amide-hydrogendeuterium-exchange-maldi-tof-mass-spectrometry-analysis

Amide Hydrogen/Deuterium Exchange &amp; MALDI-TOF Mass Spectrometry Analysis of Pak2 Activation

Amide hydrogen/deuterium exchange (H/D exchange) coupled with mass spectrometry has been widely used to analyze the interface of protein-protein ...

University of California, Riverside 

&#x7D44;&#x63DB;&#x3048;&#x30D2;&#x30C8;PRL&#x306E;Ser-177&#x4E0A;&#x3067;&#x3001;&#x540C;&#x7B49;&#x306E;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x4E0A;&#x3067;&#x30E9;&#x30C3;&#x30C8;&#x4E0B;&#x5782;&#x4F53;&#x5206;&#x6CCC;&#x9846;&#x7C92;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;p21&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C6;&#x30A4;&#x30F3;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x3B3;-PAK&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x30D7;&#x30ED;&#x30E9;&#x30AF;&#x30C1;&#x30F3;&#xFF08;PRL&#xFF09;&#x3001;&#x306E;Ser-179&#x3001;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x306F;&#x4EBA;&#x9593;&#x306E;PRL&#x5909;&#x7570;S179D&#x3068;&#x30EA;&#x30F3;&#x306E;&#x30DE;&#x30C3;&#x30D7;&#x306E;&#x6BD4;&#x8F03;&#x306B;&#x3088;&#x308A;&#x793A;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30D2;&#x30B9;&#x30C8;&#x30F3;H4&#x306E;&#x30B2;&#x30EB;&#x5185;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x3057;&#x3001;&#x514D;&#x75AB;&#x30D6;&#x30ED;&#x30C3;&#x30C8;&#x6CD5;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x8B58;&#x5225;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x3B3;-PAK&#x306F;&#x3001;&#x30E9;&#x30C3;&#x30C8;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x30A6;&#x30B7;&#x9846;&#x7C92;&#x4E2D;&#x306B;&#x5B58;&#x5728;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3057;&#x305F;&#x304C;&#x3063;&#x3066;&#x3001;&#x9846;&#x7C92;&#x4E2D;&#x306E;&#x3B3;-PAK&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;PRL&#x306E;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x304C;&#x5909;&#x66F4;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x306A;&#x3044;PRL&#x306E;&#x6210;&#x9577;&#x4FC3;&#x9032;&#x6D3B;&#x6027;&#x3092;&#x62EE;&#x6297;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x793A;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;PRL&#x5206;&#x5B50;&#x3092;&#x751F;&#x6210;&#x3057;&#x3001;&#x7D30;&#x80DE;&#x5897;&#x6B96;&#x306E;&#x8A98;&#x5C0E;&#x3068;&#x7DAD;&#x6301;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x3B3;-PAK&#x306E;&#x8B58;&#x5225;&#x5F79;&#x5272;&#x3068;&#x4E00;&#x81F4;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x4E0B;&#x5782;&#x4F53;&#x5206;&#x6CCC;&#x9846;&#x7C92;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;P21-&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C6;&#x30A4;&#x30F3;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x3B3;-PAK&#x306F;&#x3001;&#x30D7;&#x30ED;&#x30E9;&#x30AF;&#x30C1;&#x30F3;&#x3092;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x3059;&#x308B;

chinasi di proteina P21-attivato gamma-PAK tirosine prolattina (PRL) in granuli secretori pituitaria ratto su Ser-177 e sul sito equivalente, Ser-179, in PRL umana ricombinante. Ci&ograve; &egrave; dimostrato dal confronto di mappe fosfopeptide con il mutante umano PRL S179D. gamma-PAK &egrave; presente nei granuli di ratto e bovini come identificato da in-gel fosforilazione dell&#39;istone H4 e di immunoblotting. Cos&igrave;, la fosforilazione di PRL di gamma-PAK in granuli produce la molecola PRL che ha dimostrata di antagonizzare l&#39;attivit&agrave; growth-promoting di PRL non modificato ed &egrave; coerente con il ruolo identificato di gamma-PAK l&#39;induzione e la manutenzione di cytostasis.

P21-attivato proteina chinasi gamma-PAK in granuli secretori dell&#39;ipofisi tirosine prolattina.

p21 &#x6D3B;&#x5316;&#x86CB;&#x767D;&#x6FC0;&#x9176; &gamma;-&#x767D;&#x6C99; phosphorylates &#x50AC;&#x4E73;&#x7D20; (PRL) &#x5728;&#x5927;&#x9F20;&#x5782;&#x4F53;&#x5206;&#x6CCC;&#x9897;&#x7C92; Ser 177 &#x548C;&#x7B49;&#x6548;&#x7684;&#x7AD9;&#x70B9;&#xFF0C;Ser 179&#xFF0C;&#x5728;&#x91CD;&#x7EC4;&#x4EBA;&#x7C7B; PRL&#x3002;&#x6BD4;&#x8F83;&#x4E0E;&#x4EBA; PRL &#x7A81;&#x53D8;&#x4F53; S179D &#x7684;&#x78F7;&#x9178;&#x80BD;&#x5730;&#x56FE;&#x6240;&#x793A;&#x3002;&gamma;-&#x767D;&#x6C99;&#x76EE;&#x524D;&#x5728;&#x5927;&#x9F20;&#x548C;&#x725B;&#x9897;&#x7C92;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x51DD;&#x80F6;&#x4E2D;&#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x7EC4;&#x86CB;&#x767D; H4&#xFF0C;&#x548C;&#x514D;&#x75AB;&#x5370;&#x8FF9;&#x6CD5;&#x786E;&#x5B9A;&#x3002;&#x56E0;&#x6B64;&#xFF0C;PRL &#x4F3D;&#x739B;&#x767D;&#x9897;&#x7C92;&#x4E2D;&#x7684;&#x78F7;&#x9178;&#x751F;&#x4EA7; PRL &#x5206;&#x5B50;&#x8868;&#x660E;&#x4E3A;&#x654C;&#x4FC3;&#x751F;&#x957F;&#x6D3B;&#x6027;&#x7684;&#x672A;&#x7ECF;&#x4FEE;&#x6539;&#x7684; PRL&#xFF0C;&#x4E14;&#x7B26;&#x5408;&#x786E;&#x5B9A;&#x7684; &gamma;-&#x767D;&#x6C99;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x4F5C;&#x7528;&#x548C; cytostasis &#x7684;&#x7EF4;&#x4FEE;&#x3002;

&#x5782;&#x4F53;&#x5206;&#x6CCC;&#x9897;&#x7C92; p21 &#x6D3B;&#x5316;&#x86CB;&#x767D;&#x6FC0;&#x9176; &gamma;-&#x767D;&#x6C99; phosphorylates &#x50AC;&#x4E73;&#x7D20;&#x3002;

p21-activated protein kinase gamma-PAK phosphorylates prolactin (PRL) in rat pituitary secretory granules on Ser-177 and on the equivalent site, Ser-179, in recombinant human PRL. This is shown by comparison of phosphopeptide maps with the human PRL mutant S179D. gamma-PAK is present in rat and bovine granules as identified by in-gel phosphorylation of histone H4, and by immunoblotting. Thus, phosphorylation of PRL by gamma-PAK in granules produces the PRL molecule that has been shown to antagonize the growth-promoting activity of unmodified PRL, and is consistent with the identified role of gamma-PAK in the induction and maintenance of cytostasis.

p21-activated protein kinase gamma-PAK in pituitary secretory granules phosphorylates prolactin.

p21-activated protein kinase gamma-PAK phosphoryle la prolactine (PRL) dans les granules s&#xE9;cr&#xE9;toires hypophysaires de rat sur Ser-177 et sur le site &#xE9;quivalent, Ser-179, en recombinant PRL humaine. Ceci est illustr&#xE9; par la comparaison des cartes phosphopeptide avec le S179D humaine PRL mutant. gamma-PAK est pr&#xE9;sent chez le rat et granul&#xE9;s bovins identifi&#xE9;s par en gel phosphorylation de l&#x26;#39;histone H4, et par immunoblot. Ainsi, la phosphorylation de la PRL par l&#x26;#39;acide gamma-PAK dans les granules produit la mol&#xE9;cule PRL qui a &#xE9;t&#xE9; montr&#xE9; &#xE0; antagoniser l&#x26;#39;activit&#xE9; favorisant la croissance de la PRL non modifi&#xE9;, et est compatible avec le r&#xF4;le identifi&#xE9; de la gamma-PAK dans l&#x26;#39;induction et l&#x26;#39;entretien des cytostase.

Protein Kinase P21-activated gamma-PAK dans les granules s&#xE9;cr&#xE9;toires hypophysaires phosphoryle prolactine

p21-activated protein kinase gamma-PAK in der Hypophyse Sekretgranula phosphoryliert Prolaktin.

p21 &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xD55C; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xD0A4; &#xB2C8; &#xC544; &#xC81C; &#xAC10;&#xB9C8;-&#xBC15;&#xC138;&#xB9AC; phosphorylates prolactin (PRL) &#xC950; &#xB1CC; &#xBD84; &#xB9BD; Ser-177 &#xBC0F; &#xD574;&#xB2F9; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8;&#xC5D0;&#xC11C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC7AC;&#xC870;&#xD569; &#xC778;&#xAC04; PRL&#xC5D0; Ser-179. &#xC774;&#xAC83;&#xC740; &#xC778;&#xAC04;&#xC758; PRL &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; s179d&#xC640; phosphopeptide &#xC9C0;&#xB3C4;&#xC758; &#xBE44;&#xAD50; &#xD558; &#xC5EC; &#xD45C;&#xC2DC; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xAC10;&#xB9C8;-&#xBC15;&#xC138;&#xB9AC;, H4 &#xD788;&#xC2A4;&#xD1A4;&#xC758; &#xC824;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC778; &#xC0B0;&#xD654; &#xBC0F; immunoblotting&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC2DD;&#xBCC4; &#xB41C; &#xC950;&#xC640; &#xC18C;&#xACFC; &#xB9BD;&#xC5D0; &#xC874;&#xC7AC; &#xD558;&#xB294;. &#xB530;&#xB77C;&#xC11C;, &#xAC10;&#xB9C8;-&#xBC15;&#xC138;&#xB9AC;,&#xACFC; &#xB9BD;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; PRL&#xC758; &#xC778; &#xC0B0;&#xD654;&#xB294; &#xC218;&#xC815; &#xB418;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC740; PRL&#xC758; &#xC131;&#xC7A5; &#xCD94;&#xC9C4; &#xD65C;&#xB3D9; &#xBC18;&#xB300; &#xD45C;&#xC2DC; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xC720;&#xB3C4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xAC10;&#xB9C8;-&#xBC15;&#xC138;&#xB9AC;&#xC758; &#xC2DD;&#xBCC4; &#xB41C; &#xC5ED;&#xD560; &#xBC0F; cytostasis&#xC758; &#xC720;&#xC9C0; &#xBCF4;&#xC218;&#xC640; &#xC77C;&#xCE58; &#xD558;&#xB294; PRL &#xBD84;&#xC790;&#xB97C; &#xC0DD;&#xC131; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

p21 &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xD55C; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xD0A4; &#xB2C8; &#xC544; &#xC81C; &#xAC10;&#xB9C8;-&#xBC15;&#xC138;&#xB9AC; &#xB1CC; &#xBD84;&#xACFC; &#xB9BD; prolactin phosphorylates.

p21-activated prote&#xED;na quinasa gamma-PAK fosforila prolactina (PRL) en los gr&#xE1;nulos de secreci&#xF3;n pituitaria de rata en Ser-177 y en el sitio equivalente, Ser-179, en PRL humana recombinante. Esto se muestra por comparaci&#xF3;n de los mapas de phosphopeptide con la humana S179D PRL mutante. gamma-PAK est&#xE1; presente en la rata y gr&#xE1;nulos bovina identificadas por en-gel de la fosforilaci&#xF3;n de la histona H4, y por inmunotransferencia. As&#xED;, la fosforilaci&#xF3;n de PRL por gamma-PAK en gr&#xE1;nulos produce la mol&#xE9;cula de PRL que se ha demostrado que antagonizan la actividad promotora del crecimiento de la PRL no modificado, y es consistente con el papel identificado de gamma-PAK en la inducci&#xF3;n y mantenimiento de citostasis.

P21-prote&#xED;na quinasa activada por Gamma-PAK en los gr&#xE1;nulos secretores de prolactina pituitaria fosforila

&#x5728;&#x4EBA;&#x80DA;&#x80BE; 293T &#x548C; COS 7 &#x7EC6;&#x80DE;&#x68C0;&#x67E5;&#x4E86;&#x80DE;&#x5185;&#x5B9A;&#x4F4D;&#x548C; p21 &#x6D3B;&#x5316;&#x86CB;&#x767D;&#x6FC0;&#x9176; &gamma;-&#x767D;&#x6C99;&#x7684;&#x751F;&#x7406;&#x529F;&#x80FD;&#x3002;&#x5728; 1-4 &#x5929; post-transfection &#x7EC6;&#x80DE;&#x5206;&#x88C2;&#x88AB;&#x6291;&#x5236;&#x91CE;&#x751F;&#x578B; (WT) &gamma;-&#x767D;&#x6C99;&#x7684;&#x8868;&#x8FBE;&#x548C;&#x7A81;&#x53D8; S490A&#xFF0C;&#x800C;&#x8868;&#x793A; S490D &#x548C; K278R &#x548C; T402A &#x7684;&#x975E;&#x6D3B;&#x52A8;&#x72B6;&#x6001;&#x7A81;&#x53D8;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5448;&#x6307;&#x6570;&#x7EA7;&#x589E;&#x957F;&#xFF0C;&#x589E;&#x957F;&#x8868;&#x660E; &gamma;-&#x767D;&#x6C99; cytostasis &#x8BF1;&#x5BFC;&#x7684;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;WT &gamma;-&#x767D;&#x6C99;&#x548C; S490A &#x88AB;&#x672C;&#x5730;&#x5316;&#x5728;&#x539F;&#x5B50;&#x6838;&#x5468;&#x56F4;&#x7531;&#x514D;&#x75AB;&#x8367;&#x5149;&#xFF0C;&#x800C; K278R&#x3001; T402A &#x548C; S490D &#x7F3A;&#x4E4F;&#x5B9A;&#x4F4D;&#x786E;&#x5B9A;&#x4E3A;&#x5185;&#x8D28;&#x7F51; (ER) &#x7684;&#x5730;&#x533A;&#x3002;&#x8517;&#x7CD6;&#x5BC6;&#x5EA6;&#x68AF;&#x5EA6;&#x79BB;&#x5FC3;&#x6CD5;&#x6240;&#x793A;&#xFF0C;&#x5BC6;&#x5EA6;&#x9AD8; &#xFF08;ER &#x5173;&#x8054;&#xFF09; &#x4E2D;&#x95F4;&#x4F53;&#x4E4B;&#x95F4;&#x5206;&#x53D1; WT &#x4F3D;&#x739B;&#x767D;&#x6C99;&#x3001; S490A &#x548C;&#x5185;&#x6E90;&#x6027; &gamma;-&#x767D;&#x6C99;&#x3001; &#x5BC6;&#x5EA6;&#x548C;&#x4F4E;&#x5BC6;&#x5EA6;&#x7684;&#x5206;&#x6570;&#xFF0C;&#x800C;&#x4E0D;&#x4F1A;&#x59A8;&#x788D;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5206;&#x88C2;&#x7684;&#x57FA;&#x56E0;&#x7A81;&#x53D8;&#x662F;&#x76EE;&#x524D;&#x53EA;&#x80FD;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x6C34;&#x6EB6;&#x6027;&#x9176;&#x3002;&#x5F53;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5206;&#x88C2;&#xFF0C;&#x6545;&#x7535;&#x79BB;&#x8F90;&#x5C04;&#x9E21;&#x6C41;&#x589E;&#x52A0;&#x5185;&#x6E90;&#x6027;&#x4F3D;&#x739B;&#x767D;&#x5FAE;&#x7C92;&#x7684;&#x7EC4;&#x5206;&#x4E0E;&#x76F8;&#x5173;&#x8054;&#x7684;&#x91CF;&#x3002;&gamma;-&#x767D;&#x6C99; ER &#x548C;&#x4E2D;&#x95F4;&#x5BC6;&#x5EA6;&#x5206;&#x6570;&#x5DF2;&#x9AD8;&#x7684;&#x5177;&#x4F53;&#x6D3B;&#x52A8;&#x548C; &gamma;-&#x767D;&#x6C99;&#x7684;&#x53EF;&#x6EB6;&#x6027;&#x5F62;&#x5F0F;&#xFF0C;&#x800C;&#x4F4E;&#x6D3B;&#x52A8;&#x800C;&#x4E14;&#x662F;&#x5411;&#x5904;&#x4E8E;&#x6D3B;&#x52A8;&#x72B6;&#x6001;&#x3002;&Gamma;-&#x767D;&#x6C99;&#x672C;&#x5730;&#x5316;&#x7684;&#x91CD;&#x8981;&#x6027;&#x88AB;&#x652F;&#x6301;&#x6570;&#x636E;&#x4E0E; C &#x7EC8;&#x7AEF;&#x7A81;&#x53D8;&#x4F53; S490D &#x548C;&#x4E09;&#x89D2;&#x6D32; 488 &#xFF1B;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7A81;&#x53D8;&#x4F53;&#x6709;&#x9AD8;&#x6C34;&#x5E73;&#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#x6FC0;&#x9176;&#x6D3B;&#x6027;&#xFF0C;&#x4F46;&#x4E0D;&#x8981;&#x5F15;&#x8BF1; cytostasis &#x5E76;&#x4E0D;&#x4F1A;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x5230;&#x6025;&#x8BCA;&#x5BA4;&#x3002;&#x6A21;&#x578B;&#x7531;&#x4F3D;&#x739B;&#x767D;&#x6C99;&#x901A;&#x8FC7;&#x9488;&#x5BF9; &gamma;-&#x767D;&#x6C99;&#x5230; ER cytostasis &#x7684;&#x611F;&#x5E94;&#x88AB;&#x63D0;&#x51FA;&#x5728;&#x54EA; &gamma;-&#x767D;&#x6C99;&#x6D3B;&#x52A8;&#x548C; Ser 490 &#x7275;&#x8FDE;&#x5728; cytostasis &#x7684;&#x89C4;&#x7BA1;&#x3002;

&#x9700;&#x8981;&#x7684; cytostasis &#x611F;&#x5E94; p21 &#x6D3B;&#x5316;&#x86CB;&#x767D;&#x6FC0;&#x9176; &gamma;-&#x767D;&#x6C99;/Pak2 &#x5728;&#x5185;&#x8D28;&#x7F51;&#x4E2D;&#x7684;&#x5B9A;&#x4F4D;&#x3002;

The intracellular localization and physiological functions of the p21-activated protein kinase gamma-PAK have been examined in human embryonic kidney 293T and COS-7 cells. At 1-4 days post-transfection, cell division is inhibited by the expression of wild type (WT) gamma-PAK and the mutant S490A, whereas cells expressing S490D and the inactive mutants K278R and T402A grow exponentially, indicating a role for gamma-PAK in the induction of cytostasis. WT gamma-PAK and S490A are localized in a region surrounding the nucleus identified as the endoplasmic reticulum (ER), as determined by immunofluorescence, whereas K278R, T402A, and S490D lack localization. As shown by sucrose density gradient centrifugation, WT gamma-PAK, S490A, and endogenous gamma-PAK are distributed among the high density (ER-associated), intermediate density, and low density fractions, whereas the mutants that do not inhibit cell division are present only as soluble enzyme. The amount of endogenous gamma-PAK associated with the particulate fractions is increased 4-fold when cell division is inhibited by ionizing radiation. gamma-PAK in the ER and intermediate density fractions has high specific activity and is active, whereas the soluble form of gamma-PAK has low activity and is activable. The importance of localization of gamma-PAK is supported by data with the C-terminal mutants S490D and Delta 488; these mutants have high levels of protein kinase activity but do not induce cytostasis and are not bound to the ER. A model for the induction of cytostasis by gamma-PAK through targeting of gamma-PAK to the ER is presented in which gamma-PAK activity and Ser-490 are implicated in the regulation of cytostasis.

Localization of p21-activated protein kinase gamma-PAK/Pak2 in the endoplasmic reticulum is required for induction of cytostasis.

La localisation intracellulaire et les fonctions physiologiques de la prot&#xE9;ine kinase p21-activated gamma-PAK ont &#xE9;t&#xE9; examin&#xE9;s dans l&#x26;#39;homme 293T r&#xE9;nales embryonnaires et les cellules COS-7. &#xC0; 1-4 jours post-transfection, la division cellulaire est inhib&#xE9;e par l&#x26;#39;expression de type sauvage (WT) gamma-PAK et la S490A mutant, tandis que les cellules exprimant S490D et les inactifs mutants K278R et T402A cro&#xEE;tre de fa&#xE7;on exponentielle, ce qui indique un r&#xF4;le pour le gamma- PAK dans l&#x26;#39;induction de cytostase. WT-gamma PAK et S490A sont localis&#xE9;s dans une r&#xE9;gion entourant le noyau identifi&#xE9; comme le r&#xE9;ticulum endoplasmique (RE), tel que d&#xE9;termin&#xE9; par immunofluorescence, tandis localisation absence K278R, T402A, et S490D. Comme le montre par centrifugation sur gradient de densit&#xE9; de saccharose, WT gamma-PAK, S490A, et endog&#xE8;nes gamma-PAK sont r&#xE9;parties entre la haute densit&#xE9; (ER-associ&#xE9;), de densit&#xE9; interm&#xE9;diaire, et les fractions de faible densit&#xE9;, alors que les mutants qui ne sont pas inhibent la division cellulaire sont pr&#xE9;senter seulement comme enzyme soluble. La quantit&#xE9; de la gamma-endog&#xE8;ne PAK associ&#xE9; &#xE0; des fractions de particules est augment&#xE9;e de 4 fois o&#xF9; la division cellulaire est inhib&#xE9;e par un rayonnement ionisant. gamma-PAK dans les fractions de densit&#xE9; interm&#xE9;diaire ER et a une forte activit&#xE9; sp&#xE9;cifique et est active, alors que la forme soluble de la gamma-PAK a une activit&#xE9; faible et est activable. L&#x26;#39;importance de la localisation de la gamma-PAK est &#xE9;tay&#xE9;e par des donn&#xE9;es avec le S490D C-terminal des mutants et Delta 488; ces mutants ont des niveaux &#xE9;lev&#xE9;s d&#x26;#39;activit&#xE9; prot&#xE9;ine kinase, mais ne pas faire cytostase et ne sont pas li&#xE9;s &#xE0; l&#x26;#39;urgence. Un mod&#xE8;le pour l&#x26;#39;induction de cytostase par l&#x26;#39;acide gamma-PAK par le ciblage de la gamma-PAK &#xE0; l&#x26;#39;ER est pr&#xE9;sent&#xE9; dans lequel la gamma-PAK activit&#xE9; et Ser-490 sont impliqu&#xE9;s dans la r&#xE9;gulation de cytostase.

La localisation de P21-activated Gamma-PAK/Pak2 prot&#xE9;ine kinase dans le r&#xE9;ticulum endoplasmique est requise pour l&#x26;#39;induction de cytostase

Lokalisierung von p21-activated protein kinase gamma-PAK/Pak2 im endoplasmatischen Retikulum ist zur Induktion einer Cytostase erforderlich.

La localizzazione intracellulare e le funzioni fisiologiche della proteina p21-attivata della chinasi gamma-PAK sono state esaminate nel rene embrionale umano 293T e cellule COS-7. A post-transfection 1-4 giorni, divisione delle cellule &egrave; inibito da espressione di wild type (WT) gamma-PAK e il mutante S490A, considerando che le cellule che esprimono S490D e i mutanti inattivi, K278R e T402A crescono in modo esponenziale, che indica un ruolo per gamma-PAK nell&#39;induzione di cytostasis. Gamma WT-PAK e S490A sono localizzati in una regione che circonda il nucleo identificato come il reticolo endoplasmatico (ER), come determinato mediante immunofluorescenza, considerando che K278R, T402A e S490D mancano di localizzazione. Come dimostrato dalla centrifugazione gradiente di densit&agrave; saccarosio, gamma-PAK WT, S490A e gamma-PAK endogeni sono distribuiti tra intermedia (ER-associato), alta densit&agrave;, densit&agrave; e le frazioni di bassa densit&agrave;, mentre i mutanti che non inibiscono la divisione cellulare sono presentano solo come enzima solubile. La quantit&agrave; di gamma-PAK endogena associati con le frazioni di particolato &egrave; aumentata 4 volte quando la divisione cellulare viene inibita da radiazioni ionizzanti. gamma-PAK in ER e frazioni di densit&agrave; intermedia ha elevata attivit&agrave; specifica e non &egrave; attivo, mentre la forma solubile di gamma-PAK ha bassa attivit&agrave; ed &egrave; attivabile. L&#39;importanza della localizzazione della gamma-PAK &egrave; supportato da dati con i mutanti del C-terminale S490D e Delta 488; Questi mutanti hanno alti livelli di attivit&agrave; della chinasi di proteina, ma non inducono cytostasis e non sono limitati al pronto soccorso. Un modello per l&#39;induzione di cytostasis di gamma-PAK attraverso il targeting di gamma-PAK per l&#39;ER &egrave; presentato in cui gamma-PAK attivit&agrave; e Ser-490 sono implicati nella regolazione della cytostasis.

Localizzazione della proteina p21-attivata della chinasi gamma-PAK/Pak2 nel reticolo endoplasmatico &egrave; necessaria per l&#39;induzione del cytostasis.

&#x7D30;&#x80DE;&#x5185;&#x5C40;&#x5728;&#x3068;p21&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C6;&#x30A4;&#x30F3;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x3B3;-PAK&#x306E;&#x751F;&#x7406;&#x7684;&#x6A5F;&#x80FD;&#x306F;&#x3001;&#x30D2;&#x30C8;&#x80DA;&#x814E;&#x81D3;293T&#x3068;COS-7&#x7D30;&#x80DE;&#x3067;&#x691C;&#x8A0E;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x65E5;1-4&#x65E5;&#x5F8C;&#x306B;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30D5;&#x30A7;&#x30AF;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x6642;&#x306B;&#x7D30;&#x80DE;&#x304C;&#x767A;&#x73FE;&#x3059;&#x308B;&#x306E;&#x306B;&#x5BFE;&#x3057;&#x3001;S490D&#x3001;&#x7D30;&#x80DE;&#x5206;&#x88C2;&#x306F;&#x3001;&#x91CE;&#x751F;&#x578B;&#xFF08;WT&#xFF09;&#x3001;&#x3B3;-PAK&#x3068;&#x5909;&#x7570;&#x4F53;S490A&#x306E;&#x767A;&#x73FE;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x963B;&#x5BB3;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x3068;&#x975E;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6;&#x5909;&#x7570;&#x4F53;K278R&#x3068;T402A&#x306F;&#x3001;&#x30AC;&#x30F3;&#x30DE;&#x7DDA;&#x306E;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3001;&#x6307;&#x6570;&#x95A2;&#x6570;&#x7684;&#x306B;&#x6210;&#x9577;&#x3059;&#x308B;&#x7D30;&#x80DE;&#x5897;&#x6B96;&#x306E;&#x8A98;&#x5C0E;&#x3067;PAK&#x3002;&#x514D;&#x75AB;&#x86CD;&#x5149;&#x6CD5;&#x306B;&#x3088;&#x308A;&#x6C7A;&#x5B9A;&#x3055;&#x308C;&#x305F;WT&#x3B3;-PAK&#x3068;S490A&#x306F;&#x3001;K278R&#x3001;T402A&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073;S490D&#x4E0D;&#x8DB3;&#x306E;&#x30ED;&#x30FC;&#x30AB;&#x30E9;&#x30A4;&#x30BA;&#x3001;&#x4E00;&#x65B9;&#x3001;&#x5C0F;&#x80DE;&#x4F53;&#xFF08;ER&#xFF09;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x8B58;&#x5225;&#x3055;&#x308C;&#x3001;&#x6838;&#x3092;&#x53D6;&#x308A;&#x56F2;&#x3080;&#x9818;&#x57DF;&#x306B;&#x5C40;&#x5728;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30B7;&#x30E7;&#x7CD6;&#x5BC6;&#x5EA6;&#x52FE;&#x914D;&#x9060;&#x5FC3;&#x5206;&#x96E2;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x793A;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x3088;&#x3046;&#x306B;&#x7D30;&#x80DE;&#x5206;&#x88C2;&#x3092;&#x963B;&#x5BB3;&#x3057;&#x306A;&#x3044;&#x5909;&#x7570;&#x4F53;&#x304C;&#x3042;&#x308B;&#x306E;&#x306B;&#x5BFE;&#x3057;&#x3001;WT&#x3B3;-PAK&#x3001;S490A&#x3001;&#x5185;&#x56E0;&#x6027;&#x306F;&#x3001;&#x3B3;-PAK&#x306F;&#x3001;&#x9AD8;&#x5BC6;&#x5EA6;&#xFF08;ER&#x95A2;&#x9023;&#xFF09;&#x3001;&#x4E2D;&#x9593;&#x5BC6;&#x5EA6;&#x3001;&#x4F4E;&#x5BC6;&#x5EA6;&#x753B;&#x5206;&#x306B;&#x5206;&#x6563;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x53EF;&#x6EB6;&#x6027;&#x9175;&#x7D20;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x306E;&#x307F;&#x63D0;&#x793A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x7D30;&#x80DE;&#x5206;&#x88C2;&#x306F;&#x3001;&#x96FB;&#x96E2;&#x653E;&#x5C04;&#x7DDA;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x963B;&#x5BB3;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3068;&#x304D;&#x306E;&#x7C92;&#x5B50;&#x306E;&#x5206;&#x753B;&#x306B;&#x95A2;&#x9023;&#x4ED8;&#x3051;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x5185;&#x56E0;&#x6027;&#x3B3;-PAK&#x306E;&#x91CF;&#x306F;4&#x500D;&#x306B;&#x5897;&#x52A0;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002; &#x3B3;-PAK&#x306E;&#x53EF;&#x6EB6;&#x6027;&#x5F62;&#x614B;&#x306F;&#x3001;&#x4F4E;&#x6D3B;&#x6027;&#x3092;&#x6709;&#x3057;&#x3001;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x306E;&#x306B;&#x5BFE;&#x3057;&#x3001;ER&#x3001;&#x4E2D;&#x9593;&#x5BC6;&#x5EA6;&#x306E;&#x753B;&#x5206;&#x306E;&#x3B3;-PAK&#x306F;&#x3001;&#x9AD8;&#x3044;&#x6BD4;&#x6D3B;&#x6027;&#x3092;&#x6709;&#x3057;&#x3001;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6;&#x306B;&#x306A;&#x3063;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002; &#x3B3;-PAK&#x306E;&#x5C40;&#x5728;&#x306E;&#x91CD;&#x8981;&#x6027;&#x306F;&#x3001;C&#x672B;&#x7AEF;&#x5909;&#x7570;&#x4F53;S490D&#x3068;&#x30C7;&#x30EB;&#x30BF;488&#x3068;&#x306E;&#x30C7;&#x30FC;&#x30BF;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x30B5;&#x30DD;&#x30FC;&#x30C8;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3001;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x5909;&#x7570;&#x4F53;&#x306F;&#x3001;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C6;&#x30A4;&#x30F3;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x6D3B;&#x6027;&#x306E;&#x9AD8;&#x3044;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x3092;&#x6301;&#x3063;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x304C;&#x3001;&#x7D30;&#x80DE;&#x5897;&#x6B96;&#x3092;&#x8A98;&#x767A;&#x3057;&#x306A;&#x3044;&#x3068;ER&#x306B;&#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C9;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3002; ER&#x306B;&#x30AC;&#x30F3;&#x30DE;-PAK&#x306E;&#x6A19;&#x7684;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x3066;&#x3B3;-PAK&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x7D30;&#x80DE;&#x5897;&#x6B96;&#x306E;&#x8A98;&#x5C0E;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x306F;&#x3001;&#x3B3;-PAK&#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x304A;&#x3088;&#x3073;Ser-490&#x304C;&#x7D30;&#x80DE;&#x5897;&#x6B96;&#x306E;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x306B;&#x95A2;&#x4E0E;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x63D0;&#x793A;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x5C0F;&#x80DE;&#x4F53;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;P21-&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;Gamma-PAK/Pak2&#x306E;&#x5C40;&#x5728;&#x306F;&#x3001;&#x7D30;&#x80DE;&#x5897;&#x6B96;&#x306E;&#x8A98;&#x5C0E;&#x306B;&#x5FC5;&#x8981;&#x306A;

&#xC778;&#xAC04;&#xC758; &#xBC30;&#xC544; &#xC2E0;&#xC7A5; 293T &#xBC0F; COS 7 &#xC140;&#xC5D0; &#xC138;&#xD3EC;&#xB0B4; &#xC9C0;&#xC5ED;&#xD654; &#xBC0F; p21 &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xD55C; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xD0A4; &#xB2C8; &#xC544; &#xC81C; &#xAC10;&#xB9C8; &#xBC15;&#xC138;&#xB9AC;&#xC758; &#xC0DD;&#xB9AC; &#xAE30;&#xB2A5; &#xAC80;&#xC0AC; &#xC788;&#xB2E4;. 1-4 &#xC77C; post-transfection&#xC5D0;&#xC11C; s490d&#xC640; k278r&#xC640; T402A &#xBE44;&#xD65C;&#xC131; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xC138;&#xD3EC; &#xC131;&#xC7A5; &#xAE30; &#xD558; &#xAE09;&#xC218;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C;, cytostasis&#xC758; &#xC720;&#xB3C4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xAC10;&#xB9C8;-&#xBC15;&#xC138;&#xB9AC;&#xC758; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0B4;&#xB294; &#xBC18;&#xBA74; &#xC57C;&#xC0DD; &#xD0C0;&#xC785; (WT) &#xAC10;&#xB9C8;-&#xBC15;&#xC138;&#xB9AC;&#xC758; &#xD45C;&#xD604;&#xACFC; S490A, &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xC758;&#xD574; &#xC138;&#xD3EC; &#xBD84;&#xC5F4; &#xC800;&#xD574;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;. WT &#xAC10;&#xB9C8;-&#xBC15;&#xC138;&#xB9AC;&#xC640; S490A K278R, T402A, &#xBC0F; S490D &#xBD80;&#xC871; &#xC9C0;&#xC5ED;&#xD654; &#xBC18;&#xBA74; &#xBA74;&#xC5ED; &#xD615;&#xAD11; &#xAC80;&#xC0AC;, &#xC815;&#xD55C; endoplasmic &#xADF8;&#xBB3C; (&#xC751;&#xAE09;&#xC2E4;)&#xB85C; &#xC2DD;&#xBCC4; &#xB41C; &#xD575;&#xC744; &#xB458;&#xB7EC;&#xC2FC; &#xC9C0;&#xC5ED;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC9C0;&#xC5ED;&#xD654; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB192;&#xC740; &#xBC00;&#xB3C4; (&#xC751;&#xAE09;&#xC2E4; &#xAD00;&#xB828;) &#xC911;&#xAE09; &#xC911; WT &#xAC10;&#xB9C8;-&#xBC15;&#xC138;&#xB9AC;, S490A, &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; &#xC0DD; &#xAC10;&#xB9C8;-&#xBC15; &#xBC30; &#xBD80; &#xC790;&#xB2F9; &#xBC00;&#xB3C4; &#xADF8;&#xB77C;&#xB370;&#xC774;&#xC158; &#xC6D0;&#xC2EC; &#xBD84;&#xB9AC; &#xD558; &#xC5EC; &#xBCF4;&#xB294; &#xBC14;&#xC640; &#xAC19;&#xC774;, &#xBC00;&#xB3C4;, &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; &#xB0AE;&#xC740; &#xBC00;&#xB3C4; &#xBD84;&#xC218;, &#xBC18;&#xBA74; &#xC138;&#xD3EC; &#xBD84;&#xC5F4;&#xC744; &#xC5B5;&#xC81C; &#xD558;&#xC9C0; &#xC54A;&#xB294; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xC6A9; &#xD574; &#xD6A8;&#xC18C;&#xB85C;&#xB9CC; &#xC81C;&#xC2DC; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC804;&#xB9AC; &#xBC29;&#xC0AC;&#xC120;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC138;&#xD3EC; &#xBD84;&#xC5F4;&#xC744; &#xC800;&#xD574; &#xD558;&#xB294; &#xACBD;&#xC6B0; &#xB0B4; &#xAC10;&#xB9C8;-&#xBC15;&#xC138;&#xB9AC;&#xC758; &#xBBF8; &#xB9BD; &#xC790; &#xBD84;&#xC218;&#xC640; &#xAD00;&#xB828; &#xB41C; &#xAE08;&#xC561; 4-fold &#xC99D;&#xAC00; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC751;&#xAE09;&#xC2E4; &#xBC0F; &#xC911;&#xAC04; &#xBC00;&#xB3C4; &#xBD84;&#xC218;&#xC5D0;&#xC11C; &#xAC10;&#xB9C8;-&#xBC15;&#xC138;&#xB9AC; &#xB192;&#xC740; &#xD2B9;&#xC815; &#xD65C;&#xB3D9; &#xACE0; &#xAC10;&#xB9C8; &#xBC15;&#xC138;&#xB9AC;&#xC758; &#xC218;&#xC6A9; &#xC131; &#xD615;&#xD0DC;&#xB85C; &#xC800;&#xC870; &#xD588;&#xB2E4; &#xACE0; activable&#xB294; &#xD65C;&#xC131;&#xD654;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xAC10;&#xB9C8;-&#xBC15;&#xC138;&#xB9AC;&#xC758; &#xD604;&#xC9C0;&#xD654;&#xC758; &#xC911;&#xC694;&#xC131; S490D &#xBC0F; &#xB378;&#xD0C0; 488; C &#xD130;&#xBBF8;&#xB110; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774;&#xC640; &#xB370;&#xC774;&#xD130;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC9C0;&#xC6D0; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xD0A4; &#xB2C8; &#xC544; &#xC81C; &#xD65C;&#xB3D9;&#xC758; &#xB192;&#xC740; &#xC218;&#xC900;&#xC744; &#xC788;&#xC9C0;&#xB9CC; cytostasis&#xC744; &#xC720;&#xB3C4; &#xD558;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xBC0F; &#xC751;&#xAE09;&#xC2E4;&#xC5D0; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xB418;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC751;&#xAE09;&#xC2E4;&#xC5D0; &#xAC10;&#xB9C8;-&#xBC15;&#xC138;&#xB9AC;&#xC758; &#xD0C0;&#xAC9F;&#xD305;&#xC744; &#xD1B5;&#xD574; &#xAC10;&#xB9C8;-&#xBC15;&#xC138;&#xB9AC;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; cytostasis&#xC758; &#xC720;&#xB3C4; &#xB300; &#xD55C; &#xBAA8;&#xB378;&#xC774; &#xC5B4;&#xB5A4; &#xAC10;&#xB9C8; &#xBC15;&#xC138;&#xB9AC;&#xC5D0; &#xD65C;&#xB3D9;&#xACFC; Ser-490 cytostasis &#xADDC;&#xC815;&#xC5D0; &#xC5F0;&#xB8E8;&#xB294; &#xC81C;&#xACF5; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;.

P21 &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xD55C; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xD0A4; &#xB2C8; &#xC544; &#xC81C; &#xAC10;&#xB9C8;-&#xBC15;&#xC138;&#xB9AC;/Pak2 endoplasmic &#xADF8;&#xBB3C;&#xC5D0; &#xC9C0;&#xC5ED;&#xD654;&#xB294; cytostasis&#xC758; &#xC720;&#xB3C4; &#xD544;&#xC694; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

La localizaci&#xF3;n intracelular y las funciones fisiol&#xF3;gicas de la prote&#xED;na quinasa p21 activada por gamma-PAK han sido examinados en humanos 293T embrionarias de ri&#xF1;&#xF3;n y c&#xE9;lulas COS-7. En 1-4 d&#xED;as despu&#xE9;s de la transfecci&#xF3;n, la divisi&#xF3;n celular es inhibida por la expresi&#xF3;n de tipo salvaje (WT) gamma-PAK y el mutante S490A, mientras que las c&#xE9;lulas que expresan S490D y las personas inactivas K278R mutantes y T402A crecer de forma exponencial, lo que indica un papel para la gamma- PAK en la inducci&#xF3;n de citostasis. WT gamma-PAK y S490A se localizan en una regi&#xF3;n que rodea el n&#xFA;cleo identificado como el ret&#xED;culo endopl&#xE1;smico (RE), seg&#xFA;n lo determinado por inmunofluorescencia, mientras que la localizaci&#xF3;n falta K278R, T402A, y S490D. Como se muestra por centrifugaci&#xF3;n en gradiente de densidad de sacarosa, WT gamma-PAK, S490A, y end&#xF3;genos gamma-PAK se distribuyen entre la alta densidad (ER-asociado), densidad intermedia, y las fracciones de baja densidad, mientras que los mutantes que no inhiben la divisi&#xF3;n celular son presentar s&#xF3;lo como enzima soluble. La cantidad de &#xE1;cido gamma-PAK end&#xF3;geno asociado con las fracciones de part&#xED;culas se incrementa 4-veces cuando la divisi&#xF3;n celular es inhibido por la radiaci&#xF3;n ionizante. gamma-PAK en las fracciones de densidad intermedia ER y tiene alta actividad espec&#xED;fica y est&#xE1; activa, mientras que la forma soluble de gamma-PAK tiene una baja actividad y es activable. La importancia de la localizaci&#xF3;n de la gamma-PAK es apoyada por los datos con el C-terminal de mutantes S490D y Delta 488, estos mutantes tienen altos niveles de actividad de la prote&#xED;na quinasa pero no induzca el citostasis y no est&#xE1;n vinculados a la sala de emergencias. Un modelo para la inducci&#xF3;n de citostasis por gamma-PAK, mediante la identificaci&#xF3;n de la gamma-PAK a la sala de emergencia se presenta en la que la gamma-PAK actividad y Ser 490-est&#xE1;n implicados en la regulaci&#xF3;n de citostasis.

La localizaci&#xF3;n de P21 activada por la prote&#xED;na quinasa Gamma-PAK/Pak2 en el ret&#xED;culo endopl&#xE1;smico es necesaria para la inducci&#xF3;n de la citostasis

P21 &#x6FC0;&#x6D3B;&#x4E1D;&#x6C28;&#x9178;/&#x82CF;&#x6C28;&#x9178;&#x86CB;&#x767D;&#x6FC0;&#x9176; Pak2/&gamma;-&#x767D;&#x6C99;&#x548C;&#x86CB;&#x767D;&#x916A;&#x6C28;&#x9178;&#x6FC0;&#x9176; Syk nonreceptor &#x7C7B;&#x578B;&#x79F0;&#x4E3A;&#x8981;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x7EC6;&#x80DE;&#x66B4;&#x9732;&#x5728;&#x6E17;&#x900F;&#x80C1;&#x8FEB;&#x3002;&#x672C;&#x7814;&#x7A76;&#x7684;&#x76EE;&#x7684;&#x662F;&#x68C0;&#x67E5;&#x662F;&#x5426; Pak2 &#x548C; Syk &#x529F;&#x80FD;&#x5728;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4FE1;&#x53F7;&#x8F6C;&#x5BFC;&#x5408;&#x4F5C;&#x3002;Cotransfection &#x7814;&#x7A76;&#x8868;&#x660E;&#xFF0C;Pak2 &#x5C06;&#x4E0E; Syk COS &#x7EC6;&#x80DE;&#x76F8;&#x5173;&#x8054;&#x3002;&#x4E00;&#x6D3B;&#x52A8;&#x7A97;&#x4F53; Cdc42 &#x7684;&#x589E;&#x52A0;&#x4E0E; Syk Pak2 &#x534F;&#x4F1A;&#x3002;Pak2 coexpressed &#x4E0E; Cdc42 &#x7684;&#x975E;&#x6D3B;&#x52A8;&#x7A97;&#x4F53;&#x6216;&#x6FC0;&#x9176;&#x975E;&#x6D3B;&#x52A8; Pak2 &#x4EA4;&#x4E92;&#x4E0E; Syk&#xFF0C;&#x6697;&#x793A; Pak2 Syk &#x534F;&#x4F1A;&#x589E;&#x5F3A; Pak2 &#x6D3B;&#x5316;&#x7A0B;&#x5EA6;&#x8F83;&#x4F4E;&#x3002;&#x4E0E; Pak2 &#x7684;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x589E;&#x5F3A;&#x4E86; Syk &#x5185;&#x5728;&#x6FC0;&#x9176;&#x6D3B;&#x6027;&#x3002;&#x8FD9;&#x662F;&#x7531;&#x4F53;&#x5916;&#x7814;&#x7A76;&#x8868;&#x660E; Pak2 phosphorylates&#xFF0C;&#x5E76;&#x6FC0;&#x6D3B; Syk &#x652F;&#x6301;&#x3002;&#x5C71;&#x68A8;&#x9187;&#x8BF1;&#x4F7F;&#x5FEB;&#x901F;&#x4E0E;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6CBB;&#x7597;&#x7ED3;&#x679C;&#x7684; Pak2 &#x548C; Syk &#x6613;&#x4F4D;&#x5728;&#x539F;&#x5B50;&#x6838;&#x5468;&#x56F4;&#x7684;&#x533A;&#x57DF;&#x548C;&#x5728;&#x5176;&#x534F;&#x4F1A;&#x5927;&#x5E45;&#x589E;&#x5F3A;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;cotransfection &#x7684; Pak2 &#x548C; Syk &#x5BFC;&#x81F4;&#x7684; c C-jun &#x6C28;&#x57FA;&#x672B;&#x7AEF;&#x6FC0;&#x9176; (JNK&#xFF09; &#x9AD8;&#x6E17;&#x6761;&#x4EF6;&#x4E0B;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x3002;Pak2 &#x77ED;&#x5E72;&#x6270; RNA &#x6291;&#x5236;&#x5C71;&#x68A8;&#x7CD6;&#x9187;&#x4ECB;&#x5BFC;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x5185;&#x6E90;&#x6027; Syk &#x548C; JNK&#xFF0C;&#x4ECE;&#x800C;&#x786E;&#x5B9A; JNK &#x6FC0;&#x6D3B; Cdc42 &#x7684;&#x65B0;&#x9014;&#x5F84;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7ED3;&#x679C;&#x8868;&#x660E; Pak2 &#x548C; Syk &#x79EF;&#x6781;&#x5408;&#x4F5C;&#x4EE5;&#x89C4;&#x7BA1;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x53CD;&#x5E94;&#xFF0C;&#x4EE5;&#x5F3A;&#x8C03;&#x3002;

&#x5BF9;&#x6E17;&#x900F;&#x80C1;&#x8FEB;&#x54CD;&#x5E94; Syk &#x86CB;&#x767D;&#x916A;&#x6C28;&#x9178;&#x6FC0;&#x9176;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x65F6;&#xFF0C;&#x8981;&#x6C42;&#x4E0E; p21 &#x6D3B;&#x5316;&#x86CB;&#x767D;&#x6FC0;&#x9176; Pak2/&gamma;-&#x767D;&#x7684;&#x4E92;&#x52A8;

The p21-activated serine/threonine protein kinase Pak2/gamma-PAK and the nonreceptor type of protein tyrosine kinase Syk are known to be activated when the cells are exposed to osmotic stress. The purpose of the present study was to examine whether Pak2 and Syk functionally cooperate in cellular signaling. Cotransfection studies revealed that Pak2 associates with Syk in COS cells. The constitutively active form of Cdc42 increases the association of Pak2 with Syk. Pak2 coexpressed with an inactive form of Cdc42 or kinase-inactive Pak2 interacts to a lesser extent with Syk, suggesting that Pak2-Syk association is enhanced by Pak2 activation. Interaction with Pak2 enhances the intrinsic kinase activity of Syk. This is supported by in vitro studies showing that Pak2 phosphorylates and activates Syk. Treatment of cells with sorbitol to induce hyperosmolarity results in the translocation of Pak2 and Syk to the region surrounding the nucleus and in dramatic enhancement of their association. Furthermore, cotransfection of Pak2 and Syk leads to the activation of c-Jun N-terminal kinase (JNK) under hyperosmotic conditions. Pak2 short interfering RNA suppresses sorbitol-mediated activation of endogenous Syk and JNK, thus identifying a novel pathway for JNK activation by Cdc42. These results demonstrate that Pak2 and Syk positively cooperate to regulate cellular responses to stress.

Activation of Syk protein tyrosine kinase in response to osmotic stress requires interaction with p21-activated protein kinase Pak2/gamma-PAK.

La s&#xE9;rine p21-activated / thr&#xE9;onine prot&#xE9;ine kinase Pak2/gamma-PAK et le type non associ&#xE9;e de Syk prot&#xE9;ine tyrosine kinase sont connus pour &#xEA;tre activ&#xE9; lorsque les cellules sont expos&#xE9;es &#xE0; un stress osmotique. Le but de la pr&#xE9;sente &#xE9;tude &#xE9;tait d&#x26;#39;examiner si PAK2 et Syk fonctionnellement coop&#xE9;rer dans la signalisation cellulaire. Des &#xE9;tudes ont r&#xE9;v&#xE9;l&#xE9; que cotransfection PAK2 associ&#xE9;s avec Syk dans les cellules COS. La forme constitutivement active de Cdc42 augmente l&#x26;#39;association des PAK2 avec Syk. PAK2 co-exprim&#xE9; avec une forme inactive de Cdc42 ou kinase-inactif PAK2 interagit dans une moindre mesure avec Syk, ce qui sugg&#xE8;re que PAK2-Syk association est renforc&#xE9;e par PAK2 activation. Interaction avec PAK2 augmente l&#x26;#39;activit&#xE9; kinase intrins&#xE8;que de Syk. Cette hypoth&#xE8;se est &#xE9;tay&#xE9;e par des &#xE9;tudes in vitro montrent que PAK2 phosphoryle et active. Syk Le traitement des cellules avec du sorbitol pour induire des r&#xE9;sultats hyperosmolarit&#xE9; dans la translocation de PAK2 et Syk dans la r&#xE9;gion entourant le noyau et dans l&#x26;#39;am&#xE9;lioration spectaculaire de leur association. En outre, co-transfection de PAK2 et Syk conduit &#xE0; l&#x26;#39;activation de c-Jun N-terminal kinase (JNK) dans des conditions hyperosmotiques. PAK2 courts ARN interf&#xE9;rents supprime le sorbitol l&#x26;#39;activation m&#xE9;di&#xE9;e par des endog&#xE8;ne Syk et JNK, identifiant ainsi une nouvelle voie pour l&#x26;#39;activation de JNK par Cdc42. Ces r&#xE9;sultats d&#xE9;montrent que PAK2 et Syk positive de coop&#xE9;rer pour r&#xE9;guler des r&#xE9;ponses cellulaires au stress.

Activation de la kinase Syk prot&#xE9;ine tyrosine en r&#xE9;ponse &#xE0; un stress osmotique requiert une interaction avec P21-prot&#xE9;ine kinase activ&#xE9;e Pak2/gamma-PAK

Aktivierung von Syk-Protein-Tyrosinkinase in Reaktion auf osmotischen Stress eine Interaktion mit p21-activated protein kinase Pak2/gamma-PAK.

La chinasi di proteina p21-attivato serina/treonina Pak2/gamma-PAK e tipo di proteina tirosina chinasi Syk nonreceptor sono noti per essere attivati quando le cellule sono esposti a stress osmotico. Lo scopo del presente studio era quello di esaminare se Pak2 e Syk funzionalmente cooperare nella segnalazione cellulare. Cotransfection studi hanno rivelato che Pak2 associa Syk nelle cellule COS. La forma costitutivamente attiva di Cdc42 aumenta l&#39;associazione di Pak2 con Syk. Pak2 coespressi con una forma inattiva di Cdc42 o chinasi inattiva Pak2 interagisce in misura minore con Syk, suggerendo che Pak2-Syk associazione &egrave; rafforzata dall&#39;attivazione Pak2. Interazione con Pak2 migliora l&#39;attivit&agrave; chinasica intrinseca del Syk. Questo &egrave; supportato da studi in vitro che dimostrano che Pak2 fosforila e attiva Syk. Trattamento delle cellule con sorbitolo per indurre l&#39;iperosmolarit&agrave; provoca la traslocazione di Pak2 e Syk per la regione che circonda il nucleo e in drammatico aumento della loro associazione. Inoltre, cotransfection di Pak2 e Syk conduce all&#39;attivazione di c-Jun N-terminal chinasi (JNK) iperosmotico condizioni. Breve RNA interferente Pak2 sopprime sorbitolo-mediata attivazione endogena Syk e JNK, identificando cos&igrave; un percorso romanzo per attivazione JNK da Cdc42. Questi risultati dimostrano che Pak2 e Syk positivamente cooperare per regolare le risposte cellulari allo stress.

Attivazione di Syk proteina tirosina chinasi in risposta allo stress osmotico richiede l&#39;interazione con la chinasi di proteina p21-attivato Pak2/gamma-Pak.

p21&#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x30BB;&#x30EA;&#x30F3;/&#x30B9;&#x30EC;&#x30AA;&#x30CB;&#x30F3;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C6;&#x30A4;&#x30F3;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;Pak2/gamma-PAK&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x30C1;&#x30ED;&#x30B7;&#x30F3;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;Syk&#x306E;&#x975E;&#x30EC;&#x30BB;&#x30D7;&#x30BF;&#x30FC;&#x30BF;&#x30A4;&#x30D7;&#x306F;&#x3001;&#x7D30;&#x80DE;&#x304C;&#x6D78;&#x900F;&#x5727;&#x30B9;&#x30C8;&#x30EC;&#x30B9;&#x306B;&#x3055;&#x3089;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3068;&#x304D;&#x306B;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x77E5;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x672C;&#x7814;&#x7A76;&#x306E;&#x76EE;&#x7684;&#x306F;&#x3001;PAK2&#x304A;&#x3088;&#x3073;Syk&#x306F;&#x6A5F;&#x80FD;&#x7684;&#x7D30;&#x80DE;&#x5185;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#x306B;&#x5354;&#x529B;&#x3059;&#x308B;&#x304B;&#x3069;&#x3046;&#x304B;&#x3092;&#x691C;&#x8A0E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30D5;&#x30A7;&#x30AF;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x7814;&#x7A76;&#x3057;&#x305F;&#x3068;&#x3053;&#x308D;&#x3001;COS&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;Syk&#x306E;&#x3068;PAK2&#x95A2;&#x9023;&#x4ED8;&#x3051;&#x3089;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002; Cdc42&#x306E;&#x69CB;&#x6210;&#x7684;&#x306B;&#x6D3B;&#x6027;&#x306A;&#x5F62;&#x614B;&#x306F;&#x3001;Syk&#x3068;PAK2&#x306E;&#x95A2;&#x9023;&#x6027;&#x3092;&#x5411;&#x4E0A;&#x3055;&#x305B;&#x307E;&#x3059;&#x3002; PAK2&#x306F;&#x3001;Cdc42&#x306E;&#x4E0D;&#x6D3B;&#x6027;&#x578B;&#x3068;&#x5171;&#x767A;&#x73FE;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x4E0D;&#x6D3B;&#x6027;PAK2&#x306F;PAK2-Syk&#x306E;&#x30A2;&#x30BD;&#x30B7;&#x30A8;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x304C;PAK2&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x5897;&#x5F37;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x5506;&#x3057;&#x3001;Syk&#x306E;&#x3068;&#x4F4E;&#x3044;&#x7A0B;&#x5EA6;&#x306B;&#x76F8;&#x4E92;&#x306B;&#x4F5C;&#x7528;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002; PAK2&#x3068;&#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x306F;&#x3001;Syk&#x306E;&#x5185;&#x56E0;&#x6027;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x6D3B;&#x6027;&#x3092;&#x5411;&#x4E0A;&#x3055;&#x305B;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x306F;&#x3001;&#x305D;&#x306E;PAK2&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x3068;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;Syk&#x306E;&#x3092;&#x793A;&#x3059;in vitro&#x8A66;&#x9A13;&#x3067;&#x30B5;&#x30DD;&#x30FC;&#x30C8;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6838;&#x5468;&#x56F2;&#x306E;&#x9818;&#x57DF;&#x306B;PAK2&#x304A;&#x3088;&#x3073;Syk&#x306E;&#x8EE2;&#x3067;&#x3001;&#x305D;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x56E3;&#x4F53;&#x306E;&#x5287;&#x7684;&#x306A;&#x5411;&#x4E0A;&#x3067;&#x9AD8;&#x6D78;&#x900F;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x3092;&#x8A98;&#x5C0E;&#x3059;&#x308B;&#x30BD;&#x30EB;&#x30D3;&#x30C8;&#x30FC;&#x30EB;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x6CBB;&#x7642;&#x3002;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x3001;PAK2&#x304A;&#x3088;&#x3073;Syk&#x306E;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30D5;&#x30A7;&#x30AF;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x306F;&#x3001;&#x9AD8;&#x6D78;&#x900F;&#x5727;&#x6761;&#x4EF6;&#x4E0B;&#x3067;&#x306E;c-Jun N&#x672B;&#x7AEF;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#xFF08;JNK&#xFF09;&#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x306B;&#x3064;&#x306A;&#x304C;&#x308B;&#x3002; PAK2&#x77ED;&#x9396;&#x5E72;&#x6E09;RNA&#x306F;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306B;Cdc42&#x306E;&#x3067;JNK&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x65B0;&#x305F;&#x306A;&#x7D4C;&#x8DEF;&#x3092;&#x7279;&#x5B9A;&#x3057;&#x3001;&#x5185;&#x56E0;&#x6027;&#x306E;Syk&#x3068;JNK&#x306E;&#x30BD;&#x30EB;&#x30D3;&#x30C8;&#x30FC;&#x30EB;&#x5A92;&#x4ECB;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x3092;&#x6291;&#x5236;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x306F;&#x3001;PAK2&#x304A;&#x3088;&#x3073;Syk&#x304C;&#x7A4D;&#x6975;&#x7684;&#x306B;&#x30B9;&#x30C8;&#x30EC;&#x30B9;&#x306B;&#x5BFE;&#x3059;&#x308B;&#x7D30;&#x80DE;&#x5FDC;&#x7B54;&#x3092;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x5354;&#x529B;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;

&#x6D78;&#x900F;&#x5727;&#x30B9;&#x30C8;&#x30EC;&#x30B9;&#x306B;&#x5FDC;&#x7B54;&#x3057;&#x3066;Syk&#x306E;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x30C1;&#x30ED;&#x30B7;&#x30F3;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x306F;&#x3001;P21-&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C6;&#x30A4;&#x30F3;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;Pak2/gamma-PAK&#x3068;&#x306E;&#x5BFE;&#x8A71;&#x304C;&#x5FC5;&#x8981;

P21 &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xB5A0;&#xB4E4;&#xACE0;/&#xD2B8;&#xB808;&#xC624;&#xB2CC; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xD0A4; &#xB2C8; &#xC544; Pak2/&#xAC10;&#xB9C8;-&#xBC15;&#xC138;&#xB9AC;&#xC640; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xD2F0;&#xB85C;&#xC2E0; &#xD0A4; &#xB2C8; &#xC544; &#xC81C; Syk nonreceptor &#xC720;&#xD615;&#xC758; &#xC138;&#xD3EC; &#xC0BC; &#xD22C; &#xC2A4;&#xD2B8;&#xB808;&#xC2A4;&#xC5D0; &#xB178;&#xCD9C; &#xB418; &#xBA74; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xB420; &#xC54C;&#xB824;&#xC838; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xD604;&#xC7AC;&#xC758; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xC758; &#xBAA9;&#xC801;&#xC740; Pak2 &#xACE0; Syk &#xC140;&#xB8F0;&#xB7EC; &#xC2E0;&#xD638;&#xC5D0; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xD611;&#xC870; &#xC5EC;&#xBD80; &#xAC80;&#xC0AC; &#xD588;&#xB2E4;. Cotransfection &#xC5F0;&#xAD6C; &#xACF5;&#xAC1C; Pak2 Syk COS &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0;&#xC11C;&#xC640; &#xC5F0;&#xACB0; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. Cdc42 constitutively &#xD65C;&#xC131; &#xD615;&#xD0DC;&#xC758; &#xC99D;&#xAC00; Syk&#xC640; pak2&#xC758; &#xD611;&#xD68C;. Pak2 coexpressed cdc42&#xC758; &#xBE44;&#xD65C;&#xC131; &#xD615;&#xD0DC; &#xB610;&#xB294; Syk, Pak2-Syk &#xD611;&#xD68C; Pak2 &#xD65C;&#xC131;&#xD654;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xD5A5;&#xC0C1; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xC81C;&#xC548;&#xC73C;&#xB85C; &#xB0AE;&#xC740; &#xC815;&#xB3C4;&#xC758; &#xC791;&#xC6A9; &#xD558; &#xB2C8; &#xBE44;&#xD65C;&#xC131; Pak2. Pak2 &#xC0C1;&#xD638; Syk &#xB0B4;&#xC7A5; &#xD0A4; &#xB2C8; &#xC544; &#xC81C; &#xD65C;&#xB3D9;&#xC744; &#xD5A5;&#xC0C1; &#xC2DC;&#xD0B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774; &#xCCB4; &#xC678; &#xC5F0;&#xAD6C; Pak2 phosphorylates &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC8FC;&#xB294; Syk &#xD65C;&#xC131;&#xD654;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC9C0;&#xC6D0; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. Hyperosmolarity &#xC720;&#xB3C4; sorbitol&#xACFC; &#xC140;&#xC758; &#xCC98;&#xB9AC; Pak2 &#xACE0; Syk&#xC758; &#xC804; &#xD575;&#xC744; &#xB458;&#xB7EC;&#xC2FC; &#xC9C0;&#xC5ED; &#xBC0F; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC758; &#xD611;&#xD68C;&#xC758; &#xADF9;&#xC801;&#xC778; &#xD5A5;&#xC0C1;&#xC5D0; &#xBC1C;&#xC0DD; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB610;&#xD55C;, Pak2 &#xBC0F; Syk cotransfection c 6 &#xC6D4; N &#xB9E8;&#xB05D; &#xD0A4; (JNK) hyperosmotic &#xC870;&#xAC74; &#xD558;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD65C;&#xC131;&#xD654;&#xAC00; &#xB048;&#xB2E4;. Pak2 &#xC9E7;&#xC740; &#xAC04;&#xC12D; RNA &#xC0DD; Syk &#xBC0F; cdc42&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; JNK &#xD65C;&#xC131;&#xD654;&#xB97C; &#xC704;&#xD55C; &#xC0C8;&#xB85C;&#xC6B4; &#xD1B5;&#xB85C; &#xB530;&#xB77C;&#xC11C; &#xC2DD;&#xBCC4; JNK sorbitol &#xC911;&#xC7AC; &#xD65C;&#xC131;&#xD654;&#xB97C; &#xD45C;&#xC2DC; &#xD558;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xACB0;&#xACFC; pak2&#xC640; Syk &#xAE0D;&#xC815;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xC140;&#xB8F0;&#xB7EC; &#xC751;&#xB2F5; &#xC2A4;&#xD2B8;&#xB808;&#xC2A4; &#xC870;&#xC808;&#xC5D0; &#xD611;&#xC870;&#xB294; &#xC785;&#xC99D;.

P21 &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xD55C; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xD0A4; &#xB2C8; &#xC544; &#xC81C; Pak2/&#xAC10;&#xB9C8;-&#xBC15;&#xC138;&#xB9AC;&#xC640; &#xD568;&#xAED8; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC744; &#xD544;&#xC694;&#xB85C; &#xD558;&#xB294; &#xC0BC; &#xD22C; &#xC2A4;&#xD2B8;&#xB808;&#xC2A4;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC751;&#xB2F5;&#xC5D0;&#xC11C; Syk &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xD2F0;&#xB85C;&#xC2E0; &#xD0A4; &#xB2C8; &#xC544; &#xC81C; &#xD65C;&#xC131;&#xD654;

La serina activada por p21 / treonina prote&#xED;na quinasa Pak2/gamma-PAK y el tipo de nonreceptor Syk prote&#xED;na tirosina quinasa se sabe que se activa cuando las c&#xE9;lulas est&#xE1;n expuestas a estr&#xE9;s osm&#xF3;tico. El prop&#xF3;sito del presente estudio fue examinar si Pak2 y Syk funcionalmente cooperar en la se&#xF1;alizaci&#xF3;n celular. Estudios revelaron que cotransfecci&#xF3;n Pak2 asociados con Syk en c&#xE9;lulas COS. La forma constitutivamente activa de Cdc42 aumenta la asociaci&#xF3;n de Pak2 con Syk. Pak2 coexpressed con una forma inactiva de Cdc42 o quinasa inactiva Pak2 interact&#xFA;a en menor medida, con Syk, lo que sugiere que Pak2-Syk asociaci&#xF3;n se ve reforzada por Pak2 activaci&#xF3;n. Interacci&#xF3;n con Pak2 aumenta la actividad quinasa intr&#xED;nseca de Syk. Esto es apoyado por los estudios in vitro muestran que Pak2 fosforila y activa Syk. El tratamiento de c&#xE9;lulas con sorbitol para inducir hiperosmolaridad resultados en la translocaci&#xF3;n de Pak2 y Syk a la regi&#xF3;n que rodea el n&#xFA;cleo y en la mejora dram&#xE1;tica de su asociaci&#xF3;n. Adem&#xE1;s, co-transfecci&#xF3;n de Pak2 y Syk conduce a la activaci&#xF3;n de c-Jun N-terminal quinasa (JNK) en condiciones hiperosm&#xF3;ticos. Pak2 ARN corto de interferencia suprime el sorbitol mediada por la activaci&#xF3;n end&#xF3;gena de Syk y JNK, identificando as&#xED; una nueva v&#xED;a para la activaci&#xF3;n de JNK por Cdc42. Estos resultados demuestran que Pak2 y Syk positivamente cooperar para regular las respuestas celulares al estr&#xE9;s.

La activaci&#xF3;n de la prote&#xED;na quinasa Syk tirosina en respuesta al estr&#xE9;s osm&#xF3;tico requiere la interacci&#xF3;n con P21 activada por la prote&#xED;na quinasa Pak2/gamma-PAK

Pak2 &#x662F;&#x4E1D;&#x6C28;&#x9178;/&#x82CF;&#x6C28;&#x9178;&#x6FC0;&#x9176;&#x53C2;&#x4E0E;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x53CD;&#x5E94;&#xFF0C;&#x8981;&#x5F3A;&#x8C03;&#x7684;&#x3002;&#x4E4B;&#x95F4;&#x7684;&#x6F5C;&#x5728;&#x7684;&#x886C;&#x5E95;&#x6750;&#x6599;&#x7684; Pak2 &#x662F;&#x7531;&#x539F;&#x764C;&#x57FA;&#x56E0; MYC &#x7F16;&#x7801;&#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28; Myc&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#x6211;&#x4EEC;&#x5C55;&#x793A; Pak2 phosphorylates (T358&#x3001; S373 &#x548C; T400) &#x7684;&#x4E09;&#x4E2A;&#x5730;&#x70B9; Myc &#x548C;&#x5F71;&#x54CD;&#x4F53;&#x5916;&#x548C;&#x4F53;&#x5185;&#x7684; Myc &#x804C;&#x80FD;&#x3002;&#x901A;&#x8FC7;&#x963B;&#x6B62;&#x4E0E;&#x6700;&#x5927;&#x503C; &#xFF08;&#x901A;&#x8FC7;&#x5728; S373 &#x548C; T400 &#x7684;&#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#xFF09; &#x7684;&#x5FC5;&#x8981;&#x4E8C;&#x805A;&#x6216;&#x76F4;&#x63A5;&#x5E72;&#x6270; &#xFF08;&#x901A;&#x8FC7;&#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x5728; T358&#xFF09; &#x7ED1;&#x5B9A;&#x5230; DNA &#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x5728;&#x6240;&#x6709;&#x4E09;&#x4E2A;&#x6B8B;&#x7559;&#x51CF;&#x5C11;&#x4E86; dna&#xFF0C;Myc &#x7684;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x3002;Pak2 &#x7684;&#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x6291;&#x5236;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x8F6C;&#x5F55;&#xFF0C;&#x4EE5;&#x7EF4;&#x6301;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x589E;&#x6B96;&#x3001; &#x53D8;&#x6362; NIH 3T3 &#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x57F9;&#x517B;&#xFF0C;&#x5E76;&#x4E89;&#x53D6;&#x51CB;&#x4EA1;&#x8840;&#x6E05;&#x64A4;&#x51FA; Myc &#x7684;&#x80FD;&#x529B;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7ED3;&#x679C;&#x8868;&#x660E; Pak2 &#x662F;&#x4E00;&#x4E2A;&#x6D88;&#x6781;&#x7684;&#x76D1;&#x7BA1;&#x673A;&#x6784;&#x7684; Myc&#xFF0C;&#x8868;&#x660E; Myc &#x7684;&#x6291;&#x5236;&#x4F5C;&#x7528;&#x5728;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x53CD;&#x5E94;&#xFF0C;&#x5F3A;&#x8C03;&#xFF0C;&#x5E76;&#x63D0;&#x9AD8; Pak2 &#x53EF;&#x4E3A;&#x6291;&#x764C;&#x57FA;&#x56E0;&#x4EA7;&#x54C1;&#x7684;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x3002;

Myc &#x86CB;&#x767D;&#x7684;&#x5E94;&#x6FC0;&#x53CD;&#x5E94;&#x6FC0;&#x9176; Pak2 &#x7684;&#x8D1F;&#x63A7;&#x5236;&#x3002;

Pak2 is a serine/threonine kinase that participates in the cellular response to stress. Among the potential substrates for Pak2 is the protein Myc, encoded by the proto-oncogene MYC. Here we demonstrate that Pak2 phosphorylates Myc at three sites (T358, S373, and T400) and affects Myc functions both in vitro and in vivo. Phosphorylation at all three residues reduces the binding of Myc to DNA, either by blocking the requisite dimerization with Max (through phosphorylation at S373 and T400) or by interfering directly with binding to DNA (through phosphorylation at T358). Phosphorylation by Pak2 inhibits the ability of Myc to activate transcription, to sustain cellular proliferation, to transform NIH 3T3 cells in culture, and to elicit apoptosis on serum withdrawal. These results indicate that Pak2 is a negative regulator of Myc, suggest that inhibition of Myc plays a role in the cellular response to stress, and raise the possibility that Pak2 may be the product of a tumor suppressor gene.

Negative control of the Myc protein by the stress-responsive kinase Pak2.

PAK2 est une s&#xE9;rine / thr&#xE9;onine kinase qui participe &#xE0; la r&#xE9;ponse cellulaire au stress. Parmi les substrats potentiels pour PAK2 est la prot&#xE9;ine Myc, cod&#xE9;e par le proto-oncog&#xE8;ne MYC. Nous d&#xE9;montrons ici que PAK2 phosphoryle Myc sur trois sites (T358, S373, T400 et) et affecte les fonctions Myc la fois in vitro et in vivo. Phosphorylation &#xE0; tous les trois r&#xE9;sidus diminue la liaison de Myc &#xE0; l&#x26;#39;ADN, soit par blocage de la dim&#xE9;risation n&#xE9;cessaires avec Max (par phosphorylation au S373 et T400) ou en interf&#xE9;rant directement avec liaison &#xE0; l&#x26;#39;ADN (par phosphorylation au T358). La phosphorylation par PAK2 inhibe la capacit&#xE9; de Myc &#xE0; activer la transcription, pour soutenir la prolif&#xE9;ration cellulaire, pour transformer des cellules NIH 3T3 en culture, et de susciter l&#x26;#39;apoptose sur le retrait du s&#xE9;rum. Ces r&#xE9;sultats indiquent que PAK2 est un r&#xE9;gulateur n&#xE9;gatif de Myc, sugg&#xE8;rent que l&#x26;#39;inhibition de Myc joue un r&#xF4;le dans la r&#xE9;ponse cellulaire au stress, et soul&#xE8;vent la possibilit&#xE9; que PAK2 peut &#xEA;tre le produit d&#x26;#39;un g&#xE8;ne suppresseur de tumeur.

Contr&#xF4;le n&#xE9;gatif de la prot&#xE9;ine Myc par la kinase de r&#xE9;action au stress PAK2

Negative Kontrolle des Myc-Proteins von der f&#xFC;r Stress verantwortlichen Kinase PAK2.

Pak2 &egrave; una serina/treonina chinasi che partecipa la risposta cellulare allo stress. Tra i potenziali substrati per Pak2 sono la proteina Myc, codificata tramite il proto-oncogene MYC. Qui dimostriamo che Pak2 tirosine Myc in tre siti (T358, S373 e T400) e influisce su funzioni di Myc in vitro e in vivo. Fosforilazione a tutti e tre i residui riduce il legame di Myc al DNA, bloccando la dimerizzazione necessaria con Max (tramite la fosforilazione a S373 e T400) o interferendo direttamente con il legame al DNA (tramite la fosforilazione a T358). La fosforilazione di Pak2 inibisce la capacit&agrave; di Myc per attivare la trascrizione, per sostenere la proliferazione cellulare, per trasformare cellule 3T3 NIH nella cultura e a suscitare apoptosi sul prelievo di siero. Questi risultati indicano che Pak2 &egrave; un regolatore negativo di Myc, suggeriscono che l&#39;inibizione di Myc gioca un ruolo nella risposta cellulare per lo stress e aumentare la possibilit&agrave; che Pak2 pu&ograve; essere il prodotto di un gene soppressore tumorale.

Controllo negativo della proteina Myc dalla chinasi stress-responsive Pak2.

PAK2&#x306F;&#x3001;&#x30B9;&#x30C8;&#x30EC;&#x30B9;&#x306B;&#x5BFE;&#x3059;&#x308B;&#x7D30;&#x80DE;&#x5FDC;&#x7B54;&#x306B;&#x95A2;&#x4E0E;&#x3059;&#x308B;&#x30BB;&#x30EA;&#x30F3;/&#x30B9;&#x30EC;&#x30AA;&#x30CB;&#x30F3;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3002; PAK2&#x306E;&#x6F5C;&#x5728;&#x7684;&#x306A;&#x57FA;&#x8CEA;&#x306E;&#x4E2D;&#x306B;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C8;&#x30AA;&#x30F3;&#x30B3;&#x30B8;&#x30FC;&#x30F3;&#x306E;MYC&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x30B3;&#x30FC;&#x30C9;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;Myc&#x306E;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x3001;PAK2 3&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#xFF08;T358&#x3001;S373&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073;T400&#xFF09;&#x3067;Myc&#x306E;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x3068;&#x306F;&#x3001;in vitro&#x304A;&#x3088;&#x3073;in vivo&#x306E;&#x4E21;&#x65B9;Myc&#x306E;&#x6A5F;&#x80FD;&#x306B;&#x5F71;&#x97FF;&#x3092;&#x4E0E;&#x3048;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x3059;&#x3079;&#x3066;&#x306E;3&#x3064;&#x306E;&#x6B8B;&#x57FA;&#x306E;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x306F;&#x3001;&#x6700;&#x5927;&#x3067;&#x5FC5;&#x8981;&#x306A;&#x4E8C;&#x91CF;&#x4F53;&#x5316;&#x3092;&#xFF08;S373&#x3068;T400&#x306E;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x3066;&#xFF09;&#x30D6;&#x30ED;&#x30C3;&#x30AF;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3088;&#x308A;&#x3001;&#x307E;&#x305F;&#x306F;DNA&#xFF08;T358&#x306E;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x3066;&#xFF09;&#x306B;&#x7D50;&#x5408;&#x3059;&#x308B;&#x3068;&#x76F4;&#x63A5;&#x5E72;&#x6E09;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306E;&#x3044;&#x305A;&#x308C;&#x304B;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x3001;DNA&#x306B;Myc&#x306E;&#x7D50;&#x5408;&#x3092;&#x6E1B;&#x3089;&#x3059;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3002; PAK2&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x306F;&#x3001;&#x8EE2;&#x5199;&#x3092;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x3059;&#x308B;&#x7D30;&#x80DE;&#x5897;&#x6B96;&#x3092;&#x7DAD;&#x6301;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x3001;&#x6587;&#x5316;&#x306E;&#x4E2D;&#x3067;NIH 3T3&#x7D30;&#x80DE;&#x3092;&#x5F62;&#x8CEA;&#x8EE2;&#x63DB;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x3001;&#x8840;&#x6E05;&#x64A4;&#x9000;&#x306B;&#x30A2;&#x30DD;&#x30C8;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9;&#x3092;&#x8A98;&#x767A;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;Myc&#x306E;&#x80FD;&#x529B;&#x3092;&#x963B;&#x5BB3;&#x3059;&#x308B;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x306F;&#x3001;PAK2&#x306F;&#x3001;Myc&#x306E;&#x8CA0;&#x306E;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x56E0;&#x5B50;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3059;Myc&#x306E;&#x963B;&#x5BB3;&#x306F;&#x3001;&#x30B9;&#x30C8;&#x30EC;&#x30B9;&#x306B;&#x5BFE;&#x3059;&#x308B;&#x7D30;&#x80DE;&#x5FDC;&#x7B54;&#x306B;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x679C;&#x305F;&#x3057;&#x3066;&#x304A;&#x308A;&#x3001;PAK2&#x306F;&#x3001;&#x816B;&#x760D;&#x6291;&#x5236;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x7523;&#x7269;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x3092;&#x9AD8;&#x3081;&#x308B;&#x304A;&#x52E7;&#x3081;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x30B9;&#x30C8;&#x30EC;&#x30B9;&#x5FDC;&#x7B54;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;PAK2&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;myc&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x30CD;&#x30AC;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6;&#x30B3;&#x30F3;&#x30C8;&#x30ED;&#x30FC;&#x30EB;

Pak2 &#xC2A4;&#xD2B8;&#xB808;&#xC2A4; &#xC138;&#xD3EC; &#xBC18;&#xC751;&#xC5D0; &#xCC38;&#xC5EC; &#xD558; &#xACE0; &#xB5A0;&#xB4E4;&#xACE0;/&#xD2B8;&#xB808;&#xC624;&#xB2CC; &#xD0A4;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;. Pak2&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC7A0;&#xC7AC;&#xC801;&#xC778; &#xAE30;&#xD310; &#xC911; proto-oncogene MYC &#xC758;&#xD574; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; Myc, &#xC774;&#xB2E4;. &#xC5EC;&#xAE30; Pak2 phosphorylates 3 &#xAC1C;&#xC758; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8; (T358, S373, &#xBC0F; T400) Myc &#xBC0F; Myc &#xAE30;&#xB2A5; &#xC0DD;&#xCCB4; &#xC678; &#xBC0F; &#xC0DD;&#xCCB4; &#xC870;&#xAC74;&#xC5D0; &#xC601;&#xD5A5;&#xC744; &#xBCF4;&#xC5EC; &#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xBAA8;&#xB4E0; &#xC138; &#xAC00;&#xC9C0; &#xC794;&#xB958;&#xBB3C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC778; &#xC0B0;&#xD654; (T400 s373&#xC5D0;&#xC11C; &#xC778; &#xC0B0;&#xD654;)&#xC744; &#xD1B5;&#xD574; max &#xD544;&#xC218; dimerization&#xB97C; &#xCC28;&#xB2E8; &#xD558;&#xAC70;&#xB098; (t358&#xC5D0; &#xC778; &#xC0B0;&#xD654;)&#xB97C; &#xD1B5;&#xD574; DNA&#xC5D0; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xC744; &#xC9C1;&#xC811; &#xBC29;&#xD574; &#xD558; &#xC5EC; dna, Myc &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xC744; &#xC904;&#xC77C; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. Pak2&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC778; &#xC0B0;&#xD654; &#xC138;&#xD3EC; &#xD655;&#xC0B0;, &#xBB38;&#xD654;, NIH 3T3 &#xC138;&#xD3EC;&#xB97C; &#xBCC0;&#xD615; &#xD558; &#xACE0; &#xD608; &#xCCAD; &#xCCA0;&#xC218;&#xC5D0; apoptosis &#xC720;&#xB3C4; &#xC720;&#xC9C0; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD574; &#xC804;&#xC0AC; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; Myc&#xC758; &#xB2A5;&#xB825;&#xC744; &#xC5B5;&#xC81C;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xACB0;&#xACFC; Pak2 &#xB124;&#xAC70;&#xD2F0;&#xBE0C; &#xB808; &#xADE4; &#xB808;&#xC774; &#xD130;&#xB294; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0C5;&#xB2C8;&#xB2E4; Myc, &#xC81C;&#xC548; Myc &#xC5B5;&#xC81C; &#xC138;&#xD3EC; &#xBC18;&#xC751; &#xC2A4;&#xD2B8;&#xB808;&#xC2A4;, Pak2 &#xC885;&#xC591; &#xC5B5;&#xC81C;&#xAE30; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC758; &#xC81C;&#xD488;&#xC744; &#xB420; &#xC218; &#xC788;&#xB294; &#xAC00;&#xB2A5;&#xC131;&#xC744; &#xC81C;&#xAE30; &#xD558;&#xB294; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xD55C;&#xB2E4;.

&#xC2A4;&#xD2B8;&#xB808;&#xC2A4; &#xBC18;&#xC751;&#xC774; &#xB2C8; pak2&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; Myc &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xBD80;&#xC815;&#xC801;&#xC778; &#xC81C;&#xC5B4;.

Pak2 es una quinasa de serina / treonina que participa en la respuesta celular al estr&#xE9;s. Entre los sustratos potenciales para Pak2 es la prote&#xED;na Myc, codificada por el proto-oncog&#xE9;n myc. Aqu&#xED; demostramos que Pak2 fosforila Myc en tres sitios (T358, S373, T400 y) y afecta a las funciones de Myc, tanto in vitro como in vivo. La fosforilaci&#xF3;n en todos los tres residuos reduce la uni&#xF3;n de Myc al ADN, ya sea mediante el bloqueo de la dimerizaci&#xF3;n requisito con Max (a trav&#xE9;s de la fosforilaci&#xF3;n en S373 y T400) o al interferir directamente con la uni&#xF3;n a ADN (a trav&#xE9;s de la fosforilaci&#xF3;n en T358). La fosforilaci&#xF3;n por Pak2 inhibe la capacidad de Myc para activar la transcripci&#xF3;n, para mantener la proliferaci&#xF3;n celular, para transformar las c&#xE9;lulas NIH 3T3 en la cultura, y de provocar la apoptosis en la retirada de suero. Estos resultados indican que Pak2 es un regulador negativo de Myc, sugieren que la inhibici&#xF3;n de Myc juega un papel en la respuesta celular al estr&#xE9;s, y aumentar la posibilidad de que Pak2 puede ser el producto de un gen supresor de tumores.

Control negativo de la prote&#xED;na Myc por la quinasa de respuesta a estr&#xE9;s Pak2

&#x534A;&#x80F1;&#x6C28;&#x9178;&#x86CB;&#x767D;&#x9176;&#x5206;&#x89E3;&#x86CB;&#x767D;&#x6FC0;&#x9176; Pak2/&gamma;-&#x767D;&#x6C99;&#x4F46;&#x5C1A;&#x672A;&#x5F97;&#x5230; Cdc42 &#x6FC0;&#x6D3B; Pak2 &#x4E1D;&#x88C2;&#x7D20;&#x6D3B;&#x5316;&#x86CB;&#x767D;&#x6FC0;&#x9176;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x6FC0;&#x9176; 1 (Mnk1) &#x662F;&#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x3002;&#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x7684; Mnk1 &#x662F;&#x5FEB;&#x901F;&#xFF0C;&#x8FBE;&#x5230; 1 mol/mol &#x5B75;&#x5316;&#x4E0E; Pak2 &#x7684; 15 &#x5206;&#x949F;&#x5185;&#x3002;&#x7531; Pak2 Mnk1 &#x7684;&#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x52A8;&#x529B;&#x5B66;&#x5206;&#x6790;&#x6536;&#x76CA;&#x7387; 0.6 microm &#x7684; K(m) &#x548C; V(max) &#x7684; 14.9 pmol &#x7684; min/microg &#x7684; Pak2 (32) P&#x3002;Mnk1 Pak2 &#x7684;&#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x7684;&#x4E8C;&#x7EF4;&#x80F0;&#x9176;&#x78F7;&#x9178;&#x80BD;&#x6620;&#x5C04;&#x4EA7;&#x751F;&#x4E24;&#x4E2A;&#x622A;&#x7136;&#x4E0D;&#x540C;&#x7684;&#x78F7;&#x9178;&#x80BD;&#x3002;Microsequencing &#x81EA;&#x52A8;&#x548C;&#x624B;&#x52A8; Edman &#x964D;&#x89E3;&#x78F7;&#x9178;&#x7684;&#x5206;&#x6790;&#x786E;&#x5B9A;&#x4E3A; Thr(22) &#x548C; Ser(27) Mnk1 &#x7684;&#x7AD9;&#x70B9;&#x3002;Mnk1&#xFF0C;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x7684;&#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x4E0E; Erk2&#xFF0C;phosphorylates &#x771F;&#x6838;&#x8D77;&#x59CB;&#x56E0;&#x5B50; &#xFF08;eIF&#xFF09; 4E &#x548C; eIF4F &#x7684; eIF4G &#x7EC4;&#x4EF6;&#x3002;&#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x7684; Pak2 Mnk1 &#x4E0D;&#x80FD;&#x6FC0;&#x6D3B; Mnk1&#xFF0C;&#x4E0E; eIF4E &#x6216; eIF4F &#x4E3A;&#x5E95;&#x7269;&#x6765;&#x8861;&#x91CF;&#x3002;&#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x6FC0;&#x6D3B; Erk2 Mnk1 Pak2 &#x7531;&#x5BF9;&#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x7684; eIF4E &#x6CA1;&#x6709;&#x5F71;&#x54CD;&#xFF0C;&#x4F46;&#x53EF;&#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x7684; Mnk1 eIF4G &#x51CF;&#x5C11;&#x8FBE; 50%&#x3002;&#x7531; Pak2 Mnk1 &#x7684;&#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x6291;&#x5236;&#x7ED1;&#x5B9A; eIF4G &#x80BD;&#x542B; Mnk1 &#x7ED1;&#x5B9A;&#x7AD9;&#x70B9;&#x8FBE; 80%&#x3002;&#x5F53; 293T &#x7EC6;&#x80DE;&#x53D7;&#x5230;&#x51CB;&#x4EA1;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x8FC7;&#x6C27;&#x5316;&#x6C22;&#x65F6;&#xFF0C;Mnk1 &#x662F;&#x5728; Thr(22) &#x548C; Ser(27) &#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7ED3;&#x679C;&#x8868;&#x660E;&#x901A;&#x8FC7;&#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x7684; Mnk1 &#x7684; Pak2 &#x5728;&#x7EC6;&#x80DE;&#x51CB;&#x4EA1;&#x8FC7;&#x7A0B;&#x4E2D;&#x7684;&#x7FFB;&#x8BD1;&#x8D77;&#x59CB;&#x7684;&#x4E0B;&#x8C03;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;

&#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x7684;&#x534A;&#x80F1;&#x6C28;&#x9178;&#x86CB;&#x767D;&#x9176;&#x6FC0;&#x6D3B; Pak2/&gamma;-&#x767D;&#x6C99; Mnk1 &#x6291;&#x5236;&#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x548C;&#x5C3C;&#x514B;&#x4E0E; eIF4G &#x7684;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;

The mitogen-activated protein kinase-interacting kinase 1 (Mnk1) is phosphorylated by caspase-cleaved protein kinase Pak2/gamma-PAK but not by Cdc42-activated Pak2. Phosphorylation of Mnk1 is rapid, reaching 1 mol/mol within 15 min of incubation with Pak2. A kinetic analysis of the phosphorylation of Mnk1 by Pak2 yields a K(m) of 0.6 microm and a V(max) of 14.9 pmol of (32)P/min/microg of Pak2. Two-dimensional tryptic phosphopeptide mapping of Mnk1 phosphorylated by Pak2 yields two distinct phosphopeptides. Analysis of the phosphopeptides by automated microsequencing and manual Edman degradation identified the sites in Mnk1 as Thr(22) and Ser(27). Mnk1, activated by phosphorylation with Erk2, phosphorylates the eukaryotic initiation factor (eIF) 4E and the eIF4G components of eIF4F. Phosphorylation of Mnk1 by Pak2 does not activate Mnk1, as measured with either eIF4E or eIF4F as substrate. Phosphorylation of Erk2-activated Mnk1 by Pak2 has no effect on phosphorylation of eIF4E but reduces phosphorylation of eIF4G by Mnk1 by up to 50%. Phosphorylation of Mnk1 by Pak2 inhibits binding of eIF4G peptides containing the Mnk1 binding site by up to 80%. When 293T cells are subjected to apoptotic induction by hydrogen peroxide, Mnk1 is phosphorylated at both Thr(22) and Ser(27). These results indicate a role for Pak2 in the down-regulation of translation initiation in apoptosis by phosphorylation of Mnk1.

Phosphorylation of Mnk1 by caspase-activated Pak2/gamma-PAK inhibits phosphorylation and interaction of eIF4G with Mnk.

La prot&#xE9;ine kinase activ&#xE9;e par le mitog&#xE8;ne-interacting kinase 1 (Mnk1) est phosphoryl&#xE9;e par la caspase-cliv&#xE9;e Pak2/gamma-PAK prot&#xE9;ine kinase, mais pas par Cdc42-activ&#xE9; PAK2. La phosphorylation de Mnk1 est rapide, atteignant 1 mol / mol dans les 15 minutes d&#x26;#39;incubation avec PAK2. Une analyse cin&#xE9;tique de la phosphorylation de Mnk1 par PAK2 rendements une K (m) de 0,6 microm&#xE8;tre et un V (max) de 14,9 pmol de (32) P / min / microgrammes de PAK2. Deux dimensions de cartographie phosphopeptide tryptique de Mnk1 phosphoryl&#xE9;e par PAK2 rendements deux phosphopeptides distinctes. L&#x26;#39;analyse des phosphopeptides par micros&#xE9;quen&#xE7;age automatis&#xE9; et manuel d&#xE9;gradation d&#x26;#39;Edman a identifi&#xE9; les sites de Mnk1 que Thr (22) et Ser (27). Mnk1, activ&#xE9;e par phosphorylation avec Erk2, phosphoryle le facteur eucaryote d&#x26;#39;initiation (eIF) 4E et les composants de eIF4G eIF4F. La phosphorylation de Mnk1 par PAK2 n&#x26;#39;active pas Mnk1, telle que mesur&#xE9;e avec soit eIF4E ou eIF4F comme substrat. La phosphorylation de ERK2 activ&#xE9; Mnk1 par PAK2 n&#x26;#39;a aucun effet sur la phosphorylation de eIF4E, mais r&#xE9;duit la phosphorylation de eIF4G par Mnk1 jusqu&#x26;#39;&#xE0; 50%. La phosphorylation de Mnk1 par PAK2 inhibe la liaison de eIF4G peptides contenant le site de liaison Mnk1 jusqu&#x26;#39;&#xE0; 80%. Lorsque des cellules 293T sont soumis &#xE0; l&#x26;#39;induction d&#x26;#39;apoptose par le peroxyde d&#x26;#39;hydrog&#xE8;ne, Mnk1 est phosphoryl&#xE9;e &#xE0; la fois Thr (22) et Ser (27). Ces r&#xE9;sultats indiquent un r&#xF4;le &#xE0; jouer dans la PAK2 r&#xE9;gulation &#xE0; la baisse de l&#x26;#39;initiation de traduction dans l&#x26;#39;apoptose par la phosphorylation de Mnk1.

La phosphorylation de Mnk1 par la caspase-activ&#xE9; Pak2/gamma-PAK inhibe la phosphorylation et de l&#x26;#39;interaction de eIF4G avec Mnk

Die Phosphorylierung von Mnk1 durch Caspase-aktivierten Pak2/gamma-PAK hemmt die Phosphorylierung und Interaktion von eIF4G mit Mnk.

La chinasi interagenti chinasi di proteina mitogene-attivata 1 (Mnk1) &egrave; fosforilata da chinasi di proteina clivata caspase Pak2/gamma-PAK ma non da Pak2 Cdc42-attivato. La fosforilazione di Mnk1 &egrave; rapida, raggiungendo 1 mol/mol entro 15 min di incubazione con Pak2. Un&#39;analisi cinetica di fosforilazione di Mnk1 da Pak2 produce un K(m) di 0,6 microm e un FV di 14,9 pmol di (32) microg/P/min di Pak2. Mappatura bidimensionale fosfopeptide triptico di Mnk1 fosforilato da Pak2 produce due distinte fosfopeptidi. Analisi di fosfopeptidi da microsequencing automatizzato e manuale degradazione di Edman identificato i siti in Mnk1 come Thr(22) e Ser(27). Mnk1, attivata da fosforilazione con Erk2, fosforila l&#39;iniziazione eucariotico (FEI) fattore 4E e i componenti eIF4G di eIF4F. La fosforilazione di Mnk1 da Pak2 non attivare Mnk1, misurata con eIF4E o eIF4F come substrato. Fosforilazione di Mnk1 Erk2 attivata da Pak2 non ha alcun effetto sulla fosforilazione di eIF4E, ma riduce la fosforilazione di eIF4G da Mnk1 fino al 50%. Fosforilazione di Mnk1 da Pak2 inibisce il legame di peptidi eIF4G contenente il sito di legame Mnk1 fino al 80%. Quando le cellule 293T sono sottoposti ad induzione di apoptosi con perossido di idrogeno, Mnk1 &egrave; fosforilata a livello Thr(22) e Ser(27). Questi risultati indicano un ruolo per Pak2 in down-regulation di inizio di traduzione in apoptosis di fosforilazione di Mnk1.

La fosforilazione di Mnk1 di caspase-attivato Pak2/gamma-PAK inibisce la fosforilazione e l&#39;interazione di eIF4G con Mnk.

&#x30DE;&#x30A4;&#x30C8;&#x30B8;&#x30A7;&#x30F3;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C6;&#x30A4;&#x30F3;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x3068;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x3059;&#x308B;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;1&#xFF08;Mnk1&#xFF09;&#x306F;&#x3001;&#x30AB;&#x30B9;&#x30D1;&#x30FC;&#x30BC;&#x5207;&#x65AD;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C6;&#x30A4;&#x30F3;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;Pak2/gamma-PAK&#x3067;&#x306F;&#x306A;&#x304F;&#x3001;Cdc42&#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;PAK2&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x3002; Mnk1&#x306E;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x306F;&#x3001;PAK2&#x3068;&#x306E;&#x30A4;&#x30F3;&#x30AD;&#x30E5;&#x30D9;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x306E;15&#x5206;&#x4EE5;&#x5185;&#x306B;1&#x30E2;&#x30EB;/&#x30E2;&#x30EB;&#x306B;&#x9054;&#x3057;&#x3001;&#x6025;&#x901F;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3002; 0.6&#x30DE;&#x30A4;&#x30AF;&#x30ED;&#x30E2;&#x30EB;&#x3068;PAK2&#x306E;&#x306E;14.9 pmol&#x306E;V&#xFF08;&#x6700;&#x5927;&#xFF09;&#xFF08;32&#xFF09;P /&#x5206;/&#x3BC;g&#x306E;&#x306E;PAK2&#x53CE;&#x91CF;K&#xFF08;m&#xFF09;&#x3067;Mnk1&#x306E;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x306E;&#x901F;&#x5EA6;&#x8AD6;&#x7684;&#x89E3;&#x6790;&#x3002; PAK2&#x5229;&#x56DE;&#x308A;&#x3064;&#x306E;&#x7570;&#x306A;&#x308B;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x306B;&#x3088;&#x308A;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x3055;Mnk1&#x306E;&#x4E8C;&#x6B21;&#x5143;&#x30C8;&#x30EA;&#x30D7;&#x30B7;&#x30F3;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C9;&#x30DE;&#x30C3;&#x30D4;&#x30F3;&#x30B0;&#x3002;&#x81EA;&#x52D5;&#x5316;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x30DF;&#x30AF;&#x30ED;&#x3068;&#x624B;&#x52D5;&#x30A8;&#x30C9;&#x30DE;&#x30F3;&#x5206;&#x89E3;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C9;&#x306E;&#x5206;&#x6790;&#x306F;&#x3001;Thr&#xFF08;22&#xFF09;&#x304A;&#x3088;&#x3073;Ser&#xFF08;27&#xFF09;&#x3068;&#x3057;&#x3066;Mnk1&#x306E;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x3092;&#x540C;&#x5B9A;&#x3057;&#x305F;&#x3002; ERK2&#x306E;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x306B;&#x3088;&#x308A;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;Mnk1&#x306F;&#x3001;&#x771F;&#x6838;&#x751F;&#x7269;&#x306E;&#x958B;&#x59CB;&#x56E0;&#x5B50;&#xFF08;EIF&#xFF09;4E&#x3068;e&#x200B;&#x200B;IF4F&#x306E;eIF4G&#x6210;&#x5206;&#x3092;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x3059;&#x308B;&#x3002; PAK2&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;Mnk1&#x306E;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x306F;&#x3001;&#x57FA;&#x8CEA;&#x3068;&#x3057;&#x3066;eIF4E&#x307E;&#x305F;&#x306F;eIF4F&#x306E;&#x3044;&#x305A;&#x308C;&#x304B;&#x3067;&#x6E2C;&#x5B9A;&#x3057;&#x3001;Mnk1&#x3092;&#x6709;&#x52B9;&#x306B;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3002; PAK2&#x306B;&#x3088;&#x308B;ERK2&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;Mnk1&#x306E;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;eIF4E&#x306E;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x306B;&#x5F71;&#x97FF;&#x3092;&#x4E0E;&#x3048;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x304C;&#x3001;50&#xFF05;&#x307E;&#x3067;Mnk1&#x3067;eIF4G&#x306E;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x3092;&#x4F4E;&#x6E1B;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002; PAK2&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;Mnk1&#x306E;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x306F;80&#xFF05;&#x307E;&#x3067;Mnk1&#x7D50;&#x5408;&#x90E8;&#x4F4D;&#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C9;&#x3092;eIF4G&#x306E;&#x7D50;&#x5408;&#x3092;&#x963B;&#x5BB3;&#x3059;&#x308B;&#x3002; 293T&#x7D30;&#x80DE;&#x306F;&#x904E;&#x9178;&#x5316;&#x6C34;&#x7D20;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x30A2;&#x30DD;&#x30C8;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9;&#x8A98;&#x5C0E;&#x306B;&#x3055;&#x3089;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3068;&#x304D;&#x306B;&#x3001;Mnk1&#x306F;&#x30B9;&#x30EC;&#x30AA;&#x30CB;&#x30F3;&#xFF08;22&#xFF09;&#x304A;&#x3088;&#x3073;Ser&#xFF08;27&#xFF09;&#x306E;&#x4E21;&#x65B9;&#x304C;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x306F;Mnk1&#x306E;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x30A2;&#x30DD;&#x30C8;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x7FFB;&#x8A33;&#x958B;&#x59CB;&#x306E;&#x30C0;&#x30A6;&#x30F3;&#x30EC;&#x30AE;&#x30E5;&#x30EC;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x306B;PAK2&#x306E;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x30AB;&#x30B9;&#x30D1;&#x30FC;&#x30BC;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;Pak2/gamma-PAK&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;Mnk1&#x306E;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x306F;&#x3001;&#x30E2;&#x30F3;&#x30AF;&#x3068;EIF4G&#x306E;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x3068;&#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x3092;&#x963B;&#x5BB3;&#x3059;&#x308B;

&#xBB3C;&#xC9C8; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xD55C; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xD0A4; &#xB2C8; &#xC544; &#xC81C; &#xC791;&#xC6A9; &#xD0A4; 1 (Mnk1) Pak2 Cdc42 &#xD65C;&#xC131; &#xC544;&#xB2C8;&#xB77C; caspase &#xBD99;&#xC5B4; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xD0A4; &#xB2C8; &#xC544; &#xC81C; Pak2/&#xAC10;&#xB9C8;-&#xBC15;&#xC138;&#xB9AC;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; phosphorylated &#xC774;&#xB2E4;. Mnk1&#xC758; &#xC778; &#xC0B0;&#xD654;&#xB294; &#xC2E0;&#xC18D; &#xD558; &#xAC8C;, 1 mol/mol&#xC758; pak2&#xC640; &#xD568;&#xAED8; &#xBD80; &#xD654; 15 &#xBD84; &#xC774;&#xB0B4;&#xC5D0; &#xB3C4;&#xB2EC; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. Mnk1 pak2&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC778; &#xC0B0;&#xD654;&#xC758; &#xC6B4;&#xB3D9; &#xBD84;&#xC11D; 0.6 microm k(m)&#xC640; pak2&#xC758; (32) P/&#xBD84;/microg 14.9 pmol v(max)&#xB97C; &#xC0DD;&#xC131;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. Mnk1 pak2&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; phosphorylated&#xC758; 2 &#xCC28;&#xC6D0; tryptic phosphopeptide &#xB9E4;&#xD551; &#xB450; &#xAC1C;&#xC758; &#xC11C;&#xB85C; &#xB2E4;&#xB978; phosphopeptides&#xB97C; &#xC0DD;&#xC131; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC790;&#xB3D9;&#xD654; &#xB41C; microsequencing &#xBC0F; &#xC218;&#xB3D9; Edman &#xC800;&#xD558; &#xD558; &#xC5EC; phosphopeptides&#xC758; &#xBD84;&#xC11D; Thr(22) &#xBC0F; Ser(27) mnk1&#xC5D0;&#xC11C; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8; &#xC2DD;&#xBCC4;. Mnk1, Erk2&#xACFC; &#xC778; &#xC0B0;&#xD654;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; phosphorylates &#xC9C4; &#xD575; &#xAC1C;&#xC2DC; &#xC778;&#xC790; (eIF) 4E &#xBC0F; Eif4f&#xC758; eIF4G &#xAD6C;&#xC131; &#xC694;&#xC18C;. EIF4E &#xB610;&#xB294; eIF4F &#xAE30;&#xD310;&#xC73C;&#xB85C; &#xCE21;&#xC815; &#xB41C; pak2&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; mnk1&#xC758; &#xC778; &#xC0B0;&#xD654;&#xC5D0;&#xB294; Mnk1, &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xB418;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. Pak2, Mnk1 Erk2 &#xD65C;&#xC131;&#xC758; &#xC778; &#xC0B0;&#xD654; Eif4e&#xC758; &#xC778; &#xC0B0;&#xD654;&#xC5D0; &#xC601;&#xD5A5;&#xC744; &#xC8FC;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xCD5C;&#xB300; 50%&#xAE4C;&#xC9C0; mnk1&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; Eif4g&#xC758; &#xC778; &#xC0B0;&#xD654;&#xB97C; &#xAC10;&#xC18C; &#xC2DC;&#xD0A8;&#xB2E4;. Mnk1 pak2&#xC5D0; &#xC758;&#xD574;&#xC758; &#xC778; &#xC0B0;&#xD654; eIF4G &#xD3A9; &#xD2F0; &#xB4DC; Mnk1 &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8;&#xB97C; &#xD3EC;&#xD568; &#xD558;&#xB294; &#xCD5C;&#xB300; 80%&#xC758; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xC744; &#xC5B5;&#xC81C; &#xD55C;&#xB2E4;. &#xB54C; 293T &#xC138;&#xD3EC;&#xB294; &#xACFC;&#xC0B0;&#xD654; &#xC218;&#xC18C;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; apoptotic &#xC720;&#xB3C4; &#xB300;&#xC0C1;, Mnk1 thr(22)&#xC640; ser(27)&#xC5D0;&#xC11C; phosphorylated &#xC774;&#xB2E4;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xACB0;&#xACFC; mnk1&#xC758; &#xC778; &#xC0B0;&#xD654;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; apoptosis&#xC5D0; &#xBC88;&#xC5ED; &#xAC1C;&#xC2DC;&#xC758; &#xC544;&#xB798; &#xADDC;&#xC815;&#xC5D0; pak2&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0C5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Caspase &#xD65C;&#xC131; Pak2/&#xAC10;&#xB9C8;-&#xBC15;&#xC138;&#xB9AC;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; mnk1&#xC758; &#xC778; &#xC0B0;&#xD654; &#xC778; &#xC0B0;&#xD654; &#xBC0F; Mnk&#xC640; Eif4g&#xC758; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC744; &#xC5B5;&#xC81C; &#xD55C;&#xB2E4;.

La prote&#xED;na quinasa activada por mit&#xF3;genos que interacciona con la quinasa 1 (Mnk1) es fosforilada por la caspasa-hendida Pak2/gamma-PAK prote&#xED;na quinasa, pero no por Cdc42 activado Pak2. La fosforilaci&#xF3;n de Mnk1 es r&#xE1;pida, alcanzando 1 mol / mol dentro de 15 minutos de incubaci&#xF3;n con Pak2. Un an&#xE1;lisis cin&#xE9;tico de la fosforilaci&#xF3;n de Mnk1 por Pak2 rendimientos una K (m) de 0,6 micras y una V (max) de 14,9 pmol de P (32) / min / ug de Pak2. Bidimensional phosphopeptide cartograf&#xED;a tr&#xED;ptico de Mnk1 fosforilada por Pak2 produce dos fosfop&#xE9;ptidos distintas. El an&#xE1;lisis de los fosfop&#xE9;ptidos por microsecuenciaci&#xF3;n automatizado y manual de la degradaci&#xF3;n de Edman identificado los sitios en Mnk1 como Thr (22) y Ser (27). Mnk1, activada por la fosforilaci&#xF3;n con Erk2, fosforila el factor eucari&#xF3;tico de iniciaci&#xF3;n (FEI) 4E y los componentes de eIF4G eIF4F. La fosforilaci&#xF3;n de Mnk1 por Pak2 no activa Mnk1, medido ya sea con o eIF4E eIF4F como sustrato. La fosforilaci&#xF3;n de Erk2 activado Mnk1 por Pak2 no tiene ning&#xFA;n efecto sobre la fosforilaci&#xF3;n de eIF4E pero reduce la fosforilaci&#xF3;n de eIF4G por Mnk1 hasta en un 50%. La fosforilaci&#xF3;n de Mnk1 por Pak2 inhibe la uni&#xF3;n de eIF4G p&#xE9;ptidos que contienen el sitio de uni&#xF3;n Mnk1 hasta en un 80%. Cuando las c&#xE9;lulas 293T son sometidos a la inducci&#xF3;n de apoptosis por el per&#xF3;xido de hidr&#xF3;geno, Mnk1 se fosforila en ambos Thr (22) y Ser (27). Estos resultados indican un papel de Pak2 en la baja regulaci&#xF3;n de la iniciaci&#xF3;n de la traducci&#xF3;n en la apoptosis por la fosforilaci&#xF3;n de Mnk1.

La fosforilaci&#xF3;n de Mnk1 por la caspasa-activado Pak2/gamma-PAK inhibe la fosforilaci&#xF3;n y la interacci&#xF3;n de eIF4G con Mnk

Pak2&#xFF0C;p21 &#x6D3B;&#x5316;&#x86CB;&#x767D;&#x6FC0;&#x9176; (&#x767D;&#x77F3;) &#x5BB6;&#x5EAD;&#x6210;&#x5458;&#x4E2D;&#x54CD;&#x5E94;&#x7684;&#x5F3A;&#x8C03;&#x5404;&#x79CD;&#x6FC0;&#x6D3B;&#xFF0C;&#x5E76;&#x4E14;&#x76F4;&#x63A5;&#x53C2;&#x4E0E;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x7684; cytostasis&#x3002;&#x5728;&#x5206;&#x5B50;&#x6C34;&#x5E73; Pak2 &#x7ED1;&#x5B9A; Cdc42(GTP)&#xFF0C;Pak2 &#x8F6C;&#x8FD0;&#x5230;&#x5185;&#x8D28;&#x7F51;&#x662F; autophosphorylated&#xFF0C;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x3002;Pak2 &#x662F;&#x5728;&#x516B;&#x4E2A;&#x5730;&#x70B9; &#xFF1B; autophosphorylatedSer 141 &#x548C;&#x7BA1;&#x7406;&#x57DF;&#x4E2D;&#x7684; Ser 165 &#x548C;&#x82CF;&#x6C28;&#x9178; 402 &#x6FC0;&#x6D3B;&#x5FAA;&#x73AF;&#x4E2D;&#x88AB;&#x786E;&#x5B9A;&#x4E3A;&#x5173;&#x952E;&#x7AD9;&#x70B9;&#x4E2D;&#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#x6FC0;&#x9176;&#x7684;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x3002;Ser 141 &#x548C; Ser 165 &#x5BF9;&#x6D3B;&#x5316;&#x7684;&#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x4F5C;&#x7528;&#x662F;&#x4E0E;&#x91CE;&#x751F;&#x578B; (WT) &#x548C;&#x7A81;&#x53D8;&#x4F53; Pak2 &#x7684;&#x5206;&#x6790;&#x3002;&#x4E0E; S141A &#x7684;&#x81EA;&#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x6C34;&#x5E73;&#x51CF;&#x81F3; 65%&#x76F8;&#x6BD4; WT &#x548C; S141D &#x4E0E;&#x5E95;&#x7269;&#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x4E5F;&#x76F8;&#x5E94;&#x51CF;&#x5C11; 45%&#xFF0C;&#x8868;&#x660E;&#x8BE5;&#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x5728; Ser 141 &#x662F;&#x9700;&#x8981;&#x4F18;&#x5316;&#x6D3B;&#x52A8;&#x3002;&#x81EA;&#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x6291;&#x5236; WT Pak2 &#x548C; Cdc42(GTP) &#x4E4B;&#x95F4;&#x7684;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;&#x5728; 293T &#x7EC6;&#x80DE;&#xFF0C;WT Pak2&#x3001; S141A &#x548C; S141D &#x5F62;&#x6210;&#x4E00;&#x4E2A;&#x7A33;&#x5B9A;&#x7684;&#x590D;&#x6742;&#x4E00;&#x79EF;&#x6781;&#x7A81;&#x53D8; Cdc42 L61&#xFF0C;&#x4F46;&#x4E0D;&#x662F;&#x4E0E;&#x5360;&#x4E3B;&#x5BFC;&#x5730;&#x4F4D;&#x7684;&#x6D88;&#x6781; Cdc42 N17&#x3002;&#x4E2D;&#x8C37;&#x80F1;&#x7518;&#x80BD; S-&#x8F6C;&#x79FB;&#x9176;&#x4E0B;&#x62C9;&#x83DC;&#x5355;&#x5316;&#x9A8C;&#x6240;&#x793A;&#xFF0C;S141A &#x5C06;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x5230; Cdc42(GTP) &#x6BD4; S141D &#x7684;&#x586B;&#x5145;&#x7269;&#x66F4;&#x9AD8;&#x7EA7;&#x522B;&#x3002;&#x4E0E;&#x6B64;&#x76F8;&#x53CD;&#xFF0C;S165A &#x548C; S165D &#x57FA;&#x56E0;&#x7A81;&#x53D8;&#x4E86;&#x81EA;&#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#xFF0C;&#x4E0D;&#x4F1A;&#x5F71;&#x54CD;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x5230; Cdc42 &#x6216;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x7684; Pak2&#x3002;&#x603B;&#x4E4B;&#xFF0C;&#x81EA;&#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x7684; Ser 141 Pak2 &#x6FC0;&#x6D3B;&#x6240;&#x9700;&#xFF0C;&#x4E0B;&#x8C03; Cdc42 &#x4E0E; Pak2 &#x7684;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;&#x6A21;&#x578B;&#x88AB;&#x63D0;&#x8BAE;&#x6697;&#x793A; Cdc42 &#x7ED1;&#x5B9A;&#x5230;&#x5185;&#x8D28;&#x7F51;&#xFF0C;&#x81EA;&#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x6539;&#x53D8;&#x4E86;&#x534F;&#x4F1A;&#x7684;&#x4E24;&#x4E2A;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x7684;&#x672C;&#x5730;&#x5316; Pak2&#x3002;

&#x901A;&#x8FC7;&#x81EA;&#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x7684;&#x4E1D;&#x6C28;&#x9178; 141 Cdc42 &#x4E0E; Pak2 &#x7684;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x8C03;&#x8282;&#x3002;

Pak2, a member of the p21-activated protein kinase (Pak) family, is activated in response to a variety of stresses and is directly involved in the induction of cytostasis. At the molecular level Pak2 binds Cdc42(GTP), translocating Pak2 to the endoplasmic reticulum where it is autophosphorylated and activated. Pak2 is autophosphorylated at eight sites; Ser-141 and Ser-165 in the regulatory domain and Thr-402 in the activation loop are identified as key sites in activation of the protein kinase. The function of phosphorylation of Ser-141 and Ser-165 on the activation was analyzed with wild-type (WT) and mutants of Pak2. With S141A, the level of autophosphorylation was reduced to 65% as compared with that of WT and S141D with a concomitant 45% reduction in substrate phosphorylation, indicating that phosphorylation at Ser-141 is required for optimal activity. Autophosphorylation inhibited the interaction between WT Pak2 and Cdc42(GTP). In 293T cells, WT Pak2, S141A, and S141D formed a stable complex with the constitutively active mutant Cdc42 L61, but not with the dominant negative Cdc42 N17. As shown in glutathione S-transferase pull-down assays, S141A bound to Cdc42(GTP) at a 6-fold higher level than that of S141D. In contrast, the S165A and S165D mutants had no effect on autophosphorylation, binding to Cdc42, or activation of Pak2. In summary, autophosphorylation of Ser-141 was required for activation of Pak2 and down-regulated the interaction of Pak2 with Cdc42. A model is proposed suggesting that binding of Cdc42 localizes Pak2 to the endoplasmic reticulum, where autophosphorylation alters association of the two proteins.

Regulation of the interaction of Pak2 with Cdc42 via autophosphorylation of serine 141.

PAK2, un membre de la p21-activated protein kinase (Pak) de la famille, est activ&#xE9; en r&#xE9;ponse &#xE0; une vari&#xE9;t&#xE9; de stress et est directement impliqu&#xE9; dans l&#x26;#39;induction de cytostase. Au niveau mol&#xE9;culaire PAK2 lie Cdc42 (GTP), la translocation PAK2 vers le r&#xE9;ticulum endoplasmique o&#xF9; elle est autophosphoryl&#xE9;e et activ&#xE9;. PAK2 est autophosphoryl&#xE9;e sur huit sites; Ser-141 et Ser-165 dans le domaine r&#xE9;glementaire et Thr-402 dans la boucle d&#x26;#39;activation sont identifi&#xE9;s comme les principaux sites dans l&#x26;#39;activation de la prot&#xE9;ine kinase. La fonction de la phosphorylation de Ser-141 et Ser-165 sur l&#x26;#39;activation a &#xE9;t&#xE9; analys&#xE9;e avec le type sauvage (WT) et des mutants de PAK2. Avec S141A, le niveau de l&#x26;#39;autophosphorylation a &#xE9;t&#xE9; r&#xE9;duite &#xE0; 65% par rapport &#xE0; celle de WT et S141D avec une diminution concomitante de 45% de la phosphorylation du substrat, ce qui indique que la phosphorylation &#xE0; Ser-141 est n&#xE9;cessaire pour une activit&#xE9; optimale. Autophosphorylation inhibe l&#x26;#39;interaction entre WT PAK2 et Cdc42 (GTP). Dans des cellules 293T, les WT PAK2, S141A, et S141D form&#xE9; un complexe stable avec le mutant constitutivement actif Cdc42 L61, mais pas avec le dominant n&#xE9;gatif Cdc42 N17. Comme le montre la glutathion S-transf&#xE9;rase d&#xE9;roulant essais, S141A li&#xE9; &#xE0; Cdc42 (GTP) &#xE0; un niveau de 6 fois sup&#xE9;rieure &#xE0; celle de S141D. En revanche, les mutants S165A et S165D eu aucun effet sur l&#x26;#39;autophosphorylation, se lier &#xE0; Cdc42, ou l&#x26;#39;activation de PAK2. En r&#xE9;sum&#xE9;, l&#x26;#39;autophosphorylation de Ser-141 a &#xE9;t&#xE9; requise pour l&#x26;#39;activation de PAK2 et r&#xE9;gul&#xE9;e &#xE0; la baisse de l&#x26;#39;interaction des PAK2 avec Cdc42. Un mod&#xE8;le est propos&#xE9; sugg&#xE8;re que la liaison de Cdc42 localise PAK2 vers le r&#xE9;ticulum endoplasmique, o&#xF9; l&#x26;#39;autophosphorylation modifie l&#x26;#39;association des deux prot&#xE9;ines.

R&#xE8;glement de l&#x26;#39;interaction de PAK2 avec Cdc42 Via autophosphorylation de la s&#xE9;rine 141

Pak2, ein Mitglied aus der Familie der p21-aktivierte Protein-Kinase (Pak), wird als Antwort auf eine Vielzahl der Spannungen aktiviert und ist direkt an die Induktion von Cytostasis beteiligt. Auf der molekularen Ebene Pak2 bindet Cdc42(GTP), translocating Pak2, das Endoplasmatisches Reticulum, wo es Autophosphorylated und aktiviert. Pak2 ist Autophosphorylated an acht Standorten; Ser-141 und Ser-165 in der regulatorischen Dom&auml;ne und Thr-402 in der Aktivierungs-Schleife werden als wichtige Standorte in Aktivierung der Proteinkinase identifiziert. Die Funktion der Phosphorylierung von Ser-141 und Ser-165 auf der Aktivierung wurde mit Wildtyp (WT) und Mutanten von Pak2 analysiert. Mit S141A war die Autophosphorylierung zu 65 % gegen&uuml;ber verringert WT und S141D mit einer damit einhergehenden 45 % Verringerung der Substrat-Phosphorylierung, angibt, dass Phosphorylierung an Ser-141 f&uuml;r optimale Aktivit&auml;t ben&ouml;tigt wird. Autophosphorylierung hemmte die Interaktion zwischen WT-Pak2 und Cdc42(GTP). WT Pak2, S141A und S141D gebildet 293T Zellen eine stabile Komplexe mit den konstitutiv aktive Mutanten Cdc42 L61, aber nicht mit dem dominierenden negativen Cdc42 N17. Wie bei Glutathion S-Transferase Pulldown-Assays gezeigt, S141A an Cdc42(GTP) auf einer 6-fold h&ouml;heren Ebene als der S141D gebunden. Im Gegensatz dazu hatte die S165A und S165D-Mutanten keine Auswirkung auf die Autophosphorylierung, binden an Cdc42 oder Aktivierung des Pak2. Zusammenfassend l&auml;sst sich sagen Autophosphorylierung der Ser-141 war bei der Aktivierung des Pak2 und die Interaktion von Pak2 mit Cdc42 unten-geregelt. Ein Modell wird vorgeschlagen, darauf hindeutet, dass die Bindung von Cdc42 Pak2 zu dem Endoplasmatischen Retikulum, lokalisiert wo Autophosphorylierung Vereinigung der beiden Proteine ver&auml;ndert.

Verordnung der Interaktion von Pak2 mit Cdc42 &uuml;ber Autophosphorylierung von Serin 141.

Pak2, un membro della famiglia della proteina p21-attivata chinasi (Pak), viene attivato in risposta ad una variet&agrave; di sollecitazioni ed &egrave; direttamente coinvolto nell&#39;induzione della cytostasis. Presso il Pak2 livello molecolare lega Cdc42(GTP), translocating Pak2 al reticolo endoplasmatico dove &egrave; autophosphorylated e attivato. Pak2 &egrave; autophosphorylated in otto siti; Ser-141 e Ser-165 del dominio normativo e Thr-402 nel ciclo di attivazione sono identificati come siti chiave nell&#39;attivazione della chinasi di proteina. La funzione di fosforilazione della Ser-141 e sull&#39;attivazione del Ser-165 &egrave; stata analizzata con wild-type (WT) e mutanti di Pak2. Con S141A, il livello di autophosphorylation &egrave; stato ridotto al 65% rispetto con quello di WT e S141D con una concomitante riduzione del 45% nella fosforilazione del substrato, indicando che la fosforilazione in Ser-141 &egrave; richiesto per l&#39;attivit&agrave; ottimale. Autophosphorylation inibito l&#39;interazione tra WT Pak2 e Cdc42(GTP). Nelle cellule 293T, Pak2 WT, S141A e S141D formano un complesso stabile con il mutante costitutivamente attivo Cdc42 L61, ma non con la dominante negativa Cdc42 N17. Come mostrato nelle prove di pull-down glutatione S-transferasi, S141A associato a Cdc42(GTP) a un livello 6-volte superiore rispetto a quella di S141D. Al contrario, i mutanti di S165A e S165D ha avuto alcun effetto su autophosphorylation, associazione Cdc42, o attivazione di Pak2. In sintesi, autophosphorylation del Ser-141 &egrave; stato richiesto per l&#39;attivazione di Pak2 e down-regolato l&#39;interazione di Pak2 con Cdc42. Un modello &egrave; proposto suggerendo che associazione di Cdc42 localizza Pak2 il reticolo endoplasmatico, dove autophosphorylation altera associazione delle due proteine.

Regolamento dell&#39;interazione di Pak2 con Cdc42 via autophosphorylation di serina 141.

PAK2&#x3001;p21&#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C6;&#x30A4;&#x30F3;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#xFF08;PAK&#xFF09;&#x30D5;&#x30A1;&#x30DF;&#x30EA;&#x30FC;&#x306E;&#x30E1;&#x30F3;&#x30D0;&#x30FC;&#x306F;&#x3001;&#x3055;&#x307E;&#x3056;&#x307E;&#x306A;&#x30B9;&#x30C8;&#x30EC;&#x30B9;&#x306B;&#x5FDC;&#x7B54;&#x3057;&#x3066;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x3001;&#x76F4;&#x63A5;&#x7D30;&#x80DE;&#x5897;&#x6B96;&#x306E;&#x8A98;&#x5C0E;&#x306B;&#x95A2;&#x4E0E;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x5206;&#x5B50;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x306E;PAK2&#x3067;&#x3001;&#x305D;&#x308C;&#x304C;&#x81EA;&#x5DF1;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x3068;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x5C0F;&#x80DE;&#x4F53;&#x306B;PAK2&#x3092;&#x8EE2;&#x4F4D;&#x3001;Cdc42&#x306E;&#xFF08;GTP&#xFF09;&#x3092;&#x7D50;&#x5408;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002; PAK2&#x306F;&#x3001;8&#x3064;&#x306E;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x3067;&#x81EA;&#x5DF1;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x3055;&#x308C;&#x3001;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x30EB;&#x30FC;&#x30D7;&#x306E;&#x898F;&#x5236;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x3068;Thr-402&#x306E;Ser-141&#x3068;Ser-165&#x306F;&#x3001;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C6;&#x30A4;&#x30F3;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x306B;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x8B58;&#x5225;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D9;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x306B;&#x3064;&#x3044;&#x3066;&#x306E;Ser-141&#x304A;&#x3088;&#x3073;Ser-165&#x306E;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x306E;&#x6A5F;&#x80FD;&#x306F;&#x3001;&#x91CE;&#x751F;&#x578B;&#xFF08;WT&#xFF09;&#x3068;PAK2&#x306E;&#x5909;&#x7570;&#x4F53;&#x3067;&#x5206;&#x6790;&#x3057;&#x305F;&#x3002; WT&#x3068;&#x6BD4;&#x8F03;&#x3057;&#x3001;&#x6700;&#x9069;&#x306A;&#x6D3B;&#x6027;&#x306B;&#x5FC5;&#x8981;&#x3068;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x306E;Ser-141&#x3067;&#x3001;&#x305D;&#x306E;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3001;&#x57FA;&#x8CEA;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x306E;&#x4ED8;&#x968F;&#x7684;&#x306A;45&#xFF05;&#x306E;&#x6E1B;&#x5C11;&#x3068;S141D&#x3068;&#x3057;&#x3066;S141A&#x3067;&#x3001;&#x81EA;&#x5DF1;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x306E;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x306F;65&#xFF05;&#x306B;&#x6E1B;&#x5C11;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x81EA;&#x5DF1;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x306F;&#x3001;WT PAK2&#x304A;&#x3088;&#x3073;Cdc42&#xFF08;GTP&#xFF09;&#x306E;&#x9593;&#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x3092;&#x963B;&#x5BB3;&#x3057;&#x305F;&#x3002; 293T&#x7D30;&#x80DE;&#x3001;WT PAK2&#x3001;S141A&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x69CB;&#x6210;&#x7684;&#x306B;&#x6D3B;&#x6027;&#x306A;&#x5909;&#x7570;&#x4F53;Cdc42&#x306E;L61&#x3068;&#x3067;&#x306F;&#x306A;&#x304F;&#x3001;&#x30C9;&#x30DF;&#x30CA;&#x30F3;&#x30C8;&#x30CD;&#x30AC;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6;Cdc42&#x306E;N17&#x3068;&#x5B89;&#x5B9A;&#x306A;&#x8907;&#x5408;&#x4F53;&#x3092;&#x5F62;&#x6210;&#x3057;S141D&#x3002;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x30B0;&#x30EB;&#x30BF;&#x30C1;&#x30AA;&#x30F3;S-&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30D5;&#x30A7;&#x30E9;&#x30FC;&#x30BC;&#x30D7;&#x30EB;&#x30C0;&#x30A6;&#x30F3;&#x30A2;&#x30C3;&#x30BB;&#x30A4;&#x306B;&#x793A;&#x3059;&#x3088;&#x3046;&#x306B;&#x3001;S141A&#x306F;&#x3001;S141D&#x306E;&#x305D;&#x308C;&#x3088;&#x308A;&#x3082;6&#x500D;&#x9AD8;&#x3044;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x3067;Cdc42&#x306E;&#xFF08;GTP&#xFF09;&#x306B;&#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C9;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x5BFE;&#x7167;&#x7684;&#x306B;&#x3001;S165A&#x3068;S165D&#x5909;&#x7570;&#x4F53;&#x306F;&#x3001;Cdc42&#x306E;&#x304B;&#x3001;PAK2&#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x3078;&#x306E;&#x7D50;&#x5408;&#x3001;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x306B;&#x5F71;&#x97FF;&#x3092;&#x53CA;&#x307C;&#x3055;&#x306A;&#x304B;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x8981;&#x7D04;&#x3059;&#x308B;&#x3068;&#x3001;&#x306E;Ser-141&#x306E;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x306F;&#x3001;PAK2&#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x5FC5;&#x8981;&#x3067;&#x3042;&#x3063;&#x305F;&#x3068;Cdc42&#x3068;PAK2&#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x3092;&#x30C0;&#x30A6;&#x30F3;&#x30EC;&#x30AE;&#x30E5;&#x30EC;&#x30FC;&#x30C8;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x306F;&#x3001;Cdc42&#x306E;&#x7D50;&#x5408;&#x304C;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x306F;&#x3001;2&#x3064;&#x306E;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x95A2;&#x9023;&#x4ED8;&#x3051;&#x3092;&#x5909;&#x66F4;&#x3059;&#x308B;&#x5C0F;&#x80DE;&#x4F53;&#x3078;&#x306E;&#x5C40;&#x5728;PAK2&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x5506;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x63D0;&#x6848;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;

&#x30BB;&#x30EA;&#x30F3;141&#x306E;&#x81EA;&#x5DF1;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x306E;Via Cdc42&#x306E;&#x3068;PAK2&#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x306E;&#x8ABF;&#x7BC0;

Pak2, p21 &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xD55C; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xD0A4; &#xB2C8; &#xC544; &#xC81C; (&#xBC15;&#xC138;&#xB9AC;) &#xAC00;&#xC871;&#xC758; &#xAD6C;&#xC131;&#xC6D0;&#xC774; &#xB2E4;&#xC591; &#xD55C; &#xC2A4;&#xD2B8;&#xB808;&#xC2A4;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC751;&#xB2F5;&#xC5D0;&#xC11C;&#xC744; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xD558; &#xACE0; cytostasis&#xC758; &#xC720;&#xB3C4;&#xC5D0; &#xC9C1;&#xC811; &#xCC38;&#xC5EC;. &#xBD84;&#xC790; &#xC218;&#xC900;&#xC758; pak2&#xC5D0; &#xC788;&#xB294; autophosphorylated &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; endoplasmic &#xADF8;&#xBB3C;&#xC744; Pak2 translocating cdc42(gtp)&#xC5D0; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. Pak2&#xC740; autophosphorylated&#xC5D0;&#xC11C; 8 &#xAC1C;&#xC758; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8;; Ser-141 &#xBC0F; &#xADDC;&#xC81C; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778;&#xC5D0;&#xC11C; Ser-165&#xC640; Thr-402, &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xBC18;&#xBCF5;&#xC5D0;&#xC11C; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xD0A4; &#xB2C8; &#xC544; &#xC81C; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xD0A4; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8;&#xB85C; &#xC2DD;&#xBCC4; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. Ser-141&#xACFC; &#xD65C;&#xC131;&#xD654;&#xC5D0; Ser-165 &#xC778; &#xC0B0;&#xD654;&#xC758; &#xD568;&#xC218;&#xB294; &#xC57C;&#xC0DD;-&#xD0C0;&#xC785; (WT)&#xC640; pak2&#xC758; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xBD84;&#xC11D; &#xD588;&#xB2E4;. S141A&#xC640; &#xD568;&#xAED8; autophosphorylation &#xC218;&#xC900;&#xC758; WT &#xAE30;&#xD310; &#xC778; &#xC0B0;&#xD654; &#xC218; &#xBC18;&#xD558;&#xB294; 45% &#xAC10;&#xC18C; &#xD558; &#xC5EC; s141d&#xC758; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0B4;&#xB294; Ser-141&#xC5D0; &#xADF8; &#xC778; &#xC0B0;&#xD654;&#xB294; &#xCD5C;&#xC801;&#xC758; &#xD65C;&#xB3D9;&#xC5D0; &#xD544;&#xC694;&#xD55C; 65%&#xC640; &#xBE44;&#xAD50; &#xAC10;&#xC18C; &#xD588;&#xB2E4;. Autophosphorylation WT pak2&#xC640; Cdc42(GTP) &#xC0AC;&#xC774;&#xC758; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC744; &#xC800;&#xD574; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. 293T &#xC138;&#xD3EC; WT Pak2, S141A, &#xBC0F; S141D constitutively &#xD65C;&#xC131; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; Cdc42 L61 &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xC9C0;&#xBC30;&#xC801;&#xC778; &#xBD80;&#xC815;&#xC801;&#xC778; Cdc42 N17 &#xD558;&#xC9C0; &#xC548;&#xC815; &#xBCF5;&#xC7A1; &#xD55C;&#xC744; &#xD615;&#xC131;. Glutathione S&#xACFC; &#xD480; &#xB2E4;&#xC6B4; &#xBD84;&#xC11D; &#xC2E4;&#xD5D8;&#xC5D0;&#xC11C;&#xC640; &#xAC19;&#xC774; S141A Cdc42(GTP) S141D &#xBCF4;&#xB2E4; 6-fold &#xB354; &#xB192;&#xC740; &#xC218;&#xC900;&#xC5D0; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB300;&#xC870;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C;, S165A &#xBC0F; S165D &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xD588;&#xB2E4; Cdc42, &#xB610;&#xB294; pak2&#xC758; &#xD65C;&#xC131;&#xD654;&#xC5D0; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; autophosphorylation, &#xC601;&#xD5A5;&#xC744; &#xC8FC;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC694;&#xC57D; &#xD558;&#xC790;&#xBA74;, Ser-141&#xC758; autophosphorylation pak2&#xC758; &#xD65C;&#xC131;&#xD654;&#xB97C; &#xC704;&#xD574; &#xD544;&#xC694; &#xD588;&#xB2E4; &#xBC0F; &#xB2E4;&#xC6B4; &#xB808; &#xADE4; &#xB808;&#xC774;&#xD2B8; &#xB41C; cdc42&#xC640; pak2&#xC758; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;. &#xBAA8;&#xB378;&#xC740; cdc42&#xC758; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; endoplasmic &#xADF8;&#xBB3C;, autophosphorylation &#xB450; &#xAC00;&#xC9C0; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xC5F0;&#xACB0;&#xC744; &#xBCC0;&#xACBD; &#xD558;&#xB824;&#xBA74; pak2&#xB97C; localizes &#xC81C;&#xC548; &#xC81C;&#xC548; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xB5A0;&#xB4E4;&#xACE0; 141&#xC758; autophosphorylation &#xD1B5;&#xD574; cdc42&#xC640; pak2&#xC758; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC758; &#xADDC;&#xC81C;.

Pak2, un miembro de la p21 la prote&#xED;na quinasa activada (Pak) familia, se activa en respuesta a una variedad de tensiones y est&#xE1; directamente implicada en la inducci&#xF3;n de citostasis. A nivel molecular Pak2 une Cdc42 (GTP), translocaci&#xF3;n Pak2 en el ret&#xED;culo endoplasm&#xE1;tico, donde se autophosphorylated y activado. Pak2 se autophosphorylated en ocho sitios, Ser-141 y Ser 165-en el &#xE1;mbito regulatorio y Thr 402-en la activaci&#xF3;n de bucle son identificados como sitios clave en la activaci&#xF3;n de la prote&#xED;na quinasa. La funci&#xF3;n de la fosforilaci&#xF3;n de Ser-141 y Ser 165-de la activaci&#xF3;n se analiz&#xF3; con de tipo salvaje (WT) y mutantes de Pak2. Con S141A, el nivel de autofosforilaci&#xF3;n se redujo a 65% en comparaci&#xF3;n con la de WT y S141D con una reducci&#xF3;n concomitante del 45% en la fosforilaci&#xF3;n del sustrato, lo que indica que la fosforilaci&#xF3;n en Ser-141 se requiere para la actividad &#xF3;ptima. Autofosforilaci&#xF3;n inhibi&#xF3; la interacci&#xF3;n entre el TE Pak2 y Cdc42 (GTP). En las c&#xE9;lulas 293T, la WT Pak2, S141A, y S141D forma un complejo estable con el mutante constitutivamente activa Cdc42 L61, pero no con el dominante negativo Cdc42 N17. Como se muestra en glutation S-transferasa desplegable ensayos, S141A obligado a Cdc42 (GTP) a un nivel 6-veces mayor que la de S141D. En contraste, los mutantes S165A y S165D no tuvo efecto sobre la autofosforilaci&#xF3;n, la uni&#xF3;n a Cdc42, o la activaci&#xF3;n de Pak2. En resumen, la autofosforilaci&#xF3;n de Ser-141 fue necesaria para la activaci&#xF3;n de Pak2 y el regulado de la interacci&#xF3;n de Pak2 con Cdc42. Se propone un modelo que sugiere que la uni&#xF3;n de Cdc42 se localiza Pak2 en el ret&#xED;culo endoplasm&#xE1;tico, donde se altera la autofosforilaci&#xF3;n asociaci&#xF3;n de las dos prote&#xED;nas.

Reglamento de la interacci&#xF3;n de Pak2 con Cdc42 Via autofosforilaci&#xF3;n de la serina 141

&#x7FFB;&#x8BD1;&#x662F;&#x9002;&#x5EA6;&#x7684;&#x538B;&#x529B;&#xFF0C;&#x5305;&#x62EC;&#x8840;&#x6E05;&#x5265;&#x593A;&#x3001; &#x5FEB;&#x901F;&#x548C;&#x7535;&#x79BB;&#x8F90;&#x5C04;&#x7684;&#x5404;&#x79CD;&#x54CD;&#x5E94;&#x7F16;&#x7801;&#x3002;&#x6291;&#x5236; p21 &#x6FC0;&#x6D3B;&#x86CB;&#x767D;&#x6FC0;&#x9176; 2 (Pak2) / &gamma;-&#x767D;&#x6C99;&#x76F8;&#x540C;&#x7684;&#x5E94;&#x529B;&#x6761;&#x4EF6;&#x4E0B;&#x88AB;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x3002;&#x91CE;&#x751F;&#x578B; Pak2 &#x5728;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E2D;&#x7684;&#x8868;&#x8FBE;&#x548C;&#x7F51;&#x7EC7;&#x7EA2;&#x7EC6;&#x80DE;&#x88C2;&#x89E3;&#x7684; Pak2 &#x9664;&#x4E86;&#x6291;&#x5236;&#x7FFB;&#x8BD1;&#xFF0C;&#x867D;&#x7136;&#x6FC0;&#x9176;&#x5904;&#x4E8E;&#x975E;&#x6D3B;&#x52A8;&#x72B6;&#x6001;&#x7684;&#x7A81;&#x53D8;&#x4F53;&#x6CA1;&#x6709;&#x4EFB;&#x4F55;&#x6548;&#x679C;&#x3002;Pak2 phosphorylates &#x8D77;&#x59CB;&#x56E0;&#x5B50; &#xFF08;eIF&#xFF09; 4 G&#xFF0C;&#x6291;&#x5236; eIF4E m (7) GTP&#xFF0C;&#x51CF;&#x5C11;&#x542F;&#x52A8;&#x4E0E;&#x534F;&#x4F1A;&#x548C;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x7684;&#x3002;Pak2 &#x7ED1;&#x5B9A;&#x7AD9;&#x70B9;&#x6620;&#x5C04;&#x5230;&#x8BE5;&#x533A;&#x57DF;&#x5305;&#x542B; eIF4E &#x7ED1;&#x5B9A;&#x7F51;&#x7AD9; &#xFF1B; eIF4GPak2 &#x548C; eIF4E&#xFF0C;&#x7ADE;&#x9010;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x5230;&#x6B64;&#x7AD9;&#x70B9;&#x3002;&#x5C06;&#x4F7F;&#x7528;&#x88C2;&#x89E3; eIF4G &#x8017;&#x5C3D;&#x7F51;&#x7EC7;&#x7EA2;&#x7EC6;&#x80DE;&#xFF0C;&#x91CD;&#x5EFA;&#x4E0E;&#x6A21;&#x62DF;&#x78F7;&#x9178; eIF4G &#x5B8C;&#x5168;&#x8FD8;&#x539F;&#x7FFB;&#x8BD1;&#xFF0C;&#x800C;&#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x7684; eIF4G &#x51CF;&#x5C11;&#x5230; 37%&#x7684;&#x7FFB;&#x8BD1;&#x3002;RNA &#x5E72;&#x6270;&#x6280;&#x672F;&#x91CA;&#x653E; 2.7-fold Pak2 &#x8BF1;&#x5BFC;&#x7FFB;&#x8BD1;&#x7684;&#x63A5;&#x89E6;&#x6291;&#x5236;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x6291;&#x5236;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;eIF4G &#x7A81;&#x53D8;&#x4F53;&#x7684; Pak2 &#x7F51;&#x7AD9;&#x663E;&#x793A; S896D &#x6291;&#x5236;&#x7FFB;&#x8BD1;&#xFF0C;&#x867D;&#x7136; S896A &#x6CA1;&#x6709;&#x4EFB;&#x4F55;&#x5F71;&#x54CD;&#x3002;Pak2 &#x5728;&#x9AD8;&#x6E17;&#x5E94;&#x6FC0;&#x53CD;&#x5E94;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x6291;&#x5236;&#x7AE0;&#x65E0;&#x5173;&#x7684;&#x4F46;&#x6CA1;&#x6709;&#x9A71;&#x52A8; IRES &#x542F;&#x52A8;&#x3002;&#x56E0;&#x6B64;&#xFF0C;&#x786E;&#x5B9A;&#x4E86;&#x65B0;&#x578B;&#x7684;&#x54FA;&#x4E73;&#x52A8;&#x7269;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5E94;&#x6FC0;&#x4FE1;&#x53F7;&#x8F6C;&#x5BFC;&#x901A;&#x8DEF;&#xFF0C;&#x5176;&#x4E2D; Pak2 &#x7684;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x5BFC;&#x81F4;&#x901A;&#x8FC7;&#x78F7;&#x9178;&#x5316; eIF4G &#x7AE0;&#x4F9D;&#x8D56;&#x7FFB;&#x8BD1;&#x7684;&#x6291;&#x5236;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;

&#x901A;&#x8FC7;&#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x86CB;&#x767D;&#x6FC0;&#x9176; Pak2 eIF4G &#x7AE0;&#x4F9D;&#x8D56;&#x7FFB;&#x8BD1;&#x7684;&#x6291;&#x5236;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;

Translation is downregulated in response to a variety of moderate stresses, including serum deprivation, hyperosmolarity and ionizing radiation. The cytostatic p21-activated protein kinase 2 (Pak2)/gamma-PAK is activated under the same stress conditions. Expression of wild-type Pak2 in cells and addition of Pak2 to reticulocyte lysate inhibit translation, while kinase-inactive mutants have no effect. Pak2 binds to and phosphorylates initiation factor (eIF)4G, which inhibits association of eIF4E with m(7)GTP, reducing initiation. The Pak2-binding site maps to the region on eIF4G that contains the eIF4E-binding site; Pak2 and eIF4E compete for binding to this site. Using an eIF4G-depleted reticulocyte lysate, reconstitution with mock-phosphorylated eIF4G fully restores translation, while phosphorylated eIF4G reduces translation to 37%. RNA interference releases Pak2-induced inhibition of translation in contact-inhibited cells by 2.7-fold. eIF4G mutants of the Pak2 site show that S896D inhibits translation, while S896A has no effect. Activation of Pak2 in response to hyperosmotic stress inhibits cap-dependent, but not IRES-driven, initiation. Thus, a novel pathway for mammalian cell stress signaling is identified, wherein activation of Pak2 leads to inhibition of cap-dependent translation through phosphorylation of eIF4G.

Inhibition of cap-dependent translation via phosphorylation of eIF4G by protein kinase Pak2.

La traduction est r&#xE9;gul&#xE9;e &#xE0; la baisse en r&#xE9;ponse &#xE0; une vari&#xE9;t&#xE9; de stress mod&#xE9;r&#xE9;s, y compris la privation de s&#xE9;rum, hyperosmolarit&#xE9; et des rayonnements ionisants. La prot&#xE9;ine kinase p21-activated cytostatique 2 (PAK2) / gamma-PAK est activ&#xE9; dans les m&#xEA;mes conditions de stress. Expression de type sauvage PAK2 dans les cellules et plus de PAK2 &#xE0; r&#xE9;ticulocytes lysat inhiber la traduction, tandis que la kinase-inactifs mutants n&#x26;#39;ont aucun effet. PAK2 se lie et phosphoryle le facteur d&#x26;#39;initiation (eIF) 4G, qui inhibe l&#x26;#39;association de eIF4E avec m (7) GTP, r&#xE9;duire l&#x26;#39;initiation. Les cartes des sites PAK2-lier &#xE0; la r&#xE9;gion sur eIF4G qui contient le site eIF4E-contraignantes; PAK2 et eIF4E comp&#xE9;tition pour la liaison &#xE0; ce site. En utilisant une reconstitution eIF4G appauvri r&#xE9;ticulocytes lysat, avec maquette phosphoryl&#xE9;e eIF4G restaure int&#xE9;gralement la traduction, tandis que eIF4G phosphoryl&#xE9;e r&#xE9;duit traduction &#xE0; 37%. Communiqu&#xE9;s interf&#xE9;rence ARN PAK2 l&#x26;#39;inhibition de la traduction en contact cellules inhib&#xE9;es par 2,7 fois. eIF4G mutants du spectacle le site PAK2 que S896D inhibe la traduction, tandis que S896A n&#x26;#39;a aucun effet. L&#x26;#39;activation de PAK2 en r&#xE9;ponse au stress hyperosmotique inhibe cap-d&#xE9;pendante, mais pas IRES-conduit, l&#x26;#39;initiation. Ainsi, une nouvelle voie de signalisation cellulaire du stress chez les mammif&#xE8;res est identifi&#xE9;, dans lequel l&#x26;#39;activation de PAK2 conduit &#xE0; l&#x26;#39;inhibition de la traduction cap-d&#xE9;pendante par la phosphorylation de eIF4G.

L&#x26;#39;inhibition de la traduction cap-d&#xE9;pendante via la phosphorylation de eIF4G par la prot&#xE9;ine kinase PAK2

&Uuml;bersetzung ist Downregulated in Reaktion auf eine Vielzahl von moderaten Belastungen, einschlie&szlig;lich Serum Entrechtung, Hyperosmolarity und ionisierende Strahlung. Die zytostatische p21 aktivierte Proteinkinase 2 (Pak2) / Gamma-PAK ist unter den gleichen Bedingungen Spannung aktiviert. Ausdruck von Wildtyp Pak2 in den Zellen und Zugabe von Pak2 zur Reticulocyte lysate hemmen &Uuml;bersetzung, w&auml;hrend Kinase-inaktive Mutanten keine Auswirkungen haben. Pak2 bindet an und phosphorylates Einleitung Faktor (eIF) 4 G, die Vereinigung der eIF4E mit m (7) GTP, Verringerung der Einleitung hemmt. Die Pak2-Bindungsstelle ordnet der Region auf eIF4G, die die eIF4E-Bindungsstelle enth&auml;lt; Pak2 und eIF4E konkurrieren um die Bindung zu dieser Website. Verwenden ein eIF4G-abgereichertem Reticulocyte lysate, stellt Rekonstitution mit Mock-phosphoryliert eIF4G voll &Uuml;bersetzung, w&auml;hrend phosphorylierten eIF4G &Uuml;bersetzung zu 37 % reduziert. RNA-Interferenz frei Pak2-induzierte Hemmung der &Uuml;bersetzung in den Zellen Kontakt-gehemmt, durch 2.7-fold. eIF4G Mutanten des Standortes Pak2 zeigen, dass S896D &Uuml;bersetzung, hemmt, w&auml;hrend S896A keine Auswirkung hat. Aktivierung der Pak2 als Reaktion auf Hyperosmotic Stress hemmt GAP-abh&auml;ngigen, aber nicht IRES-getrieben, Einleitung. So ein neuartiger Weg f&uuml;r S&auml;ugetier-Zelle Spannung Signalisierung wird identifiziert, worin die Aktivierung des Pak2 f&uuml;hrt zur Hemmung der GAP-abh&auml;ngige &Uuml;bersetzung durch Phosphorylierung von eIF4G.

Hemmung der GAP-abh&auml;ngige &Uuml;bersetzung &uuml;ber Phosphorylierung von eIF4G durch Proteinkinase Pak2.

La traduzione &egrave; downregolata in risposta ad una variet&agrave; di stress moderato, deprivazione di siero, iperosmolarit&agrave; e radiazioni ionizzanti. La chinasi di proteina p21-attivato citostatica 2 (Pak2) / gamma-PAK &egrave; attivato nelle stesse condizioni di stress. Espressione del selvaggio-tipo Pak2 nelle cellule e aggiunta di Pak2 a reticulocyte lysate inibire traduzione, mentre chinasi inattive mutanti non hanno alcun effetto. Pak2 si lega a e fosforila il fattore di iniziazione (FEI) 4 G, che inibisce la associazione di eIF4E con GTP m (7), riducendo l&#39;iniziazione. Il sito di legame Pak2 mappe della regione su eIF4G che contiene il sito di legame eIF4E; Pak2 ed eIF4E competere per l&#39;associazione di questo sito. Utilizzando un lisato di reticolociti impoverito eIF4G, ricostituzione con eIF4G mock-fosforilato ripristina completamente traduzione, mentre eIF4G fosforilati riduce la traduzione al 37%. RNA interference rilascia indotta Pak2 inibizione della traduzione in cellule contatto inibito da 2.7-fold. eIF4G mutanti del sito Pak2 mostrano che S896D inibisce la traduzione, mentre S896A non ha alcun effetto. Attivazione di Pak2 in risposta allo stress iperosmotico inibisce la PAC-dipendente, ma non IRES-driven, iniziazione. Cos&igrave;, un romanzo pathway per la segnalazione di stress cellulare dei mammiferi &egrave; identificato, in cui la attivazione di Pak2 conduce alla inibizione della traduzione cap-dipendente attraverso la fosforilazione di eIF4G.

Inibizione della traduzione cap-dipendente tramite la fosforilazione di eIF4G dalla proteina chinasi Pak2.

&#x7FFB;&#x8A33;&#x306F;&#x3001;&#x8840;&#x6E05;&#x6B20;&#x4E4F;&#x3001;&#x9AD8;&#x6D78;&#x900F;&#x3001;&#x96FB;&#x96E2;&#x653E;&#x5C04;&#x7DDA;&#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x4E2D;&#x7B49;&#x5EA6;&#x306E;&#x3055;&#x307E;&#x3056;&#x307E;&#x306A;&#x30B9;&#x30C8;&#x30EC;&#x30B9;&#x306B;&#x5FDC;&#x7B54;&#x3057;&#x3066;&#x30C0;&#x30A6;&#x30F3;&#x30EC;&#x30AE;&#x30E5;&#x30EC;&#x30FC;&#x30C8;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x7D30;&#x80DE;&#x5897;&#x6B96;&#x6291;&#x5236;p21&#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C6;&#x30A4;&#x30F3;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;2&#xFF08;PAK2&#xFF09;/&#x3B3;-PAK&#x306F;&#x3001;&#x540C;&#x3058;&#x30B9;&#x30C8;&#x30EC;&#x30B9;&#x6761;&#x4EF6;&#x4E0B;&#x3067;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x3002;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x4E0D;&#x6D3B;&#x6027;&#x5909;&#x7570;&#x4F53;&#x304C;&#x5F71;&#x97FF;&#x3092;&#x4E0E;&#x3048;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3057;&#x306A;&#x304C;&#x3089;&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x91CE;&#x751F;&#x578B;PAK2&#x306E;&#x767A;&#x73FE;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x7DB2;&#x72B6;&#x8D64;&#x8840;&#x7403;&#x30E9;&#x30A4;&#x30BB;&#x30FC;&#x30C8;&#x3092;&#x3059;&#x308B;PAK2&#x306E;&#x6DFB;&#x52A0;&#x306F;&#x3001;&#x7FFB;&#x8A33;&#x3092;&#x963B;&#x5BB3;&#x3059;&#x308B;&#x3002; PAK2&#x306F;&#x306B;&#x7D50;&#x5408;&#x3057;&#x3001;&#x958B;&#x59CB;&#x3092;&#x524A;&#x6E1B;&#x3057;&#x3001;M&#xFF08;7&#xFF09;GTP&#x3068;eIF4E&#x306E;&#x7D50;&#x5408;&#x3092;&#x963B;&#x5BB3;&#x958B;&#x59CB;&#x56E0;&#x5B50;&#xFF08;EIF&#xFF09;4G&#x3092;&#x3001;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x3059;&#x308B;&#x3002; eIF4E&#x7D50;&#x5408;&#x90E8;&#x4F4D;&#x304C;&#x542B;&#x307E;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;eIF4G&#x4E0A;&#x306E;&#x9818;&#x57DF;&#x306B;PAK2&#x7D50;&#x5408;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x30DE;&#x30C3;&#x30D7;&#x3001;PAK2&#x3068;eIF4E&#x306F;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x3078;&#x306E;&#x7D50;&#x5408;&#x3092;&#x7AF6;&#x5408;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30EA;&#x30F3;eIF4G&#x306F;37&#xFF05;&#x3078;&#x306E;&#x5909;&#x63DB;&#x3092;&#x4F4E;&#x6E1B;&#x3057;eIF4G&#x67AF;&#x6E07;&#x7DB2;&#x72B6;&#x8D64;&#x8840;&#x7403;&#x30E9;&#x30A4;&#x30BB;&#x30FC;&#x30C8;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x30E2;&#x30C3;&#x30AF;&#x30A2;&#x30C3;&#x30D7;&#x30EA;&#x30F3;eIF4G&#x3068;&#x518D;&#x69CB;&#x6210;&#x306F;&#x3001;&#x5B8C;&#x5168;&#x306B;&#x3001;&#x7FFB;&#x8A33;&#x3092;&#x5FA9;&#x5143;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002; RNA&#x5E72;&#x6E09;&#x304C;&#x7FFB;&#x8A33;&#x306E;PAK2&#x8A98;&#x767A;&#x6027;&#x963B;&#x5BB3;&#x3092;&#x30EA;&#x30EA;&#x30FC;&#x30B9;2.7&#x500D;&#x3067;&#x7D30;&#x80DE;&#x3092;&#x63A5;&#x89E6;&#x963B;&#x5BB3;&#x3057;&#x305F;&#x3002; S896A&#x306F;&#x52B9;&#x679C;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3057;&#x306A;&#x304C;&#x3089;S896D&#x306F;&#x3001;&#x7FFB;&#x8A33;&#x3092;&#x963B;&#x5BB3;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;PAK2&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x30B7;&#x30E7;&#x30FC;&#x306E;&#x5909;&#x7570;&#x4F53;&#x3092;eIF4G&#x3002;&#x9AD8;&#x6D78;&#x900F;&#x5727;&#x30B9;&#x30C8;&#x30EC;&#x30B9;&#x306B;&#x5FDC;&#x7B54;&#x3057;&#x3066;&#x3001;PAK2&#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x306F;&#x3001;IRES&#x4E3B;&#x5C0E;&#x3001;&#x958B;&#x59CB;&#x30AD;&#x30E3;&#x30C3;&#x30D7;&#x4F9D;&#x5B58;&#x6027;&#x3067;&#x306F;&#x306A;&#x304F;&#x3001;&#x963B;&#x5BB3;&#x3059;&#x308B;&#x3002;&#x3057;&#x305F;&#x304C;&#x3063;&#x3066;&#x3001;&#x54FA;&#x4E73;&#x985E;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x30B9;&#x30C8;&#x30EC;&#x30B9;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x65B0;&#x305F;&#x306A;&#x7D4C;&#x8DEF;&#x304C;eIF4G&#x306E;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x3066;&#x30AD;&#x30E3;&#x30C3;&#x30D7;&#x4F9D;&#x5B58;&#x6027;&#x7FFB;&#x8A33;&#x306E;&#x6291;&#x5236;&#x306B;PAK2&#x30EA;&#x30FC;&#x30C9;&#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x3092;&#x3001;&#x524D;&#x8A18;&#x8B58;&#x5225;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x30D7;&#x30ED;&#x30C6;&#x30A4;&#x30F3;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;PAK2&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;EIF4G&#x306E;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x3066;&#x30AD;&#x30E3;&#x30C3;&#x30D7;&#x4F9D;&#x5B58;&#x6027;&#x7FFB;&#x8A33;&#x306E;&#x6291;&#x5236;

&#xBC88;&#xC5ED;&#xC740; downregulated &#xC801;&#xB2F9; &#xD55C; &#xC2A4;&#xD2B8;&#xB808;&#xC2A4;, &#xD608; &#xCCAD; &#xBD80;&#xC871;, &#xC804;&#xB9AC; &#xBC29;&#xC0AC;&#xC120;, hyperosmolarity &#xB4F1;&#xC758; &#xB2E4;&#xC591; &#xD55C;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC751;&#xB2F5;. Cytostatic p21 &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xD55C; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xD0A4; &#xB2C8; &#xC544; &#xC81C; 2 (Pak2) / &#xAC10;&#xB9C8; &#xBC15;&#xC138;&#xB9AC; &#xAC19;&#xC740; &#xC2A4;&#xD2B8;&#xB808;&#xC2A4; &#xC870;&#xAC74; &#xD558;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC57C;&#xC0DD;-&#xD0C0;&#xC785; Pak2 &#xC140;&#xC5D0;&#xC11C;&#xC758; &#xD45C;&#xD604;&#xACFC; reticulocyte lysate&#xC5D0; pak2&#xC758; &#xCD94;&#xAC00; &#xC5B5;&#xC81C; &#xBC88;&#xC5ED;, &#xB2C8; &#xBE44;&#xD65C;&#xC131; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xC601;&#xD5A5;&#xC744; &#xC8FC;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. Pak2&#xC5D0; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xD558;&#xACE0; &#xAC1C;&#xC2DC; &#xC778;&#xC790; (eIF) 4g, &#xD611;&#xD68C; Eif4e&#xC758; m (7) GTP, &#xAC1C;&#xC2DC; &#xAC10;&#xC18C;&#xB97C; &#xC5B5;&#xC81C; &#xD558;&#xB294; phosphorylates. Pak2 &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8; eIF4E &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8;;&#xB97C; &#xD3EC;&#xD568; &#xD558;&#xB294; Eif4g&#xC5D0; &#xC9C0;&#xC5ED; &#xC9C0;&#xB3C4; Pak2 &#xBC0F; Eif4e&#xC774;&#xC774; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xC5D0; &#xACBD;&#xC7C1;. EIF4G &#xACE0;&#xAC08; reticulocyte lysate&#xC5D0; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC;, &#xC7AC;&#xAD6C;&#xC131; &#xBAA8;&#xC758; phosphorylated Eif4g&#xC640; &#xD568;&#xAED8; &#xC644;&#xBCBD; &#xD558; &#xAC8C; &#xBCF5;&#xC6D0; &#xBC88;&#xC5ED;, phosphorylated eIF4G &#xBC88;&#xC5ED; 37% &#xAC10;&#xC18C; &#xD558;&#xB294; &#xB3D9;&#xC548;. RNA &#xAC04;&#xC12D; &#xD1B5;&#xC2E0; &#xBC88;&#xC5ED; &#xD558; &#xC5EC; &#xC811;&#xCD09; &#xC800;&#xD574; &#xC140;&#xC5D0;&#xC11C;&#xC758; Pak2 &#xC720;&#xBC1C; &#xC800;&#xD574;&#xB97C; &#xD574;&#xC81C;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. Pak2 &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8;&#xC758; eIF4G &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xD45C;&#xC2DC; S896D s896a&#xB294; &#xC601;&#xD5A5;&#xC744; &#xC8FC;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;, &#xBC88;&#xC5ED; &#xC5B5;&#xC81C; &#xD55C;&#xB2E4;. Hyperosmotic &#xC2A4;&#xD2B8;&#xB808;&#xC2A4;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC751;&#xB2F5;&#xC5D0;&#xC11C; pak2&#xC758; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xC5B5;&#xC81C; &#xBAA8;&#xC790; &#xC758;&#xC874; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xD558;&#xC9C0; IRES &#xAE30;&#xBC18; &#xAC1C;&#xC2DC;. &#xB530;&#xB77C;&#xC11C;, &#xD3EC;&#xC720;&#xB958; &#xC138;&#xD3EC; &#xC2A4;&#xD2B8;&#xB808;&#xC2A4; &#xC2E0;&#xD638;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC0C8;&#xB85C;&#xC6B4; &#xACBD;&#xB85C; &#xBC1C;&#xACAC;, &#xC5B4;&#xB5A4; &#xC810;&#xC5D0;&#xC11C; pak2&#xC758; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; Eif4g&#xC758; &#xC778; &#xC0B0;&#xD654;&#xB97C; &#xD1B5;&#xD574; &#xBC88;&#xC5ED; &#xBAA8;&#xC790; &#xC885;&#xC18D;&#xC758; &#xC800;&#xD574;.

&#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xD0A4; &#xB2C8; &#xC544; &#xC81C; pak2&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; Eif4g&#xC758; &#xC778; &#xC0B0;&#xD654;&#xB97C; &#xD1B5;&#xD574; &#xBC88;&#xC5ED; &#xBAA8;&#xC790; &#xC885;&#xC18D;&#xC758; &#xC800;&#xD574;.

La traducci&#xF3;n es downregulated en respuesta a una variedad de tensiones moderadas, incluyendo la privaci&#xF3;n de suero, hiperosmolaridad y la radiaci&#xF3;n ionizante. El citost&#xE1;tico p21 prote&#xED;na quinasa activada por 2 (Pak2) / gamma-PAK se activa bajo las mismas condiciones de estr&#xE9;s. Expresi&#xF3;n de tipo salvaje Pak2 en las c&#xE9;lulas y la adici&#xF3;n de Pak2 de lisado de reticulocitos de inhibir la traducci&#xF3;n, mientras que la quinasa-mutantes inactivos no tienen ning&#xFA;n efecto. Pak2 se une y fosforila factor de iniciaci&#xF3;n (FEI) 4G, que inhibe la asociaci&#xF3;n de eIF4E con m (7) GTP, la reducci&#xF3;n de la iniciaci&#xF3;n. Los mapas de los sitios de uni&#xF3;n a Pak2 a la regi&#xF3;n en eIF4G que contiene el sitio eIF4E vinculante; Pak2 y eIF4E competir por la uni&#xF3;n a este sitio. El uso de un reconstituci&#xF3;n eIF4G-agotado lisado de reticulocitos, con maqueta fosforilada eIF4G restaura completamente la traducci&#xF3;n, mientras que reduce la traducci&#xF3;n eIF4G fosforilada al 37%. Comunicados de ARN de interferencia Pak2 inducida por la inhibici&#xF3;n de la traducci&#xF3;n en contacto inhibe las c&#xE9;lulas en 2,7 veces. eIF4G mutantes de la demostraci&#xF3;n de que el sitio Pak2 S896D inhibe la traducci&#xF3;n, mientras que S896A no tiene ning&#xFA;n efecto. La activaci&#xF3;n de Pak2 en respuesta al estr&#xE9;s hiperosm&#xF3;tico inhibe la tapa que dependen, pero no IRES-impulsado, la iniciaci&#xF3;n. Por lo tanto, una nueva v&#xED;a de se&#xF1;alizaci&#xF3;n de estr&#xE9;s de las c&#xE9;lulas de mam&#xED;feros se identifica, en el que la activaci&#xF3;n de Pak2 conduce a la inhibici&#xF3;n de la tapa que dependen de traducci&#xF3;n a trav&#xE9;s de la fosforilaci&#xF3;n de eIF4G.

La inhibici&#xF3;n de la tapa que dependen de traducci&#xF3;n a trav&#xE9;s de la fosforilaci&#xF3;n de eIF4G por la prote&#xED;na quinasa Pak2

La tirosina chinasi c-Abl &egrave; implicato in una variet&agrave; di processi cellulari che sono strettamente regolati da attivit&agrave; della chinasi c-Abl e/o interazioni tra c-Abl e altre molecole di segnalazione. &Egrave; dimostrato che l&#39;interazione di c-Abl con la proteina interactor Abl Abi2 essere regolato negativamente dalla fosforilazione della serines 637 e 638. Questi serines sono adiacenti del motivo PxxP (PTPPKRS637S638SFR) che lega il dominio SH3 di Abi. Fosforilazione del frammento Abl 593-730 da Pak2 riduce drasticamente l&#39;associazione Abi2 (90% circa). Mutazione di serines 637-639 alanina (3A) o aspartato (3D) risultati in un&#39;attivit&agrave; di aumento tirosina chinasi c-Abl 3D, e una lieve riduzione dell&#39;attivit&agrave; del mutante 3A, rispetto al wild-type (WT) c-ABL L&#39;interazione tra Abi2 e c-Abl 3D &egrave; inibito da 80%, rispetto al WT c-Abl o 3A c-Abl. Questo &egrave; accompagnato da un aumento di 2 volte nell&#39;associazione di Crk di c-Abl 3D. I dati indicano un meccanismo molecolare per cui la fosforilazione di c-Abl da Pak2 inibisce l&#39;interazione tra il dominio SH3 della Abi2 e del motivo PxxP di c-ABL Questa fosforilazione migliora l&#39;associazione di c-Abl con il substrato Crk e aumenta la fosforilazione mediata da c-Abl di Crk, alterando cos&igrave; l&#39;associazione di Crk con altre molecole di segnalazione.

La fosforilazione di c-Abl di chinasi di proteina Pak2 regola associazione differenziale di ABI2 e CRK.

&#xD2F0;&#xB85C;&#xC2E0; &#xD0A4; &#xB2C8; &#xC544; &#xC81C; c Abl &#xB2E4;&#xC591; &#xD55C; &#xC138;&#xD3EC;&#xC9C8; &#xD504;&#xB85C;&#xC138;&#xC2A4; c Abl &#xD0A4; &#xB2C8; &#xC544; &#xC81C; &#xD65C;&#xB3D9;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xB610;&#xB294; c Abl&#xC640; &#xB2E4;&#xB978; &#xC2E0;&#xD638; &#xBD84;&#xC790; &#xAC04;&#xC758; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC5C4;&#xACA9; &#xD558; &#xAC8C; &#xADDC;&#xC81C;&#xC5D0; &#xC5F0;&#xB8E8; &#xC774;&#xB2E4;. Abl &#xB04C;&#xC5B4;&#xC640;&#xC11C; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; Abi2 c Abl &#xC0C1;&#xD638; &#xBD80;&#xC815;&#xC801;&#xC778; 637 &#xACE0; 638 serines&#xC758; &#xC778; &#xC0B0;&#xD654;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xADDC;&#xC81C; &#xB418;&#xC5B4;&#xC57C; &#xD45C;&#xC2DC; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774; serines&#xB294; Abi&#xC758; SH3 &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778; PxxP &#xBAA8;&#xD2F0;&#xBE0C; (PTPPKRS637S638SFR)&#xC5D0; &#xC778;&#xC811; &#xD55C; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. Pak2&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; Abl 593-730 &#xB2E8;&#xD3B8;&#xC758; &#xC778; &#xC0B0;&#xD654;&#xB294; &#xADF9;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; Abi2 &#xBC14;&#xC778;&#xB529; (&#xC57D; 90%)&#xB97C; &#xC904;&#xC77C; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC57C;&#xC0DD;-&#xD0C0;&#xC785; (WT) c-Abl.&#xC5D0; &#xBE44;&#xD574; &#xC54C;&#xB77C;&#xB2CC; (3A) &#xB610;&#xB294; c Abl 3D &#xBC0F; 3A &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xD65C;&#xB3D9;&#xC758; &#xC57D;&#xAC04;&#xC758; &#xAC10;&#xC18C;&#xC758; &#xC99D;&#xAC00; &#xB41C; &#xD2F0;&#xB85C;&#xC2E0; &#xD0A4; &#xB2C8; &#xC544; &#xC81C; &#xD65C;&#xB3D9;&#xC5D0; aspartate (3D) &#xACB0;&#xACFC; serines 637-639&#xC758; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9; abi2&#xC640; c Abl 3D WT c Abl &#xB610;&#xB294; c Abl 3a&#xC5D0; &#xBE44;&#xD574; 80%&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC800;&#xD574;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774;&#xAC83;&#xC740; c Abl 3d Crk &#xBC14;&#xC778;&#xB529; 2-fold &#xC99D;&#xAC00; &#xB3D9;&#xBC18;&#xC73C;&#xB85C;. &#xB370;&#xC774;&#xD130;&#xB97C; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0B4;&#xB294; c-Abl pak2&#xC5D0; &#xC758;&#xD574;&#xC758; &#xC778; &#xC0B0;&#xD654; SH3 &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778; abi2&#xC758; c-Abl.&#xC758; PxxP &#xBAA8;&#xD2F0;&#xBE0C;&#xC758; &#xC0C1;&#xD638;&#xC791;&#xC6A9;&#xC744; &#xC5B5;&#xC81C; &#xD558;&#xB294; &#xADF8;&#xAC83;&#xC5D0; &#xC758;&#xD558;&#xC5EC; &#xBD84;&#xC790; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998; &#xC774; &#xC778; &#xC0B0;&#xD654; &#xAE30;&#xD310; Crk c Abl &#xC5F0;&#xAD00; &#xD5A5;&#xC0C1; &#xB418; &#xACE0; &#xB530;&#xB77C;&#xC11C; &#xB2E4;&#xB978; &#xC2E0;&#xD638; &#xBD84;&#xC790; Crk &#xC5F0;&#xAD00; &#xBCC0;&#xACBD; Crk&#xC758; &#xC778; &#xC0B0;&#xD654; c Abl &#xC911;&#xC7AC; &#xC99D;&#xAC00;.

&#xC778; &#xC0B0;&#xD654; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xD0A4; &#xB2C8; &#xC544; &#xC81C; pak2&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; c-Abl&#xC758; ABI2 &#xCC28;&#xB3D9; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xACFC; CRK&#xC744; &#xC870;&#xC808;.

&#x30C1;&#x30ED;&#x30B7;&#x30F3;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;c-Abl&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x306F;&#x3001;&#x5BC6;&#x306E;c-Abl&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x6D3B;&#x6027;&#x304A;&#x3088;&#x3073;/&#x307E;&#x305F;&#x306F;c-Abl&#x306E;&#x3001;&#x4ED6;&#x306E;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#x5206;&#x5B50;&#x9593;&#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x30D7;&#x30ED;&#x30BB;&#x30B9;&#x306E;&#x69D8;&#x3005;&#x306B;&#x95A2;&#x4E0E;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002; Abl&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x56E0;&#x5B50;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;Abi2&#x3067;c-Abl&#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x306F;&#x8CA0;&#x306E;&#x30BB;&#x30EA;&#x30F3;637&#x3068;638&#x306E;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x793A;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x30BB;&#x30EA;&#x30F3;&#x306F;&#x3001;ABI&#x306E;SH3&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x3092;&#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C9;&#x3057;&#x307E;&#x3059;PXXP&#x30E2;&#x30C1;&#x30FC;&#x30D5;&#xFF08;PTPPKRS637S638SFR&#xFF09;&#x306B;&#x96A3;&#x63A5;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002; PAK2&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;Abl&#x306E;593&#x304B;&#x3089;730&#x306E;&#x65AD;&#x7247;&#x306E;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x306F;&#x3001;&#x5287;&#x7684;&#x306B;Abi2&#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C7;&#x30A3;&#x30F3;&#x30B0;&#xFF08;&#x7D04;90&#xFF05;&#xFF09;&#x304C;&#x6E1B;&#x5C11;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#xFF08;WT&#xFF09;&#x3001;&#x91CE;&#x751F;&#x578B;&#x306B;&#x6BD4;&#x3079;&#x3066;&#x306E;c-Abl&#x306E;3D&#x306E;&#x5897;&#x52A0;&#x30C1;&#x30ED;&#x30B7;&#x30F3;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x6D3B;&#x6027;&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073;3A&#x5909;&#x7570;&#x4F53;&#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x306E;&#x308F;&#x305A;&#x304B;&#x306A;&#x6E1B;&#x5C11;&#x306B;&#x30A2;&#x30E9;&#x30CB;&#x30F3;&#xFF08;3A&#xFF09;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x30A2;&#x30B9;&#x30D1;&#x30E9;&#x30AE;&#x30F3;&#x9178;&#xFF08;3D&#xFF09;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x306B;&#x30BB;&#x30EA;&#x30F3;637&#x304B;&#x3089;639&#x306E;&#x5909;&#x7570;&#x306F;&#x3001;&#x306E;c-Abl&#x3002; Abi2&#x304A;&#x3088;&#x3073;c-Abl&#x306E;3D&#x306E;&#x9593;&#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x306F;&#x3001;WT&#x306E;c-Abl&#x307E;&#x305F;&#x306F;c-Abl&#x306E;3A&#x306B;&#x6BD4;&#x3079;&#x3001;80&#xFF05;&#x963B;&#x5BB3;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x306F;&#x3001;c-Abl&#x306E;3D&#x3078;&#x306E;Crk&#x306E;&#x7D50;&#x5408;&#x306E;2&#x500D;&#x306E;&#x5897;&#x52A0;&#x3092;&#x4F34;&#x3063;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x30C7;&#x30FC;&#x30BF;&#x306F;&#x3001;PAK2&#x306B;&#x3088;&#x308B;c-Abl&#x306E;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x304C;Abi2&#x306E;SH3&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x304A;&#x3088;&#x3073;c-Abl&#x306E;PXXP&#x30E2;&#x30C1;&#x30FC;&#x30D5;&#x9593;&#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x3092;&#x963B;&#x5BB3;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3088;&#x308A;&#x5206;&#x5B50;&#x6A5F;&#x69CB;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x306F;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306B;&#x4ED6;&#x306E;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;&#x5206;&#x5B50;&#x3068;&#x306E;Crk&#x306E;&#x95A2;&#x9023;&#x4ED8;&#x3051;&#x3092;&#x5909;&#x66F4;&#x3057;&#x3001;&#x57FA;&#x677F;&#x306E;Crk&#x304A;&#x3088;&#x3073;Crk&#x306E;&#x5897;&#x52A0;&#x306F;&#x3001;c-ABL&#x4EF2;&#x4ECB;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x306F;c-Abl&#x306E;&#x95A2;&#x9023;&#x4ED8;&#x3051;&#x3092;&#x5F37;&#x5316;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x30D7;&#x30ED;&#x30C6;&#x30A4;&#x30F3;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;PAK2&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;C-Abl&#x306E;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x306F;ABI2&#x3068;CRK&#x306E;&#x5DEE;&#x52D5;&#x7D50;&#x5408;&#x3092;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x3059;&#x308B;

&#x916A;&#x6C28;&#x9178;&#x6FC0;&#x9176; c &#x673A;&#x8F7D;&#x6FC0;&#x5149;&#x5668;&#x88AB;&#x5377;&#x5165;&#x5404;&#x79CD;&#x7531; c Abl &#x6FC0;&#x9176;&#x6D3B;&#x6027;&#x548C;/&#x6216; c Abl &#x4E0E;&#x5176;&#x5B83;&#x4FE1;&#x53F7;&#x5206;&#x5B50;&#x4E4B;&#x95F4;&#x7684;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x7684;&#x4E25;&#x683C;&#x7BA1;&#x63A7;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8FC7;&#x7A0B;&#x3002;C Abl Abl interactor &#x86CB;&#x767D; Abi2 &#x4E0E;&#x4E92;&#x52A8;&#x663E;&#x793A;&#x4E0D;&#x5229;&#x5E94;&#x7531; 637&#x3001; 638 serines &#x7684;&#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B; serines &#x662F;&#x76F8;&#x90BB;&#x7684;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x7684; Abi SH3 &#x57DF;&#x7684; PxxP &#x6BCD;&#x9898; &#xFF08;PTPPKRS637S638SFR&#xFF09;&#x3002;&#x7531; Pak2 &#x5728; Abl 593 730 &#x7247;&#x6BB5;&#x7684;&#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x6781;&#x5927;&#x5730;&#x51CF;&#x5C11;&#x4E86; Abi2 &#x7ED1;&#x5B9A; (&#x7EA6; 90%)&#x3002;&#x7A81;&#x53D8;&#x7684; serines 637 639 &#x4E19;&#x6C28;&#x9178; (3A) &#x6216;&#x5929;&#x51AC;&#x6C28;&#x9178; (3D) &#x4E2D;&#x589E;&#x52A0;&#x7684;&#x916A;&#x6C28;&#x9178;&#x6FC0;&#x9176;&#x6D3B;&#x6027;&#x7684;&#x7ED3;&#x679C; c Abl 3D &#x548C;&#x6D3B;&#x6027;&#x7684; 3A &#x7A81;&#x53D8;&#xFF0C;&#x7A0D;&#x6709;&#x51CF;&#x5C11;&#x4E0E;&#x91CE;&#x751F;&#x578B; (WT) c-&#x82F1;&#x8BED;&#x3002;&#x4E92;&#x52A8;&#x4E4B;&#x95F4; Abi2 &#x548C; c Abl 3D &#x6291;&#x5236; 80%&#xFF0C;WT c Abl &#x6216; c Abl 3A&#x3002;&#x8FD9;&#x662F;&#x5230; c Abl 3D &#x4F34;&#x968F;&#x8328;&#x5C14;&#x514B;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x4E2D;&#x589E;&#x52A0;&#x4E86;&#x4E8C;&#x6298;&#x3002;&#x6570;&#x636E;&#x8868;&#x660E;&#x78F7;&#x9178;&#x5316; c Abl &#x7684; Pak2 &#x5373;&#x6291;&#x5236; SH3 &#x57DF;&#x7684; Abi2 &#x548C; PxxP &#x6BCD;&#x9898;&#x7684; c &#x82F1;&#x8BED;&#x3002; &#x4E4B;&#x95F4;&#x7684;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x7684;&#x5206;&#x5B50;&#x673A;&#x5236;&#x8FD9;&#x4E2A;&#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x589E;&#x5F3A;&#x4E86;&#x4E0E;&#x57FA;&#x677F;&#x8328;&#x5C14;&#x514B; c Abl &#x7684;&#x5173;&#x8054;&#xFF0C;&#x5E76;&#x589E;&#x52A0; c &#x4ECB;&#x5BFC; Abl &#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x8328;&#x5C14;&#x514B;&#xFF0C;&#x4ECE;&#x800C;&#x6539;&#x53D8;&#x4E0E;&#x5176;&#x5B83;&#x4FE1;&#x53F7;&#x5206;&#x5B50;&#x8328;&#x5C14;&#x514B;&#x7684;&#x5173;&#x8054;&#x3002;

C-Abl &#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#x6FC0;&#x9176; Pak2 &#x7684;&#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x8C03;&#x8282;&#x5FAE;&#x5206;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x7684; ABI2 &#x548C;&#x8328;&#x5C14;&#x514B;&#x3002;

The tyrosine kinase c-Abl is implicated in a variety of cellular processes that are tightly regulated by c-Abl kinase activity and/or by interactions between c-Abl and other signaling molecules. The interaction of c-Abl with the Abl interactor protein Abi2 is shown to be negatively regulated by phosphorylation of serines 637 and 638. These serines are adjacent to the PxxP motif (PTPPKRS637S638SFR) that binds the SH3 domain of Abi. Phosphorylation of the Abl 593-730 fragment by Pak2 dramatically reduces Abi2 binding ( approximately 90%). Mutation of serines 637-639 to alanine (3A) or aspartate (3D) results in an increased tyrosine kinase activity of c-Abl 3D, and a slight reduction of the activity of the 3A mutant, as compared to wild-type (WT) c-Abl. The interaction between Abi2 and c-Abl 3D is inhibited by 80%, as compared to WT c-Abl or c-Abl 3A. This is accompanied by a 2-fold increase in binding of Crk to c-Abl 3D. The data indicate a molecular mechanism whereby phosphorylation of c-Abl by Pak2 inhibits the interaction between the SH3 domain of Abi2 and the PxxP motif of c-Abl. This phosphorylation enhances the association of c-Abl with the substrate Crk and increases c-Abl-mediated phosphorylation of Crk, thus altering the association of Crk with other signaling molecules.

Phosphorylation of c-Abl by protein kinase Pak2 regulates differential binding of ABI2 and CRK.

La tyrosine kinase c-Abl est impliqu&#xE9;e dans une vari&#xE9;t&#xE9; de processus cellulaires qui sont &#xE9;troitement r&#xE9;gul&#xE9;s par l&#x26;#39;activit&#xE9; de kinase c-Abl et / ou par les interactions entre c-abl et d&#x26;#39;autres mol&#xE9;cules de signalisation. L&#x26;#39;interaction de c-Abl avec le Abi2 prot&#xE9;ines interacteur Abl est montr&#xE9; &#xE0; &#xEA;tre n&#xE9;gativement r&#xE9;gul&#xE9;e par phosphorylation des s&#xE9;rines 637 et 638. Ces s&#xE9;rines sont adjacentes au motif PxxP (PTPPKRS637S638SFR) qui se lie le domaine SH3 d&#x26;#39;Abi. La phosphorylation de la Abl 593-730 fragment par PAK2 r&#xE9;duit consid&#xE9;rablement Abi2 contraignant (environ 90%). Mutation des s&#xE9;rines 637-639 en alanine (3A) ou d&#x26;#39;aspartate (3D) se traduit par une augmentation de l&#x26;#39;activit&#xE9; tyrosine kinase de c-Abl 3D, et une l&#xE9;g&#xE8;re diminution de l&#x26;#39;activit&#xE9; du mutant 3A, par rapport au type sauvage (WT) c-Abl. L&#x26;#39;interaction entre Abi2 et c-Abl 3D est inhib&#xE9;e par 80%, par rapport &#xE0; WT c-Abl ou c-Abl 3A. Ceci est accompagn&#xE9; par une augmentation de 2 fois dans la liaison de Crk &#xE0; c-Abl 3D. Les donn&#xE9;es indiquent un m&#xE9;canisme mol&#xE9;culaire lequel la phosphorylation de c-Abl par PAK2 inhibe l&#x26;#39;interaction entre le domaine SH3 de Abi2 et le motif PxxP de c-Abl. Cette phosphorylation augmente l&#x26;#39;association de c-Abl avec le substrat et les augmentations Crk c-Abl &#xE0; m&#xE9;diation de phosphorylation de la CRK, alt&#xE9;rant ainsi l&#x26;#39;association de mol&#xE9;cules de signalisation Crk avec d&#x26;#39;autres.

La phosphorylation de c-Abl par la prot&#xE9;ine kinase PAK2 R&#xE9;gule reliure diff&#xE9;rentiel de ABI2 et CRK

Die Tyrosin-Kinase c-Abl ist in einer Vielzahl zellul&auml;rer Prozesse verwickelt, die eng von c-Abl-Kinase-Aktivit&auml;t und/oder Wechselwirkungen zwischen c-Abl und andere signalisierende Molek&uuml;le reguliert werden. Das Zusammenspiel von c-Abl mit der interactor Abl-Proteins Abi2 erscheint negativ durch Phosphorylierung von Serinresten 637 und 638 geregelt. Diese Serinresten sind neben dem PxxP Motiv (PTPPKRS637S638SFR), das die SH3-Dom&auml;ne von Abi bindet. Phosphorylierung von der Abl 593-730-Fragment von Pak2 verringert drastisch die Abi2 Bindung (ca. 90 %). Mutation des Serinresten 637-639-Alanin (3A) oder Aspartat (3D) Ergebnisse in eine h&ouml;here Tyrosin-Kinase-Aktivit&auml;t von c-Abl 3D und einer leichten Verringerung der Aktivit&auml;t von der 3A-Mutant, im Vergleich zu Wildtyp (WT) c-Abl. Die Interaktion zwischen Abi2 und c-Abl ist 3D um 80 %, verglichen mit WT c-Abl oder c-Abl 3A gehemmt. Dies ist eine 2-fold Zunahme der Bindung von Crk auf c-Abl 3D einher. Die Daten zeigen einen molekularen Mechanismus, wobei Phosphorylierung von c-Abl von Pak2 die Interaktion zwischen der SH3-Dom&auml;ne von Abi2 und das PxxP-Motiv der c-Abl. hemmt Diese Phosphorylierung verbessert die Assoziation von c-Abl mit dem Substrat Crk und erh&ouml;ht c-Abl-vermittelter Phosphorylierung von Crk, damit die Assoziation der Crk mit andere signalisierende Molek&uuml;le zu ver&auml;ndern.

Phosphorylierung von c-Abl von Proteinkinase Pak2 regelt differenzielle Anbindung von ABI2 und CRK.

La tirosina quinasa c-Abl est&#xE1; implicado en una variedad de procesos celulares que est&#xE1;n estrechamente regulado por la actividad quinasa c-Abl y / o por las interacciones entre c-Abl y otras mol&#xE9;culas de se&#xF1;alizaci&#xF3;n. La interacci&#xF3;n de c-Abl con la Abi2 interactor prote&#xED;na Abl se muestra que se regula negativamente por la fosforilaci&#xF3;n de las serinas 637 y 638. Estas son las serinas junto con el motivo PXXP (PTPPKRS637S638SFR) que se une el dominio SH3 de Abi. La fosforilaci&#xF3;n de la Abl 593-730 fragmento por Pak2 reduce dr&#xE1;sticamente Abi2 uni&#xF3;n (aproximadamente 90%). La mutaci&#xF3;n de serinas 637-639 a alanina (3A) o aspartato (3D) da como resultado un aumento de la actividad quinasa de tirosina de c-Abl 3D, y una ligera reducci&#xF3;n de la actividad de la mutante 3A, en comparaci&#xF3;n con el tipo salvaje (WT) c-Abl. La interacci&#xF3;n entre Abi2 y 3D c-Abl se inhibe en un 80%, en comparaci&#xF3;n con WT c-Abl o 3A c-Abl. Esto es acompa&#xF1;ado por un aumento de 2 veces en la uni&#xF3;n de Crk a c-Abl 3D. Los datos indican un mecanismo molecular por el que la fosforilaci&#xF3;n de c-Abl por Pak2 inhibe la interacci&#xF3;n entre el dominio SH3 de Abi2 y el motivo PXXP de c-Abl. Esta fosforilaci&#xF3;n mejora la asociaci&#xF3;n de c-Abl con la Crk sustrato y aumenta c-Abl mediada por fosforilaci&#xF3;n de Crk, alterando as&#xED; la asociaci&#xF3;n de Crk con mol&#xE9;culas de se&#xF1;alizaci&#xF3;n.

La fosforilaci&#xF3;n de c-Abl por la prote&#xED;na quinasa Pak2 Regula uni&#xF3;n diferencial de ABI2 y CRK

&#x671F;&#x95F4;&#x51CB;&#x4EA1;&#x6FC0;&#x86CB;&#x767D;&#x6FC0;&#x9176; Pak2 &#x662F;&#x534A;&#x80F1;&#x6C28;&#x9178;&#x86CB;&#x767D;&#x9176; 3&#xFF0C;&#x5F62;&#x6210; heterotetramer&#xFF0C;&#x662F;&#x4E00;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x4EE5;&#x4E0B;&#x81EA;&#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x7684;&#x5207;&#x5272;&#x7684;&#x3002;&#x6D3B;&#x6027;&#x86CB;&#x767D;&#x6FC0;&#x9176;&#x8FC1;&#x79FB;&#x901F;&#x5EA6;&#x6BD4;&#x5168;&#x9176;&#x8FD8;&#x5904;&#x4E8E;&#x975E;&#x6D3B;&#x52A8;&#x72B6;&#x6001;&#x80FD;&#x5728;&#x51DD;&#x80F6;&#x8FC7;&#x6EE4;&#xFF0C;&#x5EFA;&#x8BAE;&#x6269;&#x5927;&#x6784;&#x8C61;&#x5206;&#x6790;&#x65F6;&#x7A0D;&#x6162;&#x3002;Pak2 &#x6FC0;&#x6D3B;&#x5305;&#x62EC;&#x4E00;&#x7CFB;&#x5217;&#x7684;&#x4ECE;&#x534A;&#x80F1;&#x6C28;&#x9178;&#x86CB;&#x767D;&#x9176;&#x5288;&#x88C2;&#x3001; ATP &#x7ED1;&#x5B9A;&#x548C; Pak2 &#x7684;&#x81EA;&#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x6240;&#x9020;&#x6210;&#x7684;&#x7ED3;&#x6784;&#x6027;&#x53D8;&#x5316;&#x3002;&#x5728;&#x6BCF;&#x4E2A;&#x6B65;&#x9AA4;&#x7684;&#x66F4;&#x6539;&#x5355;&#x72EC;&#x5206;&#x6790;&#x9170;&#x80FA;&#x6C22;/&#x6C18;&#x4EA4;&#x6362;&#x8D28;&#x8C31;&#x548C;&#x76F8;&#x6BD4;&#x5904;&#x4E8E;&#x975E;&#x6D3B;&#x52A8;&#x72B6;&#x6001;&#x7684; Pak2&#x3002;&#x81EA;&#x52A8;&#x6291;&#x5236;&#x7A97;&#x4F53;&#x662F;&#x663E;&#x793A;&#x8981;&#x7ED1;&#x5B9A; ATP &#x5728;&#x6D3B;&#x52A8;&#x7F51;&#x7AD9;&#xFF0C;&#x4E0E;&#x7518;&#x6C28;&#x9178;&#x5FAA;&#x73AF;&#x548C; autoinhibitory &#x57DF; &#xFF08;&#x63F4;&#x52A9;&#xFF09; &#x7684;&#x8F7B;&#x5FAE;&#x53D8;&#x5316;&#x3002;&#x534A;&#x80F1;&#x6C28;&#x9178;&#x86CB;&#x767D;&#x9176;&#x89E3;&#x7406;&#x751F;&#x4EA7;&#x6EB6;&#x5242;&#x53EF;&#x53CA;&#x6027;&#x7684;&#x63F4;&#x52A9;&#x548C;&#x4E0A;&#x53F6;&#x5728;&#x50AC;&#x5316;&#x9886;&#x57DF;&#x7684;&#x91CD;&#x5927;&#x53D8;&#x5316;&#x3002;&#x5288;&#x88C2;&#x7684; ATP &#x7ED1;&#x5B9A; Pak2 &#x653E;&#x677E;&#x53D8;&#x6784;&#x6291;&#x5236;&#x4F5C;&#x7528;&#xFF0C;&#x5982;&#x56FE;&#x6240;&#x793A;&#x7684;&#x4E2D;&#x4E0A;&#x90E8;&#x548C;&#x4E0B;&#x90E8;&#x7684;&#x53F6;&#xFF0C;&#x5305;&#x62EC; G &#x87BA;&#x65CB;&#xFF0C;&#x4FBF;&#x5229;&#x6FC0;&#x6D3B;&#xFF0C;&#x5728;&#x7BA1;&#x7406;&#x57DF;&#x4E2D;&#x7684; Ser 141 &#x548C;&#x82CF;&#x6C28;&#x9178; 402 &#x50AC;&#x5316;&#x57DF;&#x4E2D;&#x6240;&#x9700;&#x7684;&#x4E24;&#x4E2A;&#x7AD9;&#x70B9;&#x7684;&#x81EA;&#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x589E;&#x52A0;&#x6EB6;&#x5242;&#x7684;&#x8F85;&#x52A9;&#x529F;&#x80FD;&#x3002;&#x81EA;&#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x589E;&#x52A0;&#x9170;&#x80FA;&#x6C22;/&#x6C18;&#x4EA4;&#x6362;&#x6EB6;&#x5242;&#x53EF;&#x53CA;&#x6027;&#x7684;&#x63F4;&#x52A9;&#x548C; G-&#x87BA;&#x65CB;&#x3001; E F &#x5FAA;&#x73AF;&#x548C; N &#x603B;&#x7AD9;&#x4E4B;&#x95F4;&#x7684;&#x63A5;&#x89E6;&#x533A;&#x57DF;&#x3002;&#x56E0;&#x6B64;&#xFF0C;Pak2 &#x901A;&#x8FC7;&#x5288;&#x88C2;&#x534A;&#x80F1;&#x6C28;&#x9178;&#x86CB;&#x767D;&#x9176;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x662F; Pak2&#xFF0C;&#x5B83;&#x5141;&#x8BB8;&#x5B8C;&#x6574;&#x7684;&#x81EA;&#x52A8;&#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#xFF0C;&#x4ECE;&#x800C;&#x66F4;&#x5168;&#x9762;&#x63A5;&#x89E6;&#x6EB6;&#x5242;&#x548C; conformationally &#x52A8;&#x6001;&#x9176;&#x7684;&#x7ED3;&#x6784;&#x5F1B;&#x8C6B;&#x4E0E;&#x76F8;&#x5173;&#x8054;&#x3002;

&#x6FC0;&#x6D3B;&#x86CB;&#x767D;&#x6FC0;&#x9176; Pak2 &#x9170;&#x80FA;&#x6C22;/&#x6C18;&#x4EA4;&#x6362;&#x8FC7;&#x7A0B;&#x4E2D;&#x7684;&#x6784;&#x8C61;&#x53D8;&#x5316;&#x7684;&#x5206;&#x6790;&#x3002;

During apoptotic stress, protein kinase Pak2 is cleaved by caspase 3 to form a heterotetramer that is constitutively activated following autophosphorylation. The active protein kinase migrates slightly slower than the inactive holoenzyme when analyzed by gel filtration, suggesting an expanded conformation. Activation of Pak2 comprises a series of structural changes resulting from caspase cleavage, ATP binding, and autophosphorylation of Pak2. Changes at each step were individually analyzed by amide hydrogen/deuterium exchange coupled with mass spectrometry and compared with inactive Pak2. The auto-inhibited form was shown to bind ATP in the active site, with minor changes in the glycine loop and the autoinhibitory domain (AID). Caspase cleavage produced significant changes in solvent accessibility in the AID and upper lobe of the catalytic domain. Cleavage of ATP-bound Pak2 relaxes the allosteric inhibition, as shown by increased solvent accessibility in the upper and lower lobes, including the G-helix, facilitating the autophosphorylation of two sites required for activation, Ser-141 in the regulatory domain and Thr-402 in the catalytic domain. Autophosphorylation increased the amide hydrogen/deuterium exchange solvent accessibility of the contact region between the AID and the G-helix, the E-F loop, and the N terminus. Thus, activation of Pak2 via caspase cleavage is associated with structural relaxation of Pak2 that allows for complete auto-phosphorylation, resulting in a more comprehensive solvent-exposed and conformationally dynamic enzyme.

Analysis of conformational changes during activation of protein kinase Pak2 by amide hydrogen/deuterium exchange.

Lors d&#x26;#39;un stress apoptotique, la prot&#xE9;ine kinase PAK2 est cliv&#xE9; par la caspase 3 pour former un h&#xE9;t&#xE9;rot&#xE9;tram&#xE8;re qui est constitutivement active autophosphorylation suivant. La prot&#xE9;ine kinase actif migre l&#xE9;g&#xE8;rement plus lent que l&#x26;#39;holoenzyme inactive lorsqu&#x26;#39;il est analys&#xE9; par filtration sur gel, ce qui sugg&#xE8;re une conformation &#xE9;tendue. Activation d&#x26;#39;PAK2 comprend une s&#xE9;rie de changements structuraux r&#xE9;sultant du clivage caspase, liaison de l&#x26;#39;ATP, et l&#x26;#39;autophosphorylation d&#x26;#39;PAK2. Changements &#xE0; chaque &#xE9;tape ont &#xE9;t&#xE9; analys&#xE9;s individuellement par un amide d&#x26;#39;hydrog&#xE8;ne / deut&#xE9;rium &#xE9;change coupl&#xE9;e &#xE0; la spectrom&#xE9;trie de masse et par rapport &#xE0; PAK2 inactif. L&#x26;#39;auto-inhib&#xE9;e formulaire a &#xE9;t&#xE9; montr&#xE9; pour lier l&#x26;#39;ATP dans le site actif, avec des changements mineurs dans la boucle la glycine et le domaine autoinhibitory (AID). Caspase clivage produit des changements significatifs dans l&#x26;#39;accessibilit&#xE9; de solvant dans le lobe sup&#xE9;rieur de l&#x26;#39;AID et le domaine catalytique. Clivage de l&#x26;#39;ATP li&#xE9; PAK2 d&#xE9;tend l&#x26;#39;inhibition allost&#xE9;rique, comme indiqu&#xE9; par accessibilit&#xE9; au solvant accrue dans les lobes sup&#xE9;rieur et inf&#xE9;rieur, dont le G-h&#xE9;lice, facilitant l&#x26;#39;autophosphorylation de deux sites requis pour l&#x26;#39;activation, Ser-141 dans le domaine de r&#xE9;gulation et Thr- 402 dans le domaine catalytique. Autophosphorylation augment&#xE9; l&#x26;#39;accessibilit&#xE9; de change amide hydrog&#xE8;ne / deut&#xE9;rium solvant de la r&#xE9;gion de contact entre l&#x26;#39;AID et le G-h&#xE9;lice, la boucle EF, et le terminus N. Ainsi, l&#x26;#39;activation des caspases PAK2 par clivage est associ&#xE9; &#xE0; la relaxation de construction PAK2 qui permet l&#x26;#39;auto-complets phosphorylation, r&#xE9;sultant en une enzyme plus compl&#xE8;te solvant-expos&#xE9;e et la conformation dynamique.

Analyse des changements conformationnels lors de l&#x26;#39;activation de la prot&#xE9;ine kinase PAK2 par Amide hydrog&#xE8;ne / deut&#xE9;rium Bourse

Durante el estr&#xE9;s apoptosis, la prote&#xED;na quinasa Pak2 se escinde por la caspasa 3 para formar un heterotetr&#xE1;mero que est&#xE1; activada constitutivamente autofosforilaci&#xF3;n siguiente. La prote&#xED;na quinasa activa migra ligeramente m&#xE1;s lento que la holoenzima inactivo cuando se analiza por filtraci&#xF3;n en gel, lo que sugiere una conformaci&#xF3;n ampliada. La activaci&#xF3;n de Pak2 comprende una serie de cambios estructurales derivados de la caspasa divisi&#xF3;n, uni&#xF3;n de ATP y la autofosforilaci&#xF3;n de Pak2. Los cambios en cada paso se analizaron individualmente por amida hidr&#xF3;geno / deuterio intercambio acoplada a espectrometr&#xED;a de masa y se compararon con Pak2 inactivo. El auto-inhibido forma fue demostrado que se une ATP en el sitio activo, con peque&#xF1;os cambios en el ciclo de la glicina y el dominio autoinhibici&#xF3;n (AID). Caspasa divisi&#xF3;n produjo cambios significativos en la accesibilidad de disolvente en el l&#xF3;bulo superior de la AID y el dominio catal&#xED;tico. La escisi&#xF3;n de ATP enlazado Pak2 relaja la inhibici&#xF3;n alost&#xE9;rica, como se muestra por accesibilidad disolvente aumento en los l&#xF3;bulos superiores e inferiores, incluyendo el G-h&#xE9;lice, lo que facilita la autofosforilaci&#xF3;n de dos sitios necesarios para la activaci&#xF3;n, Ser-141 en el dominio regulador y Thr 402 en el dominio catal&#xED;tico. Autofosforilaci&#xF3;n aument&#xF3; la amida de hidr&#xF3;geno / deuterio accesibilidad intercambio de disolvente de la regi&#xF3;n de contacto entre el AID y el G-h&#xE9;lice, el bucle de EF, y el N terminal. As&#xED;, la activaci&#xF3;n de Pak2 v&#xED;a caspasa divisi&#xF3;n se asocia con la relajaci&#xF3;n estructural de Pak2 que permite completa de auto-fosforilaci&#xF3;n, dando lugar a una enzima m&#xE1;s completa disolvente expuesta y din&#xE1;mica conformacionalmente.

An&#xE1;lisis de los cambios conformacionales durante la activaci&#xF3;n de la prote&#xED;na quinasa Pak2 por Amida de hidr&#xF3;geno / deuterio Bolsa

Bei Apoptotic Stress ist Proteinkinase Pak2 zerspaltet, durch Caspase 3 eine Heterotetramer bilden, die konstitutiv aktivierten folgende Autophosphorylierung ist. Die aktive Proteinkinase migriert etwas langsamer als die inaktiven Erfahrung wenn von Gel-Filtration, schl&auml;gt eine erweiterte Konformation analysiert. Aktivierung des Pak2 umfasst eine Reihe von strukturellen Ver&auml;nderungen infolge Caspase-Spaltung, ATP-Bindung und Autophosphorylierung von Pak2. &Auml;nderungen bei jedem Schritt wurden einzeln von Amid Wasserstoff/Deuterium Exchange gekoppelt mit Massenspektrometrie und im Vergleich zu inaktiven Pak2 analysiert. Auto-gehemmt Form wurde gezeigt, um ATP in der aktiven Site, mit geringf&uuml;gigen &Auml;nderungen in der Glycin-Schleife und der Autoinhibitory-Dom&auml;ne (Hilfe) zu binden. Caspase-Spaltung bedeutende &Auml;nderungen in solvent Barrierefreiheit in die Hilfe und die oberen Lobus der katalytischen Dom&auml;ne hergestellt. Spaltung von ATP gebundene Pak2 entspannt die allosterische Hemmung, wie erh&ouml;hte solvent Zug&auml;nglichkeit in der oberen und unteren Lappen, einschlie&szlig;lich der G-Helix, erleichtern die Autophosphorylierung von zwei Standorten, die f&uuml;r die Aktivierung, Ser-141 in der regulatorischen Dom&auml;ne und Thr-402 in der katalytischen Dom&auml;ne gezeigt. Autophosphorylierung erh&ouml;ht die Amid Wasserstoff/Deuterium Austausch solvent Zug&auml;nglichkeit des Gebietes Kontakt zwischen Hilfe und die G-Helix, die E-F-Schleife und das N-Terminus. Daher ist die Aktivierung der Pak2 Caspase-Spaltung strukturelle Lockerung der Pak2, die komplette Auto-Phosphorylierung, wodurch eine umfassendere L&ouml;sungsmittel ausgesetzt und konformationsgehinderten dynamische Enzym erm&ouml;glicht zugeordnet.

Analyse der Konformationsver&auml;nderungen w&auml;hrend der Aktivierung der Proteinkinase Pak2 Amid Wasserstoff/Deuterium Austausch.

Durante lo stress apoptotic, chinasi di proteina Pak2 &egrave; fenduta da caspase 3 per formare un heterotetramer che &egrave; costitutivamente attivato autophosphorylation seguenti. La chinasi di proteina attiva migra leggermente pi&ugrave; lento rispetto al esonucleasica inattivo quando analizzato mediante gel filtrazione, suggerendo una conformazione estesa. Attivazione di Pak2 comprende una serie di cambiamenti strutturali derivanti dal clivaggio di caspase, ATP binding e autophosphorylation di Pak2. Modifiche ad ogni passo sono state analizzate singolarmente tramite lo scambio di idrogeno/deuterio ammide accoppiato con spettrometria di massa e confrontato con Pak2 inattivo. Il modulo di auto-inibito &egrave; stato mostrato a legare ATP nel sito attivo, con lievi modifiche nel ciclo il glicina e il dominio automatico (aiuto). Clivaggio caspase prodotto cambiamenti significativi nel solvente accessibilit&agrave; negli aiuti e lobo superiore del dominio catalitico. Scissione dell&#39;ATP-bound Pak2 rilassa l&#39;inibizione allosterica, come dimostrato dalla maggiore accessibilit&agrave; solvibile nei lobi superiori e inferiori, tra cui il G-helix, facilitando il autophosphorylation di due siti necessari per l&#39;attivazione, Ser-141 del dominio normativo e Thr-402 nel dominio catalitico. Autophosphorylation aumentato l&#39;accessibilit&agrave; solvibile ammide idrogeno/deuterio cambio dell&#39;area di contatto tra l&#39;aiuto e il G-helix, il loop E-F e il capolinea N. Cos&igrave;, attivazione di Pak2 via caspase scissione &egrave; associata a rilassamento strutturale di Pak2 che consente una completa auto-fosforilazione, risultante in un completo pi&ugrave; esposto al solvente ed enzima conformazionalmente dinamico.

Analisi dei cambiamenti conformazionali durante l&#39;attivazione della chinasi di proteina Pak2 tramite lo scambio di idrogeno/deuterio ammide.

&#x30A2;&#x30DD;&#x30C8;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9;&#x3001;&#x30B9;&#x30C8;&#x30EC;&#x30B9;&#x6642;&#x306B;&#x306F;&#x3001;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C6;&#x30A4;&#x30F3;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;PAK2&#x306F;&#x3001;&#x6052;&#x5E38;&#x7684;&#x306B;&#x3001;&#x6B21;&#x306E;&#x81EA;&#x5DF1;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x3092;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x30D8;&#x30C6;&#x30ED;&#x3092;&#x5F62;&#x6210;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x3001;&#x30AB;&#x30B9;&#x30D1;&#x30FC;&#x30BC;3&#x306B;&#x3088;&#x308A;&#x5207;&#x65AD;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C6;&#x30A4;&#x30F3;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x306F;&#x3001;&#x5C55;&#x958B;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x30B3;&#x30F3;&#x30D5;&#x30A9;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x3092;&#x793A;&#x5506;&#x3057;&#x3001;&#x30B2;&#x30EB;&#x308D;&#x904E;&#x3067;&#x5206;&#x6790;&#x3057;&#x4E0D;&#x6D3B;&#x6027;&#x306A;&#x30DB;&#x30ED;&#x9175;&#x7D20;&#x3088;&#x308A;&#x3082;&#x82E5;&#x5E72;&#x9045;&#x304F;&#x306A;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x304C;&#x79FB;&#x884C;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002; PAK2&#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x306F;&#x3001;&#x30AB;&#x30B9;&#x30D1;&#x30FC;&#x30BC;&#x5207;&#x65AD;&#x3001;ATP&#x306E;&#x7D50;&#x5408;&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073;PAK2&#x306E;&#x81EA;&#x5DF1;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x306B;&#x8D77;&#x56E0;&#x3059;&#x308B;&#x69CB;&#x9020;&#x5909;&#x5316;&#x306E;&#x30B7;&#x30EA;&#x30FC;&#x30BA;&#x3067;&#x69CB;&#x6210;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x5404;&#x30B9;&#x30C6;&#x30C3;&#x30D7;&#x3067;&#x306E;&#x5909;&#x66F4;&#x306F;&#x500B;&#x5225;&#x306B;&#x8CEA;&#x91CF;&#x5206;&#x6790;&#x3068;&#x7D44;&#x307F;&#x5408;&#x308F;&#x305B;&#x3066;&#x3001;&#x975E;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6;PAK2&#x3068;&#x6BD4;&#x3079;&#x3066;&#x30A2;&#x30DF;&#x30C9;&#x6C34;&#x7D20;/&#x91CD;&#x6C34;&#x7D20;&#x4EA4;&#x63DB;&#x306B;&#x3088;&#x308A;&#x5206;&#x6790;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x81EA;&#x52D5;&#x6291;&#x5236;&#x3055;&#x308C;&#x30D5;&#x30A9;&#x30FC;&#x30E0;&#x304C;&#x30B0;&#x30EA;&#x30B7;&#x30F3;&#x30EB;&#x30FC;&#x30D7;&#x3068;&#x81EA;&#x5DF1;&#x963B;&#x5BB3;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#xFF08;AID&#xFF09;&#x306E;&#x30DE;&#x30A4;&#x30CA;&#x30FC;&#x306A;&#x5909;&#x66F4;&#x3067;&#x3001;&#x6D3B;&#x6027;&#x90E8;&#x4F4D;&#x3067;ATP&#x3092;&#x7D50;&#x5408;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x793A;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3002;&#x30AB;&#x30B9;&#x30D1;&#x30FC;&#x30BC;&#x306E;&#x5207;&#x65AD;&#x306F;&#x3001;&#x89E6;&#x5A92;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x306E;AID&#x3068;&#x4E0A;&#x8449;&#x306E;&#x6EB6;&#x5A92;&#x30A2;&#x30AF;&#x30BB;&#x30B7;&#x30D3;&#x30EA;&#x30C6;&#x30A3;&#x306E;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x5909;&#x66F4;&#x3092;&#x751F;&#x3058;&#x305F;&#x3002; ATP-&#x7D50;&#x5408;&#x3057;&#x305F;PAK2&#x306E;&#x5207;&#x65AD;&#x306F;&#x3001;&#x898F;&#x5236;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x3068;Thr-&#x306E;Ser-141&#x306A;&#x3069;&#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x306B;&#x5FC5;&#x8981;&#x306A;2&#x3064;&#x306E;&#x90E8;&#x4F4D;&#x306E;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x3092;&#x4FC3;&#x9032;&#x3057;&#x3001;G-&#x30D8;&#x30EA;&#x30C3;&#x30AF;&#x30B9;&#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x4E0A;&#x90E8;&#x3068;&#x4E0B;&#x90E8;&#x8449;&#x3067;&#x5897;&#x52A0;&#x3057;&#x3001;&#x6EB6;&#x5A92;&#x30A2;&#x30AF;&#x30BB;&#x30B7;&#x30D3;&#x30EA;&#x30C6;&#x30A3;&#x3001;&#x3067;&#x793A;&#x3059;&#x3088;&#x3046;&#x306B;&#x3001;&#x30A2;&#x30ED;&#x30B9;&#x30C6;&#x30EA;&#x30C3;&#x30AF;&#x963B;&#x5BB3;&#x3092;&#x7DE9;&#x548C;&#x89E6;&#x5A92;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x306E;402&#x3002;&#x81EA;&#x5DF1;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x306F;&#x3001;AID&#x3068;G-&#x30D8;&#x30EA;&#x30C3;&#x30AF;&#x30B9;&#x3001;EF&#x30EB;&#x30FC;&#x30D7;&#x3068;N&#x672B;&#x7AEF;&#x3068;&#x306E;&#x9593;&#x306E;&#x63A5;&#x89E6;&#x9818;&#x57DF;&#x306E;&#x30A2;&#x30DF;&#x30C9;&#x6C34;&#x7D20;/&#x91CD;&#x6C34;&#x7D20;&#x4EA4;&#x63DB;&#x6EB6;&#x5264;&#x306E;&#x30A2;&#x30AF;&#x30BB;&#x30B7;&#x30D3;&#x30EA;&#x30C6;&#x30A3;&#x306E;&#x5897;&#x52A0;&#x3068;&#x306A;&#x308A;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3057;&#x305F;&#x304C;&#x3063;&#x3066;&#x3001;&#x30AB;&#x30B9;&#x30D1;&#x30FC;&#x30BC;&#x5207;&#x65AD;&#x3092;&#x7D4C;&#x7531;&#x3057;&#x3066;PAK2&#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x306F;&#x3001;&#x3088;&#x308A;&#x5305;&#x62EC;&#x7684;&#x306A;&#x6EB6;&#x5A92;&#x306B;&#x3055;&#x3089;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x3068;&#x3001;&#x30B3;&#x30F3;&#x30D5;&#x30A9;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x30C0;&#x30A4;&#x30CA;&#x30DF;&#x30C3;&#x30AF;&#x9175;&#x7D20;&#x3067;&#x3001;&#x305D;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x3001;&#x5B8C;&#x5168;&#x306A;&#x81EA;&#x5DF1;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;PAK2&#x306E;&#x69CB;&#x9020;&#x7DE9;&#x548C;&#x306B;&#x95A2;&#x9023;&#x4ED8;&#x3051;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x30A2;&#x30DF;&#x30C9;&#x6C34;&#x7D20;/&#x91CD;&#x6C34;&#x7D20;&#x4EA4;&#x63DB;&#x6CD5;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C6;&#x30A4;&#x30F3;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;PAK2&#x306E;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D9;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x306E;&#x9593;&#x306E;&#x69CB;&#x9020;&#x5909;&#x5316;&#x306E;&#x89E3;&#x6790;

Apoptotic &#xC2A4;&#xD2B8;&#xB808;&#xC2A4; &#xB3D9;&#xC548; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xD0A4; &#xB2C8; &#xC544; pak2&#xB294; caspase 3 constitutively &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xB41C; &#xB2E4;&#xC74C; autophosphorylation&#xC740; heterotetramer&#xC744; &#xD615;&#xC131; &#xD558; &#xC5EC; &#xBD99;&#xC5B4;. &#xD65C;&#xC131; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xD0A4; &#xB2C8; &#xC544; &#xC81C;&#xB97C; &#xC81C;&#xC548; &#xD558;&#xB294; &#xD655;&#xC7A5; &#xB41C; &#xB098; &#xB780; &#xC824; &#xC5EC;&#xACFC; &#xC758;&#xD574; &#xBD84;&#xC11D; &#xD558;&#xBA74; &#xBE44;&#xD65C;&#xC131; holoenzyme &#xBCF4;&#xB2E4; &#xC57D;&#xAC04; &#xB290;&#xB9AC;&#xAC8C; &#xB9C8;&#xC774;&#xADF8;&#xB808;&#xC774;&#xC158;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. Pak2&#xC758; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; caspase &#xBD84;&#xC5F4;, ATP &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xBC0F; pak2&#xC758; autophosphorylation&#xC5D0;&#xC11C; &#xC720;&#xB798; &#xD558;&#xB294; &#xAD6C;&#xC870; &#xBCC0;&#xACBD;&#xC758; &#xC2DC;&#xB9AC;&#xC988; &#xAD6C;&#xC131;. &#xAC01; &#xB2E8;&#xACC4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBCC0;&#xACBD; &#xB0B4;&#xC6A9;&#xC740; &#xAC1C;&#xBCC4;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xC544; &#xBBF8;&#xB4DC; &#xC218;&#xC18C;/&#xC911;&#xC218;&#xC18C; &#xAD50;&#xD658; &#xC5F0;&#xAD00; &#xD558; &#xC5EC; &#xC9C8;&#xB7C9; &#xBD84;&#xC11D; &#xBC0F; &#xBE44;&#xD65C;&#xC131; pak2&#xC640; &#xBE44;&#xAD50; &#xD558; &#xC5EC; &#xBD84;&#xC11D; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC790;&#xB3D9; &#xC800;&#xD574; &#xC591;&#xC2DD; &#xAE00;&#xB9AC;&#xC2E0; &#xB8E8;&#xD504;&#xC640; autoinhibitory &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778; (&#xC6D0;&#xC870;)&#xC758; &#xC0AC;&#xC18C;&#xD55C; &#xBCC0;&#xD654; &#xD558;&#xB294; &#xC561;&#xD2F0;&#xBE0C; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8;&#xC758; ATP&#xC5D0; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xD558;&#xACE0; &#xD45C;&#xC2DC; &#xD588;&#xB2E4;. Caspase &#xBD84;&#xC5F4; &#xC6D0;&#xC870;&#xC640; &#xCD09;&#xB9E4; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778;&#xC758; &#xC0C1;&#xC704; &#xC5FD;&#xC5D0; &#xC6A9; &#xB9E4; &#xC811;&#xADFC;&#xC131;&#xC5D0; &#xC0C1;&#xB2F9;&#xD55C; &#xBCC0;&#xD654;&#xB97C; &#xC0DD;&#xC0B0;. ATP &#xBC14;&#xC778;&#xB529; pak2&#xC758; &#xBD84;&#xC5F4; &#xC99D;&#xAC00; &#xC6A9; &#xB9E4; &#xC811;&#xADFC;&#xC131; G-&#xB098;&#xC120;, &#xCD09;&#xC9C4; &#xD65C;&#xC131;&#xD654;, &#xADDC;&#xC81C; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778;&#xC5D0;&#xC11C; Ser-141&#xC640; Thr-402 &#xCD09;&#xB9E4; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778;&#xC5D0; &#xD544;&#xC694;&#xD55C; &#xB450; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8;&#xC758; autophosphorylation&#xB97C; &#xD3EC;&#xD568; &#xD558; &#xC5EC; &#xC0C1;&#xC704; &#xBC0F; &#xD558;&#xC704; &#xB3CC;&#xCD9C;&#xBD80;&#xC640; &#xAC19;&#xC774; allosteric &#xC800;&#xD574;&#xB97C; &#xC774;&#xC644; &#xD55C;&#xB2E4;. Autophosphorylation &#xC6D0;&#xC870;&#xC640; G-&#xB098;&#xC120;, E F &#xB8E8;&#xD504;&#xC640; N &#xB9D0;&#xB2E8; &#xC0AC;&#xC774;&#xC758; &#xC811;&#xCD09; &#xC601;&#xC5ED;&#xC758; &#xC544; &#xBBF8;&#xB4DC; &#xC218;&#xC18C;/&#xC911;&#xC218;&#xC18C; exchange &#xC6A9; &#xB9E4; &#xC811;&#xADFC;&#xC131; &#xC99D;&#xAC00;. &#xB530;&#xB77C;&#xC11C;, caspase &#xBD84;&#xC5F4;&#xC744; &#xD1B5;&#xD574; pak2&#xC758; &#xD65C;&#xC131;&#xD654;&#xB294; &#xC5F0;&#xACB0; &#xC644;&#xC804; &#xC790;&#xB3D9; &#xC778; &#xC0B0;&#xD654;, &#xC6A9; &#xB9E4; &#xB178;&#xCD9C; &#xBCF4;&#xB2E4; &#xD3EC;&#xAD04;&#xC801;&#xC778; &#xACB0;&#xACFC; &#xBC0F; conformationally &#xB3D9;&#xC801; &#xD6A8;&#xC18C; pak2&#xC758; &#xAD6C;&#xC870;&#xC801; &#xC774;&#xC644; &#xB41C;.

&#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xD0A4; &#xB2C8; &#xC544; Pak2 &#xC544; &#xBBF8;&#xB4DC; &#xC218;&#xC18C;/&#xC911;&#xC218;&#xC18C; exchange&#xC5D0;&#xC11C; &#xC778;&#xC99D; &#xD558;&#xB294; &#xB3D9;&#xC548; &#xAD6C;&#xC870;&#xC801; &#xBCC0;&#xD654;&#xC758; &#xBD84;&#xC11D;.

Pak2 &#x6D3B;&#x6027;&#x8C03;&#x8282;&#x7684;&#x6D89;&#x53CA;&#x81F3;&#x5C11;&#x4E24;&#x4E2A;&#x673A;&#x5236;&#xFF1A; (i) &#x5728;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x5FAA;&#x73AF;&#xFF0C;&#x5E76; (ii) &#x5728;&#x50AC;&#x5316;&#x9886;&#x57DF;&#x7684; autoinhibitory &#x57DF; &#xFF08;&#x63F4;&#x52A9;&#xFF09; &#x7684;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x4E2D;&#x7684;&#x5B88;&#x6052; Thr(402) &#x7684;&#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x4ECE;&#x6FC0;&#x9176;&#x6291;&#x5236;&#x6570;&#x636E;&#x5E93;&#x6536;&#x96C6; 482 &#x4EBA;&#x86CB;&#x767D;&#x6FC0;&#x9176;&#x5E8F;&#x5217;&#x548C;&#x5168;&#x5C40;&#x6620;&#x5C04;&#x5728;&#x50AC;&#x5316;&#x9886;&#x57DF;&#x4E2D;&#x7684;&#x6B8B;&#x7559;&#x91CF;&#x4E0E; Thr(402) &#x7684;&#x57FA;&#x4E8E;&#x5E8F;&#x5217;&#x7684;&#x7EDF;&#x8BA1;&#x8026;&#x5408;&#x5206;&#x6790; (SCA) &#x7684;&#x8FDB;&#x5316;&#x4EA4;&#x4E92;&#x3002;&#x6444;&#x52A8;&#x7684; Thr(402) (34.6%) &#x8868;&#x660E;&#x5728;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x5FAA;&#x73AF;&#x4E2D;&#xFF0C;Thr(402) &#x548C; Phe(387) &#x4E4B;&#x95F4;&#x7684;&#x901A;&#x4FE1;&#x8DEF;&#x5F84; (DeltaDeltaE(387F,402T) = 2.80) &#x4E2D;&#x5B9A;&#x4F4D;&#x5FAA;&#x73AF;&#x4E2D;&#xFF0C;Trp(427) &#x7684;&#x9541; (DeltaDeltaE(427W,402T) = 3.12) &#x4E2D;&#x7684; F-&#x87BA;&#x65CB;&#x7ED3;&#x6784;&#x548C; Val(404) (DeltaDeltaE(404V,402T) = 4.43) &#x548C; Gly(405) (DeltaDeltaE(405G,402T) = 2.95) &#x5B9A;&#x4F4D;&#x73AF;&#x80BD;&#x3002;&#x76F8;&#x6BD4;&#x8425;-&#x4F9D;&#x8D56;&#x86CB;&#x767D;&#x6FC0;&#x9176; (PKA) &#x548C; Src&#xFF0C;&#x82CF;&#x6C28;&#x9178;&#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x5FAA;&#x73AF;&#x7684; Pak2 &#x4E2D;&#x7684;&#x6444;&#x52A8;&#x6A21;&#x5F0F;&#x662F;&#x7C7B;&#x4F3C;&#x7684; PKA&#xFF0C;&#x548C;&#x4E0D;&#x540C;&#x4ECE; Src&#x3002; &#x76F8;&#x4E92;&#x8026;&#x5408;&#x5206;&#x6790;&#x7531;&#x653F;&#x5236;&#x4E8B;&#x52A1;&#x5C40;&#x5C40;&#x957F;&#x7684;&#x916A;&#x6C28;&#x9178;&#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x6A21;&#x5F0F;&#x663E;&#x793A; Thr(402) &#x53D7;&#x6270;&#x52A8;&#x7684;&#x6B8B;&#x7559;&#x7269;&#x548C;&#x76F8;&#x4E92;&#x8026;&#x5408;&#x5BF9;&#x5F62;&#x6210;&#x7F51;&#x7EDC; Trp(427) F-&#x87BA;&#x65CB;&#x4E2D;&#x5C45;&#x4E2D;&#x3002;&#x786E;&#x5B9A;&#x4E86;&#x4E5D;&#x4E2A;&#x6210;&#x5BF9;&#x7684;&#x76F8;&#x4E92;&#x8026;&#x5408;&#x6B8B;&#x7559;&#x9176;&#x6D3B;&#x6027;&#x548C;&#x7ED3;&#x6784;&#x7A33;&#x5B9A;&#x7684;&#x5173;&#x952E;&#x3002;Pak2&#x3001; PKA &#x548C; Src &#x5206;&#x4EAB;&#x56DB;&#x5BF9;&#x3002;&#x76F8;&#x4E92;&#x8026;&#x5408;&#x6B8B;&#x7559;&#x6EB6;&#x5242;&#x7684;&#x7EBF;&#x66B4;&#x9732;&#x4E86;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x6D3B;&#x5316;&#x69FD;&#x3002;&#x8FD9;&#x662F;&#x5177;&#x6709;&#x7EA6;&#x675F;&#x529B;&#x7684;&#x533A;&#x57DF;&#x4E2D; PKA &#x548C;&#x6D3B;&#x5316;&#x69FD;&#x7684; Pak2 &#x6291;&#x5236;&#x5242; (PKI)&#x3002;&#x8FD9;&#x8868;&#x660E;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x8FDB;&#x5316;&#x7684;&#x5B88;&#x6052;&#x7684;&#x6B8B;&#x7559; PKA &#x548C; Pak2 &#x7684;&#x50AC;&#x5316;&#x6D3B;&#x6027;&#x7684;&#x5173;&#x952E;&#x3002;

&#x76F8;&#x4E92;&#x8026;&#x5408;&#x7684;&#x6B8B;&#x7559;&#x7269;&#x86CB;&#x767D;&#x6FC0;&#x9176; Pak2 &#x6D3B;&#x52A8;&#x7531;&#x7EDF;&#x8BA1;&#x8026;&#x5408;&#x5206;&#x6790;&#x8BA1;&#x7B97;&#x7684;&#x5173;&#x952E;&#x3002;

Regulation of Pak2 activity involves at least two mechanisms: (i) phosphorylation of the conserved Thr(402) in the activation loop and (ii) interaction of the autoinhibitory domain (AID) with the catalytic domain. We collected 482 human protein kinase sequences from the kinome database and globally mapped the evolutionary interactions of the residues in the catalytic domain with Thr(402) by sequence-based statistical coupling analysis (SCA). Perturbation of Thr(402) (34.6%) suggests a communication pathway between Thr(402) in the activation loop, and Phe(387) (DeltaDeltaE(387F,402T) = 2.80) in the magnesium positioning loop, Trp(427) (DeltaDeltaE(427W,402T) = 3.12) in the F-helix, and Val(404) (DeltaDeltaE(404V,402T) = 4.43) and Gly(405) (DeltaDeltaE(405G,402T) = 2.95) in the peptide positioning loop. When compared to the cAMP-dependent protein kinase (PKA) and Src, the perturbation pattern of threonine phosphorylation in the activation loop of Pak2 is similar to that of PKA, and different from the tyrosine phosphorylation pattern of Src. Reciprocal coupling analysis by SCA showed the residues perturbed by Thr(402) and the reciprocal coupling pairs formed a network centered at Trp(427) in the F-helix. Nine pairs of reciprocal coupling residues crucial for enzymatic activity and structural stabilization were identified. Pak2, PKA and Src share four pairs. Reciprocal coupling residues exposed to the solvent line up as an activation groove. This is the inhibitor (PKI) binding region in PKA and the activation groove for Pak2. This indicates these evolutionary conserved residues are crucial for the catalytic activity of PKA and Pak2.

Reciprocally coupled residues crucial for protein kinase Pak2 activity calculated by statistical coupling analysis.

R&#xE8;glement de PAK2 activit&#xE9; implique au moins deux m&#xE9;canismes: (i) la phosphorylation de la Thr conserv&#xE9;e (402) dans la boucle d&#x26;#39;activation et (ii) l&#x26;#39;interaction du domaine autoinhibitory (AID) avec le domaine catalytique. Nous avons recueilli 482 s&#xE9;quences humaines de la prot&#xE9;ine kinase de la base de donn&#xE9;es Kinom&#xE9; et dans le monde cartographi&#xE9; les interactions de l&#x26;#39;&#xE9;volution des r&#xE9;sidus dans le domaine catalytique avec Thr (402) par une s&#xE9;quence bas&#xE9;e sur l&#x26;#39;analyse statistique de couplage (SCA). Perturbation de Thr (402) (34,6%) indique une voie de communication entre Thr (402) dans la boucle d&#x26;#39;activation, et Phe (387) (DeltaDeltaE (387F, 402T) = 2,80) dans la boucle de positionnement de magn&#xE9;sium, Trp (427) ( DeltaDeltaE (427W, 402T) = 3,12) dans le F-h&#xE9;lice, et Val (404) (DeltaDeltaE (404V, 402T) = 4,43) et Gly (405) (DeltaDeltaE (405g, 402T) = 2,95) dans la boucle de positionnement peptide . Par rapport &#xE0; la prot&#xE9;ine kinase AMPc-d&#xE9;pendante (PKA) et Src, le motif de perturbation de la phosphorylation thr&#xE9;onine dans la boucle d&#x26;#39;activation de PAK2 est similaire &#xE0; celle de la PKA, et diff&#xE9;rent du motif de phosphorylation de la tyrosine Src. Analyse d&#x26;#39;accouplement r&#xE9;ciproque par SCA montr&#xE9; les r&#xE9;sidus perturb&#xE9; par Thr (402) et les paires d&#x26;#39;accouplement r&#xE9;ciproques form&#xE9; un r&#xE9;seau centr&#xE9; &#xE0; Trp (427) dans le F-h&#xE9;lice. Neuf paires de r&#xE9;sidus de couplage r&#xE9;ciproques cruciaux pour l&#x26;#39;activit&#xE9; enzymatique et la stabilisation structurale ont &#xE9;t&#xE9; identifi&#xE9;s. PAK2, PKA et Src partager quatre paires. R&#xE9;sidus de couplage r&#xE9;ciproques expos&#xE9;s &#xE0; la ligne solvant jusqu&#x26;#39;&#xE0; une gorge que l&#x26;#39;activation. Il s&#x26;#39;agit de la s&#xE9;rotonine (PKI) dans la r&#xE9;gion de liaison PKA et la gorge d&#x26;#39;activation pour PAK2. Ce qui indique que ces r&#xE9;sidus &#xE9;volutivement conserv&#xE9;es sont cruciaux pour l&#x26;#39;activit&#xE9; catalytique de la PKA et PAK2.

R&#xE9;sidus R&#xE9;ciproquement coupl&#xE9;s Crucial pour l&#x26;#39;activit&#xE9; prot&#xE9;ine kinase PAK2 calcul&#xE9; par analyse statistique d&#x26;#39;accouplement

Regelung der Pak2 T&auml;tigkeit umfasst mindestens zwei Mechanismen: (i) Phosphorylierung von der konservierten Thr(402) in die Aktivierung Schleife und (Ii) Wechselwirkung von der Autoinhibitory-Dom&auml;ne (Beihilfen) mit der katalytischen Dom&auml;ne. Wir 482 menschliche Protein-Kinase-Sequenzen aus der Kinome-Datenbank gesammelt und weltweit die evolution&auml;ren Wechselwirkungen der R&uuml;ckst&auml;nde in der katalytischen Dom&auml;ne mit Thr(402) durch statistische Kupplung Sequenz-basierte Analyse (SCA) zugeordnet. St&ouml;rung des Thr(402) (34,6 %) schl&auml;gt ein Kommunikationsweg zwischen Thr(402) in der Aktivierungs-Schleife und Phe(387) (DeltaDeltaE(387F,402T) = 2,80) in das Magnesium Positionierung Schleife, Trp(427) (DeltaDeltaE(427W,402T) = 3.12) im F-Helix und Val(404) (DeltaDeltaE(404V,402T) = 4.43) und Gly(405) (DeltaDeltaE(405G,402T) = 2.95) in das Peptid Positionierung Schleife. Im Vergleich zu den Lager-abh&auml;ngige Proteinkinase (PKA) und Src, das St&ouml;rung-Muster von Threonin Phosphorylierung in der Aktivierungs-Schleife des Pak2 ist &auml;hnlich der PKA, und die Tyrosin-Phosphorylierung-Muster Src. gegenseitiger Kupplung Analyse von SCA zeigten die R&uuml;ckst&auml;nde von Thr(402) gest&ouml;rt und die gegenseitige Kopplung Paaren bildeten ein Netz, zentriert auf Trp(427) in der F-Helix. Neun paar gegenseitige Kopplung R&uuml;ckst&auml;nde entscheidend f&uuml;r die enzymatische Aktivit&auml;t und strukturelle Stabilisierung wurden identifiziert. Pak2, PKA und Src Teilen vier Paare. Gegenseitige Kopplung R&uuml;ckst&auml;nde ausgesetzt die solvent Linie oben als ein Aktivierungs-Groove. Dies ist der verbindliche Region PKA und der Aktivierung Nut f&uuml;r Pak2-Inhibitor (PKI). Dies zeigt an, dass diese evolution&auml;r konservierte R&uuml;ckst&auml;nde f&uuml;r die katalytische Aktivit&auml;t der PKA und Pak2 entscheidend sind.

Wechselseitig gekoppelten R&uuml;ckst&auml;nde entscheidend f&uuml;r Proteinkinase Pak2 Aktivit&auml;t durch statistische Kopplung Analyse berechnet.

Regolamento dell&#39;attivit&agrave; Pak2 coinvolge almeno due meccanismi: (i) la fosforilazione dei Thr(402) conservato nel ciclo di attivazione e (ii) l&#39;interazione del dominio automatico (aiuto) con il dominio catalitico. Abbiamo raccolto 482 sequenze di chinasi di proteina umana dal database kinome e mappato a livello globale le interazioni evolutive dei residui nel dominio catalitico con Thr(402) di accoppiamento statistici basati sulla sequenza di analisi (SCA). Perturbazione di Thr(402) (34,6%) suggerisce un percorso di comunicazione tra Thr(402) nel ciclo di attivazione e Phe(387) (DeltaDeltaE(387F,402T) = 2,80) in magnesio posizionamento loop, Trp(427) (DeltaDeltaE(427W,402T) = 3.12) in F-elica e Val(404) (DeltaDeltaE(404V,402T) = 4,43) e Gly(405) (DeltaDeltaE(405G,402T) = 2.95) nel peptide ciclo di posizionamento. Rispetto al cAMP-dipendente della chinasi di proteina (PKA) e Src, il pattern di perturbazione della fosforilazione della treonina nel ciclo di attivazione di Pak2 &egrave; simile a quella di PKA e diverso dal pattern di fosforilazione della tirosina Src. reciproco accoppiamento analisi da SCA ha mostrato i residui perturbati da Thr(402) e il reciproco accoppiamento coppie formata una rete centrata a Trp(427) nel F-elica. Sono stati identificati nove paia di reciproco accoppiamento residui cruciale per l&#39;attivit&agrave; enzimatica e la stabilizzazione strutturale. Pak2, PKA e Src condividono quattro coppie. Reciproco accoppiamento residui esposti alla linea solvente fino come un groove di attivazione. Questo &egrave; l&#39;inibitore (PKI) nella regione di PKA e la scanalatura di attivazione per Pak2 vincolanti. Questo indica che questi residui conservati evolutive sono cruciali per l&#39;attivit&agrave; catalitica di PKA e Pak2.

Mutuamente accoppiati residui cruciale per la chinasi di proteina Pak2 attivit&agrave; calcolato dall&#39;analisi statistica di accoppiamento.

&#xFF08;i&#xFF09;&#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x30EB;&#x30FC;&#x30D7;&#x5185;&#x306E;&#x4FDD;&#x5B58;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x30B9;&#x30EC;&#x30AA;&#x30CB;&#x30F3;&#xFF08;402&#xFF09;&#x306E;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x3068;&#x89E6;&#x5A92;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x3068;&#x81EA;&#x5DF1;&#x963B;&#x5BB3;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#xFF08;AID&#xFF09;&#x306E;&#xFF08;ii&#xFF09;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#xFF1A;PAK2&#x6D3B;&#x6027;&#x306E;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x306B;&#x306F;&#x3001;&#x5C11;&#x306A;&#x304F;&#x3068;&#x3082;2&#x3064;&#x306E;&#x6A5F;&#x69CB;&#x3092;&#x6301;&#x3063;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;&#x6728;&#x306E;&#x82BD;&#x3001;&#x30C7;&#x30FC;&#x30BF;&#x30D9;&#x30FC;&#x30B9;&#x304B;&#x3089;482&#x306E;&#x30D2;&#x30C8;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x200B;&#x200B;&#x30AF;&#x8CEA;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x306E;&#x914D;&#x5217;&#x3092;&#x53CE;&#x96C6;&#x3057;&#x3001;&#x30B0;&#x30ED;&#x30FC;&#x30D0;&#x30EB;&#x914D;&#x5217;&#x30D9;&#x30FC;&#x30B9;&#x306E;&#x7D71;&#x8A08;&#x7684;&#x7D50;&#x5408;&#x89E3;&#x6790;&#xFF08;SCA&#xFF09;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x30B9;&#x30EC;&#x30AA;&#x30CB;&#x30F3;&#xFF08;402&#xFF09;&#x3068;&#x89E6;&#x5A92;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x306E;&#x6B8B;&#x57FA;&#x306E;&#x9032;&#x5316;&#x7684;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x3092;&#x30DE;&#x30C3;&#x30D4;&#x30F3;&#x30B0;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002; Thr&#x306E;&#x6442;&#x52D5;&#xFF08;402&#xFF09;&#xFF08;34.6&#xFF05;&#xFF09;&#x306F;TRP&#xFF08;427&#xFF09;&#x3001;&#x30DE;&#x30B0;&#x30CD;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;&#x4F4D;&#x7F6E;&#x6C7A;&#x3081;&#x30EB;&#x30FC;&#x30D7;&#x5185;&#x3067;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x30EB;&#x30FC;&#x30D7;&#x306E;&#x30B9;&#x30EC;&#x30AA;&#x30CB;&#x30F3;&#xFF08;402&#xFF09;&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073;Phe&#xFF08;387&#xFF09;&#xFF08;DeltaDeltaE&#xFF08;387F&#x3001;402T&#xFF09;= 2.80&#xFF09;&#x3068;&#x306E;&#x9593;&#x306E;&#x901A;&#x4FE1;&#x7D4C;&#x8DEF;&#x3092;&#x793A;&#x5506;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#xFF08;&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C9;&#x4F4D;&#x7F6E;&#x6C7A;&#x3081;&#x30EB;&#x30FC;&#x30D7;&#x5185;&#x3067;F-&#x30D8;&#x30EA;&#x30C3;&#x30AF;&#x30B9;&#x3067;DeltaDeltaE&#xFF08;427W&#x3001;402T&#xFF09;= 3.12&#xFF09;&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073;Val&#xFF08;404&#xFF09;&#xFF08;DeltaDeltaE&#xFF08;404V&#x3001;402T&#xFF09;= 4.43&#xFF09;&#x3068;Gly&#xFF08;405&#xFF09;&#xFF08;DeltaDeltaE&#xFF08;405G&#x3001;402T&#xFF09;= 2.95&#xFF09; &#x3002; cAMP&#x4F9D;&#x5B58;&#x6027;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C6;&#x30A4;&#x30F3;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#xFF08;PKA&#xFF09;&#x304A;&#x3088;&#x3073;Src&#x3001;PAK2&#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x30EB;&#x30FC;&#x30D7;&#x306E;&#x30B9;&#x30EC;&#x30AA;&#x30CB;&#x30F3;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x306E;&#x6442;&#x52D5;&#x30D1;&#x30BF;&#x30FC;&#x30F3;&#x306F;PKA&#x306E;&#x305D;&#x308C;&#x306B;&#x985E;&#x4F3C;&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073;Src&#x306E;&#x30C1;&#x30ED;&#x30B7;&#x30F3;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x30D1;&#x30BF;&#x30FC;&#x30F3;&#x3068;&#x7570;&#x306A;&#x308B;&#x5834;&#x5408;&#x3068;&#x6BD4;&#x8F03;&#x3057;&#x305F;&#x5834;&#x5408;&#x3002; SCA&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x76F8;&#x4E92;&#x7D50;&#x5408;&#x5206;&#x6790;&#x306F;&#x3001;&#x6B8B;&#x57FA;&#x304C;&#x30B9;&#x30EC;&#x30AA;&#x30CB;&#x30F3;&#xFF08;402&#xFF09;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x6442;&#x52D5;&#x3068;&#x76F8;&#x4E92;&#x30AB;&#x30C3;&#x30D7;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;&#x306E;&#x30DA;&#x30A2;&#x306F;F-&#x30D8;&#x30EA;&#x30C3;&#x30AF;&#x30B9;&#x306E;TRP&#xFF08;427&#xFF09;&#x3092;&#x4E2D;&#x5FC3;&#x306B;&#x30CD;&#x30C3;&#x30C8;&#x30EF;&#x30FC;&#x30AF;&#x3092;&#x5F62;&#x6210;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x9175;&#x7D20;&#x6D3B;&#x6027;&#x3068;&#x69CB;&#x9020;&#x5B89;&#x5B9A;&#x5316;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x76F8;&#x4E92;&#x7D50;&#x5408;&#x6B8B;&#x57FA;&#x306E;9&#x30DA;&#x30A2;&#x304C;&#x540C;&#x5B9A;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3002; PAK2&#x3001;PKA&#x3068;Src&#x306F;&#x3001;4&#x3064;&#x306E;&#x30DA;&#x30A2;&#x3092;&#x5171;&#x6709;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x76F8;&#x4E92;&#x7D50;&#x5408;&#x6B8B;&#x57FA;&#x306F;&#x6D3B;&#x6027;&#x6E9D;&#x6EB6;&#x5A92;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x884C;&#x307E;&#x3067;&#x516C;&#x958B;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x306F;&#x3001;PKA&#x306E;&#x963B;&#x5BB3;&#x5264;&#xFF08;PKI&#xFF09;&#x306E;&#x7D50;&#x5408;&#x9818;&#x57DF;&#x3068;PAK2&#x306E;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D9;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x6E9D;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x306F;&#x3001;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x9032;&#x5316;&#x306E;&#x4FDD;&#x5B58;&#x6B8B;&#x57FA;&#x304C;PKA&#x3068;PAK2&#x306E;&#x89E6;&#x5A92;&#x6D3B;&#x6027;&#x306B;&#x91CD;&#x8981;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x7D71;&#x8A08;&#x7684;&#x7D50;&#x5408;&#x5206;&#x6790;&#x306B;&#x3088;&#x308A;&#x7B97;&#x51FA;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C6;&#x30A4;&#x30F3;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;PAK2&#x6D3B;&#x52D5;&#x306B;&#x3068;&#x3063;&#x3066;&#x91CD;&#x8981;&#x76F8;&#x4E92;&#x306B;&#x7D50;&#x5408;&#x6B8B;&#x7559;

Pak2 &#xD65C;&#xB3D9;&#xC758; &#xADDC;&#xC81C; &#xC801;&#xC5B4;&#xB3C4; &#xB450; &#xAC00;&#xC9C0; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;&#xC744; &#xD3EC;&#xD568; &#xD55C;&#xB2E4;: (i) &#xBCF4;&#xC874;&#xB41C; Thr(402) &#xC815;&#xD488; &#xC778;&#xC99D; &#xB8E8;&#xD504; &#xBC0F; (ii) &#xCD09;&#xB9E4; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778;&#xC73C;&#xB85C; autoinhibitory &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778; (&#xC6D0;&#xC870;)&#xC758; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC758; &#xC778; &#xC0B0;&#xD654;. &#xC6B0;&#xB9AC; kinome &#xB370;&#xC774;&#xD130;&#xBCA0;&#xC774;&#xC2A4;&#xC5D0;&#xC11C; 482 &#xC778;&#xAC04; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; kinase &#xC2DC;&#xD000;&#xC2A4;&#xB97C; &#xC218;&#xC9D1; &#xD558; &#xACE0; &#xC138;&#xACC4;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xD1B5;&#xACC4; &#xCEE4;&#xD50C;&#xB9C1; &#xC2DC;&#xD000;&#xC2A4; &#xAE30;&#xBC18; &#xBD84;&#xC11D; (SCA)&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; thr(402)&#xC640; &#xCD09;&#xB9E4; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778;&#xC5D0; &#xC794;&#xB958;&#xBB3C;&#xC758; &#xC9C4;&#xD654; &#xC0C1;&#xD638; &#xB9E4;&#xD551;. Thr(402) (34.6%)&#xC758; &#xC12D; &#xB3D9; &#xC81C;&#xC548; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xBC18;&#xBCF5;&#xC5D0;&#xC11C; thr(402)&#xC640; Phe(387) &#xC0AC;&#xC774;&#xC758; &#xD1B5;&#xC2E0; &#xACBD;&#xB85C; (DeltaDeltaE(387F,402T) = 2.80) &#xB8E8;&#xD504;, Trp(427) &#xC704;&#xCE58; &#xB9C8;&#xADF8;&#xB124;&#xC298;&#xC5D0;&#xC11C; (DeltaDeltaE(427W,402T) = 3.12) F-&#xB098;&#xC120;, &#xBC0F; Val(404) (DeltaDeltaE(404V,402T) = 4.43) &#xBC0F; Gly(405) (DeltaDeltaE(405G,402T) = 2.95) &#xD3A9; &#xD2F0; &#xB4DC; &#xB8E8;&#xD504; &#xC704;&#xCE58;&#xC5D0;. &#xCEA0;&#xD504; &#xC885;&#xC18D;&#xC5D0; &#xBE44;&#xD574; pak2&#xC758; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xBC18;&#xBCF5;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD2B8;&#xB808;&#xC624;&#xB2CC; &#xC778; &#xC0B0;&#xD654;&#xC758; &#xC12D; &#xB3D9; &#xD328;&#xD134;&#xC740; PKA, &#xBE44;&#xC2B7;&#xD55C; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xD0A4; &#xB2C8; &#xC544; &#xC81C; (PKA) &#xBC0F; Src, Src. &#xC0C1;&#xD638; &#xCEE4;&#xD50C;&#xB9C1; SCA&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xBD84;&#xC11D;&#xC758; &#xD2F0;&#xB85C;&#xC2E0; &#xC778; &#xC0B0;&#xD654; &#xD328;&#xD134;&#xC5D0;&#xC11C; &#xB2E4;&#xB978; thr(402)&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xAD50;&#xB780;&#xB41C; &#xC794;&#xB958;&#xBB3C;&#xC744; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC8FC;&#xC5C8;&#xB2E4; &#xACE0; &#xC30D; &#xCEE4;&#xD50C;&#xB9C1; &#xC0C1;&#xD638; F &#xB098;&#xC120;&#xC5D0; Trp(427) &#xC911;&#xC2EC;&#xC73C;&#xB85C; &#xB124;&#xD2B8;&#xC6CC;&#xD06C; &#xD615;&#xC131;. 9 &#xC30D;&#xC758; &#xC0C1;&#xD638; &#xCEE4;&#xD50C;&#xB9C1; &#xC794;&#xB958;&#xBB3C; &#xD6A8;&#xC18C; &#xD65C;&#xB3D9;&#xACFC; &#xAD6C;&#xC870; &#xC548;&#xC815;&#xD654;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xBC1C;&#xACAC; &#xD588;&#xB2E4;. Pak2, PKA &#xBC0F; Src 4 &#xC30D;&#xC744; &#xACF5;&#xC720; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC0C1;&#xD638; &#xCEE4;&#xD50C;&#xB9C1; &#xC794;&#xB958;&#xBB3C; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xD648;&#xC73C;&#xB85C; &#xC704;&#xB85C; &#xC6A9; &#xB9E4; &#xB77C;&#xC778;&#xC5D0; &#xB178;&#xCD9C;. &#xBC14;&#xC778;&#xB529; PKA&#xC5D0; &#xC9C0;&#xC5ED; &#xBC0F; pak2&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; groove &#xC5B5;&#xC81C;&#xC81C; (PKI)&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xC9C4;&#xD654; &#xBCF4;&#xC874;&#xB41C; &#xC794;&#xB958;&#xBB3C;&#xC740; PKA&#xC640; pak2&#xC758; &#xCD09;&#xB9E4; &#xD65C;&#xB3D9;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0C5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xC2DC;&#xD504; &#xACB0;&#xD569; &#xB41C; &#xC794;&#xB958;&#xBB3C;&#xC5D0; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xD0A4; &#xB2C8; &#xC544; &#xC81C; Pak2 &#xD65C;&#xB3D9; &#xD1B5;&#xACC4; &#xCEE4;&#xD50C;&#xB9C1; &#xBD84;&#xC11D; &#xD558; &#xC5EC; &#xACC4;&#xC0B0;.

La regulaci&#xF3;n de la actividad Pak2 implica al menos dos mecanismos: (i) de fosforilaci&#xF3;n de la conserva Thr (402) en la activaci&#xF3;n de bucle y (ii) la interacci&#xF3;n del dominio autoinhibici&#xF3;n (AID) con el dominio catal&#xED;tico. Se obtuvieron 482 secuencias de humanos prote&#xED;na quinasa de la base de datos de quinoma y en el mundo mapa de las interacciones evolutivas de los residuos en el dominio catal&#xED;tico con Thr (402) por la secuencia basada en el an&#xE1;lisis estad&#xED;stico de acoplamiento (SCA). Perturbaci&#xF3;n de Thr (402) (34,6%) sugiere una v&#xED;a de comunicaci&#xF3;n entre Thr (402) en la activaci&#xF3;n de bucle, y Phe (387) (DeltaDeltaE (387F, 402T) = 2,80) en el bucle de posicionamiento de magnesio, Trp (427) ( DeltaDeltaE (427W, 402T) = 3,12) en el F-h&#xE9;lice, y Val (404) (DeltaDeltaE (404V, 402T) = 4.43) y Gly (405) (DeltaDeltaE (405G, 402T) = 2,95) en el lazo de posici&#xF3;n p&#xE9;ptido . Cuando se compara con la prote&#xED;na quinasa dependiente de cAMP (PKA) y Src, el patr&#xF3;n de perturbaci&#xF3;n de la fosforilaci&#xF3;n de treonina en la activaci&#xF3;n de bucle de Pak2 es similar a la de la PKA, y diferente del patr&#xF3;n de la fosforilaci&#xF3;n de tirosina Src. An&#xE1;lisis acoplamiento rec&#xED;proco por SCA mostraron los residuos perturbado por Thr (402) y los pares de acoplamiento reciproco formado una red centrada en Trp (427) en el F-h&#xE9;lice. Nueve pares de residuos de acoplamiento reciproco cruciales para la actividad enzim&#xE1;tica y la estabilizaci&#xF3;n estructural se identificaron. Pak2, PKA y Src compartir cuatro pares. Residuos rec&#xED;procos de acoplamiento expuesto a la l&#xED;nea de disolvente hasta como una ranura de la activaci&#xF3;n. Este es el inhibidor (PKI), regi&#xF3;n de uni&#xF3;n de la PKA y la ranura de activaci&#xF3;n para Pak2. Esto indica que estos residuos conservados evolutivos son cruciales para la actividad catal&#xED;tica de PKA y Pak2.

Residuos Rec&#xED;procamente acoplados crucial para la actividad prote&#xED;na quinasa Pak2 calculado por el an&#xE1;lisis estad&#xED;stico de acoplamiento

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Phosphorylation of Mnk1 by caspase-activated Pak2/gamma-PAK inhibits phosphorylation and interaction of eIF4G with Mnk. The Journal of biological chemistry\| PubMed ID: 15234964	2004
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Inhibition of cap-dependent translation via phosphorylation of eIF4G by protein kinase Pak2. The EMBO journal\| PubMed ID: 16281055	2005
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Analysis of conformational changes during activation of protein kinase Pak2 by amide hydrogen/deuterium exchange. The Journal of biological chemistry\| PubMed ID: 18984590	2008
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Jolinda A. Traugh

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