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Efficient Recombinant Parvovirus Production with the Help of Adenovirus-derived Systems

Rodent parvoviruses (PV) such as rat H-1PV and MVM, are small icosahedral, single stranded, DNA viruses. Their genome includes two promoters P4 and P38 ...

German Cancer Research Center (DKFZ)

&#x5927;&#x9F20;&#x7EC6;&#x5C0F;&#x75C5;&#x6BD2; H 1PV &#x662F;&#x526F;&#x4F5C;&#x7528;&#x7684;&#x6709;&#x524D;&#x9014;&#x7684;&#x6297;&#x764C;&#x836F;&#x5728;&#x4EBA;&#x7C7B;&#x8D4B;&#x4E88;&#x5176; oncosuppressive &#x5C5E;&#x6027;&#x548C;&#x6CA1;&#x6709;&#x5DF2;&#x77E5;&#x3002;H 1PV &#x4F18;&#x5148;&#x590D;&#x5236;&#x5728;&#x8F6C;&#x5316;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#xFF0C;&#x4F46;&#x8FD9;&#x79CD;&#x75C5;&#x6BD2;&#x53EF;&#x4EE5;&#x8F93;&#x5165;&#x6B63;&#x5E38;&#x548C;&#x80BF;&#x7624;&#x7EC6;&#x80DE;&#x3002;&#x6B63;&#x5E38;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5438;&#x6536;&#x56FA;&#x8FDC;&#x79BB;&#x80BF;&#x7624;&#x76EE;&#x6807;&#x75C5;&#x6BD2;&#x6027;&#x5242;&#x91CF;&#x7684;&#x5F88;&#x5927;&#x4E00;&#x90E8;&#x5206;&#x3002;&#x56E0;&#x6B64;&#xFF0C;&#x9488;&#x5BF9;&#x5177;&#x4F53; H 1PV &#x8FDB;&#x5165;&#x80BF;&#x7624;&#x7EC6;&#x80DE;&#x662F;&#x91CD;&#x8981;&#x7684;&#x662F;&#x8981;&#x589E;&#x52A0;&#x57FA;&#x4E8E;&#x7EC6;&#x5C0F;&#x75C5;&#x6BD2;&#x75C5;&#x7684;&#x6CBB;&#x7597;&#x65B9;&#x6CD5;&#x7684;&#x7597;&#x6548;&#x3002;&#x5728;&#x6B64;&#x7814;&#x7A76;&#x4E2D;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x9996;&#x6B21;&#x53D1;&#x73B0;&#xFF0C;&#x553E;&#x6DB2;&#x9178; H 1PV &#x6761;&#x76EE;&#x4E2D;&#x53D1;&#x6325;&#x7740;&#x5173;&#x952E;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;&#x7136;&#x540E;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x8F6C;&#x57FA;&#x56E0; H 1PV &#x8863;&#x58F3;&#xFF0C;&#x6539;&#x5584;&#x5176;&#x5BF9;&#x4EBA;&#x7C7B;&#x80BF;&#x7624;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x4EB2;&#x548C;&#x529B;&#x3002;&#x901A;&#x8FC7;&#x89E3;&#x51B3;&#x7684;&#x6676;&#x4F53;&#x7ED3;&#x6784;&#x5BC6;&#x5207;&#x76F8;&#x5173;&#x7684;&#x7EC6;&#x5C0F;&#x75C5;&#x6BD2;&#x5206;&#x949F;&#x75C5;&#x6BD2;&#x5C0F;&#x9F20;&#x7684;&#x7C7B;&#x6BD4;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x5F00;&#x53D1;&#x7684;&#x7845;&#x4E09;&#x7EF4; (3D) &#x6A21;&#x578B;&#x7684; H 1PV &#x91CE;&#x751F;&#x578B;&#x8863;&#x58F3;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x57FA;&#x4E8E;&#x6B64;&#x6A21;&#x578B;&#xFF0C;&#x786E;&#x5B9A;&#x5047;&#x5B9A;&#x6C28;&#x57FA;&#x9178;&#x53C2;&#x4E0E;&#x7EC6;&#x80DE;&#x819C;&#x8BC6;&#x522B;&#x548C;&#x75C5;&#x6BD2;&#x8FDB;&#x5165;&#x4E00;&#x7EA7;&#x7684;&#x5BF9;&#x79F0;&#x7684;&#x8863;&#x58F3;&#xFF0C;&#x6240;&#x8C13;&#x7684;&#x9152;&#x7A9D;&#x533A;&#x57DF;&#x5185;&#x4E8C;&#x6298;&#x8F74;&#x7684;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x6B8B;&#x7559;&#x7269;&#x7684;&#x539F;&#x4F4D;&#x8BF1;&#x53D8;&#x5927;&#x5927;&#x51CF;&#x5C11;&#x7684;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x548C; H 1PV &#x8FDB;&#x5165;&#x8BB8;&#x53EF;&#x7684;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x3002;&#x5DE5;&#x7A0B;&#x9879;&#x7F3A;&#x9677;&#x75C5;&#x6BD2;&#x8863;&#x58F3;&#xFF0C;&#x7136;&#x540E;&#x63D2;&#x5165;&#x5FAA;&#x73AF; RGD-4 C &#x80BD;&#x5728;&#x5176;&#x4E09;&#x6298;&#x8F74;&#x7A57;&#x7684;&#x6C34;&#x5E73;&#x3002;&#x6B64;&#x80BD;&#x7ED1;&#x5B9A; &alpha;(v)&beta;(3) &#x548C; &alpha;(v)&beta;(5) &#x6574;&#x5408;&#x7D20;&#xFF0C;&#x6297;&#x539F;&#x5728;&#x764C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x548C;&#x8D8A;&#x6765;&#x8D8A;&#x591A;&#x7684;&#x8840;&#x7BA1;&#x3002;&#x63D2;&#x5165;&#x7684;&#x80BD;&#x6551;&#x51FA;&#x75C5;&#x6BD2;&#x6027;&#x4F20;&#x67D3;&#x6027;&#x8D70;&#x5411;&#x8D85;&#x91CF;&#x8868;&#x8FBE; &alpha;(v)&beta;(5) &#x6574;&#x5408;&#x7D20;&#xFF0C;&#x7531;&#x91CD;&#x65B0;&#x8BBE;&#x8BA1;&#x75C5;&#x6BD2;&#x9020;&#x6210;&#x9AD8;&#x6548;&#x88AB;&#x5BB3;&#xFF0C;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x7684;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x3002;&#x8FD9;&#x9879;&#x5DE5;&#x4F5C;&#x6F14;&#x793A; H 1PV &#x53EF;&#x4EE5;&#x91CD;&#x57FA;&#x56E0;&#x5B9A;&#x5411;&#x901A;&#x8FC7;&#x5176;&#x8863;&#x58F3;&#x4FEE;&#x6539;&#x663E;&#x793A;&#x5728;&#x764C;&#x75C7;&#x6CBB;&#x7597;&#x4E2D;&#x66F4;&#x6709;&#x6548;&#x5730;&#x5229;&#x7528;&#x8FD9;&#x79CD;&#x75C5;&#x6BD2;&#x5F88;&#x6709;&#x524D;&#x9014;&#x3002;

&#x5927;&#x9F20;&#x7EC6;&#x5C0F;&#x75C5;&#x6BD2; H 1PV &#x5BF9;&#x80BF;&#x7624;&#x7EC6;&#x80DE;&#x901A;&#x8FC7;&#x9057;&#x4F20;&#x5DE5;&#x7A0B;&#x75C5;&#x6BD2;&#x8863;&#x58F3;&#x7684;&#x91CD;&#x5B9A;&#x76EE;&#x6807;&#x3002;

The rat parvovirus H-1PV is a promising anticancer agent given its oncosuppressive properties and the absence of known side effects in humans. H-1PV replicates preferentially in transformed cells, but the virus can enter both normal and cancer cells. Uptake by normal cells sequesters a significant portion of the administered viral dose away from the tumor target. Hence, targeting H-1PV entry specifically to tumor cells is important to increase the efficacy of parvovirus-based treatments. In this study, we first found that sialic acid plays a key role in H-1PV entry. We then genetically engineered the H-1PV capsid to improve its affinity for human tumor cells. By analogy with the resolved crystal structure of the closely related parvovirus minute virus of mice, we developed an in silico three-dimensional (3D) model of the H-1PV wild-type capsid. Based on this model, we identified putative amino acids involved in cell membrane recognition and virus entry at the level of the 2-fold axis of symmetry of the capsid, within the so-called dimple region. In situ mutagenesis of these residues significantly reduced the binding and entry of H-1PV into permissive cells. We then engineered an entry-deficient viral capsid and inserted a cyclic RGD-4C peptide at the level of its 3-fold axis spike. This peptide binds Î±(v)Î²(3) and Î±(v)Î²(5) integrins, which are overexpressed in cancer cells and growing blood vessels. The insertion of the peptide rescued viral infectivity toward cells overexpressing Î±(v)Î²(5) integrins, resulting in the efficient killing of these cells by the reengineered virus. This work demonstrates that H-1PV can be genetically retargeted through the modification of its capsid, showing great promise for a more efficient use of this virus in cancer therapy.

Retargeting of rat parvovirus H-1PV to cancer cells through genetic engineering of the viral capsid.

Le parvovirus du rat H-1PV est un agent anticanc&#xE9;reux prometteur compte tenu de ses propri&#xE9;t&#xE9;s oncosuppressive et l&#x26;#39;absence d&#x26;#39;effets secondaires connus chez les humains. H-1PV r&#xE9;plique pr&#xE9;f&#xE9;rentiellement dans les cellules transform&#xE9;es, mais le virus peut p&#xE9;n&#xE9;trer &#xE0; la fois normale et les cellules canc&#xE9;reuses. L&#x26;#39;absorption par les cellules normales s&#xE9;questre une partie importante de la dose administr&#xE9;e virale loin de la cible tumorale. Par cons&#xE9;quent, le ciblage H-1PV entr&#xE9;e sp&#xE9;cifiquement aux cellules tumorales est important d&#x26;#39;augmenter l&#x26;#39;efficacit&#xE9; de traitements &#xE0; base de parvovirus. Dans cette &#xE9;tude, nous avons d&#x26;#39;abord constat&#xE9; que l&#x26;#39;acide sialique joue un r&#xF4;le cl&#xE9; dans la H-1PV entr&#xE9;e. Nous avons ensuite g&#xE9;n&#xE9;tiquement la capside H-1PV pour am&#xE9;liorer son affinit&#xE9; pour les cellules tumorales humaines. Par analogie avec la structure cristalline r&#xE9;solue du virus minute parvovirus &#xE9;troitement li&#xE9; de souris, nous avons d&#xE9;velopp&#xE9; un mod&#xE8;le in silico en trois dimensions (3D) de la H-1PV de type sauvage capside. Bas&#xE9; sur ce mod&#xE8;le, nous avons identifi&#xE9; putatifs des acides amin&#xE9;s impliqu&#xE9;s dans la reconnaissance membrane cellulaire et l&#x26;#39;entr&#xE9;e du virus au niveau de l&#x26;#39;axe 2-fois de la sym&#xE9;trie de la capside, dans la r&#xE9;gion fossette dite. En mutagen&#xE8;se in situ de ces r&#xE9;sidus consid&#xE9;rablement r&#xE9;duit la liaison et l&#x26;#39;entr&#xE9;e de la H-1PV dans les cellules permissives. On puis con&#xE7;u une capside virale entr&#xE9;e de d&#xE9;ficience de et ins&#xE9;r&#xE9; une cyclique RGD-4C peptide au niveau de son pic axe 3 fois. Ce peptide se lie &#x3B1; (v) &#x3B2; (3) et &#x3B1; (v) &#x3B2; (5) int&#xE9;grines, qui sont surexprim&#xE9;es dans les cellules canc&#xE9;reuses et les vaisseaux sanguins en croissance. L&#x26;#39;insertion du peptide sauv&#xE9; infectivit&#xE9; virale vers les cellules surexprimant &#x3B1; (v) &#x3B2; (5) les int&#xE9;grines, qui entra&#xEE;ne la mort efficace de ces cellules par le virus remani&#xE9;. Ce travail d&#xE9;montre que H-1PV peuvent &#xEA;tre g&#xE9;n&#xE9;tiquement r&#xE9;orient&#xE9;es par la modification de sa capside, semble tr&#xE8;s prometteur pour une utilisation plus efficace de ce virus dans le traitement du cancer.

Reciblage du parvovirus H-Rat 1PV &#xE0; cellules canc&#xE9;reuses par le g&#xE9;nie g&#xE9;n&#xE9;tique de la capside virale

Die Ratte-Parvovirus H-1PV ist eine vielversprechende Anti-Krebs-Agent seine Oncosuppressive Eigenschaften und das Fehlen von bekannten Nebenwirkungen beim Menschen gegeben. H-1PV repliziert bevorzugt in transformierten Zellen, aber das Virus kann sowohl Normal als auch Krebs Zellen eingeben. Aufnahme von normalen Zellen Sequester einen erheblichen Teil der viralen administrierten Dosis vom Tumor vorbei. Folglich ist es wichtig, die Wirkung einer Parvovirus-basierte Behandlung zu erh&ouml;hen, Ausrichtung auf H-1PV Eintrag speziell auf Tumorzellen. In dieser Studie fanden wir zuerst die Sialins&auml;ure spielt eine Schl&uuml;sselrolle im H-1PV-Eintrag. Wir entwickelt dann genetisch das H-1PV Kapsid seine Affinit&auml;t f&uuml;r menschliche Tumorzellen zu verbessern. In Anlehnung an die aufgel&ouml;sten Kristallstruktur des eng verwandte Parvovirus Minute Virus von M&auml;usen, entwickelten wir eine in Silico dreidimensionale (3D) Modell der H-1PV Wildtyp Kapsid. Auf der Grundlage dieses Modells wurden vermeintliche Aminos&auml;uren Zellmembran Anerkennung und Virus-Eintrag auf der Ebene der 2-fold Achse der Symmetrie der das Kapsid, innerhalb der sogenannten Gr&uuml;bchen-Region beteiligt. In-situ Mutagenese dieser R&uuml;ckst&auml;nde deutlich reduziert, die Bindung und das Inkrafttreten des H-1PV permissive Zellen. Dann entwickelt ein Eintrag-defizienten virale Kapsid und ein zyklischer RGD - 4 C-Peptid auf der Ebene einer seiner 3-Band-Achse-Spitze eingef&uuml;gt. Dieses Peptid bindet &alpha;(v)&beta;(3) und &alpha;(v)&beta;(5)-Integrine, die in Krebszellen und wachsende Blutgef&auml;&szlig;e Pleuramesotheliom sind. Die Einf&uuml;gung des Peptids gerettet virale Infektiosit&auml;t in Richtung &alpha;(v)&beta;(5)-Integrine, wodurch die effiziente T&ouml;tung dieser Zellen durch das &uuml;berarbeitete Virus &uuml;berexprimierenden Zellen. Diese Arbeit zeigt, dass H-1PV genetisch durch die Modifizierung von seiner Kapsid umgeleitet werden kann, zeigen viel versprechend f&uuml;r eine effizientere Nutzung dieses Virus in der Krebstherapie.

Neuausrichtung der Ratte Parvovirus H-1PV zu Krebszellen durch die Gentechnik von der viralen Kapsid.

Il parvovirus ratto H-1PV &egrave; un promettente agente antitumorale dato le sue propriet&agrave; oncosuppressive e l&#39;assenza di effetti collaterali conosciuti negli esseri umani. H-1PV replica preferenzialmente in cellule trasformate, ma il virus pu&ograve; entrare sia normali e cellule cancerogene. Assorbimento da parte delle cellule normali sequestra una porzione significativa della dose somministrata virale lontano dal bersaglio del tumore. Quindi, targeting H-1PV entrata in particolare per le cellule tumorali &egrave; importante per aumentare l&#39;efficacia dei trattamenti a base di parvovirus. In questo studio, abbiamo trovato prima che l&#39;acido sialico gioca un ruolo chiave nella voce H-1PV. Abbiamo quindi geneticamente il capside H-1PV per migliorare la sua affinit&agrave; per le cellule tumorali umane. Per analogia con la struttura di cristallo risolto del virus parvovirus strettamente correlati minuto dei topi, abbiamo sviluppato un in silico tridimensionale (3D) modello del capside del selvaggio-tipo H-1PV. Basato su questo modello, abbiamo identificato putativi amminoacidi coinvolti nella membrana cellulare voce riconoscimento e virus a livello dell&#39;asse di simmetria del capside, all&#39;interno della regione cosiddetta fossetta 2 volte. Mutagenesi in situ di questi residui ha ridotto significativamente l&#39;associazione e l&#39;entrata di H-1PV in cellule permissive. Abbiamo quindi progettato un deficit di entrata capside virale e inserito un peptide ciclico RGD-4 C a livello del suo picco asse 3 volte. Questo peptide si lega integrine &alpha;(v)&beta;(3) e &alpha;(v)&beta;(5), che sono overexpressed in cellule tumorali e crescita dei vasi sanguigni. L&#39;inserimento del peptide salvato infettivit&agrave; virale verso le cellule con sovraesprimono relativa &alpha;(v)&beta;(5) integrine, causando l&#39;uccisione efficiente di queste cellule dal virus riprogettato. Questo lavoro dimostra che H-1PV pu&ograve; essere ridestinato geneticamente relativo attraverso la modifica del suo capside, mostrando grande promessa per un uso pi&ugrave; efficiente di questo virus nella terapia del cancro.

Nuova destinazione di parvovirus ratto H-1PV alle cellule tumorali attraverso l&#39;ingegneria genetica delle proteine del capside virale.

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H-1PV&#x306F;&#x3001;&#x5F62;&#x8CEA;&#x8EE2;&#x63DB;&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x512A;&#x5148;&#x7684;&#x306B;&#x8907;&#x88FD;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x304C;&#x3001;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x306F;&#x3001;&#x901A;&#x5E38;&#x3001;&#x304C;&#x3093;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x4E21;&#x65B9;&#x3092;&#x5165;&#x529B;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6B63;&#x5E38;&#x7D30;&#x80DE;&#x3078;&#x306E;&#x53D6;&#x308A;&#x8FBC;&#x307F;&#x306F;&#x3001;&#x96E2;&#x308C;&#x3066;&#x816B;&#x760D;&#x6A19;&#x7684;&#x304B;&#x3089;&#x6295;&#x4E0E;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x91CF;&#x306E;&#x304B;&#x306A;&#x308A;&#x306E;&#x90E8;&#x5206;&#x3092;&#x9694;&#x96E2;&#x3002;&#x3057;&#x305F;&#x304C;&#x3063;&#x3066;&#x3001;&#x816B;&#x760D;&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x7279;&#x7570;&#x7684;&#x306B;H-1PV&#x30A8;&#x30F3;&#x30C8;&#x30EA;&#x3092;&#x30BF;&#x30FC;&#x30B2;&#x30C3;&#x30C8;&#x3068;&#x3059;&#x308B;&#x30D1;&#x30EB;&#x30DC;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x30D9;&#x30FC;&#x30B9;&#x306E;&#x6CBB;&#x7642;&#x306E;&#x6709;&#x52B9;&#x6027;&#x3092;&#x5897;&#x52A0;&#x3055;&#x305B;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x91CD;&#x8981;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3002;&#x672C;&#x7814;&#x7A76;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x307E;&#x305A;&#x3001;&#x30B7;&#x30A2;&#x30EB;&#x9178;&#x306F;&#x3001;H-1PV&#x306E;&#x30A8;&#x30F3;&#x30C8;&#x30EA;&#x3067;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x679C;&#x305F;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x308F;&#x304B;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;&#x907A;&#x4F1D;&#x7684;&#x306B;&#x30D2;&#x30C8;&#x816B;&#x760D;&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x5BFE;&#x3059;&#x308B;&#x89AA;&#x548C;&#x6027;&#x3092;&#x5411;&#x4E0A;&#x3055;&#x305B;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;H-1PV&#x306E;&#x30AB;&#x30D7;&#x30B7;&#x30C9;&#x3092;&#x8A2D;&#x8A08;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x306E;&#x5BC6;&#x63A5;&#x306B;&#x95A2;&#x9023;&#x3057;&#x305F;&#x30D1;&#x30EB;&#x30DC;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x306E;&#x5206;&#x306E;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x306E;&#x89E3;&#x6C7A;&#x306E;&#x7D50;&#x6676;&#x69CB;&#x9020;&#x304B;&#x3089;&#x985E;&#x63A8;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;H-1PV&#x91CE;&#x751F;&#x578B;&#x30AB;&#x30D7;&#x30B7;&#x30C9;&#x306E;in silico&#x3067;3&#x6B21;&#x5143;&#xFF08;3D&#xFF09;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x3092;&#x958B;&#x767A;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x306B;&#x57FA;&#x3065;&#x3044;&#x3066;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;&#x3044;&#x308F;&#x3086;&#x308B;&#x30C7;&#x30A3;&#x30F3;&#x30D7;&#x30EB;&#x9818;&#x57DF;&#x5185;&#x3067;&#x3001;&#x30AB;&#x30D7;&#x30B7;&#x30C9;&#x306E;&#x5BFE;&#x79F0;&#x6027;&#x306E;2&#x500D;&#x306E;&#x8EF8;&#x306E;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x3067;&#x7D30;&#x80DE;&#x819C;&#x306E;&#x8A8D;&#x8B58;&#x3084;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x306E;&#x4FB5;&#x5165;&#x306B;&#x95A2;&#x4E0E;&#x3059;&#x308B;&#x63A8;&#x5B9A;&#x30A2;&#x30DF;&#x30CE;&#x9178;&#x3092;&#x540C;&#x5B9A;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x6B8B;&#x57FA;&#x306E;in situ&#x7A81;&#x7136;&#x5909;&#x7570;&#x751F;&#x6210;&#x304C;&#x5927;&#x5E45;&#x306B;&#x5BDB;&#x5BB9;&#x306A;&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;H-1PV&#x306E;&#x7D50;&#x5408;&#x3068;&#x30A8;&#x30F3;&#x30C8;&#x30EA;&#x3092;&#x6E1B;&#x5C11;&#x3055;&#x305B;&#x305F;&#x3002;&#x6B21;&#x306B;&#x3001;&#x30A8;&#x30F3;&#x30C8;&#x30EA;&#x6B20;&#x640D;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x30AD;&#x30E3;&#x30D7;&#x30B7;&#x30C9;&#x3092;&#x8A2D;&#x8A08;&#x3057;&#x3001;&#x305D;&#x306E;3&#x500D;&#x306E;&#x8EF8;&#x30B9;&#x30D1;&#x30A4;&#x30AF;&#x306E;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x3067;&#x3001;&#x74B0;&#x72B6;RGD-4C&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C9;&#x3092;&#x633F;&#x5165;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C9;&#x306F;&#x3001;&#x764C;&#x7D30;&#x80DE;&#x3068;&#x6210;&#x9577;&#x3057;&#x3066;&#x8840;&#x7BA1;&#x5185;&#x306B;&#x904E;&#x5270;&#x767A;&#x73FE;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3B1;&#xFF08;v&#xFF09;&#x306E;&#x3B2;&#xFF08;3&#xFF09;&#x3068;&#x3B1;&#xFF08;v&#xFF09;&#x306E;&#x3B2;&#xFF08;5&#xFF09;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C6;&#x30B0;&#x30EA;&#x30F3;&#x3092;&#x3001;&#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C9;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C9;&#x306E;&#x633F;&#x5165;&#x306F;&#x3001;&#x518D;&#x8A2D;&#x8A08;&#x3001;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x52B9;&#x7387;&#x7684;&#x306A;&#x6BBA;&#x5BB3;&#x3001;&#x305D;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x3001;&#x7D30;&#x80DE;&#x304C;&#x904E;&#x5270;&#x767A;&#x73FE;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3B1;&#xFF08;v&#xFF09;&#x306E;&#x3B2;&#xFF08;5&#xFF09;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C6;&#x30B0;&#x30EA;&#x30F3;&#x306B;&#x5411;&#x304B;&#x3063;&#x3066;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x611F;&#x67D3;&#x3092;&#x6551;&#x52A9;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x4F5C;&#x54C1;&#x306F;&#x3001;H-1PV&#x304C;&#x907A;&#x4F1D;&#x7684;&#x306B;&#x764C;&#x6CBB;&#x7642;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x3053;&#x306E;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x306E;&#x52B9;&#x7387;&#x7684;&#x306A;&#x4F7F;&#x7528;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x5049;&#x5927;&#x306A;&#x7D04;&#x675F;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3001;&#x305D;&#x306E;&#x30AB;&#x30D7;&#x30B7;&#x30C9;&#x306E;&#x5909;&#x66F4;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x30BF;&#x30FC;&#x30B2;&#x30C3;&#x30C8;&#x3092;&#x5909;&#x66F4;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x30AD;&#x30E3;&#x30D7;&#x30B7;&#x30C9;&#x306E;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x5DE5;&#x5B66;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x764C;&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;H-1PV&#x30E9;&#x30C3;&#x30C8;&#x30D1;&#x30EB;&#x30DC;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x306E;&#x30BF;&#x30FC;&#x30B2;&#x30C3;&#x30C8;&#x5909;&#x66F4;

&#xC950; parvovirus H-1pv&#xC740; &#xC778; &#xAC04;&#xC5D0; &#xC788;&#xB294; &#xADF8;&#xAC83;&#xC758; oncosuppressive &#xC18D;&#xC131; &#xBC0F; &#xC54C;&#xB824;&#xC9C4;&#xB41C; &#xBD80;&#xC791;&#xC6A9;&#xC758; &#xBD80;&#xC7AC; &#xC8FC;&#xC5B4;&#xC9C4; &#xC720;&#xB9DD;&#xD55C; &#xD56D; &#xC554; &#xC5D0;&#xC774;&#xC804;&#xD2B8;. H-1PV &#xBCC0;&#xD658; &#xB41C; &#xC140;&#xC5D0; &#xC6B0;&#xC120;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xBCF5;&#xC81C; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4;&#xB294; &#xC815;&#xC0C1; &#xBC0F; &#xC554; &#xC138;&#xD3EC;&#xB97C; &#xC785;&#xB825;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC815;&#xC0C1; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xAE00;&#xADC0; sequesters &#xC885;&#xC591; &#xB300;&#xC0C1;&#xC5D0;&#xC11C; &#xAD00;&#xB9AC; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; &#xBCF5;&#xC6A9;&#xB7C9;&#xC758; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xBD80;&#xBD84;. &#xB530;&#xB77C;&#xC11C;, &#xD2B9;&#xD788; &#xC885;&#xC591; &#xC138;&#xD3EC;&#xB97C; H-1PV &#xD56D;&#xBAA9;&#xC744; &#xB300;&#xC0C1;&#xC73C;&#xB85C; parvovirus &#xAE30;&#xBC18; &#xCE58;&#xB8CC;&#xC758; &#xD6A8;&#xB2A5;&#xC744; &#xC99D;&#xAC00; &#xD558;&#xB294; &#xAC83;&#xC774; &#xC911;&#xC694;. &#xC774; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xBA3C;&#xC800; &#xADF8; sialic &#xC0B0; H-1PV &#xD56D;&#xBAA9;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD575;&#xC2EC;&#xC801;&#xC778; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xD558;&#xACE0;&#xC788;&#xB2E4; &#xBC1C;&#xACAC;. &#xC6B0;&#xB9AC; &#xB2E4;&#xC74C; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xC870;&#xC791; &#xC778;&#xAC04; &#xC885;&#xC591; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xADF8;&#xAC83;&#xC758; &#xC120;&#xD638;&#xB3C4; &#xAC1C;&#xC120; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD574; H-1PV capsid. &#xC950;&#xC758; &#xBC00;&#xC811; &#xD558; &#xAC8C; &#xAD00;&#xB828;&#xB41C; parvovirus &#xBD84; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4;&#xC758; &#xD655;&#xC778; &#xB41C; &#xACB0;&#xC815; &#xAD6C;&#xC870;&#xC640; &#xBE44;&#xC720;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xC2DC;&#xB0B4; silico 3 &#xCC28;&#xC6D0; (3D) &#xAC1C;&#xBC1C; H-1PV &#xC57C;&#xC0DD;-&#xD0C0;&#xC785; capsid&#xC758; &#xBAA8;&#xB378;. &#xC774; &#xBAA8;&#xB378;&#xC744; &#xBC14;&#xD0D5;&#xC73C;&#xB85C;, &#xC6B0;&#xB9AC; &#xC0C1; &#xC544;&#xBBF8;&#xB178;&#xC0B0; 2-fold capsid &#xC18C;&#xC704; &#xBCF4;&#xC870; &#xAC1C; &#xC9C0;&#xC5ED; &#xB0B4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xB300;&#xCE6D; &#xCD95;&#xC758; &#xC218;&#xC900;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC138;&#xD3EC; &#xB9C9; &#xC778;&#xC2DD; &#xBC0F; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; &#xD56D;&#xBAA9;&#xC5D0; &#xAD00;&#xB828; &#xB41C; &#xBC1C;&#xACAC;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xC794;&#xB958;&#xBB3C;&#xC758; &#xC6D0;&#xB798;&#xC758; mutagenesis &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xBC0F; &#xAD00;&#xB300; &#xD55C; &#xC140; H-1PV &#xC9C4;&#xC785;&#xC5D0; &#xD06C;&#xAC8C; &#xC904;&#xC5B4;&#xB4ED;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB2E4;&#xC74C; &#xD56D;&#xBAA9; &#xBD88;&#xCDA9;&#xBD84; &#xD55C; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; &#xC131; capsid &#xC124;&#xACC4; &#xD558; &#xACE0; &#xC21C;&#xD658; RGD-4 C &#xD3A9; &#xD2F0; &#xB4DC;&#xC758; 3 &#xCD95; &#xC2A4;&#xD30C;&#xC774;&#xD06C;&#xC758; &#xC218;&#xC900;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC0BD;&#xC785;. &#xC774; &#xD3A9; &#xD2F0;&#xC774; &#xB4DC; &#xC554; &#xC138;&#xD3EC; &#xBC0F; &#xC131;&#xC7A5; &#xD558; &#xACE0; &#xC788;&#xB294; &#xD608;&#xAD00;&#xC5D0; overexpressed &alpha;(v)&beta;(3) &#xBC0F; &alpha;(v)&beta;(5) integrins&#xB97C; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xD3A9; &#xD2F0; &#xB4DC;&#xC758; &#xC0BD;&#xC785; overexpressing &alpha;(v)&beta;(5) integrins, &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xD6A8;&#xC728;&#xC801;&#xC778; &#xC0B4;&#xC778; reengineered &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xBC1C;&#xC0DD; &#xD558;&#xB294; &#xC140; &#xBC29;&#xD5A5;&#xC73C;&#xB85C; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; &#xC131; infectivity &#xAD6C;&#xCD9C;. &#xC774; &#xC791;&#xC5C5; &#xB300;&#xC0C1;&#xC774; &#xADF8; H-1PV &#xC218; &#xC218; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xBCC0;&#xACBD;&#xC758; capsid &#xC218;&#xC815;&#xC744; &#xD1B5;&#xD574; &#xC554; &#xCE58;&#xB8CC;&#xC5D0; &#xB354; &#xD6A8;&#xC728;&#xC801;&#xC778; &#xD65C;&#xC6A9;&#xC774;&#xC774; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xD070; &#xC57D;&#xC18D;&#xC744; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC8FC;&#xB294; &#xD558;&#xB294; &#xBC29;&#xBC95;&#xC744; &#xBCF4;&#xC5EC; &#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xB300;&#xC0C1; &#xBCC0;&#xACBD; &#xC950; parvovirus H-1PV &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; capsid&#xC758; &#xC720;&#xC804; &#xACF5;&#xD559; &#xD1B5;&#xD574; &#xC554; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0;&#xC758;.

El parvovirus ratas H-1PV es un agente prometedor contra el c&#xE1;ncer debido a sus propiedades oncosuppressive y la ausencia de efectos secundarios conocidos en los seres humanos. H-1PV se replica preferentemente en las c&#xE9;lulas transformadas, pero el virus puede entrar en c&#xE9;lulas tanto normales como cancerosas. La captaci&#xF3;n por las c&#xE9;lulas normales secuestra una porci&#xF3;n significativa de la dosis administrada viral lejos de la diana del tumor. Por lo tanto, la orientaci&#xF3;n H-1PV entrada espec&#xED;ficamente a las c&#xE9;lulas tumorales es importante para aumentar la eficacia de los tratamientos a base de parvovirus. En este estudio, se encontr&#xF3; por primera vez que el &#xE1;cido si&#xE1;lico juega un papel clave en la H-1PV entrada. A continuaci&#xF3;n, gen&#xE9;ticamente la c&#xE1;psida H-1PV para mejorar su afinidad por las c&#xE9;lulas tumorales humanas. Por analog&#xED;a con la estructura cristalina del virus de resolver el parvovirus minutos estrechamente relacionado con los ratones, hemos desarrollado un modelo in silico de tres dimensiones (3D) de la H-1PV de tipo salvaje c&#xE1;pside. Basado en este modelo, hemos identificado putativo amino&#xE1;cidos implicados en el reconocimiento de la membrana celular y la entrada del virus en el plano del eje 2-pliegue de simetr&#xED;a de la c&#xE1;psida, dentro de la regi&#xF3;n hoyuelo llamada. En mutag&#xE9;nesis in situ de estos residuos reduce significativamente la uni&#xF3;n y la entrada de H-1PV en c&#xE9;lulas permisivas. A continuaci&#xF3;n, dise&#xF1;ado una c&#xE1;pside viral entrada-deficiente y se inserta un c&#xED;clico RGD-4C p&#xE9;ptido en el nivel de su espiga eje 3-pliegue. Este p&#xE9;ptido se une &#x3B1; (v) &#x3B2; (3) y &#x3B1; (v) &#x3B2; (5) integrinas, que se sobreexpresa en las c&#xE9;lulas cancerosas y crecen los vasos sangu&#xED;neos. La inserci&#xF3;n del p&#xE9;ptido rescatado infectividad viral hacia las c&#xE9;lulas que sobreexpresan &#x3B1; (v) &#x3B2; (5) integrinas, resultando en la muerte de estas c&#xE9;lulas eficiente por el virus redise&#xF1;ado. Este trabajo demuestra que H-1PV pueden ser gen&#xE9;ticamente retargeted a trav&#xE9;s de la modificaci&#xF3;n de su c&#xE1;pside, mostrando una gran promesa para un uso m&#xE1;s eficiente de este virus en la terapia del c&#xE1;ncer.

Serena Bonifati

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