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Profiling Changes in Receptor Tyrosine Kinase Phosphorylation using Antibody Arrays - ADVERTISEMENT

The dysregulation of receptor tyrosine kinase (RTK) expression and phosphorylation is frequently associated with the development and metastatic spread of ...

R&D Systems, Inc.

&#x63CF;&#x8FF0;&#x8BBE;&#x8BA1;&#x4E3A;&#x4F7F;&#x7528;&#x8868;&#x9762;&#x7B49;&#x79BB;&#x5B50;&#x4F53;&#x5171;&#x632F; (SPR) &#x7684;&#x591A;&#x80BD;&#x6297;&#x4F53;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x91D1;&#x8868;&#x9762;&#x4E0A;&#x591A;&#x80BD;&#x9635;&#x5217;&#x7684;&#x8868;&#x5F81;&#x3002;&#x4E00;&#x4E2A;&#x4E24;&#x6B65;&#x8FC7;&#x7A0B;&#x5DF2;&#x7528;&#x4E8E;&#x5236;&#x5907;&#x591A;&#x80BD;&#x9635;&#x5217;&#xFF1A; (i) &#x4E00;&#x5957;&#x5E76;&#x884C;&#x5FAE;&#x88AB;&#x7528;&#x6765;&#x8FD0;&#x9001;&#x5316;&#x5B66;&#x8BD5;&#x5242;&#x5171;&#x4EF7;&#x952E;&#x9644;&#x52A0;&#x5230;&#x8868;&#x9762;&#x7684;&#x80BD;&#x63A2;&#x9488;&#x7684;&#x5DEF;&#x57FA;&#x4E8C;&#x786B;&#x952E;&#x4EA4;&#x6362;&#x53CD;&#x5E94; &#xFF1B;(&#x8FF7;&#x4EBA;&#x7684;&#x8BBE;&#x8BA1;&#x4E8C;) &#x7B2C;&#x4E8C;&#x4E2A;&#x5FAE;&#x901A;&#x9053;&#x88AB;&#x7528;&#x4F5C;&#x5C0F;&#x4F53;&#x79EF;&#x6D41;&#x91CF;&#x7684;&#x5355;&#x5143;&#x683C; (5 microL) &#x5F15;&#x5165;&#x80BD;&#x8868;&#x9762;&#x6297;&#x4F53;&#x7684;&#x89E3;&#x51B3;&#x529E;&#x6CD5;&#x3002;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x793A;&#x8303;&#xFF0C;&#x6807;&#x5FD7;&#x6297;&#x539F;&#x8868;&#x4F4D;&#x6807;&#x8BB0;&#x548C;&#x5355;&#x514B;&#x9686; anti-FLAG M2 &#x7684;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x53D7;&#x5230; SPR &#x5F71;&#x50CF;&#x4F7F;&#x7528;&#x591A;&#x80BD;&#x9635;&#x5217;&#x3002;&#x6B64;&#x591A;&#x80BD;&#x6297;&#x4F53;&#x5BF9;&#x7531;&#x4E8E;&#x5176;&#x91CD;&#x8981;&#x6027;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x4E00;&#x79CD;&#x624B;&#x6BB5;&#x6765;&#x51C0;&#x5316;&#x878D;&#x5408;&#x86CB;&#x767D;&#x8FDB;&#x884C;&#x4E86;&#x7814;&#x7A76;&#x3002;&#x8868;&#x9762;&#x8986;&#x76D6;&#x9762;&#x56FD;&#x65D7;&#x80BD;&#x7684;&#x6B63;&#x662F;&#x88AB;&#x63A7;&#x5236;&#x786B;&#x9187;&#x5206;&#x5B50;&#x542B;&#x6709;&#x80FA;&#x7EC8;&#x6B62;&#x8868;&#x9762;&#x548C;&#x60F0;&#x6027;&#x786B;&#x9187;&#x6DF7;&#x5408;&#x5355;&#x5206;&#x5B50;&#x819C;&#x4E0A;&#x521B;&#x5EFA;&#x591A;&#x80BD;&#x9635;&#x5217;&#x3002;&#x591A;&#x80BD;&#x6297;&#x539F;&#x51B3;&#x5B9A;&#x7C07;&#x7684;&#x6469;&#x5C14;&#x5206;&#x6570;&#x4E5F;&#x662F;&#x7531;&#x5305;&#x542B;&#x6807;&#x5FD7;&#x80BD;&#x4E0E;&#x975E;&#x4EA4;&#x4E92;&#x533B;&#x7BA1;&#x5C40;&#x6216;&#x534A;&#x80F1;&#x6C28;&#x9178;&#x53CD;&#x5E94;&#x89E3;&#x51B3;&#x65B9;&#x6848;&#x63A7;&#x5236;&#x7684;&#x3002;&#x901A;&#x8FC7;&#x7814;&#x7A76;&#x57FA;&#x4E8E;&#x65D7;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x6BCD;&#x9898;&#x7684;&#x53D8;&#x4F53;&#xFF0C;&#x5B83;&#x6709;&#x53EF;&#x80FD;&#x533A;&#x5206; SPR &#x6210;&#x50CF;&#x5355;&#x4E2A;&#x6C28;&#x57FA;&#x9178;&#x66FF;&#x6362;&#x4E0D;&#x540C;&#x7684;&#x591A;&#x80BD;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;&#x4FE1;&#x53F7;&#x7684;&#x91CF;&#x5316;&#x5206;&#x6790;&#x662F;&#x4F7F;&#x7528;&#x591A;&#x80BD;&#x9635;&#x5217;&#xFF0C;&#x540C;&#x65F6;&#x786E;&#x5B9A;&#x7ED3;&#x5408;&#x5E38;&#x6570;&#x7684;&#x56DB;&#x4E2A;&#x591A;&#x80BD;&#x6297;&#x4F53;&#x80BD;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x6765;&#x5B8C;&#x6210;&#x7684;&#x3002;&#x7ED3;&#x5408;&#x5E38;&#x6570;&#xFF0C;K(ads)&#xFF0C;&#x8BE5;&#x6807;&#x5FD7;&#x80BD;&#x662F;&#x8861;&#x91CF;&#x88AB;&#x8BA4;&#x5B9A;&#x548C; 1.5 x 10(8) M(-1) &#x867D;&#x7136;&#x63D0;&#x51FA;&#x66FF;&#x4EE3;&#x7684;&#x4E19;&#x6C28;&#x9178;&#x6B8B;&#x7559;&#x57FA;&#x4E8E;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x6BCD;&#x9898;&#x7684;&#x53D8;&#x4F53;&#x7ED3;&#x5408;&#x5E38;&#x6570;&#x7684; 2.8 x 10(7)&#x3001; 10(6)&#x3001; x 5.0 &#x7248;&#x548C; 2.0 x 10(6) M(-1)&#x3002;

&#x8868;&#x5F81;&#x4E0E;&#x4F18;&#x5316;&#x591A;&#x80BD;&#x9635;&#x5217;&#x8868;&#x9762;&#x7B49;&#x79BB;&#x5B50;&#x4F53;&#x5171;&#x632F;&#x6210;&#x50CF;&#x7684;&#x6297;&#x539F;&#x6297;&#x4F53;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x3002;

The characterization of peptide arrays on gold surfaces designed for the study of peptide-antibody interactions using surface plasmon resonance (SPR) imaging is described. A two-step process was used to prepare the peptide arrays: (i) a set of parallel microchannels was used to deliver chemical reagents to covalently attach peptide probes to the surface by a thiol-disulfide exchange reaction; (ii) a second microchannel with a wraparound design was used as a small-volume flow cell (5 microL) to introduce antibody solutions to the peptide surface. As a demonstration, the interactions of the FLAG epitope tag and monoclonal anti-FLAG M2 were monitored by SPR imaging using a peptide array. This peptide-antibody pair was studied because of its importance as a means to purify fusion proteins. The surface coverage of the FLAG peptide was precisely controlled by creating the peptide arrays on mixed monolayers of alkanethiols containing an amine-terminated surface and an inert alkanethiol. The mole fraction of peptide epitopes was also controlled by reacting solutions containing FLAG peptide and the non-interacting peptide HA or cysteine. By studying variants based on the FLAG binding motif, it was possible to distinguish peptides differing by a single amino acid substitution using SPR imaging. In addition, quantitative analysis of the signal was accomplished using the peptide array to simultaneously determine the binding constants of the antibody-peptide interactions for four peptides. The binding constant, K(ads), for the FLAG peptide was measured and found to be 1.5 x 10(8) M(-1) while variants made by the substitution of alanine for residues based on the binding motif had binding constants of 2.8 x 10(7), 5.0 x 10(6), and 2.0 x 10(6) M(-1).

Characterization and optimization of peptide arrays for the study of epitope-antibody interactions using surface plasmon resonance imaging.

La caract&eacute;risation des r&eacute;seaux de peptide sur des surfaces d&#39;or con&ccedil;us pour l&#39;&eacute;tude des interactions peptide-anticorps &agrave; l&#39;aide de la r&eacute;sonance de plasmon de surface (SPR) est d&eacute;crite. Un processus en deux &eacute;tapes a &eacute;t&eacute; utilis&eacute; pour pr&eacute;parer les tableaux de peptide: (i) un ensemble de microcanaux parall&egrave;les a &eacute;t&eacute; utilis&eacute; pour livrer des r&eacute;actifs chimiques pour fixer par liaison covalente des sondes de peptide &agrave; la surface par une r&eacute;action d&#39;&eacute;change thiol-bisulfure ; (ii) un second microchannel avec une conception enveloppante a &eacute;t&eacute; utilis&eacute; comme une cellule d&#39;&eacute;coulement faible volume (5 microL) d&#39;introduire des solutions d&#39;anticorps &agrave; la surface de peptide. &Agrave; titre de d&eacute;monstration, des interactions entre la balise &eacute;pitope FLAG et monoclonaux M2 anti-FLAG ont &eacute;t&eacute; suivies par SPR imaging &agrave; l&#39;aide d&#39;un tableau de peptide. Cette paire d&#39;anticorps de peptide a &eacute;t&eacute; &eacute;tudi&eacute;e en raison de son importance comme moyen de purifier les prot&eacute;ines de fusion. La couverture de la surface du peptide drapeau a &eacute;t&eacute; contr&ocirc;l&eacute;e avec pr&eacute;cision en cr&eacute;ant des tableaux de peptide sur des monocouches mixtes d&#39;alkanethiols contenant une surface termin&eacute;e par une amine et un alkanethiol inerte. La fraction molaire d&#39;&eacute;pitopes peptidiques est &eacute;galement contr&ocirc;l&eacute;e par r&eacute;action solutions contenant du peptide de drapeau et le peptide sans interaction HA ou la cyst&eacute;ine. Par l&#39;&eacute;tude des variantes bas&eacute;es sur le motif de liaison &agrave; pavillon, on pouvait distinguer des peptides qui diff&egrave;rent par une seul acide amin&eacute; substitution en utilisant l&#39;imagerie de la SPR. En outre, une analyse quantitative du signal a &eacute;t&eacute; accomplie avec le tableau de peptide de d&eacute;terminer simultan&eacute;ment les constantes de fixation des interactions anticorps-peptide pour quatre peptides. La constante de liaison, K(ads), pour le pavillon peptide a &eacute;t&eacute; mesur&eacute;e et jug&eacute;e 1,5 x subsection M(-1) variantes apport&eacute;es par la substitution d&#39;alanine pour r&eacute;sidus bas&eacute; sur le motif de liaison malgr&eacute; les constantes de fixation de 2,8 x 10 7, 5,0 x 10 (6) et 2,0 x 10 (6) M(-1).

Caract&eacute;risation et optimisation des tableaux de peptide pour l&#39;&eacute;tude des interactions &eacute;pitope-anticorps &agrave; l&#39;aide de l&#39;imagerie par r&eacute;sonance plasmonique de surface.

Die Charakterisierung der Peptid-Arrays auf gold-Oberfl&auml;chen entwickelt, die f&uuml;r das Studium der Peptid-Antik&ouml;rper-Aktivit&auml;ten, die mit Surface Plasmon Resonance (SPR) Imaging wird beschrieben. Ein zweistufiger Prozess wurde verwendet, um die Peptid-Arrays vorbereiten: (i) eine Reihe von parallelen Mikrokan&auml;len wurde verwendet, um chemische Reagenzien um Peptid-Sonden kovalent an die Oberfl&auml;che befestigen liefern durch ein Thiol-Disulfid-Austausch-Reaktion; (Ii) eine zweite Microchannel mit umlaufender Design diente als eine kleine-Volumenstrom-Zelle (5 MicroL) L&ouml;sungen des Antik&ouml;rpers an die Peptid-Oberfl&auml;che einzuf&uuml;hren. Als Demonstration wurden die Interaktionen der FLAG-Epitop-Tag und monoklonale anti-FLAG M2 von SPR imaging unter Verwendung eines Peptid-Arrays &uuml;berwacht. Dieses Peptid-Antik&ouml;rper-Paar wurde wegen seiner Bedeutung als Mittel zum Reinigen von Schmelzverfahrensproteine untersucht. Die Oberfl&auml;che Abdeckung des Peptids Flagge war exakt gesteuert, indem Sie die Peptid-Arrays auf gemischte Monolayers von Alkanethiols, enth&auml;lt ein Amin endende Oberfl&auml;che und einem inerten Alkanethiol erstellen. Der Stoffmengenanteil von Peptid-Epitope wurde auch von reagierendem L&ouml;sungen mit Flagge Peptid und das nicht-Interaktion Peptid HA oder Cystein kontrolliert. Durch das Studium Varianten auf der Grundlage des Flagge verbindlichem Motivs, war es m&ouml;glich, die Peptide unterscheiden sich durch eine einzelne Aminos&auml;ure-Substitution mit SPR Bildgebung zu unterscheiden. Dar&uuml;ber hinaus wurde Quantitative Analyse des Signals durch die Verwendung des Peptid-Arrays gleichzeitig die Bindung-Konstanten der Antik&ouml;rper-Peptid Interaktionen f&uuml;r vier Peptide bestimmen. Die Bindung-Konstante, K(ads), f&uuml;r die Flagge Peptid wurde gemessen und festgestellt, dass 1,5 X 10 M(-1) w&auml;hrend Varianten gemacht durch die Substitution von Alanin f&uuml;r R&uuml;ckst&auml;nde, die auf der Grundlage des Bindung-Motivs Bindung Konstanten 2,8 x 2,0 X 10 6 M(-1) Haushaltsjahre ab und 5,0 X 10 6 hatte.

Charakterisierung und Optimierung von Peptid-Arrays f&uuml;r das Studium der Epitop-Antik&ouml;rper-Aktivit&auml;ten, die mit Surface Plasmon Resonance Imaging.

Viene descritta la caratterizzazione di matrici del peptide sulle superfici oro progettate per lo studio delle interazioni peptide-anticorpo mediante imaging (SPR) risonanza plasmonica di superficie. Un processo in due fasi &egrave; stato usato per preparare le matrici del peptide: (i) un set di microcanali paralleli &egrave; stato utilizzato per fornire reagenti chimici per covalentemente collegare le sonde del peptide alla superficie da una reazione di scambio tiolo-disolfuro; (ii) una seconda microchannel con un design avvolgente &egrave; stato usato come una cella di flusso di piccolo volume (5 microL) di introdurre soluzioni dell&#39;anticorpo alla superficie del peptide. Come una dimostrazione, le interazioni dei tag epitopo bandiera e anticorpo monoclonale anti-bandierina M2 sono state monitorate da SPR imaging utilizzando una matrice del peptide. Questa coppia di peptide-anticorpo &egrave; stata studiata a causa della sua importanza come mezzo per purificare le proteine di fusione. La copertura superficiale del peptide FLAG precisamente era controllata mediante la creazione di matrici del peptide su monostrati misti di alkanethiols contenente una superficie terminati ammina e un inerte alcantioli. La frazione molare di epitopi del peptide &egrave; stato anche controllata da reagire soluzioni contenenti peptide FLAG e il peptide non interagenti HA o cisteina. Studiando varianti basate sul motivo di associazione bandiera, era possibile distinguere peptidi differenti da una singolo aminoacido sostituzione mediante imaging SPR. Inoltre, analisi quantitativa del segnale &egrave; stata compiuta utilizzando la matrice del peptide per determinare simultaneamente le costanti di associazione delle interazioni anticorpo-peptide per quattro peptidi. La costante di associazione, K(ads), per la bandiera peptide &egrave; stato misurato e trovato per essere 1,5 x 10, paragrafo 8 M(-1) mentre varianti fatte la sostituzione dell&#39;alanina per residui basato sul motivo associazione ha avuto costanti di associazione di 2,8 x 10, 5.0 10 x e 2.0 x 10 M(-1).

Caratterizzazione e ottimizzazione delle matrici del peptide per lo studio delle interazioni di epitopo-anticorpo usando la formazione immagine di risonanza plasmonica di superficie.

&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C9; &#x30A2;&#x30EC;&#x30A4;&#x8868;&#x9762;&#x30D7;&#x30E9;&#x30BA;&#x30E2;&#x30F3;&#x5171;&#x9CF4; (SPR) &#x30A4;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B8;&#x30F3;&#x30B0;&#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x305F;&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C9;&#x6297;&#x4F53;&#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x306E;&#x7814;&#x7A76;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x8A2D;&#x8A08;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x91D1;&#x8868;&#x9762;&#x4E0A;&#x306E;&#x7279;&#x6027;&#x3092;&#x8AAC;&#x660E;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C9; &#x30A2;&#x30EC;&#x30A4;&#x3092;&#x6E96;&#x5099;&#x3059;&#x308B; 2 &#x6BB5;&#x968E;&#x306E;&#x30D7;&#x30ED;&#x30BB;&#x30B9;&#x304C;&#x4F7F;&#x7528;&#x3055;&#x308C;&#x305F;: (i) &#x4E26;&#x5217;&#x30DE;&#x30A4;&#x30AF;&#x30ED; &#x30C1;&#x30E3;&#x30F3;&#x30CD;&#x30EB;&#x306E;&#x30BB;&#x30C3;&#x30C8;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x30C1;&#x30AA;&#x30FC;&#x30EB; &#x30B8;&#x30B9;&#x30EB;&#x30D5;&#x30A3;&#x30C9;&#x4EA4;&#x63DB;&#x53CD;&#x5FDC;; &#x5171;&#x6709;&#x7D50;&#x5408;&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C9; 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&#x30D5;&#x30E9;&#x30C3;&#x30B0; m 2 &#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C9; &#x30A2;&#x30EC;&#x30A4;&#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x305F;&#x30A4;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B8;&#x30F3;&#x30B0; SPR &#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x76E3;&#x8996;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C9;&#x6297;&#x4F53;&#x30DA;&#x30A2;&#x878D;&#x5408;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x3092;&#x6D44;&#x5316;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x624B;&#x6BB5;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x305D;&#x306E;&#x91CD;&#x8981;&#x6027;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x691C;&#x8A0E;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x30D5;&#x30E9;&#x30B0; &#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C9;&#x306E;&#x8868;&#x9762;&#x88AB;&#x8986;&#x7387;&#x306F;&#x3001;&#x6B63;&#x78BA;&#x306B;&#x30A2;&#x30DF;&#x30F3;&#x7D42;&#x7AEF;&#x8868;&#x9762;&#x3068;&#x4E0D;&#x6D3B;&#x6027;&#x30A2;&#x30EB;&#x30AB;&#x30F3;&#x30C1; &#x30AA;&#x30FC;&#x30EB;&#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x30A2;&#x30EB;&#x30AB;&#x30F3;&#x30C1; &#x30AA;&#x30FC;&#x30EB;&#x4E0A;&#x6DF7;&#x5408;&#x5358;&#x5206;&#x5B50;&#x819C;&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C9; &#x30A2;&#x30EC;&#x30A4;&#x3092;&#x4F5C;&#x6210;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x5236;&#x5FA1;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C9; &#x30A8;&#x30D4;&#x30C8;&#x30FC;&#x30D7;&#x306E;&#x30E2;&#x30EB;&#x5206;&#x7387;&#x306F;&#x307E;&#x305F;&#x30D5;&#x30E9;&#x30B0; &#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C9;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x975E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x3059;&#x308B;&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C9;&#x306E; HA &#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30A4;&#x30F3;&#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x53CD;&#x5FDC;&#x6EB6;&#x6DB2;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x5236;&#x5FA1;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x30D5;&#x30E9;&#x30B0;&#x7D50;&#x5408;&#x30E2;&#x30C1;&#x30FC;&#x30D5;&#x306B;&#x57FA;&#x3065;&#x304F;&#x4E9C;&#x7A2E;&#x3092;&#x7814;&#x7A76;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x3001;&#x7570;&#x306A;&#x308B; SPR &#x30A4;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B8;&#x30F3;&#x30B0;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x5358;&#x4E00;&#x306E;&#x30A2;&#x30DF;&#x30CE;&#x9178;&#x7F6E;&#x63DB;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C9;&#x3092;&#x533A;&#x5225;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x53EF;&#x80FD;&#x3067;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x3001;&#x4FE1;&#x53F7;&#x306E;&#x5B9A;&#x91CF;&#x7684;&#x89E3;&#x6790;&#x306F;&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C9;&#x914D;&#x5217;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x540C;&#x6642;&#x306B; 4 &#x3064;&#x306E;&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C9;&#x6297;&#x4F53;&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C9;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x306E;&#x7D50;&#x5408;&#x5B9A;&#x6570;&#x306E;&#x6C7A;&#x5B9A;&#x306B;&#x9054;&#x6210;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;K(ads)&#x3001;&#x7D50;&#x5408;&#x5B9A;&#x6570;&#x306E;&#x30D5;&#x30E9;&#x30B0; &#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C9;&#x3060;&#x3063;&#x305F;&#x6E2C;&#x5B9A;&#x3057;&#x3001;1.5 x 10 (8) &#x7D50;&#x5408;&#x5B9A;&#x6570; 2.8 x 10 (7), 5.0 x 10 (6), &#x304A;&#x3088;&#x3073; 2.0 x 10(6) M(-1) &#x306E;&#x7D50;&#x5408;&#x30E2;&#x30C1;&#x30FC;&#x30D5;&#x306B;&#x57FA;&#x3065;&#x304F;&#x6B8B;&#x57FA;&#x3092;&#x30A2;&#x30E9;&#x30CB;&#x30F3;&#x7F6E;&#x63DB;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x4F5C;&#x3089;&#x308C;&#x305F;&#x30D0;&#x30EA;&#x30A2;&#x30F3;&#x30C8;&#x3092;&#x6301;&#x3063;&#x3066;&#x3044;&#x305F;&#x304C; M(-1) &#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x5224;&#x660E;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;

&#x8868;&#x9762;&#x30D7;&#x30E9;&#x30BA;&#x30E2;&#x30F3;&#x5171;&#x9CF4;&#x30A4;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B8;&#x30F3;&#x30B0;&#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x305F;&#x30A8;&#x30D4;&#x30C8;&#x30FC;&#x30D7;&#x6297;&#x4F53;&#x9593;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x306E;&#x7814;&#x7A76;&#x7528;&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C9; &#x30A2;&#x30EC;&#x30A4;&#x306E;&#x6700;&#x9069;&#x5316;&#x3068;&#x7279;&#x6027;&#x8A55;&#x4FA1;

&#xD45C;&#xBA74; &#xD50C;&#xB77C;&#xC2A4;&#xBAAC; &#xACF5;&#xBA85; (SPR)&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xD3A9; &#xD2F0; &#xB4DC; &#xD56D; &#xCCB4; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC758; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xB97C; &#xC704;&#xD55C; &#xAE08; &#xD45C;&#xBA74;&#xC5D0; &#xD3A9; &#xD2F0; &#xB4DC; &#xBC30;&#xC5F4;&#xC758; &#xD2B9;&#xC131;&#xC744; &#xC124;&#xBA85; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xD3A9; &#xD2F0; &#xB4DC; &#xBC30;&#xC5F4;&#xC744; &#xC900;&#xBE44; &#xD558;&#xB294; &#xB450; &#xB2E8;&#xACC4;&#xB85C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;: (i) &#xBCD1;&#xB82C; microchannels &#xC9D1;&#xD569; thiol &#xC774;&#xD669;&#xD654; &#xAD50;&#xD658; &#xBC18;&#xC751;; &#x70AD; &#xD45C;&#xBA74;&#xC5D0; &#xD3A9; &#xD2F0; &#xB4DC; &#xD504;&#xB85C;&#xBE0C;&#xB97C; &#xC5F0;&#xACB0; &#xC2DC; &#xC57D;&#xC744; &#xC804;&#xB2EC; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD574; &#xC0AC;&#xC6A9;&#xD55C; (&#xB7A9;&#xC5B4;&#xB77C;&#xC6B4;&#xB4DC; &#xB514;&#xC790;&#xC778;&#xC73C;&#xB85C; &#xB450; &#xBC88;&#xC9F8; &#xBC84;&#xC2A4;&#xAC00; &#xC544;&#xB2CC; &#xB9C8;&#xC774;&#xD06C;&#xB85C; &#xCC44;&#xB110; 2) &#xD3A9; &#xD2F0; &#xB4DC; &#xD45C;&#xBA74;&#xC5D0; &#xD56D; &#xCCB4; &#xC194;&#xB8E8;&#xC158;&#xC744; &#xC18C;&#xAC1C; &#xD558; &#xACE0; &#xC791;&#xC740; &#xBD80;&#xD53C; &#xD750;&#xB984; &#xC140; (5 microL)&#xC73C;&#xB85C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;. &#xB370;&#xBAA8;, SPR &#xC774;&#xBBF8;&#xC9D5; &#xD3A9; &#xD2F0; &#xB4DC; &#xBC30;&#xC5F4;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xD50C;&#xB798;&#xADF8; &#xD53C;&#xD1A0; &#xD504; &#xD0DC;&#xADF8; &#xBC0F; &#xB2E8;&#xC77C; &#xD074;&#xB85C; &#xB110; anti-FLAG m2&#xC758; &#xC0C1;&#xD638; &#xAC10;&#xC2DC; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;. &#xD3A9; &#xD2F0; &#xB4DC; &#xD56D; &#xCCB4; &#xC30D;&#xC774; &#xC735;&#xD574; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC744; &#xC21C;&#xD654; &#xD558;&#xB294; &#xC218;&#xB2E8;&#xC73C;&#xB85C; &#xADF8; &#xC911;&#xC694;&#xC131; &#xB54C;&#xBB38;&#xC5D0; &#xACF5;&#xBD80; &#xD588;&#xB2E4;. &#xD50C;&#xB798;&#xADF8; &#xD3A9; &#xD2F0; &#xB4DC;&#xC758; &#xD45C;&#xBA74; &#xAC80;&#xC0AC;&#xB294; &#xC815;&#xD655; &#xD558; &#xAC8C; &#xD3EC;&#xD568; &#xB41C; &#xC544;&#xBBFC; &#xC885;&#xB8CC; &#xD45C;&#xBA74;&#xACFC; &#xBD88;&#xD65C;&#xC131; alkanethiol alkanethiols&#xC758; &#xD63C;&#xD569;&#xB41C; monolayers&#xC5D0; &#xD3A9;&#xD0C0;&#xC774;&#xB4DC; &#xC5B4;&#xB808;&#xC774; &#xC0DD;&#xC131;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC81C;&#xC5B4; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xD3A9; &#xD2F0; &#xB4DC; epitopes &#xCCA9; &#xC790; &#xC77C;&#xBD80;&#xB294; &#xB610;&#xD55C; &#xBC18;&#xC751; &#xC194;&#xB8E8;&#xC158; &#xD50C;&#xB798;&#xADF8; &#xD3A9; &#xD2F0; &#xB4DC; &#xBC0F; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9; &#xBE44; &#xD3A9;&#xD0C0;&#xC774;&#xB4DC; &#xD558; &#xB610;&#xB294; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD14C;&#xC778;&#xC744; &#xD3EC;&#xD568; &#xD558; &#xC5EC; &#xC81C;&#xC5B4; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xD50C;&#xB798;&#xADF8; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xBAA8;&#xD2F0;&#xBE0C;&#xC5D0; &#xB530;&#xB77C; &#xBCC0;&#xD615; &#xD558; &#xC5EC; SPR &#xC774;&#xBBF8;&#xC9D5; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xB2E8;&#xC77C; &#xC544;&#xBBF8;&#xB178;&#xB97C; &#xD568;&#xC720;&#xD55C; &#xC0B0; &#xC131; &#xB300;&#xCCB4;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC11C;&#xB85C; &#xB2E4;&#xB978; &#xD3A9; &#xD2F0; &#xB4DC;&#xB97C; &#xAD6C;&#xBCC4; &#xAC00;&#xB2A5; &#xD588;&#xB2E4;. &#xB610;&#xD55C;, &#xC815;&#xB7C9; &#xBD84;&#xC11D;&#xC758; &#xC2E0;&#xD638; &#xD3A9; &#xD2F0; &#xB4DC; &#xC5B4;&#xB808;&#xC774; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xB3D9;&#xC2DC;&#xC5D0; 4 &#xAC1C;&#xC758; &#xD3A9; &#xD2F0; &#xB4DC; &#xD56D; &#xCCB4; &#xD3A9; &#xD2F0; &#xB4DC; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC758; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xC0C1;&#xC218;&#xB97C; &#xACB0;&#xC815; &#xD558; &#xB2EC;&#xC131; &#xD588;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xC0C1;&#xC218;, K(ads), &#xD3A9; &#xD2F0; &#xB4DC; &#xD50C;&#xB798;&#xADF8;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xCE21;&#xC815; &#xD558; &#xACE0; 1.5 x 10(8) M(-1) &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xBAA8;&#xD2F0;&#xBE0C;&#xC5D0; &#xB530;&#xB77C; &#xC794;&#xB958;&#xBB3C;&#xC744; &#xC704;&#xD55C; &#xC54C;&#xB77C;&#xB2CC;&#xC758; &#xB300;&#xCCB4;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xBCC0;&#xD615; &#xD588;&#xB2E4; 2.8 x 10(7), 5.0 x &#xC2DC;&#xBBFC;&#xAD8C;&#xC774; 2.0 x &#xC2DC;&#xBBFC;&#xAD8C;&#xC774; M(-1)&#xC758; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xC0C1;&#xC218;&#xB294; &#xAC83;&#xC744; &#xBC1C;&#xACAC; &#xD588;&#xB2E4;.

&#xD2B9;&#xC131;&#xD654; &#xBC0F; &#xD45C;&#xBA74; &#xD50C;&#xB77C;&#xC2A4;&#xBAAC; &#xACF5;&#xBA85; &#xC601;&#xC0C1; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558;&#xB294; epitope &#xD56D; &#xCCB4; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC758; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xD3A9; &#xD2F0; &#xB4DC; &#xBC30;&#xC5F4;&#xC758; &#xCD5C;&#xC801;&#xD654;.

Se describe la caracterizaci&oacute;n de matrices de p&eacute;ptido en superficies de oro dise&ntilde;ado para el estudio de las interacciones de p&eacute;ptido-anticuerpo mediante resonancia de plasm&oacute;n superficial (SPR). Se utiliz&oacute; un proceso de dos pasos para preparar los arreglos de discos de p&eacute;ptido: () un conjunto de microcanales paralelos acostumbr&eacute; a entregar los reactivos qu&iacute;micos para unir covalentemente p&eacute;ptido sondas a la superficie por una reacci&oacute;n de intercambio tiol-disulfuro; (ii) un segundo microchannel una envolvente se utiliz&oacute; como una celda de flujo de peque&ntilde;o volumen (5 microL) introducir soluciones de anticuerpo a la superficie del p&eacute;ptido. Como una demostraci&oacute;n, las interacciones de la bandera del ep&iacute;topo tag y monoclonal anti-Flag M2 fueron supervisadas por SPR im&aacute;genes utilizando una matriz de p&eacute;ptido. Este par de p&eacute;ptido-anticuerpo fue estudiada debido a su importancia como medio para purificar prote&iacute;nas de fusi&oacute;n. La cobertura superficial del p&eacute;ptido bandera precisamente fue controlada mediante la creaci&oacute;n de los arreglos de discos de p&eacute;ptido en monocapas mixtas de alkanethiols que contiene una superficie terminada en amina y un alkanethiol inerte. La fracci&oacute;n molar de p&eacute;ptido epitopos tambi&eacute;n estaba controlada por reaccionar soluciones que contienen p&eacute;ptidos de la bandera y el p&eacute;ptido no interacci&oacute;n HA o ciste&iacute;na. Mediante el estudio de variantes basadas en el motivo de uni&oacute;n de la bandera, fue posible distinguir p&eacute;ptidos diferentes por una sola substituci&oacute;n del amino&aacute;cido usando proyecci&oacute;n de imagen de SPR. Adem&aacute;s, el an&aacute;lisis cuantitativo de la se&ntilde;al se logr&oacute; utilizando la matriz de p&eacute;ptido para determinar simult&aacute;neamente las constantes de uni&oacute;n de las interacciones de anticuerpo-p&eacute;ptido para cuatro p&eacute;ptidos. La constante de Uni&oacute;n, K(ads), la bandera p&eacute;ptido se midi&oacute; y se encontr&oacute; que 1.5 x 10 (8) M(-1) mientras que variantes de la sustituci&oacute;n de la alanina de residuos basados en el motivo de Uni&oacute;n ten&iacute;an constantes vinculante de 2.8 x 10 5.0 x 10 (6) y 2.0 x 10 (6) M(-1).

Caracterizaci&oacute;n y optimizaci&oacute;n de matrices de p&eacute;ptido para el estudio de las interacciones del ep&iacute;topo-anticuerpo mediante resonancia de plasmones.

&#x521B;&#x5EFA;&#x9635;&#x5217;&#x4E0E;&#x8868;&#x5F81;&#x7EC4;&#x6C28;&#x9178;&#x6807;&#x7B7E;&#x878D;&#x5408;&#x86CB;&#x767D;&#x4F7F;&#x7528;&#x4E09;&#x4E59;&#x9178; (NTA) &#x6355;&#x83B7;&#x63A2;&#x6D4B;&#x5668;&#x9EC4;&#x91D1;&#x8584;&#x819C;&#x7814;&#x7A76;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;-&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x548C; DNA-&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x63CF;&#x8FF0;&#x3002;11 Mercaptoundecylamine &#x81EA;&#x7EC4;&#x88C5;&#x7684;&#x819C;&#x662F;&#x7528;&#x5F02;&#x79CD;&#x94FE;&#x63A5;&#x5668; N succinimidyl S-acetylthiopropionate (&#x6297;&#x6813;&#x4E38;&#xFF09; &#x521B;&#x5EFA;&#x65E0;&#x529F;&#x5DEF;&#x57FA;&#x7EC8;&#x6B62;&#x66F2;&#x9762;&#x7684;&#x53CD;&#x5E94;&#x3002;&#x56FD;&#x5BB6;&#x65C5;&#x6E38;&#x5C40;&#x6355;&#x83B7;&#x4EE3;&#x7406;&#x88AB;&#x56FA;&#x5B9A;&#x5316;&#x7684;&#x5DEF;&#x57FA;&#x8868;&#x9762;&#x53CD;&#x5E94;&#x9A6C;&#x6765;&#x9170;&#x4E9A;&#x80FA;&#x56FD;&#x5BB6;&#x65C5;&#x6E38;&#x5C40;&#x5206;&#x5B50;&#x3002;&#x6297;&#x6813;&#x4E38;&#x548C;&#x56FD;&#x5BB6;&#x65C5;&#x6E38;&#x5C40;&#x7684;&#x9644;&#x4EF6;&#x5316;&#x5B66;&#x8BC1;&#x5B9E;&#x4E0E;&#x5085;&#x91CC;&#x53F6;&#x53D8;&#x6362;&#x7EA2;&#x5916;&#x53CD;&#x5C04;&#x5438;&#x6536;&#x8C31;&#x3002;&#x9762;&#x5411;&#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x9635;&#x5217;&#x634F;&#x9020;&#x4F7F;&#x7528;&#x4E00;&#x4E2A;&#x4E24;&#x6B65;&#x8FC7;&#x7A0B;&#xFF1A; (i) &#x56FE;&#x6848;&#x56FD;&#x5BB6;&#x65C5;&#x6E38;&#x5C40;&#x901A;&#x8FC7;&#x5355;&#x4E00;&#x7684;&#x86C7;&#x7EB9;&#x77F3; poly(dimethylsiloxane) &#x5FAE;&#x901A;&#x9053; &#xFF1B; &#x9996;&#x5148;&#x5F62;&#x6210;&#x5355;&#x5206;&#x5B50;&#x819C;(ii) &#x7B2C;&#x4E8C;&#x7EC4;&#x5E73;&#x884C;&#x5FAE;&#x7136;&#x540E;&#x7528;&#x6765;&#x56FA;&#x5B9A;&#x5230;&#x8FD9;&#x79CD;&#x6A21;&#x5F0F;&#x5728;&#x79BB;&#x6563;&#x7684;&#x5730;&#x70B9;&#x4E0A;&#x7684;&#x591A;&#x4E2A; His &#x6807;&#x8BB0;&#x86CB;&#x767D;&#x3002;SPR &#x6210;&#x50CF;&#x6D4B;&#x91CF;&#x88AB;&#x96C7;&#x7528;&#x6765;&#x5B9A;&#x6027;&#x7684;&#x56FA;&#x5B9A;&#x5316;&#x548C;&#x56FD;&#x5BB6;&#x65C5;&#x6E38;&#x5C40;&#x8868;&#x9762;&#x5230;&#x4ED6;&#x6807;&#x8BB0;&#x878D;&#x5408;&#x86CB;&#x767D;&#x7684;&#x7279;&#x5F02;&#x6027;&#x3002;SPR &#x6210;&#x50CF;&#x6D4B;&#x91CF;&#x4E5F;&#x4E0E;&#x4ED6;&#x6807;&#x8BB0;&#x878D;&#x5408;&#x86CB;&#x767D;&#x9635;&#x5217;&#x4E2D;&#x4F7F;&#x7528;&#xFF0C;&#x591A;&#x4E2A;&#x6297;&#x4F53;&#x6297;&#x539F;&#x7ED3;&#x5408;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#xFF0C;&#x5E76;&#x76D1;&#x6D4B;&#x4E0E;&#x5854;&#x5854;&#x6846;&#x7ED3;&#x5408;&#x86CB;&#x767D;&#x7684;&#x53CC;&#x94FE; DNA &#x7279;&#x5B9A;&#x5E8F;&#x5217;&#x7684;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;&#x9EC4;&#x91D1;&#x66F2;&#x9762;&#x4E0A;&#x521B;&#x5EFA;&#x7684;&#x4ED6;&#x6807;&#x8BB0;&#x878D;&#x5408;&#x86CB;&#x767D;&#x9635;&#x5217;&#x8FD8;&#x7528;&#x4E8E;&#x76D1;&#x6D4B;&#x7ED3;&#x5408;&#x6297;&#x4F53;&#x4E0E;&#x8367;&#x5149;&#x663E;&#x5FAE;&#x955C;&#x5728;&#x4E09;&#x660E;&#x6CBB;&#x6D4B;&#x5B9A;&#x683C;&#x5F0F;&#x3002;

&#x7528;&#x4E8E;&#x8868;&#x9762;&#x7B49;&#x79BB;&#x5B50;&#x4F53;&#x5171;&#x632F;&#x6210;&#x50CF;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;-&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x548C; DNA-&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x7814;&#x7A76;&#x7EC4;&#x6C28;&#x9178;&#x6807;&#x7B7E;&#x878D;&#x5408;&#x86CB;&#x767D;&#x9635;&#x5217;&#x7684;&#x5236;&#x5907;&#x3002;

The creation and characterization of histidine-tagged fusion protein arrays using nitrilotriacetic acid (NTA) capture probes on gold thin films for the study of protein-protein and protein-DNA interactions is described. Self-assembled monolayers of 11-mercaptoundecylamine were reacted with the heterobifunctional linker N-succinimidyl S-acetylthiopropionate (SATP) to create reactive sulfhydryl-terminated surfaces. NTA capture agents were immobilized by reacting maleimide-NTA molecules with the sulfhydryl surface. The SATP and NTA attachment chemistry was confirmed with Fourier transform infrared reflection absorption spectroscopy. Oriented protein arrays were fabricated using a two-step process: (i) patterned NTA monolayers were first formed through a single serpentine poly(dimethylsiloxane) microchannel; (ii) a second set of parallel microchannels was then used to immobilize multiple His-tagged proteins onto this pattern at discrete locations. SPR imaging measurements were employed to characterize the immobilization and specificity of His-tagged fusion proteins to the NTA surface. SPR imaging measurements were also used with the His-tagged fusion protein arrays to study multiple antibody-antigen binding interactions and to monitor the sequence-specific interaction of double-stranded DNA with TATA box-binding protein. In addition, His-tagged fusion protein arrays created on gold surfaces were also used to monitor antibody binding with fluorescence microscopy in a sandwich assay format.

Fabrication of histidine-tagged fusion protein arrays for surface plasmon resonance imaging studies of protein-protein and protein-DNA interactions.

La cr&eacute;ation et la caract&eacute;risation des r&eacute;seaux de prot&eacute;ines histidine-&eacute;tiquet&eacute;es de fusion &agrave; l&#39;aide de l&#39;acide nitrilotriac&eacute;tique (NTA) capturent des sondes sur les couches minces or pour l&#39;&eacute;tude des prot&eacute;ines et des interactions de prot&eacute;ine-ADN est d&eacute;crite. Les monocouches autoassembl&eacute;es de 11-mercaptoundecylamine r&eacute;agissent avec l&#39;&eacute;diteur de liens h&eacute;t&eacute;robifonctionnel N-succinimidyl S-acetylthiopropionate (SATP) pour cr&eacute;er des surfaces r&eacute;actives se terminant par sulfhydryle. Agents de saisie NTA ont &eacute;t&eacute; immobilis&eacute;s par des mol&eacute;cules mal&eacute;imide-NTA qui r&eacute;agissent avec la surface sulfhydryle. La chimie de fixation SATP et NTA a &eacute;t&eacute; confirm&eacute;e par spectroscopie d&#39;absorption infrarouge de r&eacute;flexion transform&eacute;e de Fourier. Alignements de prot&eacute;ine orient&eacute;s ont &eacute;t&eacute; fabriqu&eacute;s &agrave; l&#39;aide d&#39;un processus en deux &eacute;tapes: (i) aux motifs NTA monocouches se forment d&#39;abord &agrave; travers un microcanal unique poly(dimethylsiloxane) serpentine ; (ii) une deuxi&egrave;me s&eacute;rie de microcanaux parall&egrave;les a &eacute;t&eacute; ensuite utilis&eacute;e pour immobiliser plusieurs prot&eacute;ines His-tag sur ce mod&egrave;le dans des endroits discrets. Mesures d&#39;imagerie de la SPR ont &eacute;t&eacute; utilis&eacute;es pour caract&eacute;riser l&#39;immobilisation et la sp&eacute;cificit&eacute; des prot&eacute;ines de fusion His marqu&eacute;es &agrave; la surface NTA. SPR d&#39;imagerie mesures ont &eacute;t&eacute; &eacute;galement utilis&eacute;es avec les alignements de prot&eacute;ine de fusion His-tag pour &eacute;tudier les interactions multiples liaison anticorps-antig&egrave;ne et de surveiller l&#39;interaction sp&eacute;cifique de la s&eacute;quence de l&#39;ADN double-brin avec prot&eacute;ine-bo&icirc;te TATA. En outre, alignements de prot&eacute;ine de fusion His-tag cr&eacute;&eacute;s sur surfaces or servaient aussi &agrave; surveiller la liaison de l&#39;anticorps avec la microscopie en fluorescence sous forme de dosage sandwich.

Fabrication des alignements de prot&eacute;ine de fusion de histidine-&eacute;tiquet&eacute;es pour surface plasmon resonance imaging des &eacute;tudes d&#39;interactions prot&eacute;ine-prot&eacute;ine et prot&eacute;ine-ADN.

Die Erstellung und die Charakterisierung von 6xHis-Tag-Fusion-Protein-Reihen mit Nitrilotriessigs&auml;ure (NTA) erfassen Sonden auf gold D&uuml;nnschichten f&uuml;r die Untersuchung von Protein-Protein und Protein-DNA-Wechselwirkungen beschrieben wird. Assembled Monolayers von 11-Mercaptoundecylamine wurden mit der Linker Heterobifunctional N-Succinimidyl S-Acetylthiopropionate (SATP), reaktive Sulfhydryl-terminierte Oberfl&auml;chen erstellen reagiert. NTA-Erfassung-Agenten wurden durch Reaktion Maleimide-NTA-Molek&uuml;le mit der Sulfhydryl-Oberfl&auml;che immobilisiert. Die SATP und NTA-Anlage-Chemie wurde mit Fourier-Transform-Infrarot Reflexion-Absorptionsspektroskopie best&auml;tigt. Orientierte Protein-Reihen wurden von Schritten fabriziert: (i) gemustert NTA Monolayers bildeten sich zuerst durch einen einzigen serpentine Poly Microchannel; (Ii) eine zweite Reihe von parallelen Mikrokan&auml;len wurde dann verwendet, um mehrere seiner etikettierten Proteine auf dieses Muster an einzelnen Standorten zu immobilisieren. SPR bildgebende Messungen wurden eingesetzt, um die Immobilisierung und Spezifit&auml;t von His-Fusionsproteinen der NTA-Oberfl&auml;che zu charakterisieren. SPR bildgebende Messungen wurden auch mehrere Antik&ouml;rper-Antigen-Bindung Interaktionen zu studieren und die Sequenz-spezifische Interaktion von Double-Stranded DNA mit TATA Kasten-verbindliches Protein zu &uuml;berwachen mit dem His-Tag Fusion Protein Arrays verwendet. His-Tag Fusion Protein Arrays erstellt am gold Oberfl&auml;chen wurden dar&uuml;ber hinaus auch verwendet, um die Antik&ouml;rper-Bindung mit Fluoreszenzmikroskopie in einem Sandwich-Assay-Format zu &uuml;berwachen.

Herstellung von 6xHis-Tag-Fusion-Protein-Reihen f&uuml;r Surface Plasmon Resonance imaging Studien von Protein-Protein und Protein-DNA-Wechselwirkungen.

La creazione e la caratterizzazione di matrici di proteine istidina-etichettate fusione utilizzando acido nitrilotriacetico (NTA) catturare le sonde su film sottili di oro per lo studio della proteina-proteina e le interazioni proteina-DNA &egrave; descritto. Monostrati auto-assemblati di 11-mercaptoundecylamine erano ha reagiti con il linker heterobifunctional N-succinimidil S-acetylthiopropionate (SATP) per creare superfici reattive sulfidrilici terminato. Agenti cattura NTA furono immobilizzati da molecole con-NTA reagire con la superficie sulfidrilici. La chimica di attaccamento SATP e NTA &egrave; stata confermata con spettroscopia di assorbimento infrarosso riflesso Fourier transform. Le schiere della proteina orientato erano fabbricate utilizzando un processo in due fasi: (i) patterned NTA monostrati in primo luogo sono stati formati attraverso un singolo serpentino poly(dimethylsiloxane) microchannel; (ii) un secondo set di microcanali paralleli fu quindi utilizzato per immobilizzare pi&ugrave; proteine His-tag su questo modello in punti discreti. Misurazioni imaging SPR &egrave; sono impiegate per caratterizzare l&#39;immobilizzazione e la specificit&agrave; delle proteine di fusione His-tag alla superficie NTA. Misurazioni imaging SPR sono state utilizzate anche con le matrici di proteina His-Tag fusion per studiare le interazioni di legame dell&#39;anticorpo-antigene multiple e monitorare l&#39;interazione specifica sequenza di DNA double-stranded con TATA box-proteina. Inoltre, le schiere della proteina di fusione His-Tag create su superfici d&#39;oro erano anche utilizzate per monitorare grippaggio dell&#39;anticorpo con microscopia di fluorescenza in un formato di dosaggio del panino.

Fabbricazione di matrici proteine istidina-etichettate fusion per la risonanza plasmonica di superficie gli studi delle interazioni della proteina-proteina e proteina-DNA.

&#x5275;&#x88FD;&#x30FB;&#x8A08;&#x6E2C;&#x30CB;&#x30C8;&#x30EA;&#x30ED;&#x4E09;&#x9162;&#x9178; (NTA) &#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x3066;&#x30D2;&#x30B9;&#x30C1;&#x30B8;&#x30F3;&#x30BF;&#x30B0;&#x878D;&#x5408;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x914D;&#x5217;&#x306E;&#x91D1;&#x8584;&#x819C;&#x4E0A;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x7814;&#x7A76;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30D6;&#x3092;&#x30AD;&#x30E3;&#x30D7;&#x30C1;&#x30E3;&#x3057;&#x3001;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA; DNA &#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x3092;&#x8A18;&#x8FF0;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;11 Mercaptoundecylamine &#x306E;&#x81EA;&#x5DF1;&#x7D44;&#x7E54;&#x5316;&#x5358;&#x5206;&#x5B50;&#x819C;&#x3001;heterobifunctional &#x30EA;&#x30F3;&#x30AB;&#x30FC; N &#x8A66;&#x9A13;&#x306B;&#x3088;&#x308B; S-acetylthiopropionate &#xFF08;SATP&#xFF09; &#x53CD;&#x5FDC;&#x6027; sh &#x57FA;&#x7D42;&#x7AEF;&#x8868;&#x9762;&#x3092;&#x4F5C;&#x6210;&#x3059;&#x308B;&#x306E;&#x306B;&#x53CD;&#x5FDC;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;NTA &#x6355;&#x7372;&#x306E;&#x30A8;&#x30FC;&#x30B8;&#x30A7;&#x30F3;&#x30C8;&#x3068; sh &#x57FA;&#x306E;&#x8868;&#x9762;&#x53CD;&#x5FDC;&#x30DE;&#x30EC;&#x30A4;&#x30DF;&#x30C9; NTA &#x5206;&#x5B50;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x56FA;&#x5B9A;&#x5316;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;SATP NTA &#x6DFB;&#x4ED8;&#x5316;&#x5B66;&#x30D5;&#x30FC;&#x30EA;&#x30A8;&#x5909;&#x63DB;&#x8D64;&#x5916;&#x53CD;&#x5C04;&#x5438;&#x53CE;&#x5206;&#x5149;&#x6CD5;&#x3067;&#x78BA;&#x8A8D;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x6307;&#x5411;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x306E;&#x30A2;&#x30EC;&#x30A4;&#x306F;&#x3001;2 &#x6BB5;&#x968E;&#x306E;&#x30D7;&#x30ED;&#x30BB;&#x30B9;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x306B;&#x305D;&#x308C;&#x305E;&#x308C;&#x4F5C;&#x88FD;&#x3057;&#x305F;: (i) NTA &#x30D1;&#x30BF;&#x30FC;&#x30F3;&#x5316;&#x5358;&#x5206;&#x5B50;&#x819C;&#x306E;&#x6700;&#x521D;&#x5358;&#x4E00;&#x306E;&#x86C7;&#x884C;&#x3057;&#x305F;&#x30DD;&#x30EA;&#x30B8;&#x30E1;&#x30C1;&#x30EB;&#x30B7;&#x30ED;&#x30AD;&#x30B5;&#x30F3; &#x30DE;&#x30A4;&#x30AF;&#x30ED; &#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x3092;&#x901A;&#x3058;&#x3066;; &#x3092;&#x5F62;&#x6210;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;(ii) &#x4E26;&#x5217;&#x30DE;&#x30A4;&#x30AF;&#x30ED; &#x30C1;&#x30E3;&#x30F3;&#x30CD;&#x30EB;&#x306E; 2 &#x756A;&#x76EE;&#x306E;&#x30BB;&#x30C3;&#x30C8;&#x306F;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x30D1;&#x30BF;&#x30FC;&#x30F3;&#x96E2;&#x6563;&#x5730;&#x70B9;&#x306B;&#x8907;&#x6570;&#x306E;&#x5F7C;&#x306E;&#x4ED8;&#x3051;&#x3089;&#x308C;&#x305F;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x306E;&#x56FA;&#x5B9A;&#x5316;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x305F;&#x3002;SPR &#x30A4;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B8;&#x30F3;&#x30B0;&#x6E2C;&#x5B9A;&#x306E;&#x56FA;&#x5B9A;&#x5316;&#x3068; NTA &#x8868;&#x9762;&#x3078;&#x306E;&#x5F7C;&#x306E;&#x4ED8;&#x3051;&#x3089;&#x308C;&#x305F;&#x878D;&#x5408;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x306E;&#x7279;&#x7570;&#x6027;&#x3092;&#x7279;&#x5FB4;&#x3065;&#x3051;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x63A1;&#x7528;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;SPR &#x30A4;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B8;&#x30F3;&#x30B0;&#x6E2C;&#x5B9A;&#x306F;&#x8907;&#x6570;&#x306E;&#x6297;&#x4F53;-&#x6297;&#x539F;&#x306E;&#x7D50;&#x5408;&#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x3092;&#x7814;&#x7A76;&#x3057;&#x3066; TATA &#x30DC;&#x30C3;&#x30AF;&#x30B9;&#x7D50;&#x5408;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x3068;&#x4E8C;&#x672C;&#x9396; DNA &#x306E;&#x30B7;&#x30FC;&#x30B1;&#x30F3;&#x30B9;&#x56FA;&#x6709;&#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x3092;&#x76E3;&#x8996;&#x3059;&#x308B;&#x3001;&#x30D5;&#x30E5;&#x30FC;&#x30B8;&#x30E7;&#x30F3;&#x306E;&#x5F7C;&#x306E;&#x4ED8;&#x3051;&#x3089;&#x308C;&#x305F;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x306E;&#x30A2;&#x30EC;&#x30A4;&#x3082;&#x4F7F;&#x7528;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x307E;&#x305F;&#x3001;&#x91D1;&#x8868;&#x9762;&#x3067;&#x4F5C;&#x6210; fusion &#x306E;&#x5F7C;&#x306E;&#x4ED8;&#x3051;&#x3089;&#x308C;&#x305F;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x306E;&#x30A2;&#x30EC;&#x30A4;&#x306F;&#x30B5;&#x30F3;&#x30C9;&#x30A4;&#x30C3;&#x30C1;&#x8A66;&#x91D1;&#x306E;&#x5F62;&#x5F0F;&#x3067;&#x306E;&#x86CD;&#x5149;&#x9855;&#x5FAE;&#x93E1;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x6297;&#x4F53;&#x306E;&#x7D50;&#x5408;&#x3092;&#x76E3;&#x8996;&#x3059;&#x308B;&#x307E;&#x305F;&#x4F7F;&#x7528;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;

&#x30D2;&#x30B9;&#x30C1;&#x30B8;&#x30F3;&#x30BF;&#x30B0;&#x878D;&#x5408;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x914D;&#x5217;&#x8868;&#x9762;&#x30D7;&#x30E9;&#x30BA;&#x30E2;&#x30F3;&#x5171;&#x9CF4;&#x30A4;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B8;&#x30F3;&#x30B0;&#x7814;&#x7A76;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA; DNA &#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x4F5C;&#x88FD;&#x3002;

&#xC0DD;&#xC131; &#xBC0F; &#xD2B9;&#xC131;&#xD654; &#xD788;&#xC2A4;&#xD2F0;&#xB518; &#xD0DC;&#xADF8; &#xD4E8;&#xC804; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xBC30;&#xC5F4;&#xC744; nitrilotriacetic &#xC0B0; (NTA)&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xCEA1;&#xCC98; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;-&#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xAE08; &#xBC15;&#xB9C9;&#xC5D0; &#xD504;&#xB85C;&#xBE0C; &#xBC0F; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; DNA &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9; &#xC124;&#xBA85;. 11-Mercaptoundecylamine&#xC758; &#xC870;&#xB9BD;&#xB41C; monolayers heterobifunctional &#xB9C1;&#xCEE4; N succinimidyl S-acetylthiopropionate (SATP) &#xBC18;&#xC751;&#xC131; sulfhydryl &#xC885;&#xB8CC; &#xC11C;&#xD53C;&#xC2A4; &#xC0DD;&#xC131; &#xBC18;&#xC751; &#xD588;&#xB2E4;. NTA &#xCEA1;&#xCC98; &#xC5D0;&#xC774;&#xC804;&#xD2B8; sulfhydryl &#xD45C;&#xBA74; &#xBC18;&#xC751; maleimide NTA &#xBD84;&#xC790;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC6C0;&#xC9C1;&#xC77C; &#xC218; &#xC788;&#xC5C8;&#xB2E4;. SATP NTA &#xCCA8;&#xBD80; &#xD654;&#xD559; &#xD478;&#xB9AC;&#xC5D0; &#xBCC0;&#xD658; &#xC801;&#xC678;&#xC120; &#xBC18;&#xC0AC; &#xD761;&#xC218; &#xBD84;&#xAD11;&#xD559;&#xC73C;&#xB85C; &#xD655;&#xC778; &#xB410;&#xB2E4;. &#xC911;&#xC2EC;&#xB41C; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xBC30;&#xC5F4;&#xC744; &#xB450; &#xB2E8;&#xACC4; &#xD504;&#xB85C;&#xC138;&#xC2A4;&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xB0A0;&#xC870; &#xD588;&#xB2E4;: (i) &#xAF43;&#xBB34;&#xB2AC; NTA monolayers &#xD55C; &#xBB38;&#xC11D; poly(dimethylsiloxane) &#xBC84;&#xC2A4;&#xAC00; &#xC544;&#xB2CC; &#xB9C8;&#xC774;&#xD06C;&#xB85C; &#xCC44;&#xB110;;&#xB97C; &#xD1B5;&#xD574; &#xBA3C;&#xC800; &#xD615;&#xC131; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4; (ii) &#xB450; &#xBC88;&#xC9F8; &#xC9D1;&#xD569;&#xC774; &#xBCD1;&#xB82C; microchannels &#xB2E4;&#xC74C; &#xAC1C;&#xBCC4; &#xC704;&#xCE58;&#xC5D0;&#xC11C;&#xC774; &#xD328;&#xD134;&#xC5D0; &#xC5EC;&#xB7EC; &#xAC1C;&#xC758; &#xD0DC;&#xADF8;&#xC758; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC744; &#xBB34;&#xB825;&#xD654; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;. SPR &#xC774;&#xBBF8;&#xC9D5; &#xCE21;&#xC815; &#xD2B9;&#xC131; immobilization&#xC640; NTA &#xD45C;&#xBA74;&#xC5D0; &#xADF8;&#xC758; &#xD0DC;&#xADF8; &#xC735;&#xD569; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xD2B9;&#xC774;&#xC131;&#xC744; &#xACE0;&#xC6A9; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC5EC;&#xB7EC; &#xD56D; &#xCCB4;-&#xD56D; &#xC6D0; &#xBB36;&#xB294; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC744; &#xC5F0;&#xAD6C; &#xD558; &#xACE0; &#xD0C0; &#xD0C0; &#xC0C1;&#xC790; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC73C;&#xB85C; &#xC774;&#xC911; &#xAC00;&#xB2E5; DNA&#xC758; &#xC21C;&#xC11C; &#xD2B9;&#xC815; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC744; &#xBAA8;&#xB2C8;&#xD130;&#xB9C1; SPR &#xC774;&#xBBF8;&#xC9D5; &#xCE21;&#xC815; &#xD0DC;&#xADF8; &#xADF8;&#xC758; &#xD4E8;&#xC804; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xBC30;&#xC5F4;&#xC744; &#xB610;&#xD55C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;. &#xB610;&#xD55C; &#xAE08; &#xD45C;&#xBA74;&#xC5D0; &#xB9CC;&#xB4E0; &#xADF8;&#xC758; &#xD0DC;&#xADF8; &#xD4E8;&#xC804; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xBC30;&#xC5F4;&#xC740; &#xC0CC;&#xB4DC;&#xC704;&#xCE58; &#xBD84;&#xC11D; &#xACB0;&#xACFC; &#xD615;&#xD0DC;&#xB85C; &#xD615;&#xAD11; &#xD604;&#xBBF8;&#xACBD; &#xAC80;&#xC0AC; &#xBC95;&#xC73C;&#xB85C; &#xD56D; &#xCCB4; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xC744; &#xBAA8;&#xB2C8;&#xD130;&#xB9C1;&#xC744; &#xC4F0;&#xC600;&#xB2E4;.

&#xD45C;&#xBA74; &#xD50C;&#xB77C;&#xC2A4;&#xBAAC; &#xACF5;&#xBA85; &#xC774;&#xBBF8;&#xC9D5; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; DNA&#xC640; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;-&#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC758; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xD788;&#xC2A4;&#xD2F0;&#xB518; &#xD0DC;&#xADF8; &#xD4E8;&#xC804; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xBC30;&#xC5F4;&#xC758; &#xC81C;&#xC791;.

La creaci&oacute;n y caracterizaci&oacute;n de matrices de la prote&iacute;na de fusi&oacute;n histidina-etiquetado usando &aacute;cido nitrilotriac&eacute;tico (NTA) captura de sondas en pel&iacute;culas delgadas de oro para el estudio de prote&iacute;nas y las interacciones prote&iacute;na-DNA se describe. Monocapas autoensambladas de 11-mercaptoundecylamine fueron reaccionadas con el vinculador de heterobifunctional N-succinimidyl S-acetylthiopropionate (SATP) para crear superficies terminadas sulfidrilo reactivas. Agentes de captura NTA fueron inmovilizados por las mol&eacute;culas de maleimida-NTA reaccionando con la superficie de sulfidrilo. La qu&iacute;mica de accesorio SATP y NTA fue confirmada con espectroscopia de absorci&oacute;n de reflexi&oacute;n infrarroja de transformaci&oacute;n de Fourier. Prote&iacute;na orientado a matrices fueron fabricadas mediante un proceso de dos etapas: () con motivos NTA monocapas se formaron primero a trav&eacute;s de un MCP poly(dimethylsiloxane) serpentina sola; (ii) un segundo conjunto de microcanales paralelos entonces fue utilizado para inmovilizar m&uacute;ltiples prote&iacute;nas de su etiqueta en este patr&oacute;n en lugares discretos. Se utilizaron mediciones imagen SPR para caracterizar la inmovilizaci&oacute;n y la especificidad de su etiquetado como prote&iacute;nas de fusi&oacute;n a la superficie de la NTA. Medidas imagen SPR tambi&eacute;n fueron utilizadas con los arreglos de discos de prote&iacute;na de fusi&oacute;n de su etiqueta para estudiar las interacciones m&uacute;ltiples uni&oacute;n ant&iacute;geno-anticuerpo y monitorizar la interacci&oacute;n de la secuencia espec&iacute;fica de ADN de doble hebra con prote&iacute;na de uni&oacute;n a la caja TATA. Adem&aacute;s, matrices de prote&iacute;na de fusi&oacute;n etiquetado como su creadas en superficies de oro fueron utilizadas tambi&eacute;n para supervisar la Uni&oacute;n de anticuerpos con microscop&iacute;a de fluorescencia en un formato de ensayo de s&aacute;ndwich.

Fabricaci&oacute;n de matrices de prote&iacute;na de fusi&oacute;n histidina-etiquetado para estudios de interacciones prote&iacute;na-prote&iacute;na y prote&iacute;na-ADN resonancia de plasmones.

La cin&eacute;tica de adsorci&oacute;n/desorci&oacute;n de prote&iacute;na sobre microarrays de p&eacute;ptido se estudi&oacute; mediante resonancia de plasmones en tiempo real (SPR). Las interacciones de uni&oacute;n de prote&iacute;na S fueron examinadas usando un arsenal compuesto por cinco diferentes p&eacute;ptidos: N terminal y terminal C inmovilizaci&oacute;n p&eacute;ptido de S de tipo salvaje (S1 y S2), derivado de una secuencia de enlace alternativo de phage display (LB2), un p&eacute;ptido de S NVOC-protegido y una secuencia de control del p&eacute;ptido de bandera (F). Medidas cin&eacute;ticas de la interacci&oacute;n de p&eacute;ptidos de prote&iacute;na-S1 de S fueron analizadas para determinar una constante de velocidad de desorci&oacute;n (k de 1.1 (+/-0.08) x 10(-2) s(-1), una constante de velocidad de adsorci&oacute;n (k(a)) de 1.9 (+/-0.05) x 10 M(-1) s(-1) y una constante de adsorci&oacute;n de equilibrio (K(Ads)) de 1.7 (+/-0.08) x 10 M(-1). Se realizaron medidas de equilibrio imagen SPR de prote&iacute;na S al p&eacute;ptido S1 para confirmar independientemente el valor cin&eacute;ticamente determinado de K(Ads). Constantes de velocidad para los p&eacute;ptidos S2 y LB2 en la matriz se midieron como sigue: 1.6 (+/-0.04) x 10 M(-1) s(-1) (k(a)) y 1.1 (+/-0.07) x 10(-2) s(-1) (k para S2, 1.2 (+/-0.05) x 10 M(-1) s(-1) (k(a)) y 1.1 (+/-0.03) x 10(-2) s(-1) (k para LB2. Adem&aacute;s S prote&iacute;na adsorci&oacute;n/desorci&oacute;n, proyecci&oacute;n de imagen en tiempo real de SPR de matrices de p&eacute;ptido se aplic&oacute; para estudiar las actividades enzim&aacute;ticas superficiales del factor Xa de la proteasa. Hendidura enzim&aacute;tica del p&eacute;ptido de sustrato (P1) fue demostrado para seguir la cin&eacute;tica de primer orden y proceder a una velocidad 10 veces m&aacute;s r&aacute;pido que el de los p&eacute;ptidos mutantes (P2), con velocidades de escote de 5.6 (+/-0.3) x 10(-4) s(-1) P1 y 5.7 (+/-0.3) x s(-1) de 10(-5) para P2.

Resonancia plasm&oacute;n superficial en tiempo real las medidas para la determinaci&oacute;n multiplexada de prote&iacute;na adsorci&oacute;n/desorci&oacute;n superficie y cin&eacute;tica de reacciones enzim&aacute;ticas sobre micromatrices de p&eacute;ptido.

&#x86CB;&#x767D;&#x5438;&#x9644;/&#x89E3;&#x5438;&#x5230;&#x80BD;&#x82AF;&#x7247;&#x4E0A;&#x7684;&#x52A8;&#x529B;&#x5B66;&#x7814;&#x7A76;&#x4E86;&#x4F7F;&#x7528;&#x5B9E;&#x65F6;&#x7684;&#x8868;&#x9762;&#x7B49;&#x79BB;&#x5B50;&#x4F53;&#x5171;&#x632F; (SPR)&#x3002;S &#x86CB;&#x767D;&#x7ED3;&#x5408;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x8FDB;&#x884C;&#x4E86;&#x68C0;&#x67E5;&#x4F7F;&#x7528;&#x7684;&#x4E94;&#x4E2A;&#x4E0D;&#x540C;&#x7684;&#x591A;&#x80BD;&#x7EC4;&#x6210;&#x7684;&#x6570;&#x7EC4;&#xFF1A; N &#x548C; C &#x7801;&#x5934;&#x56FA;&#x5B9A;&#x5316;&#x91CE;&#x751F;&#x578B; S &#x80BD; &#xFF08;S1 &#x548C; S2&#xFF09;&#xFF0C;&#x5907;&#x7528;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x5E8F;&#x5217;&#x6D3E;&#x751F;&#x7684;&#x566C;&#x83CC;&#x4F53;&#x5C55;&#x793A; &#xFF08;LB2&#xFF09;&#x3001; &#x627F;&#x8FD0;&#x4FDD;&#x62A4; S &#x80BD;&#x548C;&#x6807;&#x5FD7;&#x80BD;&#x63A7;&#x5236;&#x5E8F;&#x5217; (F)&#x3002;S &#x86CB;&#x767D; S1 &#x80BD;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x7684;&#x52A8;&#x529B;&#x5B66;&#x6D4B;&#x91CF;&#x4E86;&#x5206;&#x6790;&#xFF0C;&#x4EE5;&#x786E;&#x5B9A;&#x89E3;&#x5438;&#x901F;&#x7387;&#x5E38;&#x6570; &#xFF08;k(d)) x 10(-2) s(-1)&#xFF0C;&#x5438;&#x9644;&#x901F;&#x7387;&#x5E38;&#x6570; (+ /-0.08) 1.1 (k(a)) x 10(5) M(-1) s(-1) &#x548C;&#x5E73;&#x8861;&#x5438;&#x9644;&#x5E38;&#x6570; (+ /-0.05) 1.9 (1.7 (+ /-0.08) K(Ads)) x 10(7) M(-1)&#x3002;SPR &#x6210;&#x50CF;&#x5E73;&#x8861;&#x6D4B;&#x8BD5;&#x7684; S &#x86CB;&#x767D;&#x4E0E;&#x591A;&#x80BD; S1 &#x90FD;&#x8FDB;&#x884C;&#x72EC;&#x7ACB;&#x786E;&#x8BA4;&#x7684;&#x52A8;&#x529B;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x786E;&#x5B9A;&#x7684;&#x503C;&#x7684; K(Ads)&#x3002;S2 &#x548C; LB2 &#x80BD;&#x5728;&#x9635;&#x5217;&#x4E0A;&#x7684;&#x901F;&#x7387;&#x5E38;&#x6570;&#x8FDB;&#x884C;&#x4E86;&#x6D4B;&#x91CF;&#xFF0C;&#x5982;&#x4E0B;&#x6240;&#x793A;&#xFF1A; x 10(5) M(-1) s(-1) (+ /-0.04) 1.6 (k(a)) &#x548C; 10(-2) s(-1) x (+ /-0.07) 1.1 (&#x4E3A; S2&#xFF0C;1.2 (+ /-0.05) x 10(5) M(-1) s(-1) k(d)) &#xFF08;k(a)) &#x548C; 1.1 (+ /-0.03&#xFF09; x 10(-2) s(-1) (LB2 k(d))&#x3002;&#x9664;&#x4E86; S &#x86CB;&#x767D;&#x5438;&#x9644;/&#x89E3;&#x5438;&#xFF0C;&#x591A;&#x80BD;&#x9635;&#x5217; SPR &#x5B9E;&#x65F6;&#x6210;&#x50CF;&#x5E94;&#x7528;&#x7814;&#x7A76;&#x8868;&#x9762;&#x9176;&#x6D3B;&#x6027;&#x86CB;&#x767D;&#x9176;&#x56E0;&#x5B50; Xa&#x3002;&#x57FA;&#x677F;&#x80BD; (P1) &#x7684;&#x9176;&#x88C2;&#x89E3;&#x8868;&#x660E;&#x662F;&#x9075;&#x5FAA;&#x4E00;&#x9636;&#x52A8;&#x529B;&#x5B66;&#x548C;&#x8FDB;&#x884C;&#x901F;&#x5EA6; 10 &#x500D;&#x901F;&#x5EA6;&#x6BD4;&#x7A81;&#x53D8;&#x4F53;&#x80BD; (P2)&#xFF0C;&#x4E0E;&#x5288;&#x88C2;&#x901F;&#x5EA6; 5.6 (+ /-0.3) x 10(-4) s(-1) &#x4E3A; P1 &#x548C; P2 &#x7684; 10(-5) s(-1) x (+ /-0.3) 5.7&#x3002;

&#x5B9E;&#x65F6;&#x7684;&#x8868;&#x9762;&#x7B49;&#x79BB;&#x5B50;&#x4F53;&#x5171;&#x632F;&#x6210;&#x50CF;&#x6D4B;&#x91CF;&#x80BD;&#x82AF;&#x7247;&#x5BF9;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x5438;&#x9644;/&#x89E3;&#x5438;&#x52A8;&#x529B;&#x5B66;&#x53CA;&#x8868;&#x9762;&#x9176;&#x50AC;&#x5316;&#x53CD;&#x5E94;&#x7684;&#x591A;&#x8DEF;&#x590D;&#x7528;&#x786E;&#x5B9A;&#x3002;

The kinetics of protein adsorption/desorption onto peptide microarrays was studied using real-time surface plasmon resonance (SPR) imaging. S protein binding interactions were examined using an array composed of five different peptides: N terminal and C terminal immobilized wild-type S peptide (S1 and S2), an alternate binding sequence derived by phage display (LB2), an NVOC-protected S peptide, and a FLAG peptide control sequence (F). Kinetic measurements of the S protein-S1 peptide interaction were analyzed to determine a desorption rate constant (k(d)) of 1.1 (+/-0.08) x 10(-2) s(-1), an adsorption rate constant (k(a)) of 1.9 (+/-0.05) x 10(5) M(-1) s(-1), and an equilibrium adsorption constant (K(Ads)) of 1.7 (+/-0.08) x 10(7) M(-1). SPR imaging equilibrium measurements of S protein to S1 peptide were performed to independently confirm the kinetically determined value of K(Ads). Rate constants for the S2 and LB2 peptides on the array were measured as follows: 1.6 (+/-0.04) x 10(5) M(-1) s(-1) (k(a)) and 1.1 (+/-0.07) x 10(-2) s(-1) (k(d)) for S2, 1.2 (+/-0.05) x 10(5) M(-1) s(-1) (k(a)) and 1.1 (+/-0.03) x 10(-2) s(-1) (k(d)) for LB2. In addition to S protein adsorption/desorption, real-time SPR imaging of peptide arrays was applied to study the surface enzymatic activities of the protease factor Xa. Enzymatic cleavage of the substrate peptide (P1) was shown to follow first-order kinetics and proceed at a rate 10 times faster than that of the mutant peptide (P2), with cleavage velocities of 5.6 (+/-0.3) x 10(-4) s(-1) for P1 and 5.7 (+/-0.3) x 10(-5) s(-1) for P2.

Real-time surface plasmon resonance imaging measurements for the multiplexed determination of protein adsorption/desorption kinetics and surface enzymatic reactions on peptide microarrays.

La cin&eacute;tique d&#39;adsorption/d&eacute;sorption de prot&eacute;ine sur puces de peptide a &eacute;t&eacute; &eacute;tudi&eacute;e &agrave; l&#39;aide de l&#39;imagerie par r&eacute;sonance (SPR) plasmon de surface en temps r&eacute;el. Les interactions de liaison prot&eacute;ine S ont &eacute;t&eacute; examin&eacute;es en utilisant un tableau compos&eacute; de cinq peptides diff&eacute;rents : borne N et C terminale immobilisaient peptide de S de type sauvage (S1 et S2), une s&eacute;quence de liaison rempla&ccedil;ant d&eacute;riv&eacute;e de phage display (LB2), un peptide S CONV prot&eacute;g&eacute; et une s&eacute;quence de contr&ocirc;le de peptide de drapeau (F). Des mesures cin&eacute;tiques de l&#39;interaction de peptide de prot&eacute;ine-S1 de S ont &eacute;t&eacute; analys&eacute;s pour d&eacute;terminer la constante de taux de d&eacute;sorption (k(d)) de 1.1 (+/-0,08) x 10(-2) s(-1), une constante de vitesse d&#39;adsorption (k(a)) de 1,9 (+/-0,05) x 10 (5) M(-1) s(-1) et une constante d&#39;&eacute;quilibre adsorption (K(Ads)) de 1,7 (+/-0,08) x 10 (7) M(-1). Mesures d&#39;imagerie de l&#39;&eacute;quilibre SPR de prot&eacute;ine S S1 peptide effectu&eacute;es pour confirmer ind&eacute;pendamment la valeur cin&eacute;tiquement d&eacute;termin&eacute;e de K(Ads). Les constantes de vitesse pour les peptides S2 et LB2 sur le tableau ont &eacute;t&eacute; &eacute;valu&eacute;s comme suit : 1.6 (+/-0,04) x 10 (5) M(-1) s(-1) (k(a)) et 1.1 (+/-0,07) x 10(-2) s(-1) (k(d)) pour le S2, 1.2 (+/-0,05) x 10 (5) M(-1) s(-1) (k(a)) et 1.1 (+/-0,03) x 10(-2) s(-1) (k(d)) pour la LB2. En plus de la prot&eacute;ine S adsorption/d&eacute;sorption, imagerie en temps r&eacute;el de SPR de micro&eacute;chantillons de peptides a &eacute;t&eacute; appliqu&eacute;e pour &eacute;tudier l&#39;activit&eacute; enzymatique surface du facteur Xa prot&eacute;ase. Clivage enzymatique du peptide substrat (P1) a &eacute;t&eacute; montr&eacute; pour suivre la cin&eacute;tique du premier ordre et proc&eacute;der &agrave; un d&eacute;bit 10 fois plus rapide que celle du peptide mutant (P2), avec des vitesses de clivage de 5,6 (+/-0,3) x 10(-4) s(-1) pour P1 et 5,7 (+/-0,3) x 10 s(-1) pour P2.

R&eacute;sonance plasmonique de surface en temps r&eacute;el d&#39;imagerie des mesures pour la d&eacute;termination multiplex&eacute;e de prot&eacute;ine sur l&#39;adsorption/d&eacute;sorption cin&eacute;tique et surface r&eacute;actions enzymatiques sur puces de peptide.

Die Kinetik der Protein Adsorption/Desorption auf Peptid Microarrays wurde mit Echtzeit-Surface Plasmon Resonance (SPR) Imaging untersucht. S-Protein-Bindung-Interaktionen untersucht wurden, unter Verwendung eines Arrays, bestehend aus f&uuml;nf verschiedenen Peptiden: N-Terminal und C-Terminal immobilisiert Wildtyp S Peptid (S1 und S2), eine Alternative Bindung-Sequenz durch Phage Display (LB2), ein SVOC-gesch&uuml;tzte S-Peptid und ein FLAG-Peptid-Steuersequenz (F) abgeleitet. Kinetische Messungen der S-Protein-S1-Peptid-Interaktion wurden analysiert, um zu bestimmen, eine Geschwindigkeitskonstante Desorption (k(d)) 1.1 (+/-0,08) x 10(-2) s(-1), eine Adsorptions-Geschwindigkeitskonstante (k(a)) von 1,9 (+/-0.05) x 10 Absatz 5 M(-1) s(-1) und eine Adsorption Gleichgewichtskonstante (K(Ads)) von 1,7 (+/-0,08) x 7 M(-1). SPR bildgebende Gleichgewicht Messungen von S-Protein zu S1 Peptid wurden durchgef&uuml;hrt, um selbst&auml;ndig kinetisch zielstrebig Wertder K(Ads) best&auml;tigen. Wurden die Geschwindigkeitskonstanten f&uuml;r die S2 und LB2 Peptide im Array wie folgt gemessen: 1.6 (+/-0,04) x 10 Absatz 5 M(-1) s(-1) (k(a)) und 1.1 (+/-0,07) x 10(-2) s(-1) (k(d)) f&uuml;r S2, 1.2 (+/-0.05) x 10 Absatz 5 M(-1) s(-1) (k(a)) und 1.1 (+/-0.03) x 10(-2) s(-1) (k(d)) f&uuml;r LB2. Neben S Protein Adsorption/Desorption wurde SPR Echtzeit von Peptid-Arrays angewendet, um die Oberfl&auml;chen enzymatischen Aktivit&auml;ten der Protease-Faktor Xa zu studieren. Enzymatische Spaltung von der Substrat-Peptid (P1) wurde mit Dekollet&eacute; Geschwindigkeiten von 5,6 (+/-0,3) x 10(-4) s(-1) f&uuml;r P1 und 5,7 (+/-0,3) x 10(-5) s(-1) f&uuml;r P2 folgen Kinetik erster Ordnung und gehen mit einer Rate 10 mal schneller als die der mutant Peptid (P2), gezeigt.

Echtzeit Oberfl&auml;chen Plasmon-Resonanz imaging Messungen zur Bestimmung von Protein Adsorption/Desorption Kinetik und Oberfl&auml;che enzymatischen Reaktionen auf Peptid Microarrays Multiplex.

La cinetica di adsorbimento/desorbimento di proteina sul peptide microarray &egrave; stata studiata mediante imaging (SPR) risonanza plasmonica di superficie in tempo reale. Le interazioni di legame della proteina S sono state esaminate usando una matrice composta da cinque diversi peptidi: N e C terminale immobilizzato peptide S selvaggio-tipo (S1 e S2), una sequenza alternata associazione derivato da phage display (LB2), un peptide S NVOC protetto e una sequenza di controllo del peptide FLAG (F). Misurazioni cinetiche dell&#39;interazione del peptide S della proteina-S1 sono state analizzate per determinare un costante tasso di desorbimento (k(d)) 1.1 (+ /-0.08) x 10(-2) s(-1), una costante di velocit&agrave; di adsorbimento (k(a)) 1,9 (+ /-0,05) x 5 M(-1) s(-1) e una costante di equilibrio adsorbimento (K(Ads)) di 1,7 (+ /-0.08) x 10 M(-1). SPR imaging equilibrio di proteina S S1 del peptide sono state misurazioni per verificare indipendentemente il valore cineticamente risoluto di K(Ads). Costanti di velocit&agrave; per i peptidi S2 e LB2 sulla matrice sono state misurate come segue: 1.6 (+ 0,04) x 5 M(-1) s(-1) (k(a)) e 1.1 (+ 0,07) x 10(-2) s(-1) (k(d)) per S2, 1.2 (+ /-0,05) x 5 M(-1) s(-1) (k(a)) e 1.1 (+ /-0,03) x 10(-2) s(-1) (k(d)) per LB2. Oltre a S proteina adsorbimento e desorbimento, imaging SPR in tempo reale delle matrici del peptide &egrave; stato applicato per studiare la superficie attivit&agrave; enzimatiche del fattore Xa di proteasi. Scissione enzimatica del peptide substrato (P1) &egrave; stato mostrato a seguire la cinetica di primo ordine e procedere a una velocit&agrave; 10 volte pi&ugrave; veloce rispetto a quella del peptide mutante (P2), con velocit&agrave; di scissione di 5,6 (+ 0,3) x 10(-4) s(-1) per P1 e 5,7 (+ 0,3) x 10(-5) s(-1) per P2.

Risonanza plasmonica di superficie in tempo reale le misurazioni per la determinazione della proteina adsorbimento e desorbimento superficie e cinetica di reazioni enzimatiche su microarrays del peptide multiplex.

&#x30EA;&#x30A2;&#x30EB;&#x30BF;&#x30A4;&#x30E0;&#x8868;&#x9762;&#x30D7;&#x30E9;&#x30BA;&#x30E2;&#x30F3;&#x5171;&#x9CF4; (SPR) &#x30A4;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B8;&#x30F3;&#x30B0;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x5438;&#x7740;/&#x8131;&#x96E2;&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C9; &#x30A2;&#x30EC;&#x30A4;&#x4E0A;&#x306E;&#x52D5;&#x529B;&#x5B66;&#x306E;&#x7814;&#x7A76;&#x3092;&#x3060;&#x3063;&#x305F;&#x3002;S &#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x7D50;&#x5408;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x3092;&#x691C;&#x8A0E;&#x3057;&#x305F; 5 &#x3064;&#x306E;&#x7570;&#x306A;&#x308B;&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C9;&#x306E;&#x3067;&#x69CB;&#x6210;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x914D;&#x5217;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3059;&#x308B;: N &#x672B;&#x7AEF;&#x3068; C &#x672B;&#x7AEF;&#x56FA;&#x5B9A;&#x5316;&#x91CE;&#x751F;&#x578B; S &#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C9; (S1 &#x304A;&#x3088;&#x3073; S2) &#x4EE3;&#x66FF;&#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C9; &#x30B7;&#x30FC;&#x30B1;&#x30F3;&#x30B9;&#x6D3E;&#x751F;&#x30D0;&#x30AF;&#x30C6;&#x30EA;&#x30AA;&#x30D5;&#x30A1;&#x30FC;&#x30B8;&#x306E;&#x8868;&#x793A; (LB2)&#x3001;NVOC &#x4FDD;&#x8B77; S &#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C3;&#x30C9;&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x30D5;&#x30E9;&#x30B0; &#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C9;&#x5236;&#x5FA1;&#x30B7;&#x30FC;&#x30B1;&#x30F3;&#x30B9; (F) &#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x3002;S &#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA; S1 &#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C9;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x306E;&#x901F;&#x5EA6;&#x8AD6;&#x7684;&#x6E2C;&#x5B9A;&#x306E;&#x5438;&#x8131;&#x7740;&#x901F;&#x5EA6;&#x5B9A;&#x6570;&#x3092;&#x6C7A;&#x5B9A;&#x3059;&#x308B;&#x5206;&#x6790;&#x3057;&#x305F; (k(d)) &#xFF08;&plusmn; 0.08) 1.1 x 10(-2) s(-1)&#x3001;&#x5438;&#x7740;&#x306E;&#x901F;&#x5EA6;&#x5B9A;&#x6570; (k(a)) (&plusmn; 0.05) 1.9 x 10 (5) M(-1) s(-1) &#x3068;&#x3001;&#x5E73;&#x8861;&#x5438;&#x7740;&#x5B9A;&#x6570; (1.7 &#xFF08;&plusmn; 0.08) &#x306E; K(Ads)) 10 (7) M(-1) x&#x3002;SPR &#x30A4;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B8;&#x30F3;&#x30B0;&#x5E73;&#x8861;&#x6E2C;&#x5B9A; S1 &#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C9; S &#x86CB;&#x767D;&#x8CEA; K(Ads) &#x306E;&#x901F;&#x5EA6;&#x8AD6;&#x7684;&#x6C7A;&#x5B9A;&#x5024;&#x3092;&#x72EC;&#x81EA;&#x306B;&#x78BA;&#x8A8D;&#x306B;&#x884C;&#x3063;&#x305F;&#x3002;S2 &#x3068; LB2 &#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C9; &#x30A2;&#x30EC;&#x30A4;&#x4E0A;&#x306E;&#x901F;&#x5EA6;&#x5B9A;&#x6570;&#x306F;&#x6B21;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306B;&#x6E2C;&#x5B9A;&#x3057;&#x305F;: (0.04) +/-1.6 &#x500D; 10 (5) M(-1) s(-1) (k(a)) &#x304A;&#x3088;&#x3073; (+/-0.07&#xFF09; 1.1 x 10(-2) s(-1) &#xFF08;S2 (&plusmn; 0.05) 1.2 x 10 (5) M(-1) s(-1) &#x306E; k(d)) (k(a)) &#x304A;&#x3088;&#x3073; (+/-0.03) 1.1 x 10(-2) s(-1) (LB2 &#x7528; k(d))&#x3002;S &#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x5438;&#x7740;&#x30FB;&#x8131;&#x3001;&#x306B;&#x52A0;&#x3048;&#x3066;&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C9; &#x30A2;&#x30EC;&#x30A4;&#x306E;&#x30EA;&#x30A2;&#x30EB;&#x30BF;&#x30A4;&#x30E0;&#x306E; SPR &#x30A4;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B8;&#x30F3;&#x30B0; &#x30D7;&#x30ED;&#x30C6;&#x30A2;&#x30FC;&#x30BC; &#x30D5;&#x30A1;&#x30AF;&#x30BF;&#x30FC; Xa &#x306E;&#x8868;&#x9762;&#x306E;&#x9175;&#x7D20;&#x306E;&#x6D3B;&#x52D5;&#x3092;&#x7814;&#x7A76;&#x306B;&#x5FDC;&#x7528;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x57FA;&#x677F;&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C9; (P1) &#x306E;&#x9175;&#x7D20;&#x7684;&#x958B;&#x88C2;&#x4E00;&#x6B21;&#x53CD;&#x5FDC;&#x306B;&#x5F93;&#x3046;&#x3068;&#x3001;&#x30EC;&#x30FC;&#x30C8;&#x3067; 10 &#x56DE;&#x5909;&#x7570;&#x578B;&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C9; (P2) &#x306E;&#x305D;&#x308C;&#x3088;&#x308A;&#x3082;&#x901F;&#x304F;&#x9032;&#x3080; (0.3) &plusmn; 5.6 x 10(-4) s(-1) P1 &#x306E;&#x3068; &#xFF08;&plusmn; 0.3) 5.7 &times; 10(-5) s(-1) P2 &#x7528;&#x306E;&#x80F8;&#x306E;&#x8C37;&#x9593;&#x901F;&#x5EA6;&#x793A;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;

&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x5438;&#x7740;/&#x8131;&#x96E2;&#x30AD;&#x30CD;&#x30C6;&#x30A3;&#x30AF;&#x30B9;&#x3068;&#x8868;&#x9762;&#x9175;&#x7D20;&#x53CD;&#x5FDC;&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C9; &#x30A2;&#x30EC;&#x30A4;&#x4E0A;&#x306E;&#x591A;&#x91CD;&#x5B9A;&#x91CF;&#x6E2C;&#x5B9A;&#x30A4;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B8;&#x30F3;&#x30B0; &#x30EA;&#x30A2;&#x30EB;&#x30BF;&#x30A4;&#x30E0;&#x8868;&#x9762;&#x30D7;&#x30E9;&#x30BA;&#x30E2;&#x30F3;&#x5171;&#x9CF4;&#x3002;

&#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xD761;&#xCC29;/&#xD0C8; &#xCC29;&#xC5D0; &#xD3A9; &#xD2F0; &#xB4DC; microarrays&#xC758; &#xC18D;&#xB3C4; &#xB860; &#xC2E4;&#xC2DC;&#xAC04; &#xD45C;&#xBA74; &#xD50C;&#xB77C;&#xC2A4;&#xBAAC; &#xACF5;&#xBA85; (SPR)&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xACF5;&#xBD80; &#xD588;&#xB2E4;. 5 &#xB2E4;&#xB978; &#xD3A9; &#xD2F0; &#xB4DC;&#xC758;&#xB85C; &#xAD6C;&#xC131; &#xB41C; &#xBC30;&#xC5F4;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; S &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC744; &#xC870;&#xC0AC; &#xD588;&#xB2E4;: N &#xD130;&#xBBF8;&#xB110;&#xC744; C &#xD130;&#xBBF8;&#xB110; &#xC6C0;&#xC9C1;&#xC77C; &#xC218; &#xC57C;&#xC0DD;-&#xD0C0;&#xC785; S &#xD3A9; &#xD2F0; &#xB4DC; (S1 &#xBC0F; S2), &#xC0B4; &#xADE0; &#xC18C; &#xC804;&#xC2DC; (LB2), S NVOC &#xBCF4;&#xD638; &#xD3A9;&#xD0C0;&#xC774;&#xB4DC; &#xBC0F; &#xD50C;&#xB798;&#xADF8; &#xD3A9; &#xD2F0; &#xB4DC; &#xC81C;&#xC5B4; &#xC2DC;&#xD000;&#xC2A4; (F)&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xD30C;&#xC0DD; &#xB41C; &#xB300;&#xCCB4; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xC2DC;&#xD000;&#xC2A4;. S &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; S1 &#xD3A9; &#xD2F0; &#xB4DC; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC758; &#xC6B4;&#xB3D9; &#xCE21;&#xC815; &#xD0C8; &#xCC29; &#xC18D;&#xB3C4; &#xC0C1;&#xC218; &#xACB0;&#xC815;&#xC744; &#xBD84;&#xC11D; &#xD588;&#xB2E4; (10(-2) s(-1), &#xD761;&#xCC29; &#xC18D;&#xB3C4; &#xC0C1;&#xC218; x 1.1 (&plusmn; 0.08)&#xC758; k(d)) (k(a)) 10(5) M(-1) s(-1) &#xBC0F; &#xD3C9;&#xD615; &#xD761;&#xCC29; &#xC0C1;&#xC218; x (+ /-0.05) 1.9 (1.7 (&plusmn; 0.08)&#xC758; K(Ads)) 10(7) M(-1) x. S s 1 &#xD3A9; &#xD2F0; &#xB4DC; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; SPR &#xC774;&#xBBF8;&#xC9D5; &#xD3C9;&#xD615; &#xCE21;&#xC815; k(ads)&#xC758; &#xACB0;&#xC815;&#xB41C; &#xC774;&#xB098; &#xAC00;&#xCE58;&#xB97C; &#xB3C5;&#xB9BD;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xD655;&#xC778;&#xC744; &#xC218;&#xD589; &#xD588;&#xB2E4;. &#xBC30;&#xC5F4;&#xC5D0; S2 &#xBC0F; LB2 &#xD3A9; &#xD2F0; &#xB4DC;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC18D;&#xB3C4; &#xC0C1;&#xC218;&#xB294; &#xB2E4;&#xC74C;&#xACFC; &#xAC19;&#xC774; &#xCE21;&#xC815; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;: 1.6 (&plusmn; 0.04) 10(5) M(-1) s(-1) x (k(a)) &#xBC0F; 10(-2) s(-1) x (+ 0.07) 1.1 (s2, 1.2 (&plusmn; 0.05) 10(5) M(-1) s(-1) x k(d)) (k(a)) &#xBC0F; 10(-2) s(-1) (LB2 k(d)) x (&plusmn; 0.03) 1.1. S &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xD761;&#xCC29;/&#xD0C8; &#xCC29; &#xBFD0;&#xB9CC; &#xC544;&#xB2C8;&#xB77C; &#xD3A9; &#xD2F0; &#xB4DC; &#xBC30;&#xC5F4;&#xC758; &#xC2E4;&#xC2DC;&#xAC04; SPR &#xC774;&#xBBF8;&#xC9D5; &#xD504;&#xB85C; &#xD14C;&#xC544; &#xC81C; &#xC694;&#xC778; Xa&#xC758; &#xD45C;&#xBA74; &#xD6A8;&#xC18C; &#xD65C;&#xB3D9;&#xC744; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xC5D0; &#xC801;&#xC6A9; &#xD588;&#xB2E4;. &#xAE30;&#xD310; &#xD3A9; &#xD2F0; &#xB4DC; (P1)&#xC758; &#xD6A8;&#xC18C; &#xBD84;&#xC5F4; p 1&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; 10(-4) s(-1) x (+ 0.3) 5.6 5.7 p 2&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; 10(-5) s(-1) x (+ 0.3)&#xC758; &#xBD84;&#xC5F4; &#xC18D;&#xB3C4;&#xC640; 1 &#xCC28; &#xC18D;&#xB3C4; &#xB530;&#xB77C; 10 &#xBC30; &#xC18D;&#xB3C4;&#xB85C; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xD3A9; &#xD2F0; &#xB4DC; (P2) &#xBCF4;&#xB2E4; &#xBE60;&#xB978; &#xC9C4;&#xD589;&#xC744; &#xD45C;&#xC2DC; &#xD588;&#xB2E4;.

&#xC2E4;&#xC2DC;&#xAC04; &#xD45C;&#xBA74; &#xD50C;&#xB77C;&#xC2A4;&#xBAAC; &#xACF5;&#xBA85; &#xC774;&#xBBF8;&#xC9D5; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xD761;&#xCC29;/&#xD0C8; &#xCC29; &#xC18D;&#xB3C4; &#xB860; &#xBC0F; &#xD45C;&#xBA74; &#xD6A8;&#xC18C; &#xBC18;&#xC751;&#xC758; &#xD3A9; &#xD2F0; &#xB4DC; microarrays&#xC5D0; &#xB2E4;&#xC911;&#xD654; &#xB41C; &#xACB0;&#xC815;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xCE21;&#xC815;.

Article	Year
Characterization and optimization of peptide arrays for the study of epitope-antibody interactions using surface plasmon resonance imaging. Analytical chemistry\| PubMed ID: 12403566	2002
Fabrication of histidine-tagged fusion protein arrays for surface plasmon resonance imaging studies of protein-protein and protein-DNA interactions. Analytical chemistry\| PubMed ID: 14674449	2003
Real-time surface plasmon resonance imaging measurements for the multiplexed determination of protein adsorption/desorption kinetics and surface enzymatic reactions on peptide microarrays. Analytical chemistry\| PubMed ID: 15456285	2004

Greta J. Wegner

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