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Affinity Precipitation of Active Rho-GEFs Using a GST-tagged Mutant Rho Protein (GST-RhoA(G17A)) from Epithelial Cell Lysates

Proteins of the Rho family of small GTPases are central regulators of the cytoskeleton, and control a large variety of cellular processes, including cell ...

St. Michael's Hospital 

University of Toronto

&#x5DF2;&#x8BC1;&#x660E;&#x80BF;&#x7624;&#x574F;&#x6B7B;&#x56E0;&#x5B50;-&alpha; (TNF-&alpha;) &#x708E;&#x6027;&#x7EC6;&#x80DE;&#x56E0;&#x5B50;&#xFF0C;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x5C0F;&#x86CB;&#x767D; Rho&#xFF0C;&#x4F46;&#x5E95;&#x5C42;&#x7684;&#x4FE1;&#x53F7;&#x8F6C;&#x5BFC;&#x673A;&#x5236;&#x4ECD;&#x672A;&#x5B9A;&#x4E49;&#x3002;&#x56E0;&#x4E3A;&#x80BF;&#x7624;&#x574F;&#x6B7B;&#x56E0;&#x5B50;-&alpha;&#xFF0C;&#x4E3B;&#x8981;&#x8C03;&#x89E3;&#x4EBA;&#x7684;&#x80BE;&#x635F;&#x4F24;&#xFF0C;&#x4F17;&#x6240;&#x5468;&#x77E5;&#xFF0C;&#x589E;&#x52A0;&#x80BE;&#x5C0F;&#x7BA1;&#x4E0A;&#x76AE;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8102;&#x8D28;&#x4F53;&#x6E17;&#x900F;&#x7387;&#xFF0C;&#x8FD9;&#x666E;&#x904D;&#x7684;&#x95EE;&#x9898;&#x662F;&#x80BE;&#x810F;&#xFF0C;&#x5C24;&#x4E3A;&#x91CD;&#x8981;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#x6211;&#x4EEC;&#x65E8;&#x5728;&#x786E;&#x5B9A; Rho &#x8DEF;&#x5F84;&#x5728;&#x80BE;&#x5C0F;&#x7BA1;&#x7EC6;&#x80DE; &#xFF08;LLC-PK(1) &#x548C;&#x6885;&#x4E01;&#x8FBE;&#x6BD4;&#x72AC;&#x80BE;&#xFF09; &#x4E2D;&#x5BF9;&#x80BF;&#x7624;&#x574F;&#x6B7B;&#x56E0;&#x5B50;-&alpha; &#x7684;&#x5F71;&#x54CD;&#xFF0C;&#x5B9A;&#x4E49;&#x4E0A;&#x6E38;&#x7684;&#x4FE1;&#x53F7;&#xFF0C;&#x5E76;&#x8C03;&#x67E5; Rho &#x901A;&#x8DEF;&#x80BF;&#x7624;&#x574F;&#x6B7B;&#x56E0;&#x5B50;-&alpha; &#x8BF1;&#x5BFC;&#x7684;&#x8102;&#x8D28;&#x4F53;&#x6E17;&#x900F;&#x6539;&#x5EFA;&#x5DE5;&#x7A0B;&#x4E2D;&#x7684;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x663E;&#x793A;&#x80BF;&#x7624;&#x574F;&#x6B7B;&#x56E0;&#x5B50;-&alpha; &#x8BF1;&#x5BFC;&#x5BFC;&#x81F4;&#x5E94;&#x529B;&#x7EA4;&#x7EF4;&#x5F62;&#x6210;&#x548C; Rho &#x6FC0;&#x9176;&#x4F9D;&#x8D56;&#x7684;&#x808C;&#x7403;&#x86CB;&#x767D;&#x8F7B;&#x94FE; (MLC) &#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x5FEB;&#x901F;&#x548C;&#x6301;&#x7EED; RhoA &#x6FC0;&#x6D3B;&#x3002;&#x82E5;&#x8981;&#x6807;&#x8BC6;&#x8FDE;&#x63A5;&#x5230; Rho &#x4FE1;&#x53F7;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x4E0E; Rho &#x7A81;&#x53D8;&#x4F53; &#xFF08;RhoG17A&#xFF09; &#x5E94;&#x7528;&#x4EB2;&#x548C;&#x6C89;&#x6DC0;&#x6CD5;&#x68C0;&#x6D4B;&#x80BF;&#x7624;&#x574F;&#x6B7B;&#x56E0;&#x5B50;&#x53D7;&#x4F53;&#x7684;&#x65B0;&#x76D1;&#x7BA1;&#x673A;&#x6784;&#xFF0C;&#x5176;&#x4E2D;&#x6355;&#x83B7;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x56FD;&#x5185;&#x751F;&#x4EA7;&#x603B;&#x503C; GTP &#x4EA4;&#x6D41;&#x56E0;&#x7D20; (GEFs)&#x3002;RhoG17A &#x6C89;&#x6DC0;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x8D28;&#x8C31;&#x5206;&#x6790;&#x786E;&#x5B9A;&#x4E3A;&#x80BF;&#x7624;&#x574F;&#x6B7B;&#x56E0;&#x5B50;-&alpha; &#x6D3B;&#x6027; Rho &#x5168;&#x7403;&#x73AF;&#x5883;&#x57FA;&#x91D1;&#x5168;&#x7403;&#x73AF;&#x5883;&#x57FA;&#x91D1;-H1&#x3002;&#x7B26;&#x5408;&#x5168;&#x7403;&#x73AF;&#x5883;&#x57FA;&#x91D1;-H1 &#x7684;&#x4E2D;&#x5FC3;&#x4F5C;&#x7528;&#xFF0C;&#x5C0F;&#x5E72;&#x6270; rna &#x8C03;&#x63A7;&#x4E0B;&#x963B;&#x6B62; Rho &#x901A;&#x8DEF;&#x7684;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#x5168;&#x7403;&#x73AF;&#x5883;&#x57FA;&#x91D1;-H1 &#x548C; Rho &#x6FC0;&#x6D3B;&#x662F; ERK &#x4FE1;&#x53F7;&#x5C3D;&#x53EF;&#x80FD; PD98059 MEK1/2 &#x6291;&#x5236;&#x5242;&#x7F13;&#x89E3;&#x80BF;&#x7624;&#x574F;&#x6B7B;&#x56E0;&#x5B50;-&alpha; &#x8BF1;&#x5BFC;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x7684;&#x4E0B;&#x6E38;&#x3002;&#x91CD;&#x8981;&#x7684;&#x662F;&#x80BF;&#x7624;&#x574F;&#x6B7B;&#x56E0;&#x5B50;-&alpha; &#x589E;&#x5F3A; ERK &#x901A;&#x8DEF;&#x4F9D;&#x8D56;&#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x82CF;&#x6C28;&#x9178; 678 &#x7684;&#x5168;&#x7403;&#x73AF;&#x5883;&#x57FA;&#x91D1;-H1 &#x662F;&#x5BC6;&#x94A5;&#x8FDB;&#x884C;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x3002;&#x6700;&#x540E;&#x7684;&#x80BF;&#x7624;&#x574F;&#x6B7B;&#x56E0;&#x5B50;-&alpha; &#x8BF1;&#x5BFC;&#x8102;&#x8D28;&#x4F53;&#x6E17;&#x900F;&#x7387;&#x589E;&#x52A0;&#x662F;&#x7F3A;&#x5E2D;&#x5728; LLC-PK(1) &#x7EC6;&#x80DE;&#x7A33;&#x5B9A;&#x8868;&#x8FBE;&#x975E; phosphorylatable&#x3001; &#x5360;&#x4E3B;&#x5BFC;&#x5730;&#x4F4D;&#x7684;&#x6D88;&#x6781;&#x521A;&#x679C;&#x89E3;&#x653E;&#x8FD0;&#x52A8;&#x3002;&#x603B;&#x4E4B;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x53D1;&#x73B0; ERK/&#x5168;&#x7403;&#x73AF;&#x5883;&#x57FA;&#x91D1;-H1/Rho/Rho &#x6FC0;&#x9176;/&#x78F7;-&#x89E3;&#x653E;&#x8FD0;&#x52A8;&#x901A;&#x8DEF;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x4E2D;&#x4ECB;&#x7684;&#x80BE;&#x5C0F;&#x7BA1;&#x4E0A;&#x76AE;&#x7684;&#x6E17;&#x900F;&#xFF0C;&#x53CD;&#x8FC7;&#x6765;&#x53EF;&#x80FD;&#x6709;&#x52A9;&#x4E8E;&#x80BE;&#x635F;&#x4F24;&#x80BF;&#x7624;&#x574F;&#x6B7B;&#x56E0;&#x5B50;-&alpha; &#x8BF1;&#x5BFC;&#x9AD8;&#x7A0B;&#x7684;&#x673A;&#x5236;&#x3002;

&#x5168;&#x7403;&#x73AF;&#x5883;&#x57FA;&#x91D1;-H1 &#x4ECB;&#x5BFC;&#x80BF;&#x7624;&#x574F;&#x6B7B;&#x56E0;&#x5B50;-&alpha; &#x8BF1;&#x5BFC; Rho &#x6FC0;&#x6D3B;&#x548C;&#x808C;&#x7403;&#x86CB;&#x767D;&#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#xFF1A; &#x5728;&#x7BA1;&#x72B6;&#x8102;&#x8D28;&#x4F53;&#x6E17;&#x900F;&#x8C03;&#x8282;&#x4E2D;&#x7684;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;

Tumor necrosis factor-alpha (TNF-alpha), an inflammatory cytokine, has been shown to activate the small GTPase Rho, but the underlying signaling mechanisms remained undefined. This general problem is particularly important in the kidney, because TNF-alpha, a major mediator of kidney injury, is known to increase paracellular permeability in tubular epithelia. Here we aimed to determine the effect of TNF-alpha on the Rho pathway in tubular cells (LLC-PK(1) and Madin-Darby canine kidney), define the upstream signaling, and investigate the role of the Rho pathway in the TNF-alpha-induced alterations of paracellular permeability. We show that TNF-alpha induced a rapid and sustained RhoA activation that led to stress fiber formation and Rho kinase-dependent myosin light chain (MLC) phosphorylation. To identify new regulators connecting the TNF receptor to Rho signaling, we applied an affinity precipitation assay with a Rho mutant (RhoG17A), which captures activated GDP-GTP exchange factors (GEFs). Mass spectrometry analysis of the RhoG17A-precipitated proteins identified GEF-H1 as a TNF-alpha-activated Rho GEF. Consistent with a central role of GEF-H1, its down-regulation by small interfering RNA prevented the activation of the Rho pathway. Moreover GEF-H1 and Rho activation are downstream of ERK signaling as the MEK1/2 inhibitor PD98059 mitigated TNF-alpha-induced activation of these proteins. Importantly TNF-alpha enhanced the ERK pathway-dependent phosphorylation of Thr-678 of GEF-H1 that was key for activation. Finally the TNF-alpha-induced paracellular permeability increase was absent in LLC-PK(1) cells stably expressing a non-phosphorylatable, dominant negative MLC. In summary, we have identified the ERK/GEF-H1/Rho/Rho kinase/phospho-MLC pathway as the mechanism mediating TNF-alpha-induced elevation of tubular epithelial permeability, which in turn might contribute to kidney injury.

GEF-H1 mediates tumor necrosis factor-alpha-induced Rho activation and myosin phosphorylation: role in the regulation of tubular paracellular permeability.

Facteur de n&#xE9;crose tumorale-alpha (TNF-alpha), une cytokine inflammatoire, il a &#xE9;t&#xE9; d&#xE9;montr&#xE9; pour activer la petite GTPase Rho, mais les m&#xE9;canismes sous-jacents de signalisation est rest&#xE9; ind&#xE9;fini. Ce probl&#xE8;me g&#xE9;n&#xE9;ral est particuli&#xE8;rement important dans le rein, parce que le TNF-alpha, un m&#xE9;diateur majeur des l&#xE9;sions r&#xE9;nales, est connu pour augmenter la perm&#xE9;abilit&#xE9; paracellulaire en tube &#xE9;pith&#xE9;liums. Ici nous avons cherch&#xE9; &#xE0; d&#xE9;terminer l&#x26;#39;effet du TNF-alpha sur la voie Rho dans les cellules tubulaires (LLC-PK (1) et Madin-Darby Canine Kidney), d&#xE9;finir la signalisation en amont, et d&#x26;#39;enqu&#xEA;ter sur le r&#xF4;le de la voie Rho dans le TNF- alpha-alt&#xE9;rations induites de la perm&#xE9;abilit&#xE9; paracellulaire. Nous montrons que le TNF-alpha induit une activation de RhoA rapide et soutenue qui a conduit &#xE0; insister sur la formation de fibres et de Rho kinase d&#xE9;pendante de la cha&#xEE;ne l&#xE9;g&#xE8;re de myosine (MLC) de phosphorylation. Pour identifier de nouveaux r&#xE9;gulateurs de connexion du r&#xE9;cepteur du TNF &#xE0; signalisation de Rho, nous avons appliqu&#xE9; un test de pr&#xE9;cipitation d&#x26;#39;affinit&#xE9; avec un mutant de Rho (RhoG17A), qui permet d&#x26;#39;enregistrer activ&#xE9; PIB-GTP facteurs d&#x26;#39;&#xE9;change (GEF). L&#x26;#39;analyse par spectrom&#xE9;trie de masse des prot&#xE9;ines RhoG17A-pr&#xE9;cipit&#xE9;s identifi&#xE9;s FEM-H1 comme le FEM TNF-alpha activ&#xE9; par Rho. Conform&#xE9;ment &#xE0; un r&#xF4;le central de la FEM-H1, sa r&#xE9;gulation &#xE0; la baisse par petits ARN interf&#xE9;rents emp&#xEA;ch&#xE9; l&#x26;#39;activation de la voie Rho. En outre FEM-H1 et l&#x26;#39;activation de Rho se trouvent en aval de ERK signalisation que l&#x26;#39;inhibiteur de MEK1 / 2 PD98059 att&#xE9;nu&#xE9; TNF-alpha induite par l&#x26;#39;activation de ces prot&#xE9;ines. Il est important de TNF-alpha am&#xE9;lior&#xE9; l&#x26;#39;ERK-d&#xE9;pendante la phosphorylation de Thr-678 du FEM-H1 qui a &#xE9;t&#xE9; la cl&#xE9; pour l&#x26;#39;activation. Enfin l&#x26;#39;augmentation de TNF-alpha induite par la perm&#xE9;abilit&#xE9; paracellulaire &#xE9;tait absent dans LLC-PK (1) des cellules exprimant de fa&#xE7;on stable un non-phosphorylable, dominant n&#xE9;gatif MLC. En r&#xE9;sum&#xE9;, nous avons identifi&#xE9; la kinase ERK/GEF-H1/Rho/Rho / phospho-MLC voie que le m&#xE9;canisme de m&#xE9;diation TNF-alpha induite par l&#x26;#39;&#xE9;l&#xE9;vation de la perm&#xE9;abilit&#xE9; &#xE9;pith&#xE9;liale tubulaire, qui &#xE0; son tour pourrait contribuer &#xE0; une l&#xE9;sion r&#xE9;nale.

FEM-H1 m&#xE9;diateur facteur de n&#xE9;crose tumorale-alpha induite par l&#x26;#39;activation de Rho et phosphorylation de la myosine: r&#xF4;le dans la r&#xE9;gulation de la perm&#xE9;abilit&#xE9; paracellulaire tubulaire

Tumor-Nekrose-Faktor-Alpha (TNF-Alpha), eine entz&uuml;ndliche Cytokine, ist gezeigt worden, um kleine GTPase Rho zu aktivieren, aber die zugrunde liegenden Signalisierungsmechanismen blieb nicht definiert. Dieses allgemeine Problem ist besonders wichtig in der Niere, weil TNF-Alpha, wichtigen Vermittler von Verletzungen der Niere, bekannt ist, dass parazellul&auml;ren Permeabilit&auml;t in r&ouml;hrenf&ouml;rmigen Epithelien zu erh&ouml;hen. Hier sollen wir bestimmen die Wirkung von TNF-Alpha auf die Rho-Pathway in tubul&auml;ren Zellen (LLC-PK(1) und Madin Darby canine Kidney), definieren die upstream-Signalisierung und untersuchen die Rolle des Rho Biosyntheseweges in die TNF-Alpha-induzierte Ver&auml;nderungen der parazellul&auml;ren Durchl&auml;ssigkeit. Wir zeigen, dass TNF-Alpha eine rasche und nachhaltige RhoA Aktivierung induziert, die zur Bildung von Stress-Faser und Rho-Kinase abh&auml;ngige Myosin-Leichtketten (MLC)-Phosphorylierung gef&uuml;hrt. Ermittlung neuer Regler verbinden den TNF-Rezeptor mit Rho signalisieren, wir eine Affinit&auml;t-Niederschlag-Assay mit Rho Mutanten (RhoG17A) angewendet, die erfasst, aktiviert BIP-GTP Exchange Faktoren (GEFs). Massenspektrometrie-Analyse der Proteine RhoG17A-ausgef&auml;llt identifiziert GEF-H1 als ein TNF-Alpha aktivierten Rho GEF. In &Uuml;bereinstimmung mit einer zentralen Rolle der GEF-H1, seine Herunterregulation von small interfering RNA verhindert die Aktivierung des Signalweges Rho. Au&szlig;erdem sind GEF-H1 und Rho-Aktivierung nachgeschaltete ERK zu signalisieren, wie die MEK1/2-Hemmer PD98059 TNF-Alpha-induzierte Aktivierung dieser Proteine gemindert. TNF-Alpha verbessert vor allem die ERK Weg-abh&auml;ngige Phosphorylierung von Thr-678 GEF-H1, die Schl&uuml;ssel f&uuml;r die Aktivierung war. Schlie&szlig;lich die TNF-Alpha-induzierte parazellul&auml;ren Permeabilit&auml;t Erh&ouml;hung fehlte in den LLC-PK(1) Zellen stabil Ausdruck einer nicht-phosphorylatable, dominant negative MLC. Zusammenfassend l&auml;sst sich sagen haben wir die ERK/GEF-H1/Rho/Rho-Kinase/Phospho-MLC-Pathway identifiziert, als der Mechanismus, die Vermittlung von TNF-Alpha-induzierte Erh&ouml;hung von tubul&auml;ren Epithelzellen Permeabilit&auml;t, die wiederum zur Sch&auml;digung der Niere beitragen k&ouml;nnte.

GEF-H1 vermittelt, Tumor-Nekrose-Faktor-Alpha-induzierte Rho Aktivierung und Myosin Phosphorylierung: Rolle bei der Regulierung der tubul&auml;ren parazellul&auml;ren Durchl&auml;ssigkeit.

Fattore di necrosi tumorale alfa (TNF-alfa), una citochina infiammatoria, &egrave; stato dimostrato per attivare la piccola GTPasi Rho, ma i meccanismi di segnalazione sottostanti &egrave; rimasto indefiniti. Il problema generale &egrave; particolarmente importante nel rene, poich&eacute; il TNF-alfa, un importante mediatore di lesioni renali, &egrave; noto per aumentare la permeabilit&agrave; paracellular nell&#39;epitelio tubulare. Qui abbiamo finalizzato a determinare l&#39;effetto del TNF-alfa sul pathway di Rho nelle cellule tubulari (LLC-PK(1) e Madin-Darby canine kidney), definire la segnalazione a monte e indagare il ruolo del percorso Rho in alterazioni della permeabilit&agrave; paracellular indotta da TNF-alfa. Mostriamo che TNF-alfa induce un rapido e duraturo RhoA attivazione che portarono alla formazione di fibre di stress e fosforilazione della catena leggera (MLC) di miosina chinasi-dipendente Rho. Per identificare i nuovi regolatori collegando il recettore TNF a Rho di segnalazione, che abbiamo applicato un test di precipitazione di affinit&agrave; con un mutante di Rho (RhoG17A), che acquisisce attivato fattori di scambio GDP-GTP (GEFs). Analisi di spettrometria di massa delle proteine precipitate RhoG17A identificato GEF-H1 come un TNF-alpha-attivato Rho GEF. Coerente con un ruolo centrale del GEF-H1, la down-regulation di piccolo RNA interferente ha impedito l&#39;attivazione del percorso di Rho. Inoltre GEF-H1 e attivazione di Rho si trovano a valle di ERK segnalazione come l&#39;inibitore di MEK1/2 PD98059 mitigato attivazione indotta da TNF-alfa di queste proteine. Soprattutto TNF-alfa rafforzata la fosforilazione dipendente dal percorso ERK di Thr-678 del GEF-H1 che &egrave; stata la chiave per l&#39;attivazione. Infine l&#39;aumento di permeabilit&agrave; paracellular indotta da TNF-alfa &egrave; stato assente nelle cellule LLC-PK(1) stabile esprimendo un MLC negativo dominante, non phosphorylatable. In sintesi, abbiamo individuato il percorso MLC/fosfo-chinasi ERK/GEF-H1/Rho/Rho come meccanismo di mediazione indotta da TNF-alpha elevazione della permeabilit&agrave; epiteliale tubulare, che a sua volta potrebbe contribuire al danno renale.

GEF-H1 da intermediario indotta fattore di necrosi tumorale-alpha Rho attivazione e fosforilazione della miosina: ruolo nella regolazione della permeabilit&agrave; tubulare paracellular.

&#x816B;&#x760D;&#x58CA;&#x6B7B;&#x56E0;&#x5B50;&#x3B1;&#xFF08;TNF-&#x3B1;&#xFF09;&#x3001;&#x708E;&#x75C7;&#x6027;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x30AB;&#x30A4;&#x30F3;&#x306F;&#x3001;&#x4F4E;&#x5206;&#x5B50;&#x91CF;GTPase&#x306E;Rho&#x3092;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x793A;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x304C;&#x3001;&#x57FA;&#x306B;&#x306A;&#x308B;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#x6A5F;&#x69CB;&#x306F;&#x3001;&#x672A;&#x5B9A;&#x7FA9;&#x306E;&#x307E;&#x307E;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002; TNF-&#x3B1;&#x3001;&#x814E;&#x81D3;&#x640D;&#x50B7;&#x306E;&#x4E3B;&#x8981;&#x30E1;&#x30C7;&#x30A3;&#x30A8;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x5C3F;&#x7D30;&#x7BA1;&#x4E0A;&#x76AE;&#x306E;&#x508D;&#x7D30;&#x80DE;&#x900F;&#x904E;&#x6027;&#x3092;&#x5897;&#x52A0;&#x3055;&#x305B;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x77E5;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x4E00;&#x822C;&#x7684;&#x306A;&#x554F;&#x984C;&#x306F;&#x3001;&#x814E;&#x81D3;&#x3067;&#x306F;&#x7279;&#x306B;&#x91CD;&#x8981;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x5C3F;&#x7D30;&#x7BA1;&#x7D30;&#x80DE;&#xFF08;LLC-PK&#xFF08;1&#xFF09;&#x304A;&#x3088;&#x3073;Madin-Darby&#x30A4;&#x30CC;&#x814E;&#x81D3;&#xFF09;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;Rho&#x7D4C;&#x8DEF;&#x4E0A;&#x306E;TNF-&#x3B1;&#x306E;&#x52B9;&#x679C;&#x3092;&#x6C7A;&#x5B9A;&#x3059;&#x308B;&#x4E0A;&#x6D41;&#x306E;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#x3092;&#x5B9A;&#x7FA9;&#x3057;&#x3001;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;Rho&#x7D4C;&#x8DEF;&#x306E;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x8ABF;&#x67FB;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x76EE;&#x7684;&#x3068;&#x3057;&#x305F;TNF-&#x508D;&#x7D30;&#x80DE;&#x900F;&#x904E;&#x6027;&#x306E;&#x3B1;&#x8A98;&#x767A;&#x6027;&#x306E;&#x5909;&#x5316;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;TNF-&#x3B1;&#x306F;&#x3001;&#x7E4A;&#x7DAD;&#x5F62;&#x6210;&#x3068;Rho&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x4F9D;&#x5B58;&#x6027;&#x30DF;&#x30AA;&#x30B7;&#x30F3;&#x8EFD;&#x9396;&#xFF08;MLC&#xFF09;&#x306E;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x3092;&#x5F37;&#x8ABF;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x5C0E;&#x3044;&#x305F;&#x3001;&#x8FC5;&#x901F;&#x304B;&#x3064;&#x6301;&#x7D9A;&#x7684;&#x306A;RhoA&#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x3092;&#x8A98;&#x5C0E;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002; Rho&#x306E;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#x306B;TNF&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x3092;&#x63A5;&#x7D9A;&#x3059;&#x308B;&#x65B0;&#x3057;&#x3044;&#x30EC;&#x30AE;&#x30E5;&#x30EC;&#x30FC;&#x30BF;&#x3092;&#x8B58;&#x5225;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;GDP-GTP&#x4EA4;&#x63DB;&#x56E0;&#x5B50;&#xFF08;GEF&#xFF09;&#x3092;&#x6709;&#x52B9;&#x306B;&#x30AD;&#x30E3;&#x30D7;&#x30C1;&#x30E3;&#x30FC;Rho&#x306E;&#x5909;&#x7570;&#x4F53;&#xFF08;RhoG17A&#xFF09;&#x3068;&#x89AA;&#x548C;&#x6027;&#x306E;&#x6C88;&#x6BBF;&#x30A2;&#x30C3;&#x30BB;&#x30A4;&#x3092;&#x9069;&#x7528;&#x3057;&#x305F;&#x3002; TNF-&#x3B1;&#x6D3B;&#x6027;&#x306E;Rho GEF&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x3001;GEF-H1&#x8B58;&#x5225;RhoG17A&#xB7;&#x6C88;&#x6BBF;&#x3057;&#x305F;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x8CEA;&#x91CF;&#x5206;&#x6790;&#x3002; GEF-H1&#x306E;&#x4E2D;&#x5FC3;&#x7684;&#x5F79;&#x5272;&#x3068;&#x4E00;&#x81F4;&#x3057;&#x3001;&#x4F4E;&#x5206;&#x5B50;&#x5E72;&#x6E09;RNA&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x305D;&#x306E;&#x30C0;&#x30A6;&#x30F3;&#x30EC;&#x30AE;&#x30E5;&#x30EC;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x306F;&#x3001;Rho&#x7D4C;&#x8DEF;&#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x3092;&#x9632;&#x3044;&#x3060;&#x3002;&#x307E;&#x305F;&#x3001;GEF-H1&#x3068;Rho&#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x306F;&#x3001;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;TNF-&#x3B1;&#x8A98;&#x5C0E;&#x6D3B;&#x6027;&#x3092;&#x8EFD;&#x6E1B;MEK1 / 2&#x963B;&#x5BB3;&#x5264;PD98059&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;ERK&#x306E;&#x4E0B;&#x6D41;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3002;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x306E;&#x306F;TNF-&#x3B1;&#x5F37;&#x5316;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x9375;&#x3067;&#x3042;&#x3063;&#x305F;GEF-H1&#x306E;Thr-678&#x306E;ERK&#x7D4C;&#x8DEF;&#x4F9D;&#x5B58;&#x6027;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x3002;&#x6700;&#x5F8C;&#x306B;&#x3001;TNF-&#x3B1;&#x8A98;&#x767A;&#x6027;&#x508D;&#x7D30;&#x80DE;&#x900F;&#x904E;&#x6027;&#x306E;&#x5897;&#x52A0;&#x306F;&#x5B89;&#x5B9A;&#x3057;&#x3001;&#x975E;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x53EF;&#x80FD;&#x306A;&#x3001;&#x30C9;&#x30DF;&#x30CA;&#x30F3;&#x30C8;&#x30CD;&#x30AC;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6;MLC&#x3092;&#x8868;&#x73FE;&#x3059;&#x308B;LLC-PK&#xFF08;1&#xFF09;&#x7D30;&#x80DE;&#x5185;&#x306B;&#x5B58;&#x5728;&#x3057;&#x306A;&#x304B;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x8981;&#x7D04;&#x3059;&#x308B;&#x3068;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x9806;&#x756A;&#x306B;&#x814E;&#x81D3;&#x640D;&#x50B7;&#x306B;&#x5BC4;&#x4E0E;&#x3059;&#x308B;&#x304B;&#x3082;&#x3057;&#x308C;&#x306A;&#x3044;&#x5C3F;&#x7D30;&#x7BA1;&#x4E0A;&#x76AE;&#x900F;&#x904E;&#x6027;&#x306E;T&#x200B;&#x200B;NF-&#x3B1;&#x8A98;&#x767A;&#x6027;&#x4E0A;&#x6607;&#x3092;&#x5A92;&#x4ECB;&#x3059;&#x308B;&#x6A5F;&#x69CB;&#x3068;&#x3057;&#x3066;ERK/GEF-H1/Rho/Rho&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;/&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;MLC&#x7D4C;&#x8DEF;&#x3092;&#x540C;&#x5B9A;&#x3057;&#x305F;&#x3002;

GEF-H1&#x3092;&#x5A92;&#x4ECB;&#x3059;&#x308B;&#x816B;&#x760D;&#x58CA;&#x6B7B;&#x56E0;&#x5B50;-&#x3B1;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x8A98;&#x5C0E;&#x3055;&#x308C;&#x308B;Rho&#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x3068;&#x30DF;&#x30AA;&#x30B7;&#x30F3;&#x306E;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#xFF1A;&#x7BA1;&#x72B6;&#x508D;&#x7D30;&#x80DE;&#x900F;&#x904E;&#x6027;&#x306E;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x5F79;&#x5272;

&#xC885;&#xC591; &#xAD34; &#xC0AC; &#xC778;&#xC790;-&#xC54C;&#xD30C; (TNF-&#xC54C;&#xD30C;), &#xC5FC;&#xC99D; &#xC131; cytokine &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xC791;&#xC740; Gtpase&#xB85C; &#xD45C;&#xC2DC; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xAE30;&#xBCF8; &#xC2E0;&#xD638; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;&#xC744; &#xC815;&#xC758; &#xB418;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC740; &#xC720;&#xC9C0;. TNF-&#xC54C;&#xD30C;, &#xC2E0;&#xC7A5; &#xC0C1;&#xD574;&#xC758; &#xC8FC;&#xC694; &#xC911;&#xC7AC;&#xC790; &#xAD00; &#xC0C1;&#xD53C;&#xC5D0;&#xC11C; paracellular &#xCE68;&#xD22C;&#xC131;&#xC744; &#xC99D;&#xAC00; &#xD558;&#xB294; &#xAC83;&#xC73C;&#xB85C; &#xC54C;&#xB824;&#xC838; &#xC788;&#xAE30; &#xB54C;&#xBB38;&#xC5D0;&#xC774; &#xC77C;&#xBC18;&#xC801;&#xC778; &#xBB38;&#xC81C;&#xB294; &#xC2E0;&#xC7A5;&#xC5D0; &#xD2B9;&#xD788; &#xC911;&#xC694; &#xD558;&#xB2E4;. &#xC5EC;&#xAE30; &#xC6B0;&#xB9AC; &#xAD00; &#xC138;&#xD3EC; (LLC-PK(1) &#xBC0F; Madin-&#xB2E4; &#xBE44; &#xAC1C; &#xC2E0;&#xC7A5;)&#xC5D0; Rho &#xD1B5;&#xB85C;&#xC5D0; TNF-&#xC54C;&#xD30C;&#xC758; &#xD6A8;&#xACFC; &#xACB0;&#xC815; &#xD558; &#xACE0; &#xC5C5;&#xC2A4;&#xD2B8;&#xB9BC; &#xC2E0;&#xD638; &#xC815;&#xC758; paracellular &#xCE68;&#xD22C;&#xC131;&#xC758; TNF &#xC54C;&#xD30C; &#xC720;&#xB3C4; &#xBCC0;&#xACBD;&#xC5D0; Rho &#xD1B5;&#xB85C;&#xC758; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xC870;&#xC0AC;&#xD560; &#xBAA9;&#xC801;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; TNF-&#xC54C;&#xD30C;&#xB85C; &#xD0A4; &#xC885;&#xC18D; myosin &#xBE5B; &#xCCB4;&#xC778; (MLC) &#xC778; &#xC0B0;&#xD654; &#xC2A4;&#xD2B8;&#xB808;&#xC2A4; &#xC12C;&#xC720; &#xD615;&#xC131;&#xC744; &#xC8FC;&#xB3C4; &#xC2E0;&#xC18D; &#xD558; &#xACE0; &#xC9C0;&#xC18D;&#xC801;&#xC778; RhoA &#xD65C;&#xC131;&#xD654;&#xB97C; &#xC720;&#xB3C4; &#xBCF4;&#xC5EC;. TNF &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4;&#xC5D0; &#xC5F0;&#xACB0;&#xB85C; &#xC2E0;&#xD638;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB85C; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; (RhoG17A)&#xC640; &#xC120;&#xD638;&#xB3C4; &#xAC15; &#xC218; &#xBD84;&#xC11D; &#xACB0;&#xACFC; &#xC801;&#xC6A9; &#xD558;&#xB294; &#xC0C8;&#xB85C;&#xC6B4; &#xB808; &#xADE4; &#xB808;&#xC774; &#xD130;&#xB97C; &#xC2DD;&#xBCC4; &#xD558;&#xB824;&#xBA74; GDP&#xB294; GTP &#xAD50;&#xD658; &#xC694;&#xC778; (&#xC870;&#xB2EC;) &#xD65C;&#xC131;&#xD654;&#xB97C; &#xCEA1;&#xCC98;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. RhoG17A &#xC2DC; &#xCF30; &#xB358; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC9C8;&#xB7C9; &#xBD84;&#xC11D; &#xBD84;&#xC11D; TNF &#xC54C;&#xD30C; &#xD65C;&#xC131;&#xD654;&#xB85C; GEF GEF H1 &#xC2DD;&#xBCC4;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. GEF h1&#xC758; &#xC911;&#xC2EC; &#xC5ED;&#xD560;&#xC640; &#xC77C;&#xCE58;, &#xC791;&#xC740; &#xAC04;&#xC12D; RNA&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xB2E4;&#xC6B4; &#xADDC;&#xC81C;&#xB294; Rho &#xACBD;&#xB85C;&#xC758; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xC218; &#xC5C6;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB354;&#xC6B1;&#xC774; GEF H1 &#xBC0F; Rho &#xD65C;&#xC131;&#xD654;&#xB294; ERK &#xC2E0;&#xD638; MEK1/2 &#xC5B5;&#xC81C;&#xC81C; PD98059 &#xC644;&#xD654;&#xC774; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; TNF &#xC54C;&#xD30C; &#xC720;&#xB3C4;&#xC758; &#xB2E4;&#xC6B4;&#xC2A4;&#xD2B8;&#xB9BC;. &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xAC83;&#xC740; TNF-&#xC54C;&#xD30C;&#xC758; &#xD65C;&#xC131;&#xD654;&#xB97C; &#xC704;&#xD55C; &#xC5F4;&#xC1E0;&#xB294; GEF h1 Thr-678 ERK &#xACBD;&#xB85C; &#xC885;&#xC18D;&#xC801; &#xC778; &#xC0B0;&#xD654; &#xD5A5;&#xC0C1;. &#xB9C8;&#xC9C0;&#xB9C9;&#xC73C;&#xB85C; TNF &#xC54C;&#xD30C; &#xC720;&#xB3C4; paracellular &#xCE68;&#xD22C;&#xC131; &#xC99D;&#xAC00; &#xACB0; &#xC11D; &#xD588;&#xB2E4; LLC-PK(1) &#xC140; &#xC548;&#xC815;&#xC801; &#xBE44; phosphorylatable, &#xC9C0;&#xBC30;&#xC801;&#xC778; &#xBD80;&#xC815;&#xC801;&#xC778; MLC&#xB97C; &#xD45C;&#xD604;. &#xC694;&#xC57D; &#xD558;&#xC790;&#xBA74;, &#xC6B0;&#xB9AC; &#xCC28;&#xB840; &#xC2E0;&#xC7A5; &#xC0C1;&#xD574;&#xC5D0; &#xAE30;&#xC5EC;&#xD560; &#xC218;&#xB3C4; &#xAD00; &#xC0C1;&#xD53C; &#xCE68;&#xD22C;&#xC131; &#xC0C1;&#xC2B9; TNF &#xC54C;&#xD30C; &#xC720;&#xB3C4; &#xC911;&#xC7AC; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;&#xC73C;&#xB85C; ERK/GEF-H1/&#xB178;/&#xB178; &#xB2C8;/&#xC778;-MLC &#xD1B5;&#xB85C; &#xD655;&#xC778; &#xD588;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

GEF H1 &#xC911;&#xC7AC; &#xC885;&#xC591; &#xAD34; &#xC0AC; &#xC694;&#xC778; &#xC54C;&#xD30C; &#xC720;&#xB3C4; &#xD65C;&#xC131;&#xD654;&#xC640; myosin &#xC778; &#xC0B0;&#xD654;: &#xAD00; paracellular &#xCE68;&#xD22C;&#xC131;&#xC758; &#xADDC;&#xC81C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC5ED;&#xD560;.

Factor de necrosis tumoral alfa (TNF-alfa), una citoquina inflamatoria, se ha demostrado para activar la peque&#xF1;a Rho GTPasa, pero los mecanismos subyacentes de se&#xF1;alizaci&#xF3;n se mantuvo indefinido. Este problema general es particularmente importante en el ri&#xF1;&#xF3;n, porque el TNF-alfa, un mediador importante de lesi&#xF3;n renal, se sabe que aumenta la permeabilidad paracelular en epitelios tubulares. Aqu&#xED; tuvo como objetivo determinar el efecto del TNF-alfa en esta v&#xED;a, en las c&#xE9;lulas tubulares (LLC-PK (1) y de Madin-Darby de ri&#xF1;&#xF3;n canino), definir la se&#xF1;alizaci&#xF3;n de la corriente, e investigar el papel de esta v&#xED;a, en el TNF- alfa-inducidos por alteraciones de la permeabilidad paracelular. Se demuestra que el TNF-alfa induce una activaci&#xF3;n de RhoA r&#xE1;pida y sostenida que llev&#xF3; a insistir en la formaci&#xF3;n de fibras y la Rho-cinasa dependiente de la fosforilaci&#xF3;n de la cadena ligera de la miosina (MLC). Para identificar los nuevos reguladores de conexi&#xF3;n del receptor de TNF a Rho de se&#xF1;alizaci&#xF3;n, se aplic&#xF3; una prueba de la precipitaci&#xF3;n afinidad con un mutante de Rho (RhoG17A), que captura activa del PIB-GTP factores de cambio (GEFS). Masa an&#xE1;lisis de espectrometr&#xED;a de las prote&#xED;nas precipitadas RhoG17A-identificados FMAM-H1 como un FMAM TNF-alfa-activado Rho. De acuerdo con un papel central del FMAM-H1, su regulaci&#xF3;n a la baja por peque&#xF1;os ARN de interferencia impidi&#xF3; la activaci&#xF3;n de la v&#xED;a Rho. Adem&#xE1;s del FMAM-H1 y la activaci&#xF3;n de Rho son aguas abajo de se&#xF1;alizaci&#xF3;n de ERK como el inhibidor de MEK 1/2 PD98059 mitigado el TNF-alfa inducida por la activaci&#xF3;n de estas prote&#xED;nas. Es importante destacar que el TNF-alfa ha mejorado la ERK-dependiente de la fosforilaci&#xF3;n de Thr-678 del FMAM-H1 que fue clave para la activaci&#xF3;n. Finalmente, el aumento de TNF-alfa inducida por la permeabilidad paracelular estaba ausente en LLC-PK (1) c&#xE9;lulas que expresan establemente un no-phosphorylatable, dominante negativo MLC. En resumen, hemos identificado la quinasa ERK/GEF-H1/Rho/Rho / v&#xED;a fosfo-CTM como el mecanismo de la mediaci&#xF3;n de TNF-alfa inducido por la elevaci&#xF3;n de la permeabilidad del epitelio tubular, que a su vez podr&#xED;a contribuir a la lesi&#xF3;n renal.

FMAM-H1 media el Factor de Necrosis Tumoral-alfa inducida por la activaci&#xF3;n de Rho y la fosforilaci&#xF3;n de la miosina: papel en la regulaci&#xF3;n de la permeabilidad intestinal tubular

&#x7EC6;&#x80DE;&#x819C;&#x53BB;&#x6781;&#x5316;&#x6FC0;&#x6D3B; Rho/Rho &#x6FC0;&#x9176; (&#x97E9;&#x56FD;) &#x901A;&#x8DEF;&#xFF0C;&#x5E76;&#x4ECE;&#x800C;&#x589E;&#x5F3A;&#x808C;&#x7403;&#x86CB;&#x767D;&#x8F7B;&#x94FE; (MLC) &#x78F7;&#x9178;&#xFF0C;&#x53CD;&#x8FC7;&#x6765;&#x88AB;&#x8BA4;&#x4E3A;&#x662F;&#x8102;&#x8D28;&#x4F53;&#x6E17;&#x900F;&#x7684;&#x4E00;&#x4E2A;&#x5173;&#x952E;&#x8C03;&#x8282;&#x5668;&#x3002;&#x7136;&#x800C;&#xFF0C;&#x4E0A;&#x6E38;&#x7684;&#x592B;&#x5987; depolarization Rho &#x6FC0;&#x6D3B;&#x4E0E;&#x6E17;&#x900F;&#x6027;&#x53D8;&#x5316;&#x7684;&#x673A;&#x5236;&#xFF0C;&#x662F;&#x672A;&#x77E5;&#x7684;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#x663E;&#x793A;&#x4E09;&#x79CD;&#x4E0D;&#x540C;&#x53BB;&#x6781;&#x5316; &#xFF08;&#x80DE;&#x5916; K(+) &#x9AD8;&#x6D53;&#x5EA6;&#x3001; &#x4EB2;&#x8102;&#x6027;&#x9633;&#x79BB;&#x5B50; tetraphenylphosphonium &#x6216; l-&#x4E19;&#x6C28;&#x9178;&#xFF0C;&#x91C7;&#x53D6;&#x7535; Na(+) cotransport&#xFF09; &#x7684;&#x523A;&#x6FC0;&#x6240;&#x6709;&#x6311;&#x8D77;&#x9C81;&#x68D2;&#x78F7;&#x9178;&#x5316; ERK LLC PK1 &#x548C;&#x6885;&#x4E01;&#x8FBE;&#x6BD4;&#x72AC;&#x80BE; (&#x80BE;) &#x7EC6;&#x80DE;&#x4E2D;&#x3002;&#x91CD;&#x8981;&#x7684;&#x662F;&#xFF0C;&#x6291;&#x5236; ERK &#x963B;&#x6B62;&#x53BB;&#x6781;&#x5316;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x6D3B;&#x5316;&#x7684; Rho&#x3002;&#x641C;&#x7D22;&#x4E3A;&#x57FA;&#x7840;&#x7684;&#x673A;&#x5236;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x5DF2;&#x786E;&#x5B9A; GTP GDP &#x4EA4;&#x6362;&#x56E0;&#x5B50;&#x5168;&#x7403;&#x73AF;&#x5883;&#x57FA;&#x91D1;-H1 &#x4E3A;&#x8D1F;&#x8D23;&#x53BB;&#x6781;&#x5316;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x7684; Rho &#x6FC0;&#x6D3B; ERK &#x76D1;&#x7BA1;&#x5173;&#x952E;&#x4EA4;&#x6362;&#x56E0;&#x5B50;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E00;&#x7ED3;&#x8BBA;&#x57FA;&#x4E8E;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x7ED3;&#x679C; 1&#xFF09; &#x53BB;&#x6781;&#x5316;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x5168;&#x7403;&#x73AF;&#x5883;&#x57FA;&#x91D1;-H1 &#x4F46;&#x4E0D;&#x662F; p115RhoGEF&#x3001; 2&#xFF09; &#x77ED;&#x5E72;&#x6270; RNA &#x4ECB;&#x5BFC;&#x7684;&#x5168;&#x7403;&#x73AF;&#x5883;&#x57FA;&#x91D1;-H1 &#x6C89;&#x9ED8;&#x6DD8;&#x6C70;&#x7684; Rho &#x901A;&#x8DEF;&#xFF0C;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x548C; 3&#xFF09; erk &#x9014;&#x5F84;&#x963B;&#x6B62;&#x5168;&#x7403;&#x73AF;&#x5883;&#x57FA;&#x91D1;-H1 &#x7684;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x53D1;&#x73B0; Na(+)-K(+) &#x6CF5;&#x6291;&#x5236;&#x5242;&#x54C7;&#x4E5F;&#x9020;&#x6210; ERK&#x3001; &#x5168;&#x7403;&#x73AF;&#x5883;&#x57FA;&#x91D1;-H1 &#x548C; Rho &#x6FC0;&#x6D3B;&#xFF0C;&#x90E8;&#x5206;&#x7531;&#x4E8E;&#x5176;&#x9664;&#x7684;&#x6548;&#x679C;&#x3002;&#x5173;&#x4E8E;&#x8FD9;&#x4E2A;&#x65B0;&#x53D1;&#x73B0;&#x7684;&#x9014;&#x5F84;&#x7684;&#x529F;&#x80FD;&#x6027;&#x540E;&#x679C;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x53D1;&#x73B0;&#x53BB;&#x6781;&#x5316;&#x589E;&#x52A0; LLC PK1 &#x8102;&#x8D28;&#x4F53;&#x901A;&#x900F;&#x6027;&#x548C;&#x7EC6;&#x80DE;&#xFF0C;&#x8FD9;&#x79CD;&#x6548;&#x679C;&#x901A;&#x8FC7;&#x6291;&#x5236;&#x808C;&#x7403;&#x86CB;&#x767D;&#x4F7F;&#x7528; blebbistatin &#x6216;&#x663E;&#x6027;&#x51CF;&#x8F7B;&#x8D1F; (&#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x65E0;&#x80FD;) &#x521A;&#x679C;&#x89E3;&#x653E;&#x8FD0;&#x52A8;&#x3002;&#x7EFC;&#x4E0A;&#x6240;&#x8FF0;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x5EFA;&#x8BAE; ERK/&#x5168;&#x7403;&#x73AF;&#x5883;&#x57FA;&#x91D1;-H1/Rho/&#x97E9;&#x56FD;/pMLC &#x9014;&#x5F84;&#x53EF;&#x80FD;&#x662F;&#x4E00;&#x4E2A;&#x4E2D;&#x592E;&#x673A;&#x5236;&#xFF0C;&#x5373;&#x7535;&#x523A;&#x6FC0;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x7684;&#x8DE8;&#x819C;&#x8FD0;&#x8F93;&#x8FC7;&#x7A0B;&#x63A7;&#x5236;&#x808C;&#x7403;&#x86CB;&#x767D;&#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x548C;&#x89C4;&#x7BA1;&#x5728;&#x80BE;&#x5C0F;&#x7BA1;&#x4E0A;&#x76AE;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x8102;&#x8D28;&#x4F53;&#x8FD0;&#x8F93;&#x3002;

&#x7EC6;&#x80DE;&#x5916;&#x4FE1;&#x53F7;&#x8C03;&#x8282;&#x6FC0;&#x9176;&#x548C;&#x5168;&#x7403;&#x73AF;&#x5883;&#x57FA;&#x91D1;-H1 &#x8C03;&#x89E3;&#x53BB;&#x6781;&#x5316;&#x8BF1;&#x5BFC; Rho &#x6FC0;&#x6D3B;&#x548C;&#x8102;&#x8D28;&#x4F53;&#x901A;&#x900F;&#x6027;&#x589E;&#x52A0;&#x3002;

Plasma membrane depolarization activates the Rho/Rho kinase (ROK) pathway and thereby enhances myosin light chain (MLC) phosphorylation, which in turn is thought to be a key regulator of paracellular permeability. However, the upstream mechanisms that couple depolarization to Rho activation and permeability changes are unknown. Here we show that three different depolarizing stimuli (high extracellular K(+) concentration, the lipophilic cation tetraphenylphosphonium, or l-alanine, which is taken up by electrogenic Na(+) cotransport) all provoke robust phosphorylation of ERK in LLC-PK1 and Madin-Darby canine kidney (MDCK) cells. Importantly, inhibition of ERK prevented the depolarization-induced activation of Rho. Searching for the underlying mechanism, we have identified the GTP/GDP exchange factor GEF-H1 as the ERK-regulated critical exchange factor responsible for the depolarization-induced Rho activation. This conclusion is based on our findings that 1) depolarization activated GEF-H1 but not p115RhoGEF, 2) short interfering RNA-mediated GEF-H1 silencing eliminated the activation of the Rho pathway, and 3) ERK inhibition prevented the activation of GEF-H1. Moreover, we found that the Na(+)-K(+) pump inhibitor ouabain also caused ERK, GEF-H1, and Rho activation, partially due to its depolarizing effect. Regarding the functional consequences of this newly identified pathway, we found that depolarization increased paracellular permeability in LLC-PK1 and MDCK cells and that this effect was mitigated by inhibiting myosin using blebbistatin or a dominant negative (phosphorylation incompetent) MLC. Taken together, we propose that the ERK/GEF-H1/Rho/ROK/pMLC pathway could be a central mechanism whereby electrogenic transmembrane transport processes control myosin phosphorylation and regulate paracellular transport in the tubular epithelium.

Extracellular signal-regulated kinase and GEF-H1 mediate depolarization-induced Rho activation and paracellular permeability increase.

D&#xE9;polarisation de la membrane plasmatique active la Rho / Rho kinase (ROK) et am&#xE9;liore ainsi la voie l&#xE9;g&#xE8;re de la myosine cha&#xEE;ne (MLC) de phosphorylation, qui &#xE0; son tour est pens&#xE9; pour &#xEA;tre un r&#xE9;gulateur cl&#xE9; de la perm&#xE9;abilit&#xE9; paracellulaire. Cependant, les m&#xE9;canismes en amont que la d&#xE9;polarisation couple &#xE0; Rho changements d&#x26;#39;activation et de la perm&#xE9;abilit&#xE9; sont inconnus. Ici, nous montrons que les trois diff&#xE9;rents stimuli d&#xE9;polarisants (forte teneur en K extracellulaire (+) la concentration, l&#x26;#39;t&#xE9;traph&#xE9;nylphosphonium cation lipophile, ou L-alanine, qui est repris par &#xE9;lectrog&#xE8;ne Na (+) cotransport) tous les provoquent la phosphorylation de ERK dans les robustes LLC-PK1 et Madin-Darby canine r&#xE9;naux (MDCK). Il est important, l&#x26;#39;inhibition de l&#x26;#39;activation de ERK emp&#xEA;ch&#xE9; induit par la d&#xE9;polarisation de Rho. Recherche pour le m&#xE9;canisme sous-jacent, nous avons identifi&#xE9; le facteur de GTP / GDP &#xE9;change FEM-H1 comme le facteur ERK-r&#xE9;glement&#xE9; &#xE9;change critique responsable de l&#x26;#39;activation induit par la d&#xE9;polarisation Rho. Cette conclusion est bas&#xE9;e sur nos constatations selon lesquelles 1) la d&#xE9;polarisation activ&#xE9; FEM-H1 mais pas p115RhoGEF, 2) petit ARN interf&#xE9;rent m&#xE9;di&#xE9;e par le FEM-H1 silence &#xE9;limin&#xE9; l&#x26;#39;activation de la voie Rho, et 3) l&#x26;#39;inhibition de ERK emp&#xEA;ch&#xE9; l&#x26;#39;activation de FEM-H1 . En outre, nous avons constat&#xE9; que le Na (+)-K (+) inhibiteur de la pompe ouaba&#xEF;ne a &#xE9;galement caus&#xE9; ERK, le FEM-H1, et l&#x26;#39;activation de Rho, partiellement en raison de son effet d&#xE9;polarisant. En ce qui concerne les cons&#xE9;quences fonctionnelles de cette voie nouvellement identifi&#xE9;s, nous avons constat&#xE9; que la d&#xE9;polarisation augmentation de la perm&#xE9;abilit&#xE9; paracellulaire dans LLC-PK1 et cellules MDCK et que cet effet a &#xE9;t&#xE9; att&#xE9;nu&#xE9; par la myosine inhibant l&#x26;#39;aide blebbistatin ou une dominante n&#xE9;gative MLC (phosphorylation incomp&#xE9;tent). Pris dans leur ensemble, nous proposons que la voie ERK/GEF-H1/Rho/ROK/pMLC pourrait &#xEA;tre un m&#xE9;canisme central par lequel les processus de transport transmembranaires &#xE9;lectrog&#xE8;nes contr&#xF4;ler et de r&#xE9;glementer phosphorylation de la myosine transport paracellulaire dans l&#x26;#39;&#xE9;pith&#xE9;lium tubulaire.

Extracellular signal-regulated kinase et le FEM-H1 Mediate d&#xE9;polarisation induite par l&#x26;#39;activation de Rho et augmentation de la perm&#xE9;abilit&#xE9; paracellulaire

Depolarisation der Plasmamembran der Rho/Rho-Kinase (ROK)-Signalweg aktiviert und damit Myosin-Leichtketten (MLC)-Phosphorylierung, die wiederum angenommen wird, ein wichtiger Regulator der parazellul&auml;ren Durchl&auml;ssigkeit verbessert. Die vorgelagerten Mechanismen, die paar Rho-Aktivierung und Durchl&auml;ssigkeit &Auml;nderungen depolarization sind jedoch unbekannt. Hier zeigen wir, dass drei verschiedene depolarisierende Reize (extrazellul&auml;re K(+) Hochkonzentration, lipophile kation Tetraphenylphosphonium oder l-Alanin, welche von elektrizit&auml;tserzeugende Na(+) Cotransport eingenommen wird) alle provozieren robuste Phosphorylierung von ERK in LLC-PK1 und Madin Darby canine Kidney (MDCK) Zellen. Hemmung der ERK verhindert vor allem die Depolarisierung-induzierte Aktivierung des Rho. Suche nach den zugrunde liegenden Mechanismus, haben wir den GTP/BIP-Austausch-Faktor GEF-H1 als die kritischen Austausch ERK-regulierten Faktor f&uuml;r die Depolarisierung induziert Rho-Aktivierung identifiziert. Diese Schlussfolgerung ist aufgrund unserer Erkenntnisse, dass 1) Depolarisierung GEF-H1 aber nicht p115RhoGEF aktiviert, 2) kurze interferierender RNA-vermittelte GEF-H1 Unterdr&uuml;ckender die Aktivierung des Rho-Signalweges eliminiert und 3) ERK Hemmung die Aktivierung der GEF-H1 verhindert. Dar&uuml;ber hinaus fanden wir, dass die Na(+)-K(+) Pumpe Inhibitor Strophanthin auch ERK, GEF-H1 und Rho-Aktivierung, teilweise bedingt durch die depolarisierende Wirkung verursacht. Zu den funktionellen folgen diesem neu identifizierte Weg, wir fanden, dass Depolarisation parazellul&auml;ren Durchl&auml;ssigkeit im LLC-PK1 erh&ouml;ht und MDCK Zellen und, dass dieser Effekt durch die Hemmung der Myosin mit Blebbistatin oder eine dominante entsch&auml;rft war negativ (Phosphorylierung inkompetent) MLC. Zusammengenommen, schlagen wir vor, dass der Stoffwechselweg ERK/GEF-H1/Rho/ROK/pMLC einen zentralen Mechanismus sein k&ouml;nnte, wobei elektrizit&auml;tserzeugende Transmembran Transportprozesse Myosin Phosphorylierung kontrollieren und regulieren parazellul&auml;ren Transport in das tubul&auml;re Epithel.

Extrazellul&auml;re Signal-regulierte Kinase und GEF-H1 vermitteln induziert durch Depolarisation Rho Aktivierung und parazellulare Durchl&auml;ssigkeit erh&ouml;hen.

Depolarizzazione della membrana plasmatica attiva il pathway della chinasi (ROK) Rho/Rho e quindi aumenta la fosforilazione della catena leggera (MLC) di miosina, che a sua volta &egrave; pensato per essere un regolatore chiave della permeabilit&agrave; paracellular. Tuttavia, i meccanismi a monte che coppia depolarizzazione per attivazione di Rho e cambiamenti di permeabilit&agrave; sono sconosciuti. Qui vi mostriamo che tre differenti depolarizzante stimoli (alta concentrazione extracellulare di K(+), il catione lipofilico tetraphenylphosphonium o l-alanina, che &egrave; preso dalla elettrogeniche Na(+) cotrasporto) tutti provocano robusta fosforilazione di ERK in cellule di rene canino (MDCK) LLC-PK1 e Madin-Darby. Soprattutto, l&#39;inibizione di ERK ha impedito l&#39;attivazione indotta depolarizzazione di Rho. Cercando il meccanismo sottostante, abbiamo identificato il fattore di scambio GTP/GDP GEF-H1 come il fattore di scambio critico ERK-regolato responsabile per l&#39;attivazione di Rho depolarizzazione indotta. Questa conclusione &egrave; basata sulle nostre scoperte che 1) depolarizzazione attivato GEF-H1 ma non p115RhoGEF, 2) breve interfering RNA-mediata GEF-H1 silenziamento eliminato l&#39;attivazione del percorso Rho e inibizione 3) ERK ha impedito l&#39;attivazione del GEF-H1. Inoltre, abbiamo trovato che l&#39;ouabaina inibitore di pompa Na(+)-K(+) causato anche ERK, GEF-H1 e attivazione di Rho, parzialmente a causa del suo effetto depolarizing. Per quanto riguarda le conseguenze funzionali di questo percorso recentemente identificata, abbiamo scoperto che la depolarizzazione aumentata permeabilit&agrave; paracellular in LLC-PK1 e cellule MDCK e che questo effetto &egrave; stato mitigato inibendo la miosina utilizzando blebbistatin o una dominante negativo (fosforilazione incompetente) MLC. Presi insieme, proponiamo che il pathway ERK/GEF-H1/Rho/ROK/pMLC potrebbe essere un meccanismo centrale per cui i processi di trasporto transmembrana elettrogeniche controllare la fosforilazione della miosina e regolare trasporto paracellular nell&#39;epitelio tubulare.

Chinasi segnale-regolata extracellulare e GEF-H1 mediano depolarizzazione indotta Rho attivazione e paracellular permeabilit&agrave; aumento.

&#x7D30;&#x80DE;&#x819C;&#x306E;&#x8131;&#x5206;&#x6975;&#x306F;&#x3001;Rho / Rho&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#xFF08;ROK&#xFF09;&#x7D4C;&#x8DEF;&#x3092;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x3057;&#x3001;&#x305D;&#x308C;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x9806;&#x756A;&#x306B;&#x508D;&#x7D30;&#x80DE;&#x900F;&#x904E;&#x6027;&#x306E;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x56E0;&#x5B50;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3068;&#x8003;&#x3048;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x30DF;&#x30AA;&#x30B7;&#x30F3;&#x8EFD;&#x9396;&#xFF08;MLC&#xFF09;&#x306E;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x3092;&#x5897;&#x5F37;&#x3059;&#x308B;&#x3002;&#x3057;&#x304B;&#x3057;&#x3001;Rho&#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x3068;&#x900F;&#x6C34;&#x6027;&#x306E;&#x5909;&#x5316;&#x306B;&#x30AB;&#x30C3;&#x30D7;&#x30EB;&#x8131;&#x5206;&#x6975;&#x305D;&#x306E;&#x4E0A;&#x6D41;&#x306E;&#x30E1;&#x30AB;&#x30CB;&#x30BA;&#x30E0;&#x306F;&#x4E0D;&#x660E;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x793A;&#x3059;3&#x3064;&#x306E;&#x7570;&#x306A;&#x308B;&#x8131;&#x5206;&#x6975;&#x523A;&#x6FC0;&#xFF08;&#x9AD8;&#x7D30;&#x80DE;&#x5916;K&#xFF08;+&#xFF09;&#x6FC3;&#x5EA6;&#x3001;&#x8102;&#x6EB6;&#x6027;&#x967D;&#x30A4;&#x30AA;&#x30F3;&#x30C6;&#x30C8;&#x30E9;&#x30D5;&#x30A7;&#x30CB;&#x30EB;&#x30DB;&#x30B9;&#x30DB;&#x30CB;&#x30A6;&#x30E0;&#x3001;&#x307E;&#x305F;&#x306F;L-&#x30A2;&#x30E9;&#x30CB;&#x30F3;&#x3001;&#x8D77;&#x96FB;&#x6027;&#x306E;Na&#xFF08;+&#xFF09;&#x5171;&#x8F38;&#x9001;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x53D6;&#x308A;&#x8FBC;&#x307E;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#xFF09;LLC-PK1&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;ERK&#x306E;&#x3059;&#x3079;&#x3066;&#x306E;&#x6311;&#x767A;&#x5805;&#x7262;&#x306A;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x3068;Madin-Darby&#x30A4;&#x30CC;&#x814E;&#x81D3;&#xFF08;MDCK&#xFF09;&#x7D30;&#x80DE;&#x3002;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x306E;&#x306F;&#x3001;ERK&#x306E;&#x963B;&#x5BB3;&#x306F;Rho&#x306E;&#x8131;&#x5206;&#x6975;&#x8A98;&#x767A;&#x6027;&#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x3092;&#x9632;&#x3044;&#x3060;&#x3002;&#x57FA;&#x790E;&#x3068;&#x306A;&#x308B;&#x30E1;&#x30AB;&#x30CB;&#x30BA;&#x30E0;&#x3092;&#x63A2;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x79C1;&#x305F;&#x3061;&#x306F;&#x8131;&#x5206;&#x6975;&#x8A98;&#x767A;&#x6027;Rho&#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x306B;&#x95A2;&#x4E0E;&#x3059;&#x308B;ERK-&#x898F;&#x5236;&#x306E;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x4EA4;&#x63DB;&#x56E0;&#x5B50;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x3001;GTP / GDP&#x4EA4;&#x63DB;&#x56E0;&#x5B50;GEF-H1&#x3092;&#x540C;&#x5B9A;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x7D50;&#x8AD6;&#x306F;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306E;&#x8ABF;&#x67FB;&#x7D50;&#x679C;&#x3001;1&#x306B;&#x57FA;&#x3065;&#x3044;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#xFF09;&#x8131;&#x5206;&#x6975;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;GEF-H1&#x306F;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x305B;&#x3093;p115RhoGEF&#x3001;2&#xFF09;&#x77ED;&#x9396;&#x5E72;&#x6E09;RNA&#x5A92;&#x4ECB;GEF-H1&#x306E;&#x30B5;&#x30A4;&#x30EC;&#x30F3;&#x30B7;&#x30F3;&#x30B0;&#x306F;&#x3001;Rho&#x7D4C;&#x8DEF;&#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x3092;&#x6392;&#x9664;&#x3057;&#x3001;3&#xFF09;ERK&#x306E;&#x963B;&#x5BB3;&#x306F;&#x3001;GEF-H1&#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x3092;&#x9632;&#x6B62;&#x3059;&#x308B;&#x3002;&#x307E;&#x305F;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;Na&#xFF08;+&#xFF09;-K&#xFF08;+&#xFF09;&#x30DD;&#x30F3;&#x30D7;&#x963B;&#x5BB3;&#x5264;&#x30A6;&#x30A2;&#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x306F;&#x307E;&#x305F;ERK&#x3001;GEF-H1&#x3001;&#x305D;&#x306E;&#x5206;&#x6975;&#x52B9;&#x679C;&#x306B;&#x90E8;&#x5206;&#x7684;&#x306B;&#x8D77;&#x56E0;&#x3059;&#x308B;Rho&#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x3092;&#x5F15;&#x304D;&#x8D77;&#x3053;&#x3057;&#x305F;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x308F;&#x304B;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x65B0;&#x305F;&#x306B;&#x540C;&#x5B9A;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x7D4C;&#x8DEF;&#x306E;&#x6A5F;&#x80FD;&#x7684;&#x5E30;&#x7D50;&#x306B;&#x3064;&#x3044;&#x3066;&#x306F;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;&#x8131;&#x5206;&#x6975;&#x306F;&#x3001;LLC-PK1&#x304A;&#x3088;&#x3073;MDCK&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x508D;&#x7D30;&#x80DE;&#x900F;&#x904E;&#x6027;&#x3092;&#x5897;&#x52A0;&#x3055;&#x305B;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x52B9;&#x679C;&#x306F;blebbistatin&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x963B;&#x5BB3;&#x3059;&#x308B;&#x30DF;&#x30AA;&#x30B7;&#x30F3;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x30C9;&#x30DF;&#x30CA;&#x30F3;&#x30C8;&#x30CD;&#x30AC;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6;&#xFF08;&#x30EA;&#x30F3;&#x7121;&#x80FD;&#xFF09;MLC&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x8EFD;&#x6E1B;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x898B;&#x51FA;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x4E00;&#x7DD2;&#x306B;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306F;ERK/GEF-H1/Rho/ROK/pMLC&#x7D4C;&#x8DEF;&#x306F;&#x8D77;&#x96FB;&#x6027;&#x819C;&#x8F38;&#x9001;&#x904E;&#x7A0B;&#x306F;&#x3001;&#x30DF;&#x30AA;&#x30B7;&#x30F3;&#x306E;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x3092;&#x5236;&#x5FA1;&#x3057;&#x3001;&#x5C3F;&#x7D30;&#x7BA1;&#x4E0A;&#x76AE;&#x306E;&#x508D;&#x7D30;&#x80DE;&#x8F38;&#x9001;&#x3092;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3088;&#x308A;&#x4E2D;&#x5FC3;&#x7684;&#x306A;&#x30E1;&#x30AB;&#x30CB;&#x30BA;&#x30E0;&#x304B;&#x3082;&#x3057;&#x308C;&#x306A;&#x3044;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x63D0;&#x6848;&#x3059;&#x308B;&#x3002;

&#x7D30;&#x80DE;&#x5916;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x5236;&#x5FA1;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x3068;GEF-H1&#x30E1;&#x30C7;&#x30A3;&#x8131;&#x5206;&#x6975;&#x8A98;&#x767A;&#x6027;&#x306E;Rho&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x508D;&#x7D30;&#x80DE;&#x900F;&#x904E;&#x6027;&#x306E;&#x5897;&#x52A0;

&#xD50C;&#xB77C;&#xC988;&#xB9C8; &#xBA64;&#xBE0C;&#xB808;&#xC778; depolarization Rho/&#xB178; &#xB2C8; (&#xD55C;&#xAD6D;) &#xD1B5;&#xB85C; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xD558; &#xACE0; &#xB530;&#xB77C;&#xC11C; myosin &#xBE5B; &#xCCB4;&#xC778; (MLC) &#xC778; &#xC0B0;&#xD654; &#xCC28;&#xB840;&#xB85C; paracellular &#xCE68;&#xD22C;&#xC131;&#xC758; &#xD0A4; &#xB808; &#xADE4; &#xB808;&#xC774; &#xD130; &#xC0DD;&#xAC01; &#xB41C;&#xB2E4;&#xC744; &#xD5A5;&#xC0C1; &#xC2DC;&#xD0B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098;, &#xBD80;&#xBD80;&#xB85C; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xD558; &#xC5EC; &#xD22C;&#xACFC;&#xC728; &#xBCC0;&#xD654; depolarization &#xC5C5;&#xC2A4;&#xD2B8;&#xB9BC; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;&#xC744; &#xC54C; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC5EC;&#xAE30; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; 3 &#xB2E4;&#xB978; &#xD45C;&#xC2DC; &#xC904;&#xC5B4;&#xB4E4;&#xBA74;&#xC11C; &#xC790;&#xADF9; (&#xB192;&#xC740; &#xC138;&#xD3EC; &#xC678; K(+) &#xB18D;&#xB3C4;, &#xBE14;&#xB808;&#xBBF8;&#xC26C; &#xC591;&#xC774;&#xC628; tetraphenylphosphonium, &#xB610;&#xB294; l-&#xC54C;&#xB77C;&#xB2CC;, electrogenic Na(+) cotransport&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xCC28;&#xC9C0; &#xD558;&#xB294;) &#xBAA8;&#xB4E0; LLC PK1 &#xBC0F; Madin-&#xB2E4; &#xBE44; &#xC1A1;&#xACF3; &#xB2C8; &#xC2E0;&#xC7A5; (MDCK) &#xC140;&#xC5D0;&#xC11C; ERK&#xC758; &#xAC15;&#xB825;&#xD55C; &#xC778; &#xC0B0;&#xD654; &#xC790;&#xADF9;. &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xAC83;&#xC740;, ERK&#xC758; &#xC800;&#xD574;&#xB85C; depolarization &#xC720;&#xB3C4; &#xB41C; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xC218; &#xC5C6;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xAE30;&#xBCF8; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xAC80;&#xC0C9;, &#xC6B0;&#xB9AC; depolarization &#xC720;&#xB3C4; &#xD65C;&#xC131;&#xD654;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xCC45;&#xC784;&#xC774; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; exchange ERK &#xADDC;&#xC81C; &#xC694;&#xC778;&#xC73C;&#xB85C; GDP&#xB294; GTP/&#xAD50;&#xD658; &#xBE44;&#xC728; GEF H1 &#xD655;&#xC778; &#xD588;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774; &#xACB0;&#xB860; 1) depolarization &#xD65C;&#xC131;&#xD654; GEF H1 &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xD558;&#xC9C0; p115RhoGEF, 2) &#xC9E7;&#xC740; &#xAC04;&#xC12D; RNA &#xC911;&#xC7AC; GEF H1 &#xC785;&#xC744; &#xC81C;&#xAC70;&#xB85C; &#xD1B5;&#xB85C;&#xC758; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xBC0F; 3) ERK &#xC800;&#xD574; GEF-h 1&#xC758; &#xC815;&#xD488; &#xC778;&#xC99D;&#xC744; &#xBC29;&#xD574; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xC5F0;&#xAD6C; &#xACB0;&#xACFC; &#xAE30;&#xBC18;&#xC73C;&#xB85C; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB610;&#xD55C;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; Na(+)-K(+) &#xD38C;&#xD504; &#xC5B5;&#xC81C;&#xC81C; ouabain ERK, GEF H1 &#xBC0F; depolarizing&#xC758; &#xD6A8;&#xACFC; &#xB54C;&#xBB38;&#xC5D0; &#xBD80;&#xBD84;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; Rho &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xB610;&#xD55C; &#xBC1C;&#xC0DD; &#xBC1C;&#xACAC;. &#xCC3E;&#xC558;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; depolarization &#xC99D;&#xAC00; paracellular &#xCE68;&#xD22C;&#xC131;&#xC5D0; LLC PK1 &#xBC0F; MDCK &#xC140;&#xACFC; myosin blebbistatin &#xB610;&#xB294; &#xC9C0;&#xBC30;&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xC5B5;&#xC81C; &#xD558; &#xC5EC;&#xC774; &#xD6A8;&#xACFC;&#xAC00; &#xC644;&#xD654;&#xB294; &#xC74C;&#xC218; (&#xBB34;&#xB2A5; &#xD55C; &#xC778; &#xC0B0;&#xD654;)&#xC774; &#xC0C8;&#xB85C; &#xD655;&#xC778;&#xB41C; &#xB41C; &#xD1B5;&#xB85C;&#xC758; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC801; &#xACB0;&#xACFC; &#xB300;&#xD558;&#xC5EC; MLC. &#xD568;&#xAED8; &#xCC0D;&#xC740;, ERK/GEF-H1/&#xB178;/&#xD55C;&#xAD6D;/pMLC &#xD1B5;&#xB85C; &#xC911;&#xC559; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998; electrogenic &#xB9C9; &#xD6A1;&#xB2E8; &#xC804;&#xC1A1; &#xD504;&#xB85C;&#xC138;&#xC2A4; &#xC81C;&#xC5B4; myosin &#xC778; &#xC0B0;&#xD654; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xAC00;&#xB2A5; &#xD558;&#xBA70; &#xAD00; &#xC0C1;&#xD53C;&#xC758; paracellular &#xAD50;&#xD1B5; &#xADDC;&#xC81C; &#xB420; &#xC218; &#xC788;&#xB2E4;&#xACE0; &#xC81C;&#xC548; &#xD55C;&#xB2E4;.

GEF H1 &#xBC0F; &#xC138;&#xD3EC; &#xC678; &#xC2E0;&#xD638; &#xADDC;&#xC81C; &#xD0A4;&#xB85C; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xBC0F; paracellular &#xCE68;&#xD22C;&#xC131; &#xC99D;&#xAC00; depolarization &#xC720;&#xB3C4; &#xC911;&#xC7AC;.

Despolarizaci&#xF3;n de la membrana plasm&#xE1;tica se activa la Rho / Rho-kinasa (Rep&#xFA;blica de Corea) y la v&#xED;a por lo tanto mejora la cadena ligera de miosina (MLC), la fosforilaci&#xF3;n, que a su vez se cree que es un regulador clave de la permeabilidad intestinal. Sin embargo, los mecanismos de aguas arriba que la despolarizaci&#xF3;n de pareja a los cambios de activaci&#xF3;n de Rho y la permeabilidad son desconocidos. Aqu&#xED; nos muestran que tres diferentes est&#xED;mulos despolarizantes (K extracelular de alto (+) la concentraci&#xF3;n, el tetrafenilfosfonio cati&#xF3;n lipof&#xED;lico, o L-alanina, que es absorbido por electrog&#xE9;nico Na (+) cotransporte) toda la fosforilaci&#xF3;n provocan robusta de ERK en LLC-PK1 y Madin-Darby de ri&#xF1;&#xF3;n canino (MDCK). Es importante destacar que la inhibici&#xF3;n de ERK impidieron la activaci&#xF3;n inducida por despolarizaci&#xF3;n de Rho. La b&#xFA;squeda de los mecanismos subyacentes, se ha identificado el factor de GTP / PIB de cambio del FMAM-H1 como el factor de intercambio de ERK-regulado cr&#xED;tica responsable de la activaci&#xF3;n inducida por la despolarizaci&#xF3;n-Rho. Esta conclusi&#xF3;n se basa en nuestras conclusiones de que 1) la despolarizaci&#xF3;n activado FMAM-H1, pero no p115RhoGEF, 2) ARN corto de interferencia mediada por el FMAM-H1 silenciamiento eliminado la activaci&#xF3;n de la v&#xED;a Rho, y 3) la inhibici&#xF3;n de ERK impidieron la activaci&#xF3;n del FMAM-H1 . Adem&#xE1;s, se encontr&#xF3; que el Na (+)-K (+) inhibidores de la bomba ouaba&#xED;na tambi&#xE9;n caus&#xF3; ERK, FMAM-H1, y la activaci&#xF3;n de Rho, parcialmente debido a su efecto despolarizante. En cuanto a las consecuencias funcionales de esta v&#xED;a recientemente identificada, se encontr&#xF3; que la despolarizaci&#xF3;n de aumento de la permeabilidad paracelular en la LLC-PK1 y las c&#xE9;lulas MDCK y que este efecto se vio mitigado por la inhibici&#xF3;n de la miosina con blebbistatin o de una posici&#xF3;n dominante en el MLC negativo (fosforilaci&#xF3;n incompetente). Tomados en conjunto, se propone que la v&#xED;a ERK/GEF-H1/Rho/ROK/pMLC podr&#xED;a ser un mecanismo mediante el cual el centro de los procesos de transporte transmembrana electr&#xF3;genos controlar la fosforilaci&#xF3;n de la miosina y regular el transporte paracelular en el epitelio tubular.

Regulada por se&#xF1;al extracelular quinasa y el FMAM-H1 Mediate despolarizaci&#xF3;n inducida por la activaci&#xF3;n de Rho y de aumento de la permeabilidad paracelular

&#x80BF;&#x7624;&#x574F;&#x6B7B;&#x56E0;&#x5B50; (TNF)-&alpha; &#x8BF1;&#x5BFC;&#x7EC6;&#x80DE;&#x9AA8;&#x67B6;&#x548C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x95F4;&#x8FDE;&#x63A5;&#x91CD;&#x6784;&#x5728;&#x80BE;&#x5C0F;&#x7BA1;&#x4E0A;&#x76AE;&#x7EC6;&#x80DE; &#xFF1B;&#x7136;&#x800C;&#xFF0C;&#x672A;&#x5B8C;&#x5168;&#x63A2;&#x7D22;&#x57FA;&#x7840;&#x7684;&#x673A;&#x5236;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x5148;&#x524D;&#x5DF2;&#x8868;&#x660E; RhoA GDP/GTP &#x4EA4;&#x6D41;&#x56E0;&#x7D20;&#x5168;&#x7403;&#x73AF;&#x5883;&#x57FA;&#x91D1;-H1/&#x6D88;&#x5931;&#x6A21;&#x94F8;&#x9020; ERK &#x4ECB;&#x5BFC;&#x523A;&#x6FC0;&#x80BF;&#x7624;&#x574F;&#x6B7B;&#x56E0;&#x5B50;-&alpha; &#x8BF1;&#x5BFC; RhoA &#x523A;&#x6FC0;&#x81F3;&#x5173;&#x91CD;&#x8981;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#x6211;&#x4EEC;&#x8C03;&#x67E5;&#x7684;&#x4E0A;&#x6E38;&#x7684; ERK/&#x5168;&#x7403;&#x73AF;&#x5883;&#x57FA;&#x91D1;-H1 &#x6FC0;&#x6D3B;&#x673A;&#x5236;&#x3002;&#x5947;&#x602A;&#x7684;&#x662F;&#xFF0C;&#x5728;&#x80BE;&#x5C0F;&#x7BA1;&#x7EC6;&#x80DE;&#x80BF;&#x7624;&#x574F;&#x6B7B;&#x56E0;&#x5B50;-&alpha; &#x8BF1;&#x5BFC; ERK &#x548C; RhoA &#x523A;&#x6FC0;&#x9632;&#x6B62;&#x8868;&#x76AE;&#x751F;&#x957F;&#x56E0;&#x5B50;&#x53D7;&#x4F53; (EGFR) &#x6291;&#x5236;&#x6216;&#x6C89;&#x9ED8;&#x4E86;&#x3002;&#x80BF;&#x7624;&#x574F;&#x6B7B;&#x56E0;&#x5B50;-&alpha; &#x4E5F;&#x589E;&#x5F3A;&#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x7684;&#x8868;&#x76AE;&#x751F;&#x957F;&#x56E0;&#x5B50;&#x3002;&#x8868;&#x76AE;&#x751F;&#x957F;&#x56E0;&#x5B50;&#x6CBB;&#x7597;&#x6A21;&#x4EFF;&#x80BF;&#x7624;&#x574F;&#x6B7B;&#x56E0;&#x5B50;-&alpha; &#x7684;&#x5F71;&#x54CD;&#xFF0C;&#x56E0;&#x4E3A;&#x5B83;&#x5F15;&#x8D77;&#x70C8;&#x6027;&#x3001; ERK &#x76F8;&#x5173;&#x7684;&#x5168;&#x7403;&#x73AF;&#x5883;&#x57FA;&#x91D1;-H1 &#x548C; RhoA &#x6FC0;&#x6D3B;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;&#x8868;&#x76AE;&#x751F;&#x957F;&#x56E0;&#x5B50;&#x8BF1;&#x5BFC; RhoA &#x6FC0;&#x6D3B;&#x65E0;&#x6CD5;&#x7531;&#x5168;&#x7403;&#x73AF;&#x5883;&#x57FA;&#x91D1;-H1 &#x6C89;&#x9ED8;&#xFF0C;&#x8868;&#x660E;&#x5168;&#x7403;&#x73AF;&#x5883;&#x57FA;&#x91D1;-H1 &#x8868;&#x76AE;&#x751F;&#x957F;&#x56E0;&#x5B50;&#x4E3B;&#x8981;&#x4E0B;&#x6E38;&#x6548;&#x5E94;&#x3002;&#x80BF;&#x7624;&#x574F;&#x6B7B;&#x56E0;&#x5B50;-&alpha; &#x5F15;&#x8D77;&#x7684;&#x8868;&#x76AE;&#x751F;&#x957F;&#x56E0;&#x5B50;&#x3001; ERK &#x548C; RhoA &#x523A;&#x6FC0;&#x4E86;&#x4ECB;&#x5BFC;&#x53EF;&#x4EE5;&#x91CA;&#x653E;&#x8868;&#x76AE;&#x751F;&#x957F;&#x56E0;&#x5B50;&#x914D;&#x4F53;&#x7684;&#x80BF;&#x7624;&#x574F;&#x6B7B;&#x56E0;&#x5B50;-&alpha; convertase &#x9176; (TACE)&#x3002;&#x8FDB;&#x4E00;&#x6B65;&#xFF0C;EGFR &#x6FC0;&#x6D3B;&#x8FD8;&#x9700;&#x916A;&#x6C28;&#x9178;&#x6FC0;&#x9176; Src&#xFF0C;Src &#x6291;&#x5236;&#x963B;&#x6B62;&#x80BF;&#x7624;&#x574F;&#x6B7B;&#x56E0;&#x5B50;-&alpha; &#x8BF1;&#x5BFC;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x7684;&#x8868;&#x76AE;&#x751F;&#x957F;&#x56E0;&#x5B50;/ERK/&#x5168;&#x7403;&#x73AF;&#x5883;&#x57FA;&#x91D1;-H1/RhoA &#x9014;&#x5F84;&#x3002;&#x91CD;&#x8981;&#x7684;&#x662F;&#xFF0C;&#x6EB4;&#x8131;&#x6C27;&#x5C3F;&#x7519; &#xFF08;BrdU&#xFF09; &#x7EB3;&#x5165;&#x68C0;&#x6D4B;&#x548C;&#x7535;&#x6C14;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x886C;&#x5E95;&#x963B;&#x6297;&#x9065;&#x611F; &#xFF08;ECIS&#xFF09; &#x7684;&#x6D4B;&#x91CF;&#x663E;&#x793A;&#xFF0C;&#x80BF;&#x7624;&#x574F;&#x6B7B;&#x56E0;&#x5B50;-&alpha; &#x523A;&#x6FC0;&#x7EC6;&#x80DE;&#x751F;&#x957F;&#x7684;&#x8868;&#x76AE;&#x751F;&#x957F;&#x56E0;&#x5B50;&#x76F8;&#x5173;&#x7684;&#x65B9;&#x5F0F;&#x3002;&#x76F8;&#x6BD4;&#x4E4B;&#x4E0B;&#xFF0C;&#x80BF;&#x7624;&#x574F;&#x6B7B;&#x56E0;&#x5B50;-&alpha; &#x8BF1;&#x5BFC; NF&kappa;B &#x6FC0;&#x6D3B;&#x53C8;&#x4E0D;&#x56E0;&#x8868;&#x76AE;&#x751F;&#x957F;&#x56E0;&#x5B50;&#x6216; Src &#x6291;&#x5236;&#xFF0C;&#x8868;&#x660E;&#x80BF;&#x7624;&#x574F;&#x6B7B;&#x56E0;&#x5B50;-&alpha; &#x4EA7;&#x751F;&#x4F9D;&#x8D56;&#x7684;&#x8868;&#x76AE;&#x751F;&#x957F;&#x56E0;&#x5B50;&#x548C;&#x4E24;&#x79CD;&#x72EC;&#x7ACB;&#x7684;&#x5F71;&#x54CD;&#x3002;&#x603B;&#x4E4B;&#xFF0C;&#x5728;&#x672C;&#x7814;&#x7A76;&#x4E2D;&#x6211;&#x4EEC;&#x663E;&#x793A;&#x80BF;&#x7624;&#x574F;&#x6B7B;&#x56E0;&#x5B50;-&alpha; &#x8BF1;&#x5BFC;&#x6D3B;&#x5316;&#x7684;&#x5C0F;&#x7BA1;&#x7EC6;&#x80DE; ERK/&#x5168;&#x7403;&#x73AF;&#x5883;&#x57FA;&#x91D1;-H1/RhoA &#x9014;&#x5F84;&#x4ECB;&#x5BFC;&#x901A;&#x8FC7; Src &#x548C;&#x4F9D;&#x8D56;&#x4E8E;&#x809D;&#x52A8;&#x8109;&#x5316;&#x7597;&#x6813;&#x585E;&#x7684; EGFR &#x6FC0;&#x6D3B;&#x3002;&#x8FD9;&#x79CD;&#x673A;&#x5236;&#x53EF;&#x4EE5;&#x60C5;&#x4FA3;&#x708E;&#x75C7;&#x548C;&#x589E;&#x751F;&#x6027;&#x523A;&#x6FC0;&#x548C;&#xFF0C;&#x56E0;&#x6B64;&#xFF0C;&#x53EF;&#x8C03;&#x8282;&#x7684;&#x4F24;&#x53E3;&#x6108;&#x5408;&#x548C;&#x7EA4;&#x7EF4;&#x5316;&#x5F62;&#x6210;&#x4E2D;&#x53D1;&#x6325;&#x5173;&#x952E;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;

&#x8868;&#x76AE;&#x751F;&#x957F;&#x56E0;&#x5B50;&#x53D7;&#x4F53;&#x4ECB;&#x5BFC;&#x80BF;&#x7624;&#x574F;&#x6B7B;&#x56E0;&#x5B50;-&alpha; &#x8BF1;&#x5BFC;&#x6FC0;&#x6D3B; ERK/&#x5168;&#x7403;&#x73AF;&#x5883;&#x57FA;&#x91D1;-H1/RhoA &#x8DEF;&#x5F84;&#x5728;&#x80BE;&#x5C0F;&#x7BA1;&#x4E0A;&#x76AE;&#x7EC6;&#x80DE;&#x3002;

Tumor necrosis factor (TNF)-Î± induces cytoskeleton and intercellular junction remodeling in tubular epithelial cells; the underlying mechanisms, however, are incompletely explored. We have previously shown that ERK-mediated stimulation of the RhoA GDP/GTP exchange factor GEF-H1/Lfc is critical for TNF-Î±-induced RhoA stimulation. Here we investigated the upstream mechanisms of ERK/GEF-H1 activation. Surprisingly, TNF-Î±-induced ERK and RhoA stimulation in tubular cells were prevented by epidermal growth factor receptor (EGFR) inhibition or silencing. TNF-Î± also enhanced phosphorylation of the EGFR. EGF treatment mimicked the effects of TNF-Î±, as it elicited potent, ERK-dependent GEF-H1 and RhoA activation. Moreover, EGF-induced RhoA activation was prevented by GEF-H1 silencing, indicating that GEF-H1 is a key downstream effector of the EGFR. The TNF-Î±-elicited EGFR, ERK, and RhoA stimulation were mediated by the TNF-Î± convertase enzyme (TACE) that can release EGFR ligands. Further, EGFR transactivation also required the tyrosine kinase Src, as Src inhibition prevented TNF-Î±-induced activation of the EGFR/ERK/GEF-H1/RhoA pathway. Importantly, a bromodeoxyuridine (BrdU) incorporation assay and electric cell substrate impedance-sensing (ECIS) measurements revealed that TNF-Î± stimulated cell growth in an EGFR-dependent manner. In contrast, TNF-Î±-induced NFÎºB activation was not prevented by EGFR or Src inhibition, suggesting that TNF-Î± exerts both EGFR-dependent and -independent effects. In summary, in the present study we show that the TNF-Î±-induced activation of the ERK/GEF-H1/RhoA pathway in tubular cells is mediated through Src- and TACE-dependent EGFR activation. Such a mechanism could couple inflammatory and proliferative stimuli and, thus, may play a key role in the regulation of wound healing and fibrogenesis.

The epidermal growth factor receptor mediates tumor necrosis factor-alpha-induced activation of the ERK/GEF-H1/RhoA pathway in tubular epithelium.

Facteur de n&#xE9;crose tumorale (TNF)-&#x3B1; induit cytosquelette et le remodelage de jonction intercellulaire dans les cellules &#xE9;pith&#xE9;liales tubulaires, les m&#xE9;canismes sous-jacents, cependant, ne sont pas compl&#xE8;tement explor&#xE9;. Nous avons pr&#xE9;c&#xE9;demment montr&#xE9; que ERK induite par la stimulation de la RhoA GDP / GTP GEF-H1/Lfc facteur d&#x26;#39;&#xE9;change est essentiel pour le TNF-&#x3B1; induite par la stimulation RhoA. Ici, nous avons &#xE9;tudi&#xE9; les m&#xE9;canismes en amont de ERK/GEF-H1 activation. &#xC9;tonnamment, le TNF-&#x3B1; induite par ERK et la stimulation RhoA dans les cellules tubulaires ont &#xE9;t&#xE9; emp&#xEA;ch&#xE9;s par des r&#xE9;cepteurs du facteur de croissance &#xE9;pidermique (EGFR) l&#x26;#39;inhibition ou le silence. TNF-&#x3B1; a &#xE9;galement am&#xE9;lior&#xE9; la phosphorylation de l&#x26;#39;EGFR. FEM traitement imitait les effets du TNF-&#x3B1;, comme il a suscit&#xE9; puissant, ERK-d&#xE9;pendante du FEM-H1 et activation de RhoA. En outre, l&#x26;#39;EGF-activation induite par RhoA a &#xE9;t&#xE9; emp&#xEA;ch&#xE9; par le FEM-H1 silence, indiquant que le FEM-H1 est un peu en aval cl&#xE9;s effectrices de l&#x26;#39;EGFR. Le TNF-&#x3B1;-EGFR a suscit&#xE9;, ERK, et la stimulation RhoA ont &#xE9;t&#xE9; m&#xE9;di&#xE9;e par le TNF-&#x3B1; enzyme convertase (TACE) qui peut &#xE9;mettre des ligands d&#x26;#39;EGFR. En outre, la transactivation EGFR &#xE9;galement requis l&#x26;#39;tyrosine kinase Src, comme l&#x26;#39;inhibition du TNF-Src emp&#xEA;ch&#xE9; &#x3B1; induite par activation de la voie EGFR/ERK/GEF-H1/RhoA. Il est important, un dosage bromod&#xE9;soxyuridine constitution (BrdU) et &#xE9;lectrique des cellules du substrat imp&#xE9;dance de d&#xE9;tection (ECIS) mesures ont r&#xE9;v&#xE9;l&#xE9; que le TNF-&#x3B1; stimul&#xE9; la croissance des cellules d&#x26;#39;une mani&#xE8;re d&#xE9;pendante de l&#x26;#39;EGFR. En revanche, le TNF-&#x3B1; induite par l&#x26;#39;activation NFKB n&#x26;#39;a pas &#xE9;t&#xE9; emp&#xEA;ch&#xE9;e par l&#x26;#39;inhibition de l&#x26;#39;EGFR ou Src, sugg&#xE9;rant que le TNF-&#x3B1; exerce &#xE0; la fois l&#x26;#39;EGFR-d&#xE9;pendants et ind&#xE9;pendants des effets. En r&#xE9;sum&#xE9;, dans la pr&#xE9;sente &#xE9;tude, nous montrons que l&#x26;#39;activation du TNF-&#x3B1; induite par de la voie ERK/GEF-H1/RhoA dans les cellules tubulaires est m&#xE9;di&#xE9;e par Src et l&#x26;#39;activation du R-EGF TACE-d&#xE9;pendante. Un tel m&#xE9;canisme pourrait couple de stimuli inflammatoires et prolif&#xE9;ratifs et, par cons&#xE9;quent, peuvent jouer un r&#xF4;le cl&#xE9; dans la r&#xE9;gulation de la cicatrisation et la fibrogen&#xE8;se.

Les m&#xE9;diatise facteur de croissance &#xE9;pidermique r&#xE9;cepteurs tumoraux Factor-alpha induite par n&#xE9;crose activation de la voie ERK/GEF-H1/RhoA dans l&#x26;#39;&#xE9;pith&#xE9;lium tubulaire

Tumor-Nekrose-Faktor (TNF)-&alpha; induziert, Zytoskelett und interzellul&auml;re Junction Umbau tubul&auml;re Epithelzellen; die zugrunde liegenden Mechanismen sind jedoch nicht vollst&auml;ndig erforscht. Wir haben bereits gezeigt, dass ERK-vermittelte Stimulation des Faktors Austausch RhoA BIP/GTP GEF-H1/Lfc kritisch f&uuml;r TNF-&alpha; induziert RhoA Stimulation ist. Hier untersuchten wir die vorgelagerten Mechanismen der ERK/GEF-H1-Aktivierung. &Uuml;berraschenderweise wurden die TNF-&alpha; induziert ERK und RhoA Stimulation in tubul&auml;ren Zellen durch Hemmung der epidermalen Wachstumsfaktor-Rezeptor (EGFR) oder zum Schweigen verhindert. TNF-&alpha; erh&ouml;hte auch die Phosphorylierung des EGFR. EGF-Behandlung imitiert die Wirkung von TNF-&alpha;, wie es potente, ERK-abh&auml;ngige GEF-H1 und RhoA Aktivierung entlockt. Dar&uuml;ber hinaus wurde RhoA EGF-induzierte Aktivierung von GEF-H1 zum Schweigen, verhindert, dass GEF-H1 eine wichtige nachgeschaltete Effektor des EGFR ist. Die TNF-&alpha;-entlockt EGFR, ERK und RhoA Stimulation wurden vermittelt, durch die TNF-&alpha;-Konvertase-Enzym (TACE), das EGFR-Liganden freisetzen kann. Dar&uuml;ber hinaus ben&ouml;tigt EGFR Transactivation auch die Tyrosinkinase Src, wie Src Hemmung TNF-&alpha;-induzierte Aktivierung des EGFR/ERK/GEF-H1/RhoA Signalweges verhindert. Wichtig ist, eine Bromdesoxyuridin (BrdU)-Aufnahme-Test und elektrische Zelle Substrate Impedance sensing, dass (ECIS) Messungen ergeben, dass TNF-&alpha; Zellwachstum EGFR-abh&auml;ngigen Weise angeregt. TNF-&alpha;-induzierte NF&kappa;B-Aktivierung wurde hingegen nicht durch EGFR oder Src Hemmung, was darauf hindeutet, dass TNF-&alpha; EGFR-abh&auml;ngige sowohl -unabh&auml;ngige Effekte &uuml;bt verhindert. Zusammenfassend l&auml;sst sich sagen zeigen wir in der vorliegenden Studie, dass die TNF-&alpha;-induzierte Aktivierung des ERK/GEF-H1/RhoA Signalweges in tubul&auml;ren Zellen durch Src - und TACE-abh&auml;ngigen EGFR-Aktivierung vermittelt wird. Ein solcher Mechanismus k&ouml;nnte paar entz&uuml;ndliche und proliferative Reize und somit kann eine wichtige Rolle bei der Regulierung der Wundheilung und Fibrogenesis.

Der epidermalen Wachstumsfaktor-Rezeptor vermittelt die Tumor-Nekrose-Faktor-Alpha-induzierte Aktivierung des ERK/GEF-H1/RhoA Signalweges in tubul&auml;re Epithel.

Fattore di necrosi tumorale (TNF)-&alpha; induce citoscheletro e giunzione intercellulare rimodellamento nelle cellule epiteliali tubulari; Tuttavia, i meccanismi sottostanti, in modo incompleto sono esplorati. Abbiamo precedentemente dimostrato che ERK-mediata stimolazione del fattore di scambio GDP/GTP RhoA GEF-H1/Lfc &egrave; critica per la stimolazione indotta da TNF-&alpha; RhoA. Qui abbiamo studiato i meccanismi a monte dell&#39;attivazione di ERK/GEF-H1. Sorprendentemente, indotta da TNF-&alpha; ERK e RhoA stimolazione nelle cellule tubulari sono stati evitati dal epidermal growth factor receptor (EGFR) inibizione o tacere. TNF-&alpha; rafforzata anche la fosforilazione dell&#39;EGFR. Trattamento di EGF imitato gli effetti del TNF-&alpha;, come esso ha suscitato attivazione GEF-H1 e RhoA potente, ERK-dipendente. Inoltre, attivazione indotta da EGF RhoA fu impedito da GEF-H1 silenziamento, indicando che GEF-H1 &egrave; una chiave effettore a valle dell&#39;EGFR. La stimolazione di EGFR, ERK e RhoA TNF-&alpha;-suscitato erano mediati dall&#39;enzima convertasi TNF-&alpha; (TACE) che pu&ograve; rilasciare ligandi EGFR. Ulteriormente, transactivation EGFR necessaria anche la tirosina chinasi Src, come inibizione Src ha impedito il pathway EGFR/ERK/GEF-H1/RhoA attivazione indotta da TNF-&alpha;. Importante, un dosaggio di incorporazione di bromodeoxyuridine (BrdU) ed elettrici delle cellule substrato impedance sensing misurazioni (ECI) ha rivelato che TNF-&alpha; ha stimolato la crescita cellulare in maniera EGFR-dipendente. Al contrario, attivazione NF&kappa;B indotta da TNF-&alpha; non &egrave; stato impedito di inibizione di EGFR o Src, suggerendo che il TNF-&alpha; esercita sia EGFR-dipendente e - effetti indipendenti. In sintesi, nel presente studio ci mostrano che l&#39;attivazione indotta da TNF-&alpha; del percorso ERK/GEF-H1/RhoA in cellule tubulari &egrave; mediata attraverso l&#39;attivazione di EGFR Src - e TACE-dipendente. Tale meccanismo potrebbe accoppiare stimoli infiammatori e proliferative e, cos&igrave;, pu&ograve; giocare un ruolo chiave nella regolazione della guarigione delle ferite e fibrogenesis.

Il recettore del fattore di crescita epidermico media attivazione fattore di necrosi tumorale-alfa-indotta della via ERK/GEF-H1/RhoA nell&#39;epitelio tubulare.

&#x816B;&#x760D;&#x58CA;&#x6B7B;&#x56E0;&#x5B50;&#xFF08;TNF&#xFF09;-&#x3B1;&#x5C3F;&#x7D30;&#x7BA1;&#x4E0A;&#x76AE;&#x7D30;&#x80DE;&#x3067;&#x306F;&#x7D30;&#x80DE;&#x9AA8;&#x683C;&#x3068;&#x7D30;&#x80DE;&#x9593;&#x306E;&#x63A5;&#x5408;&#x306E;&#x30EA;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;&#x3092;&#x8A98;&#x5C0E;&#x3059;&#x308B;&#x3001;&#x57FA;&#x790E;&#x3068;&#x306A;&#x308B;&#x30E1;&#x30AB;&#x30CB;&#x30BA;&#x30E0;&#x306F;&#x3001;&#x3057;&#x304B;&#x3057;&#x3001;&#x4E0D;&#x5B8C;&#x5168;&#x306B;&#x691C;&#x8A0E;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x4EE5;&#x524D;RhoA&#x306E;GDP / GTP&#x4EA4;&#x63DB;&#x56E0;&#x5B50;GEF-H1/Lfc&#x306E;ERK&#x4ECB;&#x5728;&#x523A;&#x6FC0;&#x306F;TNF-&#x3B1;&#x8A98;&#x5C0E;RhoA&#x306E;&#x523A;&#x6FC0;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x91CD;&#x8981;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x793A;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;ERK/GEF-H1&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x306E;&#x4E0A;&#x6D41;&#x306E;&#x30E1;&#x30AB;&#x30CB;&#x30BA;&#x30E0;&#x3092;&#x691C;&#x8A0E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x9A5A;&#x304F;&#x3079;&#x304D;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3001;&#x5C3F;&#x7D30;&#x7BA1;&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;TNF-&#x3B1;&#x8A98;&#x5C0E;ERK&#x304A;&#x3088;&#x3073;RhoA&#x306E;&#x523A;&#x6FC0;&#x4E0A;&#x76AE;&#x6210;&#x9577;&#x56E0;&#x5B50;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#xFF08;EGFR&#xFF09;&#x963B;&#x5BB3;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x6291;&#x5236;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x9632;&#x6B62;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002; TNF-&#x3B1;&#x306B;&#x3082;EGFR&#x306E;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x3092;&#x5897;&#x5F37;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x305D;&#x308C;&#x306F;&#x5F37;&#x529B;&#x306A;&#x3001;ERK-&#x4F9D;&#x5B58;&#x6027;&#x306E;GEF-H1&#x3068;RhoA&#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x3092;&#x8A98;&#x767A;&#x3057;&#x305F;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x3001;EGF&#x6CBB;&#x7642;&#x306F;&#x3001;TNF-&#x3B1;&#x306E;&#x52B9;&#x679C;&#x3092;&#x6A21;&#x5023;&#x3059;&#x308B;&#x3002;&#x307E;&#x305F;&#x3001;EGF&#x8A98;&#x767A;&#x6027;RhoA&#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x306F;&#x3001;GEF-H1&#x306F;&#x3001;EGFR&#x306E;&#x4E0B;&#x6D41;&#x30A8;&#x30D5;&#x30A7;&#x30AF;&#x30BF;&#x30FC;&#x306E;&#x9375;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3059;&#x3001;GEF-H1&#x306E;&#x30B5;&#x30A4;&#x30EC;&#x30F3;&#x30B7;&#x30F3;&#x30B0;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x6291;&#x5236;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3002; TNF-&#x3B1;&#x8A98;&#x767A;EGFR&#x3001;ERK&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073;RhoA&#x306E;&#x523A;&#x6FC0;&#x306F;&#x3001;EGFR&#x30EA;&#x30AC;&#x30F3;&#x30C9;&#x3092;&#x89E3;&#x653E;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;TNF-&#x3B1;&#x8EE2;&#x63DB;&#x9175;&#x7D20;&#xFF08;TACE&#xFF09;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x5A92;&#x4ECB;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3002; Src&#x306E;&#x963B;&#x5BB3;&#x306F;EGFR/ERK/GEF-H1/RhoA&#x7D4C;&#x8DEF;&#x306E;TNF-&#x3B1;&#x8A98;&#x5C0E;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x3092;&#x9632;&#x6B62;&#x3059;&#x308B;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x3001;EGFR&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C1;&#x30D9;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x306F;&#x3001;&#x307E;&#x305F;&#x3001;&#x30C1;&#x30ED;&#x30B7;&#x30F3;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;Src&#x3092;&#x5FC5;&#x8981;&#x3068;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x306E;&#x306F;&#x3001;&#x30D6;&#x30ED;&#x30E2;&#x30C7;&#x30AA;&#x30AD;&#x30B7;&#x30A6;&#x30EA;&#x30B8;&#x30F3;&#xFF08;BrdU&#xFF09;&#x306E;&#x53D6;&#x308A;&#x8FBC;&#x307F;&#x30A2;&#x30C3;&#x30BB;&#x30A4;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x96FB;&#x6C60;&#x57FA;&#x677F;&#x306E;&#x30A4;&#x30F3;&#x30D4;&#x30FC;&#x30C0;&#x30F3;&#x30B9;&#x30BB;&#x30F3;&#x30B7;&#x30F3;&#x30B0;&#xFF08;ECIS&#xFF09;&#x306E;&#x6E2C;&#x5B9A;&#x306F;&#x3001;TNF-&#x3B1;&#x306F;&#x3001;EGFR&#x4F9D;&#x5B58;&#x7684;&#x306B;&#x7D30;&#x80DE;&#x5897;&#x6B96;&#x3092;&#x523A;&#x6FC0;&#x3057;&#x305F;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x5BFE;&#x7167;&#x7684;&#x306B;&#x3001;TNF-&#x3B1;&#x8A98;&#x5C0E;NF&#x3BA;B&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x306F;TNF-&#x3B1;&#x306F;&#x3001;&#x4E21;&#x65B9;&#x306E;EGFR&#x4F9D;&#x5B58;&#x6027;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x975E;&#x4F9D;&#x5B58;&#x6027;&#x52B9;&#x679C;&#x3092;&#x767A;&#x63EE;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x5506;&#x3057;&#x3001;EGFR&#x307E;&#x305F;&#x306F;Src&#x306E;&#x963B;&#x5BB3;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x963B;&#x6B62;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3002;&#x8981;&#x7D04;&#x3059;&#x308B;&#x3068;&#x3001;&#x672C;&#x7814;&#x7A76;&#x3067;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;&#x5C3F;&#x7D30;&#x7BA1;&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;ERK/GEF-H1/RhoA&#x7D4C;&#x8DEF;&#x306E;TNF-&#x3B1;&#x8A98;&#x5C0E;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x304C;Src&#x3068;TACE&#x4F9D;&#x5B58;EGFR&#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x3066;&#x5A92;&#x4ECB;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306A;&#x30E1;&#x30AB;&#x30CB;&#x30BA;&#x30E0;&#x306F;&#x3001;&#x30AB;&#x30C3;&#x30D7;&#x30EB;&#x306E;&#x708E;&#x75C7;&#x6027;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x5897;&#x6B96;&#x6027;&#x306E;&#x523A;&#x6FC0;&#x3068;&#x3001;&#x3057;&#x305F;&#x304C;&#x3063;&#x3066;&#x3001;&#x5275;&#x50B7;&#x6CBB;&#x7652;&#x3068;&#x7DDA;&#x7DAD;&#x5316;&#x306E;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x306B;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x679C;&#x305F;&#x3059;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3059;&#x308B;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x5C3F;&#x7D30;&#x7BA1;&#x4E0A;&#x76AE;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;ERK/GEF-H1/RhoA&#x7D4C;&#x8DEF;&#x306E;&#x4E0A;&#x76AE;&#x6210;&#x9577;&#x56E0;&#x5B50;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x3092;&#x5A92;&#x4ECB;&#x3059;&#x308B;&#x816B;&#x760D;&#x58CA;&#x6B7B;&#x56E0;&#x5B50;-&#x3B1;&#x8A98;&#x5C0E;&#x6D3B;&#x6027;

&#xC885;&#xC591; &#xAD34; &#xC0AC; &#xC778;&#xC790; (TNF)-&alpha; &#xC720;&#xB3C4; cytoskeleton &#xBC0F; &#xC138;&#xD3EC; &#xC811;&#xD569; &#xAD00; &#xC0C1;&#xD53C; &#xC138;&#xD3EC;;&#xC5D0; &#xAC1C;&#xC7A5; &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098;, &#xAE30;&#xBCF8; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998; &#xD0D0;&#xAD6C; &#xD558; &#xAC8C; &#xB41C;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; &#xC774;&#xC804;&#xC5D0; RhoA GDP/GTP exchange &#xC694;&#xC18C;&#xC758; GEF-H1/Lfc ERK &#xC911;&#xC7AC; &#xC790;&#xADF9;&#xC740; TNF-&alpha; &#xC720;&#xB3C4; RhoA &#xC790;&#xADF9;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xAC83;&#xC73C;&#xB85C; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0AC;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC5EC;&#xAE30; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; ERK/GEF-H1 &#xD65C;&#xC131;&#xD654;&#xC758; &#xC5C5;&#xC2A4;&#xD2B8;&#xB9BC; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;&#xC744; &#xC870;&#xC0AC; &#xD588;&#xB2E4;. &#xB180;&#xB78D;&#xAC8C;&#xB3C4;, &#xAD00; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0;&#xC11C; TNF-&alpha; &#xC720;&#xB3C4; ERK &#xBC0F; RhoA &#xC790;&#xADF9;&#xC744; &#xD45C; &#xD53C; &#xC131;&#xC7A5; &#xC778;&#xC790; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; (EGFR) &#xC800;&#xD574; &#xB610;&#xB294; &#xC785;&#xC744; &#xBC29;&#xD574; &#xD588;&#xB2E4;. TNF-&alpha;&#xC5D0; &#xC778; &#xC0B0;&#xD654; &#xB41C; EGFR&#xC758; &#xD5A5;&#xC0C1; &#xB41C;. EGF &#xCE58;&#xB8CC; &#xC720;&#xC0AC; TNF-&alpha;&#xC758; &#xD6A8;&#xACFC; &#xAC15;&#xB825;&#xD55C;, ERK &#xC885;&#xC18D; GEF H1 &#xBC0F; RhoA &#xD65C;&#xC131;&#xD654; elicited. &#xB610;&#xD55C;, EGF &#xC720;&#xB3C4; RhoA &#xD65C;&#xC131;&#xD654; GEF h1&#xB294; EGFR&#xC758; &#xD0A4; &#xB2E4;&#xC6B4;&#xC2A4;&#xD2B8;&#xB9BC; &#xC774;&#xD399;&#xD130; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0B4;&#xB294; GEF H1 &#xC785;&#xC744; &#xC758;&#xD574; &#xCC28;&#xB2E8; &#xD588;&#xB2E4;. TNF-&alpha; elicited EGFR, ERK, &#xBC0F; RhoA &#xC790;&#xADF9; EGFR ligands &#xD574;&#xC81C; &#xD558;&#xB294; TNF-&alpha; convertase &#xD6A8;&#xC18C; (TACE) &#xC911;&#xC7AC; &#xD588;&#xB2E4;. &#xB610;&#xD55C;, EGFR transactivation Src &#xC800;&#xD574; &#xBC29;&#xC9C0; EGFR/ERK/GEF-H1/RhoA &#xACBD;&#xB85C;&#xC758; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; TNF-&alpha; &#xC720;&#xB3C4; tyrosine kinase Src&#xC744; &#xB610;&#xD55C; &#xD544;&#xC694; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xAC83;&#xC740;, bromodeoxyuridine (BrdU) &#xD569;&#xB3D9; &#xBD84;&#xC11D; &#xACB0;&#xACFC; &#xBC0F; &#xC804;&#xAE30; &#xAE30;&#xD310; &#xC784;&#xD53C;&#xB358;&#xC2A4; &#xAC10;&#xC9C0; (ECIS) &#xCE21;&#xC815; &#xBC1D;&#xD600; EGFR&#xC5D0; &#xC885;&#xC18D;&#xC801;&#xC778; &#xBC29;&#xC2DD;&#xC73C;&#xB85C; &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xC131;&#xC7A5;&#xC744; &#xC790;&#xADF9; &#xD558;&#xB294; TNF-&alpha; &#xC138;&#xD3EC;. &#xBC18;&#xBA74;, TNF-&alpha; &#xC720;&#xB3C4; NF&kappa;B &#xD65C;&#xC131;&#xD654;&#xB294; EGFR &#xB610;&#xB294; Src &#xC800;&#xD574;, TNF-&alpha; &#xBBF8;&#xCE58;&#xB294; EGFR &#xC885;&#xC18D;&#xC640;-&#xB3C5;&#xB9BD;&#xC801;&#xC778; &#xD6A8;&#xACFC; &#xC81C;&#xC548; &#xD558; &#xC5EC; &#xC2E4;&#xD589;&#xD560; &#xC218; &#xC5C6;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC694;&#xC57D; &#xD558;&#xC790;&#xBA74;, &#xD604;&#xC7AC;&#xC758; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; &#xBCF4;&#xC5EC; &#xAD00; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0;&#xC11C; ERK/GEF-H1/RhoA &#xD1B5;&#xB85C;&#xC758; TNF-&alpha; &#xC720;&#xB3C4; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; Src &#xBC0F; TACE &#xC885;&#xC18D; EGFR &#xD65C;&#xC131;&#xD654;&#xB97C; &#xD1B5;&#xD574; &#xC911;&#xC7AC; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998; &#xC218; &#xBD80;&#xBD80;&#xB294; &#xC99D;&#xC2DD; &#xD558; &#xACE0; &#xC5FC;&#xC99D; &#xC131; &#xC790;&#xADF9; &#xD558; &#xACE0; &#xB530;&#xB77C;&#xC11C;, &#xC0C1;&#xCC98; &#xCE58;&#xC720; &#xBC0F; fibrogenesis&#xC758; &#xADDC;&#xC815;&#xC5D0; &#xD575;&#xC2EC;&#xC801;&#xC778; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xB2F4;&#xB2F9;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xD45C; &#xD53C; &#xC131;&#xC7A5; &#xC778;&#xC790; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; &#xAD00; &#xC0C1;&#xD53C;&#xC5D0;&#xC11C; ERK/GEF-H1/RhoA &#xACBD;&#xB85C;&#xC758; &#xC885;&#xC591; &#xAD34; &#xC0AC; &#xC694;&#xC778; &#xC54C;&#xD30C; &#xC720;&#xB3C4; &#xD65C;&#xC131;&#xD654;&#xB97C; &#xC911;&#xC7AC; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

El factor de necrosis tumoral (TNF)-&#x3B1; induce la remodelaci&#xF3;n del citoesqueleto y uniones intercelulares en las c&#xE9;lulas epiteliales tubulares, los mecanismos subyacentes, sin embargo, no est&#xE1;n totalmente exploradas. Hemos demostrado anteriormente que ERK mediada por la estimulaci&#xF3;n de la RhoA GDP / GTP GEF-H1/Lfc de cambio es decisivo para el TNF-&#x3B1; inducida por la estimulaci&#xF3;n RhoA. Aqu&#xED; hemos investigado los mecanismos de aguas arriba de ERK/GEF-H1 activaci&#xF3;n. Sorprendentemente, el TNF-&#x3B1; inducida por la estimulaci&#xF3;n de ERK y la Rho A en las c&#xE9;lulas tubulares fueron impedidos por el factor de crecimiento epid&#xE9;rmico receptor (EGFR) la inhibici&#xF3;n o el silenciamiento. TNF-&#x3B1; tambi&#xE9;n se ha mejorado la fosforilaci&#xF3;n del EGFR. EGF tratamiento imitaba los efectos de TNF-&#x3B1;, ya que provoc&#xF3; potente, ERK-dependiente FMAM-H1 y activaci&#xF3;n de RhoA. Por otra parte, EGF inducida por la activaci&#xF3;n de RhoA fue impedido por el FMAM-H1 silenciamiento, lo que indica que el FMAM-H1 es un efector corriente abajo clave del EGFR. El TNF-&#x3B1;-suscit&#xF3; EGFR, ERK, y la estimulaci&#xF3;n de RhoA se mediada por la enzima de TNF-&#x3B1; convertasa (TACE), que puede liberar ligandos del EGFR. Adem&#xE1;s, la transactivaci&#xF3;n del EGFR tambi&#xE9;n se requiere de la tirosina quinasa Src, como la inhibici&#xF3;n de TNF-Src impedido &#x3B1; inducida por la activaci&#xF3;n de la v&#xED;a EGFR/ERK/GEF-H1/RhoA. Es importante destacar que una bromodesoxiuridina (BrdU) ensayo de incorporaci&#xF3;n y el&#xE9;ctrico de c&#xE9;lulas sustrato detecci&#xF3;n de impedancia (ECIS) mediciones revelaron que el TNF-&#x3B1; estimul&#xF3; el crecimiento de c&#xE9;lulas en una forma dependiente de EGFR. Por el contrario, el TNF-&#x3B1; inducida por la activaci&#xF3;n de NFkB no fue impedida por la inhibici&#xF3;n de EGFR o Src, lo que sugiere que el TNF-&#x3B1; ejerce tanto EGFR-dependientes e independientes de efectos. En resumen, en el presente estudio muestran que la activaci&#xF3;n de TNF-&#x3B1; inducida por la v&#xED;a en las c&#xE9;lulas tubulares ERK/GEF-H1/RhoA est&#xE1; mediada por Src y la activaci&#xF3;n del EGFR TACE-dependiente. Este mecanismo podr&#xED;a pareja inflamatoria y est&#xED;mulos proliferativos y, por tanto, puede desempe&#xF1;ar un papel clave en la regulaci&#xF3;n de la cicatrizaci&#xF3;n de heridas y la fibrog&#xE9;nesis.

El crecimiento epid&#xE9;rmico media la del receptor del factor tumoral-alfa de necrosis inducida por la activaci&#xF3;n de la v&#xED;a ERK/GEF-H1/RhoA en el epitelio tubular

Pre-B cell colony-enhancing factor ([PBEF] also known as Nampt/visfatin) is a pleiotropic 52-kDa cytokine-like molecule whose activity has been implicated in multiple inflammatory disease states. PBEF promotes polymorphonuclear neutrophil (PMN) proinflammatory function by inhibiting constitutive PMN apoptosis. We investigated whether PBEF activates or primes for PMN respiratory burst. We found that although PBEF did not activate respiratory burst on its own, it primed for increased reactive oxygen species generation through the NADPH oxidase. PBEF promoted membrane translocation of cytosolic NADPH oxidase subunits p40 and p47, but not p67, induced p40 phosphorylation on Thr(154), and activated the small GTPase Rac. Priming, translocation, and phosphorylation were dependent on activation of p38 and ERK MAPKs, but not of PI3K. Priming by PBEF occurred independent of its NAD-generating capacity because neither nicotinamide mononucleotide or NAD could recapitulate the effects, and a specific inhibitor of PBEF, APO-866, could not inhibit priming. Taken together, these results demonstrate that PBEF can prime for PMN respiratory burst activity by promoting p40 and p47 translocation to the membrane, and this occurs in a MAPK-dependent fashion.

Pre-B cell colony-enhancing factor (PBEF/Nampt/visfatin) primes neutrophils for augmented respiratory burst activity through partial assembly of the NADPH oxidase.

&#x524D; B &#x7EC6;&#x80DE;&#x96C6;&#x843D;&#x589E;&#x5F3A;&#x56E0;&#x5B50; &#xFF08;[PBEF] &#x4E5F;&#x79F0;&#x4E3A; Nampt/&#x8102;) &#x662F;&#x5176;&#x6D3B;&#x52A8;&#x6709;&#x7275;&#x8FDE;&#x591A;&#x7684;&#x708E;&#x6027;&#x75BE;&#x75C5;&#x72B6;&#x6001;&#x7684;&#x591A;&#x6548;&#x6027; 52 kDa &#x7EC6;&#x80DE;&#x56E0;&#x5B50;&#x6837;&#x5206;&#x5B50;&#x3002;PBEF &#x672C;&#x6784;&#x7684;&#x4E2D;&#x6027;&#x7C92;&#x7EC6;&#x80DE;&#x51CB;&#x4EA1;&#x7684;&#x6291;&#x5236;&#xFF0C;&#x4FC3;&#x8FDB;&#x591A;&#x5F62;&#x6838;&#x4E2D;&#x6027;&#x7C92;&#x7EC6;&#x80DE; (PMN) &#x708E;&#x6027;&#x529F;&#x80FD;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x8C03;&#x67E5;&#x662F;&#x5426; PBEF &#x6FC0;&#x6D3B;&#x6216;&#x4E2D;&#x6027;&#x7C92;&#x7EC6;&#x80DE;&#x547C;&#x5438;&#x7206;&#x53D1;&#x7684;&#x7D20;&#x6570;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x53D1;&#x73B0;&#x5C3D;&#x7BA1; PBEF &#x4E0D;&#x4F1A;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x81EA;&#x5DF1;&#x7684;&#x547C;&#x5438;&#x7206;&#x53D1;&#xFF0C;&#x5B83;&#x5929;&#x751F;&#x4E3A;&#x901A;&#x8FC7; NADPH &#x6C27;&#x5316;&#x9176;&#x589E;&#x52A0;&#x6D3B;&#x6027;&#x6C27;&#x7269;&#x79CD;&#x4EE3;&#x3002;PBEF &#x4FC3;&#x8FDB;&#x819C;&#x6613;&#x4F4D;&#x7684;&#x6E38;&#x79BB; NADPH &#x6C27;&#x5316;&#x9176;&#x4E9A;&#x57FA; p40 &#x548C; p47&#xFF0C;&#x4F46;&#x4E0D;&#x662F; p67&#xFF0C;&#x8BF1;&#x5BFC; p40 &#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x5728; Thr(154)&#xFF0C;&#x5E76;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x5C0F;&#x86CB;&#x767D; Rac&#x3002;&#x9884;&#x5145;&#x3001; &#x79FB;&#x4F4D;&#x548C;&#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x90FD;&#x4F9D;&#x8D56;&#x6FC0;&#x6D3B; p38 &#x548C; ERK MAPKs&#xFF0C;&#x800C;&#x4E0D;&#x662F;&#x808C;&#x9187;&#x3002;&#x7531; PBEF &#x5438;&#x53D1;&#x751F;&#x72EC;&#x7ACB;&#x4E8E;&#x5176; NAD &#x751F;&#x6210;&#x80FD;&#x529B;&#x56E0;&#x4E3A;&#x70DF;&#x9170;&#x80FA;&#x5355;&#x6838;&#x82F7;&#x9178;&#x6216; NAD &#x65E2;&#x4E0D;&#x80FD;&#x5F71;&#x54CD;&#x548C;&#x4E00;&#x79CD;&#x7279;&#x5B9A;&#x7684;&#x6291;&#x5236;&#x5242; PBEF&#xFF0C;&#x627C;&#x8981;&#x91CD;&#x8FF0;&#x8F7D;&#x8102;&#x86CB;&#x767D;-866&#xFF0C;&#x53EF;&#x80FD;&#x4E0D;&#x4F1A;&#x963B;&#x788D;&#x8D77;&#x7206;&#x3002;&#x4E24;&#x8005;&#x5408;&#x8BA1;&#xFF0C;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7ED3;&#x679C;&#x8868;&#x660E; PBEF &#x53EF;&#x4EE5;&#x901A;&#x8FC7;&#x4FC3;&#x8FDB; p40 &#x548C; p47 &#x79FB;&#x4F4D;&#x5230;&#x819C;&#xFF0C;&#x603B;&#x7406;&#x4E3A;&#x4E2D;&#x6027;&#x7C92;&#x7EC6;&#x80DE;&#x547C;&#x5438;&#x7206;&#x53D1;&#x6D3B;&#x52A8;&#xFF0C;&#x8FD9;&#x53D1;&#x751F;&#x5728;&#x4F9D;&#x8D56; MAPK &#x7684;&#x65F6;&#x5C1A;&#x3002;

&#x524D; B &#x7EC6;&#x80DE;&#x96C6;&#x843D;&#x589E;&#x5F3A;&#x56E0;&#x5B50; &#xFF08;PBEF/Nampt/&#x8102;) &#x7D20;&#x6570;&#x55DC;&#x4E2D;&#x6027;&#x7C92;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E3A;&#x589E;&#x5F3A;&#x547C;&#x5438;&#x7206;&#x53D1;&#x6D3B;&#x52A8;&#x901A;&#x8FC7; NADPH &#x6C27;&#x5316;&#x9176;&#x7684;&#x90E8;&#x5206;&#x7A0B;&#x5E8F;&#x96C6;&#x3002;

Le facteur de cellules pr&#xE9;-B-colonie am&#xE9;lioration ([PBEF], aussi appel&#xE9; Nampt / visfatine) est un 52-kDa pl&#xE9;iotropique des cytokines comme mol&#xE9;cule dont l&#x26;#39;activit&#xE9; a &#xE9;t&#xE9; impliqu&#xE9;e dans de multiples &#xE9;tats pathologiques inflammatoires. PBEF favorise polynucl&#xE9;aires neutrophiles (PMN) la fonction pro-inflammatoire par apoptose des PMN inhibant constitutive. Nous avons examin&#xE9; si active PBEF ou nombres premiers pour salve respiratoire PMN. Nous avons constat&#xE9; que PBEF ne s&#x26;#39;est pas d&#xE9;clench&#xE9;e salve respiratoire sur son propre, il appr&#xEA;t&#xE9; pour la g&#xE9;n&#xE9;ration d&#x26;#39;oxyg&#xE8;ne accrue esp&#xE8;ces r&#xE9;actives gr&#xE2;ce &#xE0; la NADPH oxydase. Translocation membranaire PBEF promu de cytosoliques sous-unit&#xE9;s p40 et de la NADPH oxydase p47, p67, mais pas, induite p40 phosphorylation sur Thr (154), et activ&#xE9; la petite GTPase Rac. Amor&#xE7;age, la translocation et la phosphorylation &#xE9;taient tributaires de l&#x26;#39;activation de p38 MAPK et ERK, mais pas de la PI3K. Amor&#xE7;age par PBEF s&#x26;#39;est produite ind&#xE9;pendamment de sa capacit&#xE9; de production NAD parce que ni mononucl&#xE9;otide nicotinamide ou NAD pourrait r&#xE9;capituler les effets, et un inhibiteur sp&#xE9;cifique de la PBEF, APO-866, n&#x26;#39;a pas pu emp&#xEA;cher l&#x26;#39;amor&#xE7;age. Pris ensemble, ces r&#xE9;sultats d&#xE9;montrent que PBEF peut amorcer l&#x26;#39;activit&#xE9; PMN salve respiratoire par la promotion de p40 et p47 translocation vers la membrane, et cela se produit dans un mode MAPK-d&#xE9;pendante.

Les neutrophiles Primes pr&#xE9;-cellules B colonie d&#x26;#39;am&#xE9;lioration de facteur (PBEF / Nampt / visfatine) pour l&#x26;#39;activit&#xE9; augment&#xE9;e Burst respiratoire par l&#x26;#39;Assembl&#xE9;e partielle de la NADPH oxydase

Pre-B Zellen Kolonie steigernde Faktor ([PBEF] auch Nampt/Visfatin) ist ein pleiotropen 52-kDa-Zytokin-&auml;hnlichen-Molek&uuml;l, deren T&auml;tigkeit wurde, in mehreren Staaten der entz&uuml;ndliche Erkrankung verwickelt hat. PBEF f&ouml;rdert Neutrophilen neutrophil (PMN) Proinflammatory Funktion durch die Hemmung der konstitutiven PMN Apoptosis. Wir wurde untersucht, ob PBEF aktiviert oder f&uuml;r PMN Atemwege Platzen Primzahlen. Wir fanden, dass obwohl PBEF respiratorischen Burst allein nicht aktiviert haben, es auf die erh&ouml;hte reaktive Sauerstoff Spezies Generation durch die NADPH-Oxidase vorbereitet. PBEF gef&ouml;rdert Membran Translokation Zytosolische NADPH-Oxidase Untereinheiten p40 und p47, aber nicht p67, induzierte p40 Phosphorylierung auf Thr(154), und aktiviert die kleine GTPase Rac. Grundierung, Umsiedlung und Phosphorylierung waren auf Aktivierung der p38 und ERK-MAPKs, aber nicht von PI3K angewiesen. Grundierung von PBEF kam es unabh&auml;ngig von seiner NAD erzeugenden Kapazit&auml;t, weil weder Nicotinamid Mononucleotide oder NAD die Folgen und durch einen speziellen Inhibitor der PBEF rekapitulieren konnte, APO-866, k&ouml;nnte die Grundierung nicht hemmen. Zusammengenommen zeigen diese Ergebnisse, dass PBEF f&uuml;r PMN respiratorischen Burst T&auml;tigkeit vorbereiten kann, indem p40 und p47 Translokation an der Membran zu f&ouml;rdern und in diesem auf MAPK-abh&auml;ngigen Weise Fall.

Pre-B-Zelle-Kolonie-Verbesserung-Faktor (PBEF/Nampt/Visfatin) Primzahlen neutrophile f&uuml;r Atemwege Platzen Aktivit&auml;t durch teilweise Montage von der NADPH-Oxidase erg&auml;nzt.

Colonia-enhancing fattore di cellule pre-B ([PBEF] noto anche come Nampt/visfatin) &egrave; una molecola come citochina pleiotropica 52-kDa cui attivit&agrave; &egrave; stato implicato in pi&ugrave; Stati di malattia infiammatoria. PBEF promuove polimorfonucleati neutrofili (PMN) proinfiammatorie funzione inibendo l&#39;apoptosi PMN costitutiva. Abbiamo studiato se PBEF attiva o primes per burst respiratorio PMN. Abbiamo trovato che anche se PBEF non ha fatto attivare burst respiratorio in proprio, innescato per la generazione di specie maggiore reattive dell&#39;ossigeno attraverso la NADPH ossidasi. PBEF promosso traslocazione membrana citosolica NADPH ossidasi subunit&agrave; p40 e p47, ma non p67, indotta p40 fosforilazione su Thr(154) e attivato il piccolo GTPase Rac. Adescamento, traslocazione e fosforilazione dipendevano da attivazione di p38 ed ERK MAPKs, ma non di PI3K. Adescamento di PBEF si &egrave; verificato indipendente della sua capacit&agrave; di generare NAD perch&eacute; n&eacute; nicotinamide mononucleotide o NAD potrebbe riassumere gli effetti e un inibitore specifico di PBEF, APO-866, non potrebbe inibire adescamento. Presi insieme, questi risultati dimostrano che PBEF pu&ograve; innescare per PMN burst respiratorio attivit&agrave; promuovendo la traslocazione p40 e p47 alla membrana, e ci&ograve; si verifica in modo MAPK-dipendenti.

Fattore di Colonia-enhancing cellule pre-B (PBEF/Nampt/visfatin) numeri primi neutrofili per aumentata attivit&agrave; burst respiratorio mediante assemblaggio parziale di NADPH ossidasi.

&#x30D7;&#x30EC;B&#x7D30;&#x80DE;&#x30B3;&#x30ED;&#x30CB;&#x30FC;&#x5897;&#x5F37;&#x56E0;&#x5B50;&#xFF08;[PBEF]&#x3082;Nampt /&#x30D3;&#x30B9;&#x30D5;&#x30A1;&#x30C1;&#x30F3;&#x3068;&#x3057;&#x200B;&#x200B;&#x3066;&#x77E5;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#xFF09;&#x3001;&#x305D;&#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x306F;&#x8907;&#x6570;&#x306E;&#x708E;&#x75C7;&#x6027;&#x75BE;&#x60A3;&#x306E;&#x72B6;&#x614B;&#x306B;&#x95A2;&#x4E0E;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x591A;&#x9762;&#x7684;&#x306A;52-kDa&#x306E;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x30AB;&#x30A4;&#x30F3;&#x69D8;&#x5206;&#x5B50;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3002; PBEF&#x3092;&#x963B;&#x5BB3;&#x3059;&#x308B;&#x69CB;&#x6210;PMN&#x306E;&#x30A2;&#x30DD;&#x30C8;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x591A;&#x5F62;&#x6838;&#x597D;&#x4E2D;&#x7403;&#xFF08;PMN&#xFF09;&#x708E;&#x75C7;&#x6027;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3092;&#x4FC3;&#x9032;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;PMN&#x306E;&#x547C;&#x5438;&#x30D0;&#x30FC;&#x30B9;&#x30C8;PBEF&#x3092;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x7D20;&#x6570;&#x304B;&#x3069;&#x3046;&#x304B;&#x3092;&#x8ABF;&#x3079;&#x305F;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;PBEF&#x304C;&#x72EC;&#x81EA;&#x306B;&#x547C;&#x5438;&#x30D0;&#x30FC;&#x30B9;&#x30C8;&#x3092;&#x6709;&#x52B9;&#x306B;&#x3057;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3067;&#x3057;&#x305F;&#x304C;&#x3001;&#x305D;&#x308C;&#x306F;NADPH&#x30AA;&#x30AD;&#x30B7;&#x30C0;&#x30FC;&#x30BC;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x3066;&#x5897;&#x52A0;&#x3057;&#x305F;&#x6D3B;&#x6027;&#x9178;&#x7D20;&#x7A2E;&#x751F;&#x6210;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x30D7;&#x30E9;&#x30A4;&#x30DF;&#x30F3;&#x30B0;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x308F;&#x304B;&#x3063;&#x305F;&#x3002; PBEF&#x306F;Thr&#x3067;p40&#x306E;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#xFF08;154&#xFF09;&#x8A98;&#x5C0E;&#x3057;&#x3001;&#x7D30;&#x80DE;&#x8CEA;NADPH&#x30AA;&#x30AD;&#x30B7;&#x30C0;&#x30FC;&#x30BC;&#x30B5;&#x30D6;&#x30E6;&#x30CB;&#x30C3;&#x30C8;p40&#x304A;&#x3088;&#x3073;P47&#x306F;&#x306A;&#x304F;&#x3001;P67&#x306E;&#x819C;&#x79FB;&#x884C;&#x3092;&#x4FC3;&#x9032;&#x3057;&#x3001;&#x4F4E;&#x5206;&#x5B50;&#x91CF;GTPase&#x306E;Rac&#x200B;&#x200B;&#x3092;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x30D7;&#x30E9;&#x30A4;&#x30DF;&#x30F3;&#x30B0;&#x3001;&#x8EE2;&#x5EA7;&#x3001;&#x53CA;&#x3073;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x304C;p38&#x3068;ERK MAPK&#x306E;&#x3067;&#x306F;&#x306A;&#x304F;&#x3001;PI3K&#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x306B;&#x4F9D;&#x5B58;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x305F;&#x3002;&#x3069;&#x3061;&#x3089;&#x306E;&#x30CB;&#x30B3;&#x30C1;&#x30F3;&#x30A2;&#x30DF;&#x30C9;&#x30E2;&#x30CE;&#x30CC;&#x30AF;&#x30EC;&#x30AA;&#x30C1;&#x30C9;&#x307E;&#x305F;&#x306F;NAD&#x304C;&#x52B9;&#x679C;&#x3092;&#x518D;&#x73FE;&#x3067;&#x304D;&#x306A;&#x304B;&#x3063;&#x305F;&#x305F;&#x3081;PBEF&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x30D7;&#x30E9;&#x30A4;&#x30DF;&#x30F3;&#x30B0;&#x306F;&#x3001;NAD-&#x767A;&#x96FB;&#x5BB9;&#x91CF;&#x306E;&#x72EC;&#x7ACB;&#x3057;&#x305F;&#x767A;&#x751F;&#x3057;&#x3001;PBEF&#x306E;&#x7279;&#x7570;&#x7684;&#x963B;&#x5BB3;&#x5264;&#x3001;APO-866&#x306F;&#x3001;&#x30D7;&#x30E9;&#x30A4;&#x30DF;&#x30F3;&#x30B0;&#x3092;&#x6291;&#x5236;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3067;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x4E00;&#x7DD2;&#x306B;&#x3001;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x306F;&#x3001;PBEF&#x304C;&#x819C;&#x306B;p40&#x304A;&#x3088;&#x3073;P47&#x8EE2;&#x3092;&#x4FC3;&#x9032;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3088;&#x308A;&#x3001;PMN&#x547C;&#x5438;&#x30D0;&#x30FC;&#x30B9;&#x30C8;&#x6D3B;&#x6027;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x30D7;&#x30E9;&#x30A4;&#x30DF;&#x30F3;&#x30B0;&#x3067;&#x304D;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3001;&#x3053;&#x308C;&#x306F;MAPK&#x4F9D;&#x5B58;&#x7684;&#x306B;&#x767A;&#x751F;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

NADPH&#x30AA;&#x30AD;&#x30B7;&#x30C0;&#x30FC;&#x30BC;&#x306E;&#x90E8;&#x5206;&#x7684;&#x306A;&#x30A2;&#x30BB;&#x30F3;&#x30D6;&#x30EA;&#x3092;&#x62E1;&#x5F35;&#x547C;&#x5438;&#x30D0;&#x30FC;&#x30B9;&#x30C8;&#x6D3B;&#x6027;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x30D7;&#x30EC;B&#x7D30;&#x80DE;&#x30B3;&#x30ED;&#x30CB;&#x30FC;&#x5897;&#x5F37;&#x56E0;&#x5B50;&#xFF08;PBEF / Nampt /&#x30D3;&#x30B9;&#x30D5;&#x30A1;&#x30C1;&#x30F3;&#xFF09;&#x7D20;&#x6570;&#x306E;&#x597D;&#x4E2D;&#x7403;

Pre-B &#xC140; &#xC2DD;&#xBBFC;&#xC9C0; &#xAC15;&#xD654; &#xC694;&#xC18C; ([PBEF]&#xB85C; &#xC54C;&#xB824;&#xC9C4; Nampt/visfatin)&#xC740; &#xB204;&#xAD6C;&#xC758; &#xD65C;&#xB3D9; &#xC5EC;&#xB7EC; &#xC5FC;&#xC99D; &#xC131; &#xC9C8;&#xBCD1; &#xC0C1;&#xD0DC;&#xC5D0; &#xC5F0;&#xB8E8; &#xB418;&#xC5B4; &#xB2E4; &#xBA74; &#xBC1C;&#xD604; &#xC131; 52-kDa cytokine &#xAC19;&#xC740; &#xBD84;&#xC790; &#xC774;&#xB2E4;. PBEF &#xC81C;&#xC815; PMN apoptosis&#xB97C; &#xC5B5;&#xC81C; &#xD568;&#xC73C;&#xB85C;&#xC368; polymorphonuclear &#xD638; (PMN) proinflammatory &#xAE30;&#xB2A5;&#xC744; &#xCD09;&#xC9C4; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC; PBEF&#xB97C; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xB610;&#xB294; &#xC18C;&#xC218; PMN &#xD638;&#xD761;&#xAE30; &#xBC84;&#xC2A4;&#xD2B8;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC870;&#xC0AC;. PBEF&#xB294; &#xC790;&#xCCB4;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xD638;&#xD761;&#xAE30; &#xBC84;&#xC2A4;&#xD2B8;&#xB97C; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xD558;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC740;, &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xADF8;&#xAC83;&#xC740; NADPH &#xC0B0;&#xD654; &#xD6A8;&#xC18C;&#xB97C; &#xD1B5;&#xD574; &#xD5A5;&#xC0C1; &#xB41C; &#xBC18;&#xC751;&#xC131; &#xC0B0;&#xC18C; &#xC885; &#xC0DD;&#xC131;&#xC744; &#xC704;&#xD55C; &#xC561;&#xB97C; &#xCC3E;&#xC558;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. PBEF cytosolic NADPH &#xC0B0;&#xD654; &#xD6A8;&#xC18C; &#xC18C; &#xB2E8;&#xC704; p40 p47&#xC758; &#xB9C9; &#xC804; &#xC2B9;&#xC9C4; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xD558;&#xC9C0; p67, Thr(154)&#xC5D0; p40 &#xC778; &#xC0B0;&#xD654;&#xB97C; &#xC720;&#xB3C4; &#xD558; &#xACE0; &#xC791;&#xC740; GTPase Rac&#xB97C; &#xD65C;&#xC131;&#xD654;. &#xC560; &#xBC8C; &#xCE60;, &#xC804; &#xC88C;, &#xBC0F; &#xC778; &#xC0B0;&#xD654; p38&#xC640; ERK MAPKs &#xC544;&#xB2C8;&#xC9C0;&#xB9CC; pi3k&#xC758; &#xD65C;&#xC131;&#xD654;&#xC5D0; &#xC758;&#xC874; &#xD588;&#xB2E4;. &#xB2C8;&#xCF54;&#xD2F4;&#xC544;&#xBBF8;&#xB4DC; mononucleotide &#xB610;&#xB294; NAD&#xB3C4; PBEF&#xC758; &#xD2B9;&#xC815; &#xC5B5;&#xC81C;&#xC81C; &#xD6A8;&#xACFC; &#xC815;&#xB9AC; &#xD558;&#xB294; &#xC218; &#xC788;&#xAE30; &#xB54C;&#xBB38;&#xC5D0; PBEF&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xBABB;&#xC4F0;&#xAC8C; NAD&#xB97C; &#xC0DD;&#xC131; &#xC6A9;&#xB7C9;&#xC5D0; &#xAD00;&#xACC4; &#xC5C6;&#xC774; &#xBC1C;&#xC0DD; apo&#xB294;-866, &#xC560; &#xBC8C; &#xCE60;&#xC744; &#xC5B5;&#xC81C; &#xD558;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC744; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xD568;&#xAED8; &#xCC0D;&#xC740;, &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xACB0;&#xACFC; &#xC785;&#xC99D; PBEF &#xC218; &#xB9C9;, p40 &#xBC0F; p47 &#xC804; &#xD64D;&#xBCF4; &#xD558; &#xC5EC; PMN &#xD638;&#xD761;&#xAE30; &#xBC84;&#xC2A4;&#xD2B8; &#xD65C;&#xB3D9;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xCD1D;&#xB9AC;&#xC640; MAPK &#xC885;&#xC18D; &#xD328;&#xC158;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBC1C;&#xC0DD;.

&#xC911; &#xACE0;-B &#xC140; &#xC2DD;&#xBBFC;&#xC9C0; &#xAC15;&#xD654; &#xC778;&#xC790; (PBEF/Nampt/visfatin) &#xC18C;&#xC218; neutrophils NADPH &#xC0B0;&#xD654; &#xD6A8;&#xC18C;&#xC758; &#xBD80;&#xBD84; &#xC5B4;&#xC148;&#xBE14;&#xB9AC;&#xB97C; &#xD1B5;&#xD574; &#xD638;&#xD761;&#xAE30; &#xBC84;&#xC2A4;&#xD2B8; &#xD65C;&#xB3D9; &#xC99D;&#xAC15;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C;.

Pre-c&#xE9;lulas B colonia que mejora el factor ([PBEF] tambi&#xE9;n conocido como Nampt / visfatina) es un 52-kDa pleiotr&#xF3;picos citoquinas como mol&#xE9;cula cuya actividad ha sido implicada en m&#xFA;ltiples estados de enfermedad inflamatoria. PBEF promueve polimorfonucleares neutr&#xF3;filos (PMN) la funci&#xF3;n proinflamatoria al inhibir la apoptosis de PMN constitutiva. Hemos investigado si se activa PBEF o primos de estallido respiratorio PMN. Hemos encontrado que, aunque no activ&#xF3; PBEF explosi&#xF3;n respiratoria en su propio, preparado para aumento de la generaci&#xF3;n de especies reactivas del ox&#xED;geno a trav&#xE9;s de la NADPH oxidasa. PBEF promueve la translocaci&#xF3;n de la membrana de la NADPH oxidasa citos&#xF3;lica subunidades p40 y p47, pero no p67, p40 induce la fosforilaci&#xF3;n en Thr (154), y activ&#xF3; la peque&#xF1;a GTPasa Rac. Cebado, la translocaci&#xF3;n, y la fosforilaci&#xF3;n depend&#xED;an de la activaci&#xF3;n de p38 MAPK y ERK, pero no de la PI3K. Cebado por PBEF se produjo con independencia de su capacidad de generaci&#xF3;n de NAD porque ni mononucle&#xF3;tido de nicotinamida o NAD podr&#xED;a resumir los efectos, y un inhibidor espec&#xED;fico de PBEF, APO-866, no pudo inhibir la imprimaci&#xF3;n. Tomados en conjunto, estos resultados demuestran que PBEF puede cebar para la actividad de PMN explosi&#xF3;n respiratoria promoviendo p40 y p47 translocaci&#xF3;n a la membrana, y esto ocurre de una manera dependiente de MAPK.

C&#xE9;lulas pre-B Colonia-la mejora de los factores (PBEF / Nampt / visfatina) Los neutr&#xF3;filos Primes para la actividad aumentada de r&#xE1;faga respiratoria a trav&#xE9;s de la Asamblea Parcial de la NADPH oxidasa

&#x76D1;&#x7BA1;&#x548C;&#x7EF4;&#x62A4;&#x5728;&#x80BE;&#x5C0F;&#x7BA1;&#x4E0A;&#x76AE;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x8102;&#x8D28;&#x4F53;&#x8FD0;&#x8F93;&#x5BF9;&#x4E8E;&#x80BE;&#x529F;&#x80FD;&#x81F3;&#x5173;&#x91CD;&#x8981;&#x3002;&#x7EC4;&#x5408;&#x7684;&#x514D;&#x75AB;&#x6291;&#x5236;&#x836F;&#x7269;&#x73AF;&#x5B62;&#x7D20; (CsA) &#x548C;&#x96F7;&#x5E15;&#x9709;&#x7D20; (SRL) &#x65BD;&#x52A0;&#x5F3A;&#x5927;&#x7684;&#x514D;&#x75AB;&#x6291;&#x5236;&#xFF0C;&#x4F46;&#x4E5F;&#x4F1A;&#x5BFC;&#x81F4;&#x80BE;&#x6BD2;&#x6027;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x5148;&#x524D;&#x5DF2;&#x8868;&#x660E; CsA &#x548C; SRL &#x5728;&#x4E00;&#x5B9A;&#x7A0B;&#x5EA6;&#x4E0A;&#x901A;&#x8FC7; MEK/ERK1/2 &#x80BE;&#x5C0F;&#x7BA1;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E2D;&#x63D0;&#x5347; &mdash; &#x8DE8;&#x4E0A;&#x76AE;&#x7535;&#x963B; (&#x4E4B;&#x4E09;)&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x9879;&#x5DE5;&#x4F5C;&#x6211;&#x4EEC;&#x5BA1;&#x67E5;&#x4E86; RhoA &#x9014;&#x5F84;&#x53EF;&#x80FD;&#x4E5F;&#x8C03;&#x89E3; CsA &#x548C; SRL &#x7684;&#x5F71;&#x54CD;&#x7684;&#x5047;&#x8BBE;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x663E;&#x793A; CsA &#x4E0E; CsA/SRL &#x7EC4;&#x5408;&#x6FC0;&#x6D3B; RhoA&#x3001; &#x8BF1;&#x5BFC; cofilin &#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x548C;&#x4FC3;&#x8FDB;&#x5E94;&#x529B;&#x7EA4;&#x7EF4;&#x4EE3;&#x3002;Rho &#x6FC0;&#x9176; (&#x97E9;&#x56FD;) &#x6291;&#x5236;&#x5242;&#xFF0C;Y27632&#xFF0C;&#x963B;&#x6B62; CsA &#x53CA; CsA SRL &#x8BF1;&#x5BFC; cofilin &#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x548C;&#x808C;&#x52A8;&#x86CB;&#x767D;&#x91CD;&#x5851;&#x3001; &#x51CF;&#x5C11;&#x4E4B;&#x4E09;&#x589E;&#x52A0;&#x548C;&#x9632;&#x6B62;&#x836F;&#x7269;&#x6240;&#x81F4;&#x7684;&#x514B;&#x52B3;&#x4E01; 7 &#x6C34;&#x5E73;&#x4E0A;&#x5347;&#x3002;CsA &#x4E0E; CsA/SRL &#x6CBB;&#x7597;&#x5168;&#x7403;&#x73AF;&#x5883;&#x57FA;&#x91D1;-H1/&#x6D88;&#x5931;&#x6A21;&#x94F8;&#x9020;&#x4E2D;&#x7684;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x88AB;&#x63D0;&#x5347;&#x7684;&#x4EA4;&#x6362;&#x56E0;&#x5B50;&#x7684;&#x8868;&#x8FBE;&#x3002;&#x5168;&#x7403;&#x73AF;&#x5883;&#x57FA;&#x91D1;-H1 &#x6C89;&#x9ED8; &asymp;50%&#xFF0C;&#x6291;&#x5236;&#x6D3B;&#x5316; RhoA &#x548C;&#x5148;&#x5929;&#x51CF;&#x5C11;&#x8BF1;&#x53D1; CsA &#x53CA; CsA/SRL cofilin &#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x548C;&#x5E94;&#x529B;&#x7EA4;&#x7EF4;&#x7684;&#x5F62;&#x6210;&#x3002;&#x7136;&#x800C;&#xFF0C;&#x5168;&#x7403;&#x73AF;&#x5883;&#x57FA;&#x91D1;-H1 &#x4E0B;&#x8C03;&#x5E76;&#x672A;&#x963B;&#x6B62;&#x4E4B;&#x4E09;&#x53D8;&#x5316;&#x3002;&#x56E0;&#x6B64; Rho/Rho &#x6FC0;&#x9176;&#x901A;&#x8DEF;&#x53C2;&#x4E0E;&#x8C03;&#x89E3; CsA &#x53CA; CsA SRL &#x8BF1;&#x5BFC;&#x7EC6;&#x80DE;&#x9AA8;&#x67B6;&#x91CD;&#x6392;&#x548C;&#x4E4B;&#x4E09;&#x901A;&#x8FC7;&#x514B;&#x52B3;&#x4E01;-7 &#x7684;&#x8868;&#x8FBE;&#x53D8;&#x5316;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x6570;&#x636E;&#x4F46;&#x662F;&#x6307;&#x5411;&#x5FAE;&#x5206;&#x8C03;&#x8282;&#x7684; Rho &#x6FC0;&#x6D3B;&#x53C2;&#x4E0E;&#x4E2D;&#x592E;&#x7EC6;&#x80DE;&#x9AA8;&#x67B6;&#x91CD;&#x6784;&#xFF0C;&#x5373;&#x4E0D;&#x9700;&#x8981;&#x5168;&#x7403;&#x73AF;&#x5883;&#x57FA;&#x91D1;-H1 &#x7684;&#x5168;&#x7403;&#x73AF;&#x5883;&#x57FA;&#x91D1;-H1-&#x4F9D;&#x8D56;&#x548C;&#x7F1D;&#x9699;&#x6E17;&#x900F;&#x3002;

RhoA &#x548C; Rho &#x6FC0;&#x9176;&#x8C03;&#x89E3;&#x73AF;&#x5B62;&#x7D20; A &#x548C;&#x6536;&#x7D27;&#x5728;&#x80BE;&#x5C0F;&#x7BA1;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x897F;&#x7F57;&#x83AB;&#x53F8;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x7684;&#x5C4F;&#x969C;&#x3002;

The regulation and maintenance of the paracellular transport in renal tubular epithelia is vital for kidney functions. Combination of the immunosuppressant drugs cyclosporine A (CsA) and sirolimus (SRL) exerts powerful immunosuppression, but also causes nephrotoxicity. We have previously shown that CsA and SRL elevate transepithelial resistance (TER) in kidney tubular cells partly through MEK/ERK1/2. In this work we examined the hypothesis that the RhoA pathway may also be mediating effects of CsA and SRL. We show that CsA and the CsA/SRL combination activated RhoA, induced cofilin phosphorylation and promoted stress fiber generation. The Rho kinase (ROK) inhibitor, Y27632, prevented CsA and CsA/SRL-induced cofilin phosphorylation and actin remodelling, reduced the TER increase and prevented the rise in claudin-7 levels caused by the drugs. Expression of the exchange factor GEF-H1/lfc was elevated in cells treated with CsA and CsA/SRL. GEF-H1 silencing inhibited RhoA activation by â‰ˆ50%, and potently reduced cofilin phosphorylation and stress fiber formation induced by CsA and CsA/SRL. However, GEF-H1 downregulation did not prevent the TER change. Thus the Rho/Rho kinase pathway was involved in mediating CsA and CsA/SRL-induced cytoskeleton rearrangement and TER changes via claudin-7 expression. Our data however point to differential regulation of Rho activation involved in central cytoskeleton remodelling, that is GEF-H1-dependent and junctional permeability that does not require GEF-H1.

Article	Year
GEF-H1 mediates tumor necrosis factor-alpha-induced Rho activation and myosin phosphorylation: role in the regulation of tubular paracellular permeability. The Journal of biological chemistry\| PubMed ID: 19261619	2009
Extracellular signal-regulated kinase and GEF-H1 mediate depolarization-induced Rho activation and paracellular permeability increase. American journal of physiology. Cell physiology\| PubMed ID: 20237148	2010
The epidermal growth factor receptor mediates tumor necrosis factor-alpha-induced activation of the ERK/GEF-H1/RhoA pathway in tubular epithelium. The Journal of biological chemistry\| PubMed ID: 21212278	2011
Pre-B cell colony-enhancing factor (PBEF/Nampt/visfatin) primes neutrophils for augmented respiratory burst activity through partial assembly of the NADPH oxidase. Journal of immunology (Baltimore, Md. : 1950)\| PubMed ID: 21518975	2011
RhoA and Rho kinase mediate cyclosporine A and sirolimus-induced barrier tightening in renal proximal tubular cells. The international journal of biochemistry & cell biology\| PubMed ID: 22062948	2012

Faiza Waheed

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