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Cutaneous Leishmaniasis in the Dorsal Skin of Hamsters: a Useful Model for the Screening of Antileishmanial Drugs

Traditionally, hamsters are experimentally inoculated in the snout or the footpad. However in these sites an ulcer not always occurs, measurement of ...

University of Antioquia

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&#x7EFF;&#x8272;&#x8367;&#x5149;&#x86CB;&#x767D;&#x5728;&#x4F53;&#x5916;&#x548C;&#x4F53;&#x5185;&#x7684; antileishmanial &#x836F;&#x7269;&#x7B5B;&#x9009;&#x7684;&#x675C;&#x6C0F;&#x5229;&#x4EC0;&#x66FC;&#x866B;&#x8BB0;&#x8005;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x7684;&#x6539;&#x8FDB;&#x3002;

Development of new therapeutic approaches for leishmaniasis treatment requires new high throughput screening methodologies for the antileishmanial activity of the new compounds both in vitro and in vivo. Reporter genes as the GFP have become one of the most promissory and widely used tools for drug screening in several models, since it offers live imaging, high sensibility, specificity and flexibility; additionally, the use of GFP as a reporter gene in screening assays eliminates all the drawbacks presented in conventional assays and also those technical problems found using other reporter genes. The utility of the GFP as a reporter gene in drug screening assays with Leishmania parasites depends on the homogeneity and stability of the GFP transfected strains. Stable expression of the GFP in the Old World Leishmania species has been demonstrated using integration vectors; however, no reports exist yet about the success of this methodology in the New World species. Here we report the generation of New World Leishmania strains expressing the GFP protein from an integration vector, which replaces one copy of the 18S RNA in the chromosome with the GFP coding sequence by homologous recombination. We also prove that the expression of the integrated GFP is stable and homogeneous in the transfected parasites after months in culture without selective pressure or during its use in hamster infection assays. The fluorescent strains are useful for in vitro, ex vivo and in vivo drug screening assays since no considerable variations in virulence or infectivity where seen attributable to the genetic manipulation during both in vitro and in vivo infection experiments. The platform described here for drug testing assays based on the use of stable fluorescent Leishmania strains coupled to flow cytometry and fluorescent microscopy is more sensitive, more specific and faster than conventional assays used normally for the evaluation of compounds with potential antileishmanial activity.

Improvement of the green fluorescent protein reporter system in Leishmania spp. for the in vitro and in vivo screening of antileishmanial drugs.

D&eacute;veloppement de nouvelles approches th&eacute;rapeutiques pour le traitement de la leishmaniose exige de nouvel m&eacute;thodologies pour l&#39;activit&eacute; antileishmanial des nouveaux compos&eacute;s in vitro et in vivo de criblage haute. G&egrave;nes rapporteurs comme la GFP sont devenus un des outils plus promissoire et largement utilis&eacute;s pour le d&eacute;pistage des drogues en plusieurs mod&egrave;les, puisqu&#39;elle offre imagerie live, haute sensibilit&eacute;, sp&eacute;cificit&eacute; et flexibilit&eacute; ; en outre, l&#39;utilisation de la GFP comme un g&egrave;ne rapporteur lors de tests de d&eacute;pistage &eacute;limine tous les inconv&eacute;nients pr&eacute;sent&eacute;s dans les essais conventionnels et &eacute;galement ces probl&egrave;mes techniques &agrave; l&#39;aide d&#39;autres g&egrave;nes rapporteurs. L&#39;utilit&eacute; de la GFP comme un g&egrave;ne rapporteur dans les essais avec les parasites Leishmania de d&eacute;pistage de drogue d&eacute;pend de l&#39;homog&eacute;n&eacute;it&eacute; et la stabilit&eacute; de la GFP transfect&eacute;es souches. Expression stable de la GFP chez les esp&egrave;ces de Leishmania Old World a &eacute;t&eacute; d&eacute;montr&eacute;e &agrave; l&#39;aide de vecteurs d&#39;int&eacute;gration ; Toutefois, aucune d&eacute;claration n&#39;existe encore sur le succ&egrave;s de cette m&eacute;thode chez les esp&egrave;ces du nouveau monde. Nous rapportons ici la g&eacute;n&eacute;ration du nouveau monde Leishmania souches exprimant la prot&eacute;ine GFP de vecteur d&#39;int&eacute;gration, qui remplace une copie de l&#39;ARN 18 s dans le chromosome par la GFP s&eacute;quence codante par recombinaison homologue. Nous montrons &eacute;galement que l&#39;expression de la GFP int&eacute;gr&eacute;e est stable et homog&egrave;ne dans les parasites transfect&eacute;es apr&egrave;s des mois de culture sans pression s&eacute;lective ou lors de son utilisation dans des essais d&#39;infection hamster. Les souches fluorescentes sont utiles pour in vitro, ex vivo et tests de d&eacute;pistage in vivo drug depuis aucun des variations consid&eacute;rables dans la virulence ou d&#39;infectiosit&eacute; o&ugrave; vu attribuable &agrave; la manipulation g&eacute;n&eacute;tique au cours de deux exp&eacute;riences d&#39;infection in vitro et in vivo. La plate-forme d&eacute;crite ici &eacute;tudes bas&eacute;es sur l&#39;utilisation de souches de Leishmania fluorescents stables de d&eacute;pistage des drogues coupl&eacute; &agrave; la cytom&eacute;trie en flux et microscopie fluorescente est plus sensible, plus pr&eacute;cis et plus rapide que les tests conventionnels utilis&eacute;s normalement pour l&#39;&eacute;valuation des compos&eacute;s ayant une activit&eacute; antileishmanial potentielle.

Am&eacute;lioration du syst&egrave;me prot&eacute;ine fluorescente verte journaliste chez Leishmania spp pour le criblage in vitro et in vivo des m&eacute;dicaments antileishmanial.

Entwicklung neuer therapeutischer Ans&auml;tze f&uuml;r Leishmaniose-Behandlung erfordert neue high-Throughput screening-Methoden f&uuml;r die Antileishmanial-Aktivit&auml;t der neuen Verbindungen in vitro und in vivo. Reporter Gene als der GFP haben gewordenes der meisten Schuldscheindarlehen und am weitesten verbreiteten Tools for Drug Screening in mehreren Modellen, denn es live-Imaging, hohe Sensibilit&auml;t, Spezifit&auml;t und Flexibilit&auml;t bietet; Dar&uuml;ber hinaus die Verwendung von GFP als ein Reporter-gen in screening-Tests eliminiert die Nachteile, die bei konventionellen Assays vorgestellt und auch dieser technischen Probleme mit anderen Reporter-Gen gefunden. Das Dienstprogramm von der GFP als ein Reporter-gen in Drogen screening-Tests mit Leishmania-Parasiten h&auml;ngt die Homogenit&auml;t und Stabilit&auml;t der GFP transfected St&auml;mme. Stabile Ausdruck der GFP in der alten Welt Leishmania-Arten ist demonstriert worden, mit Integration Vektoren; jedoch gibt es keine Berichte &uuml;ber den Erfolg dieser Methodik in der neuen Welt-Arten noch. Hier berichten wir &uuml;ber die Generation der New World Leishmania-St&auml;mme, die Ausdruck des GFP-Proteins von einer Integration-Vektor, der eine Kopie der 18S RNA im Chromosom mit der GFP-Sequenz durch homologe Rekombination Codierung ersetzt. Wir beweisen auch, dass der Ausdruck der integrierten GFP stabil und homogen in die transfizierte Parasiten nach Monaten in Kultur ohne selektive Druck oder bei seiner Verwendung bei Zwerghamster-Infektion-Assays ist. Die fluoreszierenden Belastungen sind n&uuml;tzlich f&uuml;r in Vitro, ex-Vivo- und in-vivo Droge Vorf&uuml;hrung Proben seit keine erheblichen Schwankungen der Virulenz oder Infektiosit&auml;t, wo auf der genetischen Manipulation w&auml;hrend beide Experimente in vitro und in-vivo-Infektion zur&uuml;ckzuf&uuml;hren. Die hier beschriebene f&uuml;r Drogentests Proben, die Grundlage der Nutzung der stabilen fluoreszierende Leishmania-St&auml;mme Plattform gekoppelt, Durchflusszytometrie und Fluoreszenz-Mikroskopie ist empfindlich, spezifischer und schneller als konventionelle Proben, die normalerweise f&uuml;r die Beurteilung von Verbindungen mit potenziellen Antileishmanial-Aktivit&auml;t verwendet.

Verbesserung des gr&uuml;n fluoreszierenden Proteins Reporter in Leishmania-Arten f&uuml;r das Screening in vitro und in vivo Antileishmanial Drogen.

Lo sviluppo di nuovi approcci terapeutici per il trattamento della leishmaniosi richiede nuovi high throughput screening metodologie per l&#39;attivit&agrave; di antileishmanial di nuovi composti sia in vitro che in vivo. Geni reporter come la GFP sono diventati uno degli strumenti pi&ugrave; pagher&ograve; e ampiamente utilizzati per lo screening di stupefacenti in diversi modelli, poich&eacute; offre immagini dal vivo, ad alta sensibilit&agrave;, specificit&agrave; e flessibilit&agrave;; Inoltre, l&#39;utilizzo di GFP come un gene reporter in saggi di screening elimina tutti gli inconvenienti presentati in dosaggi convenzionali e anche quei problemi tecnici trovano usando altri geni reporter. L&#39;utilit&agrave; della GFP come un gene reporter in dosaggi con parassiti Leishmania di screening di stupefacenti dipende l&#39;omogeneit&agrave; e stabilit&agrave; della GFP transfected ceppi. Stabile espressione della GFP in specie del vecchio mondo Leishmania &egrave; stata dimostrata utilizzando i vettori di integrazione; Tuttavia, nessun rapporti esistono ancora circa il successo di questa metodologia nelle specie del nuovo mondo. Qui riportiamo la generazione di ceppi di Leishmania nuovo mondo che esprimono la proteina GFP da un vettore di integrazione, che sostituisce una copia del RNA 18S nel cromosoma con la GFP sequenza codificante di ricombinazione omologa. Abbiamo anche dimostrare che l&#39;espressione della GFP integrato &egrave; stabile e omogeneo in parassiti transfected dopo mesi nella cultura senza pressione selettiva o durante il suo utilizzo nel criceto infezione dosaggi. I ceppi fluorescenti sono utili per in vitro, ex vivo e dosaggi screening droga in vivo dal senza notevoli variazioni nella virulenza o infettivit&agrave; dove visto attribuibili alla manipolazione genetica durante entrambi gli esperimenti in vitro e in vivo di infezione. La piattaforma qui descritta per droga test analisi basate sull&#39;utilizzo di ceppi di Leishmania fluorescente stabile accoppiato al flusso cytometry e microscopia di fluorescenza &egrave; pi&ugrave; sensibile, pi&ugrave; specifico e pi&ugrave; veloce di dosaggi convenzionali utilizzati normalmente per la valutazione di composti con potenziale attivit&agrave; antileishmanial.

Miglioramento del sistema della proteina fluorescente verde reporter in Leishmania spp per lo screening in vitro e in vivo di antileishmanial farmaci.

&#x30EA;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E5; &#x30DE;&#x30CB;&#x30A2;&#x75C7;&#x306E;&#x6CBB;&#x7642;&#x306B;&#x5BFE;&#x3059;&#x308B;&#x65B0;&#x3057;&#x3044;&#x6CBB;&#x7642;&#x6CD5;&#x306E;&#x958B;&#x767A;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x65B0;&#x3057;&#x3044;&#x9AD8;&#x30B9;&#x30EB;&#x30FC;&#x30D7;&#x30C3;&#x30C8; &#x30B9;&#x30AF;&#x30EA;&#x30FC;&#x30CB;&#x30F3;&#x30B0; &#x30EA;&#x30E5;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E5;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x5408;&#x7269;&#x3001;in vitro &#x304A;&#x3088;&#x3073; in vivo &#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x65B9;&#x6CD5;&#x8AD6;&#x304C;&#x5FC5;&#x8981;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x30E9;&#x30A4;&#x30D6; &#x30A4;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B8;&#x30F3;&#x30B0;&#x3001;&#x9AD8;&#x611F;&#x6027;&#x3001;&#x7279;&#x7570;&#x6027;&#x3001;&#x67D4;&#x8EDF;&#x6027;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x306E;&#x3067;&#x30EC;&#x30DD;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x306E;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306F; GFP &#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x304F;&#x3064;&#x304B;&#x306E;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x3067;&#x306E;&#x85AC;&#x7269;&#x306E;&#x30B9;&#x30AF;&#x30EA;&#x30FC;&#x30CB;&#x30F3;&#x30B0;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x6700;&#x3082;&#x7D04;&#x675F;&#x3068;&#x5E83;&#x304F;&#x4F7F;&#x308F;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x30C4;&#x30FC;&#x30EB;&#x306E; 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&#x3082;&#x7D71;&#x5408;&#x306E; GFP &#x767A;&#x73FE;&#x6587;&#x5316;&#x9078;&#x629E;&#x7684;&#x5727;&#x529B;&#x306A;&#x3057;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x30CF;&#x30E0;&#x30B9;&#x30BF;&#x30FC;&#x611F;&#x67D3;&#x30A2;&#x30C3;&#x30BB;&#x30A4;&#x3067;&#x306E;&#x4F7F;&#x7528;&#x4E2D;&#x306B;&#x6570;&#x30F6;&#x6708;&#x5F8C;&#x5B89;&#x5B9A;&#x3057;&#x3066;&#x5747;&#x4E00; transfected &#x5BC4;&#x751F;&#x866B;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x8A3C;&#x660E;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x86CD;&#x5149;&#x306E;&#x7CFB;&#x7D71;&#x306B;&#x8D77;&#x56E0;&#x3059;&#x308B;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x64CD;&#x4F5C;&#x4E21;&#x65B9; in vitro &#x304A;&#x3088;&#x3073; in vivo &#x3067;&#x306E;&#x611F;&#x67D3;&#x5B9F;&#x9A13;&#x4E2D;&#x306B;&#x898B;&#x3066;&#x3069;&#x3053;&#x306E; in vitro, in vivo &#x304A;&#x3088;&#x3073; in vivo &#x85AC;&#x7269;&#x30B9;&#x30AF;&#x30EA;&#x30FC;&#x30CB;&#x30F3;&#x30B0; &#x30A2;&#x30C3;&#x30BB;&#x30A4;&#x4EE5;&#x6765;&#x306A;&#x3044;&#x75C5;&#x539F;&#x6027;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x611F;&#x67D3;&#x6027;&#x306B;&#x3070;&#x3089;&#x3064;&#x304D; ex &#x5F79;&#x7ACB;&#x3061;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x85AC;&#x7269;&#x691C;&#x67FB;&#x306E;&#x5B89;&#x5B9A;&#x3057;&#x305F;&#x86CD;&#x5149;&#x30EA;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E5; &#x30DE;&#x30CB;&#x30A2;&#x83CC;&#x682A;&#x306E;&#x4F7F;&#x7528;&#x306B;&#x57FA;&#x3065;&#x3044;&#x3066;&#x306E;&#x8A66;&#x91D1;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x3001;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x8AAC;&#x660E;&#x30D7;&#x30E9;&#x30C3;&#x30C8;&#x30D5;&#x30A9;&#x30FC;&#x30E0; &#x30D5;&#x30ED;&#x30FC;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x30E1;&#x30C8;&#x30EA;&#x30FC;&#x3092;&#x7D50;&#x5408;&#x3057;&#x3001;&#x86CD;&#x5149;&#x9855;&#x5FAE;&#x93E1;&#x3088;&#x308A;&#x654F;&#x611F;&#x3088;&#x308A;&#x7279;&#x5B9A;&#x3067;&#x5F93;&#x6765;&#x306E;&#x8A66;&#x91D1;&#x306E;&#x5316;&#x5408;&#x7269;&#x306E;&#x8A55;&#x4FA1;&#x306B;&#x5BFE;&#x3059;&#x308B;&#x6F5C;&#x5728;&#x7684;&#x306A;&#x30EA;&#x30E5;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E5; &#x30A2;&#x30AF;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D3;&#x30C6;&#x30A3;&#x3068;&#x5171;&#x306B;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x901A;&#x5E38;&#x3088;&#x308A;&#x3082;&#x9AD8;&#x901F;&#x3067;&#x3059;&#x3002;

&#x30EA;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E5; &#x30DE;&#x30CB;&#x30A2;&#x5C5E;&#x30EA;&#x30E5;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E5;&#x85AC;&#x306E; in vitro &#x304A;&#x3088;&#x3073; in vivo &#x3067;&#x306E;&#x30B9;&#x30AF;&#x30EA;&#x30FC;&#x30CB;&#x30F3;&#x30B0;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x7DD1;&#x8272;&#x86CD;&#x5149;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x30EC;&#x30DD;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x65B9;&#x5F0F;&#x306E;&#x6539;&#x5584;&#x3002;

Leishmaniasis &#xCE58;&#xB8CC;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC0C8;&#xB85C;&#xC6B4; &#xCE58;&#xB8CC; &#xC811;&#xADFC;&#xC758; &#xAC1C;&#xBC1C; &#xD544;&#xC694; &#xC0C8;&#xB85C;&#xC6B4; &#xB192;&#xC740; &#xCC98;&#xB9AC;&#xB7C9;&#xC758; &#xC0DD;&#xCCB4; &#xC678; &#xBC0F; &#xC0DD;&#xCCB4; &#xC870;&#xAC74; &#xC0C8;&#xB85C;&#xC6B4; &#xD654;&#xD569;&#xBB3C; antileishmanial &#xD65C;&#xB3D9;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xBC29;&#xBC95;&#xB860;&#xC744; &#xC0C1;&#xC601; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB9AC;&#xD3EC;&#xD130; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xB294; GFP&#xB85C; &#xD558;&#xB098;&#xAC00; &#xC5EC;&#xB7EC; &#xBAA8;&#xB378;&#xC5D0; &#xC57D;&#xBB3C; &#xAC80;&#xC0AC;&#xB97C; &#xC704;&#xD55C; &#xAC00;&#xC7A5; &#xC57D;&#xC18D; &#xD558; &#xACE0; &#xB110;&#xB9AC; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xB418;&#xB294; &#xB3C4;&#xAD6C; &#xC774;&#xD6C4; &#xB77C;&#xC774;&#xBE0C; &#xC601;&#xC0C1;, &#xB192;&#xC740; &#xAC10; &#xC131;&#xACFC; &#xD2B9;&#xC774;&#xC131;&#xACFC; &#xC720;&#xC5F0;&#xC131;; &#xC81C;&#xACF5; &#xB610;&#xD55C; &#xC2EC;&#xC0AC; &#xBD84;&#xC11D; &#xC2E4;&#xD5D8;&#xC5D0;&#xC11C; &#xB9AC;&#xD3EC;&#xD130; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xB85C; GFP&#xC758; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xAE30;&#xC874;&#xC758; &#xBD84;&#xC11D; &#xC2E4;&#xD5D8;&#xC5D0; &#xBAA8;&#xB4E0; &#xB2E8;&#xC810;&#xC744; &#xC81C;&#xAC70; &#xD558; &#xACE0; &#xB610;&#xD55C; &#xADF8; &#xAE30;&#xC220;&#xC801;&#xC778; &#xBB38;&#xC81C; &#xBC1C;&#xACAC; &#xB2E4;&#xB978; &#xB9AC;&#xD3EC;&#xD130; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC;. &#xB9C8;&#xC57D; &#xBD84;&#xC11D; &#xC2E4;&#xD5D8; Leishmania &#xAE30;&#xC0DD;&#xCDA9;&#xACFC; &#xC2EC;&#xC0AC;&#xC5D0; &#xB9AC;&#xD3EC;&#xD130; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xB85C;&#xB294; GFP&#xC758; &#xC720;&#xD2F8;&#xB9AC;&#xD2F0;&#xB294; &#xB3D9;&#xC9C8;&#xC131;&#xC5D0; &#xB530;&#xB77C; &#xB2EC;&#xB77C; &#xC9D1;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xBC0F; &#xC548;&#xC815;&#xC131;&#xC5D0;&#xC11C; GFP&#xC758; &#xD398; &#xAE34;&#xC7A5;. &#xC62C;&#xB4DC; &#xC6D4;&#xB4DC; Leishmania &#xC885;&#xC5D0; GFP&#xC758; &#xC548;&#xC815;&#xC801;&#xC778; &#xC2DD; &#xD1B5;&#xD569; &#xBCA1;&#xD130;;&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xC785;&#xC99D; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098;, &#xBCF4;&#xACE0; &#xC0C8;&#xB85C;&#xC6B4; &#xC138;&#xACC4; &#xC885;&#xC5D0;&#xC774; &#xBC29;&#xBC95;&#xB860;&#xC758; &#xC131;&#xACF5;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC544;&#xC9C1; &#xC874;&#xC7AC; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC5EC;&#xAE30; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xB3D9;&#xC885; &#xC7AC;&#xC870;&#xD569; &#xD558; &#xC5EC; &#xC2DC;&#xD000;&#xC2A4;&#xB97C; &#xCF54;&#xB529; GFP&#xC640; &#xC5FC;&#xC0C9;&#xCCB4;&#xC5D0; 18S RNA&#xC758; &#xBCF5;&#xC0AC;&#xBCF8; &#xD558;&#xB098;&#xB97C; &#xB300;&#xCCB4; &#xD558;&#xB294; &#xD1B5;&#xD569; &#xBCA1;&#xD130;&#xC5D0;&#xC11C; GFP &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC744; &#xD45C;&#xD604; &#xD558;&#xB294; &#xC0C8;&#xB85C;&#xC6B4; &#xC138;&#xACC4; Leishmania &#xAE34;&#xC7A5;&#xC758; &#xC138;&#xB300;&#xB97C; &#xBCF4;&#xACE0; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xB610;&#xD55C; &#xD1B5;&#xD569; &#xB41C; GFP &#xC2DD; &#xC548;&#xC815;&#xC801;&#xC774; &#xACE0; &#xADE0;&#xC9C8; transfected &#xAE30;&#xC0DD;&#xCDA9;&#xC5D0; &#xBB38;&#xD654; &#xC120;&#xD0DD;&#xC801; &#xC555;&#xB825; &#xC5C6;&#xC774; &#xB610;&#xB294; &#xD584;&#xC2A4;&#xD130; &#xAC10;&#xC5FC; &#xBD84;&#xC11D; &#xC2E4;&#xD5D8;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558;&#xB294; &#xB3D9;&#xC548;&#xC5D0; &#xB2EC; &#xD6C4;&#xC5D0; &#xC99D;&#xBA85;. &#xD615;&#xAD11; &#xAE34;&#xC7A5;&#xC740; &#xC720;&#xC6A9;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xCCB4; &#xC678; ex vivo&#xC640; in vivo &#xC57D;&#xBB3C; &#xAC80;&#xC0AC; &#xBD84;&#xC11D; &#xC2E4;&#xD5D8; &#xB3C5;&#xC131; &#xB610;&#xB294; infectivity &#xC0C1;&#xB2F9;&#xD55C; &#xBCC0;&#xD615; &#xC5C6;&#xC74C; &#xC774;&#xD6C4; &#xBCF8; &#xC0DD;&#xCCB4; &#xC678; &#xBC0F; &#xC0DD;&#xCCB4; &#xC870;&#xAC74; &#xAC10;&#xC5FC; &#xC2E4;&#xD5D8;&#xC744; &#xB450;&#xB294; &#xB3D9;&#xC548; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xC870;&#xC791;&#xC5D0; &#xAE30;&#xC778; &#xD558;&#xB294; &#xACF3;. &#xC5EC;&#xAE30;&#xC5D0; &#xC124;&#xBA85; &#xB41C; &#xC57D;&#xBB3C; &#xBD84;&#xC11D; &#xC2E4;&#xD5D8; &#xC548;&#xC815;&#xC801;&#xC778; &#xD615;&#xAD11; Leishmania &#xC885;&#xC790;&#xC758; &#xC0AC;&#xC6A9;&#xC744; &#xAE30;&#xBC18;&#xC73C;&#xB85C; &#xD14C;&#xC2A4;&#xD2B8;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xD50C;&#xB7AB;&#xD3FC; cytometry &#xD558; &#xAC8C; &#xACB0;&#xD569; &#xD558; &#xACE0; &#xD615;&#xAD11; &#xD604;&#xBBF8;&#xACBD; &#xAC80;&#xC0AC; &#xBC95;&#xC740; &#xB354; &#xC911;&#xC694; &#xD55C;, &#xB354; &#xAD6C;&#xCCB4;&#xC801;&#xC774; &#xACE0; &#xC77C;&#xBC18;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xD654;&#xD569;&#xBB3C;&#xC758; &#xD3C9;&#xAC00; &#xB300; &#xD55C; &#xC7A0;&#xC7AC;&#xC801;&#xC778; antileishmanial &#xD65C;&#xB3D9;&#xC5D0; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558;&#xB294; &#xAE30;&#xC874;&#xC758; &#xBD84;&#xC11D; &#xC2E4;&#xD5D8; &#xBCF4;&#xB2E4; &#xBE60;&#xB985;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Antileishmanial &#xC57D;&#xBB3C;&#xC758; &#xC0DD;&#xCCB4; &#xC678; &#xBC0F; &#xC0DD;&#xCCB4; &#xC870;&#xAC74; &#xC2EC;&#xC0AC;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; Leishmania spp &#xB179;&#xC0C9; &#xD615;&#xAD11; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xB9AC;&#xD3EC;&#xD130; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C;&#xC758; &#xAC1C;&#xC120;.

Desarrollo de nuevos enfoques terap&eacute;uticos para el tratamiento de la leishmaniasis requiere nuevo alto rendimiento detecci&oacute;n metodolog&iacute;as para la actividad de costosas de los nuevos compuestos tanto in vitro como in vivo. Genes reporteros como la GFP han convertido en una de las herramientas m&aacute;s promisorias y ampliamente utilizadas para la detecci&oacute;n de drogas en varios modelos, ya que ofrece en proyecci&oacute;n de imagen, alta sensibilidad, especificidad y flexibilidad; Adem&aacute;s, el uso de GFP como un gen reportero en ensayos de cribado elimina todos los inconvenientes que se presentaron en los an&aacute;lisis convencionales y tambi&eacute;n esos problemas t&eacute;cnicos encontraron usando otros genes reporteros. La utilidad de la GFP como un gen reportero en ensayos con par&aacute;sitos de Leishmania de la detecci&oacute;n de drogas depende de la homogeneidad y estabilidad de la GFP transfectadas cepas. Se ha demostrado la expresi&oacute;n estable de la GFP en las especies de Leishmania de viejo mundo usando vectores de integraci&oacute;n; sin embargo, ningunos informes existen todav&iacute;a sobre el &eacute;xito de esta metodolog&iacute;a en las especies del nuevo mundo. Aqu&iacute; divulgamos la generaci&oacute;n de cepas de Leishmania de nuevo mundo expresando la prote&iacute;na GFP de un vector de integraci&oacute;n, que sustituye una copia del ARN 18S en el cromosoma con la secuencia de codificaci&oacute;n por recombinaci&oacute;n hom&oacute;loga de GFP. Tambi&eacute;n se demuestra que la expresi&oacute;n de la GFP integrado es estable y homog&eacute;nea en los par&aacute;sitos transfected despu&eacute;s de meses en cultura sin presi&oacute;n selectiva o durante su uso en ensayos de infecci&oacute;n de h&aacute;mster. Las cepas fluorescentes son &uacute;tiles para in vitro, ex vivo y ensayos de detecci&oacute;n de drogas en vivo desde sin variaciones considerables en la virulencia o infectividad donde visto atribuible a la manipulaci&oacute;n gen&eacute;tica en ambos experimentos in vitro e in vivo de la infecci&oacute;n. La plataforma descrita aqu&iacute; para pruebas de an&aacute;lisis basados en el uso de cepas de Leishmania fluorescentes estables de drogas junto a la citometr&iacute;a de flujo y microscopia fluorescente es m&aacute;s sensible, m&aacute;s espec&iacute;fico y m&aacute;s r&aacute;pido que los ensayos convencionales utilizados normalmente para la evaluaci&oacute;n de compuestos con potencial actividad costosas.

Mejorar el sistema de reportero de la prote&iacute;na verde fluorescente en Leishmania spp para la investigaci&oacute;n in vitro e in vivo de drogas costosas.

Adriana M. Restrepo

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