calcium-imaging-of-cortical-neurons-using-fura-2-am

Calcium Imaging of Cortical Neurons using Fura-2 AM

Calcium imaging is a common technique that is useful for measuring calcium signals in cultured cells. Calcium imaging techniques take advantage of calcium ...

Stanford University School of Medicine

&#x8F6C;&#x5F55;&#x56E0;&#x5B50; CREB &#x4ECB;&#x5BFC;&#x4E2D;&#x67A2;&#x795E;&#x7ECF;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x4E2D;&#x7684;&#x4E0D;&#x540C;&#x53CD;&#x5E94;&#x3002;&#x5B83;&#x4E0D;&#x77E5;&#x9053;&#x5982;&#x4F55; CREB &#x8BF1;&#x5BFC;&#x57FA;&#x56E0;&#x8868;&#x8FBE;&#x4E0D;&#x540C;&#x7684;&#x80DE;&#x5916;&#x523A;&#x6FC0;&#x54CD;&#x5E94;&#x7684;&#x5177;&#x4F53;&#x6A21;&#x5F0F;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x53D1;&#x73B0;&#x7ECF;&#x6D8C;&#x5165;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x8BF1;&#x5BFC; CREB &#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x5728; Ser133 &#x548C; Ser142 &#x548C; Ser143 &#x8FD9;&#x4E24;&#x4E2A;&#x5730;&#x70B9;&#x3002;&#x78F7;&#x9178;&#x5316; CREB Ser133 &#x8BB8;&#x591A;&#x523A;&#x6FC0;&#x6240;&#x81F4;&#xFF0C;&#x800C;&#x5728; Ser142 &#x548C; Ser143 &#x7684;&#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x662F;&#x6709;&#x9009;&#x62E9;&#x6027;&#x5730;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x7ECF;&#x5927;&#x91CF;&#x6D8C;&#x5165;&#x3002;&#x4E09;&#x78F7;&#x9178;&#x5316; CREB &#x9700;&#x8981;&#x4F9D;&#x8D56; CREB &#x7684;&#x8F6C;&#x5F55;&#xFF0C;&#x7ECF;&#x6709;&#x6548;&#x523A;&#x6FC0;&#x4F46;&#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x7684; Ser142 &#x548C; Ser143&#xFF0C;Ser133&#xFF0C;&#x9664;&#x4E86;&#x6270;&#x4E71;&#x5176;&#x8F85;&#x9176; CBP &#x4E0E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x7684; CREB&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7ED3;&#x679C;&#x8868;&#x660E;&#x7ECF;&#x6D8C;&#x5165;&#x89E6;&#x53D1;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x57FA;&#x56E0;&#x8868;&#x8FBE;&#x7279;&#x5B9A;&#x7684;&#x7A0B;&#x5E8F;&#xFF0C;&#x901A;&#x8FC7;&#x6709;&#x9009;&#x62E9;&#x6027;&#x5730;&#x8C03;&#x8282; CREB &#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x3002;

&#x795E;&#x7ECF;&#x5143; CREB &#x8F6C;&#x5F55;&#x9176;&#x88AB;&#x53D7;&#x591A;&#x4E2A;&#x7279;&#x5B9A;&#x4E8E;&#x9499;&#x7684;&#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x4E8B;&#x4EF6;&#x3002;

The transcription factor CREB mediates diverse responses in the nervous system. It is not known how CREB induces specific patterns of gene expression in response to different extracellular stimuli. We find that Ca(2+) influx into neurons induces CREB phosphorylation at Ser133 and two additional sites, Ser142 and Ser143. While CREB Ser133 phosphorylation is induced by many stimuli, phosphorylation at Ser142 and Ser143 is selectively activated by Ca(2+) influx. The triple phosphorylation of CREB is required for effective Ca(2+) stimulation of CREB-dependent transcription, but the phosphorylation of Ser142 and Ser143, in addition to Ser133, disrupts the interaction of CREB with its cofactor CBP. These results suggest that Ca(2+) influx triggers a specific program of gene expression in neurons by selectively regulating CREB phosphorylation.

CREB transcriptional activity in neurons is regulated by multiple, calcium-specific phosphorylation events.

Les facteurs de transcription CREB m&#xE9;die des r&#xE9;ponses diverses dans le syst&#xE8;me nerveux. On ne sait pas comment CREB induit des sch&#xE9;mas sp&#xE9;cifiques de l&#x26;#39;expression des g&#xE8;nes en r&#xE9;ponse &#xE0; diff&#xE9;rents stimuli extracellulaires. Nous constatons que Ca (2 +) afflux dans les neurones induit la phosphorylation de CREB &#xE0; Ser133 et deux sites suppl&#xE9;mentaires, Ser142 et Ser143. Alors que la prot&#xE9;ine CREB Ser133 phosphorylation est induite par de nombreux stimuli, phosphorylation au Ser142 et Ser143 est s&#xE9;lectivement activ&#xE9;e par Ca (2 +) afflux. La phosphorylation de CREB triples est n&#xE9;cessaire pour efficace Ca (2 +) stimulation de la transcription d&#xE9;pendante de CREB, mais la phosphorylation de Ser142 et Ser143, Ser133 outre, perturbe les interactions de CREB avec son cofacteur CBP. Ces r&#xE9;sultats sugg&#xE8;rent que Ca (2 +) afflux d&#xE9;clenche un programme sp&#xE9;cifique de l&#x26;#39;expression des g&#xE8;nes dans les neurones par la phosphorylation de CREB r&#xE9;guler s&#xE9;lectivement.

CREB activit&#xE9; transcriptionnelle dans les neurones est r&#xE9;glement&#xE9;e par de multiples &#xE9;v&#xE9;nements de phosphorylation de calcium-sp&#xE9;cifiques

CREB transkriptionale Aktivit&#xE4;t in Neuronen durch mehrfache, Calcium-spezifische Ereignisse Phosphorylierung reguliert.

Il fattore di trascrizione CREB media diverse risposte del sistema nervoso. Non &egrave; noto come CREB induce specifici pattern di espressione genica in risposta a diversi stimoli extracellulari. Troviamo che Ca(2+) afflusso nei neuroni induce la fosforilazione di CREB presso due siti aggiuntivi, Ser142 e Ser143 e Ser133. Mentre la fosforilazione di CREB Ser133 &egrave; indotta da numerosi stimoli, fosforilazione a Ser142 e Ser143 &egrave; attivata selettivamente dall&#39;afflusso di Ca(2+). La tripla fosforilazione di CREB &egrave; necessaria per una efficacia stimolazione Ca(2+) di trascrizione CREB-dipendente, ma la fosforilazione di Ser142 e Ser143, oltre Ser133, sconvolge l&#39;interazione di CREB con suo cofattore CBP. Questi risultati suggeriscono che la Ca(2+) afflusso attiva uno specifico programma di espressione genica in neuroni regolando in modo selettivo la fosforilazione di CREB.

Attivit&agrave; transcriptional CREB in neuroni &egrave; regolata da pi&ugrave;, eventi di fosforilazione calcio-specifici.

&#x795E;&#x7D4C;&#x7CFB;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x8EE2;&#x5199;&#x56E0;&#x5B50;CREB&#x4EF2;&#x4ECB;&#x3001;&#x591A;&#x69D8;&#x306A;&#x5FDC;&#x7B54;&#x3002;&#x305D;&#x308C;&#x306F;CREB&#x306F;&#x3001;&#x7570;&#x306A;&#x308B;&#x7D30;&#x80DE;&#x5916;&#x523A;&#x6FC0;&#x306B;&#x5FDC;&#x7B54;&#x3057;&#x3066;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x767A;&#x73FE;&#x306E;&#x7279;&#x5B9A;&#x306E;&#x30D1;&#x30BF;&#x30FC;&#x30F3;&#x3092;&#x8A98;&#x5C0E;&#x3059;&#x308B;&#x65B9;&#x6CD5;&#x306F;&#x77E5;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x306A;&#x3044;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;&#x795E;&#x7D4C;&#x7D30;&#x80DE;&#x3078;&#x306E;Ca&#xFF08;2 +&#xFF09;&#x304C;&#x6D41;&#x5165;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;CREB&#x306E;Ser133&#x306E;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x3068;&#x3001;2&#x3064;&#x306E;&#x8FFD;&#x52A0;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x3067;&#x306F;&#x3001;Ser142&#x3068;Ser143&#x3092;&#x8A98;&#x5C0E;&#x3059;&#x308B;&#x3002;&#x898B;&#x3064;&#x3051;&#x308B;CREB &#x200B;&#x200B;Ser133&#x306E;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x306F;&#x3001;&#x591A;&#x304F;&#x306E;&#x523A;&#x6FC0;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x8A98;&#x5C0E;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x304C;&#x3001;Ser142&#x3068;Ser143&#x306E;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x3092;&#x9078;&#x629E;&#x7684;Ca&#xFF08;2 +&#xFF09;&#x306E;&#x6D41;&#x5165;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x3002; CREB&#x306E;&#x30C8;&#x30EA;&#x30D7;&#x30EB;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x304C;&#x52B9;&#x679C;&#x7684;&#x306A;&#x306E;Ca&#xFF08;2 +&#xFF09;CREB&#x4F9D;&#x5B58;&#x6027;&#x8EE2;&#x5199;&#x306E;&#x523A;&#x6FC0;&#x304C;&#x3001;Ser142&#x3068;Ser143&#x306E;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x5FC5;&#x8981;&#x3068;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x3001;Ser133&#x306B;&#x52A0;&#x3048;&#x3066;&#x3001;&#x305D;&#x306E;&#x88DC;&#x52A9;&#x56E0;&#x5B50;CBP&#x3068;CREB&#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x3092;&#x7834;&#x58CA;&#x3059;&#x308B;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x306F;&#x3001;Ca&#xFF08;2 +&#xFF09;&#x6D41;&#x5165;&#x304C;&#x9078;&#x629E;&#x7684;&#x306B;CREB&#x306E;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x3092;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3088;&#x308A;&#x3001;&#x795E;&#x7D4C;&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x767A;&#x73FE;&#x306E;&#x7279;&#x5B9A;&#x306E;&#x30D7;&#x30ED;&#x30B0;&#x30E9;&#x30E0;&#x3092;&#x30C8;&#x30EA;&#x30AC;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x304A;&#x52E7;&#x3081;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x795E;&#x7D4C;&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;CREB&#x8EE2;&#x5199;&#x6D3B;&#x6027;&#x306F;&#x3001;&#x8907;&#x6570;&#x306E;&#x3001;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;&#x7279;&#x6709;&#x306E;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x4E8B;&#x8C61;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;

&#xB179;&#xC74C; &#xBC29;&#xC1A1; &#xC694;&#xC778; CREB &#xC911;&#xC7AC; &#xC2E0; &#xACBD;&#xACC4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xB2E4;&#xC591; &#xD55C; &#xC751;&#xB2F5;. CREB &#xB2E4;&#xB978; &#xC138;&#xD3EC; &#xC678; &#xC790;&#xADF9;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC751;&#xB2F5;&#xC73C;&#xB85C; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xBC1C;&#xD604;&#xC758; &#xD2B9;&#xC815; &#xD328;&#xD134;&#xC744; &#xC720;&#xB3C4; &#xD558;&#xB294; &#xBC29;&#xBC95;&#xC744; &#xBAA8;&#xB978;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xC2E0;&#xACBD; &#xC138;&#xD3EC;&#xB85C; &#xC720;&#xC785; Ca(2+) ser133&#xC640; ser142&#xC640; Ser143 &#xB450; &#xCD94;&#xAC00; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8; CREB &#xC778; &#xC0B0;&#xD654; &#xC720;&#xB3C4; &#xCC3E;&#xC73C;&#xC2ED;&#xC2DC;&#xC624;. CREB Ser133 &#xC778; &#xC0B0;&#xD654;&#xB294; &#xC5EC;&#xB7EC; &#xC790;&#xADF9;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC720;&#xBC1C; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;, &#xD558;&#xB294; &#xB3D9;&#xC548; Ser142 &#xBC0F; Ser143 &#xC778; &#xC0B0;&#xD654; Ca(2+) &#xC720;&#xC785;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC120;&#xD0DD;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. CREB&#xC758; &#xD2B8;&#xB9AC;&#xD50C; &#xC778; &#xC0B0;&#xD654; CREB &#xC885;&#xC18D; &#xC804;&#xC0AC;&#xC758; &#xD6A8;&#xACFC;&#xC801;&#xC778; Ca(2+) &#xC790;&#xADF9;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xD544;&#xC694; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; ser142&#xC640; Ser143, Ser133, &#xBFD0;&#xB9CC; &#xC544;&#xB2C8;&#xB77C;&#xC758; &#xC778; &#xC0B0;&#xD654;&#xC758; cofactor CBP CREB &#xC0C1;&#xD638; &#xBC29;&#xD574;. &#xC774; &#xACB0;&#xACFC; &#xC81C;&#xC548; Ca(2+) &#xC720;&#xC785; &#xC120;&#xD0DD;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; CREB &#xC778; &#xC0B0;&#xD654;&#xB97C; &#xC870;&#xC808; &#xD558; &#xC5EC; &#xC2E0;&#xACBD; &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xBC1C;&#xD604;&#xC758; &#xD2B9;&#xC815; &#xD504;&#xB85C;&#xADF8;&#xB7A8;&#xC744; &#xD2B8;&#xB9AC;&#xAC70;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

CREB transcriptional &#xD65C;&#xB3D9; &#xC2E0;&#xACBD; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0; &#xC5EC;&#xB7EC; &#xC778; &#xC0B0;&#xD654; &#xCE7C;&#xC298; &#xD2B9;&#xC815; &#xC774;&#xBCA4;&#xD2B8;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xADDC;&#xC81C; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Los factores de transcripci&#xF3;n CREB media las diversas respuestas en el sistema nervioso. No se sabe c&#xF3;mo induce CREB patrones espec&#xED;ficos de expresi&#xF3;n g&#xE9;nica en respuesta a diferentes est&#xED;mulos extracelulares. Encontramos que el Ca (2 +) influjo en las neuronas induce la fosforilaci&#xF3;n de CREB en Ser133 y dos sitios adicionales, Ser142 y Ser143. Mientras CREB fosforilaci&#xF3;n Ser133 es inducida por muchos est&#xED;mulos, la fosforilaci&#xF3;n en Ser142 y Ser143 se activan selectivamente por Ca (2 +) afluencia. La fosforilaci&#xF3;n de CREB triples se requiere para la eficaz Ca (2 +) la estimulaci&#xF3;n de CREB dependiente de la transcripci&#xF3;n, pero la fosforilaci&#xF3;n de Ser142 y Ser143, adem&#xE1;s de Ser133, interrumpe la interacci&#xF3;n de CREB con su cofactor CBP. Estos resultados sugieren que el Ca (2 +) flujo provoca un programa espec&#xED;fico de la expresi&#xF3;n de genes en las neuronas de forma selectiva la regulaci&#xF3;n de la fosforilaci&#xF3;n de CREB.

La actividad de CREB en las neuronas de la transcripci&#xF3;n est&#xE1; regulada por m&#xFA;ltiples eventos espec&#xED;ficos, la fosforilaci&#xF3;n de calcio

&#x80FD;&#x529B;&#xFF0C;&#x4F7F;&#x654F;&#x611F;&#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;-&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x52A8;&#x529B;&#x5B66;&#x6D4B;&#x91CF;&#x5355;&#x4E2A;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x529F;&#x80FD;&#x7684;&#x5206;&#x5B50;&#x548C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x57FA;&#x7840;&#x7684;&#x7406;&#x89E3;&#x81F3;&#x5173;&#x91CD;&#x8981;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x5F00;&#x53D1;&#x4E86;&#x57FA;&#x4E8E;&#x5FAE;&#x5206;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x5927;&#x80A0;&#x57C3;&#x5E0C;&#x6C0F;&#x5927;&#x80A0;&#x6746;&#x83CC; TEM 1 &beta;-&#x5185;&#x9170;&#x80FA;&#x9176; (Bla) &#x9176;&#x7684;&#x6D3B;&#x6027;&#xFF0C;&#x53EF;&#x4EE5;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x4F20;&#x611F;&#x5668;&#x7684;&#x4E24;&#x4E2A;&#x76EE;&#x6807;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x5728;&#x4F53;&#x5185;&#x7684;&#x5355;&#x4E2A;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x5185;&#x7684;&#x4EA4;&#x4E92;&#x72B6;&#x6001;&#x8BB0;&#x8005;&#x6280;&#x672F;&#x3002;&#x8C03;&#x8282;&#x5520;&#x5520;&#x53E8;&#x53E8;&#x9176;&#x6D3B;&#x6027;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x7B2C;&#x4E00;&#x6B21;&#x62C6;&#x5206;&#x9176;&#x4E3A;&#x6211;&#x4EEC;&#x786E;&#x5B9A;&#x4E86;&#x901A;&#x8FC7;&#x4F7F;&#x7528;&#x4E00;&#x79CD;&#x57FA;&#x4E8E;&#x5706;&#x5F62;&#x6392;&#x5217;&#x7684;&#x5520;&#x5520;&#x53E8;&#x53E8;&#x9176;&#x7684;&#x529F;&#x80FD;&#x7B5B;&#x9009;&#x65B9;&#x6CD5;&#x7684;&#x4E24;&#x4E2A;&#x5355;&#x72EC;&#x7684;&#x3001; &#x4E92;&#x8865;&#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#x7247;&#x6BB5;&#x3002;&#x62C6;&#x5206;&#x9176;&#x518D;&#x805A;&#x96C6;&#x5728;&#x4E00;&#x8D77;&#x7684;&#x6FC0;&#x9176;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x7684; cAMP &#x53CD;&#x5E94;&#x5143;&#x4EF6;&#x7ED3;&#x5408;&#x86CB;&#x767D; (CREB) &#x7684; KIX &#x57DF;&#x548C; CREB &#x7ED3;&#x5408;&#x86CB;&#x767D;&#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x4F9D;&#x8D56;&#x534F;&#x4F1A;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x4F7F;&#x7528;&#x7684;&#x5520;&#x5520;&#x53E8;&#x53E8;&#x7684;&#x6C34;&#x89E3;&#x540E;&#x66F4;&#x6539;&#x5176;&#x8367;&#x5149;&#x5149;&#x8C31;&#x80DE;&#x886C;&#x5E95;&#xFF0C;&#x6267;&#x884C;&#x5B9A;&#x65F6;&#x8BA1;&#x91CF;&#x6210;&#x50CF;&#x6D4B;&#x91CF;&#x7684;&#x5520;&#x5520;&#x53E8;&#x53E8;&#x9176;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x540E;&#x7684; CREB &#x548C; CREB &#x7ED3;&#x5408;&#x86CB;&#x767D;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x57DF;&#x7684;&#x534F;&#x4F1A;&#x3002;&#x8FD9;&#x79CD;&#x65B9;&#x6CD5;&#x5141;&#x8BB8;&#x76F4;&#x63A5;&#x6210;&#x50CF;&#x9AD8;&#x4FE1;&#x53F7;&#x7684;&#x6B67;&#x89C6;&#x4E0E;&#x5355;&#x4E2A;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E2D;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;-&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;

&#x5EF6;&#x65F6;&#x5F71;&#x50CF;&#x5B66;&#x5728;&#x54FA;&#x4E73;&#x52A8;&#x7269;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E2D;&#x7684;&#x52A8;&#x6001;&#x4F9D;&#x8D56;&#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;-&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;

The ability to make sensitive measurements of protein-protein interaction kinetics in single neurons is critical for understanding the molecular and cellular basis of neuronal function. We have developed a reporter technology based on the differential induction of Escherichia coli TEM-1 beta-lactamase (Bla) enzymatic activity that can function as a sensor of the interaction state of two target proteins within single neurons in vivo. To modulate Bla enzymatic activity, we first split the enzyme into two separate, complementary protein fragments that we identified by using a functional screening approach based on circular permutation of the Bla enzyme. The split enzyme was then brought together by the phosphorylation-dependent association of the kinase inducible domain of the cAMP response element binding protein (CREB) and the KIX domain of the CREB binding protein. Using an intracellular substrate whose fluorescence spectrum changes after hydrolysis by Bla, we performed time-lapse ratiometric imaging measurements of Bla enzymatic induction after association of the CREB and CREB binding protein interaction domains. This approach permits direct imaging of protein-protein interactions in single cells with high signal discrimination.

Time-lapse imaging of a dynamic phosphorylation-dependent protein-protein interaction in mammalian cells.

La capacit&#xE9; de faire des mesures sensibles de la cin&#xE9;tique d&#x26;#39;interaction prot&#xE9;ine-prot&#xE9;ine dans les neurones simples est essentiel pour comprendre la base mol&#xE9;culaire et cellulaire de la fonction neuronale. Nous avons d&#xE9;velopp&#xE9; une technologie journaliste repose sur l&#x26;#39;induction diff&#xE9;rentielle des Escherichia coli TEM-1 beta-lactamase (Bla) activit&#xE9; enzymatique qui peut fonctionner comme un capteur de l&#x26;#39;&#xE9;tat d&#x26;#39;interaction de deux prot&#xE9;ines cibles dans les neurones in vivo simples. Pour moduler Bla activit&#xE9; enzymatique, nous avons d&#x26;#39;abord scind&#xE9; en deux l&#x26;#39;enzyme s&#xE9;par&#xE9;es, des fragments de prot&#xE9;ines compl&#xE9;mentaires que nous avons identifi&#xE9;s en utilisant une approche de d&#xE9;pistage fonctionnel bas&#xE9; sur permutation circulaire de l&#x26;#39;enzyme Bla. L &#x26;#39;enzyme scission a &#xE9;t&#xE9; ensuite r&#xE9;uni par l&#x26;#39;association la phosphorylation d&#xE9;pendante du domaine inductible de la prot&#xE9;ine kinase AMPc &#xE9;l&#xE9;ment de r&#xE9;ponse liant (CREB) et le domaine KIX de la prot&#xE9;ine de liaison de CREB. L&#x26;#39;utilisation d&#x26;#39;un substrat intracellulaire dont le spectre de fluorescence des changements apr&#xE8;s l&#x26;#39;hydrolyse par Bla, nous avons effectu&#xE9; time-lapse des mesures d&#x26;#39;imagerie ratiom&#xE9;trique de Bla induction enzymatique apr&#xE8;s l&#x26;#39;association de la CREB et CREB se lie domaines d&#x26;#39;interaction prot&#xE9;ine. Cette approche permet l&#x26;#39;imagerie directe des interactions prot&#xE9;ine-prot&#xE9;ine dans des cellules individuelles de la discrimination de signal &#xE9;lev&#xE9;.

Imagerie time-lapse d&#x26;#39;un dynamique phosphorylation d&#xE9;pendante interaction prot&#xE9;ine-prot&#xE9;ine dans les cellules de mammif&#xE8;res

Zeitraffer-Abbildung eines dynamischen Phosphorylierung-abh&#xE4;ngige Protein-Protein-Interaktion in S&#xE4;ugerzellen.

La capacit&agrave; di effettuare misurazioni sensibili della cinetica di interazione della proteina-proteina in singoli neuroni &egrave; fondamentale per comprendere le basi molecolari e cellulari della funzione neuronale. Abbiamo sviluppato una tecnologia di reporter basata sull&#39;induzione differenziale dell&#39;Escherichia coli TEM-1 beta-lattamasi (Bla) attivit&agrave; enzimatica che pu&ograve; funzionare come un sensore dello stato interazione di due proteine bersaglio all&#39;interno di singoli neuroni in vivo. Per modulare l&#39;attivit&agrave; enzimatica Bla, abbiamo diviso in primo luogo l&#39;enzima in due frammenti di proteine distinte, complementari che abbiamo identificato utilizzando un approccio funzionale screening basato sulla permutazione circolare dell&#39;enzima Bla. L&#39;enzima di Spalato fu poi riunito dall&#39;associazione fosforilazione-dipendente del dominio chinasi inducibile del cAMP response element binding protein (CREB) e del dominio KIX della proteina CREB binding. Utilizzando un substrato intracellulare cui spettro di fluorescenza cambia dopo idrolisi da Bla, abbiamo eseguito time-lapse raziometrici imaging misurazioni dell&#39;induzione enzimatica Bla dopo l&#39;associazione del CREB e CREB binding domini di interazione della proteina. Questo approccio consente l&#39;acquisizione diretta delle interazioni proteina-proteina in cellule singole con discriminazione segnale alto.

Time-lapse imaging di un&#39;interazione dinamica fosforilazione-dipendente della proteina-proteina in cellule di mammifero.

&#x5358;&#x4E00;&#x30CB;&#x30E5;&#x30FC;&#x30ED;&#x30F3;&#x306E;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA; - &#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x306E;&#x52D5;&#x529B;&#x5B66;&#x306E;&#x9AD8;&#x611F;&#x5EA6;&#x6E2C;&#x5B9A;&#x3092;&#x884C;&#x3046;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x80FD;&#x529B;&#x306F;&#x3001;&#x795E;&#x7D4C;&#x6A5F;&#x80FD;&#x306E;&#x5206;&#x5B50;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x7D30;&#x80DE;&#x57FA;&#x76E4;&#x3092;&#x7406;&#x89E3;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x91CD;&#x8981;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;&#x5927;&#x8178;&#x83CC;&#xFF08;Escherichia coli&#xFF09;TEM-1&#x3B2;-&#x30E9;&#x30AF;&#x30BF;&#x30DE;&#x30FC;&#x30BC;&#xFF08;BLA&#xFF09;in vivo&#x3067;&#x306E;&#x5358;&#x4E00;&#x30CB;&#x30E5;&#x30FC;&#x30ED;&#x30F3;&#x5185;&#x306E;2&#x3064;&#x306E;&#x6A19;&#x7684;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x72B6;&#x614B;&#x306E;&#x30BB;&#x30F3;&#x30B5;&#x30FC;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x308B;&#x9175;&#x7D20;&#x6D3B;&#x6027;&#x306E;&#x5DEE;&#x8A98;&#x5C0E;&#x306B;&#x57FA;&#x3065;&#x3044;&#x3066;&#x3001;&#x30EC;&#x30DD;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x6280;&#x8853;&#x3092;&#x958B;&#x767A;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002; BLA&#x9175;&#x7D20;&#x6D3B;&#x6027;&#x3092;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x306F;&#x3001;&#x307E;&#x305A;&#x6211;&#x3005;&#x306F;BLA&#x9175;&#x7D20;&#x306E;&#x5186;&#x9806;&#x5217;&#x306B;&#x57FA;&#x3065;&#x3044;&#x3066;&#x3001;&#x6A5F;&#x80FD;&#x7684;&#x30B9;&#x30AF;&#x30EA;&#x30FC;&#x30CB;&#x30F3;&#x30B0;&#x306E;&#x30A2;&#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30C1;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x8B58;&#x5225;&#x3055;&#x308C;&#x308B;2&#x3064;&#x306E;&#x72EC;&#x7ACB;&#x3057;&#x305F;&#x3001;&#x76F8;&#x88DC;&#x7684;&#x306A;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x65AD;&#x7247;&#x306B;&#x9175;&#x7D20;&#x3092;&#x5206;&#x5272;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x5206;&#x5272;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x9175;&#x7D20;&#x306F;&#x305D;&#x306E;&#x5F8C;&#x3001;cAMP&#x5FDC;&#x7B54;&#x30A8;&#x30EC;&#x30E1;&#x30F3;&#x30C8;&#x7D50;&#x5408;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#xFF08;CREB&#xFF09;&#x304A;&#x3088;&#x3073;CREB&#x7D50;&#x5408;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;KIX&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x306E;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x8A98;&#x5C0E;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x306E;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x4F9D;&#x5B58;&#x7D50;&#x5408;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x307E;&#x3068;&#x3081;&#x3066;&#x307F;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x305D;&#x306E;&#x86CD;&#x5149;&#x30B9;&#x30DA;&#x30AF;&#x30C8;&#x30EB;BLA&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x52A0;&#x6C34;&#x5206;&#x89E3;&#x5F8C;&#x306E;&#x5909;&#x5316;&#x3001;&#x7D30;&#x80DE;&#x5185;&#x57FA;&#x8CEA;&#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x3066;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;CREB&#x3068;CREB&#x7D50;&#x5408;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x306E;&#x95A2;&#x9023;&#x4ED8;&#x3051;&#x5F8C;&#x3001;BLA&#x9175;&#x7D20;&#x8A98;&#x5C0E;&#x306E;&#x6642;&#x9593;&#x7D4C;&#x904E;&#x30EC;&#x30B7;&#x30AA;&#x30A4;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B8;&#x30F3;&#x30B0;&#x6E2C;&#x5B9A;&#x3092;&#x884C;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x30A2;&#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30C1;&#x306F;&#x3001;&#x9AD8;&#x3044;&#x4FE1;&#x53F7;&#x8B58;&#x5225;&#x3092;&#x6301;&#x3064;&#x5358;&#x4E00;&#x7D30;&#x80DE;&#x5185;&#x306E;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA; - &#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x306E;&#x76F4;&#x63A5;&#x7684;&#x306A;&#x30A4;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B8;&#x30F3;&#x30B0;&#x3092;&#x53EF;&#x80FD;&#x306B;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

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&#xD558;&#xB098;&#xC758; &#xC2E0;&#xACBD; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0;&#xC11C; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;-&#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9; &#xC18D;&#xB3C4; &#xB860;&#xC758; &#xBBFC;&#xAC10;&#xD55C; &#xCE21;&#xC815; &#xD558; &#xAC8C; &#xB2A5;&#xB825;&#xC740; &#xC2E0;&#xACBD; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC758; &#xBD84;&#xC790; &#xBC0F; &#xC138;&#xD3EC; &#xAE30;&#xCD08;&#xB97C; &#xC774;&#xD574; &#xD558;&#xB294; &#xB370; &#xC911;&#xC694; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB2E8;&#xC77C; &#xC2E0;&#xACBD; &#xC0DD;&#xCCB4; &#xC870;&#xAC74; &#xB0B4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xB450; &#xAC1C;&#xC758; &#xB300;&#xC0C1; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9; &#xC0C1;&#xD0DC; &#xC13C;&#xC11C;&#xB85C; &#xC11C; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC744; &#xD560; &#xC218; &#xBCD1;&#xC6D0; &#xC131; &#xB300;&#xC7A5;&#xADE0; &#xD3B8; 1 &#xBCA0;&#xD0C0;-&#xB77D; &#xD0C0; &#xB9C8; &#xC81C; (&#xC990;) &#xD6A8;&#xC18C; &#xD65C;&#xB3D9;&#xC758; &#xCC28;&#xB3D9; &#xC720;&#xB3C4;&#xC5D0; &#xB530;&#xB77C; &#xAE30;&#xC790; &#xAE30;&#xC220;&#xC744; &#xAC1C;&#xBC1C; &#xD588;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC990; &#xD6A8;&#xC18C; &#xD65C;&#xB3D9;&#xC744; &#xC870;&#xC808; &#xD558;&#xB824;&#xBA74; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; &#xBA3C;&#xC800; &#xC990; &#xD6A8;&#xC18C;&#xC758; &#xC21C;&#xD658; &#xC21C;&#xC5F4;&#xC5D0; &#xB530;&#xB77C; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC131; &#xC2EC;&#xC0AC; &#xBC29;&#xC2DD;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xC2DD;&#xBCC4; &#xD558;&#xB294; &#xB450; &#xAC1C;&#xC758; &#xBCC4;&#xB3C4;, &#xC0C1;&#xD638; &#xBCF4;&#xC644;&#xC801;&#xC778; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC870;&#xAC01;&#xC73C;&#xB85C; &#xD6A8;&#xC18C; &#xBD84;&#xD560;. &#xBD84;&#xD560; &#xD6A8;&#xC18C; &#xCEA0;&#xD504; &#xC751;&#xB2F5; &#xC694;&#xC18C; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; (CREB)&#xC758; &#xB2C8; &#xC720;&#xB3C4;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xB294; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778; KIX &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778; CREB &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xC778; &#xC0B0;&#xD654;&#xC5D0; &#xC885;&#xC18D;&#xC801;&#xC778; &#xD611;&#xD68C;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC18C;&#xC9D1; &#xD6C4; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC; &#xC2DC;&#xAC04; &#xACBD;&#xACFC; &#xBE44;&#xC728; &#xAE30;&#xC900; &#xC774;&#xBBF8;&#xC9D5; &#xD611;&#xD68C; CREB CREB &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xD6C4; &#xC990; &#xD6A8;&#xC18C; &#xC720;&#xB3C4;&#xC758; &#xCE21;&#xC815; &#xC218;&#xD589; &#xC990;&#xC73C;&#xB85C; &#xAC00;&#xC218;&#xBD84;&#xD574; &#xD55C; &#xD6C4; &#xADF8; &#xD615;&#xAD11; &#xC2A4;&#xD399;&#xD2B8;&#xB7FC; &#xBCC0;&#xACBD; &#xC138;&#xD3EC;&#xB0B4; &#xAE30;&#xD310;&#xC5D0; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC;. &#xC774; &#xC774;&#xB807;&#xAC8C; &#xC9C1;&#xC811; &#xC774;&#xBBF8;&#xC9D5; &#xB192;&#xC740; &#xC2E0;&#xD638; &#xCC28;&#xBCC4; &#xB2E8;&#xC77C; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0;&#xC11C; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC758; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xD3EC;&#xC720;&#xB958; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0;&#xC11C; &#xB3D9;&#xC801; &#xC885;&#xC18D; &#xC778; &#xC0B0;&#xD654; &#xB41C; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;-&#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC758; &#xC2DC;&#xAC04; &#xACBD;&#xACFC; &#xD654;&#xC0C1; &#xC9C4; &#xCC30;.

La capacidad de realizar mediciones sensibles de la cin&#xE9;tica de la interacci&#xF3;n prote&#xED;na-prote&#xED;na en las neuronas individuales es fundamental para entender las bases moleculares y celulares de la funci&#xF3;n neuronal. Hemos desarrollado una tecnolog&#xED;a reportero basa en la inducci&#xF3;n diferencial de Escherichia coli TEM-1 beta-lactamasa (bla) la actividad enzim&#xE1;tica que puede funcionar como un sensor del estado interacci&#xF3;n de dos prote&#xED;nas diana dentro de las neuronas individuales in vivo. Para modular la actividad enzim&#xE1;tica Bla, primero dividir la enzima en dos fragmentos separados, prote&#xED;nas complementarias que se identificaron mediante el uso de un criterio de selecci&#xF3;n funcional a partir de permutaci&#xF3;n circular de la enzima Bla. La enzima de divisi&#xF3;n se llev&#xF3; entonces juntos por la asociaci&#xF3;n dependiente de la fosforilaci&#xF3;n del dominio inducible de la prote&#xED;na quinasa AMPc elemento de respuesta de uni&#xF3;n (CREB) y el dominio KIX de la prote&#xED;na CREB. El uso de un sustrato intracelular cuya fluorescencia de espectro de cambios despu&#xE9;s de la hidr&#xF3;lisis por Bla, se realiz&#xF3; un lapso de tiempo, las mediciones de imagen ratiometric de inducci&#xF3;n enzim&#xE1;tica Bla despu&#xE9;s de la asociaci&#xF3;n de la CREB y CREB vinculante dominios de interacci&#xF3;n de prote&#xED;nas. Este enfoque permite que la imagen directa de las interacciones prote&#xED;na-prote&#xED;na en las c&#xE9;lulas individuales con la discriminaci&#xF3;n de la se&#xF1;al de alto.

Time-lapse de im&#xE1;genes de una din&#xE1;mica de fosforilaci&#xF3;n dependiente de la interacci&#xF3;n prote&#xED;na-prote&#xED;na en c&#xE9;lulas de mam&#xED;fero

&#x81EA;&#x95ED;&#x75C7;&#x8C31;&#x7CFB;&#x969C;&#x788D; &#xFF08;&#x81EA;&#x95ED;&#x75C7;&#x5B66;&#x7AE5;) &#x662F;&#x4E00;&#x7EC4;&#x7684;&#x7279;&#x70B9;&#x662F;&#x793E;&#x4F1A;&#x548C;&#x60C5;&#x611F;&#x7684;&#x8D64;&#x5B57;&#x3001; &#x8BED;&#x8A00;&#x969C;&#x788D;&#x548C;&#x65E9;&#x671F;&#x4EA7;&#x540E;&#x751F;&#x6D3B;&#x4E2D;&#x8868;&#x73B0;&#x7684;&#x523B;&#x677F;&#x7684;&#x884C;&#x4E3A;&#x53D1;&#x80B2;&#x969C;&#x788D;&#x3002;&#x4E0D;&#x77E5;&#x9053;&#x7684;&#x80CC;&#x540E;&#x81EA;&#x95ED;&#x75C7;&#x5B66;&#x7AE5;&#x7684;&#x5206;&#x5B50;&#x673A;&#x5236;&#xFF0C;&#x4F46;&#x51E0;&#x4E2A;&#x6700;&#x8FD1;&#x7684;&#x4E8B;&#x6001;&#x53D1;&#x5C55;&#x8868;&#x660E;&#x67D0;&#x4E9B;&#x5F62;&#x5F0F;&#x7684;&#x81EA;&#x95ED;&#x75C7;&#x7531;&#x5728;&#x795E;&#x7ECF;&#x53D1;&#x80B2;&#x4F9D;&#x8D56;&#x4E8E;&#x6D3B;&#x52A8;&#x7684;&#x8C03;&#x63A7;&#x5931;&#x8D25;&#x9020;&#x6210;&#x3002;&#x51E0;&#x79CD;&#x7535;&#x538B;&#x95E8;&#x63A7;&#x6027;&#x7A81;&#x53D8;&#x4E0E;&#x914D;&#x4F53;&#x95E8;&#x63A7;&#x79BB;&#x5B50;&#x901A;&#x9053;&#xFF0C;&#x8C03;&#x8282;&#x795E;&#x7ECF;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x5174;&#x594B;&#x6027;&#x548C; Ca2 + &#x4FE1;&#x53F7;&#x5DF2;&#x4E0E;&#x81EA;&#x95ED;&#x75C7;&#x5B66;&#x7AE5;&#x76F8;&#x5173;&#x8054;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;Ca2 +-&#x8C03;&#x8282;&#x4FE1;&#x53F7;&#x86CB;&#x767D;&#x53C2;&#x4E0E;&#x5F62;&#x6210;&#x7A81;&#x89E6;&#x548C;&#x6811;&#x7A81;&#x751F;&#x957F;&#x7684;&#x6709;&#x7275;&#x8FDE;&#x7684;&#x81EA;&#x95ED;&#x75C7;&#x5B66;&#x7AE5;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x8FDB;&#x5C55;&#x5EFA;&#x8BAE;&#x4E00;&#x5957;&#x4FE1;&#x53F7;&#x901A;&#x8DEF;&#x53EF;&#x80FD;&#x6709;&#x4F5C;&#x7528;&#x751F;&#x6210;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x8D8A;&#x6765;&#x8D8A;&#x666E;&#x904D;&#x7684;&#x75BE;&#x75C5;&#x3002;

&#x81EA;&#x95ED;&#x75C7;&#x7684;&#x5206;&#x5B50;&#x673A;&#x5236;&#xFF1A; Ca2 + &#x4FE1;&#x53F7;&#x53EF;&#x80FD;&#x53D1;&#x6325;&#x7684;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;

Autism spectrum disorders (ASDs) are a group of developmental disorders characterized by social and emotional deficits, language impairments and stereotyped behaviors that manifest in early postnatal life. The molecular mechanisms that underlie ASDs are not known, but several recent developments suggest that some forms of autism are caused by failures in activity-dependent regulation of neural development. Mutations of several voltage-gated and ligand-gated ion channels that regulate neuronal excitability and Ca2+ signaling have been associated with ASDs. In addition, Ca2+-regulated signaling proteins involved in synapse formation and dendritic growth have been implicated in ASDs. These recent advances suggest a set of signaling pathways that might have a role in generating these increasingly prevalent disorders.

Molecular mechanisms of autism: a possible role for Ca2+ signaling.

Troubles du spectre autistique (TSA) sont un groupe de troubles du d&#xE9;veloppement caract&#xE9;ris&#xE9;e par des d&#xE9;ficits sociaux et affectifs, des troubles du langage et de comportements st&#xE9;r&#xE9;otyp&#xE9;s qui se manifestent dans la vie postnatale pr&#xE9;coce. Les m&#xE9;canismes mol&#xE9;culaires qui sous-tendent TSA ne sont pas connues, mais plusieurs d&#xE9;veloppements r&#xE9;cents sugg&#xE8;rent que certaines formes d&#x26;#39;autisme sont caus&#xE9;es par des d&#xE9;faillances dans l&#x26;#39;activit&#xE9;-d&#xE9;pendante la r&#xE9;gulation du d&#xE9;veloppement neuronal. Des mutations de plusieurs canaux ioniques voltage-d&#xE9;pendants et ligand-gated qui r&#xE9;gulent l&#x26;#39;excitabilit&#xE9; neuronale et la signalisation Ca2 + ont &#xE9;t&#xE9; associ&#xE9;s &#xE0; TSA. En outre, Ca2 +-r&#xE9;glement&#xE9;s prot&#xE9;ines de signalisation impliqu&#xE9;es dans la formation des synapses et de la croissance dendritique ont &#xE9;t&#xE9; impliqu&#xE9;s dans les TSA. Ces avanc&#xE9;es r&#xE9;centes sugg&#xE8;rent un ensemble de voies de signalisation qui pourraient avoir un r&#xF4;le dans la production de ces troubles de plus en plus r&#xE9;pandues.

M&#xE9;canismes mol&#xE9;culaires de l&#x26;#39;autisme: un r&#xF4;le possible pour Ca2 + signalisation

Autismus-Spektrum-St&ouml;rungen (ASD) sind eine Gruppe von Entwicklungsst&ouml;rungen, gekennzeichnet durch soziale und emotionale Defizite, Beeintr&auml;chtigungen der Sprache und Stereotype Verhaltensweisen, die im fr&uuml;hen postnatalen Leben manifestieren. Die molekularen Mechanismen, die ASD zugrunde liegen, sind nicht bekannt, aber mehrere j&uuml;ngste Entwicklungen legen nahe, dass einige Formen von Autismus durch Ausf&auml;lle bei leistungsabh&auml;ngige Regelung der neuronalen Entwicklung verursacht werden. Mutationen von mehreren Spannung-Gating und ligandengesteuerte Ionenkan&auml;le, die neuronale Erregbarkeit und Ca2 + Signalisierung regulieren wurden Autismus zugeordnet. Dar&uuml;ber hinaus Ca2 +-reguliert Signalisierung-Proteine Synapse Formation und dendritischen Wachstums haben im ASD impliziert worden. Diese j&uuml;ngste Fortschritte schlagen einen Satz Bahnen, die eine Rolle bei der Erzeugung dieser zunehmend verbreiteten Erkrankungen haben k&ouml;nnte zu signalisieren.

Molekulare Mechanismen der Autismus: eine m&ouml;gliche Rolle f&uuml;r Ca2 + signalisieren.

Disturbi dello spettro autistico (ASD) sono un gruppo di disturbi dello sviluppo caratterizzata da deficit sociali ed emotivi, problemi di linguaggio e comportamenti stereotipati che si manifestano nei primi anni di vita postnatale. Non sono noti i meccanismi molecolari che sottostanno alla ASD, ma parecchi sviluppi recenti suggeriscono che alcune forme di autismo sono causate da errori nella regolazione di attivit&agrave;-dipendente dello sviluppo neurale. Mutazioni di diversi tensione-gated e scanalature ligand-gated dello ione che regolano l&#39;eccitabilit&agrave; neuronale e Ca2 + segnalazione sono stati associati con ASD. In aggiunta, Ca2 +-regolato segnalazione proteine coinvolte nella formazione di sinapsi e la crescita dendritica sono state implicate in ASD. Questi progressi recenti suggeriscono una serie di vie che potrebbero avere un ruolo nel generare questi disturbi sempre pi&ugrave; diffusi di segnalazione.

Meccanismi molecolari dell&#39;autismo: un possibile ruolo per Ca2 + segnalazione.

&#x81EA;&#x9589;&#x75C7;&#x30B9;&#x30DA;&#x30AF;&#x30C8;&#x30E9;&#x30E0;&#x969C;&#x5BB3;&#xFF08;ASDs&#x306F;&#xFF09;&#x793E;&#x4F1A;&#x7684;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x60C5;&#x7DD2;&#x7684;&#x969C;&#x5BB3;&#x3001;&#x8A00;&#x8A9E;&#x969C;&#x5BB3;&#x3084;&#x51FA;&#x751F;&#x5F8C;&#x65E9;&#x671F;&#x306E;&#x751F;&#x6D3B;&#x306E;&#x4E2D;&#x3067;&#x30DE;&#x30CB;&#x30D5;&#x30A7;&#x30B9;&#x30C8;&#x7D0B;&#x5207;&#x308A;&#x578B;&#x306E;&#x884C;&#x52D5;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x7279;&#x5FB4;&#x3065;&#x3051;&#x767A;&#x9054;&#x969C;&#x5BB3;&#x306E;&#x30B0;&#x30EB;&#x30FC;&#x30D7;&#x3067;&#x3059;&#x3002; ASDs&#x306F;&#x6839;&#x5E95;&#x306B;&#x3042;&#x308B;&#x5206;&#x5B50;&#x30E1;&#x30AB;&#x30CB;&#x30BA;&#x30E0;&#x306F;&#x4E0D;&#x660E;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x304C;&#x3001;&#x3044;&#x304F;&#x3064;&#x304B;&#x306E;&#x6700;&#x8FD1;&#x306E;&#x9032;&#x5C55;&#x306F;&#x3001;&#x81EA;&#x9589;&#x75C7;&#x306E;&#x3044;&#x304F;&#x3064;&#x304B;&#x306E;&#x5F62;&#x614B;&#x304C;&#x795E;&#x7D4C;&#x767A;&#x751F;&#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x4F9D;&#x5B58;&#x7684;&#x306A;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x306E;&#x969C;&#x5BB3;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x5F15;&#x304D;&#x8D77;&#x3053;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x5506;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3002;&#x795E;&#x7D4C;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x8208;&#x596E;&#x6027;&#x3068;Ca2 +&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#x3092;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x3059;&#x308B;&#x306B;&#x306F;ASDs&#x306F;&#x95A2;&#x9023;&#x4ED8;&#x3051;&#x3089;&#x308C;&#x305F;&#x8907;&#x6570;&#x306E;&#x96FB;&#x4F4D;&#x4F9D;&#x5B58;&#x6027;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x30EA;&#x30AC;&#x30F3;&#x30C9;&#x4F9D;&#x5B58;&#x6027;&#x30A4;&#x30AA;&#x30F3;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x306E;&#x5909;&#x7570;&#x3002;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x3001;&#x30B7;&#x30CA;&#x30D7;&#x30B9;&#x5F62;&#x6210;&#x3068;&#x6A39;&#x72B6;&#x7A81;&#x8D77;&#x306E;&#x6210;&#x9577;&#x306B;&#x95A2;&#x4E0E;&#x3059;&#x308B;Ca2 +&#x306E;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306F;ASDs&#x306F;&#x95A2;&#x4E0E;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x6700;&#x8FD1;&#x306E;&#x9032;&#x6B69;&#x306F;&#x3001;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x307E;&#x3059;&#x307E;&#x3059;&#x666E;&#x53CA;&#x3057;&#x3066;&#x969C;&#x5BB3;&#x3092;&#x751F;&#x6210;&#x3059;&#x308B;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x6301;&#x3064;&#x304B;&#x3082;&#x3057;&#x308C;&#x306A;&#x3044;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#x7D4C;&#x8DEF;&#x306E;&#x30BB;&#x30C3;&#x30C8;&#x3092;&#x304A;&#x52E7;&#x3081;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x81EA;&#x9589;&#x75C7;&#x306E;&#x5206;&#x5B50;&#x6A5F;&#x69CB;&#xFF1A;Ca2 +&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#x306E;&#x53EF;&#x80FD;&#x306A;&#x5F79;&#x5272;

&#xC790;&#xD3D0;&#xC99D; &#xC2A4;&#xD399;&#xD2B8;&#xB7FC; &#xC7A5;&#xC560; (ASDs)&#xC740; &#xC0AC;&#xD68C;&#xC801; &#xBC0F; &#xC815;&#xC11C;&#xC801; &#xC801;&#xC790;, &#xC5B8;&#xC5B4; &#xC7A5;&#xC560; &#xBC0F; &#xCD08;&#xAE30; &#xC0B0; &#xD6C4; &#xC0DD;&#xD65C;&#xC5D0; &#xB9E4;&#xB2C8; &#xD398;&#xC2A4;&#xD2B8; &#xD558;&#xB294; &#xC9C4;&#xBD80;&#xD55C; &#xB3D9;&#xC791; &#xD2B9;&#xC9D5; &#xBC1C;&#xB2EC; &#xC7A5;&#xC560;&#xC758; &#xADF8;&#xB8F9; &#xC774;&#xB2E4;. ASDs &#xAE30;&#xBC18;&#xC774; &#xB418;&#xB294; &#xBD84;&#xC790; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;&#xC744; &#xC54C; &#xC218; &#xC5C6;&#xB294; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xC5EC;&#xB7EC; &#xCD5C;&#xADFC; &#xAC1C;&#xBC1C; &#xC77C;&#xBD80; &#xD615;&#xD0DC;&#xC758; &#xC790;&#xD3D0;&#xC99D; &#xC2E0;&#xACBD; &#xAC1C;&#xBC1C;&#xC758; &#xADDC;&#xC81C; &#xD65C;&#xB3D9; &#xC885;&#xC18D;&#xC5D0;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC2E4;&#xD328; &#xD558; &#xC5EC; &#xBC1C;&#xC0DD; &#xD558;&#xB294; &#xAC83;&#xC774; &#xC88B;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC804;&#xC555; &#xAC1C;&#xD3D0; &#xC5EC;&#xB7EC; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xC2E0;&#xACBD; &#xD765;&#xBD84; &#xBC0F; Ca2 + &#xC2E0;&#xD638; &#xC870;&#xC808; &#xB9AC;&#xAC04;&#xB4DC; &#xAC1C;&#xD3D0; &#xC774;&#xC628; &#xCC44;&#xB110; Asds&#xC640; &#xAD00;&#xB828; &#xB418;&#xC5B4; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB610;&#xD55C;, Ca2 +-&#xC2E0;&#xD638; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC2DC; &#xB0C5; &#xC2A4; &#xD615;&#xC131; &#xBC0F; &#xC218;&#xC9C0;&#xC0C1; &#xC131;&#xC7A5;&#xC5D0; &#xAD00;&#xC5EC; Asds&#xC5D0; &#xC5F0;&#xB8E8; &#xB418;&#xC5B4; &#xADDC;&#xC81C;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xCD5C;&#xADFC;&#xC758; &#xBC1C;&#xC804; &#xC2E0;&#xD638; &#xC0DD;&#xC131;&#xC774; &#xC810;&#xC810; &#xC720;&#xD589; &#xC9C8;&#xD658;&#xC5D0; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xB294; &#xACBD;&#xB85C; &#xC124;&#xC815; &#xC81C;&#xC548;.

&#xC790;&#xD3D0;&#xC99D;&#xC758; &#xBD84;&#xC790; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;: Ca2 + &#xC2E0;&#xD638;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xAC00;&#xB2A5;&#xD55C; &#xC5ED;&#xD560;.

Trastornos del espectro autista (TEA) son un grupo de trastornos del desarrollo caracterizados por d&#xE9;ficits sociales y emocionales, trastornos del lenguaje y los comportamientos estereotipados que se manifiestan en la vida postnatal temprana. Los mecanismos moleculares que subyacen en trastornos del espectro autista no se conocen, pero varios acontecimientos recientes sugieren que algunas formas de autismo son causados &#x200B;&#x200B;por fallas en la actividad dependen de la regulaci&#xF3;n del desarrollo neuronal. Las mutaciones de varios canales i&#xF3;nicos dependientes de voltaje y ligando cerrada-que regulan la excitabilidad neuronal y la se&#xF1;alizaci&#xF3;n de Ca2 + se han asociado con trastornos del espectro autista. Adem&#xE1;s, el Ca2 + regulados por las prote&#xED;nas de se&#xF1;alizaci&#xF3;n implicadas en la formaci&#xF3;n de sinapsis y el crecimiento dendr&#xED;tico han sido implicados en trastornos del espectro autista. Estos avances recientes sugieren un conjunto de v&#xED;as de se&#xF1;alizaci&#xF3;n que pueden tener un papel en la generaci&#xF3;n de estos des&#xF3;rdenes.

Mecanismos moleculares de autismo: un posible papel de se&#xF1;alizaci&#xF3;n por Ca2 +

&#x9499;&#x79BB;&#x5B50;&#x901A;&#x9053;&#x70B9;&#x4EAE;&#x3002;

Calcium channels light up.

Canaux calciques Light Up

Kalzium-Kan&auml;le Leuchten.

Canali di calcio si illuminano.

&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;&#x30C1;&#x30E3;&#x30F3;&#x30CD;&#x30EB;&#x304C;&#x70B9;&#x706F;

&#xCE7C;&#xC298; &#xCC44;&#xB110;&#xC744; &#xC218;&#xB193;&#xB294;&#xB2E4;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Canales de calcio Light Up

&#x7535;&#x538B;&#x95E8;&#x63A7;&#x6027;&#x9499;&#x901A;&#x9053; (VGCCs) &#x8F6C;&#x6362;&#x6210;&#x8C03;&#x8282;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5174;&#x594B;&#x6027;&#x3001; &#x5206;&#x5316;&#x3001; &#x548C;&#x8FDE;&#x901A;&#x6027;&#x7684;&#x9499; (Ca2 +) &#x4FE1;&#x53F7;&#x7684;&#x7535;&#x6D3B;&#x52A8;&#x3002;&#x89C4;&#x6A21;&#x548C;&#x52A8;&#x529B;&#x5B66;&#x7814;&#x7A76; Ca2 + &#x4FE1;&#x53F7;&#x53D6;&#x51B3;&#x4E8E; VGCCs &#x7684;&#x6570;&#x76EE;&#xFF0C;&#x5728;&#x7EC6;&#x80DE;&#x819C;&#xFF0C;&#x4F46; VGCC &#x8868;&#x9762;&#x8868;&#x8FBE;&#x8C03;&#x63A7;&#x7684;&#x4E86;&#x89E3;&#x751A;&#x5C11;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x62A5;&#x544A;&#x7535;&#x6D3B;&#x52A8;&#x539F;&#x56E0;&#x5185;&#x5728;&#x5316;&#x7684; L &#x578B; Ca2 + &#x901A;&#x9053; CaV1.2 &#xFF08;LTC&#xFF09;&#xFF0C;&#x8FD9;&#x4ECB;&#x5BFC;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x5230;&#x80BF;&#x7624;&#x6291;&#x5236; eIF3e/Int6 (&#x771F;&#x6838;&#x542F;&#x52A8;&#x56E0;&#x5B50; 3 &#x4E9A;&#x57FA; e)&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x4F7F;&#x7528;&#x5168;&#x5185;&#x53CD;&#x5C04;&#x663E;&#x5FAE;&#x955C;&#xFF0C;&#x6807;&#x8BC6;&#x51FA;&#x5305;&#x542B;&#x5176;&#x5FEB;&#x901F;&#x8D29;&#x5356;&#x5F3A;&#x70C8;&#x53D7; Ca2 + endosomes CaV1.2 &#x4EBA;&#x53E3;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x5728; CaV1.2 &#x7ED1;&#x5B9A; eIF3e&#xFF0C;&#x662F;&#x5FC5;&#x4E0D;&#x53EF;&#x5C11;&#x7684;&#x901A;&#x9053;&#x5185;&#x5316;&#x548C; endosomal &#x8D29;&#x8FD0;&#x6D3B;&#x52A8;&#x4F9D;&#x8D56;&#x7684;&#x4E8C;&#x3001; &#x4E09;&#x73AF;&#x8DEF;&#x4E2D;&#x5B9A;&#x4E49;&#x4E00;&#x4E2A;&#x57DF;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7814;&#x7A76;&#x7ED3;&#x679C;&#x4F9D;&#x8D56;&#x4E8E;&#x6D3B;&#x52A8;&#x7684;&#x5185;&#x5316;&#x548C;&#x8D29;&#x8FD0;&#x7684; CaV1.2 &#x63D0;&#x4F9B;&#x4E00;&#x79CD;&#x673A;&#x5236;&#xFF0C;&#x5E76;&#x63D0;&#x4F9B;&#x8BF1;&#x4EBA; Ca2 + &#x7A33;&#x6001;&#x4E0E;&#x54FA;&#x4E73;&#x52A8;&#x7269;&#x7684;&#x764C;&#x57FA;&#x56E0;&#x4E4B;&#x95F4;&#x7684;&#x94FE;&#x63A5;&#x3002;

&#x80BF;&#x7624;&#x6291;&#x5236;&#x56E0;&#x5B50; eIF3e &#x4ECB;&#x5BFC; L-&#x578B;&#x9499;&#x901A;&#x9053; CaV1.2 &#x9499;&#x4F9D;&#x8D56;&#x5185;&#x5728;&#x7684;&#x5316;&#x3002;

Voltage-gated calcium channels (VGCCs) convert electrical activity into calcium (Ca2+) signals that regulate cellular excitability, differentiation, and connectivity. The magnitude and kinetics of Ca2+ signals depend on the number of VGCCs at the plasma membrane, but little is known about the regulation of VGCC surface expression. We report that electrical activity causes internalization of the L-type Ca2+ channel (LTC) CaV1.2 and that this is mediated by binding to the tumor suppressor eIF3e/Int6 (eukaryotic initiation factor 3 subunit e). Using total internal reflection microscopy, we identify a population of CaV1.2 containing endosomes whose rapid trafficking is strongly regulated by Ca2+. We define a domain in the II-III loop of CaV1.2 that binds eIF3e and is essential for the activity dependence of both channel internalization and endosomal trafficking. These findings provide a mechanism for activity-dependent internalization and trafficking of CaV1.2 and provide a tantalizing link between Ca2+ homeostasis and a mammalian oncogene.

The tumor suppressor eIF3e mediates calcium-dependent internalization of the L-type calcium channel CaV1.2.

Les canaux calciques voltage-d&#xE9;pendants (VGCCs) convertir l&#x26;#39;activit&#xE9; &#xE9;lectrique en calcium (Ca2 +) des signaux qui r&#xE9;gulent l&#x26;#39;excitabilit&#xE9; cellulaire, la diff&#xE9;renciation, et la connectivit&#xE9;. L&#x26;#39;ampleur et la cin&#xE9;tique de Ca2 + de signaux d&#xE9;pendent du nombre de VGCCs &#xE0; la membrane plasmique, mais peu est connu sur la r&#xE9;gulation de l&#x26;#39;expression de surface CCAGV. Nous avons constat&#xE9; que l&#x26;#39;activit&#xE9; &#xE9;lectrique provoque l&#x26;#39;internalisation de la cha&#xEE;ne de type L Ca 2 + (LTC) Cav1.2 et que cela est m&#xE9;di&#xE9;e par la liaison &#xE0; la suppresseur de tumeur eIF3e/Int6 (facteur d&#x26;#39;initiation eucaryote 3 e sous-unit&#xE9;). En utilisant la microscopie &#xE0; r&#xE9;flexion interne totale, nous identifions une population de Cav1.2 contenant endosomes dont le rapide le trafic est fortement r&#xE9;gul&#xE9;e par le Ca2 +. Nous d&#xE9;finissons un domaine dans la boucle II-III de Cav1.2 qui lie eIF3e et est essentielle pour la d&#xE9;pendance des activit&#xE9;s de l&#x26;#39;internalisation de canal et le trafic de l&#x26;#39;endosome. Ces r&#xE9;sultats fournissent un m&#xE9;canisme d&#xE9;pendant de l&#x26;#39;activit&#xE9; pour l&#x26;#39;internalisation et le trafic de Cav1.2 et fournir un lien entre all&#xE9;chant Ca2 + et l&#x26;#39;hom&#xE9;ostasie un oncog&#xE8;ne de mammif&#xE8;re.

Les tumeurs de m&#xE9;diateur EIF3e Suppressor calcium-d&#xE9;pendante internalisation du canal calcique type L Cav1.2

Spannung-Gating Kalzium-Kan&auml;le (VGCCs) wandeln elektrischen Aktivit&auml;t in Kalzium (Ca2 +)-Signale, die zellul&auml;re Erregbarkeit, Differenzierung und Konnektivit&auml;t zu regulieren. Das Ausma&szlig; und die Kinetik der Ca2 +-Signale h&auml;ngen von der Anzahl der VGCCs an der Plasmamembran, aber &uuml;ber die Regulierung der Golfzielorten Oberfl&auml;che Ausdruck ist wenig bekannt. Wir berichten, dass die elektrische Aktivit&auml;t Ursachen Internalisierung des L-Typ Ca2 +-Kanal (LTC) CaV1.2 und dies durch Bindung an den Tumorsuppressor eIF3e/Int6 (eukaryotischen Einleitung Faktor 3 Untereinheit e) vermittelt wird. Mit Totalreflexion Mikroskopie, identifizieren wir eine Bev&ouml;lkerung von CaV1.2 mit Endosomen, deren rasche Menschenhandel stark von Ca2 + reguliert wird. Wir definieren eine Dom&auml;ne in der II-III-Schleife der CaV1.2, die eIF3e bindet und ist entscheidend f&uuml;r die Aktivit&auml;t-Abh&auml;ngigkeit von Kanal Internalisierung und Endosomen Menschenhandel. Diese Erkenntnisse bieten einen Mechanismus f&uuml;r leistungsabh&auml;ngige Internalisierung und den Handel mit CaV1.2 und stellen eine verlockende Verbindung zwischen Ca2 +-Hom&ouml;ostase und einem S&auml;ugetier-Onkogen.

Der Tumor-Suppressor-eIF3e vermittelt die Kalzium-abh&auml;ngige Verinnerlichung von der L-Typ-Kalzium-Kanal CaV1.2.

Canali del calcio voltaggio-dipendenti (VGCCs) convertono attivit&agrave; elettrica in segnali di calcio (Ca2 +) che regolano l&#39;eccitabilit&agrave; cellulare, la differenziazione e la connettivit&agrave;. La grandezza e la cinetica del Ca2 + segnali dipendono dal numero di VGCCs alla membrana del plasma, ma poco si sa circa la regolazione dell&#39;espressione di superficie VGCC. Segnaliamo che l&#39;attivit&agrave; elettrica cause interiorizzazione del tipo L Ca2 + canale CaV1.2 (LTC) e che questo &egrave; mediato dal legame con il tumore soppressore eIF3e/Int6 (iniziazione eucariotico fattore 3 subunit&agrave; e). Utilizzando la microscopia di riflessione interna totale, identifichiamo una popolazione di CaV1.2 contenenti endosomes cui traffico rapido &egrave; fortemente regolamentato di Ca2 +. Definiamo un dominio nel ciclo di II-III di CaV1.2 che lega eIF3e ed &egrave; essenziale per la dipendenza di attivit&agrave; di interiorizzazione del canale e il traffico di endosomal. Questi risultati forniscono un meccanismo di interiorizzazione di attivit&agrave;-dipendente e il traffico di CaV1.2 e forniscono un link allettante tra omeostasi del Ca2 + e un oncogene nei mammiferi.

Il eIF3e di soppressore tumorale media calcio-dipendente interiorizzazione del canale calcio tipo L CaV1.2.

&#x96FB;&#x4F4D;&#x4F9D;&#x5B58;&#x6027;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#xFF08;VGCCs&#xFF09;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x8208;&#x596E;&#x6027;&#x3001;&#x5206;&#x5316;&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x63A5;&#x7D9A;&#x3092;&#x5236;&#x5FA1;&#x3059;&#x308B;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;&#xFF08;Ca2 +&#x306E;&#xFF09;&#x4FE1;&#x53F7;&#x306B;&#x96FB;&#x6C17;&#x7684;&#x6D3B;&#x52D5;&#x3092;&#x5909;&#x63DB;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002; Ca2 +&#x306E;&#x4FE1;&#x53F7;&#x306E;&#x5927;&#x304D;&#x3055;&#x3068;&#x901F;&#x5EA6;&#x306F;&#x7D30;&#x80DE;&#x819C;&#x3067;VGCCs&#x6570;&#x306B;&#x4F9D;&#x5B58;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x304C;&#x3001;&#x5C11;&#x3057;&#x306F;VGCC&#x8868;&#x9762;&#x767A;&#x73FE;&#x306E;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x306B;&#x3064;&#x3044;&#x3066;&#x306F;&#x307B;&#x3068;&#x3093;&#x3069;&#x77E5;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x306A;&#x3044;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;&#x96FB;&#x6C17;&#x7684;&#x6D3B;&#x52D5;&#x306F;&#x3001;L&#x578B;Ca2 +&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#xFF08;LTC&#xFF09;CaV1.2&#x306E;&#x5185;&#x5728;&#x5316;&#x3092;&#x5F15;&#x304D;&#x8D77;&#x3053;&#x3057;&#x3001;&#x3053;&#x308C;&#x304C;&#x816B;&#x760D;&#x6291;&#x5236;eIF3e/Int6&#xFF08;&#x771F;&#x6838;&#x751F;&#x7269;&#x306E;&#x958B;&#x59CB;&#x56E0;&#x5B50;3&#x30B5;&#x30D6;&#x30E6;&#x30CB;&#x30C3;&#x30C8;E&#xFF09;&#x3078;&#x306E;&#x7D50;&#x5408;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x5A92;&#x4ECB;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x5831;&#x544A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x5185;&#x90E8;&#x5168;&#x53CD;&#x5C04;&#x9855;&#x5FAE;&#x93E1;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306F;CaV1.2&#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x4EBA;&#x53E3;&#x3001;&#x200B;&#x200B;&#x305D;&#x306E;&#x6025;&#x901F;&#x306A;&#x58F2;&#x8CB7;&#x5F37;&#x304F;&#x306E;Ca2 +&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x30A8;&#x30F3;&#x30C9;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x3092;&#x8B58;&#x5225;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;eIF3e&#x7D50;&#x5408;&#x3057;&#x3001;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x306E;&#x5185;&#x5728;&#x5316;&#x3068;&#x30A8;&#x30F3;&#x30C9;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x306E;&#x4EBA;&#x8EAB;&#x58F2;&#x8CB7;&#x306E;&#x4E21;&#x65B9;&#x306E;&#x6D3B;&#x52D5;&#x4F9D;&#x5B58;&#x6027;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x4E0D;&#x53EF;&#x6B20;&#x3067;&#x3042;&#x308B;CaV1.2&#x306E;II-III&#x3001;&#x30EB;&#x30FC;&#x30D7;&#x5185;&#x306E;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x3092;&#x5B9A;&#x7FA9;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x77E5;&#x898B;&#x306F;&#x3001;CaV1.2&#x306E;&#x6D3B;&#x52D5;&#x4F9D;&#x5B58;&#x7684;&#x5185;&#x5728;&#x5316;&#x3068;&#x4EBA;&#x8EAB;&#x58F2;&#x8CB7;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x30E1;&#x30AB;&#x30CB;&#x30BA;&#x30E0;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3057;&#x3001;Ca2 +&#x306E;&#x6052;&#x5E38;&#x6027;&#x3068;&#x54FA;&#x4E73;&#x985E;&#x306E;&#x764C;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x3068;&#x306E;&#x9593;&#x306E;&#x98DF;&#x6B32;&#x3092;&#x305D;&#x305D;&#x308B;&#x306E;&#x30EA;&#x30F3;&#x30AF;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

L&#x578B;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;CaV1.2&#x306E;&#x816B;&#x760D;&#x6291;&#x5236;EIF3e&#x4EF2;&#x4ECB;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;&#x4F9D;&#x5B58;&#x6027;&#x306E;&#x5185;&#x5728;&#x5316;

&#xC804;&#xC555; &#xAC1C;&#xD3D0; &#xCE7C;&#xC298; &#xCC44;&#xB110; (VGCCs) &#xC804;&#xAE30; &#xD65C;&#xB3D9; &#xC138;&#xD3EC; &#xD765;&#xBD84;, &#xCC28;&#xBCC4;&#xD654;, &#xBC0F; &#xC5F0;&#xACB0;&#xC744; &#xC870;&#xC808; &#xD558;&#xB294; &#xCE7C;&#xC298; (Ca2 +) &#xC2E0;&#xD638; &#xBCC0;&#xD658; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xADDC;&#xBAA8;&#xC640; Ca2 + &#xC2E0;&#xD638; &#xC18D;&#xB3C4; &#xB860; &#xD50C;&#xB77C;&#xC988;&#xB9C8; &#xBA64;&#xBE0C;&#xB808;&#xC778;&#xC5D0; Vgccs&#xC758; &#xC218;&#xC5D0; &#xB530;&#xB77C; &#xB2EC;&#xB77C; &#xC9D1;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xC57D;&#xAC04; VGCC &#xD45C;&#xBA74; &#xC2DD;&#xC758; &#xADDC;&#xC81C;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC54C;&#xB824;&#xC838; &#xC788;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC; &#xBCF4;&#xACE0; &#xC804;&#xAE30; &#xD65C;&#xB3D9; &#xC6D0;&#xC778; &#xAD6D;&#xC81C;&#xD654;&#xC758; L &#xD615; Ca2 + &#xCC44;&#xB110; (LTC) CaV1.2 &#xBC0F;&#xC774; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xC885;&#xC591; &#xC5B5;&#xC81C;&#xAE30; eIF3e/Int6 (&#xC9C4; &#xD575; &#xAC1C;&#xC2DC; &#xC778;&#xC790; 3 &#xC18C; &#xB2E8;&#xC704; e)&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC911;&#xC7AC;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xCD1D; &#xB0B4;&#xBD80; &#xBC18;&#xC0AC; &#xD604;&#xBBF8;&#xACBD;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC;, &#xC6B0;&#xB9AC; endosomes Ca2 +&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xAC15;&#xB825; &#xD558; &#xAC8C; &#xADDC;&#xC81C;&#xB294; &#xB204;&#xAD6C;&#xC758; &#xBE60;&#xB978; &#xB9E4;&#xB9E4;&#xB97C; &#xD3EC;&#xD568; &#xD558;&#xB294; Cav1.2&#xC758; &#xC778;&#xAD6C; &#xC2DD;&#xBCC4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; Eif3e&#xC5D0; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xD558;&#xACE0; &#xCC44;&#xB110; &#xAD6D;&#xC81C;&#xD654; &#xBC0F; endosomal &#xBC00;&#xB9E4; &#xD65C;&#xB3D9; &#xC758;&#xC874;&#xC744; &#xC704;&#xD574; &#xD544;&#xC218;&#xC801; &#xC774;&#xB2E4;&#xB294; CaV1.2 II III &#xB8E8;&#xD504;&#xC5D0; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778;&#xC744; &#xC815;&#xC758; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xC5F0;&#xAD6C; &#xACB0;&#xACFC; &#xD65C;&#xB3D9; &#xC885;&#xC18D; &#xAD6D;&#xC81C;&#xD654; &#xBC0F; Cav1.2&#xC758; &#xC778;&#xC2E0; &#xB9E4;&#xB9E4;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;&#xC744; &#xC81C;&#xACF5; &#xD558; &#xACE0; &#xC0AC;&#xC774; Ca2 + &#xD56D;&#xC0C1;&#xC131; &#xBC0F; &#xD3EC;&#xC720;&#xB958; oncogene &#xD30C;&#xD3B8; &#xB9C1;&#xD06C; &#xC81C;&#xACF5;.

&#xC885;&#xC591; &#xC5B5;&#xC81C;&#xAE30; eIF3e CaV1.2 L &#xD0C0;&#xC785; &#xCE7C;&#xC298; &#xCC44;&#xB110;&#xC758; &#xCE7C;&#xC298; &#xC885;&#xC18D; &#xAD6D;&#xC81C;&#xD654; &#xC911;&#xC7AC;.

Voltaje canales de calcio (VGCCs) convertir la actividad el&#xE9;ctrica en el calcio (Ca2 +) las se&#xF1;ales que regulan la excitabilidad celular, la diferenciaci&#xF3;n y la conectividad. La magnitud y la cin&#xE9;tica de Ca2 + se&#xF1;ales en funci&#xF3;n del n&#xFA;mero de VGCCs en la membrana plasm&#xE1;tica, pero poco se sabe sobre la regulaci&#xF3;n de la expresi&#xF3;n en la superficie VGCC. Nos informan de que la actividad el&#xE9;ctrica produce la internalizaci&#xF3;n de la L-Ca2 + tipo de canal (LTC) Cav1.2 y que esto est&#xE1; mediado por la uni&#xF3;n con el supresor de tumores eIF3e/Int6 (factor de iniciaci&#xF3;n eucari&#xF3;tico 3 e subunidad). Usando microscop&#xED;a de reflexi&#xF3;n interna total, identificamos una poblaci&#xF3;n de Cav1.2 contiene endosomas cuyo r&#xE1;pido el tr&#xE1;fico est&#xE1; fuertemente regulada por Ca2 +. Se define un dominio en el bucle II-III de la Cav1.2 que se une eIF3e y es esencial para la actividad de la dependencia de la internalizaci&#xF3;n del canal y el tr&#xE1;fico tanto endosomal. Estos resultados proporcionan un mecanismo para la actividad dependiente de la internalizaci&#xF3;n y el tr&#xE1;fico de Cav1.2 y proporcionar un v&#xED;nculo tentadora entre la homeostasis de Ca2 + y un oncog&#xE9;n mam&#xED;feros.

Los supresores de tumores media la eIF3e calcio dependiente de internalizaci&#xF3;n del canal de calcio tipo L Cav1.2

&#x4E0E;&#x5FC3;&#x8870;&#x548C;&#x5FC3;&#x8840;&#x7BA1;&#x6B7B;&#x4EA1;&#x7684;&#x98CE;&#x9669;&#x589E;&#x52A0;&#x76F8;&#x5173;&#x7684;&#x75C5;&#x7406;&#x5FC3;&#x810F;&#x80A5;&#x5927;&#x3002;&#x9499; (Ca(2+))-&#x8C03;&#x8282;&#x7684;&#x57FA;&#x56E0;&#x8868;&#x8FBE;&#x7684;&#x80A5;&#x539A;&#x3001; &#x611F;&#x5E94;&#x81F3;&#x5173;&#x91CD;&#x8981;&#xFF0C;&#x4F46;&#x5B83;&#x4E0D;&#x77E5;&#x9053;&#x808C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5982;&#x4F55;&#x533A;&#x5206;&#x7684;&#x89C4;&#x7BA1;&#x6536;&#x7F29;&#x7684;&#x7ECF;&#x4FE1;&#x53F7;&#x548C;&#x90A3;&#x4E9B;&#x5BFC;&#x81F4;&#x5FC3;&#x808C;&#x80A5;&#x539A;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x7528;&#x4E8E;&#x4F53;&#x5916;&#x65B0;&#x751F;&#x5927;&#x9F20;&#x5FC3;&#x5BA4;&#x808C;&#x7EC6;&#x80DE; RNA &#x5E72;&#x6270; (RNAi) &#x5C4F;&#x5E55;&#x6267;&#x884C;&#x8C03;&#x89E3;&#x5BF9;&#x589E;&#x751F;&#x6027;&#x523A;&#x6FC0;&#x7684;&#x53CD;&#x5E94;&#x4F9D;&#x8D56;&#x4E8E; Ca(2+) &#x7684;&#x57FA;&#x56E0;&#x8868;&#x8FBE;&#x7684;&#x79BB;&#x5B50;&#x901A;&#x9053;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x786E;&#x5B9A;&#x4E86;&#x51E0;&#x4E2A;&#x94FE;&#x63A5;&#x5230;&#x80A5;&#x539A;&#x7684;&#x57FA;&#x56E0;&#x8868;&#x8FBE;&#xFF0C;&#x5305;&#x62EC;&#x77AC;&#x65F6;&#x53D7;&#x4F53;&#x7535;&#x4F4D;&#x7684;&#x79BB;&#x5B50;&#x901A;&#x9053; C3 (TrpC3)&#x3002;&#x5F53; RNAi &#x4ECB;&#x5BFC;&#x7EC4;&#x5408;&#x5F0F;&#x7684; TrpC3 TrpC3 &#x9AD8;&#x6548;&#x8868;&#x8FBE;&#x589E;&#x52A0; BNP &#x8868;&#x8FBE;&#x7684;&#x540C;&#x65F6;&#x5C06;&#x5982; A &#x578B;&#x6216; B &#x578B;&#x94A0;&#x5C3F;&#x80BD; (ANP &#x548C; BNP) &#x80A5;&#x539A;&#x76F8;&#x5173;&#x57FA;&#x56E0;&#x8868;&#x8FBE;&#x7684;&#x8DCC;&#x5E45;&#x5BF9;&#x8BB8;&#x591A;&#x80A5;&#x539A;&#x7684;&#x523A;&#x6FC0;&#x53CD;&#x5E94;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;&#x6781;&#x5927;&#x5730;&#x4FC3;&#x4F7F;&#x80A5;&#x539A;&#x7684;&#x523A;&#x6FC0;&#x589E;&#x52A0; TrpC3 mRNA &#x6C34;&#x5E73;&#x3002;&#x91CD;&#x8981;&#x7684;&#x662F;&#xFF0C;TrpC3 &#x7EC4;&#x5408;&#x5F0F;&#x5927;&#x5927;&#x51CF;&#x5C11;&#x4E86;&#x4E0E;&#x80A5;&#x539A;&#x76F8;&#x5173;&#x7684;&#x57FA;&#x56E0;&#x8868;&#x8FBE;&#xFF0C;&#x5B83;&#x5374;&#x5BF9;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x7684;&#x5927;&#x5C0F;&#x548C;&#x8DF3;&#x52A8;&#x7684;&#x5FC3;&#x808C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x5F71;&#x54CD;&#x53EF;&#x4EE5;&#x5FFD;&#x7565;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7ED3;&#x679C;&#x8868;&#x660E;&#x7ECF;&#x6D8C;&#x5165; TrpC3 &#x6E20;&#x9053;&#x589E;&#x52A0;&#x5FC3;&#x808C;&#x80A5;&#x539A;&#x76F8;&#x5173;&#x57FA;&#x56E0;&#x7684;&#x8F6C;&#x5F55;&#xFF0C;&#x4F46;&#x5E76;&#x672A;&#x89C4;&#x5B9A;&#x63A7;&#x5236;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x7684;&#x5927;&#x5C0F;&#x6216;&#x6536;&#x7F29;&#x7684;&#x4FE1;&#x53F7;&#x901A;&#x8DEF;&#x3002;&#x56E0;&#x6B64; TrpC3 &#x53EF;&#x80FD;&#x4EE3;&#x8868;&#x4E00;&#x4E2A;&#x91CD;&#x8981;&#x6CBB;&#x7597;&#x9776;&#x70B9;&#x6CBB;&#x7597;&#x5FC3;&#x808C;&#x80A5;&#x539A;&#x548C;&#x5FC3;&#x8870;&#x3002;

TrpC3 &#x89C4;&#x8303;&#x80A5;&#x539A;&#x76F8;&#x5173;&#x57FA;&#x56E0;&#x8868;&#x8FBE;&#x800C;&#x4E0D;&#x4F1A;&#x5F71;&#x54CD;&#x5FC3;&#x808C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x88AB;&#x6BB4;&#x6253;&#x6216;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x7684;&#x5927;&#x5C0F;&#x3002;

Pathological cardiac hypertrophy is associated with an increased risk of heart failure and cardiovascular mortality. Calcium (Ca(2+)) -regulated gene expression is essential for the induction of hypertrophy, but it is not known how myocytes distinguish between the Ca(2+) signals that regulate contraction and those that lead to cardiac hypertrophy. We used in vitro neonatal rat ventricular myocytes to perform an RNA interference (RNAi) screen for ion channels that mediate Ca(2+)-dependent gene expression in response to hypertrophic stimuli. We identified several ion channels that are linked to hypertrophic gene expression, including transient receptor potential C3 (TrpC3). RNAi-mediated knockdown of TrpC3 decreases expression of hypertrophy-associated genes such as the A- and B-type natriuretic peptides (ANP and BNP) in response to numerous hypertrophic stimuli, while TrpC3 overexpression increases BNP expression. Furthermore, stimuli that induce hypertrophy dramatically increase TrpC3 mRNA levels. Importantly, whereas TrpC3-knockdown strongly reduces gene expression associated with hypertrophy, it has a negligible effect on cell size and on myocyte beating. These results suggest that Ca(2+) influx through TrpC3 channels increases transcription of genes associated with hypertrophy but does not regulate the signaling pathways that control cell size or contraction. Thus TrpC3 may represent an important therapeutic target for the treatment of cardiac hypertrophy and heart failure.

TrpC3 regulates hypertrophy-associated gene expression without affecting myocyte beating or cell size.

Pathologique hypertrophie cardiaque est associ&#xE9;e &#xE0; un risque accru d&#x26;#39;insuffisance cardiaque et la mortalit&#xE9; cardio-vasculaire. Calcium expression (Ca (2 +)) du g&#xE8;ne r&#xE9;gul&#xE9; est essentiel pour l&#x26;#39;induction de l&#x26;#39;hypertrophie, mais on ne sait pas comment &#xE9;tablir une distinction entre les myocytes Ca (2 +) des signaux qui r&#xE9;gulent la contraction et celles qui conduisent &#xE0; une hypertrophie cardiaque. Nous avons utilis&#xE9; in vitro myocytes ventriculaires de rats nouveau-n&#xE9;s pour effectuer une interf&#xE9;rence ARN (ARNi) pour l&#x26;#39;&#xE9;cran des canaux ioniques qui m&#xE9;diate Ca (2 +) d&#xE9;pendant de l&#x26;#39;expression des g&#xE8;nes en r&#xE9;ponse &#xE0; des stimuli hypertrophiques. Nous avons identifi&#xE9; les canaux ioniques plusieurs qui sont li&#xE9;s &#xE0; l&#x26;#39;expression du g&#xE8;ne hypertrophique, y compris C3 r&#xE9;cepteur potentiel transitoire (TrpC3). ARNi &#xE0; m&#xE9;diation knockdown de TrpC3 diminue l&#x26;#39;expression des g&#xE8;nes associ&#xE9;s &#xE0; l&#x26;#39;hypertrophie-tels que le A-et B-type de peptides natriur&#xE9;tiques (ANP et BNP) en r&#xE9;ponse &#xE0; des stimuli hypertrophiques nombreux, tandis que la surexpression TrpC3 augmente l&#x26;#39;expression de BNP. En outre, les stimuli qui induisent l&#x26;#39;hypertrophie augmenter consid&#xE9;rablement TrpC3 niveaux d&#x26;#39;ARNm. Il est important, alors que TrpC3-knockdown r&#xE9;duit fortement l&#x26;#39;expression des g&#xE8;nes associ&#xE9;s &#xE0; l&#x26;#39;hypertrophie, il a un effet n&#xE9;gligeable sur la taille des cellules et sur coups myocytes. Ces r&#xE9;sultats sugg&#xE8;rent que Ca (2 +) l&#x26;#39;influx par TrpC3 canaux augmente la transcription de g&#xE8;nes associ&#xE9;s &#xE0; l&#x26;#39;hypertrophie, mais ne r&#xE9;glemente pas les voies de signalisation que la taille de cellule de contr&#xF4;le ou de la contraction. Ainsi TrpC3 peut repr&#xE9;senter une cible th&#xE9;rapeutique importante pour le traitement de l&#x26;#39;hypertrophie cardiaque et l&#x26;#39;insuffisance cardiaque.

TrpC3 R&#xE9;gule hypertrophie associ&#xE9;e &#xE0; l&#x26;#39;expression g&#xE9;nique sans affecter Beating myocytes ou taille de cellule

Pathologische Herzhypertrophie ist mit einem erh&ouml;hten Risiko von Herzinsuffizienz und kardiovaskul&auml;re Mortalit&auml;t verbunden. Kalzium (Ca(2+))-regulierter Genexpression ist essentiell f&uuml;r die Induktion von Hypertrophie, aber es ist nicht bekannt, wie Myocytes unterscheiden die Ca(2+) Signale, die Kontraktion zu regulieren, und jene, die zu einer Herzhypertrophie f&uuml;hren. Wir haben in-vitro-neonatalen Ratte ventrikul&auml;ren Myozyten einen RNA-Interferenz (RNAi)-Bildschirm f&uuml;r Ionenkan&auml;le durchf&uuml;hren, die Ca(2+)-abh&auml;ngigen Genexpression in Reaktion auf Hypertrophe Reize vermitteln. Wir identifiziert mehrere Ionenkan&auml;le, die Hypertrophe Genexpression, einschlie&szlig;lich transient Receptor Potential verkn&uuml;pft sind C3 (TrpC3). RNAi-vermittelte Niederschlag von TrpC3 verringert Ausdruck der Hypertrophie-assoziierten Gene wie die und B-Typ natriuretisches Peptid (ANP und BNP) als Reaktion auf zahlreiche Hypertrophe Reize, w&auml;hrend TrpC3 &Uuml;berexpression BNP Ausdruck erh&ouml;ht. Dar&uuml;ber hinaus erh&ouml;hen Impulse, die Hypertrophie dramatisch zu induzieren TrpC3 mRNA-Level. Allem w&auml;hrend TrpC3-Niederschlag Genexpression zugeordnete Hypertrophie stark reduziert, hat es einen vernachl&auml;ssigbaren Effekt auf Zellengr&ouml;&szlig;e und Muskelfaser schlagen. Diese Ergebnisse vorschlagen, dass Ca(2+) Zustrom durch TrpC3 Kan&auml;le erh&ouml;ht die Transkription von Genen, die zugeordnete Hypertrophie regelt nicht die Signalwege, die Zellgr&ouml;&szlig;e oder Kontraktion zu steuern. TrpC3 kann somit ein wichtiges therapeutisches Ziel f&uuml;r die Behandlung von Herzhypertrophie und Herzinsuffizienz vertreten.

TrpC3 regelt Hypertrophie-assoziierten Genexpression, ohne Auswirkungen auf die Muskelfaser Beating oder Zelle Gr&ouml;&szlig;e.

L&#39;ipertrofia cardiaca patologica &egrave; associata con un aumentato rischio di insufficienza cardiaca e mortalit&agrave; cardiovascolare. Calcio (Ca(2+))-espressione del gene regolato &egrave; essenziale per l&#39;induzione dell&#39;ipertrofia, ma non &egrave; noto come miociti distinguono tra i segnali Ca(2+) che regolano la contrazione e quelle che portano a ipertrofia cardiaca. Abbiamo usato i miociti ventricolari neonatali del ratto in vitro per eseguire uno schermo di RNA interference (RNAi) per i canali ionici che mediano l&#39;espressione del gene Ca(2+)-dipendente in risposta a stimoli ipertrofiche. Abbiamo individuato diversi canali ionici che sono legati all&#39;espressione genica ipertrofica, compreso il potenziale transient receptor C3 (TrpC3). RNAi-mediata atterramento di TrpC3 diminuisce espressione dei geni associati a ipertrofia come i peptidi natriuretici di tipo A e B (ANP e BNP) in risposta a numerosi stimoli ipertrofica, mentre aumenta la sovraespressione di TrpC3 espressione di BNP. Inoltre, stimoli che inducono ipertrofia drammaticamente aumentano i livelli di mRNA di TrpC3. Importante, considerando che TrpC3-atterramento riduce fortemente l&#39;espressione di gene associato a ipertrofia, ha un effetto trascurabile sulla dimensione delle cellule e sul battere del miocita. Questi risultati suggeriscono che Ca(2+) afflusso attraverso canali TrpC3 aumenta la trascrizione di geni associati a ipertrofia ma non regolano le vie di segnalazione che controllano la dimensione delle celle o contrazione. Cos&igrave; TrpC3 pu&ograve; rappresentare un importante obiettivo terapeutico per il trattamento dell&#39;ipertrofia cardiaca e insufficienza cardiaca.

TrpC3 regola l&#39;espressione genica associate all&#39;ipertrofia senza influire sulle dimensioni pestaggio o cellula del miocita.

&#x75C5;&#x7684;&#x306A;&#x5FC3;&#x80A5;&#x5927;&#x306F;&#x5FC3;&#x4E0D;&#x5168;&#x3084;&#x5FC3;&#x8840;&#x7BA1;&#x75BE;&#x60A3;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x6B7B;&#x4EA1;&#x306E;&#x30EA;&#x30B9;&#x30AF;&#x5897;&#x52A0;&#x306B;&#x95A2;&#x9023;&#x4ED8;&#x3051;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;&#xFF08;Ca&#xFF08;2 +&#xFF09;&#xFF09;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x767A;&#x73FE;&#x306F;&#x3001;&#x80A5;&#x5927;&#x306E;&#x8A98;&#x5C0E;&#x306B;&#x4E0D;&#x53EF;&#x6B20;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x304C;&#x3001;&#x305D;&#x308C;&#x306F;&#x7B4B;&#x304C;&#x53CE;&#x7E2E;&#x3057;&#x3001;&#x5FC3;&#x81D3;&#x80A5;&#x5927;&#x306B;&#x3064;&#x306A;&#x304C;&#x308B;&#x3082;&#x306E;&#x3092;&#x898F;&#x5236;&#x3059;&#x308B;&#x306E;Ca&#xFF08;2 +&#xFF09;&#x306E;&#x4FE1;&#x53F7;&#x3092;&#x533A;&#x5225;&#x3059;&#x308B;&#x65B9;&#x6CD5;&#x306F;&#x77E5;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x306A;&#x3044;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;&#x80A5;&#x5927;&#x523A;&#x6FC0;&#x306B;&#x5FDC;&#x7B54;&#x3057;&#x3066;&#x305D;&#x306E;&#x4EF2;&#x4ECB;&#x306E;Ca&#xFF08;2 +&#xFF09;&#x4F9D;&#x5B58;&#x6027;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x767A;&#x73FE;&#x30A4;&#x30AA;&#x30F3;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;RNA&#x5E72;&#x6E09;&#xFF08;RNAi&#xFF09;&#x306E;&#x753B;&#x9762;&#x3092;&#x5B9F;&#x884C;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;in vitro&#x3067;&#x3001;&#x65B0;&#x751F;&#x5150;&#x30E9;&#x30C3;&#x30C8;&#x5FC3;&#x5BA4;&#x7B4B;&#x7D30;&#x80DE;&#x3067;&#x4F7F;&#x7528;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;&#x4E00;&#x904E;&#x6027;&#x53D7;&#x5BB9;&#x5668;&#x96FB;&#x4F4D;C3&#xFF08;TRPC3&#xFF09;&#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x80A5;&#x539A;&#x306E;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x767A;&#x73FE;&#x306B;&#x30EA;&#x30F3;&#x30AF;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3044;&#x304F;&#x3064;&#x304B;&#x306E;&#x30A4;&#x30AA;&#x30F3;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x3092;&#x540C;&#x5B9A;&#x3057;&#x305F;&#x3002; TRPC3&#x306E;&#x904E;&#x5270;&#x767A;&#x73FE;&#x306F;BNP&#x306E;&#x767A;&#x73FE;&#x3092;&#x5897;&#x52A0;&#x3055;&#x305B;&#x306A;&#x304C;&#x3089;&#x3001;TRPC3&#x306E;RNAi&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x30CE;&#x30C3;&#x30AF;&#x30C0;&#x30A6;&#x30F3;&#x306F;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306A;&#x591A;&#x6570;&#x306E;&#x80A5;&#x5927;&#x523A;&#x6FC0;&#x306B;&#x5FDC;&#x7B54;&#x3057;&#x3066;&#x306E;A&#x304A;&#x3088;&#x3073;B&#x578B;&#x30CA;&#x30C8;&#x30EA;&#x30A6;&#x30E0;&#x5229;&#x5C3F;&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C9;&#xFF08;ANP&#x304A;&#x3088;&#x3073;BNP&#xFF09;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306A;&#x80A5;&#x5927;&#x95A2;&#x9023;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x767A;&#x73FE;&#x3092;&#x6E1B;&#x5C11;&#x3055;&#x305B;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x3001;&#x80A5;&#x5927;&#x3092;&#x8A98;&#x767A;&#x3059;&#x308B;&#x523A;&#x6FC0;&#x304C;&#x5287;&#x7684;&#x306B;TRPC3 mRNA&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x3092;&#x5897;&#x52A0;&#x3055;&#x305B;&#x308B;&#x3002; TRPC3&#x30CE;&#x30C3;&#x30AF;&#x30C0;&#x30A6;&#x30F3;&#x304C;&#x5F37;&#x304F;&#x80A5;&#x5927;&#x306B;&#x95A2;&#x9023;&#x3057;&#x305F;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x767A;&#x73FE;&#x3092;&#x6E1B;&#x5C11;&#x3055;&#x305B;&#x308B;&#x4E00;&#x65B9;&#x3001;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x306E;&#x306F;&#x3001;&#x305D;&#x308C;&#x306F;&#x3001;&#x30BB;&#x30EB;&#x30B5;&#x30A4;&#x30BA;&#x306E;&#x30AA;&#x30F3;&#x3068;&#x5FC3;&#x7B4B;&#x7D30;&#x80DE;&#x62CD;&#x52D5;&#x306B;&#x306F;&#x307B;&#x3068;&#x3093;&#x3069;&#x52B9;&#x679C;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x306F;&#x793A;&#x5506;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x306E;Ca&#xFF08;2 +&#xFF09;TRPC3&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x3066;&#x6D41;&#x5165;&#x304C;&#x80A5;&#x5927;&#x306B;&#x95A2;&#x9023;&#x3059;&#x308B;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x8EE2;&#x5199;&#x3092;&#x5897;&#x52A0;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x304C;&#x3001;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#x7D4C;&#x8DEF;&#x3092;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x3057;&#x306A;&#x3044;&#x30B3;&#x30F3;&#x30C8;&#x30ED;&#x30FC;&#x30EB;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x5927;&#x304D;&#x3055;&#x3084;&#x53CE;&#x7E2E;&#x3002;&#x3057;&#x305F;&#x304C;&#x3063;&#x3066;&#x3001;TRPC3&#x306F;&#x3001;&#x5FC3;&#x80A5;&#x5927;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x5FC3;&#x4E0D;&#x5168;&#x306E;&#x6CBB;&#x7642;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x6CBB;&#x7642;&#x6A19;&#x7684;&#x3092;&#x8868;&#x3059;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x308B;&#x3002;

TRPC3&#x306F;&#x3001;&#x7B4B;&#x7D30;&#x80DE;&#x53E9;&#x89E3;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x30BB;&#x30EB;&#x306E;&#x30B5;&#x30A4;&#x30BA;&#x306B;&#x5F71;&#x97FF;&#x3092;&#x4E0E;&#x3048;&#x305A;&#x306B;&#x80A5;&#x5927;&#x95A2;&#x9023;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x767A;&#x73FE;&#x3092;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x3059;&#x308B;

&#xBCD1; &#xC801;&#xC778; &#xC2EC;&#xC7A5; &#xBE44; &#xB300; &#xC2EC;&#xC7A5; &#xB9C8;&#xBE44;&#xC640; &#xC2EC;&#xD608; &#xAD00; &#xC0AC;&#xB9DD;&#xB960;&#xC758; &#xC704;&#xD5D8;&#xC774; &#xC99D;&#xAC00;&#xC640; &#xC5F0;&#xACB0; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xCE7C;&#xC298; (Ca(2+))-&#xB808; &#xADE4; &#xB808;&#xC774;&#xD2B8; &#xB41C; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xBC1C;&#xD604;&#xC758; &#xBE44; &#xB300;, &#xC720;&#xB3C4; &#xD544;&#xC218;&#xC801; &#xC774;&#xB2E4; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xC5B4;&#xB5BB;&#xAC8C; myocytes &#xC218;&#xCD95; &#xC870;&#xC808; &#xD558;&#xB294; Ca(2+) &#xC2E0;&#xD638; &#xBC0F; &#xC2EC;&#xC7A5; &#xBE44; &#xB300;&#xB97C;&#xC774; &#xB04C; &#xAD6C;&#xBD84;&#xC740; &#xC54C;&#xB824;&#xC838; &#xC788;&#xC9C0; &#xC54A;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xCCB4; &#xC678; &#xC2E0;&#xC0DD;&#xC544; &#xC950; &#xC2EC; &#xC2E4; myocytes hypertrophic &#xC790;&#xADF9;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC751;&#xB2F5;&#xC5D0;&#xC11C; Ca(2+) &#xC885;&#xC18D; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xBC1C;&#xD604;&#xC744; &#xC911;&#xC7AC; &#xD558;&#xB294; &#xC774;&#xC628; &#xCC44;&#xB110;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; RNA &#xAC04;&#xC12D; (RNAi) &#xD654;&#xBA74;&#xC744; &#xC218;&#xD589; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC77C;&#xC2DC;&#xC801; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; &#xC7A0;&#xC7AC;&#xB825;&#xC744; &#xD3EC;&#xD568; &#xD558; &#xC5EC; hypertrophic &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xBC1C;&#xD604;&#xC5D0; &#xC5F0;&#xACB0; &#xB418;&#xB294; &#xC5EC;&#xB7EC; &#xC774;&#xC628; &#xCC44;&#xB110; &#xC2DD;&#xBCC4; C3 (TrpC3). RNAi &#xC911;&#xC7AC; &#xCD5C;&#xC800; Trpc3&#xC758; TrpC3 overexpression &#xB3D9;&#xC544; &#xC2DD; &#xC99D;&#xAC00; &#xD558;&#xB294; &#xB3D9;&#xC548; &#xC218;&#xB9CE;&#xC740; hypertrophic &#xC790;&#xADF9;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC751;&#xB2F5;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD3A9; &#xD2F0;&#xB294; A&#xC640; B &#xD0C0;&#xC785; natriuretic &#xB4DC; (ANP&#xC640; BNP) &#xAC19;&#xC740; &#xBE44; &#xAD00;&#xB828; &#xB41C; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC758; &#xD45C;&#xC815;&#xC744; &#xAC10;&#xC18C;. &#xB610;&#xD55C;, &#xADF9;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xBE44; &#xB300;&#xB97C; &#xC720;&#xBC1C; &#xD558;&#xB294; &#xC790;&#xADF9; &#xC99D;&#xAC00; TrpC3 mRNA &#xC218;&#xC900;. &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xAC83;&#xC740;, &#xBC18;&#xBA74;&#xC5D0; TrpC3 &#xCD5C;&#xC800; &#xAC15;&#xB825; &#xD558; &#xAC8C; &#xBE44; &#xB300;&#xC640; &#xAD00;&#xB828; &#xB41C; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xBC1C;&#xD604; &#xAC10;&#xC18C;, &#xC140; &#xD06C;&#xAE30;&#xC640; myocyte &#xBC15;&#xB3D9; &#xBB34;&#xC2DC;&#xD560; &#xC218; &#xC601;&#xD5A5;&#xC744; &#xC8FC;&#xC9C0;. &#xC774; &#xACB0;&#xACFC; TrpC3 &#xCC44;&#xB110;&#xC744; &#xD1B5;&#xD574; Ca(2+) &#xC720;&#xC785; &#xBE44; &#xB300;&#xC640; &#xAD00;&#xB828; &#xB41C; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC758; &#xC804;&#xC0AC;&#xB97C; &#xC99D;&#xAC00; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xC140; &#xD06C;&#xAE30; &#xB610;&#xB294; &#xC218;&#xCD95; &#xC81C;&#xC5B4; &#xC2E0;&#xD638; &#xACBD;&#xB85C; &#xADDC;&#xC81C; &#xD558;&#xC9C0; &#xC54A;&#xB294; &#xAC83;&#xC774; &#xC88B;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB530;&#xB77C;&#xC11C; TrpC3 &#xC2EC;&#xC7A5; &#xBE44; &#xB300; &#xBC0F; &#xC2EC;&#xBD80; &#xCE58;&#xB8CC;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xCE58;&#xB8CC; &#xBAA9;&#xD45C;&#xB97C; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0BC; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

TrpC3 myocyte &#xBC15;&#xB3D9; &#xB610;&#xB294; &#xC140; &#xD06C;&#xAE30;&#xB97C; &#xC601;&#xD5A5;&#xC744; &#xC8FC;&#xC9C0; &#xC54A;&#xACE0; &#xBE44; &#xB300; &#xAD00;&#xB828; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xBC1C;&#xD604;&#xC744; &#xC870;&#xC808;.

Hipertrofia card&#xED;aca patol&#xF3;gica se asocia con un mayor riesgo de insuficiencia card&#xED;aca y la mortalidad cardiovascular. El calcio (Ca (2 +)) la expresi&#xF3;n g&#xE9;nica regulada es esencial para la inducci&#xF3;n de la hipertrofia, pero no se sabe c&#xF3;mo distinguir entre los miocitos Ca (2 +) se&#xF1;ales que regulan la contracci&#xF3;n y las que conducen a la hipertrofia card&#xED;aca. Hemos utilizado in vitro neonatal miocitos ventriculares de rata para llevar a cabo un ARN de interferencia (RNAi), pantalla de los canales i&#xF3;nicos que median Ca (2 +) dependiente de la expresi&#xF3;n g&#xE9;nica en respuesta a est&#xED;mulos hipertr&#xF3;ficos. Se identificaron varios canales de iones que est&#xE1;n vinculadas a la expresi&#xF3;n g&#xE9;nica hipertr&#xF3;fica, incluyendo C3 transitoria receptor potencial (TrpC3). RNAi mediada desmontables de TrpC3 disminuye la expresi&#xF3;n de la hipertrofia asociados-genes, como el A-y B-tipo de los p&#xE9;ptidos natriur&#xE9;ticos (ANP y BNP), en respuesta a est&#xED;mulos hipertr&#xF3;ficos numerosas, mientras que la sobreexpresi&#xF3;n TrpC3 aumenta la expresi&#xF3;n del BNP. Por otra parte, los est&#xED;mulos que inducen la hipertrofia aumentar dr&#xE1;sticamente los niveles de mRNA TrpC3. Es importante destacar que, mientras que TrpC3-ca&#xED;da reduce fuertemente la expresi&#xF3;n de genes asociados con la hipertrofia, tiene un efecto insignificante en el tama&#xF1;o celular y en la paliza de miocitos. Estos resultados sugieren que el Ca (2 +) a trav&#xE9;s de flujo TrpC3 canales aumenta la transcripci&#xF3;n de los genes asociados con la hipertrofia, pero no regula las v&#xED;as de se&#xF1;alizaci&#xF3;n que controlan el tama&#xF1;o celular o contracci&#xF3;n. As&#xED; TrpC3 puede representar una importante diana terap&#xE9;utica para el tratamiento de la hipertrofia card&#xED;aca e insuficiencia card&#xED;aca.

TrpC3 Regula la hipertrofia asociada con la expresi&#xF3;n g&#xE9;nica sin afectar Golpiza miocitos o Tama&#xF1;o de la c&#xE9;lula

&#x5E97;&#x9762;&#x5F0F;&#x7ECF;&#x8425;&#x7ECF;&#x6E20;&#x9053;&#x4ECE;&#x5185;&#x8D28;&#x7F51; (ER) &#x7684;&#x7ECF;&#x8017;&#x5C3D;&#x6FC0;&#x6D3B; nonexcitable &#x7EC6;&#x80DE;&#x4E3B;&#x8981;&#x7ECF;&#x5165;&#x53E3;&#x901A;&#x8DEF;&#xFF0C;T &#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x6D3B;&#x5316;&#x548C;&#x81EA;&#x9002;&#x5E94;&#x514D;&#x75AB;&#x529F;&#x80FD;&#x7684;&#x5173;&#x952E;&#x3002;&#x5B58;&#x50A8;&#x8017;&#x5C3D;&#x540E; ER &#x7ECF;&#x4F20;&#x611F;&#x5668; STIM1 &#x548C;&#x6052;&#x6E29;&#x6052;&#x6E7F;&#x7A7A;&#x8C03;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x901A;&#x9053;&#x86CB;&#x767D; Orai1 &#x91CD;&#x65B0;&#x5206;&#x914D;&#x5230; ER &#x7B49;&#x79BB;&#x5B50;&#x819C; &#xFF08;PM&#xFF09; &#x4EA4;&#x754C;&#x5904;&#xFF0C;&#x4F46; STIM1 &#x5982;&#x4F55;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x5143;&#x4FE1;&#x9053;&#x5728;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x5730;&#x70B9;&#x7684;&#x6839;&#x672C;&#x95EE;&#x9898;&#x662F;&#x6CA1;&#x6709;&#x5F97;&#x5230;&#x89E3;&#x51B3;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x627E;&#x51FA;&#x6700;&#x8D77;&#x7801;&#x7684;&#x3001; &#x9AD8;&#x5EA6;&#x4FDD;&#x5B88; 107 aa &#x6052;&#x6E29;&#x6052;&#x6E7F;&#x7A7A;&#x8C03;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x57DF; (CAD) &#x7684; STIM1&#xFF0C;&#x5C06;&#x76F4;&#x63A5;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x5230; Orai1 &#x7684;&#x603B;&#x7AD9;&#xFF0C;N &#x548C; C &#x7684;&#x6052;&#x6E29;&#x6052;&#x6E7F;&#x7A7A;&#x8C03;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x901A;&#x9053;&#x6253;&#x5F00;&#x3002;&#x7EAF;&#x5316;&#x7684; CAD &#x5F62;&#x6210;&#x56DB;&#x805A;&#x4F53;&#xFF0C;&#x96C6;&#x7FA4;&#x6052;&#x6E29;&#x6052;&#x6E7F;&#x7A7A;&#x8C03;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x7684;&#x6E20;&#x9053;&#xFF0C;&#x4F46; STIM1 &#x7A81;&#x53D8;&#x4F53;&#x7684;&#x5206;&#x6790;&#x8868;&#x660E;&#xFF0C;&#x901A;&#x9053;&#x805A;&#x7C7B;&#x662F;&#x4E0D;&#x8DB3;&#x591F;&#x7684;&#x901A;&#x9053;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7814;&#x7A76;&#x5EFA;&#x7ACB;&#x5728;&#x5176;&#x4E2D;&#x76F4;&#x63A5;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x5230; Orai1 STIM1 &#x7684;&#x9A71;&#x52A8;&#x5668;&#x7684;&#x7D2F;&#x79EF;&#x548C;&#x6D3B;&#x5316;&#x7684;&#x6052;&#x6E29;&#x6052;&#x6E7F;&#x7A7A;&#x8C03;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x6E20;&#x9053; ER &#x4E0B;&#x5348;&#x8DEF;&#x53E3;&#x5E97;&#x9762;&#x5F0F;&#x7ECF;&#x8425;&#x7ECF;&#x6761;&#x76EE;&#x7684;&#x5206;&#x5B50;&#x673A;&#x5236;&#x3002;

STIM1 &#x96C6;&#x7FA4;&#x548C;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x6052;&#x6E29;&#x6052;&#x6E7F;&#x7A7A;&#x8C03;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x901A;&#x8FC7;&#x76F4;&#x63A5;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x5230; Orai1 &#x80DE;&#x6D46;&#x57DF;&#x7684;&#x6E20;&#x9053;&#x3002;

Store-operated Ca(2+) channels activated by the depletion of Ca(2+) from the endoplasmic reticulum (ER) are a major Ca(2+) entry pathway in nonexcitable cells and are essential for T cell activation and adaptive immunity. After store depletion, the ER Ca(2+) sensor STIM1 and the CRAC channel protein Orai1 redistribute to ER-plasma membrane (PM) junctions, but the fundamental issue of how STIM1 activates the CRAC channel at these sites is unresolved. Here, we identify a minimal, highly conserved 107-aa CRAC activation domain (CAD) of STIM1 that binds directly to the N and C termini of Orai1 to open the CRAC channel. Purified CAD forms a tetramer that clusters CRAC channels, but analysis of STIM1 mutants reveals that channel clustering is not sufficient for channel activation. These studies establish a molecular mechanism for store-operated Ca(2+) entry in which the direct binding of STIM1 to Orai1 drives the accumulation and the activation of CRAC channels at ER-PM junctions.

STIM1 clusters and activates CRAC channels via direct binding of a cytosolic domain to Orai1.

Store-exploit&#xE9; Ca (2 +) des canaux activ&#xE9;s par la d&#xE9;pl&#xE9;tion de Ca (2 +) &#xE0; partir du r&#xE9;ticulum endoplasmique (RE) sont un important Ca (2 +) voie d&#x26;#39;entr&#xE9;e dans les cellules nonexcitable et sont essentiels pour l&#x26;#39;activation des cellules T et l&#x26;#39;immunit&#xE9; adaptative. Apr&#xE8;s l&#x26;#39;&#xE9;puisement magasin, le Ca ER (2 +) capteur STIM1 et le canal CRAC prot&#xE9;ines Orai1 redistribuer aux ER-membrane plasmatique (PM) jonctions, mais la question fondamentale de savoir comment STIM1 active le canal CRAC sur ces sites n&#x26;#39;est pas r&#xE9;solu. Ici, nous identifions un minimum, hautement conserv&#xE9; 107-AA domaine d&#x26;#39;activation CRAC (CAD) de STIM1 qui se lie directement &#xE0; la N et C terminales des Orai1 pour ouvrir le canal CRAC. Purifi&#xE9;e CAD forme un t&#xE9;tram&#xE8;re que les grappes canaux CRAC, mais l&#x26;#39;analyse des mutants STIM1 r&#xE9;v&#xE8;le que le regroupement de canal n&#x26;#39;est pas suffisant pour l&#x26;#39;activation du canal. Ces &#xE9;tudes &#xE9;tablissent un m&#xE9;canisme mol&#xE9;culaire pour le magasin fonctionnant Ca (2 +) entr&#xE9;e dans laquelle la liaison directe de STIM1 &#xE0; Orai1 lecteurs de l&#x26;#39;accumulation et l&#x26;#39;activation des canaux CRAC &#xE0; ER-PM jonctions.

STIM1 Clusters et active les canaux CRAC via une liaison directe d&#x26;#39;un domaine cytosolique &#xE0; Orai1

Speicher zu bet&auml;tigende Ca(2+) Kan&auml;le aktiviert durch die Ersch&ouml;pfung der Ca(2+) aus dem Endoplasmatischen Retikulum (ER) sind eine wichtige Ca(2+) Eintrag Weg in nonexcitable Zellen und unverzichtbar f&uuml;r T-ZELLAKTIVIERUNG und adaptiven Immunit&auml;t. Nach Ersch&ouml;pfung der Speicher der ER-Ca(2+)-Sensor STIM1 und die CRAC-Kanal-Protein Orai1 verteilen Sie an ER-Plasma Membran (PM) Kreuzungen, aber das Grundproblem der wie STIM1 den CRAC-Kanal an diesen Standorten aktiviert ist ungel&ouml;st. Hier erkennen wir eine minimal, stark konservierten 107-aa CRAC Aktivierungsdom&auml;ne (CAD) des STIM1, das direkt an der N und C Termini des Orai1 bindet den CRAC-Kanal zu &ouml;ffnen. Gereinigte CAD bildet ein Tetramer, das CRAC Kan&auml;le Technologiegruppe, aber Analyse STIM1 Mutanten zeigt, dass Kanal clustering nicht ausreichend f&uuml;r die Kanal-Aktivierung ist. Diese Studien stellen eine molekulare Mechanismen f&uuml;r Informationsspeicher zu bet&auml;tigende Ca(2+) Eintrag in dem die direkte Bindung des STIM1 an Orai1 die Ansammlung und die Aktivierung von CRAC Kan&auml;le an ER-PM Kreuzungen f&auml;hrt.

STIM1-Clustern und aktiviert CRAC-Kan&auml;le &uuml;ber direkte Bindung ein cytosolisches Domain auf Orai1.

Archivio-operati Ca(2+) canali attivati dall&#39;esaurimento delle Ca(2+) dal reticolo endoplasmatico (ER) sono una via principale di entrata Ca(2+) nelle cellule nonexcitable e sono essenziali per l&#39;attivazione delle cellule T e l&#39;immunit&agrave; adattativa. Dopo deplezione del negozio, il sensore Ca(2+) ER STIM1 e la proteina canale CRAC Orai1 ridistribuire a giunzioni di ER-plasma membrana (PM), ma il problema fondamentale di come STIM1 attiva il canale CRAC in questi siti &egrave; irrisolto. Qui, ci identifichiamo un minimo, altamente conservato 107-aa CRAC attivazione dominio (CAD) di STIM1 che lega direttamente alla stazione termini di Orai1 N e C per aprire il canale CRAC. Purificato CAD costituisce un tetramero che canali CRAC dei cluster, ma analisi di mutanti STIM1 rivelano che canale clustering non &egrave; sufficiente per l&#39;attivazione del canale. Questi studi stabiliscono un meccanismo molecolare per negozio gestito Ca(2+) entrata in cui il legame diretto di STIM1 per Orai1 spinge l&#39;accumulo e l&#39;attivazione dei canali di CRAC agli incroci di ER-PM.

STIM1 cluster e attiva i canali CRAC tramite binding diretto di un dominio citosolico a Orai1.

&#x5C0F;&#x80DE;&#x4F53;&#xFF08;ER&#xFF09;&#x304B;&#x3089;&#x306E;Ca&#x306E;&#x67AF;&#x6E07;&#xFF08;2 +&#xFF09;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x3055;&#x308C;&#x3001;&#x30B9;&#x30C8;&#x30A2;&#x4F5C;&#x52D5;&#x6027;Ca&#xFF08;2 +&#xFF09;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x306F;&#x3001;&#x975E;&#x8208;&#x596E;&#x6027;&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x4E3B;&#x8981;&#x306A;Ca&#xFF08;2 +&#xFF09;&#x306E;&#x4FB5;&#x5165;&#x7D4C;&#x8DEF;&#x3067;&#x3042;&#x308A;&#x3001;T&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x3068;&#x9069;&#x5FDC;&#x514D;&#x75AB;&#x306B;&#x5FC5;&#x9808;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3002;&#x30B9;&#x30C8;&#x30A2;&#x306E;&#x67AF;&#x6E07;&#x3057;&#x305F;&#x5F8C;&#x3001;ER-&#x7D30;&#x80DE;&#x819C;&#xFF08;PM&#xFF09;&#x306E;&#x63A5;&#x5408;&#x306B;ER&#x306E;Ca&#xFF08;2 +&#xFF09;&#x30BB;&#x30F3;&#x30B5;&#x30FC;STIM1&#x3068;CRAC&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;Orai1&#x914D;&#x5E03;&#x304C;&#x3001;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x3067;CRAC&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x3092;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x3059;&#x308B;&#x65B9;&#x6CD5;STIM1&#x306E;&#x6839;&#x672C;&#x7684;&#x306A;&#x554F;&#x984C;&#x306F;&#x672A;&#x89E3;&#x6C7A;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x3001;CRAC&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x3092;&#x958B;&#x304F;&#x305F;&#x3081;&#x306B;N&#x3068;Orai1&#x306E;C&#x672B;&#x7AEF;&#x306B;&#x76F4;&#x63A5;&#x7D50;&#x5408;&#x3059;&#x308B;STIM1&#x6700;&#x5C0F;&#x9650;&#x306E;&#x3001;&#x9AD8;&#x5EA6;&#x306B;&#x4FDD;&#x5B58;&#x3055;&#x308C;&#x305F;107-AA CRAC&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#xFF08;CAD&#xFF09;&#x3092;&#x8B58;&#x5225;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x7CBE;&#x88FD;&#x3055;&#x308C;&#x305F;CAD&#x306F;&#x3001;&#x30AF;&#x30E9;&#x30B9;&#x30BF;CRAC&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x306E;&#x305D;&#x306E;&#x56DB;&#x91CF;&#x4F53;&#x3092;&#x5F62;&#x6210;&#x3059;&#x308B;&#x304C;&#x3001;STIM1&#x5909;&#x7570;&#x4F53;&#x306E;&#x5206;&#x6790;&#x306F;&#x3001;&#x305D;&#x306E;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x306E;&#x30AF;&#x30E9;&#x30B9;&#x30BF;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;&#x306F;&#x3001;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x5341;&#x5206;&#x3067;&#x306F;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x304C;&#x308F;&#x304B;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x7814;&#x7A76;&#x306F;&#x3001;STIM1&#x306B;Orai1&#x30C9;&#x30E9;&#x30A4;&#x30D6;&#x306E;&#x84C4;&#x7A4D;&#x3068;ER-PM&#x63A5;&#x5408;&#x90E8;CRAC&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x306B;&#x76F4;&#x63A5;&#x7D50;&#x5408;&#x30B9;&#x30C8;&#x30A2;&#x4F5C;&#x52D5;&#x6027;Ca&#xFF08;2 +&#xFF09;&#x30A8;&#x30F3;&#x30C8;&#x30EA;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x5206;&#x5B50;&#x6A5F;&#x69CB;&#x3092;&#x78BA;&#x7ACB;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

STIM1&#x30AF;&#x30E9;&#x30B9;&#x30BF;&#x3068;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6;Orai1&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x8CEA;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x306E;&#x76F4;&#x63A5;&#x7D50;&#x5408;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x3066;CRAC&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;

Endoplasmic &#xADF8;&#xBB3C; (&#xC751;&#xAE09;&#xC2E4;)&#xC5D0;&#xC11C; ca(2+)&#xC758; &#xACE0;&#xAC08;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; Ca(2+) &#xCC44;&#xB110; &#xC800;&#xC7A5;&#xC18C; &#xC6B4;&#xC601; nonexcitable &#xC140;&#xC758; &#xC8FC;&#xC694; Ca(2+) &#xD56D;&#xBAA9; &#xACBD;&#xB85C; &#xC774;&#xBA70; T &#xC138;&#xD3EC; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xBC0F; &#xC801;&#xC751; &#xBA74;&#xC5ED;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xD544;&#xC218;. &#xC800;&#xC7A5;&#xC18C; &#xACE0;&#xAC08; &#xD6C4; &#xC751;&#xAE09;&#xC2E4; Ca(2+) &#xC13C;&#xC11C; STIM1 &#xBC0F; CRAC &#xCC44;&#xB110; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; Orai1 ER &#xD50C;&#xB77C;&#xC988;&#xB9C8; &#xBA64;&#xBE0C;&#xB808;&#xC778; (&#xC624;&#xD6C4;) &#xC811;&#xD569;&#xBD80;&#xB97C; &#xC7AC;&#xBC30;&#xD3EC; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; stim1&#xC774;&#xC774; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8;&#xC5D0;&#xC11C; CRAC &#xCC44;&#xB110;&#xC744; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xD558;&#xB294; &#xBC29;&#xBC95;&#xC758; &#xADFC;&#xBCF8;&#xC801;&#xC778; &#xBB38;&#xC81C;&#xAC00; &#xD574;&#xACB0; &#xB418;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC73C;&#xBA74;. &#xC5EC;&#xAE30;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xCD5C;&#xC18C;&#xD55C;&#xC758; &#xACE0;&#xB3C4;&#xB85C; &#xBCF4;&#xC874; 107 aa CRAC &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778; &#xC2DD;&#xBCC4; (CAD) CRAC &#xCC44;&#xB110;&#xC744; &#xC5F4;&#xB824;&#xBA74; Orai1 N &#xBC0F; C &#xD14C;&#xB974;&#xBBF8;&#xB2C8;&#xC5D0; &#xC9C1;&#xC811; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xD558;&#xB294; stim1&#xC758;. &#xC21C;&#xD654; &#xB41C; CAD &#xC591;&#xC2DD; CRAC &#xCC44;&#xB110; &#xD074;&#xB7EC;&#xC2A4;&#xD130; tetramer &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; STIM1 &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774;&#xC758; &#xBD84;&#xC11D; &#xACB0;&#xACFC; &#xCC44;&#xB110; &#xD074;&#xB7EC;&#xC2A4;&#xD130;&#xB9C1; &#xCC44;&#xB110; &#xD65C;&#xC131;&#xD654;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xCDA9;&#xBD84; &#xD55C;&#xC740;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xB294; orai1&#xC5D0; stim1&#xC758; &#xC9C1;&#xC811; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xB4DC;&#xB77C;&#xC774;&#xBE0C; &#xCD95;&#xC801; &#xBC0F; CRAC &#xCC44;&#xB110;&#xC758; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xC751;&#xAE09;&#xC2E4; &#xC624;&#xD6C4; &#xC811;&#xD569;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC0C1;&#xC810; &#xC6B4;&#xC601; Ca(2+) &#xD56D;&#xBAA9;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xBD84;&#xC790; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;&#xC744; &#xC124;&#xC815; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

STIM1 &#xD074;&#xB7EC;&#xC2A4;&#xD130; &#xBC0F; orai1&#xC5D0; cytosolic &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778;&#xC758; &#xC9C1;&#xC811; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xC744; &#xD1B5;&#xD574; CRAC &#xCC44;&#xB110; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Tienda de accionamiento de Ca (2 +) canales activados por el agotamiento de Ca (2 +) del ret&#xED;culo endoplasm&#xE1;tico (ER) son un importante Ca (2 +) v&#xED;a de entrada en las c&#xE9;lulas no excitables y son esenciales para la activaci&#xF3;n de c&#xE9;lulas T y la inmunidad adaptativa. Tras el agotamiento de la tienda, la sala de emergencia de Ca (2 +) del sensor STIM1 y el canal CRAC prote&#xED;nas Orai1 redistribuir a ER-la membrana plasm&#xE1;tica (PM) los cruces, pero la cuesti&#xF3;n fundamental de c&#xF3;mo STIM1 activa el canal CRAC en estos sitios no se ha resuelto. En este sentido, identificar a un m&#xED;nimo, altamente conservada de 107 aa dominio de activaci&#xF3;n CRAC (CAD) de STIM1 que se une directamente a la N y C terminales de Orai1 para abrir el canal CRAC. Purificada CAD forma un tetr&#xE1;mero que racimos canales CRAC, pero el an&#xE1;lisis de mutantes STIM1 revela que la agrupaci&#xF3;n de canal no es suficiente para la activaci&#xF3;n del canal. Estos estudios establecen un mecanismo molecular para la tienda que funciona con Ca (2 +) entrada en la que la uni&#xF3;n directa de STIM1 Orai1 de las unidades de la acumulaci&#xF3;n y la activaci&#xF3;n de los canales CRAC en el ER-AM uniones.

STIM1 Clusters y activa los canales CRAC trav&#xE9;s de la uni&#xF3;n directa de un dominio citos&#xF3;lico a Orai1

Ca(2+) &#x4F9D;&#x8D56;&#x706D;&#x6D3B; (CDI) &#x662F;&#x4E00;&#x4E2A;&#x5173;&#x952E;&#x8C03;&#x8282;&#x5668;&#x548C;&#x7ECF;&#x7684;&#x91CA;&#x653E;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x7ECF; (&#x5143;) &#x4FE1;&#x9053;&#xFF0C;&#x539F;&#x578B;&#x7684;&#x5E97;&#x9762;&#x5F0F;&#x7ECF;&#x8425;&#x7ECF;&#x901A;&#x9053;&#x7684;&#x6807;&#x5FD7;&#x3002;&#x867D;&#x7136;&#x5185;&#x8D28;&#x7F51;&#x7ECF;&#x4F20;&#x611F;&#x5668; STIM1 &#x548C; Orai1 &#x901A;&#x9053;&#x4E9A;&#x5355;&#x4F4D;&#x5728;&#x6052;&#x6E29;&#x6052;&#x6E7F;&#x7A7A;&#x8C03;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x901A;&#x9053;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x4E2D;&#x7684;&#x4F5C;&#x7528;&#x4E5F;&#x53D8;&#x5F97;&#x5145;&#x5206;&#x4E86;&#x89E3; CDI &#x7684;&#x5206;&#x5B50;&#x57FA;&#x7840;&#x4ECD;&#x4E0D;&#x6E05;&#x695A;&#x3002;&#x6700;&#x8FD1;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x5B9A;&#x4E49;&#x7684;&#x6700;&#x5C0F;&#x6052;&#x6E29;&#x6052;&#x6E7F;&#x7A7A;&#x8C03;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x57DF; &#xFF08;CAD &#xFF1B; &#x6B8B;&#x7559; 342 448&#xFF09; &#x5C06;&#x76F4;&#x63A5;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x5230; Orai1 &#x8981;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x901A;&#x9053;&#x3002;&#x5947;&#x602A;&#x7684;&#x662F;&#xFF0C;CAD &#x8BF1;&#x5BFC;&#x6052;&#x6E29;&#x6052;&#x6E7F;&#x7A7A;&#x8C03;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x7535;&#x6D41;&#x7F3A;&#x4E4F;&#x5FEB;&#x901F;&#x706D;&#x6D3B;&#xFF0C;&#x5728;&#x6B64;&#x6D47;&#x6CE8;&#x8FC7;&#x7A0B;&#x4E2D;&#x4E3A; STIM1 &#x63ED;&#x793A;&#x7740;&#x5173;&#x952E;&#x7684;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;&#x901A;&#x8FC7;&#x622A;&#x53D6;&#x7684;&#x5168;&#x957F; STIM1&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x786E;&#x5B9A;&#x4E86;&#x77ED;&#x57DF;&#x540D; (&#x6B8B;&#x7559; 470 491) C &#x7EC8;&#x7AEF;&#x5230;&#x6240;&#x9700;&#x7684; CDI &#x7684; CAD&#x3002;&#x6B64;&#x57DF;&#x5305;&#x542B;&#x4E4B;&#x95F4;&#x6B8B;&#x7559; 475 &#x548C; 483 7 &#x9178;&#x6027;&#x6C28;&#x57FA;&#x9178;&#x7684;&#x7FA4;&#x96C6;&#x3002;&#x4E2D;&#x548C;&#x5929;&#x51AC;&#x6C28;&#x9178;&#x6216;&#x8C37;&#x6C28;&#x9178;&#x5BF9;&#x8FD9;&#x4E00;&#x5730;&#x533A;&#x7684;&#x51CF;&#x5C11;&#x6216;&#x589E;&#x5F3A; CDI&#xFF0C;&#x800C;&#x516D;&#x4E2A;&#x9178;&#x6027;&#x6B8B;&#x7559;&#x8054;&#x5408;&#x4E2D;&#x7684;&#x548C;&#x5B8C;&#x5168;&#x6D88;&#x9664;&#x706D;&#x6D3B;&#x3002;&#x57FA;&#x4E8E;&#x751F;&#x7269;&#x4FE1;&#x606F;&#x5B66;&#x9884;&#x6D4B;&#x7684;&#x9499;&#x8C03;&#x86CB;&#x767D; (CaM) &#x7ED1;&#x5B9A;&#x7F51;&#x7AD9; Orai1 &#x4E0A;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x8FD8;&#x8C03;&#x67E5;&#x4E86;&#x51F8;&#x8F6E;&#x7684; CDI &#x7684;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x786E;&#x5B9A;&#x7684; Orai1 &#x819C;&#x8FD1;&#x7AEF; N &#x7EC8;&#x7AEF;&#x57DF; &#xFF08;&#x6B8B;&#x7559; 68-91&#xFF09;&#xFF0C;Ca(2+) &#x4F9D;&#x8D56;&#x7684;&#x65B9;&#x5F0F;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x51F8;&#x8F6E;&#x548C;&#x6D88;&#x9664;&#x51F8;&#x8F6E;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x7684;&#x7A81;&#x53D8;&#x5E9F;&#x9664; CDI&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7814;&#x7A76;&#x67E5;&#x660E;&#x65B0;&#x578B;&#x7ED3;&#x6784;&#x7684; STIM1 &#x548C; Orai1 &#x7684;&#x5143;&#x7D20;&#x6240;&#x9700;&#x7684; CDI &#x548C;&#x652F;&#x6301;&#x914D;&#x5408; STIM1 &#x548C; Orai1 &#x7684; N &#x603B;&#x7AD9;&#x6765;&#x5524;&#x8D77;&#x5FEB;&#x901F;&#x6052;&#x6E29;&#x6052;&#x6E7F;&#x7A7A;&#x8C03;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x901A;&#x9053;&#x5931;&#x6D3B;&#x7684;&#x51F8;&#x8F6E;&#x7684;&#x884C;&#x4E3A;&#x6A21;&#x578B;&#x3002;

STIM1 &#x548C;&#x9499;&#x8C03;&#x7D20; Orai1 &#x8BF1;&#x4F7F; Ca2 + &#x4E0E;&#x4EA4;&#x4E92;-&#x4F9D;&#x8D56;&#x706D;&#x6D3B;&#x7684;&#x6052;&#x6E29;&#x6052;&#x6E7F;&#x7A7A;&#x8C03;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x7684;&#x6E20;&#x9053;&#x3002;

Ca(2+)-dependent inactivation (CDI) is a key regulator and hallmark of the Ca(2+) release-activated Ca(2+) (CRAC) channel, a prototypic store-operated Ca(2+) channel. Although the roles of the endoplasmic reticulum Ca(2+) sensor STIM1 and the channel subunit Orai1 in CRAC channel activation are becoming well understood, the molecular basis of CDI remains unclear. Recently, we defined a minimal CRAC activation domain (CAD; residues 342-448) that binds directly to Orai1 to activate the channel. Surprisingly, CAD-induced CRAC currents lack fast inactivation, revealing a critical role for STIM1 in this gating process. Through truncations of full-length STIM1, we identified a short domain (residues 470-491) C-terminal to CAD that is required for CDI. This domain contains a cluster of 7 acidic amino acids between residues 475 and 483. Neutralization of aspartate or glutamate pairs in this region either reduced or enhanced CDI, whereas the combined neutralization of six acidic residues eliminated inactivation entirely. Based on bioinformatics predictions of a calmodulin (CaM) binding site on Orai1, we also investigated a role for CaM in CDI. We identified a membrane-proximal N-terminal domain of Orai1 (residues 68-91) that binds CaM in a Ca(2+)-dependent manner and mutations that eliminate CaM binding abrogate CDI. These studies identify novel structural elements of STIM1 and Orai1 that are required for CDI and support a model in which CaM acts in concert with STIM1 and the N terminus of Orai1 to evoke rapid CRAC channel inactivation.

STIM1 and calmodulin interact with Orai1 to induce Ca2+-dependent inactivation of CRAC channels.

Ca (2 +) d&#xE9;pendant de l&#x26;#39;inactivation (IDC) est un r&#xE9;gulateur cl&#xE9; de l&#x26;#39;embl&#xE8;me de la Ca (2 +) &#xE0; lib&#xE9;ration activ&#xE9; Ca (2 +) (CRAC) de canal, un prototype fonctionnant en magasin Ca (2 +) du canal. Bien que les r&#xF4;les de l&#x26;#39;endoplasmique Ca r&#xE9;ticulum (2 +) et capteur de STIM1 la sous-unit&#xE9; de canal Orai1 dans l&#x26;#39;activation du canal CRAC commencent &#xE0; &#xEA;tre bien compris, la base mol&#xE9;culaire de CDI demeure incertain. R&#xE9;cemment, nous avons d&#xE9;fini un domaine d&#x26;#39;activation minimale CRAC (CAD; r&#xE9;sidus 342-448) qui se lie directement &#xE0; Orai1 pour activer le canal. &#xC9;tonnamment, CAD-courants induits CRAC n&#x26;#39;ont pas l&#x26;#39;inactivation rapide, r&#xE9;v&#xE9;lant un r&#xF4;le critique pour STIM1 dans ce processus de blocage. Gr&#xE2;ce &#xE0; des troncatures de pleine longueur STIM1, nous avons identifi&#xE9; un court domaine (r&#xE9;sidus 470-491) C-terminal &#xE0; la CAO qui est n&#xE9;cessaire pour CDI. Ce domaine contient un groupe de 7 acides amin&#xE9;s acides entre les r&#xE9;sidus 475 et 483. Neutralisation de paires aspartate ou de glutamate dans cette r&#xE9;gion soit r&#xE9;duite ou IDC am&#xE9;lior&#xE9;e, alors que la neutralisation combin&#xE9;e de six r&#xE9;sidus acides &#xE9;limin&#xE9;s inactivation enti&#xE8;rement. Bas&#xE9; sur les pr&#xE9;visions de la bio-informatique d&#x26;#39;une calmoduline (CaM) site de liaison sur Orai1, nous avons &#xE9;galement &#xE9;tudi&#xE9; un r&#xF4;le pour la CaM en CDI. Nous avons identifi&#xE9; une membrane-proximale domaine N-terminal de Orai1 (r&#xE9;sidus 68-91) qui se lie de came dans un Ca (2 +) de mani&#xE8;re d&#xE9;pendante et les mutations qui &#xE9;liminent CDI CaM abroger contraignant. Ces &#xE9;tudes identifient de nouveaux &#xE9;l&#xE9;ments structurels de STIM1 et Orai1 qui sont n&#xE9;cessaires pour CDI et de soutenir un mod&#xE8;le dans lequel la CaM agit de concert avec STIM1 et la terminaison N de Orai1 d&#x26;#39;&#xE9;voquer rapidement l&#x26;#39;inactivation du canal CRAC.

STIM1 et de la calmoduline Interagir avec Orai1 &#xE0; induire Ca2 +-d&#xE9;pendante inactivation des canaux CRAC

Ca(2+)-abh&auml;ngige Inaktivierung (CDI) ist ein wichtiger Regulator und Markenzeichen der zum Ca(2+) Freigabe aktiviert Ca(2+) (CRAC) Kanal, eine prototypische Speicher zu bet&auml;tigende Ca(2+). Obwohl die Rollen des endoplasmatischen Reticulum Ca(2+) Sensors STIM1 und die Kanal-Untereinheit Orai1 CRAC Kanal Aktivierung gut verstanden zu werden, bleibt die molekulare Grundlage der CDI unklar. Vor kurzem haben wir definiert eine minimale CRAC Aktivierungsdom&auml;ne (CAD; R&uuml;ckst&auml;nde 342-448), das direkt an Orai1 gebunden, um den Kanal zu aktivieren. &Uuml;berraschenderweise fehlt CRAC CAD-induzierte Str&ouml;me schnelle Inaktivierung, offenbart eine entscheidende Rolle f&uuml;r STIM1 gating dabei. Durch K&uuml;rzungen der in STIM1, ermittelten wir eine kurze Domain (R&uuml;ckst&auml;nde 470-491) C-terminalen, CAD, die f&uuml;r CDI ben&ouml;tigt. Dieser Bereich enth&auml;lt eine Gruppe von 7 sauren Aminos&auml;uren zwischen R&uuml;ckst&auml;nde 475 und 483. Neutralisierung von Aspartat oder Glutamat-Paaren in dieser Region entweder reduziert oder erweitert CDI, kombinierte Neutralisierung der sauren R&uuml;ckst&auml;nde sechs Inaktivierung vollst&auml;ndig beseitigt. Basierend auf Bioinformatik Vorhersagen &uuml;ber ein Calmodulin (CaM)-Bindungsstelle am Orai1, untersuchten wir auch eine Rolle f&uuml;r CaM in CDI. Wir identifiziert eine Membrane-proximale N-terminalen Dom&auml;ne von Orai1 (R&uuml;ckst&auml;nde 68-91), die CaM Ca(2+)-abh&auml;ngigen Weise bindet und Mutationen, die CaM Bindung beseitigen hebt CDI. Diese Studien identifizieren neuartiger Strukturelemente der STIM1 und Orai1, die f&uuml;r CDI und unterst&uuml;tzen ein Modell in der CaM handeln gemeinsam mit STIM1 und das N-Terminus der Orai1 um schnelle Inaktivierung von CRAC-Kanal zu erw&auml;hnen.

STIM1 und Calmodulin interagieren mit Orai1 zu Ca2 +-abh&auml;ngige Inaktivierung von CRAC-Kan&auml;le.

Inattivazione CA(2+)-dipendente (CDI) &egrave; un regolatore chiave e segno distintivo del Ca(2+) attivato dal rilascio Ca(2+) (CRAC) canale, un canale di Ca(2+) store-operati prototipiche. Anche se i ruoli del reticolo endoplasmatico Ca(2+) sensore STIM1 e la subunit&agrave; del canale Orai1 in attivazione canale CRAC sono sempre ben compreso, la base molecolare della CDI rimane poco chiara. Recentemente, abbiamo definito un minimo CRAC attivazione dominio (CAD; residui 342-448) che si lega direttamente al Orai1 per attivare il canale. Sorprendentemente, correnti di CAD-indotta CRAC mancano di inattivazione veloce, rivelando un ruolo critico per STIM1 in questo processo di controllo. Attraverso troncamenti del full-length STIM1, abbiamo identificato un breve dominio (residui 470-491) C-terminale di CAD che &egrave; richiesto per CDI. Questo dominio contiene un ammasso di 7 amminoacidi acidi tra residui 475 e 483. Neutralizzazione di aspartato o glutammato coppie in questa regione sia ridotto o enhanced CDI, considerando che la neutralizzazione combinata di sei residui acidi eliminati inattivazione interamente. Basato su previsioni di bioinformatica di un sito di legame (CaM) su Orai1 calmodulina, abbiamo anche studiato un ruolo per CaM in CDI. Abbiamo identificato un membrana prossimale dominio N-terminale di Orai1 (residui 68-91) che lega la CaM in modo Ca(2+)-dipendente e mutazioni che eliminano associazione CaM abrogare CDI. Questi studi identificano nuovi elementi strutturali di STIM1 e Orai1 che sono richiesti per CDI e sostengono un modello in cui CaM agisce in concerto con STIM1 e il capolinea di N di Orai1 per evocare rapida inattivazione di canale CRAC.

STIM1 e calmodulina interagire con Orai1 per indurre il Ca2 +-dipendente dalla inattivazione dei canali CRAC.

&#x306E;Ca&#xFF08;2 +&#xFF09;&#x4F9D;&#x5B58;&#x6027;&#x4E0D;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#xFF08;CDI&#xFF09;&#x306E;Ca&#xFF08;2 +&#xFF09;&#x653E;&#x51FA;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;&#xFF08;2 +&#xFF09;&#xFF08;CRAC&#xFF09;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x3001;&#x539F;&#x578B;&#x30B9;&#x30C8;&#x30A2;&#x4F5C;&#x52D5;&#x6027;Ca&#xFF08;2 +&#xFF09;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x306E;&#x30AD;&#x30FC;&#x30EC;&#x30AE;&#x30E5;&#x30EC;&#x30FC;&#x30BF;&#x3068;&#x7279;&#x5FB4;&#x3067;&#x3059;&#x3002; &#xFF08;+ 2&#xFF09;CRAC&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x30BB;&#x30F3;&#x30B5;&#x30FC;STIM1&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x306E;&#x30B5;&#x30D6;&#x30E6;&#x30CB;&#x30C3;&#x30C8;Orai1&#x306F;&#x3088;&#x304F;&#x7406;&#x89E3;&#x306B;&#x306A;&#x3063;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x5C0F;&#x80DE;&#x4F53;&#x306E;Ca&#x306E;&#x5F79;&#x5272;&#x306F;&#x3001;CDI&#x306E;&#x5206;&#x5B50;&#x57FA;&#x76E4;&#x306F;&#x4E0D;&#x660E;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x304C;&#x3002;&#x30C1;&#x30E3;&#x30F3;&#x30CD;&#x30EB;&#x3092;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6;&#x306B;&#x3059;&#x308B;&#x306B;&#x306F;Orai1&#x306B;&#x76F4;&#x63A5;&#x7D50;&#x5408;&#x3057;&#x3001;&#x6700;&#x8FD1;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x6700;&#x5C0F;&#x9650;&#x306E;CRAC&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#xFF08;&#x6B8B;&#x57FA;342&#x304B;&#x3089;448 CAD&#xFF09;&#x3092;&#x5B9A;&#x7FA9;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x9A5A;&#x304F;&#x3079;&#x304D;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3001;CAD&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x8A98;&#x767A;&#x3055;&#x308C;&#x308B;CRAC&#x96FB;&#x6D41;&#x304C;&#x3053;&#x306E;&#x30B2;&#x30FC;&#x30C8;&#x30D7;&#x30ED;&#x30BB;&#x30B9;&#x3067;STIM1&#x306E;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x3057;&#x3001;&#x901F;&#x3044;&#x4E0D;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x3092;&#x6B20;&#x3044;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x30D5;&#x30EB;&#x30EC;&#x30F3;&#x30B0;&#x30B9;STIM1&#x306E;&#x5207;&#x308A;&#x6368;&#x3066;&#x306B;&#x3088;&#x308A;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;CDI&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x5FC5;&#x8981;&#x3068;&#x3055;&#x308C;&#x308B;CAD&#x306B;&#x77ED;&#x3044;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#xFF08;&#x6B8B;&#x57FA;470&#x304B;&#x3089;491&#xFF09;&#x306E;C&#x672B;&#x7AEF;&#x3092;&#x540C;&#x5B9A;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x306F;&#x6B8B;&#x57FA;475&#x304A;&#x3088;&#x3073;483&#x306E;&#x9593;&#x306B;7&#x9178;&#x6027;&#x30A2;&#x30DF;&#x30CE;&#x9178;&#x306E;&#x30AF;&#x30E9;&#x30B9;&#x30BF;&#x30FC;&#x304C;&#x542B;&#x307E;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3069;&#x3061;&#x3089;&#x7E2E;&#x5C0F;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x62E1;&#x5F35;CDI&#x3053;&#x306E;&#x5730;&#x57DF;&#x3067;&#x306F;&#x30A2;&#x30B9;&#x30D1;&#x30E9;&#x30AE;&#x30F3;&#x9178;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x30B0;&#x30EB;&#x30BF;&#x30DF;&#x30F3;&#x9178;&#x306E;&#x30DA;&#x30A2;&#x306E;&#x4E2D;&#x548C;&#x3001;6&#x9178;&#x6027;&#x6B8B;&#x57FA;&#x306E;&#x7D50;&#x5408;&#x4E2D;&#x548C;&#x304C;&#x5B8C;&#x5168;&#x306B;&#x4E0D;&#x6D3B;&#x5316;&#x3092;&#x6392;&#x9664;&#x3057;&#x3001;&#x4E00;&#x65B9;&#x3002; Orai1&#x306B;&#x30AB;&#x30EB;&#x30E2;&#x30B8;&#x30E5;&#x30EA;&#x30F3;&#xFF08;CaM&#xFF09;&#x7D50;&#x5408;&#x90E8;&#x4F4D;&#x306E;&#x30D0;&#x30A4;&#x30AA;&#x30A4;&#x30F3;&#x30D5;&#x30A9;&#x30DE;&#x30C6;&#x30A3;&#x30AF;&#x30B9;&#x306E;&#x4E88;&#x6E2C;&#x306B;&#x57FA;&#x3065;&#x3044;&#x3066;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x307E;&#x305F;&#x3001;CDI&#x306E;CAM&#x306E;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x8ABF;&#x3079;&#x305F;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#xFF08;2 +&#xFF09;&#x306E;Ca&#x3067;CAM&#x3092;&#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C9;Orai1&#x306E;&#x819C;&#x8FD1;&#x4F4D;&#x306E;N-&#x672B;&#x7AEF;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#xFF08;&#x6B8B;&#x57FA;68&#x304B;&#x3089;91&#xFF09; - &#x4F9D;&#x5B58;&#x7684;&#x304A;&#x3088;&#x3073;CaM&#x7D50;&#x5408;&#x5EC3;&#x6B62;&#x306E;CDI&#x3092;&#x6392;&#x9664;&#x3059;&#x308B;&#x5909;&#x7570;&#x3092;&#x540C;&#x5B9A;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x7814;&#x7A76;&#x306F;&#x3001;STIM1&#x3068;CDI&#x306B;&#x5FC5;&#x8981;&#x3068;&#x3055;&#x308C;&#x308B;Orai1&#x306E;&#x5C0F;&#x8AAC;&#x306E;&#x69CB;&#x9020;&#x8981;&#x7D20;&#x3092;&#x8B58;&#x5225;&#x3057;&#x3001;CAM&#x304C;&#x6025;&#x6FC0;&#x306A;CRAC&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x3092;&#x559A;&#x8D77;&#x3059;&#x308B;STIM1&#x3068;Orai1&#x306E;N&#x672B;&#x7AEF;&#x3068;&#x5354;&#x8ABF;&#x3057;&#x3066;&#x52D5;&#x4F5C;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x3092;&#x30B5;&#x30DD;&#x30FC;&#x30C8;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

STIM1&#x3068;&#x30AB;&#x30EB;&#x30E2;&#x30B8;&#x30E5;&#x30EA;&#x30F3;&#x306F;CRAC&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x306E;Ca2 +&#x4F9D;&#x5B58;&#x6027;&#x4E0D;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x3092;&#x8A98;&#x5C0E;&#x3059;&#x308B;Orai1&#x3068;&#x306E;&#x5BFE;&#x8A71;

Ca(2+) &#xC885;&#xC18D; &#xBE44;&#xD65C;&#xC131;&#xD654; (CDI) &#xD0A4; &#xB808; &#xADE4; &#xB808;&#xC774; &#xD130; &#xBC0F; Ca(2+) &#xCD9C;&#xC2DC; &#xD65C;&#xC131; Ca(2+) (CRAC) &#xCC44;&#xB110;, prototypic &#xC800;&#xC7A5;&#xC18C; &#xC6B4;&#xC601; Ca(2+) &#xCC44;&#xB110;&#xC758; &#xD2B9;&#xC9D5; &#xC774;&#xB2E4;. Endoplasmic &#xADF8;&#xBB3C; Ca(2+) &#xC13C;&#xC11C; STIM1 &#xBC0F; CRAC &#xCC44;&#xB110; &#xD65C;&#xC131;&#xD654;&#xC758; &#xCC44;&#xB110; &#xC18C; &#xB2E8;&#xC704; orai1&#xC758; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xC798; &#xC774;&#xD574; &#xB418; &#xACE0;, &#xBE44;&#xB85D; CDI&#xC758; &#xBD84;&#xC790; &#xAE30;&#xC900; &#xBD88;&#xBD84;&#xBA85; &#xB0A8;&#xC544; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xCD5C;&#xADFC;&#xC5D0;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xCD5C;&#xC18C;&#xD55C;&#xC758; CRAC &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778; (CAD, &#xC794;&#xB958;&#xBB3C; 342-448) &#xCC44;&#xB110;&#xC744; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD574; orai1&#xC5D0; &#xC9C1;&#xC811; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xD558;&#xB294; &#xC815;&#xC758;. &#xB180;&#xB78D;&#xAC8C;&#xB3C4;, CRAC CAD &#xC720;&#xB3C4; &#xC804;&#xB958; &#xC81C;&#xC5B4; &#xACFC;&#xC815;&#xC5D0;&#xC11C; stim1&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xB4DC;&#xB7EC;&#xB0B4;&#xB294; &#xBE60;&#xB978; &#xBE44;&#xD65C;&#xC131;&#xD654;&#xB97C; &#xBD80;&#xC871; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC804;&#xCCB4; &#xAE38;&#xC774; stim1&#xC758; &#xC798;&#xB9BC;&#xC744; &#xD1B5;&#xD574; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xC9E7;&#xC740; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778; (&#xC794;&#xB958;&#xBB3C; 470-491) &#xC2DD;&#xBCC4; CDI&#xC5D0; &#xD544;&#xC694;&#xD55C; CAD C-&#xD130;&#xBBF8;&#xB110;. &#xC774; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778; &#xC794;&#xB958;&#xBB3C; 475 &#xBC0F; 483 &#xC0AC;&#xC774; 7 &#xC0B0; &#xC131; &#xC544;&#xBBF8;&#xB178;&#xC0B0;&#xC758; &#xD074;&#xB7EC;&#xC2A4;&#xD130;&#xB97C; &#xD3EC;&#xD568; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774; &#xC9C0;&#xC5ED;&#xC5D0; aspartate &#xB610;&#xB294; glutamate &#xC30D;&#xC758; &#xC911;&#xD654; &#xAC10;&#xC18C; &#xB610;&#xB294; 6 &#xC0B0; &#xC131; &#xC794;&#xB958;&#xBB3C;&#xC758; &#xACB0;&#xD569; &#xD558; &#xC5EC; &#xC911;&#xD654; &#xBE44;&#xD65C;&#xC131;&#xD654;&#xB97C; &#xC644;&#xC804;&#xD788; &#xC81C;&#xAC70; &#xD558;&#xB294; &#xBC18;&#xBA74; CDI, &#xD5A5;&#xC0C1; &#xB41C;. (&#xCEA0;) &#xAD6C;&#xC18D;&#xB825; &#xC788;&#xB294; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8; orai1&#xC5D0; calmodulin&#xC758; &#xC0DD;&#xBB3C; &#xC815;&#xBCF4;&#xD559; &#xC608;&#xCE21;&#xC744; &#xBC14;&#xD0D5;&#xC73C;&#xB85C;, &#xC6B0;&#xB9AC; &#xB610;&#xD55C; CDI&#xC5D0; &#xCEA0;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC5ED;&#xD560; &#xC870;&#xC0AC; &#xD588;&#xB2E4;. Orai1&#xC758; &#xB9C9; &#xC778;&#xC811; N &#xB9E8;&#xB05D; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778; &#xC2DD;&#xBCC4; (&#xC794;&#xB958;&#xBB3C; 68-91) &#xD558;&#xB294; &#xCEA0; Ca(2+) &#xC885;&#xC18D; &#xBC29;&#xC2DD;&#xC73C;&#xB85C; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xD558;&#xACE0; &#xCEA0; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xC81C;&#xAC70; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xD30C;&#xAE30; CDI. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xC5F0;&#xAD6C; CDI&#xC5D0; &#xD544;&#xC694;&#xD55C; stim1&#xC640; orai1&#xC758; &#xC18C;&#xC124; &#xAD6C;&#xC870; &#xC694;&#xC18C;&#xB97C; &#xC2DD;&#xBCC4; &#xD558; &#xACE0; STIM1 &#xBC0F; orai1&#xC758; N &#xB9D0;&#xB2E8; &#xBE60;&#xB978; CRAC &#xCC44;&#xB110; &#xBE44;&#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xC5F0;&#xC0C1; &#xD568;&#xAED8; &#xCEA0; &#xC5ED;&#xD560; &#xBAA8;&#xB378;&#xC744; &#xC9C0;&#xC6D0;.

STIM1 &#xBC0F; calmodulin Orai1 &#xC720;&#xB3C4; Ca2 +&#xC640; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;-CRAC &#xCC44;&#xB110;&#xC758; &#xC885;&#xC18D; &#xBE44;&#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Ca (2 +)-dependiente de la inactivaci&#xF3;n (CDI) es un regulador clave y el sello de la Ca (2 +) de liberaci&#xF3;n activados por Ca (2 +) (CRAC) de canal, un prototipo que funciona con la tienda de Ca (2 +) del canal. Aunque las funciones del ret&#xED;culo endoplasm&#xE1;tico Ca (2 +) y el sensor de STIM1 subunidad del canal Orai1 en la activaci&#xF3;n de los canales CRAC se est&#xE1;n dando a entender, la base molecular de la CDI no est&#xE1; claro. Recientemente, hemos definido un m&#xED;nimo dominio de activaci&#xF3;n del CRAC (CAD; residuos 342-448) que se une directamente a Orai1 para activar el canal. Sorprendentemente, el CAD-corrientes inducidas CRAC carecen de inactivaci&#xF3;n r&#xE1;pida, revelando un papel fundamental para STIM1 en este proceso de puerta. A trav&#xE9;s de truncamientos de larga duraci&#xF3;n STIM1, hemos identificado un dominio corto (residuos 470-491) C-terminal de CAD que se requiere para la CDI. Este dominio contiene un conjunto de 7 amino&#xE1;cidos &#xE1;cidos entre los residuos 475 y 483. La neutralizaci&#xF3;n de los pares de aspartato o glutamato en esta regi&#xF3;n sea reducida o CDI mejorada, mientras que la neutralizaci&#xF3;n combinado de seis restos de &#xE1;cidos eliminados inactivaci&#xF3;n por completo. Basado en las predicciones bioinform&#xE1;ticas de la calmodulina (CaM) en el sitio de uni&#xF3;n Orai1, tambi&#xE9;n hemos investigado el papel de CAM en CDI. Se identificaron un membrana proximal dominio N-terminal de Orai1 (residuos 68-91) que se une CaM en un Ca (2 +) de forma dependiente y las mutaciones que eliminan CDI CaM abrogan uni&#xF3;n. Estos estudios identifican nuevos elementos estructurales de STIM1 y Orai1 que se requieren para CDI y apoyar un modelo en el cual la CaM act&#xFA;a en concierto con STIM1 y el extremo N de Orai1 para evocar la r&#xE1;pida inactivaci&#xF3;n de canales CRAC.

STIM1 y calmodulina Interactuar con Orai1 para inducir la Ca2 +-dependiente de inactivaci&#xF3;n de los canales CRAC

&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;-&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x5BF9;&#x4E8E;&#x8BB8;&#x591A;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8FC7;&#x7A0B;&#x81F3;&#x5173;&#x91CD;&#x8981;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x5F00;&#x53D1;&#x4E86;&#x4E00;&#x79CD;&#x53EB;&#x505A;&#x4E8C;&#x5149;&#x6D3B;&#x5316;&#x805A; (&#x6CD5;&#x63F4;&#x7F72;) &#x4EBA;&#x5DE5;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x86CB;&#x767D;&#x5F02;&#x8D28;-&#x548C; homodimerization &#x5728;&#x6D3B;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5185;&#x5229;&#x7528;&#x5149;&#x6280;&#x672F;&#x3002;&#x4F7F;&#x7528;&#x62DF;&#x5357;&#x82A5;&#x7684; FKF1 &#x548C;&#x7FA4;&#x843D; (GI) &#x86CB;&#x767D;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x5DF2;&#x751F;&#x6210;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x6807;&#x8BB0;&#x5176;&#x4EA4;&#x4E92;&#x63A7;&#x5236;&#x7684;&#x84DD;&#x706F;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x5C55;&#x793A;&#x4E86;&#x8FD9;&#x4E00;&#x5236;&#x5EA6;&#x4E0E;&#x6CD5;&#x63F4;&#x7F72;&#x6784;&#x9020;&#x53EF;&#x4EE5;&#x62DB;&#x52DF;&#x5230;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8D28;&#x819C;&#x7684;&#x5C0F; G &#x86CB;&#x767D; Rac1 &#x548C;&#x8BF1;&#x4F7F;&#x5F53;&#x5730;&#x5F62;&#x6210;&#x7684;&#x5E72;&#x9884;&#x91CD;&#x70B9;&#x7167;&#x660E;&#x7684;&#x54CD;&#x5E94;&#x4E2D;&#x7684;&#x5B9E;&#x7528;&#x7A0B;&#x5E8F;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x8FD8;&#x751F;&#x6210;&#x7531;&#x5F15;&#x4FE1;&#x57DF; GI &#x548C; FKF1 Gal4 &#x7684; DNA &#x7ED3;&#x5408;&#x57DF;&#x548C;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x57DF;&#x7684; VP16&#xFF0C;&#x5149;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x8F6C;&#x5F55;&#x56E0;&#x5B50;&#x5206;&#x522B;&#x663E;&#x793A;&#x8FD9;&#x79CD;&#x6280;&#x672F;&#x5F88;&#x5BB9;&#x6613;&#x9002;&#x5E94;&#x4E8E;&#x5176;&#x4ED6;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7814;&#x7A76;&#x8BBE;&#x7F6E;&#x63A7;&#x5236;&#x53D7;&#x4F53;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x3001; &#x7A81;&#x89E6;&#x5F62;&#x6210;&#x548C;&#x751F;&#x7269;&#x4F53;&#x4E2D;&#x7684;&#x5176;&#x4ED6;&#x4FE1;&#x53F7;&#x4E8B;&#x4EF6;&#x5149;&#x8C03;&#x63A7;&#x7684;&#x4FE1;&#x53F7;&#x8F6C;&#x5BFC;&#x5206;&#x5B50;&#x7684;&#x53D1;&#x5C55;&#x9636;&#x6BB5;&#x3002;

&#x5229;&#x7528;&#x5149;&#x7684;&#x6D3B;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5185;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;-&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x7684;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x3002;

Protein-protein interactions are essential for many cellular processes. We have developed a technology called light-activated dimerization (LAD) to artificially induce protein hetero- and homodimerization in live cells using light. Using the FKF1 and GIGANTEA (GI) proteins of Arabidopsis thaliana, we have generated protein tags whose interaction is controlled by blue light. We demonstrated the utility of this system with LAD constructs that can recruit the small G-protein Rac1 to the plasma membrane and induce the local formation of lamellipodia in response to focal illumination. We also generated a light-activated transcription factor by fusing domains of GI and FKF1 to the DNA binding domain of Gal4 and the transactivation domain of VP16, respectively, showing that this technology is easily adapted to other systems. These studies set the stage for the development of light-regulated signaling molecules for controlling receptor activation, synapse formation and other signaling events in organisms.

Induction of protein-protein interactions in live cells using light.

Interactions prot&#xE9;ine-prot&#xE9;ine sont essentiels pour de nombreux processus cellulaires. Nous avons d&#xE9;velopp&#xE9; une technologie appel&#xE9;e activ&#xE9; par la lumi&#xE8;re de dim&#xE9;risation (DAL) pour induire artificiellement la prot&#xE9;ine h&#xE9;t&#xE9;ro-et homodim&#xE9;risation dans les cellules vivantes en utilisant la lumi&#xE8;re. En utilisant les FKF1 et gigantea (IG) des prot&#xE9;ines d&#x26;#39;Arabidopsis thaliana, nous avons g&#xE9;n&#xE9;r&#xE9; balises prot&#xE9;ines dont l&#x26;#39;interaction est contr&#xF4;l&#xE9;e par la lumi&#xE8;re bleue. Nous avons d&#xE9;montr&#xE9; l&#x26;#39;utilit&#xE9; de ce syst&#xE8;me avec des constructions DAL qui peuvent recruter la petite prot&#xE9;ine G Rac1 &#xE0; la membrane plasmique et d&#x26;#39;induire la formation locale de lamellipodes en r&#xE9;ponse &#xE0; l&#x26;#39;illumination focale. Nous avons &#xE9;galement g&#xE9;n&#xE9;r&#xE9; un facteur de transcription activ&#xE9; par la lumi&#xE8;re par fusion de domaines IG et FKF1 au domaine de liaison &#xE0; l&#x26;#39;ADN de Gal4 et le domaine de transactivation de VP16, respectivement, montrant que cette technologie est facilement adaptable &#xE0; d&#x26;#39;autres syst&#xE8;mes. Ces &#xE9;tudes pr&#xE9;parer le terrain pour le d&#xE9;veloppement de la lumi&#xE8;re-r&#xE9;glement&#xE9;s mol&#xE9;cules de signalisation pour contr&#xF4;ler l&#x26;#39;activation du r&#xE9;cepteur, la formation des synapses et d&#x26;#39;autres &#xE9;v&#xE9;nements de signalisation dans les organismes.

Induction de l&#x26;#39;interactions prot&#xE9;ine-prot&#xE9;ine dans des cellules vivantes Utilisation de la lumi&#xE8;re

Protein-Protein Interaktionen sind f&uuml;r viele zellul&auml;re Prozesse unabdingbar. Wir haben eine Technologie namens Licht aktivierte Dimerisierung (LAD), k&uuml;nstlich Hetero Protein- und Homodimerization in lebenden Zellen mit Licht genau entwickelt. Mit Hilfe der Proteine FKF1 und GIGANTEA (GI) von Arabidopsis Thaliana, haben wir Protein-Tags erzeugt, deren Interaktion durch blaues Licht gesteuert wird. Wir bewiesen die N&uuml;tzlichkeit dieses System mit LAD-Konstrukte, die die kleinen G-Protein-Rac1 auf der Plasmamembran zu rekrutieren und induzieren die lokale Bildung von Lamellipodium Reaktion auf fokale Beleuchtung. Wir generiert auch einen Licht-aktivierte Transkriptionsfaktor von fusing-Dom&auml;nen der GI und FKF1 auf die DNA-Bindung des Gal4 und der Transactivation Dom&auml;ne von VP16, bzw. zeigen, dass diese Technologie leicht an andere Systeme angepasst ist. Diese Studien Voraussetzungen f&uuml;r die f&uuml;r die Entwicklung der Licht-regulierten signalisierende Molek&uuml;le Steuern-Aktivierung, Synapse-Bildung und andere signalisierende Ereignisse in Organismen.

Induktion von Protein-Protein Interaktionen in lebenden Zellen mit Licht.

Interazioni proteina-proteina sono essenziali per molti processi cellulari. Abbiamo sviluppato una tecnologia chiamata luce-attivato la dimerizzazione (LAD) per indurre artificialmente la proteina etero - e homodimerization in cellule vive, utilizzando la luce. Utilizzando le proteine FKF1 e GIGANTEA (GI) di Arabidopsis thaliana, noi abbiamo generato Tag proteina cui interazione &egrave; controllata dalla luce blu. Abbiamo dimostrato l&#39;utilit&agrave; di questo sistema con costrutti LAD che pu&ograve; assumere il piccolo Rac1 G-proteina di membrana del plasma e indurre la formazione locale di lamellipodia in risposta a illuminazione focale. Abbiamo inoltre generato un fattore di trascrizione-attivati da fusione domini di GI e FKF1 per il dominio di legame del DNA di Gal4 e il dominio di transattivazione di VP16, rispettivamente, mostrando che questa tecnologia si adatta facilmente ad altri sistemi. Questi studi pose le basi per lo sviluppo di molecole di segnalazione luce regolata per il controllo dell&#39;attivazione del recettore, formazione di sinapsi e altri eventi di segnalazione negli organismi.

Induzione di interazioni proteina-proteina in cellule vive, utilizzando la luce.

&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA; - &#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x306F;&#x591A;&#x304F;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x30D7;&#x30ED;&#x30BB;&#x30B9;&#x306B;&#x4E0D;&#x53EF;&#x6B20;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x4EBA;&#x5DE5;&#x7684;&#x306B;&#x5149;&#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x305F;&#x751F;&#x7D30;&#x80DE;&#x5185;&#x306E;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x30D8;&#x30C6;&#x30ED;&#x3068;&#x30DB;&#x30E2;&#x4E8C;&#x91CF;&#x4F53;&#x5316;&#x3092;&#x8A98;&#x5C0E;&#x3059;&#x308B;&#x5149;&#x6D3B;&#x6027;&#x4E8C;&#x91CF;&#x4F53;&#xFF08;LAD&#xFF09;&#x3068;&#x547C;&#x3070;&#x308C;&#x308B;&#x6280;&#x8853;&#x3092;&#x958B;&#x767A;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x30B7;&#x30ED;&#x30A4;&#x30CC;&#x30CA;&#x30BA;&#x30CA;&#x306E;FKF1&#x3068;GIGANTEA&#xFF08;GI&#xFF09;&#x306E;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;&#x305D;&#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x9752;&#x8272;&#x5149;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x5236;&#x5FA1;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x30BF;&#x30B0;&#x304C;&#x751F;&#x6210;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;&#x7D30;&#x80DE;&#x819C;&#x306B;&#x5C0F;&#x3055;&#x306A;G&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;Rac1&#x306E;&#x8005;&#x3092;&#x52DF;&#x96C6;&#x3057;&#x3001;&#x7126;&#x70B9;&#x7167;&#x660E;&#x306B;&#x5BFE;&#x5FDC;&#x3057;&#x3066;&#x8449;&#x72B6;&#x4EEE;&#x8DB3;&#x306E;&#x30ED;&#x30FC;&#x30AB;&#x30EB;&#x5F62;&#x6210;&#x3092;&#x8A98;&#x5C0E;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x308B;LAD&#x69CB;&#x7BC9;&#x7269;&#x3067;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E0;&#x306E;&#x6709;&#x7528;&#x6027;&#x3092;&#x5B9F;&#x8A3C;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x307E;&#x305F;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x6280;&#x8853;&#x306F;&#x7C21;&#x5358;&#x306B;&#x4ED6;&#x306E;&#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E0;&#x306B;&#x9069;&#x5408;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3001;&#x305D;&#x308C;&#x305E;&#x308C;&#x3001;GAL4&#x306E;DNA&#x7D50;&#x5408;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x3068;VP16&#x306E;&#x8EE2;&#x5199;&#x9818;&#x57DF;&#x306B;GI&#x3068;FKF1&#x306E;&#x878D;&#x5408;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x5149;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x8EE2;&#x5199;&#x56E0;&#x5B50;&#x3092;&#x751F;&#x6210;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x7814;&#x7A76;&#x306F;&#x3001;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x3001;&#x30B7;&#x30CA;&#x30D7;&#x30B9;&#x5F62;&#x6210;&#x3084;&#x751F;&#x7269;&#x306E;&#x4ED6;&#x306E;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#x30A4;&#x30D9;&#x30F3;&#x30C8;&#x3092;&#x5236;&#x5FA1;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x5149;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#x5206;&#x5B50;&#x306E;&#x958B;&#x767A;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x6BB5;&#x968E;&#x3092;&#x8A2D;&#x5B9A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x5149;&#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x305F;&#x751F;&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA; - &#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x306E;&#x8A98;&#x5C0E;

&#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC740; &#xB9CE;&#xC740; &#xC138;&#xD3EC; &#xD504;&#xB85C;&#xC138;&#xC2A4;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xD544;&#xC218;&#xC801;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xBE5B; &#xBE5B;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xB77C;&#xC774;&#xBE0C; &#xC140;&#xC5D0; homodimerization &#xBC0F; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; hetero-&#xC778;&#xC704;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xC720;&#xB3C4; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD574; dimerization (&#xC80A;&#xC740;&#xC774;) &#xC774;&#xB77C;&#xB294; &#xAE30;&#xC220;&#xC744; &#xAC1C;&#xBC1C; &#xD588;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. Arabidopsis thaliana&#xC758; fkf1&#xC640; GIGANTEA (GI) &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; &#xB204;&#xAD6C;&#xC758; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC740; &#xD478;&#xB978; &#xBE5B;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC81C;&#xC5B4; &#xD558;&#xB294; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xD0DC;&#xADF8; &#xC0DD;&#xC131;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xC791;&#xC740; G-&#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; Rac1 &#xD50C;&#xB77C;&#xC988;&#xB9C8; &#xBA64;&#xBE0C;&#xB808;&#xC778;&#xC744; &#xBAA8;&#xC9D1; &#xD558; &#xACE0; &#xCD08;&#xC810; &#xC870;&#xBA85;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC751;&#xB2F5;&#xC5D0;&#xC11C; lamellipodia&#xC758; &#xC9C0;&#xBC29; &#xD615;&#xC131;&#xC744; &#xC720;&#xBC1C; &#xC218; &#xC788;&#xB294; &#xC80A;&#xC740;&#xC774; &#xAD6C;&#xBB38;&#xC73C;&#xB85C;&#xC774; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C;&#xC758; &#xC720;&#xD2F8;&#xB9AC;&#xD2F0; &#xC2DC;&#xC5F0;. &#xC6B0;&#xB9AC; &#xB610;&#xD55C; &#xC0DD;&#xC131; DNA &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778;&#xC758; gal4&#xC640; VP16, transactivation &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778;&#xC744; GI &#xBC0F; fkf1&#xC758; &#xC735;&#xD569; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xBE5B;&#xC758; &#xC804;&#xC0AC; &#xC694;&#xC18C; &#xAC01;&#xAC01;&#xC774; &#xAE30;&#xC220;&#xC740; &#xB2E4;&#xB978; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C;&#xC5D0; &#xC27D;&#xAC8C; &#xC801;&#xC751;&#xC744; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC8FC;&#xB294;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xC5F0;&#xAD6C; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; &#xD65C;&#xC131;&#xD654;, &#xC2DC; &#xB0C5; &#xC2A4; &#xD615;&#xC131; &#xBC0F; &#xC720;&#xAE30; &#xCCB4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xB2E4;&#xB978; &#xC2E0;&#xD638; &#xC774;&#xBCA4;&#xD2B8;&#xB97C; &#xC81C;&#xC5B4; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD55C; &#xC2E0;&#xD638; &#xBD84;&#xC790; &#xBE5B; &#xADDC;&#xC81C;&#xC758; &#xAC1C;&#xBC1C;&#xC744; &#xC704;&#xD55C; &#xBB34;&#xB300;&#xB97C; &#xC124;&#xC815;.

&#xBE5B;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xC0B4;&#xC544;&#xC788;&#xB294; &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC758; &#xC720;&#xB3C4;.

Interacciones prote&#xED;na-prote&#xED;na son esenciales para muchos procesos celulares. Hemos desarrollado una tecnolog&#xED;a llamada activada por la luz de dimerizaci&#xF3;n (LAD) para inducir artificialmente la prote&#xED;na hetero y homodimerizaci&#xF3;n en c&#xE9;lulas vivas con luz. Uso de los FKF1 y gigantea (GI), las prote&#xED;nas de la Arabidopsis thaliana, hemos generado las etiquetas de prote&#xED;nas cuya interacci&#xF3;n es controlada por la luz azul. Hemos demostrado la utilidad de este sistema con las construcciones de LAD que pueden contratar la peque&#xF1;a prote&#xED;na G Rac1 a la membrana plasm&#xE1;tica e inducir a la formaci&#xF3;n local de lamellipodia en respuesta a la iluminaci&#xF3;n focal. Tambi&#xE9;n genera un factor de transcripci&#xF3;n activado por la luz por los dominios de fusi&#xF3;n de las indicaciones geogr&#xE1;ficas y FKF1 al dominio de uni&#xF3;n al ADN de GAL4 y el dominio de transactivaci&#xF3;n de VP16, respectivamente, demostrando que esta tecnolog&#xED;a se adapta f&#xE1;cilmente a otros sistemas. Estos estudios sentar las bases para el desarrollo de la luz reguladas por las mol&#xE9;culas de se&#xF1;alizaci&#xF3;n para el control de la activaci&#xF3;n del receptor, la formaci&#xF3;n de sinapsis y otros eventos de se&#xF1;alizaci&#xF3;n en los organismos.

La inducci&#xF3;n de interacciones prote&#xED;na-prote&#xED;na en las c&#xE9;lulas vivas Uso de la luz

&#x7535;&#x538B;&#x95E8;&#x63A7;&#x6027;&#x7ECF;&#x9891;&#x9053; (VGCCs) &#x5728;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x4FE1;&#x53F7;&#x4E2D;&#x7684;&#x5173;&#x952E;&#x4F5C;&#x7528;&#xFF0C;&#x4F46;&#x4E5F;&#x6709;&#x52A9;&#x4E8E;&#x7EC6;&#x80DE;&#x529F;&#x80FD;&#x969C;&#x788D;&#xFF0C;&#x5982;&#x63CF;&#x8FB9;&#x548C;&#x795E;&#x7ECF;&#x9000;&#x884C;&#x6027;&#x75BE;&#x75C5;&#x7684;&#x75C5;&#x7406;&#x6761;&#x4EF6;&#x4E0B;&#x6B7B;&#x4EA1;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x62A5;&#x544A; N-&#x7532;&#x57FA;-D-&#x5929;&#x51AC;&#x6C28;&#x9178;&#x9178;&#x53D7;&#x4F53;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x5BFC;&#x81F4;&#x5185;&#x5728;&#x5316;&#x548C; Ca (V) 1.2 &#x6E20;&#x9053;&#xFF0C;&#x51CF;&#x5C11;&#x7ECF;&#x6761;&#x76EE;&#x4E2D;&#x6240;&#x9020;&#x6210;&#x7684;&#x9000;&#x5316;&#x548C;&#x51CF;&#x5C11;&#x6BD2;&#x6027;&#x3002;Ca (V) 1.2 &#x5185;&#x5728;&#x5316;&#x548C;&#x9000;&#x5316;&#x9700;&#x8981;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x5230;&#x78F7;&#x8102;&#x9170;&#x808C;&#x9187;-3-&#x78F7;&#x9178; 5-&#x6FC0;&#x9176; (PIKfyve) &#x8102;&#x8D28;&#x6FC0;&#x9176;&#x7684;&#x751F;&#x6210;&#x78F7;&#x8102;&#x9170;&#x808C;&#x9187;-3&#xFF0C;&#xFF08;5&#xFF09;-&#x4E8C;&#x78F7;&#x9178; (PtdIns(3,5)P(2)) &#x548C;&#x89C4;&#x7BA1; endosome &#x53CA;&#x6EB6;&#x9176;&#x4F53;&#x7684;&#x529F;&#x80FD;&#x3002;&#x8C37;&#x6C28;&#x9178;&#x53D7;&#x4F53;&#x7684;&#x6301;&#x7EED;&#x7684;&#x6FC0;&#x6D3B; Ca (V) 1.2 &#x6E20;&#x9053;&#x62DB;&#x52DF; PIKfyve&#x3001; PtdIns(3,5)P(2)&#x3001; &#x7EC6;&#x80DE;&#x6C34;&#x5E73;&#x4E0A;&#x5347;&#x548C;&#x4FC3;&#x8FDB;&#x9776;&#x5411;&#x6EB6;&#x9176;&#x4F53;&#x7684; Ca &#xFF08;V&#xFF09; 1.2&#x3002;PIKfyve &#x7EC4;&#x5408;&#x5F0F;&#x53EF;&#x9632;&#x6B62; Ca (V) 1.2 &#x9000;&#x5316;&#xFF0C;&#x5E76;&#x589E;&#x52A0;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x5174;&#x594B;&#x6BD2;&#x6027;&#x6613;&#x611F;&#x6027;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x5B9E;&#x9A8C;&#x627E;&#x51FA;&#x4E00;&#x79CD;&#x65B0;&#x578B;&#x7684;&#x673A;&#x6784;&#xFF0C;&#x5176;&#x4E2D;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x53D7;&#x6765;&#x81EA;&#x6BD2;&#x6027;&#xFF0C;&#x5E76;&#x63D0;&#x4F9B;&#x53EF;&#x80FD;&#x7684;&#x89E3;&#x91CA;&#x6027;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x6B7B;&#x4EA1;&#x7684;&#x5F71;&#x54CD; PtdIns(3,5)P(2) &#x8C03;&#x63A7;&#x7684;&#x7A81;&#x53D8;&#x6240;&#x9020;&#x6210;&#x7684;&#x75BE;&#x75C5;&#x3002;

PIKfyve &#x89C4;&#x8303; CaV1.2 &#x964D;&#x89E3;&#xFF0C;&#x5E76;&#x9632;&#x6B62;&#x5174;&#x594B;&#x6BD2;&#x6027;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6B7B;&#x4EA1;&#x3002;

Voltage-gated Ca(2+) channels (VGCCs) play a key role in neuronal signaling but can also contribute to cellular dysfunction and death under pathological conditions such as stroke and neurodegenerative diseases. We report that activation of N-methyl-D-aspartic acid receptors causes internalization and degradation of Ca(V)1.2 channels, resulting in decreased Ca(2+) entry and reduced toxicity. Ca(V)1.2 internalization and degradation requires binding to phosphatidylinositol 3-phosphate 5-kinase (PIKfyve), a lipid kinase which generates phosphatidylinositol (3,5)-bisphosphate (PtdIns(3,5)P(2)) and regulates endosome and lysosome function. Sustained activation of glutamate receptors recruits PIKfyve to Ca(V)1.2 channels, increases cellular levels of PtdIns(3,5)P(2), and promotes targeting of Ca(V)1.2 to lysosomes. Knockdown of PIKfyve prevents Ca(V)1.2 degradation and increases neuronal susceptibility to excitotoxicity. These experiments identify a novel mechanism by which neurons are protected from excitotoxicity and provide a possible explanation for neuronal death in diseases caused by mutations that affect PtdIns(3,5)P(2) regulation.

PIKfyve regulates CaV1.2 degradation and prevents excitotoxic cell death.

Voltage-d&#xE9;pendants Ca (2 +) des canaux (VGCCs) jouent un r&#xF4;le cl&#xE9; dans la signalisation neuronale, mais peut aussi contribuer &#xE0; la dysfonction cellulaire et la mort dans des conditions pathologiques telles que les maladies vasculaires c&#xE9;r&#xE9;braux et maladies neurod&#xE9;g&#xE9;n&#xE9;ratives. Nous rapportons que l&#x26;#39;activation des r&#xE9;cepteurs de l&#x26;#39;acide N-m&#xE9;thyl-D-aspartique provoque l&#x26;#39;internalisation et la d&#xE9;gradation de Ca (V) 1.2 canaux, entra&#xEE;nant une diminution de Ca (2 +) entr&#xE9;e et une toxicit&#xE9; r&#xE9;duite. Ca (V) 1,2 internalisation et la d&#xE9;gradation n&#xE9;cessite une fixation &#xE0; la phosphatidylinositol 3-phosphate de 5-kinase (PIKfyve), une lipide kinase qui g&#xE9;n&#xE8;re le phosphatidylinositol (3,5)-biphosphate (PtdIns (3,5) P (2)) et r&#xE9;gule endosome et la fonction lysosome. L&#x26;#39;activation des r&#xE9;cepteurs de glutamate soutenue recrute PIKfyve &#xE0; CA (V) 1,2 canaux, augmente les niveaux cellulaires de PtdIns (3,5) P (2), et favorise le ciblage de Ca (V) 1,2 &#xE0; lysosomes. Knockdown de PIKfyve emp&#xEA;che Ca (V) 1,2 d&#xE9;gradation et augmente la sensibilit&#xE9; des neurones &#xE0; l&#x26;#39;excitotoxicit&#xE9;. Ces exp&#xE9;riences d&#x26;#39;identifier un nouveau m&#xE9;canisme par lequel les neurones sont prot&#xE9;g&#xE9;s contre l&#x26;#39;excitotoxicit&#xE9; et de fournir une explication possible de la mort neuronale dans les maladies caus&#xE9;es par des mutations qui affectent le PtdIns (3,5) P (2) de r&#xE9;gulation.

PIKfyve R&#xE9;gule Cav1.2 D&#xE9;gradation et emp&#xEA;che la mort cellulaire excitotoxique

Spannung-Gating Ca(2+) Kan&auml;le (VGCCs) spielen eine Schl&uuml;sselrolle in neuronale Signale, sondern k&ouml;nnen auch zur zellul&auml;ren Dysfunktion und Tod unter pathologischen Bedingungen wie Schlaganfall und Neurodegenerative Krankheiten beitragen. Wir berichten, dass die Aktivierung von N-Methyl-D-Aspartic Acid-Rezeptoren verursacht Internalisierung und Abbau von Ca (V) 1.2 Kan&auml;le, was zu verminderten Ca(2+) Eintrag und Toxizit&auml;t reduziert. Ca (V) 1.2 Internalisierung und Abbau erfordert Bindung zu Phosphatidylinositol-3-Phosphat 5-Kinase (PIKfyve), ein Lipid-Kinase der Phosphatidylinositol (3,5) generiert-bisphosphat (PtdIns(3,5)P(2)) und regelt Endosom und Lysosom-Funktion. Dauerhafte Aktivierung der Glutamatrezeptoren Rekruten PIKfyve Ca (V) 1.2 Kan&auml;le, steigert die zellul&auml;re Ebenen von PtdIns(3,5)P(2) und f&ouml;rdert der Ca (V) 1.2 Lysosomen-targeting. Niederschlag des PIKfyve verhindert Ca (V) 1.2 Abbau und erh&ouml;ht neuronale Anf&auml;lligkeit f&uuml;r Exzitotoxit&auml;t. Diese Experimente identifizieren einen neuen Mechanismus, durch den Neuronen sind vor Exzitotoxit&auml;t gesch&uuml;tzt und bieten eine m&ouml;gliche Erkl&auml;rung f&uuml;r neuronale Tod Erkrankungen durch Mutationen, die PtdIns(3,5)P(2) Verordnung unber&uuml;hrt.

PIKfyve regelt CaV1.2 Abbau- und excitotoxischem Zelltod verhindert.

Tensione-gated Ca(2+) canali (VGCCs) giocano un ruolo chiave nella segnalazione neuronale, ma possono anche contribuire alla disfunzione cellulare e morte in condizioni patologiche quali ictus e delle malattie neurodegenerative. Segnaliamo che l&#39;attivazione dei recettori acidi N-metil-D-Aspartico provoca l&#39;internalizzazione e la degradazione dei canali del Ca (V) 1.2, con conseguente diminuzione Ca(2+) voce e ridotta tossicit&agrave;. Interiorizzazione di CA (V) 1.2 e degradazione richiede l&#39;associazione di fosfatidilinositolo-3-fosfato 5-chinasi (PIKfyve), una chinasi lipidica che genera fosfatidilinositolo (3,5)-bisfosfato (PtdIns(3,5)P(2)) e regola la funzione endosoma e lisosoma. Sostenuta attivazione dei recettori del glutammato reclute PIKfyve ai canali Ca (V) 1.2, aumenta i livelli cellulari di PtdIns(3,5)P(2) e promuove il targeting di Ca (V) 1.2 ai lisosomi. Atterramento di PIKfyve impedisce la degradazione di Ca (V) 1.2 e aumenta la suscettibilit&agrave; neuronale di eccitotossicit&agrave;. Questi esperimenti di identificano un nuovo meccanismo mediante il quale i neuroni sono protetti dall&#39;eccitotossicit&agrave; e forniscono una possibile spiegazione per la morte neuronale nelle malattie causate da mutazioni che influenzano PtdIns(3,5)P(2) regolamento.

PIKfyve regola la degradazione CaV1.2 e impedisce la morte delle cellule excitotoxic.

&#x96FB;&#x4F4D;&#x4F9D;&#x5B58;&#x6027;Ca&#xFF08;2 +&#xFF09;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#xFF08;VGCCs&#xFF09;&#x306F;&#x30CB;&#x30E5;&#x30FC;&#x30ED;&#x30F3;&#x306E;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#x306B;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x679C;&#x305F;&#x3059;&#x3060;&#x3051;&#x3067;&#x306A;&#x304F;&#x3001;&#x8133;&#x5352;&#x4E2D;&#x3084;&#x795E;&#x7D4C;&#x5909;&#x6027;&#x75BE;&#x60A3;&#x306A;&#x3069;&#x306E;&#x75C5;&#x7406;&#x5B66;&#x7684;&#x6761;&#x4EF6;&#x4E0B;&#x3067;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x6A5F;&#x80FD;&#x4E0D;&#x5168;&#x3068;&#x6B7B;&#x306B;&#x8CA2;&#x732E;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;N-&#x30E1;&#x30C1;&#x30EB;-D-&#x30A2;&#x30B9;&#x30D1;&#x30E9;&#x30AE;&#x30F3;&#x9178;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x306F;&#x3001;Ca&#xFF08;2 +&#xFF09;&#x306E;&#x30A8;&#x30F3;&#x30C8;&#x30EA;&#x3068;&#x4F4E;&#x6BD2;&#x6027;&#x3092;&#x6E1B;&#x5C11;&#x3055;&#x305B;&#x3001;&#x305D;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x3001;Ca&#x306E;&#x5185;&#x5728;&#x5316;&#x3068;&#x5206;&#x89E3;&#xFF08;V&#xFF09;1.2&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x3092;&#x5F15;&#x304D;&#x8D77;&#x3053;&#x3059;&#x5831;&#x544A;&#x3059;&#x308B;&#x3002; CA&#xFF08;V&#xFF09;1.2&#x30CA;&#x30EA;&#x3068;&#x52A3;&#x5316;&#x306F;&#x30DB;&#x30B9;&#x30D5;&#x30A1;&#x30C1;&#x30B8;&#x30EB;&#x30A4;&#x30CE;&#x30B7;&#x30C8;&#x30FC;&#x30EB;3  - &#x30EA;&#x30F3;&#x9178;5  - &#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#xFF08;PIKfyve&#xFF09;&#x3001;&#x30DB;&#x30B9;&#x30D5;&#x30A1;&#x30C1;&#x30B8;&#x30EB;&#x30A4;&#x30CE;&#x30B7;&#x30C8;&#x30FC;&#x30EB;&#xFF08;3,5&#xFF09; - &#x30D3;&#x30B9;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#xFF08;PtdIns&#xFF08;3,5&#xFF09;P&#xFF08;2&#xFF09;&#xFF09;&#x3092;&#x751F;&#x6210;&#x3057;&#x3001;&#x30A8;&#x30F3;&#x30C9;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x3059;&#x308B;&#x8102;&#x8CEA;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x306B;&#x7D50;&#x5408;&#x3059;&#x308B;&#x5FC5;&#x8981;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3068;&#x30EA;&#x30BD;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3002;&#x30B0;&#x30EB;&#x30BF;&#x30DF;&#x30F3;&#x9178;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x306E;&#x6301;&#x7D9A;&#x7684;&#x306A;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x306F;&#x3001;Ca&#xFF08;V&#xFF09;1.2&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x306B;PIKfyve&#x52DF;&#x96C6;PtdIns&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#xFF08;3,5&#xFF09;P&#xFF08;2&#xFF09;&#x5897;&#x52A0;&#x3057;&#x3001;&#x30EA;&#x30BD;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x3078;&#x306E;Ca&#xFF08;V&#xFF09;1.2&#x306E;&#x6A19;&#x7684;&#x63A8;&#x9032;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002; PIKfyve&#x306E;&#x30CE;&#x30C3;&#x30AF;&#x30C0;&#x30A6;&#x30F3;&#x306F;&#x3001;Ca&#xFF08;V&#xFF09;1.2&#x52A3;&#x5316;&#x3092;&#x9632;&#x6B62;&#x3057;&#x3001;&#x8208;&#x596E;&#x3059;&#x308B;&#x795E;&#x7D4C;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x611F;&#x53D7;&#x6027;&#x3092;&#x5897;&#x52A0;&#x3055;&#x305B;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x5B9F;&#x9A13;&#x306F;&#x3001;&#x30CB;&#x30E5;&#x30FC;&#x30ED;&#x30F3;&#x304C;&#x8208;&#x596E;&#x6BD2;&#x6027;&#x304B;&#x3089;&#x4FDD;&#x8B77;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x65B0;&#x305F;&#x306A;&#x30E1;&#x30AB;&#x30CB;&#x30BA;&#x30E0;&#x3092;&#x8B58;&#x5225;&#x3057;&#x3066;PtdIns&#xFF08;3,5&#xFF09;P&#xFF08;2&#xFF09;&#x898F;&#x5236;&#x306B;&#x5F71;&#x97FF;&#x3092;&#x4E0E;&#x3048;&#x308B;&#x7A81;&#x7136;&#x5909;&#x7570;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x5F15;&#x304D;&#x8D77;&#x3053;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x75BE;&#x60A3;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x795E;&#x7D4C;&#x7D30;&#x80DE;&#x6B7B;&#x306E;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x306E;&#x3042;&#x308B;&#x8AAC;&#x660E;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

PIKfyve&#x306F;CaV1.2&#x5206;&#x89E3;&#x3092;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x3057;&#x3001;&#x8208;&#x596E;&#x6BD2;&#x6027;&#x7D30;&#x80DE;&#x6B7B;&#x3092;&#x9632;&#x3050;

&#xC804;&#xC555; &#xAC1C;&#xD3D0; Ca(2+) &#xCC44;&#xB110; (VGCCs) &#xC2E0;&#xACBD; &#xC2E0;&#xD638;&#xC5D0; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xC5ED;&#xD560; &#xC774;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xB610;&#xD55C; &#xC138;&#xD3EC; &#xAE30;&#xB2A5; &#xC7A5;&#xC560; &#xBC0F; &#xB1CC;&#xC878;&#xC911; &#xBC0F; &#xC2E0;&#xACBD; &#xD1F4;&#xD589; &#xC131; &#xC9C8;&#xD658; &#xB4F1; &#xBCD1; &#xC801;&#xC778; &#xC870;&#xAC74; &#xD558;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC8FD;&#xC74C;&#xC5D0; &#xAE30;&#xC5EC;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC; &#xBCF4;&#xACE0; N-&#xBA54; &#xD2F8;-D-aspartic &#xC0B0; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4;&#xC758; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xD558;&#xBA74; &#xAD6D;&#xC81C;&#xD654;&#xC640; &#xAC10;&#xC18C; Ca(2+) &#xD56D;&#xBAA9;&#xC744; &#xCD08;&#xB798; &#xD558;&#xB294; Ca (V) 1.2 &#xCC44;&#xB110;&#xC758; &#xC800;&#xD558; &#xBC0F; &#xB3C5;&#xC131;&#xC744; &#xAC10;&#xC18C; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. Ca (V) 1.2 &#xAD6D;&#xC81C;&#xD654;&#xC640; &#xC800;&#xD558; &#xD544;&#xC694; phosphatidylinositol 3 &#xC778;&#xC0B0; 5 &#xD0A4; (PIKfyve), phosphatidylinositol (3, 5)&#xB97C; &#xC0DD;&#xC131; &#xD558;&#xB294; &#xC9C0;&#xC9C8; &#xD0A4; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;-bisphosphate (PtdIns(3,5)P(2)) endosome &#xB9AC;&#xC18C;&#xC880;&#xC758; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC744; &#xC870;&#xC808; &#xD558; &#xACE0;. Glutamate &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4;&#xC758; &#xC9C0;&#xC18D;&#xC801;&#xC778;&#xB41C; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; Ca (V) 1.2 &#xCC44;&#xB110; PIKfyve &#xC2E0;&#xBCD1; PtdIns(3,5)P(2), &#xC138;&#xD3EC; &#xC218;&#xC900;&#xC758; &#xB298;&#xC5B4;&#xB098;&#xACE0; Ca (V) 1.2&#xC758; &#xB9AC;&#xC18C;&#xC880;&#xC744; &#xB300;&#xC0C1;&#xC73C;&#xB85C; &#xCD94;&#xC9C4; &#xD558; &#xACE0; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. Pikfyve&#xC758; &#xCD5C;&#xC800;&#xC758; Ca (V) 1.2 &#xC800;&#xD558;&#xB97C; &#xBC29;&#xC9C0; &#xD558; &#xACE0; excitotoxicity &#xC2E0;&#xACBD; &#xBBFC;&#xAC10;&#xC131;&#xC744; &#xC99D;&#xAC00; &#xC2DC;&#xD0B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xC2E4;&#xD5D8;&#xC740; &#xB274;&#xB7F0; excitotoxicity&#xC5D0;&#xC11C; &#xBCF4;&#xD638;&#xC640; PtdIns(3,5)P(2) &#xADDC;&#xC815;&#xC5D0; &#xC601;&#xD5A5;&#xC744; &#xC8FC;&#xB294; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774;&#xB85C; &#xC778; &#xD55C; &#xC9C8;&#xBCD1;&#xC5D0; &#xC788;&#xB294; &#xC2E0;&#xACBD; &#xC8FD;&#xC74C;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xAC00;&#xB2A5;&#xD55C; &#xC124;&#xBA85;&#xC744; &#xC81C;&#xACF5;&#xD560; &#xC18C;&#xC124; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;&#xC744; &#xC2DD;&#xBCC4; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

PIKfyve, CaV1.2 &#xC800;&#xD558; &#xC870;&#xC808; excitotoxic &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xC8FD;&#xC74C;&#xC744; &#xBC29;&#xC9C0;.

Voltaje de Ca (2 +) canales (VGCCs) juegan un papel clave en la se&#xF1;alizaci&#xF3;n neuronal, pero tambi&#xE9;n puede contribuir a la disfunci&#xF3;n y muerte celular bajo condiciones patol&#xF3;gicas tales como accidentes cerebrovasculares y enfermedades neurodegenerativas. Nos informan de que la activaci&#xF3;n de receptores de &#xE1;cido N-metil-D-asp&#xE1;rtico provoca la internalizaci&#xF3;n y la degradaci&#xF3;n de Ca (V) 1,2 canales, lo que resulta en una disminuci&#xF3;n de Ca (2 +) de entrada y toxicidad reducida. Ca (V) 1,2 internalizaci&#xF3;n y la degradaci&#xF3;n requiere la uni&#xF3;n de fosfatidilinositol 3-fosfato 5-quinasa (PIKfyve), una quinasa de l&#xED;pidos que genera fosfatidilinositol (3,5)-bifosfato (PtdIns (3,5) P (2)) y regula endosoma y la funci&#xF3;n lisosoma. Activaci&#xF3;n sostenida de receptores de glutamato recluta PIKfyve a Ca (V) 1,2 canales, aumenta los niveles celulares de PtdIns (3,5) P (2), y promueve la focalizaci&#xF3;n de Ca (V) 1,2 a los lisosomas. Derribo de PIKfyve impide Ca (V) 1,2 degradaci&#xF3;n y aumenta la susceptibilidad a la excitotoxicidad neuronal. Estos experimentos identifican un nuevo mecanismo por el cual las neuronas est&#xE1;n protegidos contra la excitotoxicidad y ofrecer una posible explicaci&#xF3;n para la muerte neuronal en enfermedades causadas por mutaciones que afectan a PtdIns (3,5) P (2) la regulaci&#xF3;n.

PIKfyve Regula Cav1.2 degradaci&#xF3;n y previene la muerte celular excitot&#xF3;xica

&#x7406;&#x89E3;&#x795E;&#x7ECF;&#x751F;&#x7269;&#x5B66;&#x7684;&#x590D;&#x6742;&#x6027;&#x4E0E;&#x9AD8;&#x7279;&#x5F02;&#x6027;&#x548C;&#x65F6;&#x7A7A;&#x7CBE;&#x5EA6;&#x9700;&#x8981;&#x64CD;&#x7EB5;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8FC7;&#x7A0B;&#x3002;&#x4F7F;&#x7528;&#x5149;&#x6C27;&#x7535;&#x538B;&#x8BBE;&#x8BA1;&#x5408;&#x6210;&#x7167;&#x7247;&#x53EF;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x86CB;&#x767D;&#x7684;&#x6700;&#x65B0;&#x8FDB;&#x5C55;&#x548C;&#x5149;&#x654F;&#x8272;&#x7D20;&#x57DF;&#x4E3A;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4FE1;&#x53F7;&#x8F6C;&#x5BFC;&#x57FA;&#x56E0;&#x6709;&#x9488;&#x5BF9;&#x6027;&#x5149;&#x5B66;&#x63A7;&#x5236;&#x63D0;&#x4F9B;&#x4E00;&#x5957;&#x65B0;&#x7684;&#x5DE5;&#x5177;&#x3002;&#x5176;&#x6A21;&#x5757;&#x5316;&#x8BBE;&#x8BA1;&#xFF0C;&#x529F;&#x80FD;&#x591A;&#x6837;&#x6027;&#xFF0C;&#x7CBE;&#x786E;&#x5730;&#x63A7;&#x5236;&#x6D3B;&#x52A8;&#x548C;&#x4F53;&#x5185;&#x7684;&#x9002;&#x7528;&#x6027;&#x63D0;&#x4F9B;&#x8C03;&#x67E5;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x529F;&#x80FD;&#x7684;&#x8BB8;&#x591A;&#x4F18;&#x70B9;&#x3002;&#x867D;&#x7136;&#x8BBE;&#x8BA1;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x662F;&#x76F8;&#x5F53;&#x5927;&#x7684;&#x6311;&#x6218;&#xFF0C;&#x672A;&#x6765;&#x4ECD;&#x7136;&#x8FDB;&#x5C55;&#x7406;&#x6027;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x8BBE;&#x8BA1;&#x548C;&#x66F4;&#x6DF1;&#x5165;&#x5730;&#x4E86;&#x89E3;&#x5176;&#x8C03;&#x4EA1;&#x7684;&#x673A;&#x5236;&#x5C06;&#x4F7F;&#x4E0B;&#x4E00;&#x4EE3;&#x7684;&#x9057;&#x4F20;&#x5B66;&#x6280;&#x672F;&#x7684;&#x53D1;&#x5C55;&#x3002;

&#x4F7F;&#x7528;&#x63A7;&#x5236;&#x4FE1;&#x53F7;&#x6D3B;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x7684;&#x53F6;&#x6805;&#x7684;&#x5149;&#x3002;

Understanding the complexity of neuronal biology requires the manipulation of cellular processes with high specificity and spatio-temporal precision. The recent development of synthetic photo-activatable proteins designed using the light-oxygen-voltage and phytochrome domains provides a new set of tools for genetically targeted optical control of cell signaling. Their modular design, functional diversity, precisely controlled activity and in vivo applicability offer many advantages for investigating neuronal function. Although designing these proteins is still a considerable challenge, future advances in rational protein design and a deeper understanding of their photoactivation mechanisms will allow the development of the next generation of optogenetic techniques.

Using light to control signaling cascades in live neurons.

Comprendre la complexit&#xE9; de la biologie neuronale n&#xE9;cessite la manipulation des processus cellulaires avec une grande sp&#xE9;cificit&#xE9; et de pr&#xE9;cision spatio-temporelle. Le d&#xE9;veloppement r&#xE9;cent de synth&#xE8;se photo-activables prot&#xE9;ines destin&#xE9;es &#xE0; l&#x26;#39;aide des domaines &#xE0; la lumi&#xE8;re de l&#x26;#39;oxyg&#xE8;ne de tension et de phytochrome fournit un nouvel ensemble d&#x26;#39;outils pour le contr&#xF4;le optique g&#xE9;n&#xE9;tiquement cibl&#xE9;e de la signalisation cellulaire. Leur conception modulaire, la diversit&#xE9; fonctionnelle, contr&#xF4;l&#xE9;e avec pr&#xE9;cision l&#x26;#39;activit&#xE9; et en application in vivo offrent de nombreux avantages pour enqu&#xEA;ter sur la fonction neuronale. Bien que la conception de ces prot&#xE9;ines est encore un d&#xE9;fi consid&#xE9;rable, les progr&#xE8;s futurs dans la conception des prot&#xE9;ines rationnelle et une meilleure compr&#xE9;hension de leurs m&#xE9;canismes de photoactivation va permettre le d&#xE9;veloppement de la prochaine g&#xE9;n&#xE9;ration de techniques optog&#xE9;n&#xE9;tique.

Utilisation de la lumi&#xE8;re pour contr&#xF4;ler des cascades de signalisation dans les neurones vivants

Die Komplexit&auml;t der neuronalen Biologie zu verstehen, muss die Manipulation zellul&auml;rer Prozesse mit hoher Spezifit&auml;t und r&auml;umlich-zeitliche Pr&auml;zision. Die j&uuml;ngste Entwicklung der synthetischen Foto-aktivierbaren Proteine entwickelt, mit die Licht-Sauerstoff-Spannung und Phytochroms Dom&auml;nen bietet einen neuen Satz von Tools f&uuml;r genetisch gezielte optische Kontrolle der Zelle Signalisierung. Ihr modulares Design, Funktionsvielfalt, kontrolliert genau Aktivit&auml;t und in-vivo Anwendbarkeit bieten viele Vorteile f&uuml;r die Erforschung der neuronalen Funktion. Obwohl die Entwicklung dieser Proteine ist noch eine gro&szlig;e Herausforderung, die k&uuml;nftige Fortschritte in rational Protein-Design und ein tieferes Verst&auml;ndnis f&uuml;r ihre Photoaktivierung-Mechanismen wird die Entwicklung der n&auml;chsten Generation von Optogenetic Techniken erm&ouml;glichen.

Mithilfe von Licht zu kontrollieren, die Kaskaden in live Neuronen signalisieren.

Comprendere la complessit&agrave; della biologia neuronale richiede la manipolazione di processi cellulari con alta specificit&agrave; e precisione spazio-temporale. Il recente sviluppo delle proteine sintetiche foto-activatable progettato utilizzando la tensione di ossigeno luce e domini Fitokhroma fornisce un nuovo set di strumenti per il controllo ottico geneticamente mirato di segnalazione cellulare. Loro design modulare, la diversit&agrave; funzionale, precisamente controllato attivit&agrave; ed applicabilit&agrave; in vivo offrono molti vantaggi per indagare la funzione neuronale. Anche se la progettazione di queste proteine &egrave; ancora una sfida considerevole, futura progressi nella progettazione razionale della proteina e una pi&ugrave; profonda comprensione dei loro meccanismi photoactivation permetter&agrave; lo sviluppo della prossima generazione di tecniche optogenetic.

Utilizzando la luce di controllo segnalazione cascades in neuroni dal vivo.

&#x795E;&#x7D4C;&#x751F;&#x7269;&#x5B66;&#x306E;&#x8907;&#x96D1;&#x3055;&#x3092;&#x7406;&#x89E3;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306F;&#x3001;&#x9AD8;&#x3044;&#x7279;&#x7570;&#x6027;&#x3068;&#x6642;&#x7A7A;&#x9593;&#x7CBE;&#x5EA6;&#x3067;&#x7D30;&#x80DE;&#x30D7;&#x30ED;&#x30BB;&#x30B9;&#x306E;&#x64CD;&#x4F5C;&#x3092;&#x3059;&#x308B;&#x5FC5;&#x8981;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x5149;&#x9178;&#x7D20;&#x96FB;&#x5727;&#x3068;&#x30D5;&#x30A3;&#x30C8;&#x30AF;&#x30ED;&#x30E0;&#x306E;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x8A2D;&#x8A08;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x5408;&#x6210;&#x5199;&#x771F;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x6700;&#x8FD1;&#x306E;&#x958B;&#x767A;&#x306F;&#x3001;&#x7D30;&#x80DE;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;&#x306E;&#x907A;&#x4F1D;&#x7684;&#x30BF;&#x30FC;&#x30B2;&#x30C3;&#x30C8;&#x3068;&#x5149;&#x5236;&#x5FA1;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x65B0;&#x3057;&#x3044;&#x30C4;&#x30FC;&#x30EB;&#x30BB;&#x30C3;&#x30C8;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x305D;&#x306E;&#x30E2;&#x30B8;&#x30E5;&#x30E9;&#x30FC;&#x8A2D;&#x8A08;&#x3001;&#x6A5F;&#x80FD;&#x7684;&#x591A;&#x69D8;&#x6027;&#x3001;&#x6B63;&#x78BA;&#x306B;&#x5236;&#x5FA1;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x6D3B;&#x52D5;&#x304A;&#x3088;&#x3073;in vivo&#x306E;&#x9069;&#x7528;&#x306B;&#x306F;&#x3001;&#x795E;&#x7D4C;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3092;&#x8ABF;&#x3079;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x591A;&#x304F;&#x306E;&#x5229;&#x70B9;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x3092;&#x8A2D;&#x8A08;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306F;&#x307E;&#x3060;&#x304B;&#x306A;&#x308A;&#x306E;&#x6311;&#x6226;&#x3067;&#x3059;&#x304C;&#x3001;&#x5408;&#x7406;&#x7684;&#x306A;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x306E;&#x8A2D;&#x8A08;&#x3068;&#x305D;&#x306E;&#x5149;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x6A5F;&#x69CB;&#x306E;&#x7406;&#x89E3;&#x3092;&#x6DF1;&#x3081;&#x3001;&#x5C06;&#x6765;&#x306E;&#x9032;&#x6B69;&#x306F;optogenetic&#x6280;&#x8853;&#x306E;&#x6B21;&#x4E16;&#x4EE3;&#x306E;&#x958B;&#x767A;&#x3092;&#x3067;&#x304D;&#x308B;&#x3088;&#x3046;&#x306B;&#x306A;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x30E9;&#x30A4;&#x30D6;&#x30CB;&#x30E5;&#x30FC;&#x30ED;&#x30F3;&#x306E;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#x30AB;&#x30B9;&#x30B1;&#x30FC;&#x30C9;&#x3092;&#x5236;&#x5FA1;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x30E9;&#x30A4;&#x30C8;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;

Spatio &#xC2DC;&#xAC04;&#xC801; &#xC815;&#xBC00;&#xB3C4;&#xC640; &#xB192;&#xC740; &#xD2B9;&#xC774;&#xC131; &#xC138;&#xD3EC; &#xD504;&#xB85C;&#xC138;&#xC2A4;&#xC758; &#xC870;&#xC791;&#xC774; &#xD544;&#xC694;&#xB85C; &#xC2E0;&#xACBD; &#xC0DD;&#xBB3C;&#xD559;&#xC758; &#xBCF5;&#xC7A1;&#xC131;&#xC744; &#xC774;&#xD574;. &#xD569;&#xC131; &#xC0AC;&#xC9C4; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xCD5C;&#xADFC; &#xAC1C;&#xBC1C; &#xBE5B; &#xC0B0;&#xC18C; &#xC804;&#xC555;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xC124;&#xACC4; &#xBC0F; phytochrome &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778; &#xC138;&#xD3EC; &#xC2E0;&#xD638; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xD0C0;&#xAC9F;&#xB41C; &#xAD11; &#xC81C;&#xC5B4;&#xB97C; &#xC704;&#xD55C; &#xC0C8;&#xB85C;&#xC6B4; &#xB3C4;&#xAD6C; &#xC9D1;&#xD569;&#xC744; &#xC81C;&#xACF5; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xADF8;&#xB4E4;&#xC758; &#xBAA8;&#xB4C8;&#xC2DD; &#xB514;&#xC790;&#xC778;, &#xAE30;&#xB2A5;&#xC758; &#xB2E4;&#xC591;&#xC131;, &#xC815;&#xD655; &#xD558; &#xAC8C; &#xC81C;&#xC5B4; &#xD65C;&#xB3D9; &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; vivo&#xC5D0;&#xC11C; &#xC801;&#xC751;&#xC131; &#xC81C;&#xACF5; &#xC870;&#xC0AC; &#xD558; &#xACE0; &#xC2E0;&#xACBD; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC744; &#xC704;&#xD55C; &#xB9CE;&#xC740; &#xC7A5;&#xC810;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC124;&#xACC4;&#xB294; &#xC5EC;&#xC804;&#xD788; &#xC0C1;&#xB2F9;&#xD55C; &#xB3C4;&#xC804;, &#xBBF8;&#xB798;&#xC758; &#xD569;&#xB9AC;&#xC801;&#xC778; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xB514;&#xC790;&#xC778; &#xBC1C;&#xC804; &#xBC0F; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC758; photoactivation &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;&#xC758; &#xAE4A;&#xC740; &#xC774;&#xD574; optogenetic &#xAE30;&#xC220;&#xC758; &#xB2E4;&#xC74C; &#xC138;&#xB300;&#xC758; &#xAC1C;&#xBC1C;&#xC744; &#xD5C8;&#xC6A9;&#xD560; &#xAC83; &#xC774;&#xB2E4;.

&#xBE5B;&#xC774; &#xC0B4;&#xC544;&#xC788;&#xB294; &#xB274;&#xB7F0; &#xCE90;&#xC2A4;&#xCF00;&#xC774;&#xB4DC; &#xC2E0;&#xD638; &#xC81C;&#xC5B4;&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC;.

Comprender la complejidad de la biolog&#xED;a neuronal requiere la manipulaci&#xF3;n de los procesos celulares con alta especificidad y precisi&#xF3;n espacio-temporal. El reciente desarrollo de sint&#xE9;ticos foto-activables prote&#xED;nas dise&#xF1;adas utilizando los dominios de la luz y ox&#xED;geno-voltaje y fitocromo proporciona un nuevo conjunto de herramientas para el control gen&#xE9;tico dirigido &#xF3;ptica de la se&#xF1;alizaci&#xF3;n celular. Su dise&#xF1;o modular, la diversidad funcional, controlada con precisi&#xF3;n la actividad y en la aplicaci&#xF3;n in vivo ofrecen muchas ventajas para la investigaci&#xF3;n de la funci&#xF3;n neuronal. Aunque el dise&#xF1;o de estas prote&#xED;nas sigue siendo un desaf&#xED;o considerable, los futuros avances en el dise&#xF1;o racional de prote&#xED;nas y una comprensi&#xF3;n m&#xE1;s profunda de sus mecanismos de fotoactivaci&#xF3;n permitir&#xE1; el desarrollo de la pr&#xF3;xima generaci&#xF3;n de t&#xE9;cnicas de optogen&#xE9;tica.

Uso de la luz para el control de cascadas de se&#xF1;alizaci&#xF3;n en las neuronas en vivo

&#x5148;&#x5929;&#x6027;&#x6216;&#x540E;&#x5929;&#x5EF6;&#x957F; QT &#x95F4;&#x671F;&#x6216;&#x957F; QT &#x7EFC;&#x5408;&#x5F81; (LQTS) &#x4E0E;&#x4E2A;&#x4EBA;&#x90FD;&#x5192;&#x7740;&#x751F;&#x547D;&#x5371;&#x9669;&#x7684;&#x5BA4;&#x6027;&#x5FC3;&#x5F8B;&#x5931;&#x5E38;&#x3002;LQTS &#x662F;&#x5E38;&#x89C1;&#x9057;&#x4F20;&#x8D77;&#x6E90;&#x4E2D;&#x4F46;&#x53EF;&#x4EE5;&#x8FD8;&#x4F1A;&#x5BFC;&#x81F4;&#x6216;&#x52A0;&#x5267;&#x7684;&#x73AF;&#x5883;&#x56E0;&#x7D20;&#x3002;Ca (V) 1.2 L-&#x578B;&#x9499;&#x901A;&#x9053;&#x4E2D;&#x7684;&#x9519;&#x4E49;&#x7A81;&#x53D8;&#x5BFC;&#x81F4; LQTS &#x60A3;&#x8005;&#x8482;&#x83AB;&#x897F; &middot; &#x7EFC;&#x5408;&#x5F81;&#x3002;&#x63A2;&#x7D22;&#x7684;&#x8482;&#x83AB;&#x897F; &middot; &#x7EFC;&#x5408;&#x5F81;&#x7A81;&#x53D8;&#x5BF9;&#x8111;&#x7535;&#x6D3B;&#x52A8;&#x7684;&#x5F71;&#x54CD;&#x548C;&#x4EBA;&#x7C7B;&#x5FC3;&#x808C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6536;&#x7F29;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x91CD;&#x65B0;&#x7F16;&#x7A0B;&#xFF0C;&#x8482;&#x83AB;&#x897F; &middot; &#x7EFC;&#x5408;&#x5F81;&#x60A3;&#x8005;&#x4EE5;&#x751F;&#x6210;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x591A;&#x80FD;&#x5E72;&#x7EC6;&#x80DE;&#xFF0C;&#x4EBA;&#x4F53;&#x76AE;&#x80A4;&#x7EC6;&#x80DE;&#xFF0C;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5206;&#x5316;&#x4E3A;&#x5FC3;&#x808C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x3002;&#x7535;&#x751F;&#x7406;&#x8BB0;&#x5F55;&#x548C;&#x9499; &#xFF08;Ca(2+)) &#x8FD9;&#x4E9B;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x5F71;&#x50CF;&#x5B66;&#x7814;&#x7A76;&#x63ED;&#x793A;&#x4E0D;&#x89C4;&#x5219;&#x6536;&#x7F29;&#x3001; &#x8FC7;&#x5269;&#x7ECF;&#x6D8C;&#x5165;&#x3001; &#x957F;&#x65F6;&#x95F4;&#x7684;&#x52A8;&#x4F5C;&#x7535;&#x4F4D;&#x3001; &#x4E0D;&#x89C4;&#x5219;&#x7684;&#x7535;&#x6D3B;&#x52A8;&#x548C;&#x5FC3;&#x5BA4;&#x6837;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5F02;&#x5E38;&#x9499;&#x77AC;&#x53D8;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x53D1;&#x73B0;&#x8FD9;&#x7CFB;&#x5217;&#xFF0C;&#x4E00;&#x79CD;&#x5316;&#x5408;&#x7269;&#xFF0C;&#x53EF;&#x4EE5;&#x63D0;&#x9AD8;&#x7535;&#x538B;&#x4F9D;&#x8D56;&#x6027;&#x706D;&#x6D3B;&#x7684; Ca (V) 1.2 (&#x88C1;&#x5224; 6-8&#xFF09;&#xFF0C;&#x6062;&#x590D;&#x7684;&#x7535;&#x6C14;&#x548C;&#x7ECF;&#x4FE1;&#x53F7;&#x4ECE;&#x8482;&#x83AB;&#x897F; &middot; &#x7EFC;&#x5408;&#x5F81;&#x60A3;&#x8005;&#x7684;&#x5FC3;&#x808C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x5C5E;&#x6027;&#x3002;&#x8FD9;&#x9879;&#x7814;&#x7A76;&#x63D0;&#x4F9B;&#x4E86;&#x65B0;&#x7684;&#x673A;&#x4F1A;&#xFF0C;&#x5728;&#x4EBA;&#x7C7B;&#x4E2D;&#xFF0C;&#x5FC3;&#x5F8B;&#x5931;&#x5E38;&#x7684;&#x5206;&#x5B50;&#x4E0E;&#x7EC6;&#x80DE;&#x673A;&#x5236;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x548C;&#x5F00;&#x53D1;&#x65B0;&#x7684;&#x836F;&#x7269;&#x6765;&#x6CBB;&#x7597;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x75BE;&#x75C5;&#x63D0;&#x4F9B;&#x4E00;&#x79CD;&#x53EF;&#x9760;&#x7684;&#x68C0;&#x6D4B;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3002;

&#x4F7F;&#x7528;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x591A;&#x80FD;&#x5E72;&#x7EC6;&#x80DE;&#xFF0C;&#x8C03;&#x67E5;&#x8482;&#x83AB;&#x897F; &middot; &#x7EFC;&#x5408;&#x5F81;&#x5FC3;&#x810F;&#x578B;&#x3002;

Individuals with congenital or acquired prolongation of the QT interval, or long QT syndrome (LQTS), are at risk of life-threatening ventricular arrhythmia. LQTS is commonly genetic in origin but can also be caused or exacerbated by environmental factors. A missense mutation in the L-type calcium channel Ca(V)1.2 leads to LQTS in patients with Timothy syndrome. To explore the effect of the Timothy syndrome mutation on the electrical activity and contraction of human cardiomyocytes, we reprogrammed human skin cells from Timothy syndrome patients to generate induced pluripotent stem cells, and differentiated these cells into cardiomyocytes. Electrophysiological recording and calcium (Ca(2+)) imaging studies of these cells revealed irregular contraction, excess Ca(2+) influx, prolonged action potentials, irregular electrical activity and abnormal calcium transients in ventricular-like cells. We found that roscovitine, a compound that increases the voltage-dependent inactivation of Ca(V)1.2 (refs 6-8), restored the electrical and Ca(2+) signalling properties of cardiomyocytes from Timothy syndrome patients. This study provides new opportunities for studying the molecular and cellular mechanisms of cardiac arrhythmias in humans, and provides a robust assay for developing new drugs to treat these diseases.

Using induced pluripotent stem cells to investigate cardiac phenotypes in Timothy syndrome.

Les personnes qui pr&#xE9;sentent un allongement cong&#xE9;nital ou acquis de l&#x26;#39;intervalle QT, ou syndrome du QT long (SQTL), sont &#xE0; risque d&#x26;#39;arythmie ventriculaire mortelle. SQTL est g&#xE9;n&#xE9;ralement d&#x26;#39;origine g&#xE9;n&#xE9;tique, mais peut aussi &#xEA;tre caus&#xE9;e ou aggrav&#xE9;e par les facteurs environnementaux. Une mutation faux-sens dans le L-canaux calciques de type Ca (V) 1.2 conduit &#xE0; SQTL chez les patients atteints du syndrome de Timothy. Pour explorer l&#x26;#39;effet de la mutation du syndrome Timothy sur l&#x26;#39;activit&#xE9; &#xE9;lectrique et de la contraction des cardiomyocytes humains, on reprogramm&#xE9; cellules de la peau de l&#x26;#39;homme de patients atteints du syndrome Timothy pour g&#xE9;n&#xE9;rer cellules souches pluripotentes induites, et ces cellules diff&#xE9;renci&#xE9;es en cardiomyocytes. L&#x26;#39;enregistrement &#xE9;lectrophysiologique et le calcium (Ca (2 +)) les &#xE9;tudes d&#x26;#39;imagerie de ces cellules a r&#xE9;v&#xE9;l&#xE9; une contraction irr&#xE9;guli&#xE8;re, un exc&#xE8;s de Ca (2 +) afflux, des potentiels d&#x26;#39;action prolong&#xE9;e, l&#x26;#39;activit&#xE9; &#xE9;lectrique irr&#xE9;guli&#xE8;re et transitoires calciques anormaux dans les cellules-ventriculaire comme. Nous avons constat&#xE9; que la roscovitine, un compos&#xE9; qui augmente l&#x26;#39;inactivation voltage-d&#xE9;pendant de Ca (V) 1,2 (refs 6-8), restaur&#xE9; l&#x26;#39;&#xE9;lectricit&#xE9; et de Ca (2 +) propri&#xE9;t&#xE9;s de signalisation de cardiomyocytes de patients atteints du syndrome de Timothy. Cette &#xE9;tude offre de nouvelles possibilit&#xE9;s pour &#xE9;tudier les m&#xE9;canismes mol&#xE9;culaires et cellulaires des arythmies cardiaques chez les humains, et fournit un test solide pour le d&#xE9;veloppement de nouveaux m&#xE9;dicaments pour traiter ces maladies.

Utilisation de cellules souches pluripotentes induites d&#x26;#39;enqu&#xEA;ter sur les ph&#xE9;notypes cardiaques dans le syndrome de Timothy

Personen mit angeborener oder erworbener Verl&auml;ngerung des QT-Intervall oder long-QT-Syndrom (LQTS), laufen Gefahr lebensbedrohliche ventrikul&auml;re Arrhythmie. LQTS kann ist h&auml;ufig genetischen Ursprung aber auch verursacht oder verschlimmert durch Umweltfaktoren. Eine Missense-Mutation in der L-Typ-Kalzium-Kanal Ca (V) 1.2 f&uuml;hrt zu LQTS bei Patienten mit Timothy-Syndrom. Um den Effekt der Timothy Syndrom Mutation auf die elektrische Aktivit&auml;t und Kontraktion der menschlichen Cardiomyocytes zu erkunden, wir menschliche Hautzellen von Timothy-Syndrom-Patienten zum Generieren von induzierten pluripotenten Stammzellen umprogrammiert und differenziert diese Zellen in Cardiomyocytes. Elektrophysiologische Aufnahme und Calcium (Ca(2+)) imaging Studien dieser Zellen ergab unregelm&auml;&szlig;ige Kontraktion, &uuml;bersch&uuml;ssige Ca(2+) Zustrom, anhaltende Aktionspotentiale, unregelm&auml;&szlig;ige elektrische Aktivit&auml;t und abnorme Kalzium Transienten in ventrikul&auml;re-&auml;hnlichen Zellen. Wir fanden, dass Roscovitine, ein Mittel, das erh&ouml;ht die Spannung-abh&auml;ngigen Inaktivierung von Ca (V) 1.2 (Schiedsrichter 6-8), die elektrische wiederhergestellt und Ca(2+) signalisieren Eigenschaften von Cardiomyocytes von Timothy-Syndrom Patienten. Diese Studie bietet neue M&ouml;glichkeiten f&uuml;r die molekularen und zellul&auml;ren Mechanismen der kardialen Arrhythmien bei Menschen zu studieren, und stellt eine robuste Assay f&uuml;r die Entwicklung neuer Medikamente zur Behandlung dieser Krankheiten.

Mit induzierten pluripotenten Stammzellen, kardiale Ph&auml;notypen in Timothy-Syndrom zu untersuchen.

Gli individui con prolungamento congenito o acquisito dell&#39;intervallo QT o sindrome del QT lungo (LQTS), sono a rischio di aritmia ventricolare letale. LQTS &egrave; comunemente genetica in origine, ma anche pu&ograve; essere causata o aggravata da fattori ambientali. Una mutazione missenso nel canale calcio tipo L Ca (V) 1.2 conduce a LQTS in pazienti con la sindrome di Timothy. Per esplorare l&#39;effetto della mutazione sindrome Timothy sull&#39;attivit&agrave; elettrica e contrazione dei cardiomiociti umani, abbiamo riprogrammato cellule di pelle umana da pazienti con sindrome Timothy per generare cellule staminali pluripotenti indotte e queste cellule differenziate in cardiomiociti. Registrazione elettrofisiologica e calcio (Ca(2+)) imaging studies di queste cellule ha rivelato contrazione irregolare, afflusso Ca(2+) in eccesso, potenziali di azione prolungati, attivit&agrave; elettrica irregolare e transitori di calcio anormale nel ventricolo-come le cellule. Abbiamo trovato che roscovitine, un composto che aumenta l&#39;inattivazione di tensione-dipendenti del Ca (V) 1,2 (Rif. 6-8), restaurata l&#39;elettrica e Ca(2+) segnalazione di propriet&agrave; di cardiomiociti da pazienti di sindrome di Timothy. Questo studio offre nuove opportunit&agrave; per studiare i meccanismi molecolari e cellulari delle aritmie cardiache negli esseri umani e fornisce una robusta analisi per lo sviluppo di nuovi farmaci per il trattamento di queste malattie.

Utilizzando indotta da cellule staminali pluripotenti per indagare su fenotipi cardiaci nella sindrome di Timothy.

QT&#x9593;&#x9694;&#x306E;&#x5148;&#x5929;&#x6027;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x5F8C;&#x5929;&#x6027;&#x306E;&#x5EF6;&#x9577;&#x3092;&#x6301;&#x3064;&#x500B;&#x4EBA;&#x3001;&#x307E;&#x305F;&#x306F;QT&#x5EF6;&#x9577;&#x75C7;&#x5019;&#x7FA4;&#xFF08;LQTS&#xFF09;&#x306F;&#x3001;&#x751F;&#x547D;&#x3092;&#x8105;&#x304B;&#x3059;&#x5FC3;&#x5BA4;&#x6027;&#x4E0D;&#x6574;&#x8108;&#x306E;&#x5371;&#x967A;&#x306B;&#x3055;&#x3089;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002; LQTS&#x306F;&#x3001;&#x539F;&#x70B9;&#x3067;&#x4E00;&#x822C;&#x7684;&#x306B;&#x907A;&#x4F1D;&#x7684;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3060;&#x3051;&#x3067;&#x306A;&#x304F;&#x3001;&#x74B0;&#x5883;&#x8981;&#x56E0;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x5F15;&#x304D;&#x8D77;&#x3053;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x304B;&#x3001;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x60AA;&#x5316;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30C6;&#x30A3;&#x30E2;&#x30B7;&#x30FC;&#x75C7;&#x5019;&#x7FA4;&#x60A3;&#x8005;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;LQTS&#x306E;L&#x578B;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x306E;Ca&#xFF08;V&#xFF09;1.2&#x30EA;&#x30FC;&#x30C9;&#x306E;&#x30DF;&#x30B9;&#x30BB;&#x30F3;&#x30B9;&#x5909;&#x7570;&#x3002;&#x4EBA;&#x9593;&#x306E;&#x5FC3;&#x7B4B;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x96FB;&#x6C17;&#x6D3B;&#x52D5;&#x3068;&#x53CE;&#x7E2E;&#x306B;&#x5BFE;&#x3059;&#x308B;&#x30C6;&#x30A3;&#x30E2;&#x30B7;&#x30FC;&#x75C7;&#x5019;&#x7FA4;&#x306E;&#x7A81;&#x7136;&#x5909;&#x7570;&#x306E;&#x52B9;&#x679C;&#x3092;&#x63A2;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x4EBA;&#x5DE5;&#x591A;&#x80FD;&#x6027;&#x5E79;&#x7D30;&#x80DE;&#x3092;&#x751F;&#x6210;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x30C6;&#x30A3;&#x30E2;&#x30B7;&#x30FC;&#x75C7;&#x5019;&#x7FA4;&#x306E;&#x60A3;&#x8005;&#x304B;&#x3089;&#x30D2;&#x30C8;&#x306E;&#x76AE;&#x819A;&#x7D30;&#x80DE;&#x3092;&#x518D;&#x30D7;&#x30ED;&#x30B0;&#x30E9;&#x30E0;&#x3057;&#x3001;&#x5FC3;&#x7B4B;&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x3092;&#x5206;&#x5316;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x96FB;&#x6C17;&#x751F;&#x7406;&#x5B66;&#x7684;&#x8A18;&#x9332;&#x3068;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;&#xFF08;Ca&#xFF08;2 +&#xFF09;&#xFF09;&#x30A4;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B8;&#x30F3;&#x30B0;&#x7814;&#x7A76;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x4E0D;&#x898F;&#x5247;&#x306A;&#x53CE;&#x7E2E;&#x3001;&#x904E;&#x5270;&#x306E;Ca&#xFF08;2 +&#xFF09;&#x6D41;&#x5165;&#x3001;&#x9577;&#x671F;&#x306E;&#x6D3B;&#x52D5;&#x96FB;&#x4F4D;&#x3001;&#x4E0D;&#x898F;&#x5247;&#x306A;&#x96FB;&#x6C17;&#x7684;&#x6D3B;&#x52D5;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x5FC3;&#x5BA4;&#x7D30;&#x80DE;&#x69D8;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x7570;&#x5E38;&#x306A;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B8;&#x30A7;&#x30F3;&#x30C8;&#x3092;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x304C;&#x767A;&#x898B;&#x3057;&#x305F;&#x30ED;&#x30B9;&#x30B3;&#x30D3;&#x30C1;&#x30F3;&#x3001;&#x96FB;&#x6C17;&#x304A;&#x3088;&#x3073;Ca&#x3092;&#x5FA9;&#x5143;&#x3057;&#x305F;Ca&#x306E;&#x96FB;&#x4F4D;&#x4F9D;&#x5B58;&#x6027;&#x4E0D;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#xFF08;V&#xFF09;1.2&#xFF08;&#x6587;&#x732E;6-8&#xFF09;&#x3001;&#x5897;&#x52A0;&#x3055;&#x305B;&#x308B;&#x5316;&#x5408;&#x7269;&#xFF08;2 +&#xFF09;&#x30C6;&#x30A3;&#x30E2;&#x30B7;&#x30FC;&#x75C7;&#x5019;&#x7FA4;&#x306E;&#x60A3;&#x8005;&#x304B;&#x3089;&#x306E;&#x5FC3;&#x7B4B;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x6027;&#x8CEA;&#x3092;&#x77E5;&#x3089;&#x305B;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x7814;&#x7A76;&#x306F;&#x3001;&#x30D2;&#x30C8;&#x3067;&#x306E;&#x4E0D;&#x6574;&#x8108;&#x306E;&#x5206;&#x5B50;&#xB7;&#x7D30;&#x80DE;&#x30E1;&#x30AB;&#x30CB;&#x30BA;&#x30E0;&#x3092;&#x7814;&#x7A76;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x65B0;&#x3057;&#x3044;&#x6A5F;&#x4F1A;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3057;&#x3001;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x75BE;&#x60A3;&#x3092;&#x6CBB;&#x7642;&#x3059;&#x308B;&#x65B0;&#x85AC;&#x3092;&#x958B;&#x767A;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x5805;&#x7262;&#x306A;&#x30A2;&#x30C3;&#x30BB;&#x30A4;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3059;&#x308B;&#x3002;

&#x30C6;&#x30A3;&#x30E2;&#x30B7;&#x30FC;&#x75C7;&#x5019;&#x7FA4;&#x306B;&#x5FC3;&#x81D3;&#x306E;&#x8868;&#x73FE;&#x578B;&#x3092;&#x8ABF;&#x67FB;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x8A98;&#x5C0E;&#x591A;&#x80FD;&#x6027;&#x5E79;&#x7D30;&#x80DE;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;

&#xB418;&#xAC70;&#xB098; &#xD655;&#xBCF4; &#xB41C; &#xC120; &#xCC9C; &#xC131; &#xAE34; QT &#xC99D;&#xD6C4;&#xAD70; (LQTS) &#xB610;&#xB294; QT &#xAC04;&#xACA9;&#xC758; &#xC5F0;&#xC7A5;&#xACFC; &#xAC1C;&#xC778; &#xC0DD;&#xD65C;&#xC744; &#xC704;&#xD611; &#xD558; &#xACE0; &#xC2EC; &#xC2E4; &#xBD80;&#xC815;&#xB9E5;&#xC758; &#xC704;&#xD5D8;&#xC774; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. LQTS &#xC6D0;&#xC810;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC77C;&#xBC18;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xB294; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xB610;&#xD55C; &#xBC1C;&#xC0DD; &#xD558;&#xAC70;&#xB098; &#xC218; &#xD658;&#xACBD; &#xC694;&#xC778;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC545;&#xD654;. Ca (V) 1.2 L-&#xD0C0;&#xC785; &#xCE7C;&#xC298; &#xCC44;&#xB110;&#xC758; missense &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xD2F0; &#xBAA8; &#xC99D;&#xD6C4;&#xAD70; &#xD658;&#xC790;&#xC5D0;&#xC11C; LQTS&#xB85C; &#xC774;&#xC5B4;&#xC9D1;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xD6A8;&#xACFC;&#xC758; &#xC804;&#xAE30; &#xD65C;&#xB3D9;&#xC5D0; &#xD2F0; &#xBAA8; &#xC99D;&#xD6C4;&#xAD70; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xC778;&#xAC04;&#xC758; cardiomyocytes&#xC758; &#xC218;&#xCD95; &#xD0D0;&#xC0C9;, &#xC720;&#xB3C4; &#xB9CC;&#xB2A5; &#xC904;&#xAE30; &#xC138;&#xD3EC; &#xC0DD;&#xC131;&#xC744; &#xD2F0; &#xBAA8; &#xC99D;&#xD6C4;&#xAD70; &#xD658;&#xC790;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC778;&#xAC04;&#xC758; &#xD53C;&#xBD80; &#xC138;&#xD3EC; &#xD504;&#xB85C;&#xADF8;&#xB7A8; &#xD574; &#xC6B0;&#xB9AC; &#xACE0; cardiomyocytes&#xC5D0;&#xC774; &#xC138;&#xD3EC; &#xBD84;&#xD654;. Electrophysiological &#xAE30;&#xB85D;&#xACFC; &#xCE7C;&#xC298; (Ca(2+)) &#xC774;&#xBBF8;&#xC9D5; &#xC5F0;&#xAD6C; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xBD88;&#xADDC;&#xCE59; &#xD55C; &#xC218;&#xCD95;, &#xCD08;&#xACFC; Ca(2+) &#xC720;&#xC785;, &#xC7A5;&#xAE30;&#xAC04;&#xB41C; &#xC791;&#xC5C5; &#xD6C4;&#xBCF4;, &#xBD88;&#xADDC;&#xCE59; &#xD55C; &#xC804;&#xAE30; &#xD65C;&#xB3D9; &#xBC0F; &#xC2EC; &#xC2E4; &#xAC19;&#xC740; &#xC140;&#xC5D0; &#xC788;&#xB294; &#xBE44;&#xC815;&#xC0C1;&#xC801;&#xC778; &#xCE7C;&#xC298; &#xACFC;&#xB3C4; &#xACF5;&#xAC1C; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xADF8; roscovitine, &#xC804;&#xC555; &#xC885;&#xC18D; &#xBE44;&#xD65C;&#xC131;&#xD654; Ca (V) 1.2 (&#xC2EC;&#xD310; 6-8)&#xC758; &#xC99D;&#xAC00; &#xD558;&#xB294; &#xBCF5;&#xD569; &#xBCF5;&#xC6D0; &#xC804;&#xAE30; &#xBC1C;&#xACAC; &#xBC0F; Ca(2+) &#xD2F0; &#xBAA8; &#xC99D;&#xD6C4;&#xAD70; &#xD658;&#xC790;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC18D;&#xC131; cardiomyocytes&#xC758; &#xC2E0;&#xD638;. &#xC774; &#xC5F0;&#xAD6C; &#xC778;&#xAC04;, &#xC2EC;&#xC7A5; &#xBD80;&#xC815;&#xB9E5;&#xC758; &#xBD84;&#xC790; &#xBC0F; &#xC138;&#xD3EC; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xB97C; &#xC704;&#xD55C; &#xC0C8;&#xB85C;&#xC6B4; &#xAE30;&#xD68C;&#xB97C; &#xC81C;&#xACF5; &#xD558; &#xACE0; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xC9C8;&#xBCD1;&#xC744; &#xCE58;&#xB8CC; &#xD558;&#xB294; &#xC0C8;&#xB85C;&#xC6B4; &#xC57D;&#xBB3C; &#xAC1C;&#xBC1C;&#xC744; &#xC704;&#xD55C; &#xAC15;&#xB825;&#xD55C; &#xBD84;&#xC11D; &#xACB0;&#xACFC; &#xC81C;&#xACF5; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xD2F0; &#xBAA8; &#xC99D;&#xD6C4;&#xAD70; &#xC2EC;&#xC7A5; &#xACE0;&#xAE30; &#xC870;&#xC0AC; pluripotent &#xC904;&#xAE30; &#xC138;&#xD3EC; &#xC720;&#xB3C4;.

Las personas con prolongaci&#xF3;n cong&#xE9;nita o adquirida del intervalo QT, o s&#xED;ndrome de QT largo (SQTL), corren el riesgo de arritmias ventriculares potencialmente mortales. SQTL es com&#xFA;nmente de origen gen&#xE9;tico, pero tambi&#xE9;n puede ser causada o agravada por factores ambientales. Una mutaci&#xF3;n sin sentido en el tipo L del canal de calcio Ca (V) 1.2 lleva a SQTL en los pacientes con s&#xED;ndrome de Timothy. Para explorar el efecto de la mutaci&#xF3;n del s&#xED;ndrome de Timothy en la actividad el&#xE9;ctrica y la contracci&#xF3;n de los cardiomiocitos humanos, reprogramado las c&#xE9;lulas humanas de la piel de pacientes con s&#xED;ndrome de Timothy para generar c&#xE9;lulas madre pluripotentes inducidas, y se diferencian estas c&#xE9;lulas en los cardiomiocitos. Registro electrofisiol&#xF3;gico y calcio (Ca (2 +)) los estudios de imagen de estas c&#xE9;lulas revelaron una contracci&#xF3;n irregular, el exceso de Ca (2 +) influjo, los potenciales de acci&#xF3;n prolongada, la actividad el&#xE9;ctrica irregular y transitorios anormales de calcio en las c&#xE9;lulas como ventricular. Se encontr&#xF3; que la roscovitina, un compuesto que aumenta la inactivaci&#xF3;n voltaje-dependientes de Ca (V) 1,2 (refs 6-8), restaur&#xF3; la electricidad y Ca (2 +) de se&#xF1;alizaci&#xF3;n de las propiedades de los cardiomiocitos de pacientes con s&#xED;ndrome de Timothy. Este estudio proporciona nuevas oportunidades para el estudio de los mecanismos moleculares y celulares de las arritmias card&#xED;acas en los seres humanos, y proporciona un s&#xF3;lido ensayo para el desarrollo de nuevos medicamentos para tratar estas enfermedades.

Uso de c&#xE9;lulas madre pluripotentes inducidas para investigar fenotipos card&#xED;acos en el s&#xED;ndrome de Timothy

&#x901A;&#x8FC7;&#x8BBF;&#x95EE;&#x53D7;&#x5F71;&#x54CD;&#x4EBA;&#x7C7B;&#x591A;&#x5DF4;&#x80FA; (DA) &#x80FD;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x7F3A;&#x4E4F;&#x963B;&#x788D;&#x4E86;&#x5E15;&#x91D1;&#x68EE;&#x75C5; (PD) &#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x62A5;&#x544A;&#x6267;&#x884C;&#x5BCC;&#x4EAE;&#x6C28;&#x9178;&#x91CD;&#x590D;&#x6FC0;&#x9176; 2 (LRRK2) &#x57FA;&#x56E0; p.G2019S &#x7A81;&#x53D8; &#xFF08;G2019S-&#x9B54;&#x9B3C;&#xFF09;&#x3001; &#x6700;&#x5E38;&#x89C1;&#x7684; PD &#x76F8;&#x5173;&#x7A81;&#x53D8;&#x548C;&#x5411; DA &#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x5206;&#x5316;&#x7684;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x7684;&#x591A;&#x529F;&#x80FD;&#x5E72;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x751F;&#x6210;&#x3002;LRRK2 &#x7A81;&#x53D8;&#x548C;&#x96F6;&#x661F; PD &#x53CA;&#x5176;&#x4E34;&#x5E8A;&#x76F8;&#x4F3C;&#x7684;&#x9AD8;&#x5916;&#x663E;&#x7387;&#x8868;&#x660E;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7EC6;&#x80DE;&#x53EF;&#x4EE5;&#x4E3A;&#x75BE;&#x75C5;&#x5206;&#x6790;&#x548C;&#x836F;&#x7269;&#x5F00;&#x53D1;&#x63D0;&#x4F9B;&#x4E86;&#x5B9D;&#x8D35;&#x7684;&#x5E73;&#x53F0;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x53D1;&#x73B0; DA &#x795E;&#x7ECF;&#x5143; G2019S &#x9B54;&#x9B3C;&#x4ECE;&#x6D3E;&#x751F;&#x5BC6;&#x94A5;&#x7684;&#x6C27;&#x5316;&#x5E94;&#x6FC0;&#x53CD;&#x5E94;&#x57FA;&#x56E0;&#x548C; &alpha;-synuclein &#x86CB;&#x767D;&#x8868;&#x8FBE;&#x589E;&#x52A0;&#x3002;&#x7A81;&#x53D8;&#x4F53;&#x7684;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x4E5F;&#x5BF9;&#x66B4;&#x9732;&#x5F15;&#x8D77;&#x5F3A;&#x8C03;&#x4EE3;&#x7406;&#x5982;&#x8FC7;&#x6C27;&#x5316;&#x6C22;&#x3001; &#x9541;-132 &#x548C; 6-&#x7F9F;&#x57FA;&#x591A;&#x5DF4;&#x80FA;&#xFF0C;&#x591A;&#x5DF4;&#x80FA;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x63A7;&#x5236;&#x7684;&#x534A;&#x80F1;&#x6C28;&#x9178;&#x86CB;&#x767D;&#x9176;-3 &#x6D3B;&#x5316;&#x4E0E;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6B7B;&#x4EA1;&#x66F4;&#x52A0;&#x654F;&#x611F;&#x3002;&#x6B64;&#x589E;&#x5F3A;&#x7684;&#x5E94;&#x529B;&#x654F;&#x611F;&#x6027;&#x4E0E;&#x73B0;&#x6709;&#x8868;&#x578B; PD &#x65E9;&#x671F;&#x7684;&#x7406;&#x89E3;&#x662F;&#x4E00;&#x81F4;&#x7684;&#x5E76;&#x8868;&#x793A;&#x6F5C;&#x5728;&#x7684;&#x6CBB;&#x7597;&#x76EE;&#x6807;&#x3002;

LRRK2 &#x7A81;&#x53D8;&#x673A;&#x4F53;&#x529F;&#x80FD;&#x6D3E;&#x751F; DA &#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x8868;&#x660E;&#x6C27;&#x5316;&#x5E94;&#x6FC0;&#x7684;&#x654F;&#x611F;&#x6027;&#x589E;&#x52A0;&#x3002;

Studies of Parkinson's disease (PD) have been hindered by lack of access to affected human dopaminergic (DA) neurons. Here, we report generation of induced pluripotent stem cells that carry the p.G2019S mutation (G2019S-iPSCs) in the Leucine-Rich Repeat Kinase-2 (LRRK2) gene, the most common PD-related mutation, and their differentiation into DA neurons. The high penetrance of the LRRK2 mutation and its clinical resemblance to sporadic PD suggest that these cells could provide a valuable platform for disease analysis and drug development. We found that DA neurons derived from G2019S-iPSCs showed increased expression of key oxidative stress-response genes and Î±-synuclein protein. The mutant neurons were also more sensitive to caspase-3 activation and cell death caused by exposure to stress agents, such as hydrogen peroxide, MG-132, and 6-hydroxydopamine, than control DA neurons. This enhanced stress sensitivity is consistent with existing understanding of early PD phenotypes and represents a potential therapeutic target.

LRRK2 mutant iPSC-derived DA neurons demonstrate increased susceptibility to oxidative stress.

Les &#xE9;tudes de la maladie de Parkinson (PD) ont &#xE9;t&#xE9; entrav&#xE9;s par le manque d&#x26;#39;acc&#xE8;s aux humains touch&#xE9;s dopaminergiques (DA) des neurones. Ici, nous rapportons la g&#xE9;n&#xE9;ration de cellules souches pluripotentes induites qui portent la mutation p.G2019S (G2019S-CSPi) dans la leucine-rich repeat kinase-2 (LRRK2) g&#xE8;ne, le plus commun PD li&#xE9;e mutation, et leur diff&#xE9;renciation en neurones dopaminergiques . La forte p&#xE9;n&#xE9;trance de la mutation et sa ressemblance avec la LRRK2 clinique sporadique PD sugg&#xE8;rent que ces cellules pourrait fournir une plate-forme pr&#xE9;cieuse pour l&#x26;#39;analyse des maladies et le d&#xE9;veloppement de m&#xE9;dicaments. Nous avons constat&#xE9; que les neurones dopaminergiques d&#xE9;riv&#xE9;s de G2019S des CSPi ont montr&#xE9; une expression accrue des principaux stress oxydatif g&#xE8;nes de r&#xE9;ponse et de &#x3B1;-synucl&#xE9;ine. Les neurones mutantes &#xE9;taient &#xE9;galement plus sensible &#xE0; la caspase-3 activation et la mort cellulaire caus&#xE9;e par l&#x26;#39;exposition &#xE0; des agents de stress, tels que le peroxyde d&#x26;#39;hydrog&#xE8;ne, MG-132, et la 6-hydroxydopamine, que les neurones DA de contr&#xF4;le. Cette sensibilit&#xE9; au stress am&#xE9;lior&#xE9;e est compatible avec la compr&#xE9;hension actuelle de ph&#xE9;notypes PD d&#xE9;but et repr&#xE9;sente une cible th&#xE9;rapeutique potentielle.

LRRK2 Mutant IPSC d&#xE9;riv&#xE9;s neurones DA D&#xE9;montrer sensibilit&#xE9; accrue au stress oxydatif

Studien der Parkinson-Krankheit (PD) haben durch fehlenden Zugang zu betroffenen menschlichen dopaminergen (DA) Neuronen behindert worden. Hier berichten wir Generation von induzierten pluripotenten Stammzellen, die die p.G2019S Genmutation (G2019S-iPSCs) Leucin-Rich wiederholen Kinase-2 (LRRK2), die am h&auml;ufigsten im Zusammenhang mit PD-Mutation und ihre Differenzierung in DA Neuronen zu tragen. Der hohe Penetranz die LRRK2-Mutation und seine klinische &Auml;hnlichkeit mit sporadischen PD legen nahe, dass diese Zellen eine wertvolle Plattform f&uuml;r Krankheit-Analyse und Droge-Entwicklung bieten k&ouml;nnte. Wir fanden, dass DA Neuronen abgeleitet G2019S-iPSCs erh&ouml;hte Expression von Genen wichtige oxidative Stressantwort und &alpha;-Synuclein-Protein zeigte. Die mutierten Neuronen waren auch empfindlicher gegen Caspase-3 Aktivierung und Zelle Tod durch Exposition Agents, z. B. Wasserstoffperoxid, MG-132 und 6-Hydroxydopamine, als DA Neuronen Steuern zu betonen. Diese erh&ouml;hte Spannung Empfindlichkeit steht im Einklang mit bestehenden Verst&auml;ndnis der fr&uuml;hen PD Ph&auml;notypen und therapeutisches Ziel darstellt.

LRRK2 Mutante iPSC abgeleitete DA Neuronen zeigen erh&ouml;hten Anf&auml;lligkeit f&uuml;r oxidativen Stress.

Gli studi della malattia di Parkinson (MdP) sono stati ostacolati dalla mancanza di accesso ai neuroni dopaminergici umani affetti (DA). Riportiamo qui, generazione di cellule staminali pluripotenti indotte che trasportano la mutazione p.G2019S (G2019S-iPSCs) del gene della leucina-Rich Repeat Kinase-2 (LRRK2), la pi&ugrave; comune mutazione correlati a PD e loro differenziazione in DA neuroni. L&#39;elevata penetranza della mutazione LRRK2 e sua somiglianza clinica con PD sporadici suggeriscono che queste cellule potrebbero fornire una valida piattaforma per lo sviluppo di analisi e droga di malattia. Abbiamo trovato che DA neuroni derivati da G2019S-iPSCs ha mostrato maggiore espressione dei geni chiave risposta allo stress ossidativo e proteina &alpha;-sinucleina. I neuroni mutanti sono stati anche pi&ugrave; sensibili di caspase-3 attivazione e cellule morte causata da esposizione a stress agenti, come il perossido di idrogeno, MG-132 e 6-hydroxydopamine, che il controllo DA neuroni. Questa sensibilit&agrave; maggiore stress &egrave; coerente con la comprensione esistenti dei primi fenotipi PD e rappresenta un potenziale bersaglio terapeutico.

LRRK2 mutanti iPSC derivate DA neuroni dimostrano maggiore suscettibilit&agrave; allo stress ossidativo.

&#x30D1;&#x30FC;&#x30AD;&#x30F3;&#x30BD;&#x30F3;&#x75C5;&#xFF08;PD&#xFF09;&#x306E;&#x7814;&#x7A76;&#x306F;&#x3001;&#x5F71;&#x97FF;&#x3092;&#x53D7;&#x3051;&#x308B;&#x4EBA;&#x9593;&#x306E;&#x30C9;&#x30FC;&#x30D1;&#x30DF;&#x30F3;&#xFF08;DA&#xFF09;&#x30CB;&#x30E5;&#x30FC;&#x30ED;&#x30F3;&#x3078;&#x306E;&#x30A2;&#x30AF;&#x30BB;&#x30B9;&#x306E;&#x6B20;&#x5982;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x59A8;&#x3052;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x3001;DA&#x30CB;&#x30E5;&#x30FC;&#x30ED;&#x30F3;&#x306B;&#x30ED;&#x30A4;&#x30B7;&#x30F3;&#x30EA;&#x30C3;&#x30C1;&#x30EA;&#x30D4;&#x30FC;&#x30C8;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;-2&#xFF08;LRRK2&#xFF09;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x3001;&#x6700;&#x3082;&#x4E00;&#x822C;&#x7684;&#x306A;PD&#x95A2;&#x9023;&#x5909;&#x7570;&#x3057;&#x3001;&#x305D;&#x306E;&#x5206;&#x5316;&#x306B;p.G2019S&#x5909;&#x7570;&#xFF08;G2019S-&#x6027;IPSC&#xFF09;&#x3092;&#x904B;&#x3076;&#x4EBA;&#x5DE5;&#x591A;&#x80FD;&#x6027;&#x5E79;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x751F;&#x6210;&#x3092;&#x5831;&#x544A;&#x3059;&#x308B;&#x3002;&#x6563;&#x767A;&#x7684;&#x306A;PD&#x306B;LRRK2&#x5909;&#x7570;&#x3068;&#x305D;&#x306E;&#x81E8;&#x5E8A;&#x7684;&#x985E;&#x4F3C;&#x6027;&#x306E;&#x9AD8;&#x3044;&#x6D78;&#x900F;&#x7387;&#x306F;&#x3001;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x306F;&#x3001;&#x75C5;&#x6C17;&#x306E;&#x89E3;&#x6790;&#x3068;&#x85AC;&#x5264;&#x958B;&#x767A;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x8CB4;&#x91CD;&#x306A;&#x30D7;&#x30E9;&#x30C3;&#x30C8;&#x30D5;&#x30A9;&#x30FC;&#x30E0;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x5506;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;G2019S-&#x6027;IPSC&#x304B;&#x3089;&#x6D3E;&#x751F;&#x3057;&#x305F;DA&#x30CB;&#x30E5;&#x30FC;&#x30ED;&#x30F3;&#x304C;&#x9375;&#x9178;&#x5316;&#x30B9;&#x30C8;&#x30EC;&#x30B9;&#x5FDC;&#x7B54;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x3068;&#x3B1;-&#x30B7;&#x30CC;&#x30AF;&#x30EC;&#x30A4;&#x30F3;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x306E;&#x767A;&#x73FE;&#x306E;&#x5897;&#x52A0;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x305F;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x5206;&#x304B;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x5909;&#x7570;&#x4F53;&#x306E;&#x795E;&#x7D4C;&#x7D30;&#x80DE;&#x306F;&#x307E;&#x305F;&#x3001;&#x5236;&#x5FA1;DA&#x30CB;&#x30E5;&#x30FC;&#x30ED;&#x30F3;&#x3088;&#x308A;&#x3082;&#x3001;&#x30B9;&#x30C8;&#x30EC;&#x30B9;&#x904E;&#x9178;&#x5316;&#x6C34;&#x7D20;&#x306A;&#x3069;&#x306E;&#x85AC;&#x5264;&#x3001;MG-132&#x3001;&#x53CA;&#x3073;6  - &#x30D2;&#x30C9;&#x30ED;&#x30AD;&#x30B7;&#x3078;&#x306E;&#x66DD;&#x9732;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x5F15;&#x304D;&#x8D77;&#x3053;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x30AB;&#x30B9;&#x30D1;&#x30FC;&#x30BC;3&#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x3068;&#x7D30;&#x80DE;&#x6B7B;&#x306B;&#x654F;&#x611F;&#x3067;&#x3042;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x5F37;&#x5316;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x30B9;&#x30C8;&#x30EC;&#x30B9;&#x611F;&#x53D7;&#x6027;&#x306F;&#x3001;&#x65E9;&#x671F;PD&#x306E;&#x8868;&#x73FE;&#x578B;&#x306E;&#x65E2;&#x5B58;&#x306E;&#x7406;&#x89E3;&#x3068;&#x4E00;&#x8CAB;&#x6027;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x3001;&#x6F5C;&#x5728;&#x7684;&#x306A;&#x6CBB;&#x7642;&#x6A19;&#x7684;&#x3092;&#x8868;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

LRRK2&#x5909;&#x7570;IPSC&#x304B;&#x3089;&#x6D3E;&#x751F;&#x3057;&#x305F;DA&#x30CB;&#x30E5;&#x30FC;&#x30ED;&#x30F3;&#x306F;&#x9178;&#x5316;&#x30B9;&#x30C8;&#x30EC;&#x30B9;&#x306B;&#x5BFE;&#x3059;&#x308B;&#x611F;&#x53D7;&#x6027;&#x306E;&#x4E0A;&#x6607;&#x3092;&#x5B9F;&#x8A3C;

&#xD30C; &#xD0A8; &#xC2A8; &#xBCD1; (PD)&#xC758; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xB294; &#xC601;&#xD5A5;&#xC744; &#xBC1B;&#xB294; &#xC778;&#xAC04;&#xC758; dopaminergic (DA) &#xB274;&#xB7F0;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC561;&#xC138;&#xC2A4;&#xC758; &#xBD80;&#xC871;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xBC29;&#xD574; &#xC801; &#xC788;&#xB2E4;. &#xC5EC;&#xAE30;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; &#xBCF4;&#xACE0;&#xC11C; &#xC2E0; &#xD48D;&#xBD80;&#xD55C; &#xBC18;&#xBCF5; &#xD0A4; &#xB2C8; &#xC544; &#xC81C;-2 (LRRK2) &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC758; p.G2019S &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; (G2019S-iPSCs), &#xAC00;&#xC7A5; &#xC77C;&#xBC18;&#xC801;&#xC778; PD &#xAD00;&#xB828; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xBC0F; DA &#xC2E0;&#xACBD; &#xC138;&#xD3EC;&#xB85C;&#xC758; &#xBD84;&#xD654; &#xC720;&#xB3C4; &#xB9CC;&#xB2A5; &#xC904;&#xAE30; &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xC0DD;&#xC131;. LRRK2 &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774;&#xC640; &#xC0B0;&#xBC1C;&#xC801; &#xC778; PD&#xC758; &#xC784;&#xC0C1; &#xB2EE; &#xC558; &#xB192;&#xC740; penetrance &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xC138;&#xD3EC; &#xC9C8;&#xBCD1; &#xBD84;&#xC11D; &#xBC0F; &#xC57D;&#xBB3C; &#xAC1C;&#xBC1C;&#xC744; &#xC704;&#xD55C; &#xAC00;&#xCE58; &#xC788;&#xB294; &#xD50C;&#xB7AB;&#xD3FC;&#xC744; &#xC81C;&#xACF5;&#xD560; &#xC218; &#xAC83;&#xC774; &#xC88B;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; DA &#xB274;&#xB7F0; G2019S Ipscs&#xC5D0;&#xC11C; &#xD30C;&#xC0DD; &#xB41C; &#xD0A4; &#xC0B0;&#xD654; &#xC2A4;&#xD2B8;&#xB808;&#xC2A4; &#xBC18;&#xC751; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC640; &alpha;-synuclein &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xC99D;&#xAC00; &#xC2DD; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC8FC; &#xBC1C;&#xACAC;. &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xC2E0;&#xACBD; &#xC5D0;&#xC774;&#xC804;&#xD2B8;, &#xACFC;&#xC0B0;&#xD654; &#xC218;&#xC18C;, MG-132, &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; 6-hydroxydopamine, DA &#xB274;&#xB7F0; &#xC81C;&#xC5B4; &#xBCF4;&#xB2E4; &#xAC19;&#xC740; &#xC2A4;&#xD2B8;&#xB808;&#xC2A4;&#xC5D0; &#xB178;&#xCD9C;&#xC73C;&#xB85C; &#xC778; &#xD55C; caspase 3 &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xBC0F; &#xC138;&#xD3EC; &#xC8FD;&#xC74C;&#xC5D0; &#xB354; &#xBBFC;&#xAC10; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC774; &#xD5A5;&#xC0C1; &#xB41C; &#xC2A4;&#xD2B8;&#xB808;&#xC2A4; &#xBBFC;&#xAC10;&#xB3C4; &#xCD08;&#xAE30; PD &#xACE0;&#xAE30;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xAE30;&#xC874; &#xC774;&#xD574; &#xC77C;&#xCE58; &#xD558; &#xACE0; &#xC7A0;&#xC7AC;&#xC801;&#xC778; &#xCE58;&#xB8CC; &#xB300;&#xC0C1;&#xC744; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0C5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

LRRK2 &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; iPSC &#xD30C;&#xC0DD; DA &#xB274;&#xB7F0; &#xC0B0;&#xD654; &#xC2A4;&#xD2B8;&#xB808;&#xC2A4;&#xB97C; &#xC99D;&#xAC00; &#xC790;&#xD654; &#xC728;&#xC744; &#xBCF4;&#xC5EC; &#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Los estudios sobre la enfermedad de Parkinson (EP) se han visto obstaculizados por la falta de acceso a los afectados humanos dopamin&#xE9;rgicas (DA), las neuronas. En este sentido, la generaci&#xF3;n de informes de las c&#xE9;lulas madre pluripotentes inducidas que portan la mutaci&#xF3;n p.G2019S (G2019S-iPSCs) en la repetici&#xF3;n rica en leucina kinasa-2 (LRRK2) de genes, la mutaci&#xF3;n relacionada con Parkinson m&#xE1;s com&#xFA;n, y su diferenciaci&#xF3;n en neuronas DA . La alta penetrancia de la mutaci&#xF3;n LRRK2 y su semejanza cl&#xED;nica con enfermedad de Parkinson espor&#xE1;dica sugieren que estas c&#xE9;lulas podr&#xED;an proporcionar una valiosa plataforma para el an&#xE1;lisis de la enfermedad y el desarrollo de f&#xE1;rmacos. Encontramos que las neuronas DA derivadas de G2019S de iPSCs mostraron una mayor expresi&#xF3;n de clave de respuesta al estr&#xE9;s oxidativo de los genes y la prote&#xED;na &#x3B1;-sinucle&#xED;na. Las neuronas mutantes tambi&#xE9;n eran m&#xE1;s sensibles a la activaci&#xF3;n de la caspasa-3 y la muerte celular causada por la exposici&#xF3;n a agentes estresantes, como el per&#xF3;xido de hidr&#xF3;geno, MG-132, y 6-hidroxidopamina, que el control de las neuronas DA. Esta mayor sensibilidad al estr&#xE9;s es consistente con el conocimiento existente de los primeros fenotipos PD y representa una potencial diana terap&#xE9;utica.

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Ricardo E Dolmetsch

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