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Transmission Electron Microscopy: A Surgical Pathology Tool for Neuroblastoma

Pediatric small round blue cell tumors (PSRBCT) are an intriguing and challenging collection of neoplasms. Light microscopy of small round blue cell ...

University of Ottawa

&#x8FD9;&#x91CC;&#x6211;&#x4EEC;&#x4ECB;&#x7ECD;&#x6280;&#x672F;&#x6D4B;&#x91CF; Ca2 + &#x6210;&#x719F;&#x7D27;&#x51D1;&#x9AD3;&#x9798;&#x7684;&#x4E2D;&#x67A2;&#x795E;&#x7ECF;&#x7CFB;&#x7EDF; (CNS) &#x6D3B;&#x8F74;&#x7A81;&#x7684;&#x80DE;&#x6D46;&#x57DF;&#x4E2D;&#x7684;&#x53D8;&#x5316;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x901A;&#x8FC7;&#x4F7F;&#x7528; X-rhod-1 &#x52A0;&#x4E0A; DiOC6(3) &#x4EA7;&#x751F;&#x660E;&#x4EAE;&#x7684;&#x9AD3;&#x9798;&#x67D3;&#xFF0C;&#x4ECE;&#x800C;&#x660E;&#x786E;&#x8BC6;&#x522B;&#x7684;&#x9AD3;&#x9798;&#x7684;&#x53CC;&#x5149;&#x5B50;&#x6FC0;&#x53D1;&#x8367;&#x5149;&#x5206;&#x6790;&#x7684;&#x6307;&#x6807; Ca2 + &#x6807;&#x7B7E;&#x7684;&#x89C6;&#x795E;&#x7ECF;&#x53CA;&#x80CC;&#x4FA7;&#x5217;&#x8F74;&#x7A81;&#x7684;&#x9AD3;&#x9798;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x76EE;&#x524D;&#x672C;&#x5730;&#x5316;&#x7684; Ca2 + &#x8BB0;&#x8005;&#x5230;&#x80DE;&#x6D46;&#x57DF;&#x7684;&#x9AD3;&#x9798;&#xFF0C;&#x901A;&#x8FC7;&#x4F7F;&#x7528;&#x8367;&#x5149;&#x5BFF;&#x547D;&#x3001; &#x5149;&#x8C31;&#x6D4B;&#x91CF;&#x548C; Mn2 + &#x6DEC;&#x706B;&#x83B7;&#x5F97;&#x7684;&#x8BC1;&#x636E;&#x3002;&#x5316;&#x5B66;&#x7F3A;&#x8840;&#x589E;&#x52A0;&#x9AD3;&#x9798; X-rhod-1 &#x8367;&#x5149; &#xFF08;&#x7EA6; 30 &#x5206;&#x949F;&#x540E;&#x7684; 50%&#xFF09; &#x4F9D;&#x8D56;&#x4E8E;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5916; Ca2 + &#x7684;&#x65B9;&#x5F0F;&#x3002;&#x6291;&#x5236; Na +-&#x51CF;&#x5C11;&#x7F3A;&#x8840;&#x5F15;&#x8D77;&#x589E;&#x52A0; Ca2 + &#x4F9D;&#x8D56;&#x8C37;&#x6C28;&#x9178;&#x8F6C;&#x8FD0;&#x4F53; (TBOA) &#x4E0E;&#x6216;&#x7518;&#x6C28;&#x9178;&#x8F6C;&#x8FD0;&#x4F53; &#xFF08;&#x4E0E;&#x808C;&#x6C28;&#x9178;&#x548C; ALX 1393)&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x663E;&#x793A;&#x9AD3;&#x9798;&#x7684; N-&#x7532;&#x57FA;-D-&#x5929;&#x51AC;&#x6C28;&#x9178; (NMDA) &#x53D7;&#x4F53;&#x7531;&#x53D1;&#x8868;&#x5177;&#x4F53;&#x8F6C;&#x8FD0;&#x86CB;&#x767D;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE; Na + &#x52A0;&#x8F7D;&#x6761;&#x4EF6;&#x4E0B;&#x4E0E;&#x53D7;&#x4F24;&#x7684;&#x767D;&#x8272;&#x7269;&#x8D28;&#x7684;&#x53BB;&#x6781;&#x5316;&#x7684;&#x4E24;&#x4E2A;&#x5E38;&#x89C4; coagonists &#x8C37;&#x6C28;&#x9178;&#x548C;&#x7518;&#x6C28;&#x9178;&#x3001; &#x6FC0;&#x6D3B;&#x3002;&#x8FD9;&#x79CD;&#x65B0;&#x6280;&#x672F;&#x4FBF;&#x5229;&#x751F;&#x6D3B;&#x9AD3;&#x9798;&#xFF0C;&#x54FA;&#x4E73;&#x52A8;&#x7269;&#x4E2D;&#x67A2;&#x795E;&#x7ECF;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x7684;&#x4E00;&#x4E2A;&#x91CD;&#x8981;&#x7EC4;&#x6210;&#x90E8;&#x5206;&#x7684;&#x8BE6;&#x7EC6;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x3002;

CNS &#x9AD3;&#x9798;&#x7684;&#x53CC;&#x5149;&#x5B50;&#x663E;&#x5FAE;&#x955C;&#x514D;&#x8D39; Ca2 + &#x53D8;&#x5316;&#x7684;&#x5B9E;&#x65F6;&#x6D4B;&#x91CF;&#x3002;

Here we describe a technique for measuring changes in Ca2+ in the cytosolic domain of mature compact myelin of live axons in the central nervous system (CNS). We label the myelin sheath of optic nerve and dorsal column axons by using the Ca2+ indicator X-rhod-1 coupled with DiOC6(3) to produce bright myelin counterstaining, thereby providing unambiguous identification of the myelin sheath for analysis of two-photon excited fluorescence. We present evidence for localization of the Ca2+ reporter to the cytosolic domain of myelin, obtained by using fluorescence lifetime, spectral measurements and Mn2+ quenching. Chemical ischemia increased myelinic X-rhod-1 fluorescence (approximately 50% after 30 min) in a manner dependent on extracellular Ca2+. Inhibiting Na+-dependent glutamate transporters (with TBOA) or glycine transporters (with sarcosine and ALX-1393) reduced the ischemia-induced increase in Ca2+. We show that myelinic N-methyl-D-aspartate (NMDA) receptors are activated by the two conventional coagonists glutamate and glycine, which are released by specific transporters under conditions of cellular Na+ loading and depolarization in injured white matter. This new technique facilitates detailed studies of living myelin, a vital component of the mammalian CNS.

Real-time measurement of free Ca2+ changes in CNS myelin by two-photon microscopy.

Ici, nous d&eacute;crivons une technique pour mesurer les variations de Ca2 + dans le domaine cytosolique de mature my&eacute;line compact des axones direct dans le syst&egrave;me nerveux central (CNS). Nous &eacute;tiqueter la gaine de my&eacute;line du nerf optique et des axones de la colonne dorsale &agrave; l&#39;aide de l&#39;indicateur de Ca2 + X-rhod-1 coupl&eacute; avec DiOC6(3) pour produire la my&eacute;line lumineuse contre-coloration, permettant ainsi une identification sans &eacute;quivoque de la gaine de my&eacute;line pour l&#39;analyse de deux photons de fluorescence excit&eacute;. Nous pr&eacute;sentons des preuves pour la localisation du Ca2 + reporter au domaine cytosolique de la my&eacute;line, obtenu &agrave; l&#39;aide de la dur&eacute;e de vie de fluorescence, de mesures spectrales et de Mn2 + trempe. Isch&eacute;mie chimique a augment&eacute; myelinic par fluorescence X-rhod-1 (environ 50 % apr&egrave;s 30 min) d&#39;une mani&egrave;re d&eacute;pendante de Ca2 + extracellulaire. Inhibition de la Na +-transporteurs de glutamate d&eacute;pendant (avec TBOA) ou transporteurs de glycine (avec la sarcosine et ALX-1393) r&eacute;duit l&#39;augmentation induite par l&#39;isch&eacute;mie Ca2 +. Nous montrons que les r&eacute;cepteurs N-m&eacute;thyl-D-aspartate (NMDA) myelinic sont activ&eacute;s par le glutamate deux coagonists classiques et la glycine, qui sont lib&eacute;r&eacute;es par des transporteurs sp&eacute;cifiques dans des conditions de Na + cellulaire de chargement et de d&eacute;polarisation dans la substance blanche bless&eacute;e. Cette nouvelle technique facilite les &eacute;tudes d&eacute;taill&eacute;es de la vie la my&eacute;line, une composante essentielle du SNC chez les mammif&egrave;res.

Mesure en temps r&eacute;el libre Ca2 + changements dans la my&eacute;line CNS par microscopie biphotonique.

Hier beschreiben wir eine Technik zur Messung von Ver&auml;nderungen im Ca2 + in die Zytosolische Dom&auml;ne der Reifen kompaktes Myelin der live Axone in das Zentralnervensystem (ZNS). Wir beschriften die Myelinscheide der Sehnerv und dorsalen Spalte Axone mithilfe des Ca2 +-Indikators, den X-Rhod-1 wodurch eindeutigen Identifizierung der Myelinschicht f&uuml;r Analyse der zwei-Photonen aufgeregt Fluoreszenz in mit DiOC6(3) Verbindung, hell Myelin counterstaining, zu produzieren. Wir pr&auml;sentieren die Beweise f&uuml;r die Lokalisierung der Ca2 +-Reporter auf die Zytosolische Dom&auml;ne des Myelin, mithilfe von Fluoreszenz-Lebensdauer, Spektralmessungen und Mn2 + abschrecken. Chemische Isch&auml;mie erh&ouml;ht myelinic X-Rhod-1 Fluoreszenz (ca. 50 % nach 30 min) in einer Weise abh&auml;ngig extrazellul&auml;re Ca2 +. Hemmung der Na +-abh&auml;ngige Glutamat-Transporter (mit TBOA) oder Glycin-Transporter (mit Sarkosin und ALX-1393) verringert die Isch&auml;mie-induzierte Zunahme Ca2 +. Wir zeigen, dass myelinic N-Methyl-D-Aspartat (NMDA)-Rezeptoren aktiviert werden, indem die zwei konventionelle Coagonists Glutamat und Glycin, die durch spezifische Transporter unter Bedingungen der zellul&auml;ren Na + laden und Depolarisation in verletzten wei&szlig;en Substanz freigegeben werden. Diese neue Technik erm&ouml;glicht detaillierte Studien von lebenden Myelin, ein wichtiger Bestandteil des S&auml;ugetier-ZNS.

Echtzeit-Messung von freien Ca2 + Ver&auml;nderungen im CNS Myelin durch zwei-Photonen-Mikroskopie.

Qui descriviamo una tecnica per misurare i cambiamenti Ca2 + nel dominio citosolico del maturo compatto mielina degli assoni diretta nel sistema nervoso centrale (SNC). Etichettiamo la guaina mielinica del nervo ottico e assoni dorsali colonna utilizzando l&#39;indicatore di Ca2 + 1-X-rhod accoppiato con DiOC6(3) a produrre mielina brillante colorazione di contrasto, fornendo in tal modo l&#39;identificazione univoca della guaina mielinica per analisi del due-fotone di fluorescenza eccitata. Vi presentiamo le prove per la localizzazione del Ca2 + reporter al dominio citosolico della mielina, ottenuto utilizzando misure spettrali e vita di fluorescenza, Mn2 + tempra. Ischemia chimico aumentato myelinic fluorescenza X-rhod-1 (circa il 50% dopo 30 min) in un modo dipendente da Ca2 + extracellulare. Inibizione Na +-i trasportatori di glutammato dipendente (con TBOA) o i trasportatori di glicina (con sarcosina e ALX-1393) riduce l&#39;ischemia indotta aumento di Ca2 +. Mostriamo che myelinic recettori N-metil-D-aspartato (NMDA) sono attivati da due coagonists convenzionale glutammato e glicina, che vengono rilasciati da specifici trasportatori in condizioni di cellulare Na + caricamento e depolarizzazione nella sostanza bianca ferito. Questa nuova tecnica facilita studi dettagliati di mielina vivente, una componente vitale del sistema nervoso centrale dei mammiferi.

Misura in tempo reale di free Ca2 + modifiche nella mielina CNS da microscopia del due-fotone.

&#x3053;&#x3053;&#x3067; ca 2 + &#x306E;&#x4E2D;&#x67A2;&#x795E;&#x7D4C;&#x7CFB; &#xFF08;CNS&#xFF09; &#x306E;&#x30E9;&#x30A4;&#x30D6;&#x306E;&#x8EF8;&#x7D22;&#x306E;&#x6210;&#x719F;&#x3057;&#x305F;&#x30B3;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x30C8; &#x30DF;&#x30A8;&#x30EA;&#x30F3;&#x306E;&#x30BE;&#x30EB;&#x6027;&#x7D30;&#x80DE;&#x8CEA;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x306E;&#x5909;&#x5316;&#x3092;&#x6E2C;&#x5B9A;&#x3059;&#x308B;&#x624B;&#x6CD5;&#x306B;&#x3064;&#x3044;&#x3066;&#x8AAC;&#x660E;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005; &#x306E;&#x8996;&#x795E;&#x7D4C;&#x3068;&#x80CC;&#x5074;&#x5217;&#x8EF8;&#x7D22;&#x306E;&#x30DF;&#x30A8;&#x30EA;&#x30F3;&#x9798;&#x4E8C;&#x5149;&#x5B50;&#x52B1;&#x8D77;&#x86CD;&#x5149;&#x306E;&#x5206;&#x6790;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x305D;&#x308C;&#x306B;&#x3088;&#x308A;&#x9AC4;&#x9798;&#x306E;&#x660E;&#x767D;&#x306A;&#x8B58;&#x5225;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3001;&#x660E;&#x308B;&#x3044;&#x30DF;&#x30A8;&#x30EA;&#x30F3;&#x3092; counterstaining &#x3092;&#x751F;&#x6210;&#x3059;&#x308B; DiOC6(3) &#x3068; X-&#x30ED;&#x30FC;&#x30C9;-1 &#x3092;&#x7D50;&#x5408; ca 2 + &#x30A4;&#x30F3;&#x30B8;&#x30B1;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x30E9;&#x30D9;&#x30EB;&#x3092;&#x4ED8;&#x3051;&#x307E;&#x3059;&#x3002;Ca 2 + &#x86CD;&#x5149;&#x5BFF;&#x547D;&#x3001;&#x30B9;&#x30DA;&#x30AF;&#x30C8;&#x30EB;&#x8A08;&#x6E2C;&#x3001;mn 2 + &#x713C;&#x5165;&#x308C;&#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x3066;&#x5F97;&#x3089;&#x308C;&#x305F;&#x30DF;&#x30A8;&#x30EA;&#x30F3;&#x306E;&#x30BE;&#x30EB;&#x6027;&#x7D30;&#x80DE;&#x8CEA;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x306E;&#x30EC;&#x30DD;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x306E;&#x30ED;&#x30FC;&#x30AB;&#x30EA;&#x30BC;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x8A3C;&#x62E0;&#x3092;&#x63D0;&#x793A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x5316;&#x5B66;&#x7684;&#x865A;&#x8840;&#x7D30;&#x80DE;&#x5916; ca 2 + &#x4F9D;&#x5B58;&#x306E;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3067; myelinic &#x306E; X-&#x30ED;&#x30FC;&#x30C9;-1 &#x86CD;&#x5149; &#xFF08;&#x7D04; 30 &#x5206;&#x5F8C;&#x306E; 50 &#xFF05;&#xFF09; &#x5897;&#x52A0;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;Na + &#x963B;&#x5BB3;-&#x4F9D;&#x5B58;&#x6027;&#x30B0;&#x30EB;&#x30BF;&#x30DF;&#x30F3;&#x9178;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30DD;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC; (TBOA) &#x3068;&#x30B0;&#x30EA;&#x30B7;&#x30F3; &#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30DD;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC; &#xFF08;&#x3068;&#x30B5;&#x30EB;&#x30B3;&#x30B7;&#x30F3;&#x3068; ALX-1393 &#x5E74;&#xFF09; &#x524A;&#x6E1B;&#x306E; ca 2 + &#x865A;&#x8840;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x5897;&#x52A0;&#x3002;Myelinic N-&#x30E1;&#x30C1;&#x30EB;-D-&#x30A2;&#x30B9;&#x30D1;&#x30E9;&#x30AE;&#x30F3;&#x9178; (NMDA) &#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x304C;&#x7279;&#x5B9A;&#x306E;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30DD;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E; Na + &#x30ED;&#x30FC;&#x30C9;&#x6761;&#x4EF6;&#x4E0B;&#x3068;&#x8CA0;&#x50B7;&#x3057;&#x305F;&#x767D;&#x8CEA;&#x8131;&#x5206;&#x6975;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x89E3;&#x653E;&#x3055;&#x308C;&#x308B; 2 &#x3064;&#x306E;&#x5F93;&#x6765; coagonists &#x30B0;&#x30EB;&#x30BF;&#x30DF;&#x30F3;&#x9178;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x30B0;&#x30EA;&#x30B7;&#x30F3;&#x3001;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x65B0;&#x3057;&#x3044;&#x624B;&#x6CD5;&#x306F;&#x30EA;&#x30D3;&#x30F3;&#x30B0; &#x30DF;&#x30A8;&#x30EA;&#x30F3;&#x3001;&#x54FA;&#x4E73;&#x985E;&#x4E2D;&#x67A2;&#x795E;&#x7D4C;&#x7CFB;&#x306E;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x30B3;&#x30F3;&#x30DD;&#x30FC;&#x30CD;&#x30F3;&#x30C8;&#x306E;&#x8A73;&#x7D30;&#x306A;&#x7814;&#x7A76;&#x3092;&#x5BB9;&#x6613;&#x306B;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x7121;&#x6599;&#x306E; ca 2 + CNS &#x30DF;&#x30A8;&#x30EA;&#x30F3; 2 &#x5149;&#x5B50;&#x9855;&#x5FAE;&#x93E1;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x5909;&#x5316;&#x306E;&#x30EA;&#x30A2;&#x30EB;&#x30BF;&#x30A4;&#x30E0;&#x6E2C;&#x5B9A;&#x3002;

&#xC5EC;&#xAE30; &#xC6B0;&#xB9AC; &#xC911;&#xC559; &#xC2E0;&#xACBD; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C; (CNS) &#xC0B4;&#xC544;&#xC788;&#xB294; axons&#xC758; &#xC131;&#xC219;&#xD55C; &#xC18C;&#xD615; myelin&#xC758; cytosolic &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778;&#xC5D0;&#xC11C; Ca2 +&#xC758; &#xBCC0;&#xD654;&#xB97C; &#xCE21;&#xC815; &#xD558;&#xB294; &#xBC29;&#xBC95;&#xC744; &#xC124;&#xBA85; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; X-&#xB85C;&#xB4DC;-1 &#xC788;&#xC73C;&#xBBC0;&#xB85C; &#xB450; &#xAD11;&#xC790; &#xD765;&#xBD84;&#xB41C; &#xD615;&#xAD11;&#xC758; &#xBD84;&#xC11D;&#xC744; &#xC704;&#xD574; myelin &#xCE7C; &#xC9D1;&#xC758; &#xBA85;&#xD655;&#xD55C; &#xC2DD;&#xBCC4;&#xC744; &#xC81C;&#xACF5; &#xBC1D;&#xC740; myelin counterstaining&#xB97C; &#xC0DD;&#xC0B0; &#xD558;&#xB294; Dioc6(3)&#xC640; &#xACB0;&#xD569; Ca2 + &#xD45C;&#xC2DC;&#xAE30;&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xC2DC; &#xC2E0;&#xACBD; &#xBC0F; &#xC9C0; &#xC5F4; &#xCD95; &#xC0AD;&#xC758; myelin &#xCE7C; &#xC9D1; &#xB77C;&#xBCA8;. Ca2 + &#xAE30;&#xC790; &#xBBF8; &#xC5D8; &#xB9B0;, &#xD615;&#xAD11; &#xC218;&#xBA85;, &#xC2A4;&#xD399;&#xD2B8;&#xB7FC; &#xCE21;&#xC815; &#xBC0F; Mn2 + &#xD574;&#xC18C;&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; cytosolic &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778;&#xC758; &#xC9C0;&#xC5ED;&#xD654;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC99D;&#xAC70;&#xB97C; &#xC81C;&#xC2DC; &#xD558; &#xACE0; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xD654;&#xD559; &#xD5C8; &#xD608; &#xBC29;&#xC2DD;&#xC73C;&#xB85C; &#xC758;&#xC874; &#xC138;&#xD3EC; &#xC678; Ca2 + myelinic X-&#xB85C;&#xB4DC;-1 &#xD615;&#xAD11; (&#xC57D; 30 &#xBD84; &#xD6C4; 50%) &#xC99D;&#xAC00; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC5B5;&#xC81C; Na +-&#xC885;&#xC18D; &#xC870;&#xBBF8;&#xB8CC; &#xC804;&#xC1A1;&#xAE30; (TBOA)&#xC640; &#xD568;&#xAED8; &#xB610;&#xB294; &#xAE00;&#xB9AC;&#xC2E0; &#xC804;&#xC1A1;&#xAE30; (sarcosine&#xC640; ALX-1393) &#xAC10;&#xC18C;&#xC5D0; Ca2 + &#xD5C8; &#xD608; &#xC720;&#xBC1C; &#xC99D;&#xAC00;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; myelinic N-&#xBA54; &#xD2F8;-D-aspartate (NMDA) &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; &#xB450; &#xAC00;&#xC9C0; &#xAE30;&#xC874;&#xC758; coagonists &#xC870;&#xBBF8;&#xB8CC; &#xBC0F; &#xAE00;&#xB9AC;&#xC2E0;, &#xC140;&#xB8F0;&#xB7EC; Na + &#xB85C;&#xB4DC; &#xC870;&#xAC74; &#xD558;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD2B9;&#xC815; &#xC804;&#xC1A1;&#xAE30; &#xBC0F; depolarization &#xB2E4;&#xCE5C;&#xB41C; &#xBC31; &#xC9C8;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xBC1C;&#xD45C;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774; &#xC0C8;&#xB85C;&#xC6B4; &#xAE30;&#xC220;&#xC740; &#xC0DD;&#xD65C; myelin, &#xD3EC;&#xC720;&#xB958; CNS&#xC758; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xAD6C;&#xC131; &#xC694;&#xC18C;&#xC758; &#xC0C1;&#xC138;&#xD55C; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xB97C; &#xC6A9;&#xC774; &#xD558; &#xAC8C;.

&#xB450; &#xAD11;&#xC790; &#xD604;&#xBBF8;&#xACBD;&#xC73C;&#xB85C; CNS myelin&#xC5D0; &#xBB34;&#xB8CC; Ca2 + &#xBCC0;&#xACBD;&#xC758; &#xC2E4;&#xC2DC;&#xAC04; &#xCE21;&#xC815;.

Aqu&iacute; describimos una t&eacute;cnica para medir cambios en Ca2 + en el dominio citos&oacute;lico de mielina compacto maduro de axones vivos en sistema nervioso central (CNS). Etiquetamos la vaina de mielina del nervio &oacute;ptico y axones dorsal de la columna utilizando el indicador de Ca2 + X-rhod-1 junto con DiOC6(3) para producir mielina brillante contratinci&oacute;n, proporcionando as&iacute; la identificaci&oacute;n inequ&iacute;voca de la vaina de mielina para an&aacute;lisis de fluorescencia emocionada de dos fotones. Presentamos la evidencia para la localizaci&oacute;n del Ca2 + reportero el dominio citos&oacute;lico de la mielina, obtenido mediante el uso de por vida de fluorescencia, mediciones espectrales y Mn2 + Temple. Isquemia qu&iacute;mica aument&oacute; myelinic fluorescencia X-rhod-1 (aproximadamente 50% despu&eacute;s de 30 minutos) de una manera dependiente de Ca2 + extracelular. Inhibici&oacute;n de Na +-transportadores de glutamato dependientes (con TBOA) o transportadores de glicina (con sarcosina y ALX-1393) redujeron el aumento inducido por isquemia en Ca2 +. Mostramos que myelinic receptores N-metil-D-aspartato (NMDA) se activan por los dos coagonists convencional de glutamato y glicina, que son liberados por transportadores espec&iacute;ficos bajo condiciones de celular Na + carga y despolarizaci&oacute;n en la materia blanca lesionada. Esta nueva t&eacute;cnica facilita estudios detallados de la mielina de vida, un componente vital del CNS mam&iacute;fero.

Medici&oacute;n en tiempo real de libres Ca2 + cambios en mielina CNS por microscopia de dos fotones.

Yunis-Varón syndrome (YVS) is an autosomal recessive disorder comprising skeletal anomalies, dysmorphism, global developmental delay and intracytoplasmic vacuolation in brain and other tissues. All hitherto-reported pathogenic variants affect FIG4, a lipid phosphatase involved in phosphatidylinositol (3,5)-bisphosphate [PtdIns(3,5)P] metabolism. FIG4 interacts with PIKfyve, a lipid kinase, via the adapter protein VAC14; all subunits of the resulting complex are essential for PtdIns(3,5)P synthesis in the endolysosomal membrane compartment. Here, we present the case of a female neonate with clinical features of YVS and normal FIG4 sequencing; exome sequencing identified biallelic rare coding variants in VAC14. Cultured patient fibroblasts exhibited a YVS-like vacuolation phenotype ameliorated in a dose-dependent fashion by ML-SA1, a pharmacological activator of the lysosomal PtdIns(3,5)P effector TRPML1. The patient developed a diffuse leukoencephalopathy with loss of the normal N-acetylaspartate spectrographic peak and presence of a large abnormal peak consistent with myoinositol. We report that VAC14 is a second gene for Yunis-Varón syndrome.

Article	Year
Real-time measurement of free Ca2+ changes in CNS myelin by two-photon microscopy. Nature medicine\| PubMed ID: 17603496	2007
Yunis-Varón syndrome caused by biallelic VAC14 mutations. European journal of human genetics : EJHG\| PubMed ID: 28635952	2017

Jeff McClintock

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