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Isolation and Characterization of Exosomes from Skeletal Muscle Fibroblasts

Exosomes are small extracellular vesicles released by virtually all cells and secreted in all biological fluids. Many methods have been developed for the ...

St. Jude Children's Research Hospital

&#x808C;&#x8089;&#x6536;&#x7F29;&#x86CB;&#x767D;&#x8868;&#x793A;&#x4E3A;&#x4E00;&#x7CFB;&#x5217;&#x7684;&#x52A8;&#x6001;&#x91CD;&#x6784;&#x80DA;&#xFF0C;&#x4F46;&#x5982;&#x4F55;&#x8FC7;&#x65F6;&#x662F;&#x5E38;&#x6570;&#x4E2D;&#x7684;&#x53D1;&#x80B2;&#x5F02;&#x6784;&#x4F53;&#x5206;&#x5B50;&#x8BC6;&#x522B;&#x548C;&#x5220;&#x9664;&#x672A;&#x77E5;&#x7684;&#x3002;Ozz &#x662F;&#x53D1;&#x80B2;&#x53D7;&#x89C4;&#x7BA1;&#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#xFF0C;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x73AF;&#x578B;&#x6CDB;&#x7D20;&#x8FDE;&#x63A5;&#x9176;&#x590D;&#x6742;&#x5177;&#x4F53;&#x5230;&#x6A2A;&#x7EB9;&#x808C;&#x7684;&#x9002;&#x914D;&#x5668;&#x7EC4;&#x4EF6;&#x7684;&#x529F;&#x80FD;&#x3002;Ozz(-/-) &#x7A81;&#x53D8;&#x4F53;&#x5C55;&#x793A;&#x808C;&#x7EA4;&#x53CA;&#x808C;&#x7EA4;&#x7EF4;&#x5206;&#x5316;&#x8FC7;&#x7A0B;&#x4E2D;&#x7684;&#x7F3A;&#x9677;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#x6211;&#x4EEC;&#x663E;&#x793A; Ozz &#x80DA;&#x80CE;&#x808C;&#x7403;&#x86CB;&#x767D;&#x91CD;&#x94FE;&#x7684;&#x6746;&#x90E8;&#x5206;&#x7684;&#x76EE;&#x6807;&#x548C;&#x4F18;&#x5148;&#x627F;&#x8BA4;&#x5FC3;&#x808C;&#x808C;&#x7403;&#x86CB;&#x767D;&#x7684;&#x53EF;&#x6EB6;&#x6027;&#x6C60;&#x800C;&#x4E0D;&#x662F;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x63D0;&#x51FA;&#x8BC1;&#x636E; Ozz &#x7ED1;&#x5B9A;&#x5230;&#x5FC3;&#x808C;&#x539A;&#x4E1D;&#x5185;&#x80DA;&#x80CE;&#x808C;&#x7403;&#x86CB;&#x767D;&#x5F02;&#x6784;&#x4F53;&#x6807;&#x5FD7;&#x7740;&#x5B83;&#x6CDB;&#x548C;&#x86CB;&#x767D;&#x9176;&#x5206;&#x89E3;&#xFF0C;&#x4F7F;&#x5176;&#x4E0E;&#x65B0;&#x751F;&#x513F;&#x6216;&#x6210;&#x4EBA;&#x5F02;&#x6784;&#x4F53;&#x7684;&#x66F4;&#x6362;&#x3002;&#x8FD9;&#x9879;&#x72EC;&#x7279;&#x7684;&#x529F;&#x80FD;&#x5B9A;&#x4F4D; Ozz &#x4FC3;&#x8FDB;&#x5FC3;&#x808C;&#x808C;&#x7403;&#x86CB;&#x767D;&#x91CD;&#x5851;&#x808C;&#x8089;&#x6210;&#x719F;&#x548C;&#x518D;&#x751F;&#x671F;&#x95F4;&#x7684;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x5185;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x7ED3;&#x679C;&#x786E;&#x5B9A; Ozz E3 &#x6CDB;&#x7D20;&#x8FDE;&#x63A5;&#x9176;&#x590D;&#x6742;&#x7684;&#x4EA4;&#x4E92;&#xFF0C;&#x5E76;&#x89C4;&#x5B9A;&#x5176;&#x5B8C;&#x5168;&#x88C5;&#x914D;&#x7684;&#x9AA8;&#x67B6;&#x7ED3;&#x6784;&#x5185;&#x7684;&#x808C;&#x7403;&#x86CB;&#x767D;&#x3002;

Ozz E3 &#x6CDB;&#x7D20;&#x8FDE;&#x63A5;&#x9176;&#x76EE;&#x6807;&#x808C;&#x8089;&#x53D1;&#x80B2;&#x7684;&#x80DA;&#x80CE;&#x7684;&#x5FC3;&#x808C;&#x808C;&#x7403;&#x86CB;&#x767D;&#x91CD;&#x94FE;&#x3002;

Muscle contractile proteins are expressed as a series of developmental isoforms that are in constant dynamic remodeling during embryogenesis, but how obsolete molecules are recognized and removed is not known. Ozz is a developmentally regulated protein that functions as the adaptor component of a RING-type ubiquitin ligase complex specific to striated muscle. Ozz(-/-) mutants exhibit defects in myofibrillogenesis and myofiber differentiation. Here we show that Ozz targets the rod portion of embryonic myosin heavy chain and preferentially recognizes the sarcomeric rather than the soluble pool of myosin. We present evidence that Ozz binding to the embryonic myosin isoform within sarcomeric thick filaments marks it for ubiquitination and proteolytic degradation, allowing its replacement with neonatal or adult isoforms. This unique function positions Ozz within a system that facilitates sarcomeric myosin remodeling during muscle maturation and regeneration. Our findings identify Ozz-E3 as the ubiquitin ligase complex that interacts with and regulates myosin within its fully assembled cytoskeletal structure.

Ozz-E3 ubiquitin ligase targets sarcomeric embryonic myosin heavy chain during muscle development.

Les prot&eacute;ines contractiles musculaires sont exprim&eacute;s comme une s&eacute;rie d&#39;isoformes du d&eacute;veloppement qui sont en constante dynamique remodelage durant l&#39;embryogen&egrave;se, mais comment obsol&egrave;tes mol&eacute;cules sont reconnus et supprim&eacute;s n&#39;est pas connu. Ozz est une prot&eacute;ine d&eacute;veloppemental r&eacute;gl&eacute;e qui fonctionne comme la composante de l&#39;adaptateur d&#39;un sp&eacute;cifique complexe annulaire de l&#39;ubiquitine ligase au muscle stri&eacute;. Ozz(-/-) mutants pr&eacute;sentent des d&eacute;fauts dans la diff&eacute;renciation myofibrillogenesis et fibre. Nous d&eacute;montrons que Ozz vise la portion de la tige de la cha&icirc;ne lourde de myosine embryonnaires et reconna&icirc;t pr&eacute;f&eacute;rentiellement le sarcom&egrave;re plut&ocirc;t que la piscine soluble de la myosine. Nous pr&eacute;sentons des preuves que Ozz contraignant &agrave; l&#39;isoforme de la myosine embryonnaire au sein des filaments &eacute;pais du sarcom&egrave;re il marque pour l&#39;ubiquitination et la d&eacute;gradation prot&eacute;olytique, permettant son remplacement par les isoformes n&eacute;onatales ou adultes. Cette fonction unique positionne Ozz au sein d&#39;un syst&egrave;me qui facilite la myosine du sarcom&egrave;re remodelage au cours de la r&eacute;g&eacute;n&eacute;ration et la maturation de muscle. Nos r&eacute;sultats identifient Ozz-E3 comme la complexe ubiquitine ligase qui interagit avec et r&eacute;gule la myosine dans sa structure du cytosquelette enti&egrave;rement assembl&eacute;.

Ozz-E3 ubiquitine ligase cible la cha&icirc;ne lourde de myosine embryonnaire du sarcom&egrave;re durant le d&eacute;veloppement musculaire.

Muskel kontraktiler Proteine werden ausgedr&uuml;ckt als eine Reihe von Entwicklungsst&ouml;rungen Isoformen, die in Konstante dynamische Umbau w&auml;hrend der Embryogenese, aber wie veraltete Molek&uuml;le erkannt und entfernt werden, ist nicht bekannt. Ozz ist eine entwicklungspolitisch regulierte Protein, das als die Adapter-Komponente der eine RING-Ubiquitin Ligase Komplex typspezifische zu quergestreiften Muskel fungiert. Ozz(-/-)-Mutanten weisen M&auml;ngel bei Myofibrillogenesis und Myofiber Differenzierung. Hier zeigen wir, dass Ozz zielt auf den Stab-Teil des embryonalen Myosin heavy Chain und bevorzugt die Sarkomerproteine anstatt der l&ouml;slichen Pool von Myosin erkennt. Wir pr&auml;sentieren Beweise daf&uuml;r, dass es Ozz Bindung an die embryonalen Myosin Isoform innerhalb Sarkomerproteine Dicke Filamente f&uuml;r Ubiquitination und proteolytischen Abbau markiert erm&ouml;glicht seinen Ersatz bei Neugeborenen oder Erwachsenen-Isoformen. Diese einzigartige Funktion positioniert Ozz innerhalb eines Systems, das erleichtert die Sarkomerproteine Myosin Umbau w&auml;hrend der Reifung Muskel und Regeneration. Unsere Erkenntnisse identifizieren Ozz-E3 als die Ubiquitin Ligase-komplexes, die mit interagiert und Myosin in seiner komplett montierten Zytoskelett Struktur regelt.

Ozz-E3 Ubiquitin Ligase Ziele Sarkomerproteine embryonalen Myosin heavy Chain w&auml;hrend Muskelentwicklung.

Proteine contrattili del muscolo sono espressi come una serie di isoforme dello sviluppo che sono in costante dinamica rimodellamento durante l&#39;embriogenesi, ma come obsoleto molecole sono riconosciuti e rimossi non &egrave; noto. Ozz &egrave; una proteina evolutivamente regolamentata che funziona come componente di un anello di tipo ubiquitina ligasi complesso specifico muscolo striato adattatore. Ozz(-/-) mutanti presentano difetti nella differenziazione myofibrillogenesis e myofiber. Qui vi mostriamo che Ozz rivolge la porzione di asta della catena pesante della miosina embrionale e preferenzialmente riconosce il sarcomero, piuttosto che il pool solubile della miosina. Vi presentiamo prove che Ozz vincolante per l&#39;isoforma della miosina embrionale all&#39;interno del sarcomero filamenti spessi contrassegna per ubiquitination e degradazione proteolitica, permettendo la sua sostituzione con isoforme neonatale o adulto. Questa funzione unica Ozz le posizioni all&#39;interno di un sistema che facilita la miosina sarcomero rimodellamento durante la rigenerazione e la maturazione del muscolo. I nostri risultati identificano Ozz-E3 come l&#39;ubiquitina ligasi complessa che interagisce con e regola la miosina all&#39;interno della sua struttura citoscheletriche completamente assemblato.

Ozz-E3 ubiquitina ligasi obiettivi catena pesante della miosina embrionale sarcomero durante lo sviluppo muscolare.

&#x7B4B;&#x53CE;&#x7E2E;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x3092;&#x8868;&#x73FE;&#x3059;&#x308B;&#x5B9A;&#x6570;&#x3067;&#x52D5;&#x7684;&#x80DA;&#x767A;&#x751F;&#x4E2D;&#x306B;&#x6539;&#x9020;&#x3059;&#x308B;&#x304C;&#x3001;&#x3069;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306B;&#x53E4;&#x3044;&#x767A;&#x9054;&#x306E;&#x30A2;&#x30A4;&#x30BD; &#x30D5;&#x30A9;&#x30FC;&#x30E0;&#x306E;&#x30B7;&#x30EA;&#x30FC;&#x30BA;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x5206;&#x5B50;&#x304C;&#x8A8D;&#x8B58;&#x3055;&#x308C;&#x3001;&#x524A;&#x9664;&#x304C;&#x4E0D;&#x660E;&#x3067;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;Ozz &#x6A2A;&#x7D0B;&#x7B4B;&#x306B;&#x306F;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;&#x578B;&#x30E6;&#x30D3;&#x30AD;&#x30C1;&#x30F3; &#x30EA;&#x30AC;&#x30FC;&#x30BC;&#x8907;&#x96D1;&#x306A;&#x56FA;&#x6709;&#x306E;&#x30A2;&#x30C0;&#x30D7;&#x30BF;&#x30FC; &#x30B3;&#x30F3;&#x30DD;&#x30FC;&#x30CD;&#x30F3;&#x30C8;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x6A5F;&#x80FD;&#x767A;&#x9054;&#x898F;&#x5236;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x3067;&#x3059;&#x3002;Ozz(-/-) &#x5909;&#x7570;&#x4F53; myofibrillogenesis &#x3068;&#x7B4B;&#x7DDA;&#x7DAD;&#x306E;&#x5206;&#x5316;&#x4E2D;&#x306E;&#x6B20;&#x9665;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x6211;&#x3005; Ozz &#x306F;&#x80CE;&#x5150;&#x578B;&#x30DF;&#x30AA;&#x30B7;&#x30F3;&#x91CD;&#x9396;&#x306E;&#x30ED;&#x30C3;&#x30C9;&#x90E8;&#x5206;&#x3092;&#x30BF;&#x30FC;&#x30B2;&#x30C3;&#x30C8;&#x3057;&#x3001;&#x512A;&#x5148;&#x7684;&#x30DF;&#x30AA;&#x30B7;&#x30F3;&#x306E;&#x53EF;&#x6EB6;&#x6027;&#x306E;&#x30D7;&#x30FC;&#x30EB;&#x3067;&#x306F;&#x306A;&#x304F;&#x3001;&#x30B5;&#x30EB;&#x30B3;&#x30E1;&#x30A2;&#x3092;&#x8A8D;&#x8B58;. &#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005; &#x306F;&#x65B0;&#x751F;&#x5150;&#x3084;&#x6210;&#x4EBA;&#x306E;&#x30A2;&#x30A4;&#x30BD; &#x30D5;&#x30A9;&#x30FC;&#x30E0;&#x306E;&#x4EA4;&#x63DB;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x308B; Ozz &#x30B5;&#x30EB;&#x30B3;&#x30E1;&#x30A2;&#x306E;&#x592A;&#x3044;&#x30D5;&#x30A3;&#x30E9;&#x30E1;&#x30F3;&#x30C8;&#x5185;&#x80DA;&#x30DF;&#x30AA;&#x30B7;&#x30F3; &#x30A2;&#x30A4;&#x30BD; &#x30D5;&#x30A9;&#x30FC;&#x30E0;&#x3078;&#x3001;&#x30E6;&#x30D3;&#x30AD;&#x30C1;&#x30F3;&#x5316;&#x3068;&#x5206;&#x89E3;&#x3001;&#x30DE;&#x30FC;&#x30AF;&#x8A3C;&#x62E0;&#x3092;&#x63D0;&#x793A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x30E6;&#x30CB;&#x30FC;&#x30AF;&#x306A;&#x6A5F;&#x80FD; Ozz &#x30B5;&#x30EB;&#x30B3;&#x30E1;&#x30A2; &#x30DF;&#x30AA;&#x30B7;&#x30F3;&#x7B4B;&#x306E;&#x6210;&#x719F;&#x3068;&#x518D;&#x751F;&#x4E2D;&#x306B;&#x6539;&#x9020;&#x3092;&#x5BB9;&#x6613;&#x306B;&#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E0;&#x5185;&#x306B;&#x914D;&#x7F6E;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005; &#x306E;&#x8ABF;&#x67FB;&#x7D50;&#x679C;&#x3092;&#x64CD;&#x4F5C;&#x3057;&#x3001;&#x5B8C;&#x5168;&#x306B;&#x7D44;&#x307F;&#x7ACB;&#x3066;&#x3089;&#x308C;&#x305F;&#x7D30;&#x80DE;&#x9AA8;&#x683C;&#x69CB;&#x9020;&#x306E;&#x30DF;&#x30AA;&#x30B7;&#x30F3;&#x3092;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x3059;&#x308B;&#x3001;&#x30E6;&#x30D3;&#x30AD;&#x30C1;&#x30F3;&#x30EA; &#x30AC;&#x30FC;&#x30BC;&#x8907;&#x5408;&#x4F53;&#x3068;&#x3057;&#x3066; Ozz E3 &#x3092;&#x8B58;&#x5225;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

Ozz E3 &#x30E6;&#x30D3;&#x30AD;&#x30C1;&#x30F3;&#x30EA; &#x30AC;&#x30FC;&#x30BC; &#x30B5;&#x30EB;&#x30B3;&#x30E1;&#x30A2;&#x80CE;&#x5150;&#x578B;&#x30DF;&#x30AA;&#x30B7;&#x30F3;&#x91CD;&#x9396;&#x904B;&#x52D5;&#x4E2D;&#x306E;&#x7B4B;&#x3092;&#x5BFE;&#x8C61;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#xADFC;&#xC721; &#xC218;&#xCD95; &#xC131; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xB3D9;&#xC801; embryogenesis, &#xC911; &#xAC1C;&#xC7A5; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xC5B4;&#xB5BB;&#xAC8C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xB418;&#xC9C0; &#xC54A;&#xB294; &#xC0C1;&#xC218;&#xC5D0;&#xB294; &#xBC1C;&#xB2EC; isoforms &#xACC4;&#xC5F4;&#xB85C; &#xD45C;&#xD604; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xBD84;&#xC790; &#xC778;&#xC2DD; &#xBC0F; &#xC81C;&#xAC70; &#xC54C;&#xB824;&#xC838; &#xC788;&#xC9C0; &#xC54A;&#xB2E4;. Ozz &#xAD74;&#xB9AC;&#xB294; &#xADFC;&#xC721; &#xBC18;&#xC9C0;-&#xD0C0;&#xC785; &#xC720;&#xBE44;&#xD034;&#xD2F4; &#xB9AC;&#xAC00; &#xBCF5;&#xC7A1; &#xD55C; &#xD2B9;&#xC815; &#xC5B4;&#xB311;&#xD130; &#xAD6C;&#xC131; &#xC694;&#xC18C; &#xAE30;&#xB2A5; &#xBC1C;&#xB2EC; &#xB808; &#xADE4; &#xB808;&#xC774;&#xD2B8; &#xB41C; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC774;&#xB2E4;. Ozz(-/-) &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; myofibrillogenesis &#xBC0F; myofiber &#xBD84;&#xD654;&#xC5D0; &#xC804;&#xC2DC;. &#xC5EC;&#xAE30; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; Ozz &#xBC30;&#xC544; myosin &#xBB34;&#xAC70;&#xC6B4; &#xCCB4;&#xC778; &#xB9C9;&#xB300; &#xBD80;&#xBD84;&#xC744; &#xB300;&#xC0C1;&#xC73C;&#xB85C; &#xD558; &#xACE0; &#xC6B0;&#xC120;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xC778;&#xC2DD; myosin&#xC758; &#xC218;&#xC6A9; &#xC131; &#xD480; &#xBCF4;&#xB2E4;&#xB294; sarcomeric &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC120;&#xBB3C;&#xC774; sarcomeric &#xAD75;&#xC740; &#xD544; &#xB77C; &#xBA58; &#xD2B8; &#xB0B4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBC30;&#xC544; myosin isoform Ozz &#xBC14;&#xC778;&#xB529; ubiquitination&#xC640; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xC800;&#xD558;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xD45C;&#xC2DC; &#xC99D;&#xAC70; &#xC2E0;&#xC0DD;&#xC544; &#xB610;&#xB294; &#xC131;&#xC778;&#xC6A9; isoforms&#xB85C; &#xB300;&#xCCB4; &#xD5C8;&#xC6A9;. &#xC774; &#xB3C5;&#xD2B9;&#xD55C; &#xAE30;&#xB2A5; sarcomeric myosin &#xADFC;&#xC721; &#xC131;&#xC219; &#xD558; &#xACE0; &#xC7AC;&#xC0DD;&#xC131; &#xD558;&#xB294; &#xB3D9;&#xC548; &#xB9AC; &#xBAA8;&#xB378;&#xB9C1;&#xC744; &#xC6A9;&#xC774; &#xD558; &#xAC8C; &#xD558;&#xB294; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C; &#xB0B4;&#xC758; Ozz &#xBC30;&#xCE58; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xC5F0;&#xAD6C; &#xACB0;&#xACFC; Ozz E3 &#xC720;&#xBE44;&#xD034;&#xD2F4; &#xB9AC;&#xAC00; &#xBCF5;&#xC7A1; &#xD55C; myosin&#xC740; &#xC644;&#xBCBD; &#xD558; &#xAC8C; &#xC870;&#xB9BD;&#xB41C; cytoskeletal &#xAD6C;&#xC870; &#xB0B4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xADDC;&#xC81C; &#xD558; &#xACE0; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC744; &#xC2DD;&#xBCC4; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Ozz E3 &#xC720;&#xBE44;&#xD034;&#xD2F4; &#xB9AC;&#xAC00; &#xADFC;&#xC721; &#xAC1C;&#xBC1C; &#xD558;&#xB294; &#xB3D9;&#xC548; sarcomeric &#xBC30;&#xC544; myosin &#xBB34;&#xAC70;&#xC6B4; &#xCCB4;&#xC778;&#xC744; &#xB300;&#xC0C1;&#xC73C;&#xB85C; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Prote&iacute;nas contr&aacute;ctiles del m&uacute;sculo se expresan como una serie de isoformas del desarrollo que est&aacute;n en constante din&aacute;mica remodelaci&oacute;n durante la embriog&eacute;nesis, pero c&oacute;mo obsoleto mol&eacute;culas son reconocidas y eliminadas se desconoce. Ozz es una prote&iacute;na desarrollo regulada que funciona como el componente adaptador de un anillo-tipo ubiquitina ligasa complejo espec&iacute;fico al m&uacute;sculo estriado. Ozz(-/-) mutantes presentan defectos en la diferenciaci&oacute;n myofibrillogenesis y myofiber. Aqu&iacute; demostramos que Ozz apunta a la porci&oacute;n de la barra de cadena pesada de miosina embrionario y preferencial reconoce la sarcomeric en lugar de la piscina soluble de la miosina. Presentamos evidencia que Ozz vinculante a la isoforma de miosina embrionario en filamentos gruesos sarcomeric marca de ubiquitinaci&oacute;n y degradaci&oacute;n proteol&iacute;tica, permitiendo su reemplazo con isoformas neonatal o adultos. Esta funci&oacute;n &uacute;nica posiciones Ozz dentro de un sistema que facilita la miosina sarcomeric remodelaci&oacute;n durante la regeneraci&oacute;n y maduraci&oacute;n del m&uacute;sculo. Nuestros hallazgos identifican Ozz-E3 como la ligasa de ubiquitina complejo que interact&uacute;a con y regula la miosina dentro de su estructura citoesquel&eacute;tica completamente montado.

Ozz-E3 ubiquitina ligasa apunta cadenas pesadas de miosina embrionario sarcomeric durante el desarrollo muscular.

Alix/AIP1 &#x662F;&#x4E00;&#x79CD;&#x591A;&#x529F;&#x80FD;&#x9002;&#x914D;&#x5668;&#x86CB;&#x767D;&#xFF0C;&#x57FA;&#x672C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x8FC7;&#x7A0B;&#xFF0C;&#x5305;&#x62EC;&#x819C;&#x8D29;&#x8FD0;&#x548C;&#x808C;&#x52A8;&#x86CB;&#x767D;&#x7EC6;&#x80DE;&#x9AA8;&#x67B6;&#x5927;&#x4F1A;&#xFF0C;&#x901A;&#x8FC7;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x5230;&#x5404;&#x79CD;&#x5404;&#x6837;&#x7684;&#x4F19;&#x4F34;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x6709;&#x9009;&#x62E9;&#x6027;&#x5730;&#x53C2;&#x52A0;&#x3002;&#x7136;&#x800C;&#xFF0C;Alix &#x8425;&#x4E1A;&#x989D;&#x3001; &#x4E9A;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5206;&#x5E03;&#x53CA;&#x808C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x529F;&#x80FD;&#x8C03;&#x8282;&#x7684;&#x673A;&#x5236;&#x662F;&#x672A;&#x77E5;&#x7684;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x73B0;&#x5728;&#x62A5;&#x544A; Alix &#x8868;&#x793A;&#x5728;&#x6574;&#x4E2A;&#x5206;&#x5316;&#x4E3A;&#x808C;&#x9AA8;&#x9ABC;&#x808C;&#x8089;&#x3002;&#x808C;&#x7BA1;&#xFF0C;&#x5728;&#x4E00;&#x4E2A;&#x7279;&#x5B9A;&#x7684;&#x6C60;&#x7684; Alix colocalizes Ozz&#xFF0C;&#x886C;&#x5E95;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x7EC4;&#x4EF6;&#x7684;&#x7279;&#x5B9A;&#x808C;&#x8089;&#x7684;&#x6CDB;&#x7D20;&#x8FDE;&#x63A5;&#x9176;&#x4E0E;&#x590D;&#x6742; Ozz E3&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x53D1;&#x73B0;&#x6709;&#x533A;&#x522B;&#x7684;&#x808C;&#x8089;&#x7EA4;&#x7EF4;&#x4E2D;&#x7684;&#x4E24;&#x79CD;&#x5185;&#x6E90;&#x6027;&#x86CB;&#x767D;&#x7684;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528; Alix &#x6784;&#x8C61;&#x53D1;&#x751F;&#x53D8;&#x5316;&#xFF0C;&#x5E76;&#x4FC3;&#x8FDB;&#x5176;&#x6CDB;&#x3002;&#x8FD9;&#x53CD;&#x8FC7;&#x6765;&#x8C03;&#x8282;&#x5177;&#x4F53; subcompartments &#x4E2D;&#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x7684;&#x6C34;&#x5E73;&#x7279;&#x522B;&#x662F;&#x4E00;&#x5305;&#x542B;&#x808C;&#x52A8;&#x86CB;&#x767D;&#x805A;&#x5408;&#x56E0;&#x5B50;&#x76AE;&#x5C42;&#x3002;&#x5728; Ozz(-/-) &#x808C;&#x7BA1;&#xFF0C;&#x6C34;&#x5E73;&#x7684;&#x4E1D;&#x72B6; (F)-&#x808C;&#x52A8;&#x86CB;&#x767D;&#x6444;&#x52A8;&#xFF0C;&#x548C; Alix &#x79EF;&#x805A;&#x5728;&#x5927; puncta &#x76AE;&#x5C42;&#x4E3A;&#x9633;&#x6027;&#x3002;&#x6839;&#x636E;&#x8FD9;&#x4E2A;&#x770B;&#x6CD5;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x663E;&#x793A; Alix C2C12 &#x808C;&#x8089;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8868;&#x8FBE;&#x7684;&#x7EC4;&#x5408;&#x5F0F;&#x4F1A;&#x5F71;&#x54CD;&#x91CF;&#x548C;&#x5206;&#x5E03;&#x7684; F-&#x808C;&#x52A8;&#x86CB;&#x767D;&#xFF0C;&#x56E0;&#x6B64;&#x5BFC;&#x81F4;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5F62;&#x6001;&#x5B66;&#x53D8;&#x5316;&#x7684;&#x635F;&#x5BB3;&#x7EC6;&#x80DE;&#x819C;&#x7A81;&#x8D77;&#x548C;&#x6709;&#x7F3A;&#x9677;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x5F62;&#x6210;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7814;&#x7A76;&#x7ED3;&#x679C;&#x8868;&#x660E; Ozz E3 &#x8FDE;&#x63A5;&#x9176;&#x8C03;&#x8282; Alix &#x808C;&#x52A8;&#x86CB;&#x767D;&#x7EC6;&#x80DE;&#x9AA8;&#x67B6;&#x5728;&#x7ECF;&#x5386;&#x91CD;&#x5851;&#x7684;&#x5730;&#x76D8;&#x3002;

Alix &#x86CB;&#x767D;&#x662F; Ozz E3 &#x8FDE;&#x63A5;&#x9176;&#x7684;&#x5E95;&#x7269;&#x548C;&#x8C03;&#x8282;&#x808C;&#x52A8;&#x86CB;&#x767D;&#x91CD;&#x5851;&#x7684;&#x9AA8;&#x9ABC;&#x808C;&#x3002;

Alix/AIP1 is a multifunctional adaptor protein that participates in basic cellular processes, including membrane trafficking and actin cytoskeleton assembly, by binding selectively to a variety of partner proteins. However, the mechanisms regulating Alix turnover, subcellular distribution, and function in muscle cells are unknown. We now report that Alix is expressed in skeletal muscle throughout myogenic differentiation. In myotubes, a specific pool of Alix colocalizes with Ozz, the substrate-binding component of the muscle-specific ubiquitin ligase complex Ozz-E3. We found that interaction of the two endogenous proteins in the differentiated muscle fibers changes Alix conformation and promotes its ubiquitination. This in turn regulates the levels of the protein in specific subcompartments, in particular the one containing the actin polymerization factor cortactin. In Ozz(-/-) myotubes, the levels of filamentous (F)-actin is perturbed, and Alix accumulates in large puncta positive for cortactin. In line with this observation, we show that the knockdown of Alix expression in C2C12 muscle cells affects the amount and distribution of F-actin, which consequently leads to changes in cell morphology, impaired formation of sarcolemmal protrusions, and defective cell motility. These findings suggest that the Ozz-E3 ligase regulates Alix at sites where the actin cytoskeleton undergoes remodeling.

Alix protein is substrate of Ozz-E3 ligase and modulates actin remodeling in skeletal muscle.

Alix/AIP1 est une prot&eacute;ine multifonctionnelle adaptateur qui participe &agrave; des processus cellulaires fondamentaux, y compris la traite et l&#39;actine cytosquelette membranaire, par liaison s&eacute;lective &agrave; une vari&eacute;t&eacute; de prot&eacute;ines de partenaire. Cependant, les m&eacute;canismes qui r&eacute;gissent le chiffre d&#39;affaires Alix, distribution subcellulaire et fonction dans les cellules musculaires sont inconnus. Nous rapportons qu&#39;Alix est exprim&eacute;e dans le muscle squelettique tout au long de la diff&eacute;renciation myog&eacute;nique. Dans les myotubes, un pool sp&eacute;cifique d&#39;Alix putative avec Ozz, la composante de la liaison du substrat de la sp&eacute;cifiques du muscle ubiquitine ligase E3-Ozz complexes. Nous avons trouv&eacute; que l&#39;interaction de deux prot&eacute;ines endog&egrave;nes dans les fibres musculaires diff&eacute;renci&eacute;es change de conformation Alix et favorise l&#39;ubiquitination. Ceci &agrave; son tour r&eacute;gule les niveaux de la prot&eacute;ine en sous-compartiments sp&eacute;cifiques, en particulier celui contenant l&#39;actine polym&eacute;risation facteur cortactin. Dans Ozz(-/-) les myotubes, les niveaux de filamenteux (F)-actine est perturb&eacute;, et Alix s&#39;accumule dans le grand examen positif pour cortactin. Conform&eacute;ment &agrave; cette observation, nous montrons que la pr&eacute;cipitation d&#39;Alix expression dans les cellules musculaires C2C12 affecte la quantit&eacute; et distribution de F-actine, ce qui par cons&eacute;quent entra&icirc;ne des changements dans la morphologie cellulaire, avec facult&eacute;s affaiblies formation de saillies du sarcolemme et la motilit&eacute; cellulaire d&eacute;fectueux. Ces r&eacute;sultats sugg&egrave;rent que la ligase E3-Ozz Alix dans les sites o&ugrave; le cytosquelette d&#39;actine subit une r&eacute;novation.

Prot&eacute;ine d&#39;Alix est le substrat de la ligase E3-Ozz et module le remodelage de l&#39;actine dans le muscle squelettique.

Alix/AIP1 ist eine multifunktionale Adapterprotein die grundlegende zellul&auml;re Prozesse, einschlie&szlig;lich Membrane Menschenhandel und Actin Zytoskeletts Montage, durch das Binden an eine Vielzahl von Partner-Proteine selektiv Teil. Die Regulierungsmechanismen Alix Umsatz, subzellul&auml;re Verteilung und Funktion in Muskelzellen sind jedoch unbekannt. Wir berichten nun, dass Alix in der Skelettmuskulatur im gesamten myogener Differenzierung ausgedr&uuml;ckt wird. In Myotubes, ein bestimmter Pool von Alix colocalizes mit Ozz, die Substrat bindenden-Komponente von der Muskel-spezifische Ubiquitin Ligase Komplex Ozz-E3. Wir fanden, dass die Interaktion der beiden endogene Proteine in der differenzierten Muskelfasern Alix Konformation &auml;ndert und f&ouml;rdert seine Ubiquitination. Dies regelt wiederum die Niveaus des Proteins in bestimmten Subcompartments, vor allem diejenige mit dem Aktin-Polymerisation-Faktor-Cortactin. In Ozz(-/-) Myotubes, die Ebenen der filament&ouml;sen (F)-Aktin ist umwerfen und Alix sammelt in gro&szlig;en Puncta positiv f&uuml;r Cortactin. Im Einklang mit dieser Feststellung zeigen wir, dass der Niederschlag von Alix Ausdruck in Muskelzellen C2C12 die Menge beeinflu&szlig;t und Verteilung von F-Actin, f&uuml;hrt daher zu &Auml;nderungen in Zellmorphologie, Formation der sarcolemmal Vorspr&uuml;nge und defekte Zelle Motilit&auml;t beeintr&auml;chtigte. Diese Forschungsergebnisse legen nahe, dass die Ozz-E3-Ligase Alix an Standorten regelt, wo das Aktin-Zytoskelett Umbau unterzogen.

Alix Protein ist Substrat von Ozz-E3 Ligase und moduliert Aktin Umbau in der Skelettmuskulatur.

Alix/AIP1 &egrave; una proteina dell&#39;adattatore multifunzionale che partecipa alla base processi cellulari, tra cui membrana traffico e actina citoscheletro assieme, legandosi selettivamente ad una variet&agrave; di proteine partner. Tuttavia, i meccanismi che regolano il fatturato Alix, distribuzione subcellulare e funzione nelle cellule muscolari sono sconosciuti. Riportiamo ora che Alix &egrave; espressa nel muscolo scheletrico durante miogena differenziazione. In myotubes, uno specifico pool di Alix colocalizza con Ozz, il componente di substrato-associazione del muscolo specifico ubiquitina ligasi Ozz-E3 complesso. Abbiamo scoperto che l&#39;interazione di due proteine endogene nelle fibre muscolari differenziate cambia conformazione Alix e promuove la sua ubiquitination. Questo a sua volta regola i livelli della proteina in subcompartments specifici, in particolare quella contenente l&#39;actina polimerizzazione fattore cortactin. In Ozz(-/-) myotubes, i livelli di filamentose (F)-actina &egrave; turbato, e Alix si accumula in grande puncta positivo per cortactin. In linea con questa osservazione, ci mostrano che l&#39;atterramento di Alix espressione nelle cellule muscolari C2C12 influisce sulla quantit&agrave; e distribuzione di F-actina, che di conseguenza porta a cambiamenti nella morfologia cellulare, alterata formazione di protrusioni sarcolemmal e la motilit&agrave; delle cellule difettose. Questi risultati suggeriscono che la ligasi Ozz-E3 regola la Alix in siti dove il citoscheletro di actina subisce rimodellamento.

Alix proteina &egrave; substrato di Ozz-E3 ligasi e modula actina rimodellamento nel muscolo scheletrico.

&#x30A2;&#x30EA;&#x30C3;&#x30AF;&#x30B9;/AIP1&#x3001;&#x3055;&#x307E;&#x3056;&#x307E;&#x306A;&#x30D1;&#x30FC;&#x30C8;&#x30CA;&#x30FC;&#x306E;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x3092;&#x9078;&#x629E;&#x7684;&#x306B;&#x819C;&#x4EBA;&#x8EAB;&#x58F2;&#x8CB7;&#x3068;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C1;&#x30F3;&#x7D30;&#x80DE;&#x9AA8;&#x683C;&#x30A2;&#x30BB;&#x30F3;&#x30D6;&#x30EA;&#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x3001;&#x57FA;&#x672C;&#x7684;&#x306A;&#x7D30;&#x80DE;&#x30D7;&#x30ED;&#x30BB;&#x30B9;&#x306B;&#x53C2;&#x52A0;&#x3059;&#x308B;&#x591A;&#x6A5F;&#x80FD;&#x30A2;&#x30C0;&#x30D7;&#x30BF;&#x30FC;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x3067;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x305F;&#x3060;&#x3057;&#x3001;&#x30A2;&#x30EA;&#x30C3;&#x30AF;&#x30B9;&#x58F2;&#x308A;&#x4E0A;&#x3052;&#x9AD8;&#x3001;&#x7D30;&#x80DE;&#x5185;&#x5206;&#x5E03;&#x3068;&#x7B4B;&#x7D30;&#x80DE;&#x6A5F;&#x80FD;&#x5236;&#x5FA1;&#x6A5F;&#x69CB;&#x306F;&#x77E5;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x79C1;&#x305F;&#x3061;&#x4ECA;&#x30A2;&#x30EA;&#x30C3;&#x30AF;&#x30B9;&#x9AA8;&#x683C;&#x7B4B;&#x7B4B;&#x5206;&#x5316;&#x4E2D;&#x306E;&#x5358;&#x4F4D;&#x304C;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x5831;&#x544A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3042;&#x308B;&#x306E;&#x30A2;&#x30EA;&#x30C3;&#x30AF;&#x30B9;&#x306E;&#x7279;&#x5B9A;&#x306E;&#x30D7;&#x30FC;&#x30EB; colocalizes &#x7B4B;&#x56FA;&#x6709;&#x578B;&#x30E6;&#x30D3;&#x30AD;&#x30C1;&#x30F3;&#x30EA; &#x30AC;&#x30FC;&#x30BC;&#x306E;&#x57FA;&#x8CEA;&#x7D50;&#x5408;&#x30B3;&#x30F3;&#x30DD;&#x30FC;&#x30CD;&#x30F3;&#x30C8; Ozz &#x3068;&#x8907;&#x96D1;&#x306A; Ozz E3&#x3002;&#x6211;&#x3005; &#x306F;&#x5DEE;&#x5225;&#x5316;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x7B4B;&#x7DDA;&#x7DAD;&#x306E; 2 &#x3064;&#x306E;&#x5185;&#x56E0;&#x6027;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x304C;&#x30A2;&#x30EA;&#x30C3;&#x30AF;&#x30B9;&#x69CB;&#x9020;&#x5909;&#x66F4;&#x305D;&#x306E;&#x30E6;&#x30D3;&#x30AD;&#x30C1;&#x30F3;&#x5316;&#x3092;&#x4FC3;&#x9032;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x767A;&#x898B;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x9806;&#x756A;&#x306B;&#x7279;&#x5B9A;&#x306E;&#x4E2D;&#x306E;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x306E;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x7279;&#x306B;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C1;&#x30F3;&#x91CD;&#x5408;&#x56E0;&#x5B50;&#x30B3;&#x30EB;&#x30BF;&#x30AF;&#x30C1;&#x30F3;&#x3092;&#x542B;&#x3080; 1 &#x3064;&#x8ABF;&#x6574;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;Ozz(-/-) &#x3042;&#x308B;&#x3001;&#x7CF8;&#x72B6; (F) &#x306E;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x3067;-&#x30A2;&#x30AF;&#x30C1;&#x30F3;&#x306F;&#x6442;&#x52D5;&#x3068;&#x30A2;&#x30EA;&#x30C3;&#x30AF;&#x30B9;&#x5927;&#x304D;&#x306A;&#x6D99;&#x70B9;&#x30B3;&#x30EB;&#x30BF;&#x30AF;&#x30C1;&#x30F3;&#x306E;&#x6B63;&#x306B;&#x84C4;&#x7A4D;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x89B3;&#x6E2C;&#x306B;&#x6CBF;&#x3063;&#x305F;&#x30A2;&#x30EA;&#x30C3;&#x30AF;&#x30B9;&#x5F0F; C2C12 &#x7B4B;&#x7D30;&#x80DE;&#x3067;&#x306E;&#x30CE;&#x30C3;&#x30AF;&#x30C0;&#x30A6;&#x30F3;&#x91CF;&#x306B;&#x5F71;&#x97FF;&#x3092;&#x4E0E;&#x3048;&#x308B;&#x3057;&#x3001;&#x305D;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x7D30;&#x80DE;&#x5F62;&#x614B;&#x306E;&#x5909;&#x5316;&#x306B;&#x3064;&#x306A;&#x304C;&#x308B;&#x3001;F-&#x30A2;&#x30AF;&#x30C1;&#x30F3;&#x306E;&#x5206;&#x5E03;&#x306E;&#x5F62;&#x6210;&#x7D30;&#x80DE;&#x819C;&#x7A81;&#x8D77;&#x3068;&#x6B20;&#x9665;&#x304C;&#x3042;&#x308B;&#x7D30;&#x80DE;&#x904B;&#x52D5;&#x969C;&#x5BB3;&#x3092;&#x8868;&#x793A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30A2;&#x30EA;&#x30C3;&#x30AF;&#x30B9;&#x306F;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C1;&#x30F3;&#x7D30;&#x80DE;&#x9AA8;&#x683C;&#x306E;&#x6539;&#x9020;&#x53D7;&#x3051;&#x308B;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8; Ozz E3 &#x30EA;&#x30AC;&#x30FC;&#x30BC;&#x3092;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x793A;&#x5506;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;

&#x30A2;&#x30EA;&#x30C3;&#x30AF;&#x30B9; &#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA; Ozz E3 &#x30E6;&#x30D3;&#x30AD;&#x30C1;&#x30F3;&#x30EA; &#x30AC;&#x30FC;&#x30BC;&#x306E;&#x57FA;&#x8CEA;&#x3057;&#x3001;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C1;&#x30F3;&#x9AA8;&#x683C;&#x7B4B;&#x306E;&#x6539;&#x9020;&#x3092;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

Alix/AIP1 &#xB9C9; &#xC778;&#xC2E0; &#xB9E4;&#xB9E4;&#xC640; &#xB9D0;&#xB77C; cytoskeleton &#xC5B4;&#xC148;&#xBE14;&#xB9AC;, &#xB2E4;&#xC591; &#xD55C; &#xD30C;&#xD2B8;&#xB108; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC5D0; &#xC120;&#xD0DD;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xD558;&#xC5EC; &#xD3EC;&#xD568; &#xD558; &#xC5EC; &#xAE30;&#xBCF8;&#xC801;&#xC778; &#xC138;&#xD3EC; &#xD504;&#xB85C;&#xC138;&#xC2A4;&#xC5D0; &#xCC38;&#xC5EC; &#xD558;&#xB294; &#xB2E4;&#xAE30;&#xB2A5; &#xC5B4;&#xB311;&#xD130; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC774;&#xB2E4;. &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098;, Alix &#xD68C;&#xC804;&#xC728;, subcellular &#xBD84;&#xD3EC; &#xBC0F; &#xADFC;&#xC721; &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC744; &#xC870;&#xC808; &#xD558;&#xB294; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;&#xC744; &#xC54C; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xC9C0;&#xAE08; Alix myogenic &#xCC28;&#xBCC4;&#xD654;&#xB97C; &#xD1B5;&#xD574; &#xACE8;&#xACA9; &#xADFC;&#xC744; &#xB2E8;&#xC704;&#xB85C; &#xBCF4;&#xACE0; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. Myotubes, Alix&#xC758; &#xD2B9;&#xC815; &#xD480; Ozz, &#xADFC;&#xC721; &#xAD00;&#xB828; &#xC720;&#xBE44;&#xD034;&#xD2F4; &#xB9AC;&#xAC00;&#xC758; &#xAE30;&#xD310; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xAD6C;&#xC131; &#xC694;&#xC18C;&#xC640; &#xD568;&#xAED8; colocalizes &#xBCF5;&#xD569; Ozz E3. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; &#xBC1C;&#xACAC; &#xCC28;&#xBCC4;&#xD654; &#xB41C; &#xADFC;&#xC721; &#xC12C;&#xC720;&#xC5D0; &#xB450; &#xC0DD; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC744; &#xBCC0;&#xACBD; Alix &#xB098; &#xB780; &#xADF8; ubiquitination&#xC744; &#xCD94;&#xC9C4; &#xD558; &#xACE0;. &#xC774; &#xCC28;&#xB840;&#xB85C; &#xC870;&#xC808; &#xD2B9;&#xC815; subcompartments&#xC5D0; &#xC788;&#xB294; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC218;&#xC900;&#xC744; &#xD2B9;&#xD788; &#xB9D0;&#xB77C; &#xD569; &#xC694;&#xC18C; cortactin&#xB97C; &#xD3EC;&#xD568; &#xD558;. Ozz(-/-) myotubes, filamentous (F)&#xC758; &#xC218;&#xC900;&#xC5D0;&#xC11C;&#xC5D0;&#xC11C;-&#xB9D0;&#xB77C; &#xBD88;&#xC548;&#xC815; &#xD558; &#xACE0; &#xB300;&#xD615; puncta cortactin&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xAE0D;&#xC815;&#xC801;&#xC778; Alix &#xCD95;&#xC801;. &#xC774; &#xAD00;&#xCC30;&#xC5D0; &#xB9DE;&#xCDB0; &#xC6B0;&#xB9AC; C2C12 &#xADFC;&#xC721; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0;&#xC11C; Alix &#xD45C;&#xD604;&#xC758; &#xCD5C;&#xC800;&#xC758; &#xC601;&#xD5A5;&#xC744; &#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xBC0F; F-&#xB9D0;&#xB77C;, &#xACB0;&#xACFC;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xC138;&#xD3EC; &#xD615;&#xD0DC;&#xD559;&#xC5D0; &#xC788;&#xB294; &#xBCC0;&#xD654;&#xC5D0; &#xC774;&#xB974;&#xAC8C;&#xC758; &#xC7A5;&#xC560; sarcolemmal &#xB3CC;&#xCD9C; &#xBC0F; &#xACB0;&#xD568;&#xC774; &#xC788;&#xB294; &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xC6B4;&#xB3D9; &#xC131; &#xD615;&#xC131;&#xC744; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xC5F0;&#xAD6C; &#xACB0;&#xACFC; Ozz E3 &#xB9AC;&#xAC00; &#xB9D0;&#xB77C; cytoskeleton &#xAC1C;&#xC7A5; &#xACAA; &#xC2B5; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8;&#xC5D0;&#xC11C; Alix &#xC870;&#xC808; &#xD558;&#xC2DC;&#xAE30; &#xBC14;&#xB78D;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Alix &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xACFC; Ozz E3 &#xB9AC;&#xAC00;&#xC758; &#xAE30;&#xD310;&#xC740; &#xACE8;&#xACA9; &#xADFC;&#xC721;&#xC5D0; &#xC788;&#xB294; &#xB9D0;&#xB77C; &#xAC1C;&#xC7A5; &#xBCC0;&#xC870;.

Alix/AIP1 es una prote&iacute;na multifuncional adaptador que participa en procesos celulares b&aacute;sicos, incluyendo membrana tr&aacute;fico y actina citoesqueleto montaje, atando selectivamente a una variedad de prote&iacute;nas de la pareja. Sin embargo, los mecanismos de regulaci&oacute;n de volumen de ventas, Distribuci&oacute;n subcelular y funci&oacute;n en las c&eacute;lulas musculares Alix se desconocen. Ahora divulgamos que Alix se expresa en m&uacute;sculo esquel&eacute;tico a trav&eacute;s de la diferenciaci&oacute;n mi&oacute;gena. En miotubos, un grupo espec&iacute;fico de Alix colocalizes con Ozz, el componente de uni&oacute;n a sustrato de la ligasa de ubiquitina m&uacute;sculos espec&iacute;ficos complejos Ozz-E3. Se encontr&oacute; que la interacci&oacute;n de las dos prote&iacute;nas end&oacute;genas en las fibras musculares diferenciadas cambia la conformaci&oacute;n de Alix y promueve su ubiquitinaci&oacute;n. Esto a su vez regula los niveles de la prote&iacute;na en subcompartimientos espec&iacute;ficos, en particular el que contiene la polimerizaci&oacute;n de actina factor cortactina. En Ozz(-/-) miotubos, los niveles de filamentosa (F)-actina es perturbado y Alix se acumula en grande puncta positiva para cortactina. En consonancia con esta observaci&oacute;n, demostramos que la ca&iacute;da de Alix expresi&oacute;n en c&eacute;lulas del m&uacute;sculo C2C12 afecta a la cantidad y distribuci&oacute;n de la F-actina, que por lo tanto lleva a cambios en la morfolog&iacute;a de la c&eacute;lula, con problemas de formaci&oacute;n de protuberancias sarcolemales y motilidad celular defectuosa. Estos resultados sugieren que el ligase de Ozz-E3 regula Alix en sitios donde el citoesqueleto de actina somete a remodelaci&oacute;n.

Alix prote&iacute;na es sustrato de Ozz-E3 ligasas y modula la remodelaci&oacute;n de la actina en el m&uacute;sculo esquel&eacute;tico.

Understanding how tumor cells transition to an invasive and drug-resistant phenotype is central to cancer biology, but the mechanisms underlying this transition remain unclear. We show that sarcomas gain these malignant traits by inducing lysosomal exocytosis, a ubiquitous physiological process. During lysosomal exocytosis, the movement of exocytic lysosomes along the cytoskeleton and their docking at the plasma membrane involve LAMP1, a sialylated membrane glycoprotein and target of the sialidase NEU1. Cleavage of LAMP1 sialic acids by NEU1 limits the extent of lysosomal exocytosis. We found that by down-regulation of NEU1 and accumulation of oversialylated LAMP1, tumor cells exacerbate lysosomal exocytosis of soluble hydrolases and exosomes. This facilitates matrix invasion and propagation of invasive signals, and purging of lysosomotropic chemotherapeutics. In Arf (-⁄-) mice, Neu1 haploinsufficiency fostered the development of invasive, pleomorphic sarcomas, expressing epithelial and mesenchymal markers, and lysosomal exocytosis effectors, LAMP1 and Myosin-11. These features are analogous to those of metastatic, pleomorphic human sarcomas, where low NEU1 levels correlate with high expression of lysosomal exocytosis markers. In a therapeutic proof of principle, we demonstrate that inhibiting lysosomal exocytosis reversed invasiveness and chemoresistance in aggressive sarcoma cells. Thus, we reveal that this unconventional, lysosome-regulated pathway plays a primary role in tumor progression and chemoresistance. 

Regulated lysosomal exocytosis mediates cancer progression.

Maintenance of epithelial cell polarity and epithelial barrier relies on the spatial organization of the actin cytoskeleton and proper positioning/assembly of intercellular junctions. However, how these processes are regulated is poorly understood. Here we reveal a key role for the multifunctional protein Alix in both processes. In a knockout mouse model of Alix, we identified overt structural changes in the epithelium of the choroid plexus and in the ependyma, such as asymmetrical cell shape and size, misplacement and abnormal beating of cilia, blebbing of the microvilli. These defects culminate in excessive cell extrusion, enlargement of the lateral ventricles and hydrocephalus. Mechanistically, we find that by interacting with F-actin, the Par complex and ZO-1, Alix ensures the formation and maintenance of the apically restricted actomyosin-tight junction complex. We propose that in this capacity Alix plays a role in the establishment of apical-basal polarity and in the maintenance of the epithelial barrier.

Alix-mediated assembly of the actomyosin-tight junction polarity complex preserves epithelial polarity and epithelial barrier.

Lysosomal exocytosis is a ubiquitous process negatively regulated by neuraminidase 1 (NEU1), a sialidase mutated in the glycoprotein storage disease sialidosis. In  mice, excessive lysosomal exocytosis is at the basis of disease pathogenesis. Yet, the tissue-specific molecular consequences of this deregulated pathway are still unfolding. We now report that in muscle connective tissue,  fibroblasts have features of myofibroblasts and are proliferative, migratory, and exocytose large amounts of exosomes. These nanocarriers loaded with activated transforming growth factor-β and wingless-related integration site (WNT)/β-catenin signaling molecules propagate fibrotic signals to other cells, maintaining the tissue in a prolonged transitional status. Myofibroblast-derived exosomes fed to normal fibroblasts convert them into myofibroblasts, changing the recipient cells' proliferative and migratory properties. These findings reveal an unexpected exosome-mediated signaling pathway downstream of NEU1 deficiency that propagates a fibrotic disease and could be implicated in idiopathic forms of fibrosis in humans.

Excessive exosome release is the pathogenic pathway linking a lysosomal deficiency to generalized fibrosis.

Coordinated regulation of the lysosomal and autophagic systems ensures basal catabolism and normal cell physiology, and failure of either system causes disease. Here we describe an epigenetic rheostat orchestrated by c-MYC and histone deacetylases that inhibits lysosomal and autophagic biogenesis by concomitantly repressing the expression of the transcription factors MiT/TFE and FOXH1, and that of lysosomal and autophagy genes. Inhibition of histone deacetylases abates c-MYC binding to the promoters of lysosomal and autophagy genes, granting promoter occupancy to the MiT/TFE members, TFEB and TFE3, and/or the autophagy regulator FOXH1. In pluripotent stem cells and cancer, suppression of lysosomal and autophagic function is directly downstream of c-MYC overexpression and may represent a hallmark of malignant transformation. We propose that, by determining the fate of these catabolic systems, this hierarchical switch regulates the adaptive response of cells to pathological and physiological cues that could be exploited therapeutically.

Article	Year
Ozz-E3 ubiquitin ligase targets sarcomeric embryonic myosin heavy chain during muscle development. PloS one\| PubMed ID: 20352047	2010
Alix protein is substrate of Ozz-E3 ligase and modulates actin remodeling in skeletal muscle. The Journal of biological chemistry\| PubMed ID: 22334701	2012
Regulated lysosomal exocytosis mediates cancer progression. Science advances\| PubMed ID: 26824057	2015
Alix-mediated assembly of the actomyosin-tight junction polarity complex preserves epithelial polarity and epithelial barrier. Nature communications\| PubMed ID: 27336173	2016
Excessive exosome release is the pathogenic pathway linking a lysosomal deficiency to generalized fibrosis. Science advances\| PubMed ID: 31328155	2019
MYC competes with MiT/TFE in regulating lysosomal biogenesis and autophagy through an epigenetic rheostat. Nature communications\| PubMed ID: 31399583	2019

Xiaohui Qiu

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