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Manufacturing and Using Piggy-back Multibarrel Electrodes for <em>In vivo</em> Pharmacological Manipulations of Neural Responses

In vivo recordings from single neurons allow an investigator to examine the firing properties of neurons, for example in response to sensory stimuli. ...

University of Colorado Medical Campus

&#x6211;&#x4EEC;&#x6700;&#x8FD1;&#x5DF2;&#x5E94;&#x7528;&#x6797;&#x9053; Neher &#x7535;&#x5BB9;&#x6D4B;&#x91CF;&#x6280;&#x672F;&#x7814;&#x7A76;&#x56CA;&#x6CE1;&#x82B1;&#x843C;&#x7C7B;&#x578B;&#x7A81;&#x89E6;&#x5728;&#x8D29;&#x8FD0;&#x5927;&#x9F20;&#x5185;&#x4FA7;&#x6838;&#x7684;&#x5207;&#x7247;&#x6761;&#x4EF6;&#x7684;&#x68AF;&#x5F62;&#x673A;&#x6784; &#xFF08;MNTB&#xFF09;&#x3002;&#x6B64;&#x5E94;&#x7528;&#x7A0B;&#x5E8F;&#x6240;&#x4F5C; MNTB synapse &#x80DE;&#x548C;&#x5185;&#x7684;&#x541E;&#x4F5C;&#x7528;&#x5728;&#x5E38;&#x89C4;&#x6D3B;&#x52A8;&#x533A;&#x7814;&#x7A76;&#x7684;&#x6770;&#x51FA;&#x5178;&#x8303;&#x3002;&#x7136;&#x800C;&#xFF0C;&#x53EA;&#x662F;&#x5927;&#x6982;&#x76F8;&#x5F53;&#x4E8E;&#x4E00;&#x79CD;&#x5355;&#x8F66;&#x53A2;&#x7535;&#x8DEF;&#xFF0C;&#x56E0;&#x4E3A;&#x5176;&#x88AB;&#x52A8;&#x5F53;&#x524D;&#x77AC;&#x53D8;&#x5355;&#x6307;&#x6570;&#x8870;&#x53D8;&#x7684;&#x5207;&#x9762;&#x5728;&#x63D0;&#x51FA;&#x8BE5;&#x9879;&#x7533;&#x8BF7;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x786E;&#x5B9A;&#x5E94;&#x7528;&#x7A0B;&#x5E8F;&#x662F;&#x5426;&#x53EF;&#x4EE5;&#x6269;&#x5927;&#x5230;&#x5176;&#x88AB;&#x52A8;&#x5F53;&#x524D;&#x77AC;&#x53D8;&#x70C2; bi-&#x5448;&#x6307;&#x6570;&#x7EA7;&#x7684;&#x5207;&#x9762;&#x7684;&#x5927;&#x591A;&#x6570;&#x3002;&#x901A;&#x8FC7;&#x6BD4;&#x8F83;&#x4E0E;&#x5728;&#x5176;&#x88AB;&#x52A8;&#x5F53;&#x524D;&#x77AC;&#x53D8;&#x7684;&#x5355;&#x6216;&#x53CC;&#x6307;&#x6570;&#x8870;&#x51CF;&#x7684;&#x5207;&#x9762;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x53D1;&#x73B0;&#x7C7B;&#x4F3C;&#x7684;&#x5C5E;&#x6027;&#x65B9;&#x9762;&#xFF1A; (1) &#x7535;&#x5BB9;&#x8DF3;&#x81F4;&#x5217;&#x8F66;&#x52A8;&#x4F5C;&#x7535;&#x4F4D;&#x76F8;&#x5F53;&#x523A;&#x6FC0;&#xFF0C;&#x8FD9;&#x53CD;&#x6620;&#x4E86;&#x80DE; &#xFF1B;(2) &#x6C60;&#x7684;&#x5927;&#x5C0F;&#x53EF;&#x8C03;&#x6574;&#x7684;&#x56CA;&#x6CE1; &#xFF1B;(3) &#x540E;&#x7535;&#x5BB9;&#x8DF3;&#xFF0C;&#x8FD9;&#x53CD;&#x6620;&#x4E86;&#x5185;&#x541E;&#x4F5C;&#x7528; &#xFF1B; &#x8870;&#x51CF;&#x7684;&#x65F6;&#x95F4;&#x8FDB;&#x7A0B;(4) &#x548C;&#x77AC;&#x6001;&#x7535;&#x5BB9;&#x9879;&#x76EE;&#x4E0B; Cd(2+) &#x89C2;&#x5BDF;&#x5230;&#x90A3;&#x5757;&#x80DE;&#x3002;&#x4ECE;&#x5EFA;&#x6A21;&#x5207;&#x9762;&#x4E3A;&#x5355;&#x4E2A;&#x6216;&#x4E24;&#x4E2A;&#x8F66;&#x53A2;&#x7535;&#x8DEF;&#x4E5F;&#x83B7;&#x5F97;&#x4E86;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7C7B;&#x4F3C;&#x7684;&#x5C5E;&#x6027;&#x3002;&#x56E0;&#x6B64;&#xFF0C;&#x7535;&#x5BB9;&#x6D4B;&#x91CF;&#x53EF;&#x80FD;&#x6269;&#x5927;&#x5230;&#x5927;&#x591A;&#x6570;&#x7684;&#x5207;&#x9762;&#xFF0C;&#x8FD9;&#x53EF;&#x80FD;&#x6709;&#x52A9;&#x4E8E;&#x5FEB;&#x901F;&#x56CA;&#x6CE1;&#x8D29;&#x8FD0;&#x5E38;&#x89C4;&#x6B66;&#x5668;&#x6D3B;&#x52A8;&#x533A;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x3002;

&#x7535;&#x5BB9;&#x6D4B;&#x91CF;&#x5728;&#x82B1;&#x843C;&#x4E3E;&#x884C;&#x7684;&#x68AF;&#x5F62;&#x8EAB;&#x4F53;&#x5185;&#x4FA7;&#x6838;&#x5185;&#x3002;

We have recently applied Lindau-Neher's capacitance measurement technique to study vesicle trafficking at the calyx-type synapse in the rat medial nucleus of the trapezoid body (MNTB) in slice conditions. This application made the MNTB synapse an excellent model for the study of exocytosis and endocytosis at conventional active zones. However, the application was only made at calyces that are presumably equivalent to a single-compartment circuit because their passive current transients decayed mono-exponentially. Here, we determined whether the application could be extended to majority of calyces whose passive current transients decayed bi-exponentially. By comparison of calyces with mono- or bi-exponential decay in their passive current transients, we found similar properties in respect to: (1) the capacitance jump induced by trains of action-potential equivalent stimuli, which reflects exocytosis; (2) the size of a releasable vesicle pool; (3) the time course of the decay after the capacitance jump, which reflects endocytosis; and (4) the transient capacitance artifact observed in the presence of Cd(2+) that blocks exocytosis. These similar properties were also obtained from modeling calyces as a single- or two-compartment circuit. Thus, capacitance measurements may be extended to the majority of calyces, which may facilitate the study of rapid vesicle trafficking at conventional active zones.

Capacitance measurements at the calyx of Held in the medial nucleus of the trapezoid body.

Nous avons r&#xE9;cemment appliqu&#xE9; la technique de Lindau-Neher capacit&#xE9; de mesure pour &#xE9;tudier le trafic v&#xE9;siculaire au niveau de la synapse en calice de type dans le noyau de rat m&#xE9;dian du corps trap&#xE9;zo&#xEF;de (MNTB) dans des conditions tranche. Cette application fait la synapse MNTB un excellent mod&#xE8;le pour l&#x26;#39;&#xE9;tude de l&#x26;#39;exocytose et l&#x26;#39;endocytose au conventionnelles zones actives. Toutefois, l&#x26;#39;application a &#xE9;t&#xE9; fait uniquement &#xE0; calices qui sont sans doute &#xE9;quivalent &#xE0; un circuit mono-compartiment parce que leurs passifs courants transitoires pourri mono-exponentielle. Ici, nous avons d&#xE9;termin&#xE9; si l&#x26;#39;application pourrait &#xEA;tre &#xE9;tendue &#xE0; la majorit&#xE9; des calices dont passive transitoires actuelles pourri bi-exponentielle. Par comparaison avec des calices mono-ou bi-exponentielle de caries &#xE0; leurs passifs courants transitoires, nous avons trouv&#xE9; des propri&#xE9;t&#xE9;s similaires &#xE0; l&#x26;#39;&#xE9;gard de: (1) le saut de capacit&#xE9; induite par des trains de potentiel d&#x26;#39;action des stimuli &#xE9;quivalents, ce qui refl&#xE8;te l&#x26;#39;exocytose; (2) de la la taille d&#x26;#39;un pool de v&#xE9;sicules lib&#xE9;rable; (3) au cours du temps de la d&#xE9;croissance apr&#xE8;s le saut de capacit&#xE9;, qui refl&#xE8;te endocytose et (4) de l&#x26;#39;artefact de capacit&#xE9; transitoire observ&#xE9;e en pr&#xE9;sence de Cd (2 +) que l&#x26;#39;exocytose blocs. Ces propri&#xE9;t&#xE9;s similaires ont &#xE9;galement &#xE9;t&#xE9; obtenus &#xE0; partir de calices de mod&#xE9;lisation comme un circuit simple ou &#xE0; deux compartiments. Ainsi, les mesures de capacit&#xE9; peut &#xEA;tre &#xE9;tendue &#xE0; la majorit&#xE9; des calices, ce qui peut faciliter l&#x26;#39;&#xE9;tude de la traite des v&#xE9;sicules rapide &#xE0; conventionnels zones actives.

Mesures de capacit&#xE9; &#xE0; la Calyx de Held dans le noyau m&#xE9;dial du corps trap&#xE9;zo&#xEF;de

Kapazit&#xE4;tsmessungen am Kelch der im medialen Nucleus des Trapez K&#xF6;rper gehalten.

Recentemente abbiamo applicato capacitanza misurazione tecnica di Lindau-Neher per studiare la vescicola traffico al calice-tipo sinapsi nel nucleo mediale ratto del corpo trapezoidale (MNTB) in condizioni di fetta. Questa applicazione fatta i MNTB sinapsi un eccellente modello per lo studio della esocitosi ed endocitosi a zone attive convenzionali. Tuttavia, l&#39;applicazione &egrave; stato fatto solo a sepali che sono presumibilmente equivalente ad un circuito single-vano perch&eacute; loro passivi transitori di corrente decaduto mono-esponenziale. Qui, abbiamo determinato se l&#39;applicazione potrebbe essere esteso alla maggior parte dei sepali cui transitori di corrente passivi decaduto bi-esponenziale. Confronto dei sepali con decadimento mono - o bi-esponenziale nel loro passivi transitori di corrente, abbiamo trovato la propriet&agrave; simili rispetto a: (1) il salto di capacitanza indotto da treni di stimoli equivalenti potenziale d&#39;azione, che riflette la esocitosi; (2) la dimensione di un pool di vescicola rilasciabile; (3) il decorso della decadenza dopo il salto di capacitanza, che riflette l&#39;endocitosi; e (4) l&#39;artefatto di capacitanza transitori osservati in presenza di Cd(2+) che esocitosi di blocchi. Queste propriet&agrave; simili sono state ottenute anche da sepali di modellazione come un circuito singolo o due scomparti. Cos&igrave;, le misure di capacit&agrave; possono essere estesa alla maggior parte dei sepali, che possono facilitare lo studio della vescicola rapido traffico a zone attive convenzionali.

Misure di capacit&agrave; presso il calice del detenuto nel nucleo mediale del corpo trapezoidale.

&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x6700;&#x8FD1;&#x3001;&#x30B9;&#x30E9;&#x30A4;&#x30B9;&#x6761;&#x4EF6;&#x306E;&#x53F0;&#x5F62;&#x4F53;&#xFF08;MNTB&#xFF09;&#x306E;&#x30E9;&#x30C3;&#x30C8;&#x5185;&#x5074;&#x6838;&#x306E;&#x843C;&#x578B;&#x30B7;&#x30CA;&#x30D7;&#x30B9;&#x5C0F;&#x80DE;&#x8F38;&#x9001;&#x3092;&#x7814;&#x7A76;&#x3059;&#x308B;&#x30EA;&#x30F3;&#x30C0;&#x30A6;-&#x30CD;&#x30FC;&#x30A2;&#x30FC;&#x306E;&#x9759;&#x96FB;&#x5BB9;&#x91CF;&#x6E2C;&#x5B9A;&#x624B;&#x6CD5;&#x3092;&#x9069;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x30A2;&#x30D7;&#x30EA;&#x30B1;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x306F;MNTB&#x30B7;&#x30CA;&#x30D7;&#x30B9;&#x5F93;&#x6765;&#x306E;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6;&#x30BE;&#x30FC;&#x30F3;&#x3067;&#x30A8;&#x30AD;&#x30BD;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9;&#x3068;&#x30A8;&#x30F3;&#x30C9;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9;&#x306E;&#x7814;&#x7A76;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x512A;&#x308C;&#x305F;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x305F;&#x3060;&#x3057;&#x3001;&#x30A2;&#x30D7;&#x30EA;&#x30B1;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x306F;&#x3001;&#x305D;&#x306E;&#x53D7;&#x52D5;&#x7684;&#x904E;&#x6E21;&#x96FB;&#x6D41;&#x306F;&#x3001;&#x30E2;&#x30CE;&#x6307;&#x6570;&#x95A2;&#x6570;&#x7684;&#x306B;&#x6E1B;&#x8870;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x3001;&#x30B7;&#x30F3;&#x30B0;&#x30EB;&#x30B3;&#x30F3;&#x30D1;&#x30FC;&#x30C8;&#x30E1;&#x30F3;&#x30C8;&#x56DE;&#x8DEF;&#x306B;&#x304A;&#x305D;&#x3089;&#x304F;&#x540C;&#x7B49;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x814E;&#x676F;&#x3067;&#x884C;&#x308F;&#x308C;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x30A2;&#x30D7;&#x30EA;&#x30B1;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x304C;&#x53D7;&#x52D5;&#x7684;&#x306A;&#x904E;&#x6E21;&#x96FB;&#x6D41;&#x304C;&#x53CC;&#x65B9;&#x5411;&#x306E;&#x6307;&#x6570;&#x95A2;&#x6570;&#x7684;&#x306B;&#x6E1B;&#x8870;&#x814E;&#x676F;&#x306E;&#x5927;&#x90E8;&#x5206;&#x306B;&#x62E1;&#x5F35;&#x3067;&#x304D;&#x305F;&#x304B;&#x3069;&#x3046;&#x304B;&#x6C7A;&#x5B9A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x305D;&#x306E;&#x30D1;&#x30C3;&#x30B7;&#x30D6;&#x904E;&#x6E21;&#x96FB;&#x6D41;&#x3067;&#x30E2;&#x30CE; - &#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x53CC;&#x65B9;&#x5411;&#x6307;&#x6570;&#x6E1B;&#x8870;&#x814E;&#x676F;&#x3068;&#x6BD4;&#x8F03;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3088;&#x308A;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x306B;&#x5BFE;&#x3057;&#x3066;&#x3067;&#x540C;&#x69D8;&#x306E;&#x6027;&#x8CEA;&#x3092;&#x767A;&#x898B;&#x3057;&#x305F;&#xFF1A;&#xFF08;1&#xFF09;&#x9759;&#x96FB;&#x5BB9;&#x91CF;&#x306E;&#x30B8;&#x30E3;&#x30F3;&#x30D7;&#x306F;&#x3001;&#x30A8;&#x30AD;&#x30BD;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9;&#x3092;&#x53CD;&#x6620;&#x3057;&#x305F;&#x884C;&#x52D5;&#x306E;&#x6F5C;&#x5728;&#x7684;&#x306A;&#x540C;&#x7B49;&#x306E;&#x523A;&#x6FC0;&#x306E;&#x5217;&#x8ECA;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x8A98;&#x767A;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x3001;&#xFF08;2&#xFF09;&#x653E;&#x51FA;&#x53EF;&#x80FD;&#x5C0F;&#x80DE;&#x30D7;&#x30FC;&#x30EB;&#x306E;&#x30B5;&#x30A4;&#x30BA;&#x306F;&#x3001;&#x30A8;&#x30F3;&#x30C9;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9;&#x3092;&#x53CD;&#x6620;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x5BB9;&#x91CF;&#x306E;&#x30B8;&#x30E3;&#x30F3;&#x30D7;&#x306E;&#x5F8C;&#x306E;&#x5D29;&#x58CA;&#xFF08;3&#xFF09;&#x6642;&#x9593;&#x7D4C;&#x904E;&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#xFF08;4&#xFF09;CD&#xFF08;2 +&#xFF09;&#x3092;&#x30D6;&#x30ED;&#x30C3;&#x30AF;&#x3059;&#x308B;&#x30A8;&#x30AD;&#x30BD;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9;&#x306E;&#x5B58;&#x5728;&#x4E0B;&#x3067;&#x89B3;&#x5BDF;&#x904E;&#x6E21;&#x5BB9;&#x91CF;&#x30A2;&#x30FC;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D5;&#x30A1;&#x30AF;&#x30C8;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x985E;&#x4F3C;&#x3057;&#x305F;&#x30D7;&#x30ED;&#x30D1;&#x30C6;&#x30A3;&#x306F;&#x3001;&#x30B7;&#x30F3;&#x30B0;&#x30EB;&#x307E;&#x305F;&#x306F;2&#x3064;&#x306E;&#x30B3;&#x30F3;&#x30D1;&#x30FC;&#x30C8;&#x30E1;&#x30F3;&#x30C8;&#x56DE;&#x8DEF;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;&#x814E;&#x676F;&#x304B;&#x3089;&#x5F97;&#x3089;&#x308C;&#x305F;&#x3002;&#x3057;&#x305F;&#x304C;&#x3063;&#x3066;&#x3001;&#x9759;&#x96FB;&#x5BB9;&#x91CF;&#x306E;&#x6E2C;&#x5B9A;&#x306F;&#x3001;&#x5F93;&#x6765;&#x306E;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6;&#x30BE;&#x30FC;&#x30F3;&#x3067;&#x8FC5;&#x901F;&#x306A;&#x5C0F;&#x80DE;&#x8F38;&#x9001;&#x306E;&#x7814;&#x7A76;&#x3092;&#x5BB9;&#x6613;&#x306B;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x814E;&#x676F;&#x306E;&#x5927;&#x90E8;&#x5206;&#x306B;&#x5EF6;&#x9577;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x53F0;&#x5F62;&#x4F53;&#x306E;&#x5185;&#x5074;&#x6838;&#x3067;&#x958B;&#x50AC;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x306E;&#x843C;&#x3067;&#x306E;&#x5BB9;&#x91CF;&#x6E2C;&#x5B9A;

&#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; &#xCD5C;&#xADFC; &#xAE30; &#xC2AC;&#xB77C;&#xC774;&#xC2A4; &#xC870;&#xAC74;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC0AC;&#xB2E4;&#xB9AC;&#xAF34; &#xBC14;&#xB514; (MNTB)&#xC758; &#xC950; &#xB0B4;&#xCE21; &#xD575;&#xC5D0; &#xAF43; &#xBC1B;&#xCE68; &#xD615; &#xB0C5;&#xC5D0; &#xBC00;&#xB9E4; &#xACF5;&#xBD80; Lindau &#xC815;&#xCE58;&#xD559;&#xC790; &#xCEE4;&#xD328;&#xC2DC;&#xD134;&#xC2A4; &#xCE21;&#xC815; &#xAE30;&#xBC95;&#xC744; &#xC801;&#xC6A9; &#xD588;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774; &#xC751;&#xC6A9; &#xD504;&#xB85C;&#xADF8;&#xB7A8; MNTB&#xC744; synapse &#xAE30;&#xC874;&#xC758; &#xD65C;&#xC131; &#xC601;&#xC5ED;&#xC5D0; endocytosis &#xBC0F; exocytosis &#xC5F0;&#xAD6C;&#xB97C; &#xC704;&#xD55C; &#xD6CC;&#xB96D;&#xD55C; &#xBAA8;&#xB378;&#xC744; &#xD588;&#xB2E4;. &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098;, &#xC751;&#xC6A9; &#xD504;&#xB85C;&#xADF8;&#xB7A8;&#xC5D0;&#xC11C; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC758; &#xC218;&#xB3D9; &#xC804;&#xB958; &#xACFC;&#xB3C4; &#xD2B9;&#xC131; &#xBAA8;&#xB178; &#xAE09;&#xACA9; &#xD558; &#xAC8C; &#xBD80;&#xD328; &#xD558;&#xAE30; &#xB54C;&#xBB38;&#xC5D0; &#xC544;&#xB9C8;&#xB3C4; &#xB2E8;&#xC77C; &#xAD6C;&#xD68D; &#xD68C;&#xB85C;&#xC5D0; &#xD574;&#xB2F9; &#xD558;&#xB294; calyces&#xB9CC; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;. &#xC5EC;&#xAE30;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xC751;&#xC6A9; &#xD504;&#xB85C;&#xADF8;&#xB7A8; calyces &#xC218;&#xB3D9; &#xC804;&#xB958; &#xACFC;&#xB3C4; &#xD2B9;&#xC131;&#xC758; bi &#xAE09;&#xACA9; &#xD558; &#xAC8C; &#xBD80;&#xD328;&#xC758; &#xB300;&#xBD80;&#xBD84;&#xC744; &#xD655;&#xC7A5; &#xB420; &#xC218; &#xC788;&#xB294;&#xC9C0; &#xC5EC;&#xBD80;&#xB97C; &#xD655;&#xC778; &#xD588;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xBE44;&#xAD50; &#xD558; &#xC5EC; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC758; &#xC218;&#xB3D9; &#xC804;&#xB958; &#xACFC;&#xB3C4; &#xD2B9;&#xC131; &#xC9C0; &#xC218; &#xBAA8;&#xB178; &#xB610;&#xB294; bi &#xBD80;&#xD328;&#xC640; calyces&#xC758; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; &#xBC1C;&#xACAC; &#xC720;&#xC0AC;&#xD55C; &#xC18D;&#xC131;&#xC744;&#xC5D0;&#xC11C;: (1) exocytosis; &#xBC18;&#xC601; &#xD558;&#xB294; &#xD65C;&#xB3D9; &#xC804;&#xC704;&#xC5D0; &#xD574;&#xB2F9; &#xC790;&#xADF9;&#xC758; &#xC5F4;&#xCC28;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC720;&#xB3C4; &#xB41C; &#xCEE4;&#xD328;&#xC2DC;&#xD134;&#xC2A4; &#xC810;&#xD504; (2) &#xD06C;&#xAE30; releasable &#xAE30; &#xD480;; (3) &#xBC18;&#xC601; endocytosis; &#xCEE4;&#xD328;&#xC2DC;&#xD134;&#xC2A4; &#xC810;&#xD504; &#xD6C4; &#xBD95;&#xAD34;&#xC758; &#xC2DC;&#xAC04; &#xACFC;&#xC815; (4) &#xACFC;&#xB3C4; &#xCEE4;&#xD328;&#xC2DC;&#xD134;&#xC2A4; &#xC720;&#xBB3C; cd(2+)&#xC758; &#xC874;&#xC7AC;&#xB294; &#xBE14;&#xB85D; exocytosis &#xAD00;&#xCC30;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xC720;&#xC0AC;&#xD55C; &#xC18D;&#xC131; &#xB610;&#xD55C; calyces &#xB2E8;&#xC77C; &#xB610;&#xB294; 2 &#xAD6C;&#xD68D; &#xD68C;&#xB85C;&#xB85C; &#xBAA8;&#xB378;&#xB9C1;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC785;&#xC218; &#xD588;&#xB2E4;. &#xB530;&#xB77C;&#xC11C;, &#xCEE4;&#xD328;&#xC2DC;&#xD134;&#xC2A4; &#xCE21;&#xC815; &#xB300;&#xBD80;&#xBD84; &#xAE09;&#xC18D; &#xD55C; &#xAE30; &#xAE30;&#xC874;&#xC758; &#xD65C;&#xC131; &#xC601;&#xC5ED;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC778;&#xC2E0; &#xB9E4;&#xB9E4;&#xC758; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xB97C; &#xCD09;&#xC9C4; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; calyces&#xC758; &#xD655;&#xC7A5; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xC815;&#xC804; &#xC6A9;&#xB7C9; &#xCE21;&#xC815;&#xC740; &#xAF43; &#xBC1B;&#xCE68;&#xC5D0; &#xAC1C;&#xCD5C;&#xC758; &#xC0AC;&#xB2E4;&#xB9AC;&#xAF34; &#xC2E0;&#xCCB4;&#xC758; &#xB0B4;&#xCE21; &#xD575;&#xC5D0;.

Recientemente, hemos aplicado la t&#xE9;cnica-Lindau Neher capacidad de medici&#xF3;n para estudiar el tr&#xE1;fico de ves&#xED;culas en la sinapsis de tipo c&#xE1;liz en el n&#xFA;cleo de la rata medial del cuerpo trapezoide (MNTB) en condiciones de divisi&#xF3;n. Esta aplicaci&#xF3;n hace la sinapsis MNTB un excelente modelo para el estudio de la exocitosis y endocitosis en las zonas activas convencionales. Sin embargo, la solicitud se realice exclusivamente en los c&#xE1;lices que se supone equivalente a un circuito de un solo compartimiento debido a que sus pasivos corrientes transitorias decay&#xF3; mono-exponencial. En este caso, a fin de determinar si la aplicaci&#xF3;n se podr&#xED;a extender a la mayor&#xED;a de los c&#xE1;lices cuyos pasivos transitorios de corriente decay&#xF3; bi-exponencial. Por comparaci&#xF3;n de los c&#xE1;lices con mono o bi-exponencial caries en sus transitorios de corriente pasivas, hemos encontrado propiedades similares en cuanto a: (1) el salto capacitancia inducida por los trenes de potenciales de acci&#xF3;n-est&#xED;mulos equivalentes, lo que refleja exocitosis, (2) el tama&#xF1;o de una piscina ves&#xED;cula liberable, (3) el curso del tiempo de la desintegraci&#xF3;n despu&#xE9;s del salto capacitancia, que refleja la endocitosis, y (4) el artefacto capacitancia transitoria observada en presencia de Cd (2 +) que exocitosis bloques. Estas propiedades similares tambi&#xE9;n fueron obtenidos de los c&#xE1;lices de modelado como un circuito de un solo compartimento o dos. Por lo tanto, las mediciones de capacitancia se puede extender a la mayor&#xED;a de los c&#xE1;lices, que pueden facilitar el estudio de tr&#xE1;fico de ves&#xED;culas r&#xE1;pida en las zonas activas convencionales.

Las mediciones de capacitancia en el c&#xE1;liz de Held en el n&#xFA;cleo medial del cuerpo trapezoide

&#x5DF4;&#x677E;&#x7BA1;&#x5408;&#x594F;&#x548C;&#x77ED;&#x7B1B;&#x4F5C;&#x51FA;&#x8D21;&#x732E;&#x7684;&#x6D3B;&#x52A8;&#x533A; (AZ) &#x795E;&#x7ECF;&#x9012;&#x8D28;&#x91CA;&#x653E;&#x7684;&#x795E;&#x7ECF;&#x672B;&#x68A2;&#x7684;&#x7F51;&#x7AD9; cytomatrix&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x5BA1;&#x67E5;&#x4E86; 3D &#x672C;&#x5730;&#x5316;&#x7684;&#x5DF4;&#x677E;&#x7BA1;&#x5408;&#x594F;&#x548C;&#x77ED;&#x7B1B;&#x5728;&#x5927;&#x9F20;&#x82B1;&#x843C;&#x4E3E;&#x884C;&#x7684;&#x4EA7;&#x540E;&#x5929;&#x4E4B;&#x95F4; 9 &#x548C; 21&#xFF0C;&#x8046;&#x8BAF;&#x53D1;&#x75C5;&#x671F;&#x7684;&#x7279;&#x70B9;&#x660E;&#x663E;&#x7684;&#x7ED3;&#x6784;&#x548C;&#x529F;&#x80FD;&#x53D8;&#x5316;&#x3002;&#x5DF4;&#x677E;&#x7BA1;&#x5408;&#x594F;&#x77ED;&#x7B1B;&#x7A9D;&#x85CF;&#x6807;&#x6709;&#x819C;&#x951A;&#x7EFF;&#x8272;&#x8367;&#x5149;&#x86CB;&#x767D; (mGFP) &#x7684;&#x5207;&#x9762;&#x8111;&#x5E72;&#x7684;&#x7247;&#x4E0A;&#x53D1;&#x73B0;&#x514D;&#x75AB;&#x7EC4;&#x7EC7;&#x5316;&#x5B66; (&#x80A1;&#x4E1C;)&#x3002;&#x901A;&#x8FC7;&#x4F7F;&#x7528;&#x5171;&#x805A;&#x7126;&#x663E;&#x5FAE;&#x955C;&#x548C;&#x4E09;&#x7EF4;&#x91CD;&#x5EFA;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x5BA1;&#x67E5;&#x4E86;&#x5207;&#x9762;&#x5212;&#x5B9A;&#x7684; mGFP &#x7684;&#x5DF4;&#x677E;&#x7BA1;&#x5408;&#x594F;&#x548C;&#x77ED;&#x7B1B;&#x7684;&#x5206;&#x5E03;&#x3002;&#x8FD9;&#x5141;&#x8BB8;&#x6211;&#x4EEC;&#x6B67;&#x89C6;&#x76CF;&#x80A1;&#x4E1C;&#x4FE1;&#x53F7;&#x4ECE; noncalyceal &#x4FE1;&#x53F7;&#x4F4D;&#x4E8E;&#x76CF;&#x830E;&#xFF0C;&#x5176;&#x4E2D;&#x80FD;&#x591F;&#x6A21;&#x4EFF;&#x82B1;&#x843C;&#x6837;&#x5206;&#x5E03;&#x4E4B;&#x95F4;&#x7684;&#x7A7A;&#x683C;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x53D1;&#x73B0;&#x8FD9;&#x4E24;&#x79CD;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x88AB;&#x5B89;&#x6392;&#x5728;&#x7FA4;&#x96C6;&#x4E2D;&#x7C7B;&#x4F3C; AZs &#x7684;&#x5927;&#x5C0F;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x96C6;&#x7FA4;&#x6CBF;&#x63A5;&#x8FD1;&#x6240;&#x9762;&#x4E34;&#x7684;&#x4E3B;&#x8981;&#x7684;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#xFF0C;&#x6216;&#x4E0E;&#x7A81;&#x89E6;&#x56CA;&#x6CE1; (SV) &#x7C07;&#x91CD;&#x53E0;&#x7684;&#x7A81;&#x89E6;&#x524D;&#x819C;&#x3002;&#x53EA;&#x6709;&#x7EA6; 60%&#x7684;&#x5DF4;&#x677E;&#x7BA1;&#x5408;&#x594F;&#x548C;&#x77ED;&#x7B1B;&#x96C6;&#x7FA4;&#x91CD;&#x53E0;&#xFF0C;&#x800C;&#x5176;&#x4F59;&#x7684;&#x96C6;&#x7FA4;&#x4E3B;&#x8981;&#x8F7D;&#x5DF4;&#x677E;&#x7BA1;&#x5408;&#x594F;&#x6216;&#x77ED;&#x7B1B;&#xFF0C;&#x6697;&#x793A;&#x5DEE;&#x522B;&#x9488;&#x5BF9;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x5185;&#x7EC8;&#x7AEF;&#x5355;&#x4E00;&#x795E;&#x7ECF;&#x548C;&#x6F5C;&#x5728;&#x5F02;&#x6784; AZs &#x529F;&#x80FD;&#x7279;&#x6027;&#x3002;&#x5DF4;&#x677E;&#x7BA1;&#x5408;&#x594F;&#x548C;&#x77ED;&#x7B1B;&#x7FA4;&#x96C6;&#xFF0C;&#x53EF;&#x4EE5;&#x8FD1;&#x4F3C;&#x7684; AZs &#x6570;&#xFF0C;&#x603B;&#x6570;&#x4E3A; + /-35 &#x5728; P9 &#x548C; + /-45 &#x5728; P21 601 405 (&#x5E73;&#x5747;&#x4E3A; + /-&#x626B;&#x63CF;&#x7535;&#x955C;&#xFF0C;n = 12&#xFF09;&#x3002;&#x89C4;&#x8303;&#x5316;&#x4E3A; P9 &#x548C; P21 &#x82B1;&#x843C;&#x5377;&#xFF0C;&#x96C6;&#x7FA4;&#x7684;&#x5BC6;&#x5EA6;&#x662F;&#x7C7B;&#x4F3C;&#x7684;&#x8868;&#x660E;&#x7FA4;&#x96C6;&#xFF0C;&#x4E0D;&#x5BC6;&#x5EA6;&#x7684;&#x7EDD;&#x5BF9;&#x4EBA;&#x6570;&#x53EF;&#x80FD;&#x6709;&#x52A9;&#x4E8E;&#x4E0E;&#x8046;&#x8BAF;&#x53D1;&#x75C5;&#x76F8;&#x5173;&#x8054;&#x7684;&#x529F;&#x80FD;&#x6210;&#x719F;&#x3002;

&#x76EE;&#x6807;&#x4E09;&#x7EF4;&#x514D;&#x75AB;&#x7EC4;&#x5316;&#x663E;&#x793A;&#x672C;&#x5730;&#x5316;&#x7684;&#x7A81;&#x89E6;&#x86CB;&#x767D;&#x5DF4;&#x677E;&#x7BA1;&#x5408;&#x594F;&#x548C;&#x77ED;&#x7B1B;&#x7684;&#x5927;&#x9F20;&#x82B1;&#x843C;&#x4E3E;&#x884C;&#x7684;&#x8046;&#x8BAF;&#x7684;&#x7206;&#x53D1;&#x524D;&#x540E;&#x3002;

Bassoon and Piccolo contribute to the cytomatrix of active zones (AZ), the sites of neurotransmitter release in nerve terminals. Here, we examined the 3D localization of Bassoon and Piccolo in the rat calyx of Held between postnatal days 9 and 21, the period of hearing onset characterized by pronounced structural and functional changes. Bassoon and Piccolo were identified by immunohistochemistry (IHC) on slices of the brainstem harboring calyces labeled with membrane-anchored green fluorescent protein (mGFP). By using confocal microscopy and 3D reconstructions, we examined the distribution of Bassoon and Piccolo in calyces delineated by mGFP. This allowed us to discriminate calyceal IHC signals from noncalyceal signals located in the spaces between the calyceal stalks, which could mimic a calyx-like distribution. We found that both proteins were arranged in clusters resembling the size of AZs. These clusters were located along the presynaptic membrane facing the principal cell, close to or overlapping with synaptic vesicle (SV) clusters. Only about 60% of Bassoon and Piccolo clusters overlapped, whereas the remaining clusters contained predominantly Bassoon or Piccolo, suggesting differential targeting of these proteins within a single nerve terminal and potentially heterogeneous AZs functional properties. The total number of Bassoon and Piccolo clusters, which may approximate the number of AZs, was 405 +/- 35 at P9 and 601 +/- 45 at P21 (mean +/- SEM, n = 12). Normalized to calyx volume at P9 and P21, the density of clusters was similar, suggesting that the absolute number of clusters, not density, may contribute to the functional maturation associated with hearing onset.

Targeted three-dimensional immunohistochemistry reveals localization of presynaptic proteins Bassoon and Piccolo in the rat calyx of Held before and after the onset of hearing.

Basson et Piccolo contribuent &agrave; la cytomatrix des zones actives (AZ), les sites de la lib&eacute;ration des neurotransmetteurs dans les terminaisons nerveuses. Ici, nous avons examin&eacute; la localisation 3D de basson et Piccolo dans le calice de rat de tenue entre le 9 et jours 21, la p&eacute;riode de d&eacute;but de l&#39;audience, caract&eacute;ris&eacute;e par des changements structuraux et fonctionnels prononc&eacute;s. Basson et Piccolo ont &eacute;t&eacute; identifi&eacute;s par immunohistochimie (IHC) sur des tranches du tronc c&eacute;r&eacute;bral h&eacute;bergeant des calices &eacute;tiquet&eacute;s avec membrane ancr&eacute;es prot&eacute;ine fluorescente verte (mGFP). En utilisant la microscopie confocale et reconstructions 3D, nous avons &eacute;tudi&eacute; la distribution de basson et Piccolo en calices d&eacute;limit&eacute;s par des mGFP. Cela nous a permis de discriminer les signaux IHC calyceal de signaux noncalyceal situ&eacute;s dans les espaces entre les tiges de calyceal, qui pourraient imiter une distribution de type calice. Nous avons constat&eacute; que ces deux prot&eacute;ines &eacute;taient dispos&eacute;es en grappes ressemblant &agrave; la taille de l&#39;AZs. Ces groupes &eacute;taient situ&eacute;s le long de la membrane pr&eacute;synaptique, face &agrave; la principale cellule, pr&egrave;s d&#39;ou de chevauchement avec les groupes de v&eacute;sicules synaptiques (SV). Seulement environ 60 % des grappes de basson et Piccolo se chevauchaient, alors que les grappes restantes contenaient principalement basson ou Piccolo, sugg&eacute;rant le ciblage diff&eacute;renci&eacute; de ces prot&eacute;ines &agrave; l&#39;int&eacute;rieur d&#39;un seul terminal de nerf et des propri&eacute;t&eacute;s fonctionnelles AZs potentiellement h&eacute;t&eacute;rog&egrave;nes. Le nombre total de clusters basson et Piccolo, ce qui peut rapprocher le nombre de AZs, &eacute;tait de 405 +/-35 &agrave; P9 et 601 +/-45 &agrave; P21 (moyenne +/-SEM, n = 12). Normalis&eacute; au volume de calice &agrave; P9 et P21, la densit&eacute; des grappes &eacute;tait similaire, ce qui sugg&egrave;re que le nombre absolu de regroupements, pas de densit&eacute;, peut-&ecirc;tre contribuer &agrave; la maturation fonctionnelle associ&eacute;e avec le d&eacute;but de l&#39;audience.

Immunohistochemistry tridimensionnelle cibl&eacute;e r&eacute;v&egrave;le sur la localisation des prot&eacute;ines pr&eacute;synaptiques basson et Piccolo dans le calice de rat de tenue avant et apr&egrave;s le d&eacute;but de l&#39;audience.

Fagott und Piccolo tragen zu der Cytomatrix der aktiven Zonen (AZ), die Websites der Neurotransmitter-Freisetzung in Nervenenden. Hier untersuchten wir die 3D Sprachunterst&uuml;tzung f&uuml;r Fagott und Piccolo in der Ratte-Kelch der Held zwischen postnatalen Tagen 9 und 21, die Zeit der Verhandlung Auftreten von ausgepr&auml;gten strukturellen und funktionellen Ver&auml;nderungen gepr&auml;gt. Fagott und Piccolo wurden durch Immunhistochemie (IHC) auf Scheiben des Hirnstamms beherbergen Calyces beschriftet mit Membran verankerte gr&uuml;n fluoreszierendes Protein (mGFP) identifiziert. Konfokale Mikroskopie und 3D-Rekonstruktionen verwenden, haben wir den Vertrieb von Fagott und Piccolo in Calyces durch die mGFP gepr&uuml;ft. Dies erlaubte uns, Calyceal IHC Signale von Noncalyceal Signalen befindet sich in den R&auml;umen zwischen den Calyceal Stiele, die vorgibt, eine Kelch-&auml;hnliche Verteilung zu unterscheiden. Wir fanden, dass beide Proteine in Clustern, die &auml;hnlich wie die Gr&ouml;&szlig;e des AZs angeordnet waren. Diese Cluster wurden entlang der pr&auml;synaptischen Membran mit Blick auf die wichtigste Zelle, nah an oder &Uuml;berschneidungen mit synaptische Vesikel (SV)-Clustern. Nur etwa 60 % der Fagott und Piccolo Cluster &uuml;berschnitten, w&auml;hrend die verbleibenden Cluster &uuml;berwiegend Fagott oder Piccolo, darauf hindeutet, differenzielle Ausrichtung dieser Proteine innerhalb einer einzigen Nerve terminal und potenziell heterogene AZs funktionellen Eigenschaften enthalten. Die Gesamtzahl der Fagott und Piccolo-Cluster, die die Anzahl der AZs ann&auml;hern k&ouml;nnen, war 405 +/-35 bei P9 und 601 +/-45 bei P21 (Mittelwert +/-SEM, n = 12). Normalisiert, Kelch Volumen bei P9 und P21, &auml;hnelte die Dichte von Clustern, was darauf hindeutet, dass die absolute Anzahl der Cluster, nicht Dichte, die funktionelle Reifung Anh&ouml;rung auftretenden beitragen kann.

Gezielte dreidimensionale Immunohistochemistry enth&uuml;llt Lokalisation der pr&auml;synaptischen Proteine Fagott und Piccolo in der Ratte-Kelch der Held vor und nach Beginn der Verhandlung.

Fagotto e Piccolo contribuire alla cytomatrix di zone attive (AZ), i siti di rilascio di neurotrasmettitore nei terminali nervosi. Qui, abbiamo esaminato la localizzazione 3D di fagotto e ottavino nel calice ratto del detenuto tra postnatali giorni 9 e 21, il periodo di insorgenza dell&#39;udito caratterizzata da marcata cambiamenti strutturali e funzionali. Fagotto e Piccolo sono stati identificati da immunohistochemistry (IHC) su fette di tronco encefalico harboring sepali etichettati con membrana ancorata green fluorescent protein (mGFP). Utilizzando la microscopia confocale e ricostruzioni 3D, abbiamo esaminato la distribuzione di fagotto e Piccolo in sepali delineato da mGFP. Questo ci ha permesso di discriminare calyceal IHC segnali dai segnali di noncalyceal che si trova negli spazi tra i gambi di calyceal, che potrebbero simulare una distribuzione simile a calice. Abbiamo trovato che entrambe le proteine sono state organizzate in cluster che ricorda la dimensione dell&#39;AZs. Questi cluster si trovavano lungo la membrana presinaptica rivolto verso la cella principale, vicino a o sovrapposizioni di grappoli di vescicole sinaptiche (SV). Solo circa il 60% di fagotto e Piccolo cluster sovrapposti, mentre i restanti cluster contenevano principalmente fagotto o Piccolo, suggerendo di targeting differenziale di queste proteine all&#39;interno di un singolo nervo terminale e potenzialmente eterogenee AZs propriet&agrave; funzionali. Il numero totale di fagotto e Piccolo cluster, che si pu&ograve; approssimare il numero di AZs, era 405 + 35 a P9 e 601 + /-45 a P21 (media + /-SEM, n = 12). Normalizzato al volume di calice a P9 e P21, la densit&agrave; dei cluster era simile, suggerendo che il numero assoluto di cluster, non densit&agrave;, possa contribuire alla maturazione funzionale associata con l&#39;esordio dell&#39;udito.

Immunoistochimica tridimensionale mirato rivela la localizzazione delle proteine presinaptiche fagotto e Piccolo nel calice ratto del detenuto prima e dopo l&#39;insorgenza dell&#39;udito.

&#x30D5;&#x30A1;&#x30B4;&#x30C3;&#x30C8;&#x3068;&#x30D4;&#x30C3;&#x30B3;&#x30ED;&#x306E;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6;&#x306A;&#x30BE;&#x30FC;&#x30F3; (AZ) &#x795E;&#x7D4C;&#x7D42;&#x672B;&#x306E;&#x795E;&#x7D4C;&#x4F1D;&#x9054;&#x7269;&#x8CEA;&#x653E;&#x51FA;&#x306E;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x306E; cytomatrix &#x306B;&#x8CA2;&#x732E;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x6211;&#x3005; &#x30D5;&#x30A1;&#x30B4;&#x30C3;&#x30C8;&#x306E; 3 D &#x306E;&#x5C40;&#x5728;&#x3092;&#x8ABF;&#x3079;&#x305F;&#x3057;&#x3001;&#x30D4;&#x30C3;&#x30B3;&#x30ED;&#x306E;&#x30E9;&#x30C3;&#x30C8;&#x751F;&#x5F8C;&#x751F;&#x5F8C; 9&#x3001;21&#x3001;&#x8074;&#x899A;&#x767A;&#x75C7;&#x306E;&#x671F;&#x9593;&#x306E;&#x9593;&#x306B;&#x9855;&#x8457;&#x306A;&#x69CB;&#x9020;&#x3068;&#x6A5F;&#x80FD;&#x306E;&#x5909;&#x5316;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x7279;&#x5FB4;&#x4ED8;&#x3051;&#x3089;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30D5;&#x30A1;&#x30B4;&#x30C3;&#x30C8;&#x3068;&#x30D4;&#x30C3;&#x30B3;&#x30ED; (IHC) &#x306E;&#x514D;&#x75AB;&#x7D44;&#x7E54;&#x5316;&#x5B66;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x819C;&#x30A2;&#x30F3;&#x30AB;&#x30FC;&#x7DD1;&#x8272;&#x86CD;&#x5149;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA; (mGFP) &#x3068;&#x3044;&#x3046;&#x30E9;&#x30D9;&#x30EB;&#x306E;&#x4ED8;&#x3044;&#x305F;&#x814E;&#x3092;&#x304B;&#x304F;&#x307E;&#x3063;&#x3066;&#x8133;&#x5E79;&#x306E;&#x30B9;&#x30E9;&#x30A4;&#x30B9;&#x4E0A;&#x306B;&#x540C;&#x5B9A;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x5171;&#x7126;&#x70B9;&#x306E;&#x9855;&#x5FAE;&#x93E1;&#x691C;&#x67FB;&#x3068; 3&#x6B21;&#x5143;&#x518D;&#x69CB;&#x6210;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x3001;mGFP &#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x7DDA;&#x5F15;&#x304D;&#x814E;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x30D5;&#x30A1;&#x30B4;&#x30C3;&#x30C8;&#x3068;&#x30D4;&#x30C3;&#x30B3;&#x30ED;&#x306E;&#x5206;&#x5E03;&#x3092;&#x691C;&#x8A0E;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x5B5F; IHC &#x304C;&#x304F;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306A;&#x5206;&#x5E03;&#x3092;&#x6A21;&#x5023;&#x3067;&#x304D;&#x308B;&#x5B5F;&#x830E;&#x9593;&#x306E;&#x30B9;&#x30DA;&#x30FC;&#x30B9;&#x306B;&#x3042;&#x308B; noncalyceal &#x4FE1;&#x53F7;&#x304B;&#x3089;&#x8B58;&#x5225;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x6211;&#x3005; &#x306F;&#x3001;&#x4E21;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA; AZs &#x306E;&#x30B5;&#x30A4;&#x30BA;&#x306B;&#x4F3C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x30AF;&#x30E9;&#x30B9;&#x30BF;&#x30FC;&#x306B;&#x914D;&#x7F6E;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x767A;&#x898B;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x30AF;&#x30E9;&#x30B9;&#x30BF;&#x30FC;&#x306F;&#x3001;&#x30D7;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B7;&#x30D1;&#x30EB;&#x306E;&#x30BB;&#x30EB;&#x304C;&#x8FD1;&#x304F;&#x306B;&#x76F4;&#x9762;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x30B7;&#x30CA;&#x30D7;&#x30B9;&#x5C0F;&#x80DE; (SV) &#x30AF;&#x30E9;&#x30B9;&#x30BF;&#x30FC;&#x3068;&#x91CD;&#x306A;&#x308A;&#x3001;&#x30B7;&#x30CA;&#x30D7;&#x30B9;&#x524D;&#x819C;&#x306B;&#x6CBF;&#x3063;&#x3066;&#x4F4D;&#x7F6E;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x305F;&#x3002;&#x6B8B;&#x308A;&#x306E;&#x30AF;&#x30E9;&#x30B9;&#x30BF;&#x30FC;&#x306F;&#x4E3B;&#x306B;&#x3001;&#x30D5;&#x30A1;&#x30B4;&#x30C3;&#x30C8;&#x3084;&#x30D4;&#x30C3;&#x30B3;&#x30ED;&#x3001;&#x5358;&#x4E00;&#x795E;&#x7D4C;&#x7D42;&#x672B;&#x3068;&#x6F5C;&#x5728;&#x7684;&#x7570;&#x7A2E; AZs &#x6A5F;&#x80FD;&#x30D7;&#x30ED;&#x30D1;&#x30C6;&#x30A3;&#x5185;&#x306E;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x30BF;&#x30FC;&#x30B2;&#x30C3;&#x30C8;&#x306B;&#x5DEE;&#x5206;&#x3092;&#x793A;&#x5506;&#x542B;&#x307E;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x4E00;&#x65B9;&#x3067;&#x3001;&#x30D5;&#x30A1;&#x30B4;&#x30C3;&#x30C8;&#x3068;&#x30D4;&#x30C3;&#x30B3;&#x30ED; &#x30AF;&#x30E9;&#x30B9;&#x30BF;&#x30FC;&#x306E;&#x7D04; 60 &#xFF05; &#x30AA;&#x30FC;&#x30D0;&#x30FC; &#x30E9;&#x30C3;&#x30D7;&#x3002;AZs &#x6570;&#x304A;&#x304A;&#x3088;&#x305D;&#x306E;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3001;&#x30D5;&#x30A1;&#x30B4;&#x30C3;&#x30C8;&#x3068;&#x30D4;&#x30C3;&#x30B3;&#x30ED;&#x306E;&#x30AF;&#x30E9;&#x30B9;&#x30BF;&#x30FC;&#x306E;&#x7DCF;&#x6570; 35 P9 &#x3068; 601 P21 &#x3067; 45 &plusmn; &plusmn; 405 &#x3060;&#x3063;&#x305F; &#xFF08;&#x5E73;&#x5747; SEM&#x3001;+/-n = 12)&#x3002;P9 &#x3068; P21 &#x304C;&#x304F;&#x30DC;&#x30EA;&#x30E5;&#x30FC;&#x30E0;&#x3092;&#x6B63;&#x898F;&#x5316;&#x3001;&#x5BC6;&#x5EA6;&#x30AF;&#x30E9;&#x30B9;&#x30BF;&#x30FC;&#x306E;&#x30AF;&#x30E9;&#x30B9;&#x30BF;&#x30FC;&#x3001;&#x306A;&#x3044;&#x5BC6;&#x5EA6;&#x306E;&#x7D76;&#x5BFE;&#x6570;&#x304C;&#x8074;&#x899A;&#x30AA;&#x30F3;&#x30BB;&#x30C3;&#x30C8;&#x3068;&#x95A2;&#x9023;&#x6A5F;&#x80FD;&#x7684;&#x6210;&#x719F;&#x306B;&#x8CA2;&#x732E;&#x3059;&#x308B;&#x304B;&#x3082;&#x3057;&#x308C;&#x306A;&#x3044;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x5506;&#x3057;&#x3066;&#x985E;&#x4F3C;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x305F;&#x3002;

&#x5BFE;&#x8C61;&#x3068;&#x306A;&#x308B;&#x4E09;&#x6B21;&#x5143;&#x514D;&#x75AB;&#x67D3;&#x8272;&#x524D;&#x306B;&#x3001;&#x3068;&#x8074;&#x899A;&#x306E;&#x767A;&#x75C7;&#x5F8C;&#x306E;&#x30E9;&#x30C3;&#x30C8;&#x306E;&#x751F;&#x5F8C;&#x306E;&#x30B7;&#x30CA;&#x30D7;&#x30B9;&#x524D;&#x306E;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x30D5;&#x30A1;&#x30B4;&#x30C3;&#x30C8;&#x3068;&#x30D4;&#x30C3;&#x30B3;&#x30ED;&#x306E;&#x5C40;&#x5728;&#x3092;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#xBC14; &#xC21C;&#xACFC; &#xD53C;&#xCF5C;&#xB85C; &#xD65C;&#xC131; &#xC601;&#xC5ED; (AZ) &#xC2E0;&#xACBD; &#xD130;&#xBBF8;&#xB110;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC2E0;&#xACBD; &#xC804;&#xB2EC; &#xBB3C;&#xC9C8; &#xBC29;&#xCD9C;&#xC758; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8; cytomatrix&#xC5D0; &#xAE30;&#xC5EC;. &#xC5EC;&#xAE30;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; &#xBC14; &#xC21C;&#xC758; 3D &#xC9C0;&#xC5ED;&#xD654; &#xBC0F; &#xCD9C;&#xC0DD; &#xD6C4; &#xC77C; 9, 21, &#xCCAD;&#xAC01; &#xBC1C;&#xBCD1; &#xAE30;&#xAC04; &#xC0AC;&#xC774; &#xAC1C;&#xCD5C;&#xC758; &#xC950; &#xAF43; &#xBC1B;&#xCE68;&#xC5D0; &#xD53C;&#xCF5C;&#xB85C; &#xBC1C;&#xC74C;&#xB41C; &#xAD6C;&#xC870;&#xC640; &#xAE30;&#xB2A5; &#xBCC0;&#xD654;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xD2B9;&#xC9D5;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xBC14; &#xC21C;&#xACFC; &#xD53C;&#xCF5C;&#xB85C; &#xB9C9; &#xACE0;&#xC815; &#xB41C; &#xB179;&#xC0C9; &#xD615;&#xAD11; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; (mGFP)&#xC73C;&#xB85C; &#xD45C;&#xC2DC; &#xD558;&#xB294; calyces &#xC740;&#xB2C9; brainstem&#xC758; &#xC2AC;&#xB77C;&#xC774;&#xC2A4;&#xC5D0; &#xAE30;&#xC220; (IHC)&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xD655;&#xC778; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;. Confocal &#xD604;&#xBBF8;&#xACBD; &#xAC80;&#xC0AC; &#xBC95; &#xBC0F; 3 &#xCC28;&#xC6D0; reconstructions&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; calyces Mgfp&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; delineated &#xBC14; &#xC21C;&#xACFC; &#xD53C;&#xCF5C;&#xB85C;&#xC758; &#xBD84;&#xD3EC;&#xB97C; &#xC870;&#xC0AC; &#xD588;&#xB2E4;. Calyceal &#xC904;&#xAE30;, &#xAF43; &#xBC1B;&#xCE68; &#xAC19;&#xC740; &#xBD84;&#xD3EC;&#xB97C; &#xBAA8;&#xBC29;&#xD560; &#xC218; &#xC0AC;&#xC774;&#xC758; &#xACF5;&#xAC04;&#xC5D0; &#xC788;&#xB294; noncalyceal &#xC2E0;&#xD638;&#xC5D0;&#xC11C; calyceal IHC &#xC2E0;&#xD638;&#xB97C; &#xAD6C;&#xBCC4;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xBAA8;&#xB450; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; Azs&#xC758; &#xD06C;&#xAE30;&#xB97C; &#xB2EE;&#xC740; &#xD074;&#xB7EC;&#xC2A4;&#xD130;&#xC5D0; &#xBC30;&#xCE58; &#xD588;&#xB2E4; &#xBC1C;&#xACAC;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xD074;&#xB7EC;&#xC2A4;&#xD130; &#xC8FC; &#xC140; &#xC8FC;&#xBCC0;&#xC5D0; &#xC9C1;&#xBA74; &#xB610;&#xB294; &#xC2DC; &#xB0C5; &#xC2A4; &#xC18C;&#xD3EC; (SV) &#xD074;&#xB7EC;&#xC2A4;&#xD130;&#xC640; &#xACB9;&#xCE58;&#xB294; presynaptic &#xBA64;&#xBE0C;&#xB808;&#xC778;&#xC744; &#xB530;&#xB77C; &#xC704;&#xCE58; &#xD558; &#xACE0; &#xC788;&#xC5C8;&#xB2E4;. &#xBC14; &#xC21C;&#xACFC; &#xD53C;&#xCF5C;&#xB85C; &#xD074;&#xB7EC;&#xC2A4;&#xD130;&#xC758; &#xC57D; 60% &#xC911;&#xCCA9;, &#xBC18;&#xBA74; &#xB098;&#xBA38;&#xC9C0; &#xD074;&#xB7EC;&#xC2A4;&#xD130; &#xD3EC;&#xD568; &#xC8FC;&#xB85C; &#xC21C; &#xB610;&#xB294; &#xD53C;&#xCF5C;&#xB85C;, &#xB2E8;&#xC77C; &#xC2E0;&#xACBD; &#xD130;&#xBBF8;&#xB110; &#xBC0F; &#xC7A0;&#xC7AC;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xB2E4;&#xB978; &#xC720;&#xD615;&#xC758; AZs &#xAE30;&#xB2A5; &#xC18D;&#xC131; &#xB0B4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xCC28;&#xB4F1; &#xB300;&#xC0C1;&#xC73C;&#xB85C; &#xC81C;&#xC548;. AZs &#xC218;&#xC758; &#xB300;&#xB7B5;&#xC801;&#xC778; &#xC218;, &#xBC14; &#xC21C;&#xACFC; &#xD53C;&#xCF5C;&#xB85C; &#xD074;&#xB7EC;&#xC2A4;&#xD130;&#xC758; &#xCD1D; &#xC218;&#xB294; 405 p 9&#xC5D0;&#xC11C; 35 &#xBC0F; 45 P21 + 601 + (&#xD3C9;&#xADE0; &plusmn; SEM, n = 12). P9 &#xBC0F; P21 &#xAF43; &#xBC1B;&#xCE68; &#xBCFC;&#xB968;&#xC73C;&#xB85C; &#xC815;&#xADDC;&#xD654; &#xB41C; &#xD074;&#xB7EC;&#xC2A4;&#xD130;&#xC758; &#xBC00;&#xB3C4; &#xC720;&#xC0AC; &#xD074;&#xB7EC;&#xC2A4;&#xD130;, &#xBC00;&#xB3C4;, &#xC808;&#xB300; &#xC218; &#xCCAD;&#xBB38;&#xD68C; &#xBC1C;&#xBCD1;&#xACFC; &#xAD00;&#xB828; &#xB41C; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC801; &#xC131;&#xC219;&#xC5D0; &#xAE30;&#xC5EC;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xC81C;&#xC548; &#xD588;&#xB2E4;.

&#xB300;&#xC0C1;&#xB41C; 3 &#xCC28;&#xC6D0; &#xAE30;&#xC220; &#xC2EC;&#xB9AC;&#xC758; &#xAC1C;&#xC2DC; &#xC804;&#xD6C4; &#xAC1C;&#xCD5C;&#xC758; &#xC950; &#xAF43; &#xBC1B;&#xCE68;&#xC758; presynaptic &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xBC14; &#xC21C;&#xACFC; &#xD53C;&#xCF5C;&#xB85C;&#xC758; &#xC9C0;&#xC5ED;&#xD654;&#xB97C; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC900;&#xB2E4;.

Fagot y Piccolo contribuyen a la cytomatrix de zonas activas (AZ), los sitios de liberaci&oacute;n de neurotransmisores en las terminales nerviosas. Aqu&iacute;, se analiz&oacute; la localizaci&oacute;n 3D de fagot y Piccolo en el c&aacute;liz de la rata de Held entre postnatales d&iacute;as 9 y 21, el per&iacute;odo de inicio de la audiencia se caracteriza por cambios estructurales y funcionales pronunciados. Fagot y Piccolo fueron identificados por inmunohistoqu&iacute;mica (IHQ) en rebanadas del tronco encef&aacute;lico albergar c&aacute;lices con membrana-ancladas prote&iacute;na verde fluorescente (mGFP). Mediante microscop&iacute;a confocal y reconstrucciones 3D, examinamos la distribuci&oacute;n de fagot y Piccolo en c&aacute;lices delineados por mGFP. Esto permiti&oacute; diferenciar calicial IHC se&ntilde;ales de se&ntilde;ales de noncalyceal situadas en los espacios entre los tallos calicial, que podr&iacute;an imitar una distribuci&oacute;n como el c&aacute;liz. Encontramos que ambas prote&iacute;nas fueron dispuestas en racimos que se asemeja al tama&ntilde;o de la gasolina. Estos grupos fueron situados a lo largo de la membrana presin&aacute;ptica frente a la c&eacute;lula principal, cerca o superposici&oacute;n con racimos de ves&iacute;cula sin&aacute;ptica (SV). S&oacute;lo un 60% de racimos de fagot y Piccolo comprometidos, mientras que los restantes grupos contuvieron predominante fagot o Piccolo, sugiriendo la selecci&oacute;n diferencial de estas prote&iacute;nas dentro de un solo nervio terminal y potencialmente heterog&eacute;neos AZs propiedades funcionales. El n&uacute;mero total de clusters de fagot y Piccolo, que se puede aproximar el n&uacute;mero de AZs, fue 405 +-35 en P9 y 601 +/-45 en P21 (media +/-SEM, n = 12). Normalizado para el volumen del c&aacute;liz en P9 y P21, la densidad de racimos fue similar, lo que sugiere que el n&uacute;mero absoluto de racimos, no densidad, puede contribuir a la maduraci&oacute;n funcional asociada con el inicio de la audiencia.

Inmunohistoqu&iacute;mica tridimensional espec&iacute;fica revela la localizaci&oacute;n de las prote&iacute;nas presin&aacute;pticas fagot y Piccolo en el c&aacute;liz de la rata de Held antes y despu&eacute;s del inicio de la audiencia.

Article	Year
Capacitance measurements at the calyx of Held in the medial nucleus of the trapezoid body. Journal of neuroscience methods\| PubMed ID: 15003378	2004
Targeted three-dimensional immunohistochemistry reveals localization of presynaptic proteins Bassoon and Piccolo in the rat calyx of Held before and after the onset of hearing. The Journal of comparative neurology\| PubMed ID: 20127803	2010

Anna Dondzillo

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