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Small-scale Nuclear Extracts for Functional Assays of Gene-expression Machineries

A great deal of progress in understanding gene expression has been made using in vitro systems.  For most studies, functional assays are carried out using ...

Harvard Medical School

&#x53CC;&#x9762;&#x6253;&#x5370;&#x5668;&#x5F62;&#x6210;&#x5206;&#x652F;&#x70B9;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x5730;&#x533A; (BBR) &#x7684; U2 &#x5148;&#x8FDB;&#x4EEA;&#x5668;&#x8BBE;&#x5907;&#x548C;&#x5185;&#x542B;&#x5B50;&#x4E2D;&#x7684;&#x5206;&#x652F;&#x70B9;&#x5E8F;&#x5217; (BPS) &#x4E4B;&#x95F4;&#x7684;&#x62FC;&#x63A5;&#x81F3;&#x5173;&#x91CD;&#x8981;&#x3002;BBR &#x548C; BPS &#x4E0E; U2 &#x5C0F;&#x6838;&#x6838;&#x7CD6;&#x6838;&#x86CB;&#x767D; (snRNP) &#x8FDB;&#x884C;&#x4EA4;&#x4E92;-SF3b &#x590D;&#x6742;&#xFF0C;&#x8FD9;&#x662F;&#x6297;&#x80BF;&#x7624;&#x836F;&#x7269; E7107 &#x7684;&#x76EE;&#x6807;&#x76F8;&#x5173;&#x8054;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x901A;&#x8FC7;&#x5BF9; pre mRNA &#x9632;&#x6B62;&#x7D27;&#x5BC6;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x7684; U2 snRNP &#x663E;&#x793A;&#x8BE5;&#x7A0B;&#x5E8F;&#x96C6; E7107 &#x5757;&#x526A;&#x63A5;&#x3002;E7107 &#x6709; U2 snRNP &#x5B8C;&#x6574;&#x6027;&#x4E0A;&#x6CA1;&#x6709;&#x660E;&#x663E;&#x7684;&#x6548;&#x679C;&#x3002;&#x76F8;&#x53CD;&#xFF0C;E7107 &#x5E9F;&#x9664;&#x516C;&#x5F00; BBR &#x7684; U2 snRNP ATP &#x4F9D;&#x8D56;&#x6027;&#x6784;&#x8C61;&#x53D8;&#x5316;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x5F97;&#x51FA;&#x7ED3;&#x8BBA; SF3b &#x662F;&#x9700;&#x8981;&#x4E3A;&#x6B64;&#x91CD;&#x6784;&#xFF0C;&#x5176;&#x4E2D;&#x516C;&#x5F00;&#x7D27; U2 snRNP &#x7ED1;&#x5B9A;&#x5230; pre mRNA BBR&#x3002;

&#x6297;&#x80BF;&#x7624;&#x836F;&#x7269; E7107 &#x91CD;&#x5851; U2 snRNP &#x6765;&#x516C;&#x5F00;&#x8BE5;&#x5206;&#x652F;&#x70B9;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x533A;&#x57DF;&#x4E2D;&#x4E3A; SF3b &#x63ED;&#x793A;&#x4E86;&#x81F3;&#x5173;&#x91CD;&#x8981;&#x7684;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;

Duplex formation between the branch point-binding region (BBR) of U2 snRNA and the branch point sequence (BPS) in the intron is essential for splicing. Both the BBR and BPS interact with the U2 small nuclear ribonucleoprotein (snRNP)-associated SF3b complex, which is the target of the anti-tumor drug E7107. We show that E7107 blocks spliceosome assembly by preventing tight binding of U2 snRNP to pre-mRNA. E7107 has no apparent effect on U2 snRNP integrity. Instead, E7107 abolishes an ATP-dependent conformational change in U2 snRNP that exposes the BBR. We conclude that SF3b is required for this remodeling, which exposes the BBR for tight U2 snRNP binding to pre-mRNA.

The anti-tumor drug E7107 reveals an essential role for SF3b in remodeling U2 snRNP to expose the branch point-binding region.

Formation duplex entre la r&eacute;gion de point-liaison branch (BBR) de snRNA U2 et la s&eacute;quence de point de service (BPS) dans l&#39;intron est essentielle pour l&#39;&eacute;pissage. La BBR et BPS interagissent avec la ribonucl&eacute;oprot&eacute;ine nucl&eacute;aire petite U2 (snRNP)-li&eacute;s SF3b complexe, qui est la cible du m&eacute;dicament anti-tumor E7107. Nous montrons que l&#39;Assembl&eacute;e splic&eacute;osome blocs de E7107 en emp&ecirc;chant la liaison &eacute;troite des snRNP U2 &agrave; pr&eacute;-ARNm. E7107 n&#39;a aucun effet apparent sur l&#39;int&eacute;grit&eacute; des snRNP U2. Au lieu de cela, E7107 abolit un changement conformationnel de l&#39;ATP-d&eacute;pendante dans les snRNP U2 qui expose la BBR. Nous concluons que la SF3b est requis pour ce remodelage, qui expose la BBR pour liaison &eacute;troite de snRNP U2 &agrave; pr&eacute;-ARNm.

Le m&eacute;dicament anti-tumor E7107 r&eacute;v&egrave;le un r&ocirc;le essentiel pour SF3b dans le remodelage des snRNP U2 pour exposer la direction de la r&eacute;gion de point de liaison.

Duplex Bildung zwischen der Verzweigung Punkt-Bindung Region (BBR) U2 SnRNA und der Verzweigung Punkt Sequenz (BPS) in der Intron ist wesentlich f&uuml;r das Splei&szlig;en. BBR sowohl die BPS interagieren mit kleinen nuklearen Ribonucleoprotein U2 (SnRNP)-assoziierten SF3b Komplex, das ist das Ziel der Anti-Tumor-Wirkstoff E7107. Wir zeigen diese E7107 Bl&ouml;cke Spliceosom Assembly durch enge Bindung der U2 SnRNP zur Pre-mRNA verhindern. E7107 hat keinen offensichtlichen Effekt auf U2 SnRNP Integrit&auml;t. Stattdessen schafft E7107 eine ATP-abh&auml;ngigen Konformations&auml;nderungen Ver&auml;nderung U2 SnRNP, die die BBR verf&uuml;gbar macht. Wir schlie&szlig;en, dass die SF3b f&uuml;r diesen Umbau, erforderlich ist, die Macht der BBR f&uuml;r die engen U2 SnRNP Bindung an Pre-mRNA verf&uuml;gbar.

Das Anti-Tumor-Medikament E7107 offenbart eine wesentliche Rolle f&uuml;r SF3b im Umbau U2 SnRNP um die Verzweigung Punkt-Bindung Region verf&uuml;gbar zu machen.

Duplex formazione tra la regione di associazione punto di ramo (BBR) di snRNA U2 e la sequenza di punto di ramo (BPS) nell&#39;introne &egrave; essenziale per lo splicing. BBR sia BPS interagiscono con la ribonucleoproteina nucleare piccola (snRNP) di U2-associated SF3b complesso, che &egrave; il bersaglio del farmaco anti-tumorale E7107. Mostriamo assembly E7107 blocchi spliceosoma impedendo stretto legame della snRNP U2 al pre-mRNA. E7107 non ha alcun effetto apparente integrit&agrave; snRNP U2. Invece, E7107 abolisce un cambio conformazionale del trifosfato di Adenosina-dipendente in snRNP U2 che espone il BBR. Concludiamo che SF3b &egrave; richiesto per questo rimodellamento, che espone il BBR per la stretta associazione di snRNP U2 al pre-mRNA.

Il farmaco anti-tumorale E7107 rivela un ruolo essenziale per SF3b nel rimodellamento snRNP U2 per esporre la regione di associazione punto di ramo.

U2 snRNA &#x306E;&#x30D6;&#x30E9;&#x30F3;&#x30C1; &#x30DD;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C8;&#x7D50;&#x5408;&#x9818;&#x57DF; (BBR) &#x3068;&#x5206;&#x5C90;&#x30DD;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C8;&#x306E;&#x30B7;&#x30FC;&#x30B1;&#x30F3;&#x30B9; (BPS)&#x3001;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C8;&#x30ED;&#x30F3;&#x306E;&#x4E8C;&#x91CD;&#x5F62;&#x6210;&#x30B9;&#x30D7;&#x30E9;&#x30A4;&#x30B7;&#x30F3;&#x30B0;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x4E0D;&#x53EF;&#x6B20;&#x3067;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;BBR &#x3068; BPS&#x3001;U2 &#x5C0F;&#x3055;&#x306A;&#x6838;&#x30EA;&#x30DC;&#x6838;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x3068; &#xFF08;snRNP &#x5BFE;&#x8A71;-&#x6297;&#x816B;&#x760D;&#x85AC; E7107 &#x306E;&#x5BFE;&#x8C61;&#x3067;&#x3042;&#x308B; SF3b &#x8907;&#x96D1;&#x3067;&#x3001;&#x95A2;&#x9023;&#x4ED8;&#x3051;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x79C1;&#x9054;&#x306F;&#x305D;&#x306E; E7107 &#x30D6;&#x30ED;&#x30C3;&#x30AF; &#x30B9;&#x30D7;&#x30E9;&#x30A4;&#x30BD;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0; &#x30A2;&#x30BB;&#x30F3;&#x30D6;&#x30EA; &#x30BF;&#x30A4;&#x30C8;&#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C7;&#x30A3;&#x30F3;&#x30B0; U2 snRNP &#x306E; mRNA &#x3092;&#x9632;&#x6B62;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3088;&#x308A;&#x793A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;E7107 &#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B; U2 snRNP &#x6574;&#x5408;&#x6027;&#x306F;&#x5F71;&#x97FF;&#x3057;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3002;&#x4EE3;&#x308F;&#x308A;&#x306B;&#x3001;E7107&#x3001;BBR &#x516C;&#x958B; U2 snRNP &#x306E; ATP &#x4F9D;&#x5B58;&#x6027;&#x69CB;&#x9020;&#x5909;&#x5316;&#x3092;&#x5EC3;&#x6B62;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005; &#x306F; BBR mRNA &#x30BF;&#x30A4;&#x30C8;&#x306A; U2 snRNP &#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C7;&#x30A3;&#x30F3;&#x30B0;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x516C;&#x958B; SF3b &#x304C;&#x3053;&#x306E;&#x6539;&#x9020;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x5FC5;&#x8981;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3068;&#x7D50;&#x8AD6;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x6297;&#x816B;&#x760D;&#x85AC; E7107 SF3b &#x306E;&#x30D6;&#x30E9;&#x30F3;&#x30C1; &#x30DD;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C8;&#x7D50;&#x5408;&#x9818;&#x57DF;&#x3092;&#x516C;&#x958B;&#x3059;&#x308B; U2 snRNP &#x6539;&#x9020;&#x3067;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#xACF5;&#xD1B5; &#xBC0F; &#xC131;&#xC778;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBC1C;&#xC0DD; &#xD558;&#xB294; &#xC784;&#xC0C1;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xB2E4;&#xB978; &#xC720;&#xD615;&#xC758; &#xBC31;&#xD608;&#xBCD1; &#xB9CC;&#xC131; &#xB9BC;&#xD504;&#xBAA8;&#xAD6C; &#xBC31;&#xD608;&#xBCD1;&#xC758; &#xCCB4;&#xC138;&#xD3EC; &#xC720;&#xC804;&#xC73C;&#xB85C; &#xC800;&#xC870;&#xD55C; &#xC774;&#xD574; &#xB0A8;&#xC544; &#xC788;&#xB2E4;.

SF3B1 &#xBC0F; &#xB9CC;&#xC131; &#xB9BC;&#xD504;&#xBAA8;&#xAD6C; &#xBC31;&#xD608;&#xBCD1;&#xC758; &#xB2E4;&#xB978; &#xC18C;&#xC124; &#xC554; &#xC720;&#xC804;&#xC790;.

La base som&#xE1;tica gen&#xE9;tica de la leucemia linfoc&#xED;tica cr&#xF3;nica, la leucemia com&#xFA;n y cl&#xED;nicamente heterog&#xE9;nea que ocurre en los adultos, sigue siendo poco conocida.

SF3B1 y otros nuevos genes de c&#xE1;ncer en la leucemia linfoc&#xED;tica cr&#xF3;nica

Die somatische genetische Basis von chronischer lymphatischer Leuk&auml;mie, eine gemeinsame und klinisch heterogene Leuk&auml;mie bei Erwachsenen auftretenden bleibt weitgehend unverstanden.

SF3B1 und andere neue Krebstherapien-Gene in chronischer lymphatischer Leuk&auml;mie.

La base genetica somatica della leucemia linfocitica cronica, una leucemia clinicamente eterogenea che si verificano negli adulti e comune rimane scarsamente comprensibile.

SF3B1 e altri geni del cancro romanzo nella leucemia linfocitica cronica.

&#x6162;&#x6027;&#x30EA;&#x30F3;&#x30D1;&#x6027;&#x767D;&#x8840;&#x75C5;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x907A;&#x4F1D;&#x7684;&#x57FA;&#x790E;&#x3001;&#x6210;&#x4EBA;&#x306B;&#x767A;&#x751F;&#x3059;&#x308B;&#x4E00;&#x822C;&#x7684;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x81E8;&#x5E8A;&#x7684;&#x7570;&#x8CEA;&#x6027;&#x767D;&#x8840;&#x75C5;&#x306F;&#x3001;&#x3088;&#x304F;&#x308F;&#x304B;&#x3063;&#x3066;&#x3044;&#x306A;&#x3044;&#x307E;&#x307E;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3002;

&#x6162;&#x6027;&#x30EA;&#x30F3;&#x30D1;&#x6027;&#x767D;&#x8840;&#x75C5;&#x306E;SF3B1&#x3068;&#x4ED6;&#x306E;&#x65B0;&#x898F;&#x764C;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;

&#x6162;&#x6027;&#x6DCB;&#x5DF4;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6027;&#x767D;&#x8840;&#x75C5;&#xFF0C;&#x5E38;&#x7528;&#x548C;&#x4E34;&#x5E8A;&#x5F02;&#x6784;&#x767D;&#x8840;&#x75C5;&#x53D1;&#x751F;&#x5728;&#x6210;&#x4EBA;&#x4E2D;&#x7684;&#x4F53;&#x7EC6;&#x80DE;&#x9057;&#x4F20;&#x5B66;&#x57FA;&#x7840;&#x4ECD;&#x7136;&#x77E5;&#x4E4B;&#x751A;&#x5C11;&#x3002;

SF3B1 &#x548C;&#x5176;&#x4ED6;&#x65B0;&#x578B;&#x764C;&#x75C7;&#x57FA;&#x56E0;&#x5728;&#x6162;&#x6027;&#x6DCB;&#x5DF4;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6027;&#x767D;&#x8840;&#x75C5;&#x3002;

The somatic genetic basis of chronic lymphocytic leukemia, a common and clinically heterogeneous leukemia occurring in adults, remains poorly understood.

SF3B1 and other novel cancer genes in chronic lymphocytic leukemia.

La base g&#xE9;n&#xE9;tique somatique de la leuc&#xE9;mie lympho&#xEF;de chronique, une leuc&#xE9;mie commun et cliniquement h&#xE9;t&#xE9;rog&#xE8;ne survenant chez les adultes, reste mal comprise.

Article	Year
Nucleic acids research\| PubMed ID: 20631007	2010
The anti-tumor drug E7107 reveals an essential role for SF3b in remodeling U2 snRNP to expose the branch point-binding region. Genes & development\| PubMed ID: 21363962	2011
SF3B1 and other novel cancer genes in chronic lymphocytic leukemia. The New England journal of medicine\| PubMed ID: 22150006	2011

Eric G. Folco

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