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Rapid Determination of the Thermal Nociceptive Threshold in Diabetic Rats

Painful diabetic neuropathy (PDN) is characterized by hyperalgesia i.e., increased sensitivity to noxious stimulus, and allodynia i.e., hypersensitivity ...

Wright State University

GABA depolarizes &#x548C;&#x5174;&#x594B;&#x4E2D;&#x67A2;&#x795E;&#x7ECF;&#x7EC6;&#x80DE;&#x65E9;&#x671F;&#x53D1;&#x5C55;&#x8FC7;&#x7A0B;&#x4E2D;&#xFF0C;&#x6210;&#x4E3A;&#x6291;&#x5236;&#x548C;&#x8D85;&#x6781;&#x5316;&#x4E0E;&#x6210;&#x719F;&#x3002;&#x8FD9;&#x79CD;&quot;&#x53D1;&#x5C55;&#x8F6C;&#x53D8;&quot;&#x7A81;&#x7136;&#xFF0C;&#x53D1;&#x751F;&#x53CD;&#x6620;&#x51CF;&#x5C11; [Cl(-)](i) &#x548C; Cl(-) &#x5E73;&#x8861;&#x53EF;&#x80FD;&#x7531;&#x4E8E;&#x67B8;&#x6A7C;&#x9178;&#x8F6C;&#x8FD0;&#x86CB;&#x767D; K(+)-Cl(-) &#x57FA;&#x56E0; KCC2b&#xFF0C;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x7279;&#x5F02;&#x6027; Cl(-) &#x6324;&#x51FA;&#x673A;&#x4E0A;&#x8C03;&#x8D85;&#x6781;&#x5316;&#x8F6C;&#x53D8;&#x3002;&#x76F8;&#x6BD4;&#x4E4B;&#x4E0B;&#xFF0C;&#x662F;&#x521D;&#x7EA7;&#x4F20;&#x5165;&#x795E;&#x7ECF; (&#x9505;) &#x53BB;&#x6781;&#x5316;&#x5728;&#x6210;&#x5E74;&#x540E;&#x7531;&#x4E8E; NKCC1&#xFF0C;Na(+)-K(+)-2Cl(-) &#x67B8;&#x6A7C;&#x9178;&#x8F6C;&#x8FD0;&#xFF0C;&#x5176;&#x4E2D; Cl(-) &#x79EF;&#x7D2F;&#x4E0A;&#x9762;&#x5E73;&#x8861;&#x86CB;&#x767D;&#x57FA;&#x56E0;&#x7684;&#x8868;&#x8FBE;&#x6574;&#x4E2A; GABA&#x3002;GABA A &#x4ECB;&#x5BFC;&#x7684;&#x9505;&#x53BB;&#x6781;&#x5316;&#x786E;&#x5B9A;&#x7A81;&#x89E6;&#x524D;&#x6291;&#x5236;&#x810A;&#x9AD3;&#x6D47;&#x6CE8;&#x4F53;&#x611F;&#x4FE1;&#x606F;&#x7684;&#x4E00;&#x4E2A;&#x91CD;&#x8981;&#x673A;&#x5236;&#x3002;&#x5728; Cl(-) &#x8F6C;&#x8FD0;&#x86CB;&#x767D;&#x8868;&#x8FBE;&#x7684;&#x53D1;&#x80B2;&#x6027;&#x53D8;&#x5316;&#x53CA;&#x9505; Cl(-) &#x7A33;&#x6001;&#x8C03;&#x8282;&#x4E86;&#x89E3;&#x751A;&#x5C11;&#x3002;&#x662F;&#x5426; NKCC1 &#x8868;&#x793A;&#xFF0C;&#x6240;&#x6709;&#x7684;&#x8868;&#x578B;&#x7684;&#x9505;&#x6216;&#x5B83;&#x4EC5;&#x9650;&#x4E8E;&#x4E9A;&#x7FA4; &#xFF08;&#x4F8B;&#x5982; nociceptors&#xFF09;&#xFF0C;&#x662F;&#x503C;&#x5F97;&#x5546;&#x69B7;&#x3002;&#x540C;&#x6837;&#xFF0C;&#x9505;&#x5FEB;&#x9012; KCC2s &#x662F;&#x5426;&#x6709;&#x4E89;&#x8BAE;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x8C03;&#x67E5; NKCC1 &#x548C; K(+)-Cl(-) cotransporters &#x8868;&#x8FBE;&#x5728;&#x5927;&#x9F20;&#x548C;&#x5C0F;&#x9F20;&#x80CC;&#x6839;&#x795E;&#x7ECF;&#x8282; (DRG) &#x7EC6;&#x80DE;&#x4E0E;&#x5206;&#x5B50;&#x7684;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3002;&#x4F7F;&#x7528;&#x8367;&#x5149;&#x6210;&#x50CF;&#x7684;&#x663E;&#x5FAE;&#x955C;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x6D4B;&#x91CF;&#x4E86; [&#x6025;&#x6027;&#x5206;&#x79BB;&#x7684;&#x5927;&#x9F20;&#x80CC;&#x6839;&#x8282;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143; &#xFF08;P0 P21) Cl(-)](i) &#x6EE1;&#x8F7D; N-(ethoxycarbonylmethyl)-6-methoxyquinolinium &#x6EB4;&#xFF0C;&#x8868;&#x578B;&#x6807;&#x5FD7;&#x7269;&#x8FDB;&#x884C;&#x5206;&#x7C7B;&#x3002;&#x5404;&#x79CD;&#x89C4;&#x6A21;&#x7684;&#x80CC;&#x6839;&#x8282;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x8868;&#x8FBE;&#x4E24;&#x4E2A; NKCC1 mRNAs&#xFF0C;&#x4E00;&#x4E2A;&#x5168;&#x957F;&#x7F3A;&#x4E4F;&#x5916;&#x663E;&#x5B50; 21 &#x77ED;&#x63A5;&#x5934; variant &#x7C7B;&#x578B;&#x7684;&#x503C;&#x3002;&#x5DF2;&#x9A8C;&#x8BC1;&#x6297;&#x4F53;&#x5E94;&#x7528;&#x900F;&#x9732; NKCC1 &#x5728;&#x80CC;&#x6839;&#x8282;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x4E0D;&#x5206;&#x4EA7;&#x540E;&#x5E74;&#x9F84;&#x548C;&#x8868;&#x578B;&#x7684;&#x65E0;&#x5904;&#x4E0D;&#x5728;&#x8868;&#x8FBE;&#x3002;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x6210;&#x719F;&#x9010;&#x6B65;&#x8FDB;&#x5C55; [Cl(-)] (i) &#x8DCC;&#x5E45;&#xFF0C;&#x575A;&#x6301;&#x4E0A;&#x6587;&#x4E2D;&#x5E73;&#x8861; &gt; 95%&#x6210;&#x719F;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x3002;&#x80CC;&#x6839;&#x8282;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x8868;&#x8FBE;&#x5206;&#x6CCC;&#x7684; KCC1&#x3001; KCC3s &#x548C; KCC4&#xFF0C;&#x4F46;&#x5C1A;&#x672A;&#x4E3A; KCC2s.&#x673A;&#x5236;&#x57FA;&#x7840;&#x9505; Cl(-) &#x7A33;&#x6001;&#x7684;&#x53D1;&#x5C55;&#x53D8;&#x5316;&#x662F;&#x8BA8;&#x8BBA;&#x548C;&#x4E0E;&#x4E2D;&#x592E;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x76F8;&#x6BD4;&#x3002;

&#x5206;&#x5B50;&#x4E0E;&#x529F;&#x80FD;&#x8868;&#x8FBE;&#x7684;&#x9633;&#x79BB;&#x5B50;-&#x6C2F;-COTRANSPORTERS &#x80CC;&#x6839;&#x8282;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x53D1;&#x80B2;&#x6210;&#x719F;&#x8FC7;&#x7A0B;&#x3002;

GABA depolarizes and excites central neurons during early development, becoming inhibitory and hyperpolarizing with maturation. This "developmental shift" occurs abruptly, reflecting a decrease in [Cl(-)](i) and a hyperpolarizing shift in Cl(-) equilibrium potential due to upregulation of the K(+)-Cl(-) cotransporter KCC2b, a neuron-specific Cl(-) extruder. In contrast, primary afferent neurons (PANs) are depolarized by GABA throughout adulthood due to expression of NKCC1, a Na(+)-K(+)-2Cl(-) cotransporter that accumulates Cl(-) above equilibrium. The GABA(A)-mediated depolarization of PANs determines presynaptic inhibition in the spinal cord, a key mechanism gating somatosensory information. Little is known about developmental changes in Cl(-) transporters expression and Cl(-) homeostasis in PANs. Whether NKCC1 is expressed in PANs of all phenotypes or if it is restricted to subpopulations (e.g. nociceptors), is debatable. Likewise, whether PANs express KCC2s is controversial. We investigated NKCC1 and K(+)-Cl(-) cotransporters expression in rat and mouse dorsal root ganglion (DRG) neurons with molecular methods. Using fluorescence imaging microscopy we measured [Cl(-)](i) in acutely-dissociated rat DRG neurons (P0-P21) loaded with N-(ethoxycarbonylmethyl)-6-methoxyquinolinium bromide, classified with phenotypic markers. DRG neurons of all sizes express two NKCC1 mRNAs, one full-length and a shorter splice variant lacking exon 21. Immunolabeling with validated antibodies revealed ubiquitous expression of NKCC1 in DRG neurons irrespective of postnatal age and phenotype. As maturation progresses [Cl(-)](i )decreases gradually, persisting above equilibrium in >95% mature neurons. DRG neurons express mRNAs for KCC1, KCC3s and KCC4, but not for KCC2s. Mechanisms underlying PANs' developmental changes in Cl(-) homeostasis are discussed and compared with those of central neurons.

MOLECULAR AND FUNCTIONAL EXPRESSION OF CATION-CHLORIDE-COTRANSPORTERS IN DORSAL ROOT GANGLION NEURONS DURING POSTNATAL MATURATION.

GABA d&eacute;polarise et excite les neurones centraux au d&eacute;but du d&eacute;veloppement, devenant inhibitrice et hyperpolarisant avec la maturation. Ce &laquo; changement du d&eacute;veloppement &raquo; se produit brusquement, en diminution [Cl(-)](i) et hyperpolarisant changeront en &eacute;quilibre Cl(-) potentielle en raison de l&#39;upregulation of le cotransporteur de K(+)-Cl(-) KCC2b, une extrudeuse de Cl(-) de neurone-sp&eacute;cifique. En revanche, les neurones aff&eacute;rents primaires (casseroles) sont d&eacute;polaris&eacute;s par GABA tout au long de l&#39;&acirc;ge adulte en raison de l&#39;expression du NKCC1, un cotransporteur de Na(+)-K(+)-2Cl(-) qui s&#39;accumule Cl(-) au-dessus d&#39;&eacute;quilibre. La d&eacute;polarisation induite par le GABA A des casseroles d&eacute;termine l&#39;inhibition pr&eacute;synaptique dans la moelle &eacute;pini&egrave;re, un m&eacute;canisme cl&eacute; de blocage des informations somatosensorielles. On conna&icirc;t des changements d&eacute;veloppementaux dans l&#39;expression des transporteurs Cl(-) et Cl(-) l&#39;hom&eacute;ostasie dans des casseroles. Si NKCC1 est exprim&eacute;e dans des casseroles de tous les ph&eacute;notypes ou si elle est restreinte aux sous-populations (p. ex. les nocicepteurs), est discutable. De m&ecirc;me, si les casseroles expriment KCC2s est controvers&eacute;e. Nous avons &eacute;tudi&eacute; l&#39;expression co-transporteurs NKCC1 et K(+)-Cl(-) dans les neurones des ganglions (DRG) racine dorsale rat et la souris avec des m&eacute;thodes mol&eacute;culaires. &Agrave; l&#39;aide d&#39;imagerie, nous avons mesur&eacute; la microscopie de fluorescence [Cl(-)](i) dans les neurones de rat aigu&euml; dissoci&eacute;es DRG (P0-P21) charg&eacute;s de N-(ethoxycarbonylmethyl) -6-bromure de methoxyquinolinium, class&eacute; avec marqueurs ph&eacute;notypiques. Les neurones DRG de toutes tailles expriment deux NKCC1 mRNA, un album et une variante plus courte d&#39;&eacute;pissure manque exon 21. L&#39;immunomarquage avec anticorps valid&eacute;s a r&eacute;v&eacute;l&eacute; expression omnipr&eacute;sente du NKCC1 dans les neurones de la DRG quel que soit l&#39;&acirc;ge postnatal et le ph&eacute;notype. Comme la maturation progresse [Cl(-)] (i) diminue progressivement, persistant au-dessus de l&#39;&eacute;quilibre en &gt; 95 % des neurones matures. Neurones DRG expriment des mRNAs pour KCC1, KCC3s et KCC4, mais pas pour KCC2s. m&eacute;canismes changements d&eacute;veloppementaux des casseroles sous-jacent dans l&#39;hom&eacute;ostasie de le Cl(-) sont discut&eacute;s et compar&eacute;s avec ceux des neurones centraux.

EXPRESSION MOL&Eacute;CULAIRE ET FONCTIONNELLE DE CATION-CHLORURE-CO-TRANSPORTEURS DANS LES NEURONES DES GANGLIONS DE LA RACINE DORSALE DURANT LA MATURATION POSTNATALE.

GABA depolarizes und reizt zentrale Neuronen w&auml;hrend der fr&uuml;hen Entwicklung immer hemmenden und hyperpolarizing mit Reifung. Diese &quot;Entwicklungsst&ouml;rungen Shift&quot; tritt abrupt, reflektieren eine Abnahme [Cl(-)](i) und eine hyperpolarizing Verschiebung im Cl(-) Gleichgewicht potenzielle durch Hochregulation von der K(+)-Cl(-)-Kotransporter KCC2b, ein Neuron-spezifische Cl(-) Extruder. Im Gegensatz dazu sind prim&auml;re afferente Neuronen (Pfannen) von GABA ihr Leben durch Ausdruck der NKCC1, ein Na(+)-K(+)-2Cl(-)-Kotransporter ersch&uuml;tterten, die Cl(-) oben Gleichgewicht ansammelt. Die GABA A-vermittelte Depolarisierung der Pfannen bestimmt pr&auml;synaptischen Hemmung im R&uuml;ckenmark, ein wichtiges Instrument Anspritzung somatosensorische Informationen. Entwicklungsbedingte Ver&auml;nderungen im Cl(-) Transporter Ausdruck und Cl(-) Hom&ouml;ostase in Pfannen ist wenig bekannt. Ob NKCC1 Pfannen in alle Ph&auml;notypen ausgedr&uuml;ckt wird, oder wenn es auf Subpopulationen (z.B. Nozizeptoren) eingeschr&auml;nkt ist, ist fraglich. Ebenso, ob Pfannen ausdr&uuml;ckliche KCC2s ist umstritten. Wir untersuchten NKCC1 und K(+)-Cl(-)-Cotransporters-Ausdruck in Ratte und Maus Dorsal Root Ganglion (DRG) Neuronen mit molekularen Methoden. Mit Fluoreszenz-Mikroskopie, die wir gemessen imaging [Cl(-)](i) in Ratte akut dissoziiert DRG-Neuronen (P0-P21) geladen mit N-(Ethoxycarbonylmethyl)-6-Methoxyquinolinium-bromid, klassifiziert mit ph&auml;notypische Markierungen. DRG-Neuronen aller Gr&ouml;&szlig;en schnelles zwei NKCC1 mRNAs, eine in und eine k&uuml;rzere Splei&szlig;-Variante fehlt Exon 21. Immunolabeling mit validierten Antik&ouml;rper offenbart allgegenw&auml;rtige Ausdruck NKCC1 in DRG-Neuronen unabh&auml;ngig von postnatale Alter und Ph&auml;notyp. Da Reifung [Cl(-)] (i) sinkt allm&auml;hlich weiterkommt, beibehalten &uuml;ber Gleichgewicht in &gt; 95 % Reife Neuronen. DRG-Neuronen express mRNAs f&uuml;r KCC1, KCC3s und KCC4, aber nicht f&uuml;r KCC2s. Mechanismen zugrunde liegenden Pfannen entwicklungsbedingte Ver&auml;nderungen im Cl(-) Hom&ouml;ostase diskutiert und verglichen mit denen der zentralen Neuronen.

MOLEKULARE UND FUNKTIONELLE AUSDRUCK KATION-CHLORID-COTRANSPORTERS IN SPINALGANGLIEN GANGLION NEURONEN W&Auml;HREND DER POSTNATALEN REIFUNG.

GABA depolarizes ed eccita i neuroni centrali durante lo sviluppo iniziale, diventando inibitorio e hyperpolarizing con la stagionatura. Questo &quot;spostamento dello sviluppo&quot; si verifica bruscamente, riflettendo una diminuzione della [Cl(-)](i) e un cambiamento hyperpolarizing in Cl(-) equilibrio potenziale dovuto sovraregolazione del K(+)-Cl(-) che KCC2b, un estrusore Cl(-) neurone-specifico. Al contrario, i neuroni afferenti primari (padelle) sono depolarized di GABA per tutta l&#39;et&agrave; adulta a causa di espressione di NKCC1, un che di Na(+)-K(+)-2Cl(-) che si accumula Cl(-) sopra equilibrio. La depolarizzazione mediata dal GABA A delle padelle determina inibizione presinaptica nel midollo spinale, un meccanismo chiave gating informazione somatosensoriale. Poco si sa sui cambiamenti dello sviluppo nell&#39;espressione dei trasportatori di Cl(-) e Cl(-) omeostasi in padelle. Se NKCC1 &egrave; espresso in pentole di tutti i fenotipi o se &egrave; limitato a sottopopolazioni (ad esempio nocicettori), &egrave; discutibile. Similarmente, se padelle express KCC2s &egrave; controverso. Abbiamo studiato l&#39;espressione di sodio NKCC1 e K(+)-Cl(-) nel ratto e topo spinali neuroni gangliari (DRG) con metodi molecolari. Utilizzando imaging abbiamo misurato la microscopia di fluorescenza [Cl(-)](i) in neuroni di ratto acutamente dissociato DRG (P0-P21) caricato con N-(etossicarbonilmetile) -6-methoxyquinolinium bromuro, classificato con i marcatori fenotipici. Neuroni DRG di tutte le dimensioni esprimono due mRNAs NKCC1, una full-length e una variante di splice breve privo di esone 21. Immunomarcatura con anticorpi convalidati rivelato onnipresente espressione di NKCC1 nei neuroni DRG indipendentemente dall&#39;et&agrave; postnatale e fenotipo. Come maturazione progredisce [Cl(-)] (i) diminuisce gradualmente, persistendo sopra equilibrio in &amp;gt; 95% di neuroni maturi. Neuroni DRG express mRNAs per KCC1, KCC3s e KCC4, ma non per i meccanismi di KCC2s. cambiamenti dello sviluppo sottostante pentole in omeostasi Cl(-) sono discussi e confrontati con quelli dei neuroni centrali.

ESPRESSIONE MOLECOLARE E FUNZIONALE DEL CATIONE-CLORURO-SODIO NEI NEURONI DEL GANGLIO DORSALE RADICE DURANTE LA MATURAZIONE POSTNATALE.

GABA &#x306F;&#x8131;&#x5206;&#x6975;&#x3057;&#x3001;&#x6291;&#x5236;&#x3068;&#x6210;&#x719F;&#x3092;&#x904E;&#x5206;&#x6975;&#x306B;&#x306A;&#x3063;&#x3066;&#x521D;&#x671F;&#x306E;&#x958B;&#x767A;&#x6642;&#x306B;&#x3001;&#x4E2D;&#x67A2;&#x30CB;&#x30E5;&#x30FC;&#x30ED;&#x30F3;&#x3092;&#x8208;&#x596E;&#x3055;&#x305B;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x300C;&#x767A;&#x9054;&#x306E;&#x30B7;&#x30D5;&#x30C8;&#x300D;&#x306F;&#x3001;&#x7A81;&#x7136;&#x3001;&#x5F31;&#x542B;&#x307F; [Cl(-)](i) &#x3068; Cl(-) &#x306E;&#x5E73;&#x8861;&#x96FB;&#x4F4D;&#x306B;&#x3088;&#x308B; K(+)-Cl(-) &#x5171; KCC2b&#x3001;&#x30CB;&#x30E5;&#x30FC;&#x30ED;&#x30F3;&#x56FA;&#x6709;&#x306E; Cl(-) &#x62BC;&#x51FA;&#x6A5F;&#x306E;&#x30A2;&#x30C3;&#x30D7;&#x30EC;&#x30AE;&#x30E5;&#x30EC;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x306E;&#x904E;&#x5206;&#x6975;&#x30B7;&#x30D5;&#x30C8;&#x3002; &#x767A;&#x751F;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x5BFE;&#x7167;&#x7684;&#x306B;&#x3001;&#x4E00;&#x6B21;&#x6C42;&#x5FC3;&#x6027;&#x30CB;&#x30E5;&#x30FC;&#x30ED;&#x30F3; (Pan) GABA &#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x6210;&#x4EBA;&#x671F;&#x306E; NKCC1&#x3001;Cl(-) &#x4E0A;&#x8A18;&#x306E;&#x5747;&#x8861;&#x84C4;&#x7A4D; Na(+)-K(+)-2Cl(-) &#x5171;&#x767A;&#x73FE;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x5168;&#x4F53;&#x306E;&#x7121;&#x504F;&#x5149;&#x5316;&#x3057;&#x305F;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x934B;&#x306E; GABA A &#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x305F;&#x8131;&#x5206;&#x6975;&#x4F53;&#x6027;&#x611F;&#x899A;&#x60C5;&#x5831;&#x3092;&#x30B2;&#x30FC;&#x30C6;&#x30A3;&#x30F3;&#x30B0;&#x306E;&#x4E3B;&#x8981;&#x30E1;&#x30AB;&#x30CB;&#x30BA;&#x30E0;&#x306E;&#x810A;&#x9AC4;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x30B7;&#x30CA;&#x30D7;&#x30B9;&#x524D;&#x6291;&#x5236;&#x3092;&#x6C7A;&#x5B9A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x5C11;&#x3057; Cl(-) &#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30DD;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x767A;&#x73FE;&#x306E;&#x767A;&#x9054;&#x7684;&#x5909;&#x5316;&#x3068;&#x934B; Cl(-) &#x6052;&#x5E38;&#x6027;&#x306B;&#x3064;&#x3044;&#x3066;&#x77E5;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;NKCC1 &#x3059;&#x3079;&#x3066;&#x8868;&#x73FE;&#x578B;&#x306E;&#x934B;&#x3067;&#x8868;&#x73FE;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x304B;&#x3069;&#x3046;&#x304B;&#x3001;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x305D;&#x308C;&#x30B5;&#x30D6;&#x30DD;&#x30D4;&#x30E5;&#x30EC;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3; (&#x4F8B;&#x3048;&#x3070;&#x4FB5;&#x5BB3;&#x53D7;&#x5BB9;&#x5668;) &#x306B;&#x5236;&#x9650;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x5834;&#x5408;&#x306F;&#x3001;&#x8B70;&#x8AD6;&#x306E;&#x4F59;&#x5730;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x540C;&#x69D8;&#x306B;&#x3001;&#x934B; KCC2s &#x30A8;&#x30AF;&#x30B9;&#x30D7;&#x30EC;&#x30B9;&#x304B;&#x3069;&#x3046;&#x304B;&#x8B70;&#x8AD6;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005; &#x306F; NKCC1 &#x3068; K(+)-Cl(-) &#x306E;&#x5171;&#x8F38;&#x9001;&#x4F53;&#x767A;&#x73FE;&#x30E9;&#x30C3;&#x30C8;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x306E;&#x5F8C;&#x6839;&#x795E;&#x7D4C;&#x7BC0; (DRG) &#x30CB;&#x30E5;&#x30FC;&#x30ED;&#x30F3;&#x306E;&#x5206;&#x5B50;&#x306E;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3067;&#x8ABF;&#x3079;&#x305F;&#x3002;&#x86CD;&#x5149;&#x30A4;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B8;&#x30F3;&#x30B0;&#x6211;&#x3005; &#x6E2C;&#x5B9A;&#x9855;&#x5FAE;&#x93E1;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066; [Cl(-)](i) &#x6025;&#x6027;&#x89E3;&#x96E2;&#x30E9;&#x30C3;&#x30C8; DRG &#x30CB;&#x30E5;&#x30FC;&#x30ED;&#x30F3; (P0 P21) &#x3067;&#x8AAD;&#x307F;&#x8FBC;&#x307E;&#x308C;&#x308B; N-(ethoxycarbonylmethyl)-6-methoxyquinolinium &#x30D6;&#x30ED;&#x30DE;&#x30A4;&#x30C9;&#x3001;&#x8868;&#x73FE;&#x578B;&#x30DE;&#x30FC;&#x30AB;&#x30FC;&#x3068;&#x5206;&#x985E;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;DRG &#x30CB;&#x30E5;&#x30FC;&#x30ED;&#x30F3;&#x306E;&#x3059;&#x3079;&#x3066;&#x306E;&#x30B5;&#x30A4;&#x30BA;&#x306E; 2 &#x3064;&#x306E; NKCC1 Mrna&#x3001;&#x30D5;&#x30EB;&#x30EC;&#x30F3;&#x30B0;&#x30B9;&#x306E; 1 &#x3064;&#x3001;&#x30A8;&#x30AF;&#x30BD;&#x30F3; 21 &#x6B20;&#x3051;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x77ED;&#x3044;&#x30B9;&#x30D7;&#x30E9;&#x30A4;&#x30B9;&#x30D0;&#x30EA;&#x30A2;&#x30F3;&#x30C8;&#x3092;&#x8868;&#x73FE;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30A8;&#x30CA;&#x30E1;&#x30EB;&#x691C;&#x8A3C;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x6297;&#x4F53; NKCC1 &#x751F;&#x5F8C;&#x5E74;&#x9F62;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x8868;&#x73FE;&#x578B;&#x306B;&#x95A2;&#x4FC2;&#x306A;&#x304F; DRG &#x30CB;&#x30E5;&#x30FC;&#x30ED;&#x30F3;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x30E6;&#x30D3;&#x30AD;&#x30BF;&#x30B9;&#x306E;&#x5F0F;&#x3092;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x5747;&#x8861;&#x306E;&#x4E0A;&#x6210;&#x719F; [Cl(-)] (i) &#x306E;&#x6E1B;&#x5C11;&#x304C;&#x5F90;&#x3005; &#x306B;&#x9032;&#x884C;&#x3059;&#x308B;&#x3088;&#x3046;&#x306B;&#x3001;&#x6C38;&#x7D9A;&#x5316;&#x3059;&#x308B;&#x76EE; 95% &#x6210;&#x719F;&#x3057;&#x305F;&#x30CB;&#x30E5;&#x30FC;&#x30ED;&#x30F3;&#x3002;DRG &#x30CB;&#x30E5;&#x30FC;&#x30ED;&#x30F3; KCC1&#x3001;KCC3s&#x3001;KCC4 &#x306E; Mrna &#x306E;&#x8868;&#x73FE;&#x304C;&#x306A;&#x3044;&#x30E1;&#x30AB;&#x30CB;&#x30BA;&#x30E0; KCC2s&#x3002; &#x57FA;&#x306B;&#x306A;&#x308B;&#x934B; Cl(-) &#x6052;&#x5E38;&#x6027;&#x306E;&#x767A;&#x9054;&#x7684;&#x5909;&#x5316;&#x306B;&#x3064;&#x3044;&#x3066;&#x5BE9;&#x8B70;&#x30FB;&#x4E2D;&#x67A2;&#x30CB;&#x30E5;&#x30FC;&#x30ED;&#x30F3;&#x3068;&#x6BD4;&#x8F03;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x751F;&#x5F8C;&#x6210;&#x719F;&#x306E;&#x5206;&#x5B50;&#x30FB;&#x6A5F;&#x80FD;&#x767A;&#x73FE;&#x30AB;&#x30C1;&#x30AA;&#x30F3;&#x5869;&#x5316;&#x5171;&#x306E;&#x5F8C;&#x6839;&#x795E;&#x7D4C;&#x7BC0;&#x30CB;&#x30E5;&#x30FC;&#x30ED;&#x30F3;&#x306E;&#x3002;

GABA&#xB294; depolarizes &#xD558; &#xACE0; &#xAE08;&#xC9C0; &#xD558; &#xACE0; &#xC131;&#xC219; hyperpolarizing &#xCD08;&#xAE30; &#xAC1C;&#xBC1C; &#xD558;&#xB294; &#xB3D9;&#xC548; &#xC911;&#xC559; &#xC2E0;&#xACBD; &#xC138;&#xD3EC;&#xB97C; &#xD765;&#xBD84;. &#xC774; &quot;&#xBC1C;&#xB2EC; &#xBCC0;&#xD654;&quot; &#xBC1C;&#xC0DD; &#xAC11;&#xC790;&#xAE30;, &#xBC18;&#xC601; &#xAC10;&#xC18C; [cl(-)](i)&#xC640; hyperpolarizing Cl(-) &#xD3C9;&#xD615; K(+)-Cl(-) cotransporter KCC2b, &#xC2E0;&#xACBD; &#xAD00;&#xB828; Cl(-) &#xC555;&#xCD9C; &#xAE30;&#xC758; upregulation &#xC778;&#xD574; &#xC7A0;&#xC7AC;&#xC801;&#xC778; &#xBCC0;&#xD654;. &#xBC18;&#xBA74;, &#xC8FC; &#xC131;&#xC758; &#xB274;&#xB7F0; (&#xD32C;) NKCC1, &#xADE0;&#xD615; &#xC704;&#xC758; cl(-)&#xB97C; &#xCD95;&#xC801; &#xD558;&#xB294; Na(+)-K(+)-2Cl(-) cotransporter&#xC758; &#xD45C;&#xD604; &#xB54C;&#xBB38;&#xC5D0; &#xC131;&#xC778; &#xAE30;&#xC5D0; &#xAC78;&#xCCD0; GABA&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; depolarized &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xD32C;&#xC758; GABA A &#xC911;&#xC7AC; depolarization &#xCC99;&#xC218; somatosensory &#xC815;&#xBCF4; &#xAC8C;&#xC774;&#xD305; &#xD575;&#xC2EC; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998; presynaptic &#xC5B5;&#xC81C;&#xB97C; &#xACB0;&#xC815; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC791;&#xC740; Cl(-) &#xC804;&#xC1A1;&#xAE30; &#xC2DD; &#xBC1C;&#xB2EC; &#xBCC0;&#xD654;&#xC640; &#xB0C4;&#xBE44;&#xC5D0; &#xD56D;&#xC0C1;&#xC131; cl(-)&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC54C;&#xB824;&#xC838; &#xC788;&#xB2E4;. NKCC1 &#xBAA8;&#xB4E0; &#xACE0;&#xAE30; &#xD504;&#xB77C;&#xC774;&#xD32C; &#xB2E8;&#xC704;&#xB85C; &#xB610;&#xB294; &#xBD80;&#xBD84; (&#xC608;: nociceptors)&#xB97C; &#xC81C;&#xD55C; &#xD558;&#xB294; &#xACBD;&#xC6B0;, &#xB17C;&#xB780;&#xC758; &#xC5EC;&#xC9C0;&#xAC00; &#xC788;&#xB2E4;. &#xB9C8;&#xCC2C;&#xAC00;&#xC9C0;&#xB85C;, &#xD32C; KCC2s &#xC775;&#xC2A4;&#xD504;&#xB808;&#xC2A4; &#xC5EC;&#xBD80; &#xB17C;&#xB780;&#xC774; &#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC; &#xBD84;&#xC790; &#xBC29;&#xBC95;&#xACFC; &#xC950;&#xC640; &#xC950; &#xB290; &#xB8E8;&#xD2B8; &#xC2E0;&#xACBD; &#xC808; (DRG) &#xC2E0;&#xACBD;&#xC5D0; &#xC788;&#xB294; NKCC1 &#xBC0F; K(+)-Cl(-) cotransporters &#xC2DD; &#xC870;&#xC0AC;. &#xD615;&#xAD11; &#xC774;&#xBBF8;&#xC9D5; &#xCE21;&#xC815; &#xD604;&#xBBF8;&#xACBD;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; [&#xC2EC;&#xD558;&#xAC8C; &#xD574;&#xB9AC; &#xC950; DRG &#xB274;&#xB7F0; (P0-P21)&#xC5D0;&#xC11C; Cl(-)](i) &#xB85C;&#xB4DC; N-(ethoxycarbonylmethyl)-6-methoxyquinolinium &#xD654;&#xC5D0; phenotypic &#xD45C;&#xC2DD;&#xC73C;&#xB85C; &#xBD84;&#xB958;. &#xBAA8;&#xB4E0; &#xADDC;&#xBAA8;&#xC758; DRG &#xB274;&#xB7F0; &#xC775;&#xC2A4;&#xD504;&#xB808;&#xC2A4; &#xB450; NKCC1 mRNAs, &#xD558;&#xB098;&#xC758; &#xC804;&#xCCB4; &#xAE38;&#xC774; &#xBC0F; &#xC9E7;&#xC740; &#xC2A4;&#xD50C;&#xB77C;&#xC774;&#xC2A4; &#xBCC0;&#xD615; exon 21 &#xBD80;&#xC871;. &#xC720;&#xD6A8;&#xC131;&#xC774; &#xAC80;&#xC0AC; &#xB41C; &#xD56D; &#xCCB4;&#xC640; Immunolabeling &#xC0B0; &#xD6C4; &#xB098;&#xC774; &#xBC0F; &#xD615; &#xC0C1;&#xAD00; &#xC5C6;&#xC774; DRG &#xC2E0;&#xACBD;&#xC5D0; &#xC788;&#xB294; nkcc1&#xC758; &#xC720;&#xBE44;&#xCFFC;&#xD130;&#xC2A4; &#xC2DD;&#xC744; &#xACF5;&#xAC1C; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC131;&#xC219; [Cl(-)] (i) &#xAC10;&#xC18C;&#xB97C; &#xC810;&#xCC28;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xC9C4;&#xD589;, &#xD3C9;&#xD615;&#xC5D0; &#xC704;&#xC5D0; &#xC720;&#xC9C0; &amp;gt; 95% &#xC131;&#xC219;&#xD55C; &#xB274;&#xB7F0;. DRG &#xB274;&#xB7F0; &#xC775;&#xC2A4;&#xD504;&#xB808;&#xC2A4; mRNAs KCC1, KCC3s &#xBC0F; KCC4, &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xD558;&#xC9C0; KCC2s. &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xAE30;&#xBCF8; &#xD32C; &#xBC1C;&#xB2EC; Cl(-) &#xD56D;&#xC0C1;&#xC131;&#xC740; &#xB17C;&#xC758; &#xBCC0;&#xD654;&#xC640; &#xC911;&#xC559; &#xC2E0;&#xACBD; &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xBE44;&#xAD50;.

&#xBD84;&#xC790; &#xBC0F; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC131; &#xC2DD; &#xC591;&#xC774;&#xC628;-&#xC5FC;&#xD654;-COTRANSPORTERS &#xC9C0; &#xB8E8;&#xD2B8; &#xC2E0;&#xACBD; &#xC808; &#xC2E0;&#xACBD; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0;&#xC11C;&#xC758; &#xC0B0; &#xD6C4; &#xC131;&#xC219; &#xD558;&#xB294; &#xB3D9;&#xC548;.

GABA despolarizan y excita las neuronas centrales durante el desarrollo temprano, inhibitoria y hiperpolarizador con la maduraci&oacute;n. Este &quot;cambio de desarrollo&quot; se produce bruscamente, lo que refleja una disminuci&oacute;n de [Cl(-)](i) y un cambio hiperpolarizador en CL (-) potencial debido a la regulaci&oacute;n al alza de la cotransporter K(+)-Cl(-) KCC2b, un extrusor de cl (-) enolase del equilibrio. Por el contrario, las neuronas aferentes primarias (ollas) son depolarized por GABA a lo largo de la edad adulta debido a la expresi&oacute;n de NKCC1, un cotransporter Na(+)-K(+)-2Cl(-) que acumula cl (-) por encima de equilibrio. La despolarizaci&oacute;n mediada por GABA A de cacerolas determina la inhibici&oacute;n presin&aacute;ptica en la m&eacute;dula espinal, un mecanismo clave que bloquean la informaci&oacute;n somatosensorial. Poco se sabe sobre los cambios de desarrollo en la expresi&oacute;n de transportadores de cl (-) y cl (-) homeostasis en bandejas. Si NKCC1 se expresa en bandejas de todos los fenotipos o si se limita a subpoblaciones (e.g. nociceptores), es discutible. Adem&aacute;s, si ollas expresan KCC2s es controvertido. Investigamos la expresi&oacute;n de sodio-potasio NKCC1 y K(+)-Cl(-) en neuronas de ganglio (DRG) de rata y rat&oacute;n ra&iacute;z dorsal con m&eacute;todos moleculares. Utilizando im&aacute;genes medimos la microscopia de fluorescencia [Cl(-)](i) en neuronas de rata agudo-disociado DRG (P0-P21) cargado con N-(ethoxycarbonylmethyl) -6-methoxyquinolinium bromuro, clasificado con marcadores fenot&iacute;picos. Las neuronas DRG de todos los tama&ntilde;os expresan dos mRNAs NKCC1, una larga duraci&oacute;n y una variante m&aacute;s corta del empalme falta ex&oacute;n 21. Inmunomarcaci&oacute;n con anticuerpos validados revel&oacute; la expresi&oacute;n ubicua de NKCC1 en neuronas DRG independientemente de la edad postnatal y fenotipo. Como maduraci&oacute;n avanza, cl (en-[)] es (i) disminuye gradualmente, persistiendo por encima de equilibrio en &gt; neuronas maduras 95%. Las neuronas DRG expresan mRNAs para KCC1, KCC3s y KCC4, pero no KCC2s. mecanismos de los cambios de desarrollo cacerolas subyacente en la homeostasis de cl (-) se discuten y comparados con los de las neuronas centrales.

EXPRESI&Oacute;N MOLECULAR Y FUNCIONAL DE SODIO-POTASIO-CLORURO-CACI&Oacute;N EN LAS NEURONAS DEL GANGLIO DE RA&Iacute;Z DORSAL DURANTE LA MADURACI&Oacute;N POSTNATAL.

Mauricio DiFulvio

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