amide-hydrogendeuterium-exchange-maldi-tof-mass-spectrometry-analysis

Amide Hydrogen/Deuterium Exchange &amp; MALDI-TOF Mass Spectrometry Analysis of Pak2 Activation

Amide hydrogen/deuterium exchange (H/D exchange) coupled with mass spectrometry has been widely used to analyze the interface of protein-protein ...

Tunghai University

La phospholipase GIVA a (2) (PLA(2)) contient deux domaines : un domaine de liaison du calcium (C2) et un domaine catalytique. Ces domaines sont li&eacute;s par une sangle souple. GIVA PLA(2) activit&eacute; est d&eacute;pendante de Ca(2+) prot&eacute;iques &agrave; la membrane phospholipidique favorise la liaison du calcium. En outre, le domaine catalytique a un couvercle qui recouvre le site actif, sans doute r&eacute;glementant l&#39;activit&eacute; GIVA PLA(2). Maintenant, nous pr&eacute;sentons les &eacute;tudes qui explorent la dynamique et les changements de conformation de l&#39;enzyme en solution en utilisant l&#39;&eacute;change de l&#39;hydrog&egrave;ne/deut&eacute;rium (H/D) amide peptide coupl&eacute; avec liquid chromatography-mass spectrometry (DXMS) pour sonder la flexibilit&eacute; solvant de l&#39;accessibilit&eacute; et de la colonne vert&eacute;brale du domaine C2, le domaine catalytique et le PLA(2) de GIVA intact. Nous avons aussi analys&eacute; les changements en &eacute;change de H/D de la PLA(2) de GIVA intact lors de la liaison Ca(2+). DXMS ressorti un rapide &eacute;change H/D couvercle et un noyau central &eacute;change lent. Le domaine C2 a montr&eacute; deux r&eacute;gions distinctes : une r&eacute;gion &eacute;change rapide vers le domaine catalytique et une r&eacute;gion d&#39;&eacute;change lente pr&eacute;sente dans la r&eacute;gion &quot;fente&quot; entre le C2 et domaines catalytiques. La r&eacute;gion d&#39;&eacute;change lente du domaine C2 est en &eacute;troite proximit&eacute; avec le domaine catalytique. Les effets de Ca(2+) lie GIVA PLA(2) sont localis&eacute;es dans le domaine de la C2 et sugg&egrave;rent que la liaison des deux ions de Ca(2+) distinctes provoque resserrement des r&eacute;gions qui entourent le trou anionique &agrave; la pointe du domaine C2. Ce changement conformationnel est peut-&ecirc;tre la premi&egrave;re &eacute;tape d&#39;activation GIVA PLA(2).

Liaison du calcium accentuer le domaine C2 et l&#39;interaction de l&#39;architecture de GIVA phospholipase A2 telle que r&eacute;v&eacute;l&eacute;e par spectrom&eacute;trie de masse &eacute;change hydrog&egrave;ne/deut&eacute;rium.

Die GIVA Phospholipase A(2) (PLA(2)) enth&auml;lt zwei Dom&auml;nen: eine Kalzium-bindende Dom&auml;ne (C2) und einer katalytischen Dom&auml;ne. Diese Domains sind &uuml;ber eine flexible Leine verbunden. GIVA PLA(2) T&auml;tigkeit ist Ca(2+)-abh&auml;ngige Kalzium Bindung Andocken an die Phospholipid-Membrane Protein f&ouml;rdert. Dar&uuml;ber hinaus hat die katalytische Dom&auml;ne einen Deckel, der die aktive Seite, vermutlich Regulierung GIVA PLA(2) Aktivit&auml;t deckt. Wir pr&auml;sentieren nun Studien, die die Dynamik und ver&auml;ndert sich die Form dieses Enzyms in L&ouml;sung nutzt Peptid Amid Wasserstoff/Deuterium (H/T) Austausch gepaart mit liquid Chromatographie-Massenspektrometrie (DXMA) um die solvente Zug&auml;nglichkeit und R&uuml;ckgrat Flexibilit&auml;t der C2-Dom&auml;ne, die katalytische Dom&auml;ne und die intakte GIVA PLA(2) Sonde zu erkunden. Wir analysiert auch die Ver&auml;nderungen in H/D-Austausch von der intakten GIVA-PLA(2) auf Ca(2+)-Bindung. Die DXMA Ergebnisse zeigten eine schnelle H/D-Austausch von Deckel und einen langsamen Austausch von zentralen Kern. Die C2-Dom&auml;ne zeigte zwei verschiedene Regionen: eine schnelle Austausch von Region mit Blick auf die katalytische Dom&auml;ne und einer langsamen Austausch von Region, die in der &quot;Lippen&quot; Region zwischen C2 und katalytische Dom&auml;nen entfernt. Die langsame Austausch von Region der C2-Dom&auml;ne ist in der engen N&auml;he der katalytischen Dom&auml;ne. Die Auswirkungen der Ca(2+)-Bindung auf GIVA PLA(2) sind in der C2-Dom&auml;ne lokalisiert und schlagen vor, da&szlig; die Bindung von zwei unterschiedliche Ca(2+)-Ionen bewirkt, dass Versch&auml;rfung der Regionen, die das Anion-Loch an der Spitze der C2-Dom&auml;ne umgeben. Diese Konformations&auml;nderungen &Auml;nderung m&ouml;glicherweise der erste Schritt bei der GIVA PLA(2) Aktivierung.

Kalzium-Bindung rigidifies der C2-Dom&auml;ne und das langsame Zusammenspiel der GIVA Phospholipase A2 wie durch Wasserstoff/Deuterium Austausch Massenspektrometrie aufgedeckt.

GIVA A(2) &#x78F7;&#x8102;&#x9176; (PLA(2)) &#x5305;&#x542B;&#x4E24;&#x4E2A;&#x57DF;&#xFF1A; &#x9499;&#x7ED3;&#x5408;&#x57DF; (C2) &#x548C;&#x50AC;&#x5316;&#x57DF;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x57DF;&#x901A;&#x8FC7;&#x7075;&#x6D3B;&#x7684;&#x7CFB;&#x7EF3;&#x76F8;&#x8FDE;&#x3002;GIVA PLA(2) &#x6D3B;&#x52A8;&#x662F; Ca(2+) &#x4F9D;&#x8D56;&#x9499;&#x7ED3;&#x5408;&#x4FC3;&#x8FDB;&#x505C;&#x9760;&#x5230;&#x78F7;&#x8102;&#x819C;&#x86CB;&#x767D;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;&#x5728;&#x50AC;&#x5316;&#x9886;&#x57DF;&#x5DF2;&#x6DB5;&#x76D6;&#x6D3B;&#x52A8;&#x7F51;&#x7AD9;&#xFF0C;&#x5927;&#x6982;&#x8C03;&#x8282; GIVA PLA(2) &#x6D3B;&#x52A8;&#x7684;&#x76D6;&#x5B50;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x73B0;&#x5728;&#x63A2;&#x7D22;&#x7684;&#x52A8;&#x529B;&#x5B66;&#x548C;&#x5229;&#x7528;&#x80BD;&#x9170;&#x80FA;&#x6C22;/&#x6C18; (H/D) &#x4EA4;&#x6D41;&#x8026;&#x5408;&#x4E0E;&#x6DB2;&#x76F8;&#x8272;&#x8C31;-&#x8D28;&#x8C31; (DXMS) &#x6765;&#x63A2;&#x6D4B;&#x6EB6;&#x5242;&#x8F85;&#x52A9;&#x529F;&#x80FD;&#x548C;&#x9AA8;&#x5E72;&#x7684; C2 &#x57DF;&#x3001; &#x50AC;&#x5316;&#x57DF;&#x548C;&#x4E0D;&#x53D8;&#x7684; GIVA PLA(2) &#x7684;&#x7075;&#x6D3B;&#x6027;&#x7684;&#x89E3;&#x51B3;&#x65B9;&#x6848;&#x4E2D;&#x7684;&#x8FD9;&#x79CD;&#x9176;&#x7684;&#x6784;&#x8C61;&#x53D8;&#x5316;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x8FD8;&#x5206;&#x6790;&#x4E86;&#x7ECF;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x540E;&#x4FDD;&#x6301;&#x4E0D;&#x53D8;&#x7684; GIVA PLA(2) H/D &#x4EA4;&#x6362;&#x7684;&#x53D8;&#x5316;&#x3002;DXMS &#x7ED3;&#x679C;&#x8868;&#x660E;&#x4E00;&#x79CD;&#x5FEB;&#x901F; H D &#x4EA4;&#x6362;&#x76D6;&#x548C;&#x7F13;&#x6162;&#x7684;&#x4EA4;&#x6D41;&#x4E2D;&#x592E;&#x6838;&#x5FC3;&#x3002;C2 &#x57DF;&#x663E;&#x793A;&#x4E24;&#x4E2A;&#x4E0D;&#x540C;&#x7684;&#x533A;&#x57DF;&#xFF1A; &#x50AC;&#x5316;&#x57DF;&#x548C; C2 &#x548C;&#x50AC;&#x5316;&#x57DF;&#x4E4B;&#x95F4;&#x7684;&quot;&#x88C2;&quot;&#x533A;&#x57DF;&#x4E2D;&#x5B58;&#x5728;&#x4E00;&#x4E2A;&#x7F13;&#x6162;&#x4EA4;&#x6362;&#x533A;&#x57DF;&#x9762;&#x4E34;&#x5FEB;&#x901F;&#x4EA4;&#x6362;&#x533A;&#x57DF;&#x3002;C2 &#x57DF;&#x7684;&#x7F13;&#x6162;&#x4EA4;&#x6362;&#x533A;&#x57DF;&#x662F;&#x7D27;&#x9760;&#x5728;&#x50AC;&#x5316;&#x9886;&#x57DF;&#x3002;&#x7ECF;&#x5BF9; GIVA PLA(2) &#x7684;&#x5177;&#x6709;&#x7EA6;&#x675F;&#x529B;&#x7684;&#x5F71;&#x54CD; C2 &#x57DF;&#x4E2D;&#x88AB;&#x672C;&#x5730;&#x5316;&#xFF0C;&#x5E76;&#x5EFA;&#x8BAE;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x4E24;&#x4E2A;&#x4E0D;&#x540C;&#x7684;&#x7ECF;&#x79BB;&#x5B50;&#x5BFC;&#x81F4;&#x6536;&#x7D27;&#x4E86;&#x73AF;&#x7ED5;&#x9634;&#x79BB;&#x5B50;&#x5B54;&#x9876;&#x7AEF;&#x7684; C2 &#x57DF;&#x7684;&#x533A;&#x57DF;&#x3002;&#x8FD9;&#x79CD;&#x6784;&#x8C61;&#x53D8;&#x5316;&#x53EF;&#x80FD;&#x662F; GIVA PLA(2) &#x6FC0;&#x6D3B;&#x7684;&#x7B2C;&#x4E00;&#x6B65;&#x3002;

&#x9499;&#x7ED1;&#x5B9A; rigidifies C2 &#x57DF;&#x548C;&#x57DF;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x7684; GIVA &#x78F7;&#x8102;&#x9176; A2 &#x6240;&#x663E;&#x793A;&#x7684;&#x6C18;&#x6C22;/&#x4EA4;&#x6D41;&#x8D28;&#x8C31;&#x6CD5;&#x3002;

The GIVA phospholipase A(2) (PLA(2)) contains two domains: a calcium-binding domain (C2) and a catalytic domain. These domains are linked via a flexible tether. GIVA PLA(2) activity is Ca(2+)-dependent in that calcium binding promotes protein docking to the phospholipid membrane. In addition, the catalytic domain has a lid that covers the active site, presumably regulating GIVA PLA(2) activity. We now present studies that explore the dynamics and conformational changes of this enzyme in solution utilizing peptide amide hydrogen/deuterium (H/D) exchange coupled with liquid chromatography-mass spectrometry (DXMS) to probe the solvent accessibility and backbone flexibility of the C2 domain, the catalytic domain, and the intact GIVA PLA(2). We also analyzed the changes in H/D exchange of the intact GIVA PLA(2) upon Ca(2+) binding. The DXMS results showed a fast H/D-exchanging lid and a slow exchanging central core. The C2 domain showed two distinct regions: a fast exchanging region facing away from the catalytic domain and a slow exchanging region present in the "cleft" region between the C2 and catalytic domains. The slow exchanging region of the C2 domain is in tight proximity to the catalytic domain. The effects of Ca(2+) binding on GIVA PLA(2) are localized in the C2 domain and suggest that binding of two distinct Ca(2+) ions causes tightening up of the regions that surround the anion hole at the tip of the C2 domain. This conformational change may be the initial step in GIVA PLA(2) activation.

Calcium binding rigidifies the C2 domain and the intradomain interaction of GIVA phospholipase A2 as revealed by hydrogen/deuterium exchange mass spectrometry.

La GIVA fosfolipasi a (2) (PLA(2)) contiene due domini: un dominio di associazione calcio (C2) e un dominio catalitico. Questi domini sono collegati tramite un cavo flessibile. Attivit&agrave; GIVA PLA(2) &egrave; Ca(2+)-dipendente in associazione calcio promuove la proteina di ancoraggio alla membrana fosfolipidi. Inoltre, il dominio catalitico ha un coperchio che copre il sito attivo, presumibilmente regolamentare GIVA PLA(2) attivit&agrave;. Vi presentiamo ora studi che esplorano le dinamiche e i cambiamenti conformazionali di questo enzima in soluzione utilizzando scambio di idrogeno/deuterio (H/D) ammide del peptide accoppiato con liquida cromatografia spettrometria di massa (DXMS) per sondare il solvente flessibilit&agrave; l&#39;accessibilit&agrave; e la spina dorsale del dominio C2, il dominio catalitico e la PLA(2) GIVA intatto. Abbiamo anche analizzato i cambiamenti in cambio di H/D della PLA(2) GIVA intatta dell&#39;associazione Ca(2+). I risultati DXMS ha mostrato un veloce H/D-scambio coperchio e un nucleo centrale lo scambio lento. Il dominio C2 ha mostrato due regioni distinte: una regione lo scambio veloce rivolto verso il dominio catalitico e una lenta scambio regione presente nella regione &quot;schisi&quot; tra i domini catalitici e C2. La regione lo scambio lenta del dominio C2 &egrave; in stretta vicinanza con il dominio catalitico. Gli effetti dell&#39;associazione Ca(2+) su GIVA PLA(2) sono localizzati nel dominio C2 e suggeriscono che l&#39;associazione di due distinti Ca(2+) ioni provoca inasprimento delle regioni che circondano il foro anione presso la punta del dominio C2. Questo cambio conformazionale pu&ograve; essere il primo passo nell&#39;attivazione di GIVA PLA(2).

Associazione calcio avviluppa il dominio C2 e interazione di GIVA fosfolipasi A2 come rivelato tramite spettrometria totale scambio idrogeno/deuterio intradominio.

GIVA &#x30DB;&#x30B9;&#x30DB;&#x30EA;&#x30D1;&#x30FC;&#x30BC;&#x9B54;&#x65B9;&#x9663; (PLA(2)) &#x306B;&#x306F;&#x3001;2 &#x3064;&#x306E;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x304C;&#x542B;&#x307E;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#xFF1A; &#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;&#x7D50;&#x5408;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3; (C2) &#x3068;&#x89E6;&#x5A92;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x306F;&#x3001;&#x67D4;&#x8EDF;&#x306A;&#x30C6;&#x30B6;&#x30FC;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x3066;&#x30EA;&#x30F3;&#x30AF;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;&#x7D50;&#x5408;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x8102;&#x8CEA;&#x819C;&#x3078;&#x306E;&#x30C9;&#x30C3;&#x30AD;&#x30F3;&#x30B0;&#x3092;&#x4FC3;&#x9032;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068; GIVA PLA(2) &#x6D3B;&#x52D5; Ca(2+) &#x4F9D;&#x5B58;&#x3067;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x3001;&#x89E6;&#x5A92;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x306F;&#x304A;&#x305D;&#x3089;&#x304F; GIVA PLA(2) &#x6D3B;&#x52D5;&#x3092;&#x898F;&#x5236;&#x3059;&#x308B;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6; &#x30B5;&#x30A4;&#x30C8; &#x30AB;&#x30D0;&#x30FC;&#x3075;&#x305F;&#x3092;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x4ECA;&#x3001;&#x30C0;&#x30A4;&#x30CA;&#x30DF;&#x30AF;&#x30B9;&#x3068;&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C9; &#x30A2;&#x30DF;&#x30C9;&#x6C34;&#x7D20;/&#x91CD;&#x6C34;&#x7D20; (H/D) &#x4EA4;&#x63DB;&#x6DB2;&#x4F53;&#x30AF;&#x30ED;&#x30DE;&#x30C8;&#x30B0;&#x30E9;&#x30D5;&#x30A3;&#x30FC; &#x2010; &#x8CEA;&#x91CF;&#x5206;&#x6790; (DXMS) &#x6EB6;&#x5264;&#x30A2;&#x30AF;&#x30BB;&#x30B7;&#x30D3;&#x30EA;&#x30C6;&#x30A3;&#x3068;&#x30D0;&#x30C3;&#x30AF;&#x30DC;&#x30FC;&#x30F3;&#x306E;&#x67D4;&#x8EDF;&#x6027;&#x306E; C2 &#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x3001;&#x89E6;&#x5A92;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x3068;&#x305D;&#x306E;&#x307E;&#x307E;&#x306E; GIVA PLA(2) &#x3092;&#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30D6;&#x306B;&#x7D50;&#x5408;&#x3092;&#x5229;&#x7528;&#x3057;&#x305F;&#x30BD;&#x30EA;&#x30E5;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x306E;&#x3053;&#x306E;&#x9175;&#x7D20;&#x306E;&#x30B3;&#x30F3;&#x30D5;&#x30A9;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x5909;&#x5316;&#x3092;&#x63A2;&#x308B;&#x7814;&#x7A76;&#x3092;&#x63D0;&#x793A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x307E;&#x305F;&#x305D;&#x306E;&#x307E;&#x307E; GIVA PLA(2) &#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;&#x7D50;&#x5408;&#x306E; H/D &#x4EA4;&#x63DB;&#x306E;&#x5909;&#x5316;&#x3092;&#x5206;&#x6790;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;DXMS &#x7D50;&#x679C;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x305F;&#x9AD8;&#x901F; H/D &#x3092;&#x4EA4;&#x63DB;&#x3059;&#x308B;&#x84CB;&#x3068;&#x9045;&#x3044;&#x4EA4;&#x63DB;&#x4E2D;&#x592E;&#x306E;&#x30B3;&#x30A2;&#x3002;C2 &#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x305F; 2 &#x3064;&#x306E;&#x5730;&#x57DF;&#xFF1A; &#x89E6;&#x5A92;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x3068; C2 &#x3068;&#x89E6;&#x5A92;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x9593;&#x300C;&#x88C2;&#x300D;&#x306E;&#x9818;&#x57DF;&#x5185;&#x306B;&#x5B58;&#x5728;&#x304C;&#x9045;&#x3044;&#x4EA4;&#x63DB;&#x9818;&#x57DF;&#x304B;&#x3089;&#x96E2;&#x308C;&#x3066;&#x76F4;&#x9762;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x9AD8;&#x901F;&#x4EA4;&#x63DB;&#x9818;&#x57DF;&#x3002;C2 &#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x306E;&#x9045;&#x3044;&#x4EA4;&#x63DB;&#x9818;&#x57DF;&#x306B;&#x30BF;&#x30A4;&#x30C8;&#x306A;&#x8FD1;&#x63A5;&#x3057;&#x3066;&#x89E6;&#x5A92;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;&#x7D50;&#x5408; GIVA PLA(2) &#x4E0A;&#x306E;&#x52B9;&#x679C;&#x306F;&#x3001;C2 &#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x3067;&#x30ED;&#x30FC;&#x30AB;&#x30E9;&#x30A4;&#x30BA;&#x3055;&#x308C;&#x3001;&#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C7;&#x30A3;&#x30F3;&#x30B0;&#x306E; 2 &#x3064;&#x306E;&#x660E;&#x77AD;&#x306A;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0; &#x30A4;&#x30AA;&#x30F3;&#x306E;&#x9670;&#x30A4;&#x30AA;&#x30F3;&#x7A74; C2 &#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x306E;&#x5148;&#x7AEF;&#x3092;&#x56F2;&#x3080;&#x9818;&#x57DF;&#x306E;&#x5F15;&#x304D;&#x7DE0;&#x3081;&#x5F15;&#x304D;&#x8D77;&#x3053;&#x3059;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x5506;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x69CB;&#x9020;&#x5909;&#x5316;&#x306F;&#x3001;GIVA PLA(2) &#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x6700;&#x521D;&#x306E;&#x30B9;&#x30C6;&#x30C3;&#x30D7;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;&#x7D50;&#x5408; C2 &#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x3068;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x5185;&#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528; GIVA &#x30DB;&#x30B9;&#x30DB;&#x30EA;&#x30D1;&#x30FC;&#x30BC; A2 &#x6C34;&#x7D20;/&#x91CD;&#x6C34;&#x7D20;&#x4EA4;&#x63DB;&#x8CEA;&#x91CF;&#x5206;&#x6790;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3092; rigidifies &#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

GIVA phospholipase A(2) (&#xB450; &#xAC1C;&#xC758; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778;&#xC744; &#xD3EC;&#xD568; &#xD558;&#xB294; PLA(2)): &#xCE7C;&#xC298; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778; (C2) &#xBC0F; &#xCD09;&#xB9E4; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778;&#xC740; &#xC720;&#xC5F0;&#xD55C; &#xBC27;&#xC904;&#xC744; &#xD1B5;&#xD574; &#xC5F0;&#xACB0; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. GIVA PLA(2) &#xD65C;&#xB3D9; Ca(2+) &#xC885;&#xC18D; &#xCE7C;&#xC298; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xCD09;&#xC9C4; &#xC778;&#xC9C0;&#xC9C8; &#xB9C9; &#xB3C4;&#xD0B9; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC740;. &#xB610;&#xD55C;, &#xCD09;&#xB9E4; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778;&#xC740; &#xC544;&#xB9C8;&#xB3C4; GIVA PLA(2) &#xD65C;&#xB3D9;&#xC744; &#xC870;&#xC808; &#xD558;&#xB294; &#xC561;&#xD2F0;&#xBE0C; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8;&#xB97C; &#xB36E;&#xB294; &#xB69C;&#xAED1;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xC9C0;&#xAE08; &#xD3A9; &#xD2F0; &#xB4DC; &#xC544; &#xBBF8;&#xB4DC; &#xC218;&#xC18C;/&#xC911;&#xC218;&#xC18C; (H/D) &#xAD50;&#xD658; &#xC561;&#xCCB4; &#xD06C;&#xB85C;&#xB9C8;&#xD1A0;&#xADF8;&#xB798;&#xD53C;-&#xC9C8;&#xB7C9; &#xBD84;&#xC11D; (DXMS) C2 &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778; &#xCD09;&#xB9E4; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778;&#xACFC; &#xADF8;&#xB300;&#xB85C; GIVA PLA(2)&#xC758; &#xC6A9; &#xB9E4; &#xC811;&#xADFC;&#xC131; &#xBC0F; &#xBC31;&#xBCF8; &#xC720;&#xC5F0;&#xC131; &#xD504;&#xB85C;&#xBE0C;&#xB97C; &#xD568;&#xAED8; &#xC774;&#xC6A9; &#xD558;&#xB294; &#xC194;&#xB8E8;&#xC158;&#xC5D0;&#xC11C;&#xC774; &#xD6A8;&#xC18C;&#xC758; &#xAD6C;&#xC870;&#xC801; &#xBCC0;&#xD654;&#xC640; &#xC5ED;&#xB3D9;&#xC131;&#xC744; &#xD0D0;&#xAD6C; &#xD558;&#xB294; &#xC5F0;&#xAD6C; &#xC81C;&#xC2DC;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xB610;&#xD55C; Ca(2+) &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xC5D0; &#xB530;&#xB77C; &#xADF8;&#xB300;&#xB85C; GIVA PLA(2) H/D &#xAD50;&#xB958;&#xC758; &#xBCC0;&#xD654;&#xB97C; &#xBD84;&#xC11D; &#xD588;&#xB2E4;. DXMS &#xACB0;&#xACFC; &#xBCF4;&#xC5EC; &#xBE60;&#xB978; H/D &#xAD50;&#xD658; &#xB69C;&#xAED1;&#xACFC; &#xB290;&#xB9B0; &#xAD50;&#xD658; &#xC911;&#xC559; &#xCF54;&#xC5B4;. C2 &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC900; &#xB450; &#xAC00;&#xC9C0; &#xC601;&#xC5ED;: &#xCD09;&#xB9E4; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778; &#xBC0F; &#xB290;&#xB9B0; &#xAD50;&#xD658; &#xC601;&#xC5ED; c 2&#xC640; &#xCD09;&#xB9E4; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778; &#xAC04;&#xC758; &quot;&#xAC08;&#xB77C;&#xC9C4;&#xB41C;&quot; &#xC9C0;&#xC5ED;&#xC5D0; &#xC874;&#xC7AC;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBA40;&#xC5B4;&#xC9C0;&#xB294; &#xBE60;&#xB978; &#xAD50;&#xD658; &#xC601;&#xC5ED;. C2 &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778;&#xC758; &#xB290;&#xB9B0; &#xAD50;&#xD658; &#xC9C0;&#xC5ED; &#xCD09;&#xB9E4; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778;&#xC5D0; &#xAF49; &#xADFC;&#xC811;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;. GIVA PLA(2)&#xC5D0; Ca(2+) &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xD6A8;&#xACFC; C2 &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778; &#xBC0F; &#xB450; &#xAC00;&#xC9C0; Ca(2+) &#xC774;&#xC628;&#xC758; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; C2 &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778;&#xC758; &#xB05D;&#xC5D0; &#xC74C;&#xC774;&#xC628; &#xAD6C;&#xBA4D;&#xC744; &#xB458;&#xB7EC;&#xC2F8;&#xACE0; &#xC788;&#xB294; &#xC601;&#xC5ED;&#xAE4C;&#xC9C0; &#xAC15;&#xD654; &#xD558;&#xBA74; &#xC81C;&#xC548; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774; &#xAD6C;&#xC870;&#xC801; &#xBCC0;&#xD654; GIVA PLA(2) &#xC815;&#xD488; &#xC778;&#xC99D;&#xC758; &#xCD08;&#xAE30; &#xB2E8;&#xACC4;&#xAC00; &#xB420; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xCE7C;&#xC298; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; rigidifies C2 &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778;&#xACFC; GIVA phospholipase A2 &#xC218;&#xC18C;/&#xC911;&#xC218;&#xC18C; &#xAD50;&#xD658; &#xC9C8;&#xB7C9; &#xBD84;&#xC11D;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xACF5;&#xAC1C; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;.

La fosfolipasa GIVA punto (PLA(2)) contiene dos dominios: un dominio de uni&oacute;n a calcio (C2) y un dominio catal&iacute;tico. Estos dominios son conectados a trav&eacute;s de una correa flexible. GIVA PLA(2) actividad es dependiente de Ca(2+) que promueve la Uni&oacute;n de calcio prote&iacute;na de acoplamiento a la membrana de fosfol&iacute;pidos. Adem&aacute;s, el dominio catal&iacute;tico tiene una tapa que cubre el sitio activo, presumiblemente regulaci&oacute;n GIVA PLA(2) actividad. Ahora presentamos estudios que exploran la din&aacute;mica y los cambios conformacionales de esta enzima en la soluci&oacute;n utilizando intercambio de hidr&oacute;geno/deuterio (H/D) amida p&eacute;ptido juntada con cromatograf&iacute;a l&iacute;quida espectrometr&iacute;a (DXMS) para probar la flexibilidad solvente de accesibilidad y la columna vertebral del dominio C2, el dominio catal&iacute;tico y la PLA(2) de GIVA intacto. Tambi&eacute;n se analizaron los cambios en el intercambio de H/D de la PLA(2) de GIVA intacto al atascamiento de CA. Los resultados DXMS mostraron un r&aacute;pido tapa H/D-intercambio y un n&uacute;cleo central de cambio lento. El dominio C2 mostraron dos regiones distintas: una regi&oacute;n de cambio r&aacute;pida hacia el dominio catal&iacute;tico y una regi&oacute;n de cambio lenta presente en la regi&oacute;n &quot;fisura&quot; entre el C2 y dominios catal&iacute;ticos. La regi&oacute;n intercambiar lenta del dominio C2 est&aacute; en estrecha proximidad al dominio catal&iacute;tico. Los efectos de enlace de CA en GIVA PLA(2) se localizan en el dominio de C2 y sugieren que Uni&oacute;n de dos iones de CA distintos causa endurecimiento de las regiones que rodean el orificio del ani&oacute;n en la punta del dominio C2. Este cambio conformacional podr&iacute;a ser el paso inicial en la activaci&oacute;n de GIVA PLA(2).

Calcio obligatorio rigidiza el dominio C2 y la interacci&oacute;n dentro de GIVA fosfolipasa A2 seg&uacute;n lo revelado por espectrometr&iacute;a de masas de intercambio de hidr&oacute;geno/deuterio.

&#x7EC4; IVA (GIVA) &#x78F7;&#x8102;&#x9176; A(2) &#x5929;&#x7136;&#x819C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7ECF;&#x518D;&#x52A0;&#x4E0A;&#x67D0;&#x4E9B;&#x8102;&#x8D28;&#x8C03;&#x89E3;&#x5458;&#x589E;&#x52A0;&#x589E;&#x52A0;&#x54CD;&#x5E94;&#x76F8;&#x5173;&#x8054;&#x3002;&#x8FD9;&#x79CD;&#x9176;&#x5C06;&#x4E0E;&#x819C;&#x8868;&#x9762;&#xFF0C;&#x4EE5;&#x53CA;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x5355;&#x4E2A;&#x78F7;&#x8102;&#x5206;&#x5B50;&#x7684;&#x50AC;&#x5316;&#x6D3B;&#x52A8;&#x7F51;&#x7AD9;&#x4E2D;&#x76F8;&#x5173;&#x8054;&#x3002;&#x96C7;&#x7528;&#x6C18;&#x4EA4;&#x6362;&#x8D28;&#x8C31;&#x6CD5;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x786E;&#x5B9A;&#x4E86;&#x5404;&#x533A;&#x57DF;&#x7684;&#x5177;&#x6709;&#x7EA6;&#x675F;&#x529B;&#x7684;&#x8102;&#x8D28;&#x86CB;&#x767D;&#x8868;&#x9762;&#x548C;&#x6784;&#x8C61;&#x53D8;&#x5316;&#x5BF9;&#x5355;&#x4E2A;&#x78F7;&#x8102;&#x8102;&#x8868;&#x9762;&#x6CA1;&#x6709;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x3002;&#x8FDB;&#x884C;&#x4E86;&#x5B9E;&#x9A8C;&#x4F7F;&#x7528;&#x5929;&#x7136;&#x68D5;&#x6988; arachidonyl &#x78F7;&#x8102;&#x9170;&#x80C6;&#x78B1;&#x56CA;&#x6CE1;&#x4E0E;&#x5B8C;&#x597D;&#x7684; GIVA &#x9176;&#xFF0C;&#x4EE5;&#x53CA;&#x5B64;&#x7ACB;&#x7684; C2 &#x548C;&#x50AC;&#x5316;&#x57DF;&#x3002;&#x8102;&#x8D28;&#x7ED3;&#x5408;&#x4EA7;&#x751F;&#x6C18;&#x4EA4;&#x6362; 8 &#x4E2A;&#x4E0D;&#x540C;&#x5730;&#x533A;&#x7684;&#x8FD9;&#x79CD;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x7684;&#x53D8;&#x5316;&#x3002;&#x51CF;&#x5C11;&#x4EA4;&#x6362;&#x533A;&#x57DF;&#x5305;&#x62EC;&#x7ECF;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x5FAA;&#x73AF;&#x5176;&#x4E2D;&#x62DF;&#x6E17;&#x900F;&#x819C;&#x7684;&#x8868;&#x9762;&#x548C;&#x4E00;&#x5757;&#x5E26;&#x7535;&#x7684;&#x6B8B;&#x7559;&#x7269;&#xFF0C;&#x53EF;&#x80FD;&#x662F;&#x91CD;&#x8981;&#x7684;&#x78F7;&#x8102;&#x6781;&#x6027;&#x5934;&#x7EC4;&#x4E0E;&#x4E92;&#x52A8;&#x3002;&#x5728;&#x4EA4;&#x6D41;&#x4E2D;&#x589E;&#x52A0;&#x7684;&#x5730;&#x533A;&#x4F4D;&#x4E8E;&#x6240;&#x6709;&#x8981;&#x4E48;&#x5728;&#x758F;&#x6C34;&#x6838;&#x5FC3;&#x76D6;&#x533A;&#x7684;&#x4E0B;&#x65B9;&#x6216;&#x9644;&#x8FD1;&#x76D6;&#x548C;&#x94F0;&#x94FE;&#x5730;&#x533A;&#x4ECE; 403 457&#x3002;&#x4F7F;&#x7528; GIVA &#x78F7;&#x8102;&#x9176; A(2) &#x4E0D;&#x53EF;&#x9006;&#x6291;&#x5236;&#x5242;&#x7532;&#x57FA; arachidonyl fluorophosphonate&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x5F97;&#x4EE5;&#x9694;&#x79BB;&#x7684;&#x7ED3;&#x6784;&#x6027;&#x53D8;&#x5316;&#x9020;&#x6210;&#x53EA;&#x80FD;&#x7531; pseudo-substrate &#x7ED1;&#x5B9A;&#x3002;&#x8FD9;&#x4EA7;&#x751F;&#x4E86;&#x975E;&#x5E38;&#x7C7B;&#x4F3C;&#x4E8E;&#x5929;&#x7136;&#x8102;&#x8D28;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x5B58;&#x5728;&#x8102;&#x8D28;&#x754C;&#x9762; &#xFF08;&#x9664;&#x4E86; C2 &#x57DF;&#x548C;&#x533A;&#x57DF; 466-470 &#x4E0B;&#x7684;&#x7ED3;&#x679C;&#x3002;&#x8FD9;&#x610F;&#x5473;&#x7740;&#x5927;&#x591A;&#x6570;&#x5728;&#x50AC;&#x5316;&#x57DF;&#x4E2D;&#x770B;&#x5230;&#x7684;&#x53D8;&#x5316;&#x662F;&#x7531;&#x4E8E;&#x4ECB;&#x5BFC;&#x886C;&#x5E95;&#x3001; &#x4E0D;&#x4ECB;&#x5BFC;&#x63A5;&#x53E3;&#xFF0C;&#x76D6;&#x5B50;&#x6253;&#x5F00;&#xFF0C;&#x5176;&#x4E2D;&#x516C;&#x5F00;&#x6C34;&#x5230;&#x6D3B;&#x52A8;&#x7F51;&#x7AD9;&#x3002;&#x6700;&#x540E;&#x4E0E;&#x6291;&#x5236;&#x5242;&#x6240;&#x8FDB;&#x884C;&#x7684;&#x5B9E;&#x9A8C;&#x52A0;&#x78F7;&#x8102;&#x56CA;&#x6CE1;&#x5728; C2 &#x57DF;&#x7684;&#x8DCC;&#x5E45;&#xFF0C;&#x4EE5;&#x53CA;&#x88AB;&#x63A7;&#x6CC4;&#x9732;&#x5230;&#x8102;&#x8D28;&#x8868;&#x9762;&#x9176;&#x7684;&#x7ED3;&#x5408;&#x70B9;&#x5728;&#x50AC;&#x5316;&#x9886;&#x57DF;&#x7684;&#x5047;&#x5B9A;&#x819C;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x8868;&#x9762;&#x4E0A;&#x7684;&#x6B8B;&#x7559;&#x7269;&#x3002;

&#x5C45;&#x4F4F;&#x5728;&#x819C;&#x8868;&#x9762;&#x7684;&#x78F7;&#x8102;&#x5E95;&#x7269;&#x5206;&#x5B50;&#x4ECB;&#x5BFC;&#x76D6;&#x5730;&#x533A; IVA &#x80DE;&#x6D46;&#x78F7;&#x8102;&#x9176; A2 &#x7EC4;&#x4E2D;&#x7684;&#x5F00;&#x5E55;&#x3002;

The Group IVA (GIVA) phospholipase A(2) associates with natural membranes in response to an increase in intracellular Ca(2+) along with increases in certain lipid mediators. This enzyme associates with the membrane surface as well as binding a single phospholipid molecule in the active site for catalysis. Employing deuterium exchange mass spectrometry, we have identified the regions of the protein binding the lipid surface and conformational changes upon a single phospholipid binding in the absence of a lipid surface. Experiments were carried out using natural palmitoyl arachidonyl phosphatidylcholine vesicles with the intact GIVA enzyme as well as the isolated C2 and catalytic domains. Lipid binding produced changes in deuterium exchange in eight different regions of the protein. The regions with decreased exchange included Ca(2+) binding loop one, which has been proposed to penetrate the membrane surface, and a charged patch of residues, which may be important in interacting with the polar head groups of phospholipids. The regions with an increase in exchange are all located either in the hydrophobic core underneath the lid region or near the lid and hinge regions from 403 to 457. Using the GIVA phospholipase A(2) irreversible inhibitor methyl-arachidonyl fluorophosphonate, we were able to isolate structural changes caused only by pseudo-substrate binding. This produced results that were very similar to natural lipid binding in the presence of a lipid interface with the exception of the C2 domain and region 466-470. This implies that most of the changes seen in the catalytic domain are due to a substrate-mediated, not interface-mediated, lid opening, which exposes the active site to water. Finally experiments carried out with inhibitor plus phospholipid vesicles showed decreases at the C2 domain as well as charged residues on the putative membrane binding surface of the catalytic domain revealing the binding sites of the enzyme to the lipid surface.

A phospholipid substrate molecule residing in the membrane surface mediates opening of the lid region in group IVA cytosolic phospholipase A2.

La phospholipase groupe IVA (GIVA) a (2) associe &agrave; membranes naturelles en r&eacute;action &agrave; une augmentation intracellulaire Ca(2+) ainsi que l&#39;augmentation de certains m&eacute;diateurs lipidiques. Cette enzyme s&#39;associe avec la surface de la membrane ainsi que lie une mol&eacute;cule de phospholipide unique dans le site actif pour la catalyse. Employant spectrom&eacute;trie de masse de deut&eacute;rium &eacute;change, nous avons identifi&eacute; des r&eacute;gions de la prot&eacute;ine liant le lipide changements conformationnels et de surfaces sur une liaison unique de phospholipides en l&#39;absence d&#39;une surface de lipides. Exp&eacute;riences ont &eacute;t&eacute; effectu&eacute;es &agrave; l&#39;aide de v&eacute;sicules de phosphatidylcholine arachidonyl palmitoyl naturelle avec l&#39;enzyme GIVA intact ainsi que le C2 isol&eacute;es et de domaines catalytiques. Liaison de lipides produit des changements dans l&#39;&eacute;change de deut&eacute;rium dans huit r&eacute;gions diff&eacute;rentes de la prot&eacute;ine. Les r&eacute;gions avec une diminution exchange inclus Ca(2+) boucle de liaison qui a &eacute;t&eacute; propos&eacute; de p&eacute;n&eacute;trer la surface de la membrane et un patch charg&eacute; de r&eacute;sidus, ce qui peut &ecirc;tre important dans l&#39;interaction avec les groupes polaires des phospholipides. Les r&eacute;gions avec une augmentation des &eacute;changes sont tous situ&eacute;es dans le noyau hydrophobe sous la r&eacute;gion de couvercle ou &agrave; proximit&eacute; des r&eacute;gions couvercle et charni&egrave;re de 403 &agrave; 457. Le fluorophosphonate de m&eacute;thyle-arachidonyl GIVA phospholipase a (2) inhibiteur irr&eacute;versible, nous avons r&eacute;ussis &agrave; isoler les changements structurels caus&eacute;s uniquement par liaison pseudosubstrat. Cela produit des r&eacute;sultats tr&egrave;s semblables &agrave; la liaison du lipide naturel en pr&eacute;sence d&#39;une interface de lipides &agrave; l&#39;exception de la r&eacute;gion 466-470 et le domaine C2. Cela implique que la plupart des changements dans le domaine catalytique r&eacute;sultent d&#39;un induite par le substrat, pas interface-mediated, ouverture du couvercle, qui expose le site actif de l&#39;eau. Enfin, des exp&eacute;riences r&eacute;alis&eacute;es avec inhibiteur plus v&eacute;sicules phospholipidiques ont montr&eacute; une diminution au niveau du domaine C2 ainsi que les r&eacute;sidus sur la surface de liaison putative membrane du domaine catalytique r&eacute;v&eacute;lant les sites de liaison de l&#39;enzyme &agrave; la surface des lipides charg&eacute;s.

Une mol&eacute;cule de substrat de phospholipides qui r&eacute;sident dans la surface de la membrane n&eacute;gocie l&#39;ouverture de la r&eacute;gion de couvercle en groupe IVA phospholipase cytosolique A2.

Die Gruppe IVA (GIVA)-Phospholipase A(2) ordnet nat&uuml;rlichen Membranen als Reaktion auf einen Anstieg der intrazellul&auml;ren Ca(2+) zusammen mit Anstieg bestimmter Lipid-Mediatoren. Dieses Enzym ordnet der Membranoberfl&auml;che sowie ein einzelnes Phospholipid-Molek&uuml;l in der aktiven Site f&uuml;r Katalyse binden. Deuterium Austausch Massenspektrometrie besch&auml;ftigen, haben wir die Regionen des Proteins binden die Lipid identifiziert Oberfl&auml;chen- und Konformations&auml;nderungen &Auml;nderungen auf einer einzigen Phospholipid-Bindung in Ermangelung einer Lipid-Oberfl&auml;che. Experimente wurden mit nat&uuml;rlichen Palmitoyl Arachidonylglyzerol Phosphatidylcholin Bl&auml;schen mit der intakten GIVA-Enzym sowie die isolierten C2 und katalytische Dom&auml;nen durchgef&uuml;hrt. Lipid-Bindung hergestellt &Auml;nderungen im Deuterium Austausch in acht verschiedenen Regionen des Proteins. Regionen mit verminderter Exchange enthalten Ca(2+)-Bindung-Schleife ein, der vorgeschlagen hat, durchdringen die Membranoberfl&auml;che und einen aufgeladenen Patch von R&uuml;ckst&auml;nden, die bei der Interaktion mit den polaren Kopf Gruppen von Phospholipiden wichtig sein k&ouml;nnen. Regionen mit einem Anstieg der Austausch befinden sich alle entweder in der hydrophoben Kern unterhalb der Deckel-Region oder in der N&auml;he der Deckel und Scharnier Regionen von 403 bis 457. Verwenden die GIVA Phospholipase A(2) irreversible Hemmer Methyl-Arachidonylglyzerol Fluorophosphonate, konnten wir um strukturelle Ver&auml;nderungen nur durch Pseudo-substrate Bindung zu isolieren. Dies f&uuml;hrte zu Ergebnissen, die nat&uuml;rliche Lipid-Bindung in Anwesenheit einer Lipid-Schnittstelle mit Ausnahme der C2-Dom&auml;ne und der Region 466-470 sehr &auml;hnlich waren. Dies impliziert, dass die meisten &Auml;nderungen gesehen in der katalytischen Dom&auml;ne wegen einem Substrat-vermittelte, nicht-Schnittstelle-vermittelte, Deckel &ouml;ffnen, die der aktiven Site zu Wasser verf&uuml;gbar macht. Schlie&szlig;lich durchgef&uuml;hrte Versuche mit Inhibitor plus Phospholipid Vesicles zeigte R&uuml;ckg&auml;nge bei der C2-Dom&auml;ne als auch aufgeladen R&uuml;ckst&auml;nde auf der vermeintlichen Membranoberfl&auml;che der Bindung der katalytischen Dom&auml;ne offenbart die Bindungsstellen des Enzyms an die Lipid-Oberfl&auml;che.

Ein Phospholipid-Substrat-Molek&uuml;l in der Membranoberfl&auml;che wohnten vermittelt die &Ouml;ffnung des Gebietes Deckel in Gruppe IVA cytosolic Phospholipase A2.

Il gruppo IVA (GIVA) fosfolipasi a (2) associa con membrane naturali in risposta ad un aumento in intracellulare Ca(2+) insieme con aumenti in alcuni mediatori lipidici. Questo enzima si associa con la superficie della membrana, nonch&eacute; associazione di una molecola di fosfolipide unico nel sito attivo per la catalisi. Impiegando spettrometria totale cambio di deuterio, abbiamo identificato le regioni della proteina vincolanti i lipidi cambiamenti conformazionali e superficiale su di un legame unico fosfolipide in assenza di una superficie di lipidi. Gli esperimenti sono stati effettuati utilizzando naturale palmitoyl arachidonil fosfatidilcolina vescicole con l&#39;enzima GIVA intatto cos&igrave; come la C2 isolato e domini catalitici. Associazione lipidico prodotto cambiamenti in cambio di deuterio in otto diverse regioni della proteina. Le regioni con scambio diminuito includevano Ca(2+) associazione loop uno, che &egrave; stato proposto di penetrare la superficie della membrana e una macchia carica di residui, che possono essere importanti nell&#39;interazione con i gruppi di testa polari dei fosfolipidi. Le regioni con un aumento in cambio sono tutti situate sia nel nucleo idrofobo sotto la regione coperchio o vicino alle regioni coperchio e cerniera da 403 a 457. Utilizzando la GIVA fosfolipasi a (2) inibitore irreversibile metil-arachidonil-fluorophosphonate, siamo stati in grado di isolare le modifiche strutturali causate solo dall&#39;associazione pseudo-substrate. Questo produce risultati che sono molto simili a associazione naturale dei lipidi in presenza di un&#39;interfaccia di lipidi ad eccezione del dominio C2 e regione 466-470. Questo implica che la maggior parte dei cambiamenti visti nel dominio catalitico sono a causa di un substrato-mediata, non mediata da interfaccia, apertura del coperchio, che espone il sito attivo per l&#39;acqua. Infine le sperimentazioni condotte con inibitore pi&ugrave; vescicole di fosfolipidi hanno dimostrato diminuzioni presso il dominio C2 come pure residui sulla superficie membrana putativo associazione del dominio catalitico rivelando i siti di legame dell&#39;enzima per la superficie lipidica di carica.

Una molecola di substrato fosfolipide che risiedono sulla superficie della membrana media l&#39;apertura della regione del coperchio nel gruppo IVA fosfolipasi citosolica A2.

&#x30B0;&#x30EB;&#x30FC;&#x30D7; IVA (GIVA) &#x30DB;&#x30B9;&#x30DB;&#x30EA;&#x30D1;&#x30FC;&#x30BC;&#x9B54;&#x65B9;&#x9663;&#x7279;&#x5B9A;&#x8102;&#x8CEA;&#x30E1;&#x30C7;&#x30A3;&#x30A8;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x306E;&#x5897;&#x52A0;&#x3068;&#x3068;&#x3082;&#x306B;&#x7D30;&#x80DE;&#x5185;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;&#x306E;&#x5897;&#x52A0;&#x306E;&#x5FDC;&#x7B54;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x819C;&#x306E;&#x81EA;&#x7136;&#x3092;&#x95A2;&#x9023;&#x4ED8;&#x3051;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x9175;&#x7D20;&#x306F;&#x819C;&#x8868;&#x9762;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x5358;&#x4E00;&#x306E;&#x30EA;&#x30F3;&#x8102;&#x8CEA;&#x5206;&#x5B50;&#x89E6;&#x5A92;&#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x90E8;&#x4F4D;&#x3067;&#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C7;&#x30A3;&#x30F3;&#x30B0;&#x3092;&#x95A2;&#x9023;&#x4ED8;&#x3051;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x91CD;&#x6C34;&#x7D20;&#x4EA4;&#x63DB;&#x8CEA;&#x91CF;&#x5206;&#x6790;&#x6CD5;&#x3092;&#x63A1;&#x7528;&#x3057;&#x3001;&#x8102;&#x8CEA;&#x7D50;&#x5408;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x5730;&#x57DF;&#x3092;&#x8B58;&#x5225;&#x3057;&#x305F;&#x5358;&#x4E00;&#x30EA;&#x30F3;&#x8102;&#x8CEA;&#x7D50;&#x5408;&#x8102;&#x8CEA;&#x8868;&#x9762;&#x306E;&#x4E0D;&#x5728;&#x3067;&#x8868;&#x9762;&#x3068;&#x30B3;&#x30F3;&#x30D5;&#x30A9;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x5909;&#x5316;&#x3002;&#x305D;&#x306E;&#x307E;&#x307E; GIVA &#x9175;&#x7D20;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x5206;&#x96E2; C2 &#x3068;&#x89E6;&#x5A92;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x3068;&#x81EA;&#x7136;&#x30D1;&#x30EB;&#x30DF;&#x30C8;&#x30A4;&#x30EB; arachidonyl &#x30DB;&#x30B9;&#x30D5;&#x30A1;&#x30C1;&#x30B8;&#x30EB;&#x30B3;&#x30EA;&#x30F3;&#x5C0F;&#x80DE;&#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x3066;&#x5B9F;&#x9A13;&#x3092;&#x5B9F;&#x65BD;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x8102;&#x8CEA;&#x7D50;&#x5408;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x306E; 8 &#x3064;&#x306E;&#x7570;&#x306A;&#x308B;&#x5730;&#x57DF;&#x3067;&#x306E;&#x91CD;&#x6C34;&#x7D20;&#x4EA4;&#x63DB;&#x306E;&#x5909;&#x5316;&#x751F;&#x7523;&#x3002;&#x4F4E;&#x4E0B; exchange &#x3067;&#x5730;&#x57DF;&#x819C;&#x8868;&#x9762;&#x3084;&#x8377;&#x96FB;&#x30D1;&#x30C3;&#x30C1; &#x30EA;&#x30F3;&#x8102;&#x8CEA;&#x306E;&#x6975;&#x6027;&#x982D;&#x90E8;&#x7FA4;&#x3068;&#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x306B;&#x91CD;&#x8981;&#x304B;&#x3082;&#x3057;&#x308C;&#x306A;&#x3044;&#x6B8B;&#x6E23;&#x306E;&#x6D78;&#x900F;&#x306B;&#x63D0;&#x6848;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;&#x7D50;&#x5408;&#x30EB;&#x30FC;&#x30D7; 1 &#x3064;&#x306F;&#x3001;&#x542B;&#x307E;&#x308C;&#x3066;&#x3002;Exchange &#x306E;&#x5897;&#x52A0;&#x3068;&#x5730;&#x57DF;&#x306F;&#x5168;&#x3066;&#x306B;&#x3069;&#x3061;&#x3089;&#x304B;&#x758E;&#x6C34;&#x6027;&#x30B3;&#x30A2;&#x84CB;&#x9818;&#x57DF;&#x306E;&#x4E0B;&#x306B;&#x307E;&#x305F;&#x306F; 403 &#x304B;&#x3089; 457 &#x306B;&#x84CB;&#x3068;&#x30D2;&#x30F3;&#x30B8;&#x9818;&#x57DF;&#x306E;&#x8FD1;&#x304F;&#x306B;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;GIVA &#x30DB;&#x30B9;&#x30DB;&#x30EA;&#x30D1;&#x30FC;&#x30BC;&#x9B54;&#x65B9;&#x9663;&#x306E;&#x4E0D;&#x53EF;&#x9006;&#x7684;&#x963B;&#x5BB3;&#x5264;&#x30E1;&#x30C1;&#x30EB; arachidonyl fluorophosphonate &#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x6211;&#x3005; &#x306F;&#xFF0C; &#x7D50;&#x5408;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x306E;&#x307F;&#x5F15;&#x304D;&#x8D77;&#x3053;&#x3055;&#x69CB;&#x9020;&#x306E;&#x5909;&#x66F4;&#x3092;&#x5206;&#x96E2;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x306F;&#x5929;&#x7136;&#x8102;&#x8CEA;&#x7D50;&#x5408;&#x8102;&#x8CEA;&#x30A4;&#x30F3;&#x30BF;&#x30FC;&#x30D5;&#x30A7;&#x30A4;&#x30B9; C2 &#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x3068;&#x9818;&#x57DF; 466 470 &#x3092;&#x9664;&#x3044;&#x3066;&#x5B58;&#x5728;&#x3059;&#x308B;&#x5834;&#x5408;&#x306B;&#x975E;&#x5E38;&#x306B;&#x985E;&#x4F3C;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x305F;&#x7D50;&#x679C;&#x3092;&#x751F;&#x3093;&#x3060;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x306F;&#x89E6;&#x5A92;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x3067;&#x898B;&#x3089;&#x308C;&#x308B;&#x5909;&#x5316;&#x306E;&#x307B;&#x3068;&#x3093;&#x3069;&#x304C;&#x6C34;&#x306B;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6;&#x306A;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x3092;&#x516C;&#x958B;&#x3092;&#x958B;&#x304F;&#x3001;&#x57FA;&#x677F;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x305F;&#x3001;&#x306A;&#x3044;&#x754C;&#x9762;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x305F;&#x3075;&#x305F;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x610F;&#x5473;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6700;&#x5F8C;&#x306B;&#x963B;&#x5BB3;&#x85AC;&#x306E;&#x5B9F;&#x9A13;&#x3092;&#x5B9F;&#x65BD;&#x30D7;&#x30E9;&#x30B9;&#x6E1B;&#x5C11; C2 &#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x3067;&#x30EA;&#x30F3;&#x8102;&#x8CEA;&#x30D9;&#x30B7;&#x30AF;&#x30EB;&#x3068;&#x8377;&#x96FB;&#x6B8B;&#x57FA;&#x306E;&#x8102;&#x8CEA;&#x8868;&#x9762;&#x306B;&#x9175;&#x7D20;&#x7D50;&#x5408;&#x90E8;&#x4F4D;&#x3092;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x89E6;&#x5A92;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x306E;&#x63A8;&#x5B9A;&#x819C;&#x7D50;&#x5408;&#x8868;&#x9762;&#x3002;

&#x819C;&#x8868;&#x9762;&#x306B;&#x5B58;&#x5728;&#x3059;&#x308B;&#x30EA;&#x30F3;&#x8102;&#x8CEA;&#x306E;&#x57FA;&#x8CEA;&#x5206;&#x5B50;&#x30B0;&#x30EB;&#x30FC;&#x30D7; IVA &#x8CEA;&#x578B;&#x30DB;&#x30B9;&#x30DB;&#x30EA;&#x30D1;&#x30FC;&#x30BC; A2 &#x3075;&#x305F;&#x5730;&#x57DF;&#x306E;&#x30AA;&#x30FC;&#x30D7;&#x30CB;&#x30F3;&#x30B0;&#x3092;&#x4EF2;&#x4ECB;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#xADF8;&#xB8F9; IVA (GIVA) phospholipase A(2) &#xC790;&#xC5F0; &#xC138;&#xD3EC; &#xB9C9; &#xC138;&#xD3EC;&#xB0B4; Ca(2+) &#xD2B9;&#xC815; &#xC9C0;&#xC9C8; &#xC911;&#xC7AC;&#xC790;&#xC758; &#xC99D;&#xAC00; &#xD568;&#xAED8; &#xC99D;&#xAC00;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC751;&#xB2F5;&#xC5D0; &#xC5F0;&#xACB0;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774; &#xD6A8;&#xC18C;&#xB294; &#xB2E8;&#xC77C; &#xC778;&#xC9C0;&#xC9C8; &#xBD84;&#xC790; &#xCD09;&#xB9E4;&#xC758; &#xD65C;&#xC131; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8;&#xC5D0; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xBFD0;&#xB9CC; &#xC544;&#xB2C8;&#xB77C; &#xBA64;&#xBE0C;&#xB808;&#xC778; &#xD45C;&#xBA74;&#xC5D0; &#xC5F0;&#xACB0; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC740; &#xC9C0;&#xC9C8;&#xC744; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xC601;&#xC5ED; &#xD655;&#xC778; &#xD588;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xC911;&#xC218;&#xC18C; &#xAD50;&#xD658; &#xC9C8;&#xB7C9; &#xBD84;&#xC11D;&#xC744; &#xCC44;&#xC6A9;, &#xC9C0;&#xC9C8; &#xD45C;&#xBA74; &#xC5C6;&#xC744; &#xACBD;&#xC6B0;&#xC5D0;&#xC11C; &#xB2E8;&#xC77C; &#xC778;&#xC9C0;&#xC9C8; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xC5D0; &#xB530;&#xB77C; &#xD45C;&#xBA74; &#xBC0F; &#xAD6C;&#xC870;&#xC801; &#xBCC0;&#xD654;. &#xC2E4;&#xD5D8;&#xC744; &#xADF8;&#xB300;&#xB85C; GIVA &#xD6A8;&#xC18C;&#xC640; &#xACA9;&#xB9AC; &#xB41C; C2 &#xBC0F; &#xCD09;&#xB9E4; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778;&#xC73C;&#xB85C; &#xC790;&#xC5F0; palmitoyl arachidonyl phosphatidylcholine &#xC18C;&#xD3EC;&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xC2E4;&#xC2DC; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC9C0;&#xC9C8; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xC0DD;&#xC0B0; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; 8 &#xAC1C;&#xC758; &#xB2E4;&#xB978; &#xC9C0;&#xC5ED;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC911;&#xC218;&#xC18C; exchange&#xC5D0;&#xC11C; &#xBCC0;&#xACBD;. &#xAC10;&#xC18C; exchange&#xC640; &#xC601;&#xC5ED; &#xD3EC;&#xD568; Ca(2+) &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xB8E8;&#xD504; &#xBA64;&#xBE0C;&#xB808;&#xC778; &#xD45C;&#xBA74; &#xBC0F; &#xC778;&#xC9C0;&#xC9C8; &#xBD81;&#xADF9; &#xBA38;&#xB9AC; &#xADF8;&#xB8F9; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC5D0; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xC788;&#xC744; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xC794;&#xB958;&#xBB3C;&#xC758; &#xCDA9;&#xC804;&#xB41C; &#xD328;&#xCE58; &#xCE68;&#xD22C; &#xC81C;&#xC548; &#xB41C; &#xD558;&#xB098;. Exchange&#xC758; &#xC99D;&#xAC00;&#xC640; &#xC9C0;&#xC5ED; &#xC18C;&#xC218; &#xD575;&#xC2EC; &#xB69C;&#xAED1; &#xC9C0;&#xC5ED; &#xC544;&#xB798; &#xB610;&#xB294; 457&#xC5D0; 403&#xC5D0;&#xC11C; &#xB69C;&#xAED1;&#xACFC; &#xD78C;&#xC9C0; &#xC601;&#xC5ED; &#xADFC;&#xCC98;&#xC5D0; &#xBAA8;&#xB450; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. GIVA phospholipase A(2) &#xB3CC;&#xC774;&#xD0AC; &#xC218; &#xC5C6;&#xB294; &#xBC18;&#xC751; &#xC5B5;&#xC81C;&#xC81C; &#xBA54; &#xD2F8; arachidonyl fluorophosphonate&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC;, &#xC6B0;&#xB9AC; pseudo-substrate &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574;&#xC11C;&#xB9CC; &#xBC1C;&#xC0DD; &#xD558;&#xB294; &#xAD6C;&#xC870;&#xC801;&#xC778; &#xBCC0;&#xD654;&#xB97C; &#xBD84;&#xB9AC;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC5C8;&#xB2E4;. &#xC774; &#xC790;&#xC5F0; &#xC9C0;&#xC9C8; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; C2 &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778; &#xBC0F; &#xC9C0;&#xC5ED; 466 470 &#xC81C;&#xC678;&#xD55C; &#xC9C0;&#xC9C8; &#xC778;&#xD130;&#xD398;&#xC774;&#xC2A4;&#xC758; &#xC874;&#xC7AC;&#xB97C; &#xB9E4;&#xC6B0; &#xBE44;&#xC2B7;&#xD55C; &#xACB0;&#xACFC; &#xC0DD;&#xC0B0;. &#xC774; &#xC758;&#xBBF8;&#xB294; &#xCD09;&#xB9E4; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBCF8; &#xBCC0;&#xD654;&#xC758; &#xB300;&#xBD80;&#xBD84; &#xAE30;&#xD310; &#xC911;&#xC7AC;, &#xD558;&#xC9C0; &#xC778;&#xD130;&#xD398;&#xC774;&#xC2A4; &#xC911;&#xC7AC;, &#xB69C;&#xAED1;&#xC744; &#xC5F4;&#xACE0;, &#xBB3C; &#xD65C;&#xC131; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8; &#xB178;&#xCD9C; &#xD558;&#xB294; &#xB54C;&#xBB38;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB9C8;&#xC9C0;&#xB9C9;&#xC73C;&#xB85C; &#xC2E4;&#xD5D8; &#xC5B5;&#xC81C;&#xC81C;&#xC640; &#xD568;&#xAED8; &#xC2E4;&#xC2DC; &#xD50C;&#xB7EC;&#xC2A4; &#xC778;&#xC9C0;&#xC9C8; vesicles C2 &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778;&#xC5D0; &#xAC10;&#xC18C;&#xB97C; &#xBCF4;&#xC5EC; &#xBFD0;&#xB9CC; &#xC544;&#xB2C8;&#xB77C; &#xC9C0;&#xC9C8; &#xD45C;&#xBA74; &#xD6A8;&#xC18C;&#xC758; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8;&#xB97C; &#xACF5;&#xAC1C; &#xD558;&#xB294; &#xCD09;&#xB9E4; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778;&#xC758; &#xC0C1; &#xB9C9; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xD45C;&#xBA74;&#xC5D0; &#xC794;&#xB958;&#xBB3C;&#xC744; &#xCCAD;&#xAD6C; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xBA64;&#xBE0C;&#xB808;&#xC778; &#xD45C;&#xBA74;&#xC5D0; &#xC778;&#xC9C0;&#xC9C8; &#xAE30;&#xD310; &#xBD84;&#xC790; &#xC911;&#xC7AC; &#xADF8;&#xB8F9; IVA cytosolic phospholipase a2&#xC5D0;&#xC5D0;&#xC11C; &#xB69C;&#xAED1; &#xC601;&#xC5ED;&#xC758; &#xC624;&#xD504;&#xB2DD;.

El grupo IVA (GIVA) fosfolipasa punto asocia membranas naturales en respuesta a un aumento de CA intracelular junto con aumentos en ciertos mediadores lip&iacute;dicos. Esta enzima se asocia con la superficie de la membrana as&iacute; como enlace de una mol&eacute;cula de fosfol&iacute;pido solo en el sitio activo para la cat&aacute;lisis. Empleo de espectrometr&iacute;a de masas de intercambio de deuterio, hemos identificado las regiones de la prote&iacute;na vinculante el l&iacute;pido cambios conformacionales y superficiales sobre un enlace de fosfol&iacute;pido solo en la ausencia de una superficie de l&iacute;pidos. Los experimentos se llevaron a cabo usando natural palmitoyl arachidonyl fosfatidilcolina ves&iacute;culas con la enzima GIVA intacta como el C2 aislados y dominios catal&iacute;ticos. Uni&oacute;n de l&iacute;pidos produjo cambios en el intercambio de deuterio en ocho diferentes regiones de la prote&iacute;na. Las regiones con menor intercambio incluyen lazo de uni&oacute;n de CA uno, que se ha propuesto para penetrar la superficie de la membrana y una mancha cargada de residuos que pueden ser importantes en la interacci&oacute;n con los grupos de cabeza polares de los fosfol&iacute;pidos. Las regiones con un aumento en el intercambio se encuentran en el n&uacute;cleo hidrof&oacute;bico por debajo de la regi&oacute;n de tapa o cerca de las regiones de tapa y bisagra de 403 a 457. Usando la GIVA fosfolipasa punto inhibidor irreversible metil-arachidonyl fluorophosphonate, hemos sido capaces de aislar los cambios estructurales causados solamente por el enlace pseudo-substrate. Esto produjo resultados muy similares a la Uni&oacute;n de l&iacute;pidos naturales en presencia de una interfaz de l&iacute;pidos a excepci&oacute;n del dominio C2 y regi&oacute;n 466-470. Esto implica que la mayor&iacute;a de los cambios observados en el dominio catal&iacute;tico son debido a una sustrato-mediada, no mediada por interfaz, abertura de la tapa, que expone el sitio activo al agua. Finalmente llevaron cabo experimentos con el inhibidor m&aacute;s ves&iacute;culas de fosfol&iacute;pidos mostraron disminuciones en el dominio de C2, as&iacute; como residuos en la superficie de uni&oacute;n de membrana putativo del dominio catal&iacute;tico revelando los sitios de uni&oacute;n de la enzima a la superficie de l&iacute;pidos cargados.

Una mol&eacute;cula de sustrato de fosfol&iacute;pido que residen en la superficie de la membrana media apertura de la regi&oacute;n de tapa en grupo IVA citos&oacute;lica fosfolipasa A2.

&#x671F;&#x95F4;&#x51CB;&#x4EA1;&#x6FC0;&#x86CB;&#x767D;&#x6FC0;&#x9176; Pak2 &#x662F;&#x534A;&#x80F1;&#x6C28;&#x9178;&#x86CB;&#x767D;&#x9176; 3&#xFF0C;&#x5F62;&#x6210; heterotetramer&#xFF0C;&#x662F;&#x4E00;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x4EE5;&#x4E0B;&#x81EA;&#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x7684;&#x5207;&#x5272;&#x7684;&#x3002;&#x6D3B;&#x6027;&#x86CB;&#x767D;&#x6FC0;&#x9176;&#x8FC1;&#x79FB;&#x901F;&#x5EA6;&#x6BD4;&#x5168;&#x9176;&#x8FD8;&#x5904;&#x4E8E;&#x975E;&#x6D3B;&#x52A8;&#x72B6;&#x6001;&#x80FD;&#x5728;&#x51DD;&#x80F6;&#x8FC7;&#x6EE4;&#xFF0C;&#x5EFA;&#x8BAE;&#x6269;&#x5927;&#x6784;&#x8C61;&#x5206;&#x6790;&#x65F6;&#x7A0D;&#x6162;&#x3002;Pak2 &#x6FC0;&#x6D3B;&#x5305;&#x62EC;&#x4E00;&#x7CFB;&#x5217;&#x7684;&#x4ECE;&#x534A;&#x80F1;&#x6C28;&#x9178;&#x86CB;&#x767D;&#x9176;&#x5288;&#x88C2;&#x3001; ATP &#x7ED1;&#x5B9A;&#x548C; Pak2 &#x7684;&#x81EA;&#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x6240;&#x9020;&#x6210;&#x7684;&#x7ED3;&#x6784;&#x6027;&#x53D8;&#x5316;&#x3002;&#x5728;&#x6BCF;&#x4E2A;&#x6B65;&#x9AA4;&#x7684;&#x66F4;&#x6539;&#x5355;&#x72EC;&#x5206;&#x6790;&#x9170;&#x80FA;&#x6C22;/&#x6C18;&#x4EA4;&#x6362;&#x8D28;&#x8C31;&#x548C;&#x76F8;&#x6BD4;&#x5904;&#x4E8E;&#x975E;&#x6D3B;&#x52A8;&#x72B6;&#x6001;&#x7684; Pak2&#x3002;&#x81EA;&#x52A8;&#x6291;&#x5236;&#x7A97;&#x4F53;&#x662F;&#x663E;&#x793A;&#x8981;&#x7ED1;&#x5B9A; ATP &#x5728;&#x6D3B;&#x52A8;&#x7F51;&#x7AD9;&#xFF0C;&#x4E0E;&#x7518;&#x6C28;&#x9178;&#x5FAA;&#x73AF;&#x548C; autoinhibitory &#x57DF; &#xFF08;&#x63F4;&#x52A9;&#xFF09; &#x7684;&#x8F7B;&#x5FAE;&#x53D8;&#x5316;&#x3002;&#x534A;&#x80F1;&#x6C28;&#x9178;&#x86CB;&#x767D;&#x9176;&#x89E3;&#x7406;&#x751F;&#x4EA7;&#x6EB6;&#x5242;&#x53EF;&#x53CA;&#x6027;&#x7684;&#x63F4;&#x52A9;&#x548C;&#x4E0A;&#x53F6;&#x5728;&#x50AC;&#x5316;&#x9886;&#x57DF;&#x7684;&#x91CD;&#x5927;&#x53D8;&#x5316;&#x3002;&#x5288;&#x88C2;&#x7684; ATP &#x7ED1;&#x5B9A; Pak2 &#x653E;&#x677E;&#x53D8;&#x6784;&#x6291;&#x5236;&#x4F5C;&#x7528;&#xFF0C;&#x5982;&#x56FE;&#x6240;&#x793A;&#x7684;&#x4E2D;&#x4E0A;&#x90E8;&#x548C;&#x4E0B;&#x90E8;&#x7684;&#x53F6;&#xFF0C;&#x5305;&#x62EC; G &#x87BA;&#x65CB;&#xFF0C;&#x4FBF;&#x5229;&#x6FC0;&#x6D3B;&#xFF0C;&#x5728;&#x7BA1;&#x7406;&#x57DF;&#x4E2D;&#x7684; Ser 141 &#x548C;&#x82CF;&#x6C28;&#x9178; 402 &#x50AC;&#x5316;&#x57DF;&#x4E2D;&#x6240;&#x9700;&#x7684;&#x4E24;&#x4E2A;&#x7AD9;&#x70B9;&#x7684;&#x81EA;&#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x589E;&#x52A0;&#x6EB6;&#x5242;&#x7684;&#x8F85;&#x52A9;&#x529F;&#x80FD;&#x3002;&#x81EA;&#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x589E;&#x52A0;&#x9170;&#x80FA;&#x6C22;/&#x6C18;&#x4EA4;&#x6362;&#x6EB6;&#x5242;&#x53EF;&#x53CA;&#x6027;&#x7684;&#x63F4;&#x52A9;&#x548C; G-&#x87BA;&#x65CB;&#x3001; E F &#x5FAA;&#x73AF;&#x548C; N &#x603B;&#x7AD9;&#x4E4B;&#x95F4;&#x7684;&#x63A5;&#x89E6;&#x533A;&#x57DF;&#x3002;&#x56E0;&#x6B64;&#xFF0C;Pak2 &#x901A;&#x8FC7;&#x5288;&#x88C2;&#x534A;&#x80F1;&#x6C28;&#x9178;&#x86CB;&#x767D;&#x9176;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x662F; Pak2&#xFF0C;&#x5B83;&#x5141;&#x8BB8;&#x5B8C;&#x6574;&#x7684;&#x81EA;&#x52A8;&#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#xFF0C;&#x4ECE;&#x800C;&#x66F4;&#x5168;&#x9762;&#x63A5;&#x89E6;&#x6EB6;&#x5242;&#x548C; conformationally &#x52A8;&#x6001;&#x9176;&#x7684;&#x7ED3;&#x6784;&#x5F1B;&#x8C6B;&#x4E0E;&#x76F8;&#x5173;&#x8054;&#x3002;

&#x6FC0;&#x6D3B;&#x86CB;&#x767D;&#x6FC0;&#x9176; Pak2 &#x9170;&#x80FA;&#x6C22;/&#x6C18;&#x4EA4;&#x6362;&#x8FC7;&#x7A0B;&#x4E2D;&#x7684;&#x6784;&#x8C61;&#x53D8;&#x5316;&#x7684;&#x5206;&#x6790;&#x3002;

During apoptotic stress, protein kinase Pak2 is cleaved by caspase 3 to form a heterotetramer that is constitutively activated following autophosphorylation. The active protein kinase migrates slightly slower than the inactive holoenzyme when analyzed by gel filtration, suggesting an expanded conformation. Activation of Pak2 comprises a series of structural changes resulting from caspase cleavage, ATP binding, and autophosphorylation of Pak2. Changes at each step were individually analyzed by amide hydrogen/deuterium exchange coupled with mass spectrometry and compared with inactive Pak2. The auto-inhibited form was shown to bind ATP in the active site, with minor changes in the glycine loop and the autoinhibitory domain (AID). Caspase cleavage produced significant changes in solvent accessibility in the AID and upper lobe of the catalytic domain. Cleavage of ATP-bound Pak2 relaxes the allosteric inhibition, as shown by increased solvent accessibility in the upper and lower lobes, including the G-helix, facilitating the autophosphorylation of two sites required for activation, Ser-141 in the regulatory domain and Thr-402 in the catalytic domain. Autophosphorylation increased the amide hydrogen/deuterium exchange solvent accessibility of the contact region between the AID and the G-helix, the E-F loop, and the N terminus. Thus, activation of Pak2 via caspase cleavage is associated with structural relaxation of Pak2 that allows for complete auto-phosphorylation, resulting in a more comprehensive solvent-exposed and conformationally dynamic enzyme.

Analysis of conformational changes during activation of protein kinase Pak2 by amide hydrogen/deuterium exchange.

Lors d&#x26;#39;un stress apoptotique, la prot&#xE9;ine kinase PAK2 est cliv&#xE9; par la caspase 3 pour former un h&#xE9;t&#xE9;rot&#xE9;tram&#xE8;re qui est constitutivement active autophosphorylation suivant. La prot&#xE9;ine kinase actif migre l&#xE9;g&#xE8;rement plus lent que l&#x26;#39;holoenzyme inactive lorsqu&#x26;#39;il est analys&#xE9; par filtration sur gel, ce qui sugg&#xE8;re une conformation &#xE9;tendue. Activation d&#x26;#39;PAK2 comprend une s&#xE9;rie de changements structuraux r&#xE9;sultant du clivage caspase, liaison de l&#x26;#39;ATP, et l&#x26;#39;autophosphorylation d&#x26;#39;PAK2. Changements &#xE0; chaque &#xE9;tape ont &#xE9;t&#xE9; analys&#xE9;s individuellement par un amide d&#x26;#39;hydrog&#xE8;ne / deut&#xE9;rium &#xE9;change coupl&#xE9;e &#xE0; la spectrom&#xE9;trie de masse et par rapport &#xE0; PAK2 inactif. L&#x26;#39;auto-inhib&#xE9;e formulaire a &#xE9;t&#xE9; montr&#xE9; pour lier l&#x26;#39;ATP dans le site actif, avec des changements mineurs dans la boucle la glycine et le domaine autoinhibitory (AID). Caspase clivage produit des changements significatifs dans l&#x26;#39;accessibilit&#xE9; de solvant dans le lobe sup&#xE9;rieur de l&#x26;#39;AID et le domaine catalytique. Clivage de l&#x26;#39;ATP li&#xE9; PAK2 d&#xE9;tend l&#x26;#39;inhibition allost&#xE9;rique, comme indiqu&#xE9; par accessibilit&#xE9; au solvant accrue dans les lobes sup&#xE9;rieur et inf&#xE9;rieur, dont le G-h&#xE9;lice, facilitant l&#x26;#39;autophosphorylation de deux sites requis pour l&#x26;#39;activation, Ser-141 dans le domaine de r&#xE9;gulation et Thr- 402 dans le domaine catalytique. Autophosphorylation augment&#xE9; l&#x26;#39;accessibilit&#xE9; de change amide hydrog&#xE8;ne / deut&#xE9;rium solvant de la r&#xE9;gion de contact entre l&#x26;#39;AID et le G-h&#xE9;lice, la boucle EF, et le terminus N. Ainsi, l&#x26;#39;activation des caspases PAK2 par clivage est associ&#xE9; &#xE0; la relaxation de construction PAK2 qui permet l&#x26;#39;auto-complets phosphorylation, r&#xE9;sultant en une enzyme plus compl&#xE8;te solvant-expos&#xE9;e et la conformation dynamique.

Analyse des changements conformationnels lors de l&#x26;#39;activation de la prot&#xE9;ine kinase PAK2 par Amide hydrog&#xE8;ne / deut&#xE9;rium Bourse

Bei Apoptotic Stress ist Proteinkinase Pak2 zerspaltet, durch Caspase 3 eine Heterotetramer bilden, die konstitutiv aktivierten folgende Autophosphorylierung ist. Die aktive Proteinkinase migriert etwas langsamer als die inaktiven Erfahrung wenn von Gel-Filtration, schl&auml;gt eine erweiterte Konformation analysiert. Aktivierung des Pak2 umfasst eine Reihe von strukturellen Ver&auml;nderungen infolge Caspase-Spaltung, ATP-Bindung und Autophosphorylierung von Pak2. &Auml;nderungen bei jedem Schritt wurden einzeln von Amid Wasserstoff/Deuterium Exchange gekoppelt mit Massenspektrometrie und im Vergleich zu inaktiven Pak2 analysiert. Auto-gehemmt Form wurde gezeigt, um ATP in der aktiven Site, mit geringf&uuml;gigen &Auml;nderungen in der Glycin-Schleife und der Autoinhibitory-Dom&auml;ne (Hilfe) zu binden. Caspase-Spaltung bedeutende &Auml;nderungen in solvent Barrierefreiheit in die Hilfe und die oberen Lobus der katalytischen Dom&auml;ne hergestellt. Spaltung von ATP gebundene Pak2 entspannt die allosterische Hemmung, wie erh&ouml;hte solvent Zug&auml;nglichkeit in der oberen und unteren Lappen, einschlie&szlig;lich der G-Helix, erleichtern die Autophosphorylierung von zwei Standorten, die f&uuml;r die Aktivierung, Ser-141 in der regulatorischen Dom&auml;ne und Thr-402 in der katalytischen Dom&auml;ne gezeigt. Autophosphorylierung erh&ouml;ht die Amid Wasserstoff/Deuterium Austausch solvent Zug&auml;nglichkeit des Gebietes Kontakt zwischen Hilfe und die G-Helix, die E-F-Schleife und das N-Terminus. Daher ist die Aktivierung der Pak2 Caspase-Spaltung strukturelle Lockerung der Pak2, die komplette Auto-Phosphorylierung, wodurch eine umfassendere L&ouml;sungsmittel ausgesetzt und konformationsgehinderten dynamische Enzym erm&ouml;glicht zugeordnet.

Analyse der Konformationsver&auml;nderungen w&auml;hrend der Aktivierung der Proteinkinase Pak2 Amid Wasserstoff/Deuterium Austausch.

Durante lo stress apoptotic, chinasi di proteina Pak2 &egrave; fenduta da caspase 3 per formare un heterotetramer che &egrave; costitutivamente attivato autophosphorylation seguenti. La chinasi di proteina attiva migra leggermente pi&ugrave; lento rispetto al esonucleasica inattivo quando analizzato mediante gel filtrazione, suggerendo una conformazione estesa. Attivazione di Pak2 comprende una serie di cambiamenti strutturali derivanti dal clivaggio di caspase, ATP binding e autophosphorylation di Pak2. Modifiche ad ogni passo sono state analizzate singolarmente tramite lo scambio di idrogeno/deuterio ammide accoppiato con spettrometria di massa e confrontato con Pak2 inattivo. Il modulo di auto-inibito &egrave; stato mostrato a legare ATP nel sito attivo, con lievi modifiche nel ciclo il glicina e il dominio automatico (aiuto). Clivaggio caspase prodotto cambiamenti significativi nel solvente accessibilit&agrave; negli aiuti e lobo superiore del dominio catalitico. Scissione dell&#39;ATP-bound Pak2 rilassa l&#39;inibizione allosterica, come dimostrato dalla maggiore accessibilit&agrave; solvibile nei lobi superiori e inferiori, tra cui il G-helix, facilitando il autophosphorylation di due siti necessari per l&#39;attivazione, Ser-141 del dominio normativo e Thr-402 nel dominio catalitico. Autophosphorylation aumentato l&#39;accessibilit&agrave; solvibile ammide idrogeno/deuterio cambio dell&#39;area di contatto tra l&#39;aiuto e il G-helix, il loop E-F e il capolinea N. Cos&igrave;, attivazione di Pak2 via caspase scissione &egrave; associata a rilassamento strutturale di Pak2 che consente una completa auto-fosforilazione, risultante in un completo pi&ugrave; esposto al solvente ed enzima conformazionalmente dinamico.

Analisi dei cambiamenti conformazionali durante l&#39;attivazione della chinasi di proteina Pak2 tramite lo scambio di idrogeno/deuterio ammide.

&#x30A2;&#x30DD;&#x30C8;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9;&#x3001;&#x30B9;&#x30C8;&#x30EC;&#x30B9;&#x6642;&#x306B;&#x306F;&#x3001;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C6;&#x30A4;&#x30F3;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;PAK2&#x306F;&#x3001;&#x6052;&#x5E38;&#x7684;&#x306B;&#x3001;&#x6B21;&#x306E;&#x81EA;&#x5DF1;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x3092;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x30D8;&#x30C6;&#x30ED;&#x3092;&#x5F62;&#x6210;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x3001;&#x30AB;&#x30B9;&#x30D1;&#x30FC;&#x30BC;3&#x306B;&#x3088;&#x308A;&#x5207;&#x65AD;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C6;&#x30A4;&#x30F3;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x306F;&#x3001;&#x5C55;&#x958B;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x30B3;&#x30F3;&#x30D5;&#x30A9;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x3092;&#x793A;&#x5506;&#x3057;&#x3001;&#x30B2;&#x30EB;&#x308D;&#x904E;&#x3067;&#x5206;&#x6790;&#x3057;&#x4E0D;&#x6D3B;&#x6027;&#x306A;&#x30DB;&#x30ED;&#x9175;&#x7D20;&#x3088;&#x308A;&#x3082;&#x82E5;&#x5E72;&#x9045;&#x304F;&#x306A;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x304C;&#x79FB;&#x884C;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002; PAK2&#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x306F;&#x3001;&#x30AB;&#x30B9;&#x30D1;&#x30FC;&#x30BC;&#x5207;&#x65AD;&#x3001;ATP&#x306E;&#x7D50;&#x5408;&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073;PAK2&#x306E;&#x81EA;&#x5DF1;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x306B;&#x8D77;&#x56E0;&#x3059;&#x308B;&#x69CB;&#x9020;&#x5909;&#x5316;&#x306E;&#x30B7;&#x30EA;&#x30FC;&#x30BA;&#x3067;&#x69CB;&#x6210;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x5404;&#x30B9;&#x30C6;&#x30C3;&#x30D7;&#x3067;&#x306E;&#x5909;&#x66F4;&#x306F;&#x500B;&#x5225;&#x306B;&#x8CEA;&#x91CF;&#x5206;&#x6790;&#x3068;&#x7D44;&#x307F;&#x5408;&#x308F;&#x305B;&#x3066;&#x3001;&#x975E;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6;PAK2&#x3068;&#x6BD4;&#x3079;&#x3066;&#x30A2;&#x30DF;&#x30C9;&#x6C34;&#x7D20;/&#x91CD;&#x6C34;&#x7D20;&#x4EA4;&#x63DB;&#x306B;&#x3088;&#x308A;&#x5206;&#x6790;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x81EA;&#x52D5;&#x6291;&#x5236;&#x3055;&#x308C;&#x30D5;&#x30A9;&#x30FC;&#x30E0;&#x304C;&#x30B0;&#x30EA;&#x30B7;&#x30F3;&#x30EB;&#x30FC;&#x30D7;&#x3068;&#x81EA;&#x5DF1;&#x963B;&#x5BB3;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#xFF08;AID&#xFF09;&#x306E;&#x30DE;&#x30A4;&#x30CA;&#x30FC;&#x306A;&#x5909;&#x66F4;&#x3067;&#x3001;&#x6D3B;&#x6027;&#x90E8;&#x4F4D;&#x3067;ATP&#x3092;&#x7D50;&#x5408;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x793A;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3002;&#x30AB;&#x30B9;&#x30D1;&#x30FC;&#x30BC;&#x306E;&#x5207;&#x65AD;&#x306F;&#x3001;&#x89E6;&#x5A92;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x306E;AID&#x3068;&#x4E0A;&#x8449;&#x306E;&#x6EB6;&#x5A92;&#x30A2;&#x30AF;&#x30BB;&#x30B7;&#x30D3;&#x30EA;&#x30C6;&#x30A3;&#x306E;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x5909;&#x66F4;&#x3092;&#x751F;&#x3058;&#x305F;&#x3002; ATP-&#x7D50;&#x5408;&#x3057;&#x305F;PAK2&#x306E;&#x5207;&#x65AD;&#x306F;&#x3001;&#x898F;&#x5236;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x3068;Thr-&#x306E;Ser-141&#x306A;&#x3069;&#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x306B;&#x5FC5;&#x8981;&#x306A;2&#x3064;&#x306E;&#x90E8;&#x4F4D;&#x306E;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x3092;&#x4FC3;&#x9032;&#x3057;&#x3001;G-&#x30D8;&#x30EA;&#x30C3;&#x30AF;&#x30B9;&#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x4E0A;&#x90E8;&#x3068;&#x4E0B;&#x90E8;&#x8449;&#x3067;&#x5897;&#x52A0;&#x3057;&#x3001;&#x6EB6;&#x5A92;&#x30A2;&#x30AF;&#x30BB;&#x30B7;&#x30D3;&#x30EA;&#x30C6;&#x30A3;&#x3001;&#x3067;&#x793A;&#x3059;&#x3088;&#x3046;&#x306B;&#x3001;&#x30A2;&#x30ED;&#x30B9;&#x30C6;&#x30EA;&#x30C3;&#x30AF;&#x963B;&#x5BB3;&#x3092;&#x7DE9;&#x548C;&#x89E6;&#x5A92;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x306E;402&#x3002;&#x81EA;&#x5DF1;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x306F;&#x3001;AID&#x3068;G-&#x30D8;&#x30EA;&#x30C3;&#x30AF;&#x30B9;&#x3001;EF&#x30EB;&#x30FC;&#x30D7;&#x3068;N&#x672B;&#x7AEF;&#x3068;&#x306E;&#x9593;&#x306E;&#x63A5;&#x89E6;&#x9818;&#x57DF;&#x306E;&#x30A2;&#x30DF;&#x30C9;&#x6C34;&#x7D20;/&#x91CD;&#x6C34;&#x7D20;&#x4EA4;&#x63DB;&#x6EB6;&#x5264;&#x306E;&#x30A2;&#x30AF;&#x30BB;&#x30B7;&#x30D3;&#x30EA;&#x30C6;&#x30A3;&#x306E;&#x5897;&#x52A0;&#x3068;&#x306A;&#x308A;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3057;&#x305F;&#x304C;&#x3063;&#x3066;&#x3001;&#x30AB;&#x30B9;&#x30D1;&#x30FC;&#x30BC;&#x5207;&#x65AD;&#x3092;&#x7D4C;&#x7531;&#x3057;&#x3066;PAK2&#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x306F;&#x3001;&#x3088;&#x308A;&#x5305;&#x62EC;&#x7684;&#x306A;&#x6EB6;&#x5A92;&#x306B;&#x3055;&#x3089;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x3068;&#x3001;&#x30B3;&#x30F3;&#x30D5;&#x30A9;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x30C0;&#x30A4;&#x30CA;&#x30DF;&#x30C3;&#x30AF;&#x9175;&#x7D20;&#x3067;&#x3001;&#x305D;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x3001;&#x5B8C;&#x5168;&#x306A;&#x81EA;&#x5DF1;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;PAK2&#x306E;&#x69CB;&#x9020;&#x7DE9;&#x548C;&#x306B;&#x95A2;&#x9023;&#x4ED8;&#x3051;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x30A2;&#x30DF;&#x30C9;&#x6C34;&#x7D20;/&#x91CD;&#x6C34;&#x7D20;&#x4EA4;&#x63DB;&#x6CD5;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C6;&#x30A4;&#x30F3;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;PAK2&#x306E;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D9;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x306E;&#x9593;&#x306E;&#x69CB;&#x9020;&#x5909;&#x5316;&#x306E;&#x89E3;&#x6790;

Apoptotic &#xC2A4;&#xD2B8;&#xB808;&#xC2A4; &#xB3D9;&#xC548; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xD0A4; &#xB2C8; &#xC544; pak2&#xB294; caspase 3 constitutively &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xB41C; &#xB2E4;&#xC74C; autophosphorylation&#xC740; heterotetramer&#xC744; &#xD615;&#xC131; &#xD558; &#xC5EC; &#xBD99;&#xC5B4;. &#xD65C;&#xC131; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xD0A4; &#xB2C8; &#xC544; &#xC81C;&#xB97C; &#xC81C;&#xC548; &#xD558;&#xB294; &#xD655;&#xC7A5; &#xB41C; &#xB098; &#xB780; &#xC824; &#xC5EC;&#xACFC; &#xC758;&#xD574; &#xBD84;&#xC11D; &#xD558;&#xBA74; &#xBE44;&#xD65C;&#xC131; holoenzyme &#xBCF4;&#xB2E4; &#xC57D;&#xAC04; &#xB290;&#xB9AC;&#xAC8C; &#xB9C8;&#xC774;&#xADF8;&#xB808;&#xC774;&#xC158;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. Pak2&#xC758; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; caspase &#xBD84;&#xC5F4;, ATP &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xBC0F; pak2&#xC758; autophosphorylation&#xC5D0;&#xC11C; &#xC720;&#xB798; &#xD558;&#xB294; &#xAD6C;&#xC870; &#xBCC0;&#xACBD;&#xC758; &#xC2DC;&#xB9AC;&#xC988; &#xAD6C;&#xC131;. &#xAC01; &#xB2E8;&#xACC4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBCC0;&#xACBD; &#xB0B4;&#xC6A9;&#xC740; &#xAC1C;&#xBCC4;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xC544; &#xBBF8;&#xB4DC; &#xC218;&#xC18C;/&#xC911;&#xC218;&#xC18C; &#xAD50;&#xD658; &#xC5F0;&#xAD00; &#xD558; &#xC5EC; &#xC9C8;&#xB7C9; &#xBD84;&#xC11D; &#xBC0F; &#xBE44;&#xD65C;&#xC131; pak2&#xC640; &#xBE44;&#xAD50; &#xD558; &#xC5EC; &#xBD84;&#xC11D; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC790;&#xB3D9; &#xC800;&#xD574; &#xC591;&#xC2DD; &#xAE00;&#xB9AC;&#xC2E0; &#xB8E8;&#xD504;&#xC640; autoinhibitory &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778; (&#xC6D0;&#xC870;)&#xC758; &#xC0AC;&#xC18C;&#xD55C; &#xBCC0;&#xD654; &#xD558;&#xB294; &#xC561;&#xD2F0;&#xBE0C; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8;&#xC758; ATP&#xC5D0; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xD558;&#xACE0; &#xD45C;&#xC2DC; &#xD588;&#xB2E4;. Caspase &#xBD84;&#xC5F4; &#xC6D0;&#xC870;&#xC640; &#xCD09;&#xB9E4; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778;&#xC758; &#xC0C1;&#xC704; &#xC5FD;&#xC5D0; &#xC6A9; &#xB9E4; &#xC811;&#xADFC;&#xC131;&#xC5D0; &#xC0C1;&#xB2F9;&#xD55C; &#xBCC0;&#xD654;&#xB97C; &#xC0DD;&#xC0B0;. ATP &#xBC14;&#xC778;&#xB529; pak2&#xC758; &#xBD84;&#xC5F4; &#xC99D;&#xAC00; &#xC6A9; &#xB9E4; &#xC811;&#xADFC;&#xC131; G-&#xB098;&#xC120;, &#xCD09;&#xC9C4; &#xD65C;&#xC131;&#xD654;, &#xADDC;&#xC81C; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778;&#xC5D0;&#xC11C; Ser-141&#xC640; Thr-402 &#xCD09;&#xB9E4; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778;&#xC5D0; &#xD544;&#xC694;&#xD55C; &#xB450; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8;&#xC758; autophosphorylation&#xB97C; &#xD3EC;&#xD568; &#xD558; &#xC5EC; &#xC0C1;&#xC704; &#xBC0F; &#xD558;&#xC704; &#xB3CC;&#xCD9C;&#xBD80;&#xC640; &#xAC19;&#xC774; allosteric &#xC800;&#xD574;&#xB97C; &#xC774;&#xC644; &#xD55C;&#xB2E4;. Autophosphorylation &#xC6D0;&#xC870;&#xC640; G-&#xB098;&#xC120;, E F &#xB8E8;&#xD504;&#xC640; N &#xB9D0;&#xB2E8; &#xC0AC;&#xC774;&#xC758; &#xC811;&#xCD09; &#xC601;&#xC5ED;&#xC758; &#xC544; &#xBBF8;&#xB4DC; &#xC218;&#xC18C;/&#xC911;&#xC218;&#xC18C; exchange &#xC6A9; &#xB9E4; &#xC811;&#xADFC;&#xC131; &#xC99D;&#xAC00;. &#xB530;&#xB77C;&#xC11C;, caspase &#xBD84;&#xC5F4;&#xC744; &#xD1B5;&#xD574; pak2&#xC758; &#xD65C;&#xC131;&#xD654;&#xB294; &#xC5F0;&#xACB0; &#xC644;&#xC804; &#xC790;&#xB3D9; &#xC778; &#xC0B0;&#xD654;, &#xC6A9; &#xB9E4; &#xB178;&#xCD9C; &#xBCF4;&#xB2E4; &#xD3EC;&#xAD04;&#xC801;&#xC778; &#xACB0;&#xACFC; &#xBC0F; conformationally &#xB3D9;&#xC801; &#xD6A8;&#xC18C; pak2&#xC758; &#xAD6C;&#xC870;&#xC801; &#xC774;&#xC644; &#xB41C;.

&#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xD0A4; &#xB2C8; &#xC544; Pak2 &#xC544; &#xBBF8;&#xB4DC; &#xC218;&#xC18C;/&#xC911;&#xC218;&#xC18C; exchange&#xC5D0;&#xC11C; &#xC778;&#xC99D; &#xD558;&#xB294; &#xB3D9;&#xC548; &#xAD6C;&#xC870;&#xC801; &#xBCC0;&#xD654;&#xC758; &#xBD84;&#xC11D;.

Durante el estr&#xE9;s apoptosis, la prote&#xED;na quinasa Pak2 se escinde por la caspasa 3 para formar un heterotetr&#xE1;mero que est&#xE1; activada constitutivamente autofosforilaci&#xF3;n siguiente. La prote&#xED;na quinasa activa migra ligeramente m&#xE1;s lento que la holoenzima inactivo cuando se analiza por filtraci&#xF3;n en gel, lo que sugiere una conformaci&#xF3;n ampliada. La activaci&#xF3;n de Pak2 comprende una serie de cambios estructurales derivados de la caspasa divisi&#xF3;n, uni&#xF3;n de ATP y la autofosforilaci&#xF3;n de Pak2. Los cambios en cada paso se analizaron individualmente por amida hidr&#xF3;geno / deuterio intercambio acoplada a espectrometr&#xED;a de masa y se compararon con Pak2 inactivo. El auto-inhibido forma fue demostrado que se une ATP en el sitio activo, con peque&#xF1;os cambios en el ciclo de la glicina y el dominio autoinhibici&#xF3;n (AID). Caspasa divisi&#xF3;n produjo cambios significativos en la accesibilidad de disolvente en el l&#xF3;bulo superior de la AID y el dominio catal&#xED;tico. La escisi&#xF3;n de ATP enlazado Pak2 relaja la inhibici&#xF3;n alost&#xE9;rica, como se muestra por accesibilidad disolvente aumento en los l&#xF3;bulos superiores e inferiores, incluyendo el G-h&#xE9;lice, lo que facilita la autofosforilaci&#xF3;n de dos sitios necesarios para la activaci&#xF3;n, Ser-141 en el dominio regulador y Thr 402 en el dominio catal&#xED;tico. Autofosforilaci&#xF3;n aument&#xF3; la amida de hidr&#xF3;geno / deuterio accesibilidad intercambio de disolvente de la regi&#xF3;n de contacto entre el AID y el G-h&#xE9;lice, el bucle de EF, y el N terminal. As&#xED;, la activaci&#xF3;n de Pak2 v&#xED;a caspasa divisi&#xF3;n se asocia con la relajaci&#xF3;n estructural de Pak2 que permite completa de auto-fosforilaci&#xF3;n, dando lugar a una enzima m&#xE1;s completa disolvente expuesta y din&#xE1;mica conformacionalmente.

An&#xE1;lisis de los cambios conformacionales durante la activaci&#xF3;n de la prote&#xED;na quinasa Pak2 por Amida de hidr&#xF3;geno / deuterio Bolsa

2 Oxoamides &#x306E;&#x30B7;&#x30EA;&#x30FC;&#x30BA;&#x306B;&#x57FA;&#x3065;&#x3044;&#x3066;&#x30B8;&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C9;&#x4E0A;&#x3068; pseudodipeptides &#x3092;&#x5408;&#x6210;&#x3057;&#x305F;&#x3068;&#x5F7C;&#x3089;&#x306E;&#x6D3B;&#x52D5;&#x306E; 2 &#x3064;&#x306E;&#x3072;&#x3068;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x30DB;&#x30B9;&#x30DB;&#x30EA;&#x30D1;&#x30FC;&#x30BC;&#x9B54;&#x65B9;&#x9663;&#x306B;&#x5411;&#x304B;&#x3063;&#x3066; &#xFF08;GIVA cPLA(2) &#x3068; GVIA iPLA(2)) &#x3068; 1 &#x3064;&#x306E;&#x4EBA;&#x9593;&#x306E;&#x5206;&#x6CCC;&#x578B;&#x30DB;&#x30B9;&#x30DB;&#x30EA;&#x30D1;&#x30FC;&#x30BC;&#x9B54;&#x65B9;&#x9663; (GV sPLA(2)) &#x3092;&#x8A55;&#x4FA1;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x7121;&#x6599;&#x30AB;&#x30EB;&#x30DC;&#x30AD;&#x30B7;&#x30EB;&#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x30C7;&#x30EA;&#x30D0;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6; GIVA cPLA(2) &#x306E;&#x9078;&#x629E;&#x7684;&#x963B;&#x5BB3;&#x5264;&#x3067;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30A8;&#x30FC;&#x30C6;&#x30EB; pseudodipeptide &#x306E;&#x30A8;&#x30C1;&#x30EB; &#x30A8;&#x30B9;&#x30C6;&#x30EB; &#x30D9;&#x30FC;&#x30B9; &#x30C7;&#x30EA;&#x30D0;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6;&#x3001;&#x6700;&#x521D; 2 - &#x512A;&#x5148;&#x7684; GVIA iPLA(2) &#x3092;&#x963B;&#x5BB3;&#x3059;&#x308B; oxoamide&#x3001;&#x3067;&#x3059;&#x3002;2 Oxoamides &#x304C;&#x672A;&#x52A0;&#x5DE5; 264.7 &#x30DE;&#x30AF;&#x30ED;&#x30D5;&#x30A1;&#x30FC;&#x30B8;&#x304B;&#x3089;&#x306E;&#x30A2;&#x30E9;&#x30AD;&#x30C9;&#x30F3;&#x9178;&#x751F;&#x6210;&#x306B;&#x53CA;&#x307C;&#x3059;&#x5F71;&#x97FF;&#x3082;&#x691C;&#x8A0E;&#x3057;&#x305F;&#x3057;&#x3001;GIVA cPLA(2) &#x306E;&#x9078;&#x629E;&#x7684;&#x963B;&#x5BB3;&#x5264;&#x306F;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x30A2;&#x30E9;&#x30AD;&#x30C9;&#x30F3;&#x9178;&#x30EA;&#x30EA;&#x30FC;&#x30B9;&#x512A;&#x5148;&#x7684;&#x3092;&#x963B;&#x5BB3;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x898B;&#x3064;&#x304B;&#x308A;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3067;&#x3057;&#x305F;&#x3002;1 &#x3064;&#x306E; pseudodipeptide&#x3001;2muM &#x306E; ic50 &#x5024; &#xFF08;50 &#x5024;&#x3092;&#x4E0E;&#x3048;&#x305F;&#x3002;

2 Oxoamide &#x963B;&#x5BB3;&#x30B8;&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C9;&#x3068; pseudodipeptides &#x306B;&#x57FA;&#x3065;&#x304F;&#x30DB;&#x30B9;&#x30DB;&#x30EA;&#x30D1;&#x30FC;&#x30BC; A2 &#x6D3B;&#x52D5;&#x3068;&#x643A;&#x5E2F;&#x30A2;&#x30E9;&#x30AD;&#x30C9;&#x30F3;&#x9178;&#x653E;&#x51FA;&#x3002;

Une s&eacute;rie de 2-oxoamides issu des dipeptides et pseudopeptides ont &eacute;t&eacute; synth&eacute;tis&eacute;s et leurs activit&eacute;s vers deux humains intracellulaires phospholipases a (2) (GIVA cPLA(2) et GVIA iPLA(2)) et un humain s&eacute;cr&eacute;toire phospholipase a (2) (GV sPLA(2)) ont &eacute;t&eacute; &eacute;valu&eacute;es. D&eacute;riv&eacute;s contenant un groupe carboxyle libre sont les inhibiteurs s&eacute;lectifs de GIVA cPLA(2). Un d&eacute;riv&eacute; issu de l&#39;ester &eacute;thylique de le pseudodipeptide de l&#39;&eacute;ther est la premi&egrave;re 2-oxoamide, qui inhibe pr&eacute;f&eacute;rentiellement GVIA iPLA(2). L&#39;effet du 2-oxoamides sur la g&eacute;n&eacute;ration de l&#39;acide arachidonique des macrophages RAW 264.7 a &eacute;t&eacute; &eacute;galement &eacute;tudi&eacute;e et il a &eacute;t&eacute; constat&eacute; que les inhibiteurs s&eacute;lectifs de la cPLA(2) GIVA inhibent pr&eacute;f&eacute;rentiellement lib&eacute;ration d&#39;acide arachidonique cellulaire ; un pseudodipeptide a donn&eacute; une valeur IC (50) de 2muM.

2-Oxoamide inhibiteurs de phospholipase A2 activit&eacute; cellulaire arachidonate lib&eacute;ration et issu des dipeptides et pseudopeptides.

Eine Reihe von 2-Oxoamides auf der Grundlage von Dipeptide und Pseudodipeptides wurden synthetisiert und ihre Aktivit&auml;ten in Richtung zwei menschlichen intrazellul&auml;re Phospholipases A(2) (GIVA cPLA(2) und GVIA iPLA(2)) und einem menschlichen sekretorischen Phospholipase A(2) (GV-sPLA(2)) bewertet wurden. Enthaltende Derivate eine freie Carboxylgruppe sind selektive Inhibitoren der GIVA-cPLA(2). Eine Ableitung, die auf der Grundlage des Ethyl Ester der ein &Auml;ther-Pseudodipeptide ist die erste 2-Oxoamide, die vorzugsweise GVIA iPLA(2) hemmt. Die Wirkung von 2-Oxoamides auf die Generierung von Arachidons&auml;ure aus RAW 264.7 Makrophagen wurde ebenfalls untersucht und es wurde festgestellt, dass selektive GIVA cPLA(2) Hemmer bevorzugt zellul&auml;re Arachidons&auml;ure Freisetzung gehemmt; ein Pseudodipeptide gab einen IC (50)-Wert von 2muM.

2-Oxoamide-Inhibitoren der Phospholipase A2 Aktivit&auml;t und zellul&auml;re Arachidonate Version basiert auf Dipeptide und Pseudodipeptides.

Una serie di 2-oxoamides basato su dipeptidi e pseudodipeptides sono stati sintetizzati e le loro attivit&agrave; verso due phospholipases intracellulare umano a (2) (GIVA cPLA(2) e iPLA(2)) GVIA e uno umano secretiva fosfolipasi a (2) (GV sPLA(2)) sono stati valutati. Derivati contenente un gruppo carbossilico libero sono inibitori selettivi della cPLA(2) GIVA. Un derivato basato su estere etilico del pseudodipeptide etere &egrave; il primo 2-oxoamide, che inibisce preferenzialmente GVIA iPLA(2). L&#39;effetto di 2-oxoamides sulla generazione di acido arachidonico da macrofagi RAW 264.7 &egrave; stato anche studiato e si &egrave; constatato che inibitori selettivi della cPLA(2) GIVA preferenzialmente inibito rilascio di acido arachidonico cellulare; un pseudodipeptide ha dato un valore IC(50) di 2muM.

2-Oxoamide inibitori della fosfolipasi A2 attivit&agrave; cellulare arachidonato rilascio e basato su dipeptidi e pseudodipeptides.

&#x4E00;&#x7CFB;&#x5217;&#x7684; 2 oxoamides &#x57FA;&#x4E8E;&#x4E8C;&#x80BD;&#x548C;&#x5408;&#x6210;&#x4E86; pseudodipeptides &#x548C;&#x5176;&#x5B9E;&#x73B0;&#x4E24;&#x79CD;&#x4EBA;&#x7C7B;&#x7EC6;&#x80DE;&#x78F7;&#x8102;&#x9176; A(2) &#x6D3B;&#x52A8; (GIVA cPLA(2) &#x548C; GVIA iPLA(2)) &#x548C;&#x4E00;&#x4E2A;&#x4EBA;&#x7C7B;&#x5206;&#x6CCC;&#x78F7;&#x8102;&#x9176; A(2) (GV sPLA(2)) &#x8FDB;&#x884C;&#x4E86;&#x8BC4;&#x4EF7;&#x3002;&#x542B;&#x6E38;&#x79BB;&#x7FA7;&#x57FA;&#x7EC4;&#x884D;&#x751F;&#x7269;&#x662F;&#x9009;&#x62E9;&#x6027; GIVA cPLA(2) &#x6291;&#x5236;&#x5242;&#x3002;&#x57FA;&#x4E8E;&#x919A; pseudodipeptide &#x4E59;&#x916F;&#x884D;&#x751F;&#x7269;&#x662F;&#x7B2C;&#x4E00;&#x6B21; 2-oxoamide&#xFF0C;&#x5176;&#x4E2D;&#x4F18;&#x5148;&#x6291;&#x5236; GVIA iPLA(2)&#x3002;&#x5BF9;&#x4ECE;&#x539F;&#x6599; 2.647 &#x5DE8;&#x566C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x82B1;&#x751F;&#x56DB;&#x70EF;&#x9178;&#x751F;&#x6210; 2-oxoamides &#x7684;&#x5F71;&#x54CD;&#x4E5F;&#x8FDB;&#x884C;&#x4E86;&#x7814;&#x7A76;&#x548C;&#x53D1;&#x73B0;&#x9009;&#x62E9;&#x6027; GIVA cPLA(2) &#x6291;&#x5236;&#x5242;&#x4F18;&#x5148;&#x6291;&#x5236;&#x7EC6;&#x80DE;&#x82B1;&#x751F;&#x56DB;&#x70EF;&#x9178;&#x91CA;&#x653E; &#xFF1B;&#x4E00;&#x4E2A; pseudodipeptide &#x7ED9; 2muM IC(50) &#x503C;&#x3002;

2 Oxoamide &#x6291;&#x5236;&#x5242;&#x78F7;&#x8102;&#x9176; A2 &#x6D3B;&#x6027;&#x548C;&#x7EC6;&#x80DE; arachidonate &#x91CA;&#x653E;&#x4E8C;&#x80BD;&#x548C; pseudodipeptides &#x7684;&#x57FA;&#x7840;&#x3002;

A series of 2-oxoamides based on dipeptides and pseudodipeptides were synthesized and their activities towards two human intracellular phospholipases A(2) (GIVA cPLA(2) and GVIA iPLA(2)) and one human secretory phospholipase A(2) (GV sPLA(2)) were evaluated. Derivatives containing a free carboxyl group are selective GIVA cPLA(2) inhibitors. A derivative based on the ethyl ester of an ether pseudodipeptide is the first 2-oxoamide, which preferentially inhibits GVIA iPLA(2). The effect of 2-oxoamides on the generation of arachidonic acid from RAW 264.7 macrophages was also studied and it was found that selective GIVA cPLA(2) inhibitors preferentially inhibited cellular arachidonic acid release; one pseudodipeptide gave an IC(50) value of 2muM.

2-Oxoamide inhibitors of phospholipase A2 activity and cellular arachidonate release based on dipeptides and pseudodipeptides.

Dipeptides&#xC744; &#xAE30;&#xBC18;&#xC73C;&#xB85C; 2-oxoamides &#xC2DC;&#xB9AC;&#xC988; &#xBC0F; pseudodipeptides &#xD569;&#xC131; &#xD588;&#xB2E4; &#xACE0; &#xB450; &#xC778;&#xAC04;&#xC758; &#xC138;&#xD3EC;&#xB0B4; phospholipases A(2) &#xCABD;&#xC73C;&#xB85C; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC758; &#xD65C;&#xB3D9; (GIVA Cpla(2)&#xACFC; GVIA Ipla(2))&#xACFC; &#xC77C; &#xBD84; phospholipase A(2) (GV sPLA(2)) &#xD3C9;&#xAC00; &#xD588;&#xB2E4;. &#xD30C;&#xC0DD; &#xC0C1;&#xD488; &#xBB34;&#xB8CC; carboxyl &#xADF8;&#xB8F9;&#xC744; &#xD3EC;&#xD568; &#xD558;&#xB294; &#xC120;&#xD0DD;&#xC801; GIVA cPLA(2) &#xC800; &#xD574;&#xC81C;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC5D0;&#xD14C;&#xB974; pseudodipeptide&#xC758; &#xC5D0;&#xD2F8; &#xC5D0;&#xC2A4;&#xD14C; &#xB974;&#xC5D0; &#xB530;&#xB77C; &#xD30C;&#xC0DD; &#xCCAB; 2 oxoamide, GVIA Ipla(2)&#xC744; &#xC6B0;&#xC120;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xC5B5;&#xC81C; &#xD558;&#xB294; &#xC774;&#xB2E4;. &#xB610;&#xD55C; RAW 264.7 &#xB300; &#xC2DD; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC544;&#xB77C;&#xD0A4; &#xB3C8; &#xC0B0;&#xC758; &#xC0DD;&#xC131;&#xC5D0; 2 oxoamides&#xC758; &#xC601;&#xD5A5;&#xC744; &#xACF5;&#xBD80; &#xD558; &#xACE0; &#xC120;&#xD0DD;&#xC801; GIVA cPLA(2) &#xC5B5;&#xC81C;&#xC81C; &#xC6B0;&#xC120;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xC140;&#xB8F0;&#xB7EC; &#xC544;&#xB77C;&#xD0A4; &#xB3C8; &#xC0B0; &#xB9B4;&#xB9AC;&#xC2A4;;&#xC744; &#xC800;&#xD574; &#xD558;&#xB294; &#xAC83;&#xC774; &#xBC1D;&#xD600;&#xC84C;&#xB2E4; &#xD55C; pseudodipeptide 2mum&#xC758; IC(50) &#xAC12;&#xC744; &#xD588;&#xB2E4;.

2 Oxoamide &#xC5B5;&#xC81C;&#xC81C; &#xB9B4;&#xB9AC;&#xC2A4;&#xC758; phospholipase A2 &#xD65C;&#xB3D9; &#xBC0F; &#xC140;&#xB8F0;&#xB7EC; arachidonate dipeptides &#xBC0F; pseudodipeptides&#xC5D0; &#xB530;&#xB77C;.

Una serie de 2-oxoamides basado en dip&eacute;ptidos y pseudodipeptides se sintetizaron y sus actividades hacia la fosfolipasas intracelular humana dos punto (GIVA cPLA(2) y GVIA iPLA(2)) y fosfolipasa secretoria humano un punto (GV sPLA(2)) fueron evaluados. Derivados que contienen un grupo carboxilo libre son inhibidores selectivos de la cPLA(2) GIVA. Un derivado basado en el &eacute;ster et&iacute;lico de un pseudodipeptide del &eacute;ter es la primera 2-oxoamide, que inhibe preferentemente GVIA iPLA(2). Tambi&eacute;n se estudi&oacute; el efecto de 2-oxoamides en la generaci&oacute;n de &aacute;cido araquid&oacute;nico de RAW 264.7 macr&oacute;fagos y se constat&oacute; que inhibidores selectivos de la cPLA(2) GIVA preferencial inhibici&oacute;n la liberaci&oacute;n celular del &aacute;cido araquid&oacute;nico; un pseudodipeptide dio un valor IC(50) de 2muM.

2-Oxoamide inhibidores de la fosfolipasa A2 actividad celular Araquidonato liberaci&oacute;n y basado en dip&eacute;ptidos y pseudodipeptides.

&#x96C6;&#x56E2;&#x901A;&#x8FC7; 2 Ca &#xFF08;2 +&#xFF09;-&#x72EC;&#x7ACB;&#x78F7;&#x8102;&#x9176; A(2) (GVIA-2 iPLA(2)) &#x7EC4;&#x6210;&#x4E03;&#x4E2A;&#x8FDE;&#x7EED; N &#x7EC8;&#x7AEF;&#x951A;&#x91CD;&#x590D;&#x3001; &#x94FE;&#x63A5;&#x5668;&#x533A;&#x57DF;&#x548C; C &#x7EC8;&#x7AEF;&#x78F7;&#x8102;&#x9176;&#x50AC;&#x5316;&#x57DF;&#x3002;&#x65E0;&#x7ED3;&#x6784;&#x4FE1;&#x606F;&#x5B58;&#x5728;&#x7684;&#x8FD9;&#x79CD;&#x9176;&#xFF0C;&#x548C;&#x6CA1;&#x6709;&#x4FE1;&#x606F;&#x4E86;&#x89E3;&#x819C;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x8868;&#x9762;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x8FDB;&#x884C;&#x4E86;&#x6C18;&#x4EA4;&#x6362;&#x5B9E;&#x9A8C;&#x4E0E; GVIA-2 iPLA(2) &#x78F7;&#x8102;&#x57FA;&#x677F;&#x548C;&#x5171;&#x4EF7;&#x6291;&#x5236;&#x5242;&#x7532;&#x57FA; arachidonoyl fluorophosphonate &#x548C;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x8102;&#x8D28;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x540E;&#x66F4;&#x6539;&#x7684;&#x6240;&#x5728;&#x7684;&#x533A;&#x57DF;&#x3002;&#x6CA1;&#x6709;&#x66F4;&#x6539;&#x88AB;&#x89C6;&#x4E3A;&#x9762;&#x524D;&#x53EA;&#x6709;&#x7532;&#x57FA; arachidonoyl fluorophosphonate&#x3002;&#x8BE5;&#x533A;&#x57DF;&#x4E0E;&#x8102;&#x8D28;&#x7ED3;&#x5408;&#x540E;&#x7684;&#x6700;&#x5927;&#x53D8;&#x5316;&#x662F;&#x5176;&#x4E2D;&#x663E;&#x793A;&#x7684;&#x533A;&#x57DF; 708 730 &gt; &#x6C18;&#x6C34;&#x5E73;&#x5728;&#x65E0;&#x6570;&#x7684;&#x65F6;&#x95F4;&#x70B9;&#x8DCC;&#x5E45; 70%&#x3002;&#x6CA1;&#x6709;&#x5728; exchange &#x78F7;&#x8102;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x5230;&#x9002;&#x5F53;&#x7684;&#x4E0B;&#x964D;&#x7684;&#x951A;&#x86CB;&#x767D;&#x91CD;&#x590D;&#x57DF;&#x4E2D;&#x3002;&#x82E5;&#x8981;&#x627E;&#x5230;&#x5728; exchange &#x9176;&#x53D8;&#x5316;&#x7684;&#x533A;&#x57DF;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x6784;&#x9020;&#x57FA;&#x4E8E;&#x540C;&#x6E90;&#x7ED3;&#x6784;&#x8BA1;&#x7B97;&#x7684;&#x540C;&#x6E90;&#x6027;&#x6A21;&#x578B;&#x3002;&#x8FD9;&#x79CD;&#x6A21;&#x5F0F;&#x662F;&#x7531;&#x6C18;&#x4EA4;&#x6362;&#x7ED3;&#x679C;&#x4E0E;&#x9884;&#x6D4B;&#x7ED3;&#x6784;&#x6BD4;&#x8F83;&#x9A8C;&#x8BC1;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x4E0E;&#x6C18;&#x4EA4;&#x6362;&#x7ED3;&#x679C;&#x5B58;&#x5728;&#x8102;&#x8D28;&#x5E95;&#x7269;&#x76F8;&#x7ED3;&#x5408;&#x7684;&#x6A21;&#x5F0F;&#x4F7F;&#x6211;&#x4EEC;&#x80FD;&#x591F;&#x63D0;&#x51FA; GVIA-2 iPLA(2) &#x4EE5;&#x53CA;&#x754C;&#x9762;&#x8102;&#x8D28;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x533A;&#x57DF;&#x7684;&#x7B2C;&#x4E00;&#x4E2A;&#x7ED3;&#x6784;&#x6A21;&#x578B;&#x3002;

&#x672C;&#x5730;&#x5316;&#x7684;&#x7EC4;&#x901A;&#x8FC7; Ca2 + &#x819C;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x533A;&#x57DF;-&#x72EC;&#x7ACB;&#x78F7;&#x8102;&#x9176; A2 &#x4F7F;&#x7528;&#x80BD;&#x9170;&#x80FA;&#x6C22;/&#x6C18;&#x4EA4;&#x6362;&#x8D28;&#x8C31;&#x6CD5;&#x3002;

The Group VIA-2 Ca(2+)-independent phospholipase A(2) (GVIA-2 iPLA(2)) is composed of seven consecutive N-terminal ankyrin repeats, a linker region, and a C-terminal phospholipase catalytic domain. No structural information exists for this enzyme, and no information is known about the membrane binding surface. We carried out deuterium exchange experiments with the GVIA-2 iPLA(2) in the presence of both phospholipid substrate and the covalent inhibitor methyl arachidonoyl fluorophosphonate and located regions in the protein that change upon lipid binding. No changes were seen in the presence of only methyl arachidonoyl fluorophosphonate. The region with the greatest change upon lipid binding was region 708-730, which showed a >70% decrease in deuteration levels at numerous time points. No decreases in exchange due to phospholipid binding were seen in the ankyrin repeat domain of the protein. To locate regions with changes in exchange on the enzyme, we constructed a computational homology model based on homologous structures. This model was validated by comparing the deuterium exchange results with the predicted structure. Our model combined with the deuterium exchange results in the presence of lipid substrate have allowed us to propose the first structural model of GVIA-2 iPLA(2) as well as the interfacial lipid binding region.

Localizing the membrane binding region of Group VIA Ca2+-independent phospholipase A2 using peptide amide hydrogen/deuterium exchange mass spectrometry.

Le groupe VIA-2 Ca (2 +)-ind&eacute;pendant phospholipase a (2) (GVIA-2 iPLA(2)) se compose de sept cons&eacute;cutives r&eacute;p&eacute;titions ankyrin de N-terminal, une r&eacute;gion de l&#39;&eacute;diteur de liens et un domaine catalytique de la phospholipase C-terminal. Aucune information structurelle n&#39;existe pour cette enzyme, et aucune information n&#39;est connue sur la surface de fixation membranaire. Nous avons effectu&eacute; des exp&eacute;riences d&#39;&eacute;change de deut&eacute;rium avec le iPLA(2) GVIA-2 en pr&eacute;sence de substrat de phospholipides et l&#39;inhibiteur covalent m&eacute;thyle arachidonoyl fluorophosphonate et des r&eacute;gions situ&eacute;es dans la prot&eacute;ine qui changent lors de la liaison du lipide. Aucune modification n&#39;ont &eacute;t&eacute; observ&eacute;es en pr&eacute;sence uniquement de m&eacute;thyle arachidonoyl fluorophosphonate. La r&eacute;gion avec le plus grand changement lors de la liaison du lipide a r&eacute;gion 708-730, qui a montr&eacute; un &gt; diminution de 70 % dans les niveaux de deut&eacute;ration &agrave; nombreux points dans le temps. Aucune baisse en &eacute;change due &agrave; la liaison de phospholipides ont &eacute;t&eacute; observ&eacute;s dans le domaine de la prot&eacute;ine ankyrin. Pour localiser les r&eacute;gions avec les changements en &eacute;change sur l&#39;enzyme, nous avons construit un mod&egrave;le de calcul homologie issu des structures homologues. Ce mod&egrave;le a &eacute;t&eacute; valid&eacute; en comparant les r&eacute;sultats d&#39;&eacute;change de deut&eacute;rium avec la structure pr&eacute;dite. Notre mod&egrave;le combin&eacute;e aux r&eacute;sultats d&#39;&eacute;change de deut&eacute;rium en pr&eacute;sence de substrat lipidique nous ont permis de proposer le premier mod&egrave;le structurel de GVIA-2 iPLA(2) ainsi que la r&eacute;gion de liaison interfaciale lipidique.

Localisation de la r&eacute;gion de liaison de membrane de groupe VIA Ca2 +-spectrom&eacute;trie de masse ind&eacute;pendant phospholipase A2 utilisant l&#39;&eacute;change d&#39;hydrog&egrave;ne/deut&eacute;rium peptide amide.

Die Gruppe VIA-2 Ca (2 +)-unabh&auml;ngige Phospholipase A(2) (GVIA-2-iPLA(2)) besteht aus sieben aufeinanderfolgenden N-terminalen Ankyrin Wiederholungen, ein Linker-Region und einer C-terminalen Phospholipase katalytische Dom&auml;ne. Keine strukturellen Informationen f&uuml;r dieses Enzym vorhanden und keine Informationen &uuml;ber die Membranoberfl&auml;che Bindung bekannt ist. Wir haben die Deuterium-Austausch-Experimente mit der GVIA-2-iPLA(2) in Anwesenheit von Phospholipid-Substrat und kovalente Inhibitor-Methyl-Arachidonoyl-Fluorophosphonate sowohl die gelegene Regionen im Protein, die auf Lipid-Bindung &auml;ndern durchgef&uuml;hrt. Keine &Auml;nderungen wurden in Anwesenheit von nur Methyl-Arachidonoyl-Fluorophosphonate gesehen. Die Region mit dem gr&ouml;&szlig;ten Wechsel auf Lipid-Bindung war Region 708-730, die zeigte eine &gt; R&uuml;ckgang von 70 % Deuteration Ebenen zu vielen Zeitpunkten. Keine R&uuml;ckg&auml;nge im exchange aufgrund der Phospholipid-Bindung galten in der Ankyrin Wiederholungsgebiet des Proteins. Um Regionen mit &Auml;nderungen im exchange das Enzym zu suchen, errichteten wir ein computational Homologie-Modell basierend auf homologe Strukturen. Dieses Modell wurde &uuml;berpr&uuml;ft, indem die Deuterium-Austausch-Ergebnisse mit der vorhergesagten Struktur verglichen. Unser Modell kombiniert mit Deuterium Austausch Ergebnisse in Anwesenheit von Lipid-Substrat konnten wir das erste strukturelle Modell GVIA-2-iPLA(2) als auch die Grenzfl&auml;chenspannung Lipid-Bindung-Region vorzuschlagen.

Lokalisieren der Membran Bindung Region Gruppe &uuml;ber Ca2 +-unabh&auml;ngige Phospholipase A2 mit Peptid-Amid-Wasserstoff/Deuterium-Exchange-Massenspektrometrie.

Il gruppo VIA-2 Ca (2++)-indipendente fosfolipasi a (2) (iPLA(2)) GVIA-2 &egrave; composto di sette consecutivi ripete ankyrin N-terminale, una regione linker e un dominio catalitico della fosfolipasi C-terminale. Nessuna informazione strutturale non esiste per questo enzima, e nessuna informazione &egrave; conosciuta circa la superficie di membrana vincolante. Abbiamo effettuato esperimenti scambio deuterio con la iPLA(2) GVIA-2 in presenza di substrato di fosfolipidi e l&#39;inibitore covalente metile arachidonoil fluorophosphonate e trova regioni della proteina che cambiano all&#39;associazione dei lipidi. Nessun cambiamenti sono stati visti in presenza di solo metil-arachidonoil-fluorophosphonate. La regione con il pi&ugrave; grande cambiamento dell&#39;associazione dei lipidi &egrave; stato regione 708-730, che ha mostrato un &amp;gt; 70% diminuzione nei livelli di deuteration presso numerosi punti di tempo. Nel dominio della proteina ripetizione di ankyrin non erano visti diminuisce in cambio dovuti all&#39;associazione di fosfolipidi. Per individuare regioni con le modifiche apportate in exchange sull&#39;enzima, abbiamo costruito un modello di omologia computazionali basato su strutture omologhe. Questo modello &egrave; stato validato confrontando i risultati del cambio di deuterio con la struttura prevista. Il nostro modello combinato con i risultati del cambio di deuterio in presenza di substrato lipidico ci hanno permesso di proporre il primo modello strutturale del GVIA-2 iPLA(2) cos&igrave; come la regione di legame interfacciale lipidi.

Localizzazione della regione associazione membrana del gruppo VIA Ca2 +-spettrometria di massa indipendenti fosfolipasi A2 mediante scambio di idrogeno/deuterio ammide del peptide.

&#x30B0;&#x30EB;&#x30FC;&#x30D7; VIA 2 Ca (2++)-&#x72EC;&#x7ACB;&#x30DB;&#x30B9;&#x30DB;&#x30EA;&#x30D1;&#x30FC;&#x30BC;&#x9B54;&#x65B9;&#x9663; (GVIA 2 iPLA(2)) 7 &#x3064;&#x306E;&#x9023;&#x7D9A;&#x3057;&#x305F; N &#x672B;&#x7AEF;&#x30A2;&#x30F3;&#x30AD;&#x30EA;&#x30F3;&#x53CD;&#x5FA9;&#x3001;&#x30EA;&#x30F3;&#x30AB;&#x30FC;&#x9818;&#x57DF;&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073; C &#x672B;&#x7AEF;&#x30DB;&#x30B9;&#x30DB;&#x30EA;&#x30D1;&#x30FC;&#x30BC;&#x89E6;&#x5A92;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x306E;&#x3067;&#x69CB;&#x6210;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x9175;&#x7D20;&#x306E;&#x69CB;&#x9020;&#x60C5;&#x5831;&#x304C;&#x5B58;&#x5728;&#x3057;&#x306A;&#x3044;&#x3068;&#x819C;&#x7D50;&#x5408;&#x8868;&#x9762;&#x306B;&#x3064;&#x3044;&#x3066;&#x60C5;&#x5831;&#x304C;&#x77E5;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3002;&#x30EA;&#x30F3;&#x8102;&#x8CEA;&#x306E;&#x57FA;&#x8CEA;&#x3068;&#x5171;&#x6709;&#x7D50;&#x5408;&#x963B;&#x5BB3;&#x5264;&#x30E1;&#x30C1;&#x30EB; &#x30A2;&#x30E9;&#x30AD;&#x30C9;&#x30CE;&#x30A4;&#x30EB; fluorophosphonate &#x3068;&#x8102;&#x8CEA;&#x62D8;&#x675F;&#x3092;&#x5909;&#x66F4;&#x4F4D;&#x7F6E;&#x306E;&#x9818;&#x57DF;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x306E;&#x5B58;&#x5728;&#x4E0B;&#x3067; GVIA 2 iPLA(2) &#x306E;&#x91CD;&#x6C34;&#x7D20;&#x4EA4;&#x63DB;&#x5B9F;&#x9A13;&#x3092;&#x5B9F;&#x65BD;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x30E1;&#x30C1;&#x30EB; &#x30A2;&#x30E9;&#x30AD;&#x30C9;&#x30CE;&#x30A4;&#x30EB; fluorophosphonate &#x306E;&#x5B58;&#x5728;&#x4E0B;&#x3067;&#x306E;&#x307F;&#x5909;&#x5316;&#x306F;&#x898B;&#x3089;&#x308C;&#x306A;&#x304B;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x8102;&#x8CEA;&#x7D50;&#x5408;&#x306E;&#x6700;&#x5927;&#x306E;&#x5909;&#x5316;&#x3068;&#x5730;&#x57DF;&#x5730;&#x57DF; 708&#x3001;730 &#x4F1A;&#x793E;-&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x305F;&#x306A;&#x3089;&#x3070;&#x3001;&#x76EE;&#x91CD;&#x6C34;&#x7D20;&#x5316;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x3092;&#x591A;&#x304F;&#x306E;&#x6642;&#x9593;&#x306E;&#x70B9;&#x3067; 70 &#xFF05; &#x306E;&#x6E1B;&#x5C11;&#x3002;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x306E;&#x30EA;&#x30D4;&#x30FC;&#x30C8; &#x30A2;&#x30F3;&#x30AD;&#x30EA;&#x30F3; &#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x3067;&#x30EA;&#x30F3;&#x8102;&#x8CEA;&#x306E;&#x7D50;&#x5408;&#x3059;&#x308B; exchange &#x4E88;&#x5B9A;&#x306E;&#x6E1B;&#x5C11;&#x306F;&#x898B;&#x3089;&#x308C;&#x306A;&#x304B;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x5730;&#x57DF;&#x306E;&#x5909;&#x66F4;&#x304C; exchange &#x306B;&#x9175;&#x7D20;&#x3092;&#x691C;&#x7D22;&#x3059;&#x308B;&#x306B;&#x306F;&#x3001;&#x76F8;&#x540C;&#x306E;&#x69CB;&#x9020;&#x306B;&#x57FA;&#x3065;&#x304F;&#x8A08;&#x7B97;&#x30DB;&#x30E2;&#x30ED;&#x30B8;&#x30FC; &#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x3092;&#x69CB;&#x7BC9;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x306F;&#x3001;&#x91CD;&#x6C34;&#x7D20;&#x4EA4;&#x63DB;&#x7D50;&#x679C;&#x4E88;&#x6E2C;&#x306E;&#x69CB;&#x9020;&#x3068;&#x306E;&#x6BD4;&#x8F03;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x691C;&#x8A3C;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x91CD;&#x6C34;&#x7D20;&#x4EA4;&#x63DB;&#x7D50;&#x679C;&#x8102;&#x8CEA;&#x57FA;&#x677F;&#x306E;&#x5B58;&#x5728;&#x4E0B;&#x3067;&#x7D44;&#x307F;&#x5408;&#x308F;&#x305B;&#x3066;&#x6211;&#x3005; &#x306E;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3057;&#x305F; GVIA 2 iPLA(2) &#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x754C;&#x9762;&#x8102;&#x8CEA;&#x7D50;&#x5408;&#x9818;&#x57DF;&#x306E;&#x6700;&#x521D;&#x306E;&#x69CB;&#x9020;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x3092;&#x63D0;&#x6848;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x819C;&#x7D50;&#x5408;&#x9818;&#x57DF;&#x306E;&#x30B0;&#x30EB;&#x30FC;&#x30D7;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x3066; ca 2 + &#x3092;&#x30ED;&#x30FC;&#x30AB;&#x30E9;&#x30A4;&#x30BA;-&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C9; &#x30A2;&#x30DF;&#x30C9;&#x6C34;&#x7D20;/&#x91CD;&#x6C34;&#x7D20;&#x4EA4;&#x63DB;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x72EC;&#x7ACB;&#x3057;&#x305F;&#x30DB;&#x30B9;&#x30DB;&#x30EA;&#x30D1;&#x30FC;&#x30BC; A2 &#x8CEA;&#x91CF;&#x5206;&#x6790;&#x6CD5;&#x3002;

&#xADF8;&#xB8F9; VIA 2 Ca (2 +)-&#xB3C5;&#xB9BD; phospholipase A(2) (GVIA 2 Ipla(2))&#xB294; 7 &#xB144; &#xC5F0;&#xC18D; N &#xB9E8;&#xB05D; ankyrin &#xBC18;&#xBCF5;, &#xB9C1;&#xCEE4; &#xC9C0;&#xC5ED;&#xACFC; C &#xD130;&#xBBF8;&#xB110; phospholipase &#xCD09;&#xB9E4; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778;&#xC758; &#xAD6C;&#xC131; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774; &#xD6A8;&#xC18C;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xAD6C;&#xC870; &#xC815;&#xBCF4;&#xAC00; &#xC5C6;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xC874;&#xC7AC; &#xD558; &#xACE0; &#xC815;&#xBCF4;&#xAC00; &#xC5C6;&#xB294; &#xBA64;&#xBE0C;&#xB808;&#xC778; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xD45C;&#xBA74;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC54C;&#xB824;&#xC838; &#xC788;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xC778;&#xC9C0;&#xC9C8; &#xAE30;&#xD310; &#xBC0F; &#xACF5;&#xC720; &#xD558;&#xB294; &#xC5B5;&#xC81C;&#xC81C; &#xBA54; &#xD2F8; arachidonoyl fluorophosphonate &#xBC0F; &#xC9C0;&#xC9C8; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xC5D0; &#xB530;&#xB77C; &#xBCC0;&#xACBD; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC5D0; &#xC704;&#xCE58;&#xD55C; &#xC9C0;&#xC5ED; &#xC874;&#xC7AC; GVIA 2 Ipla(2)&#xC640; &#xC911;&#xC218;&#xC18C; &#xAD50;&#xD658; &#xC2E4;&#xD5D8;&#xC5D0; &#xC2E4;&#xC2DC; &#xD55C;&#xB2E4;. &#xBCC0;&#xACBD;&#xB9CC; &#xBA54; &#xD2F8; arachidonoyl fluorophosphonate &#xC874;&#xC7AC; &#xBCFC; &#xC218; &#xC788;&#xC5C8;&#xB2E4;. &#xC9C0;&#xC5ED; &#xC9C0;&#xC9C8; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xC5D0; &#xB530;&#xB77C; &#xAC00;&#xC7A5; &#xD070; &#xBCC0;&#xD654;&#xB294; &#xC9C0;&#xC5ED; 708-730, &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC900; &#xD55C; &amp;gt; &#xC218;&#xB9CE;&#xC740; &#xC2DC;&#xAC04; &#xC9C0;&#xC810;&#xC5D0;&#xC11C; deuteration &#xC218;&#xC900;&#xC5D0;&#xC11C; 70% &#xAC10;&#xC18C;. &#xC544;&#xB2C8; &#xAC10;&#xC18C; exchange &#xC778;&#xC9C0;&#xC9C8; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xC778;&#xD574; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; ankyrin &#xBC18;&#xBCF5; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBCFC; &#xC218; &#xC788;&#xC5C8;&#xB2E4;. Exchange &#xD6A8;&#xC18C;&#xC5D0; &#xBCC0;&#xD654; &#xD558;&#xB294; &#xC601;&#xC5ED;&#xC744; &#xCC3E;&#xC73C;&#xB824;&#xBA74;, &#xC6B0;&#xB9AC; &#xC804;&#xC0B0; homology &#xBAA8;&#xB378; &#xB3D9;&#xC885; &#xAD6C;&#xC870;&#xB97C; &#xAE30;&#xBC18;&#xC73C;&#xB85C; &#xAD6C;&#xC131; &#xB418;&#xC5B4; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774; &#xBAA8;&#xB378; &#xC608;&#xCE21;&#xB41C; &#xAD6C;&#xC870;&#xC640; &#xC911;&#xC218;&#xC18C; &#xAD50;&#xD658; &#xACB0;&#xACFC; &#xBE44;&#xAD50; &#xD558; &#xC5EC; &#xC720;&#xD6A8;&#xC131;&#xC744; &#xAC80;&#xC0AC; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC911;&#xC218;&#xC18C; &#xAD50;&#xD658; &#xACB0;&#xACFC; &#xC9C0;&#xC9C8; &#xAE30;&#xD310;&#xC758; &#xC874;&#xC7AC;&#xC640; &#xD568;&#xAED8; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xBAA8;&#xB378; &#xACC4;&#xBA74; &#xC9C0;&#xC9C8; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xC601;&#xC5ED;&#xC73C;&#xB85C; GVIA 2 Ipla(2)&#xC758; &#xCCAB; &#xBC88;&#xC9F8; &#xAD6C;&#xC870; &#xBAA8;&#xB378; &#xC81C;&#xC548; &#xC218; &#xC788;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xC788;&#xB2E4;.

&#xC9C0;&#xC5ED;&#xD654; &#xD558;&#xB294; &#xADF8;&#xB8F9;&#xC744; &#xD1B5;&#xD574; Ca2 +&#xC758; &#xBA64;&#xBE0C;&#xB808;&#xC778; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xC601;&#xC5ED;-&#xB3C5;&#xB9BD;&#xC801;&#xC778; phospholipase A2 &#xD3A9; &#xD2F0; &#xB4DC; &#xC544; &#xBBF8;&#xB4DC; &#xC218;&#xC18C;/&#xC911;&#xC218;&#xC18C; exchange&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xC9C8;&#xB7C9; &#xBD84;&#xC11D;.

El grupo VIA-2 Ca (2 +)-fosfolipasa independiente punto (GVIA-2 iPLA(2)) se compone de siete repeticiones consecutivas de ankyrin N-terminal, una regi&oacute;n de vinculador y un dominio catal&iacute;tico de la fosfolipasa C-terminal. No existe ninguna informaci&oacute;n estructural para esta enzima, y no se conoce ninguna informaci&oacute;n sobre la superficie de uni&oacute;n de membrana. Llevamos a cabo experimentos de intercambio de deuterio con el iPLA(2) de GVIA-2 en presencia de sustrato de fosfol&iacute;pido y el inhibidor covalente metil arachidonoyl fluorophosphonate y regiones situadas en la prote&iacute;na que cambian al atascamiento de l&iacute;pidos. Se consider&oacute; ningunos cambios en presencia de s&oacute;lo fluorophosphonate de arachidonoyl de metilo. La regi&oacute;n con el mayor cambio al atascamiento de l&iacute;pidos fue regi&oacute;n 708-730, que demostr&oacute; un &gt; disminuci&oacute;n de 70% en los niveles de grado de deuteraci&oacute;n en numerosos puntos del tiempo. No disminuye a cambio debido a la Uni&oacute;n de fosfol&iacute;pido fueron vistos en el dominio repetici&oacute;n ankyrin de la prote&iacute;na. Para localizar regiones con cambios a cambio de la enzima, construimos un modelo de homolog&iacute;a computacional basado en estructuras hom&oacute;logas. Este modelo fue validado mediante la comparaci&oacute;n de los resultados del intercambio de deuterio con la estructura prevista. Nuestro modelo combinado con los resultados del intercambio de deuterio en presencia de sustrato lip&iacute;dico han permitido proponer el primer modelo estructural de GVIA-2 iPLA(2) as&iacute; como la regi&oacute;n de uni&oacute;n de l&iacute;pidos interfacial.

Localizaci&oacute;n de la regi&oacute;n de uni&oacute;n de membrana de grupo VIA Ca2 +-espectrometr&iacute;a de masas independiente fosfolipasa A2 mediante intercambio de hidr&oacute;geno/deuterio p&eacute;ptido amida.

Pak2 &#x6D3B;&#x6027;&#x8C03;&#x8282;&#x7684;&#x6D89;&#x53CA;&#x81F3;&#x5C11;&#x4E24;&#x4E2A;&#x673A;&#x5236;&#xFF1A; (i) &#x5728;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x5FAA;&#x73AF;&#xFF0C;&#x5E76; (ii) &#x5728;&#x50AC;&#x5316;&#x9886;&#x57DF;&#x7684; autoinhibitory &#x57DF; &#xFF08;&#x63F4;&#x52A9;&#xFF09; &#x7684;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x4E2D;&#x7684;&#x5B88;&#x6052; Thr(402) &#x7684;&#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x4ECE;&#x6FC0;&#x9176;&#x6291;&#x5236;&#x6570;&#x636E;&#x5E93;&#x6536;&#x96C6; 482 &#x4EBA;&#x86CB;&#x767D;&#x6FC0;&#x9176;&#x5E8F;&#x5217;&#x548C;&#x5168;&#x5C40;&#x6620;&#x5C04;&#x5728;&#x50AC;&#x5316;&#x9886;&#x57DF;&#x4E2D;&#x7684;&#x6B8B;&#x7559;&#x91CF;&#x4E0E; Thr(402) &#x7684;&#x57FA;&#x4E8E;&#x5E8F;&#x5217;&#x7684;&#x7EDF;&#x8BA1;&#x8026;&#x5408;&#x5206;&#x6790; (SCA) &#x7684;&#x8FDB;&#x5316;&#x4EA4;&#x4E92;&#x3002;&#x6444;&#x52A8;&#x7684; Thr(402) (34.6%) &#x8868;&#x660E;&#x5728;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x5FAA;&#x73AF;&#x4E2D;&#xFF0C;Thr(402) &#x548C; Phe(387) &#x4E4B;&#x95F4;&#x7684;&#x901A;&#x4FE1;&#x8DEF;&#x5F84; (DeltaDeltaE(387F,402T) = 2.80) &#x4E2D;&#x5B9A;&#x4F4D;&#x5FAA;&#x73AF;&#x4E2D;&#xFF0C;Trp(427) &#x7684;&#x9541; (DeltaDeltaE(427W,402T) = 3.12) &#x4E2D;&#x7684; F-&#x87BA;&#x65CB;&#x7ED3;&#x6784;&#x548C; Val(404) (DeltaDeltaE(404V,402T) = 4.43) &#x548C; Gly(405) (DeltaDeltaE(405G,402T) = 2.95) &#x5B9A;&#x4F4D;&#x73AF;&#x80BD;&#x3002;&#x76F8;&#x6BD4;&#x8425;-&#x4F9D;&#x8D56;&#x86CB;&#x767D;&#x6FC0;&#x9176; (PKA) &#x548C; Src&#xFF0C;&#x82CF;&#x6C28;&#x9178;&#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x5FAA;&#x73AF;&#x7684; Pak2 &#x4E2D;&#x7684;&#x6444;&#x52A8;&#x6A21;&#x5F0F;&#x662F;&#x7C7B;&#x4F3C;&#x7684; PKA&#xFF0C;&#x548C;&#x4E0D;&#x540C;&#x4ECE; Src&#x3002; &#x76F8;&#x4E92;&#x8026;&#x5408;&#x5206;&#x6790;&#x7531;&#x653F;&#x5236;&#x4E8B;&#x52A1;&#x5C40;&#x5C40;&#x957F;&#x7684;&#x916A;&#x6C28;&#x9178;&#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x6A21;&#x5F0F;&#x663E;&#x793A; Thr(402) &#x53D7;&#x6270;&#x52A8;&#x7684;&#x6B8B;&#x7559;&#x7269;&#x548C;&#x76F8;&#x4E92;&#x8026;&#x5408;&#x5BF9;&#x5F62;&#x6210;&#x7F51;&#x7EDC; Trp(427) F-&#x87BA;&#x65CB;&#x4E2D;&#x5C45;&#x4E2D;&#x3002;&#x786E;&#x5B9A;&#x4E86;&#x4E5D;&#x4E2A;&#x6210;&#x5BF9;&#x7684;&#x76F8;&#x4E92;&#x8026;&#x5408;&#x6B8B;&#x7559;&#x9176;&#x6D3B;&#x6027;&#x548C;&#x7ED3;&#x6784;&#x7A33;&#x5B9A;&#x7684;&#x5173;&#x952E;&#x3002;Pak2&#x3001; PKA &#x548C; Src &#x5206;&#x4EAB;&#x56DB;&#x5BF9;&#x3002;&#x76F8;&#x4E92;&#x8026;&#x5408;&#x6B8B;&#x7559;&#x6EB6;&#x5242;&#x7684;&#x7EBF;&#x66B4;&#x9732;&#x4E86;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x6D3B;&#x5316;&#x69FD;&#x3002;&#x8FD9;&#x662F;&#x5177;&#x6709;&#x7EA6;&#x675F;&#x529B;&#x7684;&#x533A;&#x57DF;&#x4E2D; PKA &#x548C;&#x6D3B;&#x5316;&#x69FD;&#x7684; Pak2 &#x6291;&#x5236;&#x5242; (PKI)&#x3002;&#x8FD9;&#x8868;&#x660E;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x8FDB;&#x5316;&#x7684;&#x5B88;&#x6052;&#x7684;&#x6B8B;&#x7559; PKA &#x548C; Pak2 &#x7684;&#x50AC;&#x5316;&#x6D3B;&#x6027;&#x7684;&#x5173;&#x952E;&#x3002;

&#x76F8;&#x4E92;&#x8026;&#x5408;&#x7684;&#x6B8B;&#x7559;&#x7269;&#x86CB;&#x767D;&#x6FC0;&#x9176; Pak2 &#x6D3B;&#x52A8;&#x7531;&#x7EDF;&#x8BA1;&#x8026;&#x5408;&#x5206;&#x6790;&#x8BA1;&#x7B97;&#x7684;&#x5173;&#x952E;&#x3002;

Regulation of Pak2 activity involves at least two mechanisms: (i) phosphorylation of the conserved Thr(402) in the activation loop and (ii) interaction of the autoinhibitory domain (AID) with the catalytic domain. We collected 482 human protein kinase sequences from the kinome database and globally mapped the evolutionary interactions of the residues in the catalytic domain with Thr(402) by sequence-based statistical coupling analysis (SCA). Perturbation of Thr(402) (34.6%) suggests a communication pathway between Thr(402) in the activation loop, and Phe(387) (DeltaDeltaE(387F,402T) = 2.80) in the magnesium positioning loop, Trp(427) (DeltaDeltaE(427W,402T) = 3.12) in the F-helix, and Val(404) (DeltaDeltaE(404V,402T) = 4.43) and Gly(405) (DeltaDeltaE(405G,402T) = 2.95) in the peptide positioning loop. When compared to the cAMP-dependent protein kinase (PKA) and Src, the perturbation pattern of threonine phosphorylation in the activation loop of Pak2 is similar to that of PKA, and different from the tyrosine phosphorylation pattern of Src. Reciprocal coupling analysis by SCA showed the residues perturbed by Thr(402) and the reciprocal coupling pairs formed a network centered at Trp(427) in the F-helix. Nine pairs of reciprocal coupling residues crucial for enzymatic activity and structural stabilization were identified. Pak2, PKA and Src share four pairs. Reciprocal coupling residues exposed to the solvent line up as an activation groove. This is the inhibitor (PKI) binding region in PKA and the activation groove for Pak2. This indicates these evolutionary conserved residues are crucial for the catalytic activity of PKA and Pak2.

Reciprocally coupled residues crucial for protein kinase Pak2 activity calculated by statistical coupling analysis.

R&#xE8;glement de PAK2 activit&#xE9; implique au moins deux m&#xE9;canismes: (i) la phosphorylation de la Thr conserv&#xE9;e (402) dans la boucle d&#x26;#39;activation et (ii) l&#x26;#39;interaction du domaine autoinhibitory (AID) avec le domaine catalytique. Nous avons recueilli 482 s&#xE9;quences humaines de la prot&#xE9;ine kinase de la base de donn&#xE9;es Kinom&#xE9; et dans le monde cartographi&#xE9; les interactions de l&#x26;#39;&#xE9;volution des r&#xE9;sidus dans le domaine catalytique avec Thr (402) par une s&#xE9;quence bas&#xE9;e sur l&#x26;#39;analyse statistique de couplage (SCA). Perturbation de Thr (402) (34,6%) indique une voie de communication entre Thr (402) dans la boucle d&#x26;#39;activation, et Phe (387) (DeltaDeltaE (387F, 402T) = 2,80) dans la boucle de positionnement de magn&#xE9;sium, Trp (427) ( DeltaDeltaE (427W, 402T) = 3,12) dans le F-h&#xE9;lice, et Val (404) (DeltaDeltaE (404V, 402T) = 4,43) et Gly (405) (DeltaDeltaE (405g, 402T) = 2,95) dans la boucle de positionnement peptide . Par rapport &#xE0; la prot&#xE9;ine kinase AMPc-d&#xE9;pendante (PKA) et Src, le motif de perturbation de la phosphorylation thr&#xE9;onine dans la boucle d&#x26;#39;activation de PAK2 est similaire &#xE0; celle de la PKA, et diff&#xE9;rent du motif de phosphorylation de la tyrosine Src. Analyse d&#x26;#39;accouplement r&#xE9;ciproque par SCA montr&#xE9; les r&#xE9;sidus perturb&#xE9; par Thr (402) et les paires d&#x26;#39;accouplement r&#xE9;ciproques form&#xE9; un r&#xE9;seau centr&#xE9; &#xE0; Trp (427) dans le F-h&#xE9;lice. Neuf paires de r&#xE9;sidus de couplage r&#xE9;ciproques cruciaux pour l&#x26;#39;activit&#xE9; enzymatique et la stabilisation structurale ont &#xE9;t&#xE9; identifi&#xE9;s. PAK2, PKA et Src partager quatre paires. R&#xE9;sidus de couplage r&#xE9;ciproques expos&#xE9;s &#xE0; la ligne solvant jusqu&#x26;#39;&#xE0; une gorge que l&#x26;#39;activation. Il s&#x26;#39;agit de la s&#xE9;rotonine (PKI) dans la r&#xE9;gion de liaison PKA et la gorge d&#x26;#39;activation pour PAK2. Ce qui indique que ces r&#xE9;sidus &#xE9;volutivement conserv&#xE9;es sont cruciaux pour l&#x26;#39;activit&#xE9; catalytique de la PKA et PAK2.

R&#xE9;sidus R&#xE9;ciproquement coupl&#xE9;s Crucial pour l&#x26;#39;activit&#xE9; prot&#xE9;ine kinase PAK2 calcul&#xE9; par analyse statistique d&#x26;#39;accouplement

Regelung der Pak2 T&auml;tigkeit umfasst mindestens zwei Mechanismen: (i) Phosphorylierung von der konservierten Thr(402) in die Aktivierung Schleife und (Ii) Wechselwirkung von der Autoinhibitory-Dom&auml;ne (Beihilfen) mit der katalytischen Dom&auml;ne. Wir 482 menschliche Protein-Kinase-Sequenzen aus der Kinome-Datenbank gesammelt und weltweit die evolution&auml;ren Wechselwirkungen der R&uuml;ckst&auml;nde in der katalytischen Dom&auml;ne mit Thr(402) durch statistische Kupplung Sequenz-basierte Analyse (SCA) zugeordnet. St&ouml;rung des Thr(402) (34,6 %) schl&auml;gt ein Kommunikationsweg zwischen Thr(402) in der Aktivierungs-Schleife und Phe(387) (DeltaDeltaE(387F,402T) = 2,80) in das Magnesium Positionierung Schleife, Trp(427) (DeltaDeltaE(427W,402T) = 3.12) im F-Helix und Val(404) (DeltaDeltaE(404V,402T) = 4.43) und Gly(405) (DeltaDeltaE(405G,402T) = 2.95) in das Peptid Positionierung Schleife. Im Vergleich zu den Lager-abh&auml;ngige Proteinkinase (PKA) und Src, das St&ouml;rung-Muster von Threonin Phosphorylierung in der Aktivierungs-Schleife des Pak2 ist &auml;hnlich der PKA, und die Tyrosin-Phosphorylierung-Muster Src. gegenseitiger Kupplung Analyse von SCA zeigten die R&uuml;ckst&auml;nde von Thr(402) gest&ouml;rt und die gegenseitige Kopplung Paaren bildeten ein Netz, zentriert auf Trp(427) in der F-Helix. Neun paar gegenseitige Kopplung R&uuml;ckst&auml;nde entscheidend f&uuml;r die enzymatische Aktivit&auml;t und strukturelle Stabilisierung wurden identifiziert. Pak2, PKA und Src Teilen vier Paare. Gegenseitige Kopplung R&uuml;ckst&auml;nde ausgesetzt die solvent Linie oben als ein Aktivierungs-Groove. Dies ist der verbindliche Region PKA und der Aktivierung Nut f&uuml;r Pak2-Inhibitor (PKI). Dies zeigt an, dass diese evolution&auml;r konservierte R&uuml;ckst&auml;nde f&uuml;r die katalytische Aktivit&auml;t der PKA und Pak2 entscheidend sind.

Wechselseitig gekoppelten R&uuml;ckst&auml;nde entscheidend f&uuml;r Proteinkinase Pak2 Aktivit&auml;t durch statistische Kopplung Analyse berechnet.

Regolamento dell&#39;attivit&agrave; Pak2 coinvolge almeno due meccanismi: (i) la fosforilazione dei Thr(402) conservato nel ciclo di attivazione e (ii) l&#39;interazione del dominio automatico (aiuto) con il dominio catalitico. Abbiamo raccolto 482 sequenze di chinasi di proteina umana dal database kinome e mappato a livello globale le interazioni evolutive dei residui nel dominio catalitico con Thr(402) di accoppiamento statistici basati sulla sequenza di analisi (SCA). Perturbazione di Thr(402) (34,6%) suggerisce un percorso di comunicazione tra Thr(402) nel ciclo di attivazione e Phe(387) (DeltaDeltaE(387F,402T) = 2,80) in magnesio posizionamento loop, Trp(427) (DeltaDeltaE(427W,402T) = 3.12) in F-elica e Val(404) (DeltaDeltaE(404V,402T) = 4,43) e Gly(405) (DeltaDeltaE(405G,402T) = 2.95) nel peptide ciclo di posizionamento. Rispetto al cAMP-dipendente della chinasi di proteina (PKA) e Src, il pattern di perturbazione della fosforilazione della treonina nel ciclo di attivazione di Pak2 &egrave; simile a quella di PKA e diverso dal pattern di fosforilazione della tirosina Src. reciproco accoppiamento analisi da SCA ha mostrato i residui perturbati da Thr(402) e il reciproco accoppiamento coppie formata una rete centrata a Trp(427) nel F-elica. Sono stati identificati nove paia di reciproco accoppiamento residui cruciale per l&#39;attivit&agrave; enzimatica e la stabilizzazione strutturale. Pak2, PKA e Src condividono quattro coppie. Reciproco accoppiamento residui esposti alla linea solvente fino come un groove di attivazione. Questo &egrave; l&#39;inibitore (PKI) nella regione di PKA e la scanalatura di attivazione per Pak2 vincolanti. Questo indica che questi residui conservati evolutive sono cruciali per l&#39;attivit&agrave; catalitica di PKA e Pak2.

Mutuamente accoppiati residui cruciale per la chinasi di proteina Pak2 attivit&agrave; calcolato dall&#39;analisi statistica di accoppiamento.

&#xFF08;i&#xFF09;&#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x30EB;&#x30FC;&#x30D7;&#x5185;&#x306E;&#x4FDD;&#x5B58;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x30B9;&#x30EC;&#x30AA;&#x30CB;&#x30F3;&#xFF08;402&#xFF09;&#x306E;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x3068;&#x89E6;&#x5A92;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x3068;&#x81EA;&#x5DF1;&#x963B;&#x5BB3;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#xFF08;AID&#xFF09;&#x306E;&#xFF08;ii&#xFF09;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#xFF1A;PAK2&#x6D3B;&#x6027;&#x306E;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x306B;&#x306F;&#x3001;&#x5C11;&#x306A;&#x304F;&#x3068;&#x3082;2&#x3064;&#x306E;&#x6A5F;&#x69CB;&#x3092;&#x6301;&#x3063;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;&#x6728;&#x306E;&#x82BD;&#x3001;&#x30C7;&#x30FC;&#x30BF;&#x30D9;&#x30FC;&#x30B9;&#x304B;&#x3089;482&#x306E;&#x30D2;&#x30C8;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x200B;&#x200B;&#x30AF;&#x8CEA;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x306E;&#x914D;&#x5217;&#x3092;&#x53CE;&#x96C6;&#x3057;&#x3001;&#x30B0;&#x30ED;&#x30FC;&#x30D0;&#x30EB;&#x914D;&#x5217;&#x30D9;&#x30FC;&#x30B9;&#x306E;&#x7D71;&#x8A08;&#x7684;&#x7D50;&#x5408;&#x89E3;&#x6790;&#xFF08;SCA&#xFF09;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x30B9;&#x30EC;&#x30AA;&#x30CB;&#x30F3;&#xFF08;402&#xFF09;&#x3068;&#x89E6;&#x5A92;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x306E;&#x6B8B;&#x57FA;&#x306E;&#x9032;&#x5316;&#x7684;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x3092;&#x30DE;&#x30C3;&#x30D4;&#x30F3;&#x30B0;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002; Thr&#x306E;&#x6442;&#x52D5;&#xFF08;402&#xFF09;&#xFF08;34.6&#xFF05;&#xFF09;&#x306F;TRP&#xFF08;427&#xFF09;&#x3001;&#x30DE;&#x30B0;&#x30CD;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;&#x4F4D;&#x7F6E;&#x6C7A;&#x3081;&#x30EB;&#x30FC;&#x30D7;&#x5185;&#x3067;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x30EB;&#x30FC;&#x30D7;&#x306E;&#x30B9;&#x30EC;&#x30AA;&#x30CB;&#x30F3;&#xFF08;402&#xFF09;&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073;Phe&#xFF08;387&#xFF09;&#xFF08;DeltaDeltaE&#xFF08;387F&#x3001;402T&#xFF09;= 2.80&#xFF09;&#x3068;&#x306E;&#x9593;&#x306E;&#x901A;&#x4FE1;&#x7D4C;&#x8DEF;&#x3092;&#x793A;&#x5506;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#xFF08;&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C9;&#x4F4D;&#x7F6E;&#x6C7A;&#x3081;&#x30EB;&#x30FC;&#x30D7;&#x5185;&#x3067;F-&#x30D8;&#x30EA;&#x30C3;&#x30AF;&#x30B9;&#x3067;DeltaDeltaE&#xFF08;427W&#x3001;402T&#xFF09;= 3.12&#xFF09;&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073;Val&#xFF08;404&#xFF09;&#xFF08;DeltaDeltaE&#xFF08;404V&#x3001;402T&#xFF09;= 4.43&#xFF09;&#x3068;Gly&#xFF08;405&#xFF09;&#xFF08;DeltaDeltaE&#xFF08;405G&#x3001;402T&#xFF09;= 2.95&#xFF09; &#x3002; cAMP&#x4F9D;&#x5B58;&#x6027;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C6;&#x30A4;&#x30F3;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#xFF08;PKA&#xFF09;&#x304A;&#x3088;&#x3073;Src&#x3001;PAK2&#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x30EB;&#x30FC;&#x30D7;&#x306E;&#x30B9;&#x30EC;&#x30AA;&#x30CB;&#x30F3;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x306E;&#x6442;&#x52D5;&#x30D1;&#x30BF;&#x30FC;&#x30F3;&#x306F;PKA&#x306E;&#x305D;&#x308C;&#x306B;&#x985E;&#x4F3C;&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073;Src&#x306E;&#x30C1;&#x30ED;&#x30B7;&#x30F3;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x30D1;&#x30BF;&#x30FC;&#x30F3;&#x3068;&#x7570;&#x306A;&#x308B;&#x5834;&#x5408;&#x3068;&#x6BD4;&#x8F03;&#x3057;&#x305F;&#x5834;&#x5408;&#x3002; SCA&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x76F8;&#x4E92;&#x7D50;&#x5408;&#x5206;&#x6790;&#x306F;&#x3001;&#x6B8B;&#x57FA;&#x304C;&#x30B9;&#x30EC;&#x30AA;&#x30CB;&#x30F3;&#xFF08;402&#xFF09;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x6442;&#x52D5;&#x3068;&#x76F8;&#x4E92;&#x30AB;&#x30C3;&#x30D7;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;&#x306E;&#x30DA;&#x30A2;&#x306F;F-&#x30D8;&#x30EA;&#x30C3;&#x30AF;&#x30B9;&#x306E;TRP&#xFF08;427&#xFF09;&#x3092;&#x4E2D;&#x5FC3;&#x306B;&#x30CD;&#x30C3;&#x30C8;&#x30EF;&#x30FC;&#x30AF;&#x3092;&#x5F62;&#x6210;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x9175;&#x7D20;&#x6D3B;&#x6027;&#x3068;&#x69CB;&#x9020;&#x5B89;&#x5B9A;&#x5316;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x76F8;&#x4E92;&#x7D50;&#x5408;&#x6B8B;&#x57FA;&#x306E;9&#x30DA;&#x30A2;&#x304C;&#x540C;&#x5B9A;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3002; PAK2&#x3001;PKA&#x3068;Src&#x306F;&#x3001;4&#x3064;&#x306E;&#x30DA;&#x30A2;&#x3092;&#x5171;&#x6709;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x76F8;&#x4E92;&#x7D50;&#x5408;&#x6B8B;&#x57FA;&#x306F;&#x6D3B;&#x6027;&#x6E9D;&#x6EB6;&#x5A92;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x884C;&#x307E;&#x3067;&#x516C;&#x958B;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x306F;&#x3001;PKA&#x306E;&#x963B;&#x5BB3;&#x5264;&#xFF08;PKI&#xFF09;&#x306E;&#x7D50;&#x5408;&#x9818;&#x57DF;&#x3068;PAK2&#x306E;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D9;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x6E9D;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x306F;&#x3001;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x9032;&#x5316;&#x306E;&#x4FDD;&#x5B58;&#x6B8B;&#x57FA;&#x304C;PKA&#x3068;PAK2&#x306E;&#x89E6;&#x5A92;&#x6D3B;&#x6027;&#x306B;&#x91CD;&#x8981;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x7D71;&#x8A08;&#x7684;&#x7D50;&#x5408;&#x5206;&#x6790;&#x306B;&#x3088;&#x308A;&#x7B97;&#x51FA;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C6;&#x30A4;&#x30F3;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;PAK2&#x6D3B;&#x52D5;&#x306B;&#x3068;&#x3063;&#x3066;&#x91CD;&#x8981;&#x76F8;&#x4E92;&#x306B;&#x7D50;&#x5408;&#x6B8B;&#x7559;

Pak2 &#xD65C;&#xB3D9;&#xC758; &#xADDC;&#xC81C; &#xC801;&#xC5B4;&#xB3C4; &#xB450; &#xAC00;&#xC9C0; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;&#xC744; &#xD3EC;&#xD568; &#xD55C;&#xB2E4;: (i) &#xBCF4;&#xC874;&#xB41C; Thr(402) &#xC815;&#xD488; &#xC778;&#xC99D; &#xB8E8;&#xD504; &#xBC0F; (ii) &#xCD09;&#xB9E4; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778;&#xC73C;&#xB85C; autoinhibitory &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778; (&#xC6D0;&#xC870;)&#xC758; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC758; &#xC778; &#xC0B0;&#xD654;. &#xC6B0;&#xB9AC; kinome &#xB370;&#xC774;&#xD130;&#xBCA0;&#xC774;&#xC2A4;&#xC5D0;&#xC11C; 482 &#xC778;&#xAC04; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; kinase &#xC2DC;&#xD000;&#xC2A4;&#xB97C; &#xC218;&#xC9D1; &#xD558; &#xACE0; &#xC138;&#xACC4;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xD1B5;&#xACC4; &#xCEE4;&#xD50C;&#xB9C1; &#xC2DC;&#xD000;&#xC2A4; &#xAE30;&#xBC18; &#xBD84;&#xC11D; (SCA)&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; thr(402)&#xC640; &#xCD09;&#xB9E4; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778;&#xC5D0; &#xC794;&#xB958;&#xBB3C;&#xC758; &#xC9C4;&#xD654; &#xC0C1;&#xD638; &#xB9E4;&#xD551;. Thr(402) (34.6%)&#xC758; &#xC12D; &#xB3D9; &#xC81C;&#xC548; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xBC18;&#xBCF5;&#xC5D0;&#xC11C; thr(402)&#xC640; Phe(387) &#xC0AC;&#xC774;&#xC758; &#xD1B5;&#xC2E0; &#xACBD;&#xB85C; (DeltaDeltaE(387F,402T) = 2.80) &#xB8E8;&#xD504;, Trp(427) &#xC704;&#xCE58; &#xB9C8;&#xADF8;&#xB124;&#xC298;&#xC5D0;&#xC11C; (DeltaDeltaE(427W,402T) = 3.12) F-&#xB098;&#xC120;, &#xBC0F; Val(404) (DeltaDeltaE(404V,402T) = 4.43) &#xBC0F; Gly(405) (DeltaDeltaE(405G,402T) = 2.95) &#xD3A9; &#xD2F0; &#xB4DC; &#xB8E8;&#xD504; &#xC704;&#xCE58;&#xC5D0;. &#xCEA0;&#xD504; &#xC885;&#xC18D;&#xC5D0; &#xBE44;&#xD574; pak2&#xC758; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xBC18;&#xBCF5;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD2B8;&#xB808;&#xC624;&#xB2CC; &#xC778; &#xC0B0;&#xD654;&#xC758; &#xC12D; &#xB3D9; &#xD328;&#xD134;&#xC740; PKA, &#xBE44;&#xC2B7;&#xD55C; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xD0A4; &#xB2C8; &#xC544; &#xC81C; (PKA) &#xBC0F; Src, Src. &#xC0C1;&#xD638; &#xCEE4;&#xD50C;&#xB9C1; SCA&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xBD84;&#xC11D;&#xC758; &#xD2F0;&#xB85C;&#xC2E0; &#xC778; &#xC0B0;&#xD654; &#xD328;&#xD134;&#xC5D0;&#xC11C; &#xB2E4;&#xB978; thr(402)&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xAD50;&#xB780;&#xB41C; &#xC794;&#xB958;&#xBB3C;&#xC744; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC8FC;&#xC5C8;&#xB2E4; &#xACE0; &#xC30D; &#xCEE4;&#xD50C;&#xB9C1; &#xC0C1;&#xD638; F &#xB098;&#xC120;&#xC5D0; Trp(427) &#xC911;&#xC2EC;&#xC73C;&#xB85C; &#xB124;&#xD2B8;&#xC6CC;&#xD06C; &#xD615;&#xC131;. 9 &#xC30D;&#xC758; &#xC0C1;&#xD638; &#xCEE4;&#xD50C;&#xB9C1; &#xC794;&#xB958;&#xBB3C; &#xD6A8;&#xC18C; &#xD65C;&#xB3D9;&#xACFC; &#xAD6C;&#xC870; &#xC548;&#xC815;&#xD654;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xBC1C;&#xACAC; &#xD588;&#xB2E4;. Pak2, PKA &#xBC0F; Src 4 &#xC30D;&#xC744; &#xACF5;&#xC720; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC0C1;&#xD638; &#xCEE4;&#xD50C;&#xB9C1; &#xC794;&#xB958;&#xBB3C; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xD648;&#xC73C;&#xB85C; &#xC704;&#xB85C; &#xC6A9; &#xB9E4; &#xB77C;&#xC778;&#xC5D0; &#xB178;&#xCD9C;. &#xBC14;&#xC778;&#xB529; PKA&#xC5D0; &#xC9C0;&#xC5ED; &#xBC0F; pak2&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; groove &#xC5B5;&#xC81C;&#xC81C; (PKI)&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xC9C4;&#xD654; &#xBCF4;&#xC874;&#xB41C; &#xC794;&#xB958;&#xBB3C;&#xC740; PKA&#xC640; pak2&#xC758; &#xCD09;&#xB9E4; &#xD65C;&#xB3D9;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0C5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xC2DC;&#xD504; &#xACB0;&#xD569; &#xB41C; &#xC794;&#xB958;&#xBB3C;&#xC5D0; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xD0A4; &#xB2C8; &#xC544; &#xC81C; Pak2 &#xD65C;&#xB3D9; &#xD1B5;&#xACC4; &#xCEE4;&#xD50C;&#xB9C1; &#xBD84;&#xC11D; &#xD558; &#xC5EC; &#xACC4;&#xC0B0;.

La regulaci&#xF3;n de la actividad Pak2 implica al menos dos mecanismos: (i) de fosforilaci&#xF3;n de la conserva Thr (402) en la activaci&#xF3;n de bucle y (ii) la interacci&#xF3;n del dominio autoinhibici&#xF3;n (AID) con el dominio catal&#xED;tico. Se obtuvieron 482 secuencias de humanos prote&#xED;na quinasa de la base de datos de quinoma y en el mundo mapa de las interacciones evolutivas de los residuos en el dominio catal&#xED;tico con Thr (402) por la secuencia basada en el an&#xE1;lisis estad&#xED;stico de acoplamiento (SCA). Perturbaci&#xF3;n de Thr (402) (34,6%) sugiere una v&#xED;a de comunicaci&#xF3;n entre Thr (402) en la activaci&#xF3;n de bucle, y Phe (387) (DeltaDeltaE (387F, 402T) = 2,80) en el bucle de posicionamiento de magnesio, Trp (427) ( DeltaDeltaE (427W, 402T) = 3,12) en el F-h&#xE9;lice, y Val (404) (DeltaDeltaE (404V, 402T) = 4.43) y Gly (405) (DeltaDeltaE (405G, 402T) = 2,95) en el lazo de posici&#xF3;n p&#xE9;ptido . Cuando se compara con la prote&#xED;na quinasa dependiente de cAMP (PKA) y Src, el patr&#xF3;n de perturbaci&#xF3;n de la fosforilaci&#xF3;n de treonina en la activaci&#xF3;n de bucle de Pak2 es similar a la de la PKA, y diferente del patr&#xF3;n de la fosforilaci&#xF3;n de tirosina Src. An&#xE1;lisis acoplamiento rec&#xED;proco por SCA mostraron los residuos perturbado por Thr (402) y los pares de acoplamiento reciproco formado una red centrada en Trp (427) en el F-h&#xE9;lice. Nueve pares de residuos de acoplamiento reciproco cruciales para la actividad enzim&#xE1;tica y la estabilizaci&#xF3;n estructural se identificaron. Pak2, PKA y Src compartir cuatro pares. Residuos rec&#xED;procos de acoplamiento expuesto a la l&#xED;nea de disolvente hasta como una ranura de la activaci&#xF3;n. Este es el inhibidor (PKI), regi&#xF3;n de uni&#xF3;n de la PKA y la ranura de activaci&#xF3;n para Pak2. Esto indica que estos residuos conservados evolutivos son cruciales para la actividad catal&#xED;tica de PKA y Pak2.

Residuos Rec&#xED;procamente acoplados crucial para la actividad prote&#xED;na quinasa Pak2 calculado por el an&#xE1;lisis estad&#xED;stico de acoplamiento

&#xADF8;&#xB8F9;&#xC744; &#xD1B5;&#xD574; &#xCE7C;&#xC298; &#xB3C5;&#xB9BD;&#xC801;&#xC778; phospholipase A(2) (GVIA iPLA(2)) &#xCD5C;&#xADFC; &#xC18C;&#xC124; &#xC81C;&#xC57D; &#xB300;&#xC0C1;&#xC73C;&#xB85C; &#xB5A0;&#xC624;&#xB974;&#xACE0; &#xC788;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC; &#xC774;&#xC81C; fluoroketones&#xC640; GVIA iPLA(2) &#xC5B5;&#xC81C; &#xC0AC;&#xC774;&#xC758; &#xAD6C;&#xC870; &#xD65C;&#xB3D9; &#xAD00;&#xACC4;&#xB97C; &#xC0B4;&#xD3B4; &#xBCF4;&#xC558;&#xB2E4;. Naphthyl &#xADF8;&#xB8F9;&#xC758; &#xC874;&#xC7AC; &#xC785;&#xC99D; &#xD30C;&#xB77C;&#xB9C8;&#xC6B4;&#xD2B8; &#xC911;&#xC694;&#xC131; &#xC774;&#xC5B4;&#xC57C; &#xD588;&#xB2E4;. 1,1,1-Trifluoro-6-(naphthalen-2-yl)hexan-2-one (FKGK18)&#xB294; GVIA Ipla(2)&#xC758; &#xAC00;&#xC7A5; &#xAC15;&#xB825;&#xD55C; &#xC5B5;&#xC81C;&#xC81C; (X(I)(50) = 0.0002)&#xB3C4; &#xBCF4;&#xACE0;. 195 &#xB418; &#xACE0; &amp;gt; 455 &#xBC30; &#xC774;&#xC0C1; GVIA Ipla(2)&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xAC15;&#xB825;&#xD55C; GIVA cPLA(2) &#xBC0F; GV sPLA(2), &#xAC01;&#xAC01;, &#xAC8C; &#xC140; &#xBC0F; in vivo &#xBAA8;&#xB378;&#xC5D0;&#xC11C; GVIA Ipla(2)&#xC758; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xD0D0;&#xAD6C; &#xD558;&#xB294; &#xC720;&#xC6A9;&#xD55C; &#xB3C4;&#xAD6C;&#xAC00; &#xBCF4;&#xB2E4;. 1,1,1,2,2,3,3-Heptafluoro-8-(naphthalene-2-yl)octan-4-one 90 &#xBC88; &#xB35C; potently &#xC801;&#xC5B4;&#xB3C4; &#xB2E4;&#xB978; &#xC138;&#xD3EC;&#xB0B4; GIVA cPLA(2) &#xBC0F; GV Spla(2)&#xB97C; &#xC5B5;&#xC81C; &#xD558;&#xB294; &#xB3D9;&#xC548; GVIA iPLA(2) X(I)(50) &#xAC12;&#xC774; 0.001 &#xC800;&#xD574;. Hexa-&#xBC0F; octafluoro ketones GVIA iPLA(2);&#xC758; &#xAC15;&#xB825;&#xD55C; &#xC5B5;&#xC81C;&#xC81C; &#xBC1C;&#xACAC;&#xB3C4; &#xC788;&#xC5C8;&#xB2E4; &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098;, &#xADF8;&#xB4E4;&#xC740; &#xC120;&#xD0DD;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xCE7C;&#xC298; &#xB3C5;&#xB9BD;&#xC801;&#xC778; phospholipase a 2 &#xD1B5;&#xD574; &#xADF8;&#xB8F9;&#xC758; &#xAC15;&#xB825;&#xD55C; &#xC120;&#xD0DD;&#xC801; fluoroketone &#xC5B5;&#xC81C;&#xC81C;.

Grupo VIA calcio independiente fosfolipasa punto (GVIA iPLA(2)) recientemente ha surgido como una nueva Diana farmac&eacute;utica. Ahora hemos explorado la relaci&oacute;n estructura-actividad entre fluoroketones y GVIA iPLA(2) inhibici&oacute;n. La presencia de un grupo de naftil result&oacute; para ser de suma importancia. 1,1,1-Trifluoro-6-(naphthalen-2-yl)hexan-2-One (FKGK18) es el inhibidor m&aacute;s potente de GVIA iPLA(2) (X(I)(50) = 0.0002) divulgado nunca. Ser 195 y &gt; 455 veces m&aacute;s potente para GVIA iPLA(2) de cPLA(2) GIVA y sPLA(2) GV, respectivamente, es una herramienta valiosa para explorar el papel de iPLA(2) GVIA en c&eacute;lulas y modelos en vivo. 1,1,1,2,2,3,3-Heptafluoro-8-(Naphthalene-2-yl)octan-4-One hab&iacute;a inhibido GVIA iPLA(2) con un valor X(I)(50) de 0.001 mientras que inhibe los dem&aacute;s intracelular GIVA cPLA(2) y GV sPLA(2) por lo menos 90 veces menos potente. Cetonas Hexa - y octafluoro tambi&eacute;n fueron encontradas para ser inhibidores potentes de la GVIA iPLA(2); sin embargo, no son selectivos.

Inhibidores de la fluoroketone potente y selectivo del grupo VIA independiente de calcio fosfolipasa A2.

&#x96C6;&#x56E2;&#x901A;&#x8FC7;&#x72EC;&#x7ACB;&#x4E8E;&#x9499;&#x7684;&#x78F7;&#x8102; A(2) (GVIA iPLA(2)) &#x6700;&#x8FD1;&#x5DF2;&#x6210;&#x4E3A;&#x4E00;&#x4E2A;&#x65B0;&#x578B;&#x7684;&#x5236;&#x836F;&#x76EE;&#x6807;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x73B0;&#x5728;&#x6709; fluoroketones &#x548C; GVIA iPLA(2) &#x6291;&#x5236;&#x4E4B;&#x95F4;&#x63A2;&#x8BA8;&#x6784;&#x6548;&#x5173;&#x7CFB;&#x3002;&#x8418;&#x7EC4;&#x7684;&#x5B58;&#x5728;&#x8BC1;&#x660E;&#x662F;&#x81F3;&#x5173;&#x91CD;&#x8981;&#x3002;1,1,1-Trifluoro-6-(naphthalen-2-yl)hexan-2-one &#xFF08;FKGK18&#xFF09; &#x662F;&#x6700;&#x6709;&#x529B;&#x7684;&#x6291;&#x5236;&#x5242; GVIA iPLA(2) (X(I)(50) = 0.0002) &#x66FE;&#x7ECF;&#x62A5;&#x9053;&#x3002;&#x6B63;&#x5728; 195 &#x548C; &gt; 455 &#x500D;&#x70C8;&#x6027;&#x7684; GVIA iPLA(2)&#xFF0C;&#x6BD4; GIVA cPLA(2) &#x548C; GV sPLA(2)&#xFF0C;&#x5206;&#x522B;&#xFF0C;&#x4F7F;&#x5B83;&#x7684;&#x5B9D;&#x8D35;&#x5DE5;&#x5177;&#xFF0C;&#x63A2;&#x8BA8; GVIA iPLA(2) &#x7EC6;&#x80DE;&#x548C;&#x4F53;&#x5185;&#x6A21;&#x578B;&#x4E2D;&#x7684;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;1,1,1,2,2,3,3-Heptafluoro-8-(naphthalene-2-yl)octan-4-one &#x6291;&#x5236;&#x540C;&#x65F6;&#x81F3;&#x5C11;&#x5C11; 90 &#x500D;&#x5148;&#x5929;&#x6291;&#x5236;&#x5176;&#x4ED6;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5185;&#x7684; GIVA cPLA(2) &#x548C; GV sPLA(2) GVIA iPLA(2) X(I)(50) &#x503C;&#x4E3A; 0.001&#x3002;&#x5341;&#x516D;&#x8FDB;&#x5236;&#x548C; octafluoro &#x916E;&#x4E5F;&#x53D1;&#x73B0;&#x80FD;&#x6709;&#x6548;&#x6291;&#x5236;&#x5242; GVIA iPLA(2) &#xFF1B;&#x4F46;&#x662F;&#xFF0C;&#x4ED6;&#x4EEC;&#x4E0D;&#x662F;&#x9009;&#x62E9;&#x6027;&#x7684;&#x3002;

&#x5F3A;&#x5927;&#x548C;&#x9009;&#x62E9;&#x6027; fluoroketone &#x6291;&#x5236;&#x5242;&#x901A;&#x8FC7;&#x72EC;&#x7ACB;&#x4E8E;&#x9499;&#x7684;&#x78F7;&#x8102;&#x9176; A2 &#x7EC4;&#x3002;

Group VIA calcium-independent phospholipase A(2) (GVIA iPLA(2)) has recently emerged as a novel pharmaceutical target. We have now explored the structure-activity relationship between fluoroketones and GVIA iPLA(2) inhibition. The presence of a naphthyl group proved to be of paramount importance. 1,1,1-Trifluoro-6-(naphthalen-2-yl)hexan-2-one (FKGK18) is the most potent inhibitor of GVIA iPLA(2) (X(I)(50) = 0.0002) ever reported. Being 195 and >455 times more potent for GVIA iPLA(2) than for GIVA cPLA(2) and GV sPLA(2), respectively, makes it a valuable tool to explore the role of GVIA iPLA(2) in cells and in vivo models. 1,1,1,2,2,3,3-Heptafluoro-8-(naphthalene-2-yl)octan-4-one inhibited GVIA iPLA(2) with a X(I)(50) value of 0.001 while inhibiting the other intracellular GIVA cPLA(2) and GV sPLA(2) at least 90 times less potently. Hexa- and octafluoro ketones were also found to be potent inhibitors of GVIA iPLA(2); however, they are not selective.

Potent and selective fluoroketone inhibitors of group VIA calcium-independent phospholipase A2.

Groupe VIA ind&eacute;pendantes du calcium phospholipase a (2) (GVIA iPLA(2)) a r&eacute;cemment &eacute;merg&eacute; comme une nouvelle cible pharmaceutique. Nous avons maintenant explor&eacute; la relation structure-activit&eacute; entre fluoroketones et l&#39;inhibition de la GVIA iPLA(2). La pr&eacute;sence d&#39;un groupe de naphtyle s&#39;est av&eacute;r&eacute;e d&#39;une importance primordiale. 1,1,1-Trifluoro-6-(naphthalen-2-yl)hexan-2-one (FKGK18) est l&#39;inhibiteur le plus puissant de GVIA iPLA(2) (X(I)(50) = 0,0002) jamais signal&eacute;s. En 195 et &gt; 455 fois plus puissant pour GVIA iPLA(2) que pour cPLA(2) GIVA et GV sPLA(2), respectivement, rend un outil pr&eacute;cieux pour &eacute;tudier le r&ocirc;le de GVIA iPLA(2) dans les cellules et mod&egrave;les in vivo. 1,1,1,2,2,3,3-Heptafluoro-8-(naphthalene-2-yl)octan-4-one inhibe la GVIA iPLA(2) d&#39;une valeur X(I)(50) de 0,001 tout en inhibant les autres intracellulaire GIVA cPLA(2) et GV sPLA(2) au moins 90 fois moins puissante. C&eacute;tones hexa - et octafluoro se sont &eacute;galement r&eacute;v&eacute;l&eacute;es pour &ecirc;tre des inhibiteurs puissants du GVIA iPLA(2) ; Toutefois, ils ne sont pas s&eacute;lectifs.

Fluoroketone puissant et s&eacute;lectif inhibiteurs de groupe VIA ind&eacute;pendantes du calcium phospholipase A2.

Gruppe VIA Kalzium-unabh&auml;ngige Phospholipase A(2) (GVIA iPLA(2)) hat vor kurzem als neuartige pharmazeutische Ziel entwickelt. Wir haben jetzt die Struktur-Wirkungs-Beziehung zwischen Fluoroketones und GVIA iPLA(2) Hemmung untersucht. Das Vorhandensein einer thyl-Gruppe erwies sich von gr&ouml;&szlig;ter Bedeutung. 1,1,1-Trifluoro-6-(Naphthalen-2-yl)Hexan-2-One (FKGK18) ist die st&auml;rkste Inhibitor der GVIA iPLA(2) (X(I)(50) = 0.0002) jemals berichtet. Wird 195 und &gt; f&uuml;r GVIA iPLA(2) 455-mal st&auml;rkere Wirkung, als GIVA cPLA(2) und GV-sPLA(2), bzw. es ein wertvolles Werkzeug, um die Rolle der GVIA iPLA(2) in Zellen und in-vivo-Modelle zu erkunden macht. 1,1,1,2,2,3,3-Heptafluoro-8-(naphthalene-2-yl)octan-4-One gehemmt GVIA iPLA(2) mit einem X(I)(50)-Wert von 0,001 w&auml;hrend Hemmung der anderen intrazellul&auml;ren GIVA cPLA(2) und GV sPLA(2) mindestens 90 mal weniger stark. Hexa- und Octafluoro Ketone wurden auch gefunden, potente Inhibitoren der GVIA iPLA(2) sein; Allerdings sind sie nicht selektiv.

Potenter und selektiver Fluoroketone Inhibitoren der Gruppe VIA Kalzium-unabh&auml;ngige Phospholipase A2.

Gruppo VIA calcio indipendente dalla fosfolipasi a (2) (iPLA(2)) GVIA recentemente &egrave; emerso come un romanzo target farmaceutico. Ora abbiamo esplorato il rapporto struttura-attivit&agrave; tra fluoroketones e GVIA iPLA(2) inibizione. La presenza di un gruppo di naftil ha dimostrato di essere di fondamentale importanza. 1,1,1-Trifluoro-6-(naphthalen-2-yl)hexan-2-One (FKGK18) &egrave; il pi&ugrave; potente inibitore del GVIA iPLA(2) (X(I)(50) = 0.0002) mai segnalato. Essendo 195 e &amp;gt; 455 volte pi&ugrave; potente per iPLA(2) GVIA rispetto per GIVA cPLA(2) e GV sPLA(2), rispettivamente, rende uno strumento prezioso per esplorare il ruolo della iPLA(2) GVIA nelle cellule e modelli in vivo. 1,1,1,2,2,3,3-Heptafluoro-8-(naphthalene-2-yl)Octan-4-One inibito GVIA iPLA(2) con un valore X(I)(50) di 0,001 mentre inibendo le altre intracellulari GIVA cPLA(2) e GV sPLA(2) almeno 90 volte meno potentemente. Chetoni Hexa - e octafluoro inoltre sono stati trovati per essere potenti inibitori di iPLA(2) GVIA; Tuttavia, non sono selettivi.

Fluoroketone potente e selettivo inibitori del gruppo VIA calcio indipendente dalla fosfolipasi A2.

&#x30B0;&#x30EB;&#x30FC;&#x30D7;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x3066;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;&#x72EC;&#x7ACB;&#x30DB;&#x30B9;&#x30DB;&#x30EA;&#x30D1;&#x30FC;&#x30BC;&#x9B54;&#x65B9;&#x9663; (&#x6700;&#x8FD1;&#x3001;GVIA iPLA(2))&#x3001;&#x65B0;&#x898F;&#x533B;&#x85AC;&#x54C1;&#x30BF;&#x30FC;&#x30B2;&#x30C3;&#x30C8;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x6D6E;&#x4E0A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005; &#x306F;&#x3001;&#x4ECA; fluoroketones &#x3068; GVIA iPLA(2) &#x963B;&#x5BB3;&#x306E;&#x9593;&#x69CB;&#x9020;&#x6D3B;&#x6027;&#x306E;&#x95A2;&#x4FC2;&#x3092;&#x63A2;&#x691C;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x30CA;&#x30D5;&#x30C1;&#x30EB; &#x30B0;&#x30EB;&#x30FC;&#x30D7;&#x306E;&#x5B58;&#x5728;&#x306F;&#x3001;&#x30D1;&#x30E9;&#x30DE;&#x30A6;&#x30F3;&#x30C8;&#x306E;&#x91CD;&#x8981;&#x6027;&#x3092;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x5206;&#x304B;&#x3063;&#x305F;&#x3002;1,1,1-Trifluoro-6-(naphthalen-2-yl)hexan-2-one (FKGK18) &#x306F; GVIA iPLA(2) &#x306E;&#x6700;&#x3082;&#x5F37;&#x529B;&#x306A;&#x963B;&#x5BB3;&#x5264; (X(I)(50) 0.0002 =&#xFF09; &#x3053;&#x308C;&#x307E;&#x3067;&#x306B;&#x5831;&#x544A;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;195 &#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3068;&#x76EE; 455 &#x56DE;&#x3088;&#x308A;&#x5F37;&#x529B;&#x306A; GVIA iPLA(2) &#x306E; GIVA cPLA(2) &#x3068; GV sPLA(2) &#x306B;&#x3064;&#x3044;&#x3066;&#x306F;&#x3001;&#x305D;&#x308C;&#x305E;&#x308C;&#x3001;&#x305D;&#x308C;&#x306F; GVIA iPLA(2) &#x7D30;&#x80DE;&#x3068; in vivo &#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x3067;&#x306E;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x63A2;&#x7D22;&#x3059;&#x308B;&#x8CB4;&#x91CD;&#x306A;&#x30C4;&#x30FC;&#x30EB;&#x3092;&#x4F5C;&#x308B;&#x3088;&#x308A;&#x3082;&#x3002;1,1,1,2,2,3,3-Heptafluoro-8-(naphthalene-2-yl)octan-4-one GVIA iPLA(2) X(I)(50) &#x306E;&#x5024;&#x304C; 0.001 &#x3067;&#x5C11;&#x306A;&#x304F;&#x3068;&#x3082; 90 &#x500D;&#x3088;&#x308A;&#x5C11;&#x306A;&#x304F;&#x6709;&#x52B9;&#x306E;&#x6291;&#x5236;&#x3057;&#x306A;&#x304C;&#x3089;&#x3001;&#x4ED6;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x5185; GIVA cPLA(2) &#x3068; GV sPLA(2) &#x963B;&#x5BB3;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x30D8;&#x30AD;&#x30B5;&#x3068;&#x30D5;&#x30C3;&#x5316;&#x30B1;&#x30C8;&#x30F3;&#x306F;&#x307E;&#x305F; GVIA iPLA(2) &#x306E;&#x5F37;&#x529B;&#x306A;&#x963B;&#x5BB3;&#x5264;&#x3092;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x5224;&#x660E;&#x3057;&#x305F;;&#x3057;&#x304B;&#x3057;&#x3001;&#x5F7C;&#x3089;&#x306F;&#x9078;&#x629E;&#x7684;&#x3067;&#x306F;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3002;

&#x5F37;&#x529B;&#x3067;&#x9078;&#x629E;&#x7684; fluoroketone &#x963B;&#x5BB3;&#x5264;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;&#x72EC;&#x7ACB;&#x30DB;&#x30B9;&#x30DB;&#x30EA;&#x30D1;&#x30FC;&#x30BC; A2 &#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x3066;&#x30B0;&#x30EB;&#x30FC;&#x30D7;&#x306E;&#x3002;

&#x8102;&#x86CB;&#x767D;&#x76F8;&#x5173;&#x78F7;&#x8102;&#x9176; A(2) &#xFF08;Lp-PLA(2)) &#x5728;&#x4EBA;&#x7C7B;&#x75BE;&#x75C5;&#x4E2D;&#x626E;&#x6F14;&#x91CD;&#x8981;&#x7684;&#x89D2;&#x8272;&#xFF0C;&#x6291;&#x5236;&#x548C;&#x4FC3;&#x8FDB;&#x708E;&#x75C7;&#x3002;&#x5B83;&#x50AC;&#x5316;&#x6C34;&#x89E3;&#x706D;&#x6D3B;&#x8840;&#x6D46;&#x8840;&#x5C0F;&#x677F;&#x6D3B;&#x5316;&#x56E0;&#x5B50; (PAF)&#xFF0C;&#x4E5F;&#x79F0;&#x4E3A;&#x662F;&#x8840;&#x5C0F;&#x677F;&#x6D3B;&#x5316;&#x56E0;&#x5B50;&#x4E59;&#x9170;&#x6C34;&#x89E3;&#x9176;&#x3002;&#x9AD8;&#x6C34;&#x5E73;&#x7684;&#x8840;&#x5C0F;&#x677F;&#x6D3B;&#x5316;&#x56E0;&#x5B50;&#x662F;&#x7275;&#x8FDE;&#x5230;&#x5404;&#x79CD;&#x5404;&#x6837;&#x7684;&#x708E;&#x6027;&#x75BE;&#x75C5;&#x5982;&#x54EE;&#x5598;&#x3001; &#x574F;&#x6B7B;&#x6027;&#x5C0F;&#x80A0;&#x7ED3;&#x80A0;&#x708E;&#x3001; &#x548C;&#x8113;&#x6BD2;&#x75C7;&#x3002;Lp-PLA(2) &#x4E5F;&#x5C06;&#x4E0E;&#x5B83;&#x5728; hydrolyzes &#x6C27;&#x5316;&#x7684;&#x78F7;&#x8102;&#x751F;&#x4EA7;&#x53EF;&#x4EE5;&#x4FC3;&#x8FDB;&#x708E;&#x75C7;&#x548C;&#x52A8;&#x8109;&#x7CA5;&#x6837;&#x786C;&#x5316;&#x7684;&#x53D1;&#x5C55;&#x7684;&#x708E;&#x75C7;&#x8102;&#x8D28;&#x8C03;&#x89E3;&#x5458;&#x7684;&#x4EBA;&#x8840;&#x6D46;&#x4E2D;&#x8102;&#x86CB;&#x767D;&#x76F8;&#x5173;&#x8054;&#x3002;Lp-PLA(2) &#x8840;&#x6D46;&#x6C34;&#x5E73;&#x6709;&#x6700;&#x8FD1;&#x88AB;&#x5217;&#x4E3A;&#x751F;&#x7269;&#x6807;&#x8BB0;&#x7269;&#x7684;&#x8840;&#x7BA1;&#x708E;&#x75C7;&#x3001; &#x52A8;&#x8109;&#x7CA5;&#x6837;&#x786C;&#x5316;&#x7684;&#x8106;&#x5F31;&#x6027;&#xFF0C;&#x4EE5;&#x53CA;&#x672A;&#x6765;&#x5FC3;&#x8840;&#x7BA1;&#x4E8B;&#x4EF6;&#x3002;&#x56E0;&#x6B64;&#xFF0C;&#x9176;&#x662F;&#x7A81;&#x51FA;&#x708E;&#x75C7;&#x548C;&#x52A8;&#x8109;&#x7CA5;&#x6837;&#x786C;&#x5316;&#x8C03;&#x8282;&#x6CBB;&#x7597;&#x5B66;&#x7684;&#x53D1;&#x5C55;&#x76EE;&#x6807;&#x3002;Crystallographically &#x786E;&#x5B9A;&#x7684;&#x7ED3;&#x6784;&#x7684;&#x8FD9;&#x79CD;&#x9176;&#x5DF2;&#x77E5;&#x7684;&#x800C;&#x4E0E;&#x8840;&#x5C0F;&#x677F;&#x6D3B;&#x5316;&#x56E0;&#x5B50;&#x548C;&#x8102;&#x86CB;&#x767D;&#x529F;&#x80FD;&#x8C03;&#x8282;&#x8840;&#x8102;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x9176;&#x7684;&#x673A;&#x5236;&#x662F;&#x672A;&#x77E5;&#x7684;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x91C7;&#x7528;&#x4E86;&#x80BD;&#x9170;&#x80FA;&#x6C22;&#x6C18;&#x4EA4;&#x6362;&#x8D28;&#x8C31; (DXMS) &#x52FE;&#x7ED3;&#x7684; Lp-PLA(2) dimyristoylphosphatidylcholine (DMPC) &#x6709;&#x6C34;&#x6CE1;&#x5E76;&#x627E;&#x5230;&#x5177;&#x4F53;&#x6B8B;&#x7559;&#x7684;&#x9176;&#x8868;&#x9762;&#x5904;&#x7F6E;&#x758F;&#x6C34; &alpha;-&#x87BA;&#x65CB;&#x53EF;&#x80FD;&#x4E4B;&#x4E00; 113-120 &#x8C03;&#x89E3;&#x8102;&#x8D28;&#x4F53;&#x5177;&#x6709;&#x7EA6;&#x675F;&#x529B;&#x3002;

&#x8102;&#x86CB;&#x767D;&#x76F8;&#x5173;&#x78F7;&#x8102;&#x9176; A(2) &#x4E0E;&#x78F7;&#x8102;&#x56CA;&#x6CE1;&#x8868;&#x9762;&#x5904;&#x7F6E;&#x758F;&#x6C34; &alpha;-&#x87BA;&#x65CB;&#x901A;&#x8FC7;&#x4EA4;&#x4E92;&#x3002;

Lipoprotein-associated phospholipase A(2) (Lp-PLA(2)) plays important roles in both the inhibition and promotion of inflammation in human disease. It catalyzes the hydrolytic inactivation of plasma platelet activating factor (PAF) and is also known as PAF acetylhydrolase. High levels of PAF are implicated in a variety of inflammatory diseases such as asthma, necrotizing enterocolitis, and sepsis. Lp-PLA(2) also associates with lipoproteins in human plasma where it hydrolyzes oxidized phospholipids to produce pro-inflammatory lipid mediators that can promote inflammation and the development of atherosclerosis. Lp-PLA(2) plasma levels have recently been identified as a biomarker of vascular inflammation, atherosclerotic vulnerability, and future cardiovascular events. The enzyme is thus a prominent target for the development of inflammation and atherosclerosis-modulating therapeutics. While the crystallographically determined structure of the enzyme is known, the enzyme's mechanism of interaction with PAF and the function-modulating lipids in lipoproteins is unknown. We have employed peptide amide hydrogen-deuterium exchange mass spectrometry (DXMS) to characterize the association of Lp-PLA(2) with dimyristoylphosphatidylcholine (DMPC) vesicles and found that specific residues 113-120 in one of the enzyme's surface-disposed hydrophobic Î±-helices likely mediate liposome binding.

Lipoprotein-associated phospholipase A(2) interacts with phospholipid vesicles via a surface-disposed hydrophobic Î±-helix.

Associ&eacute;s &agrave; lipoprot&eacute;ine phospholipase a (2) (Lp-PLA(2)) joue un r&ocirc;le important dans l&#39;inhibition et la promotion de l&#39;inflammation dans la maladie humaine. Elle catalyse l&#39;hydrolyse inactivation du facteur d&#39;activation plaquettaire plasma (PAF) et est &eacute;galement connu sous le nom de PAF acetylhydrolase. Des niveaux &eacute;lev&eacute;s du PAF sont impliqu&eacute;s dans une vari&eacute;t&eacute; de maladies inflammatoires comme l&#39;asthme, l&#39;ent&eacute;rocolite n&eacute;crosante et la septic&eacute;mie. Lp-PLA(2) associe &eacute;galement des lipoprot&eacute;ines dans le plasma humain o&ugrave; il s&#39;hydrolyse des phospholipides oxyd&eacute;s pour produire des m&eacute;diateurs pro-inflammatoires qui peuvent favoriser l&#39;inflammation et le d&eacute;veloppement de l&#39;ath&eacute;roscl&eacute;rose. Lp-PLA(2) plasmatiques ont r&eacute;cemment &eacute;t&eacute; identifi&eacute;s comme des biomarqueurs de l&#39;inflammation vasculaire ath&eacute;roscl&eacute;reuse vuln&eacute;rabilit&eacute; et &eacute;v&eacute;nements cardiovasculaires futurs. L&#39;enzyme est donc une cible importante pour le d&eacute;veloppement de l&#39;inflammation et l&#39;ath&eacute;roscl&eacute;rose-modulation th&eacute;rapeutique. Alors que la structure d&eacute;termin&eacute;e par cristallographie de l&#39;enzyme est connue, le m&eacute;canisme de l&#39;enzyme de l&#39;interaction avec le PAF et les lipides fonction modulant dans les lipoprot&eacute;ines est inconnue. Nous avons utilis&eacute; la spectrom&eacute;trie de masse d&#39;&eacute;change d&#39;hydrog&egrave;ne-deut&eacute;rium d&#39;amide du peptide (DXMS) pour caract&eacute;riser l&#39;association des Lp-PLA(2) avec des v&eacute;sicules dimyristoylphosphatidylcholine (DMPC) et constat&eacute; que les r&eacute;sidus sp&eacute;cifiques 113-120 dans l&#39;un de surface-supprim&eacute;e hydrophobe &alpha;-h&eacute;lices de l&#39;enzyme probables m&eacute;dient liaison liposome.

Associ&eacute;s &agrave; lipoprot&eacute;ine phospholipase a (2) interagit avec les v&eacute;sicules phospholipidiques via une h&eacute;lice-&alpha; &agrave; hydrophobe surface-supprim&eacute;e.

Lipoprotein-assoziierte Phospholipase A(2) (Lp-PLA(2)) spielt wichtige Rolle in der Hemmung und die F&ouml;rderung der Entz&uuml;ndung bei Krankheiten des Menschen. Es katalysiert die hydrolytische Inaktivierung von Plasma-Pl&auml;ttchen-aktivierenden Faktor (PAF) und ist auch bekannt als PAF Acetylhydrolase. Hohe Konzentrationen von PAF sind in einer Vielzahl von entz&uuml;ndlichen Erkrankungen wie Asthma, nekrotisierende Enterokolitis und Sepsis beteiligt. Lp-PLA(2) ordnet auch Lipoproteine im Blutplasma, wo es Spalten oxidierte Phospholipide, Pro-inflammatorische Lipide Mediatoren zu produzieren, die Entz&uuml;ndung und die Entwicklung der Atherosklerose f&ouml;rdern k&ouml;nnen. Lp-PLA(2)-Plasmaspiegel wurden vor kurzem als Biomarker der vaskul&auml;ren Entz&uuml;ndung, atherosklerotischen Schwachstellen- und zuk&uuml;nftige kardiovaskul&auml;re Ereignisse identifiziert. Das Enzym ist somit ein prominenter Ziel f&uuml;r die Entwicklung von Entz&uuml;ndungen und Arteriosklerose-Modulation-Therapeutika. W&auml;hrend die crystallographically zielstrebig Struktur des Enzyms bekannt ist, ist das Enzym Mechanismus der Wechselwirkung mit PAF und die Funktion modulieren Lipide in Lipoproteine unbekannt. Wir haben Austausch-Massenspektrometrie (DXMA) zur Charakterisierung der Assoziation der Lp-PLA(2) mit Dimyristoylphosphatidylcholine (DMPC) Bl&auml;schen und festgestellt, dass bestimmte R&uuml;ckst&auml;nde 113-120 in einem der das Enzym Oberfl&auml;che entsorgt hydrophoben &alpha;-Helices wahrscheinlich Liposomen Bindung vermitteln des Amid Peptid Wasserstoff-Deuterium eingesetzt.

Lipoprotein-assoziierte Phospholipase A(2) interagiert mit Phospholipid-Bl&auml;schen &uuml;ber eine Oberfl&auml;che entsorgt hydrophoben &alpha;-Helix.

Lipoproteina-associated fosfolipasi a (2) (Lp-PLA(2)) svolge importanti ruoli nella inibizione e promozione dell&#39;infiammazione nella malattia umana. E catalizza la seguente l&#39;inattivazione idrolitica del fattore di attivazione piastrinica al plasma (PAF) ed &egrave; anche conosciuto come acetylhydrolase PAF. Alti livelli di PAF sono implicati in una variet&agrave; di malattie infiammatorie quali asma, enterocolite necrotizzante e sepsi. Lp-PLA(2) associa anche lipoproteine nel plasma umano dove idrolizza fosfolipidi ossidati per produrre mediatori lipidici pro-infiammatorie che possono favorire l&#39;infiammazione e lo sviluppo dell&#39;aterosclerosi. Livelli plasmatici di Lp-PLA(2) sono state recentemente identificati come un biomarker di infiammazione vascolare, vulnerabilit&agrave; aterosclerotica e futuri eventi cardiovascolari. L&#39;enzima &egrave; quindi un obiettivo importante per lo sviluppo dell&#39;infiammazione e aterosclerosi-modulazione terapeutica. Mentre la struttura determinata crystallographically dell&#39;enzima &egrave; noto, meccanismo di enzima di interazione con PAF e il funzione modulante lipidi nelle lipoproteine &egrave; sconosciuto. Noi abbiamo impiegato del peptide dell&#39;ammide idrogeno-deuterio scambio spettrometria di massa (DXMS) per caratterizzare l&#39;associazione di Lp-PLA(2) con le vescicole dimyristoylphosphatidylcholine (DMPC) e trovato che specifici residui 113-120 in uno dell&#39;enzima eliminato superficie idrofoba &alpha;-eliche probabile mediano associazione liposoma.

Lipoproteina-associated fosfolipasi a (2) interagisce con vescicole di fosfolipidi attraverso una superficie-eliminato idrofobo &alpha;-elica.

&#x30EA;&#x30DD;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x95A2;&#x9023;&#x30DB;&#x30B9;&#x30DB;&#x30EA;&#x30D1;&#x30FC;&#x30BC;&#x9B54;&#x65B9;&#x9663; (Lp-PLA(2)) &#x306F;&#x4EBA;&#x9593;&#x306E;&#x75C5;&#x6C17;&#x3067;&#x6291;&#x5236;&#x3068;&#x708E;&#x75C7;&#x306E;&#x4FC3;&#x9032;&#x306B;&#x304A;&#x3044;&#x3066;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x679C;&#x305F;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30D7;&#x30E9;&#x30BA;&#x30DE;&#x8840;&#x5C0F;&#x677F;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x56E0;&#x5B50; (PAF) &#x306E;&#x52A0;&#x6C34;&#x5206;&#x89E3;&#x306E;&#x4E0D;&#x6D3B;&#x5316;&#x3092;&#x89E6;&#x5A92;&#x3057;&#x3001;PAF &#x30A2;&#x30BB;&#x30C1;&#x30EB;&#x30D2;&#x30C9;&#x30E9;&#x30FC;&#x30BC;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x3082;&#x77E5;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;PAF &#x306E;&#x9AD8;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x306F;&#x3001;&#x5598;&#x606F;&#x3001;&#x58CA;&#x6B7B;&#x6027;&#x8178;&#x708E;, &#x6557;&#x8840;&#x75C7;&#x306A;&#x3069;&#x306E;&#x708E;&#x75C7;&#x6027;&#x75BE;&#x60A3;&#x306E;&#x69D8;&#x3005; &#x306A;&#x95A2;&#x4E0E;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;Lp-PLA(2) &#x306F;&#x3001;&#x307E;&#x305F;&#x3069;&#x3053;&#x3067;&#x708E;&#x75C7;&#x3068;&#x52D5;&#x8108;&#x786C;&#x5316;&#x75C7;&#x306E;&#x767A;&#x5C55;&#x3092;&#x4FC3;&#x9032;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x30D7;&#x30ED;&#x708E;&#x75C7;&#x8102;&#x8CEA;&#x30E1;&#x30C7;&#x30A3;&#x30A8;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x3092;&#x751F;&#x6210;&#x3059;&#x308B;&#x9178;&#x5316;&#x30EA;&#x30F3;&#x8102;&#x8CEA;&#x52A0;&#x6C34;&#x5206;&#x89E3;&#x3059;&#x308B;&#x3072;&#x3068;&#x8840;&#x6F3F;&#x30EA;&#x30DD;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x3092;&#x95A2;&#x9023;&#x4ED8;&#x3051;&#x307E;&#x3059;&#x3002;Lp-PLA(2) &#x30D7;&#x30E9;&#x30BA;&#x30DE; &#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x306F;&#x6700;&#x8FD1;&#x8840;&#x7BA1;&#x708E;&#x75C7;&#x3001;&#x30A2;&#x30C6;&#x30ED;&#x30FC;&#x30E0;&#x6027;&#x52D5;&#x8108;&#x786C;&#x5316;&#x306E;&#x8106;&#x5F31;&#x6027;&#x3068;&#x5C06;&#x6765;&#x306E;&#x5FC3;&#x8840;&#x7BA1;&#x30A4;&#x30D9;&#x30F3;&#x30C8;&#x306E;&#x30D0;&#x30A4;&#x30AA; &#x30DE;&#x30FC;&#x30AB;&#x30FC;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x8B58;&#x5225;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x9175;&#x7D20;&#x306F;&#x3001;&#x3053;&#x3046;&#x3057;&#x3066;&#x708E;&#x75C7;&#x3068;&#x52D5;&#x8108;&#x786C;&#x5316;&#x5909;&#x8ABF;&#x6CBB;&#x7642;&#x85AC;&#x306E;&#x958B;&#x767A;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x8457;&#x540D;&#x306A;&#x30BF;&#x30FC;&#x30B2;&#x30C3;&#x30C8;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x9175;&#x7D20;&#x306E;&#xFF09; &#x6C7A;&#x5B9A;&#x69CB;&#x9020;&#x304C;&#x77E5;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x304C;, PAF &#x3068;&#x30EA;&#x30DD;&#x86CB;&#x767D;&#x306E;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3092;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x3059;&#x308B;&#x8102;&#x8CEA;&#x3068;&#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x306E;&#x9175;&#x7D20;&#x306E;&#x6A5F;&#x69CB;&#x306F;&#x4E0D;&#x660E;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C9; &#x30A2;&#x30DF;&#x30C9;&#x6C34;&#x7D20;&#x91CD;&#x6C34;&#x7D20;&#x4EA4;&#x63DB;&#x8CEA;&#x91CF;&#x5206;&#x6790; (DXMS) dimyristoylphosphatidylcholine (DMPC) &#x5C0F;&#x80DE;&#x3068; Lp-PLA(2) &#x306E;&#x95A2;&#x9023;&#x4ED8;&#x3051;&#x3092;&#x7279;&#x5FB4;&#x4ED8;&#x3051;&#x308B;&#x3057;&#x3001;&#x7279;&#x5B9A;&#x6B8B;&#x7559; 113-120 &#x9175;&#x7D20;&#x306E;&#x30B5;&#x30FC;&#x30D5;&#x30A7;&#x30A4;&#x30B9;&#x304C;&#x7834;&#x68C4;&#x758E;&#x6C34;&#x6027; &alpha;-&#x30D8;&#x30EA;&#x30C3;&#x30AF;&#x30B9;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x304C;&#x9AD8;&#x3044;&#x306E;&#x3044;&#x305A;&#x308C;&#x304B;&#x3067;&#x30EA;&#x30DD;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0; &#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C7;&#x30A3;&#x30F3;&#x30B0;&#x3092;&#x4EF2;&#x4ECB;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x767A;&#x898B;&#x3059;&#x308B;&#x3092;&#x63A1;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x30EA;&#x30DD;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x95A2;&#x9023;&#x30DB;&#x30B9;&#x30DB;&#x30EA;&#x30D1;&#x30FC;&#x30BC;&#x9B54;&#x65B9;&#x9663;&#x306F;&#x3001;&#x30B5;&#x30FC;&#x30D5;&#x30A7;&#x30A4;&#x30B9;&#x304C;&#x7834;&#x68C4;&#x758E;&#x6C34;&#x6027; &alpha;-&#x30D8;&#x30EA;&#x30C3;&#x30AF;&#x30B9;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x3066;&#x306E;&#x30EA;&#x30F3;&#x8102;&#x8CEA;&#x30D9;&#x30B7;&#x30AF;&#x30EB;&#x3068;&#x3084;&#x308A;&#x53D6;&#x308A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#xB2E8;&#xBC31; &#xC5F0;&#xACB0; &#xB41C; phospholipase A(2) (Lp-PLA(2)) &#xC778;&#xAC04;&#xC758; &#xC9C8;&#xBCD1;&#xC5D0; &#xC5B5;&#xC81C; &#xBC0F; &#xC5FC;&#xC99D;&#xC758; &#xD64D;&#xBCF4;&#xC5D0; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xD55C;&#xB2E4;. &#xADF8;&#xAC83;&#xACFC; &#xD50C;&#xB77C;&#xC988;&#xB9C8; &#xD608;&#xC18C;&#xD310; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xC778;&#xC790; (PAF)&#xC758; &#xAC00;&#xC218;&#xBD84;&#xD574; &#xBE44;&#xD65C;&#xC131;&#xD654; catalyzes PAF acetylhydrolase&#xB3C4; &#xC54C;&#xB824;&#xC838; &#xC788;&#xB2E4;. PAF&#xC758; &#xC0C1;&#xBD80;&#xB294; &#xCC9C;&#xC2DD;, necrotizing enterocolitis, &#xD328; &#xD608; &#xC99D; &#xB4F1; &#xC5FC;&#xC99D; &#xC131; &#xC9C8;&#xD658;&#xC758; &#xB2E4;&#xC591; &#xD55C;&#xC5D0; &#xC5F0;&#xB8E8; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. Lp-PLA(2) &#xB610;&#xD55C; &#xC9C0; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC5B4;&#xB514; &#xADF8;&#xAC83;&#xC740; &#xC5FC;&#xC99D;&#xACFC; &#xB3D9;&#xB9E5; &#xACBD;&#xD654; &#xC99D;&#xC758; &#xBC1C;&#xC804;&#xC744; &#xD64D;&#xBCF4;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xB294; &#xC9C0;&#xC9C8; &#xD504;&#xB85C;-&#xC5FC;&#xC99D; &#xC131; &#xC911;&#xC7AC;&#xC790;&#xB97C; &#xC0DD;&#xC0B0; &#xD558;&#xB294; &#xC0B0;&#xD654; &#xC778;&#xC9C0;&#xC9C8; hydrolyzes &#xC778;&#xAC04;&#xC758; &#xD50C;&#xB77C;&#xC988;&#xB9C8;&#xC5D0; &#xC5F0;&#xACB0; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. Lp-PLA(2) &#xD50C;&#xB77C;&#xC988;&#xB9C8; &#xC218;&#xC900; &#xCD5C;&#xADFC; &#xD608;&#xAD00; &#xC5FC;&#xC99D;, &#xB3D9;&#xB9E5; &#xACBD; &#xD654;&#xC131; &#xCDE8;&#xC57D;&#xC810; &#xBC0F; &#xBBF8;&#xB798; &#xC2EC;&#xC7A5; &#xD608;&#xAD00; &#xC0AC;&#xAC74;&#xC758; biomarker&#xB85C; &#xD655;&#xC778; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xD6A8;&#xC18C; &#xB530;&#xB77C;&#xC11C; &#xC5FC;&#xC99D;&#xACFC; &#xB3D9;&#xB9E5; &#xACBD;&#xD654; &#xC99D; &#xBCC0;&#xC870; &#xCE58;&#xB8CC; &#xD559; &#xBC1C;&#xC804;&#xC744; &#xC704;&#xD574; &#xB208;&#xC5D0; &#xB744;&#xB294; &#xB300;&#xC0C1; &#xC774;&#xB2E4;. &#xD6A8;&#xC18C;&#xC758; crystallographically &#xACB0;&#xC815;&#xB41C; &#xAD6C;&#xC870; &#xC54C;&#xB824;&#xC838; &#xC788;&#xC9C0;&#xB9CC; PAF &#xBC0F; &#xD568;&#xC218; &#xBCC0;&#xC870; &#xC9C0;&#xC9C8; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC758; &#xD6A8;&#xC18C;&#xC758; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;&#xC744; &#xC54C; &#xC218; &#xC788;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xD3A9; &#xD2F0; &#xB4DC; &#xC544; &#xBBF8;&#xB4DC; &#xC218;&#xC18C;-&#xC911;&#xC218;&#xC18C; &#xAD50;&#xD658; &#xC9C8;&#xB7C9; &#xBD84;&#xC11D; (DXMS) Lp-PLA(2) dimyristoylphosphatidylcholine (DMPC) &#xC18C;&#xD3EC; &#xC5F0;&#xAD00; &#xD2B9;&#xC131;&#xD654; &#xACE0; &#xD2B9;&#xC815; &#xC794;&#xB958;&#xBB3C; &#xD6A8;&#xC18C;&#xC758; &#xD45C;&#xBA74; &#xCC98;&#xB9AC; &#xC18C;&#xC218; &#xC131; &alpha;-&#xD3EC;&#xD568; &#xAC00;&#xB2A5;&#xC131; &#xC911;&#xC5D0;&#xC11C; 113-120 liposome &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xC911;&#xC7AC;&#xB97C; &#xACE0;&#xC6A9; &#xD588;&#xB2E4;.

&#xB2E8;&#xBC31; &#xC5F0;&#xACB0; &#xB41C; phospholipase A(2) &#xD45C;&#xBA74; &#xCC98;&#xB9AC; &#xC18C;&#xC218; &#xC131; &alpha;-&#xB098;&#xC120;&#xC758; &#xD1B5;&#xD574; &#xC778;&#xC9C0;&#xC9C8; vesicles&#xC640; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Fosfolipasa asociada a lipoprote&iacute;na de punto (Lp-PLA(2)) juega un papel importante en la inhibici&oacute;n y la promoci&oacute;n de la inflamaci&oacute;n en las enfermedades humanas. Se cataliza la inactivaci&oacute;n hidrol&iacute;tica de factor de activaci&oacute;n de plaquetas de plasma (PAF) y es tambi&eacute;n conocido como acetylhydrolase de la PAF. Altos niveles de PAF est&aacute;n implicados en una variedad de enfermedades inflamatorias como el asma, enterocolitis necrotizante y sepsis. Lp-PLA(2) tambi&eacute;n se asocia con las lipoprote&iacute;nas en plasma humano donde hidroliza fosfol&iacute;pidos oxidados para producir mediadores proinflamatorios l&iacute;pidos que pueden promover la inflamaci&oacute;n y el desarrollo de la aterosclerosis. Los niveles plasm&aacute;ticos de Lp-PLA(2) han sido identificados recientemente como un biomarcador de inflamaci&oacute;n vascular ateroscler&oacute;tica vulnerabilidad y futuros eventos cardiovasculares. As&iacute;, la enzima es un objetivo importante para el desarrollo de la inflamaci&oacute;n y aterosclerosis-modulaci&oacute;n terap&eacute;utica. Aunque se conoce la estructura determinada crystallographically de la enzima, mecanismo de la enzima de la interacci&oacute;n con PAF y los l&iacute;pidos de la modulaci&oacute;n de la funci&oacute;n de lipoprote&iacute;nas se desconoce. Hemos empleado p&eacute;ptido amida hidr&oacute;geno-deuterio intercambio espectrometr&iacute;a de masas (DXMS) para caracterizar la Asociaci&oacute;n de Lp-PLA(2) con dimyristoylphosphatidylcholine (DMPC) ves&iacute;culas y encontr&oacute; que residuos espec&iacute;ficos 113-120 en uno de los dispuesto superficie hidrof&oacute;bica &alpha;-h&eacute;lices de la enzima probables median vinculante de liposomas.

Fosfolipasa asociada a lipoprote&iacute;na punto interact&uacute;a con ves&iacute;culas de fosfol&iacute;pidos mediante un intencionado superficie hidrof&oacute;bica &alpha;-h&eacute;lice.

&#x78F7;&#x8102;&#x9176; A2 &#x9176;&#xFF1A; &#x7269;&#x7406;&#x7ED3;&#x6784;&#x3001; &#x751F;&#x7269;&#x5B66;&#x529F;&#x80FD;&#x3001; &#x75BE;&#x75C5;&#x610F;&#x8574;&#x3001; &#x5316;&#x5B66;&#x6291;&#x5236;&#x548C;&#x5E72;&#x9884;&#x6CBB;&#x7597;&#x3002;

Phospholipase A2 enzymes: physical structure, biological function, disease implication, chemical inhibition, and therapeutic intervention.

Enzymes de la Phospholipase A2 : structure physique, la fonction biologique, implication de la maladie, inhibition chimique et intervention th&eacute;rapeutique.

Phospholipase A2-Enzyme: Physikalische Struktur, biologische Funktion, Krankheit Implikation, chemische Hemmung und therapeutische Intervention.

Gli enzimi Phospholipase A2: struttura fisica, funzione biologica, implicazione di malattia, inibizione chimica e intervento terapeutico.

&#x30DB;&#x30B9;&#x30DB;&#x30EA;&#x30D1;&#x30FC;&#x30BC; A2 &#x9175;&#x7D20;: &#x7269;&#x7406;&#x69CB;&#x9020;&#x751F;&#x7269;&#x5B66;&#x7684;&#x6A5F;&#x80FD;, &#x75C5;&#x542B;&#x610F;&#x3001;&#x5316;&#x5B66;&#x7684;&#x963B;&#x5BB3;&#x3001;&#x6CBB;&#x7642;&#x7684;&#x4ECB;&#x5165;&#x3002;

Phospholipase a 2 &#xD6A8;&#xC18C;: &#xBB3C;&#xB9AC;&#xC801; &#xAD6C;&#xC870;, &#xC0DD;&#xBB3C; &#xD559;&#xC801; &#xAE30;&#xB2A5;, &#xC9C8;&#xBCD1; &#xC554;&#xC2DC;, &#xD654;&#xD559; &#xC5B5;&#xC81C; &#xBC0F; &#xCE58;&#xB8CC; &#xC801; &#xAC1C;&#xC785;.

Phospholipase A2 enzimas: intervenci&oacute;n terap&eacute;utica, funci&oacute;n biol&oacute;gica, implicaci&oacute;n de la enfermedad, inhibici&oacute;n qu&iacute;mica y estructura f&iacute;sica.

&#x6781;&#x957F;&#x94FE;&#x591A;&#x4E0D;&#x9971;&#x548C;&#x8102;&#x80AA;&#x9178; (VLC-&#x591A;&#x4E0D;&#x9971;&#x548C;&#x8102;&#x80AA;&#x9178;) &#x5305;&#x542B; glycerophospholipids &#x9AD8;&#x6D53;&#x7F29;&#x5728;&#x89C6;&#x7F51;&#x819C;&#xFF0C;&#x4E0D;&#x8FC7;&#x8BE6;&#x7EC6;&#x4ECB;&#x7ECD;&#x4E86;&#x5173;&#x4E8E;&#x5177;&#x4F53;&#x5408;&#x6210;&#x548C; glycerophospholipids &#x90FD;&#x7F3A;&#x4E4F;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x6781;&#x4E0D;&#x5BFB;&#x5E38;&#x7684;&#x89C6;&#x7F51;&#x819C;&#x7684;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;ELOVL4 &#x5DF2;&#x88AB;&#x786E;&#x5B9A;&#x4E3A;&#x53C2;&#x4E0E;&#x7684; VLC-&#x591A;&#x4E0D;&#x9971;&#x548C;&#x8102;&#x80AA;&#x9178;&#x5408;&#x6210;&#x8102;&#x80AA;&#x9178; elongase &#x86CB;&#x767D;&#x3002;&#x5728; ELOVL4 &#x4E2D;&#x7684;&#x7A81;&#x53D8;&#x4E5F;&#x5377;&#x5165;&#x4E86; Stargardt &#x75C5; (STGD3)&#xFF0C;&#x4E00;&#x79CD;&#x7C7B;&#x578B;&#x7684;&#x5C11;&#x5E74;&#x9EC4;&#x6591;&#x53D8;&#x6027;&#x7684;&#x5E38;&#x67D3;&#x8272;&#x4F53;&#x663E;&#x6027;&#x9057;&#x4F20;&#x7684;&#x4E3B;&#x8981;&#x5F62;&#x5F0F;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x5DF2;&#x751F;&#x6210;&#x611F;&#x5149;&#x5668;&#x7279;&#x5B9A;&#x6761;&#x4EF6;&#x57FA;&#x56E0;&#x6572;&#x9664;&#x5C0F;&#x9F20;&#x548C;&#x4F7F;&#x7528;&#x9AD8;&#x6027;&#x80FD;&#x6DB2;&#x76F8;&#x8272;&#x8C31;-&#x8D28;&#x8C31; (&#x9AD8;&#x6548;&#x6DB2;&#x76F8;&#x8272;&#x8C31;-&#x8D28;&#x8C31;&#x6CD5;&#xFF09; &#x5BA1;&#x67E5;&#x548C;&#x5206;&#x6790;&#x8102;&#x80AA;&#x9178;&#x7EC4;&#x6210;&#x7684;&#x89C6;&#x7F51;&#x819C;&#x819C; glycerophosphocholine (PC) &#x548C; glycerophosphoethanolamine (PE) &#x7684;&#x7269;&#x79CD;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x8FD8;&#x7528;&#x514D;&#x75AB;&#x8367;&#x5149;&#x67D3;&#x8272;&#x548C;&#x7EC4;&#x7EC7;&#x5B66;&#xFF0C;&#x52A0;&#x4E0A;&#x7535;&#x751F;&#x7406;&#x6570;&#x636E;&#xFF0C;&#x6765;&#x8BC4;&#x4F30;&#x89C6;&#x7F51;&#x819C;&#x5F62;&#x6001;&#x5B66;&#x548C;&#x89C6;&#x89C9;&#x53CD;&#x5E94;&#x3002;&#x6709;&#x6761;&#x4EF6;&#x7684;&#x6572;&#x9664;&#x5C0F;&#x9F20;&#x7684;&#x89C6;&#x7F51;&#x819C; glycerophospholipids &#x542B;&#x591A;&#x4E0D;&#x9971;&#x548C; VLC-&#x8102;&#x80AA;&#x9178;&#xFF0C;&#x7279;&#x522B;&#x662F;&#x8F7D;&#x4E8E; Pc&#xFF0C;&#x7275;&#x8FDE;&#x5728;&#x5176;&#x5408;&#x6210;&#x7684; Elovl4 &#x4F5C;&#x7528;&#x7684; sn-1 &#x4F4D;&#x7F6E;&#x663E;&#x8457;&#x4E0B;&#x964D;&#x3002;&#x6709;&#x6761;&#x4EF6;&#x7684;&#x57FA;&#x56E0;&#x6572;&#x9664;&#x5C0F;&#x9F20;&#x4E5F;&#x53D1;&#x73B0;&#x6709;&#x5F02;&#x5E38;&#x79EF;&#x7D2F;&#x7684;&#x98DE;&#x6CAB;&#x8102;&#x8D28;&#x548C;&#x8102;&#x8910;&#x7D20;&#x6837;&#x9897;&#x7C92;&#xFF0C;&#x540C;&#x65F6;&#x8868;&#x660E;&#x611F;&#x5149;&#x5668;&#x7279;&#x5B9A;&#x5F02;&#x5E38;&#x7684;&#x89C6;&#x89C9;&#x53CD;&#x5E94;&#xFF0C;&#x6307;&#x793A;&#x6B63;&#x786E;&#x7684;&#x6746;&#x6216;&#x9525;&#x611F;&#x5149;&#x5668;&#x51FD;&#x6570; Elovl4 &#x7684;&#x5173;&#x952E;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;&#x5728;&#x4E00;&#x8D77;&#xFF0C;&#x8FD9;&#x9879;&#x7814;&#x7A76;&#x8868;&#x660E; ELOVL4 &#x4E2D;&#x7684; VLC-&#x591A;&#x4E0D;&#x9971;&#x548C;&#x8102;&#x80AA;&#x9178;&#x5408;&#x6210;&#x4E0E;&#x89C6;&#x7F51;&#x819C;&#x529F;&#x80FD;&#x7684;&#x91CD;&#x8981;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;

ELOVL4 &#x5728;&#x5F88;&#x957F;&#x7684;&#x94FE;&#x8102;&#x80AA;&#x9178;&#x5408;&#x6210;&#x4E0E;&#x89C6;&#x7F51;&#x819C;&#x529F;&#x80FD;&#x4E2D;&#x7684;&#x91CD;&#x8981;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;

Very long chain polyunsaturated fatty acid (VLC-PUFA) containing glycerophospholipids are highly enriched in the retina, however details regarding the specific synthesis and function of these highly unusual retinal glycerophospholipids are lacking. ELOVL4 has been identified as a fatty acid elongase protein involved in the synthesis of VLC-PUFAs. Mutations in ELOVL4 have also been implicated in an autosomal dominant form of Stargardt disease (STGD3), a type of juvenile macular degeneration. We have generated photoreceptor specific conditional knockout mice and have used high performance liquid chromatography-mass spectrometry (HPLC-MS) to examine and analyze the fatty acid composition of retinal membrane glycerophosphocholine (PC) and glycerophosphoethanolamine (PE) species. We also used immunofluorescent staining and histology, coupled with electrophysiological data, to assess retinal morphology and visual response. The conditional knockout mice showed a significant decrease in retinal glycerophospholipids containing VLC-PUFAs, specifically contained in the sn-1 position of PCs, implicating the role of Elovl4 in their synthesis. Conditional knockout mice were also found to have abnormal accumulation of lipid droplets and lipofuscin-like granules, while demonstrating photoreceptor-specific abnormalities in visual response, indicating the critical role of Elovl4 for proper rod or cone photoreceptor function. Together, this study demonstrates the essential role of ELOVL4 in VLC-PUFA synthesis and retinal function.

Essential role of ELOVL4 in very long chain fatty acid synthesis and retinal function.

Toutefois, &agrave; tr&egrave;s longue cha&icirc;ne acides gras polyinsatur&eacute;s (AGPI-VLC) contenant des glyc&eacute;rophospholipides sont hautement enrichis dans la r&eacute;tine, mentions relatives &agrave; la synth&egrave;se sp&eacute;cifique et la fonction de ces tr&egrave;s inhabituel r&eacute;tinienne glyc&eacute;rophospholipides sont insuffisantes. ELOVL4 a &eacute;t&eacute; identifi&eacute; comme un acide gras &eacute;longase prot&eacute;ines impliqu&eacute;es dans la synth&egrave;se de VLC-AGPI. ELOVL4 des mutations ont &eacute;galement &eacute;t&eacute; impliqu&eacute;es dans une forme autosomique dominante de la maladie de Stargardt (STGD3), un type de d&eacute;g&eacute;n&eacute;rescence maculaire juv&eacute;nile. Nous ont g&eacute;n&eacute;r&eacute; des souris knock-out conditionnel sp&eacute;cifiques photor&eacute;cepteur et ont utilis&eacute; la spectrom&eacute;trie de masse par chromatographie liquide de haute performance (HPLC-MS) d&#39;examiner et d&#39;analyser la composition en acides gras de la membrane r&eacute;tinienne glyc&eacute;rophosphocholine (PC) et des esp&egrave;ces glyc&eacute;rophospho&eacute;thanolamine (PE). Nous avons &eacute;galement utilis&eacute; la coloration par immunofluorescence et l&#39;histologie, coupl&eacute;e &agrave; des donn&eacute;es &eacute;lectrophysiologiques, afin d&#39;&eacute;valuer la morphologie r&eacute;tinienne et r&eacute;ponse visuelle. Les souris knock-out conditionnel a montr&eacute; une diminution significative des glyc&eacute;rophospholipides r&eacute;tiniennes contenant VLC-AGPI, sp&eacute;cifiquement contenues en position sn-1 PCs, mettant en cause le r&ocirc;le de Elovl4 dans leur synth&egrave;se. Souris knock-out conditionnel se retrouvent &eacute;galement d&#39;avoir une accumulation anormale de gouttelettes lipidiques et des granules de lipofuscine ressemblant, tout en faisant preuve de photor&eacute;cepteur sp&eacute;cifique des anomalies dans la r&eacute;ponse visuelle, indiquant le r&ocirc;le essentiel des Elovl4 pour le bon fonctionnement de photor&eacute;cepteur de tige ou de c&ocirc;ne. Ensemble, cette &eacute;tude d&eacute;montre le r&ocirc;le essentiel de ELOVL4 dans la synth&egrave;se de VLC-acides gras polyinsatur&eacute;s et de la fonction r&eacute;tinienne.

R&ocirc;le essentiel de ELOVL4 en fonction de synth&egrave;se et de la r&eacute;tine acides gras &agrave; tr&egrave;s longue cha&icirc;ne.

Sehr langkettigen mehrfach unges&auml;ttigten Fetts&auml;uren (VLC-PUFA) enthaltenden Glycerophospholipids in der Retina, hochangereichertes sind jedoch details bez&uuml;glich der spezifischen Synthese und Funktion von diesen h&ouml;chst ungew&ouml;hnlichen Retinal, den Glycerophospholipids fehlen. ELOVL4 wurde als Fetts&auml;ure Elongase Protein beteiligt bei der Synthese von VLC-PUFAs identifiziert. Mutationen im ELOVL4 haben auch in einem autosomal-dominante Form der Stargardt-Krankheit (STGD3), eine Art von juvenile Makuladegeneration verwickelt. Wir haben Photorezeptor-spezifische bedingte k.o.-M&auml;use generiert und haben hohe Leistung fl&uuml;ssige Chromatographie-Massenspektrometrie (HPLC-MS) zu pr&uuml;fen und analysieren die Fetts&auml;urezusammensetzung retinale Membran-GLYCEROPHOSPHOCHOLIN (PC) und Glycerophosphoethanolamine (PE) Arten verwendet. Wir haben auch Immunfluoreszenz-F&auml;rbung und Histologie, gepaart mit elektrophysiologische Daten, um retinale Morphologie und visuelle Antwort zu bewerten. Die bedingte Knock-out-M&auml;use zeigte einen betr&auml;chtlicher R&uuml;ckgang der Netzhaut Glycerophospholipids, enth&auml;lt VLC-PUFAs, speziell in der sn-1-Position des PCs, die Rolle der Elovl4 in deren Synthese Nicht&uuml;bernahme enthalten. Bedingte Knock-out-M&auml;use wurden auch gefunden, die abnorme Ansammlung von Lipid-Tr&ouml;pfchen und Lipofuscin-wie Granulate, w&auml;hrend Photorezeptor-spezifische Anomalien, die kritische Rolle des Elovl4 f&uuml;r Stab- oder Kegel Photorezeptor Funktion als visuelle Reaktion zeigen. Zusammen, zeigt diese Studie die wesentliche Rolle der ELOVL4 in VLC-PUFA-Synthese und retinale Funktion.

Wesentliche Rolle der ELOVL4 in sehr langkettigen Fetts&auml;ure-Synthese und Retinal-Funktion.

Acidi grassi polinsaturi catena molto lunga (VLC-PUFA) contenente glycerophospholipids sono altamente arricchito nella retina, tuttavia i dettagli per quanto riguarda la sintesi specifica e la funzione di questi altamente insolito retinica glycerophospholipids sono carenti. ELOVL4 &egrave; stato identificato come un&#39;acido grasso elongase proteina coinvolta nella sintesi di VLC-PUFA. Mutazioni in ELOVL4 inoltre sono state implicate in una forma autosomica dominante della malattia di Stargardt (STGD3), un tipo di degenerazione macula giovanile. Ci hanno generato topi knockout condizionale specifici fotorecettori e hanno usato ad alte prestazioni liquido cromatografia spettrometria di massa (HPLC-MS) per esaminare e analizzare la composizione in acidi grassi di membrana retinica glicerofosfocolina (PC) e glycerophosphoethanolamine (PE) specie. Abbiamo usato anche colorazione di immunofluorescenza e istologia, accoppiato con dati elettrofisiologici, per valutare la morfologia retinica e risposta visiva. I topi knockout condizionale ha mostrato una diminuzione significativa nella retina glycerophospholipids contenente VLC-PUFA, specificatamente contenute in posizione sn-1 del PC, implicando il ruolo di Elovl4 nella loro sintesi. Topi knockout condizionale inoltre sono stati trovati ad per avere accumulo anormale di goccioline lipidiche e granuli di lipofuscina-come, pur dimostrando fotorecettore specifiche anomalie nella risposta visiva, che indica il ruolo critico di Elovl4 per il corretto funzionamento di fotorecettori asta o cono. Insieme, questo studio dimostra il ruolo essenziale della ELOVL4 in VLC-PUFA sintesi e funzione retinica.

Ruolo essenziale di ELOVL4 in funzione di sintesi e della retina degli acidi grassi catena molto lunga.

&#x975E;&#x5E38;&#x306B;&#x9577;&#x9396;&#x591A;&#x4FA1;&#x4E0D;&#x98FD;&#x548C;&#x8102;&#x80AA;&#x9178;&#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x30B0;&#x30EA;&#x30BB;&#x30ED;&#x30EA;&#x30F3;&#x9AD8;&#x7DB2;&#x819C;&#x3067;&#x6FC3;&#x7E2E;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x9178; &#xFF08;VLC PUFA&#xFF09; &#x305F;&#x3060;&#x3057;&#x7279;&#x5B9A;&#x306E;&#x5408;&#x6210;&#x3068;&#x30B0;&#x30EA;&#x30BB;&#x30ED;&#x30EA;&#x30F3;&#x6B20;&#x3051;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x975E;&#x5E38;&#x306B;&#x73CD;&#x3057;&#x3044;&#x7DB2;&#x819C;&#x306E;&#x6A5F;&#x80FD;&#x306B;&#x3064;&#x3044;&#x3066;&#x8A73;&#x3057;&#x304F;&#x8AAC;&#x660E;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;ELOVL4 &#x306F;&#x3001;VLC Pufa &#x306E;&#x5408;&#x6210;&#x306B;&#x95A2;&#x308F;&#x308B;&#x8102;&#x80AA;&#x9178; elongase &#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x540C;&#x5B9A;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;ELOVL4 &#x306E;&#x7A81;&#x7136;&#x5909;&#x7570;&#x306F;&#x307E;&#x305F;&#x3001;&#x30B7;&#x30E5;&#x30BF;&#x30EB;&#x30AC;&#x30EB;&#x30C8;&#x75C5; &#xFF08;STGD3&#xFF09;&#x3001;&#x82E5;&#x5E74;&#x6027;&#x9EC4;&#x6591;&#x5909;&#x6027;&#x75C7;&#x306E;&#x7A2E;&#x985E;&#x306E;&#x5E38;&#x67D3;&#x8272;&#x4F53;&#x512A;&#x6027;&#x306E;&#x652F;&#x914D;&#x7684;&#x306A;&#x5F62;&#x5F0F;&#x3067;&#x95A2;&#x4E0E;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x8996;&#x7D30;&#x80DE;&#x7279;&#x5B9A;&#x30B3;&#x30F3;&#x30C7;&#x30A3;&#x30B7;&#x30E7;&#x30CA;&#x30EB;&#x30CE;&#x30C3;&#x30AF; &#x30A2;&#x30A6;&#x30C8; &#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x3092;&#x751F;&#x6210;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3057;&#x3001;&#x9AD8;&#x6027;&#x80FD;&#x6DB2;&#x4F53;&#x30AF;&#x30ED;&#x30DE;&#x30C8;&#x30B0;&#x30E9;&#x30D5;&#x30A3;&#x30FC;&#x8CEA;&#x91CF;&#x5206;&#x6790;&#x6CD5; (HPLC MS) &#x3092;&#x8ABF;&#x3079;&#x308B;&#x3057;&#x3001;&#x7DB2;&#x819C;&#x819C; glycerophosphocholine (PC) &#x3068; glycerophosphoethanolamine (PE) &#x7A2E;&#x306E;&#x8102;&#x80AA;&#x9178;&#x7D44;&#x6210;&#x3092;&#x5206;&#x6790;&#x3059;&#x308B;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005; &#x3082;&#x3001;&#x7DB2;&#x819C;&#x7D30;&#x80DE;&#x5F62;&#x614B;&#x3068;&#x8996;&#x899A;&#x53CD;&#x5FDC;&#x3092;&#x8A55;&#x4FA1;&#x3059;&#x308B;&#x514D;&#x75AB;&#x86CD;&#x5149;&#x67D3;&#x8272;&#x3068;&#x96FB;&#x6C17;&#x751F;&#x7406;&#x5B66;&#x7684;&#x30C7;&#x30FC;&#x30BF;&#x3068;&#x7D50;&#x5408;&#x7D44;&#x7E54;&#x5B66;&#x306B;&#x4F7F;&#x7528;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30B3;&#x30F3;&#x30C7;&#x30A3;&#x30B7;&#x30E7;&#x30CA;&#x30EB;&#x30CE;&#x30C3;&#x30AF; &#x30A2;&#x30A6;&#x30C8; &#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x306F;&#x5F7C;&#x3089;&#x306E;&#x5408;&#x6210;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B; Elovl4 &#x306E;&#x5F79;&#x5272;&#x3092; implicating VLC-Pufa &#x5177;&#x4F53;&#x7684;&#x306B;&#x30D1;&#x30BD;&#x30B3;&#x30F3;&#x306E; sn 1 &#x4F4D;&#x7F6E;&#x306B;&#x542B;&#x307E;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x7DB2;&#x819C;&#x30B0;&#x30EA;&#x30BB;&#x30ED;&#x30EA;&#x30F3;&#x306E;&#x5927;&#x5E45;&#x306A;&#x6E1B;&#x5C11;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x30B3;&#x30F3;&#x30C7;&#x30A3;&#x30B7;&#x30E7;&#x30CA;&#x30EB;&#x30CE;&#x30C3;&#x30AF; &#x30A2;&#x30A6;&#x30C8; &#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x306F;&#x3001;&#x307E;&#x305F; Elovl4 &#x9069;&#x5207;&#x306A;&#x30ED;&#x30C3;&#x30C9;&#x3084;&#x30B3;&#x30FC;&#x30F3;&#x5149;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x6A5F;&#x80FD;&#x306E;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x793A;&#x3059;&#x3001;&#x8996;&#x899A;&#x5FDC;&#x7B54;&#x306E;&#x8996;&#x7D30;&#x80DE;&#x56FA;&#x6709;&#x306E;&#x7570;&#x5E38;&#x3092;&#x793A;&#x3059;&#x306A;&#x304C;&#x3089;&#x7570;&#x5E38;&#x84C4;&#x7A4D;&#x8102;&#x80AA;&#x6EF4;&#x3068;&#x30EA;&#x30DD;&#x30D5;&#x30B9;&#x30C1;&#x30F3;&#x69D8;&#x9846;&#x7C92;&#x304C;&#x767A;&#x898B;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x4E00;&#x7DD2;&#x306B;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x7814;&#x7A76;&#x306F; ELOVL4 VLC &#x591A;&#x4FA1;&#x4E0D;&#x98FD;&#x548C;&#x8102;&#x80AA;&#x9178;&#x5408;&#x6210;&#x3068;&#x7DB2;&#x819C;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3067;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

ELOVL4 &#x975E;&#x5E38;&#x306B;&#x9577;&#x9396;&#x8102;&#x80AA;&#x9178;&#x5408;&#x6210;&#x3068;&#x7DB2;&#x819C;&#x95A2;&#x6570;&#x3067;&#x4E0D;&#x53EF;&#x6B20;&#x306E;&#x5F79;&#x5272;&#x3067;&#x306F;&#x3002;

&#xADF8;&#xB7EC;&#xB098; &#xB9E4;&#xC6B0; &#xAE34; &#xC0AC;&#xC2AC; &#xBD88;&#xD3EC;&#xD654; &#xC9C0;&#xBC29;&#xC0B0; (PUFA VLC) &#xD3EC;&#xD568; &#xB41C; glycerophospholipids&#xB294; &#xB9E4;&#xC6B0;&#xB294; &#xB9DD;&#xB9C9;&#xC5D0; &#xD48D;&#xBD80; &#xD558; &#xAC8C; &#xD2B9;&#xC815; &#xD569;&#xC131; &#xBC0F; glycerophospholipids &#xBD80;&#xC871;&#xC774; &#xB9E4;&#xC6B0; &#xD2B9;&#xC774; &#xD55C; &#xB9DD;&#xB9C9;&#xC758; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC5D0; &#xB300;&#xD574; &#xC790;&#xC138;&#xD788; &#xC124;&#xBA85; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. ELOVL4 &#xC9C0;&#xBC29; &#xC0B0; &#xC131; elongase &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; VLC Pufas&#xC758; &#xD569;&#xC131;&#xC5D0; &#xAD00;&#xC5EC;&#xC73C;&#xB85C; &#xD655;&#xC778; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. Elovl4&#xC758; &#xBCC0;&#xC774; Stargardt &#xC9C8;&#xBCD1; (STGD3), &#xCCAD;&#xC18C;&#xB144; &#xD669; &#xBC18; &#xBCC0;&#xC131;&#xC758; &#xC885;&#xB958;&#xC758; &#xC0C1; &#xC5FC;&#xC0C9;&#xCCB4; &#xC9C0;&#xBC30;&#xC801;&#xC778; &#xD615;&#xD0DC;&#xB85C; &#xC5F0;&#xB8E8; &#xB418;&#xC5B4;. &#xC6B0;&#xB9AC; &#xD3EC;&#xD1A0; &#xB9AC;&#xC149;&#xD130; &#xD2B9;&#xC815; &#xC870;&#xAC74;&#xBD80; &#xB179;&#xC544;&#xC6C3; &#xC950;&#xB97C; &#xC0DD;&#xC131; &#xD558; &#xACE0; &#xAC80;&#xC0AC; &#xD558; &#xACE0; &#xB9DD;&#xB9C9; &#xB9C9; glycerophosphocholine (PC) &#xBC0F; glycerophosphoethanolamine (PE) &#xC885;&#xC758; &#xC9C0;&#xBC29;&#xC0B0; &#xC870;&#xC131; &#xBD84;&#xC11D;&#xC744; &#xACE0;&#xC131;&#xB2A5; &#xC561;&#xCCB4; &#xD06C;&#xB85C;&#xB9C8;&#xD1A0;&#xADF8;&#xB798;&#xD53C;-&#xC9C8;&#xB7C9; &#xBD84;&#xC11D; (HPLC MS)&#xB97C; &#xC774;&#xC6A9; &#xD588;&#xB2E4;. Immunofluorescent &#xC5BC;&#xB8E9; &#xBC0F; &#xC870;&#xC9C1;&#xD559;, electrophysiological &#xB370;&#xC774;&#xD130;&#xC640; &#xACB0;&#xD569; &#xD558; &#xC5EC; &#xB9DD;&#xB9C9; &#xD615;&#xD0DC;&#xD559; &#xBC0F; &#xC2DC;&#xAC01;&#xC801; &#xBC18;&#xC751; &#xD3C9;&#xAC00;&#xC5D0; &#xC0AC;&#xC6A9;. &#xC870;&#xAC74;&#xBD80; &#xB179;&#xC544;&#xC6C3; &#xC950; VLC-PUFAs, &#xD2B9;&#xD788; Pc, elovl4&#xC758; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC758; &#xD569;&#xC131;&#xC5D0; &#xC5F0;&#xB8E8;&#xC758; sn-1 &#xC704;&#xCE58;&#xC5D0; &#xD3EC;&#xD568; &#xB41C; &#xD3EC;&#xD568; &#xB41C; &#xB9DD;&#xB9C9; glycerophospholipids&#xC5D0; &#xD070; &#xAC10;&#xC18C;&#xB97C; &#xBCF4;&#xC600;&#xB2E4;. &#xC870;&#xAC74;&#xBD80; &#xB179;&#xC544;&#xC6C3; &#xC950;&#xB3C4;&#xAC00;&#xC9C0;&#xACE0; &#xC801;&#xC808; &#xD55C; &#xB85C;&#xB4DC; &#xB610;&#xB294; &#xCF58; &#xD3EC;&#xD1A0; &#xB9AC;&#xC149;&#xD130; &#xD568;&#xC218;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; elovl4&#xC758; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0B4;&#xB294; &#xC2DC;&#xAC01;&#xC801; &#xC751;&#xB2F5;&#xC5D0; &#xC788;&#xB294; &#xD3EC;&#xD1A0; &#xB9AC;&#xC149;&#xD130; &#xD2B9;&#xC815; &#xC774;&#xC0C1; &#xC2DC;&#xC5F0; &#xC9C0;&#xC9C8; &#xBC29;&#xC6B8;&#xACFC; lipofuscin &#xAC19;&#xC740; &#xB9BD;&#xC758; &#xBE44;&#xC815;&#xC0C1;&#xC801;&#xC778; &#xCD95;&#xC801;&#xC744; &#xBC1C;&#xACAC; &#xD588;&#xB2E4;. &#xD568;&#xAED8;,&#xC774; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xB294; VLC PUFA &#xD569;&#xC131; &#xBC0F; &#xB9DD;&#xB9C9; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC5D0; &#xD544;&#xC218;&#xC801;&#xC778; &#xC5ED;&#xD560; ELOVL4 &#xBCF4;&#xC5EC; &#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Elovl4&#xC758; &#xB9E4;&#xC6B0; &#xAE34; &#xC0AC;&#xC2AC; &#xC9C0;&#xBC29;&#xC0B0; &#xC885;&#xD569; &#xBC0F; &#xB9DD;&#xB9C9; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC5D0; &#xD544;&#xC218;&#xC801;&#xC778; &#xC5ED;&#xD560;.

&Aacute;cido graso poliinsaturado cadena muy larga (VLC-PUFA) que contienen glicerofosfol&iacute;pidos son altamente enriquecidos en la retina, sin embargo detalles sobre la s&iacute;ntesis espec&iacute;fica y funci&oacute;n de estos altamente inusual retina carecen de glicerofosfol&iacute;pidos. ELOVL4 se ha identificado como un &aacute;cido graso elongase prote&iacute;nas implicadas en la s&iacute;ntesis de VLC-PUFAs. Las mutaciones en ELOVL4 tambi&eacute;n han sido implicadas en una forma autos&oacute;mica dominante de la enfermedad de Stargardt (STGD3), un tipo de degeneraci&oacute;n macular juvenil. Han generado ratones knockout condicional espec&iacute;fico de fotorreceptor y ha utilizado la espectrometr&iacute;a de masa l&iacute;quida de alto rendimiento (HPLC-MS) para examinar y analizar la composici&oacute;n de &aacute;cidos grasos de membrana retiniana glycerophosphocholine (PC) y especies de glycerophosphoethanolamine (PE). Tambi&eacute;n utilizamos tinci&oacute;n inmunofluorescente e histolog&iacute;a, juntada con los datos electrofisiol&oacute;gicos, para evaluar la morfolog&iacute;a retiniana y respuesta visual. Los ratones knockout condicional mostraron una disminuci&oacute;n significativa en glicerofosfol&iacute;pidos retiniana con VLC-PUFAs, espec&iacute;ficamente contenidas en la posici&oacute;n sn-1 de PC, implicando el papel de Elovl4 en su s&iacute;ntesis. Ratones knockout condicional tambi&eacute;n fueron encontrados para tener acumulaci&oacute;n anormal de gotas de l&iacute;pidos y gr&aacute;nulos de lipofuscina-como, al mismo tiempo demostrar anormalidades espec&iacute;ficas del fotorreceptor en respuesta visual, indicando el papel cr&iacute;tico de Elovl4 para que funcione correctamente varilla o cono fotorreceptores. Juntos, este estudio demuestra el papel fundamental de ELOVL4 en la s&iacute;ntesis de VLC-&aacute;cidos grasos Poliinsaturados y la funci&oacute;n retiniana.

Article	Year
Calcium binding rigidifies the C2 domain and the intradomain interaction of GIVA phospholipase A2 as revealed by hydrogen/deuterium exchange mass spectrometry. The Journal of biological chemistry\| PubMed ID: 18211893	2008
A phospholipid substrate molecule residing in the membrane surface mediates opening of the lid region in group IVA cytosolic phospholipase A2. The Journal of biological chemistry\| PubMed ID: 18753135	2008
Analysis of conformational changes during activation of protein kinase Pak2 by amide hydrogen/deuterium exchange. The Journal of biological chemistry\| PubMed ID: 18984590	2008
2-Oxoamide inhibitors of phospholipase A2 activity and cellular arachidonate release based on dipeptides and pseudodipeptides. Bioorganic & medicinal chemistry\| PubMed ID: 19443224	2009
Localizing the membrane binding region of Group VIA Ca2+-independent phospholipase A2 using peptide amide hydrogen/deuterium exchange mass spectrometry. The Journal of biological chemistry\| PubMed ID: 19556238	2009
Reciprocally coupled residues crucial for protein kinase Pak2 activity calculated by statistical coupling analysis. PloS one\| PubMed ID: 20209159	2010
Potent and selective fluoroketone inhibitors of group VIA calcium-independent phospholipase A2. Journal of medicinal chemistry\| PubMed ID: 20369880	2010
Lipoprotein-associated phospholipase A(2) interacts with phospholipid vesicles via a surface-disposed hydrophobic Î±-helix. Biochemistry\| PubMed ID: 21553808	2011
Phospholipase A2 enzymes: physical structure, biological function, disease implication, chemical inhibition, and therapeutic intervention. Chemical reviews\| PubMed ID: 21910409	2011
Essential role of ELOVL4 in very long chain fatty acid synthesis and retinal function. The Journal of biological chemistry\| PubMed ID: 22199362	2011

Yuan-Hao Hsu

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