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Substrate Generation for Endonucleases of CRISPR/Cas Systems

The  interaction of viruses and their prokaryotic hosts shaped the evolution of  bacterial and archaeal life. Prokaryotes developed several strategies to ...

Max-Planck-Institute for terrestrial Microbiology

CRISPR &#x9635;&#x5217;&#x5728;&#x8BB8;&#x591A;&#x7EC6;&#x83CC;&#x4E2D;&#x53D1;&#x73B0;&#xFF0C;&#x5927;&#x591A;&#x6570;&#x53E4;&#x751F;&#x83CC;&#x8F6C;&#x5F55;&#x6210;&#x52A0;&#x5DE5;&#x6210; RNAs &#x5C0F;&#x805A;&#x96C6;&#x5B9A;&#x671F;&#x7A7A;&#x9699;&#x77ED;&#x590D;&#x53D1;&#x6027;&#x91CD;&#x590D; &#xFF08;CRISPR&#xFF09; &#xFF08;crRNAs&#xFF09; &#x7684;&#x957F;&#x524D;&#x4F53; RNA&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B; RNA &#x5206;&#x5B50;&#x53EF;&#x4EE5;&#x5305;&#x542B;&#x75C5;&#x6BD2;&#x7684;&#x57FA;&#x56E0;&#x7EC4;&#x7247;&#x6BB5;&#x548C;&#x6253;&#x5706;&#x573A;&#xFF0C;&#x8FD8;&#x6709;&#x4E00;&#x5957; CRISPR &#x5173;&#x8054; (Cas) &#x86CB;&#x767D;&#x7684;&#x539F;&#x6838;&#x514D;&#x75AB;&#x75C5;&#x6BD2;&#x7684;&#x653B;&#x51FB;&#x3002;CRISPR/Cas &#x7CFB;&#x7EDF;&#x591A;&#x79CD;&#x591A;&#x6837;&#xFF0C;&#x5E76;&#x5904;&#x7406; crRNAs &#x7684; Cas6 &#x9176;&#x4E0D;&#x540C;&#x4E9A;&#x578B;&#x4E4B;&#x95F4;&#x5404;&#x4E0D;&#x76F8;&#x540C;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x5206;&#x6790;&#x4E86; CRISPR/Ca &#x5B50;&#x7C7B;&#x578B;&#x6211;-B&#xFF0C;&#x76EE;&#x524D;&#x4ECE;&#x7EC6;&#x83CC;&#x548C;&#x53E4;&#x83CC;&#x6A21;&#x578B;&#x751F;&#x7269;&#x4F53;&#x68AD;&#x83CC; thermocellum &#x548C; Methanococcus maripaludis C5 &#x7684;&#x65B0;&#x578B; Cas6 &#x9176;&#x7684;&#x9274;&#x5B9A;&#x3002;Methanococcus maripaludis Cas6b &#x5728;&#x4F53;&#x5916;&#x6D3B;&#x6027;&#x548C;&#x7279;&#x5F02;&#x6027;&#x786E;&#x5B9A;&#x3002;&#x786E;&#x5B9A;&#x4E86;&#x4E24;&#x4E2A;&#x8865;&#x5145;&#x6027;&#x50AC;&#x5316;&#x7EC4;&#x6C28;&#x9178;&#x6B8B;&#x57FA;&#x3002;RNA Seq &#x5206;&#x6790;&#x63ED;&#x793A;&#x4F53;&#x5185; crRNA &#x5904;&#x7406;&#x7AD9;&#x70B9;&#x3001; crRNA &#x4E30;&#x5EA6;&#x548C; CRISPR &#x8F6C;&#x5F55;&#x5185;&#x8FD9;&#x4E24;&#x79CD;&#x751F;&#x7269;&#x7684;&#x65B9;&#x5411;&#x3002;&#x4E2A;&#x522B;&#x57AB;&#x7247;&#x5E8F;&#x5217;&#x786E;&#x5B9A;&#x4E86;&#x8F6C;&#x5F55;&#x548C;&#x52A0;&#x5DE5;&#x6A21;&#x5F0F; CRISPR &#x7FA4;&#x96C6;&#x7684;&#x5F3A;&#x70C8;&#x5F71;&#x54CD;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x5F71;&#x54CD;&#x5C06;&#x9700;&#x8981;&#x8003;&#x8651;&#x7684;&#x76EE;&#x7684;&#x662F;&#x4E3A;&#x4E86;&#x4EA7;&#x751F;&#x5408;&#x6210; crRNAs &#x7684; CRISPR &#x7FA4;&#x96C6;&#x5E94;&#x7528;&#x7A0B;&#x5E8F;&#x3002;

CRISPR RNA &#x52A0;&#x5DE5;&#x68AD;&#x83CC; thermocellum &#x548C; Methanococcus maripaludis &#x7684;&#x8868;&#x5F81;&#x3002;

The CRISPR arrays found in many bacteria and most archaea are transcribed into a long precursor RNA that is processed into small clustered regularly interspaced short palindromic repeats (CRISPR) RNAs (crRNAs). These RNA molecules can contain fragments of viral genomes and mediate, together with a set of CRISPR-associated (Cas) proteins, the prokaryotic immunity against viral attacks. CRISPR/Cas systems are diverse and the Cas6 enzymes that process crRNAs vary between different subtypes. We analysed CRISPR/Cas subtype I-B and present the identification of novel Cas6 enzymes from the bacterial and archaeal model organisms Clostridium thermocellum and Methanococcus maripaludis C5. Methanococcus maripaludis Cas6b in vitro activity and specificity was determined. Two complementary catalytic histidine residues were identified. RNA-Seq analyses revealed in vivo crRNA processing sites, crRNA abundance and orientation of CRISPR transcription within these two organisms. Individual spacer sequences were identified with strong effects on transcription and processing patterns of a CRISPR cluster. These effects will need to be considered for the application of CRISPR clusters that are designed to produce synthetic crRNAs.

Characterization of CRISPR RNA processing in Clostridium thermocellum and Methanococcus maripaludis.

Les baies CRISPR trouvent dans de nombreuses bact&eacute;ries et archaea plupart sont transcrits dans un long pr&eacute;curseur RNA qui est transform&eacute; en petit cluster r&eacute;guli&egrave;rement dois&#x2011;je courtes r&eacute;p&eacute;titions palindromique (CRISPR) RNAs (crRNAs). Ces mol&eacute;cules d&#39;ARN peuvent contenir des fragments de g&eacute;nomes viraux et m&eacute;diation, ainsi qu&#39;un ensemble de prot&eacute;ines associ&eacute;es aux CRISPR (Cas), la procaryote immunit&eacute; contre les attaques virales. Syst&egrave;mes CRISPR/AR sont diverses et les enzymes Cas6 qui traitent les crRNAs varient selon les diff&eacute;rents sous-types. Nous avons analys&eacute; CRISPR/AR sous-type I-B et pr&eacute;senter l&#39;identification de nouveaux Cas6 enzymes des bact&eacute;ries et arch&eacute;es mod&egrave;le organismes Clostridium thermocellum et Methanococcus maripaludis C5. Methanococcus maripaludis Cas6b dans l&#39;activit&eacute; in vitro et la sp&eacute;cificit&eacute; a &eacute;t&eacute; d&eacute;termin&eacute;e. Deux r&eacute;sidus d&#39;histidine catalytique compl&eacute;mentaires ont &eacute;t&eacute; identifi&eacute;s. RNA-Seq analyses ont r&eacute;v&eacute;l&eacute; in vivo crRNA sites de traitement, l&#39;abondance de la crRNA et l&#39;orientation de la transcription CRISPR au sein de ces deux organismes. S&eacute;quences de l&#39;espaceur individuels ont &eacute;t&eacute; identifi&eacute;s avec des effets importants sur les habitudes de transcription et de la transformation d&#39;une grappe CRISPR. Ces effets devront &ecirc;tre consid&eacute;r&eacute;s pour l&#39;application de clusters CRISPR qui sont con&ccedil;us pour produire des crRNAs synth&eacute;tiques.

Caract&eacute;risation de l&#39;ARN CRISPR traitement Clostridium thermocellum et Methanococcus maripaludis.

Die CRISPR-Arrays in viele Bakterien und die meisten Archaeen sind transkribiert in langen Vorl&auml;ufer RNA, der zu kleinen gruppierten regelm&auml;&szlig;ig interspaced kurze palindromische Wiederholungen (CRISPR) RNAs (CrRNAs) verarbeitet wird. Diese RNA-Molek&uuml;le k&ouml;nnen enthalten Fragmente von viralen Genomen und vermitteln, zusammen mit einer Reihe von CRISPR-assoziierte (Cas) Proteine, die Prokaryoten Immunit&auml;t gegen die Viren-Attacken. CRISPR/Cas-Systeme sind vielf&auml;ltig und die Cas6 Enzyme, die CrRNAs verarbeiten variieren zwischen verschiedenen Subtypen. Wir analysierten CRISPR/Cas Subtyp-B und die Identifizierung von Roman Cas6 Enzyme der Bakterien und Archaea Modell Organismen Clostridium Thermocellum und Methanococcus Maripaludis C5 pr&auml;sentieren. Methanococcus Maripaludis Cas6b in Vitro Aktivit&auml;t und Spezifit&auml;t wurde ermittelt. Zwei erg&auml;nzende katalytische Histidin-R&uuml;ckst&auml;nde wurden identifiziert. RNA-Seq Analysen ergab in-vivo CrRNA Verarbeitung Websites, CrRNA F&uuml;lle und Ausrichtung der CRISPR-Transkription innerhalb dieser zwei Organismen. Individuelle Spacer-Sequenzen wurden mit starken Auswirkungen auf die Transkription und Verarbeitung Muster eines CRISPR-Clusters identifiziert. Diese Effekte m&uuml;ssen f&uuml;r die Anwendung der CRISPR-Cluster betrachtet werden, die entworfen sind, um synthetische CrRNAs zu produzieren.

Charakterisierung der CRISPR-RNA, die Verarbeitung in Clostridium Thermocellum und Methanococcus Maripaludis.

Le matrici CRISPR trovano in molti batteri e archaea la maggior parte sono trascritti in un lungo precursore RNA che viene trasformato in piccoli cluster regolarmente interspaced corto palindromo ripetizioni (CRISPR) RNAs (crRNAs). Queste molecole di RNA possono contenere frammenti del genoma virale e mediare, unitamente a un insieme di proteine associate CRISPR (Cas), la procariota immunit&agrave; contro gli attacchi virali. Sistemi CRISPR/Cas sono diversi e gli enzimi Cas6 che elaborano crRNAs variano tra diversi sottotipi. Abbiamo analizzato CRISPR/Cas sottotipo I-B e presentare l&#39;identificazione del romanzo Cas6 enzimi batterici e archaeal modello organismi Clostridium thermocellum e 3AB maripaludis C5. &Egrave; stato determinato 3AB maripaludis Cas6b in vitro attivit&agrave; e specificit&agrave;. Sono stati identificati due residui di istidina catalitico complementari. RNA-Seq analisi hanno evidenziato in vivo crRNA lavorazione siti, abbondanza di crRNA e l&#39;orientamento della trascrizione CRISPR all&#39;interno di questi due organismi. Sequenze distanziale individuali sono stati identificati con forti effetti sui modelli di elaborazione e trascrizione di un cluster di CRISPR. Questi effetti dovranno essere considerati per l&#39;applicazione del cluster CRISPR che sono progettati per produrre crRNAs sintetico.

Caratterizzazione di CRISPR RNA processing in Clostridium thermocellum e 3AB maripaludis.

&#x591A;&#x304F;&#x306E;&#x7D30;&#x83CC;&#x306E; CRISPR &#x914D;&#x5217;&#x3092;&#x767A;&#x898B;&#x3057;&#x3001;&#x307B;&#x3068;&#x3093;&#x3069;&#x53E4;&#x7D30;&#x83CC;&#x306F;&#x5C0F;&#x898F;&#x6A21;&#x30AF;&#x30E9;&#x30B9;&#x30BF;&#x30FC;&#x5316;&#x5B9A;&#x671F;&#x7684;&#x306B; interspaced &#x77ED;&#x3044;&#x56DE;&#x6587;&#x7E70;&#x308A;&#x8FD4;&#x3057; (CRISPR) Rna (crRNAs) &#x306B;&#x51E6;&#x7406;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x9577;&#x3044;&#x524D;&#x99C6;&#x4F53; RNA &#x306B;&#x8EE2;&#x5199;&#x3055;&#x308C;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E; RNA &#x5206;&#x5B50;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x306E;&#x30B2;&#x30CE;&#x30E0;&#x306E;&#x30D5;&#x30E9;&#x30B0;&#x30E1;&#x30F3;&#x30C8;&#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x3001;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x653B;&#x6483;&#x306B;&#x5BFE;&#x3059;&#x308B;&#x539F;&#x6838;&#x751F;&#x7269;&#x306E;&#x514D;&#x75AB; CRISPR &#x95A2;&#x9023;&#x4ED8;&#x3051;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B; (Cas) &#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x306E;&#x30BB;&#x30C3;&#x30C8;&#x3068;&#x5171;&#x306B;&#x3092;&#x4EF2;&#x4ECB;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;CRISPR/Cas &#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E0;&#x304C;&#x591A;&#x69D8;&#x3067;&#x3001;crRNAs &#x3092;&#x51E6;&#x7406; Cas6 &#x9175;&#x7D20;&#x9593;&#x306E;&#x7570;&#x306A;&#x308B;&#x30B5;&#x30D6;&#x30BF;&#x30A4;&#x30D7;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x7570;&#x306A;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005; CRISPR/Cas &#x30B5;&#x30D6;&#x30BF;&#x30A4;&#x30D7; i-b &#x3092;&#x5206;&#x6790;&#x3057;&#x3001;&#x65B0;&#x898F;&#x306E; Cas6 &#x9175;&#x7D20;&#x7D30;&#x83CC;&#x3068;&#x53E4;&#x7D30;&#x83CC;&#x306E;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x751F;&#x7269;&#x30AF;&#x30ED;&#x30B9;&#x30C8;&#x30EA;&#x30B8;&#x30A6;&#x30E0;&#x682A;&#x3068; Methanococcus maripaludis C5 &#x304B;&#x3089;&#x306E;&#x540C;&#x5B9A;&#x3092;&#x63D0;&#x793A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;Methanococcus maripaludis Cas6b &#x306E; in vitro &#x6D3B;&#x6027;&#x3068;&#x7279;&#x7570;&#x6027;&#x3092;&#x6C7A;&#x5B9A;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;2 &#x3064;&#x306E;&#x76F8;&#x88DC;&#x7684;&#x306A;&#x89E6;&#x5A92;&#x30D2;&#x30B9;&#x30C1;&#x30B8;&#x30F3;&#x6B8B;&#x57FA;&#x304C;&#x540C;&#x5B9A;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;RNA Seq &#x89E3;&#x6790;&#x3067;&#x306F;&#x3001;in vivo crRNA &#x51E6;&#x7406;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x3001;crRNA &#x306E;&#x8C4A;&#x304B;&#x3055;&#x3068; CRISPR &#x8EE2;&#x5199;&#x3053;&#x308C;&#x3089; 2 &#x3064;&#x306E;&#x751F;&#x7269;&#x5185;&#x306E;&#x65B9;&#x5411;&#x3092;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x500B;&#x3005; &#x306E;&#x30B9;&#x30DA;&#x30FC;&#x30B5;&#x30FC; &#x30B7;&#x30FC;&#x30B1;&#x30F3;&#x30B9; CRISPR &#x30AF;&#x30E9;&#x30B9;&#x30BF;&#x30FC;&#x306E;&#x8EE2;&#x5199;&#x30FB;&#x51E6;&#x7406;&#x30D1;&#x30BF;&#x30FC;&#x30F3;&#x306B;&#x5F37;&#x3044;&#x5F71;&#x97FF;&#x3068;&#x540C;&#x5B9A;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x52B9;&#x679C;&#x306F;&#x3001;&#x5408;&#x6210; crRNAs &#x3092;&#x751F;&#x6210;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x8A2D;&#x8A08;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B; CRISPR &#x30AF;&#x30E9;&#x30B9;&#x30BF;&#x30FC;&#x306E;&#x30A2;&#x30D7;&#x30EA;&#x30B1;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x3092;&#x8003;&#x616E;&#x3059;&#x308B;&#x5FC5;&#x8981;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

CRISPR &#x51E6;&#x7406;&#x682A;&#x3068; Methanococcus maripaludis RNA &#x306E;&#x7279;&#x6027;&#x3002;

CRISPR &#xBC30;&#xC5F4; &#xB9CE;&#xC740; &#xBC15;&#xD14C;&#xB9AC;&#xC544;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBC1C;&#xACAC; &#xD558; &#xACE0; &#xB300;&#xBD80;&#xBD84;&#xC758; &#xACE0;&#xC138;&#xADE0; RNAs &#xC791;&#xC740; &#xD074;&#xB7EC;&#xC2A4;&#xD130; &#xC815;&#xAE30;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; interspaced &#xC9E7;&#xC740; &#xD68C;&#xBB38; &#xBC18;&#xBCF5; (CRISPR) (crRNAs)&#xC73C;&#xB85C; &#xCC98;&#xB9AC; &#xB418;&#xB294; &#xAE34; &#xC804;&#xC870; RNA&#xB85C; &#xBCC0;&#xD558;&#xAC8C; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774; RNA &#xBD84;&#xC790; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; &#xC131; &#xAC8C;&#xB188;&#xC758; &#xD30C;&#xD3B8;&#xC744; &#xD3EC;&#xD568; &#xD558; &#xACE0; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; &#xACF5;&#xACA9;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; prokaryotic &#xBA74;&#xC5ED; CRISPR &#xAD00;&#xB828; (Cas) &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xC138;&#xD2B8;&#xB97C; &#xD568;&#xAED8; &#xC911;&#xC7AC; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. CRISPR/Ca &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C;&#xC740; &#xB2E4;&#xC591; &#xD558; &#xACE0; Cas6 &#xD6A8;&#xC18C; Crrnas&#xB97C; &#xCC98;&#xB9AC; &#xD558;&#xB294; &#xB2E4;&#xB978; &#xD558;&#xC704; &#xC720;&#xD615;&#xC774; &#xB2EC;&#xB77C; &#xC9D1;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; CRISPR/Ca &#xD558;&#xC704; &#xD615;&#xC2DD; I-B&#xB97C; &#xBD84;&#xC11D; &#xD558; &#xACE0; &#xC138;&#xADE0;&#xC131; &#xBC0F; archaeal &#xBAA8;&#xB378; &#xC0DD;&#xBB3C; Clostridium thermocellum &#xBC0F; Methanococcus maripaludis C5 &#xC18C;&#xC124; Cas6 &#xD6A8;&#xC18C;&#xC758; &#xC2E0;&#xBD84;&#xC99D;. Methanococcus maripaludis Cas6b &#xCCB4; &#xC678; &#xD65C;&#xB3D9; &#xBC0F; &#xD2B9;&#xC774;&#xC131;&#xC744; &#xACB0;&#xC815; &#xD588;&#xB2E4;. &#xB450; &#xAC1C;&#xC758; &#xC0C1;&#xD638; &#xBCF4;&#xC644;&#xC801;&#xC778; &#xCD09;&#xB9E4; &#xD788;&#xC2A4;&#xD2F0;&#xB518; &#xC794;&#xB958;&#xBB3C; &#xD655;&#xC778; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;. RNA Seq &#xBD84;&#xC11D; vivo&#xC5D0;&#xC11C; crRNA &#xCC98;&#xB9AC; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8;, crRNA &#xD48D;&#xC694;&#xB85C; &#xC6C0;&#xC774; &#xB450; &#xC720;&#xAE30; &#xCCB4; &#xB0B4;&#xC5D0;&#xC11C; CRISPR &#xC804;&#xC0AC;&#xC758; &#xBC29;&#xD5A5;&#xC744; &#xBC1D;&#xD614;&#xB2E4;. &#xAC1C;&#xBCC4; &#xACF5;&#xBC31; &#xC2DC;&#xD000;&#xC2A4; CRISPR &#xD074;&#xB7EC;&#xC2A4;&#xD130;&#xC758; &#xC804;&#xC0AC; &#xBC0F; &#xCC98;&#xB9AC; &#xD328;&#xD134;&#xC5D0; &#xAC15;&#xB825;&#xD55C; &#xC601;&#xD5A5;&#xC744; &#xBC1C;&#xACAC; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xD6A8;&#xACFC; &#xD569;&#xC131; Crrnas&#xB97C; &#xC0DD;&#xC0B0; &#xD558;&#xB3C4;&#xB85D; &#xC124;&#xACC4; &#xB41C; CRISPR &#xD074;&#xB7EC;&#xC2A4;&#xD130;&#xC758; &#xC751;&#xC6A9; &#xD504;&#xB85C;&#xADF8;&#xB7A8;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xACE0;&#xB824;&#xD574; &#xC57C; &#xD560; &#xAC83; &#xC774;&#xB2E4;.

Clostridium thermocellum &#xBC0F; Methanococcus maripaludis&#xC5D0;&#xC11C; &#xCC98;&#xB9AC; &#xD558;&#xB294; CRISPR RNA&#xC758; &#xD2B9;&#xC131; &#xBD84;&#xC11D;.

Las matrices CRISPR encontraron en muchas bacterias y archaea mayor&iacute;a se transcriben en un precursor largo RNA que son transformado en RNAs peque&ntilde;os agrupado regularmente interspaced corto palindr&oacute;mico repeticiones (CRISPR) (crRNAs). Estas mol&eacute;culas de ARN pueden contener fragmentos de genomas virales y mediar, junto con un conjunto de prote&iacute;nas asociadas a CRISPR (Cas), las procariota inmunidad contra los ataques virales. Sistemas CRISPR/Cas son diversos y las enzimas Cas6 que procesan crRNAs var&iacute;an entre los diferentes subtipos. Se analizaron CRISPR/Cas subtipo B y presenta la identificaci&oacute;n de nuevas Cas6 enzimas de las bacterias y arqueobacterias modelo organismos Clostridium thermocellum y Methanococcus Jannaschii C5. Methanococcus Jannaschii Cas6b en vitro actividad y especificidad se determinan. Se identificaron dos residuos histidina catal&iacute;tica complementarios. RNA-Seq an&aacute;lisis revelaron sitios de procesamiento en vivo crRNA, abundancia de crRNA y orientaci&oacute;n de transcripci&oacute;n CRISPR dentro de estos dos organismos. Se identificaron secuencias del espaciador individuales con fuertes efectos en los patrones de transcripci&oacute;n y procesamiento de un cl&uacute;ster CRISPR. Estos efectos se deben considerarse para la aplicaci&oacute;n de racimos CRISPR que est&aacute;n dise&ntilde;ados para producir crRNAs sint&eacute;tico.

Hagen Richter

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