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Transretinal ERG Recordings from Mouse Retina: Rod and Cone Photoresponses

There are two distinct classes of image-forming photoreceptors in the vertebrate retina: rods and cones. Rods are able to detect single photons of light ...

Washington University School of Medicine

&#x5FEB;&#x901F;&#x626B;&#x63CF;&#x5206;&#x8272; microspectrophotometer &#x7528;&#x4E8E;&#x8DDF;&#x8E2A;&#x4EA7;&#x54C1;&#x7684;&#x89C6;&#x7D2B;&#x7EA2;&#x8D28;&#x5149; (metarhodopsins &#x4E00;/&#x4E8C;/&#x4E09;&#x53CA;&#x66F4;&#x9AD8;&#x7248;&#x672C;&#xFF09; &#x5728;&#x7ED3;&#x6784;&#x4E0A;&#x5B8C;&#x597D;&#x7684;&#x4E24;&#x6816;&#x7C7B;&#x6746;&#x5916;&#x6BB5; (ROSs) &#x548C;&#x65B0;&#x9648;&#x4EE3;&#x8C22;&#x6D3B;&#x8DC3;&#xFF0C;&#x68D2;&#x3002;&#x8BE5;&#x6587;&#x4E66;&#x5141;&#x8BB8;&#x7684;&#x5438;&#x6536;&#x5149;&#x8C31;&#x4E0E;&#x65F6;&#x95F4;&#x5206;&#x8FA8;&#x7387;&#x5F55;&#x5236;&#x6BD4; 1 s&#xFF0C;&#x5E76;&#x533A;&#x522B;&#x5BF9;&#x5F85;&#x4E0D;&#x540C;&#x7684;&#x611F;&#x5149;&#x819C;&#x53CA;&#x5176;&#x4E8C;&#x9636;&#x65B9;&#x5411;&#x7684;&#x7C7B;&#x4F3C;&#x5438;&#x6536;&#x5149;&#x8C31;&#x7684;&#x4EA7;&#x54C1;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x5C55;&#x793A;&#x7B2C;&#x4E09;&#x662F;&#x5728; ph &#x503C;&#x53EF;&#x9006;&#x5E73;&#x8861;&#x4E0E; metarhodopsin II&#xFF0C;metarhodopsin &#x548C; metarhodopsin &#x4E09;&#x3001; &#x53D1;&#x8272;&#x56E2;&#x662F;&#x5B9A;&#x5411;&#x5BF9;&#x819C;&#x5E73;&#x9762;&#x6BD4; 11 &#x72EC;&#x8054;&#x4F53;&#x89C6;&#x7F51;&#x819C;&#x751A;&#x81F3;&#x66F4;&#x4E25;&#x683C;&#x5730;&#x5728;&quot;&#x9ED1;&#x6697;&quot;&#x7684;&#x89C6;&#x7D2B;&#x7EA2;&#x8D28;&#x3002;&#x8FD9;&#x8868;&#x660E;&#x8BE5;&#x5168;&#x53CD;&#x5F0F;&#x89C6;&#x7F51;&#x819C;&#x4E2D; metarhodopsin III &#x4ECD;&#x96B6;&#x5C5E;&#x4E8E;&#x5176;&#x672C;&#x673A;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x7AD9;&#x70B9;&#x4E0A;&#x7EC6;&#x83CC;&#x89C6;&#x7D2B;&#x7EA2;&#x8D28;&#x3002;Metarhodopsins &#x8870;&#x51CF;&#x7684;&#x52A8;&#x529B;&#x5B66;&#x8BA1;&#x5212;&#x63D0;&#x4EA4;&#x5728;&#x54EA; metarhodopsin &#x4E09;&#x4F4D;&#x4E8E;&#x89C6;&#x7F51;&#x819C;&#x4ECE; metarhodopsin &#x4E8C;&#x5206;&#x6D41;&#x9014;&#x5F84;&#x3002;Metarhodopsin III &#x6F02;&#x767D;&#x5242;&#x4F4E;&#x81F3;&#x7EA6; 3%&#xFF0C;&#x4E0E;&#x524D;&#x51E0;&#x6B21;&#x62A5;&#x544A;&#xFF0C;&#x5B83;&#x4E0D;&#x662F;&#x5728;&#x68C0;&#x6D4B;&#x5230;&#x7684;&#x5F62;&#x6210;&#x5F62;&#x6210;&#x5728;&#x4F4E;&#x4E8E; 10%&#x7684;&#x6F02;&#x767D;&#x5242;&#x3002;&#x5149;&#x8C31;&#x7C7B;&#x4F3C;&#x4E8E; metarhodopsin &#x7684;&#x53E6;&#x4E00;&#x79CD;&#x4EA7;&#x54C1;&#x4E09;&#xFF0C;&#x79F0;&#x4E3A; P440&#xFF0C;&#x663E;&#x793A;&#x5728;&#x4EE5;&#x540E;&#x9636;&#x6BB5;&#x7684;&#x5149;&#x89E3;&#x4E3A; metarhodopsin II &#x548C; metarhodopsin III &#x8870;&#x53D8;&#x7684;&#x7ED3;&#x679C;&#x3002;P440 &#x5728;&#x6709;&#x8272;&#x96C6;&#x56E2;&#x662F;&#x8DE8;&#x78C1;&#x76D8;&#x819C;&#x4F18;&#x5148;&#x4E3A;&#x5BFC;&#x5411;&#x7684;&#x3002;&#x6700;&#x7EC8;&#x4EA7;&#x54C1;&#x4E2D;&#x5B64;&#x7ACB;&#x7684;&#x6D3B;&#x6027;&#x6C27;&#xFF0C;&#x90A3;&#x91CC;&#x7684;&#x89C6;&#x7F51;&#x819C;&#x7684;&#x89C6;&#x9EC4;&#x9187;&#x51CF;&#x5C11;&#x88AB;&#x963B;&#x6B62;&#xFF0C;&#x5305;&#x62EC;&#x514D;&#x8D39;&#x89C6;&#x7F51;&#x819C;&#x548C;&#x89C6;&#x7F51;&#x819C;&#x53EF;&#x80FD;&#x8FDE;&#x63A5;&#x5230;&#x4E0D;&#x540C;&#x7684;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x7AD9;&#x70B9;&#x4E2D;&#x819C;&#x7684;&#x6DF7;&#x5408;&#x7269;&#x3002;&#x5728;&#x65B0;&#x9648;&#x4EE3;&#x8C22;&#x6D3B;&#x8DC3;&#x68D2;&#x65E5;&#x540E;&#x4EA7;&#x54C1;&#x5FEB;&#x901F;&#x8F6C;&#x6362;&#x4E3A;&#x89C6;&#x9EC4;&#x9187;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x5F97;&#x51FA;&#x7684;&#x7ED3;&#x8BBA;&#xFF0C;metarhodopsin &#x4E09;&#x8868;&#x793A;&#x7279;&#x5B9A;&#x7684;&#x6784;&#x8C61;&#x72B6;&#x6001;&#xFF0C;&#x5176; metarhodopsin &#x4F4D;&#x7F6E;&#x4ECD;&#x88AB;&#x6709;&#x8272;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x7F51;&#x7AD9;&#x5360;&#x9886;&#x7684;&#x5168;&#x53CD;&#x5F0F;&#x89C6;&#x7F51;&#x819C;&#x3002;&#x56E0;&#x6B64;&#xFF0C;&#x5F62;&#x6210;&#x548C;&#x8150;&#x70C2;&#x7684; metarhodopsin &#x53EF;&#x80FD;&#x4F1A;&#x9650;&#x5236;&#x4E09;&#x7387;&#x7684;&#x89C6;&#x7D2B;&#x7EA2;&#x8D28;&#x518D;&#x751F;&#x548C;&#x611F;&#x5149;&#x5668;&#x6697;&#x9002;&#x5E94;&#x3002;

Metarhodopsin &#x7B2C;&#x4E09;&#x7684;&#x8EAB;&#x4EFD;&#x3002;

A fast-scanning dichroic microspectrophotometer was used to trace products of rhodopsin photolysis (metarhodopsins I/II/III and later) in structurally intact amphibian rod outer segments (ROSs) and metabolically active rods. The instrument allows the recording of absorbance spectra with a time resolution better than 1 s, and to discriminate between products with similar absorbance spectra that differ with respect to the orientation of their chromophore in the photoreceptor membrane. We demonstrate that metarhodopsin III is in a pH-reversible equilibrium with metarhodopsin II and that the metarhodopsin III chromophore is orientated with respect to the membrane plane even more strictly than the 11-cis retinal in "dark" rhodopsin. This indicates that all-trans retinal in metarhodopsin III is still attached to its native binding site on opsin. The kinetic scheme of the decay of metarhodopsins is presented in which metarhodopsin III lies in a shunt pathway from metarhodopsin II to retinal. Formation of metarhodopsin III was detected at bleaches as low as approximately 3%, contrary to previous reports that it is not formed at below 10% bleaches. Another product that is spectrally similar to metarhodopsin III, termed P440, appears at later stages of photolysis as the result of the decay of metarhodopsin II and metarhodopsin III. The chromophoric group in P440 is orientated preferentially across the disk membrane. The final product(s) in isolated ROS, where the reduction of retinal to retinol is blocked, consists of a mixture of a free retinal and retinal possibly attached to different binding sites in the membrane. In metabolically active rods the later products are quickly converted to retinol. We conclude that metarhodopsin III represents a specific conformational state of metarhodopsin where the chromophoric binding site is still occupied by all-trans retinal. Hence, the formation and decay of metarhodopsin III may be limiting for the rate of rhodopsin regeneration and photoreceptor dark adaptation.

The identity of metarhodopsin III.

Un microspectrophotom&egrave;tre dichro&iuml;que balayage rapide a permis de retracer les produits de photolyse de rhodopsine (m&eacute;tarhodopsines I/II/III et versions ult&eacute;rieures) segments externes (ROSs) du rod amphibiens structurellement intact et tiges m&eacute;taboliquement actives. L&#39;instrument permet l&#39;enregistrement de spectres d&#39;absorbance avec une r&eacute;solution temporelle meilleure que 1 s et d&#39;&eacute;tablir une distinction entre les produits avec des spectres d&#39;absorbance semblable qui diff&egrave;rent en ce qui concerne l&#39;orientation de leur chromophore dans la membrane de la cellule photo&eacute;lectrique. Nous d&eacute;montrons que m&eacute;tarhodopsine QU&#39;III est dans un &eacute;quilibre de pH r&eacute;versible avec m&eacute;tarhodopsine II et que le chromophore III m&eacute;tarhodopsine est orient&eacute; en ce qui concerne la membrane plane encore plus stricte que le r&eacute;tinal 11-cis dans &quot;dark&quot; rhodopsine. Cela indique que r&eacute;tinal tout-trans en m&eacute;tarhodopsine QU&#39;III est toujours attach&eacute; &agrave; son site de liaison indig&egrave;nes sur opsine. Le sch&eacute;ma cin&eacute;tique de la d&eacute;composition de m&eacute;tarhodopsines est pr&eacute;sent&eacute; dans laquelle m&eacute;tarhodopsine III se trouve dans une voie de d&eacute;rivation de la m&eacute;tarhodopsine II &agrave; la r&eacute;tine. Formation de m&eacute;tarhodopsine QU&#39;III a &eacute;t&eacute; d&eacute;tect&eacute;e dans l&#39;eau de Javel aussi bas que 3 % environ, contrairement aux rapports ant&eacute;rieurs qu&#39;il n&#39;est pas form&eacute; au dessous de 10 % eau de Javel. Un autre produit semblable spectralement m&eacute;tarhodopsine III, appel&eacute; P440, appara&icirc;t aux stades ult&eacute;rieurs de la photolyse &agrave; la suite de la d&eacute;sint&eacute;gration de la m&eacute;tarhodopsine II et m&eacute;tarhodopsine III. Le groupe de chromophores dans P440 est orient&eacute; pr&eacute;f&eacute;rentiellement &agrave; travers la membrane du disque. Le produit final en ROS isol&eacute;, o&ugrave; la r&eacute;duction du r&eacute;tinal en r&eacute;tinol est bloqu&eacute;e, constitu&eacute;s d&#39;un m&eacute;lange d&#39;une r&eacute;tine gratuite et &eacute;ventuellement attach&eacute;s aux sites de liaison diff&eacute;rents dans la membrane de la r&eacute;tine. Dans les barres m&eacute;taboliquement actives les produits ult&eacute;rieurs sont rapidement converties en r&eacute;tinol. Nous concluons que m&eacute;tarhodopsine III repr&eacute;sente un &eacute;tat conformationnel sp&eacute;cifique de la m&eacute;tarhodopsine o&ugrave; l&#39;accepteur chromophores est toujours occup&eacute; de r&eacute;tinal tout-trans. Par cons&eacute;quent, la formation et la d&eacute;composition de la m&eacute;tarhodopsine III peut limiter le taux de r&eacute;g&eacute;n&eacute;ration de la rhodopsine et de photor&eacute;cepteurs adaptation &agrave; l&#39;obscurit&eacute;.

L&#39;identit&eacute; de la m&eacute;tarhodopsine III.

Die Identit&#xE4;t des Metarhodopsin III.

Una veloce scansione microspectrophotometer dicroico &egrave; stato utilizzato per tracciare prodotti di fotolisi rodopsina (metarhodopsins I/II/III e successive) in anfibio strutturalmente intatto asta esterna segmenti (ROSs) e canne metabolicamente attivi. Lo strumento permette la registrazione di spettri di assorbanza con una risoluzione temporale migliore di 1 s e per discriminare tra prodotti con gli spettri di assorbimento simili che differiscono per quanto riguarda l&#39;orientamento della loro cromoforo nella membrana del fotorecettore. Dimostriamo che essa che III &egrave; in un equilibrio di pH-reversibile con essa II e che il cromoforo III essa &egrave; orientato rispetto la membrana piano ancora pi&ugrave; strettamente l&#39;11-cis-retinale in rodopsina &quot;scuro&quot;. Questo indica che tutto-trans retinale in essa che III &egrave; ancora attaccato al suo sito di legame nativo su opsin. Lo Schema cinetico di decadimento del metarhodopsins &egrave; presentato in cui essa III si trova in un percorso di shunt da essa II a retinica. Formazione di semplice che III &egrave; stato rilevato a candeggine basse quanto 3%, contrariamente alle precedenti relazioni che non &egrave; formata a inferiore a 10% sbiancanti. Un altro prodotto che &egrave; spettralmente simile al semplice III, chiamato P440, appare nelle fasi successive della fotolisi come risultato del decadimento di semplice II e III di essa. Il gruppo cromofori P440 &egrave; orientato preferenzialmente attraverso la membrana del disco. Il prodotto finale in ROS isolato, dove la riduzione di retinale a retinolo &egrave; bloccata, consiste di una miscela di un libero retinica e possibilmente collegati a siti di legame differenti nella membrana retinica. In verghe metabolicamente attivi i successivi prodotti sono rapidamente convertiti in retinolo. Possiamo concludere che essa III rappresenta uno stato conformazionale specifico di essa dove il sito di legame cromofori &egrave; ancora occupato da tutto-trans retinale. Quindi, la formazione e la decadenza di essa III pu&ograve; limitare per il tasso di rigenerazione della rodopsina e adattamento dark fotorecettore.

L&#39;identit&agrave; di semplice III.

&#x9AD8;&#x901F;&#x30B9;&#x30AD;&#x30E3;&#x30F3; &#x30C0;&#x30A4;&#x30AF;&#x30ED;&#x30A4;&#x30C3;&#x30AF;&#x5149;&#x5EA6;&#x88FD;&#x54C1;&#x30ED;&#x30C9;&#x30D7;&#x30B7;&#x30F3;&#x5149;&#x5206;&#x89E3; (&#x30E1;&#x30BF;&#x30ED;&#x30C9;&#x30D7;&#x30B7;&#x30F3; II/III &#x3068;&#x305D;&#x308C;&#x4EE5;&#x964D;&#xFF09; &#x3067;&#x69CB;&#x9020;&#x7684;&#x306B;&#x305D;&#x306E;&#x307E;&#x307E;&#x4E21;&#x751F;&#x985E;&#x8996;&#x7D30;&#x80DE;&#x5916;&#x7BC0; &#xFF08;&#x30ED;&#x30B9;&#xFF09; &#x3068;&#x4EE3;&#x8B1D;&#x6D3B;&#x6027;&#x306E;&#x9AD8;&#x3044;&#x68D2;&#x306E;&#x30C8;&#x30EC;&#x30FC;&#x30B9;&#x306B;&#x4F7F;&#x7528;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x697D;&#x5668;&#x5438;&#x5149;&#x5EA6;&#x30B9;&#x30DA;&#x30AF;&#x30C8;&#x30EB;&#x6642;&#x9593;&#x89E3;&#x50CF;&#x5EA6;&#x306E;&#x8A18;&#x9332;&#x306F; 1 &#x3088;&#x308A;&#x826F;&#x3044;&#x53EF;&#x80FD; s&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x88FD;&#x54C1;&#x306E;&#x767A;&#x8272;&#x56E3;&#x306E;&#x5149;&#x53D7;&#x5BB9;&#x819C;&#x306E;&#x65B9;&#x5411;&#x3092;&#x57FA;&#x6E96;&#x3068;&#x306F;&#x7570;&#x306A;&#x308B;&#x3068;&#x540C;&#x69D8;&#x306E;&#x5438;&#x5149;&#x5EA6;&#x30B9;&#x30DA;&#x30AF;&#x30C8;&#x30EB;&#x3068;&#x306E;&#x9593;&#x3067;&#x533A;&#x5225;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;11 Cis &#x30EC;&#x30C1;&#x30CA;&#x30FC;&#x30EB;&#x3088;&#x308A;&#x3088;&#x308A;&#x3082;&#x53B3;&#x5BC6;&#x306B;&#x300C;&#x6697;&#x3044;&#x300D;&#x306E;&#x30ED;&#x30C9;&#x30D7;&#x30B7;&#x30F3;&#x306E;&#x5E73;&#x9762;&#x306F;&#x3001;&#x79C1;&#x305F;&#x3061;&#x305D;&#x306E;&#x30E1;&#x30BF;&#x30ED;&#x30C9;&#x30D7;&#x30B7;&#x30F3; III &#x30E1;&#x30BF;&#x30ED;&#x30C9;&#x30D7;&#x30B7;&#x30F3; II &#x3068; pH &#x30EA;&#x30D0;&#x30FC;&#x30B7;&#x30D6;&#x30EB;&#x5E73;&#x8861;&#x3067;&#x3059;&#x3092;&#x793A;&#x3059;&#x3057;&#x3001;&#x30E1;&#x30BF;&#x30ED;&#x30C9;&#x30D7;&#x30B7;&#x30F3; III &#x30AF;&#x30ED;&#x30E2;&#x30D5;&#x30A9;&#x30A2;&#x306B;&#x95A2;&#x3057;&#x3066;&#x819C;&#x5FD7;&#x5411;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x306F;&#x3001;&#x5168;&#x3066;&#x306E;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9; &#x30EC;&#x30C1;&#x30CA;&#x30FC;&#x30EB; &#x30E1;&#x30BF;&#x30ED;&#x30C9;&#x30D7;&#x30B7;&#x30F3; III &#x306F;&#x3001;&#x307E;&#x3060;&#x305D;&#x306E;&#x30CD;&#x30A4;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6; &#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C7;&#x30A3;&#x30F3;&#x30B0; &#x30B5;&#x30A4;&#x30C8; &#x30AA;&#x30D7;&#x30B7;&#x30F3;&#x4E0A;&#x306B;&#x63A5;&#x7D9A;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30E1;&#x30BF;&#x30ED;&#x30C9;&#x30D7;&#x30B7;&#x30F3;&#x306E;&#x5D29;&#x58CA;&#x306E;&#x904B;&#x52D5;&#x8AD6;&#x30B9;&#x30AD;&#x30FC;&#x30E0;&#x306F;&#x3069;&#x306E;&#x3067;&#x30E1;&#x30BF;&#x30ED;&#x30C9;&#x30D7;&#x30B7;&#x30F3; III &#x30E1;&#x30BF;&#x30ED;&#x30C9;&#x30D7;&#x30B7;&#x30F3; II &#x304B;&#x3089;&#x7DB2;&#x819C;&#x3078;&#x306E;&#x30B7;&#x30E3;&#x30F3;&#x30C8;&#x8DEF;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x63D0;&#x793A;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30E1;&#x30BF;&#x30ED;&#x30C9;&#x30D7;&#x30B7;&#x30F3; III &#x6F02;&#x767D;&#x5264;&#x3067;&#x306F;&#x306A;&#x3044;&#x4EE5;&#x524D;&#x306E;&#x5831;&#x544A;&#x306B;&#x53CD;&#x3057;&#x3066;&#x7D04; 3% &#x306E;&#x4F4E;&#x304C;&#x691C;&#x51FA;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x306E;&#x5F62;&#x6210;&#x306F; 10 &#xFF05; &#x306E;&#x6F02;&#x767D;&#x5264;&#x306E;&#x4E0B;&#x3067;&#x5F62;&#x6210;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30B9;&#x30DA;&#x30AF;&#x30C8;&#x30EB; &#x30E1;&#x30BF;&#x30ED;&#x30C9;&#x30D7;&#x30B7;&#x30F3;&#x306B;&#x4F3C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x5225;&#x306E;&#x88FD;&#x54C1; III&#x3001;P440 &#x3068;&#x547C;&#x3070;&#x308C;&#x308B;&#x5149;&#x5206;&#x89E3;&#x306E;&#x5F8C;&#x306E;&#x6BB5;&#x968E;&#x3067;&#x30E1;&#x30BF;&#x30ED;&#x30C9;&#x30D7;&#x30B7;&#x30F3; II &#x3068;&#x30E1;&#x30BF;&#x30ED;&#x30C9;&#x30D7;&#x30B7;&#x30F3; III &#x306E;&#x5D29;&#x58CA;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x8868;&#x793A;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x56E3;&#x30B0;&#x30EB;&#x30FC;&#x30D7; P440 &#x3067;&#x512A;&#x5148;&#x7684;&#x306B;&#x30C7;&#x30A3;&#x30B9;&#x30AF;&#x819C;&#x3092;&#x8D8A;&#x3048;&#x3066;&#x5FD7;&#x5411;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x5206;&#x96E2;&#x3055;&#x308C;&#x305F; ROS &#x306E;&#x6700;&#x7D42;&#x7684;&#x306A;&#x88FD;&#x54C1;&#x30EC;&#x30C1;&#x30CE;&#x30FC;&#x30EB;&#x306B;&#x7DB2;&#x819C;&#x306E;&#x4F4E;&#x6E1B;&#x304C;&#x30D6;&#x30ED;&#x30C3;&#x30AF;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x7121;&#x6599;&#x7DB2;&#x819C;&#x3084;&#x7DB2;&#x819C;&#x304A;&#x305D;&#x3089;&#x304F;&#x7570;&#x306A;&#x308B;&#x7D50;&#x5408;&#x90E8;&#x4F4D;&#x306B;&#x819C;&#x306B;&#x6DFB;&#x4ED8;&#x306E;&#x6DF7;&#x5408;&#x7269;&#x306E;&#x69CB;&#x6210;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x4EE3;&#x8B1D;&#x6D3B;&#x6027;&#x306E;&#x68D2;&#x3067;&#x4EE5;&#x964D;&#x306E;&#x88FD;&#x54C1;&#x306F;&#x3059;&#x3050;&#x306B;&#x30EC;&#x30C1;&#x30CE;&#x30FC;&#x30EB;&#x306B;&#x5909;&#x63DB;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005; &#x306F;&#x305D;&#x306E;&#x30E1;&#x30BF;&#x30ED;&#x30C9;&#x30D7;&#x30B7;&#x30F3; III &#x56E3;&#x7D50;&#x5408;&#x90E8;&#x4F4D;&#x306F;&#x3001;&#x307E;&#x3060;&#x3059;&#x3079;&#x3066;&#x306E;-trans &#x7DB2;&#x819C;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x5360;&#x3081;&#x3089;&#x308C;&#x308B;&#x30E1;&#x30BF;&#x30ED;&#x30C9;&#x30D7;&#x30B7;&#x30F3;&#x306E;&#x7279;&#x5B9A;&#x69CB;&#x9020;&#x306E;&#x72B6;&#x614B;&#x3092;&#x8868;&#x3059;&#x3092;&#x7DE0;&#x7D50;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x305D;&#x308C;&#x6545;&#x306B;&#x3001;&#x5F62;&#x6210;&#x3068;&#x5D29;&#x58CA;&#x306E;&#x30E1;&#x30BF;&#x30ED;&#x30C9;&#x30D7;&#x30B7;&#x30F3; III &#x306E;&#x30ED;&#x30C9;&#x30D7;&#x30B7;&#x30F3;&#x518D;&#x751F;&#x3068;&#x8996;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x6697;&#x9806;&#x5FDC;&#x901F;&#x5EA6;&#x306E;&#x5236;&#x9650;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x30E1;&#x30BF;&#x30ED;&#x30C9;&#x30D7;&#x30B7;&#x30F3; III &#x306E; id&#x3002;

&#xBE60;&#xB978; &#xC2A4;&#xCE94; dichroic microspectrophotometer&#xB294; &#xAD6C;&#xC870;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xADF8;&#xB300;&#xB85C; &#xC591;&#xC11C;&#xB958; &#xB9C9;&#xB300; &#xC678;&#xBD80; &#xC138;&#xADF8;&#xBA3C;&#xD2B8; (&#xB85C;&#xC2A4;)&#xC640; metabolically &#xD65C;&#xC131; &#xBD09; rhodopsin photolysis (metarhodopsins I/II/III &#xBC0F; &#xC774;&#xD6C4;) &#xC81C;&#xD488;&#xC744; &#xCD94;&#xC801; &#xD558;&#xB294; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;. &#xC545;&#xAE30; &#xC218; &#xC2DC;&#xAC04; &#xBD84;&#xD574;&#xB2A5;&#xC73C;&#xB85C; &#xD761; &#xAD11;&#xB3C4; &#xC2A4;&#xD399;&#xD2B8;&#xB7FC;&#xC744; &#xAE30;&#xB85D; &#xD558;&#xB294; 1 &#xBCF4;&#xB2E4; &#xB354; &#xB098;&#xC740; s, &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC758; &#xBC1C;&#xC5D0; &#xD3EC;&#xD1A0; &#xB9AC;&#xC149;&#xD130; &#xBA64;&#xBE0C;&#xB808;&#xC778;&#xC758; &#xBC29;&#xD5A5;&#xC5D0; &#xB300;&#xD574; &#xB2E4;&#xB978; &#xBE44;&#xC2B7;&#xD55C; &#xD761; &#xAD11;&#xB3C4; &#xC2A4;&#xD399;&#xD2B8;&#xB7FC;&#xC744; &#xAC00;&#xC9C4; &#xC81C;&#xD488;&#xC744; &#xAD6C;&#xBD84; &#xD558;. PH &#xAC00;&#xC5ED; &#xD3C9;&#xD615; metarhodopsin II&#xC640; III&#xB294; &#xADF8; metarhodopsin &#xC2DC;&#xC5F0; &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; metarhodopsin III &#xBC1C; &#xB9C9;&#xC5D0; &#xAD00;&#xD558;&#xC5EC; &#xC9C0;&#xD5A5; &quot;&#xC5B4;&#xB450;&#xC6B4;&quot; rhodopsin&#xC5D0;&#xC11C; 11-cis &#xB9DD;&#xB9C9; &#xBCF4;&#xB2E4; &#xB354; &#xC5C4;&#xACA9;&#xD788;&#xB3C4; &#xBE44;&#xD589;&#xAE30;. Metarhodopsin III opsin&#xC5D0; &#xB124;&#xC774;&#xD2F0;&#xBE0C; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8;&#xC5D0; &#xACC4;&#xC18D; &#xC5F0;&#xACB0; &#xB418;&#xC5B4; &#xC788;&#xB294; &#xBAA8;&#xB4E0; &#xD2B8;&#xB79C;&#xC2A4; &#xB9DD;&#xB9C9;&#xC744; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0C5;&#xB2C8;&#xB2E4;. Metarhodopsins&#xC758; &#xBD80;&#xD328;&#xC758; &#xC6B4;&#xB3D9; &#xCCB4;&#xACC4;&#xB294; metarhodopsin III metarhodopsin II&#xC5D0;&#xC11C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xB9DD;&#xB9C9;&#xC758; &#xC158;&#xD2B8; &#xD1B5;&#xB85C;&#xC5D0; &#xB193;&#xC5EC; &#xC81C;&#xACF5; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. 10% &#xD45C; &#xBC31;&#xC81C;&#xC758; &#xC544;&#xB798; &#xD615;&#xC131; &#xD615;&#xC131; metarhodopsin III &#xD45C; &#xBC31;&#xC81C;&#xC758; &#xB0AE;&#xC740; &#xAC83;&#xC740; &#xC774;&#xC804; &#xBCF4;&#xACE0;&#xC11C;&#xC5D0; &#xBC18;&#xD558;&#xB294; &#xC57D; 3%&#xC5D0;&#xC11C; &#xBC1C;&#xACAC; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. Spectrally metarhodopsin &#xBE44;&#xC2B7;&#xD55C; &#xB2E4;&#xB978; &#xC81C;&#xD488; &#xB418; &#xB098; P440, III metarhodopsin II &#xBC0F; metarhodopsin III&#xC758; &#xBD95;&#xAD34;&#xC758; &#xACB0;&#xACFC;&#xB85C; &#xC11C; photolysis&#xC758; &#xB098;&#xC911; &#xB2E8;&#xACC4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0A9;&#xB2C8;&#xB2E4;. P440&#xC5D0; chromophoric &#xADF8;&#xB8F9; &#xB514;&#xC2A4;&#xD06C; &#xB9C9;&#xC5D0; &#xAC78;&#xCCD0; &#xC6B0;&#xC120;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xC9C0;&#xD5A5; &#xC774;&#xB2E4;. &#xACA9;&#xB9AC; &#xB41C; &#xC120;&#xC0DD;&#xB2D8;&#xC758; &#xCD5C;&#xC885; &#xC81C;&#xD488; &#xB9DD;&#xB9C9;&#xC5D0; retinol&#xC758; &#xAC10;&#xC18C;&#xB97C; &#xCC28;&#xB2E8; &#xD558;&#xB294; &#xBB34;&#xB8CC; &#xB9DD;&#xB9C9;&#xACFC; &#xB9DD;&#xB9C9; &#xC544;&#xB9C8;&#xB3C4; &#xB9C9;&#xC5D0;&#xC11C; &#xB2E4;&#xB978; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8;&#xC5D0; &#xC5F0;&#xACB0; &#xB41C; &#xD63C;&#xD569;&#xBB3C;&#xC758; &#xAD6C;&#xC131; &#xB418;&#xC5B4; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. Metabolically &#xD65C;&#xC131; &#xBD09;&#xC5D0;&#xC11C; &#xCD5C;&#xC2E0; &#xC81C;&#xD488; retinol &#xC2E0;&#xC18D; &#xD558; &#xAC8C; &#xBCC0;&#xD658; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; &#xACB0;&#xB860;&#xC744; &#xADF8; metarhodopsin III chromophoric &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8; &#xC5EC;&#xC804;&#xD788; &#xBAA8;&#xB4E0; &#xD2B8;&#xB79C;&#xC2A4; &#xB9DD;&#xB9C9; &#xCC28;&#xC9C0;&#xD55C; &#xC5B4;&#xB514; metarhodopsin&#xC758; &#xD2B9;&#xC815; &#xAD6C;&#xC870;&#xC801; &#xC0C1;&#xD0DC;&#xB97C; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0C5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB530;&#xB77C;&#xC11C;, &#xD615;&#xC131; &#xBC0F; metarhodopsin&#xC758; III rhodopsin &#xC7AC;&#xC0DD;&#xC131; &#xBC0F; &#xD3EC;&#xD1A0; &#xB9AC;&#xC149;&#xD130; &#xB2E4;&#xD06C; &#xC801;&#xC751; &#xC18D;&#xB3C4; &#xB300; &#xD55C; &#xC81C;&#xD55C; &#xB420; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Metarhodopsin III&#xC758; id&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Un r&aacute;pido an&aacute;lisis microspectrophotometer dicroico fue utilizado para rastrear productos de fot&oacute;lisis de la rodopsina (metarhodopsins I/II/III y m&aacute;s adelante) en segmentos externos de anfibios estructuralmente intacto barra (ROSs) y barras metab&oacute;licamente activas. El instrumento permite la grabaci&oacute;n de espectros de absorbancia con un tiempo de resoluci&oacute;n mejor que 1 s y para discriminar entre los productos con los espectros de absorci&oacute;n similares que difieren con respecto a la orientaci&oacute;n de su crom&oacute;foro en la membrana de fotorreceptores. Demostramos metarhodopsin que III est&aacute; en un equilibrio de pH-reversible con metarhodopsin II y que el crom&oacute;foro de metarhodopsin III est&aacute; orientado con respecto a la membrana plano incluso m&aacute;s terminantemente que el 11-cis retinal en rodopsina &quot;oscura&quot;. Esto indica all-trans-retinal en metarhodopsin que III todav&iacute;a se une a su sitio de Uni&oacute;n nativos en opsina. El esquema cin&eacute;tico de la decadencia de metarhodopsins se presenta en que metarhodopsin III se encuentra en una v&iacute;a de derivaci&oacute;n de metarhodopsin II a la retina. Formaci&oacute;n de metarhodopsin que III fue detectado en blanqueadores como aproximadamente un 3%, contrario a los informes anteriores que no se form&oacute; por debajo de 10% blanqueadores. Otro producto espectral similar a metarhodopsin III, denominado P440, aparece en etapas posteriores de la fot&oacute;lisis como resultado del decaimiento de metarhodopsin II y metarhodopsin III. El grupo cromof&oacute;ricos en P440 est&aacute; orientado preferentemente a trav&eacute;s de la membrana del disco. El producto final en ROS aislados, donde la reducci&oacute;n de la retina al retinol est&aacute; bloqueada, consiste en una mezcla de una retina libre y posiblemente atado sitios de Uni&oacute;n diferentes en la membrana de la retina. En barras metab&oacute;licamente activas los productos posteriores se convierten r&aacute;pidamente en retinol. Concluimos que metarhodopsin III representa un estado conformacional espec&iacute;fico de metarhodopsin donde el sitio de Uni&oacute;n Cromof&oacute;ricos todav&iacute;a est&aacute; ocupado por all-trans-retinal. Por lo tanto, la formaci&oacute;n y descomposici&oacute;n de metarhodopsin III puede ser limitante para la tasa de regeneraci&oacute;n de la rodopsina y adaptaci&oacute;n de la oscuridad del fotorreceptor.

La identidad de metarhodopsin III.

DEP (&#x4E3A; Disheveled&#x3001; EGL 10&#x3001; Pleckstrin) &#x540C;&#x6E90;&#x57DF;&#x76EE;&#x524D;&#x5728;&#x8BB8;&#x591A;&#x4FE1;&#x53F7;&#x86CB;&#x767D;&#xFF0C;&#x5176;&#x4E2D;&#x5305;&#x62EC;&#x8BB8;&#x591A;&#x5728;&#x4E2D;&#x67A2;&#x795E;&#x7ECF;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x4E2D;&#xFF0C;&#x4F46;&#x5176;&#x529F;&#x80FD;&#x4ECD;&#x5927;&#x591A;&#x662F;&#x53EF;&#x671B;&#x800C;&#x4E0D;&#x53EF;&#x53CA;&#x3002;&#x62A5;&#x544A;&#x8BF4;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x611F;&#x5149;&#x5668;&#x7279;&#x5B9A;&#x4FE1;&#x53F7;&#x86CB;&#x767D;&#xFF0C;RGS9 &#x7684; DEP &#x57DF; &#xFF08;&#x8C03;&#x8282;&#x5668;&#x7684; G-&#x86CB;&#x767D;&#x4FE1;&#x53F7; 9&#xFF09;&#x3001; RGS9 &#x4F20;&#x9012;&#x5230;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5185;&#x7684;&#x5176;&#x8FD0;&#x4F5C;&#xFF0C;&#x6746;&#x5916;&#x90E8;&#x5206;&#x8F66;&#x53A2;&#x4E2D;&#x53D1;&#x6325;&#x91CD;&#x8981;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x751F;&#x6210; RGS9 &#x88AB;&#x53D6;&#x800C;&#x4EE3;&#x4E4B;&#x7F3A;&#x4E4F; DEP &#x57DF;&#x53CA;&#x5176;&#x7A81;&#x53D8;&#x4F53;&#x7684;&#x8F6C;&#x57FA;&#x56E0;&#x5C0F;&#x9F20;&#x3002;&#x7136;&#x540E;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x4F7F;&#x7528;&#x4E32;&#x884C;&#x5207;&#x5256;&#x5207;-&#x897F;&#x7528;&#x7535;&#x751F;&#x7406;&#x5F55;&#x97F3;&#x5370;&#x8FF9;&#x7684;&#x5B9A;&#x91CF;&#x6280;&#x672F;&#x7684;&#x7EC4;&#x5408;&#xFF0C;&#x8868;&#x660E;&#x8BE5;&#x7A81;&#x53D8;&#x4F53; RGS9 &#x8868;&#x793A;&#xFF0C;&#x5728;&#x6B63;&#x5E38;&#x91CF;&#x68D2;&#x7684;&#x4F46;&#x88AB;&#x5B8C;&#x5168;&#x6392;&#x9664;&#x5728;&#x5916;&#x7684;&#x90E8;&#x5206;&#x3002;RGS9 &#x8FD0;&#x9001;&#x5230;&#x6746;&#x5916;&#x90E8;&#x5206;&#x5F88;&#x53EF;&#x80FD;&#x4ECB;&#x5BFC;&#x4E0E;&#x8DE8;&#x819C;&#x86CB;&#x767D;&#xFF0C;R9AP &#xFF08;&#x5BF9;&#x4E8E; RGS9 &#x951A;&#x86CB;&#x767D;)&#xFF0C;&#x5DF2;&#x77E5;&#x7684;&#x611F;&#x5149;&#x819C;&#x8868;&#x9762;&#x4E0A;&#x7684;&#x951A;&#x70B9; RGS9 &#x7684; DEP &#x57DF;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#xFF0C;&#x5E76;&#x52A0;&#x5F3A; RGS9 &#x50AC;&#x5316;&#x6D3B;&#x6027;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x663E;&#x793A;&#x8FD9;&#x4E24;&#x4E2A;&#x51FD;&#x6570;&#x4E5F;&#x5E9F;&#x9664;&#x4F5C;&#x4E3A; DEP &#x57DF;&#x5220;&#x9664;&#x64CD;&#x4F5C;&#x7684;&#x7ED3;&#x679C;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7ED3;&#x679C;&#x8868;&#x660E; DEP &#x57DF;&#x65B0;&#x578B;&#x804C;&#x80FD;&#x662F;&#x5411;&#x7279;&#x5B9A;&#x8F66;&#x53A2;&#x9AD8;&#x5EA6;&#x4E24;&#x6781;&#x5206;&#x5316;&#x7684;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x4FE1;&#x53F7;&#x86CB;&#x767D;&#x4E3A;&#x76EE;&#x6807;&#x3002;&#x6709;&#x8DA3;&#x7684;&#x662F;&#xFF0C;R9AP &#x5E8F;&#x5217;&#x5206;&#x6790;&#x63ED;&#x793A;&#x4E86;&#x5B88;&#x6052; &#xFF08;&#x7684;&#x53EF;&#x6EB6;&#x6027; N ethylmaleimide &#x654F;&#x611F;&#x56E0;&#x5B50;&#x9644;&#x4EF6;&#x86CB;&#x767D;&#x53D7;&#x4F53;) R-&#x9677;&#x9631;&#x6BCD;&#x9898;&#x548C;&#x7F51;&#x7F57;&#x86CB;&#x767D;&#x53C2;&#x4E0E;&#x6C34;&#x75B1;&#x8D29;&#x5356;&#x548C;&#x878D;&#x5408;&#x4E0E;&#x9884;&#x6D4B;&#x6574;&#x4F53;&#x7ED3;&#x6784;&#x540C;&#x6E90;&#x6027;&#x7684;&#x5B58;&#x5728;&#x3002;&#x8FD9;&#x63D0;&#x4F9B;&#x4E86; DEP &#x57DF;&#x53EF;&#x80FD;&#x6709;&#x52A9;&#x4E8E;&#x5404;&#x79CD; DEP &#x542B;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x4E0E;&#x6269;&#x5C55;&#x7F51;&#x7F57;&#x86CB;&#x767D;&#x5BB6;&#x65CF;&#x7684;&#x6210;&#x5458;&#x901A;&#x8FC7;&#x5176;&#x80DE;&#x5185;&#x884C;&#x52A8;&#x7684;&#x7F51;&#x7AD9;&#x4E3A;&#x76EE;&#x6807;&#x7684;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x3002;

DEP &#x57DF;&#x786E;&#x5B9A;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x86CB;&#x767D; RGS9 &#x4F53;&#x5185;&#x86CB;&#x767D;&#x7684;&#x4E9A;&#x7EC6;&#x80DE;&#x9776;&#x5411;&#x3002;

DEP (for Disheveled, EGL-10, Pleckstrin) homology domains are present in numerous signaling proteins, including many in the nervous system, but their function remains mostly elusive. We report that the DEP domain of a photoreceptor-specific signaling protein, RGS9 (for regulator of G-protein signaling 9), plays an essential role in RGS9 delivery to the intracellular compartment of its functioning, the rod outer segment. We generated a transgenic mouse in which RGS9 was replaced by its mutant lacking the DEP domain. We then used a combination of the quantitative technique of serial tangential sectioning-Western blotting with electrophysiological recordings to demonstrate that mutant RGS9 is expressed in rods in the normal amount but is completely excluded from the outer segments. The delivery of RGS9 to rod outer segments is likely to be mediated by the DEP domain interaction with a transmembrane protein, R9AP (for RGS9 anchoring protein), known to anchor RGS9 on the surface of photoreceptor membranes and to potentiate RGS9 catalytic activity. We show that both of these functions are also abolished as the result of the DEP domain deletion. These findings indicate that a novel function of the DEP domain is to target a signaling protein to a specific compartment of a highly polarized neuron. Interestingly, sequence analysis of R9AP reveals the presence of a conserved R-SNARE (for soluble N-ethylmaleimide-sensitive factor attachment protein receptor) motif and a predicted overall structural homology with SNARE proteins involved in vesicular trafficking and fusion. This presents the possibility that DEP domains might serve to target various DEP-containing proteins to the sites of their intracellular action via interactions with the members of extended SNARE protein family.

The DEP domain determines subcellular targeting of the GTPase activating protein RGS9 in vivo.

Dominios homologos DEP (para Disheveled, EGL-10, Pleckstrin) est&aacute;n presentes en numerosas prote&iacute;nas de se&ntilde;alizaci&oacute;n, incluyendo muchos en el sistema nervioso, pero su funci&oacute;n sobre todo sigue siendo elusiva. Se reporta que el dominio DEP de una prote&iacute;na de se&ntilde;alizaci&oacute;n de fotorreceptor espec&iacute;fico, RGS9 (para regulador de prote&iacute;na G se&ntilde;alizaci&oacute;n 9), juega un papel esencial en RGS9 entrega del compartimiento intracelular de su funcionamiento, el segmento externo de la barra. Generamos un rat&oacute;n transg&eacute;nico que RGS9 fue reemplazado por su mutante que carece del dominio DEP. Luego, se utilizaron una combinaci&oacute;n de la t&eacute;cnica cuantitativa de serial tangencial seccionamiento-Western blot con grabaciones electrofisiol&oacute;gicas para demostrar que el mutante RGS9 se expresa en barras en la cantidad normal pero queda totalmente excluido de los segmentos externos. La entrega de RGS9 a segmentos externos barra es probable ser mediado por la interacci&oacute;n de dominio DEP con una prote&iacute;na transmembrana, R9AP (para RGS9 anclaje prote&iacute;na), sabido que ancla RGS9 en la superficie de las membranas de los fotorreceptores y para potenciar la actividad catal&iacute;tica RGS9. Mostramos que ambas de estas funciones se suprimen tambi&eacute;n como resultado de la supresi&oacute;n del dominio DEP. Estos resultados indican que una funci&oacute;n novedosa del dominio DEP es apuntar a una prote&iacute;na de se&ntilde;alizaci&oacute;n a un compartimiento espec&iacute;fico de una neurona altamente polarizado. Curiosamente, an&aacute;lisis de la secuencia de R9AP revela la presencia de un motivo de R-SNARE (para receptor soluble en sensibles a N-etilmaleimida factor accesorio prote&iacute;na) conservado y una homolog&iacute;a estructural general prevista con trampa prote&iacute;nas implicadas en el tr&aacute;fico vesicular y fusi&oacute;n. Esto presenta la posibilidad de que podr&iacute;an servir de dominios DEP apuntar varias prote&iacute;nas que contienen DEP a los sitios de su acci&oacute;n intracelular a trav&eacute;s de interacciones con los miembros de la familia extendida de prote&iacute;nas SNARE.

El dominio DEP determina orientaci&oacute;n subcelular de la GTPasa prote&iacute;na RGS9 in vivo activadora.

Domaines d&#39;homologie DEP (pour &eacute;bouriff&eacute;e, EGL-10, pleckstrine) sont pr&eacute;sents dans nombreuses prot&eacute;ines de signalisation, dont beaucoup dans le syst&egrave;me nerveux, mais leur fonction reste plus souvent insaisissable. Les auteurs rapportent que le domaine DEP d&#39;une prot&eacute;ine de signalisation sp&eacute;cifiques photor&eacute;cepteur, RGS9 (pour r&eacute;gulateur de G-prot&eacute;ine de signalisation 9), joue un r&ocirc;le essentiel en livraison RGS9 dans le compartiment intracellulaire de son fonctionnement, le segment externe de la tige. Nous avons g&eacute;n&eacute;r&eacute; une souris transg&eacute;nique dans lequel RGS9 a &eacute;t&eacute; remplac&eacute; par son mutant manque le domaine DEP. Ensuite, nous avons utilis&eacute; une combinaison de la technique quantitative de s&eacute;rie tangentielle sectionnement-Western blot avec enregistrements &eacute;lectrophysiologiques pour d&eacute;montrer ce mutant RGS9 s&#39;exprime dans les barres dans la quantit&eacute; normale, mais est totalement exclu des segments externes. La livraison du RGS9 aux segments externes des tiges est susceptible d&#39;&ecirc;tre m&eacute;di&eacute;e par l&#39;interaction de domaine DEP avec une prot&eacute;ine transmembranaire, R9AP (pour les prot&eacute;ines d&#39;ancrage RGS9), connu pour ancrer RGS9 sur la surface des membranes de la cellule photo&eacute;lectrique et de potentialiser l&#39;activit&eacute; catalytique RGS9. Nous montrons que ces deux fonctions sont &eacute;galement abolies &agrave; la suite de la suppression du domaine DEP. Ces r&eacute;sultats indiquent qu&#39;une nouvelle fonction du domaine DEP est de cibler une prot&eacute;ine de signalisation d&#39;un compartiment sp&eacute;cifique d&#39;un neurone fortement polaris&eacute;. Fait int&eacute;ressant, le s&eacute;quen&ccedil;age de R9AP r&eacute;v&egrave;le la pr&eacute;sence d&#39;un motif conserv&eacute; du R-collet (pour r&eacute;cepteur de prot&eacute;ine &agrave; attachement soluble des facteur sensible au N-&eacute;thylmal&eacute;imide) et une homologie structurale globale pr&eacute;dite avec SNARE prot&eacute;ines impliqu&eacute;es dans le trafic v&eacute;siculaire et de la fusion. Cela repr&eacute;sente la possibilit&eacute; que les domaines DEP peuvent servir &agrave; cibler diverses prot&eacute;ines contenant du DEP aux sites de leur action intracellulaire via des interactions avec les membres de la famille des prot&eacute;ines SNARE prolong&eacute;e.

Le domaine de la DEP d&eacute;termine ciblage subcellulaire de la prot&eacute;ine RGS9 in vivo de la GTPase.

Die DEP-Dom&#xE4;ne bestimmt subzellul&#xE4;ren Targeting des GTPase-aktivierendes Protein RGS9 in vivo.

Domini di omologia DEP (per arruffato, EGL-10, settori) sono presenti in numerose proteine di segnalazione, tra cui molti nel sistema nervoso, ma la loro funzione rimane per lo pi&ugrave; sfuggente. Segnaliamo che il dominio DEP di una proteina di segnalazione specifici del fotorecettore, RGS9 (per regolatore di G-proteina di segnalazione 9), gioca un ruolo essenziale nel RGS9 consegna al compartimento intracellulare del suo funzionamento, il segmento esterno rod. Abbiamo generato un topo transgenico in cui RGS9 fu sostituito dal suo mutante privo del dominio DEP. Poi abbiamo utilizzato una combinazione della tecnica quantitativa del serial tangenziale sezionamento-Western blotting con registrazioni elettrofisiologiche per dimostrare quello mutante RGS9 &egrave; espressa in canne nella quantit&agrave; normale ma &egrave; completamente esclusa dai segmenti esterni. La consegna di RGS9 a segmenti di canna esterna rischia di essere mediato dall&#39;interazione dominio DEP con una proteina transmembrana, R9AP (per RGS9 proteina d&#39;ancoraggio), noto per ancorare RGS9 sulla superficie delle membrane dei fotorecettori e di potenziare l&#39;attivit&agrave; catalitica RGS9. Mostriamo che entrambe queste funzioni sono anche abolite come risultato della cancellazione dominio DEP. Questi risultati indicano che una romanzo funzione del dominio DEP &egrave; di indirizzare una proteina di segnalazione di un comparto specifico di un neurone altamente polarizzato. &Egrave; interessante notare che, analisi di sequenza di R9AP rivelano la presenza di un motivo di R-SNARE (per recettore solubile N-ethylmaleimide-sensitive attaccamento proteina del fattore) conservato e un&#39;omologia previsto nel complesso strutturale con SNARE proteine coinvolte nel traffico vescicolare e fusion. Questo presenta la possibilit&agrave; che i domini di protezione esecuzione programmi potrebbero servire a varie proteine contenenti DEP ai siti della loro azione intracellulare attraverso le interazioni con i membri della famiglia di proteine SNARE estesa di destinazione.

Il dominio DEP determina targeting sottocellulare della proteina d&#39;attivazione RGS9 in vivo il GTPase.

DEP (Disheveled&#x3001;EGL 10 &#x30D7;&#x30EC;&#x30AF;&#x30B9;&#x30C8;&#x30EA;&#x30F3;&#x7528;) &#x76F8;&#x540C;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x591A;&#x304F;&#x306E;&#x795E;&#x7D4C;&#x7CFB;&#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x3001;&#x591A;&#x6570;&#x306E;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x5B58;&#x5728;&#x304C;&#x3001;&#x5F7C;&#x3089;&#x306E;&#x6A5F;&#x80FD;&#x306F;&#x307B;&#x3068;&#x3093;&#x3069;&#x3068;&#x3089;&#x3048;&#x3069;&#x3053;&#x308D;&#x306E;&#x306A;&#x3044;&#x307E;&#x307E;&#x3002;&#x6211;&#x3005; &#x306F;&#x5831;&#x544A;&#x3059;&#x308B;&#x8996;&#x7D30;&#x80DE;&#x56FA;&#x6709;&#x306E;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x3001;RGS9 &#x306E; DEP &#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3; (G &#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x30EC;&#x30AE;&#x30E5;&#x30EC;&#x30FC;&#x30BF;&#x306E;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0; 9) RGS9 &#x914D;&#x4FE1;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3001;&#x30ED;&#x30C3;&#x30C9;&#x306E;&#x5916;&#x5074;&#x30BB;&#x30B0;&#x30E1;&#x30F3;&#x30C8;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x5185;&#x30B3;&#x30F3;&#x30D1;&#x30FC;&#x30C8;&#x30E1;&#x30F3;&#x30C8;&#x3078;&#x306E;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x679C;&#x305F;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005; &#x306E; RGS9 DEP &#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x6B20;&#x3051;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x305D;&#x306E;&#x5909;&#x7570;&#x4F53;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x7F6E;&#x304D;&#x63DB;&#x3048;&#x3089;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30B8;&#x30A7;&#x30CB;&#x30C3;&#x30AF; &#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x3092;&#x751F;&#x6210;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x3001;&#x305D;&#x306E;&#x7A81;&#x7136;&#x5909;&#x7570;&#x4F53; RGS9 &#x68D2;&#x306E;&#x6B63;&#x5E38;&#x306A;&#x91CF;&#x3067;&#x8868;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x304C;&#x3001;&#x5916;&#x5074;&#x30BB;&#x30B0;&#x30E1;&#x30F3;&#x30C8;&#x304B;&#x3089;&#x5B8C;&#x5168;&#x306B;&#x9664;&#x5916;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x5B9F;&#x8A3C;&#x3059;&#x308B;&#x306E;&#x306B;&#x30B7;&#x30EA;&#x30A2;&#x30EB;&#x63A5;&#x7DDA;&#x30BB;&#x30AF;&#x30B7;&#x30E7;&#x30CB;&#x30F3;&#x30B0;-&#x96FB;&#x6C17;&#x751F;&#x7406;&#x5B66;&#x306E;&#x30EC;&#x30B3;&#x30FC;&#x30C7;&#x30A3;&#x30F3;&#x30B0;&#x3068;&#x30A6;&#x30A8;&#x30B9;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D6;&#x30ED;&#x30C3;&#x30C8;&#x306E;&#x5B9A;&#x91CF;&#x7684;&#x624B;&#x6CD5;&#x306E;&#x7D44;&#x307F;&#x5408;&#x308F;&#x305B;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x8996;&#x7D30;&#x80DE;&#x5916;&#x7BC0;&#x3078;&#x306E; RGS9 &#x306E;&#x914D;&#x4FE1;&#x306F;&#x3001;&#x819C;&#x8CAB;&#x901A; r9ap&#x3001;RGS9 &#x5149;&#x53D7;&#x5BB9;&#x819C;&#x306E;&#x8868;&#x9762;&#x306B;&#x30A2;&#x30F3;&#x30AB;&#x30FC;&#x3057;&#x3066; RGS9 &#x306E;&#x89E6;&#x5A92;&#x6D3B;&#x6027;&#x3092;&#x5897;&#x5F37;&#x3059;&#x308B;&#x77E5;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B; &#xFF08;RGS9 &#x30A2;&#x30F3;&#x30AB;&#x30FC;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#xFF09; &#x306E;&#x3068; DEP &#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x5A92;&#x4ECB;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x4E21;&#x65B9;&#x306E;&#x95A2;&#x6570;&#x3082; DEP &#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x524A;&#x9664;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x3092;&#x5EC3;&#x6B62;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x9AD8;&#x504F;&#x6975;&#x30CB;&#x30E5;&#x30FC;&#x30ED;&#x30F3;&#x306E;&#x7279;&#x5B9A;&#x306E;&#x30B3;&#x30F3;&#x30D1;&#x30FC;&#x30C8;&#x30E1;&#x30F3;&#x30C8;&#x3078;&#x306E;&#x4FE1;&#x53F7;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x3092;&#x30BF;&#x30FC;&#x30B2;&#x30C3;&#x30C8;&#x306B; DEP &#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x306E;&#x65B0;&#x3057;&#x3044;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x793A;&#x5506;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x8208;&#x5473;&#x6DF1;&#x3044;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3001;R9AP &#x306E;&#x30B7;&#x30FC;&#x30B1;&#x30F3;&#x30B9;&#x89E3;&#x6790;&#x3092;&#x7BC0;&#x7D04;&#x3055;&#x308C;&#x305F; R-&#x30B9;&#x30CD;&#x30A2; &#xFF08;N n-&#x30A8;&#x30C1;&#x30EB;&#x30DE;&#x30EC;&#x30A4;&#x30DF;&#x30C9;&#x611F;&#x53D7;&#x6027;&#x56E0;&#x5B50;&#x6DFB;&#x4ED8;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x53EF;&#x6EB6;&#x6027;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#xFF09; &#x306E;&#x30E2;&#x30C1;&#x30FC;&#x30D5;&#x3068; SNARE &#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x5C0F;&#x80DE;&#x8F38;&#x9001;&#x3068;&#x878D;&#x5408;&#x306B;&#x95A2;&#x4E0E;&#x3059;&#x308B;&#x3068;&#x3001;&#x4E88;&#x6E2C;&#x306E;&#x5168;&#x4F53;&#x7684;&#x69CB;&#x9020;&#x76F8;&#x540C;&#x6027;&#x306E;&#x5B58;&#x5728;&#x3092;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x306F;&#x3001;DEP &#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3; DEP &#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x69D8;&#x3005; &#x306A;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x3068;&#x305D;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x5185;&#x306E;&#x30A2;&#x30AF;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x3066;&#x62E1;&#x5F35; SNARE &#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x5BB6;&#x65CF;&#x306E;&#x30E1;&#x30F3;&#x30D0;&#x30FC;&#x3068;&#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x5F79;&#x7ACB;&#x3064;&#x304B;&#x3082;&#x3057;&#x308C;&#x306A;&#x3044;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

DEP &#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x306F;&#x7D30;&#x80DE;&#x5185;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA; RGS9 in vivo &#x6D3B;&#x6027;&#x5316; GTPase &#x306E;&#x30BF;&#x30FC;&#x30B2;&#x30C3;&#x30C8;&#x3092;&#x6C7A;&#x5B9A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

(Disheveled, EGL 10, Pleckstrin)&#xC744; &#xC704;&#xD55C; DEP homology &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778; &#xB9CE;&#xC740; &#xC2E0; &#xACBD;&#xACC4;&#xC5D0;&#xC11C;&#xB97C; &#xD3EC;&#xD568; &#xD558; &#xC5EC; &#xC218;&#xB9CE;&#xC740; &#xC2E0;&#xD638; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC5D0; &#xC874;&#xC7AC; &#xD558;&#xB294; &#xADF8;&#xB300;&#xB85C; &#xAE30;&#xB2A5; &#xC560;&#xB9E4; &#xB300;&#xBD80;&#xBD84; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xBCF4;&#xACE0; &#xD3EC;&#xD1A0; &#xB9AC;&#xC149;&#xD130; &#xAD00;&#xB828; &#xC2E0;&#xD638; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; rgs9&#xC758; DEP &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778; (G-&#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xB808; &#xADE4; &#xB808;&#xC774; &#xD130; 9 &#xC2E0;&#xD638;)&#xC758; &#xC791;&#xB3D9;, &#xB9C9;&#xB300; &#xC678;&#xBD80; &#xC138;&#xADF8;&#xBA3C;&#xD2B8;&#xC758; &#xC138;&#xD3EC;&#xB0B4; &#xAD6C;&#xD68D;&#xC744; RGS9 &#xBC30;&#xB2EC;&#xC5D0; &#xD544;&#xC218;&#xC801;&#xC778; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xD55C;&#xB2E4;. &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xBCC0;&#xD615; &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4; RGS9 DEP &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778; &#xBD80;&#xC871;&#xC758; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xC758;&#xD574; &#xB300;&#xCCB4; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4; &#xC0DD;&#xC131; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xADF8;&#xB7F0; &#xB2E4;&#xC74C; &#xADF8; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; rgs9&#xC740; &#xC815;&#xC0C1; &#xAE08;&#xC561;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBD09; &#xD45C;&#xD604; &#xB418;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xC678;&#xBD80; &#xC138;&#xADF8;&#xBA3C;&#xD2B8;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC644;&#xC804;&#xD788; &#xC81C;&#xC678; &#xD558; &#xACE0;&#xB294; &#xC124;&#xBA85; &#xD558;&#xAE30; &#xC9C1;&#xB82C; &#xC811;&#xC120; &#xB2E8;&#xBA74;-&#xC11C;&#xC591; electrophysiological &#xB179;&#xC74C; blotting &#xC591;&#xC801; &#xBC29;&#xBC95;&#xC758; &#xC870;&#xD569;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9;. RGS9 &#xB9C9;&#xB300; &#xC678;&#xBD80; &#xC138;&#xADF8;&#xBA3C;&#xD2B8; &#xBC30;&#xB2EC; &#xB9C9; &#xD6A1;&#xB2E8; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;, R9AP (RGS9 &#xACE0;&#xC815; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;)&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC575;&#xCEE4; RGS9 &#xD3EC;&#xD1A0; &#xB9AC;&#xC149;&#xD130; &#xC138;&#xD3EC; &#xB9C9; &#xD45C;&#xBA74;&#xC5D0; &#xC54C;&#xB824;&#xC9C4; DEP &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC911;&#xC7AC; RGS9 &#xCD09;&#xB9E4; &#xD65C;&#xB3D9; &#xC57D;&#xD6A8; &#xAC00;&#xB2A5;&#xC131;&#xC774; &#xB192;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xD568;&#xC218; &#xB610;&#xD55C; DEP &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778; &#xC0AD;&#xC81C;&#xC758; &#xACB0;&#xACFC;&#xB85C; &#xD3D0;&#xC9C0;&#xB97C; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774; &#xBC1C;&#xACAC;&#xC740; DEP &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778;&#xC758; &#xC18C;&#xC124; &#xAE30;&#xB2A5; &#xB192;&#xC740; &#xD3B8;&#xAD11;&#xB41C; &#xB274;&#xB7F0;&#xC758; &#xD2B9;&#xC815; &#xAD6C;&#xD68D;&#xC5D0; &#xC2E0;&#xD638; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC744; &#xB300;&#xC0C1;&#xC73C;&#xB85C; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0C5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xD765;&#xBBF8;&#xB86D;&#xAC8C;&#xB3C4;, r9ap&#xC758; &#xC2DC;&#xD000;&#xC2A4; &#xBD84;&#xC11D; &#xBCF4;&#xC874;&#xB41C; &#xC5F0;&#xAD6C;-&#xC62C; &#xBB34; (&#xC218;&#xC6A9; &#xC131; N ethylmaleimide &#xBBFC;&#xAC10;&#xD55C; &#xC694;&#xC18C; &#xCCA8;&#xBD80; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xCCB4;)&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xBAA8;&#xD2F0;&#xBE0C;&#xC640; &#xC62C; &#xBB34; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xAE30;&#xACF5;&#xC744; &#xBC00;&#xB9E4;&#xC640; &#xC735;&#xD569;&#xC5D0; &#xAD00;&#xB828; &#xB41C; &#xC608;&#xCE21;&#xB41C; &#xC804;&#xBC18;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xAD6C;&#xC870; homology&#xC758; &#xC874;&#xC7AC;&#xB97C; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC900;&#xB2E4;. &#xC774; DEP &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778; &#xD655;&#xC7A5;&#xB41C; SNARE &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xAC00;&#xC871;&#xC758; &#xAD6C;&#xC131;&#xC6D0;&#xACFC; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC744; &#xD1B5;&#xD574; &#xC138;&#xD3EC;&#xB0B4; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC758; &#xD589;&#xB3D9;&#xC758; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8;&#xC5D0; &#xB2E4;&#xC591; &#xD55C; DEP &#xD3EC;&#xD568; &#xB41C; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC744; &#xB300;&#xC0C1;&#xC73C;&#xB85C; &#xC81C;&#xACF5; &#xB420; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xAC00;&#xB2A5;&#xC131;&#xC744; &#xC120;&#xBB3C; &#xD55C;&#xB2E4;.

DEP &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; RGS9 in vivo Gtpase&#xC758; subcellular &#xB300;&#xC0C1;&#xC73C;&#xB85C; &#xACB0;&#xC815;.

&#x30B5;&#x30A4;&#x30BA;&#x6392;&#x9664;&#x30AF;&#x30ED;&#x30DE;&#x30C8;&#x30B0;&#x30E9;&#x30D5;&#x30A3;&#x30FC;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x30D0;&#x30AF;&#x30C6;&#x30EA;&#x30AA;&#x30D5;&#x30A1;&#x30FC;&#x30B8;&#x306E;&#x8868;&#x793A;&#x306E;&#x7E4A;&#x7DAD;&#x72B6;&#x30D0;&#x30AF;&#x30C6;&#x30EA;&#x30AA;&#x30D5;&#x30A1;&#x30FC;&#x30B8;&#x306E;&#x6D44;&#x5316;&#x3002;

&#xD06C;&#xAE30; &#xBC30;&#xC81C; &#xD06C;&#xB85C;&#xB9C8;&#xD1A0;&#xADF8;&#xB798;&#xD53C;&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xC0B4; &#xADE0; &#xC18C; &#xB514;&#xC2A4;&#xD50C;&#xB808;&#xC774;&#xC6A9; filamentous &#xBC15;&#xD14C;&#xB9AC;&#xC624;&#xD30C;&#xC9C0;&#xC758; &#xC815;&#xD654;.

Purificaci&oacute;n de bacteri&oacute;fagos filamentosos de phage display utilizando cromatograf&iacute;a de exclusi&oacute;n de tama&ntilde;o.

&#x4E1D;&#x72B6;&#x566C;&#x83CC;&#x4F53;&#x7684;&#x566C;&#x83CC;&#x4F53;&#x663E;&#x793A;&#x5927;&#x5C0F;&#x6392;&#x9664;&#x8272;&#x8C31;&#x6CD5;&#x7EAF;&#x5316;&#x3002;

Purification of filamentous bacteriophage for phage display using size-exclusion chromatography.

Purification du bact&eacute;riophage filamenteux pour le phage display utilisant la chromatographie d&#39;exclusion st&eacute;rique.

Die Reinigung von filament&#xF6;sen Bakteriophagen f&#xFC;r Phagen-Display mit Gr&#xF6;&#xDF;enausschlusschromatographie.

Purificazione del batteriofago filamentosa per la visualizzazione dei fagi mediante cromatografia di esclusione di formato.

&#x89C6;&#x89C9;&#x7684;&#x5468;&#x671F;&#x94FE;&#x91CD;&#x65B0;&#x751F;&#x6210;&#x89C6;&#x89C9;&#x8272;&#x7D20;&#x7684;&#x751F;&#x5316;&#x53CD;&#x5E94;&#x7684;&#x662F;&#x4E4B;&#x540E;&#x7684;&#x5149;&#x7EBF;&#x7167;&#x5C04;&#x3002;&#x521D;&#x59CB;&#x6B65;&#x9AA4;&#xFF0C;&#x89E3;&#x653E;&#x5168;&#x53CD;&#x5F0F;&#x89C6;&#x7F51;&#x819C;&#x548C;&#x5176;&#x51CF;&#x5C11;&#x5BF9;&#x5168;&#x53CD;&#x5F0F;&#x89C6;&#x9EC4;&#x9187;&#x7684;&#x89C6;&#x9EC4;&#x9187;&#x8131;&#x6C22;&#x9176; (&#x4EEA;&#x8868;&#x7740;&#x9646;&#x7CFB;&#x7EDF;)&#xFF0C;&#x5728;&#x611F;&#x5149;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8FDB;&#x884C;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x5BF9;&#x5404;&#x79CD;&#x5404;&#x6837;&#x7684;&#x877E;&#x8788;&#x7684;&#x89C6;&#x7F51;&#x819C;&#x8131;&#x79BB;&#x5173;&#x8054; photoproduct &#x8870;&#x53D8;&#x548C;&#x89C6;&#x9EC4;&#x9187;&#x751F;&#x4EA7;&#x7387;&#x5206;&#x79BB;&#x6746;&#x548C;&#x9525;&#x4F53;&#x611F;&#x53D7;&#x5668;&#x6267;&#x884C;&#x6BD4;&#x8F83;&#x7684;&#x663E;&#x5FAE;&#x548C; microfluorometric &#x6D4B;&#x91CF;&#x3002;Metapigment &#x8870;&#x53D8;&#x7387;&#x7A7A;&#x95F4;&#x7EDF;&#x4E00;&#x5185;&#x5916;&#x90E8;&#x7F51;&#x6BB5;&#x548C; 50-70 &#x500D;&#x66F4;&#x5FEB;&#x8F7D;&#x5230;&#x7EC6;&#x80DE;&#x76F8;&#x6BD4;&#x6746;&#x578B;&#x8272;&#x7D20; (RH1) &#x7684;&#x5706;&#x9525;&#x578B;&#x8272;&#x7D20; &#xFF08;SWS2 &#x548C; M/&#x6709;&#x9650;&#x4FDD;&#x4FEE;&#x58F0;&#x660E;&#xFF09; &#x7684;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x4E2D;&#x3002;&#x89C6;&#x9EC4;&#x9187;&#x751F;&#x4EA7;&#x7387;&#x5F3A;&#x70C8;&#x4F4D;&#x7F6E;&#x76F8;&#x5173;&#xFF0C;&#x6700;&#x5FEB;&#x5728;&#x57FA;&#x5730;&#x5916;&#x7684;&#x90E8;&#x5206;&#x3002;&#x89C6;&#x9EC4;&#x9187;&#x751F;&#x4EA7;&#x7387;&#x4E3A; 10-40 &#x500D;&#x901F;&#x5EA6;&#x66F4;&#x5FEB;&#x5728;&#x9525;&#x4E0E;&#x9525;&#x72B6;&#x8272;&#x7D20; &#xFF08;SWS2 &#x548C; M/&#x6709;&#x9650;&#x4FDD;&#x4FEE;&#x58F0;&#x660E;&#xFF09; &#x6BD4;&#x5728;&#x57FA;&#x5E95;&#x68D2;&#x542B;&#x6746;&#x8272;&#x7D20; (RH1) &#x7684;&#x64CD;&#x4F5C;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x4E2D;&#x3002;&#x751F;&#x4EA7;&#x901F;&#x5EA6;&#x5927;&#x7EA6;&#x662F;&#x68D2;&#x542B;&#x9525;&#x8272;&#x7D20; (SWS2) &#x5728;&#x57FA;&#x5E95; OS &#x4E2D;&#x7684;&#x68D2;&#x542B;&#x6746;&#x8272;&#x7D20; (RH1) &#x7387;&#x6BD4;&#x4E2D;&#x5FEB; 5 &#x500D;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x8868;&#x660E;&#x89C6;&#x9EC4;&#x9187;&#x751F;&#x4EA7;&#x5B9A;&#x4E49;&#x53EF;&#x4EE5;&#x901A;&#x8FC7; metapigment &#x7684;&#x8870;&#x51CF;&#x7387;&#x6216;&#x4EEA;&#x8868;&#x7740;&#x9646;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x53CD;&#x5E94;&#x901F;&#x5EA6;&#xFF0C;&#x5177;&#x4F53;&#x53D6;&#x51B3;&#x4E8E;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x7C7B;&#x578B;&#x6216;&#x533A;&#x57DF;&#x5916;&#x7684;&#x90E8;&#x5206;&#xFF0C;&#x800C;&#x7531;&#x5916;&#x90E8;&#x5206;&#x7684;&#x8868;&#x9762;&#x7684;&#x4F53;&#x79EF;&#x6BD4;&#x548C;&#x7EF4;&#x7532;&#x9178;&#x7ED3;&#x5408;&#x86CB;&#x767D; (IRBP) &#x7684;&#x53EF;&#x7528;&#x6027;&#x5B9A;&#x4E49;&#x89C6;&#x9EC4;&#x9187;&#x53BB;&#x9664;&#x3002;&#x89C6;&#x9EC4;&#x9187;&#x751F;&#x4EA7;&#x5728;&#x9525;&#x6746;&#x76F8;&#x6BD4;&#x66F4;&#x5FEB;&#x901F;&#x7387;&#x7B26;&#x5408;&#x5728;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E2D;&#x7684;&#x89C6;&#x89C9;&#x7684;&#x5468;&#x671F;&#x66F4;&#x5FEB;&#x8FD0;&#x4F5C;&#x3002;

&#x89C6;&#x89C9;&#x5468;&#x671F;&#xFF1A; &#x89C6;&#x9EC4;&#x9187;&#x751F;&#x4EA7;&#x4E0E;&#x53BB;&#x9664; photoproduct &#x8870;&#x53D8;&#x548C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5F62;&#x6001;&#x5B66;&#x7684;&#x4F9D;&#x8D56;&#x3002;

The visual cycle is a chain of biochemical reactions that regenerate visual pigment following exposure to light. Initial steps, the liberation of all-trans retinal and its reduction to all-trans retinol by retinol dehydrogenase (RDH), take place in photoreceptors. We performed comparative microspectrophotometric and microfluorometric measurements on a variety of rod and cone photoreceptors isolated from salamander retinae to correlate the rates of photoproduct decay and retinol production. Metapigment decay rate was spatially uniform within outer segments and 50-70 times faster in the cells that contained cone-type pigment (SWS2 and M/LWS) compared to cells with rod-type pigment (RH1). Retinol production rate was strongly position dependent, fastest at the base of outer segments. Retinol production rate was 10-40 times faster in cones with cone pigments (SWS2 and M/LWS) than in the basal OS of rods containing rod pigment (RH1). Production rate was approximately five times faster in rods containing cone pigment (SWS2) than the rate in basal OS of rods containing the rod pigment (RH1). We show that retinol production is defined either by metapigment decay rate or RDH reaction rate, depending on cell type or outer segment region, whereas retinol removal is defined by the surface-to-volume ratio of the outer segment and the availability of retinoid binding protein (IRBP). The more rapid rates of retinol production in cones compared to rods are consistent with the more rapid operation of the visual cycle in these cells.

Visual cycle: Dependence of retinol production and removal on photoproduct decay and cell morphology.

Le cycle visuel est une cha&#xEE;ne de r&#xE9;actions biochimiques qui se r&#xE9;g&#xE9;n&#xE8;rent apr&#xE8;s une exposition visuelle pigment &#xE0; la lumi&#xE8;re. Les premi&#xE8;res mesures, la lib&#xE9;ration de tous les trans-r&#xE9;tinal et sa r&#xE9;duction &#xE0; tous les trans-r&#xE9;tinol par r&#xE9;tinol d&#xE9;shydrog&#xE9;nase (RDH), aura lieu dans les photor&#xE9;cepteurs. Nous avons effectu&#xE9; des mesures comparatives microspectrophotometric et microfluorometric sur une vari&#xE9;t&#xE9; de b&#xE2;tonnets et des c&#xF4;nes photor&#xE9;cepteurs isol&#xE9;s &#xE0; partir de la salamandre r&#xE9;tines de corr&#xE9;ler les taux de d&#xE9;sint&#xE9;gration et de la production photoproduit r&#xE9;tinol. Taux de d&#xE9;croissance Metapigment &#xE9;tait uniforme dans l&#x26;#39;espace dans les segments ext&#xE9;rieurs et 50-70 fois plus rapide dans les cellules qui contenaient de c&#xF4;ne type de pigment (SWS2 et M / LWS) par rapport aux cellules avec tige-type de pigment (RH1). Taux de production de r&#xE9;tinol a &#xE9;t&#xE9; fortement d&#xE9;pendant de la position la plus rapide, &#xE0; la base de segments ext&#xE9;rieurs. Taux de production de r&#xE9;tinol &#xE9;tait 10-40 fois plus rapide dans les c&#xF4;nes avec des pigments de c&#xF4;nes (SWS2 et M / LWS) que dans le syst&#xE8;me d&#x26;#39;exploitation de base de crayons contenant tige pigment (RH1). Taux de production &#xE9;tait d&#x26;#39;environ cinq fois plus rapide dans les barres de pigment contenant du c&#xF4;ne (SWS2) que le taux de base OS de crayons contenant le pigment tige (RH1). Nous montrons que la production de r&#xE9;tinol est d&#xE9;finie soit par la vitesse de d&#xE9;gradation ou de vitesse de r&#xE9;action metapigment RDH, en fonction du type de cellule ou de la r&#xE9;gion du segment externe, tandis que l&#x26;#39;&#xE9;limination de r&#xE9;tinol est d&#xE9;fini par le rapport surface-volume du segment externe et la disponibilit&#xE9; de la prot&#xE9;ine de liaison des r&#xE9;tino&#xEF;des (IRBP). Les taux plus rapide de la production de r&#xE9;tinol dans les c&#xF4;nes par rapport aux tiges sont compatibles avec le fonctionnement plus rapide du cycle visuel dans ces cellules.

Cycle visuel: d&#xE9;pendance de la production de r&#xE9;tinol et de suppression sur Decay Photoproduct et la morphologie cellulaire

Die visuellen Zyklus folgt eine Kette von biochemischen Reaktionen, die Sehpigment regenerieren Exposition gegen&uuml;ber Licht. Erste Schritte, die Befreiung von All-Trans-Retinal und seine Reduktion auf All-Trans-Retinol von Retinol-Dehydrogenase (RDH), statt in Photorezeptoren. Wir spielten Vergleichsmessungen Microspectrophotometric und Microfluorometric auf einer Vielzahl von Rod und Kegel Photorezeptoren isoliert von Salamander Retinae, die Preise der Photoproduct Verfall und Retinol-Produktion zu korrelieren. Metapigment lag Zerfall r&auml;umlich einheitlichen &auml;u&szlig;eren Segmente und 50 - 70 mal schneller in die Zellen, die Kegel-Typ Pigment (SWS2 und M/LWS) im Vergleich zu Zellen mit Stab-Typ Pigment (RH1) enthalten. Retinol Produktionsrate war stark positionsabh&auml;ngig, am schnellsten die Basis der &auml;u&szlig;eren Segmente. Retinol Produktionsrate war 10 - 40 mal schneller im Kegel mit Konus Pigmente (SWS2 und M/LWS) als in der basalen OS Ruten mit Stab Pigment (RH1). Produktion lag etwa f&uuml;nfmal schneller in Stangen, Kegel Pigment (SWS2) als die Rate im basalen OS Ruten mit das Stab Pigment (RH1) enth&auml;lt. Wir zeigen, dass Retinol-Produktion durch Metapigment Zerfall Tarif oder RDH Reaktionsgeschwindigkeit, je nach Zelltyp oder &auml;u&szlig;ere Segment Region definiert ist, w&auml;hrend Retinol-Entfernung von der Oberfl&auml;che-zu-Volumen-Verh&auml;ltnis im &auml;u&szlig;eren Segment und die Verf&uuml;gbarkeit von Retinoid verbindliches Protein (IRBP) definiert ist. Die raschere Preise der Retinol-Produktion in Zapfen, die im Vergleich zu Stangen sind konsistent mit den schnelleren Betrieb des visuellen Zyklus in diesen Zellen.

Visuelle Zyklus: Abh&auml;ngigkeit von Retinol-Produktion und Beseitigung Photoproduct Verfall und Zelle Morphologie.

Il ciclo di visual &egrave; una catena di reazioni biochimiche che rigenerare pigmento visivo dopo l&#39;esposizione alla luce. Primi passi, la liberazione di tutto-trans retinale e sua riduzione a deidrogenasi di retinolo da retinolo tutto-trans (RDH), si svolgono in fotorecettori. Abbiamo effettuato misurazioni comparative microspectrophotometric e microfluorometric su una variet&agrave; di fotorecettori rod e cono isolato da retinae salamandra per correlare i tassi di decadimento e retinolo la produzione di photoproduct. Tasso di decadimento del Metapigment era spazialmente uniforme all&#39;interno di segmenti esterni e 50 - 70 volte pi&ugrave; veloce nelle cellule contenenti pigmenti cono-tipo (SWS2 e M/LWS) rispetto alle cellule con pigmento asta-tipo (RH1). Tasso di produzione di retinolo era fortemente dipendente, posizione pi&ugrave; veloce alla base dei segmenti esterni. Tasso di produzione di retinolo era 10 - 40 volte pi&ugrave; veloce in coni con pigmenti cono (SWS2 e M/LWS) pi&ugrave; in OS basale di canne contenente pigmento rod (RH1). Tasso di produzione era approssimativamente cinque volte pi&ugrave; veloce nelle barre contenenti pigmenti cono (SWS2) rispetto al tasso in OS basale delle barre che contengono il pigmento rod (RH1). Mostriamo che produzione di retinolo &egrave; definito da metapigment tasso di decadimento o tasso di reazione RDH, a seconda del tipo di cellula o regione del segmento esterno, considerando che la rimozione di retinolo &egrave; definito dal rapporto superficie / volume del segmento esterno e la disponibilit&agrave; di retinoidi binding protein (IRBP). Le tariffe pi&ugrave; rapide della produzione di retinolo in coni rispetto alle canne sono coerenti con l&#39;operazione pi&ugrave; rapida del ciclo visivo in queste cellule.

Ciclo visivo: dipendenza della produzione di retinolo e rimozione sulla morfologia delle cellule e decadimento photoproduct.

&#x8996;&#x899A;&#x30B5;&#x30A4;&#x30AF;&#x30EB;&#x306F;&#x3001;&#x5149;&#x3078;&#x306E;&#x66B4;&#x9732;&#x5F8C;&#x306B;&#x8996;&#x899A;&#x8272;&#x7D20;&#x3092;&#x518D;&#x751F;&#x6210;&#x3059;&#x308B;&#x751F;&#x5316;&#x5B66;&#x53CD;&#x5FDC;&#x306E;&#x9023;&#x9396;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3002;&#x6700;&#x521D;&#x306E;&#x30B9;&#x30C6;&#x30C3;&#x30D7;&#x3001;&#x5168;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30EC;&#x30C1;&#x30CA;&#x30FC;&#x30EB;&#x306E;&#x89E3;&#x653E;&#x3068;&#x30EC;&#x30C1;&#x30CE;&#x30FC;&#x30EB;&#x8131;&#x6C34;&#x7D20;&#x9175;&#x7D20;&#xFF08;RDH&#xFF09;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x5168; - &#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30EC;&#x30C1;&#x30CE;&#x30FC;&#x30EB;&#x3078;&#x306E;&#x6E1B;&#x5C11;&#x306F;&#x3001;&#x5149;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x3067;&#x884C;&#x308F;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x5149;&#x7523;&#x7269;&#x5D29;&#x58CA;&#x3068;&#x30EC;&#x30C1;&#x30CE;&#x30FC;&#x30EB;&#x306E;&#x751F;&#x7523;&#x7387;&#x3092;&#x76F8;&#x95A2;&#x3055;&#x305B;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x30B5;&#x30F3;&#x30B7;&#x30E7;&#x30A6;&#x30A6;&#x30AA;&#x7DB2;&#x819C;&#x304B;&#x3089;&#x5358;&#x96E2;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3001;&#x687F;&#x4F53;&#x3068;&#x9310;&#x4F53;&#x5149;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x306E;&#x69D8;&#x3005;&#x306A;&#x6BD4;&#x8F03;&#x9855;&#x5FAE;&#x3068;microfluorometric&#x6E2C;&#x5B9A;&#x3092;&#x884C;&#x3063;&#x305F;&#x3002; Metapigment&#x6E1B;&#x8870;&#x7387;&#x304C;&#x542B;&#x307E;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x30B3;&#x30FC;&#x30F3;&#x578B;&#x9854;&#x6599;&#xFF08;SWS2&#x3068;M / LWS&#xFF09;&#x306F;&#x3001;&#x30ED;&#x30C3;&#x30C9;&#x30BF;&#x30A4;&#x30D7;&#x306E;&#x9854;&#x6599;&#xFF08;RH1&#xFF09;&#x3092;&#x6301;&#x3064;&#x7D30;&#x80DE;&#x3068;&#x6BD4;&#x8F03;&#x3057;&#x3066;&#x7D30;&#x80DE;&#x5185;&#x3067;50&#x304B;&#x3089;70&#x500D;&#x306E;&#x901F;&#x3055;&#x3001;&#x5916;&#x5074;&#x306E;&#x30BB;&#x30B0;&#x30E1;&#x30F3;&#x30C8;&#x5185;&#x306E;&#x7A7A;&#x9593;&#x7684;&#x306B;&#x5747;&#x4E00;&#x3067;&#x3042;&#x3063;&#x305F;&#x3068;&#x3002;&#x30EC;&#x30C1;&#x30CE;&#x30FC;&#x30EB;&#x306E;&#x751F;&#x7523;&#x7387;&#x304C;&#x5F37;&#x304F;&#x3001;&#x5916;&#x5074;&#x306E;&#x30BB;&#x30B0;&#x30E1;&#x30F3;&#x30C8;&#x306E;&#x30D9;&#x30FC;&#x30B9;&#x3067;&#x6700;&#x901F;&#x306E;&#x3001;&#x4F4D;&#x7F6E;&#x306B;&#x4F9D;&#x5B58;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x30EC;&#x30C1;&#x30CE;&#x30FC;&#x30EB;&#x306E;&#x751F;&#x7523;&#x7387;&#x306F;&#x3001;&#x30ED;&#x30C3;&#x30C9;&#x9854;&#x6599;&#xFF08;RH1&#xFF09;&#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x68D2;&#x306E;&#x57FA;&#x5E95;OS&#x306B;&#x6BD4;&#x3079;&#x3066;&#x30B3;&#x30FC;&#x30F3;&#x8272;&#x7D20;&#xFF08;SWS2&#x3068;M / LWS&#xFF09;&#x3067;&#x5186;&#x9310;&#x5F62;&#x306B;10&#x304B;&#x3089;40&#x500D;&#x306E;&#x901F;&#x3055;&#x3067;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x751F;&#x7523;&#x901F;&#x5EA6;&#x306F;&#x3001;&#x30ED;&#x30C3;&#x30C9;&#x9854;&#x6599;&#x3092;&#x542B;&#x6709;&#x3059;&#x308B;&#x68D2;&#x306E;&#x57FA;&#x5E95;OS&#xFF08;RH1&#xFF09;&#x306E;&#x901F;&#x5EA6;&#x3088;&#x308A;&#x3082;&#x30B3;&#x30FC;&#x30F3;&#x306E;&#x9854;&#x6599;&#x3092;&#x542B;&#x6709;&#x3059;&#x308B;&#x30ED;&#x30C3;&#x30C9;&#x306E;&#x7D04;5&#x500D;&#x306E;&#x901F;&#x3055;&#xFF08;SWS2&#xFF09;&#x3067;&#x3042;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x30EC;&#x30C1;&#x30CE;&#x30FC;&#x30EB;&#x306E;&#x9664;&#x53BB;&#x306F;&#x3001;&#x5916;&#x5074;&#x306E;&#x30BB;&#x30B0;&#x30E1;&#x30F3;&#x30C8;&#x306E;&#x8868;&#x9762;&#x7A4D;&#x5BFE;&#x4F53;&#x7A4D;&#x6BD4;&#x3068;&#x30EC;&#x30C1;&#x30CE;&#x30A4;&#x30C9;&#x7D50;&#x5408;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x53EF;&#x7528;&#x6027;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x5B9A;&#x7FA9;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x306E;&#x306B;&#x5BFE;&#x3057;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;&#x7D30;&#x80DE;&#x578B;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x5916;&#x5074;&#x306E;&#x30BB;&#x30B0;&#x30E1;&#x30F3;&#x30C8;&#x9818;&#x57DF;&#x306B;&#x5FDC;&#x3058;&#x3066;&#x3001;&#x305D;&#x306E;&#x30EC;&#x30C1;&#x30CE;&#x30FC;&#x30EB;&#x751F;&#x7523;metapigment&#x6E1B;&#x8870;&#x7387;&#x3084;RDH&#x53CD;&#x5FDC;&#x901F;&#x5EA6;&#x306E;&#x3044;&#x305A;&#x308C;&#x304B;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x5B9A;&#x7FA9;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x8868;&#x793A;&#xFF08;IRBP&#xFF09;&#x3002;&#x30ED;&#x30C3;&#x30C9;&#x306B;&#x6BD4;&#x3079;&#x3066;&#x30B3;&#x30FC;&#x30F3;&#x306B;&#x30EC;&#x30C1;&#x30CE;&#x30FC;&#x30EB;&#x306E;&#x751F;&#x7523;&#x3092;&#x3088;&#x308A;&#x8FC5;&#x901F;&#x306B;&#x6599;&#x91D1;&#x306B;&#x306F;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x8996;&#x899A;&#x30B5;&#x30A4;&#x30AF;&#x30EB;&#x306E;&#x3088;&#x308A;&#x8FC5;&#x901F;&#x306A;&#x64CD;&#x4F5C;&#x3068;&#x4E00;&#x81F4;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;

&#x8996;&#x899A;&#x30B5;&#x30A4;&#x30AF;&#x30EB;&#xFF1A;&#x5149;&#x7523;&#x7269;&#x5D29;&#x58CA;&#x3057;&#x3001;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x5F62;&#x614B;&#x4E0A;&#x306E;&#x30EC;&#x30C1;&#x30CE;&#x30FC;&#x30EB;&#x306E;&#x751F;&#x7523;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x53D6;&#x308A;&#x5916;&#x3057;&#x306E;&#x4F9D;&#x5B58;&#x6027;

&#xC2DC;&#xAC01;&#xC801; &#xC0AC;&#xC774;&#xD074; &#xC2DC;&#xAC01; &#xC0C9;&#xC18C;&#xB97C; &#xC0DD;&#xC131; &#xD558;&#xB294; &#xC0DD; &#xD654; &#xD559;&#xC801; &#xBC18;&#xC751;&#xC758; &#xCCB4;&#xC778; &#xBE5B;&#xC5D0; &#xB178;&#xCD9C;&#xC744; &#xB2E4;&#xC74C; &#xC774;&#xB2E4;. &#xBAA8;&#xB4E0; &#xD2B8;&#xB79C;&#xC2A4; &#xB9DD;&#xB9C9;&#xC758; &#xD574;&#xBC29;, &#xBAA8;&#xB4E0; &#xD6A1;&#xB2E8; retinol, retinol &#xD6A8;&#xC18C; (RDH), &#xAC10;&#xC18C;&#xC758; &#xCD08;&#xAE30; &#xB2E8;&#xACC4;&#xB294; &#xB300;&#xB1CC;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC790;&#xB9AC;&#xB97C; &#xCC28;&#xC9C0;&#xD560;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xB2E4;&#xC591; &#xD55C; &#xB9C9;&#xB300; &#xBC0F; &#xC6D0;&#xBFD4; &#xB300;&#xB1CC;&#xC5D0;&#xC11C; &#xB3C4;&#xB871;&#xB1FD; retinae photoproduct &#xBD80;&#xD328;&#xC640; &#xB808; &#xD2F0; &#xB180; &#xC0DD;&#xC0B0; &#xC18D;&#xB3C4; &#xC0C1;&#xAD00; &#xAD00;&#xACC4;&#xB97C; &#xC808;&#xC5F0;&#xC5D0; &#xBE44;&#xAD50; microspectrophotometric &#xBC0F; microfluorometric &#xCE21;&#xC815; &#xC218;&#xD589;. Metapigment &#xCDA9; &#xC728; &#xBD09; &#xD615; &#xC548;&#xB8CC; (RH1) &#xC140;&#xC5D0; &#xBE44;&#xD574; &#xCF58; &#xD615; &#xC548;&#xB8CC; (SWS2 &#xBC0F; M/LWS)&#xB97C; &#xD3EC;&#xD568; &#xD558;&#xB294; &#xC140;&#xC5D0; &#xC678;&#xBD80; &#xC138;&#xADF8;&#xBA3C;&#xD2B8; &#xB0B4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xACF5;&#xAC04;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xADE0;&#xC77C; &#xD558; &#xACE0; 50-70 &#xBC30; &#xBE60;&#xB978; &#xD588;&#xB2E4;. Retinol &#xC0DD;&#xC0B0; &#xC18D;&#xB3C4; &#xAC15;&#xB825; &#xD558; &#xAC8C; &#xC704;&#xCE58; &#xB530;&#xB77C;, &#xAC00;&#xC7A5; &#xBE60;&#xB978; &#xC678;&#xBD80; &#xC138;&#xADF8;&#xBA3C;&#xD2B8;&#xC758; &#xAE30;&#xC9C0;&#xC5D0;&#xC11C;. Retinol &#xC0DD;&#xC0B0; &#xC18D;&#xB3C4; 10-40 &#xBC30; &#xBE60;&#xB978; &#xCF58; &#xCF58; &#xC548;&#xB8CC; (SWS2 &#xBC0F; M/LWS) &#xBCF4;&#xB2E4; &#xB9C9;&#xB300; &#xC548;&#xB8CC; (RH1)&#xC744; &#xD3EC;&#xD568; &#xD558;&#xB294; &#xB9C9;&#xB300;&#xC758; &#xAE30;&#xC800; &#xC6B4;&#xC601; &#xCCB4;&#xC81C;&#xC640;&#xC5D0;. &#xC0DD;&#xC0B0; &#xC18D;&#xB3C4; &#xC57D; 5 &#xBC30; &#xBE60;&#xB978; &#xBD09; &#xBD09; &#xBD09; &#xC548;&#xB8CC; (RH1)&#xC744; &#xD3EC;&#xD568; &#xD558;&#xB294; &#xAE30;&#xC800; &#xC6B4;&#xC601; &#xCCB4;&#xC81C;&#xC5D0; &#xC18D;&#xB3C4; &#xBCF4;&#xB2E4; &#xCF58; &#xC548;&#xB8CC; (SWS2)&#xC774; &#xD3EC;&#xD568; &#xB41C;&#xC5D0;. Retinol &#xC81C;&#xAC70; &#xC678;&#xBD80; &#xC138;&#xADF8;&#xBA3C;&#xD2B8; &#xD45C;&#xBA74; &#xBCFC;&#xB968; &#xBE44;&#xC728;&#xACFC; retinoid &#xC758;&#xBB34;&#xC801;&#xC778; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; (IRBP)&#xC758; &#xAC00;&#xC6A9;&#xC131;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC815;&#xC758; &#xD558;&#xB294; &#xBC18;&#xBA74; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; retinol &#xC0DD;&#xC0B0; metapigment &#xBD95;&#xAD34; &#xC18D;&#xB3C4; &#xB610;&#xB294; &#xC140; &#xD615;&#xC2DD; &#xB610;&#xB294; &#xC678;&#xBD80; &#xC138;&#xADF8;&#xBA3C;&#xD2B8; &#xC601;&#xC5ED;&#xC5D0; &#xB530;&#xB77C; RDH &#xBC18;&#xC751; &#xC18D;&#xB3C4; &#xC758;&#xD574; &#xC815;&#xC758; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. Retinol &#xC0DD;&#xC0B0; &#xCF58; &#xB9C9;&#xB300;&#xC5D0; &#xBE44;&#xD574; &#xB354; &#xBE60;&#xB978; &#xC18D;&#xB3C4; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xC140;&#xC758; &#xC2DC;&#xAC01;&#xC801; &#xC0AC;&#xC774;&#xD074;&#xC758; &#xB354; &#xBE60;&#xB978; &#xC791;&#xC5C5;&#xACFC; &#xC77C;&#xCE58; &#xD558;&#xB294;.

&#xBE44;&#xC8FC;&#xC5BC; &#xC8FC;&#xAE30;: retinol &#xC0DD;&#xC0B0; &#xBC0F; &#xC81C;&#xAC70; photoproduct &#xBD80;&#xD328;&#xC640; &#xC138;&#xD3EC; &#xD615;&#xD0DC;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC758;&#xC874;&#xB3C4;.

El ciclo visual es una cadena de reacciones bioqu&#xED;micas que regeneran la exposici&#xF3;n visual de los siguientes pigmentos a la luz. Los pasos iniciales, la liberaci&#xF3;n de todo-trans retinal y su reducci&#xF3;n a todo-trans retinol en retinol deshidrogenasa (RDH), llevar&#xE1; a cabo en los fotorreceptores. Se realizaron mediciones comparativas microspectrophotometric y microfluorom&#xE9;tricos en una variedad de fotorreceptores de los bastones y conos aislados de salamandra retinas para correlacionar las tasas de descomposici&#xF3;n photoproduct y la producci&#xF3;n de retinol. Tasa de descomposici&#xF3;n fue Metapigment espacialmente uniforme dentro de los segmentos externos y 50-70 veces m&#xE1;s r&#xE1;pido en las c&#xE9;lulas que conten&#xED;an cono tipo de pigmento (SWS2 y M / LWS) en comparaci&#xF3;n con las c&#xE9;lulas con pigmento tipo varilla (RH1). Tasa de producci&#xF3;n fue retinol fuertemente dependiente de la posici&#xF3;n m&#xE1;s r&#xE1;pida, en la base de segmentos exteriores. Tasa de producci&#xF3;n de retinol fue 10-40 veces m&#xE1;s r&#xE1;pido en los conos con pigmentos de los conos (SWS2 y M / LWS) que en el sistema operativo basal de barras que contienen pigmento de la varilla (RH1). La tasa de producci&#xF3;n fue de aproximadamente cinco veces m&#xE1;s r&#xE1;pido en las barras que contienen pigmento de los conos (SWS2) que la tasa en el sistema operativo basal de barras que contienen el pigmento de la varilla (RH1). Se demuestra que la producci&#xF3;n de retinol se define ya sea por la tasa de descomposici&#xF3;n metapigment o velocidad de reacci&#xF3;n RDH, dependiendo del tipo de c&#xE9;lula o regi&#xF3;n segmento exterior, mientras que la eliminaci&#xF3;n de retinol se define por la relaci&#xF3;n superficie-volumen del segmento externo y la disponibilidad de la prote&#xED;na de uni&#xF3;n retinoide (IRBP). Las tasas m&#xE1;s r&#xE1;pidas de la producci&#xF3;n de retinol en comparaci&#xF3;n con conos varillas son consistentes con la operaci&#xF3;n m&#xE1;s r&#xE1;pida del ciclo visual en estas c&#xE9;lulas.

Visual Ciclo: la dependencia de la producci&#xF3;n de retinol y la eliminaci&#xF3;n de caries photoproduct y la morfolog&#xED;a celular

&#x67AF;&#x8349;&#x5609;&#x58EB;&#x4F2F;&#x7684;&#x6D3B;&#x6027;&#x4E2D;&#x5FC3;&#x7684;&#x72EC;&#x7279;&#x578B;&#x7F51;&#x7EDC;&#x7684;&#x529F;&#x80FD;&#x6210;&#x50CF;&#x4EA7;&#x751F;&#x50AC;&#x5316;&#x6297;&#x72EC;&#x7279;&#x578B;&#x6297;&#x4F53;&#x4E0E;&#x80BD;&#x94FE;&#x5185;&#x5207;&#x9176;&#x3001; &#x9170;&#x80FA;&#x9176;&#x548C;&#x916F;&#x9176;&#x7684;&#x6D3B;&#x52A8;&#x3002;&#x5355;&#x514B;&#x9686;&#x6297;&#x4F53;&#x6291;&#x5236;&#x5BF9;&#x67AF;&#x8349; (ab1 &#x7C7B;&#x653E;&#x5927; 5-H4&#xFF09; &#x4EBA;&#x53D7;&#x96C7;&#x62C5;&#x4EFB;&#x6307;&#x5BFC;&#x72EC;&#x7279;&#x7F51;&#x7EDC;&#x6A21;&#x677F;&#x4EE5;&#x4EA7;&#x751F;&#x50AC;&#x5316;&#x6297;&#x72EC;&#x7279;&#x578B; Ab2 6B8-E12&#x3002;&#x86CB;&#x767D;&#x6C34;&#x89E3;&#x6D3B;&#x6027;&#x7684; 6B8 E12 &#x88AB;&#x8868;&#x660E;&#x4F7F;&#x7528;&#x5171;&#x8F6D; self-quenched &#x8367;&#x5149;&#x7D20;-&#x725B;&#x8840;&#x6E05;&#x767D;&#x86CB;&#x767D;&#x7684;&#x9176;&#x68C0;&#x6D4B;&#x4F9D;&#x8D56; Ab2 &#x7684;&#x6838;&#x7CD6;&#x6838;&#x9178;&#x9176; A &#x706D;&#x6D3B;&#x8026;&#x5408;&#x68C0;&#x6D4B;&#x4E2D;&#x3002;&#x7531; 6B8 E12 &#x80BD;&#x57FA;&#x8D28;&#x7684;&#x88C2;&#x89E3;&#x63ED;&#x793A;&#x6C34;&#x89E3;&#x4E0E;&#x82B3;&#x9999;&#x6B8B;&#x7559;&#x9AD8;&#x503E;&#x5411;&#x4E8E;&#x4E0D;&#x540C;&#x7684;&#x683C;&#x5C40;&#x4E4B;&#x524D;, &#x6216;&#x4E4B;&#x540E;&#x7684; scissile &#x7684;&#x503A;&#x5238;&#x3002;Ab2 &#x50AC;&#x5316;&#x6D3B;&#x6027;&#x88AB;&#x6291;&#x5236;&#x673A;&#x5236;&#x4E3A;&#x57FA;&#x7840;&#x7684;&#x4E1D;&#x6C28;&#x9178;&#x6C34;&#x89E3;&#x9176;&#x6291;&#x5236;&#x5242; phenylmethylsulfonyl&#xFF0C;&#x6C1F;&#x5316;&#x7269;&#x3002;5 H4 6B8 E12 &#x88AB;&#x514B;&#x9686;&#x3001; &#x5355;&#x94FE;&#x53EF;&#x53D8;&#x7247;&#x6BB5; &#xFF08;scFvs&#xFF09;&#xFF0C;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x5728;&#x5927;&#x80A0;&#x6746;&#x83CC;&#x4E2D;&#x751F;&#x4EA7;&#x548C;&#x51C0;&#x5316;&#x3002;&#x52A8;&#x529B;&#x5B66;&#x53C2;&#x6570;&#x4E3A; amidolytic &#x548C; esterolytic &#x7684;&#x6D3B;&#x52A8;&#x662F;&#x7C7B;&#x4F3C; Ab2 &#x548C;&#x5355;&#x94FE;&#x6297;&#x4F53;&#x53CA;&#x5176;&#x884D;&#x751F;&#x7269;&#x3002;&#x867D;&#x7136; 6B8 E12 &#x7684;&#x6297;&#x539F;&#x7279;&#x5F02;&#x6027;&#x90E8;&#x5206;&#x62E5;&#x6709;&#x67AF;&#x8349;&#x65E0;&#x4E3B;&#x7ED3;&#x6784;&#x76F8;&#x4F3C;&#xFF0C;&#x5B83;&#x6A21;&#x4EFF;&#x86CB;&#x767D;&#x6C34;&#x89E3;&#x548C; amidolytic &#x51FD;&#x6570;&#x7684;&#x7236;&#x6BCD;&#x6297;&#x539F;&#xFF0C;&#x5C3D;&#x7BA1;&#x6709; 4 &#x4E2A;&#x6570;&#x91CF;&#x7EA7;&#x52A0;&#x901F;&#x5EA6;&#x901F;&#x5EA6;&#x8F83;&#x6162;&#x3002;&#x63A2;&#x6D4B;&#x80BD;&#x94FE;&#x5185;&#x5207;&#x9176;&#x6D3B;&#x6027;&#x7684; 6B8 E12 &#x5355;&#x94FE;&#x6297;&#x4F53;&#x7F3A;&#x4E4F;&#x5F15;&#x8D77;&#x4E86;&#x6709;&#x8DA3;&#x7684;&#x95EE;&#x9898;&#xFF0C;&#x5173;&#x4E8E;&#x4E00;&#x822C;&#x8FDB;&#x5316;&#x7684;&#x50AC;&#x5316;&#x6D3B;&#x6027;&#x3002;&#x7845;&#x5728; 3D &#x6A21;&#x578B;&#x7684; ab1 &#x7C7B;&#x653E;&#x5927;&#x548C; Ab2 &#x900F;&#x9732;&#x5F3A;&#x7ED3;&#x6784;&#x76F8;&#x4F3C;&#x5EA6;&#x5411;&#x5DF2;&#x77E5; anti-protease &#x6297;&#x4F53;&#x548C;&#x6BCD;&#x4E73;&#x6297;&#x4F53;&#x9176;&#xFF0C;&#x5206;&#x522B;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7ED3;&#x679C;&#x8868;&#x660E;&#x72EC;&#x7279;&#x7F51;&#x7EDC;&#x662F;&#x80FD;&#x5E72;&#x7684;&#x590D;&#x5236;&#x7684;&#x4E1D;&#x6C28;&#x9178;&#x86CB;&#x767D;&#x9176;&#x50AC;&#x5316;&#x88C5;&#x7F6E;&#x7684;&#x91CD;&#x8981;&#x7A0B;&#x5EA6;&#x548C;&#x8FDB;&#x4E00;&#x6B65;&#x52A0;&#x5FEB;&#x80FD;&#x6E90;&#x8981;&#x6C42;&#x7684;&#x9170;&#x80FA;&#x952E;&#x6C34;&#x89E3;&#x7684;&#x6BCD;&#x4E73;&#x6297;&#x4F53;&#x9176;&#x7684;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x514D;&#x75AB;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x9A8C;&#x8BC1;&#x6210;&#x50CF;&#x7684;&#x9176;&#x6D3B;&#x6027;&#x4E2D;&#x5FC3;&#x7684;&#x4F7F;&#x7528;&#x3002;

&#x6297;&#x72EC;&#x7279;&#x578B;&#x6297;&#x4F53;&#x6A21;&#x4EFF;&#x7236;&#x6297;&#x539F;&#x86CB;&#x767D;&#x6C34;&#x89E3;&#x7684;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;

Functional imaging of subtilisin Carlsberg active center by the idiotypic network yielded a catalytic anti-idiotypic antibody with endopeptidase, amidase, and esterase activities. A monoclonal antibody inhibitory to subtilisin (Ab1 5-H4) was employed as the template for guiding the idiotypic network to produce the catalytic anti-idiotypic Ab2 6B8-E12. Proteolytic activity of 6B8-E12 was demonstrated by zymography using self-quenched fluorescein-BSA conjugate and in a coupled assay detecting Ab2-dependent RNase A inactivation. Cleavage of peptide substrates by 6B8-E12 revealed distinct patterns of hydrolysis with high preference for aromatic residues before or after the scissile bond. Catalytic activity of Ab2 was inhibited by phenylmethylsulfonyl fluoride, a mechanism-based inhibitor of serine hydrolases. 5-H4 and 6B8-E12 were cloned, produced in Escherichia coli as single-chain variable fragments (scFvs), and purified. Kinetic parameters for amidolytic and esterolytic activities were similar in Ab2 and its scFv derivative. Although the antigen-specific portion of 6B8-E12 possesses no primary structure similarity to subtilisin, it mimics proteolytic and amidolytic functions of the parental antigen, albeit with 4 orders of magnitude slower acceleration rates. The lack of detectable endopeptidase activity of 6B8-E12 scFv raises interesting issues concerning general evolution of catalytic activity. The in silico 3D models of Ab1 and Ab2 revealed strong structural similarity to known anti-protease antibodies and to abzymes, respectively. These results indicate that the idiotypic network is capable, to a significant extent, of reproducing catalytic apparatus of serine proteases and further validate the use of imaging of enzyme active centers by the immune system for induction of abzymes accelerating energy-demanding amide bond hydrolysis.

Anti-idiotypic antibody mimics proteolytic function of parent antigen.

Imagerie fonctionnelle du centre actif de subtilisine Carlsberg par le r&eacute;seau idiotypiques a produit un anticorps anti-idiotypiques catalytique avec activit&eacute;s endopeptidase, amidase et est&eacute;rase. Un anticorps monoclonal inhibitrice &agrave; la subtilisine (Ab1 5-H4) a travaill&eacute; comme mod&egrave;le pour guider le r&eacute;seau idiotypiques pour produire le catalytique anti-idiotypiques Ab2 6 b 8-E12. L&#39;activit&eacute; prot&eacute;olytique de 6 b 8-E12 a &eacute;t&eacute; d&eacute;montr&eacute;e par la zymographie en utilisant conjugu&eacute; self-quenched fluoresc&eacute;ine-BSA et un dosage coupl&eacute; d&eacute;tectant l&#39;inactivation d&eacute;pendante Ab2 RNase A. Le clivage des substrats peptidiques par 6 b 8-E12 a r&eacute;v&eacute;l&eacute; des profils distincts d&#39;hydrolyse avec forte pr&eacute;f&eacute;rence pour les r&eacute;sidus aromatiques avant ou apr&egrave;s la liaison se. L&#39;activit&eacute; catalytique de Ab2 est inhib&eacute;e par le fluorure de ph&eacute;nylm&eacute;thylsulfonyle, un ax&eacute;e sur le m&eacute;canisme inhibiteur de s&eacute;rine hydrolases. 5-H4 et 6 b 8-E12 ont &eacute;t&eacute; clon&eacute;s, produites chez Escherichia coli comme des fragments de variables cha&icirc;ne unique (scFvs) et purifi&eacute;s. Les param&egrave;tres cin&eacute;tiques pour activit&eacute;s amidolytique et est&eacute;rolytique &eacute;taient semblables &agrave; Ab2 et son d&eacute;riv&eacute; scFv. Bien que la partie de l&#39;antig&egrave;ne sp&eacute;cifique de 6 b 8-E12 ne poss&egrave;de aucune similitude de structure primaire de la subtilisine, elle imite prot&eacute;olytique et fonctions amidolytique de l&#39;antig&egrave;ne parental, mais avec 4 ordres de grandeur plus lente acc&eacute;l&eacute;rations. L&#39;absence d&#39;activit&eacute; endopeptidase d&eacute;tectable de 6 b 8-E12 scFv soul&egrave;ve des questions int&eacute;ressantes concernant l&#39;&eacute;volution de l&#39;activit&eacute; catalytique. L&#39;in silico des mod&egrave;les 3D de Ab1 et Ab2 a r&eacute;v&eacute;l&eacute; forte similarit&eacute; structurelle des anticorps anti-protease connus et abzymes, respectivement. Ces r&eacute;sultats indiquent que le r&eacute;seau idiotypiques est capable, dans une large mesure, des appareils catalytiques des prot&eacute;ases de s&eacute;rine de reproduction et valider l&#39;utilisation de l&#39;imagerie des centres actifs de l&#39;enzyme par le syst&egrave;me immunitaire pour l&#39;induction des abzymes acc&eacute;l&eacute;rer l&#39;hydrolyse de liaisons amide &eacute;nergivores.

Anticorps anti-idiotypiques imite fonction prot&eacute;olytique de l&#39;antig&egrave;ne de parent.

Funktionelle Bildgebung Subtilisin Carlsberg aktiv Center durch das Idiotypic-Netzwerk hat einen katalytischen Anti-Idiotypic-Antik&ouml;rper mit Endopeptidase Amidase und Esterase Aktivit&auml;ten ergeben. Ein monoklonaler Antik&ouml;rper hemmenden zu Subtilisin (Ab1 5-H4) wurde als Vorlage f&uuml;r die Leitung des Idiotypic-Netzwerks eingesetzt, um die katalytische Anti-Idiotypic Ab2 6B8-E12 zu produzieren. Proteolytische Aktivit&auml;t des 6B8-E12 wurde durch Zymography mit self-quenched Fluoreszein-BSA konjugiert und in einem gekoppelten Assay erkennen Ab2-abh&auml;ngige RNase A Inaktivierung nachgewiesen. Spaltung von Peptid-Substrate von 6B8-E12 ergeben unterschiedliche Muster der Hydrolyse mit hohe Pr&auml;ferenz f&uuml;r aromatische R&uuml;ckst&auml;nde vor oder nach der scissile Bond. Katalytische Aktivit&auml;t der Ab2 wurde durch Phenylmethylsulfonyl Fluorid, ein Mechanismus basierende Inhibitor der Serin-HYDROLASEN gehemmt. 5-H4 wurden 6B8-E12 geklont, in Escherichia coli als Einzel-Kette Variable Fragmente (ScFvs) hergestellt und gereinigt. Kinetische Parameter f&uuml;r Amidolytic und Esterolytic Aktivit&auml;ten waren in Ab2 und ihre ScFv-Ableitung. Obwohl der Antigen-spezifische Teil der 6B8-E12 keine prim&auml;re Struktur &Auml;hnlichkeit mit Subtilisin besitzt, es imitiert proteolytische und Amidolytic Funktionen des elterlichen Antigens, allerdings mit 4 Gr&ouml;&szlig;enordnungen langsamer Beschleunigung Preise. Die mangelnde Aktivit&auml;t nachweisbar Endopeptidase 6B8-E12 ScFv wirft interessante Fragen, die allgemeine Entwicklung der katalytischen. Die in Silico 3D-Modelle von Ab1 und Ab2 offenbart starken strukturellen &Auml;hnlichkeit zu bekannte anti-protease-Antik&ouml;rper und Abzymes, beziehungsweise. Diese Ergebnisse zeigen, dass das Idiotypic-Netzwerk ist in der Lage, in erheblichem Umfang, der katalytischen Tonwiedergabeger&auml;ten Serinproteasen und die Verwendung der Bildgebung Enzym aktiven Zentren weiter zu &uuml;berpr&uuml;fen, indem das Immunsystem f&uuml;r die Induktion von Abzymes Energie-anspruchsvolle Amid Bond Hydrolyse zu beschleunigen.

Anti-Idiotypic Antik&ouml;rper imitiert proteolytische Funktion des &uuml;bergeordneten Antigen.

Imaging funzionale di subtilisina Carlsberg attivo centro dalla rete idiotypic ceduto un anticorpo anti-idiotypic catalitico con attivit&agrave; endopeptidasi, amidase ed esterasi. Un anticorpo monoclonale inibitorio a subtilisina (Ab1 5-H4) fu impiegato come modello per la rete idiotypic di guida per produrre la catalitica anti-idiotypic Ab2 6B8-E12. Attivit&agrave; proteolitica di 6B8-E12 &egrave; stata dimostrata da zimogramma utilizzando coniugato BSA-fluoresceina self-quenched e in un dosaggio accoppiato rilevazione inattivazione Ab2-dipendente RNasi A. Scissione di substrati peptidici da 6B8-E12 rivelato modelli distinti di idrolisi con alta preferenza per residui aromatici prima o dopo il legame scissile. Attivit&agrave; catalitica di Ab2 &egrave; stato inibito da fluoruro di phenylmethylsulfonyl, un inibitore della serina idrolasi basata sul meccanismo. 5-H4 6B8-E12 sono stati clonati, prodotta in Escherichia coli come catena singola variabile frammenti (scFvs) e purificato. Parametri cinetici per attivit&agrave; amidolytic ed esterolytic erano simili Ab2 e suoi derivati scFv. Anche se la porzione di antigene-specifiche di 6B8-E12 non possiede alcuna somiglianza di struttura primaria con subtilisina, imita proteolitici e amidolytic le funzioni dell&#39;antigene parentale, anche se con 4 ordini di grandezza pi&ugrave; lento tasso di accelerazione. La mancanza di attivit&agrave; rilevabile endopeptidasi di scFv 6B8-E12 solleva interessanti questioni riguardanti l&#39;evoluzione generale dell&#39;attivit&agrave; catalitica. La in silico modelli 3D di Ab1 e Ab2 rivelato forte somiglianza strutturale di anticorpi noti anti-protease e abzymes, rispettivamente. Questi risultati indicano che la rete idiotypic &egrave; in grado, in misura significativa, di riproduzione catalitica della proteasi della serina e convalidare ulteriormente l&#39;uso dell&#39;imaging di centri attivi enzima dal sistema immunitario per l&#39;induzione del abzymes accelerando idrolisi di legame dell&#39;ammide intensivo di energia.

Anticorpo anti-idiotypic imita funzione proteolitica dell&#39;antigene del padre.

&#x30B5;&#x30C1;&#x30E9;&#x30A4;&#x30B7;&#x30F3; &#x30AB;&#x30FC;&#x30EB;&#x30B9;&#x30D0;&#x30FC;&#x30B0; &#x30A2;&#x30AF;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6; &#x30BB;&#x30F3;&#x30BF;&#x30FC; &#x30A4;&#x30C7;&#x30A3;&#x30AA; &#x30BF;&#x30A4;&#x30D7; &#x30CD;&#x30C3;&#x30C8;&#x30EF;&#x30FC;&#x30AF;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x6A5F;&#x80FD;&#x30A4;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B8;&#x30F3;&#x30B0;&#x89E6;&#x5A92;&#x6297;&#x30A4;&#x30C7;&#x30A3;&#x30AA; &#x30BF;&#x30A4;&#x30D7;&#x6297;&#x4F53;&#x30A8;&#x30F3;&#x30C9;&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C0;&#x30FC;&#x30BC;&#x3001;&#x30A2;&#x30DF;&#x30C0;&#x30FC;&#x30BC;&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x30A8;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E9;&#x30FC;&#x30BC;&#x6D3B;&#x52D5;&#x3092;&#x3082;&#x305F;&#x3089;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x30B5;&#x30C1;&#x30E9;&#x30A4;&#x30B7;&#x30F3; (Ab1 5 H4) &#x6291;&#x5236;&#x306E;&#x30E2;&#x30CE;&#x30AF;&#x30ED;&#x30FC;&#x30CA;&#x30EB;&#x6297;&#x4F53;&#x306F;&#x3001;&#x89E6;&#x5A92;&#x6297;&#x30A4;&#x30C7;&#x30A3;&#x30AA; Ab2 6B8 E12 &#x3092;&#x751F;&#x6210;&#x3059;&#x308B;&#x30A4;&#x30C7;&#x30A3;&#x30AA; &#x30BF;&#x30A4;&#x30D7; &#x30CD;&#x30C3;&#x30C8;&#x30EF;&#x30FC;&#x30AF;&#x3092;&#x5C0E;&#x304F;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x30C6;&#x30F3;&#x30D7;&#x30EC;&#x30FC;&#x30C8;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x63A1;&#x7528;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;6B8 E12 &#x30D7;&#x30ED;&#x30C6;&#x30A2;&#x30FC;&#x30BC;&#x6D3B;&#x6027;&#x306F; self-quenched &#x30D5;&#x30EB;&#x30AA;&#x30EC;&#x30BB;&#x30A4;&#x30F3; BSA &#x5171;&#x5F79;&#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x305F; zymography &#x306B;&#x3088;&#x308B; Ab2 &#x4F9D;&#x5B58;&#x578B; RNase &#x3092;&#x4E0D;&#x6D3B;&#x5316;&#x3092;&#x691C;&#x51FA;&#x3059;&#x308B;&#x7D50;&#x5408;&#x30A2;&#x30C3;&#x30BB;&#x30A4;&#x3067;&#x793A;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x7570;&#x306A;&#x308B;&#x30D1;&#x30BF;&#x30FC;&#x30F3;&#x306E;&#x82B3;&#x9999;&#x65CF;&#x30A2;&#x30DF;&#x30CE;&#x9178;&#x306E;&#x9AD8;&#x3044;&#x597D;&#x307F;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x52A0;&#x6C34;&#x5206;&#x89E3;&#x306E;&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C3;&#x30C9;&#x57FA;&#x677F;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066; 6B8 E12 &#x306E;&#x958B;&#x88C2;&#x5207;&#x3089;&#x30DC;&#x30F3;&#x30C9;&#x306E;&#x524D;&#x5F8C;&#x3092;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;Ab2 &#x306E;&#x89E6;&#x5A92;&#x6D3B;&#x6027;&#x30BB;&#x30EA;&#x30F3;&#x52A0;&#x6C34;&#x5206;&#x89E3;&#x9175;&#x7D20;&#x306E;&#x30E1;&#x30AB;&#x30CB;&#x30BA;&#x30E0;&#x306B;&#x57FA;&#x3065;&#x304F;&#x963B;&#x5BB3;&#x5264; phenylmethylsulfonyl &#x30D5;&#x30C3;&#x5316;&#x7269;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x6291;&#x5236;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;5 H4 6B8 E12 &#x30AF;&#x30ED;&#x30FC;&#x30F3;&#x3001;&#x5927;&#x8178;&#x83CC;&#x306E;&#x4E00;&#x672C;&#x9396;&#x53EF;&#x5909;&#x30D5;&#x30E9;&#x30B0;&#x30E1;&#x30F3;&#x30C8; (scFvs) &#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x751F;&#x7523;&#x3057;&#x3001;&#x7CBE;&#x88FD;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;Amidolytic &#x30FB; &#x30A8;&#x30B9;&#x30C6;&#x30ED;&#x30EA;&#x30C6;&#x30A3;&#x30C3;&#x30AF;&#x6D3B;&#x52D5;&#x306E;&#x901F;&#x5EA6;&#x8AD6;&#x7684;&#x30D1;&#x30E9;&#x30E1;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC; Ab2 &#x3068;&#x305D;&#x306E;&#x7121;&#x7D30;&#x80DE;&#x5C0E;&#x95A2;&#x6570;&#x3067;&#x985E;&#x4F3C;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x305F;&#x3002;6B8 E12 &#x306E;&#x6297;&#x539F;&#x7279;&#x7570;&#x7684;&#x90E8;&#x5206;&#x306B;&#x4E00;&#x6B21;&#x69CB;&#x9020;&#x985E;&#x4F3C;&#x6027;&#x30B5;&#x30C1;&#x30E9;&#x30A4;&#x30B7;&#x30F3;&#x3092;&#x6240;&#x6709;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x306A;&#x3044;&#x304C;&#x3001;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x5206;&#x89E3;&#x6A21;&#x5023;&#x3068;&#x4FDD;&#x8B77;&#x8005;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x6297;&#x539F;&#x306E; amidolytic &#x95A2;&#x6570;&#x3067; 4 &#x6841;&#x306E;&#x9045;&#x3044;&#x52A0;&#x901F;&#x7387;&#x3068;&#x306F;&#x3044;&#x3048;&#x3002;6B8 E12 &#x7121;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x691C;&#x51FA;&#x30A8;&#x30F3;&#x30C9;&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C0;&#x30FC;&#x30BC;&#x6D3B;&#x6027;&#x306E;&#x6B20;&#x5982;&#x306F;&#x3001;&#x4E00;&#x822C;&#x7684;&#x306A;&#x9032;&#x5316;&#x306E;&#x89E6;&#x5A92;&#x6D3B;&#x6027;&#x306B;&#x95A2;&#x3059;&#x308B;&#x8208;&#x5473;&#x6DF1;&#x3044;&#x554F;&#x984C;&#x3092;&#x767A;&#x751F;&#x3055;&#x305B;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x305D;&#x308C;&#x305E;&#x308C;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B; silico &#x3067; 3 D &#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x306E; Ab1 &#x3068; Ab2 &#x5F37;&#x3044;&#x69CB;&#x9020;&#x306E;&#x985E;&#x4F3C;&#x6027;&#x306B;&#x77E5;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x305F; anti-protease &#x6297;&#x4F53;&#x3068; abzymes&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x304B;&#x3089;&#x30A4;&#x30C7;&#x30A3;&#x30AA; &#x30BF;&#x30A4;&#x30D7; &#x30CD;&#x30C3;&#x30C8;&#x30EF;&#x30FC;&#x30AF; &#x30BB;&#x30EA;&#x30F3;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C6;&#x30A2;&#x30FC;&#x30BC;&#x306E;&#x89E6;&#x5A92;&#x88C5;&#x7F6E;&#x3092;&#x518D;&#x73FE;&#x3059;&#x308B;&#x304C;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x7BC4;&#x56F2;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x53EF;&#x80FD;&#x3067;&#x3059;&#x3057;&#x3001;&#x8A98;&#x5C0E;&#x52A0;&#x901F;&#x30A2;&#x30DF;&#x30C9;&#x7D50;&#x5408;&#x306E;&#x52A0;&#x6C34;&#x5206;&#x89E3;&#x306E;&#x30A8;&#x30CD;&#x30EB;&#x30AE;&#x30FC;&#x3092;&#x8981;&#x6C42; abzymes &#x306E;&#x514D;&#x75AB;&#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E0;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x9175;&#x7D20;&#x6D3B;&#x6027;&#x4E2D;&#x5FC3;&#x306E;&#x30A4;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B8;&#x30F3;&#x30B0;&#x306E;&#x4F7F;&#x7528;&#x3092;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x691C;&#x8A3C;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x6297;&#x30A4;&#x30C7;&#x30A3;&#x30AA; &#x30BF;&#x30A4;&#x30D7;&#x6297;&#x4F53;&#x306E;&#x89AA;&#x6297;&#x539F;&#x86CB;&#x767D;&#x5206;&#x89E3;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3092;&#x6A21;&#x5023;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

Idiotypic &#xB124;&#xD2B8;&#xC6CC;&#xD06C;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; subtilisin &#xCE7C; &#xD65C;&#xC131; &#xC13C;&#xD130;&#xC758; &#xAE30;&#xB2A5; &#xC774;&#xBBF8;&#xC9D5; endopeptidase, amidase, &#xBC0F; esterase &#xD65C;&#xB3D9; &#xCD09;&#xB9E4; &#xC548;&#xD2F0;-idiotypic &#xD56D; &#xCCB4;&#xB97C; &#xC5BB;&#xC9C0; &#xBABB;&#xD588;&#xB2E4;. &#xAE08;&#xC9C0; subtilisin (Ab1 5-H4) &#xB2E8;&#xC77C; &#xD074;&#xB860; &#xD56D; &#xCCB4; &#xC0DD;&#xC0B0; &#xCD09;&#xB9E4; &#xC548;&#xD2F0; idiotypic Ab2 6B8 E12 idiotypic &#xB124;&#xD2B8;&#xC6CC;&#xD06C; &#xC9C0;&#xB3C4; &#xB300; &#xD55C; &#xD15C;&#xD50C;&#xB9BF;&#xC73C;&#xB85C; &#xADFC;&#xBB34; &#xD588;&#xB2E4;. 6B8-E12 &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xD65C;&#xB3D9; zymography self-quenched fluorescein BSA &#xACF5;&#xC561;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xBC0F; &#xAC10;&#xC9C0; Ab2 &#xC885;&#xC18D; RNase A &#xBE44;&#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xACB0;&#xD569; &#xB41C; &#xBD84;&#xC11D; &#xACB0;&#xACFC;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC2DC;&#xC5F0; &#xD588;&#xB2E4;. 6B8-E12, &#xD3A9; &#xD2F0; &#xB4DC; &#xAE30;&#xD310;&#xC758; &#xBD84;&#xC5F4; scissile &#xBCF8;&#xB4DC; &#xC804;&#xD6C4; &#xD5A5;&#xAE30;&#xB85C;&#xC6B4; &#xC794;&#xB958;&#xBB3C;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xB192;&#xC740; &#xC120;&#xD638;&#xC640; &#xAC00;&#xC218;&#xBD84;&#xD574;&#xC758; &#xB3C5;&#xD2B9;&#xD55C; &#xD328;&#xD134;&#xC744; &#xACF5;&#xAC1C; &#xD588;&#xB2E4;. Ab2&#xC758; &#xCD09;&#xB9E4; &#xD65C;&#xB3D9; phenylmethylsulfonyl &#xBD88; &#xC18C;, &#xB5A0;&#xB4E4;&#xACE0; hydrolases&#xC758; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;&#xC5D0; &#xAE30;&#xCD08;&#xB97C; &#xB454; &#xC5B5;&#xC81C;&#xC81C;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC800;&#xD574; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;. 5-H4 &#xBC0F; 6B8-E12 &#xD588;&#xB2E4; &#xBCF5;&#xC81C; &#xD558; &#xACE0;, &#xB2E8;&#xC77C; &#xCCB4;&#xC778; &#xBCC0;&#xC218; &#xC870;&#xAC01; (scFvs)&#xC73C;&#xB85C; &#xB300;&#xC7A5;&#xADE0;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC0DD;&#xC0B0; &#xC815;&#xD654;. Amidolytic &#xBC0F; esterolytic &#xD65C;&#xB3D9;&#xC744; &#xC704;&#xD55C; &#xC6B4;&#xB3D9; &#xB9E4;&#xAC1C; &#xBCC0;&#xC218; Ab2 &#xBC0F; &#xADF8; scFv &#xD30C;&#xC0DD;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC720;&#xC0AC; &#xD588;&#xB2E4;. &#xBAA8;&#xBC29; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xD56D; &#xC6D0; &#xD2B9;&#xC815; &#xBD80;&#xBD84;&#xC758; 6B8-E12 subtilisin &#xAE30;&#xBCF8; &#xAD6C;&#xC870; &#xC720;&#xC0AC;&#xC131; &#xC5C6;&#xC74C;&#xC744; &#xBCF4;&#xC720; &#xD558; &#xACE0;, &#xBE44;&#xB85D; &#xBD80;&#xBAA8;&#xC758; antigen&#xC758; amidolytic &#xAE30;&#xB2A5; 4 &#xBC30;&#xB098; &#xB290;&#xB9B0; &#xAC00;&#xC18D; &#xC18D;&#xB3C4; &#xD568;&#xAED8; &#xC4F0; &#xC2E0;. 6B8-E12 Scfv&#xC758; &#xAC10;&#xC9C0; endopeptidase &#xD65C;&#xB3D9; &#xBD80;&#xC871; &#xCD09;&#xB9E4; &#xD65C;&#xB3D9;&#xC758; &#xC77C;&#xBC18;&#xC801;&#xC778; &#xC9C4;&#xD654;&#xC5D0; &#xAD00;&#xD55C; &#xD765;&#xBBF8;&#xB85C;&#xC6B4; &#xBB38;&#xC81C;&#xB97C; &#xBC1C;&#xC0DD; &#xC2DC;&#xD0B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. Silico &#xACF5;&#xAC1C; &#xC54C;&#xB824;&#xC9C4;&#xB41C; anti-protease &#xD56D; &#xCCB4;&#xC640; abzymes, &#xAC15;&#xB825;&#xD55C; &#xAD6C;&#xC870;&#xC801; &#xC720;&#xC0AC;&#xC131; Ab1 ab2&#xC758; 3D &#xBAA8;&#xB378; &#xAC01;&#xAC01;. &#xC774; &#xACB0;&#xACFC; idiotypic &#xB124;&#xD2B8;&#xC6CC;&#xD06C; &#xB5A0;&#xB4E4;&#xACE0; &#xD504;&#xB85C; &#xD14C;&#xC544;&#xC758; &#xCD09;&#xB9E4; &#xC7A5;&#xCE58;&#xB97C; &#xC7AC;&#xD604; &#xC0C1;&#xB2F9;&#xD55C; &#xC815;&#xB3C4;&#xB85C; &#xC218; &#xCD94;&#xAC00; &#xC694;&#xAD6C; &#xD558;&#xB294; &#xC5D0;&#xB108;&#xC9C0; &#xC544; &#xBBF8;&#xB4DC; &#xBCF8;&#xB4DC;&#xAC00; &#xC218; &#xBD84;&#xD574;&#xB97C; &#xAC00;&#xC18D;&#xD654; &#xD558;&#xB294; abzymes&#xC758; &#xC720;&#xB3C4; &#xB300; &#xD55C; &#xBA74;&#xC5ED; &#xCCB4;&#xACC4;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xD6A8;&#xC18C; &#xD65C;&#xC131; &#xC13C;&#xD130;&#xC758; &#xC774;&#xBBF8;&#xC9C0;&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xC720;&#xD6A8;&#xC131;&#xC744; &#xAC80;&#xC0AC; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0C5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xC548;&#xD2F0;-idiotypic &#xD56D; &#xCCB4;&#xC758; &#xBD80;&#xBAA8; &#xD56D; &#xC6D0; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC744; &#xBAA8;&#xBC29;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Proyecci&oacute;n de imagen funcional del centro activo de subtilisin Carlsberg por la red idiot&iacute;pica rindi&oacute; un anticuerpo anti-idiot&iacute;pica catal&iacute;tico con actividades endopeptidasa Amidasa y esterasa. Un anticuerpo monoclonal inhibidor a subtilisin (Ab1 5-H4) fue empleado como la plantilla para guiar la red idiot&iacute;pica para producir el catal&iacute;tico anti-idiot&iacute;pica Ab2 6B8-E12. Actividad proteol&iacute;tica de 6B8-E12 fue demostrada por Zimograf&iacute;a utilizando conjugado con fluoresce&iacute;na-BSA self-quenched y en un an&aacute;lisis acoplado detectar inactivaci&oacute;n Ab2-dependiente RNasa A. Escote de sustratos de p&eacute;ptido por 6B8-E12 revel&oacute; patrones distintos de la hidr&oacute;lisis con alta preferencia por residuos arom&aacute;ticos antes o despu&eacute;s el v&iacute;nculo scissile. La actividad catal&iacute;tica de Ab2 fue inhibida por fluoruro de phenylmethylsulfonyl, un inhibidor basado en mecanismos de serina hidrolasas. 5-H4 6B8-E12 fueron clonados, producida en Escherichia coli como fragmentos de variables de cadena simple (scFvs) y purificado. Par&aacute;metros cin&eacute;ticos para actividades amidol&iacute;tica y esterolytic fueron similares en Ab2 y su derivado scFv. Aunque la porci&oacute;n espec&iacute;fica de ant&iacute;geno de 6B8-E12 no posee ninguna semejanza de estructura primaria a subtilisin, imita proteol&iacute;ticas y amidol&iacute;tica funciones del ant&iacute;geno parental, aunque con 4 &oacute;rdenes de magnitud m&aacute;s lento aceleraciones. La falta de actividad endopeptidasa detectable de 6B8-E12 scFv plantea cuestiones interesantes sobre la evoluci&oacute;n general de la actividad catal&iacute;tica. El in silico modelos 3D de Ab1 y Ab2 revelaron fuerte similitud estructural para anticuerpos anti-proteasa conocidos y abzymes, respectivamente. Estos resultados indican que la red idiot&iacute;pica es capaz, en gran medida, de aparatos catal&iacute;tica de proteasas de serina y adem&aacute;s validar el uso de la proyecci&oacute;n de imagen de centros activos de la enzima por el sistema inmune para la inducci&oacute;n de abzymes acelerar la hidr&oacute;lisis de enlace amida energ&iacute;a exigentes.

Anticuerpo anti-idiot&iacute;pica imita la funci&oacute;n proteol&iacute;tica de ant&iacute;geno de padres.

Lethal factor (LF), a zinc-dependent protease of high specificity produced by Bacillus anthracis, is the effector component of the binary toxin that causes death in anthrax. New therapeutics targeting the toxin are required to reduce systemic anthrax-related fatalities. In particular, new insights into the LF catalytic mechanism will be useful for the development of LF inhibitors. We evaluated the minimal length required for formation of bona fide LF substrates using substrate phage display. Phage-based selection yielded a substrate that is cleaved seven times more efficiently by LF than the peptide targeted in the protein kinase MKK6. Site-directed mutagenesis within the metal-binding site in the LF active center and within phage-selected substrates revealed a complex pattern of LF-substrate interactions. The elementary steps of LF-mediated proteolysis were resolved by the stopped-flow technique. Pre-steady-state kinetics of LF proteolysis followed a four-step mechanism as follows: initial substrate binding, rearrangement of the enzyme-substrate complex, a rate-limiting cleavage step, and product release. Examination of LF interactions with metal ions revealed an unexpected activation of the protease by Ca(2+) and Mn(2+). Based on the available structural and kinetic data, we propose a model for LF-substrate interaction. Resolution of the kinetic and structural parameters governing LF activity may be exploited to design new LF inhibitors.

Substrate recognition of anthrax lethal factor examined by combinatorial and pre-steady-state kinetic approaches.

&#x81F4;&#x6B7B;&#x56E0;&#x5B50; (LF) &#x7684;&#x9AD8;&#x7279;&#x5F02;&#x6027;&#x7684;&#x70AD;&#x75BD;&#x82BD;&#x5B62;&#x6746;&#x83CC;&#xFF0C;&#x4EA7;&#x751F;&#x7684;&#x542B;&#x950C;&#x86CB;&#x767D;&#x9176;&#x662F;&#x4E8C;&#x8FDB;&#x5236;&#x6BD2;&#x7D20;&#x5728;&#x70AD;&#x75BD;&#x75C5;&#x5BFC;&#x81F4;&#x6B7B;&#x4EA1;&#x7684;&#x6548;&#x5E94;&#x7EC4;&#x4EF6;&#x3002;&#x65B0;&#x7597;&#x6CD5;&#x9776;&#x5411;&#x6BD2;&#x7D20;&#x9700;&#x964D;&#x4F4E;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x6027;&#x4E0E;&#x70AD;&#x75BD;&#x83CC;&#x6709;&#x5173;&#x7684;&#x6B7B;&#x4EA1;&#x4EBA;&#x6570;&#x3002;&#x5C24;&#x5176;&#x662F;&#xFF0C;LF &#x50AC;&#x5316;&#x673A;&#x7406;&#x7684;&#x65B0;&#x89C1;&#x89E3;&#x5C06;&#x6709;&#x52A9;&#x4E8E;&#x53D1;&#x5C55;&#x7684; LF &#x6291;&#x5236;&#x5242;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x8BC4;&#x4F30;&#x5F62;&#x6210;&#x7684;&#x5584;&#x610F; lf &#x7089;&#x886C;&#x5E95;&#x4F7F;&#x7528;&#x57FA;&#x677F;&#x566C;&#x83CC;&#x4F53;&#x663E;&#x793A;&#x6240;&#x9700;&#x7684;&#x6700;&#x5C0F;&#x957F;&#x5EA6;&#x3002;&#x57FA;&#x4E8E;&#x566C;&#x83CC;&#x4F53;&#x7684;&#x9009;&#x62E9;&#x4EA7;&#x751F;&#x4E86;&#x7528; LF &#x80BD;&#x86CB;&#x767D;&#x6FC0;&#x9176; MKK6 &#x7684;&#x76EE;&#x6807;&#x6BD4; 7 &#x500D;&#x66F4;&#x6709;&#x6548;&#x5730;&#x5206;&#x89E3;&#x7684;&#x57FA;&#x677F;&#x3002;&#x5B9A;&#x70B9;&#x7A81;&#x53D8;&#x548C;&#x566C;&#x83CC;&#x4F53;&#x9009;&#x62E9;&#x57FA;&#x8D28;&#x91D1;&#x5C5E;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x7AD9;&#x70B9;&#x5728; LF &#x6D3B;&#x52A8;&#x4E2D;&#x5FC3;&#x5185;&#x900F;&#x9732; LF-&#x57FA;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x7684;&#x590D;&#x6742;&#x7684;&#x56FE;&#x6848;&#x3002;&#x7531;&#x505C;&#x6D41;&#x6280;&#x672F;&#x89E3;&#x51B3; LF &#x4ECB;&#x5BFC;&#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x964D;&#x89E3;&#x7684;&#x57FA;&#x672C;&#x6B65;&#x9AA4;&#x3002;&#x524D;&#x7A33;&#x6001;&#x52A8;&#x529B;&#x5B66;&#x7814;&#x7A76; LF &#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x964D;&#x89E3;&#x9075;&#x5FAA;&#x56DB;&#x6B65;&#x673A;&#x5236;&#x5982;&#x4E0B;&#xFF1A; &#x521D;&#x59CB;&#x57FA;&#x6750;&#x7684;&#x7C98;&#x5408;&#x3001; &#x91CD;&#x6392;&#x7684;&#x9176;-&#x5E95;&#x7269;&#x590D;&#x5408;&#x7269;&#x3001; &#x901F;&#x7387;&#x9650;&#x5236;&#x5288;&#x88C2;&#x6B65;&#x9AA4;&#x548C;&#x4EA7;&#x54C1;&#x7684;&#x53D1;&#x884C;&#x3002;LF &#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x4E0E;&#x91D1;&#x5C5E;&#x79BB;&#x5B50;&#x7684;&#x68C0;&#x9A8C;&#x663E;&#x793A;&#x7531;&#x7ECF;&#x548C; Mn(2+) &#x86CB;&#x767D;&#x9176;&#x610F;&#x5916;&#x7684;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x57FA;&#x4E8E;&#x73B0;&#x6709;&#x7684;&#x7ED3;&#x6784;&#x548C;&#x52A8;&#x529B;&#x5B66;&#x6570;&#x636E;&#xFF0C;&#x63D0;&#x51FA; lf &#x7089;&#x886C;&#x5E95;&#x7684;&#x4E92;&#x52A8;&#x6A21;&#x5F0F;&#x3002;&#x53EF;&#x5229;&#x7528;&#x51B3;&#x8BAE;&#x7684;&#x7406;&#x4E8B; LF &#x6D3B;&#x52A8;&#x7684;&#x52A8;&#x529B;&#x5B66;&#x548C;&#x7ED3;&#x6784;&#x53C2;&#x6570;&#x8BBE;&#x8BA1;&#x65B0; LF &#x6291;&#x5236;&#x5242;&#x3002;

&#x57FA;&#x677F;&#x70AD;&#x75BD;&#x81F4;&#x6B7B;&#x56E0;&#x5B50;&#x7531;&#x7EC4;&#x5408;&#x548C;&#x524D;&#x7A33;&#x6001;&#x52A8;&#x529B;&#x5B66;&#x65B9;&#x6CD5;&#x5BA1;&#x67E5;&#x786E;&#x8BA4;&#x3002;

Facteur l&eacute;tal (LF), une prot&eacute;ase de zinc d&eacute;pendante d&#39;une sp&eacute;cificit&eacute; &eacute;lev&eacute;e produite par Bacillus anthracis, est la composante de l&#39;effecteur de la toxine binaire qui provoque la mort dans le charbon. Nouvelles th&eacute;rapies ciblant la toxine sont tenus de r&eacute;duire les accidents anthrax syst&eacute;miques. En particulier, mieux comprendre le m&eacute;canisme catalytique LF sera utile pour le d&eacute;veloppement d&#39;inhibiteurs de la LF. Nous avons &eacute;valu&eacute; la longueur minimale requise pour la formation de v&eacute;ritables substrats LF &agrave; l&#39;aide du phage display de substrat. S&eacute;lection fond&eacute;e sur les phages ont donn&eacute; un substrat qui est cliv&eacute; de sept fois plus efficacement par LF que le peptide vis&eacute; par la prot&eacute;ine kinase MKK6. Mutagen&egrave;se dirig&eacute;e au sein du site de liaison de m&eacute;tal dans le centre actif de LF et au sein de substrats phage s&eacute;lectionn&eacute;s ont r&eacute;v&eacute;l&eacute; un r&eacute;seau complexe d&#39;interactions LF-substrat. Les &eacute;tapes &eacute;l&eacute;mentaires de LF m&eacute;di&eacute;e par prot&eacute;olyse ont &eacute;t&eacute; r&eacute;solues par la technique de flux stopp&eacute;. Pr&eacute; &Eacute;tat cin&eacute;tique de prot&eacute;olyse LF suivi un m&eacute;canisme de quatre &eacute;tapes, comme suit : liaison du substrat initial, r&eacute;arrangement du complexe enzyme-substrat, cin&eacute;tiquement limitante &eacute;tape de clivage et produit de sortie. L&#39;examen des interactions LF avec des ions m&eacute;talliques a r&eacute;v&eacute;l&eacute; une inattendue de l&#39;activation de la prot&eacute;ase par Ca(2+) et Mn(2+). Bas&eacute; sur les donn&eacute;es structurelles et cin&eacute;tiques, nous proposons un mod&egrave;le d&#39;interaction de la LF du substrat. R&eacute;solution des param&egrave;tres cin&eacute;tiques et structurales qui r&eacute;gissent l&#39;activit&eacute; LF peut &ecirc;tre exploit&eacute;e pour la conception de nouveaux inhibiteurs de LF.

Reconnaissance du substrat du facteur l&eacute;tal de fi&egrave;vre charbonneuse examin&eacute; par combinatoires et pr&eacute; &eacute;tat des approches cin&eacute;tiques.

Letale Faktor (LF), ein Zink-abh&auml;ngige Protease hohe Spezifit&auml;t von Bacillus Anthracis, produziert ist die Effektor-Komponente des bin&auml;ren Toxins, der Tod in Milzbrand ausl&ouml;st. Sind neue Therapeutika, die Ausrichtung des Toxins ben&ouml;tigt, um systemische Milzbrand-bezogene Todesf&auml;lle zu senken. Insbesondere werden neue Einblicke in die LF katalytische Mechanismus n&uuml;tzlich f&uuml;r die Entwicklung von LF-Inhibitoren. Wir evaluieren die minimale L&auml;nge, die zur Bildung von bona-fide LF-Substraten mit Substrat Phage Display erforderlich sind. Phage-basierte Auswahl ergab ein Substrat, das sieben Mal effizienter als das Peptid gezielt in die Proteinkinase MKK6 von LF zerspaltet wird. Site-verwiesene Mutagenese innerhalb der Metal-Bindungsstelle im aktiven Zentrum LF und Phage ausgew&auml;hlte Substrate ergeben ein komplexes Muster von LF-Substrat Interaktionen. Die elementaren Schritte der LF-vermittelte Proteolyse wurden durch die gestoppt-Flow-Technik gel&ouml;st. Steady-State-Kinetik der LF Proteolyse folgte ein vier-Stufen-Verfahren wie folgt: erste Substrat Bindung, Neuordnung der Enzym-Substrat-Komplex, ein geschwindigkeitsbestimmende Spaltung Schritt und Produkt freigeben. Pr&uuml;fung der LF Wechselwirkung mit Metallionen ergeben eine unerwartete Aktivierung der Protease von Ca(2+) und Mn(2+). Auf der Grundlage der verf&uuml;gbaren strukturellen und kinetischen Daten, schlagen wir ein Modell f&uuml;r LF-Substrat-Wechselwirkung. Aufl&ouml;sung der kinetischen und strukturellen Parameter f&uuml;r LF-Aktivit&auml;t kann ausgenutzt werden, um neue LF-Inhibitoren zu entwerfen.

Substrat-Anerkennung von Milzbrand letale Faktor von kombinatorischen und pre-steady-State kinetische Ans&auml;tze gepr&uuml;ft.

Fattore letale (LF), una proteasi zinco-dipendente di alta specificit&agrave;, prodotto da Bacillus anthracis, &egrave; il componente effettrice della tossina binario che provoca la morte di antrace. Nuove terapie la tossina di targeting sono necessari per ridurre i decessi correlati all&#39;antrace sistemiche. In particolare, sar&agrave; utile per lo sviluppo di inibitori LF nuove intuizioni nel meccanismo catalitico LF. Abbiamo valutato la lunghezza minima necessaria per la formazione di bona fide substrati LF con substrato phage display. La selezione basata su fagi ha reso un substrato che &egrave; fenduto sette volte pi&ugrave; efficientemente da LF rispetto il peptide mirato nella chinasi di proteina MKK6. Mutagenesi luogo-diretta all&#39;interno del sito di metal-binding nel centro attivo della LF e all&#39;interno di substrati selezionati dei fagi ha rivelato un modello complesso di interazioni LF-substrato. Le operazioni elementari di proteolisi mediata da LF sono state risolte con la tecnica del flusso interrotto. Pre-steady-state cinetica della proteolisi LF seguito un meccanismo di quattro fasi come segue: substrato iniziale associazione, riarrangiamento del complesso enzima-substrato, una limitazione della velocit&agrave; passo clivaggio e prodotto di rilascio. Esame delle interazioni LF con gli ioni del metallo ha rivelato un&#39;inaspettata attivazione di proteasi di Ca(2+) e Mn(2+). Basato su dati cinetici e strutturali disponibili, proponiamo un modello di interazione LF-substrato. Risoluzione dei parametri cinetici e strutturali che disciplinano attivit&agrave; LF pu&ograve; essere sfruttata per la progettazione di nuovi inibitori di LF.

Riconoscimento del substrato del fattore letale di antrace esaminato da approcci cinetici combinatoriali e pre-steady-state.

&#x81F4;&#x6B7B;&#x56E0;&#x5B50; &#xFF08;LF&#xFF09;&#x3001;&#x4E9C;&#x925B;&#x306B;&#x4F9D;&#x5B58;&#x3057;&#x305F;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C6;&#x30A2;&#x30FC;&#x30BC;&#x70AD;&#x75BD;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x751F;&#x7523;&#x9AD8;&#x306E;&#x7279;&#x7570;&#x6027;&#x306F;&#x3001;&#x70AD;&#x75BD;&#x83CC;&#x306E;&#x6B7B;&#x3092;&#x5F15;&#x304D;&#x8D77;&#x3053;&#x3059;&#x30D0;&#x30A4;&#x30CA;&#x30EA;&#x6BD2;&#x7D20;&#x306E;&#x30A8;&#x30D5;&#x30A7;&#x30AF;&#x30BF;&#x30FC; &#x30B3;&#x30F3;&#x30DD;&#x30FC;&#x30CD;&#x30F3;&#x30C8;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x5168;&#x8EAB;&#x306E;&#x70AD;&#x75BD;&#x83CC;&#x95A2;&#x9023;&#x306E;&#x6B7B;&#x8005;&#x6570;&#x3092;&#x6E1B;&#x3089;&#x3059;&#x3001;&#x6BD2;&#x7D20;&#x3092;&#x30BF;&#x30FC;&#x30B2;&#x30C3;&#x30C8;&#x65B0;&#x3057;&#x3044;&#x6CBB;&#x7642;&#x304C;&#x5FC5;&#x8981;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x7279;&#x306B;&#x3001;LF &#x89E6;&#x5A92;&#x30E1;&#x30AB;&#x30CB;&#x30BA;&#x30E0;&#x306B;&#x65B0;&#x3057;&#x3044;&#x6D1E;&#x5BDF;&#x529B;&#x306F; LF &#x963B;&#x5BB3;&#x5264;&#x306E;&#x958B;&#x767A;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x5F79;&#x306B;&#x7ACB;&#x3064;&#x3067;&#x3057;&#x3087;&#x3046;&#x3002;&#x6211;&#x3005; &#x306F;&#x57FA;&#x677F;&#x30D5;&#x30A1;&#x30FC;&#x30B8;&#x30C7;&#x30A3;&#x30B9;&#x30D7;&#x30EC;&#x30A4;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x5584;&#x610F;&#x306E; LF &#x57FA;&#x677F;&#x306E;&#x5F62;&#x6210;&#x306B;&#x5FC5;&#x8981;&#x306A;&#x6700;&#x5C0F;&#x9650;&#x306E;&#x9577;&#x3055;&#x3092;&#x8A55;&#x4FA1;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x30D0;&#x30AF;&#x30C6;&#x30EA;&#x30AA;&#x30D5;&#x30A1;&#x30FC;&#x30B8; &#x30D9;&#x30FC;&#x30B9;&#x306E;&#x9078;&#x629E;&#x306F; 7 &#x500D;&#x3088;&#x308A;&#x52B9;&#x7387;&#x7684;&#x306B; LF &#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C6;&#x30A4;&#x30F3;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC; MKK6 &#x306E;&#x6A19;&#x7684;&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C9;&#x3088;&#x308A;&#x5207;&#x65AD;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x57FA;&#x677F;&#x3092;&#x3082;&#x305F;&#x3089;&#x3057;&#x305F;&#x3002;2P282 &#x30D0;&#x30AF;&#x30C6;&#x30EA;&#x30AA;&#x30D5;&#x30A1;&#x30FC;&#x30B8;&#x9078;&#x629E;&#x57FA;&#x677F;&#x5185;&#x304A;&#x3088;&#x3073; LF &#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x4E2D;&#x5FC3;&#x306E;&#x91D1;&#x5C5E;&#x7D50;&#x5408;&#x90E8;&#x4F4D;&#x306F; LF &#x57FA;&#x8CEA;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x306E;&#x8907;&#x96D1;&#x306A;&#x30D1;&#x30BF;&#x30FC;&#x30F3;&#x3092;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x5C0F;&#x5B66;&#x6821;&#x306E;&#x624B;&#x9806;&#x306E; LF &#x3092;&#x4ECB;&#x3059;&#x308B;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x5206;&#x89E3;&#x30B9;&#x30C8;&#x30C3;&#x30D7;&#x30C8; &#x30D5;&#x30ED;&#x30FC;&#x6CD5;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x89E3;&#x6C7A;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;LF &#x306E;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x5206;&#x89E3;&#x306E;&#x524D;&#x5B9A;&#x5E38;&#x72B6;&#x614B;&#x52D5;&#x529B;&#x5B66;&#x7D9A;&#x304F; 4 &#x3064;&#x306E;&#x30B9;&#x30C6;&#x30C3;&#x30D7;&#x306E;&#x30E1;&#x30AB;&#x30CB;&#x30BA;&#x30E0;&#x306F;&#x6B21;&#x306E;&#x3068;&#x304A;&#x308A;: &#x521D;&#x671F;&#x306E;&#x57FA;&#x8CEA;&#x7D50;&#x5408;&#x9175;&#x7D20;-&#x57FA;&#x8CEA;&#x8907;&#x5408;&#x4F53;&#x306E;&#x8A9E;&#x9806;&#x63DB;&#x3048;&#x3001;&#x30EC;&#x30FC;&#x30C8;&#x5236;&#x9650;&#x5288;&#x958B;&#x30B9;&#x30C6;&#x30C3;&#x30D7;&#x3001;&#x88FD;&#x54C1;&#x306E;&#x30EA;&#x30EA;&#x30FC;&#x30B9;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;LF &#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x3068;&#x91D1;&#x5C5E;&#x30A4;&#x30AA;&#x30F3;&#x3068;&#x306E;&#x691C;&#x8A0E;&#x3067;&#x306F;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;&#x304A;&#x3088;&#x3073; Mn(2+) &#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C6;&#x30A2;&#x30FC;&#x30BC;&#x306E;&#x4E88;&#x671F;&#x3057;&#x306A;&#x3044;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6;&#x5316;&#x3092;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x5229;&#x7528;&#x53EF;&#x80FD;&#x306A;&#x69CB;&#x9020;&#x3068;&#x901F;&#x5EA6;&#x8AD6;&#x7684;&#x30C7;&#x30FC;&#x30BF;&#x306B;&#x57FA;&#x3065;&#x3044;&#x3066;&#x3001;&#x6211;&#x3005; LF &#x57FA;&#x677F;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x306E;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x3092;&#x63D0;&#x6848;&#x3059;&#x308B;.LF &#x306E;&#x6D3B;&#x52D5;&#x3092;&#x898F;&#x5236;&#x69CB;&#x9020;&#x3068;&#x901F;&#x5EA6;&#x8AD6;&#x7684;&#x30D1;&#x30E9;&#x30E1;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x306E;&#x89E3;&#x50CF;&#x5EA6;&#x65B0;&#x3057;&#x3044; LF &#x963B;&#x5BB3;&#x5264;&#x306E;&#x8A2D;&#x8A08;&#x306B;&#x60AA;&#x7528;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x70AD;&#x75BD;&#x83CC;&#x81F4;&#x6B7B;&#x56E0;&#x5B50;&#x306E;&#x7D44;&#x5408;&#x305B;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x524D;&#x5B9A;&#x5E38;&#x72B6;&#x614B;&#x306E;&#x901F;&#x5EA6;&#x8AD6;&#x7684;&#x30A2;&#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30C1;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x691C;&#x8A0E;&#x306E;&#x57FA;&#x8CEA;&#x8A8D;&#x8B58;&#x3002;

&#xCE58;&#xBA85;&#xC801;&#xC778; &#xC694;&#xC778; (LF), &#xC544;&#xC5F0; &#xC885;&#xC18D; protease &#xADE0; &#xB4E4;&#xC740; &#xC81C;&#xC791;&#xD55C; &#xB192;&#xC740; &#xD2B9;&#xC774;&#xC131;&#xC758; &#xD0C4; &#xC800; &#xBCD1;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC8FD;&#xC74C;&#xC758; &#xC6D0;&#xC778; &#xC774;&#xC9C4; &#xB3C5; &#xC18C;&#xC758; &#xC774;&#xD399;&#xD130; &#xC694;&#xC18C;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB3C5; &#xC18C;&#xB97C; &#xB300;&#xC0C1;&#xC73C;&#xB85C; &#xCE58;&#xB8CC; &#xD558;&#xB294; &#xC0C8;&#xB85C;&#xC6B4; &#xD559; &#xC870;&#xC9C1;&#xC758; &#xD0C4; &#xC800; &#xADE0; &#xAD00;&#xB828; &#xC0AC;&#xB9DD;&#xC790;&#xB97C; &#xC904;&#xC774;&#xAE30; &#xC704;&#xD574; &#xD544;&#xC694; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xD2B9;&#xD788;, LF &#xCD09;&#xB9E4; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC0C8;&#xB85C;&#xC6B4; &#xD1B5;&#xCC30;&#xB825;&#xC740; LF &#xC5B5;&#xC81C;&#xC81C;&#xC758; &#xAC1C;&#xBC1C;&#xC744; &#xC704;&#xD574; &#xC720;&#xC6A9;&#xD560; &#xAC83; &#xC774;&#xB2E4;. &#xAE30;&#xD310; &#xD30C;&#xC9C0; &#xB514;&#xC2A4;&#xD50C;&#xB808;&#xC774; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xD0C0;&#xACE0; &#xB09C; LF &#xAE30;&#xD310;&#xC758; &#xD615;&#xC131;&#xC5D0; &#xD544;&#xC694;&#xD55C; &#xCD5C;&#xC18C; &#xAE38;&#xC774; &#xD3C9;&#xAC00; &#xD588;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC0B4; &#xADE0; &#xC18C; &#xAE30;&#xBC18; &#xC120;&#xD0DD; &#xD3A9; &#xD2F0; &#xB4DC; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xD0A4; &#xB2C8; &#xC544; mkk6&#xC5D0;&#xC11C; &#xBCF4;&#xB2E4; LF&#xC5D0;&#xC11C; 7 &#xBC30; &#xB354; &#xD6A8;&#xC728;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xBD99;&#xC5B4; &#xAE30;&#xD310; &#xB098;&#xC654;&#xACE0;. &#xC0B4; &#xADE0; &#xC18C; &#xC120;&#xD0DD; &#xAE30;&#xD310; &#xBC0F; LF &#xD65C;&#xC131; &#xC911;&#xC2EC;&#xC5D0; &#xAE08;&#xC18D; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8; &#xB0B4;&#xC758; mutagenesis &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8; &#xAC10;&#xB3C5; LF &#xAE30;&#xD310; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC758; &#xBCF5;&#xC7A1; &#xD55C; &#xD328;&#xD134;&#xC744; &#xACF5;&#xAC1C; &#xD588;&#xB2E4;. LF &#xC911;&#xC7AC; &#xBCA0;&#xC774;&#xC2A4;&#xC758; &#xCD08;&#xB4F1; &#xB2E8;&#xACC4; &#xC911;&#xC9C0; &#xD750;&#xB984; &#xAE30;&#xC220;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xD574;&#xACB0; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. LF &#xBCA0;&#xC774;&#xC2A4;&#xC758; &#xC0AC;&#xC804; steady &#xC0C1;&#xD0DC; &#xC18D;&#xB3C4; &#xB860; &#xB2E4;&#xC74C; 4 &#xB2E8;&#xACC4; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;&#xC5D0; &#xB2E4;&#xC74C;&#xACFC; &#xAC19;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;: &#xCD08;&#xAE30; &#xAE30;&#xD310; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;, &#xD6A8;&#xC18C;-&#xAE30;&#xC9C8; &#xBCF5;&#xD569;&#xCCB4;&#xC758; &#xC7AC;&#xBC30;&#xCE58;, &#xC18D;&#xB3C4; &#xC81C;&#xD55C; &#xBD84;&#xC5F4; &#xB2E8;&#xACC4; &#xBC0F; &#xC81C;&#xD488; &#xCD9C;&#xC2DC; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. LF &#xC0C1;&#xD638; &#xAE08;&#xC18D; &#xC774;&#xC628;&#xC758; &#xC2DC;&#xD5D8; ca(2+)&#xC640; mn(2+)&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xC608;&#xAE30;&#xCE58; &#xC54A;&#xC740; &#xD65C;&#xC131;&#xD654;&#xB97C; &#xACF5;&#xAC1C; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC0AC;&#xC6A9;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xB294; &#xAD6C;&#xC870; &#xBC0F; &#xC6B4;&#xB3D9; &#xB370;&#xC774;&#xD130;&#xB97C; &#xBC14;&#xD0D5;&#xC73C;&#xB85C;, &#xC6B0;&#xB9AC; LF &#xAE30;&#xD310;&#xC758; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xBAA8;&#xB378;&#xC744; &#xC81C;&#xC548; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. LF &#xD65C;&#xB3D9; &#xAD00;&#xB9AC; &#xC6B4;&#xB3D9; &#xBC0F; &#xAD6C;&#xC870; &#xB9E4;&#xAC1C; &#xBCC0;&#xC218;&#xC758; &#xD574;&#xC0C1;&#xB3C4; &#xC0C8;&#xB85C;&#xC6B4; LF &#xC5B5;&#xC81C;&#xC81C; &#xB514;&#xC790;&#xC778; &#xC545;&#xC6A9; &#xB420; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xD0C4; &#xC800; &#xADE0; &#xCE58;&#xBA85;&#xC801;&#xC778; &#xC694;&#xC18C; &#xC870;&#xD569; &#xBC0F; &#xC0AC;&#xC804; steady &#xC0C1;&#xD0DC; &#xC6B4;&#xB3D9; &#xBC29;&#xBC95;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xAC80;&#xC0AC;&#xC758; &#xAE30;&#xD310; &#xC778;&#xC2DD;.

Factor letal (LF), una proteasa dependiente de zinc de alta especificidad, producida por el Bacillus anthracis, es el componente generador de efectos de la toxina binaria que provoca la muerte en el &aacute;ntrax. Nuevas terapias dirigidas a la toxina debe reducir muertes relacionadas con el &aacute;ntrax sist&eacute;micas. En particular, nuevas perspectivas sobre el mecanismo catal&iacute;tico LF ser&aacute; &uacute;tiles para el desarrollo de inhibidores de LF. Evaluamos la longitud m&iacute;nima requerida para la formaci&oacute;n de sustratos de LF bona fide usando phage display de sustrato. Selecci&oacute;n basada en Fago rindi&oacute; un sustrato que es dividido en siete veces m&aacute;s eficientemente por el LF que el p&eacute;ptido en la prote&iacute;na quinasa MKK6. Mutag&eacute;nesis sitio-dirigida dentro del sitio de uni&oacute;n a metal en el centro activo de LF a sustratos seleccionados por el fago revel&oacute; un patr&oacute;n complejo de interacciones LF-sustrato. Los pasos elementales de la prote&oacute;lisis mediada por LF se resolvieron mediante la t&eacute;cnica de flujo detenido. Pre-steady-state cin&eacute;tica de prote&oacute;lisis LF sigui&oacute; un mecanismo de cuatro pasos como sigue: atascamiento del substrato inicial, reordenamiento del complejo enzima-sustrato, tarifa-limitaci&oacute;n paso de escote y lanzamiento de producto. Examen de las interacciones LF con iones met&aacute;licos revel&oacute; una activaci&oacute;n inesperada de la proteasa por CA y Mn(2+). Partiendo de los datos cin&eacute;ticos y estructurales, se propone un modelo de interacci&oacute;n del sustrato-LF. Resoluci&oacute;n de los par&aacute;metros cin&eacute;ticos y estructurales LF actividad puede explotarse para dise&ntilde;ar nuevos inhibidores de LF.

Reconocimiento del sustrato del factor mortal &aacute;ntrax, examinada enfoques cin&eacute;ticos combinatorios y pre-steady-state.

&#x9525;&#x7684;&#x810A;&#x690E;&#x52A8;&#x7269;&#x89C6;&#x7F51;&#x819C;&#x7684;&#x611F;&#x5149;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7EC8;&#x6B62;&#x4ED6;&#x4EEC;&#x5BF9;&#x5149;&#x7EBF;&#x7684;&#x53CD;&#x5E94;&#x901F;&#x5EA6;&#x5927;&#x5927;&#x8D85;&#x8FC7;&#x6746;&#x611F;&#x53D7;&#x5668;&#x3002;&#x4F46;&#x662F;&#xFF0C;&#x4F9D;&#x636E;&#x6B64;&#x5FEB;&#x901F;&#x53CD;&#x5E94;&#x7EC8;&#x6B62;&#x5728;&#x9525;&#x7684;&#x5206;&#x5B50;&#x673A;&#x5236;&#x4E86;&#x89E3;&#x5F97;&#x5F88;&#x5C11;&#x3002;&#x8FD9;&#x91CC;&#x4ECB;&#x7ECD;&#x7684;&#x5B9E;&#x9A8C;&#x6D4B;&#x8BD5;&#x76F8;&#x5173;&#x7684;&#x4E24;&#x4E2A;&#x5047;&#x8BBE;&#xFF1A; &#x7B2C;&#x4E00;&#xFF0C;&#x8FC5;&#x901F;&#x8150;&#x70C2;&#x7387;&#x7684; metarhodopsin (&#x5143;) &#x4E8C;&#x7EA2;&#x654F;&#x9525;&#x4E2D;&#x7684;&#x53D6;&#x51B3;&#x4E8E;&#x89C6;&#x7F51;&#x819C; 9-&#x7532;&#x57FA;&#x96C6;&#x56E2;&#x4E0E;&#x7EC6;&#x83CC;&#x89C6;&#x7D2B;&#x7EA2;&#x8D28;&#x90E8;&#x5206;&#x7684;&#x8272;&#x7D20;&#x5206;&#x5B50;&#x4E4B;&#x95F4;&#x7684;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x548C;&#x7B2C;&#x4E8C;&#xFF0C;&#x8FD9;&#x8FC5;&#x901F;&#x5143;&#x4E8C;&#x8870;&#x51CF;&#x662F;&#x4ECE;&#x9971;&#x548C;&#x7684;&#x7EA2;&#x654F;&#x9525;&#x660E;&#x4EAE;&#x7684;&#x5149;&#x7EBF;&#x7167;&#x5C04;&#x540E;&#x5FEB;&#x901F;&#x6062;&#x590D;&#x7684;&#x5173;&#x952E;&#x3002;&#x8272;&#x7D20;&#x5149;&#x663E;&#x5FAE;&#x6D4B;&#x91CF;&#x3001; &#x89C6;&#x9EC4;&#x9187;&#x751F;&#x4EA7;&#x3001; microfluorometric &#x6D4B;&#x91CF;&#x548C;&#x877E;&#x8788;&#x9525;&#x7684;&#x95EA;&#x5B58;&#x54CD;&#x5E94;&#x7684;&#x5355;&#x4E2A;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x7535;&#x751F;&#x7406;&#x5F55;&#x97F3;&#x88AB;&#x6267;&#x884C;&#x6765;&#x68C0;&#x9A8C;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x5047;&#x8BF4;&#x3002;&#x5728;&#x6240;&#x6709;&#x60C5;&#x51B5;&#x4E0B;&#xFF0C;&#x9525;&#x72B6;&#x7EC6;&#x80DE;&#x88AB;&#x6F02;&#x767D;&#x548C;&#x5176;&#x89C6;&#x89C9;&#x8272;&#x7D20;&#x518D;&#x751F;&#x4E0E;&#x4EFB;&#x4E00; 11 &#x72EC;&#x8054;&#x4F53;&#x89C6;&#x7F51;&#x819C;&#x6216; 11-&#x72EC;&#x8054;&#x4F53; 9-&#x4E59;&#x89C6;&#x7F51;&#x819C;&#xFF0C;&#x89C6;&#x7F51;&#x819C;&#x7F3A;&#x4E4F; 9-&#x7532;&#x57FA;&#x7EC4;&#x7684;&#x76F8;&#x4F3C;&#x4E4B;&#x5904;&#x3002;&#x5143;&#x4E8C;&#x8870;&#x51CF;&#x6162;&#x56DB;&#x5230;&#x4E94;&#x500D;&#xFF0C;&#x968F;&#x540E;&#x89C6;&#x9EC4;&#x9187;&#x751F;&#x4EA7;&#x662F;&#x5728;&#x7F3A;&#x4E4F;&#x89C6;&#x7F51;&#x819C; 9-&#x7532;&#x57FA;&#x96C6;&#x56E2;&#x7EA2;&#x654F;&#x9525;&#x6162;&#x4E09;&#x81F3;&#x56DB;&#x500D;&#x3002;&#x8FD9;&#x4F34;&#x968F;&#x7740;&#x4ECE;&#x9971;&#x548C;&#x9525;&#x540E;&#x66B4;&#x9732;&#x4E8E;&#x5149;&#x660E;&#x7F3A;&#x4E4F; 9-&#x7532;&#x57FA;&#x7EC4;&#x4E2D;&#x6062;&#x590D;&#x7684;&#x901F;&#x5EA6;&#x5927;&#x5E45;&#x4E0B;&#x964D; (&gt; 0.1%&#x89C6;&#x89C9;&#x8272;&#x7D20;&#x5149;&#x6D3B;&#x5316;&#xFF09; &#x4F46;&#x4E0D;&#x662F;&#x8C03;&#x6697;&#x706F;&#x5149;&#x3002;Phototransduction &#x5173;&#x65AD;&#x8FC7;&#x7A0B;&#x7684;&#x6570;&#x5B66;&#x6A21;&#x578B;&#x663E;&#x793A;&#x53EF;&#x4EE5;&#x6162;&#x5143;&#x8870;&#x51CF;&#x7684; 9 &#x89E3;&#x91CA;&#x7684;&#x7D2B;&#x5916;&#x5149;&#x54CD;&#x5E94;&#x6162;&#x590D;&#x82CF;-&#x4E59;&#x89C6;&#x89C9;&#x8272;&#x7D20;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7ED3;&#x679C;&#x8868;&#x660E;&#x89C6;&#x7F51;&#x819C; 9-&#x7532;&#x57FA;&#x96C6;&#x56E2;&#x9752;&#x7750;&#x5143;&#x4E8C;&#x7684;&#x8FC5;&#x901F;&#x8870;&#x51CF;&#x548C;&#x5FEB;&#x901F;&#x54CD;&#x5E94;&#x6062;&#x590D;&#x540E;&#x7EA2;&#x654F;&#x9525;&#x4E2D;&#x7684;&#x660E;&#x4EAE;&#x5149;&#x7EBF;&#x7167;&#x5C04;&#x7684;&#x7A7A;&#x95F4;&#x4F4D;&#x963B;&#x53D1;&#x8272;&#x56E2;-&#x7EC6;&#x83CC;&#x89C6;&#x7D2B;&#x7EA2;&#x8D28;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x7684;&#x5FC5;&#x8981;&#x6761;&#x4EF6;&#x3002;

&#x89C6;&#x7F51;&#x819C; 9-&#x7532;&#x57FA;&#x96C6;&#x56E2;&#x8FC5;&#x901F;&#x5143;&#x4E8C;&#x8870;&#x51CF;&#x548C; phototransduction &#x6DEC;&#x706B;&#x7EA2;&#x9525;&#x4E2D;&#x81F3;&#x5173;&#x91CD;&#x8981;&#x3002;

Cone photoreceptors of the vertebrate retina terminate their response to light much faster than rod photoreceptors. However, the molecular mechanisms underlying this rapid response termination in cones are poorly understood. The experiments presented here tested two related hypotheses: first, that the rapid decay rate of metarhodopsin (Meta) II in red-sensitive cones depends on interactions between the 9-methyl group of retinal and the opsin part of the pigment molecule, and second, that rapid Meta II decay is critical for rapid recovery from saturation of red-sensitive cones after exposure to bright light. Microspectrophotometric measurements of pigment photolysis, microfluorometric measurements of retinol production, and single-cell electrophysiological recordings of flash responses of salamander cones were performed to test these hypotheses. In all cases, cones were bleached and their visual pigment was regenerated with either 11-cis retinal or with 11-cis 9-demethyl retinal, an analogue of retinal lacking the 9-methyl group. Meta II decay was four to five times slower and subsequent retinol production was three to four times slower in red-sensitive cones lacking the 9-methyl group of retinal. This was accompanied by a significant slowing of the recovery from saturation in cones lacking the 9-methyl group after exposure to bright (>0.1% visual pigment photoactivated) but not dim light. A mathematical model of the turn-off process of phototransduction revealed that the slower recovery of photoresponse can be explained by slower Meta decay of 9-demethyl visual pigment. These results demonstrate that the 9-methyl group of retinal is required for steric chromophore-opsin interactions that favor both the rapid decay of Meta II and the rapid response recovery after exposure to bright light in red-sensitive cones.

The 9-methyl group of retinal is essential for rapid Meta II decay and phototransduction quenching in red cones.

C&ocirc;nes photor&eacute;cepteurs de la r&eacute;tine des vert&eacute;br&eacute;s r&eacute;silier leur r&eacute;action &agrave; la lumi&egrave;re beaucoup plus rapidement que les photor&eacute;cepteurs de la tige. Cependant, les m&eacute;canismes mol&eacute;culaires qui sous-tendent cette r&eacute;siliation d&#39;intervention rapide dans les c&ocirc;nes sont mal compris. Les exp&eacute;riences pr&eacute;sent&eacute;es ici test&eacute; deux hypoth&egrave;ses connexes : Premi&egrave;rement, que la rapide d&eacute;composition taux de m&eacute;tarhodopsine (m&eacute;ta) II en c&ocirc;nes sensibles au rouge d&eacute;pend des interactions entre le groupe m&eacute;thyl-9 de la r&eacute;tine et la partie de l&#39;opsine de la mol&eacute;cule de pigment, et Deuxi&egrave;mement, cette d&eacute;croissance rapide de Meta II est essentiel pour une restauration rapide de la saturation des c&ocirc;nes sensibles au rouge apr&egrave;s exposition &agrave; une lumi&egrave;re vive. Mesures histochimique de la photolyse de pigment, microfluorometric mesures de production de r&eacute;tinol et monocellulaires enregistrements &eacute;lectrophysiologiques des r&eacute;ponses flash de c&ocirc;nes de salamandre ont &eacute;t&eacute; effectu&eacute;es pour tester ces hypoth&egrave;ses. Dans tous les cas, les c&ocirc;nes ont &eacute;t&eacute; blanchis et leur pigment visuel a &eacute;t&eacute; r&eacute;g&eacute;n&eacute;r&eacute; avec soit r&eacute;tinal 11-cis ou avec 9 11-cis-d&eacute;m&eacute;thyl r&eacute;tinienne, un analogue de la r&eacute;tine, manque le groupe m&eacute;thyl-9. D&eacute;sint&eacute;gration Meta II &eacute;tait quatre &agrave; cinq fois plus lente et la production ult&eacute;rieure de r&eacute;tinol &eacute;tait trois &agrave; quatre fois plus lente dans les c&ocirc;nes sensibles au rouge manque le groupe m&eacute;thyl-9 de la r&eacute;tine. Cela s&#39;est accompagn&eacute; d&#39;un ralentissement significatif de la reprise de la saturation en c&ocirc;nes manque le groupe m&eacute;thyl-9 apr&egrave;s exposition &agrave; vif (&gt; photoactiv&eacute;es pigment visuel 0,1 %) mais pas la p&eacute;nombre. Un mod&egrave;le math&eacute;matique du processus de phototransduction Turn-off a r&eacute;v&eacute;l&eacute; que la reprise plus lente de la photor&eacute;ponse peut s&#39;expliquer par la lente d&eacute;composition de Meta de 9-d&eacute;m&eacute;thyl pigment visuel. Ces r&eacute;sultats d&eacute;montrent que le groupe m&eacute;thyl-9 de la r&eacute;tine est n&eacute;cessaire pour les interactions st&eacute;riques chromophore-opsine qui favorisent tant la d&eacute;croissance rapide de Meta II et la r&eacute;cup&eacute;ration de r&eacute;action rapide apr&egrave;s exposition &agrave; une lumi&egrave;re vive en c&ocirc;nes sensibles au rouge.

Groupe 9-m&eacute;thyle de la r&eacute;tine est essentiel pour d&eacute;croissance rapide de Meta II et phototransduction trempe en c&ocirc;nes rouges.

Kegel Photorezeptoren der Wirbeltiere Netzhaut k&uuml;ndigen ihre Reaktion auf Licht viel schneller als Stab Photorezeptoren. Allerdings sind die molekularen Mechanismen dieser schnelle Reaktion-Terminierung in Zapfen schlecht verstanden. Die hier vorgestellten Experimente getestet zwei &auml;hnliche Hypothesen: Erstens, dass die schnelle Rate der Metarhodopsin (Meta) zerfallen II in rot-sensible Zapfen h&auml;ngt von Interaktionen zwischen der 9-Methyl-Gruppe der Retinal und dem Opsin-Teil des Molek&uuml;ls Pigment, und zweitens, dass schnelle Meta II-Verwesung ist entscheidend f&uuml;r rasche Erholung von S&auml;ttigung von rot-sensible Kegel nach Exposition gegen&uuml;ber hellem Licht. Microspectrophotometric-Messungen von Pigment-Photolyse, Microfluorometric Messungen der Retinol-Produktion und einzellige elektrophysiologische Aufnahmen der Blitz Antworten von Salamander Kegel wurden durchgef&uuml;hrt, um diese Hypothesen zu testen. In allen F&auml;llen waren Zapfen gebleicht und ihre Sehpigment wurde regeneriert, mit entweder 11-Cis-Retinal oder 11-Cis-9-Heptyl Retinal, ein Analogon des Retinal fehlt die 9-Methyl-Gruppe. Meta II Zerfall war vier-bis f&uuml;nfmal langsamer und nachfolgende Retinol-Produktion war in rot-sensible Zapfen fehlt die 9-Methylgruppe des Retinal drei-bis viermal langsamer. Dies wurde begleitet durch eine deutliche Verlangsamung der Erholung von S&auml;ttigung in Zapfen fehlt die 9-Methyl-Gruppe nach Exposition mit hellen (&gt; 0,1 % Sehpigment Photoactivated) aber nicht dim Licht. Ein mathematisches Modell des Prozesses Abzweigung der Signaltransduktion ergab, dass die langsamere Erholung von Filmprofilen langsamer Meta-Verfall von 9 erkl&auml;rt werden kann-Heptyl Sehpigment. Diese Ergebnisse zeigen, dass die 9-Methylgruppe des Retinal f&uuml;r sterische Chromophor-Opsin Interaktionen ben&ouml;tigt, die die Schnelle Verwesung Meta II und die schnelle Reaktion-Erholung nach Exposition mit hellem Licht im rot-sensible Zapfen zu beg&uuml;nstigen.

Die 9-Methylgruppe des Retinal ist f&uuml;r schnelle Meta II Verwesung und Signaltransduktion in roten Zapfen abschrecken.

Fotorecettori cono della retina Vertebrata terminano la loro risposta alla luce molto pi&ugrave; veloce di fotorecettori rod. Tuttavia, i meccanismi molecolari sottostanti questa terminazione di risposta rapida in coni sono capiti male. Gli esperimenti presentati qui testato due ipotesi correlate: primo, che il rapido decadimento tasso di essa (Meta) II in coni sensibili al rosso dipende da interazioni tra il gruppo 9-metil della retina e la parte di opsin della molecola del pigmento, e in secondo luogo, quello rapido decadimento Meta II &egrave; fondamentale per il rapido recupero dalla saturazione dei coni sensibili al rosso dopo l&#39;esposizione alla luce intensa. Microspectrophotometric misure di fotolisi di pigmento, microfluorometric le misurazioni di produzione di retinolo e cella singola registrazioni elettrofisiologiche delle risposte flash di coni Salamandra sono state effettuate per verificare queste ipotesi. In tutti i casi, sono stati sbiancati coni e loro pigmento visivo &egrave; stato rigenerato con entrambi 11-cis retinale o con 9 11-cis-demethyl retinica, un analogo della retina manca il gruppo 9-metil. Decadimento meta II era quattro o cinque volte pi&ugrave; lento e produzione di retinolo successivi tre o quattro volte pi&ugrave; lento in coni sensibili al rosso privo del gruppo 9-metil retinica. Questo &egrave; stato accompagnato da un significativo rallentamento del recupero dalla saturazione in coni manca il gruppo metile 9 dopo l&#39;esposizione al luminoso (&amp;gt; 0.1% pigmento visivo photoactivated), ma non dim light. Un modello matematico del processo bivio di phototransduction ha rivelato che il recupero pi&ugrave; lento di fotorisposta pu&ograve; essere spiegato dal pi&ugrave; lento decadimento Meta di 9-demethyl pigmento visivo. Questi risultati dimostrano che il gruppo 9-metil della retina &egrave; richiesto per le interazioni sterico cromoforo-opsin che favoriscono il rapido deperimento del Meta II sia il recupero di una risposta rapida dopo l&#39;esposizione alla luce brillante in coni sensibili al rosso.

Il gruppo 9-metil retinica &egrave; essenziale per rapido decadimento Meta II e phototransduction tempra in coni rossi.

&#x810A;&#x690E;&#x52D5;&#x7269;&#x306E;&#x7DB2;&#x819C;&#x306E;&#x9310;&#x4F53;&#x5149;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x6746;&#x3088;&#x308A;&#x5927;&#x3044;&#x306B;&#x901F;&#x304F;&#x305D;&#x306E;&#x5149;&#x5FDC;&#x7B54;&#x3092;&#x7D42;&#x4E86;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x305F;&#x3060;&#x3057;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x6025;&#x901F;&#x306A;&#x5FDC;&#x7B54;&#x306E;&#x7D42;&#x4E86;&#x6642;&#x306B;&#x5186;&#x9310;&#x5F62;&#x306E;&#x5206;&#x5B50;&#x30E1;&#x30AB;&#x30CB;&#x30BA;&#x30E0;&#x306F;&#x3088;&#x304F;&#x308F;&#x304B;&#x3063;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x306B;&#x63D0;&#x793A;&#x5B9F;&#x9A13;&#x306B;&#x306F;&#x3001;2 &#x3064;&#x306E;&#x95A2;&#x9023;&#x3059;&#x308B;&#x4EEE;&#x8AAC;&#xFF1A; &#x6700;&#x521D;&#x306B;&#x3001;&#x6025;&#x901F;&#x306A;&#x30E1;&#x30BF;&#x30ED;&#x30C9;&#x30D7;&#x30B7;&#x30F3; (&#x30E1;&#x30BF;) &#x306E;&#x7387;&#x3092;&#x5D29;&#x58CA; II &#x8D64;&#x611F;&#x53D7;&#x6027;&#x9310;&#x4F53;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x30EC;&#x30C1;&#x30CA;&#x30FC;&#x30EB;&#x306E; 9 &#x30E1;&#x30C1;&#x30EB; &#x30B0;&#x30EB;&#x30FC;&#x30D7;&#x3068;&#x8272;&#x7D20;&#x5206;&#x5B50;&#x306E;&#x30AA;&#x30D7;&#x30B7;&#x30F3;&#x90E8;&#x5206;&#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x306B;&#x4F9D;&#x5B58;&#x3057;&#x3001;&#x305D;&#x306E;&#x6025;&#x901F;&#x306A;&#x30E1;&#x30BF; II &#x5D29;&#x58CA;&#x7B2C;&#x4E8C;&#x306B;&#x3001;&#x660E;&#x308B;&#x3044;&#x5149;&#x3078;&#x306E;&#x66B4;&#x9732;&#x5F8C;&#x306E;&#x5F69;&#x5EA6;&#x306E;&#x8D64;&#x611F;&#x53D7;&#x6027;&#x9310;&#x4F53;&#x304B;&#x3089;&#x6025;&#x901F;&#x306A;&#x56DE;&#x5FA9;&#x306B;&#x3068;&#x3063;&#x3066;&#x91CD;&#x8981;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x9854;&#x6599;&#x306E;&#x5149;&#x5206;&#x89E3;&#x306E;&#x6E2C;&#x5B9A;&#x3001;&#x30EC;&#x30C1;&#x30CE;&#x30FC;&#x30EB;&#x751F;&#x7523;&#x306E;&#x81EA;&#x52D5;&#x6E2C;&#x5B9A;&#x3068;&#x5358;&#x4E00;&#x30BB;&#x30EB;&#x306E;&#x96FB;&#x6C17;&#x751F;&#x7406;&#x5B66;&#x7684;&#x9332;&#x97F3;&#x30D5;&#x30E9;&#x30C3;&#x30B7;&#x30E5;&#x5FDC;&#x7B54;&#x306E;&#x30B5;&#x30F3;&#x30B7;&#x30E7;&#x30A6;&#x30A6;&#x30AA;&#x306E;&#x5186;&#x9310;&#x5F62;&#x306E;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x4EEE;&#x8AAC;&#x3092;&#x30C6;&#x30B9;&#x30C8;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x884C;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x3059;&#x3079;&#x3066;&#x306E;&#x30B1;&#x30FC;&#x30B9;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x30B3;&#x30FC;&#x30F3;&#x6F02;&#x767D;&#x3055;&#x308C;&#x3001;&#x305D;&#x306E;&#x8996;&#x8272;&#x7D20; 11-&#x30B7;&#x30B9;&#x578B;&#x30EC;&#x30C1;&#x30CA;&#x30FC;&#x30EB;&#x306E;&#x3044;&#x305A;&#x308C;&#x304B;&#x307E;&#x305F;&#x306F; 11-&#x30B7;&#x30B9; 9 &#x518D;&#x751F;&#x6210;&#x3055;&#x308C;&#x305F;-&#x30EC;&#x30C1;&#x30CA;&#x30FC;&#x30EB; &#x30A2;&#x30CA;&#x30ED;&#x30B0; 9 &#x30E1;&#x30C1;&#x30EB; &#x30B0;&#x30EB;&#x30FC;&#x30D7;&#x3092;&#x6B20;&#x3051;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x30EC;&#x30C1;&#x30CA;&#x30FC;&#x30EB;&#x306E;&#x6291;&#x5236;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30E1;&#x30BF; II &#x6E1B;&#x8870; 4 &#xFF5E; 5 &#x500D;&#x9045;&#x3044;&#x3068;&#x5F8C;&#x7D9A;&#x30EC;&#x30C1;&#x30CE;&#x30FC;&#x30EB;&#x751F;&#x7523;&#x306F; 3 &#xFF5E; 4 &#x500D;&#x9045;&#x3044;&#x306E;&#x8D64;&#x611F;&#x53D7;&#x6027;&#x9310;&#x4F53; 9 &#x30E1;&#x30C1;&#x30EB; &#x30B0;&#x30EB;&#x30FC;&#x30D7; &#x30EC;&#x30C1;&#x30CA;&#x30FC;&#x30EB;&#x306E;&#x6B20;&#x3051;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3060;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x306F;&#x98FD;&#x548C; 9 &#x30E1;&#x30C1;&#x30EB; &#x30B0;&#x30EB;&#x30FC;&#x30D7;&#x3092;&#x6B20;&#x3051;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x660E;&#x308B;&#x3044;&#x3078;&#x306E;&#x66B4;&#x9732;&#x5F8C;&#x306E;&#x5186;&#x9310;&#x5F62;&#x304B;&#x3089;&#x306E;&#x56DE;&#x5FA9;&#x306E;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x6E1B;&#x901F;&#x3067;&#x540C;&#x884C;&#x3057;&#x305F; &#xFF08;&#x76EE; 0.1% &#x8996;&#x8272;&#x7D20;&#x751F;&#x3058;&#x308B;&#x5149;&#x6D3B;&#x6027;&#x7684;) &#x3057;&#x304B;&#x3057;&#x3001;&#x8584;&#x6697;&#x3044;&#x5149;&#x3067;&#x306F;&#x306A;&#x3044;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x5149;&#x4F1D;&#x5C0E;&#x306E;&#x30BF;&#x30FC;&#x30F3;&#x30AA;&#x30D5;&#x904E;&#x7A0B;&#x306E;&#x6570;&#x7406;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x306E;&#x5149;&#x5FDC;&#x7B54;&#x306E;&#x9045;&#x3044;&#x56DE;&#x5FA9; 9 &#x306E;&#x9045;&#x3044;&#x30E1;&#x30BF;&#x5D29;&#x58CA;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x8AAC;&#x660E;&#x3067;&#x304D;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;-&#x8996;&#x8272;&#x7D20;&#x3092;&#x6291;&#x5236;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x306F;&#x3001;&#x7DB2;&#x819C;&#x306E; 9 &#x30E1;&#x30C1;&#x30EB; &#x30B0;&#x30EB;&#x30FC;&#x30D7;&#x304C;&#x30E1;&#x30BF; II &#x306E;&#x6025;&#x901F;&#x306A;&#x6E1B;&#x8870;&#x3068;&#x8FC5;&#x901F;&#x306A;&#x5FDC;&#x7B54;&#x56DE;&#x5FA9;&#x8D64;&#x611F;&#x53D7;&#x6027;&#x306E;&#x5186;&#x9310;&#x5F62;&#x3067;&#x660E;&#x308B;&#x3044;&#x5149;&#x3078;&#x306E;&#x66B4;&#x9732;&#x5F8C;&#x306B;&#x8CDB;&#x6210;&#x7ACB;&#x4F53;&#x767A;&#x8272;&#x56E3;&#x30FB; &#x30AA;&#x30D7;&#x30B7;&#x30F3;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x5FC5;&#x8981;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x7DB2;&#x819C;&#x306E; 9 &#x30E1;&#x30C1;&#x30EB; &#x30B0;&#x30EB;&#x30FC;&#x30D7;&#x306F;&#x6025;&#x901F;&#x306A;&#x30E1;&#x30BF; II &#x5D29;&#x58CA;&#x3068;&#x8D64;&#x306E;&#x30B3;&#x30FC;&#x30F3;&#x3067;&#x713C;&#x5165;&#x5149;&#x4F1D;&#x5C0E;&#x3059;&#x308B;&#x4E0A;&#x3067;&#x6B20;&#x304B;&#x305B;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3002;

&#xCC99;&#xCD94; &#xB9DD;&#xB9C9;&#xC758; &#xC6D0;&#xBFD4; &#xB300;&#xB1CC; &#xB9C9;&#xB300; &#xB300;&#xB1CC; &#xBCF4;&#xB2E4; &#xD6E8;&#xC52C; &#xB354; &#xBE68;&#xB9AC; &#xBE5B;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC758; &#xC751;&#xB2F5;&#xC744; &#xC885;&#xB8CC;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098;, &#xAE30;&#xBCF8; &#xCF58;&#xC5D0;&#xC774; &#xC2E0;&#xC18D; &#xD558; &#xAC8C; &#xC885;&#xB8CC; &#xD558;&#xB294; &#xBD84;&#xC790; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;&#xC740; &#xC11C; &#xD22C;&#xB974; &#xAC8C; &#xC774;&#xD574;. &#xC5EC;&#xAE30;&#xC5D0; &#xC81C;&#xC2DC; &#xB41C; &#xC2E4;&#xD5D8; &#xD14C;&#xC2A4;&#xD2B8; &#xB450; &#xAD00;&#xB828;&#xB41C; &#xAC00;&#xC124;: &#xCCAB;&#xC9F8;, &#xAE09;&#xC18D; &#xD55C; metarhodopsin (&#xBA54;&#xD0C0;)&#xC758; &#xBD80;&#xD328; 2 &#xB808;&#xB4DC;&#xC5D0; &#xBBFC;&#xAC10;&#xD55C; &#xCF58;&#xC5D0; 9-&#xBA54; &#xD2F8; &#xADF8;&#xB8F9; &#xB9DD;&#xB9C9;&#xC758; &#xC0C9;&#xC18C; &#xBD84;&#xC790;&#xC758; opsin &#xBD80;&#xBD84; &#xAC04;&#xC758; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC5D0; &#xC758;&#xC874; &#xD558; &#xACE0; &#xB458;&#xC9F8;, &#xAE09;&#xC18D; &#xD55C; &#xBA54;&#xD0C0; II &#xBD80;&#xD328; &#xADF8; &#xBC1D;&#xC740; &#xBE5B;&#xC5D0; &#xB178;&#xCD9C; &#xB41C; &#xD6C4; &#xB808;&#xB4DC;&#xC5D0; &#xBBFC;&#xAC10;&#xD55C; &#xCF58;&#xC758; &#xD3EC;&#xD654;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC2E0;&#xC18D;&#xD55C; &#xBCF5;&#xAD6C;&#xB97C; &#xC704;&#xD574; &#xC911;&#xC694; &#xD558;&#xB2E4;. &#xC548;&#xB8CC; photolysis&#xC758; Microspectrophotometric &#xCE21;&#xC815;, retinol &#xC0DD;&#xC0B0;&#xC758; microfluorometric &#xCE21;&#xC815;&#xACFC; &#xB3C4;&#xB871;&#xB1FD; &#xCF58;&#xC758; &#xD50C;&#xB798;&#xC2DC; &#xBC18;&#xC751;&#xC758; &#xB2E8;&#xC77C; &#xC140; electrophysiological &#xB179;&#xC74C; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xAC00;&#xC124;&#xC744; &#xD14C;&#xC2A4;&#xD2B8;&#xB97C; &#xC218;&#xD589; &#xD588;&#xB2E4;. &#xCF58; &#xD45C;&#xBC31; &#xB41C; &#xBAA8;&#xB4E0; &#xACBD;&#xC6B0;&#xC5D0;, &#xBC0F; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC758; &#xC2DC;&#xAC01;&#xC801; &#xC548;&#xB8CC;&#xB294; &#xC5B4;&#xB290; 11-cis &#xB9DD;&#xB9C9; &#xB610;&#xB294; 11-cis 9 &#xB2E4;&#xC2DC; &#xC0DD;&#xC131;-&#xB9DD;&#xB9C9;, &#xB9DD;&#xB9C9; &#xBD80;&#xC871; 9-&#xBA54; &#xD2F8; &#xADF8;&#xB8F9;&#xC758; &#xC544;&#xB0A0;&#xB85C;&#xADF8; demethyl. &#xBA54;&#xD0C0; II &#xBD80;&#xD328;&#xB294; 4 ~ 5 &#xBC30; &#xB290;&#xB9B0; &#xBC0F; &#xD6C4;&#xC18D; retinol &#xC0DD;&#xC0B0; 3 ~ 4 &#xBC30; &#xB290;&#xB9AC;&#xAC8C; &#xB808;&#xB4DC;&#xC5D0; &#xBBFC;&#xAC10;&#xD55C; &#xCF58; &#xB9DD;&#xB9C9;&#xC758; 9-&#xBA54; &#xD2F8; &#xADF8;&#xB8F9; &#xBD80;&#xC871; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC774; &#xCF58;&#xC5D0; &#xBC1D;&#xC740; &#xB178;&#xCD9C; &#xD6C4; 9-&#xBA54; &#xD2F8; &#xADF8;&#xB8F9; &#xBD80;&#xC871;&#xC5D0; &#xCC44;&#xB3C4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBCF5;&#xAD6C;&#xC758; &#xC0C1;&#xB2F9;&#xD55C; &#xB454;&#xD654; &#xB3D9;&#xD589; &#xD588;&#xB2E4; (&amp;gt; 0.1% &#xBE44;&#xC8FC;&#xC5BC; &#xC548;&#xB8CC; photoactivated) &#xBE5B;&#xC744; &#xD76C;&#xBBF8;&#xD558;&#xAC8C; &#xD558;&#xC9C0; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC;. Phototransduction &#xD134; &#xC624;&#xD504; &#xACFC;&#xC815;&#xC758; &#xC218;&#xD559;&#xC801; &#xBAA8;&#xB378; &#xACF5;&#xAC1C; photoresponse&#xC758; &#xB290;&#xB9B0; &#xD68C;&#xBCF5; 9&#xC758; &#xB290;&#xB9B0; &#xBA54;&#xD0C0; &#xBD80;&#xD328;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC124;&#xBA85; &#xB420; &#xC218; &#xC788;&#xB294;-&#xBE44;&#xC8FC;&#xC5BC; &#xC548;&#xB8CC;&#xB97C; demethyl. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xACB0;&#xACFC; &#xB9DD;&#xB9C9; 9-&#xBA54; &#xD2F8; &#xADF8;&#xB8F9;&#xC740; &#xB808;&#xB4DC;&#xC5D0; &#xBBFC;&#xAC10;&#xD55C; &#xCF58;&#xC5D0; &#xBC1D;&#xC740; &#xBE5B;&#xC5D0; &#xB178;&#xCD9C; &#xB41C; &#xD6C4; Meta II&#xC758; &#xAE09;&#xC18D; &#xD55C; &#xAC10;&#xD1F4;&#xC640; &#xC2E0;&#xC18D;&#xD55C; &#xB300;&#xC751; &#xBCF5;&#xAD6C; &#xBD80;&#xD0C1; &#xC785;&#xCCB4;&#xC801; &#xB9C8;&#xC774;&#xD06C;&#xB860; opsin &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC5D0; &#xD544;&#xC694;&#xD55C; &#xC785;&#xC99D;.

&#xB9DD;&#xB9C9;&#xC758; 9-&#xBA54; &#xD2F8; &#xADF8;&#xB8F9; &#xBE60;&#xB978; &#xBA54;&#xD0C0; II &#xBD80;&#xD328;&#xC640; phototransduction &#xB808;&#xB4DC; &#xCF58;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD574;&#xC18C; &#xC704;&#xD574; &#xD544;&#xC218;&#xC801; &#xC774;&#xB2E4;.

Fotorreceptores de cono de la retina vertebrada terminan su respuesta a la luz mucho m&aacute;s r&aacute;pido que los fotorreceptores de la barra. Sin embargo, los mecanismos moleculares subyacentes a esta terminaci&oacute;n de respuesta r&aacute;pida en conos son poco conocidos. Los experimentos presentados aqu&iacute; probaron dos hip&oacute;tesis relacionadas: primero, que la r&aacute;pida descomposici&oacute;n de flujo metarhodopsin (Meta) II en conos sensibles al rojo depende de las interacciones entre el grupo de 9-metil de la retina y la parte de opsina de la mol&eacute;cula del pigmento, y en segundo lugar, es fundamental para una r&aacute;pida recuperaci&oacute;n de la saturaci&oacute;n de los conos sensibles al rojo despu&eacute;s de exposici&oacute;n a la luz eso decaimiento r&aacute;pido de la Meta II. Se realizaron mediciones de microespectrofotometr&iacute;a de fot&oacute;lisis de pigmento, microfluorometric medidas de producci&oacute;n de retinol y las grabaciones electrofisiol&oacute;gicas unicelular de flash respuestas de conos de Salamandra para probar estas hip&oacute;tesis. En todos los casos, fueron blanqueados conos y su pigmento visual fue regenerado con cualquier 11-cis retinal o con 9 11-cis-retinal, un an&aacute;logo de la retina que carece del grupo 9-metil dimetil Epipodofilotoxina. Decaimiento de meta II era m&aacute;s lento de cuatro a cinco veces y retinol posterior producci&oacute;n fue de tres a cuatro veces m&aacute;s lento en los conos sensibles al rojo que carecen del grupo 9-metil de la retina. Esto fue acompa&ntilde;ado por una importante desaceleraci&oacute;n de la recuperaci&oacute;n de saturaci&oacute;n en conos que carecen del grupo 9-metil despu&eacute;s de exposici&oacute;n a brillante (&gt; 0.1% pigmento visual fotoactivado) pero no se aten&uacute;an la luz. Un modelo matem&aacute;tico del proceso desv&iacute;o de fototransducci&oacute;n revel&oacute; que la recuperaci&oacute;n m&aacute;s lenta de fotorrespuesta puede explicarse por la lenta decadencia de la Meta de 9-Epipodofilotoxina pigmento visual. Estos resultados demuestran que el grupo 9-metil de la retina se requiere interacci&oacute;n est&eacute;rica crom&oacute;foro-opsina que favorecen la r&aacute;pida decadencia del Meta II tanto la recuperaci&oacute;n de la respuesta r&aacute;pida despu&eacute;s de exposici&oacute;n a la luz en los conos sensibles al rojo.

El grupo 9-metil de la retina es esencial para r&aacute;pido decaimiento Meta II y fototransducci&oacute;n Temple en conos rojos.

Anche in individui sani, invecchiamento porta al deterioramento dell&#39;acuit&agrave; visiva, sensibilit&agrave; al contrasto, campo visivo e l&#39;adattamento di buio. Poco &egrave; conosciuto circa i meccanismi neurali che guidano i cambiamenti legati all&#39;et&agrave; della retina e, pi&ugrave; specificamente, fotorecettori. Secondo un&#39;ipotesi, il deterioramento relativo all&#39;et&agrave; in funzione di rod &egrave; a causa della disponibilit&agrave; limitata di 11-cis-retinale per formazione di pigmento rod. Per determinare come invecchiamento colpisce fotorecettori rod e per testare l&#39;ipotesi di deficit di retinoidi, abbiamo confrontato le propriet&agrave; morfologiche e funzionali delle canne di adulto e invecchiato topi B6D2F1/J. Abbiamo trovato che il numero di canne e la lunghezza dei loro segmenti esterni sono sensibilmente ridotti nei topi 2.5-anno-vecchio rispetto ad animali di 4 mesi. Invecchiamento provocato anche una duplice riduzione del livello complessivo di opsin nella retina. Test comportamentali ha rivelato che scotopica acuit&agrave; visiva e la sensibilit&agrave; al contrasto sono diminuiti da duplice nei topi anziani, e registrazioni di ERG rod dimostrato ridotta ampiezza di entrambi a - e b-onde. Sensibilit&agrave; di canne all&#39;et&agrave; determinata dalla cella singola registrazioni era anche diminuito di 1.5-fold, corrispondente a non pi&ugrave; di 1% gratis opsin in questi fotorecettori, e non sono stati modificati parametri cinetici della risposta flash dim. In particolare, il tasso di adattamento dark rod era influenzato dall&#39;et&agrave;. Cos&igrave;, i nostri risultati sostengono contro deficit legati all&#39;et&agrave; di 11-cis-retinale nel ciclo visivo rod di mouse B6D2F1/J. Sorprendentemente, il livello di rumore scuro cellulare &egrave; stato aumentato in verghe invecchiati, fornendo un meccanismo alternativo per loro desensibilizzazione.

Et&agrave;-correlate deterioramento della visione di Verga nei topi.

&#x5373;&#x4F7F;&#x662F;&#x5065;&#x5EB7;&#x7684;&#x4EBA;&#x5728;&#x8001;&#x5316;&#x5BFC;&#x81F4;&#x89C6;&#x529B;&#x3001; &#x5BF9;&#x6BD4;&#x654F;&#x611F;&#x5EA6;&#x3001; &#x89C6;&#x91CE;&#x3001; &#x6697;&#x9002;&#x5E94;&#x7684;&#x6076;&#x5316;&#x3002;&#x9A7E;&#x9A76;&#x5E74;&#x9F84;&#x76F8;&#x5173;&#x7684;&#x89C6;&#x7F51;&#x819C;&#x548C;&#xFF0C;&#x66F4;&#x5177;&#x4F53;&#x5730;&#x8BF4;&#xFF0C;&#x611F;&#x5149;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x53D8;&#x5316;&#x7684;&#x795E;&#x7ECF;&#x673A;&#x5236;&#x4E86;&#x89E3;&#x751A;&#x5C11;&#x3002;&#x6839;&#x636E;&#x4E00;&#x4E2A;&#x5047;&#x8BF4;&#xFF0C;&#x6746;&#x529F;&#x80FD;&#x4E0E;&#x5E74;&#x9F84;&#x76F8;&#x5173;&#x7684;&#x6076;&#x5316;&#x662F;&#x7531;&#x4E8E;&#x6709;&#x9650; 11-&#x72EC;&#x8054;&#x4F53;-&#x89C6;&#x7F51;&#x819C;&#x6746;&#x8272;&#x7D20;&#x5F62;&#x6210;&#x3002;&#x786E;&#x5B9A;&#x5982;&#x4F55;&#x8001;&#x5316;&#x5F71;&#x54CD;&#x6746;&#x611F;&#x53D7;&#x5668;&#x548C;&#x6D4B;&#x8BD5;&#x7EF4;&#x7532;&#x9178;&#x7F3A;&#x5047;&#x8BBE;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x6BD4;&#x8F83;&#x68D2;&#x6210;&#x4EBA;&#x7684;&#x5F62;&#x6001;&#x548C;&#x529F;&#x80FD;&#x5C5E;&#x6027;&#xFF0C;&#x5E76;&#x4E14;&#x5C81; B6D2F1/J &#x5C0F;&#x9F20;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x53D1;&#x73B0; 2.5 &#x5C81;&#x5C0F;&#x9F20;&#x4E0E; 4 &#x6708;&#x9F84;&#x52A8;&#x7269;&#x76F8;&#x6BD4;&#x5927;&#x5927;&#x51CF;&#x5C11;&#x68D2;&#x7684;&#x6570;&#x91CF;&#x548C;&#x5176;&#x5916;&#x7684;&#x7EBF;&#x6BB5;&#x7684;&#x957F;&#x5EA6;&#x3002;&#x8001;&#x5316;&#x8FD8;&#x5BFC;&#x81F4;&#x7EC6;&#x83CC;&#x89C6;&#x7D2B;&#x7EA2;&#x8D28;&#x5728;&#x89C6;&#x7F51;&#x819C;&#x4E2D;&#x7684;&#x603B;&#x4F53;&#x6C34;&#x5E73;&#x51CF;&#x5C11;&#x4E86;&#x4E24;&#x4E2A;&#x65B9;&#x9762;&#x3002;&#x884C;&#x4E3A;&#x7684;&#x6D4B;&#x8BD5;&#x7ED3;&#x679C;&#x8868;&#x660E;&#x6697;&#x89C6;&#x529B;&#x548C;&#x5BF9;&#x6BD4;&#x654F;&#x611F;&#x5EA6;&#x4E0B;&#x8DCC;&#x53CC;&#x91CD;&#x8001;&#x5E74;&#x5C0F;&#x9F20;&#x548C;&#x6746; ERG &#x5F55;&#x97F3;&#x8868;&#x660E;&#x51CF;&#x5C11;&#x7684;&#x632F;&#x5E45;&#x7684;&#x4E24;&#x4E2A; a-&#x548C; b-&#x6CE2;&#x3002;&#x8001;&#x5E74;&#x68D2;&#x4ECE;&#x5355;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x5F55;&#x97F3;&#x4E2D;&#x786E;&#x5B9A;&#x7684;&#x654F;&#x611F;&#x6027;&#x4E5F;&#x51CF;&#x5C11;&#x4E86; 1.5-fold&#xFF0C;&#x5BF9;&#x5E94;&#x4EE5;&#x4E0D;&#x591A;&#x4E8E; 1%&#x65E0;&#x7EC6;&#x83CC;&#x89C6;&#x7D2B;&#x7EA2;&#x8D28;&#x5728;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x611F;&#x53D7;&#x5668;&#xFF0C;dim &#x95EA;&#x5B58;&#x53CD;&#x5E94;&#x52A8;&#x529B;&#x5B66;&#x53C2;&#x6570;&#x90FD;&#x4E0D;&#x4F1A;&#x6539;&#x53D8;&#x3002;&#x503C;&#x5F97;&#x6CE8;&#x610F;&#x7684;&#x662F;&#xFF0C;&#x6309;&#x5E74;&#x9F84;&#x7684;&#x6746;&#x6697;&#x9002;&#x5E94;&#x7387;&#x5E76;&#x6CA1;&#x6709;&#x53D7;&#x5230;&#x5F71;&#x54CD;&#x3002;&#x56E0;&#x6B64;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x7ED3;&#x679C;&#x5728; B6D2F1/J &#x9F20;&#x6807;&#x6746;&#x89C6;&#x89C9;&#x5468;&#x671F;&#x4E2D;&#x53CD;&#x5BF9; 11-&#x72EC;&#x8054;&#x4F53;-&#x89C6;&#x7F51;&#x819C;&#x4E0E;&#x5E74;&#x9F84;&#x6709;&#x5173;&#x865A;&#x8BC1;&#x3002;&#x5947;&#x602A;&#x7684;&#x662F;&#xFF0C;&#x8001;&#x5E74;&#x68D2;&#xFF0C;&#x63D0;&#x4F9B;&#x4E00;&#x79CD;&#x66FF;&#x4EE3;&#x673A;&#x5236;&#x4E3A;&#x5176;&#x8131;&#x654F;&#x4E2D;&#x589E;&#x52A0;&#x7684;&#x8702;&#x7A9D;&#x6697;&#x566A;&#x97F3;&#x6C34;&#x5E73;&#x3002;

&#x4E0E;&#x5E74;&#x9F84;&#x76F8;&#x5173;&#x7684;&#x6746;&#x89C6;&#x89C9;&#x5728;&#x5C0F;&#x9F20;&#x4E2D;&#x6076;&#x5316;&#x3002;

Even in healthy individuals, aging leads to deterioration in visual acuity, contrast sensitivity, visual field, and dark adaptation. Little is known about the neural mechanisms that drive the age-related changes of the retina and, more specifically, photoreceptors. According to one hypothesis, the age-related deterioration in rod function is due to the limited availability of 11-cis-retinal for rod pigment formation. To determine how aging affects rod photoreceptors and to test the retinoid-deficiency hypothesis, we compared the morphological and functional properties of rods of adult and aged B6D2F1/J mice. We found that the number of rods and the length of their outer segments were significantly reduced in 2.5-year-old mice compared with 4-month-old animals. Aging also resulted in a twofold reduction in the total level of opsin in the retina. Behavioral tests revealed that scotopic visual acuity and contrast sensitivity were decreased by twofold in aged mice, and rod ERG recordings demonstrated reduced amplitudes of both a- and b-waves. Sensitivity of aged rods determined from single-cell recordings was also decreased by 1.5-fold, corresponding to not more than 1% free opsin in these photoreceptors, and kinetic parameters of dim flash response were not altered. Notably, the rate of rod dark adaptation was unaffected by age. Thus, our results argue against age-related deficiency of 11-cis-retinal in the B6D2F1/J mouse rod visual cycle. Surprisingly, the level of cellular dark noise was increased in aged rods, providing an alternative mechanism for their desensitization.

Age-related deterioration of rod vision in mice.

M&#xEA;me chez les individus sains, le vieillissement conduit &#xE0; une d&#xE9;t&#xE9;rioration de l&#x26;#39;acuit&#xE9; visuelle, la sensibilit&#xE9; au contraste, champ visuel, et adaptation &#xE0; l&#x26;#39;obscurit&#xE9;. On conna&#xEE;t peu les m&#xE9;canismes neuronaux qui conduisent les changements li&#xE9;s &#xE0; l&#x26;#39;&#xE2;ge de la r&#xE9;tine et, plus sp&#xE9;cifiquement, les photor&#xE9;cepteurs. Selon une hypoth&#xE8;se, la d&#xE9;t&#xE9;rioration li&#xE9;e &#xE0; l&#x26;#39;&#xE2;ge en fonction tige est due &#xE0; la disponibilit&#xE9; limit&#xE9;e de 11-cis-r&#xE9;tinal pour la formation du pigment tige. Pour d&#xE9;terminer comment le vieillissement affecte les photor&#xE9;cepteurs de tige et de tester l&#x26;#39;hypoth&#xE8;se r&#xE9;tino&#xEF;de carence, nous avons compar&#xE9; les propri&#xE9;t&#xE9;s morphologiques et fonctionnelles des tiges des adultes et &#xE2;g&#xE9;s de B6D2F1 / mice J. Nous avons constat&#xE9; que le nombre de tiges et de la longueur de leurs segments externes ont &#xE9;t&#xE9; significativement r&#xE9;duites de 2,5 ans chez la souris par rapport &#xE0; 4-month-old animaux. Le vieillissement a &#xE9;galement donn&#xE9; lieu &#xE0; une double r&#xE9;duction du niveau total de l&#x26;#39;opsine dans la r&#xE9;tine. Les tests comportementaux ont r&#xE9;v&#xE9;l&#xE9; que l&#x26;#39;acuit&#xE9; visuelle et scotopique la sensibilit&#xE9; au contraste a &#xE9;t&#xE9; diminu&#xE9; de double chez des souris &#xE2;g&#xE9;es, et tige enregistrements ERG d&#xE9;montr&#xE9; amplitudes r&#xE9;duites des deux a et b-ondes. Sensibilit&#xE9; de tiges &#xE2;ge d&#xE9;termin&#xE9;es &#xE0; partir monocellulaires enregistrements est &#xE9;galement diminu&#xE9;e par un facteur 1,5, qui correspond &#xE0; pas plus de 1% opsine libre dans ces photor&#xE9;cepteurs, et les param&#xE8;tres cin&#xE9;tiques de flash r&#xE9;ponse dim n&#x26;#39;ont pas &#xE9;t&#xE9; modifi&#xE9;es. Notamment, le taux de la tige adaptation &#xE0; l&#x26;#39;obscurit&#xE9; n&#x26;#39;a pas &#xE9;t&#xE9; affect&#xE9;e par l&#x26;#39;&#xE2;ge. Ainsi, nos r&#xE9;sultats plaident contre li&#xE9;e &#xE0; l&#x26;#39;&#xE2;ge de la carence en 11-cis-r&#xE9;tinal dans le cycle de B6D2F1 / J de la souris tige visuelle. &#xC9;tonnamment, le niveau de bruit d&#x26;#39;obscurit&#xE9; cellulaire a &#xE9;t&#xE9; augment&#xE9; dans les barres de personnes &#xE2;g&#xE9;es, en fournissant un m&#xE9;canisme alternatif pour leur d&#xE9;sensibilisation.

Li&#xE9;e &#xE0; l&#x26;#39;&#xE2;ge d&#xE9;t&#xE9;rioration de la vision chez la souris Rod

Auch bei gesunden Personen f&uuml;hrt Alterung zur Verschlechterung der Sehsch&auml;rfe, Kontrastempfindlichkeit, Gesichtsfeld und dunkel-Adaptation. &Uuml;ber die neuronalen Mechanismen ist wenig bekannt, die die altersbedingten Ver&auml;nderungen der Netzhaut und, genauer gesagt, Photorezeptoren zu fahren. Nach einer Hypothese ist die altersbedingte Verschlechterung der Stab-Funktion aufgrund der begrenzten Verf&uuml;gbarkeit von 11-Cis-Retinal Stab Pigment Bildung. Um festzustellen, wie Alterung Stab Photorezeptoren auswirken und die Retinoid-Mangel-Hypothese zu testen, wir verglichen die morphologischen und funktionellen Eigenschaften der St&auml;be eines Erwachsenen und im Alter von B6D2F1/J M&auml;usen. Wir fanden, dass die Anzahl der St&auml;be und die L&auml;nge ihrer &auml;u&szlig;eren Segmente 2,5 Jahre alten M&auml;usen verglichen mit 4 Monate alten Tieren deutlich reduziert wurden. Alterung f&uuml;hrte ebenfalls eine zweifache Verringerung der Gesamth&ouml;he des Opsin in der Netzhaut. Verhaltens Pr&uuml;fungen ergaben, dass die Augeninnendruckmessung Sehsch&auml;rfe und Kontrastempfindlichkeit wurden zweierlei im Alter von M&auml;usen sanken, und Stab ERG Aufnahmen zeigte reduzierte Amplituden der beiden a - und b-Wellen. Empfindlichkeit des alten St&auml;be aus einzelligen Aufnahmen bestimmt war auch verringerten 1.5-fold, entsprechen, um nicht mehr als 1 % Opsin in diese Photorezeptoren, frei und kinetische Parameter dim Blitz Antwort wurden nicht ver&auml;ndert. Insbesondere war die Rate der Stab dunkel Adaption Jahren unber&uuml;hrt. So argumentieren unsere Ergebnisse gegen altersbedingte Mangel 11-Cis-Retinal im B6D2F1/J Maus Stab visuellen Zyklus. &Uuml;berraschenderweise war die zellul&auml;re Dunkelrauschen in Alter Stangen, bietet einen alternativen Mechanismus f&uuml;r ihre Desensibilisierung erh&ouml;ht.

Altersbedingte Verschlechterung der Stab Vision in den M&auml;usen.

&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x5065;&#x5E38;&#x8005;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x9AD8;&#x9F62;&#x5316;&#x306F;&#x8996;&#x529B;&#x3001;&#x30B3;&#x30F3;&#x30C8;&#x30E9;&#x30B9;&#x30C8;&#x611F;&#x5EA6;&#x3001;&#x8996;&#x91CE;&#x3068;&#x6697;&#x9806;&#x5FDC;&#x306E;&#x52A3;&#x5316;&#x306B;&#x3064;&#x306A;&#x304C;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30EA;&#x30C8;&#x30EB;&#x306F;&#x3001;&#x52A0;&#x9F62;&#x306B;&#x4F34;&#x3046;&#x7DB2;&#x819C;&#x306E;&#x5909;&#x5316;&#x3068;&#x3001;&#x3088;&#x308A;&#x5177;&#x4F53;&#x7684;&#x306B;&#x306F;&#x3001;&#x5149;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x3092;&#x99C6;&#x52D5;&#x3059;&#x308B;&#x795E;&#x7D4C;&#x6A5F;&#x69CB;&#x306B;&#x3064;&#x3044;&#x3066;&#x306F;&#x307B;&#x3068;&#x3093;&#x3069;&#x77E5;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x306A;&#x3044;&#x3002; 1&#x4EEE;&#x8AAC;&#x306B;&#x3088;&#x308C;&#x3070;&#x3001;&#x30ED;&#x30C3;&#x30C9;&#x95A2;&#x6570;&#x5185;&#x306E;&#x7D4C;&#x5E74;&#x52A3;&#x5316;&#x306F;&#x3001;&#x30ED;&#x30C3;&#x30C9;&#x306E;&#x8272;&#x7D20;&#x5F62;&#x6210;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;11  - &#x30B7;&#x30B9; - &#x30EC;&#x30C1;&#x30CA;&#x30FC;&#x30EB;&#x306E;&#x9650;&#x3089;&#x308C;&#x305F;&#x53EF;&#x7528;&#x6027;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x8001;&#x5316;&#x306F;&#x687F;&#x4F53;&#x306B;&#x3069;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306A;&#x5F71;&#x97FF;&#x3092;&#x4E0E;&#x3048;&#x308B;&#x304B;&#x6C7A;&#x5B9A;&#x3057;&#x3001;&#x30EC;&#x30C1;&#x30CE;&#x30A4;&#x30C9;&#x6B20;&#x4E4F;&#x4EEE;&#x8AAC;&#x3092;&#x30C6;&#x30B9;&#x30C8;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;&#x6210;&#x4EBA;&#x3084;&#x9AD8;&#x9F62;&#x8005;B6D2F1 / J&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x306E;&#x30ED;&#x30C3;&#x30C9;&#x306E;&#x5F62;&#x614B;&#x5B66;&#x7684;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x6A5F;&#x80FD;&#x7684;&#x7279;&#x6027;&#x3092;&#x6BD4;&#x8F03;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;&#x68D2;&#x306E;&#x6570;&#x3068;&#x3001;&#x305D;&#x306E;&#x5916;&#x5074;&#x306E;&#x30BB;&#x30B0;&#x30E1;&#x30F3;&#x30C8;&#x306E;&#x9577;&#x3055;&#x304C;&#x5927;&#x5E45;&#x306B;4&#x30AB;&#x6708;&#x9F62;&#x306E;&#x52D5;&#x7269;&#x3068;&#x6BD4;&#x3079;&#x3066;2.5&#x6B73;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x3067;&#x6E1B;&#x5C11;&#x3057;&#x305F;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x308F;&#x304B;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x8001;&#x5316;&#x306F;&#x307E;&#x305F;&#x3001;&#x7DB2;&#x819C;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x30AA;&#x30D7;&#x30B7;&#x30F3;&#x306E;&#x5408;&#x8A08;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x304C;2&#x500D;&#x306B;&#x6E1B;&#x5C11;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x884C;&#x52D5;&#x30C6;&#x30B9;&#x30C8;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x6697;&#x8996;&#x529B;&#x3084;&#x30B3;&#x30F3;&#x30C8;&#x30E9;&#x30B9;&#x30C8;&#x611F;&#x5EA6;&#x304C;&#x8001;&#x9F62;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x306E;2&#x500D;&#x6E1B;&#x5C11;&#x3057;&#x305F;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x3057;&#x3001;&#x30ED;&#x30C3;&#x30C9;ERG&#x306E;&#x8A18;&#x9332;&#x306F;&#x3001;&#x4E21;&#x65B9;&#x306E;-a&#x304A;&#x3088;&#x3073;b&#x6CE2;&#x306E;&#x632F;&#x5E45;&#x306F;&#x6E1B;&#x5C11;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x5358;&#x4E00;&#x7D30;&#x80DE;&#x8A18;&#x9332;&#x304B;&#x3089;&#x6C7A;&#x5B9A;&#x9AD8;&#x9F62;&#x30ED;&#x30C3;&#x30C9;&#x306E;&#x611F;&#x5EA6;&#x3082;&#x3001;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x5149;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x306E;1&#xFF05;&#x306E;&#x7A7A;&#x304D;&#x30AA;&#x30D7;&#x30B7;&#x30F3;&#x4EE5;&#x4E0A;&#x306A;&#x3044;&#x306B;&#x5BFE;&#x5FDC;&#x3059;&#x308B;&#x3001;1.5&#x500D;&#x306B;&#x6E1B;&#x5C11;&#x3057;&#x3001;&#x8584;&#x6697;&#x3044;&#x30D5;&#x30E9;&#x30C3;&#x30B7;&#x30E5;&#x5FDC;&#x7B54;&#x306E;&#x52D5;&#x529B;&#x5B66;&#x7684;&#x30D1;&#x30E9;&#x30E1;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x306F;&#x5909;&#x66F4;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3067;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x7279;&#x306B;&#x3001;&#x30ED;&#x30C3;&#x30C9;&#x6697;&#x9806;&#x5FDC;&#x7387;&#x306F;&#x5E74;&#x9F62;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x5F71;&#x97FF;&#x3092;&#x53D7;&#x3051;&#x306A;&#x304B;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x3057;&#x305F;&#x304C;&#x3063;&#x3066;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x306F;&#x3001;B6D2F1 / J&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x30ED;&#x30C3;&#x30C9;&#x306E;&#x8996;&#x899A;&#x30B5;&#x30A4;&#x30AF;&#x30EB;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;11  - &#x30B7;&#x30B9; - &#x30EC;&#x30C1;&#x30CA;&#x30FC;&#x30EB;&#x306E;&#x5E74;&#x9F62;&#x306B;&#x95A2;&#x9023;&#x3057;&#x305F;&#x6B20;&#x9665;&#x306B;&#x5BFE;&#x3057;&#x3066;&#x4E3B;&#x5F35;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x9A5A;&#x304F;&#x3079;&#x304D;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3001;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x6697;&#x9A12;&#x97F3;&#x306E;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x306F;&#x3001;&#x305D;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x8131;&#x611F;&#x4F5C;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x4EE3;&#x66FF;&#x30E1;&#x30AB;&#x30CB;&#x30BA;&#x30E0;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3057;&#x3001;&#x9AD8;&#x9F62;&#x8005;&#x306E;&#x68D2;&#x306B;&#x5897;&#x52A0;&#x3057;&#x305F;&#x3002;

&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x306E;&#x30ED;&#x30C3;&#x30C9;&#x30D3;&#x30B8;&#x30E7;&#x30F3;&#x306E;&#x7D4C;&#x5E74;&#x52A3;&#x5316;

&#xAC74;&#xAC15; &#xD55C; &#xAC1C;&#xC778;&#xC5D0;&#xB3C4; &#xB178;&#xD654; &#xC800;&#xD558; &#xC2DC;&#xB825;, &#xB300;&#xBE44; &#xAC10;&#xB3C4;, &#xC2DC;&#xC57C;, &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; &#xC5B4;&#xB450;&#xC6B4; &#xC801;&#xC751;&#xC774; &#xB048;&#xB2E4;. &#xC57D;&#xAC04;&#xC758; &#xC5F0;&#xB839; &#xAD00;&#xB828; &#xBCC0;&#xACBD; &#xB9DD;&#xB9C9;&#xACFC;, &#xB354; &#xAD6C;&#xCCB4;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C;, &#xB300;&#xB1CC;&#xC758; &#xC2E0;&#xACBD; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC54C;&#xB824;&#xC838; &#xC788;&#xB2E4;. &#xD558;&#xB098;&#xC758; &#xAC00;&#xC124;&#xC5D0;&#xC758; &#xD558;&#xBA74; &#xB85C;&#xB4DC; &#xD568;&#xC218;&#xC5D0;&#xC11C; &#xB098;&#xC774; &#xAD00;&#xB828; &#xB098;&#xC058;&#xAC8C; &#xD568; 11-cis-&#xB9DD;&#xB9C9; &#xB9C9;&#xB300; &#xC0C9;&#xC18C; &#xD615;&#xC131;&#xC758; &#xD55C;&#xC815; &#xB41C; &#xAC00;&#xC6A9;&#xC131; &#xB54C;&#xBB38;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB178;&#xD654; &#xBD09; &#xB300;&#xB1CC;&#xC5D0; &#xBBF8;&#xCE58;&#xB294; &#xC601;&#xD5A5;&#xC744; &#xD655;&#xC778; &#xD558; &#xACE0; retinoid &#xACB0;&#xD54D; &#xAC00;&#xC124; &#xD14C;&#xC2A4;&#xD2B8; &#xC6B0;&#xB9AC; &#xC131;&#xC778; &#xBD09; &#xD615;&#xD0DC;&#xD559; &#xBC0F; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC801; &#xC18D;&#xC131;&#xC744; &#xBE44;&#xAD50; &#xD558; &#xACE0; B6D2F1/J &#xC950; &#xC138;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xBD09; &#xC218;&#xC640; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC758; &#xC678;&#xBD80; &#xC138;&#xADF8;&#xBA3C;&#xD2B8;&#xC758; &#xAE38;&#xC774; 2.5 &#xC138; &#xC950; 4 &#xAC1C;&#xC6D4; &#xB41C; &#xB3D9;&#xBB3C;&#xC5D0; &#xBE44;&#xD574; &#xD06C;&#xAC8C; &#xAC10;&#xC18C; &#xD588;&#xB2E4; &#xBC1C;&#xACAC;. &#xB178;&#xD654; &#xB610;&#xD55C; opsin &#xB9DD;&#xB9C9;&#xC5D0;&#xC11C;&#xC758; &#xCD1D; &#xB808;&#xBCA8;&#xC5D0; 2 &#xC911; &#xAC10;&#xC18C; &#xADC0;&#xCC29;&#xB418; &#xC5C8; &#xB2E4;. &#xD589;&#xB3D9; &#xD14C;&#xC2A4;&#xD2B8; &#xBC1D;&#xD600; scotopic &#xC2DC;&#xB825; &#xBC0F; &#xB300;&#xBE44; &#xAC10;&#xB3C4; &#xB098;&#xC774; &#xB4E0;&#xB41C; &#xC950;&#xC5D0; 2 &#xC911; &#xAC10;&#xC18C; &#xD588;&#xB2E4; &#xB85C;&#xB4DC; &#xB974; &#xADF8; &#xB179;&#xC74C; &#xC2DC;&#xC5F0; &#xAC10;&#xC18C; &#xC9C4;&#xD3ED;&#xC758; &#xB450; a-&#xC640; b-&#xD30C;. &#xC138; &#xBD09; &#xB2E8;&#xC77C; &#xC140; &#xB179;&#xC74C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xACB0;&#xC815;&#xC758; &#xAC10;&#xB3C4; &#xB610;&#xD55C; &#xAC10;&#xC18C; karin, &#xD574;&#xB2F9; 1% &#xC774;&#xC0C1; opsin &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xB300;&#xB1CC;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD574;&#xC81C; &#xD558; &#xACE0; &#xD76C;&#xBBF8; &#xD55C; &#xD50C;&#xB798;&#xC2DC; &#xC751;&#xB2F5;&#xC758; &#xD0A4;&#xB124;&#xD2F1; &#xB9E4;&#xAC1C; &#xBCC0;&#xC218; &#xBCC0;&#xACBD; &#xB418;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC740;. &#xD2B9;&#xD788;, &#xB9C9;&#xB300; &#xB2E4;&#xD06C; &#xC801;&#xC751; &#xC18D;&#xB3C4; &#xB098;&#xC774; &#xC758;&#xD574; &#xC601;&#xD5A5;&#xC744; &#xBC1B;&#xB294; &#xD588;&#xB2E4;. &#xB530;&#xB77C;&#xC11C;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xACB0;&#xACFC; B6D2F1/J &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4; &#xB85C;&#xB4DC; &#xBE44;&#xC8FC;&#xC5BC; &#xC8FC;&#xAE30;&#xC5D0;&#xC11C; 11-cis-&#xB9DD;&#xB9C9;&#xC758; &#xACB0;&#xD54D;&#xC99D;&#xC740; &#xB098;&#xC774; &#xAD00;&#xB828;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xB17C;&#xC7C1;. &#xB180;&#xB78D;&#xAC8C;&#xB3C4;, &#xADF8;&#xB4E4;&#xC758; &#xB454;&#xAC10;&#xB3C4; &#xB300; &#xD55C; &#xB300;&#xCCB4; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;&#xC744; &#xC81C;&#xACF5; &#xD558;&#xB294; &#xC138; &#xBD09;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC140;&#xB8F0;&#xB7EC; &#xC5B4;&#xB450;&#xC6B4; &#xC18C;&#xC74C; &#xC218;&#xC900;&#xC744; &#xC99D;&#xAC00; &#xD588;&#xB2E4;.

&#xB098;&#xC774; &#xAD00;&#xB828; &#xB41C; &#xC950;&#xC5D0; &#xC788;&#xB294; &#xB77C; &#xB4DC; &#xBE44;&#xC804;&#xC758; &#xC800;&#xD558;.

Incluso en individuos sanos, el envejecimiento conduce a un deterioro de la agudeza visual, sensibilidad al contraste, campo visual, y la adaptaci&#xF3;n a la oscuridad. Poco se sabe sobre los mecanismos neuronales que conducen a los cambios relacionados con la edad de la retina y, m&#xE1;s espec&#xED;ficamente, los fotorreceptores. De acuerdo con una hip&#xF3;tesis, el deterioro relacionado con la edad en funci&#xF3;n varilla es debido a la limitada disponibilidad de 11-cis-retinal para la formaci&#xF3;n de pigmento varilla. Para determinar c&#xF3;mo afecta el envejecimiento a los fotorreceptores de varilla y poner a prueba la hip&#xF3;tesis de la deficiencia de los retinoides, se compararon las propiedades morfol&#xF3;gicas y funcionales de las barras de adultos y de edad B6D2F1 o J ratones. Se encontr&#xF3; que el n&#xFA;mero de varillas y la longitud de sus segmentos externos se redujeron significativamente en 2,5 a&#xF1;os de edad, los ratones en comparaci&#xF3;n con 4-meses de edad los animales. El envejecimiento tambi&#xE9;n result&#xF3; en una reducci&#xF3;n del doble en el nivel total de opsina en la retina. Pruebas de comportamiento revela que la agudeza visual y escot&#xF3;pica la sensibilidad al contraste se redujo en un doble en ratones de edad, y la vara de grabaciones ERG demostr&#xF3; reducci&#xF3;n de las amplitudes de los dos a-y b-ondas. Sensibilidad de varillas de edad determinados a partir de una sola c&#xE9;lula de grabaciones tambi&#xE9;n se redujo en 1,5 veces, que corresponde a no m&#xE1;s de 1% opsina libre en estos fotorreceptores, y los par&#xE1;metros cin&#xE9;ticos de tenue respuesta de flash no fueron alterados. Notablemente, la tasa de adaptaci&#xF3;n varilla oscura no se vio afectada por la edad. Por lo tanto, nuestros resultados argumentar en contra de la deficiencia relacionada con la edad de 11-cis-retinal en el B6D2F1 / J del ciclo del rat&#xF3;n la barra visual. Sorprendentemente, el nivel de ruido oscuro celular se increment&#xF3; en barras de edad, proporcionando un mecanismo alternativo para su desensibilizaci&#xF3;n.

Relacionada con la edad deterioro de la visi&#xF3;n de Rod en ratones

Le RGS9 &#xB7; G&#x3B2;5 complexe est le principal r&#xE9;gulateur de neurones &#xE0; la prot&#xE9;ine G de signalisation et montre s&#xE9;lectivit&#xE9; remarquable de la composition sous-unit&#xE9;. Dans photor&#xE9;cepteurs de la r&#xE9;tine, RGS9 &#xB7; G&#x3B2;5 est li&#xE9; &#xE0; la R9AP ancrage membranaire et le complexe r&#xE9;gule signalisation visuelle. Dans les neurones des noyaux gris centraux, RGS9 &#xB7; G&#x3B2;5 est plut&#xF4;t associ&#xE9; &#xE0; une prot&#xE9;ine homologue, R7BP, et r&#xE9;glemente circuit de la r&#xE9;compense. Mise en cette composition s&#xE9;lective sous-unit&#xE9; du complexe dans les photor&#xE9;cepteurs de tige nous a permis d&#x26;#39;&#xE9;tudier le fondement mol&#xE9;culaire de la signalisation sp&#xE9;cificit&#xE9; dans diverses prot&#xE9;ines G voies. Nous avons trouv&#xE9; que les deux sous-unit&#xE9;s d&#x26;#39;ancrage membranaire jouent un r&#xF4;le dans la r&#xE9;gulation conserv&#xE9; des taux de prot&#xE9;ines de RGS9 &#xB7; G&#x3B2;5 et l&#x26;#39;am&#xE9;lioration de la capacit&#xE9; de RGS &#xB7; Les G&#x3B2;5 complexes pour stimuler l&#x26;#39;activit&#xE9; GTPase des prot&#xE9;ines G. Toutefois, des diff&#xE9;rences notables existent dans le ciblage intracellulaire de complexes alternativement configur&#xE9;s. Contrairement R9AP, qui repose sur des m&#xE9;canismes de ciblage passifs pour la livraison vers les segments externes des photor&#xE9;cepteurs, R7BP est exclu de cet endroit et est plut&#xF4;t cibl&#xE9; vers la membrane plasmique. R7BP complexes contenant pourraient &#xEA;tre redirig&#xE9;s vers les segments ext&#xE9;rieurs, o&#xF9; ils sont capables de r&#xE9;guler la cascade de phototransduction par les signaux actifs ciblant issus de la rhodopsine. Ces r&#xE9;sultats illustrent la diversit&#xE9; de la r&#xE9;glementation G-prot&#xE9;ine de signalisation par RGS &#xB7; Les G&#x3B2;5 complexes obtenus par le recrutement diff&#xE9;rentiel des ancres membranaires.

Les sous-unit&#xE9;s d&#x26;#39;ancrage membranaire Sp&#xE9;cifiez r&#xE8;glement s&#xE9;lective de RGS9 &#xB7; Gbeta5 complexe GAP dans les neurones photor&#xE9;cepteurs

RGS9&middot;G&beta;5 &#x590D;&#x6742;&#x7684;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143; G-&#x86CB;&#x767D;&#x4FE1;&#x53F7;&#x8F6C;&#x5BFC;&#x7684;&#x5173;&#x952E;&#x8C03;&#x8282;&#x5668;&#xFF0C;&#x663E;&#x793A;&#x4E86;&#x975E;&#x51E1;&#x7684;&#x4E9A;&#x57FA;&#x7EC4;&#x6210;&#x7684;&#x9009;&#x62E9;&#x6027;&#x3002;&#x5728;&#x89C6;&#x7F51;&#x819C;&#x611F;&#x5149;&#x7EC6;&#x80DE;&#xFF0C;RGS9&middot;G&beta;5 &#x7ED1;&#x5B9A;&#x5230;&#x819C;&#x951A; R9AP &#x548C;&#x590D;&#x6742;&#x8C03;&#x8282;&#x89C6;&#x89C9;&#x4FE1;&#x53F7;&#x3002;&#x4E2D;&#x7684;&#x57FA;&#x5E95;&#x795E;&#x7ECF;&#x8282;&#x7684;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#xFF0C;RGS9&middot;G&beta;5 &#x76F8;&#x53CD;&#x662F;&#x540C;&#x6E90;&#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#xFF0C;R7BP&#xFF0C;&#x4E0E;&#x76F8;&#x5173;&#x8054;&#xFF0C;&#x5E76;&#x89C4;&#x5B9A;&#x5956;&#x52B1;&#x7535;&#x8DEF;&#x3002;&#x5207;&#x6362;&#x6B64;&#x9009;&#x62E9;&#x6027;&#x4E9A;&#x5355;&#x4F4D;&#x7EC4;&#x6210;&#x7684;&#x590D;&#x6742;&#x6746;&#x611F;&#x53D7;&#x5668;&#xFF0C;&#x4F7F;&#x6211;&#x4EEC;&#x80FD;&#x591F;&#x5728;&#x4E0D;&#x540C;&#x7684; G &#x86CB;&#x767D;&#x901A;&#x8DEF;&#x4FE1;&#x53F7;&#x7279;&#x5F02;&#x6027;&#x7684;&#x5206;&#x5B50;&#x57FA;&#x7840;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x4E2D;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x53D1;&#x73B0;&#x8FD9;&#x4E24;&#x4E2A;&#x819C;&#x951A;&#x56FA;&#x4E9A;&#x57FA;&#x53D1;&#x6325;&#x5B88;&#x6052;&#x7684;&#x4F5C;&#x7528;&#xFF0C;&#x8C03;&#x8282;&#x86CB;&#x767D;&#x6C34;&#x5E73;&#x7684; RGS9&middot;G&beta;5 &#x548C; RGS&middot; &#x7684;&#x80FD;&#x529B;&#x52A0;&#x5F3A;G&beta;5 &#x914D;&#x5408;&#x7269;&#x523A;&#x6FC0;&#x86CB;&#x767D; G &#x86CB;&#x767D;&#x7684;&#x6D3B;&#x6027;&#x3002;&#x7136;&#x800C;&#xFF0C;&#x6216;&#x8005;&#x914D;&#x7F6E;&#x914D;&#x5408;&#x7269;&#x7684;&#x4E9A;&#x7EC6;&#x80DE;&#x9776;&#x5B58;&#x5728;&#x663E;&#x8457;&#x5DEE;&#x5F02;&#x3002;&#x4E0E;&#x4E0D;&#x540C;&#x7684;&#x662F; R9AP&#xFF0C;&#x5B83;&#x4F9D;&#x8D56;&#x4E8E;&#x88AB;&#x52A8;&#x7684;&#x5B9A;&#x5411;&#x673A;&#x5236;&#xFF0C;&#x8FD0;&#x9001;&#x5230;&#x89C6;&#x7F51;&#x819C;&#x611F;&#x5149;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x5916;&#x6BB5;&#xFF0C;R7BP &#x88AB;&#x6392;&#x9664;&#x5728;&#x6B64;&#x4F4D;&#x7F6E;&#x548C;&#x76F8;&#x53CD;&#x4E13;&#x95E8;&#x9488;&#x5BF9;&#x7B49;&#x79BB;&#x5B50;&#x819C;&#x3002;R7BP &#x5305;&#x542B;&#x914D;&#x5408;&#x7269;&#x53EF;&#x5916;&#x7684;&#x7FA4;&#x4F53;&#xFF0C;&#x4ED6;&#x4EEC;&#x5728;&#x54EA;&#x91CC;&#x80FD;&#x591F;&#x7531;&#x6765;&#x81EA;&#x89C6;&#x7D2B;&#x7EA2;&#x8D28;&#x7684;&#x6D3B;&#x52A8;&#x76EE;&#x6807;&#x4FE1;&#x53F7;&#x8C03;&#x8282;&#x7684; phototransduction &#x7EA7;&#x8054;&#x91CD;&#x65B0;&#x8DEF;&#x7531;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7814;&#x7A76;&#x7ED3;&#x679C;&#x8BF4;&#x660E; RGS&middot; G-&#x86CB;&#x767D;&#x4FE1;&#x53F7;&#x8F6C;&#x5BFC;&#x8C03;&#x8282;&#x7684;&#x591A;&#x6837;&#x6027;G&beta;5 &#x914D;&#x5408;&#x7269;&#x819C;&#x951A;&#x5FAE;&#x5206;&#x62DB;&#x52DF;&#x6240;&#x53D6;&#x5F97;&#x3002;

&#x819C;&#x951A;&#x56FA;&#x4E9A;&#x57FA;&#x6307;&#x5B9A; RGS9&middot; &#x9009;&#x62E9;&#x6027;&#x8C03;&#x8282;Gbeta5 &#x5DEE;&#x8DDD;&#x5728;&#x611F;&#x5149;&#x5668;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x590D;&#x6742;&#x3002;

The RGS9Â·GÎ²5 complex is the key regulator of neuronal G-protein signaling and shows remarkable selectivity of subunit composition. In retinal photoreceptors, RGS9Â·GÎ²5 is bound to the membrane anchor R9AP and the complex regulates visual signaling. In the basal ganglia neurons, RGS9Â·GÎ²5 is instead associated with a homologous protein, R7BP, and regulates reward circuit. Switching this selective subunit composition of the complex in rod photoreceptors allowed us to study the molecular underpinning of signaling specificity in diverse G-protein pathways. We have found that both membrane anchoring subunits play a conserved role in regulating protein levels of RGS9Â·GÎ²5 and enhancing the ability of RGSÂ·GÎ²5 complexes to stimulate GTPase activity of G proteins. However, notable differences exist in the subcellular targeting of alternatively configured complexes. Unlike R9AP, which relies on passive targeting mechanisms for the delivery to the outer segments of the photoreceptors, R7BP is excluded from this location and is instead specifically targeted to the plasma membrane. R7BP-containing complexes could be rerouted to the outer segments, where they are capable of regulating the phototransduction cascade by the active targeting signals derived from rhodopsin. These findings illustrate the diversity of the G-protein signaling regulation by RGSÂ·GÎ²5 complexes achieved by differential recruitment of the membrane anchors.

Membrane anchoring subunits specify selective regulation of RGS9Â·Gbeta5 GAP complex in photoreceptor neurons.

Die RGS9&middot;G&beta;5 Komplex ist die zentrale Regulierungsbeh&ouml;rde der neuronalen G-Protein-Signalisierung und zeigt bemerkenswerte Selektivit&auml;t der Untereinheit Zusammensetzung. In Retina Photorezeptoren, RGS9&middot;G&beta;5 an der Membrane Anker R9AP gebunden ist und die Anlage regelt visuelle Signalisierung. In den Basalganglien Neuronen, RGS9&middot;G&beta;5 wird stattdessen ein Homologen Protein, R7BP, zugeordnet und reguliert die Belohnung Stromkreis. Schalten diese selektive Untereinheit Zusammensetzung des Komplexes in Stab Photorezeptoren erlaubt uns, die molekulare Grundlage der Signalisierung Besonderheit in verschiedene G-Protein-Wege zu studieren. Wir haben festgestellt, dass beide Membran-Verankerung-Untereinheiten eine konservierte Rolle bei der Regulierung von Protein-Ebene des RGS9&middot;G&beta;5 und erh&ouml;ht die F&auml;higkeit des RGS&middot;G&beta;5-komplexe GTPase-Aktivit&auml;t der G-Proteine zu stimulieren. Wichtige Unterschiede bestehen jedoch in die subzellulare gezielte Alternativ konfigurierten komplexe. Im Gegensatz zu R9AP, die auf passive zielenden Mechanismen f&uuml;r die Lieferung an die &auml;u&szlig;eren Segmente der Photorezeptoren zur&uuml;ckgreift, R7BP ist von dieser Position ausgeschlossen und stattdessen gezielt an der Plasmamembran. R7BP-haltigen komplexe k&ouml;nnte auf die &auml;u&szlig;eren Segmente umgeleitet werden, wo sie zur Regelung der Signaltransduktion-Kaskade von den aktiven zielenden Signalen von Rhodopsin abgeleitet sind. Diese Ergebnisse zeigen die Vielfalt der G-Protein-Signalling-Verordnung durch RGS&middot;G&beta;5-komplexen durch differenzielle Rekrutierung der Membrane Anker erreicht.

Membran-Verankerung-Untereinheiten angeben selektive Regulierung der RGS9&middot;Gbeta5 L&uuml;cke Komplex in Photorezeptoren Neuronen.

Il RGS9&middot;Complesso G&beta;5 &egrave; il regolatore chiave della G-proteina di segnalazione neuronale e dimostra notevole selettivit&agrave; della composizione di subunit&agrave;. In fotorecettori retinici, RGS9&middot;G&beta;5 &egrave; associato per l&#39;ancoraggio della membrana R9AP e il complesso regola la segnalazione visiva. Nei neuroni dei gangli basali, RGS9&middot;G&beta;5 invece &egrave; associato a una proteina omologa, R7BP e regola il circuito della ricompensa. Questa composizione selettiva subunit&agrave; del complesso di commutazione in fotorecettori rod ci ha permesso di studiare la base molecolare della segnalazione specificit&agrave; in diversi percorsi di G-proteina. Abbiamo trovato che entrambe le subunit&agrave; ancoraggio membrana svolgono un ruolo conservato nel regolare i livelli della proteina di RGS9&middot;G&beta;5 e rafforzare la capacit&agrave; di RGS&middot;G&beta;5 complessi per stimolare attivit&agrave; GTPasi proteine G. Tuttavia, notevoli differenze esistono nel targeting sottocellulare di complessi in alternativa configurati. A differenza di R9AP, che si basa su meccanismi passivi targeting per la consegna ai segmenti esterni dei fotorecettori, R7BP &egrave; escluso da questa posizione e invece &egrave; specificamente mirate alla membrana del plasma. R7BP contenenti complessi potrebbero essere ridiretto ai segmenti esterni, dove sono in grado di regolare la cascata phototransduction dai segnali targeting attivi derivati dalla rodopsina. Questi risultati illustrano la diversit&agrave; del regolamento G-proteina di segnalazione di RGS&middot;G&beta;5 complessi raggiunti dal reclutamento differenziale della membrana ancore.

Ancoraggio subunit&agrave; membrana specifica regolazione selettiva della RGS9&middot;Gbeta5 GAP complessi nei neuroni del fotorecettore.

RGS9&#xB7;G&#x3B2;5&#x8907;&#x5408;&#x4F53;&#x306F;&#x795E;&#x7D4C;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;G&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#x306E;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x56E0;&#x5B50;&#x3067;&#x3042;&#x308A;&#x3001;&#x30B5;&#x30D6;&#x30E6;&#x30CB;&#x30C3;&#x30C8;&#x7D44;&#x6210;&#x306E;&#x9855;&#x8457;&#x306A;&#x9078;&#x629E;&#x6027;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x7DB2;&#x819C;&#x306E;&#x5149;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x3001;RGS9&#xB7;G&#x3B2;5&#x306B;&#x819C;&#x30A2;&#x30F3;&#x30AB;&#x30FC;R9AP&#x306B;&#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C9;&#x3055;&#x308C;&#x3001;&#x8907;&#x96D1;&#x306A;&#x3001;&#x8996;&#x899A;&#x7684;&#x306A;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#x3092;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x3059;&#x308B;&#x3002;&#x5927;&#x8133;&#x57FA;&#x5E95;&#x6838;&#x306E;&#x795E;&#x7D4C;&#x7D30;&#x80DE;&#x3001;RGS9&#x3067;&#xB7;G&#x3B2;5&#x3067;&#x306F;&#x306A;&#x304F;&#x3001;&#x76F8;&#x540C;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x3001;R7BP&#x306B;&#x95A2;&#x9023;&#x4ED8;&#x3051;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x304A;&#x308A;&#x3001;&#x5831;&#x916C;&#x56DE;&#x8DEF;&#x3092;&#x5236;&#x5FA1;&#x3059;&#x308B;&#x3002;&#x687F;&#x4F53;&#x3067;&#x8907;&#x96D1;&#x306A;&#x306E;&#x306F;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x9078;&#x629E;&#x7684;&#x306A;&#x30B5;&#x30D6;&#x30E6;&#x30CB;&#x30C3;&#x30C8;&#x7D44;&#x6210;&#x3092;&#x5207;&#x308A;&#x66FF;&#x3048;&#x308B;&#x3068;&#x3001;&#x79C1;&#x305F;&#x3061;&#x306F;&#x591A;&#x69D8;&#x306A;G&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x7D4C;&#x8DEF;&#x306E;&#x7279;&#x7570;&#x6027;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;&#x306E;&#x5206;&#x5B50;&#x57FA;&#x76E4;&#x3092;&#x7814;&#x7A76;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;&#x30E6;&#x30CB;&#x30C3;&#x30C8;&#x3092;&#x56FA;&#x5B9A;&#x4E21;&#x65B9;&#x306E;&#x819C;&#x304C;RGS9&#xB7;G&#x3B2;5&#x306E;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x3092;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x3059;&#x308B;&#x3068;&#xB7;G&#x3B2;5&#x8907;&#x5408;&#x4F53;&#x306F;G&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;GTP&#x30A2;&#x30FC;&#x30BC;&#x6D3B;&#x6027;&#x3092;&#x523A;&#x6FC0;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306E;RGS&#x306E;&#x80FD;&#x529B;&#x3092;&#x9AD8;&#x3081;&#x308B;&#x4E0A;&#x3067;&#x4FDD;&#x5B58;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x679C;&#x305F;&#x3059;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x767A;&#x898B;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3057;&#x304B;&#x3057;&#x3001;&#x9855;&#x8457;&#x306A;&#x9055;&#x3044;&#x306F;&#x3001;&#x4EE3;&#x308F;&#x308A;&#x306B;&#x8A2D;&#x5B9A;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x8907;&#x5408;&#x4F53;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x5185;&#x6A19;&#x7684;&#x306B;&#x5B58;&#x5728;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x5149;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x306E;&#x5916;&#x5074;&#x306E;&#x30BB;&#x30B0;&#x30E1;&#x30F3;&#x30C8;&#x306B;&#x914D;&#x4FE1;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x53D7;&#x52D5;&#x7684;&#x30BF;&#x30FC;&#x30B2;&#x30C6;&#x30A3;&#x30F3;&#x30B0;&#x306E;&#x30E1;&#x30AB;&#x30CB;&#x30BA;&#x30E0;&#x306B;&#x4F9D;&#x5B58;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;R9AP&#x3068;&#x306F;&#x7570;&#x306A;&#x308A;&#x3001;R7BP&#x306F;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x5834;&#x6240;&#x304B;&#x3089;&#x9664;&#x5916;&#x3055;&#x308C;&#x3001;&#x4EE3;&#x308F;&#x308A;&#x306B;&#x5177;&#x4F53;&#x7684;&#x306B;&#x7D30;&#x80DE;&#x819C;&#x3092;&#x5BFE;&#x8C61;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002; R7BP&#x542B;&#x6709;&#x8907;&#x5408;&#x4F53;&#x306F;&#x3001;&#x5F7C;&#x3089;&#x306F;&#x30ED;&#x30C9;&#x30D7;&#x30B7;&#x30F3;&#x304B;&#x3089;&#x6D3E;&#x751F;&#x3057;&#x305F;&#x80FD;&#x52D5;&#x7684;&#x30BF;&#x30FC;&#x30B2;&#x30C6;&#x30A3;&#x30F3;&#x30B0;&#x4FE1;&#x53F7;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x5149;&#x60C5;&#x5831;&#x4F1D;&#x9054;&#x30AB;&#x30B9;&#x30B1;&#x30FC;&#x30C9;&#x3092;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x308B;&#x5916;&#x5074;&#x306E;&#x30BB;&#x30B0;&#x30E1;&#x30F3;&#x30C8;&#x306B;&#x8EE2;&#x9001;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x77E5;&#x898B;&#x306F;&#x3001;&#x7D30;&#x80DE;&#x819C;&#x30A2;&#x30F3;&#x30AB;&#x30FC;&#x306E;&#x5DEE;&#x63A1;&#x7528;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x9054;&#x6210;RGS&#xB7;G&#x3B2;5&#x8907;&#x5408;&#x4F53;&#x306B;&#x3088;&#x308B;G&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x306E;&#x591A;&#x69D8;&#x6027;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x30B5;&#x30D6;&#x30E6;&#x30CB;&#x30C3;&#x30C8;&#x306F;RGS9&#x306E;&#x9078;&#x629E;&#x7684;&#x8ABF;&#x7BC0;&#xB7;&#x5149;&#x53D7;&#x5BB9;&#x30CB;&#x30E5;&#x30FC;&#x30ED;&#x30F3;&#x306E;&#x8907;&#x96D1;&#x306A;Gbeta5 GAP&#x3092;&#x6307;&#x5B9A;&#x3057;&#x3066;&#x30A2;&#x30F3;&#x30AB;&#x30FC;&#x819C;

RGS9&middot;G&beta;5 &#xBCF5;&#xC7A1; &#xD55C; &#xC2E0;&#xACBD; &#xC2E0;&#xD638; G-&#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xD0A4; &#xB808; &#xADE4; &#xB808;&#xC774; &#xD130; &#xBC0F; &#xC18C; &#xB2E8;&#xC704; &#xAD6C;&#xC131;&#xC758; &#xB180;&#xB77C;&#xC6B4; &#xC120;&#xD0DD;&#xB3C4; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB9DD;&#xB9C9; &#xB300;&#xB1CC;, rgs9&middot;&#xC5D0;&#xC11C;G&beta;5 &#xB9C9; &#xC575;&#xCEE4; R9AP &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xB418;&#xC5B4; &#xC788;&#xACE0; &#xBCF5;&#xC7A1; &#xD55C; &#xC2DC;&#xAC01;&#xC801; &#xC2E0;&#xD638;&#xB97C; &#xC870;&#xC808; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. RGS9&middot; &#xAE30;&#xCD08; &#xC911;&#xCD94; &#xC2E0;&#xACBD;&#xC5D0;G&beta;5, R7BP, &#xB3D9;&#xC885; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC5F0;&#xACB0; &#xB300;&#xC2E0; &#xB418;&#xBA70; &#xBCF4;&#xC0C1; &#xD68C;&#xB85C; &#xC870;&#xC808;. &#xB2E4;&#xC591; &#xD55C; G-&#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xACBD;&#xB85C; &#xC2E0;&#xD638; &#xD2B9;&#xC774;&#xC131; &#xBD84;&#xC790; underpinning &#xACF5;&#xBD80; &#xD558; &#xB85C;&#xB4DC; &#xB300;&#xB1CC;&#xC5D0;&#xC11C;&#xC758; &#xBCF5;&#xC7A1; &#xD55C; &#xC120;&#xD0DD;&#xC801; &#xC18C; &#xB2E8;&#xC704; &#xC131;&#xBD84;&#xC774; &#xC2A4;&#xC704;&#xCE6D;. &#xC6B0;&#xB9AC; &#xBAA8;&#xB450; &#xB9C9; &#xC815;&#xBC15; &#xC18C; &#xB2E8;&#xC704; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC218;&#xC900;&#xC758; RGS9&middot; &#xC870;&#xC808;&#xC5D0; &#xBCF4;&#xC874; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xBC1C;&#xACAC; &#xD588;&#xB2E4;G&beta;5 &#xBC0F; RGS&middot;&#xC758; &#xB2A5;&#xB825;&#xC744; &#xD5A5;&#xC0C1;G&beta;5 &#xB2E8;&#xC9C0; G &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; GTPase &#xD65C;&#xB3D9;&#xC744; &#xC790;&#xADF9; &#xD558;. &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098;, &#xC8FC;&#xBAA9;&#xD560; &#xB9CC;&#xD55C; &#xCC28;&#xC774; &#xB610;&#xB294; &#xAD6C;&#xC131; &#xB41C; &#xB2E8;&#xC9C0;&#xC758; subcellular &#xD0C0;&#xAC9F;&#xD305;&#xC5D0; &#xC874;&#xC7AC; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC678;&#xBD80; &#xC138;&#xADF8;&#xBA3C;&#xD2B8;&#xB294; &#xB300;&#xB1CC;&#xC758; &#xBC30;&#xB2EC;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC218;&#xB3D9; &#xD0C0;&#xAC9F;&#xD305; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;&#xC5D0; &#xC758;&#xC874; &#xD558;&#xB294; r9ap&#xC640;&#xB294; &#xB2EC;&#xB9AC; r7bp&#xB294;&#xC774; &#xC704;&#xCE58;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC81C;&#xC678; &#xD558; &#xACE0;&#xB294; &#xD50C;&#xB77C;&#xC988;&#xB9C8; &#xBA64;&#xBE0C;&#xB808;&#xC778;&#xC744; &#xAD6C;&#xCCB4;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xD0C0;&#xAC9F;&#xD305; &#xB300;&#xC2E0;. &#xB2E8;&#xC9C0; r7bp&#xB97C; &#xD3EC;&#xD568; &#xD558;&#xB294; phototransduction &#xCE90;&#xC2A4;&#xCF00;&#xC774;&#xB4DC; rhodopsin&#xC5D0;&#xC11C; &#xD30C;&#xC0DD; &#xB41C; &#xD65C;&#xC131; &#xB300;&#xC0C1; &#xC2E0;&#xD638;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC870;&#xC808; &#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xB294; &#xC678;&#xBD80; &#xC138;&#xADF8;&#xBA3C;&#xD2B8;&#xC5D0; &#xAC70;&#xB9AC;&#xB85C; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xC5F0;&#xAD6C; &#xACB0;&#xACFC; RGS&middot;, G-&#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC2E0;&#xD638; &#xADDC;&#xC81C;&#xC758; &#xB2E4;&#xC591;&#xC131; &#xC124;&#xBA85;G&beta;5 &#xB2E8;&#xC9C0; &#xB9C9; &#xC575;&#xCEE4;&#xC758; &#xCC28;&#xB3D9; &#xBAA8;&#xC9D1; &#xD558; &#xC5EC; &#xB2EC;&#xC131;.

&#xB9C9; &#xC815;&#xBC15; &#xC18C; &#xB2E8;&#xC704; &#xC9C0;&#xC815; rgs9&middot;&#xC758; &#xC120;&#xD0DD;&#xC801; &#xADDC;&#xC81C;Gbeta5 &#xAC04;&#xACA9; &#xD3EC;&#xD1A0; &#xB9AC;&#xC149;&#xD130; &#xB274;&#xB7F0;&#xC5D0; &#xBCF5;&#xC7A1; &#xD55C;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;.

El RGS9 &#xB7; G&#x3B2;5 complejo es el regulador clave de la prote&#xED;na G-neuronales de se&#xF1;alizaci&#xF3;n y muestra notable selectividad de la composici&#xF3;n de la subunidad. En fotorreceptores de la retina, RGS9 &#xB7; G&#x3B2;5 est&#xE1; enlazado a la R9AP anclaje a la membrana y el complejo regula se&#xF1;alizaci&#xF3;n visual. En las neuronas de los ganglios basales, RGS9 &#xB7; G&#x3B2;5 lugar se asocia con una prote&#xED;na hom&#xF3;loga, R7BP, y regula el circuito de recompensa. Cambio de la composici&#xF3;n de la subunidad selectiva del complejo en fotorreceptores de los bastones nos ha permitido estudiar el fundamento molecular de se&#xF1;alizaci&#xF3;n de la especificidad de diversas prote&#xED;nas G-v&#xED;as. Hemos encontrado que tanto el anclaje a la membrana subunidades desempe&#xF1;an un papel conservado en la regulaci&#xF3;n de los niveles de prote&#xED;na de RGS9 &#xB7; G&#x3B2;5 y la mejora de la capacidad de Rio Grande do Sul &#xB7; Los G&#x3B2;5 complejos para estimular la actividad GTPasa de las prote&#xED;nas G. Sin embargo, existen diferencias notables en la orientaci&#xF3;n subcelular de los complejos alternativamente configurados. A diferencia de R9AP, que se basa en los mecanismos de focalizaci&#xF3;n pasivos para la entrega de los segmentos externos de los fotorreceptores, R7BP est&#xE1; excluido de esta ubicaci&#xF3;n y en lugar de espec&#xED;ficamente a la membrana plasm&#xE1;tica. R7BP que contienen complejos podr&#xED;a ser desviado a los segmentos exteriores, donde son capaces de regular la cascada de fototransducci&#xF3;n por las se&#xF1;ales activas dirigidas derivados de rodopsina. Estos resultados ilustran la diversidad de la regulaci&#xF3;n de la prote&#xED;na G de se&#xF1;alizaci&#xF3;n de Rio Grande do Sul &#xB7; Los G&#x3B2;5 complejos obtenidos por el reclutamiento diferencial de los anclajes de la membrana.

Subunidades anclaje a la membrana Especifique Reglamento selectiva de RGS9 &#xB7; Gbeta5 Complejo GAP en neuronas fotorreceptoras

&#x5FEB;&#x901F;&#x518D;&#x751F;&#x540E;&#x5176;&#x8C03;&#x4EA1;&#x7684;&#x89C6;&#x8272;&#x7D20;&#x662F;&#x5168;&#x5929;&#x9525;&#x611F;&#x53D7;&#x5668;&#x7684;&#x529F;&#x80FD;&#x7684;&#x5173;&#x952E;&#x3002;&#x867D;&#x7136;&#x56DE;&#x6536;&#x6746;&#x8272;&#x7D20;&#x518D;&#x751F;&#x53D1;&#x8272;&#x56E2;&#x7684;&#x89C6;&#x7F51;&#x819C;&#x8272;&#x7D20;&#x4E0A;&#x76AE; (RPE) &#x7684;&#x89C6;&#x89C9;&#x5468;&#x671F;&#x7684;&#x53CD;&#x5E94;&#x5F88;&#x597D;&#x7684;&#x7279;&#x70B9;&#xFF0C;&#x4F7F;&#x9525;&#x8272;&#x7D20;&#x7684;&#x5FEB;&#x901F;&#x518D;&#x751F;&#x7684;&#x76F8;&#x5E94;&#x673A;&#x5236;&#x4E86;&#x89E3;&#x5F97;&#x5F88;&#x5C11;&#x3002;&#x5269;&#x4F59;&#x7684;&#x4E00;&#x4E2A;&#x5173;&#x952E;&#x95EE;&#x9898;&#x662F;&#x6700;&#x8FD1;&#x53D1;&#x73B0;&#x7684;&#x9525;&#x7279;&#x5B9A;&#x89C6;&#x7F51;&#x819C;&#x89C6;&#x89C9;&#x5468;&#x671F;&#x4E0E;&#x54FA;&#x4E73;&#x52A8;&#x7269;&#x9525;&#x8272;&#x7D20;&#x518D;&#x751F;&#x7684;&#x7ECF;&#x5178;&#x89C6;&#x7F51;&#x819C;&#x8272;&#x7D20;&#x4E0A;&#x76AE;&#x4F9D;&#x8D56;&#x89C6;&#x89C9;&#x5468;&#x671F;&#x7684;&#x76F8;&#x5BF9;&#x8D21;&#x732E;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;&#x5B83;&#x4E0D;&#x6E05;&#x695A;&#x5728;&#x52A0;&#x901F;&#x54FA;&#x4E73;&#x52A8;&#x7269;&#x9525;&#x8272;&#x7D20;&#x518D;&#x751F;&#x4E2D;&#x7684;&#x4EC0;&#x4E48;&#x4F5C;&#x7528;&#xFF0C;&#x5982;&#x679C;&#x4EFB;&#x4F55;&#x4E30;&#x5BCC;&#x7684; interphotoreceptor &#x7EF4;&#x7532;&#x9178;&#x7ED3;&#x5408;&#x86CB;&#x767D; (IRBP) &#x63A8;&#x5B9A;&#x7684;&#x53D1;&#x8272;&#x56E2;&#xFF0C;&#x4EA4;&#x901A;&#x4FBF;&#x5229;&#x3002;&#x8981;&#x89E3;&#x51B3;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x95EE;&#x9898;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x4F7F;&#x7528; transretinal &#x5F55;&#x97F3;&#x6765;&#x8BC4;&#x4F30;&#x5728;&#x5B64;&#x7ACB;&#x7684;&#x89C6;&#x7F51;&#x819C;&#x548C;&#x4ECE;&#x63A7;&#x5236;&#x548C; IRBP &#x57FA;&#x56E0;&#x7F3A;&#x9677;&#x5C0F;&#x9F20; eyecups M L &#x9525;&#x5F62;&#x8272;&#x7D20;&#x518D;&#x751F;&#x3002;&#x5F15;&#x4EBA;&#x6CE8;&#x76EE;&#x7684;&#x662F;&#xFF0C;&#x9F20;&#x6807;&#x89C6;&#x7F51;&#x819C;&#x4FC3;&#x8FDB; M L &#x9525;&#x5F62;&#x6697;&#x9002;&#x5E94;&#x500D;&#x5FEB;&#x4E8E;&#x89C6;&#x7F51;&#x819C;&#x8272;&#x7D20;&#x4E0A;&#x76AE;&#x3002;&#x4F46;&#x662F;&#xFF0C;&#x5B8C;&#x6210;&#x9525;&#x6062;&#x590D;&#x9700;&#x8981;&#x4E24;&#x4E2A;&#x89C6;&#x89C9;&#x7684;&#x5468;&#x671F;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x7ED3;&#x8BBA;&#x89C6;&#x7F51;&#x819C;&#x89C6;&#x89C9;&#x5468;&#x671F;&#x662F;&#x521D;&#x59CB;&#x7684;&#x5FEB;&#x901F;&#x518D;&#x751F;&#x7684;&#x9F20;&#x6807; M L &#x9525;&#x5F62;&#x989C;&#x6599;&#x5728;&#x6697;&#x9002;&#x5E94;&#x8FC7;&#x7A0B;&#x7684;&#x5173;&#x952E;&#xFF0C;&#x800C;&#x901F;&#x5EA6;&#x8F83;&#x6162;&#x7684;&#x89C6;&#x7F51;&#x819C;&#x8272;&#x7D20;&#x4E0A;&#x76AE;&#x89C6;&#x89C9;&#x5468;&#x671F;&#x662F;&#x5B8C;&#x6210;&#x8FD9;&#x4E00;&#x8FDB;&#x7A0B;&#x6240;&#x9700;&#x3002;&#x867D;&#x7136;&#x5220;&#x9664; IRBP &#x7684;&#x51CF;&#x5C11;&#x5E45;&#x5EA6;&#x548C;&#x51CF;&#x7F13;&#x9F20;&#x6807; M L &#x9525;&#x5F62;&#x5149;&#x52A8;&#x529B;&#x5B66;&#xFF0C;&#x9525;&#x9002;&#x5E94;&#x5149;&#x7EBF;&#x660E;&#x4EAE;&#x5730;&#x7A33;&#x5B9A;&#x548C;&#x52A8;&#x529B;&#x5B66;&#x7684;&#x9525;&#x6697;&#x9002;&#x5E94;&#x662F;&#x4E0D;&#x4F1A;&#x53D7;&#x5F71;&#x54CD;&#x6216;&#x4FDD;&#x6301;&#x4E0D;&#x53D8; eyecup &#x4E2D;&#x5B64;&#x7ACB;&#x89C6;&#x7F51;&#x819C;&#x3002;&#x56E0;&#x6B64;&#xFF0C;IRBP &#x4E0D;&#x4F1A;&#x52A0;&#x901F;&#x9525;&#x8272;&#x7D20;&#x518D;&#x751F;&#x5E76;&#x4E0D;&#x662F;&#x5173;&#x952E;&#x7684;&#x51FD;&#x6570;&#x7684;&#x9F20;&#x6807; M/L-&#x9525;&#x5728;&#x660E;&#x4EAE;&#x7684;&#x706F;&#x5149;&#x3002;

&#x54FA;&#x4E73;&#x52A8;&#x7269;&#x9525;&#x89C6;&#x89C9;&#x5468;&#x671F;&#x4FC3;&#x8FDB;&#x5FEB;&#x901F; M L &#x9525;&#x5F62;&#x8272;&#x7D20;&#x518D;&#x751F;&#x4E0E; interphotoreceptor &#x7684;&#x7EF4;&#x7532;&#x9178;&#x7ED3;&#x5408;&#x86CB;&#x767D;&#x65E0;&#x5173;&#x3002;

Rapid regeneration of the visual pigment following its photoactivation is critical for the function of cone photoreceptors throughout the day. Though the reactions of the visual cycle in the retinal pigment epithelium (RPE) that recycle chromophore for rod pigment regeneration are well characterized, the corresponding mechanisms that enable rapid regeneration of cone pigment are poorly understood. A key remaining question is the relative contribution of the recently discovered cone-specific retina visual cycle and the classic RPE-dependent visual cycle to mammalian cone pigment regeneration. In addition, it is not clear what role, if any, the abundant interphotoreceptor retinoid-binding protein (IRBP) presumed to facilitate the traffic of chromophore, plays in accelerating mammalian cone pigment regeneration. To address these issues, we used transretinal recordings to evaluate M/L-cone pigment regeneration in isolated retinas and eyecups from control and IRBP-deficient mice. Remarkably, the mouse retina promoted M/L-cone dark adaptation eightfold faster than the RPE. However, complete cone recovery required both visual cycles. We conclude that the retina visual cycle is critical for the initial rapid regeneration of mouse M/L-cone pigment during dark adaptation, whereas the slower RPE visual cycle is required to complete the process. While the deletion of IRBP reduced the amplitude and slowed the kinetics of mouse M/L-cone photoresponses, cone adaptation in bright, steady light and the kinetics of cone dark adaptation were not affected in isolated retina or in intact eyecup. Thus, IRBP does not accelerate cone pigment regeneration and is not critical for the function of mouse M/L-cones in bright light.

The mammalian cone visual cycle promotes rapid M/L-cone pigment regeneration independently of the interphotoreceptor retinoid-binding protein.

La r&#xE9;g&#xE9;n&#xE9;ration rapide du pigment visuel suivant celui de sa photoactivation est critique pour la fonction des photor&#xE9;cepteurs &#xE0; c&#xF4;nes tout au long de la journ&#xE9;e. Bien que les r&#xE9;actions du cycle de visuel dans l&#x26;#39;&#xE9;pith&#xE9;lium pigmentaire r&#xE9;tinien (EPR) qui chromophore de recyclage pour la r&#xE9;g&#xE9;n&#xE9;ration pigment tige sont bien caract&#xE9;ris&#xE9;s, les m&#xE9;canismes correspondants qui permettent une r&#xE9;g&#xE9;n&#xE9;ration rapide de pigment c&#xF4;ne sont mal compris. Une question cl&#xE9; reste est la contribution relative du cycle de la r&#xE9;tine de c&#xF4;ne sp&#xE9;cifique r&#xE9;cemment d&#xE9;couvert visuelle et le classique RPE-d&#xE9;pendante cycle visuel &#xE0; la r&#xE9;g&#xE9;n&#xE9;ration c&#xF4;ne pigment chez les mammif&#xE8;res. En outre, on ne sait pas quel r&#xF4;le, le cas &#xE9;ch&#xE9;ant, le interphotoreceptor abondante r&#xE9;tino&#xEF;de-binding protein (IRBP) pr&#xE9;sum&#xE9;e afin de faciliter le trafic de chromophore, joue dans l&#x26;#39;acc&#xE9;l&#xE9;ration de la r&#xE9;g&#xE9;n&#xE9;ration chez les mammif&#xE8;res pigment c&#xF4;ne. Pour r&#xE9;pondre &#xE0; ces questions, nous avons utilis&#xE9; les enregistrements pour &#xE9;valuer la r&#xE9;g&#xE9;n&#xE9;ration transretinal pigment M / L-c&#xF4;ne dans les r&#xE9;tines isol&#xE9;es et &#x153;illetons de souris t&#xE9;moins et IRBP-d&#xE9;ficient. Remarquablement, la r&#xE9;tine de la souris promu M / L-c&#xF4;ne adaptation &#xE0; l&#x26;#39;obscurit&#xE9; octuple plus vite que l&#x26;#39;EPR. Toutefois, la reprise c&#xF4;ne complet exig&#xE9; des deux cycles de visuels. Nous concluons que le cycle de la r&#xE9;tine visuelle est essentielle pour la r&#xE9;g&#xE9;n&#xE9;ration initiale rapide de la souris M / L-c&#xF4;ne pigment pendant adaptation &#xE0; l&#x26;#39;obscurit&#xE9;, tandis que le cycle lent RPE visuelle est n&#xE9;cessaire pour terminer le processus. Alors que la suppression de IRBP r&#xE9;duit l&#x26;#39;amplitude et un ralentissement de la cin&#xE9;tique de la souris M / L-c&#xF4;ne photoresponses, l&#x26;#39;adaptation c&#xF4;ne lumineux, la lumi&#xE8;re constante et de la cin&#xE9;tique du c&#xF4;ne adaptation &#xE0; l&#x26;#39;obscurit&#xE9; ne sont pas affect&#xE9;s dans la r&#xE9;tine isol&#xE9;e ou en &#x153;illeton intacte. Ainsi, IRBP ne acc&#xE9;l&#xE9;rer la r&#xE9;g&#xE9;n&#xE9;ration de pigments des c&#xF4;nes et n&#x26;#39;est pas critique pour la fonction de souris M / L-c&#xF4;nes en pleine lumi&#xE8;re.

Le cycle de c&#xF4;ne visuel des mammif&#xE8;res Favorise la r&#xE9;g&#xE9;n&#xE9;ration rapide Pigment M / L-c&#xF4;ne Ind&#xE9;pendamment de la Interphotoreceptor r&#xE9;tino&#xEF;des liaison aux prot&#xE9;ines plasmatiques

Schnelle Regeneration der das Sehpigment nach seiner Photoaktivierung ist entscheidend f&uuml;r die Funktion der Zapfen-Photorezeptoren im Laufe des Tages. Obwohl die Reaktionen des visuellen Zyklus in retinalen Pigmentepithels (RPE), das Chromophor Stab Pigment Regeneration recyceln gut charakterisiert sind, werden die entsprechenden Mechanismen, mit denen schnelle Regeneration der Kegel Pigment schlecht verstanden. Eine zentrale verbleibende Frage ist der relative Anteil der vor kurzem entdeckten Kegel-spezifische Netzhaut visuellen Zyklus und der klassische RPE-abh&auml;ngige visuelle Zyklus S&auml;ugetier-Kegel Pigment Aufbereitung. Dar&uuml;ber hinaus ist es nicht klar, welche Rolle ggf. davon ausgegangen, dass das reichlich vorhandene interphotoreceptor Retinoid-verbindliches Protein (IRBP) zur Erleichterung des Verkehrs der Chromophor, spielt bei der Beschleunigung S&auml;ugetier-Kegel Pigment Regenerierung. Um diese Probleme anzugehen, haben wir Transretinal-Aufnahmen verwendet, M/L-Kegel-Pigment-Regeneration im isolierten Netzhaut und Augenmuscheln aus Kontroll- und IRBP-defizienten M&auml;usen zu bewerten. Bemerkenswert ist, bef&ouml;rdert die Netzhaut Maus M/L-Kegel-dunkel-Anpassung verachtfacht schneller als die RPE. Komplette Kegel Erholung sind jedoch beide visuellen Zyklen erforderlich. Wir schlie&szlig;en, dass der Netzhaut-visuelle-Zyklus f&uuml;r die anf&auml;ngliche schnelle Regeneration der Maus M/L-Kegel Pigment w&auml;hrend dunkel-Anpassung, wichtig ist, der langsamere visuelle RPE-Zyklus ist erforderlich, um den Vorgang abzuschlie&szlig;en. W&auml;hrend die Streichung von IRBP reduziert die Amplitude und verlangsamt die Kinetik der Maus M/L-Kegel-Photoresponses, Kegel-Anpassung in helles, verl&auml;ssliche Licht und die Kinetik der Kegel-dunkel-Adaption waren nicht betroffen in isolierten Netzhaut oder intakt Augenmuschel. So IRBP beschleunigt Kegel Pigment Regenerierung nicht und ist nicht entscheidend f&uuml;r die Funktion der Maus M/L-Zapfen in hellem Licht.

Der visuelle S&auml;ugetier-Kegel-Zyklus f&ouml;rdert schnelle M/L-Kegel-Pigment-Regeneration unabh&auml;ngig von der interphotoreceptor Retinoid-verbindliches Protein.

Rapida rigenerazione del pigmento visivo seguendo il photoactivation &egrave; critico per la funzione dei fotorecettori cono tutto il giorno. Anche se le reazioni del ciclo visivo nell&#39;epitelio pigmentato retinico (RPE) che riciclano cromoforo per la rigenerazione del pigmento rod sono ben caratterizzate, i corrispondenti meccanismi che consentono la rapida rigenerazione del pigmento cono sono mal capiti. Una domanda chiave rimanente &egrave; il contributo relativo della retina recentemente scoperto cono specifico ciclo visivo e il classico RPE-dipendente visual ciclo di rigenerazione del pigmento mammifero cono. Inoltre, non &egrave; chiaro quale ruolo, se del caso, l&#39;abbondante interphotoreceptor retinoid-binding protein (IRBP) si presume per facilitare il traffico del cromoforo, gioca nell&#39;accelerare la rigenerazione del pigmento cono dei mammiferi. Per risolvere questi problemi, abbiamo usato transretinal registrazioni per valutare la rigenerazione pigmento M/L-cono in retine isolate e paraocchi da controllo e mouse IRBP-carenti. Notevolmente, la retina di topo promosso M/L-cono oscuro adattamento otto volte pi&ugrave; velocemente che l&#39;EPR. Tuttavia, cono completo recupero necessari entrambi i cicli di visual. Possiamo concludere che il ciclo visivo retina &egrave; critico per la rapida rigenerazione iniziale del mouse pigmento M/L-cono durante l&#39;adattamento dark, considerando che il ciclo pi&ugrave; lento di visual RPE &egrave; necessario per completare il processo. Mentre l&#39;eliminazione dei IRBP ridotta ampiezza e rallentato la cinetica del mouse M/L-cono photoresponses, adattamento del cono di luce costante e la cinetica del cono oscuro adattamento non sono stati influenzati nella retina isolato o nell&#39;oculare intatto. Cos&igrave;, IRBP non accelerare la rigenerazione del pigmento cono e non &egrave; critico per la funzione del mouse M/L-coni in piena luce.

Il ciclo visivo dei mammiferi cono promuove la rapida rigenerazione del pigmento M/L-cono indipendentemente il retinoide-binding protein interphotoreceptor.

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IRBP&#x306E;&#x524A;&#x9664;&#x306F;&#x3001;&#x632F;&#x5E45;&#x3092;&#x6E1B;&#x5C11;&#x3055;&#x305B;&#x3001;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;M / L&#x30B3;&#x30FC;&#x30F3;&#x5149;&#x5FDC;&#x7B54;&#x306E;&#x901F;&#x5EA6;&#x3092;&#x6E1B;&#x901F;&#x3057;&#x306A;&#x304C;&#x3089;&#x3001;&#x660E;&#x308B;&#x3044;&#x3001;&#x5B89;&#x5B9A;&#x3057;&#x305F;&#x5149;&#x3068;&#x30B3;&#x30FC;&#x30F3;&#x6697;&#x9806;&#x5FDC;&#x306E;&#x52D5;&#x614B;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x30B3;&#x30FC;&#x30F3;&#x306E;&#x9069;&#x5FDC;&#x306F;&#x3001;&#x5358;&#x96E2;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x7DB2;&#x819C;&#x5185;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x7121;&#x50B7;&#x30A2;&#x30A4;&#x30AB;&#x30C3;&#x30D7;&#x306E;&#x5F71;&#x97FF;&#x3092;&#x53D7;&#x3051;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3067;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3057;&#x305F;&#x304C;&#x3063;&#x3066;&#x3001;IRBP&#x306F;&#x3001;&#x30B3;&#x30FC;&#x30F3;&#x8272;&#x7D20;&#x306E;&#x518D;&#x751F;&#x3092;&#x52A0;&#x901F;&#x3057;&#x306A;&#x3044;&#x3001;&#x660E;&#x308B;&#x3044;&#x5149;&#x306E;&#x4E2D;&#x3067;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;M / L&#x9310;&#x4F53;&#x306E;&#x6A5F;&#x80FD;&#x306B;&#x3068;&#x3063;&#x3066;&#x91CD;&#x8981;&#x3067;&#x306F;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3002;

&#x54FA;&#x4E73;&#x985E;&#x30B3;&#x30FC;&#x30F3;&#x8996;&#x899A;&#x30B5;&#x30A4;&#x30AF;&#x30EB;&#x306F;&#x9593;&#x30EC;&#x30C1;&#x30CE;&#x30A4;&#x30C9;&#x7D50;&#x5408;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x3068;&#x306F;&#x72EC;&#x7ACB;&#x3057;&#x3066;&#x8FC5;&#x901F;&#x306A;M / L-&#x9310;&#x4F53;&#x8272;&#x7D20;&#x306E;&#x518D;&#x751F;&#x3092;&#x4FC3;&#x9032;

&#xADF8;&#xAC83;&#xC758; photoactivation&#xC5D0; &#xB530;&#xB77C; &#xC2DC;&#xAC01; &#xC0C9;&#xC18C;&#xC758; &#xC2E0;&#xC18D;&#xD55C; &#xC7AC;&#xC0DD;&#xC131;&#xC740; &#xD558;&#xB8E8; &#xC885;&#xC77C; &#xCF58; &#xB300;&#xB1CC;&#xC758; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC911;&#xC694; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xBE44;&#xB85D; &#xBC1C; &#xB9C9;&#xB300; &#xC0C9;&#xC18C; &#xC7AC;&#xC0DD; &#xC7AC;&#xD65C;&#xC6A9; &#xB9DD;&#xB9C9; &#xC0C9;&#xC18C; &#xC0C1;&#xD53C; (RPE)&#xC5D0; &#xC2DC;&#xAC01;&#xC801; &#xC8FC;&#xAE30;&#xC758; &#xBC18;&#xC751; &#xD2B9;&#xC9D5; &#xC798; &#xC6D0;&#xBFD4; &#xC0C9;&#xC18C;&#xC758; &#xC2E0;&#xC18D;&#xD55C; &#xC7AC;&#xC0DD;&#xC131;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xB294; &#xD574;&#xB2F9; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998; &#xC774;&#xD574; &#xAC00;&#xB09C; &#xD558; &#xAC8C; &#xB41C;&#xB2E4;. &#xC8FC;&#xC694; &#xB098;&#xBA38;&#xC9C0; &#xC9C8;&#xBB38;&#xC740; &#xCD5C;&#xADFC;&#xC5D0; &#xBC1C;&#xACAC; &#xB41C; &#xCF58; &#xAD00;&#xB828; &#xB9DD;&#xB9C9; &#xC2DC;&#xAC01;&#xC801; &#xC0AC;&#xC774;&#xD074;&#xACFC; &#xD3EC;&#xC720;&#xB958; &#xC6D0;&#xBFD4; &#xC0C9;&#xC18C; &#xC7AC;&#xC0DD; &#xACE0;&#xC804;&#xC801;&#xC778; RPE &#xC885;&#xC18D; visual &#xC0AC;&#xC774;&#xD074;&#xC758; &#xC0C1;&#xB300;&#xC801; &#xAE30;&#xC5EC;&#xB3C4;. &#xB610;&#xD55C;, &#xADF8;&#xAC83;&#xC740; &#xBD84;&#xBA85; &#xC5B4;&#xB5A4; &#xC5ED;&#xD560; &#xD3EC;&#xC720;&#xB958; &#xC6D0;&#xBFD4; &#xC0C9;&#xC18C; &#xC7AC;&#xC0DD; &#xAC00;&#xC18D;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD65C;&#xC57D; &#xD558;&#xB294; &#xACBD;&#xC6B0;&#xC5D0; &#xBAA8;&#xB4E0; &#xD48D;&#xBD80;&#xD55C; interphotoreceptor retinoid &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; (IRBP) &#xBC1C;, &#xAD50;&#xD1B5; &#xCD09;&#xC9C4;&#xC73C;&#xB85C; &#xCD94;&#xC815;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xBB38;&#xC81C;&#xB97C; &#xD574;&#xACB0; &#xD558;&#xB824;&#xBA74; &#xACA9;&#xB9AC; &#xB41C; &#xB9DD;&#xB9C9; &#xBC0F; &#xC81C;&#xC5B4; &#xBC0F; IRBP &#xBD88;&#xCDA9;&#xBD84; &#xD55C; &#xC950;&#xC5D0;&#xC11C; eyecups M/L &#xCF58; &#xC0C9;&#xC18C; &#xC7AC;&#xC0DD; &#xD3C9;&#xAC00; transretinal &#xB179;&#xC74C;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD588;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB180;&#xB78D;&#xAC8C;&#xB3C4;, &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4; &#xB9DD;&#xB9C9; &#xC2B9;&#xC9C4; M/L &#xCF58; &#xB2E4;&#xD06C; &#xC801;&#xC751; eightfold&#xB294; RPE &#xBCF4;&#xB2E4; &#xB354; &#xBE68;&#xB9AC;. &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098;, &#xC644;&#xC804; &#xD55C; &#xCF58; &#xBCF5;&#xAD6C; &#xBAA8;&#xB450; &#xBE44;&#xC8FC;&#xC5BC; &#xC0AC;&#xC774;&#xD074; &#xD544;&#xC694;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xB290;&#xB9B0; RPE &#xC2DC;&#xAC01;&#xC801; &#xC8FC;&#xAE30; &#xD504;&#xB85C;&#xC138;&#xC2A4;&#xB97C; &#xC644;&#xB8CC; &#xD558;&#xB294; &#xB370; &#xD544;&#xC694;&#xD55C; &#xBC18;&#xBA74; &#xB9DD;&#xB9C9; &#xC2DC;&#xAC01;&#xC801; &#xC0AC;&#xC774;&#xD074;&#xC740; &#xC5B4;&#xB450;&#xC6B4; &#xC801;&#xC751; &#xD558;&#xB294; &#xB3D9;&#xC548; &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4; M/L &#xCF58; &#xC548;&#xB8CC;&#xC758; &#xCD08;&#xAE30; &#xBE60;&#xB978; &#xC7AC;&#xC0DD;&#xC744; &#xC704;&#xD574; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xACB0;&#xB860;. IRBP &#xC0AD;&#xC81C; &#xC9C4;&#xD3ED; &#xAC10;&#xC18C; &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4; M/L &#xCF58; photoresponses&#xC758; &#xC18D;&#xB3C4; &#xAC10;&#xC18D; &#xD558;&#xB294; &#xB3D9;&#xC548; &#xACA9;&#xB9AC; &#xB41C; &#xB9DD;&#xB9C9; &#xB610;&#xB294; &#xADF8;&#xB300;&#xB85C; &#xC544;&#xC774;&#xD53C;, &#xAFB8;&#xC900;&#xD55C; &#xBC1D;&#xC740; &#xBE5B;&#xACFC; &#xCF58; &#xB2E4;&#xD06C; &#xC801;&#xC751; &#xC18D;&#xB3C4; &#xB860; &#xCF58; &#xC801;&#xC751; &#xBC1B;&#xC9C0; &#xD588;&#xB2E4;. &#xB530;&#xB77C;&#xC11C;, IRBP &#xCF58; &#xC0C9;&#xC18C; &#xC7AC;&#xC0DD; &#xAC00;&#xC18D; &#xD558;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xBC0F; &#xBC1D;&#xC740; &#xBE5B;&#xC5D0;&#xC11C; &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4; M/&#xD328;-&#xC6D0;&#xBFD4;&#xC758; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC911;&#xC694; &#xD558;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xD3EC;&#xC720;&#xB958; &#xCF58; &#xC2DC;&#xAC01;&#xC801; &#xC0AC;&#xC774;&#xD074; interphotoreceptor retinoid &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xB3C5;&#xB9BD;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xAE09;&#xC18D; &#xD55C; M/L &#xCF58; &#xC0C9;&#xC18C; &#xC7AC;&#xC0DD;&#xC744; &#xCD09;&#xC9C4;.

Una r&#xE1;pida regeneraci&#xF3;n del pigmento visual despu&#xE9;s de su fotoactivaci&#xF3;n es cr&#xED;tica para la funci&#xF3;n de los conos en todo el d&#xED;a. A pesar de las reacciones del ciclo visual en el epitelio pigmentario de la retina (EPR) que crom&#xF3;foro de reciclaje para la regeneraci&#xF3;n del pigmento de la barra est&#xE1;n bien caracterizados, los correspondientes mecanismos que permiten una r&#xE1;pida regeneraci&#xF3;n del pigmento de los conos son poco conocidos. Una cuesti&#xF3;n clave pendiente es la contribuci&#xF3;n relativa del ciclo de la retina descubierto recientemente cono visual espec&#xED;fico y el cl&#xE1;sico RPE-dependiente de ciclo visual a la regeneraci&#xF3;n de mam&#xED;feros pigmento de los conos. Adem&#xE1;s, no est&#xE1; claro qu&#xE9; papel, si los hubiere, el retinoide interfotorreceptora abundante prote&#xED;na de uni&#xF3;n (IRBP) presume de facilitar el tr&#xE1;fico de crom&#xF3;foro, juega en la aceleraci&#xF3;n de la regeneraci&#xF3;n de los mam&#xED;feros pigmento de los conos. Para abordar estas cuestiones, se utiliz&#xF3; para evaluar las grabaciones transretinal M / L cono la regeneraci&#xF3;n del pigmento en la retina aisladas y ojeras de los ratones de control y IRBP deficientes. Cabe destacar que la retina del rat&#xF3;n promovido M / L de cono adaptaci&#xF3;n a la oscuridad ocho veces m&#xE1;s r&#xE1;pido que el EPR. Sin embargo, la recuperaci&#xF3;n completa de cono requiere dos ciclos visuales. Se concluye que el ciclo de la retina visual es cr&#xED;tico para la regeneraci&#xF3;n r&#xE1;pida inicial de rat&#xF3;n M / L de cono pigmento durante adaptaci&#xF3;n a la oscuridad, mientras que el ciclo de RPE m&#xE1;s lento visual es necesario para completar el proceso. Si bien la eliminaci&#xF3;n de IRBP reduce la amplitud y la lenta cin&#xE9;tica de rat&#xF3;n M / L de cono photoresponses, la adaptaci&#xF3;n del cono de luz brillante, firme y cin&#xE9;tica de los de la adaptaci&#xF3;n del cono oscuro, no se vieron afectados en la retina ocular aislada o en intacta. Por lo tanto, IRBP no acelera la regeneraci&#xF3;n del cono pigmento y no es cr&#xED;tica para la funci&#xF3;n de rat&#xF3;n M / L-conos de luz brillante.

El ciclo del Cono Visual mam&#xED;feros Promueve r&#xE1;pida M / L de cono regeneraci&#xF3;n del pigmento Independientemente de la interfotorreceptora retinoide-La uni&#xF3;n a prote&#xED;nas

A fundamental question of cell signaling biology is how faint external signals produce robust physiological responses. One universal mechanism relies on signal amplification via intracellular cascades mediated by heterotrimeric G-proteins. This high amplification system allows retinal rod photoreceptors to detect single photons of light. Although much is now known about the role of the Î±-subunit of the rod-specific G-protein transducin in phototransduction, the physiological function of the auxiliary Î²Î³-complex in this process remains a mystery. Here, we show that elimination of the transducin Î³-subunit drastically reduces signal amplification in intact mouse rods. The consequence is a striking decline in rod visual sensitivity and severe impairment of nocturnal vision. Our findings demonstrate that transducin Î²Î³-complex controls signal amplification of the rod phototransduction cascade and is critical for the ability of rod photoreceptors to function in low light conditions.

G-protein betagamma-complex is crucial for efficient signal amplification in vision.

&#x7EC6;&#x80DE;&#x751F;&#x7269;&#x5B66;&#x5982;&#x4F55;&#x5FAE;&#x5F31;&#x7684;&#x5916;&#x90E8;&#x4FE1;&#x53F7;&#x7684;&#x4FE1;&#x53F7;&#x7684;&#x4E00;&#x4E2A;&#x6839;&#x672C;&#x7684;&#x95EE;&#x9898;&#x4EA7;&#x751F;&#x5F3A;&#x52B2;&#x7684;&#x751F;&#x7406;&#x53CD;&#x5E94;&#x3002;&#x4E00;&#x79CD;&#x901A;&#x7528;&#x673A;&#x5236;&#x4F9D;&#x8D56;&#x4E8E;&#x901A;&#x8FC7;&#x80DE;&#x5185;&#x53F6;&#x6805; heterotrimeric G &#x86CB;&#x767D;&#x4ECB;&#x5BFC;&#x7684;&#x4FE1;&#x53F7;&#x653E;&#x5927;&#x3002;&#x6B64;&#x9AD8;&#x653E;&#x5927;&#x500D;&#x6570;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x5141;&#x8BB8;&#x89C6;&#x7F51;&#x819C;&#x6746;&#x611F;&#x53D7;&#x5668;&#x6765;&#x68C0;&#x6D4B;&#x5355;&#x4E2A;&#x5149;&#x5B50;&#x7684;&#x5149;&#x3002;&#x867D;&#x7136;&#x4EBA;&#x4EEC;&#x73B0;&#x5728;&#x6E05;&#x695A;&#x4E86;&#x89E3;&#x5230;&#x5728; phototransduction transducin &#x6746;&#x7279;&#x5B9A; G &#x86CB;&#x767D;&#x7684; &alpha;-&#x4E9A;&#x5355;&#x4F4D;&#x7684;&#x4F5C;&#x7528;&#xFF0C;&#x5728;&#x6B64;&#x8FC7;&#x7A0B;&#x4E2D;&#x7684;&#x8F85;&#x52A9; &beta;&gamma; &#x590D;&#x6742;&#x7684;&#x751F;&#x7406;&#x529F;&#x80FD;&#x4ECD;&#x662F;&#x4E00;&#x4E2A;&#x8C1C;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x663E;&#x793A;&#x6D88;&#x9664;&#x8F6C;&#x5BFC;&#x86CB;&#x767D;&#x5473;&#x857E; &gamma; &#x4E9A;&#x57FA;&#x6781;&#x5927;&#x5730;&#x51CF;&#x5C11;&#x4E86;&#x5B8C;&#x597D;&#x7684;&#x9F20;&#x6807;&#x6746;&#x4E2D;&#x7684;&#x4FE1;&#x53F7;&#x653E;&#x5927;&#x3002;&#x7ED3;&#x679C;&#x662F;&#x60CA;&#x4EBA;&#x7684;&#x4E0B;&#x964D;&#x6746;&#x89C6;&#x89C9;&#x654F;&#x611F;&#x5EA6;&#x548C;&#x591C;&#x95F4;&#x89C6;&#x529B;&#x4E25;&#x91CD;&#x53D7;&#x635F;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x7ED3;&#x679C;&#x8868;&#x660E; transducin &beta;&gamma; &#x590D;&#x6742;&#x63A7;&#x5236;&#x6746; phototransduction &#x5C42;&#x53E0;&#x7684;&#x4FE1;&#x53F7;&#x653E;&#x5927;&#xFF0C;&#x5BF9;&#x4E8E;&#x6746;&#x89C6;&#x7F51;&#x819C;&#x611F;&#x5149;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x80FD;&#x529B;&#xFF0C;&#x80FD;&#x591F;&#x5728;&#x4F4E;&#x5149;&#x7167;&#x6761;&#x4EF6;&#x8FD0;&#x4F5C;&#x662F;&#x81F3;&#x5173;&#x91CD;&#x8981;&#x7684;&#x3002;

G-&#x86CB;&#x767D; betagamma &#x590D;&#x6742;&#x662F;&#x6709;&#x6548;&#x4FE1;&#x53F7;&#x653E;&#x5927;&#x89C6;&#x91CE;&#x4E2D;&#x7684;&#x5173;&#x952E;&#x3002;

Une question fondamentale de la biologie signalisation cellulaire est de savoir comment produire des faibles signaux externes robustes r&#xE9;ponses physiologiques. Un m&#xE9;canisme universel repose sur l&#x26;#39;amplification du signal par l&#x26;#39;interm&#xE9;diaire des cascades intracellulaires induits par prot&#xE9;ines G h&#xE9;t&#xE9;rotrim&#xE9;riques. Ce syst&#xE8;me d&#x26;#39;amplification &#xE0; haute tige permet photor&#xE9;cepteurs r&#xE9;tiniens pour d&#xE9;tecter des photons uniques de lumi&#xE8;re. Bien qu&#x26;#39;une grande partie est maintenant connu sur le r&#xF4;le de l&#x26;#39;&#x3B1;-sous-unit&#xE9; de la tige sp&#xE9;cifique &#xE0; la prot&#xE9;ine G transducine dans phototransduction, la fonction physiologique de l&#x26;#39;auxiliaire &#x3B2;&#x3B3; complexe dans ce processus reste un myst&#xE8;re. Ici, nous montrons que l&#x26;#39;&#xE9;limination de la sous-unit&#xE9; &#x3B3; transducine r&#xE9;duit consid&#xE9;rablement l&#x26;#39;amplification du signal dans les barres de souris intactes. La cons&#xE9;quence est une diminution frappante dans la tige visuelle sensibilit&#xE9; et une d&#xE9;ficience grave de la vision nocturne. Nos r&#xE9;sultats d&#xE9;montrent que la transducine &#x3B2;&#x3B3; complexe d&#x26;#39;amplification du signal de contr&#xF4;le de la cascade de phototransduction tige et est essentielle pour la capacit&#xE9; des photor&#xE9;cepteurs tige de fonctionner dans des conditions de faible luminosit&#xE9;.

La prot&#xE9;ine G Betagamma-complexe est crucial pour l&#x26;#39;amplification du signal efficace dans la Vision

Eine grundlegende Frage der Zelle Biologie wie schwache externe Signale wird produzieren robuste physiologische Reaktionen. Ein universeller Mechanismus beruht auf Signalverst&auml;rkung &uuml;ber intrazellul&auml;re Kaskaden von trimeren G-Proteine vermittelt. Dieses hohe Verst&auml;rkung-System erm&ouml;glicht retinale Stab Photorezeptoren, einzelne Photonen des Lichtes zu erkennen. Die physiologische Funktion der Hilfsstoffe &beta;&gamma;-Komplex in diesem Prozess, obwohl viel &uuml;ber die Rolle der &alpha;-Untereinheit von der Stange-spezifische G-Protein transducin in Signaltransduktion nun bekannt ist, bleibt ein Geheimnis. Hier zeigen wir, dass die Beseitigung der transducin &gamma;-Untereinheit Signalverst&auml;rkung in intakten Maus Stangen drastisch reduziert. Die Folge ist einen starken R&uuml;ckgang der Stab visuelle Empfindlichkeit und schwere Beeintr&auml;chtigung der n&auml;chtliche Vision. Unsere Ergebnisse zeigen, dass transducin &beta;&gamma;-Komplex Signalverst&auml;rkung der Stab Signaltransduktion Kaskade steuert und entscheidend f&uuml;r die F&auml;higkeit von Stab Lichtrezeptoren ist, bei schlechten Lichtverh&auml;ltnissen funktionieren.

G-Protein-Betagamma-Komplex ist entscheidend f&uuml;r effiziente Signalverst&auml;rkung in Vision.

Una questione fondamentale della cellula biologia &egrave; come deboli segnali esterni di segnalazione produrre risposte fisiologiche robuste. Un meccanismo universale si basa sull&#39;amplificazione del segnale via cascate intracellulari mediata da eterotrimerica G-proteine. Questo sistema di amplificazione ad alta permette di fotorecettori della retina asta rilevare i singoli fotoni di luce. Anche se ora molto &egrave; conosciuto circa il ruolo della &alpha;-subunit&agrave; dell&#39;asta specifica G-proteina transducina in phototransduction, la funzione fisiologica del &beta;&gamma;-complesso ausiliario in questo processo rimane un mistero. Qui, ci mostra che eliminare la subunit&agrave; &gamma; transducin riduce drasticamente l&#39;amplificazione del segnale nelle barre del mouse intatto. La conseguenza &egrave; un calo impressionante sensibilit&agrave; visiva rod e grave deterioramento della visione notturna. I nostri risultati dimostrano che transducina complesso &beta;&gamma; controlli di amplificazione del segnale della cascata phototransduction rod ed &egrave; fondamentale per la capacit&agrave; dei fotorecettori asta di funzionare in condizioni di scarsa illuminazione.

G-proteina betagamma-complesso &egrave; cruciale per l&#39;amplificazione del segnale efficiente in visione.

&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#x751F;&#x7269;&#x5B66;&#x306E;&#x6839;&#x672C;&#x7684;&#x306A;&#x554F;&#x984C;&#x306F;&#x3001;&#x304B;&#x3059;&#x304B;&#x306A;&#x5916;&#x90E8;&#x4FE1;&#x53F7;&#x306F;&#x3001;&#x5805;&#x7262;&#x306A;&#x751F;&#x7406;&#x7684;&#x5FDC;&#x7B54;&#x3092;&#x751F;&#x6210;&#x3059;&#x308B;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x3064;&#x666E;&#x904D;&#x7684;&#x306A;&#x30E1;&#x30AB;&#x30CB;&#x30BA;&#x30E0;&#x306F;&#x3001;&#x30D8;&#x30C6;&#x30ED;&#x4E09;&#x91CF;&#x4F53;G&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x5A92;&#x4ECB;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x7D30;&#x80DE;&#x5185;&#x306E;&#x30AB;&#x30B9;&#x30B1;&#x30FC;&#x30C9;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x3066;&#x4FE1;&#x53F7;&#x5897;&#x5E45;&#x306B;&#x4F9D;&#x5B58;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x9AD8;&#x3044;&#x5897;&#x5E45;&#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E0;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x7DB2;&#x819C;&#x306E;&#x687F;&#x4F53;&#x306F;&#x5149;&#x306E;&#x5358;&#x4E00;&#x5149;&#x5B50;&#x3092;&#x691C;&#x51FA;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x591A;&#x304F;&#x306F;&#x4ECA;&#x5149;&#x4F1D;&#x9054;&#x30ED;&#x30C3;&#x30C9;&#x7279;&#x6709;&#x306E;G&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30C7;&#x30E5;&#x30FC;&#x30B7;&#x30F3;&#x306E;&#x3B1;-&#x30B5;&#x30D6;&#x30E6;&#x30CB;&#x30C3;&#x30C8;&#x306E;&#x5F79;&#x5272;&#x306B;&#x3064;&#x3044;&#x3066;&#x77E5;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x304C;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x30D7;&#x30ED;&#x30BB;&#x30B9;&#x306E;&#x88DC;&#x52A9;&#x3B2;&#x3B3;&#x8907;&#x5408;&#x4F53;&#x306E;&#x751F;&#x7406;&#x7684;&#x6A5F;&#x80FD;&#x306F;&#x8B0E;&#x306E;&#x307E;&#x307E;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30C7;&#x30E5;&#x30FC;&#x30B7;&#x30F3;&#x306E;&#x3B3;&#x30B5;&#x30D6;&#x30E6;&#x30CB;&#x30C3;&#x30C8;&#x306E;&#x305D;&#x306E;&#x9664;&#x53BB;&#x304C;&#x5927;&#x5E45;&#x306B;&#x305D;&#x306E;&#x307E;&#x307E;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x30ED;&#x30C3;&#x30C9;&#x306E;&#x4FE1;&#x53F7;&#x5897;&#x5E45;&#x3092;&#x4F4E;&#x6E1B;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x8868;&#x793A;&#x7D50;&#x679C;&#x306F;&#x3001;&#x30ED;&#x30C3;&#x30C9;&#x8996;&#x899A;&#x611F;&#x5EA6;&#x3068;&#x591C;&#x9593;&#x8996;&#x529B;&#x306E;&#x91CD;&#x5EA6;&#x306E;&#x969C;&#x5BB3;&#x306E;&#x8457;&#x3057;&#x3044;&#x4F4E;&#x4E0B;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306E;&#x8ABF;&#x67FB;&#x7D50;&#x679C;&#x306F;&#x3001;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30C7;&#x30E5;&#x30FC;&#x30B7;&#x30F3;&#x3B2;&#x3B3;&#x8907;&#x5408;&#x30B3;&#x30F3;&#x30C8;&#x30ED;&#x30FC;&#x30EB;&#x4FE1;&#x53F7;&#x30ED;&#x30C3;&#x30C9;&#x5149;&#x60C5;&#x5831;&#x4F1D;&#x9054;&#x30AB;&#x30B9;&#x30B1;&#x30FC;&#x30C9;&#x306E;&#x5897;&#x5E45;&#x3068;&#x306F;&#x3001;&#x4F4E;&#x7167;&#x5EA6;&#x6761;&#x4EF6;&#x4E0B;&#x3067;&#x306E;&#x95A2;&#x6570;&#x3078;&#x306E;&#x687F;&#x4F53;&#x306E;&#x6A5F;&#x80FD;&#x306B;&#x3068;&#x3063;&#x3066;&#x91CD;&#x8981;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;

G-&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;Betagamma-&#x8907;&#x5408;&#x4F53;&#x306F;&#x3001;&#x30D3;&#x30B8;&#x30E7;&#x30F3;&#x306E;&#x52B9;&#x7387;&#x7684;&#x306A;&#x4FE1;&#x53F7;&#x5897;&#x5E45;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x91CD;&#x8981;&#x3067;&#x3042;&#x308B;

&#xC138;&#xD3EC; &#xC0DD;&#xBB3C;&#xD559;&#xC740; &#xC5BC;&#xB9C8;&#xB098; &#xD76C;&#xBBF8; &#xD55C; &#xC678;&#xBD80; &#xC2E0;&#xD638; &#xC2E0;&#xD638;&#xC758; &#xADFC;&#xBCF8;&#xC801;&#xC778; &#xC9C8;&#xBB38; &#xAC15;&#xB825;&#xD55C; &#xC0DD;&#xB9AC; &#xC801; &#xC751;&#xB2F5;&#xC744; &#xC0DD;&#xC131; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xBC94;&#xC6A9; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998; &#xC911; &#xD558;&#xB098;&#xB294; &#xC138;&#xD3EC;&#xB0B4; &#xACC4;&#xACE1; heterotrimeric G-&#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC911;&#xC7AC;&#xB97C; &#xD1B5;&#xD574; &#xC2E0;&#xD638; &#xC99D;&#xD3ED;&#xC5D0; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774; &#xB192;&#xC740; &#xC99D;&#xD3ED; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C; &#xB9DD;&#xB9C9; &#xB9C9;&#xB300; &#xB300;&#xB1CC;&#xB97C; &#xBE5B;&#xC758; &#xB2E8;&#xC77C; &#xAD11;&#xC790;&#xB97C; &#xAC80;&#xCD9C; &#xD558;&#xAE30; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xBE44;&#xB85D; &#xB9CE;&#xC740; &#xC9C0;&#xAE08; phototransduction&#xC5D0;&#xC11C; transducin &#xB85C;&#xB4DC; &#xAD00;&#xB828; G-&#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &alpha; &#xC18C; &#xB2E8;&#xC704;&#xC758; &#xC5ED;&#xD560;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC54C;&#xB824;&#xC838; &#xC788;&#xC9C0;&#xB9CC;,&#xC774; &#xACFC;&#xC815;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBCF4;&#xC870; &beta;&gamma; &#xB2E8;&#xC9C0;&#xC758; &#xC0DD;&#xB9AC; &#xAE30;&#xB2A5; &#xC2E0;&#xBE44;&#xC5D0; &#xC313;&#xC5EC;. &#xC5EC;&#xAE30;, &#xC6B0;&#xB9AC; transducin &gamma; &#xC18C; &#xB2E8;&#xC704;&#xC758; &#xC81C;&#xAC70;&#xB294; &#xADF8;&#xB300;&#xB85C; &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4; &#xBD09;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC2E0;&#xD638; &#xC99D;&#xD3ED;&#xC744; &#xD68D;&#xAE30;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xC904;&#xC77C; &#xC218; &#xBCF4;&#xC5EC; &#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xACB0;&#xACFC; &#xB85C;&#xB4DC; &#xC2DC;&#xAC01;&#xC801; &#xAC10;&#xB3C4; &#xBC0F; &#xC57C;&#xD589;&#xC131; &#xBE44;&#xC804;&#xC758; &#xC2EC;&#xD55C; &#xC7A5;&#xC560;&#xC5D0; &#xB208;&#xC5D0; &#xB744;&#xB294; &#xAC10;&#xC18C;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xC5F0;&#xAD6C; &#xACB0;&#xACFC; transducin &beta;&gamma;-&#xBCF5;&#xC7A1; &#xD55C; &#xB85C;&#xB4DC; phototransduction &#xCE90;&#xC2A4;&#xCF00;&#xC774;&#xB4DC;&#xC758; &#xC2E0;&#xD638; &#xC99D;&#xD3ED; &#xC81C;&#xC5B4; &#xD558; &#xACE0; &#xB0AE;&#xC740; &#xC870;&#xBA85; &#xC870;&#xAC74;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC791;&#xB3D9; &#xD558;&#xB294; &#xB370;&#xB294; &#xB9C9;&#xB300; &#xB300;&#xB1CC;&#xC758; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xBCF4;&#xC5EC; &#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;.

G-&#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; betagamma-&#xBCF5;&#xC7A1; &#xD55C; &#xBE44;&#xC804;&#xC5D0; &#xD6A8;&#xC728;&#xC801;&#xC778; &#xC2E0;&#xD638; &#xC99D;&#xD3ED;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xACB0;&#xC815;&#xC801; &#xC774;&#xB2E4;.

Una cuesti&#xF3;n fundamental de la biolog&#xED;a celular de se&#xF1;alizaci&#xF3;n es como tenues se&#xF1;ales externas producen fuertes respuestas fisiol&#xF3;gicas. Un mecanismo universal se basa en la amplificaci&#xF3;n de la se&#xF1;al a trav&#xE9;s de cascadas intracelulares mediadas por heterotrimeric G-prote&#xED;nas. Este sistema de amplificaci&#xF3;n de alta permite fotorreceptores de la retina de barras para detectar fotones individuales de luz. Aunque ya se conoce mucho acerca de la funci&#xF3;n de la &#x3B1;-subunidad de la varilla-espec&#xED;fica de la prote&#xED;na G transducina en fototransducci&#xF3;n, la funci&#xF3;n fisiol&#xF3;gica de la auxiliar &#x3B2;&#x3B3;-complejo en este proceso sigue siendo un misterio. En este sentido, muestran que la eliminaci&#xF3;n de la transducina &#x3B3; subunidad reduce dr&#xE1;sticamente amplificaci&#xF3;n de la se&#xF1;al en las barras de rat&#xF3;n intactas. La consecuencia es una disminuci&#xF3;n notable en la barra de sensibilidad visual y alteraci&#xF3;n grave de la visi&#xF3;n nocturna. Nuestros hallazgos demuestran que la transducina &#x3B2;&#x3B3; complejo de amplificaci&#xF3;n de la se&#xF1;al de los controles de la cascada de fototransducci&#xF3;n varilla y es cr&#xED;tico para la capacidad de los fotorreceptores de los bastones para funcionar en condiciones de poca luz.

La prote&#xED;na G Betagamma complejo es crucial para la amplificaci&#xF3;n de la se&#xF1;al eficiente en la Visi&#xF3;n

&#x76EE;&#x7684;&#x3002;&#x5B9A;&#x6027;&#x7684; transducin Gt&beta;&gamma; &#x590D;&#x6742;&#x8C03;&#x5236;&#x4FE1;&#x53F7;&#x7684;&#x89C6;&#x7D2B;&#x7EA2;&#x8D28;&#x5149;&#x6D3B;&#x5316;&#x548C;&#x5176;&#x751F;&#x547D;&#x5468;&#x671F;&#x4E2D;&#x6746;&#x76D8;&#x819C;&#x548C;&#x5B8C;&#x597D;&#x68D2;&#x5C5E;&#x6027;&#x4E2D;&#x53EF;&#x80FD;&#x53D1;&#x6325;&#x7684;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3002;&#x89C6;&#x7D2B;&#x7EA2;&#x8D28;&#x5149;&#x89E3;&#x4F5C;&#x7528;&#x8FDB;&#x884C;&#x4E86;&#x7814;&#x7A76;&#x4F7F;&#x7528;&#x7D2B;&#x5916;&#x53EF;&#x89C1;&#x5149;&#x8C31;&#x53CA;&#x5728;&#x573A;&#x7F9F;&#x80FA;&#x7684;&#x60C5;&#x51B5;&#x4E0B;&#x5FEB;&#x901F;&#x626B;&#x63CF;&#x5149;&#x8C31;&#x4E2D;&#x9AD8;&#x5EA6;&#x7EAF;&#x5316;&#x7684;&#x91CE;&#x751F;&#x578B;&#x548C; Gt&gamma; &#x7F3A;&#x9F20;&#x6807;&#x6746;&#x76D8;&#x819C;&#x3002;&#x89C6;&#x7D2B;&#x7EA2;&#x8D28;&#x5149;&#x6D3B;&#x5316;&#x548C; transducin &#x4E4B;&#x95F4;&#x7684;&#x590D;&#x6742;&#x5730;&#x5C42;&#x662F;&#x989D;&#x5916;&#x7684; metarhodopsin (&#x5143;) &#x4E8C;&#x3001; &#x6D4B;&#x5B9A;&#x7528;&#x6765;&#x8861;&#x91CF;&#x7684;&#x3002;&#x6062;&#x590D;&#x9ED1;&#x6697;&#x7684;&#x5F53;&#x524D;&#x548C;&#x95EA;&#x5B58;&#x654F;&#x611F;&#x6027;&#x7684;&#x4E2A;&#x522B;&#x5B8C;&#x597D;&#x65E0;&#x635F;&#x7684;&#x91CE;&#x751F;&#x578B;&#x548C; Gt&gamma; &#x7F3A;&#x9F20;&#x6807;&#x6746;&#x662F;&#x7528;&#x5355;&#x4E2A;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x5438;&#x5F55;&#x97F3;&#x6765;&#x8861;&#x91CF;&#x7684;&#x3002;&#x7ED3;&#x679C;&#x3002;Photoconversion &#x7684;&#x89C6;&#x7D2B;&#x7EA2;&#x8D28;&#x5143;&#x5230;&#x6211; / &#x5143;&#x4E8C;&#x5E73;&#x8861;&#x6536;&#x76CA;&#x901A;&#x5E38;&#x540E;&#x6D88;&#x9664; Gt&beta;&gamma; &#x590D;&#x6742;&#x3002;&#x5143;&#x6211; / &#x5143;&#x4E8C;&#x3001; &#x6BD4;&#x7387;&#x3001; &#x5143;&#x4E8C;&#x8870;&#x53D8;&#xFF0C;&#x7387;&#x53CD;&#x5E94;&#x6027;&#x7684; meta &#x671D;&#x5143;&#x4E09;&#x5F62;&#x6210;&#x7684; Gt&gamma; &#x7F3A;&#x6746;&#x76D8;&#x819C;&#x7387;&#x4E0E;&#x7F9F;&#x80FA;&#xFF0C;&#x4E8C;&#x662F;&#x4E0E;&#x91CE;&#x751F;&#x578B;&#x6837;&#x54C1;&#x4E2D;&#x89C2;&#x5BDF;&#x5230;&#x7684;&#x90A3;&#x4E9B;&#x76F8;&#x540C;&#x3002;&#x4F4E;&#x5F3A;&#x5EA6;&#x5149;&#x7167;&#x4E0B;&#x989D;&#x5916;&#x5143;&#x4E8C;&#x4E2D; Gt&gamma; &#x7F3A;&#x5149;&#x76D8;&#x7684;&#x6570;&#x91CF;&#x5927;&#x5927;&#x51CF;&#x5C11;&#x3002;12%&#x89C6;&#x7D2B;&#x7EA2;&#x8D28;&#x6F02;&#x767D;&#x540E;&#x6697;&#x5F53;&#x524D;&#x590D;&#x82CF;&#x7684;&#x521D;&#x59CB;&#x901F;&#x7387;&#x662F; Gt&gamma; &#x7F3A;&#x68D2;&#x4E2D;&#x5FEB;&#x4E86;&#x4E09;&#x500D;&#xFF0C;&#x800C;&#x540E;&#x671F;&#x5F53;&#x524D;&#x6062;&#x590D;&#x7387;&#x5927;&#x81F4;&#x7EF4;&#x6301;&#x4E0D;&#x53D8;&#x3002;&#x7A81;&#x53D8;&#x4F53;&#x68D2;&#x8FD8;&#x5C55;&#x51FA;&#x66F4;&#x5FEB; postbleach &#x6062;&#x590D;&#x5BF9; flash &#x7684;&#x654F;&#x611F;&#x6027;&#x3002;&#x7ED3;&#x8BBA;&#x3002;&#x8C03;&#x4EA1;&#x548C;&#x70ED;&#x8870;&#x51CF;&#x7684;&#x89C6;&#x7D2B;&#x7EA2;&#x8D28;&#x8FDB;&#x884C;&#x540C;&#x6837;&#x5728;&#x91CE;&#x751F;&#x578B;&#x548C; Gt&gamma; &#x7F3A;&#x9F20;&#x6807;&#x6746;&#xFF0C;&#x4F46;&#x89C6;&#x7D2B;&#x7EA2;&#x8D28;&#x5149;&#x6D3B;&#x5316;&#x548C; transducin &#x4E4B;&#x95F4;&#x7684;&#x590D;&#x6742;&#x5730;&#x5C42;&#x4E25;&#x91CD;&#x635F;&#x5BB3; Gt&beta;&gamma; &#x5982;&#x679C;&#x6CA1;&#x6709;&#x3002;&#x7531;&#x6B64;&#x4EA7;&#x751F;&#x7684;&#x4F4E;&#x8F6C;&#x5BFC;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x6709;&#x52A9;&#x4E8E;&#x6062;&#x590D;&#x7D2B;&#x5916;&#x5149;&#x54CD;&#x5E94;&#x901F;&#x5EA6;&#x66F4;&#x5FEB;&#x540E;&#x4E2D;&#x5EA6;&#x8272;&#x7D20;&#x6F02;&#x767D; Gt&gamma; &#x7F3A;&#x68D2;&#x4E2D;&#x3002;

&#x4FE1;&#x53F7;&#x6746;&#x78C1;&#x76D8;&#x819C;&#x7F3A;&#x4E4F;&#x8F6C;&#x5BFC;&#x86CB;&#x767D;&#x5473;&#x857E; &beta;&gamma; &#x590D;&#x6742;&#x4E2D;&#x7684;&#x89C6;&#x7D2B;&#x7EA2;&#x8D28;&#x7684;&#x56FD;&#x5BB6;&#x3002;

Purpose. To characterize the possible role of transducin GtÎ²Î³-complex in modulating the signaling properties of photoactivated rhodopsin and its lifetime in rod disc membranes and intact rods. Methods. Rhodopsin photolysis was studied using UV-visible spectroscopy and rapid scanning spectroscopy in the presence of hydroxylamine in highly purified wild-type and GtÎ³-deficient mouse rod disc membranes. Complex formation between photoactivated rhodopsin and transducin was measured by extra-metarhodopsin (meta) II assay. Recovery of dark current and flash sensitivity in individual intact wild-type and GtÎ³-deficient mouse rods was measured by single-cell suction recordings. Results. Photoconversion of rhodopsin to meta I/meta II equilibrium proceeds normally after elimination of the GtÎ²Î³-complex. The meta I/meta II ratio, the rate of meta II decay, the reactivity of meta II toward hydroxylamine, and the rate of meta III formation in GtÎ³-deficient rod disc membranes were identical with those observed in wild-type samples. Under low-intensity illumination, the amount of extra-meta II in GtÎ³-deficient discs was significantly reduced. The initial rate of dark current recovery after 12% rhodopsin bleach was three times faster in GtÎ³-deficient rods, whereas the rate of the late current recovery was largely unchanged. Mutant rods also exhibited faster postbleach recovery of flash sensitivity. Conclusions. Photoactivation and thermal decay of rhodopsin proceed similarly in wild-type and GtÎ³-deficient mouse rods, but the complex formation between photoactivated rhodopsin and transducin is severely compromised in the absence of GtÎ²Î³. The resultant lower transduction activation contributes to faster photoresponse recovery after a moderate pigment bleach in GtÎ³-deficient rods.

Signaling States of Rhodopsin in Rod Disk Membranes Lacking Transducin Î²Î³-Complex.

But. Afin de caract&#xE9;riser le r&#xF4;le possible de la transducine Gt&#x3B2;&#x3B3; complexe dans la modulation des propri&#xE9;t&#xE9;s de signalisation de la rhodopsine et photoactiv&#xE9; sa dur&#xE9;e de vie dans les membranes de disques tige et des tiges intactes. M&#xE9;thodes. Photolyse Rhodopsin a &#xE9;t&#xE9; &#xE9;tudi&#xE9;e en utilisant la spectroscopie UV-visible et rapide spectroscopie &#xE0; balayage, en pr&#xE9;sence d&#x26;#39;hydroxylamine dans hautement purifi&#xE9;e de type sauvage et d&#xE9;ficient Gt&#x3B3;-membranes de souris tige de disques. La formation du complexe entre photoactiv&#xE9; rhodopsine et la transducine a &#xE9;t&#xE9; mesur&#xE9;e par des ressources extra-m&#xE9;tarhodopsine (m&#xE9;ta) analyse II. R&#xE9;cup&#xE9;ration de la sensibilit&#xE9; actuelle et flash sombre individuelles intactes tiges de souris de type sauvage et Gt&#x3B3; d&#xE9;ficiente a &#xE9;t&#xE9; mesur&#xE9;e par des enregistrements d&#x26;#39;aspiration mono-cellulaires. R&#xE9;sultats. Photoconversion de la rhodopsine &#xE0; la m&#xE9;ta I / II m&#xE9;ta &#xE9;quilibre se d&#xE9;roule normalement apr&#xE8;s l&#x26;#39;&#xE9;limination du Gt&#x3B2;&#x3B3; complexe. La m&#xE9;ta I / II m&#xE9;ta rapport, le taux de d&#xE9;croissance m&#xE9;ta II, la r&#xE9;activit&#xE9; de la m&#xE9;ta II vers hydroxylamine, et le taux de m&#xE9;ta III formation en Gt&#x3B3; d&#xE9;ficientes membranes disques tige &#xE9;taient identiques &#xE0; ceux observ&#xE9;s dans des &#xE9;chantillons de type sauvage. Sous faible intensit&#xE9; de l&#x26;#39;&#xE9;clairage, le montant de l&#x26;#39;extra-m&#xE9;ta II Gt&#x3B3; d&#xE9;ficientes disques a &#xE9;t&#xE9; significativement r&#xE9;duite. Le taux initial de r&#xE9;cup&#xE9;ration courant d&#x26;#39;obscurit&#xE9; apr&#xE8;s 12% rhodopsine eau de Javel &#xE9;tait trois fois plus vite dans Gt&#x3B3; d&#xE9;ficientes tiges, alors que le taux de la reprise fin actuelle est demeur&#xE9; pratiquement inchang&#xE9;. Tiges Mutant &#xE9;galement montr&#xE9; une r&#xE9;cup&#xE9;ration plus rapide de la sensibilit&#xE9; postbleach flash. Conclusions. Photoactivation et de la d&#xE9;composition thermique de la rhodopsine faire de m&#xEA;me pour tiges de souris de type sauvage et Gt&#x3B3;-d&#xE9;ficient, mais la formation du complexe entre photoactiv&#xE9; rhodopsine et la transducine est gravement compromise en l&#x26;#39;absence de Gt&#x3B2;&#x3B3;. L&#x26;#39;activation de transduction r&#xE9;sultante inf&#xE9;rieure contribue &#xE0; une r&#xE9;cup&#xE9;ration plus rapide apr&#xE8;s une photor&#xE9;ponse eau de Javel pigment mod&#xE9;r&#xE9;e Gt&#x3B3; d&#xE9;ficientes tiges.

&#xC9;tats de signalisation de la rhodopsine dans les membranes des disques de Rod Faute transducine &#x3B2;&#x3B3;-Complex

Zweck. Um die m&ouml;gliche Rolle von transducin Gt&beta;&gamma;-Komplex in Modulation Signalling Eigenschaften von Photoactivated Rhodopsin und seine Lebensdauer im Stab Scheibe Membranen und intakten St&auml;be zu charakterisieren. Methoden. Rhodopsin Photolyse wurde mit UV-sichtbare Spektroskopie und schnelle Scan-Spektroskopie in Anwesenheit von Hydroxylamin in hochreinem Wildtyp und Gt&gamma;-defizienten Maus Stab Scheibe Membranen untersucht. Komplexbildung zwischen Photoactivated Rhodopsin und transducin wurde durch Extra-Metarhodopsin (Meta) II Assay gemessen. Wiederherstellung der dunklen aktuelle und flash Empfindlichkeit in einzelnen intakte Wildtyp und Gt&gamma;-defizienten Maus Stangen wurde durch einzellige Saug Aufnahmen gemessen. Ergebnisse. Photoconversion von Rhodopsin zu Meta ich / Meta II Gleichgewicht wird normal nach Eliminierung des Gt&beta;&gamma;-Komplexes. Die Meta ich / Meta-II-Verh&auml;ltnis, die Rate der Meta-II-Zerfall, die Reaktivit&auml;t von Meta II Richtung Hydroxylamin und die Rate der Meta-III-Formation in Gt&gamma;-defizienten Stab Scheibe Membranen waren identisch mit denen im Wildtyp Proben beobachtet. Unter geringer Intensit&auml;t Beleuchtung wurde die H&ouml;he der Extra-Meta II in Gt&gamma;-defizienten Scheiben deutlich reduziert. Die erste Rate von dunklen aktuelle Recovery nach 12 % Rhodopsin Bleichmittel war dreimal schneller in Gt&gamma;-defizienten St&auml;be, w&auml;hrend die der sp&auml;ten gegenw&auml;rtige Aufschwung weitgehend unver&auml;ndert lag. Mutant St&auml;be zeigte auch schneller postbleach Verwertungvon Blitz Empfindlichkeit. Schlussfolgerungen. Photoaktivierung und thermische Zerfall von Rhodopsin in Wildtyp und Gt&gamma;-defizienten Maus St&auml;be &auml;hnlich vorgehen, aber schwer gef&auml;hrdet die Komplexbildung zwischen Photoactivated Rhodopsin und transducin ohne Gt&beta;&gamma;. Die resultierende niedrigere Transduktion Aktivierung tr&auml;gt zur schnellere Filmprofilen Wiederherstellung, nachdem eine Moderate pigment Bleichmittel in Gt&gamma;-defizienten Stangen.

Signalisierung Zust&auml;nde des Rhodopsin in Rod Disk Membranen fehlen Transducin &beta;&gamma;-Komplex.

Scopo. A caratterizzare il possibile ruolo della transducina Gt&beta;&gamma;-complesso nel modulare le propriet&agrave; di segnalazione della rodopsina photoactivated e la sua durata in asta disco membrane e canne intatti. Metodi. Fotolisi di rodopsina &egrave; stata studiata tramite spettroscopia UV-visibile e spettroscopia scansione rapida in presenza di idrossilammina in membrane di disco asta altamente purificati del mouse wild-type e Gt&gamma;-carenti. Formazione di complessi tra photoactivated rodopsina e transducina &egrave; stata misurata mediante saggio II extra-semplice (meta). Recupero della sensibilit&agrave; attuale e flash scura in canne singole intatto wild-type e Gt&gamma;-carenti del mouse &egrave; stata misurata dalla cella singola aspirazione recordings. Risultati. Photoconversion della rodopsina a meta mi / equilibrio II meta procede normalmente dopo l&#39;eliminazione del Gt&beta;&gamma;-complesso. La meta mi / meta II rapporto, il tasso di decadimento di meta II, la reattivit&agrave; del meta II verso idrossilammina e il tasso di formazione III meta nelle membrane di Gt&gamma;-deficient asta disco erano identici a quelli osservati in campioni di wild-type. Sotto illuminazione di bassa intensit&agrave;, la quantit&agrave; di extra-meta II in dischi di Gt&gamma;-deficient era significativamente ridotta. Il tasso iniziale di recupero corrente scura dopo candeggina 12% rodopsina era tre volte pi&ugrave; veloce nelle barre di Gt&gamma;-deficient, considerando che il tasso di recupero corrente tardo era in gran parte invariato. Mutante canne esposte anche pi&ugrave; veloce postbleach recupero di sensibilit&agrave; flash. Conclusioni. Photoactivation e decomposizione termica della rodopsina procedere analogamente nel wild-type e canne del mouse Gt&gamma;-carenti, ma la formazione di complessa tra photoactivated rodopsina e transducina &egrave; gravemente compromessa in assenza di Gt&beta;&gamma;. L&#39;attivazione di trasduzione risultante inferiore contribuisce a fotorisposta recupero pi&ugrave; veloce dopo un moderato pigmento candeggina nelle barre di Gt&gamma;-deficient.

Segnalazione degli Stati di rodopsina in asta disco membrane manca Transducin complesso &beta;&gamma;.

&#x76EE;&#x7684;&#x3002;&#x5149;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x30ED;&#x30C9;&#x30D7;&#x30B7;&#x30F3;&#x3068;&#x30ED;&#x30C3;&#x30C9;&#x30C7;&#x30A3;&#x30B9;&#x30AF;&#x819C;&#x3068;&#x7121;&#x50B7;&#x306E;&#x68D2;&#x3067;&#x3001;&#x305D;&#x306E;&#x5B58;&#x7D9A;&#x671F;&#x9593;&#x306E;&#x5909;&#x8ABF;&#x4F1D;&#x9054;&#x7279;&#x6027;&#x306E;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30C7;&#x30E5;&#x30FC;&#x30B7;&#x30F3;Gt&#x3B2;&#x3B3;&#x8907;&#x5408;&#x4F53;&#x306E;&#x5F79;&#x5272;&#x306E;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x3092;&#x7279;&#x5FB4;&#x4ED8;&#x3051;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x3002;&#x30E1;&#x30BD;&#x30C3;&#x30C9;&#x3002;&#x30ED;&#x30C9;&#x30D7;&#x30B7;&#x30F3;&#x306E;&#x5149;&#x5206;&#x89E3;&#x306F;&#x975E;&#x5E38;&#x306B;&#x91CE;&#x751F;&#x578B;&#x304A;&#x3088;&#x3073;Gt&#x3B3;&#x6B20;&#x640D;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x30ED;&#x30C3;&#x30C9;&#x30C7;&#x30A3;&#x30B9;&#x30AF;&#x819C;&#x3092;&#x7CBE;&#x88FD;&#x30D2;&#x30C9;&#x30ED;&#x30AD;&#x30B7;&#x30EB;&#x30A2;&#x30DF;&#x30F3;&#x306E;&#x5B58;&#x5728;&#x4E0B;&#x3067;&#x7D2B;&#x5916;&#x53EF;&#x8996;&#x5206;&#x5149;&#x6CD5;&#x3068;&#x8FC5;&#x901F;&#x306A;&#x30B9;&#x30AD;&#x30E3;&#x30F3;&#x5206;&#x5149;&#x6CD5;&#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x3066;&#x691C;&#x8A0E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x5149;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x30ED;&#x30C9;&#x30D7;&#x30B7;&#x30F3;&#x3068;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30C7;&#x30E5;&#x30FC;&#x30B7;&#x30F3;&#x3068;&#x306E;&#x9593;&#x306E;&#x8907;&#x5408;&#x4F53;&#x5F62;&#x6210;&#x306F;&#x3001;&#x4F59;&#x5206;&#x306A;&#x30E1;&#x30BF;&#x30ED;&#x30C9;&#x30D7;&#x30B7;&#x30F3;&#xFF08;&#x30E1;&#x30BF;&#xFF09;II&#x30A2;&#x30C3;&#x30BB;&#x30A4;&#x306B;&#x3088;&#x308A;&#x6E2C;&#x5B9A;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x500B;&#x3005;&#x306E;&#x7121;&#x50B7;&#x306E;&#x91CE;&#x751F;&#x578B;&#x304A;&#x3088;&#x3073;Gt&#x3B3;&#x6B20;&#x640D;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x30ED;&#x30C3;&#x30C9;&#x306E;&#x6697;&#x96FB;&#x6D41;&#x3068;&#x30D5;&#x30E9;&#x30C3;&#x30B7;&#x30E5;&#x306E;&#x611F;&#x5EA6;&#x306E;&#x56DE;&#x5FA9;&#x306F;&#x3001;&#x5358;&#x4E00;&#x7D30;&#x80DE;&#x5438;&#x5F15;&#x306E;&#x8A18;&#x9332;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x6E2C;&#x5B9A;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x7D50;&#x679C;&#x3002;&#x30E1;&#x30BF;I /&#x30E1;&#x30BF;II&#x5E73;&#x8861;&#x306B;&#x30ED;&#x30C9;&#x30D7;&#x30B7;&#x30F3;&#x306E;&#x5149;&#x5909;&#x63DB;&#x306F;&#x3001;Gt&#x3B2;&#x3B3;&#x8907;&#x5408;&#x4F53;&#x306E;&#x9664;&#x53BB;&#x5F8C;&#x3082;&#x6B63;&#x5E38;&#x306B;&#x9032;&#x884C;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30E1;&#x30BF;I /&#x30E1;&#x30BF;II&#x6BD4;&#x306F;&#x3001;&#x30E1;&#x30BF;II&#x306E;&#x5D29;&#x58CA;&#x3001;&#x30D2;&#x30C9;&#x30ED;&#x30AD;&#x30B7;&#x30EB;&#x30A2;&#x30DF;&#x30F3;&#x306B;&#x5411;&#x304B;&#x3063;&#x3066;&#x30E1;&#x30BF;II&#x306E;&#x53CD;&#x5FDC;&#x3068;&#x3001;Gt&#x3B3;&#x6B20;&#x640D;&#x30ED;&#x30C3;&#x30C9;&#x30C7;&#x30A3;&#x30B9;&#x30AF;&#x819C;&#x306E;&#x30E1;&#x30BF;III&#x5F62;&#x6210;&#x306E;&#x901F;&#x5EA6;&#x306E;&#x901F;&#x5EA6;&#x306F;&#x91CE;&#x751F;&#x578B;&#x306E;&#x8A66;&#x6599;&#x3067;&#x89B3;&#x5BDF;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3082;&#x306E;&#x3068;&#x540C;&#x3058;&#x3067;&#x3042;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x4F4E;&#x5F37;&#x5EA6;&#x306E;&#x7167;&#x660E;&#x306E;&#x4E0B;&#x3067;&#x3001;Gt&#x3B3;&#x6B20;&#x640D;&#x30C7;&#x30A3;&#x30B9;&#x30AF;&#x306E;&#x4F59;&#x5206;&#x306A;&#x30E1;&#x30BF;II&#x306E;&#x91CF;&#x304C;&#x5927;&#x5E45;&#x306B;&#x6E1B;&#x5C11;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x5F8C;&#x534A;&#x73FE;&#x5728;&#x306E;&#x56DE;&#x53CE;&#x7387;&#x306F;&#x307B;&#x307C;&#x6A2A;&#x3070;&#x3044;&#x3067;&#x3042;&#x3063;&#x305F;&#x306E;&#x306B;&#x5BFE;&#x3057;&#x3001;12&#x30D1;&#x30FC;&#x30BB;&#x30F3;&#x30C8;&#x30ED;&#x30C9;&#x30D7;&#x30B7;&#x30F3;&#x6F02;&#x767D;&#x5F8C;&#x306E;&#x6697;&#x96FB;&#x6D41;&#x56DE;&#x5FA9;&#x306E;&#x521D;&#x671F;&#x901F;&#x5EA6;&#x306F;&#x3001;Gt&#x3B3;&#x6B20;&#x640D;&#x30ED;&#x30C3;&#x30C9;&#x3067;3&#x500D;&#x901F;&#x304F;&#x306A;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x5909;&#x7570;&#x4F53;&#x30ED;&#x30C3;&#x30C9;&#x306F;&#x307E;&#x305F;&#x3001;&#x30D5;&#x30E9;&#x30C3;&#x30B7;&#x30E5;&#x306E;&#x611F;&#x5EA6;&#x306E;&#x9AD8;&#x901F;postbleach&#x56DE;&#x5FA9;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x7D50;&#x8AD6;&#x3002;&#x5149;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x3068;&#x30ED;&#x30C9;&#x30D7;&#x30B7;&#x30F3;&#x306E;&#x71B1;&#x5D29;&#x58CA;&#x306F;&#x3001;&#x91CE;&#x751F;&#x578B;&#x3068;Gt&#x3B3;&#x6B20;&#x640D;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x30ED;&#x30C3;&#x30C9;&#x3067;&#x540C;&#x69D8;&#x306B;&#x9032;&#x3080;&#x304C;&#x3001;&#x5149;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x30ED;&#x30C9;&#x30D7;&#x30B7;&#x30F3;&#x3068;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30C7;&#x30E5;&#x30FC;&#x30B7;&#x30F3;&#x3068;&#x306E;&#x9593;&#x306E;&#x8907;&#x5408;&#x4F53;&#x5F62;&#x6210;&#x304C;&#x8457;&#x3057;&#x304F;Gt&#x3B2;&#x3B3;&#x306E;&#x4E0D;&#x5728;&#x4E0B;&#x3067;&#x640D;&#x306A;&#x308F;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x7D50;&#x679C;&#x4E0B;&#x306E;&#x4F1D;&#x9054;&#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x306F;Gt&#x3B3;&#x6B20;&#x640D;&#x68D2;&#x3067;&#x7DE9;&#x3084;&#x304B;&#x306A;&#x8272;&#x7D20;&#x6F02;&#x767D;&#x3057;&#x305F;&#x5F8C;&#x306B;&#x9AD8;&#x901F;&#x5149;&#x5FDC;&#x7B54;&#x306E;&#x56DE;&#x5FA9;&#x306B;&#x8CA2;&#x732E;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30C7;&#x30E5;&#x30FC;&#x30B7;&#x30F3;&#x3B2;&#x3B3;&#x8907;&#x5408;&#x4F53;&#x3092;&#x200B;&#x200B;&#x6B20;&#x3044;&#x30ED;&#x30C3;&#x30C9;&#x30C7;&#x30A3;&#x30B9;&#x30AF;&#x819C;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x30ED;&#x30C9;&#x30D7;&#x30B7;&#x30F3;&#x306E;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;&#x30A2;&#x30E1;&#x30EA;&#x30AB;&#x5408;&#x8846;&#x56FD;

&#xBAA9;&#xC801;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;. Gt&beta;&gamma;-&#xBCF5;&#xC7A1; &#xD55C; &#xBCC0;&#xC870; &#xC2E0;&#xD638; &#xC18D;&#xC131; photoactivated rhodopsin &#xBC0F; &#xB85C;&#xB4DC; &#xB514;&#xC2A4;&#xD06C; &#xC138;&#xD3EC; &#xB9C9;&#xC5D0; &#xADF8;&#xB300;&#xB85C; &#xBD09; &#xAE30;&#xAC04;&#xC5D0; transducin&#xC758; &#xAC00;&#xB2A5;&#xD55C; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0C5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xBC29;&#xBC95;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;. Rhodopsin photolysis UV &#xD45C;&#xC2DC; &#xBD84;&#xAD11;&#xD559; &#xBC0F; &#xC2E0;&#xC18D;&#xD55C; &#xC2A4;&#xCE90;&#xB2DD; &#xBD84;&#xAD11;&#xD559; hydroxylamine&#xC758; &#xC874;&#xC7AC;&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xB9E4;&#xC6B0; &#xC21C;&#xD654; &#xB41C; &#xC57C;&#xC0DD; &#xD615; &#xBC0F; Gt&gamma; &#xBD88;&#xCDA9;&#xBD84; &#xD55C; &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4; &#xB85C;&#xB4DC; &#xB514;&#xC2A4;&#xD06C; &#xC138;&#xD3EC; &#xB9C9;&#xC5D0;&#xC11C; &#xACF5;&#xBD80; &#xD588;&#xB2E4;. Photoactivated rhodopsin&#xC640; transducin &#xC0AC;&#xC774;&#xC758; &#xBCF5;&#xC7A1; &#xD55C; &#xD615;&#xC131; &#xCD94;&#xAC00;-metarhodopsin (&#xBA54;&#xD0C0;) 2 &#xCC28; &#xC2DC;&#xD5D8;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xCE21;&#xC815; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;. &#xAC1C;&#xBCC4; &#xADF8;&#xB300;&#xB85C; &#xC57C;&#xC0DD;-&#xD0C0;&#xC785; &#xBC0F; Gt&gamma; &#xBD88;&#xCDA9;&#xBD84; &#xD55C; &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4; &#xBD09;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC5B4;&#xB450;&#xC6B4; &#xD604;&#xC7AC;&#xC640; &#xD50C;&#xB798;&#xC2DC; &#xAC10;&#xB3C4;&#xC758; &#xBCF5;&#xAD6C;&#xB294; &#xB2E8;&#xC77C; &#xC140; &#xD761;&#xC785; &#xB179;&#xC74C; &#xD558; &#xC5EC; &#xCE21;&#xC815; &#xD588;&#xB2E4;. &#xACB0;&#xACFC;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xBA54;&#xD0C0;&#xB97C; rhodopsin&#xC758; Photoconversion &#xB098; / &#xBA54;&#xD0C0; 2 &#xCC28; &#xD3C9;&#xD615; Gt&beta;&gamma; &#xBCF5;&#xD569;&#xCCB4;&#xC758; &#xC81C;&#xAC70; &#xD6C4; &#xC815;&#xC0C1;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xC9C4;&#xD589; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xBA54;&#xD0C0; &#xB098; / &#xBA54;&#xD0C0; II &#xBE44;&#xC728;, &#xBA54;&#xD0C0; 2 &#xCC28; &#xBD95;&#xAD34;&#xC758; &#xC18D;&#xB3C4; &#xBA54;&#xD0C0; &#xBC18;&#xC751; hydroxylamine, &#xBC0F; Gt&gamma; &#xBD88;&#xCDA9;&#xBD84; &#xD55C; &#xB85C;&#xB4DC; &#xB514;&#xC2A4;&#xD06C; &#xC138;&#xD3EC; &#xB9C9;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBA54;&#xD0C0; III &#xD615;&#xC131;&#xC758; &#xC18D;&#xB3C4; II &#xC57C;&#xC0DD;-&#xD0C0;&#xC785; &#xC0D8;&#xD50C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xAD00;&#xCC30; &#xB41C; &#xADF8;&#xC640; &#xB3D9;&#xC77C; &#xD588;&#xB2E4;. &#xB0AE;&#xC740;-&#xAC15;&#xB3C4; &#xC870;&#xBA85;&#xC5D0;&#xC11C; Gt&gamma; &#xBD88;&#xCDA9;&#xBD84; &#xD55C; &#xB514;&#xC2A4;&#xD06C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xCD94;&#xAC00; &#xBA54;&#xD0C0; II&#xC758; &#xC591;&#xC740; &#xD06C;&#xAC8C; &#xAC10;&#xC18C; &#xD588;&#xB2E4;. &#xD6C4;&#xBC18; &#xD604;&#xC7AC; &#xBCF5;&#xAD6C; &#xC18D;&#xB3C4; &#xD06C;&#xAC8C; &#xBCC0;&#xACBD; &#xB41C; &#xBC18;&#xBA74; 12 %rhodopsin &#xD45C; &#xBC31;&#xC81C; &#xD6C4; &#xC5B4;&#xB450;&#xC6B4; &#xD604;&#xC7AC; &#xBCF5;&#xAD6C;&#xC758; &#xCD08;&#xAE30; &#xC18D;&#xB3C4; 3 &#xBC30; &#xBE60;&#xB978; Gt&gamma; &#xBD88;&#xCDA9;&#xBD84; &#xD55C; &#xBD09;&#xC5D0;&#xC11C;. &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xBD09;&#xB3C4; &#xBE68;&#xB9AC; postbleach &#xBCF5;&#xAD6C; &#xD50C;&#xB798;&#xC2DC; &#xAC10;&#xB3C4;&#xC758; &#xC804;&#xC2DC;. &#xACB0;&#xB860;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC57C;&#xC0DD;-&#xD0C0;&#xC785; &#xBC0F; Gt&gamma; &#xBD88;&#xCDA9;&#xBD84; &#xD55C; &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4; &#xBD09; Photoactivation &#xBC0F; &#xC5F4; &#xBD80;&#xD328; rhodopsin&#xC758; &#xC720;&#xC0AC; &#xD558; &#xAC8C; &#xC9C4;&#xD589; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; rhodopsin photoactivated&#xC640; transducin &#xC0AC;&#xC774;&#xC758; &#xBCF5;&#xC7A1; &#xD55C; &#xD615;&#xC131; Gt&beta;&gamma;&#xC758; &#xBD80;&#xC7AC;&#xC5D0; &#xC190;&#xC0C1; &#xC2EC;&#xAC01;. &#xACB0;&#xACFC; &#xB0AE;&#xC740; &#xBCC0;&#xD658; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xC628;&#xAC74; &#xC548;&#xB8CC; Gt&gamma; &#xBD88;&#xCDA9;&#xBD84; &#xD55C; &#xBD09;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD45C; &#xBC31;&#xC81C; &#xD6C4; &#xBE60;&#xB978; photoresponse &#xBCF5;&#xAD6C;&#xC5D0; &#xAE30;&#xC5EC; &#xD55C;&#xB2E4;.

Rhodopsin Transducin &beta;&gamma; &#xBCF5;&#xC7A1; &#xBD80;&#xC871; &#xB85C;&#xB4DC; &#xB514;&#xC2A4;&#xD06C; &#xC138;&#xD3EC; &#xB9C9;&#xC5D0;&#xC11C;&#xC758; &#xC2E0;&#xD638; &#xC0C1;&#xD0DC;.

Prop&#xF3;sito. Para caracterizar el posible papel de la transducina Gt&#x3B2;&#x3B3; complejo en la modulaci&#xF3;n de las propiedades de se&#xF1;alizaci&#xF3;n de fotoactivado rodopsina y su vida &#xFA;til en las membranas de disco de barras y varillas intactas. M&#xE9;todos. Fot&#xF3;lisis rodopsina se estudi&#xF3; mediante espectroscop&#xED;a UV-visible y espectroscopia de barrido r&#xE1;pido en presencia de hidroxilamina en altamente purificada de tipo salvaje y Gt&#x3B3; deficiente-rat&#xF3;n membranas de disco de varilla. La formaci&#xF3;n de complejos entre la rodopsina y transducina fotoactivado se midi&#xF3; por extra-metarodopsina (meta) de ensayo II. La recuperaci&#xF3;n de la sensibilidad de la corriente oscura y el flash en las distintas barras intactos de rat&#xF3;n de tipo salvaje y Gt&#x3B3; deficientes fue medido en los registros de succi&#xF3;n de una sola c&#xE9;lula. Resultados. Fotoconversi&#xF3;n de la rodopsina a la meta de E / meta de equilibrio II continuar&#xE1; normalmente despu&#xE9;s de la eliminaci&#xF3;n de la Gt&#x3B2;&#x3B3; complejo. El meta E / meta relaci&#xF3;n II, la tasa de descomposici&#xF3;n de meta II, la reactividad de meta II hacia hidroxilamina, y la tasa de formaci&#xF3;n de meta III en Gt&#x3B3; deficientes en las membranas de varilla de disco eran id&#xE9;nticos a los observados en las muestras de tipo salvaje. Bajo iluminaci&#xF3;n de baja intensidad, la cantidad de extra-II en meta Gt&#x3B3; con deficiencia de discos se redujo significativamente. La tasa inicial de la recuperaci&#xF3;n de la corriente oscura despu&#xE9;s de la rodopsina 12% de lej&#xED;a era tres veces m&#xE1;s r&#xE1;pido en Gt&#x3B3; con deficiencia de barras, mientras que la tasa actual de recuperaci&#xF3;n de la tarde fue en gran parte sin cambios. Barras de mutantes tambi&#xE9;n mostraron una recuperaci&#xF3;n m&#xE1;s r&#xE1;pida de la sensibilidad postbleach flash. Conclusiones. Fotoactivaci&#xF3;n y el deterioro t&#xE9;rmico de la rodopsina proceder&#xE1; de manera similar en las barras de rat&#xF3;n de tipo salvaje y Gt&#x3B3; deficientes, pero la formaci&#xF3;n de complejos entre la rodopsina y transducina fotoactivado se ve gravemente comprometida en la ausencia de Gt&#x3B2;&#x3B3;. La resultante de transducci&#xF3;n de menor activaci&#xF3;n contribuye a la recuperaci&#xF3;n m&#xE1;s r&#xE1;pida despu&#xE9;s de un foto-cloro pigmento moderado en Gt&#x3B3; con deficiencia de barras.

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Alexander V. Kolesnikov

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