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Regular Care and Maintenance of a Zebrafish (<em>Danio rerio</em>) Laboratory: An Introduction

This protocol describes regular care and maintenance of a zebrafish laboratory. Zebrafish are now gaining popularity in genetics, pharmacological and ...

Edith Cowan University

McCusker Alzheimer's Research foundation

&#x81B3;&#x98DF;&#x9EC4;&#x916E;&#x7C7B;&#x5316;&#x5408;&#x7269;&#xFF0C;&#x5305;&#x62EC;&#x67D1;&#x6A58;&#x9EC4;&#x916E;&#x53F6;&#x7247;&#xFF0C;&#x53EF;&#x80FD;&#x6709;&#x635F;&#x4F24;&#x7684;&#x4FDD;&#x62A4;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5185;&#x4FE1;&#x53F7;&#x8F6C;&#x5BFC;&#x7684;&#x523A;&#x6FC0;&#x6548;&#x5E94;&#x3002;&#x4E3B;&#x9F20;&#x6807;&#x76AE;&#x5C42;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x4E2D;&#x6587;&#x5316;&#xFF0C;&#x4F46;&#x4E0D;&#x662F; SH SY5Y &#x795E;&#x7ECF;&#x6BCD;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7624;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6216;&#x4E3B;&#x76AE;&#x80A4;&#x6210;&#x7EA4;&#x7EF4;&#x7EC6;&#x80DE; (Promocells)&#xFF0C;&#x53F6;&#x7247; (100-300nM&#xFF0C;15 &#x5206;&#x949F;) &#x9020;&#x6210; ERK1/2 &#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x6C34;&#x5E73;&#x7684;&#x5927;&#x5E45;&#x589E;&#x52A0;&#xFF0C;&#x4F46;&#x4E0D;&#x662F;&#x4F1A;&#x589E;&#x52A0; CREB &#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x3002;18 H &#x4E3A;&#x53F6;&#x7247;&#x7684;&#x7BA1;&#x7406;&#x5E76;&#x6CA1;&#x6709;&#x6539;&#x53D8;&#x57FA;&#x56E0;&#x8868;&#x8FBE;&#x9A71;&#x52A8;&#x7684;&#x73AF;&#x78F7;&#x9178;&#x817A;&#x82F7;&#x53CD;&#x5E94;&#x5143;&#x4EF6; &#xFF08;CRE&#xFF09;&#xFF0C;&#x8BC4;&#x4F30;&#xFF0C;&#x91C7;&#x7528;&#x8367;&#x5149;&#x7D20;&#x9176;&#x8BB0;&#x8005;&#x7CFB;&#x7EDF;&#xFF0C;&#x4F46; 300nM &#x53F6;&#x7247;&#x90E8;&#x5206;&#x626D;&#x8F6C;&#x521D;&#x7EA7;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x8BF1;&#x5BFC; ng108 &#x7EC6;&#x80DE;&#x6B7B;&#x4EA1;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x6570;&#x636E;&#x663E;&#x793A;&#xFF0C;&#x53F6;&#x7247;&#x662F;&#x5316;&#x5408;&#x7269;&#x6D53;&#x5EA6;&#x7684;&#x795E;&#x7ECF;&#x4FDD;&#x62A4;&#x4F5C;&#x7528;&#x6297;&#x6C27;&#x5316;&#x4F5C;&#x7528;&#x5728;&#x54EA;&#x91CC;&#x4F3C;&#x4E4E;&#x4E0D;&#x5360;&#x4E3B;&#x5BFC;&#x5730;&#x4F4D;&#x3002;&#x53F6;&#x7247;&#x7684;&#x5F71;&#x54CD;&#x662F;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x7C7B;&#x578B;&#x4F9D;&#x8D56;&#x548C;&#x4E0E;&#x4E0D;&#x540C;&#x7684; (-) &#x8868;&#x513F;&#x8336;&#x7D20;&#x3001; &#x795E;&#x7ECF;&#x4FDD;&#x62A4;&#x4F5C;&#x7528;&#x9EC4;&#x70F7;&#x9187;&#x4F53;&#x5916;&#x4E0D;&#x5173;&#x8054;&#x4E0E;&#x78F7;&#x9178;&#x5316; CREB &#x589E;&#x5F3A;&#x6216; CRE &#x4ECB;&#x5BFC;&#x7684;&#x57FA;&#x56E0;&#x8868;&#x8FBE;&#x3002;

&#x53F6;&#x7247;&#x4E2D;&#x9F20;&#x6807;&#x4E3B;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x7684;&#x795E;&#x7ECF;&#x4FDD;&#x62A4;&#x4F5C;&#x7528;&#x662F;&#x72EC;&#x7ACB;&#x7684; CREB &#x6D3B;&#x5316;&#x3002;

Dietary flavonoids, including the citrus flavanone hesperetin, may have stimulatory effects on cytoprotective intracellular signalling pathways. In primary mouse cortical neurone cultures, but not SH-SY5Y human neuroblastoma cells or human primary dermal fibroblasts (Promocells), hesperetin (100-300nM, 15min) caused significant increases in the level of ERK1/2 phosphorylation, but did not increase CREB phosphorylation. Administration of hesperetin for 18h did not alter gene expression driven by the cyclic AMP response element (CRE), assessed using a luciferase reporter system, but 300nM hesperetin partially reversed staurosporine-induced cell death in primary neurones. Our data show that hesperetin is a neuroprotective compound at concentrations where antioxidant effects are unlikely to predominate. The effects of hesperetin are cell-type dependent and, unlike the flavanol (-)epicatechin, neuroprotection in vitro is not associated with enhanced CREB phosphorylation or CRE-mediated gene expression.

Neuroprotective effects of hesperetin in mouse primary neurones are independent of CREB activation.

Les flavono&iuml;des alimentaires, y compris l&#39;agrumes flavanone HESPERETINE, peuvent avoir des effets stimulants sur les voies de signalisation intracellulaire cytoprotecteurs. Dans aux neurones corticaux de souris primaire cultures, mais pas les cellules de neuroblastome humain SH-SY5Y ou les fibroblastes dermiques humains primaires (Promocells), HESPERETINE (100-300 nm, 15 min) a caus&eacute; une augmentation significative du niveau de la phosphorylation de ERK1/2, mais n&#39;a pas augment&eacute; la phosphorylation de CREB. Administration de la HESPERETINE pendant 18 h n&#39;a pas alt&eacute;r&eacute; l&#39;expression des g&egrave;nes par l&#39;&eacute;l&eacute;ment de r&eacute;ponse de l&#39;AMP cyclique (CRE), &eacute;valu&eacute;e &agrave; l&#39;aide d&#39;un syst&egrave;me de rapporteur lucif&eacute;rase, mais HESPERETINE de 300nM partiellement renvers&eacute; la mort cellulaire induite par la staurosporine dans des neurones primaires. Nos donn&eacute;es montrent que HESPERETINE est un compos&eacute; &agrave; des concentrations de neuroprotecteurs o&ugrave; les effets antioxydants sont probablement pas pr&eacute;dominer. Les effets de HESPERETINE sont de type cellulaire d&eacute;pendantes et, &agrave; la diff&eacute;rence des flavanols (-) l&#39;&eacute;picat&eacute;chine, neuroprotection in vitro n&#39;est pas associ&eacute;e &agrave; la phosphorylation de CREB am&eacute;lior&eacute;e ou expression g&eacute;n&eacute;tique induite par la CRE.

Effets neuroprotecteurs de la HESPERETINE dans les neurones de souris primaire sont ind&eacute;pendantes de l&#39;activation de CREB.

Di&auml;tetische Flavonoide, einschlie&szlig;lich der Zitrusfr&uuml;chte Flavanone Hesperetin, eventuell stimulierende Wirkung auf Cytoprotective intrazellul&auml;re Signalwege. In prim&auml;re Maustaste kortikale Neurone Kulturen, aber nicht SH-SY5Y menschlichen Neuroblastoma Zellen oder menschliche prim&auml;re dermalen Fibroblasten (Promocells), Hesperetin (100-300 nm, 15 min) deutliche Steigerungen in der Ebene von ERK1/2 Phosphorylierung verursacht, aber nicht CREB Phosphorylierung zu erh&ouml;hen. Verwaltung von Hesperetin f&uuml;r 18 h Genexpression angetrieben von zyklischem AMP-Response-Element (CRE), im anhand einer Luciferase Reporter-System, nicht &auml;ndern, sondern 300nM Hesperetin teilweise r&uuml;ckg&auml;ngig gemacht Staurosporine induziert Zelltod in der prim&auml;ren Neuronen. Unsere Daten zeigen, dass diese Hesperetin ist eine neuroprotektive zusammengesetzte bei Konzentrationen wo d&uuml;rften antioxidative Effekte &uuml;berwiegen. Die Auswirkungen der Hesperetin sind Zelltyp abh&auml;ngige und, im Gegensatz zu einem (-) Epicatechin, Neuroprotektion in-vitro ist nicht zugeordnet verbesserte CREB Phosphorylierung oder CRE-vermittelten Genexpression.

Neuroprotektive Wirkung von Hesperetin in Maus prim&auml;re Neuronen sind unabh&auml;ngig von CREB-Aktivierung.

Flavonoidi dietetici, compresi gli agrumi flavanone hesperetin, possono avere effetti stimolante sulle vie di segnalazione intracellulare citoprotettivo. Nel neurone corticale primario del mouse hesperetin culture, ma non le cellule di neuroblastoma umano SH-SY5Y o fibroblasti dermici umani primari (Promocells), (100-300nM, 15 min) ha causato un aumento significativo del livello di fosforilazione di ERK1/2, ma non ha fatto aumentare la fosforilazione di CREB. Amministrazione di hesperetin per 18 h non alterava espressione genica guidata da elemento di risposta di AMP ciclico (CRE), valutata utilizzando un sistema di reporter luciferasi, ma 300nM hesperetin parzialmente invertita morte staurosporine-indotta delle cellule in neuroni primari. I nostri dati mostrano che hesperetin &egrave; un composto a concentrazioni neuroprotective dove sono improbabile che predominano gli effetti antiossidanti. Gli effetti della hesperetin sono del tipo a cella dipendente e, a differenza del flavanolo (-) epicatechina, neuroprotezione in vitro non &egrave; associato con fosforilazione di CREB avanzata o espressione del gene CRE-mediata.

Effetti neuroprotettivi della hesperetin nei neuroni primari del mouse sono indipendenti di attivazione del CREB.

&#x67D1;&#x6A58;&#x985E;&#x306E;&#x30D5;&#x30E9;&#x30D0;&#x30CE;&#x30F3; hesperetin &#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x98DF;&#x54C1;&#x4E2D;&#x306E;&#x30D5;&#x30E9;&#x30DC;&#x30CE;&#x30A4;&#x30C9;&#x306F;&#x80C3;&#x9178;&#x7D30;&#x80DE;&#x5185;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#x7D4C;&#x8DEF;&#x306E;&#x4FC3;&#x9032;&#x306E;&#x52B9;&#x679C;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30D7;&#x30E9;&#x30A4;&#x30DE;&#x30EA; &#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x76AE;&#x8CEA;&#x30CB;&#x30E5;&#x30FC;&#x30ED;&#x30F3; SH SY5Y &#x3072;&#x3068;&#x795E;&#x7D4C;&#x82BD;&#x816B;&#x7D30;&#x80DE;&#x3084;&#x3072;&#x3068;&#x30D7;&#x30E9;&#x30A4;&#x30DE;&#x30EA;&#x771F;&#x76AE;&#x7E4A;&#x7DAD;&#x82BD;&#x7D30;&#x80DE; (Promocells) &#x3067;&#x306F;&#x306A;&#x304F;&#x6587;&#x5316;&#x306E; hesperetin (100-300 nm, 15 min) ERK1/2 &#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x306E;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x3067;&#x6709;&#x610F;&#x306A;&#x5897;&#x52A0;&#x3092;&#x767A;&#x751F;&#x304C; CREB &#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x306F;&#x5897;&#x52A0;&#x3057;&#x306A;&#x304B;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x7BA1;&#x7406; 18 h &#x306E; hesperetin &#x306E;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x767A;&#x73FE;&#x3092;&#x30EB;&#x30B7;&#x30D5;&#x30A7;&#x30E9;&#x30FC;&#x30BC; &#x30EC;&#x30DD;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC; &#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E0;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x8A55;&#x4FA1;&#x3001;&#x30B5;&#x30A4;&#x30AF;&#x30EA;&#x30C3;&#x30AF; AMP &#x5FDC;&#x7B54;&#x8981;&#x7D20;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066; &#xFF08;CRE&#xFF09; &#x99C6;&#x52D5;&#x306F;&#x5909;&#x308F;&#x308A;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3067;&#x3057;&#x305F;&#x304C;&#x3001;300 nm hesperetin &#x90E8;&#x5206;&#x7684;&#x30B9;&#x30BF;&#x30A6;&#x30ED;&#x30B9;&#x30DD;&#x30EA;&#x30F3;&#x8A98;&#x767A;&#x7D30;&#x80DE;&#x6B7B;&#x4E00;&#x6B21;&#x30CB;&#x30E5;&#x30FC;&#x30ED;&#x30F3;&#x306B;&#x9006;&#x3002;&#x6211;&#x3005; &#x306E;&#x30C7;&#x30FC;&#x30BF;&#x306F;&#x3001;&#x6297;&#x9178;&#x5316;&#x52B9;&#x679C;&#x304C;&#x4E00;&#x4E16;&#x3092;&#x98A8;&#x9761;&#x3059;&#x308B;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x306F;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x305D;&#x306E; hesperetin &#x795E;&#x7D4C;&#x4FDD;&#x8B77;&#x6FC3;&#x5EA6;&#x3067;&#x5316;&#x5408;&#x7269;&#x306F;&#x898B;&#x308B;&#x3002;&#x643A;&#x5E2F;&#x578B; hesperetin &#x306E;&#x52B9;&#x679C;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x4F9D;&#x5B58;&#x3068;&#x30D5;&#x30E9;&#x30D0;&#x30CE;&#x30FC;&#x30EB; (-) &#x30A8;&#x30D4;&#x30AB;&#x30C6;&#x30AD;&#x30F3;&#x3001;&#x795E;&#x7D4C;&#x4FDD;&#x8B77;&#x3068;&#x306F;&#x7570;&#x306A;&#x308A; in vitro &#x5F37;&#x5316; CREB &#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x3084; CRE &#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x305F;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x767A;&#x73FE;&#x3068;&#x95A2;&#x9023;&#x4ED8;&#x3051;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3002;

Hesperetin &#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x4E00;&#x6B21;&#x30CB;&#x30E5;&#x30FC;&#x30ED;&#x30F3;&#x3067;&#x306E;&#x795E;&#x7D4C;&#x4FDD;&#x8B77;&#x52B9;&#x679C;&#x306F; CREB &#x6D3B;&#x6027;&#x306E;&#x72EC;&#x7ACB;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#xAC10;&#xADE4; &#xB958; flavanone hesperetin&#xB97C; &#xD3EC;&#xD568; &#xD55C; &#xC2DD;&#xC774; &#xD50C; &#xB77C; &#xBCF4;&#xB178; &#xC774;&#xB4DC; cytoprotective &#xC138;&#xD3EC;&#xB0B4; &#xC2E0;&#xD638; &#xACBD;&#xB85C;&#xC5D0; stimulatory &#xD6A8;&#xACFC;&#xAC00;&#xC9C0;&#xACE0; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xAE30;&#xBCF8; &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4; &#xB300;&#xB1CC; &#xD53C; &#xC9C8;&#xC758; &#xB274;&#xB7F0;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBB38;&#xD654;, &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; SH SY5Y &#xC778;&#xAC04; &#xC2E0;&#xACBD; &#xC138;&#xD3EC; &#xB610;&#xB294; &#xC778;&#xAC04;&#xC758; &#xAE30;&#xBCF8; &#xD53C;&#xBD80; &#xC12C;&#xC720; &#xC544; &#xC138;&#xD3EC; (Promocells), hesperetin (100-300nM, 15 &#xBD84;) ERK1/2 &#xC778; &#xC0B0;&#xD654;&#xC758; &#xC218;&#xC900;&#xC5D0; &#xC0C1;&#xB2F9;&#xD55C; &#xC99D;&#xAC00; &#xBC1C;&#xC0DD; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; CREB &#xC778; &#xC0B0;&#xD654; &#xC99D;&#xAC00; &#xD558;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC558;&#xB2E4;. 18 H&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; hesperetin&#xC758; &#xAD00;&#xB9AC; &#xD558;&#xB294; &#xC21C;&#xD658; &#xC570;&#xD504; &#xC751;&#xB2F5; &#xC694;&#xC18C; (CRE) &#xB8E8;&#xC2DC;&#xD398;&#xB77C;&#xC544;&#xC81C; &#xAE30;&#xC790; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xD3C9;&#xAC00; &#xD798;&#xC785;&#xC5B4; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xBC1C;&#xD604;&#xC744; &#xBCC0;&#xACBD; &#xD558;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC558;&#xB2E4; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; 300nM hesperetin &#xBD80;&#xBD84;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xBC18;&#xC804; &#xAE30;&#xBCF8; &#xB274;&#xB7F0;&#xC5D0;&#xC11C; staurosporine&#xC744; &#xC774;&#xC6A9;&#xD55C; &#xC138;&#xD3EC; &#xC8FD;&#xC74C;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xB370;&#xC774;&#xD130;&#xB294; hesperetin&#xC740; &#xC2E0;&#xACBD; &#xBCF4;&#xD638; &#xD654;&#xD569;&#xBB3C; &#xB18D;&#xB3C4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD56D; &#xC0B0;&#xD654; &#xD6A8;&#xACFC; predominate &#xAC00;&#xB2A5;&#xC131;&#xC774; &#xB418;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xD45C;&#xC2DC;. Hesperetin&#xC758; &#xD6A8;&#xACFC; &#xC138;&#xD3EC; &#xD615; &#xC885;&#xC18D; &#xBC0F; flavanol (-) epicatechin, neuroprotection &#xB2EC;&#xB9AC; &#xCCB4; &#xC678;&#xC640; &#xC5F0;&#xACB0; &#xB418;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC740; &#xD5A5;&#xC0C1; &#xB41C; CREB &#xC778; &#xC0B0;&#xD654; &#xB610;&#xB294; CRE &#xC911;&#xC7AC; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xBC1C;&#xD604;.

Hesperetin &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4; &#xAE30;&#xBCF8; &#xB274;&#xB7F0;&#xC5D0;&#xC11C;&#xC758; &#xC2E0;&#xACBD; &#xBCF4;&#xD638; &#xD6A8;&#xACFC; &#xB3C5;&#xB9BD;&#xC801; CREB &#xD65C;&#xC131;&#xD654;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Flavonoides diet&eacute;ticos, incluyendo la hesperidina c&iacute;tricos flavanone, pueden tener efectos estimulantes sobre rutas de se&ntilde;alizaci&oacute;n intracelular de citoprotector. En neurona cortical primario de rat&oacute;n culturas, pero no las c&eacute;lulas de neuroblastoma humano SH-SY5Y o fibroblastos d&eacute;rmicos primarios humanos (Promocells), Hesperidina (100-300nM, 15 min) caus&oacute; un aumento significativo en el nivel de fosforilaci&oacute;n de ERK1/2, pero no aument&oacute; la fosforilaci&oacute;n de CREB. Administraci&oacute;n de hesperidina 18 h no alter&oacute; expresi&oacute;n g&eacute;nica impulsado por el elemento de respuesta de AMP c&iacute;clico (CRE), evaluado mediante un sistema de reportero de luciferasa, pero 300nM hesperidina revoc&oacute; parcialmente la muerte celular inducida por staurosporina en neuronas primarias. Nuestros datos muestran que hesperidina es un neuroprotector compuesto en concentraciones donde est&aacute;n poco probable que predominan los efectos antioxidantes. Los efectos de la hesperidina son tipo c&eacute;lula dependiente y, a diferencia de los flavonoles (-) epicatechin, neuroprotecci&oacute;n in vitro no se asocia a mayor fosforilaci&oacute;n de CREB o expresi&oacute;n g&eacute;nica mediada por CRE.

Efectos neuroprotectores de hesperidina en neuronas primarias de rat&oacute;n son independientes de la activaci&oacute;n de CREB.

Alpha-amino-3-hydroxyl-5-methyl-4-isoxazole-propionate &#x53D7;&#x4F53; &#xFF08;AMPAR&#xFF09; &#x4E9A;&#x57FA; GluR2&#xFF0C;&#x8BE5;&#x6CD5;&#x6BD2;&#x6027;&#x548C;&#x708E;&#x6027;&#x7EC6;&#x80DE;&#x56E0;&#x5B50;&#x80BF;&#x7624;&#x574F;&#x6B7B;&#x56E0;&#x5B50; &alpha; (TNFalpha) &#x90FD;&#x88AB;&#x7275;&#x8FDE;&#x5230;&#x8FD0;&#x52A8;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x840E;&#x7F29;&#x4FA7;&#x7D22;&#x786C;&#x5316;/&#x8FD0;&#x52A8;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x75BE;&#x75C5;&#x4E2D;&#x7684;&#x6F0F;&#x6D1E;&#x3002;TNFalpha &#x636E;&#x62A5;&#x589E;&#x52A0;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8868;&#x9762;&#x8868;&#x8FBE; AMPAR &#x4E9A;&#x57FA;&#x4EE5;&#x589E;&#x52A0;&#x7A81;&#x89E6;&#x5F3A;&#x5EA6;&#x3001; &#x589E;&#x5F3A;&#x6BD2;&#x6027;&#xFF0C;&#x4F46;&#x8FD9;&#x4E00;&#x673A;&#x5236;&#x662F;&#x5426;&#x53D1;&#x751F;&#x5728;&#x8FD0;&#x52A8;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x662F;&#x672A;&#x77E5;&#x4E4B;&#x6570;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x7528;&#x9F20;&#x6807;&#x8FD0;&#x52A8;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x548C;&#x76AE;&#x5C42;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x539F;&#x4EE3;&#x57F9;&#x517B;&#x6765;&#x68C0;&#x67E5; TNFalpha &#x53D7;&#x4F53;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x3001; GluR2 &#x53EF;&#x7528;&#x6027;&#x3001; AMPAR &#x4ECB;&#x5BFC;&#x9499;&#x8FDB;&#x5165;&#x548C;&#x6BD2;&#x6027;&#x6613;&#x611F;&#x6027;&#x4E4B;&#x95F4;&#x7684;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;TNFalpha 10 ng/mL 15 &#x5206;&#x949F;&#xFF09; &#x6709;&#x5173;&#x751F;&#x7406;&#x6D53;&#x5EA6;&#x77ED;&#x63A5;&#x89E6;&#x9020;&#x6210; GluR1 &#x548C; GluR2 &#x6807;&#x8BB0;&#x91CD;&#x65B0;&#x5206;&#x914D;&#x5230;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8868;&#x9762;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8868;&#x9762;&#x751F;&#x7269;&#x7D20;&#x548C;&#x514D;&#x75AB;&#x8367;&#x5149;&#x6CD5;&#x6240;&#x786E;&#x5B9A;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x4F7F;&#x7528; fura-2-acetoxymethyl &#x916F; microfluorimetry&#xFF0C;&#x8868;&#x660E;&#xFF0C;&#x957F;&#x671F;&#x63A5;&#x89E6; TNFalpha PI3 &#x6FC0;&#x9176; p38 &#x4F9D;&#x8D56;&#x6FC0;&#x9176;&#x7684;&#x5730;&#xFF0C;&#x7B26;&#x5408; GluR2 &#x5305;&#x542B; AMPAR &#x589E;&#x52A0;&#x63D2;&#x5165;&#x7EC6;&#x80DE;&#x819C;&#x9020;&#x6210; AMPA &#x4ECB;&#x5BFC;&#x9499;&#x6761;&#x76EE;&#x7684;&#x5CF0;&#x503C;&#x632F;&#x5E45;&#x8FC5;&#x901F;&#x51CF;&#x5C11;&#x3002;&#x8FD9;&#x5BFC;&#x81F4;&#x8FD0;&#x52A8;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x5BF9;&#x6D77;&#x4EBA;&#x9178;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6B7B;&#x4EA1;&#x7684;&#x4E00;&#x79CD;&#x4FDD;&#x62A4;&#x3002;&#x56E0;&#x6B64;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x6570;&#x636E;&#x8868;&#x660E; TNFalpha &#x4E3B;&#x8981;&#x7528;&#x4F5C;&#x8FD0;&#x52A8;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x7A81;&#x89E6;&#x6D3B;&#x52A8;&#xFF0C;&#x800C;&#x4E0D;&#x662F;&#x5728;&#x840E;&#x7F29;&#x4FA7;&#x7D22;&#x786C;&#x5316;&#x75C7;&#x7684;&#x75C5;&#x7406;&#x9A71;&#x52A8;&#x5668;&#x7684;&#x751F;&#x7406;&#x8C03;&#x8282;&#x3002;

&#x80BF;&#x7624;&#x574F;&#x6B7B;&#x56E0;&#x5B50;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x8FC5;&#x901F;&#x51CF;&#x5C11;&#x5728;&#x8FD0;&#x52A8;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143; AMPA &#x53D7;&#x4F53;&#x4ECB;&#x5BFC;&#x7684;&#x9499;&#x6761;&#x76EE;&#x4E2D;&#x589E;&#x52A0;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8868;&#x9762;&#x8868;&#x8FBE; GluR2 &#x4E9A;&#x5355;&#x4F4D;&#xFF1A; &#x76F8;&#x5173;&#x7684;&#x795E;&#x7ECF;&#x53D8;&#x6027;&#x3002;

The alpha-amino-3-hydroxyl-5-methyl-4-isoxazole-propionate receptor (AMPAR) subunit GluR2, which regulates excitotoxicity and the inflammatory cytokine tumour necrosis factor alpha (TNFalpha) have both been implicated in motor neurone vulnerability in amyotrophic lateral sclerosis/motor neurone disease. TNFalpha has been reported to increase cell surface expression of AMPAR subunits to increase synaptic strength and enhance excitotoxicity, but whether this mechanism occurs in motor neurones is unknown. We used primary cultures of mouse motor neurones and cortical neurones to examine the interaction between TNFalpha receptor activation, GluR2 availability, AMPAR-mediated calcium entry and susceptibility to excitotoxicity. Short exposure to a physiologically relevant concentration of TNFalpha (10 ng/mL, 15 min) caused a marked redistribution of both GluR1 and GluR2 to the cell surface as determined by cell surface biotinylation and immunofluorescence. Using fura-2-acetoxymethyl ester microfluorimetry, we showed that exposure to TNFalpha caused a rapid reduction in the peak amplitude of AMPA-mediated calcium entry in a PI3-kinase and p38 kinase-dependent manner, consistent with increased insertion of GluR2-containing AMPAR into the plasma membrane. This resulted in a protection of motor neurones against kainate-induced cell death. Our data therefore, suggest that TNFalpha acts primarily as a physiological regulator of synaptic activity in motor neurones rather than a pathological drive in amyotrophic lateral sclerosis.

Tumour necrosis factor alpha induces rapid reduction in AMPA receptor-mediated calcium entry in motor neurones by increasing cell surface expression of the GluR2 subunit: relevance to neurodegeneration.

La sous-unit&eacute; alpha-amino-3-hydroxyl-5-methyl-4-isoxazole-propionate r&eacute;cepteur (AMPAR) GluR2, qui r&eacute;glemente l&#39;excitotoxicit&eacute; et l&#39;alpha de facteur de n&eacute;crose cytokine inflammatoire tumeur (TNFalpha) ont tous deux &eacute;t&eacute; impliqu&eacute;s dans vuln&eacute;rabilit&eacute; neurone moteur dans la maladie du neurone moteur/scl&eacute;rose lat&eacute;rale amyotrophique. TNFalpha a &eacute;t&eacute; signal&eacute;e pour augmenter l&#39;expression &agrave; la surface cellulaire des sous-unit&eacute;s AMPAR pour accro&icirc;tre la force synaptique et l&#39;excitotoxicit&eacute;, mais si ce m&eacute;canisme se produit dans les neurones moteurs est inconnue. Nous avons utilis&eacute; des cultures primaires de neurones moteur de souris et de neurones corticaux pour examiner l&#39;interaction entre l&#39;activation des r&eacute;cepteurs TNFalpha, disponibilit&eacute; de GluR2, entr&eacute;e calcique induite par l&#39;AMPAR et susceptibilit&eacute; &agrave; l&#39;excitotoxicit&eacute;. Courte exposition &agrave; une concentration physiologiquement pertinente de TNFalpha (10 ng/mL, 15 min) a provoqu&eacute; une redistribution marqu&eacute;e de GluR1 et de GluR2 &agrave; la surface cellulaire, tel que d&eacute;termin&eacute; par la cellule surface biotinylation et immunofluorescence. &Agrave; l&#39;aide de fura-2-ac&eacute;toxym&eacute;thyl ester microfluorim&eacute;trie, nous avons montr&eacute; que l&#39;exposition &agrave; TNFalpha a entra&icirc;n&eacute; une r&eacute;duction rapide de l&#39;amplitude de cr&ecirc;te d&#39;entr&eacute;e calcique induite par l&#39;AMPA de pi 3-kinase p38 kinase d&eacute;pendante fa&ccedil;on et, conform&eacute;ment &agrave; une insertion accrue de AMPAR GluR2 contenant dans la membrane plasmique. Il en est r&eacute;sult&eacute; une protection des neurones contre la mort cellulaire induite par le ka&iuml;nate-moteurs. Nos r&eacute;sultats sugg&egrave;rent donc que TNFalpha agit principalement comme un r&eacute;gulateur physiologique de l&#39;activit&eacute; synaptique dans les neurones moteurs, plut&ocirc;t qu&#39;un disque pathologique dans la scl&eacute;rose lat&eacute;rale amyotrophique.

N&eacute;crose tumorale facteur alpha induit une r&eacute;duction rapide dans l&#39;entr&eacute;e de calcium m&eacute;di&eacute;e par les r&eacute;cepteurs AMPA dans les neurones moteurs en augmentant l&#39;expression de la sous-unit&eacute; GluR2 &agrave; la surface cellulaire : pertinence &agrave; la neurod&eacute;g&eacute;n&eacute;rescence.

Die alpha-amino-3-hydroxyl-5-methyl-4-isoxazole-propionate-Rezeptor (AMPAR) Untereinheit GluR2, die Exzitotoxit&auml;t und die entz&uuml;ndliche Cytokine-Tumor-Nekrose-Faktor-Alpha (TNFalpha) regelt haben beide wurde verwickelt in motorischen Neurone Schwachstelle bei Amyotrophe Lateralsklerose/Motor-Neurone-Krankheit. TNFalpha wurde berichtet, um Zelle Oberfl&auml;che Ausdruck AMPAR Untereinheiten auf synaptische St&auml;rke steigern und Exzitotoxit&auml;t zu erh&ouml;hen, aber es ist nicht bekannt, ob dieser Mechanismus in motorischen Nervenzellen auftritt. Wir verwendeten Prim&auml;rkulturen von Maus motorischen Neuronen und kortikale Neuronen, um die Interaktion zwischen TNFalpha-Rezeptor-Aktivierung, GluR2-Verf&uuml;gbarkeit, AMPAR-vermittelte Kalzium-Eintrag und Anf&auml;lligkeit f&uuml;r Exzitotoxit&auml;t zu pr&uuml;fen. Kurze Belichtungszeiten zu einer physiologisch relevanten Konzentration von TNFalpha (10 ng/mL, 15 min) verursacht eine deutliche Umverteilung von GluR1 und GluR2 an der Zelloberfl&auml;che von Zelle Oberfl&auml;che Biotinylierung und Immunfluoreszenz bestimmt. Mit Fura-2-oxo-Ester Microfluorimetry, haben wir gezeigt, dass die Exposition zu TNFalpha verursachte eine rasche Reduzierung in die Spitzenamplitude AMPA-vermittelte Kalzium-Eintrags in einer PI3-Kinase und p38 Kinase-abh&auml;ngigen Weise, erh&ouml;hte Aufnahme von GluR2-haltigen AMPAR in der Plasmamembran. Dies f&uuml;hrte zu einem Schutz der motorischen Neuronen gegen Kainate-induced Zellentod. Unsere Daten zeigen daher TNFalpha fungiert in erster Linie als ein physiologischer Regulator der synaptischen Aktivit&auml;t im motorischen Neuronen statt eines pathologischen Laufwerks in Amyotrophe Lateralsklerose.

Tumor-Nekrose-Faktor-Alpha induziert rasche Reduzierung AMPA-Rezeptor-vermittelten Kalzium-Eintrag im motorischen Neuronen durch eine Erh&ouml;hung der Zelle Oberfl&auml;che Ausdruck der Untereinheit GluR2: Relevanz f&uuml;r Neurodegeneration.

La subunit&agrave; del recettore alpha-amino-3-hydroxyl-5-methyl-4-isoxazole-propionate (AMPAR) GluR2, che regola l&#39;eccitotossicit&agrave; e le citochine infiammatorie tumore fattore alfa di necrosi (TNFalpha) sono stati entrambi implicati nella vulnerabilit&agrave; del motoneurone nella malattia del neurone di sclerosi laterale amiotrofica/motore. TNFalpha &egrave; stato segnalato per aumentare la superficie espressione cellulare di subunit&agrave; AMPAR per aumentare la forza sinaptica e migliorare la eccitotossicit&agrave;, ma se questo meccanismo si verifica nei neuroni motori &egrave; sconosciuto. Abbiamo usato colture primarie di neuroni motori del mouse e neuroni corticali di esaminare l&#39;interazione tra attivazione del recettore TNFalpha, disponibilit&agrave; GluR2, voce calcio AMPAR-mediata e suscettibilit&agrave; alla eccitotossicit&agrave;. Breve esposizione a una concentrazione fisiologicamente rilevante di TNFalpha (10 ng/mL, 15 min) ha causato una ridistribuzione contrassegnata sia GluR1 che GluR2 alla superficie delle cellule, come determinato dalla cella biotinylation superficiali e immunofluorescenza. Usando fura-2-acetossimetil estere microfluorimetry, ci ha mostrato che l&#39;esposizione a TNFalpha causato una rapida riduzione nell&#39;ampiezza del picco dell&#39;entrata di calcio AMPA-mediata in un modo chinasi-dipendente PI3 chinasi e p38, coerente con maggiore inserimento di AMPAR GluR2-contenenti nella membrana del plasma. Il risultato &egrave; una protezione dei neuroni motori contro la morte cellulare indotta da Kainato. I nostri dati suggeriscono quindi che TNFalpha agisce principalmente come regolatore fisiologico dell&#39;attivit&agrave; sinaptica nei neuroni motori piuttosto che un disco patologico nella sclerosi laterale amiotrofica.

Alfa di fattore di necrosi tumorale induce la rapida riduzione nella voce calcio mediata dal recettore AMPA in neuroni motore aumentando l&#39;espressione di superficie delle cellule della subunit&agrave; GluR2: pertinenza alla neurodegenerazione.

&#x5FDC;&#x9700;&#x578B;&#x3068;&#x708E;&#x75C7;&#x6027;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x30AB;&#x30A4;&#x30F3;&#x816B;&#x760D;&#x58CA;&#x6B7B;&#x56E0;&#x5B50;&#x30A2;&#x30EB;&#x30D5;&#x30A1; &#xFF08;TNFalpha&#xFF09; &#x3092;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x3059;&#x308B; alpha-amino-3-hydroxyl-5-methyl-4-isoxazole-propionate &#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53; (AMPAR) &#x30B5;&#x30D6;&#x30E6;&#x30CB;&#x30C3;&#x30C8; GluR2&#x3001;&#x3069;&#x3061;&#x3089;&#x3082;&#x95A2;&#x4E0E;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B; als/&#x904B;&#x52D5;&#x30CB;&#x30E5;&#x30FC;&#x30ED;&#x30F3;&#x75BE;&#x60A3;&#x306E;&#x904B;&#x52D5;&#x30CB;&#x30E5;&#x30FC;&#x30ED;&#x30F3;&#x306E;&#x8106;&#x5F31;&#x6027;&#x3002;TNFalpha &#x30B7;&#x30CA;&#x30D7;&#x30B9;&#x5F37;&#x5EA6;&#x3092;&#x9AD8;&#x3081;&#x308B;&#x3068;&#x5FDC;&#x9700;&#x578B;&#x3001;&#x5F37;&#x5316; AMPAR &#x30B5;&#x30D6;&#x30E6;&#x30CB;&#x30C3;&#x30C8;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x8868;&#x9762;&#x767A;&#x73FE;&#x306E;&#x5897;&#x52A0;&#x304C;&#x5831;&#x544A;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x304C;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x30E1;&#x30AB;&#x30CB;&#x30BA;&#x30E0;&#x306E;&#x904B;&#x52D5;&#x30CB;&#x30E5;&#x30FC;&#x30ED;&#x30F3;&#x3092;&#x884C;&#x3046;&#x304B;&#x3069;&#x3046;&#x304B;&#x306F;&#x4E0D;&#x660E;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x306E;&#x904B;&#x52D5;&#x30CB;&#x30E5;&#x30FC;&#x30ED;&#x30F3;&#x3068;&#x76AE;&#x8CEA;&#x795E;&#x7D4C;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x521D;&#x4EE3;&#x57F9;&#x990A; TNFalpha &#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x3001;GluR2 &#x53EF;&#x7528;&#x6027;&#x3001;AMPAR &#x3092;&#x4ECB;&#x3059;&#x308B;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0; &#x30A8;&#x30F3;&#x30C8;&#x30EA;&#x3068;&#x5FDC;&#x9700;&#x578B;&#x306B;&#x5BFE;&#x3059;&#x308B;&#x611F;&#x53D7;&#x6027;&#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x3092;&#x8ABF;&#x67FB;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;TNFalpha (10 ng/mL, 15 min) &#x306E;&#x751F;&#x7406;&#x5B66;&#x7684;&#x95A2;&#x9023;&#x6027;&#x306E;&#x9AD8;&#x3044;&#x6FC3;&#x5EA6;&#x306B;&#x77ED;&#x671F;&#x66B4;&#x9732;&#x30DE;&#x30FC;&#x30AF;&#x306E;&#x518D;&#x5206;&#x914D;&#x306E; GluR1 &#x3068; GluR2 &#x7D30;&#x80DE;&#x8868;&#x9762;&#x30D3;&#x30AA;&#x30C1;&#x30F3;&#x5316;&#x3068;&#x86CD;&#x5149;&#x6297;&#x4F53;&#x6CD5;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x6C7A;&#x5B9A;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x7D30;&#x80DE;&#x8868;&#x9762;&#x306B;&#x5F15;&#x304D;&#x8D77;&#x3053;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30D5;&#x30E9;-2-&#x30A2;&#x30BB;&#x30C8;&#x30AD;&#x30B7;&#x30E1;&#x30C1;&#x30EB;&#x30BB;&#x30D5;&#x30A1;&#x30ED;&#x30B9;&#x30DD;&#x30EA;&#x30F3; &#x30A8;&#x30B9;&#x30C6;&#x30EB; microfluorimetry &#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x3001;TNFalpha &#x9AD8;&#x901F;&#x9084;&#x5143; AMPA &#x3092;&#x4ECB;&#x3059;&#x308B;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0; &#x30A8;&#x30F3;&#x30C8;&#x30EA;&#x3067;&#x30D4;&#x30FC;&#x30AF;&#x306E;&#x632F;&#x5E45;&#x306F; PI3 &#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x304A;&#x3088;&#x3073; p38 &#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x4F9D;&#x5B58;&#x7684;&#x3001;&#x5897;&#x52A0;&#x633F;&#x5165; GluR2 &#x3092;&#x542B;&#x3080; AMPAR &#x306E;&#x539F;&#x5F62;&#x8CEA;&#x819C;&#x3068;&#x4E00;&#x8CAB;&#x6027;&#x306E;&#x539F;&#x56E0;&#x3078;&#x306E;&#x66DD;&#x9732;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x306F;&#x3001;&#x904B;&#x52D5;&#x30CB;&#x30E5;&#x30FC;&#x30ED;&#x30F3; &#x30AB;&#x30A4;&#x30CB;&#x30F3;&#x9178;&#x8A98;&#x767A;&#x7D30;&#x80DE;&#x6B7B;&#x306B;&#x5BFE;&#x3057;&#x3066;&#x306E;&#x4FDD;&#x8B77;&#x306B;&#x306A;&#x308A;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x6211;&#x3005; &#x306E;&#x30C7;&#x30FC;&#x30BF;&#x306F;&#x3001;&#x3057;&#x305F;&#x304C;&#x3063;&#x3066;&#x3001;TNFalpha als &#x3067;&#x75C5;&#x7406;&#x5B66;&#x7684;&#x30C9;&#x30E9;&#x30A4;&#x30D6;&#x3067;&#x306F;&#x306A;&#x304F;&#x3001;&#x904B;&#x52D5;&#x30CB;&#x30E5;&#x30FC;&#x30ED;&#x30F3;&#x306E;&#x30B7;&#x30CA;&#x30D7;&#x30B9;&#x6D3B;&#x6027;&#x306E;&#x751F;&#x7406;&#x7684;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x56E0;&#x5B50;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x4E3B;&#x306B;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3059;&#x308B;&#x3092;&#x304A;&#x52E7;&#x3081;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x816B;&#x760D;&#x58CA;&#x6B7B;&#x56E0;&#x5B50;&#x30A2;&#x30EB;&#x30D5;&#x30A1; GluR2 &#x30B5;&#x30D6;&#x30E6;&#x30CB;&#x30C3;&#x30C8;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x8868;&#x9762;&#x767A;&#x73FE;&#x3092;&#x5897;&#x3084;&#x3059;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x904B;&#x52D5;&#x30CB;&#x30E5;&#x30FC;&#x30ED;&#x30F3;&#x306E; AMPA &#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x305F;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0; &#x30A8;&#x30F3;&#x30C8;&#x30EA;&#x306E;&#x6025;&#x901F;&#x306A;&#x6E1B;&#x5C11;&#x3092;&#x8A98;&#x5C0E;&#x3059;&#x308B;: &#x95A2;&#x9023;&#x6027;&#x795E;&#x7D4C;&#x5909;&#x6027;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

Excitotoxicity &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; &#xC5FC;&#xC99D; &#xC131; cytokine &#xC885;&#xC591; &#xAD34; &#xC0AC; &#xC694;&#xC778; &#xC54C;&#xD30C; (TNFalpha)&#xC744; &#xC870;&#xC808; &#xD558;&#xB294; alpha-amino-3-hydroxyl-5-methyl-4-isoxazole-propionate &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; (AMPAR) &#xC18C; &#xB2E8;&#xC704; GluR2, &#xB458; &#xB2E4; &#xB8E8; &#xAC8C; &#xB9AD; &#xBCD1; &#xCE21;&#xBA74; &#xACBD;&#xD654; &#xC99D;/&#xBAA8;&#xD130; &#xB274;&#xB7F0; &#xC9C8;&#xD658;&#xC758; &#xBAA8;&#xD130; &#xB274;&#xB7F0; &#xCDE8;&#xC57D;&#xC810;&#xC5D0; &#xC5F0;&#xB8E8; &#xB418;&#xC5B4;. TNFalpha &#xC140; &#xD45C;&#xBA74; &#xC2DD; &#xC2DC; &#xB0C5; &#xC2A4; &#xAC15;&#xB3C4; &#xC99D;&#xAC00; &#xBC0F; &#xD5A5;&#xC0C1; excitotoxicity, AMPAR subunits&#xC758; &#xC99D;&#xAC00; &#xBCF4;&#xACE0; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC;&#xC774; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998; &#xBAA8;&#xD130; &#xB274;&#xB7F0;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBC1C;&#xC0DD; &#xD558;&#xB294; &#xC5EC;&#xBD80;&#xB294; &#xC54C; &#xC218; &#xC5C6;&#xB2E4;. &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4; &#xBAA8;&#xD130; &#xB274;&#xB7F0; &#xB300;&#xB1CC; &#xD53C; &#xC9C8;&#xC758; &#xB274;&#xB7F0;&#xC758; &#xAE30;&#xBCF8; &#xBB38;&#xD654; &#xAC80;&#xC0AC; TNFalpha &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; &#xD65C;&#xC131;&#xD654;, GluR2 &#xAC00;&#xC6A9;&#xC131;, &#xCE7C;&#xC298; AMPAR &#xC911;&#xC7AC; &#xD56D;&#xBAA9; &#xBC0F; excitotoxicity &#xBBFC;&#xAC10;&#xC131; &#xC0AC;&#xC774;&#xC758; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD588;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. TNFalpha (10 ng/mL, 15 &#xBD84;)&#xC758; &#xC21C;&#xC218; &#xAD00;&#xB828; &#xB18D;&#xB3C4;&#xC5D0; &#xC9E7;&#xC740; &#xB178;&#xCD9C; &#xC140; &#xD45C;&#xBA74; biotinylation &#xBC0F; &#xBA74;&#xC5ED; &#xD615;&#xAD11; &#xAC80;&#xC0AC;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xACB0;&#xC815; &#xB41C; &#xC138;&#xD3EC; &#xD45C;&#xBA74;&#xC5D0; GluR1 &#xBC0F; GluR2 &#xD45C;&#xC2DC; &#xB41C; &#xC7AC;&#xBC30;&#xD3EC;&#xB97C; &#xBC1C;&#xC0DD; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. Fura-2-acetoxymethyl &#xC5D0;&#xC2A4;&#xD14C; &#xB974; microfluorimetry&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC;, &#xC6B0;&#xB9AC; Tnfalpha&#xC5D0;&#xC11C; PI3-&#xD0A4; &#xB2C8; &#xC544; &#xC81C; &#xBC0F; p38 &#xD0A4; &#xC885;&#xC18D;, &#xD50C;&#xB77C;&#xC988;&#xB9C8; &#xB9C9;&#xC73C;&#xB85C; &#xD3EC;&#xD568; &#xD558;&#xB294; GluR2 AMPAR&#xC758; &#xC99D;&#xAC00; &#xC0BD;&#xC785; AMPA &#xC911;&#xC7AC; &#xCE7C;&#xC298; &#xD56D;&#xBAA9;&#xC758; &#xD53C;&#xD06C; &#xC9C4;&#xD3ED;&#xC758; &#xAE09;&#xC18D; &#xD55C; &#xAC10;&#xC18C; &#xBC1C;&#xC0DD;&#xC5D0; &#xB178;&#xCD9C;&#xC744; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC774; kainate&#xC744; &#xC774;&#xC6A9;&#xD55C; &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xC8FD;&#xC74C;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xBAA8;&#xD130; &#xB274;&#xB7F0;&#xC758; &#xBCF4;&#xD638; &#xADC0;&#xCC29;&#xB418; &#xC5C8; &#xB2E4;. &#xB370;&#xC774;&#xD130; &#xB530;&#xB77C;&#xC11C;, TNFalpha &#xBAA8;&#xD130; &#xB274;&#xB7F0;&#xC758; &#xC2DC; &#xB0C5; &#xC2A4; &#xD65C;&#xB3D9; &#xBCF4;&#xB2E4;&#xB294; &#xB8E8; &#xAC8C; &#xB9AD; &#xBCD1; &#xCE21;&#xBA74; &#xACBD;&#xD654; &#xC99D;&#xC758; &#xBCD1; &#xC801;&#xC778; &#xB4DC;&#xB77C;&#xC774;&#xBE0C;&#xC758; &#xC0DD;&#xB9AC; &#xC801; &#xB808; &#xADE4; &#xB808;&#xC774; &#xD130;&#xB85C; &#xC8FC;&#xB85C; &#xC5ED;&#xD560; &#xAC83;&#xC774; &#xC88B;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xC885;&#xC591; &#xAD34; &#xC0AC; &#xC694;&#xC778; &#xC54C;&#xD30C; GluR2 &#xC18C; &#xB2E8;&#xC704; &#xC140; &#xD45C;&#xBA74; &#xC2DD; &#xC99D;&#xAC00; &#xD558; &#xC5EC; &#xBAA8;&#xD130; &#xB274;&#xB7F0;&#xC5D0;&#xC11C; AMPA &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4;-&#xC911;&#xC7AC; &#xCE7C;&#xC298; &#xD56D;&#xBAA9;&#xC758; &#xAE09;&#xC18D; &#xD55C; &#xAC10;&#xC18C;&#xB97C; &#xC720;&#xB3C4;: neurodegeneration &#xAD00;&#xB828;&#xC131;.

Tanto la subunidad del receptor alpha-amino-3-hydroxyl-5-methyl-4-isoxazole-propionate (AMPAR) GluR2, que regula la excitotoxicidad y la citoquinas inflamatorias tumor necrosis factor alfa (TNFalpha) han sido implicados en la vulnerabilidad de la neurona motora de la esclerosis lateral amiotr&oacute;fica/enfermedad de la neurona. TNFalpha se ha divulgado para aumentar la expresi&oacute;n superficial de la c&eacute;lula de subunidades AMPAR incrementar fuerza sin&aacute;ptica y mejorar la excitotoxicidad, pero si este mecanismo se produce en las neuronas de motores es desconocido. Utilizamos cultivos primarios de neuronas de motor de rat&oacute;n y las neuronas corticales para examinar la interacci&oacute;n entre la activaci&oacute;n del receptor TNFalpha, disponibilidad de GluR2, entrada de calcio mediada por AMPAR y susceptibilidad a la excitotoxicidad. Corto de la exposici&oacute;n a una concentraci&oacute;n fisiol&oacute;gicamente relevante de TNFalpha (10 ng/mL, 15 min) provoc&oacute; una marcada redistribuci&oacute;n de GluR1 y GluR2 a la superficie de la c&eacute;lula seg&uacute;n biotinilaci&oacute;n superficie celular e inmunofluorescencia. Usando fura-2-acetoxymethyl ester microfluorimetry, demostramos que la exposici&oacute;n a TNFalpha provocado una reducci&oacute;n r&aacute;pida de la amplitud del pico de entrada de calcio mediada por AMPA cinasa PI3 y p38 quinasa forma dependiente, consistente con la creciente inserci&oacute;n de AMPAR que contienen GluR2 en la membrana plasm&aacute;tica. Esto dio lugar a una protecci&oacute;n de motores neuronas contra la muerte celular inducida por kainato. Por lo tanto, nuestros datos sugieren que TNFalpha act&uacute;a principalmente como un regulador fisiol&oacute;gico de la actividad sin&aacute;ptica en neuronas del motores en lugar de una unidad patol&oacute;gica en la esclerosis lateral amiotr&oacute;fica.

Alfa del factor de necrosis tumoral induce una reducci&oacute;n r&aacute;pida en la entrada de calcio mediada por receptores AMPA en las neuronas de motores mediante el aumento de la expresi&oacute;n superficial de la c&eacute;lula de la subunidad GluR2: relevancia a la neurodegeneraci&oacute;n.

Article	Year
Neuroprotective effects of hesperetin in mouse primary neurones are independent of CREB activation. Neuroscience letters\| PubMed ID: 18467030	2008
Tumour necrosis factor alpha induces rapid reduction in AMPA receptor-mediated calcium entry in motor neurones by increasing cell surface expression of the GluR2 subunit: relevance to neurod... Journal of neurochemistry\| PubMed ID: 20132465	2010

Stephanie Rainey-Smith

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