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Preparing Individual <em>Drosophila</em> Egg Chambers for Live Imaging

Live cell imaging is an important technique applied to a number of Drosophila tissues used as models to investigate topics such as axis specification, ...

University of Oxford 

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&#x82B1;&#x7C89;&#x7BA1;&#x5C55;&#x793A;&#x5728;&#x5FC3;&#x5C16;&#x6269;&#x5C55;&#x540D;&#x6CA1;&#x6709;&#x7ECF;&#x5E38;&#x5B9A;&#x671F;&#x819C;&#x8D29;&#x5356;&#x4EBA;&#x53E3;&#x4E8B;&#x4EF6;&#x3002;

The growing pollen tube provides an excellent single cell model system in which to study the mechanisms determining growth regulation, polarity and periodic behaviour. Previously, using FM4-64, we identified periodic movements within the apical vesicle accumulation that were related to the period of oscillatory growth. This suggested a more complex interdependence between membrane traffic, apical extension and periodicity than previously thought. To investigate this a comparison was made between normally growing and Brefeldin-A-treated, non-growing, tubes. Brefeldin-A treatment established an intriguing, stable yet dynamic system of membrane aggregations in the pollen tube tip that exhibited regular movements of material with a 5-7 second period compared with the normal approximately 30 second periodicity observed in growing tubes. Heat treatment was found to reduce period length in both cases. After BFA treatment membrane was demonstrated to flow from the extreme pollen tube apex back through a distinct subapical Brefeldin-A-induced membrane accumulation. The effects of Brefeldin-A on the distribution of ER- and Golgi-targeted fluorescent proteins revealed that ER did not contribute directly to the system of membrane aggregations while only certain compartments of the Golgi might be involved. The involvement of membrane derived from the apical vesicle accumulation was strongly implicated. Calcium measurements revealed that Brefeldin-A abolished the typical tip-focused calcium gradient associated with growth and there were no obvious periodic fluctuations in apical calcium associated with the continued periodic Brefeldin-A membrane aggregation associated movements. Our experiments reveal an underlying periodicity in the pollen tube that is independent of secretion, apical extension and the oscillating tip-focused calcium gradient normally associated with growth, but requires an active actin cytoskeleton.

Pollen tubes exhibit regular periodic membrane trafficking events in the absence of apical extension.

Le tube pollinique croissant constitue une excellente cellule unique mod&egrave;le permettant d&#39;&eacute;tudier les m&eacute;canismes d&eacute;terminant le comportement p&eacute;riodique, la polarit&eacute; et la r&eacute;gulation de la croissance. Auparavant, &agrave; l&#39;aide de FM4-64, nous avons identifi&eacute; des mouvements p&eacute;riodiques au sein de l&#39;accumulation de v&eacute;sicules apicales qui &eacute;taient li&eacute;es &agrave; la p&eacute;riode de croissance oscillatoire. Cela sugg&egrave;re une interd&eacute;pendance plus complexe entre trafic membranaire, extension apicale et p&eacute;riodicit&eacute; qu&#39;on ne le pensait. Pour &eacute;tudier cette comparaison a &eacute;t&eacute; faite entre br&eacute;feldine A-trait&eacute;s, non plus, de tubes et de cro&icirc;tre normalement. Traitement br&eacute;feldine-A &eacute;tabli une intrigante, stable et pourtant un syst&egrave;me dynamique d&#39;agr&eacute;gations de membrane dans l&#39;embout du tube pollinique qui pr&eacute;sentaient des mouvements r&eacute;guliers du mat&eacute;riel avec une p&eacute;riode de 5 &agrave; 7 secondes par rapport &agrave; la p&eacute;riodicit&eacute; de seconde environ 30 normales observ&eacute;es dans la croissance des tubes. Traitement thermique s&#39;est av&eacute;r&eacute; pour r&eacute;duire la longueur de la p&eacute;riode dans les deux cas. Apr&egrave;s BFA membrane de traitement a &eacute;t&eacute; d&eacute;montr&eacute;e &agrave; l&#39;&eacute;coulement de l&#39;apex des tubes polliniques extr&ecirc;mes &agrave; travers une accumulation distincts subapical br&eacute;feldine A-induite par la membrane. Les effets de la br&eacute;feldine A sur la r&eacute;partition des prot&eacute;ines fluorescentes ER et Golgi-cibl&eacute;e a r&eacute;v&eacute;l&eacute; que ER n&#39;a pas contribu&eacute; directement au syst&egrave;me d&#39;agr&eacute;gations de membrane, tandis que seulement certains compartiments de l&#39;appareil de Golgi pourraient &ecirc;tre impliqu&eacute;s. L&#39;implication de membrane d&eacute;riv&eacute;e de l&#39;accumulation de v&eacute;sicules apicales a &eacute;t&eacute; fortement impliqu&eacute;e. Les mesures de calcium ont r&eacute;v&eacute;l&eacute; que br&eacute;feldine A aboli le gradient typique de calcium ax&eacute;s sur la pointe associ&eacute; &agrave; la croissance et il n&#39;y a aucune fluctuation p&eacute;riodique &eacute;vidente en calcium apical associ&eacute; les mouvements d&#39;agr&eacute;gation associ&eacute;e de membrane de br&eacute;feldine-a p&eacute;riodiques continues. Nos exp&eacute;riences r&eacute;v&egrave;lent une p&eacute;riodicit&eacute; sous-jacente dans le tube pollinique qui est ind&eacute;pendant de s&eacute;cr&eacute;tion, extension apicale et le gradient de calcium ax&eacute;s sur l&#39;embout oscillant normalement associ&eacute;s &agrave; la croissance, mais n&eacute;cessite un cytosquelette d&#39;actine active.

Les tubes polliniques montrent des &eacute;v&eacute;nements trafic membranaire p&eacute;riodique r&eacute;guli&egrave;re en l&#39;absence d&#39;extension apicale.

Pollenschl&#xE4;uche zeigen die regelm&#xE4;&#xDF;igen Membranverkehr Ereignisse in Abwesenheit der apikalen Erweiterung.

Il tubo pollinico crescente fornisce un sistema modello eccellente cella singola in cui studiare i meccanismi di determinazione della regolamentazione di crescita, polarit&agrave; e comportamento periodico. In precedenza, utilizzando FM4-64, abbiamo identificato periodici movimenti all&#39;interno dell&#39;accumulo apicale vescicola che erano relativi al periodo di crescita oscillatorio. Questo ha suggerito una pi&ugrave; complessa interdipendenza tra traffico di membrana, estensione apicale e periodicit&agrave; di quanto si pensasse. Per indagare su questo un confronto &egrave; stato fatto tra tubi Gbf1-un-considerato, non cresce e cresce normalmente. Gbf1-un trattamento stabilito un intrigante, stabile ancora dinamico sistema di aggregazioni di membrana nella punta del tubo pollinico che esposto movimenti regolari di materiale con un periodo di 5-7 secondi rispetto con la periodicit&agrave; secondo circa 30 normale osservato in tubi in crescita. Trattamento termico &egrave; stato trovato per ridurre la lunghezza di periodo in entrambi i casi. Dopo BFA membrana di trattamento &egrave; stata dimostrata a fluire dall&#39;apice estremo tubo pollinico indietro attraverso un accumulo di distinte subapicale membrana Gbf1-A-indotta. Gli effetti di Gbf1-A sulla distribuzione delle proteine fluorescenti mirati ER e Golgi ha rivelato che ER non ha contribuito direttamente al sistema di aggregazioni di membrana, mentre solo alcuni comparti del Golgi potrebbero essere coinvolti. Il coinvolgimento della membrana derivata dall&#39;accumulo di vescicola apicale era fortemente implicato. Misurazioni di calcio ha rivelato che Gbf1-A abolito il gradiente tipico calcio punta-focalizzata associato con la crescita e ci sono stati non ovvie fluttuazioni periodiche associato continuato periodici Gbf1-A membrana associati aggregazione movimenti apicale del calcio. Nostri esperimenti rivelano una periodicit&agrave; sottostante nel tubo di polline che &egrave; indipendente di secrezione, estensione apicale e il gradiente di calcio concentrato punta oscillante normalmente associati con la crescita, ma richiede un citoscheletro di actina attivo.

Tubi pollinici esporre eventi traffico regolare periodica membrana in assenza di estensione apicale.

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A &#x6295;&#x4E0E;&#x3001;&#x975E;&#x6210;&#x9577;&#x306E;&#x30C1;&#x30E5;&#x30FC;&#x30D6;&#x9593;&#x884C;&#x308F;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x30D6;&#x30EC;&#x30D5;&#x30A7;&#x30EB;&#x30B8;&#x30F3; A &#x6CBB;&#x7642;&#x3001;&#x5B89;&#x5B9A;&#x3057;&#x305F;&#x9B45;&#x529B;&#x7684;&#x306A;&#x8A2D;&#x7ACB;&#x307E;&#x3060;&#x89B3;&#x5BDF;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x30C1;&#x30E5;&#x30FC;&#x30D6;&#x306E;&#x6210;&#x9577;&#x3067;&#x3001;&#x901A;&#x5E38;&#x7D04; 30 &#x7B2C; 2 &#x5468;&#x671F;&#x6027;&#x819C;&#x96C6;&#x8A08;&#x6750;&#x6599; 5-7 &#x79D2;&#x9593;&#x306E;&#x898F;&#x5247;&#x7684;&#x306A;&#x52D5;&#x304D;&#x3092;&#x5C55;&#x793A;&#x3057;&#x305F;&#x82B1;&#x7C89;&#x7BA1;&#x306E;&#x5148;&#x7AEF;&#x3067;&#x306E;&#x52D5;&#x7684;&#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E0;&#x3068;&#x6BD4;&#x8F03;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x71B1;&#x51E6;&#x7406;&#x306F;&#x3001;&#x4E21;&#x65B9;&#x306E;&#x30B1;&#x30FC;&#x30B9;&#x3067;&#x306E;&#x671F;&#x9593;&#x306E;&#x9577;&#x3055;&#x3092;&#x524A;&#x6E1B;&#x3059;&#x308B;&#x304C;&#x898B;&#x3064;&#x304B;&#x308A;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3067;&#x3057;&#x305F;&#x3002;BFA &#x5F8C;&#x6CBB;&#x7642;&#x819C;&#x306E;&#x7570;&#x306A;&#x308B;, &#x307E;&#x305F;&#x30D6;&#x30EC;&#x30D5;&#x30A7;&#x30EB;&#x30B8;&#x30F3; A &#x8A98;&#x8D77;&#x819C;&#x84C4;&#x7A4D;&#x3092;&#x901A;&#x3058;&#x3066;&#x623B;&#x3063;&#x3066;&#x6975;&#x7AEF;&#x306A;&#x82B1;&#x7C89;&#x7BA1;&#x306E;&#x9802;&#x70B9;&#x304B;&#x3089;&#x306E;&#x6D41;&#x308C;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x5C0F;&#x80DE;&#x4F53;&#x3068;&#x30B4;&#x30EB;&#x30B8; &#x30BF;&#x30FC;&#x30B2;&#x30C3;&#x30C8;&#x86CD;&#x5149;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x5206;&#x5E03;&#x306B;&#x53CA;&#x307C;&#x3059;&#x30D6;&#x30EC;&#x30D5;&#x30A7;&#x30EB;&#x30B8;&#x30F3; &#x2010; A &#x306E;&#x307F;&#x7279;&#x5B9A;&#x306E;&#x30B3;&#x30F3;&#x30D1;&#x30FC;&#x30C8;&#x30E1;&#x30F3;&#x30C8;&#x306F;&#x30B4;&#x30EB;&#x30B8;&#x88C5;&#x7F6E;&#x306E;&#x95A2;&#x4E0E;&#x3059;&#x308B;&#x304B;&#x3082;&#x3057;&#x308C;&#x306A;&#x3044;&#x9593;&#x5C0F;&#x80DE;&#x4F53;&#x819C;&#x96C6;&#x8A08;&#x306E;&#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E0;&#x306B;&#x76F4;&#x63A5;&#x5BC4;&#x4E0E;&#x3059;&#x308B;&#x3044;&#x306A;&#x3044;&#x3068;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x9802;&#x5C0F;&#x80DE;&#x306E;&#x84C4;&#x7A4D;&#x304B;&#x3089;&#x6D3E;&#x751F;&#x3057;&#x305F;&#x819C;&#x306E;&#x95A2;&#x4E0E;&#x304C;&#x5F37;&#x304F;&#x95A2;&#x4E0E;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x305F;&#x3002;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;&#x6E2C;&#x5B9A;&#x30D6;&#x30EC;&#x30D5;&#x30A7;&#x30EB;&#x30B8;&#x30F3; &#x2010; A &#x306E;&#x6210;&#x9577;&#x3068;&#x95A2;&#x9023;&#x4ED8;&#x3051;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x5178;&#x578B;&#x7684;&#x306A;&#x5148;&#x7AEF;&#x306B;&#x7126;&#x70B9;&#x3092;&#x5F53;&#x3066;&#x305F;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0; &#x30B0;&#x30E9;&#x30C7;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x5EC3;&#x6B62;&#x9802;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;&#x306E;&#x7D99;&#x7D9A;&#x7684;&#x306A;&#x5468;&#x671F;&#x7684;&#x30D6;&#x30EC;&#x30D5;&#x30A7;&#x30EB;&#x30B8;&#x30F3; &#x2010; A &#x819C;&#x3068;&#x95A2;&#x9023;&#x4ED8;&#x3051;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x96C6;&#x8A08;&#x904B;&#x52D5;&#x3092;&#x95A2;&#x9023;&#x4ED8;&#x3051;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x660E;&#x767D;&#x306A;&#x5468;&#x671F;&#x7684;&#x306A;&#x5909;&#x52D5;&#x304C;&#x306A;&#x304B;&#x3063;&#x305F;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x3002;&#x6211;&#x3005; &#x306E;&#x5B9F;&#x9A13;&#x306F;&#x3001;&#x57FA;&#x306B;&#x306A;&#x308B;&#x5468;&#x671F;&#x6027;&#x82B1;&#x7C89;&#x7BA1;&#x306F;&#x5206;&#x6CCC;, &#x6839;&#x5C16;&#x62E1;&#x5F35;&#x3068;&#x901A;&#x5E38;&#x6210;&#x9577;&#x3068;&#x3001;&#x95A2;&#x9023;&#x4ED8;&#x3051;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x632F;&#x52D5;&#x306E;&#x5148;&#x7AEF;&#x306B;&#x7126;&#x70B9;&#x3092;&#x5F53;&#x3066;&#x305F;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;&#x52FE;&#x914D;&#x306E;&#x72EC;&#x7ACB;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x304C;&#x3001;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6;&#x306A;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C1;&#x30F3;&#x7D30;&#x80DE;&#x9AA8;&#x683C;&#x304C;&#x5FC5;&#x8981;&#x3067;&#x3059;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x3002;

&#x82B1;&#x7C89;&#x7BA1;&#x9802;&#x62E1;&#x5F35;&#x5B50;&#x306E;&#x4E0D;&#x5728;&#x3067;&#x5B9A;&#x671F;&#x7684;&#x5468;&#x671F;&#x7684;&#x819C;&#x4EBA;&#x8EAB;&#x58F2;&#x8CB7;&#x30A4;&#x30D9;&#x30F3;&#x30C8;&#x3092;&#x5C55;&#x793A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#xC131;&#xC7A5; &#xD558; &#xACE0; &#xC788;&#xB294; &#xAF43;&#xAC00;&#xB8E8; &#xAD00; &#xC131;&#xC7A5; &#xB808; &#xADE4; &#xB808;&#xC774; &#xC158;, &#xADF9;&#xC131; &#xBC0F; &#xC8FC;&#xAE30;&#xC801;&#xC778; &#xD589;&#xB3D9;&#xC744; &#xACB0;&#xC815; &#xD558;&#xB294; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;&#xC744; &#xC5F0;&#xAD6C; &#xD558;&#xB294; &#xC6B0;&#xC218;&#xD55C; &#xB2E8;&#xC77C; &#xC140; &#xBAA8;&#xB378; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C;&#xC744; &#xC81C;&#xACF5; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774;&#xC804;&#xC5D0;, &#xC9C4;&#xB3D9; &#xC131;&#xC7A5; &#xAE30;&#xC5D0; &#xAD00;&#xB828; &#xB41C; &#xAF2D;&#xB300;&#xAE30; &#xAE30; &#xCD95;&#xC801;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC8FC;&#xAE30;&#xC801;&#xC778; &#xC6C0;&#xC9C1;&#xC784; &#xD30C;&#xC545; FM4-64&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC;. &#xC774; &#xC0AC;&#xC774; &#xB9C9; &#xD2B8;&#xB798;&#xD53D;&#xACFC; &#xAF2D;&#xB300;&#xAE30; &#xD655;&#xC7A5; &#xC8FC;&#xAE30; &#xC774;&#xC804;&#xC5D0; &#xC0DD;&#xAC01; &#xD588;&#xB358; &#xAC83; &#xBCF4;&#xB2E4; &#xB354; &#xBCF5;&#xC7A1; &#xD55C; &#xC0C1;&#xD638; &#xC758;&#xC874;&#xC131;&#xC744; &#xC81C;&#xC548; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC774; &#xBE44;&#xAD50; &#xC870;&#xC0AC;&#xB97C; &#xC815;&#xC0C1;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xC131;&#xC7A5; &#xD558; &#xACE0; Brefeldin A &#xCC98;&#xB9AC;, &#xBE44; &#xC131;&#xC7A5; &#xD29C;&#xBE0C; &#xC0AC;&#xC774; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;. Brefeldin A &#xCE58;&#xB8CC;&#xB294; &#xD765;&#xBBF8;&#xB85C;&#xC6B4;, &#xC548;&#xC815;&#xC801;&#xC778; &#xC124;&#xB9BD; &#xC544;&#xC9C1; &#xC77C;&#xBC18; &#xC6B4;&#xB3D9; 5-7 &#xBC88;&#xC9F8; &#xAE30;&#xAC04;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC790;&#xB8CC;&#xB97C; &#xC804;&#xC2DC; &#xD558; &#xACE0; &#xAF43;&#xAC00;&#xB8E8; &#xAD00;&#xC5D0;&#xC5D0;&#xC11C; &#xB9C9; &#xC9D1;&#xACC4;&#xC758; &#xB3D9;&#xC801; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C;&#xC5D0; &#xBE44;&#xD574; &#xC131;&#xC7A5; &#xD558;&#xB294; &#xD29C;&#xBE0C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xAD00;&#xCC30; &#xB41C; &#xC815;&#xC0C1; &#xC57D; 30 &#xB450; &#xBC88;&#xC9F8; &#xC8FC;&#xAE30;. &#xC5F4; &#xCC98;&#xB9AC;&#xB294; &#xB450; &#xACBD;&#xC6B0; &#xBAA8;&#xB450; &#xAE30;&#xAC04; &#xAE38;&#xC774; &#xC904;&#xC774;&#xAE30; &#xC704;&#xD574; &#xBC1C;&#xACAC; &#xB410;&#xB2E4;. &#xC878;&#xC5C5; &#xD6C4; &#xCE58;&#xB8CC; &#xB9C9; &#xB69C;&#xB837;&#xD55C; subapical Brefeldin A &#xC720;&#xB3C4; &#xB9C9; &#xCD95;&#xC801;&#xC744; &#xD1B5;&#xD574; &#xADF9;&#xB2E8;&#xC801;&#xC778; &#xAF43;&#xAC00;&#xB8E8; &#xAD00; &#xAF2D;&#xB300;&#xAE30;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD750;&#xB984;&#xC744; &#xC2DC;&#xC5F0; &#xD588;&#xB2E4;. ER&#xC640; Golgi &#xD0C0;&#xAC9F; &#xD615;&#xAD11; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xBD84;&#xD3EC;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; Brefeldin-A&#xC758; &#xD6A8;&#xACFC; Golgi&#xC758; &#xD2B9;&#xC815; &#xAD6C;&#xD68D; &#xCC38;&#xC5EC; &#xC788;&#xC744; &#xB3D9;&#xC548; &#xC751;&#xAE09;&#xC2E4; &#xB9C9; &#xC9D1;&#xACC4; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C;&#xC5D0; &#xC9C1;&#xC811; &#xCC38;&#xAC00; &#xD558;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC558;&#xB2E4; &#xACC4;&#xC2DC; &#xD588;&#xB2E4;. &#xB9C9; &#xD600;&#xB05D; &#xAE30; &#xCD95;&#xC801;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD30C;&#xC0DD; &#xB41C; &#xAD00;&#xB828; &#xC5F0;&#xB8E8; &#xAC15;&#xB825; &#xD558; &#xAC8C; &#xB410;&#xB2E4;. &#xCE7C;&#xC298; &#xCE21;&#xC815; Brefeldin A &#xD3D0;&#xC9C0; &#xC99D;&#xAC00;&#xC640; &#xAD00;&#xB828; &#xB41C; &#xC77C;&#xBC18;&#xC801;&#xC778; &#xD301;&#xC5D0; &#xCD08;&#xC810;&#xC744; &#xB9DE;&#xCD98; &#xCE7C;&#xC298; &#xADF8;&#xB77C;&#xB370;&#xC774;&#xC158; &#xC9C0;&#xC18D;&#xC801;&#xC778;&#xB41C; &#xC815;&#xAE30; Brefeldin-A &#xB9C9; &#xC9D1;&#xACC4; &#xAD00;&#xB828; &#xB41C; &#xC6C0;&#xC9C1;&#xC784;&#xC744; &#xC5F0;&#xAD00; &#xAF2D;&#xB300;&#xAE30; &#xCE7C;&#xC298;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBD84;&#xBA85; &#xC815;&#xAE30; &#xBCC0;&#xB3D9; &#xC544;&#xBB34; &#xD588;&#xB2E4; &#xBC1D;&#xD614;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xC2E4;&#xD5D8;&#xC740; &#xBD84; &#xBE44;, &#xD600;&#xB05D; &#xD655;&#xC7A5; &#xC77C;&#xBC18;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xAD00;&#xB828; &#xB41C; &#xC131;&#xC7A5;, &#xC9C4;&#xB3D9; &#xD301;&#xC5D0; &#xCD08;&#xC810;&#xC744; &#xB9DE;&#xCD98; &#xCE7C;&#xC298; &#xADF8;&#xB77C;&#xB370;&#xC774;&#xC158; &#xB3C5;&#xB9BD;&#xC801; &#xC774;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xD544;&#xC694;&#xD55C; &#xD65C;&#xC131; &#xB9D0;&#xB77C; cytoskeleton &#xAF43;&#xAC00;&#xB8E8; &#xAD00;&#xC5D0; &#xAE30;&#xBCF8; &#xC8FC;&#xAE30; &#xACF5;&#xAC1C;.

&#xAF43;&#xAC00;&#xB8E8; &#xAD00; &#xAF2D;&#xB300;&#xAE30; &#xD655;&#xC7A5;&#xC758; &#xBD80;&#xC7AC;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC77C;&#xBC18;&#xC801;&#xC778; &#xC8FC;&#xAE30;&#xC801; &#xBA64;&#xBE0C;&#xB808;&#xC778; &#xBC00;&#xB9E4; &#xC774;&#xBCA4;&#xD2B8; &#xC804;&#xC2DC;.

Tubo pol&iacute;nico creciente proporciona un sistema modelo de excelente unicelular que estudiar los mecanismos de determinaci&oacute;n de la regulaci&oacute;n del crecimiento, la polaridad y el comportamiento peri&oacute;dico. Previamente, usando FM4-64, identificamos los movimientos peri&oacute;dicos dentro de la acumulaci&oacute;n de ves&iacute;cula apical que se relacionaron con el per&iacute;odo de crecimiento oscilatoria. Esto sugiere una m&aacute;s compleja interdependencia entre tr&aacute;fico de membrana, extensi&oacute;n apical y periodicidad que pens&oacute; previamente. Para investigar esto una comparaci&oacute;n se hizo entre creciendo normalmente y tratados con Brefeldino-A, no crecimiento, tubos. Brefeldino-A tratamiento hab&iacute;a establecido un intrigante, estable, sin embargo, un sistema din&aacute;mico de agregaciones de membrana en la punta del tubo pol&iacute;nico que exhiben movimientos regulares de material con un per&iacute;odo de 5-7 segundos en comparaci&oacute;n con el normal periodicidad de aproximadamente 30 segundo observados en tubos de cultivo. Tratamiento t&eacute;rmico fue encontrado para reducir la duraci&oacute;n en ambos casos. Despu&eacute;s de BFA membrana tratamiento fue demostrada a fluir desde el &aacute;pice de extremos de tubo pol&iacute;nico a trav&eacute;s de una acumulaci&oacute;n de membrana de Brefeldino-A-inducida subapical distintas. Los efectos de la Brefeldino-A en la distribuci&oacute;n de prote&iacute;nas fluorescentes orientada a ER y Golgi revelaron que ER no contribuy&oacute; directamente al sistema de agregaciones de membrana, mientras que s&oacute;lo ciertos compartimientos del Golgi involucrarnos. La participaci&oacute;n de membrana derivada de la acumulaci&oacute;n de ves&iacute;cula apical estuvo fuertemente implicada. Las mediciones del calcio revelaron que Brefeldino-A la gradiente de calcio t&iacute;pico centrada en Punta asociado con el crecimiento y no hab&iacute;a obvias fluctuaciones peri&oacute;dicas en calcio apical asociado con los continuos Brefeldino-A membrana agregaci&oacute;n asociado movimientos peri&oacute;dicos. Nuestros experimentos revelan una periodicidad subyacente en el tubo pol&iacute;nico que es independiente de la secreci&oacute;n, extensi&oacute;n apical y el gradiente de calcio centrada en Punta oscilante normalmente asociados con el crecimiento, pero requiere un citoesqueleto de actina activo.

Tubos de polen muestran eventos tr&aacute;fico regular membrana peri&oacute;dicas en la ausencia de extensi&oacute;n apical.

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&#x6210;&#x50CF;&#x679C;&#x8747;&#x5375;&#x5BA4;&#x7684;&#x9694;&#x79BB;&#x3002;

The fruit fly Drosophila melanogaster is an important model for basic research into the molecular mechanisms underlying cell function and development, as well as a major biomedical research tool. A significant advantage of Drosophila is the ability to apply live cell imaging to a variety of living tissues that can be dissected and imaged in vivo, ex vivo, or in vitro. Drosophila egg chambers, for example, have proven to be a useful model system for studying border cell migration, Golgi unit transport, the rapid movement of mRNA and protein particles, and the role of microtubules in meiosis and oocyte differentiation. A crucial first step before imaging is preparation of the experimental material to ensure physiological relevance and to achieve the best conditions for image quality. Early- to mid-stage egg chambers cannot be mounted in an aqueous-based medium, because this causes a change in microtubule organization and follicle cell morphology. Such egg chambers survive better in Halocarbon oil, which allows free diffusion of oxygen, has low viscosity, and thus prevents dehydration and hypoxia. With a refractive index similar to glycerol, Halocarbon oil also has good optical properties for imaging. It also provides a good environment for injection and is particularly useful for long-term imaging of embryos. However, unlike with aqueous solutions, changes in the medium are not possible. This protocol describes the isolation of Drosophila egg chambers.

Isolation of Drosophila egg chambers for imaging.

La mouche Drosophila melanogaster est un mod&#xE8;le important pour la recherche fondamentale sur les m&#xE9;canismes mol&#xE9;culaires qui sous-tendent le fonctionnement des cellules et le d&#xE9;veloppement, ainsi que d&#x26;#39;un important outil de recherche biom&#xE9;dicale. Un avantage important de la drosophile est la capacit&#xE9; d&#x26;#39;appliquer imagerie des cellules vivantes &#xE0; une vari&#xE9;t&#xE9; de tissus vivants qui peuvent &#xEA;tre diss&#xE9;qu&#xE9;s et imag&#xE9;es in vivo, ex vivo ou in vitro. Drosophila oeuf chambres, par exemple, se sont r&#xE9;v&#xE9;l&#xE9;s &#xEA;tre un syst&#xE8;me mod&#xE8;le utile pour &#xE9;tudier la migration cellulaire fronti&#xE8;re, l&#x26;#39;unit&#xE9; de transport de Golgi, le mouvement rapide de l&#x26;#39;ARNm et de prot&#xE9;ines des particules, et le r&#xF4;le des microtubules dans la m&#xE9;iose et la diff&#xE9;renciation des ovocytes. Une premi&#xE8;re &#xE9;tape cruciale avant l&#x26;#39;imagerie est la pr&#xE9;paration du mat&#xE9;riel exp&#xE9;rimental pour assurer la pertinence physiologique et d&#x26;#39;atteindre les meilleures conditions pour une qualit&#xE9; d&#x26;#39;image. D&#xE9;but &#xE0; la mi-chambres d&#x26;#39;oeufs sc&#xE8;ne ne peut pas &#xEA;tre mont&#xE9; dans un milieu &#xE0; base aqueuse, parce que ceci cause un changement dans l&#x26;#39;organisation des microtubules et la morphologie des cellules du follicule. Ces chambres d&#x26;#39;&#x153;ufs survivent mieux dans de l&#x26;#39;huile sur les halocarbures, qui permet la libre diffusion de l&#x26;#39;oxyg&#xE8;ne, a une faible viscosit&#xE9;, et emp&#xEA;che ainsi la d&#xE9;shydratation et l&#x26;#39;hypoxie. Avec un indice de r&#xE9;fraction similaire &#xE0; du glyc&#xE9;rol, l&#x26;#39;huile halocarbone a de bonnes propri&#xE9;t&#xE9;s optiques d&#x26;#39;imagerie. Il fournit &#xE9;galement un bon environnement pour l&#x26;#39;injection et est particuli&#xE8;rement utile &#xE0; long terme d&#x26;#39;imagerie de l&#x26;#39;embryon. Cependant, contrairement &#xE0; des solutions aqueuses, des changements dans le milieu ne sont pas possibles. Ce protocole d&#xE9;crit l&#x26;#39;isolement de chambres d&#x26;#39;oeufs de drosophile.

Isolement de la drosophile Egg Chambres pour l&#x26;#39;imagerie

Der Fruchtfliege Drosophila Melanogaster ist ein wichtiges Modell f&uuml;r die Grundlagenforschung in die molekularen Mechanismen Zellfunktionen und Entwicklung, sowie einer gro&szlig;en biomedizinische Forschungswerkzeug. Ein wesentlicher Vorteil von Drosophila ist die F&auml;higkeit, Leben Zelle Bildgebung zu einer Vielzahl von lebendes Gewebe, die zerlegt und in-vivo, ex Vivo abgebildet werden k&ouml;nnen, oder in vitro anwenden. Taufliege Ei Kammern, haben sich als n&uuml;tzliches Modell System zur Grenze Zellmigration, Golgi Einheit Transport, die schnelle Bewegung der mRNA und Protein-Partikel und die Rolle der Mikrotubuli in Meiose und Eizelle Differenzierung beispielsweise bew&auml;hrt. Ein entscheidender erster Schritt vor der Bildgebung ist die Vorbereitung der Experimentiermaterial, physiologische Relevanz zu gew&auml;hrleisten und die besten Voraussetzungen f&uuml;r Bildqualit&auml;t zu erreichen. Fr&uuml;h - zu mid - stage Ei Kammern k&ouml;nnen nicht in w&auml;ssrigen basierenden Medium, gemountet werden, da hierdurch eine &Auml;nderung im Microtubule Organisation und Follikel Zellmorphologie. Solche Ei Kammern &Uuml;berleben besser in Halocarbon&ouml;l, welche erlaubt freie Diffusion von Sauerstoff, hat niedrigen Viskosit&auml;t, und verhindert so das Austrocknen und Hypoxie. Mit einem Brechungsindex &auml;hnlich wie Glycerin hat Halocarbon&ouml;l auch gute optische Eigenschaften f&uuml;r Imaging. Au&szlig;erdem bietet eine gute Umgebung f&uuml;r Injektion und eignet sich besonders f&uuml;r langfristige Imaging von Embryonen. Allerdings sind im Gegensatz zu mit w&auml;ssrigen L&ouml;sungen, &Auml;nderungen im Medium nicht m&ouml;glich. Dieses Protokoll beschreibt die Isolation der Taufliege Ei Kammern.

Isolierung von Drosophila Ei Kammern f&uuml;r Imaging.

Il moscerino della frutta Drosophila melanogaster &egrave; un importante modello per la ricerca di base sui meccanismi molecolari sottostanti la funzione delle cellule e lo sviluppo, nonch&eacute; uno strumento importante nella ricerca biomedica. Un vantaggio significativo di Drosophila &egrave; la capacit&agrave; di applicare live cell imaging ad una variet&agrave; di tessuti viventi che pu&ograve; essere sezionata e imaging in vivo, ex vivo o in vitro. Camere di uovo di Drosophila, ad esempio, hanno dimostrato di essere un sistema utile modello per lo studio della migrazione cellulare di bordo, trasporto unit&agrave; Golgi, il rapido movimento delle particelle di mRNA e di proteine e il ruolo dei microtubuli nella differenziazione meiosi e ovocita. Un primo passo fondamentale prima di imaging &egrave; la preparazione del materiale sperimentale per garantire rilevanza fisiologica e per ottenere le migliori condizioni per la qualit&agrave; dell&#39;immagine. Chambers primi - a met&agrave; - stadio di uovo non pu&ograve; essere montato in un mezzo acquoso-based, perch&eacute; questo provoca un cambiamento nella morfologia di cella microtubule organizzazione e follicolo. Tali alloggiamenti uovo sopravvivono meglio in Olio halocarbone, che permette la libera diffusione dell&#39;ossigeno, ha bassa viscosit&agrave; e quindi impedisce la disidratazione e l&#39;ipossia. Con un indice di rifrazione simile a glicerolo, olio di halocarbone ha anche buone propriet&agrave; ottiche per l&#39;imaging. E inoltre fornisce un buon ambiente per iniezione ed &egrave; particolarmente utile per l&#39;imaging a lungo termine degli embrioni. Tuttavia, a differenza con soluzioni acquose, modifiche a medio non sono possibili. Questo protocollo descrive l&#39;isolamento delle camere uovo di Drosophila.

Isolamento delle camere uovo drosofila per l&#39;imaging.

&#x30B7;&#x30E7;&#x30A6;&#x30B8;&#x30E7;&#x30A6;&#x30D0;&#x30A8;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3068;&#x958B;&#x767A;&#x306E;&#x6839;&#x5E95;&#x306B;&#x3042;&#x308B;&#x5206;&#x5B50;&#x6A5F;&#x69CB;&#x3068;&#x540C;&#x69D8;&#x306B;&#x3001;&#x4E3B;&#x8981;&#x306A;&#x751F;&#x7269;&#x533B;&#x5B66;&#x7814;&#x7A76;&#x30C4;&#x30FC;&#x30EB;&#x306B;&#x57FA;&#x790E;&#x7814;&#x7A76;&#x306E;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x30B7;&#x30E7;&#x30A6;&#x30B8;&#x30E7;&#x30A6;&#x30D0;&#x30A8;&#x306E;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x5229;&#x70B9;&#x306F;&#x3001;in vivo&#x3001;ex vivo&#x3067;&#x3001;&#x307E;&#x305F;&#x306F;in vitro&#x3067;&#x89E3;&#x5256;&#x3057;&#x3001;&#x64AE;&#x50CF;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x308B;&#x751F;&#x4F53;&#x7D44;&#x7E54;&#x306E;&#x69D8;&#x3005;&#x306A;&#x30E9;&#x30A4;&#x30D6;&#x30BB;&#x30EB;&#x30A4;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B8;&#x30F3;&#x30B0;&#x3092;&#x9069;&#x7528;&#x3059;&#x308B;&#x6A5F;&#x80FD;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30B7;&#x30E7;&#x30A6;&#x30B8;&#x30E7;&#x30A6;&#x30D0;&#x30A8;&#x5375;&#x5BA4;&#x306F;&#x3001;&#x4F8B;&#x3048;&#x3070;&#x3001;&#x56FD;&#x5883;&#x7D30;&#x80DE;&#x904A;&#x8D70;&#x3001;&#x30B4;&#x30EB;&#x30B8;&#x88C5;&#x7F6E;&#x306E;&#x8F38;&#x9001;&#x3001;mRNA&#x3068;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x7C92;&#x5B50;&#x306E;&#x6025;&#x901F;&#x306A;&#x52D5;&#x304D;&#x3001;&#x305D;&#x3057;&#x3066;&#x6E1B;&#x6570;&#x5206;&#x88C2;&#x3068;&#x5375;&#x6BCD;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x5206;&#x5316;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x5FAE;&#x5C0F;&#x7BA1;&#x306E;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x7814;&#x7A76;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x6709;&#x7528;&#x306A;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E0;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x5224;&#x660E;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x30A4;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B8;&#x30F3;&#x30B0;&#x3059;&#x308B;&#x524D;&#x306B;&#x3001;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x6700;&#x521D;&#x306E;&#x30B9;&#x30C6;&#x30C3;&#x30D7;&#x306F;&#x3001;&#x751F;&#x7406;&#x5B66;&#x7684;&#x95A2;&#x9023;&#x6027;&#x3092;&#x78BA;&#x4FDD;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x3001;&#x753B;&#x50CF;&#x54C1;&#x8CEA;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x6700;&#x9AD8;&#x306E;&#x6761;&#x4EF6;&#x3092;&#x9054;&#x6210;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x3001;&#x5B9F;&#x9A13;&#x6750;&#x6599;&#x306E;&#x6E96;&#x5099;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x306F;&#x5FAE;&#x5C0F;&#x7BA1;&#x306E;&#x7D44;&#x7E54;&#x3068;&#x5375;&#x80DE;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x5F62;&#x614B;&#x5909;&#x5316;&#x3092;&#x5F15;&#x304D;&#x8D77;&#x3053;&#x3059;&#x305F;&#x3081;&#x3001;&#x65E9;&#x671F;&#x304B;&#x3089;&#x4E2D;&#x671F;&#x6BB5;&#x968E;&#x306E;&#x5375;&#x5BA4;&#x306F;&#x3001;&#x6C34;&#x6027;&#x5A92;&#x4F53;&#x4E2D;&#x306B;&#x30DE;&#x30A6;&#x30F3;&#x30C8;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306F;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306A;&#x5375;&#x5BA4;&#x306F;&#x3001;&#x9178;&#x7D20;&#x306E;&#x81EA;&#x7531;&#x306A;&#x62E1;&#x6563;&#x3092;&#x53EF;&#x80FD;&#x306B;&#x3059;&#x308B;&#x4F4E;&#x7C98;&#x5EA6;&#x3092;&#x6301;&#x3064;&#x30CF;&#x30ED;&#x30AB;&#x30FC;&#x30DC;&#x30F3;&#x306E;&#x30AA;&#x30A4;&#x30EB;&#x3067;&#x826F;&#x3044;&#x751F;&#x304D;&#x6B8B;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x3001;&#x8131;&#x6C34;&#x75C7;&#x72B6;&#x3084;&#x4F4E;&#x9178;&#x7D20;&#x75C7;&#x3092;&#x9632;&#x304E;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30B0;&#x30EA;&#x30BB;&#x30ED;&#x30FC;&#x30EB;&#x306B;&#x4F3C;&#x3066;&#x5C48;&#x6298;&#x7387;&#x3067;&#x3001;&#x30CF;&#x30ED;&#x30AB;&#x30FC;&#x30DC;&#x30F3;&#x306E;&#x30AA;&#x30A4;&#x30EB;&#x306F;&#x307E;&#x305F;&#x3001;&#x30A4;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B8;&#x30F3;&#x30B0;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x826F;&#x597D;&#x306A;&#x5149;&#x5B66;&#x7279;&#x6027;&#x3092;&#x6709;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x307E;&#x305F;&#x3001;&#x6CE8;&#x5C04;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x826F;&#x3044;&#x74B0;&#x5883;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3057;&#x3001;&#x80DA;&#x306E;&#x9577;&#x671F;&#x7684;&#x30A4;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B8;&#x30F3;&#x30B0;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x7279;&#x306B;&#x6709;&#x7528;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3002;&#x3057;&#x304B;&#x3057;&#x3001;&#x6C34;&#x6EB6;&#x6DB2;&#x3068;&#x306F;&#x7570;&#x306A;&#x308A;&#x3001;&#x30E1;&#x30C7;&#x30A3;&#x30A2;&#x306E;&#x5909;&#x66F4;&#x306F;&#x53EF;&#x80FD;&#x3067;&#x306F;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C8;&#x30B3;&#x30EB;&#x306F;&#x3001;&#x30B7;&#x30E7;&#x30A6;&#x30B8;&#x30E7;&#x30A6;&#x30D0;&#x30A8;&#x306E;&#x5375;&#x5BA4;&#x306E;&#x5206;&#x96E2;&#x3092;&#x8AAC;&#x660E;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x30A4;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B8;&#x30F3;&#x30B0;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x30B7;&#x30E7;&#x30A6;&#x30B8;&#x30E7;&#x30A6;&#x30D0;&#x30A8;&#x30A8;&#x30C3;&#x30B0;&#x30C1;&#x30A7;&#x30F3;&#x30D0;&#x30FC;&#x30B9;&#x306E;&#x5206;&#x96E2;

&#xACFC;&#xC77C; &#xD30C;&#xB9AC; Drosophila melanogaster &#xC138;&#xD3EC; &#xAE30;&#xB2A5; &#xBC0F; &#xAC1C;&#xBC1C;, &#xC8FC;&#xC694; &#xC0DD;&#xBA85; &#xC758;&#xD559; &#xC5F0;&#xAD6C; &#xB3C4;&#xAD6C; &#xAE30;&#xBCF8; &#xBD84;&#xC790; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xAE30;&#xBCF8; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xBAA8;&#xB378;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xCD08;&#xD30C;&#xB9AC;&#xC758; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xC7A5;&#xC810;&#xC740; &#xB77C;&#xC774;&#xBE0C; &#xC140; &#xC774;&#xBBF8;&#xC9D5; &#xB2E4;&#xC591; &#xD55C; in vivo, ex vivo, &#xBA87; &#xAD70;&#xB370; &#xD574; &#xBD80; &#xC218; &#xC788;&#xB294; &#xC0B4;&#xC544;&#xC788;&#xB294; &#xC870;&#xC9C1; &#xB610;&#xB294; &#xC0DD;&#xCCB4; &#xC678;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC801;&#xC6A9; &#xD558;&#xB294; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;. Drosophila &#xACC4;&#xB780; &#xC57D; &#xC2E4;, &#xC608;&#xB97C; &#xB4E4;&#xC5B4;, &#xD14C;&#xB450;&#xB9AC; &#xC140; &#xB9C8;&#xC774;&#xADF8;&#xB808;&#xC774;&#xC158;, Golgi &#xB2E8;&#xC704; &#xC804;&#xC1A1;, Mrna&#xC640; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC785;&#xC790;&#xC758; &#xACE0;&#xC18D; &#xC774;&#xB3D9; &#xBC0F; microtubules meiosis &#xBC0F; oocyte &#xBD84;&#xD654;&#xC5D0;&#xC11C;&#xC758; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xACF5;&#xBD80; &#xD558;&#xB294; &#xB370; &#xC720;&#xC6A9;&#xD55C; &#xBAA8;&#xB378; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C;&#xC744; &#xC785;&#xC99D; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC774;&#xBBF8;&#xC9D5; &#xD558;&#xAE30; &#xC804;&#xC5D0; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xCCAB; &#xBC88;&#xC9F8; &#xB2E8;&#xACC4;&#xB294; &#xC0DD;&#xB9AC; &#xC801; &#xAD00;&#xB828;&#xC131;&#xC744; &#xBCF4;&#xC7A5; &#xD558; &#xACE0; &#xC774;&#xBBF8;&#xC9C0; &#xD488;&#xC9C8;&#xC744; &#xC704;&#xD55C; &#xCD5C;&#xC0C1;&#xC758; &#xC870;&#xAC74;&#xC744; &#xB2EC;&#xC131; &#xC2E4;&#xD5D8; &#xC7AC;&#xB8CC;&#xC758; &#xC900;&#xBE44; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xCD08;&#xAE30;-&#xD558; &#xC911;&#xAC04;-stage &#xACC4;&#xB780; &#xCC54;&#xBC84; microtubule &#xC870;&#xC9C1; &#xBC0F; &#xC5EC; &#xD3EC; &#xC138;&#xD3EC; &#xD615;&#xD0DC;&#xD559;&#xC5D0; &#xC788;&#xB294; &#xBCC0;&#xD654;&#xB97C; &#xBC1C;&#xC0DD; &#xD558;&#xAE30; &#xB54C;&#xBB38;&#xC5D0; &#xC218;&#xC131; &#xAE30;&#xBC18; &#xB9E4;&#xCCB4;&#xC5D0; &#xD0D1;&#xC7AC;&#xD560; &#xC218; &#xC5C6;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xACC4;&#xB780; &#xCC54;&#xBC84; Halocarbon &#xAE30;&#xB984;, &#xC0B0;&#xC18C;&#xC758; &#xBB34;&#xB8CC; &#xBCF4;&#xAE09;&#xC744; &#xC218; &#xC788;&#xB3C4;&#xB85D; &#xC800; &#xC810;&#xB3C4; &#xC788;&#xC73C;&#xBA70; &#xB530;&#xB77C;&#xC11C; &#xD0C8;&#xC218;&#xC640; &#xC800; &#xC0B0;&#xC18C; &#xC99D;&#xC744; &#xBC29;&#xC9C0; &#xD558;&#xB294; &#xB354; &#xB098;&#xC740; &#xC0DD;&#xC874;. Halocarbon &#xC624;&#xC77C;&#xC740; &#xB610;&#xD55C; &#xAD74;&#xC808; &#xC778;&#xB371;&#xC2A4; &#xAE00;&#xB9AC;&#xC138;&#xB864;&#xACFC; &#xBE44;&#xC2B7;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xC774;&#xBBF8;&#xC9D5;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC88B;&#xC740; &#xAD11;&#xD559; &#xC18D;&#xC131;. &#xB610;&#xD55C; &#xC8FC;&#xC785;&#xC744; &#xC704;&#xD55C; &#xC88B;&#xC740; &#xD658;&#xACBD;&#xC744; &#xC81C;&#xACF5; &#xD558; &#xACE0; &#xBC30;&#xC544;&#xC758; &#xC7A5;&#xAE30;&#xC801;&#xC778; &#xC774;&#xBBF8;&#xC9C0;&#xC5D0; &#xD2B9;&#xD788; &#xC720;&#xC6A9; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098;, &#xB2EC;&#xB9AC; &#xC218;&#xC131; &#xC194;&#xB8E8;&#xC158;&#xACFC; &#xB9E4;&#xCCB4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBCC0;&#xACBD; &#xBD88;&#xAC00;&#xB2A5; &#xD558;&#xB2E4;. &#xC774; &#xD504;&#xB85C;&#xD1A0;&#xCF5C; Drosophila &#xACC4;&#xB780; &#xCC54;&#xBC84; &#xACA9;&#xB9AC;&#xB97C; &#xC124;&#xBA85;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xC774;&#xBBF8;&#xC9D5; Drosophila &#xACC4;&#xB780; &#xCC54;&#xBC84;&#xC758; &#xBD84;&#xB9AC;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;.

La mosca de la fruta Drosophila melanogaster es un modelo importante para la investigaci&#xF3;n b&#xE1;sica sobre los mecanismos moleculares que subyacen a la funci&#xF3;n celular y el desarrollo, as&#xED; como una importante herramienta de investigaci&#xF3;n biom&#xE9;dica. Una ventaja significativa de Drosophila es la capacidad de aplicar im&#xE1;genes de c&#xE9;lulas vivas para una variedad de tejidos vivos que pueden ser disecados y observado en vivo, ex vivo o in vitro. Drosophila huevo c&#xE1;maras, por ejemplo, han demostrado ser un sistema modelo &#xFA;til para estudiar la migraci&#xF3;n borde de la celda, el transporte de Golgi unidad, el r&#xE1;pido movimiento de mRNA y las part&#xED;culas de prote&#xED;na, y el papel de los microt&#xFA;bulos en la meiosis y diferenciaci&#xF3;n de oocitos. Un primer paso crucial antes de formaci&#xF3;n de im&#xE1;genes es la preparaci&#xF3;n del material experimental para asegurar la relevancia fisiol&#xF3;gica y para lograr las mejores condiciones para la calidad de imagen. Temprana a las c&#xE1;maras de huevo a mediados de la etapa no se puede montar en un medio acuoso basado, porque esto causa un cambio en la organizaci&#xF3;n de los microt&#xFA;bulos y morfolog&#xED;a de las c&#xE9;lulas del fol&#xED;culo. Tales c&#xE1;maras de huevo sobrevivir mejor en aceite de halocarbono, que permite la libre difusi&#xF3;n de ox&#xED;geno, tiene baja viscosidad, y por lo tanto evita la deshidrataci&#xF3;n y la hipoxia. Con un &#xED;ndice de refracci&#xF3;n similar al glicerol, aceite de halocarbono tambi&#xE9;n tiene buenas propiedades &#xF3;pticas para formaci&#xF3;n de im&#xE1;genes. Tambi&#xE9;n proporciona un buen ambiente para inyecci&#xF3;n y es particularmente &#xFA;til a largo plazo de im&#xE1;genes de los embriones. Sin embargo, a diferencia de las soluciones acuosas, los cambios en el medio no son posibles. Este protocolo se describe el aislamiento de Drosophila c&#xE1;maras de huevo.

El aislamiento de Drosophila huevo C&#xE1;maras de Im&#xE1;genes

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The fruit fly Drosophila melanogaster is an important model for basic research into the molecular mechanisms underlying cell function and development, as well as a major biomedical research tool. A significant advantage of Drosophila is the ability to apply live cell imaging to a variety of living tissues that can be dissected and imaged in vivo, ex vivo, or in vitro. For example, such imaging can be used for visual genetic screens such as analysis of morphological characteristics or of the distribution of fluorescently tagged proteins in living embryos. Indeed, Drosophila embryos have proven to be a useful model system for studying a variety of cellular processes such as asymmetric division, migration, wound healing, apoptosis, and fasciculation, as well as for tracking lipid droplet motility, protein recycling, fast mRNA transport, and the movement of chromosomal loci within individual cells. A crucial first step before imaging is preparation of the experimental material to ensure physiological relevance and to achieve the best conditions for image quality. Because it contributes to autofluorescence and lack of transparency, it is useful to remove the chorion before imaging by treating the embryos with bleach. This protocol describes the collection and mounting of Drosophila embryos for live cell imaging.

Collection and mounting of Drosophila embryos for imaging.

La mouche Drosophila melanogaster est un mod&#xE8;le important pour la recherche fondamentale sur les m&#xE9;canismes mol&#xE9;culaires qui sous-tendent le fonctionnement des cellules et le d&#xE9;veloppement, ainsi que d&#x26;#39;un important outil de recherche biom&#xE9;dicale. Un avantage important de la drosophile est la capacit&#xE9; d&#x26;#39;appliquer imagerie des cellules vivantes &#xE0; une vari&#xE9;t&#xE9; de tissus vivants qui peuvent &#xEA;tre diss&#xE9;qu&#xE9;s et imag&#xE9;es in vivo, ex vivo ou in vitro. Par exemple, l&#x26;#39;imagerie par exemple peut &#xEA;tre utilis&#xE9; pour visuels &#xE9;crans g&#xE9;n&#xE9;tiques tels que l&#x26;#39;analyse des caract&#xE9;ristiques morphologiques ou de la r&#xE9;partition des prot&#xE9;ines marqu&#xE9;es par fluorescence dans embryon vivant. En effet, les embryons de drosophile ont r&#xE9;v&#xE9;l&#xE9; &#xEA;tre un syst&#xE8;me mod&#xE8;le utile pour &#xE9;tudier une vari&#xE9;t&#xE9; de processus cellulaires comme la division asym&#xE9;trique, la migration, la cicatrisation des plaies, l&#x26;#39;apoptose, et des fasciculations, ainsi que pour la motilit&#xE9; des lipides des gouttelettes de suivi, le recyclage des prot&#xE9;ines, des transports ARNm rapide, et le mouvement de locus chromosomique dans les cellules individuelles. Une premi&#xE8;re &#xE9;tape cruciale avant l&#x26;#39;imagerie est la pr&#xE9;paration du mat&#xE9;riel exp&#xE9;rimental pour assurer la pertinence physiologique et d&#x26;#39;atteindre les meilleures conditions pour une qualit&#xE9; d&#x26;#39;image. Parce qu&#x26;#39;il contribue &#xE0; l&#x26;#39;autofluorescence et le manque de transparence, il est utile de retirer le chorion avant l&#x26;#39;imagerie en traitant les embryons avec l&#x26;#39;eau de Javel. Ce protocole d&#xE9;crit la collecte et le montage d&#x26;#39;embryons de drosophile pour l&#x26;#39;imagerie des cellules vivantes.

Collecte et de montage des embryons de drosophile pour l&#x26;#39;imagerie

Der Fruchtfliege Drosophila Melanogaster ist ein wichtiges Modell f&uuml;r die Grundlagenforschung in die molekularen Mechanismen Zellfunktionen und Entwicklung, sowie einer gro&szlig;en biomedizinische Forschungswerkzeug. Ein wesentlicher Vorteil von Drosophila ist die F&auml;higkeit, Leben Zelle Bildgebung zu einer Vielzahl von lebendes Gewebe, die zerlegt und in-vivo, ex Vivo abgebildet werden k&ouml;nnen, oder in vitro anwenden. Beispielsweise kann solche Bildgebung f&uuml;r visuelle genetische Schirme wie Analyse morphologischen Merkmale oder der Verteilung von Leuchtstoff markierte Proteine in lebenden Embryonen verwendet werden. In der Tat erwiesen Drosophila Embryonen sich n&uuml;tzliche Modellsystem zur Untersuchung einer Vielzahl zellul&auml;rer Prozesse wie asymmetrische Teilung, Migration, Wundheilung, Apoptosis und Faszikulation sowie f&uuml;r die Verfolgung von Lipid Tr&ouml;pfchen Motilit&auml;t Protein Verwertung, schnellen Transport von mRNA und die Bewegung der einzelnen Zellen chromosomale Loci werden. Ein entscheidender erster Schritt vor der Bildgebung ist die Vorbereitung der Experimentiermaterial, physiologische Relevanz zu gew&auml;hrleisten und die besten Voraussetzungen f&uuml;r Bildqualit&auml;t zu erreichen. Weil sie zum Autofluoreszenz und mangelnde Transparenz beitr&auml;gt, ist es sinnvoll, das Chorion vor Bildgebung zu entfernen, durch die Behandlung der Embryos mit Bleichmittel. Dieses Protokoll beschreibt die Sammlung und die Montage von Drosophila Embryos f&uuml;r live Cell Imaging.

Sammlung und Montage von Drosophila Embryos f&uuml;r Imaging.

Il moscerino della frutta Drosophila melanogaster &egrave; un importante modello per la ricerca di base sui meccanismi molecolari sottostanti la funzione delle cellule e lo sviluppo, nonch&eacute; uno strumento importante nella ricerca biomedica. Un vantaggio significativo di Drosophila &egrave; la capacit&agrave; di applicare live cell imaging ad una variet&agrave; di tessuti viventi che pu&ograve; essere sezionata e imaging in vivo, ex vivo o in vitro. Ad esempio, tali immagini possono essere utilizzato per visual schermi genetici quali l&#39;analisi delle caratteristiche morfologiche o della distribuzione delle proteine fluorescente contrassegnate in embrioni viventi. Infatti, gli embrioni di Drosophila hanno dimostrato di essere un sistema utile modello per lo studio di una variet&agrave; di processi cellulari come la divisione asimmetrica, migrazione, la guarigione della ferita, apoptosi e fascicolazioni, cos&igrave; come per rilevamento motilit&agrave; gocce lipidiche, proteine riciclaggio, trasporto veloce di mRNA e il movimento dei loci cromosomici all&#39;interno di singole celle. Un primo passo fondamentale prima di imaging &egrave; la preparazione del materiale sperimentale per garantire rilevanza fisiologica e per ottenere le migliori condizioni per la qualit&agrave; dell&#39;immagine. Perch&eacute; esso contribuisce ad autofluorescenza e mancanza di trasparenza, &egrave; utile rimuovere il corion prima imaging trattando gli embrioni con la candeggina. Questo protocollo descrive la raccolta e il montaggio degli embrioni di Drosophila per imaging cellulare dal vivo.

Raccolta e montaggio degli embrioni di Drosophila per l&#39;imaging.

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&#x30B3;&#x30EC;&#x30AF;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x3068;&#x30A4;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B8;&#x30F3;&#x30B0;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x3001;&#x30B7;&#x30E7;&#x30A6;&#x30B8;&#x30E7;&#x30A6;&#x30D0;&#x30A8;&#x306E;&#x80DA;&#x306E;&#x53D6;&#x308A;&#x4ED8;&#x3051;

&#xACFC;&#xC77C; &#xD30C;&#xB9AC; Drosophila melanogaster &#xC138;&#xD3EC; &#xAE30;&#xB2A5; &#xBC0F; &#xAC1C;&#xBC1C;, &#xC8FC;&#xC694; &#xC0DD;&#xBA85; &#xC758;&#xD559; &#xC5F0;&#xAD6C; &#xB3C4;&#xAD6C; &#xAE30;&#xBCF8; &#xBD84;&#xC790; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xAE30;&#xBCF8; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xBAA8;&#xB378;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xCD08;&#xD30C;&#xB9AC;&#xC758; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xC7A5;&#xC810;&#xC740; &#xB77C;&#xC774;&#xBE0C; &#xC140; &#xC774;&#xBBF8;&#xC9D5; &#xB2E4;&#xC591; &#xD55C; in vivo, ex vivo, &#xBA87; &#xAD70;&#xB370; &#xD574; &#xBD80; &#xC218; &#xC788;&#xB294; &#xC0B4;&#xC544;&#xC788;&#xB294; &#xC870;&#xC9C1; &#xB610;&#xB294; &#xC0DD;&#xCCB4; &#xC678;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC801;&#xC6A9; &#xD558;&#xB294; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC608;&#xB97C; &#xB4E4;&#xC5B4;, &#xD615;&#xD0DC;&#xD559; &#xD2B9;&#xC131; &#xB610;&#xB294; &#xC0DD;&#xD65C; &#xBC30;&#xC544;&#xC5D0; &#xB193;&#xC5EC;&#xC788;&#xB294;&#xC9C0; &#xD0DC;&#xADF8; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xBD84;&#xD3EC;&#xC758; &#xBD84;&#xC11D; &#xB4F1; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xC601;&#xC0C1; &#xD654;&#xBA74;&#xC5D0; &#xAC19;&#xC740; &#xC774;&#xBBF8;&#xC9C0;&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC2E4;&#xC81C;&#xB85C;, &#xCD08;&#xD30C;&#xB9AC; &#xBC30;&#xC544; &#xC9C0;&#xC9C8; &#xBC29;&#xC6B8; &#xC6B4;&#xB3D9; &#xC131;, &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC7AC;&#xD65C;&#xC6A9;, &#xBE60;&#xB978; mRNA &#xC804;&#xC1A1; &#xBC0F; &#xAC1C;&#xBCC4; &#xC138;&#xD3EC; &#xB0B4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC5FC;&#xC0C9;&#xCCB4; loci&#xC758; &#xC6C0;&#xC9C1;&#xC784;&#xC744; &#xCD94;&#xC801; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD55C; &#xBFD0;&#xB9CC; &#xC544;&#xB2C8;&#xB77C; &#xB2E4;&#xC591; &#xD55C; &#xC138;&#xD3EC;&#xC9C8; &#xD504;&#xB85C;&#xC138;&#xC2A4; &#xBE44;&#xB300;&#xCE6D; &#xBD80;&#xBB38;, &#xB9C8;&#xC774;&#xADF8;&#xB808;&#xC774;&#xC158;, &#xC0C1;&#xCC98; &#xCE58;&#xC720;, apoptosis, fasciculation, &#xB4F1;&#xC744; &#xACF5;&#xBD80; &#xD558;&#xB294; &#xB370; &#xC720;&#xC6A9;&#xD55C; &#xBAA8;&#xB378; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C;&#xC744; &#xC785;&#xC99D; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC774;&#xBBF8;&#xC9D5; &#xD558;&#xAE30; &#xC804;&#xC5D0; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xCCAB; &#xBC88;&#xC9F8; &#xB2E8;&#xACC4;&#xB294; &#xC0DD;&#xB9AC; &#xC801; &#xAD00;&#xB828;&#xC131;&#xC744; &#xBCF4;&#xC7A5; &#xD558; &#xACE0; &#xC774;&#xBBF8;&#xC9C0; &#xD488;&#xC9C8;&#xC744; &#xC704;&#xD55C; &#xCD5C;&#xC0C1;&#xC758; &#xC870;&#xAC74;&#xC744; &#xB2EC;&#xC131; &#xC2E4;&#xD5D8; &#xC7AC;&#xB8CC;&#xC758; &#xC900;&#xBE44; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. Autofluorescence &#xBC0F; &#xD22C;&#xBA85;&#xB3C4;&#xC758; &#xBD80;&#xC871;&#xC5D0; &#xAE30;&#xC5EC; &#xD558; &#xACE0;, &#xB54C;&#xBB38;&#xC5D0; &#xD45C; &#xBC31;&#xC81C;&#xC640; &#xBC30;&#xC544;&#xB97C; &#xCC98;&#xB9AC; &#xD558; &#xC5EC; &#xC601;&#xC0C1; &#xC804;&#xC5D0; chorion &#xC81C;&#xAC70; &#xC720;&#xC6A9; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774; &#xD504;&#xB85C;&#xD1A0;&#xCF5C; &#xC218;&#xC9D1; &#xBC0F; &#xB77C;&#xC774;&#xBE0C; &#xC140; &#xC774;&#xBBF8;&#xC9D5; &#xCD08;&#xD30C;&#xB9AC; &#xBC30;&#xC544;&#xC758; &#xC7A5;&#xCC29;&#xC5D0; &#xC124;&#xBA85;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xC218;&#xC9D1; &#xBC0F; &#xC774;&#xBBF8;&#xC9D5; &#xCD08;&#xD30C;&#xB9AC; &#xBC30;&#xC544;&#xC758; &#xC7A5;&#xCC29;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;.

La mosca de la fruta Drosophila melanogaster es un modelo importante para la investigaci&#xF3;n b&#xE1;sica sobre los mecanismos moleculares que subyacen a la funci&#xF3;n celular y el desarrollo, as&#xED; como una importante herramienta de investigaci&#xF3;n biom&#xE9;dica. Una ventaja significativa de Drosophila es la capacidad de aplicar im&#xE1;genes de c&#xE9;lulas vivas para una variedad de tejidos vivos que pueden ser disecados y observado en vivo, ex vivo o in vitro. Por ejemplo, im&#xE1;genes, tal puede ser utilizado para pantallas visuales gen&#xE9;ticos tales como el an&#xE1;lisis de las caracter&#xED;sticas morfol&#xF3;gicas o de la distribuci&#xF3;n de las prote&#xED;nas marcadas con fluorescencia en los embriones vivos. En efecto, los embriones de Drosophila han demostrado ser un sistema modelo &#xFA;til para estudiar una variedad de procesos celulares tales como la divisi&#xF3;n asim&#xE9;trica, la migraci&#xF3;n, la curaci&#xF3;n de heridas, la apoptosis y fasciculaci&#xF3;n, as&#xED; como para el seguimiento de la motilidad gotas de l&#xED;pidos, el reciclado de prote&#xED;nas, el transporte r&#xE1;pido de ARNm, y el movimiento de los loci cromos&#xF3;micos dentro de las c&#xE9;lulas individuales. Un primer paso crucial antes de formaci&#xF3;n de im&#xE1;genes es la preparaci&#xF3;n del material experimental para asegurar la relevancia fisiol&#xF3;gica y para lograr las mejores condiciones para la calidad de imagen. Debido a que contribuye a la autofluorescencia y la falta de transparencia, es &#xFA;til para eliminar el corion antes de formaci&#xF3;n de im&#xE1;genes mediante el tratamiento de los embriones con cloro. Este protocolo describe la colecci&#xF3;n y el montaje de embriones de Drosophila para obtener im&#xE1;genes de c&#xE9;lulas vivas.

Recogida y montaje de embriones de Drosophila de la Imagen

Drosophila plasmatocytes, also known as macrophages, are part of the Drosophila innate immune system and also have roles during development. In late-stage embryos, it is possible to image macrophage migration in situ during development and when they converge at sites of wounding. This protocol describes the isolation of macrophages from third instar Drosophila larvae. The macrophages can be cultured for several hours, and fluorescently labeled macrophages can be screened using a fluorescence-imaging system.

Drosophila macrophage preparation and screening.

Plasmatocytes drosophile, &#xE9;galement connus comme les macrophages, font partie de la drosophile syst&#xE8;me immunitaire inn&#xE9; et ont &#xE9;galement des r&#xF4;les au cours du d&#xE9;veloppement. &#xC0; un stade avanc&#xE9; embryons, il est possible de la migration des macrophages in situ sur l&#x26;#39;image pendant le d&#xE9;veloppement et quand ils convergent vers des sites de blessure. Ce protocole d&#xE9;crit l&#x26;#39;isolement des macrophages &#xE0; partir du troisi&#xE8;me stade larvaire chez les larves drosophiles. Les macrophages peuvent &#xEA;tre cultiv&#xE9;es pendant plusieurs heures, et les macrophages marqu&#xE9;s par fluorescence peuvent &#xEA;tre cribl&#xE9;s en utilisant un syst&#xE8;me d&#x26;#39;imagerie de fluorescence.

Drosophila macrophages pr&#xE9;paration et la s&#xE9;lection

Taufliege Plasmatocytes, auch bekannt als Makrophagen, sind Teil des angeborenen Immunsystems Drosophila und auch Rollen w&auml;hrend der Entwicklung. Im Sp&auml;tstadium Embryonen ist es m&ouml;glich, Bild Makrophagen Migration an Ort und Stelle bei der Entwicklung und wenn sie an den Standorten der Verwundung konvergieren. Dieses Protokoll beschreibt die Isolation von Makrophagen aus dritte instar Drosophila-Larven. Die Makrophagen k&ouml;nnen kultiviert werden, f&uuml;r mehrere Stunden und Leuchtstoff beschriftete Makrophagen k&ouml;nnen gesiebt werden, mit einem Fluoreszenz-Imaging-System.

Taufliege-Makrophagen-Vorbereitung und Vorf&uuml;hrung.

Drosofila plasmatocytes, noto anche come macrofagi, fanno parte del sistema immunitario innato della drosofila e hanno anche ruoli durante lo sviluppo. In ritardo-fase embrioni, &egrave; possibile migrazione di macrofagi immagine in situ durante lo sviluppo, e quando essi convergono ai luoghi della ferita. Questo protocollo descrive l&#39;isolamento dei macrofagi dal terzo instar larve di Drosophila. I macrofagi possono essere messi in coltura per diverse ore, e fluorescente contrassegnati macrofagi possono essere proiettati utilizzando un sistema di imaging-fluorescenza.

Preparazione dei macrofagi della drosofila e screening.

&#x307E;&#x305F;&#x3001;&#x30DE;&#x30AF;&#x30ED;&#x30D5;&#x30A1;&#x30FC;&#x30B8;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x77E5;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x30B7;&#x30E7;&#x30A6;&#x30B8;&#x30E7;&#x30A6;&#x30D0;&#x30A8;&#x306E;&#x30D7;&#x30E9;&#x30BA;&#x30DE;&#x7D30;&#x80DE;&#x306F;&#x3001;&#x30B7;&#x30E7;&#x30A6;&#x30B8;&#x30E7;&#x30A6;&#x30D0;&#x30A8;&#x306E;&#x81EA;&#x7136;&#x514D;&#x75AB;&#x7CFB;&#x306E;&#x4E00;&#x90E8;&#x3067;&#x3042;&#x308A;&#x3001;&#x307E;&#x305F;&#x958B;&#x767A;&#x4E2D;&#x306E;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x62C5;&#x3063;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x5F8C;&#x671F;&#x80DA;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x958B;&#x767A;&#x6642;&#x306B;&#x305D;&#x306E;&#x5834;&#x3067;&#x753B;&#x50CF;&#x306E;&#x30DE;&#x30AF;&#x30ED;&#x30D5;&#x30A1;&#x30FC;&#x30B8;&#x3078;&#x306E;&#x79FB;&#x884C;&#x304C;&#x53EF;&#x80FD;&#x3067;&#x3042;&#x308A;&#x3001;&#x5F7C;&#x3089;&#x306F;&#x8CA0;&#x50B7;&#x90E8;&#x4F4D;&#x306B;&#x53CE;&#x675F;&#x3057;&#x305F;&#x3068;&#x304D;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C8;&#x30B3;&#x30EB;&#x306F;&#x3001;&#x7B2C;&#x4E09;&#x9F62;&#x5E7C;&#x866B;&#x30B7;&#x30E7;&#x30A6;&#x30B8;&#x30E7;&#x30A6;&#x30D0;&#x30A8;&#x306E;&#x5E7C;&#x866B;&#x304B;&#x3089;&#x30DE;&#x30AF;&#x30ED;&#x30D5;&#x30A1;&#x30FC;&#x30B8;&#x306E;&#x5358;&#x96E2;&#x3092;&#x8AAC;&#x660E;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30DE;&#x30AF;&#x30ED;&#x30D5;&#x30A1;&#x30FC;&#x30B8;&#x306F;&#x6570;&#x6642;&#x9593;&#x57F9;&#x990A;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x3001;&#x86CD;&#x5149;&#x6A19;&#x8B58;&#x3057;&#x305F;&#x30DE;&#x30AF;&#x30ED;&#x30D5;&#x30A1;&#x30FC;&#x30B8;&#x306F;&#x3001;&#x86CD;&#x5149;&#x30A4;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B8;&#x30F3;&#x30B0;&#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E0;&#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x3066;&#x30B9;&#x30AF;&#x30EA;&#x30FC;&#x30CB;&#x30F3;&#x30B0;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x30B7;&#x30E7;&#x30A6;&#x30B8;&#x30E7;&#x30A6;&#x30D0;&#x30A8;&#x30DE;&#x30AF;&#x30ED;&#x30D5;&#x30A1;&#x30FC;&#x30B8;&#x306E;&#x8ABF;&#x88FD;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x30B9;&#x30AF;&#x30EA;&#x30FC;&#x30CB;&#x30F3;&#x30B0;

&#x679C;&#x8747; plasmatocytes&#xFF0C;&#x4E5F;&#x79F0;&#x4E3A;&#x5DE8;&#x566C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x662F;&#x679C;&#x8747;&#x5148;&#x5929;&#x514D;&#x75AB;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x7684;&#x4E00;&#x90E8;&#x5206;&#xFF0C;&#x4E5F;&#x6709;&#x5728;&#x5F00;&#x53D1;&#x8FC7;&#x7A0B;&#x4E2D;&#x7684;&#x89D2;&#x8272;&#x3002;&#x5728;&#x540E;&#x671F;&#x9636;&#x6BB5;&#x80DA;&#x80CE;&#xFF0C;&#x5B83;&#x662F;&#x53EF;&#x80FD;&#x7684;&#x56FE;&#x50CF;&#x566C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x539F;&#x4F4D;&#x5728;&#x5F00;&#x53D1;&#x671F;&#x95F4;&#xFF0C;&#x4EE5;&#x53CA;&#x4ED6;&#x4EEC;&#x6C47;&#x96C6;&#x5728;&#x7AD9;&#x70B9;&#x7684;&#x4F24;&#x4EBA;&#x3002;&#x6B64;&#x534F;&#x8BAE;&#x63CF;&#x8FF0;&#x4E86;&#x4ECE;&#x7B2C;&#x4E09;&#x5DE8;&#x566C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5206;&#x79BB;&#x9F84;&#x679C;&#x8747;&#x5E7C;&#x866B;&#x3002;&#x5DE8;&#x566C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x53EF;&#x4EE5;&#x57F9;&#x517B;&#x4E86;&#x51E0;&#x4E2A;&#x5C0F;&#x65F6;&#xFF0C;&#x5E76;&#x53EF;&#x4EE5;&#x4F7F;&#x7528;&#x4E00;&#x79CD;&#x8367;&#x5149;&#x6210;&#x50CF;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x5C4F;&#x853D;&#x9057;&#x4F20;&#x7269;&#x8D28;&#x6807;&#x8BB0;&#x7684;&#x5DE8;&#x566C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x3002;

&#x679C;&#x8747;&#x7684;&#x5DE8;&#x566C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5236;&#x5907;&#x548C;&#x7B5B;&#x9009;&#x3002;

Drosophila plasmatocytes, &#xB300; &#xC2DD; &#xC138;&#xD3EC;&#xB85C; &#xC54C;&#xB824;&#xC838; Drosophila &#xD0C0;&#xACE0; &#xB09C; &#xBA74;&#xC5ED; &#xCCB4;&#xACC4;&#xC758; &#xC77C;&#xBD80; &#xC774;&#xBA70; &#xB610;&#xD55C; &#xAC1C;&#xBC1C; &#xD558;&#xB294; &#xB3D9;&#xC548; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xD588;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB2E8;&#xACC4;&#xC758; &#xBC30;&#xC544;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC774;&#xBBF8;&#xC9C0; macrophage &#xB9C8;&#xC774;&#xADF8;&#xB808;&#xC774;&#xC158; &#xAC1C;&#xBC1C; &#xD558;&#xB294; &#xB3D9;&#xC548; &#xBC0F; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8;&#xC758; &#xBD80;&#xC0C1;&#xC5D0; &#xC218;&#xB834; &#xD604;&#xC7A5;&#xC5D0;&#xC11C; &#xAC00;&#xB2A5; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774; &#xD504;&#xB85C;&#xD1A0;&#xCF5C;&#xC5D0; &#xC124;&#xBA85; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xC81C; 3&#xC5D0;&#xC11C; &#xB300; &#xC2DD; &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xACE0;&#xB9BD; &#xD0C8;&#xD53C; &#xD558;&#xB294; &#xCD08;&#xD30C;&#xB9AC; &#xC560;&#xBC8C;&#xB808;. &#xB300; &#xC2DD; &#xC138;&#xD3EC;&#xB294; &#xBA87; &#xC2DC;&#xAC04; &#xB3D9;&#xC548; &#xACBD;&#xC791; &#xC218;&#xC640; &#xD615;&#xAD11; &#xC774;&#xBBF8;&#xC9D5; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xBD99;&#xC77C; &#xB808;&#xC774;&#xBE14;&#xC774; &#xC788;&#xB294; &#xB300; &#xC2DD; &#xC138;&#xD3EC;&#xB97C; &#xC0C1;&#xC601;.

Drosophila macrophage &#xC900;&#xBE44; &#xBC0F; &#xC2EC;&#xC0AC;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Plasmatocitos Drosophila, tambi&#xE9;n conocidas como macr&#xF3;fagos, son parte de la Drosophila sistema inmune innato, y tambi&#xE9;n tienen un papel durante el desarrollo. En la &#xFA;ltima etapa de embriones, es posible que la migraci&#xF3;n de macr&#xF3;fagos de la imagen in situ durante el desarrollo y cuando convergen en los sitios de heridas. Este protocolo describe el aislamiento de los macr&#xF3;fagos del tercer estadio las larvas de Drosophila. Los macr&#xF3;fagos pueden ser cultivadas durante varias horas, y los macr&#xF3;fagos marcadas fluorescentemente pueden ser seleccionados utilizando un sistema de fluorescencia de im&#xE1;genes.

Drosophila macr&#xF3;fagos Preparaci&#xF3;n y Evaluaci&#xF3;n

&#x679C;&#x8747;&#x662F;&#x4E00;&#x5957;&#x65E2;&#x5B9A;&#x7684;&#x5236;&#x5EA6;&#xFF0C;&#x7528;&#x6765;&#x7814;&#x7A76;&#x795E;&#x7ECF;&#x7A81;&#x89E6;&#x53D1;&#x80B2;&#x3001; &#x529F;&#x80FD;&#x548C;&#x53EF;&#x5851;&#x6027;&#x3002;&#x5E7C;&#x866B;&#x795E;&#x7ECF;&#x808C;&#x8089;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x7684;&#x4E00;&#x4E2A;&#x7279;&#x6B8A;&#x4F18;&#x70B9;&#x662F;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x548C;&#x808C;&#x8089;&#x6307;&#x6807;&#x53CA;&#x5176;&#x4E00;&#x81F4;&#x660E;&#x786E;&#x8282;&#x6BB5;&#x6027;&#x5B89;&#x6392;&#x3002;&#x4E8B;&#x5B9E;&#x4E0A;&#xFF0C;&#x679C;&#x8747;&#x4E2D;&#x67A2;&#x795E;&#x7ECF;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x8FD0;&#x52A8;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x7279;&#x522B;&#x597D;&#x7279;&#x5F81;&#x8868;&#x73B0;&#x5728;&#x51FA;&#x8EAB;&#x3001; &#x8EAB;&#x4EFD;&#x3001; &#x5F62;&#x6001;&#x5B66;&#x548C;&#x7535;&#x751F;&#x7406;&#x3001; &#x5E76;&#x5DF2;&#x7528;&#x4E8E;&#x8F74;&#x7A81;&#x8FD0;&#x8F93;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5668;&#x3001; &#x56CA;&#x6CE1;&#x8D29;&#x8FD0;&#x548C;&#x56DE;&#x6536;&#x5229;&#x7528;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x3002;&#x4E3A;&#x4E86;&#x4FC3;&#x8FDB;&#x795E;&#x7ECF;&#x548C;&#x795E;&#x7ECF;&#x7A81;&#x89E6;&#x4F53;&#x5185;&#x7684;&#x9274;&#x5B9A;&#xFF0C;&#x53EF;&#x4EE5;&#x4F7F;&#x7528;&#x7279;&#x5B9A;&#x7684;&#x8367;&#x5149;&#x86CB;&#x767D;&#x6807;&#x8BB0;&#x3002;&#x4F8B;&#x5982;&#xFF0C;UASmCD8 &#x7EFF;&#x8272;&#x8367;&#x5149;&#x86CB;&#x767D; (GFP) &#x548C; UASmyr &#x7EA2;&#x8272;&#x8367;&#x5149;&#x86CB;&#x767D; (RFP) &#x4F18;&#x5148;&#x6807;&#x7B7E;&#x7EC6;&#x80DE;&#x819C;&#xFF0C;&#x800C;&#x5149;&#x76D8;&#x5927; (DLG) &#x63ED;&#x793A;&#x4E86;&#x795E;&#x7ECF;&#x7A81;&#x89E6;&#x3002;Gal4 &#x9A71;&#x52A8;&#x7A0B;&#x5E8F;&#x53EF;&#x7528;&#x4E8E;&#x6240;&#x6709;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143; &#xFF08;&#x4F8B;&#x5982;&#xFF0C;elavGal4&#xFF09; &#x6216;&#x4E13;&#x95E8;&#x6807;&#x7B7E;&#x8FD0;&#x52A8;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143; &#xFF08;&#x4F8B;&#x5982;&#xFF0C;d42Gal4&#xFF09; &#x7684;&#x90FD;&#x76EE;&#x6807;&#x3002;&#x6B64;&#x534F;&#x8BAE;&#x8BF4;&#x660E;&#x679C;&#x8747;&#x5E7C;&#x866B;&#x8981;&#x9694;&#x79BB;&#x7684;&#x6D3B;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6210;&#x50CF;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x7684;&#x5939;&#x5C42;&#x3002;

&#x679C;&#x8747;&#x5E7C;&#x866B;&#x5706;&#x89D2;&#x5236;&#x5907;&#x548C;&#x6210;&#x50CF;&#x7684;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x3002;

Drosophila is an established system in which to study synaptic development, function, and plasticity. A particular advantage of the larval neuromuscular system is its consistent well-defined segmental arrangement of neurons and muscle targets. Indeed, the motor neurons of the Drosophila central nervous system are particularly well characterized in terms of origin, identity, morphology, and electrophysiology, and have been used for studies on axonal transport of organelles, vesicle trafficking, and recycling. To facilitate the identification of nerves and synapses in vivo, specific fluorescent protein markers can be used. For example, UASmCD8-green fluorescent protein (GFP) and UASmyr-red fluorescent protein (RFP) both preferentially label plasma membranes, whereas Discs large (DLG) reveals synapses. Gal4 drivers can be used to target all neurons (e.g., elavGal4) or specifically label motor neurons (e.g., d42Gal4). This protocol describes the dissection of Drosophila larvae to isolate neurons for live cell imaging.

Drosophila larval fillet preparation and imaging of neurons.

Drosophile est un syst&#xE8;me mis en place pour &#xE9;tudier le d&#xE9;veloppement synaptique, la fonction, et la plasticit&#xE9;. Un avantage particulier du syst&#xE8;me neuromusculaire larvaire est sa constante et bien d&#xE9;finie arrangement segmentaire des neurones et des cibles musculaires. En effet, les neurones moteurs du syst&#xE8;me nerveux central chez la drosophile sont particuli&#xE8;rement bien caract&#xE9;ris&#xE9; en termes d&#x26;#39;origine, l&#x26;#39;identit&#xE9;, la morphologie et l&#x26;#39;&#xE9;lectrophysiologie, et ont &#xE9;t&#xE9; utilis&#xE9;s pour les &#xE9;tudes sur le transport axonal des organites, le trafic v&#xE9;siculaire, et le recyclage. Pour faciliter l&#x26;#39;identification des nerfs et des synapses in vivo, des marqueurs sp&#xE9;cifiques de prot&#xE9;ines fluorescentes peut &#xEA;tre utilis&#xE9;. Par exemple, UASmCD8-prot&#xE9;ine fluorescente verte (GFP) et UASmyr-prot&#xE9;ine fluorescente rouge (RFP), les deux membranes plasmiques pr&#xE9;f&#xE9;rentiellement l&#x26;#39;&#xE9;tiquette, alors que les disques de grande taille (DLG) r&#xE9;v&#xE8;le des synapses. Gal4 les conducteurs peuvent &#xEA;tre utilis&#xE9;s pour cibler tous les neurones (par exemple, elavGal4) ou, plus pr&#xE9;cis&#xE9;ment l&#x26;#39;&#xE9;tiquette neurones moteurs (par exemple, d42Gal4). Ce protocole d&#xE9;crit la dissection des larves de drosophile pour isoler les neurones pour l&#x26;#39;imagerie des cellules vivantes.

Pr&#xE9;paration Drosophila Filet larves et d&#x26;#39;imagerie des neurones

Taufliege ist ein etabliertes System, um synaptische Entwicklung, Funktion und Plastizit&auml;t zu untersuchen. Ein besonderer Vorteil des larvalen neuromuskul&auml;ren Systems ist seine konsequente klar definierte segmentale Anordnung der Neuronen und Muskel-Ziele. Tats&auml;chlich den Motor Neuronen des Zentralnervensystems Drosophila zeichnen sich besonders gut in Bezug auf Herkunft, Identit&auml;t, Morphologie und Elektrophysiologie und Studien &uuml;ber axonale Transport von Organellen, Vesikel Menschenhandel und Wiederverwertung verwendet worden. Zur Erleichterung der Identifizierung von Nerven und Synapsen in-vivo k&ouml;nnen bestimmte fluoreszierende Protein-Marker verwendet werden. Z. B. label UASmCD8-gr&uuml;n fluoreszierendes Protein (GFP) und UASmyr-rot fluoreszierende Protein (RFP) beide bevorzugt Plasma Membranen, w&auml;hrend gro&szlig;e Scheiben (DLG) Synapsen offenbart. Gal4-Treiber k&ouml;nnen alle Neuronen (z.B. elavGal4) oder speziell die Etikett-Motoneuronen (z.B. d42Gal4) als Ziel verwendet werden. Dieses Protokoll beschreibt die Pr&auml;paration der Drosophila-Larven, Neuronen f&uuml;r live Cell Imaging zu isolieren.

Taufliege larvalen Filet Vorbereitung und Darstellung von Neuronen.

Drosofila &egrave; un sistema stabilito in cui studiare la plasticit&agrave;, la funzione e lo sviluppo di synaptic. Un particolare vantaggio del sistema neuromuscolare larvale &egrave; sua coerente disposizione segmentale ben definito di neuroni e di muscolo target. Infatti, i motoneuroni del sistema nervoso centrale della drosofila sono particolarmente ben caratterizzati in termini di origine, identit&agrave;, morfologia ed elettrofisiologia e sono stati utilizzati per gli studi sul trasporto assonale di organelli, vescicola traffico e riciclaggio. Per facilitare l&#39;identificazione dei nervi e sinapsi in vivo, marcatori specifici della proteina fluorescente possono essere utilizzati. Per esempio, proteina fluorescente verde-UASmCD8 (GFP) e proteina fluorescente rosso-UASmyr (RFP) sia preferenzialmente etichetta plasma membrane, mentre grandi dischi (DLG) rivela sinapsi. GAL4 driver pu&ograve; essere utilizzato per indirizzare tutti i neuroni (per esempio, elavGal4) o specificamente etichetta motoneuroni (ad esempio, d42Gal4). Questo protocollo descrive la dissezione delle larve di Drosophila per isolare i neuroni per imaging cellulare dal vivo.

Preparazione filetto larvale della drosofila e imaging dei neuroni.

&#x30B7;&#x30E7;&#x30A6;&#x30B8;&#x30E7;&#x30A6;&#x30D0;&#x30A8;&#x306F;&#x3001;&#x30B7;&#x30CA;&#x30D7;&#x30B9;&#x767A;&#x9054;&#x3001;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3001;&#x53EF;&#x5851;&#x6027;&#x3092;&#x7814;&#x7A76;&#x3059;&#x308B;&#x306B;&#x78BA;&#x7ACB;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E0;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x5E7C;&#x866B;&#x306E;&#x795E;&#x7D4C;&#x7B4B;&#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E0;&#x306E;&#x7279;&#x5B9A;&#x306E;&#x5229;&#x70B9;&#x306F;&#x3001;&#x795E;&#x7D4C;&#x7D30;&#x80DE;&#x3084;&#x7B4B;&#x8089;&#x76EE;&#x6A19;&#x306E;&#x4E00;&#x8CAB;&#x6027;&#x306E;&#x3042;&#x308B;&#x660E;&#x78BA;&#x306B;&#x5B9A;&#x7FA9;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x30BB;&#x30B0;&#x30E1;&#x30F3;&#x30C8;&#x306B;&#x914D;&#x7F6E;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x5B9F;&#x969B;&#x306B;&#x3001;&#x30B7;&#x30E7;&#x30A6;&#x30B8;&#x30E7;&#x30A6;&#x30D0;&#x30A8;&#x4E2D;&#x67A2;&#x795E;&#x7D4C;&#x7CFB;&#x306E;&#x904B;&#x52D5;&#x30CB;&#x30E5;&#x30FC;&#x30ED;&#x30F3;&#x306F;&#x3001;&#x7279;&#x306B;&#x8D77;&#x6E90;&#x3001;&#x30A2;&#x30A4;&#x30C7;&#x30F3;&#x30C6;&#x30A3;&#x30C6;&#x30A3;&#x3001;&#x5F62;&#x614B;&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x96FB;&#x6C17;&#x751F;&#x7406;&#x5B66;&#x306E;&#x89B3;&#x70B9;&#x304B;&#x3089;&#x7279;&#x5FB4;&#x3065;&#x3051;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x304A;&#x308A;&#x3001;&#x8EF8;&#x7D22;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x5C0F;&#x5668;&#x5B98;&#x306E;&#x8F38;&#x9001;&#x5C0F;&#x80DE;&#x8F38;&#x9001;&#x3001;&#x30EA;&#x30B5;&#x30A4;&#x30AF;&#x30EB;&#x306E;&#x7814;&#x7A76;&#x306B;&#x4F7F;&#x7528;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002; in vivo&#x3067;&#x306E;&#x795E;&#x7D4C;&#x3068;&#x30B7;&#x30CA;&#x30D7;&#x30B9;&#x306E;&#x8B58;&#x5225;&#x3092;&#x5BB9;&#x6613;&#x306B;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x3001;&#x7279;&#x5B9A;&#x306E;&#x86CD;&#x5149;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x30DE;&#x30FC;&#x30AB;&#x30FC;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x305F;&#x3068;&#x3048;&#x3070;&#x3001;UASmCD8&#x7DD1;&#x8272;&#x86CD;&#x5149;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#xFF08;GFP&#xFF09;&#x3068;UASmyr&#x8D64;&#x8272;&#x86CD;&#x5149;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#xFF08;RFP&#xFF09;&#x306E;&#x4E21;&#x65B9;&#x3092;&#x512A;&#x5148;&#x7684;&#x306B;&#x30E9;&#x30D9;&#x30EB;&#x306E;&#x539F;&#x5F62;&#x8CEA;&#x819C;&#x3001;&#x5927;&#x898F;&#x6A21;&#x306A;&#x30C7;&#x30A3;&#x30B9;&#x30AF;&#x306F;&#x3001;&#xFF08;DLG&#xFF09;&#x30B7;&#x30CA;&#x30D7;&#x30B9;&#x3092;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x3059;&#x308B;&#x4E00;&#x65B9;&#x3002; GAL4&#x306E;&#x30C9;&#x30E9;&#x30A4;&#x30D0;&#x306F;&#x3059;&#x3079;&#x3066;&#x306E;&#x30CB;&#x30E5;&#x30FC;&#x30ED;&#x30F3;&#xFF08;&#x4F8B;&#x3048;&#x3070;&#x3001;elavGal4&#xFF09;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x7279;&#x306B;&#x30E9;&#x30D9;&#x30EB;&#x904B;&#x52D5;&#x30CB;&#x30E5;&#x30FC;&#x30ED;&#x30F3;&#xFF08;&#x4F8B;&#x3048;&#x3070;&#x3001;d42Gal4&#xFF09;&#x3092;&#x5BFE;&#x8C61;&#x306B;&#x4F7F;&#x7528;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C8;&#x30B3;&#x30EB;&#x306F;&#x3001;&#x751F;&#x7D30;&#x80DE;&#x30A4;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B8;&#x30F3;&#x30B0;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x795E;&#x7D4C;&#x7D30;&#x80DE;&#x3092;&#x5358;&#x96E2;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x3001;&#x30B7;&#x30E7;&#x30A6;&#x30B8;&#x30E7;&#x30A6;&#x30D0;&#x30A8;&#x306E;&#x5E7C;&#x866B;&#x306E;&#x89E3;&#x5256;&#x3092;&#x8AAC;&#x660E;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

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&#xCD08;&#xD30C;&#xB9AC;&#xB294; &#xC2DC; &#xB0C5; &#xC2A4; &#xAC1C;&#xBC1C;, &#xAE30;&#xB2A5;, &#xBC0F;&#xAC00; &#xC18C;&#xC131;&#xC744; &#xC5F0;&#xAD6C; &#xD558;&#xB294; &#xC124;&#xB9BD;&#xB41C; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C;. &#xC560;&#xBC8C;&#xB808; &#xC2E0;&#xACBD; &#xADFC;&#xC721; &#xD559; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C;&#xC758; &#xD2B9;&#xC815; &#xC7A5;&#xC810;&#xC740; &#xC2E0;&#xACBD; &#xBC0F; &#xADFC;&#xC721; &#xB300;&#xC0C1;&#xC758; &#xADF8;&#xAC83;&#xC758; &#xC77C;&#xAD00; &#xB41C; &#xC798; &#xC815;&#xC758; &#xB41C; segmental &#xBC30;&#xC5F4;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC2E4;&#xC81C;&#xB85C;, &#xCD08;&#xD30C;&#xB9AC; &#xC911;&#xC559; &#xC2E0;&#xACBD; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C;&#xC758; &#xBAA8;&#xD130; &#xB274;&#xB7F0; &#xC804;&#xAE30; &#xC0DD;&#xB9AC;&#xD559;, &#xD615;&#xD0DC;&#xD559;, &#xC815;&#xCCB4;&#xC131; &#xAE30;&#xC6D0; &#xC870;&#xAC74;&#xACFC; &#xD2B9;&#xC9D5; &#xD2B9;&#xD788; &#xC798; &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; organelles, &#xAE30; &#xB9E4;&#xB9E4;, &#xC7AC;&#xD65C;&#xC6A9;&#xC758; axonal &#xC804;&#xC1A1;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC0AC;&#xC6A9;. &#xC2E0;&#xACBD; &#xC2DC; &#xB0C5; &#xC2A4; in vivo&#xC758; &#xC2DD;&#xBCC4;&#xC744; &#xC6A9;&#xC774; &#xD558; &#xAC8C; &#xD558;&#xB824;&#xBA74; &#xD2B9;&#xC815; &#xD615;&#xAD11; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xB9C8;&#xCEE4;&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC608;&#xB97C; &#xB4E4;&#xC5B4;, UASmCD8-&#xB179;&#xC0C9; &#xD615;&#xAD11; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; (GFP)&#xC640; UASmyr-&#xB808;&#xB4DC; &#xD615;&#xAD11; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; (RFP) &#xC6B0;&#xC120;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xB808;&#xC774;&#xBE14;&#xC744; &#xD50C;&#xB77C;&#xC988;&#xB9C8; &#xBA64;&#xBE0C;&#xB808;&#xC778; &#xB514;&#xC2A4;&#xD06C; &#xB300;&#xD615; (DLG) &#xBC1D;&#xD600; &#xB0C5; &#xBC18;&#xBA74;. Gal4 &#xB4DC;&#xB77C;&#xC774;&#xBC84;&#xB294; &#xBAA8;&#xB4E0; &#xC2E0;&#xACBD; (&#xC608;: elavGal4) &#xB610;&#xB294; &#xBA85;&#xD655; &#xD558; &#xAC8C; &#xB808;&#xC774;&#xBE14; &#xBAA8;&#xD130; &#xB274;&#xB7F0; (&#xC608;: d42Gal4)&#xC744; &#xB300;&#xC0C1;&#xC73C;&#xB85C; &#xC0AC;&#xC6A9;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774; &#xD504;&#xB85C;&#xD1A0;&#xCF5C; &#xB77C;&#xC774;&#xBE0C; &#xC140; &#xC774;&#xBBF8;&#xC9D5;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC2E0;&#xACBD; &#xBD84;&#xB9AC;&#xB97C; &#xCD08;&#xD30C;&#xB9AC; &#xC560;&#xBC8C;&#xB808;&#xC758; &#xD574; &#xBD80;&#xB97C; &#xC124;&#xBA85; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xCD08;&#xD30C;&#xB9AC; &#xC560;&#xBC8C;&#xB808; &#xD544;&#xB81B; &#xC900;&#xBE44; &#xBC0F; &#xC2E0;&#xACBD; &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xC601;&#xC0C1;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Drosophila es un sistema establecido para estudiar el desarrollo sin&#xE1;ptico, la funci&#xF3;n y plasticidad. Una ventaja particular del sistema neuromuscular larval es su consistente bien definida disposici&#xF3;n segmentaria de las neuronas y objetivos musculares. De hecho, las neuronas motoras del sistema nervioso central de Drosophila son particularmente bien caracterizado en t&#xE9;rminos de origen, la identidad, la morfolog&#xED;a y la electrofisiolog&#xED;a, y se han utilizado para los estudios sobre el transporte axonal de los org&#xE1;nulos, tr&#xE1;fico vesicular, y el reciclaje. Para facilitar la identificaci&#xF3;n de los nervios y las sinapsis in vivo, marcadores espec&#xED;ficos de prote&#xED;nas fluorescentes puede ser utilizado. Por ejemplo, UASmCD8-prote&#xED;na verde fluorescente (GFP) y UASmyr-prote&#xED;na fluorescente roja (RFP), ambos preferentemente las membranas plasm&#xE1;ticas de la etiqueta, mientras que los discos grandes (DLG) revela las sinapsis. Gal4 los conductores pueden ser utilizados para desarrollar todas las neuronas (por ejemplo, elavGal4) o espec&#xED;ficamente de la etiqueta de las neuronas motoras (por ejemplo, d42Gal4). Este protocolo describe la disecci&#xF3;n de las larvas de Drosophila para aislar a las neuronas de im&#xE1;genes de c&#xE9;lulas vivas.

Drosophila larvas preparaci&#xF3;n de filetes y de imagen de las neuronas

&#x867D;&#x7136;&#x8BB8;&#x591A;&#x679C;&#x8747;&#x6D3B;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6210;&#x50CF;&#x6280;&#x672F;&#x8FD8;&#x7528;&#x4E8E;&#x66F4;&#x5927;&#x793E;&#x4F1A;&#x7684;&#x5DE5;&#x4F5C;&#x5728;&#x5176;&#x4ED6;&#x578B;&#x53F7;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x3001; &#x5B66;&#x4E60;&#x65B9;&#x9762;&#x4FDD;&#x6301;&#x7684;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x8FD8;&#x6D3B;&#x7740;&#xFF0C;&#x751F;&#x6D3B;&#x98DE;&#x7EC4;&#x7EC7;&#x793C;&#x7269;&#x552F;&#x4E00;&#x56F0;&#x96BE;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x751F;&#x7269;&#x5B66;&#x5BB6;&#x4ECB;&#x7ECD;&#x8367;&#x5149;&#x63A2;&#x9488;&#xFF0C;&#x548C;&#x900F;&#x8FC7;&#x539A;&#x539A;&#x7684;&#x3001; &#x6726;&#x80E7;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8D28;&#x7684;&#x5F71;&#x50CF;&#x3002;&#x8FD9;&#x7BC7;&#x6587;&#x7AE0;&#x6982;&#x8FF0;&#x4E86;&#x9002;&#x5408;&#x7684;&#x4E3B;&#x8981;&#x7EC4;&#x7EC7;&#x7C7B;&#x578B;&#xFF0C;&#x7814;&#x7A76;&#x7531;&#x5B9A;&#x65F6;&#x6444;&#x5F71;&#x548C;&#x4E0D;&#x540C;&#x7684;&#x65B9;&#x6CD5;&#x6765;&#x4FDD;&#x6301;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x3002;&#x5B83;&#x63CF;&#x8FF0;&#x4E86;&#x6700;&#x9002;&#x5408;&#x4E8E;&#x4EE5;&#x4E0B;&#x7684;&#x9057;&#x4F20;&#x7269;&#x8D28;&#x6807;&#x8BB0;&#x5206;&#x5B50;&#x5728;&#x5B9E;&#x65F6;&#x5728;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7EC4;&#x7EC7;&#x4E2D;&#x7684;&#x5206;&#x5E03;&#x53D8;&#x5316;&#x7684;&#x5404;&#x79CD;&#x5F71;&#x50CF;&#x548C;&#x76F8;&#x5173;&#x6280;&#x672F;&#x3002;&#x6210;&#x50CF;&#xFF0C;&#x4E00;&#x822C;&#x60C5;&#x51B5;&#x4E0B;&#xFF0C;&#x662F;&#x4E00;&#x4E2A;&#x53D1;&#x5C55;&#x8FC5;&#x901F;&#x7684;&#x5B66;&#x79D1;&#xFF0C;&#x5E76;&#x80FD;&#x591F;&#x5927;&#x5927;&#x5EF6;&#x957F;&#x679C;&#x8747;&#x7EC4;&#x7EC7;&#x7684;&#x6D3B;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6210;&#x50CF;&#x80FD;&#x591F;&#x505A;&#x5230;&#x6210;&#x50CF;&#x6280;&#x672F;&#x7684;&#x6700;&#x65B0;&#x8FDB;&#x5C55;&#x3002;&#x53EA;&#x8981;&#x6709;&#x53EF;&#x80FD;&#xFF0C;&#x8FD9;&#x7BC7;&#x6587;&#x7AE0;&#x5305;&#x62EC;&#x6280;&#x672F;&#x7684;&#x6700;&#x65B0;&#x53D1;&#x5C55;&#xFF0C;&#x5E76;&#x8BA8;&#x8BBA;&#x4E86;&#x5728;&#x6210;&#x50CF;&#x53EF;&#x5BF9;&#x5229;&#x7528;&#x679C;&#x8747;&#x7814;&#x7A76;&#x4EA7;&#x751F;&#x5F71;&#x54CD;&#x7684;&#x65B9;&#x6CD5;&#x4ECA;&#x540E;&#x53EF;&#x80FD;&#x7684;&#x53D1;&#x5C55;&#x3002;

&#x4F4F;&#x5728;&#x9ED1;&#x8179;&#x679C;&#x8747;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6210;&#x50CF;&#x3002;

Although many of the techniques of live cell imaging in Drosophila melanogaster are also used by the greater community of cell biologists working on other model systems, studying living fly tissues presents unique difficulties with regard to keeping the cells alive, introducing fluorescent probes, and imaging through thick, hazy cytoplasm. This article outlines the major tissue types amenable to study by time-lapse cinematography and different methods for keeping the cells alive. It describes various imaging and associated techniques best suited to following changes in the distribution of fluorescently labeled molecules in real time in these tissues. Imaging, in general, is a rapidly developing discipline, and recent advances in imaging technology are able to greatly extend what can be achieved with live cell imaging of Drosophila tissues. As far as possible, this article includes the latest technical developments and discusses likely future developments in imaging methods that could have an impact on research using Drosophila.

Live cell imaging in Drosophila melanogaster.

Bien que la plupart des techniques de l&#x26;#39;imagerie des cellules vivantes chez Drosophila melanogaster sont &#xE9;galement utilis&#xE9;s par la plus grande communaut&#xE9; de biologistes cellulaires qui travaillent sur des syst&#xE8;mes mod&#xE8;les d&#x26;#39;autres, l&#x26;#39;&#xE9;tude des tissus vivants mouche pr&#xE9;sente des difficult&#xE9;s uniques en ce qui concerne la tenue des cellules vivantes, l&#x26;#39;introduction de sondes fluorescentes, et l&#x26;#39;imagerie par d&#x26;#39;&#xE9;paisseur, le cytoplasme brumeux. Cet article d&#xE9;crit les principaux types de tissus qui se pr&#xEA;tent &#xE0; l&#x26;#39;&#xE9;tude par time-lapse cin&#xE9;matographie et diff&#xE9;rentes m&#xE9;thodes pour maintenir les cellules en vie. Il d&#xE9;crit les divers imagerie et les techniques connexes qui conviennent le mieux aux changements suivants dans la distribution des mol&#xE9;cules marqu&#xE9;es par fluorescence en temps r&#xE9;el dans ces tissus. Imagerie, en g&#xE9;n&#xE9;ral, est une discipline qui se d&#xE9;veloppe rapidement, et les progr&#xE8;s r&#xE9;cents dans la technologie d&#x26;#39;imagerie sont en mesure de prolonger consid&#xE9;rablement ce qui peut &#xEA;tre r&#xE9;alis&#xE9; avec imagerie des cellules vivantes des tissus chez la drosophile. Autant que possible, cet article inclut les derniers d&#xE9;veloppements techniques et discute sans doute l&#x26;#39;&#xE9;volution future de m&#xE9;thodes d&#x26;#39;imagerie qui pourraient avoir un impact sur la recherche en utilisant la drosophile.

Vivre d&#x26;#39;imagerie cellulaire chez Drosophila melanogaster

Obwohl viele der Techniken live Cell Imaging in Drosophila Melanogaster auch, durch die Gro&szlig;gemeinde Zelle Biologen arbeiten an andere Modellsysteme verwendet werden, lebende fliegen Gewebe pr&auml;sentiert einzigartige Schwierigkeiten in Bezug auf die Zellen am Leben, studieren Einf&uuml;hrung fluoreszierende Sonden und imaging durch Dicke, tr&uuml;be Zytoplasma. Dieser Artikel beschreibt die wichtigsten Gewebearten geneigt sein von Zeitraffer-Film und verschiedene Methoden f&uuml;r die Zellen lebendig zu studieren. Es beschreibt die verschiedenen bildgebende und die damit verbundenen Techniken, die am besten auf folgende Ver&auml;nderungen in der Verteilung der Leuchtstoff beschriftetem Molek&uuml;le in Echtzeit in diese Gewebe. Imaging, im Allgemeinen ist eine sich rasch entwickelnde Disziplin und j&uuml;ngste Fortschritte in der imaging-Technologie sind in der Lage, erheblich zu erweitern, was mit Leben-Zelle Darstellung der Taufliege Gewebe erreicht werden kann. Soweit wie m&ouml;glich dieser Artikel enth&auml;lt die neuesten technischen Entwicklungen und er&ouml;rtert voraussichtlichen Entwicklung in Sicherungsmethoden, die Forschung unter Verwendung von Drosophila auswirken k&ouml;nnte.

Leben Sie Zelle Darstellung in Drosophila Melanogaster.

Sebbene molte delle tecniche di imaging cellulare live in Drosophila melanogaster sono utilizzati anche per la grande comunit&agrave; dei biologi cellula lavorando su altri sistemi modello, studiando vivente tessuti fly presenta unica difficolt&agrave; per quanto riguarda mantenendo le cellule in vive, l&#39;introduzione di sonde fluorescenti e imaging attraverso il citoplasma denso, nebbioso. In questo articolo sono illustrati i tipi di tessuto principale assoggettabile a studiare fotografia time-lapse e diversi metodi per mantenere in vita le cellule. Esso descrive le varie tecniche di imaging e associate pi&ugrave; adatte ai seguenti cambiamenti nella distribuzione delle molecole fluorescente contrassegnati in tempo reale in questi tessuti. Imaging, in generale, &egrave; una disciplina in rapido sviluppo, e i recenti progressi nella tecnologia di imaging sono in grado di estendere notevolmente la cosa pu&ograve; essere realizzato con imaging diretta delle cellule dei tessuti della drosofila. Per quanto possibile, in questo articolo include i pi&ugrave; recenti sviluppi tecnici e discute probabili sviluppi futuri in imaging metodi che potrebbero avere un impatto sulla ricerca usando della drosofila.

Live imaging cellulare in Drosophila melanogaster.

&#x30AD;&#x30A4;&#x30ED;&#x30B7;&#x30E7;&#x30A6;&#x30B8;&#x30E7;&#x30A6;&#x30D0;&#x30A8;&#x306E;&#x30E9;&#x30A4;&#x30D6;&#x30BB;&#x30EB;&#x30A4;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B8;&#x30F3;&#x30B0;&#x306E;&#x624B;&#x6CD5;&#x306E;&#x591A;&#x304F;&#x306F;&#x307E;&#x305F;&#x3001;&#x751F;&#x304D;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x30CF;&#x30A8;&#x306E;&#x7D44;&#x7E54;&#x3092;&#x52C9;&#x5F37;&#x3059;&#x308B;&#x86CD;&#x5149;&#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30D6;&#x3092;&#x5C0E;&#x5165;&#x3057;&#x3001;&#x7D30;&#x80DE;&#x304C;&#x751F;&#x304D;&#x3066;&#x7DAD;&#x6301;&#x306B;&#x95A2;&#x3057;&#x3066;&#x56FA;&#x6709;&#x306E;&#x96E3;&#x3057;&#x3055;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3001;&#x4ED6;&#x306E;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E0;&#x306B;&#x53D6;&#x308A;&#x7D44;&#x3093;&#x3067;&#x7D30;&#x80DE;&#x751F;&#x7269;&#x5B66;&#x8005;&#x306E;&#x5927;&#x304D;&#x306A;&#x30B3;&#x30DF;&#x30E5;&#x30CB;&#x30C6;&#x30A3;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x4F7F;&#x7528;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x304C;&#x3001;&#x30A4;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B8;&#x30F3;&#x30B0;&#x3092;&#x901A;&#x3058;&#x3066;&#x3001;&#x539A;&#x3055;&#x3001;&#x304B;&#x3059;&#x3093;&#x3067;&#x7D30;&#x80DE;&#x8CEA;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x8CC7;&#x6599;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x6642;&#x9593;&#x7D4C;&#x904E;&#x306E;&#x6620;&#x753B;&#x64AE;&#x5F71;&#x3001;&#x7D30;&#x80DE;&#x304C;&#x751F;&#x304D;&#x3066;&#x7DAD;&#x6301;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x7570;&#x306A;&#x308B;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3067;&#x52C9;&#x5F37;&#x3059;&#x308B;&#x5F93;&#x9806;&#x4E3B;&#x8981;&#x306A;&#x7D44;&#x7E54;&#x306E;&#x7A2E;&#x985E;&#x3092;&#x6982;&#x8AAC;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x305D;&#x308C;&#x306F;&#x6700;&#x9AD8;&#x306E;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x7D44;&#x7E54;&#x30EA;&#x30A2;&#x30EB;&#x30BF;&#x30A4;&#x30E0;&#x3067;&#x86CD;&#x5149;&#x6A19;&#x8B58;&#x5206;&#x5B50;&#x306E;&#x5206;&#x5E03;&#x306E;&#x5909;&#x5316;&#x3092;&#x4EE5;&#x4E0B;&#x306B;&#x9069;&#x3057;&#x305F;&#x69D8;&#x3005;&#x306A;&#x30A4;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B8;&#x30F3;&#x30B0;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x4ED8;&#x968F;&#x3059;&#x308B;&#x30C6;&#x30AF;&#x30CB;&#x30C3;&#x30AF;&#x306B;&#x3064;&#x3044;&#x3066;&#x8AAC;&#x660E;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x4E00;&#x822C;&#x7684;&#x306A;&#x306E;&#x30A4;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B8;&#x30F3;&#x30B0;&#x306F;&#x200B;&#x200B;&#x3001;&#x6025;&#x901F;&#x306B;&#x767A;&#x5C55;&#x898F;&#x5F8B;&#x3067;&#x3042;&#x308A;&#x3001;&#x30A4;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B8;&#x30F3;&#x30B0;&#x6280;&#x8853;&#x306E;&#x6700;&#x8FD1;&#x306E;&#x9032;&#x6B69;&#x306F;&#x3001;&#x30B7;&#x30E7;&#x30A6;&#x30B8;&#x30E7;&#x30A6;&#x30D0;&#x30A8;&#x306E;&#x7D44;&#x7E54;&#x306E;&#x751F;&#x7D30;&#x80DE;&#x30A4;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B8;&#x30F3;&#x30B0;&#x3092;&#x9054;&#x6210;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x308B;&#x3082;&#x306E;&#x304C;&#x5927;&#x5E45;&#x306B;&#x62E1;&#x5F35;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x53EF;&#x80FD;&#x306A;&#x9650;&#x308A;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x8A18;&#x4E8B;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x6700;&#x65B0;&#x306E;&#x6280;&#x8853;&#x958B;&#x767A;&#x304C;&#x542B;&#x307E;&#x308C;&#x3066;&#x304A;&#x308A;&#x3001;&#x30B7;&#x30E7;&#x30A6;&#x30B8;&#x30E7;&#x30A6;&#x30D0;&#x30A8;&#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x305F;&#x7814;&#x7A76;&#x306B;&#x5F71;&#x97FF;&#x3092;&#x53CA;&#x307C;&#x3059;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x304C;&#x3042;&#x308B;&#x30A4;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B8;&#x30F3;&#x30B0;&#x6CD5;&#x306E;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x304C;&#x9AD8;&#x3044;&#x5C06;&#x6765;&#x306E;&#x767A;&#x5C55;&#x306B;&#x3064;&#x3044;&#x3066;&#x8AAC;&#x660E;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x30AD;&#x30A4;&#x30ED;&#x30B7;&#x30E7;&#x30A6;&#x30B8;&#x30E7;&#x30A6;&#x30D0;&#x30A8;&#x306E;&#x30E9;&#x30A4;&#x30D6;&#x30BB;&#x30EB;&#x30A4;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B8;&#x30F3;&#x30B0;

&#xBE44;&#xB85D; &#xB9CE;&#xC740; Drosophila melanogaster&#xC758; &#xB77C;&#xC774;&#xBE0C; &#xC140; &#xC774;&#xBBF8;&#xC9D5; &#xAE30;&#xBC95; &#xB610;&#xD55C; &#xC138;&#xD3EC; &#xC0DD;&#xBB3C;&#xD559; &#xACF5;&#xBD80; &#xC0DD;&#xD65C; &#xD50C;&#xB77C;&#xC774; &#xD2F0;&#xC288; &#xC120;&#xBB3C; &#xB3C5;&#xD2B9;&#xD55C; &#xC5B4;&#xB824;&#xC6C0; &#xC0B4;&#xC544;&#xC788;&#xB294; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0; &#xAD00;&#xD574;&#xC11C;&#xB294; &#xB2E4;&#xB978; &#xBAA8;&#xB378; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C;&#xC5D0; &#xB354; &#xD070; &#xACF5;&#xB3D9;&#xCCB4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558;&#xB294; &#xD615;&#xAD11; &#xD504;&#xB85C;&#xBE0C;&#xB97C; &#xC18C;&#xAC1C; &#xD558; &#xACE0; &#xB450;&#xAED8;, &#xD5F7;&#xAC08;&#xB9AC;&#xB294; &#xC138;&#xD3EC;&#xC9C8;&#xC744; &#xD1B5;&#xD574; &#xC774;&#xBBF8;&#xC9D5;. &#xC774; &#xBB38;&#xC11C;&#xC5D0;&#xC11C;&#xB294; &#xC8FC;&#xC694; &#xC870;&#xC9C1; &#xC720;&#xD615;&#xC744; &#xC758;&#xBB34;&#xAC00; &#xC2DC;&#xAC04; &#xACBD;&#xACFC; &#xCD2C;&#xC601; &#xBC0F; &#xC138;&#xD3EC;&#xB97C; &#xC0B4;&#xB824; &#xB2E4;&#xC591; &#xD55C; &#xBC29;&#xBC95;&#xC73C;&#xB85C; &#xACF5;&#xBD80;&#xB97C; &#xC124;&#xBA85;. &#xB2E4;&#xC74C; &#xBCC0;&#xD654; &#xC2E4;&#xC2DC;&#xAC04;&#xC73C;&#xB85C; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xC870;&#xC9C1;&#xC5D0; &#xB193;&#xC5EC;&#xC788;&#xB294;&#xC9C0; &#xB808;&#xC774;&#xBE14;&#xC774; &#xD45C;&#xC2DC; &#xB41C; &#xBD84;&#xC790;&#xC758; &#xBC30;&#xD3EC;&#xC5D0; &#xAC00;&#xC7A5; &#xC801;&#xD569; &#xD55C; &#xB2E4;&#xC591; &#xD55C; &#xC774;&#xBBF8;&#xC9C0; &#xBC0F; &#xAD00;&#xB828; &#xAE30;&#xC220;&#xC744; &#xC124;&#xBA85; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xAE09;&#xC18D; &#xD558; &#xAC8C; &#xBC1C;&#xC804; &#xBD84;&#xC57C;&#xB294; &#xC77C;&#xBC18;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C;, &#xC774;&#xBBF8;&#xC9D5;, &#xBC0F; &#xC774;&#xBBF8;&#xC9D5; &#xAE30;&#xC220;&#xC5D0; &#xCD5C;&#xADFC;&#xC758; &#xC9C4;&#xBCF4;&#xB294; &#xD06C;&#xAC8C; Drosophila &#xC870;&#xC9C1;&#xC758; &#xB77C;&#xC774;&#xBE0C; &#xC138;&#xD3EC; &#xC774;&#xBBF8;&#xC9D5;&#xC73C;&#xB85C; &#xC5BB;&#xC744; &#xC218; &#xC788;&#xB294; &#xD655;&#xC7A5;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xAE4C;&#xC9C0; &#xAC00;&#xB2A5;&#xD55C;,&#xC774; &#xBB38;&#xC11C;&#xB294; &#xCD5C;&#xC2E0; &#xAE30;&#xC220; &#xAC1C;&#xBC1C;&#xC744; &#xD3EC;&#xD568; &#xD558; &#xACE0; &#xAC00;&#xB2A5;&#xC131;&#xC774; &#xD5A5;&#xD6C4; &#xAC1C;&#xBC1C; &#xC774;&#xBBF8;&#xC9D5; &#xCD08;&#xD30C;&#xB9AC;&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xC5D0; &#xC601;&#xD5A5;&#xC744; &#xC904; &#xC218; &#xC788;&#xB294; &#xBC29;&#xBC95;&#xC5D0; &#xC124;&#xBA85; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Drosophila melanogaster&#xC5D0; &#xC140; &#xC601;&#xC0C1; &#xB77C;&#xC774;&#xBE0C;.

Aunque muchas de las t&#xE9;cnicas de im&#xE1;genes de c&#xE9;lulas vivas en la Drosophila melanogaster tambi&#xE9;n son utilizados por la gran comunidad de bi&#xF3;logos celulares que trabajan en otros sistemas modelo, el estudio de los tejidos vivos mosca presenta dificultades particulares con respecto a mantener las c&#xE9;lulas vivas, la introducci&#xF3;n de sondas fluorescentes, y las im&#xE1;genes a trav&#xE9;s de citoplasma gruesa y brumosa. En este art&#xED;culo se describen los principales tipos de tejidos susceptibles de estudio por la cinematograf&#xED;a de lapso de tiempo y diferentes m&#xE9;todos para mantener las c&#xE9;lulas vivas. Se describen diversos im&#xE1;genes y las t&#xE9;cnicas asociadas que mejor se adapte a los cambios siguientes en la distribuci&#xF3;n de mol&#xE9;culas marcadas fluorescentemente en tiempo real en estos tejidos. Im&#xE1;genes, en general, es una disciplina en r&#xE1;pido desarrollo, y los &#xFA;ltimos avances en tecnolog&#xED;a de imagen son capaces de extender en gran medida lo que se puede lograr con im&#xE1;genes de c&#xE9;lulas vivas de los tejidos de Drosophila. Como medida de lo posible, este art&#xED;culo incluye los &#xFA;ltimos adelantos t&#xE9;cnicos y discute las posibles tendencias futuras en los m&#xE9;todos de imagen que podr&#xED;an tener un impacto en la investigaci&#xF3;n con Drosophila.

En vivo im&#xE1;genes de c&#xE9;lulas en la mosca Drosophila melanogaster

MRNA localizzata fornisce l&#39;espressione della proteina spaziali e temporali essenziale per la fisiologia e lo sviluppo delle cellule. Per esplorare i meccanismi coinvolto, notevole sforzo &egrave; stato speso nella creazione di metodi nuovi e migliorati per la visualizzazione di mRNA. Qui, si discute di come queste tecniche hanno ampliato la nostra comprensione della localizzazione intracellulare di mRNA in una variet&agrave; di organismi. Oltre alla maggiore facilit&agrave; e specificit&agrave; di rilevazione in tessuto fisso, metodi di ibridazione in situ consentono ora verifica della distribuzione di mRNA a livello ultrastrutturale con microscopia elettronica. Pi&ugrave; significativamente, metodi per seguendo il movimento del mRNA in cellule viventi sono ora in uso diffuso. Questi includono l&#39;introduzione delle trascrizioni etichette dal microinjection, metodi di ibridazione basata utilizzando sonde antisense etichette e metodi complementari transgenici per il tagging mRNAs endogeno utilizzando componenti del batteriofago. Queste innovazioni tecniche sono ora essere accoppiate con metodi di Super-risoluzione microscopia chiara e la promessa di rivoluzionare la nostra comprensione delle dinamiche e la complessit&agrave; del meccanismo molecolare della localizzazione di mRNA.

Rendendo il messaggio chiaro: visualizzare la localizzazione di mRNA.

&#x672C;&#x5730;&#x5316;&#x7684; mRNA &#x63D0;&#x4F9B;&#x4E86;&#x7A7A;&#x95F4;&#x548C;&#x65F6;&#x95F4;&#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#x8868;&#x8FBE;&#x7EC6;&#x80DE;&#x53D1;&#x80B2;&#x548C;&#x751F;&#x7406;&#x7684;&#x5173;&#x952E;&#x3002;&#x63A2;&#x7D22;&#x673A;&#x5236;&#x5728;&#x5EFA;&#x7ACB;&#x65B0;&#x7684;&#x548C;&#x6539;&#x8FDB;&#x7684;&#x53EF;&#x89C6;&#x5316;&#x8868;&#x8FBE;&#x65B9;&#x6CD5;&#x82B1;&#x4E86;&#x6D89;&#x53CA;&#x76F8;&#x5F53;&#x5927;&#x7684;&#x52AA;&#x529B;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x5C06;&#x8BA8;&#x8BBA;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x6280;&#x672F;&#x5982;&#x4F55;&#x6269;&#x5C55;&#x6211;&#x4EEC;&#x5BF9;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5185; mRNA &#x5B9A;&#x4F4D;&#x5728;&#x751F;&#x7269;&#x591A;&#x6837;&#x6027;&#x7684;&#x7406;&#x89E3;&#x3002;&#x9664;&#x4E86;&#x589E;&#x5F3A;&#x6613;&#x7528;&#x6027;&#x548C;&#x7279;&#x5F02;&#x6027;&#x7684;&#x56FA;&#x5B9A;&#x7EC4;&#x7EC7;&#x4E2D;&#x68C0;&#x6D4B;&#xFF0C;&#x539F;&#x4F4D;&#x6742;&#x4EA4;&#x65B9;&#x6CD5;&#x73B0;&#x5728;&#x542F;&#x7528; mRNA &#x5206;&#x5E03;&#x5728;&#x7535;&#x955C;&#x8D85;&#x5FAE;&#x7ED3;&#x6784;&#x4E00;&#x7EA7;&#x7684;&#x8003;&#x8BD5;&#x3002;&#x6700;&#x91CD;&#x8981;&#x7684;&#x662F;&#xFF0C;&#x73B0;&#x5728;&#x4E4B;&#x540E;&#x7684; mRNA &#x5728;&#x6D3B;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E2D;&#x79FB;&#x52A8;&#x7684;&#x65B9;&#x6CD5;&#x88AB;&#x5E7F;&#x6CDB;&#x91C7;&#x7528;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x63AA;&#x65BD;&#x5305;&#x62EC;&#x6807;&#x8BB0;&#x8A8A;&#x672C;&#x4ECB;&#x7ECD;&#x663E;&#x5FAE;&#x6CE8;&#x5C04;&#x6CD5;&#xFF0C;&#x6839;&#x636E;&#x6742;&#x4EA4;&#x65B9;&#x6CD5;&#x6807;&#x8BB0;&#x4F7F;&#x7528;&#x566C;&#x83CC;&#x4F53;&#x7EC4;&#x4EF6;&#x7684;&#x5185;&#x6E90;&#x6027;&#x5206;&#x6CCC;&#x4F7F;&#x7528;&#x6807;&#x8BB0;&#x7684;&#x53CD;&#x4E49;&#x63A2;&#x9488;&#x548C;&#x8F6C;&#x57FA;&#x56E0;&#x65B9;&#x6CD5;&#x7684;&#x4F18;&#x52BF;&#x4E92;&#x8865;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x6280;&#x672F;&#x521B;&#x65B0;&#x90FD;&#x88AB;&#x52A0;&#x4E0A;&#x73B0;&#x5728;&#x8D85;&#x5206;&#x8FA8;&#x5149;&#x955C;&#x65B9;&#x6CD5;&#x548C;&#x627F;&#x8BFA;&#xFF0C;&#x4F7F;&#x6211;&#x4EEC;&#x4E86;&#x89E3;&#x7684;&#x52A8;&#x6001;&#x548C;&#x590D;&#x6742;&#x6027;&#x7684; mRNA &#x5B9A;&#x4F4D;&#x7684;&#x5206;&#x5B50;&#x673A;&#x5236;&#x53D1;&#x751F;&#x9769;&#x547D;&#x6027;&#x53D8;&#x5316;&#x3002;

&#x6E05;&#x9664;&#x90AE;&#x4EF6;&#xFF1A; &#x53EF;&#x89C6;&#x5316; mRNA &#x672C;&#x5730;&#x5316;&#x3002;

Localized mRNA provides spatial and temporal protein expression essential to cell development and physiology. To explore the mechanisms involved, considerable effort has been spent in establishing new and improved methods for visualizing mRNA. Here, we discuss how these techniques have extended our understanding of intracellular mRNA localization in a variety of organisms. In addition to increased ease and specificity of detection in fixed tissue, in situ hybridization methods now enable examination of mRNA distribution at the ultrastructural level with electron microscopy. Most significantly, methods for following the movement of mRNA in living cells are now in widespread use. These include the introduction of labeled transcripts by microinjection, hybridization based methods using labeled antisense probes and complementary transgenic methods for tagging endogenous mRNAs using bacteriophage components. These technical innovations are now being coupled with super-resolution light microscopy methods and promise to revolutionize our understanding of the dynamics and complexity of the molecular mechanism of mRNA localization.

Making the message clear: visualizing mRNA localization.

ARNm localis&#xE9; fournit l&#x26;#39;expression des prot&#xE9;ines spatiale et temporelle essentielle au d&#xE9;veloppement et physiologie cellulaire. Pour explorer les m&#xE9;canismes impliqu&#xE9;s, des efforts consid&#xE9;rables ont &#xE9;t&#xE9; consacr&#xE9;s &#xE0; l&#x26;#39;&#xE9;tablissement de m&#xE9;thodes nouvelles et am&#xE9;lior&#xE9;es pour visualiser l&#x26;#39;ARNm. Ici, nous discutons de la fa&#xE7;on dont ces techniques ont am&#xE9;lior&#xE9; notre compr&#xE9;hension de la localisation intracellulaire d&#x26;#39;ARNm dans une vari&#xE9;t&#xE9; d&#x26;#39;organismes. En plus de la facilit&#xE9; accrue et la sp&#xE9;cificit&#xE9; de la d&#xE9;tection dans les tissus fixe, dans les m&#xE9;thodes d&#x26;#39;hybridation in situ permettent maintenant l&#x26;#39;examen de la distribution d&#x26;#39;ARNm au niveau ultrastructural en microscopie &#xE9;lectronique. Plus important encore, les m&#xE9;thodes pour la suite du mouvement de l&#x26;#39;ARNm dans les cellules vivantes sont maintenant largement utilis&#xE9;s. Il s&#x26;#39;agit notamment de l&#x26;#39;introduction de transcrits marqu&#xE9;s par des m&#xE9;thodes bas&#xE9;es sur la micro-injection d&#x26;#39;hybridation, en utilisant des sondes antisens marqu&#xE9;s et compl&#xE9;mentaires des m&#xE9;thodes transg&#xE9;niques pour ARNm endog&#xE8;nes marquage utilisant des composants bact&#xE9;riophages. Ces innovations techniques sont maintenant coupl&#xE9; avec un super-r&#xE9;solution des m&#xE9;thodes de microscopie optique et la promesse de r&#xE9;volutionner notre compr&#xE9;hension de la dynamique et la complexit&#xE9; du m&#xE9;canisme mol&#xE9;culaire de la localisation des ARNm.

Rendre le message est clair: Visualisation localisation des ARNm

Lokalisierte mRNA stellt r&auml;umliche und zeitliche Proteinexpression Zelle Entwicklung und Physiologie. Um die Mechanismen zu erforschen sind beteiligt, erhebliche Anstrengungen bei der Schaffung neuer und verbesserter Methoden zur Visualisierung von mRNA ausgegeben worden. Hier diskutieren wir, wie diese Techniken unser Verst&auml;ndnis von intrazellul&auml;rer mRNA Lokalisierung in einer Vielzahl von Organismen erweitert haben. Neben erh&ouml;hter Bedienkomfort und Spezifit&auml;t der Erkennung im festen Gewebe erm&ouml;glichen in situ Hybridisierung Methoden jetzt Pr&uuml;fung der mRNA Distribution ultrastrukturelle Ebene mit Elektronenmikroskopie. Am wichtigsten sind die Methoden f&uuml;r die Bewegung der mRNA in lebenden Zellen folgende jetzt weit verbreitet. Dazu geh&ouml;ren die Einf&uuml;hrung von beschrifteten Abschriften durch Mikroinjektion, Hybridisierung basierte Methoden mit beschrifteten antisense Sonden und erg&auml;nzende transgene Methoden f&uuml;r tagging endogene mRNAs Bakteriophage Komponenten. Diese technischen Innovationen sind jetzt mit superaufl&ouml;sende Lichtmikroskopie Methoden und Versprechen zu revolutionieren unser Verst&auml;ndnis der Dynamik und Komplexit&auml;t des molekularen Mechanismus der mRNA Lokalisierung gekoppelt wird.

Machen die Botschaft klar: mRNA Lokalisierung zu visualisieren.

&#x30ED;&#x30FC;&#x30AB;&#x30E9;&#x30A4;&#x30BA;&#x3055;&#x308C;&#x305F;mRNA&#x306F;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x767A;&#x9054;&#x3068;&#x751F;&#x7406;&#x306B;&#x4E0D;&#x53EF;&#x6B20;&#x306A;&#x7A7A;&#x9593;&#x7684;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x6642;&#x9593;&#x7684;&#x306A;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x767A;&#x73FE;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x95A2;&#x4E0E;&#x3059;&#x308B;&#x30E1;&#x30AB;&#x30CB;&#x30BA;&#x30E0;&#x3092;&#x63A2;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x3001;&#x304B;&#x306A;&#x308A;&#x306E;&#x52AA;&#x529B;&#x304C;mRNA&#x3092;&#x53EF;&#x8996;&#x5316;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x65B0;&#x3057;&#x3044;&#x6539;&#x826F;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3092;&#x78BA;&#x7ACB;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x8CBB;&#x3084;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x6280;&#x8853;&#x306F;&#x3001;&#x751F;&#x7269;&#x306E;&#x69D8;&#x3005;&#x306A;&#x7D30;&#x80DE;&#x5185;&#x306E;mRNA&#x306E;&#x5C40;&#x5728;&#x306E;&#x6211;&#x3005;&#x306E;&#x7406;&#x89E3;&#x3092;&#x62E1;&#x5F35;&#x3057;&#x305F;&#x65B9;&#x6CD5;&#x306B;&#x3064;&#x3044;&#x3066;&#x8AAC;&#x660E;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x56FA;&#x5B9A;&#x7D44;&#x7E54;&#x306E;&#x691C;&#x51FA;&#x306E;&#x5897;&#x52A0;&#x4F7F;&#x3044;&#x3084;&#x3059;&#x3055;&#x3068;&#x7279;&#x7570;&#x6027;&#x306B;&#x52A0;&#x3048;&#x3066;&#x3001;in situ&#x30CF;&#x30A4;&#x30D6;&#x30EA;&#x30C0;&#x30A4;&#x30BC;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x306E;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3067;&#x3001;&#x73FE;&#x5728;&#x96FB;&#x5B50;&#x9855;&#x5FAE;&#x93E1;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x8D85;&#x5FAE;&#x7D30;&#x69CB;&#x9020;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x3067;&#x306E;mRNA&#x306E;&#x5206;&#x5E03;&#x306E;&#x691C;&#x67FB;&#x3092;&#x6709;&#x52B9;&#x306B;&#x3057;&#x3066;&#x304F;&#x3060;&#x3055;&#x3044;&#x3002;&#x6700;&#x3082;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x306E;&#x306F;&#x3001;&#x751F;&#x304D;&#x305F;&#x7D30;&#x80DE;&#x5185;&#x306E;mRNA&#x306E;&#x52D5;&#x304D;&#x3092;&#x4EE5;&#x4E0B;&#x306E;&#x30E1;&#x30BD;&#x30C3;&#x30C9;&#x306F;&#x3001;&#x5E83;&#x304F;&#x4F7F;&#x7528;&#x3055;&#x308C;&#x3088;&#x3046;&#x306B;&#x306A;&#x308A;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306F;&#x3001;&#x30DE;&#x30A4;&#x30AF;&#x30ED;&#x30A4;&#x30F3;&#x30B8;&#x30A7;&#x30AF;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x6A19;&#x8B58;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x8EE2;&#x5199;&#x7523;&#x7269;&#x306E;&#x5C0E;&#x5165;&#x3001;&#x30D0;&#x30AF;&#x30C6;&#x30EA;&#x30AA;&#x30D5;&#x30A1;&#x30FC;&#x30B8;&#x30B3;&#x30F3;&#x30DD;&#x30FC;&#x30CD;&#x30F3;&#x30C8;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x5185;&#x56E0;&#x6027;&#x306E;mRNA&#x306E;&#x30BF;&#x30AE;&#x30F3;&#x30B0;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x6A19;&#x8B58;&#x30A2;&#x30F3;&#x30C1;&#x30BB;&#x30F3;&#x30B9;&#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30D6;&#x3068;&#x76F8;&#x88DC;&#x7684;&#x306A;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x7D44;&#x63DB;&#x3048;&#x624B;&#x6CD5;&#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x305F;&#x30CF;&#x30A4;&#x30D6;&#x30EA;&#x30C0;&#x30A4;&#x30BC;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x306B;&#x57FA;&#x3065;&#x304F;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x6280;&#x8853;&#x9769;&#x65B0;&#x306F;&#x73FE;&#x5728;&#x3001;&#x8D85;&#x89E3;&#x50CF;&#x5149;&#x5B66;&#x9855;&#x5FAE;&#x93E1;&#x306E;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3068;mRNA&#x306E;&#x5C40;&#x5728;&#x306E;&#x5206;&#x5B50;&#x6A5F;&#x69CB;&#x306E;&#x52D5;&#x529B;&#x5B66;&#x3068;&#x8907;&#x96D1;&#x3055;&#x306E;&#x7406;&#x89E3;&#x306B;&#x9769;&#x547D;&#x3092;&#x7D04;&#x675F;&#x3057;&#x3066;&#x7D50;&#x5408;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

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&#xC9C0;&#xC5ED;&#xD654; &#xB41C; mRNA &#xC804;&#xC9C0; &#xAC1C;&#xBC1C; &#xBC0F; &#xC0DD;&#xB9AC;&#xC5D0; &#xD544;&#xC218;&#xC801;&#xC778; &#xACF5;&#xAC04; &#xBC0F; &#xC2DC;&#xAC04; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC2DD;&#xC744; &#xC81C;&#xACF5;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;&#xC744; &#xD0D0;&#xAD6C; Mrna&#xB97C; &#xC2DC;&#xAC01;&#xD654;&#xB97C; &#xC704;&#xD55C; &#xC0C8;&#xB86D;&#xACE0; &#xAC1C;&#xC120; &#xB41C; &#xBC29;&#xBC95;&#xC744; &#xC218;&#xB9BD;&#xC5D0; &#xCC38;&#xC5EC;, &#xC0C1;&#xB2F9;&#xD55C; &#xB178;&#xB825; &#xC9C0;&#xCD9C; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC5EC;&#xAE30;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xAE30;&#xC220;&#xC744; &#xB2E4;&#xC591; &#xD55C; &#xC0DD;&#xBB3C;&#xC758; &#xC138;&#xD3EC;&#xB0B4; mRNA &#xC9C0;&#xC5ED;&#xD654;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xC774;&#xD574;&#xB97C; &#xD655;&#xC7A5; &#xD558;&#xB294; &#xBC29;&#xBC95;&#xC744; &#xB17C;&#xC758; &#xD55C;&#xB2E4;. &#xC99D;&#xAC00; &#xD3B8;&#xB9AC;&#xC640; &#xC870;&#xC815;&#xB41C; &#xC870;&#xC9C1;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD0D0;&#xC9C0;&#xC758; &#xD2B9;&#xC774;&#xC131;, &#xC81C;&#xC790;&#xB9AC; &#xAD50; &#xC7A1; &#xBA54;&#xC11C;&#xB4DC;&#xB97C; &#xC9C0;&#xAE08; &#xC804;&#xC790; &#xD604;&#xBBF8;&#xACBD;&#xC73C;&#xB85C; ultrastructural &#xC218;&#xC900;&#xC5D0;&#xC11C; mRNA &#xBD84;&#xD3EC;&#xC758; &#xC2DC;&#xD5D8; &#xC0AC;&#xC6A9;. &#xAC00;&#xC7A5; &#xD06C;&#xAC8C;, &#xC0B4;&#xC544;&#xC788;&#xB294; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0; &#xC788;&#xB294; Mrna&#xC758; &#xC6C0;&#xC9C1;&#xC784;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xBA54;&#xC11C;&#xB4DC;&#xB294; &#xC9C0;&#xAE08; &#xAD11;&#xBC94;&#xC704; &#xD558; &#xAC8C; &#xC0AC;&#xC6A9;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xAE30;&#xBC18;&#xC73C;&#xB85C; &#xAD50; &#xC7A1; &#xBC29;&#xBC95; &#xC0DD; mRNAs &#xBC15;&#xD14C;&#xB9AC;&#xC624;&#xD30C;&#xC9C0; &#xAD6C;&#xC131; &#xC694;&#xC18C;&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xD0DC;&#xADF8;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xB808;&#xC774;&#xBE14;&#xC774; &#xC788;&#xB294; &#xC13C;&#xC2A4; &#xD504;&#xB85C;&#xBE0C;&#xC640; &#xBCF4;&#xC644; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xBCC0;&#xD615; &#xBA54;&#xC11C;&#xB4DC;&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; microinjection&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xB808;&#xC774;&#xBE14;&#xC774; &#xC9C0;&#xC815; &#xB41C; &#xC131;&#xC801; &#xC99D;&#xBA85;&#xC11C;&#xC758; &#xB3C4;&#xC785; &#xD3EC;&#xD568;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xAE30;&#xC220; &#xD601;&#xC2E0;&#xC740; &#xC774;&#xC81C; &#xC288;&#xD37C; &#xD574;&#xC0C1;&#xB3C4; &#xAC00;&#xBCBC;&#xC6B4; &#xD604;&#xBBF8;&#xACBD; &#xAC80;&#xC0AC; &#xBC95; &#xBC29;&#xBC95; &#xBC0F; &#xC57D;&#xC18D; &#xC5ED;&#xD559;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xC774;&#xD574; &#xBC0F; &#xBCF5;&#xC7A1; &#xD55C; &#xBD84;&#xC790; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998; mRNA &#xC9C0;&#xC5ED;&#xD654;&#xC758; &#xD601;&#xBA85;&#xC744; &#xACB0;&#xD569; &#xB418; &#xACE0;.

&#xC120;&#xD0DD;&#xC744; &#xCDE8;&#xC18C; &#xD558;&#xB294; &#xBA54;&#xC2DC;&#xC9C0;&#xB97C; &#xB9CC;&#xB4E4;&#xAE30;: mRNA &#xC9C0;&#xC5ED;&#xD654;&#xB97C; &#xC2DC;&#xAC01;&#xD654;.

MRNA localizada proporciona la expresi&#xF3;n de prote&#xED;nas espacial y temporal esencial para el desarrollo celular y la fisiolog&#xED;a. Para explorar los mecanismos involucrados, un esfuerzo considerable se ha invertido en el establecimiento de nuevos y mejores m&#xE9;todos para la visualizaci&#xF3;n de ARNm. En este caso, se discute c&#xF3;mo estas t&#xE9;cnicas han ampliado nuestra comprensi&#xF3;n de la localizaci&#xF3;n intracelular del ARNm en una variedad de organismos. Adem&#xE1;s de una mayor facilidad y especificidad de la detecci&#xF3;n en el tejido fijo, en los m&#xE9;todos de hibridaci&#xF3;n in situ ahora permitir el examen de la distribuci&#xF3;n del mRNA en el nivel ultraestructural con microscop&#xED;a electr&#xF3;nica. M&#xE1;s significativamente, los m&#xE9;todos para seguir el movimiento de ARNm en las c&#xE9;lulas vivas est&#xE1;n ahora en uso generalizado. Estas incluyen la introducci&#xF3;n de las transcripciones etiquetadas por m&#xE9;todos basados &#x200B;&#x200B;en la hibridaci&#xF3;n, microinyecci&#xF3;n usando sondas antisentido y complementarios m&#xE9;todos transg&#xE9;nicos para ARNm end&#xF3;genos de marcado que utilizan componentes de bacteri&#xF3;fagos. Estas innovaciones t&#xE9;cnicas est&#xE1;n siendo, junto con super-resoluci&#xF3;n m&#xE9;todos de microscop&#xED;a de luz y la promesa de revolucionar nuestra comprensi&#xF3;n de la din&#xE1;mica y la complejidad de los mecanismos moleculares de la localizaci&#xF3;n del mRNA.

Hacer que el mensaje claro: Visualizaci&#xF3;n de Localizaci&#xF3;n de ARNm

&#x6D3B;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7EC6;&#x80DE;&#x52A8;&#x6001;&#x8FC7;&#x7A0B;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x662F;&#x751F;&#x7269;&#x5B66;&#x7684;&#x6838;&#x5FC3;&#xFF0C;&#x7279;&#x522B;&#x662F;&#x5F3A;&#x5927;&#x65F6;&#x53EF;&#x4EE5;&#x786E;&#x5B9A;&#x548C;&#x7EDF;&#x8BA1;&#x5206;&#x6790;&#x7684;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x5185;&#x7684;&#x4E2A;&#x522B;&#x5BF9;&#x8C61;&#x7684;&#x52A8;&#x529B;&#x7279;&#x5F81;&#x3002;&#x7136;&#x800C;&#xFF0C;&#x5546;&#x4E1A;&#x7A0B;&#x5E8F;&#x53EA;&#x63D0;&#x4F9B;&#x8303;&#x56F4;&#x6709;&#x9650;&#x7684;&#x975E;&#x5F39;&#x6027;&#x5206;&#x6790;&#x6A21;&#x5757;&#x548C;&#x76EE;&#x524D;&#x6709;&#x5E7F;&#x6CDB;&#x5206;&#x6790;&#x7684;&#x7C92;&#x5B50;&#x52A8;&#x529B;&#x6CA1;&#x6709;&#x5F00;&#x653E;&#x6E90;&#x7801;&#x7A0B;&#x5E8F;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x63CF;&#x8FF0; ParticleStats (http://www.ParticleStats.com)&#x3001; web &#x670D;&#x52A1;&#x5668;&#x548C;&#x5F00;&#x653E;&#x6E90;&#x7801;&#x7684;&#x7A0B;&#x5E8F;&#xFF0C;&#x8F93;&#x5165; X&#x3001; Y &#x534F;&#x8C03;&#x7684;&#x5BF9;&#x8C61;&#x7684;&#x4F4D;&#x7F6E;&#x3001; &#x65F6;&#x95F4;&#x548C;&#x8F93;&#x51FA;&#x65B0;&#x578B;&#x5206;&#x6790;&#x3001; &#x56FE;&#x5F62;&#x5316;&#x7684;&#x60C5;&#x8282;&#x548C;&#x80FD;&#x52A8;&#x6027;&#x5BF9;&#x8C61;&#x7684;&#x7EDF;&#x8BA1;&#x4FE1;&#x606F;&#x3002;ParticleStats &#x5305;&#x542B;&#x4E09;&#x4E2A;&#x5355;&#x72EC;&#x7684;&#x5206;&#x6790;&#x7A0B;&#x5E8F;&#x3002;&#x5168;&#x7403;&#x5206;&#x6790;&#x7684;&#x6781;&#x6027;&#xFF0C;&#x793A;&#x4F8B;&#x5FAE;&#x7BA1;&#x518D;&#x52A0;&#x4E0A;&#x5E74;&#x5E95;&#x589E;&#x957F;&#x7684;&#x679C;&#x8747;&#x5375;&#x6BCD;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x7B2C;&#x4E00;&#x6B21;&#xFF0C;ParticleStats:Directionality&#x3002;&#x7B2C;&#x4E8C;&#xFF0C;ParticleStats:Compare &#x7684;&#x8FD0;&#x884C;&#x548C;&#x6682;&#x505C;&#x8DE8;&#x8D8A;&#x5F0F;&#x8FD0;&#x52A8;&#x7684;&#x5206;&#x6790;&#x3002;&#x8FD9;&#x53EF;&#x4EE5;&#x5E94;&#x7528;&#x4E8E;&#x67D3;&#x8272;&#x4F53;&#x5206;&#x79BB;&#x548C;&#x5206;&#x5B50;&#x57FA;&#x4E8E;&#x7535;&#x673A;&#x7684;&#x8FD0;&#x52A8;&#x3002;&#x7B2C;&#x4E09; ParticleStats:Kymographs kymograph &#x56FE;&#x50CF;&#xFF0C;&#x4F8B;&#x5982;&#x5728;&#x5E94;&#x7528;&#x4E8E;&#x5206;&#x79BB;&#x7684;&#x67D3;&#x8272;&#x4F53;&#x5728;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6709;&#x4E1D;&#x5206;&#x88C2;&#x7684;&#x5206;&#x6790;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x5206;&#x6790;&#x63D0;&#x4F9B;&#x4E86;&#x5206;&#x5B50;&#x673A;&#x5236;&#xFF0C;&#x4E0D;&#x53EF;&#x80FD;&#x5355;&#x51ED;&#x8D28;&#x91CF;&#x5206;&#x6790;&#xFF0C;&#x5E76;&#x5E7F;&#x6CDB;&#x9002;&#x7528;&#x4E8E;&#x5F88;&#x591A;&#x5176;&#x4ED6;&#x7EC6;&#x80DE;&#x751F;&#x7269;&#x5B66;&#x95EE;&#x9898;&#x654F;&#x9510;&#x7684;&#x6D1E;&#x5BDF;&#x529B;&#x3002;

ParticleStats&#xFF1A; &#x5F00;&#x653E;&#x6E90;&#x7801;&#x8F6F;&#x4EF6;&#x5206;&#x6790;&#x7684;&#x7C92;&#x5B50;&#x52A8;&#x529B;&#x53CA;&#x7EC6;&#x80DE;&#x9AA8;&#x67B6;&#x7684;&#x6781;&#x6027;&#x3002;

The study of dynamic cellular processes in living cells is central to biology and is particularly powerful when the motility characteristics of individual objects within cells can be determined and analysed statistically. However, commercial programs only offer a limited range of inflexible analysis modules and there are currently no open source programs for extensive analysis of particle motility. Here, we describe ParticleStats (http://www.ParticleStats.com), a web server and open source programs, which input the X,Y coordinate positions of objects in time, and output novel analyses, graphical plots and statistics for motile objects. ParticleStats comprises three separate analysis programs. First, ParticleStats:Directionality for the global analysis of polarity, for example microtubule plus end growth in Drosophila oocytes. Second, ParticleStats:Compare for the analysis of saltatory movement in terms of runs and pauses. This can be applied to chromosome segregation and molecular motor-based movements. Thirdly ParticleStats:Kymographs for the analysis of kymograph images, for example as applied to separation of chromosomes in mitosis. These analyses have provided key insights into molecular mechanisms that are not possible from qualitative analysis alone and are widely applicable to many other cell biology problems.

ParticleStats: open source software for the analysis of particle motility and cytoskeletal polarity.

L&#x26;#39;&#xE9;tude de la dynamique des processus cellulaires dans les cellules vivantes est au c&#x153;ur de la biologie et est particuli&#xE8;rement puissant lorsque les caract&#xE9;ristiques de la motilit&#xE9; des objets individuels au sein de cellules peut &#xEA;tre d&#xE9;termin&#xE9; et analys&#xE9;es statistiquement. Toutefois, les programmes commerciaux n&#x26;#39;offrent qu&#x26;#39;une gamme limit&#xE9;e de modules d&#x26;#39;analyse rigides et il n&#x26;#39;existe actuellement aucun programme open source pour une analyse approfondie de la motilit&#xE9; des particules. Ici, nous d&#xE9;crivons ParticleStats (http://www.ParticleStats.com), un serveur web et des programmes open source, qui d&#x26;#39;entr&#xE9;e de l&#x26;#39;X, Y positions de coordonn&#xE9;es des objets dans le temps, et des analyses nouvelles sorties, des trac&#xE9;s graphiques et de statistiques pour les objets mobiles . ParticleStats comprend trois programmes d&#x26;#39;analyse distincts. Tout d&#x26;#39;abord, ParticleStats: direction pour l&#x26;#39;analyse globale de la polarit&#xE9;, par exemple des microtubules ainsi que la croissance dans les ovocytes chez la drosophile fin. Deuxi&#xE8;mement, ParticleStats: Comparer pour l&#x26;#39;analyse du mouvement saltatoire en termes de pistes et les pauses. Ceci peut &#xEA;tre appliqu&#xE9; &#xE0; la s&#xE9;gr&#xE9;gation des chromosomes et mol&#xE9;culaires du moteur &#xE0; base de mouvements. ParticleStats Troisi&#xE8;mement: Kymographs pour l&#x26;#39;analyse des images kymographe, par exemple tel qu&#x26;#39;il est appliqu&#xE9; &#xE0; la s&#xE9;paration des chromosomes lors de la mitose. Ces analyses ont fourni un aper&#xE7;u important des m&#xE9;canismes mol&#xE9;culaires qui ne sont pas possibles &#xE0; partir de l&#x26;#39;analyse qualitative seule et sont largement applicables &#xE0; de nombreux autres probl&#xE8;mes de biologie cellulaire.

ParticleStats: Logiciels Open Source pour l&#x26;#39;analyse de la motilit&#xE9; des particules et la polarit&#xE9; du cytosquelette

Das Studium der dynamische zellul&auml;re Prozesse in lebenden Zellen ist zentral in der Biologie und ist besonders stark, wenn die Motilit&auml;t Merkmale einzelner Objekte innerhalb der Zellen ermittelt und statistisch ausgewertet werden k&ouml;nnen. Jedoch kommerzielle Programme bieten nur eine begrenzte Anzahl von unflexiblen Analysemodule und derzeit gibt es keine open-Source-Programme f&uuml;r umfangreiche Analyse der Partikel Motilit&auml;t. Hier beschreiben wir, ParticleStats (http://www.ParticleStats.com), einem Web-Server und open-Source-Programme, die Eingabe, die X, Y Positionen von Objekten in Zeit und Ausgabe neuartige Analysen, grafische Stellpl&auml;tze und Statistiken f&uuml;r bewegliche Objekte zu koordinieren. ParticleStats umfasst drei separate Analyse-Programme. Ersten, ParticleStats:Directionality f&uuml;r die globale Analyse der Polarit&auml;t, f&uuml;r Beispiel Microtubule zuz&uuml;glich Ende Wachstum in Drosophila Eizellen. Zweite, ParticleStats:Compare f&uuml;r die Analyse von saltatory Bewegung in Bezug auf die Pisten und Pausen. Dies kann auf Chromosom Segregation und molekularen Motor-basierte Bewegungen angewendet werden. Drittens: ParticleStats:Kymographs f&uuml;r die Analyse der Kymograph Bilder, zum Beispiel als angewandte Trennung der Chromosomen in Mitose. Diese Analysen haben wichtige Einblicke in die molekularen Mechanismen, die nicht von qualitativen Analyse allein m&ouml;glich und sind &uuml;berall anwendbar auf viele andere Zellen-Biologie-Probleme, zur Verf&uuml;gung gestellt.

ParticleStats: open Sie-Source-Software zur Analyse von Teilchen Motilit&auml;t und Zytoskelett Polarit&auml;t.

Lo studio dei processi dinamici cellulari nelle cellule viventi &egrave; centrale alla biologia ed &egrave; particolarmente potente quando le caratteristiche di motilit&agrave; dei singoli oggetti all&#39;interno delle cellule possono essere determinate e analizzate statisticamente. Tuttavia, programmi commerciali offrono solo una gamma limitata di moduli di analisi inflessibile e non ci sono attualmente programmi open source per la vasta analisi di motilit&agrave; delle particelle. Descriviamo qui, ParticleStats (http://www.ParticleStats.com), un server web e programmi open source, il cui ingresso che x, Y coordinare le posizioni degli oggetti nel tempo e uscita romanzo analisi, grafici e statistiche per gli oggetti mobili. ParticleStats comprende tre programmi per l&#39;analisi separata. Primo, ParticleStats:Directionality per l&#39;analisi globale di polarit&agrave;, per la crescita dei microtubuli plus fine esempio gli ovociti della drosofila. Secondo, ParticleStats:Compare per l&#39;analisi del movimento saltatoria in termini di esecuzioni e le pause. Questo pu&ograve; essere applicato al cromosoma segregazione e movimenti basati su motore molecolari. In terzo luogo ParticleStats:Kymographs per l&#39;analisi delle immagini kymograph, ad esempio come applicata alla separazione dei cromosomi in mitosi. Queste analisi hanno fornito la chiave intuizioni meccanismi molecolari che non sono possibili da analisi qualitativa da solo e sono ampiamente applicabili a molti altri problemi di biologia cellulare.

ParticleStats: software open source per l&#39;analisi della motilit&agrave; delle particelle e polarit&agrave; del citoscheletro.

&#x751F;&#x304D;&#x305F;&#x7D30;&#x80DE;&#x5185;&#x306E;&#x30C0;&#x30A4;&#x30CA;&#x30DF;&#x30C3;&#x30AF;&#x306A;&#x7D30;&#x80DE;&#x30D7;&#x30ED;&#x30BB;&#x30B9;&#x306E;&#x7814;&#x7A76;&#x306F;&#x3001;&#x751F;&#x7269;&#x5B66;&#x306E;&#x4E2D;&#x5FC3;&#x3068;&#x306A;&#x308A;&#x3001;&#x7D30;&#x80DE;&#x5185;&#x306E;&#x500B;&#x3005;&#x306E;&#x30AA;&#x30D6;&#x30B8;&#x30A7;&#x30AF;&#x30C8;&#x306E;&#x904B;&#x52D5;&#x7279;&#x6027;&#x304C;&#x6C7A;&#x5B9A;&#x3055;&#x308C;&#x3001;&#x7D71;&#x8A08;&#x7684;&#x306B;&#x5206;&#x6790;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x308B;&#x5834;&#x5408;&#x306B;&#x7279;&#x306B;&#x5F37;&#x529B;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x3057;&#x304B;&#x3057;&#x3001;&#x5E02;&#x8CA9;&#x306E;&#x30D7;&#x30ED;&#x30B0;&#x30E9;&#x30E0;&#x306F;&#x3001;&#x67D4;&#x8EDF;&#x6027;&#x306E;&#x89E3;&#x6790;&#x30E2;&#x30B8;&#x30E5;&#x30FC;&#x30EB;&#x306E;&#x9650;&#x3089;&#x308C;&#x305F;&#x7BC4;&#x56F2;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3057;&#x3001;&#x7C92;&#x5B50;&#x306E;&#x904B;&#x52D5;&#x306E;&#x5E83;&#x7BC4;&#x306A;&#x5206;&#x6790;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x30AA;&#x30FC;&#x30D7;&#x30F3;&#x30BD;&#x30FC;&#x30B9;&#x30D7;&#x30ED;&#x30B0;&#x30E9;&#x30E0;&#x306F;&#x3001;&#x73FE;&#x5728;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x3001;ParticleStats&#xFF08;http://www.ParticleStats.com&#xFF09;&#x3001;Web&#x30B5;&#x30FC;&#x30D0;&#x3068;&#x30AA;&#x30FC;&#x30D7;&#x30F3;&#x30BD;&#x30FC;&#x30B9;&#x30D7;&#x30ED;&#x30B0;&#x30E9;&#x30E0;&#x3092;&#x8A18;&#x8FF0;&#x3059;&#x308B;&#x5165;&#x529B;X&#x3001;&#x6642;&#x9593;&#x5185;&#x306E;&#x30AA;&#x30D6;&#x30B8;&#x30A7;&#x30AF;&#x30C8;&#x306E;Y&#x5EA7;&#x6A19;&#x4F4D;&#x7F6E;&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x51FA;&#x529B;&#x306E;&#x5C0F;&#x8AAC;&#x306E;&#x5206;&#x6790;&#x3001;&#x904B;&#x52D5;&#x6027;&#x306E;&#x30AA;&#x30D6;&#x30B8;&#x30A7;&#x30AF;&#x30C8;&#x306E;&#x30B0;&#x30E9;&#x30D5;&#x30A3;&#x30AB;&#x30EB;&#x306A;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C3;&#x30C8;&#x3068;&#x7D71;&#x8A08;&#x60C5;&#x5831;&#x3092;&#x3002; ParticleStats&#x306F;3&#x3064;&#x306E;&#x5225;&#x3005;&#x306E;&#x89E3;&#x6790;&#x30D7;&#x30ED;&#x30B0;&#x30E9;&#x30E0;&#x3067;&#x69CB;&#x6210;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x307E;&#x305A;&#x3001;ParticleStats&#xFF1A;&#x6975;&#x6027;&#x306E;&#x30B0;&#x30ED;&#x30FC;&#x30D0;&#x30EB;&#x5206;&#x6790;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x65B9;&#x5411;&#x6027;&#x306F;&#x3001;&#x4F8B;&#x3048;&#x3070;&#x5FAE;&#x5C0F;&#x7BA1;&#x30D7;&#x30E9;&#x30B9;&#x30B7;&#x30E7;&#x30A6;&#x30B8;&#x30E7;&#x30A6;&#x30D0;&#x30A8;&#x306E;&#x5375;&#x6BCD;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x30A8;&#x30F3;&#x30C9;&#x6210;&#x9577;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x3002;&#x7B2C;&#x4E8C;&#x306B;&#x3001;ParticleStats&#x306F;&#xFF1A;&#x5B9F;&#x884C;&#x306E;&#x9762;&#x3067;&#x8DF3;&#x8E8D;&#x904B;&#x52D5;&#x306E;&#x5206;&#x6790;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x6BD4;&#x8F03;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x4E00;&#x6642;&#x505C;&#x6B62;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x306F;&#x67D3;&#x8272;&#x4F53;&#x306E;&#x5206;&#x96E2;&#x3068;&#x5206;&#x5B50;&#x30E2;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x30D9;&#x30FC;&#x30B9;&#x306E;&#x52D5;&#x304D;&#x306B;&#x9069;&#x7528;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x7B2C;&#x4E09;ParticleStats&#xFF1A;&#x6709;&#x7CF8;&#x5206;&#x88C2;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x67D3;&#x8272;&#x4F53;&#x306E;&#x5206;&#x96E2;&#x306B;&#x9069;&#x7528;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x4F8B;&#x3048;&#x3070;&#x30AD;&#x30E2;&#x30B0;&#x30E9;&#x30D5;&#x753B;&#x50CF;&#x306E;&#x5206;&#x6790;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;Kymographs&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x5206;&#x6790;&#x3060;&#x3051;&#x3067;&#x306F;&#x5B9A;&#x6027;&#x5206;&#x6790;&#x304B;&#x3089;&#x53EF;&#x80FD;&#x3067;&#x306F;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3001;&#x4ED6;&#x306E;&#x591A;&#x304F;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x751F;&#x7269;&#x5B66;&#x306E;&#x554F;&#x984C;&#x306B;&#x5E83;&#x304F;&#x9069;&#x7528;&#x53EF;&#x80FD;&#x306A;&#x5206;&#x5B50;&#x6A5F;&#x69CB;&#x306B;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x6D1E;&#x5BDF;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3057;&#x3066;&#x304D;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;

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ParticleStats: &#xC785;&#xC790;&#xC758; &#xC6B4;&#xB3D9; &#xC131; &#xBC0F; cytoskeletal &#xADF9;&#xC131; &#xBD84;&#xC11D;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC624;&#xD508; &#xC18C;&#xC2A4; &#xC18C;&#xD504;&#xD2B8;&#xC6E8;&#xC5B4;.

El estudio de la din&#xE1;mica de los procesos celulares en las c&#xE9;lulas vivas es fundamental para la biolog&#xED;a y es particularmente potente cuando las caracter&#xED;sticas de motilidad de los objetos individuales dentro de las c&#xE9;lulas puede ser determinada y se analizaron estad&#xED;sticamente. Sin embargo, los programas comerciales ofrecen s&#xF3;lo una gama limitada de m&#xF3;dulos de an&#xE1;lisis e inflexibles, y actualmente no hay programas de c&#xF3;digo abierto para el an&#xE1;lisis extenso de la motilidad de las part&#xED;culas. A continuaci&#xF3;n, describimos ParticleStats (http://www.ParticleStats.com), un servidor web y los programas de c&#xF3;digo abierto, que la entrada de la X, Y las posiciones de las coordenadas de los objetos en el tiempo, y los an&#xE1;lisis de producci&#xF3;n novel&#xED;stica, parcelas gr&#xE1;ficas y estad&#xED;sticas de los objetos m&#xF3;viles . ParticleStats se compone de tres programas de an&#xE1;lisis por separado. En primer lugar, ParticleStats: direccionalidad para el an&#xE1;lisis global de la polaridad, por ejemplo, los microt&#xFA;bulos m&#xE1;s el crecimiento final en los ovocitos de Drosophila. En segundo lugar, ParticleStats: Compare para el an&#xE1;lisis del movimiento relativa a la danza, en t&#xE9;rminos de carreras y hace una pausa. Esto se puede aplicar a la segregaci&#xF3;n de cromosomas y moleculares movimientos del motor basados. En tercer lugar ParticleStats: Kymographs para el an&#xE1;lisis de im&#xE1;genes quim&#xF3;grafo, por ejemplo tal como se aplica a la separaci&#xF3;n de los cromosomas en la mitosis. Estos an&#xE1;lisis han proporcionado informaci&#xF3;n clave sobre los mecanismos moleculares que no son posibles a partir de un an&#xE1;lisis cualitativo solos y son ampliamente aplicables a muchos otros problemas de biolog&#xED;a celular.

ParticleStats: El software de c&#xF3;digo abierto para el an&#xE1;lisis de la motilidad de part&#xED;culas y de la polaridad del citoesqueleto

&#x6D77;&#x9798;&#x662F;&#x7B80;&#x5355;&#x65E0;&#x810A;&#x690E;&#x810A;&#x7D22;&#x52A8;&#x7269;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x4E00;&#x95EE;&#x9898;&#x7684;&#x53D1;&#x5C55;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#xFF0C;&#x9AD8;&#x9E1F;&#x4E2D;&#x5357;&#x5DE5;&#x4E1A;&#x5927;&#x5B66;&#x663E;&#x793A;&#x6838;&#x8FC1;&#x79FB;&#x5185;&#x9798; mesendodermal &#x7EC6;&#x80DE;&#x4F7F;&#x6781;&#x5316;&#x672C;&#x5730;&#x5316;&#x4E0D;&#x5B83;&#x5C06;&#x7F16;&#x7801;&#x4E2D;&#x80DA;&#x5C42;&#x5185;&#x80DA;&#x5C42;&#x547D;&#x8FD0;&#x533A;&#x5206;&#x5F00;&#x6765;&#x7684;&#x540C;&#x6E90;&#x76D2;&#x57FA;&#x56E0;&#x86CB;&#x767D;&#x7684;&#x8868;&#x8FBE;&#x3002;&#x6838;&#x8FC1;&#x79FB;&#x4E0E; mRNA &#x5B9A;&#x4F4D;&#x4E4B;&#x95F4;&#x7684;&#x8054;&#x7CFB;&#x8868;&#x660E; protostomes &#x76F8;&#x63D0;&#x5E76;&#x8BBA;&#xFF0C;&#x4EE4;&#x4EBA;&#x5174;&#x594B;&#x3002;

&#x5982;&#x4F55;&#x6D77;&#x9798;&#x6838;&#x544A;&#x8BC9;&#x4E2D;&#x80DA;&#x5C42;&#x4E0D;&#x80FD;&#x5185;&#x80DA;&#x5C42;&#x3002;

Sea squirts are simple invertebrate chordates. In this issue of Developmental Cell, Takatori etÂ al. show nuclear migration within ascidian mesendodermal cells enables polarized localization of Not mRNA, which encodes a homeobox protein that distinguishes mesoderm from endoderm fates. The link between nuclear migration and mRNA localization suggests exciting parallels with protostomes.

How the sea squirt nucleus tells mesoderm not to be endoderm.

Ascidies sont simples chord&#xE9;s invert&#xE9;br&#xE9;s. Dans ce num&#xE9;ro de Developmental Cell, Takatori et al. montrent la migration nucl&#xE9;aire dans les cellules mesendodermal ascidies permet la localisation polaris&#xE9;e de ne pas l&#x26;#39;ARNm, qui code pour une prot&#xE9;ine hom&#xE9;otique qui distingue m&#xE9;soderme de destins endoderme. Le lien entre migration nucl&#xE9;aire et localisation des ARNm sugg&#xE8;re des parall&#xE8;les int&#xE9;ressants avec protostomiens.

Comment le Noyau ascidie Indique m&#xE9;soderme Ne pas &#xEA;tre Endoderme

Seescheiden sind einfache wirbelloser Chordatiere. In dieser Ausgabe des Developmental Cell zeigen Takatori Et Al. nuklearen Migration innerhalb Ascidian Mesendodermal Zellen erm&ouml;glicht polarisierten Lokalisierung nicht mRNA, das ein Homeobox Protein kodiert, das Mesoderm von Endodermis Schicksale unterscheidet. Zusammenhang zwischen nuklearen Migration und mRNA Lokalisierung ergibt spannende Parallelen zu den Urm&uuml;ndern.

Wie sagt der Sea Squirt-Kern Mesoderm, Entoderm nicht zu.

Ascidie sono semplici cordati invertebrati. In questo numero di cellulare dello sviluppo, Takatori et al Visualizza migrazione nucleare all&#39;interno di Ascidia mesendodermal cellule consente polarizzata localizzazione non mRNA, che codifica per una proteina homeobox che distingue il mesoderma da destini endoderma. Il legame tra migrazione nucleare e localizzazione di mRNA suggerisce interessanti paralleli con protostomes.

Come il nucleo di sea squirt racconta mesoderma non deve essere l&#39;endoderma.

&#x30DB;&#x30E4;&#x306F;&#x3001;&#x5358;&#x7D14;&#x306A;&#x7121;&#x810A;&#x690E;&#x52D5;&#x7269;&#x306E;&#x810A;&#x7D22;&#x52D5;&#x7269;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3002; Developmental Cell&#x8A8C;&#x3001;&#x9AD8;&#x53D6;&#x3089;&#x306E;&#x3053;&#x306E;&#x554F;&#x984C;&#x3067;&#x306F;&#x3002;&#x30DB;&#x30E4;mesendodermal&#x7D30;&#x80DE;&#x5185;&#x306E;&#x6838;&#x79FB;&#x884C;&#x3092;&#x793A;&#x3059;&#x306B;&#x306F;&#x3001;&#x5185;&#x80DA;&#x8449;&#x306E;&#x904B;&#x547D;&#x304B;&#x3089;&#x4E2D;&#x80DA;&#x8449;&#x3092;&#x533A;&#x5225;&#x3059;&#x308B;&#x30DB;&#x30E1;&#x30AA;&#x30DC;&#x30C3;&#x30AF;&#x30B9;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x3092;&#x30B3;&#x30FC;&#x30C9;&#x3057;&#x306A;&#x3044;mRNA&#x306E;&#x504F;&#x5149;&#x5C40;&#x5728;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6838;&#x79FB;&#x884C;&#x304A;&#x3088;&#x3073;mRNA&#x306E;&#x5C40;&#x5728;&#x306E;&#x9593;&#x306E;&#x30EA;&#x30F3;&#x30AF;&#x306F;protostomes&#x30A8;&#x30AD;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C6;&#x30A3;&#x30F3;&#x30B0;&#x306A;&#x985E;&#x4F3C;&#x70B9;&#x3092;&#x793A;&#x5506;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;

&#x30DB;&#x30E4;Nucleus&#x306F;&#x5185;&#x80DA;&#x8449;&#x3067;&#x306F;&#x306A;&#x3044;&#x3068;&#x4E2D;&#x80DA;&#x8449;&#x306B;&#x6307;&#x793A;&#x65B9;&#x6CD5;

&#xBC14;&#xB2E4; squirts &#xAC04;&#xB2E8;&#xD55C; &#xBB34;&#xCC99; &#xCD94; &#xB3D9;&#xBB3C; chordates &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774; &#xBB38;&#xC81C;&#xC758; &#xBC1C;&#xB2EC; &#xC140;&#xC5D0;&#xC11C; &#xB2E4; &#xCE74;&#xD1A0; &#xB9AC; &#xC678;. ascidian mesendodermal &#xC138;&#xD3EC; &#xD65C;&#xC131;&#xD654;&#xB97C; &#xD3B8;&#xAD11;&#xB41C; &#xC9C0;&#xC5ED;&#xD654; &#xD558;&#xC9C0; mRNA endoderm &#xC6B4;&#xBA85;&#xC744;&#xC5D0;&#xC11C; mesoderm &#xAD6C;&#xBCC4; homeobox &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC778;&#xCF54;&#xB529;&#xD558;&#xB294; &#xB0B4; &#xD575; &#xC774;&#xB3D9;&#xC744; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xD575; &#xC774;&#xB3D9; &#xBC0F; mRNA &#xC9C0;&#xC5ED;&#xD654; &#xAC04;&#xC758; &#xB9C1;&#xD06C; protostomes&#xC640; &#xD765;&#xBBF8;&#xB85C;&#xC6B4; &#xC720;&#xC0AC;&#xC810;&#xC744; &#xC81C;&#xC548;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xC5B4;&#xB5BB;&#xAC8C; &#xBC14;&#xB2E4; &#xBB3C; &#xCD1D; &#xD575; mesoderm endoderm &#xC218; &#xC54C;&#xB824;&#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Las ascidias son simples cordados invertebrados. En este n&#xFA;mero de Developmental Cell, Takatori et al. muestran la migraci&#xF3;n nuclear dentro de las c&#xE9;lulas de ascidia mesendodermal permite la localizaci&#xF3;n polarizada de No ARNm, que codifica una prote&#xED;na homeobox que distingue a los destinos del mesodermo endodermo. El v&#xED;nculo entre la migraci&#xF3;n y la localizaci&#xF3;n nuclear de ARNm sugiere paralelismos interesantes con protostomes.

C&#xF3;mo funciona el N&#xFA;cleo de ascidia dice mesodermo No Ser Endodermo

&#x6211;&#x4EEC;&#x63CF;&#x8FF0;&#x4E86;&#x4E00;&#x79CD;&#x65B9;&#x6CD5;&#x4ECE;&#x56FE;&#x50CF;&#x4E0A;&#x5E26;&#x6709;&#x5EC9;&#x4EF7;&#x9644;&#x4EF6;&#x663E;&#x5FAE;&#x955C;&#x548C;&#x76F8;&#x673A;&#x4E4B;&#x95F4;&#x7684;&#x6807;&#x51C6;&#x663E;&#x5FAE;&#x955C;&#x8BB0;&#x5F55;&#x8DDF;&#x8E2A;&#x5C0F;&#x529F;&#x80FD;&#x7684;&#x4E09;&#x4E2A;&#x7EF4;&#x5EA6;&#x4E2D;&#x7684;&#x4F4D;&#x7F6E;&#x3002;&#x6B64;&#x65B9;&#x6CD5;&#x7684;&#x6DF1;&#x5EA6;&#x6D4B;&#x91CF;&#x7CBE;&#x5EA6;&#x4E0A;&#x7684;&#x5BBD;&#x89C6;&#x573A;&#x3001; &#x5012;&#x7F6E;&#x663E;&#x5FAE;&#x955C;&#x5B9E;&#x9A8C;&#x6D4B;&#x8BD5;&#x548C;&#x663E;&#x793A;&#x7ED9;&#x5927;&#x7EA6; 8 nm &#x7684;&#x6DF1;&#x5EA6;&#x5206;&#x8FA8;&#x7387;&#xFF0C;&#x5BF9;&#x7EA6; 6 &#x5FAE;&#x7C73;&#xFF0C;&#x4F7F;&#x7528; 12 &#x4F4D;&#x7535;&#x8377;&#x8026;&#x5408;&#x5668;&#x4EF6; (CCD) &#x7167;&#x76F8;&#x673A;&#x548C;&#x975E;&#x5E38;&#x660E;&#x4EAE;&#xFF0C;&#x4F46;&#x65E0;&#x6CD5;&#x89E3;&#x6790;&#x7C92;&#x5B50;&#x65F6;&#x8BD5;&#x6837;&#x6DF1;&#x5EA6;&#x3002;&#x8981;&#x8BC4;&#x4F30;&#x4F4E;&#x6D41;&#x91CF;&#x9650;&#x5236;&#x7684;&#x7406;&#x8BBA;&#x6A21;&#x578B;&#x7528;&#x4E8E;&#x6D3E;&#x751F;&#x7EA6;&#x675F;&#x7684;&#x6700;&#x5C0F;&#x65B9;&#x5DEE;&#x5206;&#x6790;&#x8868;&#x8FBE;&#x3002;&#x7528;&#x4E8E;&#x5206;&#x6790;&#x6CBB;&#x7597;&#x7684;&#x903C;&#x8FD1;&#x8FDB;&#x884C;&#x6D4B;&#x8BD5;&#x4F7F;&#x7528;&#x7684;&#x6570;&#x503C;&#x6A21;&#x62DF;&#x3002;&#x5B83;&#x88AB;&#x7ED3;&#x675F;&#x8DDF;&#x8E2A;&#x5728;&#x6D3B;&#x7EC6;&#x80DE;&#x751F;&#x7269;&#x5B66;&#x7684;&#x4E09;&#x4E2A;&#x7EF4;&#x5EA6;&#x4E2D;&#x7684;&#x8367;&#x5149;&#x6765;&#x6E90;&#x548C;&#x65B9;&#x6CD5;&#x662F;&#x9002;&#x5408;&#x4E09;&#x7EF4;&#x5149;&#x6D3B;&#x5316;&#x672C;&#x5730;&#x5316;&#x663E;&#x5FAE;&#x955C;&#x5206;&#x8FA8;&#x7387;&#x5927;&#x7EA6; 14 nm &#x6DF1;&#x5EA6;&#x5206;&#x8FA8;&#x7387;&#x65F6;&#x53EF;&#x5B9E;&#x73B0;&#x4E0E;&#x53EF;&#x7528;&#x7684;&#x901A;&#x91CF;&#x6C34;&#x5E73;&#x3002;Sub-&#x7EB3;&#x7C73;&#x7EA7;&#x5206;&#x8FA8;&#x7387;&#x53EF;&#x4EE5;&#x5B9E;&#x73B0;&#x5149;&#x5B50;&#x8BA1;&#x6570;&#x6280;&#x672F;&#x9AD8;&#x7684;&#x901A;&#x91CF;&#x7EA7;&#x3002;

&#x7EB3;&#x7C73;&#x6DF1;&#x5EA6;&#x4ECE;&#x7126;&#x663E;&#x5FAE;&#x955C;&#x56FE;&#x50CF;&#x7684;&#x5206;&#x8FA8;&#x7387;&#x3002;

We describe a method for tracking the position of small features in three dimensions from images recorded on a standard microscope with an inexpensive attachment between the microscope and the camera. The depth-measurement accuracy of this method is tested experimentally on a wide-field, inverted microscope and is shown to give approximately 8 nm depth resolution, over a specimen depth of approximately 6 Âµm, when using a 12-bit charge-coupled device (CCD) camera and very bright but unresolved particles. To assess low-flux limitations a theoretical model is used to derive an analytical expression for the minimum variance bound. The approximations used in the analytical treatment are tested using numerical simulations. It is concluded that approximately 14 nm depth resolution is achievable with flux levels available when tracking fluorescent sources in three dimensions in live-cell biology and that the method is suitable for three-dimensional photo-activated localization microscopy resolution. Sub-nanometre resolution could be achieved with photon-counting techniques at high flux levels.

Nanometric depth resolution from multi-focal images in microscopy.

Nous d&#xE9;crivons une m&#xE9;thode pour le suivi de la position de petits &#xE9;l&#xE9;ments en trois dimensions &#xE0; partir d&#x26;#39;images enregistr&#xE9;es sur un microscope standard avec une pi&#xE8;ce jointe peu co&#xFB;teux entre le microscope et la cam&#xE9;ra. La pr&#xE9;cision de la profondeur de mesure de cette m&#xE9;thode est test&#xE9;e exp&#xE9;rimentalement sur un grand champ, microscope invers&#xE9; et est repr&#xE9;sent&#xE9; &#xE0; donner environ 8 nm r&#xE9;solution en profondeur, sur une profondeur sp&#xE9;cimen d&#x26;#39;environ 6 um, lorsque vous utilisez un 12-bit charge-coupled device ( CCD) et de particules tr&#xE8;s lumineuses, mais non r&#xE9;solue. Afin d&#x26;#39;&#xE9;valuer &#xE0; faible flux des limitations d&#x26;#39;un mod&#xE8;le th&#xE9;orique est utilis&#xE9; pour d&#xE9;river une expression analytique de la variance minimale li&#xE9;e. Les approximations utilis&#xE9;es dans le traitement analytique sont test&#xE9;es en utilisant des simulations num&#xE9;riques. Il est conclu que d&#x26;#39;environ 14 nm r&#xE9;solution en profondeur est r&#xE9;alisable avec des niveaux de flux disponibles lors du suivi des sources fluorescentes en trois dimensions dans des cellules vivantes biologie et que la m&#xE9;thode est appropri&#xE9;e pour tridimensionnelle photo-activ&#xE9; la r&#xE9;solution microscopie localisation. Sous-nanom&#xE8;tre r&#xE9;solution pourrait &#xEA;tre r&#xE9;alis&#xE9; avec des techniques de comptage de photons &#xE0; des niveaux &#xE9;lev&#xE9;s de flux.

R&#xE9;solution en profondeur nanom&#xE9;trique de Multi-Images en microscopie focaux

Wir beschreiben eine Methode zur Verfolgung der Position des kleinen Features in drei Dimensionen von Bildern auf einem standard Mikroskop mit einer preiswerten Anlage zwischen dem Mikroskop und Kamera aufgezeichnet. Tiefe-Messgenauigkeit dieser Methode ist experimentell getestet auf einem Wide-Field, umgekehrtes Mikroskop und ist ungef&auml;hr 8 macht gezeigt nm Tiefe Aufl&ouml;sung, &uuml;ber eine Probe-Tiefe von ca. 6 &micro;m, bei Verwendung einer 12bit Charge - Coupled Device (CCD) Kamera und sehr hell, aber nicht aufgel&ouml;sten Teilchen. Um Low-Flux-Einschr&auml;nkungen zu beurteilen ist ein theoretisches Modell verwendet, um einen analytischen Ausdruck f&uuml;r die minimale Varianz gebunden abgeleitet werden. Die N&auml;herungswerte verwendet in der analytischen Behandlung sind mit numerische Simulationen getestet. Geschlussfolgert, dass etwa 14 nm Tiefe Aufl&ouml;sung mit Flussmittel Stufen erreichbar, beim Nachverfolgen von fluoreszierenden Quellen in drei Dimensionen im Leben-Zelle Biologie und ist, dass die Methode f&uuml;r die dreidimensionale Foto aktivierte Lokalisierung Mikroskopie Aufl&ouml;sung geeignet ist. Sub-Nanometer Aufl&ouml;sung k&ouml;nnte mit Photonen-Techniken auf hohen bei Ebenen erreicht werden.

Nanometrischen Tiefe Aufl&ouml;sung von Multi-Images in der Mikroskopie.

Descriviamo un metodo per rilevare la posizione delle piccole caratteristiche in tre dimensioni da immagini registrate su un microscopio standard con un collegamento economico tra la fotocamera e il microscopio. L&#39;accuratezza di misura di profondit&agrave; di questo metodo &egrave; testato sperimentalmente su un microscopio wide-field, invertito ed &egrave; indicato per dare circa 8 risoluzione profondit&agrave; nm, sopra una profondit&agrave; di campione di circa 6 &micro;m, quando si utilizza una fotocamera 12-bit charge coupled device (CCD) e particelle molto luminosi ma non risolti. Per valutare la low-flux limitazioni un modello teorico &egrave; utilizzato per derivare un&#39;espressione analitica per la minima varianza associata. Le approssimazioni usate nel trattamento analitico sono testate mediante simulazioni numeriche. Si &egrave; concluso che circa 14 nm profondit&agrave; risoluzione &egrave; realizzabile con livelli di flusso disponibili quando il rilevamento delle sorgenti fluorescenti in tre dimensioni nella biologia delle cellule vive e che il metodo &egrave; adatto per la risoluzione di microscopia tridimensionale localizzazione foto-attivato. Risoluzione Sub-nanometro potrebbe essere raggiunto con le tecniche di photon counting a livelli ad alto flusso.

Risoluzione nanometrica profondit&agrave; da plurifocale immagini in microscopia.

&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;&#x9855;&#x5FAE;&#x93E1;&#x3068;&#x30AB;&#x30E1;&#x30E9;&#x306E;&#x9593;&#x306B;&#x5B89;&#x4FA1;&#x306A;&#x6DFB;&#x4ED8;&#x30D5;&#x30A1;&#x30A4;&#x30EB;&#x4ED8;&#x304D;&#x306E;&#x6A19;&#x6E96;&#x7684;&#x306A;&#x9855;&#x5FAE;&#x93E1;&#x306B;&#x8A18;&#x9332;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x753B;&#x50CF;&#x304B;&#x3089;&#x4E09;&#x6B21;&#x5143;&#x306E;&#x5C0F;&#x3055;&#x306A;&#x6A5F;&#x80FD;&#x306E;&#x4F4D;&#x7F6E;&#x3092;&#x8FFD;&#x8DE1;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3092;&#x8AAC;&#x660E;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x30E1;&#x30BD;&#x30C3;&#x30C9;&#x306E;&#x6DF1;&#x3055;&#x6E2C;&#x5B9A;&#x7CBE;&#x5EA6;&#x306F;12&#x30D3;&#x30C3;&#x30C8;&#x306E;&#x96FB;&#x8377;&#x7D50;&#x5408;&#x7D20;&#x5B50;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3059;&#x308B;&#x5834;&#x5408;&#x306F;&#x3001;&#x5E83;&#x8996;&#x91CE;&#x3001;&#x5012;&#x7ACB;&#x9855;&#x5FAE;&#x93E1;&#x3067;&#x5B9F;&#x9A13;&#x7684;&#x306B;&#x30C6;&#x30B9;&#x30C8;&#x3055;&#x308C;&#x3001;&#x7D04;6&#x3BC;m&#x306E;&#x8A66;&#x6599;&#x306E;&#x6DF1;&#x3055;&#x306B;&#x308F;&#x305F;&#x3063;&#x3066;&#x3001;&#x7D04;8 nm&#x306E;&#x6DF1;&#x3055;&#x5206;&#x89E3;&#x80FD;&#x3092;&#x4E0E;&#x3048;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x793A;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#xFF08; CCD&#xFF09;&#x30AB;&#x30E1;&#x30E9;&#x3068;&#x975E;&#x5E38;&#x306B;&#x660E;&#x308B;&#x3044;&#x304C;&#x672A;&#x89E3;&#x6C7A;&#x306E;&#x7C92;&#x5B50;&#x3002;&#x4F4E;&#x30D5;&#x30E9;&#x30C3;&#x30AF;&#x30B9;&#x306E;&#x5236;&#x9650;&#x3092;&#x8A55;&#x4FA1;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x7406;&#x8AD6;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x304C;&#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C9;&#x6700;&#x5C0F;&#x5206;&#x6563;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x89E3;&#x6790;&#x5F0F;&#x3092;&#x5C0E;&#x51FA;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x4F7F;&#x7528;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x5206;&#x6790;&#x6CBB;&#x7642;&#x306B;&#x4F7F;&#x7528;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x8FD1;&#x4F3C;&#x5024;&#x306F;&#x3001;&#x6570;&#x5024;&#x30B7;&#x30DF;&#x30E5;&#x30EC;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x3066;&#x30C6;&#x30B9;&#x30C8;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x751F;&#x7D30;&#x80DE;&#x751F;&#x7269;&#x5B66;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x65B9;&#x6CD5;&#x306F;&#x3001;&#x4E09;&#x6B21;&#x5143;&#x5149;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x5C40;&#x5728;&#x9855;&#x5FAE;&#x93E1;&#x306E;&#x89E3;&#x50CF;&#x5EA6;&#x306B;&#x9069;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x4E09;&#x6B21;&#x5143;&#x306E;&#x86CD;&#x5149;&#x6E90;&#x3092;&#x8FFD;&#x8DE1;&#x3059;&#x308B;&#x3068;&#x304D;&#x3001;&#x305D;&#x308C;&#x306F;&#x7D04;14 nm&#x306E;&#x6DF1;&#x3055;&#x5206;&#x89E3;&#x80FD;&#x304C;&#x53EF;&#x80FD;&#x30D5;&#x30E9;&#x30C3;&#x30AF;&#x30B9;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x3067;&#x9054;&#x6210;&#x53EF;&#x80FD;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3068;&#x7D50;&#x8AD6;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x3002;&#x30B5;&#x30D6;&#x30CA;&#x30CE;&#x30E1;&#x30FC;&#x30C8;&#x30EB;&#x306E;&#x5206;&#x89E3;&#x80FD;&#x306F;&#x3001;&#x9AD8;&#x78C1;&#x675F;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x3067;&#x30D5;&#x30A9;&#x30C8;&#x30F3;&#x30AB;&#x30A6;&#x30F3;&#x30C6;&#x30A3;&#x30F3;&#x30B0;&#x6280;&#x8853;&#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x3066;&#x9054;&#x6210;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x308B;&#x3002;

&#x9855;&#x5FAE;&#x93E1;&#x306E;&#x591A;&#x7126;&#x70B9;&#x753B;&#x50CF;&#x304B;&#x3089;&#x306E;&#x30CA;&#x30CE;&#x30E1;&#x30FC;&#x30C8;&#x30EB;&#x306E;&#x6DF1;&#x3055;&#x5206;&#x89E3;&#x80FD;

&#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xD45C;&#xC900; &#xD604;&#xBBF8;&#xACBD; &#xD604;&#xBBF8;&#xACBD;&#xACFC; &#xCE74;&#xBA54;&#xB77C; &#xC0AC;&#xC774;&#xC758; &#xC800;&#xB834; &#xD55C; &#xCCA8;&#xBD80; &#xD30C;&#xC77C;&#xC5D0; &#xAE30;&#xB85D; &#xB41C; &#xC774;&#xBBF8;&#xC9C0;&#xC5D0;&#xC11C; 3 &#xCC28;&#xC6D0;&#xC5D0; &#xC791;&#xC740; &#xAE30;&#xB2A5; &#xB4E4;&#xC758; &#xC704;&#xCE58;&#xB97C; &#xCD94;&#xC801; &#xD558;&#xB294; &#xBC29;&#xBC95;&#xC744; &#xC124;&#xBA85; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774; &#xBC29;&#xBC95;&#xC758; &#xAE4A;&#xC774; &#xCE21;&#xC815; &#xC815;&#xD655;&#xB3C4; &#xB113;&#xC740; &#xD544;&#xB4DC;, &#xAC70;&#xAFB8;&#xB85C; &#xD604;&#xBBF8;&#xACBD;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC2E4;&#xD5D8;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xD14C;&#xC2A4;&#xD2B8; &#xD558; &#xACE0; &#xC57D; 8 &#xC904; &#xD45C;&#xC2DC; &micro; &#xC57D; 6 m, 12-&#xBE44;&#xD2B8; &#xC804; &#xD558; &#xACB0;&#xD569; &#xC18C;&#xC790; (CCD) &#xCE74;&#xBA54;&#xB77C;&#xC640; &#xB9E4;&#xC6B0; &#xBC1D;&#xC740; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xD655;&#xC778; &#xB418;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC740; &#xC785;&#xC790;&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558;&#xB294; &#xACBD;&#xC6B0;&#xC758; &#xD45C;&#xBCF8; &#xAE4A;&#xC774; &#xC774;&#xC0C1; nm &#xAE4A;&#xC774; &#xD574;&#xC0C1;&#xB3C4;. &#xB0AE;&#xC740; &#xC720;&#xB7C9; &#xC81C;&#xD55C; &#xC0AC;&#xD56D;&#xC744; &#xD3C9;&#xAC00; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD574; &#xC774;&#xB860;&#xC801; &#xBAA8;&#xB378; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xB41C; &#xCD5C;&#xC18C; &#xD3B8;&#xCC28;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xBD84;&#xC11D; &#xC2DD;&#xC744; &#xD30C;&#xC0DD; &#xC2DC;&#xD0A4;&#xB294; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xBD84;&#xC11D; &#xCE58;&#xB8CC;&#xC5D0; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558;&#xB294; &#xADFC;&#xC0AC; &#xC218;&#xCE58; &#xC2DC;&#xBBAC;&#xB808;&#xC774;&#xC158;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xD14C;&#xC2A4;&#xD2B8; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xADF8;&#xAC83;&#xC740; &#xC57D; 14 nm &#xAE4A;&#xC774; &#xD574;&#xACB0; &#xBC29;&#xBC95;&#xC740; 3 &#xCC28;&#xC6D0; &#xC0AC;&#xC9C4; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xC9C0;&#xC5ED;&#xD654; &#xD604;&#xBBF8;&#xACBD; &#xD574;&#xC0C1;&#xB3C4;&#xC5D0; &#xC801;&#xD569; &#xD55C; &#xB77C;&#xC774;&#xBE0C; &#xC138;&#xD3EC; &#xC0DD;&#xBB3C;&#xD559; 3 &#xCC28;&#xC6D0;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD615;&#xAD11; &#xC18C;&#xC2A4;&#xB97C; &#xCD94;&#xC801; &#xD558;&#xB294; &#xACBD;&#xC6B0; &#xC720;&#xB7C9; &#xC218;&#xC900; &#xC0AC;&#xC6A9;&#xD560; &#xC218; &#xB2EC;&#xC131;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xB2E4; &#xACB0;&#xB860; &#xC774;&#xB2E4;. &#xC11C;&#xBE0C; &#xB098;&#xB178;&#xBBF8;&#xD130; &#xD574;&#xC0C1;&#xB3C4; &#xB192;&#xC740; &#xD50C;&#xB7ED;&#xC2A4; &#xC218;&#xC900;&#xC5D0;&#xC11C; &#xAD11;&#xC790; &#xCE74;&#xC6B4;&#xD305; &#xAE30;&#xC220;&#xB85C; &#xB2EC;&#xC131; &#xB420; &#xC218; &#xC788;&#xC5C8;&#xB2E4;.

&#xD604;&#xBBF8;&#xACBD; multi-focal &#xC774;&#xBBF8;&#xC9C0;&#xC5D0;&#xC11C; nanometric &#xAE4A;&#xC774; &#xD574;&#xC0C1;&#xB3C4;.

Se describe un m&#xE9;todo para el seguimiento de la posici&#xF3;n de los peque&#xF1;os rasgos en tres dimensiones a partir de im&#xE1;genes grabadas en un microscopio est&#xE1;ndar con un archivo adjunto de bajo costo entre el microscopio y la c&#xE1;mara. La exactitud de la profundidad de medici&#xF3;n de este m&#xE9;todo se ha probado experimentalmente en un campo amplio, microscopio invertido y se muestra para dar aproximadamente 8 nm resoluci&#xF3;n de profundidad, en un espesor de la muestra de aproximadamente 6 micras, cuando se utiliza un 12-bits dispositivo de carga acoplada ( CCD) y las part&#xED;culas muy brillantes, pero sin resolver. Para evaluar de bajo flujo limitaciones de un modelo te&#xF3;rico se utiliza para obtener una expresi&#xF3;n anal&#xED;tica para la varianza l&#xED;mite m&#xED;nimo. Las aproximaciones utilizadas en el tratamiento anal&#xED;tico se controlar&#xE1;n mediante simulaciones num&#xE9;ricas. Se concluye que aproximadamente 14 nm de resoluci&#xF3;n de profundidad se puede lograr con los niveles de flujo disponibles cuando el seguimiento de fuentes fluorescentes en tres dimensiones en vivo de c&#xE9;lulas biolog&#xED;a y que el m&#xE9;todo es adecuado para tridimensional foto-activada resoluci&#xF3;n microscop&#xED;a de localizaci&#xF3;n. Resoluci&#xF3;n sub-nanom&#xE9;trica se podr&#xED;a lograr con las t&#xE9;cnicas de conteo de fotones en los altos niveles de flujo.

Resoluci&#xF3;n Profundidad nanom&#xE9;trica de Multi-focal im&#xE1;genes en microscop&#xED;a

&#x9AA8;&#x67B6;&#x7EC4;&#x7EC7;&#x662F;&#x5EFA;&#x7ACB;&#x5728;&#x5404;&#x79CD;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x60C5;&#x51B5;&#x4E0B;&#xFF0C;&#x5305;&#x62EC;&#x671F;&#x95F4;&#x6392;&#x5E8F;&#x5728;&#x679C;&#x8747;&#x679C;&#x8747;&#x5375;&#x6BCD;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E2D;&#x7684;&#x5FAE;&#x7BA1; (MT) &#x7684;&#x4FE1;&#x4F7F;&#x6838;&#x7CD6;&#x6838;&#x9178;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6781;&#x6027;&#x7684;&#x6838;&#x5FC3;-&#x4F9D;&#x8D56;&#x7684;&#x5206;&#x5B50;&#x9A6C;&#x8FBE;&#x3002;&#x7136;&#x800C;&#xFF0C;&#x5C71;&#x7EC4;&#x7EC7;&#x548C;&#x52A8;&#x6001;&#x4ECD;&#x7136;&#x5728;&#x5375;&#x6BCD;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5F15;&#x8D77;&#x4E86;&#x4E89;&#x8BAE;&#x3002;&#x5728;&#x672C;&#x6587;&#x4E2D;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x4F7F;&#x7528;&#x5FEB;&#x901F;&#x591A;&#x901A;&#x9053;&#x6D3B;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6210;&#x50CF;&#x4E0E;&#x65B0;&#x578B;&#x56FE;&#x50CF;&#x5206;&#x6790;&#x3001; &#x8DDF;&#x8E2A;&#x548C;&#x53EF;&#x89C6;&#x5316;&#x5DE5;&#x5177;&#x5C71;&#x6781;&#x6027;&#x548C;&#x52A8;&#x529B;&#x5B66;&#x7279;&#x70B9;&#x540C;&#x65F6;&#x6210;&#x50CF;&#x540E;&#x7684;&#x8D27;&#x7269;&#x8FD0;&#x8F93;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x53D1;&#x73B0;&#x5728;&#x5375;&#x6BCD;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E2D;&#x7684;&#x6240;&#x6709; MTs &#x662F;&#x9AD8;&#x5EA6;&#x52A8;&#x6001;&#x548C;&#x4E3E;&#x529E;&#x4E86;&#x6709;&#x504F;&#x89C1;&#x7684;&#x968F;&#x673A;&#x6781;&#x6027;&#xFF0C;&#x671D;&#x540E;&#x589E;&#x52A0;&#x3002;&#x8FD9;&#x6E90;&#x4E8E;&#x5C71;&#x6210;&#x6838;&#x7684;&#x5375;&#x6BCD;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6838;&#x548C;&#x76AE;&#x8D28;&#xFF0C;&#x5728;&#x901A;&#x8FC7;&#x9664;&#x5916;&#x7684;&#x540E;&#x7AEF;&#x7684;&#x5375;&#x6BCD;&#x7EC6;&#x80DE;&#xFF0C;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC; PAR 1 &#x538B;&#x5236;&#x6210;&#x6838;&#x7684;&#x7EC4;&#x7EC7;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x7ED3;&#x679C;&#x89E3;&#x91CA;&#x5EFA;&#x7ACB;&#x751F;&#x6B96;&#x53CA;&#x540E;&#x6709;&#x504F;&#x968F;&#x673A;&#x540E;&#x8D27;&#x7269;&#x6D41;&#x52A8;&#x5728;&#x5375;&#x6BCD;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E2D;&#x3002;

&#x52A8;&#x6001;&#x5FAE;&#x7BA1;&#x4F9D;&#x8D56;&#x7684; PAR-1 &#x65B9;&#x5411;&#x68AF;&#x5EA6;&#x6307;&#x793A;&#x5728;&#x679C;&#x8747;&#x5375;&#x6BCD;&#x7EC6;&#x80DE;&#x540E;&#x7684;&#x8D27;&#x7269;&#x8FD0;&#x8F93;&#x3002;

Cytoskeletal organization is central to establishing cell polarity in various cellular contexts, including during messenger ribonucleic acid sorting in Drosophila melanogaster oocytes by microtubule (MT)-dependent molecular motors. However, MT organization and dynamics remain controversial in the oocyte. In this paper, we use rapid multichannel live-cell imaging with novel image analysis, tracking, and visualization tools to characterize MT polarity and dynamics while imaging posterior cargo transport. We found that all MTs in the oocyte were highly dynamic and were organized with a biased random polarity that increased toward the posterior. This organization originated through MT nucleation at the oocyte nucleus and cortex, except at the posterior end of the oocyte, where PAR-1 suppressed nucleation. Our findings explain the biased random posterior cargo movements in the oocyte that establish the germline and posterior.

A PAR-1-dependent orientation gradient of dynamic microtubules directs posterior cargo transport in the Drosophila oocyte.

L&#x26;#39;organisation du cytosquelette est au c&#x153;ur de l&#x26;#39;&#xE9;tablissement de la polarit&#xE9; cellulaire dans divers contextes cellulaires, y compris pendant le tri acide ribonucl&#xE9;ique messager dans les ovocytes de Drosophila melanogaster par des microtubules (MT)-d&#xE9;pendantes des moteurs mol&#xE9;culaires. Toutefois, MT organisation et la dynamique restent controvers&#xE9;es dans l&#x26;#39;ovocyte. Dans ce papier, nous utilisons rapide multicanal imagerie des cellules vivantes avec l&#x26;#39;analyse d&#x26;#39;image, de suivi et des outils de visualisation pour caract&#xE9;riser la polarit&#xE9; MT et la dynamique tandis que le transport de fret imagerie post&#xE9;rieure. Nous avons constat&#xE9; que tous les MTs dans l&#x26;#39;ovocyte ont &#xE9;t&#xE9; tr&#xE8;s dynamique et ont &#xE9;t&#xE9; organis&#xE9;es avec une polarit&#xE9; biais&#xE9;e al&#xE9;atoire qui a augment&#xE9; vers la partie post&#xE9;rieure. Cette organisation a &#xE9;t&#xE9; form&#xE9;e par nucl&#xE9;ation MT au noyau de l&#x26;#39;ovocyte et le cortex, sauf &#xE0; l&#x26;#39;extr&#xE9;mit&#xE9; post&#xE9;rieure de l&#x26;#39;ovocyte, o&#xF9; PAR-1 nucl&#xE9;ation supprim&#xE9;e. Nos r&#xE9;sultats expliquent les mouvements de marchandises biais&#xE9;es al&#xE9;atoires post&#xE9;rieures dans l&#x26;#39;ovocyte qui &#xE9;tablissent la lign&#xE9;e germinale et post&#xE9;rieure.

Un gradient d&#x26;#39;orientation PAR-1-d&#xE9;pendante des microtubules dynamiques Diriger Cargo Transport post&#xE9;rieur de l&#x26;#39;ovocyte chez la drosophile

Zytoskelett-Organisation ist entscheidend f&uuml;r die Festlegung der Zellpolarit&auml;t in verschiedenen zellul&auml;ren zusammenh&auml;ngen, einschlie&szlig;lich w&auml;hrend der Sortierung in Drosophila Melanogaster Eizellen von Microtubule (MT) Messenger-Ribonukleins&auml;ure-abh&auml;ngige molekulare Motoren. MT-Organisation und Dynamik bleiben jedoch umstritten in der Eizelle. In diesem Papier verwenden wir schnelle Mehrkanal Leben-Zelle imaging mit neuartigen Bildanalyse, Ortungs- und Visualisierung Tools, um MT Polarit&auml;t und Dynamik zu charakterisieren, w&auml;hrend imaging posterior Frachtverkehr. Wir fanden, dass alle MTs in der Eizelle hochdynamische und wurden mit einer voreingenommenen zuf&auml;llige Polarit&auml;t, die in Richtung der hinteren erh&ouml;ht organisiert. Diese Organisation entstand durch MT Keimbildung im Zellkern der Eizelle und Kortex, au&szlig;er am hinteren Ende der Eizelle, wo PAR-1 Keimbildung unterdr&uuml;ckt. Unsere Erkenntnisse erkl&auml;ren die voreingenommene zuf&auml;llige posterior Fracht-Bewegungen in der Eizelle, die Einrichten der Keimbahn und Posterior.

PAR-1-abh&auml;ngigen Orientierung Steigung dynamische Mikrotubuli leitet posterior Frachtverkehr in der Taufliege-Eizelle.

Organizzazione del citoscheletro &egrave; centrale per stabilire la polarit&agrave; delle cellule in vari contesti di cellulari, tra cui durante l&#39;ordinamento in ovociti di Drosophila melanogaster da microtubuli (MT) l&#39;acido ribonucleico Messaggero-dipendenti motori molecolari. Tuttavia, dinamiche e organizzazione MT rimangono controversi nell&#39;ovocita. In questa carta, usiamo rapida multicanale live-cella strumenti di imaging con visualizzazione, rilevamento e analisi di immagine romanzo per caratterizzare la polarit&agrave; MT e dinamica durante il trasporto di carico posteriore di imaging. Abbiamo scoperto che tutte le MTs in ovocita erano altamente dinamico e sono stati organizzati con una parziale polarit&agrave; casuale che aumenta verso la parte posteriore. Questa organizzazione originata attraverso nucleazione MT presso il nucleo degli ovociti e la corteccia, tranne sull&#39;estremit&agrave; posteriore dell&#39;ovocita, dove PAR-1 soppresso nucleazione. I nostri risultati spiegano i movimenti distorto carico posteriore casuale nell&#39;ovocita che stabiliscono la linea germinale e la parte posteriore.

Una sfumatura di orientamento PAR-1-dipendente della dinamici dei microtubuli dirige il trasporto cargo posteriore nell&#39;ovocita drosofila.

&#x7D30;&#x80DE;&#x9AA8;&#x683C;&#x306E;&#x7D44;&#x7E54;&#x306F;&#x5FAE;&#x5C0F;&#x7BA1;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x30AD;&#x30A4;&#x30ED;&#x30B7;&#x30E7;&#x30A6;&#x30B8;&#x30E7;&#x30A6;&#x30D0;&#x30A8;&#x306E;&#x5375;&#x6BCD;&#x7D30;&#x80DE;&#x3067;&#x306E;&#x30BD;&#x30FC;&#x30C8;&#x30E1;&#x30C3;&#x30BB;&#x30F3;&#x30B8;&#x30E3;&#x30FC;&#x30EA;&#x30DC;&#x6838;&#x9178;&#xFF08;MT&#xFF09;&#x306B;&#x4F9D;&#x5B58;&#x3057;&#x305F;&#x5206;&#x5B50;&#x30E2;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x306E;&#x9593;&#x306A;&#x3069;&#x3001;&#x3055;&#x307E;&#x3056;&#x307E;&#x306A;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x6587;&#x8108;&#x3067;&#x7D30;&#x80DE;&#x6975;&#x6027;&#x306E;&#x78BA;&#x7ACB;&#x306E;&#x4E2D;&#x5FC3;&#x3068;&#x306A;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3057;&#x304B;&#x3057;&#x3001;MT&#x306E;&#x7D44;&#x7E54;&#x3068;&#x529B;&#x5B66;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x5375;&#x6BCD;&#x7D30;&#x80DE;&#x3067;&#x7269;&#x8B70;&#x3092;&#x91B8;&#x3059;&#x6B8B;&#x3063;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x672C;&#x7A3F;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x30A4;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B8;&#x30F3;&#x30B0;&#x5F8C;&#x90E8;&#x8CA8;&#x7269;&#x8F38;&#x9001;&#x3057;&#x306A;&#x304C;&#x3089;MT&#x306E;&#x6975;&#x6027;&#x3068;&#x30C0;&#x30A4;&#x30CA;&#x30DF;&#x30AF;&#x30B9;&#x3092;&#x7279;&#x5FB4;&#x3065;&#x3051;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x65B0;&#x305F;&#x306A;&#x753B;&#x50CF;&#x89E3;&#x6790;&#x3001;&#x30C8;&#x30E9;&#x30C3;&#x30AD;&#x30F3;&#x30B0;&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x8996;&#x899A;&#x5316;&#x30C4;&#x30FC;&#x30EB;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x8FC5;&#x901F;&#x306A;&#x30DE;&#x30EB;&#x30C1;&#x30C1;&#x30E3;&#x30F3;&#x30CD;&#x30EB;&#xB7;&#x30E9;&#x30A4;&#x30D6;&#x30BB;&#x30EB;&#x30A4;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B8;&#x30F3;&#x30B0;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x79C1;&#x305F;&#x3061;&#x306F;&#x3001;&#x5375;&#x6BCD;&#x7D30;&#x80DE;&#x5185;&#x306E;&#x3059;&#x3079;&#x3066;&#x306E;MT&#x304C;&#x975E;&#x5E38;&#x306B;&#x52D5;&#x7684;&#x3067;&#x3042;&#x3063;&#x305F;&#x3068;&#x5F8C;&#x65B9;&#x306B;&#x5411;&#x304B;&#x3063;&#x3066;&#x5897;&#x52A0;&#x3057;&#x305F;&#x30D0;&#x30A4;&#x30A2;&#x30B9;&#x30E9;&#x30F3;&#x30C0;&#x30E0;&#x6975;&#x6027;&#x3067;&#x958B;&#x50AC;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x308F;&#x304B;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x7D44;&#x7E54;&#x306F;&#x3001;&#x5375;&#x6BCD;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x5F8C;&#x7AEF;&#x3001;PAR-1&#x3092;&#x6291;&#x5236;&#x3057;&#x305F;&#x6838;&#x3092;&#x9664;&#x3044;&#x3066;&#x3001;&#x5375;&#x6BCD;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x6838;&#x3068;&#x76AE;&#x8CEA;&#x3067;&#x306F;MT&#x306E;&#x6838;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x3066;&#x59CB;&#x307E;&#x308A;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x4ECA;&#x56DE;&#x306E;&#x77E5;&#x898B;&#x306F;&#x3001;&#x751F;&#x6B96;&#x7D30;&#x80DE;&#x3068;&#x5F8C;&#x3092;&#x78BA;&#x7ACB;&#x3057;&#x305F;&#x5375;&#x6BCD;&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x504F;&#x3063;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x30E9;&#x30F3;&#x30C0;&#x30E0;&#x5F8C;&#x90E8;&#x8CA8;&#x7269;&#x306E;&#x52D5;&#x304D;&#x3092;&#x8AAC;&#x660E;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x52D5;&#x7684;&#x306A;&#x5FAE;&#x5C0F;&#x7BA1;&#x306E;PAR-1&#x4F9D;&#x5B58;&#x30AA;&#x30EA;&#x30A8;&#x30F3;&#x30C6;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x30B0;&#x30E9;&#x30C7;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x30B7;&#x30E7;&#x30A6;&#x30B8;&#x30E7;&#x30A6;&#x30D0;&#x30A8;&#x306E;&#x5375;&#x6BCD;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x5F8C;&#x65B9;&#x8CA8;&#x7269;&#x8F38;&#x9001;&#x3092;&#x6307;&#x793A;

Cytoskeletal &#xC870;&#xC9C1; &#xC138;&#xD3EC; &#xADF9;&#xC131; &#xBA54;&#xC2E0;&#xC800; ribonucleic &#xC0B0; microtubule (&#xC0B0;)&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; Drosophila melanogaster oocytes&#xC5D0;&#xC11C; &#xC815;&#xB82C; &#xD558;&#xB294; &#xB3D9;&#xC548; &#xD3EC;&#xD568; &#xD558; &#xC5EC; &#xB2E4;&#xC591; &#xD55C; &#xC138;&#xD3EC; &#xCEE8;&#xD14D;&#xC2A4;&#xD2B8;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC124;&#xC815; &#xC911;&#xC2EC; &#xC774;&#xB2E4;-&#xC885;&#xC18D; &#xBD84;&#xC790; &#xBAA8;&#xD130;. &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098;, &#xB9C8;&#xC6B4;&#xD2B8; &#xC870;&#xC9C1; &#xBC0F; &#xC5ED;&#xD559;&#xC740; oocyte &#xB17C;&#xB780;&#xC774; &#xB0A8;&#xC544; &#xC788;&#xB2E4;. &#xC774; &#xC885;&#xC774; &#xD6C4;&#xBD80; &#xD654;&#xBB3C; &#xC218;&#xC1A1;&#xC744; &#xC774;&#xBBF8;&#xC9D5; &#xD558;&#xB294; &#xB3D9;&#xC548; &#xB9C8;&#xC6B4;&#xD2B8; &#xADF9;&#xC131; &#xBC0F; &#xC5ED;&#xD559; &#xD2B9;&#xC131;&#xC744; &#xACE0;&#xC18D; &#xBA40;&#xD2F0; &#xCC44;&#xB110; &#xB77C;&#xC774;&#xBE0C; &#xC140; &#xC774;&#xBBF8;&#xC9D5; &#xC18C;&#xC124; &#xC774;&#xBBF8;&#xC9C0; &#xBD84;&#xC11D;, &#xCD94;&#xC801;, &#xBC0F; &#xC2DC;&#xAC01;&#xD654; &#xB3C4;&#xAD6C;&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; &#xBC1C;&#xACAC; &#xB41C; oocyte &#xBAA8;&#xB4E0; MTs &#xB9E4;&#xC6B0; &#xC5ED;&#xB3D9;&#xC801;&#xC778; &#xD588;&#xB2E4; &#xC99D;&#xAC00; &#xB4B7;&#xBD80;&#xBD84; &#xCABD;&#xC73C;&#xB85C; &#xD3B8; &#xD30C; &#xC784;&#xC758; &#xADF9;&#xC131;&#xC73C;&#xB85C; &#xC870;&#xC9C1; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;. &#xC774; &#xC870;&#xC9C1;&#xC744; &#xD1B5;&#xD574; &#xC720;&#xB798; oocyte &#xD575;&#xACFC; &#xD53C; &#xC9C8;, MT nucleation &#xC81C;&#xC678;&#xD55C; oocyte, &#xD6C4;&#xBD80; &#xB05D;&#xC5D0; &#xC5B4;&#xB514; &#xD30C; 1 nucleation &#xC5B5;&#xC81C;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xC5F0;&#xAD6C; &#xACB0;&#xACFC; &#xD6C4;&#xBD80; &#xD654;&#xBB3C; &#xD3B8; &#xD30C; &#xC784;&#xC758; &#xC6C0;&#xC9C1;&#xC784;&#xC740; oocyte&#xC5D0; &#xBC88;&#xC9F8; &#xBC0F; &#xD6C4;&#xBD80;&#xB97C; &#xC124;&#xC815; &#xD558;&#xB294; &#xC124;&#xBA85; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xB3D9;&#xC801; microtubules&#xC758; &#xD30C; 1 &#xC885;&#xC18D; &#xBC29;&#xD5A5; &#xADF8;&#xB77C;&#xB370;&#xC774;&#xC158; Drosophila oocyte&#xC5D0; &#xD6C4;&#xBD80; &#xD654;&#xBB3C; &#xC218;&#xC1A1;&#xC744; &#xC9C0;&#xC2DC;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

La organizaci&#xF3;n del citoesqueleto es fundamental para el establecimiento de la polaridad celular en varios contextos celulares, incluyendo durante la clasificaci&#xF3;n &#xE1;cido ribonucleico mensajero en Drosophila melanogaster los ovocitos por los microt&#xFA;bulos (MT) que dependen de los motores moleculares. Sin embargo, MT organizaci&#xF3;n y la din&#xE1;mica siguen siendo controvertidos en el ovocito. En este trabajo se utiliza multicanal r&#xE1;pida de im&#xE1;genes en vivo de las c&#xE9;lulas con el an&#xE1;lisis de la imagen novedosa, el seguimiento y herramientas de visualizaci&#xF3;n para caracterizar la polaridad y la din&#xE1;mica de MT mientras que el transporte de carga de im&#xE1;genes posteriores. Se encontr&#xF3; que todas las MT en el ovocito fueron muy din&#xE1;mico y se organizaron con una polaridad sesgada al azar que aumentaron hacia la parte posterior. Esta organizaci&#xF3;n se origin&#xF3; a trav&#xE9;s de la nucleaci&#xF3;n MT en el n&#xFA;cleo de los ovocitos y la corteza, excepto en el extremo posterior de los ovocitos, donde PAR-1 nucleaci&#xF3;n suprimida. Nuestros resultados explican los movimientos aleatorios de carga parciales posteriores en el ovocito, que establecen la l&#xED;nea germinal y posterior.

Un gradiente de Orientaci&#xF3;n PAR-1-dependiente de microt&#xFA;bulos din&#xE1;micos Dirige el Transporte de Carga posterior en el ovocito Drosophila

OMX&#xFF1A; &#x591A;&#x5F0F;&#x8054;&#x8FD0;&#x3001; &#x591A;&#x901A;&#x9053;&#x5BBD;&#x89C6;&#x573A;&#x6210;&#x50CF;&#x65B0;&#x7684;&#x5E73;&#x53F0;&#x3002;

OMX: a new platform for multimodal, multichannel wide-field imaging.

OMX: une nouvelle plateforme pour multimodale, multi-canal imagerie &#xE0; grand champ

OMX: eine neue Plattform f&uuml;r multimodale, Mehrkanal-weite-Feld-Bildgebung.

OMX: una nuova piattaforma per l&#39;imaging multimodale, multicanale wide-field.

OMX&#xFF1A;&#x30DE;&#x30EB;&#x30C1;&#x30E2;&#x30FC;&#x30C0;&#x30EB;&#x3001;&#x30DE;&#x30EB;&#x30C1;&#x5E83;&#x8996;&#x91CE;&#x30A4;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B8;&#x30F3;&#x30B0;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x65B0;&#x3057;&#x3044;&#x30D7;&#x30E9;&#x30C3;&#x30C8;&#x30D5;&#x30A9;&#x30FC;&#x30E0;

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OMX: una nueva plataforma para el transporte multimodal, el multicanal de gran campo de imagen

&#x81EA;&#x7136;&#x6740;&#x624B; (NK) &#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x5206;&#x6CCC;&#x6EB6;&#x7684;&#x9897;&#x7C92;&#xFF0C;&#x53EF;&#x4EE5;&#x76F4;&#x63A5;&#x6740;&#x6B7B;&#x75C5;&#x6BD2;&#x611F;&#x67D3;&#x6216;&#x5DF2;&#x8F6C;&#x6362;&#x7684;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x8DE8;&#x8D8A;&#x514D;&#x75AB;&#x7A81;&#x89E6;&#x7684;&#x5148;&#x5929;&#x514D;&#x75AB;&#x7EC6;&#x80DE;&#x3002;&#x4F46;&#x662F;&#xFF0C;&#x7406;&#x89E3;&#x8FD9;&#x4E2A;&#x8FC7;&#x7A0B;&#x7684;&#x4E3B;&#x8981;&#x5DEE;&#x8DDD;&#x662F;&#x5728;&#x5EFA;&#x7ACB;&#x5982;&#x4F55;&#x6EB6;&#x9897;&#x7C92;&#x7A7F;&#x8FC7;&#x76AE;&#x5C42;&#x808C;&#x52A8;&#x86CB;&#x767D;&#x5DF2;&#x77E5;&#x57FA;&#x7840; NK &#x7EC6;&#x80DE;&#x819C;&#x7F51;&#x683C;&#x3002;&#x7814;&#x7A76;&#x4E00;&#x76F4;&#x53D7;&#x5230;&#x4F20;&#x7EDF;&#x7684;&#x5149;&#x5B66;&#x663E;&#x5FAE;&#x955C;&#x7684;&#x5206;&#x8FA8;&#x7387;&#xFF0C;&#x662F;&#x592A;&#x4F4E;&#x7684;&#x89E3;&#x51B3;&#x76AE;&#x5C42;&#x808C;&#x52A8;&#x86CB;&#x767D;&#x5728;&#x6EB6;&#x9897;&#x7C92;&#x5206;&#x6CCC;&#x8FC7;&#x7A0B;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#x6211;&#x4EEC;&#x4F7F;&#x7528;&#x4E24;&#x4E2A;&#x9AD8;&#x5206;&#x8FA8;&#x7387;&#x6210;&#x50CF;&#x6280;&#x672F;&#x63A2;&#x6D4B;&#x7A81;&#x89E6;&#x7EC4;&#x7EC7; NK &#x7EC6;&#x80DE;&#x53D7;&#x4F53;&#x548C;&#x4E1D;&#x72B6; (F)-&#x808C;&#x52A8;&#x86CB;&#x767D;&#x3002;&#x5149;&#x5B66;&#x954A;&#x5B50;&#x548C;&#x6D3B;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5171;&#x805A;&#x7126;&#x663E;&#x5FAE;&#x955C;&#x7684;&#x7EC4;&#x5408;&#x663E;&#x793A; microclusters NKG2D &#x7EC4;&#x88C5;&#x6210;&#x73AF;&#x5F62;&#x7ED3;&#x6784;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x95F4;&#x7A81;&#x89E6;&#xFF0C;&#x4E2D;&#x5FC3;&#x5728; Vav1 &#x548C; Grb2 &#x4E5F;&#x79EF;&#x7D2F;&#x3002;&#x6B64;&#x73AF;&#x5F62; NK &#x7EC6;&#x80DE;&#x86CB;&#x767D;&#x7684;&#x7EC4;&#x7EC7;&#x5185;, &#x6EB6;&#x9897;&#x7C92;&#x7D2F;&#x79EF;&#x7684;&#x5206;&#x6CCC;&#x3002;&#x4F7F;&#x7528; 3D &#x7ED3;&#x6784;&#x7167;&#x660E;&#x663E;&#x5FAE;&#x955C; (3D SIM) &#x83B7;&#x5F97;&#x8D85;&#x5206;&#x8FA8;&#x7684; ~ 100 nm&#xFF0C;&#x76AE;&#x5C42;&#x808C;&#x52A8;&#x86CB;&#x767D;&#x68C0;&#x6D4B; NK &#x7EC6;&#x80DE;&#x7A81;&#x89E6;&#x4E0D;&#x8BBA;&#x4E2D;&#x90E8;&#x5730;&#x533A;&#x662F;&#x5426;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x6216;&#x6291;&#x5236;&#x4FE1;&#x53F7;&#x5360;&#x636E;&#x4E3B;&#x5BFC;&#x5730;&#x4F4D;&#x3002;&#x5F15;&#x4EBA;&#x6CE8;&#x76EE;&#x7684;&#x662F;&#xFF0C;&#x76AE;&#x5C42;&#x808C;&#x52A8;&#x86CB;&#x767D;&#x7F51;&#x683C;&#x7684;&#x5468;&#x671F;&#x5728;&#x7A81;&#x89E6;&#x5728;&#x7279;&#x5B9A;&#x57DF;&#x4E2D;&#x589E;&#x52A0; NK &#x7EC6;&#x80DE;&#x88AB;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x65F6;&#x3002;&#x4E24;&#x8272;&#x8D85;&#x5206;&#x8FA8;&#x6210;&#x50CF;&#x663E;&#x793A;&#x6EB6;&#x9897;&#x7C92;&#x505C;&#x9760;&#x6B63;&#x662F;&#x5728;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x57DF;&#x4E5F;&#x662F;&#x8FD1;&#x7AEF;&#x5230;&#x90A3;&#x91CC;&#x5FAE;&#x7BA1;&#x7EC4;&#x7EC7;&#x4E2D;&#x5FC3; &#xFF08;MTOC&#xFF09; &#x7684;&#x4E24;&#x6781;&#x5206;&#x5316;&#x3002;&#x5728;&#x4E00;&#x8D77;&#xFF0C;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x6570;&#x636E;&#x8868;&#x660E;&#x6539;&#x5EFA;&#x7684;&#x76AE;&#x5C42;&#x808C;&#x52A8;&#x86CB;&#x767D;&#x7F51;&#x53D1;&#x751F;&#x5728;&#x6EB6; NK &#x7EC6;&#x80DE;&#x514D;&#x75AB;&#x7A81;&#x89E6;&#x7684;&#x4E2D;&#x90E8;&#x5730;&#x533A;&#x3002;&#x8FD9;&#x662F;&#x6709;&#x53EF;&#x80FD;&#x53D1;&#x751F;&#x5176;&#x4ED6;&#x7C7B;&#x578B;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5206;&#x6CCC;&#xFF0C;&#x8FD8;&#x5F3A;&#x8C03;&#x65B0;&#x5174;&#x900F;&#x9732;&#x65B0;&#x751F;&#x7269;&#x5B66;&#x8D85;&#x5206;&#x8FA8;&#x6210;&#x50CF;&#x6280;&#x672F;&#x7684;&#x91CD;&#x8981;&#x6027;&#x3002;

&#x51E1;&#x6EB6;&#x9897;&#x7C92;&#x505C;&#x9760;&#x5728;&#x63ED;&#x793A;&#x7684;&#x8D85;&#x5206;&#x8FA8;&#x7387;&#x663E;&#x5FAE;&#x955C;&#x7684;&#x81EA;&#x7136;&#x6740;&#x4F24;&#x7EC6;&#x80DE;&#x514D;&#x75AB;&#x7A81;&#x89E6;&#x7684;&#x76AE;&#x5C42;&#x808C;&#x52A8;&#x86CB;&#x767D;&#x91CD;&#x5851;&#x3002;

Natural Killer (NK) cells are innate immune cells that secrete lytic granules to directly kill virus-infected or transformed cells across an immune synapse. However, a major gap in understanding this process is in establishing how lytic granules pass through the mesh of cortical actin known to underlie the NK cell membrane. Research has been hampered by the resolution of conventional light microscopy, which is too low to resolve cortical actin during lytic granule secretion. Here we use two high-resolution imaging techniques to probe the synaptic organisation of NK cell receptors and filamentous (F)-actin. A combination of optical tweezers and live cell confocal microscopy reveals that microclusters of NKG2D assemble into a ring-shaped structure at the centre of intercellular synapses, where Vav1 and Grb2 also accumulate. Within this ring-shaped organisation of NK cell proteins, lytic granules accumulate for secretion. Using 3D-structured illumination microscopy (3D-SIM) to gain super-resolution of ~100 nm, cortical actin was detected in a central region of the NK cell synapse irrespective of whether activating or inhibitory signals dominate. Strikingly, the periodicity of the cortical actin mesh increased in specific domains at the synapse when the NK cell was activated. Two-colour super-resolution imaging revealed that lytic granules docked precisely in these domains which were also proximal to where the microtubule-organising centre (MTOC) polarised. Together, these data demonstrate that remodelling of the cortical actin mesh occurs at the central region of the cytolytic NK cell immune synapse. This is likely to occur for other types of cell secretion and also emphasises the importance of emerging super-resolution imaging technology for revealing new biology.

Remodelling of cortical actin where lytic granules dock at natural killer cell immune synapses revealed by super-resolution microscopy.

Natural Killer (NK) sont les cellules immunitaires inn&#xE9;es qui s&#xE9;cr&#xE8;tent granules lytiques &#xE0; tuer directement les cellules infect&#xE9;es par le virus ou transform&#xE9;es &#xE0; travers une synapse immunologique. Cependant, une lacune majeure dans la compr&#xE9;hension de ce processus consiste &#xE0; &#xE9;tablir comment granules lytiques passer &#xE0; travers les mailles de l&#x26;#39;actine corticale connue &#xE0; la base de la membrane des cellules NK. La recherche a &#xE9;t&#xE9; entrav&#xE9;e par la r&#xE9;solution de la microscopie optique conventionnelle, qui est trop faible pour r&#xE9;soudre actine corticale lors de la s&#xE9;cr&#xE9;tion des granules lytiques. Ici, nous utilisons deux techniques d&#x26;#39;imagerie haute r&#xE9;solution pour sonder l&#x26;#39;organisation synaptique des r&#xE9;cepteurs des cellules NK et filamenteuse (F)-actine. Une combinaison de pinces optiques et la microscopie confocale de cellules vivantes r&#xE9;v&#xE8;le que microamas de NKG2D assembler en une structure en forme d&#x26;#39;anneau au centre de synapses intercellulaires, o&#xF9; VAV1 et Grb2 &#xE9;galement s&#x26;#39;accumuler. Dans cette organisation en forme d&#x26;#39;anneau de prot&#xE9;ines des cellules NK, des granules lytiques accumuler pour la s&#xE9;cr&#xE9;tion. En utilisant la microscopie &#xE9;clairement 3D-structur&#xE9;e (3D-SIM) pour obtenir de super-r&#xE9;solution de ~ 100 nm, l&#x26;#39;actine corticale a &#xE9;t&#xE9; d&#xE9;tect&#xE9;e dans une r&#xE9;gion centrale de la synapse des cellules NK ind&#xE9;pendamment du fait que les signaux d&#x26;#39;activation ou d&#x26;#39;inhibition dominent. &#xC9;tonnamment, la p&#xE9;riodicit&#xE9; de la maille actine corticale accrue dans des domaines sp&#xE9;cifiques &#xE0; la synapse lorsque la cellule NK a &#xE9;t&#xE9; activ&#xE9;. Deux couleurs de super-r&#xE9;solution d&#x26;#39;imagerie a r&#xE9;v&#xE9;l&#xE9; que granules lytiques amarr&#xE9; pr&#xE9;cis&#xE9;ment dans ces domaines qui &#xE9;taient aussi proximale &#xE0; l&#x26;#39;endroit o&#xF9; le microtubule-centre organisateur (MTOC) polaris&#xE9;e. Ensemble, ces donn&#xE9;es d&#xE9;montrent que le remodelage de la maille actine corticale se produit dans la r&#xE9;gion centrale de la synapse des cellules NK cytolytique immunitaire. Il est probable de se produire pour d&#x26;#39;autres types de s&#xE9;cr&#xE9;tion cellulaire et souligne &#xE9;galement l&#x26;#39;importance de la technologie d&#x26;#39;imagerie &#xE9;mergentes super-r&#xE9;solution pour r&#xE9;v&#xE9;ler la nouvelle biologie.

Transformations de l&#x26;#39;actine corticale O&#xF9; granules lytiques Dock &#xE0; Synapses des cellules tueuses naturelles immunitaire r&#xE9;v&#xE9;l&#xE9;es par super-r&#xE9;solution microscopie

Nat&uuml;rliche Killer (NK) Zellen sind angeborene immune Zellen, die lytische Granulat direkt abzut&ouml;ten, infizierte oder transformierte Zellen &uuml;ber einen immun Synapse absondern. Jedoch ist eine gro&szlig;e L&uuml;cke im Verst&auml;ndnis dieses Prozesses in Festlegung wie lytischer Granulat passieren das Gitter der kortikalen Aktin bekannt, dass die NK-Zell-Membran zugrunde liegen. Forschung hat behindert durch die Aufl&ouml;sung der konventionellen Lichtmikroskopie, die ist zu niedrig, kortikale Aktin w&auml;hrend lytischer Untermodul Sekretion zu l&ouml;sen. Hier verwenden wir zwei hochaufl&ouml;sende bildgebende Verfahren zur probe der synaptischen Organisation der NK-Zell-Rezeptoren und filament&ouml;sen F-Aktin. Eine Kombination aus optischen Pinzette und Leben Zelle confocal Mikroskopie zeigt, dass Mikrocluster von NKG2D in eine ringf&ouml;rmige Struktur im Zentrum der interzellul&auml;ren Synapsen montieren, wo sammeln Vav1 und Grb2 auch. Innerhalb dieser Organisation ringf&ouml;rmige NK Zelle Proteine akkumulieren lytischer Granulat f&uuml;r Sekretion. Mit 3D-strukturierte Beleuchtung, Mikroskopie (3D-SIM) superaufl&ouml;sende ~ 100 zu gewinnen nm, kortikale Aktin wurde erkannt in eine zentrale Region der NK-Zelle-Synapse, unabh&auml;ngig davon, ob die Aktivierung oder hemmende Signale dominieren. Auff&auml;llig ist, erh&ouml;ht die Periodizit&auml;t der kortikalen Aktin Mesh in bestimmten Dom&auml;nen an der Synapse, wenn die NK-Zelle aktiviert wurde. Zweifarbige superaufl&ouml;sende Bildgebung ergab, dass lytische Granulat genau in diesen Dom&auml;nen, die waren auch proximale angedockt, wo das Microtubule-Veranstaltung-Zentrum (MTOC) polarisiert. Zusammen zeigen diese Daten, dass Umbau des kortikalen Aktin Mesh an der Region der CYTOLYTISCHE NK Zelle immun Synapse auftritt. Dies ist wahrscheinlich f&uuml;r andere Arten der Zelle Sekretion auftreten und auch betont die Bedeutung der Schwellenl&auml;nder superaufl&ouml;sende-imaging-Technologie f&uuml;r die Preisgabe der neuen Biologie.

Neugestaltung der kortikalen Aktin wo lytischer Granulat bei Natural Killer Cell immun Synapsen enth&uuml;llt durch superaufl&ouml;sende Mikroskopie andocken.

Naturale delle cellule Killer (NK) sono cellule del sistema immunitario innate che secernono granuli litici per uccidere direttamente le cellule infettate da virus o trasformate attraverso una sinapsi immunitaria. Tuttavia, una lacuna importante nella comprensione di questo processo &egrave; in granuli che stabilisce come litici passano attraverso le maglie della actina corticale noto sottendono alla membrana delle cellule NK. Ricerca &egrave; stato ostacolato dalla risoluzione di microscopia convenzionale, che &egrave; troppo basso per risolvere l&#39;actina corticale durante la secrezione di granuli litici. Qui usiamo due tecniche di imaging ad alta risoluzione per sondare l&#39;organizzazione sinaptica dei recettori delle cellule NK e filamentose (F)-actina. Una combinazione di una pinzetta ottica e microscopia confocale cell live rivela che microclusters del NKG2D assemblate in una struttura a forma di anello al centro della sinapsi intercellulare, dove Vav1 e Grb2 anche accumulare. All&#39;interno di questa organizzazione a forma di anello di proteine delle cellule NK, granuli litici si accumulano per la secrezione. Utilizzando la microscopia illuminazione strutturata 3D (3D-SIM) per ottenere il Super-risoluzione di ~ 100 nm, actina corticale &egrave; stato rilevato in una regione centrale della sinapsi delle cellule NK indipendentemente se attivare o segnali inibitori dominano. Sorprendentemente, la periodicit&agrave; della mesh actina corticale aumentato in domini specifici presso la sinapsi attivando le cellule NK. Imaging due colori Super-risoluzione ha rivelato che i granuli litici ancorata proprio in questi domini che sono stati anche prossimali al cui centro Organizzatore dei microtubuli (MTOC) polarizzati. Insieme, questi dati dimostrano che rimodellamento della mesh actina corticale si verifica presso la regione centrale della citolitica sinapsi immunitaria delle cellule NK. Questo &egrave; probabile che si verifichi per altri tipi di secrezione delle cellule e sottolinea anche l&#39;importanza delle emergenti tecnologie di imaging di Super-risoluzione per rivelare nuova biologia.

Rimodellamento di actina corticale dove granuli litici dock a sinapsi immunitaria delle cellule killer naturali rivelati da microscopia di Super-risoluzione.

&#x30CA;&#x30C1;&#x30E5;&#x30E9;&#x30EB;&#x30AD;&#x30E9;&#x30FC;&#xFF08;NK&#xFF09;&#x7D30;&#x80DE;&#x306F;&#x3001;&#x76F4;&#x63A5;&#x514D;&#x75AB;&#x30B7;&#x30CA;&#x30D7;&#x30B9;&#x3092;&#x8D8A;&#x3048;&#x3066;&#x3001;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x611F;&#x67D3;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x5F62;&#x8CEA;&#x8EE2;&#x63DB;&#x7D30;&#x80DE;&#x3092;&#x6BBA;&#x3059;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x6EB6;&#x89E3;&#x6027;&#x306E;&#x9846;&#x7C92;&#x3092;&#x5206;&#x6CCC;&#x3059;&#x308B;&#x81EA;&#x7136;&#x514D;&#x75AB;&#x7D30;&#x80DE;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3002;&#x305F;&#x3060;&#x3057;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x30D7;&#x30ED;&#x30BB;&#x30B9;&#x3092;&#x7406;&#x89E3;&#x3059;&#x308B;&#x4E0A;&#x3067;&#x5927;&#x304D;&#x306A;&#x30AE;&#x30E3;&#x30C3;&#x30D7;&#x304C;&#x6EB6;&#x89E3;&#x9846;&#x7C92;NK&#x7D30;&#x80DE;&#x819C;&#x306E;&#x6839;&#x5E95;&#x306B;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x77E5;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x76AE;&#x8CEA;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C1;&#x30F3;&#x306E;&#x7DB2;&#x76EE;&#x3092;&#x901A;&#x904E;&#x3059;&#x308B;&#x65B9;&#x6CD5;&#x306E;&#x78BA;&#x7ACB;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3002;&#x7814;&#x7A76;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x6EB6;&#x89E3;&#x3001;&#x9846;&#x7C92;&#x5206;&#x6CCC;&#x306E;&#x9593;&#x306B;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C1;&#x30F3;&#x3092;&#x89E3;&#x6C7A;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x4F4E;&#x3059;&#x304E;&#x308B;&#x3068;&#x3001;&#x5F93;&#x6765;&#x306E;&#x5149;&#x5B66;&#x9855;&#x5FAE;&#x93E1;&#x306E;&#x5206;&#x89E3;&#x80FD;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x59A8;&#x3052;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x3001;NK&#x7D30;&#x80DE;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x3068;&#x7CF8;&#x72B6;&#xFF08;F&#xFF09;-&#x30A2;&#x30AF;&#x30C1;&#x30F3;&#x306E;&#x30B7;&#x30CA;&#x30D7;&#x30B9;&#x306E;&#x7D44;&#x7E54;&#x3092;&#x8ABF;&#x3079;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;2&#x3064;&#x306E;&#x9AD8;&#x89E3;&#x50CF;&#x5EA6;&#x30A4;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B8;&#x30F3;&#x30B0;&#x6280;&#x8853;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x5149;&#x30D4;&#x30F3;&#x30BB;&#x30C3;&#x30C8;&#x3068;&#x751F;&#x7D30;&#x80DE;&#x5171;&#x7126;&#x70B9;&#x9855;&#x5FAE;&#x93E1;&#x306E;&#x7D44;&#x307F;&#x5408;&#x308F;&#x305B;&#x306F;&#x3001;NKG2D&#x306E;&#x30DE;&#x30A4;&#x30AF;&#x30ED;&#x30AF;&#x30E9;&#x30B9;&#x30BF;&#x30FC;&#x306F;&#x3001;Vav1&#x3068;Grb2&#x3082;&#x84C4;&#x7A4D;&#x3059;&#x308B;&#x7D30;&#x80DE;&#x9593;&#x30B7;&#x30CA;&#x30D7;&#x30B9;&#x306E;&#x4E2D;&#x5FC3;&#x306B;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;&#x72B6;&#x306E;&#x69CB;&#x9020;&#x306B;&#x7D44;&#x307F;&#x7ACB;&#x3066;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x306A;&#x3063;&#x305F;&#x3002; NK&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x3053;&#x306E;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;&#x72B6;&#x306E;&#x7D44;&#x7E54;&#x5185;&#x3067;&#x3001;&#x6EB6;&#x83CC;&#x9846;&#x7C92;&#x5206;&#x6CCC;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x84C4;&#x7A4D;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002; &#x301C;100 nm&#x306E;&#x8D85;&#x89E3;&#x50CF;&#x3092;&#x5F97;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;3&#x6B21;&#x5143;&#x69CB;&#x9020;&#x5316;&#x7167;&#x660E;&#x9855;&#x5FAE;&#x93E1;&#xFF08;3D-SIM&#xFF09;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3001;&#x76AE;&#x8CEA;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C1;&#x30F3;&#x306F;&#x3001;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x6291;&#x5236;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x304C;&#x652F;&#x914D;&#x7684;&#x304B;&#x3069;&#x3046;&#x304B;&#x306B;&#x304B;&#x304B;&#x308F;&#x3089;&#x305A;&#x3001;NK&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x30B7;&#x30CA;&#x30D7;&#x30B9;&#x306E;&#x4E2D;&#x5FC3;&#x9818;&#x57DF;&#x3067;&#x691C;&#x51FA;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3002; NK&#x7D30;&#x80DE;&#x304C;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3068;&#x304D;&#x306B;&#x9A5A;&#x304F;&#x3079;&#x304D;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3001;&#x76AE;&#x8CEA;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C1;&#x30F3;&#x30E1;&#x30C3;&#x30B7;&#x30E5;&#x306E;&#x5468;&#x671F;&#x6027;&#x306F;&#x3001;&#x30B7;&#x30CA;&#x30D7;&#x30B9;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x7279;&#x5B9A;&#x306E;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x306B;&#x5897;&#x52A0;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x4E8C;&#x8272;&#x8D85;&#x89E3;&#x50CF;&#x30A4;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B8;&#x30F3;&#x30B0;&#x306F;&#x200B;&#x200B;&#x3001;&#x6EB6;&#x83CC;&#x9846;&#x7C92;&#x304C;&#x307E;&#x305F;&#x3069;&#x3053;&#x306B;&#x5FAE;&#x5C0F;&#x7BA1;&#x5F62;&#x6210;&#x4E2D;&#x5FC3;&#xFF08;MTOC&#xFF09;&#x504F;&#x5149;&#x306E;&#x8FD1;&#x4F4D;&#x3067;&#x3042;&#x3063;&#x305F;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x3067;&#x6B63;&#x78BA;&#x306B;&#x30C9;&#x30C3;&#x30AD;&#x30F3;&#x30B0;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x4E00;&#x7DD2;&#x306B;&#x3001;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x30C7;&#x30FC;&#x30BF;&#x306F;&#x76AE;&#x8CEA;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C1;&#x30F3;&#x30E1;&#x30C3;&#x30B7;&#x30E5;&#x306E;&#x6539;&#x9020;&#x304C;&#x6EB6;&#x89E3;NK&#x7D30;&#x80DE;&#x514D;&#x75AB;&#x30B7;&#x30CA;&#x30D7;&#x30B9;&#x306E;&#x4E2D;&#x5FC3;&#x9818;&#x57DF;&#x3067;&#x8D77;&#x3053;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x306F;&#x3001;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x5206;&#x6CCC;&#x306E;&#x4ED6;&#x306E;&#x7A2E;&#x985E;&#x306E;&#x767A;&#x751F;&#x3059;&#x308B;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x3001;&#x307E;&#x305F;&#x3001;&#x65B0;&#x305F;&#x306A;&#x751F;&#x7269;&#x5B66;&#x3092;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x65B0;&#x3057;&#x3044;&#x8D85;&#x89E3;&#x50CF;&#x30A4;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B8;&#x30F3;&#x30B0;&#x6280;&#x8853;&#x306E;&#x91CD;&#x8981;&#x6027;&#x3092;&#x5F37;&#x8ABF;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;

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&#xC790;&#xC5F0; &#xD0AC;&#xB7EC; (NK) &#xC138;&#xD3EC;&#xB294; &#xC9C1;&#xC811; &#xBA74;&#xC5ED; &#xB0C5;&#xC5D0; &#xAC78;&#xCCD0; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; &#xAC10;&#xC5FC; &#xB610;&#xB294; &#xBCC0;&#xD615; &#xB41C; &#xC138;&#xD3EC;&#xB97C; &#xC8FD; &#xC77C; &#xC6A9;&#xADE0;&#xC131;&#xACFC; &#xB9BD; &#xBD84; &#xBE44; &#xD558;&#xB294; &#xD0C0;&#xACE0; &#xB09C; &#xBA74;&#xC5ED; &#xC138;&#xD3EC;. &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098;&#xC774; &#xD504;&#xB85C;&#xC138;&#xC2A4; &#xC774;&#xD574;&#xC5D0; &#xD070; &#xACA9;&#xCC28;&#xB294; &#xC124;&#xC815; &#xC5B4;&#xB5BB;&#xAC8C; &#xC6A9;&#xADE0;&#xC131;&#xACFC; &#xB9BD;&#xC5D0; &#xD1B5;&#xACFC; NK &#xC138;&#xD3EC; &#xB9C9;&#xC758; &#xAE30;&#xCD08;&#xAC00; &#xC54C;&#xB824;&#xC9C4; &#xB300;&#xB1CC; &#xD53C; &#xC9C8;&#xC758; &#xB9D0;&#xB77C; &#xBA54;&#xC26C;. &#xC5F0;&#xAD6C; &#xC6A9;&#xADE0;&#xC131;&#xACFC; &#xB9BD; &#xBD84; &#xBE44; &#xD558;&#xB294; &#xB3D9;&#xC548; &#xB300;&#xB1CC; &#xD53C; &#xC9C8;&#xC758; &#xB9D0;&#xB77C;&#xB97C; &#xD574;&#xACB0; &#xD558;&#xB294; &#xB108;&#xBB34; &#xB0AE;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xAE30;&#xC874;&#xC758; &#xAC00;&#xBCBC;&#xC6B4; &#xD604;&#xBBF8;&#xACBD;&#xC758; &#xD574;&#xC0C1;&#xB3C4; &#xC758;&#xD574; &#xBC29;&#xD574; &#xB418;&#xC5B4; &#xC788;&#xB2E4;. NK &#xC138;&#xD3EC; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4;&#xC640; filamentous (F)&#xC758; &#xC2DC; &#xB0C5; &#xC2A4; &#xC870;&#xC9C1; &#xD558; &#xB450; &#xACE0;&#xD574;&#xC0C1;&#xB3C4; &#xC774;&#xBBF8;&#xC9D5; &#xAE30;&#xBC95;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558;&#xB294; &#xC5EC;&#xAE30;-&#xB9D0;&#xB77C;. &#xAD11;&#xD559; &#xD540;&#xC14B;&#xACFC; &#xB77C;&#xC774;&#xBE0C; &#xC140; confocal &#xD604;&#xBBF8;&#xACBD; &#xAC80;&#xC0AC; &#xBC95;&#xC758; &#xC870;&#xD569; nkg2d&#xC758; microclusters vav1&#xC640; grb2&#xB3C4; &#xCD95;&#xC801; &#xC5B4;&#xB514; &#xC138;&#xD3EC; &#xC2DC; &#xB0C5; &#xC2A4;&#xC758; &#xC13C;&#xD130;&#xC5D0; &#xACE0;&#xB9AC; &#xBAA8;&#xC591;&#xC758; &#xAD6C;&#xC870;&#xB85C; &#xC870;&#xB9BD; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC900;&#xB2E4;. NK &#xC138;&#xD3EC; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xACE0;&#xB9AC; &#xBAA8;&#xC591;&#xC758; &#xC870;&#xC9C1;, &#xB0B4; &#xC6A9;&#xADE0;&#xC131;&#xACFC; &#xB9BD; &#xBD84; &#xBE44;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xB204;&#xC801; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. 3D &#xAD6C;&#xC870; &#xC870;&#xBA85; &#xD604;&#xBBF8;&#xACBD; (3D-SIM)&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; ~ 100&#xC758; &#xC288;&#xD37C; &#xD574;&#xC0C1;&#xB3C4; &#xC5BB;&#xAE30; &#xC704;&#xD574; nm, &#xB300;&#xB1CC; &#xD53C; &#xC9C8;&#xC758; &#xB9D0;&#xB77C;&#xB294; &#xAC10;&#xC9C0; &#xBD88;&#xBB38;&#xC758; NK &#xC138;&#xD3EC; &#xB0C5;&#xC758; &#xC911;&#xC559; &#xC9C0;&#xC5ED;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xC5EC;&#xBD80; &#xB610;&#xB294; &#xC5B5;&#xC81C; &#xC2E0;&#xD638;&#xB97C; &#xC9C0;&#xBC30;. &#xAE30; &#xB9C9;&#xD788;&#xAC8C;, &#xB300;&#xB1CC; &#xD53C; &#xC9C8;&#xC758; &#xB9D0;&#xB77C; &#xBA54;&#xC26C; &#xC8FC;&#xAE30; &#xC99D;&#xAC00; &#xC2DC; &#xB0C5; &#xC2A4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD2B9;&#xC815; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778; NK &#xC138;&#xD3EC;&#xB294; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xB420; &#xB54C;. 2 &#xCEEC;&#xB7EC; &#xC288;&#xD37C; &#xACE0;&#xD574;&#xC0C1;&#xB3C4; &#xC774;&#xBBF8;&#xC9D5; &#xC6A9;&#xADE0;&#xC131;&#xACFC; &#xB9BD; microtubule &#xC870;&#xC9C1; &#xC13C;&#xD130; (MTOC) polarised &#xC778;&#xC811; &#xD588;&#xB2E4; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC815;&#xD655; &#xD558; &#xAC8C; &#xB3C4;&#xD0B9; &#xBC1D;&#xD614;&#xB2E4;. &#xD568;&#xAED8;, &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xB370;&#xC774;&#xD130;&#xB294; &#xB300;&#xB1CC; &#xD53C; &#xC9C8;&#xC758; &#xB9D0;&#xB77C; &#xBA54;&#xC2DC;&#xC758; &#xAC1C;&#xC7A5; cytolytic NK &#xC138;&#xD3EC; &#xBA74;&#xC5ED; &#xB0C5;&#xC758; &#xC911;&#xBD80; &#xC9C0;&#xC5ED;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBC1C;&#xC0DD; &#xD558;&#xB294; &#xBCF4;&#xC5EC; &#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB2E4;&#xB978; &#xC720;&#xD615;&#xC758; &#xC138;&#xD3EC; &#xBD84; &#xBE44;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xBC1C;&#xC0DD; &#xAC00;&#xB2A5;&#xC131;&#xC774; &#xC774;&#xBA70; &#xB610;&#xD55C; &#xC0C8;&#xB85C;&#xC6B4; &#xC0DD;&#xBB3C;&#xD559;&#xC744; &#xB4DC;&#xB7EC;&#xB0B4;&#xB294; &#xAC83;&#xC744; &#xC704;&#xD574; &#xC288;&#xD37C; &#xACE0;&#xD574;&#xC0C1;&#xB3C4; &#xC774;&#xBBF8;&#xC9D5; &#xAE30;&#xC220;&#xC744; &#xC2E0;&#xD765;&#xC758; &#xC911;&#xC694;&#xC131;&#xC744; &#xAC15;&#xC870; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xC6A9;&#xADE0;&#xC131;&#xACFC; &#xB9BD; &#xC790;&#xC5F0; &#xD0AC;&#xB7EC; &#xC138;&#xD3EC; &#xBA74;&#xC5ED; &#xB0C5; &#xC288;&#xD37C; &#xD574;&#xC0C1;&#xB3C4; &#xD604;&#xBBF8;&#xACBD;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xACC4;&#xC2DC;&#xC5D0;&#xC11C; &#xACE0;&#xC815; &#xC704;&#xCE58; &#xD558;&#xB294; &#xB300;&#xB1CC; &#xD53C; &#xC9C8;&#xC758; &#xB9D0;&#xB77C;&#xC758; &#xAC1C;&#xC7A5;.

Article	Year
Pollen tubes exhibit regular periodic membrane trafficking events in the absence of apical extension. Journal of cell science\| PubMed ID: 12746485	2003
Isolation of Drosophila egg chambers for imaging. Cold Spring Harbor protocols\| PubMed ID: 20360356	2010
Collection and mounting of Drosophila embryos for imaging. Cold Spring Harbor protocols\| PubMed ID: 20360357	2010
Drosophila macrophage preparation and screening. Cold Spring Harbor protocols\| PubMed ID: 20360358	2010
Drosophila larval fillet preparation and imaging of neurons. Cold Spring Harbor protocols\| PubMed ID: 20360359	2010
Live cell imaging in Drosophila melanogaster. Cold Spring Harbor protocols\| PubMed ID: 20360379	2010
Making the message clear: visualizing mRNA localization. Trends in cell biology\| PubMed ID: 20444605	2010
ParticleStats: open source software for the analysis of particle motility and cytoskeletal polarity. Nucleic acids research\| PubMed ID: 20542911	2010
How the sea squirt nucleus tells mesoderm not to be endoderm. Developmental cell\| PubMed ID: 20951340	2010
Nanometric depth resolution from multi-focal images in microscopy. Journal of the Royal Society, Interface / the Royal Society\| PubMed ID: 21247948	2011
A PAR-1-dependent orientation gradient of dynamic microtubules directs posterior cargo transport in the Drosophila oocyte. The Journal of cell biology\| PubMed ID: 21746854	2011
OMX: a new platform for multimodal, multichannel wide-field imaging. Cold Spring Harbor protocols\| PubMed ID: 21807861	2011
Remodelling of cortical actin where lytic granules dock at natural killer cell immune synapses revealed by super-resolution microscopy. PLoS biology\| PubMed ID: 21931537	2011
A Cell Biologist's Guide to High Resolution Imaging. Methods in enzymology\| PubMed ID: 22264528	2012

Richard M. Parton

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