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Selecting and Isolating Colonies of Human Induced Pluripotent Stem Cells Reprogrammed from Adult Fibroblasts

Herein we present a protocol of reprogramming human adult fibroblasts into human induced pluripotent stem cells (hiPSC) using retroviral vectors encoding ...

University of Texas M.D. Anderson Cancer Center

Poznan University of Medical Sciences

&#x6269;&#x5927;&#x7684;&#x4E32;&#x8054;&#x91CD;&#x590D;&#x5E8F;&#x5217;&#x8D1F;&#x8D23;&#x8D85;&#x8FC7; 20 &#x7684;&#x4EBA;&#x7C7B;&#x75BE;&#x75C5;&#x3002;&#x5DF2;&#x786E;&#x5B9A;&#x4E86;&#x51E0;&#x4E2A;&#x72EC;&#x8054;&#x4F53;&#x5143;&#x7D20;&#x548C;&#x8DE8;&#x56E0;&#x7D20;&#x53C2;&#x4E0E;&#x91CD;&#x590D;&#x4E0D;&#x7A33;&#x5B9A; &#xFF08;&#x6269;&#x5C55;&#x548C;&#x6536;&#x7F29;&#xFF09;&#x3002;&#x4F46;&#x662F;&#x6CA1;&#x6709;&#x5168;&#x9762;&#x7684;&#x6A21;&#x5F0F;&#x6765;&#x89E3;&#x91CA;&#x5927;&#x4EE3;&#x9645;&#x6216;&#x8EAF;&#x4F53;&#x53D8;&#x5316;&#x7684;&#x91CD;&#x590D;&#x5E8F;&#x5217;&#x7684;&#x957F;&#x5EA6;&#x7684;&#x5B58;&#x5728;&#x3002;&#x82E5;&#x5E72;&#x884C;&#x7684;&#x8BC1;&#x636E;&#xFF0C;&#x79EF;&#x7D2F;&#x4E86;&#x4ECE;&#x4E0D;&#x540C;&#x6A21;&#x578B;&#x7814;&#x7A76;&#x8868;&#x660E;&#x901A;&#x8FC7;&#x91CD;&#x590D;&#x5E8F;&#x5217;&#x8F6C;&#x5F55;&#x662F;&#x4FC3;&#x8FDB;&#x5176;&#x4E0D;&#x7A33;&#x5B9A;&#x7684;&#x91CD;&#x8981;&#x56E0;&#x7D20;&#x3002;&#x8868;&#x660E;&#x8F6C;&#x5F55;&#x6A21;&#x677F; DNA &#x548C;&#x65B0;&#x751F; RNA &#xFF08;RNA&bull;DNA &#x6DF7;&#x5408;&#x52A8;&#x529B;&#x8F66;&#xFF0C;R &#x5FAA;&#x73AF;&#xFF09; &#x7684;&#x6301;&#x7EED;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x662F;&#x523A;&#x6FC0;&#x57FA;&#x56E0;&#x7EC4;&#x4E0D;&#x7A33;&#x5B9A;&#x3002;&#x6700;&#x8FD1;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x5C55;&#x793A;&#x4E86;&#x6DF7;&#x5408;&#x52A8;&#x529B;&#x8F66; RNA&bull;DNA cotranscriptional &#x4F18;&#x5148;&#x5F62;&#x6210;&#x4E8E;&#x5BCC;&#x542B; GC &#x7684;&#x6838;&#x82F7;&#x9178;&#x548C;&#x56DB;&#x6838;&#x82F7;&#x9178;&#x91CD;&#x590D;&#x5E8F;&#x5217;&#x4F53;&#x5916;&#x4EE5;&#x53CA;&#x4E0E;&#x4EBA;&#x7C7B;&#x57FA;&#x56E0;&#x7EC4; DNA&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x663E;&#x793A;&#x8BE5; cotranscriptional &#x5F62;&#x6210; RNA&bull;DNA &#x6DF7;&#x5408;&#x52A8;&#x529B;&#x8F66;&#x5728; CTG&bull;CAG &#x548C; GAA&bull;TTC &#x7684;&#x91CD;&#x590D;&#x523A;&#x6FC0;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x5E8F;&#x5217;&#x5728;&#x5927;&#x80A0;&#x6746;&#x83CC;&#x548C;&#x4EBA;&#x7C7B;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E2D;&#x7684;&#x4E0D;&#x7A33;&#x5B9A;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x7ED3;&#x679C;&#x8868;&#x660E;&#x6DF7;&#x5408;&#x52A8;&#x529B;&#x8F66; RNA&bull;DNA &#x6301;&#x4E45;&#x6027;&#x8FD8;&#x53EF;&#x80FD;&#x8D1F;&#x8D23;&#x5176;&#x4ED6;&#x4E0B;&#x6E38;&#x5F71;&#x54CD;&#x6269;&#x5927;&#x4E09;&#x6838;&#x82F7;&#x9178;&#x91CD;&#x590D;&#x5E8F;&#x5217;&#xFF0C;&#x5305;&#x62EC;&#x57FA;&#x56E0;&#x6C89;&#x9ED8;&#x3002;&#x8003;&#x8651;&#x901A;&#x8FC7;&#x4EBA;&#x7C7B;&#x57FA;&#x56E0;&#x7EC4;&#x8F6C;&#x5F55;&#x7684;&#x7A0B;&#x5EA6;&#x4EE5;&#x53CA;&#x4E30;&#x5BCC;&#x7684; GC &#x5BCC;&#x548C;/&#x6216;&#x975E;&#x89C4;&#x8303;&#x7684; DNA &#x7ED3;&#x6784;&#xFF0C;&#x5F62;&#x6210;&#x4E32;&#x8054;&#x91CD;&#x590D;&#xFF0C;RNA&bull;DNA &#x6DF7;&#x5408;&#x52A8;&#x529B;&#x8F66;&#x53EF;&#x80FD;&#x4EE3;&#x8868;&#x5171;&#x540C;&#x8BF1;&#x53D8;&#x6784;&#x8C61;&#x3002;&#x56E0;&#x6B64;&#xFF0C;R &#x5FAA;&#x73AF;&#x662F;&#x5BCC;&#x6709;&#x5438;&#x5F15;&#x529B;&#x7684;&#x6F5C;&#x5728;&#x57FA;&#x56E0;&#x7EC4;&#x4E0D;&#x7A33;&#x5B9A;&#x4E0E;&#x76F8;&#x5173;&#x75BE;&#x75C5;&#x7684;&#x6CBB;&#x7597;&#x9776;&#x70B9;&#x3002;

&#x91CD;&#x590D;&#x7684;&#x4E0D;&#x7A33;&#x5B9A;&#x7684;&#x65B0;&#x89C1;&#x89E3;&#xFF1A; RNA&bull;DNA &#x6DF7;&#x5408;&#x52A8;&#x529B;&#x8F66;&#x7684;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;

Expansion of tandem repeat sequences is responsible for more than 20 human diseases. Several cis elements and trans factors involved in repeat instability (expansion and contraction) have been identified. However no comprehensive model explaining large intergenerational or somatic changes of the length of the repeating sequences exists. Several lines of evidence, accumulated from different model studies, indicate that transcription through repeat sequences is an important factor promoting their instability. The persistent interaction between transcription template DNA and nascent RNA (RNAâ€¢DNA hybrids, R loops) was shown to stimulate genomic instability. Recently, we demonstrated that cotranscriptional RNAâ€¢DNA hybrids are preferentially formed at GC-rich trinucleotide and tetranucleotide repeat sequences in vitro as well as in human genomic DNA. Additionally, we showed that cotranscriptional formation of RNAâ€¢DNA hybrids at CTGâ€¢CAG and GAAâ€¢TTC repeats stimulate instability of these sequences in both E. coli and human cells. Our results suggest that persistent RNAâ€¢DNA hybrids may also be responsible for other downstream effects of expanded trinucleotide repeats, including gene silencing. Considering the extent of transcription through the human genome as well as the abundance of GC-rich and/or non-canonical DNA structure forming tandem repeats, RNAâ€¢DNA hybrids may represent a common mutagenic conformation. Hence, R loops are potentially attractive therapeutic target in diseases associated with genomic instability.

New insights into repeat instability: role of RNAâ€¢DNA hybrids.

L&#x26;#39;expansion de s&#xE9;quences r&#xE9;p&#xE9;t&#xE9;es en tandem est responsable de plus de 20 maladies humaines. &#xC9;l&#xE9;ments cis Plusieurs facteurs et trans impliqu&#xE9;s dans l&#x26;#39;instabilit&#xE9; de r&#xE9;p&#xE9;tition (expansion et contraction) ont &#xE9;t&#xE9; identifi&#xE9;s. Toutefois, aucun mod&#xE8;le exhaustif qui explique les grandes variations entre les g&#xE9;n&#xE9;rations ou somatique de la longueur des s&#xE9;quences r&#xE9;p&#xE9;titives existe. Plusieurs &#xE9;l&#xE9;ments de preuve, accumul&#xE9;s &#xE0; partir d&#x26;#39;&#xE9;tudes de mod&#xE8;les diff&#xE9;rents, indiquent que la transcription par des s&#xE9;quences r&#xE9;p&#xE9;t&#xE9;es est un facteur important de la promotion de leur instabilit&#xE9;. L&#x26;#39;interaction permanente entre l&#x26;#39;ADN et l&#x26;#39;ARN de transcription mod&#xE8;le naissantes (ARN &#x2022; ADN hybrides, R boucles) a &#xE9;t&#xE9; montr&#xE9; pour stimuler l&#x26;#39;instabilit&#xE9; g&#xE9;nomique. R&#xE9;cemment, nous avons d&#xE9;montr&#xE9; que cotranscriptional ARN &#x2022; Les hybrides d&#x26;#39;ADN sont pr&#xE9;f&#xE9;rentiellement form&#xE9; &#xE0; GC riche en s&#xE9;quences r&#xE9;p&#xE9;t&#xE9;es de trinucl&#xE9;otides et t&#xE9;tranucl&#xE9;otidiques in vitro ainsi que dans l&#x26;#39;ADN g&#xE9;nomique humain. En outre, nous avons montr&#xE9; que la formation des cotranscriptional hybrides ARN-ADN &#x2022; Les CTG &#x2022; ACG et GAA &#x2022; Les r&#xE9;p&#xE9;titions TTC stimuler l&#x26;#39;instabilit&#xE9; de ces s&#xE9;quences chez E. coli et les cellules humaines. Nos r&#xE9;sultats sugg&#xE8;rent que la persistance de l&#x26;#39;ARN &#x2022; Les hybrides d&#x26;#39;ADN peut &#xE9;galement &#xEA;tre responsable d&#x26;#39;autres effets en aval de &#xE9;largis trinucl&#xE9;otides, y compris sous silence des g&#xE8;nes. Consid&#xE9;rant l&#x26;#39;ampleur de la transcription &#xE0; travers le g&#xE9;nome humain ainsi que l&#x26;#39;abondance de structure de l&#x26;#39;ADN riche en GC et / ou non-canonique formant r&#xE9;p&#xE9;titions en tandem, d&#x26;#39;ARN &#x2022; Les hybrides d&#x26;#39;ADN peuvent repr&#xE9;senter une conformation commune mutag&#xE8;ne. Par cons&#xE9;quent, les boucles R sont potentiellement int&#xE9;ressante cible th&#xE9;rapeutique dans les maladies associ&#xE9;es &#xE0; l&#x26;#39;instabilit&#xE9; g&#xE9;nomique.

Nouvelles perspectives dans l&#x26;#39;instabilit&#xE9; de r&#xE9;p&#xE9;tition: le r&#xF4;le de l&#x26;#39;ARN hybrides d&#x26;#39;ADN &#x2022;

Ausbau von Tandem repeat Sequenzen ist verantwortlich f&uuml;r mehr als 20 Menschen Krankheiten. Mehrere Cis-Elemente und Trans Faktoren wiederholen Instabilit&auml;t (Expansion und Kontraktion) beteiligt wurden. Jedoch gibt es kein umfassendes Modell gro&szlig;e generationen&uuml;bergreifende oder somatische Ver&auml;nderungen der L&auml;nge der wiederholten Sequenzen zu erkl&auml;ren. Mehrere Zeilen Beweise, anderes Modell Studien, zeigen, dass die Transkription durch wiederholte Sequenzen ist ein wichtiger Faktor, die F&ouml;rderung ihrer Instabilit&auml;t. Die permanente Interaktion zwischen Transkription Vorlage DNA und entstehende RNA (RNA&bull;DNA Hybriden, R-Loops) wurde gezeigt, genomische Instabilit&auml;t zu stimulieren. Vor kurzem bewiesen wir, dass cotranscriptional RNA&bull;DNA-Hybriden sich bevorzugt an GC-reiche Repeats bilden und Tetranucleotide wiederholen Sie Sequenzen in-vitro-als auch, wie in menschlicher genomic DNA. Dar&uuml;ber hinaus haben wir gezeigt, dass cotranscriptional Bildung von RNA&bull;DNA Hybriden bei CTG&bull;CAG und GAA&bull;TTC stimulieren Wiederholungen Instabilit&auml;t dieser Sequenzen in E. Coli und menschlichen Zellen. Unsere Ergebnisse legen nahe, dass persistente RNA&bull;DNA Hybriden auch f&uuml;r andere nachgeschalteten Auswirkungen der erweiterten Trinucleotide Repeats, einschlie&szlig;lich gen-silencing verantwortlich sein k&ouml;nnen. In Anbetracht des Umfangs der Transkription durch das menschliche Genom sowie die F&uuml;lle von GC-reiche bzw. nicht-kanonische Struktur der DNA bilden tandem-Wiederholungen, RNA&bull;DNA k&ouml;nnen Hybriden eine gemeinsame Mutagene Konformation vertreten. R-Schleifen sind daher potenziell attraktive therapeutisches Ziel bei Krankheiten, die genomische Instabilit&auml;t zugeordnet.

Neue Einblicke in wiederholen Instabilit&auml;t: Rolle der RNA&bull;DNA-Hybriden.

Espansione del tandem ripetere sequenze &egrave; responsabile per pi&ugrave; di 20 malattie umane. Sono stati identificati diversi cis elementi trans fattori e coinvolti nella ripetizione instabilit&agrave; (espansione e contrazione). Tuttavia nessun modello completo spiegando grandi cambiamenti intergenerazionale o somatiche della lunghezza delle sequenze ripetute esiste. Parecchie linee di prova, accumulato dagli studi di modello diverso, indicano che trascrizione attraverso sequenze di ripetizione &egrave; un fattore importante per promuovere la loro instabilit&agrave;. L&#39;interazione persistente tra trascrizione modello DNA e RNA nascente (ibridi RNA&bull;DNA, R Loop) &egrave; stato mostrato per stimolare la instabilit&agrave; genomica. Recentemente, abbiamo dimostrato che ibridi RNA&bull;DNA cotranscriptional si formano preferenzialmente a trinucleotide GC-ricco e tetranucleotide ripetere sequenze in vitro, cos&igrave; come nel DNA genomico umano. Inoltre, abbiamo dimostrato che cotranscriptional formazione di ibridi RNA&bull;DNA a CTG&bull;CAG e GAA&bull;TTC si ripete stimolano instabilit&agrave; di queste sequenze in e. coli e cellule umane. I nostri risultati suggeriscono che gli ibridi RNA&bull;DNA persistenti possono anche essere responsabili di altri effetti a valle di espanso trinucleotide ripetizioni, tra cui il silenziamento genico. Considerando l&#39;entit&agrave; della trascrizione attraverso il genoma umano, nonch&eacute; l&#39;abbondanza della struttura di DNA ricchi di GC e/o non-canonical formando tandem ripete, RNA&bull;DNA ibridi possono rappresentare una comune conformazione mutagenica. Quindi, R loop sono potenzialmente attraente obiettivo terapeutico nelle malattie associate all&#39;instabilit&agrave; genomica.

New insights into instabilit&agrave; ripetizione: ruolo degli ibridi RNA&bull;DNA.

&#x30BF;&#x30F3;&#x30C7;&#x30E0;&#x53CD;&#x5FA9;&#x914D;&#x5217;&#x306E;&#x62E1;&#x5F35;&#x306F;&#x3001;20&#x4EE5;&#x4E0A;&#x306E;&#x4EBA;&#x9593;&#x306E;&#x75C5;&#x6C17;&#x306B;&#x8CAC;&#x4EFB;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30EA;&#x30D4;&#x30FC;&#x30C8;&#x306E;&#x4E0D;&#x5B89;&#x5B9A;&#x6027;&#xFF08;&#x4F38;&#x7E2E;&#xFF09;&#x306B;&#x95A2;&#x4E0E;&#x3059;&#x308B;&#x3044;&#x304F;&#x3064;&#x304B;&#x306E;&#x30B7;&#x30B9;&#x30A8;&#x30EC;&#x30E1;&#x30F3;&#x30C8;&#x3068;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x56E0;&#x5B50;&#x304C;&#x540C;&#x5B9A;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x3057;&#x304B;&#x3057;&#x3001;&#x7E70;&#x308A;&#x8FD4;&#x3057;&#x914D;&#x5217;&#x306E;&#x9577;&#x3055;&#x306E;&#x5927;&#x898F;&#x6A21;&#x306A;&#x4E16;&#x4EE3;&#x3084;&#x4F53;&#x306E;&#x5909;&#x5316;&#x3092;&#x8AAC;&#x660E;&#x3059;&#x308B;&#x5305;&#x62EC;&#x7684;&#x306A;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x306F;&#x5B58;&#x5728;&#x3057;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3002;&#x7570;&#x306A;&#x308B;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x306E;&#x7814;&#x7A76;&#x304B;&#x3089;&#x84C4;&#x7A4D;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x8A3C;&#x62E0;&#x306E;&#x3044;&#x304F;&#x3064;&#x304B;&#x306E;&#x884C;&#x306F;&#x3001;&#x53CD;&#x5FA9;&#x914D;&#x5217;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x3066;&#x8EE2;&#x5199;&#x304C;&#x305D;&#x306E;&#x4E0D;&#x5B89;&#x5B9A;&#x6027;&#x3092;&#x4FC3;&#x9032;&#x3059;&#x308B;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x56E0;&#x5B50;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x8EE2;&#x5199;&#x92F3;&#x578B;DNA&#x3068;&#x65B0;&#x751F;RNA&#xFF08;RNA&#x2022;DNA&#x30CF;&#x30A4;&#x30D6;&#x30EA;&#x30C3;&#x30C9;&#x3001;R&#x30EB;&#x30FC;&#x30D7;&#xFF09;&#x306E;&#x9593;&#x306B;&#x6C38;&#x7D9A;&#x7684;&#x306A;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x306F;&#x3001;&#x30B2;&#x30CE;&#x30E0;&#x306E;&#x4E0D;&#x5B89;&#x5B9A;&#x6027;&#x3092;&#x523A;&#x6FC0;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x793A;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x6700;&#x8FD1;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x305D;&#x306E;cotranscriptional RNA&#x2022;DNA&#x30CF;&#x30A4;&#x30D6;&#x30EA;&#x30C3;&#x30C9;&#x304C;&#x512A;&#x5148;&#x7684;&#x306B;&#x8A66;&#x9A13;&#x7BA1;&#x5185;&#x3060;&#x3051;&#x3067;&#x306A;&#x304F;&#x3001;&#x4EBA;&#x9593;&#x306E;&#x30B2;&#x30CE;&#x30E0;DNA&#x4E2D;&#x306E;GC-&#x30EA;&#x30C3;&#x30C1;&#x306A;&#x30C8;&#x30EA;&#x30CC;&#x30AF;&#x30EC;&#x30AA;&#x30C1;&#x30C9;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x30C6;&#x30C8;&#x30E9;&#x30CC;&#x30AF;&#x30EC;&#x30AA;&#x30C1;&#x30C9;&#x53CD;&#x5FA9;&#x914D;&#x5217;&#x3067;&#x5F62;&#x6210;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x5B9F;&#x8A3C;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;CTG&#x2022;CAG&#x3068;GAA&#x2022;TTC&#x304C;&#x7E70;&#x308A;&#x8FD4;&#x3055;&#x308C;&#x3001;&#x5927;&#x8178;&#x83CC;&#x3084;&#x30D2;&#x30C8;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x4E21;&#x65B9;&#x3067;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x914D;&#x5217;&#x306E;&#x4E0D;&#x5B89;&#x5B9A;&#x6027;&#x3092;&#x523A;&#x6FC0;&#x3059;&#x308B;&#x3067;RNA&#x2022;DNA&#x30CF;&#x30A4;&#x30D6;&#x30EA;&#x30C3;&#x30C9;&#x306E;&#x305D;&#x306E;cotranscriptional&#x5F62;&#x6210;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x306F;&#x6C38;&#x7D9A;&#x7684;&#x306A;RNA&#x2022;DNA&#x30CF;&#x30A4;&#x30D6;&#x30EA;&#x30C3;&#x30C9;&#x3082;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x30B5;&#x30A4;&#x30EC;&#x30F3;&#x30B7;&#x30F3;&#x30B0;&#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x3001;&#x62E1;&#x5F35;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x30C8;&#x30EA;&#x30CC;&#x30AF;&#x30EC;&#x30AA;&#x30C1;&#x30C9;&#x30EA;&#x30D4;&#x30FC;&#x30C8;&#x306E;&#x4ED6;&#x306E;&#x4E0B;&#x6D41;&#x52B9;&#x679C;&#x306B;&#x8CAC;&#x4EFB;&#x304C;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x793A;&#x5506;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3002;&#x30D2;&#x30C8;&#x30B2;&#x30CE;&#x30E0;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x3066;&#x8EE2;&#x5199;&#x306E;&#x7A0B;&#x5EA6;&#x3068;&#x540C;&#x69D8;&#x306B;&#x30BF;&#x30F3;&#x30C7;&#x30E0;&#x30EA;&#x30D4;&#x30FC;&#x30C8;&#x3092;&#x5F62;&#x6210;&#x3059;&#x308B;GC-&#x30EA;&#x30C3;&#x30C1;&#x304A;&#x3088;&#x3073;/&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x975E;&#x6A19;&#x6E96;&#x7684;&#x306A;DNA&#x69CB;&#x9020;&#x306E;&#x8C4A;&#x5BCC;&#x3055;&#x3092;&#x8003;&#x3048;&#x308B;&#x3068;&#x3001;RNA&#x2022;DNA&#x30CF;&#x30A4;&#x30D6;&#x30EA;&#x30C3;&#x30C9;&#x306F;&#x3001;&#x4E00;&#x822C;&#x7684;&#x306A;&#x5909;&#x7570;&#x539F;&#x6027;&#x30B3;&#x30F3;&#x30D5;&#x30A9;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x3092;&#x8868;&#x3059;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x308B;&#x3002;&#x3057;&#x305F;&#x304C;&#x3063;&#x3066;&#x3001;R&#x30EB;&#x30FC;&#x30D7;&#x306F;&#x30B2;&#x30CE;&#x30E0;&#x306E;&#x4E0D;&#x5B89;&#x5B9A;&#x6027;&#x306B;&#x95A2;&#x9023;&#x3057;&#x305F;&#x75BE;&#x60A3;&#x3067;&#x6F5C;&#x5728;&#x7684;&#x306B;&#x9B45;&#x529B;&#x7684;&#x306A;&#x6CBB;&#x7642;&#x6A19;&#x7684;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3002;

&#x30EA;&#x30D4;&#x30FC;&#x30C8;&#x306E;&#x4E0D;&#x5B89;&#x5B9A;&#x6027;&#x306B;&#x65B0;&#x305F;&#x306A;&#x6D1E;&#x5BDF;&#xFF1A;RNA&#x2022;DNA&#x30CF;&#x30A4;&#x30D6;&#x30EA;&#x30C3;&#x30C9;&#x306E;&#x5F79;&#x5272;

&#xD611;&#xB3D9;&#xC758; &#xD655;&#xC7A5; &#xBC18;&#xBCF5; &#xC2DC;&#xD000;&#xC2A4;&#xB294; 20 &#xAC1C; &#xC774;&#xC0C1;&#xC758; &#xC778;&#xAC04;&#xC758; &#xC9C8;&#xBCD1;&#xC744; &#xB2F4;&#xB2F9;. &#xC5EC;&#xB7EC; &#xAC00;&#xC9C0; cis &#xC694;&#xC18C;&#xC640; &#xD2B8;&#xB79C;&#xC2A4; &#xC694;&#xC18C; &#xBC18;&#xBCF5; &#xBD88;&#xC548;&#xC815; (&#xD655;&#xC7A5;&#xACFC; &#xC218;&#xCD95;)&#xC5D0; &#xAD00;&#xB828; &#xB41C; &#xBC1C;&#xACAC; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098; &#xD070; &#xC138;&#xB300;&#xAC04; &#xB610;&#xB294; &#xCCB4;&#xC138;&#xD3EC; &#xBCC0;&#xD654; &#xBC18;&#xBCF5; &#xC2DC;&#xD000;&#xC2A4;&#xC758; &#xAE38;&#xC774; &#xC124;&#xBA85; &#xD558; &#xACE0; &#xD3EC;&#xAD04;&#xC801;&#xC778; &#xBAA8;&#xB378;&#xC774; &#xC874;&#xC7AC; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB2E4;&#xB978; &#xBAA8;&#xB378; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xCD95;&#xC801; &#xB41C; &#xC99D;&#xAC70;&#xC758; &#xC5EC;&#xB7EC; &#xC904; &#xBC18;&#xBCF5; &#xC2DC;&#xD000;&#xC2A4;&#xB97C; &#xD1B5;&#xD574; &#xC804;&#xC0AC; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC758; &#xBD88;&#xC548;&#xC815;&#xC744; &#xD64D;&#xBCF4; &#xD558;&#xB294; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xC694;&#xC18C;&#xAC00; &#xB418;&#xC5C8;&#xC74C;&#xC744; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0C5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC804;&#xC0AC; &#xD15C;&#xD50C;&#xB9BF; DNA &#xCD08;&#xAE30; RNA (RNA&bull;DNA &#xD558;&#xC774;&#xBE0C;&#xB9AC;&#xB4DC;, R &#xB8E8;&#xD504;)&#xC758; &#xC9C0;&#xC18D;&#xC801;&#xC778; &#xC0C1;&#xD638;&#xC791;&#xC6A9; &#xC790;&#xADF9; &#xD558;&#xB294; genomic &#xBD88;&#xC548;&#xC815;&#xC131;&#xC744; &#xD45C;&#xC2DC; &#xD588;&#xB2E4;. &#xCD5C;&#xADFC;&#xC5D0;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; cotranscriptional RNA&bull;DNA &#xD558;&#xC774;&#xBE0C;&#xB9AC;&#xB4DC; GC &#xD48D;&#xBD80;&#xD55C; trinucleotide&#xC5D0;&#xC11C; &#xC6B0;&#xC120;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xD615;&#xC131; &#xB418; &#xACE0; tetranucleotide &#xBC18;&#xBCF5; &#xC2DC;&#xD000;&#xC2A4; &#xCCB4; &#xC678;&#xB3C4; &#xC778;&#xAC04; &#xAC8C;&#xB188; DNA&#xB85C; &#xC2DC;&#xC5F0;. &#xB610;&#xD55C;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; cotranscriptional &#xD615;&#xC131; &#xBCF4;&#xC600;&#xB2E4; CTG&bull;CAG &#xBC0F; GAA&bull;TTC RNA&bull;DNA &#xD558;&#xC774;&#xBE0C;&#xB9AC;&#xB4DC;&#xC758; &#xBC18;&#xBCF5; &#xC790;&#xADF9; &#xB300;&#xC7A5;&#xADE0;&#xACFC; &#xC778;&#xAC04;&#xC758; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xC2DC;&#xD000;&#xC2A4;&#xC758; &#xBD88;&#xC548;&#xC815;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xACB0;&#xACFC; &#xC601;&#xAD6C; RNA&bull;DNA &#xD558;&#xC774;&#xBE0C;&#xB9AC;&#xB4DC; &#xD655;&#xC7A5;&#xB41C; trinucleotide &#xBC18;&#xBCF5;, &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xCE68;&#xBB35; &#xB4F1;&#xC758; &#xB2E4;&#xB978; &#xB2E4;&#xC6B4;&#xC2A4;&#xD2B8;&#xB9BC; &#xD6A8;&#xACFC; &#xB300; &#xD55C; &#xCC45;&#xC784;&#xC744; &#xC9C0;&#xC9C0; &#xC218;&#xB3C4; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xAC83;&#xC774; &#xC88B;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC778;&#xAC04; &#xAC8C;&#xB188;&#xC744; &#xD1B5;&#xD574; &#xC804;&#xC0AC;&#xC758; &#xBC94;&#xC704; &#xBFD0;&#xB9CC; &#xC544;&#xB2C8;&#xB77C; GC &#xD48D;&#xBD80;&#xD55C; &#xB610;&#xB294; &#xC815;&#xC2DD;&#xC774; &#xC544;&#xB2CC; DNA &#xAD6C;&#xC870; &#xD615;&#xC131; &#xD0E0;&#xB364; &#xD48D;&#xC694;&#xC758; &#xBC18;&#xBCF5;, RNA&bull;DNA &#xACE0;&#xB824; &#xD558;&#xC774;&#xBE0C;&#xB9AC;&#xB4DC; &#xC77C;&#xBC18;&#xC801;&#xC778; &#xBCC0;&#xC774; &#xC6D0; &#xC131; &#xD615;&#xD0DC;&#xB97C; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0BC; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB530;&#xB77C;&#xC11C;, R &#xB8E8;&#xD504;&#xB294; &#xC7A0;&#xC7AC;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xB9E4;&#xB825;&#xC801;&#xC778; &#xCE58;&#xB8CC; &#xB300;&#xC0C1; &#xC9C8;&#xD658; &#xAD00;&#xB828; &#xB41C; genomic &#xBD88;&#xC548;&#xC815;&#xC131;.

&#xBC18;&#xBCF5; &#xBD88;&#xC548;&#xC815;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC0C8;&#xB85C;&#xC6B4; &#xD1B5;&#xCC30;&#xB825;: RNA&bull;DNA &#xD558;&#xC774;&#xBE0C;&#xB9AC;&#xB4DC;&#xC758; &#xC5ED;&#xD560;.

La expansi&#xF3;n de secuencias repetidas en tandem es responsable de m&#xE1;s de 20 enfermedades humanas. Varios elementos cis y trans factores que intervienen en la inestabilidad de repetici&#xF3;n (expansi&#xF3;n y contracci&#xF3;n) han sido identificados. Sin embargo no existe un modelo integral que explica los grandes cambios intergeneracionales o som&#xE1;ticas de la longitud de las secuencias de repetici&#xF3;n existe. Varias l&#xED;neas de evidencia, acumuladas desde los estudios de diferentes modelos, indican que la transcripci&#xF3;n a trav&#xE9;s de secuencias de repetici&#xF3;n es un factor importante para la promoci&#xF3;n de su inestabilidad. La constante interacci&#xF3;n entre el ADN y el ARN de transcripci&#xF3;n plantilla de nacientes (ARN &#x2022; ADN h&#xED;bridos, circuitos R) ha demostrado estimular la inestabilidad gen&#xF3;mica. Recientemente, hemos demostrado que cotranscriptional ARN H&#xED;bridos de ADN son preferentemente formado en rica en GC trinucle&#xF3;tido y secuencias repetidas tetranucleotide in vitro, as&#xED; como en el ADN gen&#xF3;mico humano. Adem&#xE1;s, puso de manifiesto que la formaci&#xF3;n de ARN cotranscriptional &#x2022; Los h&#xED;bridos de ADN en la CTG &#x2022; CAG y GAA &#x2022; Las repeticiones TTC estimular la inestabilidad de estas secuencias, tanto en E. coli y c&#xE9;lulas humanas. Nuestros resultados sugieren que la persistencia de ARN &#x2022; Los h&#xED;bridos de ADN tambi&#xE9;n puede ser responsable de otros efectos aguas abajo de la ampliaci&#xF3;n de repeticiones de trinucle&#xF3;tidos, incluyendo el silenciamiento de genes. Considerando la extensi&#xF3;n de la transcripci&#xF3;n a trav&#xE9;s del genoma humano, as&#xED; como la abundancia de la estructura del ADN ricas en GC y / o no can&#xF3;nica formando repeticiones en t&#xE1;ndem, ARN H&#xED;bridos de ADN puede representar una conformaci&#xF3;n mutag&#xE9;nico com&#xFA;n. Por lo tanto, los bucles de R son diana terap&#xE9;utica potencialmente atractiva en enfermedades asociadas con la inestabilidad gen&#xF3;mica.

Urszula Polak

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