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Clinical Testing and Spinal Cord Removal in a Mouse Model for Amyotrophic Lateral Sclerosis (ALS)

Amyotrophic lateral sclerosis (ALS) is a fatal neurodegenerative disorder resulting in progressive degeneration of motoneurons. Peak of onset is around 60 ...

University Medicine Göttingen

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TGF-&beta; 1 &#x589E;&#x5F3A;&#x4E86;&#x901A;&#x8FC7;&#x8C03;&#x8282;&#x86CB;&#x767D;&#x9176;&#x4F53;&#x529F;&#x80FD;&#x4E0E; EFABP &#x7A81;&#x8D77;&#x3002;

Malfunction of the ubiquitin-proteasome system has been implicated as a causal factor in the pathogenesis of aggregation-related disorders, e.g. Parkinson's disease. We show here that Transforming growth factor-beta 1 (TGF-beta), a multifunctional cytokine and trophic factor for dopaminergic (DAergic) neurons modulates proteasome function in primary midbrain neurons. TGF-beta differentially inhibited proteasomal subactivities with a most pronounced time-dependent inhibition of the peptidyl-glutamyl peptide hydrolyzing-like and chymotrypsin-like subactivity. Regulation of proteasomal activity could be specifically quantified in the DAergic subpopulation. Protein blot analysis revealed an accumulation of ubiquitinated proteins after TGF-beta treatment. The identity of these enriched proteins was further analyzed by 2D-gel electrophoresis and mass spectrometry. We found epidermal fatty acid binding protein (EFABP) to be strongly increased and ubiquitinated after TGF-beta treatment and confirmed this finding by co-immunoprecipitation. While application of TGF-beta increased neurite regeneration in a scratch lesion model, downregulation of EFABP by siRNA significantly decreased this effect. We thus postulate that a differential regulation of proteasomal function, as demonstrated for TGF-beta, can result in an enrichment of proteins, such as EFABP, that mediate physiological functions, such as neurite regeneration.

TGF-beta 1 enhances neurite outgrowth via regulation of proteasome function and EFABP.

Dysfonctionnement du syst&egrave;me ubiquitine-prot&eacute;asome est consid&eacute;r&eacute; comme un facteur causal dans la pathogen&egrave;se des troubles li&eacute;s &agrave; l&#39;agr&eacute;gation, par exemple la maladie de Parkinson. Nous montrons ici que le Transforming growth factor-beta 1 (TGF-b&ecirc;ta), une cytokine multifonctionnel et facteur trophique des neurones dopaminergiques (DAergic) module fonction prot&eacute;asome dans les neurones du m&eacute;senc&eacute;phale primaire. TGF-b&ecirc;ta inhibe diff&eacute;rentiellement proteasome sous-activit&eacute;s avec une inhibition du peptide peptidyl-glutamyl hydrolysant-comme temps plus prononc&eacute;e et une sous-activit&eacute; chymotrypsine-like. R&eacute;gulation de l&#39;activit&eacute; du prot&eacute;asome quantifiables sp&eacute;cifiquement dans la sous-population des DAergic. Buvardage de prot&eacute;ine a r&eacute;v&eacute;l&eacute; une accumulation de prot&eacute;ines ubiquitin&eacute;es apr&egrave;s traitement de TGF-b&ecirc;ta. L&#39;identit&eacute; de ces prot&eacute;ines enrichis a &eacute;t&eacute; davantage analys&eacute;e par &eacute;lectrophor&egrave;se sur gel 2D et spectrom&eacute;trie de masse. Nous avons trouv&eacute; de la prot&eacute;ine &eacute;pidermiques acide gras (EFABP) &agrave; &ecirc;tre fortement augment&eacute;e et ubiquitin&eacute;es apr&egrave;s traitement de TGF-b&ecirc;ta et a confirm&eacute; cette conclusion par co-immunopr&eacute;cipitation. Alors que la demande de TGF-b&ecirc;ta augmentait neurites r&eacute;g&eacute;n&eacute;ration dans un mod&egrave;le de l&eacute;sion de grattage downregulation de EFABP de siARN ont diminu&eacute; significativement cet effet. Nous postulons donc qu&#39;une r&eacute;gulation diff&eacute;rentielle de la fonction du prot&eacute;asome, comme le d&eacute;montrent des TGF-b&ecirc;ta, peut entra&icirc;ner un enrichissement des prot&eacute;ines, tels que EFABP, qui assurent la m&eacute;diation des fonctions physiologiques, comme la r&eacute;g&eacute;n&eacute;ration des neurites.

TGF-b&ecirc;ta 1 am&eacute;liore la croissance des neurites via la r&eacute;gulation de la fonction du prot&eacute;asome et EFABP.

Fehlfunktion des Ubiquitin-Proteasom-Systems hat sich als urs&auml;chlicher Faktor in der Pathogenese von Aggregation-Erkrankungen, z.B. Morbus Parkinson verwickelt. Wir zeigen hier, dass Transforming Growth Factor-Beta 1 (TGF-Beta), eine multifunktionale Cytokine und trophischen Faktor f&uuml;r (DAergic) dopaminergen Neuronen Proteasom-Funktion in prim&auml;ren Mittelhirn Neuronen moduliert. TGF-Beta gehemmt differentiell Proteasomal Teilhandlungen mit einem ausgepr&auml;gteste zeitabh&auml;ngige Hemmung des Peptids konvertierende-Glutamyl IAH1-wie und Chymotrypsin-wie Unteraktivit&auml;t darstellt. Regelung der Proteasomal T&auml;tigkeit konnte speziell in der Teilgesamtheit DAergic quantifiziert werden. Protein-Fleck-Analyse ergab eine Anh&auml;ufung von Ubiquitinated Proteinen nach der TGF-Beta-Behandlung. Die Identit&auml;t dieser angereicherten Proteine wurde weiter von 2D Gelelektrophorese und Massenspektrometrie analysiert. Wir fanden epidermale Fetts&auml;ure verbindliches Protein (EFABP) stark erh&ouml;ht werden und Ubiquitinated nach der TGF-Beta-Behandlung und diese Feststellung von co-Immunopr&auml;zipitation best&auml;tigt. W&auml;hrend der Anwendung von TGF-Beta Neurit Regenerierung in einem kratzen L&auml;sion Modell stieg, sank Heraufregulation des EFABP von SiRNA deutlich diesen Effekt. Wir nehmen daher, dass eine differenzielle Verordnung der Proteasomal-Funktion, wie f&uuml;r TGF-Beta, demonstriert eine Bereicherung der Proteine, wie EFABP, ergeben kann, das physiologische Funktionen, wie z. B. Neurit Regenerierung zu vermitteln.

TGF-Beta 1 verbessert Neurit Auswuchs per Verordnung der Proteasom-Funktion und EFABP.

Malfunzionamento del sistema ubiquitina-proteasoma &egrave; stato implicato come fattore causale nella patogenesi dei disturbi correlati di aggregazione, ad esempio la malattia di Parkinson. Mostriamo qui che modula il Transforming growth factor-beta 1 (TGF-beta), una citochina multifunzionale e fattore trofico per i neuroni dopaminergici (DAergic) funzione del proteasoma nei neuroni primari del mesencefalo. TGF-beta differenzialmente inibito proteosomale attivit&agrave; con una pi&ugrave; marcata inibizione dipendente dal tempo del peptide peptidilica-glutamil spezzettare-come chimotripsina-come una sottoattivit&agrave;. Regolamento dell&#39;attivit&agrave; proteosomale pu&ograve; essere quantificata in particolare nella sottopopolazione di DAergic. L&#39;analisi della proteina macchia ha rivelato un accumulo di proteine ubiquitarie dopo trattamento di TGF-beta. L&#39;identit&agrave; di queste proteine arricchite &egrave; stato ulteriormente analizzato da 2D-gel elettroforesi e spettrometria di massa. Abbiamo trovato epidermico fatty acid binding protein (EFABP) per essere fortemente aumentato e ubiquitarie dopo trattamento di TGF-beta e ha confermato questa scoperta di co-immunoprecipitazione. Applicazione di TGF-beta &egrave; aumentato dei neuriti rigenerazione in un modello di lesione gratta e Vinci, downregulation del EFABP di siRNA diminuito significativamente questo effetto. Abbiamo cos&igrave; ipotizzare che una regolazione differenziale della funzione proteosomale, come dimostrato per TGF-beta, pu&ograve; risultare in un arricchimento di proteine, come EFABP, che mediano le funzioni fisiologiche, come la rigenerazione dei neuriti.

TGF-beta 1 migliora dei neuriti escrescenza tramite regolazione della funzione del proteasoma ed EFABP.

&#x30E6;&#x30D3;&#x30AD;&#x30C1;&#x30F3;-&#x30D7;&#x30ED;&#x30C6;&#x30A2;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x7CFB;&#x306E;&#x6A5F;&#x80FD;&#x4E0D;&#x5168;&#x306F;&#x3001;&#x96C6;&#x7D04;&#x95A2;&#x9023;&#x75BE;&#x60A3;&#x3001;&#x4F8B;&#x3048;&#x3070;&#x30D1;&#x30FC;&#x30AD;&#x30F3;&#x30BD;&#x30F3;&#x75C5;&#x306E;&#x75C5;&#x614B;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x56E0;&#x679C;&#x8981;&#x56E0;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x95A2;&#x4E0E;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005; &#x306F;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x8EE2;&#x63DB;&#x6210;&#x9577;&#x56E0;&#x5B50; &beta; 1 &#xFF08;TGF &#x30D9;&#x30FC;&#x30BF;&#x7248;&#xFF09;&#x3001;&#x591A;&#x6A5F;&#x80FD;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x30AB;&#x30A4;&#x30F3;&#x3068;&#x30C9;&#x30FC;&#x30D1;&#x30DF;&#x30F3;&#x30CB;&#x30E5;&#x30FC;&#x30ED;&#x30F3; &#xFF08;&#x30C9;&#x30FC;&#x30D1;&#x30DF;&#x30F3;&#xFF09; &#x306E;&#x6804;&#x990A;&#x56E0;&#x5B50;&#x304C;&#x30D7;&#x30E9;&#x30A4;&#x30DE;&#x30EA;&#x4E2D;&#x8133;&#x30CB;&#x30E5;&#x30FC;&#x30ED;&#x30F3;&#x306E;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C6;&#x30A2;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x306E;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3092;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;TGF-&beta; &#x7279;&#x7570;&#x7684;&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30B8;&#x30EB; &#x30B0;&#x30EB;&#x30BF;&#x30DF;&#x30EB; &#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C9;&#x52A0;&#x6C34;&#x5206;&#x89E3;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306A;&#x6700;&#x3082;&#x9855;&#x8457;&#x306A;&#x6642;&#x9593;&#x4F9D;&#x5B58;&#x7684;&#x306B;&#x6291;&#x5236;&#x3092;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C6;&#x30A2;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x306B;&#x542B;&#x307E;&#x308C;&#x308B;&#x30B5;&#x30D6;&#x3068;&#x30AD;&#x30E2;&#x30C8;&#x30EA;&#x30D7;&#x30B7;&#x30F3;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306A;&#x632F;&#x308B;&#x821E;&#x3044;&#x3092;&#x6291;&#x5236;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C6;&#x30A2;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x6D3B;&#x6027;&#x306E;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x306F;&#x3001;&#x30C9;&#x30FC;&#x30D1;&#x30DF;&#x30F3; subpopulation &#x7279;&#x306B;&#x5B9A;&#x91CF;&#x5316;&#x3067;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x3057;&#x307F;&#x306E;&#x5206;&#x6790;&#x306F;&#x3001;&#x30E6;&#x30D3;&#x30AD;&#x30C1;&#x30F3;&#x5316;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x84C4;&#x7A4D; TGF &beta; &#x6CBB;&#x7642;&#x5F8C;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x6FC3;&#x7E2E;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x30A2;&#x30A4;&#x30C7;&#x30F3;&#x30C6;&#x30A3;&#x30C6;&#x30A3;&#x306F;&#x3055;&#x3089;&#x306B; 2&#x6B21;&#x5143;&#x30B2;&#x30EB;&#x96FB;&#x6C17;&#x6CF3;&#x52D5;&#x3068;&#x8CEA;&#x91CF;&#x5206;&#x6790;&#x6CD5;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x89E3;&#x6790;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x6211;&#x3005; &#x306F;&#x3001;&#x8868;&#x76AE;&#x8102;&#x80AA;&#x9178;&#x7D50;&#x5408;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA; (EFABP) &#x3092;&#x5F37;&#x304F;&#x5897;&#x52A0;&#x3057;&#x3066;&#x30E6;&#x30D3;&#x30AD;&#x30C1;&#x30F3; TGF &#x30D9;&#x30FC;&#x30BF;&#x6CBB;&#x7642;&#x5F8C;&#x3092;&#x767A;&#x898B;&#x3057;&#x3001;co-&#x514D;&#x75AB;&#x6C88;&#x964D;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x3053;&#x306E;&#x767A;&#x898B;&#x3092;&#x78BA;&#x8A8D;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30A2;&#x30D7;&#x30EA;&#x30B1;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3; TGF-&beta; &#x306E;&#x795E;&#x7D4C;&#x7A81;&#x8D77;&#x518D;&#x751F;&#x30B9;&#x30AF;&#x30E9;&#x30C3;&#x30C1;&#x75C5;&#x5909;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x306B;&#x5897;&#x52A0;&#x3057;&#x305F;&#x304C;&#x3001;EFABP &#x306E;&#x30C0;&#x30A6;&#x30F3;&#x30EC;&#x30AE;&#x30E5;&#x30EC;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3; siRNA &#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x3053;&#x306E;&#x52B9;&#x679C;&#x6E1B;&#x5C11;&#x3057;&#x305F;.&#x6211;&#x3005; &#x3057;&#x305F;&#x304C;&#x3063;&#x3066;&#x3001;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C6;&#x30A2;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x306B;&#x542B;&#x307E;&#x308C;&#x308B;&#x95A2;&#x6570;&#x306E;&#x5DEE;&#x52D5;&#x5236;&#x5FA1; TGF &#x30D9;&#x30FC;&#x30BF;&#x3092;&#x793A;&#x3059;&#x3088;&#x3046;&#x3001;&#x795E;&#x7D4C;&#x7A81;&#x8D77;&#x518D;&#x751F;&#x306A;&#x3069;&#x306E;&#x751F;&#x7406;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3092;&#x4EF2;&#x4ECB;&#x3059;&#x308B; EFABP &#x306A;&#x3069;&#x306E;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x6FC3;&#x7E2E;&#x3067;&#x8D77;&#x56E0;&#x3067;&#x304D;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x516C;&#x6E96;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

TGF-&beta; 1 &#x306F;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C6;&#x30A2;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x306E;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3068; EFABP &#x306E;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x3066;&#x795E;&#x7D4C;&#x7A81;&#x8D77;&#x4F38;&#x9577;&#x3092;&#x9AD8;&#x3081;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#xC720;&#xBE44;&#xD034;&#xD2F4;-&#xD504;&#xB85C;&#xD14C;&#xC544;&#xC880; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C;&#xC758; &#xACE0;&#xC7A5; &#xC9D1;&#xACC4; &#xAD00;&#xB828; &#xC7A5;&#xC560;, &#xC608;&#xB97C; &#xB4E4;&#xBA74; &#xD30C; &#xD0A8; &#xC2A8; &#xBCD1;&#xC758; &#xBCD1; &#xC778;&#xC5D0; &#xC778;&#xACFC; &#xC694;&#xC778;&#xC73C;&#xB85C; &#xC5F0;&#xB8E8; &#xB418;&#xC5B4; &#xC788;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; &#xC5EC;&#xAE30;&#xC5D0; &#xBCC0;&#xD615; &#xC131;&#xC7A5; &#xC778;&#xC790;-&#xBCA0;&#xD0C0; 1 (TGF-&#xBCA0;&#xD0C0;) &#xB2E4;&#xAE30;&#xB2A5; cytokine&#xC640; trophic &#xC694;&#xC18C; (DAergic) dopaminergic &#xC2E0;&#xACBD; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xAE30;&#xBCF8; midbrain &#xB274;&#xB7F0;&#xC5D0; &#xD504;&#xB85C;&#xD14C;&#xC544;&#xC880; &#xD568;&#xC218; &#xBCC0;&#xC870; &#xD45C;&#xC2DC;. TGF-&#xBCA0;&#xD0C0;&#xB294; &#xCC28;&#xB3D9; peptidyl glutamyl &#xD3A9; &#xD2F0; &#xB4DC; hydrolyzing &#xAC19;&#xC740;&#xC758; &#xAC00;&#xC7A5; &#xB69C;&#xB837;&#xD55C; &#xC2DC;&#xAC04;&#xC5D0; &#xB530;&#xB77C; &#xC800;&#xD574;&#xC640; proteasomal subactivities &#xBC0F; &#xBC94;&#xC6A9;&#xC131; &#xAC19;&#xC740; subactivity &#xC800;&#xD574;. Proteasomal &#xD65C;&#xB3D9;&#xC758; &#xADDC;&#xC81C; &#xAD6C;&#xCCB4;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; DAergic subpopulation&#xC5D0; &#xCE21;&#xC815;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC624; &#xC810; &#xBD84;&#xC11D; TGF-&#xBCA0;&#xD0C0; &#xCE58;&#xB8CC; &#xD6C4; ubiquitinated &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xCD95;&#xC801;&#xC744; &#xACF5;&#xAC1C; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC774; &#xD48D;&#xBD80;&#xD55C; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; id&#xB294; &#xB354;&#xC6B1;&#xB354; 2 &#xCC28;&#xC6D0; &#xC824; &#xC804;&#xAE30; &#xC774;&#xB3D9; &#xBC95; &#xBC0F; &#xC9C8;&#xB7C9; &#xBD84;&#xC11D;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xBD84;&#xC11D; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC; TGF-&#xBCA0;&#xD0C0; &#xCE58;&#xB8CC; &#xD6C4; &#xD45C; &#xD53C; &#xC9C0;&#xBC29;&#xC0B0; &#xC758;&#xBB34;&#xC801;&#xC778; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; (EFABP) &#xAC15;&#xB825; &#xD558; &#xAC8C; &#xC99D;&#xAC00; &#xD558; &#xACE0; ubiquitinated&#xB97C; &#xBC1C;&#xACAC; &#xD558; &#xACE0; &#xACF5;&#xB3D9;-immunoprecipitation&#xC5D0; &#xC758;&#xD574;&#xC774; &#xBC1C;&#xACAC;&#xC744; &#xD655;&#xC778;. TGF-&#xBCA0;&#xD0C0; &#xBC84;&#xC804;&#xC758; &#xC751;&#xC6A9; &#xD504;&#xB85C;&#xADF8;&#xB7A8; &#xC2A4;&#xD06C;&#xB798;&#xCE58; &#xBCD1; &#xBCC0; &#xBAA8;&#xB378;&#xC5D0;&#xC11C; neurite &#xC7AC;&#xC0DD; &#xC99D;&#xAC00;, Sirna&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; EFABP&#xC758; downregulation&#xC774;&#xC774; &#xD6A8;&#xACFC; &#xD06C;&#xAC8C; &#xC904;&#xC600;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xB530;&#xB77C;&#xC11C; &#xADF8; proteasomal &#xD568;&#xC218;&#xC758; &#xCC28;&#xB4F1; &#xADDC;&#xC81C; TGF-&#xBCA0;&#xD0C0;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC99D;&#xBA85;&#xC73C;&#xB85C; &#xBC1C;&#xC0DD;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; neurite &#xC7AC;&#xC0DD;&#xC131; &#xB4F1;&#xC758; &#xC0DD;&#xB9AC; &#xC801; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC744; &#xC911;&#xC7AC; &#xD558;&#xB294; EFABP, &#xB4F1;&#xC758; &#xB18D;&#xCD95; &#xACF5;&#xC900;.

TGF-&#xBCA0;&#xD0C0; 1 neurite &#xD30C;&#xC0DD;&#xBB3C;&#xC744; &#xD504;&#xB85C;&#xD14C;&#xC544;&#xC880; &#xAE30;&#xB2A5;&#xACFC; EFABP&#xC758; &#xB808; &#xADE4; &#xB808;&#xC774; &#xC158;&#xC744; &#xD1B5;&#xD574; &#xD5A5;&#xC0C1; &#xC2DC;&#xD0B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Mal funcionamiento del sistema ubiquitina-proteasoma se ha implicado como un factor causal en la patog&eacute;nesis de los trastornos relacionados con la agregaci&oacute;n, por ejemplo la enfermedad de Parkinson. Aqu&iacute; mostramos que el factor de crecimiento de transformaci&oacute;n-beta 1 (TGF-beta), una citoquina multifuncional y factor tr&oacute;fico para las neuronas dopamin&eacute;rgicas (DAergic) modula la funci&oacute;n del proteasoma en las neuronas del cerebro medio primario. TGF-beta diferencialmente hab&iacute;a inhibida proteasomal subactivities con una inhibici&oacute;n de time-dependent m&aacute;s pronunciada de la peptidil-glutamil p&eacute;ptido similar hidrolizaci&oacute;n y quimotripsina-como Subactividad. Regulaci&oacute;n de la actividad proteasomal podr&iacute;a cuantificarse espec&iacute;ficamente en la subpoblaci&oacute;n de DAergic. An&aacute;lisis de prote&iacute;na mancha blanca /negra revelaron una acumulaci&oacute;n de prote&iacute;nas ubiquitinated despu&eacute;s del tratamiento de TGF-beta. La identidad de estas prote&iacute;nas enriquecidas m&aacute;s se analiz&oacute; por electroforesis en gel de 2D y espectrometr&iacute;a de masas. Hemos encontrado prote&iacute;na de Uni&oacute;n epid&eacute;rmica de &aacute;cidos grasos (EFABP) a incrementarse fuertemente y ubiquitinated despu&eacute;s del tratamiento de TGF-beta y hab&iacute;a confirmado este hallazgo por co-inmunoprecipitaci&oacute;n. Aplicaci&oacute;n de TGF-beta aumentado neurita regeneraci&oacute;n en un modelo de lesi&oacute;n rasgu&ntilde;o, downregulation de EFABP por siRNA disminuy&oacute; significativamente este efecto. As&iacute;, postulamos que una regulaci&oacute;n diferencial de proteasomal funci&oacute;n, seg&uacute;n lo demostrado por TGF-beta, puede resultar en un enriquecimiento de prote&iacute;nas, como EFABP, que median funciones fisiol&oacute;gicas, tales como la regeneraci&oacute;n de la neurita.

TGF-beta 1 mejora neurita fruto mediante la regulaci&oacute;n de la funci&oacute;n del proteasoma y EFABP.

&#x5F25;&#x6F2B;&#x6027;&#x8F74;&#x7D22;&#x53D8;&#x6027;&#x662F;&#x5916;&#x4F24;&#x6027;&#x521D;&#x59CB;&#x5173;&#x952E;&#x6B65;&#x9AA4;&#x548C;&#x4E2D;&#x67A2;&#x795E;&#x7ECF;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x9000;&#x884C;&#x6027;&#x75BE;&#x75C5;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x5EFA;&#x7ACB;&#x4E86;&#x72EC;&#x7279;&#x7684;&#x4F53;&#x5185;&#x8367;&#x5149;&#x6210;&#x50CF;&#x7279;&#x70B9;&#x975E;&#x5E38;&#x65E9;&#x671F;&#x4E8B;&#x4EF6;&#x5728;&#x5927;&#x9F20;&#x89C6;&#x795E;&#x7ECF;&#x7684;&#x8F74;&#x7A81;&#x53D8;&#x6027;&#x7684;&#x8303;&#x4F8B;&#x3002;&#x8FD9;&#x5141;&#x8BB8; postlesional &#x6025;&#x6027;&#x5F25;&#x6F2B;&#x6027;&#x8F74;&#x7D22;&#x53D8;&#x6027; (&#x53CD;&#x503E;&#x9500;&#x534F;&#x5B9A; &#x300B;&#xFF09; &#x7684;&#x91CF;&#x5316;&#x548C;&#x5355;&#x4E2A;&#x89C6;&#x7F51;&#x819C;&#x795E;&#x7ECF;&#x8282;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8F74;&#x7A81;&#x53EF;&#x89C6;&#x5316;&#x7684;&#x817A;&#x76F8;&#x5173;&#x75C5;&#x6BD2;&#x4ECB;&#x5BFC; dsRed &#x7684;&#x8868;&#x8FBE;&#x3002;EM &#x5206;&#x6790;&#x63ED;&#x793A;&#x7EC6;&#x80DE;&#x9AA8;&#x67B6;&#x3001; &#x65E0;&#x673A;&#x76D0; cytoplasmatic&#xFF0C;&#x548C; autophagosomes &#x7684;&#x5916;&#x89C2;&#x635F;&#x4F24;&#x540E;&#x7684;&#x7B2C;&#x4E00;&#x4E2A;&#x5C0F;&#x65F6;&#x5185;&#x4E25;&#x91CD;&#x7ED3;&#x6784;&#x6539;&#x52A8;&#x3002;&#x81EA;&#x566C;&#x7684;&#x6291;&#x5236;&#x5BFC;&#x81F4;&#x7684;&#x6025;&#x6027;&#x5F25;&#x6F2B;&#x6027;&#x8F74;&#x7D22;&#x53D8;&#x6027;&#x7684;&#x8870;&#x51CF;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;&#x53EF;&#x4EE5;&#x4F7F;&#x7528;&#x9499;&#x654F;&#x611F;&#x67D3;&#x6599;&#x53EF;&#x89C6;&#x5316;&#x540E;&#x6324;&#x538B;&#x75C5;&#x53D8;&#x7684; intraaxonal &#x9499;&#x542B;&#x91CF;&#x8FC5;&#x901F;&#x589E;&#x52A0;&#x3002;&#x9499;&#x901A;&#x9053;&#x6291;&#x5236;&#x5242;&#x7684;&#x5E94;&#x7528;&#x65E0;&#x6CD5;&#x7C89;&#x788E;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x9499;&#x589E;&#x52A0;&#x548C;&#x663E;&#x8457;&#x51CF;&#x6BD2;&#x5F25;&#x6F2B;&#x6027;&#x8F74;&#x7D22;&#x53D8;&#x6027;&#xFF0C;&#x800C;&#x9499;&#x79BB;&#x5B50;&#x8F7D;&#x4F53;&#x7684;&#x5E94;&#x7528;&#x52A0;&#x5267;&#x7684;&#x9000;&#x884C;&#x6027;&#x8868;&#x578B;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x6700;&#x540E;&#x8BC1;&#x660E;&#x8FD9;&#x589E;&#x52A0;&#x7684; postlesional &#x81EA;&#x566C;&#x662F;&#x9499;&#x4F9D;&#x8D56;&#xFF0C;&#x56E0;&#x6B64;&#x673A;&#x68B0;&#x5316;&#x94FE;&#x63A5;&#x81EA;&#x566C;&#x548C; intraaxonal &#x9499;&#x6C34;&#x5E73;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E24;&#x4E2A;&#x8FDB;&#x7A0B;&#x62DF;&#x5C06;&#x5F25;&#x6F2B;&#x6027;&#x8F74;&#x7D22;&#x53D8;&#x6027;&#x7684;&#x672A;&#x6765;&#x6CBB;&#x7597;&#x8BBE;&#x7F6E;&#x64CD;&#x4F5C;&#x7684;&#x4E3B;&#x8981;&#x76EE;&#x6807;&#x3002;

&#x6025;&#x6027;&#x5F25;&#x6F2B;&#x6027;&#x8F74;&#x7D22;&#x53D8;&#x6027;&#x7684;&#x4F53;&#x5185;&#x7684;&#x89C6;&#x795E;&#x7ECF;&#x635F;&#x4F24;&#x7684;&#x673A;&#x5236;&#x3002;

Axonal degeneration is an initial key step in traumatic and neurodegenerative CNS disorders. We established a unique in vivo epifluorescence imaging paradigm to characterize very early events in axonal degeneration in the rat optic nerve. Single retinal ganglion cell axons were visualized by AAV-mediated expression of dsRed and this allowed the quantification of postlesional acute axonal degeneration (AAD). EM analysis revealed severe structural alterations of the cytoskeleton, cytoplasmatic vacuolization, and the appearance of autophagosomes within the first hours after lesion. Inhibition of autophagy resulted in an attenuation of acute axonal degeneration. Furthermore, a rapid increase of intraaxonal calcium levels following crush lesion could be visualized using a calcium-sensitive dye. Application of calcium channel inhibitors prevented crush-induced calcium increase and markedly attenuated axonal degeneration, whereas application of a calcium ionophore aggravated the degenerative phenotype. We finally demonstrate that increased postlesional autophagy is calcium dependent and thus mechanistically link autophagy and intraaxonal calcium levels. Both processes are proposed to be major targets for the manipulation of axonal degeneration in future therapeutic settings.

Mechanisms of acute axonal degeneration in the optic nerve in vivo.

D&eacute;g&eacute;n&eacute;rescence axonale est une premi&egrave;re &eacute;tape cl&eacute;e en post-traumatique et les troubles neurod&eacute;g&eacute;n&eacute;ratifs CNS. Nous avons &eacute;tabli un unique &eacute;pifluorescence in vivo imagerie paradigme afin de caract&eacute;riser les &eacute;v&eacute;nements tr&egrave;s t&ocirc;t dans la d&eacute;g&eacute;n&eacute;rescence des axones du nerf optique de rat. Axones des cellules ganglionnaires r&eacute;tiniennes unique ont &eacute;t&eacute; visualis&eacute;es par expression induite par l&#39;AAV de dsRed, et cela a permis la quantification de la d&eacute;g&eacute;n&eacute;rescence axonale aigu&euml; postlesional (AAD). L&#39;analyse EM a r&eacute;v&eacute;l&eacute; de graves alt&eacute;rations structurales du cytosquelette, vacuolisation cytoplasmique et l&#39;apparence des autophagosomes dans les premi&egrave;res heures apr&egrave;s la l&eacute;sion. L&#39;inhibition de l&#39;autophagie a entra&icirc;n&eacute; une att&eacute;nuation de la d&eacute;g&eacute;n&eacute;rescence axonale aigu&euml;. Par ailleurs, une augmentation rapide du taux de calcium intra-neuronaux apr&egrave;s l&eacute;sion de l&#39;&eacute;crasement pourrait &ecirc;tre visualis&eacute;e en utilisant un colorant sensible au calcium. Application des inhibiteurs des canaux calciques emp&ecirc;ch&eacute; augmentation de calcium induite par l&#39;&eacute;crasement et la d&eacute;g&eacute;n&eacute;rescence axonale nettement att&eacute;nu&eacute;e, consid&eacute;rant que l&#39;application d&#39;un ionophore calcique aggrav&eacute; le ph&eacute;notype d&eacute;g&eacute;n&eacute;ratif. Finalement, nous d&eacute;montrons que l&#39;autophagie postlesional accrue est calcium-d&eacute;pendante et donc un lien m&eacute;caniste calc&eacute;mie autophagie et intra-neuronaux. Les deux processus sont propos&eacute;s comme des cibles principales pour la manipulation de la d&eacute;g&eacute;n&eacute;rescence axonale dans param&egrave;tres th&eacute;rapeutiques futures.

M&eacute;canismes de la d&eacute;g&eacute;n&eacute;rescence axonale aigu&euml; du nerf optique in vivo.

Axonale Degeneration ist ein erster wichtiger Schritt in traumatischen und CNS neurodegenerativen Erkrankungen. Wir etabliert ein einzigartiges in-vivo Epifluoreszenz imaging Paradigma um sehr fr&uuml;he Veranstaltungen in axonale Degeneration in den Sehnerv Ratte zu charakterisieren. Einzelne retinalen Ganglienzellen Zelle Axone wurden durch AAV-vermittelten Expression DsRed visualisiert und dies erlaubt die Quantifizierung der postlesional akute axonale Degeneration (AAD). EM-Analyse ergab schwere strukturelle Ver&auml;nderungen des Zytoskeletts, cytoplasmatic Vakuolisierung und die Darstellung des Autophagosomes innerhalb der ersten Stunden nach der L&auml;sion. Hemmung der Autophagy f&uuml;hrte zu einer D&auml;mpfung der akute axonale Degeneration. Dar&uuml;ber hinaus k&ouml;nnte eine rasche Erh&ouml;hung der Intraaxonal Kalziumspiegel nach Zerstampfung L&auml;sion mit einen Kalzium-Sensitive-Farbstoff visualisiert werden. Anwendung der Kalzium-Kanal-Hemmer verhindert Gedr&auml;nge-induzierte Kalzium erh&ouml;hen und deutlich abgeschw&auml;chte axonale Degeneration, w&auml;hrend der Anwendung von einer Kalzium-Ionophor degenerative Ph&auml;notyps versch&auml;rft. Wir zeigen schlie&szlig;lich, dass erh&ouml;hte postlesional Autophagy Kalzium angewiesen ist und so mechanistisch Autophagy und Intraaxonal Kalziumspiegel zu verkn&uuml;pfen. Beide Prozesse werden vorgeschlagen, um die wichtigsten Ziele f&uuml;r die Manipulation der axonalen Degeneration in zuk&uuml;nftigen therapeutischen Einstellungen werden.

Mechanismen der akute axonale Degeneration in den Sehnerv in-vivo.

Degenerazione assonale &egrave; un passo chiave iniziale in traumatiche e malattie neurodegenerative CNS. Abbiamo stabilito un unico epifluorescenza in vivo imaging paradigma per caratterizzare gli eventi molto precoce nella degenerazione assonale nel nervo ottico ratto. Assoni delle cellule gangliari della retina singolo sono stati visualizzati da AAV-mediata espressione di dsRed e questo ha permesso la quantificazione di degenerazione assonale acuta postlesional (AAD). EM analisi hanno rivelato gravi alterazioni strutturali del citoscheletro, vacuolizzazione citoplasmatiche e la comparsa di autophagosomes entro le prime ore dopo la lesione. Inibizione di autophagy ha provocato un&#39;attenuazione di degenerazione assonale acuta. Inoltre, un rapido aumento dei livelli di calcio intraaxonal seguito schiacci lesione potrebbe essere visualizzato utilizzando un colorante sensibile al calcio. Applicazione di inibitori del canale calcio impedito aumento calcio indotta da schiacciare e degenerazione assonale notevolmente attenuata, considerando che l&#39;applicazione di un ionoforo calcio aggravato il fenotipo degenerativo. Abbiamo infine dimostrare che autophagy postlesional maggiore &egrave; calcio dipendente e cos&igrave; meccanicistico link autophagy e intraaxonal i livelli di calcio. Entrambi i processi sono proposti per essere obiettivi principali per la manipolazione di degenerazione assonale nelle impostazioni terapeutiche future.

Meccanismi di degenerazione assonale acuta nel nervo ottico in vivo.

&#x8EF8;&#x7D22;&#x5909;&#x6027;&#x3067;&#x3059;&#x30AD;&#x30FC;&#x306E;&#x521D;&#x671F;&#x3001;&#x30B9;&#x30C6;&#x30C3;&#x30D7;&#x3067;&#x5916;&#x50B7;&#x6027;&#x3068;&#x4E2D;&#x67A2;&#x795E;&#x7D4C;&#x7CFB;&#x306E;&#x5909;&#x6027;&#x75BE;&#x60A3;&#x3002;&#x6211;&#x3005; &#x306F;&#x975E;&#x5E38;&#x306B;&#x521D;&#x671F;&#x306E;&#x30A4;&#x30D9;&#x30F3;&#x30C8;&#x3067;&#x3001;&#x30E9;&#x30C3;&#x30C8;&#x306E;&#x8996;&#x795E;&#x7D4C;&#x306E;&#x8EF8;&#x7D22;&#x5909;&#x6027;&#x3092;&#x7279;&#x5FB4;&#x4ED8;&#x3051;&#x308B;&#x30D1;&#x30E9;&#x30C0;&#x30A4;&#x30E0; &#x30A4;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B8;&#x30F3;&#x30B0; &#x30E6;&#x30CB;&#x30FC;&#x30AF;&#x306A; in vivo &#x843D;&#x5C04;&#x86CD;&#x5149;&#x8A2D;&#x7ACB;&#x3002;&#x5358;&#x4E00;&#x7DB2;&#x819C;&#x795E;&#x7D4C;&#x7BC0;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x8EF8;&#x7D22;&#x3092;&#x5229;&#x7528;&#x3057;&#x305F; dsRed &#x306E; AAV &#x5A92;&#x4ECB;&#x306E;&#x767A;&#x73FE;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x53EF;&#x8996;&#x5316;&#x3057;&#x305F;&#x3001;&#x3053;&#x306E; postlesional &#x306E;&#x6025;&#x6027;&#x306E;&#x8EF8;&#x7D22;&#x5909;&#x6027; (AAD) &#x306E;&#x5B9A;&#x91CF;&#x5316;&#x3092;&#x8A31;&#x53EF;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;EM &#x89E3;&#x6790;&#x3001;&#x7D30;&#x80DE;&#x9AA8;&#x683C;&#x3001;&#x30A6;&#x30A7;&#x30FC;&#x30B2;&#x30CA;&#x30FC;&#x306E;&#x7A7A;&#x80DE;&#x5909;&#x6027;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x30AA;&#x30FC;&#x30C8;&#x30D5;&#x30A1;&#x30B4;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x306E;&#x5916;&#x89B3;&#x75C5;&#x5909;&#x5F8C;&#x6700;&#x521D;&#x6642;&#x9593;&#x4EE5;&#x5185;&#x306E;&#x6DF1;&#x523B;&#x306A;&#x69CB;&#x9020;&#x5909;&#x5316;&#x3092;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x3002;&#x30AA;&#x30FC;&#x30C8;&#x30D5;&#x30A1;&#x30B8;&#x30FC;&#x306E;&#x963B;&#x5BB3;&#x306F;&#x6025;&#x6027;&#x306E;&#x8EF8;&#x7D22;&#x5909;&#x6027;&#x306E;&#x6E1B;&#x8870;&#x306B;&#x8D77;&#x56E0;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x3001;&#x6B21;&#x306E;&#x3068;&#x304D;&#x3081;&#x304D;&#x75C5;&#x5909; intraaxonal &#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;&#x6FC3;&#x5EA6;&#x306E;&#x6025;&#x6FC0;&#x306A;&#x5897;&#x52A0;&#x306F;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;&#x611F;&#x53D7;&#x6027;&#x8272;&#x7D20;&#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x305F;&#x53EF;&#x8996;&#x5316;&#x3067;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x30A2;&#x30D7;&#x30EA;&#x30B1;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3; &#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0; &#x30A4;&#x30AA;&#x30CE;&#x30D5;&#x30A9;&#x30A2;&#x306E;&#x9000;&#x884C;&#x6027;&#x306E;&#x8868;&#x73FE;&#x578B;&#x60AA;&#x5316;&#x306B;&#x5BFE;&#x3057;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0; &#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x963B;&#x5BB3;&#x5264;&#x306E;&#x30A2;&#x30D7;&#x30EA;&#x30B1;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3; &#x30AF;&#x30E9;&#x30C3;&#x30B7;&#x30E5;&#x8A98;&#x767A;&#x6027;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;&#x306E;&#x5897;&#x52A0;&#x3068;&#x8457;&#x3057;&#x304F;&#x6E1B;&#x8870;&#x306E;&#x8EF8;&#x7D22;&#x5909;&#x6027;&#x3092;&#x9632;&#x3050;&#x3002;&#x6211;&#x3005; &#x306F;&#x6700;&#x7D42;&#x7684;&#x306B;&#x5897;&#x52A0; postlesional &#x30AA;&#x30FC;&#x30C8;&#x30D5;&#x30A1;&#x30B8;&#x30FC; &#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;&#x4F9D;&#x5B58;&#x3067;&#x3042;&#x308A;&#x3001;&#x3057;&#x305F;&#x304C;&#x3063;&#x3066;&#x6A5F;&#x68B0;&#x8AD6;&#x7684;&#x30AA;&#x30FC;&#x30C8;&#x30D5;&#x30A1;&#x30B8;&#x30FC;&#x3068; intraaxonal &#x306E;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0; &#x30EC;&#x30D9;&#x30EB; &#x30EA;&#x30F3;&#x30AF;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x4E21;&#x65B9;&#x306E;&#x30D7;&#x30ED;&#x30BB;&#x30B9;&#x306F;&#x3001;&#x5C06;&#x6765;&#x306E;&#x6CBB;&#x7642;&#x8A2D;&#x5B9A;&#x306E;&#x8EF8;&#x7D22;&#x5909;&#x6027;&#x306E;&#x64CD;&#x4F5C;&#x306E;&#x4E3B;&#x8981;&#x306A;&#x30BF;&#x30FC;&#x30B2;&#x30C3;&#x30C8;&#x306B;&#x63D0;&#x6848;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;.

In vivo &#x3067;&#x306E;&#x5149;&#x30D5;&#x30A1;&#x30A4;&#x30D0;&#x30FC;&#x795E;&#x7D4C;&#x306E;&#x6025;&#x6027;&#x306E;&#x8EF8;&#x7D22;&#x5909;&#x6027;&#x306E;&#x30E1;&#x30AB;&#x30CB;&#x30BA;&#x30E0;&#x3002;

Axonal &#xBCC0;&#xC131;&#xC740; &#xC678;&#xC0C1;&#xC758; &#xCD08;&#xAE30; &#xC8FC;&#xC694; &#xB2E8;&#xACC4; &#xBC0F; &#xC2E0;&#xACBD; &#xD1F4;&#xD589; &#xC131; CNS &#xBB34;&#xC9C8;&#xC11C;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; &#xC124;&#xB9BD; &#xB3C5;&#xD2B9;&#xD55C; vivo&#xC5D0;&#xC11C; epifluorescence &#xC774;&#xBBF8;&#xC9D5; &#xD328;&#xB7EC;&#xB2E4;&#xC784; axonal &#xBCC0;&#xC131; &#xC950; &#xC2DC; &#xC2E0;&#xACBD;&#xC5D0; &#xC544;&#xC8FC; &#xCD08;&#xAE30; &#xC774;&#xBCA4;&#xD2B8;&#xB97C; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0C5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB2E8;&#xC77C; &#xB9DD;&#xB9C9; &#xC2E0;&#xACBD; &#xC808; &#xC138;&#xD3EC; &#xCD95; &#xC0AD; Dsred&#xC758; &#xC2DD; AAV &#xC911;&#xC7AC;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC2DC;&#xAC01; &#xD588;&#xB2E4; &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0;&#xC774; postlesional &#xAE09;&#xC131; axonal &#xBCC0;&#xC131; (AAD)&#xC758; &#xC815;&#xB7C9;&#xD654;&#xB97C; &#xD5C8;&#xC6A9;. EM &#xBD84;&#xC11D; &#xACF5;&#xAC1C;&#xB294; cytoskeleton, cytoplasmatic vacuolization, autophagosomes&#xC758; &#xBAA8;&#xC591; &#xBCD1; &#xBCC0; &#xD6C4; &#xCCAB; &#xBC88;&#xC9F8; &#xC2DC;&#xAC04; &#xB0B4;&#xC758; &#xC2EC;&#xAC01;&#xD55C; &#xAD6C;&#xC870; &#xBCC0;&#xACBD;. Autophagy&#xC758; &#xC800;&#xD574; &#xAE09;&#xC131; axonal &#xBCC0;&#xC131;&#xC758; &#xAC10;&#xC1C4; &#xADC0;&#xCC29;&#xB418; &#xC5C8; &#xB2E4;. &#xB610;&#xD55C;, &#xD638;&#xAC10; &#xBCD1; &#xBCC0; &#xB2E4;&#xC74C; intraaxonal &#xCE7C;&#xC298; &#xB808;&#xBCA8;&#xC758; &#xAE09;&#xC18D; &#xD55C; &#xC99D;&#xAC00; &#xCE7C;&#xC298;&#xC5D0; &#xBBFC;&#xAC10;&#xD55C; &#xC5FC;&#xB8CC;&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xC2DC;&#xAC01; &#xB420; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xBC18;&#xBA74; &#xCE7C;&#xC298; ionophore &#xC751;&#xC6A9; &#xC545;&#xD654; &#xD1F4;&#xD589; &#xC131; &#xD615; &#xCE7C;&#xC298; &#xCC44;&#xB110; &#xC800; &#xD574;&#xC81C;&#xC758; &#xC751;&#xC6A9; &#xD638;&#xAC10;&#xC744; &#xC774;&#xC6A9;&#xD55C; &#xCE7C;&#xC298; &#xC99D;&#xAC00; &#xD604;&#xC800; &#xD558; &#xAC8C; &#xAC10;&#xC1E0; axonal &#xBCC0;&#xC131; &#xC218; &#xC5C6;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB9C8;&#xC9C0;&#xB9C9;&#xC73C;&#xB85C; &#xADF8; &#xC99D;&#xAC00; postlesional autophagy &#xC885;&#xC18D; &#xCE7C;&#xC298; &#xC774;&#xBA70; &#xB530;&#xB77C;&#xC11C; mechanistically &#xB9C1;&#xD06C; autophagy&#xC640; intraaxonal &#xCE7C;&#xC298; &#xC218;&#xC900;&#xC744; &#xBCF4;&#xC5EC; &#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB450; &#xD504;&#xB85C;&#xC138;&#xC2A4;&#xB294; &#xBBF8;&#xB798; &#xCE58;&#xB8CC; &#xC124;&#xC815; axonal &#xBCC0;&#xC131;&#xC758; &#xC870;&#xC791;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC8FC;&#xC694; &#xBAA9;&#xD45C;&#xB97C; &#xC81C;&#xC2DC; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xAE09;&#xC131; axonal &#xBCC0;&#xC131; vivo&#xC5D0;&#xC11C; &#xC2DC; &#xC2E0;&#xACBD;&#xC758; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;.

La degeneraci&oacute;n axonal es un primer paso clave en la traum&aacute;tica y trastornos neurodegenerativos CNS. Establecimos un &uacute;nico epifluorescencia en vivo im&aacute;genes de paradigma para caracterizar acontecimientos muy tempranos en la degeneraci&oacute;n axonal en el nervio &oacute;ptico de rata. Axones de c&eacute;lulas ganglionares de la retina solo fueron visualizados por la expresi&oacute;n mediada por AAV de dsRed y esto permiti&oacute; la cuantificaci&oacute;n de la degeneraci&oacute;n axonal aguda postlesional (AAD). EM el an&aacute;lisis revel&oacute; graves alteraciones estructurales del citoesqueleto, vacuolizaci&oacute;n citoplasm&aacute;tica y la aparici&oacute;n de autophagosomes en las primeras horas despu&eacute;s de la lesi&oacute;n. Inhibici&oacute;n de la autofagia dio lugar a una atenuaci&oacute;n de la degeneraci&oacute;n axonal aguda. Adem&aacute;s, un r&aacute;pido incremento de los niveles de calcio intraaxonal tras la lesi&oacute;n de aplastamiento podr&iacute;a visualizarse utilizando un medio de contraste sensible al calcio. Aplicaci&oacute;n de inhibidores de canales de calcio impidi&oacute; aumento de calcio inducida por aplastamiento y degeneraci&oacute;n axonal marcadamente atenuada, Considerando que la aplicaci&oacute;n de un ion&oacute;foro de calcio agrava el fenotipo degenerativo. Finalmente, demostramos ese aumentada postlesional autofagia es dependiente de calcio y as&iacute; mecan&iacute;sticamente vincular los niveles de calcio de autofagia y intraaxonal. Ambos procesos se proponen objetivos principales para la manipulaci&oacute;n de la degeneraci&oacute;n axonal en futuras opciones terap&eacute;uticas.

Mecanismos de la degeneraci&oacute;n axonal aguda en el nervio &oacute;ptico en vivo.

&#x5F25;&#x6F2B;&#x6027;&#x8F74;&#x7D22;&#x53D8;&#x6027;&#x662F;&#x8BB8;&#x591A;&#x521B;&#x4F24;&#x7684;&#x75C5;&#x7406;&#x7279;&#x70B9;&#x53CA;&#x795E;&#x7ECF;&#x9000;&#x884C;&#x6027;&#x795E;&#x7ECF;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x75BE;&#x75C5;&#x3002;&#x5C3D;&#x7BA1;&#x5E95;&#x5C42;&#x7684;&#x673A;&#x5236;&#x4ECD;&#x7136;&#x5B58;&#x5728;&#x5F88;&#x5927;&#x7A0B;&#x5EA6;&#x4E0A;&#x4E0D;&#x6E05;&#x695A;&#xFF0C;&#x589E;&#x52A0;&#x81EA;&#x566C;&#x548C;&#x80DE;&#x5916;&#x9499;&#x79BB;&#x5B50;&#x5927;&#x91CF;&#x6D8C;&#x5165;&#x6709;&#x7275;&#x8FDE;&#x57FA;&#x4E8E;&#x4F53;&#x5916;&#x6570;&#x636E;&#x7684;&#x5F25;&#x6F2B;&#x6027;&#x8F74;&#x7D22;&#x53D8;&#x6027;&#x7684;&#x53D1;&#x75C5;&#x673A;&#x5236;&#x3002;&#x4F7F;&#x7528;&#x6D3B;&#x4F53;&#x6210;&#x50CF;&#x7684;&#x5927;&#x9F20;&#x89C6;&#x795E;&#x7ECF;&#x635F;&#x4F24;&#x540E;&#x6324;&#x538B;&#x75C5;&#x53D8;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x73B0;&#x5728;&#x65E0;&#x6CD5;&#x663E;&#x793A;&#x8FD9;&#x4E24;&#x79CD;&#x673A;&#x5236;&#x76F8;&#x8FDE;&#xFF0C;&#x5E76;&#x5728;&#x4F53;&#x5185;&#x7684;&#x6025;&#x6027;&#x5F25;&#x6F2B;&#x6027;&#x8F74;&#x7D22;&#x53D8;&#x6027;&#x4E2D;&#x53D1;&#x6325;&#x7740;&#x91CD;&#x8981;&#x7684;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x6570;&#x636E;&#x8868;&#x660E;&#xFF0C;&#x7C89;&#x788E;&#x7684;&#x89C6;&#x795E;&#x7ECF;&#x75C5;&#x53D8;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x6D8C;&#x5165;&#x5FEB;&#x901F;&#x9499;&#x9499;&#x901A;&#x9053;&#xFF0C;&#x901A;&#x8FC7;&#x79EF;&#x6781;&#x53C2;&#x4E0E;&#x5728;&#x5F25;&#x6F2B;&#x6027;&#x8F74;&#x7D22;&#x9000;&#x5316;&#x7684;&#x81EA;&#x566C;&#x8F85;&#x52A9;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x7684;&#x7ED3;&#x679C;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E24;&#x4E2A;&#x4E8B;&#x4EF6;&#x7684;&#x6CBB;&#x7597;&#x624B;&#x6CD5;&#x53EF;&#x4EE5;&#x5927;&#x5927;&#x6539;&#x53D8;&#x4F53;&#x5185;&#x7684;&#x6025;&#x6027;&#x5F25;&#x6F2B;&#x6027;&#x8F74;&#x7D22;&#x53D8;&#x6027;&#x7684;&#x65F6;&#x95F4;&#x8FDB;&#x7A0B;&#x548C;&#x53EF;&#x80FD;&#x56E0;&#x6B64;&#x4EE3;&#x8868;&#x672A;&#x6765;&#x6709;&#x524D;&#x9014;&#x7684;&#x6CBB;&#x7597;&#x9776;&#x70B9;&#x3002;

&#x6025;&#x6027;&#x5F25;&#x6F2B;&#x6027;&#x8F74;&#x7D22;&#x53D8;&#x6027;&#x4F53;&#x5185;&#x662F;&#x4EE5;&#x9499;&#x4F9D;&#x8D56;&#x7684;&#x65B9;&#x5F0F;&#x5F31;&#x6BD2;&#x75AB;&#x82D7;&#x7684;&#x81EA;&#x566C;&#x7684;&#x6291;&#x5236;&#x3002;

Axonal degeneration is a pathological hallmark of many traumatic and neurodegenerative neurological disorders. Although the underlying mechanisms remain largely unclear, increased autophagy and the influx of extracellular calcium have been implicated in the pathogenesis of axonal degeneration based on in vitro data. Using in vivo imaging of the rat optic nerve after crush lesion we could now show that both mechanisms are linked and play an important role in acute axonal degeneration in vivo. Our data suggest that crush lesion of the optic nerve induces a rapid calcium influx through calcium channels, which results in a secondary induction of autophagy that participates actively in axonal degradation. Therapeutic manipulation of both events could significantly alter the time course of acute axonal degeneration in vivo and may thus represent promising therapeutic targets for the future.

Acute axonal degeneration in vivo is attenuated by inhibition of autophagy in a calcium-dependent manner.

D&eacute;g&eacute;n&eacute;rescence axonale est une caract&eacute;ristique pathologique d&#39;un grand nombre de traumatismes et troubles neurologiques neurod&eacute;g&eacute;n&eacute;ratifs. Bien que les m&eacute;canismes sous-jacents demeurent largement obscures, autophagie accrue et l&#39;influx de calcium extracellulaire ont &eacute;t&eacute; impliqu&eacute;s dans la pathogen&egrave;se de la d&eacute;g&eacute;n&eacute;rescence axonale issue des donn&eacute;es in vitro. &Agrave; l&#39;aide d&#39;imagerie in vivo du nerf optique rat apr&egrave;s l&eacute;sion &eacute;craser, que nous avons pu montrer maintenant que les deux m&eacute;canismes sont li&eacute;s et jouent un r&ocirc;le important dans la d&eacute;g&eacute;n&eacute;rescence axonale aigu&euml; in vivo. Nos donn&eacute;es sugg&egrave;rent qui &eacute;crasent la l&eacute;sion du nerf optique induit un influx de calcium rapide par le biais de canaux calciques, qui se traduit par une induction secondaire de l&#39;autophagie qui participe activement &agrave; la d&eacute;gradation de l&#39;axone. Des manipulations th&eacute;rapeutiques de ces deux &eacute;v&eacute;nements pourraient modifier sensiblement l&#39;&eacute;volution temporelle de la d&eacute;g&eacute;n&eacute;rescence axonale aigu&euml; in vivo et peuvent ainsi repr&eacute;senter des cibles th&eacute;rapeutiques prometteuses pour l&#39;avenir.

La d&eacute;g&eacute;n&eacute;rescence axonale aigu&euml; in vivo est att&eacute;nu&eacute;e par l&#39;inhibition de l&#39;autophagie de fa&ccedil;on d&eacute;pendante du calcium.

Axonale Degeneration ist ein pathologisches Merkmal vieler traumatische und Neurodegenerative neurologische Erkrankungen. Obwohl die zugrunde liegenden Mechanismen weitgehend unklar bleiben, haben erh&ouml;hte Autophagy und der Zustrom von extrazellul&auml;ren Calcium in der Pathogenese der axonalen Degeneration basierend auf in-vitro-Daten verwickelt war. Mithilfe von in-vivo Bildgebung Sehnerv Ratte nach Zerstampfung L&auml;sion, die wir jetzt zeigen konnten, dass beide Mechanismen miteinander verbunden sind und eine wichtige Rolle in akute axonale Degeneration in-vivo spielen. Unsere Daten zeigen, dass Gedr&auml;nge L&auml;sion der Sehnerv induziert einen raschen Kalzium-Zufluss durch Kalzium-Kan&auml;le, die Ergebnisse in eine sekund&auml;re Induktion von Autophagy die axonale Sch&auml;digung aktiv teil. Therapeutischen Manipulation der beiden Ereignisse k&ouml;nnten erheblich ver&auml;ndern den zeitlichen Verlauf der akute axonale Degeneration in-vivo und kann somit viel versprechende therapeutische Ziele f&uuml;r die Zukunft darstellen.

Akute axonale Degeneration in-vivo ist durch Hemmung der Autophagy Kalzium-abh&auml;ngigen Weise abgeschw&auml;cht.

Degenerazione assonale &egrave; un marchio di garanzia patologico di molti traumatiche e neurologiche malattie neurodegenerative. Anche se i meccanismi sottostanti rimangono in gran parte poco chiari, aumento autophagy e l&#39;afflusso di calcio extracellulare sono stati implicati nella patogenesi della degenerazione assonale, sulla base dei dati in vitro. Utilizzo di imaging in vivo del nervo ottico ratto dopo lesione schiacci che noi potremmo ora mostrano che entrambi i meccanismi sono collegati e giocano un ruolo importante nella degenerazione assonale acuta in vivo. I nostri dati suggeriscono che schiacci un afflusso rapido calcio attraverso i canali di calcio, che si traduce in un&#39;induzione secondaria di autophagy che partecipa attivamente alla degradazione assonale induce la lesione del nervo ottico. Manipolazione terapeutica di entrambi gli eventi poteva alterare in modo significativo il decorso della degenerazione assonale acuta in vivo e quindi possa rappresentare bersagli terapeutici promettenti per il futuro.

Degenerazione assonale acuta in vivo &egrave; attenuata dall&#39;inibizione di autophagy in maniera calcio-dipendente.

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Axonal &#xBCC0;&#xC131;&#xC740; &#xB9CE;&#xC740; &#xC678;&#xC0C1;&#xC758; &#xBCD1; &#xC801;&#xC778; &#xD2B9;&#xC9D5; &#xBC0F; &#xC2E0;&#xACBD; &#xD1F4;&#xD589; &#xC131; &#xC2E0;&#xACBD; &#xC9C8;&#xD658;. &#xAE30;&#xBCF8; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998; &#xB300;&#xBD80;&#xBD84; &#xBD88;&#xBD84;&#xBA85; &#xB0A8;&#xC544; &#xC788;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xC99D;&#xAC00; autophagy&#xC640; &#xC138;&#xD3EC; &#xC678; &#xCE7C;&#xC298;&#xC758; &#xC720;&#xC785;&#xC744; axonal &#xBCC0;&#xC131; &#xCCB4; &#xC678; &#xB370;&#xC774;&#xD130;&#xB97C; &#xAE30;&#xBC18;&#xC73C;&#xB85C; &#xBCD1; &#xC778;&#xC5D0; &#xC5F0;&#xB8E8; &#xB418;&#xC5B4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; &#xC9C0;&#xAE08; &#xB450; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998; &#xBAA8;&#xB450; &#xC5F0;&#xACB0; &#xB418; &#xACE0; &#xAE09;&#xC131; axonal &#xBCC0;&#xC131; &#xC0DD;&#xCCB4; &#xC870;&#xAC74;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC904; &#xC218; &#xC788;&#xB294; &#xD638;&#xAC10; &#xBCD1; &#xBCC0; &#xD6C4; &#xC950; &#xC2DC; &#xC2E0;&#xACBD;&#xC758; in vivo &#xC601;&#xC0C1;&#xC5D0; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC;. &#xADF8; &#xD638;&#xAC10;&#xC744; &#xC81C;&#xC548; &#xD558;&#xB294; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xB370;&#xC774;&#xD130;&#xC758; &#xC2DC; &#xC2E0;&#xACBD; &#xBCD1; &#xBCC0; &#xC720;&#xB3C4; autophagy axonal &#xC800;&#xD558;&#xC5D0; &#xC801;&#xADF9;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xCC38;&#xC5EC; &#xD558;&#xB294;&#xC758; 2 &#xCC28; &#xC720;&#xB3C4; &#xADC0;&#xCC29;&#xB418;&#xB294; &#xCE7C;&#xC298; &#xCC44;&#xB110;&#xC744; &#xD1B5;&#xD574; &#xC2E0;&#xC18D; &#xD558; &#xAC8C; &#xCE7C;&#xC298; &#xC720;&#xC785;. &#xB450; &#xC774;&#xBCA4;&#xD2B8;&#xC758; &#xCE58;&#xB8CC; &#xC801; &#xC870;&#xC791; &#xD06C;&#xAC8C; &#xAE09;&#xC131; axonal &#xBCC0;&#xC131; vivo&#xC5D0;&#xC11C; &#xC2DC;&#xAC04; &#xACFC;&#xC815;&#xC744; &#xBCC0;&#xACBD;&#xD560; &#xC218; &#xBC0F; &#xB530;&#xB77C;&#xC11C; &#xBBF8;&#xB798;&#xB97C; &#xC704;&#xD55C; &#xC720;&#xB9DD;&#xD55C; &#xCE58;&#xB8CC; &#xD45C;&#xC801;&#xC744; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0BC; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xAE09;&#xC131; axonal &#xBCC0;&#xC131; vivo&#xC5D0;&#xC11C; &#xCE7C;&#xC298;-&#xC758;&#xC874; &#xBC29;&#xC2DD;&#xC5D0;&#xC11C; autophagy&#xC758; &#xC800;&#xD574;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xAC10;&#xC1E0; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;.

La degeneraci&oacute;n axonal es un sello patol&oacute;gico de muchos traum&aacute;tica y trastornos neurol&oacute;gicos neurodegenerativas. Aunque los mecanismos subyacentes siguen siendo en gran parte confusos, aumentada de la autofagia y el influjo de calcio extracelular han sido implicados en la patogenia de la degeneraci&oacute;n axonal basada en datos in vitro. Uso de imagen in vivo del nervio &oacute;ptico rata despu&eacute;s de lesi&oacute;n del agolpamiento que ahora podr&iacute;amos demostramos que ambos mecanismos est&aacute;n vinculados y juegan un papel importante en la degeneraci&oacute;n axonal aguda en vivo. Nuestros datos sugieren que aplastar una afluencia de calcio r&aacute;pido a trav&eacute;s de los canales de calcio, que se traduce en una inducci&oacute;n secundaria de la autofagia que participa activamente en la degradaci&oacute;n axonal induce la lesi&oacute;n del nervio &oacute;ptico. Manipulaci&oacute;n terap&eacute;utica de ambos eventos podr&iacute;a alterar significativamente el curso temporal de la degeneraci&oacute;n axonal aguda en vivo y as&iacute; puede representar dianas terap&eacute;uticas prometedoras para el futuro.

Degeneraci&oacute;n axonal aguda en vivo es atenuada por la inhibici&oacute;n de la autofagia en una forma dependiente de calcio.

&#x963B;&#x904F;&#x7269;&#x5143;&#x7D20; 1 &#x6C89;&#x9ED8;&#x8F6C;&#x5F55;&#x56E0;&#x5B50; (REST) &#x662F;&#x963B;&#x904F;&#x8F6C;&#x5F55;&#x7269;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x7279;&#x5F02;&#x6027;&#x57FA;&#x56E0;&#x7684;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x5230;&#x4E00;&#x4E2A;&#x4FDD;&#x5B88;&#x7684; DNA &#x5143;&#x7D20;&#xFF0C;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x9650;&#x5236;&#x6027;&#x6D88;&#x58F0;&#x5668;&#x5143;&#x7D20; &#xFF08;NRSE/RE1)&#x3002;&#x6709;&#x8DA3;&#x7684;&#x662F;&#xFF0C;&#x5728;&#x51E0;&#x79CD;&#x795E;&#x7ECF;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x75BE;&#x75C5;&#x5982;&#x4EA8;&#x5EF7;&#x987F;&#x6C0F;&#x821E;&#x8E48;&#x75C5;&#x548C;&#x7F3A;&#x8840;&#x6027;&#x8111;&#x635F;&#x4F24;&#x4E2D;&#x627E;&#x5230;&#x4F11;&#x606F;&#x6D3B;&#x52A8;&#x7684;&#x589E;&#x52A0;&#x3002;&#x6700;&#x8FD1;&#xFF0C;&#x5B83;&#x662F;&#x8868;&#x660E; NRSE dsRNA&#xFF0C;&#x53CC;&#x7EDE;&#x975E;&#x7F16;&#x7801; RNA &#x5728;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x5206;&#x5316;&#xFF0C;&#x5B9A;&#x4E49;&#x671F;&#x95F4;&#x53EF;&#x4EE5;&#x5C06;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x5230;&#x4F11;&#x606F;&#xFF0C;&#x4ECE;&#x800C;&#x66F4;&#x6539;&#x4ECE;&#x8F6C;&#x5F55;&#x963B;&#x904F;&#x7269;&#x7684;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x7279;&#x5F02;&#x6027;&#x57FA;&#x56E0;&#x6D3B;&#x5316;&#x5242;&#x5BF9;&#x4F11;&#x606F;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x5206;&#x6790;&#x4E86; NRSE dsRNA &#x8868;&#x8FBE;&#x5728;&#x539F;&#x53D1;&#x6027;&#x89C6;&#x7F51;&#x819C;&#x795E;&#x7ECF;&#x8282;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x5F71;&#x54CD;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x53D1;&#x73B0;&#x5373;&#x4F7F;&#x5728;&#x5F25;&#x6F2B;&#x6027;&#x8F74;&#x7D22;&#x53D8;&#x6027;&#x5F15;&#x8D77;&#x7684;&#x795E;&#x7ECF;&#x8425;&#x517B;&#x56E0;&#x5B50;&#x5265;&#x593A; NRSE dsRNA &#x8868;&#x8FBE;&#x8F7D;&#x4F53;&#x53EF;&#x4EE5;&#x5927;&#x5927;&#x63D0;&#x9AD8;&#x7A81;&#x8D77;&#x3002;&#x8F6C;&#x67D3;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E0E; NRSE dsRNA &#x8868;&#x793A;&#x5411;&#x91CF;&#x6539;&#x53D8;&#x5BFC;&#x81F4;&#x8584;&#x8FC7;&#x7A0B;&#x7684;&#x5F62;&#x6210;&#x53CA;&#x5176;&#x5F62;&#x6001;&#x548C;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x8868;&#x8FBE;&#x7684;&#x4E1D;-68&#x3002;&#x5947;&#x602A;&#x7684;&#x662F;&#xFF0C;&#x63A7;&#x5236;&#x5411;&#x91CF;&#x5305;&#x542B;&#x5176;&#x4F59;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x7684;&#x7AD9;&#x70B9;&#xFF0C;&#x4F46;&#x4E0D;&#x662F;&#x8868;&#x793A; NRSE dsRNA&#xFF0C;&#x9020;&#x6210;&#x540C;&#x6837;&#x7684;&#x540E;&#x679C;&#xFF0C;&#x4E5F;&#x5728;&#x89C6;&#x7F51;&#x819C;&#x795E;&#x7ECF;&#x8282;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6A21;&#x578B;&#x3002;&#x8BB0;&#x8005;&#x5316;&#x9A8C;&#x548C;&#x6807;&#x8BB0; NRSE RE1 &#x542B;&#x8D28;&#x4E0D;&#x80FD;&#x8FDB;&#x5165;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6838;&#x4E0E;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8D28;&#x4E2D;&#x7684;&#x5176;&#x4F59;&#x90E8;&#x5206;&#x4FDD;&#x7559;&#x8868;&#x660E;&#x87AF;&#x5408;&#x7684;&#x5176;&#x4F59;&#x90E8;&#x5206;&#x5728;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8D28;&#x4E2D;&#x89C2;&#x5BDF;&#x5230;&#x7684;&#x5F71;&#x54CD;&#x7684;&#x539F;&#x56E0;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x6A21;&#x578B;&#x4E2D;&#x627E; NRSE dsRNA &#x7684;&#x751F;&#x7269;&#x5B66;&#x529F;&#x80FD;&#x6CA1;&#x6709;&#x8BC1;&#x636E;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x5F97;&#x51FA;&#x7684;&#x7ED3;&#x8BBA;&#x87AF;&#x5408;&#x7684;&#x5176;&#x4F59;&#x90E8;&#x5206;&#x4F1A;&#x5BFC;&#x81F4;&#x89C6;&#x7F51;&#x819C;&#x795E;&#x7ECF;&#x8282;&#x7EC6;&#x80DE;&#x589E;&#x5F3A;&#x7684;&#x7A81;&#x8D77;&#x548C;&#x6D3B;&#x52A8;&#x589E;&#x52A0;&#x7684;&#x5176;&#x4F59;&#x90E8;&#x5206;&#xFF0C;&#x53D1;&#x73B0;&#x4E2D;&#x51E0;&#x79CD;&#x795E;&#x7ECF;&#x9000;&#x884C;&#x6027;&#x75BE;&#x75C5;&#xFF0C;&#x53EF;&#x4EE5;&#x88AB;&#x6709;&#x6548;&#x5730;&#x8C03;&#x5236;&#x7684;&#x87AF;&#x5408;&#x7684;&#x5176;&#x4F59;&#x90E8;&#x5206;&#x4E0E;&#x8D28;&#x7C92;&#x542B; NRSE/RE1 &#x7AD9;&#x70B9;&#x3002;

&#x8D28;&#x7C92;&#x542B; NRSE/RE1 &#x7F51;&#x7AD9;&#x52A0;&#x5F3A;&#x901A;&#x8FC7;&#x87AF;&#x5408;&#x7684;&#x5176;&#x4F59;&#x90E8;&#x5206;&#x72EC;&#x7ACB; NRSE dsRNA &#x8868;&#x8FBE;&#x5F0F;&#x7684;&#x89C6;&#x7F51;&#x819C;&#x795E;&#x7ECF;&#x8282;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x8F74;&#x7A81;&#x3002;

Repressor element-1 silencing transcription factor (REST) is a transcriptional repressor of neuron-specific genes that binds to a conserved DNA element, the neuron restrictive silencer element (NRSE/RE1). Interestingly, increased REST activity is found in several neurological diseases like Huntington's disease and cerebral ischemia. Recently, it was shown that NRSE dsRNA, a double-stranded non-coding RNA can bind to REST during a defined period of neuronal differentiation, and thereby changes REST from a transcriptional repressor to an activator of neuron-specific genes. Here, we analyzed the effects of NRSE dsRNA expression in primary retinal ganglion cells. We found that NRSE dsRNA expression vectors significantly enhance neurite outgrowth even when axonal degeneration is induced by neurotrophin deprivation. Transfection of HEK cells with NRSE dsRNA-expressing vectors altered their morphology leading to the formation of thin processes and induced the expression of neurofilament-68. Surprisingly, control vectors containing REST-binding sites, but not expressing NRSE dsRNA, resulted in the same effects, also in the retinal ganglion cell model. Reporter assays and retention of REST in the cytoplasm with a labeled NRSE/RE1-containing plasmid incapable of entering the nucleus suggest that sequestration of REST in the cytoplasm is the reason for the observed effects. No evidence for a biological function of NRSE dsRNA could be found in these models. We conclude that sequestration of REST leads to enhanced neurite outgrowth in retinal ganglion cells and that an increased activity of REST, as it is found in several neurodegenerative diseases, can be effectively modulated by sequestration of REST with plasmids containing NRSE/RE1 sites.

Plasmids containing NRSE/RE1 sites enhance neurite outgrowth of retinal ganglion cells via sequestration of REST independent of NRSE dsRNA expression.

Facteur de transcription silencieux r&eacute;presseur &eacute;l&eacute;ment-1 (repos) est un r&eacute;presseur transcriptionnel de g&egrave;nes sp&eacute;cifiques aux neurones qui se lie &agrave; un &eacute;l&eacute;ment d&#39;ADN conserv&eacute;, l&#39;&eacute;l&eacute;ment restrictif silencieux de neurone (NRSE/RE1). Fait int&eacute;ressant, augmentation de l&#39;activit&eacute; reste se trouve dans plusieurs maladies neurologiques comme la maladie de Huntington et isch&eacute;mie c&eacute;r&eacute;brale. R&eacute;cemment, il a d&eacute;montr&eacute; que NRSE dsRNA, un ARN double-brin de non-codage pouvez lier au repos pendant une p&eacute;riode d&eacute;finie de la diff&eacute;renciation neuronale et ainsi les changements reposent d&#39;un r&eacute;presseur transcriptionnel &agrave; un activateur de g&egrave;nes sp&eacute;cifiques aux neurones. Ici, nous avons analys&eacute; les effets de l&#39;expression de dsRNA NRSE dans les cellules ganglionnaires r&eacute;tiniennes primaires. Nous avons trouv&eacute; que vecteurs d&#39;expression NRSE dsRNA am&eacute;liorent consid&eacute;rablement la croissance des neurites m&ecirc;me quand la d&eacute;g&eacute;n&eacute;rescence axonale est induite par la privation de la neurotrophine. Transfection des cellules HEK avec des vecteurs exprimant l&#39;ARNdb NRSE alt&eacute;r&eacute; leur morphologie conduisant &agrave; la formation des processus minces et induit l&#39;expression de neurofilament-68. &Eacute;tonnamment, contr&ocirc;ler les vecteurs contenant les sites de liaison du reste, mais n&#39;expriment ne pas de dsRNA NRSE, a entra&icirc;n&eacute; les m&ecirc;mes effets, &eacute;galement dans le mod&egrave;le de cellules ganglionnaires r&eacute;tiniennes. Dosages de journaliste et de r&eacute;tention de repos dans le cytoplasme avec un plasmide contenant NRSE/RE1 &eacute;tiquet&eacute; incapable de p&eacute;n&eacute;trer dans le noyau sugg&egrave;rent que la s&eacute;questration du reste dans le cytoplasme est la raison pour les effets observ&eacute;s. Aucun &eacute;l&eacute;ment de preuve pour une fonction biologique d&#39;ARNdb NRSE ne figuraient dans ces mod&egrave;les. Nous concluons que s&eacute;questration du reste m&egrave;ne &agrave; la croissance des neurites accrue dans les cellules ganglionnaires r&eacute;tiniennes et qu&#39;une activit&eacute; accrue de repos, que l&#39;on retrouve dans plusieurs maladies neurod&eacute;g&eacute;n&eacute;ratives, peut &ecirc;tre efficacement modul&eacute;e par s&eacute;questration de repos avec des plasmides contenant des sites NRSE/RE1.

Plasmides contenant des sites NRSE/RE1 am&eacute;liorent la croissance des neurites des cellules ganglionnaires r&eacute;tiniennes par s&eacute;questration du reste ind&eacute;pendant d&#39;expression dsRNA NRSE.

Verdr&auml;nger-Element-1 silencing &Uuml;bertragungfaktor (REST) ist ein transkriptionelle Verdr&auml;nger Neuron-spezifische Gene, die an eine konservierte DNA-Element, das Neuron restriktive Schalld&auml;mpfer Element (NRSE/RE1) bindet. Interessanterweise findet man erh&ouml;hter REST-Aktivit&auml;t in verschiedenen neurologischen Erkrankungen wie Chorea Huntington und zerebrale Isch&auml;mie. Vor kurzem konnte gezeigt werden, dass NRSE sequenzspezifischen, eine doppelstr&auml;ngige non-coding RNA an REST, w&auml;hrend eines definierten Zeitraums neuronale Differenzierung binden kann und damit &Auml;nderungen aus ein transkriptionelle Verdr&auml;nger zu Aktivator Neuron-spezifische Gene ruhen. Hier analysierten wir die Auswirkungen der NRSE sequenzspezifischen Ausdruck im prim&auml;ren retinalen Ganglienzellen. Wir fanden, dass NRSE sequenzspezifischen Expressionsvektoren Neurit Auswuchs erheblich verbessern, auch wenn axonale Degeneration Neurotrophin Freiheitsstrafe induziert wird. HEK-Zellen mit NRSE sequenzspezifischen-Ausdruck Vektoren ver&auml;ndert ihre Morphologie, was zur Bildung von d&uuml;nnen Prozessen und induzierte Ausdruck Neurofilament-68. &Uuml;berraschenderweise steuern Sie Vektoren, die REST-Bindungsstellen enthalten, aber nicht ausdr&uuml;cken NRSE sequenzspezifischen, ergab die gleiche Wirkung, auch in der retinalen Ganglienzellen Zelle Modell. Reporter-Assays und Beibehaltung der REST im Zytoplasma mit einem beschrifteten NRSE/RE1-haltigen Plasmid nicht in der Lage des Eintretens des Kerns zufolge Sequestrierung der Erholung im Zytoplasma der Grund f&uuml;r die beobachteten Effekte ist. Keine Beweise f&uuml;r eine biologische Funktion des NRSE sequenzspezifischen konnte in diesen Modellen gefunden werden. Wir schlie&szlig;en, dass die Beschlagnahme von REST zu verst&auml;rkten Neurit Auswuchs in retinalen Ganglienzellen f&uuml;hrt und eine erh&ouml;hte Aktivit&auml;t der Erholung, wie in verschiedenen neurodegenerativen Krankheiten vorgefunden, effektiv durch Beschlagnahme von REST mit Plasmide mit NRSE/RE1 Websites moduliert werden kann.

Plasmide mit NRSE/RE1 Websites verbessern Neurit Auswuchs der retinalen Ganglienzellen &uuml;ber Beschlagnahme von REST unabh&auml;ngig von NRSE sequenzspezifischen Ausdruck.

Repressor element-1 silenziamento fattore di trascrizione (REST) &egrave; un repressore trascrizionale dei geni neurone-specifico che si lega a un elemento di DNA conservato, l&#39;elemento restrittivo silenziatore neurone (NRSE/RE1). &Egrave; interessante notare che, maggiore attivit&agrave; di riposo si trova in diverse malattie neurologiche come il morbo di Huntington e ischemia cerebrale. Recentemente, &egrave; stato dimostrato che NRSE dsRNA, un double-stranded RNA non codificanti pu&ograve; associare a riposo durante un periodo definito di differenziazione neuronale, e quindi modifiche riposano da un repressore trascrizionale di un attivatore di geni specifici del neurone. Qui, abbiamo analizzato gli effetti dell&#39;espressione dsRNA NRSE nelle cellule gangliari della retina primario. Abbiamo trovato che vettori di espressione di dsRNA NRSE migliorano in modo significativo dei neuriti escrescenza anche quando la degenerazione assonale &egrave; indotta dalla Neurotrofina privazione. Transfezione delle cellule HEK con vettori che esprimono dsRNA NRSE alterato la loro morfologia che porta alla formazione di processi sottili e indotta l&#39;espressione del neurofilamento-68. Sorprendentemente, controllo vettori contenenti siti di legame di riposo, ma non esprimere NRSE dsRNA, ha portato gli stessi effetti, anche nel modello delle cellule gangliari della retina. Dosaggi di reporter e ritenzione del resto nel citoplasma con un plasmide etichettato NRSE/RE1-contenenti incapace di entrare il nucleo suggeriscono che il sequestro del resto nel citoplasma &egrave; il motivo per cui gli effetti osservati. Nessuna prova di una funzione biologica del dsRNA NRSE potrebbe essere trovata in questi modelli. Concludiamo che il sequestro del resto porta a escrescenza avanzata dei neuriti in cellule gangliari della retina e che un aumento dell&#39;attivit&agrave; del resto, come si &egrave; trovato in diverse malattie neurodegenerative, pu&ograve; essere efficacemente modulato dal sequestro del resto con i plasmidi contenenti siti NRSE/RE1.

Plasmidi contenenti siti NRSE/RE1 migliorano escrescenza dei neuriti delle cellule gangliari della retina tramite sequestro del resto indipendente di espressione dsRNA NRSE.

&#x30EA;&#x30D7;&#x30EC;&#x30C3;&#x30B5;&#x30FC;&#x306E;&#x8981;&#x7D20; 1 &#x30B5;&#x30A4;&#x30EC;&#x30F3;&#x30B7;&#x30F3;&#x30B0;&#x306E;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30AF;&#x30EA;&#x30D7;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x8981;&#x56E0; (&#x6B8B;&#x308A;) &#x306B;&#x4FDD;&#x5B58;&#x3055;&#x308C;&#x305F; DNA &#x306E;&#x8981;&#x7D20;&#x30CB;&#x30E5;&#x30FC;&#x30ED;&#x30F3;&#x5236;&#x9650;&#x6D88;&#x97F3;&#x8981;&#x7D20; (NRSE/RE1) &#x306B;&#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C9;&#x3059;&#x308B;&#x8EE2;&#x5199;&#x30EA;&#x30D7;&#x30EC;&#x30C3;&#x30B5;&#x30FC; &#x30CB;&#x30E5;&#x30FC;&#x30ED;&#x30F3;&#x7279;&#x7570;&#x7684;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x8208;&#x5473;&#x6DF1;&#x3044;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3001;&#x6B8B;&#x308A;&#x306E;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D3;&#x30C6;&#x30A3;&#x306E;&#x5897;&#x52A0;&#x306F;&#x3001;&#x30CF;&#x30F3;&#x30C1;&#x30F3;&#x30C8;&#x30F3;&#x75C5;&#x3068;&#x8133;&#x865A;&#x8840;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306A;&#x3044;&#x304F;&#x3064;&#x304B;&#x306E;&#x795E;&#x7D4C;&#x75BE;&#x60A3;&#x3067;&#x767A;&#x898B;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6700;&#x8FD1;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x4E2D;&#x6027;&#x5B50;&#x5171;&#x9CF4;&#x30B9;&#x30D4;&#x30F3;&#x30A8;&#x30B3;&#x30FC; dsRNA &#x3057;&#x3066;&#x975E;&#x30B3;&#x30FC;&#x30C7;&#x30A3;&#x30F3;&#x30B0;&#x4E8C;&#x672C;&#x9396; RNA &#x306F;&#x795E;&#x7D4C;&#x5206;&#x5316;&#x306E;&#x5B9A;&#x7FA9;&#x671F;&#x9593;&#x4E2D;&#x306B;&#x6B8B;&#x308A;&#x306E;&#x90E8;&#x5206;&#x306B;&#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C9;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3001;&#x305D;&#x308C;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x5909;&#x66F4;&#x8EE2;&#x5199;&#x30EA;&#x30D7;&#x30EC;&#x30C3;&#x30B5;&#x30FC;&#x304B;&#x3089;&#x3001;&#x30CB;&#x30E5;&#x30FC;&#x30ED;&#x30F3;&#x7279;&#x7570;&#x7684;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x306B;&#x6B8B;&#x308A;&#x304C;&#x793A;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x30D7;&#x30E9;&#x30A4;&#x30DE;&#x30EA;&#x7DB2;&#x819C;&#x795E;&#x7D4C;&#x7BC0;&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x4E2D;&#x6027;&#x5B50;&#x5171;&#x9CF4;&#x30B9;&#x30D4;&#x30F3;&#x30A8;&#x30B3;&#x30FC; dsRNA &#x767A;&#x73FE;&#x306E;&#x52B9;&#x679C;&#x3092;&#x5206;&#x6790;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x6211;&#x3005; &#x306F;&#x3001;&#x4E2D;&#x6027;&#x5B50;&#x5171;&#x9CF4;&#x30B9;&#x30D4;&#x30F3;&#x30A8;&#x30B3;&#x30FC;&#x306E; dsRNA &#x306E;&#x8868;&#x73FE;&#x306E;&#x30D9;&#x30AF;&#x30C8;&#x30EB;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x3082;&#x8EF8;&#x7D22;&#x5909;&#x6027;&#x30CB;&#x30E5;&#x30FC;&#x30ED;&#x30C8;&#x30ED;&#x30D5;&#x30A3;&#x30F3;&#x5265;&#x596A;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x8A98;&#x5C0E;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x3068;&#x304D;&#x795E;&#x7D4C;&#x7A81;&#x8D77;&#x4F38;&#x9577;&#x304C;&#x5927;&#x5E45;&#x306B;&#x5F37;&#x5316;&#x3092;&#x767A;&#x898B;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x4E2D;&#x6027;&#x5B50;&#x5171;&#x9CF4;&#x30B9;&#x30D4;&#x30F3;&#x30A8;&#x30B3;&#x30FC; dsRNA &#x3092;&#x8868;&#x73FE;&#x3059;&#x308B;&#x30D9;&#x30AF;&#x30C8;&#x30EB;&#x3068; HEK &#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30D5;&#x30A7;&#x30AF;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x3068;&#x30CB;&#x30E5;&#x30FC;&#x30ED; &#x30D5;&#x30A3;&#x30E9;&#x30E1;&#x30F3;&#x30C8; 68 &#x306E;&#x767A;&#x73FE;&#x8A98;&#x5C0E;&#x8584;&#x819C;&#x30D7;&#x30ED;&#x30BB;&#x30B9;&#x306E;&#x5F62;&#x6210;&#x306B;&#x3064;&#x306A;&#x304C;&#x308B;&#x305D;&#x306E;&#x5F62;&#x614B;&#x3092;&#x5909;&#x66F4;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x9A5A;&#x3044;&#x305F;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3001;&#x6B8B;&#x308A;&#x306E;&#x7D50;&#x5408;&#x90E8;&#x4F4D;&#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x304C;&#x3001;&#x7DB2;&#x819C;&#x795E;&#x7D4C;&#x7BC0;&#x7D30;&#x80DE;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x306B;&#x3082;&#x3001;&#x540C;&#x3058;&#x52B9;&#x679C;&#x306B;&#x8D77;&#x56E0;&#x3057;&#x305F;&#x4E2D;&#x6027;&#x5B50;&#x5171;&#x9CF4;&#x30B9;&#x30D4;&#x30F3;&#x30A8;&#x30B3;&#x30FC; dsRNA &#x3092;&#x767A;&#x73FE;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x306A;&#x3044;&#x30D9;&#x30AF;&#x30C8;&#x30EB;&#x3092;&#x5236;&#x5FA1;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30EC;&#x30DD;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x306E;&#x8A66;&#x91D1;&#x3068;&#x6B8B;&#x308A;&#x306E;&#x4FDD;&#x6301;&#x30E9;&#x30D9;&#x30EB;&#x4ED8;&#x304D; NRSE/RE1 &#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x30D7;&#x30E9;&#x30B9;&#x30DF;&#x30C9;&#x306F;&#x6838;&#x306B;&#x5165;&#x308B;&#x306E;&#x7121;&#x80FD;&#x3068;&#x7D30;&#x80DE;&#x8CEA;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x8CEA;&#x4E2D;&#x306E;&#x6B8B;&#x308A;&#x306E;&#x90E8;&#x5206;&#x306E;&#x9694;&#x96E2;&#x3001;&#x89B3;&#x5BDF;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x5F71;&#x97FF;&#x306E;&#x7406;&#x7531;&#x304C;&#x793A;&#x5506;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x306E; NRSE dsRNA &#x306E;&#x751F;&#x7269;&#x5B66;&#x7684;&#x6A5F;&#x80FD;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x8A3C;&#x62E0;&#x304C;&#x898B;&#x3064;&#x304B;&#x308A;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3067;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x6211;&#x3005; &#x306F;&#x6B8B;&#x308A;&#x306E;&#x9694;&#x96E2;&#x304C;&#x5F37;&#x5316;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x795E;&#x7D4C;&#x7A81;&#x8D77;&#x4F38;&#x9577;&#x7DB2;&#x819C;&#x795E;&#x7D4C;&#x7BC0;&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x3064;&#x306A;&#x304C;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3001;&#x3044;&#x304F;&#x3064;&#x304B;&#x306E;&#x795E;&#x7D4C;&#x5909;&#x6027;&#x75BE;&#x60A3;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x304C;&#x898B;&#x3064;&#x304B;&#x308A;&#x3001;&#x5897;&#x52A0;&#x6D3B;&#x52D5;&#x3001;&#x6B8B;&#x308A;&#x306E;&#x52B9;&#x679C;&#x7684;&#x306B;&#x6B8B;&#x308A;&#x306E;&#x9694;&#x96E2;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066; NRSE/RE1 &#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x3092;&#x542B;&#x3093;&#x3067;&#x3044;&#x308B;&#x30D7;&#x30E9;&#x30B9;&#x30DF;&#x30C3;&#x30C9;&#x3092;&#x5909;&#x8ABF;&#x3067;&#x304D;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x7DE0;&#x7D50;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

NRSE/RE1 &#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x3092;&#x542B;&#x3093;&#x3067;&#x3044;&#x308B;&#x30D7;&#x30E9;&#x30B9;&#x30DF;&#x30C3;&#x30C9;&#x306E;&#x6B8B;&#x308A; NRSE dsRNA &#x5F0F;&#x306E;&#x72EC;&#x7ACB;&#x3057;&#x305F;&#x9694;&#x96E2;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x3066;&#x7DB2;&#x819C;&#x795E;&#x7D4C;&#x7BC0;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x795E;&#x7D4C;&#x7A81;&#x8D77;&#x4F38;&#x9577;&#x3092;&#x9AD8;&#x3081;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#xC9C4;&#xC555; &#xC694;&#xC18C; 1 silencing &#xB179;&#xC74C; &#xBC29;&#xC1A1; &#xC694;&#xC778; (&#xB098;&#xBA38;&#xC9C0;)&#xC740; &#xBCF4;&#xC874; DNA &#xC694;&#xC18C;, &#xC2E0;&#xACBD; &#xC81C;&#xD55C;&#xC801;&#xC778; &#xC18C;&#xC74C; &#xC694;&#xC18C; (NRSE/RE1)&#xB294; &#xC2E0;&#xACBD; &#xAD00;&#xB828; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC758; transcriptional &#xC9C4;&#xC555;. &#xD765;&#xBBF8;&#xB86D;&#xAC8C;&#xB3C4;, &#xB098;&#xBA38;&#xC9C0; &#xD65C;&#xB3D9; &#xC99D;&#xAC00; Huntington&#xC758; &#xC9C8;&#xBCD1;&#xACFC; &#xB300;&#xB1CC; &#xAD6D; &#xC18C; &#xBE48; &#xD608; &#xAC19;&#xC740; &#xC5EC;&#xB7EC; &#xC2E0;&#xACBD; &#xC9C8;&#xD658;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBC1C;&#xACAC; &#xB41C;&#xB2E4;. &#xCD5C;&#xADFC;&#xC5D0;, &#xADF8;&#xAC83; NRSE dsRNA &#xB354;&#xBE14;-&#xC88C;&#xCD08; &#xBE44; &#xCF54;&#xB529; RNA&#xB294; &#xC77C;&#xC815; &#xC2DC;&#xAC04; &#xB3D9;&#xC548; &#xC2E0;&#xACBD; &#xBD84;&#xD654; &#xD558;&#xB294; &#xB3D9;&#xC548; &#xB098;&#xBA38;&#xC9C0; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xACE0; &#xC2E0;&#xACBD; &#xAD00;&#xB828; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC758; &#xD65C;&#xC131;&#xC744; &#xBCC0;&#xD654; transcriptional &#xC9C4;&#xC555;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD734;&#xC2DD; &#xD558;&#xB294; &#xADF8;&#xB85C; &#xC778;&#xD558;&#xC5EC; &#xD45C;&#xC2DC; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC5EC;&#xAE30;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; &#xAE30;&#xBCF8; &#xB9DD;&#xB9C9; &#xC2E0;&#xACBD; &#xC808; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0;&#xC11C; NRSE dsRNA &#xD45C;&#xD604;&#xC758; &#xD6A8;&#xACFC; &#xBD84;&#xC11D;. &#xC6B0;&#xB9AC; axonal &#xBCC0;&#xC131; neurotrophin &#xBD80;&#xC871; &#xD558; &#xC5EC; &#xC720;&#xBC1C; &#xD558;&#xB294; &#xACBD;&#xC6B0;&#xC5D0; NRSE dsRNA &#xC2DD; &#xBCA1;&#xD130; &#xD06C;&#xAC8C; neurite &#xD30C;&#xC0DD;&#xBB3C;&#xC744; &#xD5A5;&#xC0C1; &#xBC1C;&#xACAC;. NRSE dsRNA &#xD45C;&#xD604; &#xBCA1;&#xD130;&#xC640; HEK &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; transfection &#xC587;&#xC740; &#xD504;&#xB85C;&#xC138;&#xC2A4;&#xC758; &#xD615;&#xC131;&#xC73C;&#xB85C; &#xC774;&#xC5B4;&#xC9C0;&#xB294; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC758; &#xD615;&#xD0DC;&#xB97C; &#xBCC0;&#xACBD; &#xD558; &#xACE0; neurofilament 68 &#xC2DD; &#xC720;&#xB3C4;. &#xB180;&#xB78D;&#xAC8C;&#xB3C4;, &#xB098;&#xBA38;&#xC9C0; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8;&#xB97C; &#xD3EC;&#xD568; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xC5C6;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; NRSE dsRNA, &#xADC0;&#xCC29;&#xB418; &#xC5C8; &#xB2E4; &#xB9DD;&#xB9C9; &#xC2E0;&#xACBD; &#xC808; &#xC138;&#xD3EC; &#xBAA8;&#xB378;&#xC5D0;&#xB3C4; &#xAC19;&#xC740; &#xD6A8;&#xACFC; &#xD45C;&#xD604; &#xD558;&#xB294; &#xBCA1;&#xD130; &#xC81C;&#xC5B4;. &#xAE30;&#xC790;&#xAC00; &#xBD84;&#xC11D; &#xC2E4;&#xD5D8;&#xACFC;&#xB294; &#xB808;&#xC774;&#xBE14;&#xC774; NRSE/RE1 &#xD3EC;&#xD568; &#xB41C; &#xD50C;&#xB77C;&#xC2A4; &#xC785;&#xB825; &#xD575; &#xB2A5;&#xB825;&#xC774; &#xAC00;&#xC9C4; &#xC138;&#xD3EC;&#xC9C8;&#xC5D0; &#xB098;&#xBA38;&#xC9C0;&#xC758; &#xBCF4;&#xC874;&#xC5D0;&#xB294; &#xC138;&#xD3EC;&#xC9C8;&#xC5D0; &#xB098;&#xBA38;&#xC9C0;&#xC758; &#xACA9;&#xB9AC; &#xAD00;&#xCC30; &#xB41C; &#xD6A8;&#xACFC; &#xB300; &#xD55C; &#xC774;&#xC720;&#xB294; &#xD558;&#xB294; &#xAC83;&#xC774; &#xC88B;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xBAA8;&#xB378;&#xC5D0;&#xC11C; NRSE Dsrna&#xC758; &#xC0DD;&#xBB3C; &#xD559;&#xC801; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC99D;&#xAC70;&#xB97C; &#xCC3E;&#xC744; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xB098;&#xBA38;&#xC9C0;&#xC758; &#xACA9;&#xB9AC; &#xB9DD;&#xB9C9; &#xC2E0;&#xACBD; &#xC808; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD5A5;&#xC0C1; &#xB41C; neurite &#xD30C;&#xC0DD;&#xBB3C;&#xC5D0; &#xC774;&#xB974;&#xAC8C; &#xD558; &#xACE0; &#xADF8; &#xB098;&#xBA38;&#xC9C0;&#xC758; &#xD65C;&#xB3D9; &#xC99D;&#xAC00; &#xC5EC;&#xB7EC; &#xC2E0;&#xACBD; &#xD1F4;&#xD589; &#xC131; &#xC9C8;&#xD658;&#xC758; &#xBC1C;&#xACAC;&#xC73C;&#xB85C; &#xC218; &#xC218; &#xD6A8;&#xACFC;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xBCC0;&#xC870; &#xB098;&#xBA38;&#xC9C0;&#xC758; &#xACA9;&#xB9AC; &#xD558; &#xC5EC; NRSE/RE1 &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8;&#xB97C; &#xD3EC;&#xD568; &#xD558;&#xB294; &#xD50C;&#xB77C;&#xC2A4; &#xBBF8;&#xB4DC;&#xC640; &#xACB0;&#xB860; &#xC9C0;&#xC5C8;&#xB2E4;.

NRSE/RE1 &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8;&#xB97C; &#xD3EC;&#xD568; &#xD558;&#xB294; &#xD50C;&#xB77C;&#xC2A4; &#xBBF8;&#xB4DC; neurite &#xD30C;&#xC0DD;&#xBB3C; &#xB098;&#xBA38;&#xC9C0; NRSE dsRNA &#xC2DD;&#xC758; &#xB3C5;&#xB9BD;&#xC758; &#xACA9;&#xB9AC;&#xB97C; &#xD1B5;&#xD574; &#xB9DD;&#xB9C9; &#xC2E0;&#xACBD; &#xC808; &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xAC15;&#xD654;.

Factor de transcripci&oacute;n silenciamiento represor elemento-1 (resto) es un represor transcripcional de genes espec&iacute;ficos de neurona que se une a un elemento de ADN conservado, el elemento de silenciador restrictivas de neurona (NRSE/RE1). Curiosamente, mayor actividad de descanso se encuentra en varias enfermedades neurol&oacute;gicas como la enfermedad de Huntington y la isquemia cerebral. Recientemente, fue demostrado que NRSE dsRNA, un ARN no codificante de bicatenario puede atar al resto durante un per&iacute;odo definido de diferenciaci&oacute;n neuronal, y as&iacute; cambios descansan de un represor transcripcional a un activador de enolase genes. Aqu&iacute;, hemos analizado los efectos de la expresi&oacute;n de dsARN NRSE en las c&eacute;lulas ganglionares de la retina primario. Encontramos que vectores de expresi&oacute;n de dsARN NRSE mejoran considerablemente neurita consecuencia incluso cuando la degeneraci&oacute;n axonal es inducida por la deprivaci&oacute;n de la neurotrofina. Transfecci&oacute;n de c&eacute;lulas HEK con vectores de dsRNA-expresando NRSE hab&iacute;a alterado su morfolog&iacute;a conduciendo a la formaci&oacute;n de procesos delgadas e indujo la expresi&oacute;n de neurofilament-68. Sorprendentemente, control de vectores que contiene sitios de uni&oacute;n del resto, pero no expresan dsARN NRSE, dio lugar a los mismos efectos, tambi&eacute;n en el modelo de c&eacute;lulas ganglionares de la retina. Ensayos de reportero y retenci&oacute;n de descanso en el citoplasma con un pl&aacute;smido que contengan NRSE/RE1 etiquetado incapaz de entrar en el n&uacute;cleo sugieren que el secuestro de descanso en el citoplasma es la raz&oacute;n de los efectos observados. Ninguna evidencia para una funci&oacute;n biol&oacute;gica de dsRNA NRSE podr&iacute;a encontrarse en estos modelos. Concluimos que el secuestro del resto conduce a neurita mayor consecuencia en las c&eacute;lulas ganglionares de la retina y que un aumento de la actividad de descanso, ya que se encuentra en varias enfermedades neurodegenerativas, puede ser efectivamente modulado por secuestro de descanso con pl&aacute;smidos que contienen sitios NRSE/RE1.

Pl&aacute;smidos que contienen sitios NRSE/RE1 mejoran neurita consecuencia de c&eacute;lulas ganglionares de la retina mediante secuestro de descanso independiente de expresi&oacute;n de dsARN NRSE.

&#xC774; &#xD504;&#xB85C;&#xD1A0;&#xCF5C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xC950; &#xC2DC; &#xC2E0;&#xACBD; &#xC0DD;&#xCCB4; &#xC870;&#xAC74;&#xC5D0;&#xC11C; &#xB2E8;&#xC77C; &#xCD95; &#xC0AD;&#xC758; &#xC774;&#xBBF8;&#xC9D5; &#xAE30;&#xC220;. &#xCD95; &#xC0AD;&#xC740; fluorophore (&#xD504;&#xB85C;&#xC2DC;&#xC800; &sim;1 h &#xAE30;&#xAC04;) &#xD45C;&#xD604; adeno &#xC81C;&#xD734;&#xD574; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; &#xC131; &#xBCA1;&#xD130; (AAVs) intravitreal &#xC8FC;&#xC0AC;&#xB97C; &#xD1B5;&#xD574; &#xD45C;&#xC2DC; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. Intravitreal &#xC8FC;&#xC785; &#xD6C4; 2 &#xC8FC; &#xC2DC; &#xC2E0;&#xACBD; &#xC218;&#xC220;&#xB85C; &#xB178;&#xCD9C; (&#xAE30;&#xAC04; &sim;1 h) &#xBC0F; &#xB808;&#xC774;&#xBE14;&#xC774; &#xC9C0;&#xC815; &#xB41C; &#xCD95; &#xC0AD; epifluorescence &#xD604;&#xBBF8;&#xACBD; 8 h&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xB610;&#xB294; &#xB2E4;&#xC74C; &#xB0A0;&#xC5D0; &#xBC18;&#xBCF5;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xBA87; &#xAD70;&#xB370; &#xC788;&#xB2E4;. &#xB610;&#xD55C;, &#xCE7C;&#xC298;&#xC5D0; &#xBBFC;&#xAC10;&#xD55C; &#xC5FC;&#xB8CC;&#xC758; &#xC8FC;&#xC785; intravitreal &#xB0B4;&#xBD80; axonal &#xCE7C;&#xC298; &#xC18D;&#xB3C4; &#xB860;&#xC758; &#xC774;&#xBBF8;&#xC9D5;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774; &#xC808;&#xCC28;&#xB97C;&#xC774; &#xC218;&#xD589; &#xD558;&#xBA74; &#xC2DC; &#xC2E0;&#xACBD; &#xD638;&#xAC10;, axotomy &#xB610;&#xB294; &#xD540; &#xBCD1; &#xBCC0; &#xAC19;&#xC740; &#xB2E4;&#xB978; &#xBCD1; &#xBCC0; &#xD328;&#xB7EC;&#xB2E4;&#xC784;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC2DC; &#xC2E0;&#xACBD;&#xC5D0; &#xC545;&#xD654; axons&#xC758; &#xD615;&#xD0DC;&#xD559; &#xBCC0;&#xD654; &#xBD84;&#xC11D;. &#xB610;&#xD55C;, axonal &#xC548;&#xC815;&#xC131; &#xBC0F; axonal &#xCE7C;&#xC298; &#xC18D;&#xB3C4; &#xB860; &#xCD95; &#xC0AD;&#xC758; &#xC911;&#xC559; &#xC2E0; &#xACBD;&#xACC4;&#xC5D0; &#xC57D;&#xB9AC; &#xC870;&#xC791;&#xC758; &#xD6A8;&#xACFC; vivo&#xC5D0;&#xC11C; &#xACF5;&#xBD80; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Vivo&#xC5D0;&#xC11C; &#xC950; &#xC2DC; &#xC2E0;&#xACBD; &#xCD95; &#xC0AD;&#xC758; &#xC774;&#xBBF8;&#xC9C0;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#x5728;&#x672C;&#x8BAE;&#x5B9A;&#x4E66;&#x4E2D;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x63CF;&#x8FF0;&#x5355;&#x4E2A;&#x8F74;&#x7A81;&#x5927;&#x9F20;&#x89C6;&#x795E;&#x7ECF;&#x4F53;&#x5185;&#x7684;&#x6210;&#x50CF;&#x3002;&#x8F74;&#x7A81;&#x88AB;&#x6807;&#x4E3A;&#x901A;&#x8FC7;&#x817A;&#x76F8;&#x5173;&#x75C5;&#x6BD2;&#x8F7D;&#x4F53; &#xFF08;AAVs&#xFF09; &#x8868;&#x793A; &#xFF08;&#x5DE5;&#x671F;&#x7684;&#x8FC7;&#x7A0B; &sim;1 h) &#x8367;&#x5149;&#x73BB;&#x7483;&#x4F53;&#x8154;&#x5185;&#x6CE8;&#x5C04;&#x3002;&#x73BB;&#x7483;&#x4F53;&#x8154;&#x5185;&#x6CE8;&#x5C04;&#x540E;&#x4E24;&#x5468;&#x5185;&#x89C6;&#x795E;&#x7ECF;&#x635F;&#x4F24;&#x624B;&#x672F;&#x662F;&#x66B4;&#x9732; (&#x6301;&#x7EED;&#x65F6;&#x95F4; &sim;1 h) &#x548C;&#x6807;&#x8BB0;&#x795E;&#x7ECF;&#x8F74;&#x7A81;&#x5F71;&#x50CF;&#x4E0E;&#x8367;&#x5149;&#x663E;&#x5FAE;&#x955C;&#x8FBE; 8 h &#x6216;&#x91CD;&#x590D;&#xFF0C;&#x4EE5;&#x4E0B;&#x7684;&#x51E0;&#x5929;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;&#x9499;&#x654F;&#x611F;&#x67D3;&#x6599;&#x73BB;&#x7483;&#x4F53;&#x8154;&#x5185;&#x7684;&#x6CE8;&#x5C04;&#x5141;&#x8BB8;&#x5185;&#x5F25;&#x6F2B;&#x9499;&#x52A8;&#x529B;&#x5B66;&#x7684;&#x6210;&#x50CF;&#x3002;&#x6B64;&#x8FC7;&#x7A0B;&#x53EF;&#x4EE5;&#x5728;&#x4E0D;&#x540C;&#x75C5;&#x53D8;&#x7684;&#x8303;&#x4F8B;&#xFF0C;&#x5982;&#x89C6;&#x795E;&#x7ECF;&#x538B;&#x788E;&#x3001; &#x5207;&#x65AD;&#x6216; pin &#x75C5;&#x53D8;&#x89C6;&#x795E;&#x7ECF;&#x9000;&#x5316;&#x8F74;&#x7A81;&#x7684;&#x5F62;&#x6001;&#x53D8;&#x5316;&#x7684;&#x5206;&#x6790;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;&#x53EF;&#x4EE5;&#x7814;&#x7A76;&#x5BF9;&#x5F25;&#x6F2B;&#x6027;&#x8F74;&#x7D22;&#x7A33;&#x5B9A;&#x548C;&#x4E2D;&#x67A2;&#x795E;&#x7ECF;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x7684;&#x795E;&#x7ECF;&#x8F74;&#x7A81;&#x8F74;&#x7A81;&#x9499;&#x52A8;&#x529B;&#x5B66;&#x7684;&#x836F;&#x7406;&#x64CD;&#x7EB5;&#x5F71;&#x54CD;&#x4F53;&#x5185;&#x3002;

&#x5927;&#x9F20;&#x89C6;&#x795E;&#x7ECF;&#x8F74;&#x7A81;&#x4F53;&#x5185;&#x6210;&#x50CF;&#x3002;

In this protocol, we describe the imaging of single axons in the rat optic nerve in vivo. Axons are labeled through the intravitreal injection of adeno-associated viral vectors (AAVs) expressing a fluorophore (duration of the procedure âˆ¼1 h). Two weeks after intravitreal injection, the optic nerve is surgically exposed (duration âˆ¼1 h) and labeled axons are imaged with an epifluorescence microscope either for up to 8 h or repetitively on the following days. Additionally, intravitreal injection of calcium-sensitive dyes allows for imaging of intra-axonal calcium kinetics. This procedure enables the analysis of the morphological changes of degenerating axons in the optic nerve in different lesion paradigms, such as optic nerve crush, axotomy or pin lesion. Furthermore, the effects of pharmacological manipulations on axonal stability and axonal calcium kinetics in axons of the central nervous system can be studied in vivo.

Imaging of rat optic nerve axons in vivo.

Dans ce protocole, nous d&eacute;crivons l&#39;imagerie des axones unique dans le nerf optique de rat in vivo. Les axones sont &eacute;tiquet&eacute;s par le biais de l&#39;injection intravitr&eacute;enne de vecteurs viraux ad&eacute;no-associ&eacute;s (AAVs) exprimant un fluorophore (dur&eacute;e de la proc&eacute;dure &sim;1 h). Deux semaines apr&egrave;s l&#39;injection intravitr&eacute;enne, le nerf optique est chirurgicalement expos&eacute;s (dur&eacute;e &sim;1 h) et &eacute;tiquet&eacute;s axones sont imag&eacute;s avec un microscope &agrave; &eacute;pifluorescence pour jusqu&#39;&agrave; 8 h ou r&eacute;p&eacute;titive les jours suivants. En outre, l&#39;injection intravitr&eacute;enne de colorants sensibles au calcium permet d&#39;imagerie de la cin&eacute;tique de calcium intra-axonale. Cette proc&eacute;dure permet l&#39;analyse des changements morphologiques de la d&eacute;g&eacute;n&eacute;rescence des axones du nerf optique dans des paradigmes de l&eacute;sion diff&eacute;rents, tels que le nerf optique B&eacute;guin, axotomie ou broche l&eacute;sion. En outre, les effets des manipulations pharmacologiques sur la stabilit&eacute; axonale et cin&eacute;tique de calcium axonale dans les axones du syst&egrave;me nerveux central peuvent &ecirc;tre &eacute;tudi&eacute;s in vivo.

Imagerie des axones de nerf optique de rat in vivo.

In diesem Protokoll beschreiben wir die Bildgebung der einzelnen Axone im in-vivo Ratte Sehnerv. Axone sind durch die Intravitreal Injektion von Adeno-assoziierter viraler Vektoren (AAVs) zum Ausdruck einer Fluorophor (Dauer der Prozedur &sim;1 h) gekennzeichnet. Zwei Wochen nach der Intravitreal Injektion des Sehnerven ist chirurgisch ausgesetzt (Dauer &sim;1 h) und beschriftete Axone sind mit einem Epifluoreszenz-Mikroskop f&uuml;r bis zu 8 h oder wiederholt an den folgenden Tagen &uuml;berhaupt. Dar&uuml;ber hinaus erm&ouml;glicht Intravitreal Injektion von Kalzium-empfindlichen Farbstoffen Bildgebung der Intra-axonale Kalzium-Kinetik. Dieses Verfahren erm&ouml;glicht die Analyse der morphologischen Ver&auml;nderungen der degeneriertes Axone im Sehnerv in verschiedenen L&auml;sion Paradigmen, wie Sehnerv-Zerstampfung, Axotomie oder Pin-L&auml;sion. Dar&uuml;ber hinaus k&ouml;nnen die Auswirkungen der pharmakologische Manipulationen auf axonale Stabilit&auml;t und axonale Kalzium Kinetik in Axone des zentralen Nervensystems in-vivo untersucht werden.

Ratte Sehnerv Axone in-vivo Bildgebung.

In questo protocollo, descriviamo l&#39;imaging del singoli assoni nel nervo ottico ratto in vivo. Assoni sono etichettati attraverso l&#39;iniezione intravitreal di vettori virali adeno-associati (AAVs) esprimendo un fluoroforo (durata della procedura &sim;1 h). Due settimane dopo l&#39;iniezione intravitreal, il nervo ottico &egrave; chirurgicamente esposti (durata &sim;1 h) ed etichettati assoni sono stampati con un microscopio a epifluorescenza per fino a 8 h o ripetutamente nei giorni successivi. Inoltre, permette di iniezione intravitreal di calcio-sensibili coloranti per l&#39;imaging della cinetica di calcio intra-assonale. Questa procedura consente l&#39;analisi dei cambiamenti morfologici della degenerazione assoni nel nervo ottico in paradigmi di lesione differenti, come il nervo ottico &egrave; cotta, axotomy o pin lesione. Inoltre, gli effetti delle manipolazioni farmacologiche sulla stabilit&agrave; assonale e cinetica di calcio assonale in assoni del sistema nervoso centrale possono essere studiati in vivo.

Imaging di assoni di nervo ottico del ratto in vivo.

&#x3053;&#x306E;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C8;&#x30B3;&#x30EB;&#x3067;&#x306F;&#x3001;in vivo &#x3067;&#x30E9;&#x30C3;&#x30C8;&#x306E;&#x8996;&#x795E;&#x7D4C;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x5358;&#x4E00;&#x8EF8;&#x7D22;&#x306E;&#x30A4;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B8;&#x30F3;&#x30B0;&#x306B;&#x3064;&#x3044;&#x3066;&#x8AAC;&#x660E;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x8EF8;&#x7D22; fluorophore (&sim;1 h &#x306E;&#x30D7;&#x30ED;&#x30B7;&#x30FC;&#x30B8;&#x30E3;&#x306E;&#x671F;&#x9593;) &#x3092;&#x8868;&#x73FE;&#x3059;&#x308B;&#x30A2;&#x30C7;&#x30CE;&#x968F;&#x4F34;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x30D9;&#x30AF;&#x30BF;&#x30FC;&#x901A;&#x6C17;&#x306E;&#x30B1;&#x30CA;&#x30B3;&#x30EB;&#x30C8;&#x785D;&#x5B50;&#x4F53;&#x5185;&#x6CE8;&#x5165;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x30E9;&#x30D9;&#x30EB;&#x4ED8;&#x3051;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;2 &#x9031;&#x9593;&#x5F8C;&#x30B1;&#x30CA;&#x30B3;&#x30EB;&#x30C8;&#x785D;&#x5B50;&#x4F53;&#x5185;&#x6CE8;&#x5165;&#x5149;&#x30D5;&#x30A1;&#x30A4;&#x30D0;&#x30FC;&#x795E;&#x7D4C;&#x5916;&#x79D1;&#x7684;&#x3067;&#x3059; (&#x7D99;&#x7D9A;&#x6642;&#x9593; &sim;1 h) &#x3092;&#x516C;&#x958B;&#x3057;&#x3001;&#x30E9;&#x30D9;&#x30EB;&#x4ED8;&#x304D;&#x8EF8;&#x7D22;&#x3092;&#x30A4;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B8;&#x3057;&#x3066;&#x843D;&#x5C04;&#x86CD;&#x5149;&#x9855;&#x5FAE;&#x93E1;&#x7528; 8 h &#x307E;&#x3067;&#x3001;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x6B21;&#x306E;&#x65E5;&#x306B;&#x7E70;&#x308A;&#x8FD4;&#x3057;&#x3002;&#x307E;&#x305F;&#x3001;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;&#x611F;&#x53D7;&#x6027;&#x8272;&#x7D20;&#x785D;&#x5B50;&#x4F53;&#x5185;&#x6CE8;&#x5165;&#x7528;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C8;&#x30E9;&#x8EF8;&#x7D22;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;&#x52D5;&#x614B;&#x306E;&#x30A4;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B8;&#x30F3;&#x30B0;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x624B;&#x9806;&#x306F;&#x3001;&#x8996;&#x795E;&#x7D4C;&#x306E;&#x30AF;&#x30E9;&#x30C3;&#x30B7;&#x30E5;&#x3001;&#x81A0;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x30D4;&#x30F3;&#x75C5;&#x5909;&#x306A;&#x3069;&#x306E;&#x7570;&#x306A;&#x308B;&#x75C5;&#x5909;&#x306E;&#x30D1;&#x30E9;&#x30C0;&#x30A4;&#x30E0;&#x306E;&#x4E2D;&#x3067;&#x8996;&#x795E;&#x7D4C;&#x306E;&#x5909;&#x6027;&#x306E;&#x8EF8;&#x7D22;&#x306E;&#x5F62;&#x614B;&#x5909;&#x5316;&#x306E;&#x89E3;&#x6790;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x3001;&#x85AC;&#x7406;&#x5B66;&#x7684;&#x64CD;&#x4F5C;&#x304C;&#x8EF8;&#x7D22;&#x306E;&#x5B89;&#x5B9A;&#x6027;&#x3068;&#x4E2D;&#x67A2;&#x795E;&#x7D4C;&#x7CFB;&#x306E;&#x8EF8;&#x7D22;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x8EF8;&#x7D22;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;&#x52D5;&#x614B;&#x306B;&#x53CA;&#x307C;&#x3059;&#x5F71;&#x97FF;&#x306F; in vivo &#x3067;&#x5B66;&#x3076;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x30E9;&#x30C3;&#x30C8;&#x306E;&#x8996;&#x795E;&#x7D4C;&#x306E;&#x8EF8;&#x7D22;&#x306E; in vivo &#x30A4;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B8;&#x30F3;&#x30B0;

En el presente Protocolo, describimos la proyecci&oacute;n de imagen de axones solos en el nervio &oacute;ptico de rata in vivo. Axones se etiquetan a trav&eacute;s de la inyecci&oacute;n intrav&iacute;trea de vectores virales adeno-asociado (aireaci&oacute;n) expresando un fluor&oacute;foro (duraci&oacute;n del procedimiento &sim;1 h). Dos semanas despu&eacute;s de la inyecci&oacute;n intrav&iacute;trea, el nervio &oacute;ptico es quir&uacute;rgicamente expuesta (duraci&oacute;n &sim;1 h) y etiquetados axones son fotografiadas con un microscopio de epifluorescencia para hasta 8 h o repetitivas en los d&iacute;as siguientes. Adem&aacute;s, la inyecci&oacute;n intrav&iacute;trea de tintes sensibles al calcio permite la proyecci&oacute;n de imagen de cin&eacute;tica de calcio intra-axonal. Este procedimiento permite el an&aacute;lisis de los cambios morfol&oacute;gicos de degeneraci&oacute;n de axones en el nervio &oacute;ptico en paradigmas de lesi&oacute;n diferentes, como la lesi&oacute;n de aplastamiento, axotom&iacute;a o pin de nervio &oacute;ptico. Adem&aacute;s, los efectos de las manipulaciones farmacol&oacute;gicas sobre estabilidad axonal y cin&eacute;tica de calcio axonal en los axones del sistema nervioso central pueden ser estudiados in vivo.

Proyecci&oacute;n de imagen de axones del nervio &oacute;ptico de rata in vivo.

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CNS&#xC5D0;&#xC11C; &#xCE58;&#xB8CC; &#xB300;&#xC0C1;&#xC73C;&#xB85C; axonal &#xBCC0;&#xC131;.

Degeneraci&oacute;n del ax&oacute;n es un paso importante en el pathomechanism de enfermedades neurol&oacute;gicas, traum&aacute;ticas, inflamatorias y degenerativas. Creciente evidencia sugiere que la degeneraci&oacute;n axonal ocurre temprano en el curso de estas enfermedades y por lo tanto representa un objetivo prometedor para futuras estrategias terap&eacute;uticas. Repasamos la evidencia de la destrucci&oacute;n axonal de resultados patol&oacute;gicos y en modelos animales con especial &eacute;nfasis en trastornos neurodegenerativos y neurotraumatic. Discutimos las modalidades b&aacute;sicas morfol&oacute;gicas y temporales de la degeneraci&oacute;n axonal (degeneraci&oacute;n axonal aguda y cr&oacute;nica focal y degeneraci&oacute;n walleriana). Basado en los conceptos mecanicistas, luego delinear detalladamente los principales mecanismos moleculares que subyacen a la cascada degenerativa, como la afluencia de calcio, transporte axonal, agregaci&oacute;n de la prote&iacute;na y autofagia. Finalmente, nos concentramos en posibles dianas terap&eacute;uticas basados en los requisitos mecanicistas.

Degeneraci&oacute;n axonal como diana terap&eacute;utica en el SNC.

Degenerazione dell&#39;assone &egrave; un passo importante nella pathogener di malattie neurologiche degenerative, infiammatorie e traumatiche. Crescente evidenza suggerisce che la degenerazione assonale si verifica precocemente nel corso di queste malattie e quindi rappresenta un bersaglio promettente per future strategie terapeutiche. Passiamo in rassegna le prove per distruzione assonale da risultati patologici e modelli animali con particolare enfasi sulle malattie neurodegenerative e neurotraumatic. Discuteremo le modalit&agrave; base morfologiche e temporale della degenerazione assonale (acuta, cronica e focale degenerazione assonale e degenerazione walleriana). Basato su concetti meccanicistici, abbiamo quindi delineare nel dettaglio i principali meccanismi molecolari che sottendono la cascata degenerativa, come afflusso di calcio, trasporto assonale, aggregazione proteica e autophagy. Infine ci concentriamo su putativi bersagli terapeutici basati sui prerequisiti meccanicistici.

Degenerazione assonale come un obiettivo terapeutico nel SNC.

&#x8EF8;&#x7D22;&#x5909;&#x6027;&#x306F;&#x3001;&#x5916;&#x50B7;&#x3001;&#x708E;&#x75C7;&#x3001;&#x5909;&#x6027;&#x795E;&#x7D4C;&#x75BE;&#x60A3;&#x306E;&#x75C5;&#x614B;&#x306B;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x30B9;&#x30C6;&#x30C3;&#x30D7;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x5897;&#x52A0;&#x3059;&#x308B;&#x8A3C;&#x62E0;&#x306B;&#x306F;&#x3001;&#x8EF8;&#x7D22;&#x5909;&#x6027;&#x521D;&#x671F;&#x904E;&#x7A0B;&#x3067;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x75BE;&#x60A3;&#x304C;&#x767A;&#x751F;&#x3057;&#x3001;&#x3057;&#x305F;&#x304C;&#x3063;&#x3066;&#x4ECA;&#x5F8C;&#x306E;&#x6CBB;&#x7642;&#x6226;&#x7565;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x6709;&#x671B;&#x306A;&#x30BF;&#x30FC;&#x30B2;&#x30C3;&#x30C8;&#x3092;&#x8868;&#x3059;&#x793A;&#x5506;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005; &#x306F;&#x75C5;&#x7406;&#x6240;&#x898B;&#x3068;&#x7279;&#x306B;&#x91CD;&#x70B9; neurotraumatic &#x3068;&#x795E;&#x7D4C;&#x5909;&#x6027;&#x75BE;&#x60A3;&#x306E;&#x52D5;&#x7269;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x304B;&#x3089;&#x306E;&#x8EF8;&#x7D22;&#x306E;&#x7834;&#x58CA;&#x306E;&#x8A3C;&#x62E0;&#x3092;&#x78BA;&#x8A8D;&#x3057;&#x3066;&#x304F;&#x3060;&#x3055;&#x3044;&#x3002;&#x8EF8;&#x7D22;&#x5909;&#x6027; (&#x6025;&#x6027;&#x3001;&#x6162;&#x6027;&#x3001;&#x7126;&#x70B9;&#x8DDD;&#x96E2;&#x306E;&#x8EF8;&#x7D22;&#x5909;&#x6027;&#x3068;&#x30EF;&#x30FC;&#x30E9;&#x30FC;&#x5909;&#x6027;) &#x306E;&#x57FA;&#x672C;&#x7684;&#x306A;&#x5F62;&#x614B;&#x5B66;&#x7684;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x6642;&#x9593;&#x7684;&#x30E2;&#x30C0;&#x30EA;&#x30C6;&#x30A3;&#x3092;&#x8B70;&#x8AD6;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6A5F;&#x68B0;&#x7684;&#x306A;&#x6982;&#x5FF5;&#x306B;&#x57FA;&#x3065;&#x3044;&#x3066;&#x3001;&#x6211;&#x3005; [&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;&#x6D41;&#x5165;, &#x8EF8;&#x7D22;&#x8F38;&#x9001;&#x3001;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x51DD;&#x96C6;&#x30AA;&#x30FC;&#x30C8;&#x30D5;&#x30A1;&#x30B8;&#x30FC;&#x306A;&#x3069;&#x306E;&#x9000;&#x884C;&#x6027;&#x30AB;&#x30B9;&#x30B1;&#x30FC;&#x30C9;&#x306E;&#x6839;&#x5E95;&#x306B;&#x3042;&#x308B;&#x4E3B;&#x8981;&#x306A;&#x5206;&#x5B50;&#x30E1;&#x30AB;&#x30CB;&#x30BA;&#x30E0;&#x8A73;&#x7D30;&#x306B;&#x63CF;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x79C1;&#x305F;&#x3061;&#x6700;&#x5F8C;&#x306B;&#x6A5F;&#x68B0;&#x7684;&#x306A;&#x8981;&#x4EF6;&#x306B;&#x57FA;&#x3065;&#x3044;&#x305F;&#x63A8;&#x5B9A;&#x306E;&#x6CBB;&#x7642;&#x4E0A;&#x306E;&#x30BF;&#x30FC;&#x30B2;&#x30C3;&#x30C8;&#x306B;&#x96C6;&#x4E2D;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

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&#x8F74;&#x7A81;&#x7684;&#x53D8;&#x6027;&#x662F;&#x5916;&#x4F24;&#x3001; &#x708E;&#x75C7;&#x548C;&#x9000;&#x884C;&#x6027;&#x795E;&#x7ECF;&#x75BE;&#x75C5;&#x7684;&#x75C5;&#x7406;&#x673A;&#x5236;&#x7684;&#x91CD;&#x8981;&#x4E00;&#x6B65;&#x3002;&#x8D8A;&#x6765;&#x8D8A;&#x591A;&#x7684;&#x8BC1;&#x636E;&#x8868;&#x660E;&#x5F25;&#x6F2B;&#x6027;&#x8F74;&#x7D22;&#x53D8;&#x6027;&#x521D;&#x51FA;&#x73B0;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x75BE;&#x75C5;&#xFF0C;&#x56E0;&#x6B64;&#x8868;&#x793A;&#x6709;&#x524D;&#x9014;&#x7684;&#x672A;&#x6765;&#x6CBB;&#x7597;&#x7B56;&#x7565;&#x76EE;&#x6807;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x68C0;&#x8BA8;&#x4ECE;&#x75C5;&#x7406;&#x548C;&#x7279;&#x522B;&#x4FA7;&#x91CD;&#x4E8E; neurotraumatic &#x548C;&#x795E;&#x7ECF;&#x9000;&#x884C;&#x6027;&#x75BE;&#x75C5;&#x7684;&#x52A8;&#x7269;&#x6A21;&#x578B;&#x7684;&#x8F74;&#x7A81;&#x9500;&#x6BC1;&#x8BC1;&#x636E;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x8BA8;&#x8BBA;&#x5F25;&#x6F2B;&#x6027;&#x8F74;&#x7D22;&#x53D8;&#x6027; (&#x6025;&#x6027;&#x3001; &#x6162;&#x6027;&#x548C;&#x7126;&#x5F25;&#x6F2B;&#x6027;&#x8F74;&#x7D22;&#x53D8;&#x6027;&#x548C;&#x6C83;&#x52D2;&#x53D8;&#x6027;) &#x57FA;&#x672C;&#x5F62;&#x6001;&#x548C;&#x65F6;&#x95F4;&#x7684;&#x6A21;&#x5F0F;&#x3002;&#x57FA;&#x4E8E;&#x673A;&#x68B0;&#x7684;&#x6982;&#x5FF5;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x5728;&#x7136;&#x540E;&#x5212;&#x5206;&#x8BE6;&#x7EC6;&#x7684;&#x57FA;&#x7840;&#x7684;&#x9000;&#x884C;&#x6027;&#x7684;&#x7EA7;&#x8054;&#xFF0C;&#x5982;&#x9499;&#x5927;&#x91CF;&#x6D8C;&#x5165;&#xFF0C;&#x8F74;&#x7A81;&#x8FD0;&#x8F93;&#x3001; &#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x805A;&#x96C6;&#x548C;&#x81EA;&#x566C;&#x7684;&#x4E3B;&#x8981;&#x5206;&#x5B50;&#x673A;&#x5236;&#x3002;&#x6700;&#x540E;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x96C6;&#x4E2D;&#x57FA;&#x4E8E;&#x673A;&#x68B0;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x5FC5;&#x5907;&#x7EC4;&#x4EF6;&#x7684;&#x63A8;&#x5B9A;&#x6CBB;&#x7597;&#x9776;&#x70B9;&#x3002;

&#x4F5C;&#x4E3A;&#x6CBB;&#x7597;&#x4E2D;&#x67A2;&#x795E;&#x7ECF;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x7684;&#x8F74;&#x7D22;&#x53D8;&#x6027;&#x3002;

Degeneration of the axon is an important step in the pathomechanism of traumatic, inflammatory and degenerative neurological diseases. Increasing evidence suggests that axonal degeneration occurs early in the course of these diseases and therefore represents a promising target for future therapeutic strategies. We review the evidence for axonal destruction from pathological findings and animal models with particular emphasis on neurodegenerative and neurotraumatic disorders. We discuss the basic morphological and temporal modalities of axonal degeneration (acute, chronic and focal axonal degeneration and Wallerian degeneration). Based on the mechanistic concepts, we then delineate in detail the major molecular mechanisms that underlie the degenerative cascade, such as calcium influx, axonal transport, protein aggregation and autophagy. We finally concentrate on putative therapeutic targets based on the mechanistic prerequisites.

Axonal degeneration as a therapeutic target in the CNS.

La d&eacute;g&eacute;n&eacute;rescence de l&#39;axone est une &eacute;tape importante dans la globalement des maladies neurologiques traumatiques, inflammatoires et d&eacute;g&eacute;n&eacute;ratives. Plus en plus &eacute;vident sugg&egrave;re que la d&eacute;g&eacute;n&eacute;rescence axonale survient t&ocirc;t dans le cadre de ces maladies et repr&eacute;sente donc une cible prometteuse pour les strat&eacute;gies th&eacute;rapeutiques futures. Nous passons en revue les &eacute;l&eacute;ments de preuve pour destruction axonale des r&eacute;sultats pathologiques et des mod&egrave;les animaux, avec un accent particulier sur les troubles neurod&eacute;g&eacute;n&eacute;ratifs et Alhzeimer. Nous discutons les modalit&eacute;s base morphologiques et temporelles de la d&eacute;g&eacute;n&eacute;rescence axonale (d&eacute;g&eacute;n&eacute;rescence axonale aigu&euml;, chronique et focale et d&eacute;g&eacute;n&eacute;rescence wall&eacute;rienne). Bas&eacute; sur les concepts m&eacute;canistes, nous puis d&eacute;finissent en d&eacute;tail les principaux m&eacute;canismes mol&eacute;culaires qui sous-tendent la cascade d&eacute;g&eacute;n&eacute;rative, telles que l&#39;influx calcique, transport axonal, agr&eacute;gation des prot&eacute;ines et autophagie. Enfin, nous nous concentrons sur putatifs cibles th&eacute;rapeutiques bas&eacute;es sur les pr&eacute;requis m&eacute;canistes.

D&eacute;g&eacute;n&eacute;rescence axonale comme une cible th&eacute;rapeutique dans le syst&egrave;me nerveux central.

Degeneration der das Axon ist ein wichtiger Schritt in der Pathomechanism der traumatischen, entz&uuml;ndlichen und degenerativen neurologischen Erkrankungen. Zunehmender Beweis schl&auml;gt vor, dass axonale Degeneration fr&uuml;h im Verlauf dieser Krankheiten tritt und folglich ein vielversprechendes Ziel f&uuml;r k&uuml;nftige therapeutische Strategien stellt. Wir &uuml;berpr&uuml;fen die Beweise f&uuml;r axonaler Zerst&ouml;rung von pathologischen Befunde und Tiermodelle mit besonderem Schwerpunkt auf Neurodegenerative und Neurotraumatic Erkrankungen. Wir besprechen die grundlegenden morphologischen und zeitlichen Modalit&auml;ten der axonalen Degeneration (akute, chronische und fokale axonale Degeneration und Wallersche Degeneration). Auf der Grundlage der mechanistische Konzepte beschreiben wir dann im Detail die wichtigsten molekularen Mechanismen, die die degenerative Kaskade, wie Kalzium-Zustrom, axonale Transport, Proteinanh&auml;ufung und Autophagy zugrunde liegen. Wir konzentrieren uns schlie&szlig;lich auf vermeintliche therapeutische Targets, die auf der Grundlage der mechanistischen Voraussetzungen.

Article	Year
TGF-beta 1 enhances neurite outgrowth via regulation of proteasome function and EFABP. Neurobiology of disease\| PubMed ID: 20211260	2010
Mechanisms of acute axonal degeneration in the optic nerve in vivo. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America\| PubMed ID: 20231460	2010
Acute axonal degeneration in vivo is attenuated by inhibition of autophagy in a calcium-dependent manner. Autophagy\| PubMed ID: 20458173	2010
Plasmids containing NRSE/RE1 sites enhance neurite outgrowth of retinal ganglion cells via sequestration of REST independent of NRSE dsRNA expression. The FEBS journal\| PubMed ID: 21790997	2011
Imaging of rat optic nerve axons in vivo. Nature protocols\| PubMed ID: 22051801	2011
Axonal degeneration as a therapeutic target in the CNS. Cell and tissue research\| PubMed ID: 22392734	2012

Jan C. Koch

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