microfluidic-mixers-for-studying-protein-folding

Microfluidic Mixers for Studying Protein Folding

The process by which a protein folds into its native conformation is highly relevant to biology and human health yet still poorly understood. One reason ...

Michigan State University

&#x8C03;&#x67E5;&#x87BA;&#x65CB;&#x6210;&#x578B;&#x7684;&#x7AEF;&#x5230;&#x7AEF;&#x80BD;&#x63A5;&#x89E6;&#x7387;&#x7684;&#x7EBF;&#x5708;&#x72B6;&#x6001;&#x7684;&#x52A8;&#x6001;&#x7075;&#x6D3B;&#x786E;&#x5B9A;&#x3002;&#x7EB3;&#x79D2;&#x5149;&#x6FC0;&#x52B1;&#x7684;&#x4E00;&#x7AEF; 22 &#x6B8B;&#x7559;&#x7684;&#x8272;&#x6C28;&#x9178;&#x3001; &#x4E19;&#x6C28;&#x9178;&#x80BD;&#x586B;&#x5145;&#x957F;&#x5BFF;&#x4E09;&#x7EBF;&#x6001;&#x72B6;&#x6001;&#x7684;&#x6DEC;&#x706B;&#x540E;&#x5BC6;&#x5207;&#x8054;&#x7CFB;&#x4E0E;&#x9644;&#x52A0;&#x5230;&#x53E6;&#x4E00;&#x7AEF;&#x7684;&#x5FAA;&#x73AF;&#x786B;&#x5316;&#x3002;&#x4F7F;&#x7528;&#x87BA;&#x65CB;&#x5F62;&#x6210;&#x7684;&#x4E24;&#x56FD;&#x6A21;&#x578B;&#x7684;&#x4E09;&#x80DE;&#x80CE;&#x4EBA;&#x53E3;&#x8870;&#x51CF;&#x7684;&#x5206;&#x6790;&#x5F97;&#x51FA;&#x80BD;&#x4EE5;&#x53CA;&#x7EBF;&#x5708;&#x548C;&#x7EBF;&#x5708;&#x87BA;&#x65CB;&#x7387;--&gt; &#x87BA;&#x65CB;&#x7EBF;&#x5708;&#x72B6;&#x6001;&#x7684;&#x6269;&#x6563;&#x9650;&#x5236;&#x7AEF;&#x5230;&#x7AEF;&#x63A5;&#x89E6;&#x7387;&#x3002;&#x87BA;&#x65CB;&#x7EBF;&#x5708;&#x623F;&#x4EF7;&#x975E;&#x5E38;&#x7C7B;&#x4F3C;&#x4E8E;&#x90A3;&#x4E9B;&#x4EE5;&#x524D;&#x5728;&#x6FC0;&#x5149;&#x6E29;&#x5EA6;&#x8DF3;&#x5B9E;&#x9A8C;&#x4E2D;&#x6D4B;&#x91CF;&#x3002;&#x7AEF;&#x5230;&#x7AEF;&#x7684;&#x7EBF;&#x5708;&#x72B6;&#x6001; 1.1 x 10(7) s(-1) &#x7684;&#x63A5;&#x89E6;&#x7387;&#x662F; 10 &#x500D;&#x5FEB;&#x4E8E;&#x65E0;&#x5E8F;&#x7684;&#x80BD;&#x7684;&#x901F;&#x7387;&#x4E0E;&#x82CF;&#x6C28;&#x9178;&#x4EE3;&#x66FF;&#x4E19;&#x6C28;&#x9178;&#xFF0C;&#x6709;&#x70B9;&#x4EE4;&#x4EBA;&#x60CA;&#x8BB6;&#x7684;&#x662F;&#xFF0C;&#x662F;&#x5173;&#x4E8E;&#x4E3A;&#x65E0;&#x5E8F;&#x7684;&#x7518;&#x6C28;&#x9178;&#x542B;&#x80BD;&#x7387;&#x7684;&#x4E24;&#x500D;&#x3002;&#x8428;&#x535A;&#x3001; &#x65AF;&#x8003;&#x5C14;&#x6ED5;&#x548C;&#x65AF;&#x8003;&#x5C14;&#x6ED5;&#x7406;&#x8BBA;&#x4E0A;&#x8BA8;&#x8BBA;&#x4E86;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x5DEE;&#x5F02;&#x3002;&#x7387;&#x5E94;&#x63D0;&#x4F9B;&#x65B0;&#x7684;&#x91CD;&#x8981;&#x57FA;&#x51C6;&#x6D4B;&#x8BD5;&#x539F;&#x5B50;&#x5206;&#x5B50;&#x52A8;&#x529B;&#x5B66;&#x6A21;&#x62DF;&#x7684;&#x51C6;&#x786E;&#x6027;&#x3002;

&#x6D4B;&#x91CF;&#x87BA;&#x65CB;&#x5F62;&#x6210;&#x591A;&#x80BD;&#x7684;&#x7EBF;&#x5708;&#x72B6;&#x6001;&#x7684;&#x52A8;&#x6001;&#x7075;&#x6D3B;&#x6027;&#x3002;

To investigate the dynamic flexibility of the coil state of a helix-forming peptide the end-to-end contact rate was determined. Nanosecond optical excitation of tryptophan at one end of a 22 residue, alanine peptide populates a long-lived triplet state which is quenched upon close contact with a cyclic disulfide attached to the opposite end. Analysis of the decay of the triplet population using a two-state model for helix formation yields the diffusion-limited end-to-end contact rate of the coil state of the peptide as well as the helix-->coil and coil-->helix rates. The helix-coil rates are very similar to those previously measured in laser temperature-jump experiments. The end-to-end contact rate of 1.1 x 10(7) s(-1) in the coil state is tenfold faster than the rate for a disordered peptide with threonine substituted for alanine and, somewhat surprisingly, is about twice the rate for a disordered glycine-containing peptide. These differences are discussed in terms of the theory of Szabo, Schulten and Schulten. The rates should provide important new benchmarks for testing the accuracy of atomistic molecular dynamics simulations.

Measuring dynamic flexibility of the coil state of a helix-forming peptide.

&#xC0; rechercher la flexibilit&#xE9; dynamique de l&#x26;#39;&#xE9;tat de la bobine d&#x26;#39;un peptide h&#xE9;lice formant le taux de contact d&#x26;#39;extr&#xE9;mit&#xE9; en bout a &#xE9;t&#xE9; d&#xE9;termin&#xE9;e. D&#x26;#39;excitation optique de la nanoseconde tryptophane &#xE0; une extr&#xE9;mit&#xE9; d&#x26;#39;un r&#xE9;sidu 22, alanine peptide remplit un &#xE9;tat de triplet de longue dur&#xE9;e qui est tremp&#xE9; &#xE0; contact &#xE9;troit avec un disulfure cyclique attach&#xE9; &#xE0; l&#x26;#39;extr&#xE9;mit&#xE9; oppos&#xE9;e. L&#x26;#39;analyse de la d&#xE9;croissance de la population triplet en utilisant un mod&#xE8;le &#xE0; deux Etats pour la formation d&#x26;#39;h&#xE9;lice donne le taux de diffusion limit&#xE9;e de contact en bout &#xE0; bout de l&#x26;#39;&#xE9;tat de la bobine du peptide ainsi que l&#x26;#39;h&#xE9;lice - bobine&#x26;gt; et de la bobine -&#x26;gt; taux d&#x26;#39;h&#xE9;lice. Les taux d&#x26;#39;h&#xE9;lice-convecteurs sont tr&#xE8;s similaires &#xE0; ceux pr&#xE9;c&#xE9;demment mesur&#xE9;e en laser &#xE0; temp&#xE9;rature saut exp&#xE9;riences. Le taux de contact de bout-en-fin de 1,1 x 10 (7) s (-1) dans l&#x26;#39;&#xE9;tat bobine est d&#xE9;cupl&#xE9; plus vite que le taux pour un peptide d&#xE9;sordonn&#xE9;e avec la thr&#xE9;onine substitu&#xE9; pour l&#x26;#39;alanine et, &#xE9;tonnamment, est environ deux fois le taux de mani&#xE8;re d&#xE9;sordonn&#xE9;e glycine contenant des peptides. Ces diff&#xE9;rences sont discut&#xE9;es en termes de la th&#xE9;orie de la Szabo, Schulten et Schulten. Les taux devraient fournir d&#x26;#39;importants nouveaux rep&#xE8;res pour tester la pr&#xE9;cision des simulations de dynamique mol&#xE9;culaire atomistique.

Mesure la flexibilit&#xE9; dynamique de l&#x26;#39;&#xE9;tat de la bobine d&#x26;#39;un peptide Helix-formation

Messung der dynamischen Flexibilit&#xE4;t der Spule Zustand eines Helix-bildenden Peptids.

Per indagare la flessibilit&agrave; dinamica dello stato di un tasso del peptide dell&#39;end-to-end Contatta elica formando bobina &egrave; stata determinata. Eccitazione ottica nanosecondo del triptofano ad una estremit&agrave; di un residuo 22, peptide alanina popola un stato di tripletto longevi che si spegne a stretto contatto con un disolfuro ciclico fissato all&#39;estremit&agrave; opposta. Analisi del decadimento della popolazione terzina utilizzando un modello di due-dichiari per formazione elica produce il tasso di contatto-to-end diffusione limitata dello stato bobina del peptide cos&igrave; come l&#39;elica--&gt; bobina e la bobina--&gt; tassi di elica. Le tariffe di elica-bobina sono molto simili a quelli precedentemente misurata in esperimenti di salto di temperatura laser. Il tasso di contatto-to-end di 1,1 x 10 s(-1) nello stato bobina &egrave; dieci volte pi&ugrave; veloce rispetto al tasso di un peptide disordinato con treonina sostituito con alanina e, piuttosto sorprendentemente, &egrave; circa due volte il tasso per un peptide contenente glicina disordinato. Queste differenze sono discussi in termini di teoria di Szabo, Schulten e Schulten. Le tariffe dovrebbero fornire importanti nuovi parametri di riferimento per la verifica dell&#39;accuratezza delle simulazioni di dinamica molecolare atomistico.

Misurazione dinamica flessibilit&agrave; dello stato bobina di un peptide formando helix.

&#x3089;&#x305B;&#x3093;&#x5F62;&#x6210;&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C9;&#x306E;&#x30B3;&#x30A4;&#x30EB;&#x72B6;&#x614B;&#x306E;&#x52D5;&#x7684;&#x306A;&#x67D4;&#x8EDF;&#x6027;&#x3092;&#x8ABF;&#x67FB;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x3001;&#x30A8;&#x30F3;&#x30C9;&#x30C4;&#x30FC;&#x30A8;&#x30F3;&#x30C9;&#x306E;&#x63A5;&#x89E6;&#x7387;&#x3092;&#x6E2C;&#x5B9A;&#x3057;&#x305F;&#x3002; 22&#x6B8B;&#x57FA;&#x306E;&#x4E00;&#x65B9;&#x306E;&#x7AEF;&#x306B;&#x30C8;&#x30EA;&#x30D7;&#x30C8;&#x30D5;&#x30A1;&#x30F3;&#x306E;&#x30CA;&#x30CE;&#x5149;&#x5B66;&#x7684;&#x52B1;&#x8D77;&#x306F;&#x3001;&#x30A2;&#x30E9;&#x30CB;&#x30F3;&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C9;&#x306F;&#x3001;&#x53CD;&#x5BFE;&#x5074;&#x306E;&#x7AEF;&#x90E8;&#x306B;&#x53D6;&#x308A;&#x4ED8;&#x3051;&#x3089;&#x308C;&#x305F;&#x74B0;&#x72B6;&#x30B8;&#x30B9;&#x30EB;&#x30D5;&#x30A3;&#x30C9;&#x3068;&#x306E;&#x5BC6;&#x63A5;&#x306A;&#x63A5;&#x89E6;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x6025;&#x51B7;&#x3055;&#x308C;&#x3001;&#x9577;&#x5BFF;&#x547D;&#x4E09;&#x91CD;&#x9805;&#x72B6;&#x614B;&#x3092;&#x79FB;&#x5165;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3089;&#x305B;&#x3093;&#x5F62;&#x6210;&#x306E;2&#x3064;&#x306E;&#x72B6;&#x614B;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x305F;&#x4E09;&#x91CD;&#x9805;&#x306E;&#x4EBA;&#x53E3;&#x306E;&#x5D29;&#x58CA;&#x306E;&#x5206;&#x6790;&#x306F;&#x3001;&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C9;&#x306E;&#x30B3;&#x30A4;&#x30EB;&#x72B6;&#x614B;&#x306E;&#x62E1;&#x6563;&#x304C;&#x5236;&#x9650;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x30A8;&#x30F3;&#x30C9;&#xB7;&#x30C4;&#x30FC;&#xB7;&#x30A8;&#x30F3;&#x30C9;&#x306E;&#x63A5;&#x89E6;&#x7387;&#x3068;&#x540C;&#x69D8;&#x306B;&#x3089;&#x305B;&#x3093;&#x3092;&#x751F;&#x6210;&#x3059;&#x308B; - &#x26;gt;&#x30B3;&#x30A4;&#x30EB;&#x3068;&#x30B3;&#x30A4;&#x30EB; - &#x26;gt;&#x3089;&#x305B;&#x3093;&#x30EC;&#x30FC;&#x30C8;&#x3002;&#x30D8;&#x30EA;&#x30C3;&#x30AF;&#x30B9; - &#x30B3;&#x30A4;&#x30EB;&#x7387;&#x306F;&#x4EE5;&#x524D;&#x306B;&#x30EC;&#x30FC;&#x30B6;&#x30FC;&#x6E29;&#x5EA6;&#x30B8;&#x30E3;&#x30F3;&#x30D7;&#x5B9F;&#x9A13;&#x3067;&#x6E2C;&#x5B9A;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3082;&#x306E;&#x3068;&#x975E;&#x5E38;&#x306B;&#x4F3C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30B3;&#x30A4;&#x30EB;&#x306E;&#x72B6;&#x614B;&#x3067;1.1&#xD7;10&#xFF08;7&#xFF09;S&#xFF08;-1&#xFF09;&#x306E;&#x30A8;&#x30F3;&#x30C9;&#x30C4;&#x30FC;&#x30A8;&#x30F3;&#x30C9;&#x306E;&#x63A5;&#x89E6;&#x7387;&#x304C;&#x30A2;&#x30E9;&#x30CB;&#x30F3;&#x306B;&#x7F6E;&#x63DB;&#x30B9;&#x30EC;&#x30AA;&#x30CB;&#x30F3;&#x3068;&#x7121;&#x79E9;&#x5E8F;&#x306A;&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C9;&#x306E;&#x901F;&#x5EA6;&#x3088;&#x308A;&#x3082;&#x500D;&#x9AD8;&#x901F;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3068;&#x3001;&#x3084;&#x3084;&#x9A5A;&#x304F;&#x3079;&#x304D;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3001;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x7D04;2&#x500D;&#x306E;&#x901F;&#x5EA6;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x7121;&#x79E9;&#x5E8F;&#x30B0;&#x30EA;&#x30B7;&#x30F3;&#x542B;&#x6709;&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C9;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x9055;&#x3044;&#x306F;&#x3001;&#x30B5;&#x30DC;&#x30FC;&#x3001;Schulten&#x306F;&#x3068;Schulten&#x306F;&#x7406;&#x8AD6;&#x306E;&#x89B3;&#x70B9;&#x304B;&#x3089;&#x8B70;&#x8AD6;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x7387;&#x306F;&#x539F;&#x5B50;&#x3001;&#x5206;&#x5B50;&#x52D5;&#x529B;&#x5B66;&#x30B7;&#x30DF;&#x30E5;&#x30EC;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x306E;&#x7CBE;&#x5EA6;&#x3092;&#x30C6;&#x30B9;&#x30C8;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x65B0;&#x3057;&#x3044;&#x30D9;&#x30F3;&#x30C1;&#x30DE;&#x30FC;&#x30AF;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3059;&#x308B;&#x5FC5;&#x8981;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x3089;&#x305B;&#x3093;&#x5F62;&#x6210;&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C9;&#x306E;&#x30B3;&#x30A4;&#x30EB;&#x72B6;&#x614B;&#x306E;&#x52D5;&#x7684;&#x67D4;&#x8EDF;&#x6027;&#x3092;&#x6E2C;&#x5B9A;&#x3059;&#x308B;

&#xB098;&#xC120; &#xD615;&#xC131; &#xD3A9; &#xD2F0; &#xB4DC; &#xC5D4;&#xB4DC;-&#xD22C;-&#xC5D4;&#xB4DC; &#xC5F0;&#xB77D;&#xCC98; &#xC18D;&#xB3C4;&#xC758; &#xCF54;&#xC77C; &#xC0C1;&#xD0DC;&#xC758; &#xB3D9;&#xC801; &#xC720;&#xC5F0;&#xC131; &#xC870;&#xC0AC;&#xB97C; &#xACB0;&#xC815; &#xD588;&#xB2E4;. &#xB098;&#xB178;&#xCD08; 22 &#xC794;&#xB958;&#xBB3C;&#xC758; &#xD55C;&#xCABD; &#xB05D;&#xC5D0; &#xD2B8;&#xB9BD;&#xD1A0;&#xD310;&#xC758; &#xAD11; &#xC5EC;&#xAE30;, &#xC54C;&#xB77C;&#xB2CC; &#xD3A9; &#xD2F0; &#xB4DC; &#xC8FC;&#xAE30;&#xC801; &#xC774;&#xD669;&#xD654; &#xBC18;&#xB300;&#xCABD; &#xB05D;&#xC5D0; &#xC5F0;&#xACB0; &#xB41C;&#xC640; &#xAE34;&#xBC00; &#xD55C; &#xC811;&#xCD09;&#xC5D0; &#xB530;&#xB77C; &#xCE68;&#xBB35; &#xD558;&#xB294; &#xC218;&#xBA85;&#xC774; &#xAE34; triplet &#xC0C1;&#xD0DC;&#xB97C; &#xCC44;&#xC6C1;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xD5EC;&#xB9AD;&#xC2A4; &#xD615;&#xC131;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; 2-&#xC0C1;&#xD0DC; &#xBAA8;&#xB378;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; triplet &#xC778;&#xAD6C; &#xCDA9;&#xC758; &#xBD84;&#xC11D; &#xD3A9; &#xD2F0; &#xB4DC;&#xC758; &#xCF54;&#xC77C;&#xACFC; &#xCF54;&#xC77C; &#xB098;&#xC120; &#xC694;&#xAE08;--&gt;--&gt; &#xB098;&#xC120; &#xCF54;&#xC77C; &#xC0C1;&#xD0DC;&#xC758; &#xD655;&#xC0B0; &#xC81C;&#xD55C; &#xB05D; &#xC5F0;&#xB77D;&#xCC98; &#xC18D;&#xB3C4; &#xC0DD;&#xC131; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB098;&#xC120; &#xCF54;&#xC77C; &#xC694;&#xAE08;&#xC740; &#xC774;&#xC804;&#xC5D0; &#xB808;&#xC774;&#xC800; &#xC628;&#xB3C4; &#xC810;&#xD504; &#xC2E4;&#xD5D8;&#xC5D0;&#xC11C; &#xCE21;&#xC815; &#xB41C; &#xADF8;&#xC640; &#xB9E4;&#xC6B0; &#xBE44;&#xC2B7;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. 1.1 X 10(7) s(-1) &#xCF54;&#xC77C; &#xC0C1;&#xD0DC;&#xC5D0;&#xC11C;&#xC758; &#xC5D4;&#xB4DC;-&#xD22C;-&#xC5D4;&#xB4DC; &#xC5F0;&#xB77D;&#xCC98; &#xC18D;&#xB3C4; 10 &#xBC30; &#xBB34;&#xC9C8;&#xC11C; &#xD3A9; &#xD2F0; &#xB4DC;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC18D;&#xB3C4; &#xBCF4;&#xB2E4; &#xB354; &#xBE68;&#xB9AC; &#xD2B8;&#xB808;&#xC624;&#xB2CC; &#xC54C;&#xB77C;&#xB2CC;&#xC73C;&#xB85C; &#xB300;&#xCCB4; &#xB41C; &#xC774;&#xBA70;, &#xB2E4;&#xC18C; &#xC758;&#xC678;&#xB85C; &#xBB34;&#xC9C8;&#xC11C; &#xAE00;&#xB9AC;&#xC2E0; &#xD3EC;&#xD568; &#xB41C; &#xD3A9; &#xD2F0; &#xB4DC;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xB450; &#xBC30; &#xC18D;&#xB3C4; &#xB300; &#xD55C;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xCC28;&#xC774; &#xC790;, Schulten Schulten&#xC758; &#xC774;&#xB860;&#xC758; &#xAD00;&#xC810;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC124;&#xBA85; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC694;&#xAE08; atomistic &#xBD84;&#xC790; &#xB3D9;&#xC5ED;&#xD559; &#xC2DC;&#xBBAC;&#xB808;&#xC774;&#xC158;&#xC758; &#xC815;&#xD655;&#xB3C4; &#xD14C;&#xC2A4;&#xD2B8; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD55C; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xC0C8;&#xB85C;&#xC6B4; &#xBCA4;&#xCE58; &#xB9C8;&#xD06C;&#xB97C; &#xC81C;&#xACF5; &#xD574;&#xC57C; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xD5EC;&#xB9AD;&#xC2A4; &#xD615;&#xC131; &#xD3A9; &#xD2F0; &#xB4DC;&#xC758; &#xCF54;&#xC77C; &#xC0C1;&#xD0DC;&#xC758; &#xB3D9;&#xC801; &#xC720;&#xC5F0;&#xC131;&#xC744; &#xCE21;&#xC815; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Para investigar la flexibilidad din&#xE1;mica del estado de la bobina de una h&#xE9;lice p&#xE9;ptido formador de la tasa de contacto de extremo a extremo se determin&#xF3;. Nanosegundo excitaci&#xF3;n &#xF3;ptica de tript&#xF3;fano en un extremo de un residuo 22, alanina p&#xE9;ptido rellena un estado triplete de larga vida que se inactiv&#xF3; al entrar en contacto cercano con un disulfuro c&#xED;clico unido al extremo opuesto. El an&#xE1;lisis de la decadencia de la poblaci&#xF3;n triplete utilizando un modelo de dos estados para la formaci&#xF3;n de h&#xE9;lice produce la difusi&#xF3;n limitada de extremo a extremo tasa de contacto del estado de la bobina del p&#xE9;ptido, as&#xED; como la h&#xE9;lice -&#x26;gt; bobina y la bobina -&#x26;gt; las tasas de h&#xE9;lice. Las tasas de bobina h&#xE9;lice-son muy similares a los anteriormente medido en l&#xE1;ser salto de temperatura-experimentos. La tasa de contacto de extremo a extremo de 1,1 x 10 (7) s (-1) en el estado de la bobina es diez veces m&#xE1;s r&#xE1;pido que la velocidad para un p&#xE9;ptido desordenada con treonina sustituido por alanina y, sorprendentemente, es aproximadamente el doble de la velocidad para un desordenado que contiene glicina p&#xE9;ptido. Estas diferencias se discuten en t&#xE9;rminos de la teor&#xED;a de Szabo, Schulten y Schulten. Las tarifas deben proporcionar importantes nuevos puntos de referencia para comprobar la exactitud de los atomistas simulaciones de din&#xE1;mica molecular.

Medici&#xF3;n de la flexibilidad din&#xE1;mica del estado de la bobina de un p&#xE9;ptido que forma la h&#xE9;lice

&#x7531;&#x534A;&#x80F1;&#x6C28;&#x9178;&#x6DEC;&#x706B;&#x7684;&#x8272;&#x6C28;&#x9178;&#x7684;&#x4E09;&#x7EBF;&#x6001;&#x72B6;&#x6001;&#x63D0;&#x4F9B;&#x4E86;&#x4E00;&#x4E2A;&#x65B0;&#x7684;&#x5DE5;&#x5177;&#x6D4B;&#x91CF;&#x5F62;&#x6210;&#x65E0;&#x5E8F;&#x591A;&#x80BD;&#x5206;&#x5B50;&#x5185;&#x7279;&#x5B9A;&#x8054;&#x7CFB;&#x4EBA;&#x7684;&#x901F;&#x7387;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x4F7F;&#x7528;&#x8FD9;&#x79CD;&#x6280;&#x672F;&#x6765;&#x8C03;&#x67E5;&#x8054;&#x7CFB;&#x5F62;&#x6210;&#x4E2D;&#x7684; CspTm&#xFF0C;&#x4ECE;&#x6027;&#x8D28;&#x7814;&#x7A76;&#x5229;&#x7528;&#x8010;&#x76D0;&#xFF0C;&#x8BBE;&#x8BA1;&#x7528;&#x6765;&#x5305;&#x542B;&#x4E00;&#x4E2A;&#x5355;&#x4E2A;&#x7684;&#x8272;&#x6C28;&#x9178;&#x7684;&#x6B8B;&#x7559;&#x7269; &#xFF08;W29&#xFF09; &#x548C;&#x4E00;&#x4E2A;&#x5355;&#x4E00;&#x7684;&#x534A;&#x80F1;&#x6C28;&#x9178; C &#x603B;&#x7AD9; (C67) &#x6B8B;&#x7559;&#x7269;&#x7684;&#x5C0F;&#x51B7;&#x4F11;&#x514B;&#x86CB;&#x767D;&#x53D8;&#x6027;&#x72B6;&#x6001;&#x3002;&#x5728;&#x6240;&#x6709;&#x7684;&#x53D8;&#x6027;&#x5242;&#x7684;&#x6D53;&#x5EA6;&#xFF0C;W29 &#x6001;&#x7684;&#x672A;&#x6298;&#x53E0;&#x86CB;&#x767D;&#x7684;&#x8870;&#x51CF;&#x7387;&#x90FD;&#x8D85;&#x8FC7; 10 &#x500D;&#x9AD8;&#x4E8E;&#x7387;&#x7684;&#x5E45;&#x5EA6;&#x4E3A;&#x672C;&#x673A;&#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28; &#xFF08;&#x7EA6; 10(4)s(-1))&#x3002;&#x4E0A;&#x65E0;&#x6DFB;&#x52A0; C &#x7EC8;&#x7AEF;&#x534A;&#x80F1;&#x6C28;&#x9178;&#x6E23;&#x7684;&#x672A;&#x6298;&#x53E0;&#x86CB;&#x767D;&#x5B9E;&#x9A8C;&#x8868;&#x660E;&#x8FD9;&#x66F4;&#x5FEB;&#x7684;&#x901F;&#x5EA6;&#x7ED3;&#x679C;&#x5B8C;&#x5168;&#x4ECE;&#x63A5;&#x89E6;&#x6DEC;&#x706B; C67&#x3002;&#x6DEC;&#x706B;&#x7387;&#x5904;&#x4E8E;&#x5C55;&#x5F00;&#x72B6;&#x6001;&#x7531; C67 &#x5C31;&#x4F1A;&#x589E;&#x52A0;&#x7684;&#x53D8;&#x6027;&#x5242;&#x6D53;&#x5EA6;&#x7684;&#x9752;&#x7750;&#x6298;&#x53E0;&#xFF0C;&#x6307;&#x793A;&#x672A;&#x6298;&#x53E0;&#x86CB;&#x767D;&#x7684;&#x538B;&#x5B9E;&#xFF0C;&#x4EE5;&#x524D;&#x5728;&#x5355;&#x5206;&#x5B50; F&ouml;rster &#x5171;&#x632F;&#x80FD;&#x91CF;&#x8F6C;&#x79FB; &#xFF08;&#x97F3;&#x54C1;&#xFF09; &#x5B9E;&#x9A8C;&#x4E2D;&#x89C2;&#x5BDF;&#x5230;&#x3002;

&#x53D8;&#x6027;&#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x5206;&#x5B50;&#x5185;&#x8054;&#x7CFB;&#x5F62;&#x6210;&#x7684;&#x52A8;&#x529B;&#x5B66;&#x7814;&#x7A76;&#x3002;

Quenching of the triplet state of tryptophan by cysteine has provided a new tool for measuring the rate of forming a specific intramolecular contact in disordered polypeptides. Here, we use this technique to investigate contact formation in the denatured state of CspTm, a small cold-shock protein from Thermotoga maritima, engineered to contain a single tryptophan residue (W29) and a single cysteine residue at the C terminus (C67). At all concentrations of denaturant, the decay rate of the W29 triplet of the unfolded protein is more than tenfold faster than the rate observed for the native protein ( approximately 10(4)s(-1)). Experiments on the unfolded protein without the added C-terminal cysteine residue show that this faster rate results entirely from contact quenching by C67. The quenching rate in the unfolded state by C67 increases at concentrations of denaturant that favor folding, indicating a compaction of the unfolded protein as observed previously in single-molecule FÃ¶rster resonance energy transfer (FRET) experiments.

Kinetics of intramolecular contact formation in a denatured protein.

Trempe de l&#x26;#39;&#xE9;tat triplet du tryptophane par la cyst&#xE9;ine a fourni un nouvel outil pour mesurer le taux de formation d&#x26;#39;un contact sp&#xE9;cifique intramol&#xE9;culaire dans les polypeptides d&#xE9;sordonn&#xE9;s. Ici, nous utilisons cette technique pour &#xE9;tudier la formation de contact dans l&#x26;#39;&#xE9;tat d&#xE9;natur&#xE9; de CspTm, une petite prot&#xE9;ine de choc froid de Thermotoga maritima, con&#xE7;ue pour contenir un r&#xE9;sidu tryptophane unique (W29) et un r&#xE9;sidu cyst&#xE9;ine unique &#xE0; l&#x26;#39;extr&#xE9;mit&#xE9; C-terminale (C67). A toutes les concentrations de d&#xE9;naturant, le taux de d&#xE9;croissance du triplet W29 de la prot&#xE9;ine d&#xE9;pli&#xE9;e est plus que d&#xE9;cupl&#xE9; plus vite que le taux observ&#xE9; pour la prot&#xE9;ine native (environ 10 (4) s (-1)). Les exp&#xE9;riences sur le d&#xE9;roulement de prot&#xE9;ines sans la valeur ajout&#xE9;e C-terminale spectacle r&#xE9;sidu cyst&#xE9;ine que les r&#xE9;sultats des taux de cette plus rapides de la trempe de contact enti&#xE8;rement par C67. La vitesse de trempe &#xE0; l&#x26;#39;&#xE9;tat d&#xE9;pli&#xE9; par C67 augmente &#xE0; des concentrations de d&#xE9;naturant qui favorisent pliage, qui indique une compactage des prot&#xE9;ines d&#xE9;pli&#xE9;es comme observ&#xE9; pr&#xE9;c&#xE9;demment dans une seule mol&#xE9;cule de transfert F&#xF6;rster d&#x26;#39;&#xE9;nergie de r&#xE9;sonance (FRET) exp&#xE9;riences.

Cin&#xE9;tique de formation de contact intramol&#xE9;culaire dans une prot&#xE9;ine d&#xE9;natur&#xE9;e

Kinetik der intramolekularen Kontaktbildung zu einem denaturierten Protein.

Tempra dello stato di tripletto di triptofano da cisteina ha fornito un nuovo strumento per misurare il tasso di formazione di un determinato contatto intramolecolare in polipeptidi disordinati. Qui, utilizziamo questa tecnica per indagare il contatto formazione nello stato denaturato del CspTm, una piccola proteina freddo-shock da Thermotoga maritima, progettato per contenere un residuo di triptofano singolo (W29) e un residuo di cisteina singolo presso il capolinea di C (C67). A tutte le concentrazioni di denaturante, il tasso di decadimento della terzina W29 della proteina unfolded &egrave; oltre dieci volte pi&ugrave; veloce rispetto al tasso osservato per la proteina nativa (circa 10(4)s(-1)). Esperimenti sulla proteina spiegata senza i residui di cisteina C-terminale aggiunto mostrano che questo tasso pi&ugrave; veloce risulta interamente da contatto tempra da C67. Il tasso di tempra nello stato spiegato da C67 aumenta a concentrazioni di denaturante che favore pieghevole, che indica una compattazione della proteina unfolded, come osservato in precedenza in esperimenti di singola molecola F&ouml;rster resonance energy transfer (FRET).

Cinetica di formazione intramolecolare contatto in una proteina denaturata.

&#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30A4;&#x30F3;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x30C8;&#x30EA;&#x30D7;&#x30C8;&#x30D5;&#x30A1;&#x30F3;&#x306E;&#x4E09;&#x91CD;&#x9805;&#x72B6;&#x614B;&#x306E;&#x6D88;&#x5149;&#x306F;&#x3001;&#x7121;&#x79E9;&#x5E8F;&#x306A;&#x30DD;&#x30EA;&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C9;&#x306E;&#x7279;&#x5B9A;&#x306E;&#x5206;&#x5B50;&#x5185;&#x63A5;&#x89E6;&#x306E;&#x5F62;&#x6210;&#x901F;&#x5EA6;&#x3092;&#x6E2C;&#x5B9A;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x65B0;&#x3057;&#x3044;&#x30C4;&#x30FC;&#x30EB;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x3001;CspTm&#x3001;&#x5358;&#x4E00;&#x306E;&#x30C8;&#x30EA;&#x30D7;&#x30C8;&#x30D5;&#x30A1;&#x30F3;&#x6B8B;&#x57FA;&#xFF08;W29&#xFF09;&#x3068;C&#x672B;&#x7AEF;&#xFF08;C67&#xFF09;&#x3067;&#x3001;&#x5358;&#x4E00;&#x306E;&#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30A4;&#x30F3;&#x6B8B;&#x57FA;&#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x3088;&#x3046;&#x306B;&#x8A2D;&#x8A08;&#x3055;&#x308C;&#x305F;Thermotoga maritima&#x306E;&#x304B;&#x3089;&#x5C0F;&#x3055;&#x3044;&#x30B3;&#x30FC;&#x30EB;&#x30C9;&#x30B7;&#x30E7;&#x30C3;&#x30AF;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x5909;&#x6027;&#x72B6;&#x614B;&#x306E;&#x30B3;&#x30F3;&#x30BF;&#x30AF;&#x30C8;&#x5F62;&#x6210;&#x3092;&#x8ABF;&#x3079;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x3053;&#x306E;&#x30C6;&#x30AF;&#x30CB;&#x30C3;&#x30AF;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x5909;&#x6027;&#x3001;&#x30A2;&#x30F3;&#x30D5;&#x30A9;&#x30FC;&#x30EB;&#x30C9;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;W29&#x30C8;&#x30EA;&#x30D7;&#x30EC;&#x30C3;&#x30C8;&#x306E;&#x6E1B;&#x8870;&#x7387;&#x306E;&#x3059;&#x3079;&#x3066;&#x306E;&#x6FC3;&#x5EA6;&#x3067;&#x3001;&#x5929;&#x7136;&#x306E;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#xFF08;&#x7D04;10&#xFF08;4&#xFF09;S&#xFF08;-1&#xFF09;&#xFF09;&#x306B;&#x3064;&#x3044;&#x3066;&#x89B3;&#x5BDF;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x30EC;&#x30FC;&#x30C8;&#x3088;&#x308A;&#x3082;&#x500D;&#x901F;&#x3044;&#x4EE5;&#x4E0A;&#x306E;&#x3082;&#x306E;&#x3067;&#x3059;&#x3002; C67&#x3067;&#x8FFD;&#x52A0;&#x3055;&#x308C;&#x305F;C&#x672B;&#x7AEF;&#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30A4;&#x30F3;&#x6B8B;&#x57FA;&#x306E;&#x30B7;&#x30E7;&#x30FC;&#x306A;&#x3057;&#x3067;&#x7E70;&#x308A;&#x5E83;&#x3052;&#x3089;&#x308C;&#x308B;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x306E;&#x5B9F;&#x9A13;&#x306E;&#x63A5;&#x89E6;&#x6D88;&#x5149;&#x304B;&#x3089;&#x5B8C;&#x5168;&#x306B;&#x3053;&#x306E;&#x901F;&#x3044;&#x901F;&#x5EA6;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x3001;&#x305D;&#x308C;&#x306F;&#x3002;&#x5358;&#x4E00;&#x5206;&#x5B50;&#x30D5;&#x30A7;&#x30EB;&#x30B9;&#x30BF;&#x30FC;&#x5171;&#x9CF4;&#x30A8;&#x30CD;&#x30EB;&#x30AE;&#x30FC;&#x79FB;&#x52D5;&#xFF08;FRET&#xFF09;&#x306E;&#x5B9F;&#x9A13;&#x3067;&#x4EE5;&#x524D;&#x306B;&#x89B3;&#x5BDF;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x306E;&#x5727;&#x7E2E;&#x3092;&#x793A;&#x3059;&#x6298;&#x308A;&#x305F;&#x305F;&#x307F;&#x5F0F;&#x3092;&#x597D;&#x3080;&#x5909;&#x6027;&#x5264;&#x306E;&#x6FC3;&#x5EA6;&#x306E;C67&#x304C;&#x5897;&#x52A0;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x5C55;&#x958B;&#x72B6;&#x614B;&#x306E;&#x6D88;&#x5149;&#x7387;&#x306F;&#x3001;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x3092;&#x5E83;&#x3052;&#x305F;&#x3002;

&#x5909;&#x6027;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x5206;&#x5B50;&#x5185;&#x63A5;&#x89E6;&#x5F62;&#x6210;&#x306E;&#x52D5;&#x529B;&#x5B66;

&#xC2DC;&#xC2A4;&#xD14C;&#xC778;, &#xD2B8;&#xB9BD;&#xD1A0;&#xD310;&#xC758; triplet &#xC0C1;&#xD0DC; &#xD574;&#xC18C; &#xBB34;&#xC9C8;&#xC11C; polypeptides&#xC5D0; &#xD2B9;&#xC815; intramolecular &#xC5F0;&#xB77D;&#xCC98; &#xD615;&#xC131;&#xC758; &#xC18D;&#xB3C4; &#xCE21;&#xC815; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD55C; &#xC0C8;&#xB85C;&#xC6B4; &#xB3C4;&#xAD6C;&#xB97C; &#xC81C;&#xACF5; &#xD558;&#xACE0;&#xC788;&#xB2E4;. &#xC5EC;&#xAE30;,&#xC774; &#xAE30;&#xC220;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xC5F0;&#xB77D;&#xCC98; &#xD615;&#xC131; CspTm, Thermotoga maritima, &#xB2E8;&#xC77C; &#xD2B8;&#xB9BD;&#xD1A0;&#xD310; &#xC794;&#xB958;&#xBB3C; (W29)&#xC640; C &#xC885;&#xC810; (C67)&#xC5D0; &#xB2E8;&#xC77C; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD14C;&#xC778; &#xC794;&#xB958;&#xBB3C;&#xC744; &#xD3EC;&#xD568; &#xD558;&#xB3C4;&#xB85D; &#xC124;&#xACC4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC791;&#xC740; &#xB0C9; &#xCDA9;&#xACA9; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xBCC0;&#xC131; &#xC0C1;&#xD0DC;&#xC5D0;&#xC11C;&#xB97C; &#xC870;&#xC0AC;. Denaturant&#xC758; &#xBAA8;&#xB4E0; &#xB18D;&#xB3C4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD3BC;&#xCE5C;&#xB41C; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; W29 triplet&#xC758; &#xBD80;&#xD328; &#xC18D;&#xB3C4; &#xC774;&#xC0C1; &#xC5F4; &#xBC30; &#xCC9C;&#xC5F0; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; (&#xC57D; 10(4)s(-1))&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xAD00;&#xCC30; &#xD558;&#xB294; &#xC18D;&#xB3C4; &#xBCF4;&#xB2E4; &#xB354; &#xBE68;&#xB9AC;. &#xCD94;&#xAC00; C &#xD130;&#xBBF8;&#xB110; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD14C;&#xC778; &#xC794;&#xB958;&#xBB3C; &#xC5C6;&#xC774; &#xD3BC;&#xCE5C;&#xB41C; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC2E4;&#xD5D8;&#xC774; &#xBE60;&#xB978; &#xC18D;&#xB3C4;&#xB85C; C67 &#xC5EC; &#xBB38;&#xC758; &#xD574;&#xC18C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC644;&#xC804;&#xD788; &#xACB0;&#xACFC; &#xD45C;&#xC2DC;. C67 &#xD558; &#xC5EC; &#xD3BC;&#xCE5C;&#xB41C; &#xC0C1;&#xD0DC;&#xC5D0;&#xC11C; &#xB0C9;&#xAC01; &#xC18D;&#xB3C4; &#xC99D;&#xAC00; denaturant&#xC758; &#xB18D;&#xB3C4;&#xC5D0; &#xD574;&#xB2F9; &#xD638;&#xC758; &#xC811;&#xB294; &#xB2E8;&#xC77C; &#xBD84;&#xC790; F&ouml;rster &#xACF5;&#xBA85; &#xC5D0;&#xB108;&#xC9C0; &#xC804;&#xC1A1; (&#xBB34;&#xC11C; &#xC6CC;) &#xC2E4;&#xD5D8;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC774;&#xC804;&#xC5D0; &#xAD00;&#xCC30;&#xB85C; &#xD3BC;&#xCE5C;&#xB41C; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xC555;&#xCD95;&#xC744; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0B4;&#xB294;.

&#xBCC0;&#xC131; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC5D0;&#xC11C; intramolecular &#xC5F0;&#xB77D;&#xCC98; &#xD615;&#xC131; &#xC18D;&#xB3C4; &#xB860;.

Enfriamiento del estado triplete de tript&#xF3;fano por ciste&#xED;na ha proporcionado una nueva herramienta para medir la tasa de formaci&#xF3;n de un contacto espec&#xED;fico intramolecular en polip&#xE9;ptidos desordenadas. Aqu&#xED;, nosotros usamos esta t&#xE9;cnica para investigar la formaci&#xF3;n de contacto en el estado desnaturalizado de CspTm, una peque&#xF1;a prote&#xED;na de choque en fr&#xED;o de Thermotoga maritima, dise&#xF1;ado para contener un residuo de tript&#xF3;fano &#xFA;nica (W29) y un residuo de ciste&#xED;na sola en la terminal C (C67). En todas las concentraciones de desnaturalizante, la velocidad de desintegraci&#xF3;n de la tripleta W29 de la prote&#xED;na desplegada es m&#xE1;s de diez veces m&#xE1;s r&#xE1;pida que la observada para la prote&#xED;na nativa (aproximadamente 10 (4) s (-1)). Los experimentos sobre la prote&#xED;na desplegada sin el a&#xF1;adido C-terminal de residuo de ciste&#xED;na muestran que este tipo de resultados m&#xE1;s r&#xE1;pidos por completo de enfriamiento por contacto C67. La velocidad de enfriamiento en el estado desplegado por el aumento de C67 en concentraciones de desnaturalizante que favorecen plegable, lo que indica una compactaci&#xF3;n de las prote&#xED;nas se desarrollaron seg&#xFA;n lo observado previamente en una sola mol&#xE9;cula de transferencia de energ&#xED;a F&#xF6;rster resonancia (FRET) experimentos.

Cin&#xE9;tica de la formaci&#xF3;n de contacto intramolecular en una prote&#xED;na desnaturalizada

&#x5728;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x6298;&#x53E0;&#x7684;&#x6700;&#x7ECF;&#x5E38;&#x6027;&#x7684;&#x95EE;&#x9898;&#x4E4B;&#x4E00;&#x662F;&#x6307;&#x4E8C;&#x7EA7;&#x7ED3;&#x6784;&#x7684;&#x5F62;&#x6210;&#x548C;&#x758F;&#x6C34;&#x6027;&#x5D29;&#x6E83;&#x4E4B;&#x95F4;&#x7684;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;&#x4E0E;&#x4E8C;&#x7EA7;&#x7ED3;&#x6784;&#xFF0C;&#x5F88;&#x96BE;&#x9694;&#x79BB;&#x758F;&#x6C34;&#x7684;&#x5D29;&#x6E83;&#xFF0C;&#x4ECE;&#x5176;&#x4ED6;&#x6298;&#x53E0;&#x4E8B;&#x4EF6;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x76F4;&#x63A5;&#x6D4B;&#x91CF;&#x4E86;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x758F;&#x6C34;&#x6027;&#x6298;&#x53E0;&#x5728;&#x6CA1;&#x6709;&#x7ADE;&#x4E89;&#x8FDB;&#x7A0B;&#x7684;&#x52A8;&#x6001;&#x3002;&#x5D29;&#x6E83;&#x662F;&#x89E6;&#x53D1;&#x5E26;&#x9178;&#x53D8;&#x6027;&#x5F62;&#x5F0F;&#x7684;&#x4E00;&#x79CD;&#x7B80;&#x5355;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x6FC0;&#x5149;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x6E29;&#x5EA6;&#x8DF3;&#x8DC3;&#x548C;&#x76D1;&#x6D4B;&#x7684;&#x8367;&#x5149;&#x5171;&#x632F;&#x80FD;&#x91CF;&#x8F6C;&#x79FB;&#x63A2;&#x9488;&#x653E;&#x5728;&#x86CB;&#x767D;&#x4E24;&#x7AEF;&#x4E4B;&#x95F4;&#x3002;&#x5F1B;&#x8C6B;&#x65F6;&#x95F4;&#x7684;&#x758F;&#x6C34;&#x6027;&#x5D29;&#x6E83;&#x53EA;&#x662F;&#x7EA6;&#x7B49;&#x4E8E; 60 ns &#x5728; 305 K&#xFF0C;&#x6BD4;&#x4E8C;&#x7EA7;&#x7ED3;&#x6784;&#x5F62;&#x6210;&#x751A;&#x81F3;&#x66F4;&#x5FEB;&#x3002;&#x5728;&#x8F83;&#x9AD8;&#x6E29;&#x5EA6;&#x4E0B;&#xFF0C;&#x968F;&#x7740;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x7684;&#x758F;&#x6C34;&#x6027;&#x66F4;&#x5F3A;&#x529B;&#x91CF;&#x53D8;&#x5F97;&#x8D8A;&#x6765;&#x8D8A;&#x7D27;&#x51D1;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x89C2;&#x5BDF;&#x52A8;&#x6001;&#x7684;&#x5D29;&#x6E83;&#x7ECF;&#x6D4E;&#x653E;&#x7F13;&#x3002;&#x6B64;&#x52A8;&#x6001;&#x758F;&#x6C34;&#x6548;&#x679C;&#x662F;&#x52A8;&#x6001;&#x7684;&#x73BB;&#x7483;&#x5316;&#x8F6C;&#x53D8;&#x7684;&#x7406;&#x8BBA;&#x9884;&#x6D4B;&#x9AD8;&#x6E29;&#x6A21;&#x62DF;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x7ED3;&#x679C;&#x8868;&#x660E;&#x8BB8;&#x591A;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x5728;&#x751F;&#x7406;&#x6761;&#x4EF6;&#x5C06;&#x542F;&#x52A8;&#x6298;&#x53E0;&#x6298;&#x53E0;&#x5230;&#x975E;&#x7ED3;&#x6784;&#x5316;&#x7684;&#x5C0F;&#x7403;&#x3002;&#x672C;&#x5730;&#x8FD0;&#x52A8;&#x5927;&#x6982;&#x5C06;&#x4F1A;&#x63A8;&#x52A8;&#x4EE5;&#x4E0B;&#x641C;&#x7D22;&#x672C;&#x673A;&#x7ED3;&#x6784;&#x7684;&#x6298;&#x53E0;&#x5C0F;&#x7403;&#x3002;

&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x758F;&#x6C34;&#x6027;&#x5D29;&#x6E83;&#x6709;&#x591A;&#x5FEB;&#xFF1F;

One of the most recurring questions in protein folding refers to the interplay between formation of secondary structure and hydrophobic collapse. In contrast with secondary structure, it is hard to isolate hydrophobic collapse from other folding events. We have directly measured the dynamics of protein hydrophobic collapse in the absence of competing processes. Collapse was triggered with laser-induced temperature jumps in the acid-denatured form of a simple protein and monitored by fluorescence resonance energy transfer between probes placed at the protein ends. The relaxation time for hydrophobic collapse is only approximately equal to 60 ns at 305 K, even faster than secondary structure formation. At higher temperatures, as the protein becomes increasingly compact by a stronger hydrophobic force, we observe a slowdown of the dynamics of collapse. This dynamic hydrophobic effect is a high-temperature analogue of the dynamic glass transition predicted by theory. Our results indicate that in physiological conditions many proteins will initiate folding by collapsing to an unstructured globule. Local motions will presumably drive the following search for native structure in the collapsed globule.

How fast is protein hydrophobic collapse?

L&#x26;#39;une des questions les plus r&#xE9;currentes dans le repliement des prot&#xE9;ines se r&#xE9;f&#xE8;re &#xE0; l&#x26;#39;interaction entre la formation de la structure secondaire et de l&#x26;#39;effondrement hydrophobe. En contraste avec la structure secondaire, il est difficile d&#x26;#39;isoler l&#x26;#39;effondrement hydrophobe d&#x26;#39;autres &#xE9;v&#xE9;nements de pliage. Nous avons mesur&#xE9; directement la dynamique de l&#x26;#39;effondrement hydrophobe des prot&#xE9;ines en l&#x26;#39;absence de processus concurrents. Effondrement a &#xE9;t&#xE9; d&#xE9;clench&#xE9; avec des sauts de temp&#xE9;rature induite par laser sous la forme d&#x26;#39;acide-d&#xE9;natur&#xE9; de prot&#xE9;ines une simple et surveill&#xE9;e par transfert d&#x26;#39;&#xE9;nergie de r&#xE9;sonance de fluorescence entre sondes plac&#xE9;es aux extr&#xE9;mit&#xE9;s de prot&#xE9;ines. Le temps de relaxation de l&#x26;#39;effondrement hydrophobe est seulement &#xE0; peu pr&#xE8;s &#xE9;gale &#xE0; 60 ns &#xE0; 305 K, encore plus vite que la formation de structure secondaire. &#xC0; des temp&#xE9;ratures plus &#xE9;lev&#xE9;es, comme la prot&#xE9;ine devient de plus en plus compacte par une force plus forte hydrophobe, on observe un ralentissement de la dynamique de l&#x26;#39;effondrement. Cet effet hydrophobe dynamique est un analogue &#xE0; haute temp&#xE9;rature de la transition vitreuse dynamique pr&#xE9;dit par la th&#xE9;orie. Nos r&#xE9;sultats indiquent que dans des conditions physiologiques de nombreuses prot&#xE9;ines lancera pliage par l&#x26;#39;effondrement d&#x26;#39;un globule non structur&#xE9;es. Mouvements locaux seront sans doute conduire la recherche suivante pour la structure native dans le globule effondr&#xE9;.

Quelle est la vitesse R&#xE9;duire hydrophobe des prot&#xE9;ines?

Wie schnell ist Protein hydrophoben Kollaps?

Una delle domande pi&ugrave; ricorrenti in ripiegamento proteico si riferisce all&#39;interazione tra formazione della struttura secondaria e collasso idrofobico. In contrasto con la struttura secondaria, &egrave; difficile isolare collasso idrofobico da altri eventi pieghevole. Noi abbiamo misurato direttamente la dinamica del collasso idrofobico proteine in assenza di processi concorrenti. Crollo &egrave; stato innescato con salti di temperatura indotta da laser sotto forma di una semplice proteina denaturata acido e monitorata dalla fluorescenza resonance energy transfer tra sonde posizionato alle estremit&agrave; della proteina. Il tempo di rilassamento per collasso idrofobico &egrave; solo approssimativamente pari a 60 ns a 305 K, anche pi&ugrave; veloce di formazione della struttura secondaria. A temperature pi&ugrave; elevate, come la proteina diventa sempre pi&ugrave; compatta da una forza pi&ugrave; forte idrofobia, si osserva un rallentamento della dinamica del crollo. Questo dinamico effetto idrofobo &egrave; un analogo ad alta temperatura di transizione dinamica vetro previsto dalla teoria. I nostri risultati indicano che in condizioni fisiologiche molte proteine avvier&agrave; pieghevole dal collasso di un globulo non strutturato. Mozioni locali presumibilmente guider&agrave; la seguente ricerca per struttura nativa nel globulo crollato.

Quanto veloce &egrave; proteine idrofobiche crollo?

&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x6298;&#x308A;&#x7573;&#x307F;&#x306E;&#x4E2D;&#x3067;&#x6700;&#x3082;&#x5B9A;&#x671F;&#x7684;&#x306A;&#x8CEA;&#x554F;&#x306E;&#x4E00;&#x3064;&#x306F;&#x4E8C;&#x6B21;&#x69CB;&#x9020;&#x3068;&#x758E;&#x6C34;&#x6027;&#x5D29;&#x58CA;&#x306E;&#x5F62;&#x6210;&#x306E;&#x9593;&#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x3092;&#x6307;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x4E8C;&#x6B21;&#x69CB;&#x9020;&#x3068;&#x306F;&#x5BFE;&#x7167;&#x7684;&#x306B;&#x3001;&#x305D;&#x308C;&#x306F;&#x4ED6;&#x306E;&#x6298;&#x308A;&#x305F;&#x305F;&#x307F;&#x30A4;&#x30D9;&#x30F3;&#x30C8;&#x304B;&#x3089;&#x758E;&#x6C34;&#x6027;&#x306E;&#x5D29;&#x58CA;&#x3092;&#x5206;&#x96E2;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306F;&#x56F0;&#x96E3;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x76F4;&#x63A5;&#x7AF6;&#x5408;&#x3059;&#x308B;&#x30D7;&#x30ED;&#x30BB;&#x30B9;&#x304C;&#x5B58;&#x5728;&#x3057;&#x306A;&#x3044;&#x5834;&#x5408;&#x306B;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x306E;&#x758E;&#x6C34;&#x6027;&#x5D29;&#x58CA;&#x306E;&#x30C0;&#x30A4;&#x30CA;&#x30DF;&#x30AF;&#x30B9;&#x3092;&#x6E2C;&#x5B9A;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x5D29;&#x58CA;&#x306F;&#x3001;&#x5358;&#x7D14;&#x306A;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x9178;&#x5909;&#x6027;&#x578B;&#x306E;&#x30EC;&#x30FC;&#x30B6;&#x30FC;&#x8A98;&#x8D77;&#x6E29;&#x5EA6;&#x30B8;&#x30E3;&#x30F3;&#x30D7;&#x3067;&#x30C8;&#x30EA;&#x30AC;&#x3055;&#x308C;&#x3001;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x4E21;&#x7AEF;&#x306B;&#x914D;&#x7F6E;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30D6;&#x3068;&#x306E;&#x9593;&#x306E;&#x86CD;&#x5149;&#x5171;&#x9CF4;&#x30A8;&#x30CD;&#x30EB;&#x30AE;&#x30FC;&#x79FB;&#x52D5;&#x306B;&#x3088;&#x308A;&#x30E2;&#x30CB;&#x30BF;&#x30FC;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x758E;&#x6C34;&#x6027;&#x306E;&#x5D29;&#x58CA;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x7DE9;&#x548C;&#x6642;&#x9593;&#x304C;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x901F;&#x304F;&#x3001;&#x4E8C;&#x6B21;&#x69CB;&#x9020;&#x5F62;&#x6210;&#x3067;&#x306F;&#x306A;&#x304F;&#x3001;&#x552F;&#x4E00;&#x306E;305 K&#x3067;60 ns&#x306E;&#x307B;&#x307C;&#x7B49;&#x3057;&#x3044;&#x3002;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306F;&#x5F37;&#x3044;&#x758E;&#x6C34;&#x6027;&#x306E;&#x529B;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x3001;&#x307E;&#x3059;&#x307E;&#x3059;&#x30B3;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x30C8;&#x306B;&#x306A;&#x308A;&#x3001;&#x3088;&#x308A;&#x9AD8;&#x3044;&#x6E29;&#x5EA6;&#x3067;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;&#x5D29;&#x58CA;&#x306E;&#x30C0;&#x30A4;&#x30CA;&#x30DF;&#x30AF;&#x30B9;&#x306E;&#x6E1B;&#x901F;&#x3092;&#x78BA;&#x8A8D;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x30C0;&#x30A4;&#x30CA;&#x30DF;&#x30C3;&#x30AF;&#x306A;&#x758E;&#x6C34;&#x6027;&#x306E;&#x52B9;&#x679C;&#x306F;&#x3001;&#x7406;&#x8AD6;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x4E88;&#x6E2C;&#x3055;&#x308C;&#x3001;&#x52D5;&#x7684;&#x30AC;&#x30E9;&#x30B9;&#x8EE2;&#x79FB;&#x306E;&#x9AD8;&#x6E29;&#x30A2;&#x30CA;&#x30ED;&#x30B0;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x306F;&#x3001;&#x751F;&#x7406;&#x7684;&#x6761;&#x4EF6;&#x4E0B;&#x3067;&#x591A;&#x304F;&#x306E;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x304C;&#x69CB;&#x9020;&#x5316;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x306A;&#x3044;&#x7403;&#x306B;&#x5D29;&#x58CA;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x6298;&#x308A;&#x7573;&#x307F;&#x304C;&#x958B;&#x59CB;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x5730;&#x5143;&#x306E;&#x52D5;&#x304D;&#x306F;&#x3001;&#x304A;&#x305D;&#x3089;&#x304F;&#x5012;&#x58CA;&#x7403;&#x306E;&#x30CD;&#x30A4;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6;&#x69CB;&#x9020;&#x306F;&#x3001;&#x4EE5;&#x4E0B;&#x306E;&#x691C;&#x7D22;&#x3092;&#x99C6;&#x52D5;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x758E;&#x6C34;&#x6027;&#x5D29;&#x58CA;&#x306F;&#x3069;&#x308C;&#x304F;&#x3089;&#x3044;&#x901F;&#x3044;&#x3067;&#x3059;&#x304B;&#xFF1F;

&#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xD3F4;&#xB529;&#xC5D0; &#xAC00;&#xC7A5; &#xBC18;&#xBCF5; &#xB418;&#xB294; &#xC9C8;&#xBB38; &#xC911; &#xD558;&#xB098;&#xB294; 2 &#xCC28; &#xAD6C;&#xC870; &#xD615;&#xC131; &#xBC0F; &#xC18C;&#xC218; &#xC131; &#xBD95;&#xAD34; &#xC0AC;&#xC774;&#xC758; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC744; &#xB9D0;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. 2 &#xCC28; &#xAD6C;&#xC870;&#xC640;&#xB294; &#xB2EC;&#xB9AC; &#xB2E4;&#xB978; &#xC811;&#xB294; &#xC774;&#xBCA4;&#xD2B8;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC18C;&#xC218; &#xC131;&#xC758; &#xBD95;&#xAD34;&#xB97C; &#xBD84;&#xB9AC; &#xD558;&#xAE30; &#xC5B4;&#xB835;&#xB2E4;. &#xC9C1;&#xC811; &#xACBD;&#xC7C1; &#xD504;&#xB85C;&#xC138;&#xC2A4;&#xC758; &#xBD80;&#xC7AC;&#xC5D0;&#xC11C; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xC18C;&#xC218; &#xC131; &#xBD95;&#xAD34;&#xC758; &#xC5ED;&#xD559; &#xCE21;&#xC815; &#xD588;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xCD95;&#xC18C; &#xB2E8;&#xC21C; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xC0B0; &#xBCC0;&#xC131; &#xD615;&#xD0DC;&#xB85C; &#xB808;&#xC774;&#xC800; &#xC720;&#xB3C4; &#xC628;&#xB3C4; &#xC810;&#xD504; &#xC720;&#xBC1C; &#xB418;&#xC5C8;&#xACE0; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xB05D;&#xC5D0; &#xBC30;&#xCE58; &#xD558;&#xB294; &#xD504;&#xB85C;&#xBE0C; &#xC0AC;&#xC774;&#xC758; &#xD615;&#xAD11; &#xACF5;&#xBA85; &#xC5D0;&#xB108;&#xC9C0; &#xC804;&#xB2EC;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xBAA8;&#xB2C8;&#xD130;&#xB9C1;. &#xC18C;&#xC218; &#xC131;&#xC758; &#xBD95;&#xAD34;&#xB97C; &#xC704;&#xD55C; &#xD734;&#xC2DD; &#xC2DC;&#xAC04;&#xC640; 60&#xB9CC;&#xC740; 2 &#xCC28; &#xAD6C;&#xC870; &#xD615;&#xC131; &#xBCF4;&#xB2E4; &#xB354; &#xBE68;&#xB9AC; 305 K&#xC5D0;&#xC11C; ns. &#xB354; &#xB192;&#xC740; &#xC628;&#xB3C4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xB418; &#xACE0; &#xB354; &#xAC15;&#xD55C; &#xC18C;&#xC218; &#xC131;&#xC758; &#xD798;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC810;&#xC810; &#xB354; &#xCF64;&#xD329;&#xD2B8;, &#xC6B0;&#xB9AC; &#xCE68;&#xCCB4;&#xC758; &#xBD95;&#xAD34;&#xC758; &#xC5ED;&#xD559;&#xC744; &#xAD00;&#xCC30;. &#xC774; &#xB3D9;&#xC801; &#xC18C;&#xC218; &#xC131; &#xD6A8;&#xACFC;&#xC758; &#xC774;&#xB860;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC608;&#xCE21; &#xB3D9;&#xC801; &#xC720;&#xB9AC; &#xC804;&#xC774; &#xACFC;&#xC5F4; &#xC544;&#xB0A0;&#xB85C;&#xADF8; &#xC774;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xACB0;&#xACFC; &#xC0DD;&#xB9AC; &#xC801; &#xC870;&#xAC74;&#xC5D0; &#xB9CE;&#xC740; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC2DC;&#xC791; &#xAD6C;&#xC870;&#xD654; &#xB418;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC740; globule &#xCD95;&#xC18C; &#xD558; &#xC5EC; &#xC811;&#xB294; &#xAC83;&#xC744; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0C5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB85C;&#xCEEC; &#xB3D9;&#xC791; &#xC544;&#xB9C8;&#xB3C4; &#xCD95;&#xC18C; globule&#xC758; &#xAE30;&#xBCF8; &#xAD6C;&#xC870;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xB2E4;&#xC74C;&#xACFC; &#xAC19;&#xC740; &#xAC80;&#xC0C9;&#xC744; &#xBAB0; &#xAC83; &#xC774;&#xB2E4;.

&#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC18C;&#xC218; &#xC131;&#xC758; &#xBD95;&#xAD34;&#xB294; &#xC5BC;&#xB9C8;&#xB098; &#xBE60;&#xB978;&#xAC00;?

Una de las preguntas m&#xE1;s recurrentes en el plegamiento de prote&#xED;nas se refiere a la interacci&#xF3;n entre la formaci&#xF3;n de la estructura secundaria y el colapso hidrof&#xF3;bico. En contraste con la estructura secundaria, es dif&#xED;cil de aislar colapso hidr&#xF3;fobo de otros eventos plegables. Hemos medido directamente la din&#xE1;mica del colapso prote&#xED;na hidr&#xF3;foba en la ausencia de procesos que compiten. Contraer se activ&#xF3; con saltos de temperatura inducidas por l&#xE1;ser en la forma de &#xE1;cido desnaturalizado de una prote&#xED;na simple y controlado por la transferencia de energ&#xED;a de resonancia de fluorescencia entre las sondas colocadas en los extremos de prote&#xED;nas. El tiempo de relajaci&#xF3;n para el colapso hidr&#xF3;fobo es s&#xF3;lo aproximadamente igual a 60 ns a 305 K, incluso m&#xE1;s r&#xE1;pido que la formaci&#xF3;n de estructura secundaria. A temperaturas m&#xE1;s altas, como la prote&#xED;na se vuelve cada vez m&#xE1;s compactos por un grupo hidr&#xF3;fobo m&#xE1;s fuerte, se observa una desaceleraci&#xF3;n de la din&#xE1;mica del colapso. Este efecto hidr&#xF3;fobo din&#xE1;mica es un an&#xE1;logo de alta temperatura de transici&#xF3;n v&#xED;trea de la din&#xE1;mica predicho por la teor&#xED;a. Nuestros resultados indican que en condiciones fisiol&#xF3;gicas muchas prote&#xED;nas iniciar&#xE1; plegado por el colapso de un gl&#xF3;bulo no estructurada. Movimientos locales, presumiblemente impulsar&#xE1; la b&#xFA;squeda de la estructura nativa en el gl&#xF3;bulo colapsado.

&#xBF;Qu&#xE9; tan r&#xE1;pido es el colapso hidr&#xF3;fobas de la prote&#xED;na?

&#x6DEC;&#x706B;&#x7684;&#x8272;&#x6C28;&#x9178;&#x7684;&#x4E09;&#x7EBF;&#x6001;&#x72B6;&#x6001;&#x7684;&#x5BC6;&#x5207;&#x63A5;&#x89E6;&#x4E0E;&#x534A;&#x80F1;&#x6C28;&#x9178;&#x5DF2;&#x88AB;&#x7528;&#x6765;&#x8861;&#x91CF;&#x7684;&#x5FAA;&#x73AF;&#x5F62;&#x6210;&#x7684;&#x65E0;&#x5E8F;&#x591A;&#x80BD;&#x5177;&#x6709;&#x5E8F;&#x5217; cys-(ala-&#x7518;-&#x8C37;&#x6C28;&#x9170;&#x80FA;) j-&#x6FC0;&#x8FDB;&#x515A;&#x53CD;&#x5E94;&#x6709;&#x9650;&#x548C;&#x4F20;&#x64AD;&#x6709;&#x9650;&#x516C;&#x53F8;&#x7387; (j = 1-9&#xFF09;&#x3002;&#x5728;&#x9AD8;&#x6D53;&#x5EA6;&#x7684;&#x5316;&#x5B66;&#x53D8;&#x6027;&#x5242; &#xFF08;6 M GdmCl &#x548C; 8 &#x7C73;&#x5C3F;&#x7D20;&#xFF09;&#xFF0C;&#x663E;&#x793A;&#x53D8;&#x6027;&#x5242;&#x589E;&#x52A0;&#x94FE;&#x7075;&#x6D3B;&#x6027;&#x4E0D;&#x89C2;&#x5BDF;&#x53CD;&#x5E94;&#x6709;&#x9650;&#x7387;&#x4E2D;&#x6C34;&#x7F13;&#x51B2;&#x533A;&#xFF0C;&#x4EE5;&#x524D;&#x5F52;&#x56E0;&#x4E8E;&#x94FE;&#x521A;&#x5EA6;&#x3001; &#x77ED;&#x94FE;&#x7684;&#x957F;&#x5EA6;&#x4F9D;&#x8D56;&#x7684;&#x51CF;&#x5C11;&#x3002;&#x957F;&#x7684;&#x94FE;&#xFF0C;&#x53CD;&#x5E94;&#x6709;&#x9650;&#x548C;&#x4F20;&#x64AD;&#x6709;&#x9650;&#x516C;&#x53F8;&#x7387;&#x662F;&#x5C0F;&#x4E86;&#x5F88;&#x591A;&#x5728;&#x53D8;&#x6027;&#x5242;&#x548C;&#x5C55;&#x54C1;&#x9661;&#x7684;&#x957F;&#x5EA6;&#x4F9D;&#x8D56;&#x3002;&#x53EF;&#x4EE5;&#x4F7F;&#x7528;&#x7AEF;&#x5230;&#x7AEF;&#x5206;&#x5E03;&#x4ECE;&#x6392;&#x9664;&#x7684;&#x4F53;&#x79EF;&#x4E92;&#x52A8;&#x5DF2;&#x901A;&#x8FC7;&#x5C06;&#x76F8;&#x5173;&#x8054;&#x7684; 0.4-0.5 &#x7684;&#x8815;&#x866B;&#x72B6;&#x94FE;&#x6A21;&#x578B;&#x89E3;&#x91CA;&#x7ED3;&#x679C; nm &#x76F4;&#x5F84;&#x786C;&#x7403;&#x7684;&#x6BCF;&#x4E2A;&#x865A;&#x62DF;&#x7684;&#x80BD;&#x952E;&#x7ED3;&#x675F;&#x3002;&#x7BA1;&#x63A5;&#x5934;&#x4E0E;&#x6B64;&#x6A21;&#x578B;&#x6570;&#x636E;&#x663E;&#x793A;&#x53D8;&#x6027;&#x5242;&#x51CF;&#x5C11;&#x6301;&#x4E45;&#x6027;&#x957F;&#x5EA6;&#x5927;&#x7EA6;&#x4E3A; 0.6 &#x81F3;&#x7EA6; 0.4 nm nm&#xFF0C;&#x53EA;&#x7565;&#x5927;&#x4E8E;&#x80BD;&#x952E;&#x7684;&#x957F;&#x5EA6;&#x3002;&#x76F8;&#x540C;&#x7684;&#x6A21;&#x578B;&#x8FD8;&#x4ECB;&#x7ECD;&#x7684;&#x542B; 50 400 &#x6B8B;&#x7559;&#x7684;&#x5316;&#x5B66;&#x53D8;&#x6027;&#x86CB;&#x767D;&#x7684;&#x56DE;&#x8F6C;&#x534A;&#x5F84;&#x4E3A;&#x62A5;&#x544A;&#x7684;&#x957F;&#x5EA6;&#x4F9D;&#x8D56;&#x3002;&#x4ECE;&#x4F20;&#x64AD;&#x6709;&#x9650;&#x516C;&#x53F8;&#x7387;&#x83B7;&#x5F97;&#x7684;&#x7AEF;&#x5230;&#x7AEF;&#x6269;&#x6563;&#x7CFB;&#x6570;&#x5C0F;&#x4E8E;&#x5355;&#x4F53;&#x6269;&#x6563;&#x7CFB;&#x6570;&#x7684;&#x603B;&#x548C;&#x548C;&#x8868;&#x73B0;&#x51FA;&#x663E;&#x8457;&#x7684;&#x6E29;&#x5EA6;&#xFF0C;&#x6697;&#x793A;&#x6269;&#x6563;&#x7531;&#x5185;&#x90E8;&#x6469;&#x64E6;&#x5411;&#x9AA8;&#x5E72;&#x6784;&#x8C61;&#x53D8;&#x5316;&#x6240;&#x4EA7;&#x751F;&#x7684;&#x969C;&#x788D;&#x6709;&#x6240;&#x653E;&#x7F13;&#x3002;

&#x53D8;&#x6027;&#x5242;&#x5BF9;&#x591A;&#x80BD;&#x7684;&#x5FAA;&#x73AF;&#x5F62;&#x6210;&#x52A8;&#x6001;&#x7684;&#x5F71;&#x54CD;&#x3002;

Quenching of the triplet state of tryptophan by close contact with cysteine has been used to measure the reaction-limited and diffusion-limited rates of loop formation in disordered polypeptides having the sequence cys-(ala-gly-gln)j-trp (j=1-9). The decrease in the length-dependence of the reaction-limited rate for short chains in aqueous buffer, previously attributed to chain stiffness, is not observed at high concentrations of chemical denaturant (6 M GdmCl and 8 M urea), showing that denaturants increase chain flexibility. For long chains, both reaction-limited and diffusion-limited rates are significantly smaller in denaturant and exhibit a steeper length dependence. The results can be explained using end-to-end distributions from a wormlike chain model in which excluded volume interactions are incorporated by associating a 0.4-0.5 nm diameter hard sphere with the end of each virtual peptide bond. Fitting the data with this model shows that the denaturants reduce the persistence length from approximately 0.6 nm to approximately 0.4 nm, only slightly greater than the length of a peptide bond. The same model also describes the reported length dependence for the radii of gyration of chemically denatured proteins containing 50-400 residues. The end-to-end diffusion coefficients obtained from the diffusion-limited rates are smaller than the sum of the monomer diffusion coefficients and exhibit significant temperature dependence, suggesting that diffusion is slowed by internal friction arising from barriers to backbone conformational changes.

Effects of denaturants on the dynamics of loop formation in polypeptides.

Trempe de l&#x26;#39;&#xE9;tat triplet du tryptophane par contact &#xE9;troit avec la cyst&#xE9;ine a &#xE9;t&#xE9; utilis&#xE9;e pour mesurer les taux de r&#xE9;action limit&#xE9;es et la diffusion limit&#xE9;e de formation de la boucle dans les polypeptides de troubles ayant la s&#xE9;quence Cys-(Ala-Gly-Gln) j-trp (j = 1-9). La diminution de la longueur-d&#xE9;pendance de la vitesse de r&#xE9;action limit&#xE9;e pour les cha&#xEE;nes courtes dans un tampon aqueux, pr&#xE9;c&#xE9;demment attribu&#xE9; &#xE0; la rigidit&#xE9; de la cha&#xEE;ne, n&#x26;#39;est pas observ&#xE9;e &#xE0; des concentrations &#xE9;lev&#xE9;es de produits chimiques d&#xE9;naturant (6 M GdmCl et 8 M d&#x26;#39;ur&#xE9;e), montrant que la cha&#xEE;ne augmentation d&#xE9;naturants flexibilit&#xE9;. Pour de longues cha&#xEE;nes, les deux taux de r&#xE9;action limit&#xE9;es et la diffusion limit&#xE9;e sont nettement plus faible dans d&#xE9;naturant et pr&#xE9;sentent une d&#xE9;pendance plus forte longueur. Les r&#xE9;sultats peuvent &#xEA;tre expliqu&#xE9;s &#xE0; l&#x26;#39;aide de bout-en-distributions de fin d&#x26;#39;d&#x26;#39;un mod&#xE8;le de cha&#xEE;ne vermiforme dans lequel les interactions de volume exclu sont incorpor&#xE9;s en associant une sph&#xE8;re de 0.4 &#xE0; 0.5 nm de diam&#xE8;tre dur avec la fin de chaque liaison peptidique virtuel. Montage des donn&#xE9;es avec ce mod&#xE8;le montre que les d&#xE9;naturants r&#xE9;duire la longueur de persistance d&#x26;#39;environ 0,6 nm &#xE0; environ 0,4 nm, que l&#xE9;g&#xE8;rement sup&#xE9;rieure &#xE0; la longueur d&#x26;#39;une liaison peptidique. Le m&#xEA;me mod&#xE8;le d&#xE9;crit &#xE9;galement la d&#xE9;pendance envers la longueur d&#xE9;clar&#xE9;e pour les rayons de giration de chimiquement les prot&#xE9;ines d&#xE9;natur&#xE9;es contenant des r&#xE9;sidus 50-400. Les coefficients de diffusion de bout en bout obtenus &#xE0; partir des taux de diffusion limit&#xE9;e sont plus petites que la somme des coefficients de diffusion et de monom&#xE8;re pr&#xE9;sentent une d&#xE9;pendance de temp&#xE9;rature significatif, indiquant que la diffusion est ralentie par friction interne r&#xE9;sultant de barri&#xE8;res &#xE0; des changements conformationnels de squelette.

Effets de D&#xE9;naturants sur la dynamique de formation de la boucle dans polypeptides

Abschrecken von der Triplett-Zustand von Tryptophan durch engen Kontakt mit Cystein wurde benutzt, um die Reaktion-Limited und Verbreitung-Limited Schleife-Formation in ungeordneten Polypeptide mit der Sequenz Cys (Ala-Gly-Gln) j-Trp Messen (j = 1-9). Der R&uuml;ckgang der L&auml;nge-Abh&auml;ngigkeit der Reaktion-begrenzte Rate f&uuml;r kurze Ketten in w&auml;ssrigen Puffer, zuvor zugeschrieben Kette Steifigkeit, wird nicht eingehalten, in hohen Konzentrationen chemischer Verg&auml;llungsmittel (6 M GdmCl und 8 M Harnstoff), zeigen, dass Denaturierungsmittel Kette Flexibilit&auml;t erh&ouml;hen. F&uuml;r lange Ketten sowohl Reaktion-Limited und Verbreitung-Limited-Preise sind deutlich geringer, in Verg&auml;llungsmittel und weisen eine steilere L&auml;nge-Abh&auml;ngigkeit. Die Ergebnisse k&ouml;nnen erkl&auml;rt werden, mit End-to-End-Distributionen von wurmartigen Kette Modell in dem ausgeschlossenen Volume Interaktionen vereinigt sind durch Zuordnen einer 0.4-0.5 nm Durchmesser harte Kugel mit Ende jedes virtuellen Peptidbindung. Passend die Daten mit diesem Modell zeigt, dass die Denaturierungsmittel die Persistenz-L&auml;nge von etwa 0,6 reduzieren nm bis ca. 0,4 nm, nur etwas gr&ouml;&szlig;er als die L&auml;nge der eine Peptidbindung. Das gleiche Modell beschreibt auch die gemeldeten L&auml;nge-Abh&auml;ngigkeit f&uuml;r die Radien der Gyration chemisch denaturierten Proteine, die 50-400 R&uuml;ckst&auml;nde. Die End-to-End-Diffusionskoeffizienten, die aus der Verbreitung begrenzte Preise gewonnen sind kleiner als die Summe der Monomer-Diffusionskoeffizienten und zeigen deutliche Temperaturabh&auml;ngigkeit, die darauf hindeutet, dass die Verbreitung durch innere Reibung aufgrund von Barrieren an R&uuml;ckgrat Konformationsver&auml;nderungen verlangsamt wird.

Auswirkungen auf die Dynamik der Schleife-Formation in Polypeptide Denaturierungsmittel.

Tempra dello stato di tripletto di triptofano da stretto contatto con la cisteina &egrave; stato usato per misurare i tassi di reazione limitata e limitata diffusione della formazione di loop in polipeptidi disordinati avendo la sequenza cys-(ala-gly-gln) j-trp (j = 1-9). Non si osserva la diminuzione nella lunghezza-dipendenza del tasso di reazione limitata per brevi catene in tampone acquosa, in precedenza attribuito alla rigidit&agrave; della catena, ad alte concentrazioni del prodotto chimico denaturante (6 GdmCl M e 8 M urea), mostrando che denaturanti aumentano la flessibilit&agrave; della catena. Per lunghe catene, tassi di reazione limitata e di diffusione limitata sono significativamente pi&ugrave; piccoli nel denaturante ed esibiscono una dipendenza di lunghezza pi&ugrave; ripida. I risultati possono essere spiegati mediante distribuzioni to-end da un modello di vermi catena in cui sono incorporate volume escluse interazioni associando un 0,4-0,5 nm Diametro difficile sfera con il fine di ogni legame peptidico virtuale. Montaggio i dati con questo modello dimostra che i denaturanti riducono la lunghezza di persistenza da circa 0,6 nm a circa 0,4 nm, solo leggermente maggiore della lunghezza di un legame peptidico. Lo stesso modello descrive anche la dipendenza dalla lunghezza segnalati per i raggi di girazione chimicamente denaturato proteine contenenti residui 50-400. I coefficienti di diffusione to-end ottenuti dai tassi di diffusione limitata sono inferiori alla somma dei coefficienti di diffusione di monomero e mostrano la dipendenza di temperatura significativi, suggerendo che diffusione &egrave; rallentato dall&#39;attrito interno derivanti dalle barriere a cambiamenti conformazionali di spina dorsale.

Effetti dei denaturanti sulla dinamica di formazione del ciclo in polipeptidi.

&#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30A4;&#x30F3;&#x3068;&#x306E;&#x5BC6;&#x63A5;&#x306A;&#x63A5;&#x89E6;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x30C8;&#x30EA;&#x30D7;&#x30C8;&#x30D5;&#x30A1;&#x30F3;&#x306E;&#x4E09;&#x91CD;&#x9805;&#x72B6;&#x614B;&#x306E;&#x6D88;&#x5149;&#x53CD;&#x5FDC;&#x304C;&#x9650;&#x5B9A;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x6E2C;&#x5B9A;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x4F7F;&#x7528;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3068;Cys-&#xFF08;ALA-Gly&#x306E;-GLN&#xFF09;J-TRP&#xFF08;J =&#x914D;&#x5217;&#x3092;&#x6709;&#x3059;&#x308B;&#x4E0D;&#x898F;&#x5247;&#x306A;&#x30DD;&#x30EA;&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C9;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x30EB;&#x30FC;&#x30D7;&#x5F62;&#x6210;&#x306E;&#x62E1;&#x6563;&#x5F8B;&#x901F;&#x901F;&#x5EA6;1-9&#xFF09;&#x3002;&#x6C34;&#x6027;&#x7DE9;&#x885D;&#x6DB2;&#x4E2D;&#x306E;&#x77ED;&#x9396;&#x306E;&#x53CD;&#x5FDC;&#x304C;&#x9650;&#x5B9A;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x901F;&#x5EA6;&#x306E;&#x9577;&#x3055;&#x4F9D;&#x5B58;&#x6027;&#x306E;&#x6E1B;&#x5C11;&#x306F;&#x3001;&#x4EE5;&#x524D;&#x306B;&#x305D;&#x306E;&#x5909;&#x6027;&#x306E;&#x5897;&#x52A0;&#x306E;&#x9023;&#x9396;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3001;&#x30C1;&#x30A7;&#x30FC;&#x30F3;&#x306E;&#x525B;&#x6027;&#x3001;&#x5316;&#x5B66;&#x5909;&#x6027;&#x5264;&#xFF08;6M GdmCl&#x3001;8 M&#x5C3F;&#x7D20;&#xFF09;&#x306E;&#x9AD8;&#x6FC3;&#x5EA6;&#x3067;&#x89B3;&#x5BDF;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x306B;&#x8D77;&#x56E0;&#x3059;&#x308B;&#x67D4;&#x8EDF;&#x6027;&#x3002;&#x9577;&#x3044;&#x9396;&#x306F;&#x3001;&#x4E21;&#x65B9;&#x306E;&#x53CD;&#x5FDC;&#x9650;&#x5B9A;&#x7684;&#x3068;&#x62E1;&#x6563;&#x5F8B;&#x901F;&#x7387;&#x306F;&#x5909;&#x6027;&#x5264;&#x3067;&#x6709;&#x610F;&#x306B;&#x5C0F;&#x3055;&#x304F;&#x3001;&#x6025;&#x52FE;&#x914D;&#x306E;&#x9577;&#x3055;&#x4F9D;&#x5B58;&#x6027;&#x3092;&#x793A;&#x3059;&#x3002;&#x7D50;&#x679C;&#x306F;&#x3001;&#x6392;&#x9664;&#x4F53;&#x7A4D;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x306F;&#x3001;&#x5404;&#x4EEE;&#x60F3;&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C9;&#x7D50;&#x5408;&#x306E;&#x7D42;&#x308F;&#x308A;&#x3067;0.4&#x304B;&#x3089;0.5 nm&#x306E;&#x76F4;&#x5F84;&#x525B;&#x4F53;&#x7403;&#x3092;&#x95A2;&#x9023;&#x4ED8;&#x3051;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x3001;&#x7D44;&#x307F;&#x8FBC;&#x307E;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x307F;&#x307F;&#x305A;&#x9396;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x304B;&#x3089;&#x30A8;&#x30F3;&#x30C9;&#x30C4;&#x30FC;&#x30A8;&#x30F3;&#x30C9;&#x306E;&#x30C7;&#x30A3;&#x30B9;&#x30C8;&#x30EA;&#x30D3;&#x30E5;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x3066;&#x8AAC;&#x660E;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x3067;&#x306F;&#x30C7;&#x30FC;&#x30BF;&#x3092;&#x30D5;&#x30A3;&#x30C3;&#x30C6;&#x30A3;&#x30F3;&#x30B0;&#x3059;&#x308B;&#x3068;&#x3001;&#x5909;&#x6027;&#x5264;&#x306F;&#x3001;&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C9;&#x7D50;&#x5408;&#x306E;&#x9577;&#x3055;&#x3088;&#x308A;&#x308F;&#x305A;&#x304B;&#x306B;&#x5927;&#x304D;&#x3044;&#x3060;&#x3051;&#x3067;&#x7D04;0.6 nm&#x304B;&#x3089;&#x7D04;0.4 nm&#x306E;&#x6301;&#x7D9A;&#x9577;&#x3092;&#x6E1B;&#x3089;&#x3059;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x540C;&#x3058;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x3067;&#x3082;50&#x304B;&#x3089;400&#x6B8B;&#x57FA;&#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x5316;&#x5B66;&#x7684;&#x306B;&#x5909;&#x6027;&#x3057;&#x305F;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x65CB;&#x56DE;&#x534A;&#x5F84;&#x306E;&#x5831;&#x544A;&#x9577;&#x4F9D;&#x5B58;&#x6027;&#x3092;&#x8AAC;&#x660E;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x62E1;&#x6563;&#x5F8B;&#x901F;&#x901F;&#x5EA6;&#x304B;&#x3089;&#x5F97;&#x3089;&#x308C;&#x305F;&#x30A8;&#x30F3;&#x30C9;&#xB7;&#x30C4;&#x30FC;&#xB7;&#x30A8;&#x30F3;&#x30C9;&#x306E;&#x62E1;&#x6563;&#x4FC2;&#x6570;&#x306F;&#x3001;&#x30E2;&#x30CE;&#x30DE;&#x30FC;&#x306E;&#x62E1;&#x6563;&#x4FC2;&#x6570;&#x306E;&#x548C;&#x3088;&#x308A;&#x3082;&#x5C0F;&#x3055;&#x304F;&#x3001;&#x5927;&#x304D;&#x306A;&#x6E29;&#x5EA6;&#x4F9D;&#x5B58;&#x6027;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3001;&#x305D;&#x306E;&#x62E1;&#x6563;&#x304C;&#x30D0;&#x30C3;&#x30AF;&#x30DC;&#x30FC;&#x30F3;&#x30B3;&#x30F3;&#x30D5;&#x30A9;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x5909;&#x5316;&#x3078;&#x306E;&#x969C;&#x58C1;&#x306B;&#x8D77;&#x56E0;&#x3059;&#x308B;&#x5185;&#x90E8;&#x6469;&#x64E6;&#x306B;&#x3088;&#x308A;&#x6E1B;&#x901F;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3092;&#x793A;&#x5506;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;

&#x30DD;&#x30EA;&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C9;&#x306E;&#x30EB;&#x30FC;&#x30D7;&#x5F62;&#x6210;&#x306E;&#x30C0;&#x30A4;&#x30CA;&#x30DF;&#x30AF;&#x30B9;&#x306E;&#x5909;&#x6027;&#x5264;&#x306E;&#x5F71;&#x97FF;

&#xC2DC;&#xD000;&#xC2A4; cys-(ala-gly-gln) j-trp &#xB370; &#xBB34;&#xC9C8;&#xC11C; polypeptides&#xC5D0;&#xC11C; &#xB8E8;&#xD504; &#xD615;&#xC131;&#xC758; &#xBC18;&#xC751; &#xC81C;&#xD55C; &#xBC0F; &#xD655;&#xC0B0; &#xC81C;&#xD55C; &#xC18D;&#xB3C4; &#xCE21;&#xC815; &#xD558; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xB41C; cysteine&#xC640; &#xAE34;&#xBC00; &#xD55C; &#xC811;&#xCD09;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xD2B8;&#xB9BD;&#xD1A0;&#xD310;&#xC758; triplet &#xC0C1;&#xD0DC; &#xD574;&#xC18C; (j = 1-9). &#xC774;&#xC804;&#xC5D0; &#xCCB4;&#xC778; &#xAC15;&#xC131;&#xC5D0; &#xAE30;&#xC778; &#xD558;&#xB294; &#xC218;&#xC131; &#xBC84;&#xD37C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC9E7;&#xC740; &#xCCB4;&#xC778;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xBC18;&#xC751;&#xC774; &#xC81C;&#xD55C; &#xC18D;&#xB3C4;&#xC758; &#xAE38;&#xC774; &#xC758;&#xC874;&#xB3C4; &#xAC10;&#xC18C; &#xD558;&#xC9C0; denaturants &#xCCB4;&#xC778; &#xC720;&#xC5F0;&#xC131; &#xC99D;&#xAC00; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC8FC;&#xB294; &#xD654;&#xD559; denaturant (6m GdmCl &#xBC0F; 8 M &#xC694;&#xC18C;), &#xB192;&#xC740; &#xB18D;&#xB3C4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xAD00;&#xCC30; &#xD588;&#xB2E4;. &#xAE34; &#xCCB4;&#xC778;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xBC18;&#xC751;&#xC774; &#xC81C;&#xD55C; &#xBC0F; &#xD655;&#xC0B0; &#xC81C;&#xD55C; &#xC18D;&#xB3C4; &#xD06C;&#xAC8C; denaturant&#xC5D0;&#xC11C; &#xC9C4;&#xD589; &#xB418;&#xBA70; &#xD5D8;&#xD55C; &#xAE38;&#xC774; &#xC758;&#xC874;&#xC131;&#xC744; &#xC804;&#xC2DC;. &#xC81C;&#xC678; &#xB41C; &#xBCFC;&#xB968; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9; 0.4-0.5&#xC5D0; &#xC5F0;&#xACB0; &#xD558; &#xC5EC; &#xD1B5;&#xD569; wormlike &#xCCB4;&#xC778; &#xBAA8;&#xB378;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC5D4;&#xB4DC;-&#xD22C;-&#xC5D4;&#xB4DC; &#xBC30;&#xD3EC;&#xD310;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xACB0;&#xACFC; &#xC124;&#xBA85;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xB2E4; nm &#xC9C1;&#xACBD; &#xD558;&#xB4DC; &#xAD6C;&#xAC00; &#xAC01; &#xAC00;&#xC0C1; &#xD3A9; &#xD2F0; &#xB4DC; &#xACB0;&#xD569;&#xC758; &#xB05D;. &#xC774; &#xBAA8;&#xB378;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xB370;&#xC774;&#xD130;&#xB97C; &#xD53C;&#xD305; &#xD45C;&#xC2DC;&#xB294; denaturants &#xC57D; 0.6&#xC5D0;&#xC11C; &#xC9C0; &#xC18D;&#xC131; &#xAE38;&#xC774; &#xC904;&#xC77C; &#xC218; &#xC57D; 0.4 nm nm, &#xD3A9; &#xD2F0; &#xB4DC; &#xACB0;&#xD569;&#xC758; &#xAE38;&#xC774; &#xBCF4;&#xB2E4; &#xC57D;&#xAC04; &#xD070;&#xB9CC;. &#xB3D9;&#xC77C;&#xD55C; &#xBAA8;&#xB378; 50-400 &#xC794;&#xB958;&#xBB3C;&#xC744; &#xD3EC;&#xD568; &#xD558;&#xB294; &#xD654;&#xD559;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xBCC0;&#xC131;&#xB41C; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xC120;&#xD68C; &#xBC18;&#xC9C0;&#xB984;&#xC758; &#xBCF4;&#xACE0; &#xB41C; &#xAE38;&#xC774; &#xC758;&#xC874;&#xB3C4;&#xB97C; &#xB300;&#xD574;&#xC11C;&#xB3C4; &#xC124;&#xBA85; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xBCF4;&#xAE09; &#xC81C;&#xD55C; &#xC18D;&#xB3C4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC5BB;&#xC740; &#xB05D; &#xD655;&#xC0B0; &#xACC4;&#xC218; &#xB2E8;&#xC704;&#xCCB4; &#xD655;&#xC0B0; &#xACC4;&#xC218; &#xD569;&#xACC4; &#xBCF4;&#xB2E4; &#xC791;&#xC740; &#xBC0F; &#xD655;&#xC0B0; &#xC7A5;&#xBCBD;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBC1C;&#xC0DD; &#xD558;&#xB294; &#xBC31;&#xBCF8; &#xAD6C;&#xC870;&#xC801; &#xBCC0;&#xD654;&#xB97C; &#xB0B4;&#xBD80; &#xB9C8;&#xCC30;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xB454;&#xD654; &#xC81C;&#xC548; &#xC0C1;&#xB2F9;&#xD55C; &#xC628;&#xB3C4; &#xC758;&#xC874;&#xC131;&#xC744; &#xC804;&#xC2DC;.

Polypeptides&#xC5D0;&#xC11C; &#xB8E8;&#xD504; &#xD615;&#xC131;&#xC758; &#xC5ED;&#xD559;&#xC5D0; denaturants&#xC758; &#xD6A8;&#xACFC;.

Enfriamiento del estado triplete de tript&#xF3;fano por el contacto cercano con ciste&#xED;na ha sido utilizado para medir las tasas de reacci&#xF3;n limitada y limitada por difusi&#xF3;n de la formaci&#xF3;n de bucle en polip&#xE9;ptidos desordenadas que tienen la secuencia Cys-(Ala-Gly-Gln) j-trp (j = 1-9). La disminuci&#xF3;n en la longitud de la dependencia de la velocidad de reacci&#xF3;n limitada por cadenas cortas en tamp&#xF3;n acuoso, previamente atribuido a la rigidez de la cadena, no se observa a altas concentraciones de producto qu&#xED;mico desnaturalizante (6 M GdmCl y 8 M de urea), mostrando que la cadena de aumento desnaturalizantes flexibilidad. Para largas cadenas, tanto las tasas de reacci&#xF3;n limitada y limitada difusi&#xF3;n-son significativamente m&#xE1;s peque&#xF1;os en el desnaturalizante y presentan una dependencia de la longitud m&#xE1;s pronunciada. Los resultados se puede explicar utilizando extremo a extremo distribuciones de un modelo de cadena de gusano en el que las interacciones excluidos de volumen se incorporan por la asociaci&#xF3;n de una esfera nm 0.4-0.5 di&#xE1;metro duro con el extremo de cada enlace pept&#xED;dico virtual. Montar los datos con este modelo demuestra que los desnaturalizantes reducir la longitud de la persistencia de aproximadamente 0,6 nm a aproximadamente 0,4 nm, s&#xF3;lo ligeramente mayor que la longitud de un enlace pept&#xED;dico. El mismo modelo tambi&#xE9;n describe la dependencia de la longitud reportada por los radios de giro de qu&#xED;micamente las prote&#xED;nas desnaturalizadas que contienen 50-400 residuos. Los coeficientes de difusi&#xF3;n de extremo a extremo obtenidos a partir de las tasas de difusi&#xF3;n limitada son m&#xE1;s peque&#xF1;as que la suma de los coeficientes de difusi&#xF3;n de mon&#xF3;mero y exhiben dependencia de la temperatura significativa, lo que sugiere que la difusi&#xF3;n es frenado por la fricci&#xF3;n interna derivada de las barreras a los cambios conformacionales columna vertebral.

Efectos de la Desnaturalizantes sobre la din&#xE1;mica de formaci&#xF3;n de la lazada en polip&#xE9;ptidos

&#x6211;&#x4EEC;&#x63CF;&#x8FF0;&#x4E00;&#x79CD;&#x65B0;&#x7684;&#x65F6;&#x95F4;&#x53D7;&#x5149;&#x9611;&#x9650;&#x5236;&#x7684;&#x5149;&#x5B50;&#x76F8;&#x5173;&#x65B9;&#x6CD5;&#x89E3;&#x51B3;&#x4E24;&#x4E2A;&#x4E4B;&#x95F4;&#x7684;&#x8FC7;&#x6E21;&#x65F6;&#x95F4;&#x56FD;&#x5BB6;&#x7684; RNA &#x5728;&#x6298;&#x53E0; &mdash; &mdash; &#x5373;&#x56FD;&#x5BB6;&#x4E4B;&#x95F4;&#x7684;&#x8FC7;&#x6E21;&#x65F6;&#x95F4;&#x800C;&#x4E0D;&#x662F;&#x5728;&#x6BCF;&#x4E2A;&#x72B6;&#x6001;&#x4E2D;&#x6240;&#x7528;&#x7684;&#x65F6;&#x95F4;&#x3002;&#x5355;&#x5206;&#x5B50;&#x8367;&#x5149;&#x5171;&#x632F;&#x80FD;&#x91CF;&#x8F6C;&#x79FB;&#x548C;&#x8367;&#x5149;&#x76F8;&#x5173;&#x5149;&#x8C31;&#x7528;&#x4E8E;&#x83B7;&#x53D6;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x6D4B;&#x91CF;&#x7ED3;&#x679C;&#x3002;&#x5355;&#x4E2A; RNA &#x5206;&#x5B50;&#x6807;&#x6709;&#x8367;&#x5149; Cy3 &#x548C; Cy5 &#x7B49;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x5206;&#x5B50;&#x7136;&#x540E;&#x662F;&#x56FA;&#x5B9A;&#x5316;&#x7684;&#x8868;&#x9762;&#x4E0A;&#xFF0C;&#x5E76;&#x89C2;&#x5BDF;&#x5230;&#x8BB8;&#x591A;&#x79D2;&#x5728;&#x8FD9;&#x6BB5;&#x65F6;&#x95F4;&#xFF0C;&#x5206;&#x5B50;&#x81EA;&#x53D1;&#x72B6;&#x6001;&#x4E4B;&#x95F4;&#x5207;&#x6362;&#x4E24;&#x4E2A;&#x6784;&#x8C61;&#x4E0D;&#x540C;&#x6C34;&#x5E73;&#x7684;&#x8367;&#x5149;&#x5171;&#x632F;&#x80FD;&#x91CF;&#x8F6C;&#x79FB;&#x6548;&#x7387;&#x3002;&#x5355;&#x5149;&#x5B50;&#x4ECE;&#x6BCF;&#x4E2A;&#x8367;&#x5149;&#x8BA1;&#x6570;&#x548C;&#x4EA4;&#x53C9;&#x76F8;&#x5173;&#x5728;&#x5468;&#x56F4;&#x8F6C;&#x7684;&#x5C0F;&#x7A97;&#x53E3;&#x4E2D;&#x3002;1000 &#x4E2A;&#x4EE5;&#x4E0A;&#x4EA4;&#x53C9;&#x5173;&#x8054;&#x7684;&#x5E73;&#x5747;&#x503C;&#x53EF;&#x4EE5;&#x9002;&#x5E94;&#x7684;&#x591A;&#x9879;&#x5F0F;&#xFF0C;&#x53EF;&#x4EE5;&#x786E;&#x5B9A;&#x8FC7;&#x6E21;&#x65F6;&#x95F4;&#x77ED;&#xFF0C;&#x5E73;&#x5747;&#x5149;&#x5B50;&#x53D1;&#x5C04;&#x95F4;&#x9694;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x5E94;&#x7528;&#x8BE5;&#x65B9;&#x6CD5;&#x4E8E; P4 P6 &#x57DF;&#x56DB;&#x819C;&#x866B;&#x7EC4;&#x7684;&#x6211; self-splicing &#x5185;&#x542B;&#x5B50;&#x4EE5;&#x4EA7;&#x91CF; 240 &#x5FAE;&#x7C73;&#x7684;&#x6298;&#x53E0;&#x7684;&#x8FC7;&#x6E21;&#x65F6;&#x95F4;&#x3002;&#x53D1;&#x73B0;&#x6B63;&#x5728;&#x53D1;&#x751F;&#x7684;&#x65F6;&#x95F4;&#x662F;&#x592A;&#x77ED;&#xFF0C;&#x65E0;&#x6CD5;&#x7528;&#x6B64;&#x65B9;&#x6CD5;&#x6D4B;&#x91CF;&#x3002;

&#x6D4B;&#x91CF;&#x5355;&#x4E2A; RNA &#x5206;&#x5B50;&#x7684;&#x6298;&#x53E0;&#x7684;&#x8FC7;&#x6E21;&#x65F6;&#x95F4;&#x3002;

We describe a new, time-apertured photon correlation method for resolving the transition time between two states of RNA in folding--i.e., the time of the transition between states rather than the time spent in each state. Single molecule fluorescence resonance energy transfer and fluorescence correlation spectroscopy are used to obtain these measurements. Individual RNA molecules are labeled with fluorophores such as Cy3 and Cy5. Those molecules are then immobilized on a surface and observed for many seconds during which time the molecules spontaneously switch between two conformational states with different levels of flourescence resonance energy transfer efficiency. Single photons are counted from each fluorophore and cross correlated in a small window around a transition. The average of over 1000 cross correlations can be fit to a polynomial, which can determine transition times as short as the average photon emission interval. We applied the method to the P4-P6 domain of the Tetrahymena group I self-splicing intron to yield the folding transition time of 240 micros. The unfolding time is found to be too short to measure with this method.

Measuring the folding transition time of single RNA molecules.

Nous d&#xE9;crivons une nouvelle m&#xE9;thode de temps-perfor&#xE9; de corr&#xE9;lation de photons pour r&#xE9;soudre le temps de transition entre deux &#xE9;tats de l&#x26;#39;ARN dans le repliement - c&#x26;#39;est &#xE0; dire le moment de la transition entre les &#xE9;tats plut&#xF4;t que le temps pass&#xE9; dans chaque &#xE9;tat. Simple fluorescence mol&#xE9;cule d&#x26;#39;&#xE9;nergie par r&#xE9;sonance de transfert et de la spectroscopie de corr&#xE9;lation de fluorescence sont utilis&#xE9;es pour obtenir ces mesures. Individuels des mol&#xE9;cules d&#x26;#39;ARN sont marqu&#xE9;es par des fluorophores tels que Cy3 et Cy5. Ces mol&#xE9;cules sont ensuite immobilis&#xE9;s sur une surface et ensuite observ&#xE9;s pendant plusieurs secondes pendant lesquelles les mol&#xE9;cules spontan&#xE9;ment basculer entre deux &#xE9;tats conformationnels avec diff&#xE9;rents niveaux d&#x26;#39;efficacit&#xE9; de r&#xE9;sonance de transfert d&#x26;#39;&#xE9;nergie de fluorescence. Photons uniques sont compt&#xE9;s &#xE0; partir de chaque fluorophore et en corr&#xE9;lation crois&#xE9;e dans une petite fen&#xEA;tre autour d&#x26;#39;un passage. La moyenne de plus de 1000 corr&#xE9;lations crois&#xE9;es peuvent &#xEA;tre adapt&#xE9;s &#xE0; un polyn&#xF4;me, qui peut d&#xE9;terminer les p&#xE9;riodes de transition aussi courte que l&#x26;#39;intervalle d&#x26;#39;&#xE9;mission moyen de photons. Nous avons appliqu&#xE9; la m&#xE9;thode dans le domaine P4-P6 de l&#x26;#39;Tetrahymena groupe I auto-&#xE9;pissage intron pour donner le temps de transition de pliage de 240 micros. Le temps de d&#xE9;roulement est jug&#xE9;e trop courte pour mesurer avec cette m&#xE9;thode.

Mesure de la p&#xE9;riode de transition de pliage d&#x26;#39;mol&#xE9;cules d&#x26;#39;ARN simple

Wir beschreiben einen neuen, Zeit-apertured-Photon-Korrelationsverfahren f&uuml;r L&ouml;sung der &Uuml;bergangszeit zwischen zwei RNA in Falten--d.h. die Zeit des &Uuml;bergangs zwischen Staaten Staaten, anstatt die Verweildauer in den einzelnen. Einzelmolek&uuml;l Fluoreszenz Resonanz Energie Transfer und Fluoreszenz Korrelation Spektroskopie werden verwendet, um diese Messungen zu erhalten. Einzelnen RNA-Molek&uuml;le sind mit Fluorophore wie Cy3 und Cy5 beschriftet. Diese Molek&uuml;le sind dann auf einer Oberfl&auml;che immobilisiert und f&uuml;r viele Sekunden zu beobachten, w&auml;hrend welcher Zeit die Molek&uuml;le spontan zwischen zwei Konformations&auml;nderungen Staaten mit unterschiedlichen Fluoreszenz Resonanz Energie Transfer-Effizienz wechseln. Einzelne Photonen werden von jedem Fluorophor gez&auml;hlt und in einem kleinen Fenster um einen &Uuml;bergang korrelierte &uuml;berqueren. Der Durchschnitt von &uuml;ber 1000 Kreuz Korrelationen passen in ein Polynom, die &Uuml;bergangszeiten so kurz wie das durchschnittliche Photon-Emission-Intervall bestimmen k&ouml;nnen. Wir die Methode der P4-P6-Dom&auml;ne der Gruppe Tetrahymena ich angewandt self-splicing Intron, die Falten &Uuml;bergangszeit von 240 Mikrofone zu erbringen. Die Entfaltung Zeit ist gefunden, zu kurz, um mit dieser Methode zu messen sein.

Messzeit die klappbare &Uuml;bergang von einzelnen RNA-Molek&uuml;le.

Descriviamo un metodo di correlazione tempo-catodica, nuovo fotone per risolvere il tempo di transizione tra due stati di RNA in pieghevoli - cio&egrave;, il tempo di transizione tra dichiara piuttosto che il tempo trascorso in ogni stato. Singola molecola risonanza energia trasferimento e fluorescenza correlazione spettroscopia di fluorescenza vengono utilizzati per ottenere queste misurazioni. Singole molecole di RNA sono etichettati con fluorofori quali Cy3 e Cy5. Tali molecole sono poi immobilizzati su una superficie e osservati per molti secondi durante i quali le molecole di passare spontaneamente tra due stati conformazionali con diversi livelli di efficienza di trasferimento di fluorescenza risonanza energetica. Singoli fotoni sono contati da ogni fluoroforo e croce correlati in una piccola finestra intorno a una transizione. Alla media di oltre 1000 correlazioni incrociate pu&ograve; essere in forma per un polinomio, che pu&ograve; determinare periodi di transizione pi&ugrave; breve l&#39;intervallo di emissione di fotone Media. Abbiamo applicato il metodo al dominio del gruppo di Tetrahymena P4-P6 ho self-splicing introne di cedere il tempo di transizione pieghevole di 240 micros. Il tempo di svolgimento &egrave; trovato per essere troppo breve per misurare con questo metodo.

Misurare il tempo di transizione pieghevole di singole molecole di RNA.

&#x3059;&#x306A;&#x308F;&#x3061;&#x3001;&#x72B6;&#x614B;&#x9593;&#x306E;&#x9077;&#x79FB;&#x3067;&#x306F;&#x306A;&#x304F;&#x3001;&#x5404;&#x72B6;&#x614B;&#x3067;&#x8CBB;&#x3084;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x6642;&#x9593;&#x306E;&#x6642;&#x9593; - &#x79C1;&#x305F;&#x3061;&#x306F;&#x6298;&#x308A;&#x305F;&#x305F;&#x307F;&#x3067;RNA&#x306E;2&#x3064;&#x306E;&#x72B6;&#x614B;&#x9593;&#x306E;&#x9077;&#x79FB;&#x6642;&#x9593;&#x3092;&#x89E3;&#x6C7A;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x65B0;&#x3057;&#x3044;&#x3001;&#x30BF;&#x30A4;&#x30E0;&#x958B;&#x53E3;&#x5149;&#x5B50;&#x76F8;&#x95A2;&#x6CD5;&#x3092;&#x8AAC;&#x660E;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x5358;&#x4E00;&#x5206;&#x5B50;&#x86CD;&#x5149;&#x5171;&#x9CF4;&#x30A8;&#x30CD;&#x30EB;&#x30AE;&#x30FC;&#x79FB;&#x52D5;&#x3068;&#x86CD;&#x5149;&#x76F8;&#x95A2;&#x5206;&#x5149;&#x6CD5;&#x306F;&#x3001;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x6E2C;&#x5B9A;&#x5024;&#x3092;&#x5F97;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x4F7F;&#x7528;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x500B;&#x3005;&#x306E;RNA&#x5206;&#x5B50;&#x306F;&#x3001;&#x305D;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306A;Cy3&#x304A;&#x3088;&#x3073;Cy5&#x306A;&#x3069;&#x306E;&#x86CD;&#x5149;&#x8272;&#x7D20;&#x3067;&#x6A19;&#x8B58;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x5206;&#x5B50;&#x306F;&#x3001;&#x305D;&#x306E;&#x5F8C;&#x8868;&#x9762;&#x4E0A;&#x306B;&#x56FA;&#x5B9A;&#x5316;&#x3068;&#x5206;&#x5B50;&#x304C;&#x81EA;&#x767A;&#x7684;&#x306B;flourescence&#x5171;&#x9CF4;&#x30A8;&#x30CD;&#x30EB;&#x30AE;&#x30FC;&#x79FB;&#x52D5;&#x52B9;&#x7387;&#x306E;&#x7570;&#x306A;&#x308B;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x3092;&#x6301;&#x3064;2&#x3064;&#x306E;&#x30B3;&#x30F3;&#x30D5;&#x30A9;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x306E;&#x72B6;&#x614B;&#x3092;&#x5207;&#x308A;&#x66FF;&#x3048;&#x308B;&#x305D;&#x306E;&#x9593;&#x306B;&#x4F55;&#x79D2;&#x3067;&#x89B3;&#x5BDF;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x5358;&#x4E00;&#x5149;&#x5B50;&#x306F;&#x3001;&#x9077;&#x79FB;&#x306E;&#x5468;&#x308A;&#x306B;&#x5C0F;&#x3055;&#x306A;&#x30A6;&#x30A3;&#x30F3;&#x30C9;&#x30A6;&#x3067;&#x3001;&#x76F8;&#x95A2;&#x95A2;&#x4FC2;&#x3001;&#x5404;&#x86CD;&#x5149;&#x4F53;&#x3068;&#x30AF;&#x30ED;&#x30B9;&#x304B;&#x3089;&#x30AB;&#x30A6;&#x30F3;&#x30C8;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002; 1000&#x4EBA;&#x4EE5;&#x4E0A;&#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x76F8;&#x95A2;&#x306E;&#x5E73;&#x5747;&#x306F;&#x3001;&#x5E73;&#x5747;&#x5149;&#x5B50;&#x653E;&#x51FA;&#x9593;&#x9694;&#x306F;&#x3067;&#x304D;&#x308B;&#x3060;&#x3051;&#x77ED;&#x304F;&#x3001;&#x9077;&#x79FB;&#x6642;&#x9593;&#x3092;&#x6C7A;&#x5B9A;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x308B;&#x591A;&#x9805;&#x5F0F;&#x306B;&#x30D5;&#x30A3;&#x30C3;&#x30C8;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;240&#x30DE;&#x30A4;&#x30AF;&#x30ED;&#x306E;&#x30D5;&#x30A9;&#x200B;&#x200B;&#x30FC;&#x30EB;&#x30C7;&#x30A3;&#x30F3;&#x30B0;&#x9077;&#x79FB;&#x6642;&#x9593;&#x3092;&#x5F97;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x3001;&#x30C6;&#x30C8;&#x30E9;&#x30D2;&#x30E1;&#x30CA;&#x306E;&#x200B;&#x200B;&#x30B0;&#x30EB;&#x30FC;&#x30D7;I&#x81EA;&#x5DF1;&#x30B9;&#x30D7;&#x30E9;&#x30A4;&#x30B7;&#x30F3;&#x30B0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C8;&#x30ED;&#x30F3;&#x306E;P4-P6&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x306B;&#x30E1;&#x30BD;&#x30C3;&#x30C9;&#x3092;&#x9069;&#x7528;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x5C55;&#x958B;&#x6642;&#x9593;&#x306F;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x30E1;&#x30BD;&#x30C3;&#x30C9;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x6E2C;&#x5B9A;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x77ED;&#x3059;&#x304E;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x5224;&#x660E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;

&#x5358;&#x4E00;&#x306E;RNA&#x5206;&#x5B50;&#x306E;&#x30D5;&#x30A9;&#x30FC;&#x30EB;&#x30C7;&#x30A3;&#x30F3;&#x30B0;&#x9077;&#x79FB;&#x6642;&#x9593;&#x3092;&#x6E2C;&#x5B9A;&#x3059;&#x308B;

&#xB450; &#xAC04; &#xC804;&#xD658; &#xC2DC;&#xAC04;&#xC744; &#xD574;&#xACB0; &#xC0C1;&#xD0DC;&#xC5D0; &#xB300;&#xD574; RNA&#xC758; &#xC811;&#xB294;-&#xC5D0; &#xC989;, &#xC0AC;&#xC774;&#xC758; &#xC804;&#xD658;&#xC758; &#xC2DC;&#xAE30;&#xC5D0; &#xB530;&#xB974;&#xBA74; &#xAC01; &#xC8FC;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBCF4;&#xB0B8; &#xC2DC;&#xAC04; &#xBCF4;&#xB2E4;&#xB294; &#xC624;&#xD788;&#xB824; &#xC0C8;&#xB85C;&#xC6B4;, &#xC2DC;&#xAC04; apertured &#xAD11;&#xC790; &#xC0C1;&#xAD00; &#xAD00;&#xACC4; &#xBA54;&#xC11C;&#xB4DC;&#xB97C; &#xC124;&#xBA85; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB2E8;&#xC77C; &#xBD84;&#xC790; &#xD615;&#xAD11; &#xACF5;&#xBA85; &#xC5D0;&#xB108;&#xC9C0; &#xC804;&#xB2EC; &#xBC0F; &#xD615;&#xAD11; &#xC0C1;&#xAD00; &#xBD84;&#xAD11;&#xD559;&#xC774; &#xCE21;&#xC815;&#xC744; &#xC5BB;&#xAE30; &#xC704;&#xD574; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xAC1C;&#xBCC4; RNA &#xBD84;&#xC790; Cy3 Cy5 &#xB4F1; fluorophores &#xD45C;&#xC2DC; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xADF8; &#xBD84;&#xC790; &#xB2E4;&#xC74C; &#xD45C;&#xBA74;&#xC5D0; &#xC6C0;&#xC9C1;&#xC77C; &#xD558; &#xACE0; &#xC5B4;&#xB290; &#xC2DC;&#xAC04; &#xB3D9;&#xC548; &#xBD84;&#xC790; &#xC800;&#xC808;&#xB85C; flourescence &#xACF5;&#xBA85; &#xC5D0;&#xB108;&#xC9C0; &#xC804;&#xC1A1; &#xD6A8;&#xC728;&#xC758; &#xC11C;&#xB85C; &#xB2E4;&#xB978; &#xC218;&#xC900;&#xC73C;&#xB85C; &#xB450; &#xAD6C;&#xC870;&#xC801; &#xC0C1;&#xD0DC; &#xAC04;&#xC5D0; &#xC804;&#xD658; &#xB9CE;&#xC740; &#xCD08; &#xB3D9;&#xC548; &#xAD00;&#xCC30; &#xD588;&#xB2E4;. &#xB2E8;&#xC77C; &#xAD11;&#xC790; &#xAC01; fluorophore&#xC5D0;&#xC11C; &#xACC4;&#xC0B0; &#xBC0F; &#xC0C1;&#xD638; &#xAD00;&#xB828; &#xB41C; &#xC8FC;&#xC704;&#xB97C; &#xC804;&#xD658; &#xC791;&#xC740; &#xCC3D;&#xC5D0; &#xD06C;&#xB85C;&#xC2A4;. 1000 &#xAD50;&#xCC28; &#xC0C1;&#xAD00; &#xAD00;&#xACC4;&#xC758; &#xD3C9;&#xADE0; &#xD3C9;&#xADE0; &#xAD11;&#xC790; &#xBC29;&#xCD9C; &#xAC04;&#xACA9;&#xC73C;&#xB85C; &#xC9E7;&#xAC8C; &#xC804;&#xD658; &#xC2DC;&#xAC04;&#xC744; &#xD655;&#xC778;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xB294; &#xB2E4;&#xD56D;&#xC2DD;&#xC744; &#xB9DE;&#xC744; &#xC218; &#xC788;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC; &#xBA54;&#xC11C;&#xB4DC;&#xB97C; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778;&#xC5D0; &#xC801;&#xC6A9; P4 P6 Tetrahymena &#xADF8;&#xB8F9;&#xC758; &#xC218;&#xC775;&#xB960; 240 &#xB9C8;&#xC774;&#xD06C;&#xB85C; &#xC811;&#xB294; &#xC804;&#xD658; &#xC2DC;&#xAC04; intron self-splicing &#xB098;. &#xC804;&#xAC1C; &#xC2DC;&#xAC04;&#xC774;&#xC774; &#xBC29;&#xBC95;&#xC73C;&#xB85C; &#xCE21;&#xC815; &#xD558;&#xB294; &#xB108;&#xBB34; &#xC9E7;&#xC740; &#xBC1C;&#xACAC;.

&#xB2E8;&#xC77C; RNA &#xBD84;&#xC790;&#xC758; &#xC811;&#xB294; &#xC804;&#xD658; &#xC2DC;&#xAC04;&#xC744; &#xCE21;&#xC815; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Se describe un nuevo m&#xE9;todo de tiempo de aberturas de correlaci&#xF3;n de fotones para resolver el tiempo de transici&#xF3;n entre dos estados de ARN en el plegamiento, es decir, el tiempo de la transici&#xF3;n entre estados en lugar del tiempo transcurrido en cada estado. Fluorescencia sola mol&#xE9;cula de resonancia transferencia de energ&#xED;a y espectroscopia de correlaci&#xF3;n de fluorescencia se utilizan para obtener estas mediciones. Individuales de las mol&#xE9;culas de ARN est&#xE1;n marcadas con fluorocromos como Cy3 y Cy5. Estas mol&#xE9;culas son luego inmovilizado sobre una superficie y se observaron durante muchos segundos durante los cuales las mol&#xE9;culas espont&#xE1;neamente cambiar entre dos estados conformacionales con diferentes niveles de eficacia de transferencia de energ&#xED;a de resonancia de fluorescencia. Fotones individuales se cuentan a partir de cada fluor&#xF3;foro y correlacionados entre s&#xED; en una peque&#xF1;a ventana en torno a una transici&#xF3;n. El promedio de m&#xE1;s de 1000 correlaciones cruzadas pueden ajustarse a un polinomio, que puede determinar los tiempos de transici&#xF3;n lo m&#xE1;s corto el intervalo promedio de emisi&#xF3;n de fotones. Se aplic&#xF3; el m&#xE9;todo para el dominio P4-P6 del grupo I Tetrahymena auto-empalme intr&#xF3;n para dar el tiempo de transici&#xF3;n de plegado de 240 micras. El tiempo de desarrollo se encuentra que es demasiado corto para medir con este m&#xE9;todo.

Medir el tiempo de transici&#xF3;n de plegado de un solo mol&#xE9;culas de ARN

&#x6211;&#x4EEC;&#x5728;&#x8BC1;&#x660E; sub-millisecond &#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x6298;&#x53E0;&#x8FC7;&#x7A0B;&#x79F0;&#x4E3A;&quot;&#x5D29;&#x6E83;&quot;&#x5176;&#x5B9E;&#x5305;&#x542B;&#x81F3;&#x5C11;&#x4E24;&#x4E2A;&#x72EC;&#x7ACB;&#x7684;&#x8FDB;&#x7A0B;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x89C2;&#x5BDF;&#x5230;&#x4ECE;&#x7D2B;&#x5916;&#x8367;&#x5149;&#x5149;&#x8C31;&#x81EA;&#x7136;&#x53D1;&#x751F;&#x5728;&#x4E09;&#x79CD;&#x8D28;&#x91CF;&#x629B;&#x5C04;&#x7269;&#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#x3001; &#x7EC6;&#x80DE;&#x8272;&#x7D20; c&#x3001; apomyoglobin&#x3001; &#x6EB6;&#x83CC;&#x9176; tryptophans&#xFF0C;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x5FAE;&#x6D41;&#x4F53;&#x6DF7;&#x5408;&#x5668;&#x4E2D;&#x5927;&#x7EA6; 20 mus.&#x5355;&#x503C;&#x5206;&#x89E3;&#xFF0C;&#x4F9D;&#x8D56;&#x4E8E;&#x65F6;&#x95F4;&#x8C31;&#x7684;&#x6B7B;&#x533A;&#x65F6;&#x95F4;&#x4E0E;&#x65F6;&#x95F4;&#x7684;&#x51FD;&#x6570;&#x663E;&#x793A;&#x4E24;&#x4E2A;&#x5355;&#x72EC;&#x7684;&#x8FDB;&#x7A0B;&#xFF1A; 1&#xFF09;&#x3001; &#x5149;&#x8C31;&#x7684;&#x8F6C;&#x53D8;&#x53D1;&#x751F;&#x5728;&#x6405;&#x62CC;&#x7684;&#x65F6;&#x95F4; &#xFF1B; &#x5185;&#x548C; 2&#xFF09;&#xFF0C;&#x7EA6; 100 &#x548C; 300 &#x5FAE;&#x7C73;&#x4E4B;&#x95F4;&#x53D1;&#x751F;&#x8367;&#x5149;&#x8870;&#x51CF;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x7B2C;&#x4E00;&#x4E2A;&#x8FC7;&#x7A0B;&#x5F52;&#x758F;&#x6C34;&#x5D29;&#x6E83;&#x548C;&#x5F62;&#x6210;&#x7684;&#x7B2C;&#x4E00;&#x4E2A;&#x672C;&#x673A;&#x4E13;&#x4E0A;&#x63A5;&#x89E6;&#x5230;&#x7684;&#x7B2C;&#x4E8C;&#x4E2A;&#x8FDB;&#x7A0B;&#x3002;

&#x758F;&#x6C34;&#x6027;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x6298;&#x53E0;&#x548C;&#x65E9;&#x671F;&#x6298;&#x53E0;&#x6B65;&#x9AA4;&#x5728;&#x5FAE;&#x6D41;&#x4F53;&#x6DF7;&#x5408;&#x5668;&#x4E2D;&#x89C2;&#x5BDF;&#x5230;&#x3002;

We demonstrate that the sub-millisecond protein folding process referred to as "collapse" actually consists of at least two separate processes. We observe the UV fluorescence spectrum from naturally occurring tryptophans in three well-studied proteins, cytochrome c, apomyoglobin, and lysozyme, as a function of time in a microfluidic mixer with a dead time of approximately 20 mus. Single value decomposition of the time-dependent spectra reveal two separate processes: 1), a spectral shift which occurs within the mixing time; and 2), a fluorescence decay occurring between approximately 100 and 300 micros. We attribute the first process to hydrophobic collapse and the second process to the formation of the first native tertiary contacts.

Protein hydrophobic collapse and early folding steps observed in a microfluidic mixer.

Nous d&#xE9;montrons que le processus de sous-milliseconde de repliement des prot&#xE9;ines d&#xE9;nomm&#xE9;es &#xAB;effondrement&#xBB; est en fait constitu&#xE9; d&#x26;#39;au moins deux processus distincts. On observe le spectre UV de fluorescence &#xE0; partir d&#x26;#39;origine naturelle tryptophanes en trois prot&#xE9;ines bien &#xE9;tudi&#xE9;s, le cytochrome c, apomyoglobine, et le lysozyme, en tant que fonction du temps dans un m&#xE9;langeur microfluidique avec un temps mort d&#x26;#39;environ 20 mus. D&#xE9;composition en valeurs simples de spectres d&#xE9;pendant du temps r&#xE9;v&#xE8;lent deux processus distincts: 1), un d&#xE9;calage spectral qui se produit dans le temps de m&#xE9;lange, et 2), une d&#xE9;croissance de la fluorescence se produisant entre environ 100 et 300 micros. Nous attribuons le premier processus de l&#x26;#39;effondrement hydrophobe et le second proc&#xE9;d&#xE9; &#xE0; la formation des premiers indig&#xE8;nes contacts tertiaires.

R&#xE9;duire hydrophobe des prot&#xE9;ines et Early Steps pliantes observ&#xE9;s dans un m&#xE9;langeur microfluidique

Wir zeigen, dass die Buszykluszeiten Proteinfaltung Prozess als &quot;Kollaps&quot; tats&auml;chlich aus mindestens zwei separate Prozesse besteht bezeichnet. Wir beobachten das UV-Fluoreszenz-Spektrum aus nat&uuml;rlich vorkommenden Tryptophans in drei gut erforscht Proteine, Cytochrom c, Apomyoglobin und Lysozym, als Funktion der Zeit in einem Microfluidic-Mischer mit einer Totzeit von etwa 20 Musik Einzelwert Zersetzung der zeitabh&auml;ngigen Spektren enth&uuml;llen zwei getrennte Prozesse: 1), ein Spektralwechsel eintretenden innerhalb der mischende Zeit; und 2), a Fluoreszenz-Zerfall, die zwischen ca. 100 und 300 Mikrofone auftreten. Wir f&uuml;hren im ersten Prozess auf hydrophoben Kollaps und der zweite Prozess zur Bildung der ersten nativen terti&auml;ren Kontakte.

Protein hydrophobe reduzieren und fr&uuml;h Falten Schritte in einem Mischer mikrofluidische beobachtet.

Ci dimostrano che la proteina sub-millisecond pieghevole processo indicato come &quot;collasso&quot; in realt&agrave; consiste di almeno due processi separati. Osserviamo lo spettro di fluorescenza UV da naturalmente tryptophans in tre proteine ben studiate, citocromo c, apomyoglobin e lisozima, in funzione del tempo in un mixer microfluidica con un tempo morto di circa 20 decomposizione singolo mus. degli spettri dipendente dal tempo rivelare due processi distinti: 1), uno spostamento spettrale che si verifica entro il tempo di miscelazione; e 2), un decadimento della fluorescenza che si verificano tra circa 100 e 300 micros. Noi attribuiamo il primo processo di collasso idrofobico e il secondo processo per la formazione dei primi contatti terziari nativi.

Proteine idrofobiche crollo e pieghevole primi passi osservata in un mixer microfluidica.

&#x79C1;&#x305F;&#x3061;&#x306F; &#x26;quot;&#x5D29;&#x58CA;&#x26;quot;&#x3068;&#x547C;&#x3070;&#x308C;&#x308B;&#x30B5;&#x30D6;&#x30DF;&#x30EA;&#x79D2;&#x306E;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x30D5;&#x30A9;&#x30FC;&#x30EB;&#x30C7;&#x30A3;&#x30F3;&#x30B0;&#x30D7;&#x30ED;&#x30BB;&#x30B9;&#x306F;&#x5B9F;&#x969B;&#x306B;&#x306F;&#x3001;&#x5C11;&#x306A;&#x304F;&#x3068;&#x3082;2&#x3064;&#x306E;&#x72EC;&#x7ACB;&#x3057;&#x305F;&#x30D7;&#x30ED;&#x30BB;&#x30B9;&#x3067;&#x69CB;&#x6210;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x81EA;&#x7136;&#x306B;&#x7D04;20&#x4E09;&#x83F1;UFJ&#x8A3C;&#x5238;&#x306E;&#x30C7;&#x30C3;&#x30C9;&#x30BF;&#x30A4;&#x30E0;&#x3068;&#x30DE;&#x30A4;&#x30AF;&#x30ED;&#x30DF;&#x30AD;&#x30B5;&#x30FC;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x6642;&#x9593;&#x306E;&#x95A2;&#x6570;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x3001;3&#x3088;&#x304F;&#x7814;&#x7A76;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306F;&#x3001;&#x30B7;&#x30C8;&#x30AF;&#x30ED;&#x30E0;c&#x3001;&#x30A2;&#x30DD;&#x30DF;&#x30AA;&#x30B0;&#x30ED;&#x30D3;&#x30F3;&#x3068;&#x30EA;&#x30BE;&#x30C1;&#x30FC;&#x30E0;&#x306E;&#x30C8;&#x30EA;&#x30D7;&#x30C8;&#x30D5;&#x30A1;&#x30F3;&#x3092;&#x767A;&#x751F;&#x3057;&#x3001;UV&#x86CD;&#x5149;&#x30B9;&#x30DA;&#x30AF;&#x30C8;&#x30EB;&#x3092;&#x89B3;&#x5BDF;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002; &#x3001;2&#xFF09;&#x3001;&#x7D04;100&#x301C;300&#x30DE;&#x30A4;&#x30AF;&#x30ED;&#x3068;&#x306E;&#x9593;&#x306B;&#x767A;&#x751F;&#x3059;&#x308B;&#x86CD;&#x5149;&#x6E1B;&#x8870;1&#xFF09;&#x3001;&#x30B9;&#x30DA;&#x30AF;&#x30C8;&#x30EB;&#x306E;&#x6DF7;&#x5408;&#x6642;&#x9593;&#x4EE5;&#x5185;&#x306B;&#x767A;&#x751F;&#x3057;&#x30B7;&#x30D5;&#x30C8;&#xFF1A;&#x6642;&#x9593;&#x4F9D;&#x5B58;&#x30B9;&#x30DA;&#x30AF;&#x30C8;&#x30EB;&#x306E;&#x5358;&#x4E00;&#x5024;&#x5206;&#x89E3;&#x306F;2&#x3064;&#x306E;&#x72EC;&#x7ACB;&#x3057;&#x305F;&#x30D7;&#x30ED;&#x30BB;&#x30B9;&#x3092;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x307E;&#x305A;&#x3001;&#x30CD;&#x30A4;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6;&#x9AD8;&#x7B49;&#x30B3;&#x30F3;&#x30BF;&#x30AF;&#x30C8;&#x306E;&#x5F62;&#x6210;&#x306B;&#x758E;&#x6C34;&#x6027;&#x306E;&#x5D29;&#x58CA;&#x3068;2&#x756A;&#x76EE;&#x306E;&#x30D7;&#x30ED;&#x30BB;&#x30B9;&#x306B;&#x6700;&#x521D;&#x306E;&#x30D7;&#x30ED;&#x30BB;&#x30B9;&#x5C5E;&#x6027;&#x3002;

&#x30DE;&#x30A4;&#x30AF;&#x30ED;&#x30D5;&#x30EB;&#x30A4;&#x30C7;&#x30A3;&#x30AF;&#x30B9;&#x30DF;&#x30AD;&#x30B5;&#x30FC;&#x3067;&#x89B3;&#x6E2C;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x758E;&#x6C34;&#x6027;&#x306E;&#x5D29;&#x58CA;&#x3068;&#x65E9;&#x671F;&#x6298;&#x308A;&#x305F;&#x305F;&#x307F;&#x30B9;&#x30C6;&#x30C3;&#x30D7;

Sub-millisecond &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xD3F4;&#xB529; &#xACFC;&#xC815;&#xC73C;&#xB85C; &#xC2E4;&#xC81C;&#xB85C; &#xB450; &#xAC1C; &#xC774;&#xC0C1;&#xC758; &#xBCC4;&#xB3C4; &#xD504;&#xB85C;&#xC138;&#xC2A4;&#xB85C; &#xC774;&#xB8E8;&#xC5B4;&#xC838; &quot;&#xCD95;&#xC18C;&quot; &#xD558;&#xB294; &#xBCF4;&#xC5EC; &#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294;&#xC5D0;&#xC11C; UV &#xD615;&#xAD11; &#xC2A4;&#xD399;&#xD2B8;&#xB7FC;&#xC744; &#xAD00;&#xCC30; &#xC8FD;&#xC740; &#xC2DC;&#xAC04;&#xC758; &#xC2DC;&#xAC04;&#xC5D0; &#xB530;&#xB978; &#xC2A4;&#xD399;&#xD2B8;&#xB7FC;&#xC758; &#xC57D; 20 mus. &#xB2E8;&#xC77C; &#xAC12; &#xBD84;&#xD574;&#xC640; &#xBBF8;&#xC138; &#xBBF9;&#xC11C;&#xC5D0; &#xC2DC;&#xAC04;&#xC758; &#xD568;&#xC218;&#xB85C; &#xC790;&#xC5F0;&#xC2A4;&#xB7FD; &#xAC8C; &#xBC1C;&#xC0DD; 3 &#xC774;&#xC57C;&#xAE30;&#xB3C4; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;, &#xC2DC; &#xD1A0; &#xD06C;&#xB86C; c, apomyoglobin, &#xBC0F; lysozyme tryptophans, &#xB450; &#xAC1C;&#xC758; &#xBCC4;&#xB3C4; &#xD504;&#xB85C;&#xC138;&#xC2A4;&#xB97C; &#xACF5;&#xAC1C;: 1), &#xBBF9;&#xC2F1; &#xC2DC;&#xAC04;; &#xB0B4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBC1C;&#xC0DD; &#xD558;&#xB294; &#xC2A4;&#xD399;&#xD2B8;&#xB7FC; &#xBCC0;&#xD654; &#xACE0; 2), &#xC57D; 100 &#xBC0F; 300 &#xB9C8;&#xC774;&#xD06C;&#xB85C; &#xC0AC;&#xC774; &#xBC1C;&#xC0DD; &#xD558;&#xB294; &#xD615;&#xAD11; &#xBD95;&#xAD34;. &#xC6B0;&#xB9AC; &#xC18C;&#xC218; &#xC131;&#xC758; &#xBD95;&#xAD34;&#xC640; &#xCD5C;&#xCD08;&#xC758; &#xB124;&#xC774;&#xD2F0;&#xBE0C; 3 &#xCC28; &#xC5F0;&#xB77D;&#xCC98;&#xC758; &#xD615;&#xC131;&#xC5D0; &#xB450; &#xBC88;&#xC9F8; &#xD504;&#xB85C;&#xC138;&#xC2A4;&#xAC00; &#xCCAB; &#xBC88;&#xC9F8; &#xD504;&#xB85C;&#xC138;&#xC2A4;&#xB97C; &#xD2B9;&#xC131;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xC18C;&#xC218; &#xC131; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xCD95;&#xC18C; &#xD558; &#xACE0; &#xC77C;&#xCC0D; &#xC811;&#xB294; &#xB2E8;&#xACC4; &#xBBF8;&#xC138; &#xBBF9;&#xC11C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xAD00;&#xCC30; &#xD588;&#xB2E4;.

Se demuestra que el proceso de la prote&#xED;na sub-milisegundos de plegado denominado &#x26;quot;colapso&#x26;quot; en realidad consiste de al menos dos procesos separados. Se observa el espectro de fluorescencia UV de origen natural tript&#xF3;fanos en tres prote&#xED;nas bien estudiado, el citocromo c, apomyoglobin, y la lisozima, como una funci&#xF3;n del tiempo en un mezclador de microfluidos con un tiempo muerto de aproximadamente 20 m&#xFA;sculos. Descomposici&#xF3;n de valor individual de los espectros en funci&#xF3;n del tiempo revelan dos procesos separados: 1), un cambio espectral que se produce en el tiempo de mezclado, y 2), un decaimiento de fluorescencia que ocurre aproximadamente entre 100 y 300 micros. Atribuimos el primer proceso de colapso hidrof&#xF3;bico y el segundo proceso para la formaci&#xF3;n de los primeros contactos terciarias nativas.

Prote&#xED;na Collapse hidr&#xF3;fobo y primeros pasos plegables observados en una mezcladora de microfluidos

&#x5F62;&#x6210;&#x7684;&#x7279;&#x5B9A;&#x5206;&#x5B50;&#x5185;&#x8054;&#x7CFB;&#x4EBA;&#x5E08;&#x4ECE;&#x4E00;&#x7CFB;&#x5217;&#x5355;&#x4E2A;&#x57DF;&#x4E2D;&#x7684;&#x514D;&#x75AB;&#x7403;&#x86CB;&#x767D;&#x7ED3;&#x5408;&#x86CB;&#x767D; L &#x548C; G.&#x53D8;&#x6027;&#x6761;&#x4EF6;&#x867D;&#x7136;&#x4ED6;&#x4EEC;&#x5171;&#x4EAB;&#x6CA1;&#x6709;&#x91CD;&#x5927;&#x5E8F;&#x5217;&#x76F8;&#x4F3C;&#x6027;&#xFF0C;&#x5E76;&#x6709;&#x4E0D;&#x540C;&#x7684;&#x6298;&#x53E0;&#x9014;&#x5F84;&#xFF0C;&#x8FD9;&#x4E24;&#x4E2A;&#x57DF;&#x5177;&#x6709;&#x7C7B;&#x4F3C;&#x7684;&#x672C;&#x673A;&#x6298;&#x53E0;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x6D4B;&#x91CF;&#x8868;&#x660E;&#x6210;&#x5F62;&#x4E2D;&#x7684;&#x4E24;&#x79CD;&#x86CB;&#x767D;&#x5206;&#x5B50;&#x5C55;&#x5F00;&#x56FD;&#x5BB6;&#x76F8;&#x5E94;&#x8054;&#x7CFB;&#x4EBA;&#x7387;&#x975E;&#x5E38;&#x76F8;&#x4F3C;&#xFF0C;&#x751A;&#x81F3;&#x8868;&#x73B0;&#x51FA;&#x7C7B;&#x4F3C;&#x4F9D;&#x8D56;&#x53D8;&#x6027;&#x5242;&#x7684;&#x6D53;&#x5EA6;&#x3002;&#x672A;&#x6298;&#x53E0;&#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#x88AB;&#x6A21;&#x5F0F;&#x5316;&#x7684;&#x4F7F;&#x7528;&#x8428;&#x535A;&#x3001; &#x65AF;&#x8003;&#x5C14;&#x6ED5;&#x548C;&#x65AF;&#x8003;&#x5C14;&#x6ED5; (SSS) &#x7406;&#x8BBA;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x8815;&#x866B;&#x72B6;&#x94FE;&#x4E0E;&#x6392;&#x9664;&#x4F53;&#x79EF; &#xFF1B;&#x5F53;&#x4E0E;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x5B9E;&#x9A8C;&#x6570;&#x636E;&#x76F8;&#x7ED3;&#x5408;&#xFF0C;SSS &#x5206;&#x6790;&#x8868;&#x660E;&#x672A;&#x6298;&#x53E0;&#x7684;&#x72B6;&#x6001;&#x53D8;&#x4E3A;&#x5747;&#x5300;&#x66F4;&#x7D27;&#x51D1;&#xFF0C;&#x66F4;&#x4E0D;&#x6269;&#x6563; &#xFF08;&#x5373;&#xFF0C;&#x6392;&#x5217;&#x8F83;&#x6162;&#xFF09; &#x4E0E;&#x964D;&#x4F4E;&#x53D8;&#x6027;&#x5242;&#x6D53;&#x5EA6;&#x3002;

&#x52A8;&#x6001;&#x76F8;&#x4F3C;&#x6027;&#x7684; L &#x548C; G.&#x86CB;&#x767D;&#x7684;&#x5C55;&#x5F00;&#x72B6;&#x6001;

The formation of specific intramolecular contacts has been studied under a range of denaturing conditions in single domains of the immunoglobulin-binding proteins L and G. Although they share no significant sequence similarity and have dissimilar folding pathways, the two domains have a similar native fold. Our measurements show that the rates of forming corresponding contacts in the unfolded states of both proteins are remarkably similar and even exhibit similar dependence on denaturant concentration. The unfolded proteins were modeled using Szabo, Schulten, and Schulten (SSS) theory as wormlike chains with excluded volume; when combined with our experimental data, the SSS analysis suggests that the unfolded state becomes uniformly more compact and less diffusive (i.e., rearranges more slowly) with decreasing denaturant concentrations.

Dynamic similarity of the unfolded states of proteins L and G.

La formation de contacts sp&#xE9;cifiques intramol&#xE9;culaires a &#xE9;t&#xE9; &#xE9;tudi&#xE9;e dans une gamme de conditions de d&#xE9;naturation dans des domaines simples des prot&#xE9;ines de liaison &#xE0; l&#x26;#39;immunoglobuline L et G. Bien qu&#x26;#39;ils partagent aucune similarit&#xE9; de s&#xE9;quence significative et avoir diff&#xE9;rents chemins de pliage, les deux domaines ont un pli semblable natif. Nos mesures montrent que les taux de nouer des contacts correspondants dans les Etats se sont d&#xE9;roul&#xE9;s des deux prot&#xE9;ines sont remarquablement semblables et m&#xEA;me caract&#xE9;ris&#xE9;es par une d&#xE9;pendance similaire sur la concentration de d&#xE9;naturant. Les prot&#xE9;ines se sont d&#xE9;roul&#xE9;s ont &#xE9;t&#xE9; mod&#xE9;lis&#xE9;s &#xE0; l&#x26;#39;aide Szabo, Schulten, et Schulten (SSS) la th&#xE9;orie que les cha&#xEE;nes g&#xE9;antes avec volume exclu; lorsqu&#x26;#39;il est combin&#xE9; avec nos donn&#xE9;es exp&#xE9;rimentales, l&#x26;#39;analyse SSS sugg&#xE8;re que l&#x26;#39;&#xE9;tat non pli&#xE9; devient uniform&#xE9;ment plus compact et moins diffusif (c.-&#xE0;-r&#xE9;arrange plus lentement) avec des concentrations d&#xE9;croissantes d&#xE9;naturants.

Similitude dynamique de la d&#xE9;pli&#xE9; &#xC9;tats des prot&#xE9;ines L et G

Die Bildung von spezifischen intramolekulare Kontakte wurde untersucht, unter einer Reihe von Denaturierung Bedingungen in den einzelnen Dom&auml;nen der der Immunglobulin-bindenen Proteine, L und G. Obwohl sie keine signifikante Sequenz &Auml;hnlichkeit zu teilen und unterschiedliche Faltung Wege haben, haben die beiden Dom&auml;nen eine &auml;hnliche native Falte. Unsere Messungen zeigen, dass die entsprechenden Kontakte in den entfaltet beide Proteine zu bilden bemerkenswert &auml;hnlich sind und sogar &auml;hnliche Abh&auml;ngigkeit Verg&auml;llungsmittel Konzentration weisen. Die entfaltete Proteine wurden mit Szabo, Schulten und Schulten (SSS) Theorie als wurmartigen Ketten mit ausgeschlossenen Volumen modelliert; in Kombination mit unserer experimentellen Daten die SSS-Analyse zufolge die ungefaltet einheitlich kompakter und weniger wird diffusiven (d. h. ordnet langsamer) mit abnehmender Verg&auml;llungsmittel Konzentrationen.

Dynamische &Auml;hnlichkeit der entfalteten Staaten Proteine L und G.

La formazione di specifici contatti intramolecolare &egrave; stata studiata nell&#39;ambito di una gamma di condizioni denaturanti in singoli domini delle proteine immunoglobulina-associazione L e G. Anche se non condividono nessuna similarit&agrave; di sequenza significativa e dispongono di percorsi pieghevole dissimili, i due domini hanno una piega simile nativa. Le nostre misurazioni mostrano che i tassi di formare contatti corrispondenti negli stati dispiegati di entrambe le proteine sono notevolmente simili e persino esibiscono simile dipendenza dalla concentrazione di denaturante. Le proteine dispiegate sono state modellate utilizzando la teoria Szabo, Schulten e Schulten (SSS) come vermi catene con volume escluso; Quando combinato con i nostri dati sperimentali, l&#39;analisi SSS suggerisce che lo stato non ripiegato diventa uniformemente pi&ugrave; compatta e meno diffusiva (cio&egrave;, riorganizza pi&ugrave; lentamente) con la diminuzione della concentrazione di denaturante.

Similitudine dinamica degli stati svelati delle proteine L e G.

&#x5F7C;&#x3089;&#x306F;&#x6709;&#x610F;&#x306A;&#x914D;&#x5217;&#x985E;&#x4F3C;&#x6027;&#x3092;&#x5171;&#x6709;&#x3057;&#x306A;&#x3044;&#x3068;&#x7570;&#x306A;&#x308B;&#x30D5;&#x30A9;&#x30FC;&#x30EB;&#x30C7;&#x30A3;&#x30F3;&#x30B0;&#x7D4C;&#x8DEF;&#x3092;&#x6301;&#x3063;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x304C;&#x3001;&#x7279;&#x5B9A;&#x306E;&#x5206;&#x5B50;&#x30B3;&#x30F3;&#x30BF;&#x30AF;&#x30C8;&#x306E;&#x5F62;&#x6210;&#x306F;&#x3001;&#x514D;&#x75AB;&#x30B0;&#x30ED;&#x30D6;&#x30EA;&#x30F3;&#x7D50;&#x5408;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x5358;&#x4E00;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x5185;&#x3067;&#x5909;&#x6027;&#x6761;&#x4EF6;&#x306E;&#x7BC4;&#x56F2;&#x3067;&#x691C;&#x8A0E;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;L&#x304A;&#x3088;&#x3073;G&#x306F;&#x3001;2&#x3064;&#x306E;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x304C;&#x540C;&#x3058;&#x3088;&#x3046;&#x306A;&#x30CD;&#x30A4;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6;&#x500D;&#x3092;&#x6301;&#x3063;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x79C1;&#x305F;&#x3061;&#x306E;&#x6E2C;&#x5B9A;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x4E21;&#x65B9;&#x306E;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x5C55;&#x958B;&#x306E;&#x72B6;&#x614B;&#x306B;&#x5BFE;&#x5FDC;&#x3059;&#x308B;&#x30B3;&#x30F3;&#x30BF;&#x30AF;&#x30C8;&#x3092;&#x5F62;&#x6210;&#x7387;&#x306F;&#x8457;&#x3057;&#x304F;&#x985E;&#x4F3C;&#x3057;&#x3066;&#x304A;&#x308A;&#x3001;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x5909;&#x6027;&#x5264;&#x6FC3;&#x5EA6;&#x3067;&#x540C;&#x69D8;&#x306E;&#x4F9D;&#x5B58;&#x6027;&#x3092;&#x793A;&#x3059;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x5C55;&#x958B;&#x3057;&#x305F;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x306F;&#x6392;&#x9664;&#x4F53;&#x7A4D;&#x3092;&#x6301;&#x3064;&#x3072;&#x3082;&#x72B6;&#x9396;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x30B5;&#x30DC;&#x30FC;&#x3001;Schulten&#x306F;&#x3001;&#x3068;Schulten&#x306F;&#xFF08;SSS&#xFF09;&#x7406;&#x8AD6;&#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x3066;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x5316;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306E;&#x5B9F;&#x9A13;&#x30C7;&#x30FC;&#x30BF;&#x3068;&#x7D44;&#x307F;&#x5408;&#x308F;&#x305B;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3067;&#x3001;SSS&#x306E;&#x5206;&#x6790;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x5C55;&#x958B;&#x72B6;&#x614B;&#x304C;&#x5747;&#x4E00;&#x306B;&#x3001;&#x3088;&#x308A;&#x30B3;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x30C8;&#x3001;&#x3088;&#x308A;&#x5C11;&#x306A;&#x3044;&#x62E1;&#x6563;&#x3068;&#x306A;&#x308B;&#xFF08;&#x3059;&#x306A;&#x308F;&#x3061;&#x3001;&#x3088;&#x308A;&#x591A;&#x304F;&#x3092;&#x518D;&#x914D;&#x7F6E;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x5506;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x5F90;&#x3005;&#x306B;&#xFF09;&#x5909;&#x6027;&#x5264;&#x6FC3;&#x5EA6;&#x304C;&#x6E1B;&#x5C11;&#x3057;&#x305F;&#x3002;

&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x3001;L&#x3068;G&#x306E;&#x5C55;&#x958B;&#x50CF;&#x7C73;&#x56FD;&#x306E;&#x52D5;&#x7684;&#x985E;&#x4F3C;&#x6027;

&#xD2B9;&#xC815; intramolecular &#xC5F0;&#xB77D;&#xCC98; &#xD615;&#xC131; L&#xACFC; g. &#xBA74;&#xC5ED; &#xAE00;&#xB85C;&#xBD88;&#xB9B0; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xB2E8;&#xC77C; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBCC0;&#xC131; &#xC870;&#xAC74; &#xBC94;&#xC704;&#xC5D0;&#xC11C; &#xACF5;&#xBD80; &#xD558;&#xACE0;&#xC788;&#xB2E4; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC740; &#xC804;&#xD600; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xC2DC;&#xD000;&#xC2A4; &#xC720;&#xC0AC;&#xC131;&#xC744; &#xACF5;&#xC720; &#xD558; &#xACE0; &#xBE44;&#xC2B7;&#xD558;&#xC9C0; &#xC811;&#xB294; &#xACBD;&#xB85C;, &#xB450; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778; &#xBE44;&#xC2B7;&#xD55C; &#xB124;&#xC774;&#xD2F0;&#xBE0C; &#xBC30;&#xAC00; &#xC788;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xCE21;&#xC815; &#xB450; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xD3BC;&#xCE5C;&#xB41C; &#xC0C1;&#xD0DC;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD574;&#xB2F9; &#xC5F0;&#xB77D;&#xCC98;&#xB97C; &#xD615;&#xC131;&#xC758; &#xC18D;&#xB3C4; &#xBE44;&#xC2B7;&#xD574;&#xB3C4; denaturant &#xB18D;&#xB3C4; &#xC720;&#xC0AC;&#xD55C; &#xC758;&#xC874;&#xB3C4; &#xC804;&#xC2DC; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC790;, Schulten, &#xBC0F; Schulten (SSS) &#xC774;&#xB860;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xC81C;&#xC678; &#xB41C; &#xBCFC;&#xB968;; wormlike &#xCCB4;&#xC778;&#xC73C;&#xB85C; &#xD3BC;&#xCE5C;&#xB41C; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xBAA8;&#xB378;&#xB85C; &#xD588;&#xB2E4; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xC2E4;&#xD5D8; &#xB370;&#xC774;&#xD130;&#xC640; &#xACB0;&#xD569; &#xD558; &#xC5EC; SSS &#xBD84;&#xC11D; &#xC81C;&#xC548; &#xD3BC;&#xCE5C;&#xB41C; &#xC0C1;&#xD0DC;&#xB85C; &#xADE0;&#xC77C; &#xD558; &#xAC8C; &#xB354; &#xCF64;&#xD329;&#xD2B8; &#xD558; &#xACE0; &#xB35C; &#xB418; &#xBA74; &#xB2E4;&#xC2DC; &#xD37C;&#xC9C0;&#xB294; (&#xC989;, &#xC815;&#xB82C; &#xB354; &#xB290;&#xB9AC;&#xAC8C;) denaturant &#xB18D;&#xB3C4; &#xAC10;&#xC18C;&#xC640; &#xD568;&#xAED8;.

L&#xACFC; g. &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xD3BC;&#xCE5C; &#xC0C1;&#xD0DC;&#xC758; &#xB3D9;&#xC801; &#xC720;&#xC0AC;&#xC131;

La formaci&#xF3;n de determinados contactos intramoleculares se ha estudiado en una amplia gama de condiciones de desnaturalizaci&#xF3;n de los dominios individuales de las prote&#xED;nas de uni&#xF3;n a inmunoglobulina-L y G. A pesar de que no comparten similitud de secuencia y tienen diferentes v&#xED;as de plegado, los dos dominios tienen un pliegue natural similar. Nuestras mediciones muestran que las tasas de formaci&#xF3;n de los contactos correspondientes en los estados se desarrollaron de ambas prote&#xED;nas son muy similares e incluso presentan una dependencia similar en la concentraci&#xF3;n de desnaturalizante. Las prote&#xED;nas se desarrollaron fueron modelados utilizando Szabo, Schulten y Schulten (SSS) la teor&#xED;a de las cadenas de gusano con un volumen de excluidos, cuando se combina con los datos experimentales, el an&#xE1;lisis SSS sugiere que el estado se desarroll&#xF3; de manera uniforme se convierte en m&#xE1;s compacta y menos difusa (es decir, reordena m&#xE1;s lentamente) con concentraciones decrecientes desnaturalizantes.

Similitud din&#xE1;mica del desplegado los Estados de las prote&#xED;nas L y G

&#xB9E4;&#xC6B0; &#xBEE3; &#xBEE3; &#xD55C; &#xD3A9; &#xD2F0; &#xB4DC; &#xB420; Trp/Cys &#xC5F0;&#xB77D; polyglutamine &#xC5F0;&#xB77D;&#xCC98; &#xD615;&#xC131;&#xC758; &#xC18D;&#xB3C4; &#xCE21;&#xC815; &#xD558; &#xACE0; &#xADF8;&#xAC83;&#xC744; &#xCC3E;&#xAE30; &#xC704;&#xD574; &#xB2F4;&#xAE08;&#xC9C8; &#xBC29;&#xBC95; &#xC0AC;&#xC6A9;. &#xBC18;&#xC751; &#xC81C;&#xD55C; &#xBC0F; &#xD655;&#xC0B0; &#xC81C;&#xD55C; &#xC18D;&#xB3C4;&#xC5D0; &#xAD00;&#xCC30; &#xB41C; &#xC18D;&#xB3C4;&#xC758; &#xBD84;&#xB9AC;&#xB294; &#xBC18;&#xC751;&#xC774; &#xC81C;&#xD55C; &#xC18D;&#xB3C4; &#xC99D;&#xAC00; (&#xAC10;&#xC18C; &#xBCF4;&#xB2E4;) &#xC57D;&#xAC04; 4 &#xBC0F; 16 &#xC544;&#xBBF8;&#xB178;&#xC0B0; &#xC0AC;&#xC774;&#xC758; &#xAE38;&#xC774; &#xD568;&#xAED8; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC790;, Schulten, &#xBC0F; Schulten &#xC774;&#xB860;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC;, &#xC6B0;&#xB9AC; &#xC81C;&#xC678; &#xB41C; &#xBCFC;&#xB968; wormlike &#xCCB4;&#xC778; &#xACB0;&#xACFC; &#xBAA8;&#xB378;&#xB9C1;&#xAC00;&#xC9C0;&#xACE0; &#xCC3E;&#xC544; &#xC9C0; &#xC18D;&#xC131; &#xAE38;&#xC774;&#xB97C; &#xC57D; 13.0 A&#xAC00; &#xAC83; &#xBCF4;&#xB2E4; &#xD6E8;&#xC52C; &#xB354; &#xC624;&#xB798; &#xB41C; &#xB2E4;&#xB978; &#xC784;&#xC758;&#xC758; &#xD3A9; &#xD2F0; &#xB4DC;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xAD00;&#xCC30; &#xBC0F; &#xD3BC;&#xCCD0; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;. &#xC120;&#xD638; &#xB098; &#xB780; polyglutamine&#xC758; &#xD655;&#xC7A5; &#xACC4;&#xC815; &#xC218; &#xC131;&#xD5A5;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xD655;&#xC7A5; &#xB41C; &#xAE00;&#xB8E8;&#xD0C0;&#xBBFC; &#xBED7;&#xC5B4; &#xD3BC;&#xCCD0; &#xD5CC;&#xD305;&#xD134;&#xC758; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xACFC; &#xB192;&#xC740; &#xC131;&#xD5A5;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xBB34;&#xC9C8;&#xC11C; &#xB2E8;&#xC704;&#xCCB4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC9D1;&#xACC4;&#xB97C; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Polyglutamine &#xD3A9; &#xD2F0; &#xB4DC;&#xC758; &#xBCF8;&#xC9C8;&#xC801;&#xC778; &#xAC15;&#xC131;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Se ha utilizado el m&#xE9;todo de Trp / enfriamiento contacto Cys para medir la velocidad de formaci&#xF3;n de contacto en poliglutaminas y encontrar&#xE1; que es un p&#xE9;ptido muy r&#xED;gido. La separaci&#xF3;n de las tasas observadas en la reacci&#xF3;n limitada y las tasas de difusi&#xF3;n limitada muestran que la reacci&#xF3;n limitada de las tasas de aumento (en lugar de disminuir) ligeramente con una longitud de entre 4 y 16 amino&#xE1;cidos. Usando Szabo, Schulten y la teor&#xED;a de Schulten, hemos modelado los resultados con una cadena de gusano con volumen excluido y encontrar la longitud persistencia a unos 13,0 A, mucho m&#xE1;s largo que se ha observado para otros p&#xE9;ptidos al azar y las prote&#xED;nas desplegadas. La conformaci&#xF3;n preferida prolongado de poliglutaminas podr&#xED;a dar cuenta de una propensi&#xF3;n a la ampliaci&#xF3;n de tramos de glutamina para desplegar la prote&#xED;na de Huntington y la alta propensi&#xF3;n a agruparse a partir de un mon&#xF3;mero desordenada.

La rigidez intr&#xED;nseca de los p&#xE9;ptidos Poliglutaminas

&#x6211;&#x4EEC;&#x7528;&#x8DE8;&#x56FD;&#x6FC0;&#x8FDB;&#x515A;/Cys &#x8054;&#x7CFB;&#x4EBA;&#x6DEC;&#x706B;&#x6765;&#x8861;&#x91CF; polyglutamine &#x7684;&#x63A5;&#x89E6;&#x5F62;&#x6210;&#x7387;&#x548C;&#x67E5;&#x627E;&#x5B83;&#x7684;&#x65B9;&#x6CD5;&#x662F;&#x5F88;&#x50F5;&#x786C;&#x7684;&#x591A;&#x80BD;&#x3002;&#x89C2;&#x5BDF;&#x5230;&#x7387;&#x6210;&#x53CD;&#x5E94;&#x6709;&#x9650;&#x548C;&#x4F20;&#x64AD;&#x6709;&#x9650;&#x516C;&#x53F8;&#x7387;&#x5206;&#x79BB;&#x663E;&#x793A;&#x53CD;&#x5E94;&#x6709;&#x9650;&#x7387;&#x589E;&#x52A0; &#xFF08;&#x800C;&#x4E0D;&#x662F;&#x51CF;&#x5C11;&#xFF09; &#x7565; 4 &#x548C; 16 &#x6C28;&#x57FA;&#x9178;&#x4E4B;&#x95F4;&#x7684;&#x957F;&#x5EA6;&#x3002;&#x4F7F;&#x7528;&#x8428;&#x535A;&#x3001; &#x65AF;&#x8003;&#x5C14;&#x6ED5;&#x548C;&#x65AF;&#x8003;&#x5C14;&#x6ED5;&#x7406;&#x8BBA;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x6709;&#x6A21;&#x62DF;&#x7ED3;&#x679C;&#x4E0E;&#x8815;&#x866B;&#x72B6;&#x94FE;&#x4E0E;&#x6392;&#x9664;&#x4F53;&#x79EF;&#x548C;&#x67E5;&#x627E;&#x6301;&#x4E45;&#x6027;&#x957F;&#x5EA6;&#x7EA6; 13.0 A&#x3001; &#x65F6;&#x95F4;&#x8FDC;&#x957F;&#x4E8E;&#x5DF2;&#x88AB;&#x89C2;&#x5BDF;&#x5230;&#x7684;&#x5176;&#x4ED6;&#x968F;&#x673A;&#x591A;&#x80BD;&#x5E76;&#x5C55;&#x5F00;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x3002;&#x9996;&#x9009;&#x6269;&#x5C55; polyglutamine &#x7684;&#x6784;&#x8C61;&#x80FD;&#x5360;&#x7684;&#x503E;&#x5411;&#x6269;&#x5927;&#x8C37;&#x6C28;&#x9170;&#x80FA;&#x8FDB;&#x884C;&#x62C9;&#x4F38;&#x4EE5;&#x5C55;&#x73B0;&#x4EA8;&#x5EF7;&#x987F;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x548C;&#x9AD8;&#x5EA6;&#x503E;&#x5411;&#x4E8E;&#x4ECE;&#x65E0;&#x5E8F;&#x7684;&#x5355;&#x4F53;&#x7684;&#x805A;&#x5408;&#x3002;

&#x5185;&#x5728;&#x521A;&#x5EA6;&#x7684; polyglutamine &#x591A;&#x80BD;&#x3002;

We have used the method of Trp/Cys contact quenching to measure the rate of contact formation in polyglutamine and find it to be a very stiff peptide. Separation of observed rates into reaction-limited and diffusion-limited rates show that the reaction-limited rates increase (rather than decrease) slightly with length between 4 and 16 amino acids. Using Szabo, Schulten, and Schulten theory, we have modeled the results with a wormlike chain with excluded volume and find the persistence length to be about 13.0 A, much longer than has been observed for other random peptides and unfolded proteins. The preferred extended conformation of polyglutamine could account for a propensity for expanded glutamine stretches to unfold the Huntington's protein and the high propensity to aggregate from a disordered monomer.

The intrinsic stiffness of polyglutamine peptides.

Nous avons utilis&#xE9; la m&#xE9;thode de Trp / trempe de contact Cys pour mesurer le taux de formation de contact dans polyglutamine et de trouver qu&#x26;#39;il s&#x26;#39;agit d&#x26;#39;un peptide tr&#xE8;s raide. S&#xE9;paration des taux observ&#xE9;s dans la r&#xE9;action limit&#xE9;e et les taux de diffusion limit&#xE9;es montrent que la r&#xE9;action limit&#xE9;e de hausse des taux (plut&#xF4;t qu&#x26;#39;une diminution) l&#xE9;g&#xE8;rement avec une longueur entre 4 et 16 acides amin&#xE9;s. Utilisation de Szabo, Schulten, et la th&#xE9;orie Schulten, nous avons mod&#xE9;lis&#xE9; les r&#xE9;sultats avec une cha&#xEE;ne vermiforme avec volume exclu et de trouver la longueur de persistance &#xE0; environ 13,0 A, beaucoup plus que ce qui a &#xE9;t&#xE9; observ&#xE9; pour d&#x26;#39;autres peptides al&#xE9;atoires et prot&#xE9;ines d&#xE9;pli&#xE9;es. La conformation pr&#xE9;f&#xE9;r&#xE9;e &#xE9;tendue de polyglutamine pourrait expliquer une propension pour les tron&#xE7;ons &#xE9;largis glutamine se d&#xE9;rouler la prot&#xE9;ine de Huntington et la forte propension &#xE0; s&#x26;#39;agr&#xE9;ger &#xE0; partir d&#x26;#39;un monom&#xE8;re d&#xE9;sordonn&#xE9;e.

La rigidit&#xE9; intrins&#xE8;que des peptides polyglutamine

Wir haben fr&uuml;her die Methode der Trp/Cys Kontaktaufnahme abschrecken zu messen die Rate bei Polyglutamin-Kontakt Formation und finde es eine sehr steife Peptid. Trennung der beobachteten Preise in Reaktion-Limited und Verbreitung-Limited Preise zeigen, dass die Reaktion-begrenzte Zunahme (anstatt Abnahme) leicht mit L&auml;nge zwischen 4 und 16 Aminos&auml;uren Preise. Mit Szabo, Schulten und Schulten Theorie, wir haben die Ergebnisse mit einer wurmartigen Kette mit ausgeschlossenen Volumen modelliert und finden die Persistenz-L&auml;nge ca. 13,0 A, viel l&auml;nger als hat wurden beobachtet f&uuml;r andere zuf&auml;llige Peptide und entfaltete Proteine. Die bevorzugte Konformation von bei Polyglutamin erweitert k&ouml;nnte entfallen eine Neigung f&uuml;r erweiterte Glutamin erstreckt sich die Huntington-Proteins und die ausgepr&auml;gte Neigung zu entfalten, Aggregat aus einem ungeordneten Monomer.

Die systeminterne Steifigkeit bei Polyglutamin-Peptide.

Abbiamo usato il metodo di contatto Trp/Cys tempra per misurare il tasso di formazione di contatto in poliglutamine e trovo sia un peptide molto rigido. Separazione dei tassi osservati in tassi di reazione limitata e diffusione limitata mostrano che la reazione limitata prezzi aumento (anzich&eacute; diminuire) leggermente con lunghezza compresa tra 4 e 16 aminoacidi. Utilizzando la teoria Szabo, Schulten e Schulten, hanno modellato i risultati con una catena di vermi con volume escluso e trovare la lunghezza di persistenza per essere circa 13,0 A, molto pi&ugrave; di quanto ha stato osservato per altri peptidi casuali e spiegato le proteine. Il preferito estesa conformazione di poliglutamine potrebbe spiegare per una propensione per espansa glutamina si estende a svolgersi della proteina di Huntington e l&#39;alta propensione all&#39;aggregato da un monomero disordinato.

L&#39;intrinseca rigidit&agrave; dei peptidi delle poliglutamine.

&#x6211;&#x3005;&#x306F;Trp / Cys&#x3092;&#x63A5;&#x89E6;&#x6D88;&#x5149;&#x30B0;&#x30EB;&#x30BF;&#x30DF;&#x30F3;&#x306E;&#x30B3;&#x30F3;&#x30BF;&#x30AF;&#x30C8;&#x5F62;&#x6210;&#x306E;&#x901F;&#x5EA6;&#x3092;&#x6E2C;&#x5B9A;&#x3057;&#x3001;&#x305D;&#x308C;&#x306F;&#x975E;&#x5E38;&#x306B;&#x786C;&#x3044;&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C9;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x898B;&#x3064;&#x3051;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x53CD;&#x5FDC;&#x9650;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x304A;&#x308A;&#x3001;&#x62E1;&#x6563;&#x5F8B;&#x901F;&#x901F;&#x5EA6;&#x306B;&#x89B3;&#x6E2C;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x30EC;&#x30FC;&#x30C8;&#x306E;&#x5206;&#x96E2;&#x306F;&#x3001;&#x53CD;&#x5FDC;&#x304C;&#x9650;&#x5B9A;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x30EC;&#x30FC;&#x30C8;&#x304C;&#x5897;&#x52A0;&#x3059;&#x308B;&#xFF08;&#x3080;&#x3057;&#x308D;&#x6E1B;&#x5C11;&#xFF09;&#x3088;&#x308A;&#x5C11;&#x3057;&#x3060;&#x3051;4&#x301C;16&#x30A2;&#x30DF;&#x30CE;&#x9178;&#x306E;&#x9593;&#x306E;&#x9577;&#x3055;&#x3092;&#x6301;&#x3064;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x30B5;&#x30DC;&#x30FC;&#x3001;Schulten&#x306F;&#x3001;&#x3068;Schulten&#x306F;&#x7406;&#x8AD6;&#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x3066;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x6392;&#x9664;&#x4F53;&#x7A4D;&#x3068;&#x307F;&#x307F;&#x305A;&#x9396;&#x3067;&#x7D50;&#x679C;&#x3092;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x5316;&#x3057;&#x3001;&#x306F;&#x308B;&#x304B;&#x306B;&#x9577;&#x304F;&#x3001;&#x4ED6;&#x306E;&#x30E9;&#x30F3;&#x30C0;&#x30E0;&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C9;&#x3092;&#x89B3;&#x5BDF;&#x3057;&#x3001;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x3092;&#x5C55;&#x958B;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3088;&#x308A;&#x3082;&#x3001;32.9&#x7A0B;&#x5EA6;&#x3068;&#x6301;&#x7D9A;&#x9577;&#x3092;&#x898B;&#x3064;&#x3051;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x30DD;&#x30EA;&#x30B0;&#x30EB;&#x30BF;&#x30DF;&#x30F3;&#x306E;&#x597D;&#x307E;&#x3057;&#x3044;&#x62E1;&#x5F35;&#x30B3;&#x30F3;&#x30D5;&#x30A9;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x306F;&#x3001;&#x7121;&#x79E9;&#x5E8F;&#x306A;&#x30E2;&#x30CE;&#x30DE;&#x30FC;&#x304B;&#x3089;&#x96C6;&#x7D04;&#x3059;&#x308B;&#x30CF;&#x30F3;&#x30C1;&#x30F3;&#x30C8;&#x30F3;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x3068;&#x9AD8;&#x3044;&#x50BE;&#x5411;&#x3092;&#x5C55;&#x958B;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x62E1;&#x5F35;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x30B0;&#x30EB;&#x30BF;&#x30DF;&#x30F3;&#x30B9;&#x30C8;&#x30EC;&#x30C3;&#x30C1;&#x306E;&#x50BE;&#x5411;&#x3092;&#x8003;&#x616E;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x30DD;&#x30EA;&#x30B0;&#x30EB;&#x30BF;&#x30DF;&#x30F3;&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C9;&#x306E;&#x56FA;&#x6709;&#x525B;&#x6027;

&#x5728;&#x690D;&#x7269;&#x91CC;&#xFF0C;&#x753E;&#x9187;&#x751F;&#x7269;&#x5408;&#x6210;&#x7684;&#x7C7B;&#x56FA;&#x9187;&#x6FC0;&#x7D20;&#x53D1;&#x6325;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x819C;&#x6210;&#x5206;&#x7684;&#x57FA;&#x672C;&#x89D2;&#x8272;&#xFF0C;&#x5E76;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x524D;&#x4F53;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x58C1;&#x6C89;&#x79EF;&#x3002;&#x753E;&#x9187;&#x5408;&#x6210;&#x5728;&#x5185;&#x8D28;&#x7F51; &#xFF08;ER&#xFF09;&#xFF0C;&#x4F46;&#x4E3B;&#x8981;&#x662F;&#x5728;&#x7EC6;&#x80DE;&#x819C;&#x4E2D;&#x5806;&#x79EF;&#x3002;&#x5982;&#x4F55;&#x5728;&#x690D;&#x7269;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E2D;&#x88AB;&#x8D29;&#x5356;&#x753E;&#x9187;&#x662F;&#x4E3B;&#x8981;&#x662F;&#x672A;&#x77E5;&#x7684;&#x3002;&#x5728;&#x975E;&#x690D;&#x7269;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x6C27;&#x4EE3;&#x56FA;&#x9187;&#x7ED3;&#x5408;&#x86CB;&#x767D;&#x6709;&#x53C2;&#x4E0E;&#x753E;&#x9187;&#x8D29;&#x8FD0;&#x548C;&#x52A8;&#x6001;&#x5E73;&#x8861;&#x3002;&#x6709;&#x81F3;&#x5C11;&#x5341;&#x4E8C;&#x540C;&#x7CFB;&#x7269;&#x7684;&#x6C27;&#x4EE3;&#x56FA;&#x9187;&#x7ED3;&#x5408;&#x86CB;&#x767D;&#x5728;&#x62DF;&#x5357;&#x82A5;&#x57FA;&#x56E0;&#x7EC4;&#xFF0C;&#x4F46;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x751F;&#x7269;&#x5B66;&#x4ECD;&#x7136;&#x5728;&#x6700;&#x5927;&#x7A0B;&#x5EA6;&#x4E0D;&#x660E;&#x6717;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x76EE;&#x6807;&#x8981;&#x6C42;&#x6211;&#x4EEC;&#x5206;&#x6790;&#x548C;&#x62A5;&#x544A;&#x5C0F;&#x62DF;&#x5357;&#x82A5;&#x6C27;&#x4EE3;&#x56FA;&#x9187;&#x7ED3;&#x5408;&#x86CB;&#x767D; ORP3a &#x7684;&#x753E;&#x9187;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x5C5E;&#x6027;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x5DF2;&#x786E;&#x5B9A; ORP3a &#x662F;&#x5584;&#x610F;&#x7684;&#x753E;&#x9187;&#x7ED3;&#x5408;&#x86CB;&#x767D;&#x4E0E;&#x8C37;&#x753E;&#x9187;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x5C5E;&#x6027;&#x3002;&#x6D3B;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6210;&#x50CF;&#x5206;&#x6790;&#x663E;&#x793A; ORP3a &#x5728;&#x6025;&#x8BCA;&#x5BA4;&#xFF0C;&#x672C;&#x5730;&#x5316;&#xFF0C;&#x8BE5;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x5230;&#x6B64;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5668;&#x53D6;&#x51B3;&#x4E8E; PVA12&#xFF0C;&#x5F88;&#x5927;&#x7A0B;&#x5EA6;&#x4E0A;&#x65E0; VAP33 &#x690D;&#x7269;&#x86CB;&#x767D;&#x7684;&#x5BB6;&#x5EAD;&#x6210;&#x5458;&#x76F4;&#x63A5;&#x4EA4;&#x4E92;&#x3002;&#x5206;&#x5B50;&#x5EFA;&#x6A21;&#x5206;&#x6790;&#x548C;&#x5B9A;&#x70B9;&#x7A81;&#x53D8;&#x5BFC;&#x81F4;&#x8D1F;&#x8D23; PVA12 ORP3a &#x4E92;&#x52A8;&#x7684;&#x65B0;&#x578B;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x57DF;&#x7684;&#x6807;&#x8BC6;&#x3002;&#x6B64;&#x57DF;&#x7684;&#x5B8C;&#x6574;&#x6027;&#x4E2D;&#x65AD;&#x5F15;&#x8D77;&#x7684; ORP3a &#x5230;&#x9AD8;&#x5C14;&#x57FA;&#xFF0C;&#x6697;&#x793A; ORP3a &#x53EF;&#x5FAA;&#x73AF; ER &#x548C;&#x9AD8;&#x5C14;&#x57FA;&#x4E4B;&#x95F4;&#x91CD;&#x65B0;&#x5206;&#x914D;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7ED3;&#x679C;&#x4EE3;&#x8868;&#x7684;&#x753E;&#x9187;&#x7ED3;&#x5408;&#x86CB;&#x767D;&#x5728;&#x690D;&#x7269;&#x7EC6;&#x80DE;&#x751F;&#x7269;&#x5B66;&#x7684;&#x65B0;&#x89C1;&#x89E3;&#xFF0C;&#x9610;&#x660E;&#x8FC4;&#x4ECA;&#x672A;&#x77E5;&#x7684;&#x6210;&#x5458;&#x7684;&#x6C27;&#x4EE3;&#x56FA;&#x9187;&#x7ED3;&#x5408;&#x86CB;&#x767D;&#x548C;&#x690D;&#x7269;&#x86CB;&#x767D;&#x5728;&#x65E9;&#x671F;&#x7684;&#x690D;&#x7269;&#x5206;&#x6CCC;&#x9014;&#x5F84;&#x4E2D;&#x7684; VAP33 &#x5BB6;&#x5EAD;&#x4E4B;&#x95F4;&#x5173;&#x7CFB;&#x3002;

&#x9488;&#x5BF9;&#x6C27;&#x4EE3;&#x56FA;&#x9187;&#x7ED3;&#x5408;&#x86CB;&#x767D; ORP3a &#x5BF9;&#x5185;&#x8D28;&#x7F51;&#x5E94;&#x4F9D;&#x8D56;&#x4E8E;&#x690D;&#x7269; VAP33 &#x540C;&#x6E90; PVA12&#x3002;

In plants, sterols play fundamental roles as membrane constituents in the biosynthesis of steroid hormones, and act as precursors for cell wall deposition. Sterols are synthesized in the endoplasmic reticulum (ER), but mainly accumulate in the plasma membrane. How sterols are trafficked in plant cells is largely unknown. In non-plant systems, oxysterol-binding proteins have been involved in sterol trafficking and homeostasis. There are at least twelve homologs of oxysterol-binding proteins in the Arabidopsis genome, but the biology of these proteins remains for the most part obscure. Here, we report our analysis of the targeting requirements and the sterol-binding properties of a small Arabidopsis oxysterol-binding protein, ORP3a. We have determined that ORP3a is a bona fide sterol-binding protein with sitosterol-binding properties. Live-cell imaging analyses revealed that ORP3a is localized at the ER, and that binding to this organelle depends on a direct interaction with PVA12, a member of the largely uncharacterized VAP33 family of plant proteins. Molecular modeling analyses and site-directed mutagenesis led to the identification of a novel protein domain that is responsible for the PVA12-ORP3a interaction. Disruption of the integrity of this domain caused redistribution of ORP3a to the Golgi apparatus, suggesting that ORP3a may cycle between the ER and the Golgi. These results represent new insights into the biology of sterol-binding proteins in plant cells, and elucidate a hitherto unknown relationship between members of oxysterol-binding protein and VAP33 families of plant proteins in the early plant secretory pathway.

The targeting of the oxysterol-binding protein ORP3a to the endoplasmic reticulum relies on the plant VAP33 homolog PVA12.

Dans les usines, st&#xE9;rols jouent des r&#xF4;les fondamentaux en tant que constituants membranaires dans la biosynth&#xE8;se des hormones st&#xE9;ro&#xEF;des, et agissent comme pr&#xE9;curseurs pour le d&#xE9;p&#xF4;t paroi cellulaire. Les st&#xE9;rols sont synth&#xE9;tis&#xE9;es dans le r&#xE9;ticulum endoplasmique (RE), mais surtout s&#x26;#39;accumuler dans la membrane plasmique. Comment st&#xE9;rols sont victimes de la traite dans les cellules v&#xE9;g&#xE9;tales est largement inconnue. En non-v&#xE9;g&#xE9;tales syst&#xE8;mes, oxyst&#xE9;rol prot&#xE9;ines de liaison ont &#xE9;t&#xE9; impliqu&#xE9;s dans le trafic des st&#xE9;rols et de l&#x26;#39;hom&#xE9;ostasie. Il ya au moins douze homologues de prot&#xE9;ines de liaison des oxyst&#xE9;rols dans le g&#xE9;nome d&#x26;#39;Arabidopsis, mais la biologie de ces prot&#xE9;ines reste la plupart du temps obscurs. Nous rapportons ici notre analyse des besoins de ciblage et les propri&#xE9;t&#xE9;s des st&#xE9;rols de liaison d&#x26;#39;une petite Arabidopsis oxyst&#xE9;rol-binding protein, ORP3a. Nous avons d&#xE9;termin&#xE9; que ORP3a est un bona fide st&#xE9;rol-binding protein avec sitost&#xE9;rol propri&#xE9;t&#xE9;s de liaison. Analyses d&#x26;#39;imagerie des cellules vivantes r&#xE9;v&#xE9;l&#xE9; que ORP3a est localis&#xE9;e &#xE0; l&#x26;#39;ER, et que la liaison &#xE0; ce organite d&#xE9;pend d&#x26;#39;une interaction directe avec PVA12, un membre de la grande partie non caract&#xE9;ris&#xE9; VAP33 famille de prot&#xE9;ines v&#xE9;g&#xE9;tales. Analyses de mod&#xE9;lisation mol&#xE9;culaire et mutagen&#xE8;se dirig&#xE9;e a conduit &#xE0; l&#x26;#39;identification d&#x26;#39;un domaine prot&#xE9;ique roman qui est responsable de l&#x26;#39;interaction PVA12-ORP3a. La perturbation de l&#x26;#39;int&#xE9;grit&#xE9; de ce domaine caus&#xE9; la redistribution des ORP3a &#xE0; l&#x26;#39;appareil de Golgi, ce qui sugg&#xE8;re que ORP3a peut alterner entre l&#x26;#39;ER et l&#x26;#39;appareil de Golgi. Ces r&#xE9;sultats repr&#xE9;sentent de nouveaux aper&#xE7;us sur la biologie des prot&#xE9;ines de liaison st&#xE9;rol dans les cellules v&#xE9;g&#xE9;tales, et d&#x26;#39;&#xE9;lucider une relation jusque-l&#xE0; inconnu entre les membres de la prot&#xE9;ine de liaison des oxyst&#xE9;rols et VAP33 familles de prot&#xE9;ines v&#xE9;g&#xE9;tales dans la voie s&#xE9;cr&#xE9;toire des plantes au d&#xE9;but.

Le ciblage de l&#x26;#39;ORP3a prot&#xE9;ines de liaison des oxyst&#xE9;rols dans le r&#xE9;ticulum endoplasmique S&#x26;#39;appuie sur l&#x26;#39;usine de VAP33 Homolog PVA12

In Pflanzen Sterine spielen eine grundlegende Rolle als Membran-Bestandteile in der Biosynthese der Steroidhormone und fungieren als Vorstufen f&uuml;r Zellwand Ablagerung. Sterine sind in dem Endoplasmatischen Retikulum (ER) synthetisiert, sondern sammeln sich vor allem in der Plasmamembran. Es ist weitgehend unbekannt, wie Sterine in pflanzlichen Zellen verschleppt werden. In nicht-Anlagensysteme sind Oxysterol-bindene Proteine in Sterin Menschenhandel und Hom&ouml;ostase beteiligt. Es gibt mindestens zw&ouml;lf UCP1 der Oxysterol-bindenen Proteine im Arabidopsis Genom, aber die Biologie dieser Proteine bleibt zum gr&ouml;&szlig;ten Teil obskuren. Hier berichten wir unsere Analyse der zielenden Anforderungen und den Sterin-Bindungseigenschaften eines kleinen Arabidopsis Oxysterol bindenden Proteins, ORP3a. Wir haben festgestellt, dass ORP3a ein gutgl&auml;ubiger Sterin-verbindliches Protein mit Sitosterin-Bindungseigenschaften. Leben-Zelle bildgebende Analysen ergaben, dass ORP3a, an der ER lokalisiert wird, und diese Bindung zu diesem Organell eine direkte Interaktion mit PVA12, ein Mitglied der weitgehend uncharakterisiertes VAP33-Familie von pflanzlichen Proteinen h&auml;ngt. Molekulare Modellierung Analysen und Site-verwiesene Mutagenese f&uuml;hrte zur Identifizierung der eine neuartige Protein-Dom&auml;ne, die f&uuml;r die PVA12-ORP3a-Interaktion verantwortlich ist. St&ouml;rung der Integrit&auml;t dieser Dom&auml;ne verursacht Umverteilung von ORP3a zum Golgi-Apparat, darauf hindeutet, dass die ORP3a zwischen die ER und die Golgi wechseln kann. Diese Ergebnisse stellen neue Einblicke in die Biologie der Sterin-bindenen Proteine in Pflanzenzellen und eine bisher unbekannte Beziehung zwischen Mitgliedern der Oxysterol-verbindliches Protein und VAP33 Familien von Eiwei&szlig;pflanzen in der fr&uuml;hen Werk sekretorischen Weg zu erhellen.

Die Angriffe auf die Oxysterol-verbindliches Protein ORP3a, dem Endoplasmatischen Retikulum beruht auf der Pflanze VAP33 Homolog PVA12.

Nelle piante, steroli svolgono un ruolo fondamentale come costituenti di membrana nella biosintesi degli ormoni steroidi e agiscono come precursori per la deposizione della parete cellulare. Gli steroli sono sintetizzati nel reticolo endoplasmatico (ER), ma principalmente si accumulano nella membrana del plasma. Come steroli sono trafficati nelle cellule vegetali &egrave; in gran parte sconosciuto. Nei sistemi non-impianto, oxysterol-binding proteins sono stati coinvolti nel traffico di steroli e omeostasi. Ci sono almeno dodici omologhi di proteine oxysterol-associazione nel genoma Arabidopsis, ma la biologia di queste proteine rimane per la maggior parte oscura. Riportiamo la nostra analisi dei requisiti di targeting e le propriet&agrave; di sterolo-binding di un piccolo Arabidopsis oxysterol-binding protein, ORP3a. Abbiamo determinato che ORP3a &egrave; una bona fide sterolo-proteina con propriet&agrave; di sitosterolo-binding. Live cell imaging analisi ha rivelato che ORP3a &egrave; localizzata al pronto soccorso, e quell&#39;associazione di questo organello dipende da un&#39;interazione diretta con PVA12, un membro della famiglia VAP33 in gran parte atipiche di proteine vegetali. Analisi modellistica molecolare e mutagenesi luogo-diretta ha portato all&#39;individuazione di un dominio romanzo della proteina che &egrave; responsabile per l&#39;interazione PVA12-ORP3a. Interruzione dell&#39;integrit&agrave; di questo dominio causato ridistribuzione di ORP3a all&#39;apparato di Golgi, suggerendo che pu&ograve; pedalare per ORP3a ER e il Golgi. Questi risultati rappresentano nuove intuizioni in biologia di sterolo-binding proteins in cellule vegetali e delucidare un rapporto finora sconosciuto tra i membri del oxysterol-binding protein e VAP33 famiglie di proteine vegetali nella via secretiva dell&#39;impianto precoce.

Il targeting di oxysterol-binding protein ORP3a il reticolo endoplasmatico si basa sulla pianta omologo VAP33 PVA12.

&#x690D;&#x7269;&#x306B;&#x304A;&#x3044;&#x3066;&#x3001;&#x30B9;&#x30C6;&#x30ED;&#x30FC;&#x30EB;&#x306F;&#x30B9;&#x30C6;&#x30ED;&#x30A4;&#x30C9;&#x30DB;&#x30EB;&#x30E2;&#x30F3;&#x306E;&#x751F;&#x5408;&#x6210;&#x306E;&#x819C;&#x69CB;&#x6210;&#x6210;&#x5206;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x57FA;&#x672C;&#x7684;&#x306A;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x679C;&#x305F;&#x3057;&#x3001;&#x7D30;&#x80DE;&#x58C1;&#x306E;&#x5806;&#x7A4D;&#x306E;&#x524D;&#x99C6;&#x4F53;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30B9;&#x30C6;&#x30ED;&#x30FC;&#x30EB;&#x306F;&#x3001;&#x5C0F;&#x80DE;&#x4F53;&#xFF08;ER&#xFF09;&#x3067;&#x5408;&#x6210;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x304C;&#x3001;&#x4E3B;&#x306B;&#x7D30;&#x80DE;&#x819C;&#x306B;&#x84C4;&#x7A4D;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3069;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306B;&#x30B9;&#x30C6;&#x30ED;&#x30FC;&#x30EB;&#x306F;&#x3001;&#x690D;&#x7269;&#x7D30;&#x80DE;&#x5185;&#x3067;&#x4EBA;&#x8EAB;&#x58F2;&#x8CB7;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x306F;&#x3001;&#x5927;&#x90E8;&#x5206;&#x306F;&#x4E0D;&#x660E;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3002;&#x975E;&#x690D;&#x7269;&#x7CFB;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x30AA;&#x30AD;&#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30ED;&#x30FC;&#x30EB;&#x7D50;&#x5408;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306F;&#x3001;&#x30B9;&#x30C6;&#x30ED;&#x30FC;&#x30EB;&#x306E;&#x4EBA;&#x8EAB;&#x58F2;&#x8CB7;&#x3068;&#x6052;&#x5E38;&#x6027;&#x306B;&#x95A2;&#x308F;&#x3063;&#x3066;&#x304D;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x305D;&#x3053;&#x306B;&#x30B7;&#x30ED;&#x30A4;&#x30CC;&#x30CA;&#x30BA;&#x30CA;&#x30B2;&#x30CE;&#x30E0;&#x4E2D;&#x306E;&#x30AA;&#x30AD;&#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30ED;&#x30FC;&#x30EB;&#x7D50;&#x5408;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x306E;&#x5C11;&#x306A;&#x304F;&#x3068;&#x3082;12&#x30DB;&#x30E2;&#x30ED;&#x30B0;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x304C;&#x3001;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x751F;&#x7269;&#x5B66;&#x306F;&#x3042;&#x3044;&#x307E;&#x3044;&#x306A;&#x5927;&#x90E8;&#x5206;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x6B8B;&#x3057;&#x3066;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306E;&#x5BFE;&#x8C61;&#x8981;&#x4EF6;&#x306E;&#x5206;&#x6790;&#x3068;&#x5C0F;&#x3055;&#x306A;&#x30B7;&#x30ED;&#x30A4;&#x30CC;&#x30CA;&#x30BA;&#x30CA;&#x30AA;&#x30AD;&#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30ED;&#x30FC;&#x30EB;&#x7D50;&#x5408;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x3001;ORP3a&#x306E;&#x30B9;&#x30C6;&#x30ED;&#x30FC;&#x30EB;&#x7D50;&#x5408;&#x7279;&#x6027;&#x3092;&#x5831;&#x544A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;ORP3a&#x306F;&#x30B7;&#x30C8;&#x30B9;&#x30C6;&#x30ED;&#x30FC;&#x30EB;&#x306E;&#x7D50;&#x5408;&#x7279;&#x6027;&#x3092;&#x6709;&#x3059;&#x308B;&#x5584;&#x610F;&#x306E;&#x30B9;&#x30C6;&#x30ED;&#x30FC;&#x30EB;&#x7D50;&#x5408;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x5224;&#x660E;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x30E9;&#x30A4;&#x30D6;&#x30BB;&#x30EB;&#x30A4;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B8;&#x30F3;&#x30B0;&#x89E3;&#x6790;&#x306F;ORP3a&#x306F;ER&#x306B;&#x5C40;&#x5728;&#x3057;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x5C0F;&#x5668;&#x5B98;&#x3078;&#x306E;&#x7D50;&#x5408;&#x304C;PVA12&#x3001;&#x690D;&#x7269;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x306E;&#x5927;&#x90E8;&#x5206;&#x306F;&#x672A;&#x77E5;VAP33&#x5BB6;&#x65CF;&#x306E;&#x30E1;&#x30F3;&#x30D0;&#x30FC;&#x3068;&#x306E;&#x76F4;&#x63A5;&#x7684;&#x306A;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x306B;&#x4F9D;&#x5B58;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x5206;&#x5B50;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;&#x89E3;&#x6790;&#x3068;&#x90E8;&#x4F4D;&#x7279;&#x7570;&#x7684;&#x7A81;&#x7136;&#x5909;&#x7570;&#x8A98;&#x767A;&#x306F;&#x3001;PVA12-ORP3a&#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x8CAC;&#x4EFB;&#x304C;&#x3042;&#x308B;&#x65B0;&#x898F;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x306E;&#x540C;&#x5B9A;&#x306B;&#x3064;&#x306A;&#x304C;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x306E;&#x6574;&#x5408;&#x6027;&#x306E;&#x7834;&#x58CA;&#x306F;&#x3001;ER&#x3068;&#x30B4;&#x30EB;&#x30B8;&#x4F53;&#x9593;&#x306E;ORP3a 5&#x6708;&#x306E;&#x30B5;&#x30A4;&#x30AF;&#x30EB;&#x3092;&#x793A;&#x5506;&#x3057;&#x3001;&#x30B4;&#x30EB;&#x30B8;&#x88C5;&#x7F6E;&#x306B;ORP3a&#x306E;&#x518D;&#x5206;&#x914D;&#x3092;&#x5F15;&#x304D;&#x8D77;&#x3053;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x306F;&#x3001;&#x690D;&#x7269;&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x30B9;&#x30C6;&#x30ED;&#x30FC;&#x30EB;&#x7D50;&#x5408;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x751F;&#x7269;&#x5B66;&#x306B;&#x65B0;&#x305F;&#x306A;&#x6D1E;&#x5BDF;&#x3092;&#x8868;&#x3057;&#x3001;&#x30AA;&#x30AD;&#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30ED;&#x30FC;&#x30EB;&#x7D50;&#x5408;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x3068;&#x521D;&#x671F;&#x306E;&#x690D;&#x7269;&#x306E;&#x5206;&#x6CCC;&#x7D4C;&#x8DEF;&#x306E;&#x690D;&#x7269;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x306E;VAP33&#x5BB6;&#x65CF;&#x306E;&#x30E1;&#x30F3;&#x30D0;&#x30FC;&#x9593;&#x306E;&#x672A;&#x77E5;&#x306E;&#x95A2;&#x4FC2;&#x3092;&#x89E3;&#x660E;&#x3059;&#x308B;&#x3002;

&#x5C0F;&#x80DE;&#x4F53;&#x306B;&#x30AA;&#x30AD;&#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30ED;&#x30FC;&#x30EB;&#x7D50;&#x5408;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;ORP3a&#x306E;&#x30BF;&#x30FC;&#x30B2;&#x30C6;&#x30A3;&#x30F3;&#x30B0;&#x306F;&#x3001;&#x30D7;&#x30E9;&#x30F3;&#x30C8;VAP33&#x30DB;&#x30E2;&#x30ED;&#x30B0;PVA12&#x306B;&#x4F9D;&#x5B58;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;

&#xC2DD;&#xBB3C;, sterols &#xC2A4;&#xD14C;&#xB85C;&#xC774;&#xB4DC; &#xD638;&#xB974;&#xBAAC;&#xC758; &#xC0DD; &#xD569;&#xC131;&#xC5D0;&#xC11C; &#xB9C9; &#xC131;&#xBD84;&#xC73C;&#xB85C; &#xC11C; &#xADFC;&#xBCF8;&#xC801;&#xC778; &#xC5ED;&#xD560; &#xBC0F; &#xC138;&#xD3EC; &#xBCBD; &#xC99D; &#xCC29;&#xC744; &#xC704;&#xD55C; &#xC120;&#xAD6C;&#xC790; &#xC5ED;&#xD560;. &#xC2A4; &#xD14C; &#xB864; endoplasmic &#xADF8;&#xBB3C; (&#xC751;&#xAE09;&#xC2E4;)&#xC5D0;&#xC11C; &#xD569;&#xC131; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xC8FC;&#xB85C; &#xD50C;&#xB77C;&#xC988;&#xB9C8; &#xBA64;&#xBE0C;&#xB808;&#xC778;&#xC5D0; &#xB204;&#xC801; &#xB420;. &#xC2A4; &#xD14C; &#xB864;&#xC740; &#xC2DD;&#xBB3C; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC778;&#xC2E0; &#xB9E4;&#xB9E4;&#xB294; &#xC5B4;&#xB5BB;&#xAC8C; &#xD558;&#xB294; &#xAC83;&#xC740; &#xD06C;&#xAC8C; &#xC54C;&#xB824;&#xC838;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xBE44; &#xACF5;&#xC7A5; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C;, oxysterol &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xD56D;&#xC0C1;&#xC131; sterol &#xC778;&#xC2E0; &#xB9E4;&#xB9E4;&#xC5D0; &#xCC38;&#xC5EC; &#xD558;&#xACE0;&#xC788;&#xB2E4;. Arabidopsis &#xAC8C;&#xB188;&#xC5D0; &#xC788;&#xB294; oxysterol &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xC801;&#xC5B4;&#xB3C4; 12 &#xAC1C;&#xC758; homologs &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xC0DD;&#xBB3C;&#xD559;&#xC758; &#xAC00;&#xC7A5; &#xBD80;&#xBD84;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC560;&#xB9E4; &#xD55C; &#xB0A8;&#xC544; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC5EC;&#xAE30;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xB300;&#xC0C1; &#xC694;&#xAD6C; &#xC0AC;&#xD56D; &#xBD84;&#xC11D; &#xBC0F; &#xC791;&#xC740; Arabidopsis oxysterol &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;, orp3a&#xC758; &#xB9B0; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xC18D;&#xC131;&#xC744; &#xBCF4;&#xACE0;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC; ORP3a sitosterol &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xD2B9;&#xC131;&#xC744; &#xAC00;&#xC9C4; &#xD0C0;&#xACE0; &#xB09C; &#xB9B0; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC740; &#xACB0;&#xC815;. &#xB77C;&#xC774;&#xBE0C; &#xC140; &#xC774;&#xBBF8;&#xC9D5; &#xBD84;&#xC11D; &#xBC1D;&#xD600; orp3a&#xB294; &#xC751;&#xAE09;&#xC2E4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC9C0;&#xC5ED;&#xD654; &#xD558; &#xACE0; &#xD574;&#xB2F9; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xC744;&#xC774; &#xD2B8;&#xB294;&#xC5D0; &#xC9C1;&#xC811;&#xC801;&#xC778; &#xC0C1;&#xD638; PVA12, &#xC2DD;&#xBB3C; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xD06C;&#xAC8C; &#xC0C8;&#xB86D;&#xAC70;&#xB098; VAP33 &#xC81C;&#xD488;&#xAD70;&#xC758; &#xAD6C;&#xC131;&#xC6D0;&#xC5D0; &#xB530;&#xB77C; &#xB2EC;&#xB77C; &#xC9D1;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xBD84;&#xC790; &#xBAA8;&#xB378;&#xB9C1; &#xBD84;&#xC11D; &#xBC0F; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8; &#xC9C0;&#xC2DC; &#xB41C; mutagenesis PVA12 ORP3a &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC744; &#xB2F4;&#xB2F9; &#xD558;&#xB294; &#xC18C;&#xC124; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778;&#xC758; id&#xB97C; &#xC774;&#xB04C;&#xC5B4; &#xB0C8;&#xB2E4;. &#xC774; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778;&#xC758; &#xBB34;&#xACB0;&#xC131;&#xC758; &#xC7A5;&#xC560; &#xBC1C;&#xC0DD; ORP3a ER&#xC640; Golgi&#xB294; &#xC21C;&#xD658; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xC81C;&#xC548; Golgi &#xAE30;&#xAD6C;&#xB97C; orp3a&#xC758; &#xC7AC;&#xBC30;&#xD3EC;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xACB0;&#xACFC; &#xC2DD;&#xBB3C; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0; &#xB9B0; &#xBB36;&#xB294; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xC0DD;&#xBB3C;&#xD559;&#xC5D0; &#xC0C8;&#xB85C;&#xC6B4; &#xD1B5;&#xCC30;&#xB825;&#xC744; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0C5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xD558; &#xACE0; oxysterol &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xAD6C;&#xC131;&#xC6D0; &#xBC0F; &#xCD08;&#xAE30; &#xACF5;&#xC7A5; &#xBD84; &#xD1B5;&#xB85C;&#xC5D0; &#xC2DD;&#xBB3C; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; VAP33 &#xAC00;&#xC871; &#xAC04;&#xC758; &#xC9C0;&#xAE08;&#xAE4C;&#xC9C0; &#xC54C; &#xC218; &#xC5C6;&#xB294; &#xAD00;&#xACC4;&#xB97C; &#xBA85;&#xB8CC; &#xD558; &#xAC8C;.

Endoplasmic &#xADF8;&#xBB3C;&#xC744; oxysterol &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; ORP3a &#xB300;&#xC0C1;&#xC73C;&#xB85C; &#xACF5;&#xC7A5; VAP33 &#xCCB4; PVA12 &#xC758;&#xC874; &#xD558;&#xACE0;&#xC788;&#xB2E4;.

En las plantas, esteroles desempe&#xF1;ar papeles fundamentales como constituyentes de la membrana en la bios&#xED;ntesis de hormonas esteroides, y act&#xFA;an como precursores para la deposici&#xF3;n de la pared celular. Los esteroles se sintetizan en el ret&#xED;culo endopl&#xE1;smico (RE), pero principalmente se acumulan en la membrana plasm&#xE1;tica. &#xBF;C&#xF3;mo esteroles son v&#xED;ctimas del tr&#xE1;fico en las c&#xE9;lulas vegetales es en gran parte desconocido. En los sistemas no son de plantas, oxysterol prote&#xED;nas de uni&#xF3;n se han involucrado en el tr&#xE1;fico de esteroles y la homeostasis. Hay por lo menos doce hom&#xF3;logos de oxysterol de uni&#xF3;n a prote&#xED;nas en el genoma de Arabidopsis, pero la biolog&#xED;a de estas prote&#xED;nas se mantiene en su mayor parte oscura. Aqu&#xED;, se presenta el an&#xE1;lisis de las necesidades de orientaci&#xF3;n y las propiedades de uni&#xF3;n con esteroles de un peque&#xF1;o Arabidopsis oxysterol la prote&#xED;na de uni&#xF3;n, ORP3a. Hemos determinado que ORP3a es un aut&#xE9;ntico esterol-prote&#xED;na de uni&#xF3;n con el sitosterol-vinculante propiedades. Vivo de c&#xE9;lulas an&#xE1;lisis de imagen revel&#xF3; que ORP3a se localiza en el RE, y que la uni&#xF3;n a este org&#xE1;nulo depende de una interacci&#xF3;n directa con PVA12, un miembro de la gran uncharacterized VAP33 familia de prote&#xED;nas vegetales. Los an&#xE1;lisis de modelado molecular y mutag&#xE9;nesis dirigida al sitio condujo a la identificaci&#xF3;n de un dominio nueva prote&#xED;na que es responsable de la interacci&#xF3;n PVA12-ORP3a. La alteraci&#xF3;n de la integridad de este dominio provoc&#xF3; la redistribuci&#xF3;n de la ORP3a al aparato de Golgi, lo que sugiere que ORP3a ciclo de mayo entre el RE y el aparato de Golgi. Estos resultados representan nuevos conocimientos sobre la biolog&#xED;a de la uni&#xF3;n con esteroles prote&#xED;nas en las c&#xE9;lulas vegetales, y dilucidar una relaci&#xF3;n hasta ahora desconocida entre los miembros de oxysterol la prote&#xED;na de uni&#xF3;n y VAP33 familias de prote&#xED;nas vegetales en la v&#xED;a de la planta secretora temprana.

La focalizaci&#xF3;n de la prote&#xED;na ORP3a Oxysterol vinculante en el ret&#xED;culo endoplasm&#xE1;tico Se basa en la Planta de VAP33 Hom&#xF3;logo PVA12

&#xD3C9;&#xD615; &#xBC0F; &#xAE09;&#xACA9; &#xD55C; &#xC6B4;&#xB3D9; &#xC2E4;&#xD5D8;&#xC758; &#xC77C;&#xB828;&#xC758; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; L B1 &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778;&#xC758; &#xC811;&#xB294; &#xACBD;&#xB85C; &#xD30C;&#xC545; &#xD558; &#xC5EC; &#xC6B0;&#xB9AC; 2 &#xC0C1;&#xD0DC; &#xC811;&#xD788;&#xB294; &#xBAA8;&#xB378;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC81C;&#xC548; &#xB41C; &#xAC83; &#xBCF4;&#xB2E4; &#xB354; &#xBCF5;&#xC7A1; &#xD55C; &#xC218; &#xD3BC;&#xCE5C;&#xB41C; &#xC0C1;&#xD0DC;&#xB85C; &#xBC1C;&#xACAC; &#xD588;&#xB2E4;. Ultrarapid &#xBBF9;&#xC11C;&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xC57D; 2-4 &#xB9C8;&#xC774;&#xD06C;&#xB85C;&#xCD08; &#xC774;&#xB0B4; &#xC811;&#xB294; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC744; &#xC2DC;&#xC791;, &#xC6B0;&#xB9AC; &#xB0B4;&#xC7A5; &#xD2B8;&#xB9BD;&#xD1A0;&#xD310; &#xD615;&#xAD11; &#xBC0F; &#xD615;&#xAD11; &#xACF5;&#xBA85; &#xC5D0;&#xB108;&#xC9C0; &#xC804;&#xB2EC;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC811;&#xD788;&#xB294; &#xC18D;&#xB3C4; &#xB860;&#xC744; &#xAD00;&#xCC30; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB450; &#xAC1C; &#xC774;&#xC0C1;&#xC758; &#xD504;&#xB85C;&#xC138;&#xC2A4; &#xC911;&#xC9C0; &#xD750;&#xB984; &#xC545;&#xAE30; &#xD2B8;&#xB9BD;&#xD1A0;&#xD310; &#xD615;&#xAD11; &#xCE21;&#xC815;&#xC758; &#xBC84;&#xC2A4;&#xD2B8; &#xB2E8;&#xACC4; &#xC228;&#xACA8;&#xC838; &#xC788;&#xC744; &#xAC83; &#xC774;&#xB77C;&#xACE0; 100 &#xBA38; &#xC2A4; &#xBCF4;&#xB2E4; &#xB354; &#xBE68;&#xB9AC; &#xAC10;&#xC9C0;. &#xC774;&#xC804;&#xC5D0; &#xB290;&#xB9B0; intramolecular &#xBCF4;&#xAE09;&#xC758; &#xBCF4;&#xACE0; &#xB41C; &#xCE21;&#xC815;&#xC740; &#xB450; &#xAC1C;&#xC758; &#xAD00;&#xCC30; &#xBE60;&#xB978; &#xB2E8;&#xACC4; &#xB290;&#xB9B0; &#xC54C;&#xB9DE;&#xC740;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xACB0;&#xACFC; &#xB2E4;&#xCC28;&#xC6D0; &#xC5D0;&#xB108;&#xC9C0; &#xD48D;&#xACBD; L, &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xD3F4;&#xB529;&#xC5D0; &#xB300;&#xD574; &#xC124;&#xBA85; &#xD558;&#xB294; &#xB370; &#xD544;&#xC694;&#xD55C; &#xD558; &#xACE0; &#xD3BC;&#xCE5C;&#xB41C; &#xC0C1;&#xD0DC; &#xC5ED;&#xD559; &#xC5EC;&#xB7EC; &#xC791;&#xC740; &#xC5D0;&#xB108;&#xC9C0; &#xC7A5;&#xBCBD;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC9C0;&#xBC30; &#xB41C;&#xB2E4;&#xB294; &#xAC83;&#xC774; &#xC88B;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; L. &#xC811;&#xB294; &#xD48D;&#xACBD;&#xC744; &#xACAC;&#xACE0;

Al explorar las v&#xED;as de plegado del dominio B1 de la prote&#xED;na L con una serie de equilibrio y r&#xE1;pidos experimentos cin&#xE9;ticos, se ha encontrado su estado desplegado a ser m&#xE1;s compleja que la sugerida por dos modelos de estado plegado. Con una batidora ultrarr&#xE1;pido para iniciar el plegamiento de prote&#xED;nas dentro de aproximadamente 2.4 microsegundos, se observa cin&#xE9;tica de plegamiento por fluorescencia intr&#xED;nseca del tript&#xF3;fano y la transferencia de energ&#xED;a de resonancia de fluorescencia. Se detecta al menos dos procesos m&#xE1;s r&#xE1;pidos de 100 m&#xFA;sculos que se oculta dentro de la fase de explosi&#xF3;n de un instrumento de medici&#xF3;n de flujo detenido tript&#xF3;fano fluorescencia. Las mediciones se ha informado de la difusi&#xF3;n intramolecular lenta son acordes con la m&#xE1;s lenta de las dos fases r&#xE1;pidas observadas. Estos resultados sugieren que un paisaje energ&#xED;a multidimensional es necesario describir el plegamiento de la prote&#xED;na L, y que la din&#xE1;mica del estado desplegado est&#xE1; dominado por m&#xFA;ltiples barreras de energ&#xED;a peque&#xF1;as.

Robustez en el paisaje plegable de la prote&#xED;na L

&#x901A;&#x8FC7;&#x63A2;&#x7D22;&#x4E0E;&#x4E00;&#x7CFB;&#x5217;&#x7684;&#x5E73;&#x8861;&#x548C;&#x5FEB;&#x901F;&#x7684;&#x52A8;&#x529B;&#x5B66;&#x5B9E;&#x9A8C;&#x7684;&#x86CB;&#x767D; L B1 &#x57DF;&#x7684;&#x6298;&#x53E0;&#x9014;&#x5F84;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x53D1;&#x73B0;&#x5176;&#x5C55;&#x5F00;&#x7684;&#x72B6;&#x6001;&#x8981;&#x6BD4;&#x5EFA;&#x8BAE;&#x4E24;&#x56FD;&#x6298;&#x53E0;&#x6A21;&#x578B;&#x7684;&#x590D;&#x6742;&#x7684;&#x591A;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x4F7F;&#x7528;&#x8D85;&#x901F;&#x7684;&#x6DF7;&#x97F3;&#x5668;&#x6765;&#x542F;&#x52A8;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x6298;&#x53E0;&#x5927;&#x7EA6; 2-4 &#x5FAE;&#x79D2;&#xFF0C;&#x89C2;&#x5BDF;&#x5185;&#x5728;&#x8272;&#x6C28;&#x9178;&#x8367;&#x5149;&#x53CA;&#x8367;&#x5149;&#x5171;&#x632F;&#x80FD;&#x91CF;&#x8F6C;&#x79FB;&#x7684;&#x6298;&#x53E0;&#x52A8;&#x529B;&#x5B66;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x53D1;&#x73B0;&#x81F3;&#x5C11;&#x4E24;&#x4E2A;&#x8FDB;&#x7A0B;&#x5FEB;&#x505C;&#x6D41;&#x4EEA;&#x8272;&#x6C28;&#x9178;&#x8367;&#x5149;&#x7684;&#x7206;&#x53D1;&#x9636;&#x6BB5;&#x5185;&#x5C06;&#x5904;&#x4E8E;&#x9690;&#x85CF;&#x72B6;&#x6001;&#x7684; 100 &#x4EA9;&#x3002;&#x4EE5;&#x524D;&#x62A5;&#x544A;&#x7684;&#x6D4B;&#x91CF;&#x7F13;&#x6162;&#x5206;&#x5B50;&#x5185;&#x6269;&#x6563;&#x7684;&#x662F;&#x4E0E;&#x8F83;&#x6162;&#x7684;&#x4E24;&#x4E2A;&#x89C2;&#x5BDF;&#x5230;&#x7684;&#x5FEB;&#x901F;&#x9636;&#x6BB5;&#x76F8;&#x9002;&#x5E94;&#x7684;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7ED3;&#x679C;&#x8868;&#x660E;&#x591A;&#x5C42;&#x9762;&#x7684;&#x80FD;&#x6E90;&#x683C;&#x5C40;&#x4E5F;&#x6CA1;&#x6709;&#x5FC5;&#x8981;&#x6765;&#x63CF;&#x8FF0; L&#xFF0C;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x6298;&#x53E0;&#x7684;&#x548C;&#x5C55;&#x5F00;&#x72B6;&#x6001;&#x7684;&#x52A8;&#x6001;&#x7531;&#x591A;&#x4E2A;&#x5C0F;&#x578B;&#x80FD;&#x91CF;&#x58C1;&#x5792;&#x3002;

L.&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x7684;&#x6298;&#x53E0;&#x5F0F;&#x666F;&#x89C2;&#x7684;&#x575A;&#x56FA;&#x6027;

By exploring the folding pathways of the B1 domain of protein L with a series of equilibrium and rapid kinetic experiments, we have found its unfolded state to be more complex than suggested by two-state folding models. Using an ultrarapid mixer to initiate protein folding within approximately 2-4 microseconds, we observe folding kinetics by intrinsic tryptophan fluorescence and fluorescence resonance energy transfer. We detect at least two processes faster than 100 mus that would be hidden within the burst phase of a stopped-flow instrument measuring tryptophan fluorescence. Previously reported measurements of slow intramolecular diffusion are commensurate with the slower of the two observed fast phases. These results suggest that a multidimensional energy landscape is necessary to describe the folding of protein L, and that the dynamics of the unfolded state is dominated by multiple small energy barriers.

Ruggedness in the folding landscape of protein L.

En explorant les voies de pliage du domaine B1 de la prot&#xE9;ine L avec une s&#xE9;rie d&#x26;#39;&#xE9;quilibre et rapides exp&#xE9;riences de cin&#xE9;tique, nous avons trouv&#xE9; son &#xE9;tat d&#xE9;pli&#xE9; pour &#xEA;tre plus complexe que celle sugg&#xE9;r&#xE9;e par deux &#xE9;tats mod&#xE8;les pliants. L&#x26;#39;utilisation d&#x26;#39;un m&#xE9;langeur ultra-rapide pour lancer le repliement des prot&#xE9;ines dans environ 2-4 microsecondes, nous observons cin&#xE9;tique de repliement par intrins&#xE8;que fluorescence du tryptophane et de Fluorescence Resonance Energy Transfer. On d&#xE9;tecter au moins deux proc&#xE9;d&#xE9;s plus rapide que 100 mus qui serait masqu&#xE9;e dans la phase de la salve d&#x26;#39;un instrument de mesure de d&#xE9;bit arr&#xEA;t&#xE9;-tryptophane de fluorescence. Mesures pr&#xE9;c&#xE9;demment rapport&#xE9;s de diffusion intramol&#xE9;culaire lente sont en rapport avec le plus lent des deux phases observ&#xE9;es rapides. Ces r&#xE9;sultats sugg&#xE8;rent que le paysage de l&#x26;#39;&#xE9;nergie multidimensionnelle est n&#xE9;cessaire pour d&#xE9;crire le repliement de la prot&#xE9;ine L, et que la dynamique de l&#x26;#39;&#xE9;tat non pli&#xE9; est domin&#xE9;e par de multiples barri&#xE8;res d&#x26;#39;&#xE9;nergie de petite taille.

Robustesse dans le paysage de la prot&#xE9;ine L pliante

Erkunden Sie die Falten Bahnen der B1-Dom&auml;ne des Protein L mit einer Reihe von Gleichgewicht und schnelle kinetische Experimente, fanden wir seine ungefaltet komplexer, als von zwei-Staaten-Klapp-Modelle vorgeschlagen werden. Mit einen Verbl Mixer um Proteinfaltung innerhalb von ca. 2-4 Mikrosekunden zu initiieren, beobachten wir Falten Kinetik durch systeminterne Tryptophan Fluoreszenz und Fluoreszenz-Resonanz-Energie-Transfer. Wir erkennen mindestens zwei Prozesse schneller als 100 Mus, die innerhalb der Burst-Phase eines gestoppt-Flow Instruments Messung der Fluoreszenz von Tryptophan ausgeblendet werden w&uuml;rde. Zuvor sind die gemeldete Messungen langsam intramolekulare Diffusion entsprechend die langsamere der beiden beobachteten schnellen Phasen. Diese Ergebnisse legen nahe, dass eine mehrdimensionale Energielandschaft zu beschreiben, die Faltung des Proteins L notwendig ist und die Dynamik der die ungefaltet durch mehrere kleine Energie-Barrieren dominiert wird.

Robustheit in der Faltung Landschaft des Proteins L.

Esplorando le vie piegantesi del dominio B1 della proteina L con una serie di esperimenti di cinetici rapidi ed equilibrio, abbiamo trovato suo stato spiegato essere pi&ugrave; complessa di quanto suggerito da due stati modelli pieghevoli. Utilizzando un mixer ultrarapido per avviare proteine pieghevole all&#39;interno di circa 2-4 microsecondi, osserviamo pieghevole cinetica di fluorescenza del triptofano intrinseca e il trasferimento di energia di risonanza di fluorescenza. Rileviamo almeno due processi pi&ugrave; veloce di 100 mus che sarebbe nascosto all&#39;interno della fase di scoppio di un flusso interrotto strumento misura la fluorescenza del triptofano. Precedentemente segnalate misurazioni della lenta diffusione intramolecolari sono commisurate con la pi&ugrave; lenta delle due fasi veloci osservate. Questi risultati suggeriscono che un paesaggio di energia multidimensionale &egrave; necessario descrivere la piegatura della proteina L, e che la dinamica dello stato spiegato &egrave; dominata da barriere multiple di piccola energia.

Robustezza nel paesaggio piegante della proteina L.

&#x5747;&#x8861;&#x3068;&#x8FC5;&#x901F;&#x306A;&#x904B;&#x52D5;&#x4E00;&#x9023;&#x306E;&#x5B9F;&#x9A13;&#x306E;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;L&#x306E;B1&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x306E;&#x6298;&#x308A;&#x305F;&#x305F;&#x307F;&#x7D4C;&#x8DEF;&#x3092;&#x63A2;&#x7D22;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x305D;&#x306E;&#x5C55;&#x958B;&#x72B6;&#x614B;&#x306F;&#x3001;2&#x3064;&#x306E;&#x72B6;&#x614B;&#x306E;&#x6298;&#x308A;&#x305F;&#x305F;&#x307F;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x63D0;&#x6848;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3088;&#x308A;&#x8907;&#x96D1;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x5224;&#x660E;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x7D04;2&#x301C;4&#x30DE;&#x30A4;&#x30AF;&#x30ED;&#x79D2;&#x4EE5;&#x5185;&#x306B;&#x3001;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x30D5;&#x30A9;&#x30FC;&#x30EB;&#x30C7;&#x30A3;&#x30F3;&#x30B0;&#x3092;&#x958B;&#x59CB;&#x3059;&#x308B;&#x8D85;&#x9AD8;&#x901F;&#x30DF;&#x30AD;&#x30B5;&#x30FC;&#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x3066;&#x3001;&#x5185;&#x56E0;&#x6027;&#x30C8;&#x30EA;&#x30D7;&#x30C8;&#x30D5;&#x30A1;&#x30F3;&#x86CD;&#x5149;&#x3068;&#x86CD;&#x5149;&#x5171;&#x9CF4;&#x30A8;&#x30CD;&#x30EB;&#x30AE;&#x30FC;&#x79FB;&#x52D5;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x6298;&#x308A;&#x305F;&#x305F;&#x307F;&#x52D5;&#x614B;&#x3092;&#x89B3;&#x5BDF;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;&#x5C11;&#x306A;&#x304F;&#x3068;&#x3082;2&#x3064;&#x306E;&#x30D7;&#x30ED;&#x30BB;&#x30B9;&#x306E;&#x30C8;&#x30EA;&#x30D7;&#x30C8;&#x30D5;&#x30A1;&#x30F3;&#x86CD;&#x5149;&#x3092;&#x6E2C;&#x5B9A;&#x3059;&#x308B;&#x30B9;&#x30C8;&#x30C3;&#x30D7;&#x30C8;&#x30D5;&#x30ED;&#x30FC;&#x88C5;&#x7F6E;&#x306E;&#x30D0;&#x30FC;&#x30B9;&#x30C8;&#x4F4D;&#x76F8;&#x306E;&#x4E2D;&#x306B;&#x96A0;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x3088;&#x308A;&#x3082;&#x901F;&#x304F;100 MU&#x3092;&#x691C;&#x51FA;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x9045;&#x3044;&#x5206;&#x5B50;&#x62E1;&#x6563;&#x306E;&#x4EE5;&#x524D;&#x306B;&#x5831;&#x544A;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x6E2C;&#x5B9A;&#x7D50;&#x679C;&#x306F;&#x3001;2&#x3064;&#x306E;&#x89B3;&#x6E2C;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x9AD8;&#x901F;&#x306E;&#x30D5;&#x30A7;&#x30FC;&#x30BA;&#x306E;&#x3044;&#x305A;&#x308C;&#x304B;&#x9045;&#x3044;&#x65B9;&#x306B;&#x898B;&#x5408;&#x3063;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x306F;&#x3001;&#x591A;&#x6B21;&#x5143;&#x30A8;&#x30CD;&#x30EB;&#x30AE;&#x30FC;&#x5730;&#x5F62;&#x306F;&#x3001;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;L&#x306E;&#x6298;&#x308A;&#x305F;&#x305F;&#x307F;&#x3092;&#x8A18;&#x8FF0;&#x3059;&#x308B;&#x5FC5;&#x8981;&#x304C;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x5506;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3001;&#x3068;&#x5C55;&#x958B;&#x72B6;&#x614B;&#x306E;&#x30C0;&#x30A4;&#x30CA;&#x30DF;&#x30AF;&#x30B9;&#x306F;&#x3001;&#x8907;&#x6570;&#x306E;&#x5C0F;&#x3055;&#x306A;&#x30A8;&#x30CD;&#x30EB;&#x30AE;&#x30FC;&#x969C;&#x58C1;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x652F;&#x914D;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;

&#x30D7;&#x30ED;&#x30C6;&#x30A4;&#x30F3;L&#x306E;&#x6298;&#x308A;&#x305F;&#x305F;&#x307F;&#x98A8;&#x666F;&#x306E;&#x8010;&#x4E45;&#x6027;

&#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; lambda(6-85) &#xB098;&#xB178;&#xCD08; T &#xC810;&#xD504; &#xD6C4; &#xC6B4;&#xB3D9; &#xD734;&#xC2DD;&#xC758; &#xAD00;&#xCC30;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; barrierless &#xD3F4;&#xB529;&#xC5D0; &#xC5F0;&#xB8E8; &#xB418;&#xC5B4;&#xC788;&#xB2E4;. &#xC774; &#xC791;&#xD488;&#xC5D0;&#xC11C;&#xB294; &#xB192;&#xC740; &#xD76C;&#xC11D; &#xD6C4;&#xC774; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xD3F4;&#xB529; &#xAD00;&#xCC30; &#xD588;&#xB2E4; &#xC5F4; &#xC911;&#xAC04;&#xC810; &#xD6E8;&#xC52C; &#xC544;&#xB798; &#xC628;&#xB3C4;&#xC5D0;&#xC11C; ultrarapid &#xBBF8;&#xC138; &#xBBF9;&#xC11C;&#xC5D0; denaturant. &#xC804;&#xCCB4; &#xC870;&#xB3C4;&#xC758; &#xAD00;&#xCC30;&#xACFC; &#xD2B8;&#xB9BD;&#xD1A0;&#xD310; &#xD615;&#xAD11;&#xC758; &#xC2A4;&#xD399;&#xD2B8;&#xB7FC; &#xBCC0;&#xD654; &#xBA85;&#xBC31; &#xD558; &#xAC8C; &#xB2E4;&#xB978; &#xC18D;&#xB3C4; &#xB860; &#xBC0F; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xC5D0;&#xB108;&#xC9C0;&#xB97C; &#xC5BB;&#xC9C0; &#xBABB;&#xD588;&#xB2E4;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xACB0;&#xACFC; &#xB2E4;&#xB978; &#xD504;&#xB85C;&#xBE0C; &#xBC18;&#xC751; &#xC88C;&#xD45C;&#xB97C; &#xB530;&#xB77C; &#xB2E4;&#xB978; &#xAC10;&#xB3C4; &#xB370; &#xB0AE;&#xC740; &#xC7A5;&#xBCBD;, 1 &#xCC28;&#xC6D0;, &#xC790;&#xC720; &#xC5D0;&#xB108;&#xC9C0; &#xD45C;&#xBA74;&#xC5D0; &#xD655;&#xC0B0;&#xC73C;&#xB85C; &#xC124;&#xBA85; &#xB420; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB610;&#xD55C;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; T-&#xC810;&#xD504; &#xD558; &#xC5EC; &#xAD00;&#xCC30; &#xD558;&#xC9C0;&#xB294; &#xD63C;&#xD569; &#xC2DC;&#xAC04; &#xB0B4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xB9E4;&#xC6B0; &#xBE60;&#xB978; &#xB2E8;&#xACC4; &#xAD00;&#xCC30; &#xD3BC;&#xCE5C; &#xC0C1;&#xD0DC;&#xC758; &#xC559;&#xC0C1;&#xBE14; &#xB192;&#xC740; &#xCC44;&#xC6CC;&#xC9C4; &#xC81C;&#xC548; denaturant&#xC740; &#xADF8; &#xC561;&#xC138;&#xC2A4;&#xD560; &#xC218; &#xB2E4;&#xB97C; &#xB192;&#xC740; &#xC628;&#xB3C4;&#xC5D0;&#xC11C;.

&#xBBF8;&#xC138; &#xBBF9;&#xC11C;&#xC5D0; &#xB78C;&#xB2E4;-&#xC9C4;&#xC555;&#xC758; &#xB0B4;&#xB9AC;&#xB9C9; &#xC811;&#xB294;&#xC758; &#xC9C1;&#xC811; &#xAD00;&#xCC30;.

&#x86CB;&#x767D;&#x8D28; lambda(6-85) &#x5377;&#x5165; barrierless &#x6298;&#x53E0;&#x7684;&#x52A8;&#x529B;&#x5B66;&#x677E;&#x5F1B;&#x7EB3;&#x79D2; T &#x8DF3;&#x8F6C;&#x540E;&#x7684;&#x610F;&#x89C1;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x9879;&#x5DE5;&#x4F5C;&#x4E2D;&#x6211;&#x4EEC;&#x89C2;&#x5BDF;&#x5230;&#x9AD8;&#x7A00;&#x91CA;&#x540E;&#x6298;&#x53E0;&#x7684;&#x8FD9;&#x79CD;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x53D8;&#x6027;&#x6E29;&#x5EA6;&#x8FDC;&#x4F4E;&#x4E8E;&#x70ED;&#x4E2D;&#x70B9;&#x8D85;&#x901F;&#x5FAE;&#x6D41;&#x63A7;&#x6DF7;&#x5408;&#x5668;&#x3002;&#x603B;&#x5F3A;&#x5EA6;&#x7684;&#x610F;&#x89C1;&#x548C;&#x8272;&#x6C28;&#x9178;&#x8367;&#x5149;&#x5149;&#x8C31;&#x8F6C;&#x79FB;&#x4EA7;&#x751F;&#x660E;&#x663E;&#x4E0D;&#x540C;&#x7684;&#x52A8;&#x529B;&#x5B66;&#x548C;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x80FD;&#x91CF;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7ED3;&#x679C;&#x53EF;&#x80FD;&#x88AB;&#x89E3;&#x91CA;&#x4E3A;&#x6269;&#x6563;&#x95E8;&#x69DB;&#x4F4E;&#x3001; &#x4E00;&#x7EF4;&#x3001; &#x91CA;&#x653E;&#x80FD;&#x91CF;&#x7684;&#x8868;&#x9762;&#x4E0A;&#x6709;&#x4E0D;&#x540C;&#x654F;&#x611F;&#x6027;&#x53CD;&#x5E94;&#x5750;&#x6807;&#x6CBF;&#x4E0D;&#x540C;&#x63A2;&#x9488;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x89C2;&#x5BDF;&#x5230;&#x6DF7;&#x5408; T-&#x8DF3;&#xFF0C;&#x6CA1;&#x6709;&#x89C2;&#x5BDF;&#x5230;&#x7684;&#x65F6;&#x95F4;&#x5185;&#x901F;&#x5EA6;&#x6781;&#x5FEB;&#x7684;&#x9636;&#x6BB5;&#x5EFA;&#x8BAE;&#x5C55;&#x5F00;&#x56FD;&#x5BB6;&#x4E50;&#x56E2;&#x586B;&#x5145;&#x9AD8;&#x53D8;&#x6027;&#x5242;&#x662F;&#x6709;&#x522B;&#x4E8E;&#x90A3;&#x4E9B;&#x53EF;&#x4EE5;&#x8BBF;&#x95EE;&#x5728;&#x9AD8;&#x6E29;&#x3002;

&#x4E0B;&#x5761;&#x6298;&#x53E0;&#x7684; lambda &#x963B;&#x904F;&#x7269;&#x7684;&#x5FAE;&#x6D41;&#x4F53;&#x6DF7;&#x5408;&#x5668;&#x7684;&#x76F4;&#x63A5;&#x89C2;&#x5BDF;&#x3002;

The protein lambda(6-85) has been implicated in barrierless folding by observations of kinetic relaxation after nanosecond T-jump. In this work we observed folding of this protein after dilution of a high denaturant in an ultrarapid microfluidic mixer at temperatures far below the thermal midpoint. The observations of total intensity and spectral shift of tryptophan fluorescence yielded distinctly different kinetics and activation energies. These results may be explained as diffusion on a low-barrier, one-dimensional, free-energy surface, with different probes having different sensitivities along the reaction coordinate. Additionally, we observed an extremely fast phase within the mixing time that was not observed by T-jump, suggesting that the ensemble of unfolded states populated at high denaturant is distinct from those accessible at high temperature.

Direct observation of downhill folding of lambda-repressor in a microfluidic mixer.

La prot&#xE9;ine (6-85) lambda a &#xE9;t&#xE9; impliqu&#xE9;e dans le repliement sans barri&#xE8;res par des observations de d&#xE9;tente cin&#xE9;tique apr&#xE8;s nanoseconde T-saut. Dans ce travail, nous avons observ&#xE9; de pliage de cette prot&#xE9;ine apr&#xE8;s dilution d&#x26;#39;un d&#xE9;naturant haute dans un m&#xE9;langeur microfluidique ultrarapide &#xE0; des temp&#xE9;ratures bien en dessous de la m&#xE9;diane thermique. Les observations de l&#x26;#39;intensit&#xE9; totale et d&#xE9;calage spectral de la fluorescence du tryptophane a abouti &#xE0; la cin&#xE9;tique nettement diff&#xE9;rentes et des &#xE9;nergies d&#x26;#39;activation. Ces r&#xE9;sultats peuvent &#xEA;tre expliqu&#xE9;s que la diffusion sur une barri&#xE8;re faible, &#xE0; une dimension, l&#x26;#39;&#xE9;nergie libre de surface, avec des sondes diff&#xE9;rentes ayant des sensibilit&#xE9;s diff&#xE9;rentes le long de la r&#xE9;action de coordonner. En outre, nous avons observ&#xE9; une phase extr&#xEA;mement rapide dans le temps de m&#xE9;lange qui n&#x26;#39;a pas &#xE9;t&#xE9; observ&#xE9;e par T-saut, ce qui sugg&#xE8;re que l&#x26;#39;ensemble des &#xE9;tats peupl&#xE9;s d&#xE9;pli&#xE9; &#xE0; haute d&#xE9;naturant est distinct de ceux qui sont accessibles &#xE0; haute temp&#xE9;rature.

Observation directe de la Descente de pliage de Lambda-r&#xE9;presseur dans un m&#xE9;langeur microfluidique

Die Protein-lambda(6-85) hat verwickelt in barrierenfrei faltbar durch Beobachtungen der kinetischen Entspannung nach Nanosekunden T-Sprung. In dieser Arbeit, die wir beobachteten, Faltung dieses Proteins nach Verd&uuml;nnung eines hohen Verg&auml;llungsmittel in einem Verbl Microfluidic-Mixer bei Temperaturen weit unter dem thermischen Mittelpunkt. Die Beobachtungen der gesamten Intensit&auml;t und spektrale Verschiebung des Tryptophan-Fluoreszenz ergab deutlich unterschiedliche Kinetik und Aktivierung Energie. Diese Ergebnisse k&ouml;nnen mit verschiedenen Sonden mit unterschiedliche Empfindlichkeiten entlang der Reaktion Koordinate als Verbreitung auf einer Oberfl&auml;che leichter, eindimensionale, freie Energie, erkl&auml;rt werden. Dar&uuml;ber hinaus beobachten wir eine extrem schnelle Phase innerhalb der Mischung, die nicht von T-Jump, beobachtet wurde darauf hindeutet, dass das Ensemble entfaltet Staaten hoch aufgef&uuml;llt Verg&auml;llungsmittel unterscheidet sich von jenen zug&auml;nglich bei hohen Temperaturen.

Direkte Beobachtung der Abfahrt Faltung der Lambda-Repressor in einem Microfluidic-Mischer.

Il lambda(6-85) della proteina &egrave; stato implicato in barrierless pieghevole da osservazioni di cinetica relax dopo nanosecondo T-salto. In questo lavoro abbiamo osservato pieghevole di questa proteina dopo diluizione di un&#39;alta denaturante in un miscelatore di microfluidica ultrarapido a temperature molto di sotto il punto centrale termica. Le osservazioni dell&#39;intensit&agrave; totale e spostamento spettrale di fluorescenza del triptofano ceduto nettamente diverse energie cinetica e attivazione. Questi risultati possono essere spiegati come diffusione su una superficie basso-barriera, unidimensionale, energia libera, con diverse sonde aventi diverse sensibilit&agrave; lungo la coordinata di reazione. Inoltre, abbiamo osservato una fase estremamente veloce entro il tempo di miscelazione non &egrave; stata osservata da T-salto, suggerendo che l&#39;ensemble degli stati svelati popolato in alto denaturante &egrave; distinta da quelli accessibili ad alta temperatura.

Osservazione diretta di piegatura in discesa di lambda-repressore in un mixer microfluidica.

&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x30E9;&#x30E0;&#x30C0;&#xFF08;6&#x304B;&#x3089;85&#xFF09;&#x306F;&#x3001;&#x30CA;&#x30CE;&#x79D2;T-&#x30B8;&#x30E3;&#x30F3;&#x30D7;&#x306E;&#x5F8C;&#x306E;&#x904B;&#x52D5;&#x7DE9;&#x548C;&#x306E;&#x89B3;&#x6E2C;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x200B;&#x200B;&#x3066;barrierless&#x6298;&#x308A;&#x7573;&#x307F;&#x306B;&#x95A2;&#x4E0E;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x7814;&#x7A76;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x306F;&#x308B;&#x304B;&#x306B;&#x71B1;&#x4E2D;&#x70B9;&#x4EE5;&#x4E0B;&#x306E;&#x6E29;&#x5EA6;&#x3067;&#x8D85;&#x9AD8;&#x901F;&#x30DE;&#x30A4;&#x30AF;&#x30ED;&#x30DF;&#x30AD;&#x30B5;&#x30FC;&#x306E;&#x9AD8;&#x5909;&#x6027;&#x5264;&#x306E;&#x5E0C;&#x91C8;&#x3057;&#x305F;&#x5F8C;&#x306B;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x6298;&#x308A;&#x305F;&#x305F;&#x307F;&#x3092;&#x89B3;&#x5BDF;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x5168;&#x5F37;&#x5EA6;&#x3068;&#x30C8;&#x30EA;&#x30D7;&#x30C8;&#x30D5;&#x30A1;&#x30F3;&#x86CD;&#x5149;&#x306E;&#x30B9;&#x30DA;&#x30AF;&#x30C8;&#x30EB;&#x30B7;&#x30D5;&#x30C8;&#x306E;&#x89B3;&#x6E2C;&#x304C;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x7570;&#x306A;&#x308B;&#x53CD;&#x5FDC;&#x901F;&#x5EA6;&#x3068;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x30A8;&#x30CD;&#x30EB;&#x30AE;&#x30FC;&#x304C;&#x5F97;&#x3089;&#x308C;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x306F;&#x3001;&#x53CD;&#x5FDC;&#x5EA7;&#x6A19;&#x306B;&#x6CBF;&#x3063;&#x3066;&#x7570;&#x306A;&#x308B;&#x611F;&#x5EA6;&#x3092;&#x6709;&#x3059;&#x308B;&#x7570;&#x306A;&#x308B;&#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30D6;&#x3067;&#x3001;&#x4F4E;&#x969C;&#x58C1;&#x3001;&#x4E00;&#x6B21;&#x5143;&#x3001;&#x81EA;&#x7531;&#x30A8;&#x30CD;&#x30EB;&#x30AE;&#x30FC;&#x9762;&#x4E0A;&#x306B;&#x62E1;&#x6563;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x8AAC;&#x660E;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306F;T-&#x30B8;&#x30E3;&#x30F3;&#x30D7;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x89B3;&#x5BDF;&#x3055;&#x308C;&#x306A;&#x304B;&#x3063;&#x305F;&#x6DF7;&#x5408;&#x6642;&#x9593;&#x5185;&#x3067;&#x975E;&#x5E38;&#x306B;&#x9AD8;&#x901F;&#x306A;&#x4F4D;&#x76F8;&#x3092;&#x89B3;&#x5BDF;&#x3057;&#x3001;&#x5C55;&#x958B;&#x72B6;&#x614B;&#x306E;&#x30A2;&#x30F3;&#x30B5;&#x30F3;&#x30D6;&#x30EB;&#x306F;&#x3001;&#x9AD8;&#x5909;&#x6027;&#x5264;&#x304C;&#x79FB;&#x5165;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x5506;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3068;&#x3001;&#x9AD8;&#x6E29;&#x3067;&#x306E;&#x30A2;&#x30AF;&#x30BB;&#x30B9;&#x53EF;&#x80FD;&#x306A;&#x3082;&#x306E;&#x3068;&#x306F;&#x7570;&#x306A;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x30DE;&#x30A4;&#x30AF;&#x30ED;&#x6D41;&#x4F53;&#x30DF;&#x30AD;&#x30B5;&#x30FC;&#x306E;&#x30E9;&#x30E0;&#x30C0;&#x30EA;&#x30D7;&#x30EC;&#x200B;&#x200B;&#x30C3;&#x30B5;&#x30FC;&#x306E;&#x30C0;&#x30A6;&#x30F3;&#x30D2;&#x30EB;&#x6298;&#x308A;&#x7573;&#x307F;&#x306E;&#x76F4;&#x63A5;&#x89B3;&#x5BDF;

La prote&#xED;na lambda (6-85) ha sido implicado en el plegamiento para minusv&#xE1;lidos por las observaciones de la relajaci&#xF3;n despu&#xE9;s de la cin&#xE9;tica nanosegundo T-salto. En este trabajo se observ&#xF3; plegamiento de esta prote&#xED;na despu&#xE9;s de la diluci&#xF3;n de un desnaturalizante alta en un mezclador ultrarr&#xE1;pido microfluidos a temperaturas muy por debajo del punto medio t&#xE9;rmico. Las observaciones de intensidad total y el desplazamiento espectral de fluorescencia de tript&#xF3;fano produjo la cin&#xE9;tica muy diferentes y las energ&#xED;as de activaci&#xF3;n. Estos resultados pueden ser explicado como la difusi&#xF3;n en una barrera de baja, unidimensional, la energ&#xED;a libre superficial, con diferentes sondas que tienen diferentes sensibilidades a lo largo de la reacci&#xF3;n coordinar. Adicionalmente, se observ&#xF3; una fase extremadamente r&#xE1;pido en el tiempo de mezcla que no se observ&#xF3; por T-salto, lo que sugiere que el conjunto de estados desdobla pobladas a alta desnaturalizante es distinto de los accesibles a alta temperatura.

La observaci&#xF3;n directa de descenso plegable de Lambda-represor en un mezclador de microfluidos

&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;&#x69D8;&#x3005;&#x306A;&#x5909;&#x6027;&#x6761;&#x4EF6;&#x4E0B;&#x3067;&#x51DD;&#x96C6;&#x3057;&#x3084;&#x3059;&#x3044;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;HypF-N&#x3067;&#x9060;&#x9694;&#x6B8B;&#x57FA;&#x9593;&#x306E;&#x5206;&#x5B50;&#x306E;&#x62E1;&#x6563;&#x901F;&#x5EA6;&#x3092;&#x6E2C;&#x5B9A;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x30C8;&#x30EA;&#x30D7;&#x30C8;&#x30D5;&#x30A1;&#x30F3;&#x306E;&#x4E09;&#x91CD;&#x9805;&#x72B6;&#x614B;&#x306E;&#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30A4;&#x30F3;&#x6D88;&#x5149;&#x306E;&#x30E1;&#x30BD;&#x30C3;&#x30C9;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x305D;&#x306E;&#x5206;&#x5B50;&#x62E1;&#x6563;&#x304C;&#x5909;&#x6027;&#x5264;&#x306E;&#x9AD8;&#x6FC3;&#x5EA6;&#xFF08;2-6 M GdnHCl&#xFF09;&#x3067;&#x307B;&#x307C;&#x4E00;&#x5B9A;&#x306E;&#x307E;&#x307E;&#x3068;&#x5909;&#x6027;&#x5264;&#x306E;&#x4F4E;&#x6FC3;&#x5EA6;&#x3067;&#x9045;&#x304F;&#x898B;&#x3064;&#x3051;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3001;&#x6E1B;&#x5C11;&#x306F;&#x3001;&#x30C1;&#x30A7;&#x30FC;&#x30F3;&#x5168;&#x4F53;&#x3067;&#x5747;&#x4E00;&#x3067;&#x306F;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3002; 0 M GdnHCl&#x306B;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x6E2C;&#x5B9A;&#x5024;&#x306E;&#x5916;&#x633F;&#x306F;&#x3001;D&#x306E;&#x884C;&#x5100;&#x306E;&#x826F;&#x3044;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x3088;&#x308A;&#x69CB;&#x9020;&#x5316;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x306A;&#x3044;&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C9;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x5927;&#x304D;&#x3055;&#x306E;&#x5C11;&#x306A;&#x304F;&#x3068;&#x3082;2&#x6841;&#x3088;&#x308A;&#x3082;&#x4F4E;&#x3044;&#x306E;&#x5927;&#x304D;&#x3055;&#x7D04;10&#xFF08;-7&#xFF09;cm&#xFF08;2&#x30A4;&#x30F3;&#x30C1;&#xFF09;S&#xFF08;-1&#xFF09;&#x3001;&#x7D04;1&#x9806;&#x5E8F;&#x3092;&#x4E0E;&#x3048;&#x308B;&#x3082;&#x306E;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x306F;&#x3001;&#x90E8;&#x5206;&#x7684;&#x306B;&#x72B6;&#x614B;&#x304C;&#x51DD;&#x96C6;&#x3059;&#x308B;&#x50BE;&#x5411;&#x304C;&#x3042;&#x308B;&#x5C55;&#x958B;&#x305D;&#x306E;&#x4E2D;&#x306B;&#x30B3;&#x30F3;&#x30D5;&#x30A9;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x306E;&#x518D;&#x7DE8;&#x6210;&#x306E;&#x30C0;&#x30A4;&#x30CA;&#x30DF;&#x30C3;&#x30AF;&#x30EC;&#x30F3;&#x30B8;&#x304C;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x5506;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;

&#x306E;&#x30B3;&#x30F3;&#x30D5;&#x30A9;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x30D7;&#x30ED;&#x30D1;&#x30C6;&#x30A3;HypF-N&#x5C55;&#x958B;&#x50CF;

&#x6211;&#x4EEC;&#x6D4B;&#x91CF;&#x4E86;&#x9065;&#x8FDC;&#x6B8B;&#x7559;&#x5728;&#x5404;&#x79CD;&#x53D8;&#x6027;&#x6761;&#x4EF6;&#x4E0B;&#x6613;&#x53D1;&#x751F;&#x805A;&#x5408;&#x86CB;&#x767D; HypF N &#x4E4B;&#x95F4;&#x7684;&#x5206;&#x5B50;&#x5185;&#x6269;&#x6563;&#x7387;&#x3002;&#x4F7F;&#x7528;&#x534A;&#x80F1;&#x6C28;&#x9178;&#x6DEC;&#x706B;&#x7684;&#x8272;&#x6C28;&#x9178;&#x4E09;&#x7EBF;&#x6001;&#x72B6;&#x6001;&#x7684;&#x65B9;&#x6CD5;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x627E;&#x5230;&#x5206;&#x5B50;&#x5185;&#x6269;&#x6563;&#x4ECD;&#x7136;&#x5927;&#x4F53;&#x4E0D;&#x53D8;&#x7684;&#x53D8;&#x6027;&#x5242;&#x6D53;&#x5EA6;&#x9AD8; (2-6m &#x76D0;&#x9178;&#x80CD;&#x53D8;&#x6027;) &#x548C;&#x5728;&#x4F4E;&#x6D53;&#x5EA6;&#x7684;&#x53D8;&#x6027;&#x5242;&#xFF0C;&#x51CF;&#x6162;&#x4F46;&#x51CF;&#x5C11;&#x4E0D;&#x662F;&#x7EDF;&#x4E00;&#x6574;&#x4E2A;&#x94FE;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x6D4B;&#x91CF;&#x7ED3;&#x679C; 0 M &#x76D0;&#x9178;&#x80CD;&#x53D8;&#x6027;&#x7ED9; D &#x7684;&#x5916;&#x63A8;&#x6CD5;&#x7EA6; 10(-7) cm(2) s(-1)&#xFF0C;&#x6BD4;&#x975E;&#x7ED3;&#x6784;&#x5316;&#x7684;&#x591A;&#x80BD;&#x4F4E;&#x7EA6; 1 &#x6570;&#x91CF;&#x7EA7;&#x548C;&#x81F3;&#x5C11; 2 &#x4E2A;&#x6570;&#x91CF;&#x7EA7;&#x9AD8;&#x4E8E;&#x4E56;&#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x3002;&#x8FD9;&#x8868;&#x660E;&#x52A8;&#x6001;&#x8303;&#x56F4;&#x5185;&#x7684;&#x90E8;&#x5206;&#x5C55;&#x5F00;&#x7684;&#x56FD;&#x5BB6;&#x5F88;&#x5BB9;&#x6613;&#x805A;&#x5408;&#x7684;&#x6784;&#x8C61;&#x91CD;&#x7EC4;&#x3002;

&#x5C55;&#x5F00; HypF N.&#x7684;&#x6784;&#x8C61;&#x5C5E;&#x6027;

We have measured the intramolecular diffusion rate between distant residues in the aggregation-prone protein HypF-N under various denaturing conditions. Using the method of cysteine quenching of the tryptophan triplet state, we find that intramolecular diffusion remains roughly constant at high concentrations of denaturant (2-6 M GdnHCl) and slows down at low concentrations of denaturant, but the decrease is not uniform throughout the chain. Extrapolation of these measurements to 0 M GdnHCl gives D approximately 10(-7) cm(2) s(-1), about 1 order of magnitude lower than unstructured peptides and at least 2 orders of magnitude higher than well-behaved proteins. This suggests that there is a dynamic range of conformational reorganization within which partially unfolded states are prone to aggregation.

Conformational properties of unfolded HypF-N.

Nous avons mesur&#xE9; la vitesse de diffusion intramol&#xE9;culaire entre les r&#xE9;sidus &#xE9;loign&#xE9;s dans la prot&#xE9;ine d&#x26;#39;agr&#xE9;gation sujette HypF-N dans diverses conditions de d&#xE9;naturation. En utilisant la m&#xE9;thode de la trempe cyst&#xE9;ine de l&#x26;#39;&#xE9;tat triplet le tryptophane, nous constatons que la diffusion intramol&#xE9;culaire reste &#xE0; peu pr&#xE8;s constante &#xE0; des concentrations &#xE9;lev&#xE9;es de d&#xE9;naturant (2-6 M GdnHCl) et ralentit &#xE0; de faibles concentrations de d&#xE9;naturant, mais la baisse n&#x26;#39;est pas uniforme tout au long de la cha&#xEE;ne . L&#x26;#39;extrapolation de ces mesures &#xE0; 0 M GdnHCl donne D d&#x26;#39;environ 10 (-7) cm (2) s (-1), environ 1 ordre de grandeur inf&#xE9;rieur &#xE0; celui des peptides non structur&#xE9;es et au moins 2 ordres de grandeur plus &#xE9;lev&#xE9;s que les prot&#xE9;ines bien comport&#xE9;s. Ceci sugg&#xE8;re qu&#x26;#39;il existe une gamme dynamique de r&#xE9;organisation conformationnelle dans lequel partiellement d&#xE9;pli&#xE9;e Etats sont enclins &#xE0; l&#x26;#39;agr&#xE9;gation.

Propri&#xE9;t&#xE9;s de conformation de D&#xE9;pli&#xE9; HypF-N

Wir haben die intramolekulare Verbreitung Rate zwischen weit entfernten R&uuml;ckst&auml;nde in der Aggregation neigende Protein HypF-N unter verschiedenen denaturierend Bedingungen gemessen. Mit der Methode der Cystein abschrecken von der Tryptophan-Triplett-Zustand, finden wir, dass die intramolekulare Verbreitung in hohen Konzentrationen von Verg&auml;llungsmittel ungef&auml;hr konstant bleibt (2-6 M GdnHCl) und bei niedrigen Konzentrationen von Verg&auml;llungsmittel, verlangsamt aber der R&uuml;ckgang ist nicht einheitlich in der gesamten Kette. Hochrechnung dieser Messungen auf 0 M GdnHCl gibt D ca. 10(-7) cm(2) s(-1), ca. 1 Gr&ouml;&szlig;enordnung niedriger als unstrukturierten Peptiden und mindestens 2 Gr&ouml;&szlig;enordnungen h&ouml;her als gut erzogene Proteine. Dies deutet darauf hin, da&szlig; es ein Dynamikumfang von Konformations&auml;nderungen Reorganisation innerhalb dessen teilweise entfaltete Staaten Aggregation neigen.

Konformations&auml;nderungen Eigenschaften entfaltet HypF-n.

Noi abbiamo misurato il tasso di diffusione intramolecolare tra residui distanti della proteina aggregazione-inclini HypF-N in varie condizioni di denaturazione. Utilizzando il metodo della cisteina tempra dello stato di tripletto di triptofano, troviamo che intramolecolare diffusione rimane all&#39;incirca costante ad alte concentrazioni di denaturante (2-6 M GdnHCl) e rallenta a basse concentrazioni di denaturante, ma il calo non &egrave; uniforme in tutta la catena. Estrapolazione di tali misure a 0 M GdnHCl d&agrave; D circa 10(-7) cm(2) s(-1), circa 1 ordine di grandezza inferiore a peptidi non strutturati e almeno 2 ordini di grandezza maggiore di proteine ben educate. Questo suggerisce che c&#39;&egrave; una gamma dinamica di riorganizzazione conformazionali all&#39;interno dei quali stati parzialmente svelati sono inclini all&#39;aggregazione.

Propriet&agrave; conformazionali di dispiegata HypF-N.

&#xC6B0;&#xB9AC; &#xC0AC;&#xC774; &#xB2E4;&#xC591; &#xD55C; &#xBCC0;&#xC131; &#xC870;&#xAC74;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC9D1;&#xACC4; &#xD558;&#xAE30; &#xC26C;&#xC6B4; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; HypF N &#xBA3C; &#xC794;&#xB958;&#xBB3C; intramolecular &#xBCF4;&#xAE09; &#xC18D;&#xB3C4; &#xCE21;&#xC815;. &#xC6B0;&#xB9AC; intramolecular &#xBCF4;&#xAE09; &#xC57D; denaturant&#xC758; &#xB192;&#xC740; &#xB18D;&#xB3C4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC77C;&#xC815; &#xD558; &#xAC8C; &#xC720;&#xC9C0;&#xB97C; &#xCC3E;&#xC744; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD14C;&#xC778; &#xD2B8;&#xB9BD;&#xD1A0;&#xD310; triplet &#xC0C1;&#xD0DC; &#xD574;&#xC18C;&#xC758; &#xBC29;&#xBC95;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC;, (2-6 M GdnHCl), denaturant&#xC758; &#xB0AE;&#xC740; &#xB18D;&#xB3C4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xAC10;&#xC18D; &#xAC10;&#xC18C; &#xCCB4;&#xC778;&#xC5D0; &#xAC78;&#xCCD0; &#xADE0;&#xC77C; &#xD55C; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC;. M GdnHCl &#xC81C;&#xACF5; D 0&#xC774; &#xCE21;&#xC815;&#xC758; &#xC678;&#xC0BD; &#xBC95; &#xC57D; 10(-7) cm(2) s(-1), &#xAD6C;&#xC870;&#xD654; &#xB418;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC740; &#xD3A9; &#xD2F0; &#xB4DC; &#xBCF4;&#xB2E4; &#xB0AE;&#xC740; &#xC57D; 1 &#xC21C;&#xC11C;&#xC758; &#xD06C;&#xAE30;&#xC640; &#xCD5C;&#xC18C; 2 &#xBC30;&#xB098; &#xCEE4;&#xC9C0;&#xAE34; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xBCF4;&#xB2E4; &#xB354; &#xB192;&#xC740;. &#xC774;&#xB294; &#xBD80;&#xBD84;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xD3BC;&#xCE5C;&#xB41C; &#xC0C1;&#xD0DC;&#xB294; &#xC9D1;&#xACC4; &#xD558;&#xB294; &#xACBD;&#xD5A5;&#xC774; &#xAD6C;&#xC870;&#xC801; &#xAC1C;&#xD3B8;&#xC758; &#xB3D9;&#xC801; &#xBC94;&#xC704;&#xB97C; &#xB098;&#xC654;&#xB2E4;.

&#xD3BC;&#xCE5C; HypF n &#xAD6C;&#xC870;&#xC801; &#xC18D;&#xC131;

Hemos medido la velocidad de difusi&#xF3;n intramolecular entre residuos distantes en la prote&#xED;na agregaci&#xF3;n propensos HypF-N bajo diversas condiciones de desnaturalizaci&#xF3;n. Utilizando el m&#xE9;todo de enfriamiento de ciste&#xED;na del estado de triplete tript&#xF3;fano, encontramos que la difusi&#xF3;n intramolecular permanece aproximadamente constante a altas concentraciones de desnaturalizante (2-6 M GdnHCl) y ralentiza a bajas concentraciones de desnaturalizante, pero la disminuci&#xF3;n no es uniforme en toda la cadena . La extrapolaci&#xF3;n de estas mediciones a 0 M GdnHCl D da alrededor de 10 (-7) cm (2) s (-1), alrededor de 1 orden de magnitud menor que los p&#xE9;ptidos no estructurados y por lo menos 2 &#xF3;rdenes de magnitud superiores a las prote&#xED;nas de buen comportamiento. Esto sugiere que hay un rango din&#xE1;mico de reorganizaci&#xF3;n conformacional en el que parcialmente desplegada estados son propensos a la agregaci&#xF3;n.

Propiedades conformacionales de Desplegado HypF-N

&#x867D;&#x7136;&#x8868;&#x5F81;&#x86CB;&#x767D;&#x5DF2;&#x5C55;&#x5F00;&#x7684;&#x56FD;&#x5BB6;&#xFF0C;&#x6240;&#x6709;&#x539F;&#x5B50;&#x7684;&#x5C55;&#x5F00;&#x56FD;&#x5BB6;&#x73B0;&#x5728;&#x5B58;&#x5728;&#x51E0;&#x4E2A;&#x5B9E;&#x9A8C;&#x6280;&#x672F;&#x6311;&#x6218;&#x6027;&#x56E0;&#x957F;&#x65F6;&#x95F4;&#x5C3A;&#x5EA6;&#x548C;&#x6784;&#x8C61;&#x53D6;&#x6837;&#x6240;&#x9700;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x89E3;&#x51B3;&#x8FD9;&#x4E00;&#x95EE;&#x9898;&#xFF0C;&#x901A;&#x8FC7;&#x4F7F;&#x7528;&#x56FE;&#x5F62;&#x5904;&#x7406;&#x5668;&#x5355;&#x4F4D;&#x4E0A;&#x7684;&#x52A0;&#x901F;&#x8BA1;&#x7B97;&#x7684;&#x7EC4;&#x5408;&#x548C;&#x5206;&#x5E03;&#x5F0F;&#x8BA1;&#x7B97; &#xFF08;&#x4E3A; 127 ms &#x603B;&#x805A;&#x5408;&#x4EFF;&#x771F;&#x65F6;&#x95F4;&#xFF09; &#x6A21;&#x62DF;&#x6570;&#x4EE5;&#x4E07;&#x8BA1;&#x7684;&#x8FD0;&#x52A8;&#x5206;&#x5B50;&#x52A8;&#x529B;&#x5B66;&#x8F68;&#x8FF9;&#x6BCF;&#x4E2A;&#x6700;&#x591A;&#x7EA6; 10 &#x4EA9;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x8FD9;&#x79CD;&#x65B9;&#x6CD5;&#x7ED3;&#x5408;&#x4F7F;&#x7528;&#x4E0E;&#x8DE8;&#x56FD;&#x6FC0;&#x8FDB;&#x515A;-&#x534A;&#x80F1;&#x6C28;&#x9178;&#x8054;&#x7CFB;&#x4EBA;&#x6DEC;&#x706B;&#x5B9E;&#x9A8C;&#x4EE5;&#x5C55;&#x5F00;&#x7684;&#x7ED3;&#x6784;&#x548C;&#x52A8;&#x529B;&#x5B66;&#x7684;&#x86CB;&#x767D; L.&#x7279;&#x70B9;&#x6211;&#x4EEC;&#x91C7;&#x7528;&#x805A;&#x5408;&#x7269;&#x7406;&#x8BBA;&#x65B9;&#x6CD5;&#x8FDB;&#x884C;&#x5B9A;&#x91CF;&#x6BD4;&#x8F83;&#xFF0C;&#x6A21;&#x62DF;&#x9AD8;&#x6E29;&#x548C;&#x5316;&#x5B66;&#x53D8;&#x6027;&#x5B9E;&#x9A8C;&#x5408;&#x5531;&#x56E2;&#x548C;&#x67E5;&#x627E;&#x53CD;&#x5E94;&#x6709;&#x9650;&#x6DEC;&#x706B;&#x7387;&#x4ECE;&#x6A21;&#x62DF;&#x8BA1;&#x7B97;&#x51FA;&#x8272;&#x540C;&#x610F;&#x5B9E;&#x9A8C;&#x3002;&#x5728;&#x5B9E;&#x9A8C;&#x548C;&#x4EFF;&#x771F;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x627E;&#x5230;&#x5C55;&#x5F00;&#x72B6;&#x6001;&#x5206;&#x5B50;&#x5185;&#x6269;&#x6563;&#x7387;&#x90FD;&#x975E;&#x5E38;&#x6162;&#x76F8;&#x6BD4;&#x9AD8;&#x53D8;&#x6027;&#x94FE;&#x548C;&#x5355;&#x6B8B;&#x7559;&#x7A81;&#x53D8;&#x53EF;&#x4EE5;&#x5927;&#x5927;&#x6539;&#x53D8;&#x5C55;&#x5F00;&#x72B6;&#x6001;&#x52A8;&#x6001;&#x548C;&#x7ED3;&#x6784;&#x3002;&#x8FD9;&#x9879;&#x5DE5;&#x4F5C;&#x8868;&#x660E;&#x51FA;&#x5947;&#x7684;&#x5C11;&#x6269;&#x6563;&#x7387;&#x53EF;&#x80FD;&#x9650;&#x5236;&#x6298;&#x53E0;&#x7684;&#x5C55;&#x5F00;&#x72B6;&#x6001;&#x7684;&#x89C6;&#x56FE;&#xFF0C;&#x5E76;&#x4E3A;&#x6240;&#x6709;&#x539F;&#x5B50;&#x5206;&#x5B50;&#x6A21;&#x62DF;&#x662F;&#x8868;&#x5F81;&#x86CB;&#x767D;&#x5C55;&#x73B0;&#x56FD;&#x5BB6;&#x76F4;&#x63A5;&#x6D4B;&#x91CF;&#x5206;&#x5B50;&#x6269;&#x6563;&#x7684;&#x5B9E;&#x9A8C;&#x548C;&#x6709;&#x7528;&#x7684;&#x9884;&#x6D4B;&#x5DE5;&#x5177;&#x6253;&#x5F00;&#x4E86;&#x5927;&#x95E8;&#x3002;

&#x5C55;&#x5F00;&#x72B6;&#x6001;&#x52A8;&#x6001;&#x548C;&#x7ED3;&#x6784;&#x7684;&#x86CB;&#x767D; L &#x4EFF;&#x771F;&#x548C;&#x5B9E;&#x9A8C;&#x7684;&#x7279;&#x70B9;&#x3002;

While several experimental techniques now exist for characterizing protein unfolded states, all-atom simulation of unfolded states has been challenging due to the long time scales and conformational sampling required. We address this problem by using a combination of accelerated calculations on graphics processor units and distributed computing to simulate tens of thousands of molecular dynamics trajectories each up to approximately 10 mus (for a total aggregate simulation time of 127 ms). We used this approach in conjunction with Trp-Cys contact quenching experiments to characterize the unfolded structure and dynamics of protein L. We employed a polymer theory method to make quantitative comparisons between high-temperature simulated and chemically denatured experimental ensembles and find that reaction-limited quenching rates calculated from simulation agree remarkably well with experiment. In both experiment and simulation, we find that unfolded-state intramolecular diffusion rates are very slow compared to highly denatured chains and that a single-residue mutation can significantly alter unfolded-state dynamics and structure. This work suggests a view of the unfolded state in which surprisingly low diffusion rates could limit folding and opens the door for all-atom molecular simulation to be a useful predictive tool for characterizing protein unfolded states along with experiments that directly measure intramolecular diffusion.

Unfolded-state dynamics and structure of protein L characterized by simulation and experiment.

Bien que plusieurs techniques exp&#xE9;rimentales existent maintenant pour la caract&#xE9;risation des prot&#xE9;ines d&#xE9;pli&#xE9; Etats, tout atome de simulation d&#x26;#39;&#xE9;tats se sont d&#xE9;roul&#xE9;s a &#xE9;t&#xE9; difficile en raison des &#xE9;chelles de temps longues et d&#x26;#39;&#xE9;chantillonnage conformationnel n&#xE9;cessaire. Nous nous adressons &#xE0; ce probl&#xE8;me en utilisant une combinaison de calculs acc&#xE9;l&#xE9;r&#xE9;s sur les unit&#xE9;s de processeurs graphiques et de calcul distribu&#xE9; pour simuler des dizaines de milliers de trajectoires de dynamique mol&#xE9;culaire chacun jusqu&#x26;#39;&#xE0; environ 10 mus (pour une simulation en temps total cumul&#xE9; de 127 ms). Nous avons utilis&#xE9; cette approche en collaboration avec Trp-Cys exp&#xE9;riences de trempe de contact pour caract&#xE9;riser la structure d&#xE9;pli&#xE9;e et la dynamique de la prot&#xE9;ine L. Nous avons utilis&#xE9; une m&#xE9;thode th&#xE9;orie des polym&#xE8;res de faire des comparaisons quantitatives entre haute temp&#xE9;rature simul&#xE9;e et chimiquement d&#xE9;natur&#xE9;s ensembles exp&#xE9;rimentaux et de trouver que la r&#xE9;action limit&#xE9;e taux d&#x26;#39;extinction calcul&#xE9;s &#xE0; partir de la simulation concordent remarquablement bien avec l&#x26;#39;exp&#xE9;rience. Dans les deux cas l&#x26;#39;exp&#xE9;rience et la simulation, nous constatons que d&#xE9;pli&#xE9; &#xE9;tatiques taux de diffusion intramol&#xE9;culaires sont tr&#xE8;s lents par rapport &#xE0; cha&#xEE;nes tr&#xE8;s d&#xE9;natur&#xE9;es et que d&#x26;#39;une seule mutation de r&#xE9;sidus peuvent modifier de mani&#xE8;re significative &#xE0; l&#x26;#39;&#xE9;tat d&#xE9;pli&#xE9; la dynamique et la structure. Ce travail sugg&#xE8;re une vision de l&#x26;#39;&#xE9;tat non pli&#xE9; dans lequel les taux de diffusion &#xE9;tonnamment bas pourrait limiter le pliage et ouvre la porte &#xE0; tous les atomes de simulation mol&#xE9;culaire pour &#xEA;tre un outil utile pour la caract&#xE9;risation pr&#xE9;dictive Etats prot&#xE9;ines se sont d&#xE9;roul&#xE9;s le long avec des exp&#xE9;riences qui mesurent directement la diffusion intramol&#xE9;culaire.

D&#xE9;pli&#xE9; &#xE9;tatiques Dynamique et Structure de la prot&#xE9;ine L Caract&#xE9;ris&#xE9; par la simulation et l&#x26;#39;exp&#xE9;rience

W&auml;hrend verschiedene experimentelle Techniken es heute gibt f&uuml;r die Charakterisierung von Protein entfaltete Staaten, All-Atom Simulation entfaltet Staaten wurde aufgrund der langen Zeit an skaliert und Konformations&auml;nderungen Probenahme erforderlich. Wir l&ouml;sen dieses Problem durch eine Kombination von beschleunigte Berechnungen auf Prozessor-Grafik-Units und verteiltes Rechnen um Zehntausende von Molekulardynamik Bahnen jeweils bis zu ca. 10 Mus (eine Zeitlang Aggregat Totalsimulation 127 MS) zu simulieren. Wir verwendet diesen Ansatz in Verbindung mit Trp-Cys Kontakt abschrecken Experimente entfaltet Struktur und Dynamik des Proteins L. charakterisieren Wir Besch&auml;ftigten eine Polymer-Theorie-Methode, um quantitative Vergleiche zwischen Hochtemperatur-simuliert und chemisch denaturierten experimentelle Ensembles und feststellen, dass die Reaktion-begrenzte abschrecken Preise berechnet aus Simulation Experiments bemerkenswert gut zustimmen. In Experiment und Simulation finden wir, dass entfaltet-Staat intramolekulare Verbreitung, die Preise sehr sind im Vergleich zu &auml;u&szlig;erst denaturiertes Ketten langsam und Einzel-R&uuml;ckstand Mutation entfaltet-Staat Dynamik und Struktur erheblich &auml;ndern kann. Diese Arbeit schl&auml;gt vor, einen Blick auf die ungefaltet in der &uuml;berraschend geringe Verbreitung Preise Faltreifen beeintr&auml;chtigen k&ouml;nnten und &ouml;ffnet die T&uuml;r f&uuml;r All-Atom Molekulare Simulation werden vorausschauende n&uuml;tzlich f&uuml;r die Charakterisierung von Protein entfaltet Staaten zusammen mit Experimenten, die intramolekulare Verbreitung direkt zu messen.

Article	Year
Measuring dynamic flexibility of the coil state of a helix-forming peptide. Journal of molecular biology\| PubMed ID: 12051933	2002
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How fast is protein hydrophobic collapse? Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America\| PubMed ID: 14530404	2003
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Measuring the folding transition time of single RNA molecules. Biophysical journal\| PubMed ID: 17307831	2007
Protein hydrophobic collapse and early folding steps observed in a microfluidic mixer. Biophysical journal\| PubMed ID: 17416618	2007
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The intrinsic stiffness of polyglutamine peptides. The journal of physical chemistry. B\| PubMed ID: 18817433	2008
The targeting of the oxysterol-binding protein ORP3a to the endoplasmic reticulum relies on the plant VAP33 homolog PVA12. The Plant journal : for cell and molecular biology\| PubMed ID: 19207211	2009
Ruggedness in the folding landscape of protein L. HFSP journal\| PubMed ID: 19436489	2008
Direct observation of downhill folding of lambda-repressor in a microfluidic mixer. Biophysical journal\| PubMed ID: 19751683	2009
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Curcumin Prevents Aggregation in Î±-Synuclein by Increasing Reconfiguration Rate. The Journal of biological chemistry\| PubMed ID: 22267729	2012
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Lisa J. Lapidus

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