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Biochemical Reconstitution of Steroid Receptor&#x2022;Hsp90 Protein  Complexes and Reactivation of Ligand Binding

Hsp90 is an essential and highly abundant molecular chaperone protein that has been found to regulate more than 150 eukaryotic signaling proteins, ...

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Automated Hydrophobic Interaction Chromatography Column Selection for Use in Protein Purification

In contrast to other chromatographic methods for purifying proteins (e.g. gel filtration, affinity, and ion exchange), hydrophobic interaction ...

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Visualization of Recombinant DNA and Protein Complexes Using Atomic Force Microscopy

Atomic force microscopy (AFM) allows for the visualizing of individual proteins, DNA molecules, protein-protein complexes, and DNA-protein complexes. On ...

Seattle University

&#xC774; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC801; &#xC5ED;&#xD560; &#xC815;&#xC758; &#xB418;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC740; &#xC788;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xADF8; &#xC2E0;&#xACBD; &#xC544;&#xBB34; synthase (nNOS) &#xBCF4;&#xD638;&#xC790; hsp90&#xC640; &#xAD00;&#xB828; &#xB41C; &#xC124;&#xC815; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; radicicol &#xB610;&#xB294; geldanamycin&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; hsp90&#xC758; &#xC800;&#xD574;&#xB97C; &#xAC70;&#xC758; heme &#xC911;&#xC7AC; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xBC0F; &#xACE4;&#xCDA9; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0;&#xC11C; heme &#xBD88;&#xCDA9;&#xBD84; &#xD55C; apo Nnos&#xC758; &#xC870;&#xB9BD; &#xBC29;&#xC9C0; &#xBC1C;&#xACAC;. &#xC774; &#xD6A8;&#xACFC; &#xB18D;&#xB3C4; &#xB530;&#xB77C; &#xB2E4;&#xB985;&#xB2C8;&#xB2E4; 75% &#xC774;&#xC0C1;&#xC73C;&#xB85C; &#xC800;&#xD574; 20 microm radicicol&#xC5D0;&#xC11C; &#xC5BB;&#xC744; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. Nnos&#xC758; &#xCCA0; &#xCE74; &#xBCF5;&#xD569; &#xAE30;&#xB2A5; heme &#xC0BD;&#xC785; &#xC218; &#xC5C6;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0B4;&#xB294; hsp90 &#xC800;&#xD574;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xB54C; &#xD615;&#xC2DD;&#xC774; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xBCF4;&#xD638;&#xC790; hsp90 &#xAE30;&#xBC18; &#xAE30;&#xACC4; &#xAE30;&#xB2A5; heme &#xC785;&#xAD6D; apo nNOS &#xC6A9;&#xC774; &#xD558; &#xAC8C; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xC18C;&#xC218; &#xC131; heme &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xBD84;&#xC5F4;&#xC758; &#xAC1C;&#xBC29;&#xC744; &#xC81C;&#xC548; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774;&#xC804;&#xC5D0;, &#xADF8;&#xAC83;&#xC740; hsp90 &#xC5B5;&#xC81C;&#xC81C; geldanamycin uncouples &#xB0B4; &#xD53C; NOS &#xD65C;&#xB3D9; &#xBC0F; &#xB0B4; &#xD53C; NOS &#xC885;&#xC18D; O(2)() &#xC0DD;&#xC0B0; &#xC99D;&#xAC00; &#xBCF4;&#xACE0; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. Geldanamycin ansamycin &#xB2E4; &#xACE0; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; &#xC5EC;&#xAE30;&#xC5D0; &#xC21C;&#xD654; &#xB41C; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xBFD0;&#xB9CC; &#xC544;&#xB2C8;&#xB77C; &#xACE4;&#xCDA9; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0;&#xC11C; Nnos&#xC5D0;&#xC11C; &#xC81C; &#xC0DD;&#xC0B0; &#xD558;&#xBA74; &#xD45C;&#xC2DC;. 20 Microm&#xC758; &#xB18D;&#xB3C4;&#xC5D0;&#xC11C; geldanamycin NADPH &#xC0B0;&#xD654; &#xBC0F; &#xACFC;&#xC0B0;&#xD654; &#xC218;&#xC18C; &#xD615;&#xC131;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC21C;&#xD654; nNOS &#xBC18;&#xBA74; &#xBE44; quinone hsp90 &#xC5B5;&#xC81C;&#xC81C; radicicol &#xC788; &#xC5C8; &#xC544;&#xBB34;&#xB7F0; &#xC601;&#xD5A5;&#xC744; &#xBBF8;&#xCE58;&#xC9C0; 3 &#xC99D;&#xAC00; &#xBC1C;&#xC0DD; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB530;&#xB77C;&#xC11C;, &#xB2E4;&#xB978; &#xD034;, geldanamycin&#xC758; &#xC54C;&#xB824;&#xC9C4;&#xB41C; &#xC131;&#xD5A5; &#xC77C;&#xCE58; &#xC9C1;&#xC811; redox &#xC0AC;&#xC774;&#xD074; nNOS hsp90 &#xC77C;&#xC5D0; &#xBAA8;&#xB4E0; &#xC791;&#xC5C5;&#xC758; &#xD504;&#xB85C;&#xC138;&#xC2A4; &#xB3C5;&#xB9BD;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; redox-&#xC561;&#xD2F0;&#xBE0C; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C;&#xC5D0; &#xD2B9;&#xC815;&#xC758; hsp90 &#xC5B5;&#xC81C;&#xC81C;&#xB85C; geldanamycin&#xC758; &#xC0AC;&#xC6A9;&#xC5D0; &#xB300;&#xD574; cautioning&#xACFC;.

hsp90&#xB294; heme &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xACFC; apo &#xC2E0;&#xACBD; nitric &#xC0B0;&#xD654;&#xBB3C; synthase&#xC758; &#xD65C;&#xC131;&#xD654;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xD544;&#xC694;: geldanamycin &#xC911;&#xC7AC; &#xC81C; &#xC138;&#xB300;&#xB294; hsp90 &#xC870;&#xCE58; &#xAD00;&#xB828;.

&#x867D;&#x7136;&#x5C1A;&#x672A;&#x5B9A;&#x4E49;&#x7684;&#x529F;&#x80FD;&#x89D2;&#x8272;&#x7684;&#x8FD9;&#x79CD;&#x4E92;&#x52A8;&#xFF0C;&#x5B83;&#x88AB;&#x5EFA;&#x7ACB;&#x5373;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x6C27;&#x5316;&#x6C2E;&#x5408;&#x9176; (nNOS) &#x662F;&#x4E0E;&#x4F34;&#x4FA3;&#x70ED;&#x4F11;&#x514B;&#x86CB;&#x767D; 90&#xFF0C;&#x76F8;&#x5173;&#x8054;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x53D1;&#x73B0;&#x901A;&#x8FC7; radicicol &#x6216;&#x683C;&#x5C14;&#x70ED;&#x4F11;&#x514B;&#x86CB;&#x767D; 90 &#x6291;&#x5236;&#x8FD1;&#x9632;&#x6B62;&#x8840;&#x7EA2;&#x7D20;&#x4ECB;&#x5BFC;&#x7684;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x548C;&#x8840;&#x7EA2;&#x7D20;&#x4E0D;&#x8DB3;&#x8F7D;&#x8102;&#x86CB;&#x767D;-nNOS &#x5728;&#x6606;&#x866B;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E2D;&#x7684;&#x7A0B;&#x5E8F;&#x96C6;&#x3002;&#x8FD9;&#x79CD;&#x6548;&#x5E94;&#x662F;&#x6D53;&#x5EA6;&#x4F9D;&#x8D56;&#x6027;&#x4E0E; 75%&#x4EE5;&#x4E0A;&#x8FBE;&#x5230; 20 microm radicicol &#x7684;&#x6291;&#x5236;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;&#x70ED;&#x4F11;&#x514B;&#x86CB;&#x767D; 90 &#x53D7;&#x5230;&#x6291;&#x5236;&#xFF0C;&#x8868;&#x660E;&#x963B;&#x6B62;&#x529F;&#x80FD;&#x8840;&#x7EA2;&#x7D20;&#x63D2;&#x5165;&#x65F6;&#x4E0D;&#x5F62;&#x6210; nNOS &#x7684;&#x9ED1;&#x8272;&#x91D1;&#x5C5E;&#x7FB0;&#x57FA;&#x60C5;&#x7ED3;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x5EFA;&#x8BAE;&#x57FA;&#x4E8E;&#x70ED;&#x4F11;&#x514B;&#x86CB;&#x767D; 90 &#x7684;&#x4F34;&#x4FA3;&#x673A;&#x68B0;&#x7531;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x5728;&#x758F;&#x6C34;&#x7684;&#x8840;&#x7EA2;&#x7D20;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x816D;&#x88C2;&#x5F00;&#x5E55;&#x4FBF;&#x5229;&#x529F;&#x80FD;&#x8840;&#x7EA2;&#x7D20;&#x8FDB;&#x5165;&#x4E9A;&#x6D32;&#x751F;&#x4EA7;&#x529B;&#x7EC4;&#x7EC7; nNOS&#x3002;&#x4EE5;&#x524D;&#xFF0C;&#x636E;&#x62A5;&#x70ED;&#x4F11;&#x514B;&#x86CB;&#x767D; 90 &#x6291;&#x5236;&#x5242;&#x683C;&#x5C14; uncouples &#x76AE; NOS &#x6D3B;&#x6027;&#x548C;&#x589E;&#x52A0;&#x8840;&#x7BA1;&#x5185;&#x76AE; NOS &#x4F9D;&#x8D56; O(2)() &#x751F;&#x4EA7;&#x3002;&#x683C;&#x5C14;&#x5FB7;&#x9709;&#x7D20;&#x662F; ansamycin &#x82EF;&#x918C;&#xFF0C;&#x548C;&#x6211;&#x4EEC;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#x5C55;&#x793A;&#x5B83;&#x5BFC;&#x81F4;&#x6C27;&#x5316;&#x5242;&#x751F;&#x4EA7;&#x4ECE; nNOS &#x5728;&#x6606;&#x866B;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E2D;&#x4EE5;&#x53CA;&#x7EAF;&#x5316;&#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#x3002;20 Microm &#x7684;&#x6D53;&#x5EA6;&#xFF0C;&#x683C;&#x5C14; NADPH &#x6C27;&#x5316;&#x4E0E;&#x8FC7;&#x6C27;&#x5316;&#x6C22;&#x5F62;&#x6210;&#x4ECE;&#x51C0;&#x5316; nNOS&#xFF0C;&#x5BFC;&#x81F4;&#x4E09;&#x6298;&#x7684;&#x589E;&#x52A0;&#xFF0C;&#x800C;&#x975E;&#x918C;&#x70ED;&#x4F11;&#x514B;&#x86CB;&#x767D; 90 &#x6291;&#x5236;&#x5242; radicicol &#x5E76;&#x65E0;&#x5F71;&#x54CD;&#x3002;&#x56E0;&#x6B64;&#xFF0C;&#x4E0E;&#x5DF2;&#x77E5;&#x7684;&#x5176;&#x4ED6;&#x57FA;&#x5C3C;&#x5965;&#x5185;&#x65AF;&#x683C;&#x5C14;&#x503E;&#x5411;&#x4E00;&#x81F4;&#x76F4;&#x63A5;&#x6C27;&#x5316;&#x8FD8;&#x539F;&#x5468;&#x671F;&#x7531;&#x70ED;&#x4F11;&#x514B;&#x86CB;&#x767D; 90&#xFF0C;&#x4EFB;&#x4F55;&#x884C;&#x52A8;&#x8FDB;&#x7A0B;&#x72EC;&#x7ACB; nNOS &#x544A;&#x8BEB;&#x683C;&#x5C14;&#x5FB7;&#x9709;&#x7D20;&#x4F7F;&#x7528;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x4E00;&#x79CD;&#x7279;&#x5B9A;&#x7684;&#x6291;&#x5236;&#x5242;&#x70ED;&#x4F11;&#x514B;&#x86CB;&#x767D; 90 &#x5728;&#x6C27;&#x5316;&#x8FD8;&#x539F;&#x6D3B;&#x52A8;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x3002;

&#x70ED;&#x4F11;&#x514B;&#x86CB;&#x767D; 90 &#x662F;&#x6240;&#x5FC5;&#x9700;&#x7684;&#x8840;&#x7EA2;&#x7D20;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x548C;&#x8F7D;&#x8102;&#x86CB;&#x767D;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x6C27;&#x5316;&#x6C2E;&#x5408;&#x9176;&#x7684;&#x6FC0;&#x6D3B;&#xFF1A; &#x683C;&#x5C14;&#x5FB7;&#x9709;&#x7D20;&#x4ECB;&#x5BFC;&#x6C27;&#x5316;&#x5242;&#x4EE3;&#x65E0;&#x5173;&#x7684;&#x70ED;&#x4F11;&#x514B;&#x86CB;&#x767D; 90 &#x7684;&#x4EFB;&#x4F55;&#x884C;&#x52A8;&#x3002;

It is established that neuronal NO synthase (nNOS) is associated with the chaperone hsp90, although the functional role for this interaction has not been defined. We have discovered that inhibition of hsp90 by radicicol or geldanamycin nearly prevents the heme-mediated activation and assembly of heme-deficient apo-nNOS in insect cells. This effect is concentration-dependent with over 75% inhibition achieved at 20 microm radicicol. The ferrous carbonyl complex of nNOS is not formed when hsp90 is inhibited, indicating that functional heme insertion is prevented. We propose that the hsp90-based chaperone machinery facilitates functional heme entry into apo-nNOS by the opening of the hydrophobic heme-binding cleft in the protein. Previously, it has been reported that the hsp90 inhibitor geldanamycin uncouples endothelial NOS activity and increases endothelial NOS-dependent O(2)() production. Geldanamycin is an ansamycin benzoquinone, and we show here that it causes oxidant production from nNOS in insect cells as well as with the purified protein. At a concentration of 20 microm, geldanamycin causes a 3-fold increase in NADPH oxidation and hydrogen peroxide formation from purified nNOS, whereas the non-quinone hsp90 inhibitor radicicol had no effect. Thus, consistent with the known propensity of other quinones, geldanamycin directly redox cycles with nNOS by a process independent of any action on hsp90, cautioning against the use of geldanamycin as a specific inhibitor of hsp90 in redox-active systems.

hsp90 is required for heme binding and activation of apo-neuronal nitric-oxide synthase: geldanamycin-mediated oxidant generation is unrelated to any action of hsp90.

Il est &eacute;tabli que neuronale que no synthase (nNOS) est associ&eacute;e &agrave; la hsp90 Chaperon, bien que le r&ocirc;le fonctionnel de cette interaction n&#39;a pas &eacute;t&eacute; d&eacute;fini. Nous avons d&eacute;couvert que l&#39;inhibition de la hsp90 par radicicol ou geldanamycine emp&ecirc;che presque l&#39;activation par l&#39;h&egrave;me et Assembl&eacute;e des pauvres en h&egrave;me apo-nNOS dans les cellules d&#39;insectes. Cet effet est dose-d&eacute;pendante avec plus de 75 % l&#39;inhibition atteinte &agrave; 20 microm radicicol. Le complexe de carbonyle ferreux de nNOS n&#39;est pas form&eacute; lors de la hsp90 est inhib&eacute;e, ce qui indique que l&#39;insertion fonctionnelle de l&#39;h&egrave;me est emp&ecirc;ch&eacute;e. Nous proposons que le m&eacute;canisme de base de hsp90 chaperon facilite l&#39;h&egrave;me fonctionnelle entr&eacute;e apo-nNOS par l&#39;ouverture de la fente de l&#39;h&egrave;me-liaison hydrophobe de la prot&eacute;ine. Auparavant, il a signal&eacute; que la geldanamycine inhibiteur de hsp90 d&eacute;couple l&#39;activit&eacute; de NOS endoth&eacute;liale et augmente la production endoth&eacute;liale d&eacute;pendante de NOS O(2)(). Geldanamycine est une benzoquinone ansamycine, et nous d&eacute;montrons qu&#39;il provoque la production oxydant de nNOS dans les cellules d&#39;insectes, ainsi qu&#39;avec la prot&eacute;ine purifi&eacute;e. &Agrave; une concentration de 20 microm, geldanamycine provoque une augmentation de trois fois dans l&#39;oxydation du NADPH et la formation de peroxyde d&#39;hydrog&egrave;ne de nNOS purifi&eacute;e, tandis que le radicicol inhibiteur de hsp90 non-quinone n&#39;a aucun effet. Ainsi, conform&eacute;ment &agrave; la tendance connue des autres quinones, geldanamycine directement redox cycles avec nNOS par un ind&eacute;pendant du processus d&#39;intervention de hsp90, mettant en garde contre l&#39;utilisation de la geldanamycine comme un inhibiteur sp&eacute;cifique de la hsp90 dans les syst&egrave;mes actifs en oxydor&eacute;duction.

HSP90 est requise pour la liaison de l&#39;h&egrave;me et activation d&#39;apo-neuronale d&#39;oxyde nitrique synthase : g&eacute;n&eacute;ration oxydant induite par la geldanamycine n&#39;est pas li&eacute;e &agrave; une action quelconque de hsp90.

Hsp90 ist f&#xFC;r die H&#xE4;m-Bindung und Aktivierung von apo-neuronalen Stickoxid-Synthase ben&#xF6;tigt: Geldanamycin-vermittelte Oxidationsmittel Generation ist nichts mit einer Aktion von Hsp90.

&Egrave; accertato che un neurone che no sintetasi (nNOS) sono associato con il chaperone hsp90, anche se non &egrave; stato definito il ruolo funzionale per questa interazione. Abbiamo scoperto che l&#39;inibizione di hsp90 radicicol o geldanamycin quasi impedisce l&#39;attivazione mediata eme e montaggio di EME-carenti apo-nNOS nelle cellule degli insetti. Questo effetto &egrave; concentrazione-dipendente con oltre il 75% realizzato a 20 microm radicicol inibizione. Il complesso ferroso carbonile del nNOS non &egrave; formato quando hsp90 &egrave; inibita, che indica che l&#39;inserimento funzionale eme &egrave; impedito. Proponiamo che il macchinario di chaperone hsp90-based facilita l&#39;ingresso di EME funzionale in apo-nNOS dall&#39;apertura della fessura eme-associazione idrofoba nella proteina. In precedenza, &egrave; stato segnalato che il geldanamycin inibitore hsp90 spariglia attivit&agrave; NOS endoteliale e aumenta la produzione endoteliale di O(2)() NOS-dipendente. Geldanamycin &egrave; un benzochinone ansamycin, e mostriamo qui che esso provoca la produzione di ossidanti da nNOS nelle cellule degli insetti cos&igrave; come con la proteina purificata. Ad una concentrazione di 20 microm, geldanamycin provoca un aumento di 3 volte in NADPH ossidazione e formazione di perossido di idrogeno da nNOS purificato, considerando che la radicicol inibitore hsp90 chinone non ha avuto alcun effetto. Cos&igrave;, coerente con la nota propensione degli altri chinoni, geldanamycin direttamente redox cicli con nNOS da un processo indipendente di qualsiasi azione su hsp90, ammonendo contro l&#39;uso di geldanamycin come un inibitore specifico di hsp90 in sistemi redox-attiva.

Hsp90 &egrave; richiesto per l&#39;associazione di eme e attivazione di apo-neuronale ossido nitrico sintasi: generazione ossidante geldanamycin-mediata &egrave; correlata a qualsiasi azione di hsp90.

&#x3053;&#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x6A5F;&#x80FD;&#x7684;&#x5F79;&#x5272;&#x304C;&#x5B9A;&#x7FA9;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x306A;&#x3044;&#x304C;&#x305D;&#x306E;&#x795E;&#x7D4C;&#x5408;&#x6210;&#x9175;&#x7D20; &#xFF08;nNOS&#xFF09; &#x306E;&#x30B7;&#x30E3;&#x30DA;&#x30ED;&#x30F3; hsp90 &#x3068;&#x95A2;&#x9023;&#x4ED8;&#x3051;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x306A;&#x3044;&#x78BA;&#x7ACB;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005; &#x306E; radicicol &#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x30B2;&#x30EB;&#x30C0;&#x30CA;&#x30DE;&#x30A4;&#x30B7;&#x30F3; hsp90 &#x963B;&#x5BB3;&#x304C;&#x307B;&#x307C;&#x30D8;&#x30E0;&#x3092;&#x4ECB;&#x3059;&#x308B;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x3068;&#x30D8;&#x30E0;&#x6B20;&#x4E4F; apo nNOS &#x6606;&#x866B;&#x7D30;&#x80DE;&#x3067;&#x306E;&#x7D44;&#x7ACB;&#x3092;&#x9632;&#x3050;&#x3092;&#x767A;&#x898B;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x52B9;&#x679C;&#x306F;&#x6FC3;&#x5EA6;&#x4F9D;&#x5B58; 75% &#x4EE5;&#x4E0A;&#x6291;&#x5236; 20 microm radicicol &#x3067;&#x9054;&#x6210;&#x3002;Hsp90 &#x304C;&#x963B;&#x5BB3;&#x6A5F;&#x80FD;&#x30D8;&#x30E0;&#x633F;&#x5165;&#x304C;&#x7981;&#x6B62;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3059;&#x3068;&#x304D;&#x3001;nnos &#x9244;&#x30AB;&#x30EB;&#x30DC;&#x30CB;&#x30EB;&#x932F;&#x4F53;&#x3092;&#x5F62;&#x6210;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3002;&#x30B7;&#x30E3;&#x30DA;&#x30ED;&#x30F3; hsp90 &#x30D9;&#x30FC;&#x30B9;&#x6A5F;&#x68B0;&#x6A5F;&#x80FD;&#x30D8;&#x30E0; apo nNOS &#x53C2;&#x5165;&#x3092;&#x5BB9;&#x6613;&#x306B;&#x958B;&#x3044;&#x3066;&#x306F;&#x3001;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x758E;&#x6C34;&#x6027;&#x306E;&#x30D8;&#x30E0;&#x7D50;&#x5408;&#x88C2;&#x3092;&#x63D0;&#x6848;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x4EE5;&#x524D;&#x306F;&#x3001;hsp90 &#x963B;&#x5BB3;&#x5264;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x30B2;&#x30EB;&#x30C0;&#x30CA;&#x30DE;&#x30A4;&#x30B7;&#x30F3;&#x306F;&#x5185;&#x76AE;&#x306E; NOS &#x6D3B;&#x52D5;&#x3089;&#x5207;&#x308A;&#x96E2;&#x3057;&#x3001;&#x5185;&#x76AE;&#x306E; NOS &#x4F9D;&#x5B58;&#x6027; O(2)() &#x306E;&#x751F;&#x7523;&#x304C;&#x5897;&#x52A0;&#x3059;&#x308B;&#x304C;&#x3001;&#x5831;&#x544A;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3042;&#x308B;&#x30B2;&#x30EB;&#x30C0;&#x30CA;&#x30DE;&#x30A4;&#x30B7;&#x30F3;&#x306F;&#x30A2;&#x30F3;&#x30B5;&#x30DE;&#x30A4;&#x30B7;&#x30F3; &#x30D9;&#x30F3;&#x30BE;&#x30AD;&#x30CE;&#x30F3;&#x3067;&#x3042;&#x308A;&#x3001;&#x6211;&#x3005; &#x3053;&#x3053;&#x305D;&#x308C;&#x30AA;&#x30AD;&#x30B7;&#x30C0;&#x30F3;&#x30C8;&#x751F;&#x7523; nNOS &#x304B;&#x3089;&#x7CBE;&#x88FD;&#x3057;&#x305F;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x3060;&#x3051;&#x3067;&#x306A;&#x304F;&#x3001;&#x6606;&#x866B;&#x7D30;&#x80DE;&#x3067;&#x306E;&#x539F;&#x56E0;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x975E;&#x30AD;&#x30CE;&#x30F3; hsp90 &#x963B;&#x5BB3;&#x5264; radicicol &#x306F;&#x52B9;&#x679C;&#x304C;&#x3042;&#x308B;&#x306A;&#x304B;&#x3063;&#x305F;&#x306B;&#x5BFE;&#x3057; 20 &#x30DE;&#x30A4;&#x30AF;&#x30ED;&#x30E1;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x306E;&#x6FC3;&#x5EA6;&#x3067;&#x306F;&#x3001;3 &#x500D;&#x306E;&#x5897;&#x52A0;&#x306E;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x30B2;&#x30EB;&#x30C0;&#x30CA;&#x30DE;&#x30A4;&#x30B7;&#x30F3; NADPH &#x9178;&#x5316;&#x3068;&#x6C34;&#x7D20;&#x904E;&#x9178;&#x5316;&#x7269;&#x5F62;&#x6210;&#x7CBE;&#x88FD;&#x3055;&#x308C;&#x305F; nNOS &#x304B;&#x3089;&#x304C;&#x767A;&#x751F;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3057;&#x305F;&#x304C;&#x3063;&#x3066;&#x3001;&#x4E00;&#x8CAB;&#x6027;&#x306E;&#x3042;&#x308B;&#x65E2;&#x77E5;&#x306E;&#x50BE;&#x5411;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x30B2;&#x30EB;&#x30C0;&#x30CA;&#x30DE;&#x30A4;&#x30B7;&#x30F3;&#x4ED6;&#x30AD;&#x30CE;&#x30F3;&#x306E;&#x76F4;&#x63A5;&#x9178;&#x5316;&#x9084;&#x5143;&#x30EC;&#x30C9;&#x30C3;&#x30AF;&#x30B9; &#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E0;&#x3067; hsp90 &#x963B;&#x5BB3;&#x7269;&#x8CEA;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x30B2;&#x30EB;&#x30C0;&#x30CA;&#x30DE;&#x30A4;&#x30B7;&#x30F3;&#x306E;&#x4F7F;&#x7528;&#x306B;&#x5BFE;&#x3057;&#x3066;&#x6CE8;&#x610F;&#x3092;&#x4FC3;&#x3057;&#x305F; nNOS hsp90&#x3001;&#x4E0A;&#x306E;&#x4EFB;&#x610F;&#x306E;&#x30A2;&#x30AF;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x306E;&#x30D7;&#x30ED;&#x30BB;&#x30B9;&#x304B;&#x3089;&#x72EC;&#x7ACB;&#x3057;&#x305F;&#x6295;&#x7A3F;&#x3092;&#x30B5;&#x30A4;&#x30AF;&#x30EB;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

hsp90 &#x30D8;&#x30E0;&#x306E;&#x7D50;&#x5408;&#x3068; apo &#x795E;&#x7D4C;-&#x9178;&#x5316;&#x7A92;&#x7D20;&#x5408;&#x6210;&#x9175;&#x7D20;&#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x304C;&#x5FC5;&#x8981;&#x3067;&#x3059;: &#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x30B2;&#x30EB;&#x30C0;&#x30CA;&#x30DE;&#x30A4;&#x30B7;&#x30F3;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x305F;&#x30AA;&#x30AD;&#x30B7;&#x30C0;&#x30F3;&#x30C8;&#x751F;&#x6210;&#x306F; hsp90 &#x306E;&#x4EFB;&#x610F;&#x306E;&#x30A2;&#x30AF;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x306B;&#x95A2;&#x9023;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

Se establece que neuronal que no sintasa (nNOS) se asocia con la chaperona hsp90, aunque no se ha definido el papel funcional de esta interacci&oacute;n. Hemos descubierto que la inhibici&oacute;n de hsp90 por radicicol o geldanamicina casi impide la activaci&oacute;n mediada por hemo y montaje de hemo-deficiente apo-nNOS en c&eacute;lulas de los insectos. Este efecto es dependiente de la concentraci&oacute;n con m&aacute;s del 75% inhibici&oacute;n alcanzada en 20 microm radicicol. El complejo ferroso de carbonilo de nNOS no se forma cuando se inhibe la hsp90, indicando que se evita la inserci&oacute;n de hemo funcional. Proponemos que la maquinaria de chaperona hsp90 basadas facilita la entrada de hemo funcional en apo-nNOS por la abertura de la hendidura de hemo-enlace hidrof&oacute;bica de la prote&iacute;na. Previamente, se ha informado que la hsp90 inhibidor geldanamicina desacopla endotelial actividad NOS y aumenta la producci&oacute;n de O(2)() dependiente NOS endotelial. Geldanamicina es una benzoquinona ansamicina y mostramos aqu&iacute; que causa la producci&oacute;n oxidante de nNOS en c&eacute;lulas de los insectos, as&iacute; como con la prote&iacute;na purificada. En una concentraci&oacute;n de 20 microm, geldanamicina causa un aumento de tres veces en la oxidaci&oacute;n de NADPH y formaci&oacute;n de per&oacute;xido de hidr&oacute;geno de nNOS purificada, mientras que los no-quinona hsp90 inhibidor radicicol no tuvo ning&uacute;n efecto. As&iacute;, consistente con la propensi&oacute;n conocida de otros Qui&ntilde;ones, geldanamicina directamente redox ciclos con nNOS por un proceso independiente de cualquier acci&oacute;n en hsp90, advirtiendo contra la utilizaci&oacute;n de la geldanamicina como un inhibidor espec&iacute;fico de hsp90 en sistemas redox activos.

Hsp90 se requiere para enlace de hemo y activaci&oacute;n de la sintasa de &oacute;xido n&iacute;trico apo-neuronal: generaci&oacute;n de oxidante mediada por geldanamicina est&aacute; relacionado con cualquier acci&oacute;n de hsp90.

&#x7CD6;&#x76AE;&#x8D28;&#x6FC0;&#x7D20;&#x53D7;&#x4F53; (GRs) &#x5FC5;&#x987B;&#x4E0E;&#x70ED;&#x4F11;&#x514B;&#x86CB;&#x767D; 90 &#x6709;&#x7EA6;&#x675F;&#x529B;&#x7684;&#x7C7B;&#x56FA;&#x9187;&#x53EF;&#x4EE5;&#x8BBF;&#x95EE;&#x7684;&#x816D;&#x88C2;&#x5F00;&#x653E;&#x7C7B;&#x56FA;&#x9187; heterocomplex&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x62A5;&#x544A;&#x8BF4;&#xFF0C;&#x4E03;-&#x6C28;&#x57FA;&#x9178;&#x7684;&#x9178;&#x5E8F;&#x5217; (547 553 &#x7684;&#x5927;&#x9F20; GR) &#x91CD;&#x53E0;&#x7684;&#x914D;&#x4F53;&#x7ED3;&#x5408;&#x57DF;&#x7684;&#x6C28;&#x57FA;&#x672B;&#x7AEF;&#x7ED3;&#x675F;&#x662F;&#x70ED;&#x4F11;&#x514B;&#x86CB;&#x767D; 90 &#x7ED1;&#x5B9A;&#x5230; GR &#x7684;&#x5FC5;&#x8981;&#x6761;&#x4EF6;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x73B0;&#x5728;&#x8FDB;&#x884C;&#x9971;&#x548C;&#x7A81;&#x53D8;&#x7684;&#x6B64;&#x5E8F;&#x5217;&#x4E2D;&#xFF0C;&#x4F3C;&#x4E4E;&#x662F;&#x8868;&#x9762;&#x90E8;&#x5206;&#x7684;&#x914D;&#x4F53;&#x7ED3;&#x5408;&#x5730;&#x65B9;&#x5507;&#x88C2;&#x5408;&#x5E76;&#x4E0E;&#x914D;&#x4F53;&#x7ED3;&#x5408;&#x57DF;&#x7684;&#x8868;&#x9762;&#x3002;&#x6CA1;&#x6709;&#x5355;&#x70B9;&#x7A81;&#x53D8;&#x5BFC;&#x81F4;&#x7684;&#x5404;&#x79CD;&#x751F;&#x5316;&#x548C;&#x751F;&#x7269;&#x5C5E;&#x6027;&#x9664;&#x4E86;&#x70ED;&#x4F11;&#x514B;&#x86CB;&#x767D; 90 &#x5177;&#x6709;&#x7EA6;&#x675F;&#x529B;&#x7684;&#x4EFB;&#x4F55;&#x91CD;&#x5927;&#x53D8;&#x5316;&#x3002;(P548A/T549A/V551A) &#x7684;&#x4E09;&#x91CD;&#x7A81;&#x53D8;&#x589E;&#x52A0; &gt; 100 &#x500D;&#x534A;-&#x6781;&#x5927;&#x611F;&#x5E94;&#x800C;&#x4E0D;&#x4F1A;&#x5F71;&#x54CD;&#x7684;&#x6700;&#x5927;&#x7684;&#x611F;&#x5E94;&#x6216;&#x8F85;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x56E0;&#x5B50; pgc-1 &#x54CD;&#x5E94;&#x7EA7;&#x522B;&#x6240;&#x9700;&#x7684;&#x7C7B;&#x56FA;&#x9187;&#x6FC0;&#x7D20;&#x6D53;&#x5EA6;&#x3002;&#x6709;&#x8DA3;&#x7684;&#x662F;&#xFF0C;&#x8FD9;&#x4E09;&#x91CD;&#x7684;&#x7A81;&#x53D8;&#x4F53;&#x663E;&#x793A;&#x51CF;&#x5C11;&#x7684;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x7684;&#x7C7B;&#x56FA;&#x9187;&#x548C;&#x70ED;&#x4F11;&#x514B;&#x86CB;&#x767D; 90 &#x5728;&#x6574;&#x4E2A;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#xFF0C;&#x4F46;&#x5B83;&#x62E5;&#x6709;&#x91CE;&#x751F;&#x578B;&#x4EB2;&#x548C;&#x529B;&#x7684;&#x7C7B;&#x56FA;&#x9187;&#x548C;&#x6B63;&#x5E38;&#x7684;&#x70ED;&#x4F11;&#x514B;&#x86CB;&#x767D; 90 &#x7EA6;&#x675F;&#x529B;&#x7684;&#x65E0;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x6761;&#x4EF6;&#x4E0B;&#x7684;&#x80FD;&#x529B;&#x3002;&#x6B64;&#x8868;&#x578B;&#x4E3A;&#x53CD;&#x5F0F;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x57FA;&#x56E0;&#x7684;&#x5242;&#x91CF;&#x53CD;&#x5E94;&#x7684;&#x5267;&#x70C8;&#x8F6C;&#x53D8;&#x7684;&#x9884;&#x671F;&#x5C06;&#x4ECE;&#x589E;&#x52A0;&#x7387;&#x7684;&#x4E09;&#x91CD;&#x7A81;&#x53D8; GR.hsp90 heterocomplex &#x5728;&#x8BE5;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x7684;&#x53CD;&#x6C47;&#x7F16;&#x3002;&#x7A81;&#x53D8;&#x7684; CAAAAAC &#x5230;&#x6574;&#x4E2A;&#x4E03;-&#x6C28;&#x57FA;&#x9178;&#x9178;&#x5730;&#x533A;&#x6D3E;&#x9A7B;&#x5173;&#x952E;&#x7684; &alpha; &#x87BA;&#x65CB;&#x7ED3;&#x6784;&#x4E0E; heterocomplex &#x5F62;&#x6210;&#xFF0C;&#x4E0E;&#x70ED;&#x4F11;&#x514B;&#x86CB;&#x767D; 90&#xFF0C;&#x4F46;&#x6D88;&#x9664;&#x4E86;&#x7C7B;&#x56FA;&#x9187;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x548C;&#x8F6C;&#x5F55;&#x6FC0;&#x6D3B;&#xFF0C;&#x4ECE;&#x800C;&#x65AD;&#x5F00;&#x5F00;&#x5E55;&#x7684;&#x914D;&#x4F53;&#x7ED3;&#x5408;&#x5507;&#x88C2;&#x548C;&#x7C7B;&#x56FA;&#x9187;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x4E0E;&#x70ED;&#x4F11;&#x514B;&#x86CB;&#x767D; 90 &#x7ED1;&#x5B9A;&#x3002;

&#x9635;&#x5730; 547 553 &#x5927;&#x9F20;&#x7CD6;&#x76AE;&#x8D28;&#x6FC0;&#x7D20;&#x53D7;&#x4F53;&#x57FA;&#x56E0;&#x7A81;&#x53D8;&#x63ED;&#x793A;&#x70ED;&#x4F11;&#x514B;&#x86CB;&#x767D; 90 &#x7ED1;&#x5B9A;&#x9700;&#x8981;&#x5B58;&#x5728;&#xFF0C;&#x4F46;&#x672A;&#x5B9A;&#x4E49;&#x7684;&#x914D;&#x4F53;&#x7ED3;&#x5408;&#x57DF;&#x7684;&#x6C28;&#x57FA;&#x9178;&#x603B;&#x7AD9; 7-&#x6C28;&#x57FA;&#x9178;&#x5E8F;&#x5217;&#x7684;&#x7EC4;&#x6210;&#x3002;

Glucocorticoid receptors (GRs) must heterocomplex with hsp90 to have an open steroid binding cleft that can be accessed by steroid. We reported that a seven-amino acid sequence (547-553 of rat GR) overlapping the amino-terminal end of the ligand binding domain is required for hsp90 binding to GR. We have now conducted saturation mutagenesis of this sequence, which appears to be part of the surface where the ligand binding cleft merges with the surface of the ligand binding domain. No single point mutation causes significant changes in any of a variety of biochemical and biological properties in addition to hsp90 binding. A triple mutation (P548A/T549A/V551A) increases by >100-fold the steroid concentration required for half-maximal induction without affecting the level of maximal induction or coactivator response. Interestingly, this triple mutant displays reduced binding of steroid and hsp90 in whole cells, but it possesses wild type affinity for steroid and normal hsp90 binding capacity under cell-free conditions. This phenotype of a dramatic shift in the dose response for transactivation would be expected from an increase in the rate of disassembly of the triple mutant GR.hsp90 heterocomplex in the cell. Mutation of the entire seven-amino acid region to CAAAAAC maintains the presence of a critical alpha-helical structure and heterocomplex formation with hsp90 but eliminates steroid binding and transcriptional activation, thus disconnecting hsp90 binding from opening of the ligand binding cleft and steroid binding.

Mutations at positions 547-553 of rat glucocorticoid receptors reveal that hsp90 binding requires the presence, but not defined composition, of a seven-amino acid sequence at the amino terminus of the ligand binding domain.

R&eacute;cepteurs des glucocortico&iuml;des (GR) doivent h&eacute;t&eacute;rocomplexe avec hsp90 pour avoir un st&eacute;ro&iuml;de ouvrir une fente qui est accessible par le st&eacute;ro&iuml;de de liaison. Nous avons signal&eacute; qu&#39;une s&eacute;quence d&#39;acide amine sept (547-553 du rat GR) chevauchant l&#39;extr&eacute;mit&eacute; amino-terminale de la domaine de liaison du ligand est requise pour la liaison de la hsp90 &agrave; GR. Nous avons effectu&eacute; maintenant mutagen&egrave;se de la saturation de cette s&eacute;quence, qui semble &ecirc;tre une partie de la surface o&ugrave; la liaison du ligand une fente se confond avec la surface du domaine de liaison de ligand. Aucune mutation ponctuelle unique ne provoque des changements importants dans l&#39;une des diverses propri&eacute;t&eacute;s biochimiques et biologiques en plus de la hsp90 contraignant. Une triple mutation (P548A/T549A/V551A) augmente de &amp;gt; 100 fois la concentration de st&eacute;ro&iuml;de requise pour l&#39;induction maximale sans affecter le niveau de r&eacute;ponse maximale de coactivateur ou induction. Fait int&eacute;ressant, ce mutant triple affiche une liaison r&eacute;duite des st&eacute;ro&iuml;des et hsp90 dans les cellules enti&egrave;res, mais il poss&egrave;de une affinit&eacute; type sauvage pour hsp90 st&eacute;ro&iuml;des et normale capacit&eacute; acellulaire des conditions de fixation. Ce ph&eacute;notype d&#39;un changement radical dans la relation dose-r&eacute;ponse pour la transactivation attendrait d&#39;une augmentation du taux de d&eacute;montage de ce triple mutant GR.hsp90 h&eacute;t&eacute;rocomplexe dans la cellule. Mutation de la r&eacute;gion 7-amine acide &agrave; CAAAAAC maintient la pr&eacute;sence d&#39;une formation critique de structure et h&eacute;t&eacute;rocomplexe alpha-h&eacute;lico&iuml;dale avec hsp90 mais &eacute;limine la liaison des st&eacute;ro&iuml;des et activation de la transcription, donc d&eacute;connecter hsp90 liaison depuis l&#39;ouverture de la liaison du ligand une fente et la liaison des st&eacute;ro&iuml;des.

Mutations aux postes 547-553 des r&eacute;cepteurs des glucocortico&iuml;des rat r&eacute;v&egrave;lent que hsp90 liaison n&eacute;cessite la pr&eacute;sence, mais pas d&eacute;fini de composition, d&#39;une s&eacute;quence d&#39;acide amine sept &agrave; l&#39;extr&eacute;mit&eacute; amin&eacute;e de la domaine de liaison du ligand.

Mutationen an den Positionen 547 bis 553 von Ratten-Glucocorticoid-Rezeptoren zeigen, dass hsp90 Bindung das Vorhandensein ben&#xF6;tigt, aber nicht definiert Zusammensetzung, eines Sieben-Aminos&#xE4;uresequenz am Amino-Terminus des Liganden-Bindungsdom&#xE4;ne.

Recettori glucocorticoidi (GRs) devono heterocomplex con hsp90 ad avere uno steroide aperto associazione schisi che possono essere raggiunti da steroide. Abbiamo segnalato che una sequenza di sette-amino acida (547-553 del ratto GR) sovrapposti alla fine amminico-terminale del dominio ligand binding &egrave; richiesto per l&#39;associazione hsp90 GR. Ora abbiamo condotto la mutagenesi saturazione di questa sequenza, che sembra essere parte della superficie dove il ligand-legantesi schisi si fonde con la superficie del dominio ligand binding. Nessuna singola mutazione puntiforme provoca cambiamenti significativi in una qualsiasi delle diverse propriet&agrave; biochimiche e biologiche oltre a hsp90 vincolante. Una mutazione tripla (P548A/T549A/V551A) aumenta da &amp;gt; 100 volte la concentrazione di steroidea necessaria per met&agrave;-maximal induzione senza compromettere il livello di massima induzione o coactivator risposta. Interessante, questa mutante tripla Visualizza ridotta associazione di steroidi e hsp90 in cellule intere, ma possiede affinit&agrave; wild type per hsp90 steroidi e normale capacit&agrave; in cella senza condizioni di associazione. Questo fenotipo di un cambiamento drammatico nella dose risposta per transactivation ci si aspetterebbe da un aumento del tasso di smontaggio del mutante triple GR.hsp90 heterocomplex nella cella. Mutazione dell&#39;intera regione sette-amino acida a CAAAAAC mantiene la presenza di un critico alfa-elicoidale struttura e heterocomplex formazione con hsp90 ma Elimina associazione steroidi e attivazione trascrizionale, quindi scollegare hsp90 associazione dall&#39;apertura del legame ligando schisi e associazione steroide.

Mutazioni in posizioni 547-553 dei recettori glucocorticoidi rat rivelano che hsp90 associazione richiede la presenza, ma non definita composizione, di una sequenza di sette-amino acida presso il terminus amminico del dominio di legame del ligando.

&#x30B0;&#x30EB;&#x30B3;&#x30B3;&#x30EB;&#x30C1;&#x30B3;&#x30A4;&#x30C9;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53; (GRs) &#x30B9;&#x30C6;&#x30ED;&#x30A4;&#x30C9;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x30A2;&#x30AF;&#x30BB;&#x30B9;&#x3067;&#x304D;&#x308B;&#x88C2;&#x3092;&#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C9;&#x3001;&#x30AA;&#x30FC;&#x30D7;&#x30F3;&#x306E;&#x30B9;&#x30C6;&#x30ED;&#x30A4;&#x30C9;&#x304C;&#x3042;&#x308B; hsp90 &#x3068;&#x91CD;&#x5408;&#x3059;&#x308B;&#x5FC5;&#x8981;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005; &#x306F;&#x5831;&#x544A;&#x3001;7 &#x30A2;&#x30DF;&#x30CE;&#x9178;&#x914D;&#x5217; (&#x30E9;&#x30C3;&#x30C8; GR &#x306E; 547-553) &#x30EA;&#x30AC;&#x30F3;&#x30C9;&#x7D50;&#x5408;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x306E;&#x30A2;&#x30DF;&#x30CE;&#x672B;&#x7AEF;&#x91CD;&#x8907; GR &#x3078;&#x306E; hsp90 &#x306E;&#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C9;&#x304C;&#x5FC5;&#x8981;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005; &#x306F;&#x4ECA;&#x3069;&#x3053;&#x30EA;&#x30AC;&#x30F3;&#x30C9;&#x7D50;&#x5408;&#x7D50;&#x5408;&#x88C2;&#x8868;&#x9762;&#x306E;&#x4E00;&#x90E8;&#x306B;&#x8868;&#x793A;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x3053;&#x306E;&#x30B7;&#x30FC;&#x30B1;&#x30F3;&#x30B9;&#x306F;&#x3001;&#x98FD;&#x548C;&#x5909;&#x7570;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x884C;&#x3063;&#x305F;&#x30EA;&#x30AC;&#x30F3;&#x30C9;&#x7D50;&#x5408;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x306E;&#x8868;&#x9762;&#x3068;&#x3002;&#x5358;&#x4E00;&#x306E;&#x70B9;&#x7A81;&#x7136;&#x5909;&#x7570;&#x306E;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x5909;&#x66F4;&#x306E;&#x3055;&#x307E;&#x3056;&#x307E;&#x306A;&#x751F;&#x5316;&#x5B66;&#x3068;&#x751F;&#x7269;&#x306E;&#x30D7;&#x30ED;&#x30D1;&#x30C6;&#x30A3; &#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C9; hsp90 &#x306B;&#x52A0;&#x3048;&#x3066;&#x306E;&#x3044;&#x305A;&#x308C;&#x304B;&#x3067;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3002;&#x30C8;&#x30EA;&#x30D7;&#x30EB;&#x5909;&#x7570; (P548A/T549A/V551A) &#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x5897;&#x52A0;&#x3059;&#x308B;&#x76EE;&#x534A;&#x6700;&#x5927;&#x8A98;&#x5C0E;&#x306E;&#x6700;&#x5927;&#x8A98;&#x5C0E;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x30B3;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C1;&#x30D9;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x5FDC;&#x7B54;&#x306E;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x306B;&#x5F71;&#x97FF;&#x3092;&#x4E0E;&#x3048;&#x305A;&#x306B;&#x5FC5;&#x8981;&#x306A;&#x30B9;&#x30C6;&#x30ED;&#x30A4;&#x30C9;&#x6FC3;&#x5EA6; 100 &#x500D;&#x3002;&#x8208;&#x5473;&#x6DF1;&#x3044;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x30C8;&#x30EA;&#x30D7;&#x30EB;&#x5909;&#x7570;&#x4F53;&#x5168;&#x4F53;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x30B9;&#x30C6;&#x30ED;&#x30A4;&#x30C9;&#x3068; hsp90 &#x306E;&#x524A;&#x6E1B;&#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C7;&#x30A3;&#x30F3;&#x30B0;&#x304C;&#x8868;&#x793A;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x304C;&#x3001;&#x91CE;&#x751F;&#x578B;&#x89AA;&#x548C;&#x5BB9;&#x91CF;&#x30BB;&#x30EB;&#x7121;&#x6599;&#x306E;&#x6761;&#x4EF6;&#x4E0B;&#x3067;&#x30B9;&#x30C6;&#x30ED;&#x30A4;&#x30C9;&#x3068;&#x901A;&#x5E38; hsp90 &#x306E;&#x6240;&#x6709;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x8868;&#x73FE;&#x578B;&#x7528;&#x91CF;&#x5FDC;&#x7B54;&#x8EE2;&#x5199;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x5287;&#x7684;&#x306A;&#x5909;&#x5316;&#x306E;&#x30C8;&#x30EA;&#x30D7;&#x30EB;&#x5909;&#x7570;&#x4F53; GR.hsp90 &#x306E;&#x91CD;&#x5408;&#x306E;&#x30BB;&#x30EB;&#x306E;&#x5206;&#x89E3;&#x7387;&#x306E;&#x5897;&#x52A0;&#x304B;&#x3089;&#x4E88;&#x60F3;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30BB;&#x30D6;&#x30F3; &#x30A2;&#x30DF;&#x30CE;&#x9178;&#x5730;&#x57DF; CAAAAAC &#x306B;&#x5168;&#x4F53;&#x306E;&#x7A81;&#x7136;&#x5909;&#x7570;&#x304C; hsp90 &#x3067;&#x91CD;&#x8981;&#x306A; &alpha;-&#x30D8;&#x30EA;&#x30C3;&#x30AF;&#x30B9;&#x69CB;&#x9020;&#x3068;&#x91CD;&#x5408;&#x5F62;&#x6210;&#x306E;&#x5B58;&#x5728;&#x3092;&#x4FDD;&#x6301;&#x30B9;&#x30C6;&#x30ED;&#x30A4;&#x30C9;&#x7D50;&#x5408;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x3053;&#x3046;&#x3057;&#x3066; hsp90 &#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C7;&#x30A3;&#x30F3;&#x30B0;&#x88C2;&#x30EA;&#x30AC;&#x30F3;&#x30C9;&#x7D50;&#x5408;&#x3068;&#x30B9;&#x30C6;&#x30ED;&#x30A4;&#x30C9;&#x7D50;&#x5408;&#x306E;&#x958B;&#x53E3;&#x90E8;&#x304B;&#x3089;&#x5207;&#x65AD;&#x3001;&#x8EE2;&#x5199;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x3092;&#x9664;&#x53BB;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x5909;&#x7570;&#x30E9;&#x30C3;&#x30C8; &#x30B0;&#x30EB;&#x30B3;&#x30B3;&#x30EB;&#x30C1;&#x30B3;&#x30A4;&#x30C9;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x7B2C; 547 553 &#x4F4D;&#x7F6E; hsp90 &#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C7;&#x30A3;&#x30F3;&#x30B0;&#x304C;&#x5B58;&#x5728;&#x3092;&#x5FC5;&#x8981;&#x3067;&#x3059;&#x304C;&#x3001;&#x30BB;&#x30D6;&#x30F3; &#x30A2;&#x30DF;&#x30CE;&#x9178;&#x914D;&#x5217;&#x306F;&#x30EA;&#x30AC;&#x30F3;&#x30C9;&#x7D50;&#x5408;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x306E;&#x30A2;&#x30DF;&#x30CE;&#x672B;&#x7AEF;&#x306E;&#x7D44;&#x6210;&#x3092;&#x5B9A;&#x7FA9;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x306A;&#x3044;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

Glucocorticoid &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; (GRs) heterocomplex&#xB97C; hsp90 &#xBD84;&#xC5F4; &#xC2A4;&#xD14C;&#xB85C;&#xC774;&#xB4DC;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC561;&#xC138;&#xC2A4;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xB294; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xC624;&#xD508; &#xC2A4;&#xD14C;&#xB85C;&#xC774;&#xB4DC;&#xB97C; &#xD568;&#xAED8; &#xD574;&#xC57C; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xBCF4;&#xACE0; 7-&#xC544;&#xBBF8;&#xB178; &#xC0B0; &#xC2DC;&#xD000;&#xC2A4; (547-553 &#xC950; GR) &#xC544;&#xBBF8;&#xB178; &#xD130;&#xBBF8;&#xB110; &#xB05D; ligand &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778;&#xC758; &#xC911;&#xBCF5;&#xC740; GR hsp90 &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xC744; &#xD544;&#xC694;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xC9C0;&#xAE08; &#xC5B4;&#xB514; ligand &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xBCD1;&#xD569; &#xCABC;&#xAC1C;&#xC9C4; &#xBA74;&#xC758; &#xC77C;&#xBD80;&#xAC00; &#xB420; &#xAC83;&#xC73C;&#xB85C; &#xBCF4;&#xC778;&#xB2E4;&#xC774; &#xC2DC;&#xD000;&#xC2A4;&#xC758; &#xCC44;&#xB3C4; mutagenesis &#xC2E4;&#xC2DC; ligand &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778;&#xC758; &#xD45C;&#xBA74;. &#xC544;&#xB2C8; &#xB2E8;&#xC77C; &#xC9C0;&#xC810; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xB2E4;&#xC591; &#xD55C; &#xC0DD; &#xD654; &#xD559;&#xC801; &#xBC0F; &#xC0DD;&#xBB3C; &#xD559;&#xC801; &#xC18D;&#xC131;&#xB3C4; hsp90 &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xC911;&#xC5D0; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xBCC0;&#xD654;&#xAC00; &#xBC1C;&#xC0DD; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xD2B8;&#xB9AC;&#xD50C; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; (P548A/T549A/V551A)&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC99D;&#xAC00; &amp;gt; &#xC57D; &#xC2A4;&#xD14C;&#xB85C;&#xC774;&#xB4DC; &#xB18D;&#xB3C4; &#xCD5C;&#xB300;&#xD55C; &#xC720;&#xB3C4; &#xB610;&#xB294; coactivator &#xC751;&#xB2F5;&#xC758; &#xC218;&#xC900;&#xC5D0; &#xC601;&#xD5A5;&#xC744; &#xC8FC;&#xC9C0; &#xC54A;&#xACE0; &#xBC18; &#xCD5C;&#xB300;&#xD55C; &#xC720;&#xB3C4; &#xD558;&#xB294; &#xB370; &#xD544;&#xC694;&#xD55C;. &#xD765;&#xBBF8;&#xB86D;&#xAC8C;&#xB3C4;, &#xD2B8;&#xB9AC;&#xD50C;&#xC774; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xC804;&#xCCB4; &#xC140; &#xC2A4;&#xD14C;&#xB85C;&#xC774;&#xB4DC; &#xBC0F; hsp90 &#xAC10;&#xC18C; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xC744; &#xD45C;&#xC2DC; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xC640;&#xC77C;&#xB4DC; &#xC720;&#xD615; &#xC120;&#xD638;&#xB3C4; &#xC2A4;&#xD14C;&#xB85C;&#xC774;&#xB4DC;&#xC640; &#xC815;&#xC0C1;&#xC801;&#xC778; hsp90 &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xC140; &#xC5C6;&#xB294; &#xC870;&#xAC74; &#xD558;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC6A9;&#xB7C9;&#xC744; &#xBCF4;&#xC720; &#xD558; &#xACE0; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. Transactivation&#xC758; &#xBCF5;&#xC6A9;&#xB7C9; &#xC751;&#xB2F5;&#xC5D0; &#xADF9;&#xC801;&#xC778; &#xBCC0;&#xD654;&#xB97C; &#xD45C;&#xD604;&#xC774; &#xD615;&#xC774; &#xD2B8;&#xB9AC;&#xD50C; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xC140;&#xC5D0;&#xC11C; GR.hsp90 heterocomplex&#xC758; &#xBD84;&#xD574; &#xC18D;&#xB3C4;&#xC758; &#xC99D;&#xAC00;&#xB85C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC608;&#xC0C1; &#xB418;&#xB294; &#xAC83;. CAAAAAC&#xC5D0; &#xC804;&#xCCB4; 7-&#xC544;&#xBBF8;&#xB178; &#xC0B0; &#xC9C0;&#xC5ED;&#xC758; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; hsp90&#xC640; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xC54C;&#xD30C; &#xB098;&#xC120;&#xD615; &#xAD6C;&#xC870; &#xBC0F; heterocomplex &#xD615;&#xC131;&#xC758; &#xC874;&#xC7AC;&#xB97C; &#xC720;&#xC9C0; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xC2A4;&#xD14C;&#xB85C;&#xC774;&#xB4DC; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xBC0F; &#xB530;&#xB77C;&#xC11C; &#xCABC;&#xAC1C;&#xC9C4; ligand &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xBC0F; &#xC2A4;&#xD14C;&#xB85C;&#xC774;&#xB4DC; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xC744; &#xC5F4;&#xC9C0; hsp90 &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xC744; &#xBD84;&#xB9AC; transcriptional &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xC81C;&#xAC70;.

&#xC704;&#xCE58; 547-553 &#xC950; glucocorticoid &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4;&#xC758; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xACF5;&#xAC1C; hsp90 &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xC874;&#xC7AC;, &#xD544;&#xC694; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xC544;&#xBBF8;&#xB178; &#xC2EC;&#xD50C;&#xD558;&#xAC8C; ligand &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778;&#xC758; 7-&#xC544;&#xBBF8;&#xB178; &#xC0B0; &#xC2DC;&#xD000;&#xC2A4;&#xC758; &#xAD6C;&#xC131;&#xC5D0; &#xC815;&#xC758; &#xB418;&#xC5B4; &#xC788;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Receptores de glucocorticoides (GRs) deben heterocomplex con hsp90 tener un esteroide abierto vinculante la hendidura que se puede acceder por esteroides. Nos informan que una secuencia de &aacute;cido amino-siete (547-553 de rata GR) superpuestas en el extremo amino-terminal del dominio de uni&oacute;n del ligando se requiere uni&oacute;n hsp90 GR. Ahora hemos realizado mutag&eacute;nesis de saturaci&oacute;n de esta secuencia, que parece ser parte de la superficie donde el ligando hendidura se fusiona con la superficie del dominio de uni&oacute;n de ligando. Ninguna mutaci&oacute;n de punto &uacute;nica provoca cambios significativos en cualquiera de una variedad de propiedades bioqu&iacute;micas y biol&oacute;gicas adem&aacute;s de hsp90 vinculante. Una mutaci&oacute;n triple (P548A/T549A/V551A) aumenta por &gt; cien veces la concentraci&oacute;n de esteroide necesaria para inducir la mitad-m&aacute;ximo sin afectar el nivel de respuesta m&aacute;xima de inducci&oacute;n o coactivator. Curiosamente, este triple mutante muestra atar reducido de esteroide y hsp90 en c&eacute;lulas enteras, pero posee afinidad de tipo salvaje para hsp90 esteroides y normal vinculante capacidad en condiciones libres de c&eacute;lulas. Este fenotipo de un cambio dram&aacute;tico en la respuesta a la dosis de transactivaci&oacute;n se espera de un aumento en la tasa de desmontaje del triple mutante GR.hsp90 heterocomplex en la c&eacute;lula. Mutaci&oacute;n de toda la regi&oacute;n siete-amino &aacute;cida a CAAAAAC mantiene la presencia de una formaci&oacute;n cr&iacute;tica de estructura y heterocomplex alfa-helicoidal con hsp90 pero elimina esteroide vinculante y activaci&oacute;n transcripcional, desconectando as&iacute; hsp90 vinculante de apertura del ligando la hendidura y esteroide vinculante.

Las mutaciones en las posiciones 547-553 de receptores de glucocorticoides rata revelan que hsp90 vinculante requiere la presencia, pero no define la composici&oacute;n, de una secuencia de &aacute;cido amino-siete en el amino terminal del dominio ligando.

FKBP52 &#x662F;&#x901A;&#x8FC7;&#x5BF9;&#x70ED;&#x4F11;&#x514B;&#x86CB;&#x767D; 90 tetratricopeptide &#x91CD;&#x590D; (TPR) &#x57DF;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x7684;&#x7C7B;&#x56FA;&#x9187;&#x6FC0;&#x7D20;&#x53D7;&#x4F53;&#x76F8;&#x5173; immunophilin&#x3002;FKBP52 &#x4E5F;&#x663E;&#x793A;&#x4EA4;&#x4E92;&#x6216;&#x8005;&#x76F4;&#x63A5;&#x6216;&#x95F4;&#x63A5;&#x901A;&#x8FC7;&#x5176; peptidylprolyl &#x5F02;&#x6784;&#x9176; (PPIase) &#x57DF;&#x4E0E;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8D28;&#x808C;&#xFF0C;&#x9A6C;&#x8FBE;&#x86CB;&#x767D;&#x53C2;&#x4E0E;&#x9006;&#x884C;&#x5411;&#x6838;&#x5FC3;&#x56CA;&#x6CE1;&#x7684;&#x8FD0;&#x8F93;&#x3002;&#x53D7;&#x4F53;&#x8FD0;&#x52A8;&#x4E2D;&#x7684; PPIase &#x57DF;&#x7684;&#x529F;&#x80FD;&#x89D2;&#x8272;&#x8868;&#x73B0;&#x663E;&#x793A; PPIase &#x57DF;&#x7247;&#x6BB5; FKBP52 3T3 &#x7EC6;&#x80DE;&#x4E2D;&#x7684;&#x8868;&#x8FBE;&#x6291;&#x5236;&#x5730;&#x585E;&#x7C73;&#x677E;&#x4F9D;&#x8D56;&#x6838;&#x6613;&#x4F4D;&#x7684;&#x7EFF;&#x8272;&#x8367;&#x5149;&#x86CB;&#x767D;-&#x7CD6;&#x76AE;&#x8D28;&#x6FC0;&#x7D20;&#x53D7;&#x4F53;&#x5D4C;&#x5408;&#x4F53;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x663E;&#x793A;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8D28;&#x808C;&#x662F; co immunoadsorbed &#x4E0E;&#x4E24;&#x79CD;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x70ED;&#x4F11;&#x514B;&#x86CB;&#x767D; 90 &#x5176;&#x4ED6; TPR &#x57DF;&#x86CB;&#x767D; (CyP 40 &#x4EB2;&#x548C; PP5 &#x86CB;&#x767D;&#x78F7;&#x9178;&#x9176;)&#x3002;&#x8FD9;&#x4E24;&#x79CD;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x62E5;&#x6709; PPIase &#x540C;&#x6E90;&#x57DF;&#xFF0C;&#x5E76; co &#x514D;&#x75AB;&#x5438;&#x9644;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8D28;&#x808C;&#x4E0E;&#x6BCF;&#x4E2A; FKBP52 &#x7684; PPIase &#x57DF;&#x7247;&#x6BB5;&#x88AB;&#x963B;&#x6B62;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x4F7F;&#x7528;&#x7EAF;&#x5316;&#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#xFF0C;&#x663E;&#x793A; FKBP52&#xFF0C;PP5 &#x548C; PPIase &#x57DF;&#x7247;&#x6BB5;&#x76F4;&#x63A5;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x5230;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8D28;&#x808C;&#x4E2D;&#x95F4;&#x94FE;&#x3002;PP5 &#x4E0E;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8D28;&#x808C;&#x548C;&#x5FAE;&#x7BA1;&#xFF0C;colocalizes &#x548C; PPIase &#x57DF;&#x7247;&#x6BB5; FKBP52 3T3 &#x7EC6;&#x80DE;&#x4E2D;&#x7684;&#x8868;&#x8FBE;&#x6270;&#x4E71;&#x5176;&#x9AA8;&#x67B6;&#x7684;&#x672C;&#x5730;&#x5316;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x5F97;&#x51FA;&#x7684;&#x7ED3;&#x8BBA;&#x7684;&#x70ED;&#x4F11;&#x514B;&#x86CB;&#x767D; 90 &#x7ED1;&#x5B9A; immunophilins PPIase &#x57DF;&#x76F4;&#x63A5;&#x4EA4;&#x4E92;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8D28;&#x808C;&#xFF0C;&#x4E14;&#x8D1F;&#x8D23;&#x539F;&#x672C;&#x5730;&#x5316; PP5 &#x4F53;&#x5185;&#x7684;&#x8FD9;&#x79CD;&#x4E92;&#x52A8;&#x7684;&#x9A6C;&#x8FBE;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x3002;

&#x70ED;&#x4F11;&#x514B;&#x86CB;&#x767D; 90 &#x5173;&#x8054; immunophilins &#x5230;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8D28;&#x808C;&#x7684;&#x7EA6;&#x675F;&#x529B;&#xFF1A; &#x76F4;&#x63A5;&#x7EA6;&#x675F;&#x529B;&#x548C;&#x4F53;&#x5185; peptidylprolyl &#x5F02;&#x6784;&#x9176;&#x57DF;&#x662F;&#x808C;&#x4EA4;&#x4E92;&#x57DF;&#x7684;&#x8BC1;&#x636E;&#x3002;

FKBP52 is a steroid receptor-associated immunophilin that binds via a tetratricopeptide repeat (TPR) domain to hsp90. FKBP52 has also been shown to interact either directly or indirectly via its peptidylprolyl isomerase (PPIase) domain with cytoplasmic dynein, a motor protein involved in retrograde transport of vesicles toward the nucleus. The functional role for the PPIase domain in receptor movement was demonstrated by showing that expression of the PPIase domain fragment of FKBP52 in 3T3 cells inhibits dexamethasone-dependent nuclear translocation of a green fluorescent protein-glucocorticoid receptor chimera. Here, we show that cytoplasmic dynein is co-immunoadsorbed with two other TPR domain proteins that bind hsp90 (the cyclophilin CyP-40 and the protein phosphatase PP5). Both proteins possess PPIase homology domains, and co-immunoadsorption of cytoplasmic dynein with each is blocked by the PPIase domain fragment of FKBP52. Using purified proteins, we show that FKBP52, PP5, and the PPIase domain fragment bind directly to the intermediate chain of cytoplasmic dynein. PP5 colocalizes with both cytoplasmic dynein and microtubules, and expression of the PPIase domain fragment of FKBP52 in 3T3 cells disrupts its cytoskeletal localization. We conclude that the PPIase domains of the hsp90-binding immunophilins interact directly with cytoplasmic dynein and that this interaction with the motor protein is responsible for the microtubular localization of PP5 in vivo.

Binding of hsp90-associated immunophilins to cytoplasmic dynein: direct binding and in vivo evidence that the peptidylprolyl isomerase domain is a dynein interaction domain.

FKBP52 est un st&eacute;ro&iuml;de immunophilin associ&eacute;e au r&eacute;cepteur qui se lie par un domaine (TPR) tetratricopeptide de hsp90. FKBP52 a &eacute;galement &eacute;t&eacute; &eacute;tabli soit interagir directement ou indirectement par l&#39;interm&eacute;diaire de son domaine de peptidylprolyl isom&eacute;rase (PPiases) avec la dyn&eacute;ine cytoplasmique, une prot&eacute;ine motrice impliqu&eacute; dans le transport r&eacute;trograde des v&eacute;sicules vers le noyau. Le r&ocirc;le fonctionnel du domaine PPiases dans le mouvement du r&eacute;cepteur a &eacute;t&eacute; d&eacute;montr&eacute; en prouvant qu&#39;expression du fragment domaine PPiases de FKBP52 dans les cellules 3 t 3 l&#39;inhibe la translocation nucl&eacute;aire de dexam&eacute;thasone d&eacute;pendant d&#39;une chim&egrave;re de r&eacute;cepteur vert fluorescent prot&eacute;ine-glucocortico&iuml;des. Ici, nous montrons que dyn&eacute;ine cytoplasmique est co-immunoadsorbed avec deux autres prot&eacute;ines TPR domaine qui lient la hsp90 (la cyclophiline CyP-40 et la phosphatase prot&eacute;ique PP5). Les deux prot&eacute;ines poss&egrave;dent des PPiases domaines d&#39;homologie, et co-immunoadsorption de dyn&eacute;ine cytoplasmique avec chacun est bloqu&eacute; par le fragment de domaine PPiases de FKBP52. &Agrave; l&#39;aide de prot&eacute;ines purifi&eacute;es, nous montrons que la FKBP52, PP5 et le fragment de domaine PPiases se lient directement &agrave; la cha&icirc;ne interm&eacute;diaire de dyn&eacute;ine cytoplasmique. PP5 log&eacute;e avec la dyn&eacute;ine cytoplasmique et des microtubules, et expression du fragment domaine PPiases de FKBP52 dans les cellules 3 t 3 perturbe sa localisation du cytosquelette. Nous concluons que les domaines PPiases de l&#39;immunophilins de liaison de hsp90 interagissent directement avec la dyn&eacute;ine cytoplasmique et que cette interaction avec la prot&eacute;ine motrice est responsable de la localisation microtubulaire PP5 in vivo.

La liaison d&#39;immunophilins hsp90 associ&eacute;e &agrave; la dyn&eacute;ine cytoplasmique : preuves contraignantes et in vivo, que le domaine d&#39;isom&eacute;rase de peptidylprolyl est un domaine d&#39;interaction de dyn&eacute;ine directes.

Die Bindung von Hsp90-assoziierten Immunophiline zu zytoplasmatischen Dynein: direkte Bindung und in vivo nachzuweisen, dass der Peptidylprolyl Isomerase Dom&#xE4;ne ein Dynein-Interaktion Dom&#xE4;ne ist.

FKBP52 &egrave; un steroide immunophilin associato al recettore che si lega tramite un dominio (TPR) ripetizione di tetratricopeptide a hsp90. FKBP52 ha anche dimostrato di interagire sia direttamente o indirettamente tramite il dominio di isomerasi (PPIase) peptidylprolyl con dineina citoplasmatica, una motore proteine coinvolte nel trasporto retrogrado di vescicole verso il nucleo. Mostrando che espressione del frammento PPIase dominio di FKBP52 in cellule 3T3 inibisce la traslocazione nucleare Desametasone-dipendente di una chimera di recettore proteina fluorescente verde-ai glucocorticoidi &egrave; stato dimostrato il ruolo funzionale per il dominio di PPIase in movimento del ricevitore. Qui, vi mostriamo quello dineina citoplasmatica &egrave; co-immunoadsorbed con due altre proteine di dominio TPR che legano hsp90 (cyclophilin CyP-40 e la proteina fosfatasi PP5). Entrambe le proteine possiedono domini di omologia di PPIase, e co-immunoadsorbimento della dineina citoplasmatica con ognuno &egrave; bloccato dal frammento PPIase dominio di FKBP52. Utilizzando proteine purificate, mostriamo che FKBP52, PP5 e il frammento di dominio PPIase si legano direttamente alla catena intermedia di dineina citoplasmatica. PP5 colocalizza con entrambi dineina citoplasmatica e microtubuli, ed espressione del frammento PPIase dominio di FKBP52 in cellule 3T3 sconvolge la sua localizzazione citoscheletriche. Possiamo concludere che i domini di PPIase di immunophilins la hsp90-associazione interagiscano direttamente con dineina citoplasmatica e che questa interazione con la proteina motore &egrave; responsabile per la localizzazione microtubulare PP5 in vivo.

Associazione di hsp90-associated immunophilins di dineina citoplasmatica: diretta prove in vivo e vincolante che il dominio di isomerasi peptidylprolyl &egrave; un dominio di interazione dineina.

FKBP52 &#x30C6;&#x30C8;&#x30E9;&#x30C8;&#x30EA;&#x30B3;&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C9; &#x30EA;&#x30D4;&#x30FC;&#x30C8; (TPR) &#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x306B; hsp90 &#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x3066;&#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C9;&#x3059;&#x308B;&#x30B9;&#x30C6;&#x30ED;&#x30A4;&#x30C9;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x95A2;&#x9023;&#x306E;&#x30A4;&#x30E0;&#x30CE;&#x30D5;&#x30A3;&#x30EA;&#x30F3;&#x3067;&#x3059;&#x3002;FKBP52 &#x306F;&#x3001;&#x307E;&#x305F;&#x3069;&#x3061;&#x3089;&#x304B;&#x306E;&#x76F4;&#x63A5;&#x5BFE;&#x8A71;&#x3092;&#x793A;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3001;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x76F4;&#x63A5;&#x7D30;&#x80DE;&#x8CEA;&#x30C0;&#x30A4;&#x30CB;&#x30F3;&#x306E; peptidylprolyl &#x306E;&#x7570;&#x6027;&#x5316;&#x9175;&#x7D20; (PPIase) &#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x3066;&#x306F;&#x3001;&#x30E2;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x9006;&#x884C;&#x6027;&#x8F38;&#x9001;&#x5C0F;&#x80DE;&#x6838;&#x3078;&#x306E;&#x95A2;&#x4E0E;&#x3057;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3002;PPIase &#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x904B;&#x52D5;&#x306E;&#x6A5F;&#x80FD;&#x7684;&#x5F79;&#x5272;&#x30C7;&#x30AD;&#x30B5;&#x30E1;&#x30BF;&#x30BE;&#x30F3;&#x4F9D;&#x5B58;&#x578B;&#x6838;&#x8EE2;&#x5EA7;&#x7DD1;&#x8272;&#x86CD;&#x5149;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x30B0;&#x30EB;&#x30B3;&#x30B3;&#x30EB;&#x30C1;&#x30B3;&#x30A4;&#x30C9;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x30AD;&#x30E1;&#x30E9;&#x306E; PPIase &#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3; &#x30D5;&#x30E9;&#x30B0;&#x30E1;&#x30F3;&#x30C8; 3T3 &#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B; FKBP52 &#x306E;&#x767A;&#x73FE;&#x3092;&#x963B;&#x5BB3;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3059;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x793A;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x6211;&#x3005; &#x306F;&#x305D;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x8CEA;&#x30C0;&#x30A4;&#x30CB;&#x30F3;&#x3042;&#x308B; co-immunoadsorbed hsp90 &#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C9;&#x4ED6;&#x306E; 2 &#x3064;&#x306E; TPR &#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x3092;&#x793A;&#x3059; (&#x30B5;&#x30A4;&#x30AF;&#x30ED;&#x30D5;&#x30A3;&#x30EA;&#x30F3; CyP 40 &#x3068;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C6;&#x30A4;&#x30F3;&#x30DB;&#x30B9;&#x30D5;&#x30A1;&#x30BF;&#x30FC;&#x30BC; PP5)&#x3002;PPIase &#x76F8;&#x540C;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x4E21;&#x65B9;&#x306E;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x3092;&#x6301;&#x3063;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3001;&#x514D;&#x75AB;&#x5438;&#x7740; co - &#x5404;&#x7D30;&#x80DE;&#x8CEA;&#x30C0;&#x30A4;&#x30CB;&#x30F3;&#x306E; FKBP52 &#x306E; PPIase &#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3; &#x30D5;&#x30E9;&#x30B0;&#x30E1;&#x30F3;&#x30C8;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x30D6;&#x30ED;&#x30C3;&#x30AF;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6D44;&#x5316;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x3001;FKBP52&#x3001;PP5&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073; PPIase &#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x306E;&#x30D5;&#x30E9;&#x30B0;&#x30E1;&#x30F3;&#x30C8;&#x306F;&#x7D30;&#x80DE;&#x8CEA;&#x30C0;&#x30A4;&#x30CB;&#x30F3;&#x306E;&#x4E2D;&#x9593;&#x306E;&#x30C1;&#x30A7;&#x30FC;&#x30F3;&#x306B;&#x76F4;&#x63A5;&#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C9;&#x3059;&#x308B;. &#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;PP5 &#x7D30;&#x80DE;&#x8CEA;&#x30C0;&#x30A4;&#x30CB;&#x30F3;&#x3068;&#x5FAE;&#x5C0F;&#x7BA1;&#x306E;&#x4E21;&#x65B9;&#x3068; colocalizes &#x3057;&#x3001;&#x305D;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x9AA8;&#x683C;&#x306E;&#x30ED;&#x30FC;&#x30AB;&#x30EA;&#x30BC;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x306E; PPIase &#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3; &#x30D5;&#x30E9;&#x30B0;&#x30E1;&#x30F3;&#x30C8; 3T3 &#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B; FKBP52 &#x306E;&#x767A;&#x73FE;&#x3092;&#x4E71;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;Hsp90 &#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C7;&#x30A3;&#x30F3;&#x30B0; immunophilins &#x306E; PPIase &#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x8CEA;&#x30C0;&#x30A4;&#x30CB;&#x30F3;&#x3068;&#x76F4;&#x63A5;&#x5BFE;&#x8A71;&#x3057;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x30E2;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x3068;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528; PP5 in vivo &#x3067;&#x306E;&#x5FAE;&#x5C0F;&#x306E;&#x30ED;&#x30FC;&#x30AB;&#x30EA;&#x30BC;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x8CAC;&#x4EFB;&#x304C;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x7DE0;&#x7D50;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

Hsp90 &#x95A2;&#x9023;&#x4ED8;&#x3051;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B; immunophilins &#x7D30;&#x80DE;&#x8CEA;&#x30C0;&#x30A4;&#x30CB;&#x30F3;&#x3078;&#x306E;&#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C9;: &#x76F4;&#x63A5;&#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C9;&#x3068; in vivo &#x306E;&#x8A3C;&#x62E0; peptidylprolyl &#x30A4;&#x30BD;&#x30E1;&#x30E9;&#x30FC;&#x30BC; &#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3; &#x30C0;&#x30A4;&#x30CB;&#x30F3;&#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3002;

Fkbp52&#xC740; &#xC2A4;&#xD14C;&#xB85C;&#xC774;&#xB4DC; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; &#xAD00;&#xB828; immunophilin hsp90 tetratricopeptide &#xBC18;&#xBCF5; (TPR) &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778;&#xC744; &#xD1B5;&#xD574; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. FKBP52 &#xD558;&#xB098; &#xC9C1;&#xC811; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9; &#xB610;&#xD55C; &#xD45C;&#xC2DC; &#xB41C; &#xB610;&#xB294; &#xC9C1;&#xC811; &#xC138;&#xD3EC;&#xC9C8; &#xD68C;&#xC640; &#xADF8;&#xAC83;&#xC758; peptidylprolyl isomerase (PPIase) &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778;&#xC744; &#xD1B5;&#xD574; &#xBAA8;&#xD130; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xAD00;&#xC5EC; &#xD558;&#xC9C0; &#xC18C;&#xD3EC; &#xD575; &#xCABD;&#xC73C;&#xB85C; &#xC5ED;&#xD589; &#xC804;&#xC1A1;&#xC5D0;. &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4;&#xC758; &#xC6C0;&#xC9C1;&#xC784;&#xC5D0; PPIase &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC801; &#xC5ED;&#xD560; 3T3 &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0;&#xC11C; fkbp52&#xC758; PPIase &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778; &#xC870;&#xAC01;&#xC758; &#xC2DD; dexamethasone &#xC885;&#xC18D; &#xD575; &#xC804; &#xB179;&#xC0C9; &#xD615;&#xAD11; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; glucocorticoid &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; &#xD0A4;&#xBA54;&#xB77C;&#xC758; &#xC5B5;&#xC81C;&#xB97C; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC90C;&#xC73C;&#xB85C;&#xC368; &#xC2DC;&#xC5F0; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC5EC;&#xAE30;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; &#xADF8; &#xC138;&#xD3EC;&#xC9C8; &#xD68C;&#xB294; &#xACF5;&#xB3D9;-immunoadsorbed hsp90 &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xD558;&#xB294; &#xB450; &#xAC00;&#xC9C0; &#xB2E4;&#xB978; TPR &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC744; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4; (CyP-40 cyclophilin&#xC640; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC778;&#xC0B0; &#xAC00;&#xC218;&#xBD84;&#xD574; &#xD6A8;&#xC18C; PP5). &#xB450; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; PPIase homology &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778;&#xC744; &#xC18C;&#xC720; &#xD558; &#xACE0; &#xC138;&#xD3EC;&#xC9C8; &#xD68C; &#xAC01;&#xAC01;&#xC758; &#xACF5;&#xB3D9;-immunoadsorption FKBP52 PPIase &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778; &#xC870;&#xAC01;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xCC28;&#xB2E8; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC21C;&#xD654; &#xB41C; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; FKBP52, PP5, &#xBC0F; PPIase &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778; &#xC870;&#xAC01; &#xC138;&#xD3EC;&#xC9C8; &#xD68C;&#xC758; &#xC911;&#xAC04; &#xCCB4;&#xC778;&#xC5D0; &#xC9C1;&#xC811; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xD560; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC138;&#xD3EC;&#xC9C8; &#xD68C;&#xC640; microtubules, PP5 colocalizes &#xBC0F; 3T3 &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0;&#xC11C; fkbp52&#xC758; PPIase &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778; &#xC870;&#xAC01;&#xC758; &#xC2DD; &#xBC29;&#xD574; &#xADF8; cytoskeletal &#xC9C0;&#xC5ED;&#xD654;. &#xC6B0;&#xB9AC; &#xACB0;&#xB860; hsp90 &#xBC14;&#xC778;&#xB529; immunophilins&#xC758; PPIase &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778; &#xC138;&#xD3EC;&#xC9C8; &#xD68C;&#xC640; &#xC9C1;&#xC811; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9; &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; &#xBAA8;&#xD130; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC774;&#xC774; &#xC0C1;&#xD638; microtubular PP5 vivo&#xC5D0;&#xC11C; &#xC9C0;&#xC5ED;&#xD654;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xCC45;&#xC784;.

&#xC138;&#xD3EC;&#xC9C8; &#xD68C;&#xB97C; immunophilins hsp90 &#xC5F0;&#xACB0;&#xC758; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;: &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xBC0F; &#xC0DD;&#xCCB4; &#xC870;&#xAC74; &#xC99D;&#xAC70; peptidylprolyl isomerase &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778; &#xD68C; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778;&#xC740; &#xC9C1;&#xC811;.

FKBP52 es un esteroide Induccin asociado a receptor que une a trav&eacute;s de un dominio de (TPR) repetici&oacute;n de tetratricopeptide a hsp90. FKBP52 tambi&eacute;n se ha demostrado para interactuar ya sea directamente o indirectamente mediante su dominio de la isomerasa (PPIase) del peptidylprolyl con dine&iacute;na citoplasm&aacute;tica, una prote&iacute;na motora involucrados en el transporte retr&oacute;grado de ves&iacute;culas hacia el n&uacute;cleo. El rol funcional para el dominio PPIase en movimiento de receptor fue demostrado mostrando que inhibe la expresi&oacute;n del fragmento PPIase dominio de FKBP52 en c&eacute;lulas 3T3 translocaci&oacute;n nuclear dexametasona dependiente de una quimera de receptor verde fluorescente prote&iacute;na-glucocorticoide. Aqu&iacute;, demostramos que dine&iacute;na citoplasm&aacute;tica es co-immunoadsorbed con dos otros TPR dominio prote&iacute;nas que se unen hsp90 (la ciclofilina CyP-40 y la prote&iacute;na fosfatasa PP5). Ambas prote&iacute;nas poseen dominios homologos de PPIase y co-immunoadsorption de dine&iacute;na citoplasm&aacute;tica con cada uno est&aacute; bloqueada por el fragmento de dominio PPIase de FKBP52. Utilizando prote&iacute;nas purificadas, mostramos que el fragmento de dominio PPIase, FKBP52 y PP5 enlazar directamente a la cadena intermedia de dine&iacute;na citoplasm&aacute;tica. PP5 colocalizes con dine&iacute;na citoplasm&aacute;tica y microt&uacute;bulos y expresi&oacute;n del fragmento PPIase dominio de FKBP52 en c&eacute;lulas 3T3 interrumpe su localizaci&oacute;n citoesqueleto. Concluimos que los dominios PPIase de las inmunofilinas hsp90 vinculante interactuar&aacute;n directamente con dine&iacute;na citoplasm&aacute;tica y que esta interacci&oacute;n con la prote&iacute;na motora es responsable de la localizaci&oacute;n microtubular de PP5 in vivo.

Encuadernaci&oacute;n de inmunofilinas hsp90 asociada a dine&iacute;na citoplasm&aacute;tica: directa evidencia vinculante e in vivo que el dominio de la isomerasa de peptidylprolyl es un dominio de la interacci&oacute;n de dine&iacute;na.

&#x4E94;&#x4E2A;&#x86CB;&#x767D;&#x3001; &#x70ED;&#x4F11;&#x514B;&#x86CB;&#x767D; 90&#x3001; &#x70ED;&#x4F11;&#x514B;&#x86CB;&#x767D; 70&#x3001; &#x8DC3;&#x3001; hsp40&#xFF0C;&#x548C; p23&#xFF0C;&#x6700;&#x5C11;&#x7684;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x6C47;&#x7F16;&#x7CD6;&#x76AE;&#x8D28;&#x6FC0;&#x7D20;&#x53D7;&#x4F53; (GR).hsp90 heterocomplexes&#xFF0C;&#x5E76;&#x5BFC;&#x81F4;&#x816D;&#x88C2;&#x8BBF;&#x95EE;&#x7684;&#x7C7B;&#x56FA;&#x9187;&#x7C7B;&#x56FA;&#x9187;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x7684;&#x540C;&#x65F6;&#x5F00;&#x5E55;&#x3002;&#x5927;&#x4F1A;&#x7684;&#x7B2C;&#x4E00;&#x6B65;&#x662F; ATP &#x4F9D;&#x8D56;&#x548C; hsp40 (YDJ-1)-&#x4F9D;&#x8D56;&#x5F62;&#x6210;&#x7684;&#x4E00;&#x4E2A;&#x7D20;&#x6570;&#x7684;&#x70ED;&#x4F11;&#x514B;&#x86CB;&#x767D; 90&#x3001; &#x8DC3;&#x70B9;&#x548C; p23 &#x968F;&#x540E;&#x4F9D;&#x8D56;&#x4E8E; ATP &#x7684;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x53D7;&#x4F53;&#x7684; GR.hsp70 &#x590D;&#x6742;&#x3002;&#x8FD9;&#x9879;&#x7814;&#x7A76;&#x7684;&#x91CD;&#x70B9;&#x4E0E;&#x70ED;&#x4F11;&#x514B;&#x86CB;&#x767D; 70 &#x7684; GR &#x542F;&#x52A8;&#x53CD;&#x5E94;&#x7684;&#x4E09;&#x4E2A;&#x65B9;&#x9762;&#x3002;&#x9996;&#x5148;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x6709;&#x7684;&#x539F;&#x5B50;&#x529B;&#x663E;&#x5FAE;&#x955C;&#x3001; &#x53EF;&#x89C6;&#x5316;&#x5F15;&#x7269;&#x7684; GR.hsp70 &#x914D;&#x5408;&#x7269;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x53D1;&#x73B0;&#x6700;&#x5E38;&#x89C1;&#x7684;&#x5316;&#x5B66;&#x8BA1;&#x91CF;&#x6BD4;&#x662F; 1&#xFF1A; 1&#xFF0C;&#x4E00;&#x4E9B;&#x914D;&#x5408;&#x7269;&#x5927;&#x5C0F;&#x5927;&#x7EA6; 1&#xFF1A; 2 &#x548C;&#x51E0;&#x4E2A;&#x8F83;&#x5927;&#x7684;&#x5927;&#x5C0F;&#x7684;&#x914D;&#x5408;&#x3002;&#x7B2C;&#x4E8C;&#xFF0C;&#x5728;&#x96CC;&#x5B55;&#x6FC0;&#x7D20;&#x53D7;&#x4F53;&#x542F;&#x52A8;&#x7684;&#x6700;&#x8FD1;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#xFF0C;&#x663E;&#x793A;&#x8BE5; hsp40 &#x9996;&#x5148;&#xFF0C;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x5BFC;&#x81F4;&#x5B83;&#x9488;&#x5BF9;&#x70ED;&#x4F11;&#x514B;&#x86CB;&#x767D; 70 &#x548C;&#x53D7;&#x4F53;&#x7684;&#x6982;&#x5FF5;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#x5C55;&#x793A; hsp40 &#x4E0D;&#x6267;&#x884C;&#x6B64;&#x7C7B;&#x76EE;&#x6807;&#x51FD;&#x6570;&#x542F;&#x52A8;&#x514B;&#x7B2C;&#x4E09;&#x3001; &#x6211;&#x4EEC;&#x4E13;&#x6CE8;&#x7684;&#x914D;&#x4F53;&#x7ED3;&#x5408;&#x57DF;&#x6240;&#x9700;&#x7684; GR.hsp90 heterocomplex &#x5927;&#x4F1A;&#x77ED;&#x6C28;&#x57FA;&#x672B;&#x7AEF;&#x90E8;&#x5206;&#x3002;&#x901A;&#x8FC7;&#x4F7F;&#x7528;&#x4E24;&#x4E2A;&#x8C37;&#x80F1;&#x7518;&#x80BD; S-&#x8F6C;&#x79FB;&#x9176; (GST) / &#x914D;&#x4F53;&#x7ED3;&#x5408;&#x57DF;&#x878D;&#x5408;&#x4E0E; (GST/520 C) &#x548C; (GST/554 C) &#x70ED;&#x4F11;&#x514B;&#x86CB;&#x767D; 90 &#x7ED1;&#x5B9A;&#x548C;&#x7C7B;&#x56FA;&#x9187;&#x7ED3;&#x5408;&#x6D3B;&#x6027;&#xFF0C;&#x6CA1;&#x6709;&#x663E;&#x793A;&#x4E0E;&#x70ED;&#x4F11;&#x514B;&#x86CB;&#x767D; 70 &#x5728;&#x542F;&#x52A8;&#x6B65;&#x9AA4;&#x53D1;&#x751F;&#x65F6;&#x4E0E; GST/554 C&#xFF0C;&#x548C;&#x5B83;&#x662F;&#x4E0E;&#x70ED;&#x4F11;&#x514B;&#x86CB;&#x767D; 90 &#x662F;&#x6709;&#x7F3A;&#x9677;&#x7684;&#x968F;&#x540E;&#x5927;&#x4F1A;&#x6B65;&#x3002;

&#x53EF;&#x89C6;&#x5316;&#x548C;&#x7CD6;&#x76AE;&#x8D28;&#x6FC0;&#x7D20;&#x53D7;&#x4F53;&#x7684;&#x7A0B;&#x5E8F;&#x96C6;&#x7684;&#x673A;&#x5236;&#x3002;&#x70ED;&#x4F11;&#x514B;&#x86CB;&#x767D; 70 &#x662F;&#x7C7B;&#x56FA;&#x9187;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x816D;&#x88C2;&#x968F;&#x540E;&#x70ED;&#x4F11;&#x514B;&#x86CB;&#x767D; 90 &#x4F9D;&#x8D56;&#x5F00;&#x653E;&#x5F15;&#x7269;&#x7684;&#x590D;&#x6742;&#x3002;

A minimal system of five proteins, hsp90, hsp70, Hop, hsp40, and p23, assembles glucocorticoid receptor (GR).hsp90 heterocomplexes and causes the simultaneous opening of the steroid binding cleft to access by steroid. The first step in assembly is the ATP-dependent and hsp40 (YDJ-1)-dependent formation of a GR.hsp70 complex that primes the receptor for subsequent ATP-dependent activation by hsp90, Hop, and p23. This study focuses on three aspects of the GR priming reaction with hsp70. First, we have visualized the primed GR.hsp70 complexes by atomic force microscopy, and we find the most common stoichiometry to be 1:1, with some complexes of a size approximately 1:2 and a few complexes of larger size. Second, in a recent study of progesterone receptor priming, it was shown that hsp40 binds first, leading to the notion that it targets hsp70 to the receptor. We show here that hsp40 does not perform such a targeting function in priming the GR. Third, we focus on a short amino-terminal segment of the ligand binding domain that is required for GR.hsp90 heterocomplex assembly. By using two glutathione S-transferase (GST)/ligand binding domain fusions with (GST/520C) and without (GST/554C) hsp90 binding and steroid binding activity, we show that the priming step with hsp70 occurs with GST/554C, and it is the subsequent assembly step with hsp90 that is defective.

Visualization and mechanism of assembly of a glucocorticoid receptor.Hsp70 complex that is primed for subsequent Hsp90-dependent opening of the steroid binding cleft.

Un syst&egrave;me minimal de cinq prot&eacute;ines hsp90, hsp70, Hop, hsp40 et p23, assemble des glucocortico&iuml;des (GR) de r&eacute;cepteurs .hsp90 heterocomplexes et provoque l&#39;ouverture simultan&eacute;e de la liaison des st&eacute;ro&iuml;des une fente d&#39;acc&egrave;s de st&eacute;ro&iuml;des. La premi&egrave;re &eacute;tape de l&#39;assemblage est l&#39;ATP-d&eacute;pendante et hsp40 (YDJ-1)-formation d&eacute;pendante d&#39;un complexe de GR.hsp70 qui pr&eacute;dispose le r&eacute;cepteur pour activation subs&eacute;quente de ATP-d&eacute;pendante de la hsp90 et Hop p23. Cette &eacute;tude se concentre sur trois aspects de la r&eacute;action d&#39;amor&ccedil;age GR hsp70. Tout d&#39;abord, nous avons visualis&eacute; les complexes GR.hsp70 appr&ecirc;t&eacute;s par microscopie &agrave; force atomique, et nous trouvons la stoechiom&eacute;trie de la plus courante est 1:1, avec quelques complexes de taille environ des complexes 1:2 et quelques de plus grande taille. Deuxi&egrave;mement, il a &eacute;t&eacute; d&eacute;montr&eacute; dans une &eacute;tude r&eacute;cente d&#39;appr&ecirc;tage du r&eacute;cepteur de la progest&eacute;rone, que ce hsp40 lie tout d&#39;abord, conduisant &agrave; la notion qu&#39;il cible hsp70 au r&eacute;cepteur. Nous montrons ici que hsp40 n&#39;effectue pas une telle fonction de ciblage en amor&ccedil;ant la troisi&egrave;me GR., nous nous concentrons sur un court segment amino-terminale de la domaine de liaison du ligand qui est requis pour l&#39;assemblage de h&eacute;t&eacute;rocomplexe GR.hsp90. En utilisant deux glutathion S-transf&eacute;rase (GST) / ligand binding fusions de domaine (GST/520 C) et sans liaison de hsp90 (GST/554 C) et l&#39;activit&eacute; de liaison des st&eacute;ro&iuml;des, nous montrons que l&#39;&eacute;tape d&#39;amor&ccedil;age avec hsp70 survient avec GST/554 C, et c&#39;est l&#39;&eacute;tape d&#39;assemblage subs&eacute;quent avec hsp90 est d&eacute;fectueux.

Visualisation et m&eacute;canisme de montage d&#39;un r&eacute;cepteur des glucocortico&iuml;des.Hsp70 complexe qui est appr&ecirc;t&eacute; pour ouverture ult&eacute;rieure de Hsp90 d&eacute;pendant de la fente de liaison des st&eacute;ro&iuml;des.

Visualisierung und der Mechanismus zum Zusammenbau eines Glucocorticoid receptor.Hsp70, der f&#xFC;r die nachfolgende Hsp90-abh&#xE4;ngige &#xD6;ffnung der Steroid bindenden Spalte gef&#xFC;llt zu haben.

Un sistema minimale di cinque proteine, hsp90, hsp70, Hop, hsp40 e p23, assembla glucocorticoidi recettore (GR) .hsp90 heterocomplexes e provoca l&#39;apertura simultanea dell&#39;associazione steroidea schisi per accesso di steroide. Il primo passo nell&#39;assembly &egrave; l&#39;ATP-dipendente e hsp40 (YDJ-1)-dipendente dalla formazione di un complesso GR.hsp70 che innesca il recettore per la successiva attivazione di trifosfato di Adenosina-dipendente di hsp90, Hop e p23. Questo studio si concentra su tre aspetti della reazione di adescamento GR con hsp70. In primo luogo, noi abbiamo visualizzato i complessi GR.hsp70 innescati da microscopia a forza atomica, e troviamo la stechiometria pi&ugrave; comune essere 1:1, con alcuni complessi di dimensioni circa 1:2 e alcuni complessi di grandi dimensioni. In secondo luogo, in un recente studio di adescamento di recettore del progesterone, &egrave; stato dimostrato che hsp40 si lega in primo luogo, che porta alla nozione che esso si rivolge hsp70 al recettore. Mostriamo qui che hsp40 non esegue una funzione di targeting in priming il terzo GR., ci concentriamo su un breve segmento amminico-terminale del dominio associazione ligando che &egrave; necessario per l&#39;assemblaggio di heterocomplex GR.hsp90. Utilizzando due glutatione S-transferasi (GST) / ligand binding fusioni di dominio con (GST/520 C) e senza associazione di hsp90 (GST/554 C) e l&#39;associazione steroidi attivit&agrave;, mostriamo il passaggio di innesco con hsp70 si verifica con GST/554 C, che &egrave; il passo successivo assemblaggio con hsp90 che &egrave; difettoso.

Visualizzazione e meccanismo di assemblaggio di un recettore glucocorticoide.Complesso hsp70 che &egrave; innescato per la successiva apertura di Hsp90-dipendente dell&#39;associazione steroidea schisi.

&#x6700;&#x5C0F;&#x9650;&#x306E;&#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E0;&#x306E; 5 &#x3064;&#x306E;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x3001;hsp90, hsp70&#x3001;&#x30DB;&#x30C3;&#x30D7;&#x3001;hsp40 &#x3068; p23&#x3001;&#x30B0;&#x30EB;&#x30B3;&#x30B3;&#x30EB;&#x30C1;&#x30B3;&#x30A4;&#x30C9;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53; &#xFF08;GR&#xFF09; .hsp90 heterocomplexes &#x3092;&#x30A2;&#x30BB;&#x30F3;&#x30D6;&#x30EB;&#x3057;&#x3001;&#x3078;&#x306E;&#x30A2;&#x30AF;&#x30BB;&#x30B9;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x30B9;&#x30C6;&#x30ED;&#x30A4;&#x30C9;&#x88C2;&#x30B9;&#x30C6;&#x30ED;&#x30A4;&#x30C9;&#x7D50;&#x5408;&#x306E;&#x540C;&#x6642;&#x30AA;&#x30FC;&#x30D7;&#x30F3;&#x3092;&#x5F15;&#x304D;&#x8D77;&#x3053;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30A2;&#x30BB;&#x30F3;&#x30D6;&#x30EA;&#x306E;&#x6700;&#x521D;&#x306E;&#x30B9;&#x30C6;&#x30C3;&#x30D7;&#x306F;&#x3001;ATP &#x4F9D;&#x5B58;&#x6027;&#x3068; hsp40 &#x3060; &#xFF08;YDJ 1&#xFF09;-&#x5F8C;&#x7D9A;&#x306E; ATP &#x4F9D;&#x5B58;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D9;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3; hsp90&#x3001;&#x30DB;&#x30C3;&#x30D7;&#x3001;p23 &#x306E;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x306E;&#x7D20;&#x6570;&#x306F; GR.hsp70 &#x8907;&#x5408;&#x4F53;&#x306E;&#x4F9D;&#x5B58;&#x5F62;&#x6210;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x7814;&#x7A76; hsp70 &#x3068; GR &#x30D7;&#x30E9;&#x30A4;&#x30DF;&#x30F3;&#x30B0;&#x53CD;&#x5FDC;&#x306E; 3 &#x3064;&#x306E;&#x5074;&#x9762;&#x306B;&#x7126;&#x70B9;&#x3092;&#x5F53;&#x3066;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x307E;&#x305A;&#x3001;&#x6211;&#x3005; &#x306F;&#x539F;&#x5B50;&#x9593;&#x529B;&#x9855;&#x5FAE;&#x93E1;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x30D7;&#x30E9;&#x30A4;&#x30DF;&#x30F3;&#x30B0; GR.hsp70 &#x932F;&#x4F53;&#x3092;&#x8996;&#x899A;&#x5316;&#x3057;&#x305F;&#x3001;&#x79C1;&#x305F;&#x3061;&#x306F;&#x7D04; 1:2 &#x3068;&#x3044;&#x304F;&#x3064;&#x304B;&#x306E;&#x932F;&#x4F53;&#x5927;&#x304D;&#x3044;&#x30B5;&#x30A4;&#x30BA;&#x306E;&#x3044;&#x304F;&#x3064;&#x304B;&#x306E;&#x30B5;&#x30A4;&#x30BA;&#x306E;&#x932F;&#x4F53;&#x3092; 1:1 &#x3068;&#x3059;&#x308B;&#x6700;&#x3082;&#x4E00;&#x822C;&#x7684;&#x306A;&#x5316;&#x5B66;&#x91CF;&#x8AD6;&#x3092;&#x898B;&#x3064;&#x3051;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x7B2C;&#x4E8C;&#x306B;&#x3001;&#x30D7;&#x30ED;&#x30B2;&#x30B9;&#x30C6;&#x30ED;&#x30F3;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x30D7;&#x30E9;&#x30A4;&#x30DF;&#x30F3;&#x30B0;&#x306E;&#x6700;&#x8FD1;&#x306E;&#x7814;&#x7A76;&#x3067;&#x306F;, &#x305D;&#x306E; hsp40 &#x306F;&#x3001;&#x307E;&#x305A;&#x3001;&#x305D;&#x308C; hsp70&#x3001;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x3092;&#x30BF;&#x30FC;&#x30B2;&#x30C3;&#x30C8;&#x6982;&#x5FF5;&#x306B;&#x3064;&#x306A;&#x304C;&#x308B;&#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C9;&#x304C;&#x793A;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x793A;&#x3057;&#x3066; GR. 3 &#x756A;&#x76EE;&#x306E;&#x30D7;&#x30E9;&#x30A4;&#x30DF;&#x30F3;&#x30B0;&#x306B; hsp40 &#x30BF;&#x30FC;&#x30B2;&#x30C3;&#x30C8;&#x95A2;&#x6570;&#x5B9F;&#x884C;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3001;GR.hsp90 &#x91CD;&#x5408;&#x30A2;&#x30BB;&#x30F3;&#x30D6;&#x30EA;&#x306E;&#x5FC5;&#x8981;&#x306A;&#x30EA;&#x30AC;&#x30F3;&#x30C9;&#x7D50;&#x5408;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x306E;&#x77ED;&#x3044;&#x30A2;&#x30DF;&#x30CE;&#x672B;&#x7AEF;&#x30BB;&#x30B0;&#x30E1;&#x30F3;&#x30C8;&#x306B;&#x7126;&#x70B9;&#x3092;&#x5F53;&#x3066;&#x307E;&#x3059;&#x3002;2 &#x30B0;&#x30EB;&#x30BF;&#x30C1;&#x30AA;&#x30F3; s-&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30D5;&#x30A7;&#x30E9;&#x30FC;&#x30BC; (GST) &#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;/&#x30EA;&#x30AC;&#x30F3;&#x30C9;&#x7D50;&#x5408;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x878D;&#x5408; &#xFF08;GST/520 C) &#x3068; (GST/554 C) hsp90 &#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C7;&#x30A3;&#x30F3;&#x30B0;&#x3068;&#x30B9;&#x30C6;&#x30ED;&#x30A4;&#x30C9;&#x7D50;&#x5408;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D3;&#x30C6;&#x30A3;&#x304C;&#x306A;&#x3051;&#x308C;&#x3070;&#x3001;&#x30D7;&#x30E9;&#x30A4;&#x30DF;&#x30F3;&#x30B0; &#x30B9;&#x30C6;&#x30C3;&#x30D7; hsp70 &#x3068; C&#x3001;GST/554 &#x3067;&#x767A;&#x751F;&#x3057;&#x3001;&#x6B20;&#x9665;&#x304C;&#x3042;&#x308B; hsp90 &#x3068;&#x5F8C;&#x7D9A;&#x306E;&#x30A2;&#x30BB;&#x30F3;&#x30D6;&#x30EA; &#x30B9;&#x30C6;&#x30C3;&#x30D7;&#x3067;&#x3059;&#x3092;&#x793A;&#x3059;&#x3002;

&#x53EF;&#x8996;&#x5316;&#x3068;&#x30B0;&#x30EB;&#x30B3;&#x30B3;&#x30EB;&#x30C1;&#x30B3;&#x30A4;&#x30C9;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x306E;&#x30A2;&#x30BB;&#x30F3;&#x30D6;&#x30EA;&#x306E;&#x30E1;&#x30AB;&#x30CB;&#x30BA;&#x30E0;&#x3002;&#x5F8C;&#x7D9A;&#x306E; Hsp90 &#x4F9D;&#x5B58;&#x30B9;&#x30C6;&#x30ED;&#x30A4;&#x30C9;&#x7D50;&#x5408;&#x88C2;&#x306E;&#x958B;&#x304F;&#x306E;&#x767A;&#x52D5;&#x3092;&#x4FC3;&#x3055;&#x308C;&#x308B; Hsp70 &#x30B3;&#x30F3;&#x30D7;&#x30EC;&#x30C3;&#x30AF;&#x30B9;&#x3002;

5 &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;, hsp90, hsp70, &#xD649;, hsp40, &#xBC0F; p23, &#xCD5C;&#xC18C;&#xD55C;&#xC758; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C; &#xC870;&#xB9BD; glucocorticoid &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; (GR).hsp90 heterocomplexes &#xACE0; &#xC2A4;&#xD14C;&#xB85C;&#xC774;&#xB4DC; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xC561;&#xC138;&#xC2A4;&#xB97C; &#xC2A4;&#xD14C;&#xB85C;&#xC774;&#xB4DC;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xCABC;&#xAC1C;&#xC9C4; &#xB3D9;&#xC2DC; &#xAC1C;&#xD1B5;. &#xC5B4;&#xC148;&#xBE14;&#xB9AC;&#xC758; &#xCCAB; &#xBC88;&#xC9F8; &#xB2E8;&#xACC4;&#xB294; ATP &#xC885;&#xC18D; &#xBC0F; hsp40 (YDJ-1)-&#xC18C;&#xC218; hsp90&#xC640; &#xD649;, p23 &#xD6C4;&#xC18D; ATP &#xC885;&#xC18D; &#xD65C;&#xC131;&#xD654;&#xB97C; &#xC704;&#xD55C; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; GR.hsp70 &#xB2E8;&#xC9C0;&#xC758; &#xC885;&#xC18D; &#xD615;&#xC131;. &#xC774; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xB294; hsp70&#xC640; GR &#xBABB;&#xC4F0;&#xAC8C; &#xBC18;&#xC751;&#xC758; &#xC138; &#xAC00;&#xC9C0; &#xCE21;&#xBA74;&#xC5D0; &#xCD08;&#xC810;&#xC744; &#xB9DE;&#xCD94;&#xACE0;. &#xCCAB;&#xC9F8;, &#xC6D0;&#xC790; &#xD798; &#xD604;&#xBBF8;&#xACBD;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xB05D;&#xB0AC;&#xB2E4; GR.hsp70 &#xB2E8;&#xC9C0; &#xC2DC;&#xAC01;&#xD654;&#xB294; &#xC6B0;&#xB9AC; &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xB354; &#xD070; &#xD06C;&#xAE30;&#xC758; &#xC57D; 1: 2&#xC640; &#xBA87; &#xB2E8;&#xC9C0; 1:1 &#xD06C;&#xAE30;&#xC758; &#xC77C;&#xBD80; &#xB2E8;&#xC9C0;&#xC640; &#xD568;&#xAED8; &#xAC00;&#xC7A5; &#xC77C;&#xBC18;&#xC801;&#xC778; stoichiometry&#xB97C; &#xCC3E;&#xC73C;&#xC2ED;&#xC2DC;&#xC624;. &#xB458;&#xC9F8;, &#xD669; &#xCCB4; &#xD638;&#xB974;&#xBAAC; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; &#xBABB;&#xC4F0;&#xAC8C;&#xC758; &#xCD5C;&#xADFC; &#xC5F0;&#xAD6C;, &#xADF8;&#xAC83;&#xC740; &#xADF8; hsp40 &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xCCAB;&#xC9F8;, &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4;&#xC5D0;&#xB294; hsp70 &#xB300;&#xC0C1; &#xAC1C;&#xB150;&#xC744; &#xC120;&#xB3C4; &#xD45C;&#xC2DC; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; &#xC5EC;&#xAE30;&#xC5D0; &#xD45C;&#xC2DC; hsp40 GR. 3 &#xBABB;&#xC4F0;&#xAC8C;&#xC5D0; &#xD0C0;&#xAC9F;&#xD305; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC744; &#xC218;&#xD589; &#xD558;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; GR.hsp90 heterocomplex &#xC5B4;&#xC148;&#xBE14;&#xB9AC;&#xC5D0; &#xD544;&#xC694;&#xD55C; ligand &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778;&#xC758; &#xC9E7;&#xC740; &#xC544;&#xBBF8;&#xB178; &#xD130;&#xBBF8;&#xB110; &#xC138;&#xADF8;&#xBA3C;&#xD2B8;&#xC5D0; &#xCD08;&#xC810;. &#xB450; glutathione S-&#xC804;&#xC774; (GST)&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; ligand &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778; fusions&#xC640; (GST/520 C) / (GST/554 C) hsp90 &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xBC0F; &#xC2A4;&#xD14C;&#xB85C;&#xC774;&#xB4DC; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xD65C;&#xB3D9; &#xC5C6;&#xC774; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; &#xBCF4;&#xC5EC; hsp70 &#xD568;&#xAED8; &#xC560; &#xBC8C; &#xCE60; &#xB2E8;&#xACC4; GST/554 C&#xB85C; &#xC774;&#xB8E8;&#xC5B4;&#xC9C0;&#xBA70; &#xACB0;&#xD568;&#xC774; hsp90&#xC640; &#xD6C4;&#xC18D; &#xC5B4;&#xC148;&#xBE14;&#xB9AC; &#xB2E8;&#xACC4; &#xC774;&#xB2E4;.

&#xC2DC;&#xAC01;&#xD654; &#xBC0F; glucocorticoid &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4;&#xC758; &#xC870;&#xB9BD;&#xC758; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;.Hsp70 &#xBCF5;&#xC7A1; &#xD55C; &#xB2E4;&#xC74C; Hsp90 &#xC885;&#xC18D; &#xC5EC; &#xC2A4;&#xD14C;&#xB85C;&#xC774;&#xB4DC; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xBD84;&#xC5F4;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC900;&#xBE44;&#xAC00; &#xB05D;&#xB0AC;&#xB2E4;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Un sistema m&iacute;nimo de cinco prote&iacute;nas hsp90, hsp70, Hop, hsp40 y p23, monta de glucocorticoides (GR) del receptor .hsp90 heterocomplejos y provoca la apertura simult&aacute;nea de la encuadernaci&oacute;n esteroide hendidos para acceso por esteroides. El primer paso en la Asamblea es el dependiente de ATP y hsp40 (YDJ-1)-formaci&oacute;n dependiente de un complejo GR.hsp70 que prepara el receptor para la posterior activaci&oacute;n dependiente de ATP por hsp90, salto y p23. Este estudio se centra en tres aspectos de la reacci&oacute;n de cebado de GR con hsp70. En primer lugar, nos hemos visualizado los complejos GR.hsp70 preparados por microscop&iacute;a de fuerza at&oacute;mica, y encontramos la m&aacute;s com&uacute;n estequiometr&iacute;a 1:1, con algunos complejos de un tama&ntilde;o de aproximadamente 1:2 y unos complejos de mayor tama&ntilde;o. En segundo lugar, en un estudio reciente de cebado del receptor de progesterona, fue demostrado que hsp40 se une en primer lugar, lleva a la noci&oacute;n que se dirige a hsp70 al receptor. Aqu&iacute; mostramos que hsp40 no realiza tal funci&oacute;n de focalizaci&oacute;n en cebado el tercer GR., nos centramos en un segmento corto del amino-terminal del dominio de uni&oacute;n de ligando que se requiere para el montaje de heterocomplex de GR.hsp90. Utilizando dos glutati&oacute;n S-transferasa (GST) / ligando vinculante fusiones de dominio con (GST/520 C) y sin (GST/554 C) hsp90 vinculante y actividad obligatoria esteroide, demostramos que el paso de cebado con hsp70 ocurre con GST/554 C, y es el paso posterior montaje con hsp90 que es defectuoso.

Visualizaci&oacute;n y mecanismo de montaje de un receptor de glucocorticoides.Complejo de HSP70 que est&aacute; preparado para la posterior apertura de Hsp90-dependiente de la hendidura del esteroide vinculante.

&#x4FE1;&#x53F7;&#x4E0E;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x7A97;&#x4F53; heterocomplexes &#x548C;&#x662F;&#x53D7;&#x70ED;&#x4F11;&#x514B;&#x86CB;&#x767D;&#x53CA;&#x4F34;&#x4FA3;&#x70ED;&#x4F11;&#x514B;&#x86CB;&#x767D; 90 &#x591A;&#x79CD;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x5316;&#x5408;&#x7269;&#x662F;&#x7531; multiprotein &#x7684;&#x673A;&#x68B0;&#xFF0C;&#x5305;&#x62EC;&#x70ED;&#x4F11;&#x514B;&#x86CB;&#x767D; 90 &#x548C;&#x70ED;&#x4F11;&#x514B;&#x86CB;&#x767D; 70 &#x57FA;&#x672C;&#x548C;&#x4E30;&#x5BCC;&#x7684;&#x7EC4;&#x4EF6;&#x548C;&#x8DC3;&#x70B9;&#x3001; hsp40&#xFF0C;&#x4EE5;&#x53CA; p23 &#x4F5C;&#x4E3A;&#x591A;&#x4F4E;&#x4E30;&#x5EA6;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E2D;&#x5B58;&#x5728;&#x7684;&#x975E;&#x5FC5;&#x8981; cochaperones &#x5F62;&#x6210;&#x7684;&#x3002;&#x8868;&#x8FBE;&#x7684;&#x4FE1;&#x53F7;&#x86CB;&#x767D;&#x53EF;&#x4EE5;&#x538B;&#x5012;&#x6B63;&#x786E;&#x88C5;&#x914D;&#x4E0E;&#x70ED;&#x4F11;&#x514B;&#x86CB;&#x767D; 90 heterocomplexes &#x8FD9;&#x4E00;&#x673A;&#x5236;&#x7684;&#x80FD;&#x529B;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x663E;&#x793A;&#x6B64;&#x7A0B;&#x5E8F;&#x96C6;&#x673A;&#x68B0; Sf9 &#x7EC6;&#x80DE;&#x7F51;&#x7EC7;&#x7EA2;&#x7EC6;&#x80DE;&#x88C2;&#x89E3;&#x548C;&#x4F53;&#x5185;&#x4F53;&#x5916;&#x7684;&#x9650;&#x5236;&#x7EC4;&#x4EF6;&#x662F; p23&#x3002;&#x53EA;&#x6709;&#x4E00;&#x5C0F;&#x90E8;&#x5206;&#x7684;&#x7CD6;&#x76AE;&#x8D28;&#x6FC0;&#x7D20;&#x53D7;&#x4F53; (GR) Sf9 &#x7EC6;&#x80DE;&#x4E2D;&#x4E0E;&#x70ED;&#x4F11;&#x514B;&#x86CB;&#x767D; 90 heterocomplex&#xFF0C;&#x6709;&#x7C7B;&#x56FA;&#x9187;&#x7ED3;&#x5408;&#x6D3B;&#x6027;&#xFF0C;&#x672C;&#x4E3A;&#x4E0D;&#x6EB6;&#x6027;&#x548C;&#x80DE;&#x6D46; GR &#x805A;&#x5408;&#x4F53;&#x7684;&#x5927;&#x591A;&#x6570;&#x3002;P23 &#x4E0E; GR &#x7684;&#x5171;&#x8868;&#x8FBE;&#x589E;&#x52A0;&#x80DE;&#x6D46;&#x53D7;&#x4F53;&#x4E0E;&#x7C7B;&#x56FA;&#x9187;&#x7ED3;&#x5408;&#x6D3B;&#x6027;&#x7A33;&#x5B9A; GR.hsp90 heterocomplexes &#x4E2D;&#x6240;&#x5360;&#x7684;&#x6BD4;&#x4F8B;&#xFF0C;p23 &#x7B2C;&#x514B;&#x5171;&#x8868;&#x8FBE;&#x7684;&#x4E00;&#x4E2A;&#x4E25;&#x683C;&#x7684;&#x70ED;&#x4F11;&#x514B;&#x86CB;&#x767D; 90 &#x76F8;&#x5173;&#x6D3B;&#x52A8;&#x53EF;&#x4EE5;&#x6D88;&#x9664;&#x4E0D;&#x6EB6;&#x6027; GR &#x805A;&#x5408;&#x548C;&#x80DE;&#x6D46;&#x53D7;&#x4F53;&#x4ECE;&#x65E0;&#x7C7B;&#x56FA;&#x9187;&#x7ED3;&#x5408;&#x6D3B;&#x6027;&#x5F88;&#x5927;&#x805A;&#x5408;&#x8F6C;&#x79FB;&#x5230;&#x5927;&#x7EA6; 600 kDa heterocomplexes&#xFF0C;&#x4E0E;&#x7C7B;&#x56FA;&#x9187;&#x7ED3;&#x5408;&#x6D3B;&#x6027;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x6570;&#x636E;&#x4F7F;&#x6211;&#x4EEC;&#x5F97;&#x51FA;&#x7ED3;&#x8BBA;&#xFF0C;p23 &#x884C;&#x4E3A;&#x7A33;&#x5B9A;&#x70ED;&#x4F11;&#x514B;&#x86CB;&#x767D; 90 &#x7ED1;&#x5B9A;&#x5230;&#x5BA2;&#x6237;&#x7AEF;&#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x5728;&#x4F53;&#x5185;&#x3002;

&#x70ED;&#x4F11;&#x514B;&#x86CB;&#x767D; 90 cochaperone p23 &#x662F;&#x9650;&#x5236;&#x7EC4;&#x4EF6;&#x7684; multiprotein &#x70ED;&#x4F11;&#x514B;&#x86CB;&#x767D; 90 &#x70ED;&#x4F11;&#x514B;&#x86CB;&#x767D; 70 &#x57FA;&#x4E8E;&#x4F34;&#x4FA3;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x7684;&#x4F53;&#x5185;&#xFF0C;&#x5B83;&#x4EE5;&#x7A33;&#x5B9A;&#x5BA2;&#x6237;&#x7AEF;&#x86CB;&#x767D;&#xFF1A; &#x70ED;&#x4F11;&#x514B;&#x86CB;&#x767D; 90 &#x590D;&#x6742;&#x3002;

A variety of signaling proteins form heterocomplexes with and are regulated by the heat shock protein chaperone hsp90. These complexes are formed by a multiprotein machinery, including hsp90 and hsp70 as essential and abundant components and Hop, hsp40, and p23 as non-essential cochaperones that are present in much lower abundance in cells. Overexpression of signaling proteins can overwhelm the capacity of this machinery to properly assemble heterocomplexes with hsp90. Here, we show that the limiting component of this assembly machinery in vitro in reticulocyte lysate and in vivo in Sf9 cells is p23. Only a fraction of glucocorticoid receptors (GR) overexpressed in Sf9 cells are in heterocomplex with hsp90 and have steroid binding activity, with the majority of the receptors present as both insoluble and cytosolic GR aggregates. Coexpression of p23 with the GR increases the proportion of cytosolic receptors that are in stable GR.hsp90 heterocomplexes with steroid binding activity, a strictly hsp90-dependent activity for the GR. Coexpression of p23 eliminates the insoluble GR aggregates and shifts the cytosolic receptor from very large aggregates without steroid binding activity to approximately 600-kDa heterocomplexes with steroid binding activity. These data lead us to conclude that p23 acts in vivo to stabilize hsp90 binding to client protein.

The hsp90 cochaperone p23 is the limiting component of the multiprotein hsp90/hsp70-based chaperone system in vivo where it acts to stabilize the client protein: hsp90 complex.

Une vari&eacute;t&eacute; de prot&eacute;ines forme heterocomplexes avec et sont r&eacute;glement&eacute;es par la hsp90 chaleur choc prot&eacute;ine chaperon de signalisation. Ces complexes sont form&eacute;s par une machinerie multiprot&eacute;ique, y compris de hsp90 et hsp70 comme composants essentiels et abondantes et Hop, hsp40 et p23 comme cochaperons non essentiels qui sont pr&eacute;sents en quantit&eacute; plus faible abondance dans les cellules. La surexpression de prot&eacute;ines de signalisation peut d&eacute;passer la capacit&eacute; de cette machine pour assembler correctement heterocomplexes avec hsp90. Ici, nous montrons que l&#39;&eacute;l&eacute;ment limitatif de cette machinerie Assembl&eacute;e in vitro dans reticulocyte lysate et in vivo dans des cellules Sf9 est p23. Seule une fraction des r&eacute;cepteurs des glucocortico&iuml;des (GR) surexprim&eacute;s dans les cellules Sf9 sont en h&eacute;t&eacute;rocomplexe avec hsp90 et ont une activit&eacute; de liaison des st&eacute;ro&iuml;des, avec la majorit&eacute; des r&eacute;cepteurs pr&eacute;sents sous forme d&#39;agr&eacute;gats GR insolubles et cytosoliques. Coexpression de p23 avec les ressources g&eacute;n&eacute;tiques augmente la proportion de r&eacute;cepteurs cytosoliques dans stable GR.hsp90 heterocomplexes avec l&#39;activit&eacute; de liaison des st&eacute;ro&iuml;des, une activit&eacute; strictement d&eacute;pendante de hsp90 pour la Coexpression de GR. de p23 &eacute;limine l&#39;insoluble GR agr&egrave;ge et d&eacute;place le r&eacute;cepteur cytosolique de tr&egrave;s gros agr&eacute;gats sans activit&eacute; de liaison des st&eacute;ro&iuml;des pour environ 600-kDa heterocomplexes avec activit&eacute; de liaison des st&eacute;ro&iuml;des. Ces donn&eacute;es nous am&egrave;nent &agrave; conclure que p23 agit in vivo pour stabiliser la hsp90 liaison aux prot&eacute;ines du client.

La hsp90 cochaperons p23 est l&#39;&eacute;l&eacute;ment limitant du syst&egrave;me multiprot&eacute;ique chaperons hsp90/hsp70-based in vivo o&ugrave; il s&#39;agit de stabiliser la prot&eacute;ine client : hsp90 complexes.

Die Hsp90 Cochaperon p23 ist der limitierende Komponente des Multiprotein hsp90/hsp70-based Chaperon-Systems in vivo, wo es wirkt, um die Client-Protein zu stabilisieren: Hsp90-Komplex.

Una variet&agrave; di proteine forma heterocomplexes con e sono regolati dalla heat shock proteina chaperone hsp90 di segnalazione. Questi complessi sono formati da un macchinari multiproteici, compresi hsp90 e hsp70 come componenti essenziali e abbondanti e Hop, hsp40 e p23 come cochaperones non essenziali che sono presenti in molta abbondanza bassa nelle cellule. Sovraespressione di proteine di segnalazione pu&ograve; sopraffare la capacit&agrave; di questa macchina per assemblare correttamente heterocomplexes con hsp90. Qui, ci dimostrano che il componente limito di questa macchine di assemblaggio in vitro in reticolociti lisato e in vivo nelle cellule Sf9 p23. Solo una frazione dei recettori glucocorticoidi (GR) overexpressed in cellule Sf9 sono in heterocomplex con hsp90 e attivit&agrave; di associazione di steroidi, con la maggioranza dei recettori presenti come insolubili e citosolici aggregati GR. Coexpression di p23 con il GR aumenta la proporzione dei recettori citosolici in stabile GR.hsp90 heterocomplexes con attivit&agrave; di associazione steroide, un&#39;attivit&agrave; strettamente hsp90-dipendente per il GR. Coexpression di p23 elimina insolubile GR aggrega e sposta il recettore citosolico da molto grandi aggregati senza attivit&agrave; associazione steroidi a circa 600-kDa heterocomplexes con attivit&agrave; di associazione di steroidi. Questi dati ci portano a concludere che p23 agisce in vivo per stabilizzare hsp90 associazione a proteine del client.

La p23 cochaperone hsp90 &egrave; il componente limito del sistema multiproteici chaperone hsp90/hsp70 basato su in vivo dove agisce per stabilizzare la proteina client: complessi hsp90.

&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x30D5;&#x30A9;&#x30FC;&#x30E0; heterocomplexes &#x3067;&#x3042;&#x308A;&#x3001;&#x71B1;&#x30B7;&#x30E7;&#x30C3;&#x30AF;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x30B7;&#x30E3;&#x30DA;&#x30ED;&#x30F3; hsp90 &#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x898F;&#x5236;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;&#x306E;&#x69D8;&#x3005; &#x306A;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x8907;&#x5408;&#x4F53;&#x306F; hsp90 &#x3068; hsp70 &#x4E0D;&#x53EF;&#x6B20;&#x3068;&#x8C4A;&#x5BCC;&#x306A;&#x30B3;&#x30F3;&#x30DD;&#x30FC;&#x30CD;&#x30F3;&#x30C8;&#x3068;&#x30DB;&#x30C3;&#x30D7;&#x3001;hsp40&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073; p23 &#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x591A;&#x304F;&#x4F4E;&#x3044;&#x306E;&#x8C4A;&#x5BCC;&#x306A;&#x7D30;&#x80DE;&#x5185;&#x306B;&#x5B58;&#x5728;&#x3059;&#x308B;&#x975E;&#x672C;&#x8CEA;&#x7684;&#x306A; cochaperones &#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x306A;&#x3069;&#x3001;&#x591A;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x306E;&#x6A5F;&#x68B0;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x5F62;&#x6210;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x306E; overexpression &#x6B63;&#x3057;&#x304F; hsp90 &#x3068; heterocomplexes &#x3092;&#x30A2;&#x30BB;&#x30F3;&#x30D6;&#x30EB;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x306E;&#x6A5F;&#x68B0;&#x306E;&#x80FD;&#x529B;&#x3092;&#x5727;&#x5012;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x30A2;&#x30BB;&#x30F3;&#x30D6;&#x30EA;&#x306E;&#x6A5F;&#x68B0;&#x985E;&#x306E; in vitro Sf9 &#x7D30;&#x80DE;&#x3067;&#x306E;&#x7DB2;&#x72B6;&#x8D64;&#x8840;&#x7403;&#x30E9;&#x30A4;&#x30BB;&#x30FC;&#x30C8;&#x304A;&#x3088;&#x3073; in vivo &#x3067;&#x306E;&#x5236;&#x9650;&#x306E;&#x3042;&#x308B;&#x30B3;&#x30F3;&#x30DD;&#x30FC;&#x30CD;&#x30F3;&#x30C8;&#x306F;&#x3001;p23 &#x3044;&#x308B;. &#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;Sf9 &#x7D30;&#x80DE;&#x3067;&#x904E;&#x5270;&#x306B;&#x767A;&#x73FE;&#x30B0;&#x30EB;&#x30B3;&#x30B3;&#x30EB;&#x30C1;&#x30B3;&#x30A4;&#x30C9;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53; &#xFF08;GR&#xFF09; &#x306E;&#x307B;&#x3093;&#x306E;&#x4E00;&#x90E8;&#x3057;&#x304B; hsp90 &#x3068;&#x91CD;&#x5408;&#x306B;&#x304A;&#x308A;&#x30B9;&#x30C6;&#x30ED;&#x30A4;&#x30C9;&#x7D50;&#x5408;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D3;&#x30C6;&#x30A3;&#x3067;&#x4E0D;&#x6EB6;&#x89E3;&#x6027;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x7D30;&#x80DE;&#x8CEA;&#x306E; GR &#x96C6;&#x8A08;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x73FE;&#x5728;&#x306E;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x306E;&#x5927;&#x591A;&#x6570;&#x3092;&#x6301;&#x3063;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;P23 GR &#x3068;&#x306E;&#x767A;&#x73FE;&#x306E;&#x5897;&#x52A0;&#x30B9;&#x30C6;&#x30ED;&#x30A4;&#x30C9;&#x7D50;&#x5408;&#x6D3B;&#x6027;&#x3092;&#x3082;&#x3064;&#x5B89;&#x5B9A;&#x3057;&#x305F; GR.hsp90 heterocomplexes &#x3067;&#x3044;&#x308B;&#x30BE;&#x30EB;&#x6027;&#x7D30;&#x80DE;&#x8CEA;&#x306E;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x306E;&#x5272;&#x5408;&#x3001;&#x53B3;&#x5BC6;&#x306B; hsp90 &#x4F9D;&#x5B58;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D3;&#x30C6;&#x30A3;&#x306E; p23 GR. &#x767A;&#x73FE;&#x306E; GR &#x3092;&#x96C6;&#x7D04;&#x3057;&#x3066;&#x30BE;&#x30EB;&#x6027;&#x7D30;&#x80DE;&#x8CEA;&#x306E;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x30B9;&#x30C6;&#x30ED;&#x30A4;&#x30C9;&#x7D50;&#x5408;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D3;&#x30C6;&#x30A3;&#x306A;&#x304F;&#x975E;&#x5E38;&#x306B;&#x5927;&#x304D;&#x306A;&#x51DD;&#x96C6;&#x4F53;&#x304B;&#x3089;&#x7D04; 600 kDa heterocomplexes &#x306B;&#x30B9;&#x30C6;&#x30ED;&#x30A4;&#x30C9;&#x7D50;&#x5408;&#x6D3B;&#x6027;&#x3092;&#x30B7;&#x30D5;&#x30C8;&#x4E0D;&#x6EB6;&#x6027;&#x3092;&#x9664;&#x53BB;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x30C7;&#x30FC;&#x30BF;&#x305D;&#x306E; p23 in vivo hsp90 &#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C9; &#x30AF;&#x30E9;&#x30A4;&#x30A2;&#x30F3;&#x30C8; &#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x3092;&#x5B89;&#x5B9A;&#x3055;&#x305B;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x884C;&#x70BA;&#x3092;&#x7DE0;&#x7D50;&#x3059;&#x308B;&#x79C1;&#x305F;&#x3061;&#x3092;&#x5C0E;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x305D;&#x308C;&#x30AF;&#x30E9;&#x30A4;&#x30A2;&#x30F3;&#x30C8; &#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x3092;&#x5B89;&#x5B9A;&#x3055;&#x305B;&#x308B;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x679C;&#x305F;&#x3057;&#x307E;&#x3059; hsp90 cochaperone p23 in vivo &#x591A;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x30B7;&#x30E3;&#x30DA;&#x30ED;&#x30F3; hsp90 hsp70 &#x30D9;&#x30FC;&#x30B9; &#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E0;&#x306E;&#x5236;&#x9650;&#x306E;&#x3042;&#x308B;&#x30B3;&#x30F3;&#x30DD;&#x30FC;&#x30CD;&#x30F3;&#x30C8;&#x3067;&#x3059;&#xFF1A; hsp90 &#x8907;&#x96D1;&#x3002;

&#xB2E4;&#xC591; &#xD55C; &#xC2E0;&#xD638; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC591;&#xC2DD; heterocomplexes&#xC640; &#xD568;&#xAED8; &#xACE0; &#xC5F4; &#xCDA9;&#xACA9; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xBCF4;&#xD638;&#xC790; hsp90&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xADDC;&#xC81C;. &#xC774; &#xB2E8;&#xC9C0; &#xB4F1; hsp90 hsp70 &#xADFC;&#xBCF8; &#xC801;&#xC774; &#xACE0; &#xD48D;&#xBD80;&#xD55C; &#xAD6C;&#xC131; &#xC694;&#xC18C; &#xBC0F; &#xD649;, hsp40, p23 &#xC140;&#xC5D0; &#xD6E8;&#xC52C; &#xB354; &#xB0AE;&#xC740; &#xD48D;&#xBD80;&#xC5D0; &#xC788;&#xB294; &#xBD88;&#xD544;&#xC694; cochaperones&#xB85C; multiprotein &#xAE30;&#xACC4;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xD615;&#xC131; &#xB41C;&#xB2E4;. &#xC2E0;&#xD638; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; overexpression &#xC81C;&#xB300;&#xB85C; &#xC870;&#xB9BD; hsp90&#xC640; heterocomplexes&#xC774; &#xAE30;&#xACC4;&#xC758; &#xC6A9;&#xB7C9;&#xC744; &#xC555;&#xB3C4; &#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC5EC;&#xAE30;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00;&#xC774; &#xC5B4;&#xC148;&#xBE14;&#xB9AC; &#xAE30;&#xACC4; reticulocyte lysate &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; vivo&#xC5D0;&#xC11C; Sf9 &#xC140;&#xC5D0;&#xC5D0;&#xC11C; &#xCCB4; &#xC678;&#xC758; &#xC81C;&#xD55C; &#xAD6C;&#xC131; &#xC694;&#xC18C;&#xB294; p23 &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. Glucocorticoid &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; (GR) Sf9 &#xC140;&#xC5D0; overexpressed&#xC758; &#xC77C;&#xBD80; &#xBD84; &#xC77C; &#xBFD0;&#xC778; hsp90&#xC640; heterocomplex&#xC5D0; &#xC788;&#xACE0; &#xB300;&#xBD80;&#xBD84; &#xBD88;&#xC6A9; &#xC131; &#xBC0F; cytosolic GR &#xC9D1;&#xACC4;&#xB85C; &#xD604;&#xC7AC; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4;&#xC758; &#xC2A4;&#xD14C;&#xB85C;&#xC774;&#xB4DC; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xD65C;&#xB3D9;. P23&#xB294; GR&#xACFC;&#xC758; coexpression &#xC2A4;&#xD14C;&#xB85C;&#xC774;&#xB4DC; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xD65C;&#xB3D9;&#xC73C;&#xB85C; &#xC548;&#xC815;&#xC801;&#xC778; GR.hsp90 heterocomplexes&#xC5D0; &#xC788;&#xB294; cytosolic &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4;&#xC758; &#xBE44;&#xC728; &#xC99D;&#xAC00;, p23 GR. Coexpression&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC5C4;&#xACA9; &#xD558; &#xAC8C; hsp90 &#xC885;&#xC18D; &#xC791;&#xC5C5; &#xC81C;&#xAC70; GR&#xB97C; &#xC9D1;&#xACC4; &#xD558; &#xACE0; &#xC2A4;&#xD14C;&#xB85C;&#xC774;&#xB4DC; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xD65C;&#xB3D9; &#xC2A4;&#xD14C;&#xB85C;&#xC774;&#xB4DC; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xD65C;&#xB3D9; &#xC5C6;&#xC774; &#xB9E4;&#xC6B0; &#xD070; &#xC9D1;&#xACC4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC57D; 600-kDa heterocomplexes cytosolic &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; &#xC774;&#xB3D9; &#xBD88;&#xC6A9; &#xC131;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xB370;&#xC774;&#xD130; &#xADF8; p23 &#xC5ED;&#xD560; hsp90 &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xD074;&#xB77C;&#xC774;&#xC5B8;&#xD2B8; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC548;&#xC815;&#xD654; vivo&#xC5D0;&#xC11C; &#xACB0;&#xB860;&#xC5D0; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB97C; &#xB04C;.

Hsp90 cochaperone p23 &#xC774;&#xB2E4; vivo&#xC5D0;&#xC11C; multiprotein hsp90/hsp70 &#xAE30;&#xBC18; &#xBCF4;&#xD638;&#xC790; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C;&#xC758; &#xC81C;&#xD55C; &#xAD6C;&#xC131; &#xC694;&#xC18C; &#xC5B4;&#xB514; &#xD074;&#xB77C;&#xC774;&#xC5B8;&#xD2B8; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC548;&#xC815;&#xD654; &#xC5ED;&#xD560;: hsp90 &#xBCF5;&#xC7A1; &#xD55C;.

Una variedad de prote&iacute;nas forma heterocomplejos con y son reguladas por el calor choque Prote&iacute;na chaperona hsp90 de se&ntilde;alizaci&oacute;n. Estos complejos est&aacute;n formados por una maquinaria multiprote&iacute;nas, incluyendo hsp90 y hsp70 como componentes esenciales y abundantes y Hop, hsp40 y p23 como cochaperones no esenciales que est&aacute;n presentes en mucho menor abundancia en las c&eacute;lulas. Sobreexpresi&oacute;n de prote&iacute;nas de se&ntilde;alizaci&oacute;n puede desbordar la capacidad de esta maquinaria para montar correctamente heterocomplejos con hsp90. Aqu&iacute;, demostramos que el componente limitante de esta maquinaria de montaje in vitro en reticulocitos lisado e in vivo en c&eacute;lulas Sf9 es p23. S&oacute;lo una fracci&oacute;n de receptores de glucocorticoides (GR) sobreexpresa en c&eacute;lulas Sf9 est&aacute;n en heterocomplex con hsp90 y tienen actividad esteroide, con la mayor&iacute;a de los receptores presentes como agregados GR tanto insolubles y citos&oacute;licas. Coexpresi&oacute;n de p23 con el GR aumenta la proporci&oacute;n de receptores citos&oacute;licas que se encuentran en heterocomplejos de GR.hsp90 estable con actividad obligatoria esteroide, una actividad estrictamente hsp90-dependiente de la coexpresi&oacute;n de GR. de p23 elimina el insoluble GR agregados y cambia el receptor citos&oacute;lico de agregados muy grandes sin actividad obligatoria esteroide a aproximadamente 600-kDa heterocomplejos con actividad obligatoria esteroide. Estos datos nos llevan a concluir que P23 act&uacute;a en vivo para estabilizar hsp90 Uni&oacute;n a prote&iacute;nas del cliente.

La hsp90 cochaperone p23 es el componente limitante del sistema multiprote&iacute;nas chaperona hsp90/hsp70-basado en vivo donde act&uacute;a para estabilizar la prote&iacute;na del cliente: hsp90 complejo.

Pifithrin-&alpha; (PFTalpha) &#x6700;&#x521D;&#x88AB;&#x8BA4;&#x4E3A;&#x662F;&#x4E00;&#x79CD;&#x7279;&#x5B9A;&#x7684;&#x6291;&#x5236;&#x5242;&#x7531;&#x80BF;&#x7624;&#x6291;&#x5236;&#x86CB;&#x767D; p53 &#x4FE1;&#x53F7;&#x3002;&#x7136;&#x800C;&#xFF0C;&#x53D1;&#x73B0; pifithrin &#x7684;&#x5B9E;&#x9A8C;&#x5BA4;&#x6700;&#x8FD1;&#x62A5;&#x544A;&#x5927;&#x9662;&#x4E5F;&#x6291;&#x5236;&#x70ED;&#x4F11;&#x514B;&#x53CA;&#x7CD6;&#x76AE;&#x8D28;&#x6FC0;&#x7D20;&#x53D7;&#x4F53; (GR) &#x4FE1;&#x53F7;&#xFF0C;&#x548C;&#x4ED6;&#x4EEC;&#x5EFA;&#x8BAE; PFTalpha &#x7684;&#x76EE;&#x6807;&#x662F;&#x5171;&#x540C;&#x7684;&#x6240;&#x6709;&#x4E09;&#x4E2A;&#x4FE1;&#x53F7;&#x8F6C;&#x5BFC;&#x901A;&#x8DEF;&#xFF0C;&#x5982;&#x70ED;&#x4F11;&#x514B;&#x86CB;&#x767D; 90 &#x70ED;&#x4F11;&#x514B;&#x86CB;&#x767D; 70 &#x57FA;&#x4E8E;&#x4F34;&#x4FA3;&#x673A;&#x68B0;&#x56E0;&#x7D20; &#xFF08;&#x79D1;&#x3001; E.A.&#x3001; &#x6D85;&#x5179;&#x7EB3;&#x8BFA;&#x592B;&#xFF0C;N.&#x3001; Komarov&#x3001; P.G.&#x3001; &#x5E03;&#x83B1;&#x3001; &#x4E94;.M.&#x3001; &#x738B;&#xFF0C;K.&#x548C;&#x53E4;&#x5FB7;&#x79D1;&#x592B;&#xFF0C;A.&#x8BC9; (2003&#x5E74;) J.Biol.&#x5316;&#x5B66; 27815465 15468)&#x3002;&#x56E0;&#x4E3A;&#x5B83;&#x662F;&#x91CD;&#x8981;&#x7684;&#x8FD9;&#x79CD;&#x673A;&#x5236;&#x6765;&#x6807;&#x8BC6;&#x552F;&#x4E00;&#x7684;&#x4F34;&#x4FA3;&#x884C;&#x52A8;&#x6291;&#x5236;&#x673A;&#x7406;&#x7814;&#x7A76;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x5BA1;&#x67E5;&#x4E86;&#x8F6C;&#x5F55;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x5BF9; PFTalpha &#x7684;&#x5F71;&#x54CD;&#x3001; &#x70ED;&#x4F11;&#x514B;&#x86CB;&#x767D; 90 heterocomplex &#x7A0B;&#x5E8F;&#x96C6;&#x548C; p53 &#x548C; GR &#x70ED;&#x4F11;&#x514B;&#x86CB;&#x767D; 90 &#x4F9D;&#x8D56;&#x6838;&#x6613;&#x4F4D;&#x3002;PFTalpha &#x51E1;&#x963B;&#x6B62; p53 &#x4ECB;&#x5BFC;&#x8BF1;&#x5BFC; p21/Waf-1 &#x5728;&#x4EBA;&#x80DA;&#x80BE;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E2D;&#x7684;&#x6D53;&#x5EA6;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x89C2;&#x5BDF;&#x5230;&#x6C2F;&#x9709;&#x7D20;&#x4E59;&#x9170;&#x57FA;&#x8F6C;&#x79FB;&#x9176;&#x8BB0;&#x8005;&#x5728; LMCAT &#x7EC6;&#x80DE;&#x4ECB;&#x5BFC; GR &#x8BF1;&#x5BFC;&#x65E0;&#x6291;&#x5236;&#x7684;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;PFTalpha &#x505A;&#x7684;&#x90A3;&#x6837;&#xFF0C;&#x4F46;&#x662F;&#xFF0C;&#x5BFC;&#x81F4;&#x5DE6;&#x7684;&#x79FB;&#x4F4D;&#x5730;&#x585E;&#x7C73;&#x677E;&#x5242;&#x91CF;&#x53CD;&#x5E94;&#x66F2;&#x7EBF;&#x4E2D;&#x901A;&#x8FC7;&#x589E;&#x52A0;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5185;&#x7684;&#x5730;&#x585E;&#x7C73;&#x677E;&#x6D53;&#x5EA6;&#xFF0C;&#x663E;&#x7136;&#x4E89;&#x593A;&#x5730;&#x585E;&#x7C73;&#x677E;&#x5C04;&#x6D41;&#x4ECE;&#x8BE5;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x3002;P53 &#x6216;&#x4E0E;&#x70ED;&#x4F11;&#x514B;&#x86CB;&#x767D; 90 &#x548C; immunophilins GR heterocomplexes &#x5927;&#x4F1A;&#x6CA1;&#x6709;&#x53D7;&#x5230;&#x4F53;&#x5185;&#x6216;&#x4F53;&#x5916;&#x7684; PFTalpha &#x5E76;&#x4E0D;&#x5F71;&#x54CD;&#x6216;&#x8F6C;&#x5F55;&#x56E0;&#x5B50;&#x6838;&#x6613;&#x4F4D;&#x3002;&#x56E0;&#x6B64;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x7ED3;&#x675F; PFTalpha &#x4E0D;&#x4F1A;&#x4E0D;&#x4F1A;&#x59A8;&#x788D; GR &#x4ECB;&#x5BFC;&#x611F;&#x5E94;&#x6216;&#x529F;&#x80FD;&#x7684;&#x4F34;&#x4FA3;&#x673A;&#x68B0;&#xFF0C;&#x5E76;&#xFF0C;&#x4E3A;&#x672C;&#x6765;&#x4EE5;&#x4E3A;&#xFF0C;&#x5B83;&#x53EF;&#x80FD;&#x4E13;&#x95E8;&#x6291;&#x5236; p53 &#x4FE1;&#x53F7;&#x7531;&#x4EE3;&#x7406;&#x9636;&#x6BB5;&#x540E;&#x5411;&#x6838; p53 &#x6613;&#x4F4D;&#x3002;

Pifithrin-&alpha; &#x6291;&#x5236; p53 &#x80BF;&#x7624;&#x6291;&#x5236;&#x86CB;&#x767D;&#x4E0E;&#x70ED;&#x4F11;&#x514B;&#x86CB;&#x767D; 90 &#x548C;&#x5176;&#x6838;&#x6613;&#x4F4D;&#x4EA4;&#x4E92;&#x4E4B;&#x540E;&#x7684;&#x4FE1;&#x53F7;&#x3002;

Pifithrin-alpha (PFTalpha) was originally thought to be a specific inhibitor of signaling by the tumor suppressor protein p53. However, the laboratory that discovered pifithrin recently reported that the compound also inhibits heat shock and glucocorticoid receptor (GR) signaling, and they suggested that PFTalpha targets a factor common to all three signal transduction pathways, such as the hsp90/hsp70-based chaperone machinery (Komarova, E. A., Neznanov, N., Komarov, P. G., Chernov, M. V., Wang, K., and Gudkov, A. V. (2003) J. Biol. Chem. 278, 15465-15468). Because it is important for the mechanistic study of this machinery to identify unique inhibitors of chaperone action, we have examined the effect of PFTalpha on transcriptional activation, the hsp90 heterocomplex assembly, and hsp90-dependent nuclear translocation for both p53 and the GR. At concentrations where PFTalpha blocks p53-mediated induction of p21/Waf-1 in human embryonic kidney cells, we observed no inhibition of GR-mediated induction of a chloramphenicol acetyl transferase reporter in LMCAT cells. PFTalpha did, however, cause a left shift in the dexamethasone dose response curve by increasing intracellular dexamethasone concentration, apparently by competing for dexamethasone efflux from the cell. The assembly of p53 or GR heterocomplexes with hsp90 and immunophilins was not affected by PFTalpha either in vivo or in vitro and did not affect the nuclear translocation of either transcription factor. Thus, we conclude that PFTalpha does not inhibit GR-mediated induction or the function of the chaperone machinery, and, as originally thought, it may specifically inhibit p53 signaling by acting at a stage after p53 translocation to the nucleus.

Pifithrin-alpha inhibits p53 signaling after interaction of the tumor suppressor protein with hsp90 and its nuclear translocation.

Pifithrin-alpha (PFTalpha) &eacute;tait initialement consid&eacute;r&eacute; comme un inhibiteur sp&eacute;cifique de la signalisation par le suppresseur de tumeur prot&eacute;ine p53. Toutefois, le laboratoire qui a d&eacute;couvert le pifithrin a r&eacute;cemment indiqu&eacute; que le compos&eacute; inhibe aussi le choc thermique et la signalisation de r&eacute;cepteur (GR) de glucocortico&iuml;des, et ils ont sugg&eacute;r&eacute; que PFTalpha cible un facteur commun &agrave; tous les trois signaux voies de transduction, tels que le m&eacute;canisme de base de hsp90/hsp70 chaperon (Komarova, E. A., Neznanov, N., Komarov, P. G., Chernov, V. M., Wang, K. et Goudkov, A. c. (2003) J. Biol. chem. 27815465 15468). Parce qu&#39;il est important pour l&#39;&eacute;tude m&eacute;canistique de cette machinerie pour identifier les inhibiteurs uniques d&#39;action Chaperon, nous avons examin&eacute; l&#39;effet du PFTalpha sur l&#39;activation de la transcription, la hsp90 h&eacute;t&eacute;rocomplexe Assembl&eacute;e et translocation nucl&eacute;aire d&eacute;pendant de la hsp90 pour p53 et le GR. &Agrave; des concentrations o&ugrave; PFTalpha bloque induction par p53 p21/Waf-1 dans les cellules r&eacute;nales embryonnaires humaines, nous avons n&#39;observ&eacute; aucune inhibition d&#39;induction par GR de reporter au chloramph&eacute;nicol ac&eacute;tyl transf&eacute;rase dans les cellules LMCAT. PFTalpha cependant, causer un d&eacute;placement vers la gauche de la courbe dose-r&eacute;ponse dexam&eacute;thasone en augmentant la concentration intracellulaire de dexam&eacute;thasone, apparemment en concurrence pour l&#39;efflux de dexam&eacute;thasone de la cellule. L&#39;Assembl&eacute;e de p53 ou heterocomplexes GR avec hsp90 et immunophilins n&#39;est pas affect&eacute;e par le PFTalpha in vivo ou in vitro et n&#39;a pas affect&eacute; la translocation nucl&eacute;aire d&#39;un facteur de transcription. Ainsi, nous concluons que PFTalpha n&#39;inhibe pas induction par GR ou le fonctionnement de la machinerie de chaperon et, comme pr&eacute;vu, il peut inhiber sp&eacute;cifiquement p53 signalisation en agissant &agrave; un stade apr&egrave;s p53 translocation vers le noyau.

Pifithrin-alpha inhibe la p53 signalisation apr&egrave;s l&#39;interaction de la prot&eacute;ine suppresseur de tumeur avec hsp90 et sa translocation nucl&eacute;aire.

Pifithrin-alpha hemmt p53-Signalisierung nach Interaktion des Tumorsuppressor-Protein Hsp90 und mit seinen nuklearen Translokation.

Pifithrin-alpha (PFTalpha) &egrave; stato originariamente pensato per essere un inibitore specifico di segnalazione per la proteina di soppressore tumorale p53. Tuttavia, il laboratorio che ha scoperto pifithrin ha recentemente riferito che il composto inibisce anche la scossa di calore e segnalazione di glucocorticoidi recettore (GR), e hanno suggerito che PFTalpha gli obiettivi di un fattore comune a tutti i tre segnale vie di trasduzione del, come ad esempio i macchinari di chaperone hsp70/hsp90-basato (Komarova, E. A., Neznanov, N., Komarov, P. G., Chernov, M. V., Wang, K. e Gudkov, A. V. (2003) j Biol Chem 27815465-15468). Perch&eacute; &egrave; importante per lo studio di questo macchinario per identificare inibitori unici di azione di chaperone meccanicistico, abbiamo esaminato l&#39;effetto della PFTalpha su attivazione trascrizionale, hsp90 heterocomplex assemblaggio e traslocazione nucleare hsp90-dipendente sia per p53 e il GR. A concentrazioni dove PFTalpha blocca p53-mediata ad induzione di p21/Waf-1 in cellule di rene embrionale umano, abbiamo non osservato alcuna inibizione dell&#39;induzione GR-mediata di un reporter di cloramfenicolo acetil transferasi nelle cellule LMCAT. PFTalpha ha fatto, tuttavia, a causa uno spostamento a sinistra della curva dose-risposta Desametasone aumentando la concentrazione intracellulare di Desametasone, apparentemente da competizione per efflusso Desametasone dalla cellula. L&#39;Assemblea di p53 o heterocomplexes GR con hsp90 e immunophilins non &egrave; stata influenzata da PFTalpha o in vivo o in vitro e non influenza la traslocazione nucleare di fattore della trascrizione. Cos&igrave;, noi concludere che PFTalpha non inibisce induzione GR-mediata o la funzione della macchina tuttofare e, come inizialmente pensato, pu&ograve; inibire specificamente la p53 segnalazione agendo in una fase dopo la traslocazione di p53 nel nucleo.

Pifithrin-alfa inibisce p53 segnalazione dopo l&#39;interazione della proteina soppressore tumorale con hsp90 e sua traslocazione nucleare.

Pifithrin-&alpha; (PFTalpha) &#x306F;&#x3001;&#x3082;&#x3068;&#x3082;&#x3068;&#x6291;&#x5236;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA; p53 &#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x4FE1;&#x53F7;&#x306E;&#x7279;&#x7570;&#x7684;&#x963B;&#x5BB3;&#x5264;&#x3068;&#x8003;&#x3048;&#x3089;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x305F;&#x3060;&#x3057;&#x3001;pifithrin &#x3092;&#x767A;&#x898B;&#x3057;&#x305F;&#x7814;&#x7A76;&#x5BA4;&#x6700;&#x8FD1;&#x5316;&#x5408;&#x7269;&#x3082;&#x30D2;&#x30FC;&#x30C8; &#x30B7;&#x30E7;&#x30C3;&#x30AF;&#x3068;&#x30B0;&#x30EB;&#x30B3;&#x30B3;&#x30EB;&#x30C1;&#x30B3;&#x30A4;&#x30C9;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53; &#xFF08;GR&#xFF09; &#x4F1D;&#x9054;&#x3092;&#x963B;&#x5BB3;&#x3059;&#x308B;&#x3001;&#x5F7C;&#x3089;&#x306F; PFTalpha&#x3001;&#x30B7;&#x30E3;&#x30DA;&#x30ED;&#x30F3; hsp90 hsp70 &#x30D9;&#x30FC;&#x30B9;&#x6A5F;&#x68B0;&#x306A;&#x3069;&#x306B;&#x3001;3 &#x3064;&#x3059;&#x3079;&#x3066;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x306E;&#x4F1D;&#x9054;&#x7D4C;&#x8DEF;&#x306B;&#x5171;&#x901A;&#x306E;&#x8981;&#x56E0;&#x3092;&#x5BFE;&#x8C61;&#x306B;&#x63D0;&#x6848;&#x3092;&#x5831;&#x544A; &#xFF08;Komarova&#x3001;e. a.&#x3001;Neznanov&#x3001;N.&#x3001;&#x30B3;&#x30DE;&#x30ED;&#x30D5;&#x3001;P. G.&#x3001;&#x30C1;&#x30A7;&#x30EB;&#x30CE;&#x30D5;, M. V.&#x3001;&#x738B;&#x3001;k. &#x3068; Gudkov&#x3001;a. v. (2003&#x5E74;) J. Biol. chem. 278&#x3001;15465 15468)&#x3002;&#x30B7;&#x30E3;&#x30DA;&#x30ED;&#x30F3; &#x30A2;&#x30AF;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x306E;&#x30E6;&#x30CB;&#x30FC;&#x30AF;&#x306A;&#x963B;&#x5BB3;&#x5264;&#x3092;&#x8B58;&#x5225;&#x3059;&#x308B;&#x306B;&#x306F;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x6A5F;&#x68B0;&#x306E;&#x6A5F;&#x69CB;&#x306E;&#x89E3;&#x660E;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x91CD;&#x8981;&#x3067;&#x3059;&#x306E;&#x3067;&#x3001;PFTalpha &#x8EE2;&#x5199;&#x6D3B;&#x6027;&#x306B;&#x53CA;&#x307C;&#x3059;&#x5F71;&#x97FF;&#x3001;hsp90 &#x91CD;&#x5408;&#x30A2;&#x30BB;&#x30F3;&#x30D6;&#x30EA;&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073; p53 &#x304A;&#x3088;&#x3073; GR hsp90 &#x4F9D;&#x5B58;&#x6027;&#x6838;&#x79FB;&#x884C;&#x3092;&#x8ABF;&#x3079;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3069;&#x3053; PFTalpha p21/Waf 1 &#x4EBA;&#x9593;&#x306E;&#x840C;&#x82BD;&#x671F;&#x306E;&#x814E;&#x81D3;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E; p53 &#x3092;&#x4ECB;&#x3059;&#x308B;&#x8A98;&#x5C0E;&#x30D6;&#x30ED;&#x30C3;&#x30AF;&#x306E;&#x6FC3;&#x5EA6;&#x3067;&#x30AF;&#x30ED;&#x30E9;&#x30E0;&#x30D5;&#x30A7;&#x30CB; &#x30B3;&#x30FC;&#x30EB; &#x30A2;&#x30BB;&#x30C1;&#x30EB;&#x8EE2;&#x79FB;&#x9175;&#x7D20;&#x8A18;&#x8005; LMCAT &#x7D30;&#x80DE;&#x3067;&#x306E; GR &#x3092;&#x4ECB;&#x3059;&#x308B;&#x8A98;&#x5C0E;&#x306E;&#x963B;&#x5BB3;&#x306F;&#x3089;&#x308C;&#x305A;&#x3002;PFTalpha &#x306F;&#x30C7;&#x30AD;&#x30B5;&#x30E1;&#x30BF;&#x30BE;&#x30F3;&#x6D41;&#x51FA;&#x306E;&#x30BB;&#x30EB;&#x304B;&#x3089;&#x306E;&#x7AF6;&#x5408;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x7D30;&#x80DE;&#x5185;&#x30C7;&#x30AD;&#x30B5;&#x30E1;&#x30BF;&#x30BE;&#x30F3;&#x6FC3;&#x5EA6;&#x3069;&#x3046;&#x3084;&#x3089;&#x5897;&#x3001;&#x30C7;&#x30AD;&#x30B5;&#x30E1;&#x30BF;&#x30BE;&#x30F3;&#x7528;&#x91CF;&#x5FDC;&#x7B54;&#x66F2;&#x7DDA;&#x306E;&#x5DE6;&#x30B7;&#x30D5;&#x30C8;&#x3092;&#x305F;&#x3060;&#x3057;&#x3001;&#x539F;&#x56E0;&#x3067;&#x3057;&#x305F;&#x3002;P53 &#x307E;&#x305F;&#x306F; GR heterocomplexes hsp90 &#x3068; immunophilins &#x306E;&#x30A2;&#x30BB;&#x30F3;&#x30D6;&#x30EA; PFTalpha in vivo &#x3084; in vitro &#x3092;&#x53D7;&#x3051;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3067;&#x3057;&#x305F;&#x3001;&#x3069;&#x3061;&#x3089;&#x306E;&#x8EE2;&#x5199;&#x56E0;&#x5B50;&#x306E;&#x6838;&#x79FB;&#x884C;&#x306B;&#x5F71;&#x97FF;&#x3057;&#x306A;&#x304B;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x3057;&#x305F;&#x304C;&#x3063;&#x3066;&#x3001;&#x6211;&#x3005; PFTalpha GR &#x4EF2;&#x4ECB;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x8A98;&#x5C0E;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x30B7;&#x30E3;&#x30DA;&#x30ED;&#x30F3;&#x6A5F;&#x68B0;&#x306E;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3092;&#x963B;&#x5BB3;&#x3057;&#x306A;&#x3044;&#x3068;&#x7D50;&#x8AD6;&#x3057;&#x3001;&#x5F53;&#x521D;&#x306E;&#x8003;&#x3048;&#x3001;&#x305D;&#x308C;&#x5177;&#x4F53;&#x7684;&#x306B;&#x6838;&#x306B; p53 &#x8EE2;&#x5EA7;&#x5F8C;&#x306E;&#x6BB5;&#x968E;&#x3067;&#x6F14;&#x6280;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066; p53 &#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#x3092;&#x963B;&#x5BB3;&#x3059;&#x308B;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

Pifithrin &#x30A2;&#x30EB;&#x30D5;&#x30A1; hsp90 &#x3068;&#x305D;&#x306E;&#x6838;&#x8EE2;&#x5EA7;&#x3068;&#x816B;&#x760D;&#x6291;&#x5236;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x5F8C;&#x306E; p53 &#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#x3092;&#x963B;&#x5BB3;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

Pifithrin-&#xC54C;&#xD30C; (PFTalpha)&#xB294; &#xC6D0;&#xB798; &#xC2E0;&#xD638;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC885;&#xC591; &#xC5B5;&#xC81C; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; p 53&#xC758; &#xD2B9;&#xC815; &#xC5B5;&#xC81C;&#xC81C; &#xB77C;&#xACE0; &#xC0DD;&#xAC01;. &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098;, &#xBC1C;&#xACAC; &#xD588;&#xB2E4; pifithrin &#xC2E4;&#xD5D8;&#xC2E4; &#xCD5C;&#xADFC; &#xBCF4;&#xACE0; &#xD654;&#xD569;&#xBB3C;&#xC740; &#xB610;&#xD55C; &#xC5F4; &#xCDA9;&#xACA9; &#xBC0F; glucocorticoid &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; (GR) &#xC2E0;&#xD638; &#xC5B5;&#xC81C; &#xD55C;&#xB2E4; &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC740; PFTalpha &#xBAA8;&#xB4E0; &#xC138; &#xAC00;&#xC9C0; &#xC2E0;&#xD638; &#xC804;&#xB2EC; &#xACBD;&#xB85C;, &#xBCF4;&#xD638;&#xC790; hsp90/hsp70 &#xAE30;&#xBC18; &#xAE30;&#xACC4; &#xAC19;&#xC740; &#xACF5;&#xD1B5; &#xC694;&#xC18C;&#xB97C; &#xB300;&#xC0C1; &#xC81C;&#xC548; (Komarova, E. A. Neznanov, &#xBD81; &#xC544; &#xC77C;, Komarov, P. G., Chernov, M. V., &#xC655;, &#xACF5;&#xD654;&#xAD6D;, &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; Gudkov, A. V. (2003) J. Biol. &#xD654;&#xD559; 27815465 15468). &#xBCF4;&#xD638;&#xC790; &#xB3D9;&#xC791;&#xC758; &#xACE0;&#xC720;&#xD55C; &#xC5B5;&#xC81C;&#xC81C;&#xB97C; &#xC2DD;&#xBCC4; &#xD558;&#xB294;&#xC774; &#xAE30;&#xACC4;&#xC758; &#xAE30;&#xACC4; &#xB860; &#xC801;&#xC778; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC911;&#xC694; &#xD558;&#xAE30; &#xB54C;&#xBB38;&#xC5D0; transcriptional &#xD65C;&#xC131;&#xD654;&#xC5D0; Pftalpha&#xC758; &#xC601;&#xD5A5;, hsp90 heterocomplex &#xC5B4;&#xC148;&#xBE14;&#xB9AC;&#xC640; p53 &#xBC0F;&#xB294; GR hsp90 &#xC885;&#xC18D; &#xD575; &#xC804; &#xC0B4;&#xD3B4;&#xBCF4;&#xC558;&#xB2E4;. PFTalpha p21/Waf-1 &#xCD08;&#xC744; &#xD558; &#xC5EC; &#xC778;&#xAC04; &#xBC30;&#xC544; &#xC2E0;&#xC7A5; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0;&#xC11C; p53 &#xC911;&#xC7AC; &#xC720;&#xB3C4; &#xCC28;&#xB2E8; &#xD558;&#xB294; &#xB18D;&#xB3C4;&#xC5D0;&#xC11C; LMCAT &#xC140;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD398;&#xB2C8; &#xC544; &#xC138; &#xD2F8; &#xC804;&#xC774; &#xAE30;&#xC790;&#xC758; GR &#xC911;&#xC7AC; &#xC720;&#xB3C4;&#xC758; &#xC544;&#xBB34; &#xC800;&#xD574;&#xB97C; &#xAD00;&#xCC30; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098; PFTalpha &#xC140;&#xC5D0;&#xC11C; dexamethasone &#xACBD;&#xACFC; &#xB300; &#xD55C; &#xACBD;&#xC7C1;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xBD84;&#xBA85;&#xD788; &#xC138;&#xD3EC;&#xB0B4; dexamethasone &#xB18D;&#xB3C4; &#xC99D;&#xAC00; &#xC2DC;&#xCF1C; dexamethasone &#xBCF5;&#xC6A9;&#xB7C9; &#xC751;&#xB2F5; &#xACE1;&#xC120;&#xC5D0; &#xC67C;&#xCABD;&#xB41C; &#xC774;&#xB3D9;&#xC73C;&#xB85C; &#xC778;&#xD574;. P53&#xC758; hsp90&#xC640; immunophilins GR heterocomplexes &#xC5B4;&#xC148;&#xBE14;&#xB9AC; PFTalpha &#xC0DD;&#xCCB4; &#xC870;&#xAC74; &#xB610;&#xB294; &#xC0DD;&#xCCB4; &#xC678;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC601;&#xD5A5;&#xC744; &#xBC1B;&#xC9C0;&#xB294; &#xACE0; &#xC5B4;&#xB290; &#xB179;&#xC74C; &#xBC29;&#xC1A1; &#xC694;&#xC778;&#xC758; &#xD575; &#xC804;&#xC5D0;&#xB294; &#xC601;&#xD5A5;&#xC744; &#xBBF8;&#xCE58;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC558;&#xB2E4;. &#xB530;&#xB77C;&#xC11C;, &#xC6B0;&#xB9AC; PFTalpha GR &#xC911;&#xC7AC; &#xC720;&#xB3C4; &#xB610;&#xB294; &#xBCF4;&#xD638;&#xC790; &#xAE30;&#xACC4;&#xC758; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC744; &#xC5B5;&#xC81C; &#xD558;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xACB0;&#xB860; &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0;, &#xC6D0;&#xB798; &#xC0DD;&#xAC01;&#xC5D0;, &#xADF8;&#xAC83;&#xC740; &#xD2B9;&#xD788; &#xD575;&#xC5D0; p53 &#xC804; &#xD6C4; &#xBB34;&#xB300;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC5F0;&#xAE30; &#xD558; &#xC5EC; p53 &#xC2E0;&#xD638; &#xC5B5;&#xC81C; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Pifithrin-&#xC54C;&#xD30C; p53 hsp90&#xC640; &#xADF8;&#xAC83;&#xC758; &#xD575; &#xC804; &#xC885;&#xC591; &#xC5B5;&#xC81C; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9; &#xD6C4; &#xC2E0;&#xD638;&#xB97C; &#xC5B5;&#xC81C; &#xD55C;&#xB2E4;.

Pifithrin-alfa (PFTalpha) fue pensada originalmente para ser un inhibidor espec&iacute;fico de la se&ntilde;alizaci&oacute;n por la prote&iacute;na p53 supresora de tumor. Sin embargo, el laboratorio que descubri&oacute; pifithrin inform&oacute; recientemente que el compuesto tambi&eacute;n inhibe el choque t&eacute;rmico y glucocorticoide se&ntilde;alizaci&oacute;n del receptor (GR), y sugirieron que PFTalpha dirige un factor com&uacute;n a todos tres se&ntilde;al v&iacute;as de transducci&oacute;n, tales como la maquinaria de chaperona hsp90/hsp70-base de (Komarova, E. A., Neznanov, N., Komarov, P. G., Chernov, M. V., Wang, K. y Goudkov, A. V. (2003) J. Biol. Chem. 27815465-15468). Porque es importante para el estudio mec&aacute;nico de esta maquinaria para identificar inhibidores &uacute;nicos de acci&oacute;n de acompa&ntilde;ante, hemos examinado el efecto de PFTalpha en la activaci&oacute;n transcripcional, hsp90 heterocomplex Asamblea y translocaci&oacute;n nuclear dependiente de hsp90 para p53 y el GR. A concentraciones donde PFTalpha bloquea la inducci&oacute;n mediada por p53, p21/Waf-1 en c&eacute;lulas de ri&ntilde;&oacute;n embrionario humano, no observamos ninguna inhibici&oacute;n de inducci&oacute;n GR-mediada de reportero en c&eacute;lulas LMCAT cloranfenicol acetil transferasa. PFTalpha, sin embargo, provocaron un cambio de izquierda en la curva de respuesta de dosis de dexametasona incrementando la concentraci&oacute;n intracelular de la dexametasona, aparentemente compitiendo por emanaci&oacute;n de dexametasona de la c&eacute;lula. La Asamblea de p53 o GR heterocomplejos con hsp90 e inmunofilinas no fue afectada por PFTalpha in vivo o in vitro y no afect&oacute; la translocaci&oacute;n nuclear de cualquier factor de transcripci&oacute;n. As&iacute;, nos concluir que PFTalpha no inhibe GR-mediada de la inducci&oacute;n o la funci&oacute;n de la maquinaria de acompa&ntilde;ante y, como se pensaba, que puede inhibir espec&iacute;ficamente p53 se&ntilde;alizaci&oacute;n actuando en un escenario despu&eacute;s de p53 translocaci&oacute;n al n&uacute;cleo.

Pifithrin-alfa inhibe p53 se&ntilde;alizaci&oacute;n tras la interacci&oacute;n de la prote&iacute;na supresora de tumores con hsp90 y su translocaci&oacute;n nuclear.

&#x50CF;&#x5176;&#x4ED6;&#x6C27;&#x5316;&#x6C2E;&#x5408;&#x9176; (NOS)&#x3001; &#x6C27;&#x5316;&#x6C2E;&#x5408;&#x9176; (nNOS) &#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x8425;&#x4E1A;&#x989D;&#x548C;&#x6D3B;&#x52A8;&#x5747;&#x53D7;&#x65E0;&#x5904;&#x4E0D;&#x5728;&#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#x4F34;&#x4FA3;&#x70ED;&#x4F11;&#x514B;&#x86CB;&#x767D; 90&#x3002;&#x524D;&#x9762;&#x663E;&#x793A; nNOS &#x7684;&#x5185;&#x6E90;&#x6027;&#x8840;&#x7EA2;&#x7D20;&#x6C34;&#x5E73;&#x8F83;&#x4F4E;&#x7684; Sf9 &#x7EC6;&#x80DE;&#x8868;&#x8FBE;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x4ECE; apo-&#x5230;&#x5168;&#x606F;&#x9176;&#x5916;&#x6E90;&#x8840;&#x7EA2;&#x7D20;&#x7684;&#x57F9;&#x517B;&#x57FA;&#xFF0C;&#x53E6;&#x5916;&#x548C;&#x8FD9;&#x4E2A;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x6291;&#x5236; radicicol&#xFF0C;&#x4E00;&#x79CD;&#x7279;&#x5B9A;&#x7684;&#x6291;&#x5236;&#x5242;&#x70ED;&#x4F11;&#x514B;&#x86CB;&#x767D; 90 (Billecke&#xFF0C;S.S.&#xFF0C;&#x6298;&#x5F2F;&#x673A;&#x3001; A.T.&#x3001; Kanelakis&#x3001; K.C.&#x3001; &#x58A8;&#x83F2;&#x3001; P.J.M.&#xFF0C;Lowe E.R.&#x70DF;&#x7530;&#xFF0C;Y.&#xFF0C;&#x666E;&#x62C9;&#x7279;&#xFF0C;B.&#x548C;&#x5927;&#x6CFD;&#xFF0C;&#xFF08;2002 &#x5E74;&#xFF09; Y.J.Biol.&#x5316;&#x5B66; 278&#xFF0C;15465 15468 W.&#xFF09;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x9879;&#x5DE5;&#x4F5C;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x901A;&#x8FC7; apo nNOS &#x5728;&#x65E0;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x4E2D;&#x5F62;&#x6210;&#x6D3B;&#x6027;&#x7684;&#x9176;&#x68C0;&#x67E5;&#x8840;&#x7EA2;&#x7D20;&#x5177;&#x6709;&#x7EA6;&#x675F;&#x529B;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x5C55;&#x793A;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8D28;&#x6DB2;&#x4ECE; Sf9 &#x7EC6;&#x80DE;&#x65B9;&#x4FBF;&#x4E86;&#x4F9D;&#x8D56;&#x8840;&#x7EA2;&#x7D20;&#x7684; apo nNOS &#x6FC0;&#x6D3B;&#x901A;&#x8FC7;&#x4FC3;&#x8FDB;&#x9176;&#x529F;&#x80FD;&#x8840;&#x7EA2;&#x7D20;&#x63D2;&#x5165;&#x3002;Sf9 &#x7EC6;&#x80DE;&#x8D28;&#x6DB2;&#x4E5F;&#x5C06;&#x7CD6;&#x76AE;&#x8D28;&#x6FC0;&#x7D20;&#x53D7;&#x4F53; (GR) &#x8F6C;&#x6362;&#x5230;&#x758F;&#x6C34;&#x6027;&#x914D;&#x4F53;&#x7ED3;&#x5408;&#x816D;&#x88C2;&#x5F00;&#x653E;&#x8BBF;&#x95EE;&#x7684;&#x7C7B;&#x56FA;&#x9187;&#x7684;&#x72B6;&#x6001;&#x3002;&#x7EAF;&#x51C0; nNOS &#x7684;&#x65E0;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8840;&#x7EA2;&#x7D20;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x548C;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x7684;&#x7C7B;&#x56FA;&#x9187;&#x7ED3;&#x5408;&#x6D3B;&#x6027;&#x7684; immunopurified GR &#x6291;&#x5236; radicicol Sf9 &#x7EC6;&#x80DE;&#x524D;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8D28;&#x6DB2;&#x5236;&#x5907;&#x6CBB;&#x7597;&#x548C;&#x7EAF;&#x51C0;&#x70ED;&#x4F11;&#x514B;&#x86CB;&#x767D; 90 &#x5230;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8D28;&#x6DB2;&#x589E;&#x52A0;&#x90E8;&#x5206;&#x514B;&#x670D;&#x4E86;&#x8FD9;&#x79CD;&#x6291;&#x5236;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;&#x867D;&#x7136;&#x5728;&#x4FC3;&#x8FDB;&#x8840;&#x7EA2;&#x7D20;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x7684; apo nNOS &#x7684; Sf9 &#x7EC6;&#x80DE;&#x4E2D;&#x70ED;&#x4F11;&#x514B;&#x86CB;&#x767D; 90 &#x4F9D;&#x8D56;&#x673A;&#x68B0;&#xFF0C;&#x5B83;&#x662F;&#x660E;&#x663E;&#x4E0D;&#x540C;&#x4E8E;&#x4FC3;&#x8FDB;&#x7C7B;&#x56FA;&#x9187;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x7684;&#x673A;&#x68B0;&#x7531;&#x514B;&#x70ED;&#x4F11;&#x514B;&#x86CB;&#x767D; 90 apo nNOS &#x8840;&#x7EA2;&#x7D20;&#x6D3B;&#x5316;&#x7684;&#x8C03;&#x63A7;&#x662F;&#x975E;&#x5E38;&#x52A8;&#x6001;&#x7684;&#x548C;&#x9700;&#x8981;&#x4E3A;&#x5176;&#x6291;&#x5236;&#x6D53;&#x5EA6;&#x66F4;&#x9AD8;&#x7684; radicicol&#xFF0C;&#x800C; GR &#x7C7B;&#x56FA;&#x9187;&#x5177;&#x6709;&#x7EA6;&#x675F;&#x529B;&#xFF0C;&#x7531;&#x5927;&#x4F1A;&#x662F;&#x7531;&#x4E0D;&#x80FD;&#x6FC0;&#x6D3B; apo nNOS &#x7EAF;&#x51C0; 5 &#x4F34;&#x4FA3;&#x673A;&#x68B0;&#x5F62;&#x6210;&#x7A33;&#x5B9A; GR.hsp90 heterocomplexes&#x3002;

&#x70ED;&#x4F11;&#x514B;&#x86CB;&#x767D; 90 &#x5728;&#x8840;&#x7EA2;&#x7D20;&#x4F9D;&#x8D56;&#x8F7D;&#x8102;&#x86CB;&#x767D;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x6C27;&#x5316;&#x6C2E;&#x5408;&#x9176;&#x7684;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;

Like other nitric-oxide synthase (NOS) enzymes, neuronal NOS (nNOS) turnover and activity are regulated by the ubiquitous protein chaperone hsp90. We have shown previously that nNOS expressed in Sf9 cells where endogenous heme levels are low is activated from the apo- to the holo-enzyme by addition of exogenous heme to the culture medium, and this activation is inhibited by radicicol, a specific inhibitor of hsp90 (Billecke, S. S., Bender, A. T., Kanelakis, K. C., Murphy, P. J. M., Lowe, E. R., Kamada, Y., Pratt, W. B., and Osawa, Y. (2002) J. Biol. Chem. 278, 15465-15468). In this work, we examine heme binding by apo-nNOS to form the active enzyme in a cell-free system. We show that cytosol from Sf9 cells facilitates heme-dependent apo-nNOS activation by promoting functional heme insertion into the enzyme. Sf9 cytosol also converts the glucocorticoid receptor (GR) to a state where the hydrophobic ligand binding cleft is open to access by steroid. Both cell-free heme activation of purified nNOS and activation of steroid binding activity of the immunopurified GR are inhibited by radicicol treatment of Sf9 cells prior to cytosol preparation, and addition of purified hsp90 to cytosol partially overcomes this inhibition. Although there is an hsp90-dependent machinery in Sf9 cytosol that facilitates heme binding by apo-nNOS, it is clearly different from the machinery that facilitates steroid binding by the GR. hsp90 regulation of apo-nNOS heme activation is very dynamic and requires higher concentrations of radicicol for its inhibition, whereas GR steroid binding is determined by assembly of stable GR.hsp90 heterocomplexes that are formed by a purified five-chaperone machinery that does not activate apo-nNOS.

The role of hsp90 in heme-dependent activation of apo-neuronal nitric-oxide synthase.

Comme autre synthase d&#39;oxyde nitrique, enzymes (NOS), chiffre d&#39;affaires de NOS (nNOS) neuronale et l&#39;activit&eacute; sont r&eacute;glement&eacute;s par l&#39;omnipr&eacute;sente prot&eacute;ines chaperons hsp90. Nous avons d&eacute;j&agrave; montr&eacute; que nNOS exprim&eacute;s dans les cellules Sf9 o&ugrave; les niveaux de l&#39;h&egrave;me endog&egrave;ne sont faibles est activ&eacute;e de l&#39;apo - de l&#39;holo-enzyme par addition de l&#39;h&egrave;me exog&egrave;ne dans le milieu de culture et cette activation est inhib&eacute;e par le radicicol, un inhibiteur sp&eacute;cifique de la hsp90 (Billecke, S. S., Bender, A. T., Kanellakis, K. C., Murphy, P. J. M., Lowe, E. R.Kamada, Y., Pratt, w. B. et Osawa, Y. (2002) J. Biol. chem. 278, 15465 15468). Dans ce travail, nous examinons la liaison de l&#39;h&egrave;me par apo-nNOS pour former l&#39;enzyme active dans un syst&egrave;me acellulaire. Nous montrons que cytosol de Sf9 cellules facilite l&#39;activation d&eacute;pendante de l&#39;h&egrave;me apo-nNOS en favorisant l&#39;insertion de l&#39;h&egrave;me fonctionnelle dans l&#39;enzyme. Cytosol Sf9 convertit &eacute;galement le r&eacute;cepteur des glucocortico&iuml;des (GR) &agrave; un &eacute;tat o&ugrave; la fente de la liaison du ligand hydrophobe est ouverte &agrave; l&#39;acc&egrave;s par les st&eacute;ro&iuml;des. Deux h&egrave;me acellulaire activation de nNOS purifi&eacute;e et de l&#39;activit&eacute; de liaison des st&eacute;ro&iuml;des de l&#39;immunopurifi&eacute;es GR sont inhib&eacute;es par traitement radicicol des cellules Sf9 avant pr&eacute;paration de cytosol et ajout de hsp90 purifi&eacute;e au cytosol surmonte partiellement cette inhibition. Bien qu&#39;il existe un m&eacute;canisme d&eacute;pendant de la hsp90 dans le cytosol Sf9 qui facilite la liaison de l&#39;h&egrave;me par apo-nNOS, il est clairement diff&eacute;rent de la machinerie qui facilite la liaison des st&eacute;ro&iuml;des de la hsp90 GR., r&eacute;gulation de l&#39;activation de l&#39;h&egrave;me apo-nNOS est tr&egrave;s dynamique et exige des concentrations plus &eacute;lev&eacute;es de radicicol pour son inhibition, alors que la liaison des st&eacute;ro&iuml;des GR est d&eacute;termin&eacute;e par l&#39;Assembl&eacute;e de heterocomplexes de GR.hsp90 stables qui sont form&eacute;s par une machine de cinq-chaperon purifi&eacute;e qui ne s&#39;active pas apo-nNOS.

Le r&ocirc;le de hsp90 dans activation d&eacute;pendante du h&egrave;me d&#39;apo-neuronale d&#39;oxyde nitrique synthase.

Die Rolle von Hsp90 in H&#xE4;m-abh&#xE4;ngige Aktivierung von apo-neuronalen Stickoxid-Synthase.

Come altri ossido nitrico sintasi (NOS) enzimi, neuronale fatturato NOS (nNOS) e attivit&agrave; sono regolati dall&#39;onnipresente proteina chaperone hsp90. Abbiamo dimostrato in precedenza nNOS espresso nelle cellule Sf9 dove sono bassi livelli endogeni eme viene attivato da apo - holo-enzima mediante aggiunta di EME esogeno per il terreno di coltura, che questa attivazione &egrave; inibita da radicicol, un inibitore specifico di hsp90 (Billecke, S. S., Bender, A. T., Kanelakis, K. C., Murphy, P. J. M., Lowe, E. R.Kamada, Y., Pratt, w. B. e Osawa, Y. (2002) j Biol Chem 278, 15465-15468). In questo lavoro, esaminiamo associazione eme da apo-nNOS per formare l&#39;enzima attivo in un sistema senza cellula. Vi mostriamo quello cytosol da Sf9 celle facilita l&#39;attivazione eme-dipendente apo-nNOS promuovendo l&#39;inserimento funzionale dell&#39;eme nell&#39;enzima. Sf9 citosol converte anche i recettori glucocorticoidi (GR) in uno stato dove la schisi associazione idrofoba ligando sono aperto all&#39;accesso di steroide. Sia privo di cella eme attivazione della nNOS purificato e attivazione di attivit&agrave; di associazione steroide di immunopurified GR sono inibiti da radicicol trattamento delle cellule Sf9 prima della preparazione del citosol, e aggiunta di hsp90 purificato al citosol parzialmente supera questa inibizione. Anche se c&#39;&egrave; un macchinario hsp90-dipendente nel citosol Sf9 che facilita il legame eme da apo-nNOS, &egrave; chiaramente diverso da macchine che facilita l&#39;associazione di steroidi per la hsp90 GR. regolamento di attivazione eme apo-nNOS &egrave; molto dinamico e richiede concentrazioni pi&ugrave; elevate di radicicol per la sua inibizione, mentre associazione steroide GR &egrave; determinato dall&#39;Assemblea dei heterocomplexes GR.hsp90 stabili che sono formate da un macchinario cinque-chaperone purificato che non attivano apo-nNOS.

Il ruolo di hsp90 in attivazione eme-dipendente dell&#39;apo-neuronale ossido nitrico sintasi.

&#x305D;&#x306E;&#x4ED6; - &#x9178;&#x5316;&#x7A92;&#x7D20;&#x5408;&#x6210;&#x9175;&#x7D20;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306A;&#x9175;&#x7D20; (NOS)&#x3001;&#x795E;&#x7D4C;&#x306E; NOS &#xFF08;nNOS&#xFF09; &#x306E;&#x58F2;&#x308A;&#x4E0A;&#x3052;&#x9AD8;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x6D3B;&#x52D5;&#x30E6;&#x30D3;&#x30AD;&#x30BF;&#x30B9; &#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x30B7;&#x30E3;&#x30DA;&#x30ED;&#x30F3; hsp90 &#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x898F;&#x5236;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005; &#x306F;&#x4EE5;&#x524D;&#x8D77;&#x52D5;&#x3055;&#x308C;&#x5185;&#x56E0;&#x6027;&#x30D8;&#x30E0; &#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x304C;&#x4F4E;&#x304F; Sf9 &#x7D30;&#x80DE;&#x3067;&#x767A;&#x73FE; nNOS apo - &#x304B;&#x3089;&#x30DB;&#x30ED;&#x9175;&#x7D20;&#x306B;&#x5916;&#x56E0;&#x6027;&#x30D8;&#x30E0;&#x57F9;&#x990A;&#x6DB2;&#x3078;&#x306E;&#x6DFB;&#x52A0;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D9;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3; hsp90 &#x306E;&#x7279;&#x7570;&#x7684;&#x963B;&#x5BB3;&#x5264;&#x3067;&#x3042;&#x308B; radicicol &#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x963B;&#x5BB3;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B; &#xFF08;Billecke&#x3001;s. s.&#x3001;&#x30D9;&#x30F3;&#x30C0;&#x30FC;&#x3001;A. T.&#x3001;Kanelakis&#x3001;k. c.&#x3001;&#x30DE;&#x30FC;&#x30D5;&#x30A3;&#x30FC;&#x3001;P. J. M.&#x3001;&#x30ED;&#x30A6;&#x3001;e. r.&#x3001;&#x938C;&#x7530;&#x7950;&#x30D7;&#x30E9;&#x30C3;&#x30C8; W. B.&#x3001;&#x3068;&#x5927;&#x6FA4;&#x7FA9;&#x6CBB; (2002) J. Biol. chem. 278, 15465 15468)&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x4F5C;&#x696D;&#x3067;&#x306F;&#x3001;apo nNOS &#x7121;&#x7D30;&#x80DE;&#x7CFB;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x6D3B;&#x6027;&#x9175;&#x7D20;&#x3092;&#x5F62;&#x6210;&#x3059;&#x308B;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x30D8;&#x30E0;&#x306E;&#x7D50;&#x5408;&#x3092;&#x8ABF;&#x3079;&#x308B;&#x3002;&#x79C1;&#x9054;&#x306F;&#x305D;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x8CEA;&#x3092;&#x793A;&#x3059;&#x304B;&#x3089; Sf9 &#x7D30;&#x80DE;&#x4FC3;&#x9032;&#x30D8;&#x30E0;&#x4F9D;&#x5B58;&#x578B; apo nNOS &#x30A2;&#x30AF;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D9;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x6A5F;&#x80FD;&#x6027;&#x30D8;&#x30E0;&#x9175;&#x7D20;&#x633F;&#x5165;&#x3092;&#x4FC3;&#x9032;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x3002;Sf9 &#x7D30;&#x80DE;&#x8CEA;&#x3082;&#x30B0;&#x30EB;&#x30B3;&#x30B3;&#x30EB;&#x30C1;&#x30B3;&#x30A4;&#x30C9;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53; (GR) &#x758E;&#x6C34;&#x6027;&#x30EA;&#x30AC;&#x30F3;&#x30C9;&#x7D50;&#x5408;&#x88C2;&#x304C;&#x30B9;&#x30C6;&#x30ED;&#x30A4;&#x30C9;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x30A2;&#x30AF;&#x30BB;&#x30B9;&#x306B;&#x958B;&#x3044;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x72B6;&#x614B;&#x306B;&#x5909;&#x63DB;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x4E21;&#x65B9;&#x306E;&#x6D44;&#x5316;&#x3055;&#x308C;&#x305F; nNOS &#x7121;&#x7D30;&#x80DE;&#x30D8;&#x30E0;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x3068; immunopurified &#x30B0;&#x30E9;&#x30E0;&#x306E;&#x30B9;&#x30C6;&#x30ED;&#x30A4;&#x30C9;&#x7D50;&#x5408;&#x6D3B;&#x6027;&#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316; Sf9 &#x7D30;&#x80DE;&#x7D30;&#x80DE;&#x8CEA;&#x306E;&#x6E96;&#x5099;&#x306E;&#x524D;&#x306B; radicicol &#x51E6;&#x7406;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x963B;&#x5BB3;&#x3057;&#x305F;&#x3057;&#x3001;&#x7CBE;&#x88FD; hsp90 &#x7D30;&#x80DE;&#x8CEA;&#x3078;&#x306E;&#x6DFB;&#x52A0;&#x306F;&#x90E8;&#x5206;&#x7684;&#x306B;&#x3053;&#x306E;&#x6291;&#x5236;&#x3092;&#x514B;&#x670D;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30D8;&#x30E0;&#x306E;&#x7D50;&#x5408; apo-nNOS &#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x5BB9;&#x6613;&#x306B; Sf9 &#x7D30;&#x80DE;&#x5185; hsp90 &#x4F9D;&#x5B58;&#x578B;&#x6A5F;&#x68B0;&#x304C;&#x767A;&#x751F;&#x30B9;&#x30C6;&#x30ED;&#x30A4;&#x30C9;&#x7D50;&#x5408;&#x3092;&#x5BB9;&#x6613;&#x306B;&#x6A5F;&#x68B0;&#x304B;&#x3089;&#x306F;&#x3063;&#x304D;&#x308A;&#x7570;&#x306A;&#x308B;&#x3067;&#x3059;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066; GR. hsp90 &#x306E; apo nNOS &#x30D8;&#x30E0;&#x6D3B;&#x6027;&#x306F;&#x3068;&#x3066;&#x3082;&#x30C0;&#x30A4;&#x30CA;&#x30DF;&#x30C3;&#x30AF;&#x3067;&#x3001;GR &#x30B9;&#x30C6;&#x30ED;&#x30A4;&#x30C9;&#x7D50;&#x5408; apo nNOS &#x30A2;&#x30AF;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6;&#x306B;&#x3057;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3001;&#x7CBE;&#x88FD; 5 &#x30B7;&#x30E3;&#x30DA;&#x30ED;&#x30F3;&#x6A5F;&#x68B0;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x5F62;&#x6210;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x5B89;&#x5B9A;&#x3057;&#x305F;&#x306E; GR.hsp90 heterocomplexes &#x306E;&#x30A2;&#x30BB;&#x30F3;&#x30D6;&#x30EA;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x6C7A;&#x307E;&#x308B;&#x306B;&#x5BFE;&#x3057;&#x3001;&#x305D;&#x306E;&#x963B;&#x5BB3;&#x306E;&#x305F;&#x3081; radicicol &#x306E;&#x9AD8;&#x6FC3;&#x5EA6;&#x304C;&#x5FC5;&#x8981;&#x3067;&#x3059;&#x3002;

Apo &#x795E;&#x7D4C;-&#x9178;&#x5316;&#x7A92;&#x7D20;&#x5408;&#x6210;&#x9175;&#x7D20;&#x306E;&#x30D8;&#x30E0;&#x4F9D;&#x5B58;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D9;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x3067; hsp90 &#x306E;&#x5F79;&#x5272;&#x3002;

&#xAC19;&#xC740; &#xB2E4;&#xB978; &#xC0B0;&#xD654;&#xBB3C; nitric synthase (NOS) &#xD6A8;&#xC18C;, &#xC2E0;&#xACBD; NOS (nNOS) &#xD68C;&#xC804;&#xC728; &#xBC0F; &#xD65C;&#xB3D9; &#xC720;&#xBE44; &#xCFFC;&#xD130; &#xC2A4; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xBCF4;&#xD638;&#xC790; hsp90&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xADDC;&#xC81C; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC; &#xC55E;&#xC5D0; &#xB098;&#xC640; &#xC0DD; heme &#xB808;&#xBCA8;&#xC740; &#xB0AE;&#xC740; Sf9 &#xC140; &#xB2E8;&#xC704;&#xB85C; Nnos&#xC740; &#xBB38;&#xD654; &#xB9E4;&#xCCB4; exogenous heme&#xC758; &#xCD94;&#xAC00; &#xC758;&#xD574; apo&#xB294;-&#xD640;&#xB85C; &#xD6A8;&#xC18C;&#xAE4C;&#xC9C0; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xB418; &#xACE0;&#xC774; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; radicicol, hsp90&#xC758; &#xD2B9;&#xC815; &#xC5B5;&#xC81C;&#xC81C;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC800;&#xD574; (Billecke, S. S., &#xBCA4;&#xB354;, A. T., Kanelakis, K. C., &#xBA38;&#xD53C;, P. J. M., &#xB85C;&#xC6B0;, E. R.2., &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; &#xC624; &#xC624; &#xC0AC;&#xC640;, Y. (2002) J. Biol. &#xD654;&#xD559; 278 15465 15468 W. &#xC9C0;&#xAE08;&#xB3C4;, Y., &#xD504;&#xB7AB;). &#xC774; &#xC791;&#xD488;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; apo&#xB294;-nNOS &#xC140; &#xC5C6;&#xB294; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD65C;&#xC131; &#xD6A8;&#xC18C;&#xB97C; &#xD615;&#xC131; &#xD558; &#xC5EC; heme &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xC744; &#xAC80;&#xC0AC;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; cytosol &#xD45C;&#xC2DC; &#xC140;&#xC744; sf9&#xC5D0;&#xC11C; heme &#xC885;&#xC18D; apo nNOS &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xC6A9;&#xC774; &#xD558; &#xAC8C; &#xD6A8;&#xC18C;&#xC5D0; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC801;&#xC778; heme &#xC0BD;&#xC785;&#xC744; &#xD64D;&#xBCF4; &#xD558; &#xC5EC;. &#xB610;&#xD55C; Sf9 cytosol glucocorticoid &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; (GR) &#xC18C;&#xC218; &#xC131; &#xB9AC;&#xAC04;&#xB4DC; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xC5D0; &#xBD84;&#xC5F4; &#xC2A4;&#xD14C;&#xB85C;&#xC774;&#xB4DC;&#xC5D0;&#xC758; &#xD55C; &#xC561;&#xC138;&#xC2A4; &#xAC1C;&#xBC29; &#xC0C1;&#xD0DC;&#xC5D0; &#xBCC0;&#xD658;. &#xC815;&#xD654; Nnos&#xC758; &#xC140; &#xD504;&#xB9AC; heme &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xBC0F; immunopurified GR&#xC758; &#xC2A4;&#xD14C;&#xB85C;&#xC774;&#xB4DC; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xD65C;&#xB3D9;&#xC758; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; cytosol &#xC900;&#xBE44; &#xC804;&#xC5D0; &#xC140; Sf9 radicicol &#xCE58;&#xB8CC;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC800;&#xD574;&#xC640; cytosol &#xD558; &#xC815;&#xD654; hsp90&#xC758; &#xCD94;&#xAC00; &#xBD80;&#xBD84;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C;&#xC774; &#xC800;&#xD574;&#xB97C; &#xADF9;&#xBCF5;. &#xADF8;&#xAC83;&#xC740; &#xC2A4;&#xD14C;&#xB85C;&#xC774;&#xB4DC; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xC744; &#xC6A9;&#xC774; &#xD558; &#xAC8C; &#xD558;&#xB294; &#xAE30;&#xACC4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBA85;&#xD655; &#xD558; &#xAC8C; &#xB2E4;&#xB978; heme &#xBC14;&#xC778;&#xB529; apo Nnos&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC6A9;&#xC774; &#xD558; &#xAC8C; Sf9 cytosol hsp90 &#xC885;&#xC18D; &#xAE30;&#xACC4; &#xBE44;&#xB85D; GR. hsp90&#xC73C;&#xB85C; apo nNOS heme &#xD65C;&#xC131;&#xD654;&#xC758; &#xADDC;&#xC81C; &#xB9E4;&#xC6B0; &#xB3D9;&#xC801;&#xC774; &#xACE0; GR &#xC2A4;&#xD14C;&#xB85C;&#xC774;&#xB4DC; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; apo nNOS &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xB418;&#xC9C0; &#xC54A;&#xB294; &#xC815;&#xC81C; 5 &#xBCF4;&#xD638;&#xC790; &#xAE30;&#xACC4; &#xC7A5;&#xCE58;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xD615;&#xC131; &#xB418;&#xB294; &#xC548;&#xC815;&#xC801;&#xC778; GR.hsp90 heterocomplexes&#xC758; &#xC870;&#xB9BD;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xACB0;&#xC815; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xBC18;&#xBA74; &#xADF8;&#xAC83;&#xC758; &#xC5B5;&#xC81C;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; radicicol&#xC758; &#xB192;&#xC740; &#xB18D;&#xB3C4; &#xC694;&#xAD6C; &#xD55C;&#xB2E4;.

Hsp90 apo &#xC2E0;&#xACBD; nitric &#xC0B0;&#xD654;&#xBB3C; synthase&#xC758; heme &#xC885;&#xC18D; &#xD65C;&#xC131;&#xD654;&#xC5D0; &#xC5ED;&#xD560;.

Como otra sintasa de &oacute;xido n&iacute;trico enzimas (CNC), la facturaci&oacute;n de enmiendas (nNOS) neuronal y la actividad est&aacute;n regulados por la prote&iacute;na ubicua chaperona hsp90. Hemos demostrado previamente que nNOS expresados en c&eacute;lulas Sf9 donde comienzan los niveles end&oacute;genos de hemo se activa desde el apo - a la holo-enzima por la adici&oacute;n de hemo ex&oacute;geno al medio de cultivo, y esta activaci&oacute;n es inhibida por el radicicol, un inhibidor espec&iacute;fico de hsp90 (Billecke, S. S., Bender, A. T., Kanelakis, K. C., Murphy, P. J. M., Lowe, E. R.Kamada, Y., Pratt, w. B. y Osawa, Y. (2002) J. Biol Chem 278, 15465-15468). En este trabajo, examinamos vinculante heme por apo-nNOS para formar la enzima activa en un sistema sin c&eacute;lulas. Mostramos que citosol de Sf9 c&eacute;lulas facilita la activaci&oacute;n dependiente de hemo apo-nNOS promoviendo la inserci&oacute;n de hemo funcional en la enzima. SF9 citosol tambi&eacute;n convierte el receptor de glucocorticoides (GR) en un estado donde la hendidura ligando hidrof&oacute;bico est&aacute; abierta al acceso por esteroides. Tanto heme acelulares activaci&oacute;n de nNOS purificada y activaci&oacute;n de actividad esteroide de la immunopurified GR son inhibidas por el tratamiento de la radicicol de c&eacute;lulas Sf9 antes de la preparaci&oacute;n del citosol y adici&oacute;n de hsp90 purificada al citosol supera parcialmente esta inhibici&oacute;n. Aunque existe un mecanismo dependiente de hsp90 en Sf9 citosol que favorece la fijaci&oacute;n de heme por apo-nNOS, es claramente diferente de la maquinaria que favorece la fijaci&oacute;n esteroide por la hsp90 GR. regulaci&oacute;n de la activaci&oacute;n de apo-nNOS hemo es muy din&aacute;mico y requiere mayores concentraciones de radicicol para su inhibici&oacute;n, mientras que Uni&oacute;n esteroide GR es determinada por la Asamblea de heterocomplejos de GR.hsp90 estable que se forman por un mecanismo de cinco-acompa&ntilde;ante purificado que no activa el apo-nNOS.

El papel de hsp90 en activaci&oacute;n de hemo-dependiente de la sintasa de &oacute;xido n&iacute;trico apo-neuronal.

Unliganded recettori steroidei sono assemblati in heterocomplexes con la proteina heat-shock (hsp) 90 da un macchinari multiproteici chaperone. Oltre all&#39;associazione i recettori presso il sito di chaperone, hsp90 associa cofattori presso altri siti che fanno parte delle macchine di assemblaggio, cos&igrave; come immunophilins che collegano la heterocomplexes recettore-hsp90 assemblato ad un percorso di traffico della proteina. Hsp90- / macchinari chaperone hsp70-based interagisce con il recettore glucocorticoide unliganded per aprire la schisi steroide-associazione di accedere da uno steroide, e le macchine interagisce in modo molto dinamico con il recettore liganded, trasformato per facilitare la sua traslocazione lungo le autostrade MICROTUBULARI al nucleo. Nel nucleo, il macchinario chaperone interagisce con il recettore in complessi regolatori trascrizionali dopo dissociazione dell&#39;ormone per rilasciare il recettore e terminare l&#39;attivazione trascrizionale. Formando heterocomplexes con hsp90, il macchinario chaperone stabilizza il recettore alla degradazione dal pathway ubiquitina-proteasoma di proteolisi.

Ruolo di chaperoni molecolari in azione dei recettori steroidei.

&#x30EA;&#x30AC;&#x30F3;&#x30C9;&#x306A;&#x3057;&#x30B9;&#x30C6;&#x30ED;&#x30A4;&#x30C9;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x306F;&#x71B1;&#x30B7;&#x30E7;&#x30C3;&#x30AF;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA; (hsp) 90 &#x591A;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x30B7;&#x30E3;&#x30DA;&#x30ED;&#x30F3;&#x6A5F;&#x68B0;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x3068; heterocomplexes &#x306B;&#x30A2;&#x30BB;&#x30F3;&#x30D6;&#x30EB;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x30B7;&#x30E3;&#x30DA;&#x30ED;&#x30F3; &#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x3092;&#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C9;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x52A0;&#x3048;&#x3066;&#x3001;hsp90 &#x30EA;&#x30C3;&#x30C1;&#x30A2;&#x30DF;&#x30CE;&#x4ED6;&#x7D44;&#x7ACB;&#x6A5F;&#x68B0;&#x306E;&#x4E00;&#x90E8;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x7D44;&#x307F;&#x7ACB;&#x3066;&#x3089;&#x308C;&#x305F;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53; hsp90 heterocomplexes &#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x306E;&#x4EBA;&#x8EAB;&#x58F2;&#x8CB7;&#x7D4C;&#x8DEF;&#x306B;&#x63A5;&#x7D9A; immunophilins &#x3092;&#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C9;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;Hsp90-/hsp70 &#x30D9;&#x30FC;&#x30B9; &#x30B7;&#x30E3;&#x30DA;&#x30ED;&#x30F3;&#x6A5F;&#x68B0;&#x3068;&#x306E;&#x5BFE;&#x8A71;&#x304C;&#x3001;&#x30B9;&#x30C6;&#x30ED;&#x30A4;&#x30C9;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x30A2;&#x30AF;&#x30BB;&#x30B9;&#x3059;&#x308B;&#x30B9;&#x30C6;&#x30ED;&#x30A4;&#x30C9; &#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C7;&#x30A3;&#x30F3;&#x30B0;&#x88C2;&#x3092;&#x958B;&#x304F;&#x306B;&#x306F;&#x30EA;&#x30AC;&#x30F3;&#x30C9;&#x306A;&#x3057;&#x30B0;&#x30EB;&#x30B3;&#x30B3;&#x30EB;&#x30C1;&#x30B3;&#x30A4;&#x30C9;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x3068;&#x30EA;&#x30AC;&#x30F3;&#x30C9;&#x7D50;&#x5408;&#x72B6;&#x614B;&#x306F;&#x3001;&#x5F62;&#x8CEA;&#x8EE2;&#x63DB;&#x306E;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x3092;&#x305D;&#x306E;&#x6838;&#x3078;&#x306E;&#x5FAE;&#x5C0F;&#x306E;&#x30CF;&#x30A4;&#x30A6;&#x30A7;&#x30FC;&#x306B;&#x6CBF;&#x3046;&#x8EE2;&#x6D41;&#x3092;&#x4FC3;&#x9032;&#x3059;&#x308B;&#x3068;&#x3001;&#x975E;&#x5E38;&#x306B;&#x30C0;&#x30A4;&#x30CA;&#x30DF;&#x30C3;&#x30AF;&#x306A;&#x30D5;&#x30A1;&#x30C3;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x3067;&#x6A5F;&#x68B0;&#x3092;&#x64CD;&#x4F5C;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6838;&#x306E;&#x30B7;&#x30E3;&#x30DA;&#x30ED;&#x30F3;&#x6A5F;&#x68B0;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x8EE2;&#x5199;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x8907;&#x5408;&#x306E;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x3092;&#x89E3;&#x653E;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x8EE2;&#x5199;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x3092;&#x7D42;&#x4E86;&#x3059;&#x308B;&#x306B;&#x306F;&#x3001;&#x30DB;&#x30EB;&#x30E2;&#x30F3;&#x89E3;&#x96E2;&#x5F8C;&#x3084;&#x308A;&#x53D6;&#x308A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;Hsp90 &#x3068; heterocomplexes &#x3092;&#x5F62;&#x6210;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3088;&#x308A;&#x3001;&#x30B7;&#x30E3;&#x30DA;&#x30ED;&#x30F3;&#x6A5F;&#x68B0;&#x52A3;&#x5316;&#x3059;&#x308B;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x30E6;&#x30D3;&#x30AD;&#x30C1;&#x30F3;-&#x30D7;&#x30ED;&#x30C6;&#x30A2;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x7D4C;&#x8DEF;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x5B89;&#x5B9A;&#x5316;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x30B9;&#x30C6;&#x30ED;&#x30A4;&#x30C9;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x306E;&#x5206;&#x5B50;&#x30B7;&#x30E3;&#x30DA;&#x30ED;&#x30F3;&#x306E;&#x5F79;&#x5272;&#x3002;

Unliganded &#xC2A4;&#xD14C;&#xB85C;&#xC774;&#xB4DC; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4;&#xB294; &#xC5F4; &#xCDA9;&#xACA9; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; (hsp) 90 multiprotein &#xBCF4;&#xD638;&#xC790; &#xAE30;&#xACC4;&#xC640; &#xD568;&#xAED8; heterocomplexes&#xB85C; &#xC870;&#xB9BD; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xBCF4;&#xD638;&#xC790; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8;&#xC5D0; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4;&#xB97C; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xBFD0;&#xB9CC; &#xC544;&#xB2C8;&#xB77C; hsp90 cofactors &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xBC00;&#xB9E4; &#xD1B5;&#xB85C;&#xC5D0; &#xC5F0;&#xACB0; &#xD558;&#xB294; &#xC870;&#xB9BD;&#xB41C; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; hsp90 heterocomplexes&#xB294; immunophilins &#xBFD0;&#xB9CC; &#xC544;&#xB2C8;&#xB77C; &#xB2E4;&#xB978; &#xC5B4;&#xC148;&#xBE14;&#xB9AC; &#xAE30;&#xACC4;&#xC5D0; &#xD3EC;&#xD568; &#xB41C; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8;&#xC5D0; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. Hsp90-/ &#xBCF4;&#xD638;&#xC790; hsp70 &#xAE30;&#xBC18; &#xAE30;&#xACC4;&#xB294; &#xC2A4;&#xD14C;&#xB85C;&#xC774;&#xB4DC;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC561;&#xC138;&#xC2A4;&#xD560; &#xC218; &#xC2A4;&#xD14C;&#xB85C;&#xC774;&#xB4DC; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xBD84;&#xC5F4;&#xC744; &#xC5F4;&#xB824;&#xBA74; unliganded glucocorticoid &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4;&#xC640; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9; &#xD558; &#xACE0; &#xB9E4;&#xC6B0; &#xC5ED;&#xB3D9;&#xC801;&#xC778; &#xD328;&#xC158;&#xC758; &#xC804; &#xD575;&#xC744; microtubular &#xACE0;&#xC18D;&#xB3C4;&#xB85C; &#xB530;&#xB77C; &#xCD09;&#xC9C4; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD558;&#xC5EC; liganded, &#xBCC0;&#xD658; &#xB41C; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4;&#xC640; &#xC791;&#xC6A9; &#xD558;&#xB294; &#xAE30;&#xACC4;. &#xD575;, &#xBCF4;&#xD638;&#xC790; &#xAE30;&#xACC4; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4;&#xB97C; transcriptional &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xC885;&#xB8CC;&#xB97C; &#xD638;&#xB974;&#xBAAC; &#xBD84;&#xB9AC; &#xD6C4; transcriptional &#xADDC;&#xC81C; &#xBCF5;&#xD569;&#xBB3C;&#xC5D0; &#xC788;&#xB294; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4;&#xC640; &#xC791;&#xC6A9; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. Hsp90&#xC640; heterocomplexes&#xB97C; &#xD615;&#xC131; &#xD558; &#xC5EC; &#xBCF4;&#xD638;&#xC790; &#xAE30;&#xACC4; &#xBCA0;&#xC774;&#xC2A4; &#xC720;&#xBE44;&#xD034;&#xD2F4;-&#xD504;&#xB85C;&#xD14C;&#xC544;&#xC880; &#xD1B5;&#xB85C; &#xC758;&#xD574; &#xC800;&#xD558;&#xB85C; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4;&#xB97C; &#xC548;&#xC815;&#xD654;.

&#xC2A4;&#xD14C;&#xB85C;&#xC774;&#xB4DC; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; &#xD589;&#xB3D9;&#xC5D0; &#xBD84;&#xC790; &#xBCF4;&#xD638;&#xC790;&#xC758; &#xC5ED;&#xD560;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Unliganded &#x753E;&#x4F53;&#x6FC0;&#x7D20;&#x53D7;&#x4F53;&#x7EC4;&#x88C5;&#x6210;&#x4E0E;&#x70ED;&#x4F11;&#x514B;&#x86CB;&#x767D; (hsp) 90 multiprotein &#x4F34;&#x4FA3;&#x673A;&#x68B0;&#x7684; heterocomplexes&#x3002;&#x9664;&#x4E86;&#x5177;&#x6709;&#x7EA6;&#x675F;&#x529B;&#x7684;&#x4F34;&#x4FA3;&#x7AD9;&#x70B9;&#x4E0A;&#x7684;&#x53D7;&#x4F53;&#xFF0C;&#x70ED;&#x4F11;&#x514B;&#x86CB;&#x767D; 90 &#x7ED1;&#x5B9A;&#x5728;&#x5176;&#x4ED6;&#x662F;&#x96C6;&#x673A;&#x68B0;&#x3001; &#x7684;&#x4E00;&#x90E8;&#x5206;&#x7684;&#x7AD9;&#x70B9;&#xFF0C;&#x4EE5;&#x53CA;&#x8FDE;&#x63A5;&#x5230;&#x86CB;&#x767D;&#x8D29;&#x5356;&#x901A;&#x8DEF;&#x7684;&#x70ED;&#x4F11;&#x514B;&#x86CB;&#x767D; 90-&#x53D7;&#x4F53;&#x7EC4;&#x88C5;&#x7684; heterocomplexes &#x7684; immunophilins &#x7684;&#x8F85;&#x52A9;&#x56E0;&#x5B50;&#x3002;&#x70ED;&#x4F11;&#x514B;&#x86CB;&#x767D; 90-/ unliganded &#x7CD6;&#x76AE;&#x8D28;&#x6FC0;&#x7D20;&#x53D7;&#x4F53;&#xFF0C;&#x6253;&#x5F00;&#x6765;&#x8BBF;&#x95EE;&#x7684;&#x7C7B;&#x56FA;&#x9187;&#xFF0C;&#x7C7B;&#x56FA;&#x9187;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x816D;&#x88C2;&#x4E0E;&#x8FDB;&#x884C;&#x4EA4;&#x4E92;&#xFF0C;&#x57FA;&#x4E8E;&#x70ED;&#x4F11;&#x514B;&#x86CB;&#x767D; 70 &#x7684;&#x4F34;&#x4FA3;&#x673A;&#x68B0;&#x548C;&#x673A;&#x68B0;&#x4E2D;&#x975E;&#x5E38;&#x52A8;&#x611F;&#x65F6;&#x5C1A;&#x4E0E; liganded&#x3001; &#x8F6C;&#x5316;&#x53D7;&#x4F53;&#xFF0C;&#x4FC3;&#x8FDB;&#x5176;&#x79FB;&#x4F4D;&#x5230;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6838;&#x7684;&#x539F;&#x516C;&#x8DEF;&#x6CBF;&#x7EBF;&#x8FDB;&#x884C;&#x4EA4;&#x4E92;&#x3002;&#x5728;&#x539F;&#x5B50;&#x6838;&#xFF0C;&#x4F34;&#x4FA3;&#x673A;&#x68B0;&#x540E;&#x6FC0;&#x7D20;&#x89E3;&#x79BB;&#xFF0C;&#x91CA;&#x653E;&#x53D7;&#x4F53;&#x548C;&#x7EC8;&#x6B62;&#x8F6C;&#x5F55;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x4EA4;&#x4E92;&#x53D7;&#x4F53;&#x7684;&#x8F6C;&#x5F55;&#x8C03;&#x63A7;&#x914D;&#x5408;&#x7269;&#x3002;&#x5F62;&#x6210;&#x4E0E;&#x70ED;&#x4F11;&#x514B;&#x86CB;&#x767D; 90 heterocomplexes&#xFF0C;&#x4F34;&#x4FA3;&#x673A;&#x68B0;&#x7A33;&#x5B9A;&#x9000;&#x5316;&#x5230;&#x53D7;&#x4F53;&#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x964D;&#x89E3;&#x7684;&#x6CDB;&#x7D20;&#x86CB;&#x767D;&#x9176;&#x4F53;&#x9014;&#x5F84;&#x3002;

&#x5728;&#x7C7B;&#x56FA;&#x9187;&#x6FC0;&#x7D20;&#x53D7;&#x4F53;&#x4F5C;&#x7528;&#x7684;&#x5206;&#x5B50;&#x4F34;&#x4FA3;&#x7684;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;

Unliganded steroid receptors are assembled into heterocomplexes with heat-shock protein (hsp) 90 by a multiprotein chaperone machinery. In addition to binding the receptors at the chaperone site, hsp90 binds cofactors at other sites that are part of the assembly machinery, as well as immunophilins that connect the assembled receptor-hsp90 heterocomplexes to a protein trafficking pathway. The hsp90-/hsp70-based chaperone machinery interacts with the unliganded glucocorticoid receptor to open the steroid-binding cleft to access by a steroid, and the machinery interacts in very dynamic fashion with the liganded, transformed receptor to facilitate its translocation along microtubular highways to the nucleus. In the nucleus, the chaperone machinery interacts with the receptor in transcriptional regulatory complexes after hormone dissociation to release the receptor and terminate transcriptional activation. By forming heterocomplexes with hsp90, the chaperone machinery stabilizes the receptor to degradation by the ubiquitin-proteasome pathway of proteolysis.

Role of molecular chaperones in steroid receptor action.

R&eacute;cepteurs des st&eacute;ro&iuml;des aboutissent sont assembl&eacute;s en heterocomplexes avec la prot&eacute;ine de choc thermique (hsp) 90 par une machinerie multiprot&eacute;iques chaperon. En plus de liant les r&eacute;cepteurs sur le site de chaperon, hsp90 lie cofacteurs &agrave; d&#39;autres sites qui font partie de la machinerie de l&#39;Assembl&eacute;e, ainsi qu&#39;immunophilins qui relient la heterocomplexes r&eacute;cepteur-hsp90 assembl&eacute; &agrave; une voie de trafic prot&eacute;ique. La hsp90- / machines de base hsp70 chaperon interagit avec le r&eacute;cepteur des glucocortico&iuml;des aboutissent pour ouvrir la fente liant les st&eacute;ro&iuml;des pour acc&eacute;der &agrave; un st&eacute;ro&iuml;de, et la machinerie interagit de fa&ccedil;on tr&egrave;s dynamique avec le r&eacute;cepteur li&eacute;, transform&eacute; pour faciliter sa translocation le long des autoroutes microtubulaires dans le noyau. Dans le noyau, la machinerie de chaperon interagit avec le r&eacute;cepteur dans les complexes de r&eacute;gulation transcriptionnelles apr&egrave;s dissociation d&#39;hormone pour lib&eacute;rer le r&eacute;cepteur et de terminer l&#39;activation transcriptionnelle. En formant des heterocomplexes avec hsp90, la machinerie de chaperon stabilise le r&eacute;cepteur &agrave; la d&eacute;gradation par la voie ubiquitine-prot&eacute;asome de prot&eacute;olyse.

R&ocirc;le des chaperons mol&eacute;culaires dans l&#39;action des r&eacute;cepteurs st&eacute;ro&iuml;des.

Die Rolle der molekularen Chaperone in der Steroid-Rezeptor-Aktion.

Unliganded receptores de esteroides son ensamblados en heterocomplejos con prote&iacute;na de choque t&eacute;rmico (hsp) 90 por una maquinaria de multiprote&iacute;nas chaperone. Adem&aacute;s de enlazar los receptores en el lugar del acompa&ntilde;ante, hsp90 se une cofactores en otros sitios que forman parte de la maquinaria de la Asamblea, as&iacute; como inmunofilinas que conectan el heterocomplejos receptor-hsp90 montado a una v&iacute;a de tr&aacute;fico de prote&iacute;nas. La hsp90- / maquinaria de chaperone basadas en hsp70 interact&uacute;a con el receptor de glucocorticoide unliganded para abrir la hendidura del esteroide vinculante para acceder a un esteroide, y la maquinaria interact&uacute;a en forma muy din&aacute;mica con el receptor liganded, transformado para facilitar su desplazamiento a lo largo de las carreteras microtubular al n&uacute;cleo. En el n&uacute;cleo, la maquinaria de chaperone interact&uacute;a con el receptor en complejos de regulaci&oacute;n transcripcionales despu&eacute;s de disociaci&oacute;n de la hormona para liberar el receptor y terminar la activaci&oacute;n transcripcional. Mediante la formaci&oacute;n de heterocomplejos con hsp90, la maquinaria del acompa&ntilde;ante estabiliza el receptor a la degradaci&oacute;n por la v&iacute;a de la ubiquitina-proteasoma de prote&oacute;lisis.

Papel de chaperonas moleculares en la acci&oacute;n de los receptores de esteroides.

&#x5FEB;&#x901F;&#x3001; &#x76AE;&#x8D28;&#x6FC0;&#x7D20;&#x53D7;&#x4F53; (GR) &#x4ECE;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8D28;&#x5411;&#x6838;&#x914D;&#x4F53;&#x4F9D;&#x8D56;&#x8FD0;&#x52A8;&#x662F;&#x70ED;&#x4F11;&#x514B;&#x86CB;&#x767D; 90-&#x4F9D;&#x8D56;&#xFF0C;&#x5E76;&#x4E14;&#x5B9A;&#x4E49;&#x4E86;&#x5F88;&#x591A;&#x8FD0;&#x52A8;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x3002;GR.hsp90 heterocomplexes &#x5206;&#x79BB;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x5305;&#x542B;&#x51E0;&#x4E2A;&#x94FE;&#x63A5;&#x5230;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8D28;&#x808C;&#xFF0C;&#x6CBF;&#x539F;&#x8F68;&#x9053;&#x5411;&#x6838;&#x8FC7;&#x7A0B;&#x7684;&#x5206;&#x5B50;&#x9A6C;&#x8FBE;&#x7684;&#x590D;&#x6742;&#x7684;&#x70ED;&#x4F11;&#x514B;&#x86CB;&#x767D; 90 &#x7ED1;&#x5B9A; immunophilins &#x4E4B;&#x4E00;&#x3002;Immunophilins &#x94FE;&#x63A5;&#x5230;&#x808C;&#x808C;&#x5173;&#x8054; dynactin &#x590D;&#x6742; &#xFF08;Galigniana&#x3001; M.D.&#x3001; &#x54C8;&#x745E;&#x5C14;&#x3001; J.M.&#x3001; O&#39;Hagen&#x3001; H.M.&#x3001; Ljungman&#xFF0C;M.&#x548C;&#x666E;&#x62C9;&#x7279;&#xFF0C;J.W.B.(2004) Biol.22483 22489 279&#x3001; &#x5316;&#x5B66;) &#x7684; dynamitin &#x7EC4;&#x4EF6;&#x901A;&#x8FC7;&#x95F4;&#x63A5;&#x3002;&#x5C3D;&#x7BA1;&#x77E5;&#x9053;&#x5FEB;&#x901F;&#x3001; &#x70ED;&#x4F11;&#x514B;&#x86CB;&#x767D; 90 &#x4F9D;&#x8D56; GR &#x8FD0;&#x52A8;&#x9700;&#x8981;&#x4FDD;&#x6301;&#x4E0D;&#x53D8;&#x7684;&#x5FAE;&#x7BA1;&#xFF0C;&#x4E0D;&#x8868;&#x660E;&#x8FD0;&#x52A8;&#x662F;&#x808C;&#x4F9D;&#x8D56;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x663E;&#x793A; dynamitin&#xFF0C;&#x8BE5;&#x8FC7;&#x5EA6;&#x7684;&#x8868;&#x8FBE;&#xFF0C;&#x907F;&#x514D;&#x8BEF;&#x5165;&#x6B67;&#x9014;&#x808C;&#x7535;&#x673A;&#x53CA;&#x5176;&#x8D27;&#x7269;&#xFF0C;&#x4ECE;&#x54EA;&#x4E2A;&#x5757;&#x8FD0;&#x52A8;&#x5411;&#x6838;&#x6291;&#x5236;&#x7684; GR &#x914D;&#x4F53;&#x4F9D;&#x8D56;&#x7684;&#x8FD0;&#x52A8;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x663E;&#x793A;&#x672C;&#x673A; GR.hsp90.immnunophilin &#x914D;&#x5408;&#x7269;&#x5305;&#x542B; dynamitin &#x4EE5;&#x53CA;&#x808C;&#x548C; GR heterocomplexes &#x4ECE;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8D28;&#x6DB2;&#x542B;&#x7D2B;&#x6749;&#x9187;&#x7684;&#x5206;&#x79BB;&#x548C; GTP &#x7A33;&#x5B9A;&#x5FAE;&#x7BA1;&#x8FD8;&#x5305;&#x542B;&#x5FAE;&#x7BA1;&#x86CB;&#x767D;&#x3002;&#x5B8C;&#x6574;&#x8FD0;&#x52A8;&#x7CFB;&#x7EDF;&#xFF0C;&#x5305;&#x62EC;&#x590D;&#x6742;&#x7684;&#x808C;&#x7535;&#x673A;&#x548C;&#x5FAE;&#x7BA1;&#x86CB;&#x767D;&#xFF0C;&#x53EF;&#x4EE5;&#x7EC4;&#x88C5;&#x65E0;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x6761;&#x4EF6;&#x4E0B;&#xFF0C;&#x7531; GR(-) L &#x7EC6;&#x80DE;&#x5236;&#x5907;&#x7684;&#x7D2B;&#x6749;&#x9187; GTP &#x7A33;&#x5B9A;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8D28;&#x6DB2;&#x4E0E;&#x5B75;&#x5316; GR &#x514D;&#x75AB;&#x7403;&#x3002;&#x8FD9;&#x662F;&#x7C7B;&#x56FA;&#x9187;&#x6FC0;&#x7D20;&#x53D7;&#x4F53;&#x7684;&#x8FD0;&#x52A8;&#x662F;&#x4F9D;&#x8D56;&#x808C;&#x7684;&#x5B83;&#x662F;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x5230;&#x6574;&#x4E2A;&#x7CFB;&#x7EDF;&#xFF0C;&#x4EE5;&#x786E;&#x5B9A;&#x5176;&#x9006;&#x884C;&#x8FD0;&#x52A8;&#x7C7B;&#x56FA;&#x9187;&#x6FC0;&#x7D20;&#x53D7;&#x4F53;&#x7684;&#x9996;&#x6B21;&#x5206;&#x79BB;&#x7684;&#x7B2C;&#x4E00;&#x4E2A;&#x8BC1;&#x636E;&#x3002;

&#x5FAE;&#x7BA1;&#x7531;&#x808C;&#x4E0A;&#x7CD6;&#x76AE;&#x8D28;&#x6FC0;&#x7D20;&#x53D7;&#x4F53;&#x8FD0;&#x8F93;&#x7684;&#x8BC1;&#x636E;&#x3002;

Rapid, ligand-dependent movement of glucocorticoid receptors (GR) from cytoplasm to the nucleus is hsp90-dependent, and much of the movement system has been defined. GR.hsp90 heterocomplexes isolated from cells contain one of several hsp90-binding immunophilins that link the complex to cytoplasmic dynein, a molecular motor that processes along microtubular tracks to the nucleus. The immunophilins link to dynein indirectly via the dynamitin component of the dynein-associated dynactin complex (Galigniana, M. D., Harrell, J. M., O'Hagen, H. M., Ljungman, M., and Pratt, W. B. (2004) J. Biol. Chem. 279, 22483-22489). Although it is known that rapid, hsp90-dependent GR movement requires intact microtubules, it has not been shown that the movement is dynein-dependent. Here, we show that overexpression of dynamitin, which blocks movement by dissociating the dynein motor from its cargo, inhibits ligand-dependent movement of the GR to the nucleus. We show that native GR.hsp90.immnunophilin complexes contain dynamitin as well as dynein and that GR heterocomplexes isolated from cytosol containing paclitaxel and GTP to stabilize microtubules also contain tubulin. The complete movement system, including the dynein motor complex and tubulin, can be assembled under cell-free conditions by incubating GR immune pellets with paclitaxel/GTP-stabilized cytosol prepared from GR(-) L cells. This is the first evidence that the movement of a steroid receptor is dynein-dependent, and it is the first isolation of a steroid receptor bound to the entire system that determines its retrograde movement.

Evidence for glucocorticoid receptor transport on microtubules by dynein.

Mouvement rapide, d&eacute;pendants du ligand des r&eacute;cepteurs des glucocortico&iuml;des (GR) du cytoplasme au noyau d&eacute;pend de la hsp90, et la majeure partie du syst&egrave;me de mouvement a &eacute;t&eacute; d&eacute;finie. GR.hsp90 heterocomplexes isol&eacute;es de cellules contiennent une des plusieurs immunophilins de liaison de hsp90 qui relient le complexe de dyn&eacute;ine cytoplasmique, un moteur mol&eacute;culaire qui traite le long des voies microtubulaires au noyau. Les immunophilins lien vers dyn&eacute;ine indirectement via le composant dynamitin de la dyn&eacute;ine associ&eacute;es aux DCTN1 complexe (Galigniana, M. D., Herv&eacute;, J. M., O&#39;Hagen, H. M., Ljungman, M. et Pratt, W. B. (2004) J. Biol. chim. 279, 22483-22489). M&ecirc;me si on sait que le mouvement de GR rapide, d&eacute;pendante de la hsp90 exige microtubules intacts, il n&#39;a pas &eacute;t&eacute; d&eacute;montr&eacute; que le mouvement est d&eacute;pendante de la dyn&eacute;ine. Ici, nous montrons que la surexpression de dynamitin, quel mouvement de blocs en dissociant le moteur de la dyn&eacute;ine de sa cargaison, inhibe le mouvement de ligand-d&eacute;pendants de la GR au noyau. Nous montrons que natives GR.hsp90.immnunophilin complexes contiennent des dynamitin comme dyn&eacute;ine et que GR heterocomplexes isol&eacute;e du cytosol contenant du paclitaxel et GTP pour stabiliser les microtubules contiennent &eacute;galement de la tubuline. Le syst&egrave;me de mouvement complet, y compris le moteur de la dyn&eacute;ine complexe et la tubuline, peut &ecirc;tre assembl&eacute; dans des conditions libres de cellules en incubant les pellets immunitaires GR avec paclitaxel/GTP-stabilis&eacute; cytosol pr&eacute;par&eacute; &agrave; partir de cellules GR(-) L. Il s&#39;agit de la premi&egrave;re preuve que le mouvement d&#39;un st&eacute;ro&iuml;de r&eacute;cepteur d&eacute;pend de la dyn&eacute;ine, et c&#39;est le premier isolement d&#39;un r&eacute;cepteur st&eacute;ro&iuml;de li&eacute; &agrave; l&#39;ensemble du syst&egrave;me qui d&eacute;termine son mouvement r&eacute;trograde.

Les &eacute;l&eacute;ments de preuve pour le transport du r&eacute;cepteur aux glucocortico&iuml;des sur les microtubules de dyn&eacute;ine.

Der Nachweis f&#xFC;r Glucocorticoid-Rezeptor Transport von Dynein an den Mikrotubuli.

Movimento rapido, ligando-dipendente dei recettori glucocorticoidi (GR) dal citoplasma al nucleo &egrave; hsp90-dipendente, e gran parte del sistema di movimento &egrave; stato definito. GR.hsp90 heterocomplexes isolato da cellule contengono uno dei diversi immunophilins di hsp90-associazione che collegano il complesso di dineina citoplasmatica, un motore molecolare che i processi lungo piste MICROTUBULARI al nucleo. Il immunophilins link a dineina indirettamente tramite il componente dynamitin della dineina-associated DCTN1 complessi (Galigniana, D. M., Harrell, J. M., O&#39;Hagen, H. M., Ljungman, M. e Pratt, W. B. (2004) j Biol Chem. 279, 22483-22489). Anche se &egrave; noto che movimento GR rapido, hsp90-dipendente richiede microtubuli intatti, non &egrave; stato dimostrato che il movimento &egrave; dineina-dipendente. Qui, vi mostriamo quello sovraespressione di dynamitin, che blocca il movimento di dissociando il dineina motore dal suo carico, inibisce il movimento ligando-dipendente di GR al nucleo. Mostriamo che nativi GR.hsp90.immnunophilin complessi contengono dynamitin come pure dineina e che GR heterocomplexes isolato dal citosol contenente paclitaxel e GTP per stabilizzare i microtubuli contengono anche tubulina. Il sistema di movimento completo, compreso il motore di dineina complesse e la tubulina, pu&ograve; essere assemblato in condizioni senza cellula incubando immune pellet GR con paclitaxel/GTP-stabilizzato citosol preparato da cellule GR(-) L. Questa &egrave; la prima evidenza che il movimento di un recettore steroideo &egrave; dineina-dipendente, ed &egrave; il primo isolamento di un recettore steroideo legato all&#39;intero sistema che determina il movimento retrogrado.

Prove per il trasporto dei recettori glucocorticoidi sui microtubuli di dineina.

&#x6025;&#x901F;&#x306A;&#x30EA;&#x30AC;&#x30F3;&#x30C9;&#x4F9D;&#x5B58;&#x904B;&#x52D5;&#x30B0;&#x30EB;&#x30B3;&#x30B3;&#x30EB;&#x30C1;&#x30B3;&#x30A4;&#x30C9;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53; &#xFF08;GR&#xFF09; &#x7D30;&#x80DE;&#x8CEA;&#x304B;&#x3089;&#x6838;&#x3078;&#x306E; hsp90 &#x306B;&#x4F9D;&#x5B58;&#x3057;&#x904B;&#x52D5;&#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E0;&#x306E;&#x5927;&#x90E8;&#x5206;&#x304C;&#x5B9A;&#x7FA9;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30BB;&#x30EB;&#x304B;&#x3089;&#x9694;&#x96E2;&#x3055;&#x308C;&#x308B; GR.hsp90 heterocomplexes &#x306B;&#x306F;&#x6838;&#x3078;&#x306E;&#x5FAE;&#x5C0F;&#x30C8;&#x30E9;&#x30C3;&#x30AF;&#x306B;&#x6CBF;&#x3063;&#x3066;&#x51E6;&#x7406;&#x5206;&#x5B50;&#x30E2;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x7D30;&#x80DE;&#x8CEA;&#x30C0;&#x30A4;&#x30CB;&#x30F3;&#x8907;&#x5408;&#x30EA;&#x30F3;&#x30AF;&#x3044;&#x304F;&#x3064;&#x304B;&#x306E; hsp90 &#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C7;&#x30A3;&#x30F3;&#x30B0; immunophilins &#x306E;&#x3044;&#x305A;&#x308C;&#x304B;&#x304C;&#x542B;&#x307E;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;Immunophilins &#x30C0;&#x30A4;&#x30CB;&#x30F3; &#x30C0;&#x30A4;&#x30CB;&#x30F3;&#x95A2;&#x9023;&#x4ED8;&#x3051;&#x3089;&#x308C;&#x305F;&#x30C0;&#x30A4;&#x30CA;&#x30AF;&#x30C1;&#x30F3;&#x8907;&#x5408; (Galigniana M. D.&#x3001;&#x30CF;&#x30EC;&#x30EB;&#x3001;J. M.&#x3001;O&#39;Hagen&#x3001;h. M.&#x3001;Ljungman&#x3001;M.&#x3001;&#x30D7;&#x30E9;&#x30C3;&#x30C8;&#x3001;J. W. B. (2004) &#x751F;&#x7269;&#x5316;&#x5B66; 279&#x3001;22483 22489) dynamitin &#x30B3;&#x30F3;&#x30DD;&#x30FC;&#x30CD;&#x30F3;&#x30C8;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x3066;&#x9593;&#x63A5;&#x7684;&#x306B;&#x30EA;&#x30F3;&#x30AF;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6025;&#x901F;&#x306B;&#x3001;hsp90 &#x4F9D;&#x5B58;&#x578B; GR &#x904B;&#x52D5;&#x305D;&#x306E;&#x307E;&#x307E;&#x5FAE;&#x5C0F;&#x7BA1;&#x3092;&#x5FC5;&#x8981;&#x3068;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x77E5;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x304C;&#x3001;&#x305D;&#x308C;&#x306F;&#x904B;&#x52D5;&#x30C0;&#x30A4;&#x30CB;&#x30F3;&#x4F9D;&#x5B58;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x793A;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x305D;&#x306E;&#x8CA8;&#x7269;&#x304B;&#x3089;&#x30C0;&#x30A4;&#x30CB;&#x30F3; &#x30E2;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x3092;&#x89E3;&#x96E2;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x3069;&#x306E;&#x30D6;&#x30ED;&#x30C3;&#x30AF;&#x79FB;&#x52D5;&#x6291;&#x5236; GR &#x306E;&#x30EA;&#x30AC;&#x30F3;&#x30C9;&#x4F9D;&#x5B58;&#x6027;&#x904B;&#x52D5;&#x6838;&#x306B; dynamitin&#x3001;&#x305D;&#x306E;&#x767A;&#x73FE;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x79C1;&#x305F;&#x3061;&#x306F;&#x30CD;&#x30A4;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6;&#x306E; GR.hsp90.immnunophilin &#x932F;&#x4F53;&#x306B; dynamitin &#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x30C0;&#x30A4;&#x30CB;&#x30F3;&#x542B;&#x3080;&#x3068; GR heterocomplexes &#x30D1;&#x30AF;&#x30EA;&#x30BF; &#x30AD;&#x30BB;&#x30EB;&#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x7D30;&#x80DE;&#x8CEA;&#x304B;&#x3089;&#x5206;&#x96E2;&#x3055;&#x308C;&#x3001;&#x5FAE;&#x5C0F;&#x7BA1;&#x3092;&#x5B89;&#x5B9A;&#x3055;&#x305B;&#x308B; GTP &#x3082;&#x542B;&#x3080;&#x30C1;&#x30E5;&#x30FC;&#x30D6;&#x30EA;&#x30F3;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30C0;&#x30A4;&#x30CB;&#x30F3; &#x30E2;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x8907;&#x5408;&#x3068;&#x30C1;&#x30E5;&#x30FC;&#x30D6;&#x30EA;&#x30F3;&#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x3001;&#x5B8C;&#x5168;&#x306A;&#x904B;&#x52D5;&#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E0;&#x7121;&#x6599;&#x306E;&#x30BB;&#x30EB;&#x6761;&#x4EF6;&#x4E0B;&#x3067;&#x514D;&#x75AB;&#x30DA;&#x30EC;&#x30C3;&#x30C8; GR GR(-) L &#x7D30;&#x80DE;&#x304B;&#x3089;&#x4F5C;&#x88FD;&#x3057;&#x305F;&#x30D1;&#x30AF;&#x30EA;&#x30BF; &#x30AD;&#x30BB;&#x30EB;/GTP &#x5B89;&#x5B9A;&#x5316;&#x7D30;&#x80DE;&#x8CEA;&#x3092;&#x30A4;&#x30F3;&#x30AD;&#x30E5;&#x30D9;&#x30FC;&#x30C8;&#x3057;&#x3066;&#x7D44;&#x307F;&#x7ACB;&#x3066;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x306F;&#x3001;&#x30C0;&#x30A4;&#x30CB;&#x30F3;&#x4F9D;&#x5B58;&#x30B9;&#x30C6;&#x30ED;&#x30A4;&#x30C9;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x306E;&#x52D5;&#x304D;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3057;&#x3001;&#x305D;&#x306E;&#x9006;&#x884C;&#x306E;&#x52D5;&#x304D;&#x3092;&#x6C7A;&#x5B9A;&#x5168;&#x4F53;&#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E0;&#x306B;&#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C9;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x30B9;&#x30C6;&#x30ED;&#x30A4;&#x30C9;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x306E;&#x6700;&#x521D;&#x306E;&#x5206;&#x96E2;&#x306F;&#x3001;&#x6700;&#x521D;&#x306E;&#x8A3C;&#x62E0;&#x3067;&#x3059;&#x3002;

&#x30B0;&#x30EB;&#x30B3;&#x30B3;&#x30EB;&#x30C1;&#x30B3;&#x30A4;&#x30C9;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x8F38;&#x9001;&#x30C0;&#x30A4;&#x30CB;&#x30F3;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x5FAE;&#x5C0F;&#x7BA1;&#x4E0A;&#x306E;&#x8A3C;&#x62E0;&#x3002;

&#xAE09;&#xC18D; &#xD55C;, &#xB9AC;&#xAC04;&#xB4DC; &#xC885;&#xC18D; &#xC6B4;&#xB3D9;&#xC758; glucocorticoid &#xC218;&#xC6A9; (GR) &#xC138;&#xD3EC;&#xC9C8;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD575;&#xC744; hsp90 &#xC885;&#xC18D;&#xC801; &#xC774;&#xBA70; &#xB9CE;&#xC740; &#xC774;&#xB3D9; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C;&#xC744; &#xC815;&#xC758; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. GR.hsp90 heterocomplexes &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBD84;&#xB9AC; &#xB41C; &#xBCF5;&#xC7A1; &#xD55C; &#xC138;&#xD3EC;&#xC9C8; &#xD68C;, microtubular &#xD2B8;&#xB799; &#xD575;&#xC744; &#xD568;&#xAED8; &#xCC98;&#xB9AC; &#xD558;&#xB294; &#xBD84;&#xC790; &#xBAA8;&#xD130;&#xB97C; &#xC5F0;&#xACB0; &#xD558;&#xB294; &#xC5EC;&#xB7EC; hsp90 &#xBC14;&#xC778;&#xB529; immunophilins &#xC911; &#xD558;&#xB098;&#xB97C; &#xD3EC;&#xD568; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. Immunophilins &#xD68C;&#xB294; &#xD68C;&#xC5D0; &#xC5F0;&#xACB0; dynactin &#xBCF5;&#xD569; (Galigniana, M. D., &#xD558; &#xB810;, J. M., O&#39;Hagen, H. M., Ljungman, M., &#xBC0F; &#xD504;&#xB7AB;, W. B. (2004) J. Biol. &#xD654;&#xD559; 279, 22483 22489)&#xC758; dynamitin &#xAD6C;&#xC131; &#xC694;&#xC18C;&#xB97C; &#xD1B5;&#xD574; &#xAC04;&#xC811;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xC5F0;&#xACB0;. &#xAE09;&#xC18D; &#xD55C;, hsp90 &#xC885;&#xC18D; GR &#xC6C0;&#xC9C1;&#xC784; &#xADF8;&#xB300;&#xB85C; microtubules &#xD544;&#xC694; &#xD558;&#xB2E4;&#xB294; &#xAC83;&#xC774; &#xC54C;&#xB824;&#xC838;, &#xBE44;&#xB85D; &#xADF8;&#xAC83;&#xC740; &#xD45C;&#xC2DC; &#xB418;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC740; &#xC6C0;&#xC9C1;&#xC784;&#xC740; &#xD68C;&#xC5D0; &#xB530;&#xB77C; &#xB2E4;&#xB985;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC5EC;&#xAE30;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; dissociating&#xC758; &#xD654;&#xBB3C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD68C; &#xBAA8;&#xD130;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC5B4;&#xB290; &#xBE14;&#xB85D; &#xC6C0;&#xC9C1;&#xC784; &#xD575;&#xC5D0;&#xB294; GR&#xC758; ligand &#xC758;&#xC874; &#xC6C0;&#xC9C1;&#xC784;&#xC744; &#xC5B5;&#xC81C; &#xD558;&#xB294; dynamitin&#xC758; &#xADF8; overexpression&#xC744; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xB124;&#xC774;&#xD2F0;&#xBE0C; GR.hsp90.immnunophilin &#xB2E8;&#xC9C0; dynamitin &#xBFD0;&#xB9CC; &#xC544;&#xB2C8;&#xB77C; &#xD68C;&#xB97C; &#xD3EC;&#xD568; &#xD558; &#xACE0; GR heterocomplexes cytosol paclitaxel &#xD3EC;&#xD568; &#xB41C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC808;&#xC5F0; &#xBC0F; &#xC548;&#xC815;&#xD654; microtubules GTP tubulin &#xD3EC;&#xD568; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xBCF5;&#xC7A1; &#xD55C; &#xD68C; &#xBAA8;&#xD130; &#xB4F1; tubulin, &#xC804;&#xCCB4; &#xC774;&#xB3D9; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C; paclitaxel/GTP &#xC548;&#xC815;&#xD654; cytosol GR(-) L &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC900;&#xBE44; &#xB41C; GR &#xBA74;&#xC5ED; &#xD3A0; &#xB9BF;&#xC744; &#xBC30;&#xC591; &#xD558; &#xC5EC; &#xC138;&#xD3EC; &#xC5C6;&#xB294; &#xC870;&#xAC74; &#xD558;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC870;&#xB9BD; &#xB420; &#xC218; &#xC788;&#xB2E4;. &#xC774;&#xAC83;&#xC740; &#xC2A4;&#xD14C;&#xB85C;&#xC774;&#xB4DC; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4;&#xC758; &#xC6C0;&#xC9C1;&#xC784;&#xC740; &#xD68C;&#xC5D0; &#xC885;&#xC18D; &#xB418;&#xBA70; &#xC2A4;&#xD14C;&#xB85C;&#xC774;&#xB4DC; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4;&#xC758; &#xC5ED;&#xD589; &#xC6B4;&#xB3D9;&#xC744; &#xACB0;&#xC815; &#xD558;&#xB294; &#xC804;&#xCCB4; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C;&#xC5D0; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xB41C; &#xCCAB; &#xBC88;&#xC9F8; &#xC808;&#xC5F0; &#xCCAB; &#xBC88;&#xC9F8; &#xC99D;&#xAC70; &#xC774;&#xB2E4;.

&#xD68C;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; microtubules&#xC5D0; glucocorticoid &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; &#xC804;&#xC1A1;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC99D;&#xAC70;.

Hsp90 depende del movimiento r&aacute;pido, dependiente de ligando de receptores de glucocorticoides (GR) de citoplasma al n&uacute;cleo, y gran parte del sistema del movimiento ha sido definida. GR.hsp90 heterocomplejos aislados de las c&eacute;lulas contienen uno de varios inmunofilinas hsp90 vinculante que vinculan el complejo a dine&iacute;na citoplasm&aacute;tica, un motor molecular que procesa a lo largo de pistas microtubular al n&uacute;cleo. Las inmunofilinas vinculan a dynein indirectamente mediante el componente dynamitin de la dine&iacute;na asociada complejo dinactina (Galigniana, M. D., Harrell, J. M., O&#39;Hagen, H. M., divida, M. y Pratt, J. W. B. (2004) Biol Chem. 279, 22483-22489). Aunque se sabe que la hsp90 y dependiente, r&aacute;pido movimiento GR requiere microt&uacute;bulos intactos, no se ha demostrado que el movimiento es dependiente de dine&iacute;na. Aqu&iacute;, demostramos que la sobreexpresi&oacute;n de dynamitin, que bloquea el movimiento sald&aacute;ndose el dine&iacute;na motor de su carga, inhibe el movimiento dependiente de ligando de la GR al n&uacute;cleo. Mostramos que nativo GR.hsp90.immnunophilin complejos contienen dynamitin, as&iacute; como la dine&iacute;na y que GR heterocomplejos aislaron de citosol con paclitaxel y GTP para estabilizar los microt&uacute;bulos tambi&eacute;n contienen tubulina. El sistema de movimiento completo, incluyendo el motor de la dine&iacute;na complejo y tubulina, puede ser montado en condiciones libres de c&eacute;lulas por incubaci&oacute;n pelotillas inmunes GR con paclitaxel/GTP-estabilizado citosol preparado a partir de c&eacute;lulas de GR(-) L. Se trata de la primera evidencia de que el movimiento de un esteroide receptor depende de la dine&iacute;na, y es el primer aislamiento de un receptor de esteroide a todo el sistema que determina su movimiento retr&oacute;grado.

Pruebas para el transporte de receptor de glucocorticoides en microt&uacute;bulos por dine&iacute;na.

&#x5206;&#x5B50;&#x4F34;&#x4FA3;&#x70ED;&#x4F11;&#x514B;&#x86CB;&#x767D; 90 (&#x70ED;&#x4F11;&#x514B;&#x86CB;&#x767D; 90&#xFF09; &#x548C;&#x5176;&#x914D;&#x4EF6; cochaperones &#x51FD;&#x6570;&#x901A;&#x8FC7;&#x4FC3;&#x8FDB;&#x7ED3;&#x6784;&#x7684;&#x6210;&#x719F;&#x548C;&#x590D;&#x6742;&#x7EC4;&#x4EF6;&#x7684;&#x5BA2;&#x6237;&#x7AEF;&#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#xFF0C;&#x5305;&#x62EC;&#x7C7B;&#x56FA;&#x9187;&#x6FC0;&#x7D20;&#x53D7;&#x4F53;&#x548C;&#x9009;&#x5B9A;&#x7684;&#x6FC0;&#x9176;&#x3002;&#x901A;&#x8FC7;&#x4FC3;&#x8FDB;&#x6D3B;&#x52A8;&#x548C;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x4FE1;&#x53F7;&#x86CB;&#x767D;&#x7684;&#x7A33;&#x5B9A;&#x6027;&#xFF0C;&#x70ED;&#x4F11;&#x514B;&#x86CB;&#x767D; 90 &#x5DF2;&#x6210;&#x4E3A;&#x5173;&#x952E;&#x8C03;&#x5236;&#x5668;&#x5728;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5185;&#x4FE1;&#x53F7;&#x4F20;&#x9012;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x63D0;&#x51FA;&#x70ED;&#x4F11;&#x514B;&#x86CB;&#x767D; 90 &#x4F34;&#x4FA3;&#x6D3B;&#x52A8;&#x662F;&#x53D7;&#x53EF;&#x9006;&#x4E59;&#x9170;&#x5316;&#x548C;&#x63A7;&#x5236;&#x7684; HDAC6 &#x8131;&#x4E59;&#x9170;&#x9176;&#x7684;&#x8BC1;&#x636E;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x663E;&#x793A; HDAC6 &#x51FD;&#x6570;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x70ED;&#x4F11;&#x514B;&#x86CB;&#x767D; 90 &#x8131;&#x4E59;&#x9170;&#x9176;&#x3002;HDAC6 &#x706D;&#x6D3B;&#x5BFC;&#x81F4;&#x70ED;&#x4F11;&#x514B;&#x86CB;&#x767D; 90 hyperacetylation&#xFF0C;&#x4ECE;&#x57FA;&#x672C;&#x7684; cochaperone&#x3001; p23&#x3001; &#x548C;&#x5931;&#x53BB;&#x4F34;&#x4FA3;&#x6D3B;&#x6027;&#x53CA;&#x5176;&#x5206;&#x79BB;&#x3002;HDAC6 &#x7F3A;&#x9677;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E2D;&#x70ED;&#x4F11;&#x514B;&#x86CB;&#x767D; 90 &#x4F9D;&#x8D56;&#x6210;&#x719F;&#x7684;&#x7CD6;&#x76AE;&#x8D28;&#x6FC0;&#x7D20;&#x53D7;&#x4F53; (GR) &#x53D7;&#x5230;&#x5A01;&#x80C1;&#x4E2D;&#x914D;&#x4F53;&#x7ED3;&#x5408;&#x3001; &#x6838;&#x79FB;&#x4F4D;&#x548C;&#x8F6C;&#x5F55;&#x6FC0;&#x6D3B;, GR &#x7F3A;&#x9677;&#x9020;&#x6210;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x7ED3;&#x679C;&#x786E;&#x5B9A;&#x70ED;&#x4F11;&#x514B;&#x86CB;&#x767D; 90 &#x4F5C;&#x4E3A; HDAC6 &#x7684;&#x76EE;&#x6807;&#xFF0C;&#x5E76;&#x5EFA;&#x8BAE;&#x53EF;&#x9006;&#x4E59;&#x9170;&#x5316;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x4E00;&#x4E2A;&#x72EC;&#x7279;&#x7684;&#x673A;&#x5236;&#xFF0C;&#x89C4;&#x5B9A;&#x4E86;&#x70ED;&#x4F11;&#x514B;&#x86CB;&#x767D; 90 &#x4F34;&#x4FA3;&#x590D;&#x6742;&#x6D3B;&#x52A8;&#x3002;

HDAC6 &#x89C4;&#x5B9A;&#x4E86;&#x70ED;&#x4F11;&#x514B;&#x86CB;&#x767D; 90 &#x4E59;&#x9170;&#x5316;&#x548C;&#x4F9D;&#x8D56;&#x4F34;&#x4FA3;&#x7684;&#x7CD6;&#x76AE;&#x8D28;&#x6FC0;&#x7D20;&#x53D7;&#x4F53;&#x7684;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x3002;

The molecular chaperone heat shock protein 90 (Hsp90) and its accessory cochaperones function by facilitating the structural maturation and complex assembly of client proteins, including steroid hormone receptors and selected kinases. By promoting the activity and stability of these signaling proteins, Hsp90 has emerged as a critical modulator in cell signaling. Here, we present evidence that Hsp90 chaperone activity is regulated by reversible acetylation and controlled by the deacetylase HDAC6. We show that HDAC6 functions as an Hsp90 deacetylase. Inactivation of HDAC6 leads to Hsp90 hyperacetylation, its dissociation from an essential cochaperone, p23, and a loss of chaperone activity. In HDAC6-deficient cells, Hsp90-dependent maturation of the glucocorticoid receptor (GR) is compromised, resulting in GR defective in ligand binding, nuclear translocation, and transcriptional activation. Our results identify Hsp90 as a target of HDAC6 and suggest reversible acetylation as a unique mechanism that regulates Hsp90 chaperone complex activity.

HDAC6 regulates Hsp90 acetylation and chaperone-dependent activation of glucocorticoid receptor.

La prot&eacute;ine chaperon mol&eacute;culaire de choc thermique 90 (Hsp90) et son accessoire cochaperones fonction de faciliter la maturation structurelle et un assemblage complexe de prot&eacute;ines de client, y compris des r&eacute;cepteurs des hormones st&eacute;ro&iuml;des et certaines kinases. En favorisant l&#39;activit&eacute; et la stabilit&eacute; de ces prot&eacute;ines de signalisation, Hsp90 est apparu comme un modulateur critique dans la signalisation cellulaire. Nous pr&eacute;sentons ici la preuve que l&#39;activit&eacute; Hsp90 chaperon est r&eacute;gie par ac&eacute;tylation r&eacute;versible et contr&ocirc;l&eacute;e par la d&eacute;sac&eacute;tylase HDAC6. Nous montrons que HDAC6 fonctionne comme une d&eacute;sac&eacute;tylase Hsp90. Inactivation de HDAC6 conduit &agrave; hyperac&eacute;tylation Hsp90, sa dissociation d&#39;un essentiel cochaperons, p23 et une perte d&#39;activit&eacute; chaperon. Dans les cellules d&eacute;ficientes en HDAC6, maturation de Hsp90 d&eacute;pendant du r&eacute;cepteur des glucocortico&iuml;des (GR) est compromise, ayant pour r&eacute;sultat d&eacute;fectueux GR dans la liaison du ligand, translocation nucl&eacute;aire et activation de la transcription. Nos r&eacute;sultats identifient Hsp90 comme une cible de HDAC6 et sugg&egrave;rent une ac&eacute;tylation r&eacute;versible comme un m&eacute;canisme unique qui r&eacute;gule l&#39;activit&eacute; complexe de la Hsp90 chaperon.

HDAC6 r&eacute;gule l&#39;ac&eacute;tylation de la Hsp90 et activation du Chaperon-d&eacute;pendante du r&eacute;cepteur des glucocortico&iuml;des.

HDAC6 regelt Hsp90 Acetylierung und Chaperon-abh&#xE4;ngige Aktivierung von Glucocorticoid-Rezeptor.

La proteina di scossa di calore chaperone molecolare 90 (Hsp90) e suo accessorio cochaperones funzione facilitando la maturazione strutturale e complesso assemblaggio delle proteine client, tra cui i recettori dell&#39;ormone steroide e selezionate le chinasi. Promuovendo l&#39;attivit&agrave; e la stabilit&agrave; di queste proteine di segnalazione, Hsp90 &egrave; emerso come un modulatore critico nella segnalazione delle cellule. Presentiamo qui, prove che attivit&agrave; di chaperone Hsp90 &egrave; regolata da acetilazione reversibile e controllato da deacetylase HDAC6. Mostriamo che HDAC6 funziona come un deacetylase Hsp90. Inattivazione di HDAC6 porta a Hsp90 hyperacetylation, sua dissociazione da un essenziale cochaperone, p23 e una perdita di attivit&agrave; di chaperone. Nelle cellule HDAC6-carenti, maturazione Hsp90-dipendente del recettore glucocorticoidi (GR) &egrave; compromessa, con conseguente difettoso GR in ligand binding, traslocazione nucleare e attivazione trascrizionale. I nostri risultati identificano Hsp90 come bersaglio di HDAC6 e suggeriscono acetilazione reversibile come un unico meccanismo che regola l&#39;attivit&agrave; complessa di chaperone Hsp90.

HDAC6 regola Hsp90 acetilazione e chaperone-dipendente dalla attivazione dei recettori glucocorticoidi.

&#x5206;&#x5B50;&#x30B7;&#x30E3;&#x30DA;&#x30ED;&#x30F3;&#x71B1;&#x30B7;&#x30E7;&#x30C3;&#x30AF;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA; 90 (Hsp90) &#x3068;&#x305D;&#x306E;&#x4ED8;&#x5C5E;&#x54C1; cochaperones &#x95A2;&#x6570;&#x69CB;&#x9020;&#x306E;&#x6210;&#x719F;&#x3068;&#x30B9;&#x30C6;&#x30ED;&#x30A4;&#x30C9; &#x30DB;&#x30EB;&#x30E2;&#x30F3;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x3068;&#x9078;&#x629E;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x30AF;&#x30E9;&#x30A4;&#x30A2;&#x30F3;&#x30C8;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x306E;&#x8907;&#x96D1;&#x306A;&#x30A2;&#x30BB;&#x30F3;&#x30D6;&#x30EA;&#x3092;&#x4FC3;&#x9032;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3088;&#x308A;&#x3002;&#x6D3B;&#x52D5;&#x3068;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x306E;&#x5B89;&#x5B9A;&#x6027;&#x3092;&#x4FC3;&#x9032;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x3001;Hsp90 &#x7D30;&#x80DE;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x3001;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x5909;&#x8ABF;&#x5668;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x6D6E;&#x4E0A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x6211;&#x3005; Hsp90 &#x30B7;&#x30E3;&#x30DA;&#x30ED;&#x30F3;&#x6D3B;&#x6027;&#x306F;&#x3001;&#x30EA;&#x30D0;&#x30FC;&#x30B7;&#x30D6;&#x30EB;&#x306E;&#x30A2;&#x30BB;&#x30C1;&#x30EB;&#x5316;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x898F;&#x5236;&#x3055;&#x308C;&#x30C7;&#x30A2;&#x30BB;&#x30C1;&#x30E9;&#x30FC;&#x30BC; HDAC6 &#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x5236;&#x5FA1;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x8A3C;&#x62E0;&#x3092;&#x63D0;&#x793A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;HDAC6 &#x306B; Hsp90 &#x8131;&#x30A2;&#x30BB;&#x30C1;&#x30EB;&#x5316;&#x9175;&#x7D20;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;Hsp90 hyperacetylation&#x3001;&#x305D;&#x306E;&#x672C;&#x8CEA;&#x7684;&#x306A; cochaperone&#x3001;p23 &#x3068;&#x30B7;&#x30E3;&#x30DA;&#x30ED;&#x30F3;&#x6D3B;&#x6027;&#x306E;&#x640D;&#x5931;&#x304B;&#x3089;&#x89E3;&#x96E2; HDAC6 &#x306E;&#x4E0D;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x306B; &#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;HDAC6 &#x4E0D;&#x5341;&#x5206;&#x306A;&#x30BB;&#x30EB;&#x3067;&#x3001;&#x30B0;&#x30EB;&#x30B3;&#x30B3;&#x30EB;&#x30C1;&#x30B3;&#x30A4;&#x30C9;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53; &#xFF08;GR&#xFF09; &#x306E; Hsp90 &#x4F9D;&#x5B58;&#x578B;&#x6210;&#x719F; GR &#x6B20;&#x9665;&#x306E;&#x30EA;&#x30AC;&#x30F3;&#x30C9;&#x7D50;&#x5408;&#x3001;&#x6838;&#x8EE2;&#x5EA7;&#x8EE2;&#x5199;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x304C;&#x640D;&#x306A;&#x308F;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005; &#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x306F; Hsp90 HDAC6 &#x306E;&#x5BFE;&#x8C61;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x8B58;&#x5225;&#x3057;&#x3066;&#x53EF;&#x9006;&#x7684;&#x30A2;&#x30BB;&#x30C1;&#x30EB;&#x5316; Hsp90 &#x30B7;&#x30E3;&#x30DA;&#x30ED;&#x30F3;&#x8907;&#x5408;&#x6D3B;&#x6027;&#x3092;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x3059;&#x308B;&#x72EC;&#x81EA;&#x306E;&#x6A5F;&#x69CB;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x63D0;&#x6848;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

HDAC6 &#x306B; Hsp90 &#x306E;&#x30A2;&#x30BB;&#x30C1;&#x30EB;&#x5316;&#x3068;&#x30B7;&#x30E3;&#x30DA;&#x30ED;&#x30F3;&#x4F9D;&#x5B58;&#x6027;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x30B0;&#x30EB;&#x30B3;&#x30B3;&#x30EB;&#x30C1;&#x30B3;&#x30A4;&#x30C9;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x3092;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#xBD84;&#xC790; &#xBCF4;&#xD638;&#xC790; &#xC5F4; &#xCDA9;&#xACA9; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; 90 (Hsp90)&#xC758; &#xC561;&#xC138;&#xC11C;&#xB9AC; &#xAE30;&#xB2A5; &#xAD6C;&#xC870; &#xC644;&#xC131; &#xBC0F; &#xD074;&#xB77C;&#xC774;&#xC5B8;&#xD2B8; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;, &#xC2A4;&#xD14C;&#xB85C;&#xC774;&#xB4DC; &#xD638;&#xB974;&#xBAAC; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4;&#xC640; &#xC120;&#xD0DD;&#xD55C; kinases &#xB4F1;&#xC758; &#xBCF5;&#xC7A1; &#xD55C; &#xC5B4;&#xC148;&#xBE14;&#xB9AC;&#xB97C; &#xCD09;&#xC9C4; &#xD558; &#xC5EC; cochaperones &#xBC0F;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xC2E0;&#xD638; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xC548;&#xC815;&#xC131;&#xACFC; &#xD65C;&#xB3D9;&#xC744; &#xD64D;&#xBCF4; &#xD558; &#xC5EC; Hsp90 &#xC138;&#xD3EC; &#xC2E0;&#xD638;&#xC5D0; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xBCC0;&#xC870;&#xAE30;&#xB85C; &#xB5A0;&#xC624;&#xB974;&#xACE0; &#xC788;&#xB2E4;. &#xC5EC;&#xAE30;, &#xC120;&#xBB3C;&#xC774; &#xC99D;&#xAC70; Hsp90 &#xBCF4;&#xD638;&#xC790; &#xD65C;&#xB3D9;&#xC740; &#xAC00;&#xC5ED; acetylation &#xADDC;&#xC81C; &#xD558; &#xACE0; deacetylase hdac6&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC81C;&#xC5B4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; HDAC6 Hsp90 deacetylase&#xB85C; &#xC791;&#xB3D9; &#xD558;&#xB294; &#xAC83;&#xC744; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. Hdac6&#xC758; &#xBE44;&#xD65C;&#xC131;&#xD654; Hsp90 hyperacetylation, &#xADF8;&#xAC83;&#xC758; &#xBD84;&#xB9AC;&#xB294; &#xD544;&#xC218; cochaperone, p23, &#xBCF4;&#xD638;&#xC790; &#xD65C;&#xB3D9;&#xC758; &#xC190;&#xC2E4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC774;&#xC5B4;&#xC9D1;&#xB2C8;&#xB2E4;. HDAC6-&#xBD88;&#xCDA9;&#xBD84; &#xD55C; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0;&#xC11C; ligand &#xBC14;&#xC778;&#xB529;, &#xD575; &#xC804; transcriptional &#xD65C;&#xC131;&#xD654;&#xC5D0; GR &#xACB0;&#xD568;&#xC758; &#xACB0;&#xACFC;&#xB85C; glucocorticoid &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; (GR)&#xC758; Hsp90 &#xC885;&#xC18D; &#xC131;&#xC219; &#xC190;&#xC0C1; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xACB0;&#xACFC; hdac6&#xC758; &#xB300;&#xC0C1;&#xC73C;&#xB85C; Hsp90 &#xC2DD;&#xBCC4; &#xD558; &#xACE0; &#xAC00;&#xC5ED; acetylation Hsp90 &#xBCF4;&#xD638;&#xC790; &#xBCF5;&#xC7A1; &#xD55C; &#xD65C;&#xB3D9;&#xC744; &#xC870;&#xC808; &#xD558;&#xB294; &#xB3C5;&#xD2B9;&#xD55C; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;&#xC73C;&#xB85C; &#xAC83;&#xC774; &#xC88B;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

HDAC6 Hsp90 acetylation &#xBC0F; &#xBCF4;&#xD638;&#xC790; &#xC885;&#xC18D; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; glucocorticoid &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4;&#xC758; &#xC870;&#xC808;.

La prote&iacute;na de choque de calor molecular chaperone 90 (Hsp90) y su accesorio cochaperones funci&oacute;n facilitando la maduraci&oacute;n estructural y complejo conjunto de prote&iacute;nas del cliente, incluyendo receptores de hormonas esteroides y las quinasas. Mediante la promoci&oacute;n de la actividad y estabilidad de estas prote&iacute;nas de se&ntilde;alizaci&oacute;n, Hsp90 ha surgido como un modulador importante en la se&ntilde;alizaci&oacute;n celular. Aqu&iacute;, presentamos evidencia que Hsp90 acompa&ntilde;ante actividad es regulada por acetilaci&oacute;n reversible y controlado por la deacetilasa HDAC6. Mostramos que HDAC6 funciona como una deacetilasa Hsp90. Inactivaci&oacute;n de HDAC6 conduce a Hsp90 hyperacetylation, su disociaci&oacute;n de un cochaperone esencial, p23 y una p&eacute;rdida de actividad de acompa&ntilde;ante. En c&eacute;lulas de HDAC6-deficientes, maduraci&oacute;n Hsp90 dependiente de los receptores de glucocorticoides (GR) est&aacute; comprometida, dando por resultado defectuoso GR ligando, translocaci&oacute;n nuclear y activaci&oacute;n transcripcional. Nuestros resultados Hsp90 identifican como un objetivo de HDAC6 y sugieren la acetilaci&oacute;n reversible como &uacute;nico mecanismo que regula la actividad compleja de chaperona Hsp90.

HDAC6 regula la acetilaci&oacute;n de Hsp90 y activaci&oacute;n de acompa&ntilde;ante dependiente del receptor de glucocorticoides.

&#x4F17;&#x6240;&#x5468;&#x77E5;&#x7EC4;&#x86CB;&#x767D;&#x5316;&#x9176; &#xFF08;HDACs&#xFF09; &#x7684;&#x6291;&#x5236;&#x4F5C;&#x7528;&#xFF0C;&#x5BFC;&#x81F4;&#x5BF9;&#x4E30;&#x5BCC;&#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x4F34;&#x4FA3;&#x70ED;&#x4F11;&#x514B;&#x86CB;&#x767D; 90 &#x7684;&#x4E59;&#x9170;&#x5316;&#x3002;&#x5728;&#x6700;&#x8FD1;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x4E2D;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x5DF2;&#x8868;&#x660E;&#x67D0;&#x9879;&#x5177;&#x4F53;&#x7684; HDAC6&#xFF0C;&#x6572;&#x5C0F;&#x5206;&#x5B50;&#x5E72;&#x6270; RNA &#x5BFC;&#x81F4;&#x7684;&#x70ED;&#x4F11;&#x514B;&#x86CB;&#x767D; 90 hyperacetylation &#x548C;&#x7CD6;&#x76AE;&#x8D28;&#x6FC0;&#x7D20;&#x53D7;&#x4F53; (GR) &#x65E2;&#x5B9A;&#x7684;&#x70ED;&#x4F11;&#x514B;&#x86CB;&#x767D; 90&quot;&#x5BA2;&#x6237;&#x7AEF;&quot;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#xFF0C;&#x662F;&#x5728;&#x914D;&#x4F53;&#x7ED3;&#x5408;&#x3001; &#x6838;&#x79FB;&#x4F4D;&#x548C; HDAC6 &#x7F3A;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E2D;&#x7684;&#x57FA;&#x56E0;&#x6D3B;&#x5316;&#x5B58;&#x5728;&#x7F3A;&#x9677; (&#x79D1;&#x74E6;&#x5947;&#x3001; J.J.&#x3001; &#x58A8;&#x83F2;&#xFF0C;P.J.M.&#x3001; &#x51EF;&#x7EB3; S.&#xFF0C;&#x8D75;&#xFF0C;&#x5341;&#x3001; &#x5434;&#xFF0C;J T.&#x3001; Nicchitta&#x3001; C.V&#x3002;&#x5409;&#x7530;&#xFF0C;M.&#xFF0C;&#x5730;&#x57FA; D.O.&#x3001; &#x666E;&#x62C9;&#x7279;&#x3001; W.B.&#x59DA;&#xFF0C;T &#x4F53;&#x80B2;(2005 &#x5E74;) mol.&#x7EC6;&#x80DE; 18&#x3001; 601 607)&#x3002;&#x4F7F;&#x7528;&#x4EBA;&#x7C7B;&#x80DA;&#x80CE;&#x80BE;&#x91CE;&#x751F;&#x578B;&#x548C; HDAC6 (&#x5C0F;&#x5E72;&#x6270; RNA) &#x7EC4;&#x5408;&#x5F0F;&#x6682;&#x6001;&#x8868;&#x793A;&#x9F20;&#x6807; GR &#x7684;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#x5C55;&#x793A;&#x7684;&#x53D7;&#x4F53;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x672C;&#x8EAB;&#x7684;&#x5185;&#x5728;&#x5C5E;&#x6027;&#x4E0D;&#x53D7; HDAC6 &#x7EC4;&#x5408;&#x5F0F;&#x4F46;&#x51FB;&#x5012;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8D28;&#x6DB2;&#x5DF2;&#x88C5;&#x914D;&#x7A33;&#x5B9A; GR.hsp90 heterocomplexes &#x548C;&#x751F;&#x6210;&#x65E0;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x6761;&#x4EF6;&#x4E0B;&#x7A33;&#x5B9A;&#x7684;&#x7C7B;&#x56FA;&#x9187;&#x7ED3;&#x5408;&#x6D3B;&#x6027;&#x663E;&#x8457;&#x51CF;&#x5C11;&#x7684;&#x80FD;&#x529B;&#x3002;HDAC6 &#x7EC4;&#x5408;&#x5F0F;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8D28;&#x6DB2;&#x5177;&#x6709;&#x76F8;&#x540C;&#x80FD;&#x529B;&#x8FDB;&#x884C;&#x52A8;&#x6001; GR.hsp90 heterocomplex &#x7A0B;&#x5E8F;&#x96C6;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x91CE;&#x751F;&#x578B;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8D28;&#x6DB2;&#x3002;&#x6DFB;&#x52A0;&#x5230; HDAC6 &#x7EC4;&#x5408;&#x5F0F;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8D28;&#x6DB2;&#x7EAF;&#x5316;&#x70ED;&#x4F11;&#x514B;&#x86CB;&#x767D; 90 &#x7684;&#x91CE;&#x751F;&#x578B;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8D28;&#x6DB2;&#x6C34;&#x5E73;&#x6062;&#x590D;&#x7A33;&#x5B9A; GR.hsp90 heterocomplex &#x5927;&#x4F1A;&#x3002;&#x70ED;&#x4F11;&#x514B;&#x86CB;&#x767D; 90 HDAC6 &#x7EC4;&#x5408;&#x5F0F;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8D28;&#x6DB2;&#x4ECE;&#x51CF;&#x5C11;&#x4E86; ATP &#x7ED3;&#x5408;&#x4EB2;&#x548C;&#x529B;&#xFF0C;&#x548C;&#x5B83;&#x4E0D;&#x88C5;&#x914D;&#x7A33;&#x5B9A; GR.hsp90 heterocomplexes&#xFF0C;&#x5F53;&#x5B83;&#x662F;&#x4E00;&#x4E2A;&#x7A0B;&#x5E8F;&#x96C6;&#x4E94;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x7EAF;&#x5316;&#x7684;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x7684;&#x4E00;&#x4E2A;&#x7EC4;&#x6210;&#x90E8;&#x5206;&#x3002;&#x5B75;&#x5316;&#x4E0E;&#x7EAF;&#x51C0; HDAC6 &#x7EC4;&#x5408;&#x5F0F;&#x7EC6;&#x80DE;&#x70ED;&#x4F11;&#x514B;&#x86CB;&#x767D; 90 &#x5C06;&#x70ED;&#x4F11;&#x514B;&#x86CB;&#x767D; 90 &#x8F6C;&#x6362;&#x4E3A;&#x91CE;&#x751F;&#x578B;&#x884C;&#x4E3A;&#x3002;&#x56E0;&#x6B64;&#xFF0C;&#x4E59;&#x9170;&#x5316;&#x7684;&#x70ED;&#x4F11;&#x514B;&#x86CB;&#x767D; 90 &#x5728;&#x52A8;&#x6001; GR.hsp90 heterocomplex &#x7EC4;&#x88C5;/&#x62C6;&#x5378;&#xFF0C;&#x7ED3;&#x679C;&#xFF0C;&#x8FD9;&#x662F;&#x6E05;&#x5355;&#x4E2D;&#x7684;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x5927;&#x7EA6; 100-fold &#x57FA;&#x56E0;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x7684;&#x7C7B;&#x56FA;&#x9187;&#x6FC0;&#x7D20;&#x5242;&#x91CF;&#x54CD;&#x5E94;&#x4E2D;&#x5411;&#x53F3;&#x79FB;&#x4F4D;&#x3002;

&#x70ED;&#x4F11;&#x514B;&#x86CB;&#x767D; 90 &#x884C;&#x52A8;&#x4E0A;&#x7684;&#x4E59;&#x9170;&#x5316;/&#x8131;&#x4E59;&#x9170;&#x5316;&#x7684;&#x7CD6;&#x76AE;&#x8D28;&#x6FC0;&#x7D20;&#x53D7;&#x4F53;&#x7684;&#x4F34;&#x4FA3;&#x7684;&#x52A8;&#x6001;&#x8C03;&#x8282;&#x3002;

It is known that inhibition of histone deacetylases (HDACs) leads to acetylation of the abundant protein chaperone hsp90. In a recent study, we have shown that knockdown of HDAC6 by a specific small interfering RNA leads to hyperacetylation of hsp90 and that the glucocorticoid receptor (GR), an established hsp90 "client" protein, is defective in ligand binding, nuclear translocation, and gene activation in HDAC6-deficient cells (Kovacs, J. J., Murphy, P. J. M., Gaillard, S., Zhao, X., Wu, J-T., Nicchitta, C. V., Yoshida, M., Toft, D. O., Pratt, W. B., and Yao, T-P. (2005) Mol. Cell 18, 601-607). Using human embryonic kidney wild-type and HDAC6 (small interfering RNA) knockdown cells transiently expressing the mouse GR, we show here that the intrinsic properties of the receptor protein itself are not affected by HDAC6 knockdown, but the knockdown cytosol has a markedly decreased ability to assemble stable GR.hsp90 heterocomplexes and generate stable steroid binding activity under cell-free conditions. HDAC6 knockdown cytosol has the same ability to carry out dynamic GR.hsp90 heterocomplex assembly as wild-type cytosol. Addition of purified hsp90 to HDAC6 knockdown cytosol restores stable GR.hsp90 heterocomplex assembly to the level of wild-type cytosol. hsp90 from HDAC6 knockdown cytosol has decreased ATP-binding affinity, and it does not assemble stable GR.hsp90 heterocomplexes when it is a component of a purified five-protein assembly system. Incubation of knockdown cell hsp90 with purified HDAC6 converts the hsp90 to wild-type behavior. Thus, acetylation of hsp90 results in dynamic GR.hsp90 heterocomplex assembly/disassembly, and this is manifest in the cell as a approximately 100-fold shift to the right in the steroid dose response for gene activation.

Regulation of the dynamics of hsp90 action on the glucocorticoid receptor by acetylation/deacetylation of the chaperone.

Il est connu que l&#39;inhibition de l&#39;histone d&eacute;sac&eacute;tylases (HDAC) conduit &agrave; l&#39;ac&eacute;tylation de la hsp90 chaperon de prot&eacute;ine abondante. Dans une &eacute;tude r&eacute;cente, nous avons montr&eacute; cette pr&eacute;cipitation d&#39;HDAC6 par un particulier de petits ARN interf&eacute;rents conduit &agrave; hyperac&eacute;tylation de hsp90 et que le r&eacute;cepteur des glucocortico&iuml;des (GR), une prot&eacute;ine hsp90 &eacute;tablies &laquo; client &raquo; est d&eacute;fectueux dans la liaison du ligand, translocation nucl&eacute;aire et activation de g&egrave;nes dans les cellules d&eacute;ficientes en HDAC6 (Kovacs, J. J., Murphy, P. J. M., Gaillard, S., Zhao, x., Wu, J.-T., Nicchitta, C. V.Toft Yoshida, M., d. O. Pratt, W. B. et Yao, T.-P. (2005) Mol Cell 18, 601-607). &Agrave; l&#39;aide de rein embryonnaire humain sauvage et HDAC6 (petite interf&eacute;rence RNA) d&eacute;fiant les cellules exprimant transitoirement la souris GR, nous montrons ici que les propri&eacute;t&eacute;s intrins&egrave;ques de la prot&eacute;ine du r&eacute;cepteur lui-m&ecirc;me ne sont pas affect&eacute;es par pr&eacute;cipitation HDAC6, mais le cytosol knockdown a une capacit&eacute; nettement diminu&eacute;e &agrave; assembler stable GR.hsp90 heterocomplexes et g&eacute;n&eacute;rer une activit&eacute; de liaison des st&eacute;ro&iuml;des stable dans des conditions sans cellule. HDAC6 cytosol knockdown a la m&ecirc;me capacit&eacute; de mener des assembly dynamique de h&eacute;t&eacute;rocomplexe GR.hsp90 dans le cytosol de type sauvage. Ajout de hsp90 purifi&eacute;e au cytosol d&eacute;fiant HDAC6 restaure stable GR.hsp90 h&eacute;t&eacute;rocomplexe Assembl&eacute;e au niveau du cytosol de type sauvage. hsp90 du cytosol d&eacute;fiant HDAC6 a diminu&eacute; ATP-affinit&eacute;, et il ne pas assembler stable GR.hsp90 heterocomplexes quand c&#39;est un composant d&#39;un syst&egrave;me d&#39;assemblage de cinq prot&eacute;ines purifi&eacute;es. L&#39;incubation de hsp90 cellule d&eacute;montable avec HDAC6 purifi&eacute;e convertit la hsp90 comportement sauvage. Ainsi, l&#39;ac&eacute;tylation de hsp90 se traduit par la dynamique GR.hsp90 h&eacute;t&eacute;rocomplexe montage/d&eacute;montage, et cela est manifeste dans la cellule comme un d&eacute;placement environ 100 fois vers la droite dans la r&eacute;ponse de la dose de st&eacute;ro&iuml;des pour l&#39;activation du g&egrave;ne.

R&egrave;glement de la dynamique d&#39;action de la hsp90 sur le r&eacute;cepteur des glucocortico&iuml;des par ac&eacute;tylation/d&eacute;sac&eacute;tylation de l&#39;escorte.

Regulierung der Dynamik von hsp90 Wirkung auf den Glucocorticoid-Rezeptor durch Acetylierung / Deacetylierung des Chaperon.

&Egrave; noto che l&#39;inibizione dei deacetylases dell&#39;istone (HDACs) conduce alla acetilazione dell&#39;abbondante proteina chaperone hsp90. In un recente studio, abbiamo dimostrato che atterramento di HDAC6 da uno specifico che il recettore glucocorticoidi (GR), una proteina hsp90 stabilito di &quot;client&quot;, &egrave; difettoso in ligand binding, traslocazione nucleare e attivazione del gene in cellule di HDAC6-deficient e piccolo RNA interferente conduce al hyperacetylation di hsp90 (Kovacs, J. J., Murphy, P. J. M., Gaillard, S., Zhao, x., Wu, T. J, Nicchitta, C. V.Toft Yoshida, M., d. O., Pratt, w. B. e Yao, T-P. (2005) PM = cella 18, 601-607). Utilizzando Rene embrionale umano wild-type e atterramento HDAC6 (small interfering RNA) le cellule che esprimono transitoriamente il mouse GR, mostriamo qui che le propriet&agrave; intrinseche della proteina recettore stesso non sono influenzate da HDAC6 atterramento, ma nel citosol atterramento ha una capacit&agrave; notevolmente diminuito assemblare stabile GR.hsp90 heterocomplexes e generare attivit&agrave; stabile associazione steroidi in cella senza condizioni. HDAC6 atterramento cytosol ha la stessa capacit&agrave; di svolgere GR.hsp90 heterocomplex assembly dinamico come wild-type citosol. Aggiunta di hsp90 purificato per atterramento citosol HDAC6 Ripristina stabile GR.hsp90 heterocomplex assieme al livello di citosol wild-type. Hsp90 dal citosol atterramento HDAC6 &egrave; diminuita affinit&agrave; di legame di ATP, ed esso non assemblare stabile GR.hsp90 heterocomplexes quando si tratta di un componente di un sistema di assemblaggio di cinque-proteina purificata. Incubazione di atterramento cella hsp90 con HDAC6 purificato converte la hsp90 selvaggio-tipo comportamento. Cos&igrave;, acetilazione di hsp90 risultati nella dinamico GR.hsp90 heterocomplex montaggio/smontaggio, e questo &egrave; manifesto nella cella come uno spostamento di circa 100 volte a destra nella risposta dose di steroidi per l&#39;attivazione del gene.

Regolamento della dinamica di hsp90 azione sui recettori glucocorticoidi di acetilazione/deacetilazione del chaperone.

&#x30D2;&#x30B9;&#x30C8;&#x30F3;&#x8131;&#x30A2;&#x30BB;&#x30C1;&#x30EB;&#x3092; &#xFF08;HDACs&#xFF09; &#x963B;&#x5BB3;&#x8C4A;&#x5BCC;&#x306A;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x30B7;&#x30E3;&#x30DA;&#x30ED;&#x30F3; hsp90 &#x306E;&#x30A2;&#x30BB;&#x30C1;&#x30EB;&#x5316;&#x306B;&#x3064;&#x306A;&#x304C;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x77E5;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6700;&#x8FD1;&#x306E;&#x7814;&#x7A76;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x6211;&#x3005; &#x306F;&#x3001;&#x4F4E;&#x5206;&#x5B50;&#x5E72;&#x6E09; RNA hsp90 &#x306E; hyperacetylation &#x306B;&#x3064;&#x306A;&#x304C;&#x308B;&#x3057;&#x3001;&#x30B0;&#x30EB;&#x30B3;&#x30B3;&#x30EB;&#x30C1;&#x30B3;&#x30A4;&#x30C9;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53; (GR) &#x306F;&#x78BA;&#x7ACB;&#x3055;&#x308C;&#x305F; hsp90&#x300C;&#x30AF;&#x30E9;&#x30A4;&#x30A2;&#x30F3;&#x30C8;&#x300D;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x30EA;&#x30AC;&#x30F3;&#x30C9;&#x7D50;&#x5408;&#x3001;&#x6838;&#x8EE2;&#x5EA7; HDAC6 &#x6B20;&#x640D;&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x6B20;&#x9665;&#x304C;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306E;&#x7279;&#x5B9A;&#x306B;&#x3088;&#x308B; HDAC6 &#x306E;&#x30CE;&#x30C3;&#x30AF;&#x30C0;&#x30A6;&#x30F3;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B; (&#x30B3;&#x30D0;&#x30C1;&#x3001;&#x30B8;&#x30E5;&#x30F3;&#x30B8;&#x30A8;&#x3001;JJ&#x3001;&#x30DE;&#x30FC;&#x30D5;&#x30A3;&#x30FC;&#x3001;P. J. M.&#x3001;&#x30AC;&#x30A4;&#x30E4;&#x30FC;&#x30EB;&#x3001;&#x8061;&#x30FB;&#x8D99;&#x5449;&#x3001;x. J &#x54F2;&#x7537;, Nicchitta, C. V&#x3002;&#x3001;&#x5409;&#x7530;&#x96C5;&#x3001;&#x30C8;&#x30D5;&#x30C8; &#x30D7;&#x30E9;&#x30C3;&#x30C8;&#x3001;W. B.&#x3001;&#x516B;&#x5C3E;&#x3001;T p. d. o.&#xFF08;2005 &#x5E74;&#xFF09; &#x5206;&#x5B50;&#x91CF;&#x7D30;&#x80DE; 18, 601-607)&#x3002;&#x4EBA;&#x9593;&#x306E;&#x840C;&#x82BD;&#x671F;&#x306E;&#x814E;&#x81D3;&#x91CE;&#x751F;&#x578B;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9; GR &#x3092;&#x4E00;&#x904E;&#x6027;&#x767A;&#x73FE;&#x7D30;&#x80DE;&#x3001;&#x6211;&#x3005; &#x3053;&#x3053;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x81EA;&#x4F53;&#x306E;&#x56FA;&#x6709;&#x7269;&#x6027; HDAC6 &#x30CE;&#x30C3;&#x30AF;&#x30C0;&#x30A6;&#x30F3;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x5F71;&#x97FF;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x304C;&#x30CE;&#x30C3;&#x30AF;&#x30C0;&#x30A6;&#x30F3;&#x7D30;&#x80DE;&#x8CEA;&#x5B89;&#x5B9A;&#x3057;&#x305F; GR.hsp90 heterocomplexes &#x3092;&#x30A2;&#x30BB;&#x30F3;&#x30D6;&#x30EB;&#x3057;&#x3066;&#x7121;&#x6599;&#x306E;&#x30BB;&#x30EB;&#x6761;&#x4EF6;&#x4E0B;&#x3067;&#x5B89;&#x5B9A;&#x3057;&#x305F;&#x30B9;&#x30C6;&#x30ED;&#x30A4;&#x30C9;&#x7D50;&#x5408;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D3;&#x30C6;&#x30A3;&#x3092;&#x751F;&#x6210;&#x3059;&#x308B;&#x80FD;&#x529B;&#x306E;&#x8457;&#x3057;&#x304F;&#x4F4E;&#x4E0B;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3059; (&#x5C0F;&#x3055;&#x306A; RNA &#x5E72;&#x6E09;&#xFF09; HDAC6 &#x30CE;&#x30C3;&#x30AF;&#x30C0;&#x30A6;&#x30F3;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;HDAC6 &#x30CE;&#x30C3;&#x30AF;&#x30C0;&#x30A6;&#x30F3;&#x7D30;&#x80DE;&#x8CEA;&#x306F;&#x91CE;&#x751F;&#x578B;&#x7D30;&#x80DE;&#x8CEA;&#x3068;&#x52D5;&#x7684; GR.hsp90 &#x91CD;&#x5408;&#x30A2;&#x30BB;&#x30F3;&#x30D6;&#x30EA;&#x3092;&#x9042;&#x884C;&#x3059;&#x308B;&#x540C;&#x3058;&#x6A5F;&#x80FD;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x7CBE;&#x88FD; hsp90 HDAC6 &#x30CE;&#x30C3;&#x30AF;&#x30C0;&#x30A6;&#x30F3;&#x7D30;&#x80DE;&#x8CEA;&#x3078;&#x306E;&#x6DFB;&#x52A0;&#x5B89;&#x5B9A; GR.hsp90 &#x91CD;&#x5408;&#x30A2;&#x30BB;&#x30F3;&#x30D6;&#x30EA;&#x91CE;&#x751F;&#x578B;&#x7D30;&#x80DE;&#x8CEA;&#x306E;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x306B;&#x5FA9;&#x5143;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;hsp90 HDAC6 &#x30CE;&#x30C3;&#x30AF;&#x30C0;&#x30A6;&#x30F3;&#x7D30;&#x80DE;&#x8CEA;&#x304B;&#x3089; ATP &#x7D50;&#x5408;&#x89AA;&#x548C;&#x6027;&#x3001;&#x6E1B;&#x5C11;&#x3057;&#x3066;&#x304A;&#x308A;&#x3001;&#x7CBE;&#x88FD; 5 &#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x7D44;&#x7ACB;&#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E0;&#x306E;&#x30B3;&#x30F3;&#x30DD;&#x30FC;&#x30CD;&#x30F3;&#x30C8;&#x3068;&#x304D;&#x5B89;&#x5B9A;&#x3057;&#x305F; GR.hsp90 heterocomplexes &#x3092;&#x30A2;&#x30BB;&#x30F3;&#x30D6;&#x30EB;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3002;&#x7CBE;&#x88FD;&#x3057;&#x305F; HDAC6 &#x306B;&#x30CE;&#x30C3;&#x30AF;&#x30C0;&#x30A6;&#x30F3;&#x7D30;&#x80DE; hsp90 &#x306E;&#x30A4;&#x30F3;&#x30AD;&#x30E5;&#x30D9;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x3001;hsp90 &#x306F;&#x91CE;&#x751F;&#x578B;&#x306E;&#x52D5;&#x4F5C;&#x306B;&#x5909;&#x63DB;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3057;&#x305F;&#x304C;&#x3063;&#x3066;&#x3001;hsp90 &#x306E;&#x30A2;&#x30BB;&#x30C1;&#x30EB;&#x5316;&#x7D50;&#x679C;&#x304C;&#x52D5;&#x7684; GR.hsp90 &#x91CD;&#x5408;&#x7D44;&#x7ACB;/&#x5206;&#x89E3;&#x3067;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x30DE;&#x30CB;&#x30D5;&#x30A7;&#x30B9;&#x30C8;&#x306E;&#x30BB;&#x30EB;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x7D04; 100 &#x500D;&#x306E;&#x30B7;&#x30D5;&#x30C8;&#x3001;&#x53F3;&#x30B9;&#x30C6;&#x30ED;&#x30A4;&#x30C9;&#x6295;&#x4E0E;&#x91CF;&#x5FDC;&#x7B54;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x3067;&#x3059;&#x3002;

&#x30A2;&#x30BB;&#x30C1;&#x30EB;&#x5316;/&#x8131;&#x30A2;&#x30BB;&#x30C1;&#x30EB;&#x5316;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x30B0;&#x30EB;&#x30B3;&#x30B3;&#x30EB;&#x30C1;&#x30B3;&#x30A4;&#x30C9;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x3001;&#x30B7;&#x30E3;&#x30DA;&#x30ED;&#x30F3; hsp90 &#x4F5C;&#x7528;&#x306E;&#x30C0;&#x30A4;&#x30CA; &#x30DF;&#x30C3;&#x30AF;&#x30B9;&#x306E;&#x898F;&#x5236;&#x3002;

&#xD788;&#xC2A4;&#xD1A4; deacetylases (HDACs)&#xC758; &#xC800;&#xD574; &#xD48D;&#xBD80;&#xD55C; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xBCF4;&#xD638;&#xC790; hsp90 acetylation&#xC5D0; &#xC774;&#xB974;&#xAC8C; &#xD558;&#xB294; &#xAC83;&#xC774; &#xC54C;&#xB824;&#xC838; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xCD5C;&#xADFC; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xC5D0;&#xC11C;&#xB294; &#xC791;&#xC740; &#xAC04;&#xC12D; RNA &#xB9AC;&#xB4DC; hsp90 hyperacetylation &#xD558; &#xACE0; &#xC218;&#xC6A9; glucocorticoid &#xCCB4; (GR) &#xC124;&#xB9BD;&#xB41C; hsp90 &quot;&#xD074;&#xB77C;&#xC774;&#xC5B8;&#xD2B8;&quot; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC740; &#xB9AC;&#xAC04;&#xB4DC; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xACFC; &#xD575; &#xC804; HDAC6 &#xBD88;&#xCDA9;&#xBD84; &#xD55C; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xD65C;&#xC131;&#xD654;&#xC5D0; &#xACB0;&#xD568;&#xC774; &#xD2B9;&#xC815; &#xD558; &#xC5EC; hdac6&#xC758; &#xADF8; &#xCD5C;&#xC800;&#xC758; &#xBCF4;&#xC5EC; &#xC8FC;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; (&#xCF54;&#xBC14;&#xCE58;, &#xC81C;&#xC774; &#xC81C;&#xC774;, &#xBA38;&#xD53C;, P. J. M.&#xAC00;, S., &#xC790;&#xC624;, &#xC5D1;&#xC2A4;, &#xC6B0;, J., Nicchitta, C. V.&#xC694;&#xC2DC;&#xB2E4;, M., Toft, D. O., &#xD504;&#xB7AB;, W. B.&#xACFC; &#xC57C; &#xC624;, T. (2005) Mol. &#xC140; 18, 601-607). &#xC778;&#xAC04;&#xC758; &#xBC30;&#xC544; &#xC2E0;&#xC7A5; &#xC57C;&#xC0DD;-&#xD0C0;&#xC785; &#xBC0F; HDAC6 (&#xC791;&#xC740; &#xBC29;&#xD574; RNA) &#xCD5C;&#xC800;&#xC758; &#xC140; transiently &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4; GR&#xC744; &#xD45C;&#xD604;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; &#xC5EC;&#xAE30;&#xC5D0; &#xD45C;&#xC2DC; &#xC790;&#xCCB4;&#xB294; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xBCF8;&#xC9C8;&#xC801;&#xC778; &#xC18D;&#xC131; HDAC6 &#xCD5C;&#xC800;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC601;&#xD5A5;&#xC744; &#xBC1B;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xCD5C;&#xC800;&#xC758; cytosol &#xC548;&#xC815;&#xC801;&#xC778; GR.hsp90 heterocomplexes &#xC870;&#xB9BD; &#xC140; &#xC5C6;&#xB294; &#xC870;&#xAC74; &#xD558;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC548;&#xC815; &#xB41C; &#xC2A4;&#xD14C;&#xB85C;&#xC774;&#xB4DC; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xD65C;&#xB3D9; &#xC0DD;&#xC131;&#xC744; &#xD604;&#xC800; &#xD558; &#xAC8C; &#xAC10;&#xC18C; &#xB2A5;&#xB825;&#xC774; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558;. HDAC6 &#xCD5C;&#xC800;&#xC758; cytosol &#xC57C;&#xC0DD;-&#xD0C0;&#xC785; cytosol &#xB3D9;&#xC801; GR.hsp90 heterocomplex &#xC5B4;&#xC148;&#xBE14;&#xB9AC;&#xB97C; &#xC218;&#xD589; &#xD558;&#xB294; &#xB3D9;&#xC77C;&#xD55C; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC774; &#xC788;&#xB2E4;. HDAC6 &#xCD5C;&#xC800;&#xC758; cytosol &#xD558; &#xC815;&#xD654; hsp90 &#xCD94;&#xAC00; &#xC57C;&#xC0DD;-&#xD0C0;&#xC785; cytosol &#xC218;&#xC900;&#xC758; &#xC548;&#xC815;&#xC801;&#xC778; GR.hsp90 heterocomplex &#xC5B4;&#xC148;&#xBE14;&#xB9AC;&#xB97C; &#xBCF5;&#xC6D0;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. hsp90 HDAC6 &#xCD5C;&#xC800;&#xC758; cytosol&#xC5D0;&#xC11C; ATP &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xC120;&#xD638;&#xB3C4; &#xAC10;&#xC18C;&#xC640; &#xC815;&#xC81C; 5 &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC870;&#xB9BD; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C;&#xC758; &#xAD6C;&#xC131; &#xC694;&#xC18C;&#xC778; &#xACBD;&#xC6B0; &#xC548;&#xC815;&#xC801;&#xC778; GR.hsp90 heterocomplexes&#xC744; &#xC870;&#xB9BD; &#xD558;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xCD5C;&#xC800;&#xC758; &#xC140; hsp90 &#xC21C;&#xD654; hdac6&#xC640;&#xC758; &#xBD80; &#xD654;&#xB294; hsp90 &#xC57C;&#xC0DD;-&#xD0C0;&#xC785; &#xB3D9;&#xC791;&#xC73C;&#xB85C; &#xBCC0;&#xD658;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB530;&#xB77C;&#xC11C;, hsp90 acetylation &#xACB0;&#xACFC; &#xB3D9;&#xC801; GR.hsp90 heterocomplex &#xC870;&#xB9BD;/&#xBD84;&#xD574;, &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; &#xC774;&#xAC83;&#xC774; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xD65C;&#xC131;&#xD654;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC2A4;&#xD14C;&#xB85C;&#xC774;&#xB4DC;&#xC758; &#xBCF5;&#xC6A9;&#xB7C9; &#xC751;&#xB2F5;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC624;&#xB978;&#xCABD;&#xC73C;&#xB85C; &#xC57D; 100 shift&#xB85C; &#xC140;&#xC5D0;&#xC11C; &#xB9E4;&#xB2C8;&#xD398;&#xC2A4;&#xD2B8;.

Hsp90 &#xC561;&#xC158; acetylation/deacetylation&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; glucocorticoid &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4;&#xC5D0;&#xB294; &#xBCF4;&#xD638;&#xC790;&#xC758; &#xC5ED;&#xD559;&#xC758; &#xADDC;&#xC81C;.

Se sabe que la inhibici&oacute;n de Histona Desacetilasas (HDAC) conduce a la acetilaci&oacute;n de la abundante Prote&iacute;na chaperona hsp90. En un estudio reciente, hemos demostrado que ca&iacute;da de HDAC6 por una espec&iacute;fica ARN interferente peque&ntilde;o conduce a hyperacetylation de hsp90 y que el receptor de glucocorticoides (GR), una prote&iacute;na hsp90 establecido de &quot;cliente&quot;, es defectuoso en la activaci&oacute;n de genes en c&eacute;lulas HDAC6-deficientes, ligando y translocaci&oacute;n nuclear (Kovacs, J. J., Murphy, P. J. M., Gaillard, S., Zhao, x., Wu, J-T., Nicchitta, C. V.Toft Yoshida, M., O. D., Pratt, W. B. y Yao, T-P. (2005) PM c&eacute;lula 18, 601-607). Usando ri&ntilde;&oacute;n embrionario humano salvaje-tipo y ca&iacute;da HDAC6 (peque&ntilde;os RNA de interferencia) c&eacute;lulas expresando transitoriamente el rat&oacute;n GR, mostramos aqu&iacute; que las propiedades intr&iacute;nsecas de la prote&iacute;na del receptor s&iacute; mismo no son afectadas por la ca&iacute;da de HDAC6, pero el precipitaci&oacute;n citosol tiene un marcado disminuci&oacute;n de la capacidad para montar estable GR.hsp90 heterocomplejos y generar actividad esteroide estable en condiciones libres de c&eacute;lulas. HDAC6 precipitaci&oacute;n citosol tiene la misma capacidad para llevar a cabo el ensamblado din&aacute;mico de heterocomplex de GR.hsp90 como salvaje-tipo citosol. Adici&oacute;n de hsp90 purificada al citosol precipitaci&oacute;n HDAC6 restaura Asamblea de heterocomplex de GR.hsp90 estable al nivel del citosol de tipo salvaje. Hsp90 de citosol precipitaci&oacute;n HDAC6 ha disminuido la afinidad de uni&oacute;n a ATP, y no arme estable GR.hsp90 heterocomplejos cuando es un componente de un sistema de montaje de cinco-prote&iacute;na purificada. Incubaci&oacute;n de hsp90 de precipitaci&oacute;n de la c&eacute;lula con HDAC6 purificada convierte la hsp90 al comportamiento de tipo salvaje. As&iacute;, acetilaci&oacute;n de hsp90 resultado din&aacute;mico GR.hsp90 heterocomplex montaje/desmontaje, y esto es manifiesto en la c&eacute;lula como un centesimal aproximadamente cambio a la derecha en la respuesta de la dosis de esteroides para la activaci&oacute;n del gene.

Regulaci&oacute;n de la din&aacute;mica de hsp90 de acci&oacute;n sobre el receptor de glucocorticoides por acetilaci&oacute;n/desacetilaci&oacute;n de the chaperone.

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Visualization and mechanism of assembly of a glucocorticoid receptor.Hsp70 complex that is primed for subsequent Hsp90-dependent opening of the steroid binding cleft. The Journal of biological chemistry\| PubMed ID: 12807878	2003
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Patrick J. M. Murphy

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