Cecal Ligation Puncture Procedure

Human sepsis is characterized by a set of systemic reactions in response to intensive and massive infection that failed to be locally contained by the ...

Temple University 

&#x9AD8;&#x6548;&#x5B89;&#x5168;&#x7684;&#x57FA;&#x56E0;&#x4FEE;&#x9970;&#x7684;&#x9020;&#x8840;&#x5E72;&#x7EC6;&#x80DE;&#x662F;&#x57FA;&#x56E0;&#x6CBB;&#x7597;&#x539F;&#x53D1;&#x6027;&#x5E7C;&#x7AE5;&#x7EF4;&#x65AF;&#x79D1;&#x7279;-&#x5965;&#x5C14;&#x5FB7;&#x91CC;&#x5947;&#x7EFC;&#x5408;&#x5F81;&#x7B49;&#x7684;&#x8981;&#x6C42;&#x3002;&#x7136;&#x800C;&#xFF0C;&#x653E;&#x677E;&#x7BA1;&#x5236;&#x7684;&#x8868;&#x8FBE;&#x5F0F;&#x6216;&#x540E;&#x4EE3;&#x7684;&#x8F6C;&#x5BFC;&#x7684; nonhematopoietic &#x7956;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5F02;&#x4F4D;&#x8868;&#x8FBE;&#x53EF;&#x80FD;&#x5BFC;&#x81F4;&#x6709;&#x5BB3;&#x7684;&#x6BD2;&#x6027;&#x3002;&#x56E0;&#x6B64;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x5206;&#x6790;&#x4E86;&#x7EF4;&#x65AF;&#x79D1;&#x7279;-&#x5965;&#x5C14;&#x5FB7;&#x91CC;&#x5947;&#x7EFC;&#x5408;&#x5F81;&#x86CB;&#x767D; (&#x9EC4;&#x8702;) &#x5F02;&#x4F4D;&#x8868;&#x8FBE;&#x4E0E;&#x7279;&#x5B9A;&#x9020;&#x8840;&#x7684;&#x6162;&#x75C5;&#x6BD2;&#x8F7D;&#x4F53; (WAS &#x8FD1;&#x7AEF;&#x542F;&#x52A8;&#x5B50;&#x9A71;&#x52A8;) &#x7684;&#x6F5C;&#x5728;&#x5229;&#x76CA;&#x7684;&#x5F71;&#x54CD;&#x3002;&#x9EC4;&#x8702;&#x672C;&#x6784;&#x7684;&#x6162;&#x75C5;&#x6BD2;&#x8F7D;&#x4F53;&#x8868;&#x8FBE;&#x662F;&#x5267;&#x6BD2; nonhematopoietic &#x7EC6;&#x80DE;&#x56E0;&#x4E3A;&#x5B83;&#x5C06;&#x5BFC;&#x81F4;&#x808C;&#x52A8;&#x86CB;&#x767D;&#x672C;&#x5730;&#x5316;&#x7FFB;&#x5929;&#x8986;&#x5730;&#x7684;&#x53D8;&#x5316;&#xFF0C;&#x5BFC;&#x81F4;&#x51CF;&#x5C11;&#x7684;&#x805A;&#x5408;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x4E0A;&#x7684;&#x53EF;&#x884C;&#x6027;&#x3001; &#x9EC4;&#x8702;&#x8D85;&#x91CF;&#x8868;&#x8FBE; nonhematopoietic &#x7EC6;&#x80DE;&#x53CA;&#x589E;&#x52A0;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6B7B;&#x4EA1;&#x663E;&#x8457;&#x589E;&#x957F;&#x4E0D;&#x5229;&#x5730;&#x4F4D;&#x53EF;&#x89C1;&#x4E00;&#x6591;&#x3002;&#x56E0;&#x4E3A;&#xFF0C;&#x5F15;&#x4EBA;&#x6CE8;&#x76EE;&#x7684;&#x662F;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x53D1;&#x73B0;&#x9EC4;&#x8702;&#x4E0D;&#x80FD;&#x8F7B;&#x6613;&#x5916;&#x6E90;&#x5728; T &#x7EC6;&#x80DE;&#xFF0C;&#x751A;&#x81F3;&#x540E;&#x6BCF;&#x4E2A;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x4E2D;&#x7684;&#x591A;&#x4E2A;&#x5411;&#x91CF;&#x96C6;&#x6210;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x6709;&#x6BD2;&#x7684;&#x5F71;&#x54CD;&#x5E76;&#x4E0D;&#x4F1A;&#x5F71;&#x54CD;&#x9020;&#x8840;&#x8D77;&#x6E90;&#x7EC6;&#x80DE;&#x3002;&#x540E;&#x540C;&#x6784;&#x7684;&#x6162;&#x75C5;&#x6BD2;&#x8F7D;&#x4F53; nonhematopoietic &#x7EC6;&#x80DE;&#x8F6C;&#x5BFC;&#x514B;&#x670D;&#x7531;&#x8868;&#x793A;&#x9EC4;&#x8702;&#xFF0C;&#x4ECB;&#x5BFC;&#x9776;&#x5411;&#x6162;&#x75C5;&#x6BD2;&#x8F7D;&#x4F53;&#xFF0C;&#x8FD9;&#x5728;&#x540C;&#x4E00;&#x65F6;&#x95F4;&#xFF0C;&#x90FD;&#x662F;&#x57FA;&#x56E0;&#x6CBB;&#x7597;&#x7684; WAS &#x7684;&#x6709;&#x6548;&#x5DE5;&#x5177;&#x91CD;&#x7EC4;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7F3A;&#x9677;&#x4ECE;&#x9EC4;&#x8702;&#x7F3A;&#x9677;&#x5C0F;&#x9F20;&#x548C;&#x4EBA;&#x7C7B;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x80FD;&#x529B;&#x6240;&#x793A;&#x7684;&#x4F7F;&#x7528;&#x53D1;&#x73B0;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x4E0D;&#x5229;&#x5F71;&#x54CD;&#x3002;&#x56E0;&#x6B64;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x5047;&#x5B9A;&#x4ECB;&#x5BFC;&#x53D7;&#x89C4;&#x7BA1;&#x7684;&#x6162;&#x75C5;&#x6BD2;&#x8F7D;&#x4F53;&#x4EE3;&#x8868; WAS &#x57FA;&#x56E0;&#x6CBB;&#x7597;&#x7684;&#x4E34;&#x5E8A;&#x6CBB;&#x7597;&#x65B9;&#x6848;&#x7684;&#x53D1;&#x5C55;&#x66F4;&#x5B89;&#x5168;&#x3001; &#x9AD8;&#x6548;&#x7684;&#x66FF;&#x4EE3;&#x65B9;&#x6848;&#x3002;

Hematopoietic &#x7279;&#x5B9A;&#x6162;&#x75C5;&#x6BD2;&#x8F7D;&#x4F53;&#x89C4;&#x907F;&#x7531;&#x4E8E;&#x5F02;&#x4F4D;&#x86CB;&#x767D;&#x8868;&#x8FBE;&#x7684;&#x7EF4;&#x65AF;&#x79D1;&#x7279;-&#x5965;&#x5C14;&#x5FB7;&#x91CC;&#x5947;&#x7EFC;&#x5408;&#x5F81;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6BD2;&#x6027;&#x3002;

Efficient and safe gene modification of hematopoietic stem cells is a requirement for gene therapy of primary immunodeficiencies such as Wiskott-Aldrich syndrome. However, deregulated expression or ectopic expression in the progeny of transduced nonhematopoietic progenitor cells may lead to unwanted toxicity. We therefore analyzed the effect of ectopic expression of Wiskott-Aldrich syndrome protein (WASp) and the potential benefits of hematopoietic-specific lentiviral vectors (driven by the WAS proximal promoter). Overexpression of WASp by constitutive lentiviral vectors is highly toxic in nonhematopoietic cells because it causes dramatic changes in actin localization and polymerization that result in decreased cell viability, as evidenced by a significant growth disadvantage of WASp-overexpressing nonhematopoietic cells and increased cell death. These toxic effects do not affect cells of hematopoietic origin because, remarkably, we found that WASp cannot be readily overexpressed in T cells, even after multiple vector integrations per cell. The adverse cellular effects found after transduction of nonhematopoietic cells with constitutive lentiviral vectors are overcome by the use of transcriptionally targeted lentiviral vectors expressing WASp, which, at the same time, are efficient tools for gene therapy of WAS as demonstrated by their ability to reconstitute cellular defects from WASp-deficient mouse and human cells. We therefore postulate that transcriptionally regulated lentiviral vectors represent a safer and efficient alternative for the development of clinical protocols of WAS gene therapy.

Hematopoietic-specific lentiviral vectors circumvent cellular toxicity due to ectopic expression of Wiskott-Aldrich syndrome protein.

Modification g&eacute;nique efficace et s&eacute;curitaire de cellules souches h&eacute;matopo&iuml;&eacute;tiques est une exigence pour la th&eacute;rapie g&eacute;nique des immunod&eacute;ficiences primaires ex. syndrome de Wiskott - Aldrich. Toutefois, d&eacute;r&eacute;glement&eacute;s ou expression ectopique dans la descendance de cellules prog&eacute;nitrices transduite nonhematopoietic peut-&ecirc;tre conduire &agrave; toxicit&eacute; non d&eacute;sir&eacute;e. Par cons&eacute;quent, nous avons analys&eacute; l&#39;effet de l&#39;expression ectopique de Wiskott - Aldrich, syndrome de prot&eacute;ine (WASp) et les avantages potentiels de h&eacute;matopo&iuml;&eacute;tiques sp&eacute;cifiques des vecteurs LENTIVIRAUX (pilot&eacute;s par le promoteur proximal WAS). La surexpression de la gu&ecirc;pe de vecteurs LENTIVIRAUX constitutives est hautement toxique dans les cellules de nonhematopoietic car il provoque des changements dans la localisation de l&#39;actine et la polym&eacute;risation qui entra&icirc;nent une diminution de viabilit&eacute;, cellulaire comme en t&eacute;moigne un d&eacute;savantage significatif de la croissance des cellules surexprimant la gu&ecirc;pe de nonhematopoietic et de la mort cellulaire accrue. Ces effets toxiques n&#39;affectent pas les cellules d&#39;origine h&eacute;matopo&iuml;&eacute;tique car, fait remarquable, nous avons constat&eacute; que gu&ecirc;pe ne peut pas &ecirc;tre facilement surexprim&eacute;e dans les cellules T, m&ecirc;me apr&egrave;s plusieurs int&eacute;grations de vecteur par cellule. Les effets cellulaires trouvent apr&egrave;s transduction de nonhematopoietic des cellules avec des vecteurs LENTIVIRAUX constitutives sont surmont&eacute;s par l&#39;utilisation de transcriptionnellement cibl&eacute;es vecteurs LENTIVIRAUX exprimant la gu&ecirc;pe, qui, en m&ecirc;me temps, sont des outils efficaces pour la th&eacute;rapie g&eacute;nique de WAS, comme en t&eacute;moigne leur capacit&eacute; &agrave; reconstituer des d&eacute;fauts cellulaires de souris d&eacute;ficientes en gu&ecirc;pe et les cellules humaines. Par cons&eacute;quent, nous postulons que les vecteurs LENTIVIRAUX transcriptionnellement r&eacute;glement&eacute;s repr&eacute;sentent une alternative plus s&ucirc;re et efficace pour l&#39;&eacute;laboration de protocoles cliniques de th&eacute;rapie g&eacute;nique WAS.

Vecteurs LENTIVIRAUX h&eacute;matopo&iuml;&eacute;tique sp&eacute;cifiques contournent une toxicit&eacute; cellulaire due &agrave; l&#39;expression ectopique de Wiskott - Aldrich, syndrome de prot&eacute;ine.

Effiziente und sichere genetischer Ver&auml;nderungen von h&auml;matopoetischen Stammzellen ist eine Voraussetzung f&uuml;r Gentherapie der prim&auml;re Immundefekte wie Wiskott - Aldrich-Syndrom. Jedoch kann deregulierten Ausdruck oder ektopische Expression in der Nachkommenschaft transduzierten Nonhematopoietic Vorl&auml;uferzellen zu unerw&uuml;nschten Toxizit&auml;t f&uuml;hren. Wir analysierten daher die Wirkung von ektopische Expression des Proteins Wiskott - Aldrich Syndrom (WASp) und die potenziellen Vorteile der h&auml;matopoetischen-spezifische Lentiviralen Vektoren (angetrieben durch den proximalen WAS-Projekttr&auml;ger). Eine &Uuml;berexpression von WASp durch konstitutive Lentiviralen Vektoren ist hochgiftig in Nonhematopoietic Zellen, weil es dramatische Ver&auml;nderungen in der Aktin-Lokalisierung verursacht und Polymerisation, die verminderte f&uuml;hren Zelle Entwicklungsf&auml;higkeit, wie ein signifikantes Wachstum Nachteil der WASp-&uuml;berexprimierenden Nonhematopoietic Zellen und erh&ouml;hte Zelltod belegt. Diese toxischen Wirkungen betreffen nicht Zellen h&auml;matopoetischen Ursprungs, denn Bemerkenswerterweise fanden wir, dass WASp leicht &uuml;berexprimiert in T-Zellen, auch nach mehreren Vektor-Integrationen pro Zelle nicht. Die zellul&auml;ren Nebenwirkungen gefunden, nachdem Transduktion von Nonhematopoietic Zellen mit konstitutiven Lentiviralen Vektoren werden durch den Einsatz von transcriptionally gezielte Lentiviralen Vektoren WASp, zum Ausdruck zu bringen, die zur gleichen Zeit, effiziente Werkzeuge f&uuml;r Gentherapie von WAS sind wie durch ihre F&auml;higkeit, zellul&auml;re M&auml;ngel von WASp-defizienten Maus und menschlichen Zellen zu rekonstituieren &uuml;berwunden. Wir nehmen daher, dass transcriptionally geregelte Lentivirale Vektoren eine sicherere und effizientere Alternative f&uuml;r die Entwicklung von klinischen Protokollen der Gentherapie WAS dar.

Hematopoietic-spezifische Lentivirale Vektoren umgehen zellul&auml;re Toxizit&auml;t durch ektopische Expression des Proteins Wiskott - Aldrich-Syndrom.

Modificazione genetica efficiente e sicura di cellule staminali ematopoietiche &egrave; un requisito per la terapia genica delle Immunodeficienze primarie quali Wiskott - Aldrich-Syndroms. Tuttavia, deregolamentato espressione o ectopica nella progenie di cellule progenitrici non emopoietico trasdotte possono portare a tossicit&agrave; indesiderate. Abbiamo quindi analizzato l&#39;effetto di espressione ectopica della proteina Wiskott - Aldrich-Syndroms (WASp) e i potenziali benefici di vettori lentivirali ematopoietici specifici (guidati dal promotore prossimale WAS). Sovraespressione di Vespa di vettori lentivirali costitutive &egrave; altamente tossici nelle cellule non emopoietico perch&eacute; provoca cambiamenti drammatici nella localizzazione di actina e polimerizzazione che si traducono in una riduzione delle cellule vitalit&agrave;, come evidenziato da uno svantaggio significativo di crescita delle cellule non emopoietico con sovraesprimono relativa WASp e aumento delle cellule morte. Questi effetti tossici non influenzano le cellule di origine ematopoietica perch&eacute;, incredibilmente, abbiamo trovato che Vespa non pu&ograve; essere prontamente overexpressed in cellule T, anche dopo pi&ugrave; integrazioni di vettore per ogni cella. Gli effetti negativi del cellulari trovano dopo la trasduzione delle cellule non emopoietico con vettori lentivirali costitutive sono superati dall&#39;uso di transcriptionally mirati vettori lentivirali esprimendo WASp, che, allo stesso tempo, sono strumenti efficaci per la terapia genica di WAS, come dimostrato dalla loro capacit&agrave; di ricostituire il cellulari difetti da WASp-carenti mouse e cellule umane. Abbiamo pertanto postulato che vettori lentivirali transcriptionally regolamentati rappresentano un&#39;alternativa pi&ugrave; sicura ed efficace per lo sviluppo di protocolli clinici di terapia genica WAS.

Vettori lentivirali hematopoietic specifica aggirare tossicit&agrave; cellulare a causa della espressione ectopica della proteina di Wiskott - Aldrich-Syndroms.

&#x9020;&#x8840;&#x5E79;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x52B9;&#x7387;&#x7684;&#x3067;&#x5B89;&#x5168;&#x306A;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x6539;&#x5909;&#x30A6;&#x30A3;&#x30B9;&#x30B3;&#x30C3;&#x30C8;&#x30A2;&#x30EB;&#x30C9;&#x30EA;&#x30C3;&#x30C1;&#x75C7;&#x5019;&#x7FA4;&#x306A;&#x3069;&#x306E;&#x4E00;&#x6B21;&#x514D;&#x75AB;&#x4E0D;&#x5168;&#x306E;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x7642;&#x6CD5;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x8981;&#x4EF6;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x305F;&#x3060;&#x3057;&#x3001;&#x898F;&#x5236;&#x7DE9;&#x548C;&#x5F0F;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x5F62;&#x8CEA;&#x5C0E;&#x5165;&#x3055;&#x308C;&#x305F; nonhematopoietic &#x524D;&#x99C6;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x5F8C;&#x4EE3;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x7570;&#x6240;&#x6027;&#x767A;&#x73FE;&#x4E0D;&#x8981;&#x306A;&#x6BD2;&#x6027;&#x306B;&#x3064;&#x306A;&#x304C;&#x308B;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005; &#x3057;&#x305F;&#x304C;&#x3063;&#x3066; Wiskott-Aldrich &#x75C7;&#x5019;&#x7FA4;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA; &#xFF08;WASp&#xFF09; &#x306E;&#x7570;&#x6240;&#x6027;&#x767A;&#x73FE;&#x3068; (WAS &#x8FD1;&#x4F4D;&#x30D7;&#x30ED;&#x30E2;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x99C6;&#x52D5;) &#x7279;&#x5B9A;&#x306E;&#x9020;&#x8840;&#x30EC;&#x30F3;&#x30C1;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x30D9;&#x30AF;&#x30BF;&#x30FC;&#x306E;&#x6F5C;&#x5728;&#x7684;&#x306A;&#x5229;&#x70B9;&#x306E;&#x52B9;&#x679C;&#x3092;&#x5206;&#x6790;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x69CB;&#x6210;&#x30EC;&#x30F3;&#x30C1;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x30D9;&#x30AF;&#x30BF;&#x30FC;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x904E;&#x5270; WASp &#x306E;&#x767A;&#x73FE;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C1;&#x30F3;&#x306E;&#x5C40;&#x5728;&#x306E;&#x5287;&#x7684;&#x306A;&#x5909;&#x5316;&#x3092;&#x539F;&#x56E0;&#x3057;&#x3001;&#x6E1B;&#x5C11;&#x7D50;&#x679C;&#x91CD;&#x5408;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x751F;&#x5B58;&#x7387;&#x3001;&#x305F;&#x3081;&#x30EF;&#x30B9;&#x30D7;&#x904E;&#x5270; nonhematopoietic &#x7D30;&#x80DE;&#x3068;&#x7D30;&#x80DE;&#x6B7B;&#x304C;&#x5897;&#x52A0;&#x306E;&#x8457;&#x3057;&#x3044;&#x6210;&#x9577;&#x6B20;&#x70B9;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x8A3C;&#x660E;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x3088;&#x3046;&#x306B; nonhematopoietic &#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x6BD2;&#x6027;&#x306E;&#x9AD8;&#x3044;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x9A5A;&#x304F;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3001;&#x6211;&#x3005; &#x306F; WASp T &#x7D30;&#x80DE;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x30BB;&#x30EB;&#x3054;&#x3068;&#x306E;&#x8907;&#x6570;&#x306E;&#x30D9;&#x30AF;&#x30C8;&#x30EB;&#x7D71;&#x5408;&#x5F8C;&#x3082;&#x5BB9;&#x6613;&#x306B;&#x30D2;&#x30C8;&#x30A2;&#x30F3;&#x30AE;&#x30AA;&#x30C6;&#x30F3;&#x30B7;&#x30CE;&#x30FC;&#x30B2;&#x30F3;&#x3092;&#x904E;&#x5270;&#x767A;&#x73FE;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306F;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x304C;&#x898B;&#x3064;&#x304B;&#x308A;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x306E;&#x3067;&#x3001;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x6709;&#x6BD2;&#x306A;&#x52B9;&#x679C;&#x9020;&#x8840;&#x306E;&#x8D77;&#x6E90;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x306F;&#x5F71;&#x97FF;&#x3057;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3002;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x526F;&#x4F5C;&#x7528;&#x306F;&#x3001;&#x540C;&#x6642;&#x306B;&#x3001;WAS &#x306E;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x6CBB;&#x7642;&#x306E;&#x52B9;&#x7387;&#x7684;&#x306A;&#x30C4;&#x30FC;&#x30EB; WASp-&#x6B20;&#x640D;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x3072;&#x3068;&#x7D30;&#x80DE;&#x304B;&#x3089;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x6B20;&#x9665;&#x3092;&#x518D;&#x69CB;&#x6210;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x5F7C;&#x3089;&#x306E;&#x80FD;&#x529B;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x793A;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x3088;&#x3046;&#x306B;&#x30EF;&#x30B9;&#x30D7;&#x3001;&#x8868;&#x73FE;&#x3059;&#x308B;&#x767A;&#x73FE;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x30BF;&#x30FC;&#x30B2;&#x30C3;&#x30C8; &#x30EC;&#x30F3;&#x30C1; &#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9; &#x30D9;&#x30AF;&#x30C8;&#x30EB;&#x306E;&#x4F7F;&#x7528;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x69CB;&#x6210;&#x30EC;&#x30F3;&#x30C1;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x30D9;&#x30AF;&#x30BF;&#x30FC;&#x3068; nonhematopoietic &#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x60C5;&#x5831;&#x4F1D;&#x9054;&#x306F;&#x514B;&#x670D;&#x5F8C;&#x306B;&#x767A;&#x898B;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x6211;&#x3005; &#x3057;&#x305F;&#x304C;&#x3063;&#x3066;&#x3001;&#x767A;&#x73FE;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x898F;&#x5236;&#x30EC;&#x30F3;&#x30C1;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x30D9;&#x30AF;&#x30BF;&#x30FC; WAS &#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x7642;&#x6CD5;&#x306E;&#x81E8;&#x5E8A;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C8;&#x30B3;&#x30EB;&#x306E;&#x958B;&#x767A;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x3088;&#x308A;&#x5B89;&#x5168;&#x3067;&#x52B9;&#x7387;&#x7684;&#x306A;&#x4EE3;&#x66FF;&#x3092;&#x8868;&#x3059;&#x516C;&#x6E96;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x9020;&#x8840;&#x56FA;&#x6709;&#x30EC;&#x30F3;&#x30C1;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x30D9;&#x30AF;&#x30BF;&#x30FC; Wiskott-Aldrich &#x75C7;&#x5019;&#x7FA4;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x7570;&#x6240;&#x6027;&#x767A;&#x73FE;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x7D30;&#x80DE;&#x6BD2;&#x6027;&#x3092;&#x56DE;&#x907F;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#xC870; &#xD608; &#xC904;&#xAE30; &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xD6A8;&#xC728;&#xC801;&#xC774; &#xACE0; &#xC548;&#xC804; &#xD558; &#xAC8C; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xC218;&#xC815; Wiskott-&#xC62C;&#xB4DC; &#xB9AC;&#xCE58; &#xC99D;&#xD6C4;&#xAD70; &#xB4F1; &#xAE30;&#xBCF8; &#xACB0;&#xD54D;&#xC99D;&#xC758; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xCE58;&#xB8CC;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC694;&#xAD6C; &#xC0AC;&#xD56D;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098;, &#xADDC;&#xC81C; &#xC644;&#xD654; &#xC2DD; &#xB610;&#xB294; transduced nonhematopoietic &#xC870;&#xC0C1; &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xC790;&#xC190;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC18C;&#xC131; &#xC2DD; &#xC6D0;&#xCE58; &#xC54A;&#xB294; &#xB3C5;&#xC131; &#xBC1C;&#xC0DD;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xB530;&#xB77C;&#xC11C; Wiskott-&#xC62C;&#xB4DC; &#xB9AC;&#xCE58; &#xC99D;&#xD6C4;&#xAD70; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; (WASp)&#xC758; &#xC18C;&#xC131; &#xC2DD; &#xBC0F; &#xC870; &#xD608; &#xAD00;&#xB828; lentiviral &#xBCA1;&#xD130; (WAS &#xADFC; &#xC704; &#xBC1C;&#xAE30;&#xC778;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xAD6C;&#xB3D9;)&#xC758; &#xC7A0;&#xC7AC;&#xC801;&#xC778; &#xD61C;&#xD0DD;&#xC758; &#xD6A8;&#xACFC;&#xB97C; &#xBD84;&#xC11D; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC81C;&#xC815; lentiviral &#xBCA1;&#xD130;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xB9D0; &#xBC8C;&#xC758; overexpression&#xC740; WASp overexpressing nonhematopoietic &#xC138;&#xD3EC; &#xC99D;&#xAC00; &#xC138;&#xD3EC; &#xC8FD;&#xC74C;&#xC758; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xC131;&#xC7A5; &#xB2E8;&#xC810;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC785;&#xC99D;&#xC73C;&#xB85C; &#xB9D0;&#xB77C; &#xC9C0;&#xC5ED;&#xD654;&#xC5D0; &#xADF9;&#xC801;&#xC778; &#xBCC0;&#xD654;&#xB97C; &#xC77C;&#xC73C;&#xD0A4;&#xB294; &#xAC10;&#xC18C; &#xADC0;&#xCC29;&#xB418;&#xB294; &#xC911; &#xD569; &#xC138;&#xD3EC; &#xC0DD;&#xC874;, &#xB54C;&#xBB38;&#xC5D0; &#xB9E4;&#xC6B0; nonhematopoietic &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0; &#xB3C5;&#xC131;. &#xB180;&#xB78D;&#xAC8C;&#xB3C4;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xB9D0; &#xBC8C; &#xC218; &#xC5C6;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xC27D;&#xAC8C; overexpressed T &#xC140;&#xC5D0; &#xC140; &#xB9C8;&#xB2E4; &#xC5EC;&#xB7EC; &#xBCA1;&#xD130; &#xD1B5;&#xD569; &#xD6C4;&#xC5D0; &#xBC1C;&#xACAC; &#xD558;&#xAE30; &#xB54C;&#xBB38;&#xC5D0; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xB3C5;&#xC131; &#xD6A8;&#xACFC; &#xC870; &#xD608; &#xC6D0;&#xBCF8; &#xC140; &#xC601;&#xD5A5;&#xC744; &#xC8FC;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC140;&#xB8F0;&#xB7EC; &#xBD80;&#xC791;&#xC6A9; &#xBC1C;&#xACAC; &#xD6C4; &#xC81C;&#xC815; lentiviral &#xBCA1;&#xD130; nonhematopoietic &#xC140;&#xC758; &#xBCC0;&#xD658; transcriptionally &#xD0C0;&#xAC9F;&#xB41C; lentiviral &#xBCA1;&#xD130; &#xD45C;&#xD604; &#xD558;&#xB294; &#xB9D0; &#xBC8C;, &#xB9D0; &#xBC8C; &#xBD88;&#xCDA9;&#xBD84; &#xD55C; &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4; &#xBC0F; &#xC778;&#xAC04;&#xC758; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC138;&#xD3EC; &#xACB0;&#xD568;&#xC744; &#xB2E4;&#xC2DC; &#xAD6C;&#xC131; &#xD558;&#xB294; &#xB2A5;&#xB825;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC99D;&#xBA85; WAS&#xC758; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xCE58;&#xB8CC;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xD6A8;&#xC728;&#xC801;&#xC778; &#xB3C4;&#xAD6C;&#xB294; &#xAC19;&#xC740; &#xC2DC;&#xAC04;&#xC5D0;&#xB294; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xADF9;&#xBCF5; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xB530;&#xB77C;&#xC11C; transcriptionally &#xB808; &#xADE4; &#xB808;&#xC774;&#xD2B8; &#xB41C; lentiviral &#xBCA1;&#xD130; WAS &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xCE58;&#xB8CC;&#xC758; &#xC784;&#xC0C1; &#xD504;&#xB85C;&#xD1A0;&#xCF5C; &#xAC1C;&#xBC1C;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC548;&#xC804; &#xD558; &#xACE0; &#xD6A8;&#xC728;&#xC801;&#xC778; &#xB300;&#xC548;&#xC744; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0C5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xACF5;&#xC900;.

Hematopoietic &#xD2B9;&#xC815; lentiviral &#xBCA1;&#xD130; &#xD68C;&#xD53C; &#xB54C;&#xBB38;&#xC5D0; &#xC18C;&#xC131; &#xC2DD; Wiskott-&#xC62C;&#xB4DC; &#xB9AC;&#xCE58; &#xC99D;&#xD6C4;&#xAD70; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xC138;&#xD3EC; &#xB3C5;&#xC131;.

Modificaci&oacute;n g&eacute;nica eficiente y segura de las c&eacute;lulas madre hematopoy&eacute;ticas es un requisito para la terapia g&eacute;nica de inmunodeficiencias primarias como s&iacute;ndrome de Wiskott &ndash; Aldrich. Sin embargo, la expresi&oacute;n liberalizado o expresi&oacute;n ect&oacute;pica en la progenie de c&eacute;lulas progenitoras de nonhematopoietic transduced puede llevar a toxicidad no deseada. Por lo tanto, hemos analizado el efecto de la expresi&oacute;n ect&oacute;pica de la prote&iacute;na del s&iacute;ndrome de Wiskott &ndash; Aldrich (avispa) y los beneficios potenciales de vectores lentivirales hematopoy&eacute;tico espec&iacute;ficos (conducidos por el promotor proximal WAS). Sobreexpresi&oacute;n de avispa por vectores lentivirales constitutivas es altamente t&oacute;xica en las c&eacute;lulas nonhematopoietic porque provoca cambios dram&aacute;ticos en la localizaci&oacute;n de actina y viabilidad de la c&eacute;lula de polimerizaci&oacute;n que resultan en disminuci&oacute;n evidenciada por una desventaja de un crecimiento significativo de avispa-overexpressing nonhematopoietic las c&eacute;lulas y la muerte de celdas. Estos efectos t&oacute;xicos no afectan a las c&eacute;lulas de origen hematopoy&eacute;tico porque, sorprendentemente, encontramos que avispa no puede ser f&aacute;cilmente sobreexpresada en c&eacute;lulas T, incluso despu&eacute;s de m&uacute;ltiples integraciones del vector por la c&eacute;lula. Los efectos adversos del celulares encontraron despu&eacute;s de transducci&oacute;n de c&eacute;lulas nonhematopoietic con vectores lentivirales constitutivas es superado por el uso de vectores lentivirales transcripcionalmente espec&iacute;ficas expresando la avispa, que, al mismo tiempo, son herramientas eficaces para la terapia g&eacute;nica de WAS como lo demuestra su capacidad para reconstituir los defectos celulares de rat&oacute;n avispa deficientes y c&eacute;lulas humanas. Por lo tanto postulamos que los vectores lentivirales regulados transcripcionalmente representan una alternativa m&aacute;s segura y eficiente para el desarrollo de protocolos cl&iacute;nicos de terapia g&eacute;nica WAS.

Vectores lentivirales hematopoietic espec&iacute;fica evitar toxicidad celular debido a la expresi&oacute;n ect&oacute;pica de la prote&iacute;na del s&iacute;ndrome de Wiskott &ndash; Aldrich.

&#x5DF2;&#x8BC1;&#x660E;&#x8840;&#x7BA1;&#x6D3B;&#x6027;&#x80A0;&#x80BD; (VIP) &#x65BD;&#x52A0;&#x5F3A;&#x5927;&#x7684;&#x514D;&#x75AB;&#x8C03;&#x8282;&#x6D3B;&#x6027;&#xFF0C;&#x5E76;&#x4E14;&#x5DF2;&#x627E;&#x5230;&#x6162;&#x75C5;&#x6BD2;&#x8F7D;&#x4F53;&#x7684;&#x4F7F;&#x7528;&#x662F;&#x57FA;&#x56E0;&#x4F20;&#x9012;&#x7684;&#x6709;&#x6548;&#x624B;&#x6BB5;&#x3002;&#x672C;&#x7814;&#x7A76;&#x62A5;&#x544A;&#x56E0;&#x6B64;&#x8FDB;&#x884C;&#x4E86;&#x8C03;&#x67E5;&#x7684;&#x53EF;&#x884C;&#x6027;&#x548C;&#x6548;&#x7387;&#x4F7F;&#x7528;&#x8868;&#x8FBE; VIP (LentiVIP) &#x7684;&#x6162;&#x75C5;&#x6BD2;&#x8F7D;&#x4F53;&#x7684;&#x57FA;&#x56E0;&#x6CBB;&#x7597;&#x7C7B;&#x98CE;&#x6E7F;&#x5173;&#x8282;&#x708E; (RA) &#x6CBB;&#x7597;&#x3002;

&#x5728;&#x4F53;&#x5185;&#x4F20;&#x9012;&#x7684;&#x6162;&#x75C5;&#x6BD2;&#x8F7D;&#x4F53;&#x8868;&#x8FBE;&#x8840;&#x7BA1;&#x6D3B;&#x6027;&#x80A0;&#x80BD;&#x4E92;&#x8865; DNA &#x4F5C;&#x4E3A;&#x80F6;&#x539F;&#x6027;&#x5173;&#x8282;&#x708E;&#x7684;&#x57FA;&#x56E0;&#x6CBB;&#x7597;&#x3002;

Vasoactive intestinal peptide (VIP) has been shown to exert potent immunomodulatory activity, and the use of lentiviral vectors has been found to be an effective means of gene delivery. The present study was therefore undertaken to investigate the feasibility and efficiency of gene therapy using lentiviral vectors expressing VIP (LentiVIP) for the treatment of rheumatoid arthritis (RA).

In vivo delivery of lentiviral vectors expressing vasoactive intestinal peptide complementary DNA as gene therapy for collagen-induced arthritis.

Le peptide intestinal vasoactif (VIP) a &eacute;t&eacute; montr&eacute; pour exercer une activit&eacute; immunomodulatrice puissant, et l&#39;utilisation de vecteurs LENTIVIRAUX s&#39;est av&eacute;r&eacute;e pour &ecirc;tre un moyen efficace de livraison de g&egrave;ne. La pr&eacute;sente &eacute;tude visait donc &agrave; &eacute;tudier la faisabilit&eacute; et l&#39;efficacit&eacute; de la th&eacute;rapie g&eacute;nique &agrave; l&#39;aide de vecteurs LENTIVIRAUX exprimant VIP (LentiVIP) pour le traitement de la polyarthrite rhumato&iuml;de (PR).

Livraison in vivo des g&egrave;nes, vecteurs exprimant le peptide intestinal vasoactif l&#39;ADN compl&eacute;mentaire comme la th&eacute;rapie g&eacute;nique pour l&#39;arthrite induite par le collag&egrave;ne.

Vasoaktives intestinales Peptid (VIP) ist gezeigt worden, um potente immunmodulatorische Aktivit&auml;t aus&uuml;ben, und die Verwendung von Lentiviralen Vektoren hat ein wirksames Mittel der Gen-Lieferung festgestellt wurde. Die vorliegende Studie wurde deshalb unternommen, um die Durchf&uuml;hrbarkeit und Wirksamkeit der Gentherapie mit Lentivirale Vektoren Ausdr&uuml;cken VIP (LentiVIP) untersuchen zur Behandlung der rheumatoiden Arthritis (RA).

In-vivo Lieferung von Lentiviralen Vektoren auszudr&uuml;cken Vasoaktives intestinales Peptid komplement&auml;re DNA als Gentherapie f&uuml;r Kollagen-induzierte Arthritis.

Peptide intestinale vasoattivo (VIP) ha dimostrato di esercitare attivit&agrave; potente immunomodulatore, e l&#39;utilizzo di vettori lentivirali &egrave; stato trovato per essere un efficacia mezzo di consegna del gene. Il presente studio &egrave; stato intrapreso quindi per studiare la fattibilit&agrave; e l&#39;efficacia della terapia genica con vettori lentivirali esprimendo VIP (LentiVIP) per il trattamento dell&#39;artrite reumatoide (RA).

Consegna in vivo di lentivirali di vettori che esprimono peptide intestinale vasoattivo DNA complementare come terapia genica per l&#39;artrite collageno-indotta.

&#x5F37;&#x529B;&#x306A;&#x514D;&#x75AB;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x6D3B;&#x6027;&#x3092;&#x767A;&#x63EE;&#x3059;&#x308B;&#x8840;&#x7BA1;&#x4F5C;&#x52D5;&#x6027;&#x8178;&#x7BA1;&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C9; (VIP) &#x304C;&#x793A;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3001;&#x30EC;&#x30F3;&#x30C1;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x30D9;&#x30AF;&#x30BF;&#x30FC;&#x306E;&#x4F7F;&#x7528;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x30C7;&#x30EA;&#x30D0;&#x30EA;&#x30FC;&#x306E;&#x52B9;&#x679C;&#x7684;&#x306A;&#x624B;&#x6BB5;&#x3092;&#x767A;&#x898B;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x672C;&#x7814;&#x7A76;&#x306F;&#x3001;&#x3057;&#x305F;&#x304C;&#x3063;&#x3066;&#x306E;&#x6CBB;&#x7642;&#x6162;&#x6027;&#x95A2;&#x7BC0;&#x30EA;&#x30A6;&#x30DE;&#x30C1; (RA) &#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x3068; VIP (LentiVIP) &#x3092;&#x8868;&#x73FE;&#x3059;&#x308B;&#x30EC;&#x30F3;&#x30C1;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x30D9;&#x30AF;&#x30BF;&#x30FC;&#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x305F;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x6CBB;&#x7642;&#x306E;&#x52B9;&#x7387;&#x3092;&#x8ABF;&#x67FB;&#x3092;&#x5B9F;&#x65BD;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;

&#x30EC;&#x30F3;&#x30C1; &#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x306E; in vivo &#x3067;&#x306E;&#x914D;&#x4FE1;&#x306F;&#x30B3;&#x30E9;&#x30FC;&#x30B2;&#x30F3;&#x8A98;&#x767A;&#x95A2;&#x7BC0;&#x708E;&#x306B;&#x5BFE;&#x3059;&#x308B;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x6CBB;&#x7642;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x8868;&#x73FE;&#x3059;&#x308B;&#x8840;&#x7BA1;&#x4F5C;&#x52D5;&#x6027;&#x8178;&#x7BA1;&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C9;&#x306E;&#x76F8;&#x88DC;&#x7684; DNA &#x3092;&#x30D9;&#x30AF;&#x30C8;&#x30EB;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#xAC15;&#xB825;&#xD55C; immunomodulatory &#xD65C;&#xB3D9;&#xC744; &#xBC1C;&#xD718; &#xD558; vasoactive &#xCC3D; &#xC790; &#xD3A9; &#xD2F0; &#xB4DC; (VIP&#xAC00;) &#xD45C;&#xC2DC; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xBC0F; lentiviral &#xBCA1;&#xD130; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xC804;&#xB2EC;&#xC758; &#xD6A8;&#xACFC;&#xC801;&#xC778; &#xC218;&#xB2E8; &#xB420; &#xBC1C;&#xACAC; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xD604;&#xC7AC;&#xC758; &#xC5F0;&#xAD6C; &#xB530;&#xB77C;&#xC11C; &#xB958; &#xB9C8;&#xD2F0;&#xC2A4; &#xAD00;&#xC808;&#xC5FC; (RA)&#xC758; &#xCE58;&#xB8CC;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xD0C0;&#xB2F9;&#xC131; &#xBC0F; VIP (LentiVIP)&#xC744; &#xD45C;&#xD604; &#xD558;&#xB294; lentiviral &#xBCA1;&#xD130;&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xCE58;&#xB8CC;&#xC758; &#xD6A8;&#xC728;&#xC131; &#xC870;&#xC0AC;&#xB97C; &#xCC29;&#xC218; &#xD588;&#xB2E4;.

Lentiviral&#xC758; &#xC0DD;&#xCCB4; &#xC870;&#xAC74; &#xBC30;&#xB2EC; &#xCF5C;&#xB77C;&#xAC90; &#xC720;&#xBC1C; &#xAD00;&#xC808;&#xC5FC;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xCE58;&#xB8CC;&#xB85C; &#xD45C;&#xD604; vasoactive &#xCC3D; &#xC790; &#xD3A9; &#xD2F0; &#xB4DC; &#xBCF4;&#xC644; DNA &#xBCA1;&#xD130;.

P&eacute;ptido intestinal vasoactivo (VIP) se ha demostrado para ejercer actividad inmunomoduladora potente, y el uso de vectores lentivirales se ha encontrado para ser un medio eficaz de genes. Por lo tanto, el actual estudio fue emprendido para investigar la viabilidad y eficacia de la terapia g&eacute;nica con vectores lentivirales expresando a VIP (LentiVIP) para el tratamiento de la artritis reumatoide (ar).

Entrega en vivo de lentivirales vectores expresando su ADN complementario de p&eacute;ptido intestinal vasoactivo como terapia g&eacute;nica para la artritis inducida por col&aacute;geno.

&#x4E3B;&#x5E7C;&#x7AE5; (PID) &#x662F;&#x7531;&#x635F;&#x5BB3;&#x53D1;&#x5C55;&#x6216;&#x6D3B;&#x6027;&#x7684;&#x514D;&#x75AB;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x7684;&#x57FA;&#x56E0;&#x7A81;&#x53D8;&#x5F15;&#x8D77;&#x7684;&#x3002;&#x867D;&#x7136;&#x9AA8;&#x9AD3;&#x79FB;&#x690D;&#x5B9E;&#x73B0;&#x957F;&#x65F6;&#x95F4;&#x6062;&#x590D;&#x8FBE; 90%&#x7684;&#x624B;&#x672F;&#x6CBB;&#x7597;&#xFF0C;&#x53D1;&#x75C5;&#x7387;&#x548C;&#x6B7B;&#x4EA1;&#x7387;&#x90FD;&#x4ECD;&#x7136;&#x5F88;&#x9AD8;&#x4E00;&#x4E9B;&#x7684; PID &#x548C;&#x8DB3;&#x591F;&#x7684;&#x6350;&#x52A9;&#x8005;&#x5E76;&#x975E;&#x59CB;&#x7EC8;&#x53EF;&#x7528;&#x3002;&#x57FA;&#x56E0;&#x7597;&#x6CD5; (GT) &#x4F5C;&#x4E3A;&#x4E00;&#x79CD;&#x66FF;&#x4EE3;&#x5904;&#x7406;&#x4E3A; PID &#x6240;&#x8BBE;&#x60F3;&#x7684;&#x90A3;&#x6837;&#x6B63;&#x786E;&#x7684;&#x57FA;&#x56E0;&#x63D2;&#x5165;&#x75C5;&#x4EBA;&#x7684;&#x9020;&#x8840;&#x5E72;&#x7EC6;&#x80DE; (&#x661F;)&#x3002;&#x5230;&#x76EE;&#x524D;&#x4E3A;&#x6B62;&#xFF0C;PID &#x7684; GT &#x5DF2;&#x6210;&#x529F; 40 44 &#x6CBB;&#x7597;&#x7684;&#x75C5;&#x4EBA;&#x4E2D;&#x56DB;&#x4E2A;&#x4E34;&#x5E8A;&#x8BD5;&#x9A8C;&#x3002;&#x7136;&#x800C;&#xFF0C;&#x4E94;&#x4E2A;&#x513F;&#x7AE5;&#x5165;&#x5B66; SCID-X 1 &#x4E34;&#x5E8A;&#x8BD5;&#x9A8C;&#x5F00;&#x53D1;&#x767D;&#x8840;&#x75C5;&#x6837;&#x75BE;&#x75C5;&#x4EA7;&#x751F;&#x7684;&#x764C;&#x57FA;&#x56E0;&#x7684;&#x5F02;&#x5E38;&#x8868;&#x8FBE;&#x3002;&#x8FD9;&#x79CD;&#x73B0;&#x8C61;&#x9020;&#x6210;&#x81F4;&#x547D;&#x7684;&#x4E00;&#x4F4D;&#x75C5;&#x4EBA;&#xFF0C;&#x4EE3;&#x8868;&#x4E86;&#x57FA;&#x56E0;&#x6CBB;&#x7597;&#x7684;&#x4E25;&#x91CD;&#x632B;&#x6298;&#x3002;&#x81EA;&#x90A3;&#x65F6;&#x4EE5;&#x6765;&#xFF0C;&#x77E2;&#x91CF;&#x53D1;&#x5C55;&#x4E00;&#x76F4;&#x662F;&#x4F18;&#x5148;&#x4E8B;&#x9879;&#x5728; GT &#x5B57;&#x6BB5;&#x4E2D;&#xFF0C;&#x901A;&#x8FC7;&#x7CBE;&#x70BC;&#x73B0;&#x6709;&#x5C0F;&#x9F20; laeukemia &#x75C5;&#x6BD2; (MLV)-&#x57FA;&#x4E8E;&#x5411;&#x91CF;&#x6216;&#x5236;&#x5B9A;&#x65B0;&#x7684;&#x3002;&#x8FD9;&#x9879;&#x68C0;&#x8BA8;&#x4E3A; PID GT &#x7A81;&#x51FA;&#x52A8;&#x7269;&#x6A21;&#x578B;&#x7684; PID GT &#x6210;&#x529F;&#x7684;&#x91CD;&#x8981;&#x6027;&#x548C;&#x65B0;&#x57FA;&#x56E0;&#x8F6C;&#x79FB;&#x8F7D;&#x4F53;&#x4E3A;&#x91CD;&#x70B9;&#xFF0C;&#x4EE5;&#x5B9E;&#x73B0;&#x5B89;&#x5168;&#x3001; &#x9AD8;&#x6548;&#x3001; &#x7A33;&#x5B9A;&#x7684;&#x57FA;&#x56E0;&#x4FEE;&#x9970;&#x603B;&#x7ED3;&#x73B0;&#x6709;&#x7684;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3002;

&#x66F4;&#x5B89;&#x5168;&#x7684;&#x4E3B;&#x5E7C;&#x7AE5;&#x7684;&#x57FA;&#x56E0;&#x6CBB;&#x7597;&#x8F7D;&#x4F53;&#x3002;

Primary immunodeficiencies (PID) are caused by mutations in genes that impair the development or activity of the immune system. Although bone marrow transplants achieve long time restoration in up to 90% of treated patients, morbidity and mortality are still high for some PID and adequate donors are not always available. Gene Therapy (GT) was envisioned as an alternative treatment for PID by inserting the correct gene into the patient's haematopoietic stem cells (HSCs). Up to date, GT for PID has succeeded in 40 of 44 patients treated in four clinical trials. However, five children enrolled in the SCID-X1 clinical trial developed leukaemia-like disease produced by aberrant expression of oncogenes. This phenomenon resulted fatal in one patient and represented a severe setback for gene therapy. Since then, vector development has been a priority in the GT field, by refining existing Murine laeukemia virus (MLV)-based vectors or by developing new ones. This review summarize existing methodologies for PID GT highlighting the importance of animal models in the PID GT success and focusing on new gene transfer vectors to achieve safe, efficient and stable gene modification.

Safer vectors for gene therapy of primary immunodeficiencies.

Inmunodeficiencias primarias (PID) son causados por mutaciones en los genes que afectan el desarrollo o la actividad del sistema inmune. Aunque los trasplantes de m&eacute;dula &oacute;sea alcanzar largo restauraci&oacute;n de tiempo en hasta un 90% de pacientes tratados, morbilidad y mortalidad siguen siendo altos para algunos PID y donantes adecuados no siempre est&aacute;n disponibles. Terapia del gene (GT) fue concebido como un tratamiento alternativo por PID introduciendo el gen correcto en las c&eacute;lulas del paciente madre hematopoy&eacute;ticas (HSCs). Hasta la fecha, GT para PID ha logrado 40 de 44 pacientes tratados en cuatro ensayos cl&iacute;nicos. Sin embargo, cinco ni&ntilde;os matriculados en el ensayo cl&iacute;nico de SCID - X 1 desarrollaron leucemia-como enfermedad producida por la expresi&oacute;n aberrante de oncogenes. Este fen&oacute;meno result&oacute; fatal en un paciente y represent&oacute; un grave rev&eacute;s para la terapia g&eacute;nica. Desde entonces, el vector de desarrollo ha sido una prioridad en el campo GT, refinando los virus murino laeukemia existentes (MLV)-basado en vectores o por desarrollar nuevos. Esta revisi&oacute;n resume metodolog&iacute;as existentes para que GT PID resaltando la importancia de modelos animales en el &eacute;xito de GT PID y enfocando nuevos vectores de transferencia g&eacute;nica lograr la modificaci&oacute;n gen&eacute;tica segura, eficiente y estable.

Vectores m&aacute;s seguros para la terapia g&eacute;nica de inmunodeficiencias primarias.

D&eacute;ficits immunitaires primaires (PID) sont caus&eacute;es par des mutations dans les g&egrave;nes qui entravent le d&eacute;veloppement ou l&#39;activit&eacute; du syst&egrave;me immunitaire. Bien que les greffes de moelle osseuse atteindre long temps restauration chez 90 % des patients trait&eacute;s, la morbidit&eacute; et la mortalit&eacute; sont toujours &eacute;lev&eacute;s pour certains PID et bailleurs de fonds ad&eacute;quats ne sont pas toujours disponibles. Gene Therapy (GT) a &eacute;t&eacute; envisag&eacute;e comme un traitement alternatif pour PID en y ins&eacute;rant le g&egrave;ne correct souches h&eacute;matopo&iuml;&eacute;tiques du patient (CSH). Mis &agrave; jour GT pour le PID a r&eacute;ussi dans 40 des 44 patients trait&eacute;s dans quatre essais cliniques. Toutefois, cinq enfants inscrits dans l&#39;essai clinique de SCID - X 1 mis au point la maladie semblable &agrave; la leuc&eacute;mie, produite par l&#39;expression aberrante d&#39;oncog&egrave;nes. Ce ph&eacute;nom&egrave;ne a entra&icirc;n&eacute; fatal chez un patient et repr&eacute;sente un grave revers pour la th&eacute;rapie g&eacute;nique. Depuis lors, vecteur de d&eacute;veloppement a &eacute;t&eacute; une priorit&eacute; dans le domaine de la GT, en affinant les virus existants de laeukemia Murine (MLV)-base de vecteurs ou de d&eacute;velopper de nouveaux. Cette revue r&eacute;sume les m&eacute;thodologies existantes pour PID GT en soulignant l&#39;importance des mod&egrave;les animaux dans le succ&egrave;s de PID GT et en se concentrant sur les nouveaux vecteurs de transfert de g&egrave;ne r&eacute;aliser la modification g&eacute;nique s&eacute;curitaire, efficace et stable.

Vecteurs plus s&ucirc;res pour la th&eacute;rapie g&eacute;nique des immunod&eacute;ficiences primaires.

Prim&auml;re Immundefekte (PID) entstehen durch Mutationen in Genen, die die Entwicklung oder die Aktivit&auml;t des Immunsystems beeintr&auml;chtigen. Obwohl Knochenmarktransplantationen lange Zeit Wiederherstellung bei bis zu 90 % der behandelten Patienten erreichen, Morbidit&auml;t und Mortalit&auml;t sind immer noch hoch f&uuml;r einige PID und geeignete Spender sind nicht immer verf&uuml;gbar. Gen Therapie (GT) war als eine alternative Behandlung f&uuml;r PID geplant, indem das richtige gen in der behandelnde h&auml;matopoetische Stammzellen (HSCs) eingef&uuml;gt. Aktuell, gelungen, GT f&uuml;r PID in 40 von 44 Patienten, die in vier Studien behandelt. Jedoch entwickelt f&uuml;nf Kinder einer ersten klinischen Studie SCID - X 1 Leuk&auml;mie-&auml;hnliche Krankheit produziert durch aberrante Expression Onkogene. Dieses Ph&auml;nomen f&uuml;hrte zu schwerwiegenden in einem Patienten und vertreten einen herber R&uuml;ckschlag f&uuml;r Gentherapie. Vektor-Entwicklung hat seitdem eine Priorit&auml;t im Feld GT durch Raffination vorhandenen murinen Laeukemia Virus (MLV)-basierte Vektoren oder durch die neue Entwicklung. Diesen Bericht zusammenfassen bestehende Methoden f&uuml;r PID-GT Hervorhebung der Bedeutung von Tiermodellen in der PID-GT-Erfolg und die Konzentration auf neue Transfer Genvektoren, sichere, effiziente und stabile genetischer Ver&auml;nderungen zu erreichen.

Sicherer Vektoren f&uuml;r die Gentherapie der prim&auml;re Immundefekte.

Immunodeficienze primarie (PID) sono causate da mutazioni in geni che compromettere lo sviluppo o l&#39;attivit&agrave; del sistema immunitario. Sebbene trapianti di midollo osseo raggiungere lungo restauro di tempo nel 90% dei pazienti trattati, morbilit&agrave; e mortalit&agrave; sono ancora elevati per alcuni PID e adeguati dei donatori non sono sempre disponibili. Gene Therapy (GT) &egrave; stato concepito come un trattamento alternativo per PID inserendo il gene corretto nelle cellule staminali ematopoietiche del paziente (HSCs). Fino ad oggi, GT per PID &egrave; riuscito a 40 di 44 pazienti trattati in quattro studi clinici. Tuttavia, cinque bambini arruolati nel trial clinico di SCID-X1 sviluppato leucemia-come malattia prodotta da aberrante espressione di oncogeni. Questo fenomeno ha portato fatale in un paziente e rappresentato una grave battuta d&#39;arresto per la terapia genica. Da allora, lo sviluppo del vettore &egrave; stata una priorit&agrave; nel campo GT, mediante raffinazione esistente murino laeukemia virus (MLV)-basato su vettori o da sviluppandone di nuove. Questa recensione riepilogare le metodologie esistenti per PID GT evidenziando l&#39;importanza di modelli animali di successo PID GT e concentrandosi sui vettori di trasferimento nuovo gene ottenere la modificazione genetica sicuro, efficiente e stabile.

Safer vettori per la terapia genica delle Immunodeficienze primarie.

&#x4E00;&#x6B21;&#x514D;&#x75AB;&#x4E0D;&#x5168; (PID) &#x306F;&#x3001;&#x958B;&#x767A;&#x3084;&#x514D;&#x75AB;&#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E0;&#x306E;&#x6D3B;&#x52D5;&#x3092;&#x640D;&#x306A;&#x3046;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x7A81;&#x7136;&#x5909;&#x7570;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x5F15;&#x304D;&#x8D77;&#x3053;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x9AA8;&#x9AC4;&#x79FB;&#x690D;&#x306F; 90% &#x307E;&#x3067;&#x6CBB;&#x7642;&#x60A3;&#x8005;&#x306E;&#x9577;&#x3044;&#x6642;&#x9593;&#x4FEE;&#x5FA9;&#x3092;&#x5B9F;&#x73FE;&#x3059;&#x308B;&#x304C;&#x3001;&#x7F79;&#x60A3;&#x7387;&#x3068;&#x6B7B;&#x4EA1;&#x7387;&#x306F;&#x3044;&#x304F;&#x3064;&#x304B;&#x306E; PID &#x3092;&#x307E;&#x3060;&#x9AD8;&#x3044;&#x3067;&#x3059;&#x3001;&#x5341;&#x5206;&#x306A;&#x30C9;&#x30CA;&#x30FC;&#x304C;&#x5E38;&#x306B;&#x5229;&#x7528;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3002;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x7642;&#x6CD5; (GT) &#x306F;&#x6B63;&#x3057;&#x3044;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x3092;&#x60A3;&#x8005;&#x306E;&#x9020;&#x8840;&#x5E79;&#x7D30;&#x80DE; (HSCs) &#x306B;&#x633F;&#x5165;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x3001;PID &#x306E;&#x4EE3;&#x66FF;&#x6CBB;&#x7642;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x60F3;&#x5B9A;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x305F;&#x3002;&#x307E;&#x3067;&#x306B; PID &#x306E; GT 40 4 &#x3064;&#x306E;&#x81E8;&#x5E8A;&#x8A66;&#x9A13;&#x3067;&#x6271;&#x308F;&#x308C;&#x308B; 44 &#x306E;&#x60A3;&#x8005;&#x306E;&#x6210;&#x529F;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x305F;&#x3060;&#x3057;&#x3001;SCID X 1 &#x81E8;&#x5E8A;&#x8A66;&#x9A13;&#x306B;&#x767B;&#x9332; 5 &#x4EBA;&#x306E;&#x5B50;&#x4F9B;&#x306E;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x7570;&#x5E38;&#x306E;&#x5F0F;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x751F;&#x6210;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x767D;&#x8840;&#x75C5;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306A;&#x75C5;&#x6C17;&#x3092;&#x958B;&#x767A;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x73FE;&#x8C61;&#x306F;&#x3001;&#x4E00;&#x4EBA;&#x306E;&#x60A3;&#x8005;&#x306B;&#x81F4;&#x547D;&#x7684;&#x306A;&#x7D50;&#x679C;&#x3057;&#x3001;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x6CBB;&#x7642;&#x306B;&#x3068;&#x3063;&#x3066;&#x91CD;&#x5927;&#x306A;&#x6253;&#x6483;&#x306F;&#x3001;&#x8868;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x305D;&#x308C;&#x4EE5;&#x6765;&#x3001;&#x30D9;&#x30AF;&#x30BF;&#x30FC;&#x958B;&#x767A;&#x306B;&#x512A;&#x5148; GT] &#x30D5;&#x30A3;&#x30FC;&#x30EB;&#x30C9;&#x3067;&#x3001;&#x65E2;&#x5B58;&#x306E;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9; laeukemia &#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9; (MLV) &#x3092;&#x7CBE;&#x88FD;&#x306B;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;-&#x30D9;&#x30AF;&#x30C8;&#x30EB; &#x30D9;&#x30FC;&#x30B9;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x65B0;&#x3057;&#x3044;&#x3082;&#x306E;&#x3092;&#x958B;&#x767A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x30EC;&#x30D3;&#x30E5;&#x30FC;&#x306F; PID PID GT &#x6210;&#x529F;&#x306E;&#x52D5;&#x7269;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x306E;&#x91CD;&#x8981;&#x6027;&#x3092;&#x5F37;&#x8ABF;&#x3057;&#x3001;&#x65B0;&#x3057;&#x3044;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x8EE2;&#x9001;&#x30D9;&#x30AF;&#x30C8;&#x30EB;&#x306B;&#x7126;&#x70B9;&#x3092;&#x5F53;&#x3066;&#x52B9;&#x7387;&#x7684;&#x3001;&#x5B89;&#x5168;&#x304B;&#x3064;&#x5B89;&#x5B9A;&#x3057;&#x305F;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x6539;&#x5909;&#x3092;&#x9054;&#x6210;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B; GT &#x306E;&#x65E2;&#x5B58;&#x306E;&#x65B9;&#x6CD5;&#x8AD6;&#x3092;&#x8981;&#x7D04;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x4E00;&#x6B21;&#x514D;&#x75AB;&#x4E0D;&#x5168;&#x306E;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x7642;&#x6CD5;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x3088;&#x308A;&#x5B89;&#x5168;&#x306A;&#x30D9;&#x30AF;&#x30C8;&#x30EB;&#x3002;

&#xAE30;&#xBCF8; &#xACB0;&#xD54D;&#xC99D; (PID)&#xB294; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xB97C; &#xAC1C;&#xBC1C; &#xB610;&#xB294; &#xBA74;&#xC5ED; &#xCCB4;&#xACC4;&#xC758; &#xD65C;&#xB3D9;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xBC1C;&#xC0DD; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xBE44;&#xB85D; &#xACE8; &#xC218; &#xC774;&#xC2DD; &#xCE58;&#xB8CC; &#xD658;&#xC790;&#xC758; 90%&#xC5D0;&#xC11C; &#xAE34; &#xC2DC;&#xAC04; &#xBCF5;&#xC6D0;, &#xBCD1; &#xC801; &#xC0C1;&#xD0DC;&#xC640; &#xC0AC;&#xB9DD;&#xB960;&#xC740; &#xC5EC;&#xC804;&#xD788; &#xB192;&#xC740; &#xC77C;&#xBD80; PID&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xBC0F; &#xC801;&#xC808; &#xD55C; &#xAE30;&#xC99D;&#xC790;&#xB294; &#xD56D;&#xC0C1; &#xC0AC;&#xC6A9;&#xD560; &#xC218; &#xC5C6;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xCE58;&#xB8CC; (GT) &#xD658;&#xC790;&#xC758; haematopoietic &#xC904;&#xAE30; &#xC138;&#xD3EC; (HSCs)&#xC5D0; &#xC62C;&#xBC14;&#xB978; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xB97C; &#xC0BD;&#xC785; &#xD558; &#xC5EC; PID&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xB300;&#xC548; &#xCE58;&#xB8CC;&#xB85C; &#xAD6C;&#xC0C1; &#xD588;&#xB2E4;. &#xCD5C;&#xC2E0;, PID&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; GT&#xB294; 4 &#xAC1C;&#xC758; &#xC784;&#xC0C1; &#xC2DC;&#xD5D8;&#xC5D0;&#xC11C; &#xCE58;&#xB8CC; 44 &#xD658;&#xC790;&#xC758; 40&#xC5D0; &#xC131;&#xACF5; &#xD588;&#xB2E4;. &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098;, SCID-X 1&#xC744; &#xC784;&#xC0C1; &#xC2DC;&#xD5D8;&#xC5D0; &#xB4F1;&#xB85D; &#xD55C; &#xB2E4;&#xC12F; &#xC544;&#xC774; &#xB4E4; &#xBC31;&#xD608;&#xBCD1; &#xCC98;&#xB7FC; &#xC9C8;&#xBCD1; oncogenes&#xC758; &#xD0C8; &#xC120; &#xC2DD;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC0DD;&#xC0B0; &#xAC1C;&#xBC1C;. &#xC774; &#xD604;&#xC0C1;&#xACFC; &#xD55C; &#xD658;&#xC790;&#xC5D0;&#xC11C; &#xCE58;&#xBA85;&#xC801; &#xACB0;&#xACFC; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xCE58;&#xB8CC;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC2EC;&#xAC01;&#xD55C; &#xC88C;&#xC808;&#xC744; &#xD45C;&#xD604;. &#xADF8; &#xC774;&#xD6C4;&#xB85C;, &#xBCA1;&#xD130; &#xAC1C;&#xBC1C; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; GT &#xBD84;&#xC57C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC6B0;&#xC120; &#xAE30;&#xC874; Murine laeukemia &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; (MLV)&#xB97C; &#xC815;&#xC81C; &#xD558; &#xC5EC;-&#xBCA1;&#xD130; &#xAE30;&#xBC18; &#xB610;&#xB294; &#xC758;&#xD574; &#xC0C8;&#xB85C;&#xC6B4; &#xAC83; &#xB4E4;&#xC744; &#xAC1C;&#xBC1C;. &#xC774; &#xAC80;&#xD1A0; &#xD6A8;&#xC728;&#xC801;&#xC778; &#xC548;&#xC804; &#xD558; &#xACE0; &#xC548;&#xC815;&#xC801;&#xC778; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xC218;&#xC815; &#xB2EC;&#xC131; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD574; PID GT PID GT &#xC131;&#xACF5; &#xB3D9;&#xBB3C; &#xBAA8;&#xB378;&#xC758; &#xC911;&#xC694;&#xC131;&#xC744; &#xAC15;&#xC870; &#xD558; &#xACE0; &#xC0C8;&#xB85C;&#xC6B4; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xC804;&#xC1A1; &#xACBD;&#xB85C;&#xC5D0; &#xCD08;&#xC810;&#xC744; &#xC704;&#xD574; &#xAE30;&#xC874; &#xBC29;&#xBC95;&#xB860;&#xC744; &#xC694;&#xC57D;.

&#xAE30;&#xBCF8; &#xACB0;&#xD54D;&#xC99D;&#xC758; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xCE58;&#xB8CC;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC548;&#xC804;&#xD55C; &#xBCA1;&#xD130;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#x62BD;&#x8C61;&#x7684;&#x53D1;&#x5C55;&#x6709;&#x6548;&#x5730;&#x8868;&#x8FBE;&#x6CBB;&#x7597;&#x8F6C;&#x57FA;&#x56E0;&#x7684;&#x5411;&#x91CF;&#x7684;&#x548C;&#x5177;&#x4F53;&#x7684;&#x9020;&#x8840;&#x7EC6;&#x80DE; &#xFF08;HCs&#xFF09; &#x662F;&#x57FA;&#x56E0;&#x6CBB;&#x7597;&#x8840;&#x6DB2;&#x75C5;&#x7684;&#x4E00;&#x4E2A;&#x91CD;&#x8981;&#x76EE;&#x6807;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x4EE5;&#x524D;&#x5DF2;&#x7ECF;&#x8868;&#x660E;&#xFF0C;&#x4ECE;&#x8FD1;&#x7AEF; 500 bp &#x7247;&#x6BB5;&#x662F;&#x57FA;&#x56E0;&#x542F;&#x52A8;&#x5B50;&#x7684;&#x8F7D;&#x4F53; (LV) &#x662F;&#x4E0D;&#x8DB3;&#x4EE5;&#x5B9E;&#x73B0;&#x7EF4;&#x65AF;&#x79D1;&#x7279;-&#x5965;&#x5C14;&#x5FB7;&#x91CC;&#x5947;&#x7EFC;&#x5408;&#x5F81;&#x86CB;&#x767D;&#x5728; nonhematopoietic &#x7EC6;&#x80DE; &#xFF08;&#x975E;&#x78B3;&#x6C27;&#x5316;&#x5408;&#x7269;) &#x6BD4;&#x78B3;&#x6C27;&#x5316;&#x5408;&#x7269;&#x4E2D;&#x7684;&#x591A;&#x4E2A; 100-fold &#x66F4;&#x9AD8;&#x6C34;&#x5E73;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x5C55;&#x793A;&#x73B0;&#x5728;&#xFF0C;&#x8FD9;&#x4E00;&#x5DEE;&#x5F02;&#x51CF;&#x5C11;&#x6700;&#x9AD8;&#x8FBE; 10 &#x500D;&#x65F6;&#x589E;&#x5F3A;&#x578B;&#x7EFF;&#x8272;&#x8367;&#x5149;&#x86CB;&#x767D;&#x57FA;&#x56E0; (eGFP) &#x8868;&#x793A;&#x800C;&#x4E0D;&#x662F;&#x5728;&#x540C;&#x4E00; LV &#x9AA8;&#x5E72;&#x3002;&#x63D2;&#x5165;&#x7684;&#x662F; cDNA &#x5E8F;&#x5217;&#x4E0B;&#x6E38;&#x7684;&#x7EFF;&#x8272;&#x8367;&#x5149;&#x86CB;&#x767D;&#x5728;&#x8FD9;&#x4E9B; LVs &#x4E86;&#x8F6C;&#x57FA;&#x56E0;&#x8868;&#x8FBE;&#x8D1F;&#x9762;&#x7684;&#x5F71;&#x54CD;&#x3002;&#x8FD9;&#x79CD;&#x6548;&#x679C;&#x5404;&#x4E0D;&#x76F8;&#x540C;&#xFF0C;&#x5728;&#x4E0D;&#x540C;&#x7684;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x7C7B;&#x578B;&#xFF0C;&#x4F46;&#x603B;&#x7684;&#x6765;&#x8BF4;&#xFF0C;&#x662F; cDNA &#x5E8F;&#x5217;&#x589E;&#x52A0;&#x9020;&#x8840;&#x7684;&#x7279;&#x6B8A;&#x6027;&#x662F;&#x542F;&#x52A8;&#x5B50;&#x9A71;&#x52A8; LV.&#x6211;&#x4EEC;&#x6709;&#x7279;&#x70B9;&#x6700;&#x5C11;&#x589E;&#x52A0;&#x9020;&#x8840;&#x7684;&#x7279;&#x5F02;&#x6027;&#x548C;&#x8868;&#x660E;&#x673A;&#x5236;&#x6D89;&#x53CA;&#x5230;&#x6240;&#x9700;&#x7684;&#x7247;&#x6BB5;&#x662F;&#x542F;&#x52A8;&#x5B50;&#x8C03;&#x63A7;&#x548C; RNA &#x52A0;&#x5DE5;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x5DF2;&#x8868;&#x660E;&#x662F; cDNA &#x5E8F;&#x5217;&#x5E72;&#x6270;&#x5242;&#x6D3B;&#x6027;&#x7684;&#x571F;&#x62E8;&#x9F20;&#x8F6C;&#x5F55;&#x540E;&#x6C34;&#x5E73;&#x8C03;&#x8282;&#x5143;&#x4EF6;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7ED3;&#x679C;&#x662F;&#x7B2C;&#x4E00;&#x4E2A;&#x6570;&#x636E;&#x663E;&#x793A;&#x7684;&#x4F5C;&#x7528;&#x662F;&#x5728;&#x57FA;&#x56E0;&#x8C03;&#x63A7;&#x7684;&#x57FA;&#x56E0;&#x5185;&#x6291;&#x5236;&#x5E8F;&#x5217;&#x3002;

CDNA &#x5E8F;&#x5217;&#x662F;&#x8C03;&#x5236;&#x8F6C;&#x57FA;&#x56E0;&#x8868;&#x8FBE;&#x7684;&#x662F;&#x542F;&#x52A8;&#x5B50;&#x9A71;&#x52A8;&#x7684;&#x6162;&#x75C5;&#x6BD2;&#x8F7D;&#x4F53;&#x3002;

Abstract The development of vectors that express a therapeutic transgene efficiently and specifically in hematopoietic cells (HCs) is an important goal for gene therapy of hematological disorders. We have previously shown that a 500-bp fragment from the proximal Was gene promoter in a lentiviral vector (LV) was sufficient to achieve more than 100-fold higher levels of Wiskott-Aldrich syndrome protein in HCs than in nonhematopoietic cells (non-HCs). We show now that this differential was reduced up to 10 times when the enhanced green fluorescent protein gene (eGFP) was expressed instead of Was in the same LV backbone. Insertion of Was cDNA sequences downstream of eGFP in these LVs had a negative effect on transgene expression. This effect varied in different cell types but, overall, Was cDNA sequences increased the hematopoietic specificity of Was promoter-driven LV. We have characterized the minimal fragment required to increase hematopoietic specificity and have demonstrated that the mechanism involves Was promoter regulation and RNA processing. In addition, we have shown that Was cDNA sequences interfere with the enhancer activity of the woodchuck posttranscriptional regulatory element. These results represent the first data showing the role of Was intragenic sequences in gene regulation.

Was cDNA sequences modulate transgene expression of was promoter-driven lentiviral vectors.

R&eacute;sum&eacute; la mise au point de vecteurs qui expriment un transg&egrave;ne th&eacute;rapeutique efficace et plus pr&eacute;cis&eacute;ment dans les cellules h&eacute;matopo&iuml;&eacute;tiques (HCs) est un objectif important pour la th&eacute;rapie g&eacute;nique des maladies h&eacute;matologiques. Nous avons d&eacute;montr&eacute; pr&eacute;c&eacute;demment qu&#39;un fragment de 500 PB de proximale a &eacute;t&eacute; le promoteur du g&egrave;ne dans un vecteur lentiviral (LV) ne suffisait pas atteindre plus de 100 fois plus &eacute;lev&eacute;s de prot&eacute;ine de Wiskott - Aldrich, syndrome de HCs que dans les cellules nonhematopoietic (non-HCs). Nous montrons maintenant que cette diff&eacute;rence a &eacute;t&eacute; r&eacute;duite jusqu&#39;&agrave; 10 fois quand le g&egrave;ne de la prot&eacute;ine fluorescente verte am&eacute;lior&eacute;e (eGFP) a &eacute;t&eacute; exprim&eacute; au lieu d&#39;a dans le m&ecirc;me squelette de LV. Insertion de s&eacute;quences d&#39;ADNc en aval d&#39;eGFP dans ces LVs avait un effet n&eacute;gatif sur l&#39;expression du transg&egrave;ne. Cet effet varie dans des types de cellules diff&eacute;rents mais, dans l&#39;ensemble, &eacute;tait s&eacute;quences d&#39;ADNc a augment&eacute; la sp&eacute;cificit&eacute; h&eacute;matopo&iuml;&eacute;tique d&#39;a &eacute;t&eacute; pilot&eacute;e par le promoteur LV Nous avons caract&eacute;ris&eacute; la minime fragment n&eacute;cessaire pour augmenter la sp&eacute;cificit&eacute; h&eacute;matopo&iuml;&eacute;tique et ont d&eacute;montr&eacute; que le m&eacute;canisme implique &eacute;tait r&egrave;glement promoteur et ARN. En outre, nous avons montr&eacute; que s&eacute;quences d&#39;ADNc interf&egrave;rent avec l&#39;activit&eacute; de renforceur de l&#39;&eacute;l&eacute;ment de r&eacute;gulation post-transcriptionnelle marmotte. Ces r&eacute;sultats constituent les premi&egrave;res donn&eacute;es montrant le r&ocirc;le d&#39;&eacute;tait intrag&eacute;niques s&eacute;quences dans la r&eacute;gulation des g&egrave;nes.

&Eacute;tait s&eacute;quences d&#39;ADNc modulent l&#39;expression des transg&egrave;nes d&#39;a &eacute;t&eacute; pilot&eacute;e par le promoteur des vecteurs LENTIVIRAUX.

Abstrakt die Entwicklung von Vektoren, die eine therapeutische Transgene effizient Ausdr&uuml;cken und speziell in h&auml;matopoetischen Zellen (HCs) ist ein wichtiges Ziel f&uuml;r Gentherapie h&auml;matologischen Erkrankungen. Wir haben bereits gezeigt, dass 500-bp Fragment aus dem proximalen war gen Projekttr&auml;ger in einem lentiviralen Vektor (LV) war ausreichend, mehr als verhundertfacht h&ouml;here Wiskott - Aldrich Syndrom Protein bei HCs als in Nonhematopoietic Zellen (HCs) zu erreichen. Wir zeigen jetzt, dass dieser Unterschied reduziert wurde bis zu 10 Mal wenn das erh&ouml;hte gr&uuml;n fluoreszierendes Protein-gen (eGFP) anstelle von bemessen war war im gleichen LV Backbone. Einf&uuml;gen von DNA-Sequenzen stromabw&auml;rts von eGFP in diese LVs hatte einen negativen Effekt auf Transgenexpression. Dieser Effekt variiert verschiedenen Zelle schreibt, aber insgesamt, war DNA-Sequenzen erh&ouml;ht die h&auml;matopoetische Spezifit&auml;t der Projekttr&auml;ger-gesteuerte LV wurde Wir haben charakterisiert die minimal Fragment h&auml;matopoetischen Spezifit&auml;t zu erh&ouml;hen und haben gezeigt, dass der Mechanismus beinhaltet war Projekttr&auml;ger Verordnung und RNA-Verarbeitung. Dar&uuml;ber hinaus haben wir gezeigt, dass war DNA-Sequenzen st&ouml;ren die Enhancer-Aktivit&auml;t der das Murmeltier Posttranscriptionale regulatorische Element. Diese Ergebnisse stellen die ersten Daten zeigen die Rolle des intragenic-Sequenzen in Genregulation wurde.

Wurde DNA-Sequenzen modulieren Transgenexpression von Lentivirale Vektoren Projekttr&auml;ger-getrieben wurde.

Astratto allo sviluppo di vettori che esprimono un transgene terapeutico in modo efficiente e in particolare in cellule ematopoietiche (HCs) &egrave; un obiettivo importante per la terapia genica delle malattie ematologiche. In precedenza abbiamo dimostrato che un frammento di 500 bp dalla prossimale &egrave; stato promotore del gene in un vettore lentivirale (LV) &egrave; stato sufficiente a raggiungere pi&ugrave; di 100 volte pi&ugrave; alti livelli della proteina di Wiskott - Aldrich-Syndroms nell&#39;HCs che nelle cellule non emopoietico (non-HCs). Mostriamo ora che questo differenziale &egrave; stato ridotto fino a 10 volte quando &egrave; stato espresso il gene della proteina fluorescente verde migliorato (eGFP) invece era la stessa spina dorsale LV. Inserimento di sequenze del cDNA a valle di eGFP in questi LVs ha un effetto negativo sull&#39;espressione del transgene. Questo effetto variato tipi differenti delle cellule ma, nel complesso, era sequenze del cDNA aumentata la specificit&agrave; ematopoietica del fu promotore-driven lv Noi abbiamo caratterizzato il minimo frammento necessaria per aumentare la specificit&agrave; ematopoietiche e hanno dimostrato che il meccanismo coinvolge fu promotore regolamento ed elaborazione di RNA. Inoltre, abbiamo dimostrato che era sequenze del cDNA interferire con l&#39;attivit&agrave; di rinforzatore dell&#39;elemento normativo posttranscriptional marmotta. Questi risultati rappresentano i primi dati che mostrano il ruolo di stato intragenic sequenze nella regolazione genica.

Era sequenze del cDNA modulano espressione del transgene di fu promotore-driven di vettori lentivirali.

&#x62BD;&#x8C61;&#x7684;&#x306A;&#x6CBB;&#x7642; transgene &#x3092;&#x52B9;&#x7387;&#x7684;&#x306B;&#x8868;&#x73FE;&#x306E;&#x30D9;&#x30AF;&#x30C8;&#x30EB;&#x306E;&#x7279;&#x306B;&#x9020;&#x8840;&#x7D30;&#x80DE; (HCs) &#x306E;&#x958B;&#x767A;&#x8840;&#x6DB2;&#x75BE;&#x60A3;&#x306E;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x6CBB;&#x7642;&#x306E;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x76EE;&#x6A19;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x79C1;&#x305F;&#x3061;&#x4EE5;&#x524D;&#x306F;&#x3001;&#x8FD1;&#x4F4D;&#x304B;&#x3089; 500 bp &#x30D5;&#x30E9;&#x30B0;&#x30E1;&#x30F3;&#x30C8;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B; (LV) &#x30EC;&#x30F3;&#x30C1;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x30D9;&#x30AF;&#x30BF;&#x30FC;&#x306E;&#x30D7;&#x30ED;&#x30E2;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC; Wiskott-Aldrich &#x75C7;&#x5019;&#x7FA4;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x3088;&#x308A; HCs nonhematopoietic &#x7D30;&#x80DE; (&#x975E; HCs) &#x306E; 100 &#x4EE5;&#x4E0A;&#x306E;&#x9AD8;&#x3044;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x3092;&#x9054;&#x6210;&#x3059;&#x308B;&#x306E;&#x306B;&#x5341;&#x5206;&#x3060;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x5DEE;&#x52D5;&#x6E1B;&#x5C11;&#x3057;&#x305F;&#x4ECA;&#x3067;&#x306F;&#x6211;&#x3005; &#x3068;&#x304D;&#x5F37;&#x5316;&#x7DD1;&#x8272;&#x86CD;&#x5149;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50; (eGFP) &#x306E;&#x4EE3;&#x308F;&#x308A;&#x306B;&#x8868;&#x73FE;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x6700;&#x5927; 10 &#x56DE;&#x307E;&#x3067;&#x8868;&#x793A;&#x540C;&#x3058; LV &#x30D0;&#x30C3;&#x30AF;&#x30DC;&#x30FC;&#x30F3;&#x3067;&#x3042;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x633F;&#x5165;&#x3055;&#x308C;&#x305F; cDNA &#x30B7;&#x30FC;&#x30B1;&#x30F3;&#x30B9;&#x4E0B;&#x6D41; eGFP &#x3053;&#x308C;&#x3089; LVs &#x3067;&#x3044;&#x305F;&#x5C0E;&#x5165;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x767A;&#x73FE;&#x306B;&#x60AA;&#x5F71;&#x97FF;&#x3092;&#x53CA;&#x307C;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x52B9;&#x679C;&#x3067;&#x69D8;&#x3005; &#x306A;&#x5168;&#x4F53;&#x7684;&#x306B;&#x306F;&#x3001;&#x578B;&#x306E;&#x7570;&#x306A;&#x308B;&#x30BB;&#x30EB;&#x3060;&#x3063;&#x305F; cDNA &#x30B7;&#x30FC;&#x30B1;&#x30F3;&#x30B9;&#x5897;&#x52A0;&#x9020;&#x8840;&#x306E;&#x7279;&#x7570;&#x6027;&#x5DE6;&#x306E;&#x30D7;&#x30ED;&#x30E2;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x306B;&#x99C6;&#x52D5;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x6211;&#x3005; &#x306F;&#x3001;&#x6700;&#x5C0F;&#x9650;&#x306B;&#x7279;&#x5FB4;&#x304C;&#x3042;&#x308B;&#x9020;&#x8840;&#x306E;&#x7279;&#x7570;&#x6027;&#x3092;&#x9AD8;&#x3081;&#x3001;&#x30E1;&#x30AB;&#x30CB;&#x30BA;&#x30E0;&#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x5FC5;&#x8981;&#x306A;&#x30D5;&#x30E9;&#x30B0;&#x30E1;&#x30F3;&#x30C8;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x30D7;&#x30ED;&#x30E2;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x898F;&#x5236;&#x3068; RNA &#x30D7;&#x30ED;&#x30BB;&#x30B7;&#x30F3;&#x30B0;&#x3002;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x3001;&#x79C1;&#x305F;&#x3061;&#x3060;&#x3063;&#x305F; cDNA &#x30B7;&#x30FC;&#x30B1;&#x30F3;&#x30B9;&#x5E72;&#x6E09;&#x3053;&#x3068;&#x30A6;&#x30C3;&#x30C9; &#x30C1;&#x30E3;&#x30C3;&#x30AF;&#x306E;&#x8EE2;&#x5199;&#x5F8C;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x30A8;&#x30EC;&#x30E1;&#x30F3;&#x30C8;&#x306E;&#x30A8;&#x30F3;&#x30CF;&#x30F3;&#x30B5;&#x30FC;&#x6D3B;&#x52D5;&#x306B;&#x793A;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x306E;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x793A;&#x3059;&#x6700;&#x521D;&#x306E;&#x30C7;&#x30FC;&#x30BF;&#x3092;&#x8868;&#x3059;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x30B7;&#x30FC;&#x30B1;&#x30F3;&#x30B9;&#x306E;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x767A;&#x73FE;&#x5236;&#x5FA1;&#x3060;&#x3063;&#x305F;&#x3002;

&#x3055;&#x308C;&#x305F; cDNA &#x30B7;&#x30FC;&#x30B1;&#x30F3;&#x30B9; &#x30E2;&#x30B8;&#x30E5;&#x30EC;&#x30FC;&#x30C8;&#x5C0E;&#x5165;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x767A;&#x73FE;&#x306E;&#x30D7;&#x30ED;&#x30E2;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x306B;&#x99C6;&#x52D5;&#x30EC;&#x30F3;&#x30C1;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x30D9;&#x30AF;&#x30BF;&#x30FC;&#x3092;&#x3060;&#x3063;&#x305F;&#x3002;

&#xCE58;&#xB8CC; transgene&#xB97C; &#xD6A8;&#xC728;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xD45C;&#xD604; &#xD558; &#xACE0; &#xD2B9;&#xD788; &#xC870; &#xD608; &#xC138;&#xD3EC; (HCs)&#xC740; &#xD608;&#xC561; &#xC9C8;&#xD658;&#xC758; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xCE58;&#xB8CC;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xBAA9;&#xD45C;&#xB294; &#xBCA1;&#xD130;&#xB97C; &#xAC1C;&#xBC1C; &#xD558;&#xB294; &#xCD94;&#xC0C1;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xADFC; &#xC704;&#xC5D0;&#xC11C; 500 bp &#xC870;&#xAC01; &#xD45C;&#xC2DC;&#xAC00; &#xC774;&#xC804;&#xC5D0; lentiviral &#xBCA1;&#xD130; (LV)&#xC5D0;&#xC11C; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xD504;&#xB85C;&#xBAA8;&#xD130;&#xB294; 100 &#xAC1C; &#xC774;&#xC0C1;&#xC758; &#xB192;&#xC740; &#xC218;&#xC900;&#xC758; nonhematopoietic &#xC140; (&#xBE44; HCs) &#xBCF4;&#xB2E4; Hcs&#xC5D0; Wiskott-&#xC62C;&#xB4DC; &#xB9AC;&#xCE58; &#xC99D;&#xD6C4;&#xAD70; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC744; &#xB2EC;&#xC131; &#xD558;&#xAE30;&#xC5D0; &#xCDA9;&#xBD84; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC; &#xD45C;&#xC2DC; &#xC774;&#xB2C8;&#xAE4C;&#xC774; &#xCC28;&#xB3D9; &#xAC10;&#xC18C; &#xD588;&#xB2E4; &#xCD5C;&#xB300; 10 &#xBC30;&#xAE4C;&#xC9C0; &#xD5A5;&#xC0C1; &#xB41C; &#xB179;&#xC0C9; &#xD615;&#xAD11; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC720;&#xC804;&#xC790; (eGFP) &#xB300;&#xC2E0; &#xD45C;&#xD604; &#xD588;&#xB2E4; &#xB54C; &#xB3D9;&#xC77C;&#xD55C; LV&#xB294; &#xBC31;&#xBCF8;&#xC744;. &#xC0BD;&#xC785;&#xC758; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xC815; &#xB9E5;&#xC774; &#xC8FC;&#xC0AC;&#xC5D0;&#xC11C; Egfp&#xC758; &#xD558;&#xB958; cDNA &#xC2DC;&#xD000;&#xC2A4; transgene &#xC2DD;&#xC5D0; &#xBD80;&#xC815;&#xC801;&#xC778; &#xC601;&#xD5A5;&#xC744; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC774; &#xD6A8;&#xACFC;&#xC5D0; &#xB2E4;&#xC591; &#xD55C; cDNA &#xC2DC;&#xD000;&#xC2A4; hematopoietic &#xD2B9;&#xC774;&#xC131;&#xC758; &#xC99D;&#xAC00; &#xB2E4;&#xB978; &#xC138;&#xD3EC; &#xC720;&#xD615; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC;, &#xC804;&#xBC18;&#xC801;&#xC778;, &#xBAA8;&#xD130; &#xAD6C;&#xB3D9; &#xB77C;&#xC2A4;&#xBCA0;&#xAC00;&#xC2A4;&#xB294; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xCD5C;&#xC18C;&#xD55C;&#xC758; &#xD2B9;&#xC9D5; &#xC788;&#xB294; &#xC870;&#xAC01; hematopoietic &#xD2B9;&#xC774;&#xC131;&#xC744; &#xC99D;&#xAC00; &#xD558; &#xACE0; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;&#xC5D0; &#xAD00;&#xB828; &#xB41C; &#xC785;&#xC99D; &#xD558;&#xB294; &#xB370; &#xD544;&#xC694;&#xD55C;&#xB294; &#xBC1C;&#xAE30;&#xC778; &#xADDC;&#xC815;&#xACFC; RNA &#xCC98;&#xB9AC;. &#xB610;&#xD55C;, &#xADF8;&#xB294; cDNA &#xC2DC;&#xD000;&#xC2A4; &#xBC29;&#xD574; &#xB9C8; posttranscriptional &#xADDC;&#xC81C; &#xC694;&#xC18C; &#xC99D;&#xAC15; &#xD65C;&#xB3D9; &#xBCF4;&#xC5EC; &#xC8FC;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xACB0;&#xACFC;&#xC758; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xBCF4;&#xC5EC; &#xC8FC;&#xB294; &#xCCAB; &#xBC88;&#xC9F8; &#xB370;&#xC774;&#xD130;&#xB97C; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0B4;&#xB294; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xC870;&#xC808; intragenic &#xC2DC;&#xD000;&#xC2A4;&#xB97C; &#xD588;&#xB2E4;.

CDNA &#xC2DC;&#xD000;&#xC2A4; &#xBCC0;&#xC870; transgene &#xD45C;&#xD604;&#xC758; lentiviral &#xBCA1;&#xD130; &#xBAA8;&#xD130; &#xAD6C;&#xB3D9; &#xD588;&#xB2E4;.

Resumen el desarrollo de vectores que expresan un transgen terap&eacute;utico eficaz y espec&iacute;ficamente en las c&eacute;lulas hematopoy&eacute;ticas (HCs) es un objetivo importante para la terapia g&eacute;nica de desordenes hematol&oacute;gicos. Previamente hemos demostrado que un fragmento de 500-bp de la pr&oacute;xima fue el promotor del gen en un vector lentivirales (LV) fue suficiente para conseguir m&aacute;s de centesimal a mayores niveles de prote&iacute;na del s&iacute;ndrome de Wiskott &ndash; Aldrich en HCs que en las c&eacute;lulas nonhematopoietic (no-HCs). Mostramos ahora que esta diferencia se redujo hasta 10 veces cuando el gen de la prote&iacute;na fluorescente verde mejorada (eGFP) se expres&oacute; en vez de en la misma columna vertebral de LV. Inserci&oacute;n de secuencias de cDNA aguas abajo de eGFP en estos LVs tuvo un efecto negativo en la expresi&oacute;n del transg&eacute;n. Este efecto variada en c&eacute;lulas diferentes tipos pero, total, fue secuencias de cDNA aumentaron la especificidad hematopoy&eacute;tica de fue impulsada por promotor LV Hemos caracterizado el m&iacute;nimo fragmento necesaria para aumentar la especificidad hematopoy&eacute;tico y han demostrado que el mecanismo implica fue promotor regulaci&oacute;n y procesamiento del RNA. Adem&aacute;s, hemos demostrado que era secuencias de cDNA interfiere con la actividad de potenciador del elemento regulador postranscripcional marmota. Estos resultados representan los primeros datos mostrando el papel de fue secuencias intrag&eacute;nicas en la regulaci&oacute;n g&eacute;nica.

Fue secuencias de cDNA modulan la expresi&oacute;n del transg&eacute;n de fue impulsada por promotor vectores lentivirales.

&#x6811;&#x7A81;&#x72B6;&#x7EC6;&#x80DE; (Dc) &#x542F;&#x52A8;&#x514D;&#x75AB;&#x5E94;&#x7B54;&#x4EE5;&#x53CA;&#x5BBD;&#x5BB9;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x4EE5;&#x524D;&#x663E;&#x793A;&#x795E;&#x7ECF;&#x80BD;&#x8840;&#x7BA1;&#x6D3B;&#x6027;&#x80A0;&#x80BD; (VIP) &#x53D6;&#x6D88;&#x56FA;&#x6709;&#x514D;&#x75AB;&#x53CD;&#x5E94;&#x3001; &#x901A;&#x8FC7;&#x76D1;&#x7BA1; T &#x7EC6;&#x80DE; &#xFF08;Treg&#xFF09; &#x751F;&#x6210;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x7684;&#x8010;&#x53D7;&#x96C6;&#x6563;&#x63A7;&#x5236;&#x7CFB;&#x7EDF; (tDCs)&#xFF0C;&#x901A;&#x8FC7;&#x8C03;&#x8282;&#x7684;&#x9002;&#x5E94;&#x5BF9;&#x7B56;&#x548C;&#x6A21;&#x578B;&#x7684;&#x81EA;&#x8EAB;&#x514D;&#x75AB;&#x6027;/&#x708E;&#x6027;&#x75BE;&#x75C5;&#x6709;&#x7597;&#x6548;&#x3002;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x6027; VIP &#x7BA1;&#x7406;&#x662F;&#x5176;&#x77ED;&#x7684;&#x751F;&#x7269;&#x534A;&#x8870;&#x671F;&#xFF0C;&#x53CA;&#x5176;&#x5BF9;&#x5FC3;&#x8840;&#x7BA1;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x548C;&#x80C3;&#x80A0;&#x9053;&#x7684;&#x591A;&#x6548;&#x6027;&#x5F71;&#x54CD;&#x6709;&#x9650;&#x3002;&#x56E0;&#x6B64;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x7528;&#x4E8E;&#x6162;&#x75C5;&#x6BD2;&#x8F7D;&#x4F53;&#x57FA;&#x56E0;&#x5DE5;&#x7A0B;&#x5E08;&#x8D35;&#x5BBE;&#x8868;&#x793A;&#x9AA8;&#x9AD3;&#x6E90; DC &#xFF08;&#x73B0;&#x4EE3;&#x821E;&#xFF09; &#x548C;&#x8868;&#x578B;&#x548C;&#x6A21;&#x578B;&#x7684;&#x5B9E;&#x9A8C;&#x6027;&#x81EA;&#x8EAB;&#x514D;&#x75AB;&#x6027;&#x8111;&#x810A;&#x9AD3;&#x708E; (EAE) &#x548C;&#x76F2;&#x80A0;&#x7ED3;&#x624E;&#x548C;&#x7A7F;&#x523A; &#xFF08;&#x4E2D;&#x7535;&#xFF09; &#x8113;&#x6BD2;&#x75C7;&#x7597;&#x6548;&#x7684;&#x8F6C;&#x5BFC;&#x7684; LentiVIP &#x76F4;&#x6D41;&#x7684;&#x7279;&#x70B9;&#x3002;LentiVIP DCs &#x5206;&#x6CCC;&#x8D35;&#x5BBE;&#xFF0C;&#x548C;&#x7C7B;&#x4F3C;&#x4E8E; tDCs &#x8F85;&#x52A9;&#x523A;&#x6FC0;&#x5206;&#x5B50;&#x8868;&#x8FBE;&#x4E0A;&#x8C03;&#xFF0C;&#x7F3A;&#x4E4F;&#x5206;&#x6CCC;&#x708E;&#x6027;&#x7EC6;&#x80DE;&#x56E0;&#x5B50;&#xFF0C;&#x589E;&#x52A0;&#x767D;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4ECB;&#x7D20; (IL)-10 &#x4EBA;&#x751F;&#x4EA7;&#x548C; T &#x7EC6;&#x80DE;&#x540C;&#x79CD;&#x5F02;&#x4F53;&#x7684;&#x4E0D;&#x826F;&#x523A;&#x6FC0;&#x3002;LentiVIP &#x76F4;&#x6D41; EAE &#x6216;&#x7535;&#x5C0F;&#x9F20;&#x5355;&#x4E2A;&#x63A5;&#x79CD;&#x4E86;&#x5206;&#x522B;&#x4E0E;&#x7B80;&#x5316;&#x7684;&#x8868;&#x8FBE;&#x5F0F;&#x7684;&#x708E;&#x6027;&#x7EC6;&#x80DE;&#x56E0;&#x5B50;&#x548C;&#x810A;&#x9AD3;&#x548C;&#x8179;&#x8154;&#x6DB2;&#x4E2D;&#x7684;&#x767D;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4ECB;&#x7D20;-10 &#x4EA7;&#x91CF;&#x589E;&#x52A0;&#x76F8;&#x5173;&#x7684;&#x6CBB;&#x7597;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;&#x4E0E;&#x9700;&#x8981;&#x53CD;&#x590D;&#x3001; &#x9AD8;&#x5242;&#x91CF;&#x63A5;&#x79CD;&#x7684;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x6027; VIP &#x7BA1;&#x7406;&#xFF0C;&#x7531; LentiVIP &#x76F4;&#x6D41; VIP &#x7684;&#x672C;&#x5730;&#x4F20;&#x9012;&#x53EF;&#x80FD;&#x4EE3;&#x8868;&#x6709;&#x524D;&#x9014;&#x7684;&#x6CBB;&#x7597;&#x81EA;&#x8EAB;&#x514D;&#x75AB;&#x6027;&#x75BE;&#x75C5;&#x548C;&#x708E;&#x75C7;&#x75BE;&#x75C5;&#x7684;&#x6CBB;&#x7597;&#x5DE5;&#x5177;&#x3002;

&#x8868;&#x8FBE; VIP &#x7684;&#x6162;&#x75C5;&#x6BD2;&#x8F7D;&#x4F53;&#x8F6C;&#x67D3;&#x6811;&#x7A81;&#x72B6;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5206;&#x5316;&#x6210; VIP &#x5206;&#x6CCC;&#x7C7B;&#x4F3C;&#x8010;&#x53D7;&#x7684;&#x533A;&#x8BAE;&#x4F1A;&#x3002;

Dendritic cells (DCs) initiate immune responses as well as tolerance. We showed previously that the neuropeptide vasoactive intestinal peptide (VIP) suppresses innate immune responses, modulates adaptive responses by generating regulatory T cells (Treg) through the induction of tolerogenic DCs (tDCs), and has therapeutic effects in models of autoimmune/inflammatory disorders. Systemic VIP administration is limited by its short biological half-life and by its pleiotropic effects on the cardiovascular system and gastrointestinal tract. Therefore, we used lentiviral vectors to genetically engineer VIP-expressing bone marrow-derived DC (BMDC) and characterized the transduced LentiVIP-DC in terms of phenotype and therapeutic effects in models of experimental autoimmune encephalomyelitis (EAE) and cecal ligation and puncture (CLP) sepsis. LentiVIP-DCs secrete VIP, and resemble tDCs through lack of co-stimulatory molecule upregulation, lack of proinflammatory cytokine secretion, increased interleukin (IL)-10 production, and poor stimulation of allogeneic T cells. A single inoculation of LentiVIP-DC in EAE or CLP mice had therapeutic effects, which correlated with reduced expression of proinflammatory cytokines and increased IL-10 production in spinal cord and peritoneal fluid, respectively. In contrast to systemic VIP administration that requires repeated, high-dose inoculations, local delivery of VIP by LentiVIP-DC may represent a promising therapeutic tool for the treatment of autoimmune diseases and inflammatory disorders.

Dendritic cells transduced with lentiviral vectors expressing VIP differentiate into VIP-secreting tolerogenic-like DCs.

Les cellules dendritiques (CD) initier des r&eacute;ponses immunitaires ainsi que la tol&eacute;rance. Nous avons montr&eacute; pr&eacute;c&eacute;demment que le neuropeptide peptide intestinal vasoactif (VIP) supprime les r&eacute;ponses immunitaires inn&eacute;es, module les r&eacute;ponses adaptatives en g&eacute;n&eacute;rant des lymphocytes T r&eacute;gulateurs (Treg) par le biais de l&#39;induction de tol&eacute;rog&egrave;ne DCs (CDV) et a des effets th&eacute;rapeutiques dans les mod&egrave;les de maladies auto-immunes et inflammatoires. Administration syst&eacute;mique de VIP est limit&eacute;e par sa courte demi-vie biologique et par ses effets pl&eacute;iotropiques sur le syst&egrave;me cardiovasculaire et le syst&egrave;me gastro-intestinal. Donc, nous avons utilis&eacute; des vecteurs LENTIVIRAUX &agrave; l&#39;ing&eacute;nieur g&eacute;n&eacute;tiquement DC de moelle osseuse exprimant le VIP (BMDC) et caract&eacute;rise le LentiVIP-DC transduite en termes de ph&eacute;notype et effets th&eacute;rapeutiques dans les mod&egrave;les de l&#39;enc&eacute;phalomy&eacute;lite allergique exp&eacute;rimentale (EAE) et ligature caecum et septic&eacute;mie de ponction (CLP). LentiVIP-DCs s&eacute;cr&egrave;tent des VIP et ressemblent &agrave; des CDV par manque de mol&eacute;cules de costimulation upregulation, manque de s&eacute;cr&eacute;tion de cytokines pro-inflammatoires, augmentation interleukine (IL) -10 production et mauvaise stimulation des cellules T allog&eacute;niques. Une seule inoculation de LentiVIP-DC chez les souris EAE ou CLP avait des effets th&eacute;rapeutiques, en corr&eacute;lation avec la r&eacute;duction de l&#39;expression des cytokines pro-inflammatoires et augmentation de la production IL-10 dans la moelle &eacute;pini&egrave;re et le liquide p&eacute;riton&eacute;al, respectivement. Contrairement &agrave; l&#39;administration syst&eacute;mique VIP qui requiert des inoculations r&eacute;p&eacute;t&eacute;es, &agrave; forte dose, livraison locale de VIP de LentiVIP-DC peut repr&eacute;senter un outil th&eacute;rapeutique prometteur pour le traitement des maladies auto-immunes et inflammatoires.

Les cellules dendritiques transduites avec des vecteurs LENTIVIRAUX exprimant VIP se diff&eacute;rencient en s&eacute;cr&eacute;tant des VIP comme tol&eacute;rog&egrave;ne DCs.

Dendritische Zellen (DCs) initiieren Immunantworten sowie Toleranz. Wir zeigten bereits, dass Neuropeptid Vasoaktives intestinales Peptid (VIP) angeborenen Immunantwort unterdr&uuml;ckt, adaptive Reaktionen durch die Generierung von regulatorische T-Zellen (Treg) durch die Induktion von Tolerogenic DCs (tDCs) moduliert und therapeutische Effekte in Modellen der Autoimmun/entz&uuml;ndliche Erkrankungen hat. Systemische VIP-Verwaltung ist durch seine kurzen biologischen Halbwertszeit und ihre pleiotropen Effekte auf das Herz-Kreislauf-System und Gastrointestinaltrakt begrenzt. Daher wir verwendet Lentivirale Vektoren zu VIP-Ausdr&uuml;cken Knochenmark abgeleitete DC (BMDC) genetisch Ingenieur und charakterisiert den transduzierten LentiVIP-DC in Bezug auf Ph&auml;notyp und therapeutischen Wirkungen in Modellen der experimentellen autoimmunen Enzephalomyelitis (EAE) und cecal Verbindung und Punktion (CLP) Sepsis. LentiVIP-DCs VIP absondern, und &auml;hneln tDCs Mangels co-stimulatory Molek&uuml;l Hochregulation, mangelnde Proinflammatory Cytokine Absonderung, erh&ouml;hte Interleukin (IL)-10 Produktion und Armen Stimulation der allogenen T-Zellen. Eine einzelne Impfung von LentiVIP-DC in EAE oder CLP M&auml;use hatte therapeutische Wirkungen, die mit reduzierten Ausdruck der Proinflammatory Cytokines und erh&ouml;hte IL-10-Produktion im R&uuml;ckenmark und peritonealen Fl&uuml;ssigkeit, bzw. korreliert. Im Gegensatz zur systemischen VIP-Verwaltung, die wiederholte, hochdosierte Impfungen erfordert, kann lokale &Uuml;bermittlung der VIP durch LentiVIP-DC ein viel versprechendes therapeutisches Hilfsmittel f&uuml;r die Behandlung von Autoimmunerkrankungen und entz&uuml;ndliche Erkrankungen darstellen.

Dendritische Zellen mit Lentiviralen Vektoren Ausdr&uuml;cken VIP transduzierten differenzieren sich in VIP-sezernierende Tolerogenic-wie DCs.

Le cellule dendritiche (DCs) avviano la risposta immunitaria, cos&igrave; come la tolleranza. Vi abbiamo mostrato in precedenza il neuropeptide peptide intestinale vasoattivo (VIP) sopprime la risposta immunitaria innata, modula le risposte adattative tramite la generazione di cellule T regolatorie (Treg) attraverso l&#39;induzione di tollerogeniche DCs (TDC) che ha effetti terapeutici in modelli di malattie infiammatorie/autoimmuni. Somministrazione sistemica di VIP &egrave; limitato dalla sua breve emivita biologica e dai suoi effetti pleiotropici sul sistema cardiovascolare e gastrointestinale. Pertanto, abbiamo utilizzato vettori lentivirali a geneticamente assistente tecnico VIP-esprimendo derivate da midollo osseo DC (BMDC) e caratterizzato il LentiVIP-DC trasdotte in termini di fenotipo ed effetti terapeutici in modelli di encefalomielite autoimmune sperimentale (EAE) e legatura Cecala e sepsi puntura (CLP). LentiVIP-DCs secernono VIP e assomigliano a TDC per mancanza di co-stimulatory molecola upregulation, mancanza di secrezione di citochine proinfiammatorie, aumentata interleuchina (IL) -10 produzione e scarsa stimolazione delle cellule T allogeniche. Una singola inoculazione di LentiVIP-DC in topi EAE o CLP ha avuto effetti terapeutici, che correlato con ridotta espressione di citochine proinfiammatorie e aumentata produzione di IL-10 nel midollo spinale e il liquido peritoneale, rispettivamente. In contrasto con la somministrazione di VIP sistemica che richiede vaccinazioni ripetute, ad alte dosi, recapito locale dei VIP da LentiVIP-DC pu&ograve; rappresentare un promettente strumento terapeutico per il trattamento di malattie autoimmuni e patologie infiammatorie.

Le cellule dendritiche transduced con vettori lentivirali esprimendo VIP differenziano in DCs tollerogeniche-come VIP-secernenti.

&#x514D;&#x75AB;&#x5BDB;&#x5BB9;&#x3092;&#x6A39;&#x72B6;&#x7D30;&#x80DE; (Dc) &#x3092;&#x958B;&#x59CB;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005; &#x306F;&#x4EE5;&#x524D;&#x30CB;&#x30E5;&#x30FC;&#x30ED;&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C9;&#x8840;&#x7BA1;&#x4F5C;&#x52D5;&#x6027;&#x8178;&#x7BA1;&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C9; (VIP) &#x81EA;&#x7136;&#x514D;&#x75AB;&#x5FDC;&#x7B54;&#x3092;&#x6291;&#x5236;&#x3059;&#x308B;&#x3001;DCs (Tdc) &#x514D;&#x75AB;&#x5BDB;&#x5BB9;&#x306E;&#x8A98;&#x5C0E;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x3066;&#x5236;&#x5FA1;&#x6027; T &#x7D30;&#x80DE; &#xFF08;Treg&#xFF09; &#x3092;&#x751F;&#x6210;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3088;&#x308A;&#x3001;&#x9069;&#x5FDC;&#x5FDC;&#x7B54;&#x3092;&#x8ABF;&#x6574;&#x3057;&#x3066;&#x306E;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x306E;&#x81EA;&#x5DF1;&#x514D;&#x75AB;&#x708E;&#x75C7;&#x6027;&#x75BE;&#x60A3;&#x306E;&#x6CBB;&#x7642;&#x52B9;&#x679C;&#x304C;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x305F;&#x3002;VIP &#x306E;&#x5168;&#x8EAB;&#x6295;&#x4E0E;&#x306F;&#x3001;&#x305D;&#x306E;&#x751F;&#x7269;&#x5B66;&#x7684;&#x534A;&#x6E1B;&#x671F;&#x304C;&#x77ED;&#x3044;&#x3068;&#x5FC3;&#x8840;&#x7BA1;&#x7CFB;&#x3084;&#x6D88;&#x5316;&#x7BA1;&#x305D;&#x306E;&#x591A;&#x9762;&#x52B9;&#x679C;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x5236;&#x9650;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x3057;&#x305F;&#x304C;&#x3063;&#x3066;&#x3001;&#x6211;&#x3005; &#x30EC;&#x30F3;&#x30C1;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x30D9;&#x30AF;&#x30BF;&#x30FC;&#x907A;&#x4F1D; VIP &#x3092;&#x8868;&#x73FE;&#x3059;&#x308B;&#x9AA8;&#x9AC4;&#x7531;&#x6765; DC (&#x814E;&#x4E0D;&#x5168;) &#x3092;&#x8A2D;&#x8A08;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x4F7F;&#x7528;&#x3001;&#x8868;&#x73FE;&#x578B;&#x3068;&#x6CBB;&#x7642;&#x52B9;&#x679C;&#x306E;&#x5B9F;&#x9A13;&#x7684;&#x81EA;&#x5DF1;&#x514D;&#x75AB;&#x6027;&#x8133;&#x810A;&#x9AC4;&#x708E; (EAE) &#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x76F2;&#x8178;&#x7D50;&#x7D2E;&#x7A7F;&#x523A; &#xFF08;CLP&#xFF09; &#x306E;&#x6557;&#x8840;&#x75C7;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x9762;&#x3067;&#x5F62;&#x8CEA;&#x5C0E;&#x5165;&#x3055;&#x308C;&#x305F; LentiVIP DC &#x7279;&#x5FB4;&#x4ED8;&#x3051;&#x3089;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;LentiVIP Dc VIP&#x3001;&#x5206;&#x6CCC;&#x3057;&#x3001;Tdc &#x5171;&#x523A;&#x6FC0;&#x5206;&#x5B50;&#x30A2;&#x30C3;&#x30D7;&#x30EC;&#x30AE;&#x30E5;&#x30EC;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x3001;&#x708E;&#x75C7;&#x6027;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x30AB;&#x30A4;&#x30F3;&#x5206;&#x6CCC;&#x5897;&#x52A0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30BF;&#x30FC;&#x30ED;&#x30A4;&#x30AD;&#x30F3; (IL)-10 &#x306E;&#x6B20;&#x5982;&#x4E0D;&#x8DB3;&#x304C;&#x539F;&#x56E0;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306B;&#x751F;&#x7523;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x540C;&#x7A2E;&#x306E; T &#x7D30;&#x80DE;&#x8CA7;&#x3057;&#x3044;&#x523A;&#x6FC0;&#x3002;LentiVIP DC EAE &#x307E;&#x305F;&#x306F; CLP &#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x3067;&#x5358;&#x4E00;&#x306E;&#x63A5;&#x7A2E;&#x6CBB;&#x7642;&#x306E;&#x52B9;&#x679C;&#x306F;&#x3001;&#x305D;&#x308C;&#x305E;&#x308C;&#x524A;&#x6E1B;&#x5F0F;&#x306E;&#x708E;&#x75C7;&#x6027;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x30AB;&#x30A4;&#x30F3;&#x3084;&#x810A;&#x9AC4;&#x3068;&#x8179;&#x8154;&#x6DB2;&#x306E; IL-10 &#x751F;&#x7523;&#x306E;&#x5897;&#x52A0;&#x3068;&#x76F8;&#x95A2;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x305F;&#x3002;&#x7E70;&#x308A;&#x8FD4;&#x3057;&#x3001;&#x9AD8;&#x7528;&#x91CF;&#x306E;&#x4E88;&#x9632;&#x63A5;&#x7A2E;&#x3092;&#x5FC5;&#x8981;&#x3068;&#x3059;&#x308B; VIP &#x306E;&#x5168;&#x8EAB;&#x6295;&#x4E0E;&#x3068;&#x306F;&#x5BFE;&#x7167;&#x7684;&#x81EA;&#x5DF1;&#x514D;&#x75AB;&#x75BE;&#x60A3;&#x3068;&#x708E;&#x75C7;&#x6027;&#x75BE;&#x60A3;&#x306E;&#x6CBB;&#x7642;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x6709;&#x671B;&#x306A;&#x6CBB;&#x7642;&#x30C4;&#x30FC;&#x30EB; LentiVIP DC &#x3067; VIP &#x306E;&#x30ED;&#x30FC;&#x30AB;&#x30EB;&#x914D;&#x4FE1;&#x3092;&#x8868;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

VIP &#x5206;&#x6CCC;&#x514D;&#x75AB;&#x5BDB;&#x5BB9;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306A; Dc &#x306B; VIP &#x3092;&#x8868;&#x73FE;&#x3059;&#x308B;&#x30EC;&#x30F3;&#x30C1;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x30D9;&#x30AF;&#x30BF;&#x30FC;&#x3092;&#x5C0E;&#x5165;&#x3057;&#x305F;&#x6A39;&#x72B6;&#x7D30;&#x80DE;&#x3092;&#x533A;&#x5225;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#xC218;&#xC9C0;&#xC0C1; &#xC138;&#xD3EC; (DCs) &#xAD00;&#xC6A9;&#xC73C;&#xB85C; &#xBA74;&#xC5ED; &#xC751;&#xB2F5;&#xC744; &#xC2DC;&#xC791;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; neuropeptide vasoactive &#xCC3D; &#xC790; &#xD3A9;&#xD0C0;&#xC774;&#xB4DC; (VIP) &#xD0C0;&#xACE0; &#xB09C; &#xBA74;&#xC5ED; &#xBC18;&#xC751; &#xC5B5;&#xC81C; tolerogenic Dc (tDCs)&#xC758; &#xC720;&#xB3C4; &#xD1B5;&#xD574; &#xADDC;&#xC81C; T &#xC138;&#xD3EC; (Treg)&#xB97C; &#xC0DD;&#xC131; &#xD558; &#xC5EC; &#xC801;&#xC751; &#xC751;&#xB2F5; &#xBCC0;&#xC870; &#xBC0F; &#xBAA8;&#xB378; &#xBA74;&#xC5ED;/&#xC5FC;&#xC99D; &#xC131; &#xC9C8;&#xD658;&#xC758; &#xCE58;&#xB8CC; &#xD6A8;&#xACFC;&#xAC00; &#xC774;&#xC804;&#xC5D0; &#xBCF4;&#xC600;&#xB2E4;. &#xC870;&#xC9C1;&#xC758; VIP &#xAD00;&#xB9AC;&#xC758; &#xC9E7;&#xC740; &#xC0DD;&#xBB3C;&#xD559;&#xC801; &#xBC18;&#xAC10;&#xAE30;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC2EC;&#xC7A5; &#xD608;&#xAD00; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C; &#xBC0F; &#xC694;&#xB85C; &#xC704; &#xC7A5;&#xBCD1;&#xC5D0; &#xB2E4; &#xBA74; &#xBC1C;&#xD604; &#xC131; &#xD6A8;&#xACFC; &#xC758;&#xD574; &#xC81C;&#xD55C; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB530;&#xB77C;&#xC11C;, lentiviral &#xBCA1;&#xD130; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xC5D4;&#xC9C0;&#xB2C8;&#xC5B4; &#xACE8; &#xD30C;&#xC0DD; &#xB41C; DC VIP &#xD45C;&#xD604; (BMDC)&#xC744; &#xD558; &#xACE0; transduced LentiVIP-DC &#xD615; &#xBC0F; &#xC2E4;&#xD5D8;&#xC801;&#xC778; &#xC790;&#xAE30; &#xBA74;&#xC5ED; encephalomyelitis (EAE) &#xBC0F; cecal &#xACB0; &#xCC30; &#xBC0F; &#xD391;&#xD06C; (CLP) &#xD328; &#xD608; &#xC99D; &#xBAA8;&#xB378;&#xC5D0;&#xC11C; &#xCE58;&#xB8CC; &#xD6A8;&#xACFC; &#xD2B9;&#xC9D5;. LentiVIP Dc VIP, &#xBD84; &#xBE44;&#xC640; &#xB2EE;&#xC740; tDCs co-stimulatory &#xBD84;&#xC790; upregulation, proinflammatory cytokine &#xBD84; &#xBE44;, &#xC99D;&#xAC00; &#xB41C; &#xC778;&#xD130; &#xB8E8; &#xD0A8; (IL)-10&#xC758; &#xBD80;&#xC871; &#xBD80;&#xC871;&#xC73C;&#xB85C; &#xC0DD;&#xC0B0;&#xACFC; allogeneic T &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xBD88; &#xC30D; &#xD55C; &#xC790;&#xADF9;. EAE &#xB610;&#xB294; CLP &#xC950;&#xC5D0; LentiVIP DC&#xC758; &#xB2E8;&#xC77C; &#xC811;&#xC885;&#xC774; &#xD588;&#xB2E4; &#xAC01;&#xAC01; &#xAC10;&#xC18C; &#xC2DD; proinflammatory cytokines &#xBC0F; &#xCC99;&#xC218;&#xC640; &#xBCF5; &#xB9C9; &#xC561;, IL-10 &#xC0DD;&#xC0B0; &#xC99D;&#xAC00;&#xC640; &#xC0C1;&#xAD00; &#xAD00;&#xACC4;&#xAC00; &#xC788;&#xB294; &#xCE58;&#xB8CC; &#xD6A8;&#xACFC;. &#xBC18;&#xBCF5;, &#xB192;&#xC740; &#xBCF5;&#xC6A9;&#xB7C9; &#xC608;&#xBC29; &#xC811;&#xC885;&#xC744; &#xC694;&#xAD6C; &#xD558;&#xB294; &#xCCB4;&#xACC4;&#xC801; VIP &#xAD00;&#xB9AC;&#xB294; &#xB2EC;&#xB9AC; &#xB85C;&#xCEEC; &#xBC30;&#xB2EC; LentiVIP-DC &#xD558; &#xC5EC; VIP&#xC758; &#xC790;&#xAC00; &#xBA74;&#xC5ED; &#xC9C8;&#xD658;&#xACFC; &#xC5FC;&#xC99D; &#xC131; &#xC9C8;&#xD658;&#xC758; &#xCE58;&#xB8CC;&#xB97C; &#xC704;&#xD574; &#xC720;&#xB9DD;&#xD55C; &#xCE58;&#xB8CC; &#xB3C4;&#xAD6C;&#xB97C; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0BC; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Lentiviral &#xBCA1;&#xD130; VIP &#xD45C;&#xD604;&#xC73C;&#xB85C; &#xBD88;&#xB9AC;&#xACE0; &#xC218;&#xC9C0;&#xC0C1; &#xC138;&#xD3EC; tolerogenic &#xAC19;&#xC740; Dc VIP &#xC740;&#xB2C9;&#xC73C;&#xB85C; &#xCC28;&#xBCC4;&#xD654;.

Las c&eacute;lulas dendr&iacute;ticas (DCs) inician la respuesta inmune, as&iacute; como tolerancia. Hemos demostrado previamente que el neurop&eacute;ptido p&eacute;ptido intestinal vasoactivo (VIP) suprime la respuesta inmune innata, modula las respuestas de adaptaci&oacute;n mediante la generaci&oacute;n de c&eacute;lulas T reguladoras (Treg) a trav&eacute;s de la inducci&oacute;n de tolerog&eacute;nicas DCs (tipo) y tiene efectos terap&eacute;uticos en modelos de desordenes autoinmunes inflamatorio. La administraci&oacute;n sist&eacute;mica de VIP est&aacute; limitada por su corta vida media de biol&oacute;gico y sus efectos pleiotr&oacute;picos en el sistema cardiovascular y el aparato gastrointestinal. Por lo tanto, usamos vectores lentivirales para Ingeniero gen&eacute;ticamente VIP-expresando m&eacute;dula &oacute;sea DC (BMDC) y caracteriza el transduced LentiVIP-DC en cuanto a fenotipo y efectos terap&eacute;uticos en modelos de encefalomielitis autoinmune experimental (EAE) y ligadura cecal y sepsis de punci&oacute;n (CLP). LentiVIP-DCs secretan VIP y se asemejan a tipo por falta de mol&eacute;cula coestimuladoras upregulation, carencia de la secreci&oacute;n de citoquinas proinflamatorias, mayor interleucina (IL) -10 producci&oacute;n y pobre estimulaci&oacute;n de c&eacute;lulas de T alog&eacute;nicas. Una sola inoculaci&oacute;n de LentiVIP-DC en ratones EAE o CLP tuvo efectos terap&eacute;uticos, que correlaciona con la expresi&oacute;n reducida de citocinas proinflamatorias y mayor producci&oacute;n de IL-10 en la m&eacute;dula espinal y el l&iacute;quido peritoneal, respectivamente. En contraste con la administraci&oacute;n sist&eacute;mica de VIP que requiere repetidas, altas dosis de vacunas, administraci&oacute;n local de VIP por LentiVIP-DC puede representar una herramienta terap&eacute;utica prometedora para el tratamiento de enfermedades autoinmunes y enfermedades inflamatorias.

Las c&eacute;lulas dendr&iacute;ticas transduced con vectores lentivirales expresando a VIP se diferencian en VIP-secreci&oacute;n tolerog&eacute;nicas-como DCs.

&#x6025;&#x6027;&#x548C;&#x6162;&#x6027;&#x708E;&#x75C7;&#x708E;&#x75C7;/&#x81EA;&#x4F53;&#x514D;&#x75AB;&#x75BE;&#x75C5;&#x4E2D;&#x53D1;&#x6325;&#x4E86;&#x91CD;&#x8981;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;&#x4FDD;&#x62A4;&#x6297;&#x708E;&#x4F5C;&#x7528;&#x7684; n-3 &#x8102;&#x80AA;&#x9178;&#x4E8C;&#x5341;&#x4E8C;&#x78B3;&#x516D;&#x70EF;&#x9178; (DHA) &#x548C;&#x4E8C;&#x5341;&#x78B3;&#x4E94;&#x70EF;&#x9178; (EPA) &#x636E;&#x62A5;&#x5728;&#x7ED3;&#x80A0;&#x708E;&#x3001; &#x8113;&#x6BD2;&#x75C7;&#x3001; &#x4E2D;&#x98CE;&#x7684;&#x52A8;&#x7269;&#x6A21;&#x578B;&#x3002;&#x7531;&#x4E8E;&#x6811;&#x7A81;&#x72B6;&#x7EC6;&#x80DE; (DC) &#x4EE3;&#x8868;&#x4E4B;&#x95F4;&#x56FA;&#x6709;&#x7684;&#x3001; &#x81EA;&#x9002;&#x5E94;&#x514D;&#x75AB;&#x7684;&#x57FA;&#x672C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8054;&#x7CFB;&#xFF0C;&#x800C;&#x4E14;&#x5728;&#x5BF9;&#x81EA;&#x8EAB;&#x6297;&#x539F;&#x7684;&#x5BB9;&#x5FCD;&#x5EA6;&#x6709;&#x4E86;&#x7A81;&#x51FA;&#x7684;&#x4F5C;&#x7528;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x5BFB;&#x6C42;&#x5728; DC &#x6210;&#x719F;&#x548C;&#x4FC3;&#x708E;&#x7EC6;&#x80DE;&#x56E0;&#x5B50;&#x751F;&#x4EA7;&#x8C03;&#x67E5;&#x7684; DHA &#x7684;&#x5F71;&#x54CD;&#x3002;

&#x6811;&#x7A81;&#x72B6;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6210;&#x719F;&#x548C;&#x4F53;&#x5916;&#x548C;&#x4F53;&#x5185;&#x8868;&#x8FBE;&#x7684;&#x767D;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4ECB;&#x7D20;-12 &#x7EC6;&#x80DE;&#x56E0;&#x5B50;&#x5BB6;&#x65CF;&#xFF0C;&#x53EF;&#x4EE5;&#x9632;&#x6B62;&#x4E8C;&#x5341;&#x4E8C;&#x78B3;&#x516D;&#x70EF;&#x9178;&#x3002;

Acute and chronic inflammation play essential roles in inflammatory/autoimmune conditions. Protective anti-inflammatory effects of the n-3 fatty acids docosahexaenoic acid (DHA) and eicosapentaenoic acid (EPA) were reported in animal models of colitis, sepsis, and stroke. Since dendritic cells (DC) represent the essential cellular link between innate and adaptive immunity and have a prominent role in tolerance for self-antigens, we sought to investigate the impact of DHA on DC maturation and proinflammatory cytokine production.

Docosahexaenoic acid prevents dendritic cell maturation and in vitro and in vivo expression of the IL-12 cytokine family.

Inflammation aigu&euml; et chronique jouent un r&ocirc;le essentiel dans des conditions inflammatoires/autoimmun. Effets anti-inflammatoires protecteurs des acides gras n-3 docosahexa&eacute;no&iuml;que (ADH) et l&#39;acide eicosapenta&eacute;no&iuml;que (EPA) ont &eacute;t&eacute; signal&eacute;s chez des mod&egrave;les animaux de colite, septic&eacute;mie et les AVC. Puisque les cellules dendritiques (DC) repr&eacute;sentent le lien cellulaire essentiel entre l&#39;immunit&eacute; inn&eacute;e et adaptative et ont un r&ocirc;le important dans la tol&eacute;rance pour les auto-antig&egrave;nes, nous avons cherch&eacute; &agrave; &eacute;tudier l&#39;impact de DHA sur la maturation de la DC et la production de cytokines pro-inflammatoires.

Acide docosahexa&eacute;no&iuml;que emp&ecirc;che la maturation des cellules dendritiques et l&#39;expression in vitro et in vivo de la famille de cytokine IL-12.

Akute und chronische Entz&uuml;ndungen spielen wichtige Rollen in entz&uuml;ndliche/Autoimmun Bedingungen. Sch&uuml;tzende entz&uuml;ndungshemmende Wirkung der n-3-Fetts&auml;uren Docosahexaens&auml;ure (DHA) und Eicosapentaens&auml;ure (EPA) meldeten sich in Tiermodellen f&uuml;r Kolitis, Sepsis und Schlaganfall. Da dendritische Zellen (DC), die notwendige zellul&auml;re Verbindung zwischen angeborenen und erworbenen Immunit&auml;t dar und eine herausragende Rolle in Toleranz gegen&uuml;ber selbst-Antigenen haben, die wir untersucht die Auswirkungen der DHA auf DC Reifung und Proinflammatory Cytokine Produktion wollte.

Docosahexaens&auml;ure verhindert die Reifung von dendritischen Zellen und in-vitro- und in-vivo-Ausdruck aus der Familie der Zytokin IL-12.

Infiammazione acuta e cronica giocano un ruolo essenziale in condizioni infiammatorie/autoimmuni. In modelli animali di colite, sepsi e ictus sono stati segnalati effetti anti-infiammatori protettivi dei acidi grassi n-3 acido docosaesaenoico (DHA) e acido eicosapentaenoico (EPA). Poich&eacute; le cellule dendritiche (DC) rappresentano il collegamento cellulare essenziale tra immunit&agrave; innata e adattiva e hanno un ruolo prominente nella tolleranza per gli antigeni self, abbiamo cercato di indagare l&#39;impatto di DHA su DC maturazione e la produzione di citochine proinfiammatorie.

Acido docosaesaenoico impedisce la maturazione delle cellule dendritiche e espressione in vitro e in vivo della famiglia delle citochine IL-12.

&#x6025;&#x6027;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x6162;&#x6027;&#x306E;&#x708E;&#x75C7;&#x306F;&#x708E;&#x75C7;&#x6027;&#x81EA;&#x5DF1;&#x514D;&#x75AB;&#x306E;&#x6761;&#x4EF6;&#x3067;&#x4E0D;&#x53EF;&#x6B20;&#x306A;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x518D;&#x751F;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;N 3 &#x8102;&#x80AA;&#x9178;&#x30C9;&#x30B3;&#x30B5;&#x30D8;&#x30AD;&#x30B5;&#x30A8;&#x30F3;&#x9178; &#xFF08;DHA&#xFF09; &#x3084;&#x30A8;&#x30A4;&#x30B3;&#x30B5;&#x30DA;&#x30F3;&#x30BF;&#x30A8;&#x30F3;&#x9178; (EPA) &#x306E;&#x6297;&#x708E;&#x75C7;&#x52B9;&#x679C;&#x5927;&#x8178;&#x708E;, &#x6557;&#x8840;&#x75C7;, &#x3068;&#x30B9;&#x30C8;&#x30ED;&#x30FC;&#x30AF;&#x306E;&#x52D5;&#x7269;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x3067;&#x5831;&#x544A;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x6A39;&#x72B6;&#x7D30;&#x80DE; (DC) &#x306F;&#x81EA;&#x7136;&#x514D;&#x75AB;&#x3068;&#x9069;&#x5FDC;&#x514D;&#x75AB;&#x306E;&#x9593;&#x306E;&#x672C;&#x8CEA;&#x7684;&#x306A;&#x30BB;&#x30EB;&#x30E9; &#x30EA;&#x30F3;&#x30AF;&#x3092;&#x8868;&#x3059;&#x3001;&#x8A31;&#x5BB9;&#x5EA6;&#x306E;&#x81EA;&#x5DF1;&#x6297;&#x539F;&#x306E;&#x8457;&#x540D;&#x306A;&#x5F79;&#x5272;&#x304C;&#x3042;&#x308B;&#x306E;&#x3067;&#x3001;DC &#x6210;&#x719F;&#x3068;&#x708E;&#x75C7;&#x6027;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x30AB;&#x30A4;&#x30F3;&#x7523;&#x751F;&#x306B; DHA &#x306E;&#x5F71;&#x97FF;&#x3092;&#x8ABF;&#x67FB;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x6C42;&#x3081;&#x305F;&#x3002;

&#x30C9;&#x30B3;&#x30B5;&#x30D8;&#x30AD;&#x30B5;&#x30A8;&#x30F3;&#x9178;&#x306F;&#x6A39;&#x72B6;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x6210;&#x719F;&#x3068; IL 12 &#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x30AB;&#x30A4;&#x30F3;&#x5BB6;&#x65CF;&#x306E; in vitro &#x304A;&#x3088;&#x3073; in vivo &#x3067;&#x306E;&#x767A;&#x73FE;&#x3092;&#x9632;&#x6B62;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#xAE09;&#xC131; &#xBC0F; &#xB9CC;&#xC131; &#xC5FC;&#xC99D; &#xBA74;&#xC5ED;/&#xC5FC;&#xC99D; &#xC131; &#xC870;&#xAC74;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD544;&#xC218;&#xC801;&#xC778; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xD55C;&#xB2E4;. N-3 &#xC9C0;&#xBC29;&#xC0B0; docosahexaenoic &#xC0B0; &#xC131; (DHA) &#xBC0F; eicosapentaenoic &#xC0B0; (EPA)&#xC758; &#xBCF4;&#xD638; &#xD56D; &#xC5FC;&#xC99D; &#xD6A8;&#xACFC; &#xB300; &#xC7A5; &#xC5FC;, &#xD328; &#xD608; &#xC99D;, &#xBC0F; &#xB1CC;&#xC878;&#xC911; &#xB3D9;&#xBB3C; &#xBAA8;&#xB378;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBCF4;&#xACE0; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;. &#xB54C;&#xBB38;&#xC5D0; &#xC218;&#xC9C0;&#xC0C1; &#xC138;&#xD3EC; (DC)&#xAC00; &#xD0C0;&#xACE0; &#xB09C; &#xBC0F; &#xC801;&#xC751;&#xD615; &#xBA74;&#xC5ED; &#xC0AC;&#xC774;&#xC758; &#xD544;&#xC218;&#xC801;&#xC778; &#xC140;&#xB8F0;&#xB7EC; &#xB9C1;&#xD06C;&#xB97C; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0B4;&#xACE0; &#xC790;&#xAE30; &#xD56D; &#xC6D0;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xB0B4;&#xC131;&#xC5D0; &#xB208;&#xC5D0; &#xB744;&#xB294; &#xC5ED;&#xD560;&#xC774; &#xC6B0;&#xB9AC; DC &#xC131;&#xC219;&#xACFC; proinflammatory cytokine &#xC0DD;&#xC0B0;&#xC5D0; DHA&#xC758; &#xC601;&#xD5A5;&#xC744; &#xC870;&#xC0AC; &#xD558;&#xACE0;&#xC790; &#xD588;&#xB2E4;.

Docosahexaenoic &#xC0B0; &#xC218;&#xC9C0;&#xC0C1; &#xC138;&#xD3EC; &#xC131;&#xC219; &#xBC0F; IL-12 cytokine &#xAC00;&#xC871;&#xC758; &#xC0DD;&#xCCB4; &#xC678; &#xBC0F; &#xC0DD;&#xCCB4; &#xC870;&#xAC74; &#xC2DD;&#xC744; &#xBC29;&#xC9C0;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

La inflamaci&oacute;n aguda y cr&oacute;nica un papel esencial en condiciones inflamatoria autoinmune. Protecci&oacute;n efectos antiinflamatorios de los &aacute;cidos grasos n-3 docosahexaen&oacute;ico (DHA) y &aacute;cido eicosapentaenoico (EPA) informaron en modelos animales de colitis, sepsis y accidente cerebrovascular. Puesto que las c&eacute;lulas dendr&iacute;ticas (DC) representan el enlace celular esencial entre la inmunidad innata y adaptativa y tienen un papel destacado en la tolerancia para uno mismo-ant&iacute;genos, se intent&oacute; investigar el impacto de DHA en la maduraci&oacute;n de la DC y la producci&oacute;n de citoquinas proinflamatorias.

&Aacute;cido docosahexaenoico impide la maduraci&oacute;n de c&eacute;lulas dendr&iacute;ticas y expresi&oacute;n in vitro e in vivo de la familia de citoquinas IL-12.

&#x6162;&#x75C5;&#x6BD2;&#x8F7D;&#x4F53; (LVs) &#x88AB;&#x8BA4;&#x4E3A;&#x6700;&#x6709;&#x524D;&#x9014;&#x7684;&#x8F66;&#x8F86;&#xFF0C;&#x4EE5;&#x9AD8;&#x6548;&#x5730;&#x63D0;&#x4F9B;&#x9057;&#x4F20;&#x4FE1;&#x606F;&#x7684;&#x57FA;&#x672C;&#x7814;&#x7A76;&#x548C;&#x57FA;&#x56E0;&#x6CBB;&#x7597;&#x65B9;&#x6CD5;&#x4E4B;&#x4E00;&#x3002;LVs &#x7ED3;&#x5408;&#x836F;&#x7269;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x8868;&#x8FBE;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x5E94;&#x5141;&#x8BB8;&#x8F6C;&#x57FA;&#x56E0;&#x8868;&#x8FBE;&#x4E0E;&#x6700;&#x5C0F;&#x7684;&#x526F;&#x4F5C;&#x7528;&#x6709;&#x5173;&#x76EE;&#x6807;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E0A;&#x7684;&#x4E25;&#x5BC6;&#x63A7;&#x5236;&#x3002;1998 &#x5E74;&#x5236;&#x5B9A;&#x4E86;&#x65B0;&#x7684;&#x591A;&#x897F;&#x73AF;&#x7D20;&#x76D1;&#x7BA1;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x57FA;&#x4E8E;&#x539F;&#x59CB; TetR &#x963B;&#x904F;&#x7269;&#xFF0C;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x5907;&#x7528; TetR VP16 &#x5D4C;&#x5408;&#x4F53; &#xFF08;tTA &#x548C; rtTA&#xFF09;&#xFF0C;&#x4EE5;&#x907F;&#x514D;&#x7531;&#x4E8E;&#x8868;&#x8FBE;&#x7684;&#x53CD;&#x5F0F;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x56E0;&#x5B50;&#x57DF;&#x4E8C;&#x7EA7;&#x5F71;&#x54CD;&#x3002;&#x7136;&#x800C;&#xFF0C;&#x524D;&#x9762;&#x6240;&#x8FF0;&#x57FA;&#x4E8E; TetR &#x7684;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x6240;&#x9700;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x514B;&#x9686;&#x6216;&#x6297;&#x751F;&#x7D20;&#x56DB;&#x73AF;&#x7D20;&#x654F;&#x611F;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x7684;&#x9009;&#x62E9;&#xFF0C;&#x4EE5;&#x5B9E;&#x73B0;&#x826F;&#x597D;&#x76D1;&#x7BA1;&#x3002;&#x5728;&#x672C;&#x624B;&#x7A3F;&#x4E2D;&#x6211;&#x4EEC;&#x5DF2;&#x7ECF;&#x5EFA;&#x6210;&#x4E86;&#x57FA;&#x4E8E;&#x4E24;&#x4E2A;&#x6162;&#x75C5;&#x6BD2;&#x8F7D;&#x4F53;&#x4E4B;&#x4E00;&#x8868;&#x793A;&#x901A;&#x8FC7;&#x5F62;&#x6210;&#x75C5;&#x6BD2; (SFFV) &#x542F;&#x52A8;&#x5B50; (STetR) &#x548C;&#x7B2C;&#x4E8C;&#x6B21;&#x901A;&#x8FC7;&#x53EF;&#x8C03; CMV TetO &#x542F;&#x52A8;&#x5B50; (CTetOE) &#x8868;&#x8FBE;&#x7EFF;&#x8272;&#x8367;&#x5149;&#x86CB;&#x767D;&#x7684;&#x813E;&#x91CD;&#x70B9; TetR Tet &#x5BF9;&#x53CC;&#x8F68;&#x5236;&#x3002;&#x4F7F;&#x7528;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x5A92;&#x4ECB;&#x6211;&#x4EEC;&#x8868;&#x660E; TetR &#x963B;&#x904F;&#x7269;&#x4E0E;&#x53CD;&#x53CD;&#x5F0F;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x56E0;&#x5B50; (rtTA)&#xFF0C;&#x53EF;&#x4EE5;&#x8FC7;&#x91CF;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x5E76;&#x8C03;&#x5236; TetO operons &#x9AD8;&#x6570;&#x8868;&#x793A;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x4E5F;&#x6709;&#x8868;&#x660E;&#x6B64;&#x53CC;&#x77E2;&#x91CF;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x53EF;&#x4EE5;&#x751F;&#x6210;&#x80FD;&#x591F;&#x8C03;&#x8282;&#x8F6C;&#x57FA;&#x56E0;&#x8868;&#x8FBE;&#x53EF;&#x8C03;&#x6279;&#x91CF;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7CFB; (&#x8868;&#x8FBE;&#x9AD8;&#x6C34;&#x5E73;&#x7684; TetR&#xFF09; &#x6216;&#x8005;&#x901A;&#x8FC7;&#x6539;&#x53D8;&#x591A;&#x897F;&#x73AF;&#x7D20;&#x6D53;&#x5EA6;&#x6216;&#x7531;&#x4E0D;&#x540C;&#x7684; CTetOE &#x91CF;&#x77E2;&#x91CF;&#x7684;&#x6BCF;&#x4E2A;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x57FA;&#x56E0;&#x7EC4;&#x3002;&#x57FA;&#x4E8E;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7ED3;&#x679C;&#x6211;&#x4EEC;&#x5236;&#x5B9A;&#x4E86;&#x65B0;&#x591A;&#x529F;&#x80FD;&#x4E00;&#x4F53;&#x8F7D;&#x4F53; (&#x77DB;&#x76FE;) &#x9A7E;&#x9A76; TetR &#x901A;&#x8FC7; SFFV &#x542F;&#x52A8;&#x5B50;&#x7684;&#x8868;&#x8FBE;&#x548C;&#x5F3A;&#x529B;&#x9709;&#x7D20;&#x654F;&#x611F;&#x7684;&#x5DE8;&#x7EC6;&#x80DE;&#x75C5;&#x6BD2; TetO &#x64CD;&#x7EB5;&#x5B50;&#x901A;&#x8FC7;&#x7EFF;&#x8272;&#x8367;&#x5149;&#x86CB;&#x767D;&#x7684;&#x8868;&#x8FBE;&#x3002;&#x6B64;&#x5411;&#x91CF;&#x9AD8;&#x6548;&#x7387;&#x4EA7;&#x751F; Tet ON &#x53EF;&#x8C03;&#x6C38;&#x751F; (293T) &#x548C;&#x5C0F;&#x5B66; &#xFF08;&#x4EBA;&#x9AA8;&#x9AD3;&#x95F4;&#x5145;&#x8D28;&#x5E72;&#x7EC6;&#x80DE;&#x548C;&#x6210;&#x7EA4;&#x7EF4;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E3B;&#x8981;&#xFF09; &#x7684;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x3002;&#x6279;&#x91CF;&#x591A;&#x897F;&#x73AF;&#x7D20;&#x654F;&#x611F;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8868;&#x8FBE;&#x9AD8;&#x6C34;&#x5E73;&#x4E0E;&#x4F4E;&#x91CF;&#x591A;&#x897F;&#x73AF;&#x7D20;&#x8F6C;&#x57FA;&#x56E0;&#x7684;&#x548C;&#x4ECE;&#x5176;&#x7236;&#x6BCD;&#x7684;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x662F;&#x8868;&#x6A21;&#x7CCA;&#x3002;

&#x4E3A;&#x65B9;&#x4FBF;&#x4EE3; Tet &#x5BF9;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7CFB;&#x57FA;&#x4E8E;&#x539F;&#x59CB;&#x7684; TetR &#x591A;&#x529F;&#x80FD;&#x4E00;&#x4F53;&#x6162;&#x75C5;&#x6BD2;&#x8F7D;&#x4F53;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x7684;&#x5F00;&#x53D1;&#x3002;

Lentiviral vectors (LVs) are considered one of the most promising vehicles to efficiently deliver genetic information for basic research and gene therapy approaches. Combining LVs with drug-inducible expression systems should allow tight control of transgene expression with minimal side effect on relevant target cells. A new doxycycline-regulated system based on the original TetR repressor was developed in 1998 as an alternative to the TetR-VP16 chimeras (tTA and rtTA) to avoid secondary effects due to the expression of transactivator domains. However, previously described TetR-based systems required cell cloning and/or antibiotic selection of tetracycline-responsive cells in order to achieve good regulation. In the present manuscript we have constructed a dual Tet-ON system based on two lentiviral vectors, one expressing the TetR through the spleen focus forming virus (SFFV) promoter (STetR) and a second expressing eGFP through the regulatable CMV-TetO promoter (CTetOE). Using these vectors we have demonstrated that the TetR repressor, contrary to the reverse transactivator (rtTA), can be expressed in excess to bind and modulate a high number of TetO operons. We have also showed that this dual vector system can generate regulatable bulk cell lines (expressing high levels of TetR) that are able to modulate transgene expression either by varying doxycycline concentration and/or by varying the amount of CTetOE vector genomes per cell. Based on these results we have developed a new all-in-one lentiviral vector (CEST) driving the expression of TetR through the SFFV promoter and the expression of eGFP through the doxycycline-responsive CMV-TetO operon. This vector efficiently produced Tet-ON regulatable immortalized (293T) and primary (human mesenchymal stem cells and human primary fibroblasts) cells. Bulk doxycycline-responsive cell lines express high levels of the transgene with low amount of doxycycline and are phenotypically indistinct from its parental cells.

Development of an all-in-one lentiviral vector system based on the original TetR for the easy generation of Tet-ON cell lines.

Vecteurs LENTIVIRAUX (LVs) sont consid&eacute;r&eacute;s comme un des v&eacute;hicules plus prometteurs pour d&eacute;livrer efficacement l&#39;information g&eacute;n&eacute;tique pour des approches fondamentales de th&eacute;rapie g&eacute;nique et de la recherche. Combinant LVs avec syst&egrave;mes d&#39;expression inductible par la drogue devrait permettre un contr&ocirc;le serr&eacute; de transgene expression avec des effets secondaires minimes sur les cellules cibles concern&eacute;s. Un nouveau syst&egrave;me de doxycycline r&eacute;glement&eacute;s bas&eacute; sur le r&eacute;presseur TetR original a &eacute;t&eacute; d&eacute;velopp&eacute; en 1998 comme une alternative pour les chim&egrave;res de Tite-VP16 (tTA et rtTA) afin d&#39;&eacute;viter des effets secondaires en raison de l&#39;expression des domaines transactivateur. Cependant, d&eacute;crit pr&eacute;c&eacute;demment clonage de syst&egrave;mes ax&eacute;s sur la Tite cellulaire requis et/ou antibiotique s&eacute;lection de cellules sensibles &agrave; la t&eacute;tracyclines pour atteindre la bonne r&eacute;glementation. Dans le pr&eacute;sent manuscrit, nous avons construit un syst&egrave;me dual de Tet-ON bas&eacute; sur deux vecteurs LENTIVIRAUX, on exprime la Tite gr&acirc;ce &agrave; la mise au point de rate formant le promoteur du virus (SFFV) (STetR) et un deuxi&egrave;me eGFP exprimant par le biais du promoteur de CMV-TetO r&eacute;glementable (CTetOE). &Agrave; l&#39;aide de ces vecteurs, nous avons d&eacute;montr&eacute; que le r&eacute;presseur de Tite, contrairement &agrave; l&#39;inverse transactivateur (rtTA), peut &ecirc;tre exprim&eacute; en exc&egrave;s de lier et de moduler un nombre &eacute;lev&eacute; de TetO op&eacute;rons. Nous avons &eacute;galement montr&eacute; que ce syst&egrave;me de double vecteur peut g&eacute;n&eacute;rer des lign&eacute;es de cellules r&eacute;glementable en vrac (exprimant des niveaux &eacute;lev&eacute;s de Tite) qui sont capables de moduler l&#39;expression du transg&egrave;ne soit en faisant varier la concentration de la doxycycline et/ou en faisant varier la quantit&eacute; de CTetOE vector g&eacute;nomes par cellule. Selon ces r&eacute;sultats, nous avons d&eacute;velopp&eacute; un nouveau tout-en-un g&egrave;nes vecteur (CEST) conduisant &agrave; l&#39;expression de Tite par le promoteur SFFV et l&#39;expression d&#39;eGFP par le biais de l&#39;op&eacute;ron CMV-TetO doxycycline-sensible. Ce vecteur produit efficacement Tet-ON r&eacute;glementable 293 immortalis&eacute; (t) et les cellules primaires (cellules souches m&eacute;senchymateuses humaines et les fibroblastes humains primaires). Des lign&eacute;es de cellules sensibles &agrave; la doxycycline en vrac expriment des niveaux &eacute;lev&eacute;s du transg&egrave;ne avec faible quantit&eacute; de doxycycline et sont ph&eacute;notypiquement indistinctes de ses cellules parentales.

D&eacute;veloppement d&#39;un syst&egrave;me tout-en-un vecteur lentiviral bas&eacute; sur la Tite original pour la g&eacute;n&eacute;ration simple de lign&eacute;es cellulaires de Tet-ON.

Lentivirale Vektoren (LVs) gelten als eines der vielversprechendsten Fahrzeuge effizient genetischen Informationen f&uuml;r grundlegende Forschung und gen-Therapie-Ans&auml;tze zu liefern. Kombination von LVs mit Droge-inducible Expressionssysteme sollten strenge Kontrolle &uuml;ber Transgenexpression mit minimaler Nebeneffekt auf relevanten Zielzellen erm&ouml;glichen. Ein neues Doxycyclin regulierte System, basierend auf der urspr&uuml;nglichen TetR-Hemmer entwickelte sich im Jahr 1998 als Alternative zu den TetR-VP16 Chim&auml;ren (tTA und RtTA) Nebenwirkungen aufgrund der Ausdruck Transactivator Domains zu vermeiden. Jedoch zuvor beschriebenen TetR-basierte Systeme erforderlich Zelle Klonen und/oder Antibiotika Auswahl von Tetracyclin-responsive Zellen, um gute Regelung zu erreichen. In der vorliegenden Handschrift haben wir ein duales Tet-ON-System basiert auf zwei Lentiviralen Vektoren, ein Ausdruck der TetR durch die Milz-Fokus bilden Virus (SFFV) Projekttr&auml;ger (STetR) und einen zweiten Ausdruck eGFP durch dosierbare CMV-TetO Projekttr&auml;ger (CTetOE) errichtet. Mit diesen Vektoren haben wir bewiesen, dass der Verdr&auml;nger TetR entgegen den umgekehrten Transactivator (RtTA), im &Uuml;berma&szlig; zu binden und eine hohe Anzahl von TetO Operone modulieren ausgedr&uuml;ckt werden kann. Wir haben auch gezeigt, dass dieses dualen Vektor-System kann dosierbare Massen-Zelllinien generieren (hohe TetR auszudr&uuml;cken), die Transgenexpression modulieren k&ouml;nnen entweder durch Variation von Doxycyclin Konzentration bzw. durch Variation der Menge an CTetOE Genome pro Zelle Vektor. Basierend auf diesen Ergebnissen haben wir einen neuen all-in-One Lentiviralen Vektor (MESZ) fahren, der Ausdruck der TetR durch den Projekttr&auml;ger SFFV und der Ausdruck der eGFP durch die Doxycyclin-responsive CMV-TetO-Operon entwickelt. Dieser Vektor effizient erzeugt Tet-ON dosierbare verewigt (293T) und Prim&auml;rzellen (humaner mesenchymaler Stammzellen und menschlichen prim&auml;re Fibroblasten). Lose Doxycyclin-responsive Zelllinien express hohe Transgene mit niedrigen Betrag von Doxycyclin und aus seiner elterlichen Zellen ph&auml;notypisch nicht fokussiert sind.

Entwicklung eines all-in-One Lentiviralen Vektor-Systems auf der Grundlage der urspr&uuml;nglichen TetR f&uuml;r die einfache Generierung von Tet-ON-Zelllinien.

Vettori lentivirali (LVs) sono considerati uno dei veicoli pi&ugrave; promettenti per fornire in modo efficiente informazioni genetiche per base approcci di terapia genica e di ricerca. Combinando LVs con sistemi di espressione droga-inducible dovrebbe consentire stretto controllo dell&#39;espressione del transgene con effetti collaterali minimi su cellule bersaglio pertinenti. Un nuovo sistema regolamentato doxiciclina basato sul repressor TetR originale &egrave; stato sviluppato nel 1998 come alternativa per le chimere TetR-VP16 (tTA e rtTA) per evitare effetti secondari dovuti l&#39;espressione dei domini transactivator. Tuttavia, in precedenza descritto TetR-ha basato i sistemi richiesti cell clonazione o selezione antibiotica delle cellule tetraciclina-sensible a reagire al fine di conseguire il buon regolamento. Nel manoscritto presente noi abbiamo costruito un sistema duale di Tet-ON basato su due vettori lentivirali, uno che esprime il TetR attraverso la messa a fuoco della milza formando una seconda eGFP che esprimono attraverso il promotore CMV-TetO regolabile (CTetOE) e virus (SFFV) promotore (STetR). Utilizzando questi vettori abbiamo dimostrato che il repressore TetR, contrariamente a quanto il transactivator inversa (rtTA), pu&ograve; essere espresso in eccesso per associare e modulano un numero elevato di TetO operoni. Noi abbiamo anche mostrato che questo sistema di doppio vettore pu&ograve; generare linee cellulari bulk regolabile (che esprimono alti livelli di TetR) che sono in grado di modulare l&#39;espressione del transgene sia variando la concentrazione di doxiciclina e/o variando la quantit&agrave; di CTetOE vector genomi per cella. Sulla base di questi risultati abbiamo sviluppato un nuovo all-in-one lentivirali vector (CEST) guida l&#39;espressione del TetR attraverso il promotore SFFV e l&#39;espressione di eGFP attraverso l&#39;operone CMV-TetO doxiciclina-sensibli a reagire. Questo vettore prodotto efficientemente Tet-ON regolabile immortalata (293T) e celle primarie (cellule staminali mesenchimali e fibroblasti umani primari). Cellula doxiciclina-sensibli a reagire alla rinfusa esprimono alti livelli di transgene con bassa quantit&agrave; di doxiciclina e &egrave; fenotipicamente indistinte dalle sue cellule parentali.

Sviluppo di un sistema di vettori lentivirali all-in-one basato sul TetR originale per la facile generazione di linee cellulari Tet-ON.

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TetR VP16 &#x30AD;&#x30E1;&#x30E9; (tTA &#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x983C;&#x3080;&#x3053;&#x3068;) &#x30AB;&#x30C1;&#x30AA;&#x30CB;&#x30C3;&#x30AF;&#x30EA;&#x30DD;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0; &#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x306E;&#x767A;&#x73FE;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x4E8C;&#x6B21;&#x7684;&#x52B9;&#x679C;&#x3092;&#x907F;&#x3051;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x4EE3;&#x66FF;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x958B;&#x767A;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x305F;&#x3060;&#x3057;&#x3001;&#x4EE5;&#x524D; TetR &#x30D9;&#x30FC;&#x30B9;&#x306E;&#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E0;&#x304C;&#x5FC5;&#x8981;&#x306A;&#x7D30;&#x80DE;&#x30AF;&#x30ED;&#x30FC;&#x30CB;&#x30F3;&#x30B0;&#x3042;&#x308B;&#x3044;&#x306F;&#x30C6;&#x30C8;&#x30E9;&#x30B5;&#x30A4;&#x30AF;&#x30EA;&#x30F3;&#x5FDC;&#x7B54;&#x6027;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x6297;&#x751F;&#x7269;&#x8CEA;&#x306E;&#x9078;&#x629E;&#x826F;&#x3044;&#x898F;&#x5236;&#x3092;&#x9054;&#x6210;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x8A18;&#x8F09;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x672C;&#x7A3F;&#x3067;&#x6211;&#x3005; 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293 &#x30C6;&#x30C8; ON &#x306A;&#x5916;&#x6765;&#x4E0D;&#x6B7B;&#x5316; (t) &#x3068;&#x30D7;&#x30E9;&#x30A4;&#x30DE;&#x30EA; (&#x30D2;&#x30C8;&#x9593;&#x8449;&#x7CFB;&#x5E79;&#x7D30;&#x80DE;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x30D2;&#x30C8;&#x4E00;&#x6B21;&#x7E4A;&#x7DAD;&#x82BD;&#x7D30;&#x80DE;) &#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x751F;&#x7523;&#x3002;&#x4E00;&#x62EC;&#x30C9;&#x30AD;&#x30B7;&#x30B5;&#x30A4;&#x30AF;&#x30EA;&#x30F3;&#x5FDC;&#x7B54;&#x6027;&#x7D30;&#x80DE;&#x682A;&#x306F;&#x3001;&#x30C9;&#x30AD;&#x30B7;&#x30B5;&#x30A4;&#x30AF;&#x30EA;&#x30F3;&#x306E;&#x4F4E;&#x91CF;&#x3067; transgene &#x306E;&#x9AD8;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x8868;&#x73FE;&#x3001;&#x305D;&#x306E;&#x89AA;&#x7D30;&#x80DE;&#x304B;&#x3089;&#x306F;&#x7570;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3002;

&#x30C6;&#x30C8; ON &#x30BB;&#x30EB;&#x30E9;&#x30A4;&#x30F3;&#x3092;&#x7C21;&#x5358;&#x306B;&#x751F;&#x6210;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x30AA;&#x30EA;&#x30B8;&#x30CA;&#x30EB;&#x306E; TetR &#x30AA;&#x30FC;&#x30EB; &#x30A4;&#x30F3; &#x30EF;&#x30F3; &#x30EC;&#x30F3;&#x30C1;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x30D9;&#x30AF;&#x30BF;&#x30FC;&#x7CFB;&#x306E;&#x958B;&#x767A;

Lentiviral &#xBCA1;&#xD130; (LVs) &#xD6A8;&#xC728;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xAE30;&#xBCF8; &#xC5F0;&#xAD6C; &#xBC0F; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xCE58;&#xB8CC; &#xC811;&#xADFC;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC720;&#xC804; &#xC815;&#xBCF4;&#xB97C; &#xC804;&#xB2EC; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD574; &#xAC00;&#xC7A5; &#xC720;&#xB9DD;&#xD55C; &#xCC28;&#xB7C9; &#xC911; &#xD558;&#xB098; &#xAC04;&#xC8FC; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC815; &#xB9E5; &#xC8FC;&#xC0AC; &#xB9C8;&#xC57D;&#xC744; &#xC720;&#xB3C4;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xB294; &#xC2DD; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C;&#xACFC; &#xACB0;&#xD569; &#xD558; &#xC5EC; &#xAD00;&#xB828; &#xB300;&#xC0C1; &#xC140;&#xC5D0; &#xCD5C;&#xC18C;&#xD55C;&#xC758; &#xBD80;&#xC791;&#xC6A9;&#xC73C;&#xB85C; transgene &#xC2DD;&#xC758; &#xAF49; &#xC81C;&#xC5B4;&#xB97C; &#xD5C8;&#xC6A9; &#xD574;&#xC57C; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6D0;&#xB798; TetR &#xC9C4;&#xC555;&#xC5D0; &#xB530;&#xB77C; &#xC0C8;&#xB85C;&#xC6B4; &#xC544;&#xBAA9;&#xC2DC;&#xC2E4;&#xB9B0;&#xACFC; &#xADDC;&#xC81C; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C; TetR VP16 &#xD0A4;&#xBA54;&#xB77C; (Tta&#xC640; rtTA) transactivator &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778;&#xC758; &#xD45C;&#xD604; &#xB54C;&#xBB38;&#xC5D0; &#xBCF4;&#xC870; &#xD6A8;&#xACFC; &#xBC29;&#xC9C0; &#xD558;&#xB294; &#xB300;&#xC2E0; 1998 &#xB144;&#xC5D0; &#xAC1C;&#xBC1C; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;. &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098;, &#xC55E;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC124;&#xBA85;&#xD55C; TetR &#xAE30;&#xBC18; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C; &#xD544;&#xC694;&#xD55C; &#xC138;&#xD3EC; &#xBCF5;&#xC81C; &#xBC0F; &#xD56D;&#xC0DD;&#xBB3C;&#xC9C8; &#xBC18;&#xC751; &#xC140;&#xC758; &#xD56D;&#xC0DD;&#xC81C; &#xC120;&#xD0DD; &#xC88B;&#xC740; &#xB808; &#xADE4; &#xB808;&#xC774; &#xC158;&#xC744; &#xB2EC;&#xC131; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD574;. &#xD604;&#xC7AC; &#xC6D0;&#xACE0;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; (SFFV) &#xBAA8;&#xD130; (STetR) regulatable CMV TetO &#xBC1C;&#xAE30;&#xC778; (CTetOE)&#xB97C; &#xD1B5;&#xD574; &#xB450; &#xBC88;&#xC9F8; &#xD45C;&#xD604; Egfp&#xC744; &#xD615;&#xC131; &#xD558;&#xB294; &#xBE44;&#xC7A5; &#xD3EC;&#xCEE4;&#xC2A4;&#xB97C; &#xD1B5;&#xD574; Tetr&#xC744; &#xD45C;&#xD604; &#xD558;&#xB098; &#xB450; lentiviral &#xBCA1;&#xD130; &#xAE30;&#xBC18; &#xB4C0;&#xC5BC; Tet-&#xCF1C; &#xC9D0; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C; &#xC0DD;&#xC131;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xBCA1;&#xD130;&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; TetR &#xC9C4;&#xC555;&#xC758; &#xC5ED;&#xBC29;&#xD5A5; transactivator (rtTA), &#xBC18;&#xB300;&#xB85C; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xD558;&#xACE0; TetO operons&#xC758; &#xB192;&#xC740; &#xC218; &#xBCC0;&#xC870; &#xCD08;&#xACFC; &#xD45C;&#xD604; &#xB420; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xC99D;&#xBA85; &#xD558;&#xACE0;&#xC788;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC; &#xB610;&#xD55C;&#xC774; &#xB4C0;&#xC5BC; &#xBCA1;&#xD130; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C; regulatable &#xB300;&#xB7C9; &#xC140; &#xB77C;&#xC778; (Tetr&#xC758; &#xB192;&#xC740; &#xB808;&#xBCA8;&#xC744; &#xD45C;&#xD604;) &#xBCC0;&#xC870; transgene &#xC2DD; &#xC218; &#xC544;&#xBAA9;&#xC2DC;&#xC2E4;&#xB9B0;&#xACFC; &#xB18D;&#xB3C4; &#xBCC0;&#xD654; &#xD558; &#xC5EC; &#xC0DD;&#xC131;&#xD560; &#xC218; &#xB610;&#xB294; Ctetoe&#xC758; &#xC591;&#xC744; &#xBCC0;&#xD654; &#xC2DC;&#xCF1C; &#xC140;&#xB2F9; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xB97C; &#xBCA1;&#xD130;&#xB97C; &#xC54C;&#xB824; &#xC8FC;&#xC5C8;&#xB2E4;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xACB0;&#xACFC;&#xC5D0; &#xB530;&#xB77C; &#xC0C8;&#xB85C;&#xC6B4; &#xBAA8;&#xB4E0; &#xD558;&#xB098;&#xC758; lentiviral &#xBCA1;&#xD130; (&#xCD08;) &#xC6B4;&#xC804; TetR SFFV &#xBAA8;&#xD130;&#xB97C; &#xD1B5;&#xD574; &#xD45C;&#xD604;&#xACFC; &#xC544;&#xBAA9;&#xC2DC;&#xC2E4;&#xB9B0;&#xACFC; &#xC751;&#xB2F5; CMV TetO &#xC624; &#xD398;&#xB860;&#xC744; &#xD1B5;&#xD574; Egfp&#xC758; &#xC2DD;&#xC744; &#xAC1C;&#xBC1C; &#xD588;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774; &#xBCA1;&#xD130;&#xB294; &#xD6A8;&#xC728;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; 1 &#xCC28; (&#xC778;&#xAC04; &#xC911;&#xAC04; &#xC5FD; &#xC904;&#xAE30; &#xC138;&#xD3EC;&#xC640; &#xC778;&#xAC04;&#xC758; &#xAE30;&#xBCF8; &#xAC8C;&#xC7AC;) &#xC140; Tet ON regulatable &#xBD88;&#xBA78; &#xD558; &#xAC8C; (293T) &#xC0DD;&#xC0B0;. &#xB300;&#xB7C9; &#xC544;&#xBAA9;&#xC2DC;&#xC2E4;&#xB9B0;&#xACFC; &#xBC18;&#xC751; &#xC140; &#xB77C;&#xC778; &#xC775;&#xC2A4;&#xD504;&#xB808;&#xC2A4; &#xC544;&#xBAA9;&#xC2DC;&#xC2E4;&#xB9B0;&#xACFC; &#xB0AE;&#xC740; &#xC591;&#xC758; transgene&#xC758; &#xC0C1;&#xBD80; &#xBC0F; &#xBD80;&#xBAA8; &#xC140;&#xC5D0;&#xC11C; phenotypically &#xBCC4;&#xAC1C; &#xC5C6;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Tet&#xC5D0; &#xC140; &#xB77C;&#xC778;&#xC758; &#xC26C;&#xC6B4; &#xC138;&#xB300;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC6D0;&#xB798; Tetr&#xC5D0; &#xAE30;&#xBC18; &#xD558; &#xC5EC; &#xBAA8;&#xB4E0; &#xD558;&#xB098;&#xC758; lentiviral &#xBCA1;&#xD130; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C;&#xC758; &#xAC1C;&#xBC1C;.

Vectores lentivirales (LVs) se consideran uno de los veh&iacute;culos m&aacute;s prometedores para administrar informaci&oacute;n gen&eacute;tica para enfoques b&aacute;sicos de la terapia de la investigaci&oacute;n y gene. Combinando LVs con sistemas de expresi&oacute;n inducible por la droga debe permitir un control estricto de la expresi&oacute;n del transg&eacute;n con m&iacute;nimo efecto secundario en las c&eacute;lulas blanco relevante. Un nuevo sistema de doxiciclina-regulado basado en el represor Tet original fue desarrollado en 1998 como una alternativa a las quimeras de Tet-VP16 (tTA y rtTA) para evitar efectos secundarios debido a la expresi&oacute;n de dominios transactivator. Sin embargo, previamente descrito sistemas basados en Tet celular requiere clonaci&oacute;n o selecci&oacute;n antibi&oacute;tico de tetraciclinas responden c&eacute;lulas para lograr buena regulaci&oacute;n. En el presente manuscrito hemos construido un sistema dual de Tet-ON basado en dos vectores lentivirales, uno expresar el Tet concentr&aacute;ndose bazo formando promotor de virus (SFFV) (STetR) y un segundo eGFP expresar a trav&eacute;s de la promotora de CMV-TetO regulable (CTetOE). Usando estos vectores hemos demostrado que el represor del Tet, contrario a la inversa transactivator (rtTA), puede expresarse en exceso para atar y modulan un alto n&uacute;mero de operones de TetO. Tambi&eacute;n hemos demostrado que este sistema de doble vector puede generar l&iacute;neas de c&eacute;lulas de la regulable a granel (expresando altos niveles de Tet) que son capaces de modular la expresi&oacute;n del transg&eacute;n ya sea variando la concentraci&oacute;n de doxiciclina o variando la cantidad de CTetOE vector genomas por la c&eacute;lula. Basado en estos resultados hemos desarrollado nuevo all-in-one lentivirales vector (CEST) conduce a la expresi&oacute;n del Tet a trav&eacute;s de la promotora de la SFFV y la expresi&oacute;n de eGFP por el oper&oacute;n de CMV-TetO doxiciclina-sensible. Este vector producido eficientemente Tet-ON inmortalizadas regulable (293T) y c&eacute;lulas primarias (c&eacute;lulas madre mesenquimales humanas y fibroblastos humanos primarios). L&iacute;neas de c&eacute;lulas sensibles a la doxiciclina a granel expresan altos niveles del transg&eacute;n con baja cantidad de doxiciclina y son fenot&iacute;picamente indistintas de sus c&eacute;lulas parentales.

Desarrollo de un sistema de vectores lentivirales todo-en-uno basado en el Tet original para la f&aacute;cil generaci&oacute;n de l&iacute;neas celulares de Tet-ON.

Article	Year
Hematopoietic-specific lentiviral vectors circumvent cellular toxicity due to ectopic expression of Wiskott-Aldrich syndrome protein. Human gene therapy\| PubMed ID: 18240968	2008
In vivo delivery of lentiviral vectors expressing vasoactive intestinal peptide complementary DNA as gene therapy for collagen-induced arthritis. Arthritis and rheumatism\| PubMed ID: 18383372	2008
Safer vectors for gene therapy of primary immunodeficiencies. Current gene therapy\| PubMed ID: 19534652	2009
Was cDNA sequences modulate transgene expression of was promoter-driven lentiviral vectors. Human gene therapy\| PubMed ID: 19630517	2009
Dendritic cells transduced with lentiviral vectors expressing VIP differentiate into VIP-secreting tolerogenic-like DCs. Molecular therapy : the journal of the American Society of Gene Therapy\| PubMed ID: 20068554	2010
Docosahexaenoic acid prevents dendritic cell maturation and in vitro and in vivo expression of the IL-12 cytokine family. Lipids in health and disease\| PubMed ID: 20122166	2010
Development of an all-in-one lentiviral vector system based on the original TetR for the easy generation of Tet-ON cell lines. PloS one\| PubMed ID: 21876765	2011

Miguel G. Toscano

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