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Performing Vaginal Lavage, Crystal Violet Staining, and Vaginal Cytological Evaluation for Mouse Estrous Cycle Staging Identification

A rapid means of assessing reproductive status in rodents is useful not only in the study of reproductive dysfunction but is also required for the ...

Neural Regeneration Laboratory and Ottawa Institute of Systems Biology

University of Ottawa 

&#x7F1D;&#x9699;&#x8FDE;&#x63A5;&#x86CB;&#x767D;&#x662F;&#x4E00;&#x79CD;&#x9AD8;&#x5EA6;&#x540C;&#x6E90;&#x7684;&#x5BB6;&#x4EBA;&#xFF0C;21 &#x7F1D;&#x9699;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#xFF0C;&#x4F5C;&#x8005;&#x63CF;&#x8FF0;&#x4E86;&#x5E76;&#x53D1;&#x4E2D;&#x67A2;&#x795E;&#x7ECF;&#x7CFB;&#x7EDF; connexin32 &#x86CB;&#x767D;&#x8868;&#x8FBE;&#x7684;&#x5206;&#x6790;&#x7279;&#x5B9A;&#x7EC4;&#x7EC7;&#x7684;&#x6280;&#x672F;&#x9879;&#x76EE;&#x3002;&#x4F5C;&#x8005;&#x8868;&#x660E;&#xFF0C;&#x5728;&#x5927;&#x8111;&#x4E2D;&#xFF0C;&#x4F46;&#x4E0D;&#x662F;&#x809D;&#x3001; &#x516B;&#x4E2A;&#x5E38;&#x7528;&#x7684;&#x6297;&#x4F53;&#x5C55;&#x793A;&#x66F4;&#x9AD8;&#x7684;&#x4EB2;&#x548C;&#x6027;&#x7684;&#x4EA4;&#x53C9;&#x53CD;&#x5E94;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#xFF0C;&#x63A9;&#x76D6;&#x4E86; connexin32 &#x7684;&#x68C0;&#x6D4B;&#x3002;&#x53D8;&#x5E94;&#x539F;&#x662F;&#x660E;&#x663E;&#x7684;&#x5370;&#x8FF9;&#x5206;&#x6790;&#xFF0C;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x53D7;&#x5230;&#x964D;&#x4F4E;&#x53D8;&#x6027;&#x7684;&#x6761;&#x4EF6;&#xFF0C;&#x4F46;&#x4E0D;&#x662F;&#x6C89;&#x6DC0;&#x6216;&#x514D;&#x75AB;&#x8367;&#x5149;&#x5E94;&#x7528;&#x7A0B;&#x5E8F;&#x65F6;&#x3002;&#x901A;&#x8FC7;&#x751F;&#x7269;&#x4FE1;&#x606F;&#x5B66;&#x5206;&#x6790;&#xFF0C;&#x7531;&#x8517;&#x7CD6;&#x68AF;&#x5EA6;&#x5206;&#x998F;&#x548C;&#x8FDE;&#x63A5;&#x86CB;&#x767D; null &#x7A81;&#x53D8;&#x5C0F;&#x9F20;&#xFF0C;&#x4ECE;&#x88C2;&#x89E3;&#x7684;&#x514D;&#x75AB;&#x5370;&#x8FF9;&#x6CD5;&#x6D4B;&#x8BD5;&#x4F5C;&#x8005;&#x663E;&#x793A;&#x4EA4;&#x53C9;&#x53CD;&#x5E94;&#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28; connexin32 &#x4F5C;&#x4E3A;&#x540C;&#x4E00;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8F66;&#x53A2;&#x5185;&#x627E;&#x4E0D;&#x5230;&#x548C;&#x4E0D;&#x53EF;&#x80FD;&#x662F;&#x8FDE;&#x63A5;&#x86CB;&#x767D;&#x5BB6;&#x65CF;&#x7684;&#x6210;&#x5458;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7ED3;&#x679C;&#xFF0C;&#x610F;&#x56FE;&#x5E2E;&#x52A9;&#x51CF;&#x5C11;&#x7684;&#x5B9E;&#x9A8C;&#x5BA4;&#x76EE;&#x524D;&#x82B1;&#x8D39;&#x5728;&#x4E2D;&#x67A2;&#x795E;&#x7ECF;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x4E2D;&#x7684; connexin32 &#x8868;&#x8FBE;&#x5F0F;&#x4E2D;&#x7684;&#x66F4;&#x6539;&#x8FDB;&#x884C;&#x9A8C;&#x8BC1;&#x7684;&#x65F6;&#x95F4;&#x91CF;&#x3002;

Connexin32 &#x6297;&#x4F53;&#x7684;&#x7EC4;&#x7EC7;&#x7279;&#x5F02;&#x6027;&#x53D8;&#x5E94;&#x539F;&#xFF1A; &#x5B58;&#x5728;&#x7684;&#x95EE;&#x9898;&#x53CA;&#x89E3;&#x51B3;&#x65B9;&#x6848;&#x72EC;&#x6709;&#x7684;&#x4E2D;&#x67A2;&#x795E;&#x7ECF;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x3002;

Gap junction proteins are a highly homologous family of 21 connexins. Here, the authors describe a tissue-specific technical artifact complicating analysis of connexin32 protein expression in the central nervous system. The authors show that in brain, but not liver, eight commonly employed antibodies exhibit a higher affinity for a cross-reactive protein that masks the detection of connexin32. Cross-reactivity is evident in Western blot analyses when proteins are subjected to reducing/denaturing conditions but not immunoprecipitation or immunofluorescent applications. Through bioinformatic analyses, tested by sucrose gradient fractionation and immunoblotting of lysates from connexin null-mutant mice, the authors show that the cross-reactive protein is not found in the same cellular compartments as connexin32 and is likely not a member of the connexin family. These findings are presented with the intent of helping to reduce the amount of time laboratories currently expend in validating changes in connexin32 expression in the central nervous system.

Tissue-specific cross-reactivity of connexin32 antibodies: problems and solutions unique to the central nervous system.

Prot&#xE9;ines des jonctions lacunaires sont hautement homologues de la famille des connexines 21. Ici, les auteurs d&#xE9;crivent une analyse sp&#xE9;cifique du tissu artefact technique complique de connexin32 expression de la prot&#xE9;ine dans le syst&#xE8;me nerveux central. Les auteurs montrent que dans le cerveau, mais pas le foie, huit anticorps couramment utilis&#xE9;s pr&#xE9;sentent une plus grande affinit&#xE9; pour une prot&#xE9;ine &#xE0; r&#xE9;action crois&#xE9;e qui masque la d&#xE9;tection de connexin32. La r&#xE9;activit&#xE9; crois&#xE9;e est &#xE9;vident dans les analyses de Western blot lorsque les prot&#xE9;ines sont soumises &#xE0; la r&#xE9;duction / d&#xE9;naturation des conditions, mais pas immunopr&#xE9;cipitation ou immunofluorescence applications. Gr&#xE2;ce &#xE0; des analyses bioinformatiques, test&#xE9; par fractionnement sur gradient de saccharose et immunoblot des lysats de connexine null-souris mutantes, les auteurs montrent que la prot&#xE9;ine &#xE0; r&#xE9;action crois&#xE9;e ne se trouve pas dans les m&#xEA;mes compartiments cellulaires comme connexin32 et n&#x26;#39;est probablement pas un membre de la famille de la connexine. Ces r&#xE9;sultats sont pr&#xE9;sent&#xE9;s avec l&#x26;#39;intention d&#x26;#39;aider &#xE0; r&#xE9;duire la quantit&#xE9; de temps laboratoires actuellement consacrer &#xE0; la validation des changements dans connexin32 expression dans le syst&#xE8;me nerveux central.

Tissu-sp&#xE9;cifique de la Croix-r&#xE9;activit&#xE9; des anticorps Connexin32: Probl&#xE8;mes et solutions uniques pour le syst&#xE8;me nerveux central

Gap Junction-Proteine sind eine hochgradig homologe 21 Connexins. Hier beschreiben die Autoren einer Gewebe-spezifischen technischen Artefakt Komplikationen der Analyse der connexin32-Proteinexpression in das zentrale Nervensystem. Die Autoren zeigen, dass im Gehirn, aber nicht der Leber, acht h&auml;ufig verwendete Antik&ouml;rper weisen eine h&ouml;here Affinit&auml;t f&uuml;r ein kreuzreagierenden Protein, das die Erkennung von connexin32 verbirgt. Kreuzreaktivit&auml;t ist offensichtlich im Western-Blot Analysen, wenn Proteine verringern/Denaturierung Bedingungen aber nicht Immunopr&auml;zipitation oder Immunfluoreszenz Anwendungen ausgesetzt sind. Durch bioinformatische Analysen, getestet von Saccharose gradient Fraktionierung und Immunoblotting von Lysates Connexin Null-Mutanten M&auml;use zeigen die Autoren, dass das kreuzreagierenden Protein sich nicht in der gleichen zellularen F&auml;chern als connexin32 findet und wahrscheinlich nicht Mitglied der Connexin-Familie ist. Diese Erkenntnisse werden vorgestellt, mit der Absicht zu helfen, die Zeitspanne, die Labors zur Zeit aufwenden, bei der &Uuml;berpr&uuml;fung von &Auml;nderungen in connexin32 Ausdruck in das zentrale Nervensystem m&uuml;ssen zu reduzieren.

Gewebe-spezifischen Kreuzreaktivit&auml;t von connexin32 Antik&ouml;rpern: Probleme und L&ouml;sungen, die auf das zentrale Nervensystem.

Gap junction proteine sono una famiglia altamente omologa di 21 connexins. Qui, gli autori descrivono un artefatto tecnico tessuto-specifici, complicando l&#39;analisi dell&#39;espressione della proteina connexin32 nel sistema nervoso centrale. Gli autori mostrano che nel cervello, ma non epatiche, otto comunemente impiegati anticorpi presentano una maggiore affinit&agrave; per una proteina interferenti che mascheri la rilevazione di connexin32. Cross-reattivit&agrave; &egrave; evidente nelle analisi Western blot quando le proteine sono sottoposti a condizioni di riduzione/denaturazione ma non immunoprecipitazione o applicazioni di immunofluorescenza. Attraverso le analisi bioinformatiche, testate da frazionamento gradiente di saccarosio e immunoblotting di lisati da connessina topi mutanti null, gli autori mostrano che la proteina interferenti non viene trovata la stessa compartimenti cellulari come connexin32 e probabilmente non &egrave; un membro della famiglia connessina. Questi risultati sono stati presentati con l&#39;intento di contribuire a ridurre la quantit&agrave; di tempo laboratori attualmente spendono nella convalida delle modifiche in connexin32 espressione nel sistema nervoso centrale.

Tessuto-specifici cross-reattivit&agrave; degli anticorpi connexin32: problemi e soluzioni uniche per il sistema nervoso centrale.

&#x30AE;&#x30E3;&#x30C3;&#x30D7;&#x7D50;&#x5408;&#x86CB;&#x767D;&#x30B3;&#x30CD;&#x30AD;&#x30B7;&#x30F3;21&#x306E;&#x76F8;&#x540C;&#x6027;&#x306E;&#x9AD8;&#x3044;&#x30D5;&#x30A1;&#x30DF;&#x30EA;&#x30FC;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x3001;&#x8457;&#x8005;&#x3089;&#x306F;&#x3001;&#x4E2D;&#x67A2;&#x795E;&#x7D4C;&#x7CFB;&#x306E;connexin32&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x767A;&#x73FE;&#x306E;&#x7D44;&#x7E54;&#x7279;&#x7570;&#x7684;&#x306A;&#x6280;&#x8853;&#x7684;&#x6210;&#x679C;&#x8907;&#x96D1;&#x306A;&#x5206;&#x6790;&#x3092;&#x8A18;&#x8FF0;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x8457;&#x8005;&#x3089;&#x306F;&#x3001;&#x8133;&#x5185;&#x306B;&#x8868;&#x793A;&#x3055;&#x308C;&#x306A;&#x304F;&#x3001;&#x809D;&#x81D3;&#x306F;&#x3001;8&#x3064;&#x306E;&#x4E00;&#x822C;&#x7684;&#x306B;&#x7528;&#x3044;&#x3089;&#x308C;&#x308B;&#x6297;&#x4F53;&#x306F;&#x3001;&#x4EA4;&#x5DEE;&#x53CD;&#x5FDC;&#x6027;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306B;&#x5BFE;&#x3057;&#x3066;&#x9AD8;&#x3044;&#x89AA;&#x548C;&#x6027;&#x3092;&#x793A;&#x3059;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x30DE;&#x30B9;&#x30AF;connexin32&#x306E;&#x691C;&#x51FA;&#x3002;&#x4EA4;&#x5DEE;&#x53CD;&#x5FDC;&#x6027;&#x306F;&#x3001;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x306F;&#x9084;&#x5143;&#x72B6;&#x614B;/&#x5909;&#x6027;&#x306B;&#x3055;&#x3089;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3068;&#x304D;&#x306B;&#x30A6;&#x30A7;&#x30B9;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D6;&#x30ED;&#x30C3;&#x30C8;&#x5206;&#x6790;&#x3067;&#x306F;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x3067;&#x306F;&#x306A;&#x304F;&#x3001;&#x514D;&#x75AB;&#x6C88;&#x964D;&#x3084;&#x514D;&#x75AB;&#x30A2;&#x30D7;&#x30EA;&#x30B1;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x3002;&#x30D0;&#x30A4;&#x30AA;&#x30A4;&#x30F3;&#x30D5;&#x30A9;&#x30DE;&#x30C6;&#x30A3;&#x30AF;&#x30B9;&#x89E3;&#x6790;&#x306B;&#x3088;&#x308A;&#x3001;&#x30B7;&#x30E7;&#x7CD6;&#x5BC6;&#x5EA6;&#x52FE;&#x914D;&#x5206;&#x753B;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x30C6;&#x30B9;&#x30C8;&#x3055;&#x308C;&#x3001;&#x30B3;&#x30CD;&#x30AD;&#x30B7;&#x30F3;&#x30CC;&#x30EB;&#x5909;&#x7570;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x304B;&#x3089;&#x306E;&#x6EB6;&#x89E3;&#x7269;&#x306E;&#x514D;&#x75AB;&#x30D6;&#x30ED;&#x30C3;&#x30C8;&#x6CD5;&#x3001;&#x8457;&#x8005;&#x3089;&#x306F;&#x3001;&#x4EA4;&#x5DEE;&#x53CD;&#x5FDC;&#x6027;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306F;connexin32&#x540C;&#x3058;&#x7D30;&#x80DE;&#x30B3;&#x30F3;&#x30D1;&#x30FC;&#x30C8;&#x30E1;&#x30F3;&#x30C8;&#x5185;&#x306B;&#x898B;&#x3064;&#x304B;&#x3089;&#x306A;&#x3044;&#x3068;&#x601D;&#x308F;&#x30B3;&#x30CD;&#x30AD;&#x30B7;&#x30F3;&#x5BB6;&#x65CF;&#x306E;&#x30E1;&#x30F3;&#x30D0;&#x30FC;&#x3067;&#x306F;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x77E5;&#x898B;&#x306F;&#x3001;&#x73FE;&#x5728;&#x3001;&#x4E2D;&#x67A2;&#x795E;&#x7D4C;&#x7CFB;&#x306B;connexin32&#x767A;&#x73FE;&#x306E;&#x5909;&#x5316;&#x3092;&#x691C;&#x8A3C;&#x306B;&#x8CBB;&#x3084;&#x3059;&#x6642;&#x9593;&#x7814;&#x7A76;&#x6240;&#x306E;&#x91CF;&#x3092;&#x524A;&#x6E1B;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x610F;&#x56F3;&#x3057;&#x3066;&#x8868;&#x793A;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

Connexin32&#x6297;&#x4F53;&#x306E;&#x7D44;&#x7E54;&#x7279;&#x7570;&#x7684;&#x306A;&#x4EA4;&#x5DEE;&#x53CD;&#x5FDC;&#x6027;&#xFF1A;&#x4E2D;&#x67A2;&#x795E;&#x7D4C;&#x7CFB;&#x306B;&#x56FA;&#x6709;&#x306E;&#x554F;&#x984C;&#x3068;&#x89E3;&#x6C7A;&#x7B56;

&#xAC2D; &#xC815;&#xC158; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; 21 connexins&#xC758; &#xB192;&#xC740; &#xB3D9;&#xC885; &#xC81C;&#xD488;&#xAD70;&#xC740;. &#xC5EC;&#xAE30;&#xC5D0;&#xC11C;, &#xC800;&#xC790; &#xC870;&#xC9C1; &#xAD00;&#xB828; &#xAE30;&#xC220; &#xC720;&#xBB3C; &#xC911;&#xC559; &#xC2E0;&#xACBD; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C;&#xC5D0; connexin32 &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xBC1C;&#xD604;&#xC758; &#xBD84;&#xC11D;&#xC744; &#xBCF5;&#xC7A1; &#xD558; &#xAC8C; &#xC124;&#xBA85; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC800;&#xC790;&#xB294; &#xB1CC;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC8FC;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xC548; &#xAC04; 8 &#xC77C;&#xBC18;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xACE0;&#xC6A9;&#xB41C; &#xD56D; &#xCCB4; &#xC804;&#xC2DC; connexin32 &#xAC80;&#xCD9C; &#xB9C8;&#xC2A4;&#xD06C; cross-reactive &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xB192;&#xC740; &#xC120;&#xD638;&#xB3C4;. &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xD558;&#xC9C0; immunoprecipitation &#xB610;&#xB294; immunofluorescent &#xC751;&#xC6A9; &#xD504;&#xB85C;&#xADF8;&#xB7A8; &#xC870;&#xAC74; &#xC904;&#xC774;&#xAE30;/&#xBCC0;&#xC131; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xBC1B;&#xAC8C; &#xB418; &#xBA74; &#xBD84; &#xC11C;&#xCABD; &#xC624; &#xC810; &#xBD84;&#xC11D;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBD84;&#xBA85; &#xD558;&#xB2E4;. Bioinformatic &#xBD84;&#xC11D;, &#xC790;&#xB2F9; &#xADF8;&#xB77C;&#xB370;&#xC774;&#xC158; &#xBD84;&#xB958; &#xBC0F; connexin null &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xC950;&#xC5D0;&#xC11C; lysates&#xC758; immunoblotting&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xD14C;&#xC2A4;&#xD2B8;&#xB97C; &#xD1B5;&#xD574; &#xC800;&#xC790; cross-reactive &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; connexin32&#xB85C; &#xB3D9;&#xC77C;&#xD55C; &#xC138;&#xD3EC; &#xAD6C;&#xD68D;&#xC5D0;&#xC11C; &#xCC3E;&#xC744; &#xC218; &#xC5C6;&#xB294; &#xBC0F; &#xAC00;&#xB2A5;&#xC131;&#xC774; connexin &#xAC00;&#xC871;&#xC758; &#xC77C;&#xC6D0; &#xC54A;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xBCF4;&#xC5EC; &#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xC5F0;&#xAD6C; &#xACB0;&#xACFC; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xC18C;&#xB294; &#xD604;&#xC7AC; &#xC720;&#xD6A8;&#xC131; &#xAC80;&#xC0AC; &#xC911;&#xC559; &#xC2E0;&#xACBD; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C;&#xC5D0; connexin32 &#xC2DD;&#xC758; &#xBCC0;&#xD654;&#xC5D0; &#xC18C;&#xBE44; &#xD558;&#xB294; &#xC2DC;&#xAC04;&#xC758; &#xC591;&#xC744; &#xC904;&#xC77C; &#xC218; &#xC788;&#xB3C4;&#xB85D; &#xD558;&#xB294; &#xBAA9;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xC81C;&#xACF5; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Connexin32 &#xD56D; &#xCCB4;&#xC758; &#xC870;&#xC9C1; &#xAD00;&#xB828; &#xBD84;: &#xBB38;&#xC81C; &#xBC0F; &#xC911;&#xC559; &#xC2E0;&#xACBD; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C;&#xC5D0; &#xACE0;&#xC720;&#xD55C; &#xC194;&#xB8E8;&#xC158;.

Las prote&#xED;nas de las uniones son altamente hom&#xF3;logas de la familia de 21 conexinas. Aqu&#xED;, los autores describen un an&#xE1;lisis espec&#xED;fico de tejido artefacto t&#xE9;cnica complicando de expresi&#xF3;n de la prote&#xED;na connexin32 en el sistema nervioso central. Los autores muestran que en el cerebro, pero no el h&#xED;gado, ocho anticuerpos empleados com&#xFA;nmente exhiben una mayor afinidad por una prote&#xED;na de reacci&#xF3;n cruzada que enmascara la detecci&#xF3;n de connexin32. La reactividad cruzada es evidente en los an&#xE1;lisis de Western blot cuando las prote&#xED;nas se someten a la reducci&#xF3;n / desnaturalizaci&#xF3;n condiciones, pero no inmunoprecipitaci&#xF3;n o aplicaciones de inmunofluorescencia. A trav&#xE9;s de an&#xE1;lisis bioinform&#xE1;ticos, probado por el fraccionamiento en gradiente de sacarosa y la inmunotransferencia de lisados &#x200B;&#x200B;de conexina nulo ratones mutantes, los autores muestran que la prote&#xED;na de reacci&#xF3;n cruzada no se encuentra en los mismos compartimentos celulares como connexin32 y no es probable que un miembro de la familia de la conexina. Estos resultados se presentan con el prop&#xF3;sito de ayudar a reducir la cantidad de tiempo laboratorios actualmente gastar en la validaci&#xF3;n de los cambios en connexin32 expresi&#xF3;n en el sistema nervioso central.

Ashleigh C. McLean

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