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Targeting Olfactory Bulb Neurons Using Combined <em>In Vivo</em> Electroporation and Gal4-Based Enhancer Trap Zebrafish Lines

In vivo electroporation is a powerful method for delivering DNA expression plasmids, RNAi reagents, and morpholino anti-sense oligonucleotides to specific ...

Pace University

&#x7B80;&#x4ECB;&#xFF1A; &#x4F53;&#x5185;&#x7535;&#x7A7F;&#x5B54;&#x662F;&#x4EA4;&#x4ED8;&#x7684;&#x8D28;&#x7C92;&#x548C;&#x5176;&#x4ED6;&#x5BE1;&#x6838;&#x82F7;&#x9178;&#x8BD5;&#x5242;&#xFF0C;&#x63D0;&#x4F9B;&#x7CBE;&#x786E;&#x7684;&#x65F6;&#x95F4;&#x63A7;&#x5236;&#x7684;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3002;&#x5728;&#x6591;&#x9A6C;&#x9C7C;&#xFF0C;&#x7279;&#x522B;&#x9002;&#x5408;&#x4E8E;&#x5411;&#x53D1;&#x5C55;&#x4E2D;&#x56FD;&#x5BB6;&#x4E2D;&#x67A2;&#x795E;&#x7ECF;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x63D0;&#x4F9B;&#x7EFF;&#x8272;&#x8367;&#x5149;&#x86CB;&#x767D; (GFP) &#x8868;&#x8FBE;&#x8F7D;&#x4F53;&#x4F53;&#x5185;&#x7535;&#x7A7F;&#x5B54;&#x3002;&#x6B64;&#x534F;&#x8BAE;&#x63CF;&#x8FF0;&#x4E86;&#x53EF;&#x4EE5;&#x7528;&#x4E8E;&#x4E13;&#x95E8;&#x9488;&#x5BF9;&#x53D1;&#x5C55;&#x4E2D;&#x56FD;&#x5BB6;&#x7684;&#x6591;&#x9A6C;&#x9C7C;&#x80DA;&#x80CE;&#x5F00;&#x59CB;&#x5728; 24 h post-fertilization (hpf) &#x9876;&#x76D6;&#x7684;&#x4F53;&#x5185;&#x7535;&#x7A7F;&#x5B54;&#x7684;&#x4FEE;&#x6539;&#x3002;&#x8FD9;&#x79CD;&#x65B9;&#x6CD5;&#x6240;&#x9700;&#x7684;&#x7535;&#x7A7F;&#x5B54;&#x7535;&#x6781;&#x53EF;&#x4EE5;&#x4ECE;&#x76F8;&#x5BF9;&#x5EC9;&#x4EF7;&#x7684;&#x6750;&#x6599;&#x5F88;&#x5BB9;&#x6613;&#x6784;&#x9020;&#x3002;&#x8D28;&#x7C92; DNA &#x5230;&#x8DDF;&#x7535;&#x7A7F;&#x5B54;&#x7535;&#x6781;&#x7684;&#x7CBE;&#x786E;&#x5B9A;&#x4F4D;&#x7684;&#x4E2D;&#x8111;&#x8111;&#x5BA4;&#x5FAE;&#x91CF;&#x6CE8;&#x5C04;&#x5141;&#x8BB8;&#x9488;&#x5BF9;&#x53D1;&#x5C55;&#x4E2D;&#x53EA;&#x6709;&#x4E00;&#x4E2A;&#x534A;&#x7403;&#x7684;&#x524D;&#x89C6;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x3002;&#x4F7F;&#x7528;&#x6B64;&#x534F;&#x8BAE;&#xFF0C;&#x524D;&#x89C6;&#x53EF;&#x4EE5;&#x6BD4;&#x4F8B;&#x9AD8; (79%) &#x8868;&#x793A;&#x80DA;&#x80CE;&#x7684;&#x6709;&#x6548;&#x76EE;&#x6807;&#x3002;&#x6B64;&#x65B9;&#x6CD5;&#x4E5F;&#x53EF;&#x7528;&#x4E8E;&#x540C;&#x65F6;&#x4F20;&#x9001;&#x8868;&#x8FBE;&#x8F7D;&#x4F53;&#x548C;&#x529F;&#x80FD;&#x4E27;&#x5931;&#x7684;&#x8BD5;&#x5242;&#xFF0C;&#x5B83;&#x53EF;&#x4EE5;&#x63D0;&#x4F9B;&#x7CBE;&#x786E;&#x7684;&#x65F6;&#x95F4;&#x63A7;&#x5236;&#x57FA;&#x56E0;&#x529F;&#x80FD;&#x7684;&#x7EC4;&#x5408;&#x5F0F;&#x3002;

&#x9488;&#x5BF9;&#x4F7F;&#x7528;&#x4F53;&#x5185;&#x7535;&#x7A7F;&#x5B54;&#x7684;&#x6591;&#x9A6C;&#x9C7C;&#x89C6;&#x9876;&#x76D6;&#x3002;

INTRODUCTION: In vivo electroporation is a method for delivery of plasmids and other oligonucleotide reagents that offers precise temporal control. In zebrafish, in vivo electroporation is particularly well-suited to delivering green fluorescent protein (GFP) expression vectors to the developing central nervous system. This protocol describes a modification of in vivo electroporation that can be used to specifically target the developing optic tectum of zebrafish embryos beginning at 24 h post-fertilization (hpf). The electroporation electrodes required for this approach can be constructed easily from relatively inexpensive materials. Microinjection of plasmid DNA to the midbrain ventricle followed by precise positioning of the electroporation electrodes allows for the targeting of developing neurons in only one hemisphere of the optic tectum. Using this protocol, the optic tectum can be effectively targeted in a high percentage (79%) of expressing embryos. This method can also be used to simultaneously deliver expression vectors and loss-of-function reagents, which can provide precise temporal control of the knockdown of gene function.

Targeting the zebrafish optic tectum using in vivo electroporation.

INTRODUCTION: Dans &#xE9;lectroporation in vivo est une m&#xE9;thode pour la livraison de plasmides et d&#x26;#39;autres r&#xE9;actifs oligonucl&#xE9;otidiques qui offre un contr&#xF4;le pr&#xE9;cis du temporel. Chez le poisson z&#xE8;bre, &#xE9;lectroporation in vivo est particuli&#xE8;rement bien adapt&#xE9; &#xE0; la r&#xE9;alisation vertes fluorescentes vecteurs d&#x26;#39;expression de prot&#xE9;ines (GFP) pour le d&#xE9;veloppement du syst&#xE8;me nerveux central. Ce protocole d&#xE9;crit une modification de &#xE9;lectroporation in vivo qui peut &#xEA;tre utilis&#xE9; pour cibler sp&#xE9;cifiquement le tectum optique de d&#xE9;veloppement embryons de poisson z&#xE8;bre en commen&#xE7;ant &#xE0; 24 h apr&#xE8;s la f&#xE9;condation (HPF). Les &#xE9;lectrodes d&#x26;#39;&#xE9;lectroporation requis pour cette approche peut &#xEA;tre construit facilement &#xE0; partir de mat&#xE9;riaux relativement peu co&#xFB;teux. Microinjection d&#x26;#39;ADN plasmidique au ventricule du m&#xE9;senc&#xE9;phale suivie par un positionnement pr&#xE9;cis des &#xE9;lectrodes d&#x26;#39;&#xE9;lectroporation permet pour le ciblage des neurones d&#xE9;veloppement dans une seule h&#xE9;misph&#xE8;re de la toit optique. En utilisant ce protocole, le tectum optique peut &#xEA;tre efficacement cibl&#xE9;es dans un pourcentage &#xE9;lev&#xE9; (79%) d&#x26;#39;exprimer embryons. Cette m&#xE9;thode peut &#xE9;galement &#xEA;tre utilis&#xE9; pour diffuser simultan&#xE9;ment des vecteurs d&#x26;#39;expression et la perte de fonction des r&#xE9;actifs, qui peuvent fournir un contr&#xF4;le pr&#xE9;cis du temporel de l&#x26;#39;inactivation de la fonction des g&#xE8;nes.

Cibler le poisson-z&#xE8;bre Tectum optique utilisant &#xE9;lectroporation in vivo

Einleitung: In-vivo Elektroporation ist eine Methode f&uuml;r die Bereitstellung von Plasmiden und andere Oligonukleotid-Reagenzien, die genaue zeitliche Steuerung bietet. In-vivo Elektroporation eignet sich im Zebrafisch besonders die Lieferung Expressionsvektoren gr&uuml;n fluoreszierendes Protein (GFP) in den Entwicklungsl&auml;ndern Zentralnervensystem. Dieses Protokoll beschreibt eine &Auml;nderung der in-vivo Elektroporation, die verwendet werden kann, um gezielt gegen die entwickelnden Optik Tectum Zebrafisch-Embryonen, die beginnend bei 24 h Post-fertilization (hpf). Die Elektroporation Elektroden f&uuml;r diesen Ansatz k&ouml;nnen leicht von relativ preiswerte Materialien konstruiert werden. Microinjection der Plasmid-DNA um die Mittelhirn-Ventrikel, gefolgt von der pr&auml;zisen Positionierung der Elektroporation Elektroden erm&ouml;glicht die gezielte Entwicklung von Neuronen nur eine Hemisph&auml;re von der Optik Tectum. Dieses Protokoll verwenden, kann die Optik Tectum effektiv in einem hohen Prozentsatz (79 %) auszudr&uuml;cken Embryonen ausgerichtet werden. Diese Methode kann auch verwendet werden, und liefert gleichzeitig Ausdruck Vektoren und Verlust der Funktion Reagenzien, die pr&auml;zise zeitliche Steuerung der Niederschlag der Genfunktion liefern k&ouml;nnen.

Im Visier der Zebrafisch Optik Tectum mit in-vivo Elektroporation.

Introduzione: elettroporazione In vivo &egrave; un metodo per la consegna di plasmidi e altri reagenti del oligonucleotide che offre un controllo temporale preciso. In zebrafish, elettroporazione in vivo &egrave; particolarmente adatto a fornire i vettori di espressione della proteina fluorescente verde (GFP) di sviluppo del sistema nervoso centrale. Questo protocollo descrive una modifica di elettroporazione in vivo che pu&ograve; essere utilizzati per indirizzare specificamente la tectum ottica lo sviluppo degli embrioni di zebrafish cominciando a post-fertilization h 24 (hpf). Gli elettrodi di elettroporazione richiesti per questo approccio possono essere facilmente costruiti da materiali relativamente poco costosi. Microiniezione del DNA del plasmide al ventricolo mesencefalo seguito da un posizionamento preciso degli elettrodi elettroporazione permette per il targeting di sviluppare neuroni in un solo emisfero dell&#39;ottica tectum. Utilizzando questo protocollo, il tectum ottica pu&ograve; essere efficacemente mirati in un&#39;alta percentuale (79%) di esprimere gli embrioni. Questo metodo pu&ograve; essere utilizzato anche per fornire simultaneamente i vettori di espressione e perdita di funzione reagenti, che possono fornire un controllo temporale preciso di atterramento di funzione del gene.

Il Danio rerio optic tectum usando elettroporazione in vivo di targeting.

&#x306F;&#x3058;&#x3081;&#x306B;&#xFF1A;&#x751F;&#x4F53;&#x5185;&#x30A8;&#x30EC;&#x30AF;&#x30C8;&#x30ED;&#x30DD;&#x30EC;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x30D7;&#x30E9;&#x30B9;&#x30DF;&#x30C9;&#x3068;&#x6B63;&#x78BA;&#x306A;&#x6642;&#x9593;&#x5236;&#x5FA1;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3057;&#x3001;&#x4ED6;&#x306E;&#x30AA;&#x30EA;&#x30B4;&#x30CC;&#x30AF;&#x30EC;&#x30AA;&#x30C1;&#x30C9;&#x8A66;&#x85AC;&#x306E;&#x9001;&#x9054;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x30BC;&#x30D6;&#x30E9;&#x30D5;&#x30A3;&#x30C3;&#x30B7;&#x30E5;&#x3067;&#x306F;&#x3001;in vivo&#x3067;&#x306E;&#x30A8;&#x30EC;&#x30AF;&#x30C8;&#x30ED;&#x30DD;&#x30EC;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x3067;&#x306F;&#x7279;&#x306B;&#x767A;&#x9054;&#x4E2D;&#x306E;&#x4E2D;&#x67A2;&#x795E;&#x7D4C;&#x7CFB;&#x306B;&#x7DD1;&#x8272;&#x86CD;&#x5149;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#xFF08;GFP&#xFF09;&#x767A;&#x73FE;&#x30D9;&#x30AF;&#x30BF;&#x30FC;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x9069;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C8;&#x30B3;&#x30EB;&#x306F;&#x3001;&#x7279;&#x306B;24&#x6642;&#x9593;&#x5F8C;&#x306B;&#x53D7;&#x7CBE;&#xFF08;HPF&#xFF09;&#x3067;&#x59CB;&#x307E;&#x308B;&#x30BC;&#x30D6;&#x30E9;&#x30D5;&#x30A3;&#x30C3;&#x30B7;&#x30E5;&#x80DA;&#x306E;&#x958B;&#x767A;&#x8996;&#x84CB;&#x3092;&#x6A19;&#x7684;&#x3068;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x4F7F;&#x7528;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x308B;&#x751F;&#x4F53;&#x5185;&#x30A8;&#x30EC;&#x30AF;&#x30C8;&#x30ED;&#x30DD;&#x30EC;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x3067;&#x306E;&#x5909;&#x66F4;&#x3092;&#x8AAC;&#x660E;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x30A2;&#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30C1;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x5FC5;&#x8981;&#x306A;&#x30A8;&#x30EC;&#x30AF;&#x30C8;&#x30ED;&#x30DD;&#x30EC;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x96FB;&#x6975;&#x306F;&#x6BD4;&#x8F03;&#x7684;&#x5B89;&#x4FA1;&#x306A;&#x6750;&#x6599;&#x3067;&#x7C21;&#x5358;&#x306B;&#x69CB;&#x7BC9;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30A8;&#x30EC;&#x30AF;&#x30C8;&#x30ED;&#x30DD;&#x30EC;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x96FB;&#x6975;&#x306E;&#x6B63;&#x78BA;&#x306A;&#x4F4D;&#x7F6E;&#x6C7A;&#x3081;&#x304C;&#x7D9A;&#x304F;&#x4E2D;&#x8133;&#x8133;&#x5BA4;&#x3078;&#x306E;&#x30D7;&#x30E9;&#x30B9;&#x30DF;&#x30C9;DNA&#x306E;&#x30DE;&#x30A4;&#x30AF;&#x30ED;&#x30A4;&#x30F3;&#x30B8;&#x30A7;&#x30AF;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x306F;&#x3001;&#x8996;&#x84CB;&#x306E;&#x552F;&#x4E00;&#x306E;&#x534A;&#x7403;&#x306E;&#x795E;&#x7D4C;&#x7D30;&#x80DE;&#x3092;&#x958B;&#x767A;&#x3059;&#x308B;&#x306E;&#x30BF;&#x30FC;&#x30B2;&#x30C6;&#x30A3;&#x30F3;&#x30B0;&#x304C;&#x53EF;&#x80FD;&#x306B;&#x306A;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C8;&#x30B3;&#x30EB;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x8996;&#x84CB;&#x304C;&#x52B9;&#x679C;&#x7684;&#x306B;&#x767A;&#x73FE;&#x3057;&#x305F;&#x80DA;&#x306E;&#x5272;&#x5408;&#x304C;&#x9AD8;&#x3044;&#xFF08;79&#xFF05;&#xFF09;&#x3067;&#x5BFE;&#x8C61;&#x3068;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x30E1;&#x30BD;&#x30C3;&#x30C9;&#x306F;&#x3001;&#x540C;&#x6642;&#x306B;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x6A5F;&#x80FD;&#x306E;&#x30CE;&#x30C3;&#x30AF;&#x30C0;&#x30A6;&#x30F3;&#x306E;&#x6B63;&#x78BA;&#x306A;&#x6642;&#x9593;&#x5236;&#x5FA1;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x308B;&#x767A;&#x73FE;&#x30D9;&#x30AF;&#x30BF;&#x30FC;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x6A5F;&#x80FD;&#x55AA;&#x5931;&#x8A66;&#x85AC;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x4F7F;&#x7528;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x751F;&#x4F53;&#x5185;&#x30A8;&#x30EC;&#x30AF;&#x30C8;&#x30ED;&#x30DD;&#x30EC;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x306B;&#x4F7F;&#x7528;&#x3059;&#x308B;&#x30BC;&#x30D6;&#x30E9;&#x30D5;&#x30A3;&#x30C3;&#x30B7;&#x30E5;&#x8996;&#x84CB;&#x3092;&#x30BF;&#x30FC;&#x30B2;&#x30C3;&#x30C8;&#x306B;

&#xC18C;&#xAC1C;: &#xC0DD;&#xCCB4; &#xC870;&#xAC74; electroporation &#xC815;&#xD655;&#xD55C; &#xC2DC;&#xAC04;&#xC801; &#xC81C;&#xC5B4;&#xB97C; &#xC81C;&#xACF5; &#xD558;&#xB294; &#xD50C;&#xB77C;&#xC2A4; &#xBBF8;&#xB4DC;&#xC640; &#xB2E4;&#xB978; oligonucleotide &#xC2DC; &#xC57D; &#xB0A9;&#xD488;&#xC744; &#xC704;&#xD55C; &#xBC29;&#xBC95;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;. Zebrafish, in vivo electroporation&#xC740; &#xB179;&#xC0C9; &#xD615;&#xAD11; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; (GFP) &#xC2DD; &#xBCA1;&#xD130; &#xAC1C;&#xBC1C; &#xC911;&#xCD94;&#xC5D0; &#xC804;&#xB2EC;&#xC5D0; &#xD2B9;&#xD788; &#xC801;&#xD569; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774; &#xD504;&#xB85C;&#xD1A0;&#xCF5C; &#xD2B9;&#xD788; 24 &#xC2DC;&#xAC04; post-fertilization (hpf)&#xC5D0;&#xC11C; &#xC2DC;&#xC791; zebrafish &#xD0DC;&#xC544;&#xC758; &#xAC1C;&#xBC1C; &#xAD11;&#xC12C;&#xC720; tectum &#xB300;&#xC0C1;&#xC73C;&#xB85C; &#xC0AC;&#xC6A9;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xB294; &#xC0DD;&#xCCB4; &#xC870;&#xAC74; electroporation &#xC218;&#xC815;&#xC744; &#xC124;&#xBA85; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774; &#xC811;&#xADFC;&#xC5D0; &#xD544;&#xC694;&#xD55C; electroporation &#xC804;&#xADF9;&#xC740; &#xC0C1;&#xB300;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xC800;&#xB834; &#xD55C; &#xC18C;&#xC7AC;&#xB85C; &#xC27D;&#xAC8C; &#xC0DD;&#xC131;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. Microinjection midbrain &#xC2EC; &#xC2E4; &#xB4A4;&#xC5D0; electroporation &#xC804;&#xADF9;&#xC758; &#xC815;&#xD655;&#xD55C; &#xC704;&#xCE58;&#xB97C; &#xD50C;&#xB77C;&#xC2A4; &#xBBF8;&#xB4DC; DNA&#xC758; &#xAD11;&#xC12C;&#xC720; tectum&#xC758; &#xD55C; &#xBC18;&#xAD6C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xB274;&#xB7F0;&#xC744; &#xAC1C;&#xBC1C;&#xC758; &#xB300;&#xC0C1;&#xC73C;&#xB85C; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774; &#xD504;&#xB85C;&#xD1A0;&#xCF5C;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xAD11;&#xC12C;&#xC720; tectum &#xD45C;&#xD604; &#xD558;&#xB294; &#xBC30;&#xC544;&#xC758; &#xB192;&#xC740; &#xBC31;&#xBD84;&#xC728; (79%)&#xC5D0;&#xC11C; &#xD6A8;&#xACFC;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xD0C0;&#xAC9F;&#xD305; &#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774; &#xC774;&#xB807;&#xAC8C; &#xC2DD; &#xBCA1;&#xD130; &#xBC0F; &#xAE30;&#xB2A5; &#xC0C1;&#xC2E4; &#xC2DC; &#xC57D;, &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC758; &#xCD5C;&#xC800;&#xC758;&#xC758; &#xC815;&#xD655;&#xD55C; &#xC2DC;&#xAC04;&#xC801; &#xC81C;&#xC5B4;&#xB97C; &#xC81C;&#xACF5;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xB294; &#xB3D9;&#xC2DC;&#xC5D0; &#xC804;&#xB2EC; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD574; &#xC0AC;&#xC6A9;&#xD558;&#xC2E4; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xC0DD;&#xCCB4; &#xC870;&#xAC74; electroporation zebrafish &#xAD11;&#xC12C;&#xC720; tectum &#xD0C0;&#xAC9F;&#xD305;.

Introducci&#xF3;n: En la electroporaci&#xF3;n in vivo es un m&#xE9;todo para la entrega de los pl&#xE1;smidos y otros reactivos de oligonucle&#xF3;tidos que ofrece un control temporal preciso. En el pez cebra, electroporaci&#xF3;n in vivo est&#xE1; particularmente bien adaptado a la entrega de prote&#xED;na verde fluorescente (GFP) vectores de expresi&#xF3;n para el desarrollo del sistema nervioso central. Este protocolo describe una modificaci&#xF3;n de la electroporaci&#xF3;n in vivo que se puede utilizar para apuntar espec&#xED;ficamente el tectum &#xF3;ptica de desarrollo de embriones de pez cebra a partir a las 24 horas post-fecundaci&#xF3;n (HPF). Los electrodos de electroporaci&#xF3;n necesarios para este m&#xE9;todo se pueden construir f&#xE1;cilmente a partir de materiales relativamente baratos. La microinyecci&#xF3;n de ADN del pl&#xE1;smido con el ventr&#xED;culo del cerebro medio seguido de la colocaci&#xF3;n precisa de los electrodos de electroporaci&#xF3;n permite la orientaci&#xF3;n de las neuronas en desarrollo en s&#xF3;lo un hemisferio del techo &#xF3;ptico. El uso de este protocolo, el techo &#xF3;ptico puede orientar de manera efectiva en un alto porcentaje (79%) de expresar embriones. Este m&#xE9;todo tambi&#xE9;n puede usarse para suministrar simult&#xE1;neamente vectores de expresi&#xF3;n y los reactivos p&#xE9;rdida de funci&#xF3;n, que pueden proporcionar un control preciso temporal de la ca&#xED;da de la funci&#xF3;n g&#xE9;nica.

Kenric J. Hoegler

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