immunohistochemical-staining-b7-h1-pd-l1-on-paraffin-embedded-slides

Immunohistochemical Staining of B7-H1 (PD-L1) on Paraffin-embedded Slides of Pancreatic Adenocarcinoma Tissue

B7-H1/PD-L1, a member  of the B7 family of immune-regulatory cell-surface proteins, plays an important  role in the negative regulation of cell-mediated ...

The Johns Hopkins University School of Medicine

Gli enzimi SIR2 formano una classe unica di NAD (+)-deacetylases dipendenti richiesti per diversi processi biologici, tra cui il silenziamento trascrizionale, regolazione del apoptosis, grasso mobilitazione e durata regolamento. Attivit&agrave; SIR2 &egrave; regolata da nicotinamide, un inibitore non competitivo che promuove una reazione di base di exchange a scapito della deacetilazione. Per delucidare il meccanismo dell&#39;inibizione di nicotinamide, abbiamo determinato ternari strutture complesse di Sir2 enzimi contenenti nicotinamide. Le strutture mostrano che nicotinammide libera si lega in una tasca conservata che partecipa alla catalisi e l&#39;associazione NAD(+). Basato sulle nostre strutture, abbiamo progettato un mutante che deacetylates peptidi utilizzando acido nicotinico adenina dinucleotide (NAAD) come un cosubstrate ed &egrave; inibito da acido nicotinico. Le caratteristiche dell&#39;enzima alterato specificit&agrave; stabiliscono che gli enzimi Sir2 contengono un singolo sito che partecipa al regolamento catalisi e nicotinamide e fornisce ulteriori approfondimenti nel meccanismo catalitico Sir2.

Meccanismo di inibizione di sirtuine di nicotinammide: alterare la specificit&agrave; di cosubstrate NAD(+) di un enzima Sir2.

Sir2 &#x9175;&#x7D20; NAD (+) &#x306E;&#x4E00;&#x610F;&#x306E;&#x30AF;&#x30E9;&#x30B9;&#x3092;&#x5F62;&#x6210;-&#x8EE2;&#x5199;&#x30B5;&#x30A4;&#x30EC;&#x30F3;&#x30B7;&#x30F3;&#x30B0;&#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x591A;&#x69D8;&#x306A;&#x751F;&#x7269;&#x5B66;&#x7684;&#x30D7;&#x30ED;&#x30BB;&#x30B9;&#x306B;&#x5FC5;&#x8981;&#x306A;&#x4F9D;&#x5B58;&#x3059;&#x308B;&#x8131;&#x30A2;&#x30BB;&#x30C1;&#x30EB;&#x5316;&#x9175;&#x7D20;&#x30A2;&#x30DD;&#x30C8;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9;&#x3001;&#x8102;&#x80AA;&#x52D5;&#x54E1;&#x53CA;&#x3073;&#x5BFF;&#x547D;&#x898F;&#x5236;&#x306E;&#x898F;&#x5236;&#x3002;Sir2 &#x6D3B;&#x52D5;&#x306F;&#x3001;&#x30CB;&#x30B3;&#x30C1;&#x30F3;&#x30A2;&#x30DF;&#x30C9;&#x3001;&#x8131;&#x30A2;&#x30BB;&#x30C1;&#x30EB;&#x5316;&#x3092;&#x72A0;&#x7272;&#x306B;&#x3057;&#x3066;&#x5869;&#x57FA;&#x4EA4;&#x63DB;&#x53CD;&#x5FDC;&#x3092;&#x4FC3;&#x9032;&#x3059;&#x308B;&#x975E;&#x7AF6;&#x5408;&#x7684;&#x963B;&#x5BB3;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x898F;&#x5236;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30CB;&#x30B3;&#x30C1;&#x30F3;&#x30A2;&#x30DF;&#x30C9;&#x963B;&#x5BB3;&#x306E;&#x30E1;&#x30AB;&#x30CB;&#x30BA;&#x30E0;&#x3092;&#x89E3;&#x660E;&#x3059;&#x308B;&#x306B;&#x306F;&#x3001;&#x30CB;&#x30B3;&#x30C1;&#x30F3;&#x30A2;&#x30DF;&#x30C9;&#x3092;&#x542B;&#x3080; Sir2 &#x9175;&#x7D20;&#x306E;&#x4E09;&#x5143;&#x7CFB;&#x306E;&#x8907;&#x96D1;&#x306A;&#x69CB;&#x9020;&#x3092;&#x6C7A;&#x5B9A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x305D;&#x306E;&#x7121;&#x6599;&#x30CB;&#x30B3;&#x30C1;&#x30F3;&#x30A2;&#x30DF;&#x30C9; NAD(+) &#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C7;&#x30A3;&#x30F3;&#x30B0;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x89E6;&#x5A92;&#x4F5C;&#x7528;&#x306B;&#x95A2;&#x4E0E;&#x3059;&#x308B;&#x4FDD;&#x5B58;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x30DD;&#x30B1;&#x30C3;&#x30C8;&#x306B;&#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C9;&#x3059;&#x308B;&#x69CB;&#x9020;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x79C1;&#x305F;&#x3061;&#x306E;&#x69CB;&#x9020;&#x306B;&#x57FA;&#x3065;&#x3044;&#x3066;&#x3001;&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C9;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x30EA;&#x30B0;&#x30CB;&#x30F3; &#x30CB;&#x30B3;&#x30C1;&#x30F3;&#x9178;&#x30A2;&#x30DF;&#x30C9;&#x30A2;&#x30C7;&#x30CB;&#x30F3;&#x30B8;&#x30CC;&#x30AF;&#x30EC;&#x30AA;&#x30C1;&#x30C9; (NAAD) &#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3059;&#x308B; deacetylates &#x3068;&#x30CB;&#x30B3;&#x30C1;&#x30F3;&#x9178;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x6291;&#x5236;&#x5909;&#x7570;&#x4F53;&#x3092;&#x30EA;&#x30D0;&#x30FC;&#x30B9; &#x30A8;&#x30F3;&#x30B8;&#x30CB;&#x30A2; &#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;&#x3002;&#x5909;&#x66F4;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x7279;&#x7570;&#x6027;&#x9175;&#x7D20;&#x306E;&#x7279;&#x6027; Sir2 &#x9175;&#x7D20;&#x306F;&#x89E6;&#x5A92;&#x3068;&#x30CB;&#x30B3;&#x30C1;&#x30F3;&#x9178;&#x30A2;&#x30DF;&#x30C9;&#x306E;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x306B;&#x53C2;&#x52A0;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B; Sir2 &#x89E6;&#x5A92;&#x6A5F;&#x69CB;&#x306E;&#x8FFD;&#x52A0;&#x6D1E;&#x5BDF;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059; 1 &#x3064;&#x306E;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x304C;&#x542B;&#x307E;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x78BA;&#x7ACB;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x30CB;&#x30B3;&#x30C1;&#x30F3;&#x30A2;&#x30DF;&#x30C9;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x30B5;&#x30FC;&#x30C1;&#x30E5;&#x30A4;&#x30F3;&#x963B;&#x5BB3;&#x306E;&#x30E1;&#x30AB;&#x30CB;&#x30BA;&#x30E0;: Sir2 &#x9175;&#x7D20;&#x306E; NAD(+) &#x30EA;&#x30B0;&#x30CB;&#x30F3;&#x306E;&#x7279;&#x7570;&#x6027;&#x3092;&#x5909;&#x3048;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

Sir2 &#xD6A8;&#xC18C; NAD (+)&#xC758; &#xACE0;&#xC720; &#xD074;&#xB798;&#xC2A4;&#xB97C; &#xAD6C;&#xC131;-&#xC885;&#xC18D; deacetylases transcriptional &#xC785;&#xC744; &#xD3EC;&#xD568; &#xD558; &#xC5EC; &#xB2E4;&#xC591; &#xD55C; &#xC0DD;&#xBB3C; &#xD559;&#xC801; &#xACFC;&#xC815;&#xC5D0; &#xD544;&#xC694;&#xD55C; apoptosis, &#xC9C0;&#xBC29; &#xB3D9;&#xC6D0; &#xBC0F; &#xC218;&#xBA85; &#xADDC;&#xCE59;&#xC758; &#xADDC;&#xC815;. Sir2 &#xD65C;&#xB3D9; &#xB2C8;&#xCF54;&#xD2F4;&#xC544;&#xBBF8;&#xB4DC;, deacetylation&#xC758; &#xBE44;&#xC6A9; &#xC790;&#xB8CC; &#xAD50;&#xD658; &#xBC18;&#xC751;&#xC744; &#xCD09;&#xC9C4; &#xD68C;&#xC7A5; &#xC5B5;&#xC81C;&#xC81C;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xADDC;&#xC81C; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB2C8;&#xCF54;&#xD2F4;&#xC544;&#xBBF8;&#xB4DC; &#xC5B5;&#xC81C; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;&#xC744; &#xBA85;&#xB8CC;, &#xB2C8;&#xCF54;&#xD2F4;&#xC774; &#xD3EC;&#xD568; &#xB41C; Sir2 &#xD6A8;&#xC18C;&#xC758; &#xBCF5;&#xC7A1; &#xD55C; &#xAD6C;&#xC870;&#xB97C; 3 &#xC9C4; &#xACB0;&#xC815;. &#xAD6C;&#xC870; &#xD45C;&#xC2DC;&#xB294; &#xBB34;&#xB8CC; &#xB2C8;&#xCF54;&#xD2F4;&#xC544;&#xBBF8;&#xB4DC; NAD(+) &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xBC0F; &#xCD09;&#xB9E4;&#xC5D0; &#xCC38;&#xC5EC; &#xD558; &#xACE0; &#xBCF4;&#xC874;&#xB41C; &#xC8FC;&#xBA38;&#xB2C8;&#xC5D0; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xAD6C;&#xC870;&#xB97C; &#xBC14;&#xD0D5;&#xC73C;&#xB85C;, &#xC6B0;&#xB9AC; &#xB2C8;&#xCF54;&#xD2F4;&#xC0B0; &#xC0B0; &#xC544;&#xB370;&#xB2CC; &#xB514;&#xB274;&#xD074;&#xB808;&#xC624;&#xD2F0;&#xB4DC; (NAAD)&#xB294; cosubstrate&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xD3A9; &#xD2F0; &#xB4DC; deacetylates&#xC640; &#xB2C8;&#xCF54;&#xD2F4;&#xC0B0; &#xC0B0;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC800;&#xD574; &#xD558;&#xB294; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xC124;&#xACC4; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xBCC0;&#xACBD; &#xB41C; &#xD2B9;&#xC774;&#xC131; &#xD6A8;&#xC18C;&#xC758; &#xD2B9;&#xC131; &#xC124;&#xC815; Sir2 &#xD6A8;&#xC18C; &#xCD09;&#xB9E4;&#xC640; &#xB2C8;&#xCF54;&#xD2F4;&#xC544;&#xBBF8;&#xB4DC; &#xADDC;&#xC81C;&#xC5D0; &#xCC38;&#xC5EC; &#xD558; &#xACE0; Sir2 &#xCD09;&#xB9E4; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xCD94;&#xAC00;&#xC801;&#xC778; &#xD1B5;&#xCC30;&#xB825;&#xC744; &#xC81C;&#xACF5; &#xD558;&#xB294; &#xB2E8;&#xC77C; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8;&#xB97C; &#xD3EC;&#xD568; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xB2C8;&#xCF54;&#xD2F4;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; sirtuin &#xC5B5;&#xC81C; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;: Sir2 &#xD6A8;&#xC18C;&#xC758; NAD(+) cosubstrate &#xD2B9;&#xC774;&#xC131; &#xBCC0;&#xACBD;.

&#x5316;&#x9176; 2 &#x9176;&#x5F62;&#x6210;&#x4E00;&#x4E2A;&#x72EC;&#x7279;&#x7684;&#x7C7B;&#x7684; NAD (+)-&#x4ECE;&#x5C5E;&#x5316;&#x9176;&#x6240;&#x9700;&#x7684;&#x5404;&#x79CD;&#x751F;&#x7269;&#x8FC7;&#x7A0B;&#xFF0C;&#x5305;&#x62EC;&#x8F6C;&#x5F55;&#x6C89;&#x9ED8;&#xFF0C;&#x8C03;&#x8282;&#x7EC6;&#x80DE;&#x51CB;&#x4EA1;&#x3001; &#x8102;&#x80AA;&#x52A8;&#x5458;&#x548C;&#x89C4;&#x7BA1;&#x4F7F;&#x7528;&#x5BFF;&#x547D;&#x3002;&#x5316;&#x9176; 2 &#x6D3B;&#x52A8;&#x88AB;&#x53D7;&#x70DF;&#x9170;&#x80FA;&#xFF0C;&#x4FC3;&#x8FDB;&#x800C;&#x8131;&#x4E59;&#x9170;&#x57FA;&#x4EA4;&#x6362;&#x53CD;&#x5E94;&#x7684;&#x7ADE;&#x4E89;&#x6027;&#x6291;&#x5236;&#x5242;&#x3002;&#x6F84;&#x6E05;&#x70DF;&#x9170;&#x80FA;&#x6291;&#x5236;&#x7684;&#x673A;&#x5236;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x5DF2;&#x786E;&#x5B9A;&#x5316;&#x9176; 2 &#x9176;&#x542B;&#x6709;&#x70DF;&#x9170;&#x80FA;&#x7684;&#x590D;&#x6742;&#x7684;&#x4E09;&#x5143;&#x7ED3;&#x6784;&#x3002;&#x7ED3;&#x6784;&#x663E;&#x793A;&#x8FD9;&#x514D;&#x8D39;&#x7684;&#x70DF;&#x9170;&#x80FA;&#x5C06;&#x53C2;&#x52A0; NAD(+) &#x7ED1;&#x5B9A;&#x548C;&#x50AC;&#x5316;&#x7684;&#x5B88;&#x6052;&#x53E3;&#x888B;&#x4E2D;&#x7684;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x3002;&#x57FA;&#x4E8E;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x7ED3;&#x6784;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x5236;&#x9020;&#x51FA;&#x4E00;&#x4E2A;&#x7A81;&#x53D8;&#x4F53;&#xFF0C;deacetylates &#x901A;&#x8FC7;&#x4F7F;&#x7528;&#x70DF;&#x9178;&#x817A;&#x560C;&#x5464;&#x4E8C;&#x6838;&#x82F7;&#x9178; (NAAD) &#x4F5C;&#x4E3A;&#x8F85;&#x52A9;&#x7684;&#x591A;&#x80BD;&#x548C;&#x70DF;&#x9178;&#xFF0C;&#x6545;&#x3002;&#x6539;&#x53D8;&#x7684;&#x7279;&#x5F02;&#x6027;&#x9176;&#x7684;&#x7279;&#x70B9;&#x5EFA;&#x7ACB;&#x5316;&#x9176; 2 &#x9176;&#x5305;&#x542B;&#x5355;&#x4E2A;&#x7AD9;&#x70B9;&#xFF0C;&#x53C2;&#x52A0;&#x50AC;&#x5316;&#x548C;&#x70DF;&#x9170;&#x80FA;&#x7684;&#x89C4;&#x7BA1;&#xFF0C;&#x5E76;&#x63D0;&#x4F9B;&#x5316;&#x9176; 2 &#x50AC;&#x5316;&#x673A;&#x7406;&#x7684;&#x65B0;&#x89C1;&#x89E3;&#x3002;

&#x70DF;&#x9170;&#x80FA; sirtuin &#x6291;&#x5236;&#x4F5C;&#x7528;&#x7684;&#x673A;&#x5236;&#xFF1A; &#x6539;&#x53D8; NAD(+) &#x7518;&#x6CB9;&#x751F;&#x4EA7;&#x5316;&#x9176; 2 &#x9176;&#x7684;&#x7279;&#x5F02;&#x6027;&#x3002;

Sir2 enzymes form a unique class of NAD(+)-dependent deacetylases required for diverse biological processes, including transcriptional silencing, regulation of apoptosis, fat mobilization, and lifespan regulation. Sir2 activity is regulated by nicotinamide, a noncompetitive inhibitor that promotes a base-exchange reaction at the expense of deacetylation. To elucidate the mechanism of nicotinamide inhibition, we determined ternary complex structures of Sir2 enzymes containing nicotinamide. The structures show that free nicotinamide binds in a conserved pocket that participates in NAD(+) binding and catalysis. Based on our structures, we engineered a mutant that deacetylates peptides by using nicotinic acid adenine dinucleotide (NAAD) as a cosubstrate and is inhibited by nicotinic acid. The characteristics of the altered specificity enzyme establish that Sir2 enzymes contain a single site that participates in catalysis and nicotinamide regulation and provides additional insights into the Sir2 catalytic mechanism.

Mechanism of sirtuin inhibition by nicotinamide: altering the NAD(+) cosubstrate specificity of a Sir2 enzyme.

Enzymes SIR2 forment une classe unique de NAD (+)-d&eacute;pendante d&eacute;sac&eacute;tylases requis pour divers processus biologiques, y compris transcriptionnelle, r&eacute;gulation de l&#39;apoptose, mobilisation des graisse et r&eacute;gulation de la dur&eacute;e de vie. SIR2 activit&eacute; est r&eacute;glement&eacute;e par la nicotinamide, un inhibiteur non comp&eacute;titif qui favorise une r&eacute;action d&#39;&eacute;changeurs de base au d&eacute;triment de la d&eacute;sac&eacute;tylation. Afin d&#39;&eacute;lucider le m&eacute;canisme d&#39;inhibition de la nicotinamide, nous avons d&eacute;termin&eacute; les structures complexes ternaires des enzymes Sir2 contenant nicotinamide. Les structures montrent que nicotinamide libre se lie dans une poche conserv&eacute;e qui participe &agrave; la catalyse et la liaison NAD(+). Bas&eacute;e sur nos structures, nous avons con&ccedil;u un mutant qui deacetylates des peptides en utilisant de l&#39;acide nicotinique ad&eacute;nine dinucl&eacute;otide (ADNA) comme un co-substrat et est inhib&eacute; par l&#39;acide nicotinique. Les caract&eacute;ristiques de l&#39;enzyme de sp&eacute;cificit&eacute; alt&eacute;r&eacute;e &eacute;tablissent que les enzymes Sir2 contiennent un seul site qui participe au r&egrave;glement de catalyse et de nicotinamide et permet de mieux comprendre le m&eacute;canisme catalytique Sir2 suppl&eacute;mentaires.

M&eacute;canisme d&#39;inhibition de la SIRTUINE de nicotinamide : modifier la sp&eacute;cificit&eacute; du co-substrat NAD(+) d&#39;une enzyme Sir2.

Sir2 Enzyme bilden eine einzigartige Klasse von NAD (+)-abh&auml;ngige Deacetylases erforderlich f&uuml;r verschiedene biologische Prozesse, einschlie&szlig;lich transkriptionelle Unterdr&uuml;ckender Verordnung von Apoptosis, Fett Mobilisierung und Lebensdauer-Verordnung. Sir2-Aktivit&auml;t wird durch Nicotinamid, ein au&szlig;er Konkurrenz-Hemmer geregelt, die eine Base-Austausch-Reaktion auf Kosten der Deacetylierung f&ouml;rdert. Um den Mechanismus des Nicotinamid-Hemmung zu erhellen, entschlossen wir tern&auml;re komplexe Strukturen Sir2 Enzyme mit Nicotinamid. Die Strukturen zeigen, dass dieser Kostenlose Nicotinamid in einer Tasche konservierten bindet, die in NAD(+) Bindung und Katalyse teilnimmt. Auf der Grundlage unserer Strukturen, entwickelt wir eine Mutante, die deacetylates Peptide mit Nikotins&auml;ure-adenin-dinucleotid (NAAD) als ein Cosubstrate und ist durch Nikotins&auml;ure gehemmt. Die Eigenschaften des Enzyms ver&auml;ndert Spezifit&auml;t nachweisen, da&szlig; Sir2 Enzyme eine einzelne Website enthalten, die Katalyse und Nicotinamid Verordnung beteiligt und bietet zus&auml;tzliche Einblicke in die katalytische Sir2-Mechanismus.

Mechanismus der Sirtuine Inhibition von Nicotinamid: die NAD(+) Cosubstrate Spezifit&auml;t eines Enzyms Sir2 zu ver&auml;ndern.

SIR2 enzimas forman una clase &uacute;nica de NAD (+)-deacetilasas dependientes necesarios para diversos procesos biol&oacute;gicos, incluyendo silenciamiento transcripcional, regulaci&oacute;n de la apoptosis, la movilizaci&oacute;n de grasa y regulaci&oacute;n de la vida. SIR2 actividad es regulada por nicotinamida, un inhibidor no competitivo que promueve una reacci&oacute;n de intercambio de base a expensas de desacetilaci&oacute;n. Para aclarar el mecanismo de inhibici&oacute;n de la nicotinamida, determinamos ternarias estructuras complejas de Sir2 enzimas que contienen nicotinamida. Las estructuras Mostrar que eso nicotinamida libre se une en un bolsillo conservado que participa en la cat&aacute;lisis y NAD(+) enlace. Partiendo de nuestras estructuras, hemos dise&ntilde;ado a un mutante que deacetylates p&eacute;ptidos mediante &aacute;cido nicot&iacute;nico adenina dinucle&oacute;tido (NAAD) como un cosubstrate y es inhibido por el &aacute;cido nicot&iacute;nico. Las caracter&iacute;sticas de la enzima de especificidad alterada establecen que Sir2 enzimas contienen un solo sitio que participa en la regulaci&oacute;n de la cat&aacute;lisis y Nicotinamida y proporciona informaci&oacute;n detallada adicional sobre el mecanismo catal&iacute;tico Sir2.

Katherine M. Bever

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