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Monitoring Cell-autonomous Circadian Clock Rhythms of Gene Expression Using Luciferase Bioluminescence Reporters

In mammals, many aspects of behavior and physiology such as sleep-wake cycles and liver metabolism are regulated by endogenous circadian clocks ...

The University of Memphis

&#x663C;&#x591C;&#x8282;&#x5F8B; (ca.24 &#x5C0F;&#x65F6;&#xFF09; &#x632F;&#x8361;&#x7684;&#x54FA;&#x4E73;&#x52A8;&#x7269;&#x8868;&#x8FBE;&#x7684;&quot;&#x65F6;&#x949F;&#x57FA;&#x56E0;&quot;&#x88AB;&#x53D1;&#x73B0;&#x4E0D;&#x4EC5;&#x5728;&#x89C6;&#x4EA4;&#x53C9;&#x4E0A;&#x6838; (SCN)&#xFF0C;&#x4E2D;&#x592E;&#x7684;&#x663C;&#x591C;&#x8282;&#x5F8B;&#x6027;&#x8D77;&#x640F;&#x5668;&#xFF0C;&#x800C;&#x4E14;&#x8FD8;&#x5728;&#x5916;&#x5468;&#x7EC4;&#x7EC7;&#x4E2D;&#x3002;&#x7136;&#x800C;&#xFF0C;&#x5728;&#x6052;&#x5B9A;&#x6761;&#x4EF6;&#x4E0B;&#x4F53;&#x5916;&#xFF0C;&#x8282;&#x594F;&#x7684;&#x5916;&#x5468;&#x7EC4;&#x7EC7;&#x5916;&#x690D;&#x4F53;&#xFF0C;&#x6216;&#x6C38;&#x751F;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6F6E;&#x6E7F;&#xFF0C;&#x90E8;&#x5206;&#x6216;&#x5B8C;&#x5168;&#x3002;&#x8FD9;&#x662F;&#x5426;&#x53CD;&#x6620;&#x5916;&#x5468;&#x8840;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7EF4;&#x6301;&#x7684;&#x8282;&#x594F;&#xFF0C;&#x968F;&#x7740; SCN &#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x53EF;&#x4EE5;&#xFF0C;&#x4E0D;&#x80FD;&#x6216;&#x635F;&#x5931;&#x7684;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x4E4B;&#x95F4;&#x662F;&#x540C;&#x6B65;&#x6027;&#x7684;&#x672A;&#x77E5;&#x7684;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x4F7F;&#x7528; Bmal1::luc &#x8D28;&#x7C92;&#x548C;&#x8131;&#x79BB; mPer2(Luciferase-SV40) &#x6572;&#x95E8;&#x5C0F;&#x9F20;&#x6210;&#x7EA4;&#x7EF4;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8F6C;&#x67D3;&#x5927;&#x9F20; 1 &#x6210;&#x7EA4;&#x7EF4;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x751F;&#x7269;&#x53D1;&#x5149;&#x6210;&#x50CF;&#xFF0C;&#x76D1;&#x6D4B;&#x5355;&#x4E2A;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x8282;&#x5F8B;&#x65F6;&#x949F;&#x57FA;&#x56E0;&#x8868;&#x8FBE;&#x4E3A; 1-2 &#x5468;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x53D1;&#x73B0;&#x5355;&#x6210;&#x7EA4;&#x7EF4;&#x7EC6;&#x80DE;&#x53EF;&#x4EE5;&#x4E0E;&#x4E0D;&#x53D7;&#x51CF;&#x635F;&#x7684;&#x632F;&#x5E45;&#x548C;&#x591A;&#x6837;&#x7684;&#x663C;&#x591C;&#x8282;&#x5F8B;&#x5468;&#x671F;&#x632F;&#x8361;&#x6709;&#x529B;&#x7684;&#x72EC;&#x7ACB;&#x3002;&#x7EC6;&#x80DE;&#x88AB;&#x90E8;&#x5206;&#x540C;&#x6B65;&#x7684;&#x4E2D;&#x671F;&#x53D8;&#x5316;&#x5728;&#x5F00;&#x59CB;&#x4E00;&#x9879;&#x5B9E;&#x9A8C;&#xFF0C;&#x4F46;&#x5185;&#x5728;&#x7684;&#x4E0D;&#x540C;&#x65F6;&#x671F;&#xFF0C;&#x7531;&#x4E8E;&#x5176;&#x9636;&#x6BB5;&#x6210;&#x4E3A;&#x968F;&#x673A;&#x5206;&#x5E03;&#x51E0;&#x5929;&#x540E;&#x3002;&#x5BC6;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x5728;&#x540C;&#x4E00;&#x6587;&#x5316;&#x4E2D;&#x7684;&#x5E76;&#x6CA1;&#x6709;&#x7C7B;&#x4F3C;&#x7684;&#x9636;&#x6BB5;&#xFF0C;&#x8FD9;&#x610F;&#x5473;&#x7740;&#x7F3A;&#x4E4F;&#x4E4B;&#x95F4;&#x7684;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x7684;&#x529F;&#x80FD;&#x8026;&#x5408;&#x3002;&#x56E0;&#x6B64;&#xFF0C;&#x50CF; SCN &#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#xFF0C;&#x5355;&#x6210;&#x7EA4;&#x7EF4;&#x7EC6;&#x80DE;&#x53EF;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x72EC;&#x7ACB;&#x7684;&#x663C;&#x591C;&#x8282;&#x5F8B;&#x632F;&#x8361;&#x5668; &#xFF1B;&#x7136;&#x800C;&#xFF0C;&#x7F3A;&#x4E4F;&#x6E38;&#x79BB;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x57F9;&#x517B;&#x7269;&#x4E2D;&#x7684;&#x8026;&#x5408;&#x632F;&#x8361;&#x5668;&#x5BFC;&#x81F4;&#x635F;&#x5931;&#x7684;&#x5404;&#x4E2A;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x4E4B;&#x95F4;&#x7684;&#x534F;&#x8C03;&#x6027;&#x548C;&#x963B;&#x5C3C;&#x7684;&#x4EBA;&#x53E3;&#x4E00;&#x7EA7;&#x7684;&#x5408;&#x594F;&#x8282;&#x594F;&#x3002;

&#x4E2A;&#x522B;&#x7684;&#x6210;&#x7EA4;&#x7EF4;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x751F;&#x7269;&#x53D1;&#x5149;&#x6210;&#x50CF;&#x663E;&#x793A;&#x6301;&#x4E45;&#x6027;&#x3001; &#x72EC;&#x7ACB;&#x5206;&#x9636;&#x6BB5;&#x8282;&#x5F8B;&#x65F6;&#x949F;&#x57FA;&#x56E0;&#x7684;&#x8868;&#x8FBE;&#x3002;

Circadian (ca. 24 hr) oscillations in expression of mammalian "clock genes" are found not only in the suprachiasmatic nucleus (SCN), the central circadian pacemaker, but also in peripheral tissues. Under constant conditions in vitro, however, rhythms of peripheral tissue explants or immortalized cells damp partially or completely. It is unknown whether this reflects an inability of peripheral cells to sustain rhythms, as SCN neurons can, or a loss of synchrony among cells. Using bioluminescence imaging of Rat-1 fibroblasts transfected with a Bmal1::luc plasmid and primary fibroblasts dissociated from mPer2(Luciferase-SV40) knockin mice, we monitored single-cell circadian rhythms of clock gene expression for 1-2 weeks. We found that single fibroblasts can oscillate robustly and independently with undiminished amplitude and diverse circadian periods. Cells were partially synchronized by medium changes at the start of an experiment, but due to different intrinsic periods, their phases became randomly distributed after several days. Closely spaced cells in the same culture did not have similar phases, implying a lack of functional coupling among cells. Thus, like SCN neurons, single fibroblasts can function as independent circadian oscillators; however, lack of oscillator coupling in dissociated cell cultures leads to a loss of synchrony among individual cells and damping of the ensemble rhythm at the population level.

Bioluminescence imaging of individual fibroblasts reveals persistent, independently phased circadian rhythms of clock gene expression.

Oscillations circadien (env. 24 h) dans l&#39;expression de mammif&egrave;res &laquo; horloge g&egrave;nes &raquo; se retrouvent non seulement dans le noyau suprachiasmatique (SCN), le pacemaker circadien central, mais aussi dans les tissus p&eacute;riph&eacute;riques. Toutefois, dans des conditions constantes in vitro, rythmes des tissus p&eacute;riph&eacute;riques explants ou immortalis&eacute; les cellules humides partiellement ou compl&egrave;tement. On ne sait pas si cela traduit l&#39;incapacit&eacute; des cellules p&eacute;riph&eacute;riques pour soutenir les rythmes, que peuvent de neurones SCN, ou une perte de synchronisme entre les cellules. &Agrave; l&#39;aide d&#39;imagerie de la bioluminescence des fibroblastes de Rat-1 transfect&eacute;es avec un plasmide Bmal1::luc et des fibroblastes primaires dissoci&eacute;es mPer2(Luciferase-SV40) knockin souris, nous avons suivi unicellulaire circadien de l&#39;expression g&eacute;nique horloge pendant 1-2 semaines. Nous avons trouv&eacute; que fibroblastes uniques peuvent osciller solidement et en toute ind&eacute;pendance avec amplitude non diminu&eacute;e et diverses p&eacute;riodes circadiennes. Les cellules ont &eacute;t&eacute; partiellement synchronis&eacute;s par modifications moyennes au d&eacute;but d&#39;une exp&eacute;rience, mais en raison des diff&eacute;rentes p&eacute;riodes intrins&egrave;ques, les stades sont devenus distribu&eacute;es au hasard apr&egrave;s plusieurs jours. Rapproch&eacute;es des cellules dans la m&ecirc;me culture n&#39;avaient pas de phases semblables, ce qui implique une absence de couplage fonctionnel entre les cellules. Ainsi, comme les neurones de la SCN, fibroblastes uniques peuvent fonctionner comme des oscillateurs circadiens ind&eacute;pendants ; Cependant, manque d&#39;oscillateur dans les cultures de cellules dissoci&eacute;es de couplage conduit &agrave; une perte de synchronisme entre les cellules individuelles et l&#39;amortissement du rythme ensemble au niveau des populations.

Imagerie de la bioluminescence des fibroblastes individuels r&eacute;v&egrave;le persistants, ind&eacute;pendamment par phases des rythmes circadiens de l&#39;expression g&eacute;nique horloge.

Circadian (ca. 24 h) Schwingungen im Ausdruck von S&auml;ugetier-&quot;Uhren-Gene&quot; gefunden werden, nicht nur im gefundenes Kern (SCN), der zentralen zirkadianen Schrittmacher, sondern auch in peripheren Geweben. Unter konstanten Bedingungen in-vitro jedoch Rhythmen der peripheren Gewebe explants oder Zellen feuchten verewigt, ganz oder teilweise. Es ist nicht bekannt, ob dies spiegelt die Unf&auml;higkeit der peripheren Zellen, Rhythmen, aufrechtzuerhalten, wie SCN Neuronen k&ouml;nnen oder bei Verlust Synchronizit&auml;t zwischen den Zellen. Mit Biolumineszenz Bildgebung der Ratte-1 Fibroblasten transfected mit einem Bmal1::luc-Plasmid und prim&auml;re Fibroblasten distanzierte von mPer2(Luciferase-SV40) knockin M&auml;use, verfolgten wir einzellige Tagesrhythmus der Uhr-Genexpression f&uuml;r 1-2 Wochen. Wir fanden, dass einzelne Fibroblasten robust und unabh&auml;ngig mit unverminderter Amplitude und diverse circadian Perioden oszillieren k&ouml;nnen. Zellen wurden teilweise durch mittlere Ver&auml;nderungen zu Beginn eines Experiments synchronisiert, aber wegen systeminterne Epochen, ihre Phasen wurde nach dem Zufallsprinzip verteilt nach mehreren Tagen. Eng beieinander Zellen in der gleichen Kultur habe nicht &auml;hnliche Phasen, was bedeutet mangelnde funktionale Verbindung zwischen den Zellen. Somit k&ouml;nnen wie SCN Neuronen, einzelne Fibroblasten als unabh&auml;ngige circadiane Oszillatoren eingesetzt werden; mangelnde Oszillator Kopplung in getrennten Zellkulturen f&uuml;hrt zu einem Verlust der Synchronit&auml;t zwischen den einzelnen Zellen und die D&auml;mpfung der Ensemble Rhythmus auf Bev&ouml;lkerungsebene.

Biolumineszenz Bildgebung der einzelnen Fibroblasten enth&uuml;llt hartn&auml;ckig, selbst&auml;ndig schrittweise Tagesrhythmus der Uhr-Genexpression.

Circadiano (ca. 24 hr) oscillazioni nell&#39;espressione di mammiferi &quot;orologio di geni&quot; si trovata nel nucleo soprachiasmatico (SCN), il pacemaker circadiano centrale, ma anche nei tessuti periferici. In condizioni di costante in vitro, tuttavia, ritmi del tessuto periferico explants o immortalato celle umide parzialmente o completamente. Non &egrave; noto se questo riflette l&#39;incapacit&agrave; delle cellule periferiche a sostenere ritmi, come i neuroni ANK possono, o una perdita di sincronia tra le cellule. Utilizzando immagini di bioluminescenza dei fibroblasti di ratto-1 transfected con un plasmide Bmal1::luc e fibroblasti primari dissociati da mPer2(Luciferase-SV40) knockin topi, abbiamo monitorato ritmi circadiani cella singola di espressione del gene dell&#39;orologio per 1-2 settimane. Abbiamo trovato che fibroblasti singoli possono oscillare con fermezza e indipendentemente con ampiezza intatta e diversi periodi circadiani. Cellule sono state parzialmente sincronizzate dai cambiamenti medi all&#39;inizio di un esperimento, ma a causa di diversi periodi di intrinseci loro fasi divennero distribuiti casualmente dopo diversi giorni. Cellule strettamente spaziate nella cultura stessa non hanno avuto fasi simili, che implica una mancanza di accoppiamento funzionale tra cellule. Cos&igrave;, come i neuroni SCN, fibroblasti singoli possono funzionare come oscillatori circadiani indipendenti; Tuttavia, la mancanza di oscillatore di accoppiamento in colture di cellule dissociate porta a una perdita di sincronia tra le singole celle e smorzamento del ritmo ensemble a livello della popolazione.

Imaging di bioluminescenza dei fibroblasti individuali rivela persistenti, indipendentemente graduali ritmi circadiani di espressione del gene dell&#39;orologio.

&#x5F0F;&#x54FA;&#x4E73;&#x985E;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x30B5;&#x30FC;&#x30AB;&#x30C7;&#x30A3;&#x30A2;&#x30F3; (ca&#x3002; 24 hr) &#x632F;&#x52D5;&quot;&#x6642;&#x8A08;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x300D;&#x304C;&#x898B;&#x3064;&#x304B;&#x3063;&#x305F;&#x8996;&#x4EA4;&#x53C9;&#x4E0A;&#x6838; &#xFF08;SCN &#x306E;&#xFF09; &#x4E2D;&#x592E;&#x306E;&#x30B5;&#x30FC;&#x30AB;&#x30C7;&#x30A3;&#x30A2;&#x30F3;&#x30DA;&#x30FC;&#x30B9;&#x30E1;&#x30FC;&#x30AB;&#x306E;&#x307F;&#x306A;&#x3089;&#x305A;&#x3001;&#x672B;&#x68A2;&#x7D44;&#x7E54;&#x3002;In vitro &#x3067;&#x4E00;&#x5B9A;&#x306E;&#x6761;&#x4EF6;&#x4E0B;&#x3067;&#x305F;&#x3060;&#x3057;&#x3001;&#x672B;&#x68A2;&#x7D44;&#x7E54;&#x306E;&#x30EA;&#x30BA;&#x30E0;&#x690D;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x90E8;&#x5206;&#x7684;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x5B8C;&#x5168;&#x306B;&#x6E7F;&#x3063;&#x305F;&#x7D30;&#x80DE;&#x4E0D;&#x6B7B;&#x5316;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x306E; SCN &#x30CB;&#x30E5;&#x30FC;&#x30ED;&#x30F3;&#x3092;&#x53EF;&#x80FD;&#x306A;&#x9650;&#x308A;&#x306E;&#x30EA;&#x30BA;&#x30E0;&#x3092;&#x7DAD;&#x6301;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x5468;&#x8FBA;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x3067;&#x304D;&#x306A;&#x3044;&#x3053;&#x3068;&#x3001;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x30BB;&#x30EB;&#x9593;&#x3067;&#x306E;&#x540C;&#x671F;&#x306E;&#x640D;&#x5931;&#x3092;&#x53CD;&#x6620;&#x3057;&#x3066;&#x304B;&#x3069;&#x3046;&#x304B;&#x306F;&#x4E0D;&#x660E;&#x3067;&#x3059;&#x3002;Bmal1::luc &#x30D7;&#x30E9;&#x30B9;&#x30DF;&#x30C9;&#x3068;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9; &#x30CE;&#x30C3;&#x30AD;&#x30F3; mPer2(Luciferase-SV40) &#x304B;&#x3089;&#x89E3;&#x96E2;&#x4E00;&#x6B21;&#x7E4A;&#x7DAD;&#x82BD;&#x7D30;&#x80DE;&#x5C0E;&#x5165;&#x30E9;&#x30C3;&#x30C8; 1 &#x7DDA;&#x7DAD;&#x82BD;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x751F;&#x7269;&#x767A;&#x5149;&#x30A4;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B8;&#x30F3;&#x30B0;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x3001;1 &#x301C; 2 &#x9031;&#x9593;&#x306E;&#x6642;&#x8A08;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x767A;&#x73FE;&#x306E;&#x5358;&#x4E00;&#x7D30;&#x80DE;&#x6982;&#x65E5;&#x30EA;&#x30BA;&#x30E0;&#x3092;&#x76E3;&#x8996;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x6211;&#x3005; &#x306F;&#x3001;&#x5358;&#x4E00;&#x306E;&#x7DDA;&#x7DAD;&#x82BD;&#x7D30;&#x80DE;&#x9811;&#x5065;&#x304B;&#x3064;&#x72EC;&#x7ACB;&#x3057;&#x3066;&#x8870;&#x3048;&#x3066;&#x3044;&#x306A;&#x3044;&#x632F;&#x5E45;&#x3068;&#x591A;&#x69D8;&#x306A;&#x6982;&#x65E5;&#x671F;&#x9593;&#x3067;&#x767A;&#x632F;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x767A;&#x898B;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x7D30;&#x80DE;&#x306F;&#x3001;&#x5B9F;&#x9A13;&#x306E;&#x958B;&#x59CB;&#x6642;&#x306B;&#x5A92;&#x4F53;&#x306E;&#x5909;&#x5316;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x90E8;&#x5206;&#x7684;&#x306B;&#x540C;&#x671F;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x304C;&#x3001;&#x5225;&#x306E;&#x672C;&#x8CEA;&#x7684;&#x306A;&#x671F;&#x9593;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x5F7C;&#x3089;&#x306E;&#x6BB5;&#x968E;&#x306F;&#x3001;&#x6570;&#x65E5;&#x5F8C;&#x306B;&#x30E9;&#x30F3;&#x30C0;&#x30E0;&#x306B;&#x5206;&#x6563;&#x3068;&#x306A;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x540C;&#x3058;&#x6587;&#x5316;&#x306E;&#x5BC6;&#x63A5;&#x306B;&#x4E26;&#x3093;&#x3060;&#x30BB;&#x30EB;&#x306F;&#x7D30;&#x80DE;&#x9593;&#x306E;&#x6A5F;&#x80FD;&#x7684;&#x7D50;&#x5408;&#x306E;&#x6B20;&#x5982;&#x3092;&#x610F;&#x5473;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x3088;&#x304F;&#x4F3C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x6BB5;&#x968E;&#x3092;&#x6301;&#x3063;&#x3066;&#x3044;&#x306A;&#x304B;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x3057;&#x305F;&#x304C;&#x3063;&#x3066;&#x3001;SCN &#x30CB;&#x30E5;&#x30FC;&#x30ED;&#x30F3;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306A;&#x5358;&#x4E00;&#x7E4A;&#x7DAD;&#x82BD;&#x7D30;&#x80DE;&#x306F;&#x72EC;&#x7ACB;&#x306E;&#x6982;&#x65E5;&#x30AA;&#x30B7;&#x30EC;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3067;&#x304D;&#x308B;;&#x305F;&#x3060;&#x3057;&#x3001;&#x89E3;&#x96E2;&#x7D30;&#x80DE;&#x57F9;&#x990A;&#x3067;&#x306E;&#x7D50;&#x5408;&#x767A;&#x632F;&#x5668;&#x306E;&#x6B20;&#x5982;&#x306F;&#x3001;&#x500B;&#x3005; &#x306E;&#x30BB;&#x30EB;&#x306E;&#x540C;&#x671F;&#x6027;&#x306E;&#x640D;&#x5931;&#x3068;&#x30A2;&#x30F3;&#x30B5;&#x30F3;&#x30D6;&#x30EB;&#x306E;&#x30EA;&#x30BA;&#x30E0;&#x4EBA;&#x53E3;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x306E;&#x6E1B;&#x8870;&#x306B; &#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x500B;&#x3005; &#x306E;&#x7DDA;&#x7DAD;&#x82BD;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x751F;&#x7269;&#x767A;&#x5149;&#x30A4;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B8;&#x30F3;&#x30B0;&#x6C38;&#x7D9A;&#x3001;&#x72EC;&#x7ACB;&#x3057;&#x3066;&#x6BB5;&#x968E;&#x306E;&#x6982;&#x65E5;&#x30EA;&#x30BA;&#x30E0;&#x6642;&#x8A08;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x767A;&#x73FE;&#x306E;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

Circadian (ca. 24hr) &#xC9C4;&#xB3D9; &#xC2DD; &#xD3EC;&#xC720;&#xB958;&#xC758; suprachiasmatic &#xD575; (SCN) &#xC911;&#xC559; circadian &#xC2EC;&#xC7A5; &#xBC15; &#xB3D9;&#xAE30; &#xBFD0;&#xB9CC; &#xC544;&#xB2C8;&#xB77C; &#xB9D0; &#xCD08; &#xC870;&#xC9C1;&#xC5D0;&#xC11C; &#xB610;&#xD55C; &#xCC3E;&#xC744; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &quot;&#xC2DC;&#xACC4; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&quot;. &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098; &#xC77C;&#xC815; &#xC870;&#xAC74; &#xD558;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC0DD;&#xCCB4; &#xC678;&#xC5D0;&#xC11C;,, &#xC8FC;&#xBCC0; &#xC870;&#xC9C1;&#xC758; &#xB9AC;&#xB4EC; explants &#xB610;&#xB294; &#xBD80;&#xBD84;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xB610;&#xB294; &#xC644;&#xC804;&#xD788; &#xC816;&#xC740; &#xC140; &#xBD88;&#xD6C4;&#xC758; &#xBA85;&#xC791;. SCN &#xC2E0;&#xACBD; &#xC218; &#xC788;&#xB294; &#xB9AC;&#xB4EC;&#xC744; &#xC720;&#xC9C0; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD574; &#xC8FC;&#xBCC0; &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xBB34; &#xB2A5;&#xB825; &#xB610;&#xB294; &#xC140; &#xC0AC;&#xC774;&#xC758; synchrony&#xC758; &#xC190;&#xC2E4; &#xBC18;&#xC601; &#xC5EC;&#xBD80;&#xB294; &#xC54C; &#xC218; &#xC788;&#xB2E4;. Bmal1::luc &#xD50C;&#xB77C;&#xC2A4; &#xBBF8;&#xB4DC;&#xC640; &#xAE30;&#xBCF8; &#xAC8C;&#xC7AC; &#xC950;&#xB97C; &#xCAD3; &#xACE0; Mper2(luciferase-sv40)&#xC5D0;&#xC11C; &#xD574;&#xB9AC; &#xD398; &#xC950; 1 &#xAC8C;&#xC7AC;&#xC758; &#xC0DD;&#xBB3C; &#xBC1C;&#xAD11; &#xC601;&#xC0C1;&#xC5D0; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; 1-2 &#xC8FC; &#xB3D9;&#xC548; &#xC2DC;&#xACC4; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xBC1C;&#xD604;&#xC758; &#xB2E8;&#xC77C; &#xC140; circadian &#xB9AC;&#xB4EC; &#xBAA8;&#xB2C8;&#xD130;&#xB9C1;. &#xB2E8;&#xC77C; &#xAC8C;&#xC7AC; undiminished &#xC9C4;&#xD3ED;&#xACFC; &#xB2E4;&#xC591; &#xD55C; circadian &#xAE30;&#xAC04; &#xACAC;&#xACE0; &#xD558; &#xACE0; &#xB3C5;&#xB9BD;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xC9C4;&#xB3D9; &#xC218;&#xB97C; &#xCC3E;&#xC558;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC138;&#xD3EC;&#xB294; &#xC2E4;&#xD5D8; &#xC2DC;&#xC791; &#xC2DC; &#xB9E4;&#xCCB4; &#xBCC0;&#xACBD;&#xC73C;&#xB85C; &#xBD80;&#xBD84;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xB3D9;&#xAE30;&#xD654; &#xB41C; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xB2E4;&#xB978; &#xB0B4;&#xC7A5; &#xAE30;&#xAC04;&#xC73C;&#xB85C; &#xC778;&#xD574; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC758; &#xB2E8;&#xACC4; &#xBB34;&#xC791;&#xC704;&#xB85C; &#xBA87; &#xC77C; &#xD6C4;&#xC5D0; &#xBC30;&#xD3EC; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;. &#xAC19;&#xC740; &#xBB38;&#xD654;&#xC5D0; &#xBC00;&#xC811; &#xD558; &#xAC8C; &#xAC04;&#xACA9; &#xB454;&#xB41C; &#xC140; &#xC138;&#xD3EC; &#xAC04;&#xC758; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC801; &#xACB0;&#xD569;&#xC758; &#xBD80;&#xC871;&#xC744; &#xC554;&#xC2DC; &#xD558; &#xACE0; &#xBE44;&#xC2B7;&#xD55C; &#xB2E8;&#xACC4; &#xC5C6; &#xC5C8; &#xC5B4; &#xC694;. &#xB530;&#xB77C;&#xC11C;, SCN &#xC2E0;&#xACBD; &#xC138;&#xD3EC; &#xCC98;&#xB7FC; &#xB2E8;&#xC77C; &#xAC8C;&#xC7AC; &#xB3C5;&#xB9BD;&#xC801;&#xC778; circadian &#xBC1C;&#xC9C4;&#xAE30;;&#xC73C;&#xB85C; &#xC791;&#xB3D9;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098;, &#xCC9C;&#xC5F0;&#xB41C; &#xC140; &#xBB38;&#xD654;&#xC5D0; &#xCEE4;&#xD50C;&#xB9C1; &#xD558;&#xB294; &#xBC1C;&#xC9C4;&#xAE30;&#xC758; &#xBD80;&#xC871;&#xC73C;&#xB85C; &#xAC1C;&#xBCC4; &#xC140; &#xC0AC;&#xC774;&#xC758; synchrony &#xC190;&#xC2E4;&#xACFC; &#xC778;&#xAD6C; &#xC218;&#xC900;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC559;&#xC0C1;&#xBE14; &#xB9AC;&#xB4EC;&#xC758; &#xB310;&#xD551; &#xC774;&#xC5B4;&#xC9D1;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xAC1C;&#xBCC4; &#xC12C;&#xC720; &#xC544; &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xC0DD;&#xBB3C; &#xBC1C;&#xAD11; &#xC601;&#xC0C1; &#xC2DC;&#xACC4; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xBC1C;&#xD604;&#xC758; &#xC9C0;&#xC18D;&#xC801;, &#xB3C5;&#xB9BD;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xB2E8;&#xACC4;&#xC801; circadian &#xB9AC;&#xB4EC;&#xC744; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC900;&#xB2E4;.

Circadiano (aprox. 24 horas) las variaciones en la expresi&oacute;n de mam&iacute;feros &quot;genes reloj&quot; se encuentra no s&oacute;lo en el n&uacute;cleo supraquiasm&aacute;tico (SCN), los marcapasos circadianos central, sino tambi&eacute;n en los tejidos perif&eacute;ricos. Sin embargo, bajo condiciones constantes in vitro, ritmos de tejido perif&eacute;rico explantes o inmortalizado c&eacute;lulas h&uacute;medas parcial o totalmente. Se desconoce si esto debe a la incapacidad de las c&eacute;lulas perif&eacute;ricas para mantener ritmos, como las neuronas de la SCN, o una p&eacute;rdida de sincron&iacute;a entre las c&eacute;lulas. Usando la proyecci&oacute;n de imagen de bioluminiscencia de fibroblastos Rat-1 transfectadas con un pl&aacute;smido Bmal1::luc y fibroblastos primarios disociados mPer2(Luciferase-SV40) knockin ratones, supervisamos los ritmos circadianos unicelular de la expresi&oacute;n g&eacute;nica de reloj de 1 a 2 semanas. Encontramos que solo fibroblastos pueden oscilar robusta e independiente con amplitud sin menoscabo y diversos per&iacute;odos circadianos. Las c&eacute;lulas fueron parcialmente sincronizadas por medianos cambios al inicio de un experimento, pero debido a diferentes per&iacute;odos intr&iacute;nsecas, sus fases se convirtieron distribuyeron al azar despu&eacute;s de varios d&iacute;as. C&eacute;lulas espaciadas en la misma cultura no ten&iacute;a fases similares, lo que implica una falta de acoplamiento funcional entre las c&eacute;lulas. As&iacute;, como las neuronas de la SCN, los fibroblastos solos pueden funcionar como osciladores circadianos independientes; sin embargo, falta de acoplamiento en cultivos de c&eacute;lulas disociadas de oscilador conduce a una p&eacute;rdida de sincron&iacute;a entre las c&eacute;lulas individuales y la amortiguaci&oacute;n del ritmo conjunto a nivel de poblaci&oacute;n.

Proyecci&oacute;n de imagen de bioluminiscencia de fibroblastos individuales revela persistentes, independientemente por etapas los ritmos circadianos de la expresi&oacute;n g&eacute;nica de reloj.

Molecular mechanisms of the mammalian circadian clock have been studied primarily by genetic perturbation and behavioral analysis. Here, we used bioluminescence imaging to monitor Per2 gene expression in tissues and cells from clock mutant mice. We discovered that Per1 and Cry1 are required for sustained rhythms in peripheral tissues and cells, and in neurons dissociated from the suprachiasmatic nuclei (SCN). Per2 is also required for sustained rhythms, whereas Cry2 and Per3 deficiencies cause only period length defects. However, oscillator network interactions in the SCN can compensate for Per1 or Cry1 deficiency, preserving sustained rhythmicity in mutant SCN slices and behavior. Thus, behavior does not necessarily reflect cell-autonomous clock phenotypes. Our studies reveal previously unappreciated requirements for Per1, Per2, and Cry1 in sustaining cellular circadian rhythmicity and demonstrate that SCN intercellular coupling is essential not only to synchronize component cellular oscillators but also for robustness against genetic perturbations.

Intercellular coupling confers robustness against mutations in the SCN circadian clock network.

Mecanismos moleculares del reloj circadiano de mam&#xED;feros se han estudiado principalmente por la perturbaci&#xF3;n gen&#xE9;tica y an&#xE1;lisis de comportamiento. En este caso, hemos utilizado im&#xE1;genes de bioluminiscencia para controlar Per2 la expresi&#xF3;n g&#xE9;nica en las c&#xE9;lulas y tejidos procedentes de ratones mutantes Clock. Descubrimos que Per1 y Cry1 son necesarios para ritmos sostenidos en los tejidos perif&#xE9;ricos y c&#xE9;lulas, y en las neuronas disociadas de los n&#xFA;cleos supraquiasm&#xE1;tico (NSQ). Per2 tambi&#xE9;n es necesario para ritmos sostenidos, mientras que Cry2 y PER3 deficiencias causan s&#xF3;lo los defectos de la duraci&#xF3;n del per&#xED;odo. Sin embargo, las interacciones de la red del oscilador en el SCN se pueden compensar o Per1 Cry1 deficiencia, la preservaci&#xF3;n de la ritmicidad sostenido en rodajas SCN mutantes y el comportamiento. Por lo tanto, el comportamiento no refleja necesariamente las c&#xE9;lulas aut&#xF3;nomas fenotipos de reloj. Nuestros estudios revelan requisitos anteriormente menospreciados por Per1, Per2 y Cry1 en el mantenimiento de la ritmicidad circadiana celular y demuestran que el acoplamiento SCN intercelular es esencial no s&#xF3;lo para sincronizar los osciladores de componentes celulares, sino tambi&#xE9;n para la robustez frente a perturbaciones gen&#xE9;ticas.

Desacoplamiento confiere robustez frente a las mutaciones en la red SCN reloj circadiano

&#x54FA;&#x4E73;&#x52A8;&#x7269;&#x751F;&#x7269;&#x949F;&#x7684;&#x5206;&#x5B50;&#x673A;&#x5236;&#x4E3B;&#x8981;&#x662F;&#x7531;&#x9057;&#x4F20;&#x6270;&#x52A8;&#x548C;&#x884C;&#x4E3A;&#x5206;&#x6790;&#x8FDB;&#x884C;&#x4E86;&#x7814;&#x7A76;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x7528;&#x751F;&#x7269;&#x53D1;&#x5149;&#x6210;&#x50CF;&#x76D1;&#x6D4B;&#x7EC4;&#x7EC7;&#x4ECE;&#x65F6;&#x949F;&#x57FA;&#x56E0;&#x7A81;&#x53D8;&#x5C0F;&#x9F20;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E2D;&#x7684; Per2 &#x57FA;&#x56E0;&#x8868;&#x8FBE;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x53D1;&#x73B0;&#x7B2C; 1 &#x548C; Cry1 &#x662F;&#x9700;&#x8981;&#x6301;&#x7EED;&#x7684;&#x8282;&#x594F;&#x5728;&#x5916;&#x56F4;&#x7EC4;&#x7EC7;&#x548C;&#x7EC6;&#x80DE;&#xFF0C;&#x548C;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x8131;&#x79BB;&#x89C6;&#x4EA4;&#x53C9;&#x4E0A;&#x6838; (SCN)&#x3002;Per2 &#x4E5F;&#x662F;&#x9700;&#x8981;&#x6301;&#x7EED;&#x7684;&#x8282;&#x594F;&#xFF0C;&#x800C; Cry2 &#x548C; Per3 &#x7F3A;&#x9677;&#x5BFC;&#x81F4;&#x53EA;&#x6709;&#x671F;&#x95F4;&#x957F;&#x5EA6;&#x7F3A;&#x9677;&#x3002;&#x7136;&#x800C;&#xFF0C;&#x5728; SCN &#x632F;&#x8361;&#x5668;&#x7F51;&#x7EDC;&#x4EA4;&#x4E92;&#x53EF;&#x4EE5;&#x5F25;&#x8865;&#x7B2C; 1 &#x6216; Cry1 &#x4E0D;&#x8DB3;&#x4E4B;&#x5904;&#xFF0C;&#x4FDD;&#x6301;&#x6301;&#x7EED;&#x7684;&#x6027;&#x7A81;&#x53D8; SCN &#x5207;&#x7247;&#x548C;&#x884C;&#x4E3A;&#x3002;&#x56E0;&#x6B64;&#xFF0C;&#x884C;&#x4E3A;&#x5E76;&#x4E0D;&#x4E00;&#x5B9A;&#x53CD;&#x6620;&#x8868;&#x578B;&#x7EC6;&#x80DE;&#x81EA;&#x4E3B;&#x65F6;&#x949F;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x63ED;&#x793A;&#x7B2C; 1&#x3001; Per2 &#x548C; Cry1 &#x4EE5;&#x524D;&#x8D4F;&#x8BC6;&#x7684;&#x8981;&#x6C42;&#x5728;&#x7EF4;&#x6301;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x663C;&#x591C;&#x8282;&#x5F8B;&#x6027;&#xFF0C;&#x5E76;&#x8868;&#x660E; SCN &#x7EC6;&#x80DE;&#x95F4;&#x8026;&#x5408;&#x662F;&#x91CD;&#x8981;&#x7684;&#x4E0D;&#x53EA;&#x662F;&#x540C;&#x6B65;&#x7EC4;&#x4EF6;&#x8702;&#x7A9D;&#x632F;&#x8361;&#x5668;&#x53C8;&#x53EF;&#x7528;&#x4E8E;&#x5BF9;&#x9057;&#x4F20;&#x6270;&#x52A8;&#x7684;&#x9C81;&#x68D2;&#x6027;&#x3002;

&#x7EC6;&#x80DE;&#x95F4;&#x8026;&#x5408;&#x8D4B;&#x4E88;&#x5BF9;&#x7A81;&#x53D8;&#x7684; SCN &#x751F;&#x7269;&#x949F;&#x7F51;&#x7EDC;&#x7684;&#x5065;&#x58EE;&#x6027;&#x3002;

M&#xE9;canismes mol&#xE9;culaires de l&#x26;#39;horloge circadienne chez les mammif&#xE8;res ont &#xE9;t&#xE9; &#xE9;tudi&#xE9;s principalement par des perturbations g&#xE9;n&#xE9;tiques et l&#x26;#39;analyse comportementale. Ici, nous avons utilis&#xE9; l&#x26;#39;imagerie par bioluminescence pour surveiller Per2 expression des g&#xE8;nes dans les tissus et les cellules de souris mutantes d&#x26;#39;horloge. Nous avons d&#xE9;couvert que Per1 et Cry1 sont n&#xE9;cessaires pour les rythmes soutenus dans les tissus p&#xE9;riph&#xE9;riques et les cellules, et dans les neurones dissoci&#xE9;s de l&#x26;#39;noyaux suprachiasmatiques (SCN). Per2 est &#xE9;galement n&#xE9;cessaire pour les rythmes soutenus, tandis que Cry2 et PER3 carences provoquer uniquement les d&#xE9;fauts de dur&#xE9;e de la p&#xE9;riode. Cependant, les interactions r&#xE9;seau oscillateur dans le SCN peut compenser Per1 ou Cry1 carence, la pr&#xE9;servation de la rythmicit&#xE9; soutenue en tranches SCN mutantes et les comportements. Ainsi, le comportement ne refl&#xE8;te pas n&#xE9;cessairement les ph&#xE9;notypes d&#x26;#39;horloge cellulaire autonomes. Nos &#xE9;tudes r&#xE9;v&#xE8;lent des exigences pr&#xE9;c&#xE9;demment m&#xE9;connus pour Per1, Per2, et Cry1 dans le maintien de la rythmicit&#xE9; circadienne et cellulaire de d&#xE9;montrer que le couplage intercellulaire SCN est essentielle non seulement pour synchroniser des composants cellulaires oscillateurs, mais aussi pour la robustesse contre les perturbations g&#xE9;n&#xE9;tiques.

Couplage intercellulaire Conf&#xE8;re Robustesse contre les mutations dans le r&#xE9;seau d&#x26;#39;horloge circadienne SCN

Molekulare Mechanismen der S&auml;ugetier-circadian Clock wurden vor allem durch genetische St&ouml;rung und Verhaltensanalyse untersucht. Hier verwendeten wir Biolumineszenz imaging 2Mio. Genexpression in Geweben und Zellen von Uhr Mutanten M&auml;usen zu &uuml;berwachen. Wir entdeckten, dass Per1 und Cry1 f&uuml;r nachhaltige Rhythmen in peripheren Geweben und Zellen und Neuronen distanzierte von gefundenes Zellkerne (SCN) erforderlich sind. 2Mio. muss auch f&uuml;r nachhaltige Rhythmen, Cry2 und Per3 M&auml;ngel nur Periodenl&auml;nge M&auml;ngel f&uuml;hren. Jedoch k&ouml;nnen Oszillator Netzwerk Interaktionen in der SCN Per1 oder Cry1-Mangel, Erhaltung nachhaltiger Rhythmik in mutant SCN-Scheiben und Verhalten ausgleichen. Verhalten geben daher nicht notwendigerweise Zelle-autonome Uhr Ph&auml;notypen. Unsere Studien zeigen bisher unbeachtet Anforderungen f&uuml;r Per1, 2Mio. und Cry1 bei der Aufrechterhaltung zellul&auml;rer circadiane Rhythmik und demonstrieren, SCN interzellul&auml;re Kupplung unerl&auml;sslich, nicht nur um zellul&auml;re Komponente Oszillatoren sondern auch f&uuml;r die Robustheit gegen genetische St&ouml;rungen zu synchronisieren ist.

Interzellul&auml;re Kupplung verleiht Robustheit gegen Mutationen im SCN circadian Clock Netz.

Meccanismi molecolari dell&#39;orologio circadiano dei mammiferi sono state studiate principalmente da perturbazione genetica e analisi comportamentale. Qui, abbiamo utilizzato la bioluminescenza imaging per monitorare l&#39;espressione genica Per2 in tessuti e cellule da topi mutanti orologio. Abbiamo scoperto che Per1 e Cry1 sono necessari per i ritmi sostenuti nelle cellule e tessuti periferici e nei neuroni dissociati dai nuclei suprachiasmatic (SCN). Per2 &egrave; richiesta anche per i ritmi sostenuti, mentre carenze Cry2 e Per3 causano difetti di lunghezza solo periodo. Tuttavia, le interazioni di rete oscillatore in SCN possono compensare deficit Per1 o Cry1, preservando la ritmicit&agrave; sostenuta nel mutante ANK fette e comportamento. Cos&igrave;, comportamento non riflettono necessariamente fenotipi orologio cellulare-autonomo. I nostri studi dimostrano che accoppiamento intercellulare SCN &egrave; essenziale non solo per sincronizzare oscillatori a componente cellulare ma anche per la robustezza contro le perturbazioni genetiche e rivelano precedentemente incompreso requisiti per Per1, Per2 e Cry1 nel sostenere cellulare ritmicit&agrave; circadiano.

Accoppiamento intercellulare conferisce robustezza contro le mutazioni nella rete ANK orologio circadiano.

&#x54FA;&#x4E73;&#x985E;&#x306E;&#x6982;&#x65E5;&#x6642;&#x8A08;&#x306E;&#x5206;&#x5B50;&#x6A5F;&#x69CB;&#x306F;&#x3001;&#x4E3B;&#x306B;&#x907A;&#x4F1D;&#x7684;&#x6442;&#x52D5;&#x3068;&#x884C;&#x52D5;&#x5206;&#x6790;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x7814;&#x7A76;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x30AF;&#x30ED;&#x30C3;&#x30AF;&#x30DF;&#x30E5;&#x30FC;&#x30BF;&#x30F3;&#x30C8;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x304B;&#x3089;&#x7D44;&#x7E54;&#x3084;&#x7D30;&#x80DE;&#x5185;&#x3067;PER2&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x767A;&#x73FE;&#x3092;&#x76E3;&#x8996;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x751F;&#x7269;&#x767A;&#x5149;&#x30A4;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B8;&#x30F3;&#x30B0;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;PER1&#x3068;Cry1&#x306F;&#x3001;&#x672B;&#x68A2;&#x7D44;&#x7E54;&#x3084;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x6301;&#x7D9A;&#x7684;&#x306A;&#x30EA;&#x30BA;&#x30E0;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x5FC5;&#x8981;&#x3067;&#x3042;&#x308A;&#x3001;&#x8996;&#x4EA4;&#x53C9;&#x4E0A;&#x6838;&#xFF08;SCN&#xFF09;&#x304B;&#x3089;&#x89E3;&#x96E2;&#x3057;&#x305F;&#x30CB;&#x30E5;&#x30FC;&#x30ED;&#x30F3;&#x306B;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x767A;&#x898B;&#x3057;&#x305F;&#x3002; Cry2&#x3068;Per3&#x6B20;&#x9665;&#x304C;&#x552F;&#x4E00;&#x306E;&#x671F;&#x9593;&#x306E;&#x9577;&#x3055;&#x306E;&#x6B20;&#x9665;&#x3092;&#x5F15;&#x304D;&#x8D77;&#x3053;&#x3059;&#x306E;&#x306B;&#x5BFE;&#x3057;&#x3001;PER2&#x306F;&#x307E;&#x305F;&#x3001;&#x6301;&#x7D9A;&#x7684;&#x306A;&#x30EA;&#x30BA;&#x30E0;&#x304C;&#x5FC5;&#x8981;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x3057;&#x304B;&#x3057;&#x3001;SCN&#x306E;&#x767A;&#x632F;&#x5668;&#x30CD;&#x30C3;&#x30C8;&#x30EF;&#x30FC;&#x30AF;&#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x304C;&#x5909;&#x7570;SCN&#x30B9;&#x30E9;&#x30A4;&#x30B9;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x884C;&#x52D5;&#x306E;&#x6301;&#x7D9A;&#x7684;&#x306A;&#x30EA;&#x30BA;&#x30E0;&#x3092;&#x7DAD;&#x6301;&#x3057;&#x305F;&#x307E;&#x307E;&#x3001;PER1&#x3042;&#x308B;&#x3044;&#x306F;Cry1&#x6B20;&#x4E4F;&#x3092;&#x88DC;&#x3046;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3057;&#x305F;&#x304C;&#x3063;&#x3066;&#x3001;&#x52D5;&#x4F5C;&#x306F;&#x3001;&#x5FC5;&#x305A;&#x3057;&#x3082;&#x7D30;&#x80DE;&#x81EA;&#x5F8B;&#x7684;&#x306A;&#x6642;&#x8A08;&#x306E;&#x8868;&#x73FE;&#x578B;&#x3092;&#x53CD;&#x6620;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306E;&#x7814;&#x7A76;&#x306F;&#x3001;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x6982;&#x65E5;&#x30EA;&#x30BA;&#x30E0;&#x3092;&#x7DAD;&#x6301;&#x3059;&#x308B;&#x306B;PER1&#x3001;PER2&#x3001;&#x3068;Cry1&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x4EE5;&#x524D;&#x306B;&#x6B63;&#x3057;&#x304F;&#x8A55;&#x4FA1;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x306A;&#x3044;&#x8981;&#x4EF6;&#x3092;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x3057;&#x3001;&#x305D;&#x306E;SCN&#x7D30;&#x80DE;&#x9593;&#x306E;&#x7D50;&#x5408;&#x304C;&#x306A;&#x304F;&#x3001;&#x907A;&#x4F1D;&#x7684;&#x6442;&#x52D5;&#x306B;&#x5BFE;&#x3059;&#x308B;&#x30ED;&#x30D0;&#x30B9;&#x30C8;&#x6027;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x30B3;&#x30F3;&#x30DD;&#x30FC;&#x30CD;&#x30F3;&#x30C8;&#x3001;&#x643A;&#x5E2F;&#x306E;&#x767A;&#x632F;&#x5668;&#x3092;&#x540C;&#x671F;&#x3055;&#x305B;&#x308B;&#x3060;&#x3051;&#x3067;&#x306A;&#x304F;&#x3001;&#x4E0D;&#x53EF;&#x6B20;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x5B9F;&#x8A3C;&#x3002;

&#x7D30;&#x80DE;&#x9593;&#x30AB;&#x30C3;&#x30D7;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;&#x306F;SCN&#x30B5;&#x30FC;&#x30AB;&#x30C7;&#x30A3;&#x30A2;&#x30F3;&#xB7;&#x30AF;&#x30ED;&#x30C3;&#x30AF;&#xB7;&#x30CD;&#x30C3;&#x30C8;&#x30EF;&#x30FC;&#x30AF;&#x306E;&#x5909;&#x7570;&#x306B;&#x5BFE;&#x3059;&#x308B;&#x30ED;&#x30D0;&#x30B9;&#x30C8;&#x6027;&#x3092;&#x4ED8;&#x4E0E;&#x3059;&#x308B;

&#xD3EC;&#xC720;&#xB958; circadian clock&#xC758; &#xBD84;&#xC790; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;&#xC740; &#xC8FC;&#xB85C; &#xC720;&#xC804; &#xC12D; &#xB3D9; &#xBC0F; &#xD589;&#xB3D9; &#xBD84;&#xC11D; &#xD558; &#xC5EC; &#xACF5;&#xBD80; &#xD588;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC5EC;&#xAE30;&#xC5D0;&#xC11C;, &#xC870;&#xC9C1; &#xBC0F; &#xC2DC;&#xACC4; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xC0DD;&#xC950;&#xC758; &#xC138;&#xD3EC; Per2 &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xBC1C;&#xD604; &#xBAA8;&#xB2C8;&#xD130;&#xB9C1;&#xC744; &#xC774;&#xBBF8;&#xC9D5; &#xD558;&#xB294; &#xC0DD;&#xBB3C; &#xBC1C;&#xAD11;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD588;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; per1&#xC640; cry1&#xB294; &#xC9C0;&#xC18D;&#xC801;&#xC778;&#xB41C; &#xB9AC;&#xB4EC; &#xC8FC;&#xBCC0; &#xC870;&#xC9C1;&#xACFC; &#xC138;&#xD3EC;, &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; &#xC2E0;&#xACBD; &#xC138;&#xD3EC; suprachiasmatic &#xD575; (SCN)&#xC5D0;&#xC11C; &#xD574;&#xB9AC; &#xD544;&#xC694; &#xBC1C;&#xACAC; &#xD588;&#xB2E4;. Per2 Cry2 &#xBC0F; Per3 &#xACB0;&#xD568;&#xB9CC; &#xAE30;&#xAC04; &#xAE38;&#xC774; &#xACB0;&#xD568; &#xC6D0;&#xC778; &#xBC18;&#xBA74; &#xC9C0;&#xC18D;&#xC801;&#xC778;&#xB41C; &#xB9AC;&#xB4EC;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC694;&#xAD6C; &#xC774;&#xAE30;&#xB3C4; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098;, &#xBC1C;&#xC9C4;&#xAE30; &#xB124;&#xD2B8;&#xC6CC;&#xD06C; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC740; SCN&#xC5D0; Per1 &#xB610;&#xB294; Cry1 &#xACB0;&#xD54D;, &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; SCN &#xC2AC;&#xB77C;&#xC774;&#xC2A4;&#xC640; &#xD589;&#xB3D9;&#xC5D0; &#xC9C0;&#xC18D;&#xC801;&#xC778;&#xB41C; rhythmicity &#xBCF4;&#xC874;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xBCF4;&#xC644;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB530;&#xB77C;&#xC11C;, &#xB3D9;&#xC791; &#xC140; &#xC790;&#xCE58; &#xC2DC;&#xACC4; &#xACE0;&#xAE30;&#xB97C; &#xBC18;&#xB4DC;&#xC2DC; &#xBC18;&#xC601; &#xD558;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xC5F0;&#xAD6C; &#xC140;&#xB8F0;&#xB7EC; circadian rhythmicity &#xC720;&#xC9C0;&#xC5D0; Per1, Per2, &#xBC0F; Cry1 &#xC774;&#xC804;&#xC5D0; &#xC9C4;&#xAC00; &#xC694;&#xAD6C;&#xB97C; &#xACF5;&#xAC1C; &#xD558; &#xACE0; SCN &#xC138;&#xD3EC; &#xCEE4;&#xD50C;&#xB9C1; &#xB610;&#xD55C; &#xC720;&#xC804; &#xBB3C;&#xACB0;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xACAC;&#xACE0;&#xC131;&#xC744; &#xC704;&#xD574; &#xC140;&#xB8F0;&#xB7EC; &#xBC1C;&#xC9C4;&#xAE30; &#xAD6C;&#xC131; &#xC694;&#xC18C; &#xB3D9;&#xAE30;&#xD654; &#xD560; &#xBFD0;&#xB9CC; &#xC544;&#xB2C8;&#xB77C;&#xC774; &#xD544;&#xC218;&#xC801;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xC138;&#xD3EC; &#xCEE4;&#xD50C;&#xB9C1; SCN circadian &#xD074;&#xB85D; &#xB124;&#xD2B8;&#xC6CC;&#xD06C;&#xC758; &#xBCC0;&#xC774; &#xB300; &#xD55C; &#xACAC;&#xACE0;&#xC131;&#xC744; &#xC218; &#xC5EC; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#x4EBA;&#x4F53;&#x51E0;&#x4E4E;&#x6240;&#x6709;&#x7EC6;&#x80DE;&#x90FD;&#x6709;&#x4E00;&#x4E2A;&#x8D1F;&#x53CD;&#x9988;&#x673A;&#x5236;&#x57FA;&#x4E8E;&#x80DE;&#x5185;&#x53D1;&#x6761;&#x3002;&#x54FA;&#x4E73;&#x52A8;&#x7269;&#x663C;&#x591C;&#x8282;&#x5F8B;&#x62A5;&#x65F6;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x662F;&#x5206;&#x5C42;&#x7684; multi-oscillator &#x7F51;&#x7EDC;&#xFF0C;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x4E2D;&#x592E;&#x5FC3;&#x810F;&#x8D77;&#x640F;&#x5668;&#x7684;&#x89C6;&#x4EA4;&#x53C9;&#x4E0A;&#x6838; (SCN)&#x3002;SCN &#x5230;&#x65E5;&#x5E38;&#x5149;&#x6697;&#x5468;&#x671F;&#x540C;&#x6B65;&#x548C;&#x534F;&#x8C03;&#x8282;&#x594F;&#x751F;&#x7406;&#x548C;&#x884C;&#x4E3A;&#x3002;&#x540C;&#x6B65;&#x5728; SCN &#x548C;&#x7535;&#x5B50;&#x5B66;&#x4E00;&#x7EA7;&#x662F;&#x751F;&#x7269;&#x949F;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x7684;&#x4E00;&#x4E2A;&#x4E3B;&#x8981;&#x7279;&#x70B9;&#x3002;&#x5C24;&#x5176;&#x662F;&#xFF0C;&#x5728; SCN &#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x95F4;&#x8026;&#x5408;&#x540C;&#x6B65;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x632F;&#x8361;&#x5668;&#x548C;&#x8D4B;&#x4E88;&#x5BF9;&#x6270;&#x52A8;&#x7684;&#x9C81;&#x68D2;&#x6027;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x77E5;&#x8BC6;&#x548C;&#x80FD;&#x529B;&#x64CD;&#x7EB5;&#x8282;&#x5F8B;&#x7814;&#x7A76;&#x8FDB;&#x5C55;&#x4F7F;&#x53EF;&#x7528;&#x57FA;&#x4E8E;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x7684;&#x65F6;&#x949F;&#x6A21;&#x578B;&#xFF0C;&#x5B83;&#x4EEC;&#x7F3A;&#x4E4F;&#x5F3A;&#x8026;&#x5408;&#x548C;&#x662F;&#x76EE;&#x6807;&#x53D1;&#x73B0;&#x4E0E;&#x5316;&#x5B66;&#x751F;&#x7269;&#x5B66;&#x7684;&#x7406;&#x60F3;&#x9009;&#x62E9;&#x3002;

&#x54FA;&#x4E73;&#x52A8;&#x7269;&#x663C;&#x591C;&#x8282;&#x5F8B;&#x4FE1;&#x53F7;&#x4F20;&#x8F93;&#x7F51;&#x7EDC;&#x548C;&#x6CBB;&#x7597;&#x9776;&#x70B9;&#x3002;

Virtually all cells in the body have an intracellular clockwork based on a negative feedback mechanism. The circadian timekeeping system in mammals is a hierarchical multi-oscillator network, with the suprachiasmatic nuclei (SCN) acting as the central pacemaker. The SCN synchronizes to daily light-dark cycles and coordinates rhythmic physiology and behavior. Synchronization in the SCN and at the organismal level is a key feature of the circadian clock system. In particular, intercellular coupling in the SCN synchronizes neuron oscillators and confers robustness against perturbations. Recent advances in our knowledge of and ability to manipulate circadian rhythms make available cell-based clock models, which lack strong coupling and are ideal for target discovery and chemical biology.

Mammalian circadian signaling networks and therapeutic targets.

Presque toutes les cellules du corps ont un mouvement d&#39;horlogerie intracellulaire bas&eacute; sur un m&eacute;canisme de r&eacute;troaction n&eacute;gative. Le syst&egrave;me de chronom&eacute;trage circadienne chez les mammif&egrave;res est un r&eacute;seau multi-oscillator hi&eacute;rarchique, avec les noyaux suprachiasmatiques (SCN) agissant comme le stimulateur central. Le RCS est synchronis&eacute; &agrave; cycle lumi&egrave;re-obscurit&eacute; quotidien et coordonne le comportement et la physiologie rythmique. Synchronisation dans le SCN et au niveau organismique est un &eacute;l&eacute;ment cl&eacute; du syst&egrave;me circadien. En particulier, un couplage intercellulaire dans le SCN synchronise les oscillateurs de neurone et conf&egrave;re robustesse contre les perturbations. Les progr&egrave;s r&eacute;cents dans notre connaissance d&#39;et la possibilit&eacute; de manipuler des rythmes circadiens faire mod&egrave;les d&#39;horloge de base de cellules disponibles, qui manquent de couplage fort et sont id&eacute;ales pour la biologie chimique et de la d&eacute;couverte de cible.

R&eacute;seaux de signalisation circadiennes chez les mammif&egrave;res et les cibles th&eacute;rapeutiques.

Praktisch alle Zellen im K&ouml;rper haben eine intrazellul&auml;re Uhrwerk, basierend auf einen negativen Feedback-Mechanismus. Das circadianen Zeitnahme-System bei S&auml;ugetieren ist ein hierarchisches multi-oscillator Netzwerk mit gefundenes Zellkerne (SCN) als der zentralen Schrittmacher. Die SCN synchronisiert mit t&auml;glichen hell-dunkel-Zyklen und koordiniert die rhythmische Physiologie und Verhalten. Die Synchronisierung in der SCN und auf die organische Ebene ist ein wesentliches Merkmal des Systems circadian Clock. Insbesondere interzellul&auml;re Kopplung in der SCN synchronisiert Neuron Oszillatoren und Robustheit gegen Perturbationen verleiht. J&uuml;ngste Fortschritte in unserem Wissen und M&ouml;glichkeiten zur Bearbeitung von Tagesrhythmus machen verf&uuml;gbar zellbasierte Uhr Modelle, das Fehlen starken Kopplung und sind ideal f&uuml;r Ziel-Entdeckung und chemische Biologie.

S&auml;ugetier-circadian Signalling Netzwerke und therapeutische Targets.

Praticamente tutte le cellule del corpo hanno un&#39;orologeria intracellulare basato su un meccanismo di feedback negativo. Il sistema di cronometraggio circadiano nei mammiferi &egrave; una rete gerarchica di multi-oscillator, con i nuclei suprachiasmatic (SCN) che agisce come stimolatore cardiaco centrale. SCN sincronizza a cicli giornalieri di chiaro-scuro e coordina il comportamento e la fisiologia ritmico. Sincronizzazione in SCN e a livello di organismal &egrave; una caratteristica fondamentale del sistema orologio circadiano. In particolare, accoppiamento intercellulare in SCN Sincronizza gli oscillatori neurone e conferisce robustezza contro perturbazioni. I recenti progressi nelle nostre conoscenze e capacit&agrave; di manipolare i ritmi circadiani fare modelli disponibili orologio cell-based, che mancano di accoppiamento forte e sono ideali per la scoperta e chimica biologia di destinazione.

Reti segnalazione circadiani dei mammiferi e bersagli terapeutici.

&#x4F53;&#x5185;&#x306E;&#x4E8B;&#x5B9F;&#x4E0A;&#x3059;&#x3079;&#x3066;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x306F;&#x7D30;&#x80DE;&#x5185;&#x6642;&#x8A08;&#x3058;&#x304B;&#x3051;&#x306E;&#x8CA0;&#x306E;&#x30D5;&#x30A3;&#x30FC;&#x30C9;&#x30D0;&#x30C3;&#x30AF;&#x6A5F;&#x69CB;&#x306B;&#x57FA;&#x3065;&#x304F;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x54FA;&#x4E73;&#x985E;&#x6982;&#x8A08;&#x6642;&#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E0;&#x4E2D;&#x592E;&#x306E;&#x30DA;&#x30FC;&#x30B9; &#x30E1;&#x30FC;&#x30AB;&#x30FC;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x4F5C;&#x7528;&#x3059;&#x308B;&#x8996;&#x4EA4;&#x53C9;&#x4E0A;&#x6838; (SCN)&#x3001;&#x968E;&#x5C64;&#x7684;&#x632F;&#x52D5;&#x4F53;&#x306E;&#x30CD;&#x30C3;&#x30C8;&#x30EF;&#x30FC;&#x30AF;&#x3067;&#x3059;&#x3002;SCN &#x306F;&#x3001;&#x6BCE;&#x65E5;&#x306E;&#x660E;&#x6697;&#x30B5;&#x30A4;&#x30AF;&#x30EB;&#x306B;&#x540C;&#x671F;&#x3057;&#x3001;&#x30EA;&#x30BA;&#x30DF;&#x30AB;&#x30EB;&#x306A;&#x751F;&#x7406;&#x30FB;&#x884C;&#x52D5;&#x5EA7;&#x6A19;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x540C;&#x671F;&#x3068;&#x500B;&#x4F53;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x306E; SCN &#x306E;&#x6982;&#x65E5;&#x6642;&#x8A08;&#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E0;&#x306E;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x7279;&#x306B;&#x3001;SCN &#x7D30;&#x80DE;&#x9593;&#x7D50;&#x5408;&#x30CB;&#x30E5;&#x30FC;&#x30ED;&#x30F3;&#x767A;&#x632F;&#x5668;&#x3092;&#x540C;&#x671F;&#x3057;&#x3001;&#x6442;&#x52D5;&#x306B;&#x5BFE;&#x3059;&#x308B;&#x9811;&#x5065;&#x6027;&#x3092;&#x4ED8;&#x4E0E;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x79C1;&#x305F;&#x3061;&#x306E;&#x77E5;&#x8B58;&#x3068;&#x6982;&#x65E5;&#x30EA;&#x30BA;&#x30E0;&#x3092;&#x64CD;&#x308B;&#x7A0B;&#x5EA6;&#x306E;&#x80FD;&#x529B;&#x306E;&#x6700;&#x8FD1;&#x306E;&#x9032;&#x6B69;&#x306F;&#x5F37;&#x3044;&#x7D50;&#x5408;&#x304C;&#x4E0D;&#x8DB3;&#x3001;&#x30BF;&#x30FC;&#x30B2;&#x30C3;&#x30C8;&#x306E;&#x691C;&#x51FA;&#x3068;&#x5316;&#x5B66;&#x751F;&#x7269;&#x5B66;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x7406;&#x60F3;&#x7684;&#x3067;&#x3059;&#x5229;&#x7528;&#x53EF;&#x80FD;&#x306A;&#x30BB;&#x30EB; &#x30D9;&#x30FC;&#x30B9;&#x306E;&#x6642;&#x8A08;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x3092;&#x4F5C;&#x308B;&#x3002;

&#x54FA;&#x4E73;&#x985E;&#x6982;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0; &#x30CD;&#x30C3;&#x30C8;&#x30EF;&#x30FC;&#x30AF;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x6CBB;&#x7642;&#x4E0A;&#x306E;&#x30BF;&#x30FC;&#x30B2;&#x30C3;&#x30C8;&#x3002;

&#xC2E0;&#xCCB4;&#xC758; &#xAC70;&#xC758; &#xBAA8;&#xB4E0; &#xC138;&#xD3EC;&#xB294; &#xBD80;&#xC815;&#xC801;&#xC778; &#xD53C;&#xB4DC;&#xBC31; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;&#xC5D0; &#xB530;&#xB77C; &#xC138;&#xD3EC;&#xB0B4; &#xC2DC;&#xACC4;. &#xD3EC;&#xC720;&#xB958;&#xC5D0;&#xC11C; circadian &#xD0C0;&#xC784; &#xD0A4; &#xD551; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C;&#xC740; &#xACC4;&#xCE35;&#xC801; multi-oscillator &#xB124;&#xD2B8;&#xC6CC;&#xD06C;, &#xC911;&#xC559; &#xB9E5; &#xBC15; &#xC870;&#xC815;&#xAE30;&#xB85C; &#xC5F0;&#xAE30; suprachiasmatic &#xD575; (SCN). SCN &#xB9E4;&#xC77C; &#xBE5B; &#xC5B4;&#xB450;&#xC6B4; &#xC0AC;&#xC774;&#xD074;&#xC744; &#xB3D9;&#xAE30;&#xD654; &#xD558; &#xACE0; &#xB9AC;&#xB4EC; &#xC0DD;&#xB9AC;&#xD559; &#xBC0F; &#xB3D9;&#xC791;. &#xB3D9;&#xAE30;&#xD654;&#xB294; SCN &#xBC0F; organismal &#xC218;&#xC900; circadian &#xD074;&#xB85D; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C;&#xC758; &#xD575;&#xC2EC; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xD2B9;&#xD788;,&#xB294; SCN &#xC138;&#xD3EC; &#xCEE4;&#xD50C;&#xB9C1; &#xC2E0;&#xACBD; &#xBC1C;&#xC9C4;&#xAE30;&#xB97C; &#xB3D9;&#xAE30;&#xD654; &#xD558; &#xACE0; &#xBB3C;&#xACB0;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xACAC;&#xACE0;&#xC131;&#xC744; &#xC218; &#xC5EC;. &#xCD5C;&#xADFC; &#xBC1C;&#xC804; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xC9C0;&#xC2DD;&#xC758; circadian &#xB9AC;&#xB4EC;&#xC744; &#xC870;&#xC791; &#xD558;&#xB294; &#xB2A5;&#xB825;&#xC5D0; &#xAC15;&#xD55C; &#xCEE4;&#xD50C;&#xB9C1; &#xBD80;&#xC871; &#xD558; &#xACE0; &#xB300;&#xC0C1; &#xAC80;&#xC0C9; &#xBC0F; &#xD654;&#xD559; &#xC0DD;&#xBB3C;&#xD559;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC774;&#xC0C1;&#xC801; &#xC0AC;&#xC6A9;&#xD560; &#xC218; &#xC140; &#xAE30;&#xBC18; &#xD074;&#xB85D; &#xBAA8;&#xB378;&#xC744; &#xD655;&#xC778; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xD3EC;&#xC720;&#xB958; circadian &#xC2E0;&#xD638; &#xB124;&#xD2B8;&#xC6CC;&#xD06C; &#xBC0F; &#xCE58;&#xB8CC; &#xB300;&#xC0C1;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Pr&aacute;cticamente todas las c&eacute;lulas del cuerpo tienen un mecanismo intracelular basado en un mecanismo de retroalimentaci&oacute;n negativa. El sistema de cronometraje circadiano en los mam&iacute;feros es una red jer&aacute;rquica de la multi-oscillator, con los n&uacute;cleos supraquiasm&aacute;ticos (SCN) act&uacute;a como el marcapasos central. El SCN se sincroniza con los ciclos de luz-oscuridad diarios y coordina el comportamiento y la fisiolog&iacute;a r&iacute;tmica. Sincronizaci&oacute;n en el SCN y a nivel de organismo es una caracter&iacute;stica clave del sistema reloj circadiano. En particular, acoplamiento intercelular en el SCN sincroniza osciladores de neurona y confiere robustez contra perturbaciones. Recientes avances en nuestro conocimiento de y habilidad para manipular los ritmos circadianos hacen modelos de reloj celular disponible, que carecen de acoplamiento fuerte y son ideales para la biolog&iacute;a de descubrimiento y qu&iacute;mica de destino.

Redes de se&ntilde;alizaci&oacute;n circadianas mam&iacute;feras y dianas terap&eacute;uticas.

&#x54FA;&#x4E73;&#x52A8;&#x7269;&#x663C;&#x591C;&#x8282;&#x5F8B;&#x53D1;&#x6761;&#x662F;&#x7EC4;&#x6210;&#xFF0C;&#x6BCF;&#x4E2A;&#x6838;&#x5FC3;/&#x54ED;&#x6CE3;&#x53CD;&#x9988;&#x56DE;&#x8DEF;&#x548C;&#x989D;&#x5916;&#x7684;&#x8054;&#x9501;&#x56DE;&#x8DEF;&#x3002;&#x5C24;&#x5176;&#x662F;&#xFF0C;&#x9000;&#x4F11;/&#x51AF;/Bmal1 &#x5FAA;&#x73AF;&#xFF0C;&#x6D3B;&#x5316;&#x5242;&#xFF0C;&#x5426;&#x5219;&#x4F1A;&#x635F;&#x574F;&#x548C; Bmal1 &#x8868;&#x8FBE;&#x7684;&#x8C03;&#x8282;&#x7684;&#x51AF;-&#x96C7;&#x5458;&#x518D;&#x57F9;&#x8BAD;&#x5C40; repressors &#x7EC4;&#x6210;&#x7684;&#x8BA4;&#x4E3A;&#x662F;&quot;&#x7A33;&#x5B9A;&quot;&#x6838;&#x5FC3;&#x65F6;&#x949F;&#x529F;&#x80FD;&#x3002;&#x7136;&#x800C;&#xFF0C;&#x7531;&#x4E8E;&#x529F;&#x80FD;&#x5197;&#x4F59;&#x548C;&#x591A;&#x6548;&#x6027;&#x4F5C;&#x7528;&#x7684;&#x57FA;&#x56E0;&#x7F3A;&#x5931;&#xFF0C;&#x9000;&#x4F11;/&#x51AF;/Bmal1 &#x5FAA;&#x73AF;&#x7684;&#x4F5C;&#x7528;&#x5C1A;&#x672A;&#x51C6;&#x786E;&#x5B9A;&#x4E49;&#x3002;&#x5728;&#x6B64;&#x7814;&#x7A76;&#x4E2D;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x5BA1;&#x67E5;&#x4E86;&#x4F7F;&#x7528;&#x8054;&#x5408;&#x7684;&#x57FA;&#x56E0;&#x6572;&#x9664;&#x548C; RNA &#x5E72;&#x6270;&#x7EC6;&#x80DE;&#x81EA;&#x4E3B;&#x8282;&#x5F8B;&#x632F;&#x8361;&#x548C;&#x8BC1;&#x660E;&#x51AF; ERBalpha &#x548C; beta &#x7248;&#x7684;&#x529F;&#x80FD;&#x5197;&#x4F59;&#x548C;&#x6240;&#x9700;&#x7684;&#x8282;&#x594F; Bmal1 &#x8868;&#x8FBE;&#x3002;&#x76F8;&#x6BD4;&#x4E4B;&#x4E0B;&#xFF0C;&#x586B;&#x62A5; Bmal1 &#x632F;&#x5E45;&#x7684;&#x8D21;&#x732E;&#xFF0C;&#x4F46;&#x90FD; Bmal1 &#x8282;&#x594F;&#x7684;&#x91CD;&#x8981;&#x524D;&#x63D0;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x63D0;&#x4F9B;&#x76F4;&#x63A5;&#x4F53;&#x5185;&#x9057;&#x4F20;&#x8BC1;&#x636E;&#x51AF;-&#x57C3;&#x5C14;&#x5E03;&#x65AF;&#x4E5F;&#x53C2;&#x52A0;&#x7EC4;&#x5408;&#x8868;&#x8FBE;&#x8C03;&#x63A7;&#x7684; Cry1 &#x548C; Rorc&#xFF0C;&#x5BFC;&#x81F4;&#x51AF; erbalpha &#x4E0E;&#x4ED6;&#x4EEC;&#x76F8;&#x5EF6;&#x65F6;&#x3002;&#x56E0;&#x6B64;&#xFF0C;&#x51AF;-&#x57C3;&#x5C14;&#x5E03;&#x65AF;&#x7684;&#x57FA;&#x672C;&#x65F6;&#x949F;&#x673A;&#x5236;&#x4E2D;&#x626E;&#x6F14;&#x66F4;&#x91CD;&#x8981;&#x7684;&#x4F5C;&#x7528;&#xFF0C;&#x6BD4;&#x8BA4;&#x53EF;&#x804C;&#x4E1A;&#x9000;&#x4F11;&#x8BA1;&#x5212;&#x3002;&#x7EC6;&#x80DE;&#x9057;&#x4F20;&#x65B9;&#x6CD5;&#x5141;&#x8BB8;&#x7684;&#x9C81;&#x68D2;&#x6027;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5185;&#x6838;&#x5FC3;&#x65F6;&#x949F;&#x529F;&#x80FD;&#x6D4B;&#x8BD5;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x8868;&#x660E;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7F3A;&#x4E4F;&#x65E2;&#x51AF; ERBalpha &#x548C; beta &#x51FD;&#x6570;&#xFF0C;&#x6216;&#x90A3;&#x4E9B;&#x8868;&#x793A;&#x672C;&#x6784; BMAL1&#xFF0C;&#x4ECD;&#x7136;&#x80FD;&#x591F;&#x751F;&#x6210;&#x548C;&#x7EF4;&#x62A4;&#x6B63;&#x5E38; Per2 &#x8282;&#x5F8B;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x7ED3;&#x679C;&#x56E0;&#x6B64;&#x5F3A;&#x8C03;&#x80DE;&#x5185;&#x65F6;&#x949F;&#x673A;&#x5236;&#x7684;&#x590D;&#x539F;&#x80FD;&#x529B;&#xFF0C;&#x5E76;&#x63D0;&#x4F9B;&#x91CD;&#x8981;&#x4F9D;&#x636E;&#x751F;&#x7269;&#x949F;&#x7684;&#x8F6C;&#x5F55;&#x62D3;&#x6251;&#x7684;&#x89C1;&#x89E3;&#x3002;&#x81EA;&#x4ECE;&#x51AF;-&#x96C7;&#x5458;&#x518D;&#x57F9;&#x8BAD;&#x5C40;&#x529F;&#x80FD;&#x548C; Bmal1 mRNA/&#x86CB;&#x767D;&#x9A91;&#x81EA;&#x884C;&#x8F66;&#x4E0D;&#x5FC5;&#x8981;&#x7684;&#x57FA;&#x672C;&#x65F6;&#x949F;&#x529F;&#x80FD;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x5EFA;&#x8BAE;&#x9000;&#x4F11;/&#x51AF;/Bmal1 &#x5FAA;&#x73AF;&#x548C;&#x5176;&#x6210;&#x5206;&#x7684;&#x4E3B;&#x8981;&#x4F5C;&#x7528;&#x662F;&#x63A7;&#x5236;&#x8282;&#x594F;&#x8F6C;&#x5F55;&#x7684;&#x65F6;&#x949F;&#x8F93;&#x51FA;&#x7684;&#x57FA;&#x56E0;&#x3002;

&#x51AF; ERBalpha &#x548C; beta &#x7248;&#x3001; &#x975E;&#x5FC5;&#x8981;&#x4F5C;&#x7528;&#x4E3A; Bmal1 &#x5FAA;&#x73AF;&#x4E2D;&#x8F6C;&#x5F55;&#x8C03;&#x63A7;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8282;&#x5F8B;&#x7684;&#x5197;&#x4F59;&#x529F;&#x80FD;&#x3002;

The mammalian circadian clockwork is composed of a core PER/CRY feedback loop and additional interlocking loops. In particular, the ROR/REV/Bmal1 loop, consisting of ROR activators and REV-ERB repressors that regulate Bmal1 expression, is thought to "stabilize" core clock function. However, due to functional redundancy and pleiotropic effects of gene deletions, the role of the ROR/REV/Bmal1 loop has not been accurately defined. In this study, we examined cell-autonomous circadian oscillations using combined gene knockout and RNA interference and demonstrated that REV-ERBalpha and beta are functionally redundant and are required for rhythmic Bmal1 expression. In contrast, the RORs contribute to Bmal1 amplitude but are dispensable for Bmal1 rhythm. We provide direct in vivo genetic evidence that the REV-ERBs also participate in combinatorial regulation of Cry1 and Rorc expression, leading to their phase-delay relative to Rev-erbalpha. Thus, the REV-ERBs play a more prominent role than the RORs in the basic clock mechanism. The cellular genetic approach permitted testing of the robustness of the intracellular core clock function. We showed that cells deficient in both REV-ERBalpha and beta function, or those expressing constitutive BMAL1, were still able to generate and maintain normal Per2 rhythmicity. Our findings thus underscore the resilience of the intracellular clock mechanism and provide important insights into the transcriptional topologies underlying the circadian clock. Since REV-ERB function and Bmal1 mRNA/protein cycling are not necessary for basic clock function, we propose that the major role of the ROR/REV/Bmal1 loop and its constituents is to control rhythmic transcription of clock output genes.

Redundant function of REV-ERBalpha and beta and non-essential role for Bmal1 cycling in transcriptional regulation of intracellular circadian rhythms.

L&#39;horloge circadienne chez les mammif&egrave;res est compos&eacute; d&#39;un noyau PER / CRY boucle de r&eacute;troaction et de boucles imbriqu&eacute;es suppl&eacute;mentaires. En particulier, la boucle ROR/REV/Bmal1, consistant en des activateurs de ROR et r&eacute;presseurs REV-ERB qui r&eacute;gulent l&#39;expression Bmal1, est pens&eacute;e pour &laquo; stabiliser &raquo; la fonction horloge. Cependant, en raison de la redondance fonctionnelle et les effets pl&eacute;iotropiques des destructions de g&egrave;ne, le r&ocirc;le de la boucle ROR/REV/Bmal1 n&#39;a pas &eacute;t&eacute; correctement d&eacute;fini. Dans cette &eacute;tude, nous avons examin&eacute; les oscillations circadiennes cellules autonomes &agrave; l&#39;aide de knock-out du g&egrave;ne combin&eacute;e et l&#39;interf&eacute;rence ARN et d&eacute;montr&eacute; que REV-ERBalpha b&ecirc;ta fonctionnellement redondantes et sont n&eacute;cessaires pour l&#39;expression rythmique Bmal1. En revanche, le taux de rendement contribue &agrave; Bmal1 amplitude mais est dispensables pour le rythme Bmal1. Nous fournissons une preuve g&eacute;n&eacute;tique in vivo directe que les REV-ERBs participent &eacute;galement au r&egrave;glement combinatoire d&#39;expression Cry1 et Rorc, conduisant &agrave; leur retard de phase par rapport &agrave; Rev-erbalpha. Ainsi, les REV-ERBs jouent un r&ocirc;le plus important que le taux de rendement dans le m&eacute;canisme de l&#39;horloge de base. L&#39;approche g&eacute;n&eacute;tique cellulaire permis de tester la robustesse de la fonction horloge intracellulaire. Nous avons montr&eacute; que les cellules d&eacute;ficientes en REV-ERBalpha et fonction b&ecirc;ta ou ceux exprimant BMAL1 constitutive, &eacute;taient encore capables de g&eacute;n&eacute;rer et maintenir normale Per2 rythmicit&eacute;. Ainsi, nos r&eacute;sultats soulignent la r&eacute;silience du m&eacute;canisme horloge intracellulaire et fournissent des renseignements importants sur les topologies de transcriptionnelles qui sous-tendent l&#39;horloge circadienne. Depuis la fonction REV-ERB et Bmal1 ARNm/prot&eacute;ine cyclisme ne sont pas n&eacute;cessaires pour la fonction de l&#39;horloge de base, nous proposons que le r&ocirc;le majeur de la boucle ROR/REV/Bmal1 et de ses constituants est de contr&ocirc;ler la transcription rythmique de l&#39;horloge de sortie g&egrave;nes.

Fonction redondante de REV-ERBalpha et b&ecirc;ta et non essentiel r&ocirc;le Bmal1 cyclisme dans la r&eacute;gulation transcriptionnelle d&#39;intracellulaires des rythmes circadiens.

Das S&auml;ugetier-circadiane Uhrwerk besteht aus einem Kern pro / CRY Feedback-Schleife und zus&auml;tzliche Verzahnung Schleifen. Insbesondere ist die ROR/REV/Bmal1-Schleife, bestehend aus ROR Aktivatoren und REV-ERB-Repressoren, die Regeln der Bmal1 Ausdruck, dachte, Kern-Clock-Funktion zu &quot;stabilisieren&quot;. Jedoch wurde aufgrund funktionaler Redundanz und pleiotropen Effekte gen-Deletionen, die Rolle der ROR/REV/Bmal1-Schleife nicht genau definiert. In dieser Studie haben wir gepr&uuml;ft Zelle-autonome circadiane Schwingungen mit kombinierten gen k.o. und RNA-Interferenz und gezeigt, dass die REV-ERBalpha und Beta sind funktional redundant sind f&uuml;r rhythmische Bmal1 Ausdruck erforderlich. Im Gegensatz dazu die RORs tragen zur Bmal1 Amplitude aber sind entbehrlich f&uuml;r Bmal1 Rhythmus. Wir bieten direkten in-vivo genetischen Beweis, dass sich die REV-ERBs kombinatorische Verordnung Cry1 und Rorc Ausdrucksformen, auch an zu ihrer Phase-Verz&ouml;gerung im Vergleich zu Rev-Erbalpha f&uuml;hrt. So spielen die REV-ERBs eine wichtigere Rolle als die RORs in das grundlegende Uhrwerk. Der zellul&auml;re genetische Ansatz gestattet die Robustheit der intrazellul&auml;ren Kern-Clock-Funktion testen. Wir haben gezeigt, dass Zellen einen Mangel an sowohl REV-ERBalpha und Beta-Funktion, oder die konstitutive BMAL1 ausdr&uuml;cken konnten sich immer noch auf generieren und pflegen normalen 2Mio. Rhythmik. Unsere Ergebnisse so unterstreichen die Widerstandsf&auml;higkeit der intrazellul&auml;ren Uhrwerk und wichtige Einblicke in die transkriptionelle Topologien die circadiane Uhr zugrunde. Seit REV-ERB-Funktion und Bmal1 mRNA-Eiwei&szlig; schlagen wir Radfahren sind nicht notwendig f&uuml;r grundlegende Clock-Funktion, die wichtige Rolle der ROR/REV/Bmal1-Schleife und seiner Bestandteile ist, rhythmische Transkription der Uhr zu kontrollieren Ausgabe Gene.

Redundante Funktion des REV-ERBalpha und Beta und unwesentliche Rolle f&uuml;r Bmal1 Veloland transkriptionelle Regulation des intrazellul&auml;ren Tagesrhythmus.

L&#39;orologio circadiano dei mammiferi &egrave; composta da un nucleo PER / grido feedback loop e loop aggiuntivi ad incastro. In particolare, il ciclo ROR/REV/Bmal1, costituito da ROR attivatori e repressori REV-ERB che regolano l&#39;espressione Bmal1, &egrave; pensato per &quot;stabilizzare&quot; la funzione dell&#39;orologio di nucleo. Tuttavia, a causa della ridondanza funzionale e gli effetti pleiotropici delle delezioni del gene, il ruolo del ciclo ROR/REV/Bmal1 non &egrave; stato accuratamente definito. In questo studio, abbiamo esaminato oscillazioni circadiane cella autonome utilizzando combinato gene knockout e interferenza del RNA e ha dimostrato che REV-ERBalpha e beta sono funzionalmente ridondanti e sono necessari per l&#39;espressione Bmal1 ritmica. Al contrario, l&#39;arrotondamento contribuisce a Bmal1 ampiezza ma &egrave; dispensabili per Bmal1 ritmo. Forniamo prove genetiche dirette in vivo che i REV-erbe anche partecipano regolamento combinatoria di Cry1 e Rorc expression, portando a loro ritardo di fase rispetto alla Rev-erbalpha. Cos&igrave;, la REV-erbe giocano un ruolo pi&ugrave; importante dell&#39;arrotondamento nel meccanismo di base dell&#39;orologio. L&#39;approccio genetico cellulare consentito test di robustezza della funzione orologio core intracellulare. Abbiamo dimostrato che le cellule carenti di REV-ERBalpha e funzione beta sia quelli che esprimono BMAL1 costitutiva, erano ancora in grado di generare e mantenere la normale ritmicit&agrave; Per2. I nostri risultati cos&igrave; sottolineano la resilienza del meccanismo dell&#39;orologio intracellulare e forniscono importanti intuizioni le topologie transcriptional sottostante l&#39;orologio circadiano. Poich&eacute; la funzione REV-ERB e proteina Bmal1 mRNA/ciclismo non sono necessari per la funzione di base dell&#39;orologio, proponiamo che il ruolo principale di ROR/REV/Bmal1 loop e dei suoi costituenti &egrave; a trascrizione ritmica dell&#39;orologio di controllo uscita geni.

Funzione ridondante di REV-ERBalpha e beta e non essenziale ruolo per Bmal1 ciclismo nella regolazione trascrizionale dei ritmi circadiani intracellulari.

&#x54FA;&#x4E73;&#x985E;&#x6982;&#x6642;&#x8A08;&#x3058;&#x304B;&#x3051;&#x3042;&#x305F;&#x308A;&#x306E;&#x30B3;&#x30A2;&#x3067;&#x69CB;&#x6210;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;/&#x30D5;&#x30A3;&#x30FC;&#x30C9; &#x30D0;&#x30C3;&#x30AF; &#x30EB;&#x30FC;&#x30D7;&#x3068;&#x30EB;&#x30FC;&#x30D7;&#x306E;&#x8FFD;&#x52A0;&#x9023;&#x7D50;&#x6CE3;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x7279;&#x306B;&#x3001;ROR &#x30A2;&#x30AF;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D9;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x3068; Bmal1 &#x306E;&#x767A;&#x73FE;&#x3092;&#x8ABF;&#x7BC0; REV ERB &#x30EA;&#x30D7;&#x30EC;&#x30C3;&#x30B5;&#x30FC;&#x304B;&#x3089;&#x6210;&#x308B; ROR/REV/Bmal1 &#x306E;&#x30EB;&#x30FC;&#x30D7;&#x306F;&#x3001;&quot;&#x30B3;&#x30A2;&#x6642;&#x8A08;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3092;&#x5B89;&#x5B9A;&#x3055;&#x305B;&#x308B;&#x306B;&#x306F;&quot;&#x3068;&#x8003;&#x3048;&#x3089;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x305F;&#x3060;&#x3057;&#x3001;&#x6A5F;&#x80FD;&#x5197;&#x9577;&#x3068;&#x591A;&#x9762;&#x52B9;&#x679C;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x524A;&#x9664;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x3001;ROR/REV/Bmal1 &#x30EB;&#x30FC;&#x30D7;&#x306E;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x6B63;&#x78BA;&#x306B;&#x5B9A;&#x7FA9;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3002;&#x672C;&#x7814;&#x7A76;&#x3067;&#x306F;&#x8907;&#x5408;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x30CE;&#x30C3;&#x30AF;&#x30A2;&#x30A6;&#x30C8;&#x3068; RNA &#x5E72;&#x6E09;&#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x305F;&#x30BB;&#x30EB;&#x81EA;&#x5F8B;&#x306E;&#x6982;&#x65E5;&#x632F;&#x52D5;&#x306E;&#x691C;&#x8A0E;&#x3057;&#x3001;REV ERBalpha &#x3068;&#x30D9;&#x30FC;&#x30BF;&#x6A5F;&#x80FD;&#x7684;&#x5197;&#x9577;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3057;&#x3001;&#x30EA;&#x30BA;&#x30DF;&#x30AB;&#x30EB;&#x306A; Bmal1 &#x5F0F;&#x3092;&#x5FC5;&#x8981;&#x306A;&#x5B9F;&#x8A3C;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x5BFE;&#x7167;&#x7684;&#x306B;&#x3001;RORs &#x304C; Bmal1 &#x632F;&#x5E45;&#x306B;&#x8CA2;&#x732E; Bmal1 &#x30EA;&#x30BA;&#x30E0;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x4E0D;&#x53EF;&#x6B20;&#x3067;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;REV Erb &#x307E;&#x305F; Cry1 &#x3068; Rorc &#x5F0F;&#x306E;&#x7D44;&#x5408;&#x305B;&#x306E;&#x898F;&#x5236;&#x3067;&#x305D;&#x306E; Rev erbalpha &#x76F8;&#x5BFE;&#x4F4D;&#x76F8;&#x9045;&#x5EF6;&#x306B;&#x3064;&#x306A;&#x304C;&#x308B;&#x53C2;&#x52A0;&#x3068;&#x76F4;&#x63A5;&#x306E; in vivo &#x907A;&#x4F1D;&#x5B66;&#x7684;&#x8A3C;&#x62E0;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3057;&#x305F;&#x304C;&#x3063;&#x3066;&#x3001;REV Erb &#x306F;&#x57FA;&#x672C;&#x7684;&#x306A;&#x6642;&#x8A08;&#x306E;&#x30E1;&#x30AB;&#x30CB;&#x30BA;&#x30E0;&#x3067;&#x3001;RORs &#x3088;&#x308A;&#x3082;&#x3088;&#x308A;&#x9855;&#x8457;&#x306A;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x679C;&#x305F;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x7D30;&#x80DE;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B66;&#x7684;&#x30A2;&#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30C1;&#x306F;&#x3001;&#x7D30;&#x80DE;&#x5185;&#x306E;&#x30B3;&#x30A2;&#x6642;&#x8A08;&#x6A5F;&#x80FD;&#x306E;&#x5805;&#x7262;&#x6027;&#x3092;&#x30C6;&#x30B9;&#x30C8;&#x8A31;&#x53EF;&#x3002;REV ERBalpha &#x3068;&#x30D9;&#x30FC;&#x30BF;&#x95A2;&#x6570;&#x306E;&#x4E21;&#x65B9;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x305D;&#x306E;&#x305D;&#x308C;&#x3089;&#x69CB;&#x6210; BMAL1 &#x8868;&#x73FE;&#x3067;&#x6B20;&#x640D;&#x7D30;&#x80DE;&#x306F;&#x307E;&#x3060;&#x3092;&#x751F;&#x6210;&#x3057;&#x3001;&#x901A;&#x5E38;&#x306E; Per2 &#x30EA;&#x30BA;&#x30E0;&#x3092;&#x7DAD;&#x6301;&#x3059;&#x308B;&#x306F;&#x3067;&#x304D;&#x305F;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x6211;&#x3005; &#x306E;&#x8ABF;&#x67FB;&#x7D50;&#x679C;&#x306F;&#x3053;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306B;&#x7D30;&#x80DE;&#x6642;&#x8A08;&#x6A5F;&#x69CB;&#x306E;&#x5F3E;&#x529B;&#x6027;&#x3092;&#x5F37;&#x8ABF;&#x3057;&#x3066;&#x6982;&#x65E5;&#x6642;&#x8A08;&#x306E;&#x57FA;&#x790E;&#x3068;&#x306A;&#x308B;&#x8EE2;&#x5199;&#x30C8;&#x30DD;&#x30ED;&#x30B8;&#x306B;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x6D1E;&#x5BDF;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;REV ERB &#x95A2;&#x6570;&#x3068; Bmal1 mRNA/&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x4EE5;&#x6765;&#x30B5;&#x30A4;&#x30AF;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;&#x306E;&#x57FA;&#x672C;&#x7684;&#x306A;&#x6642;&#x8A08;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3092;&#x5FC5;&#x8981;&#x306F;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x79C1;&#x305F;&#x3061;&#x304C;&#x63D0;&#x6848; ROR/REV/Bmal1 &#x30EB;&#x30FC;&#x30D7;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x305D;&#x306E;&#x6210;&#x5206;&#x306E;&#x4E3B;&#x8981;&#x306A;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x6642;&#x8A08;&#x306E;&#x30EA;&#x30BA;&#x30DF;&#x30AB;&#x30EB;&#x306A;&#x8EE2;&#x5199;&#x5236;&#x5FA1;&#x306B;&#x306F;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x3092;&#x51FA;&#x529B;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

REV ERBalpha &#x3068;&#x30D9;&#x30FC;&#x30BF;&#x7248;&#x3068;&#x975E;&#x672C;&#x8CEA;&#x7684;&#x306A;&#x5F79;&#x5272; Bmal1 &#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x5185;&#x306E;&#x6982;&#x65E5;&#x30EA;&#x30BA;&#x30E0;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x8EE2;&#x5199;&#x5236;&#x5FA1;&#x3092;&#x30B5;&#x30A4;&#x30AF;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;&#x306E;&#x5197;&#x9577;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3002;

&#xD3EC;&#xC720;&#xB958; circadian &#xC2DC;&#xACC4;&#xB294; &#xB2F9; &#xD575;&#xC2EC; &#xAD6C;&#xC131;/&#xD53C;&#xB4DC;&#xBC31; &#xB8E8;&#xD504;&#xC640; &#xCD94;&#xAC00; &#xC5F0;&#xB3D9; &#xB8E8;&#xD504; &#xC6B8;. &#xD2B9;&#xD788;, ROR &#xD65C;&#xC131; &#xC81C; &#xBC0F; Bmal1 &#xC2DD; &#xC870;&#xC808; &#xACC4; ERB repressors &#xC774;&#xB8E8;&#xC5B4;&#xC9C4; ROR/&#xB808; &#xBE0C;/Bmal1 &#xB8E8;&#xD504; &quot;&#xC548;&#xC815;&#xD654;&quot; &#xCF54;&#xC5B4; &#xD074;&#xB85D; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC73C;&#xB85C; &#xC0DD;&#xAC01; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098;, &#xAE30;&#xB2A5; &#xC911;&#xBCF5; &#xBC0F; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xC0AD;&#xC81C; &#xB2E4; &#xBA74; &#xBC1C;&#xD604; &#xC131; &#xD6A8;&#xACFC;, ROR/&#xB808; &#xBE0C;/Bmal1 &#xB8E8;&#xD504;&#xC758; &#xC5ED;&#xD560; &#xC815;&#xC758; &#xB418;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC740; &#xC815;&#xD655; &#xD558; &#xAC8C;. &#xC774; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; &#xACB0;&#xD569; &#xD558; &#xC5EC; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xB179;&#xC544;&#xC6C3; &#xBC0F; RNA &#xBC29;&#xD574;&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xC140; &#xC790;&#xCE58; circadian &#xC9C4;&#xB3D9; &#xBC0F; &#xB808; &#xBE0C; ERBalpha &#xBC0F; &#xBCA0;&#xD0C0; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xC911;&#xBCF5; &#xD558; &#xACE0; &#xB9AC;&#xB4EC; Bmal1 &#xC2DD;&#xC5D0; &#xD544;&#xC694;&#xD55C;. &#xBC18;&#xBA74;, Rors&#xB294; Bmal1 &#xC9C4;&#xD3ED; &#xAE30;&#xC5EC; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; Bmal1 &#xB9AC;&#xB4EC;&#xC5D0; &#xBD88;&#xAC00;&#xACB0;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xB808; &#xBE0C; ERBs &#xB610;&#xD55C; &#xCC38;&#xC5EC; cry1&#xACFC; Rorc &#xC2DD;&#xC758; &#xC870;&#xD569; &#xADDC;&#xC815;&#xC5D0; &#xB808; &#xBE0C; erbalpha&#xC5D0; &#xC0C1;&#xB300;&#xC801;&#xC778; &#xC704;&#xC0C1; &#xC9C0;&#xC5F0; &#xB4E4;&#xB85C; &#xC774;&#xC5B4;&#xC9C0;&#xB294; &#xC9C1;&#xC811; in vivo &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xC99D;&#xAC70;&#xB97C; &#xC81C;&#xACF5;. &#xB530;&#xB77C;&#xC11C;, &#xB808; &#xBE0C; ERBs &#xAE30;&#xBCF8; &#xD074;&#xB7ED; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;&#xC5D0;&#xB294; RORs &#xBCF4;&#xB2E4; &#xB354; &#xB208;&#xC5D0; &#xB744;&#xB294; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xD560;. &#xC138;&#xD3EC; &#xC720;&#xC804; &#xC811;&#xADFC; &#xD5C8;&#xC6A9; &#xC138;&#xD3EC;&#xB0B4; &#xCF54;&#xC5B4; &#xD074;&#xB85D; &#xAE30;&#xB2A5; &#xACAC;&#xACE0;&#xC131;&#xC758; &#xD14C;&#xC2A4;&#xD2B8;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xC140; &#xBAA8;&#xB450; &#xB808; &#xBE0C; ERBalpha &#xBC0F; &#xBCA0;&#xD0C0; &#xD568;&#xC218; &#xB610;&#xB294; &#xC81C;&#xC815; BMAL1 &#xD45C;&#xD604; &#xADF8; &#xACB0;&#xD54D; &#xC5EC;&#xC804;&#xD788; &#xC0DD;&#xC131; &#xD558; &#xACE0; &#xC815;&#xC0C1;&#xC801;&#xC778; Per2 rhythmicity &#xC720;&#xC9C0; &#xC218; &#xC788;&#xC5C8;&#xB2E4; &#xBCF4;&#xC600;&#xB2E4;. &#xB530;&#xB77C;&#xC11C; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xC5F0;&#xAD6C; &#xACB0;&#xACFC; &#xC138;&#xD3EC;&#xB0B4; &#xC2DC;&#xACC4; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;&#xC758; &#xD0C4;&#xB825;&#xC131;&#xC744; &#xAC15;&#xC870; &#xD558; &#xACE0; transcriptional &#xD1A0;&#xD3F4;&#xB85C;&#xC9C0; circadian &#xC2DC;&#xACC4;&#xB97C; &#xAE30;&#xBCF8;&#xC73C;&#xB85C; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xD1B5;&#xCC30;&#xB825;&#xC744; &#xC81C;&#xACF5;. &#xC6B0;&#xB9AC; &#xACC4; ERB &#xAE30;&#xB2A5;&#xACFC; Bmal1 mRNA/&#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xBD80;&#xD130; &#xC81C;&#xC548; &#xC0AC;&#xC774;&#xD074;&#xB9C1; &#xAE30;&#xBCF8;&#xC801;&#xC778; &#xC2DC;&#xACC4; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC5D0; &#xD544;&#xC694; &#xD558;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC740; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xB97C; &#xCD9C;&#xB825; ROR/&#xB808; &#xBE0C;/Bmal1 &#xB8E8;&#xD504; &#xBC0F; &#xADF8; &#xC131;&#xBD84;&#xC758; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xC5ED;&#xD560; &#xC2DC;&#xACC4;&#xC758; &#xB9AC;&#xB4EC; &#xC804;&#xC0AC; &#xC81C;&#xC5B4; &#xD558;&#xB294; &#xAC83;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xB808; &#xBE0C; ERBalpha &#xBC0F; &#xBCA0;&#xD0C0;&#xC640; &#xC911;&#xC694; &#xD558;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC740; &#xC5ED;&#xD560; Bmal1 &#xC138;&#xD3EC;&#xB0B4; circadian &#xB9AC;&#xB4EC;&#xC758; transcriptional &#xADDC;&#xC81C;&#xC5D0;&#xC11C;&#xC758; &#xC911;&#xBCF5; &#xAE30;&#xB2A5;.

El reloj circadiano mam&iacute;fero est&aacute; compuesto por un n&uacute;cleo por / llorar circuito de retroalimentaci&oacute;n y loops de enclavamientos adicionales. En particular, el bucle ROR/REV/Bmal1, consistiendo en ROR activadores y represores REV-ERB que regulan la expresi&oacute;n de Bmal1, est&aacute; pensado para &quot;estabilizar&quot; la funci&oacute;n de reloj central. Sin embargo, debido a la redundancia funcional y efectos pleiotr&oacute;picos de deleciones del gen, el papel del bucle ROR/REV/Bmal1 no ha sido en exactamente definido. En este estudio, se analizaron c&eacute;lulas aut&oacute;nomas circadianas oscilaciones con nocaut gen combinado y ARN de interferencia y demostr&oacute; que REV-ERBalpha y beta son funcionalmente redundantes y son necesarias para la expresi&oacute;n de Bmal1 r&iacute;tmica. En contraste, la espe contribuye a Bmal1 amplitud pero es prescindibles para Bmal1 ritmo. Proporcionamos la evidencia gen&eacute;tica en vivo directa que la REV-ERBs tambi&eacute;n participan en combinatoria regulaci&oacute;n de la expresi&oacute;n Cry1 y Rorc, llevando a su fase de retraso en relaci&oacute;n con Rev-erbalpha. As&iacute;, los REV-ERBs juegan un papel m&aacute;s prominente que la espe en el mecanismo del reloj b&aacute;sico. El enfoque gen&eacute;tico celular permite la prueba de la solidez de la funci&oacute;n de reloj de n&uacute;cleo intracelular. Nos demostr&oacute; que las c&eacute;lulas deficientes en tanto REV-ERBalpha y funci&oacute;n beta o expresar BMAL1 constitutiva, eran a&uacute;n capaces de generar y mantener normal rhythmicity Per2. As&iacute;, nuestros resultados subrayan la resistencia del mecanismo del reloj intracelular y proporcionan penetraciones importantes en las topolog&iacute;as transcripcionales subyacente el reloj circadiano. Desde la funci&oacute;n de REV-ERB y Bmal1 mRNA/prote&iacute;na ciclismo no son necesarios para la funci&oacute;n de reloj b&aacute;sico, proponemos que el papel fundamental del ROR/REV/Bmal1 lazo y sus mandantes es controlar la transcripci&oacute;n r&iacute;tmica del reloj salida genes.

Funci&oacute;n redundante de REV-ERBalpha y beta y papel no esenciales para Bmal1 ciclismo en la regulaci&oacute;n transcripcional de los ritmos circadianos intracelulares.

&#x751F;&#x7269;&#x949F;&#x63A7;&#x5236;&#x6BCF;&#x65E5;&#x632F;&#x8361;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6C34;&#x5E73;&#x7684;&#x57FA;&#x56E0;&#x8868;&#x8FBE;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x62A5;&#x544A;&#x7531;&#x53D1;&#x5149;&#x8BB0;&#x8005;&#x7EC6;&#x80DE;&#x3001; &#x7B5B;&#x9009;&#x81EA;&#x52A8;&#x5316;&#x548C;&#x6570;&#x636E;&#x5206;&#x6790;&#x7BA1;&#x9053;&#x7EC4;&#x6210;&#x7684;&#x9AD8;&#x541E;&#x5410;&#x91CF;&#x663C;&#x591C;&#x8282;&#x5F8B;&#x6027;&#x529F;&#x80FD;&#x68C0;&#x6D4B;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x7684;&#x5F00;&#x53D1;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x91C7;&#x7528;&#x8FD9;&#x4E2A;&#x5236;&#x5EA6;&#xFF0C;&#x4EE5;&#x8FDB;&#x4E00;&#x6B65;&#x89E3;&#x5256;&#x57FA;&#x7840;&#x4F7F;&#x7528;&#x5316;&#x5B66;&#x751F;&#x7269;&#x5B66;&#x65B9;&#x6CD5;&#x7684;&#x54FA;&#x4E73;&#x52A8;&#x7269;&#x751F;&#x7269;&#x949F;&#x7684;&#x5206;&#x5B50;&#x673A;&#x5236;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x5206;&#x6790;&#x4E86;&#x5BF9;&#x663C;&#x591C;&#x8282;&#x5F8B;&#x7684;&#x671F;&#x95F4;&#x957F;&#x5EA6;&#x662F;&#x6307;&#x793A;&#x6027;&#x7684;&#x6838;&#x5FC3;&#x65F6;&#x949F;&#x673A;&#x5236; 1,280 &#x836F;&#x7406;&#x6D3B;&#x6027;&#x7684;&#x5316;&#x5408;&#x7269;&#xFF0C;&#x5177;&#x6709;&#x4E0D;&#x540C;&#x7684;&#x7ED3;&#x6784;&#x7684;&#x5F71;&#x54CD;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x7B5B;&#x9009;&#x6A21;&#x5F0F;&#x786E;&#x5B9A;&#x8BB8;&#x591A;&#x5316;&#x5408;&#x7269;&#x5148;&#x524D;&#x5DF2;&#x77E5;&#x7684;&#x66F4;&#x6539;&#x7684;&#x663C;&#x591C;&#x8282;&#x5F8B;&#x7684;&#x65F6;&#x671F;&#x6216;&#x9636;&#x6BB5;&#xFF0C;&#x8868;&#x660E;&#x68C0;&#x6D4B;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x7684;&#x6709;&#x6548;&#x6027;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x53D1;&#x73B0;&#x5C0F;&#x5206;&#x5B50;&#x6291;&#x5236;&#x5242;&#x7CD6;&#x539F;&#x5408;&#x6210;&#x9176;&#x6FC0;&#x9176; 3 (GSK-3&#xFF09; &#x4E0D;&#x65AD;&#x9020;&#x6210;&#x5F3A;&#x77ED;&#x671F;&#x95F4;&#x8868;&#x578B;&#x4E0E;&#x77E5;&#x540D;&#x671F;&#x95F4;&#x5EF6;&#x957F;&#x9502;&#xFF0C;&#x53E6;&#x4E00;&#x79CD;&#x63A8;&#x5B9A;&#x845B;&#x5170;&#x7D20;&#x53F2;&#x514B;-3 &#x6291;&#x5236;&#x5242;&#x3002;siRNA &#x4ECB;&#x5BFC;&#x7684;&#x7EC4;&#x5408;&#x5F0F;&#x7684;&#x845B;&#x5170;&#x7D20;&#x53F2;&#x514B; 3beta &#x8FD8;&#x9020;&#x6210;&#x77ED;&#x65F6;&#x95F4;&#xFF0C;&#x786E;&#x8BA4;&#x4E0E;&#x5C0F;&#x5206;&#x5B50;&#x6291;&#x5236;&#x5242;&#x83B7;&#x5F97;&#x7684;&#x8868;&#x578B;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7ED3;&#x679C;&#x6F84;&#x6E05;&#x845B;&#x5170;&#x7D20;&#x53F2;&#x514B; 3beta &#x5728;&#x54FA;&#x4E73;&#x52A8;&#x7269;&#x7684; clockworks &#x671F;&#x95F4;&#x8C03;&#x8282;&#x4E2D;&#x7684;&#x4F5C;&#x7528;&#xFF0C;&#x5E76;&#x7A81;&#x51FA;&#x663E;&#x793A;&#x5316;&#x5B66;&#x751F;&#x7269;&#x5B66;&#x4E2D;&#x63A2;&#x7D22;&#x4E0D;&#x660E;&#x7684;&#x751F;&#x7269;&#x949F;&#x673A;&#x5236;&#x7684;&#x6709;&#x6548;&#x6027;&#x3002;

&#x5316;&#x5B66;&#x751F;&#x7269;&#x5B66;&#x65B9;&#x6CD5;&#x7531;&#x845B;&#x5170;&#x7D20;&#x53F2;&#x514B; 3beta &#x7279;&#x5F02;&#x6027;&#x6291;&#x5236;&#x63ED;&#x793A;&#x4E86;&#x54FA;&#x4E73;&#x52A8;&#x7269;&#x751F;&#x7269;&#x949F;&#x5468;&#x671F;&#x7684;&#x7F29;&#x77ED;&#x3002;

The circadian clock controls daily oscillations of gene expression at the cellular level. We report the development of a high-throughput circadian functional assay system that consists of luminescent reporter cells, screening automation, and a data analysis pipeline. We applied this system to further dissect the molecular mechanisms underlying the mammalian circadian clock using a chemical biology approach. We analyzed the effect of 1,280 pharmacologically active compounds with diverse structures on the circadian period length that is indicative of the core clock mechanism. Our screening paradigm identified many compounds previously known to change the circadian period or phase, demonstrating the validity of the assay system. Furthermore, we found that small molecule inhibitors of glycogen synthase kinase 3 (GSK-3) consistently caused a strong short period phenotype in contrast to the well-known period lengthening by lithium, another presumed GSK-3 inhibitor. siRNA-mediated knockdown of GSK-3beta also caused a short period, confirming the phenotype obtained with the small molecule inhibitors. These results clarify the role of GSK-3beta in the period regulation of the mammalian clockworks and highlight the effectiveness of chemical biology in exploring unidentified mechanisms of the circadian clock.

A chemical biology approach reveals period shortening of the mammalian circadian clock by specific inhibition of GSK-3beta.

L&#39;horloge circadienne contr&ocirc;le des oscillations quotidiennes d&#39;expression de g&egrave;ne au niveau cellulaire. Nous rapportons le d&eacute;veloppement d&#39;un syst&egrave;me de test fonctionnel circadienne de haut d&eacute;bit qui se compose de cellules journaliste luminescentes, l&#39;automatisation de d&eacute;pistage et un pipeline d&#39;analyse de donn&eacute;es. Nous avons appliqu&eacute; ce syst&egrave;me pour davantage de diss&eacute;quer les m&eacute;canismes mol&eacute;culaires qui sous-tendent l&#39;horloge circadienne chez les mammif&egrave;res, &agrave; l&#39;aide d&#39;une approche de la biologie chimique. Nous avons analys&eacute; l&#39;effet de 1 280 compos&eacute;s pharmacologiquement actifs avec diverses structures sur la longueur de la p&eacute;riode circadienne qui indique le m&eacute;canisme d&#39;horloge de noyau. Notre paradigme de d&eacute;pistage a identifi&eacute; de nombreux compos&eacute;s pr&eacute;c&eacute;demment connus pour changer la p&eacute;riode circadienne ou la phase, ce qui d&eacute;montre la validit&eacute; du syst&egrave;me de dosage. En outre, nous avons trouv&eacute; des petites mol&eacute;cules inhibitrices de la glycog&egrave;ne synthase kinase 3 (GSK-3) toujours caus&eacute; un ph&eacute;notype de p&eacute;riode court fort contraste avec la p&eacute;riode connue, allongement de lithium, un autre pr&eacute;sum&eacute; inhibiteur de GSK-3. induite par le siARN knockdown de GSK-3beta a &eacute;galement provoqu&eacute; une courte p&eacute;riode, confirmant le ph&eacute;notype obtenus avec les inhibiteurs de petites mol&eacute;cules. Ces r&eacute;sultats clarifier le r&ocirc;le de GSK-3beta dans la p&eacute;riode r&eacute;gulation de l&#39;horlogerie de mammif&egrave;res et de mettre en &eacute;vidence l&#39;efficacit&eacute; de la biologie chimique dans l&#39;exploration des m&eacute;canismes non identifi&eacute;s de l&#39;horloge circadienne.

Une approche de la biologie chimique r&eacute;v&egrave;le la p&eacute;riode raccourcissement de l&#39;horloge circadienne chez les mammif&egrave;res par inhibition sp&eacute;cifique de GSK-3beta.

Die circadiane Clock steuert t&auml;gliche Schwingungen der Genexpression auf zellul&auml;rer Ebene. Wir berichten &uuml;ber das Entwicklung eines Hochdurchsatz circadian funktionelle Assay, der leuchtende Reporter Zellen, Screening-Automatisierung und eine Daten-Analyse-Pipeline besteht. Wir verwendet dieses System um die molekularen Mechanismen der S&auml;ugetier-circadianen Uhr mit einem chemischen Biologie-Ansatz weiter zu sezieren. Wir analysierten die Wirkung von 1.280 pharmakologisch aktiven Verbindungen mit unterschiedlichen Strukturen auf die circadiane Periodenl&auml;nge, die bezeichnend f&uuml;r das Kern-Uhrwerk ist. Unsere Screening-Paradigma identifiziert viele chemische Verbindungen, die fr&uuml;her den zirkadianen Periode oder Phase, demonstrieren die G&uuml;ltigkeit der Assay-System &auml;ndern. Dar&uuml;ber hinaus fanden wir, dass ein anderes vermutet GSK-3-Hemmer, niedermolekularer Hemmer der Glykogen-Synthase Kinase 3 (GSK-3) konsequent verursacht einen starken kurzen Periode Ph&auml;notyp im Gegensatz zu den bekannten Zeitraum verl&auml;ngern von Lithium. SiRNA-vermittelte Niederschlag von GSK-3beta verursachte auch einen kurzen Zeitraum, Best&auml;tigung der Ph&auml;notyp mit der niedermolekularen-Inhibitoren erzielten. Diese Ergebnisse verdeutlichen die Rolle der GSK-3beta in der Periode der S&auml;ugetier-Uhrwerk-Verordnung und markieren Sie die Wirksamkeit der chemischen Biologie in der Erforschung der unbekannter Mechanismen der circadianen Uhr.

Ein chemische Biologie-Ansatz zeigt Zeitraum Verk&uuml;rzung der S&auml;ugetier-circadian Clock durch spezifische Hemmung der GSK-3beta.

L&#39;orologio circadiano controlla le oscillazioni giornaliere di espressione genica a livello cellulare. Riportiamo lo sviluppo di un sistema high-throughput test funzionali circadiani che consiste di cellule luminescenti reporter, automazione di screening e una pipeline di analisi dei dati. Abbiamo applicato questo sistema per sezionare ulteriormente i meccanismi molecolari sottostanti l&#39;orologio circadiano mammiferi utilizzando un approccio di biologia chimica. Abbiamo analizzato l&#39;effetto di 1.280 composti farmacologicamente attivi con diverse strutture sulla lunghezza di periodo circadiana &egrave; indicativa del meccanismo dell&#39;orologio di nucleo. Il nostro paradigma di screening identificato molti composti precedentemente conosciuti per cambiare il periodo circadiano o fase, dimostrando la validit&agrave; del sistema di dosaggio. Inoltre, abbiamo scoperto che piccole molecole inibitori delle chinasi 3 di glicogeno sintasi (GSK-3) costantemente ha causato un forte fenotipo periodo breve in contrasto con il periodo ben noto allungamento di litio, un altro presunto GSK-3 inibitore. siRNA-mediata atterramento di GSK-3beta anche causato un breve periodo, confermando il fenotipo ottenuto con piccole molecole inibitori. Questi risultati chiarire il ruolo di GSK-3beta nel periodo regolamento i clockworks mammiferi ed evidenziano l&#39;efficacia di biologia chimica nell&#39;esplorazione non identificati meccanismi dell&#39;orologio circadiano.

Un approccio di biologia chimica rivela periodo accorciamento dell&#39;orologio circadiano mammiferi tramite inibizione specifica di GSK-3 &beta;.

&#x6982;&#x65E5;&#x6642;&#x8A08;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x767A;&#x73FE;&#x306F;&#x7D30;&#x80DE;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x3067;&#x306E;&#x6BCE;&#x65E5;&#x306E;&#x632F;&#x52D5;&#x3092;&#x5236;&#x5FA1;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x767A;&#x5149;&#x30EC;&#x30DD;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x7D30;&#x80DE;&#x3001;&#x30B9;&#x30AF;&#x30EA;&#x30FC;&#x30CB;&#x30F3;&#x30B0;&#x306E;&#x81EA;&#x52D5;&#x5316;&#x3001;&#x30C7;&#x30FC;&#x30BF;&#x5206;&#x6790;&#x306E;&#x30D1;&#x30A4;&#x30D7;&#x30E9;&#x30A4;&#x30F3;&#x3067;&#x69CB;&#x6210;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x9AD8;&#x30B9;&#x30EB;&#x30FC;&#x30D7;&#x30C3;&#x30C8;&#x6982;&#x6A5F;&#x80FD;&#x30A2;&#x30C3;&#x30BB;&#x30A4; &#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E0;&#x306E;&#x958B;&#x767A;&#x3092;&#x5831;&#x544A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005; &#x306F;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x5316;&#x5B66;&#x751F;&#x7269;&#x5B66;&#x306E;&#x30A2;&#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30C1;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x54FA;&#x4E73;&#x985E;&#x306E;&#x6982;&#x65E5;&#x6642;&#x8A08;&#x306E;&#x5206;&#x5B50;&#x30E1;&#x30AB;&#x30CB;&#x30BA;&#x30E0;&#x3092;&#x89E3;&#x5256;&#x3059;&#x308B;&#x306B;&#x306F;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E0;&#x3092;&#x9069;&#x7528;&#x3057;&#x305F;.&#x6211;&#x3005; &#x306E;&#x30B3;&#x30A2;&#x306E;&#x30AF;&#x30ED;&#x30C3;&#x30AF; &#x30E1;&#x30AB;&#x30CB;&#x30BA;&#x30E0;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x6982;&#x65E5;&#x30EA;&#x30BA;&#x30E0;&#x306E;&#x671F;&#x9593;&#x306E;&#x9577;&#x3055;&#x306B;&#x53CA;&#x307C;&#x3059; 1,280 &#x85AC;&#x7406;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x5408;&#x7269;&#x306E;&#x591A;&#x69D8;&#x306A;&#x69CB;&#x9020;&#x3092;&#x5206;&#x6790;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x79C1;&#x305F;&#x3061;&#x306E;&#x30B9;&#x30AF;&#x30EA;&#x30FC;&#x30CB;&#x30F3;&#x30B0; &#x30D1;&#x30E9;&#x30C0;&#x30A4;&#x30E0;&#x6982;&#x65E5;&#x5468;&#x671F;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x30A2;&#x30C3;&#x30BB;&#x30A4; &#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E0;&#x306E;&#x6709;&#x52B9;&#x6027;&#x3092;&#x793A;&#x3059;&#x4F4D;&#x76F8;&#x3092;&#x5909;&#x66F4;&#x3059;&#x308B;&#x306B;&#x306F;&#x3001;&#x4EE5;&#x524D;&#x77E5;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x591A;&#x304F;&#x306E;&#x5316;&#x5408;&#x7269;&#x3092;&#x8B58;&#x5225;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x3001;&#x6211;&#x3005; &#x30B0;&#x30EA;&#x30B3;&#x30FC;&#x30B2;&#x30F3;&#x30B7;&#x30F3;&#x30BF;&#x30FC;&#x30BC;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC; 3 &#x306E;&#x5C0F;&#x5206;&#x5B50;&#x963B;&#x5BB3;&#x5264; &#xFF08;GSK 3&#xFF09; &#x306F;&#x3001;&#x4E00;&#x8CAB;&#x3057;&#x3066;&#x5F37;&#x3044;&#x77ED;&#x3044;&#x671F;&#x9593;&#x8868;&#x73FE;&#x578B;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x30EA;&#x30C1;&#x30A6;&#x30E0;&#x3092;&#x9577;&#x304F;&#x6709;&#x540D;&#x306A;&#x671F;&#x9593;&#x3068;&#x306F;&#x5BFE;&#x7167;&#x7684;&#x539F;&#x56E0;&#x3001;&#x5225; GSK 3 &#x963B;&#x5BB3;&#x5264;&#x3068;&#x63A8;&#x5B9A;&#x304C;&#x898B;&#x3064;&#x304B;&#x308A;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;siRNA &#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x305F;&#x30CE;&#x30C3;&#x30AF;&#x30C0;&#x30A6;&#x30F3; GSK 3 &beta; &#x306E;&#x5C0F;&#x5206;&#x5B50;&#x963B;&#x5BB3;&#x5264;&#x3067;&#x5F97;&#x3089;&#x308C;&#x308B;&#x8868;&#x73FE;&#x578B;&#x78BA;&#x8A8D;&#x3059;&#x308B;&#x77ED;&#x671F;&#x9593;&#x767A;&#x751F;&#x3053;&#x3068;&#x3082;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x306F;&#x3001;&#x54FA;&#x4E73;&#x985E;&#x306E;&#x6642;&#x8A08;&#x4ED5;&#x639B;&#x3051;&#x306E;&#x671F;&#x9593;&#x306E;&#x898F;&#x5247;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B; GSK 3 &beta; &#x306E;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x660E;&#x78BA;&#x306B;&#x3001;&#x6982;&#x65E5;&#x6642;&#x8A08;&#x306E;&#x6B63;&#x4F53;&#x4E0D;&#x660E;&#x306E;&#x30E1;&#x30AB;&#x30CB;&#x30BA;&#x30E0;&#x3092;&#x63A2;&#x6C42;&#x306E;&#x30B1;&#x30DF;&#x30AB;&#x30EB;&#x30D0;&#x30A4;&#x30AA;&#x30ED;&#x30B8;&#x30FC;&#x306E;&#x6709;&#x52B9;&#x6027;&#x3092;&#x5F37;&#x8ABF;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x5316;&#x5B66;&#x751F;&#x7269;&#x5B66;&#x30A2;&#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30C1;&#x3067;&#x306F;&#x54FA;&#x4E73;&#x985E;&#x306E;&#x6982;&#x65E5;&#x6642;&#x8A08;&#x306E;&#x5468;&#x671F;&#x77ED;&#x7E2E; GSK 3 &beta; &#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x7279;&#x5B9A;&#x306E;&#x963B;&#x5BB3;&#x3092;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

Circadian &#xD074;&#xB85D;&#xC744; &#xC138;&#xD3EC; &#xC218;&#xC900;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xBC1C;&#xD604;&#xC758; &#xC77C;&#xC77C; &#xC9C4;&#xB3D9; &#xC81C;&#xC5B4;. &#xC6B0;&#xB9AC; &#xBCF4;&#xACE0; &#xBC1C;&#xAD11; &#xAE30;&#xC790; &#xC804;&#xC9C0;&#xC640; &#xC2EC;&#xC0AC; &#xC790;&#xB3D9;&#xD654;, &#xB370;&#xC774;&#xD130; &#xBD84;&#xC11D; &#xD30C;&#xC774;&#xD504;&#xB77C;&#xC778;&#xC73C;&#xB85C; &#xC774;&#xB8E8;&#xC5B4;&#xC838; &#xB192;&#xC740; &#xCC98;&#xB9AC;&#xB7C9; circadian &#xAE30;&#xB2A5; &#xBD84;&#xC11D; &#xACB0;&#xACFC; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C; &#xAC1C;&#xBC1C;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xB354; &#xD654;&#xD559; &#xC0DD;&#xBB3C;&#xD559; &#xC811;&#xADFC;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xD3EC;&#xC720;&#xB958; circadian &#xC2DC;&#xACC4; &#xB0B4;&#xBD80; &#xBD84;&#xC790; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;&#xC744; &#xD574; &#xBD80;&#xC774; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C;&#xC744; &#xC801;&#xC6A9;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xCF54;&#xC5B4; &#xD074;&#xB7ED; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998; circadian &#xAE30;&#xAC04; &#xAE38;&#xC774;&#xC5D0; &#xB2E4;&#xC591; &#xD55C; &#xAD6C;&#xC870;&#xC640; 1280 pharmacologically &#xD65C;&#xC131; &#xD654;&#xD569;&#xBB3C;&#xC758; &#xD6A8;&#xACFC; &#xBD84;&#xC11D;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xC2EC;&#xC0AC; &#xD328;&#xB7EC;&#xB2E4;&#xC784; circadian &#xAE30;&#xAC04; &#xB610;&#xB294; &#xBD84;&#xC11D; &#xACB0;&#xACFC; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C;&#xC758; &#xC720;&#xD6A8;&#xC131;&#xC744; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC8FC;&#xB294; &#xB2E8;&#xACC4; &#xBCC0;&#xACBD; &#xC774;&#xC804;&#xC758; &#xB9CE;&#xC740; &#xD654;&#xD569;&#xBB3C;&#xC744; &#xC2DD;&#xBCC4;. &#xB610;&#xD55C;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xC791;&#xC740; &#xBD84;&#xC790; &#xC5B5;&#xC81C;&#xC81C; glycogen synthase &#xD0A4; &#xB2C8; &#xC544; &#xC81C; 3&#xC758; (GSK-3) &#xC77C;&#xAD00; &#xB418; &#xAC8C; &#xBC1C;&#xC0DD; &#xB9AC;&#xD2AC;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xAE38;&#xC5B4; &#xC798; &#xC54C;&#xB824;&#xC9C4; &#xAE30;&#xAC04; &#xB2EC;&#xB9AC; &#xAC15;&#xD55C; &#xC9E7;&#xC740; &#xAE30;&#xAC04; &#xD615;, GSK 3 &#xC5B5;&#xC81C;&#xC81C;&#xB97C; &#xCD94;&#xC815; &#xB610; &#xB2E4;&#xB978; &#xBC1C;&#xACAC;. GSK-3beta&#xC758; siRNA &#xC911;&#xC7AC; &#xCD5C;&#xC800;&#xC758; &#xD655;&#xC778; &#xC791;&#xC740; &#xBD84;&#xC790; &#xC5B5;&#xC81C;&#xC81C;&#xB85C; &#xC5BB;&#xC740; &#xD615; &#xC9E7;&#xC740; &#xAE30;&#xAC04;&#xC744; &#xBC1C;&#xC0DD; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xACB0;&#xACFC; &#xD3EC;&#xC720;&#xB958; &#xC6CD;&#xC2A4;&#xC758; &#xAE30;&#xAC04; &#xADDC;&#xC815;&#xC5D0; GSK-3beta&#xC758; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xBA85;&#xD655;&#xD788; &#xD558; &#xACE0; &#xD0D0;&#xD5D8; circadian clock&#xC758; &#xC54C; &#xC218; &#xC5C6;&#xB294; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;&#xC5D0; &#xD654;&#xD559; &#xC0DD;&#xBB3C;&#xD559;&#xC758; &#xD6A8;&#xACFC; &#xAC15;&#xC870;.

&#xD654;&#xD559; &#xC0DD;&#xBB3C;&#xD559; &#xC811;&#xADFC; GSK-3beta&#xC758; &#xD2B9;&#xC815; &#xC800;&#xD574; &#xD558; &#xC5EC; &#xD3EC;&#xC720;&#xB958; circadian clock&#xC758; &#xAE30;&#xAC04; &#xB2E8;&#xCD95;&#xC744; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC900;&#xB2E4;.

El reloj circadiano controla las oscilaciones diarias de la expresi&oacute;n g&eacute;nica a nivel celular. Se presenta el desarrollo de un sistema de an&aacute;lisis funcional circadiana de alto rendimiento que consiste en c&eacute;lulas de reportero luminiscente, automatizaci&oacute;n de proyecci&oacute;n y una tuber&iacute;a de an&aacute;lisis de datos. Aplicamos este sistema para diseccionar a&uacute;n m&aacute;s los mecanismos moleculares subyacentes reloj circadiano mam&iacute;fero utilizando un enfoque de la Biolog&iacute;a qu&iacute;mica. Se analiz&oacute; el efecto de 1.280 compuestos farmacol&oacute;gicamente activos con diversas estructuras en la duraci&oacute;n del periodo circadiano que es indicativo del mecanismo de reloj del n&uacute;cleo. Nuestro paradigma de investigaci&oacute;n identificado muchos compuestos conocidos para cambiar el per&iacute;odo circadiano o fase, demostrando la validez del sistema de ensayo. Adem&aacute;s, hemos encontrado que inhibidores de mol&eacute;cula peque&ntilde;a de la quinasa de gluc&oacute;geno sintasa 3 (GSK-3) constantemente causaron un fuerte fenotipo per&iacute;odo corto en contraste con el per&iacute;odo conocido alargamiento por litio, otro presunto inhibidor de GSK-3. mediada por siRNA ca&iacute;da de GSK-3beta tambi&eacute;n caus&oacute; un breve per&iacute;odo, confirmando el fenotipo obtenido con los inhibidores de la mol&eacute;cula peque&ntilde;a. Estos resultados aclarar el papel de GSK-3beta en la regulaci&oacute;n de la &eacute;poca de los mecanismos mam&iacute;feros y destacan la eficacia de Biolog&iacute;a qu&iacute;mica en explorar mecanismos no identificados del reloj circadiano.

Un enfoque de la Biolog&iacute;a qu&iacute;mica revela acortamiento per&iacute;odo del reloj circadiano mam&iacute;fero por la inhibici&oacute;n espec&iacute;fica de GSK-3beta.

Circadiano normal por los relojes moleculares intracelulares es evidente ampliamente en procariotas y eucariotas. Los mecanismos son conducidos por bucles de retroalimentaci&oacute;n hay que llevar a la oscilaci&oacute;n de los niveles de componentes cuyos m&aacute;ximos se encuentran en relaciones de fase fija uno con el otro. Estas relaciones de fase son las m&eacute;tricas clave que caracterizan el funcionamiento de los relojes. En este estudio, se construy&oacute; un modelo matem&aacute;tico de la estructura regulatoria del reloj circadiano intracelular en ratones y se identificaron sus par&aacute;metros usando una estrategia evolutiva iterativa, con el m&iacute;nimo costo mediante conformidad con separaciones de fase en c&eacute;lulas aut&oacute;nomas osciladores. El modelo fue evaluado contra los fenotipos circadianos c&eacute;lulas aut&oacute;nomos observados experimentalmente de nocauts del gene, particularmente la retenci&oacute;n de rhythmicity y cambios en la expresi&oacute;n a nivel de componentes del reloj molecular. Estas pruebas revelan excelente de novo capacidad predictiva del modelo. Adem&aacute;s, an&aacute;lisis de sensibilidad muestran que estos fenotipos nocaut son robustos a la perturbaci&oacute;n del par&aacute;metro.

Un modelo del reloj circadiano mam&iacute;fero c&eacute;lula aut&oacute;nomo.

Cronometraggio circadiano dagli orologi molecolari intracellulari &egrave; evidente ampiamente nei procarioti e negli eucarioti. Il meccanismo dell&#39;orologio &egrave; guidati da autoregulatory feedback loop che portano a oscillanti livelli dei componenti cui maxima &egrave; in relazioni di fase fissa uno con l&#39;altro. Queste relazioni di fase sono la metrica chiave che caratterizzano il funzionamento degli orologi. In questo studio, abbiamo costruito un modello matematico dalla struttura di regolamentazione dell&#39;orologio circadiano intracellulare nei topi e identificati i parametri utilizzando una strategia evolutiva iterativa, con costo minimo raggiunto attraverso la conformit&agrave; alle separazioni di fase visto in cella-autonomi oscillatori. Il modello &egrave; stato valutato contro gli sperimentalmente osservati fenotipi circadiani cella-autonomi di Knockout del gene, particolarmente ritenzione di ritmicit&agrave; e cambiamenti nel livello di espressione dei componenti dell&#39;orologio molecolare. Questi test rivelano eccellente de novo capacit&agrave; predittiva del modello. Inoltre, analisi di sensibilit&agrave; dimostra che questi fenotipi knockout sono robusti di perturbazione del parametro.

Un modello dell&#39;orologio circadiano mammifero cella-autonomo.

&#x7D30;&#x80DE;&#x5185;&#x306E;&#x5206;&#x5B50;&#x6642;&#x8A08;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x6982;&#x65E5;&#x30EA;&#x30BA;&#x30E0;&#x306E;&#x8A08;&#x6642;&#x306F;&#x3001;&#x539F;&#x6838;&#x751F;&#x7269;&#x3068;&#x771F;&#x6838;&#x751F;&#x7269;&#x3067;&#x5E83;&#x304F;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x6642;&#x8A08;&#x4ED5;&#x639B;&#x3051;&#x306F;&#x305D;&#x306E;&#x30DE;&#x30AD;&#x30B7;&#x30DE;&#x56FA;&#x5B9A;&#x76F8;&#x306E;&#x95A2;&#x4FC2;&#x3092; 1 &#x3064;&#x306E;&#x5225;&#x306E;&#x30B3;&#x30F3;&#x30DD;&#x30FC;&#x30CD;&#x30F3;&#x30C8;&#x306E;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x306E;&#x632F;&#x52D5;&#x306B;&#x3064;&#x306A;&#x304C;&#x308B;&#x591A;&#x30D5;&#x30A3;&#x30FC;&#x30C9;&#x30D0;&#x30C3;&#x30AF; &#x30EB;&#x30FC;&#x30D7;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x99C6;&#x52D5;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x4F4D;&#x76F8;&#x95A2;&#x4FC2;&#x6642;&#x8A08;&#x306E;&#x64CD;&#x4F5C;&#x7279;&#x6027;&#x8A55;&#x4FA1;&#x306E;&#x4E3B;&#x8981;&#x306A;&#x6307;&#x6A19;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x672C;&#x7814;&#x7A76;&#x3067;&#x306F;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x3067;&#x7D30;&#x80DE;&#x5185;&#x306E;&#x6982;&#x65E5;&#x6642;&#x8A08;&#x306E;&#x898F;&#x5236;&#x69CB;&#x9020;&#x304B;&#x3089;&#x6570;&#x7406;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x306E;&#x69CB;&#x7BC9;&#x3057;&#x3001;&#x30BB;&#x30EB;&#x81EA;&#x5F8B;&#x767A;&#x632F;&#x5668;&#x306B;&#x898B;&#x3089;&#x308C;&#x308B;&#x76F8;&#x5206;&#x96E2;&#x3078;&#x306E;&#x6E96;&#x62E0;&#x3092;&#x9054;&#x6210;&#x3092;&#x6700;&#x5C0F;&#x306E;&#x30B3;&#x30B9;&#x30C8;&#x3067;&#x3001;&#x53CD;&#x5FA9;&#x7684;&#x306A;&#x9032;&#x5316;&#x6226;&#x7565;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x305D;&#x306E;&#x30D1;&#x30E9;&#x30E1;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x3092;&#x8B58;&#x5225;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x5B9F;&#x9A13;&#x7D50;&#x679C;&#x30BB;&#x30EB;&#x81EA;&#x5F8B;&#x6982;&#x8868;&#x73FE;&#x578B;&#x306E;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x30CE;&#x30C3;&#x30AF;&#x30A2;&#x30A6;&#x30C8;&#x3001;&#x7279;&#x306B;&#x30EA;&#x30BA;&#x30E0;&#x3068;&#x5206;&#x5B50;&#x6642;&#x8A08;&#x30B3;&#x30F3;&#x30DD;&#x30FC;&#x30CD;&#x30F3;&#x30C8;&#x306E;&#x767A;&#x73FE;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x306E;&#x5909;&#x5316;&#x306E;&#x4FDD;&#x6301;&#x306B;&#x5BFE;&#x3057;&#x3066;&#x8A55;&#x4FA1;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x30C6;&#x30B9;&#x30C8;&#x3067;&#x306F;&#x512A;&#x79C0;&#x306A;&#x30C7; novo &#x4E88;&#x6E2C;&#x80FD;&#x529B;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x3092;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x3001;&#x611F;&#x5EA6;&#x89E3;&#x6790;&#x306F;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x30CE;&#x30C3;&#x30AF;&#x30A2;&#x30A6;&#x30C8;&#x306E;&#x8868;&#x73FE;&#x578B;&#x304C;&#x30D1;&#x30E9;&#x30E1;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x6442;&#x52D5;&#x306B;&#x30ED;&#x30D0;&#x30B9;&#x30C8;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x30BB;&#x30EB;&#x81EA;&#x5F8B;&#x306E;&#x54FA;&#x4E73;&#x985E;&#x306E;&#x6982;&#x65E5;&#x6642;&#x8A08;&#x306E;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x3002;

&#xC138;&#xD3EC;&#xB0B4; &#xBD84;&#xC790; &#xC2DC;&#xACC4; &#xC5EC; circadian &#xCE21;&#xC815; prokaryotes&#xC640; &#xC9C4;&#xD575;&#xC0DD;&#xBB3C;&#xC5D0; &#xAD11;&#xBC94;&#xC704; &#xD558; &#xAC8C; &#xBD84;&#xBA85; &#xD558;&#xB2E4;. &#xC6CD;&#xC2A4;&#xC758; &#xB9E5;&#xC2DC; &#xB9C8;&#xB97C; &#xC11C;&#xB85C; &#xACE0;&#xC815;&#xB41C; &#xC704;&#xC0C1; &#xAD00;&#xACC4;&#xC5D0;&#xB294; &#xAD6C;&#xC131; &#xC694;&#xC18C; &#xC218;&#xC900;&#xC758; &#xC9C4;&#xB3D9;&#xC73C;&#xB85C; &#xC774;&#xC5B4;&#xC9C8; autoregulatory &#xD53C;&#xB4DC;&#xBC31; &#xB8E8;&#xD504;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xAD6C;&#xB3D9; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xC704;&#xC0C1; &#xAD00;&#xACC4;&#xB294; &#xC2DC;&#xACC4; &#xC791;&#xB3D9;&#xC744; &#xD2B9;&#xC131;&#xD654; &#xC8FC;&#xC694; &#xD1B5;&#xACC4;. &#xC774; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC0DD;&#xC950;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC138;&#xD3EC;&#xB0B4; circadian clock&#xC758; &#xADDC;&#xC815; &#xD558;&#xB294; &#xAD6C;&#xC870;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC218;&#xD559;&#xC801; &#xBAA8;&#xB378;&#xC744; &#xAD6C;&#xCD95; &#xD558; &#xACE0; &#xC704;&#xC0C1; &#xBD84;&#xD310; &#xC140; &#xC790;&#xCE58; &#xBC1C;&#xC9C4;&#xAE30;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBCFC;&#xC5D0; &#xD1B5;&#xD574; &#xCD5C;&#xC18C; &#xBE44;&#xC6A9;&#xC73C;&#xB85C; &#xBC18;&#xBCF5;&#xC801;&#xC778; &#xC9C4;&#xD654; &#xC804;&#xB7B5;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xB9E4;&#xAC1C; &#xBCC0;&#xC218;&#xB97C; &#xC2DD;&#xBCC4;. &#xBAA8;&#xB378; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xB179;&#xC544;&#xC6C3;, rhythmicity&#xACFC; &#xBD84;&#xC790; &#xC2DC;&#xACC4; &#xCEF4;&#xD3EC;&#xB10C;&#xD2B8;&#xC758; &#xC2DD; &#xB808;&#xBCA8;&#xC758; &#xBCC0;&#xD654; &#xD2B9;&#xD788; &#xBCF4;&#xC874;&#xC758; &#xC2E4;&#xD5D8;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xAD00;&#xCC30; &#xB41C; &#xC138;&#xD3EC; &#xC790;&#xCE58; circadian &#xACE0;&#xAE30;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xD3C9;&#xAC00; &#xBC1B;&#xC558;&#xB2E4;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xD14C;&#xC2A4;&#xD2B8; &#xC6B0;&#xC218; &#xB4DC; &#xB178; &#xBCF4; &#xBAA8;&#xB378;&#xC758; &#xC608;&#xCE21; &#xB2A5;&#xB825;&#xC744; &#xACF5;&#xAC1C;. &#xB610;&#xD55C;, &#xBBFC;&#xAC10;&#xB3C4; &#xBD84;&#xC11D;&#xC774; &#xB179;&#xC544;&#xC6C3; &#xACE0;&#xAE30; &#xB9E4;&#xAC1C; &#xBCC0;&#xC218; &#xC12D; &#xB3D9;&#xC744; &#xAC15;&#xB825;&#xD55C; &#xAC83;&#xC744; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xC140; &#xC790;&#xCE58;&#xAD8C;&#xC774; &#xC788;&#xB294; &#xD3EC;&#xC720;&#xB958; circadian clock&#xC758; &#xBAA8;&#xB378;.

&#x663C;&#x591C;&#x8282;&#x5F8B;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5185;&#x5206;&#x5B50;&#x65F6;&#x949F;&#x8BA1;&#x65F6;&#x662F;&#x660E;&#x663E;&#x5E7F;&#x6CDB;&#x7684;&#x539F;&#x6838;&#x751F;&#x7269;&#x548C;&#x771F;&#x6838;&#x751F;&#x7269;&#x3002;Clockworks &#x662F;&#x9A71;&#x52A8;&#x7684;&#x5EF6;&#x7F13;&#x53F6;&#x7247;&#x7684;&#x53CD;&#x9988;&#x56DE;&#x8DEF;&#xFF0C;&#x5BFC;&#x81F4;&#x632F;&#x8361;&#x5176;&#x6781;&#x5927;&#x503C;&#x662F;&#x5728;&#x56FA;&#x5B9A;&#x7684;&#x76F8;&#x4F4D;&#x5173;&#x7CFB;&#x4E0E;&#x53E6;&#x4E00;&#x4E2A;&#x7EC4;&#x4EF6;&#x7684;&#x6C34;&#x5E73;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x9636;&#x6BB5;&#x5173;&#x7CFB;&#x662F;&#x8868;&#x5F81;&#x7684;&#x65F6;&#x949F;&#x8FD0;&#x4F5C;&#x7684;&#x4E00;&#x4E2A;&#x91CD;&#x8981;&#x5EA6;&#x91CF;&#x3002;&#x5728;&#x6B64;&#x7814;&#x7A76;&#x4E2D;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x5EFA;&#x7ACB;&#x4E00;&#x4E2A;&#x6570;&#x5B66;&#x6A21;&#x578B;&#xFF0C;&#x4ECE;&#x5C0F;&#x9F20;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5185;&#x663C;&#x591C;&#x8282;&#x5F8B;&#x751F;&#x7269;&#x949F;&#x7684;&#x89C4;&#x7BA1;&#x67B6;&#x6784;&#xFF0C;&#x5E76;&#x786E;&#x5B9A;&#x901A;&#x8FC7;&#x7EC6;&#x80DE;&#x81EA;&#x4E3B;&#x632F;&#x8361;&#x5668;&#x4E2D;&#x770B;&#x5230;&#x7684;&#x9636;&#x6BB5;&#x79BB;&#x804C;&#x7684;&#x4E00;&#x81F4;&#x6027;&#x5B9E;&#x73B0;&#x6700;&#x4F4E;&#x6210;&#x672C;&#x4E0E;&#x4F7F;&#x7528;&#x8FED;&#x4EE3;&#x7684;&#x8FDB;&#x5316;&#x7B56;&#x7565;&#x53CA;&#x5176;&#x53C2;&#x6570;&#x3002;&#x8BE5;&#x6A21;&#x578B;&#x662F;&#x9488;&#x5BF9;&#x901A;&#x8FC7;&#x5B9E;&#x9A8C;&#x89C2;&#x5BDF;&#x5230;&#x7684;&#x663C;&#x591C;&#x8282;&#x5F8B;&#x6027;&#x7EC6;&#x80DE;&#x81EA;&#x4E3B;&#x8868;&#x578B;&#x7684;&#x57FA;&#x56E0;&#x6572;&#x9664;&#xFF0C;&#x5C24;&#x5176;&#x662F;&#x4FDD;&#x7559;&#x7684;&#x8282;&#x594F;&#x548C;&#x8868;&#x8FBE;&#x6C34;&#x5E73;&#x7684;&#x5206;&#x5B50;&#x65F6;&#x949F;&#x7EC4;&#x4EF6;&#x7684;&#x53D8;&#x5316;&#x8BA1;&#x7B97;&#x7684;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x6D4B;&#x8BD5;&#x63ED;&#x793A;&#x4F18;&#x79C0; de novo &#x9884;&#x6D4B;&#x80FD;&#x529B;&#x7684;&#x6A21;&#x578B;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;&#x654F;&#x611F;&#x6027;&#x5206;&#x6790;&#x8868;&#x660E;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x6316;&#x7A7A;&#x8868;&#x578B;&#x53C2;&#x6570;&#x6444;&#x52A8;&#x7684;&#x9C81;&#x68D2;&#x3002;

&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x81EA;&#x4E3B;&#x54FA;&#x4E73;&#x52A8;&#x7269;&#x751F;&#x7269;&#x949F;&#x7684;&#x6A21;&#x578B;&#x3002;

Circadian timekeeping by intracellular molecular clocks is evident widely in prokaryotes and eukaryotes. The clockworks are driven by autoregulatory feedback loops that lead to oscillating levels of components whose maxima are in fixed phase relationships with one another. These phase relationships are the key metric characterizing the operation of the clocks. In this study, we built a mathematical model from the regulatory structure of the intracellular circadian clock in mice and identified its parameters using an iterative evolutionary strategy, with minimum cost achieved through conformance to phase separations seen in cell-autonomous oscillators. The model was evaluated against the experimentally observed cell-autonomous circadian phenotypes of gene knockouts, particularly retention of rhythmicity and changes in expression level of molecular clock components. These tests reveal excellent de novo predictive ability of the model. Furthermore, sensitivity analysis shows that these knockout phenotypes are robust to parameter perturbation.

A model of the cell-autonomous mammalian circadian clock.

Circadienne chronom&eacute;trage par les horloges mol&eacute;culaires intracellulaires se manifeste largement dans les procaryotes et eucaryotes. Les rouages sont pilot&eacute;es par l&#39;autor&eacute;gulation des boucles de r&eacute;troaction qui m&egrave;nent &agrave; la charge des composants dont les maxima sont dans les relations de phase fixe entre eux. Ces relations de phase sont la m&eacute;trique cl&eacute; caract&eacute;risant le fonctionnement de l&#39;horloge. Dans cette &eacute;tude, nous avons construit un mod&egrave;le math&eacute;matique de la structure r&eacute;glementaire de l&#39;horloge circadienne intracellulaire chez les souris et identifi&eacute; ses param&egrave;tres &agrave; l&#39;aide d&#39;une strat&eacute;gie &eacute;volutive it&eacute;rative, avec un co&ucirc;t minimum atteint par le biais de conformit&eacute; aux s&eacute;parations de phase dans la cellules autonomes oscillateurs. Le mod&egrave;le a &eacute;t&eacute; &eacute;valu&eacute; contre les ph&eacute;notypes circadiens autonomes cellules observ&eacute;es exp&eacute;rimentalement des d&eacute;bouchures de g&egrave;ne, notamment la r&eacute;tention de la rythmicit&eacute; et changements au niveau de l&#39;expression des composants de l&#39;horloge mol&eacute;culaire. Ces tests ne r&eacute;v&egrave;lent excellents de novo capacit&eacute; pr&eacute;dictive du mod&egrave;le. En outre, une analyse de sensibilit&eacute; montre que ces ph&eacute;notypes knock-out sont robustes pour perturbation de param&egrave;tre.

Un mod&egrave;le de cellule autonome circadien chez les mammif&egrave;res.

Circadian Zeitmessung durch intrazellul&auml;re molekularer Uhren wird weithin in Prokaryoten und Eukaryoten. Die Uhrwerke sind von Autoregulatory Feedback-Schleifen gesteuert, der dazu f&uuml;hren, dass die oszillierenden Ebenen der Komponenten, deren Maxima in fester Phase Beziehungen zueinander sind. Diese Phase-Beziehungen sind die wichtigsten Metrik, die Charakterisierung des Vorgangs der Uhren. In dieser Studie haben wir gebaut, ein mathematisches Modell aus der rechtlichen Struktur der intrazellul&auml;ren circadian Clock bei M&auml;usen und identifiziert seine Parameter mit eine iterative evolution&auml;re Strategie, mit minimalen Kosten durch die Einhaltung von Phasentrennstrecken in Zelle-autonome Oszillatoren gesehen. Das Modell wurde f&uuml;r die experimentell beobachteten Zellen-autonomen circadianen Ph&auml;notypen von Gen Aussparungen, besonders Aufbewahrung Rhythmik und Ver&auml;nderungen der Ausdrucksebene der molekularen Uhr Komponenten ausgewertet. Diese Tests zeigen hervorragende de Novo Vorhersagef&auml;higkeit des Modells. Dar&uuml;ber hinaus zeigt Sensitivit&auml;tsanalyse, dass diese k.o.-Ph&auml;notypen robust, um Parameter einer St&ouml;rung.

Ein Modell der S&auml;ugetier-Zelle-autonome circadian Clock.

&#x4E24;&#x4E2A;&#x6570;&#x5341;&#x5E74;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x53D1;&#x73B0;&#x5341;&#x591A;&#x4E2A;&#x65F6;&#x949F;&#x57FA;&#x56E0;&#x548C;&#x5B9A;&#x4E49;&#x7684;&#x663C;&#x591C;&#x8282;&#x5F8B;&#x632F;&#x8361;&#x5668;&#x529F;&#x80FD;&#x7684;&#x751F;&#x5316;&#x53CD;&#x9988;&#x673A;&#x5236;&#x3002;&#x8981;&#x786E;&#x5B9A;&#x989D;&#x5916;&#x65F6;&#x949F;&#x57FA;&#x56E0;&#x548C;&#x4FEE;&#x9970;&#x7B26;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x8FDB;&#x884C;&#x4E86;&#x5168;&#x57FA;&#x56E0;&#x7EC4;&#x5C0F;&#x5E72;&#x6270; RNA &#x5E55;&#x4EBA;&#x7C7B;&#x7EC6;&#x80DE;&#x65F6;&#x949F;&#x6A21;&#x578B;&#x4E2D;&#x3002;&#x2477; &#x8FD1; 1000&#x5E74;&#x57FA;&#x56E0;&#x51CF;&#x5C11;&#x8282;&#x594F;&#x632F;&#x5E45;&#x3002;&#x70C8;&#x6027;&#x5F71;&#x54CD;&#x671F;&#x95F4;&#x957F;&#x5EA6;&#x6216;&#x589E;&#x52A0;&#x7684;&#x5E45;&#x5EA6;&#x662F;&#x4E0D;&#x592A;&#x9891;&#x7E41; &#xFF1B;&#x6211;&#x4EEC;&#x53D1;&#x73B0;&#x6570;&#x4EE5;&#x767E;&#x8BA1;&#x7684;&#x8FD9;&#x4E9B;&#xFF0C;&#x5E76;&#x8BC1;&#x5B9E;&#x4ED6;&#x4EEC;&#x5728;&#x4E2D;&#x7B49;&#x5C4F;&#x5E55;&#x4E2D;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x57FA;&#x56E0;&#x7684;&#x4E00;&#x4E2A;&#x5B50;&#x96C6;&#x7684;&#x8868;&#x5F81;&#x8868;&#x73B0;&#x51FA;&#x5242;&#x91CF;&#x4F9D;&#x8D56;&#x6027;&#x5BF9;&#x632F;&#x8361;&#x5668;&#x529F;&#x80FD;&#x3002;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x7F51;&#x7EDC;&#x5206;&#x6790;&#x8868;&#x660E;&#x6570;&#x5341;&#x79CD;&#x57FA;&#x56E0;&#x4EA7;&#x54C1;&#x76F4;&#x63A5;&#x6216;&#x95F4;&#x63A5;&#x5173;&#x8054;&#x4E0E;&#x5DF2;&#x77E5;&#x7684;&#x65F6;&#x949F;&#x7EC4;&#x4EF6;&#x3002;&#x9014;&#x5F84;&#x5206;&#x6790;&#x53D1;&#x73B0;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x57FA;&#x56E0;&#x662F;&#x4EFB;&#x804C;&#x4EBA;&#x6570;&#x8FC7;&#x591A;&#x7684;&#x7EC4;&#x4EF6;&#x7684;&#x80F0;&#x5C9B;&#x7D20;&#x4FE1;&#x53F7;&#x8F6C;&#x5BFC;&#x7684;&#x523A;&#x732C;&#xFF0C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5468;&#x671F;&#x548C;&#x53F6;&#x9178;&#x4EE3;&#x8C22;&#x3002;&#x52A0;&#x4E0A;&#x6570;&#x636E;&#x663E;&#x793A;&#x8BB8;&#x591A;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x9014;&#x5F84;&#x90FD;&#x53D7;&#x89C4;&#x7BA1;&#x7684;&#x65F6;&#x949F;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x5F97;&#x51FA;&#x7684;&#x7ED3;&#x8BBA;&#x65F6;&#x949F;&#x4E0E;&#x7EC6;&#x80DE;&#x529F;&#x80FD;&#x7684;&#x8BB8;&#x591A;&#x65B9;&#x9762;&#x76F8;&#x4E92;&#x8054;&#x7CFB;&#x3002;

&#x5728;&#x4EBA;&#x7C7B;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E2D;&#x7684;&#x663C;&#x591C;&#x8282;&#x5F8B;&#x751F;&#x7269;&#x949F;&#x7684;&#x4FEE;&#x9970;&#x7B26;&#x4E00;&#x4E2A;&#x5168;&#x57FA;&#x56E0;&#x7EC4; RNAi &#x5C4F;&#x5E55;&#x3002;

Two decades of research identified more than a dozen clock genes and defined a biochemical feedback mechanism of circadian oscillator function. To identify additional clock genes and modifiers, we conducted a genome-wide small interfering RNA screen in a human cellular clock model. Knockdown of nearly 1000 genes reduced rhythm amplitude. Potent effects on period length or increased amplitude were less frequent; we found hundreds of these and confirmed them in secondary screens. Characterization of a subset of these genes demonstrated a dosage-dependent effect on oscillator function. Protein interaction network analysis showed that dozens of gene products directly or indirectly associate with known clock components. Pathway analysis revealed these genes are overrepresented for components of insulin and hedgehog signaling, the cell cycle, and the folate metabolism. Coupled with data showing many of these pathways are clock regulated, we conclude the clock is interconnected with many aspects of cellular function.

A genome-wide RNAi screen for modifiers of the circadian clock in human cells.

Deux d&eacute;cennies de recherche identifi&eacute;s des g&egrave;nes d&#39;horloge de plus d&#39;une douzaine et d&eacute;fini un m&eacute;canisme de r&eacute;troaction biochimique de la fonction de l&#39;oscillateur circadien. Pour identifier les modificateurs et les g&egrave;nes de l&#39;horloge suppl&eacute;mentaires, nous avons r&eacute;alis&eacute; un &eacute;cran petit G&eacute;nome-large des RNA interf&eacute;rant dans un mod&egrave;le d&#39;horloge cellulaire humaine. Pr&eacute;cipitation de pr&egrave;s de 1000 g&egrave;nes r&eacute;duit amplitude de rythme. Des effets puissants sur la longueur de la p&eacute;riode ou l&#39;amplitude accrue ont &eacute;t&eacute; moins fr&eacute;quents ; Nous avons trouv&eacute; des centaines d&#39;entre eux et confirm&eacute;s dans les &eacute;crans secondaires. Caract&eacute;risation d&#39;un sous-ensemble de ces g&egrave;nes ont d&eacute;montr&eacute; un effet dose-d&eacute;pendant sur la fonction de l&#39;oscillateur. Analyse de r&eacute;seau l&#39;interaction prot&eacute;ine a montr&eacute; que des dizaines de produits g&eacute;n&eacute;tiques directement ou indirectement associent avec les composants d&#39;horloge connus. Analyse de la voie a r&eacute;v&eacute;l&eacute; que ces g&egrave;nes sont surrepr&eacute;sent&eacute;s pour les composants de l&#39;insuline et signalisation hedgehog, le cycle cellulaire et le m&eacute;tabolisme de l&#39;acide folique. Coupl&eacute; avec les donn&eacute;es montrant que la plupart de ces voies sont horloge r&eacute;gl&eacute;e, nous concluons que l&#39;horloge est interconnect&eacute;e avec les nombreux aspects de la fonction cellulaire.

Un &eacute;cran de RNAi genome-wide pour les modificateurs de l&#39;horloge circadienne dans les cellules humaines.

Zwei Jahrzehnten der Forschung mehr als ein Dutzend Uhr Gene identifiziert und definiert einen biochemische Feedback-Mechanismus der circadian Oszillator-Funktion. Um zus&auml;tzliche Uhr Gene und Modifikatoren zu identifizieren, haben wir einen genomweiten kleinen st&ouml;renden RNA-Bildschirm in einem menschlichen zellularen Uhr-Modell durchgef&uuml;hrt. Niederschlag von fast 1000 Genen reduziert Rhythmus Amplitude. Starke Auswirkungen auf die Periodenl&auml;nge oder erh&ouml;hter Amplitude waren seltener; Wir fanden hunderte davon und best&auml;tigt sie in sekund&auml;ren Bildschirmen. Charakterisierung einer Teilmenge dieser Gene zeigten eine Dosis-abh&auml;ngige Wirkung auf Oszillator-Funktion. Protein-Interaktion-Netzwerk-Analyse zeigte, dass Dutzende von Genprodukten direkt oder indirekt mit bekannten Uhr Komponenten verbinden. Weg-Analyse ergab, dass diese Gene f&uuml;r Komponenten von Insulin und Igel-signalisieren, Zellzyklus und die Folat-Stoffwechsel &uuml;berrepr&auml;sentiert sind. Zusammen mit Daten, die zeigen, dass viele dieser Wege Uhr geregelt sind, schlie&szlig;en wir, dass die Uhr mit vielen Aspekten der Zellfunktion verbunden ist.

Ein genomweiten RNAi-Bildschirm f&uuml;r Modifikatoren der circadianen Uhr in den menschlichen Zellen.

Due decenni di ricerca identificati geni orologio pi&ugrave; di un dozzina e definito un meccanismo di feedback biochimica della funzione oscillatore circadiano. Per identificare geni orologio supplementari e modificatori, abbiamo condotto un genome-wide interferenza RNA schermo piccolo in un modello di orologio cellulare umana. Atterramento di quasi 1000 geni ridotta ampiezza del ritmo. Potenti effetti sulla lunghezza di periodo o maggiore ampiezza erano meno frequenti; Abbiamo trovato centinaia di questi e li conferm&ograve; in schermi secondari. Caratterizzazione di un sottoinsieme di questi geni hanno dimostrato un effetto dose-dipendente sulla funzione dell&#39;oscillatore. Analisi di rete di interazione della proteina ha mostrato decine di prodotti genici direttamente o indirettamente associano con componenti noti orologio. Percorso analisi hanno rivelato che questi geni sono sovrarappresentati per componenti di insulina e hedgehog signaling, ciclo cellulare e il metabolismo dei folati. Accoppiato con i dati che mostrano che molti di questi percorsi sono orologio regolato, possiamo concludere che l&#39;orologio &egrave; interconnesso con molti aspetti della funzione cellulare.

Una schermata di RNAi genome-wide per modificatori dell&#39;orologio circadiano nelle cellule umane.

&#x7814;&#x7A76;&#x306E; 20 &#x5E74;&#x9593; 1 &#x30C0;&#x30FC;&#x30B9;&#x4EE5;&#x4E0A;&#x306E;&#x6642;&#x8A08;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x3092;&#x8B58;&#x5225;&#x3057;&#x3001;&#x751F;&#x5316;&#x5B66;&#x7684;&#x30D5;&#x30A3;&#x30FC;&#x30C9;&#x30D0;&#x30C3;&#x30AF; &#x30E1;&#x30AB;&#x30CB;&#x30BA;&#x30E0; &#x30B5;&#x30FC;&#x30AB;&#x30C7;&#x30A3;&#x30A2;&#x30F3;&#x632F;&#x52D5;&#x5B50;&#x95A2;&#x6570;&#x306E;&#x5B9A;&#x7FA9;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x8FFD;&#x52A0;&#x306E;&#x6642;&#x8A08;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x3068;&#x4FEE;&#x98FE;&#x5B50;&#x3092;&#x8B58;&#x5225;&#x3059;&#x308B;&#x306B;&#x306F;&#x3001;&#x30B2;&#x30CE;&#x30E0;&#x5C0F;&#x3055;&#x306A;&#x5E72;&#x6E09; RNA &#x753B;&#x9762;&#x3072;&#x3068;&#x7D30;&#x80DE;&#x6642;&#x8A08;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x3067;&#x5B9F;&#x65BD;&#x3002;&#x307B;&#x307C; 1000&#x5E74;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x30CE;&#x30C3;&#x30AF;&#x30C0;&#x30A6;&#x30F3; &#x30EA;&#x30BA;&#x30E0;&#x306E;&#x632F;&#x5E45;&#x3092;&#x6E1B;&#x5C11;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x5468;&#x671F;&#x9577;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x5897;&#x52A0;&#x306E;&#x632F;&#x5E45;&#x306E;&#x5F37;&#x529B;&#x306A;&#x5F71;&#x97FF;&#x306F;&#x305D;&#x308C;&#x307B;&#x3069;&#x983B;&#x7E41;&#x306B;&#x3042;&#x3063;&#x305F;;&#x6211;&#x3005; &#x306F;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x6570;&#x767E;&#x3092;&#x767A;&#x898B;&#x3057;&#x3001;&#x305D;&#x308C;&#x3089;&#x304C;&#x4E8C;&#x6B21;&#x306E;&#x753B;&#x9762;&#x3067;&#x78BA;&#x8A8D;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x30B5;&#x30D6;&#x30BB;&#x30C3;&#x30C8;&#x306E;&#x7279;&#x6027;&#x8A55;&#x4FA1;&#x306F;&#x767A;&#x632F;&#x5668;&#x306E;&#x6A5F;&#x80FD;&#x306E;&#x7528;&#x91CF;&#x4F9D;&#x5B58;&#x6027;&#x306E;&#x5F71;&#x97FF;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x30CD;&#x30C3;&#x30C8;&#x30EF;&#x30FC;&#x30AF;&#x89E3;&#x6790;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x7523;&#x7269;&#x306E;&#x6570;&#x5341;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x9593;&#x63A5;&#x7684;&#x65E2;&#x77E5;&#x306E;&#x30AF;&#x30ED;&#x30C3;&#x30AF;&#x306E;&#x30B3;&#x30F3;&#x30DD;&#x30FC;&#x30CD;&#x30F3;&#x30C8;&#x3068;&#x95A2;&#x9023;&#x4ED8;&#x3051;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x30D1;&#x30B9;&#x30A6;&#x30A7;&#x30A4;&#x89E3;&#x6790;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306F;&#x3001;&#x30A4;&#x30F3;&#x30B9;&#x30EA;&#x30F3;&#x3068;&#x30D8;&#x30C3;&#x30B8;&#x30DB;&#x30C3;&#x30B0; &#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#x3001;&#x7D30;&#x80DE;&#x5468;&#x671F;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x8449;&#x9178;&#x4EE3;&#x8B1D;&#x306E;&#x30B3;&#x30F3;&#x30DD;&#x30FC;&#x30CD;&#x30F3;&#x30C8;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x53CE;&#x76E3;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x6642;&#x8A08;&#x306E;&#x898F;&#x5236;&#x304C;&#x591A;&#x3044;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x7D4C;&#x8DEF;&#x3092;&#x793A;&#x3059;&#x30C7;&#x30FC;&#x30BF;&#x3068;&#x76F8;&#x307E;&#x3063;&#x3066;&#x3001;&#x6642;&#x8A08;&#x7D30;&#x80DE;&#x6A5F;&#x80FD;&#x306E;&#x591A;&#x304F;&#x306E;&#x5074;&#x9762;&#x3092;&#x76F8;&#x4E92;&#x63A5;&#x7D9A;&#x3092;&#x7DE0;&#x7D50;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x3072;&#x3068;&#x7D30;&#x80DE;&#x3067;&#x306E;&#x6982;&#x65E5;&#x6642;&#x8A08;&#x306E;&#x4FEE;&#x98FE;&#x5B50;&#x306E;&#x30B2;&#x30CE;&#x30E0;&#x30EF;&#x30A4;&#x30C9; RNAi screen&#x3002;

&#xC5F0;&#xAD6C;&#xC758; 20 &#xB144; &#xC774;&#xC0C1;&#xC758; &#xC2DC;&#xACC4; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xC2DD;&#xBCC4; &#xD558; &#xACE0; &#xC815;&#xC758; circadian &#xBC1C;&#xC9C4;&#xAE30; &#xD568;&#xC218;&#xC758; &#xC0DD; &#xD654; &#xD655; &#xC801;&#xC778; &#xD53C;&#xB4DC;&#xBC31; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;. &#xCD94;&#xAC00; &#xC2DC;&#xACC4; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC640; &#xD55C;&#xC815;&#xC790;&#xB97C; &#xC2DD;&#xBCC4;, &#xC778;&#xAC04;&#xC758; &#xC138;&#xD3EC; &#xC2DC;&#xACC4; &#xBAA8;&#xB378;&#xC758; &#xAC8C;&#xB188; &#xB113;&#xC740; &#xC791;&#xC740; &#xAC04;&#xC12D; RNA &#xD654;&#xBA74; &#xC2E4;&#xC2DC;. &#xAC70;&#xC758; 1000 &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC758; &#xCD5C;&#xC800;&#xC758; &#xB9AC;&#xB4EC; &#xC9C4;&#xD3ED; &#xAC10;&#xC18C;. &#xAE30;&#xAC04; &#xAE38;&#xC774; &#xB610;&#xB294; &#xC99D;&#xAC00; &#xC9C4;&#xD3ED;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xAC15;&#xB825;&#xD55C; &#xD6A8;&#xACFC; &#xD588;&#xB2E4; &#xB35C; &#xC790;&#xC8FC;; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xC774;&#xB4E4;&#xC758; &#xC218;&#xBC31;&#xC744; &#xBC1C;&#xACAC; &#xD558; &#xACE0; &#xBCF4;&#xC870; &#xD654;&#xBA74;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD655;&#xC778;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC758; &#xBD80;&#xBD84; &#xC9D1;&#xD569;&#xC758; &#xD2B9;&#xC131; &#xBC1C;&#xC9C4;&#xAE30; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC5D0; &#xBCF5;&#xC6A9;&#xB7C9;-&#xC758;&#xC874; &#xD6A8;&#xACFC; &#xC785;&#xC99D;. &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC0C1;&#xD638;&#xC791;&#xC6A9; &#xB124;&#xD2B8;&#xC6CC;&#xD06C; &#xBD84;&#xC11D; &#xC218;&#xC2ED; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xC81C;&#xD488;&#xC758; &#xC9C1;&#xC811; &#xB610;&#xB294; &#xAC04;&#xC811;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xC5F0;&#xACB0; &#xC54C;&#xB824;&#xC9C4;&#xB41C; &#xC2DC;&#xACC4; &#xBD80;&#xD488;&#xC744; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC8FC;&#xC5C8;&#xB2E4;. &#xD1B5;&#xB85C; &#xBD84;&#xC11D;&#xC774;&#xC774; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xB294; &#xC5FD; &#xC0B0; &#xB300;&#xC0AC;, &#xC138;&#xD3EC; &#xC8FC;&#xAE30; &#xBC0F; &#xC2E0;&#xD638; &#xACE0;&#xC2B4;&#xB3C4;&#xCE58;, &#xC778;&#xC290;&#xB9B0;&#xC758; &#xAD6C;&#xC131; &#xC694;&#xC18C;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; overrepresented &#xBC1D;&#xD614;&#xB2E4;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xACBD;&#xB85C; &#xB9CE;&#xC740; &#xC2DC;&#xACC4; &#xADDC;&#xC81C; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC8FC;&#xB294; &#xB370;&#xC774;&#xD130;&#xC640; &#xACB0;&#xD569; &#xD558; &#xC5EC;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xC2DC;&#xACC4; &#xC140;&#xB8F0;&#xB7EC; &#xD568;&#xC218;&#xC758; &#xC5EC;&#xB7EC; &#xCE21;&#xBA74;&#xC73C;&#xB85C; &#xC0C1;&#xD638; &#xC5F0;&#xACB0; &#xACB0;&#xB860;.

&#xC778;&#xAC04;&#xC758; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0; circadian clock&#xC758; &#xD55C;&#xC815;&#xC790;&#xC758; &#xAC8C;&#xB188; &#xB113;&#xC740; RNAi screen.

Dos d&eacute;cadas de investigaci&oacute;n hab&iacute;a identificado genes reloj de m&aacute;s de una docena y define un mecanismo de retroalimentaci&oacute;n bioqu&iacute;micos de la funci&oacute;n de oscilador circadiano. Para identificar genes de reloj adicional y modificadores, se realiz&oacute; una pantalla de RNA interferente de genoma peque&ntilde;a en un modelo de reloj celular humana. Ca&iacute;da de casi 1000 genes reduce la amplitud del ritmo. Efectos potentes en duraci&oacute;n o amplitud creciente fueron menos frecuentes; hemos encontrado cientos de &eacute;stos y hab&iacute;a confirmado en pantallas secundarias. Caracterizaci&oacute;n de un subconjunto de estos genes demostr&oacute; un efecto dosis dependiente en funci&oacute;n de oscilador. An&aacute;lisis de red de interacci&oacute;n de prote&iacute;nas mostraron que docenas de productos g&eacute;nicos directa o indirectamente asocian con componentes conocidos del reloj. V&iacute;a an&aacute;lisis revel&oacute; que estos genes son componentes de insulina y se&ntilde;alizaci&oacute;n de erizo, el ciclo celular y el metabolismo del folato. Junto con los datos que muestran que muchas de estas v&iacute;as son reloj regulado, concluimos que el reloj est&aacute; interconectado con muchos aspectos de la funci&oacute;n celular.

Una pantalla de ARNi genoma para modificadores del reloj circadiano en c&eacute;lulas humanas.

&#x671F;&#x95F4;&#x7981;&#x98DF;&#xFF0C;&#x54FA;&#x4E73;&#x52A8;&#x7269;&#x901A;&#x8FC7;&#x523A;&#x6FC0;&#x809D;&#x810F;&#x8461;&#x8404;&#x7CD6;&#x7EF4;&#x6301;&#x6B63;&#x5E38;&#x8840;&#x7CD6;&#x7A33;&#x6001;&#x3002;&#x5728;&#x5FAA;&#x73AF;&#x80F0;&#x9AD8;&#x8840;&#x7CD6;&#x7D20;&#x548C;&#x80BE;&#x4E0A;&#x817A;&#x7D20;&#xFF0C;&#x4E24;&#x79CD;&#x6FC0;&#x7D20;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x809D;&#x8461;&#x8404;&#x7CD6;&#xFF0C;&#x6D77;&#x62D4;&#x89E6;&#x53D1; cAMP &#x4ECB;&#x5BFC;&#x78F7;&#x9178;&#x5316; cAMP &#x53CD;&#x5E94;&#x5143;&#x4EF6;&#x7ED3;&#x5408;&#x86CB;&#x767D; (Creb) &#x548C;&#x8131;&#x6C2E;&#x9664;&#x78F7;&#x7684; Creb &#x8C03;&#x8282;&#x8F6C;&#x5F55;&#x5171;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x56E0;&#x5B50;-2 &#xFF08;Crtc2&#xFF09; &mdash; &mdash; &#x8FD9;&#x4E00;&#x8FDB;&#x7A0B;&#x7684;&#x4E24;&#x4E2A;&#x5173;&#x952E;&#x8F6C;&#x5F55;&#x8C03;&#x8282;&#x3002;&#x867D;&#x7136;&#x57FA;&#x672C;&#x673A;&#x5236;&#x5F88;&#x4E0D;&#x6E05;&#x695A;&#xFF0C;&#x809D;&#x8461;&#x8404;&#x7CD6;&#x8FD8;&#x53D7;&#x751F;&#x7269;&#x949F;&#x5750;&#x6807;&#x8461;&#x8404;&#x7CD6;&#x4EE3;&#x8C22;&#x4E0E;&#x5916;&#x90E8;&#x73AF;&#x5883;&#x7684;&#x53D8;&#x5316;&#x3002;&#x663C;&#x591C;&#x8282;&#x5F8B;&#x63A7;&#x5236;&#x57FA;&#x56E0;&#x8868;&#x8FBE;&#x901A;&#x8FC7;&#x4E24;&#x4E2A;&#x8F6C;&#x5F55;&#x6D3B;&#x5316;&#x5242;&#xFF0C;&#x65F6;&#x949F;&#x548C; Bmal1 &#x523A;&#x6FC0;&#x9690;&#x82B1;&#x8272;&#x7D20; &#xFF08;Cry1 &#x548C; Cry2&#xFF09; &#x548C;&#x9972;&#x6599;&#x7684;&#x671F;&#x95F4; &#xFF08;&#x7B2C; 1&#x3001; Per2 &#x548C; Per3&#xFF09; repressors &#x80CC;&#x9762;&#x65F6;&#x949F; Bmal1 &#x6D3B;&#x52A8;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#x6211;&#x4EEC;&#x5C55;&#x793A; Creb &#x6D3B;&#x52A8;&#x671F;&#x95F4;&#x7981;&#x98DF;&#x8C03;&#x5236;&#x7684; Cry1 &#x548C; Cry2&#xFF0C;&#x809D;&#x810F;&#x6709;&#x8282;&#x594F;&#x5730;&#x8868;&#x73B0;&#x7684;&#x3002;Cry1 &#x8868;&#x8FBE;&#x63D0;&#x5347;&#x5728;&#x65E5;&#x591C;&#x8FC7;&#x6E21;&#x65F6;&#x671F;&#xFF0C;&#x5F53;&#x5B83;&#x901A;&#x8FC7;&#x963B;&#x6B62;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5185;&#x8425;&#x6D53;&#x5EA6;&#x53CA;&#x86CB;&#x767D;&#x6FC0;&#x9176; A &#x4ECB;&#x5BFC;&#x78F7;&#x9178;&#x5316; Creb &#x80F0;&#x9AD8;&#x8840;&#x7CD6;&#x7D20;&#x4ECB;&#x5BFC;&#x589E;&#x52A0;&#x964D;&#x4F4E;&#x7A7A;&#x8179;&#x7CD6;&#x539F;&#x5F02;&#x751F;&#x4F5C;&#x7528;&#x7684;&#x57FA;&#x56E0;&#x7684;&#x8868;&#x8FBE;&#x3002;&#x5728;&#x751F;&#x5316;&#x91CD;&#x7EC4;&#x7814;&#x7A76;&#x4E2D;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x53D1;&#x73B0;&#x8425;&#x9488;&#x5BF9; G &#x86CB;&#x767D;&#x5076;&#x8054;&#x53D7;&#x4F53; (&#x6C14;&#x76F8;&#x5316;&#x5B66;&#x8FD8;&#x539F;&#xFF09; &#x6FC0;&#x6D3B;&#xFF0C;&#x800C;&#x4E0D;&#x662F;&#x773C;&#x538B;&#x5347;&#x9AD8;&#xFF0C;&#x76F4;&#x63A5;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x817A;&#x73AF;&#x5316;&#x9176;&#xFF0C;&#x6291;&#x5236; Cry1 &#x79EF;&#x7D2F;&#x3002;&#x54ED;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x4F3C;&#x4E4E;&#x8C03;&#x5236;&#x6C14;&#x76F8;&#x76F4;&#x63A5;&#x901A;&#x8FC7;&#x4E0E; G(s) &alpha; &#x7684;&#x4E92;&#x52A8;&#x6D3B;&#x52A8;&#x3002;&#x7531;&#x4E8E;&#x809D;&#x8868;&#x8FBE;&#x7684; Cry1 &#x964D;&#x4F4E;&#x8840;&#x7CD6;&#x6D53;&#x5EA6;&#x4E0E;&#x80F0;&#x5C9B;&#x7D20;&#x62B5;&#x6297;&#x7684; db/db &#x5C0F;&#x9F20;&#x6539;&#x5584;&#x7684;&#x80F0;&#x5C9B;&#x7D20;&#x654F;&#x611F;&#x6027;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x7ED3;&#x679C;&#x5EFA;&#x8BAE;&#x589E;&#x5F3A;&#x9690;&#x82B1;&#x8272;&#x7D20;&#x6D3B;&#x6027;&#x7684;&#x5316;&#x5408;&#x7269;&#x53EF;&#x5411;&#x4E2A;&#x4EBA;&#x4E0E; 2 &#x578B;&#x7CD6;&#x5C3F;&#x75C5;&#x7684;&#x6CBB;&#x7597;&#x6548;&#x76CA;&#x3002;

&#x9690;&#x82B1;&#x8272;&#x7D20;&#x4ECB;&#x5BFC;&#x663C;&#x591C;&#x8282;&#x5F8B;&#x8C03;&#x8282;&#x8425;&#x5730;&#x4FE1;&#x53F7;&#x4E0E;&#x809D;&#x8461;&#x8404;&#x7CD6;&#x3002;

During fasting, mammals maintain normal glucose homeostasis by stimulating hepatic gluconeogenesis. Elevations in circulating glucagon and epinephrine, two hormones that activate hepatic gluconeogenesis, trigger the cAMP-mediated phosphorylation of cAMP response element-binding protein (Creb) and dephosphorylation of the Creb-regulated transcription coactivator-2 (Crtc2)--two key transcriptional regulators of this process. Although the underlying mechanism is unclear, hepatic gluconeogenesis is also regulated by the circadian clock, which coordinates glucose metabolism with changes in the external environment. Circadian control of gene expression is achieved by two transcriptional activators, Clock and Bmal1, which stimulate cryptochrome (Cry1 and Cry2) and Period (Per1, Per2 and Per3) repressors that feed back on Clock-Bmal1 activity. Here we show that Creb activity during fasting is modulated by Cry1 and Cry2, which are rhythmically expressed in the liver. Cry1 expression was elevated during the night-day transition, when it reduced fasting gluconeogenic gene expression by blocking glucagon-mediated increases in intracellular cAMP concentrations and in the protein kinase A-mediated phosphorylation of Creb. In biochemical reconstitution studies, we found that Cry1 inhibited accumulation of cAMP in response to G protein-coupled receptor (GPCR) activation but not to forskolin, a direct activator of adenyl cyclase. Cry proteins seemed to modulate GPCR activity directly through interaction with G(s)Î±. As hepatic overexpression of Cry1 lowered blood glucose concentrations and improved insulin sensitivity in insulin-resistant db/db mice, our results suggest that compounds that enhance cryptochrome activity may provide therapeutic benefit to individuals with type 2 diabetes.

Cryptochrome mediates circadian regulation of cAMP signaling and hepatic gluconeogenesis.

Pendant le je&ucirc;ne, les mammif&egrave;res maintiennent l&#39;hom&eacute;ostasie du glucose normal par glucon&eacute;ogen&egrave;se h&eacute;patique stimulant. &Eacute;l&eacute;vations en circulant de glucagon et adr&eacute;naline, deux hormones qui activent la glucon&eacute;ogen&egrave;se h&eacute;patique, d&eacute;clenchent la phosphorylation m&eacute;di&eacute;e par le cAMP de cAMP response element-binding protein (Creb) et la d&eacute;phosphorylation de la transcription Creb r&eacute;glement&eacute;s coactivateur-2 (Crtc2)--deux r&eacute;gulateurs transcriptionnels cl&eacute;s de ce processus. Bien que le m&eacute;canisme sous-jacent n&#39;est pas clair, glucon&eacute;ogen&egrave;se h&eacute;patique est &eacute;galement r&eacute;gul&eacute; par l&#39;horloge circadienne, qui coordonne le m&eacute;tabolisme du glucose avec l&#39;&eacute;volution de l&#39;environnement ext&eacute;rieur. Rythme circadien, contr&ocirc;le de l&#39;expression g&eacute;nique est r&eacute;alis&eacute; par deux activateurs transcriptionnels, horloge et Bmal1, qui stimulent les cryptochromes (Cry1 et Cry2) et p&eacute;riode r&eacute;presseurs (Per1, Per2 et Per3) qui se nourrissent de retour sur l&#39;activit&eacute; de l&#39;horloge-Bmal1. Nous d&eacute;montrons que Creb activit&eacute; pendant le je&ucirc;ne est modul&eacute;e par Cry1 et Cry2, rythmiquement exprim&eacute;es dans le foie. Expression cry1 &eacute;tait &eacute;lev&eacute;e pendant la transition jour-nuit, lorsqu&#39;il a r&eacute;duit l&#39;expression des g&egrave;nes glucoformateurs jeun en bloquant une augmentation induite par le glucagon dans les concentrations d&#39;AMPc intracellulaires et la phosphorylation de m&eacute;diation A prot&eacute;ine kinase de Creb. Dans des &eacute;tudes biochimiques de reconstitution, nous avons constat&eacute; que Cry1 inhib&eacute;e l&#39;accumulation d&#39;AMPc en r&eacute;ponse &agrave; l&#39;activation des r&eacute;cepteurs coupl&eacute;s aux prot&eacute;ines (GPCR) G, mais pas &agrave; la forskoline, un activateur direct de l&#39;ad&eacute;nyl-cyclase. Prot&eacute;ines Cry semblent moduler l&#39;activit&eacute; des RCPG directement via l&#39;interaction avec s &alpha;. H&eacute;patique surexpression de Cry1 affale en concentrations de glucose de sang et de la sensibilit&eacute; &agrave; l&#39;insuline am&eacute;lior&eacute;e chez les souris db/db insulino-r&eacute;sistants, nos r&eacute;sultats sugg&egrave;rent que les compos&eacute;s qui augmentent l&#39;activit&eacute; cryptochrome peuvent fournir b&eacute;n&eacute;fice th&eacute;rapeutique pour personnes atteintes de diab&egrave;te de type 2.

Fibromyalgia m&eacute;die circadienne r&egrave;glement du cAMP de signalisation et de la glucon&eacute;ogen&egrave;se h&eacute;patique.

W&auml;hrend Fasten pflegen S&auml;ugetiere normalen Glukose-Hom&ouml;ostase durch anregende hepatische Glukoneogenese. Erhebungen in zirkulierenden Glukagon und Adrenalin, zwei Hormone, die hepatische Glukoneogenese aktivieren Ausl&ouml;sen der cAMP-vermittelten Phosphorylierung von cAMP Response Element-Binding Protein (Creb) und Dephosphorylierung von Creb regulierte Transkription Coaktivator-2 (Crtc2)--zwei wichtige transkriptionelle Regulatoren dieses Prozesses. Obwohl der zugrunde liegende Mechanismus unklar ist, wird hepatische Glukoneogenese auch der circadianen Uhr reguliert die Glukosestoffwechsel mit Ver&auml;nderungen in der externen Umwelt koordiniert. Circadian Kontrolle der Genexpression erfolgt durch zwei transcriptional Aktivatoren, Clock und Bmal1, die Cryptochrom (Cry1 und Cry2) stimulieren und Zeitraum (Per1, 2Mio. und Per3) Repressoren, die Speisen wieder auf die Uhr-Bmal1-Aktivit&auml;t. Hier zeigen wir, dass Creb-Aktivit&auml;t w&auml;hrend des Fastens moduliert wird, durch Cry1 und Cry2, die rhythmisch in der Leber exprimiert werden. Cry1 Ausdruck wurde w&auml;hrend des Tag-Nacht-&Uuml;bergangs erhoben, wenn sie Fasten gluconeogenic Genexpression Glukagon-vermittelte Steigerungen im intrazellul&auml;ren cAMP-Konzentration und in der Protein-Kinase A-vermittelte Phosphorylierung von Creb-Blockierung reduziert. In biochemischen Rekonstitution Studien fanden wir dass Cry1 hemmte die Akkumulation des Lagers in Reaktion mit Aktivierung der G-Protein-gekoppelter Rezeptor (GPCR) jedoch nicht mit Forskolin, einer direkten Aktivierung Adenyl Cyclase. Schrei Proteine schien GPCR Aktivit&auml;t direkt durch Interaktion mit G(s) &alpha; zu modulieren. Wie Leber eine &Uuml;berexpression von Cry1 Blut-Glukose-Konzentrationen und verbesserte Insulinsensitivit&auml;t bei Insulinresistenz Db/Db-M&auml;usen gesenkt, deuten unsere Ergebnisse an Verbindungen, die Cryptochrom Aktivit&auml;t verbessern k&ouml;nnte therapeutischen Nutzen f&uuml;r Menschen mit Typ 2 Diabetes darstellen.

Cryptochrom vermittelt die circadiane Regulierung von cAMP Signalisierung und hepatische Glukoneogenese.

Durante il digiuno, mammiferi mantengono l&#39;omeostasi normale glucosio dalla gluconeogenesi epatica stimolante. Elevazioni in circolazione glucagone e adrenalina, due ormoni che attivano la gluconeogenesi epatica, innescano la fosforilazione accampamento-mediata del cAMP response element-binding protein (Creb) e defosforilazione della trascrizione regolata da Creb coactivator-2 (Crtc2) - due regolatori trascrizionali chiavi di questo processo. Sebbene il meccanismo sottostante &egrave; chiaro, gluconeogenesi epatica sono regolata anche dall&#39;orologio circadiano, che coordina il metabolismo del glucosio con cambiamenti nell&#39;ambiente esterno. Circadiano controllo dell&#39;espressione genica &egrave; ottenuto da due Attivatori trascrizionali, orologio e Bmal1, che stimolano l&#39;ablazione (Cry1 e Cry2) e periodo repressori (Per1, Per2 e Per3) che alimentano indietro sull&#39;orologio-Bmal1 attivit&agrave;. Qui vi mostriamo che Creb attivit&agrave; durante il digiuno &egrave; modulata da Cry1 e Cry2, che ritmicamente sono espressi nel fegato. Cry1 espressione fu elevato durante la transizione giorno-notte, quando ridotta espressione del gene gluconeogenic digiuno bloccando aumenta glucagone-mediata in concentrazioni intracellulari di cAMP e la fosforilazione della proteina chinasi A-mediata di Creb. Negli studi di biochimica ricostituzione, abbiamo trovato che accumulo Cry1 inibito di cAMP in risposta all&#39;attivazione dei recettori accoppiati a proteine (GPCR) G, ma non la forskolina, un attivatore diretto del adenyl cyclase. Cry proteine sembravano modulano attivit&agrave; GPCR direttamente attraverso l&#39;interazione con g &alpha;. Come epatico sovraespressione di Cry1 abbassato concentrazioni di glucosio del sangue e la sensibilit&agrave; all&#39;insulina migliorata nei topi db/db insulino-resistenti, i nostri risultati suggeriscono che composti che aumentano l&#39;attivit&agrave; di ablazione possono fornire benefici terapeutici alle persone con diabete di tipo 2.

Ablazione media circadiano regolazione del signaling cAMP e gluconeogenesi epatica.

&#x65AD;&#x98DF;&#x4E2D;&#x306B;&#x54FA;&#x4E73;&#x985E;&#x306F;&#x3001;&#x523A;&#x6FC0;&#x306E;&#x809D;&#x7CD6;&#x65B0;&#x751F;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x901A;&#x5E38;&#x30B0;&#x30EB;&#x30B3;&#x30FC;&#x30B9;&#x6052;&#x5E38;&#x6027;&#x3092;&#x7DAD;&#x6301;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30B0;&#x30EB;&#x30AB;&#x30B4;&#x30F3;&#x53CA;&#x3073;&#x30A8;&#x30D4;&#x30CD;&#x30D5;&#x30EA;&#x30F3;&#x3001;&#x809D;&#x7CD6;&#x65B0;&#x751F;&#x3092;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6;&#x306B;&#x3059;&#x308B; 2 &#x3064;&#x306E;&#x30DB;&#x30EB;&#x30E2;&#x30F3;&#x3092;&#x5FAA;&#x74B0;&#x6A19;&#x9AD8;&#x30AD;&#x30E3;&#x30F3;&#x30D7;&#x5FDC;&#x7B54;&#x8981;&#x7D20;&#x7D50;&#x5408;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA; (Creb) &#x306E;&#x30AD;&#x30E3;&#x30F3;&#x30D7;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x305F;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x3068;&#x8131;&#x71D0;&#x9178;&#x5316; Creb &#x898F;&#x5236;&#x8EE2;&#x5199;&#x30B3;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C1;&#x30D9;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC; 2 (Crtc2)--2 &#x3064;&#x306E;&#x30AD;&#x30FC;&#x306E;&#x8EE2;&#x5199;&#x30EC;&#x30AE;&#x30E5;&#x30EC;&#x30FC;&#x30BF;&#x3053;&#x306E;&#x30D7;&#x30ED;&#x30BB;&#x30B9;&#x3092;&#x30C8;&#x30EA;&#x30AC;&#x30FC;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x57FA;&#x306B;&#x306A;&#x308B;&#x30E1;&#x30AB;&#x30CB;&#x30BA;&#x30E0;&#x306F;&#x660E;&#x78BA;&#x3067;&#x306F;&#x306A;&#x3044;&#x304C;&#x3001;&#x809D;&#x7CD6;&#x65B0;&#x751F;&#x3082;&#x5916;&#x90E8;&#x74B0;&#x5883;&#x306E;&#x5909;&#x5316;&#x306B;&#x306F;&#x7CD6;&#x4EE3;&#x8B1D;&#x3092;&#x5EA7;&#x6A19;&#x6982;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x898F;&#x5236;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30B5;&#x30FC;&#x30AB;&#x30C7;&#x30A3;&#x30A2;&#x30F3;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x767A;&#x73FE;&#x5236;&#x5FA1;&#x306E; 2 &#x3064;&#x306E;&#x8EE2;&#x5199;&#x6D3B;&#x6027;&#x6642;&#x8A08;&#x304C;&#x9054;&#x6210;&#x3055;&#x308C;&#x3001;&#x30AF;&#x30EA;&#x30D7;&#x30C8; &#x30AF;&#x30ED;&#x30E0; &#xFF08;Cry1 &#x3068; Cry2&#xFF09; &#x3092;&#x523A;&#x6FC0;&#x3059;&#x308B; Bmal1 &#x3068;&#x30D5;&#x30A3;&#x30FC;&#x30C9;&#x671F;&#x9593; (Per1&#x3001;Per2&#x3001;Per3&#xFF09; &#x306E;&#x30EA;&#x30D7;&#x30EC;&#x30C3;&#x30B5;&#x30FC;&#x6642;&#x8A08; Bmal1 &#x6D3B;&#x52D5;&#x3092;&#x30D0;&#x30C3;&#x30AF;&#x30A2;&#x30C3;&#x30D7;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x7A7A;&#x8179;&#x6642; Creb &#x6D3B;&#x6027; Cry1 &#x3068; Cry2&#x3001;&#x30EA;&#x30BA;&#x30DF;&#x30AB;&#x30EB;&#x306B;&#x809D;&#x81D3;&#x3067;&#x8868;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x305D;&#x308C;&#x5897;&#x52A0;&#x3059;&#x308B;&#x30B0;&#x30EB;&#x30AB;&#x30B4;&#x30F3;&#x3092;&#x4ECB;&#x3059;&#x308B;&#x7D30;&#x80DE;&#x5185;&#x30AD;&#x30E3;&#x30F3;&#x30D7;&#x6FC3;&#x5EA6;&#x3068;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC; A &#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x305F;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316; Creb &#x3092;&#x30D6;&#x30ED;&#x30C3;&#x30AF;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x7A7A;&#x8179;&#x6642;&#x7CD6;&#x65B0;&#x751F;&#x7CFB;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x767A;&#x73FE;&#x3092;&#x6E1B;&#x5C11;&#x3059;&#x308B;&#x3068;&#x304D; Cry1 &#x5F0F;&#x6CCA;&#x65E5;&#x9077;&#x79FB;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x6607;&#x683C;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x751F;&#x5316;&#x5B66;&#x7684;&#x518D;&#x69CB;&#x6210;&#x306E;&#x7814;&#x7A76;&#x3067;&#x306F;, &#x305D;&#x306E;&#x6291;&#x5236; Cry1 &#x84C4;&#x7A4D;&#x5408;&#x5BBF;&#x5FDC;&#x7B54;&#x30D5;&#x30A9;&#x30EB;&#x30B9;&#x30B3;&#x30EA;&#x30F3; &#x30A2;&#x30C7;&#x30CB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30AF;&#x30E9;&#x30FC;&#x30BC;&#x6D3B;&#x6027;&#x306E;&#x76F4;&#x63A5;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x304C; G &#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x5171;&#x5F79;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53; &#xFF08;GPCR&#xFF09; &#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x3059;&#x308B;&#x3092;&#x767A;&#x898B;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x6CE3;&#x304F;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA; G(s) &alpha; &#x3068;&#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x3092;&#x901A;&#x3058;&#x3066;&#x76F4;&#x63A5; GPCR &#x6D3B;&#x6027;&#x3092;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x3059;&#x308B;&#x3088;&#x3046;&#x306B;&#x898B;&#x3048;&#x305F;&#x3002;&#x8840;&#x4E2D;&#x30B0;&#x30EB;&#x30B3;&#x30FC;&#x30B9;&#x6FC3;&#x5EA6;&#x3068;&#x6539;&#x5584;&#x30A4;&#x30F3;&#x30B9;&#x30EA;&#x30F3;&#x611F;&#x53D7;&#x6027;&#x30A4;&#x30F3;&#x30B9;&#x30EA;&#x30F3;&#x8010;&#x6027;&#x306E; db/db &#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B; Cry1 &#x306E;&#x809D;&#x306E;&#x904E;&#x5270;&#x767A;&#x73FE;&#x3092;&#x4E0B;&#x3052;&#x308B;&#x3088;&#x3046;&#x306B;&#x3001;&#x6211;&#x3005; &#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x30AF;&#x30EA;&#x30D7;&#x30C8; &#x30AF;&#x30ED;&#x30E0;&#x6D3B;&#x52D5;&#x3092;&#x9AD8;&#x3081;&#x308B;&#x5316;&#x5408;&#x7269;&#x304C; 2 &#x578B;&#x7CD6;&#x5C3F;&#x75C5;&#x3092;&#x6301;&#x3064;&#x500B;&#x4EBA;&#x306B;&#x6CBB;&#x7642;&#x52B9;&#x679C;&#x3092;&#x4E0E;&#x3048;&#x308B;&#x304B;&#x3082;&#x3057;&#x308C;&#x306A;&#x3044;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x304A;&#x52E7;&#x3081;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x30AF;&#x30EA;&#x30D7;&#x30C8; &#x30AF;&#x30ED;&#x30E0;&#x306E;&#x809D;&#x7CD6;&#x65B0;&#x751F;&#x30AD;&#x30E3;&#x30F3;&#x30D7; &#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;&#x3068;&#x6982;&#x898F;&#x5236;&#x3092;&#x4EF2;&#x4ECB;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#xAE08;&#xC2DD; &#xD558;&#xB294; &#xB3D9;&#xC548; &#xD3EC;&#xC720;&#xB958; &#xC790;&#xADF9; &#xAC04;&#xC7A5; gluconeogenesis&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC815;&#xC0C1;&#xC801;&#xC778; &#xD3EC;&#xB3C4; &#xB2F9; &#xD56D;&#xC0C1;&#xC131; &#xC720;&#xC9C0;. &#xAE00; &#xB8E8;&#xCE74; &#xACE4;&#xACFC; &#xD53C; &#xB124; &#xD504; &#xB9B0;, &#xAC04;&#xC7A5; gluconeogenesis&#xB97C; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xD558;&#xB294; &#xB450; &#xD638;&#xB974;&#xBAAC; &#xC21C;&#xD658;&#xC5D0; &#xACE0;&#xB3C4; &#xD2B8;&#xB9AC;&#xAC70; &#xCEA0;&#xD504; &#xC751;&#xB2F5; &#xC694;&#xC18C; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; (Creb)&#xC758; &#xCEA0;&#xD504; &#xC911;&#xC7AC; &#xC778; &#xC0B0;&#xD654; &#xBC0F; &#xC804;&#xC0AC; Creb &#xB808; &#xADE4; &#xB808;&#xC774;&#xD2B8; &#xB41C; coactivator 2 (Crtc2)-dephosphorylation&#xC774;&#xC774; &#xD504;&#xB85C;&#xC138;&#xC2A4;&#xC758; &#xB450; &#xAC00;&#xC9C0; &#xC8FC;&#xC694; transcriptional &#xB808; &#xADE4; &#xB808;&#xC774; &#xD130;. &#xAE30;&#xBCF8; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;&#xC740; &#xBD84;&#xBA85; &#xD558;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xAC04;&#xC7A5; gluconeogenesis&#xC758; &#xC678;&#xBD80; &#xD658;&#xACBD; &#xBCC0;&#xD654;&#xC5D0; &#xB530;&#xB77C; &#xD3EC;&#xB3C4; &#xB2F9; &#xB300;&#xC0AC;&#xB97C; &#xC870;&#xC815; &#xD558;&#xB294; circadian &#xC2DC;&#xACC4;&#xB85C; &#xADDC;&#xC81C;. &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xBC1C;&#xD604;&#xC758; circadian &#xC81C;&#xC5B4; &#xB450; transcriptional &#xD65C;&#xC131; &#xC81C;, &#xD074;&#xB85D;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC774;&#xB8E8;&#xC5B4;&#xC9D1;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; Bmal1, cryptochrome (Cry1 &#xBC0F; Cry2)&#xC744; &#xC790;&#xADF9; &#xD558; &#xACE0; &#xACF5;&#xAE09; &#xD558;&#xB294; &#xAE30;&#xAC04; (Per1 Per2, Per3) repressors &#xC2DC;&#xACC4; Bmal1 &#xD65C;&#xB3D9;&#xC5D0; &#xB2E4;&#xC2DC;. &#xC5EC;&#xAE30; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; &#xAE08;&#xC2DD; &#xD558;&#xB294; &#xB3D9;&#xC548; Creb &#xD65C;&#xB3D9; Cry1 &#xBC0F; Cry2, &#xAC04;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD45C;&#xD604; &#xB9AC;&#xB4EC;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xBCC0;&#xC870; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. Cry1 &#xC2DD; &#xC138;&#xD3EC;&#xB0B4; &#xCEA0;&#xD504; &#xB18D;&#xB3C4; &#xC778;&#xC740; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xD0A4; &#xB2C8; &#xC544; &#xC81C; A &#xC911;&#xC7AC; &#xC0B0;&#xD654; Creb&#xC758; &#xAE00; &#xB8E8;&#xCE74; &#xACE4; &#xC911;&#xC7AC; &#xC99D;&#xAC00; &#xCC28;&#xB2E8; &#xD558; &#xC5EC; &#xACF5; &#xBCF5; &#xC2DC; gluconeogenic &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xBC1C;&#xD604;&#xC744; &#xAC10;&#xC18C; &#xBC24; &#xC77C; &#xC804;&#xD658; &#xD558;&#xB294; &#xB3D9;&#xC548; &#xC0C1;&#xC2B9; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC0DD; &#xD654; &#xD655; &#xC801;&#xC778; &#xC7AC;&#xAD6C;&#xC131; &#xC5F0;&#xAD6C; &#xCEA0;&#xD504; forskolin, adenyl cyclase&#xC758; &#xC9C1;&#xC811; &#xD65C;&#xC131; &#xC81C; &#xC544;&#xB2C8;&#xB77C; G &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xACB0;&#xD569; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; (GPCR) &#xD65C;&#xC131;&#xD654;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC751;&#xB2F5;&#xC5D0;&#xC11C;&#xC758; &#xADF8; Cry1 &#xC800;&#xD574; &#xCD95;&#xC801;&#xC744; &#xCC3E;&#xC558;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B8; &#xC5B4; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; G(s) &alpha;&#xC640;&#xC758; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC744; &#xD1B5;&#xD574; &#xC9C1;&#xC811; GPCR &#xD65C;&#xB3D9;&#xC744; &#xC870;&#xC808; &#xD558; &#xB4EF;. &#xAC04;&#xC7A5; overexpression cry1&#xC758; &#xD608;&#xC561; &#xD3EC;&#xB3C4; &#xB2F9; &#xB18D;&#xB3C4; &#xC778;&#xC290;&#xB9B0; &#xC800;&#xD56D; db/db &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD5A5;&#xC0C1; &#xB41C; &#xC778;&#xC290;&#xB9B0; &#xAC10;&#xB3C4; &#xD558;&#xD5A5; &#xC870;&#xC815;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xACB0;&#xACFC; &#xD654;&#xD569;&#xBB3C; cryptochrome &#xD65C;&#xB3D9;&#xC744; &#xAC15;&#xD654; &#xD558;&#xB294; &#xD0C0;&#xC785;-2 &#xB2F9;&#xB1E8;&#xBCD1;&#xC744; &#xAC00;&#xC9C4; &#xAC1C;&#xC778;&#xC5D0; &#xAC8C; &#xCE58;&#xB8CC; &#xD61C;&#xD0DD;&#xC744; &#xC81C;&#xACF5;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xAD8C;&#xD574; &#xB4DC;&#xB9BD;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Cryptochrome &#xCEA0;&#xD504; &#xC2E0;&#xD638; &#xBC0F; &#xAC04;&#xC7A5; gluconeogenesis circadian &#xADDC;&#xC81C;&#xB97C; &#xC911;&#xC7AC; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Durante el ayuno, mam&iacute;feros mantienen la homeostasis de la glucosa normal al estimulante gluconeog&eacute;nesis hep&aacute;tica. Elevaciones en la circulaci&oacute;n de glucag&oacute;n y epinefrina, dos hormonas que activan la gluconeog&eacute;nesis hep&aacute;tica, activan la fosforilaci&oacute;n mediada por cAMP de la prote&iacute;na de uni&oacute;n a elemento de respuesta de campo (Creb) y desfosforilaci&oacute;n de la transcripci&oacute;n Creb-regulado coactivator-2 (Crtc2)--dos reguladores transcripcionales claves de este proceso. Aunque se desconoce el mecanismo subyacente, gluconeog&eacute;nesis hep&aacute;tica tambi&eacute;n est&aacute; regulada por el reloj circadiano, que coordina el metabolismo de la glucosa con cambios en el ambiente externo. Circadiano de la expresi&oacute;n g&eacute;nica se controla mediante dos activadores transcripcionales, reloj y Bmal1, que estimulan el Criptocromo (Cry1 y Cry2) y per&iacute;odo represores (Per1, Per2 y Per3) que se alimentan de nuevo en actividad del reloj-Bmal1. Aqu&iacute; mostramos que la actividad de Creb durante el ayuno es modulada por Cry1 y Cry2, que r&iacute;tmicamente se expresan en el h&iacute;gado. Cry1 expresi&oacute;n fue elevado durante la transici&oacute;n del d&iacute;a a la noche, cuando reducci&oacute;n el ayuno genes gluconeog&eacute;nicos bloqueando mediada por glucag&oacute;n aumentos en las concentraciones intracelulares de campo y en la fosforilaci&oacute;n mediada por A prote&iacute;na quinasa de Creb. En estudios bioqu&iacute;micos de la reconstituci&oacute;n, encontramos que Cry1 inhibidas la acumulaci&oacute;n de campamento en respuesta a la activaci&oacute;n del receptor acoplado a prote&iacute;nas (GPCR) de G, pero no a forskoline, un activador directo de la adenil ciclasa. Las prote&iacute;nas Cry parec&iacute;an modulan la actividad GPCR directamente a trav&eacute;s de la interacci&oacute;n con el &alpha; de g (s). Al hep&aacute;tica sobreexpresi&oacute;n de Cry1 baja las concentraciones de glucosa de la sangre y la sensibilidad a la insulina mejora en resistencia a la insulina ratones db/db, nuestros resultados sugieren que compuestos que mejoran la actividad Criptocromo pueden proporcionar beneficio terap&eacute;utico a las personas con diabetes tipo 2.

Criptocromo media regulaci&oacute;n circadiana de se&ntilde;alizaci&oacute;n del campo y la gluconeog&eacute;nesis hep&aacute;tica.

Bmal1 &#x662F;&#x5FC5;&#x4E0D;&#x53EF;&#x5C11;&#x7684;&#x8F6C;&#x5F55;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x56E0;&#x5B50;&#x5728;&#x54FA;&#x4E73;&#x52A8;&#x7269;&#x751F;&#x7269;&#x949F;&#x5185;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#x62A5;&#x544A; Bmal1 null &#x57FA;&#x56E0;&#x7A81;&#x53D8;&#x5C0F;&#x9F20;&#x89C6;&#x4EA4;&#x53C9;&#x4E0A;&#x7684;&#x6838; &#xFF08;SCN&#xFF09; &#x610F;&#x5916;&#x7684;&#x662F;&#xFF0C;&#x751F;&#x6210;&#x968F;&#x673A;&#x632F;&#x52A8;&#x4E0E;&#x663C;&#x591C;&#x8282;&#x5F8B;&#x7684;&#x8303;&#x56F4;&#x91CD;&#x53E0;&#x7684;&#x65F6;&#x95F4;&#x3002;&#x6E38;&#x79BB;&#x7684; SCN &#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x8868;&#x793A;&#x6CE2;&#x52A8;&#x6C34;&#x5E73; PER2 &#x751F;&#x7269;&#x53D1;&#x5149;&#x6210;&#x50CF;&#x68C0;&#x6D4B;&#x5230;&#x7684;&#x4F46;&#x4E0D;&#x662F;&#x80FD;&#x751F;&#x6210;&#x672C;&#x8D28;&#x4E0A;&#x663C;&#x591C;&#x8282;&#x5F8B;&#x632F;&#x8361;&#x3002;&#x6291;&#x5236;&#x7EC6;&#x80DE;&#x95F4;&#x901A;&#x8BAF;&#x6216;&#x4FE1;&#x53F7;&#x5728; SCN &#x5207;&#x7247;&#xFF0C;&#x4EE5;&#x63D0;&#x4F9B;&#x4E00;&#x4E2A;&#x79EF;&#x6781;&#x7684;&#x524D;&#x9988;&#x4FE1;&#x53F7;&#x5F00;&#x8F66;&#x5728;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5185;&#x7684;&#x8D1F;&#x9762;&#x53CD;&#x9988;&#x5FAA;&#x73AF;&#xFF0C;&#x5FAA;&#x73AF; AMP &#x5E9F;&#x9664;&#x968F;&#x673A;&#x632F;&#x8361;&#x3002;&#x7136;&#x540E; SCN &#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x4E4B;&#x95F4;&#x8FD9;&#x4E2A;&#x524D;&#x9988;&#x4FE1;&#x53F7;&#x4F20;&#x64AD;&#x4FC3;&#x8FDB;&#x4F5C;&#x4E3A; SCN &#x7F51;&#x7EDC;&#x7684;&#x7A81;&#x73B0;&#x51FA;&#x73B0;&#x7684; quasi-circadian &#x632F;&#x8361;&#x3002;&#x5B9E;&#x9A8C;&#x5206;&#x6790;&#x4E0E;&#x6570;&#x5B66;&#x5EFA;&#x6A21;&#x8FA9;&#x79F0;&#x7EC6;&#x80DE;&#x95F4;&#x7684;&#x8026;&#x5408;&#x548C;&#x5206;&#x5B50;&#x566A;&#x58F0;&#x4E5F;&#x662F;&#x968F;&#x673A;&#x7684;&#x8282;&#x594F;&#xFF0C;&#x63D0;&#x4F9B;&#x65B0;&#x578B;&#x751F;&#x7269;&#x793A;&#x4F8B;&#x7684;&#x566A;&#x97F3;&#x6240;&#x81F4;&#x7684;&#x632F;&#x8361;&#x7684;&#x5FC5;&#x8981;&#x6761;&#x4EF6;&#x3002;SCN &#x7F51;&#x7EDC;&#x4E2D;&#x6CA1;&#x6709;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x81EA;&#x4E3B;&#x8282;&#x5F8B;&#x632F;&#x8361;&#x51FD;&#x6570;&#x7684;&#x632F;&#x52A8;&#x968F;&#x673A;&#x663C;&#x591C;&#x8282;&#x5F8B;&#x6027;&#x7684;&#x51FA;&#x73B0;&#x7A81;&#x51FA;&#x4E86;&#x4EE5;&#x524D;&#x65E0;&#x6CD5;&#x8BC6;&#x522B;&#x7684;&#x6C34;&#x5E73;&#x7684;&#x663C;&#x591C;&#x8282;&#x5F8B;&#x6027;&#x7684;&#x7EC4;&#x7EC7;&#x3002;

&#x51FA;&#x73B0;&#x7684;&#x566A;&#x97F3;&#x6240;&#x81F4;&#x7684;&#x632F;&#x8361;&#xFF0C;&#x5728;&#x4E2D;&#x592E;&#x7684;&#x663C;&#x591C;&#x8282;&#x5F8B;&#x8D77;&#x640F;&#x5668;&#x3002;

Bmal1 is an essential transcriptional activator within the mammalian circadian clock. We report here that the suprachiasmatic nucleus (SCN) of Bmal1-null mutant mice, unexpectedly, generates stochastic oscillations with periods that overlap the circadian range. Dissociated SCN neurons expressed fluctuating levels of PER2 detected by bioluminescence imaging but could not generate circadian oscillations intrinsically. Inhibition of intercellular communication or cyclic-AMP signaling in SCN slices, which provide a positive feed-forward signal to drive the intracellular negative feedback loop, abolished the stochastic oscillations. Propagation of this feed-forward signal between SCN neurons then promotes quasi-circadian oscillations that arise as an emergent property of the SCN network. Experimental analysis and mathematical modeling argue that both intercellular coupling and molecular noise are required for the stochastic rhythms, providing a novel biological example of noise-induced oscillations. The emergence of stochastic circadian oscillations from the SCN network in the absence of cell-autonomous circadian oscillatory function highlights a previously unrecognized level of circadian organization.

Emergence of noise-induced oscillations in the central circadian pacemaker.

Bmal1 est un activateur de la transcription essentiel au sein de l&#39;horloge circadienne chez les mammif&egrave;res. Nous rapportons ici que le noyau suprachiasmatique (SCN) de souris mutantes Bmal1 null, g&eacute;n&egrave;re de fa&ccedil;on inattendue, oscillations stochastiques avec des p&eacute;riodes qui se chevauchent la gamme circadienne. Dissoci&eacute;es des neurones YVERT exprim&eacute; des fluctuations du niveau de PER2 d&eacute;tect&eacute;es par imagerie de bioluminescence mais pas peuvent g&eacute;n&eacute;rer des oscillations circadiennes intrins&egrave;quement. L&#39;inhibition de la communication intercellulaire ou AMP-cyclique de signalisation dans les tranches de SCN, qui fournissent un signal positif de feed-forward pour piloter la boucle de contre-r&eacute;action intracellulaire, aboli les oscillations stochastiques. Propagation de ce signal de feed-forward entre neurones SCN puis promeut des oscillations quasi-circadian qui se posent comme une propri&eacute;t&eacute; &eacute;mergente du r&eacute;seau SCN. Analyse exp&eacute;rimentale et la mod&eacute;lisation math&eacute;matique font valoir que le couplage intercellulaire et bruit mol&eacute;culaire sont requis pour les rythmes stochastiques, fournissant un exemple biologique roman d&#39;oscillations induites par le bruit. L&#39;&eacute;mergence du stochastiques oscillations circadiennes provenant du r&eacute;seau de la SCN en l&#39;absence de cellule autonome fonction oscillatoire circadienne met en &eacute;vidence un niveau auparavant non reconnu d&#39;organisation circadienne.

&Eacute;mergence des oscillations induites par le bruit dans le pacemaker circadien central.

Bmal1 ist ein wesentlicher transcriptional Aktivator innerhalb der S&auml;ugetier-circadianen Uhr. Wir berichten hier, dass der gefundenes Kern (SCN) Bmal1-Null-mutant-M&auml;use, unerwartet, stochastische Schwingungen mit Perioden generiert, die circadianen Bereich &uuml;berlappen. Getrennten SCN Neuronen ausgedr&uuml;ckt schwankenden Niveaus der 2Mio. von Biolumineszenz Bildgebung erkannt aber konnte nicht generiert werden circadiane Schwingungen an sich. Hemmung der interzellul&auml;re Kommunikation oder zyklische AMP signalisieren in den SCN-Segmente, die ein positives Feed-Forward-Signal an die intrazellul&auml;re negativen R&uuml;ckkopplung fahren vorsehen, schaffte die stochastischen Schwingungen. Ausbreitung dieser Feed-Forward-Signals zwischen SCN Neuronen dann f&ouml;rdert quasi-circadian Schwingungen, die als emergente Eigenschaft des SCN Netzwerks entstehen. Experimentelle Analyse und MODELLRECHNUNG argumentieren, dass interzellul&auml;re Kupplung und Molekulare L&auml;rm f&uuml;r die stochastischen Rhythmen, eine neuartige biologische Beispiel l&auml;rminduzierte Schwingungen erforderlich sind. Die Entstehung der stochastischen circadian Schwingungen aus dem SCN-Netzwerk in Ermangelung der Zelle-autonome circadian oszillierende Funktion hebt ein bisher unbekanntes Ma&szlig; an circadiane Organisation.

Entstehung der l&auml;rminduzierte Schwingungen in der zentralen zirkadianen Schrittmacher.

Bmal1 &egrave; un attivatore trascrizionale essenziale all&#39;interno dell&#39;orologio circadiano dei mammiferi. Segnaliamo qui che il nucleo soprachiasmatico (SCN) di topi mutanti Bmal1 null, inaspettatamente, genera oscillazioni stocastiche con periodi che si sovrappongono la gamma circadiana. Neuroni ANK dissociati espresso livelli fluttuanti di PER2 rilevato da imaging bioluminescenza ma non potrebbero generare oscillazioni circadiane intrinsecamente. Inibizione della comunicazione intercellulare o AMP ciclico segnalazione in fette SCN, che forniscono un segnale positivo feed-forward per guidare il ciclo di feedback negativo intracellulare, abolito le oscillazioni stocastiche. Propagazione di questo segnale di feed-forward tra neuroni ANK poi promuove quasi-circadian oscillazioni che si presentano come una propriet&agrave; emergente della rete SCN. Analisi sperimentale e modellazione matematica sostengono che sia giunto intercellulare e rumore molecolare sono obbligatori per i ritmi stocastici, fornendo un esempio biologico romanzo di oscillazioni indotta dal rumore. L&#39;emersione delle oscillazioni circadiane stocastiche dalla rete ANK in assenza della cellula autonoma funzione oscillatorio circadiano evidenzia un livello precedentemente non riconosciuto dell&#39;organizzazione circadiano.

Emersione delle oscillazioni indotta dal rumore nella centrale pacemaker circadiano.

Bmal1 &#x306F;&#x4E0D;&#x53EF;&#x6B20;&#x306A;&#x8EE2;&#x5199;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x54FA;&#x4E73;&#x985E;&#x306E;&#x6982;&#x65E5;&#x6642;&#x8A08;&#x4EE5;&#x5185;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067; Bmal1 null &#x5909;&#x7570;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x306E;&#x8996;&#x4EA4;&#x53C9;&#x4E0A;&#x6838; (SCN) &#x304C;&#x4E88;&#x671F;&#x305B;&#x305A;&#x3001;&#x6982;&#x65E5;&#x30EA;&#x30BA;&#x30E0;&#x306E;&#x7BC4;&#x56F2;&#x3068;&#x91CD;&#x306A;&#x308B;&#x671F;&#x9593;&#x78BA;&#x7387;&#x632F;&#x52D5;&#x3092;&#x751F;&#x6210;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x5831;&#x544A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x89E3;&#x96E2;&#x306E; SCN &#x30CB;&#x30E5;&#x30FC;&#x30ED;&#x30F3;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x751F;&#x7269;&#x767A;&#x5149;&#x30A4;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B8;&#x30F3;&#x30B0;&#x3092;&#x691C;&#x51FA; PER2 &#x306E;&#x5909;&#x52D5;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x3092;&#x8868;&#x660E;&#x304C;&#x6982;&#x65E5;&#x632F;&#x52D5;&#x304C;&#x672C;&#x8CEA;&#x7684;&#x306B;&#x751F;&#x6210;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3067;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x7D30;&#x80DE;&#x9593;&#x30B3;&#x30DF;&#x30E5;&#x30CB;&#x30B1;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x30B5;&#x30A4;&#x30AF;&#x30EA;&#x30C3;&#x30AF; AMP &#x7D30;&#x80DE;&#x5185;&#x8CA0;&#x5E30;&#x9084;&#x30EB;&#x30FC;&#x30D7;&#x3092;&#x99C6;&#x52D5;&#x3059;&#x308B;&#x3001;&#x6B63;&#x306E;&#x30D5;&#x30A3;&#x30FC;&#x30C9; &#x30D5;&#x30A9;&#x30EF;&#x30FC;&#x30C9;&#x4FE1;&#x53F7;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3059;&#x308B;&#x3001;SCN &#x306E;&#x30B9;&#x30E9;&#x30A4;&#x30B9;&#x3067;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#x306E;&#x963B;&#x5BB3;&#x306F;&#x78BA;&#x7387;&#x8AD6;&#x7684;&#x632F;&#x52D5;&#x3092;&#x5EC3;&#x6B62;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x30D5;&#x30A3;&#x30FC;&#x30C9; &#x30D5;&#x30A9;&#x30EF;&#x30FC;&#x30C9;&#x4FE1;&#x53F7; SCN &#x30CB;&#x30E5;&#x30FC;&#x30ED;&#x30F3; [&#x9593;&#x306E;&#x4F1D;&#x642C;&#x3001;SCN &#x30CD;&#x30C3;&#x30C8;&#x30EF;&#x30FC;&#x30AF;&#x306E;&#x5275;&#x767A;&#x7279;&#x6027;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x767A;&#x751F;&#x3059;&#x308B; quasi-circadian &#x306E;&#x632F;&#x52D5;&#x3092;&#x4FC3;&#x9032;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x5B9F;&#x9A13;&#x89E3;&#x6790;&#x3068;&#x6570;&#x7406;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x7D30;&#x80DE;&#x9593;&#x7D50;&#x5408;&#x3068;&#x5206;&#x5B50;&#x30CE;&#x30A4;&#x30BA;&#x304C;&#x30CE;&#x30A4;&#x30BA;&#x8A98;&#x8D77;&#x632F;&#x52D5;&#x306E;&#x5C0F;&#x8AAC;&#x306E;&#x751F;&#x7269;&#x306E;&#x4F8B;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x78BA;&#x7387;&#x306E;&#x30EA;&#x30BA;&#x30E0;&#x304C;&#x5FC5;&#x8981;&#x3060;&#x3068;&#x4E3B;&#x5F35;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30BB;&#x30EB;&#x81EA;&#x5F8B;&#x306E;&#x6982;&#x65E5;&#x632F;&#x52D5;&#x95A2;&#x6570;&#x306E;&#x4E0D;&#x5728;&#x3067; SCN &#x30CD;&#x30C3;&#x30C8;&#x30EF;&#x30FC;&#x30AF;&#x304B;&#x3089;&#x78BA;&#x7387;&#x306E;&#x6982;&#x65E5;&#x632F;&#x52D5;&#x306E;&#x51FA;&#x73FE;&#x4EE5;&#x524D;&#x8A8D;&#x8B58;&#x3055;&#x308C;&#x306A;&#x3044;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x6982;&#x65E5;&#x7D44;&#x7E54;&#x306E;&#x30CF;&#x30A4;&#x30E9;&#x30A4;&#x30C8;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x4E2D;&#x592E;&#x30B5;&#x30FC;&#x30AB;&#x30C7;&#x30A3;&#x30A2;&#x30F3;&#x30DA;&#x30FC;&#x30B9;&#x30E1;&#x30FC;&#x30AB;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x30CE;&#x30A4;&#x30BA;&#x8A98;&#x8D77;&#x632F;&#x52D5;&#x306E;&#x51FA;&#x73FE;&#x3002;

Bmal1 &#xD3EC;&#xC720;&#xB958; circadian &#xC2DC;&#xACC4; &#xB0B4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD544;&#xC218;&#xC801;&#xC778; transcriptional &#xD65C;&#xC131; &#xC81C; &#xC774;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC; &#xBCF4;&#xACE0; &#xC5EC;&#xAE30; Bmal1 null &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xC0DD;&#xC950;&#xC758; suprachiasmatic &#xD575; (SCN) &#xC608;&#xAE30;&#xCE58; &#xC54A;&#xAC8C;, stochastic &#xC9C4;&#xB3D9; circadian &#xBC94;&#xC704; &#xACB9;&#xCE58;&#xB294; &#xAE30;&#xAC04;&#xC744; &#xC0DD;&#xC131; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xCC9C;&#xC5F0;&#xB41C; SCN &#xC2E0;&#xACBD; &#xC0DD;&#xBB3C; &#xBC1C;&#xAD11; &#xC601;&#xC0C1;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xAC10;&#xC9C0; PER2 &#xBCC0;&#xB3D9; &#xC218;&#xC900;&#xC758; &#xD45C;&#xD604; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xBCF8;&#xC9C8;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; circadian &#xC9C4;&#xB3D9;&#xC744; &#xC0DD;&#xC131; &#xD558;&#xC9C0; &#xBABB;&#xD588;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC5B5;&#xC81C; &#xC138;&#xD3EC; &#xD1B5;&#xC2E0; &#xB610;&#xB294; &#xC8FC;&#xAE30;&#xC801; AMP SCN &#xC870;&#xAC01; &#xAE0D;&#xC815;&#xC801;&#xC778; &#xD53C;&#xB4DC; &#xD3EC;&#xC6CC;&#xB4DC; &#xC2E0;&#xD638; &#xC138;&#xD3EC;&#xB0B4; &#xB124;&#xAC70;&#xD2F0;&#xBE0C; &#xD53C;&#xB4DC;&#xBC31; &#xB8E8;&#xD504; &#xB4DC;&#xB77C;&#xC774;&#xBE0C;&#xB97C; &#xC81C;&#xACF5; &#xD558;&#xB294; &#xC2DC;&#xADF8;&#xB110;&#xB9C1;&#xC758; &#xD655;&#xB960;&#xC801; &#xC9C4;&#xB3D9; &#xD3D0;&#xC9C0;. SCN &#xC2E0;&#xACBD; &#xB2E4;&#xC74C; &#xC0AC;&#xC774;&#xC774; &#xD53C;&#xB4DC; &#xD3EC;&#xC6CC;&#xB4DC; &#xC2E0;&#xD638;&#xC758; &#xC804;&#xD30C; &#xCD09;&#xC9C4; SCN &#xB124;&#xD2B8;&#xC6CC;&#xD06C;&#xC758; &#xC751;&#xAE09; &#xC18D;&#xC131;&#xC73C;&#xB85C; &#xBC1C;&#xC0DD; &#xD558;&#xB294; quasi-circadian &#xC9C4;&#xB3D9;. &#xC2E4;&#xD5D8; &#xBD84;&#xC11D; &#xBC0F; &#xC218;&#xD559;&#xC801; &#xBAA8;&#xB378;&#xB9C1; &#xC138;&#xD3EC; &#xACB0;&#xD569; &#xBC0F; &#xBD84;&#xC790; &#xC18C;&#xC74C; &#xC9C4;&#xB3D9; &#xC18C;&#xC74C; &#xC720;&#xBC1C;&#xC758; &#xC18C;&#xC124;&#xC744; &#xC0DD;&#xBB3C; &#xD559;&#xC801; &#xC608; &#xC81C;&#xACF5; stochastic &#xB9AC;&#xB4EC;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xD544;&#xC694;&#xB294; &#xC8FC;&#xC7A5; &#xD55C;&#xB2E4;. &#xC140; &#xC790;&#xCE58; circadian &#xC9C4;&#xB3D9; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC758; &#xBD80;&#xC7AC;&#xC5D0; SCN &#xB124;&#xD2B8;&#xC6CC;&#xD06C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD655;&#xB960;&#xC801; circadian &#xC9C4;&#xB3D9;&#xC758; &#xCD9C;&#xD604; &#xC774;&#xC804;&#xC5D0; &#xC778;&#xC2DD;&#xD560; &#xC218; &#xC5C6;&#xB294; &#xC218;&#xC900;&#xC758; circadian &#xC870;&#xC9C1; &#xD558;&#xC774;&#xB77C;&#xC774;&#xD2B8;.

&#xC911;&#xC559; circadian &#xC2EC;&#xC7A5; &#xBC15; &#xB3D9;&#xAE30;&#xC758; &#xC9C4;&#xB3D9; &#xC18C;&#xC74C; &#xC720;&#xBC1C;&#xC758; &#xCD9C;&#xD604;.

Bmal1 es un activador transcripcional esencial dentro del reloj circadiano mam&iacute;fero. Divulgamos aqu&iacute; que el n&uacute;cleo supraquiasm&aacute;tico (SCN) de ratones mutantes nulos Bmal1, inesperadamente, genera oscilaciones estoc&aacute;sticas con per&iacute;odos que se superponen la gama circadiana. Las neuronas disociadas de SCN expresan niveles fluctuantes de PER2 detectado por la proyecci&oacute;n de imagen de bioluminiscencia pero no pudieran generar oscilaciones circadianas intr&iacute;nsecamente. Inhibici&oacute;n de la comunicaci&oacute;n intercelular o AMP c&iacute;clico en rebanadas SCN, que proporcionan una se&ntilde;al positiva de feed-forward para conducir el lazo intracelular contrarreacci&oacute;n, aboli&oacute; las oscilaciones estoc&aacute;sticas. Propagaci&oacute;n de esta se&ntilde;al de feed-forward entre las neuronas de la SCN entonces promueve quasi-circadian oscilaciones que se presentan como una propiedad emergente de la red SCN. An&aacute;lisis experimental y modelaci&oacute;n matem&aacute;tica argumentan que el acoplamiento intercelular tanto ruido molecular son requeridos por los ritmos estoc&aacute;sticos, proporcionando un nuevo ejemplo biol&oacute;gico de oscilaciones inducida por el ruido. La aparici&oacute;n de oscilaciones circadianas estoc&aacute;sticas de la red SCN en ausencia de c&eacute;lula aut&oacute;noma funci&oacute;n oscilatoria circadiana destaca un nivel previamente desconocido de organizaci&oacute;n circadiano.

Aparici&oacute;n de oscilaciones inducida por el ruido en los marcapasos circadianos central.

&#x5EF6;&#x8FDF;&#x53CD;&#x9988;&#x9547;&#x538B;&#x5728;&#x54FA;&#x4E73;&#x52A8;&#x7269;&#x751F;&#x7269;&#x949F;&#x7684;&#x8981;&#x6C42;&#x76F4;&#x63A5;&#x8BC1;&#x636E;&#x4E00;&#x76F4;&#x662F;&#x53EF;&#x671B;&#x800C;&#x4E0D;&#x53EF;&#x53CA;&#x3002;&#x9690;&#x82B1;&#x8272;&#x7D20; 1 (Cry1) &#x57FA;&#x672C;&#x65F6;&#x949F;&#x7EC4;&#x4EF6;&#x663E;&#x793A;&#x665A;&#x4E0A;&#x65F6;&#x95F4;&#x8868;&#x8FBE;&#x5F0F;&#xFF0C;&#x5E76;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x5F3A;&#x6709;&#x529B;&#x7684;&#x963B;&#x904F;&#x7269;&#x5728;&#x4E0A;&#x5348;&#x65F6;&#x95F4;&#x5143;&#x7D20; &#xFF08;E &#x6846;/E&#39; &#x6846;&#xFF09;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x9879;&#x7814;&#x7A76;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x63ED;&#x793A;&#x5929;&#x65F6;&#x95F4;&#x4E2D;&#x7684;&#x5143;&#x7D20; &#xFF08;D &#x6846;&#xFF09; Cry1 &#x8FD1;&#x7AEF;&#x542F;&#x52A8;&#x5B50;&#x548C;&#x591C;&#x65F6;&#x95F4;&#x5185;&#x7684;&#x5143;&#x7D20; (RREs) &#x5176;&#x5185;&#x542B;&#x5B50;&#x589E;&#x5F3A;&#x5B50;&#x7ED3;&#x5408;&#x5F15;&#x8D77;&#x665A;&#x4E0A;&#x65F6;&#x95F4;&#x8868;&#x8FBE;&#x5F0F;&#x3002;&#x5408;&#x6210;&#x7684;&#x590D;&#x5408;&#x5242;&#x751F;&#x4EA7;&#x665A;&#x4E0A;&#x65F6;&#x95F4;&#x8868;&#x8FBE;&#x5F0F;&#xFF0C;&#x5B83;&#x7531;&#x4E00;&#x4E2A;&#x7B80;&#x5355;&#x7684;&#x9636;&#x6BB5;&#x77E2;&#x91CF;&#x6A21;&#x578B;&#x8FDB;&#x4E00;&#x6B65;&#x6982;&#x62EC;&#x3002;&#x503C;&#x5F97;&#x6CE8;&#x610F;&#xFF0C;&#x65E5;&#x95F4;&#x4E0E;&#x591C;&#x95F4;&#x5143;&#x7D20;&#x534F;&#x8C03;&#x53EF;&#x8C03;&#x8282;&#x76F8;&#x4F4D;&#x5EF6;&#x8FDF;&#x7684;&#x7A0B;&#x5EA6;&#x3002;Cry1(-/-):Cry2(-/-) &#x7EC6;&#x80DE;&#x9057;&#x4F20;&#x4E92;&#x8865;&#x8BD5;&#x9A8C;&#x663E;&#x793A;&#x6062;&#x590D;&#x663C;&#x591C;&#x8282;&#x5F8B;&#x6027;&#xFF0C;&#x6240;&#x9700;&#x7684;&#x5927;&#x91CF;&#x5EF6;&#x8FDF;&#x7684; Cry1 &#x8868;&#x8FBE;&#x5176;&#x62D6;&#x5EF6;&#x4F1A;&#x51CF;&#x6162;&#x663C;&#x591C;&#x8282;&#x5F8B;&#x632F;&#x8361;&#x3002;&#x603B;&#x4E4B;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x6570;&#x636E;&#x8868;&#x660E; Cry1 &#x8F6C;&#x5F55;&#x9636;&#x6BB5;&#x62D6;&#x5EF6;&#x662F;&#x54FA;&#x4E73;&#x52A8;&#x7269;&#x65F6;&#x949F;&#x529F;&#x80FD;&#x9700;&#x8981;&#x3002;

&#x9690;&#x82B1;&#x8272;&#x7D20; 1 &#x53CD;&#x9988;&#x9547;&#x538B;&#x62D6;&#x5EF6;&#x662F;&#x751F;&#x7269;&#x949F;&#x529F;&#x80FD;&#x9700;&#x8981;&#x3002;

Direct evidence for the requirement of delay in feedback repression in the mammalian circadian clock has been elusive. Cryptochrome 1 (Cry1), an essential clock component, displays evening-time expression and serves as a strong repressor at morning-time elements (E box/E' box). In this study, we reveal that a combination of day-time elements (D box) within the Cry1-proximal promoter and night-time elements (RREs) within its intronic enhancer gives rise to evening-time expression. A synthetic composite promoter produced evening-time expression, which was further recapitulated by a simple phase-vector model. Of note, coordination of day-time with night-time elements can modulate the extent of phase delay. A genetic complementation assay in Cry1(-/-):Cry2(-/-) cells revealed that substantial delay of Cry1 expression is required to restore circadian rhythmicity, and its prolonged delay slows circadian oscillation. Taken together, our data suggest that phase delay in Cry1 transcription is required for mammalian clock function.

Delay in feedback repression by cryptochrome 1 is required for circadian clock function.

Preuve directe de l&#39;exigence d&#39;un retard dans la r&eacute;pression de la r&eacute;troaction dans l&#39;horloge circadienne chez les mammif&egrave;res a &eacute;t&eacute; difficile &agrave; atteindre. Cryptochrome 1 (Cry1), une composante essentielle d&#39;horloge, affiche l&#39;expression de soir et sert un r&eacute;presseur fort au matin-temps &eacute;l&eacute;ments (bo&icirc;te de E/E&#39; bo&icirc;te). Dans cette &eacute;tude, nous r&eacute;v&egrave;lent qu&#39;une combinaison d&#39;&eacute;l&eacute;ments de date-heure (zone D) dans les &eacute;l&eacute;ments Cry1-proximale de promoteur et nocturne (RREs) au sein de son rehausseur intronic donne lieu &agrave; expression de soir&eacute;e. Un promoteur composite synth&eacute;tique produit expression de soir&eacute;e, qui a &eacute;t&eacute; &eacute;galement r&eacute;capitul&eacute;e par un mod&egrave;le simple phase-vecteur. &Agrave; noter, coordination de diurne avec &eacute;l&eacute;ments nocturne peut moduler l&#39;ampleur du retard de phase. Une analyse de compl&eacute;mentation g&eacute;n&eacute;tique dans les cellules de Cry1(-/-):Cry2(-/-) a r&eacute;v&eacute;l&eacute; qu&#39;un d&eacute;lai important d&#39;expression Cry1 est n&eacute;cessaire pour restaurer la rythmicit&eacute; circadienne et son retard prolong&eacute; ralentit oscillation circadienne. Ensemble, nos r&eacute;sultats sugg&egrave;rent que retard de phase dans la transcription Cry1 est requis pour la fonction horloge chez les mammif&egrave;res.

Retard dans la r&eacute;pression de la r&eacute;troaction par cryptochrome 1 est requis pour la fonction de l&#39;horloge circadienne.

Direkte Beweise f&uuml;r das Erfordernis einer Verz&ouml;gerung bei der R&uuml;ckmeldung Repression in der S&auml;ugetier-circadianen Uhr hat als tr&uuml;gerisch erwiesen. Cryptochrom 1 (Cry1), eine wesentliche Taktgeber-Komponente zeigt Abend-Zeit Ausdruck und dient als ein starke Verdr&auml;nger am Morgen-Zeit-Elemente (E-Feld/E&#39; Feld). In dieser Studie zeigen wir, dass eine Kombination aus tags&uuml;ber Elementen (Feld D) innerhalb der Cry1-proximale Promotor und n&auml;chtliche-Elemente (RREs) innerhalb seiner verband intronic Vergr&ouml;&szlig;erer Abend-Zeitausdruck begr&uuml;ndet. Synthetischer zusammengesetzter F&ouml;rderer produziert Abend-Zeit-Ausdruck, der weiter von einem einfachen Phase-Vektor-Modell abgewogen wurde. Beachten ist kann Koordinierung der tags&uuml;ber mit n&auml;chtlichen Elementen das Ausma&szlig; der Phase Verz&ouml;gerung modulieren. Eine genetische Complementation Assay in Cry1(-/-):Cry2(-/-) Zellen ergab, dass erhebliche Verz&ouml;gerung Cry1 Ausdrucks ben&ouml;tigt wird, um die circadiane Rhythmik wiederherstellen, und ihre anhaltende Verz&ouml;gerung circadian Schwingung bremst. Zusammen genommen, zufolge unsere Daten Phase Verz&ouml;gerung in Cry1 Transkription f&uuml;r S&auml;ugetier-Clock-Funktion erforderlich ist.

Verz&ouml;gerung bei der Feedback-Unterdr&uuml;ckung von Cryptochrom 1 ist f&uuml;r circadian Clock-Funktion erforderlich.

Prove dirette per il requisito di ritardo nella repressione di feedback nell&#39;orologio circadiano dei mammiferi sono stato evasivo. Ablazione 1 (Cry1), un componente essenziale dell&#39;orologio, Visualizza la sera-tempo espressione e serve come un repressore forte al mattino-tempo elementi (E casella/E&#39; casella). In questo studio, ci rivelano che una combinazione di elementi diurni (casella D) all&#39;interno di Cry1-prossimale promotore e notturna elementi (RREs) all&#39;interno del suo enhancer intronic d&agrave; luogo all&#39;espressione di sera-tempo. Un promotore composito sintetico prodotto sera-tempo espressione, che &egrave; stato ricapitolato ulteriormente da un modello semplice fase-vettore. Di nota, coordinamento di giorno-tempo con elementi di notte-tempo pu&ograve; modulare l&#39;entit&agrave; del ritardo di fase. Un test di complementazione genetica nelle cellule Cry1(-/-):Cry2(-/-) rivelato notevole ritardo di Cry1 espressione &egrave; necessaria per ripristinare la ritmicit&agrave; circadiano, che il ritardo prolungato rallenta oscillazione circadiano. Presi insieme, i nostri dati suggeriscono che ritardo di fase nel Cry1 trascrizione &egrave; richiesto per la funzione dell&#39;orologio dei mammiferi.

Ritardo nella repressione di feedback di ablazione 1 &egrave; richiesto per la funzione dell&#39;orologio circadiano.

&#x54FA;&#x4E73;&#x985E;&#x306E;&#x6982;&#x65E5;&#x6642;&#x8A08;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x30D5;&#x30A3;&#x30FC;&#x30C9;&#x30D0;&#x30C3;&#x30AF;&#x6291;&#x5236;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x9045;&#x5EF6;&#x306E;&#x8981;&#x4EF6;&#x306E;&#x76F4;&#x63A5;&#x7684;&#x8A3C;&#x62E0;&#x306F;&#x3001;&#x3068;&#x3089;&#x3048;&#x3069;&#x3053;&#x308D;&#x306E;&#x306A;&#x3044;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30AF;&#x30EA;&#x30D7;&#x30C8; &#x30AF;&#x30ED;&#x30E0; 1 (Cry1&#xFF09; &#x4E0D;&#x53EF;&#x6B20;&#x306A;&#x30AF;&#x30ED;&#x30C3;&#x30AF; &#x30B3;&#x30F3;&#x30DD;&#x30FC;&#x30CD;&#x30F3;&#x30C8;&#x3001;&#x591C;&#x306E;&#x6642;&#x9593;&#x5F0F;&#x304C;&#x8868;&#x793A;&#x3055;&#x308C;&#x3001;&#x5F37;&#x3044;&#x30EA;&#x30D7;&#x30EC;&#x30C3;&#x30B5;&#x30FC;&#x3067;&#x671D;&#x306E;&#x6642;&#x9593;&#x8981;&#x7D20;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x6A5F;&#x80FD; (&#x30DC;&#x30C3;&#x30AF;&#x30B9;/&#x96FB;&#x5B50; &#39; &#x30DC;&#x30C3;&#x30AF;&#x30B9;)&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x7814;&#x7A76;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x65E5;&#x306E;&#x6642;&#x9593; (D &#x30DC;&#x30C3;&#x30AF;&#x30B9;) &#x8981;&#x7D20;&#x5185;&#x306E;&#x8981;&#x7D20;&#x3001;Cry1 &#x8FD1;&#x4F4D;&#x30D7;&#x30ED;&#x30E2;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x3068;&#x591C;&#x306E;&#x6642;&#x9593; (RREs) &#x305D;&#x306E;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C8;&#x30ED;&#x30F3; &#x30A8;&#x30F3;&#x30CF;&#x30F3;&#x30B5;&#x30FC;&#x5185;&#x306E;&#x7D44;&#x307F;&#x5408;&#x308F;&#x305B;&#x5915;&#x65B9;&#x6642;&#x9593;&#x5F0F;&#x306B;&#x4E0A;&#x6607;&#x3092;&#x4E0E;&#x3048;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x5408;&#x6210;&#x8907;&#x5408;&#x30D7;&#x30ED;&#x30E2;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x5358;&#x7D14;&#x306A;&#x4F4D;&#x76F8;&#x30D9;&#x30AF;&#x30C8;&#x30EB; &#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x3092;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x518D;&#x8868;&#x73FE;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x591C;&#x306E;&#x6642;&#x9593;&#x5F0F;&#x751F;&#x7523;&#x3002;&#x30E1;&#x30E2;&#x306E;&#x663C;&#x3068;&#x591C;&#x306E;&#x6642;&#x9593;&#x8981;&#x7D20;&#x306E;&#x30B3;&#x30FC;&#x30C7;&#x30A3;&#x30CD;&#x30FC;&#x30C8;&#x4F4D;&#x76F8;&#x9045;&#x308C;&#x306E;&#x7A0B;&#x5EA6;&#x3092;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3002;Cry1(-/-):Cry2(-/-) &#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x907A;&#x4F1D;&#x7684;&#x76F8;&#x88DC;&#x30A2;&#x30C3;&#x30BB;&#x30A4;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x5B9F;&#x8CEA;&#x7684;&#x306A;&#x9045;&#x5EF6; Cry1 &#x5F0F;&#x306E;&#x6982;&#x65E5;&#x30EA;&#x30BA;&#x30E0;&#x3092;&#x5FA9;&#x5143;&#x3059;&#x308B;&#x5FC5;&#x8981;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x3001;&#x9577;&#x6642;&#x9593;&#x306E;&#x9045;&#x5EF6;&#x306E;&#x6982;&#x65E5;&#x632F;&#x52D5;&#x304C;&#x4F4E;&#x4E0B;&#x3092;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x4E00;&#x7DD2;&#x306B;&#x53D6;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3001;&#x79C1;&#x305F;&#x3061;&#x306E;&#x30C7;&#x30FC;&#x30BF; Cry1 &#x8EE2;&#x5199;&#x306E;&#x4F4D;&#x76F8;&#x9045;&#x5EF6;&#x304C;&#x54FA;&#x4E73;&#x985E;&#x4F53;&#x5185;&#x6642;&#x8A08;&#x306E;&#x6A5F;&#x80FD;&#x306B;&#x5FC5;&#x8981;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x5506;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x9045;&#x5EF6;&#x30D5;&#x30A3;&#x30FC;&#x30C9;&#x30D0;&#x30C3;&#x30AF;&#x6291;&#x5727;&#x30AF;&#x30EA;&#x30D7;&#x30C8; &#x30AF;&#x30ED;&#x30E0; 1 &#x3067;&#x306E;&#x6982;&#x65E5;&#x6642;&#x8A08;&#x6A5F;&#x80FD;&#x306B;&#x5FC5;&#x8981;&#x3067;&#x3059;&#x3002;

&#xD3EC;&#xC720;&#xB958; circadian &#xC2DC;&#xACC4;&#xC5D0; &#xD53C;&#xB4DC;&#xBC31; &#xC5B5;&#xC555;&#xC5D0; &#xC9C0;&#xC5F0;&#xC758; &#xC694;&#xAD6C; &#xC0AC;&#xD56D;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC9C1;&#xC811;&#xC801;&#xC778; &#xC99D;&#xAC70;&#xAC00; &#xC560;&#xB9E4; &#xD588;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. Cryptochrome 1 (Cry1), &#xD544;&#xC218;&#xC801;&#xC778; &#xC2DC;&#xACC4; &#xCEF4;&#xD3EC;&#xB10C;&#xD2B8; &#xC800;&#xB141; &#xC2DC;&#xAC04; &#xC2DD; &#xD45C;&#xC2DC; &#xD558; &#xACE0; &#xC544;&#xCE68; &#xC2DC;&#xAC04; &#xC694;&#xC18C;&#xC5D0; &#xAC15;&#xB825;&#xD55C; &#xC9C4;&#xC555;&#xC73C;&#xB85C; &#xC0AC;&#xC6A9; (E &#xC0C1;&#xC790;/E&#39; &#xC0C1;&#xC790;). &#xC774; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xC5D0;&#xC11C;&#xB294; &#xC694;&#xC18C; &#xB0B4;&#xC5D0; Cry1 &#xADFC; &#xC704; &#xBC1C;&#xAE30;&#xC778; &#xBC0F; &#xC57C;&#xAC04; &#xC2DC;&#xAC04; (RREs)&#xC758; intronic &#xC99D;&#xAC15; &#xB0B4; &#xD558;&#xB8E8; &#xC2DC;&#xAC04; &#xC694;&#xC18C; (D &#xC0C1;&#xC790;) &#xC870;&#xD569;&#xC758; &#xC800;&#xB141; &#xC2DC;&#xAC04; &#xC2DD;&#xC744; &#xC0DD;&#xACA8;&#xB098;&#xAC8C; &#xACF5;&#xAC1C; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xD569;&#xC131; &#xD569;&#xC131; &#xD504;&#xB85C;&#xBAA8;&#xD130; &#xC81C;&#xC791; &#xB354; &#xAC04;&#xB2E8;&#xD55C; &#xC704;&#xC0C1; &#xBCA1;&#xD130; &#xBAA8;&#xB378;&#xC5D0;&#xC11C; recapitulated&#xB294; &#xC800;&#xB141; &#xC2DC;&#xAC04; &#xC2DD;. &#xB178;&#xD2B8;, &#xBC24; &#xC2DC;&#xAC04; &#xC694;&#xC18C;&#xC640; &#xD558;&#xB8E8; &#xC2DC;&#xAC04;&#xC758; &#xC870;&#xC815; &#xC704;&#xC0C1; &#xC9C0;&#xC5F0;&#xC758; &#xC815;&#xB3C4; &#xC870;&#xC808; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. Cry1(-/-):Cry2(-/-) &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xBCF4;&#xC644;&#xC131; &#xBD84;&#xC11D; &#xACB0;&#xACFC; &#xBC1D;&#xD600; circadian rhythmicity&#xB97C; &#xBCF5;&#xC6D0; &#xD558;&#xB294; &#xB370; &#xD544;&#xC694;&#xD55C; Cry1 &#xC2DD;&#xC758; &#xC0C1;&#xB2F9;&#xD55C; &#xC9C0;&#xC5F0;&#xC758; &#xC7A5;&#xAE30;&#xAC04;&#xB41C; &#xC9C0;&#xC5F0; &#xB420;&#xC218;&#xB85D; circadian &#xBC1C;&#xC9C4;. &#xD568;&#xAED8; &#xCC0D;&#xC740; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xB370;&#xC774;&#xD130; Cry1 &#xC804;&#xC0AC;&#xC758; &#xC704;&#xC0C1; &#xC9C0;&#xC5F0; &#xD3EC;&#xC720;&#xB958; &#xC2DC;&#xACC4; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC744; &#xC704;&#xD574; &#xD544;&#xC694; &#xD558;&#xB2E4;&#xB294; &#xAC83;&#xC774; &#xC88B;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xC9C0;&#xC5F0; cryptochrome 1&#xB85C; &#xD53C;&#xB4DC;&#xBC31; &#xC5B5;&#xC81C;&#xC5D0;&#xB294; circadian &#xC2DC;&#xACC4; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC5D0; &#xD544;&#xC694; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Evidencia directa para el requisito de retraso en la represi&oacute;n de la regeneraci&oacute;n en el reloj circadiano mam&iacute;fero ha sido esquivo. Criptocromo 1 (Cry1), un componente esencial del reloj, muestra expresiones en tiempo de noche y sirve como un represor fuerte en elementos de tiempo de la ma&ntilde;ana (E caja/E&#39; caja). En este estudio, nos revelan que una combinaci&oacute;n de elementos durante el d&iacute;a (cuadro D) dentro de los (RREs) elementos Cry1 proximal promotor y nocturnas dentro de su potenciador intronic da lugar a la expresi&oacute;n del tiempo de la tarde. Un promotor compuesto sint&eacute;tico hab&iacute;a producido expresiones en tiempo de noche, que adem&aacute;s fue recapitulado por un modelo simple fase-vector. De nota, coordinaci&oacute;n de durante el d&iacute;a con elementos de la noche puede modular el grado de retraso de fase. Un ensayo de complementaci&oacute;n gen&eacute;tica en c&eacute;lulas de Cry1(-/-):Cry2(-/-) revel&oacute; que el retraso considerable de Cry1 expresi&oacute;n es necesaria para restaurar rhythmicity circadiano, y su demora prolongada disminuye la oscilaci&oacute;n circadiano. Tomados en conjunto, nuestros datos sugieren que retraso de fase en transcripci&oacute;n Cry1 es necesaria para la funci&oacute;n de reloj mam&iacute;feros.

Retraso en la represi&oacute;n de la regeneraci&oacute;n por Criptocromo 1 es necesario para la funci&oacute;n del reloj circadiano.

&#x663C;&#x591C;&#x8282;&#x5F8B;&#x65F6;&#x95F4;&#x949F;&#x7EF4;&#x6301;&#x6BCF;&#x65E5;&#x632F;&#x8361;&#x7684;&#x57FA;&#x56E0;&#x8868;&#x8FBE;&#x3001; &#x751F;&#x7406;&#x548C;&#x884C;&#x4E3A;&#xFF0C;&#x8282;&#x594F;&#x4EE3;&#x4E3A;&#x4F9D;&#x6258;&#x7684;&#x65F6;&#x949F;&#x57FA;&#x56E0;&#x8F6C;&#x5F55;&#x7FFB;&#x8BD1;&#x53CD;&#x9988;&#x5FAA;&#x73AF;&#x3002;&#x661F;&#x5F62;&#x80F6;&#x8D28;&#x7EC6;&#x80DE;&#x663E;&#x793A;&#x6BCF;&#x65E5;&#x632F;&#x8361;&#x7684; ATP&#xFF0C;&#x6697;&#x793A; ATP &#x91CA;&#x653E;&#x663C;&#x591C;&#x8282;&#x5F8B;&#x7684;&#x8F93;&#x51FA;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x5047;&#x8BBE;&#x751F;&#x7269;&#x949F;&#x8C03;&#x8282; ATP &#x91CA;&#x653E;&#x901A;&#x8FC7;&#x8C03;&#x8282;&#x4ECE;&#x80F6;&#x8D28;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6025;&#x6027; ATP &#x91CA;&#x653E;&#x7684;&#x673A;&#x5236;&#x3002;&#x82E5;&#x8981;&#x6D4B;&#x8BD5;&#x663C;&#x591C;&#x8282;&#x5F8B;&#x7684; ATP &#x91CA;&#x653E;&#x7684;&#x5206;&#x5B50;&#x57FA;&#x7840;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x5F00;&#x53D1;&#x5B9E;&#x65F6; ATP &#x91CA;&#x653E;&#x548C; Bmal1::dLuc &#x663C;&#x591C;&#x8282;&#x5F8B;&#x8BB0;&#x8005;&#x8868;&#x8FBE;&#x4ECE;&#x5C0F;&#x9F20;&#x76AE;&#x5C42;&#x661F;&#x5F62;&#x80F6;&#x8D28;&#x7EC6;&#x80DE;&#x57F9;&#x517B;&#x4E2D;&#x4E0D;&#x540C;&#x57FA;&#x56E0;&#x578B;&#x7684;&#x6D4B;&#x91CF;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3002;&#x6BCF;&#x65E5;&#x8282;&#x5F8B;&#x7684;&#x57FA;&#x56E0;&#x8868;&#x8FBE;&#x6240;&#x9700;&#x529F;&#x80FD;&#x7684;&#x65F6;&#x949F;&#x548C; Bmal1&#xFF0C;&#x7B2C; 1 &#x548C; Per2&#xFF0C;Cry1 &#x548C; Cry2 &#x57FA;&#x56E0;&#x3002;&#x540C;&#x6837;&#x5730;&#xFF0C;&#x9AD8;&#x7EA7;&#x522B;&#x3001; &#x663C;&#x591C;&#x8282;&#x5F8B; ATP &#x91CA;&#x653E;&#x8FD8;&#x9700;&#x8981;&#x529F;&#x80FD;&#x65F6;&#x949F;&#x673A;&#x5236;&#x3002;&#x800C;&#x963B;&#x6B62; IP(3) &#x4FE1;&#x53F7;&#x5927;&#x5927;&#x6253;&#x4E71;&#x4E86; ATP &#x8282;&#x594F;&#x5BF9; Bmal1::dLuc &#x5FAA;&#x73AF;&#x6CA1;&#x6709;&#x4EFB;&#x4F55;&#x5F71;&#x54CD;&#xFF0C;&#x963B;&#x6B62;&#x6C34;&#x6CE1;&#x91CA;&#x653E;&#x5E76;&#x6CA1;&#x6709;&#x6539;&#x53D8;&#x663C;&#x591C;&#x8282;&#x5F8B;&#x6027;&#x7684; ATP &#x91CA;&#x653E;&#x6216;&#x57FA;&#x56E0;&#x8868;&#x8FBE;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x5F97;&#x51FA;&#x7684;&#x7ED3;&#x8BBA;&#x661F;&#x5F62;&#x80F6;&#x8D28;&#x7EC6;&#x80DE;&#x53D6;&#x51B3;&#x4E8E;&#x663C;&#x591C;&#x8282;&#x5F8B;&#x751F;&#x7269;&#x949F;&#x57FA;&#x56E0;&#x548C; IP(3) &#x4FE1;&#x53F7;&#x8868;&#x793A;&#x5728; ATP &#x91CA;&#x653E;&#x6BCF;&#x65E5;&#x8282;&#x5F8B;&#x3002;

&#x661F;&#x5F62;&#x80F6;&#x8D28;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E2D;&#x7684; ATP &#x91CA;&#x653E;&#x7684;&#x663C;&#x591C;&#x8282;&#x5F8B;&#x8C03;&#x8282;&#x3002;

Circadian clocks sustain daily oscillations in gene expression, physiology, and behavior, relying on transcription-translation feedback loops of clock genes for rhythm generation. Cultured astrocytes display daily oscillations of extracellular ATP, suggesting that ATP release is a circadian output. We hypothesized that the circadian clock modulates ATP release via mechanisms that regulate acute ATP release from glia. To test the molecular basis for circadian ATP release, we developed methods to measure in real-time ATP release and Bmal1::dLuc circadian reporter expression in cortical astrocyte cultures from mice of different genotypes. Daily rhythms of gene expression required functional Clock and Bmal1, both Per1 and Per2, and both Cry1 and Cry2 genes. Similarly, high-level, circadian ATP release also required a functional clock mechanism. Whereas blocking IP(3) signaling significantly disrupted ATP rhythms with no effect on Bmal1::dLuc cycling, blocking vesicular release did not alter circadian ATP release or gene expression. We conclude that astrocytes depend on circadian clock genes and IP(3) signaling to express daily rhythms in ATP release.

Circadian regulation of ATP release in astrocytes.

Horloges circadiennes soutiennent des oscillations quotidiennes dans l&#39;expression g&eacute;n&eacute;tique, physiologie et le comportement, en s&#39;appuyant sur des boucles de r&eacute;troaction de traduction de la transcription des g&egrave;nes de l&#39;horloge pour la g&eacute;n&eacute;ration de rythme. Les astrocytes cultiv&eacute;s affichent des oscillations quotidiennes de l&#39;ATP extracellulaire, ce qui sugg&egrave;re que la lib&eacute;ration de l&#39;ATP est une sortie de rythme circadienne. Nous avons &eacute;mis l&#39;hypoth&egrave;se que l&#39;horloge circadienne module lib&eacute;ration d&#39;ATP par l&#39;interm&eacute;diaire de m&eacute;canismes qui r&eacute;gulent la lib&eacute;ration d&#39;ATP aigu&euml; de cellules gliales. Pour tester la base mol&eacute;culaire circadienne lib&eacute;ration d&#39;ATP, nous avons d&eacute;velopp&eacute; des m&eacute;thodes permettant de mesurer dans lib&eacute;ration d&#39;ATP en temps r&eacute;el et l&#39;expression de journaliste circadien Bmal1::dLuc dans les cultures des astrocytes corticaux de souris de g&eacute;notypes diff&eacute;rents. Rythmes quotidiens de l&#39;expression g&eacute;nique requis fonctionnels horloge et Bmal1, PAR1 et Per2 tant les Cry1 et Cry2 g&egrave;nes. De m&ecirc;me, la lib&eacute;ration d&#39;ATP circadienne, permettant tenus &eacute;galement un m&eacute;canisme d&#39;horloge fonctionnelle. Alors que le blocage IP(3) signalisation significativement perturb&eacute; rythmes ATP sans effet sur Bmal1::dLuc v&eacute;lo, bloquant la lib&eacute;ration v&eacute;siculaire n&#39;a pas alt&eacute;r&eacute; circadienne expression ATP de lib&eacute;ration ou de g&egrave;ne. Nous concluons que les astrocytes d&eacute;pendent de g&egrave;nes de l&#39;horloge circadienne et IP(3) de signalisation exprimer des rythmes quotidiens dans le communiqu&eacute; de l&#39;ATP.

R&egrave;glement circadiens de la lib&eacute;ration d&#39;ATP dans les astrocytes.

Circadiane Uhren zu t&auml;gliche Schwankungen Genexpression, Physiologie und Verhalten, unter Berufung auf Transkription-&Uuml;bersetzung-Feedback-Schleifen der Taktgeber-Gene f&uuml;r Rhythmus-Generation erhalten. Kultivierte Astrozyten anzeigen t&auml;gliche Schwingungen der extrazellul&auml;ren ATP, darauf hindeutet, dass ATP-Release eine circadiane Ausgabe ist. Wir die Hypothese, dass die circadiane Clock ATP-Freisetzung &uuml;ber Mechanismen moduliert, die akute ATP-Freisetzung aus Glia zu regulieren. Um die molekulare Grundlage f&uuml;r circadian ATP-Version zu testen, entwickelten wir Methoden in Echtzeit ATP-Freisetzung und Bmal1::dLuc circadian Reporter Ausdruck in kortikalen Gliazelle Kulturen von den M&auml;usen von unterschiedlichen Genotypen zu messen. T&auml;gliche Rhythmus der Genexpression ben&ouml;tigt funktionale Uhr und Bmal1, Per1 und 2Mio. sowohl Cry1 und Cry2 gen. Ebenso erfordert hochrangige, circadiane ATP-Version auch eine funktionale Uhrwerk. W&auml;hrend ATP Rhythmen mit keinen Einfluss auf die Bmal1::dLuc, die Radfahren blockieren IP(3) signalisieren deutlich gest&ouml;rt werden, blockieren vesikul&auml;ren Freigabe circadian ATP-Freisetzung oder Gen-Ausdruck &auml;ndern nicht. Wir schlie&szlig;en, dass die Astrozyten abh&auml;ngig von zirkadianen Taktgeber-Gene und IP(3) signalisieren, t&auml;gliche Rhythmus in ATP-Version &auml;u&szlig;ern.

Circadiane Regulierung der ATP-Freisetzung in Astrozyten.

Gli orologi circadiani sostengono oscillazioni giornaliere nell&#39;espressione genica, fisiologia e del comportamento, basandosi su anelli di retroazione di trascrizione-traduzione dei geni dell&#39;orologio per la generazione di ritmo. Astrociti colti visualizzano oscillazioni giornaliere del trifosfato di Adenosina extracellulare, suggerendo che il rilascio di ATP &egrave; un output circadiano. Abbiamo ipotizzato che l&#39;orologio circadiano modula il rilascio di ATP attraverso meccanismi che regolano il rilascio di ATP acuta da glia. Per testare la base molecolare per il rilascio di ATP circadiano, abbiamo sviluppato metodi per misurare nel rilascio di ATP in tempo reale e Bmal1::dLuc espressione circadiano reporter in colture di corticale Astrocita da topi di genotipi differenti. Ritmi giornalieri di espressione genica necessaria funzionale dell&#39;orologio e Bmal1, Per1 e Per2 e geni Cry1 e Cry2. Analogamente, rilascio di ATP ad alto livello, circadiano richiesto anche un meccanismo funzionale dell&#39;orologio. Considerando che il blocco IP(3) segnalazione significativamente sconvolto ritmi ATP senza alcun effetto sul Bmal1::dLuc ciclismo, bloccando il rilascio vescicolare non alterava circadiana ATP rilascio o gene espressione. Possiamo concludere che gli astrociti dipendono dai geni orologio circadiano e IP(3) di segnalazione per esprimere ritmi giornalieri nel rilascio di ATP.

Regolamento circadiano di rilascio di ATP negli astrociti.

&#x6982;&#x65E5;&#x6642;&#x8A08;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x767A;&#x73FE;&#x3001;&#x751F;&#x7406;&#x5B66;&#x3001;&#x6642;&#x8A08;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x8EE2;&#x5199;&#x30FB;&#x7FFB;&#x8A33;&#x30D5;&#x30A3;&#x30FC;&#x30C9; &#x30D0;&#x30C3;&#x30AF; &#x30EB;&#x30FC;&#x30D7;&#x306B;&#x983C;&#x308B;&#x30EA;&#x30BA;&#x30E0;&#x751F;&#x6210;&#x6319;&#x52D5;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x6BCE;&#x65E5;&#x306E;&#x632F;&#x52D5;&#x3092;&#x7DAD;&#x6301;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x57F9;&#x990A;&#x30A2;&#x30B9;&#x30C8;&#x30ED; &#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x6BCE;&#x65E5;&#x632F;&#x52D5; ATP &#x653E;&#x51FA;&#x6982;&#x51FA;&#x529B;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x5506;&#x3001;&#x7D30;&#x80DE;&#x5916; ATP &#x306E;&#x8868;&#x793A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6982;&#x65E5;&#x6642;&#x8A08;&#x30B0;&#x30EA;&#x30A2;&#x7D30;&#x80DE;&#x304B;&#x3089;&#x306E;&#x6025;&#x6027;&#x306E; ATP &#x653E;&#x51FA;&#x3092;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x3059;&#x308B;&#x30E1;&#x30AB;&#x30CB;&#x30BA;&#x30E0;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x3066;&#x306E; ATP &#x653E;&#x51FA;&#x3092;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x4EEE;&#x5B9A;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x6982;&#x65E5;&#x30EA;&#x30BA;&#x30E0;&#x306E; ATP &#x653E;&#x51FA;&#x306E;&#x5206;&#x5B50;&#x57FA;&#x76E4;&#x3092;&#x30C6;&#x30B9;&#x30C8;&#x3059;&#x308B;&#x306B;&#x306F;&#x3001;&#x30EA;&#x30A2;&#x30EB;&#x30BF;&#x30A4;&#x30E0;&#x306E; ATP &#x653E;&#x51FA;&#x3068;&#x7570;&#x306A;&#x3063;&#x305F;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x578B;&#x306E;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x304B;&#x3089;&#x5927;&#x8133;&#x76AE;&#x8CEA;&#x30A2;&#x30B9;&#x30C8;&#x30ED; &#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x57F9;&#x990A; Bmal1::dLuc &#x6982;&#x30EC;&#x30DD;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x8868;&#x73FE;&#x306E;&#x6E2C;&#x5B9A;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3092;&#x958B;&#x767A;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x767A;&#x73FE;&#x306E;&#x6BCE;&#x65E5;&#x306E;&#x30EA;&#x30BA;&#x30E0;&#x304C;&#x5FC5;&#x8981;&#x306A;&#x6A5F;&#x80FD;&#x306E;&#x6642;&#x8A08;&#x304A;&#x3088;&#x3073; Bmal1&#x3001;Per1 &#x3068; Per2 &#x3068; Cry1 &#x3068; Cry2 &#x306E;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x4E21;&#x65B9;&#x3002;&#x540C;&#x69D8;&#x306B;&#x3001;&#x9AD8;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x3001;&#x6982;&#x65E5;&#x30EA;&#x30BA;&#x30E0;&#x306E; ATP &#x653E;&#x51FA;&#x306F;&#x307E;&#x305F;&#x6A5F;&#x80FD;&#x7684;&#x306A;&#x6642;&#x8A08;&#x306E;&#x30E1;&#x30AB;&#x30CB;&#x30BA;&#x30E0;&#x304C;&#x5FC5;&#x8981;&#x3002;&#x5927;&#x5E45;&#x306B;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB; IP(3) &#x3092;&#x30D6;&#x30ED;&#x30C3;&#x30AD;&#x30F3;&#x30B0; ATP &#x30EA;&#x30BA;&#x30E0; &#x30B5;&#x30A4;&#x30AF;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0; Bmal1::dLuc &#x306B;&#x5F71;&#x97FF;&#x3092;&#x4E0E;&#x3048;&#x306A;&#x3044;&#x304C;&#x4E2D;&#x65AD;&#x306B;&#x5BFE;&#x3057;&#x3001;&#x5C0F;&#x80DE;&#x306E;&#x30EA;&#x30EA;&#x30FC;&#x30B9;&#x3092;&#x30D6;&#x30ED;&#x30C3;&#x30AF;&#x6982; ATP &#x306E;&#x30EA;&#x30EA;&#x30FC;&#x30B9;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x767A;&#x73FE;&#x306F;&#x5909;&#x308F;&#x308A;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3067;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x6211;&#x3005; &#x306F;&#x3001;&#x30A2;&#x30B9;&#x30C8;&#x30ED; &#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x6982;&#x65E5;&#x6642;&#x8A08;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x3068; IP(3) &#x306E; ATP &#x653E;&#x51FA;&#x306E;&#x65E5;&#x5468;&#x30EA;&#x30BA;&#x30E0;&#x3092;&#x8868;&#x73FE;&#x3059;&#x308B;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#x306B;&#x4F9D;&#x5B58;&#x3068;&#x7DE0;&#x7D50;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x6982;&#x898F;&#x5236;&#x30A2;&#x30B9;&#x30C8;&#x30ED; &#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B; ATP &#x653E;&#x51FA;&#x306E;&#x3002;

Circadian &#xC2DC;&#xACC4; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xBC1C;&#xD604;, &#xC0DD;&#xB9AC;, &#xBC0F; &#xB3D9;&#xC791;, &#xB9AC;&#xB4EC; &#xC138;&#xB300;&#xC6A9; &#xC2DC;&#xACC4; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC758; &#xC804;&#xC0AC; &#xBC88;&#xC5ED; &#xD53C;&#xB4DC;&#xBC31; &#xB8E8;&#xD504;&#xC5D0; &#xC758;&#xC874;&#xC5D0; &#xC77C;&#xC77C; &#xC9C4;&#xB3D9; &#xC720;&#xC9C0;. &#xAD50;&#xC591;&#xB41C; &#xC774;&#xB2E4; ATP &#xB9B4;&#xB9AC;&#xC2A4; circadian &#xCD9C;&#xB825;&#xC744; &#xC81C;&#xC548; &#xD558;&#xB294; &#xC138;&#xD3EC; &#xC678; ATP&#xC758; &#xC77C;&#xC77C; &#xC9C4;&#xB3D9; &#xD45C;&#xC2DC;. Circadian &#xD074;&#xB85D; &#xBCC0;&#xC870; ATP &#xB9B4;&#xB9AC;&#xC2A4; &#xBA85;&#xACFC;&#xC5D0;&#xC11C; &#xAE09;&#xC131; ATP &#xB9B4;&#xB9AC;&#xC2A4;&#xB97C; &#xC870;&#xC808; &#xD558;&#xB294; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;&#xC744; &#xD1B5;&#xD574; &#xAC00;&#xC124;&#xC744; &#xC138;&#xC6E0;&#xB2E4;. Circadian ATP &#xB9B4;&#xB9AC;&#xC2A4;&#xB97C; &#xC704;&#xD55C; &#xBD84;&#xC790; &#xB2E8;&#xC704;&#xB85C; &#xD14C;&#xC2A4;&#xD2B8; &#xC2E4;&#xC2DC;&#xAC04; ATP &#xB9B4;&#xB9AC;&#xC2A4; &#xBC0F; &#xB2E4;&#xB978; genotypes &#xC950;&#xC5D0;&#xC11C; &#xB300;&#xB1CC; &#xD53C; &#xC9C8;&#xC758; &#xC0AC;&#xC774;&#xD1A0; &#xBB38;&#xD654;&#xC5D0;&#xC11C; Bmal1::dLuc circadian &#xAE30;&#xC790; &#xC2DD; &#xCE21;&#xC815; &#xBC29;&#xBC95; &#xAC1C;&#xBC1C;. &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xBC1C;&#xD604;&#xC758; &#xC77C;&#xC77C; &#xB9AC;&#xB4EC; &#xD544;&#xC694;&#xD55C; &#xD074;&#xB85D; &#xAE30;&#xB2A5;&#xACFC; Bmal1, Per1 Per2, &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; Cry1 &#xBC0F; Cry2 &#xC720;&#xC804;&#xC790;. &#xB9C8;&#xCC2C;&#xAC00;&#xC9C0;&#xB85C;, &#xB192;&#xC740; &#xC218;&#xC900;&#xC758; circadian ATP &#xB9B4;&#xB9AC;&#xC2A4; &#xAE30;&#xB2A5; &#xC2DC;&#xACC4; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;&#xC744; &#xD544;&#xC694;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC0AC;&#xC774;&#xD074;&#xB9C1; bmal1::dluc&#xC5D0;&#xB294; &#xC601;&#xD5A5;&#xC744; &#xC8FC;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;&#xC640; ATP &#xB9AC;&#xB4EC;, &#xC911;&#xB2E8; IP(3) &#xD06C;&#xAC8C; &#xC2E0;&#xD638;&#xB97C; &#xCC28;&#xB2E8; &#xD558;&#xB294; &#xBC18;&#xBA74; &#xAE30;&#xACF5;&#xC744; &#xB9B4;&#xB9AC;&#xC2A4; &#xCC28;&#xB2E8; circadian ATP &#xB9B4;&#xB9AC;&#xC2A4; &#xB610;&#xB294; &#xC9C4; &#xC2DD;&#xC744; &#xBCC0;&#xACBD; &#xD558;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC558;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC; &#xACB0;&#xB860; &#xC774;&#xB2E4; circadian &#xC2DC;&#xACC4; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC640; IP(3) ATP &#xB9B4;&#xB9AC;&#xC2A4; &#xC77C;&#xC77C; &#xB9AC;&#xB4EC;&#xC744; &#xD45C;&#xD604; &#xD558;&#xB294; &#xC2E0;&#xD638;&#xC5D0; &#xB530;&#xB77C; &#xB2EC;&#xB77C; &#xC9D1;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Circadian &#xB808; &#xADE4; &#xB808;&#xC774; &#xC158;&#xC758; ATP &#xB9B4;&#xB9AC;&#xC2A4; &#xC774;&#xB2E4;.

Relojes circadianos sostienen oscilaciones diarias en la expresi&oacute;n gen&eacute;tica, fisiolog&iacute;a y comportamiento, confiando en bucles de retroalimentaci&oacute;n de la traducci&oacute;n de la transcripci&oacute;n de genes de reloj para la generaci&oacute;n de ritmo. Astrocitos cultivados Mostrar oscilaciones diarias de ATP extracelular, sugiriendo que la liberaci&oacute;n de ATP es una salida circadiana. Presumimos que el reloj circadiano modula la liberaci&oacute;n de ATP a trav&eacute;s de mecanismos que regulan la liberaci&oacute;n de ATP aguda de la gl&iacute;a. Para probar la base molecular para la liberaci&oacute;n de ATP circadiano, desarrollamos m&eacute;todos para medir en tiempo real liberaci&oacute;n de ATP y Bmal1::dLuc expresi&oacute;n de reportero circadiana en culturas Astrocito cortical de los ratones de diferentes genotipos. Ritmos diarios de la expresi&oacute;n g&eacute;nica requirieron funcional reloj y Bmal1, tanto Per1 y Per2 y genes Cry1 y Cry2. Del mismo modo, liberaci&oacute;n de ATP de alto nivel, circadiano tambi&eacute;n requiere un mecanismo de reloj funcional. Considerando que el bloqueo IP(3) se&ntilde;alizaci&oacute;n significativamente hab&iacute;a alterado ritmos de ATP sin afectar al Bmal1::dLuc ciclismo, bloqueando la liberaci&oacute;n vesicular no alter&oacute; circadiana expresi&oacute;n de liberaci&oacute;n o gene de ATP. Concluimos que astrocitos dependen de genes del reloj circadiano y IP(3) se&ntilde;alizaci&oacute;n expresar ritmos diarios en liberaci&oacute;n de ATP.

Regulaci&oacute;n circadiana de liberaci&oacute;n de ATP en los astrocitos.

&#x54FA;&#x4E73;&#x52A8;&#x7269;&#x663C;&#x591C;&#x8282;&#x5F8B;&#x65F6;&#x949F;&#x90FD;&#x57FA;&#x4E8E;&#x5728;&#x5176;&#x4E2D;&#x8F6C;&#x5F55;&#x6291;&#x5236;&#x7531;&#x9690;&#x82B1;&#x8272;&#x7D20;&#xFF0C;CRY1 &#x548C; CRY2&#xFF0C;&#x6838;&#x5FC3;&#x662F;&#x673A;&#x5236;&#x7684;&#x8D1F;&#x9762;&#x53CD;&#x9988;&#x5FAA;&#x73AF;&#x3002;&#x5E8F;&#x5217;&#x3001; &#x57DF;&#x7ED3;&#x6784;&#x548C;&#x751F;&#x5316;&#x6D3B;&#x6027;&#x7684;&#x76F8;&#x4F3C;&#x4E4B;&#x5904;&#xFF0C;&#x5C3D;&#x7BA1;&#x4ED6;&#x4EEC;&#x5728;&#x65F6;&#x949F;&#x529F;&#x80FD;&#x53D1;&#x6325;&#x72EC;&#x7279;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;&#x4E0D;&#x8FC7;&#xFF0C;&#x8BE6;&#x7EC6;&#x7684;&#x751F;&#x5316;&#x7814;&#x7A76;&#x4E0D;&#x662F;&#x7B80;&#x5355;&#x660E;&#x4E86;&#xFF0C;&#x54ED;&#x529F;&#x80FD;&#x5C1A;&#x672A;&#x4E88;&#x4EE5;&#x5BA1;&#x67E5;&#x5728;&#x5B9E;&#x9645;&#x65F6;&#x949F;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x4E2D;&#x4F7F;&#x7528;&#x52A8;&#x529B;&#x5B66;&#x6D4B;&#x91CF;&#x3002;&#x5728;&#x6B64;&#x7814;&#x7A76;&#x4E2D;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x6F14;&#x793A;&#xFF0C;&#x901A;&#x8FC7;&#x57FA;&#x4E8E;&#x7EC6;&#x80DE;&#x9057;&#x4F20;&#x4E92;&#x8865;&#x548C;&#x5B9E;&#x65F6;&#x7684;&#x5206;&#x5B50;&#x8BB0;&#x5F55;&#xFF0C;&#x8BE5; Cry1 &#x4EC5;&#x662F;&#x80FD;&#x591F;&#x7EF4;&#x6301;&#x7EC6;&#x80DE;&#x81EA;&#x4E3B;&#x8282;&#x5F8B;&#x800C; Cry2 &#x4E0D;&#x80FD;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x4F7F;&#x7528;&#x8FD9;&#x79CD;&#x65B0;&#x578B;&#x7684;&#x529F;&#x80FD;&#x6D4B;&#x5B9A;&#xFF0C;&#x627E;&#x51FA;&#x9274;&#x522B; &alpha; &#x87BA;&#x65CB;&#x57DF;&#x5185;&#x5149;&#x89E3;&#x9176;&#x540C;&#x6E90;&#x533A; (PHR) &#x7684; CRY1&#xFF0C;&#x88AB;&#x6307;&#x5B9A;&#x4E3A; CRY1-PHR(313-426)&#xFF0C;&#x65F6;&#x949F;&#x529F;&#x80FD;&#x9700;&#x8981;&#x548C; CRY1 &#x5F00;&#x6765; CRY2 &#x9690;&#x82B1;&#x8272;&#x7D20;&#x3002;&#x4E0E;&#x6295;&#x673A;&#xFF0C;&#x53D1;&#x6563;&#x7FA7;&#x57FA;&#x672B;&#x7AEF;&#x57DF; (CTD) &#x662F;&#x53EF;&#x6709;&#x53EF;&#x65E0;&#xFF0C;&#x4F46;&#x6709;&#x52A9;&#x4E8E;&#x8C03;&#x8282;&#x8282;&#x594F;&#x632F;&#x5E45;&#x548C;&#x5468;&#x671F;&#x7684;&#x957F;&#x5EA6;&#x3002;&#x6700;&#x540E;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x627E;&#x51FA;&#x5176;&#x72EC;&#x7279;&#x7684;&#x529F;&#x80FD; &#xFF1B; &#x7684;&#x751F;&#x5316;&#x57FA;&#x7840;CRY1 &#x662F;&#x6BD4; CRY2&#xFF0C;&#x66F4;&#x6709;&#x6548;&#x7684;&#x8F6C;&#x5F55;&#x963B;&#x904F;&#x7269;&#x548C;&#x538B;&#x5236;&#x7684;&#x5404;&#x79CD;&#x5F62;&#x5F0F;&#x7684;&#x54ED;&#x6CE3;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x5F3A;&#x5EA6;&#x663E;&#x8457;&#x5173;&#x8054;&#x8282;&#x594F;&#x632F;&#x5E45;&#x3002;&#x4E24;&#x8005;&#x5408;&#x8BA1;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x7ED3;&#x679C;&#x8868;&#x660E; CRY1-PHR(313-426)&#xFF0C;&#x4E0D;&#x53D1;&#x6563;&#x7684; CTD&#xFF0C;&#x65F6;&#x949F;&#x529F;&#x80FD;&#x7684;&#x5173;&#x952E;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7814;&#x7A76;&#x7ED3;&#x679C;&#x63D0;&#x4F9B; flavoproteins &#x7684;&#x5149;&#x89E3;&#x9176;/&#x9690;&#x82B1;&#x8272;&#x7D20;&#x5BB6;&#x5EAD;&#x7684;&#x5404;&#x9879;&#x804C;&#x80FD;&#x7684;&#x6F14;&#x53D8;&#x7684;&#x65B0;&#x89C1;&#x89E3;&#xFF0C;&#x5E76;&#x63D0;&#x4F9B;&#x54ED;&#x529F;&#x80FD;&#x7684;&#x673A;&#x7406;&#x7814;&#x7A76;&#x65B0;&#x7684;&#x673A;&#x4F1A;&#x3002;

&#x65B0;&#x578B;&#x9690;&#x82B1;&#x8272;&#x7D20;&#x9274;&#x522B;&#x53CD;&#x9988;&#x9547;&#x538B;&#x5728;&#x751F;&#x7269;&#x949F;&#x529F;&#x80FD;&#x6240;&#x9700;&#x7684;&#x57DF;&#x7684;&#x6807;&#x8BC6;&#x3002;

Circadian clocks in mammals are based on a negative feedback loop in which transcriptional repression by the cryptochromes, CRY1 and CRY2, lies at the heart of the mechanism. Despite similarities in sequence, domain structure, and biochemical activity, they play distinct roles in clock function. However, detailed biochemical studies have not been straightforward and Cry function has not been examined in real clock cells using kinetic measurements. In this study, we demonstrate, through cell-based genetic complementation and real-time molecular recording, that Cry1 alone is able to maintain cell-autonomous circadian rhythms, whereas Cry2 cannot. Using this novel functional assay, we identify a cryptochrome differentiating Î±-helical domain within the photolyase homology region (PHR) of CRY1, designated as CRY1-PHR(313-426), that is required for clock function and distinguishes CRY1 from CRY2. Contrary to speculation, the divergent carboxyl-terminal tail domain (CTD) is dispensable, but serves to modulate rhythm amplitude and period length. Finally, we identify the biochemical basis of their distinct function; CRY1 is a much more potent transcriptional repressor than CRY2, and the strength of repression by various forms of CRY proteins significantly correlates with rhythm amplitude. Taken together, our results demonstrate that CRY1-PHR(313-426), not the divergent CTD, is critical for clock function. These findings provide novel insights into the evolution of the diverse functions of the photolyase/cryptochrome family of flavoproteins and offer new opportunities for mechanistic studies of CRY function.

Identification of a novel cryptochrome differentiating domain required for feedback repression in circadian clock function.

Des horloges circadiennes chez les mammif&egrave;res sont bas&eacute;s sur une boucle de r&eacute;troaction n&eacute;gative dans laquelle la r&eacute;pression transcriptionnelle par les cryptochromes, CRY1 et CRY2, se situe au c&oelig;ur du m&eacute;canisme. Malgr&eacute; les similitudes dans la s&eacute;quence, la structure du domaine et l&#39;activit&eacute; biochimique, ils jouent un r&ocirc;le distinct dans la fonction horloge. Toutefois, des &eacute;tudes biochimiques d&eacute;taill&eacute;es n&#39;ont pas &eacute;t&eacute; simples et fonction cri n&#39;a pas &eacute;t&eacute; examin&eacute;e dans des cellules d&#39;horloge r&eacute;elle &agrave; l&#39;aide de mesures cin&eacute;tiques. Dans cette &eacute;tude, nous d&eacute;montrons, par compl&eacute;mentation g&eacute;n&eacute;tique ax&eacute;e sur la cellule et enregistrement en temps r&eacute;el de mol&eacute;culaire, que Cry1 seul est capable de maintenir la cellules autonomes des rythmes circadiens, tandis que Cry2 ne peut. En utilisant ce nouveau dosage fonctionnel, nous identifions un cryptochrome diff&eacute;renciant les domaines &alpha;-h&eacute;lico&iuml;dale dans la r&eacute;gion d&#39;homologie photolyase (PHR) de CRY1, appel&eacute;es CRY1-PHR(313-426), qui est requis pour la fonction horloge et distingue CRY1 CRY2. Contrairement aux sp&eacute;culations, le domaine de la queue de carboxyl terminal divergents (CTD) n&#39;est pas indispensable, mais sert &agrave; moduler l&#39;amplitude de rythme et de la longueur de la p&eacute;riode. Enfin, nous identifions la base biochimique de leur fonction distincte ; CRY1 est un r&eacute;presseur transcriptionnel beaucoup plus puissant que CRY2, et la force de r&eacute;pression par diverses formes de prot&eacute;ines CRY est corr&eacute;l&eacute;e significativement avec une amplitude de rythme. Pris ensemble, nos r&eacute;sultats d&eacute;montrent que les CRY1-PHR(313-426), pas la CTD divergent, est critique pour la fonction horloge. Ces r&eacute;sultats fournissent de nouveaux aper&ccedil;us de l&#39;&eacute;volution des diverses fonctions de la famille photolyase/cryptochrome de flavoproteins et offrent de nouvelles opportunit&eacute;s pour des &eacute;tudes m&eacute;canistes de la fonction de cri.

Identification d&#39;un roman cryptochrome diff&eacute;renciant le domaine requis pour la r&eacute;pression de la r&eacute;troaction en fonction de l&#39;horloge circadienne.

Circadiane Uhren bei S&auml;ugetieren basieren auf einer negativen R&uuml;ckkopplung, in denen transkriptionelle Unterdr&uuml;ckung durch die Cryptochromes, CRY1 und CRY2, den Kern des Mechanismus bildet. Trotz der &Auml;hnlichkeiten in der Sequenz, Dom&auml;nenstruktur und biochemische Aktivit&auml;t spielen sie verschiedene Rollen im Clock-Funktion. Jedoch detaillierte biochemische Untersuchungen wurden nicht unkompliziert und Cry-Funktion ist nicht in real Taktgeber Zellen mittels kinetische Messungen untersucht worden. In dieser Studie zeigen wir, kann durch genetische Komplementation zellbasierte und Echtzeit-Molekulare Aufnahme, dass allein Cry1 Zelle-autonome Tagesrhythmus beibehalten Cry2 jedoch nicht. Verwenden dieses neuartige funktionelle Assays, identifizieren wir ein Cryptochrom Differenzierung &alpha;-Kegelrad Dom&auml;ne innerhalb der Photolyasen Homologie Region (PHR) CRY1, als CRY1-PHR(313-426), die f&uuml;r die Clock-Funktion ist erforderlich und CRY2 CRY1 unterscheidet. Im Gegensatz zu Spekulationen die divergierenden Karboxyl--Terminal-Schwanz-Dom&auml;ne (CTD) ist entbehrlich, sondern dient, Rhythmus-Amplitude und die Periodenl&auml;nge modulieren. Schlie&szlig;lich identifizieren wir die Biochemische Grundlagen der distinct-Funktion; CRY1 ist ein sehr potenter transkriptionelle Verdr&auml;nger als CRY2 und die St&auml;rke der Unterdr&uuml;ckung durch verschiedene Formen der CRY-Proteine signifikant korreliert mit Rhythmus-Amplitude. Zusammengenommen zeigen unsere Ergebnisse, dass CRY1-PHR(313-426), nicht abweichende CTD, kritische f&uuml;r Clock-Funktion. Diese Befunde geben neue Einblicke in die Entwicklung der vielf&auml;ltigen Funktionen der Familie Photolyasen/Cryptochrom Flavoproteine und bietet neue Chancen f&uuml;r mechanistische Untersuchungen der Schrei-Funktion.

Kennung f&uuml;r eine neuartige Cryptochrom Differenzierung Dom&auml;ne f&uuml;r Feedback Unterdr&uuml;ckung in circadian Clock-Funktion erforderlich.

Gli orologi circadiani nei mammiferi sono basati su un ciclo di feedback negativo in cui repressione trascrizionale di cryptochromes, CRY1 e CRY2, si trova nel cuore del meccanismo. Nonostante le somiglianze nella sequenza, la struttura di dominio e attivit&agrave; biochimica, essi svolgono ruoli distinti in funzione dell&#39;orologio. Tuttavia, studi biochimici dettagliati non &egrave; stato semplici e funzione di grido non &egrave; stata esaminata in cellule real clock utilizzando misurazioni cinetiche. In questo studio, noi dimostrare, tramite cell-based complementazione genetica e registrazione in tempo reale molecolare, che Cry1 da solo &egrave; in grado di mantenere i ritmi circadiani cella-autonomi, mentre Cry2 non pu&ograve;. Usando questa romanzo analisi funzionale, identifichiamo un ablazione differenziando dominio &alpha;-elica all&#39;interno della regione di omologia di photolyase (PHR) di CRY1, designato come CRY1-PHR(313-426), che &egrave; richiesto per la funzione di orologio e distingue CRY1 da CRY2. Contrariamente alla speculazione, il dominio divergenti coda carbossi-terminale (CTD) &egrave; superfluo, ma serve per modulare il ritmo ampiezza e durata. Infine, ci identifichiamo la base biochimica della loro funzione distinte; CRY1 &egrave; un repressore trascrizionale molto pi&ugrave; potente rispetto a CRY2, e la forza della repressione di varie forme di proteine CRY correla significativamente con ampiezza di ritmo. Presi insieme, i nostri risultati dimostrano che CRY1-PHR(313-426), non i CTD divergenti, &egrave; critico per la funzione orologio. Questi risultati forniscono approfondimenti romanzo l&#39;evoluzione delle diverse funzioni della famiglia di flavoproteins photolyase/ablazione e offrono nuove opportunit&agrave; per gli Studi meccanicistici della funzione di grido.

Identificazione di un romanzo ablazione differenziando dominio richiesto per la repressione di feedback in funzione dell&#39;orologio circadiano.

&#x54FA;&#x4E73;&#x985E;&#x306E;&#x6982;&#x65E5;&#x6642;&#x8A08;&#x306E;&#x30AF;&#x30EA;&#x30D7;&#x30C8; &#x30AF;&#x30ED;&#x30E0;&#x3001;CRY1 &#x3068; CRY2&#x3001;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x8EE2;&#x5199;&#x6291;&#x5236;&#x6A5F;&#x69CB;&#x306E;&#x4E2D;&#x5FC3;&#x90E8;&#x306B;&#x4F4D;&#x7F6E;&#x3001;&#x8CA0;&#x5E30;&#x9084;&#x30EB;&#x30FC;&#x30D7;&#x306B;&#x57FA;&#x3065;&#x3044;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30B7;&#x30FC;&#x30B1;&#x30F3;&#x30B9;&#x3001;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x69CB;&#x9020;&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x751F;&#x5316;&#x5B66;&#x7684;&#x6D3B;&#x52D5;&#x306E;&#x985E;&#x4F3C;&#x6027;&#x306B;&#x3082;&#x304B;&#x304B;&#x308F;&#x3089;&#x305A;&#x3001;&#x5F7C;&#x3089;&#x6642;&#x8A08;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3067;&#x7570;&#x306A;&#x308B;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x679C;&#x305F;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x305F;&#x3060;&#x3057;&#x3001;&#x8A73;&#x7D30;&#x306A;&#x751F;&#x5316;&#x5B66;&#x7814;&#x7A76;&#x306F;&#x7C21;&#x5358;&#x3067;&#x3057;&#x305F;&#x304C;&#x3001;&#x6CE3;&#x304F;&#x95A2;&#x6570;&#x30AD;&#x30CD;&#x30C6;&#x30A3;&#x30C3;&#x30AF;&#x6E2C;&#x5B9A;&#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x305F;&#x5B9F;&#x30AF;&#x30ED;&#x30C3;&#x30AF;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x691C;&#x8A0E;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3002;Cry2 &#x3067;&#x304D;&#x306A;&#x3044;&#x306B;&#x5BFE;&#x3057;&#x672C;&#x7814;&#x7A76;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x79C1;&#x305F;&#x3061;&#x3092;&#x793A;&#x3059;&#x7D30;&#x80DE;&#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x305F;&#x907A;&#x4F1D;&#x7684;&#x88DC;&#x5B8C;&#x3068;&#x30EA;&#x30A2;&#x30EB;&#x30BF;&#x30A4;&#x30E0;&#x306E;&#x5206;&#x5B50;&#x8A18;&#x9332;&#x3092;&#x901A;&#x3058;&#x3066;&#x305D;&#x306E; Cry1 &#x3060;&#x3051;&#x3067;&#x30BB;&#x30EB;&#x81EA;&#x5F8B;&#x306E;&#x6982;&#x65E5;&#x30EA;&#x30BA;&#x30E0;&#x3092;&#x7DAD;&#x6301;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x5C0F;&#x8AAC;&#x306E;&#x6A5F;&#x80FD;&#x30A2;&#x30C3;&#x30BB;&#x30A4;&#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x305F;&#x3001;&alpha; &#x30D8;&#x30EA;&#x30AB;&#x30EB; &#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x5185;&#x306E;&#x30AF;&#x30ED;&#x30C3;&#x30AF;&#x6A5F;&#x80FD;&#x306B;&#x5FC5;&#x8981;&#x3068;&#x3057;&#x3001;CRY1 CRY2 &#x304B;&#x3089;&#x533A;&#x5225;&#x3059;&#x308B; CRY1-PHR(313-426) &#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x6307;&#x5B9A; CRY1 &#x30D5;&#x30A9;&#x30C8;&#x30EA;&#x30A2;&#x30FC;&#x30BC;&#x76F8;&#x540C;&#x9818;&#x57DF; (PHR) &#x3067;&#x533A;&#x5225;&#x3059;&#x308B;&#x30AF;&#x30EA;&#x30D7;&#x30C8; &#x30AF;&#x30ED;&#x30E0;&#x3092;&#x8B58;&#x5225;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x61B6;&#x6E2C;&#x306B;&#x53CD;&#x3057;&#x3066;&#x767A;&#x6563;&#x30AB;&#x30EB;&#x30DC;&#x30AD;&#x30B7;&#x30EB;&#x57FA;&#x672B;&#x7AEF;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3; &#xFF08;CTD&#xFF09; &#x306F;&#x4E0D;&#x53EF;&#x6B20;&#x3067;&#x3001;&#x3067;&#x3059;&#x304C;&#x3001;&#x30EA;&#x30BA;&#x30E0;&#x306E;&#x632F;&#x5E45;&#x3068;&#x5468;&#x671F;&#x9577;&#x3092;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x3059;&#x308B;&#x306B;&#x5F79;&#x7ACB;&#x3061;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6700;&#x5F8C;&#x306B;&#x3001;&#x6211;&#x3005; &#x306F;&#x3001;distinct &#x95A2;&#x6570;&#x306E;&#x751F;&#x5316;&#x5B66;&#x7684;&#x3092;&#x8B58;&#x5225;;CRY1 CRY2 &#x3088;&#x308A;&#x306F;&#x308B;&#x304B;&#x306B;&#x5F37;&#x529B;&#x306A;&#x8EE2;&#x5199;&#x30EA;&#x30D7;&#x30EC;&#x30C3;&#x30B5;&#x30FC;&#x3067;&#x3042;&#x308A;&#x3001;&#x6291;&#x5727; CRY &#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x69D8;&#x3005; &#x306A;&#x5F62;&#x614B;&#x3067;&#x306E;&#x5F37;&#x5EA6;&#x306F;&#x5927;&#x5E45;&#x306B;&#x30EA;&#x30BA;&#x30E0;&#x306E;&#x632F;&#x5E45;&#x3068;&#x76F8;&#x95A2;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x4E00;&#x7DD2;&#x306B;&#x53D6;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3001;&#x6211;&#x3005; &#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x306F;&#x3001;CRY1-PHR(313-426)&#x3001;&#x306A;&#x3044;&#x767A;&#x6563;&#x306E; CTD&#x3001;&#x6642;&#x8A08;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3092;&#x91CD;&#x8981;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x8ABF;&#x67FB;&#x7D50;&#x679C;&#x30D5;&#x30A9;&#x30C8;&#x30EA;&#x30A2;&#x30FC;&#x30BC;/&#x30AF;&#x30EA;&#x30D7;&#x30C8; &#x30AF;&#x30ED;&#x30E0;&#x306E;&#x5BB6;&#x65CF;&#x306E;&#x30D5;&#x30E9;&#x30D3;&#x30F3;&#x86CB;&#x767D;&#x306E;&#x591A;&#x69D8;&#x306A;&#x6A5F;&#x80FD;&#x306E;&#x9032;&#x5316;&#x306B;&#x65B0;&#x3057;&#x3044;&#x6D1E;&#x5BDF;&#x529B;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3057;&#x3066;&#x6CE3;&#x304F;&#x95A2;&#x6570;&#x306E;&#x6A5F;&#x69CB;&#x89E3;&#x660E;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x65B0;&#x3057;&#x3044;&#x6A5F;&#x4F1A;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x30D5;&#x30A3;&#x30FC;&#x30C9;&#x30D0;&#x30C3;&#x30AF;&#x6291;&#x5727;&#x6982;&#x65E5;&#x6642;&#x8A08;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3067;&#x5FC5;&#x8981;&#x306A;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x3092;&#x533A;&#x5225;&#x3059;&#x308B;&#x5C0F;&#x8AAC;&#x30AF;&#x30EA;&#x30D7;&#x30C8; &#x30AF;&#x30ED;&#x30E0;&#x306E; id&#x3002;

&#xD3EC;&#xC720;&#xB958; circadian &#xC2DC;&#xACC4; cryptochromes, CRY1 &#xBC0F; CRY2, &#xC758;&#xD574; transcriptional &#xC5B5;&#xC555; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;&#xC758; &#xC2EC;&#xC7A5;&#xBD80;&#xC5D0; &#xB193;&#xC5EC; &#xBD80;&#xC815;&#xC801;&#xC778; &#xD53C;&#xB4DC;&#xBC31; &#xB8E8;&#xD504;&#xB97C; &#xAE30;&#xBC18;&#xC73C;&#xB85C; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC2DC;&#xD000;&#xC2A4;, &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778; &#xAD6C;&#xC870; &#xBC0F; &#xC0DD; &#xD654; &#xD655; &#xC801;&#xC778; &#xD65C;&#xB3D9;&#xC758; &#xC720;&#xC0AC;&#xC131;&#xC5D0;&#xB3C4; &#xBD88;&#xAD6C; &#xD558; &#xACE0; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC740; &#xC2DC;&#xACC4; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC5D0; &#xB69C;&#xB837;&#xD55C; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xC7AC;&#xC0DD;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098;, &#xAD6C;&#xCCB4;&#xC801;&#xC778;&#xB41C; &#xC0DD;&#xD654;&#xD559; &#xC5F0;&#xAD6C; &#xAC04;&#xB2E8; &#xD558;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC740; &#xBC0F; &#xC6B4;&#xB3D9; &#xCE21;&#xC815;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xC2E4;&#xC81C; &#xC2DC;&#xACC4; &#xC140;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC678;&#xCE68; &#xAE30;&#xB2A5; &#xAC80;&#xC0AC; &#xD558;&#xC9C0;. &#xC774; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; &#xBCF4;&#xC5EC; &#xC720;&#xC804; &#xBCF4;&#xC644;&#xC131; &#xC140; &#xAE30;&#xBC18; &#xC2E4;&#xC2DC;&#xAC04; &#xBD84;&#xC790; &#xB179;&#xC74C;&#xC744; &#xD1B5;&#xD574; &#xD63C;&#xC790; &#xADF8; cry1&#xC740; &#xC140; &#xC790;&#xCE58; circadian &#xB9AC;&#xB4EC;&#xC744; &#xC720;&#xC9C0;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xAC8C; Cry2 &#xC218; &#xC5C6;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xBC18;&#xBA74;. &#xC6B0;&#xB9AC; cryptochrome CRY1-PHR(313-426) &#xC2DC;&#xACC4; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC5D0; &#xD544;&#xC694;&#xD55C; &#xACE0; cry2&#xC5D0;&#xC11C; cry1&#xB97C; &#xAD6C;&#xBCC4;&#xB85C; &#xC9C0;&#xC815; &#xD558;&#xB294; cry1&#xC758; photolyase homology &#xC601;&#xC5ED; (PHR) &#xB0B4;&#xC5D0;&#xC11C; &alpha; &#xD5EC;&#xB9AC;&#xCEEC; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778; &#xCC28;&#xBCC4;&#xD654; &#xC2DD;&#xBCC4;&#xC774; &#xC18C;&#xC124; &#xAE30;&#xB2A5; &#xBD84;&#xC11D; &#xACB0;&#xACFC; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC;. &#xD22C;&#xAE30;, &#xBC18;&#xB300; &#xBD84;&#xAE30; carboxyl &#xD130;&#xBBF8;&#xB110; &#xAF2C;&#xB9AC; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778; (CTD)&#xC740; &#xD544;&#xC218;, &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xB9AC;&#xB4EC; &#xC9C4;&#xD3ED; &#xBC0F; &#xAE30;&#xAC04; &#xAE38;&#xC774; &#xC870;&#xC808; &#xD558;&#xB294; &#xC5ED;&#xD560;. &#xB9C8;&#xC9C0;&#xB9C9;&#xC73C;&#xB85C;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC758; &#xACE0;&#xC720; &#xAE30;&#xB2A5;;&#xC758; &#xC0DD; &#xD654; &#xD559;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xC2DD;&#xBCC4; CRY1 CRY2, &#xBCF4;&#xB2E4; &#xD6E8;&#xC52C; &#xB354; &#xAC15;&#xB825;&#xD55C; transcriptional &#xC9C4;&#xC555; &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; &#xC6B8; &#xC5B4; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xB2E4;&#xC591; &#xD55C; &#xD615;&#xD0DC;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC5B5;&#xC555;&#xC758; &#xAC15;&#xB3C4; &#xD06C;&#xAC8C; &#xB9AC;&#xB4EC; &#xC9C4;&#xD3ED;&#xACFC; &#xC5F0;&#xAD00;. &#xD568;&#xAED8; &#xCC0D;&#xC740;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xACB0;&#xACFC; CRY1-PHR(313-426), &#xC544;&#xB2C8;&#xB77C; &#xBD84;&#xAE30; CTD&#xB294; &#xC2DC;&#xACC4; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xC785;&#xC99D;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xC5F0;&#xAD6C; &#xACB0;&#xACFC; flavoproteins photolyase/cryptochrome &#xC81C;&#xD488;&#xAD70;&#xC758; &#xB2E4;&#xC591; &#xD55C; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC758; &#xC9C4;&#xD654;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC0C8;&#xB85C;&#xC6B4; &#xD1B5;&#xCC30;&#xB825;&#xC744; &#xC81C;&#xACF5; &#xD558; &#xACE0; &#xC6B8; &#xC5B4; &#xD568;&#xC218;&#xC758; &#xAE30;&#xACC4; &#xB860; &#xC801;&#xC778; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC0C8;&#xB85C;&#xC6B4; &#xAE30;&#xD68C;&#xB97C; &#xC81C;&#xACF5;.

&#xC18C;&#xC124; cryptochrome circadian &#xC2DC;&#xACC4; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC5D0; &#xD53C;&#xB4DC;&#xBC31; &#xC5B5;&#xC81C;&#xC5D0; &#xD544;&#xC694;&#xD55C; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778;&#xC744; &#xCC28;&#xBCC4;&#xD654;&#xC758; &#xC2DD;&#xBCC4;.

Relojes circadianos en mam&iacute;feros se basan en un bucle de realimentaci&oacute;n negativa en que la represi&oacute;n transcripcional de la cryptochromes, CRY1 y CRY2, yace en el coraz&oacute;n del mecanismo. A pesar de las similitudes en la secuencia, estructura de dominios y actividad bioqu&iacute;mica, que juegan papeles distintos en funci&oacute;n del reloj. Sin embargo, detallados estudios bioqu&iacute;micos no han sido sencillos y funci&oacute;n grito no ha sido examinada en las c&eacute;lulas de reloj real usando medidas cin&eacute;ticas. En este estudio, demostramos, a trav&eacute;s de complementaci&oacute;n gen&eacute;tica celular y grabaci&oacute;n en tiempo real molecular, eso Cry1 solo es capaz de mantener los ritmos circadianos c&eacute;lulas aut&oacute;nomos, mientras que Cry2 no. Usando este an&aacute;lisis funcional nuevo, identificamos un Criptocromo diferenciando &alpha;-helicoidal dominio dentro de la regi&oacute;n de homolog&iacute;a photolyase (PHR) de CRY1, denominada CRY1-PHR(313-426), que se requiere para la funci&oacute;n de reloj y distingue CRY1 de CRY2. Contrario a la especulaci&oacute;n, el dominio de la cola de carboxilo-terminal divergentes (CTD) es prescindible, pero sirve para modular la amplitud del ritmo y la duraci&oacute;n. Finalmente, identificamos las bases bioqu&iacute;micas de su funci&oacute;n distinta; CRY1 es un represor transcripcional mucho m&aacute;s potente que CRY2, y la fuerza de la represi&oacute;n de diversas formas de prote&iacute;nas CRY se correlaciona significativamente con la amplitud del ritmo. Tomados en conjunto, nuestros resultados demuestran que CRY1-PHR(313-426), no el CCD divergente, es cr&iacute;tica para la funci&oacute;n de reloj. Estos resultados proporcionan nuevos conocimientos sobre la evoluci&oacute;n de las diversas funciones de la familia de photolyase/Criptocromo de flavoproteins y ofrecen nuevas oportunidades para el estudio de mecanismos de funci&oacute;n del grito.

Identificaci&oacute;n de una novela Criptocromo diferenciar el dominio necesario para la represi&oacute;n de la regeneraci&oacute;n en funci&oacute;n del reloj circadiano.

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Andrew C. Liu

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