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Analysis of Neural Crest Migration and Differentiation by Cross-species Transplantation

Avian embryos provide a unique platform for studying many vertebrate developmental processes, due to the easy access of the embryos within the egg. ...

Rice University 

A transgenic mouse line named iUBC-KikGR was generated, which expresses the photoconvertible fluorescent protein Kikume Green-Red (KikGR) under the control of the human Ubiquitin C promoter. KikGR is natively a green fluorophore, which can be converted into a red fluorophore upon exposure to UV light. KikGR is expressed broadly throughout transgenic embryos from the two-cell stage onward and in the adult. Specificity of photoconversion can range from the entire embryo to a region of an organ, to a few individual cells, depending on the needs of the experimenter. Cell movements, tissue reorganization, and migration can then be observed in real time by culturing the tissue of interest as an explant on the microscope stage. The iUBC-KikGR transgenic line represents a singular genetic reagent, which can be used for fate mapping, lineage tracing, and live visualization of cell behaviors and tissue movements in multiple organs at multiple time points.

Generation and characterization of iUBC-KikGR photoconvertible transgenic mice for live time-lapse imaging during development.

&#x540D;&#x4E3A; iUBC KikGR &#x7684;&#x8F6C;&#x57FA;&#x56E0;&#x5C0F;&#x9F20;&#x884C;&#x751F;&#x6210;&#x7684;&#x5176;&#x4E2D;&#x8868;&#x793A; photoconvertible &#x8367;&#x5149;&#x86CB;&#x767D; Kikume &#x7EFF;-&#x7EA2; (KikGR) &#x5728;&#x4EBA;&#x7C7B;&#x6CDB;&#x7D20; C &#x57FA;&#x56E0;&#x542F;&#x52A8;&#x5B50;&#x63A7;&#x5236;&#x4E0B;&#x3002;KikGR &#x672C;&#x8EAB;&#x662F;&#x7EFF;&#x8272;&#x7684;&#x8367;&#x5149;&#xFF0C;&#x53EF;&#x4EE5;&#x8F6C;&#x5316;&#x4E3A;&#x56E0;&#x66B4;&#x9732;&#x4E8E;&#x7D2B;&#x5916;&#x7EBF;&#x7684;&#x7EA2;&#x8272;&#x8367;&#x5149;&#x3002;&#x5728; KikGR &#x662F;&#x5927;&#x81F4;&#x6574;&#x4E2A;&#x8868;&#x8FBE;&#x8F6C;&#x57FA;&#x56E0;&#x80DA;&#x80CE;&#x4ECE;&#x4E24;&#x4E2A;&#x7EC6;&#x80DE;&#x9636;&#x6BB5;&#x524D;&#x8FDB;&#x548C;&#x6210;&#x4EBA;&#x3002;&#x7279;&#x5F02;&#x6027; photoconversion &#x7684;&#x8303;&#x56F4;&#x53EF;&#x4EE5;&#x4ECE;&#x6574;&#x4E2A;&#x80DA;&#x80CE;&#x5230;&#x533A;&#x57DF;&#x7684;&#x5668;&#x5B98;&#xFF0C;&#x5BF9;&#x51E0;&#x4E2A;&#x5355;&#x4E2A;&#x7684;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#xFF0C;&#x6839;&#x636E;&#x5B9E;&#x9A8C;&#x7684;&#x9700;&#x8981;&#x3002;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8FD0;&#x52A8;&#x3001; &#x7EC4;&#x7EC7;&#x91CD;&#x7EC4;&#x548C;&#x8FC1;&#x79FB;&#x53EF;&#x4EE5;&#x7136;&#x540E;&#x770B;&#x5230;&#x5B9E;&#x65F6;&#x7531;&#x611F;&#x5174;&#x8DA3;&#x7684;&#x7EC4;&#x7EC7;&#x57F9;&#x517B;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x5916;&#x690D;&#x4F53;&#x5728;&#x663E;&#x5FAE;&#x955C;&#x821E;&#x53F0;&#x4E0A;&#x3002;IUBC KikGR &#x8F6C;&#x57FA;&#x56E0;&#x7EBF;&#x8868;&#x793A;&#x5947;&#x5F02;&#x7684;&#x9057;&#x4F20;&#x8BD5;&#x5242;&#xFF0C;&#x53EF;&#x4EE5;&#x7528;&#x4E8E;&#x547D;&#x8FD0;&#x6620;&#x5C04;&#x3001; &#x6CBF;&#x88AD;&#x8DDF;&#x8E2A;&#x548C;&#x6D3B;&#x7EC6;&#x80DE;&#x884C;&#x4E3A;&#x548C;&#x5728;&#x591A;&#x4E2A;&#x65F6;&#x95F4;&#x70B9;&#x7684;&#x591A;&#x4E2A;&#x5668;&#x5B98;&#x7EC4;&#x7EC7;&#x8FD0;&#x52A8;&#x7684;&#x53EF;&#x89C6;&#x5316;&#x3002;

&#x4EE3;&#x548C; iUBC KikGR photoconvertible &#x8F6C;&#x57FA;&#x56E0;&#x5C0F;&#x9F20;&#x53D1;&#x80B2;&#x8FC7;&#x7A0B;&#x76F4;&#x64AD;&#x5EF6;&#x65F6;&#x6210;&#x50CF;&#x7684;&#x8868;&#x5F81;&#x3002;

Une lign&eacute;e de souris transg&eacute;niques, nomm&eacute;e iUBC-KikGR a &eacute;t&eacute; g&eacute;n&eacute;r&eacute;e, qui exprime la prot&eacute;ine fluorescente et Kikume vert-rouge (KikGR) sous le contr&ocirc;le du promoteur Ubiquitin C humain. KikGR est en mode natif un fluorophore vert, qui peut &ecirc;tre converti en un fluorophore rouge lors de l&#39;exposition aux rayons ultraviolets. KikGR est largement exprim&eacute;e tout au long des embryons transg&eacute;niques depuis le stade de deux cellules onward et chez l&#39;adulte. Sp&eacute;cificit&eacute; de photoconversion peut varier de l&#39;embryon de toute une r&eacute;gion d&#39;un organe, &agrave; quelques cellules individuelles, selon les besoins de l&#39;exp&eacute;rimentateur. Mouvements de la cellule, r&eacute;organisation des tissus et la migration peuvent alors &ecirc;tre observ&eacute;es en temps r&eacute;el en cultivant le tissu d&#39;int&eacute;r&ecirc;t comme un explant sur la platine du microscope. La lign&eacute;e transg&eacute;nique d&#39;iUBC-KikGR repr&eacute;sente un r&eacute;actif g&eacute;n&eacute;tique singuli&egrave;re, qui peut &ecirc;tre utilis&eacute; pour la cartographie de sort, suivi de lign&eacute;e et visualisation direct des comportements cellulaires et les mouvements des tissus dans plusieurs organes et &agrave; plusieurs points dans le temps.

G&eacute;n&eacute;ration et caract&eacute;risation d&#39;iUBC-KikGR et les souris transg&eacute;niques pour l&#39;imagerie de Time-Lapse vivant au cours du d&eacute;veloppement.

Eine transgene Maus-Linie mit dem Namen iUBC-KikGR wurde generiert, die dr&uuml;ckt Photoconvertible fluoreszierenden Proteins Kikume gr&uuml;n-rot (KikGR) von der menschlichen Ubiquitin C-Promoter gesteuert. KikGR ist nativ eine gr&uuml;ne Fluorophore, die in einem roten Fluorophor bei Exposition gegen&uuml;ber UV-Licht umgewandelt werden kann. KikGR wird weitgehend in transgenen Embryonen aus der zwei-Zellen-Stadium vorw&auml;rts und in den Erwachsenen ausgedr&uuml;ckt. Besonderheit des Photoconversion reichen von der gesamten Embryo in eine Region eines Organs auf ein paar einzelne Zellen, je nach den Anforderungen der Experimentator. Bewegungen der Zelle, Gewebe-Reorganisation und Migration k&ouml;nnen dann in Echtzeit beobachtet werden, durch die Kultivierung des Gewebes von Interesse als eine Explant auf der Mikroskop-B&uuml;hne. Die transgenen iUBC-KikGR-Linie stellt eine einzigartige genetische-Reagenz, die f&uuml;r Schicksal-Zuordnung, Linie Ablaufverfolgung und live-Visualisierung der Zelle Verhaltensweisen und Gewebe Bewegungen in mehreren Organen zu mehreren Zeitpunkten verwendet werden kann.

Generierung und Charakterisierung von iUBC-KikGR Photoconvertible transgene M&auml;use f&uuml;r live Zeitraffer Bildgebung w&auml;hrend der Entwicklung.

Una linea di mouse transgenici denominata iUBC-KikGR &egrave; stata generata, che esprime la proteina fluorescente fotoconvertibile Kikume verde-rosso (KikGR) sotto il controllo del promotore del Ubiquitin C umano. KikGR &egrave; nativamente un fluoroforo verde, che pu&ograve; essere convertito in un fluoroforo rosso all&#39;esposizione ai raggi UV. KikGR &egrave; espresso ampiamente in tutta transgenici embrioni dalla fase due celle in avanti e nell&#39;adulto. Specificit&agrave; di photoconversion pu&ograve; variare dall&#39;intero embrione a una regione di un organo, a poche cellule individuali, a seconda delle esigenze dello sperimentatore. Movimenti delle cellule, tessuto riorganizzazione e migrazione possono allora essere osservati in tempo reale dalla coltura del tessuto di interesse come un espianto sul palco del microscopio. La linea transgenica iUBC-KikGR rappresenta un singolare reagente genetico, che pu&ograve; essere utilizzato per la mappatura del destino, lignaggio traccia e visualizzazione diretta dei comportamenti delle cellule e tessuti movimenti in diversi organi a pi&ugrave; punti di tempo.

Generazione e caratterizzazione di iUBC-KikGR fotoconvertibile topi transgenici per l&#39;imaging di time-lapse dal vivo durante lo sviluppo.

&#x30D2;&#x30C8;&#x306E;&#x30E6;&#x30D3;&#x30AD;&#x30C1;&#x30F3; C &#x30D7;&#x30ED;&#x30E2;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x306E;&#x5236;&#x5FA1;&#x4E0B;&#x3067;&#x306E; photoconvertible &#x86CD;&#x5149;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA; Kikume &#x7DD1;-&#x8D64; (KikGR) &#x306E;&#x8868;&#x73FE; iUBC KikGR &#x3068;&#x3044;&#x3046;&#x540D;&#x524D;&#x306E;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30B8;&#x30A7;&#x30CB;&#x30C3;&#x30AF; &#x30DE;&#x30A6;&#x30B9; &#x30E9;&#x30A4;&#x30F3;&#x304C;&#x751F;&#x6210;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;KikGR &#x306F;&#x30CD;&#x30A4;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6;&#x3067;&#x8D64;&#x3044;&#x86CD;&#x5149;&#x7D2B;&#x5916;&#x7DDA;&#x3078;&#x306E;&#x9732;&#x51FA;&#x306B;&#x5909;&#x63DB;&#x3067;&#x304D;&#x308B;&#x3001;&#x7DD1;&#x306E; fluorophore &#x3067;&#x3059;&#x3002;KikGR &#x306F;&#x5E83;&#x304F;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30B8;&#x30A7;&#x30CB;&#x30C3;&#x30AF; 2 &#x7D30;&#x80DE;&#x671F;&#x80DA;&#x5168;&#x4F53;&#x4EE5;&#x964D;&#x3068;&#x5927;&#x4EBA;&#x3067;&#x8868;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x5149;&#x5909;&#x63DB;&#x306E;&#x7279;&#x7570;&#x6027;&#x5B9F;&#x9A13;&#x8005;&#x306E;&#x30CB;&#x30FC;&#x30BA;&#x306B;&#x5FDC;&#x3058;&#x3066;&#x3001;&#x3044;&#x304F;&#x3064;&#x304B;&#x306E;&#x500B;&#x3005; &#x306E;&#x30BB;&#x30EB;&#x306E;&#x6A5F;&#x95A2;&#x306E;&#x5730;&#x57DF;&#x5168;&#x4F53;&#x306E;&#x80DA;&#x304B;&#x3089;&#x7BC4;&#x56F2;&#x3067;&#x6307;&#x5B9A;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x7D30;&#x80DE;&#x904B;&#x52D5;&#x3001;&#x7D44;&#x7E54;&#x518D;&#x7DE8;&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x79FB;&#x884C;&#x30EA;&#x30A2;&#x30EB;&#x30BF;&#x30A4;&#x30E0;&#x3067;&#x3001;&#x57F9;&#x990A;&#x9855;&#x5FAE;&#x93E1;&#x30B9;&#x30C6;&#x30FC;&#x30B8;&#x4E0A;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x8208;&#x5473;&#x306E;&#x30C6;&#x30A3;&#x30C3;&#x30B7;&#x30E5;&#x306E;&#x57F9;&#x990A;&#x3067;&#x89B3;&#x5BDF;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3002;IUBC KikGR &#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30B8;&#x30A7;&#x30CB;&#x30C3;&#x30AF; &#x30E9;&#x30A4;&#x30F3;&#x904B;&#x547D;&#x30DE;&#x30C3;&#x30D4;&#x30F3;&#x30B0;&#x3001;&#x7CFB;&#x8B5C;&#x30C8;&#x30EC;&#x30FC;&#x30B9;&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x30E9;&#x30A4;&#x30D6;&#x306E;&#x53EF;&#x8996;&#x5316;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x6319;&#x52D5;&#x3068;&#x7D44;&#x7E54;&#x904B;&#x52D5;&#x306E;&#x8907;&#x6570;&#x306E;&#x6642;&#x70B9;&#x3067;&#x8907;&#x6570;&#x306E;&#x81D3;&#x5668;&#x306B;&#x4F7F;&#x7528;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x7279;&#x7570;&#x907A;&#x4F1D;&#x8A66;&#x85AC;&#x3092;&#x8868;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x4E16;&#x4EE3;&#x3068; iUBC KikGR photoconvertible &#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30B8;&#x30A7;&#x30CB;&#x30C3;&#x30AF; &#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x306E;&#x958B;&#x767A;&#x4E2D;&#x306B;&#x30E9;&#x30A4;&#x30D6; &#x30BF;&#x30A4;&#x30E0;&#x30E9;&#x30D7;&#x30B9; &#x30A4;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B8;&#x30F3;&#x30B0;&#x306E;&#x7279;&#x6027;&#x3002;

IUBC KikGR &#xB77C;&#xB294; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xBCC0;&#xD615; &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4; &#xB77C;&#xC778;&#xC744; &#xD45C;&#xD604; &#xD558;&#xB294; &#xC778;&#xAC04;&#xC758; &#xC720;&#xBE44;&#xD034;&#xD2F4; C &#xBAA8;&#xD130; &#xC81C;&#xC5B4; photoconvertible &#xD615;&#xAD11; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; Kikume &#xADF8;&#xB9B0;-&#xB808;&#xB4DC; (KikGR) &#xC0DD;&#xC131; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. Kikgr&#xC740; &#xAE30;&#xBCF8;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xB179;&#xC0C9; fluorophore &#xC790;&#xC678;&#xC120;&#xC5D0; &#xB178;&#xCD9C; &#xB418; &#xBA74; &#xBD89;&#xC740; fluorophore&#xB85C; &#xBCC0;&#xD658; &#xB420; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. Kikgr&#xB294; &#xC55E;&#xC73C;&#xB85C; &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; &#xC131;&#xC778; 2 &#xC140; &#xB2E8;&#xACC4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xBCC0;&#xD615; &#xD0DC;&#xC544;&#xC5D0; &#xAC78;&#xCCD0; &#xAD11;&#xBC94;&#xC704; &#xD558; &#xAC8C; &#xD45C;&#xD604; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. Photoconversion&#xC758; &#xD2B9;&#xC774;&#xC131;&#xC758; &#xBC94;&#xC704;&#xB294; &#xC804;&#xCCB4; &#xBC30;&#xC544;&#xC5D0;&#xC11C; &#xAE30;&#xAD00;, &#xC2E4;&#xD5D8; &#xC790;&#xB294; &#xD544;&#xC694;&#xC5D0; &#xB530;&#xB77C; &#xBA87; &#xAC00;&#xC9C0; &#xAC1C;&#xBCC4; &#xC140;&#xC758; &#xC601;&#xC5ED;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC140; &#xC6C0;&#xC9C1;&#xC784;, &#xC870;&#xC9C1; &#xAC1C;&#xD3B8; &#xBC0F; &#xB9C8;&#xC774;&#xADF8;&#xB808;&#xC774;&#xC158; &#xD6C4; &#xAD00;&#xCC30;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xC2E4;&#xC2DC;&#xAC04;&#xC73C;&#xB85C; &#xD604;&#xBBF8;&#xACBD; &#xC2A4;&#xD14C;&#xC774;&#xC9C0;&#xC5D0; explant&#xC73C;&#xB85C; &#xAD00;&#xC2EC;&#xC758; &#xC870;&#xC9C1; &#xBC30;&#xC591; &#xD558; &#xC5EC;. IUBC KikGR &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xBCC0;&#xD615; &#xC120; &#xC2DC;&#xB97C; &#xB2E8; &#xC218; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xC57D;&#xC744;, &#xC6B4;&#xBA85; &#xB9E4;&#xD551;, &#xACC4;&#xBCF4; &#xCD94;&#xC801; &#xBC0F; &#xC140; &#xB3D9;&#xC791; &#xBC0F; &#xC5EC;&#xB7EC; &#xAC1C;&#xC758; &#xC2DC;&#xAC04; &#xC810;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC5EC;&#xB7EC; &#xC7A5;&#xAE30;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC870;&#xC9C1; &#xD589;&#xB3D9;&#xC758; &#xB77C;&#xC774;&#xBE0C; &#xC2DC;&#xAC01;&#xD654;&#xC5D0; &#xC0AC;&#xC6A9;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xB294; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0C5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xC0DD;&#xC131; &#xBC0F; &#xAC1C;&#xBC1C; &#xD558;&#xB294; &#xB3D9;&#xC548; &#xB77C;&#xC774;&#xBE0C; &#xC2DC;&#xAC04; &#xACBD;&#xACFC; &#xC601;&#xC0C1;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; iUBC KikGR photoconvertible &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xBCC0;&#xD615; &#xC0DD;&#xC950;&#xC758; &#xD2B9;&#xC131; &#xBD84;&#xC11D;.

Se gener&oacute; una l&iacute;nea de rat&oacute;n transg&eacute;nico, llamada iUBC-KikGR, que expresa la prote&iacute;na fluorescente verde-rojo de Kikume (KikGR) de photoconvertible bajo el control del promotor ubiquitina C humano. KikGR nativo es un fluor&oacute;foro verde, que se puede convertir en un fluor&oacute;foro rojo sobre la exposici&oacute;n a los rayos UV. KikGR se expresa ampliamente a lo largo de embriones transg&eacute;nicos de la etapa dos c&eacute;lulas hacia adelante y en el adulto. Especificidad de photoconversion puede ir desde el embri&oacute;n entero a una regi&oacute;n de un &oacute;rgano, a algunas c&eacute;lulas individuales, dependiendo de las necesidades del experimentador. Movimientos celulares, la reorganizaci&oacute;n del tejido y la migraci&oacute;n pueden entonces observarse en tiempo real por cultivo del tejido de inter&eacute;s como un explante sobre la platina del microscopio. La l&iacute;nea transg&eacute;nica iUBC-KikGR representa un singular reactivo gen&eacute;tico, que puede utilizarse para el mapeo de destino, seguimiento de linaje y visualizaci&oacute;n vivo de comportamientos de c&eacute;lulas y tejidos movimientos en m&uacute;ltiples &oacute;rganos en varios puntos del tiempo.

Generaci&oacute;n y caracterizaci&oacute;n de iUBC-KikGR photoconvertible ratones transg&eacute;nicos para obtener im&aacute;genes de time-lapse vivo durante el desarrollo.

Shannon L. Griswold

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