antibody-transfection-into-neurons-as-tool-to-study-disease

Antibody Transfection into Neurons as a Tool to Study Disease Pathogenesis

Antibodies provide the ability to gain novel insight into various events taking place in living systems.  The ability to produce highly specific ...

Veterans Administration Medical Center, Memphis, TN

University of Tennessee Health Science Center, Memphis, TN

&#x5728;&#x751F;&#x7269;&#x5B66;&#x4E2D;&#x7684;&#x57FA;&#x672C;&#x95EE;&#x9898;&#x662F;&#x5982;&#x4F55;&#x5728; G &#x86CB;&#x767D;&#x5076;&#x8054;&#x53D7;&#x4F53;&#x7684;&#x5404;&#x79CD;&#x56FE;&#x6848;&#x53C2;&#x4E0E;&#x7CBE;&#x5FC3;&#x7B56;&#x5212;&#x7684;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x5206;&#x5B50;&#x7684;&#x4E0D;&#x540C;&#x804C;&#x80FD;&#x3002;&#x8FD9;&#x91CC;&#x6211;&#x4EEC;&#x4ECB;&#x7ECD;&#x4EBA;&#x7C7B; beta (1) &#x7B2C;&#x4E09;&#x80DE;&#x5185;&#x5FAA;&#x73AF;&#x4E2D;&#x7684;&#x4F4D;&#x7F6E; 312 &#x4E1D;&#x6C28;&#x9178;&#x6B8B;&#x57FA;&#x7684;&#x57FA;&#x672C;&#x4F5C;&#x7528;-&#x80BE;&#x4E0A;&#x817A;&#x7D20;&#x80FD;&#x53D7;&#x4F53; (beta(1)-AR) &#x53D7;&#x4F53;&#x6FC0;&#x52A8;&#x5242;&#x5185;&#x5728;&#x541E;&#x5FAA;&#x73AF;&#x4E2D;&#x3002;&#x53D7;&#x4F53;&#x56DE;&#x6536;&#x5B9E;&#x9A8C;&#x4E2D;&#xFF0C;&#x7531;&#x8FDB;&#x884C;&#x76D1;&#x6D4B;&#x5171;&#x805A;&#x7126;&#x663E;&#x5FAE;&#x955C;&#xFF0C;&#x6FC0;&#x52A8;&#x5242;&#x5185;&#x5728;&#x91CE;&#x751F;&#x578B; (WT) beta 1-AR &#x56DE;&#x6536;&#x4E0E; t(0.5) &#x7684; + /-3 &#x5206;&#x949F;&#x8BF1;&#x53D8;&#x7684; Ser(312) &#x5230;&#x4E19;&#x6C28;&#x9178; &#xFF08;Ala beta(1)-AR)--&gt; &#x6216;&#x5230;&#x4E1D;&#x6C28;&#x9178;&#x6A21;&#x62DF;&#x5929;&#x95E8;&#x51AC;&#x6C28;&#x9178; &#xFF08;Asp beta(1)-AR)--&gt; Ser(312) &#x5BFC;&#x81F4;&#x4E86;&#x836F;&#x7406;&#x5B66;&#x533A;&#x5206; WT beta 1 &#x6C29;&#x6C14;&#x4FDD;&#x62A4;&#x7684; beta 1-AR &#x6784;&#x9020;&#x7684; Ser(312) 14&#x5185;&#x5728;&#x5316;&#x7684; Asp beta 1-AR--&gt; Ser(312) &#x56DE;&#x6536;&#x6709;&#x6548;&#x5730;&#x4E0E; t(0.5) &#x7684; 11 + /-3 &#x5206;&#x949F;&#xFF0C;&#x800C;&#x5185;&#x5728;&#x7684; Ala beta 1-AR--&gt; Ser(312) &#x4E0D;&#x662F;&#x5FAA;&#x73AF;&#x518D;&#x7528;&#x6216;&#x529F;&#x80FD;&#x4E0A; resensitized endosomal &#x9014;&#x5F84;&#x3002;&#x56E0;&#x4E3A;&#x6B64;&#x4E1D;&#x6C28;&#x9178;&#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x7684;&#x73AF;&#x78F7;&#x9178;&#x817A;&#x82F7;-&#x4F9D;&#x8D56;&#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#x6FC0;&#x9176; (PKA) &#x5047;&#x5B9A;&#x6E23;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x5BA1;&#x67E5;&#x4E86;&#x4F5C;&#x7528; PKA &#x751F;&#x5316;&#x6216;&#x57FA;&#x56E0;&#x4F7F;&#x7528;&#x5360;&#x4E3B;&#x5BFC;&#x5730;&#x4F4D;&#x7684;&#x6D88;&#x6781; PKA &#x6784;&#x9020; 1 &#x4E34;&#x573A;&#x6291;&#x5236;&#x963B;&#x6B62;&#x56DE;&#x6536;&#x5185;&#x5728; WT beta 1-&#x4E34;&#x573A;&#x7684;&#x5185;&#x5728; beta &#x7684;&#x56DE;&#x6536;&#x6B64;&#x6FC0;&#x9176;&#x7684;&#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x7814;&#x7A76;&#x63ED;&#x793A; beta 1-AR &#x90E8;&#x5206;&#x78F7;&#x9178; PKA &#x548C;&#x8BE5;&#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x7684; beta 1-AR PKA &#x50AC;&#x5316;&#x4E9A;&#x5355;&#x4F4D;&#x7684;&#x4EC5;&#x5728; Ser(312) &#x65F6;&#x51FA;&#x73B0;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x7ED3;&#x679C;&#x786E;&#x5B9A;&#x4E00;&#x4E2A;&#x65B0;&#x7684;&#x4FE1;&#x53F7;&#x6A21;&#x5F0F;&#x5728;&#x540C;&#x6E90;&#x7684;&#x6FC0;&#x9176;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x6240;&#x63D0;&#x4F9B;&#x7684;&#x79FB;&#x5411;&#x56DE;&#x6536;&#x548C; resensitization &#x7684;&#x5185;&#x90E8;&#x5316;&#x53D7;&#x4F53;&#x7684;&#x884C;&#x7A0B;&#x7684;&#x53EF;&#x9006;&#x4FEE;&#x6539;&#x3002;&#x56E0;&#x6B64;&#xFF0C;G &#x86CB;&#x767D;&#x5076;&#x8054;&#x53D7;&#x4F53;&#x4ECB;&#x5BFC; PKA &#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x53EF;&#x80FD;&#x5BFC;&#x81F4;&#x4F9D;&#x8D56;&#x6BCD;&#x9898;&#x7684;&#x8131;&#x654F;&#x6216; resensitization&#x3002;

&#x73AF;&#x78F7;&#x9178;&#x817A;&#x82F7;&#x4F9D;&#x8D56;&#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#x6FC0;&#x9176;&#x7684;&#x540C;&#x6E90; resensitization beta1-&#x80BE;&#x4E0A;&#x817A;&#x7D20;&#x80FD;&#x53D7;&#x4F53;&#x7684;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;

A fundamental question in biology is how the various motifs in G protein-coupled receptors participate in the divergent functions orchestrated by these molecules. Here we describe a fundamental role for a serine residue at position 312 in the third intracellular loop of the human beta(1)-adrenergic receptor (beta(1)-AR) in endocytic recycling of the agonist-internalized receptor. In receptor recycling experiments that were monitored by confocal microscopy, the agonist-internalized wild-type (WT) beta(1)-AR recycled with a t(0.5) of 14 +/- 3 min. Mutagenesis of Ser(312) to alanine (Ser(312) --> Ala beta(1)-AR) or to the phosphoserine mimic aspartic acid (Ser(312) --> Asp beta(1)-AR) resulted in beta(1)-AR constructs that were pharmacologically indistinguishable from the WT beta(1)-AR. The internalized Ser(312) --> Asp beta(1)-AR recycled efficiently with a t(0.5) of 11 +/- 3 min, whereas the internalized Ser(312) --> Ala beta(1)-AR was not recycled or functionally resensitized through the endosomal pathway. Because this serine is a putative residue for phosphorylation by the cyclic AMP-dependent protein kinase (PKA), we examined the role of this kinase in recycling of the internalized beta(1)-AR. Inhibition of PKA biochemically or genetically using a dominant negative PKA construct blocked the recycling of the internalized WT beta(1)-AR. Phosphorylation studies revealed that the beta(1)-AR is partially phosphorylated by PKA and that phosphorylation of the beta(1)-AR by the catalytic subunit of PKA occurs exclusively at Ser(312). Our results identify a new signaling paradigm in which homologous activation of a kinase provides a reversible modification that shifts the itinerary of the internalized receptor toward recycling and resensitization. Therefore, PKA-mediated phosphorylation of G protein-coupled receptors might result in motif-dependent desensitization or resensitization.

Role of the cyclic AMP-dependent protein kinase in homologous resensitization of the beta1-adrenergic receptor.

Une question fondamentale en biologie est la fa&ccedil;on dont les divers motifs dans les r&eacute;cepteurs coupl&eacute;s aux prot&eacute;ines G interviennent dans les fonctions divergentes orchestr&eacute;es par ces mol&eacute;cules. Nous d&eacute;crivons ici un r&ocirc;le fondamental pour un r&eacute;sidu s&eacute;rine &agrave; la poste 312 dans la troisi&egrave;me boucle intracellulaire de la b&ecirc;ta humain (1)-r&eacute;cepteur adr&eacute;nergique (beta(1)-AR) en recyclage endocytose des r&eacute;cepteurs internalis&eacute;s par l&#39;agoniste. R&eacute;cepteurs recyclage des exp&eacute;riences qui ont &eacute;t&eacute; suivis par microscopie confocale, la version b&ecirc;ta de sauvage internalis&eacute;s par l&#39;agoniste (WT) (1)-AR recycl&eacute; avec un t(0.5) de 14 +/-3 min. mutag&eacute;n&egrave;se de Ser(312) d&#39;alanine (Ser(312)--&gt; Ala beta(1)-AR) ou &agrave; l&#39;acide aspartique mimiques phosphos&eacute;rine (Ser(312)--&gt; beta(1)-AR) Asp s&#39;est sold&eacute;e b&ecirc;ta (1) - constructions AR qui se distinguaient sur le plan pharmacologique de la beta WT (1) - AR. Le Ser(312) int&eacute;rioris&eacute;e--&gt; b&ecirc;ta Asp (1) - AR recycl&eacute; efficacement avec un t(0.5) de 11 +/-3 min, alors que l&#39;int&eacute;riorisation Ser(312)--&gt; b&ecirc;ta Ala (1) - AR n&#39;&eacute;tait pas recycl&eacute; ou resensibiliser fonctionnellement par la voie endosomale. Car cette s&eacute;rine est un r&eacute;sidu putatif de la phosphorylation par l&#39;AMP cyclique d&eacute;pendante prot&eacute;ine kinase (PKA), nous avons examin&eacute; le r&ocirc;le de cette kinase dans le recyclage de la b&ecirc;ta int&eacute;rioris&eacute;e (1) - AR. Inhibition de PKA biochimiquement et g&eacute;n&eacute;tiquement &agrave; l&#39;aide d&#39;une construction PKA n&eacute;gative dominante bloqu&eacute; le recyclage de la b&ecirc;ta WT int&eacute;rioris&eacute;e (1) - &eacute;tudes de Phosphorylation AR. a r&eacute;v&eacute;l&eacute; que la b&ecirc;ta (1) - AR est partiellement phosphoryl&eacute;e par la PKA et que la phosphorylation de la b&ecirc;ta (1) - AR de la sous-unit&eacute; catalytique de la PKA se produit exclusivement au Ser(312). Nos r&eacute;sultats indiquent un nouveau paradigme de signalisation dans lequel activation homologue d&#39;une kinase fournit une modification r&eacute;versible qui se d&eacute;place de l&#39;itin&eacute;raire du r&eacute;cepteur vers le recyclage et sensibilisaient int&eacute;rioris&eacute;. Par cons&eacute;quent, PKA-phosphorylation m&eacute;di&eacute;e par des r&eacute;cepteurs coupl&eacute;s &agrave; la prot&eacute;ine G pourrait entra&icirc;ner une d&eacute;sensibilisation motif d&eacute;pendant ou sensibilisaient.

R&ocirc;le de l&#39;AMP cyclique-prot&eacute;ine kinase d&eacute;pendante dans sensibilisaient homologue des r&eacute;cepteurs beta1-adr&eacute;nergiques.

Eine grundlegende Frage in der Biologie ist, wie die verschiedenen Motive G-Protein-gekoppelte Rezeptoren in den unterschiedlichen Funktionen, orchestriert von dieser Molek&uuml;le teilnehmen. Hier beschreiben wir eine grundlegende Rolle f&uuml;r eine Serin-R&uuml;ckstand an Position 312 in der dritten intrazellul&auml;ren Schleife des menschlichen Beta (1)-adrenerge Rezeptor (beta(1)-AR) in endocytic recycling von den Rezeptor Agonist-verinnerlicht. Rezeptor-recycling-Experimente waren, die durch konfokale Mikroskopie, der Agonist-verinnerlicht Wildtyp (WT) Beta 1-AR Recycling mit einer t(0.5) von 14 +/-3 min. Mutagenese des Ser(312) von Alanin (Ser(312)--&gt; Ala beta(1)-AR) oder Phosphoserinphosphatase mimischer Asparagins&auml;ure (Ser(312)--&gt; Asp beta(1)-AR) resultierte in Beta-1-AR-Konstrukte, die pharmakologisch ununterscheidbar von den WT Beta 1-AR. waren &uuml;berwacht Die verinnerlichten Ser(312)--&gt; Asp Beta 1-AR Recycling effizient mit einer t(0.5) von 11 +/-3 min, w&auml;hrend die verinnerlichten Ser(312)--&gt; Ala Beta 1-AR nicht recycelt oder funktional durch die Endosomen-Pathway nationalstaatlicher wurde. Da diese Serin vermeintlichen R&uuml;ckst&auml;nde f&uuml;r die Phosphorylierung von der zyklischem AMP-abh&auml;ngige Proteinkinase (PKA) ist, untersucht die Rolle der diese Kinase des verinnerlichten Beta 1-AR. Hemmung der PKA biochemisch oder genetisch mit einer dominanten negative PKA-Konstrukt blockiert die verinnerlichten WT Beta 1-AR-recycling Recycling Phosphorylierung Studien belegten, dass die Beta-1-AR teilweise durch PKA und die Phosphorylierung der Beta 1-AR durch die katalytische Untereinheit des PKA phosphoryliert ist erfolgt ausschlie&szlig;lich auf Ser(312). Unsere Ergebnisse identifiziert ein neues Signal Paradigma, in dem homologe Aktivierung einer Kinase eine reversible &Auml;nderung bereitstellt, die die Reiseroute des verinnerlichten Rezeptors in Richtung recycling und Resensitization verschiebt. Daher kann PKA-vermittelte Phosphorylierung von G-Protein-gekoppelter Rezeptoren Motiv-abh&auml;ngige Desensibilisierung oder Resensitization f&uuml;hren.

Rolle der zyklischem AMP-abh&auml;ngigen Proteinkinase in homologe Resensitization die beta1-adrenerge Rezeptor.

Una questione fondamentale in biologia &egrave; come i diversi motivi di recettori accoppiati a proteine G partecipano le funzioni divergenti orchestrate da queste molecole. Qui descriviamo un ruolo fondamentale per un residuo di serina in posizione 312 del terzo ciclo intracellulare della beta umana (1)-recettori adrenergici (beta(1)-AR) in endocitico riciclo del recettore agonista interiorizzato. Nel recettore riciclaggio esperimenti che sono stati monitorati da microscopia confocal, beta agonista interiorizzato wild-type (WT) (1)-AR riciclato con una t(0.5) di 14 + 3 min mutagenesi di Ser(312) di alanina (Ser(312)--&gt; Ala beta(1)-AR) o l&#39;acido aspartico mimico phosphoserine (Ser(312)--&gt; Asp beta(1)-AR) portato a beta (1) - costrutti AR che erano farmacologicamente indistinguibili da beta WT (1) - AR. Il Ser(312) interiorizzata--&gt; beta Asp (1) - riciclati in modo efficiente con un t(0.5) di 11 + 3 min, considerando che la Ser(312) interiorizzata--&gt; beta Ala (1) AR - AR non &egrave; stato riciclato o funzionalmente resensitized attraverso il pathway endosomal. Perch&eacute; questa serina &egrave; un putativo residuo per fosforilazione dalla chinasi di proteina amp&egrave;re ciclico-dipendente (PKA), abbiamo esaminato il ruolo di questa chinasi nel riciclaggio della beta interiorizzata (1) - AR. inibizione della PKA biochimicamente o geneticamente usando un costrutto PKA negativo dominante bloccato il riciclaggio della beta WT interiorizzata (1) - AR. fosforilazione studi hanno rivelato che la beta (1) - AR &egrave; parzialmente fosforilate da PKA e che la fosforilazione della beta (1) - AR della subunit&agrave; catalitica di PKA avviene esclusivamente a Ser(312). I nostri risultati identificano un nuovo paradigma di segnalazione in cui attivazione omologo di una chinasi fornisce una modificazione reversibile che sposta l&#39;itinerario del recettore interiorizzato verso il riciclo e resensitization. Quindi, mediata da PKA fosforilazione dei recettori accoppiati a proteine G potrebbe causare desensibilizzazione motif-dipendente o resensitization.

Ruolo dell&#39;AMP ciclico-dependent protein kinase in omologa resensitization del recettore beta1-adrenergico.

&#x751F;&#x7269;&#x5B66;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x57FA;&#x672C;&#x7684;&#x306A;&#x554F;&#x984C;&#x306F;&#x3001;&#x3069;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306B;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x5206;&#x5B50;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x4ED5;&#x7D44;&#x307E;&#x308C;&#x305F;&#x767A;&#x6563;&#x95A2;&#x6570; G &#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x5171;&#x5F79;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x306E;&#x69D8;&#x3005; &#x306A;&#x30E2;&#x30C1;&#x30FC;&#x30D5;&#x306B;&#x53C2;&#x52A0;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x6211;&#x3005; &#x306F;&#x30BB;&#x30EA;&#x30F3;&#x6B8B;&#x57FA;&#x4F4D;&#x7F6E; 312 &#x7B2C;&#x4E09;&#x7D30;&#x80DE;&#x5185;&#x30EB;&#x30FC;&#x30D7;&#x306E;&#x3072;&#x3068;&#x30D9;&#x30FC;&#x30BF;&#x7248; (1) &#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x57FA;&#x672C;&#x7684;&#x306A;&#x5F79;&#x5272;&#x306B;&#x3064;&#x3044;&#x3066;&#x8AAC;&#x660E;&#x3057;&#x307E;&#x3059;-&#x30A2;&#x30C9;&#x30EC;&#x30CA;&#x30EA;&#x30F3;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53; (beta(1)-AR) &#x30A8;&#x30F3;&#x30C9;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9;&#x306E;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x306E;&#x30A2;&#x30B4;&#x30CB;&#x30B9;&#x30C8;&#x3092;&#x5185;&#x9762;&#x5316;&#x30EA;&#x30B5;&#x30A4;&#x30AF;&#x30EB;&#x3002;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x30A2;&#x30B4;&#x30CB;&#x30B9;&#x30C8;&#x5185;&#x9762;&#x91CE;&#x751F;&#x578B; &#xFF08;WT&#xFF09; &#x30D9;&#x30FC;&#x30BF;&#x7248; (1) &#x5171;&#x7126;&#x70B9;&#x306E;&#x9855;&#x5FAE;&#x93E1;&#x6CD5;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x76E3;&#x8996;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x5B9F;&#x9A13;&#x3092;&#x30EA;&#x30B5;&#x30A4;&#x30AF;&#x30EB;-AR &#x306E;&#x30EA;&#x30B5;&#x30A4;&#x30AF;&#x30EB;&#x3092; 14 &plusmn; 3 &#x5206;&#x5909;&#x7570; Ser(312) &#x306E;&#x30A2;&#x30E9;&#x30CB;&#x30F3;&#x306E; t(0.5) &#xFF08;Ser(312) Ala beta(1)-AR)--&gt; &#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x5F79;&#x5272;&#x306E;&#x6A21;&#x5023;&#x30A2;&#x30B9;&#x30D1;&#x30E9;&#x30AE;&#x30F3;&#x9178; (Asp beta(1)-AR)--&gt; Ser(312) &#x7D50;&#x679C;&#x306E;&#x30D9;&#x30FC;&#x30BF;&#x7248; (1) - &#x85AC;&#x7406; WT &#x30D9;&#x30FC;&#x30BF; (1) &#x304B;&#x3089;&#x533A;&#x5225;&#x3055;&#x308C;&#x305F; AR &#x30B3;&#x30F3;&#x30B9;&#x30C8;&#x30E9;&#x30AF;&#x30C8; - &#x7740;&#x5185;&#x9762; Ser(312) Asp &#x30D9;&#x30FC;&#x30BF; (1) - AR Ala &#x30D9;&#x30FC;&#x30BF; (1) &#x306E;&#x5185;&#x9762;&#x306E; Ser(312)--&gt; &#x306B;&#x5BFE;&#x3057;&#x52B9;&#x7387;&#x7684;&#x306B; 11 3 &#x5206; +/-&#x306E; t(0.5) &#x306E;&#x30EA;&#x30B5;&#x30A4;&#x30AF;&#x30EB;---&gt; AR &#x3060;&#x3063;&#x305F;&#x306A;&#x3044;&#x30EA;&#x30B5;&#x30A4;&#x30AF;&#x30EB;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x6A5F;&#x80FD;&#x7684;&#x30A8;&#x30F3;&#x30C9;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x7D4C;&#x8DEF;&#x3067; resensitized&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x30BB;&#x30EA;&#x30F3; &#x30B5;&#x30A4;&#x30AF;&#x30EA;&#x30C3;&#x30AF; AMP &#x4F9D;&#x5B58;&#x578B;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC; (PKA) &#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x306E;&#x63A8;&#x5B9A;&#x306E;&#x6B8B;&#x6E23;&#x306F;&#x3001;&#x3067;&#x3059;&#x306E;&#x3067;&#x3001;&#x6211;&#x3005; &#x306E;&#x5185;&#x9762;&#x30D9;&#x30FC;&#x30BF; (1) &#x30EA;&#x30B5;&#x30A4;&#x30AF;&#x30EB;&#x3053;&#x306E;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x306E;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x691C;&#x8A0E;&#x3057;&#x305F;-&#x751F;&#x5316;&#x5B66;&#x7684;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x907A;&#x4F1D;&#x7684;&#x652F;&#x914D;&#x7684;&#x306A;&#x8CA0; PKA &#x30B3;&#x30F3;&#x30B9;&#x30C8;&#x30E9;&#x30AF;&#x30C8;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066; PKA &#x306E;&#x7740;&#x963B;&#x5BB3;&#x30D6;&#x30ED;&#x30C3;&#x30AF;&#x5185;&#x9762; WT &#x30D9;&#x30FC;&#x30BF; (1) &#x306E;&#x30EA;&#x30B5;&#x30A4;&#x30AF;&#x30EB;&#x7740;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x306E;&#x7814;&#x7A76;&#x306F;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x30D9;&#x30FC;&#x30BF; (1) - AR &#x306F;&#x3001;PKA &#x3068;&#x30D9;&#x30FC;&#x30BF;&#x7248; &#xFF08;1&#xFF09; &#x306E;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x90E8;&#x5206;&#x7684; - AR PKA &#x306E;&#x89E6;&#x5A92;&#x30B5;&#x30D6;&#x30E6;&#x30CB;&#x30C3;&#x30C8;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x6392;&#x4ED6;&#x7684; Ser(312) &#x3067;&#x767A;&#x751F;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005; &#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x306F;&#x3001;&#x76F8;&#x540C;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x306E;&#x30EA;&#x30B5;&#x30A4;&#x30AF;&#x30EB;&#x3068; resensitization &#x306B;&#x5411;&#x304B;&#x3063;&#x3066;&#x5185;&#x9762;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x306E;&#x65C5;&#x7A0B;&#x3092;&#x30B7;&#x30D5;&#x30C8; &#x30EA;&#x30D0;&#x30FC;&#x30B7;&#x30D6;&#x30EB;&#x306E;&#x5909;&#x66F4;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x65B0;&#x3057;&#x3044;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#x306E;&#x30D1;&#x30E9;&#x30C0;&#x30A4;&#x30E0;&#x3092;&#x8B58;&#x5225;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3057;&#x305F;&#x304C;&#x3063;&#x3066;&#x3001;G &#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x5171;&#x5F79;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x306E;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x3092; PKA &#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x305F;&#x30E2;&#x30C1;&#x30FC;&#x30D5;&#x4F9D;&#x5B58;&#x8131;&#x611F;&#x4F5C;&#x307E;&#x305F;&#x306F; resensitization &#x3067;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

Beta1 &#x30A2;&#x30C9;&#x30EC;&#x30CA;&#x30EA;&#x30F3;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x76F8;&#x540C; resensitization &#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B; CAMP &#x4F9D;&#x5B58;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C6;&#x30A4;&#x30F3;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x306E;&#x5F79;&#x5272;&#x3002;

&#xC0DD;&#xBB3C;&#xD559;&#xC5D0;&#xC11C; &#xADFC;&#xBCF8;&#xC801;&#xC778; &#xC9C8;&#xBB38; G &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xACB0;&#xD569; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4;&#xC5D0; &#xB2E4;&#xC591; &#xD55C; &#xBAA8;&#xD2F0;&#xD504;&#xAC00;&#xC774; &#xBD84;&#xC790;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC870;&#xC728; &#xB41C; &#xBD84;&#xAE30; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC5D0; &#xCC38;&#xC5EC; &#xD558;&#xB294; &#xBC29;&#xBC95; &#xC774;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC; &#xC778;&#xAC04;&#xC758; &#xBCA0;&#xD0C0; (1)&#xC758; &#xC138; &#xBC88;&#xC9F8; &#xC138;&#xD3EC;&#xB0B4; &#xB8E8;&#xD504;&#xC5D0; &#xC704;&#xCE58; 312&#xC5D0;&#xC11C; &#xB5A0;&#xB4E4;&#xACE0; &#xC794;&#xB958;&#xBB3C;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xADFC;&#xBCF8;&#xC801;&#xC778; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xC124;&#xBA85; &#xD558;&#xB294; &#xC5EC;&#xAE30;-&#xC544;&#xB4DC;&#xB808;&#xB0A0;&#xB9B0; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; (beta(1)-AR) &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; &#xAE38; &#xD56D; &#xC81C; &#xB0B4; &#xBA74;&#xC758; endocytic &#xC7AC;&#xD65C;&#xC6A9;. &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; &#xC7AC;&#xD65C;&#xC6A9; &#xC2E4;&#xD5D8; &#xD558;&#xB294; confocal &#xD604;&#xBBF8;&#xACBD; &#xAC80;&#xC0AC; &#xBC95;, &#xAE38; &#xD56D; &#xC81C; &#xB0B4; &#xBA74; &#xC57C;&#xC0DD;-&#xD0C0;&#xC785; (WT) &#xBCA0;&#xD0C0; (1)-&#xC544;&#xCE78;&#xC18C; 3 &#xC54C;&#xB77C;&#xB2CC; (Ser(312) Ala beta(1)-AR)--&gt; &#xB610;&#xB294; phosphoserine &#xBAA8;&#xBC29; aspartic &#xC0B0; &#xC131; (Asp beta(1)-AR)--&gt; Ser(312) &#xBCA0;&#xD0C0; (1)-&#xC544;&#xCE78;&#xC18C; &#xAD6C;&#xBB38; pharmacologically WT&#xB294; &#xBCA0;&#xD0C0; (1)-&#xC544;&#xCE78;&#xC18C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xAD6C;&#xBCC4;&#xD560; &#xC218; &#xC5C6;&#xC5C8;&#xB358; &#xACB0;&#xACFC;&#xB97C; ser(312)&#xC758; &#xBD84; Mutagenesis + 14&#xC758; t(0.5)&#xC640; &#xD568;&#xAED8; &#xC7AC;&#xD65C;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xAC10;&#xC2DC; &#xD588;&#xB2E4; Ala &#xBCA0;&#xD0C0; (1)-&#xC544;&#xCE78;&#xC18C;--&gt; &#xB0B4; &#xBA74;&#xB41C; Ser(312) &#xC7AC;&#xD65C;&#xC6A9; &#xB418;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC558;&#xAC70;&#xB098; endosomal &#xD1B5;&#xB85C; &#xD1B5;&#xD574; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; resensitized &#xBC18;&#xBA74; Asp &#xBCA0;&#xD0C0; (1)-&#xC544;&#xCE78;&#xC18C;--&gt; &#xB0B4; &#xBA74;&#xB41C; Ser(312) 3 &#xBD84; + 11 t(0.5)&#xC640; &#xD568;&#xAED8; &#xD6A8;&#xC728;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xC7AC;&#xD65C;&#xC6A9;. &#xC774; &#xB5A0;&#xB4E4;&#xACE0; &#xC21C;&#xD658; &#xC570;&#xD504; &#xC885;&#xC18D; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xD0A4; &#xB2C8; &#xC544; &#xC81C; (PKA)&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC778; &#xC0B0;&#xD654;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC0C1; &#xCC0C; &#xAEBC; &#xAE30; &#xB54C;&#xBB38;&#xC5D0; &#xC6B0;&#xB9AC; &#xAC80;&#xC0AC; &#xC5ED;&#xD560;&#xC758; &#xB0B4; &#xBA74;&#xB41C; &#xBCA0;&#xD0C0; (1)-&#xC544;&#xCE78;&#xC18C; &#xC5B5;&#xC81C;&#xC758; PKA &#xD654;&#xD559;&#xC801; &#xB610;&#xB294; &#xC720;&#xC804;&#xC73C;&#xB85C; &#xC9C0;&#xBC30;&#xC801;&#xC778; &#xBD80;&#xC815;&#xC801;&#xC778; PKA &#xAD6C;&#xBB38;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xCC28;&#xB2E8; &#xB41C; &#xB0B4; &#xBA74;&#xB41C; WT &#xBCA0;&#xD0C0; (1)-&#xC544;&#xCE78;&#xC18C; &#xC7AC;&#xD65C;&#xC6A9; &#xC7AC;&#xD65C;&#xC6A9;&#xC774; &#xB2C8;&#xC758; &#xC778; &#xC0B0;&#xD654; &#xC5F0;&#xAD6C; PKA&#xC758; &#xCD09;&#xB9E4; &#xC18C; &#xB2E8;&#xC704;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xBCA0;&#xD0C0; (1)-&#xC544;&#xCE78;&#xC18C; PKA&#xC640; &#xBCA0;&#xD0C0; (1)-&#xC544;&#xCE78;&#xC18C;&#xC758; &#xADF8; &#xC778; &#xC0B0;&#xD654;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; phosphorylated &#xBD80;&#xBD84;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xBC1D;&#xD600; ser(312)&#xC5D0; &#xB300;&#xD574;&#xC11C;&#xB9CC; &#xBC1C;&#xC0DD;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xACB0;&#xACFC; kinase&#xC758; &#xB3D9;&#xC885; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xC7AC;&#xD65C;&#xC6A9; &#xBC0F; resensitization&#xB97C; &#xD5A5;&#xD574; &#xB0B4; &#xBA74;&#xB41C; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4;&#xC758; &#xC5EC;&#xC815;&#xC73C;&#xB85C; &#xC774;&#xB3D9; &#xAC00;&#xB2A5;&#xD574; &#xC218;&#xC815;&#xC5D0;&#xC11C;&#xB294; &#xC0C8;&#xB85C;&#xC6B4; &#xC2E0;&#xD638; &#xD328;&#xB7EC;&#xB2E4;&#xC784;&#xC744; &#xC2DD;&#xBCC4; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB530;&#xB77C;&#xC11C;, G &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xACB0;&#xD569; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4;&#xC758; &#xC778; &#xC0B0;&#xD654; PKA &#xC911;&#xC7AC; &#xBAA8;&#xD2F0;&#xBE0C; &#xC885;&#xC18D; &#xB454;&#xAC10; &#xB610;&#xB294; resensitization &#xB420; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Beta1 &#xC544;&#xB4DC;&#xB808;&#xB0A0;&#xB9B0; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4;&#xC758; &#xB3D9;&#xC885; resensitization&#xC5D0;&#xC11C; &#xC21C;&#xD658; &#xC570;&#xD504; &#xC885;&#xC18D; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xD0A4; &#xB2C8; &#xC544;&#xC758; &#xC5ED;&#xD560;.

Una pregunta fundamental en biolog&iacute;a es c&oacute;mo los diversos motivos en receptores acoplados a prote&iacute;na G participan en las funciones divergentes orquestadas por estas mol&eacute;culas. Aqu&iacute; describimos un papel fundamental para un residuo de serina en la posici&oacute;n 312 en el tercer lazo intracelular de la beta humana (1)-receptor adren&eacute;rgico (beta(1)-AR) en reciclaje endoc&iacute;ticas del receptor agonista-interiorizado. En experimentos de reciclaje del receptor fueron supervisados por microscop&iacute;a confocal, el agonista-interiorizado wild-type (WT) beta 1-AR reciclado con un t(0.5) de 14 +/-3 minutos mutag&eacute;nesis de Ser(312) a la alanina (Ser(312)--&gt; Ala beta(1)-AR) y el &aacute;cido asp&aacute;rtico m&iacute;mica de Fosfoserina (Ser(312)--&gt; Asp beta(1)-AR) dio lugar a construcciones de AR-1 beta que eran farmacol&oacute;gicamente indistinguibles de la WT beta 1-AR. El Ser(312) internalizada--&gt; Asp beta 1-AR reciclado eficientemente con una t(0.5) de 11 + /-3 min, mientras que el Ser(312) internalizada--&gt; Ala beta 1-AR no fue reciclado o funcionalmente sensibilizado a trav&eacute;s de la v&iacute;a endosomal. Porque este serina es un residuo putativo de fosforilaci&oacute;n por la quinasa dependiente de AMP c&iacute;clico (PKA), examinamos el papel de esta quinasa en el reciclaje de la internalizada beta 1-AR. inhibici&oacute;n de PKA bioqu&iacute;mico o gen&eacute;tico utilizando una construcci&oacute;n PKA negativa dominante bloqueado el reciclaje de la internalizada WT beta 1-AR. fosforilaci&oacute;n estudios revelaron que la beta 1-AR parcialmente es fosforilado por PKA y que la fosforilaci&oacute;n de la beta 1-AR por la subunidad catal&iacute;tica de PKA se produce exclusivamente en Ser(312). Nuestros resultados identifican un nuevo paradigma de se&ntilde;alizaci&oacute;n que hom&oacute;logo activaci&oacute;n de una quinasa proporciona una modificaci&oacute;n reversible que cambia el Itinerario del receptor hacia el reciclaje y resensitization internalizado. Por lo tanto, podr&iacute;a producir la fosforilaci&oacute;n mediada por PKA de receptores acoplados a prote&iacute;na G desensibilizaci&oacute;n dependiente de adorno o resensitization.

Papel de la quinasa dependiente de AMP c&iacute;clico en resensitization hom&oacute;logo del receptor beta1-adren&eacute;rgico.

&#x5185;&#x4E24;&#x4EB2;&#x6027;&#x87BA;&#x65CB; 8 &#x4EBA; beta1-&#x80BE;&#x4E0A;&#x817A;&#x7D20;&#x80FD;&#x53D7;&#x4F53; (beta1-AR) &#x7684;&#x51E0;&#x4E2A;&#x5173;&#x952E;&#x6C28;&#x57FA;&#x9178;&#x88AB;&#x8BF1;&#x53D8;&#x7C73;&#x6765;&#x63CF;&#x8FF0;&#x4ED6;&#x4EEC;&#x5728;&#x7531; G &#x86CB;&#x767D;&#x5076;&#x8054;&#x53D7;&#x4F53;&#x4FE1;&#x53F7;&#x8F6C;&#x5BFC;&#x4E2D;&#x7684;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;&#x82EF;&#x4E19;&#x6C28;&#x9178;&#x7EC4;&#x6C28;&#x9178; (F383H) &#x7684;&#x758F;&#x6C34;&#x63A5;&#x53E3;&#x4E2D;&#x4F4D;&#x7F6E; 383 &#x8BF1;&#x53D8;&#x963B;&#x6B62;&#x53D7;&#x4F53;&#xFF0C;&#x6307;&#x793A;&#x7684;&#x87BA;&#x65CB; 8 &#x65B9;&#x5411;&#x91CD;&#x8981;&#x7684;&#x53D7;&#x4F53;&#x751F;&#x7269;&#x5408;&#x6210;&#x7684;&#x751F;&#x7269;&#x5408;&#x6210;&#x3002;&#x8BF1;&#x53D8;&#x7684;&#x5929;&#x95E8;&#x51AC;&#x6C28;&#x9178;&#x4EAE;&#x6C28;&#x9178; (D382L) &#x5230;&#x4F4D;&#x7F6E; 382 &#x4EB2;&#x6C34;&#x754C;&#x9762;&#x4E2D;&#x51CF;&#x5C11;&#x7ED1;&#x5B9A;&#xFF0C;&#x8BA9;&#x4ECE; G &#x86CB;&#x767D;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x53D7;&#x4F53;&#x3002;&#x4F4D;&#x7F6E; 384 &#x5230;&#x8C37;&#x6C28;&#x9170;&#x80FA; (R384Q) &#x6216;&#x8C37;&#x6C28;&#x9178; (R384E) &#x57FA;&#x672C;&#x7CBE;&#x6C28;&#x9178;&#x6B8B;&#x7559;&#x7684;&#x8BF1;&#x53D8;&#x589E;&#x52A0;&#x57FA;&#x5E95;&#x548C;&#x6FC0;&#x52A8;&#x5242;&#x523A;&#x6FC0;&#x817A;&#x82F7;&#x9178;&#x73AF;&#x5316;&#x9176;&#x7684;&#x6D3B;&#x52A8;&#x3002;R384Q &#x548C; R384E &#x663E;&#x793A;&#x4E00;&#x6D3B;&#x52A8;&#x53D7;&#x4F53;&#x4E0E;&#x5173;&#x8054;&#xFF0C;&#x56E0;&#x4E3A;&#x53CD;&#x53D7;&#x4F53;&#x6FC0;&#x52A8;&#x5242;&#x663E;&#x8457;&#x51CF;&#x5C11;&#x5176;&#x63D0;&#x5347;&#x57FA;&#x5E95;&#x817A;&#x82F7;&#x9178;&#x73AF;&#x5316;&#x9176;&#x6D3B;&#x52A8;&#x7684;&#x529F;&#x80FD;&#x3002;&#x5F02;&#x4E19;&#x80BE;&#x4E0A;&#x817A;&#x7D20;&#x589E;&#x52A0;&#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x548C;&#x4FC3;&#x8FDB;&#x7684; Gly389 &#x6216; Arg389 &#x57FA;&#x56E0;&#x591A;&#x6001;&#x6027;&#x7684;&#x91CE;&#x751F;&#x578B; beta1-AR &#x8131;&#x654F;&#x4F46;&#x672A;&#x80FD;&#x51FA;&#x793A;&#x5728; R384Q &#x548C; R384E&#xFF0C;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x5F71;&#x54CD;&#xFF0C;&#x56E0;&#x4E3A;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x53D7;&#x4F53;&#x88AB;&#x6700;&#x5927;&#x9650;&#x5EA6;&#x5730;&#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x548C;&#x57FA;&#x5E95;&#x6761;&#x4EF6;&#x4E0B;&#x8FDF;&#x949D;&#x3002;&#x4E0E;&#x91CE;&#x751F;&#x578B; beta1-AR &#x819C;&#x72B6;&#x5206;&#x5E03;&#xFF0C;&#x5927;&#x591A;&#x5728;&#x80DE;&#x5185;&#x767D;&#x70B9;&#x7ED3;&#x6784;&#x5185;&#x672C;&#x5730;&#x5316;&#x4E86; R384Q &#x548C; R384E&#x3002;&#x9006;&#x53D7;&#x4F53;&#x6FC0;&#x52A8;&#x5242;&#x8FD8;&#x539F;&#x7684;&#x819C;&#x72B6;&#x5206;&#x5E03;&#x7684; R384Q &#x548C; R384E&#xFF0C;&#x6307;&#x793A;&#x4ED6;&#x4EEC;&#x901A;&#x5E38;&#x56DE;&#x6536;&#x5176;&#x6784;&#x5185;&#x90E8;&#x5316;&#x65F6;&#x88AB;&#x963B;&#x6B62;&#x7684;&#x9006;&#x53D7;&#x4F53;&#x6FC0;&#x52A8;&#x5242;&#x3002;&#x7ED3;&#x5408;&#x8BA1;&#x7B97;&#x673A;&#x5EFA;&#x6A21;&#x7684;&#x87BA;&#x65CB; 8 &#x5047;&#x5B9A;&#x4E09;&#x7EF4;&#x7EC4;&#x7EC7;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x6570;&#x636E;&#x8868;&#x660E;&#x87BA;&#x65CB; 8 &#x4E24;&#x4EB2;&#x6027;&#x7279;&#x5F81;&#x4E0E;&#x4EB2;&#x6C34;&#x754C;&#x9762;&#x5185;&#x7684; Asp382 &#x548C; Arg384 &#x4FA7;&#x94FE;&#x9884;&#x6D4B;&#x53EF;&#x80FD;&#x4F5C;&#x4E3A; G &#x86CB;&#x767D;&#x7684;&#x8BA9;&#x7F51;&#x7AD9;&#x3002;

&#x6240;&#x6D89;&#x53CA;&#x7684; G &#x86CB;&#x767D;&#x5076;&#x8054;&#x53D7;&#x4F53;&#x5728;&#x4EBA;&#x7C7B; beta1-&#x80BE;&#x4E0A;&#x817A;&#x7D20;&#x80FD;&#x53D7;&#x4F53;&#x7684;&#x87BA;&#x65CB; 8 &#x6B8B;&#x7559;&#x7269;&#x7684;&#x8868;&#x5F81;&#x3002;

Several key amino acids within amphipathic helix 8 of the human beta1-adrenergic receptor (beta1-AR) were mutagenized to characterize their role in signaling by G protein-coupled receptors. Mutagenesis of phenylalanine at position 383 in the hydrophobic interface to histidine (F383H) prevented the biosynthesis of the receptor, indicating that the orientation of helix 8 is important for receptor biosynthesis. Mutagenesis of aspartic acid at position 382 in the hydrophilic interface to leucine (D382L) reduced the binding and uncoupled the receptor from G protein activation. Mutagenesis of the basic arginine residue at position 384 to glutamine (R384Q) or to glutamic acid (R384E) increased basal and agonist-stimulated adenylyl cyclase activities. R384Q and R384E displayed features associated with constitutively active receptors because inverse agonists markedly reduced their elevated basal adenylyl cyclase activities. Isoproterenol increased the phosphorylation and promoted the desensitization of the Gly389 or Arg389 allelic variants of the wild type beta1-AR but failed to produce these effects in R384Q and R384E, because these receptors were maximally phosphorylated and desensitized under basal conditions. In contrast to the membranous distribution of the wild type beta1-AR, R384Q and R384E were localized mostly within intracellular punctate structures. Inverse agonists restored the membranous distribution of R384Q and R384E, indicating that they recycled normally when their constitutive internalization was blocked by inverse agonists. These data combined with computer modeling of the putative three-dimensional organization of helix 8 indicated that the amphipathic character of helix 8 and side chain projections of Asp382 and Arg384 within the hydrophilic interface might serve as a tethering site for the G protein.

Characterization of the residues in helix 8 of the human beta1-adrenergic receptor that are involved in coupling the receptor to G proteins.

Plusieurs acides amin&eacute;s essentiels au sein d&#39;amphipathic helix 8 du r&eacute;cepteur humain beta1-adr&eacute;nergique (b&ecirc;ta1-AR) ont &eacute;t&eacute; mutag&eacute;nis&eacute;es tant pour caract&eacute;riser leur r&ocirc;le dans la signalisation par les r&eacute;cepteurs coupl&eacute;s aux prot&eacute;ines G. Mutagen&egrave;se de la ph&eacute;nylalanine en position 383 dans l&#39;interface hydrophobe de l&#39;histidine (F383H) a emp&ecirc;ch&eacute; la biosynth&egrave;se du r&eacute;cepteur, ce qui indique que l&#39;orientation de l&#39;h&eacute;lice 8 est importante pour la biosynth&egrave;se de r&eacute;cepteur. Mutag&eacute;n&egrave;se d&#39;acide aspartique en position 382 dans l&#39;interface hydrophile en leucine (D382L) r&eacute;duit la liaison et d&eacute;saccoupl&eacute;e du r&eacute;cepteur de l&#39;activation de la prot&eacute;ine G. Mutag&eacute;n&egrave;se du r&eacute;sidu arginine base &agrave; mesure 384 de glutamine (R384Q) ou d&#39;acide glutamique (R384E) a augment&eacute; les activit&eacute;s de basale et stimul&eacute;e par l&#39;agoniste de l&#39;ad&eacute;nylyl cyclase. R384Q et R384E affichent des caract&eacute;ristiques associ&eacute;es aux r&eacute;cepteurs constitutivement actifs parce que les agonistes inverses r&eacute;duit consid&eacute;rablement leurs activit&eacute;s de cyclase ad&eacute;nylyl basale &eacute;lev&eacute;e. L&#39;isoprot&eacute;r&eacute;nol a augment&eacute; la phosphorylation et promu la d&eacute;sensibilisation des variants all&eacute;liques Gly389 ou Arg389 de la souche sauvage b&ecirc;ta1-AR mais a &eacute;chou&eacute; &agrave; produire ces effets en R384Q et R384E, parce que ces r&eacute;cepteurs &eacute;taient au maximum phosphoryl&eacute;es et d&eacute;sensibilis&eacute;s dans des conditions basales. Contrairement &agrave; la distribution membraneuse de la souche sauvage b&ecirc;ta1-AR, R384Q et R384E ont &eacute;t&eacute; localis&eacute;es principalement au sein des structures intracellulaires ponctu&eacute;es. Agonistes inverses restaur&eacute; la distribution membraneuse de R384Q et R384E, indiquant qu&#39;ils sont recycl&eacute;s normalement quand leur internalisation constitutive a &eacute;t&eacute; bloqu&eacute;e par les agonistes inverses. Ces donn&eacute;es combin&eacute;es avec la mod&eacute;lisation informatique de l&#39;organisation en trois dimensions putative d&#39;h&eacute;lice 8 indiquent que le caract&egrave;re amphipathique d&#39;h&eacute;lice 8 et des projections de cha&icirc;ne lat&eacute;rale de Asp382 et Arg384 au sein de l&#39;interface hydrophile pourraient servir d&#39;un site d&#39;attachement pour la prot&eacute;ine G.

Caract&eacute;risation des r&eacute;sidus en h&eacute;lice 8 des r&eacute;cepteurs beta1-adr&eacute;nergiques humains qui sont impliqu&eacute;es dans le couplage du r&eacute;cepteur aux prot&eacute;ines G.

Mehrere wichtige Aminos&auml;uren innerhalb amphipathische Helix 8 von den menschlichen beta1-adrenerge Rezeptor (beta1-AR) wurden mutagenized, um ihre Rolle bei der Signalisierung durch G-Protein-gekoppelte Rezeptoren zu charakterisieren. Mutagenese von Phenylalanin an Position 383 in der hydrophoben Oberfl&auml;che, Histidin (F383H) verhindert die Biosynthese des Rezeptors, darauf hinweist, dass die Ausrichtung der Helix 8 f&uuml;r Rezeptor-Biosynthese wichtig. Mutagenese von Asparagins&auml;ure an Position 382 in der hydrophile Oberfl&auml;che, Leucin (D382L) reduziert die Bindung und losgel&ouml;st von der G-Protein-Aktivierung des Rezeptors. Mutagenese des R&uuml;ckstands grundlegende Arginin an Position 384 Glutamin (R384Q) oder Glutamins&auml;ure (R384E) erh&ouml;hte basale und Agonist stimuliert Fehlfunktion Guanylatcyclase Aktivit&auml;ten. R384Q und R384E angezeigt Funktionen konstitutiv aktiven Rezeptoren zugeordnet, weil inverse Agonisten ihre erh&ouml;hten basalen Fehlfunktion Guanylatcyclase Aktivit&auml;ten deutlich reduziert. Isoproterenol erh&ouml;ht die Phosphorylierung und f&ouml;rderte die Desensibilisierung der Gly389 oder Arg389 allelischen Varianten der Wildtyp beta1-AR aber vers&auml;umt, diese Effekte in R384Q und R384E, zu produzieren, da diese Rezeptoren wurden maximal phosphoryliert und basalen Bedingungen desensibilisiert. Im Gegensatz zu der membran&ouml;se Verteilung der Wildtyp beta1-AR wurden R384Q und R384E meist in intrazellul&auml;ren punctata Strukturen lokalisiert. Inverse Agonisten restauriert die membran&ouml;se Verteilung von R384Q und R384E, darauf hinweist, dass sie normalerweise recycelt, wenn ihre konstitutive Internalisierung durch inverse Agonisten blockiert wurde. Diese Daten zusammen mit Computer-Modellierung der vermeintlichen dreidimensionale Organisation der Helix 8 darauf hingewiesen, dass die AMPHIPHILE Charakter der Helix 8 und Seite Kette Projektionen von Asp382 und Arg384 die hydrophile Oberfl&auml;che als begrenzende Website f&uuml;r das G-Protein dienen k&ouml;nnte.

Charakterisierung der R&uuml;ckst&auml;nde in Helix 8 von den menschlichen beta1-adrenerge Rezeptor, die Ankopplung des Rezeptors an G-Proteine beteiligt sind.

Diversi amminoacidi chiave all&#39;interno di amphipathic elica 8 del recettore umano beta1-adrenergico (beta1-AR) sono stati mutagenized per caratterizzare il loro ruolo nella segnalazione di recettori accoppiati a proteine G. Mutagenesi di fenilalanina in posizione 383 nell&#39;interfaccia idrofobica di istidina (F383H) ha impedito la biosintesi del recettore, che indica che l&#39;orientamento dell&#39;elica 8 &egrave; importante per la biosintesi del recettore. Mutagenesi di acido aspartico in posizione 382 nell&#39;interfaccia idrofilo di leucina (D382L) ridotto il binding e disgiunto il recettore di attivazione della proteina G. Mutagenesi del residuo di arginina base posizione 384 glutammina (R384Q) o acido glutammico (R384E) aumentata attivit&agrave; di basale e stimolata da agonista adenil ciclasi. R384Q e R384E visualizzato caratteristiche associate con recettori costitutivamente attivi perch&eacute; agonisti inversi notevolmente ridotto la loro attivit&agrave; di elevati basali adenil ciclasi. Isoproterenol aumentato la fosforilazione e promosso la desensibilizzazione delle varianti alleliche Gly389 o Arg389 di tipo selvatico beta1-AR ma non &egrave; riuscito a produrre questi effetti in R384Q e R384E, perch&eacute; questi recettori sono stati al massimo fosforilati e insensibili alle condizioni basali. In contrasto con la distribuzione membranosa di tipo selvatico beta1-AR, R384Q e R384E erano localizzati per lo pi&ugrave; all&#39;interno di strutture punctati intracellulare. Agonisti inversi restaurata la distribuzione membranosa di R384Q e R384E, che indica che sono riciclati normalmente quando loro costitutiva internalizzazione &egrave; stato bloccato da agonisti inversi. Questi dati, combinati con la modellizzazione al computer dell&#39;organizzazione tridimensionale putativo di elica 8 indicato che il personaggio di amphipathic dell&#39;elica 8 e proiezioni di catena laterale di Asp382 e Arg384 all&#39;interno dell&#39;interfaccia idrofilo potrebbero servire come un sito di legare la proteina G.

Caratterizzazione dei residui nell&#39;elica 8 del recettore umano beta1-adrenergico che sono coinvolti nell&#39;accoppiamento del recettore delle proteine G.

&#x4E21;&#x89AA;&#x5A92;&#x6027;&#x30D8;&#x30EA;&#x30C3;&#x30AF;&#x30B9; 8 &#x4EBA;&#x9593; beta1 &#x30A2;&#x30C9;&#x30EC;&#x30CA;&#x30EA;&#x30F3;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53; &#xFF08;beta1-AR&#xFF09; &#x306E;&#x5185;&#x306E;&#x3044;&#x304F;&#x3064;&#x304B;&#x306E;&#x30AD;&#x30FC; &#x30A2;&#x30DF;&#x30CE;&#x9178;&#x306B;&#x3088;&#x308B; G &#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x5171;&#x5F79;&#x578B;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#x306E;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x7279;&#x5FB4;&#x3065;&#x3051;&#x308B;&#x30B9;&#x30AF;&#x30EA;&#x30FC;&#x30CB;&#x30F3;&#x30B0;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x30D5;&#x30A7;&#x30CB;&#x30EB;&#x30A2;&#x30E9;&#x30CB;&#x30F3; 383 &#x30D2;&#x30B9;&#x30C1;&#x30B8;&#x30F3; &#xFF08;F383H&#xFF09; &#x3078;&#x306E;&#x758E;&#x6C34;&#x6027;&#x306E;&#x30A4;&#x30F3;&#x30BF;&#x30FC;&#x30D5;&#x30A7;&#x30A4;&#x30B9;&#x5185;&#x306E;&#x4F4D;&#x7F6E;&#x306E;&#x7A81;&#x7136;&#x5909;&#x7570;&#x8A98;&#x767A;&#x30D8;&#x30EA;&#x30C3;&#x30AF;&#x30B9; 8 &#x306E;&#x5411;&#x304D;&#x304C;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x306E;&#x751F;&#x5408;&#x6210;&#x306B;&#x91CD;&#x8981;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3059;&#x3001;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x306E;&#x751F;&#x5408;&#x6210;&#x3092;&#x9632;&#x6B62;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x30ED;&#x30A4;&#x30B7;&#x30F3; (D382L) &#x306B;&#x89AA;&#x6C34;&#x6027;&#x30A4;&#x30F3;&#x30BF;&#x30FC;&#x30D5;&#x30A7;&#x30A4;&#x30B9;&#x5185;&#x4F4D;&#x7F6E;&#x306B; 382 &#x30A2;&#x30B9;&#x30D1;&#x30E9;&#x30AE;&#x30F3;&#x9178;&#x306E;&#x7A81;&#x7136;&#x5909;&#x7570;&#x8A98;&#x767A;&#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C7;&#x30A3;&#x30F3;&#x30B0;&#x3092;&#x6E1B;&#x5C11;&#x3057;&#x3001;&#x975E;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53; G &#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x304B;&#x3089;&#x3002;&#x57FA;&#x672C;&#x7684;&#x306A;&#x30A2;&#x30EB;&#x30AE;&#x30CB;&#x30F3;&#x6B8B;&#x57FA;&#x4F4D;&#x7F6E; 384 &#x30B0;&#x30EB;&#x30BF;&#x30DF;&#x30F3; (R384Q)&#x3001;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x30B0;&#x30EB;&#x30BF;&#x30DF;&#x30F3;&#x9178; (R384E) &#x306E;&#x7A81;&#x7136;&#x5909;&#x7570;&#x8A98;&#x767A;&#x57FA;&#x5E95;&#x3068;&#x30A2;&#x30B4;&#x30CB;&#x30B9;&#x30C8;&#x523A;&#x6FC0;&#x30A2;&#x30C7;&#x30CB;&#x30EB;&#x9178;&#x30B7;&#x30AF;&#x30E9;&#x30FC;&#x30BC;&#x6D3B;&#x52D5;&#x3092;&#x5897;&#x52A0;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;R384Q &#x3068; R384E &#x9006;&#x4F5C;&#x52D5;&#x85AC;&#x306F;&#x8457;&#x3057;&#x304F;&#x4E0A;&#x6607;&#x57FA;&#x5E95;&#x30A2;&#x30C7;&#x30CB;&#x30EB;&#x9178;&#x30B7;&#x30AF;&#x30E9;&#x30FC;&#x30BC;&#x6D3B;&#x52D5;&#x6E1B;&#x5C11;&#x305F;&#x3081;&#x6052;&#x5E38;&#x6D3B;&#x6027;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x3068;&#x95A2;&#x9023;&#x4ED8;&#x3051;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3092;&#x8868;&#x793A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30A4;&#x30BD;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C6;&#x30EC;&#x30CE;&#x30FC;&#x30EB; &#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x306E;&#x5897;&#x52A0;&#x3057;&#x91CE;&#x751F;&#x578B;&#x306E; beta1-AR &#x306E; Gly389 &#x307E;&#x305F;&#x306F; Arg389 &#x306E; allelic &#x5909;&#x5F62;&#x306E;&#x8131;&#x611F;&#x4F5C;&#x3092;&#x6607;&#x683C;&#x304C;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x306E;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x57FA;&#x5E95;&#x6761;&#x4EF6;&#x4E0B;&#x3067;&#x920D;&#x611F;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x6700;&#x5927;&#x9650;&#x306E;&#x3067; R384Q &#x3068; R384E&#x3001;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x52B9;&#x679C;&#x3092;&#x751F;&#x6210;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x5931;&#x6557;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x91CE;&#x751F;&#x578B;&#x306E; beta1-AR &#x306E;&#x819C;&#x8CEA;&#x306E;&#x5206;&#x5E03;&#x3068;&#x306F;&#x5BFE;&#x7167;&#x7684;&#x3001;R384Q &#x3068; R384E &#x4E3B;&#x7D30;&#x80DE;&#x5185;&#x306E;&#x70B9;&#x72B6;&#x8868;&#x5C64;&#x69CB;&#x9020;&#x5185;&#x5C40;&#x5728;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x305F;.&#x9006;&#x4F5C;&#x52D5;&#x85AC;&#x819C;&#x5206;&#x5E03; R384Q &#x3068; R384E&#x3001;&#x5F7C;&#x3089;&#x306F;&#x901A;&#x5E38;&#x3001;&#x305D;&#x306E;&#x69CB;&#x6210;&#x306E;&#x5185;&#x90E8;&#x9006;&#x4F5C;&#x52D5;&#x85AC;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x30D6;&#x30ED;&#x30C3;&#x30AF;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x5834;&#x5408;&#x30EA;&#x30B5;&#x30A4;&#x30AF;&#x30EB;&#x3092;&#x793A;&#x3059;&#x5FA9;&#x5143;&#x3002;&#x3089;&#x305B;&#x3093; 8 &#x306E;&#x63A8;&#x5B9A;&#x306E;&#x4E09;&#x6B21;&#x5143;&#x7D44;&#x7E54;&#x306E;&#x30B3;&#x30F3;&#x30D4;&#x30E5;&#x30FC;&#x30BF; &#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x3068;&#x3092;&#x7D44;&#x307F;&#x5408;&#x308F;&#x305B;&#x305F;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x30C7;&#x30FC;&#x30BF; &#x30D8;&#x30EA;&#x30C3;&#x30AF;&#x30B9; 8 &#x306E;&#x4E21;&#x89AA;&#x5A92;&#x6027;&#x6027;&#x683C;&#x3068;&#x89AA;&#x6C34;&#x6027;&#x306E;&#x30A4;&#x30F3;&#x30BF;&#x30FC;&#x30D5;&#x30A7;&#x30A4;&#x30B9;&#x5185;&#x5074;&#x30C1;&#x30A7;&#x30FC;&#x30F3;&#x4E88;&#x6E2C; Asp382 &#x3068; Arg384 &#x306E; G &#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x30C6;&#x30B6;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;&#x306E;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x306F;&#x3001;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x5F79;&#x7ACB;&#x3064;&#x304B;&#x3082;&#x3057;&#x308C;&#x306A;&#x3044;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x305F;&#x3002;

G &#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x306B;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x306E;&#x7D50;&#x5408;&#x306B;&#x95A2;&#x4E0E;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x4EBA;&#x9593;&#x306E; beta1 &#x30A2;&#x30C9;&#x30EC;&#x30CA;&#x30EA;&#x30F3;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x306E;&#x87BA;&#x65CB; 8 &#x4E2D;&#x306E;&#x6B8B;&#x7559;&#x306E;&#x30AD;&#x30E3;&#x30E9;&#x30AF;&#x30BF;&#x30EA;&#x30BC;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;

Amphipathic &#xB098;&#xC120; 8 &#xC778;&#xAC04;&#xC758; beta1 &#xC544;&#xB4DC;&#xB808;&#xB0A0;&#xB9B0; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; (beta1 &#xC544;&#xCE78;&#xC18C;) &#xB0B4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBA87; &#xAC00;&#xC9C0; &#xC8FC;&#xC694; &#xC544;&#xBBF8;&#xB178;&#xC0B0; G &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xACB0;&#xD569; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC2E0;&#xD638;&#xC5D0;&#xC11C; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC758; &#xC5ED;&#xD560;&#xC758; &#xD2B9;&#xC131;&#xC744; mutagenized &#xD588;&#xB2E4;. &#xD788;&#xC2A4;&#xD2F0;&#xB518; (F383H)&#xB97C; &#xC18C;&#xC218; &#xC131; &#xC778;&#xD130;&#xD398;&#xC774;&#xC2A4;&#xC5D0;&#xC11C; 383 &#xC704;&#xCE58;&#xC758; &#xD398;&#xB2D0;&#xC54C;&#xB77C;&#xB2CC; mutagenesis &#xB098;&#xC120; 8 &#xBC29;&#xD5A5;&#xC744; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; &#xC0DD; &#xD569;&#xC131;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC911;&#xC694; &#xD55C;&#xC744; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0B4;&#xB294; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4;&#xC758; &#xC0DD; &#xD569;&#xC131; &#xC218; &#xC5C6;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC704;&#xCE58; 382 &#xCE5C;&#xC218;&#xC131; &#xC778;&#xD130;&#xD398;&#xC774;&#xC2A4;&#xC5D0; &#xC2E0; (D382L) aspartic &#xC0B0; mutagenesis &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xC744; &#xC904;&#xC5B4;&#xB4E4;&#xACE0; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; G &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xD65C;&#xC131;&#xD654;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC0C1;&#xD0DC;&#xB85C;. &#xC704;&#xCE58; 384 &#xAE00;&#xB8E8;&#xD0C0;&#xBBFC; (R384Q) &#xC774;&#xB098; &#xAE00;&#xB8E8;&#xD0D0;&#xC0B0; (R384E)&#xC5D0;&#xC11C; &#xAE30;&#xBCF8; &#xC544;&#xB974;&#xAE30;&#xB2CC; &#xC794;&#xB958;&#xBB3C;&#xC758; mutagenesis &#xAE30;&#xC800; &#xBC0F; &#xAE38; &#xD56D; &#xC81C; &#xC790;&#xADF9; adenylyl cyclase &#xD65C;&#xB3D9; &#xC99D;&#xAC00; &#xD588;&#xB2E4;. R384Q &#xBC0F; R384E &#xC5ED; agonists &#xD604;&#xC800; &#xD558; &#xAC8C; &#xC0C1;&#xC2B9; &#xB41C; &#xAE30;&#xC800; adenylyl cyclase &#xD65C;&#xB3D9; &#xAC10;&#xC18C; &#xB54C;&#xBB38;&#xC5D0; constitutively &#xD65C;&#xC131; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4;&#xC640; &#xAD00;&#xB828; &#xB41C; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC744; &#xD45C;&#xC2DC;. Isoproterenol&#xB294; &#xC778; &#xC0B0;&#xD654; &#xC99D;&#xAC00; &#xC2B9;&#xC9C4; &#xC57C;&#xC0DD; &#xD0C0;&#xC785; beta1 AR&#xC758; Gly389 &#xB610;&#xB294; Arg389 &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xBCC0;&#xD615; &#xB454;&#xAC10; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; phosphorylated maximally &#xB418;&#xC5C8;&#xACE0; &#xAE30;&#xC800; &#xC870;&#xAC74; &#xD558;&#xC5D0;&#xC11C; desensitized &#xB54C;&#xBB38;&#xC5D0; r384q&#xC640; R384E, &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xD6A8;&#xACFC; &#xC0DD;&#xC131; &#xD558;&#xC9C0; &#xBABB;&#xD588;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC57C;&#xC0DD; &#xD0C0;&#xC785; beta1 &#xC544;&#xCE78;&#xC18C; &#xC561;&#xCCB4;&#xB85C; &#xBD84;&#xD3EC;&#xB294; &#xB2EC;&#xB9AC; R384Q &#xBC0F; r384e&#xB294; &#xC138;&#xD3EC;&#xB0B4; punctate &#xAD6C;&#xC870; &#xB0B4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC8FC;&#xB85C; &#xD604;&#xC9C0; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC5ED; agonists &#xBCF5;&#xC6D0; R384Q &#xBC0F; R384E, &#xC561;&#xCCB4;&#xB85C; &#xBD84;&#xD3EC;&#xB294; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC774; &#xC7AC;&#xD65C;&#xC6A9; &#xC77C;&#xBC18;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xC5ED; agonists&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC758; &#xC81C;&#xC815; &#xAD6D;&#xC81C;&#xD654;&#xB294; &#xCC28;&#xB2E8; &#xD558;&#xB294; &#xACBD;&#xC6B0;&#xB97C; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0B4;&#xB294;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xB370;&#xC774;&#xD130; &#xB098;&#xC120; 8&#xC758; 3 &#xCC28;&#xC6D0; &#xC0C1; &#xC870;&#xC9C1;&#xC758; &#xCEF4;&#xD4E8;&#xD130; &#xBAA8;&#xB378;&#xB9C1;&#xC744; &#xD568;&#xAED8; &#xB098;&#xC120; 8 amphipathic &#xC131;&#xACA9;&#xACFC; &#xCE5C;&#xC218;&#xC131; &#xC778;&#xD130;&#xD398;&#xC774;&#xC2A4; &#xB0B4;&#xC5D0;&#xC11C; Asp382 &#xBC0F; arg384&#xC758; &#xC0AC;&#xC774;&#xB4DC; &#xCCB4;&#xC778; &#xACC4;&#xD68D; &#xC218;&#xB3C4; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; tethering &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8; G &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xD45C;&#xC2DC;.

&#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; G &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC5D0; &#xACB0;&#xD569; &#xD558;&#xB294; &#xD5EC;&#xB9AD;&#xC2A4; 8 &#xC778;&#xAC04;&#xC758; beta1 &#xC544;&#xB4DC;&#xB808;&#xB0A0;&#xB9B0; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4;&#xC5D0;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC794;&#xB958;&#xBB3C;&#xC758; &#xD2B9;&#xC131; &#xBD84;&#xC11D;.

Varios amino&aacute;cidos claves dentro de la h&eacute;lice anfip&aacute;ticos 8 del receptor beta1 adren&eacute;rgico humano (beta1-AR) fueron mutagenized para caracterizar su papel en la se&ntilde;alizaci&oacute;n por receptores acoplados a prote&iacute;nas G. Mutag&eacute;nesis de fenilalanina en la posici&oacute;n 383 en la interfaz hidrof&oacute;bica a histidina (F383H) impidi&oacute; la bios&iacute;ntesis de los receptores, lo que indica que la orientaci&oacute;n de la h&eacute;lice 8 es importante para la bios&iacute;ntesis del receptor. Mutag&eacute;nesis de &aacute;cido asp&aacute;rtico en la posici&oacute;n 382 en la interfaz hidrof&iacute;lica para leucina (D382L) reduce el atascamiento y desacoplado el receptor de activaci&oacute;n de prote&iacute;nas G. Mutag&eacute;nesis de los residuos de arginina b&aacute;sica en posici&oacute;n 384 glutamina (R384Q) o &aacute;cido glut&aacute;mico (R384E) aument&oacute; actividades de cyclase del adenylyl basal y estimulada por los agonistas. R384Q y R384E muestran caracter&iacute;sticas asociadas a receptores constitutivamente activos porque agonistas inversos reducci&oacute;n notablemente sus actividades de cyclase del adenylyl basal elevada. Isoproterenol aumenta la fosforilaci&oacute;n y hab&iacute;a promovido la desensibilizaci&oacute;n de las variantes al&eacute;licas Gly389 o Arg389 del tipo salvaje beta1-AR pero no producir estos efectos en R384Q y R384E, porque estos receptores m&aacute;ximo se fosforila y desensibilizados bajo condiciones basales. En contraste con la distribuci&oacute;n membranosa del tipo salvaje beta1-AR, R384Q y R384E fueron localizados principalmente en estructuras punteadas intracelulares. Agonistas inversos restauran la distribuci&oacute;n membranosa de R384Q y R384E, indicando que recicla normalmente cuando su internalizaci&oacute;n constitutiva fue bloqueada por los agonistas inversos. Estos datos junto con el modelado de la computadora de la supuesta organizaci&oacute;n tridimensional de h&eacute;lice 8 indican que el car&aacute;cter anfip&aacute;ticos de h&eacute;lice 8 y proyecciones de la cadena lateral de Asp382 y Arg384 dentro de la interfaz hidrof&iacute;lica podr&iacute;an servir como un sitio tethering para la prote&iacute;na G.

Caracterizaci&oacute;n de los residuos en h&eacute;lice 8 del receptor beta1 adren&eacute;rgico humano que participan en el receptor de acoplamiento a prote&iacute;nas G.

&#x7ADE;&#x4E89;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x7B49;&#x6E29;&#x7EBF;&#x7684; G &#x86CB;&#x767D;&#x5076;&#x8054;&#x53D7;&#x4F53; (&#x6C14;&#x76F8;&#x5316;&#x5B66;&#x8FD8;&#x539F;&#xFF09; &#x53D7;&#x4F53;&#x6FC0;&#x52A8;&#x5242;&#x7684;&#x9AD8;&#x3001; &#x4F4E;&#x663E;&#x793A;&#x4EB2;&#x548C;&#x529B;&#x7684;&#x3002;&#x8BF1;&#x53D8;&#x80B2;&#x79CD;&#x4E2D;&#x7684;&#x91CE;&#x751F;&#x578B; (WT) &#x87BA;&#x65CB; 6 &#x4EBA;&#x7C7B; beta1-&#x80BE;&#x4E0A;&#x817A;&#x7D20;&#x53D7;&#x4F53; (beta1-AR) &#x751F;&#x6210;&#x7A81;&#x53D8;&#x4F53;&#x6FC0;&#x52A8;&#x5242;&#x548C;&#x51CF;&#x5C11;&#x7684;&#x6548;&#x529B;&#x7684;&#x5168;&#x90E8;&#x6216;&#x90E8;&#x5206;&#x53D7;&#x4F53;&#x6FC0;&#x52A8;&#x5242;&#x523A;&#x6FC0;&#x817A;&#x82F7;&#x9178;&#x73AF;&#x5316;&#x9176;&#x6709; GTP &#x4E0D;&#x533A;&#x5206;&#x5355;&#x4E2A;&#x4F4E;&#x4EB2;&#x548C;&#x6027;&#x7ED3;&#x5408;&#x4F4D;&#x70B9;&#x7684;&#x4F4D;&#x7F6E; 324 &#x8D56;&#x6C28;&#x9178;&#x3002;&#x4E0E;&#x4E0D;&#x540C;&#x7684; WT beta1-AR&#xFF0C;&#x5185;&#x5728;&#x6D3B;&#x52A8;&#x4E2D;&#x6FC0;&#x6D3B;--&gt; Ala beta1-AR (K324A) &#x7A81;&#x53D8;&#x4F53; Lys324 &#x7684;&#x5168;&#x90E8;&#x548C;&#x90E8;&#x5206;&#x6FC0;&#x52A8;&#x5242;&#x88AB;&#x5176;&#x4EB2;&#x548C;&#x529B;&#x7684; K324A &#x7A81;&#x53D8;&#x4F53;&#x4E0E;&#x5173;&#x8054;&#x8D77;&#x6765;&#x3002;&#x5728;&#x6D4B;&#x5B9A;&#xFF0C;&#x5982;&#x6FC0;&#x52A8;&#x5242;&#x4ECB;&#x5BFC;&#x7684;&#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x548C;&#x56DE;&#x6536;&#xFF0C;K324A &#x7A81;&#x53D8;&#x548C; WT beta1-AR &#x8868;&#x73B0;&#x540C;&#x6837;&#x3002;&#x7136;&#x800C;&#xFF0C;&#x5728;&#x8367;&#x5149;&#x5171;&#x632F;&#x80FD;&#x91CF;&#x8F6C;&#x79FB;&#x5316;&#x9A8C;&#x786E;&#x5B9A; G(s) alpha WT beta1-AR &#x6216; K324A &#x7A81;&#x53D8;&#x4F53;&#x4E4B;&#x95F4;&#x8DDD;&#x79BB;&#x8F83;&#x8FD1;&#xFF0C;&#x6709;&#x663E;&#x8457;&#x5DEE;&#x5F02;&#x3002;&#x4E09;&#x5143;&#x590D;&#x6742;&#x6A21;&#x578B;&#x7684;&#x6982;&#x5FF5;&#x6846;&#x67B6;&#x65E0;&#x6CD5;&#x5145;&#x5206;&#x8BF4;&#x660E;&#x9664; K324A &#x7A81;&#x53D8;&#x4F53;&#x7684;&#x4F4E;&#x53D7;&#x4F53; G &#x86CB;&#x767D;&#x4EB2;&#x548C;&#x529B;&#x7684;&#x5047;&#x8BBE;&#x6761;&#x4EF6;&#x4E0B;&#x7684;&#x884C;&#x4E3A;&#x3002;&#x5BF9;&#x5F02;&#x4E19;&#x80BE;&#x4E0A;&#x817A;&#x7D20; K324A &#x7A81;&#x53D8;&#x4F53;&#x7684;&#x5355;&#x4E00;&#x4F4E;&#x4EB2;&#x548C;&#x529B;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x7AD9;&#x70B9;&#x88AB;&#x8F6C;&#x6362;&#x7531; C &#x7EC8;&#x7AEF; 11-&#x6C28;&#x57FA;&#x9178;&#x80BD;&#x7684; G(s) alpha&#xFF0C;&#x5C31;&#x5230;&#x9AD8;&#x548C;&#x4F4E;&#x4EB2;&#x548C;&#x529B;&#x7AD9;&#x70B9;&#x7684;&#x672C;&#x5730;&#x751F;&#x4EA7;&#x603B;&#x503C;&#x7ED1;&#x5B9A; G(s) alpha &#x6A21;&#x4EFF;&#x7684;&#x884C;&#x4E3A;&#x3002;&#x57FA;&#x4E8E;&#x4EBA;&#x7C7B; beta1-AR &#x7684;&#x4E09;&#x7EF4;&#x4F53;&#x7CFB;&#x7ED3;&#x6784;&#xFF0C;Lys324 &#x548C;&#x87BA;&#x65CB; 3 Asp/Glu-Arg-Tyr &#x6BCD;&#x4E4B;&#x95F4;&#x7684;&#x8DDD;&#x79BB;&#x662F;&#x6700;&#x77ED; 6 &#x87BA;&#x65CB;&#x4E2D;&#x5404;&#x79CD;&#x6C28;&#x57FA;&#x9178;&#x4E4B;&#x95F4;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7ED3;&#x679C;&#x8868;&#x660E; Lys324 &#x4F4D;&#x4E8E;&#x69FD;&#x4E4B;&#x95F4;&#x87BA;&#x65CB; 3 &#x548C; 6&#xFF0C;&#x548C;&#x5176;&#x7A81;&#x53D8;&#x4EA7;&#x751F;&#x7A81;&#x53D8;&#x53D7;&#x4F53;&#x4E0E; G(s) &#x7684;&#x56FD;&#x5185;&#x751F;&#x4EA7;&#x603B;&#x503C;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x9F3B;&#x606F;&#x8089;&#x7684;&#x6781;&#x4F4E;&#x7684;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x4EB2;&#x548C;&#x529B;&#x3002;

&#x5185;&#x87BA;&#x65CB; 6 &#x4EBA;&#x7C7B; beta1-&#x80BE;&#x4E0A;&#x817A;&#x7D20;&#x80FD;&#x53D7;&#x4F53;&#x8BF1;&#x53D8;&#x6807;&#x8BC6;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x6B8B;&#x7559; Lysine324 &#x53C2;&#x4E0E;&#x4F20;&#x6388;&#x7684;&#x53D7;&#x4F53;&#x6FC0;&#x52A8;&#x5242;&#x7684;&#x9AD8;&#x4EB2;&#x548C;&#x529B;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x72B6;&#x6001;&#x3002;

Competition binding isotherms for agonists to G protein-coupled receptors (GPCR) display high and low binding affinities. Mutagenesis of lysine at position 324 in helix 6 of the wild-type (WT) human beta1-adrenergic receptor (beta1-AR) generated mutant receptors that had GTP-insensitive single low-affinity binding sites for agonists and reduced potencies of full or partial agonists in stimulating adenylyl cyclase. Unlike the WT beta1-AR, intrinsic activities of full and partial agonists in activating the Lys324-->Ala beta1-AR (K324A) mutant were correlated with their binding affinities to the K324A mutant. In assays, such as agonist-mediated phosphorylation and recycling, the K324A mutant and the WT beta1-AR behaved similarly. However, in fluorescence resonance energy transfer assays that determined the proximity between the WT beta1-AR or the K324A mutant to G(s)alpha, there were significant differences. The conceptual framework of the ternary complex model could not adequately account for the behavior of the K324A mutant except under assumptions of low receptor-G protein binding affinities. The single low-affinity binding site of the K324A mutant to isoproterenol was converted by the C-terminal 11-amino-acid peptide of G(s)alpha, which acts a GDP-bound G(s)alpha mimic, to high- and low-affinity sites. Based upon the three-dimensional architecture of the human beta1-AR, the distance between Lys324 and the Asp/Glu-Arg-Tyr motif in helix 3 was the shortest among the various amino acids in helix 6. These findings indicate that Lys324 lies in a groove between helices 3 and 6, and its mutagenesis generates a mutant receptor with very low binding affinity for the GDP-bound isoform of G(s).

Mutagenesis within helix 6 of the human beta1-adrenergic receptor identifies Lysine324 as a residue involved in imparting the high-affinity binding state of agonists.

Les isothermes de liaison concurrence pour les agonistes des r&eacute;cepteurs coupl&eacute;s aux prot&eacute;ines G (RCPG) affichent haute et basse affinit&eacute;s de liaison. Mutagen&egrave;se de lysine au poste 324 &agrave; h&eacute;lice 6 de type sauvage (WT) humaine beta1-adr&eacute;nergique (b&ecirc;ta1-AR) g&eacute;n&eacute;r&eacute; r&eacute;cepteurs mutantes qui avaient des sites de GTP ind&eacute;pendante de la seule liaison de faible affinit&eacute; pour les agonistes et les puissances r&eacute;duites des agonistes complets ou partiels en stimulant l&#39;ad&eacute;nylcyclase. &Agrave; la diff&eacute;rence du WT beta1-AR, activit&eacute;s intrins&egrave;ques des agonistes complets et partiels dans l&#39;activation de la Lys324--&gt; mutant b&ecirc;ta1-AR (K324A) Ala sont en corr&eacute;lation avec leurs affinit&eacute;s de liaison pour le mutant K324A. Lors d&#39;essais, tels que la phosphorylation m&eacute;di&eacute;e par un agoniste et le recyclage, le mutant K324A et le WT b&ecirc;ta1-AR se comportaient de la m&ecirc;me fa&ccedil;on. Toutefois, en fluorescence resonance &eacute;nergie transfert dosages qui d&eacute;termine la proximit&eacute; entre le WT b&ecirc;ta1-AR ou le mutant K324A alpha s, il y a des diff&eacute;rences significatives. Le comportement du mutant K324A sauf sous des hypoth&egrave;ses d&#39;affinit&eacute;s de liaison r&eacute;cepteur-G hypoprotidique pourrait expliquer pas ad&eacute;quatement le cadre conceptuel du mod&egrave;le complex ternaire. Le site de liaison de faible affinit&eacute; unique du mutant K324A &agrave; l&#39;isoprot&eacute;r&eacute;nol fut converti par le peptide de 11 acides amin&eacute;s C-terminaux d&#39;alpha 2.b, constituant un imitateur alpha PIB li&eacute; aux s, aux sites de haute et de basse affinit&eacute;. Compte tenu de l&#39;architecture en trois dimensions de l&#39;humain b&ecirc;ta1-AR, la distance entre Lys324 et le motif de l&#39;Asp/Glu-Arg-Tyr en h&eacute;lice 3 a &eacute;t&eacute; la plus courte entre les diff&eacute;rents acides amin&eacute;s en h&eacute;lice 6. Ces r&eacute;sultats indiquent que les Lys324 se trouve dans une rainure entre les h&eacute;lices 3 et 6, et sa mutag&eacute;n&egrave;se g&eacute;n&egrave;re un r&eacute;cepteur mutant avec tr&egrave;s faible affinit&eacute; pour l&#39;isoforme de PIB li&eacute; de s.

Mutagen&egrave;se au sein de l&#39;h&eacute;lice 6 du r&eacute;cepteur adr&eacute;nergique-beta1 humain identifie Lysine324 comme un r&eacute;sidu impliqu&eacute; en conf&eacute;rant &agrave; l&#39;&eacute;tat de la liaison de haute affinit&eacute; des agonistes.

Wettbewerb Bindung Isothermen f&uuml;r Agonisten an G-Protein-gekoppelte Rezeptoren (GPCR) zeigen hohe und niedrige verbindliche Affinit&auml;ten. Mutagenese von Lysin an Position 324 Helix 6 der Wildtyp (WT) menschlichen beta1-adrenerge Rezeptor (beta1-AR) generiert mutierten Rezeptoren, die GTP-unempfindliche einzelne niedrige Affinit&auml;t Bindungsstellen f&uuml;r Agonisten und reduzierte Potenzen der vollst&auml;ndigen oder partiellen Agonisten in anregenden Fehlfunktion Guanylatcyclase hatte. Im Gegensatz zu den WT-beta1-AR wurden systeminterne Aktivit&auml;ten von voll- und -Agonisten in der Aktivierung der Lys324--&gt; Ala beta1-AR (K324A) Mutant korreliert mit ihren verbindlichen Affinit&auml;ten zu den K324A-Mutanten. In Tests, wie Agonist-vermittelte Phosphorylierung und recycling verhielt sich der K324A-Mutant und der WT-beta1-AR &auml;hnlich. Bei Fluoreszenz Resonanz Energie Transfer Assays, die die N&auml;he zwischen der WT-beta1-AR oder den K324A-Mutanten zu G(s) Alpha bestimmt, gab es jedoch erhebliche Unterschiede. Der konzeptionelle Rahmen der tern&auml;ren komplexes Modell k&ouml;nnte das Verhalten der K324A-Mutant au&szlig;er unter Annahmen der niedrigen Rezeptor-G-Protein-Bindung Affinit&auml;ten nicht angemessen ber&uuml;cksichtigt. Die einzelnen geringer Affinit&auml;t-Bindungsstelle von den K324A-Mutanten zu Isoproterenol wurde von der C-terminalen 11-amino-S&auml;ure-Peptid von G(s) Alpha, umgewandelt, die ein BIP gebundene G(s) alpha-Nach&auml;ffer, zu hoher und niedriger Affinit&auml;t Websites fungiert. Auf der Grundlage der dreidimensionalen Architektur der menschlichen beta1-AR, war der Abstand zwischen Lys324 und dem Asp/Glu-Arg-Tyr-Motiv in Helix 3 die k&uuml;rzeste unter den verschiedenen Aminos&auml;uren in Helix 6. Diese Befunde zeigen, dass Lys324 in den Falz zwischen Helices 3 und 6 liegt, und seine Mutagenese einen mutierten Rezeptor mit sehr niedrige Bindungsaffinit&auml;t f&uuml;r das BIP gebundene Isoform von G(s) erzeugt.

Mutagenese innerhalb Helix 6 von den menschlichen beta1-adrenerge Rezeptor identifiziert Lysine324 als einen R&uuml;ckstand in der Vermittlung der hoher Affinit&auml;t Bindungszustand Agonisten beteiligt.

Isoterme associazione concorso per agonisti ai recettori accoppiati a proteine G (GPCR) visualizzano ad alta e bassa affinit&agrave; di legame. Mutagenesi di lisina in posizione 324 nell&#39;elica 6 di wild-type (WT) umana recettori beta1-adrenergici (beta1-AR) generato mutante recettori che aveva siti GTP-insensibile singola associazione bassa affinit&agrave; per agonisti e potenze ridotte degli agonisti completi o parziali in stimolante adenil ciclasi. A differenza del WT beta1-AR, attivit&agrave; intrinseca degli agonisti totali e parziali nell&#39;attivazione del Lys324--&gt; mutante beta1-AR (K324A) Ala erano correlate con loro affinit&agrave; di legame per il mutante K324A. Dosaggi, come ad esempio la fosforilazione agonista-mediata e riciclaggio, il mutante di K324A e il WT beta1-AR comportati allo stesso modo. Tuttavia, in fluorescenza risonanza energia trasferimento dosaggi che ha determinato la vicinanza tra il WT beta1-AR o il mutante K324A alfa g, c&#39;erano differenze significative. Il quadro concettuale del modello complesso ternario non potrebbe spiegare adeguatamente il comportamento del mutante K324A tranne sotto le ipotesi di affinit&agrave; di legame della proteina recettore-G bassa. Il sito di legame di bassa affinit&agrave; singola del mutante K324A di isoproterenolo &egrave; stato convertito da peptide 11-amminoacido C-terminale di alpha g, che agisce un mimic alfa g PIL associati, ai siti di alta e bassa affinit&agrave;. Basato sull&#39;architettura tridimensionale dell&#39;umano beta1-AR, la distanza tra Lys324 e il motivo di Asp/Glu-Arg-Tyr in elica 3 &egrave; stata la pi&ugrave; breve tra i vari amminoacidi nell&#39;elica 6. Questi risultati indicano che Lys324 si trova in un solco tra eliche 3 e 6, e la mutagenesi genera un recettore mutante con affinit&agrave; di legame molto bassa per l&#39;isoforma PIL associati di g.

Mutagenesi nell&#39;elica 6 del recettore beta1-adrenergico umano identifica Lysine324 come un residuo coinvolto nell&#39;imprimere lo stato di legame ad alta affinit&agrave; degli agonisti.

&#x30A2;&#x30B4;&#x30CB;&#x30B9;&#x30C8; G &#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x5171;&#x5F79;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53; &#xFF08;GPCR&#xFF09; &#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x7AF6;&#x4E89;&#x7D50;&#x5408;&#x7B49;&#x6E29;&#x7DDA;&#x306F;&#x30CF;&#x30A4;&#x3068;&#x30ED;&#x30FC;&#x306E;&#x7D50;&#x5408;&#x89AA;&#x548C;&#x6027;&#x3092;&#x8868;&#x793A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30EA;&#x30B8;&#x30F3;&#x4F4D;&#x7F6E; 324 &#x30A2;&#x30B4;&#x30CB;&#x30B9;&#x30C8;&#x3068;&#x7E2E;&#x5C0F;&#x30DD;&#x30FC;&#x30C6;&#x30F3;&#x30B7;&#x30FC;&#x523A;&#x6FC0;&#x30A2;&#x30C7;&#x30CB;&#x30EB;&#x9178;&#x30B7;&#x30AF;&#x30E9;&#x30FC;&#x30BC;&#x306E;&#x5B8C;&#x5168;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x90E8;&#x5206;&#x7684;&#x30A2;&#x30B4;&#x30CB;&#x30B9;&#x30C8;&#x306E; GTP-&#x533A;&#x5225;&#x3057;&#x306A;&#x3044;&#x5358;&#x4E00;&#x4F4E;&#x89AA;&#x548C;&#x6027;&#x7D50;&#x5408;&#x90E8;&#x4F4D;&#x3092;&#x6301;&#x3063;&#x3066;&#x3044;&#x305F;&#x30D8;&#x30EA;&#x30C3;&#x30AF;&#x30B9; 6 &#x91CE;&#x751F;&#x578B; &#xFF08;WT&#xFF09; &#x306E;&#x751F;&#x6210;&#x4EBA;&#x9593; beta1-&#x30A2;&#x30C9;&#x30EC;&#x30CA;&#x30EA;&#x30F3;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53; &#xFF08;beta1-AR&#xFF09; &#x306E;&#x5909;&#x7570;&#x4F53;&#x53D7;&#x5BB9;&#x306E;&#x7A81;&#x7136;&#x5909;&#x7570;&#x8A98;&#x767A;&#x3002;WT beta1 AR &#x3068;&#x306F;&#x7570;&#x306A;&#x308A;&#x3001;&#x7D44;&#x307F;&#x8FBC;&#x307F;&#x306E;&#x6D3B;&#x52D5; Lys324 Ala beta1-AR (K324A) &#x5909;&#x7570;&#x4F53;--&gt; &#x306E;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6;&#x5316;&#x306B;&#x5B8C;&#x5168;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x90E8;&#x5206;&#x30A2;&#x30B4;&#x30CB;&#x30B9;&#x30C8;&#x306E; K324A &#x5909;&#x7570;&#x4F53;&#x306B;&#x305D;&#x306E;&#x7D50;&#x5408;&#x89AA;&#x548C;&#x6027;&#x3068;&#x76F8;&#x95A2;&#x304C;&#x8A8D;&#x3081;&#x3089;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x30A2;&#x30B4;&#x30CB;&#x30B9;&#x30C8;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x305F;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x3084;&#x30EA;&#x30B5;&#x30A4;&#x30AF;&#x30EB;&#x306A;&#x3069;&#x3001;&#x8A66;&#x91D1;&#x3067;&#x540C;&#x69D8;&#x306B; K324A &#x5909;&#x7570;&#x4F53;&#x3068; WT &#x306E; beta1 AR &#x3092;&#x632F;&#x308B;&#x821E;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x305F;&#x3060;&#x3057;&#x3001;WT beta1 AR &#x307E;&#x305F;&#x306F; K324A &#x5909;&#x7570;&#x4F53;&#x9593;&#x8FD1;&#x63A5; G(s) &alpha; &#x306B;&#x6C7A;&#x5B9A;&#x3057;&#x305F;&#x86CD;&#x5149;&#x5171;&#x9CF4;&#x30A8;&#x30CD;&#x30EB;&#x30AE;&#x30FC;&#x4F1D;&#x9054;&#x30A2;&#x30C3;&#x30BB;&#x30A4;&#x3067;, &#x6709;&#x610F;&#x5DEE;&#x304C;&#x3042;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x4E09;&#x5143;&#x7CFB;&#x306E;&#x8907;&#x96D1;&#x306A;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x306E;&#x6982;&#x5FF5;&#x67A0;&#x7D44;&#x307F;&#x5341;&#x5206;&#x306B;&#x9664;&#x304F; K324A &#x5909;&#x7570;&#x4F4E;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53; G &#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x7D50;&#x5408;&#x89AA;&#x548C;&#x6027;&#x306E;&#x4EEE;&#x5B9A;&#x306E;&#x4E0B;&#x3067;&#x306E;&#x6319;&#x52D5;&#x3092;&#x8AAC;&#x660E;&#x3067;&#x304D;&#x306A;&#x304B;&#x3063;&#x305F;&#x3002;K324A &#x5909;&#x7570;&#x4F53;&#x30A4;&#x30BD;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C6;&#x30EC;&#x30CE;&#x30FC;&#x30EB;&#x3078;&#x306E;&#x5358;&#x4E00;&#x306E;&#x4F4E;&#x89AA;&#x548C;&#x6027;&#x7D50;&#x5408;&#x90E8;&#x4F4D;&#x306E;&#x9AD8;&#x3068;&#x4F4E;&#x89AA;&#x548C;&#x6027;&#x306E;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x3078;&#x306E; GDP &#x7D50;&#x5408; G(s) &#x30A2;&#x30EB;&#x30D5;&#x30A1;&#x6A21;&#x5023;&#x884C;&#x70BA; G(s) &#x30A2;&#x30EB;&#x30D5;&#x30A1;&#x306E; C &#x672B;&#x7AEF; 11 &#x30A2;&#x30DF;&#x30CE;&#x9178;&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C9;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x5909;&#x63DB;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x4EBA;&#x9593;&#x306E; beta1 AR &#x306E;&#x4E09;&#x6B21;&#x5143;&#x306E;&#x30A2;&#x30FC;&#x30AD;&#x30C6;&#x30AF;&#x30C1;&#x30E3;&#x306B;&#x57FA;&#x3065;&#x3044;&#x3066;&#x3001;Lys324 &#x3068;&#x30D8;&#x30EA;&#x30C3;&#x30AF;&#x30B9; 3 &#x306E; Asp/Glu-Arg-Tyr &#x30E2;&#x30C1;&#x30FC;&#x30D5;&#x306E;&#x8DDD;&#x96E2;&#x306F;&#x6700;&#x77ED;&#x306E;&#x87BA;&#x65CB; 6 &#x5404;&#x7A2E;&#x30A2;&#x30DF;&#x30CE;&#x9178;&#x306E;&#x4E2D;&#x3067;&#x3060;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x30D8;&#x30EA;&#x30C3;&#x30AF;&#x30B9; 3 &#x3068; 6 &#x5E74;&#x9593;&#x306E;&#x6E9D;&#x306F; Lys324 &#x306B;&#x4F4D;&#x7F6E;&#x3057;&#x3001;&#x305D;&#x306E;&#x7A81;&#x7136;&#x5909;&#x7570;&#x8A98;&#x767A;&#x7A81;&#x7136;&#x5909;&#x7570;&#x4F53;&#x306E;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53; G(s) &#x306E; GDP &#x7D50;&#x5408;&#x30A2;&#x30A4;&#x30BD; &#x30D5;&#x30A9;&#x30FC;&#x30E0;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x975E;&#x5E38;&#x306B;&#x4F4E;&#x3044;&#x7D50;&#x5408;&#x89AA;&#x548C;&#x6027;&#x3092;&#x751F;&#x6210;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x793A;&#x5506;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;

&#x4EBA;&#x9593;&#x306E; beta1 &#x30A2;&#x30C9;&#x30EC;&#x30CA;&#x30EA;&#x30F3;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x306E;&#x30D8;&#x30EA;&#x30C3;&#x30AF;&#x30B9; 6 &#x5185;&#x306E;&#x7A81;&#x7136;&#x5909;&#x7570;&#x8A98;&#x767A;&#x3092;&#x8B58;&#x5225; Lysine324 &#x6B8B;&#x6E23;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x30A2;&#x30B4;&#x30CB;&#x30B9;&#x30C8;&#x306E;&#x9AD8;&#x89AA;&#x548C;&#x6027;&#x7D50;&#x5408;&#x72B6;&#x614B;&#x3092;&#x4F1D;&#x6388;&#x306E;&#x95A2;&#x4E0E;&#x3002;

G &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xACB0;&#xD569; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; (GPCR) agonists&#xC758; &#xACBD;&#xC7C1; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; isotherms &#xD45C;&#xC2DC; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; affinities &#xB192;&#xAC70;&#xB098; &#xB0AE;&#xC740;. 324 Agonists &#xBC0F; &#xC790;&#xADF9; adenylyl cyclase&#xC5D0;&#xC11C; &#xC804;&#xCCB4; &#xB610;&#xB294; &#xBD80;&#xBD84; agonists&#xC758; &#xAC10;&#xC18C; potencies GTP&#xB97C; &#xAD6C;&#xBD84; &#xD558;&#xC9C0; &#xC54A;&#xB294; &#xB2E8;&#xC77C; &#xB0AE;&#xC740; &#xC120;&#xD638;&#xB3C4; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8; &#xD588;&#xB2E4; &#xD5EC;&#xB9AD;&#xC2A4; 6 &#xC57C;&#xC0DD;-&#xD0C0;&#xC785; (WT)&#xC758; &#xC218;&#xC6A9; &#xC778;&#xAC04;&#xC758; beta1 &#xC544;&#xB4DC;&#xB808;&#xB0A0;&#xB9B0; &#xCCB4; (beta1 &#xC544;&#xCE78;&#xC18C;) &#xC0DD;&#xC131; &#xB41C; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xC218;&#xC6A9;&#xC758; &#xC704;&#xCE58;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC2E0;&#xC758; mutagenesis. WT beta1 AR &#xB2EC;&#xB9AC; Ala beta1 AR (K324A) &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774;--&gt; Lys324 &#xD65C;&#xC131;&#xD654;&#xC5D0; &#xC804;&#xCCB4; &#xBC0F; &#xBD80;&#xBD84; agonists&#xC758; &#xBCF8;&#xC9C8;&#xC801;&#xC778; &#xD65C;&#xB3D9; K324A &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774;&#xC5D0; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; affinities&#xC640; &#xC0C1;&#xAD00; &#xD588;&#xB2E4;. &#xAE38; &#xD56D; &#xC81C; &#xC911;&#xC7AC; &#xC778; &#xC0B0;&#xD654; &#xB4F1; &#xC7AC;&#xD65C;&#xC6A9;, &#xBD84;&#xC11D; &#xC2E4;&#xD5D8;&#xC5D0;&#xC11C;&#xC758; &#xC8FC;&#xC694;&#xD55C; K324A &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; WT beta1 AR &#xD589;&#xB3D9; &#xC720;&#xC0AC; &#xD558; &#xAC8C;. &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098; &#xBD84;&#xC11D; &#xD615;&#xAD11; &#xACF5;&#xBA85; &#xC5D0;&#xB108;&#xC9C0; &#xC804;&#xC1A1; &#xC2E4;&#xD5D8; G(s) &#xC54C;&#xD30C; WT beta1 &#xC544;&#xCE78;&#xC18C; &#xB610;&#xB294; K324A &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xC0AC;&#xC774;&#xC758; &#xADFC;&#xC811;&#xC744; &#xACB0;&#xC815; &#xD558;&#xB294;, &#xD070; &#xCC28;&#xC774;&#xAC00; &#xC788;&#xC5C8;&#xB2E4;. &#xC0BC;&#xD56D; &#xBCF5;&#xC7A1; &#xD55C; &#xBAA8;&#xB378;&#xC758; &#xAC1C;&#xB150;&#xC801; &#xD504;&#xB808;&#xC784; &#xC6CC;&#xD06C; &#xB0AE;&#xC740; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; G &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xB3D9;&#xC9C8;&#xC131;&#xC758; &#xAC00;&#xC815; &#xC544;&#xB798;&#xB97C; &#xC81C;&#xC678; &#xD558; &#xACE0; K324A &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774;&#xC758; &#xB3D9;&#xC791;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC801;&#xC808; &#xD558; &#xAC8C; &#xACE0;&#xB824; &#xD558;&#xC9C0; &#xC218; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. Isoproterenol K324A &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774;&#xC758; &#xB2E8;&#xC77C; &#xB0AE;&#xC740; &#xC120;&#xD638;&#xB3C4; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8; C &#xD130;&#xBBF8;&#xB110; 11 &#xC544;&#xBBF8;&#xB178; &#xC0B0; &#xC131; &#xD3A9; &#xD2F0; &#xB4DC; &#xB192;&#xC740; &#xBC0F; &#xB0AE;&#xC740; &#xC120;&#xD638;&#xB3C4; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8; GDP &#xBC14;&#xC778;&#xB529; G(s) &#xC54C;&#xD30C; &#xBAA8;&#xBC29; &#xD589;&#xC704; G(s) &#xC54C;&#xD30C;&#xB85C; &#xBCC0;&#xD658; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC778;&#xAC04;&#xC758; beta1 AR&#xC758; 3 &#xCC28;&#xC6D0; &#xC544;&#xD0A4;&#xD14D;&#xCC98;&#xB97C; &#xAE30;&#xBC18;&#xC73C;&#xB85C;, Lys324 &#xBC0F; &#xB098;&#xC120; 3&#xC5D0;&#xC11C;&#xC5D0;&#xC11C; Asp/Glu-Arg-Tyr &#xBAA8;&#xD2F0;&#xBE0C; &#xC0AC;&#xC774;&#xC758; &#xAC70;&#xB9AC; &#xB098;&#xC120; 6&#xC5D0;&#xC5D0;&#xC11C; &#xB2E4;&#xC591; &#xD55C; &#xC544;&#xBBF8;&#xB178;&#xC0B0; &#xAC00;&#xC6B4;&#xB370; &#xAC00;&#xC7A5; &#xC9E7;&#xC740; &#xC774;&#xC5C8;&#xB2E4;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xC5F0;&#xAD6C; &#xACB0;&#xACFC; Lys324 &#xD3EC;&#xD568; 3&#xACFC; 6 &#xC0AC;&#xC774;&#xC758; &#xD648;&#xC5D0; &#xB193;&#xC5EC; &#xADF8; mutagenesis G(S)&#xC758; GDP &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xB41C; isoform&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xB9E4;&#xC6B0; &#xB0AE;&#xC740; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xC120;&#xD638;&#xB3C4; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; &#xC0DD;&#xC131; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0C5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xD5EC;&#xB9AD;&#xC2A4; 6 &#xC778;&#xAC04;&#xC758; beta1 &#xC544;&#xB4DC;&#xB808;&#xB0A0;&#xB9B0; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; &#xB0B4;&#xC758; mutagenesis &#xC2DD;&#xBCC4; &#xC794;&#xB958;&#xBB3C;&#xC73C;&#xB85C; Lysine324 agonists&#xC758; &#xB192;&#xC740; &#xCE5C; &#xD654;&#xB825; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xC0C1;&#xD0DC; &#xBD80;&#xC5EC;&#xC5D0; &#xAD00;&#xC5EC;.

Isotermas de competencia vinculante para los agonistas de receptores de acoplados a prote&iacute;na G (GPCR) Mostrar alta y baja afinidad de Uni&oacute;n. Mutag&eacute;nesis de lisina en la posici&oacute;n 324 en h&eacute;lice 6 del tipo salvaje (WT) humano receptores beta1-adren&eacute;rgicos (beta1-AR) generado receptores del mutante que ten&iacute;an sitios de uni&oacute;n a GTP-insensible de baja afinidad solo por agonistas y potencias reducidas de agonistas parciales o totales en cyclase del adenylyl estimulante. A diferencia de la WT beta1-AR, actividades intr&iacute;nsecas de agonistas parciales y totales en la activaci&oacute;n de la Lys324--&gt; mutante de Ala beta1-AR (K324A) se correlacionaron con sus afinidades vinculantes para el mutante K324A. En ensayos, como la fosforilaci&oacute;n mediada por agonista y reciclaje, el mutante K324A y la WT beta1-AR se comportaron de manera similar. Sin embargo, en fluorescencia resonancia energ&iacute;a transferencia ensayos que determinaron la proximidad entre el WT beta1-AR o el mutante K324A a alfa de g (s), hubo diferencias significativas. El marco conceptual del modelo complejo ternario no podr&iacute;a explicar adecuadamente para el comportamiento del mutante K324A excepto bajo supuestos de afinidades de uni&oacute;n de baja prote&iacute;na de receptor-G. El sitio &uacute;nico de baja afinidad de uni&oacute;n del mutante K324A al isoproterenol fue convertido por el p&eacute;ptido de 11 amino&aacute;cidos del c-terminal de alfa de g (s), que act&uacute;a de un imitador de PIB-limite g alfa, a sitios de alta y baja afinidad. Seg&uacute;n la arquitectura tridimensional de la humana beta1-AR, la distancia entre Lys324 y el motivo de Asp/Glu-Arg-Tyr en h&eacute;lice 3 es la m&aacute;s corta entre los diferentes amino&aacute;cidos en h&eacute;lice 6. Estos resultados indican que la Lys324 se encuentra en una ranura entre 3 y 6 h&eacute;lices, y su mutag&eacute;nesis genera un receptor mutante con muy baja afinidad para el isoform del PIB-limite de g (s).

Mutag&eacute;nesis en h&eacute;lice 6 del receptor beta1 adren&eacute;rgico humano identifica Lysine324 como residuo en impartir el estado de alta afinidad de uni&oacute;n de los agonistas.

Resensitization G &#x86CB;&#x767D;&#x5076;&#x8054;&#x4F53; (&#x6C14;&#x76F8;) &#x6FC0;&#x52A8;&#x5242;&#x957F;&#x671F;&#x7684;&#x66B4;&#x9732;&#x540E;&#x662F;&#x8FD8;&#x539F;&#x5230;&#x968F;&#x540E;&#x6311;&#x6218;&#x7684;&#x6FC0;&#x52A8;&#x5242;&#x53D7;&#x4F53;&#x7684;&#x53CD;&#x5E94;&#x80FD;&#x529B;&#x7684;&#x5173;&#x952E;&#x3002;3&#39;-5&#39; &#x73AF;&#x78F7;&#x9178;&#x817A;&#x82F7;&#x4F9D;&#x8D56;&#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#x6FC0;&#x9176; (PKA) &#x548C;&#x5728;&#x4EBA;&#x7C7B; beta (1) &#x7B2C;&#x4E09;&#x80DE;&#x5185;&#x73AF;&#x4E1D;&#x6C28;&#x9178; 312-&#x80BE;&#x4E0A;&#x817A;&#x7D20;&#x80FD;&#x53D7;&#x4F53; (beta(1)-AR) &#x90FD;&#x662F;&#x5FC5;&#x8981;&#x7684;&#x6709;&#x6548;&#x56DE;&#x6536;&#x548C;&#x6FC0;&#x52A8;&#x5242;&#x5185;&#x5728; beta 1-AR &#xFF08;&#x52A0;&#x5FB7;&#x7EB3;&#x3001; L.A.&#x3001; &#x6570;&#x5B57;&#x56FE;&#x4E66;&#x9986;&#x591A;&#x65AF;&#x6851;&#x6258;&#x65AF;&#x3001; N.M.&#x3001; &#x9A6C;&#x5854; &middot; &#x5DF4;&#x585E;&#x3001; S.G.&#x3001; Whitt&#x3001; M.A.&#x548C; Bahouth&#xFF0C;&#xFF08;2004 &#x5E74;&#xFF09; S.W.J.Biol.&#x5316;&#x5B66; 279 resensitization21135 21143)&#x3002;&#x56E0;&#x4E3A; PKA &#x88AB;&#x9644;&#x8FD1;&#x76EE;&#x6807;&#x57FA;&#x8D28;&#x86CB;&#x767D;&#x6FC0;&#x9176; A &#x951A;&#x86CB;&#x767D; (AKAPs) &#x4E0E;&#x4EA4;&#x4E92;&#x6765;&#x5206;&#x5272;&#x7684;&#x672C;&#x7814;&#x7A76;&#x62A5;&#x544A;&#x8FDB;&#x884C;&#xFF0C;&#x4EE5;&#x67E5;&#x660E;&#x53C2;&#x4E0E;&#x4ECB;&#x5BFC; PKA &#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x7684; beta 1-AR &#x548C;&#x5176;&#x56DE;&#x6536;&#x548C; resensitization AKAP&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x62A5;&#x544A; Ht-31 &#x80BD;&#x4ECB;&#x5BFC;&#x4E2D;&#x65AD; PKA/AKAP &#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x7684;&#x963B;&#x6B62;&#x8FD9;&#x4E24;&#x79CD;&#x57FA;&#x56E0;&#x8868;&#x8FBE;&#x7684; beta 1-AR &#x66FC;&#x6D66;&#x6C49;&#x514B; 293 &#x7EC6;&#x80DE;&#x548C;&#x6B65;&#x4E4B;&#x9065;&#x8868;&#x793A;&#x7684; beta 1-AR SK-N-MC &#x7EC6;&#x80DE;&#x548C;&#x65B0;&#x751F;&#x5927;&#x9F20;&#x76AE;&#x5C42;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x7684;&#x518D;&#x751F;&#x548C;&#x529F;&#x80FD; resensitization&#x3002;&#x800C;&#x5728;&#x66FC;&#x6D66;&#x6C49;&#x514B; 293 &#x7EC6;&#x80DE;&#x4E2D;&#x786E;&#x5B9A;&#x4E86;&#x51E0;&#x79CD;&#x5185;&#x6E90;&#x6027; AKAPs&#xFF0C;&#x5C0F;&#x5E72;&#x6270; RNA &#x4ECB;&#x5BFC;&#x4E0B;&#x8C03; AKAP79 &#x963B;&#x6B62;&#x56DE;&#x6536; beta 1-AR &#x5728;&#x6B64;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x7684;&#x884C;&#x3002;Co immunoprecipitations &#x548C;&#x8367;&#x5149;&#x5171;&#x632F;&#x80FD;&#x91CF;&#x8F6C;&#x79FB; &#xFF08;&#x97F3;&#x54C1;&#xFF09; &#x663E;&#x5FAE;&#x955C;&#x5B9E;&#x9A8C;&#x66FC;&#x6D66;&#x6C49;&#x514B; 293 &#x7EC6;&#x80DE;&#x4E2D;&#x7684;&#x53D1;&#x73B0;&#x7684; beta 1-AR&#xFF0C;AKAP79 &#x548C; PKA &#x7684; beta 1 &#x6C29;&#x6C14;&#x4FDD;&#x62A4;&#x7FA7;&#x57FA;&#x603B;&#x7AD9;&#x5F62;&#x6210;&#x4E09;&#x5143;&#x590D;&#x6570;&#x6B64;&#x590D;&#x6742;&#x53C2;&#x4E0E;&#x4ECB;&#x5BFC; PKA &#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x7684; beta 1-AR &#x7B2C;&#x4E09;&#x80DE;&#x5185;&#x73AF;&#x56E0;&#x4E3A; PKA/AKAP &#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x7684;&#x4E2D;&#x65AD;&#x6216;&#x5C0F;&#x5E72;&#x6270; RNA &#x4ECB;&#x5BFC;&#x4E0B;&#x8C03; AKAP79 &#x65E2;&#x6291;&#x5236;&#x8FD9;&#x79CD;&#x53CD;&#x5E94;&#x3002;&#x56E0;&#x6B64;&#xFF0C;AKAP79 &#x63D0;&#x4F9B;&#x4E86; PKA phosphorylate beta 1-AR&#xFF0C;&#x5E76;&#x4ECE;&#x800C;&#x542C;&#x5199;&#x56DE;&#x6536;&#x548C; resensitization &#x884C;&#x7A0B;&#x7684; beta 1 &#x4EBA;&#x624D;&#x57F9;&#x8BAD;&#x4E2D;&#x5FC3;&#x3002;

AKAP79 &#x4ECB;&#x5BFC;&#x7684;&#x9776;&#x5411; beta1-&#x80BE;&#x4E0A;&#x817A;&#x7D20;&#x80FD;&#x53D7;&#x4F53;&#x73AF;&#x78F7;&#x9178;&#x817A;&#x82F7;&#x9178;&#x4F9D;&#x8D56;&#x6027;&#x86CB;&#x767D;&#x6FC0;&#x9176;&#x7684;&#x4FC3;&#x8FDB;&#x518D;&#x751F;&#x53CA;&#x529F;&#x80FD; resensitization &#x53D7;&#x4F53;&#x3002;

Resensitization of G protein-coupled receptors (GPCR) following prolonged agonist exposure is critical for restoring the responsiveness of the receptor to subsequent challenges by agonist. The 3'-5' cyclic AMP-dependent protein kinase (PKA) and serine 312 in the third intracellular loop of the human beta(1)-adrenergic receptor (beta(1)-AR) were both necessary for efficient recycling and resensitization of the agonist-internalized beta(1)-AR (Gardner, L. A., Delos Santos, N. M., Matta, S. G., Whitt, M. A., and Bahouth, S. W. (2004) J. Biol. Chem. 279, 21135-21143). Because PKA is compartmentalized near target substrates by interacting with protein kinase A anchoring proteins (AKAPs), the present study was undertaken to identify the AKAP involved in PKA-mediated phosphorylation of the beta(1)-AR and in its recycling and resensitization. Here, we report that Ht-31 peptide-mediated disruption of PKA/AKAP interactions prevented the recycling and functional resensitization of heterologously expressed beta(1)-AR in HEK-293 cells and endogenously expressed beta(1)-AR in SK-N-MC cells and neonatal rat cortical neurons. Whereas several endogenous AKAPs were identified in HEK-293 cells, small interfering RNA-mediated down-regulation of AKAP79 prevented the recycling of the beta(1)-AR in this cell line. Co-immunoprecipitations and fluorescence resonance energy transfer (FRET) microscopy experiments in HEK-293 cells revealed that the beta(1)-AR, AKAP79, and PKA form a ternary complex at the carboxyl terminus of the beta(1)-AR. This complex was involved in PKA-mediated phosphorylation of the third intracellular loop of the beta(1)-AR because disruption of PKA/AKAP interactions or small interfering RNA-mediated down-regulation of AKAP79 both inhibited this response. Thus, AKAP79 provides PKA to phosphorylate the beta(1)-AR and thereby dictate the recycling and resensitization itineraries of the beta(1)-AR.

AKAP79-mediated targeting of the cyclic AMP-dependent protein kinase to the beta1-adrenergic receptor promotes recycling and functional resensitization of the receptor.

Resensibilisation de G protein-coupled receptors (GPCR) apr&egrave;s une exposition prolong&eacute;e agoniste est essentielle pour la restauration de la sensibilit&eacute; du r&eacute;cepteur aux d&eacute;fis ult&eacute;rieurs par l&#39;agoniste. La 3&#39;-5&#39; AMP cyclique-prot&eacute;ine kinase d&eacute;pendante (PKA) et s&eacute;rine 312 dans la boucle intracellulaire troisi&egrave;me b&ecirc;ta humain (1)-r&eacute;cepteur adr&eacute;nergique (beta(1)-AR) sont toutes deux n&eacute;cessaires pour le recyclage efficace et la resensibilisation de la b&ecirc;ta agoniste int&eacute;rioris&eacute; 1-AR (Gardner, L. A., deque, N. M., Matta, S. G., Whitt, M. A. et Bahouth, S. W. (2004) J. Biol. Chim. 27921135-21143). Parce que la PKA est compartiment&eacute;e pr&egrave;s de substrats de cible en interagissant avec les prot&eacute;ines ancrage de prot&eacute;ine kinase A (AKAPs), la pr&eacute;sente &eacute;tude visait &agrave; identifier l&#39;AKAP impliqu&eacute; dans la phosphorylation m&eacute;di&eacute;e par le PKA de la b&ecirc;ta 1-AR et son recyclage et la resensibilisation. Nous rapportons ici que Ht-31 induite par le peptide perturbation des interactions de PKA/AKAP emp&ecirc;ch&eacute; la resensibilisation recyclage et fonctionnelle de fa&ccedil;on h&eacute;t&eacute;rologue expresse b&ecirc;ta 1-AR dans les cellules HEK-293 et exprim&eacute;s de fa&ccedil;on endog&egrave;ne b&ecirc;ta 1-AR SK-N-MC cellules et des neurones corticaux de rat n&eacute;onatal. Consid&eacute;rant que plusieurs AKAPs endog&egrave;nes ont &eacute;t&eacute; identifi&eacute;s dans les cellules HEK-293, petite parasite-mediated RNA r&eacute;gulation n&eacute;gative de AKAP79 a emp&ecirc;ch&eacute; le recyclage de la b&ecirc;ta 1-AR dans cette lign&eacute;e cellulaire. Co-immunopr&eacute;cipitation et fluorescence &eacute;nergie transfert (FRET) microscopie exp&eacute;riences de r&eacute;sonance dans les cellules HEK-293 a r&eacute;v&eacute;l&eacute; que la b&ecirc;ta 1-AR, AKAP79 et PKA forment un complexe ternaire au terminus carboxylique de la b&ecirc;ta 1-AR. Ce complexe a particip&eacute; &agrave; la phosphorylation m&eacute;di&eacute;e par le PKA de la troisi&egrave;me boucle intracellulaire de la b&ecirc;ta 1-AR, parce que la rupture des interactions de PKA/AKAP ou petite parasite-mediated RNA r&eacute;gulation n&eacute;gative de AKAP79 les deux inhibe cette r&eacute;ponse. Ainsi, AKAP79 fournit des PKA pour phosphoryler la b&ecirc;ta 1-AR et dicter ainsi les recyclage et sensibilisaient itin&eacute;raires de la b&ecirc;ta 1-AR.

AKAP79-mediated ciblage de l&#39;AMP cyclique-prot&eacute;ine kinase d&eacute;pendante de la beta1-adr&eacute;nergique favorise sensibilisaient recyclage et fonctionnelle du r&eacute;cepteur.

Resensitization von G Protein gekoppelten Rezeptoren (GPCR) nach l&auml;ngerer Agonist Exposition ist entscheidend f&uuml;r die Wiederherstellung der Reaktionsf&auml;higkeit des Rezeptors auf nachfolgende Herausforderungen von Agonist. Die 3&#39;-5&#39; zyklischem AMP-abh&auml;ngige Proteinkinase (PKA) und Serin 312 in der dritten intrazellul&auml;ren Schleife des menschlichen Beta (1)-adrenerge Rezeptor (beta(1)-AR) waren beide notwendig f&uuml;r effizientes recycling und Resensitization der Agonist-verinnerlicht Beta 1-AR (Gardner, L. A., Delos Santos, N. M., Matta, S. G., Whitt, M. A. und Bahouth, S. W. (2004) J. Biol. Chem. 27921135-21143). Da PKA durch die Interaktion mit Protein Kinase A verankern Proteine (AKAPs) in der N&auml;he deiner Substrate aufgeteilt ist, wurde die vorliegende Studie unternommen, um die AKAP PKA-vermittelte Phosphorylierung der Beta 1-AR und der seine recycling und Resensitization zu identifizieren. Hier berichten wir, dass Ht-31 Peptid-vermittelte St&ouml;rung der PKA/AKAP Interaktionen der Recycling- und funktionelle Resensitization heterologously exprimierten Beta 1-AR in den HEK-293-Zellen und endogen exprimierten Beta 1-AR in SK-N-MC Zellen und neonatalen Ratte kortikale Neuronen verhindert. W&auml;hrend mehrere endogene AKAPs in HEK-293-Zellen identifiziert wurden, verhindert kleine interferierender RNA-vermittelte Herunterregulation AKAP79 das recycling der Beta 1-AR in dieser Zelle. Co-Immunpr&auml;zipitation und Fluoreszenz Resonanz Energie Transfer (FRET) Mikroskopie Experimente in HEK-293-Zellen ergab, dass die Beta 1-AR, AKAP79 und PKA einen tern&auml;ren Komplex im Karboxyl-Terminus von der Beta 1-AR bilden. Komplex beteiligte sich an PKA-vermittelte Phosphorylierung der dritten intrazellul&auml;ren Schleife der Beta 1-AR, weil die Unterbrechung der PKA/AKAP Interaktionen oder kleine interferierender RNA-vermittelte Herunterregulation AKAP79 beide diese Reaktion gehemmt. Daher bietet AKAP79 PKA phosphoryliert die Beta 1-AR und damit diktieren die Recycling- und Resensitization Routen von der Beta 1-AR.

AKAP79-vermittelte Ausrichtung der die zyklischem AMP-abh&auml;ngigen Proteinkinase an die beta1-adrenerge Rezeptor f&ouml;rdert recycling und funktionalen Resensitization des Rezeptors.

Resensitization dei recettori di proteina-accoppiati del G (GPCR) a seguito di esposizione prolungata agonista &egrave; fondamentale per ripristinare la capacit&agrave; di risposta del recettore alle successive sfide da agonista. 3&#39; -5 &#39; AMP ciclico-dependent protein kinase (PKA) e serina 312 nel ciclo terzo intracellulare della beta umana (1)-recettori adrenergici (beta(1)-AR) erano entrambe necessarie per il riciclaggio efficiente e resensitization della beta agonista interiorizzato (1)-AR (Gardner, L. A., Delos Santos, N. M., Matta, S. G., Whitt, M. A. e Bahouth si, W. S. (2004) j Biol Chem. 27921135-21143). Perch&eacute; PKA &egrave; compartimentato vicino a substrati di destinazione interagendo con proteine l&#39;ancoraggio della proteina chinasi A (AKAPs), il presente studio &egrave; stato intrapreso per identificare l&#39;AKAP coinvolti nella fosforilazione mediata da PKA della beta (1)-AR e riciclaggio e resensitization. Qui, segnaliamo che Ht-31 perturbazione del peptide-mediata delle interazioni PKA/AKAP ha impedito il riciclaggio e funzionale resensitization di heterologously espresso beta (1) - AR in cellule HEK-293 e beta endogena espresso (1) - AR in cellule di SK-N-MC e neuroni corticali del ratto neonatale. Considerando che in cellule HEK-293 sono stati identificati diversi AKAPs endogena, piccolo interfering RNA-mediata down-regulation di AKAP79 ha impedito il riciclaggio della beta (1)-AR in questa linea cellulare. Co-immunoprecipitazione e fluorescenza resonance energy transfer (FRET) microscopia esperimenti in cellule HEK-293 ha rivelato che la beta (1) - AR, AKAP79 e PKA formano un complesso ternario presso il terminus carbossilico della beta (1) - AR. Questo complesso &egrave; stato coinvolto nella fosforilazione mediata da PKA del terzo ciclo intracellulare della beta (1)-AR perch&eacute; perturbazione delle interazioni PKA/AKAP o piccole interfering RNA-mediata down-regulation di AKAP79 sia inibita questa risposta. AKAP79 fornisce quindi PKA per fosforilare il beta (1)-AR e quindi dettare i riciclaggio e resensitization itinerari della beta (1)-AR.

AKAP79-mediated targeting della chinasi AMP ciclico-dipendente della proteina per i recettori beta1-adrenergici di promuove resensitization riciclaggio e funzionale del recettore.

Resensitization G &#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x5171;&#x5F79;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53; &#xFF08;GPCR&#xFF09; &#x9577;&#x671F;&#x30A2;&#x30B4;&#x30CB;&#x30B9;&#x30C8;&#x66B4;&#x9732;&#x5F8C;&#x306E;&#x5FDC;&#x7B54;&#x6027;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x306E;&#x30A2;&#x30B4;&#x30CB;&#x30B9;&#x30C8;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x5F8C;&#x7D9A;&#x306E;&#x8AB2;&#x984C;&#x3092;&#x5FA9;&#x5143;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x6B20;&#x304B;&#x305B;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3002;3&#39;-5 &#39; &#x30B5;&#x30A4;&#x30AF;&#x30EA;&#x30C3;&#x30AF; AMP &#x4F9D;&#x5B58;&#x578B;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC; (PKA) &#x3068;&#x30BB;&#x30EA;&#x30F3; 312 &#x30D2;&#x30C8; &beta; (1) &#x306E;&#x7B2C;&#x4E09;&#x7D30;&#x80DE;&#x5185;&#x30EB;&#x30FC;&#x30D7;&#x3067;-&#x30A2;&#x30C9;&#x30EC;&#x30CA;&#x30EA;&#x30F3;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53; (beta(1)-AR) &#x3044;&#x305F;&#x4E21;&#x65B9;&#x306E;&#x52B9;&#x7387;&#x7684;&#x306A;&#x30EA;&#x30B5;&#x30A4;&#x30AF;&#x30EB;&#x3068; resensitization &#x30A2;&#x30B4;&#x30CB;&#x30B9;&#x30C8;&#x5185;&#x9762;&#x306E;&#x30D9;&#x30FC;&#x30BF;&#x7248; &#xFF08;1&#xFF09; &#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x5FC5;&#x8981;-AR (&#x30AC;&#x30FC;&#x30C9;&#x30CA;&#x30FC; l. a.&#x3001;Delos &#x30B5;&#x30F3;&#x30C8;&#x30B9;&#x3001;N. M.&#x3001;&#x30DE;&#x30C3;&#x30BF;&#x3001;S. G.&#x3001;Whitt&#x3001;M. A.&#x3001;Bahouth&#x3001;J. S. w. (2004) &#x751F;&#x7269;&#x5316;&#x5B66; 279&#x3001;21135 21143)&#x3002;PKA &#x306F;&#x3001;&#x8FD1;&#x304F;&#x306E;&#x30BF;&#x30FC;&#x30B2;&#x30C3;&#x30C8;&#x57FA;&#x677F;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC; A &#x30A2;&#x30F3;&#x30AB;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA; (AKAPs) &#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x4ED5;&#x5207;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x306E;&#x3067;&#x3001;&#x672C;&#x7814;&#x7A76;&#x306F; AKAP &#x30D9;&#x30FC;&#x30BF;&#x7248; (1) &#x306E; PKA &#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x305F;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x306E;&#x95A2;&#x4E0E;&#x3092;&#x8B58;&#x5225;&#x3059;&#x308B;&#x3046;&#x3051;&#x3066;-AR &#x3068;&#x305D;&#x306E;&#x30EA;&#x30B5;&#x30A4;&#x30AF;&#x30EB;&#x3068; resensitization&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x3001;&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C9;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x305F; Ht 31 &#x4E2D;&#x65AD; PKA/AKAP &#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x306E; heterologously &#x8868;&#x73FE;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x30D9;&#x30FC;&#x30BF; (1) - AR HEK 293 &#x7D30;&#x80DE;&#x3068;&#x5185;&#x751F;&#x306B;&#x8868;&#x73FE;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x30D9;&#x30FC;&#x30BF; (1) - &#x306E;&#x30EA;&#x30B5;&#x30A4;&#x30AF;&#x30EB;&#x3068;&#x6A5F;&#x80FD; resensitization &#x3092;&#x9632;&#x3050;&#x5831;&#x544A; SK-N-MC &#x7D30;&#x80DE;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x65B0;&#x751F;&#x5150;&#x30E9;&#x30C3;&#x30C8;&#x5927;&#x8133;&#x76AE;&#x8CEA;&#x30CB;&#x30E5;&#x30FC;&#x30ED;&#x30F3;&#x306E; AR&#x3002;&#x3044;&#x304F;&#x3064;&#x304B;&#x306E;&#x5185;&#x56E0;&#x6027; AKAPs HEK 293 &#x7D30;&#x80DE;&#x3067;&#x8B58;&#x5225;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x306B;&#x5BFE;&#x3057;&#x3001;&#x5C0F;&#x3055;&#x306A;&#x5E72;&#x6E09; RNA &#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x305F;&#x306E;&#x30C0;&#x30A6;&#x30F3;&#x30EC;&#x30AE;&#x30E5;&#x30EC;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3; AKAP79 &#x306E;&#x30D9;&#x30FC;&#x30BF;&#x7248; (1) &#x30EA;&#x30B5;&#x30A4;&#x30AF;&#x30EB;&#x9632;&#x6B62;-AR &#x3053;&#x306E;&#x30BB;&#x30EB;&#x306E;&#x884C;&#x3002;Co immunoprecipitations &#x3068;&#x86CD;&#x5149;&#x306E;&#x5171;&#x9CF4;&#x30A8;&#x30CD;&#x30EB;&#x30AE;&#x30FC;&#x4F1D;&#x9054; (FRET) &#x9855;&#x5FAE;&#x93E1;&#x5B9F;&#x9A13; HEK 293 &#x7D30;&#x80DE;&#x3067;&#x306F;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x30D9;&#x30FC;&#x30BF; (1) - AR&#x3001;AKAP79 &#x3068; PKA &#x4E09;&#x5143;&#x932F;&#x4F53;&#x5F62;&#x6210; (1) &#x30D9;&#x30FC;&#x30BF;&#x7248;&#x306E;&#x30AB;&#x30EB;&#x30DC;&#x30AD;&#x30B7;&#x30EB;&#x57FA;&#x5074;&#x3067; - &#x7740;&#x3053;&#x306E;&#x8907;&#x96D1;&#x306A;&#x30D9;&#x30FC;&#x30BF; (1) &#x306E; 3 &#x756A;&#x76EE;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x5185;&#x30EB;&#x30FC;&#x30D7;&#x306E; PKA &#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x305F;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x306E;&#x95A2;&#x4E0E;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x305F;-AR PKA/AKAP &#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x306E;&#x4E2D;&#x65AD;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x5C0F;&#x3055;&#x3044;&#x5E72;&#x6E09; RNA &#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x305F;&#x30C0;&#x30A6;&#x30F3;&#x30EC;&#x30AE;&#x30E5;&#x30EC;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3; AKAP79 &#x306E;&#x4E21;&#x65B9;&#x3053;&#x306E;&#x5FDC;&#x7B54;&#x3092;&#x6291;&#x5236;&#x3057;&#x305F;&#x306E;&#x3067;&#x3002;&#x3057;&#x305F;&#x304C;&#x3063;&#x3066;&#x3001;AKAP79 (1) &#x30D9;&#x30FC;&#x30BF;&#x3092;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x3059;&#x308B; PKA &#x63D0;&#x4F9B;&#x3057;&#x307E;&#x3059;-AR &#x3068;&#x305D;&#x308C;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x30D9;&#x30FC;&#x30BF; (1) &#x306E;&#x30EA;&#x30B5;&#x30A4;&#x30AF;&#x30EB;&#x3068; resensitization &#x306E;&#x65C5;&#x7A0B;&#x3092;&#x6307;&#x793A;-&#x7740;

AKAP79 &#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x305F;&#x30B5;&#x30A4;&#x30AF;&#x30EA;&#x30C3;&#x30AF; AMP &#x4F9D;&#x5B58;&#x578B;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC; beta1 &#x30A2;&#x30C9;&#x30EC;&#x30CA;&#x30EA;&#x30F3;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x3092;&#x30BF;&#x30FC;&#x30B2;&#x30C3;&#x30C8;&#x3068;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x306E;&#x30EA;&#x30B5;&#x30A4;&#x30AF;&#x30EB;&#x3068;&#x6A5F;&#x80FD; resensitization &#x3092;&#x4FC3;&#x9032;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

Resensitization &#xC218;&#xC6A9; G &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xACB0;&#xD569; &#xCCB4; (GPCR) &#xC7A5;&#xAE30;&#xAC04;&#xB41C; &#xAE38; &#xD56D; &#xC81C; &#xB178;&#xCD9C; &#xD6C4;&#xC758; &#xAE38; &#xD56D; &#xC81C;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xD6C4;&#xC18D; &#xACFC;&#xC81C;&#xB97C; &#xBCF5;&#xC6D0; &#xD558;&#xB294; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4;&#xC758; &#xC751;&#xB2F5; &#xC18D;&#xB3C4; &#xB300; &#xD55C; &#xC911;&#xC694; &#xD558;&#xB2E4;. 3&#39;-5&#39; &#xC21C;&#xD658; &#xC570;&#xD504; &#xC885;&#xC18D; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xD0A4; &#xB2C8; &#xC544; &#xC81C; (PKA)&#xC640; &#xC778;&#xAC04;&#xC758; &#xBCA0;&#xD0C0; (1)&#xC758; 3 &#xBC88;&#xC9F8; &#xC138;&#xD3EC;&#xB0B4; &#xB8E8;&#xD504;&#xC5D0;&#xC11C; &#xB5A0;&#xB4E4;&#xACE0; 312-&#xC544;&#xB4DC;&#xB808;&#xB0A0;&#xB9B0; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; (beta(1)-AR) &#xD588;&#xB2E4; &#xBAA8;&#xB450; &#xD6A8;&#xC728;&#xC801;&#xC778; &#xC7AC;&#xD65C;&#xC6A9; &#xBC0F; &#xBCA0;&#xD0C0; &#xAE38; &#xD56D; &#xC81C; &#xB0B4; &#xBA74; (1)-&#xC544;&#xCE78;&#xC18C; (&#xAC00;&#xB4DC;&#xB108;, L. A. Delos &#xC0B0;&#xD1A0;&#xC2A4;, N. M., Matta, S. G., &#xD718; &#xD2B8;, M. A.&#xC640; Bahouth, S. W. (2004) J. Biol. &#xD654;&#xD559; 279 resensitization21135 21143). PKA&#xB294; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xD0A4; &#xB2C8; &#xC544; &#xC81C; A &#xACE0;&#xC815; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; (AKAPs)&#xC640; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xB300;&#xC0C1; &#xAE30;&#xD310; &#xADFC;&#xCC98; &#xB4E4; &#xC5D0;&#xAC8C;&#xB9CC;, &#xB54C;&#xBB38;&#xC5D0; &#xD604;&#xC7AC;&#xC758; &#xC5F0;&#xAD6C; AKAP &#xC7AC;&#xD65C;&#xC6A9; &#xBC0F; resensitization &#xBCA0;&#xD0C0; (1)-&#xC544;&#xCE78;&#xC18C;&#xC758; &#xC778; &#xC0B0;&#xD654; PKA &#xC911;&#xC7AC;&#xC5D0; &#xAD00;&#xB828; &#xB41C; &#xC2DD;&#xBCC4;&#xC744; &#xCC29;&#xC218; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC5EC;&#xAE30;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; Ht 31 &#xD3A9; &#xD2F0; &#xB4DC;-&#xC911;&#xC7AC; &#xC911;&#xB2E8; PKA/AKAP &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC758; heterologously &#xD45C;&#xD604;&#xB41C; &#xBCA0;&#xD0C0; (1)-&#xC544;&#xCE78;&#xC18C; HEK 293 &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0;&#xC11C;&#xC640; endogenously &#xD45C;&#xD604;&#xB41C; &#xBCA0;&#xD0C0; (1)-&#xC544;&#xCE78;&#xC18C; SK N &#xC5E0;&#xC528; &#xC140;&#xACFC; &#xC2E0;&#xC0DD;&#xC544; &#xC950; &#xB300;&#xB1CC; &#xD53C; &#xC9C8;&#xC758; &#xC2E0;&#xACBD; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0;&#xC11C;&#xC758; &#xC7AC;&#xD65C;&#xC6A9; &#xBC0F; &#xAE30;&#xB2A5; resensitization &#xC218; &#xC5C6;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xBCF4;&#xACE0; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC5EC;&#xB7EC; &#xC0DD; AKAPs HEK 293 &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0; &#xBC1C;&#xACAC; &#xD588;&#xB2E4;, &#xBC18;&#xBA74; &#xC791;&#xC740; &#xAC04;&#xC12D; RNA &#xC911;&#xC7AC; &#xB2E4;&#xC6B4; &#xB808; &#xADE4; &#xB808;&#xC774; &#xC158; akap79&#xC758; &#xBCA0;&#xD0C0; (1)-&#xC544;&#xCE78;&#xC18C;&#xAC00; &#xC140; &#xB77C;&#xC778;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC7AC;&#xD65C;&#xC6A9; &#xC218; &#xC5C6;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. Co immunoprecipitations &#xBC0F; &#xD615;&#xAD11; &#xACF5;&#xBA85; &#xC5D0;&#xB108;&#xC9C0; &#xC804;&#xC1A1; (&#xBB34;&#xC11C; &#xC6CC;) &#xD604;&#xBBF8;&#xACBD; &#xC2E4;&#xD5D8; HEK 293 &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0; &#xBCA0;&#xD0C0; (1)-&#xC544;&#xCE78;&#xC18C;, AKAP79, &#xBC0F; PKA&#xB294; &#xBCA0;&#xD0C0; (1)-&#xC544;&#xCE78;&#xC18C; carboxyl &#xC885;&#xC810;&#xC5D0; &#xC0BC;&#xD56D; &#xBCF5;&#xC7A1; &#xD55C; &#xD615;&#xD0DC;&#xB85C; &#xACF5;&#xAC1C; &#xC774; &#xBCF5;&#xC7A1; &#xD55C; PKA/AKAP &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC758; &#xC911;&#xB2E8; &#xC774;&#xB098; &#xC791;&#xC740; &#xAC04;&#xC12D; RNA &#xC911;&#xC7AC; &#xB2E4;&#xC6B4; &#xB808; &#xADE4; &#xB808;&#xC774; &#xC158; akap79&#xC758; &#xB458;&#xC774; &#xC751;&#xB2F5;&#xC744; &#xC800;&#xD574; &#xD558;&#xAE30; &#xB54C;&#xBB38;&#xC5D0; &#xBCA0;&#xD0C0; (1)-&#xC544;&#xCE78;&#xC18C;&#xC758; &#xC138; &#xBC88;&#xC9F8; &#xC138;&#xD3EC;&#xB0B4; &#xB8E8;&#xD504;&#xC758; &#xC778; &#xC0B0;&#xD654; PKA &#xC911;&#xC7AC;&#xC5D0; &#xCC38;&#xC5EC; &#xD588;&#xB2E4;. &#xB530;&#xB77C;&#xC11C; AKAP79 phosphorylate &#xBCA0;&#xD0C0; (1)-&#xC544;&#xCE78;&#xC18C; &#xD568;&#xC73C;&#xB85C;&#xC368;&#xB294; &#xBCA0;&#xD0C0; (1)-&#xC544;&#xCE78;&#xC18C;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC7AC;&#xD65C;&#xC6A9; &#xBC0F; resensitization &#xC5EC;&#xD589; &#xC77C;&#xC815;&#xC744; &#xC9C0;&#xC2DC; &#xD558;&#xB294; PKA &#xC81C;&#xACF5;

AKAP79 &#xC911;&#xC7AC; beta1 &#xC544;&#xB4DC;&#xB808;&#xB0A0;&#xB9B0; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4;&#xC5D0; &#xC21C;&#xD658; &#xC570;&#xD504; &#xC885;&#xC18D; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xD0A4; &#xB2C8; &#xC544;&#xB97C; &#xB300;&#xC0C1;&#xC73C;&#xB85C; &#xC7AC;&#xD65C;&#xC6A9; &#xD558; &#xACE0; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC801;&#xC778; resensitization &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4;&#xC758; &#xCD09;&#xC9C4;.

Resensitization de receptores de acoplados a prote&iacute;na de G (GPCR) despu&eacute;s de la exposici&oacute;n prolongada de agonista es fundamental para restaurar la capacidad de respuesta del receptor a desaf&iacute;os posteriores por el agonista. El 3&#39;-5&#39; quinasa dependiente de AMP c&iacute;clico (PKA) y 312 de serina en el loop tercero intracelular de la beta humana (1)-receptor adren&eacute;rgico (beta(1)-AR) fueron ambos necesarios para reciclaje eficiente y resensitization de la interiorizado de agonista beta 1-AR (Gardner, L. A. Delos Santos, N. M., Matta, S. G., Whitt, M. A. y Bahouth, S. W. (2004) J. Biol Chem 27921135-21143). Porque PKA est&aacute; compartimentado cerca de sustratos de destino interactuando con las prote&iacute;nas prote&iacute;na kinase A anclaje (AKAPs), el actual estudio fue emprendido para identificar el AKAP involucrada en la fosforilaci&oacute;n mediada por PKA de la beta 1-AR y en su reciclaje y resensitization. Aqu&iacute;, Divulgamos que Ht-31 p&eacute;ptido-mediado interrupci&oacute;n de interacciones de PKA/AKAP impidi&oacute; el resensitization funcional y reciclaje de heterologously expresados beta 1-AR en las c&eacute;lulas HEK-293 y end&oacute;geno expresado beta 1-AR en SK-N-MC c&eacute;lulas y neuronas corticales de rata neonatal. Considerando que varios AKAPs end&oacute;genos fueron identificados en las c&eacute;lulas HEK-293, peque&ntilde;a interferencia mediada por RNA abajo-regulaci&oacute;n de AKAP79 evitar el reciclaje de la beta 1-AR en esta l&iacute;nea celular. Co-immunoprecipitations y fluorescencia energ&iacute;a transferencia (FRET) microscopia experimentos de resonancia en las c&eacute;lulas HEK-293 revelaron que la beta 1-AR, AKAP79 y PKA forman un complejo ternario en la terminal de carboxilo de la beta 1-AR. Este complejo estuvo implicado en la fosforilaci&oacute;n mediada por PKA del tercer lazo intracelular de la beta 1-AR debido a la interrupci&oacute;n de las interacciones de PKA/AKAP o peque&ntilde;a interferencia mediada por RNA abajo-regulaci&oacute;n de AKAP79 tanto inhibe esta respuesta. As&iacute;, AKAP79 proporciona PKA fosforilan la beta 1-AR y lo dictan los itinerarios de reciclaje y resensitization de la beta 1-AR.

AKAP79 mediada por orientaci&oacute;n de la quinasa dependiente de AMP c&iacute;clico para los receptores beta1-adren&eacute;rgicos promueve resensitization reciclaje y funcional del receptor.

Traffico appropriato della beta (1)-recettori adrenergici (beta(1)-AR) dopo agonista promosse interiorizzazione &egrave; cruciale per la resensitization della sua via di segnalazione. Riciclaggio efficiente della beta (1) - AR necessaria l&#39;associazione della chinasi di proteina un ancoraggio della proteina-79 (AKAP79) fino al capolinea carbossilico della beta (1) - AR (Gardner, L. A., Tavalin, S. A., Goehring, A., Scott, D. J. e Bahouth si, W. S. (2006) j Biol Chem. 281, 33537-33553). In questo studio dimostriamo che AKAP79 forma un complesso con la sequenza di PDZ-associazione di tipo 1 (ESKV) presso il capolinea di estrema carbossilico della beta (1)-AR, che &egrave; mediato dalla proteina associata di membrana guanilato chinasi (MAGUK) SAP97. Cos&igrave;, la PDZ e il suo complesso associato SAP97-AKAP79 sono coinvolti nel targeting la chinasi di proteina amp&egrave;re ciclico-dipendente (PKA) per la beta (1)-AR. La PDZ e il patibolo sono stati richiesti per il riciclaggio efficiente della beta (1)-AR e per fosforilazione mediata da PKA della beta (1)-AR a Ser(312). Sovraespressione della subunit&agrave; catalitica di PKA o mutagenesi di Ser(312) per la phosphoserine mimico acido aspartico sia salvato il riciclaggio del traffico-difettoso beta (1)-mutante ARDelta PDZ. Cos&igrave;, traffici di segnali trasmessi dal patibolo PDZ-associati nel terminus carbossilico della beta (1)-AR a Ser(312) nel 3 &deg; intracellulare ciclo (3 &deg; IC) erano di primaria importanza nell&#39;impostazione dell&#39;itinerario traffico della beta (1)-AR. I dati qui presentati mostrano che un romanzo beta (1)-adrenergici receptosome &egrave; organizzato presso la beta (1) - AR PDZ per generare un&#39;impalcatura essenziale per traffico e di networking della beta (1) - AR.

Montaggio di un ponteggio di chinasi di proteina SAP97-AKAP79-cAMP-dipendente presso il motivo di PSD-95/DLG/ZO1 tipo 1 della beta umana (1)-recettori adrenergici genera un receptosome coinvolti nel recettore di riciclaggio e di networking.

&#x9002;&#x5F53;&#x8D29;&#x5356; (1) &beta;-&#x80BE;&#x4E0A;&#x817A;&#x7D20;&#x80FD;&#x53D7;&#x4F53; (beta(1)-AR) &#x540E;&#x6FC0;&#x52A8;&#x5242;&#x4FC3;&#x8FDB;&#x5185;&#x90E8;&#x662F; resensitization &#x7684;&#x4FE1;&#x53F7;&#x8F6C;&#x5BFC;&#x7814;&#x7A76;&#x7684;&#x5173;&#x952E;&#x3002;Beta 1-AR &#x9AD8;&#x6548;&#x56DE;&#x6536;&#x6240;&#x9700;&#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#x6FC0;&#x9176;&#x951A;&#x5B9A;&#x86CB;&#x767D; 79 &#xFF08;AKAP79&#xFF09; &#x7ED1;&#x5B9A; beta 1-AR &#x7684;&#x7FA7;&#x57FA;&#x603B;&#x7AD9; (&#x52A0;&#x5FB7;&#x7EB3;&#x3001; L.A.&#x3001; Tavalin S.A.Goehring&#xFF0C;Bahouth&#xFF0C;(2006 &#x5E74;) S.W.J.Biol.&#x5316;&#x5B66; 281&#xFF0C;J.D.&#x65AF;&#x79D1;&#x7279;&#x3001; A.33537 33553)&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x9879;&#x7814;&#x7A76;&#x4E2D;&#x6211;&#x4EEC;&#x663E;&#x793A; AKAP79 &#x5F62;&#x6210;&#x4E00;&#x4E2A;&#x590D;&#x6742;&#x7C7B;&#x578B; 1 PDZ &#x7ED1;&#x5B9A;&#x987A;&#x5E8F; (ESKV) &#x4E0E; beta 1-AR&#xFF0C;&#x5176;&#x4E2D;&#x4ECB;&#x5BFC;&#x819C;&#x5173;&#x8054;&#x9E1F;&#x82F7;&#x9178;&#x6FC0;&#x9176; (MAGUK) &#x86CB;&#x767D; SAP97 &#x6781;&#x7AEF;&#x7FA7;&#x57FA;&#x603B;&#x7AD9;&#x3002;&#x56E0;&#x6B64;&#xFF0C;PDZ &#x548C;&#x5176;&#x76F8;&#x5173;&#x8054;&#x7684; SAP97 AKAP79 &#x590D;&#x6742;&#x53C2;&#x4E0E;&#x9488;&#x5BF9;&#x73AF;&#x78F7;&#x9178;&#x817A;&#x82F7;-&#x4F9D;&#x8D56;&#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#x6FC0;&#x9176; (PKA) &#x5230; beta 1 &#x4EBA;&#x624D;&#x57F9;&#x8BAD;&#x4E2D;&#x5FC3;&#x3002;&#x9700;&#x8981;&#x9AD8;&#x6548;&#x56DE;&#x6536;&#x7684; beta 1-AR &#x548C;&#x4ECB;&#x5BFC; PKA &#x78F7;&#x9178;&#x5316; Ser(312) beta 1-AR PDZ &#x548C;&#x5176;&#x652F;&#x67B6;&#x3002;&#x8868;&#x8FBE;&#x7684; PKA &#x50AC;&#x5316;&#x4E9A;&#x5355;&#x4F4D;&#x6216; Ser(312) &#x7684;&#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x4E1D;&#x6C28;&#x9178;&#x7A81;&#x53D8;&#x6A21;&#x4EFF;&#x5929;&#x95E8;&#x51AC;&#x6C28;&#x9178;&#x90FD;&#x6551;&#x51FA;&#x8D29;&#x5356;&#x7F3A;&#x9677; beta 1 ARDelta PDZ &#x7A81;&#x53D8;&#x7684;&#x56DE;&#x6536;&#x5229;&#x7528;&#x3002;&#x56E0;&#x6B64;&#xFF0C;&#x8D29;&#x5356;&#x8BAF;&#x53F7;&#x4F20;&#x9001;&#x4ECE; PDZ &#x5173;&#x8054;&#x811A;&#x624B;&#x67B6;&#x5728; beta 1-AR &#x7684;&#x7FA7;&#x57FA;&#x603B;&#x7AD9;&#x5230; Ser(312) &#x7B2C;&#x4E09;&#x80DE;&#x5185;&#x5FAA;&#x73AF;&#x4E2D; (&#x7B2C;&#x4E09;&#x5C4A; IC) &#x662F;&#x6700;&#x91CD;&#x8981;&#x7684;&#x8BBE;&#x7F6E;&#x8D29;&#x5356;&#x884C;&#x7A0B;&#x7684; beta 1 &#x4EBA;&#x624D;&#x57F9;&#x8BAD;&#x4E2D;&#x5FC3;&#x3002;&#x6B64;&#x5904;&#x63D0;&#x4F9B;&#x7684;&#x6570;&#x636E;&#x663E;&#x793A;&#xFF0C;&#x65B0;&#x7684;&#x6D4B;&#x8BD5;&#x7248; (1)-&#x80BE;&#x4E0A;&#x817A;&#x7D20;&#x80FD; receptosome &#x7EC4;&#x7EC7;&#x5728; beta 1-AR PDZ &#x751F;&#x6210;&#x811A;&#x624B;&#x67B6;&#x5FC5;&#x4E0D;&#x53EF;&#x5C11;&#x7684;&#x8D29;&#x8FD0;&#x548C;&#x8054;&#x7F51;&#x7684; beta 1 &#x4EBA;&#x624D;&#x57F9;&#x8BAD;&#x4E2D;&#x5FC3;&#x3002;

&#x7A0B;&#x5E8F;&#x96C6;&#x7684;&#x7C7B;&#x578B; 1 PSD-95/DLG/ZO1 &#x6BCD;&#x9898;&#x7684;&#x4EBA;&#x7C7B; beta (1) &#x5728; SAP97-AKAP79-&#x8425;-&#x4F9D;&#x8D56;&#x86CB;&#x767D;&#x6FC0;&#x9176;&#x811A;&#x624B;&#x67B6;-&#x80BE;&#x4E0A;&#x817A;&#x7D20;&#x80FD;&#x53D7;&#x4F53;&#x751F;&#x6210; receptosome &#x53C2;&#x4E0E;&#x56DE;&#x6536;&#x548C;&#x8054;&#x7F51;&#x7684;&#x53D7;&#x4F53;&#x3002;

Appropriate trafficking of the beta(1)-adrenergic receptor (beta(1)-AR) after agonist-promoted internalization is crucial for the resensitization of its signaling pathway. Efficient recycling of the beta(1)-AR required the binding of the protein kinase A anchoring protein-79 (AKAP79) to the carboxyl terminus of the beta(1)-AR (Gardner, L. A., Tavalin, S. A., Goehring, A., Scott, J. D., and Bahouth, S. W. (2006) J. Biol. Chem. 281, 33537-33553). In this study we show that AKAP79 forms a complex with the type 1 PDZ-binding sequence (ESKV) at the extreme carboxyl terminus of the beta(1)-AR, which is mediated by the membrane-associated guanylate kinase (MAGUK) protein SAP97. Thus, the PDZ and its associated SAP97-AKAP79 complex are involved in targeting the cyclic AMP-dependent protein kinase (PKA) to the beta(1)-AR. The PDZ and its scaffold were required for efficient recycling of the beta(1)-AR and for PKA-mediated phosphorylation of the beta(1)-AR at Ser(312). Overexpression of the catalytic subunit of PKA or mutagenesis of Ser(312) to the phosphoserine mimic aspartic acid both rescued the recycling of the trafficking-defective beta(1)-ARDelta PDZ mutant. Thus, trafficking signals transmitted from the PDZ-associated scaffold in the carboxyl terminus of the beta(1)-AR to Ser(312) in the 3rd intracellular loop (3rd IC) were paramount in setting the trafficking itinerary of the beta(1)-AR. The data presented here show that a novel beta(1)-adrenergic receptosome is organized at the beta(1)-AR PDZ to generate a scaffold essential for trafficking and networking of the beta(1)-AR.

Assembly of an SAP97-AKAP79-cAMP-dependent protein kinase scaffold at the type 1 PSD-95/DLG/ZO1 motif of the human beta(1)-adrenergic receptor generates a receptosome involved in receptor recycling and networking.

Trafic appropri&eacute; de la b&ecirc;ta (1)-r&eacute;cepteur adr&eacute;nergique (beta(1)-AR) apr&egrave;s internalisation favoris&eacute;e par l&#39;agoniste est cruciale pour la resensibilisation de sa voie de signalisation. Un recyclage efficace de la b&ecirc;ta 1-AR n&eacute;cessaire &agrave; la liaison de la prot&eacute;ine kinase un ancrage prot&eacute;ine-79 (AKAP79) &agrave; l&#39;extr&eacute;mit&eacute; carboxyle de la b&ecirc;ta 1-AR (Gardner, L. A., Tavalin, S. A., Goehring, A., Scott, J. D. et Bahouth, S. W. (2006) J. Biol. Chem. 281, 33537-33553). Dans cette &eacute;tude nous montrent que le AKAP79 forme un complexe avec la s&eacute;quence de PDZ-liaison de type 1 (ESKV) au terminus carboxylique extr&ecirc;me de la b&ecirc;ta 1-AR, m&eacute;di&eacute;e par la prot&eacute;ine kinase (MAGUK) de guanylate associ&eacute;e &agrave; la membrane SAP97. Ainsi, le PDZ et son complexe associ&eacute; de SAP97-AKAP79 sont impliqu&eacute;s dans le ciblage de l&#39;AMP cyclique-prot&eacute;ine kinase d&eacute;pendante (PKA) pour la version b&ecirc;ta 1-AR. La zone de danger permanent et son &eacute;chafaudage ont &eacute;t&eacute; n&eacute;cessaires pour un recyclage efficace de la b&ecirc;ta 1-AR et phosphorylation m&eacute;di&eacute;e par le PKA de la b&ecirc;ta 1-AR, &agrave; Ser(312). La surexpression de la sous-unit&eacute; catalytique de la PKA ou mutagen&egrave;se de Ser(312) pour la phosphos&eacute;rine imiter tous les deux ont secouru le recyclage du mutant PDZ d&eacute;fectueux trafic b&ecirc;ta 1-ARDelta l&#39;acide aspartique. Ainsi, le trafic de signaux transmis de l&#39;&eacute;chafaud PDZ-associ&eacute;s dans l&#39;extr&eacute;mit&eacute; carboxyle de la b&ecirc;ta 1-AR au Ser(312) dans la 3&egrave;me boucle intracellulaire (3e IC) &eacute;taient primordiaux pour &eacute;tablir l&#39;itin&eacute;raire de trafic de la b&ecirc;ta 1-AR. Les donn&eacute;es pr&eacute;sent&eacute;es ici montrent qu&#39;une nouvelle b&ecirc;ta (1)-adr&eacute;nergique receptosome est organis&eacute; sur la beta 1-AR PDZ pour g&eacute;n&eacute;rer un &eacute;chafaudage indispensable pour le trafic et le r&eacute;seautage de la b&ecirc;ta 1-AR.

Montage d&#39;un &eacute;chafaudage de kinase de prot&eacute;ine SAP97-AKAP79-cAMP-d&eacute;pendante sur le motif de PSD-95/DLG/ZO1 type 1 de la version b&ecirc;ta humain (1)-r&eacute;cepteur adr&eacute;nergique g&eacute;n&egrave;re une receptosome impliqu&eacute; dans les r&eacute;cepteurs de recyclage et de r&eacute;seautage.

Entsprechenden Handel mit der Beta (1)-adrenerge Rezeptor (beta(1)-AR) nach Internalisierung Agonist-Promotion f&uuml;r die Resensitization von den Signalweg von entscheidender Bedeutung ist. Effiziente Recyclen der Beta 1-AR die Bindung der Proteinkinase A Verankerung Protein-79 (AKAP79) ben&ouml;tigt, um das Karboxyl-Terminus der Beta 1-AR (Gardner, L. A., Tavalin, S. A., Goehring, A., Scott, J. D. und Bahouth, S. W. (2006) J. Biol. Chem. 281, 33537-33553). In dieser Studie zeigen wir, dass AKAP79 einen Komplex mit der Typ-1-PDZ-Bindung-Sequenz (ESKV bildet) im extremen Karboxyl-Terminus der Beta 1-AR, die durch die Membran-assoziierte Guanylate Kinase (MAGUK) Protein SAP97 vermittelt wird. So sind die PDZ und die damit verbundenen SAP97-AKAP79-Komplex beteiligt bei der Ausrichtung von zyklischem AMP-abh&auml;ngige Proteinkinase (PKA) f&uuml;r die Beta 1-AR. Das PDZ und seine Ger&uuml;st waren f&uuml;r das effiziente Recyclen der Beta 1-AR und PKA-vermittelte Phosphorylierung der Beta 1-AR an Ser(312) erforderlich. Eine &Uuml;berexpression von die katalytische Untereinheit des PKA oder Mutagenese von Ser(312) auf die Phosphoserinphosphatase imitieren Asparagins&auml;ure, die beide gerettet, das recycling von den Menschenhandel-Genen Beta 1-ARDelta-PDZ-Mutanten. Damit Menschenhandel Signale &uuml;bertragen aus dem PDZ-assoziierte Ger&uuml;st in das Karboxyl-Terminus der Beta 1-AR an Ser(312) in der 3. intrazellul&auml;ren Schleife (3. IC) wurden vorrangig bei der Festlegung der Menschenhandel Reiseroute die Beta 1-AR. Die hier vorgestellten Daten zeigen, dass eine neue Beta (1)-adrenerge Receptosome gliedert sich in die Beta 1-AR PDZ generieren ein Ger&uuml;st notwendig f&uuml;r Menschenhandel und Vernetzung von der Beta 1-AR.

Montage von einem SAP97-AKAP79-Lager-abh&auml;ngige Protein Kinase Ger&uuml;st an Typ 1-PSD-95/DLG/ZO1-Motiv der menschlichen Beta (1)-adrenerge Rezeptor generiert eine Receptosome-Rezeptor-recycling und Vernetzung beteiligt.

&#x9069;&#x5207;&#x306A;&#x4EBA;&#x8EAB;&#x58F2;&#x8CB7;&#x306E; &#xFF08;1&#xFF09; &#x306E;&#x30D9;&#x30FC;&#x30BF;&#x7248;-&#x30A2;&#x30C9;&#x30EC;&#x30CA;&#x30EA;&#x30F3;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53; (&#x5185;&#x5316;&#x30A2;&#x30B4;&#x30CB;&#x30B9;&#x30C8;&#x6607;&#x683C;&#x306F;&#x305D;&#x306E;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#x7D4C;&#x8DEF;&#x306E; resensitization &#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x91CD;&#x5927;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x5F8C; beta(1)-AR)&#x3002;&#x52B9;&#x7387;&#x7684;&#x306A;&#x30EA;&#x30B5;&#x30A4;&#x30AF;&#x30EB;&#x306E; &#xFF08;1&#xFF09; &#x306E;&#x30D9;&#x30FC;&#x30BF;&#x7248; - AR &#x5FC5;&#x9808;&#x306E;&#x7D50;&#x5408;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC; &#x30A2;&#x30F3;&#x30AB;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0; &#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA; 79 (AKAP79) &#x306E;&#x30D9;&#x30FC;&#x30BF; (1) &#x306E;&#x30AB;&#x30EB;&#x30DC;&#x30AD;&#x30B7;&#x30EB;&#x672B;&#x7AEF;&#x306B; - AR (&#x30AC;&#x30FC;&#x30C9;&#x30CA;&#x30FC;&#x3001;l. a.&#x3001;Goehring&#x3001;Tavalin&#x3001;S. A. A.&#x3001;&#x30B9;&#x30B3;&#x30C3;&#x30C8;&#x3001;j. d.&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073; Bahouth&#x3001;J. S. w. (2006) &#x751F;&#x7269;&#x5316;&#x5B66; 281, 33537 33553)&#x3002;&#x672C;&#x7814;&#x7A76;&#x3067;&#x306F;&#x6211;&#x3005; AKAP79 &#x578B; 1 PDZ &#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C9; &#x30B7;&#x30FC;&#x30B1;&#x30F3;&#x30B9; (ESKV) &#x3068;&#x306E;&#x8907;&#x5408;&#x4F53;&#x3092;&#x5F62;&#x6210;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3067;&#x6975;&#x7AEF;&#x306A;&#x30AB;&#x30EB;&#x30DC;&#x30AD;&#x30B7;&#x30EB;&#x57FA;&#x5074; &#xFF08;1&#xFF09; &#x30D9;&#x30FC;&#x30BF;&#x7248;&#x306E;&#x8868;&#x793A;-AR &#x306E;&#x819C;&#x6E96;&#x30B0;&#x30A2;&#x30CB;&#x30EB;&#x9178;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC; (MAGUK) &#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA; SAP97 &#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x5A92;&#x4ECB;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3057;&#x305F;&#x304C;&#x3063;&#x3066;&#x3001;PDZ &#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x305D;&#x306E;&#x95A2;&#x9023;&#x4ED8;&#x3051;&#x3089;&#x308C;&#x305F; SAP97 AKAP79 &#x8907;&#x96D1;&#x30B5;&#x30A4;&#x30AF;&#x30EA;&#x30C3;&#x30AF; AMP &#x4F9D;&#x5B58;&#x578B;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC; (PKA) &#x3092;&#x30BF;&#x30FC;&#x30B2;&#x30C3;&#x30C8;&#x306B;&#x30D9;&#x30FC;&#x30BF; (1) &#x306B;&#x304B;&#x304B;&#x308F;&#x308B;-&#x7740;PDZ &#x3068;&#x305D;&#x306E;&#x8DB3;&#x5834;&#x306E;&#x30D9;&#x30FC;&#x30BF;&#x7248; (1) &#x52B9;&#x7387;&#x7684;&#x306A;&#x30EA;&#x30B5;&#x30A4;&#x30AF;&#x30EB;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x8981;&#x6C42;&#x3055;&#x308C;&#x305F;-AR &#x3068; PKA &#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x305F;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316; &beta; (1) &#x306E;&#x305F;&#x3081;-AR Ser(312) &#x3067;&#x3002;PKA &#x306E;&#x89E6;&#x5A92;&#x30B5;&#x30D6;&#x30E6;&#x30CB;&#x30C3;&#x30C8;&#x307E;&#x305F;&#x306F; Ser(312) &#x306E;&#x7A81;&#x7136;&#x5909;&#x7570;&#x8A98;&#x767A;&#x3059;&#x308B;&#x5F79;&#x5272;&#x6A21;&#x5023;&#x30A2;&#x30B9;&#x30D1;&#x30E9;&#x30AE;&#x30F3;&#x9178;&#x4E21;&#x65B9;&#x306E;&#x904E;&#x5270;&#x767A;&#x73FE;&#x304C;&#x6551;&#x51FA;&#x306E;&#x4EBA;&#x8EAB;&#x58F2;&#x8CB7;&#x6B20;&#x9665;&#x30D9;&#x30FC;&#x30BF; (1) &#x30EA;&#x30B5;&#x30A4;&#x30AF;&#x30EB;-ARDelta PDZ &#x5909;&#x7570;&#x3002;&#x3057;&#x305F;&#x304C;&#x3063;&#x3066;&#x3001;&#x4EBA;&#x8EAB;&#x58F2;&#x8CB7;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x304C;&#x9001;&#x4FE1;&#x3055;&#x308C;&#x305F; PDZ &#x95A2;&#x9023;&#x4ED8;&#x3051;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x8DB3;&#x5834;&#x306E;&#x30AB;&#x30EB;&#x30DC;&#x30AD;&#x30B7;&#x30EB;&#x57FA;&#x5074;&#x306E;&#x30D9;&#x30FC;&#x30BF; (1) &#x304B;&#x3089;-AR Ser(312) &#x7B2C;&#x4E09;&#x7D30;&#x80DE;&#x5185;&#x306B;&#x30EB;&#x30FC;&#x30D7; &#xFF08;3 IC&#xFF09; &#x30D9;&#x30FC;&#x30BF; &#xFF08;1&#xFF09; &#x306E;&#x4EBA;&#x8EAB;&#x58F2;&#x8CB7;&#x306E;&#x65C5;&#x7A0B;&#x3092;&#x8A2D;&#x5B9A;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x6700;&#x512A;&#x5148;&#x3055;&#x308C;&#x305F;-&#x7740;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x63D0;&#x793A;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x30C7;&#x30FC;&#x30BF;&#x306F;&#x3001;&#x5C0F;&#x8AAC;&#x306E;&#x30D9;&#x30FC;&#x30BF;&#x7248; (1) &#x8868;&#x793A;-&#x30A2;&#x30C9;&#x30EC;&#x30CA;&#x30EA;&#x30F3; receptosome &#x3092;&#x7DE8;&#x6210; (1) - AR &#x306E;&#x4EBA;&#x8EAB;&#x58F2;&#x8CB7;&#x3068;&#x306E; &#xFF08;1&#xFF09; &#x306E;&#x30D9;&#x30FC;&#x30BF;&#x7248;&#x3092;&#x30CD;&#x30C3;&#x30C8;&#x30EF;&#x30FC;&#x30AF;&#x306B;&#x4E0D;&#x53EF;&#x6B20;&#x306A;&#x8DB3;&#x5834;&#x3092;&#x751F;&#x6210;&#x3059;&#x308B; PDZ - &#x30D9;&#x30FC;&#x30BF;&#x7248;&#x3067;&#x7740;

&#x30A2;&#x30BB;&#x30F3;&#x30D6;&#x30EA;&#x3092; SAP97 AKAP79 &#x30AD;&#x30E3;&#x30F3;&#x30D7;&#x4F9D;&#x5B58;&#x3057;&#x305F;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x8DB3;&#x5834; 1 &#x578B; PSD-95/DLG/ZO1 &#x30E2;&#x30C1;&#x30FC;&#x30D5;&#x306E;&#x3072;&#x3068;&#x30D9;&#x30FC;&#x30BF;&#x7248; (1) &#x3067;&#x306E;-&#x30A2;&#x30C9;&#x30EC;&#x30CA;&#x30EA;&#x30F3;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x306F;&#x30EA;&#x30B5;&#x30A4;&#x30AF;&#x30EB;&#x3068;&#x30CD;&#x30C3;&#x30C8;&#x30EF;&#x30FC; &#x30AD;&#x30F3;&#x30B0;&#x306E;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x306E;&#x95A2;&#x4E0E;&#x306E; receptosome &#x3092;&#x751F;&#x6210;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#xBCA0;&#xD0C0; (1)&#xC758; &#xC801;&#xC808; &#xD55C; &#xC778;&#xC2E0; &#xB9E4;&#xB9E4;-&#xC544;&#xB4DC;&#xB808;&#xB0A0;&#xB9B0; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; (beta(1)-AR) &#xAE38; &#xD56D; &#xC81C; &#xC2B9;&#xC9C4; &#xAD6D;&#xC81C;&#xD654; &#xB418;&#xB294; &#xC2E0;&#xD638; &#xD1B5;&#xB85C;&#xC758; resensitization&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC911;&#xC694; &#xD55C;. &#xBCA0;&#xD0C0; (1)-&#xC544;&#xCE78;&#xC18C; carboxyl &#xC885;&#xC810; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xD0A4; &#xB2C8; &#xC544; &#xC81C; &#xACE0;&#xC815; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; 79 (AKAP79)&#xC758; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xC774; &#xD544;&#xC694; &#xBCA0;&#xD0C0; (1)-&#xC544;&#xCE78;&#xC18C;&#xC758; &#xD6A8;&#xC728;&#xC801;&#xC778; &#xC7AC;&#xD65C;&#xC6A9; (&#xAC00;&#xB4DC;&#xB108;, L. A. Tavalin S. A. Goehring, A. J. D.&#xC640; &#xC2A4;&#xCF67; Bahouth, S. W. (2006) J. Biol. &#xD654;&#xD559; 281, 33537 33553). &#xC774; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; &#xBCF4;&#xC5EC; AKAP79 &#xC720;&#xD615; 1 PDZ-&#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xC2DC;&#xD000;&#xC2A4; (ESKV)&#xC640; &#xD568;&#xAED8; &#xBCF5;&#xC7A1; &#xD55C; &#xD615;&#xD0DC;&#xC758; &#xBCA0;&#xD0C0; (1)-&#xC544;&#xCE78;&#xC18C;, &#xBA64;&#xBE0C;&#xB808;&#xC778; &#xAD00;&#xB828; guanylate &#xD0A4; (MAGUK) &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; SAP97 &#xC911;&#xC7AC; &#xD558;&#xB294; &#xADF9;&#xB2E8;&#xC801;&#xC778; carboxyl &#xC885;&#xC810;&#xC5D0;. &#xB530;&#xB77C;&#xC11C;,&#xB294; PDZ&#xC640; &#xADF8; &#xAD00;&#xB828; SAP97 AKAP79 &#xC21C;&#xD658; &#xC570;&#xD504; &#xC885;&#xC18D; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; kinase (PKA)&#xB294; &#xBCA0;&#xD0C0; (1)-&#xC544;&#xCE78;&#xC18C;&#xB97C; &#xB300;&#xC0C1;&#xC73C;&#xB85C;&#xC5D0; &#xAD00;&#xB828; PDZ&#xC640; &#xADF8; &#xBE44; &#xACC4;&#xB294; &#xBCA0;&#xD0C0; (1)-AR&#xC758; &#xD6A8;&#xC728;&#xC801; &#xC7AC;&#xD65C;&#xC6A9; &#xBC0F; &#xBCA0;&#xD0C0; (1)-&#xC544;&#xCE78;&#xC18C; ser(312)&#xC5D0;&#xC11C;&#xC758; &#xC778; &#xC0B0;&#xD654; PKA &#xC911;&#xC7AC; &#xD544;&#xC694; &#xD588;&#xB2E4;. PKA&#xC758; &#xCD09;&#xB9E4; &#xC18C; &#xB2E8;&#xC704; &#xB610;&#xB294; &#xD558;&#xB294; phosphoserine&#xC758; Ser(312) mutagenesis overexpression &#xB458; &#xB2E4; &#xB9E4;&#xB9E4; &#xACB0;&#xD568; &#xBCA0;&#xD0C0; (1)-ARDelta PDZ &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xC7AC;&#xD65C;&#xC6A9; &#xAD6C;&#xCD9C; aspartic &#xC0B0; &#xBAA8;&#xBC29;. &#xB530;&#xB77C;&#xC11C;, &#xC778;&#xC2E0; &#xB9E4;&#xB9E4; &#xC2E0;&#xD638; &#xC804;&#xC1A1;&#xC758; &#xBCA0;&#xD0C0; (1)-&#xC544;&#xCE78;&#xC18C; carboxyl &#xC885;&#xC810;&#xC5D0;&#xC11C; PDZ &#xAD00;&#xB828; &#xBE44; &#xACC4;&#xC5D0;&#xC11C; Ser(312) 3 &#xC138;&#xD3EC;&#xB0B4; &#xB8E8;&#xD504;&#xC5D0;&#xC11C; (3 IC)&#xB294; &#xBCA0;&#xD0C0; (1)-&#xC544;&#xCE78;&#xC18C; &#xBC00;&#xB9E4; &#xC77C;&#xC815; &#xC124;&#xC815;&#xC5D0; &#xB2F5;&#xD574;&#xC57C; &#xD588;&#xB2E4; &#xC5EC;&#xAE30;&#xC5D0; &#xC81C;&#xC2DC; &#xB41C; &#xB370;&#xC774;&#xD130;&#xC5D0; &#xD45C;&#xC2DC; &#xB418;&#xC5B4; &#xC788;&#xB294; &#xC18C;&#xC124; &#xBCA0;&#xD0C0; (1)-&#xC544;&#xB4DC;&#xB808;&#xB0A0;&#xB9B0; receptosome &#xBCA0;&#xD0C0;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC870;&#xC9C1; (1)-&#xC544;&#xCE78;&#xC18C; PDZ &#xC778;&#xC2E0; &#xB9E4;&#xB9E4;&#xC640; &#xBCA0;&#xD0C0; (1)-&#xC544;&#xCE78;&#xC18C;&#xC758; &#xB124;&#xD2B8;&#xC6CC;&#xD0B9;&#xC5D0; &#xD544;&#xC218;&#xC801;&#xC778; &#xBE44; &#xACC4;&#xB97C; &#xC0DD;&#xC131; &#xD558;

&#xC778;&#xAC04;&#xC758; &#xBCA0;&#xD0C0; (1)&#xC758; &#xC720;&#xD615; 1 PSD-95/DLG/ZO1 &#xBAA8;&#xD2F0;&#xBE0C;&#xC5D0;&#xC11C; SAP97 AKAP79 &#xCEA0;&#xD504; &#xC885;&#xC18D; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xD0A4; &#xB2C8; &#xC544; &#xC81C; &#xBE44; &#xACC4; &#xC870;&#xB9BD;-&#xC544;&#xB4DC;&#xB808;&#xB0A0;&#xB9B0; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4;&#xC5D0;&#xC11C;&#xB294; receptosome &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; &#xC7AC;&#xD65C;&#xC6A9; &#xBC0F; &#xB124;&#xD2B8;&#xC6CC;&#xD0B9;&#xC5D0; &#xAD00;&#xB828; &#xB41C; &#xC624;&#xB958;&#xAC00; &#xC0DD;&#xC131; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Tr&aacute;fico apropiado de la beta (1)-receptor adren&eacute;rgico (beta(1)-AR) despu&eacute;s de agonista-promueve la internalizaci&oacute;n es crucial para el resensitization de su v&iacute;a de se&ntilde;alizaci&oacute;n. Reciclaje eficaz de la beta 1-AR requiere la Uni&oacute;n de la prote&iacute;na quinasa un anclaje prote&iacute;na-79 (AKAP79) a la terminal de carboxilo de la beta 1-AR (Gardner, L. A., S. A., Tavalin, Goehring, A., Scott, J. D. y Bahouth, S. W. (2006) J. Biol Chem 281, 33537-33553). En este estudio demostramos que la AKAP79 forma un complejo con la secuencia de la PDZ-enlace de tipo 1 (ESKV) en la terminal del extremo carboxilo de la beta 1-AR, que est&aacute; mediada por la prote&iacute;na quinasa (MAGUK) de guanilato asociada a la membrana SAP97. As&iacute;, el PDZ y su complejo de SAP97-AKAP79 asociado participan en la orientaci&oacute;n de la quinasa dependiente de AMP c&iacute;clico (PKA) a la beta 1-AR. Se requer&iacute;a para reciclaje eficaz de la beta 1-AR y para la fosforilaci&oacute;n mediada por PKA de la beta 1-AR en Ser(312) el PDZ y su andamio. La sobreexpresi&oacute;n de la subunidad catal&iacute;tica de PKA o mutag&eacute;nesis de Ser(312) a la Fosfoserina m&iacute;mico &aacute;cido asp&aacute;rtico ambos rescataron el reciclaje de los mutantes PDZ tr&aacute;fico defectuoso beta 1-ARDelta. As&iacute;, las se&ntilde;ales de tr&aacute;fico transmiten desde el andamio PDZ-asociado en la terminal de carboxilo de la beta 1-AR al Ser(312) en el tercer lazo intracelular (IC 3) fueron primordial en el establecimiento el Itinerario trata de la beta 1-AR. Los datos aqu&iacute; presentados muestran que una novela beta (1)-receptosome adren&eacute;rgico se organiza en la beta 1-AR PDZ para generar un andamio esencial para el tr&aacute;fico y redes de la beta 1-AR.

Montaje de un andamio de cinasa de prote&iacute;na de SAP97-AKAP79-campo-dependiente en el adorno de PSD-95/DLG/ZO1 del tipo 1 de la beta humana (1)-receptor adren&eacute;rgico genera un receptosome involucrado en receptor de reciclaje y redes.

&#x6211;&#x4EEC;&#x5229;&#x7528;&#x8FD9;&#x4E00;&#x4E8B;&#x5B9E;&#x767D;&#x8840;&#x75C5;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5229;&#x7528; S &#x817A;&#x82F7;&#x86CB;&#x6C28;&#x9178; &#xFF08;&#x76F8;&#x540C;&#xFF09; &#x7684;&#x6C34;&#x5E73;&#x663E;&#x8457;&#x9AD8;&#x4E8E;&#x6B63;&#x5E38;&#x6DCB;&#x5DF4;&#x7EC6;&#x80DE;&#x548C;&#x5F00;&#x53D1;&#x6709;&#x9009;&#x62E9;&#x6027;&#x5730;&#x51CF;&#x5C11;&#x4ED6;&#x4EEC;&#x5728;&#x751F;&#x7406;&#x6761;&#x4EF6;&#x4E0B;&#x7684;&#x751F;&#x5B58;&#x7684;&#x5DE5;&#x5177;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x5229;&#x7528; RNA &#x5E72;&#x6270;&#x57FA;&#x56E0;&#x6C89;&#x9ED8;&#x6280;&#x672F;&#xFF0C;&#x8C03;&#x5236;&#x7684;&#x52A8;&#x529B;&#x5B66;&#x7814;&#x7A76;&#x86CB;&#x6C28;&#x9178; adenosyltransferase-II (&#x57AB;-II)&#xFF0C;&#x5176;&#x4E2D;&#x50AC;&#x5316;&#x540C;&#x4E00;&#x4ECE; ATP &#x7684;&#x5408;&#x6210;&#x548C; l &#x6EE1;&#x8DB3;&#x3002;&#x5177;&#x4F53;&#x5730;&#x8BF4;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x6C89;&#x9ED8; Jurkat &#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x8C03;&#x8282;&#x57AB; IIbeta &#x4E9A;&#x57FA;&#x7684;&#x8868;&#x8FBE;&#xFF0C;&#x56E0;&#x6B64;&#x8F6C;&#x5411; K (m L &#x6EE1;&#x8DB3;&#xFF09; &#x7684;&#x9176; 10-15 &#x500D;&#x9AD8;&#x4E8E;&#x751F;&#x7406;&#x6C34;&#x5E73;&#x7684; l &#x6EE1;&#x8DB3;&#xFF0C;&#x4ECE;&#x800C;&#x51CF;&#x5C11;&#x9176;&#x6D3B;&#x6027;&#x548C;&#x540C;&#x4E00;&#x6C60;&#xFF0C;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8FC7;&#x5EA6;&#x51CB;&#x4EA1;&#x548C;&#x51CF;&#x5C11;&#x767D;&#x8840;&#x75C5;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4F53;&#x5916;&#x548C;&#x4F53;&#x5185;&#x7684;&#x751F;&#x957F;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x5F71;&#x54CD;&#x88AB;&#x626D;&#x8F6C;&#x5728; unphysiologically &#x9AD8; l &#x6EE1;&#x8DB3; (&gt; 50 microm&#xFF09;&#xFF0C;&#x6307;&#x793A;&#xFF0C;&#x51CF;&#x5C11;&#x767D;&#x8840;&#x75C5;&#x7EC6;&#x80DE;&#x751F;&#x957F;&#x751F;&#x7406; l &#x6EE1;&#x8DB3;&#x5404;&#x7EA7;&#x5728;&#x540C;&#x4E00;&#x5408;&#x6210;&#x662F;&#x57AB; II K(m L-Met) &#x7531;&#x4E8E;&#x57AB; IIbeta &#x6D88;&#x878D;&#x7684;&#x589E;&#x52A0;&#x548C;&#x51CF;&#x5C11;&#xFF0C;&#x4ECE;&#x800C;&#x76F4;&#x63A5;&#x7ED3;&#x679C;&#x3002;&#x5728;&#x4EBA;&#x6027;&#x5316;&#x7684;&#x5C0F;&#x9F20;&#x6A21;&#x578B;&#x7684;&#x767D;&#x8840;&#x75C5;&#xFF0C;shRNA &#x8F6C;&#x5BFC; Jurkat &#x7EC6;&#x80DE;&#x8868;&#x73B0;&#x51FA;&#x66F4;&#x5927;&#x7684;&#x690D;&#x5165;&#xFF0C;&#x800C;&#x63A7;&#x5236;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7F3A;&#x4E4F;&#x57AB; IIbeta &#x672A;&#x80FD;&#x8FBE;&#x5AC1;&#x63A5;&#x4E3A;&#x6211;&#x4EEC; NOD/Scid IL-2Rgamma(null) 5 &#x5468;&#x6DCB;&#x5DF4;&#x7EC6;&#x80DE;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x5DEE;&#x5F02;&#x5341;&#x5206;&#x660E;&#x663E;&#x6076;&#x6027;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5B58;&#x6D3B;&#xFF0C;&#x53D7;&#x57AB; IIbeta &#x6D88;&#x878D;&#xFF0C;&#x8868;&#x660E;&#x5B83;&#x53EF;&#x80FD;&#x53EF;&#x4EE5;&#x4F7F;&#x7528;&#x8FD9;&#x79CD;&#x65B9;&#x6CD5;&#x6765;&#x4F7F;&#x5904;&#x4E8E;&#x4E0D;&#x5229;&#x5730;&#x4F4D;&#xFF0C;&#x4F46;&#x4E0D;&#x4F24;&#x5BB3;&#x6B63;&#x5E38;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5728;&#x4F53;&#x5185;&#x7684;&#x767D;&#x8840;&#x75C5;&#x7EC6;&#x80DE;&#x751F;&#x5B58;&#x3002;

&#x6709;&#x9009;&#x62E9;&#x6027;&#x5730;&#x9488;&#x5BF9;&#x767D;&#x8840;&#x75C5;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5728;&#x4F53;&#x5185;&#x548C;&#x4F53;&#x5916;&#x4F7F;&#x7528;&#x57FA;&#x56E0;&#x6C89;&#x9ED8;&#x7684;&#x529E;&#x6CD5;&#x6765;&#x51CF;&#x5C11; S-&#x817A;&#x82F7;&#x5408;&#x6210;&#x7684;&#x751F;&#x957F;&#x3002;

We exploited the fact that leukemic cells utilize significantly higher levels of S-adenosylmethionine (SAMe) than normal lymphocytes and developed tools that selectively diminished their survival under physiologic conditions. Using RNA interference gene silencing technology, we modulated the kinetics of methionine adenosyltransferase-II (MAT-II), which catalyzes SAMe synthesis from ATP and l-Met. Specifically, we silenced the expression of the regulatory MAT-IIbeta subunit in Jurkat cells and accordingly shifted the K(m L-Met) of the enzyme 10-15-fold above the physiologic levels of l-Met, thereby reducing enzyme activity and SAMe pools, inducing excessive apoptosis and diminishing leukemic cell growth in vitro and in vivo. These effects were reversed at unphysiologically high l-Met (>50 microm), indicating that diminished leukemic cell growth at physiologic l-Met levels was a direct result of the increase in MAT-II K(m L-Met) due to MAT-IIbeta ablation and the consequent reduction in SAMe synthesis. In our NOD/Scid IL-2Rgamma(null) humanized mouse model of leukemia, control shRNA-transduced Jurkat cells exhibited heightened engraftment, whereas cells lacking MAT-IIbeta failed to engraft for up to 5 weeks post-transplant. These stark differences in malignant cell survival, effected by MAT-IIbeta ablation, suggest that it may be possible to use this approach to disadvantage leukemic cell survival in vivo with little to no harm to normal cells.

Selective targeting of leukemic cell growth in vivo and in vitro using a gene silencing approach to diminish S-adenosylmethionine synthesis.

Nous avons exploit&eacute; le fait que les cellules leuc&eacute;miques utilisent un taux significativement plus &eacute;lev&eacute;s de la S-ad&eacute;nosylm&eacute;thionine (m&ecirc;me chose) que les lymphocytes normaux et des outils d&eacute;velopp&eacute;s s&eacute;lectivement diminu&eacute; leur survie dans des conditions physiologiques. Technologie RNA interference g&egrave;ne silencieux, nous avons modul&eacute; la cin&eacute;tique de la m&eacute;thionine ad&eacute;nosyl-II (MAT-II), qui catalyse la synth&egrave;se d&#39;ATP m&ecirc;me et l-Met. Plus pr&eacute;cis&eacute;ment, nous taire l&#39;expression de la sous-unit&eacute; r&eacute;gulatrice de la MAT-IIbeta dans les cellules Jurkat et d&eacute;plac&eacute; en cons&eacute;quence le K (m L-Met) de l&#39;enzyme 10 &agrave; 15 fois au-dessus des niveaux physiologiques de l-Met, r&eacute;duisant ainsi l&#39;activit&eacute; enzymatique et m&ecirc;mes piscines, induisant l&#39;apoptose excessive et la diminution des leuc&eacute;miques croissance in vitro et in vivo des cellules. Ces effets ont &eacute;t&eacute; renvers&eacute;s &agrave; unphysiologically haut l-Met (&gt; microm 50), indiquant qui a diminu&eacute; la croissance des cellules leuc&eacute;miques &agrave; des niveaux physiologiques l-Met a &eacute;t&eacute; une cons&eacute;quence directe de l&#39;augmentation K(m L-Met) MAT-II en raison de l&#39;ablation de la MAT-IIbeta et la r&eacute;duction cons&eacute;quente dans la synth&egrave;se m&ecirc;me. Dans notre IL-2Rgamma(null) NOD/Scid mod&egrave;le murin humanis&eacute; de leuc&eacute;mie, contr&ocirc;le des cellules Jurkat shARN-transduites montrent greffe accrue, alors que les cellules d&eacute;pourvues de MAT-IIbeta n&#39;a pas pu greffer pour jusqu&#39;&agrave; 5 semaines post-transplant. Ces diff&eacute;rences aust&egrave;res dans la survie des cellules malignes, effectu&eacute;e par l&#39;ablation des MAT-IIbeta, sugg&egrave;rent qu&#39;il peut &ecirc;tre possible d&#39;utiliser cette approche au d&eacute;triment de la survie des cellules leuc&eacute;miques in vivo avec peu ou sans endommager les cellules normales.

Ciblage s&eacute;lectif de la croissance de cellules leuc&eacute;miques in vivo et in vitro en utilisant un g&egrave;ne silencieux approche pour diminuer la synth&egrave;se de la S-ad&eacute;nosylm&eacute;thionine.

Wir nutzen die Tatsache, dass leuk&auml;mischen Zellen nutzen deutlich h&ouml;here S-Adenosylmethionine (gleiche) als normale Lymphozyten und entwickelten Tools, die ihr &Uuml;berleben unter physiologischen Bedingungen selektiv vermindert. RNA Interferenz-gen-silencing-Technologie verwenden, moduliert wir die Kinetik von Methionin Adenosyltransferase-II (MAT-II), die gleichen Synthese von ATP katalysiert und l-Met. Insbesondere wir schweigen Ausdruck der regulatorischen Untereinheit der MAT-IIbeta in Jurkat-Zellen und dementsprechend verlagerte die K (m L-Met) der Enzym 10-15-Falte &uuml;ber das physiologische Ausma&szlig; der l-Met, wodurch Enzymaktivit&auml;t und gleichen Pools, &uuml;berm&auml;&szlig;ige Apoptose induzieren und abnehmender leuk&auml;mischen Zellen Wachstum in vitro und in vivo. Diese Effekte wurden umgekehrt bei unphysiologically hoch l-Met (&gt; 50 Microm), angibt, das verminderte Wachstum der leuk&auml;mischen Zellen auf physiologische l-Met Ebenen war eine direkte Folge der Zunahme der MAT-II K(m L-Met) aufgrund von MAT-IIbeta abtragen und die konsequente Reduktion in der gleichen Synthese. Nach Transplantation in unsere NOD/Scid-IL-2Rgamma(null) humanisierten Mausmodell an Leuk&auml;mie, Kontrolle ShRNA-septischen Jurkat Zellen erh&ouml;hte Verteilung, ausgestellt, w&auml;hrend fehlt MAT-IIbeta Fehler beim Raft Zellen f&uuml;r bis zu 5 Wochen. Diese krassen Unterschiede in b&ouml;sartige Zelle &uuml;berleben, bedingt durch die MAT-IIbeta Ablation, schlage vor, dass es m&ouml;glich ist, diesen Ansatz zu verwenden, um zu leuk&auml;mischen Zellen &Uuml;berleben in-vivo mit wenig bis kein Schaden, zum normalen Zellen zu benachteiligen.

Selektive Ausrichtung der leuk&auml;mischen Zellwachstum in vivo und in vitro mithilfe eines Gens Unterdr&uuml;ckender Ansatz, um S-Adenosylmethionine Synthese zu verringern.

Abbiamo sfruttato il fatto che le cellule leucemiche utilizzano significativamente pi&ugrave; elevati livelli di S-adenosilmetionina (SAMe) rispetto al normale linfociti e sviluppati strumenti che selettivamente diminuito la loro sopravvivenza in condizioni fisiologiche. Utilizzando la tecnologia silenziamento RNA interferenza genica, abbiamo modulato la cinetica della metionina adenosyltransferase-II (MAT-II), che catalizza la seguente sintesi stessa dal trifosfato di Adenosina e l-Met. In particolare, abbiamo messo a tacere l&#39;espressione della subunit&agrave; MAT-IIbeta normativa nelle cellule Jurkat e spostato di conseguenza il K (m L-Met) dell&#39;enzima 10-15 volte di sopra dei livelli fisiologici di l-Met, riducendo in tal modo l&#39;attivit&agrave; dell&#39;enzima e piscine stesse, indurre apoptosi eccessivo e diminuendo leucemici sviluppo delle cellule in vitro e in vivo. Questi effetti sono stati invertiti a unphysiologically alto l-Met (&amp;gt; 50 microm), che indica che ha diminuito la crescita delle cellule leucemiche a livelli fisiologici ha incontrato l era un risultato diretto dell&#39;aumento in MAT-II K(m L-Met) a causa di ablazione MAT-IIbeta e la conseguente riduzione nella sintesi stessa. Nel nostro IL-2Rgamma(null) NOD/Scid modello murino umanizzato di leucemia, controllo le cellule Jurkat transduced shRNA esposta maggiore attecchimento, considerando che le cellule manca MAT-IIbeta non &egrave; riuscito a Raft per fino a 5 settimane post-transplant. Queste differenze nella sopravvivenza delle cellule maligne, stark effettuata tramite ablazione MAT-IIbeta, suggeriscono che potrebbe essere possibile utilizzare questo approccio per svantaggiare la sopravvivenza delle cellule leucemiche in vivo con poco o nessun danno alle cellule normali.

Targeting selettivo di crescita delle cellule leucemiche in vivo e in vitro utilizzando un gene silencing approccio per diminuire la sintesi di S-adenosilmetionina.

&#x767D;&#x8840;&#x75C5;&#x7D30;&#x80DE;&#x3092;&#x6B63;&#x5E38;&#x30EA;&#x30F3;&#x30D1;&#x7403;&#x3068;&#x9078;&#x629E;&#x7684;&#x751F;&#x7406;&#x7684;&#x6761;&#x4EF6;&#x306E;&#x4E0B;&#x3067;&#x5F7C;&#x3089;&#x306E;&#x751F;&#x5B58;&#x3092;&#x6E1B;&#x5C11;&#x958B;&#x767A;&#x30C4;&#x30FC;&#x30EB;&#x3088;&#x308A;&#x5927;&#x5E45;&#x306B;&#x9AD8;&#x3044;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB; s-&#x30A2;&#x30C7;&#x30CE;&#x30B7;&#x30EB;&#x30E1;&#x30C1;&#x30AA;&#x30CB;&#x30F3; &#xFF08;&#x540C;&#x3058;&#xFF09; &#x306E;&#x5229;&#x7528;&#x3068;&#x4E8B;&#x5B9F;&#x3092;&#x60AA;&#x7528;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;RNA &#x5E72;&#x6E09;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x30B5;&#x30A4;&#x30EC;&#x30F3;&#x30B7;&#x30F3;&#x30B0;&#x306E;&#x6280;&#x8853;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x30E1;&#x30C1;&#x30AA;&#x30CB;&#x30F3; adenosyltransferase - ATP &#x304B;&#x3089;&#x540C;&#x3058;&#x5408;&#x6210;&#x3092;&#x89E6;&#x5A92;&#x3057;&#x3066; l &#x4F1A;&#x3063;&#x305F; II &#xFF08;&#x30DE;&#x30C3;&#x30C8;-&#x2171;&#xFF09; &#x306E;&#x52D5;&#x614B;&#x3092;&#x5909;&#x8ABF;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x5177;&#x4F53;&#x7684;&#x306B;&#x306F;&#x3001;&#x898F;&#x5236;&#x306E;&#x30DE;&#x30C3;&#x30C8; IIbeta &#x30B5;&#x30D6;&#x30E6;&#x30CB;&#x30C3;&#x30C8; Jurkat &#x7D30;&#x80DE;&#x3067;&#x306E;&#x767A;&#x73FE;&#x306F;&#x6C88;&#x9ED9;&#x3057;&#x3001;KX &#x306F;&#x305D;&#x308C;&#x306B;&#x5FDC;&#x3058;&#x3066;&#x79FB;&#x52D5; (m L &#x306B;&#x4F1A;&#x3063;&#x305F;) &#x9175;&#x7D20; 10-15 - &#x9175;&#x7D20;&#x6D3B;&#x6027;&#x3068;&#x540C;&#x3058;&#x30D7;&#x30FC;&#x30EB;&#x3092;&#x6E1B;&#x3089;&#x3059;&#x306E;&#x3072;&#x3060;&#x4E0A;&#x8A18;&#x306E;&#x751F;&#x7406;&#x5B66;&#x7684;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x306E; l-&#x30E1;&#x30C1;&#x30AA;&#x30CB;&#x30F3;, &#x904E;&#x5270;&#x306A;&#x30A2;&#x30DD;&#x30C8;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9;&#x8A98;&#x5C0E;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x6E1B;&#x5C11;&#x306E;&#x767D;&#x8840;&#x75C5;&#x7D30;&#x80DE;&#x5897;&#x6B96; in vitro &#x304A;&#x3088;&#x3073; in vivo &#x3067;&#x3002;Unphysiologically &#x9AD8; l &#x4F1A;&#x3063;&#x305F;&#x3067;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x52B9;&#x679C;&#x304C;&#x9006;&#x8EE2;&#x3057;&#x305F; &#xFF08;&#x76EE; 50 microm&#xFF09;&#x3001;&#x751F;&#x7406; l &#x4F1A;&#x3063;&#x305F;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x3067;&#x767D;&#x8840;&#x75C5;&#x7D30;&#x80DE;&#x5897;&#x6B96;&#x3092;&#x6E1B;&#x5C11;&#x3092;&#x793A;&#x3059;&#x30DE;&#x30C3;&#x30C8; II K(m L-Met) &#x30DE;&#x30C3;&#x30C8; IIbeta &#x30A2;&#x30D6;&#x30EC;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x5897;&#x52A0;&#x3068;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x6E1B;&#x5C11;&#x306E;&#x76F4;&#x63A5;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x3067;&#x540C;&#x3058;&#x5408;&#x6210;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x79C1;&#x305F;&#x3061; NOD/Scid &#x30DE;&#x30C3;&#x30C8; IIbeta &#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x63A5;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3067;&#x3057;&#x305F;&#x306E;&#x304C;&#x6B20;&#x3051;&#x3066;&#x7D30;&#x80DE;&#x767D;&#x8840;&#x75C5; Jurkat &#x7D30;&#x80DE;&#x306E; shRNA &#x5C0E;&#x5165;&#x9AD8;&#x307E;&#x308A;&#x751F;&#x7740;&#x306B;&#x5BFE;&#x3057;&#x5C55;&#x793A;&#x30B3;&#x30F3;&#x30C8;&#x30ED;&#x30FC;&#x30EB;&#x306E;&#x30D2;&#x30C8;&#x5316;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9; &#x30E2;&#x30C7;&#x30EB; IL-2Rgamma(null) &#x3067; 5 &#x9031;&#x9593; post-transplant &#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x60AA;&#x6027;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x751F;&#x5B58;&#x3001;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x6975;&#x7AEF;&#x306B;&#x7570;&#x306A;&#x308B;&#x30DE;&#x30C3;&#x30C8; IIbeta &#x30A2;&#x30D6;&#x30EC;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x5F71;&#x97FF;&#x3001;&#x767D;&#x8840;&#x75C5;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x751F;&#x5B58; in vivo &#x6B63;&#x5E38;&#x7D30;&#x80DE;&#x3078;&#x306E;&#x5BB3;&#x306B;&#x5C11;&#x3057;&#x4E0D;&#x5229;&#x306A;&#x70B9;&#x306B;&#x3053;&#x306E;&#x30A2;&#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30C1;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x53EF;&#x80FD;&#x304B;&#x3082;&#x3057;&#x308C;&#x306A;&#x3044;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x63D0;&#x6848;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x767D;&#x8840;&#x75C5;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x5897;&#x6B96;&#x306E; in vivo &#x304A;&#x3088;&#x3073; in vitro s-&#x30A2;&#x30C7;&#x30CE;&#x30B7;&#x30EB;&#x30E1;&#x30C1;&#x30AA;&#x30CB;&#x30F3;&#x5408;&#x6210;&#x3092;&#x6E1B;&#x5C11;&#x3055;&#x305B;&#x308B;&#x30B8;&#x30FC;&#x30F3;&#x30B5;&#x30A4;&#x30EC;&#x30F3;&#x30B7;&#x30F3;&#x30B0;&#x306E;&#x30A2;&#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30C1;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x9078;&#x629E;&#x7684;&#x306B;&#x30BF;&#x30FC;&#x30B2;&#x30C6;&#x30A3;&#x30F3;&#x30B0;&#x3002;

&#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; &#xC545;&#xC6A9; leukemic &#xC138;&#xD3EC; &#xC815;&#xC0C1; &#xC138;&#xD3EC;&#xC640; &#xC120;&#xD0DD;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xC0DD;&#xB9AC; &#xC801;&#xC778; &#xC870;&#xAC74; &#xD558;&#xC5D0;&#xC11C; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC758; &#xC0DD;&#xC874;&#xC744; &#xAC10;&#xC18C; &#xAC1C;&#xBC1C;&#xB41C; &#xB3C4;&#xAD6C; &#xBCF4;&#xB2E4; &#xD6E8;&#xC52C; &#xB354; &#xB192;&#xC740; &#xC218;&#xC900;&#xC758; S-adenosylmethionine (&#xB3D9;&#xC77C;)&#xC744; &#xD65C;&#xC6A9; &#xD558;&#xB294; &#xC0AC;&#xC2E4;. RNA &#xBC29;&#xD574; &#xC720;&#xC804;&#xC790; silencing &#xAE30;&#xC220;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC;, &#xC6B0;&#xB9AC; &#xBA54;&#xD2F0;&#xC624;&#xB2CC; adenosyltransferase-2 (&#xB9E4;&#xD2B8;-&#x2171;), &#xCC28;&#xB294; ATP&#xC5D0;&#xC11C; &#xB3D9;&#xC77C;&#xD55C; &#xD569;&#xC131; catalyzes l &#xB9CC;&#xB09C; &#xC18D;&#xB3C4; &#xB860; &#xBCC0;&#xC870;. &#xD2B9;&#xD788; &#xC6B0;&#xB9AC; Jurkat &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0;&#xC11C; &#xADDC;&#xC81C; &#xB9E4;&#xD2B8; IIbeta &#xC18C; &#xB2E8;&#xC704; &#xC2DD; &#xC785; &#xB9C9; &#xC74C;&#xC744; &#xD558; &#xACE0; &#xC801;&#xC808; &#xD558; &#xAC8C; &#xC774;&#xB3D9; K (m L &#xB9CC;&#xB09C;) &#xD6A8;&#xC18C; 10-15-&#xBC30; l &#xCDA9;&#xC871; &#xD558;&#xB294; &#xC0DD;&#xB9AC; &#xC801;&#xC778; &#xC218;&#xC900; &#xC774;&#xC0C1;&#xC758; &#xD6A8;&#xC18C; &#xD65C;&#xB3D9;&#xACFC; &#xAC19;&#xC740; &#xD480;&#xC744; &#xC808;&#xAC10;&#xC758; &#xACFC;&#xB3C4; &#xD55C; apoptosis&#xB97C; &#xC720;&#xB3C4; &#xD558; &#xACE0; &#xC810;&#xAC10; leukemic &#xC138;&#xD3EC; &#xC0DD;&#xCCB4; &#xC678; &#xBC0F; &#xC0DD;&#xCCB4; &#xC870;&#xAC74; &#xC131;&#xC7A5;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xD6A8;&#xACFC;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBC18;&#xB300; &#xD588;&#xB2E4; unphysiologically &#xB192;&#xC740; l &#xB9CC;&#xB0AC;&#xB2E4; (&amp;gt; 50 microm), &#xAC19;&#xC740; &#xD569;&#xC131;&#xC5D0;&#xC11C; &#xB9E4;&#xD2B8; II K(m L-Met) &#xB9E4;&#xD2B8; IIbeta &#xC808;&#xC81C; &#xB54C;&#xBB38;&#xC5D0; &#xC99D;&#xAC00; &#xD558; &#xACE0; &#xD544;&#xC5F0;&#xC801;&#xC778; &#xAC10;&#xC18C;&#xC758; &#xC9C1;&#xC811;&#xC801;&#xC778; &#xACB0;&#xACFC; &#xADF8; &#xC0DD;&#xB9AC; l &#xCDA9;&#xC871; &#xC218;&#xC900; leukemic &#xC138;&#xD3EC; &#xC131;&#xC7A5;&#xC744; &#xAC10;&#xC18C;&#xB97C; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0B4;&#xB294;. Humanized &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4; &#xBAA8;&#xB378; &#xC81C;&#xC5B4; shRNA &#xBD88;&#xB9AC;&#xACE0; Jurkat &#xC138;&#xD3EC; &#xBC1C;&#xB2EC; &#xB41C; engraftment&#xC744; &#xC804;&#xC2DC; &#xD558;&#xB294; &#xBC18;&#xBA74; &#xBC31;&#xD608;&#xBCD1;&#xC758; &#xC138;&#xD3EC;&#xAC00; &#xB9E4;&#xD2B8;-Iibeta&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xCD5C;&#xB300; engraft &#xD558;&#xC9C0; &#xBABB;&#xD588;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xBD80;&#xC871; &#xD55C; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xB044; &#xB355;/Scid IL-2Rgamma(null) 5 &#xC8FC; post-transplant. &#xC545;&#xC131; &#xC138;&#xD3EC; &#xC0DD;&#xC874;&#xC5D0; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xC2A4; &#xD0C1; &#xCC28;&#xC774; &#xB9E4;&#xD2B8; IIbeta &#xC808;&#xC81C;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC601;&#xD5A5;&#xC744;, &#xC81C;&#xC548; &#xD558;&#xB294;&#xC774; &#xBC29;&#xBC95;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xC815;&#xC0C1; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0; &#xD574;&#xB97C; &#xAC70;&#xC758; vivo leukemic &#xC138;&#xD3EC; &#xC0DD;&#xC874; &#xB2E8;&#xC810;&#xC744; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xC120;&#xD0DD;&#xC801; leukemic &#xC138;&#xD3EC; &#xC131;&#xC7A5;&#xC758; &#xC0DD;&#xCCB4; &#xC870;&#xAC74; &#xBC0F; S adenosylmethionine &#xD569;&#xC131; &#xC904;&#xC774;&#xAE30; &#xC811;&#xADFC; &#xC785;&#xC744; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xC2DC;&#xD5D8;&#xAD00;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD0C0;&#xAC9F;&#xD305;.

Nos explota el hecho de que las c&eacute;lulas leuc&eacute;micas utilizan niveles de S-adenosilmetionina (SAMe) significativamente mayores que los linfocitos normales y desarrollados herramientas que selectivamente disminuci&oacute;n su supervivencia bajo condiciones fisiol&oacute;gicas. Usando tecnolog&iacute;a de silenciamiento de RNA interferencia gen&eacute;tica, nos hab&iacute;an modulada la cin&eacute;tica de metionina adenosyltransferase-II (MAT-II), que cataliza la misma s&iacute;ntesis de ATP y l-Met. Espec&iacute;ficamente, nos silenciaron la expresi&oacute;n de la subunidad reguladora de MAT-IIbeta en c&eacute;lulas Jurkat y cambiado de puesto por consiguiente la K (m L-Met) de la enzima 10-15 veces por encima de los niveles fisiol&oacute;gicos de l-Met, lo que reduce la actividad enzim&aacute;tica y piscinas mismos, induciendo apoptosis excesiva y disminuyendo leuc&eacute;micas crecimiento in vitro e in vivo de la c&eacute;lula. Estos efectos se invirtieron en unphysiologically alto l-Met (&gt; 50 microm), indicando que disminuy&oacute; el crecimiento de las c&eacute;lulas leuc&eacute;micas a niveles fisiol&oacute;gicos l-Met fue consecuencia directa del aumento en MAT-II K(m L-Met) debido a la ablaci&oacute;n de MAT-IIbeta y la consecuente reducci&oacute;n en la s&iacute;ntesis mismo. En nuestro IL-2Rgamma(null) NOD/Scid modelo de rat&oacute;n humanizado de la leucemia, control c&eacute;lulas Jurkat shRNA-transduced exhibieron mayor injerto, mientras que las c&eacute;lulas carentes de MAT-IIbeta no engraft para hasta 5 semanas poste-trasplante. Estas marcadas diferencias en la supervivencia de la c&eacute;lula maligna, efectuado por ablaci&oacute;n MAT-IIbeta, sugieren que es posible utilizar este enfoque a la desventaja de la supervivencia de la c&eacute;lula leuc&eacute;mica en vivo con poco o ning&uacute;n da&ntilde;o a las c&eacute;lulas normales.

Selective targeting de crecimiento de las c&eacute;lulas leuc&eacute;micas in vivo e in vitro utilizando un enfoque de silenciamiento del gen para disminuir la s&iacute;ntesis de S-adenosilmetionina.

&szlig;1-&#x80BE;&#x4E0A;&#x817A;&#x7D20;&#x80FD;&#x53D7;&#x4F53; (&szlig;1-AR) &#x548C;&#x53D7;&#x4F53;&#x6FC0;&#x52A8;&#x5242;&#x7684;&#x56DE;&#x5E94;&#x6D88;&#x5316;&#xFF0C;&#x7136;&#x540E;&#x56DE;&#x6536;&#x56DE;&#x6765;&#x7684;&#x53E6;&#x4E00;&#x8F6E;&#x7684;&#x4FE1;&#x53F7;&#x3002;&#x4E1D;&#x6C28;&#x9178; 312 &#x4E19;&#x6C28;&#x9178;&#x7A81;&#x53D8;&#x4F53;&#x7684; &szlig;1 AR &#xFF08;S312A&#xFF09; &#x5185;&#x5728;&#x5316;&#xFF0C;&#x4F46;&#x4E0D;&#x4F1A;&#x56DE;&#x6536;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x5DF2;&#x786E;&#x5B9A; WT &szlig;1 AR &#x548C; S312A &#x8BB0;&#x53D6;&#x6700;&#x521D;&#x5230;&#x65E9;&#x671F;&#x7684;&#x6392;&#x5E8F;&#x8F66;&#x53A2;&#x56E0;&#x4E3A;&#x4ED6;&#x4EEC;&#x7531; colocalized &gt; &#x4E0E;&#x65E9;&#x671F;&#x7684; endosomal &#x6807;&#x8BB0; rab5a &#x548C;&#x65E9;&#x671F; endosomal &#x6297;&#x539F;-1 (EEA1) &#x7684; 70%&#x3002;&#x968F;&#x540E;&#xFF0C;WT &szlig;1-AR &#x8D29;&#x8FD0;&#x5230;&#x56DE;&#x6536; endosomes rab4a &#x8868;&#x793A;&#x6392;&#x5E8F; endosomes &#x901A;&#x8FC7;&#x3002;&#x5728;&#x56DE;&#x6536; endosomes WT &szlig;1 AR &#x7531; colocalized &gt; &#x4E0E; rab11 &#x86CB;&#x767D;&#x7684; 70%&#x3002;S312A &#x6CA1;&#x6709;&#x4E0D; colocalize &#x4E0E; rab4a &#x6216; rab11&#xFF0C;&#x76F8;&#x53CD;&#x4ED6;&#x4EEC;&#x9000;&#x51FA;&#x4ECE;&#x65E9;&#x671F;&#x7684; endosomes &#x5230;&#x665A; endosomes/&#x6EB6;&#x9176;&#x4F53;&#x9000;&#x5316;&#x7684;&#x4E86;&#x3002;Rab11a &#x5728;&#x53D1;&#x6325;&#x7A81;&#x51FA;&#x4F5C;&#x7528;&#x7684; WT &szlig;1-AR &#x56DE;&#x6536;&#xFF0C;&#x56E0;&#x4E3A;&#x5360;&#x4E3B;&#x5BFC;&#x5730;&#x4F4D;&#x7684;&#x6D88;&#x6781; rab11a &#x6291;&#x5236;&#xFF0C;&#x867D;&#x7136;&#x4E00;&#x6D3B;&#x52A8; rab11a &#x52A0;&#x901F;&#x56DE;&#x6536; &szlig;1-&#x4EBA;&#x624D;&#x57F9;&#x8BAD;&#x4E2D;&#x5FC3;&#x3002;&#x63A5;&#x4E0B;&#x6765;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x51B3;&#x5B9A;&#x5BF9;&#x8D29;&#x8FD0;&#x7684; WT &szlig;1 &#x6C29;&#x6C14;&#x4FDD;&#x62A4;&#x6BCF;&#x4E2A; rab11 &#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x86CB;&#x767D;&#x7684;&#x5F71;&#x54CD;&#x56DE;&#x6536; &szlig;1-AR &#x662F;&#x663E;&#x8457;&#x6291;&#x5236;&#x808C;&#x7403;&#x86CB;&#x767D; Vb&#x3001; FIP2&#x3001; FIP3 &#x548C; rabphillin &#x88AB;&#x649E;&#x5012;&#x65F6;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x6570;&#x636E;&#x8868;&#x660E;&#xFF0C;rab11a &#x548C;&#x4E00;&#x7EC4;&#x9009;&#x5B9A;&#x7684;&#x5176;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x4F19;&#x4F34;&#x53D1;&#x6325;&#x4E86;&#x7A81;&#x51FA;&#x7684;&#x4F5C;&#x7528;&#xFF0C;&#x5728;&#x56DE;&#x6536;&#x7684;&#x4EBA;&#x7C7B; &szlig;1-&#x4EBA;&#x624D;&#x57F9;&#x8BAD;&#x4E2D;&#x5FC3;&#x3002;

Rab11a &#x548C;&#x5176;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x4F19;&#x4F34;&#x89C4;&#x7BA1;&#x56DE;&#x6536; &szlig;1-&#x80BE;&#x4E0A;&#x817A;&#x7D20;&#x80FD;&#x53D7;&#x4F53;&#x3002;

ÃŸ1-adrenergic receptors (ÃŸ1-AR) are internalized in response to agonists and then recycle back for another round of signaling. The serine 312 to alanine mutant of the ÃŸ1-AR (S312A) is internalized but does not recycle. We determined that WT ÃŸ1-AR and S312A were internalized initially to an early sorting compartment because they colocalized by >70% with the early endosomal markers rab5a and early endosomal antigen-1 (EEA1). Subsequently, the WT ÃŸ1-AR trafficked via rab4a-expressing sorting endosomes to recycling endosomes. In recycling endosomes WT ÃŸ1-AR were colocalized by >70% with the rab11 GTPase. S312A did not colocalize with either rab4a or rab11, instead they exited from early endosomes to late endosomes/lysosomes in which they were degraded. Rab11a played a prominent role in recycling of the WT ÃŸ1-AR because dominant negative rab11a inhibited, while constitutively active rab11a accelerated the recycling of the ÃŸ1-AR. Next, we determined the effect of each of the rab11-interacting proteins on trafficking of the WT ÃŸ1-AR. The recycling of the ÃŸ1-AR was markedly inhibited when myosin Vb, FIP2, FIP3 and rabphillin were knocked down. These data indicate that rab11a and a select group of its binding partners play a prominent role in recycling of the human ÃŸ1-AR.

Rab11a and its binding partners regulate the recycling of the ÃŸ1-adrenergic receptor.

r&eacute;cepteurs &szlig;1 adr&eacute;nergiques (&szlig;1-AR) sont internalis&eacute;s en r&eacute;ponse aux agonistes et recyclent puis retour pour une nouvelle s&eacute;rie de signalisation. La s&eacute;rine 312 au mutant alanine de l&#39;AR-&szlig;1 (S312A) est internalis&eacute;e mais ne recycle pas. Nous avons d&eacute;termin&eacute; que WT &szlig;1-AR et S312A ont &eacute;t&eacute; int&eacute;rioris&eacute;s initialement dans un compartiment de tri au d&eacute;but car ils &eacute;pididymaire par &gt; 70 % avec le rab5a de marqueurs pr&eacute;coces endosomale et d&eacute;but endosomale antig&egrave;ne-1 (EEA1). Par la suite, le WT &szlig;1-AR traite via exprimant rab4a tri endosomes de recyclage des endosomes. Dans le recyclage des endosomes WT &szlig;1-AR ont &eacute;t&eacute; log&eacute;es par &gt; 70 % avec la GTPase rab11. S312A ne pas sont colocalis&eacute;es avec rab4a ou rab11, plut&ocirc;t qu&#39;ils aient quitt&eacute; les endosomes pr&eacute;coces &agrave; la fin des endosomes/lysosomes dans lequel ils ont &eacute;t&eacute; d&eacute;grad&eacute;s. Rab11a a jou&eacute; un r&ocirc;le important dans le recyclage de la WT &szlig;1-AR car rab11a n&eacute;gative dominante inhib&eacute;e, alors que constitutivement actif rab11a acc&eacute;l&eacute;r&eacute; le recyclage de l&#39;AR &szlig;1-. Ensuite, nous avons d&eacute;termin&eacute; l&#39;effet de chacune des prot&eacute;ines interagissant rab11 sur la traite de la WT &szlig;1-AR. Le recyclage de l&#39;AR-&szlig;1 &eacute;tait fortement inhib&eacute; lorsque la myosine Vb, FIP2, FIP3 et rabphillin sont fauch&eacute;s. Ces donn&eacute;es indiquent que les rab11a et un groupe restreint de ses partenaires de liaison jouent un r&ocirc;le important dans le recyclage de l&#39;humain &szlig;1-AR.

Rab11a et ses partenaires de liaison r&eacute;glementent le recyclage des r&eacute;cepteurs &szlig;1 adr&eacute;nergiques.

&szlig;1-adrenerge Rezeptoren (&szlig;1-AR) sind als Antwort auf Agonisten verinnerlicht und dann wieder f&uuml;r eine weitere Runde der Signalisierung zu recyceln. Die Serin-312, Alanin Mutant der &szlig;1-AR (S312A) verinnerlicht ist aber nicht zu recyceln. Wir festgestellt, dass WT &szlig;1-AR und S312A zun&auml;chst zu einer fr&uuml;hen Sortierung Fach verinnerlicht wurden weil sie durch colocalized &gt; 70 % mit den fr&uuml;hen Endosomen Marker rab5a und fr&uuml;hen Endosomen Antigen-1 (EEA1). Anschlie&szlig;end verschleppt die WT &szlig;1-AR &uuml;ber rab4a-Ausdruck Sortierung Endosomen Recycling Endosomen. Recycling Endosomen WT wurden &szlig;1-AR von colocalized &gt; 70 % mit der rab11-GTPase. S312A nicht mit rab4a oder rab11 colocalize, stattdessen verlassen sie aus fr&uuml;hen Endosomen zu sp&auml;ten Endosomen/Lysosomen, in denen sie degradiert wurden. Rab11a spielte eine wichtige Rolle im recycling der WT &szlig;1-AR, da dominant negative rab11a gehemmt, w&auml;hrend konstitutiv aktive rab11a beschleunigt der &szlig;1-AR-recycling, Als n&auml;chstes bestimmt wir die Auswirkungen der rab11-Interaktion Proteine zum Handel mit den WT &szlig;1-AR. Das recycling der &szlig;1-AR war deutlich gehemmt, wenn Myosin Vb, FIP2, FIP3 und Rabphillin abgerissen wurden. Diese Daten deuten darauf hin, dass rab11a und einer ausgew&auml;hlten Gruppe von seiner Bindung-Partner eine herausragende Rolle im recycling von der menschlichen &szlig;1-AR spielen.

Rab11a und seinen Partnern verbindliche Regeln der &szlig;1-adrenerge Rezeptor-recycling.

i recettori &szlig;1-adrenergici (&szlig;1-AR) vengono interiorizzati in risposta agli agonisti e poi riciclano torna per un altro giro di segnalazione. La serina 312 mutante alanina &szlig;1-AR (S312A) &egrave; interiorizzato, ma non riciclare. Abbiamo determinato che WT &szlig;1-AR e S312A erano interiorizzato inizialmente a un vano ordinamento precoce perch&eacute; essi colocalized da &amp;gt; 70% con i primi endosomal marcatori rab5a e primi endosomal antigene-1 (EEA1). Successivamente, il WT &szlig;1-AR trafficate via endosomes ordinamento rab4a-esprimere al riciclaggio endosomes. Nel riciclaggio endosomes WT &szlig;1-AR sono state colocalized da &amp;gt; 70% con il GTPase rab11. S312A non colocalize con rab4a o rab11, invece sono usciti presto endosomes a late endosomes/lisosomi in cui essi sono stati degradati. Rab11a ha svolto un ruolo prominente nel riciclaggio di WT &szlig;1-AR perch&eacute; dominante negativo rab11a inibita, mentre costitutivamente attive rab11a accelerato il riciclaggio del &szlig;1-AR. Successivamente, abbiamo determinato l&#39;effetto di ciascuna delle proteine interagenti rab11 sul traffico di WT &szlig;1-AR. Il riciclaggio di &szlig;1-AR era marcatamente inibito quando miosina Vb, FIP2, FIP3 e rabphillin sono state abbattute. Questi dati indicano che rab11a e un gruppo selezionato di partner associazione gioca un ruolo prominente nel riciclaggio dell&#39;umano &szlig;1-AR.

Rab11a e i suoi partner associazione regolano il riciclo del recettore &szlig;1-adrenergico.

&szlig;1 &#x30A2;&#x30C9;&#x30EC;&#x30CA;&#x30EA;&#x30F3;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53; &#xFF08;&szlig;1-AR&#xFF09; &#x30A2;&#x30B4;&#x30CB;&#x30B9;&#x30C8;&#x306B;&#x5FDC;&#x3048;&#x3066;&#x5185;&#x5728;&#x5316;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3057;&#x3001;&#x5225;&#x306E;&#x30E9;&#x30A6;&#x30F3;&#x30C9;&#x3092;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;&#x306E;&#x30D0;&#x30C3;&#x30AF;&#x3092;&#x30EA;&#x30B5;&#x30A4;&#x30AF;&#x30EB;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30BB;&#x30EA;&#x30F3; 312 &#x30A2;&#x30E9;&#x30CB;&#x30F3;&#x5909;&#x7570;&#x4F53; &szlig;1 AR (S312A) &#x306B;&#x5185;&#x9762;&#x5316;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x304C;&#x3001;&#x30EA;&#x30B5;&#x30A4;&#x30AF;&#x30EB;&#x306F;&#x3057;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3002;&#x6211;&#x3005; &#x306F;&#x5F7C;&#x3089;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x7D50;&#x679C;&#x306E;&#x3067; WT &szlig;1 AR &#x3068; S312A &#x3092;&#x521D;&#x671F;&#x306E;&#x4E26;&#x3079;&#x66FF;&#x3048;&#x30B3;&#x30F3;&#x30D1;&#x30FC;&#x30C8;&#x30E1;&#x30F3;&#x30C8;&#x306B;&#x6700;&#x521D;&#x5185;&#x9762;&#x3060;&#x3063;&#x305F;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x6C7A;&#x5B9A;&#x76EE;&#x521D;&#x671F;&#x30A8;&#x30F3;&#x30C9;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0; &#x30DE;&#x30FC;&#x30AB;&#x30FC; rab5a &#x3068;&#x65E9;&#x671F;&#x30A8;&#x30F3;&#x30C9;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x6297;&#x539F; 1 (EEA1&#xFF09; 70 &#xFF05;&#x3002;&#x305D;&#x306E;&#x5F8C;&#x3001;WT &szlig;1 AR rab4a &#x3092;&#x8868;&#x73FE;&#x3059;&#x308B;&#x4E26;&#x3079;&#x66FF;&#x3048;&#x306E;&#x30A8;&#x30F3;&#x30C9;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0; &#x30A8;&#x30F3;&#x30C9;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0; &#x30EA;&#x30B5;&#x30A4;&#x30AF;&#x30EB;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x3066;&#x4EBA;&#x8EAB;&#x58F2;&#x8CB7;&#x3002;&#x30A8;&#x30F3;&#x30C9;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0; WT &#x3092;&#x30EA;&#x30B5;&#x30A4;&#x30AF;&#x30EB;&#x3067; &szlig;1 AR &#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x7D50;&#x679C;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x76EE; rab11 GTPase &#x3068; 70 &#xFF05;&#x3002;S312A rab4a &#x307E;&#x305F;&#x306F; rab11 &#x3092; colocalize &#x3057;&#x306A;&#x304B;&#x3063;&#x305F;&#x3044;&#x306A;&#x3044;&#x3001;&#x4EE3;&#x308F;&#x308A;&#x306B;&#x5F7C;&#x3089;&#x306F;&#x52A3;&#x5316;&#x3057;&#x305F;&#x5F8C;&#x671F;&#x30A8;&#x30F3;&#x30C9;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;/&#x30EA;&#x30BD;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x306B;&#x65E9;&#x671F;&#x30A8;&#x30F3;&#x30C9;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x304B;&#x3089;&#x7D42;&#x4E86;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;Rab11a &szlig;1 &#x7740;&#x306E;&#x30EA;&#x30B5;&#x30A4;&#x30AF;&#x30EB;&#x6052;&#x5E38;&#x6D3B;&#x6027; rab11a &#x52A0;&#x901F;&#x3057;&#x305F;&#x4E00;&#x65B9;&#x3067;&#x652F;&#x914D;&#x7684;&#x306A;&#x8CA0; rab11a &#x963B;&#x5BB3;&#x3057;&#x305F;&#x306E;&#x3067; WT &szlig;1-AR &#x306E;&#x30EA;&#x30B5;&#x30A4;&#x30AF;&#x30EB;&#x3001;&#x8457;&#x540D;&#x306A;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x679C;&#x305F;&#x3057;&#x305F;&#x6B21;&#x306B;&#x3001;&#x6211;&#x3005; WT &szlig;1 AR &#x306E;&#x4EBA;&#x8EAB;&#x58F2;&#x8CB7;&#x306B;&#x53CA;&#x307C;&#x3059;&#x5404; rab11 &#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x306E;&#x6C7A;&#x5B9A;&szlig;1 AR &#x306E;&#x30EA;&#x30B5;&#x30A4;&#x30AF;&#x30EB;&#x306F;&#x3001;&#x30DF;&#x30AA;&#x30B7;&#x30F3; Vb&#x3001;FIP2&#x3001;FIP3&#x3001;rabphillin &#x304C;&#x30CE;&#x30C3;&#x30AF;&#x30C0;&#x30A6;&#x30F3;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3068;&#x304D;&#x306B;&#x8457;&#x3057;&#x304F;&#x963B;&#x5BB3;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x30C7;&#x30FC;&#x30BF;&#x306F;&#x3001;rab11a &#x3068;&#x305D;&#x306E;&#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C9;&#x5148;&#x306E;&#x30B0;&#x30EB;&#x30FC;&#x30D7;&#x3092;&#x9078;&#x629E;&#x304C;&#x4EBA;&#x9593;&#x306E; &szlig;1 &#x7740;&#x306E;&#x30EA;&#x30B5;&#x30A4;&#x30AF;&#x30EB;&#x8457;&#x540D;&#x306A;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x679C;&#x305F;&#x3059;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3059;

Rab11a &#x3068;&#x305D;&#x306E;&#x7D50;&#x5408;&#x30D1;&#x30FC;&#x30C8;&#x30CA;&#x30FC;&#x306E; &szlig;1 &#x30A2;&#x30C9;&#x30EC;&#x30CA;&#x30EA;&#x30F3;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x30EA;&#x30B5;&#x30A4;&#x30AF;&#x30EB;&#x3092;&#x898F;&#x5236;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&szlig;1-&#xC544;&#xB4DC;&#xB808;&#xB0A0;&#xB9B0; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; (&szlig;1-AR) &#xC751;&#xB2F5; agonists&#xB85C; &#xB0B4; &#xBA74; &#xD558; &#xACE0; &#xC2DC;&#xADF8;&#xB110;&#xB9C1;&#xC758; &#xB610; &#xB2E4;&#xB978; &#xB77C;&#xC6B4;&#xB4DC; &#xB2E4;&#xC74C; &#xB2E4;&#xC2DC; &#xC7AC;&#xD65C;&#xC6A9;. &szlig;1 AR (S312A)&#xC758; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xC54C;&#xB77C;&#xB2CC;&#xC744; &#xB5A0;&#xB4E4;&#xACE0; 312 &#xB0B4; &#xBA74;&#xC740; &#xC788;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xC7AC;&#xD65C;&#xC6A9; &#xD558;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; &#xB0B4;&#xB294; WT &szlig;1-AR &#xBC0F; S312A &#xD588;&#xB2E4; &#xBA74; &#xCC98;&#xC74C; &#xCD08;&#xAE30; &#xC815;&#xB82C; &#xAD6C;&#xD68D; &#xD558; &#xC5EC; colocalized &#xC788;&#xAE30; &#xB54C;&#xBB38;&#xC5D0; &#xACB0;&#xC815; &amp;gt; &#xCD08;&#xAE30; endosomal &#xB9C8;&#xCEE4; rab5a &#xBC0F; &#xCD08;&#xAE30; endosomal &#xD56D; &#xC6D0;-1 (EEA1)&#xC640; 70%. &#xADF8; &#xD6C4;, WT &szlig;1-AR rab4a &#xD45C;&#xD604; &#xC815;&#xB82C; endosomes endosomes &#xC7AC;&#xD65C;&#xC6A9;&#xC744; &#xD1B5;&#xD574; &#xC778;&#xC2E0; &#xB9E4;&#xB9E4;. Endosomes WT &#xC7AC;&#xD65C;&#xC6A9; &szlig;1 AR&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; colocalized &#xD588;&#xB2E4; &amp;gt; rab11 Gtpase&#xC640; 70%. S312A rab4a &#xB610;&#xB294; rab11 colocalize &#xD558;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC558;&#xB2E4;, &#xB300;&#xC2E0; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC740; &#xB2A6;&#xC740; endosomes/&#xB9AC;&#xC18C;&#xC880; &#xD0C0;&#xB77D; &#xD588;&#xB2E4;&#xC744; &#xCD08;&#xAE30; endosomes&#xC5D0;&#xC11C; &#xC885;&#xB8CC; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. WT &szlig;1-AR&#xC758; &#xC9C0;&#xBC30;&#xC801;&#xC778; &#xBD80;&#xC815;&#xC801;&#xC778; rab11a &#xC800;&#xD574; &#xD65C;&#xC131; constitutively rab11a &#xAC00;&#xC18D; &szlig;1 &#xC544;&#xCE78;&#xC18C; &#xC7AC;&#xD65C;&#xC6A9; &#xD558;&#xB294; &#xB3D9;&#xC548; &#xB54C;&#xBB38;&#xC5D0; &#xC7AC;&#xD65C;&#xC6A9; &#xD558;&#xB294; &#xB208;&#xC5D0; &#xB744;&#xB294; &#xC5ED;&#xD560; Rab11a &#xB2E4;&#xC74C;&#xC73C;&#xB85C;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; &#xACB0;&#xC815; WT &szlig;1-&#xC544;&#xCE78;&#xC18C;&#xC758; &#xC778;&#xC2E0; &#xB9E4;&#xB9E4;&#xC5D0; &#xAC01; rab11 &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xC601;&#xD5A5; &szlig;1 AR&#xC758; &#xC7AC;&#xD65C;&#xC6A9; myosin Vb, FIP2, FIP3 &#xBC0F; rabphillin &#xB728; &#xD588;&#xB2E4; &#xB54C; &#xD604;&#xC800; &#xD558; &#xAC8C; &#xC800;&#xD574; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xB370;&#xC774;&#xD130;&#xB97C; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0B4;&#xB294; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xD30C;&#xD2B8;&#xB108;&#xC758; &#xC120;&#xD0DD; &#xADF8;&#xB8F9;&#xACFC; rab11a &#xC778;&#xAC04;&#xC758; &szlig;1 &#xC544;&#xCE78;&#xC18C;&#xC758; &#xC7AC;&#xD65C;&#xC6A9;&#xC5D0; &#xB208;&#xC5D0; &#xB744;&#xB294; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744;

Rab11a &#xBC0F; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xD30C;&#xD2B8;&#xB108; &#xADDC;&#xC81C; &szlig;1 &#xC544;&#xB4DC;&#xB808;&#xB0A0;&#xB9B0; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4;&#xC758; &#xC7AC;&#xD65C;&#xC6A9;.

receptores adren&eacute;rgicos SS1 (SS1-AR) se internalizan en respuesta a los agonistas y luego reciclan para otra ronda de se&ntilde;alizaci&oacute;n. La serina 312 a mutante de la alanina de la SS1-AR (S312A) es internalizado pero no reciclar. Determinamos que WT SS1-AR y S312A fueron internalizados inicialmente a un compartimiento clasificaci&oacute;n temprano porque ellos colocalized por &gt; 70% con la temprana endosomal marcadores rab5a y temprano endosomal ant&iacute;geno-1 (EEA1). Posteriormente, la WT SS1-AR tr&aacute;fico v&iacute;a rab4a-expresi&oacute;n clasificaci&oacute;n endosomas reciclaje endosomas. En el reciclaje de endosomas WT SS1-AR fueron colocalized por &gt; 70% con la GTPasa de rab11. S312A no colocalize con rab4a o rab11, en cambio salieron de endosomas tempranos a finales endosomas/lisosomas en que ellos fueron degradados. Rab11a desempe&ntilde;&oacute; un papel prominente en el reciclaje de la WT SS1-AR porque inhibe rab11a negativo dominante, mientras que rab11a constitutivamente activa aceler&oacute; el reciclaje de la SS1-AR. A continuaci&oacute;n, determinamos el efecto de cada una de las prote&iacute;nas de interacci&oacute;n rab11 en el tr&aacute;fico de la WT SS1-AR. El reciclaje de la SS1-AR se inhibi&oacute; marcadamente cuando fueron derribados miosina Vb, FIP2, FIP3 y rabphillin. Estos datos indican que la rab11a y un selecto grupo de sus socios de la Uni&oacute;n juegan un papel prominente en el reciclaje de la humana SS1-AR.

Article	Year
Role of the cyclic AMP-dependent protein kinase in homologous resensitization of the beta1-adrenergic receptor. The Journal of biological chemistry\| PubMed ID: 14990580	2004
Characterization of the residues in helix 8 of the human beta1-adrenergic receptor that are involved in coupling the receptor to G proteins. The Journal of biological chemistry\| PubMed ID: 16500896	2006
Mutagenesis within helix 6 of the human beta1-adrenergic receptor identifies Lysine324 as a residue involved in imparting the high-affinity binding state of agonists. Molecular pharmacology\| PubMed ID: 16760361	2006
AKAP79-mediated targeting of the cyclic AMP-dependent protein kinase to the beta1-adrenergic receptor promotes recycling and functional resensitization of the receptor. The Journal of biological chemistry\| PubMed ID: 16940053	2006
Assembly of an SAP97-AKAP79-cAMP-dependent protein kinase scaffold at the type 1 PSD-95/DLG/ZO1 motif of the human beta(1)-adrenergic receptor generates a receptosome involved in receptor re... The Journal of biological chemistry\| PubMed ID: 17170109	2007
Selective targeting of leukemic cell growth in vivo and in vitro using a gene silencing approach to diminish S-adenosylmethionine synthesis. The Journal of biological chemistry\| PubMed ID: 18753136	2008
Rab11a and its binding partners regulate the recycling of the ÃŸ1-adrenergic receptor. Cellular signalling\| PubMed ID: 20727405	2011

Lidia A. Gardner

Biography

JoVE Journal Publications

Other Publications