30;&#xB97C; &#xC2DC;&#xC791; &#xD558; (2.4 Angstroms, R = 20.1%)&#xC758; PfDHODH leflunomide&#xC758; &#xD65C;&#xC131; &#xB300;&#xC0AC; &#xC0B0;&#xBB3C;&#xC744; x-&#xC120; &#xACB0;&#xC815;&#xD559;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xACB0;&#xC815; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;. HsDHODH &#xBC0F; Pfdhodh&#xC758; &#xAD6C;&#xC870; &#xBE44;&#xAD50;&#xAC00; &#xB450; catalytically &#xB3D9;&#xC77C;&#xD55C; &#xD6A8;&#xC18C;&#xC5D0; &#xB3D9;&#xC77C;&#xD55C; &#xC5B5;&#xC81C;&#xC81C;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC644;&#xC804;&#xD788; &#xB2E4;&#xB978; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xBAA8;&#xB4DC;&#xB97C; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC900;&#xB2E4; &#xD558; &#xACE0; &#xC774;&#xC804;&#xC5D0; &#xAD00;&#xCC30; &#xB41C; &#xC885;&#xC758; &#xD2B9;&#xD61C; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xC744; &#xC124;&#xBA85; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC544;&#xB2C8; &#xD6A8;&#xACFC;&#xC801;&#xC778; &#xC5B5;&#xC81C;&#xC81C; Pfdhodh&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC124;&#xBA85; &#xB418;&#xC5B4; &#xC788;&#xAE30; &#xB54C;&#xBB38;&#xC5D0;&#xC774; &#xAD6C;&#xC870;&#xB294; &#xC7A0;&#xC7AC;&#xC801;&#xC778; antimalarials&#xC758; &#xB514;&#xC790;&#xC778;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xD1B5;&#xCC30;&#xB825;&#xC744; &#xC81C;&#xACF5; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xBC14;&#xC6B4;&#xB4DC; &#xC5B5;&#xC81C;&#xC81C;&#xC640; Plasmodium falciparum dihydroorotate &#xD6A8;&#xC18C;&#xC758; &#xAD6C;&#xC870;.

&#x91CD;&#x7EC4;&#x9175;&#x6BCD;&#x8868;&#x8FBE;&#x6076;&#x6027;&#x759F;&#x539F;&#x866B;&#x88C2;&#x6B96;&#x5B50;&#x8868;&#x9762;&#x86CB;&#x767D; 3 (MSP3) &#x514D;&#x75AB;&#x4FDD;&#x62A4;&#x53CD;&#x6BD2;&#x6311;&#x6218;&#x611F;&#x67D3; Aotus nancymai &#x7334;&#x5B50;&#x3002;&#x4E0D;&#x5E78;&#x7684;&#x662F;&#xFF0C;&#x8FD9;&#x79CD;&#x9175;&#x6BCD;&#x8868;&#x8FBE;&#x6750;&#x6599;&#x7684;&#x751F;&#x4EA7;&#x8FC7;&#x7A0B;&#x4E0D;&#x662F;&#x6700;&#x4F18;&#x7684;&#x4EBA;&#x4F53;&#x8BD5;&#x9A8C;&#x3002;&#x52AA;&#x529B;&#x751F;&#x4EA7;&#x91CD;&#x7EC4; MSP3 &#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x4EE5;&#x53EF;&#x6269;&#x5C55;&#x7684;&#x65B9;&#x5F0F;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x8868;&#x793A;&#x548C;&#x51C0;&#x5316;&#x5168;&#x957F;&#x5EA6;&#x8FD1; MSP3 &#x5927;&#x80A0;&#x57C3;&#x5E0C;&#x6C0F;&#x5927;&#x80A0;&#x6746;&#x83CC; (EcMSP3) &#x4E2D;&#x3002;&#x7EAF;&#x51C0;&#x7684; EcMSP3 &#x5F62;&#x6210;&#x6240;&#x5206;&#x6790;&#x7684;&#x5927;&#x5C0F;&#x6392;&#x65A5;&#x9AD8;&#x6548;&#x6DB2;&#x76F8;&#x8272;&#x8C31;&#x4E32;&#x8054;&#x591A;&#x89D2;&#x5EA6;&#x5149;&#x6563;&#x5C04;&#x548C;&#x51C6;&#x5F39;&#x6027;&#x5149;&#x6563;&#x5C04;&#x68C0;&#x6D4B;&#x548C;&#x901F;&#x5EA6;&#x6C89;&#x6DC0;&#x6CD5;&#x786E;&#x5B9A;&#x975E;&#x7403;&#x72B6;&#x4E8C;&#x805A;&#x4F53; (R(h) 7.6+/-0.2nm &#x548C; 6.9nm&#xFF0C;&#x5206;&#x522B;)&#x3002;&#x9AD8;&#x5206;&#x8FA8;&#x7387;&#x7684;&#x539F;&#x5B50;&#x529B;&#x663E;&#x5FAE;&#x955C;&#x8BC4;&#x4EF7;&#x8868;&#x660E;&#x975E;&#x76F4;&#x7EBF;&#x7684;&#x975E;&#x5BF9;&#x79F0;&#x7ED3;&#x6784;&#xFF0C;&#x4E0E;&#x4E32;&#x73E0;&#x7684;&#x57DF;&#x548C;&#x7075;&#x6D3B;&#x7684;&#x5FAA;&#x73AF;&#xFF0C;&#x88AB;&#x627F;&#x8BA4;&#x4E3A;&#x4E8C;&#x805A;&#x4F53;&#xFF0C;&#x4E3B;&#x8981;&#x662F;&#x867D;&#x7136;&#x89C2;&#x5BDF;&#x5230;&#x5355;&#x4F53;&#x548C;&#x8F83;&#x5927;&#x7684;&#x591A;&#x805A;&#x4F53;&#x3002;&#x4E32;&#x73E0;&#x5B50;&#x7ED3;&#x6784;&#x5BF9;&#x5E94;&#x5230;&#x9884;&#x6D4B;&#x7684;&#x7ED3;&#x6784;&#x57DF;&#xFF0C;&#x5176;&#x4E2D;&#x89E3;&#x91CA;&#x4E86;&#x901F;&#x5EA6;&#x6C89;&#x6DC0;&#x7684;&#x7ED3;&#x679C;&#xFF0C;&#x63D0;&#x9AD8;&#x4E86;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x7684;&#x6982;&#x5FF5;&#x6A21;&#x578B;&#x3002;EcMSP3 &#x5728;&#x5F17;&#x6C0F;&#x4F50;&#x5242;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x6297;&#x4F53;&#x514D;&#x75AB;&#x8367;&#x5149;&#x6CD5;&#x68C0;&#x6D4B;&#x627F;&#x8BA4;&#x672C;&#x673A; MSP3 &#x5BC4;&#x751F;&#x7EA2;&#x7EC6;&#x80DE;&#x548C;&#x7ED9;&#x63A5;&#x79CD;&#x5EF6;&#x8FDF;&#x5230;&#x7FA4; Aotus &#x7334;&#x5B50;&#x6311;&#x6218;&#x5F3A;&#x6BD2;&#x611F;&#x67D3;&#x759F;&#x539F;&#x866B; FVO &#x5E94;&#x53D8;&#x4E0E;&#x6CBB;&#x7597;&#x65F6;&#x95F4;&#x3002;&#x4E09;&#x53EA;&#x7334;&#x5B50;&#x4E03; EcMSP3 &#x63A5;&#x79CD;&#x4E86;&#x4F4E;&#x5CF0;&#x503C; parasitemias&#x3002;EcMSP3&#xFF0C;&#x5176;&#x4E2D;&#x6709;&#x53EF;&#x80FD;&#x6A21;&#x4EFF;&#x672C;&#x673A; MSP3 &#x7ED3;&#x6784;&#x4F4D;&#x4E8E;&#x88C2;&#x6B96;&#x5B50;&#x8868;&#x9762;&#x4E0A;&#xFF0C;&#x662F;&#x4E00;&#x79CD;&#x591A;&#x7EC4;&#x5206;&#x7684;&#x759F;&#x75BE;&#x75AB;&#x82D7;&#x5217;&#x5165;&#x53EF;&#x884C;&#x5019;&#x9009;&#x3002;

&#x4FDD;&#x62A4;&#x6027;&#x5927;&#x80A0;&#x57C3;&#x5E0C;&#x6C0F;&#x5927;&#x80A0;&#x6746;&#x83CC;&#x8868;&#x8FBE;&#x6076;&#x6027;&#x759F;&#x539F;&#x866B;&#x88C2;&#x6B96;&#x5B50;&#x8868;&#x9762;&#x86CB;&#x767D; 3 &#x8868;&#x5F81;&#x6307;&#x793A;&#x975E;&#x76F4;&#x7EBF;&#x7684;&#x591A;&#x57DF;&#x7684;&#x7ED3;&#x6784;&#x3002;

Immunization with a recombinant yeast-expressed Plasmodium falciparum merozoite surface protein 3 (MSP3) protected Aotus nancymai monkeys against a virulent challenge infection. Unfortunately, the production process for this yeast-expressed material was not optimal for human trials. In an effort to produce a recombinant MSP3 protein in a scaleable manner, we expressed and purified near-full-length MSP3 in Escherichia coli (EcMSP3). Purified EcMSP3 formed non-globular dimers as determined by analytical size-exclusion HPLC with in-line multi-angle light scatter and quasi-elastic light scatter detection and velocity sedimentation (R(h) 7.6+/-0.2nm and 6.9nm, respectively). Evaluation by high-resolution atomic force microscopy revealed non-linear asymmetric structures, with beaded domains and flexible loops that were recognized predominantly as dimers, although monomers and larger multimers were observed. The beaded substructure corresponds to predicted structural domains, which explains the velocity sedimentation results and improves the conceptual model of the protein. Vaccination with EcMSP3 in Freund's adjuvant-induced antibodies that recognized native MSP3 in parasitized erythrocytes by an immunofluorescence assay and gave delayed time to treatment in a group of Aotus monkeys in a virulent challenge infection with the FVO strain of P. falciparum. Three of the seven monkeys vaccinated with EcMSP3 had low peak parasitemias. EcMSP3, which likely mimics the native MSP3 structure located on the merozoite surface, is a viable candidate for inclusion in a multi-component malaria vaccine.

Characterization of a protective Escherichia coli-expressed Plasmodium falciparum merozoite surface protein 3 indicates a non-linear, multi-domain structure.

Vaccination avec une levure exprim&eacute;e Plasmodium falciparum m&eacute;rozo&iuml;te surface prot&eacute;ine recombinante 3 (MSP3) prot&eacute;g&eacute; Aotus stephanemaogloire singes contre l&#39;infection par une contestation virulente. Malheureusement, le processus de production pour ce mat&eacute;riau exprim&eacute;s par les levures n&#39;&eacute;tait pas optimal pour les essais chez l&#39;homme. Dans le but de produire une prot&eacute;ine recombinante de MSP3 de mani&egrave;re &eacute;volutive, nous exprim&eacute; et purifi&eacute; pr&egrave;s de pleine longueur-MSP3 chez Escherichia coli (EcMSP3). EcMSP3 purifi&eacute; forment des dim&egrave;res non-globulaires tel que d&eacute;termin&eacute; par l&#39;analyse HPLC exclusion st&eacute;rique avec facteur de diffusion en ligne multi-angle et facteur de diffusion quasi &eacute;lastique d&eacute;tection et vitesse de s&eacute;dimentation (r (h) 7.6+/-0.2nm et 6.9nm, respectivement). &Eacute;valuation par microscopie &agrave; force atomique haute r&eacute;solution r&eacute;v&egrave;le des structures asym&eacute;triques non lin&eacute;aires, avec des domaines de perles et boucles souples qui ont &eacute;t&eacute; reconnus principalement comme dim&egrave;res, bien qu&#39;on observe les monom&egrave;res et les plus grands multim&egrave;res. La sous-structure perl&eacute;e correspond &agrave; pr&eacute;dits domaines structuraux, ce qui explique les r&eacute;sultats de la s&eacute;dimentation de la vitesse et am&eacute;liore le mod&egrave;le conceptuel de la prot&eacute;ine. Vaccination avec EcMSP3 en anticorps induite par l&#39;adjuvant de Freund qui reconnu MSP3 natif dans les &eacute;rythrocytes parasit&eacute;s par un test d&#39;immunofluorescence et Donna a retard&eacute; le temps de traitement dans un groupe de singes Aotus une infection virulente d&eacute;fi avec la souche de l&#39;OAV de P. falciparum. Trois des sept singes vaccin&eacute;s avec EcMSP3 affichaient pic faibles parasit&eacute;mies. EcMSP3, qui probablement imite la structure native de MSP3 situ&eacute;e sur la surface du m&eacute;rozo&iuml;te, est un candidat viable pour inclusion dans un vaccin contre le paludisme &agrave; composants multiples.

Caract&eacute;risation d&#39;une protecteur Escherichia coli-exprim&eacute; Plasmodium falciparum m&eacute;rozo&iuml;te prot&eacute;ine de surface 3 indique une structure non lin&eacute;aire, multi-domaines.

Immunisierung mit einem rekombinanten Hefe ausgedr&uuml;ckt Plasmodium Falciparum Merozoite Oberfl&auml;che Protein 3 (MSP3) gesch&uuml;tzt Aotus Nancymai Affen gegen eine Infektion virulenten Herausforderung. Des Produktionsprozesses f&uuml;r dieses Hefe-ausgedr&uuml;ckt-Material war leider nicht optimal f&uuml;r menschliche Studien. In dem Bem&uuml;hen, ein rekombinantes Protein MSP3 eine skalierbare Weise zu produzieren wir ausgedr&uuml;ckt und in der N&auml;he-Full-Length MSP3 in Escherichia coli (EcMSP3) gereinigt. Gereinigte EcMSP3 gebildet nicht kugelige Dimere festgelegt durch analytische Gr&ouml;&szlig;e-Ausschluss-HPLC mit Inline-Multi-Angle Lichtstreuung und quasi-elastic Lichtstreuung Erkennung und Geschwindigkeit Sedimentation (R(h) 7.6+/-0.2nm und 6.9nm, beziehungsweise). Auswertung von hochaufl&ouml;senden Rasterkraftmikroskopie ergab nichtlineare asymmetrische Strukturen mit Perlen Dom&auml;nen und flexible Loops, die &uuml;berwiegend als Dimere, erkannt wurden, obwohl Monomere und gr&ouml;&szlig;eren Multimere beobachtet wurden. Der wulstige Unterbau entspricht vorhergesagten strukturelle Dom&auml;nen, das erkl&auml;rt die Geschwindigkeit Ablagerung Ergebnisse und verbessert das konzeptionelle Modell des Proteins. Impfung mit EcMSP3 in Freund&#39;s Adjuvans-induzierte Antik&ouml;rper, die native MSP3 in parasitized Erythrozyten durch ein Immunfluoreszenz-Assay erkannt und gab verz&ouml;gert Zeit zur Behandlung in einer Gruppe von Aotus Affen in einer virulenten Herausforderung-Infektion mit der LVA-Belastung von p. Falciparum. Drei der sieben Affen mit EcMSP3 geimpft hatte niedrige Gipfel Parasitemias. EcMSP3, die wahrscheinlich die systemeigene MSP3 Struktur befindet sich auf der Merozoite Oberfl&auml;che imitiert, ist einem denkbaren Kandidaten f&uuml;r die Aufnahme in ein Mehrkomponenten Malaria-Impfstoff.

Charakterisierung von einem sch&uuml;tzenden Escherichia coli ausgedr&uuml;ckt Plasmodium Falciparum Merozoite Oberfl&auml;che Protein 3 gibt eine nicht-lineare, Multi-Domain-Struktur.

Immunizzazione con una lievito-espresso Plasmodium falciparum merozoite superficie proteina ricombinante 3 (MSP3) protetto Aotus nancymai scimmie contro un&#39;infezione sfida virulento. Purtroppo, il processo di produzione per questo materiale lievito-espresso non era ottimo per la sperimentazione umana. Nel tentativo di produrre una proteina ricombinante MSP3 in modo scalabile, abbiamo espresso e purificato vicino-full-length MSP3 in Escherichia coli (EcMSP3). EcMSP3 purificato formano dimeri non-globulari come determinato dalla analitica HPLC dimensione-esclusione con dispersione della luce multiangolare in linea e dispersione della luce quasi-elastic rilevamento e velocit&agrave; di sedimentazione (R(h) 7.6+/-0.2nm e 6.9nm, rispettivamente). Valutazione di microscopia a forza atomica ad alta risoluzione ha rivelato non lineare strutture asimmetriche, con perline domini e loop flessibili che sono stati riconosciuti principalmente come dimeri, sebbene monomeri e multimeri pi&ugrave; grandi sono stati osservati. La sottostruttura beaded corrisponde al predetti domini strutturali, che spiega i risultati di velocit&agrave; sedimentazione e migliora il modello concettuale della proteina. Vaccinazione con EcMSP3 di anticorpi indotta da adiuvante di Freund riconosciuto MSP3 nativo negli eritrociti parassitati da un test di immunofluorescenza, che ha dato in ritardo tempo di trattamento in un gruppo di scimmie Aotus in infezione virulenta sfida con il ceppo di UAV di p. falciparum. Tre dei sette scimmie vaccinate con EcMSP3 aveva parassitemie basso picco. EcMSP3, che probabilmente imita la struttura nativa MSP3 situata sulla superficie del merozoite, &egrave; un candidato vitale per l&#39;inclusione in un vaccino contro la malaria multicomponente.

Caratterizzazione di una protettiva Escherichia coli espressi Plasmodium falciparum merozoite superficie proteina 3 indica una struttura non-lineare, multidominio.

&#x7D44;&#x63DB;&#x3048;&#x9175;&#x6BCD;&#x767A;&#x73FE;&#x539F;&#x866B;&#x71B1;&#x5E2F;&#x71B1;&#x30DE;&#x30E9;&#x30EA;&#x30A2;&#x539F;&#x866B;&#x30E1;&#x30ED;&#x30BE;&#x30A4;&#x30C8;&#x8868;&#x9762;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA; 3 (MSP3) &#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x514D;&#x75AB; Aotus nancymai &#x30B5;&#x30EB;&#x5287;&#x6BD2;&#x6027;&#x306E;&#x6311;&#x6226;&#x306E;&#x611F;&#x67D3;&#x306B;&#x5BFE;&#x3059;&#x308B;&#x4FDD;&#x8B77;&#x3002;&#x6B8B;&#x5FF5;&#x306A;&#x304C;&#x3089;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x9175;&#x6BCD;&#x767A;&#x73FE;&#x6750;&#x6599;&#x306E;&#x88FD;&#x9020;&#x30D7;&#x30ED;&#x30BB;&#x30B9;&#x306F;&#x4EBA;&#x9593;&#x306E;&#x8A66;&#x9A13;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x6700;&#x9069;&#x3067;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x62E1;&#x5F35;&#x6027;&#x306E;&#x9AD8;&#x3044;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3067;&#x7D44;&#x63DB;&#x3048; MSP3 &#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x3092;&#x751F;&#x6210;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x52AA;&#x529B;&#x3001;&#x8868;&#x73FE;&#x3001;&#x8FD1;&#x304F;&#x5B8C;&#x5168;&#x9577; MSP3 &#x5927;&#x8178;&#x83CC; &#xFF08;EcMSP3&#xFF09; &#x3092;&#x7CBE;&#x88FD;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x7CBE;&#x88FD; EcMSP3 hplc &#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x30B5;&#x30A4;&#x30BA;&#x6392;&#x9664;&#x5206;&#x6790;&#x7DDA;&#x3067;&#x30DE;&#x30EB;&#x30C1;&#x30A2;&#x30F3;&#x30B0;&#x30EB;&#x30D6;&#x5149;&#x306E;&#x62E1;&#x6563;&#x3068;&#x6E96;&#x5F3E;&#x6027;&#x5149;&#x6563;&#x4E71;&#x306E;&#x691C;&#x51FA;&#x3068;&#x6D41;&#x901F;&#x306E;&#x6C88;&#x964D;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x6C7A;&#x5B9A;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x975E;&#x7403;&#x5F62;&#x4E8C;&#x91CF;&#x4F53;&#x5F62;&#x6210; (R(h) 7.6+/-0.2nm &#x3068; 6.9nm&#x3001;&#x305D;&#x308C;&#x305E;&#x308C;)&#x3002;&#x9AD8;&#x5206;&#x89E3;&#x80FD;&#x539F;&#x5B50;&#x9593;&#x529B;&#x9855;&#x5FAE;&#x93E1;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x8A55;&#x4FA1;&#x30D3;&#x30FC;&#x30BA; &#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x3068;&#x30E2;&#x30CE;&#x30DE;&#x30FC;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x5927;&#x304D;&#x3044;&#x591A;&#x91CF;&#x4F53;&#x304C;&#x89B3;&#x5BDF;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x304C;&#x3001;&#x30C0;&#x30A4;&#x30DE;&#x30FC;&#x3001;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x4E3B;&#x306B;&#x8A8D;&#x3081;&#x3089;&#x308C;&#x305F;&#x67D4;&#x8EDF;&#x306A;&#x30EB;&#x30FC;&#x30D7;&#x306E;&#x975E;&#x7DDA;&#x578B;&#x975E;&#x5BFE;&#x79F0;&#x69CB;&#x9020;&#x3092;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x30D3;&#x30FC;&#x30BA;&#x306E;&#x30B5;&#x30D6;&#x30B9;&#x30C8;&#x30E9;&#x30AF;&#x30C1;&#x30E3;&#x30FC;&#x901F;&#x5EA6;&#x6C88;&#x964D;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x306B;&#x3064;&#x3044;&#x3066;&#x8AAC;&#x660E;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3068;&#x3001;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x6982;&#x5FF5;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x306E;&#x5411;&#x4E0A;&#x4E88;&#x6E2C;&#x69CB;&#x9020;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x306B;&#x5BFE;&#x5FDC;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;EcMSP3 &#x30CD;&#x30A4;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6; MSP3 &#x5BC4;&#x751F;&#x8D64;&#x8840;&#x7403;&#x3067;&#x306F;&#x86CD;&#x5149;&#x6297;&#x4F53;&#x6CD5;&#x306B;&#x3088;&#x308A;&#x8A8D;&#x8B58;&#x3055;&#x308C;&#x3001;&#x4E0E;&#x3048;&#x305F; immunology &#x8A98;&#x8D77;&#x6297;&#x4F53;&#x3067;&#x30EF;&#x30AF;&#x30C1;&#x30F3;&#x306E;&#x63A5;&#x7A2E;&#x5287;&#x6BD2;&#x6027;&#x306E;&#x6311;&#x6226;&#x306E;&#x611F;&#x67D3;&#x75C7;&#x306E; Aotus &#x30B5;&#x30EB;&#x306E;&#x30B0;&#x30EB;&#x30FC;&#x30D7;&#x3067; FVO &#x3072;&#x305A;&#x307F;&#x30DE;&#x30E9;&#x30EA;&#x30A2;&#x6CBB;&#x7642;&#x6642;&#x9593;&#x3092;&#x9045;&#x5EF6;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;3 &#x3064;&#x306E;&#x4E88;&#x9632;&#x63A5;&#x7A2E;&#x3092; EcMSP3 &#x3068; 7 &#x3064;&#x306E;&#x30B5;&#x30EB;&#x4F4E;&#x30D4;&#x30FC;&#x30AF; parasitemias &#x3092;&#x3042;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x304C;&#x9AD8;&#x3044;&#x30E1;&#x30ED;&#x30BE;&#x30A4;&#x30C8;&#x8868;&#x9762;&#x4E0A;&#x306B;&#x3042;&#x308B;&#x30CD;&#x30A4;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6; MSP3 &#x69CB;&#x9020;&#x3092;&#x6A21;&#x5023;&#x3059;&#x308B;, EcMSP3 &#x306E;&#x591A;&#x6210;&#x5206;&#x30DE;&#x30E9;&#x30EA;&#x30A2; &#x30EF;&#x30AF;&#x30C1;&#x30F3;&#x306B;&#x542B;&#x307E;&#x308C;&#x308B;&#x5B9F;&#x884C;&#x53EF;&#x80FD;&#x306A;&#x5019;&#x88DC;&#x3067;&#x3059;&#x3002;

&#x4FDD;&#x8B77;&#x5927;&#x8178;&#x83CC;&#x5927;&#x8178;&#x83CC;&#x767A;&#x73FE;&#x539F;&#x866B;&#x71B1;&#x5E2F;&#x71B1;&#x30DE;&#x30E9;&#x30EA;&#x30A2;&#x539F;&#x866B;&#x30E1;&#x30ED;&#x30BE;&#x30A4;&#x30C8;&#x8868;&#x9762;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA; 3 &#x306E;&#x30AD;&#x30E3;&#x30E9;&#x30AF;&#x30BF;&#x30EA;&#x30BC;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3; &#x30CE;&#x30F3;&#x30EA;&#x30CB;&#x30A2;&#x3001;&#x30DE;&#x30EB;&#x30C1; &#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x69CB;&#x9020;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#xC7AC;&#xC870;&#xD569; &#xD6A8; &#xBAA8; &#xD45C;&#xD604; Plasmodium falciparum merozoite &#xD45C;&#xBA74; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; 3 (MSP3)&#xC640; &#xBA74;&#xC5ED; &#xBCF4;&#xD638; &#xC545;&#xC131; &#xB3C4;&#xC804; &#xAC10;&#xC5FC;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; Aotus nancymai &#xC6D0;&#xC22D;&#xC774;. &#xBD88;&#xD589; &#xD558; &#xAC8C;&#xB3C4;, &#xC0DD;&#xC0B0; &#xACF5;&#xC815;&#xC774; &#xD6A8; &#xBAA8; &#xD45C;&#xD604; &#xC7AC;&#xB8CC;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC778;&#xCCB4; &#xC2E4;&#xD5D8;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xCD5C;&#xC801;&#xC758; &#xC544;&#xB2C8;&#xC5C8;&#xB2E4;. &#xD655;&#xC7A5; &#xAC00;&#xB2A5;&#xD55C; &#xBC29;&#xC2DD;&#xC73C;&#xB85C; &#xC7AC;&#xC870;&#xD569; MSP3 &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC744; &#xC0DD;&#xC0B0; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD574; &#xB178;&#xB825;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xD45C;&#xD604;&#xACFC; &#xB300;&#xC7A5;&#xADE0; (EcMSP3)&#xC5D0;&#xC11C; &#xC804;&#xCCB4; &#xAE38;&#xC774; &#xADFC;&#xCC98; MSP3 &#xC815;&#xD654;. &#xC21C;&#xD654; EcMSP3 &#xC778;&#xB77C;&#xC778; &#xBA40;&#xD2F0; &#xC575;&#xAE00; &#xAC00;&#xBCBC;&#xC6B4; &#xC0B4;&#xD3EC;&#xC640; quasi-elastic &#xAC00;&#xBCBC;&#xC6B4; &#xC0B4;&#xD3EC; &#xAC10;&#xC9C0; &#xBC0F; &#xC18D;&#xB3C4; &#xCE68; &#xAC15; &#xBD84;&#xC11D; &#xD06C;&#xAE30; &#xC81C;&#xC678; HPLC&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xACB0;&#xC815; &#xBE44; &#xAD6C;&#xD615; &#xC774;&#xD569;&#xCCB4; &#xD615;&#xC131; (R(h) 7.6+/-0.2nm &#xBC0F; 6.9nm, &#xAC01;&#xAC01;). &#xACE0;&#xD574;&#xC0C1;&#xB3C4; &#xC6D0;&#xC790; &#xD798; &#xD604;&#xBBF8;&#xACBD;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xD3C9;&#xAC00; &#xD398;&#xB974;&#xC2DC; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778;&#xACFC; &#xB2E8;&#xC704;&#xCCB4;&#xC640; &#xD070; multimers &#xAD00;&#xCC30; &#xD588;&#xB2E4; &#xBE44;&#xB85D; &#xC774;&#xD569;&#xCCB4;&#xB85C; &#xC8FC;&#xB85C; &#xC778;&#xC2DD; &#xD588;&#xB2E4; &#xC720;&#xC5F0;&#xD55C; &#xB8E8;&#xD504;&#xC640; &#xBE44; &#xC120;&#xD615; &#xBE44;&#xB300;&#xCE6D; &#xAD6C;&#xC870; &#xBC1D;&#xD600;. &#xD30C;&#xB780;&#xC0C9;&#xB41C; &#xD558;&#xC704; &#xC18D;&#xB3C4; &#xCE68; &#xAC15; &#xACB0;&#xACFC; &#xC124;&#xBA85; &#xD558; &#xACE0; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xAC1C;&#xB150;&#xC801; &#xBAA8;&#xB378;&#xC744; &#xAC1C;&#xC120; &#xD558;&#xB294; &#xC608;&#xCE21;&#xB41C; &#xAD6C;&#xC870; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778;&#xC5D0; &#xD574;&#xB2F9; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. Freund&#xC758; &#xBCF4;&#xC870; &#xC81C;&#xB85C; &#xC720;&#xB3C4; &#xB41C; &#xD56D; &#xCCB4;&#xB97C; &#xBA74;&#xC5ED; &#xD615;&#xAD11; &#xBD84;&#xC11D; &#xACB0;&#xACFC; parasitized &#xC801;&#xD608;&#xAD6C;&#xC5D0; &#xB124;&#xC774;&#xD2F0;&#xBE0C; MSP3 &#xC778;&#xC2DD; &#xBC0F; &#xC900; Ecmsp3&#xC640; &#xBC31;&#xC2E0; &#xC811;&#xC885; P. falciparum FVO &#xBCC0;&#xD615; &#xB41C; &#xC545;&#xC131; &#xB3C4;&#xC804; &#xAC10;&#xC5FC;&#xC5D0;&#xC11C; Aotus &#xC6D0;&#xC22D;&#xC774;&#xC758; &#xADF8;&#xB8F9;&#xC5D0;&#xC11C; &#xCE58;&#xB8CC; &#xD558;&#xB294; &#xC2DC;&#xAC04;&#xC744; &#xC9C0;&#xC5F0;. 3 Ecmsp3&#xC640; &#xC77C;&#xACF1; &#xC6D0;&#xC22D;&#xC774;&#xC758; &#xB0AE;&#xC740; &#xD53C;&#xD06C; parasitemias&#xB97C; &#xD588;&#xB2E4;. &#xAC00;&#xB2A5;&#xC131;&#xC774; merozoite &#xD45C;&#xBA74;&#xC5D0; &#xC788;&#xB294; &#xB124;&#xC774;&#xD2F0;&#xBE0C; MSP3 &#xAD6C;&#xC870; &#xBAA8;&#xBC29;, EcMSP3 &#xC774;&#xC1A1; &#xB9D0;&#xB77C;&#xB9AC;&#xC544; &#xBC31;&#xC2E0;&#xC5D0; &#xD3EC;&#xD568;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC720;&#xB825;&#xD55C; &#xD6C4;&#xBCF4; &#xC774;&#xB2E4;.

&#xBCF4;&#xD638; &#xBCD1;&#xC6D0; &#xC131; &#xB300;&#xC7A5;&#xADE0;&#xC744; &#xD45C;&#xBA85; Plasmodium falciparum merozoite &#xD45C;&#xBA74; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; 3&#xC758; &#xBE44;-&#xC120;&#xD615;, &#xB2E4;&#xC911; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778; &#xAD6C;&#xC870;&#xB97C; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0C5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Inmunizaci&oacute;n con una levadura-expres&oacute; Plasmodium falciparum merozoito superficie prote&iacute;na recombinante 3 (MSP3) hab&iacute;a protegido Aotus nancymai monos contra una infecci&oacute;n virulenta desaf&iacute;o. Lamentablemente, el proceso de producci&oacute;n de este material expresado en levadura no era &oacute;ptimo para los ensayos en humanos. En un esfuerzo para producir una prote&iacute;na recombinante de MSP3 de manera escalable, expres&oacute; y hab&iacute;a purificada cerca-full-length MSP3 en Escherichia coli (EcMSP3). EcMSP3 purificada forman d&iacute;meros no globulares seg&uacute;n lo determinado por HPLC anal&iacute;tica de exclusi&oacute;n de tama&ntilde;o con la dispersi&oacute;n de la luz del multi-&aacute;ngulo en l&iacute;nea y sedimentaci&oacute;n de detecci&oacute;n y velocidad de dispersi&oacute;n de la luz cuasiel&aacute;sticas (R(h) 7.6+/-0.2nm y 6.9nm, respectivamente). Evaluaci&oacute;n por microscop&iacute;a de fuerza at&oacute;mica alta resoluci&oacute;n revel&oacute; no lineales estructuras asim&eacute;tricas, con cuentas de dominios y lazos flexibles que fueron reconocidos predominante como d&iacute;meros, aunque se observaron mon&oacute;meros y Mult&iacute;meros m&aacute;s grande. La subestructura de cuentas corresponde a dominios estructurales previstos, que explica los resultados de la sedimentaci&oacute;n de velocidad y mejora el modelo conceptual de la prote&iacute;na. Vacunaci&oacute;n con EcMSP3 de anticuerpos inducidos por adyuvante de Freund que reconocido MSP3 nativa en eritrocitos parasitados por un an&aacute;lisis de la inmunofluorescencia y dio hab&iacute;a retrasado el tiempo de tratamiento en un grupo de monos Aotus una infecci&oacute;n virulenta desaf&iacute;o con la cepa FVO de p. falciparum. Tres de los siete monos vacunados con EcMSP3 ten&iacute;an pico bajo parasitemias. EcMSP3, que es probable que imita la estructura nativa de MSP3 situada en la superficie de merozoito, es un candidato viable para su inclusi&oacute;n en una vacuna de la malaria multicomponente.

Caracterizaci&oacute;n de una protecci&oacute;n Escherichia coli-expres&oacute; Plasmodium falciparum merozoito prote&iacute;na superficial 3 indica una estructura no lineal, m&uacute;ltiples dominios.

&#x6076;&#x6027;&#x759F;&#x539F;&#x866B;&#x73AF;&#x5B50;&#x5B62;&#x5B50;&#x86CB;&#x767D; (CSP) &#x662F;&#x5173;&#x952E;&#x5B50;&#x5B62;&#x5B50;&#x529F;&#x80FD;&#x548C;&#x809D;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x5165;&#x4FB5;&#x3002;&#x9274;&#x4E8E;&#x5176;&#x5173;&#x952E;&#x7684;&#x6027;&#x8D28;&#xFF0C;&#x4E00;&#x4E2A;&#x9636;&#x6BB5;&#x4E09;&#x3001; &#x4EBA;&#x7C7B;&#x7684; CSP &#x759F;&#x75BE;&#x75AB;&#x82D7;&#x8BD5;&#x9A8C;&#x6B63;&#x5728;&#x8FDB;&#x884C;&#x3002;CSP &#x7531;&#x7EC4;&#x6210;&#x7684;&#x4E09;&#x4E2A;&#x533A;&#x57DF;&#xFF0C;&#x5982;&#x4E0B;&#x6240;&#x793A;&#xFF1A; &#x7ED1;&#x5B9A;&#x809D;&#x7D20;&#x786B;&#x9178;&#x86CB;&#x767D;&#x91A3; N &#x603B;&#x7AD9;&#xFF0C;&#x56DB;&#x4E2A;&#x6C28;&#x57FA;&#x9178;&#x91CD;&#x590D;&#x533A;&#x57DF; (NANP) &#x548C;&#x4E00;&#x4E2A;&#x5305;&#x542B;&#x6211;&#x91CD;&#x590D;&#x4E00;&#x904D; (TSR) &#x57DF;&#x8840;&#x5C0F;&#x677F;&#x53CD;&#x5E94;&#x7C7B;&#x4F3C;&#x7C7B;&#x578B;&#x7684; C &#x603B;&#x7AD9;&#x3002;CSP &#x7684;&#x91CD;&#x8981;&#x6027;&#xFF0C;&#x5C3D;&#x7BA1;&#x5F88;&#x5C11;&#x4E86;&#x89E3;&#x5176;&#x7ED3;&#x6784;&#x3002;&#x56E0;&#x6B64;&#xFF0C;&#x91CD;&#x7EC4;&#x5F62;&#x5F0F;&#x7684; CSP &#x6240;&#x4EA7;&#x751F;&#x5728;&#x8FD9;&#x4E24;&#x79CD;&#x5927;&#x80A0;&#x6746;&#x83CC; (Ec) &#x4E2D;&#x8868;&#x8FBE;&#xFF0C;&#x7136;&#x540E; refolded (EcCSP) &#x6216;&#x7532;&#x9187;&#x9175;&#x6BCD;&#x6BD5;&#x8D64;&#x9175;&#x6BCD; (PpCSP) &#x7684;&#x7ED3;&#x6784;&#x5206;&#x6790;&#x3002;&#x82E5;&#x8981;&#x5206;&#x6790;&#x91CD;&#x7EC4; CSP &#x7684; TSR &#x57DF;&#xFF0C;&#x786E;&#x5B9A;&#x4E86;&#x516C;&#x8BA4;&#x7684;&#x975E;&#x56FA;&#x5B9A;&#x7684;&#x759F;&#x539F;&#x866B;&#x866B;&#x5B50;&#x548C; HepG2 &#x7EC6;&#x80DE;&#x4F53;&#x5916;&#x6291;&#x5236;&#x5B50;&#x5B62;&#x5B50;&#x5165;&#x4FB5;&#x7684;&#x6784;&#x8C61;&#x4F9D;&#x8D56;&#x7684;&#x5355;&#x514B;&#x9686;&#x6297;&#x4F53;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x5355;&#x514B;&#x9686;&#x6297;&#x4F53;&#x786E;&#x8BA4;&#x6240;&#x6709;&#x91CD;&#x7EC4; Csp&#xFF0C;&#x91CD;&#x7EC4;&#x7684; Csp&#xFF0C;&#x8BE5;&#x503C;&#x6307;&#x793A;&#x90FD;&#x5305;&#x542B;&#x6B63;&#x786E;&#x6298;&#x53E0;&#x7684; TSR &#x57DF;&#x7ED3;&#x6784;&#x3002;EcCSP &#x548C; PpCSP &#x7684;&#x52A8;&#x6001;&#x5149;&#x6563;&#x5C04;&#x548C;&#x901F;&#x5EA6;&#x6C89;&#x6DC0;&#x8868;&#x5F81;&#x8868;&#x660E;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x9AD8;&#x5EA6;&#x6269;&#x5C55;&#x86CB;&#x767D;&#x51FA;&#x73B0;&#x7684;&#x4E24;&#x79CD;&#x5F62;&#x5F0F;&#x7684; CSP (R(h) 4.2 &#x548C; 4.58 nm&#xFF0C;&#x5206;&#x522B;)&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;&#x9AD8;&#x5206;&#x8FA8;&#x7387;&#x539F;&#x5B50;&#x529B;&#x663E;&#x5FAE;&#x955C;&#x663E;&#x793A;&#x7075;&#x6D3B;&#x3001; &#x68D2;&#x72B6;&#x7ED3;&#x6784;&#x4E0E;&#x529F;&#x80FD;&#x533A;&#x6837;&#x5916;&#x89C2;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x4F7F;&#x7528;&#x6B64;&#x4FE1;&#x606F;&#xFF0C;&#x5EFA;&#x6A21;&#x7684; NANP &#x91CD;&#x590D;&#x548C; TSR &#x57DF;&#x7684; CSP&#x3002;&#x7B26;&#x5408;&#x751F;&#x7269;&#x5316;&#x5B66;&#x548C;&#x751F;&#x7269;&#x7269;&#x7406;&#x7ED3;&#x679C;&#xFF0C;&#x91CD;&#x590D;&#x533A;&#x57DF;&#x5F62;&#x6210;&#x68D2;&#x72B6;&#x7ED3;&#x6784;&#x4E8E;&#x5927;&#x7EA6; 21 25 nm &#x5728;&#x957F;&#x5EA6;&#x548C; 1.5 nm &#x7684;&#x5BBD;&#x5EA6;&#x3002;&#x56E0;&#x6B64;&#x672C;&#x673A; CSP &#x663E;&#x793A;&#x4E3A;&#x808C;&#x9187;&#x3001; &#x7075;&#x6D3B;&#x7684;&#x68D2;&#x72B6;&#x86CB;&#x767D;&#x5B50;&#x5B62;&#x5B50;&#x8868;&#x9762;&#x4E0A;&#x3002;

&#x6076;&#x6027;&#x759F;&#x539F;&#x866B;&#x73AF;&#x5B50;&#x5B62;&#x5B50;&#x86CB;&#x767D;&#xFF0C;&#x9886;&#x5148;&#x7684;&#x759F;&#x75BE;&#x75AB;&#x82D7;&#x5019;&#x9009;&#x7684;&#x7ED3;&#x6784;&#x3002;

The Plasmodium falciparum circumsporozoite protein (CSP) is critical for sporozoite function and invasion of hepatocytes. Given its critical nature, a phase III human CSP malaria vaccine trial is ongoing. The CSP is composed of three regions as follows: an N terminus that binds heparin sulfate proteoglycans, a four amino acid repeat region (NANP), and a C terminus that contains a thrombospondin-like type I repeat (TSR) domain. Despite the importance of CSP, little is known about its structure. Therefore, recombinant forms of CSP were produced by expression in both Escherichia coli (Ec) and then refolded (EcCSP) or in the methylotrophic yeast Pichia pastoris (PpCSP) for structural analyses. To analyze the TSR domain of recombinant CSP, conformation-dependent monoclonal antibodies that recognized unfixed P. falciparum sporozoites and inhibited sporozoite invasion of HepG2 cells in vitro were identified. These monoclonal antibodies recognized all recombinant CSPs, indicating the recombinant CSPs contain a properly folded TSR domain structure. Characterization of both EcCSP and PpCSP by dynamic light scattering and velocity sedimentation demonstrated that both forms of CSP appeared as highly extended proteins (R(h) 4.2 and 4.58 nm, respectively). Furthermore, high resolution atomic force microscopy revealed flexible, rod-like structures with a ribbon-like appearance. Using this information, we modeled the NANP repeat and TSR domain of CSP. Consistent with the biochemical and biophysical results, the repeat region formed a rod-like structure about 21-25 nm in length and 1.5 nm in width. Thus native CSP appears as a glycosylphosphatidylinositol-anchored, flexible rod-like protein on the sporozoite surface.

Structure of the Plasmodium falciparum circumsporozoite protein, a leading malaria vaccine candidate.

La prot&eacute;ine de circumsporozo&iuml;te Plasmodium falciparum (CSP) est critique pour la fonction sporozo&iuml;te et invasion des h&eacute;patocytes. Compte tenu de sa nature essentielle, une phase III CSP paludisme vaccin humain du proc&egrave;s est en cours. Le CSP est ainsi compos&eacute; de trois r&eacute;gions : une extr&eacute;mit&eacute; N terminale qui lie l&#39;h&eacute;parine sulfate prot&eacute;oglycanes, un acide amin&eacute; quatre r&eacute;p&eacute;ter r&eacute;gion (PNNA) et un terminus de C qui contient un type de thrombospondine-comme je le r&eacute;p&egrave;te, domaine (TSR). Malgr&eacute; l&#39;importance du CSP, on conna&icirc;t sa structure. Par cons&eacute;quent, des formes recombinantes du CSP ont &eacute;t&eacute; produites par l&#39;expression dans les deux Escherichia coli (Ec) et puis repli&eacute; (EcCSP) ou dans la m&eacute;thylotrophes levure Pichia pastoris (PpCSP) pour les analyses structurelles. Pour analyser le domaine de la TSR du CSP recombinante, d&eacute;pendant de la conformation des anticorps monoclonaux qui reconnus non fix&eacute;es &agrave; P. falciparum sporozo&iuml;tes et invasion sporozo&iuml;te inhib&eacute; des cellules HepG2 in vitro ont &eacute;t&eacute; identifi&eacute;s. Ces anticorps monoclonaux reconnu tous les recombinant EFPC, indiquant l&#39;OPCS recombinantes contiennent une structure de domaine TSR correctement pli&eacute;e. Caract&eacute;risation de EcCSP et de PpCSP par s&eacute;dimentation dynamique de diffusion et de la vitesse lumi&egrave;re a d&eacute;montr&eacute; que les deux formes de CSP est apparu sous forme de prot&eacute;ines tr&egrave;s prolong&eacute;e (r (h) 4.2 et 4,58 nm, respectivement). En outre, microscopie &agrave; force atomique haute r&eacute;solution ont r&eacute;v&eacute;l&eacute; des structures flexibles, b&acirc;tonnet avec une apparence ruban&eacute;e. En utilisant cette information, nous avons mod&eacute;lis&eacute; la r&eacute;p&eacute;tition du PNNA et le domaine de la TSR du CSP. Compatible avec les r&eacute;sultats biochimiques et biophysiques, la r&eacute;gion de r&eacute;p&eacute;tition a form&eacute; une structure en forme de tige environ 21 &agrave; 25 nm de longueur et 1,5 nm de large. CSP native appara&icirc;t ainsi comme une prot&eacute;ine de b&acirc;tonnet ancr&eacute;es &agrave; un glycosylphosphatidylinositol, flexible sur la surface de sporozo&iuml;tes.

Structure de la prot&eacute;ine circumsporozo&iuml;te falciparum de Plasmodium, un premier candidat-vaccin contre le paludisme.

Das Plasmodium Falciparum Circumsporozoite Protein (LSP) ist entscheidend f&uuml;r die Sporozoite Funktion und Invasion der Hepatozyten. Angesichts seiner kritischen Art, ist eine Phase III menschliche CSP Malaria Impfstudie laufenden. Die CSP besteht aus drei Regionen wie folgt: ein Amino-Terminus, die Heparin-Sulfat Proteoglykane bindet, einer vier Aminos&auml;ure wiederholen, Region (NANP) und eine Carboxyl-Terminus, die einen Thrombospondin-wie-Typ, ich wiederhole (TSR) Dom&auml;ne enth&auml;lt. Trotz der Bedeutung der CSP ist wenig bekannt &uuml;ber seine Struktur. Daher rekombinante Formen der CSP wurden von Ausdruck in beiden Escherichia coli (EG) produziert und dann refaltet (EcCSP) oder in die METHYLOTROPHE Hefe Pichia Pastoris (PpCSP) f&uuml;r strukturmechanische Analysen. Um die TSR-Dom&auml;ne des rekombinanten CSP zu analysieren, wurden Konformation abh&auml;ngigen monoklonale Antik&ouml;rper, die nicht fixierten p. Falciparum Sporozoites und HepG2-Zellen in vitro gehemmt Sporozoite Invasion erkannt identifiziert. Diese monoklonalen Antik&ouml;rper erkannt, alle rekombinante CSPs, Angabe der rekombinanten CSPs enthalten eine richtig gefaltete TSR-Dom&auml;nenstruktur. Charakterisierung von EcCSP und PpCSP durch dynamisches Licht Streuung und Geschwindigkeit Sedimentation zeigte, dass beide Formen der CSP als stark erweiterte Proteine erschien (R(h) 4.2 und 4.58 nm, beziehungsweise). Dar&uuml;ber hinaus ergab hohe Aufl&ouml;sung Rasterkraftmikroskopie flexible, Stab-wie Strukturen mit eine Multifunktionsleiste aussehen. Anhand dieser Informationen modelliert wir der NANP Wiederholung und TSR-Gebiet der CSP. In &Uuml;bereinstimmung mit den biochemischen und biophysikalischen Ergebnisse, Wiederholbereich bildete sich eine Stab-Struktur etwa 21-25 nm L&auml;nge und 1,5 nm breit. Somit scheint die native CSP als Glykosylphosphatidyl verankert, flexible Stange-wie Protein auf der Oberfl&auml;che Sporozoite.

Struktur des Plasmodium Falciparum Circumsporozoite Protein, ein f&uuml;hrender Malaria-Impfstoff-Kandidat.

La proteina di circumsporozoite di Plasmodium falciparum (CSP) &egrave; critica per la funzione sporozoite e invasione degli epatociti. Data la sua natura critica, una fase III umana CSP malaria vaccino &egrave; in corso. Il CSP &egrave; composto di tre regioni come segue: N terminale che associa eparina proteoglicani dei solfato, un aminoacido quattro ripetere regione (NANP) e un terminus di C che contiene un tipo trombospondina-come ripetere il dominio (TSR). Nonostante l&#39;importanza del CSP, poco si sa sulla sua struttura. Pertanto, forme ricombinante del CSP sono state prodotte dall&#39;espressione in entrambi Escherichia coli (Ec) e poi ripiegato (EcCSP) o nel methylotrophic lievito Pichia pastoris (PpCSP) per analisi strutturali. Per analizzare il dominio TSR di CSP ricombinante, sono stati identificati anticorpi monoclonali dipendente dalla conformazione che riconosciuto sporozoiti unfixed p. falciparum e inibito sporozoite invasione delle cellule HepG2 in vitro. Questi anticorpi monoclonali riconosciuto tutti ricombinante CSP, che indica il CSP ricombinante contengono una struttura di dominio correttamente piegata TSR. Caratterizzazione di EcCSP e di PpCSP dal dynamic light scattering e velocit&agrave; sedimentazione ha dimostrato che entrambe le forme di CSP &egrave; apparso come proteine altamente estese (R(h) 4.2 e 4,58 nm, rispettivamente). Inoltre, microscopia a forza atomica ad alta risoluzione rivela flessibile, asta-come le strutture con un nastro-come l&#39;apparenza. Utilizzando queste informazioni, abbiamo modellato il NANP repeat e dominio TSR di CSP. Coerente con i risultati biochimici e biofisici, regione di ripetizione formata una struttura simil-asta circa 21-25 nm di lunghezza e 1,5 nm di larghezza. Cos&igrave; nativo CSP appare come una proteina simil-asta flessibile, ancorata glicosilfosfatidilinositolo sulla superficie sporozoite.

Struttura della proteina circumsporozoite Plasmodium falciparum, un leader candidato vaccino contro la malaria.

&#x30DE;&#x30E9;&#x30EA;&#x30A2;&#x539F;&#x866B;&#x71B1;&#x5E2F;&#x71B1;&#x30DE;&#x30E9;&#x30EA;&#x30A2;&#x539F;&#x866B; circumsporozoite &#x86CB;&#x767D;&#x8CEA; (CSP) &#x306E;&#x30B9;&#x30DD;&#x30ED;&#x30BE;&#x30A4;&#x30C8;&#x95A2;&#x6570;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x809D;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x6D78;&#x6F64;&#x306B;&#x4E0D;&#x53EF;&#x6B20;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x305D;&#x306E;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x6027;&#x8CEA;&#x3092;&#x8003;&#x3048;&#x308B;&#x3068;&#x3001;&#x30D5;&#x30A7;&#x30FC;&#x30BA; III &#x4EBA;&#x9593; CSP &#x30DE;&#x30E9;&#x30EA;&#x30A2; &#x30EF;&#x30AF;&#x30C1;&#x30F3;&#x8A66;&#x9A13;&#x304C;&#x9032;&#x884C;&#x4E2D;&#x3067;&#x3059;&#x3002;CSP &#x306F;&#x6B21;&#x306E;&#x3068;&#x304A;&#x308A; 3 &#x306E;&#x9818;&#x57DF;&#x3067;&#x69CB;&#x6210;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;: &#x30D8;&#x30D1;&#x30EA;&#x30F3;&#x786B;&#x9178;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C6;&#x30AA;&#x30B0;&#x30EA;&#x30AB;&#x30F3; &#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C9;&#x3057;&#x307E;&#x3059; N &#x672B;&#x7AEF;&#x3001;4 &#x3064;&#x306E;&#x30A2;&#x30DF;&#x30CE;&#x9178;&#x3092;&#x7E70;&#x308A;&#x8FD4;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x5730;&#x57DF; (NANP) &#x3068; (TSR) &#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x3092;&#x7E70;&#x308A;&#x8FD4;&#x3057;&#x3066;&#x30C8;&#x30ED;&#x30F3;&#x30DC;&#x30B9;&#x30DD;&#x30F3;&#x30B8;&#x30F3;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306A;&#x578B;&#x304C;&#x542B;&#x307E;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B; C &#x672B;&#x7AEF;&#x3002;CSP &#x306E;&#x91CD;&#x8981;&#x6027;&#x306B;&#x3082;&#x304B;&#x304B;&#x308F;&#x3089;&#x305A;&#x3001;&#x307B;&#x3068;&#x3093;&#x3069;&#x305D;&#x306E;&#x69CB;&#x9020;&#x306B;&#x3064;&#x3044;&#x3066;&#x77E5;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3002;&#x3057;&#x305F;&#x304C;&#x3063;&#x3066;&#x3001;CSP &#x306E;&#x7D44;&#x63DB;&#x3048;&#x30D5;&#x30A9;&#x30FC;&#x30E0;&#x5F0F;&#x4E21;&#x65B9;&#x5927;&#x8178;&#x83CC; (Ec) &#x3067;&#x751F;&#x7523;&#x3055;&#x308C;&#x3001;(EcCSP) &#x3092; refolded &#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x30E1;&#x30C1;&#x30ED;&#x30C8;&#x30ED;&#x30FC;&#x30D5;&#x9175;&#x6BCD; Pichia &#x7D44;&#x6210;&#x5206;&#x6790; (PpCSP) &#x69CB;&#x9020;&#x89E3;&#x6790;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x3002;&#x7D44;&#x63DB;&#x3048; CSP &#x306E; TSR &#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x3092;&#x5206;&#x6790;&#x3059;&#x308B;&#x306B;&#x306F;&#x3001;&#x672A;&#x56FA;&#x5B9A;&#x306E;&#x30DE;&#x30E9;&#x30EA;&#x30A2;&#x306E;&#x30B9;&#x30DD;&#x30ED;&#x30BE;&#x30A4;&#x30C8;&#x3068;&#x6291;&#x5236;&#x30B9;&#x30DD;&#x30ED;&#x30BE;&#x30A4;&#x30C8;&#x4FB5;&#x7565; HepG2 &#x7D30;&#x80DE;&#x306E; in vitro &#x306E;&#x8A8D;&#x8B58;&#x69CB;&#x9020;&#x4F9D;&#x5B58;&#x6027;&#x30E2;&#x30CE;&#x30AF;&#x30ED;&#x30FC;&#x30CA;&#x30EB;&#x6297;&#x4F53;&#x304C;&#x540C;&#x5B9A;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x30E2;&#x30CE;&#x30AF;&#x30ED;&#x30FC;&#x30CA;&#x30EB;&#x6297;&#x4F53;&#x306F;&#x3059;&#x3079;&#x3066;&#x7D44;&#x63DB;&#x3048;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x7D44;&#x63DB;&#x3048; Csp &#x3092;&#x793A;&#x3059;&#x306E; Csp &#x304C;&#x6B63;&#x3057;&#x304F;&#x6298;&#x308A;&#x7573;&#x307E;&#x308C;&#x305F; TSR &#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x69CB;&#x9020;&#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x8A8D;&#x8B58;&#x3002;&#x52D5;&#x7684;&#x5149;&#x6563;&#x4E71;&#x3068;&#x901F;&#x5EA6;&#x6C88;&#x964D;&#x306B;&#x3088;&#x308B; EcCSP &#x3068; PpCSP &#x306E;&#x4E21;&#x65B9;&#x306E;&#x8A55;&#x4FA1;&#x304C;&#x5B9F;&#x8A3C; CSP &#x306E;&#x4E21;&#x65B9;&#x306E;&#x5F62;&#x5F0F;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x9AD8;&#x3044;&#x62E1;&#x5F35;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x3092;&#x767B;&#x5834; &#xFF08;R(h) 4.2 &#x3068; 4.58 nm&#x3001;&#x305D;&#x308C;&#x305E;&#x308C;)&#x3002;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x3001;&#x9AD8;&#x5206;&#x89E3;&#x80FD;&#x539F;&#x5B50;&#x9593;&#x529B;&#x9855;&#x5FAE;&#x93E1;&#x306F;&#x30EA;&#x30DC;&#x30F3;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306A;&#x5916;&#x89B3;&#x3092;&#x6301;&#x3064;&#x67D4;&#x8EDF;&#x306A;&#x30ED;&#x30C3;&#x30C9;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306A;&#x69CB;&#x9020;&#x3092;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x60C5;&#x5831;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x3001;NANP &#x30EA;&#x30D4;&#x30FC;&#x30C8;&#x3068; CSP &#x306E; TSR &#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x3092;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x5316;&#x3002;&#x30EA;&#x30D4;&#x30FC;&#x30C8;&#x9818;&#x57DF;&#x306E;&#x4E00;&#x8CAB;&#x6027;&#x306E;&#x3042;&#x308B;&#x751F;&#x5316;&#x5B66;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x751F;&#x7269;&#x7406;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x306F;&#x3001;&#x7D50;&#x6210;&#x68D2;&#x72B6;&#x69CB;&#x9020;&#x306B;&#x3064;&#x3044;&#x3066; 21 25 nm &#x306E;&#x9577;&#x3055;&#x3068; 1.5 nm &#x306E;&#x5E45;&#x3002;&#x3057;&#x305F;&#x304C;&#x3063;&#x3066;&#x30CD;&#x30A4;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6; CSP &#x4E00;&#x7A2E;&#x30A2;&#x30F3;&#x30AB;&#x30FC;&#x3001;&#x67D4;&#x8EDF;&#x68D2;&#x72B6;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x30B9;&#x30DD;&#x30ED;&#x30BE;&#x30A4;&#x30C8;&#x8868;&#x9762;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x8868;&#x793A;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x4E3B;&#x8981;&#x306A;&#x30DE;&#x30E9;&#x30EA;&#x30A2; &#x30EF;&#x30AF;&#x30C1;&#x30F3;&#x5019;&#x88DC;&#x30DE;&#x30E9;&#x30EA;&#x30A2;&#x539F;&#x866B;&#x71B1;&#x5E2F;&#x71B1;&#x30DE;&#x30E9;&#x30EA;&#x30A2;&#x539F;&#x866B; circumsporozoite &#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x306E;&#x69CB;&#x9020;&#x3002;

Plasmodium falciparum circumsporozoite &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; (CSP)&#xC740; sporozoite &#xAE30;&#xB2A5;&#xACFC; hepatocytes&#xC758; &#xCE68;&#xACF5;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC911;&#xC694; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xADF8;&#xAC83;&#xC758; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xC131;&#xACA9;&#xC744; &#xAC10;&#xC548;&#xD560; &#xB54C;, &#xB2E8;&#xACC4; III &#xC778;&#xAC04;&#xC758; CSP &#xB9D0;&#xB77C;&#xB9AC;&#xC544; &#xBC31;&#xC2E0; &#xC608; &#xC2EC; &#xC9C4;&#xD589; &#xC911; &#xC774;&#xB2E4;. CSP &#xC138; &#xC9C0;&#xC5ED; &#xB2E4;&#xC74C;&#xACFC; &#xAC19;&#xC774; &#xAD6C;&#xC131; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;: &#xD5E4; &#xD30C; &#xB9B0; &#xD669;&#xC0B0; proteoglycans &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xD558;&#xB294; N &#xB9D0;&#xB2E8;, 4 &#xAC1C;&#xC758; &#xC544;&#xBBF8;&#xB178;&#xC0B0; &#xBC18;&#xBCF5; &#xC601;&#xC5ED; (NANP) &#xBC0F; &#xBC18;&#xBCF5; (TSR) &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778; thrombospondin &#xAC19;&#xC740; &#xD615;&#xC2DD;&#xC744; &#xD3EC;&#xD568; &#xD558;&#xB294; C &#xB9D0;&#xB2E8;. CSP&#xC758; &#xC911;&#xC694;&#xC131;&#xC5D0;&#xB3C4; &#xBD88;&#xAD6C; &#xD558; &#xACE0; &#xC57D;&#xAC04;&#xC758; &#xAD6C;&#xC870;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC54C;&#xB824;&#xC838; &#xC788;&#xB2E4;. &#xB530;&#xB77C;&#xC11C; CSP &#xC7AC;&#xC870;&#xD569; &#xD615;&#xD0DC;&#xC758; &#xC2DD; &#xBAA8;&#xB450; &#xB300;&#xC7A5;&#xADE0; (Ec)&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC0DD;&#xC131; &#xD558; &#xACE0; &#xB2E4;&#xC74C; refolded (EcCSP) &#xB610;&#xB294; methylotrophic &#xD6A8; &#xBAA8; Pichia pastoris &#xAD6C;&#xC870; &#xBD84;&#xC11D; (PpCSP). &#xC7AC;&#xC870;&#xD569; CSP&#xC758; TSR &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778; &#xBD84;&#xC11D;, &#xACE0;&#xC815; &#xB418;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC740; P. falciparum sporozoites &#xC800;&#xD574; sporozoite &#xCE68;&#xD574; HepG2 &#xC138;&#xD3EC; &#xC0DD;&#xCCB4; &#xC678;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC778;&#xC815; &#xD558;&#xB294; &#xB098; &#xB780; &#xC885;&#xC18D; &#xB2E8;&#xC77C; &#xD074;&#xB860; &#xD56D; &#xCCB4; &#xBC1C;&#xACAC; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC774; &#xB2E8;&#xC77C; &#xD074;&#xB860; &#xD56D; &#xCCB4; &#xC81C;&#xB300;&#xB85C; &#xC811;&#xD78C;&#xB41C; TSR &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778; &#xAD6C;&#xC870;&#xB97C; &#xD3EC;&#xD568; &#xD558;&#xB294; &#xBAA8;&#xB4E0; &#xC7AC;&#xC870;&#xD569; Csp, &#xC7AC;&#xC870;&#xD569; Csp&#xB97C; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0B4;&#xB294; &#xC778;&#xC2DD; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB3D9;&#xC801; &#xAD11; &#xC0B0;&#xB780; &#xBC0F; &#xC18D;&#xB3C4; &#xCE68; &#xAC15;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; Eccsp&#xC640; Ppcsp&#xC758; &#xD2B9;&#xC131;&#xD654; &#xC2DC;&#xC5F0; CSP&#xC758; &#xB450; &#xD615;&#xD0DC;&#xC758; &#xB9E4;&#xC6B0; &#xD655;&#xC7A5; &#xB41C; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC73C;&#xB85C; &#xB4F1;&#xC7A5; (R(h) 4.2&#xC640; 4.58 nm, &#xAC01;&#xAC01;). &#xB610;&#xD55C;, &#xACE0;&#xD574;&#xC0C1;&#xB3C4; &#xC6D0;&#xC790; &#xD798; &#xD604;&#xBBF8;&#xACBD; &#xB9AC;&#xBCF8; &#xBAA8;&#xC591;&#xC758; &#xC678;&#xAD00;&#xC73C;&#xB85C; &#xC720;&#xC5F0; &#xD558; &#xACE0;, &#xB9C9;&#xB300; &#xBAA8;&#xC591;&#xC758; &#xAD6C;&#xC870;&#xB97C; &#xBC1D;&#xD614;&#xB2E4;. &#xC774; &#xC815;&#xBCF4;&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC;, &#xC6B0;&#xB9AC; NANP &#xBC18;&#xBCF5; &#xBC0F; CSP&#xC758; TSR &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778; &#xBAA8;&#xB378;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC0DD;&#xD654;&#xD559; &#xBC0F; &#xC0DD;&#xBB3C; &#xB9AC; &#xACB0;&#xACFC;&#xC640; &#xC77C;&#xCE58;, &#xBC18;&#xBCF5; &#xC601;&#xC5ED;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xB9C9;&#xB300; &#xBAA8;&#xC591;&#xC758; &#xAD6C;&#xC870;&#xB97C; &#xD615;&#xC131; 21-25 nm &#xAE38;&#xC774;&#xC640; 1.5 nm &#xD3ED;&#xC5D0;&#xC11C;. &#xB530;&#xB77C;&#xC11C; &#xAE30;&#xBCF8; CSP sporozoite &#xD45C;&#xBA74;&#xC5D0; glycosylphosphatidylinositol &#xC815;&#xBC15;, &#xC720;&#xC5F0;&#xD55C; &#xB9C9;&#xB300; &#xBAA8;&#xC591;&#xC758; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC73C;&#xB85C; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0A9;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xCD5C;&#xACE0;&#xC758; &#xB9D0;&#xB77C;&#xB9AC;&#xC544; &#xBC31;&#xC2E0; &#xD6C4;&#xBCF4; Plasmodium falciparum circumsporozoite &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xAD6C;&#xC870;.

La prote&iacute;na de circumsporozoite de Plasmodium falciparum (CSP) es fundamental para la funci&oacute;n de esporozoito y la invasi&oacute;n de los hepatocitos. Dado su car&aacute;cter cr&iacute;tico, una fase III humana CSP la vacuna juicio est&aacute; en curso. El CSP se compone de tres regiones como sigue: una N-terminal que une proteoglicanos de sulfato de heparina, un amino&aacute;cido cuatro repetir regi&oacute;n (NANP) y una terminal de C que contiene un tipo de Trombospondina-como repito dominio (TSR). A pesar de la importancia de la CSP, poco se sabe sobre su estructura. Por lo tanto, formas recombinantes de CSP fueron producidas por la expresi&oacute;n en ambos Escherichia coli (Ec) y luego volver a plegarlo (EcCSP) o en la levadura metilotr&oacute;fica Pichia pastoris (PpCSP) para el an&aacute;lisis estructurales. Para analizar el dominio de la TSR de CSP recombinante, se identificaron anticuerpos monoclonales de conformaci&oacute;n-dependiente que reconoce los esporozoitos no fijadas por p. falciparum y esporozoito inhibido invasi&oacute;n de c&eacute;lulas HepG2 in vitro. Estos anticuerpos monoclonales reconocido todos recombinante CSP, indicando los CSP recombinantes contienen una estructura de dominio correctamente doblada de TSR. Caracterizaci&oacute;n de EcCSP y PpCSP por sedimentaci&oacute;n de dispersi&oacute;n y velocidad luz din&aacute;mica demostr&oacute; que ambas formas de CSP aparec&iacute;an como prote&iacute;nas altamente extendidas (R(h) 4.2 y 4.58 nm, respectivamente). Adem&aacute;s, microscop&iacute;a de fuerza at&oacute;mica de alta resoluci&oacute;n revelaron las estructuras flexibles, barra-como con un aspecto similar de la cinta. Con esta informaci&oacute;n, modelamos la repetici&oacute;n NANP y dominio TSR de CSP. De acuerdo con los resultados bioqu&iacute;micos y biof&iacute;sicos, la regi&oacute;n de repetici&oacute;n formado una estructura de barra-como sobre 21-25 nm de longitud y 1,5 nm de ancho. CSP nativo aparece as&iacute; como una prote&iacute;na glicosilfosfatidilinositol anclada, flexible de la barra-como en la superficie de esporozoito.

Estructura de la prote&iacute;na circumsporozoite de Plasmodium falciparum, un candidato principal de la vacuna de la malaria.

La disponibilit&agrave; di nutrienti influenza la crescita cellulare e la sopravvivenza interessando la trascrizione del gene. I glucocorticoidi anche influenzano la trascrizione del gene e hanno diverse attivit&agrave; sulla crescita cellulare, dispendio energetico e la sopravvivenza. Abbiamo trovato che la crescita arresto specifico 5 (Gas5) non codificante RNA, che &egrave; abbondante nelle cellule la cui crescita &egrave; stato arrestato a causa della mancanza di nutrienti o fattori di crescita, sensibilizzato le cellule all&#39;apoptosi sopprimendo induzione glucocorticoide-mediata di diversi geni sensibili, compresa quella codifica cellulare inibitore dell&#39;apoptosi 2. Gas5 associato al dominio DNA-binding del recettore glucocorticoidi (GR) agendo come un elemento di risposta ai glucocorticoidi decoy (GRE), cos&igrave; in competizione con DNA GREs per l&#39;associazione al GR. Concludiamo che Gas5 &egrave; un &quot;riborepressor&quot; di GR, che influenzano la sopravvivenza delle cellule e attivit&agrave; metaboliche durante fame modulando l&#39;attivit&agrave; trascrizionale di GR.

Gas5 di RNA non codificante &egrave; un repressore arresto e fame associati crescita del recettore glucocorticoide.

Die Verf&uuml;gbarkeit von N&auml;hrstoffen beeinflusst zellul&auml;ren Wachstum und &Uuml;berleben durch Einwirkung auf Gen-Transkription. Glukokortikoide auch gen-Transkription zu beeinflussen und haben diverse Aktivit&auml;ten auf Zellwachstum, Energieverbrauch und &uuml;berleben. Wir fanden, dass das Wachstum Verhaftung-spezifische 5 (Gas5) nichtkodierende RNA, die reichlich in den Zellen ist deren Wachstum wegen des Mangels an N&auml;hrstoffen oder Wachstumsfaktoren festgenommen wurde, Zellen zum Apoptosis sensibilisiert durch die Unterdr&uuml;ckung von Glukokortikoid-vermittelte Induktion der mehrere Gene reagieren, einschlie&szlig;lich der zellul&auml;ren Inhibitor der Apoptose-2-Codierung. Gas5 gebunden an der DNA-bindenden Dom&auml;ne von der Glucocorticoid-Rezeptor (GR) durch das fungieren als ein K&ouml;der Glucocorticoid Response-Element (GRE), damit im Wettbewerb mit DNA GREs f&uuml;r die Bindung an die GR. Wir schlie&szlig;en, dass Gas5 eine &quot;Riborepressor&quot; der GR, beeinflussen Zelle &uuml;berleben und die metabolischen Aktivit&auml;ten w&auml;hrend Hunger durch Modulation die transkriptionelle Aktivit&auml;t der GR.

Nichtkodierende RNA-gas5 ist ein Wachstum Verhaftung und Hunger-assoziierte Verdr&auml;nger von der Glucocorticoid-Rezeptor.

&#x8425;&#x517B;&#x7269;&#x5F71;&#x54CD;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x751F;&#x957F;&#x548C;&#x5B58;&#x6D3B;&#x7684;&#x5F71;&#x54CD;&#x57FA;&#x56E0;&#x8F6C;&#x5F55;&#x3002;&#x7CD6;&#x76AE;&#x8D28;&#x6FC0;&#x7D20;&#x4E5F;&#x5F71;&#x54CD;&#x57FA;&#x56E0;&#x8F6C;&#x5F55;&#x548C;&#x6709;&#x5404;&#x79CD;&#x5404;&#x6837;&#x7684;&#x6D3B;&#x52A8;&#xFF0C;&#x5BF9;&#x7EC6;&#x80DE;&#x751F;&#x957F;&#x3001; &#x80FD;&#x91CF;&#x6D88;&#x8017;&#x548C;&#x751F;&#x5B58;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x53D1;&#x73B0;&#x975E;&#x589E;&#x957F;&#x902E;&#x6355;&#x7279;&#x5B9A; 5 &#xFF08;Gas5&#xFF09; &#x7F16;&#x7801; RNA&#xFF0C;&#x8FD9;&#x662F;&#x5728;&#x5176;&#x589E;&#x957F;&#x5DF2;&#x88AB;&#x902E;&#x6355;&#xFF0C;&#x7531;&#x4E8E;&#x7F3A;&#x5C11;&#x517B;&#x5206;&#x6216;&#x751F;&#x957F;&#x56E0;&#x5B50;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E30;&#x5BCC;&#xFF0C;&#x901A;&#x8FC7;&#x6291;&#x5236;&#x4ECB;&#x5BFC;&#x7CD6;&#x76AE;&#x8D28;&#x6FC0;&#x7D20;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x7684;&#x51E0;&#x4E2A;&#x654F;&#x611F;&#x57FA;&#x56E0;&#xFF0C;&#x5176;&#x4E2D;&#x5305;&#x62EC;&#x7F16;&#x7801; 2 &#x51CB;&#x4EA1;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6291;&#x5236;&#x5242;&#x81F4;&#x654F;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x51CB;&#x4EA1;&#x3002;Gas5 &#x7ED1;&#x5B9A;&#x5230;&#x5145;&#x5F53;&#x8BF1;&#x9975;&#x7CD6;&#x76AE;&#x8D28;&#x6FC0;&#x7D20;&#x53CD;&#x5E94;&#x5143;&#x4EF6; (GRE) &#x7684;&#x7CD6;&#x76AE;&#x8D28;&#x6FC0;&#x7D20;&#x53D7;&#x4F53; (GR) &#x7684; DNA &#x7ED3;&#x5408;&#x57DF;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x5230; GR &#x56E0;&#x6B64;&#x7ADE;&#x4E89;&#x4E0E; DNA &#x82B1;&#x7816;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x5F97;&#x51FA;&#x7ED3;&#x8BBA; Gas5 &#x662F;&quot;riborepressor&quot;&#x7684; GR&#xFF0C;&#x9965;&#x997F;&#x671F;&#x95F4;&#x5F71;&#x54CD;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5B58;&#x6D3B;&#x548C;&#x4EE3;&#x8C22;&#x6D3B;&#x52A8;&#xFF0C;&#x901A;&#x8FC7;&#x8C03;&#x8282;&#x8F6C;&#x5F55;&#x6D3B;&#x6027;&#x7684; GR&#x3002;

&#x975E;&#x7F16;&#x7801; RNA gas5 &#x662F;&#x963B;&#x904F;&#x589E;&#x957F;&#x902E;&#x6355;&#x548C;&#x9965;&#x997F;&#x76F8;&#x5173;&#x7269;&#x7684;&#x7CD6;&#x76AE;&#x8D28;&#x6FC0;&#x7D20;&#x53D7;&#x4F53;&#x3002;

The availability of nutrients influences cellular growth and survival by affecting gene transcription. Glucocorticoids also influence gene transcription and have diverse activities on cell growth, energy expenditure, and survival. We found that the growth arrest-specific 5 (Gas5) noncoding RNA, which is abundant in cells whose growth has been arrested because of lack of nutrients or growth factors, sensitized cells to apoptosis by suppressing glucocorticoid-mediated induction of several responsive genes, including the one encoding cellular inhibitor of apoptosis 2. Gas5 bound to the DNA-binding domain of the glucocorticoid receptor (GR) by acting as a decoy glucocorticoid response element (GRE), thus competing with DNA GREs for binding to the GR. We conclude that Gas5 is a "riborepressor" of the GR, influencing cell survival and metabolic activities during starvation by modulating the transcriptional activity of the GR.

Noncoding RNA gas5 is a growth arrest- and starvation-associated repressor of the glucocorticoid receptor.

La disponibilit&eacute; des &eacute;l&eacute;ments nutritifs influe sur la croissance cellulaire et la survie en agissant sur la transcription du g&egrave;ne. Glucocortico&iuml;des &eacute;galement influer sur la transcription des g&egrave;nes et ont diverses activit&eacute;s sur la croissance cellulaire, d&eacute;pense &eacute;nerg&eacute;tique et la survie. Nous avons constat&eacute; que la croissance arrestation-5 (Gas5) non codantes ARN sp&eacute;cifiques, qui est abondant dans les cellules dont la croissance a &eacute;t&eacute; arr&ecirc;t&eacute;e &agrave; cause du manque d&#39;&eacute;l&eacute;ments nutritifs ou de facteurs de croissance, sensibilis&eacute;s &agrave; l&#39;apoptose des cellules en supprimant l&#39;induction glucocortico&iuml;de par de plusieurs g&egrave;nes sensibles, dont celle d&#39;encodage cellulaire inhibiteur de l&#39;apoptose 2. Gas5 li&eacute; au domaine de liaison &agrave; l&#39;ADN du r&eacute;cepteur des glucocortico&iuml;des (GR) en agissant comme un &eacute;l&eacute;ment de r&eacute;ponse aux glucocortico&iuml;des leurre (GRE), donc en comp&eacute;tition avec ADN GREs pour se lier &agrave; la GR. Nous concluons que le Gas5 est un &laquo; riborepressor &raquo; de la GR, influen&ccedil;ant la survie cellulaire et m&eacute;tabolisme durant le je&ucirc;ne en modulant l&#39;activit&eacute; transcriptionnelle de la GR.

Non codantes RNA gas5 est un r&eacute;presseur arrestation et famine-associ&eacute;e de croissance du r&eacute;cepteur glucocortico&iuml;de.

&#x6804;&#x990A;&#x7D20;&#x306E;&#x53EF;&#x7528;&#x6027;&#x306F;&#x3001;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x8EE2;&#x5199;&#x306B;&#x5F71;&#x97FF;&#x3092;&#x4E0E;&#x3048;&#x308B;&#x3001;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x5897;&#x6B96;&#x3068;&#x751F;&#x5B58;&#x306B;&#x5F71;&#x97FF;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30B0;&#x30EB;&#x30B3;&#x30B3;&#x30EB;&#x30C1;&#x30B3;&#x30A4;&#x30C9;&#x306F;&#x307E;&#x305F;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x8EE2;&#x5199;&#x306B;&#x5F71;&#x97FF;&#x3092;&#x4E0E;&#x3048;&#x308B;&#x3057;&#x3001;&#x7D30;&#x80DE;&#x5897;&#x6B96;&#x3001;&#x30A8;&#x30CD;&#x30EB;&#x30AE;&#x30FC;&#x6D88;&#x8CBB;&#x91CF;, &#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x751F;&#x5B58;&#x306E;&#x591A;&#x69D8;&#x306A;&#x6D3B;&#x52D5;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005; &#x306F;&#x305D;&#x306E;&#x6210;&#x9577;&#x306E;&#x6804;&#x990A;&#x7D20;&#x3084;&#x6210;&#x9577;&#x56E0;&#x5B50;&#x306E;&#x4E0D;&#x8DB3;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x902E;&#x6355;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x7D30;&#x80DE;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x8C4A;&#x5BCC;&#x306A;&#x6210;&#x9577;&#x902E;&#x6355;&#x56FA;&#x6709; 5 (Gas5) &#x975E;&#x30B3;&#x30FC;&#x30C9; RNA &#x3092;&#x7D30;&#x80DE;&#x30A2;&#x30DD;&#x30C8;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9;&#x306B;&#x30B0;&#x30EB;&#x30B3;&#x30B3;&#x30EB;&#x30C1;&#x30B3;&#x30A4;&#x30C9;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x305F;&#x8A98;&#x5C0E;&#x30A2;&#x30DD;&#x30C8;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9; 2 &#x7D30;&#x80DE;&#x30A4;&#x30F3;&#x30D2;&#x30D3;&#x30BF;&#x30FC;&#x306E;&#x30A8;&#x30F3;&#x30B3;&#x30FC;&#x30C7;&#x30A3;&#x30F3;&#x30B0;&#x306E; 1 &#x3064;&#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x3044;&#x304F;&#x3064;&#x304B;&#x306E;&#x5FDC;&#x7B54;&#x6027;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x6291;&#x5236;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x611F;&#x4F5C;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x898B;&#x3064;&#x304B;&#x308A;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;Gas5 &#x306F;&#x3001;&#x6F14;&#x6280;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x304A;&#x3068;&#x308A;&#x30B0;&#x30EB;&#x30B3;&#x30B3;&#x30EB;&#x30C1;&#x30B3;&#x30A4;&#x30C9;&#x5FDC;&#x7B54;&#x8981;&#x7D20; (GRE) &#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x30B0;&#x30EB;&#x30B3;&#x30B3;&#x30EB;&#x30C1;&#x30B3;&#x30A4;&#x30C9;&#x30EC;&#x30BB;&#x30D7;&#x30BF;&#x30FC; (GR) &#x306E; DNA &#x7D50;&#x5408;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x306B;&#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C9;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3001;&#x3053;&#x3046;&#x3057;&#x3066; DNA GREs &#x3068; GR &#x3078;&#x306E;&#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C7;&#x30A3;&#x30F3;&#x30B0;&#x306E;&#x7AF6;&#x5408;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005; &#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x751F;&#x5B58;&#x3068;&#x4EE3;&#x8B1D;&#x6D3B;&#x6027;&#x306B;&#x5F71;&#x97FF;&#x306E;&#x9593;&#x306B;&#x98E2;&#x9913; GR &#x306E;&#x8EE2;&#x5199;&#x6D3B;&#x6027;&#x3092;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x3001;GR Gas5&quot;riborepressor&quot;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3068;&#x7D50;&#x8AD6;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x975E;&#x30B3;&#x30FC;&#x30C9; RNA gas5 &#x30B0;&#x30EB;&#x30B3;&#x30B3;&#x30EB;&#x30C1;&#x30B3;&#x30A4;&#x30C9;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x306E;&#x6210;&#x9577;&#x306E;&#x902E;&#x6355;&#x3068;&#x98E2;&#x9913;&#x306B;&#x95A2;&#x9023;&#x4ED8;&#x3051;&#x3089;&#x308C;&#x305F;&#x30EA;&#x30D7;&#x30EC;&#x30C3;&#x30B5;&#x30FC;&#x3067;&#x3059;&#x3002;

&#xC601;&#xC591;&#xBD84;&#xC758; &#xAC00;&#xC6A9;&#xC131;&#xC5D0; &#xC601;&#xD5A5;&#xC744; &#xBBF8;&#xCE58;&#xB294; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xC804;&#xC0AC;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC138;&#xD3EC; &#xC131;&#xC7A5; &#xBC0F; &#xC0DD;&#xC874; &#xC601;&#xD5A5;. &#xC2A4;&#xD14C;&#xB85C;&#xC774;&#xB4DC; &#xC81C;&#xC81C;&#xB294; &#xB610;&#xD55C; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC758; &#xC804;&#xC0AC;&#xB97C; &#xC88C;&#xC6B0; &#xD558; &#xACE0; &#xC138;&#xD3EC; &#xC131;&#xC7A5;, &#xC5D0;&#xB108;&#xC9C0; &#xC18C;&#xBE44;, &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; &#xC0DD;&#xC874;&#xC5D0; &#xB2E4;&#xC591; &#xD55C; &#xD65C;&#xB3D9;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xC131;&#xC7A5; &#xCCB4;&#xD3EC; &#xAD00;&#xB828; 5 (Gas5) noncoding RNA, &#xB204;&#xAD6C;&#xC758; &#xC131;&#xC7A5; &#xC601;&#xC591;&#xBD84; &#xC774;&#xB098; &#xC131;&#xC7A5; &#xC778;&#xC790;&#xC758; &#xBD80;&#xC871;&#xC73C;&#xB85C; &#xC778;&#xD574; &#xCCB4;&#xD3EC; &#xB418;&#xC5B4; &#xC140;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD48D;&#xBD80;&#xD55C;&#xC740; glucocorticoid &#xC911;&#xC7AC; &#xC720;&#xB3C4; 2 apoptosis&#xC758; &#xC138;&#xD3EC; &#xC5B5;&#xC81C;&#xC81C;&#xB97C; &#xC778;&#xCF54;&#xB529; &#xC911; &#xD558;&#xB098;&#xB97C; &#xD3EC;&#xD568; &#xD558; &#xC5EC; &#xC5EC;&#xB7EC; &#xAC00;&#xC9C0; &#xBC18;&#xC751; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC758; &#xC5B5;&#xC81C;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; apoptosis &#xC140;&#xC744; sensitized &#xBC1C;&#xACAC;. Gas5 &#xBBF8;&#xB07C; glucocorticoid &#xC751;&#xB2F5; &#xC694;&#xC18C; (GRE)&#xB85C; &#xC791;&#xB3D9; &#xD558; &#xC5EC; glucocorticoid &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; (GR)&#xC758; DNA &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778;&#xC5D0; &#xB530;&#xB77C;&#xC11C; DNA Gres&#xC640; &#xACBD;&#xC7C1; &#xD558;&#xB294; &#xD560;&#xBA38;&#xB2C8;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xC5D0; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; GR&#xC758; transcriptional &#xD65C;&#xB3D9;&#xC744; &#xBCC0;&#xC870; &#xD558; &#xC5EC; &#xAE30;&#xC544; &#xC911; &#xC138;&#xD3EC; &#xC0DD;&#xC874; &#xBC0F; &#xB300;&#xC0AC; &#xD65C;&#xB3D9;&#xC5D0; &#xC601;&#xD5A5;&#xC744; &#xBBF8;&#xCE58;&#xB294; GR&#xC758; Gas5 &quot;riborepressor&quot;&#xB294; &#xACB0;&#xB860;.

Noncoding RNA gas5 glucocorticoid &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4;&#xC758; &#xC131;&#xC7A5;&#xC744; &#xCCB4;&#xD3EC; &#xBC0F; &#xAE30;&#xC544; &#xAD00;&#xB828; &#xC9C4;&#xC555;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;.

La disponibilidad de nutrientes influye el crecimiento celular y la supervivencia afectando la transcripci&oacute;n gen&eacute;tica. Glucocorticoides tambi&eacute;n influyen la transcripci&oacute;n gen&eacute;tica y tienen diversas actividades en el crecimiento celular, gasto energ&eacute;tico y la supervivencia. Encontramos que el crecimiento detenci&oacute;n espec&iacute;ficos 5 (Gas5) los RNA, que es abundante en las c&eacute;lulas cuyo crecimiento ha sido detenido por falta de nutrientes o factores de crecimiento, sensibilizados apoptosis de las c&eacute;lulas mediante la supresi&oacute;n de glucocorticoides mediada por la inducci&oacute;n del trabajo de varios genes sensibles, incluyendo la codificaci&oacute;n celular inhibidor de apoptosis 2. Gas5 obligado el dominio de uni&oacute;n al ADN de los receptores de glucocorticoides (GR) actuando como un elemento de respuesta a glucocorticoides se&ntilde;uelo (GRE), as&iacute; que compiten con GREs de ADN para atar a la GR. Concluimos que Gas5 es un &quot;riborepressor&quot; de la GR, influir en la supervivencia celular y actividades metab&oacute;licas durante el hambre mediante la modulaci&oacute;n de la actividad transcripcional de la GR.

Los RNA gas5 es un represor de detenci&oacute;n - y hambre-asociada de crecimiento del receptor glucocorticoide.

&#x4E00;&#x822C;&#x5316;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x30B9;&#x30C6;&#x30ED;&#x30A4;&#x30C9;&#x62B5;&#x6297;&#x6027;&#x75C7;&#x5019;&#x7FA4;&#x30B0;&#x30EB;&#x30B3;&#x30B3;&#x30EB;&#x30C1;&#x30B3;&#x30A4;&#x30C9;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53; (GR) &#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x5909;&#x7570;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x5F15;&#x304D;&#x8D77;&#x3053;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x30B0;&#x30EB;&#x30B3;&#x30B3;&#x30EB;&#x30C1;&#x30B3;&#x30A4;&#x30C9;&#x306B;&#x90E8;&#x5206;&#x7684;&#x306A;&#x7121;&#x611F;&#x5FDC;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x7279;&#x5FB4;&#x3065;&#x3051;&#x3089;&#x308C;&#x308B;&#x307E;&#x308C;&#x306A;&#x5BB6;&#x65CF;&#x6027;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x6563;&#x767A;&#x7684;&#x306A;&#x6761;&#x4EF6;&#x3067;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x5831;&#x544A;&#x4F8B;&#x306E;&#x307B;&#x3068;&#x3093;&#x3069;&#x306F;&#x3001;&#x5927;&#x4EBA;&#x3001;&#x30DF;&#x30CD;&#x30E9;&#x30EB;&#x30B3;&#x30EB;&#x30C1;&#x30B3;&#x30A4;&#x30C9;&#x304A;&#x3088;&#x3073;/&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x526F;&#x814E;&#x30A2;&#x30F3;&#x30C9;&#x30ED;&#x30B2;&#x30F3;&#x904E;&#x5270;&#x306A;&#x526F;&#x814E;&#x76AE;&#x8CEA;&#x523A;&#x6FC0;&#x30DB;&#x30EB;&#x30E2;&#x30F3;&#x306E; compensatively &#x5897;&#x52A0;&#x306E;&#x5206;&#x6CCC;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x5F15;&#x304D;&#x8D77;&#x3053;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x306B;&#x95A2;&#x9023;&#x4ED8;&#x3051;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x75C7;&#x72B6;&#x3092;&#x793A;&#x3059;&#x3067;&#x3059;&#x3002;

&#x65B0;&#x3057;&#x3044;&#x70B9;&#x7A81;&#x7136;&#x5909;&#x7570;&#x306F;&#x30D8;&#x30EA;&#x30C3;&#x30AF;&#x30B9; 10 &#x4EBA;&#x9593;&#x30B0;&#x30EB;&#x30B3;&#x30B3;&#x30EB;&#x30C1;&#x30B3;&#x30A4;&#x30C9;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x306E;&#x4E00;&#x822C;&#x5316;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x30B0;&#x30EB;&#x30B3;&#x30B3;&#x30EB;&#x30C1;&#x30B3;&#x30A4;&#x30C9;&#x62B5;&#x6297;&#x30EA;&#x30AC;&#x30F3;&#x30C9;&#x7D50;&#x5408;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x306E;&#x69CB;&#x9020;&#x3092;&#x6DF7;&#x4E71;&#x3055;&#x305B;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

Sindrome da resistenza generalizzata glucocorticoide &egrave; una rara condizione o sporadica caratterizzata da insensibilit&agrave; parziale di glucocorticoidi, causata da mutazioni del gene del recettore (GR) di glucocorticoidi. La maggior parte dei casi segnalati sono adulti, dimostrando i sintomi associati di mineralcorticoidi e/o surrenale androgeni in eccesso causato da compensatively aumentata secrezione dell&#39;ormone adrenocorticotropo.

Una romanzo mutazione puntiforme nell&#39;elica 10 del recettore glucocorticoide umano provoca resistenza generalizzata ai glucocorticoidi interrompendo la struttura del dominio ligand-legantesi.

&#x5E7F;&#x4E49;&#x7684;&#x7CD6;&#x76AE;&#x8D28;&#x6FC0;&#x7D20;&#x62B5;&#x6297;&#x7EFC;&#x5408;&#x5F81;&#x662F;&#x7F55;&#x89C1;&#x7684;&#x5BB6;&#x65CF;&#x6027;&#x6216;&#x6563;&#x53D1;&#x6027;&#x6761;&#x4EF6;&#xFF0C;&#x5C06;&#x7CD6;&#x76AE;&#x8D28;&#x6FC0;&#x7D20;&#x3001; &#x7CD6;&#x76AE;&#x8D28;&#x6FC0;&#x7D20;&#x53D7;&#x4F53; (GR) &#x57FA;&#x56E0;&#x7A81;&#x53D8;&#x6240;&#x9020;&#x6210;&#x7684;&#x90E8;&#x5206;&#x6297;&#x5E72;&#x6270;&#x6027;&#x7684;&#x7279;&#x70B9;&#x3002;&#x5927;&#x591A;&#x6570;&#x62A5;&#x544A;&#x7684;&#x6848;&#x4EF6;&#x90FD;&#x662F;&#x6210;&#x5E74;&#x4EBA;&#xFF0C;&#x8868;&#x660E;&#x4E0E; mineralocorticoid &#x548C; &#xFF08;&#x6216;&#xFF09; &#x80BE;&#x4E0A;&#x817A;&#x6FC0;&#x7D20;&#x8FC7;&#x5269;&#x5F15;&#x8D77;&#x7684;&#x6709;&#x507F;&#x589E;&#x52A0;&#x5206;&#x6CCC;&#x7684;&#x4FC3;&#x80BE;&#x4E0A;&#x817A;&#x76AE;&#x8D28;&#x6FC0;&#x7D20;&#x76F8;&#x5173;&#x7684;&#x75C7;&#x72B6;&#x3002;

&#x87BA;&#x65CB; 10 &#x4EBA;&#x7CD6;&#x76AE;&#x8D28;&#x6FC0;&#x7D20;&#x53D7;&#x4F53;&#x7684;&#x4E00;&#x79CD;&#x65B0;&#x578B;&#x70B9;&#x7A81;&#x53D8;&#x5BFC;&#x81F4;&#x5E7F;&#x4E49;&#x7CD6;&#x76AE;&#x8D28;&#x6FC0;&#x7D20;&#x62B5;&#x6297;&#x6270;&#x4E71;&#x7684;&#x914D;&#x4F53;&#x7ED3;&#x5408;&#x57DF;&#x7684;&#x7ED3;&#x6784;&#x3002;

Generalized glucocorticoid resistance syndrome is a rare familial or sporadic condition characterized by partial insensitivity to glucocorticoids, caused by mutations in the glucocorticoid receptor (GR) gene. Most of the reported cases are adults, demonstrating symptoms associated with mineralocorticoid and/or adrenal androgen excess caused by compensatively increased secretion of the adrenocorticotropic hormone.

A novel point mutation in helix 10 of the human glucocorticoid receptor causes generalized glucocorticoid resistance by disrupting the structure of the ligand-binding domain.

Syndrome de r&eacute;sistance aux glucocortico&iuml;des g&eacute;n&eacute;ralis&eacute;e est une maladie rare de familiale ou sporadique caract&eacute;ris&eacute;e par une insensibilit&eacute; partielle aux glucocortico&iuml;des, caus&eacute;e par des mutations dans le g&egrave;ne du r&eacute;cepteur (GR) de glucocortico&iuml;des. La plupart des cas signal&eacute;s sont adultes, montrant des sympt&ocirc;mes associ&eacute;s aux min&eacute;ralocortico&iuml;des ou surr&eacute;nale androg&egrave;ne exc&egrave;s caus&eacute; par compensatively augmentation de la s&eacute;cr&eacute;tion de l&#39;hormone corticotrope.

Une nouvelle mutation de point en h&eacute;lice 10 du r&eacute;cepteur glucocortico&iuml;de humain provoque la r&eacute;sistance g&eacute;n&eacute;ralis&eacute;e des glucocortico&iuml;des en perturbant la structure du domaine de liaison du ligand.

Generalisierte Glukokortikoid-Resistenz-Syndrom ist eine seltene famili&auml;re oder sporadische Form durch partielle Schmerzunempfindlichkeit, Glucocorticoide, verursacht durch Mutationen im Gen Glucocorticoid-Rezeptor (GR) charakterisiert. Die meisten der gemeldeten F&auml;lle sind Erwachsene, zeigen Symptome der Mineralokortikoiden und/oder Nebennieren Androgen &uuml;bersch&uuml;ssige durch compensatively erh&ouml;hte Sekretion von der Adrenocorticotropes Hormon verursacht.

Eine neuartige Punktmutation im Helix 10 von den menschlichen Glucocorticoid-Rezeptor verursacht generalisierte Glukokortikoid-Resistenz durch St&ouml;rung der Struktur der Dom&auml;ne Ligand-Bindung.

&#xC77C;&#xBC18;&#xD654; &#xB41C; glucocorticoid &#xC800;&#xD56D; &#xC99D;&#xD6C4;&#xAD70; glucocorticoids glucocorticoid &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; (GR) &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC5D0; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xC758;&#xD574; &#xBC1C;&#xC0DD; &#xD558;&#xB294; &#xBD80;&#xBD84;&#xC801;&#xC778; &#xBB34;&#xAC10;&#xAC01;&#xC774; &#xD2B9;&#xC9D5; &#xB4DC;&#xBB38; &#xAC00;&#xC871; &#xB610;&#xB294; &#xC0B0;&#xBC1C;&#xC801; &#xC778; &#xC0C1;&#xD0DC; &#xC774;&#xB2E4;. &#xBCF4;&#xACE0; &#xB41C; &#xCF00;&#xC774;&#xC2A4;&#xC758; &#xB300;&#xBD80;&#xBD84;&#xC740; &#xC131;&#xC778;, mineralocorticoid &#xBC0F; &#xBD80; &#xC2E0; androgen &#xCD08;&#xACFC; adrenocorticotropic &#xD638;&#xB974;&#xBAAC;&#xC758; compensatively &#xC99D;&#xAC00; &#xBD84; &#xBE44;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xBC1C;&#xC0DD;&#xACFC; &#xAD00;&#xB828; &#xB41C; &#xC99D;&#xC0C1;&#xC744; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC8FC;&#xB294;.

&#xC18C;&#xC124; &#xD3EC;&#xC778;&#xD2B8; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774;&#xC5D0; &#xB098;&#xC120; 10 &#xC778;&#xAC04;&#xC758; glucocorticoid &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4;&#xC758; ligand &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778; &#xAD6C;&#xC870;&#xB97C; &#xBC29;&#xD574; &#xD558; &#xC5EC; &#xC77C;&#xBC18;&#xD654; &#xB41C; glucocorticoid &#xC800;&#xD56D;&#xC744; &#xBC1C;&#xC0DD; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

S&iacute;ndrome de resistencia a glucocorticoides generalizada es una condici&oacute;n familiar o espor&aacute;dica rara caracterizada por la insensibilidad parcial a los glucocorticoides, causada por mutaciones en el gen del receptor (GR) de glucocorticoides. La mayor&iacute;a de los casos es adultos, demostrando los s&iacute;ntomas asociados con mineralocorticoide y/o suprarrenal exceso del andr&oacute;geno causado por compensatively mayor secreci&oacute;n de la hormona adrenocorticotr&oacute;pica.

Una mutaci&oacute;n de punto en h&eacute;lice 10 del receptor glucocorticoide humano causa resistencia generalizada glucocorticoide interrumpiendo la estructura del dominio ligand-obligatorio.

&#x6297;&#x539F;&#x6F02;&#x79FB;&#x7684;&#x7532;&#x578B;&#x6D41;&#x611F;&#x75C5;&#x6BD2;&#x8840;&#x51DD;&#x7D20; (HA) &#x8D1F;&#x8D23;&#x5B63;&#x8282;&#x6027;&#x6D41;&#x611F;&#x75AB;&#x82D7;&#x7684;&#x6539;&#x5199;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x5904;&#x7406;&#x6297;&#x539F;&#x6F02;&#x79FB;&#x4E2D;&#x7684;&#x4E00;&#x4E2A;&#x91CD;&#x8981;&#x548C;&#x5F88;&#x5927;&#x7A0B;&#x5EA6;&#x4E0A;&#x88AB;&#x5FFD;&#x89C6;&#x7684;&#x95EE;&#x9898;&#xFF1A; &#x600E;&#x6837;&#x7684;&#x6570;&#x91CF;&#x548C;&#x4F4D;&#x7F6E;&#x7684;&#x7CD6;&#x57FA;&#x5316;&#x7F51;&#x7AD9;&#x5F71;&#x54CD;&#x533B;&#x7BA1;&#x5C40;&#x6F14;&#x53D8;&#x4E2D;&#x7684;&#x4EBA;&#xFF1F;&#x6211;&#x4EEC;&#x5206;&#x6790;&#x4E86;&#x6240;&#x6709;&#x5168;&#x957F; H1 &#x4E9A;&#x578B;&#x533B;&#x7BA1;&#x5C40;&#x5E8F;&#x5217;&#x5728; NCBI &#x6D41;&#x611F;&#x6570;&#x636E;&#x5E93;&#x4E2D;&#x53EF;&#x7528;&#x7684;&#x7CD6;&#x57FA;&#x5316;&#x72B6;&#x6001;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x5236;&#x8BA2;&#x4E86;&quot;&#x6D41;&#x52A8;&#x6307;&#x6570;&quot;(FI)&#xFF0C;&#x4E00;&#x79CD;&#x7B80;&#x5355;&#x7684;&#x7B97;&#x6CD5;&#x8BA1;&#x7B97;&#x75C5;&#x6BD2;&#x4EE5;&#x83B7;&#x5F97;&#x6216;&#x5931;&#x53BB;&#x7684;&#x5171;&#x8BC6;&#x7CD6;&#x57FA;&#x5316;&#x7AD9;&#x70B9;&#x7684;&#x8D8B;&#x52BF;&#x3002;FI &#x9884;&#x6D4B;&#x73B0;&#x6709;&#x83CC;&#x682A;&#x4E4B;&#x95F4;&#x7684;&#x7CD6;&#x57FA;&#x5316;&#x56FD;&#x5BB6;&#x7684;&#x4E3B;&#x5BFC;&#x5730;&#x4F4D;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x5206;&#x6790;&#x8868;&#x660E;&#xFF0C;&#x5C3D;&#x7BA1;&#x5728;&#x533B;&#x7BA1;&#x5C40;&#x7684;&#x7403;&#x72B6;&#x7ED3;&#x6784;&#x57DF;&#x4E2D;&#x7684;&#x7CD6;&#x57FA;&#x5316;&#x7AD9;&#x70B9;&#x7684;&#x6570;&#x91CF;&#x4E0D;&#x4F1A;&#x5F71;&#x54CD;&#x6574;&#x4F53;&#x89C4;&#x6A21;&#x53D8;&#x5316;&#x7684;&#x5B9A;&#x4E49;&#x6297;&#x539F;&#x6027;&#x533A;&#x57DF;&#xFF0C;&#x53D8;&#x5316;&#x4FA7;&#x91CD;&#x4E8E;&#x901A;&#x8FC7;&#x7CD6;&#x57FA;&#x5316;&#x975E;&#x5C4F;&#x853D;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x533A;&#x57DF;&#x3002;&#x8FD9;&#x652F;&#x6301;&#x8FD9;&#x7CD6;&#x57FA;&#x5316;&#x4E00;&#x822C;&#x4ECE;&#x6297;&#x4F53;&#x4ECB;&#x5BFC;&#x7684;&#x4E2D;&#x548C;&#x3001; &#x76FE;&#x724C;&#x533B;&#x7BA1;&#x5C40;&#x7684;&#x7ED3;&#x8BBA;&#xFF0C;&#x5E76;&#x610F;&#x5473;&#x7740;&#x5305;&#x5BB9;&#x4F4E;&#x805A;&#x7CD6;&#x7684;&#x5065;&#x8EAB;&#x8D39;&#x7528;&#x9650;&#x5236;&#x901A;&#x8FC7;&#x533B;&#x7BA1;&#x5C40; hyperglycosylation &#x75C5;&#x6BD2;&#x8F6C;&#x4E49;&#x3002;

&#x7CD6;&#x57FA;&#x5316;&#x96C6;&#x4E2D;&#x5728;&#x6D41;&#x611F;&#x75C5;&#x6BD2; H1 &#x8840;&#x51DD;&#x7D20;&#x7403;&#x72B6;&#x7ED3;&#x6784;&#x57DF;&#x7684;&#x5E8F;&#x5217;&#x53D8;&#x5F02;&#x3002;

Antigenic drift in the influenza A virus hemagglutinin (HA) is responsible for seasonal reformulation of influenza vaccines. Here, we address an important and largely overlooked issue in antigenic drift: how does the number and location of glycosylation sites affect HA evolution in man? We analyzed the glycosylation status of all full-length H1 subtype HA sequences available in the NCBI influenza database. We devised the "flow index" (FI), a simple algorithm that calculates the tendency for viruses to gain or lose consensus glycosylation sites. The FI predicts the predominance of glycosylation states among existing strains. Our analyses show that while the number of glycosylation sites in the HA globular domain does not influence the overall magnitude of variation in defined antigenic regions, variation focuses on those regions unshielded by glycosylation. This supports the conclusion that glycosylation generally shields HA from antibody-mediated neutralization, and implies that fitness costs in accommodating oligosaccharides limit virus escape via HA hyperglycosylation.

Glycosylation focuses sequence variation in the influenza A virus H1 hemagglutinin globular domain.

D&eacute;rive antig&eacute;nique de l&#39;h&eacute;magglutinine des virus grippaux A (HA) est responsable de la reformulation saisonni&egrave;re des vaccins contre la grippe. Ici, nous abordons une question importante et largement n&eacute;glig&eacute;e dans la d&eacute;rive antig&eacute;nique : comment le nombre et l&#39;emplacement des sites de glycosylation affecte HA &eacute;volution chez l&#39;homme ? Nous avons analys&eacute; l&#39;&eacute;tat de glycosylation de tous les longs H1 sous-type s&eacute;quences HA disponibles dans la base de donn&eacute;es de la grippe NCBI. Nous avons con&ccedil;u le &laquo; indice de fluidit&eacute; &raquo; (FI), un simple algorithme qui calcule la tendance pour les virus &agrave; gagner ou &agrave; perdre des sites de glycosylation de consensus. La FI pr&eacute;dit la pr&eacute;dominance de glycosylation &Eacute;tats parmi les souches existantes. Nos analyses montrent que, tandis que le nombre de sites de glycosylation dans le domaine globulaire HA n&#39;influence pas l&#39;ampleur globale de la variation dans des r&eacute;gions d&eacute;finies antig&eacute;niques, variation se concentre sur ces r&eacute;gions non blind&eacute;es de glycosylation. Ceci permet de conclure que la glycosylation prot&egrave;ge g&eacute;n&eacute;ralement HA de neutralisation m&eacute;di&eacute;e par les anticorps et implique que les co&ucirc;ts de remise en forme en oligosaccharides accommodants limitent &eacute;vasion de virus par l&#39;interm&eacute;diaire de hyperglycosylation HA.

Glycosylation s&#39;int&eacute;resse &agrave; des variations de s&eacute;quence dans la grippe un domaine globulaire de l&#39;h&eacute;magglutinine virus H1.

Antigendrift in der Influenza-A-Virus-H&auml;magglutinin (HA) ist verantwortlich f&uuml;r saisonale Neuformulierung des Influenza-Impfstoffe. Hier wir eine Thematik wichtig und weitgehend &uuml;bersehen in Antigendrift: wie wirkt sich die Anzahl und Position der Glykosylierung Seiten aus HA Entwicklung im Mann? Wir analysierten den Glykosylierung-Status aller in H1 Untertyp HA folgen in der Datenbank des NCBI-Grippe. Wir entwickelten den &quot;Flow-Index&quot; (FI), ein einfacher Algorithmus, die die Tendenz, dass Viren zu gewinnen oder verlieren Konsens Glycosylation Websites berechnet. Die FI prognostiziert die Dominanz der Glykosylierung Staaten unter den bestehenden Belastungen. Unsere Analysen zeigen, dass zwar die Anzahl der Glykosylierung Websites in der kugelige HA-Dom&auml;ne nicht das gesamte Ausma&szlig; der Variation in definierten Antigene Regionen beeinflu&szlig;t, Variation durch Glycosylation ungeschirmten Regionen konzentriert. Dies unterst&uuml;tzt die Schlussfolgerung, dass die Glykosylierung HA im Allgemeinen aus antik&ouml;rpervermittelten Neutralisierung abschirmt und impliziert, dass Eignung Kosten in zuvorkommend Oligosaccharide Virus Flucht &uuml;ber HA Hyperglycosylation zu begrenzen.

Glykosylierung konzentriert sich Sequenz Variation in der Influenza eine Virus-H1-H&auml;magglutinin kugelige Domain.

Deriva antigenica nell&#39;emagglutinina del virus dell&#39;influenza A (HA) &egrave; responsabile per stagionale riformulazione dei vaccini contro l&#39;influenza. Qui, affrontiamo una questione importante e largamente trascurata in deriva antigenica: come il numero e l&#39;ubicazione dei siti di glicosilazione influisce HA evoluzione nell&#39;uomo? Abbiamo analizzato lo stato di glicosilazione di tutti full-length H1 sottotipo HA sequenze disponibili nel database dell&#39;influenza di NCBI. Abbiamo ideato la &quot;flow index&quot; (FI), un semplice algoritmo che calcola la tendenza per i virus guadagnare o perdere siti di glicosilazione consenso. Il FI predice il predominio degli Stati di glicosilazione tra ceppi esistenti. Il nostro spettacolo di analisi che, mentre il numero dei siti di glicosilazione nel dominio globulare HA non influenza la grandezza complessiva della variazione antigeniche regioni definite, variazione si concentra su quelle regioni non schermati di glicosilazione. Questo supporta la conclusione che glicosilazione scudi generalmente HA da neutralizzazione mediata e implica che i costi di fitness in oligosaccaridi accomodanti limitano fuga virus via HA hyperglycosylation.

Glicosilazione si concentra variazione di sequenza con l&#39;influenza di un dominio globulare virus H1 di emoagglutinina.

A &#x578B;&#x30A4;&#x30F3;&#x30D5;&#x30EB;&#x30A8;&#x30F3;&#x30B6; &#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x306E;&#x30D8;&#x30DE;&#x30B0;&#x30EB;&#x30C1;&#x30CB;&#x30F3; (HA) &#x3067;&#x9023;&#x7D9A;&#x7684;&#x6297;&#x539F;&#x5909;&#x7570;&#x30A4;&#x30F3;&#x30D5;&#x30EB;&#x30A8;&#x30F3;&#x30B6; &#x30EF;&#x30AF;&#x30C1;&#x30F3;&#x306E;&#x5B63;&#x7BC0;&#x306E;&#x6539;&#x8CEA;&#x3092;&#x62C5;&#x5F53;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x6211;&#x3005; &#x6297;&#x539F;&#x30C9;&#x30EA;&#x30D5;&#x30C8;&#x3067;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x4E3B;&#x306B;&#x898B;&#x843D;&#x3068;&#x3055;&#x308C;&#x304C;&#x3061;&#x306A;&#x554F;&#x984C;&#x306B;&#x5BFE;&#x51E6;&#xFF1A; &#x3069;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306B;&#x3057;&#x3066;&#x6570;&#x3068;&#x7CD6;&#x9396;&#x4FEE;&#x98FE;&#x90E8;&#x4F4D;&#x306E;&#x5834;&#x6240;&#x5F71;&#x97FF; HA &#x9032;&#x5316;&#x7537;&#x3067;&#xFF1F;&#x7CD6;&#x9396;&#x4FEE;&#x98FE;&#x72B6;&#x614B;&#x3059;&#x3079;&#x3066;&#x306E;&#x30D5;&#x30EB;&#x30EC;&#x30F3;&#x30B0;&#x30B9; H1 &#x30B5;&#x30D6;&#x30BF;&#x30A4;&#x30D7; HA &#x30B7;&#x30FC;&#x30B1;&#x30F3;&#x30B9;&#x306E; NCBI &#x30A4;&#x30F3;&#x30D5;&#x30EB;&#x30A8;&#x30F3;&#x30B6; &#x30C7;&#x30FC;&#x30BF;&#x30D9;&#x30FC;&#x30B9;&#x3067;&#x5229;&#x7528;&#x53EF;&#x80FD;&#x306A;&#x3092;&#x5206;&#x6790;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x300C;&#x30D5;&#x30ED;&#x30FC; &#x30A4;&#x30F3;&#x30C7;&#x30C3;&#x30AF;&#x30B9;&#x300D;&#x3092;&#x8003;&#x6848; (FI) &#x306E;&#x5229;&#x5F97;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x30B3;&#x30F3;&#x30BB;&#x30F3;&#x30B5;&#x30B9;&#x7CD6;&#x9396;&#x4FEE;&#x98FE;&#x90E8;&#x4F4D;&#x3092;&#x5931;&#x3046;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x50BE;&#x5411;&#x3092;&#x8A08;&#x7B97;&#x3001;&#x5358;&#x7D14;&#x306A;&#x30A2;&#x30EB;&#x30B4;&#x30EA;&#x30BA;&#x30E0;&#x3002;&#x7CD6;&#x9396;&#x4FEE;&#x98FE;&#x5408;&#x8846;&#x56FD;&#x65E2;&#x5B58;&#x7CFB;&#x7D71;&#x9593;&#x306E;&#x512A;&#x4F4D;&#x6027;&#x3068;&#x3001;FI &#x306F;&#x4E88;&#x6E2C;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;1P102 HA &#x7403;&#x72B6;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x306E;&#x6570;&#x304C;&#x5B9A;&#x7FA9;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x6297;&#x539F;&#x9818;&#x57DF;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x5909;&#x7570;&#x306E;&#x5168;&#x4F53;&#x7684;&#x306A;&#x5927;&#x304D;&#x3055;&#x3092;&#x5F71;&#x97FF;&#x3057;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x304C;&#x3001;&#x30D0;&#x30EA;&#x30A8;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3; &#x30B0;&#x30EA;&#x30B3;&#x30B7;&#x30EB;&#x5316;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x975E;&#x30B7;&#x30FC;&#x30EB;&#x30C9;&#x305D;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x9818;&#x57DF;&#x306B;&#x7126;&#x70B9;&#x3092;&#x5F53;&#x3066;&#x3066;&#x3053;&#x3068;&#x79C1;&#x305F;&#x3061;&#x89E3;&#x6790;&#x306E;&#x30B7;&#x30E7;&#x30FC;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x306F;&#x3001;&#x7D50;&#x8AD6;&#x306F;&#x305D;&#x306E;&#x7CD6;&#x9396;&#x4FEE;&#x98FE;&#x901A;&#x5E38;&#x306E; HA &#x6297;&#x4F53;&#x3092;&#x4ECB;&#x3059;&#x308B;&#x4E2D;&#x548C;&#x304B;&#x3089;&#x30B7;&#x30FC;&#x30EB;&#x30C9;&#x3092;&#x30B5;&#x30DD;&#x30FC;&#x30C8;&#x3057;&#x3001;&#x53CE;&#x5BB9;&#x30AA;&#x30EA;&#x30B4;&#x7CD6;&#x306B;&#x30D5;&#x30A3;&#x30C3;&#x30C8;&#x30CD;&#x30B9; &#x30B3;&#x30B9;&#x30C8; &#x30CF; hyperglycosylation &#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x3066;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9; &#x30A8;&#x30B9;&#x30B1;&#x30FC;&#x30D7;&#x3092;&#x5236;&#x9650;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x610F;&#x5473;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x7CD6;&#x9396;&#x4FEE;&#x98FE;&#x30B7;&#x30FC;&#x30B1;&#x30F3;&#x30B9;&#x5909;&#x7570;&#x30A4;&#x30F3;&#x30D5;&#x30EB;&#x30A8;&#x30F3;&#x30B6; &#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9; H1 &#x30D8;&#x30DE;&#x30B0;&#x30EB;&#x30C1;&#x30CB;&#x30F3;&#x306E;&#x7403;&#x72B6;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x3067;&#x7126;&#x70B9;&#x3092;&#x5F53;&#x3066;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#xC778;&#xD50C;&#xB8E8;&#xC5D4;&#xC790; A &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; &#xC870;&#xB958; (HA) &#xD56D; &#xC6D0; &#xB4DC;&#xB9AC;&#xD504;&#xD2B8; &#xB3C5;&#xAC10; &#xBC31;&#xC2E0;&#xC758; &#xACC4;&#xC808; &#xC7AC;&#xAC74;&#xCD95;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xCC45;&#xC784; &#xC774;&#xB2E4;. &#xC5EC;&#xAE30;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; antigenic &#xB4DC;&#xB9AC;&#xD504;&#xD2B8;&#xC5D0; &#xC911;&#xC694; &#xD558; &#xACE0; &#xD06C;&#xAC8C; &#xAC04;&#xACFC; &#xBB38;&#xC81C; &#xD574;&#xACB0;: &#xC601;&#xD5A5; &#xD558;&#xB294; &#xBC29;&#xBC95; &#xC218;&#xC640; glycosylation &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8;&#xC758; &#xC704;&#xCE58;&#xB97C; &#xC0AC;&#xB78C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD558; &#xC9C4;&#xD654;? &#xC6B0;&#xB9AC; &#xBAA8;&#xB4E0; &#xC804;&#xCCB4; &#xAE38;&#xC774; H1 &#xD558;&#xC704; &#xD558; &#xC2DC;&#xD000;&#xC2A4; NCBI &#xC778;&#xD50C;&#xB8E8;&#xC5D4;&#xC790; &#xB370;&#xC774;&#xD130;&#xBCA0;&#xC774;&#xC2A4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC0AC;&#xC6A9;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xB294; glycosylation &#xC0C1;&#xD0DC; &#xBD84;&#xC11D;. &quot;&#xD750;&#xB984; &#xC778;&#xB371;&#xC2A4;&quot; &#xACE0;&#xC548; (FI)&#xB97C; &#xC5BB;&#xAC70;&#xB098; &#xC783;&#xAC8C; &#xD569;&#xC758; glycosylation &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8;&#xC5D0; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xACBD;&#xD5A5;&#xC744; &#xACC4;&#xC0B0; &#xD558;&#xB294; &#xAC04;&#xB2E8;&#xD55C; &#xC54C;&#xACE0;&#xB9AC;&#xC998;. FI&#xB97C; &#xAE30;&#xC874; &#xAE34;&#xC7A5; &#xAC00;&#xC6B4;&#xB370; glycosylation &#xAD6D;&#xAC00;&#xC758; &#xC6B0;&#xC704;&#xB97C; &#xC608;&#xCE21;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xADF8; &#xB3D9;&#xC548; &#xD558; &#xAD6C;&#xD615; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778; glycosylation &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8; &#xC218; &#xBCC0;&#xD654;&#xC5D0;&#xC758; &#xC804;&#xBC18;&#xC801;&#xC778; &#xD06C;&#xAE30;&#xC5D0; &#xC601;&#xD5A5;&#xC744; &#xC8FC;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xBD84;&#xC11D; &#xD45C;&#xC2DC; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xC815;&#xC758; &#xD56D; &#xC6D0; &#xC9C0;&#xC5ED;, &#xBCC0;&#xD615; glycosylation&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xBE44;&#xCC28;&#xD3D0; &#xADF8; &#xC9C0;&#xC5ED;&#xC5D0; &#xCD08;&#xC810;&#xC744; &#xB9DE;&#xCD94;&#xACE0; &#xC788;&#xB2E4;. &#xC774; &#xADF8; glycosylation &#xC77C;&#xBC18;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xC911;&#xD654; &#xD56D; &#xCCB4; &#xC911;&#xC7AC;&#xC5D0;&#xC11C; HA&#xB97C; &#xBC29;&#xD328; &#xACB0;&#xB860;&#xC744; &#xC9C0;&#xC6D0; &#xD558; &#xACE0; &#xD53C;&#xD2B8; &#xB2C8;&#xC2A4; &#xBE44;&#xC6A9; &#xC218;&#xC6A9; oligosaccharides &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; &#xD0C8;&#xCD9C; &#xD558; hyperglycosylation &#xD1B5;&#xD574; &#xC81C;&#xD55C; &#xD558;&#xB294; &#xAC83;&#xC744; &#xC758;&#xBBF8;.

Glycosylation &#xC778;&#xD50C;&#xB8E8;&#xC5D4;&#xC790; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; H1 &#xC870;&#xB958; &#xAD6C;&#xD615; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778;&#xC758;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC21C;&#xC11C; &#xBCC0;&#xD654;&#xC5D0; &#xCD08;&#xC810;&#xC744; &#xB9DE;&#xCD94;&#xACE0; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Deriva antig&eacute;nica en la hemaglutinina del virus de la gripe A (HA) es responsable de temporada reformulaci&oacute;n de las vacunas antigripales. Aqu&iacute;, nos dirigimos a una cuesti&oacute;n importante y pasados por alto en gran parte en deriva antig&eacute;nica: &iquest;c&oacute;mo el n&uacute;mero y localizaci&oacute;n de sitios de glicosilaci&oacute;n afecta HA evoluci&oacute;n en el hombre? Hemos analizado la situaci&oacute;n de glicosilaci&oacute;n de todo cuerpo entero H1 subtipo HA secuencias disponibles en la base de datos NCBI gripe. Ideamos el &quot;&Iacute;ndice de flujo&quot; (FI), un algoritmo simple que calcula la tendencia de los virus ganar o perder sitios de glicosilaci&oacute;n de consenso. La FI predice el predominio de Estados de glicosilaci&oacute;n entre cepas existentes. Nuestro programa de an&aacute;lisis que mientras que el n&uacute;mero de sitios de glicosilaci&oacute;n en el dominio globular HA no influy&oacute; en la magnitud total de la variaci&oacute;n en regiones definidas antig&eacute;nicas, variaci&oacute;n se centra en las regiones sin blindaje por glicosilaci&oacute;n. Esto apoya la conclusi&oacute;n que eso glicosilaci&oacute;n generalmente protege HA de neutralizaci&oacute;n mediada por anticuerpos e implica que los costos de adecuaci&oacute;n en oligosac&aacute;ridos complacientes limitan virus escape v&iacute;a HA hyperglycosylation.

Article	Year
Brequinar derivatives and species-specific drug design for dihydroorotate dehydrogenase. Bioorganic & medicinal chemistry letters\| PubMed ID: 16406782	2006
Structure of Plasmodium falciparum dihydroorotate dehydrogenase with a bound inhibitor. Acta crystallographica. Section D, Biological crystallography\| PubMed ID: 16510978	2006
Characterization of a protective Escherichia coli-expressed Plasmodium falciparum merozoite surface protein 3 indicates a non-linear, multi-domain structure. Molecular and biochemical parasitology\| PubMed ID: 19073223	2009
Structure of the Plasmodium falciparum circumsporozoite protein, a leading malaria vaccine candidate. The Journal of biological chemistry\| PubMed ID: 19633296	2009
Noncoding RNA gas5 is a growth arrest- and starvation-associated repressor of the glucocorticoid receptor. Science signaling\| PubMed ID: 20124551	2010
A novel point mutation in helix 10 of the human glucocorticoid receptor causes generalized glucocorticoid resistance by disrupting the structure of the ligand-binding domain. The Journal of clinical endocrinology and metabolism\| PubMed ID: 20335448	2010
Glycosylation focuses sequence variation in the influenza A virus H1 hemagglutinin globular domain. PLoS pathogens\| PubMed ID: 21124818	2010

Darrell E. Hurt

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