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Primary Culture of Adult Rat Heart Myocytes

Cultured primary adult rodent heart cells are an important model system for cardiovascular research.  Nevertheless, establishment of robust, viable ...

Columbia University

Columbia College

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Recombinant adenoviruses were used to overexpress green fluorescent protein (GFP)-fused auxiliary Ca(2+) channel beta subunits (beta(1)-beta(4)) in cultured adult rat heart cells, to explore new dimensions of beta subunit functions in vivo. Distinct beta-GFP subunits distributed differentially between the surface sarcolemma, transverse elements, and nucleus in single heart cells. All beta-GFP subunits increased the native cardiac whole-cell L-type Ca(2+) channel current density, but produced distinctive effects on channel inactivation kinetics. The degree of enhancement of whole-cell current density was non-uniform between beta subunits, with a rank order of potency beta(2a) approximately equal to beta(4) > beta(1b) > beta(3). For each beta subunit, the increase in L-type current density was accompanied by a correlative increase in the maximal gating charge (Q(max)) moved with depolarization. However, beta subunits produced characteristic effects on single L-type channel gating, resulting in divergent effects on channel open probability (P(o)). Quantitative analysis and modelling of single-channel data provided a kinetic signature for each channel type. Spurred on by ambiguities regarding the molecular identity of the actual endogenous cardiac L-type channel beta subunit, we cloned a new rat beta(2) splice variant, beta(2b), from heart using 5' rapid amplification of cDNA ends (RACE) PCR. By contrast with beta(2a), expression of beta(2b) in heart cells yielded channels with a microscopic gating signature virtually identical to that of native unmodified channels. Our results provide novel insights into beta subunit functions that are unattainable in traditional heterologous expression studies, and also provide new perspectives on the molecular identity of the beta subunit component of cardiac L-type Ca(2+) channels. Overall, the work establishes a powerful experimental paradigm to explore novel functions of ion channel subunits in their native environments.

Novel functional properties of Ca(2+) channel beta subunits revealed by their expression in adult rat heart cells.

Les ad&#xE9;novirus recombinants ont &#xE9;t&#xE9; utilis&#xE9;s pour surexprimer la prot&#xE9;ine fluorescente verte (GFP)-fusion auxiliaire Ca (2 +) sous-unit&#xE9;s b&#xEA;ta (b&#xEA;ta canal (1)-beta (4)) dans les cellules adultes en culture de c&#x153;ur de rat, afin d&#x26;#39;explorer de nouvelles dimensions de fonctions sous-unit&#xE9; b&#xEA;ta de vivo. Distinct b&#xEA;ta-GFP sous-unit&#xE9;s r&#xE9;parties diff&#xE9;remment entre le sarcolemme de surface, des &#xE9;l&#xE9;ments transversaux, et le noyau dans les cellules cardiaques simples. Tous les sous-unit&#xE9;s b&#xEA;ta-GFP a augment&#xE9; le natif cardiaque &#xE0; cellules enti&#xE8;res de type L Ca (2 +) canal densit&#xE9; de courant, mais produit des effets distinctifs sur la cin&#xE9;tique d&#x26;#39;inactivation des canaux. Le degr&#xE9; d&#x26;#39;am&#xE9;lioration de la cellule enti&#xE8;re densit&#xE9; de courant est non-uniforme entre sous-unit&#xE9;s b&#xEA;ta, avec un classement par ordre de b&#xEA;ta puissance (2a) &#xE0; peu pr&#xE8;s &#xE9;gale &#xE0; la b&#xEA;ta (4)&#x26;gt; b&#xEA;ta (1b)&#x26;gt; beta (3). Pour chaque sous-unit&#xE9; b&#xEA;ta, l&#x26;#39;augmentation de la L-Type de la densit&#xE9; de courant a &#xE9;t&#xE9; accompagn&#xE9;e par une augmentation corr&#xE9;lative de la charge maximale de d&#xE9;clenchement (Q (max)) propose une d&#xE9;polarisation. Toutefois, les sous-unit&#xE9;s b&#xEA;ta produit des effets caract&#xE9;ristiques sur un seul canal de d&#xE9;clenchement de type L, entra&#xEE;nant des effets divergents sur le canal ouvert probabilit&#xE9; (P (o)). L&#x26;#39;analyse quantitative et la mod&#xE9;lisation de canal unique de donn&#xE9;es a fourni une signature cin&#xE9;tique pour chaque type de canal. Stimul&#xE9; par les ambigu&#xEF;t&#xE9;s relatives &#xE0; l&#x26;#39;identit&#xE9; mol&#xE9;culaire de la r&#xE9;elle endog&#xE8;ne cardiaque de type L sous-unit&#xE9; b&#xEA;ta de canal, nous avons clon&#xE9; un b&#xEA;ta rat nouveau (2) variant d&#x26;#39;&#xE9;pissage, b&#xEA;ta (2b), du c&#x153;ur en utilisant une amplification rapide 5 &#x26;#39;des extr&#xE9;mit&#xE9;s d&#x26;#39;ADNc (RACE) PCR. Par contraste avec beta (2a), l&#x26;#39;expression de la b&#xEA;ta (2b) dans les cellules cardiaques donn&#xE9; canaux avec une signature de d&#xE9;clenchement microscopique pratiquement identique &#xE0; celui des natifs canaux non modifi&#xE9;s. Nos r&#xE9;sultats fournissent des informations nouvelles sur les fonctions des sous-unit&#xE9; b&#xEA;ta qui sont impossible &#xE0; atteindre dans les &#xE9;tudes traditionnelles d&#x26;#39;expression h&#xE9;t&#xE9;rologues, et aussi offrir de nouvelles perspectives sur l&#x26;#39;identit&#xE9; mol&#xE9;culaire de la composante sous-unit&#xE9; b&#xEA;ta de la cardiaques de type L Ca (2 +) des canaux. Dans l&#x26;#39;ensemble, le travail &#xE9;tablit un paradigme puissant exp&#xE9;rimentale pour explorer de nouvelles fonctions de sous-unit&#xE9;s de canaux ioniques dans leur environnement naturel.

Propri&#xE9;t&#xE9;s fonctionnelles de nouveaux Ca (2 +) des canaux sous-unit&#xE9;s b&#xEA;ta r&#xE9;v&#xE9;l&#xE9; par leur expression dans des cellules adultes c&#x153;ur de rat

Neuen funktionalen Eigenschaften von Ca (2 +)-Kanal beta-Untereinheiten durch ihre Expression in adulten Rattenherzen Zellen zeigte.

Adenovirus ricombinante sono state utilizzate per iperesprimono la proteina fluorescente verde (GFP)-fuse le ausiliarie Ca(2+) canale beta subunit&agrave; (beta(1)-beta(4)) in cellule del cuore di ratto adulto colto, per esplorare nuove dimensioni di funzioni di subunit&agrave; beta in vivo. Subunit&agrave; beta-GFP distinti differenzialmente distribuite tra la superficie sarcolemma, elementi trasversali e nucleo in cellule del cuore unico. Tutte le subunit&agrave; beta-GFP aumentato il nativa cardiaca cellule intere tipo L Ca(2+) canale densit&agrave; di corrente, ma produsse effetti distintivi sulla cinetica di inattivazione del canale. Il grado di aumento della densit&agrave; di corrente di cellule intere era non uniforme tra le subunit&agrave; beta, con un ordine di rango di potenza beta(2a) approssimativamente pari a beta(4) &amp;gt; beta(1b) &amp;gt; beta(3). Per ogni subunit&agrave; beta, l&#39;aumento della densit&agrave; di corrente di tipo L &egrave; stato accompagnato da un correlativo aumento nel controllo carica massima (Q(max)) si trasfer&igrave; con depolarizzazione. Tuttavia, le subunit&agrave; beta prodotto effetti caratteristici su singolo canale L-tipo gating, causando effetti divergenti sulla probabilit&agrave; aperta canale (P(o)). Analisi quantitativa e modellistica del singolo canale dati fornito una cinetica firma per ciascun tipo di canale. Spronato da ambiguit&agrave; per quanto riguarda l&#39;identit&agrave; molecolare della effettiva endogena cardiaca L-tipo canale beta subunit&agrave;, abbiamo clonato un nuovo ratto beta(2) splice variante, beta(2b), dal cuore utilizzando 5&#39; rapida amplificazione del cDNA finisce PCR (gara). Al contrario con beta(2a), espressione di beta(2b) in cellule del cuore fruttato canali con una firma di controllo microscopica praticamente identica a quello dei canali nativi non modificati. I nostri risultati forniscono romanzo in funzioni di subunit&agrave; beta che sono irraggiungibili in studi di espressione eterologa tradizionale e anche forniscono nuove prospettive sull&#39;identit&agrave; molecolare del componente beta subunit&agrave; dei canali L-type Ca(2+) cardiaci. Nel complesso, il lavoro stabilisce un potente paradigma sperimentale per esplorare nuove funzioni delle subunit&agrave; canale ionico nei loro ambienti nativi.

Romanzo propriet&agrave; funzionali di Ca(2+) canale subunit&agrave; beta rivelata dalla loro espressione in cellule di topo adulto del cuore.

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vivo&#x3067;&#x3002;&#x8868;&#x9762;&#x7B4B;&#x9798;&#x3001;&#x6A2A;&#x65AD;&#x8981;&#x7D20;&#x3092;&#x3001;&#x5358;&#x4E00;&#x306E;&#x5FC3;&#x81D3;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x6838;&#x306E;&#x9593;&#x306E;&#x5DEE;&#x306E;&#x5206;&#x6563;&#x306E;&#x7570;&#x306A;&#x308B;&#x3B2;-GFP&#x306E;&#x30B5;&#x30D6;&#x30E6;&#x30CB;&#x30C3;&#x30C8;&#x3002;&#x3059;&#x3079;&#x3066;&#x306E;&#x3B2;-GFP&#x306E;&#x30B5;&#x30D6;&#x30E6;&#x30CB;&#x30C3;&#x30C8;&#x306F;&#x3001;&#x30CD;&#x30A4;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6;&#x306E;&#x5FC3;&#x81D3;&#x5168;&#x4F53;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;L&#x578B;Ca&#xFF08;2 +&#xFF09;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x306E;&#x96FB;&#x6D41;&#x5BC6;&#x5EA6;&#x3092;&#x5897;&#x52A0;&#x3057;&#x305F;&#x304C;&#x3001;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x4E0D;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x52D5;&#x529B;&#x5B66;&#x306B;&#x72EC;&#x7279;&#x306E;&#x52B9;&#x679C;&#x3092;&#x4F5C;&#x308A;&#x51FA;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x5168;&#x7D30;&#x80DE;&#x96FB;&#x6D41;&#x5BC6;&#x5EA6;&#x306E;&#x5411;&#x4E0A;&#x306E;&#x7A0B;&#x5EA6;&#x306F;&#x3B2;&#x3068;&#x307B;&#x307C;&#x7B49;&#x3057;&#x3044;&#x52B9;&#x529B;&#x306E;&#x30D9;&#x30FC;&#x30BF;&#x7248;&#x306E;&#x9806;&#x4F4D;&#xFF08;2A&#xFF09;&#xFF08;4&#xFF09;&#x26;gt;&#x30D9;&#x30FC;&#x30BF;&#xFF08;1B&#xFF09;&#x26;gt;&#x3B2;&#xFF08;3&#xFF09;&#x3067;&#x3001;&#x3B2;&#x30B5;&#x30D6;&#x30E6;&#x30CB;&#x30C3;&#x30C8;&#x3068;&#x306E;&#x9593;&#x306E;&#x975E;&#x5747;&#x4E00;&#x3067;&#x3042;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x305D;&#x308C;&#x305E;&#x308C;&#x306E;&#x3B2;&#x30B5;&#x30D6;&#x30E6;&#x30CB;&#x30C3;&#x30C8;&#x306B;&#x3064;&#x3044;&#x3066;&#x306F;&#x3001;L&#x578B;&#x96FB;&#x6D41;&#x5BC6;&#x5EA6;&#x306E;&#x5897;&#x52A0;&#x306F;&#x3001;&#x8131;&#x5206;&#x6975;&#x3068;&#x4E00;&#x7DD2;&#x306B;&#x79FB;&#x52D5;&#x306E;&#x6700;&#x5927;&#x306E;&#x30B2;&#x30FC;&#x30C8;&#x96FB;&#x8377;&#xFF08;Q&#xFF08;MAX&#xFF09;&#xFF09;&#x306E;&#x76F8;&#x95A2;&#x306E;&#x5897;&#x52A0;&#x3092;&#x4F34;&#x3063;&#x3066;&#x3044;&#x305F;&#x3002;&#x3057;&#x304B;&#x3057;&#x3001;&#x3B2;&#x30B5;&#x30D6;&#x30E6;&#x30CB;&#x30C3;&#x30C8;&#x304C;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x958B;&#x78BA;&#x7387;&#xFF08;P&#xFF08;O&#xFF09;&#xFF09;&#x306E;&#x767A;&#x6563;&#x52B9;&#x679C;&#x3092;&#x3082;&#x305F;&#x3089;&#x3057;&#x3001;&#x5358;&#x4E00;L&#x578B;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x306E;&#x30B2;&#x30FC;&#x30C6;&#x30A3;&#x30F3;&#x30B0;&#x306B;&#x7279;&#x5FB4;&#x7684;&#x306A;&#x52B9;&#x679C;&#x3092;&#x4F5C;&#x308A;&#x51FA;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x30B7;&#x30F3;&#x30B0;&#x30EB;&#xB7;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#xB7;&#x30C7;&#x30FC;&#x30BF;&#x306E;&#x5B9A;&#x91CF;&#x5206;&#x6790;&#x3068;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;&#x306F;&#x3001;&#x5404;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x306E;&#x30BF;&#x30A4;&#x30D7;&#x306E;&#x52D5;&#x7684;&#x7F72;&#x540D;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x5B9F;&#x969B;&#x306E;&#x5185;&#x56E0;&#x6027;&#x5FC3;&#x7B4B;L&#x578B;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x306E;&#x3B2;&#x30B5;&#x30D6;&#x30E6;&#x30CB;&#x30C3;&#x30C8;&#x306E;&#x5206;&#x5B50;&#x8B58;&#x5225;&#x306B;&#x95A2;&#x3059;&#x308B;&#x66D6;&#x6627;&#x3055;&#x306B;&#x62CD;&#x8ECA;&#x3092;&#x304B;&#x3051;&#x3001;&#x65B0;&#x305F;&#x306A;&#x30E9;&#x30C3;&#x30C8;&#x306E;&#x30D9;&#x30FC;&#x30BF;&#x7248;&#x3092;&#x30AF;&#x30ED;&#x30FC;&#x30CB;&#x30F3;&#x30B0;&#x3057;&#x305F;&#xFF08;2&#xFF09;&#x30B9;&#x30D7;&#x30E9;&#x30A4;&#x30B9;&#x5909;&#x7570;&#x4F53;&#x3001;&#x3B2;&#xFF08;2b&#xFF09;&#x3092;&#x3001;cDNA&#x672B;&#x7AEF;&#x306E;5 &#x26;#39;&#x8FC5;&#x901F;&#x5897;&#x5E45;&#xFF08;RACE&#xFF09;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x5FC3;&#x306E;&#x5E95;&#x304B;&#x3089;PCR&#x3002;&#x30D9;&#x30FC;&#x30BF;&#x7248;&#xFF08;2A&#xFF09;&#x3068;&#x306F;&#x5BFE;&#x7167;&#x7684;&#x306B;&#x3001;&#x5FC3;&#x81D3;&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x3B2;&#x306E;&#x767A;&#x73FE;&#xFF08;&#x56F3;2b&#xFF09;&#x306F;&#x3001;&#x30CD;&#x30A4;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6;&#x5909;&#x66F4;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x306A;&#x3044;&#x30C1;&#x30E3;&#x30F3;&#x30CD;&#x30EB;&#x306E;&#x3082;&#x306E;&#x3068;&#x5B9F;&#x8CEA;&#x7684;&#x306B;&#x540C;&#x4E00;&#x306E;&#x5FAE;&#x8996;&#x7684;&#x30B2;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CD;&#x30C1;&#x30E3;&#x3092;&#x6301;&#x3064;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x304C;&#x5F97;&#x3089;&#x308C;&#x305F;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x306F;&#x3001;&#x5F93;&#x6765;&#x306E;&#x7570;&#x7A2E;&#x767A;&#x73FE;&#x306E;&#x7814;&#x7A76;&#x200B;&#x200B;&#x3067;&#x306F;&#x5B9F;&#x73FE;&#x4E0D;&#x53EF;&#x80FD;&#x3067;&#x3042;&#x308A;&#x3001;&#x307E;&#x305F;&#x5FC3;&#x7B4B;L&#x578B;Ca&#xFF08;2 +&#xFF09;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x306E;&#x3B2;&#x30B5;&#x30D6;&#x30E6;&#x30CB;&#x30C3;&#x30C8;&#x6210;&#x5206;&#x306E;&#x5206;&#x5B50;&#x306E;&#x30A2;&#x30A4;&#x30C7;&#x30F3;&#x30C6;&#x30A3;&#x30C6;&#x30A3;&#x306B;&#x65B0;&#x3057;&#x3044;&#x8996;&#x70B9;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3059;&#x308B;&#x3B2;&#x30B5;&#x30D6;&#x30E6;&#x30CB;&#x30C3;&#x30C8;&#x306E;&#x6A5F;&#x80FD;&#x306B;&#x65B0;&#x305F;&#x306A;&#x6D1E;&#x5BDF;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x5168;&#x4F53;&#x7684;&#x306B;&#x3001;&#x4ED5;&#x4E8B;&#x306F;&#x305D;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x30CD;&#x30A4;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6;&#x74B0;&#x5883;&#x3067;&#x306E;&#x30A4;&#x30AA;&#x30F3;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x306E;&#x30B5;&#x30D6;&#x30E6;&#x30CB;&#x30C3;&#x30C8;&#x306E;&#x65B0;&#x3057;&#x3044;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3092;&#x63A2;&#x7D22;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x5F37;&#x529B;&#x306A;&#x5B9F;&#x9A13;&#x30D1;&#x30E9;&#x30C0;&#x30A4;&#x30E0;&#x3092;&#x78BA;&#x7ACB;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

Ca&#x306E;&#x5C0F;&#x8AAC;&#x306E;&#x6A5F;&#x80FD;&#x7279;&#x6027;&#xFF08;2 +&#xFF09;&#x6210;&#x4F53;&#x30E9;&#x30C3;&#x30C8;&#x5FC3;&#x81D3;&#x7D30;&#x80DE;&#x3067;&#x306E;&#x767A;&#x73FE;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x306E;&#x3B2;&#x30B5;&#x30D6;&#x30E6;&#x30CB;&#x30C3;&#x30C8;

&#xC7AC;&#xC870;&#xD569; adenoviruses &#xB179;&#xC0C9; &#xD615;&#xAD11; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; (GFP)&#xB97C; overexpress &#xD558;&#xB294; &#xB370; &#xC0AC;&#xC6A9;&#xD55C;-&#xC735;&#xD569; &#xBCF4;&#xC870; Ca(2+) &#xCC44;&#xB110; &#xBCA0;&#xD0C0; &#xD558;&#xC704; &#xB2E8;&#xC704; (&#xBCA0;&#xD0C0; &#xC18C; &#xB2E8;&#xC704; &#xAE30;&#xB2A5; vivo&#xC5D0;&#xC11C;&#xC758; &#xC0C8;&#xB85C;&#xC6B4; &#xCC28;&#xC6D0;&#xC744; &#xD0D0;&#xAD6C; &#xAD50;&#xC591;&#xB41C; &#xC131;&#xC778; &#xC950; &#xC2EC;&#xC7A5; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0;&#xC11C; beta(1)-beta(4)). &#xB69C;&#xB837;&#xD55C; &#xBCA0;&#xD0C0; GFP subunits &#xCC28;&#xB3D9; &#xD45C;&#xBA74; sarcolemma, &#xAC00;&#xB85C; &#xC694;&#xC18C; &#xBC0F; &#xB2E8;&#xC77C; &#xC2EC;&#xC7A5; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD575; &#xC0AC;&#xC774; &#xBD84;&#xC0B0;. &#xBAA8;&#xB4E0; &#xBCA0;&#xD0C0; GFP subunits &#xB124;&#xC774;&#xD2F0;&#xBE0C; &#xC2EC;&#xC7A5; &#xC804;&#xCCB4; &#xC140; L &#xD0C0;&#xC785; Ca(2+) &#xCC44;&#xB110; &#xC804;&#xB958; &#xBC00;&#xB3C4; &#xC99D;&#xAC00; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xCC44;&#xB110; &#xBE44;&#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xC18D;&#xB3C4; &#xB860;&#xC5D0; &#xB3C5;&#xD2B9;&#xD55C; &#xD6A8;&#xACFC; &#xC0DD;&#xC0B0;. &#xC804;&#xCCB4; &#xC140; &#xC804;&#xB958; &#xBC00;&#xB3C4;&#xC758; &#xD5A5;&#xC0C1; &#xC815;&#xB3C4; &#xC720;&#xB2C8;&#xD3FC;&#xC774; &#xC544;&#xB2CC; &#xBCA0;&#xD0C0; &#xD558;&#xC704; &#xB2E8;&#xC704; &#xAC04;&#xC758; &#xD798; beta(2a)&#xC758; &#xB4F1;&#xAE09; &#xC21C;&#xC11C;&#xC640; &#xB300;&#xB7B5; &#xB3D9;&#xC77C; beta(4) &amp;gt; beta(1b) &amp;gt; beta(3). &#xAC01; &#xBCA0;&#xD0C0; &#xC18C; &#xB2E8;&#xC704;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; L &#xD615; &#xC804;&#xB958; &#xBC00;&#xB3C4;&#xC758; &#xC99D;&#xAC00; (Q(max)) depolarization &#xC774;&#xB3D9; &#xCD5C;&#xB300;&#xD55C; &#xC81C;&#xC5B4; &#xB2F4;&#xB2F9;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC0C1;&#xD638; &#xC99D;&#xAC00; &#xB3D9;&#xD589; &#xD588;&#xB2E4;. &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098; &#xBCA0;&#xD0C0; &#xD558;&#xC704; &#xB2E8;&#xC704; &#xC0DD;&#xC0B0; &#xD55C; L &#xD615; &#xCC44;&#xB110; &#xAC8C;&#xC774;&#xD305;&#xC5D0; &#xD2B9;&#xC9D5;&#xC801;&#xC778; &#xD6A8;&#xACFC; &#xCC44;&#xB110; &#xC624;&#xD508; &#xD655;&#xB960; (P(o)) &#xBD84;&#xAE30; &#xD6A8;&#xACFC;&#xC5D0; &#xB530;&#xB978;. &#xC815;&#xB7C9; &#xBD84;&#xC11D; &#xBC0F; &#xB2E8;&#xC77C; &#xCC44;&#xB110; &#xB370;&#xC774;&#xD130; &#xBAA8;&#xB378;&#xB9C1; &#xC6B4;&#xB3D9; &#xC11C;&#xBA85; &#xAC01; &#xCC44;&#xB110; &#xD615;&#xC2DD;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC81C;&#xACF5;. &#xC18C;&#xB294; &#xC2E4;&#xC81C; &#xC0DD; &#xC2EC;&#xC7A5; L &#xD615; &#xCC44;&#xB110; &#xBCA0;&#xD0C0; &#xB2E8;&#xC704; &#xBD84;&#xC790; &#xC815;&#xCCB4;&#xC131;&#xC5D0; &#xAD00;&#xD55C; &#xBAA8;&#xD638;&#xC131;&#xC774;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xD588;&#xB2E4;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xC0C8;&#xB85C;&#xC6B4; &#xC950; beta(2) &#xC2A4;&#xD50C;&#xB77C;&#xC774;&#xC2A4; variant, beta(2b) &#xBCF5;&#xC81C;, 5&#39;&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xC2EC;&#xC7A5;&#xC5D0;&#xC11C; Cdna&#xC758; &#xAE09;&#xC18D; &#xD55C; &#xD655;&#xB300; &#xB05D; (&#xACBD;&#xC8FC;) PCR. &#xC774;&#xC640; &#xB300;&#xC870;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; beta(2a), &#xC2EC;&#xC7A5; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0; beta(2b)&#xC758; &#xD45C;&#xD604;&#xC740; &#xBBF8;&#xC138;&#xD55C; &#xC81C;&#xC5B4; &#xC11C;&#xBA85; &#xAC70;&#xC758; &#xC218;&#xC815; &#xB418;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC740; &#xAE30;&#xBCF8; &#xCC44;&#xB110; &#xB3D9;&#xC77C; &#xCC44;&#xB110; &#xB098;&#xC654;&#xACE0;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xACB0;&#xACFC; &#xC804;&#xD1B5;&#xC801;&#xC778; &#xBD84;&#xB9AC; &#xC2DD; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xC5D0; &#xB2EC;&#xC131; &#xB418;&#xC9C0; &#xC54A;&#xB294; &#xBCA0;&#xD0C0; &#xC18C; &#xB2E8;&#xC704; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC73C;&#xB85C; &#xC0C8;&#xB85C;&#xC6B4; &#xD1B5;&#xCC30;&#xB825;&#xC744; &#xC81C;&#xACF5; &#xD558; &#xACE0; &#xB610;&#xD55C; &#xC2EC;&#xC7A5; L &#xD0C0;&#xC785; Ca(2+) &#xCC44;&#xB110;&#xC758; &#xBCA0;&#xD0C0; &#xC18C; &#xB2E8;&#xC704; &#xAD6C;&#xC131; &#xC694;&#xC18C; &#xBD84;&#xC790; id&#xC5D0; &#xC0C8;&#xB85C;&#xC6B4; &#xC2DC;&#xAC01;&#xC744; &#xC81C;&#xACF5;. &#xC804;&#xBC18;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C;, &#xC791;&#xD488;&#xC740; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC758; &#xB124;&#xC774;&#xD2F0;&#xBE0C; &#xD658;&#xACBD;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC774;&#xC628; &#xCC44;&#xB110; subunits&#xC758; &#xC0C8;&#xB85C;&#xC6B4; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC744; &#xD0D0;&#xAD6C; &#xD558;&#xB294; &#xAC15;&#xB825;&#xD55C; &#xC2E4;&#xD5D8; &#xD328;&#xB7EC;&#xB2E4;&#xC784;&#xC744; &#xC124;&#xC815; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Ca(2+) &#xCC44;&#xB110; &#xBCA0;&#xD0C0; &#xD558;&#xC704; &#xB2E8;&#xC704; &#xC131;&#xC778; &#xC950; &#xC2EC;&#xC7A5; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0; &#xC788;&#xB294; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC758; &#xC2DD;&#xC73C;&#xB85C; &#xACC4;&#xC2DC;&#xC758; &#xC18C;&#xC124; &#xAE30;&#xB2A5; &#xC18D;&#xC131;.

Los adenovirus recombinantes se utilizaron para sobreexpresar la prote&#xED;na verde fluorescente (GFP)-fusionado auxiliar de Ca (2 +) del canal subunidades beta (beta (1)-beta-(4)) en cultivos de c&#xE9;lulas adultas del coraz&#xF3;n de ratas, para explorar nuevas dimensiones de las funciones de la subunidad beta en in vivo. Las buenas pr&#xE1;cticas agrarias distintas subunidades beta-distribuidos diferencialmente entre el sarcolema superficie, elementos transversales, y el n&#xFA;cleo de las c&#xE9;lulas card&#xED;acas individuales. Todas las subunidades beta-GFP aument&#xF3; el nativo cardiaca de c&#xE9;lulas enteras de tipo L de Ca (2 +) la densidad de canal actual, sino que se produce distintos efectos sobre la cin&#xE9;tica de inactivaci&#xF3;n de los canales. El grado de mejora de c&#xE9;lulas enteras densidad de corriente era no uniforme entre las subunidades beta, con una orden de rango de beta potencia (2a) aproximadamente igual a la beta (4)&#x26;gt; beta (1b)&#x26;gt; beta (3). Para cada subunidad beta, el aumento de la densidad de corriente de tipo L fue acompa&#xF1;ado por un aumento correlativo en la carga m&#xE1;xima de puerta (Q (m&#xE1;x)) movido con la despolarizaci&#xF3;n. Sin embargo, las subunidades beta producen efectos caracter&#xED;sticos de compuerta de un canal de tipo L, resultando en efectos divergentes sobre la probabilidad de canal abierto (p (o)). El an&#xE1;lisis cuantitativo y modelizaci&#xF3;n de los datos de un solo canal proporciona una firma cin&#xE9;tica para cada tipo de canal. Alentados por las ambig&#xFC;edades con respecto a la identidad molecular de la actual end&#xF3;gena cardiaca de tipo L subunidad beta del canal, hemos clonado una beta de rata (2) nueva variante de empalme, beta (2b), de coraz&#xF3;n a trav&#xE9;s de la r&#xE1;pida amplificaci&#xF3;n 5 &#x26;#39;del cDNA extremos (RACE) PCR. Por contraste con la beta (2a), la expresi&#xF3;n de beta (2b) en las c&#xE9;lulas del coraz&#xF3;n dio canales con una firma de puerta microsc&#xF3;pico pr&#xE1;cticamente id&#xE9;ntica a la de los canales nativos no modificados. Nuestros resultados proporcionan nuevos conocimientos sobre las funciones de la subunidad beta que son inalcanzables en los tradicionales estudios de expresi&#xF3;n heter&#xF3;loga, y tambi&#xE9;n proporcionan nuevas perspectivas sobre la identidad molecular de la subunidad beta de la componente cardiaca de tipo L de Ca (2 +) canales. En general, el trabajo establece un poderoso paradigma experimental para explorar nuevas funciones de las subunidades de los canales i&#xF3;nicos en sus ambientes nativos.

Nuevas propiedades funcionales de Ca (2 +) canal beta subunidades revela por su expresi&#xF3;n en las c&#xE9;lulas card&#xED;acas adultas

&#x5DE5;&#x7A0B; calmodulins (&#x51F8;&#x8F6E;)&#xFF0C;&#x5448;&#x73B0; Ca2 +-&#x4E0D;&#x533A;&#x5206;&#x5927;&#x5C0F;&#x5199;&#x7684;&#x7A81;&#x53D8;&#xFF0C;&#x51FD;&#x6570;&#x4EE5;&#x53CA;&#x663E;&#x6027;&#x5E95;&#x7247;&#x5728;&#x5F02;&#x6E90;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x4E2D;&#xFF0C;&#x63ED;&#x793A;&#x4E86;&#x79BB;&#x5B50;&#x901A;&#x9053;&#x8C03;&#x5236; Ca2 &#x7684;&#x673A;&#x5236; + / CaM&#x3002;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x4E00;&#x9879;&#x6218;&#x7565;&#xFF0C;&#x6BCD;&#x7CFB;&#x793E;&#x4F1A;&#x7684;&#x8FD9;&#x79CD;&#x53CD;&#x9988; Ca2 + &#x751F;&#x7269;&#x5B66;&#x73B0;&#x5728;&#x51FA;&#x73B0;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x672C;&#x673A;&#x54FA;&#x4E73;&#x52A8;&#x7269;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E2D;&#x7684;&#x51F8;&#x8F6E;&#x7684;&#x4F7F;&#x7528;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x5236;&#x5B9A;&#x4E86;&#x91CD;&#x7EC4;&#x817A;&#x75C5;&#x6BD2;&#x8F74;&#x627F;&#x5DE5;&#x7A0B;&#x51F8;&#x8F6E;&#xFF0C;&#x65B9;&#x4FBF;&#x4ED6;&#x4EEC;&#x8868;&#x8FBE;&#x6210;&#x4EBA;&#x5FC3;&#x810F;&#x7EC6;&#x80DE;&#xFF0C;&#x5728; Ca2 + &#x76D1;&#x7BA1;&#x53EF;&#x80FD;&#x5FC3;&#x8DF3;&#x65F6;&#x523B;&#x63A7;&#x5236;&#x7684;&#x5FC5;&#x8981;&#x6761;&#x4EF6;&#x3002;&#x5DE5;&#x7A0B;&#x7684;&#x51F8;&#x8F6E;&#x4E0D;&#x4EC5;&#x6D88;&#x9664;&#x4E86; Ca2 +-&#x4F9D;&#x8D56;&#x706D;&#x6D3B;&#x7684;&#x672C;&#x673A;&#x9499;&#x901A;&#x9053;&#xFF0C;&#x4F46;&#x66B4;&#x9732;&#x610F;&#x5916;&#x5927;&#x7684;&#x5F71;&#x54CD;&#xFF0C;&#x6D88;&#x9664;&#x8FD9;&#x79CD;&#x53CD;&#x9988;&#xFF1A; &#x524D;&#x6240;&#x672A;&#x6709; (4-&#x81F3;&#x4E94;&#x6298;&#xFF09; &#x5EF6;&#x957F;&#x52A8;&#x4F5C;&#x7535;&#x4F4D;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E2A;&#x5F15;&#x4EBA;&#x6CE8;&#x76EE;&#x7684;&#x7ED3;&#x679C;&#x91CD;&#x94F8;&#x52A8;&#x4F5C;&#x7535;&#x4F4D;&#x63A7;&#x5236;&#x7684;&#x57FA;&#x672C;&#x6A21;&#x5F0F;&#xFF0C;&#x5E76;&#x9610;&#x91CA;&#x7684;&#x75C5;&#x6BD2;&#x5F0F;&#x4EA4;&#x4ED8;&#x5DE5;&#x7A0B;&#x51F8;&#x8F6E;&#x7B54;&#x5E94;&#x8FDB;&#x884C;&#x8C03;&#x67E5;&#x7684;&#x8BB8;&#x591A;&#x5176;&#x4ED6;&#x51F8;&#x8F6E;&#x4FE1;&#x53F7;&#x901A;&#x8DEF;&#x7684;&#x751F;&#x7269;&#x5B66;&#x3002;

&#x5DE5;&#x7A0B; calmodulins &#x63ED;&#x793A;&#x610F;&#x5916;&#x663E;&#x8D6B;&#x5730;&#x4F4D;&#x7684; Ca2 + &#x901A;&#x9053;&#x5931;&#x6D3B;&#xFF0C;&#x5728;&#x63A7;&#x5236;&#x5FC3;&#x52B1;&#x78C1;&#x3002;

Engineered calmodulins (CaMs), rendered Ca2+-insensitive by mutations, function as dominant negatives in heterologous systems, and have revealed mechanisms of ion channel modulation by Ca2+/CaM. The use of these CaMs in native mammalian cells now emerges as a strategy to unmask the biology of such Ca2+ feedback. Here, we developed recombinant adenoviruses bearing engineered CaMs to facilitate their expression in adult heart cells, where Ca2+ regulation may be essential for moment-to-moment control of the heartbeat. Engineered CaMs not only eliminated the Ca2+-dependent inactivation of native calcium channels, but exposed an unexpectedly large impact of removing such feedback: the unprecedented (4- to 5-fold) prolongation of action potentials. This striking result recasts the basic paradigm for action-potential control and illustrates the promise of virally delivered engineered CaM to investigate the biology of numerous other CaM-signaling pathways.

Engineered calmodulins reveal the unexpected eminence of Ca2+ channel inactivation in controlling heart excitation.

Calmodulins Engineered (CAMS), rendu insensible &#xE0; la casse Ca2 + par des mutations, la fonction que dominants n&#xE9;gatifs dans des syst&#xE8;mes h&#xE9;t&#xE9;rologues, et ont r&#xE9;v&#xE9;l&#xE9; les m&#xE9;canismes de modulation des canaux ioniques par le Ca 2 + / CaM. L&#x26;#39;utilisation de ces cames en cellules de mammif&#xE8;res indig&#xE8;nes &#xE9;merge maintenant comme une strat&#xE9;gie visant &#xE0; d&#xE9;masquer la biologie de Ca2 + tels commentaires. Ici, nous avons d&#xE9;velopp&#xE9; des ad&#xE9;novirus recombinants portant CAM ing&#xE9;nierie afin de faciliter leur expression dans les cellules cardiaques adultes, o&#xF9; Ca2 + r&#xE8;glement peut &#xEA;tre essentiel pour un moment &#xE0; moment de contr&#xF4;le du rythme cardiaque. Webcams Engineered non seulement &#xE9;limin&#xE9; le Ca 2 +-d&#xE9;pendante l&#x26;#39;inactivation des canaux calciques natifs, mais expos&#xE9; un impact plus &#xE9;lev&#xE9; que pr&#xE9;vu de supprimer ces commentaires: le pr&#xE9;c&#xE9;dent (4 - &#xE0; 5 fois) la prolongation des potentiels d&#x26;#39;action. Ce r&#xE9;sultat frappant refond le paradigme de base pour l&#x26;#39;action potentielle de contr&#xF4;le et illustre la promesse d&#x26;#39;un virus con&#xE7;u livr&#xE9; CaM pour &#xE9;tudier la biologie de nombreuses autres voies de signalisation CaM-.

Calmodulins Engineered R&#xE9;v&#xE9;lez la Eminence inattendue de Ca2 + dans l&#x26;#39;inactivation du canal Contr&#xF4;le d&#x26;#39;excitation cardiaque

Engineered calmodulins zeigen die unerwartete &#xDC;berlegenheit von Ca2 +-Kanal-Inaktivierung bei der Kontrolle der Herz Anregung.

Engineered calmodulins (CaMs), reso Ca2 +-insensibile alle mutazioni, funzione come dominante negativi nei sistemi eterologo e hanno rivelato i meccanismi di modulazione canale ionico di Ca2 + CaM. L&#39;uso di queste camme in cellule di mammifero native ora emerge come una strategia per smascherare la biologia di tale feedback Ca2 +. Qui, abbiamo sviluppato adenovirus ricombinante cuscinetto engineered CaMs per facilitare la loro espressione in cellule del cuore adulto, dove regolamento Ca2 + pu&ograve; essere essenziale per il controllo di momento per momento del battito cardiaco. CaMs ingegnerizzati eliminato non solo il Ca2 +-dipendente dalla inattivazione dei canali del calcio nativo, ma esposti un impatto inaspettatamente grande di rimuovere tale feedback: il senza precedenti (4-5 volte) prolungamento del potenziale d&#39;azione. Questo sorprendente risultato rifonde il paradigma di base per il controllo del potenziale di azione e illustra la promessa di viralmente consegnati CaM progettato per studiare la biologia di numerose altre vie di segnalazione CaM.

Engineered calmodulins rivelare l&#39;inatteso eminenza di inattivazione del canale del Ca2 + nel controllo eccitazione del cuore.

&#x30A8;&#x30F3;&#x30B8;&#x30CB;&#x30A2;&#x30AB;&#x30EB;&#x30E2;&#x30B8;&#x30E5;&#x30EA;&#x30F3;&#x306F;&#x3001;&#xFF08;&#x30AB;&#x30E1;&#x30E9;&#xFF09;&#x3001;&#x7570;&#x7A2E;&#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E0;&#x306E;&#x30C9;&#x30DF;&#x30CA;&#x30F3;&#x30C8;&#x30CD;&#x30AC;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6;&#x7A81;&#x7136;&#x5909;&#x7570;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x95A2;&#x6570;&#x3067;&#x306E;Ca2 +&#x3068;&#x5C0F;&#x6587;&#x5B57;&#x3092;&#x533A;&#x5225;&#x3057;&#x306A;&#x3044;&#x3067;&#x30EC;&#x30F3;&#x30C0;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;&#x3001;&#x3068;Ca2 + /&#x30AB;&#x30EB;&#x30E2;&#x30B8;&#x30E5;&#x30EA;&#x30F3;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x30A4;&#x30AA;&#x30F3;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x306E;&#x30E1;&#x30AB;&#x30CB;&#x30BA;&#x30E0;&#x3092;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x30CD;&#x30A4;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6;&#x54FA;&#x4E73;&#x52D5;&#x7269;&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x30AB;&#x30E0;&#x306E;&#x4F7F;&#x7528;&#x306F;&#x3001;&#x73FE;&#x5728;&#x3053;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306A;Ca2 +&#x306E;&#x30D5;&#x30A3;&#x30FC;&#x30C9;&#x30D0;&#x30C3;&#x30AF;&#x306E;&#x751F;&#x7269;&#x306E;&#x6B63;&#x4F53;&#x3092;&#x66B4;&#x9732;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x6226;&#x7565;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x73FE;&#x308C;&#x308B;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x3001;Ca2 +&#x306E;&#x898F;&#x5236;&#x306F;&#x3001;&#x30CF;&#x30FC;&#x30C8;&#x30D3;&#x30FC;&#x30C8;&#x306E;&#x30E2;&#x30FC;&#x30E1;&#x30F3;&#x30C8;&#x306B;&#x30E2;&#x30FC;&#x30E1;&#x30F3;&#x30C8;&#x5236;&#x5FA1;&#x306B;&#x4E0D;&#x53EF;&#x6B20;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x304B;&#x3082;&#x3057;&#x308C;&#x306A;&#x3044;&#x3068;&#x3053;&#x308D;&#x3001;&#x6210;&#x4EBA;&#x306E;&#x5FC3;&#x81D3;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x3067;&#x305D;&#x306E;&#x767A;&#x73FE;&#x3092;&#x4FC3;&#x9032;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x8A2D;&#x8A08;&#x3055;&#x308C;&#x305F;CAM&#x3092;&#x6709;&#x3059;&#x308B;&#x7D44;&#x63DB;&#x3048;&#x30A2;&#x30C7;&#x30CE;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x3092;&#x958B;&#x767A;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x30A8;&#x30F3;&#x30B8;&#x30CB;&#x30A2;&#x30AB;&#x30E0;&#x306F;&#x30CD;&#x30A4;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x306E;Ca2 +&#x4F9D;&#x5B58;&#x6027;&#x4E0D;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x3092;&#x6392;&#x9664;&#x3057;&#x3001;&#x3057;&#x304B;&#x3057;&#x3001;&#x305D;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306A;&#x30D5;&#x30A3;&#x30FC;&#x30C9;&#x30D0;&#x30C3;&#x30AF;&#x3092;&#x9664;&#x53BB;&#x3059;&#x308B;&#x306E;&#x4E88;&#x671F;&#x3057;&#x306A;&#x3044;&#x5927;&#x304D;&#x306A;&#x5F71;&#x97FF;&#x3092;&#x9732;&#x51FA;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x306A;&#x3044;&#xFF1A;&#x524D;&#x4F8B;&#x306E;&#x306A;&#x3044;&#xFF08;4&#x304B;&#x3089;5&#x500D;&#x307E;&#x3067;&#xFF09;&#x6D3B;&#x52D5;&#x96FB;&#x4F4D;&#x306E;&#x5EF6;&#x9577;&#x3092;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x5370;&#x8C61;&#x7684;&#x306A;&#x7D50;&#x679C;&#x306F;&#x3001;&#x30A2;&#x30AF;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x96FB;&#x4F4D;&#x5236;&#x5FA1;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x57FA;&#x672C;&#x7684;&#x306A;&#x30D1;&#x30E9;&#x30C0;&#x30A4;&#x30E0;&#x3092;&#x66F8;&#x304D;&#x76F4;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x591A;&#x6570;&#x306E;&#x4ED6;&#x306E;CAM-&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#x7D4C;&#x8DEF;&#x306E;&#x751F;&#x7269;&#x5B66;&#x3092;&#x8ABF;&#x67FB;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x30D0;&#x30A4;&#x30E9;&#x30EB;&#x914D;&#x4FE1;&#x8A2D;&#x8A08;CAM&#x306E;&#x7D04;&#x675F;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x30A8;&#x30F3;&#x30B8;&#x30CB;&#x30A2;&#x30AB;&#x30EB;&#x30E2;&#x30B8;&#x30E5;&#x30EA;&#x30F3;&#x30CF;&#x30FC;&#x30C8;&#x52B1;&#x78C1;&#x3092;&#x5236;&#x5FA1;&#x3059;&#x308B;Ca2 +&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x306E;&#x4E0D;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x306E;&#x4E88;&#x671F;&#x3057;&#x306A;&#x3044;&#x30A8;&#x30DF;&#x30CD;&#x30F3;&#x30B9;&#x3092;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;

Calmodulins (&#xCE74;&#xBA54;&#xB77C;), &#xB80C;&#xB354;&#xB9C1; Ca2 + &#xC5D4;&#xC9C0;&#xB2C8;&#xC5B4;&#xB9C1;-&#xC9C0;&#xBC30; &#xBD84;&#xB9AC; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xB124;&#xAC70;&#xD2F0;&#xBE0C; &#xD558; &#xACE0; &#xC774;&#xC628; &#xCC44;&#xB110; &#xBCC0;&#xC870; Ca2 &#xC5EC;&#xC758; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;&#xC744; &#xBC1D;&#xD600; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774;, &#xD568;&#xC218;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xAD6C;&#xBD84; + / &#xCEA0;. &#xC6D0;&#xC2DC; &#xD3EC;&#xC720;&#xB958; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xCE74;&#xBA54;&#xB77C;&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xC9C0;&#xAE08; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; Ca2 + &#xD53C;&#xB4DC;&#xBC31;&#xC758; &#xC0DD;&#xBB3C;&#xD559; &#xC815;&#xCCB4; &#xD558;&#xB294; &#xC804;&#xB7B5;&#xC73C;&#xB85C; &#xB098;&#xC628;&#xB2E4;. &#xC5EC;&#xAE30;, &#xC6B0;&#xB9AC; &#xAC1C;&#xBC1C; &#xC7AC;&#xC870;&#xD569; adenoviruses &#xBCA0;&#xC5B4;&#xB9C1; &#xC124;&#xACC4; &#xCEA0; &#xC131;&#xC778; &#xC2EC;&#xC7A5; &#xC138;&#xD3EC;, Ca2 + &#xADDC;&#xC81C; &#xC2EC;&#xC7A5; &#xBC15;&#xB3D9;&#xC758; &#xC21C;&#xAC04; &#xC21C;&#xAC04; &#xC81C;&#xC5B4;&#xB97C; &#xC704;&#xD55C; &#xD544;&#xC218;&#xC801;&#xC778; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC758; &#xD45C;&#xD604;&#xC744; &#xCD09;&#xC9C4; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD558;&#xC5EC;. &#xBFD0;&#xB9CC; &#xC544;&#xB2C8;&#xB77C; &#xC0AD;&#xC81C; &#xC870;&#xC791;&#xB41C; &#xCE74;&#xBA54;&#xB77C; Ca2 +-&#xB124;&#xC774;&#xD2F0;&#xBE0C; &#xCE7C;&#xC298; &#xCC44;&#xB110;&#xC758; &#xC885;&#xC18D; &#xBE44;&#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xB178;&#xCD9C; &#xAC19;&#xC740; &#xD53C;&#xB4DC;&#xBC31; &#xC81C;&#xAC70; &#xC608;&#xAE30;&#xCE58; &#xC54A;&#xAC8C; &#xD070; &#xC601;&#xD5A5;:&#xB294; &#xC804;&#xB840; &#xC5C6;&#xB294; (&#xB97C; 4-5) &#xD589;&#xB3D9; &#xC7A0;&#xC7AC;&#xB825;&#xC758; &#xC5F0;&#xC7A5;. &#xC774; &#xB208;&#xC5D0; &#xB744;&#xB294; &#xACB0;&#xACFC; &#xD589;&#xB3D9; &#xC7A0;&#xC7AC;&#xB825; &#xC81C;&#xC5B4;&#xB97C; &#xC704;&#xD55C; &#xAE30;&#xBCF8;&#xC801;&#xC778; &#xD328;&#xB7EC;&#xB2E4;&#xC784; recasts &#xACE0; virally &#xC804;&#xB2EC;&#xB41C; &#xC870;&#xC791;&#xB41C; &#xCEA0;&#xC758; &#xC57D;&#xC18D;&#xC744; &#xCEA0; &#xC2E0;&#xD638; &#xACBD;&#xB85C; &#xB2E4;&#xB978; &#xC218;&#xB9CE;&#xC740; &#xC0DD;&#xBB3C; &#xC870;&#xC0AC;&#xB97C; &#xBCF4;&#xC5EC; &#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Calmodulins &#xACF5;&#xAC1C; &#xC81C;&#xC5B4; &#xB9C8;&#xC74C; &#xC5EC;&#xAE30;&#xC5D0; Ca2 + &#xCC44;&#xB110; &#xBE44;&#xD65C;&#xC131;&#xD654;&#xC758; &#xC608;&#xAE30;&#xCE58; &#xC54A;&#xC740; &#xC608; &#xD558; &#xC124;&#xACC4;.

Calmodulins de ingenier&#xED;a (CAMS), dictada por Ca2 + por mutaciones insensibles, funcionan como dominantes negativos en los sistemas heter&#xF3;logos, y han puesto de manifiesto los mecanismos de modulaci&#xF3;n de canales de iones Ca2 + / CaM. El uso de estas c&#xE1;maras en las c&#xE9;lulas de mam&#xED;feros nativos ahora emerge como una estrategia para desenmascarar a la biolog&#xED;a de Ca2 + como retroalimentaci&#xF3;n. En este sentido, hemos desarrollado los adenovirus recombinantes que llevan C&#xE1;maras de ingenier&#xED;a para facilitar su expresi&#xF3;n en las c&#xE9;lulas del coraz&#xF3;n de adultos, donde la regulaci&#xF3;n de Ca2 + puede ser esencial para el control de momento a momento de los latidos del coraz&#xF3;n. C&#xE1;maras de ingenier&#xED;a no s&#xF3;lo elimina el Ca 2 +-dependiente de la inactivaci&#xF3;n de los canales de calcio nativos, pero expone un efecto inesperadamente grande de la eliminaci&#xF3;n de dichos comentarios: sin precedentes (4 - a 5 veces) La prolongaci&#xF3;n de los potenciales de acci&#xF3;n. Este sorprendente resultado replantea el paradigma b&#xE1;sico de la acci&#xF3;n potencial de control e ilustra la promesa de entrega por virus dise&#xF1;ado CAM para investigar la biolog&#xED;a de muchas otras v&#xED;as de se&#xF1;alizaci&#xF3;n CaM.

Revelar la ingenier&#xED;a Calmodulins Eminencia inesperado de Ca2 + en la inactivaci&#xF3;n del canal Control de Excitaci&#xF3;n del coraz&#xF3;n

&#x4EBA;&#x7C7B;&#x57FA;&#x56E0;&#x7EC4;&#x5E8F;&#x5217;&#x5206;&#x6790;&#x5141;&#x8BB8;&#x514B;&#x9686;&#x7684;&#x4E94;&#x4E2A; Ca(2+) &#x901A;&#x9053; beta(2) &#x63A5;&#x5934;&#x53D8;&#x4F53; &#xFF08;&#x4EC5;&#x5728;&#x5176;&#x8FD1;&#x7AEF;&#x6C28;&#x57FA;&#x603B;&#x7AD9;&#x4E0D;&#x540C;&#x7684; beta(2a)-beta(2e))&#x3002;&#x5728;&#x91CD;&#x7EC4;&#x4E8E;&#x66FC;&#x6D66;&#x6C49;&#x514B; 293 &#x7EC6;&#x80DE;&#x91CD;&#x7EC4;&#x7684; L &#x578B;&#x901A;&#x9053;&#x4E2D;&#x63A2;&#x8BA8;&#x4E86;&#x8FD9;&#x79CD; &beta; 2-&#x4E9A;&#x57FA;&#x591A;&#x6837;&#x6027;&#x7684;&#x529F;&#x80FD;&#x6027;&#x540E;&#x679C;&#x3002;Beta(2a) &#x548C; beta(2e) &#x9488;&#x5BF9;&#x81EA;&#x4E3B;&#x7EC6;&#x80DE;&#x819C;&#xFF0C;&#x800C; beta(2b)-beta(2d) &#x672C;&#x5730;&#x5316;&#x4E3A;&#x65F6;&#x8868;&#x793A;&#x5728;&#x66FC;&#x6D66;&#x6C49;&#x514B; 293 &#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8D28;&#x6DB2;&#x3002;&#x8C03;&#x5236;&#x7684; L &#x578B;&#x901A;&#x9053;&#x7535;&#x538B;&#x4F9D;&#x8D56;&#x6027;&#x5931;&#x6D3B;&#x95E8;&#x63A7;&#x6A21;&#x5F0F;&#x76F8;&#x5173;&#x7684;&#x4E9A;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5B9A;&#x4F4D;&#x7684;&#x7EC4;&#x4EF6; beta(2) &#x53D8;&#x819C;&#x7ED1;&#x5B9A; beta(2a) &#x548C; beta(2e) &#x4E9A;&#x57FA;&#x8D4B;&#x4E88; slow(er) &#x901A;&#x9053;&#x706D;&#x6D3B;&#x52A8;&#x529B;&#x5B66;&#x548C;&#x663E;&#x793A;&#x6E20;&#x9053;&#x4ECE;&#x5931;&#x6D3B;&#x4E0E;&#x5FEB;&#x901F;&#x53CD;&#x5E94;&#x52A8;&#x529B;&#x5B66;&#xFF0C;&#x76F8;&#x6BD4; beta(2b)-beta(2d) &#x6E20;&#x9053;&#x6062;&#x590D;&#x4E00;&#x5C0F;&#x90E8;&#x5206;&#x3002;Beta(2) &#x4E9A;&#x57FA;&#x5BF9;&#x5931;&#x6D3B;&#x95E8;&#x63A7;&#x5360;&#x5176;&#x4E2D; L &#x578B;&#x901A;&#x9053;&#x53EF;&#x9006;&#x5206;&#x5E03;&#x5F0F;&#x4E4B;&#x95F4;&#x7684;&#x5B9A;&#x91CF;&#x6A21;&#x578B;&#x7684;&#x4E0D;&#x540C;&#x5F71;&#x54CD;&#x7684;&#x5FEB;&#x901F;&#x548C;&#x6162;&#x901F;&#x5F62;&#x5F0F;&#x7684;&#x7535;&#x538B;&#x4F9D;&#x8D56;&#x6027;&#x949D;&#x5316;&#x819C;&#x7ED1;&#x5B9A; beta(2) &#x4E9A;&#x57FA;&#x5927;&#x5E45;&#x51CF;&#x5C11;&#x5FEB;&#x901F;&#x706D;&#x6D3B;&#x6E20;&#x9053;&#x7684;&#x7A33;&#x6001;&#x7684;&#x5206;&#x6570;&#x3002;&#x6700;&#x540E;&#xFF0C;beta(2) &#x53D8;&#x79CD;&#x8FD8;&#x4E86; L &#x578B;&#x901A;&#x9053;&#x7A33;&#x5B9A;&#x72B6;&#x6001;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x6D47;&#x6CE8;&#x72EC;&#x7279;&#x5F71;&#x54CD;&#x6240;&#x663E;&#x793A;&#x7684;&#x5C3E;&#x5DF4;&#x6FC0;&#x6D3B; (G-V) &#x66F2;&#x7EBF;&#x548C;&#x8D4B;&#x4E88;&#x4E0D;&#x540C;&#x7A0B;&#x5EA6;&#x7684;&#x60CA;&#x4FBF;&#x5229;&#x901A;&#x9053;&#x7684;&#x6CE2;&#x5F62;&#x4E2D;&#x7684;&#x5DEE;&#x5F02;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x7ED3;&#x679C;&#x9884;&#x6D4B;&#x6240;&#x4EA7;&#x751F;&#x7684;&#x5FAE;&#x5999;&#x7684;&#x53D8;&#x5316;&#xFF0C;&#x5728;&#x526A;&#x63A5; Ca(2+) &#x901A;&#x9053; beta 2-&#x4E9A;&#x57FA;&#x7ED3;&#x6784;&#x7684;&#x91CD;&#x8981;&#x751F;&#x7406;&#x540E;&#x679C;&#xFF0C;&#x5E76;&#x5F3A;&#x8C03;&#x8BE5;&#x5B9E;&#x7528;&#x7A0B;&#x5E8F;&#x7684;&#x62FC;&#x63A5;&#x53D8;&#x5F02;&#x4F53;&#x7ED3;&#x6784;&#x4E0E;&#x529F;&#x80FD;&#x673A;&#x5236;&#x7684;&#x63A2;&#x8BA8;&#x3002;

&#x4E9A;&#x57FA;&#x4EBA;&#x7C7B;&#x8F85;&#x52A9; beta2 &#x4E94;&#x4E2A;&#x72EC;&#x7279;&#x7684;&#x8C03;&#x8282;&#x4F5C;&#x7528;&#x62FC;&#x63A5;&#x4E0A; L-&#x578B;&#x9499;&#x901A;&#x9053;&#x95E8;&#x63A7;&#x53D8;&#x91CF;&#x3002;

Sequence analysis of the human genome permitted cloning of five Ca(2+)-channel beta(2) splice variants (beta(2a)-beta(2e)) that differed only in their proximal amino-termini. The functional consequences of such beta(2)-subunit diversity were explored in recombinant L-type channels reconstituted in HEK 293 cells. Beta(2a) and beta(2e) targeted autonomously to the plasma membrane, whereas beta(2b)-beta(2d) localized to the cytosol when expressed in HEK 293 cells. The pattern of modulation of L-type channel voltage-dependent inactivation gating correlated with the subcellular localization of the component beta(2) variant-membrane-bound beta(2a) and beta(2e) subunits conferred slow(er) channel inactivation kinetics and displayed a smaller fraction of channels recovering from inactivation with fast kinetics, compared to beta(2b)-beta(2d) channels. The varying effects of beta(2) subunits on inactivation gating were accounted for by a quantitative model in which L-type channels reversibly distributed between fast and slow forms of voltage-dependent inactivation-membrane-bound beta(2) subunits substantially decreased the steady-state fraction of fast inactivating channels. Finally, the beta(2) variants also had distinctive effects on L-type channel steady-state activation gating, as revealed by differences in the waveforms of tail-activation (G-V) curves, and conferred differing degrees of prepulse facilitation to the channel. Our results predict important physiological consequences arising from subtle changes in Ca(2+)-channel beta(2)-subunit structure due to alternative splicing and emphasize the utility of splice variants in probing structure-function mechanisms.

Distinctive modulatory effects of five human auxiliary beta2 subunit splice variants on L-type calcium channel gating.

L&#x26;#39;analyse des s&#xE9;quences du clonage du g&#xE9;nome humain permet de cinq Ca (2 +)-canal variantes d&#x26;#39;&#xE9;pissage b&#xEA;ta (2) (version b&#xEA;ta (2a)-b&#xEA;ta (2e)) qui ne diff&#xE8;rent que par leurs proximales amin&#xE9;s terminaux. Les cons&#xE9;quences fonctionnelles de la b&#xEA;ta tels (2) la diversit&#xE9; des sous-unit&#xE9;s ont &#xE9;t&#xE9; explor&#xE9;es dans recombinantes canaux de type L reconstitu&#xE9;s dans des cellules HEK 293. Beta (2a) et b&#xEA;ta (2e) cibl&#xE9;e de mani&#xE8;re autonome &#xE0; la membrane plasmique, tandis que b&#xEA;ta (2b)-b&#xEA;ta (2d) localis&#xE9;e dans le cytosol lorsqu&#x26;#39;il est exprim&#xE9; dans des cellules HEK 293. Le motif de modulation de type L de d&#xE9;clenchement inactivation du canal d&#xE9;pendant de la tension en corr&#xE9;lation avec la localisation subcellulaire de la b&#xEA;ta composant (2) variante-membranaire b&#xEA;ta (2a) et b&#xEA;ta (2e) sous-unit&#xE9;s conf&#xE9;r&#xE9; lente (er) cin&#xE9;tique d&#x26;#39;inactivation de canal et affich&#xE9; une plus petite fraction de canaux se remettent d&#x26;#39;une inactivation avec une cin&#xE9;tique rapide, par rapport &#xE0; la b&#xEA;ta (2b)-beta (2d) canaux. Les diff&#xE9;rents effets des b&#xEA;ta (2) sous-unit&#xE9;s sur d&#xE9;clenchement d&#x26;#39;inactivation ont &#xE9;t&#xE9; comptabilis&#xE9;s par un mod&#xE8;le quantitatif dans lequel canaux de type L r&#xE9;versible distribu&#xE9;s entre les formes lentes et rapides de la tension d&#xE9;pendant de l&#x26;#39;inactivation de la membrane-bound beta (2) sous-unit&#xE9;s de la constante sensiblement diminu&#xE9; fraction &#xE9;tat de rapides canaux d&#x26;#39;inactivation. Enfin, les b&#xEA;ta (2) variantes &#xE9;galement eu des effets distinctifs sur L-Type de d&#xE9;clenchement activation du canal l&#x26;#39;&#xE9;tat d&#x26;#39;&#xE9;quilibre, comme l&#x26;#39;a r&#xE9;v&#xE9;l&#xE9; par des diff&#xE9;rences dans les formes d&#x26;#39;onde de la queue-activation (GV) courbes, et conf&#xE9;r&#xE9; des degr&#xE9;s divers de prepulse facilitation de la cha&#xEE;ne. Nos r&#xE9;sultats pr&#xE9;disent d&#x26;#39;importantes cons&#xE9;quences physiologiques d&#xE9;coulant de changements subtils dans Ca (2 +) des canaux b&#xEA;ta (2) sous-unit&#xE9; de structure dus &#xE0; l&#x26;#39;&#xE9;pissage alternatif et de souligner l&#x26;#39;utilit&#xE9; de variants d&#x26;#39;&#xE9;pissage &#xE0; sonder la structure-fonction des m&#xE9;canismes.

Particularit&#xE9;s des effets modulateurs de cinq Beta2 auxiliaire humaines sous-unit&#xE9; des variants d&#x26;#39;&#xE9;pissage de type L sur Gating canaux calciques

Markante modulierenden Effekte von f&#xFC;nf menschlichen Hilfs-beta2-Untereinheit Splei&#xDF;varianten auf L-Typ Calcium-Kanal-Gating.

Analisi di sequenza del genoma umano permesso la clonazione di cinque canali Ca(2+) beta(2) splice varianti (beta(2a)-beta(2e)) che differivano solo per loro amino-termini prossimale. Le conseguenze funzionali di tali beta (2)-diversit&agrave; di subunit&agrave; sono stati esplorati nei canali di tipo L ricombinante ricostituiti in cellule HEK 293. Beta(2a) e beta(2e) mirati autonomamente alla membrana del plasma, mentre beta(2b)-beta(2d) localizzata nel citosol quando espresso in cellule HEK 293. Lo schema di modulazione di tipo L canale voltaggio-dipendente inattivazione gating correlata con la localizzazione sottocellulare il componente beta(2) variante-membrana-limiti beta(2a) e subunit&agrave; beta(2e) conferito cinetica di inattivazione canali slow(er) e visualizzata una frazione pi&ugrave; piccola del recupero da inattivazione con cinetica veloce, rispetto ai canali beta(2b)-beta(2d) canali. I vari effetti di beta(2) subunit&agrave; sull&#39;inattivazione gating sono state contabilizzate con un modello quantitativo in cui canali di tipo L reversibilmente distribuiti tra veloce e lente forme di subunit&agrave; beta(2) inattivazione-membrana-limiti di voltaggio-dipendenti &egrave; diminuito sostanzialmente la frazione di steady-state di rapida inattivazione canali. Infine, le varianti di beta(2) avevano anche effetti distintivi su L-tipo canale stazionario attivazione gating, come rivelato da differenze di forme d&#39;onda di coda-attivazione (G-V) curve e conferiti gradi differenti di facilitazione prepulse al canale. I nostri risultati prevedono importanti conseguenze fisiologiche derivanti da cambiamenti sottili nella beta Ca(2+)-canale (2)-subunit&agrave; della struttura a causa di splicing alternativo e sottolineare l&#39;utilit&agrave; delle varianti di splicing nel sondaggio meccanismi di struttura-funzione.

Effetti modulatrice distintivi delle cinque subunit&agrave; beta2 ausiliario umana splice varianti sul canale di calcio tipo L gating.

&#x30D2;&#x30C8;&#x30B2;&#x30CE;&#x30E0;&#x306E;&#x914D;&#x5217;&#x89E3;&#x6790;&#x306F;&#x3001;&#x305D;&#x306E;&#x8FD1;&#x4F4D;&#x306E;&#x30A2;&#x30DF;&#x30CE;&#x672B;&#x7AEF;&#x3067;&#x306E;&#x307F;&#x7570;&#x306A;&#x3063;&#x3066;&#x3044;&#x305F;5&#x306E;Ca&#xFF08;2 +&#xFF09;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x3B2;&#xFF08;2&#xFF09;&#x30B9;&#x30D7;&#x30E9;&#x30A4;&#x30B9;&#x30D0;&#x30EA;&#x30A2;&#x30F3;&#x30C8;&#xFF08;&#x30D9;&#x30FC;&#x30BF;&#x7248;&#xFF08;2A&#xFF09;-&#x3B2;&#xFF08;2E&#xFF09;&#xFF09;&#x306E;&#x30AF;&#x30ED;&#x30FC;&#x30CB;&#x30F3;&#x30B0;&#x3092;&#x8A31;&#x53EF;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x6A5F;&#x80FD;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306A;&#x3B2;&#x306E;&#x5F71;&#x97FF;&#xFF08;2&#xFF09;&#x30B5;&#x30D6;&#x30E6;&#x30CB;&#x30C3;&#x30C8;&#x306E;&#x591A;&#x69D8;&#x6027;&#x306F;&#x3001;HEK 293&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x518D;&#x69CB;&#x6210;&#x3057;&#x305F;&#x7D44;&#x63DB;&#x3048;L-&#x578B;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x3067;&#x691C;&#x8A0E;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002; HEK 293&#x7D30;&#x80DE;&#x3067;&#x767A;&#x73FE;&#x3055;&#x305B;&#x305F;&#x3068;&#x304D;&#x306B;&#x30D9;&#x30FC;&#x30BF;&#x7248;&#xFF08;2B&#xFF09;-&#x3B2;&#xFF08;2D&#xFF09;&#x306F;&#x7D30;&#x80DE;&#x8CEA;&#x306B;&#x5C40;&#x5728;&#x3059;&#x308B;&#x306E;&#x306B;&#x5BFE;&#x3057;&#x3001;&#x3B2;&#xFF08;2a&#xFF09;&#x53CA;&#x3073;&#x3B2;&#x306F;&#x3001;&#xFF08;2E&#xFF09;&#x3001;&#x7D30;&#x80DE;&#x819C;&#x306B;&#x81EA;&#x5F8B;&#x7684;&#x306B;&#x5BFE;&#x8C61;&#x3068;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x6210;&#x5206;&#x3B2;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x5185;&#x5C40;&#x5728;&#x3068;&#x76F8;&#x95A2;&#x3057;&#x3001;L&#x578B;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x306E;&#x96FB;&#x4F4D;&#x4F9D;&#x5B58;&#x6027;&#x4E0D;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x30B2;&#x30FC;&#x30C8;&#x306E;&#x5909;&#x8ABF;&#x306E;&#x30D1;&#x30BF;&#x30FC;&#x30F3;&#x306F;&#xFF08;2&#xFF09;&#x5909;&#x7570;&#x4F53;&#x819C;&#x306B;&#x7D50;&#x5408;&#x3057;&#x305F;&#x3B2;&#xFF08;2a&#xFF09;&#x53CA;&#x3073;&#x3B2;&#xFF08;2E&#xFF09;&#x306E;&#x30B5;&#x30D6;&#x30E6;&#x30CB;&#x30C3;&#x30C8;&#x306F;&#x9045;&#x3044;&#xFF08;ER&#xFF09;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x4E0D;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x901F;&#x5EA6;&#x3092;&#x6388;&#x4E0E;&#x3057;&#x3001;&#x30D9;&#x30FC;&#x30BF;&#x7248;&#xFF08;2B&#xFF09;-&#x3B2;&#xFF08;2D&#xFF09;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x306B;&#x6BD4;&#x3079;&#x3066;&#x901F;&#x3044;&#x53CD;&#x5FDC;&#x901F;&#x5EA6;&#x3067;&#x4E0D;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x304B;&#x3089;&#x306E;&#x56DE;&#x5FA9;&#x30C1;&#x30E3;&#x30F3;&#x30CD;&#x30EB;&#x306E;&#x5C0F;&#x3055;&#x3044;&#x5206;&#x6570;&#x3092;&#x8868;&#x793A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x4E0D;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x30B2;&#x30FC;&#x30C8;&#x306E;&#x3B2;&#xFF08;2&#xFF09;&#x30B5;&#x30D6;&#x30E6;&#x30CB;&#x30C3;&#x30C8;&#x306E;&#x69D8;&#x3005;&#x306A;&#x52B9;&#x679C;&#x306F;L-&#x578B;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x304C;&#x53EF;&#x9006;&#x7684;&#x306B;&#x96FB;&#x4F4D;&#x4F9D;&#x5B58;&#x6027;&#x4E0D;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x819C;&#x306B;&#x7D50;&#x5408;&#x3057;&#x305F;&#x3B2;&#x306E;&#x9AD8;&#x901F;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x4F4E;&#x901F;&#x306E;&#x30D5;&#x30A9;&#x30FC;&#x30E0;&#x9593;&#x3067;&#x5206;&#x6563;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x5B9A;&#x91CF;&#x7684;&#x306A;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x8AAC;&#x660E;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#xFF08;2&#xFF09;&#x30B5;&#x30D6;&#x30E6;&#x30CB;&#x30C3;&#x30C8;&#x306F;&#x3001;&#x5B9F;&#x8CEA;&#x7684;&#x306B;&#x5B89;&#x5B9A;&#x3057;&#x305F;&#x6E1B;&#x5C11;&#x3057;&#x305F;&#x901F;&#x3044;&#x4E0D;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x306E;&#x72B6;&#x614B;&#x306E;&#x5272;&#x5408;&#x3002;&#x6700;&#x5F8C;&#x306B;&#x3001;&#x3B2;&#xFF08;2&#xFF09;&#x5909;&#x7570;&#x4F53;&#x306F;&#x307E;&#x305F;&#x3001;&#x30C6;&#x30FC;&#x30EB;&#xB7;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D9;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#xFF08;GV&#xFF09;&#x66F2;&#x7DDA;&#x306E;&#x6CE2;&#x5F62;&#x306E;&#x9055;&#x3044;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x3055;&#x308C;&#x305F;L&#x578B;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x306E;&#x5B9A;&#x5E38;&#x72B6;&#x614B;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x30B2;&#x30FC;&#x3001;&#x4E0A;&#x306B;&#x72EC;&#x7279;&#x306E;&#x52B9;&#x679C;&#x3092;&#x6301;&#x3063;&#x3066;&#x3044;&#x3066;&#x3001;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x3078;&#x306E;&#x5186;&#x6ED1;&#x5316;&#x3092;&#x30D7;&#x30EC;&#x30D1;&#x30EB;&#x30B9;&#x306E;&#x7570;&#x306A;&#x308B;&#x5B66;&#x4F4D;&#x3092;&#x6388;&#x4E0E;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x306F;&#x3001;&#x9078;&#x629E;&#x7684;&#x30B9;&#x30D7;&#x30E9;&#x30A4;&#x30B7;&#x30F3;&#x30B0;&#x306B;&#x8D77;&#x56E0;&#x3059;&#x308B;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x751F;&#x7406;&#x7684;&#x306A;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;&#x306E;&#x5FAE;&#x5999;&#x306A;&#x5909;&#x5316;&#x304B;&#x3089;&#x751F;&#x3058;&#x305F;&#x7D50;&#x679C;&#xFF08;2 +&#xFF09;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x3B2;&#xFF08;2&#xFF09;&#x30B5;&#x30D6;&#x30E6;&#x30CB;&#x30C3;&#x30C8;&#x306E;&#x69CB;&#x9020;&#x3092;&#x4E88;&#x6E2C;&#x3057;&#x3001;&#x69CB;&#x9020;&#x3068;&#x6A5F;&#x80FD;&#x306E;&#x30E1;&#x30AB;&#x30CB;&#x30BA;&#x30E0;&#x3092;&#x63A2;&#x308B;&#x306E;&#x30B9;&#x30D7;&#x30E9;&#x30A4;&#x30B9;&#x5909;&#x7570;&#x4F53;&#x306E;&#x6709;&#x7528;&#x6027;&#x3092;&#x5F37;&#x8ABF;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

L&#x578B;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x30B2;&#x30FC;&#x30C6;&#x30A3;&#x30F3;&#x30B0;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;5&#x4EBA;&#x306E;&#x88DC;&#x52A9;&#x30D9;&#x30FC;&#x30BF;&#x30B5;&#x30D6;&#x30E6;&#x30CB;&#x30C3;&#x30C8;&#x306E;&#x30B9;&#x30D7;&#x30E9;&#x30A4;&#x30B9;&#x5909;&#x7570;&#x4F53;&#x306E;&#x7279;&#x5FB4;&#x7684;&#x306A;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x4F5C;&#x7528;

&#xC778;&#xAC04; &#xAC8C;&#xB188;&#xC758; &#xC2DC;&#xD000;&#xC2A4; &#xBD84;&#xC11D; 5 Ca(2+) &#xCC44;&#xB110; beta(2) &#xC2A4;&#xD50C;&#xB77C;&#xC774;&#xC2A4; &#xBCC0;&#xC885; (beta(2a)-beta(2e)) &#xADF8;&#xB4E4;&#xC758; &#xADFC; &#xC704; &#xC544;&#xBBF8;&#xB178;-&#xD14C;&#xB974;&#xBBF8;&#xB2C8;&#xC5D0;&#xB9CC; &#xB2EC;&#xB790;&#xB2E4; &#xBCF5;&#xC81C; &#xD5C8;&#xC6A9;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xBCA0;&#xD0C0; (2)-&#xC18C; &#xB2E8;&#xC704; &#xB2E4;&#xC591;&#xC131;&#xC758; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC801; &#xACB0;&#xACFC; HEK 293 &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC7AC;&#xAD6C;&#xC131; &#xD558;&#xB294; &#xC7AC;&#xC870;&#xD569; &#xD615; L &#xD615; &#xCC44;&#xB110;&#xC5D0; &#xD0D0;&#xD5D8; &#xD588;&#xB2E4;. Beta(2a) &#xBC0F; beta(2e) beta(2b)-beta(2d) cytosol HEK 293 &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD45C;&#xD604; &#xD558;&#xB294; &#xC9C0;&#xC5ED;&#xD654; &#xB41C; &#xBC18;&#xBA74; &#xD50C;&#xB77C;&#xC988;&#xB9C8; &#xBA64;&#xBE0C;&#xB808;&#xC778;&#xC744; &#xC790;&#xC728;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xB300;&#xC0C1;&#xC73C;&#xB85C; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. L &#xD615; &#xCC44;&#xB110; &#xC804;&#xC555; &#xC885;&#xC18D; &#xBE44;&#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xAC8C;&#xC774;&#xD305;&#xC758; &#xBCC0;&#xC870; &#xD328;&#xD134; &#xAD6C;&#xC131; &#xC694;&#xC18C; beta(2) &#xBCC0;&#xD615; &#xB9C9; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; beta(2a)&#xC758; subcellular &#xC9C0;&#xC5ED;&#xD654;&#xC640; &#xC0C1;&#xAD00; &#xBC0F; beta(2e) &#xD558;&#xC704; &#xB2E8;&#xC704; slow(er) &#xCC44;&#xB110; &#xBE44;&#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xC18D;&#xB3C4; &#xB860;&#xC744; &#xC218; &#xC5EC; &#xD558; &#xACE0; beta(2b)-beta(2d) &#xCC44;&#xB110;&#xC5D0; &#xBE44;&#xD574; &#xBE60;&#xB978; &#xC18D;&#xB3C4;&#xC640; &#xBE44;&#xD65C;&#xC131;&#xD654;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD68C;&#xBCF5; &#xD558;&#xB294; &#xCC44;&#xB110;&#xC758; &#xC791;&#xC740; &#xBD84;&#xC218;&#xB97C; &#xD45C;&#xC2DC;. &#xBE44;&#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xAC8C;&#xC774;&#xD305;&#xC5D0; &#xC18C; &#xB2E8;&#xC704;&#xB294; &#xC5ED; L &#xD615; &#xCC44;&#xB110; &#xC0AC;&#xC774;&#xC758; &#xBD84;&#xC0B0; &#xC591;&#xC801; &#xBAA8;&#xB378;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xCC28;&#xC9C0; &#xD588;&#xB2E4; beta(2)&#xC758; &#xB2E4;&#xC591; &#xD55C; &#xD6A8;&#xACFC; &#xBE60;&#xB978; &#xBC0F; &#xC804;&#xC555; &#xC885;&#xC18D; &#xBE44;&#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xB9C9; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; beta(2) subunits &#xB290;&#xB9B0; &#xD615;&#xD0DC;&#xC758; &#xC2E4;&#xC9C8;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xBE60;&#xB978; inactivating &#xCC44;&#xB110;&#xC758; &#xC548;&#xC815; &#xC0C1;&#xD0DC; &#xC77C;&#xBD80; &#xAC10;&#xC18C;. &#xB9C8;&#xC9C0;&#xB9C9;&#xC73C;&#xB85C;, beta(2) &#xBCC0;&#xC885; &#xAF2C;&#xB9AC; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; (G-V) &#xACE1;&#xC120; &#xBC0F; &#xCC44;&#xB110; prepulse &#xCD09;&#xC9C4;&#xC758; conferred &#xC11C;&#xB85C; &#xB2E4;&#xB978;&#xB3C4;&#xC758; &#xD30C;&#xD615;&#xC5D0; &#xCC28;&#xC774; &#xC758;&#xD574; &#xACF5;&#xAC1C; L &#xD615; &#xCC44;&#xB110; &#xC548;&#xC815; &#xC0C1;&#xD0DC; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xAC8C;&#xC774;&#xD305;&#xC5D0; &#xB3C5;&#xD2B9;&#xD55C; &#xC601;&#xD5A5;&#xC744; &#xB610;&#xD55C; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xACB0;&#xACFC; Ca(2+) &#xCC44;&#xB110; &#xBCA0;&#xD0C0; (2)-&#xC18C; &#xB2E8;&#xC704; &#xAD6C;&#xC870; &#xB300;&#xCCB4; &#xC811;&#xD569; &#xB54C;&#xBB38;&#xC5D0; &#xBBF8;&#xBB18;&#xD55C; &#xBCC0;&#xD654;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBC1C;&#xC0DD; &#xD558;&#xB294; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xC0DD;&#xB9AC; &#xC801; &#xACB0;&#xACFC; &#xC608;&#xCE21; &#xD558; &#xACE0; &#xAD6C;&#xC870; &#xAE30;&#xB2A5; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;&#xC744; &#xD504;&#xB85C; &#xBE59;&#xC5D0; &#xBD99;&#xC5EC; &#xC11C; &#xBCC0;&#xC885; &#xC720;&#xD2F8;&#xB9AC;&#xD2F0;&#xB97C; &#xAC15;&#xC870;.

5 &#xC778;&#xAC04;&#xC758; &#xBCF4;&#xC870; beta2 &#xC18C; &#xB2E8;&#xC704;&#xC758; &#xB3C5;&#xD2B9;&#xD55C; modulatory &#xD6A8;&#xACFC; L &#xD0C0;&#xC785; &#xCE7C;&#xC298; &#xCC44;&#xB110; &#xAC8C;&#xC774;&#xD305;&#xC5D0; &#xBCC0;&#xC885; &#xACB0;&#xD569;.

An&#xE1;lisis de la secuencia del genoma humano permite la clonaci&#xF3;n de cinco a&#xF1;os de Ca (2 +)-canal beta (2) variantes de empalme (beta (2a)-beta (2e)), que difieren s&#xF3;lo en sus pr&#xF3;ximas amino-terminales. Las consecuencias funcionales de la versi&#xF3;n beta como (2)-subunidad fueron explorados en la diversidad recombinantes canales tipo L reconstituido en c&#xE9;lulas HEK 293. Beta (2a) y beta (2e) dirigidos de forma aut&#xF3;noma a la membrana plasm&#xE1;tica, mientras que beta (2b)-beta (2d) localizado en el citosol cuando se expresa en c&#xE9;lulas HEK 293. El patr&#xF3;n de modulaci&#xF3;n de la compuerta de tipo L inactivaci&#xF3;n canal dependiente de voltaje correlacionada con la localizaci&#xF3;n subcelular de la beta componente (2) variante-unida a la membrana beta (2a) y beta (2e) subunidades conferido lento (ER) la cin&#xE9;tica de inactivaci&#xF3;n de los canales y muestra una fracci&#xF3;n m&#xE1;s peque&#xF1;a de los canales que se recuperan de la inactivaci&#xF3;n con una cin&#xE9;tica r&#xE1;pida, en comparaci&#xF3;n con el beta (2b)-beta (2d) canales. Los diversos efectos de los beta (2) subunidades de compuerta de inactivaci&#xF3;n se explica por un modelo cuantitativo en el que los canales de tipo L-reversible distribuido entre las formas r&#xE1;pidas y lentas de tensi&#xF3;n dependiente de la inactivaci&#xF3;n de membrana versi&#xF3;n beta (2) subunidades disminuido sustancialmente la constante Estado-fracci&#xF3;n de los canales r&#xE1;pidos inactivantes. Por &#xFA;ltimo, los beta (2) variantes tambi&#xE9;n han tenido efectos distintivos en compuerta de tipo L de la activaci&#xF3;n del canal de estado estable, seg&#xFA;n lo revelado por las diferencias en las formas de onda de la cola-activaci&#xF3;n (GV) las curvas, y confiere diferentes grados de prepulso facilitaci&#xF3;n para el canal. Nuestros resultados predicen importantes consecuencias fisiol&#xF3;gicas derivadas de los cambios sutiles en la Ca (2 +) del canal beta (2)-subunidad, debido a la estructura de splicing alternativo y hacer hincapi&#xE9; en la utilidad de las variantes de empalme en la exploraci&#xF3;n de estructura-funci&#xF3;n de los mecanismos.

Efectos distintivos modulador de cinco Beta2 auxiliar Humanos subunidad variantes de empalme en la apertura de puerta de tipo L de canales de calcio

N-(Cav2.2) &#x548C; G &#x86CB;&#x767D; P/Q &#x578B; (Cav2.1) &#x9499;&#x901A;&#x9053;&#x7684;&#x6291;&#x5236;&#x4F5C;&#x7528;&#x5BF9;&#x7A81;&#x89E6;&#x524D;&#x6291;&#x5236;&#x4EE5;&#x53CA;&#x4F55;&#x5F71;&#x54CD;&#x7684;&#x9E26;&#x7247;&#x548C;&#x5927;&#x9EBB;&#x7D20;&#xFF0C;&#x6709;&#x91CD;&#x8981;&#x7684;&#x8D21;&#x732E;&#x3002;&#x56E0;&#x6B64;&#xFF0C;&#x9610;&#x53D1; G &#x86CB;&#x767D;&#x6291;&#x5236;&#x7535;&#x538B;&#x95E8;&#x63A7;&#x9499;&#x79BB;&#x5B50;&#x901A;&#x9053;&#x7684;&#x5206;&#x5B50;&#x673A;&#x5236;&#x4E00;&#x76F4;&#x662F;&#x4E3B;&#x8981;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x91CD;&#x70B9;&#x3002;&#x5230;&#x76EE;&#x524D;&#x4E3A;&#x6B62;&#xFF0C;&#x6291;&#x5236;&#x4F5C;&#x7528;&#x88AB;&#x8BA4;&#x4E3A;&#x4E0E;&#x590D;&#x6742;&#x7684; Gbetagamma (Gbetagamma) &#x63D0;&#x51FA;&#x591A;&#x4E2A;&#x7AD9;&#x70B9;&#x7684;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x4EA7;&#x751F;&#x3002;&#x8FDC;&#x5C0F;&#x4E8E;&#x77E5;&#x4E0A; Gbetagamma &#x672C;&#x8EAB;&#x7684;&#x91CD;&#x8981;&#x4E92;&#x52A8;&#x7F51;&#x7AD9;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x5F00;&#x53D1;&#x4E86;&#x65B0;&#x578B;&#x7684;&#x7535;&#x751F;&#x7406;&#x8303;&#x5F0F;&#x3001;&quot;&#x590D;&#x5408;&#x72B6;&#x6001;&#x4E0D;&#x613F;&#x610F;&#x613F;&#x610F;&#x5206;&#x6790;&#xFF0C;&quot;&#x6765;&#x5F62;&#x5BB9; Gbetagamma &#x4E92;&#x52A8;&#x4E0E; N &#x548C; P Q &#x578B;&#x6E20;&#x9053;&#xFF0C;&#x5E76;&#x63D0;&#x4F9B;&#x7075;&#x654F;&#x9AD8;&#x6548;&#x7684;&#x5C4F;&#x5E55;&#x8C03;&#x8282;&#x884C;&#x4E3A;&#x4E2D;&#x7684;&#x66F4;&#x6539;&#x5728;&#x4E00;&#x7CFB;&#x5217;&#x5E7F;&#x6CDB;&#x7684;&#x6F5C;&#x529B;&#x3002;&#x5206;&#x6790;&#x8BC1;&#x5B9E;&#x660E;&#x663E; (un) &#x7ED1;&#x5B9A;&#x52A8;&#x529B;&#x5B66;&#x7814;&#x7A76; Gbetagamma N &#x578B;&#x4E0E; P Q &#x578B;&#x7535;&#x538B;&#x4E24;&#x7AEF;&#x6BD4;&#x6162;&#x7684;&#x4E24;&#x4E2A;&#x65B9;&#x9762;&#xFF0C;&#x5E76;&#x5F3A;&#x8C03;&#x52A8;&#x529B;&#x5B66;&#x5DEE;&#x5F02;&#x8FBE;&#x5341;&#x500D;&#x589E;&#x52A0;&#x5728;&#x4E2D;&#x538B;&#x8303;&#x56F4;&#x5185;&#x3002;&#x82E5;&#x8981;&#x8FDB;&#x4E00;&#x6B65;&#x8C03;&#x67E5;&#x8C03;&#x8282;&#x884C;&#x4E3A;&#x7684;&#x660E;&#x663E;&#x5DEE;&#x5F02;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x7504;&#x522B;&#x7684;&#x5355;&#x70B9;&#x4E19;&#x6C28;&#x9178;&#x7A81;&#x53D8;&#x5728;&#x56DB;&#x4E2A;&#x533A;&#x57DF;&#x5185;&#x7684; Gbeta1&#xFF0C;&#x5728;&#x5DF2;&#x77E5;&#x4E0E; Galpha &#x8FDB;&#x884C;&#x4EA4;&#x4E92;&#x7684;&#x6B8B;&#x7559;&#x5F71;&#x54CD;&#x8FD9;&#x4E24;&#x4E2A;&#x6E20;&#x9053;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x6B8B;&#x7559;&#x7269;&#x4ECE;&#x800C;&#x9884;&#x8BA1;&#x53EF;&#x80FD;&#x4E0E;&#x901A;&#x9053;&#x4EA7;&#x751F;&#x5F71;&#x54CD;&#x7684;&#x624B;&#x6BB5;&#x8FDB;&#x884C;&#x4EA4;&#x4E92;&#x3002;&#x516B;&#x4E2A;&#x7A81;&#x53D8;&#x7814;&#x7A76;&#x3001; &#x516D;&#x53D7;&#x5F71;&#x54CD;&#x7684; G &#x86CB;&#x767D;&#x8C03;&#x5236;&#x7684; N-&#x548C;&#x4E0D;&#x540C;&#x7A0B;&#x5EA6;&#x7684; P Q &#x578B;&#x6E20;&#x9053;&#xFF0C;&#x53E6;&#x4E00;&#x4E2A;&#x5DF2;&#x7ECF;&#x5BF9;&#x4EFB;&#x4E00;&#x901A;&#x9053;&#x6CA1;&#x6709;&#x660E;&#x663E;&#x5F71;&#x54CD;&#x3002;&#x5176;&#x4F59;&#x7684;&#x7A81;&#x53D8;&#x662F;&#x4E86;&#x4E0D;&#x8D77;&#x7684;&#x9009;&#x62E9;&#x6027;&#x8870;&#x51CF;&#x7684;&#x5F71;&#x54CD; P/Q-&#xFF0C;&#x4F46;&#x4E0D;&#x662F; N &#x578B;&#x4FE1;&#x9053;&#x3002;&#x5947;&#x602A;&#x7684;&#x662F;&#xFF0C;&#x8FD9;&#x4E2A;&#x7A81;&#x53D8;&#x800C;&#x4E0D;&#x4F1A;&#x5F71;&#x54CD;&#x5176;&#x6574;&#x4F53;&#x7684;&#x4EB2;&#x548C;&#x529B;&#x4E0B;&#x964D; (un) &#x7ED1;&#x5B9A;&#x7387;&#x3002;&#x540E;&#x8005;&#x7684;&#x7A81;&#x53D8;&#xFF0C;&#x8868;&#x660E; Gbetagamma N &#x548C; P Q &#x578B;&#x901A;&#x9053;&#x7684;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x8868;&#x9762;&#x4E0D;&#x540C;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;&#x5728;&#x5176;&#x4E2D;&#x8FD9;&#x6700;&#x540E;&#x4E00;&#x4E2A;&#x7A81;&#x53D8;&#x5F71;&#x54CD; P Q &#x578B;&#x6E20;&#x9053;&#x7684;&#x65B9;&#x5F0F;&#x5EFA;&#x8BAE;&#x4E00;&#x4E9B;&#x6B8B;&#x7559;&#x7269;&#x53EF;&#x80FD;&#x4F1A;&#x91CD;&#x8981;&#x7684;&quot;&#x8F6C;&#x5411;&quot;&#x6216;&#x6307;&#x5BFC;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x5230;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x7684;&#x53E3;&#x888B;&#x91CC;&#xFF0C;&#x800C;&#x53E6;&#x5916;&#x4E00;&#x4E9B;&#x5219;&#x53EA;&#x662F;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x5230;&#x901A;&#x9053;&#x7684;&#x91CD;&#x8981;&#x3002;

N &#x578B; (CaV2.2) &#x4E0E; P/Q &#x578B; (CaV2.1) &#x9499;&#x901A;&#x9053;&#x4E0E; G &#x86CB;&#x767D; &beta; &#x4E9A;&#x57FA;&#x7684;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x4E2D;&#x7684;&#x81EA;&#x5B9A;&#x4E49;&#x533A;&#x522B;&#x3002;

Inhibition of N- (Cav2.2) and P/Q-type (Cav2.1) calcium channels by G-proteins contribute importantly to presynaptic inhibition as well as to the effects of opiates and cannabinoids. Accordingly, elucidating the molecular mechanisms underlying G-protein inhibition of voltage-gated calcium channels has been a major research focus. So far, inhibition is thought to result from the interaction of multiple proposed sites with the Gbetagamma complex (Gbetagamma). Far less is known about the important interaction sites on Gbetagamma itself. Here, we developed a novel electrophysiological paradigm, "compound-state willing-reluctant analysis," to describe Gbetagamma interaction with N- and P/Q-type channels, and to provide a sensitive and efficient screen for changes in modulatory behavior over a broad range of potentials. The analysis confirmed that the apparent (un)binding kinetics of Gbetagamma with N-type are twofold slower than with P/Q-type at the voltage extremes, and emphasized that the kinetic discrepancy increases up to ten-fold in the mid-voltage range. To further investigate apparent differences in modulatory behavior, we screened both channels for the effects of single point alanine mutations within four regions of Gbeta1, at residues known to interact with Galpha. These residues might thereby be expected to interact with channel effectors. Of eight mutations studied, six affected G-protein modulation of both N- and P/Q-type channels to varying degrees, and one had no appreciable effect on either channel. The remaining mutation was remarkable for selective attenuation of effects on P/Q-, but not N-type channels. Surprisingly, this mutation decreased the (un)binding rates without affecting its overall affinity. The latter mutation suggests that the binding surface on Gbetagamma for N- and P/Q-type channels are different. Also, the manner in which this last mutation affected P/Q-type channels suggests that some residues may be important for "steering" or guiding the protein into the binding pocket, whereas others are important for simply binding to the channel.

Custom distinctions in the interaction of G-protein beta subunits with N-type (CaV2.2) versus P/Q-type (CaV2.1) calcium channels.

L&#x26;#39;inhibition de la N-(CaV2.2) et P / Q-type (Cav2.1) canaux calciques par les prot&#xE9;ines G contribuent de mani&#xE8;re importante &#xE0; l&#x26;#39;inhibition pr&#xE9;synaptique ainsi que les effets des opiac&#xE9;s et des cannabino&#xEF;des. En cons&#xE9;quence, l&#x26;#39;&#xE9;lucidation des m&#xE9;canismes mol&#xE9;culaires sous-jacents &#xE0; la prot&#xE9;ine G inhibition des canaux calciques voltage-d&#xE9;pendants a &#xE9;t&#xE9; un axe de recherche majeur. Jusqu&#x26;#39;&#xE0; pr&#xE9;sent, l&#x26;#39;inhibition est consid&#xE9;r&#xE9;e comme le r&#xE9;sultat de l&#x26;#39;interaction de plusieurs sites propos&#xE9;s avec le complexe Gbetagamma (Gbetagamma). Beaucoup moins est connu sur les sites d&#x26;#39;interaction importants sur Gbetagamma lui-m&#xEA;me. Ici, nous avons d&#xE9;velopp&#xE9; un nouveau paradigme &#xE9;lectrophysiologique &#x26;quot;, compos&#xE9; &#xE0; l&#x26;#39;&#xE9;tat pr&#xEA;t-r&#xE9;ticents analyse,&#x26;quot; pour d&#xE9;crire l&#x26;#39;interaction avec N-Gbetagamma et P / Q-canaux de type, et de fournir un &#xE9;cran sensible et efficace pour les changements de comportement modulateur sur une large gamme de potentiels. L&#x26;#39;analyse a confirm&#xE9; que les apparentes (ONU) la cin&#xE9;tique de liaison de Gbetagamma avec la N-Type est double plus lent qu&#x26;#39;avec P / Q-type &#xE0; des extr&#xEA;mes de tension, et a soulign&#xE9; que l&#x26;#39;&#xE9;cart cin&#xE9;tique augmente jusqu&#x26;#39;&#xE0; dix fois dans la gamme moyenne tension . Afin de mieux &#xE9;tudier les diff&#xE9;rences apparentes dans le comportement modulateur, nous avons projet&#xE9; les deux canaux pour les effets de simples mutations ponctuelles au sein de l&#x26;#39;alanine quatre r&#xE9;gions de Gbeta1, au niveau des r&#xE9;sidus connus pour interagir avec Galpha. Ces r&#xE9;sidus pourraient ainsi &#xEA;tre pr&#xE9;vu pour interagir avec les effecteurs de canaux. Sur les huit mutations &#xE9;tudi&#xE9;es, six touch&#xE9;s &#xE0; la prot&#xE9;ine G de modulation &#xE0; la fois N et P / Q-canaux de type &#xE0; des degr&#xE9;s divers, et un n&#x26;#39;a eu aucun effet appr&#xE9;ciable sur les deux canaux. La mutation restant &#xE9;tait remarquable pour l&#x26;#39;att&#xE9;nuation s&#xE9;lective des effets sur P/Q-, mais pas de type N canaux. &#xC9;tonnamment, cette mutation a diminu&#xE9; les taux de (d&#xE9;) liaison sans affecter son affinit&#xE9; globale. La mutation-ci sugg&#xE8;re que la surface de liaison sur Gbetagamma pour N-et P / Q-canaux de type sont diff&#xE9;rents. En outre, la mani&#xE8;re dont cette derni&#xE8;re mutation affect&#xE9;s P / Q-type de canaux sugg&#xE8;re que certains r&#xE9;sidus peuvent &#xEA;tre importants pour &#xAB;pilotage&#xBB; ou guider la prot&#xE9;ine dans la poche de liaison, tandis que d&#x26;#39;autres sont tout simplement important pour la liaison &#xE0; la cha&#xEE;ne.

Distinctions personnalis&#xE9;s dans l&#x26;#39;interaction des sous-unit&#xE9;s b&#xEA;ta aux prot&#xE9;ines G avec la N-Type (CaV2.2) Versus P / Q-type (Cav2.1) canaux calciques

Individuelle Unterschiede in der Interaktion von G-Protein beta-Untereinheiten mit N-Typ (CaV2.2) versus P / Q-Typ (CaV2.1) Kalziumkan&#xE4;le.

Inibizione di N-(Cav2.2) e canali del calcio di tipo P/Q (Cav2.1) di G-proteine contribuiscono soprattutto a presinaptica inibizione pure per quanto riguarda gli effetti degli oppiacei e cannabinoidi. Di conseguenza, chiarire i meccanismi molecolari sottostanti inibizione G-proteina dei canali del calcio voltaggio-dipendenti &egrave; stato un fuoco di ricerca pi&ugrave; importanti. Finora, l&#39;inibizione &egrave; pensato per derivare dall&#39;interazione di molteplici siti proposti con il complesso Gbetagamma (Gbetagamma). Molto meno &egrave; conosciuto circa i siti di interazione importante su Gbetagamma stesso. Qui, abbiamo sviluppato un romanzo paradigma elettrofisiologico, composto-stato disposto-riluttante analysis,&quot;per descrivere l&#39;interazione Gbetagamma con canali N e tipo P/Q e per fornire uno schermo sensibile ed efficiente per i cambiamenti nel comportamento schematizzato sopra una vasta gamma di potenzialit&agrave;. L&#39;analisi ha confermato che la cinetica di apparente associazione (ONU) di Gbetagamma con N-tipo sono duplici pi&ugrave; lento con tipo P/Q agli estremi di tensione e ha sottolineato che la discrepanza cinetica aumenta fino a dieci volte nella gamma mid-voltage. Per indagare ulteriormente apparenti differenze nel comportamento schematizzato, abbiamo proiettato entrambi i canali per gli effetti della singola alanina mutazioni puntiformi all&#39;interno delle quattro regioni di Gbeta1, a residui conosciuti per interagire con Galpha. Questi residui potrebbero quindi essere previsto per interagire con effettori canale. Di otto mutazioni studiate, sei interessato modulazione G-proteina di N - e canali di tipo P/Q a vari gradi e uno ha avuto alcun effetto apprezzabile su o canale. La mutazione restante era notevole per l&#39;attenuazione selettiva degli effetti su P/Q-, ma non i canali di tipo N. Sorprendentemente, questa mutazione &egrave; diminuito le tariffe vincolanti (ONU) senza alterare la sua affinit&agrave; complessiva. La mutazione di quest&#39;ultima suggerisce che la superficie di associazione su Gbetagamma per canali N e tipo P/Q sono differenti. Inoltre, il modo in cui questa ultima mutazione influenzata canali P/Q-tipo suggerisce che alcuni residui possono essere importanti per &quot;sterzo&quot; o guidare la proteina nella tasca di legame, mentre altri sono importanti per l&#39;associazione semplicemente al canale.

Distinzioni personalizzati nell&#39;interazione di subunit&agrave; beta proteina G con N-tipo (CaV2.2) contro i canali del calcio tipo P/Q (CaV2.1).

G-&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x963B;&#x5BB3;N-&#xFF08;Cav2.2&#xFF09;&#x3068;P / Q&#x578B;&#xFF08;Cav2.1&#xFF09;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x306F;&#x3001;&#x30A2;&#x30D8;&#x30F3;&#x3068;&#x30AB;&#x30F3;&#x30CA;&#x30D3;&#x30CE;&#x30A4;&#x30C9;&#x306E;&#x5F71;&#x97FF;&#x3092;&#x540C;&#x69D8;&#x306B;&#x30B7;&#x30CA;&#x30D7;&#x30B9;&#x524D;&#x6291;&#x5236;&#x306B;&#x91CD;&#x200B;&#x200B;&#x8981;&#x306A;&#x8CA2;&#x732E;&#x3002;&#x3057;&#x305F;&#x304C;&#x3063;&#x3066;&#x3001;&#x96FB;&#x4F4D;&#x4F9D;&#x5B58;&#x6027;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x306E;G&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x3092;&#x963B;&#x5BB3;&#x3059;&#x308B;&#x5206;&#x5B50;&#x30E1;&#x30AB;&#x30CB;&#x30BA;&#x30E0;&#x3092;&#x89E3;&#x660E;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306E;&#x4E3B;&#x8981;&#x306A;&#x7814;&#x7A76;&#x5BFE;&#x8C61;&#x3068;&#x306A;&#x3063;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x307E;&#x3067;&#x306E;&#x3068;&#x3053;&#x308D;&#x3001;&#x963B;&#x5BB3;&#x306F;Gbetagamma&#x8907;&#x5408;&#x4F53;&#xFF08;Gbetagamma&#xFF09;&#x3092;&#x6301;&#x3064;&#x8907;&#x6570;&#x306E;&#x5019;&#x88DC;&#x5730;&#x3068;&#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x306B;&#x8D77;&#x56E0;&#x3059;&#x308B;&#x3068;&#x8003;&#x3048;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x306F;&#x308B;&#x304B;&#x306B;&#x5C11;&#x306A;&#x3044;&#x304C;Gbetagamma&#x81EA;&#x4F53;&#x306B;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x90E8;&#x4F4D;&#x306B;&#x3064;&#x3044;&#x3066;&#x77E5;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x3001;N&#x304A;&#x3088;&#x3073;P / Q&#x578B;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x306B;Gbetagamma&#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x3092;&#x8A18;&#x8FF0;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x65B0;&#x305F;&#x306A;&#x96FB;&#x6C17;&#x751F;&#x7406;&#x5B66;&#x7684;&#x306A;&#x30D1;&#x30E9;&#x30C0;&#x30A4;&#x30E0;&#x3001; &#x26;quot;&#x8907;&#x5408;&#x72B6;&#x614B;&#x559C;&#x3093;-&#x6D88;&#x6975;&#x7684;&#x5206;&#x6790;&#x26;quot;&#x3092;&#x958B;&#x767A;&#x3057;&#x3001;&#x5E83;&#x7BC4;&#x56F2;&#x306B;&#x308F;&#x305F;&#x3063;&#x3066;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x884C;&#x52D5;&#x306E;&#x5909;&#x5316;&#x306B;&#x654F;&#x611F;&#x304B;&#x3064;&#x52B9;&#x7387;&#x7684;&#x306A;&#x753B;&#x9762;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3059;&#x308B;&#x96FB;&#x4F4D;&#x306E;&#x7BC4;&#x56F2;&#x3002;&#x5206;&#x6790;&#x306F;&#x3001;N&#x578B;&#x3068;Gbetagamma&#x306E;&#x898B;&#x304B;&#x3051;&#x306E;&#xFF08;&#x30A2;&#x30F3;&#xFF09;&#x7D50;&#x5408;&#x901F;&#x5EA6;&#x306F;&#x3001;&#x96FB;&#x5727;&#x306E;&#x4E21;&#x6975;&#x7AEF;&#x3067;P / Q&#x578B;&#x306B;&#x6BD4;&#x3079;&#x3066;&#x4E8C;&#x91CD;&#x9045;&#x304F;&#x306A;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x78BA;&#x8A8D;&#x3057;&#x3001;&#x904B;&#x52D5;&#x4E0D;&#x4E00;&#x81F4;&#x304C;&#x534A;&#x3070;&#x96FB;&#x5727;&#x7BC4;&#x56F2;&#x3067;10&#x500D;&#x307E;&#x3067;&#x5897;&#x52A0;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x5F37;&#x8ABF;&#x3002;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x52D5;&#x4F5C;&#x306B;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306A;&#x9055;&#x3044;&#x3092;&#x8ABF;&#x3079;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306F;Galpha&#x3068;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x77E5;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x6B8B;&#x57FA;&#x3067;&#x3001;Gbeta1&#x306E;4&#x3064;&#x306E;&#x5730;&#x57DF;&#x5185;&#x306E;&#x5358;&#x4E00;&#x306E;&#x30DD;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C8;&#x306E;&#x30A2;&#x30E9;&#x30CB;&#x30F3;&#x5909;&#x7570;&#x306E;&#x52B9;&#x679C;&#x306E;&#x4E21;&#x65B9;&#x306E;&#x30C1;&#x30E3;&#x30F3;&#x30CD;&#x30EB;&#x3092;&#x30B9;&#x30AF;&#x30EA;&#x30FC;&#x30CB;&#x30F3;&#x30B0;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x6B8B;&#x57FA;&#x306F;&#x3001;&#x305D;&#x308C;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x306E;&#x30A8;&#x30D5;&#x30A7;&#x30AF;&#x30BF;&#x30FC;&#x3068;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x4E88;&#x60F3;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x304B;&#x3082;&#x3057;&#x308C;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3002; 8&#x5909;&#x7570;&#x306E;&#x3001;&#x7A0B;&#x5EA6;&#x306E;&#x5DEE;N&#x304A;&#x3088;&#x3073;P / Q&#x578B;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x306E;&#x4E21;&#x65B9;&#x306E;&#x5F71;&#x97FF;&#x3092;&#x53D7;&#x3051;&#x305F;6 G-&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x5909;&#x8ABF;&#x3092;&#x5B66;&#x3073;&#x3001;&#x3082;&#x3046;1&#x3064;&#x306F;&#x3001;&#x3044;&#x305A;&#x308C;&#x304B;&#x306E;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x306B;&#x306F;&#x304B;&#x306A;&#x308A;&#x306E;&#x5F71;&#x97FF;&#x3092;&#x4E0E;&#x3048;&#x306A;&#x304B;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x6B8B;&#x308A;&#x306E;&#x7A81;&#x7136;&#x5909;&#x7570;&#x306F;&#x9078;&#x629E;P/Q-&#x3078;&#x306E;&#x5F71;&#x97FF;&#x306E;&#x6E1B;&#x8870;&#x3067;&#x306F;&#x306A;&#x304F;&#x3001;N&#x578B;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x9855;&#x8457;&#x3067;&#x3042;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x9A5A;&#x304F;&#x3079;&#x304D;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x5909;&#x7570;&#x306F;&#x3001;&#x305D;&#x306E;&#x5168;&#x4F53;&#x7684;&#x306A;&#x89AA;&#x548C;&#x6027;&#x306B;&#x5F71;&#x97FF;&#x3092;&#x4E0E;&#x3048;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306A;&#x304F;&#x3001;&#x56FD;&#x969B;&#x9023;&#x5408;&#xFF08;UN&#xFF09;&#x306E;&#x7D50;&#x5408;&#x7387;&#x304C;&#x6E1B;&#x5C11;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x5F8C;&#x8005;&#x306E;&#x5909;&#x7570;&#x306F;&#x3001;N&#x304A;&#x3088;&#x3073;P / Q&#x578B;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x306E;Gbetagamma&#x306B;&#x7D50;&#x5408;&#x8868;&#x9762;&#x304C;&#x7570;&#x306A;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x5506;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x307E;&#x305F;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x6700;&#x5F8C;&#x306E;&#x5909;&#x7570;&#x306F;P / Q&#x578B;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x306B;&#x5F71;&#x97FF;&#x3092;&#x4E0E;&#x3048;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x65B9;&#x6CD5;&#x306F;&#x3001;&#x4ED6;&#x306E;&#x30C1;&#x30E3;&#x30F3;&#x30CD;&#x30EB;&#x306B;&#x7C21;&#x5358;&#x306B;&#x7D50;&#x5408;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x91CD;&#x8981;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x306E;&#x306B;&#x5BFE;&#x3057;&#x3001;&#x3044;&#x304F;&#x3064;&#x304B;&#x306E;&#x6B8B;&#x57FA;&#x306F; &#x26;quot;&#x30B9;&#x30C6;&#x30A2;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;&#x26;quot;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x7D50;&#x5408;&#x30DD;&#x30B1;&#x30C3;&#x30C8;&#x3078;&#x306E;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x3092;&#x5C0E;&#x304F;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x91CD;&#x8981;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x5506;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;

N-&#x30BF;&#x30A4;&#x30D7;&#xFF08;CaV2.2&#xFF09;&#x5BFE;P / Q&#x578B;&#xFF08;CaV2.1&#xFF09;&#x3068;G&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x3B2;&#x30B5;&#x30D6;&#x30E6;&#x30CB;&#x30C3;&#x30C8;&#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x6027;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x306E;&#x30AB;&#x30B9;&#x30BF;&#x30E0;&#x9593;&#x306E;&#x9055;&#x3044;

N-(Cav2.2) &#xBC0F; G-&#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; P/Q &#xD0C0;&#xC785; (Cav2.1) &#xCE7C;&#xC298; &#xCC44;&#xB110;&#xC758; &#xC800;&#xD574; presynaptic &#xC5B5;&#xC81C; &#xBFD0; &#xD6A8;&#xACFC; &#xAD00;&#xD574;&#xC11C;&#xB294; &#xC544;&#xD3B8; &#xBC0F; cannabinoids &#xC911;&#xC694; &#xD558; &#xAC8C; &#xAE30;&#xC5EC;&#xD560;. &#xC774; &#xB530;&#xB77C;, &#xAE30;&#xBCF8; &#xC804;&#xC555; &#xAC1C;&#xD3D0; &#xCE7C;&#xC298; &#xCC44;&#xB110;&#xC758; G-&#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC800;&#xD574; &#xD558;&#xB294; &#xBD84;&#xC790; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998; elucidating &#xC8FC;&#xC694; &#xC5F0;&#xAD6C; &#xCD08;&#xC810; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC9C0;&#xAE08;&#xAE4C;&#xC9C0; &#xC5B5;&#xC81C; &#xBCF5;&#xC7A1; &#xD55C; Gbetagamma (Gbetagamma)&#xC640; &#xC5EC;&#xB7EC; &#xC81C;&#xC548; &#xB41C; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8;&#xC758; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBC1C;&#xC0DD; &#xAC83;&#xC73C;&#xB85C; &#xC0DD;&#xAC01; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC9C0;&#xAE08;&#xAE4C;&#xC9C0; &#xC801;&#xC740; Gbetagamma &#xC790;&#xCCB4;&#xC5D0; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC54C;&#xB824;&#xC838; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC5EC;&#xAE30;, &#xC6B0;&#xB9AC; &#xC18C;&#xC124; electrophysiological &#xD328;&#xB7EC;&#xB2E4;&#xC784;, &quot;&#xAE30;&#xAEBC;&#xC774; &#xAEBC; &#xB824; &#xD654;&#xD569;&#xBB3C; &#xC0C1;&#xD0DC; &#xBD84;&#xC11D;,&quot; &#xAC1C;&#xBC1C; N &#xBC0F; P/Q &#xD0C0;&#xC785; &#xCC44;&#xB110; Gbetagamma &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC744; &#xC124;&#xBA85; &#xD558; &#xACE0; &#xC7A0;&#xC7AC;&#xB825;&#xC758; &#xAD11;&#xBC94;&#xC704; &#xD55C; &#xBC94;&#xC704;&#xC5D0; &#xAC78;&#xCCD0; &#xBCC0;&#xACBD; &#xB41C; modulatory&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC911;&#xC694; &#xD558; &#xACE0; &#xD6A8;&#xC728;&#xC801;&#xC778; &#xD654;&#xBA74;&#xC744; &#xC81C;&#xACF5; &#xD558;. &#xBD84;&#xC11D;&#xACFC; &#xD655;&#xC778; N-&#xD0C0;&#xC785;&#xC73C;&#xB85C; Gbetagamma&#xC758; &#xBA85;&#xBC31;&#xD55C; (&#xC720;&#xC5D4;) &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xC18D;&#xB3C4; &#xB860;&#xC740; &#xB450; &#xAC00;&#xC9C0; &#xC804;&#xC555; &#xADF9;&#xB2E8;&#xC5D0;&#xC11C; P/Q &#xD0C0;&#xC785;&#xC73C;&#xB85C; &#xBCF4;&#xB2E4; &#xB290;&#xB9B0; &#xB7F0; &#xC15C; &#xBC94;&#xC704;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD0A4;&#xB124;&#xD2F1; &#xCC28;&#xC774;&#xAC00; &#xCD5C;&#xB300; 10 &#xBC30; &#xC99D;&#xAC00; &#xAC15;&#xC870; &#xD588;&#xB2E4;. Modulatory &#xB3D9;&#xC791;&#xC5D0; &#xBA85;&#xBC31;&#xD55C; &#xCC28;&#xC774;&#xAC00; &#xB354; &#xC870;&#xC0AC;&#xD560; &#xC6B0;&#xB9AC; &#xB450; &#xCC44;&#xB110; &#xBAA8;&#xB450; &#xB2E8;&#xC77C; &#xC9C0;&#xC810; &#xC54C;&#xB77C;&#xB2CC; 4 &#xAC1C; &#xC9C0;&#xC5ED; &#xB0B4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBCC0;&#xC774; Gbeta1, Galpha&#xC640; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9; &#xD558;&#xB294; &#xAC83;&#xC73C;&#xB85C; &#xC54C;&#xB824;&#xC9C4; &#xC794;&#xB958;&#xBB3C;&#xC5D0;&#xC758; &#xD6A8;&#xACFC; &#xB300; &#xD55C; &#xC0C1;&#xC601;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xC794;&#xB958;&#xBB3C; &#xCC44;&#xB110; &#xC774;&#xD399;&#xD130;&#xC640; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9; &#xD568;&#xC73C;&#xB85C;&#xC368; &#xC608;&#xC815; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xACF5;&#xBD80; &#xD558;&#xB294; 8 &#xAC1C;&#xC758; &#xBCC0;&#xC774;&#xC758; N-&#xBC0F; P/Q &#xD615; &#xCC44;&#xB110;&#xC744; &#xB2E4;&#xC591; &#xD55C; &#xAC01;&#xB3C4;&#xC758; &#xC601;&#xD5A5;&#xC744; &#xBC1B;&#xB294; 6 G-&#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xBCC0;&#xC870; &#xBC0F; &#xD558;&#xB098; &#xC5B4;&#xB290; &#xCC44;&#xB110;&#xC5D0; &#xAC10;&#xC9C0;&#xD560; &#xC218; &#xC5C6;&#xB294; &#xC601;&#xD5A5;&#xC744; &#xBBF8;&#xCCE4;&#xB2E4;. &#xB098;&#xBA38;&#xC9C0; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; P/Q&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xD6A8;&#xACFC;&#xC758; &#xC120;&#xD0DD;&#xC801; &#xAC10;&#xC1E0;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC8FC;&#xBAA9;&#xD560;-, N &#xD615; &#xCC44;&#xB110; &#xC548; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC;. &#xB180;&#xB78D;&#xAC8C;&#xB3C4;,&#xC774; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xC804;&#xBC18;&#xC801;&#xC778; &#xC120;&#xD638;&#xB3C4; &#xC601;&#xD5A5;&#xC744; &#xC8FC;&#xC9C0; &#xC54A;&#xACE0; (&#xC720;&#xC5D4;) &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xC18D;&#xB3C4; &#xAC10;&#xC18C;. &#xD6C4;&#xC790;&#xC758; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; N &#xBC0F; P/Q &#xD0C0;&#xC785; &#xCC44;&#xB110; Gbetagamma&#xC5D0; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xD45C;&#xBA74;&#xC740; &#xB2E4;&#xB978; &#xC81C;&#xC548;. &#xB610;&#xD55C;,&#xC774; &#xB9C8;&#xC9C0;&#xB9C9; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; P/Q &#xD615; &#xCC44;&#xB110;&#xC744; &#xC601;&#xD5A5;&#xC744; &#xBC1B;&#xB294; &#xBC29;&#xC2DD;&#xC73C;&#xB85C; &#xBC18;&#xBA74; &#xB2E4;&#xB978; &#xC0AC;&#xB78C;&#xC740; &#xB2E8;&#xC21C;&#xD788; &#xCC44;&#xB110;&#xC5D0; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xD558;&#xB294; &#xAC83;&#xC774; &#xC911;&#xC694; &#xC77C;&#xBD80; &#xC794;&#xB958;&#xBB3C; &quot;&#xC6B4;&#xC601;&quot; &#xB610;&#xB294; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xC8FC;&#xBA38;&#xB2C8;&#xC5D0; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC744; &#xC548;&#xB0B4;&#xB294; &#xAC83;&#xC774; &#xC911;&#xC694; &#xC788;&#xC744; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xB098;&#xC654;&#xB2E4;.

P/Q &#xD0C0;&#xC785; (CaV2.1) &#xCE7C;&#xC298; &#xCC44;&#xB110; &#xB300; N &#xD0C0;&#xC785; (CaV2.2)&#xC640; G-&#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xBCA0;&#xD0C0; subunits&#xC758; &#xC0C1;&#xD638;&#xC791;&#xC6A9;&#xC5D0; &#xC0AC;&#xC6A9;&#xC790; &#xC9C0;&#xC815; &#xD2B9;&#xC131;.

La inhibici&#xF3;n de N-(Cav2.2) y P / Q-tipo (Cav2.1) canales de calcio por parte de las prote&#xED;nas G contribuyen de manera importante a la inhibici&#xF3;n presin&#xE1;ptica, as&#xED; como a los efectos de los opi&#xE1;ceos y cannabinoides. Por lo tanto, dilucidar los mecanismos moleculares que subyacen a la prote&#xED;na G-inhibici&#xF3;n de los canales de calcio dependientes de voltaje ha sido un foco importante de investigaci&#xF3;n. Hasta ahora, la inhibici&#xF3;n se cree que resulta de la interacci&#xF3;n de m&#xFA;ltiples sitios propuestos con el complejo Gbetagamma (Gbetagamma). Mucho menos se sabe acerca de los sitios de interacci&#xF3;n importantes en Gbetagamma s&#xED; mismo. En este sentido, hemos desarrollado un nuevo paradigma electrofisiol&#xF3;gico, &#x26;quot;compuesto de estado dispuestos-reacios an&#xE1;lisis&#x26;quot;, para describir la interacci&#xF3;n Gbetagamma con N y P / Q tipo de canales, y para proporcionar una pantalla sensible y eficaz para los cambios en el comportamiento modulador sobre una amplia gama de posibilidades. El an&#xE1;lisis confirm&#xF3; que los aparentes (ONU) la cin&#xE9;tica de uni&#xF3;n de Gbetagamma con N-tipo son de dos tipos m&#xE1;s lento que con P / Q-tipo en los extremos de tensi&#xF3;n, e hizo hincapi&#xE9; en que la discrepancia cin&#xE9;tica aumenta hasta diez veces en el rango de media tensi&#xF3;n . Para investigar m&#xE1;s a fondo las aparentes diferencias en el comportamiento del modulador, hemos examinado los dos canales para los efectos de las mutaciones de un solo punto de alanina en cuatro regiones de Gbeta1, en los residuos conocidos para interactuar con Galpha. Estos residuos as&#xED; se podr&#xED;a esperar que interact&#xFA;an con los efectores de canal. De las ocho mutaciones estudiadas, seis afectada la prote&#xED;na G modulaci&#xF3;n de ambos N y P / Q canales de tipo en diversos grados, y uno no tuvo ning&#xFA;n efecto apreciable en cualquiera de los canales. La mutaci&#xF3;n restante fue notable por atenuaci&#xF3;n selectiva de los efectos sobre P/Q-, pero no de tipo N canales. Sorprendentemente, esta mutaci&#xF3;n disminuci&#xF3;n de las tasas de (des) uni&#xF3;n sin afectar a su afinidad en general. La mutaci&#xF3;n anterior sugiere que la superficie de uni&#xF3;n en Gbetagamma para N y P / Q tipo-canales son diferentes. Adem&#xE1;s, la manera en que esta &#xFA;ltima mutaci&#xF3;n afectado P / Q canales de tipo sugiere que algunos residuos puede ser importante para &#x26;quot;direcci&#xF3;n&#x26;quot; o guiar la prote&#xED;na en el bolsillo de uni&#xF3;n, mientras que otros son importantes para la uni&#xF3;n simplemente al canal.

Las distinciones a medida en la interacci&#xF3;n de las subunidades beta prote&#xED;na G con N-tipo (Cav2.2) Versus P / Q-tipo (CaV2.1) canales de calcio

&#x9AD8;&#x7535;&#x538B;&#x6FC0;&#x6D3B; Ca2 + &#x901A;&#x9053;&#x8C03;&#x8282;&#x4ECE;&#x808C;&#x8089;&#x6536;&#x7F29;&#x5230;&#x7A81;&#x89E6;&#x4F20;&#x9012;&#x7684;&#x4E0D;&#x540C;&#x529F;&#x80FD;&#x3002;&#x8F85;&#x52A9;&#x6D4B;&#x8BD5;&#x7248;-&#x548C;&#x4E0D;&#x540C;&#x5B54;&#x9699;&#x5F62;&#x6210; 1 &#x53D7;&#x4F53;&#x53CA;&#x5176;&#x4E9A;&#x57FA;&#x4E4B;&#x95F4;&#x7684;&#x5173;&#x8054;&#x662F;&#x5F3A;&#x5236;&#x6027;&#x7684;&#x5F62;&#x6210;&#x529F;&#x80FD;&#x6027;&#x9AD8;&#x7535;&#x538B;&#x6FC0;&#x6D3B; Ca2 + &#x901A;&#x9053;&#xFF0C;&#x4F46;&#x8FD9;&#x79CD;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x7684;&#x7ED3;&#x6784;&#x56E0;&#x7D20;&#x4ECD;&#x77E5;&#x4E4B;&#x751A;&#x5C11;&#x3002;&#x6700;&#x8FD1;&#xFF0C;&#x540C;&#x6E90;&#x5EFA;&#x6A21;&#x7684; Ca(2+) &#x9891;&#x9053; beta1b-&#x4E9A;&#x5355;&#x4F4D;&#x786E;&#x5B9A; src &#x540C;&#x6E90; 3 (SH3) &#x548C;&#x4E32;&#x8BA9;&#x4EBA;&#x60F3;&#x8D77;&#x811A;&#x624B;&#x67B6;&#x86CB;&#x767D;&#x7684;&#x819C;&#x5173;&#x8054;&#x9E1F;&#x82F7;&#x9178;&#x6FC0;&#x9176; (MAGUK) &#x7C7B;&#x9E1F;&#x82F7;&#x9178;&#x6FC0;&#x9176; (GK) &#x56FE;&#x6848;&#x3002;&#x7136;&#x800C;&#xFF0C;&#x7F3A;&#x4E4F;&#x7C7B;&#x4F3C; MAGUK &#x7684;&#x5C5E;&#x6027;&#x548C; &beta;-&#x4E9A;&#x57FA;&#x53CA;&#x5176;&#x529F;&#x80FD;&#x610F;&#x4E49;&#x7684;&#x76F4;&#x63A5;&#x8BC1;&#x636E;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x5728; beta2a &#x4E2D;&#x663E;&#x793A; SH3 &#x548C; GK &#x57DF;&#x7684;&#x529F;&#x80FD;&#x8981;&#x6C42;&#x3002;&#x5047;&#x5B9A; beta2a SH3 &#x6216; GK &#x57DF;&#x4E2D;&#x7684;&#x70B9;&#x7A81;&#x53D8;&#x4E25;&#x91CD;&#x949D;&#x5316;&#x8C03;&#x5236;&#x91CD;&#x7EC4; L &#x578B;&#x901A;&#x9053;&#xFF0C;&#x663E;&#x793A;&#x8FD9;&#x4E24;&#x4E2A;&#x56FE;&#x6848;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x529F;&#x80FD;-&beta; 1 &#x53D7;&#x4F53;&#x53CA;&#x5176;&#x4EA4;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x7684;&#x91CD;&#x8981;&#x6027;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x529F;&#x80FD;&#x4E0A;&#x6709;&#x7F3A;&#x9677;&#x7684; beta2a SH3 &#x548C; GK &#x7A81;&#x53D8;&#x4F53;&#x5171;&#x8868;&#x8FBE;&#x6551;&#x51FA; WT &#x7535;&#x6D41;&#xFF0C;&#x8868;&#x660E;&#x5728; MAGUKs &#x4E2D;&#x89C2;&#x5BDF;&#x5230;&#x7C7B;&#x4F3C;&#x7684;&#x8DE8;&#x4E92;&#x8865;&#x3002;&#x622A;&#x65AD;&#x7684;&quot;&#x534A; beta2a&quot;&#x4E9A;&#x57FA;&#xFF0C;&#x5305;&#x542B;&#x7684; SH3 &#x6216; GK &#x57DF;&#xFF0C;&#x662F;&#x5BF9;&#x4ED6;&#x4EEC;&#x81EA;&#x5DF1;&#xFF0C;&#x4F46;&#x91CD;&#x7EC4; WT &#x7535;&#x6D41;&#x65F6; coexpressed &#x65E0;&#x6548;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;SH3 &#x548C; GK &#x627E;&#x5230;&#x57DF;&#x8FDB;&#x884C;&#x4EA4;&#x4E92;&#x4F53;&#x5916;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7814;&#x7A76;&#x7ED3;&#x679C;&#x63ED;&#x793A;&#x4E2D; &beta;-&#x4E9A;&#x57FA;&#x81F3;&#x5173;&#x91CD;&#x8981;&#x7684; 1 &#x53D7;&#x4F53;&#x53CA;&#x5176;&#x4E9A;&#x5355;&#x4F4D;&#x8C03;&#x5236;&#x7684;&#x7C7B;&#x4F3C; MAGUK &#x7684;&#x5C5E;&#x6027;&#x3001; &#x4FEE;&#x6539; &#xFF0D; &beta; 1 &#x53D7;&#x4F53;&#x53CA;&#x5176;&#x5173;&#x8054;&#x7684;&#x5F53;&#x524D;&#x6A21;&#x578B;&#x548C;&#x9884;&#x6D4B;&#x65B0;&#x751F;&#x7406;&#x5C42;&#x9762;&#x7684; &beta;-&#x4E9A;&#x57FA;&#x51FD;&#x6570;&#x3002;

&Beta;-&#x4E9A;&#x57FA;&#x7EC6;&#x80DE;&#x819C;&#x76F8;&#x5173;&#x9E1F;&#x82F7;&#x9178;&#x6FC0;&#x9176;&#x6837;&#x5C5E;&#x6027;&#x6240;&#x9700;&#x7684;&#x7535;&#x538B;&#x4F9D;&#x8D56;&#x6027; Ca2 + &#x901A;&#x9053;&#x8C03;&#x5236;&#x3002;

High-voltage-activated Ca2+ channels regulate diverse functions ranging from muscle contraction to synaptic transmission. Association between auxiliary beta- and distinct pore-forming alpha1-subunits is obligatory for forming functional high-voltage-activated Ca2+ channels, yet the structural determinants underlying this interaction remain poorly understood. Recently, homology modeling of Ca(2+)-channel beta1b-subunit identified src homology 3 (SH3) and guanylate kinase (GK) motifs in a tandem arrangement reminiscent of the membrane-associated guanylate kinase (MAGUK) class of scaffolding proteins. However, direct evidence for MAGUK-like properties and their functional implications in beta-subunits is lacking. Here, we show a functional requirement for both SH3 and GK domains in beta2a. Point mutations in either the putative beta2a SH3 or GK domains severely blunted modulation of recombinant L-type channels, showing the importance of both motifs for a functional alpha1-beta interaction. Coexpression of these functionally deficient beta2a-SH3 and GK mutants rescued WT currents, demonstrating trans complementation similar to that observed in MAGUKs. Truncated "hemi-beta2a" subunits, containing either the SH3 or GK domain, were ineffective on their own, but reconstituted WT currents when coexpressed. Moreover, the SH3 and GK domains were found to interact in vitro. These findings reveal MAGUK-like properties in beta-subunits that are critical for alpha1-subunit modulation, revise current models of alpha1-beta association, and predict new physiological dimensions of beta-subunit function.

Membrane-associated guanylate kinase-like properties of beta-subunits required for modulation of voltage-dependent Ca2+ channels.

Haute tension activ&#xE9;s canaux Ca2 + r&#xE9;glementer diverses fonctions allant de la contraction musculaire &#xE0; la transmission synaptique. Association entre les b&#xEA;ta-et auxiliaires distinctes porog&#xE8;nes alpha1-sous-unit&#xE9;s est obligatoire pour former fonctionnels haute tension activ&#xE9;s canaux Ca2 +, mais les d&#xE9;terminants structurels qui sous-tendent cette interaction sont encore mal compris. R&#xE9;cemment, la mod&#xE9;lisation par homologie de Ca (2 +)-canal beta1b sous-unit&#xE9; a identifi&#xE9; homologie src 3 (SH3) et guanylate kinase (GK) des motifs dans un dispositif tandem rappelle le guanylate associ&#xE9;e &#xE0; la membrane kinase (MAGUK) classe de prot&#xE9;ines d&#x26;#39;&#xE9;chafaudage. Toutefois, des preuves directes de MAGUK des propri&#xE9;t&#xE9;s similaires et leurs implications fonctionnelles dans les sous-unit&#xE9;s b&#xEA;ta est absente. Ici, nous montrons une exigence fonctionnelle &#xE0; la fois pour les domaines SH3 et GK dans beta2a. Des mutations ponctuelles dans les deux putatif SH3 beta2a ou GK Domaines de modulation s&#xE9;v&#xE8;rement &#xE9;mouss&#xE9; des recombinants canaux de type L, montrant l&#x26;#39;importance des deux motifs pour une fonctionnelle alpha1-b&#xEA;ta interaction. La coexpression de ces fonctionnellement d&#xE9;ficient beta2a-SH3 et GK mutants sauv&#xE9; courants WT, en &#xE9;vidence une compl&#xE9;mentation trans similaire &#xE0; celle observ&#xE9;e dans MAGUKs. Tronqu&#xE9; &#x26;quot;h&#xE9;mi-beta2a&#x26;quot; sous-unit&#xE9;s, contenant soit le SH3 ou GK domaine, &#xE9;taient inefficaces sur leur propre, mais reconstitu&#xE9; courants WT quand coexprim&#xE9;. En outre, les domaines SH3 et GK ont &#xE9;t&#xE9; trouv&#xE9;s &#xE0; interagir in vitro. Ces r&#xE9;sultats r&#xE9;v&#xE8;lent MAGUK des propri&#xE9;t&#xE9;s similaires dans les sous-unit&#xE9;s b&#xEA;ta qui sont critiques pour l&#x26;#39;alpha1-sous-unit&#xE9; de modulation, de r&#xE9;viser les mod&#xE8;les actuels de l&#x26;#39;alpha1-beta association, et de pr&#xE9;voir de nouvelles dimensions physiologiques de sous-unit&#xE9; b&#xEA;ta de fonction.

Associ&#xE9;e &#xE0; la membrane guanylate kinase-like Propri&#xE9;t&#xE9;s de b&#xEA;ta-sous-unit&#xE9;s requises pour la modulation de la tension d&#xE9;pendant de canaux Ca 2 +

Membran-assoziierten Guanylatkinase-&#xE4;hnlichen Eigenschaften von Beta-Untereinheiten f&#xFC;r die Modulation von spannungsabh&#xE4;ngigen Ca 2 +-Kan&#xE4;le ben&#xF6;tigt.

Alta tensione-attivati canali Ca2 + regolano diverse funzioni che vanno dalla contrazione muscolare alla trasmissione sinaptica. Associazione tra beta - ausiliario e distinte che formano dei pori alpha1-subunit&agrave; &egrave; obbligatorio per la formazione di canali Ca2 + alta-tensione-attivato funzionale, tuttavia i determinanti strutturali sottostanti questa interazione &egrave; ancora scarsamente comprensibili. Recentemente, guanilato chinasi (GK) motivi disposizione in tandem che ricorda della classe associata di membrana guanilato chinasi (MAGUK) delle proteine ponteggi e modellistica di omologia di omologia di src beta1b-subunit&agrave; identificato Ca(2+)-canale 3 (SH3). Tuttavia, manca una prova diretta per MAGUK-come propriet&agrave; e le loro implicazioni funzionali nella subunit&agrave; beta. Qui, vi mostriamo un requisito funzionale per i domini SH3 sia GK in beta2a. Mutazioni puntiformi in entrambi i domini SH3 o GK di beta2a putativo blunted gravemente la modulazione dei canali di tipo L ricombinante, mostrando l&#39;importanza di entrambi motivi per un&#39;interazione funzionale alpha1-beta. Coexpression di questi beta2a-SH3 funzionalmente carente e mutanti GK salvato correnti WT, dimostrando trans complementazione simile a quello osservato in MAGUKs. Subunit&agrave; troncato &quot;hemi-beta2a&quot;, contenente il dominio SH3 o GK, erano inefficaci su loro, ma ricostituite correnti WT quando coespressi. Inoltre, i domini SH3 e GK sono stati trovati ad per interagire in vitro. Questi risultati rivelano MAGUK-come propriet&agrave; nella subunit&agrave; beta che sono critiche per la modulazione alpha1-subunit&agrave;, rivedere i modelli correnti dell&#39;associazione alfa1-beta e prevedono nuove dimensioni fisiologiche della funzione beta-subunit.

Associata di membrana guanilato chinasi-come propriet&agrave; della subunit&agrave; beta necessaria per la modulazione dei canali Ca2 + voltaggio-dipendenti.

&#x9AD8;&#x96FB;&#x5727;&#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;Ca2 +&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x306F;&#x3001;&#x7B4B;&#x8089;&#x306E;&#x53CE;&#x7E2E;&#x304B;&#x3089;&#x30B7;&#x30CA;&#x30D7;&#x30B9;&#x4F1D;&#x9054;&#x306B;&#x81F3;&#x308B;&#x307E;&#x3067;&#x591A;&#x69D8;&#x306A;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3092;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x3059;&#x308B;&#x3002;&#x88DC;&#x52A9;&#x30D9;&#x30FC;&#x30BF;&#x7248;&#x3068;&#x5225;&#x500B;&#x306E;&#x7D30;&#x5B54;&#x3092;&#x5F62;&#x6210;&#x3059;&#x308B;&#x3B1;1-&#x30B5;&#x30D6;&#x30E6;&#x30CB;&#x30C3;&#x30C8;&#x3068;&#x306E;&#x9593;&#x306E;&#x95A2;&#x9023;&#x4ED8;&#x3051;&#x306F;&#x3001;&#x6A5F;&#x80FD;&#x306E;&#x9AD8;&#x96FB;&#x5727;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;Ca2 +&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x3092;&#x5F62;&#x6210;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x7FA9;&#x52D9;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3001;&#x307E;&#x3060;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x306E;&#x57FA;&#x790E;&#x3068;&#x306A;&#x308B;&#x69CB;&#x9020;&#x306E;&#x6C7A;&#x5B9A;&#x8981;&#x56E0;&#x306F;&#x3042;&#x307E;&#x308A;&#x7406;&#x89E3;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x307E;&#x307E;&#x306B;&#x306A;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6700;&#x8FD1;&#x3067;&#x306F;&#x3001;Ca&#x306E;&#x30DB;&#x30E2;&#x30ED;&#x30B8;&#x30FC;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;&#xFF08;2 +&#xFF09;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;beta1b&#x30B5;&#x30D6;&#x30E6;&#x30CB;&#x30C3;&#x30C8;&#x8DB3;&#x5834;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x819C;&#x95A2;&#x9023;&#x30B0;&#x30A2;&#x30CB;&#x30EB;&#x9178;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#xFF08;MAGUK&#xFF09;&#x30AF;&#x30E9;&#x30B9;&#x3092;&#x5F77;&#x5F7F;&#x3068;&#x3055;&#x305B;&#x308B;&#x30BF;&#x30F3;&#x30C7;&#x30E0;&#x914D;&#x7F6E;&#x306E;src&#x30DB;&#x30E2;&#x30ED;&#x30B8;&#x30FC;3&#xFF08;SH3&#xFF09;&#x3068;&#x30B0;&#x30A2;&#x30CB;&#x30EB;&#x9178;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#xFF08;GK&#xFF09;&#x30E2;&#x30C1;&#x30FC;&#x30D5;&#x304C;&#x540C;&#x5B9A;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3002;&#x3057;&#x304B;&#x3057;&#x3001;&#x3B2;-&#x30B5;&#x30D6;&#x30E6;&#x30CB;&#x30C3;&#x30C8;&#x306E;MAGUK&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306A;&#x30D7;&#x30ED;&#x30D1;&#x30C6;&#x30A3;&#x3068;&#x305D;&#x306E;&#x6A5F;&#x80FD;&#x306E;&#x5F71;&#x97FF;&#x306E;&#x76F4;&#x63A5;&#x7684;&#x8A3C;&#x62E0;&#x306F;&#x6B20;&#x3051;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x3001;beta2a&#x306E;SH3&#x3068;GK&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x306E;&#x4E21;&#x65B9;&#x306E;&#x6A5F;&#x80FD;&#x8981;&#x4EF6;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x63A8;&#x5B9A;beta2a SH3&#x307E;&#x305F;&#x306F;GK&#x306E;&#x3069;&#x3061;&#x3089;&#x304B;&#x306E;&#x70B9;&#x5909;&#x7570;&#x306F;&#x3001;&#x6A5F;&#x80FD;&#x7684;&#x306A;&#x3B1;1-&#x3B2;&#x4F5C;&#x7528;&#x306E;&#x4E21;&#x65B9;&#x306E;&#x30E2;&#x30C1;&#x30FC;&#x30D5;&#x306E;&#x91CD;&#x8981;&#x6027;&#x3092;&#x793A;&#x3059;&#x7D44;&#x63DB;&#x3048;L-&#x578B;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x306E;&#x6DF1;&#x523B;&#x306A;&#x920D;&#x5316;&#x5909;&#x8ABF;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x6A5F;&#x80FD;&#x7684;&#x6B20;&#x640D;beta2a-SH3&#x3068;GK&#x5909;&#x7570;&#x4F53;&#x306E;&#x5171;&#x767A;&#x73FE;&#x306F;&#x3001;MAGUKs&#x3067;&#x89B3;&#x5BDF;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3082;&#x306E;&#x3068;&#x540C;&#x69D8;&#x306E;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x76F8;&#x88DC;&#x6027;&#x3092;&#x5B9F;&#x8A3C;&#x3057;&#x3001;WT&#x96FB;&#x6D41;&#x3092;&#x6551;&#x52A9;&#x3057;&#x305F;&#x3002; SH3&#x307E;&#x305F;&#x306F;GK&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x306E;&#x3044;&#x305A;&#x308C;&#x304B;&#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x5207;&#x308A;&#x8A70;&#x3081;&#x3089;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F; &#x26;quot;&#x30D8;&#x30DF;beta2a&#x26;quot;&#x30B5;&#x30D6;&#x30E6;&#x30CB;&#x30C3;&#x30C8;&#x306F;&#x3001;&#x81EA;&#x5206;&#x81EA;&#x8EAB;&#x3067;&#x52B9;&#x679C;&#x304C;&#x3042;&#x3063;&#x305F;&#x304C;&#x3001;&#x5171;&#x767A;&#x73FE;&#x3055;&#x305B;&#x305F;&#x3068;&#x304D;WT&#x96FB;&#x6D41;&#x3092;&#x518D;&#x69CB;&#x6210;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x307E;&#x305F;&#x3001;SH3&#x3068;GK&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x306F;in vitro&#x3067;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x5206;&#x304B;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x77E5;&#x898B;&#x306F;&#x3001;&#x3B1;1-&#x30B5;&#x30D6;&#x30E6;&#x30CB;&#x30C3;&#x30C8;&#x306E;&#x5909;&#x8ABF;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x91CD;&#x8981;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3B2;-&#x30B5;&#x30D6;&#x30E6;&#x30CB;&#x30C3;&#x30C8;&#x306E;MAGUK&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306A;&#x6027;&#x8CEA;&#x3092;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x3057;&#x3001;&#x3B1;1-&#x3B2;&#x30A2;&#x30BD;&#x30B7;&#x30A8;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x306E;&#x73FE;&#x5728;&#x306E;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x3092;&#x4FEE;&#x6B63;&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x3B2;-&#x30B5;&#x30D6;&#x30E6;&#x30CB;&#x30C3;&#x30C8;&#x6A5F;&#x80FD;&#x306E;&#x65B0;&#x305F;&#x306A;&#x751F;&#x7406;&#x7684;&#x306A;&#x5BF8;&#x6CD5;&#x3092;&#x4E88;&#x6E2C;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x96FB;&#x4F4D;&#x4F9D;&#x5B58;&#x6027;Ca2 +&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x306E;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x306B;&#x5FC5;&#x8981;&#x306A;&#x3B2;-&#x30B5;&#x30D6;&#x30E6;&#x30CB;&#x30C3;&#x30C8;&#x306E;&#x819C;&#x95A2;&#x9023;&#x30B0;&#x30A2;&#x30CB;&#x30EB;&#x9178;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306A;&#x30D7;&#x30ED;&#x30D1;&#x30C6;&#x30A3;

&#xB192;&#xC740; &#xC804;&#xC555; &#xD65C;&#xC131; Ca2 + &#xCC44;&#xB110; &#xADFC;&#xC721; &#xC218;&#xCD95;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC2DC; &#xB0C5; &#xC2A4; &#xC804;&#xC1A1;&#xC5D0; &#xC774;&#xB974;&#xAE30;&#xAE4C;&#xC9C0; &#xB2E4;&#xC591; &#xD55C; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC744; &#xC870;&#xC808;. &#xBCF4;&#xC870; &#xBCA0;&#xD0C0;-&#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; &#xACE0;&#xC720; &#xAE30; &#xACF5; &#xD615;&#xC131; alpha1 subunits &#xAC04;&#xC758; &#xC5F0;&#xACB0; &#xAE30;&#xB2A5; &#xB192;&#xC740; &#xC804;&#xC555; &#xD65C;&#xC131; Ca2 + &#xCC44;&#xB110;&#xC744; &#xD615;&#xC131; &#xD558;&#xB294; &#xAC83;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC758;&#xBB34; &#xC544;&#xC9C1; &#xAE30;&#xBCF8;&#xC774; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9; &#xD558;&#xB294; &#xAD6C;&#xC870; &#xACB0;&#xC815; &#xC694;&#xC778; &#xB0A8;&#xC544; &#xC81C;&#xB300;&#xB85C; &#xC774;&#xD574;. &#xCD5C;&#xADFC;, Ca(2+) &#xCC44;&#xB110; beta1b &#xC18C; &#xB2E8;&#xC704; &#xC2DD;&#xBCC4; src homology 3&#xC758; &#xD638;&#xBAB0;&#xB85C;&#xC9C0; &#xBAA8;&#xB378;&#xB9C1; (SH3) &#xBC0F; &#xBE44; &#xACC4; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xB9C9; &#xAD00;&#xB828; guanylate &#xD0A4; &#xB2C8; &#xC544; &#xC81C; (MAGUK) &#xD074;&#xB798;&#xC2A4;&#xC758; &#xC5F0;&#xC0C1; &#xD0E0;&#xB364; &#xBC30;&#xC5F4;&#xC5D0;&#xC11C; guanylate &#xB2C8; (GK) &#xBAA8;&#xD2F0;&#xBE0C;. &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098;, MAGUK&#xC640; &#xAC19;&#xC740; &#xC18D;&#xC131; &#xBC0F; &#xBCA0;&#xD0C0; &#xD558;&#xC704; &#xB2E8;&#xC704;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD574;&#xB2F9; &#xAE30;&#xB2A5; &#xAD6C;&#xD604;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC9C1;&#xC811;&#xC801;&#xC778; &#xC99D;&#xAC70;&#xB294; &#xBD80;&#xC871; &#xD558;&#xB2E4;. &#xC5EC;&#xAE30;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; beta2a&#xC5D0;&#xC11C; SH3 &#xBC0F; GK &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC801; &#xC694;&#xAD6C; &#xC0AC;&#xD56D;&#xC744; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC0C1; beta2a SH3 &#xB610;&#xB294; GK &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778;&#xC5D0; &#xC810; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xC2EC;&#xAC01; &#xAE30;&#xB2A5; alpha1 &#xBCA0;&#xD0C0; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xB450; &#xBAA8;&#xD2F0;&#xBE0C;&#xC758; &#xC911;&#xC694;&#xC131;&#xC744; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC8FC;&#xB294; &#xC7AC;&#xC870;&#xD569; &#xD615; L &#xD615; &#xCC44;&#xB110;&#xC758; &#xBCC0;&#xC870; &#xBB34;&#xB518;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xBD80;&#xC871; &#xD55C; beta2a SH3 &#xBC0F; GK &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; coexpression WT &#xC804;&#xB958;, Maguks&#xC5D0;&#xC11C; &#xBE44;&#xC2B7;&#xD55C; &#xD2B8;&#xB79C;&#xC2A4; &#xBCF4;&#xC644;&#xC131;&#xC744; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC8FC;&#xB294; &#xAD6C;&#xCD9C;. &#xC798;&#xB9B0;&#xB41C; &quot;hemi-beta2a&quot; &#xD558;&#xC704; &#xB2E8;&#xC704;, SH3 &#xB610;&#xB294; GK &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778;&#xC744; &#xD3EC;&#xD568; &#xD558; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC758; &#xC790;&#xC2E0;&#xC758; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xC7AC;&#xAD6C;&#xC131;&#xB41C; WT &#xC804;&#xB958; coexpressed &#xACBD;&#xC6B0;&#xC5D0; &#xD6A8;&#xACFC;&#xAC00; &#xB418;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC558;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB610;&#xD55C;, &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778; SH3 &#xBC0F; GK &#xC0DD;&#xCCB4; &#xC678;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC744; &#xBC1C;&#xACAC; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xC5F0;&#xAD6C; &#xACB0;&#xACFC; alpha1-&#xC18C; &#xB2E8;&#xC704; &#xBCC0;&#xC870;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xBCA0;&#xD0C0; subunits&#xC5D0; MAGUK&#xC640; &#xAC19;&#xC740; &#xC18D;&#xC131;&#xC744; &#xACF5;&#xAC1C; &#xD558; &#xACE0; alpha1 &#xBCA0;&#xD0C0; &#xD611;&#xD68C;&#xC758; &#xD604;&#xC7AC; &#xBAA8;&#xB378;&#xC744; &#xC218;&#xC815; &#xBCA0;&#xD0C0;-&#xC18C; &#xB2E8;&#xC704; &#xD568;&#xC218;&#xC758; &#xC0C8;&#xB85C;&#xC6B4; &#xC0DD;&#xB9AC; &#xC801; &#xD06C;&#xAE30; &#xC608;&#xCE21;.

&#xBA64;&#xBE0C;&#xB808;&#xC778; &#xAD00;&#xB828; guanylate &#xB2C8; &#xAC19;&#xC740; &#xC18D;&#xC131;&#xC758; &#xBCA0;&#xD0C0; &#xD558;&#xC704; &#xB2E8;&#xC704; &#xC804;&#xC555; &#xC885;&#xC18D; Ca2 + &#xCC44;&#xB110;&#xC758; &#xBCC0;&#xC870;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xD544;&#xC694;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

De alto voltaje-activados canales de Ca2 + regulan diversas funciones que van desde la contracci&#xF3;n de los m&#xFA;sculos de la transmisi&#xF3;n sin&#xE1;ptica. Asociaci&#xF3;n entre el auxiliar de beta-y distintos poros de la formaci&#xF3;n subunidades alfa1-es obligatoria para la formaci&#xF3;n de funcionales de alto voltaje-activados canales de Ca2 +, sin embargo, los determinantes estructurales que subyacen en esta interacci&#xF3;n se conoce poco. Recientemente, el modelado de homolog&#xED;a de Ca (2 +)-canal beta1b subunidad identific&#xF3; homolog&#xED;a src 3 (SH3) y guanilato motivos quinasa (GK) en un t&#xE1;ndem, una reminiscencia de la asociada a la membrana guanilato quinasa (MAGUK) clase de prote&#xED;nas de andamiaje. Sin embargo, la evidencia directa de MAGUK propiedades similares y sus implicaciones funcionales en beta-subunidades que falta. A continuaci&#xF3;n, mostramos un requisito funcional para ambos dominios SH3 y GK en beta2a. Las mutaciones puntuales, ya sea en la supuesta SH3 beta2a o GK dominios de modulaci&#xF3;n gravemente debilitados recombinante de tipo L-canales, mostrando la importancia de los motivos para una funcional de alfa 1-beta de la interacci&#xF3;n. Coexpresi&#xF3;n de estos funcionalmente deficiente beta2a-SH3 y mutantes GK rescatado corrientes WT, demostrando complementaci&#xF3;n trans similar a la observada en MAGUKs. Truncadas &#x26;quot;hemi-&#x26;quot; beta2a subunidades, que contengan el dominio SH3 o GK, fueron ineficaces por s&#xED; solos, pero reconstituido corrientes WT cuando coexpressed. Adem&#xE1;s, los dominios SH3 y GK se encontraron para interactuar in vitro. Estos hallazgos revelan MAGUK propiedades similares a las de los beta-subunidades que son cr&#xED;ticos para la modulaci&#xF3;n de la subunidad alfa-1-, revisar los modelos actuales de alfa-1-beta asociaci&#xF3;n, y predecir nuevas dimensiones fisiol&#xF3;gicas de la funci&#xF3;n de la subunidad beta.

Asociadas a la membrana-guanilato quinasa como las propiedades de los beta-subunidades requeridos para la modulaci&#xF3;n de los dependientes de voltaje canales de Ca2 +

N &#x578B; (CaV2.2) &#x7535;&#x538B;&#x4F9D;&#x8D56;&#x6027; G &#x86CB;&#x767D; (Gbetagamma) &#x6291;&#x5236;&#x4F5C;&#x7528;&#x6E20;&#x9053;&#x652F;&#x6301;&#x7A81;&#x89E6;&#x524D;&#x6291;&#x5236;&#x548C;&#x4EE3;&#x8868;&#x4E2D;&#x592E;&#x901A;&#x9053;&#x8C03;&#x5236;&#x7684;&#x8303;&#x4F8B;&#x3002;&#x4ECD;&#x6709;&#x4E89;&#x8BAE;&#x662F;&#x4E3A;&#x8FD9;&#x79CD;&#x8C03;&#x5236;&#x4E3B;&#x4F53; alpha1B &#x901A;&#x9053;&#x4E9A;&#x5355;&#x4F4D;&#x4E0A;&#x7684;&#x62DF;&#x8BAE;&#x51B3;&#x5B9A;&#x56E0;&#x7D20;&#x3002;&#x5176;&#x4E2D;&#x5305;&#x62EC;&#x7B2C;&#x4E00;&#x57DF;&#x95F4;&#x548C;&#x4E8C;&#x73AF;&#x8DEF; (&#x4E8C;&#x671F;)&#x3001; &#x7FA7;&#x57FA;&#x5C3E; (CT) &#x548C;&#x6C28;&#x57FA;&#x603B;&#x7AD9; (NT)&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x63A2;&#x6D4B;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x51B3;&#x5B9A;&#x56E0;&#x7D20;&#x548C;&#x76F8;&#x5173;&#x7684;&#x673A;&#x5236;&#xFF0C;&#x5229;&#x7528;&#x590D;&#x5408;&#x72B6;&#x6001;&#x5206;&#x6790;&#x4E0E;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x4E4B;&#x95F4;&#x901A;&#x9053;&#x6BB5;&#x548C; G &#x86CB;&#x767D;&#x7684;&#x9175;&#x6BCD;&#x53CC;&#x6742;&#x4EA4;&#x548C;&#x54FA;&#x4E73;&#x52A8;&#x7269;&#x7EC6;&#x80DE;&#x97F3;&#x54C1;&#x5316;&#x9A8C;&#x3002;&#x5D4C;&#x5408;&#x6E20;&#x9053;&#x8BC1;&#x5B9E;&#x5177;&#x6709;&#x7279;&#x6B8A;&#x91CD;&#x8981;&#x6027;&#x7684; NT&#x3002; &#x7ED3;&#x5408;&#x8BD5;&#x9A8C;&#x663E;&#x793A;&#x9009;&#x62E9;&#x6027; NT &#x548C;&#x4E8C;&#x5143;&#x7D20;&#x4E4B;&#x95F4;&#x7684;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;Coexpressing &#x4E0E; Gbetagamma NT &#x80BD;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x6784;&#x901A;&#x9053;&#x6291;&#x5236;&#xFF0C;&#x6697;&#x793A;&#x7684; NT &#x57DF;&#x6784;&#x6210; G &#x86CB;&#x767D;&#x5C01;&#x95ED;&#x6291;&#x5236;&#x6A21;&#x5757;&#x3002;&#x8FD9;&#x79CD;&#x6291;&#x5236;&#x4F5C;&#x7528;&#x53EA;&#x9650;&#x4E8E;&#x65B0;&#x754C;&#x5730;&#x533A;&#x4E0E;&#x7B2C;&#x4E00;&#x548C;&#x4E8C;&#xFF0C;&#x4EA4;&#x4E92;&#x548C; G &#x86CB;&#x767D;&#x6291;&#x5236; alpha1B &#x6E20;&#x9053;&#x7F3A;&#x4E4F;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x65B0;&#x754C;&#x5730;&#x533A;&#x5185;&#x88AB;&#x5E9F;&#x9664;&#x3002;&#x56E0;&#x6B64;&#xFF0C;&#x4E00;&#x4E2A; NT &#x6A21;&#x5757;&#xFF0C;&#x901A;&#x8FC7;&#x4EA4;&#x4E92;-&#x4E8C;&#x73AF;&#x8DEF;&#xFF0C;&#x884C;&#x4E8B;&#x4F3C;&#x4E4E;&#x8FD9;&#x79CD;&#x8C03;&#x5236;&#x7684;&#x6839;&#x672C;&#x3002;

G &#x86CB;&#x767D;&#x5C01;&#x95ED;&#x6291;&#x5236;&#x6A21;&#x5757;&#x7684; N &#x578B; &#xFF08;ca(v)2.2) ca2 + &#x901A;&#x9053;&#x3002;

Voltage-dependent G protein (Gbetagamma) inhibition of N-type (CaV2.2) channels supports presynaptic inhibition and represents a central paradigm of channel modulation. Still controversial are the proposed determinants for such modulation, which reside on the principal alpha1B channel subunit. These include the interdomain I-II loop (I-II), the carboxy tail (CT), and the amino terminus (NT). Here, we probed these determinants and related mechanisms, utilizing compound-state analysis with yeast two-hybrid and mammalian cell FRET assays of binding among channel segments and G proteins. Chimeric channels confirmed the unique importance of NT. Binding assays revealed selective interaction between NT and I-II elements. Coexpressing NT peptide with Gbetagamma induced constitutive channel inhibition, suggesting that the NT domain constitutes a G protein-gated inhibitory module. Such inhibition was limited to NT regions interacting with I-II, and G-protein inhibition was abolished within alpha1B channels lacking these NT regions. Thus, an NT module, acting via interactions with the I-II loop, appears fundamental to such modulation.

G protein-gated inhibitory module of N-type (ca(v)2.2) ca2+ channels.

D&#xE9;pendant de la tension prot&#xE9;ine G (Gbetagamma) l&#x26;#39;inhibition de type N (CaV2.2) supporte canaux inhibition pr&#xE9;synaptique et repr&#xE9;sente un paradigme centrale de canal de modulation. Toujours controvers&#xE9;e sont les d&#xE9;terminants propos&#xE9;s pour une telle modulation, qui se trouvent sur la sous-unit&#xE9; alpha1B canal principal. Il s&#x26;#39;agit notamment de l&#x26;#39;interdomaine boucle I-II (I-II), la queue carboxy (CT), et l&#x26;#39;extr&#xE9;mit&#xE9; amino (NT). Ici, nous avons sond&#xE9; ces d&#xE9;terminants et les m&#xE9;canismes connexes, en utilisant compos&#xE9; analyse de l&#x26;#39;&#xE9;tat avec deux hybrides de levure et de cellules de mammif&#xE8;re FRET tests de liaison entre les segments de canaux et les prot&#xE9;ines G. Canaux chim&#xE9;riques a confirm&#xE9; l&#x26;#39;importance unique de NT. Les essais de liaison ont r&#xE9;v&#xE9;l&#xE9; une interaction s&#xE9;lective entre NT et I-II &#xE9;l&#xE9;ments. Coexprimant NT peptide avec Gbetagamma induite par l&#x26;#39;inhibition des canaux constitutive, ce qui sugg&#xE8;re que le domaine NT constitue une prot&#xE9;ine G-module de gated inhibitrice. Cette inhibition a &#xE9;t&#xE9; limit&#xE9;e aux r&#xE9;gions NT interagissant avec I-II, et l&#x26;#39;inhibition de la prot&#xE9;ine G a &#xE9;t&#xE9; aboli dans les canaux alpha1B d&#xE9;pourvues de ces r&#xE9;gions NT. Ainsi, un module de NT, agissant par l&#x26;#39;interm&#xE9;diaire d&#x26;#39;interactions avec la boucle I-II, appara&#xEE;t fondamental de cette modulation.

G Protein-gated Module inhibiteur de type N (Ca (v) 2.2) canaux Ca 2 +

G Protein-gekoppelten inhibitorische Modul vom N-Typ (ca (v) 2.2) Ca2 +-Kan&#xE4;le.

Voltaggio-dipendenti G proteina (Gbetagamma) inibizione di tipo N (CaV2.2) canali supporta inibizione presinaptica e rappresenta un paradigma centrale di modulazione del canale. Ancora controversi sono i determinanti proposti per tale modulazione, che risiedono sulla subunit&agrave; del canale principale alpha1B. Questi includono il loop tra domini I-II (I-II), la coda carbossi (CT) e il terminus amminico (NT). Qui, abbiamo sondato questi determinanti e i meccanismi correlati, utilizzando analisi dello stato composto con dosaggi FRET cella due ibridi e mammiferi lievito di associazione tra segmenti del canale e delle proteine G. Canali chimerici ha confermato l&#39;importanza unica di NT. Associazione dosaggi rivelato selettiva interazione tra elementi NT e II. Coexpressing peptide NT con Gbetagamma indotta da inibizione del canale costitutiva, suggerendo che il dominio NT costituisce un modulo inibitorio gated la proteina G. Tale inibizione &egrave; stata limitata alle regioni NT interagendo con II, e l&#39;inibizione della proteina G &egrave; stata abolita entro canali alpha1B privo di queste regioni di NT. Cos&igrave;, un modulo di NT, agendo attraverso le interazioni con il loop II, appare fondamentale per tale modulazione.

Modulo G-gated la proteina inibitoria di N-tipo (canali ca2 + ca(v)2.2).

N-&#x30BF;&#x30A4;&#x30D7;&#xFF08;CaV2.2&#xFF09;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x306E;&#x96FB;&#x4F4D;&#x4F9D;&#x5B58;&#x6027;G&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#xFF08;Gbetagamma&#xFF09;&#x963B;&#x5BB3;&#x306F;&#x30B7;&#x30CA;&#x30D7;&#x30B9;&#x524D;&#x6291;&#x5236;&#x3092;&#x30B5;&#x30DD;&#x30FC;&#x30C8;&#x3057;&#x3001;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x5909;&#x8ABF;&#x306E;&#x4E2D;&#x5FC3;&#x7684;&#x306A;&#x30D1;&#x30E9;&#x30C0;&#x30A4;&#x30E0;&#x3092;&#x8868;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x4F9D;&#x7136;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x8AD6;&#x4E89;&#x306E;&#x4E3B;&#x8981;&#x306A;alpha1B&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x30B5;&#x30D6;&#x30E6;&#x30CB;&#x30C3;&#x30C8;&#x4E0A;&#x306B;&#x5B58;&#x5728;&#x3059;&#x308B;&#x305D;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306A;&#x5909;&#x8ABF;&#x3001;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x63D0;&#x6848;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x6C7A;&#x5B9A;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306F;&#x3001;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x9593;&#x306E;I-II&#x30EB;&#x30FC;&#x30D7;&#xFF08;I-II&#xFF09;&#x3001;&#x30AB;&#x30EB;&#x30DC;&#x30AD;&#x30B7;&#x5C3E;&#xFF08;CT&#xFF09;&#x3068;&#x3001;&#x30A2;&#x30DF;&#x30CE;&#x672B;&#x7AEF;&#xFF08;NT&#xFF09;&#x304C;&#x542B;&#x307E;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x9175;&#x6BCD;two-hybrid&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x54FA;&#x4E73;&#x52D5;&#x7269;&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x5316;&#x5408;&#x7269;&#x306E;&#x72B6;&#x614B;&#x5206;&#x6790;&#x3092;&#x6D3B;&#x7528;&#x3057;&#x3001;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x6C7A;&#x5B9A;&#x3068;&#x95A2;&#x9023;&#x3059;&#x308B;&#x30E1;&#x30AB;&#x30CB;&#x30BA;&#x30E0;&#x3092;&#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30D6;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x30BB;&#x30B0;&#x30E1;&#x30F3;&#x30C8;&#x3068;G&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x9593;&#x306E;&#x7D50;&#x5408;&#x30A2;&#x30C3;&#x30BB;&#x30A4;&#x3001;FRET&#x3002;&#x30AD;&#x30E1;&#x30E9;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x306F;&#x3001;NT&#x306E;&#x30E6;&#x30CB;&#x30FC;&#x30AF;&#x306A;&#x91CD;&#x8981;&#x6027;&#x3092;&#x78BA;&#x8A8D;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x7D50;&#x5408;&#x30A2;&#x30C3;&#x30BB;&#x30A4;&#x306F;&#x3001;NT&#x304A;&#x3088;&#x3073;I-II&#x8981;&#x7D20;&#x306E;&#x9593;&#x306E;&#x9078;&#x629E;&#x7684;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x3092;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x3057;&#x305F;&#x3002; Gbetagamma&#x8A98;&#x767A;&#x69CB;&#x6210;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x963B;&#x5BB3;&#x3068;&#x5171;&#x767A;&#x73FE;NT&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C9;&#x3001;NT&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x306F;G&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x4F9D;&#x5B58;&#x6027;&#x6291;&#x5236;&#x30E2;&#x30B8;&#x30E5;&#x30FC;&#x30EB;&#x3092;&#x69CB;&#x6210;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x5506;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x305D;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306A;&#x963B;&#x5BB3;&#x306F;&#x3001;I-II&#x3068;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x3059;&#x308B;NT&#x306E;&#x9818;&#x57DF;&#x306B;&#x9650;&#x5B9A;&#x3055;&#x308C;&#x3001;G&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x963B;&#x5BB3;&#x306F;&#x3001;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;NT&#x9818;&#x57DF;&#x3092;&#x6B20;&#x3044;&#x3066;&#x3044;&#x308B;alpha1B&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x5185;&#x3067;&#x5EC3;&#x6B62;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3057;&#x305F;&#x304C;&#x3063;&#x3066;&#x3001;NT&#x306E;&#x30E2;&#x30B8;&#x30E5;&#x30FC;&#x30EB;&#x306F;&#x3001;I-II&#x30EB;&#x30FC;&#x30D7;&#x3068;&#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x3066;&#x4F5C;&#x7528;&#x3059;&#x308B;&#x3001;&#x305D;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306A;&#x5909;&#x8ABF;&#x306E;&#x57FA;&#x790E;&#x3068;&#x8868;&#x793A;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

N&#x578B;&#x306E;G&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x4F9D;&#x5B58;&#x6027;&#x6291;&#x5236;&#x30E2;&#x30B8;&#x30E5;&#x30FC;&#x30EB;&#xFF08;&#x7D04;&#xFF08;V&#xFF09;2.2&#xFF09;&#x306E;Ca2 +&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;

N &#xD615; (CaV2.2)&#xC758; &#xC804;&#xC555; &#xC885;&#xC18D; G &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; (Gbetagamma) &#xC800;&#xD574; &#xC9C0;&#xC6D0; presynaptic &#xC5B5;&#xC81C; &#xCC44;&#xB110;&#xACFC; &#xC911;&#xC559; &#xCC44;&#xB110; &#xBCC0;&#xC870; &#xD328;&#xB7EC;&#xB2E4;&#xC784;&#xC744; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0C5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC5EC;&#xC804;&#xD788; &#xB17C;&#xB780;&#xC740; &#xC8FC; alpha1B &#xCC44;&#xB110; &#xC18C; &#xB2E8;&#xC704;&#xC5D0; &#xADF8;&#xB7EC;&#xD55C; &#xBCC0;&#xC870;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC81C;&#xC548; &#xB41C; &#xACB0;&#xC815; &#xC694;&#xC778;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB09C; &#xC6B0;&#xC120; II &#xB8E8;&#xD504; (I-II), carboxy &#xAF2C;&#xB9AC; (CT) &#xBC0F; &#xC544;&#xBBF8;&#xB178; &#xB9D0;&#xB2E8; (NT) &#xD3EC;&#xD568; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC5EC;&#xAE30;&#xC5D0;, &#xC6B0;&#xB9AC; &#xC870;&#xC0AC; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xACB0;&#xC815; &#xC694;&#xC778; &#xBC0F; &#xAD00;&#xB828;&#xB41C; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;, &#xD6A8; &#xBAA8; 2 &#xC7A1;&#xC885;&#xACFC; &#xD3EC;&#xC720;&#xB958; &#xC138;&#xD3EC; &#xBB34;&#xC11C; &#xC6CC; &#xBD84;&#xC11D; &#xC2E4;&#xD5D8; &#xCC44;&#xB110; &#xC138;&#xADF8;&#xBA3C;&#xD2B8; &#xBC0F; G &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xD568;&#xAED8; &#xD654;&#xD569;&#xBB3C; &#xC0C1;&#xD0DC; &#xBD84;&#xC11D;&#xC744; &#xD65C;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC;. Chimeric &#xCC44;&#xB110; NT. &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xBD84;&#xC11D; &#xC2E4;&#xD5D8;&#xC758; &#xB3C5;&#xD2B9;&#xD55C; &#xC911;&#xC694;&#xC131; &#xBC1D;&#xD600; NT&#xC640; &#xB098; 2 &#xC138; &#xC694;&#xC18C;&#xB294; &#xC120;&#xD0DD;&#xC801; &#xC0C1;&#xD638;&#xC791;&#xC6A9;&#xC744; &#xD655;&#xC778; &#xD588;&#xB2E4;. NT &#xD3A9; &#xD2F0; &#xB4DC; Gbetagamma&#xC640; coexpressing &#xC81C;&#xC815; &#xCC44;&#xB110; &#xC800;&#xD574;, NT &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778; G &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xBB38;&#xC774; &#xAE08;&#xC9C0; &#xBAA8;&#xB4C8; &#xAD6C;&#xC131; &#xC81C;&#xC548; &#xC720;&#xB3C4;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xC5B5;&#xC81C;&#xB294; NT &#xC601;&#xC5ED;-II, &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC744; &#xC81C;&#xD55C; &#xD558; &#xACE0; G-&#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC800;&#xD574; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; NT &#xC601;&#xC5ED; &#xBD80;&#xC871; alpha1B &#xCC44;&#xB110;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD3D0;&#xC9C0; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;. &#xB530;&#xB77C;&#xC11C;, I II &#xB8E8;&#xD504;&#xC640;&#xC758; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC744; &#xD1B5;&#xD574; &#xD589;&#xB3D9; &#xD558;&#xB294; NT &#xBAA8;&#xB4C8; &#xAC19;&#xC740; &#xBCC0;&#xC870; &#xADFC;&#xBCF8;&#xC801;&#xC778; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0A9;&#xB2C8;&#xB2E4;.

G &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xBB38;&#xC774; &#xAE08;&#xC9C0; &#xBAA8;&#xB4C8; N &#xD615; (ca(v)2.2) ca2 + &#xCC44;&#xB110;.

Voltaje-dependiente de la prote&#xED;na G (Gbetagamma) inhibici&#xF3;n de tipo N (Cav2.2) canales soporta inhibici&#xF3;n presin&#xE1;ptica y representa un paradigma central de canal de modulaci&#xF3;n. Sin embargo controversial son los determinantes propuestos para dicha adaptaci&#xF3;n, que residen en la subunidad del canal principal de alpha1B. Estos incluyen el interdominio I-II de bucle (I-II), la cola carboxi (TC), y el extremo amino terminal (NT). En este sentido, probaron estos determinantes y mecanismos relacionados, utilizando el compuesto del estado con el an&#xE1;lisis de dos h&#xED;bridos de levadura y c&#xE9;lulas de mam&#xED;feros FRET ensayos de uni&#xF3;n entre los segmentos de los canales y las prote&#xED;nas G. Canales quim&#xE9;ricos confirm&#xF3; la importancia &#xFA;nica de NT. Los ensayos de uni&#xF3;n revel&#xF3; interacci&#xF3;n selectiva entre el NT y los elementos de I-II. Coexpressing NT p&#xE9;ptido con la inhibici&#xF3;n del canal inducida por Gbetagamma constitutiva, lo que sugiere que el dominio NT constituye una prote&#xED;na G inhibitoria del m&#xF3;dulo cerrado. Dicha inhibici&#xF3;n se limitaba a las regiones NT que interact&#xFA;an con la I-II, y la inhibici&#xF3;n de la prote&#xED;na G fue abolida dentro de los canales alpha1B que carecen de estas regiones NT. As&#xED;, un m&#xF3;dulo de NT, actuando a trav&#xE9;s de interacciones con el bucle I-II, parece fundamental para dicha modulaci&#xF3;n.

Prote&#xED;na G-cerrada del m&#xF3;dulo inhibidor de tipo N (Ca (v) 2.2) canales de Ca2 +

&#x7535;&#x538B;&#x4F9D;&#x8D56;&#x6027;&#x9499;&#x901A;&#x9053; &beta; &#x4E9A;&#x57FA; (Ca(V)beta) &#x5F3A;&#x70C8;&#x8C03;&#x5236;&#x6210;&#x5B54; alpha(1) &#x4E9A;&#x57FA;&#x901A;&#x8FC7;&#x8D29;&#x5356;&#x5230;&#x7EC6;&#x80DE;&#x819C;&#x901A;&#x9053;&#x914D;&#x5408;&#x548C;&#x52A0;&#x5F3A;&#x901A;&#x9053;&#x5F00;&#x653E;&#x6982;&#x7387; (P(o))&#x3002;&#x5C3D;&#x7BA1;&#x5176;&#x6838;&#x5FC3;&#x7684;&#x4F5C;&#x7528;&#xFF0C;&#x4F46;&#x5C1A;&#x4E0D;&#x6E05;&#x695A;&#x662F;&#x5426;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x5355;&#x4E2A; Ca (V) &#x6D4B;&#x8BD5;&#x7248;&#xFF0C;&#x6216;&#x591A;&#x4E2A; Ca (V) beta&#xFF0C;&#x5230; alpha(1) &#x4E9A;&#x5355;&#x4F4D;&#x7BA1;&#x8F96;&#x4E24;&#x4E2A;&#x4E0D;&#x540C;&#x7684;&#x804C;&#x80FD;&#x3002;&#x5229;&#x7528; alpha(1) &#x548C; Ca (V) &beta; &#x4E9A;&#x57FA;&#x7684;&#x5171;&#x8868;&#x8FBE;&#x7684;&#x5E38;&#x89C4;&#x5B9E;&#x9A8C;&#x4E00;&#x76F4;&#x672A;&#x80FD;&#x89E3;&#x6790;&#x591A;&#x4E49;&#x6027;&#x56E0;&#x4E3A;&#x5EFA;&#x7ACB;&#x5176;&#x5316;&#x5B66;&#x8BA1;&#x91CF;&#x5B66;&#x529F;&#x80FD;&#x901A;&#x9053;&#x4E2D;&#x9047;&#x5230;&#x7684;&#x56F0;&#x96BE;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#xFF0C;&#x6BEB;&#x4E0D;&#x542B;&#x7CCA;&#x5730;&#x901A;&#x8FC7;&#x5171;&#x4EF7;&#x952E;&#x94FE;&#x63A5; Ca(V)beta(2b) &#x5230; alpha(1C) (Ca(V)1.2)&#xFF0C;&#x521B;&#x5EFA; alpha(1C).beta(2b) &#x7FA7;&#x57FA;&#x603B;&#x7AD9;&#x5EFA;&#x7ACB; 1&#xFF1A; 1 &#x5316;&#x5B66;&#x8BA1;&#x91CF;&#x5B66;.&#x5728;&#x4E0E; alpha(1C).beta(2b) &#x66FC;&#x6D66;&#x6C49;&#x514B; 293 &#x7EC6;&#x80DE;&#x91CD;&#x7EC4;&#x91CD;&#x7EC4; L &#x578B;&#x901A;&#x9053;&#x652F;&#x6301;&#x5168;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7535;&#x6D41;&#x540C;&#x6837;&#x7A0B;&#x5EA6;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x91CD;&#x7EC4;&#x901A;&#x8FC7;&#x5404;&#x4E2A;&#x4E9A;&#x57FA;&#x7684;&#x5171;&#x8868;&#x8FBE;&#x7684;&#x6E20;&#x9053;&#x3002;&#x6D47;&#x6CE8;&#x7535;&#x8377;&#x5206;&#x6790;&#x8868;&#x660E; alpha(1C).beta(2b) &#x5B8C;&#x5168;&#x6062;&#x590D;&#x5230;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8D28;&#x819C;&#x8D29;&#x8FD0;&#x901A;&#x9053;&#x3002;Co-transfecting Ca(V)beta(2a) &#x4E0E; alpha(1C).beta(2b) &#x51FD;&#x6570;&#x5BF9;&#x4E86;&#x8FDB;&#x4E00;&#x6B65;&#x5F71;&#x54CD;&#x751A;&#x5FAE;&#x3002;&#x82E5;&#x8981;&#x6392;&#x9664; Ca(V)beta(2b) &#x5728;&#x4E0E;&#x90BB;&#x56FD; alpha(1) &#x5206;&#x5B50;&#x8DE8;&#x4EA4;&#x4E92;&#x878D;&#x5408;&#x7684;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#xFF0C;&#x88AB; cotransfected&#xFF0C;alpha(1C).beta(2b) alpha(1B) (Ca(V)2.2)&#xFF0C;&#x5E76;&#x8868;&#x660E;&#x6CA1;&#x6709; alpha(1B) &#x8D29;&#x8FD0;&#x6D3B;&#x52A8;&#x7684;&#x5C3C;&#x83AB;&#x5730;&#x5E73;&#x7684;&#x836F;&#x7406;&#x5757;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7ED3;&#x679C;&#x5EFA;&#x7ACB;&#x5355;&#x4E2A; Ca (V) &#x6D4B;&#x8BD5;&#x7248;&#x4E0E;&#x6210;&#x5B54; alpha(1) &#x4E9A;&#x57FA;&#x534F;&#x4F1A;&#x6355;&#x83B7; HVA &#x9499;&#x901A;&#x9053;&#xFF0C;&#x529F;&#x80FD;&#x6027;&#x7684;&#x672C;&#x8D28;&#xFF0C;&#x5E76;&#x4ECB;&#x7ECD; alpha 1-Ca (V) beta &#x878D;&#x5408;&#x86CB;&#x767D;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x4E00;&#x4E2A;&#x529F;&#x80FD;&#x5F3A;&#x5927;&#x7684;&#x65B0;&#x5DE5;&#x5177;&#xFF0C;&#x7ED3;&#x6784;&#x4E0E;&#x529F;&#x80FD;&#x673A;&#x5236;&#x7684;&#x63A2;&#x8BA8;&#x3002;

&#x5355;&#x4E00;&#x7684; CaVbeta &#x53EF;&#x4EE5;&#x91CD;&#x7EC4;&#x7535;&#x538B;&#x4F9D;&#x8D56;&#x6027;&#x9499;&#x901A;&#x9053;&#x7684;&#x8D29;&#x8FD0;&#x548C;&#x5B8F;&#x89C2;&#x7684;&#x7535;&#x5BFC;&#x3002;

Voltage-dependent calcium-channel beta subunits (Ca(V)beta) strongly modulate pore-forming alpha(1) subunits by trafficking channel complexes to the plasma membrane and enhancing channel open probability (P(o)). Despite their central role, it is unclear whether binding of a single Ca(V)beta, or multiple Ca(V)betas, to an alpha(1) subunit governs the two distinct functions. Conventional experiments utilizing coexpression of alpha(1) and Ca(V)beta subunits have been unable to resolve the ambiguity due to difficulties in establishing their stoichiometry in functional channels. Here, we unambiguously establish a 1: 1 stoichiometry by covalently linking Ca(V)beta(2b) to the carboxyl terminus of alpha(1C) (Ca(V)1.2), creating alpha(1C).beta(2b). Recombinant L-type channels reconstituted in HEK 293 cells with alpha(1C).beta(2b) supported whole-cell currents to the same extent as channels reconstituted via coexpression of the individual subunits. Analysis of gating charge showed alpha(1C).beta(2b) fully restored channel trafficking to the plasma membrane. Co-transfecting Ca(V)beta(2a) with alpha(1C).beta(2b) had little further impact on function. To rule out the possibility that fused Ca(V)beta(2b) was interacting in trans with neighbouring alpha(1) molecules, alpha(1C).beta(2b) was cotransfected with alpha(1B) (Ca(V)2.2), and pharmacological block with nimodipine showed an absence of alpha(1B) trafficking. These results establish that association of a single Ca(V)beta with a pore-forming alpha(1) subunit captures the functional essence of HVA calcium channels, and introduce alpha(1)-Ca(V)beta fusion proteins as a powerful new tool to probe structure-function mechanisms.

A single CaVbeta can reconstitute both trafficking and macroscopic conductance of voltage-dependent calcium channels.

Voltage-d&#xE9;pendants sous-unit&#xE9;s b&#xEA;ta de canaux calciques (Ca (V) beta) moduler fortement porog&#xE8;ne alpha (1) sous-unit&#xE9;s par des complexes de canaux de trafic &#xE0; la membrane plasmique et la probabilit&#xE9; de canal am&#xE9;liorer ouvert (P (o)). En d&#xE9;pit de leur r&#xF4;le central, il est difficile de savoir si la liaison d&#x26;#39;un seul Ca (V) b&#xEA;ta ou plusieurs Ca (V) b&#xEA;tas, &#xE0; un alpha (1) sous-unit&#xE9; r&#xE9;git les deux fonctions distinctes. Exp&#xE9;riences classiques en utilisant la co-expression de l&#x26;#39;alpha (1) et sous-unit&#xE9;s b&#xEA;ta (Ca V) ont &#xE9;t&#xE9; incapables de r&#xE9;soudre l&#x26;#39;ambigu&#xEF;t&#xE9; en raison de difficult&#xE9;s &#xE0; &#xE9;tablir leur stoechiom&#xE9;trie dans les canaux fonctionnels. Ici, on sans ambigu&#xEF;t&#xE9; &#xE9;tablir un rapport 1: 1 stoechiom&#xE9;trie par liaison covalente Ca (V) b&#xEA;ta (2b) &#xE0; l&#x26;#39;extr&#xE9;mit&#xE9; carboxy-terminale de l&#x26;#39;alpha-satellite (1C) (Ca (V) 1,2), la cr&#xE9;ation d&#x26;#39;alpha (1C) b&#xEA;ta (2b).. Recombinants canaux de type L reconstitu&#xE9; dans les cellules HEK 293, alpha (1C). B&#xEA;ta (2b) support&#xE9;s de cellules enti&#xE8;res courants dans la m&#xEA;me mesure que les canaux reconstitu&#xE9;e par l&#x26;#39;interm&#xE9;diaire d&#x26;#39;co-expression des sous-unit&#xE9;s individuelles. Analyse de la charge de d&#xE9;clenchement a montr&#xE9; alpha (1C). Beta (2b) le trafic de canal enti&#xE8;rement restaur&#xE9;e &#xE0; la membrane plasmique. Co-transfection de Ca (V) beta (2a) avec alpha (1C). Beta (2b) eu peu d&#x26;#39;impact encore sur la fonction. Pour &#xE9;carter la possibilit&#xE9; que fusionn&#xE9; Ca (V) beta (2b) a &#xE9;t&#xE9; l&#x26;#39;interaction en trans avec les pays voisins alpha (1) mol&#xE9;cules, l&#x26;#39;alpha (1C). Beta (2b) a &#xE9;t&#xE9; co-transfect&#xE9;es avec alpha (1B) (Ca (V) 2.2) , et le bloc pharmacologique avec la nimodipine a montr&#xE9; une absence d&#x26;#39;alpha (1B) traite des personnes. Les r&#xE9;sultats &#xE9;tablir que l&#x26;#39;association d&#x26;#39;une seule Ca (V) avec un alpha b&#xEA;ta porog&#xE8;ne (1) sous-unit&#xE9; fonctionnelle saisit l&#x26;#39;essence de canaux calciques HVA, et introduire l&#x26;#39;alpha (1)-Ca (V) des prot&#xE9;ines de fusion b&#xEA;ta comme une nouvelle puissance outil pour sonder la structure-fonction des m&#xE9;canismes.

Un simple CaVbeta peut reconstituer la fois le trafic et la conductance macroscopique des canaux calciques voltage-d&#xE9;pendants

Ein einzelner CaVbeta wiederherstellen kann sowohl Menschenhandel und makroskopischen Leitf&#xE4;higkeit von spannungsabh&#xE4;ngigen Calcium-Kan&#xE4;le.

Subunit&agrave; beta di canale del calcio voltaggio-dipendenti (Ca(V)beta) fortemente modulare formando dei pori subunit&agrave; alpha(1) traffico complessi di canale di membrana del plasma e potenziando la probabilit&agrave; aperta canale (P(o)). Nonostante il loro ruolo centrale, non &egrave; chiaro se l&#39;associazione di un singolo beta Ca (V), o pi&ugrave; versioni beta di Ca (V), per una subunit&agrave; alpha(1) governa le due funzioni distinte. Esperimenti convenzionali utilizzando coexpression di alpha(1) e subunit&agrave; beta Ca (V) sono stati in grado di risolvere l&#39;ambiguit&agrave; a causa delle difficolt&agrave; nello stabilire loro stechiometria di canali funzionali. Qui, noi stabilire inequivocabilmente una stechiometria 1:1 da legame covalente che collega Ca(V)beta(2b) al terminus carbossilico di alpha(1C) (Ca(V)1.2), creazione di alpha(1C).beta(2b). Canali di tipo L ricombinante ricostituiti in cellule HEK 293 con alpha(1C).beta(2b) supportato cellule intere correnti nella stessa misura come canali ricostituito via coexpression delle singole subunit&agrave;. Analisi di gating carica ha mostrato alpha(1C).beta(2b) completamente restaurato canale traffico alla membrana del plasma. Co-transfecting Ca(V)beta(2a) con alpha(1C).beta(2b) ebbe poco impatto ulteriore funzione. Per escludere la possibilit&agrave; che fuse che CA(v)beta(2b) &egrave; stata l&#39;interazione in trans con le vicine molecole di alpha(1), alpha(1C).beta(2b) era cotransfected con alpha(1B) (Ca(V)2.2) e blocco farmacologico con nimodipina ha mostrato un&#39;assenza di traffico di alpha(1B). Questi risultati stabiliscono che l&#39;associazione di un singolo beta Ca (V) con una subunit&agrave; alpha(1) formando dei pori cattura l&#39;essenza funzionale dei canali del calcio di HVA e introdurre alfa (1)-proteine di fusione beta Ca (V) come un nuovo e potente strumento per sondare i meccanismi di struttura-funzione.

Un singolo CaVbeta pu&ograve; ricostituire il traffico e macroscopica della conduttanza dei canali del calcio voltaggio-dipendenti.

&#x96FB;&#x4F4D;&#x4F9D;&#x5B58;&#x6027;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x3B2;&#x30B5;&#x30D6;&#x30E6;&#x30CB;&#x30C3;&#x30C8;&#xFF08;&#x306E;Ca&#xFF08;V&#xFF09;&#x3B2;&#xFF09;&#x304C;&#x5F37;&#x304F;&#x3001;&#x539F;&#x5F62;&#x8CEA;&#x819C;&#x3068;&#x3092;&#x5411;&#x4E0A;&#x3055;&#x305B;&#x308B;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x958B;&#x78BA;&#x7387;&#xFF08;P&#xFF08;O&#xFF09;&#xFF09;&#x306B;&#x4EBA;&#x8EAB;&#x58F2;&#x8CB7;&#x306E;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x8907;&#x5408;&#x4F53;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x3001;&#xFF08;1&#xFF09;&#x30B5;&#x30D6;&#x30E6;&#x30CB;&#x30C3;&#x30C8;&#x306E;&#x7D30;&#x5B54;&#x5F62;&#x6210;&#x30A2;&#x30EB;&#x30D5;&#x30A1;&#x3092;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x3059;&#x308B;&#x3002;&#x305D;&#x306E;&#x4E2D;&#x5FC3;&#x7684;&#x306A;&#x5F79;&#x5272;&#x306B;&#x3082;&#x304B;&#x304B;&#x308F;&#x3089;&#x305A;&#x3001;&#x305D;&#x308C;&#x306F;2&#x3064;&#x306E;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3092;&#x652F;&#x914D;&#x3059;&#x308B;&#x30A2;&#x30EB;&#x30D5;&#x30A1;&#xFF08;1&#xFF09;&#x30B5;&#x30D6;&#x30E6;&#x30CB;&#x30C3;&#x30C8;&#x306B;&#x306F;&#x3001;&#x5358;&#x4E00;&#x306E;Ca&#xFF08;V&#xFF09;&#x306E;&#x30D9;&#x30FC;&#x30BF;&#x7248;&#x3001;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x8907;&#x6570;&#x306E;CA&#xFF08;V&#xFF09;&#x30D9;&#x30FC;&#x30BF;&#x7248;&#x306E;&#x7D50;&#x5408;&#x304B;&#x3069;&#x3046;&#x304B;&#x306F;&#x4E0D;&#x660E;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3002;&#x30A2;&#x30EB;&#x30D5;&#x30A1;&#xFF08;1&#xFF09;&#x304A;&#x3088;&#x3073;Ca&#xFF08;V&#xFF09;&#x3B2;&#x30B5;&#x30D6;&#x30E6;&#x30CB;&#x30C3;&#x30C8;&#x306E;&#x5171;&#x767A;&#x73FE;&#x3092;&#x5229;&#x7528;&#x3057;&#x305F;&#x5F93;&#x6765;&#x306E;&#x5B9F;&#x9A13;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x6A5F;&#x80FD;&#x7684;&#x306A;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x3067;&#x305D;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x5316;&#x5B66;&#x91CF;&#x8AD6;&#x3092;&#x78BA;&#x7ACB;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306E;&#x96E3;&#x3057;&#x3055;&#x306B;&#x8D77;&#x56E0;&#x3059;&#x308B;&#x3042;&#x3044;&#x307E;&#x3044;&#x3055;&#x3092;&#x89E3;&#x6C7A;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3067;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x660E;&#x78BA;&#x306B;1&#x3092;&#x78BA;&#x7ACB;&#x3059;&#x308B;&#xFF1A;1&#x5316;&#x5B66;&#x91CF;&#x8AD6;&#x3092;&#x5171;&#x6709;&#x30A2;&#x30EB;&#x30D5;&#x30A1;&#xFF08;1C&#xFF09;&#x3092;&#x4F5C;&#x6210;&#x3057;&#x3001;&#x30A2;&#x30EB;&#x30D5;&#x30A1;&#x306E;&#x30AB;&#x30EB;&#x30DC;&#x30AD;&#x30B7;&#x30EB;&#x672B;&#x7AEF;&#xFF08;1C&#xFF09;&#xFF08;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;&#xFF08;V&#xFF09;1.2&#xFF09;&#x306E;Ca&#xFF08;V&#xFF09;&#x3B2;&#xFF08;2b&#xFF09;&#x3092;&#x30EA;&#x30F3;&#x30AF;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3088;&#x308A;&#x3001;&#x30D9;&#x30FC;&#x30BF;&#x7248;&#x3067;&#x306F;&#xFF08;&#x56F3;2b&#xFF09;&#x3002;&#x7D44;&#x63DB;&#x3048;L-&#x578B;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x306F;&#x3001;&#x30A2;&#x30EB;&#x30D5;&#x30A1;&#xFF08;1C&#xFF09;&#x306E;HEK 293&#x7D30;&#x80DE;&#x3067;&#x518D;&#x69CB;&#x6210;&#x3002;&#x30C1;&#x30E3;&#x30F3;&#x30CD;&#x30EB;&#x306F;&#x500B;&#x3005;&#x306E;&#x30B5;&#x30D6;&#x30E6;&#x30CB;&#x30C3;&#x30C8;&#x306E;&#x5171;&#x767A;&#x73FE;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x3066;&#x518D;&#x69CB;&#x6210;&#x3057;&#x305F;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x30D9;&#x30FC;&#x30BF;&#x7248;&#x306F;&#x3001;&#xFF08;2b&#xFF09;&#x3068;&#x540C;&#x7A0B;&#x5EA6;&#x306B;&#x7D30;&#x80DE;&#x5168;&#x4F53;&#x306E;&#x96FB;&#x6D41;&#x3092;&#x30B5;&#x30DD;&#x30FC;&#x30C8;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x30B2;&#x30FC;&#x30C8;&#x96FB;&#x8377;&#x306E;&#x89E3;&#x6790;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x30A2;&#x30EB;&#x30D5;&#x30A1;&#xFF08;1C&#xFF09;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x7D30;&#x80DE;&#x819C;&#x306B;&#x3B2;&#xFF08;2b&#xFF09;&#x3092;&#x5B8C;&#x5168;&#x306B;&#x5FA9;&#x5143;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x306E;&#x4EBA;&#x8EAB;&#x58F2;&#x8CB7;&#x3002;&#x30A2;&#x30EB;&#x30D5;&#x30A1;&#x3068;&#x306E;&#x5171;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30D5;&#x30A7;&#x30AF;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x306E;Ca&#xFF08;V&#xFF09;&#x3B2;&#xFF08;2A&#xFF09;&#xFF08;1C&#xFF09;&#x3002;&#x3B2;&#xFF08;2b&#xFF09;&#x306F;&#x3001;&#x95A2;&#x6570;&#x306B;&#x3082;&#x3046;&#x5C11;&#x3057;&#x30A4;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x30C8;&#x3092;&#x4E0E;&#x3048;&#x305F;&#x3002; &#xFF08;1&#xFF09;&#x5206;&#x5B50;&#x306F;&#x3001;&#x3B1;&#xFF08;1C&#xFF09;&#x3002;&#x3B2;&#xFF08;2b&#xFF09;&#x3092;&#x3B1;&#xFF08;1B&#xFF09;&#xFF08;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;&#xFF08;V&#xFF09;2.2&#xFF09;&#x3067;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30D5;&#x30A7;&#x30AF;&#x30C8;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x30A2;&#x30EB;&#x30D5;&#x30A1;&#x3092;&#x96A3;&#x56FD;&#x3068;&#x306E;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x3067;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x3057;&#x305F;CA&#xFF08;V&#xFF09;&#x3B2;&#xFF08;2b&#xFF09;&#x3092;&#x878D;&#x5408;&#x3057;&#x305F;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x3092;&#x6392;&#x9664;&#x3059;&#x308B;&#x3068;&#x3001;&#x30CB;&#x30E2;&#x30B8;&#x30D4;&#x30F3;&#x306E;&#x85AC;&#x7406;&#x30D6;&#x30ED;&#x30C3;&#x30AF;&#x306F;&#x30A2;&#x30EB;&#x30D5;&#x30A1;&#xFF08;1B&#xFF09;&#x3001;&#x4EBA;&#x8EAB;&#x58F2;&#x8CB7;&#x306E;&#x4E0D;&#x5728;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x306F;&#x3001;&#x30B5;&#x30D6;&#x30E6;&#x30CB;&#x30C3;&#x30C8;&#x306F;&#x3001;HVA&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;&#x30C1;&#x30E3;&#x30F3;&#x30CD;&#x30EB;&#x306E;&#x6A5F;&#x80FD;&#x306E;&#x672C;&#x8CEA;&#x3092;&#x6349;&#x3048;&#x5B54;&#x5F62;&#x6210;&#x30A2;&#x30EB;&#x30D5;&#x30A1;&#xFF08;1&#xFF09;&#x3067;&#x5358;&#x4E00;&#x306E;CA&#xFF08;V&#xFF09;&#x3B2;&#x306E;&#x3001;&#x305D;&#x306E;&#x30A2;&#x30BD;&#x30B7;&#x30A8;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x3092;&#x78BA;&#x7ACB;&#x3057;&#x3001;&#x65B0;&#x3057;&#x3044;&#x5F37;&#x529B;&#x306A;&#x3088;&#x3046;&#x306B;&#x3B1;&#xFF08;1&#xFF09;-CA&#xFF08;V&#xFF09;&#x3B2;&#x878D;&#x5408;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x3092;&#x5C0E;&#x5165;&#x3059;&#x308B;&#x69CB;&#x9020;&#xB7;&#x6A5F;&#x80FD;&#x306E;&#x30E1;&#x30AB;&#x30CB;&#x30BA;&#x30E0;&#x3092;&#x8ABF;&#x3079;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x30C4;&#x30FC;&#x30EB;&#x3002;

&#x96FB;&#x4F4D;&#x4F9D;&#x5B58;&#x6027;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x306E;&#x30B7;&#x30F3;&#x30B0;&#x30EB;CaVbeta&#x7F36;&#x6EB6;&#x89E3;&#x3057;&#x3066;&#x4EBA;&#x8EAB;&#x58F2;&#x8CB7;&#x3068;&#x30DE;&#x30AF;&#x30ED;&#x306E;&#x4E21;&#x65B9;&#x30B3;&#x30F3;&#x30C0;&#x30AF;&#x30BF;&#x30F3;&#x30B9;

&#xC804;&#xC555; &#xC885;&#xC18D; &#xCE7C;&#xC298; &#xCC44;&#xB110; &#xBCA0;&#xD0C0; &#xD558;&#xC704; &#xB2E8;&#xC704; (Ca(V)beta) &#xAC15;&#xB825; &#xD558; &#xAC8C; &#xBCC0;&#xC870; &#xAE30; &#xACF5; &#xD615;&#xC131; alpha(1) subunits &#xD50C;&#xB77C;&#xC988;&#xB9C8; &#xBA64;&#xBE0C;&#xB808;&#xC778; &#xCC44;&#xB110; &#xB2E8;&#xC9C0; &#xC778;&#xC2E0; &#xB9E4;&#xB9E4; &#xBC0F; &#xCC44;&#xB110; &#xC624;&#xD508; &#xD655;&#xB960; (P(o)) &#xAC15;&#xD654; &#xD558; &#xC5EC;. &#xADF8;&#xB4E4;&#xC758; &#xC911;&#xC2EC; &#xC5ED;&#xD560;&#xC5D0;&#xB3C4; &#xBD88;&#xAD6C; &#xD558; &#xACE0; &#xADF8;&#xAC83;&#xC740; &#xBA85;&#xD655; &#xD558;&#xC9C0; &#xC54A;&#xB2E4; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xB2E8;&#xC77C; Ca (V) &#xBCA0;&#xD0C0; &#xB610;&#xB294; alpha(1) &#xC18C; &#xB2E8;&#xC704;&#xC5D0; &#xC5EC;&#xB7EC; &#xAC1C;&#xC758; Ca (V) &#xBCA0;&#xD0C0;&#xC758; &#xB450; &#xAC00;&#xC9C0; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC744; &#xC81C;&#xC5B4; &#xD558;&#xB294; &#xC5EC;&#xBD80;. Coexpression alpha(1) &#xBC0F; Ca (V) &#xBCA0;&#xD0C0; &#xD558;&#xC704; &#xB2E8;&#xC704;&#xB97C; &#xD65C;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xAE30;&#xC874;&#xC758; &#xC2E4;&#xD5D8; &#xAE30;&#xB2A5; &#xCC44;&#xB110;&#xC5D0; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC758; stoichiometry &#xC124;&#xC815;&#xC5D0; &#xC5B4;&#xB824;&#xC6C0;&#xC73C;&#xB85C; &#xC778;&#xD574; &#xBAA8;&#xD638;&#xC131;&#xC744; &#xD574;&#xACB0;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; &#xC5EC;&#xAE30;&#xC5D0;, &#xBA85;&#xD655; &#xD558; &#xAC8C; &#x70AD; Ca(V)beta(2b) alpha(1C) (Ca(V)1.2), alpha(1C).beta(2b) &#xC791;&#xC131; carboxyl &#xC885;&#xC810;&#xC5D0; &#xC5F0;&#xACB0; &#xD558; &#xC5EC; 1: 1 stoichiometry &#xC124;&#xC815;. Alpha(1c).beta(2b)&#xC640; HEK 293 &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xC7AC;&#xAD6C;&#xC131; &#xC7AC;&#xC870;&#xD569; &#xD615; L &#xD615; &#xCC44;&#xB110; &#xCC44;&#xB110;&#xC744; &#xAC1C;&#xBCC4; subunits&#xC758; coexpression&#xC744; &#xD1B5;&#xD574; &#xC7AC;&#xAD6C;&#xC131; &#xAC19;&#xC740; &#xC815;&#xB3C4;&#xB85C; &#xC804;&#xCCB4; &#xC140; &#xC804;&#xB958; &#xC9C0;&#xC6D0;. &#xCDA9;&#xC804; &#xAC8C;&#xC774;&#xD305;&#xC758; &#xBD84;&#xC11D; alpha(1C).beta(2b) &#xD50C;&#xB77C;&#xC988;&#xB9C8; &#xBA64;&#xBE0C;&#xB808;&#xC778; &#xC778;&#xC2E0; &#xB9E4;&#xB9E4; &#xCC44;&#xB110;&#xC744; &#xC644;&#xBCBD; &#xD558; &#xAC8C; &#xBCF5;&#xC6D0; &#xD588;&#xB2E4;. Alpha(1c).beta(2b)&#xC640; co-transfecting Ca(V)beta(2a) &#xAE30;&#xB2A5;&#xC5D0; &#xC880; &#xB354; &#xC601;&#xD5A5;&#xC744; &#xBBF8;&#xCCE4;&#xB2E4;. Ca(V)beta(2b) alpha(1) &#xBD84;&#xC790;&#xB97C; &#xC774;&#xC6C3;&#xC73C;&#xB85C; &#xD2B8;&#xB79C;&#xC2A4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9; &#xD558;&#xB294; &#xC735;&#xD569; &#xAC00;&#xB2A5;&#xC131;&#xC744; &#xBC30;&#xC81C;, alpha(1c).beta(2b)&#xB294; alpha(1B) (Ca(V)2.2), &#xBC0F; alpha(1B) &#xC778;&#xC2E0; &#xB9E4;&#xB9E4;&#xC758; &#xBD80;&#xC7AC;&#xB97C; &#xBCF4;&#xC5EC; nimodipine &#xC57D;&#xB9AC; &#xBE14;&#xB85D; &#xD568;&#xAED8; cotransfected. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xACB0;&#xACFC; &#xC124;&#xC815; &#xAE30; &#xACF5; &#xD615;&#xC131; alpha(1) &#xC18C; &#xB2E8;&#xC704; &#xB2E8;&#xC77C; Ca (V) &#xBCA0;&#xD0C0; &#xC5F0;&#xAD00; HVA &#xCE7C;&#xC298; &#xCC44;&#xB110;&#xC758; &#xAE30;&#xB2A5; &#xBCF8;&#xC9C8;&#xC744; &#xD3EC;&#xCC29; &#xD558; &#xACE0; &#xC54C;&#xD30C; (1)-Ca (V) &#xBCA0;&#xD0C0; &#xC735;&#xD569; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xAD6C;&#xC870; &#xD568;&#xC218; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;&#xC744; &#xC870;&#xC0AC; &#xAC15;&#xB825;&#xD55C; &#xC0C8; &#xB3C4;&#xAD6C;&#xB97C; &#xC18C;&#xAC1C; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xB2E8;&#xC77C; CaVbeta &#xC804;&#xC555; &#xC885;&#xC18D; &#xCE7C;&#xC298; &#xCC44;&#xB110;&#xC758; &#xC778;&#xC2E0; &#xB9E4;&#xB9E4;&#xC640; &#xAC70;&#xC2DC;&#xC801;&#xC778; &#xC804;&#xB3C4;&#xB3C4; &#xC7AC;&#xAD6C;&#xC131;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Dependientes de voltaje del canal del calcio subunidades beta (Ca (V) beta) fuertemente modular la formaci&#xF3;n de poros alfa (1) subunidades de complejos de canal de tr&#xE1;fico a la membrana plasm&#xE1;tica y la probabilidad de canal abierto mejora (P (O)). A pesar de su papel central, no est&#xE1; claro si la uni&#xF3;n de una sola CA (V), beta, o varias versiones beta de Ca (V), con un alfa (1) subunidad regula las dos funciones distintas. Experimentos convencionales que utilizan co-expresi&#xF3;n de alfa (1) y CA (V) subunidades beta han sido incapaces de resolver la ambig&#xFC;edad, debido a las dificultades para establecer su estequiometr&#xED;a en los canales funcionales. Aqu&#xED;, sin ambig&#xFC;edades establecer un 1: 1 estequiometr&#xED;a por uni&#xF3;n covalente de Ca (V) beta (2b) para el carboxilo terminal de la alfa (1C) (Ca (V) 1,2), creando alfa (1C) beta (2b).. Recombinantes canales de tipo L se reconstituye en c&#xE9;lulas HEK 293 con alfa (1C). Beta (2b) soportados de c&#xE9;lulas enteras corrientes en la misma medida como canales reconstituido a trav&#xE9;s de coexpresi&#xF3;n de las subunidades individuales. An&#xE1;lisis de la carga de puerta mostr&#xF3; alfa (1C). Beta (2b) el tr&#xE1;fico totalmente restaurado del canal en la membrana plasm&#xE1;tica. Cotransfecci&#xF3;n de Ca (V) beta (2a) con alfa (1C). Beta (2b) tuvo poco impacto sobre la funci&#xF3;n. Para descartar la posibilidad de que funden Ca (V) beta (2b) se interactuando en trans con el vecino alfa (1) mol&#xE9;culas, alfa (1C). Beta (2b) se cotransfect&#xF3; con alfa (1B) (Ca (V) 2,2) , y el bloqueo farmacol&#xF3;gico con nimodipino mostraron una ausencia de alfa (1B) trata de personas. Estos resultados establecen que la asociaci&#xF3;n de una sola Ca (V) beta con un alfa de formaci&#xF3;n de poros (1) subunidad captura la esencia funcional de los canales de calcio HVA, e introducir alfa (1)-Ca (V) prote&#xED;nas de fusi&#xF3;n beta como una nueva y potente herramienta para sondear estructura-funci&#xF3;n de los mecanismos.

Un &#xFA;nico CaVbeta pueden reconstituir Tanto el tr&#xE1;fico y la conductancia macrosc&#xF3;pica de canales de calcio voltaje-dependientes

&#x8F85;&#x52A9;&#x7ECF;&#x901A;&#x9053; &beta; &#x4E9A;&#x57FA; (Ca(V)beta) &#x8C03;&#x8282;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7ECF;&#x4FE1;&#x53F7;&#x901A;&#x8FC7;&#x8D29;&#x5356;&#x6210;&#x5B54; alpha(1) &#x4E9A;&#x57FA;&#x5BF9;&#x819C;&#x548C;&#x6B63;&#x5E38;&#x5316;&#x901A;&#x9053;&#x95E8;&#x63A7;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x6548;&#x679C;&#x7279;&#x8272; src &#x540C;&#x6E90; 3/&#x9E1F;&#x82F7;&#x9178;&#x6FC0;&#x9176; (SH3-GK) &#x7ED3;&#x6784;&#x6A21;&#x5757;&#x901A;&#x8FC7;&#x8C03;&#x89E3;&#x3001; &#x8BBE;&#x8BA1;&#x529F;&#x80FD;&#x7684;&#x5171;&#x540C;&#x819C;&#x5173;&#x8054;&#x9E1F;&#x82F7;&#x9178;&#x6FC0;&#x9176;&#x7684;&#x811A;&#x624B;&#x67B6;&#x86CB;&#x767D; (MAGUK) &#x5BB6;&#x65CF;&#x3002;&#x7136;&#x800C;&#xFF0C;&#x7531;&#x8BE5; Ca (V) beta SH3-GK &#x6A21;&#x5757;&#x89C4;&#x7BA1;&#x591A;&#x4E2A;&#x7ECF;&#x901A;&#x9053;&#x529F;&#x80FD;&#x7684;&#x673A;&#x5236;&#x4E0D;&#x662F;&#x5341;&#x5206;&#x6E05;&#x695A;&#x7684;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x4F7F;&#x7528;&#x62C6;&#x5206;&#x57DF;&#x65B9;&#x6CD5;&#xFF0C;&#x8C03;&#x67E5; Ca (V) beta SH3 &#x548C; GK &#x57DF;&#x4E2D;&#x5B9A;&#x4E49;&#x7684;&#x4FE1;&#x9053;&#x5C5E;&#x6027;&#x4E4B;&#x95F4;&#x7684;&#x76F8;&#x4E92;&#x5173;&#x7CFB;&#x7684;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;&#x7814;&#x7A76;&#x5EFA;&#x7ACB;&#x540E;&#x4E00;&#x4E8B;&#x5148;&#x786E;&#x5B9A;&#x7684;&#x62C6;&#x5206;&#x57DF;&#x5BF9;&#x663E;&#x793A;&#x8DE8; SH3-GK &#x4EA4;&#x4E92;&#xFF0C;&#x5E76;&#x5145;&#x5206;&#x91CD;&#x7EC4; Ca (V) beta &#x5BF9;&#x8D29;&#x8FD0;&#x901A;&#x9053;&#x3001; &#x6FC0;&#x6D3B;&#x6D47;&#x6CE8;&#xFF0C;&#x53CA;&#x589E;&#x52A0;&#x5F00;&#x653E;&#x6982;&#x7387; (P(o))&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#xFF0C;&#x7531;&#x4E0D;&#x540C;&#x7684;&#x7CBE;&#x786E;&#x4F4D;&#x7F6E;&#xFF0C;&#x7528;&#x6765;&#x5206;&#x9694; SH3 &#x548C; GK &#x57DF;&#x548C;&#x76D1;&#x6D4B;&#x968F;&#x540E; SH3-GK &#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x7684;&#x8367;&#x5149;&#x5171;&#x632F;&#x80FD;&#x91CF;&#x8F6C;&#x79FB; &#xFF08;&#x97F3;&#x54C1;&#xFF09;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x786E;&#x5B9A;&#x67D0;&#x4E00;&#x62C6;&#x5206;&#x57DF;&#x5BF9;&#x663E;&#x793A;&#x8DE8; SH3-GK &#x4E92;&#x52A8;&#x5FAE;&#x5999;&#x5730;&#x6539;&#x53D8;&#x7684;&#x914D;&#x7F6E;&#x3002;&#x5F15;&#x4EBA;&#x6CE8;&#x76EE;&#x7684;&#x662F;&#xFF0C;&#x8FD9;&#x4E00;&#x5BF9;&#x6B67;&#x89C6; Ca (V) beta &#x8D29;&#x8FD0;&#x548C;&#x6D47;&#x6CE8;&#x5C5E;&#x6027;&#x4E4B;&#x95F4;&#xFF1A; alpha(1C) &#x9776;&#x5411;&#x819C;&#x5B8C;&#x5168;&#x91CD;&#x7EC4;&#xFF0C;&#x800C;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x6D47;&#x6CE8;&#x548C;&#x589E;&#x52A0;&#x7684; P(o) &#x804C;&#x80FD;&#x7684;&#x8F6C;&#x53D8;&#x662F;&#x6709;&#x9009;&#x62E9;&#x6027;&#x5730;&#x4E22;&#x5931;&#x3002;&#x66F4;&#x6781;&#x7AEF;&#x7684;&#x4F8B;&#x5B50;&#xFF0C;&#x5176;&#x4E2D;&#x8DE8; SH3-GK &#x4E92;&#x52A8;&#x6709;&#x9009;&#x62E9;&#x6027;&#x5730;&#x70E7;&#x8680;&#xFF0C;&#x4EA7;&#x751F;&#x4E86;&#x62C6;&#x5206;&#x57DF;&#x5BF9;&#xFF0C;&#x53EF;&#x4EE5;&#x91CD;&#x7EC4;&#x65E2;&#x4E0D;&#x8D29;&#x5356;&#xFF0C;&#x4E5F;&#x4E0D;&#x6D47;&#x6CE8;&#x8C03;&#x5236;&#x7684;&#x529F;&#x80FD;&#xFF0C;&#x5373;&#x4F7F;&#x8FD9;&#x4E24;&#x4E2A;&#x4E2D;&#x95F4;&#x76F8;&#x9694;&#x53EF;&#x4EE5;&#x72EC;&#x7ACB;&#x8FDB;&#x884C;&#x5176;&#x5404;&#x81EA;&#x7ED3;&#x5408;&#x4F4D;&#x70B9;&#x4E0A; alpha(1C) (Ca(V)1.2) &#x4E9A;&#x5355;&#x4F4D;&#x3002;&#x7ED3;&#x679C;&#x8868;&#x660E; Ca (V) beta SH3 &#x548C; GK &#x57DF;&#x51FD;&#x6570; codependently &#x6765;&#x8C03;&#x6574;&#x7ECF;&#x901A;&#x9053;&#x8D29;&#x8FD0;&#x548C;&#x6D47;&#x6CE8;&#x7684;&#x5C5E;&#x6027;&#xFF0C;&#x5E76;&#x5EFA;&#x8BAE;&#x7ECF;&#x901A;&#x9053;&#x6D3B;&#x52A8;&#x751F;&#x7406;&#x548C;&#x6CBB;&#x7597;&#x89C4;&#x8303;&#x7684;&#x65B0;&#x8303;&#x5F0F;&#x3002;

CaVbeta SH3/&#x9E1F;&#x82F7;&#x9178;&#x6FC0;&#x9176;&#x57DF;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x8C03;&#x8282;&#x7535;&#x538B;&#x95E8;&#x63A7;&#x6027; Ca2 + &#x901A;&#x9053;&#x7684;&#x591A;&#x4E2A;&#x5C5E;&#x6027;&#x3002;

Auxiliary Ca(2+) channel beta subunits (Ca(V)beta) regulate cellular Ca(2+) signaling by trafficking pore-forming alpha(1) subunits to the membrane and normalizing channel gating. These effects are mediated through a characteristic src homology 3/guanylate kinase (SH3-GK) structural module, a design feature shared in common with the membrane-associated guanylate kinase (MAGUK) family of scaffold proteins. However, the mechanisms by which the Ca(V)beta SH3-GK module regulates multiple Ca(2+) channel functions are not well understood. Here, using a split-domain approach, we investigated the role of the interrelationship between Ca(V)beta SH3 and GK domains in defining channel properties. The studies build upon a previously identified split-domain pair that displays a trans SH3-GK interaction, and fully reconstitutes Ca(V)beta effects on channel trafficking, activation gating, and increased open probability (P(o)). Here, by varying the precise locations used to separate SH3 and GK domains and monitoring subsequent SH3-GK interactions by fluorescence resonance energy transfer (FRET), we identified a particular split-domain pair that displayed a subtly altered configuration of the trans SH3-GK interaction. Remarkably, this pair discriminated between Ca(V)beta trafficking and gating properties: alpha(1C) targeting to the membrane was fully reconstituted, whereas shifts in activation gating and increased P(o) functions were selectively lost. A more extreme case, in which the trans SH3-GK interaction was selectively ablated, yielded a split-domain pair that could reconstitute neither the trafficking nor gating-modulation functions, even though both moieties could independently engage their respective binding sites on the alpha(1C) (Ca(V)1.2) subunit. The results reveal that Ca(V)beta SH3 and GK domains function codependently to tune Ca(2+) channel trafficking and gating properties, and suggest new paradigms for physiological and therapeutic regulation of Ca(2+) channel activity.

A CaVbeta SH3/guanylate kinase domain interaction regulates multiple properties of voltage-gated Ca2+ channels.

Auxiliaire Ca (2 +) des canaux sous-unit&#xE9;s b&#xEA;ta (Ca (V) beta) r&#xE9;glementer cellulaire Ca (2 +) par le trafic de signalisation porog&#xE8;ne alpha (1) sous-unit&#xE9;s &#xE0; la membrane et de d&#xE9;clenchement de canal de normalisation. Ces effets sont m&#xE9;di&#xE9;s par une kinase 3/guanylate src homologie caract&#xE9;ristique (SH3-GK) module structurel, une caract&#xE9;ristique de conception partag&#xE9;e en commun avec la membrane-associated guanylate kinase (MAGUK) de la famille des prot&#xE9;ines d&#x26;#39;&#xE9;chafaudage. Cependant, les m&#xE9;canismes par lesquels le Ca (V) beta SH3-GK module de multiples r&#xE9;glemente Ca (2 +) fonctions des canaux ne sont pas bien comprises. Ici, en utilisant une approche split-domaine, nous avons &#xE9;tudi&#xE9; le r&#xF4;le de l&#x26;#39;interrelation entre le Ca SH3 (V) b&#xEA;ta et domaines GK dans la d&#xE9;finition de propri&#xE9;t&#xE9;s du canal. Les &#xE9;tudes de s&#x26;#39;appuyer sur une pr&#xE9;c&#xE9;demment identifi&#xE9; split-domaine paire qui affiche une trans SH3-GK interaction, et reconstitue enti&#xE8;rement effets Ca b&#xEA;ta (V) sur le trafic de canal, de d&#xE9;clenchement d&#x26;#39;activation, et une probabilit&#xE9; accrue ouvert (P (o)). Ici, en faisant varier les endroits pr&#xE9;cis utilis&#xE9;s pour s&#xE9;parer les domaines SH3 et GK et au suivi ult&#xE9;rieur SH3-GK interactions par transfert d&#x26;#39;&#xE9;nergie par r&#xE9;sonance de fluorescence (FRET), nous avons identifi&#xE9; un particulier split-domaine paire qui fait preuve d&#x26;#39;une configuration l&#xE9;g&#xE8;rement modifi&#xE9;e de la trans-SH3 GK l&#x26;#39;interaction. Remarquablement, cette paire discrimination entre le trafic de Ca beta (V) et les propri&#xE9;t&#xE9;s de d&#xE9;clenchement: alpha (1C) de ciblage &#xE0; la membrane a &#xE9;t&#xE9; enti&#xE8;rement reconstitu&#xE9;, alors que les changements dans l&#x26;#39;activation et d&#xE9;clenchement a augment&#xE9; P (O) ont &#xE9;t&#xE9; s&#xE9;lectivement les fonctions perdues. Un cas plus extr&#xEA;me, dans laquelle la trans-SH3 GK interaction a &#xE9;t&#xE9; ablat&#xE9;e s&#xE9;lectivement, a abouti &#xE0; une paire s&#xE9;par&#xE9;e de domaine qui pourrait-reconstituer ni les fonctions de trafic, ni de d&#xE9;clenchement &#xE0; modulation, m&#xEA;me si les deux moiti&#xE9;s peuvent ind&#xE9;pendamment engager leurs sites de liaison respectifs sur l&#x26;#39;alpha ( 1C) (Ca (V) 1,2) sous-unit&#xE9;. Les r&#xE9;sultats r&#xE9;v&#xE8;lent que Ca (V) et les domaines SH3 b&#xEA;ta fonction gk codependently pour r&#xE9;gler Ca (2 +) le trafic de canal et les propri&#xE9;t&#xE9;s de d&#xE9;clenchement, et de proposer de nouveaux paradigmes pour la r&#xE9;gulation physiologique et th&#xE9;rapeutique de Ca (2 +) l&#x26;#39;activit&#xE9; du canal.

Une interaction CaVbeta SH3/guanylate domaine kinase r&#xE9;gule plusieurs propri&#xE9;t&#xE9;s de voltage-d&#xE9;pendants canaux Ca 2 +

Zus&auml;tzliche Ca(2+) Kanal-Beta-Untereinheiten (Ca(V)beta) regulieren zellul&auml;re Ca(2+) Signalisierung durch Drogenhandel Pore-bildenden alpha(1) Untereinheiten an der Membran und normalisierenden Anspritzung Kanal. Diese Effekte werden durch eine charakteristische Src Homologie 3/Guanylate Kinase (SH3-GK) strukturelle Modul vermittelt, ein Design-Merkmal, die mit der Membran-assoziierte Guanylate Kinase (MAGUK) Familie leska Proteine geteilt. Allerdings sind die Mechanismen, mit denen das Ca (V)-Beta-SH3-GK-Modul mehrere Ca(2+) Kanalfunktionen regelt, nicht gut verstanden. Hier, untersucht mit einem Split-Dom&auml;ne-Ansatz, wir die Rolle von der Wechselbeziehung zwischen Ca (V) Beta SH3 und GK-Dom&auml;nen Channeleigenschaften zu definieren. Die Untersuchungen bauen auf ein zuvor identifizierten Split-Dom&auml;ne-Paar, das zeigt eine Trans SH3-GK-Interaktion und vollst&auml;ndig rekonstruiert Ca (V) Beta Auswirkungen auf Kanal Menschenhandel, Aktivierung Anschnitt- und erh&ouml;hte offen Wahrscheinlichkeit (P(o)). Hier durch Variation der genauen Standorte zum Trennen von SH3 und GK-Domains und &Uuml;berwachung sp&auml;tere SH3-GK-Interaktionen durch Fluoreszenz Resonanz Energietransfer (FRET), wir identifiziert eine bestimmte Split-Dom&auml;ne-Paar, das eine subtil ge&auml;nderte Konfiguration der Trans SH3-GK Interaktion angezeigt. Bemerkenswert ist, dieses Paar diskriminiert zwischen Ca (V) Beta Menschenhandel und gating Eigenschaften: alpha(1C) gezielt auf die Membrane war vollst&auml;ndig wiederhergestellt, w&auml;hrend Verschiebungen bei Aktivierung Anschnitt- und erh&ouml;hte P(o) Funktionen selektiv verloren gingen. Extremer Fall, in dem die Trans SH3-GK Interaktion selektiv ablated wurde ergab ein Split-Dom&auml;ne-Paar, das weder die Menschenhandel noch gating-Modulation Funktionen wiederherstellen konnte, obwohl beide Adsorptionseigenschaften unabh&auml;ngig voneinander ihre jeweiligen Bindungsstellen auf der alpha(1C) (Ca(V)1.2)-Untereinheit. engagieren konnte, Die Ergebnisse zeigen, dass Ca (V) Beta SH3 und GK-Dom&auml;nen-Funktion Codependently Ca(2+) Kanal Menschenhandel und Anspritzung Eigenschaften einzustellen, und schlagen Sie neue Paradigmen f&uuml;r physiologische und therapeutische Verordnung des Ca(2+) Channel-Aktivit&auml;ten.

Eine CaVbeta SH3/Guanylate Kinase-Dom&auml;ne-Interaktion reguliert mehrere Eigenschaften der Spannung-Gating Ca2 + Kan&auml;le.

Ausiliaria Ca(2+) canale beta subunit&agrave; (Ca(V)beta) regolare cellular Ca(2+) segnalazione di traffico subunit&agrave; alpha(1) formando dei pori nella membrana e normalizzante canale gating. Questi effetti sono mediati attraverso un modulo di strutturali caratteristici src homology 3/guanilato chinasi (SH3-GK), una caratteristica condivisa in comune con la membrana associato guanilato chinasi famiglia (MAGUK) delle proteine impalcatura. Tuttavia, i meccanismi con cui il modulo Ca (V) beta SH3-GK regola funzioni multiple di canale Ca(2+) non sono ben compresi. Qui, utilizzando un approccio di Spalato-dominio, abbiamo studiato il ruolo dell&#39;interrelazione tra Ca (V) beta SH3 e GK domini nella definizione delle propriet&agrave; del canale. Gli studi di costruire su una coppia di Spalato-dominio precedentemente identificata che visualizza un&#39;interazione trans SH3-GK e ricostituisce completamente effetti beta Ca (V) sul traffico di canale, attivazione gating e maggiore probabilit&agrave; aperta (P(o)). Qui, variando i luoghi precisi utilizzati per separare i domini SH3 e GK e monitoraggio successive interazioni SH3-GK di fluorescenza resonance energy transfer (FRET), abbiamo individuato una particolare coppia di Spalato-dominio visualizzato una configurazione sottilmente alterata di trans interazione SH3-GK. Notevolmente, questa coppia discriminate tra traffico beta di Ca (V) e le propriet&agrave; di controllo: alpha(1C) destinate alla membrana &egrave; stato completamente ricostituito, considerando turni in attivazione gating e aumentate P(o) funzioni sono stati persi in modo selettivo. Un caso pi&ugrave; estremo, in cui l&#39;interazione SH3-GK trans era ablazione selettivamente, ceduto un paio di Spalato-dominio che potrebbe ricostituire le funzioni n&eacute; traffico n&eacute; gating-modulazione, anche se entrambi moiety potrebbe impegnarsi in modo indipendente loro siti di legame rispettivi su alpha(1C) (subunit&agrave; Ca(V)1.2). I risultati rivelano che Ca (V) beta SH3 domini GK funzionano codependently per ottimizzare il traffico del canale di Ca(2+) e propriet&agrave; di gating e suggeriscono nuovi paradigmi per regolamento fisiologico e terapeutico dell&#39;attivit&agrave; del canale Ca(2+).

Un&#39;interazione di dominio SH3 CaVbeta/guanilato chinasi regola pi&ugrave; propriet&agrave; dei canali Ca2 + voltaggio-dipendenti.

&#x88DC;&#x52A9;&#x306E;Ca&#xFF08;2 +&#xFF09;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x306E;&#x3B2;&#x30B5;&#x30D6;&#x30E6;&#x30CB;&#x30C3;&#x30C8;&#xFF08;&#x306E;Ca&#xFF08;V&#xFF09;&#x3B2;&#xFF09;&#x306F;&#x7D30;&#x80DE;&#x819C;&#x3068;&#x6B63;&#x898F;&#x5316;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x30B2;&#x30FC;&#x30C6;&#x30A3;&#x30F3;&#x30B0;&#x306B;&#x5BFE;&#x3059;&#x308B;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;Ca&#xFF08;2 +&#xFF09;&#x306F;&#x3001;&#x4EBA;&#x8EAB;&#x58F2;&#x8CB7;&#x306E;&#x7D30;&#x5B54;&#x3092;&#x5F62;&#x6210;&#x3059;&#x308B;&#x3B1;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x30B7;&#x30B0;&#x200B;&#x200B;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#xFF08;1&#xFF09;&#x30B5;&#x30D6;&#x30E6;&#x30CB;&#x30C3;&#x30C8;&#x3092;&#x5236;&#x5FA1;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x52B9;&#x679C;&#x306F;&#x3001;&#x7279;&#x6027;&#x306E;src&#x76F8;&#x540C;&#x6027;3/guanylate&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#xFF08;SH3-GK&#xFF09;&#x69CB;&#x9020;&#x30E2;&#x30B8;&#x30E5;&#x30FC;&#x30EB;&#x3001;&#x8DB3;&#x5834;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x819C;&#x7D50;&#x5408;&#x578B;&#x30B0;&#x30A2;&#x30CB;&#x30EB;&#x9178;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#xFF08;MAGUK&#xFF09;&#x30D5;&#x30A1;&#x30DF;&#x30EA;&#x30FC;&#x3068;&#x5171;&#x901A;&#x306E;&#x5171;&#x6709;&#x30C7;&#x30B6;&#x30A4;&#x30F3;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x3066;&#x5A92;&#x4ECB;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x3002;&#x305F;&#x3060;&#x3057;&#x3001;CA&#xFF08;V&#xFF09;&#x3B2;SH3-GK&#x30E2;&#x30B8;&#x30E5;&#x30FC;&#x30EB;&#x306F;&#x8907;&#x6570;&#x306E;Ca&#xFF08;2 +&#xFF09;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x306E;&#x6A5F;&#x80FD;&#x306F;&#x3088;&#x304F;&#x7406;&#x89E3;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x306A;&#x3044;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x3059;&#x308B;&#x6A5F;&#x69CB;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x30B9;&#x30D7;&#x30EA;&#x30C3;&#x30C8;&#xB7;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#xB7;&#x30A2;&#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30C1;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;Ca&#xFF08;V&#xFF09;&#x3B2;SH3&#x3068;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x306E;&#x30D7;&#x30ED;&#x30D1;&#x30C6;&#x30A3;&#x3092;&#x5B9A;&#x7FA9;&#x3059;&#x308B;GK&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x9593;&#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x306E;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x8ABF;&#x3079;&#x305F;&#x3002;&#x7814;&#x7A76;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;SH3-GK&#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x3092;&#x8868;&#x793A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x4EE5;&#x524D;&#x306B;&#x540C;&#x5B9A;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x30B9;&#x30D7;&#x30EA;&#x30C3;&#x30C8;&#xB7;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x306E;&#x30DA;&#x30A2;&#x306B;&#x69CB;&#x7BC9;&#x3057;&#x3001;&#x5B8C;&#x5168;&#x306B;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x306E;&#x4EBA;&#x8EAB;&#x58F2;&#x8CB7;&#x306B;&#x5BFE;&#x3059;&#x308B;Ca&#xFF08;V&#xFF09;&#x3B2;&#x306E;&#x52B9;&#x679C;&#x3092;&#x518D;&#x69CB;&#x7BC9;&#x3001;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x30B2;&#x30FC;&#x30C8;&#x3068;&#x3001;&#xFF08;P&#xFF08;O&#xFF09;&#xFF09;&#x30AA;&#x30FC;&#x30D7;&#x30F3;&#x78BA;&#x7387;&#x3092;&#x5897;&#x52A0;&#x3055;&#x305B;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x3001;SH3&#x3068;GK&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x3092;&#x533A;&#x5207;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x4F7F;&#x7528;&#x3059;&#x308B;&#x6B63;&#x78BA;&#x306A;&#x4F4D;&#x7F6E;&#x3092;&#x5909;&#x5316;&#x3055;&#x305B;&#x3001;&#x86CD;&#x5149;&#x5171;&#x9CF4;&#x30A8;&#x30CD;&#x30EB;&#x30AE;&#x30FC;&#x79FB;&#x52D5;&#xFF08;FRET&#xFF09;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x3001;&#x5F8C;&#x7D9A;&#x306E;SH3-GK&#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x3092;&#x76E3;&#x8996;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;SH3-GK&#x306E;&#x5FAE;&#x5999;&#x306B;&#x5909;&#x66F4;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x69CB;&#x6210;&#x3092;&#x8868;&#x793A;&#x3057;&#x3001;&#x7279;&#x5B9A;&#x306E;&#x30B9;&#x30D7;&#x30EA;&#x30C3;&#x30C8;&#xB7;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x306E;&#x30DA;&#x30A2;&#x3092;&#x540C;&#x5B9A;&#x3057;&#x305F;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;&#x9A5A;&#x304F;&#x3079;&#x304D;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x30DA;&#x30A2;&#x306F;&#x3001;Ca&#xFF08;V&#xFF09;&#x306E;&#x30D9;&#x30FC;&#x30BF;&#x7248;&#x306E;&#x4EBA;&#x8EAB;&#x58F2;&#x8CB7;&#x3068;&#x30B2;&#x30FC;&#x30C8;&#x306E;&#x7279;&#x6027;&#x306E;&#x9593;&#x306E;&#x533A;&#x5225;&#xFF1A;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D9;&#x30FC;&#x30C6;&#x30A3;&#x30F3;&#x30B0;&#x306E;&#x5909;&#x5316;&#x306B;&#x5BFE;&#x3057;&#x3001;&#x5B8C;&#x5168;&#x306B;&#x518D;&#x69CB;&#x6210;&#x3057;&#x305F;&#x819C;&#x306B;&#x6A19;&#x7684;&#x30A2;&#x30EB;&#x30D5;&#x30A1;&#xFF08;1C&#xFF09;&#x3068;P&#xFF08;O&#xFF09;&#x95A2;&#x6570;&#x304C;&#x9078;&#x629E;&#x7684;&#x306B;&#x5931;&#x308F;&#x308C;&#x305F;&#x5897;&#x52A0;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;SH3-GK&#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x3092;&#x9078;&#x629E;&#x7684;&#x306B;&#x30A2;&#x30D6;&#x30EC;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x591A;&#x304F;&#x306E;&#x6975;&#x7AEF;&#x306A;&#x30B1;&#x30FC;&#x30B9;&#x306F;&#x3001;&#x4E21;&#x65B9;&#x306E;&#x90E8;&#x5206;&#x304C;&#x72EC;&#x7ACB;&#x3057;&#x3066;&#x30A2;&#x30EB;&#x30D5;&#x30A1;&#x3067;&#x3001;&#x305D;&#x308C;&#x305E;&#x308C;&#x306E;&#x7D50;&#x5408;&#x90E8;&#x4F4D;&#x3092;&#x884C;&#x3046;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x308B;&#x306B;&#x3082;&#x304B;&#x304B;&#x308F;&#x3089;&#x305A;&#x3001;&#x4EBA;&#x8EAB;&#x58F2;&#x8CB7;&#x3082;&#x30B2;&#x30FC;&#x30C8;&#x5909;&#x8ABF;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3082;&#x518D;&#x69CB;&#x6210;&#x3059;&#x308B;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x304C;&#x30B9;&#x30D7;&#x30EA;&#x30C3;&#x30C8;&#xB7;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x306E;&#x30DA;&#x30A2;&#x304C;&#x5F97;&#x3089;&#x308C;&#x305F;&#xFF08; 1C&#xFF09;&#xFF08;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;&#xFF08;V&#xFF09;1.2&#xFF09;&#x30B5;&#x30D6;&#x30E6;&#x30CB;&#x30C3;&#x30C8;&#x3002;&#x7D50;&#x679C;&#x306F;&#x3001;Ca&#xFF08;V&#xFF09;&#x3B2;SH3&#x3068;GK&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x306F;Ca&#xFF08;2 +&#xFF09;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x306E;&#x4EBA;&#x8EAB;&#x58F2;&#x8CB7;&#x3068;&#x30B2;&#x30FC;&#x30C6;&#x30A3;&#x30F3;&#x30B0;&#x7279;&#x6027;&#x3092;&#x8ABF;&#x6574;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;codependently&#x6A5F;&#x80FD;&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073;Ca&#xFF08;2 +&#xFF09;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x6D3B;&#x6027;&#x306E;&#x751F;&#x7406;&#x5B66;&#x7684;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x6CBB;&#x7642;&#x7684;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x65B0;&#x3057;&#x3044;&#x30D1;&#x30E9;&#x30C0;&#x30A4;&#x30E0;&#x3092;&#x63D0;&#x6848;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x3057;&#x305F;&#x3002;

CaVbeta SH3/guanylate&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x306F;&#x3001;&#x96FB;&#x4F4D;&#x4F9D;&#x5B58;&#x6027;Ca2 +&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x306E;&#x8907;&#x6570;&#x306E;&#x30D7;&#x30ED;&#x30D1;&#x30C6;&#x30A3;&#x3092;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x3059;&#x308B;

&#xBCF4;&#xC870; Ca(2+) &#xCC44;&#xB110; &#xBCA0;&#xD0C0; subunits (Ca(V)beta) &#xC870;&#xC808; &#xC138;&#xD3EC; Ca(2+) &#xBA64;&#xBE0C;&#xB808;&#xC778;&#xC744; &#xAE30; &#xACF5; &#xD615;&#xC131; alpha(1) subunits &#xC778;&#xC2E0; &#xB9E4;&#xB9E4;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC2E0;&#xD638; &#xBC0F; &#xCC44;&#xB110; &#xAC8C;&#xC774;&#xD305; &#xC815;&#xC0C1;&#xD654;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xD6A8;&#xACFC; &#xD2B9;&#xC131; src homology 3/guanylate &#xD0A4; (SH3 GK) &#xAD6C;&#xC870; &#xBAA8;&#xB4C8;&#xC744; &#xD1B5;&#xD574; &#xC911;&#xC7AC;, &#xB514;&#xC790;&#xC778; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC740; &#xACF5;&#xC720; guanylate &#xBA64;&#xBE0C;&#xB808;&#xC778; &#xAD00;&#xB828; kinase&#xC640; &#xBE44; &#xACC4; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; (MAGUK) &#xAC00;&#xC871;. &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098;, Ca (V) &#xBCA0;&#xD0C0; SH3 GK &#xBAA8;&#xB4C8; &#xC5EC;&#xB7EC; Ca(2+) &#xCC44;&#xB110; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC744; &#xC870;&#xC808; &#xD558;&#xB294; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;&#xC744; &#xC798; &#xC774;&#xD574; &#xD558;&#xC9C0;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xC5EC;&#xAE30;, Ca (V) &#xBCA0;&#xD0C0; SH3 &#xBC0F; &#xCC44;&#xB110; &#xC18D;&#xC131; &#xC815;&#xC758;&#xC5D0; GK &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778; &#xC0AC;&#xC774;&#xC758; &#xC0C1;&#xD638; &#xAD00;&#xACC4;&#xC758; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xC870;&#xC0AC; &#xBD84;&#xD560; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778; &#xC811;&#xADFC;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC;. &#xD2B8;&#xB79C;&#xC2A4; SH3 GK &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC744; &#xD45C;&#xC2DC; &#xD558; &#xACE0; &#xCC44;&#xB110; &#xC778;&#xC2E0; &#xB9E4;&#xB9E4;, &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xAC8C;&#xC774;&#xD305;, &#xD5A5;&#xC0C1; &#xB41C; &#xC624;&#xD508; &#xD655;&#xB960; (p(o))&#xC5D0; Ca (V) &#xBCA0;&#xD0C0; &#xD6A8;&#xACFC; &#xC644;&#xBCBD; &#xD558; &#xAC8C; &#xB2E4;&#xC2DC; &#xAD6C;&#xC131; &#xD558;&#xB294; &#xC774;&#xC804;&#xC5D0; &#xD655;&#xC778; &#xB41C; &#xBD84;&#xD560; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778; &#xC30D;&#xC744; &#xBC14;&#xD0D5;&#xC73C;&#xB85C; &#xAD6C;&#xCD95; &#xC5F0;&#xAD6C;. &#xC5EC;&#xAE30;&#xC5D0;, &#xBCC0;&#xD654;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC815;&#xD655;&#xD55C; &#xC704;&#xCE58;&#xB97C; SH3 &#xBC0F; GK &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778;&#xC744; &#xAD6C;&#xBD84; &#xD558;&#xB294; &#xBC0F; &#xD2B8;&#xB79C;&#xC2A4; SH3 GK &#xC0C1;&#xD638;&#xC791;&#xC6A9;&#xC758; &#xBBF8;&#xBB18; &#xD558; &#xAC8C; &#xBCC0;&#xACBD; &#xB41C; &#xAD6C;&#xC131; &#xD45C;&#xC2DC; &#xD2B9;&#xC815; &#xBD84;&#xD560; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778; &#xC30D;&#xC744; &#xC2DD;&#xBCC4; &#xD615;&#xAD11; &#xACF5;&#xBA85; &#xC5D0;&#xB108;&#xC9C0; &#xC804;&#xB2EC; (FRET) &#xD558; &#xC5EC; &#xD6C4;&#xC18D; SH3 GK &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC744; &#xBAA8;&#xB2C8;&#xD130;&#xB9C1;. &#xB180;&#xB78D;&#xAC8C;&#xB3C4;,&#xC774; &#xC30D; Ca (V) &#xBCA0;&#xD0C0; &#xC778;&#xC2E0; &#xB9E4;&#xB9E4; &#xBC0F; &#xC81C;&#xC5B4; &#xC18D;&#xC131; &#xAC04;&#xC758; &#xCC28;&#xBCC4;: alpha(1C) &#xBA64;&#xBE0C;&#xB808;&#xC778;&#xC744; &#xB300;&#xC0C1;&#xC73C;&#xB85C; &#xC644;&#xBCBD; &#xD558; &#xAC8C; &#xC7AC;&#xAD6C;&#xC131;, &#xBC18;&#xBA74; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xAC8C;&#xC774;&#xD305; &#xBC0F; &#xC99D;&#xAC00; &#xB41C; P(o) &#xAE30;&#xB2A5; &#xBCC0;&#xD654;&#xC5D0; &#xC120;&#xD0DD;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xC190;&#xC2E4; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB354; &#xADF9;&#xB2E8;&#xC801;&#xC778; &#xACBD;&#xC6B0;&#xC5D0;&#xB294; &#xD2B8;&#xB79C;&#xC2A4; SH3 GK &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC740; &#xC120;&#xD0DD;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; ablated, &#xBC00;&#xB9E4;&#xB3C4; &#xAC8C;&#xC774;&#xD305; &#xBCC0;&#xC870; &#xAE30;&#xB2A5; &#xB458; &#xB2E4;&#xB97C; &#xB2E4;&#xC2DC; &#xAD6C;&#xC131;&#xD560; &#xC218; &#xC5C6;&#xB294; &#xBD84;&#xD560; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778; &#xC30D; &#xB450; moieties &#xC218; &#xB3C5;&#xB9BD;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xAD00;&#xC5EC; &#xD558;&#xC9C0; alpha(1C) (Ca(V)1.2) &#xC18C; &#xB2E8;&#xC704;&#xC5D0; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC758; &#xAC01;&#xAC01; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8;&#xC5D0;&#xB3C4; &#xB098;&#xC654;&#xACE0;. &#xACB0;&#xACFC; &#xACF5;&#xAC1C; Ca (V) &#xBCA0;&#xD0C0; SH3 &#xBC0F; GK &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC744; Ca(2+) &#xCC44;&#xB110; &#xC778;&#xC2E0; &#xB9E4;&#xB9E4; &#xBC0F; &#xAC8C;&#xC774;&#xD305; &#xC18D;&#xC131;&#xC744; &#xC870;&#xC815; &#xD558;&#xB294; codependently &#xBC0F; Ca(2+) &#xCC44;&#xB110; &#xD65C;&#xB3D9;&#xC758; &#xC0DD;&#xB9AC; &#xC801; &#xBC0F; &#xCE58;&#xB8CC; &#xC801; &#xADDC;&#xC81C;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC0C8;&#xB85C;&#xC6B4; &#xD328;&#xB7EC;&#xB2E4;&#xC784;&#xC744; &#xC81C;&#xC548; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

CaVbeta SH3/guanylate &#xB2C8; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC744; &#xC804;&#xC555; &#xAC1C;&#xD3D0; Ca2 + &#xCC44;&#xB110;&#xC758; &#xC5EC;&#xB7EC; &#xC18D;&#xC131;&#xC744; &#xC870;&#xC815;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Auxiliar de Ca (2 +) del canal subunidades beta (Ca (V) beta) regular celular Ca (2 +) de se&#xF1;alizaci&#xF3;n por el tr&#xE1;fico de formaci&#xF3;n de poros alfa (1) subunidades de la membrana y de puerta normalizar canal. Estos efectos est&#xE1;n mediados a trav&#xE9;s de una quinasa 3/guanylate src caracter&#xED;stica de homolog&#xED;a (SH3-GK) m&#xF3;dulo estructural, una caracter&#xED;stica de dise&#xF1;o en un hecho com&#xFA;n con la quinasa asociada a la membrana guanilato (MAGUK) la familia de prote&#xED;nas de andamiaje. Sin embargo, los mecanismos por los cuales el Ca (V) beta SH3-GK m&#xF3;dulo regula m&#xFA;ltiples Ca (2 +) las funciones de los canales no son bien entendidos. En este caso, utilizando un planteamiento por dominio, hemos investigado el papel de la interrelaci&#xF3;n entre Ca SH3 (V), beta y dominios de GK en la definici&#xF3;n de las propiedades del canal. Los estudios se basan en una divisi&#xF3;n previamente identificados-de dominio par que muestra una trans SH3-GK interacci&#xF3;n, y totalmente reconstituye Ca (V), efectos sobre el tr&#xE1;fico del canal beta, apertura de puerta de activaci&#xF3;n, y el aumento de la probabilidad abierta (p (o)). En este caso, mediante la variaci&#xF3;n de la ubicaci&#xF3;n exacta se utilizan para separar los dominios SH3 y GK y posterior seguimiento SH3-GK interacciones mediante la transferencia de energ&#xED;a de resonancia fluorescente (FRET), hemos identificado una determinada fracci&#xF3;n de dominio par que muestra una configuraci&#xF3;n sutilmente alterada de la trans-GK SH3 interacci&#xF3;n. Cabe destacar que este par de discriminaci&#xF3;n entre el tr&#xE1;fico de Ca beta (V) y las propiedades de compuerta: alfa (1C) dirigidos a la membrana se reconstituy&#xF3; por completo, mientras que los cambios en la activaci&#xF3;n de puerta y el aumento de P (O) funciones se perdieron de forma selectiva. Un caso m&#xE1;s extremo, en el que se realiza la ablaci&#xF3;n de la trans-GK SH3 la interacci&#xF3;n selectiva, dio un par dividido-de dominio que no se podr&#xED;an reconstruir las funciones de tr&#xE1;fico, ni de puerta de modulaci&#xF3;n, a pesar de que ambas mitades de forma independiente podr&#xED;a involucrar a sus respectivos sitios de uni&#xF3;n en la alfa ( 1C) (Ca (V) 1,2) subunidad. Los resultados revelan que el Ca (V) beta SH3 y dominios GK funcionar codependientemente para sintonizar Ca (2 +) el tr&#xE1;fico de canal y las propiedades de una puerta, y proponer nuevos paradigmas para la regulaci&#xF3;n fisiol&#xF3;gica y terap&#xE9;utica de la Ca (2 +) la actividad del canal.

Un CaVbeta quinasa SH3/guanylate Dominio de Interacci&#xF3;n Regula m&#xFA;ltiples propiedades de dependientes de voltaje canales de Ca2 +

&#x7535;&#x538B;&#x95E8;&#x63A7; Ca2 + (Ca(V)) &#x9891;&#x9053;&#x662F;&#x4E2D;&#x592E;&#x7ED9;&#x7684;&#x53EF;&#x5174;&#x594B;&#x6027;&#x7EC6;&#x80DE;&#x751F;&#x7269;&#x5B66;&#x548C;&#x56E0;&#x6B64;&#x89C4;&#x8303;&#x5176;&#x6D3B;&#x52A8;&#x5177;&#x6709;&#x5E7F;&#x6CDB;&#x7684;&#x5E94;&#x7528;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x63CF;&#x8FF0;&#x57FA;&#x56E0;&#x7F16;&#x7801;&#x7684;&#x5206;&#x5B50; inducibly &#x6291;&#x5236; Ca(V) &#x9891;&#x9053; (GEMIICCs)&#x3002;GEMIICCs &#x662F; rem &#x7684;&#x91D1;&#x878D;&#x884D;&#x751F;&#x54C1;&#xFF0C;Ras &#x6837;&#x86CB;&#x767D;&#x8FD9;&#x4E00;&#x6291;&#x5236; Ca2 + &#x7535;&#x6D41; &#xFF08;I(Ca))&#x3002;C &#x603B;&#x7AD9;&#x622A;&#x65AD;&#x5931;&#x53BB;&#x80FD;&#x529B;&#x7531;&#x4E8E;&#x635F;&#x5931;&#x7684;&#x819C;&#x9776;&#x5411;&#x6291;&#x5236; I(Ca) Rem(1-265)&#x3002;&#x878D;&#x5408; C1 &#x57DF;&#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#x6FC0;&#x9176; Cgamma &#x5BF9;&#x9EC4;&#x8272;&#x8367;&#x5149;&#x86CB;&#x767D; &#xFF08;YFP)-Rem(1-265) &#x751F;&#x6210;&#x518D;&#x8FC5;&#x901F;&#x8F6C;&#x79FB;&#x7684;&#x5206;&#x5B50;&#x4ECE;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8D28;&#x6DB2;&#x5BF9;&#x4E0E;&#x4F5B;&#x6CE2;-12,13-dibutyrate &#x5728;&#x4EBA;&#x80DA;&#x80BE;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x819C;&#x3002;&#x91CD;&#x7EC4; Ca (V) 2.2 &#x548C; Ca (V) 1.2 &#x6E20;&#x9053;&#x88AB;&#x540C;&#x65F6;&#x6291;&#x5236;&#x4E0E; C1(PKCgamma)-YFP-Rem(1-265) &#x819C;&#x6613;&#x4F4D;&#x3002;&#x65B9;&#x6CD5;&#x7684;&#x4E00;&#x822C;&#x6027;&#x7684;&#x539F;&#x5219;&#x4E0B;&#x8BC1;&#x5B9E;&#x901A;&#x8FC7;&#x521B;&#x5EFA;&#x4F7F;&#x7528;&#x96F7;&#x5E15;&#x9709;&#x7D20;&#x4F9D;&#x8D56;&#x4E00;&#x819C;&#x9488;&#x5BF9;&#x96F7;&#x5E15;&#x9709;&#x7D20;&#x7ED3;&#x5408;&#x7ED3;&#x6784;&#x57DF;&#x548C; YFP-FKBP-Rem(1-265) &#x7684; heterodimerization GEMIICC&#x3002;GEMIICCs &#x51CF;&#x5C11; I(Ca) &#x800C;&#x4E0D;&#x524A;&#x5F31;&#x6D47;&#x6CE8;&#x7535;&#x8377;&#xFF0C;&#x4ECE;&#x800C;&#x6392;&#x9664;&#x4E86;&#x660E;&#x6E20;&#x548C;&#x7535;&#x538B;&#x4F20;&#x611F;&#x5668;&#x56FA;&#x5B9A;&#x5316;&#x7684;&#x6570;&#x76EE;&#x51CF;&#x5C11;&#xFF0C;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x6291;&#x5236;&#x4F5C;&#x7528;&#x7684;&#x673A;&#x5236;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x5F15;&#x8FDB;&#x5C0F;&#x5206;&#x5B50;&#x8C03;&#x8282; GEMIICCs &#x4F5C;&#x4E3A;&#x8FC5;&#x901F;&#x64CD;&#x7EB5; Ca2 + &#x4FE1;&#x53F7;&#x7684;&#x53EF;&#x5174;&#x594B;&#x6027;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x6709;&#x529B;&#x5DE5;&#x5177;&#x3002;

&#x57FA;&#x56E0;&#x7F16;&#x7801;&#x4E3A; inducibly &#x706D;&#x6D3B;&#x7EA4;&#x901A;&#x9053;&#x7684;&#x5206;&#x5B50;&#x3002;

Voltage-gated Ca2+ (Ca(V)) channels are central to the biology of excitable cells, and therefore regulating their activity has widespread applications. We describe genetically encoded molecules for inducibly inhibiting Ca(V) channels (GEMIICCs). GEMIICCs are derivatives of Rem, a Ras-like GTPase that constitutively inhibits Ca2+ currents (I(Ca)). C terminus-truncated Rem(1-265) lost the ability to inhibit I(Ca) owing to loss of membrane targeting. Fusing the C1 domain of protein kinase Cgamma to yellow fluorescent protein (YFP)-Rem(1-265) generated a molecule that rapidly translocated from cytosol to plasma membrane with phorbol-12,13-dibutyrate in human embryonic kidney cells. Recombinant Ca(V)2.2 and Ca(V)1.2 channels were inhibited concomitantly with C1(PKCgamma)-YFP-Rem(1-265) membrane translocation. The generality of the approach was confirmed by creating a GEMIICC using rapamycin-dependent heterodimerization of YFP-FKBP-Rem(1-265) and a constitutively membrane-targeted rapamycin-binding domain. GEMIICCs reduced I(Ca) without diminishing gating charge, thereby ruling out decreased number of surface channels and voltage-sensor immobilization as mechanisms for inhibition. We introduce small-molecule-regulated GEMIICCs as potent tools for rapidly manipulating Ca2+ signals in excitable cells.

Genetically encoded molecules for inducibly inactivating CaV channels.

Voltage-d&#xE9;pendants Ca 2 + (Ca (V)) canaux sont au c&#x153;ur de la biologie des cellules excitables, et donc r&#xE9;guler leur activit&#xE9; a des applications &#xE0; grande &#xE9;chelle. Nous d&#xE9;crivons g&#xE9;n&#xE9;tiquement mol&#xE9;cules cod&#xE9;es pour inductible inhibant Ca (V) (canaux GEMIICCs). GEMIICCs sont des d&#xE9;riv&#xE9;s de Rem, une GTPase Ras-like qui inhibe de mani&#xE8;re constitutive les courants Ca 2 + (I (Ca)). C terminale tronqu&#xE9;e Rem (1-265) ont perdu la capacit&#xE9; &#xE0; inhiber I (Ca) en raison de la perte de la membrane de ciblage. Fusion du domaine de la prot&#xE9;ine kinase C 1 &#xE0; Cgamma prot&#xE9;ine fluorescente jaune (YFP)-Rem (1-265) g&#xE9;n&#xE9;r&#xE9; une mol&#xE9;cule qui rapidement transport&#xE9; du cytosol vers la membrane du plasma avec le phorbol-12 ,13-dibutyrate de cellules r&#xE9;nales embryonnaires humaines. Ca recombinant (V) 2.2 et Ca (V) 1.2 canaux ont &#xE9;t&#xE9; inhib&#xE9;es de fa&#xE7;on concomitante avec C1 (PKCgamma)-YFP-Rem (1-265) translocation membranaire. La g&#xE9;n&#xE9;ralit&#xE9; de l&#x26;#39;approche a &#xE9;t&#xE9; confirm&#xE9;e par la cr&#xE9;ation d&#x26;#39;un GEMIICC utilisant la rapamycine-d&#xE9;pendante h&#xE9;t&#xE9;rodim&#xE9;risation de YFP-FKBP-Rem (1-265) et une membrane constitutive cibl&#xE9;e domaine de liaison &#xE0; la rapamycine. GEMIICCs r&#xE9;duite I (Ca), sans diminuer de charge de d&#xE9;clenchement, ce qui exclut diminution du nombre de canaux de surface et la tension du capteur d&#x26;#39;immobilisation comme des m&#xE9;canismes d&#x26;#39;inhibition. Nous introduisons petite mol&#xE9;cule-r&#xE9;glement&#xE9;s comme des outils puissants GEMIICCs pour manipuler rapidement Ca2 + dans les signaux des cellules excitables.

Mol&#xE9;cules cod&#xE9;es g&#xE9;n&#xE9;tiquement pour les canaux Cav inductible Inactivation

Spannung-Gating Ca2 + (Ca(V)) Kan&auml;le sind zentral f&uuml;r die Biologie der excitable Zellen, und daher Regulierung ihrer Aktivit&auml;t hat weit verbreiteten Anwendungen. Wir beschreiben die genetisch codierte Molek&uuml;le f&uuml;r inducibly Hemmung Ca(V) Kan&auml;le (GEMIICCs). GEMIICCs sind Derivate von Rem, eine Ras-&auml;hnlichen GTPase, die konstitutiv Ca2 + Str&ouml;mungen (I(Ca)) hemmt. C Endstation-abgeschnitten Rem(1-265) verloren I(Ca) wegen Verlust des Zielens der Membran zu hemmen. Verschmelzung der C1-Dom&auml;ne der Proteinkinase Cgamma gelb fluoreszierende Protein (YFP)-Rem(1-265) generiert ein Molek&uuml;l, das rasch systemisch vom Zytosol zu Plasmamembran mit Phorbol-12,13-Dibutyrate im menschlichen embryonalen Nierenzellen. Rekombinante Ca (V) 2.2 und Ca (V) 1.2 Kan&auml;le wurden begleitend mit C1(PKCgamma)-YFP-Rem(1-265) Membran Translokation gehemmt. Erstellen einer GEMIICC mit angiomiolipomas-abh&auml;ngige Heterodimerization YFP-FKBP-Rem(1-265) und einer konstitutiv Membran-bezogene angiomiolipomas bindende Dom&auml;ne wurde die Allgemeing&uuml;ltigkeit des Konzepts best&auml;tigt. GEMIICCs verringert I(Ca) ohne Anschnitt-Geb&uuml;hr, dadurch verminderte Anzahl der Oberfl&auml;che Kan&auml;le und Spannungssensor Immobilisierung als Mechanismen zur Hemmung auszuschlie&szlig;en. Wir f&uuml;hren kleine Molek&uuml;l-regulierte GEMIICCs als m&auml;chtige Werkzeuge zum Bearbeiten der rasch Ca2 +-Signale in excitable Zellen.

Genetisch codierte Molek&uuml;le f&uuml;r inducibly inaktivieren CaV-Kan&auml;le.

Tensione-gated Ca2 + (Ca(V)) canali sono al centrali di biologia delle cellule eccitabili, e quindi che regolano la loro attivit&agrave; ha applicazioni molto diffuse. Descriviamo molecole geneticamente codificati per inibire inducibly canali Ca(V) (GEMIICCs). GEMIICCs sono derivati di Rem, un simil-Ras GTPasi che inibisce costitutivamente correnti Ca2 + (I(Ca)). C terminus-troncata Rem(1-265) perduto la capacit&agrave; di inibire la I(Ca) a causa della perdita della membrana di targeting. Fondendo il dominio C1 della chinasi di proteina Cgamma di proteina fluorescente gialla (YFP)-Rem(1-265) generato una molecola che rapidamente traslocata dal citosol alla membrana plasmatica con forbolo-12,13-dibutyrate in cellule di rene embrionale umano. Ricombinante Ca (V) 2.2 e Ca (V) 1.2 canali erano inibite simultaneamente con traslocazione membrana C1(PKCgamma)-YFP-Rem(1-265). La generalit&agrave; dell&#39;approccio &egrave; stata confermata con la creazione di un GEMIICC utilizzando heterodimerization rapamicina-dipendente di YFP-FKBP-Rem(1-265) e un dominio di rapamicina-associazione costitutivamente mirati a membrana. GEMIICCs ridotto I(Ca) senza sminuire gating carica, escludendo quindi riduzione del numero di canali superficiali e sensore di voltaggio immobilizzazione come meccanismi di inibizione. Vi presentiamo GEMIICCs piccolo-molecola-regolata come strumenti potenti per manipolare rapidamente Ca2 + segnali nelle cellule eccitabili.

Molecole geneticamente codificati per inducibly inattivazione canali CaV.

&#x96FB;&#x4F4D;&#x4F9D;&#x5B58;&#x6027;&#x306E;Ca2 +&#xFF08;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;&#xFF08;V&#xFF09;&#xFF09;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x306F;&#x8208;&#x596E;&#x6027;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x751F;&#x7269;&#x5B66;&#x306E;&#x4E2D;&#x5FC3;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x3001;&#x305D;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x3092;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x3059;&#x308B;&#x3068;&#x3001;&#x5E83;&#x7BC4;&#x306A;&#x30A2;&#x30D7;&#x30EA;&#x30B1;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x3092;&#x6301;&#x3063;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;&#x8A98;&#x5C0E;&#x7684;&#x306B;&#x963B;&#x5BB3;&#x3059;&#x308B;&#x306E;Ca&#xFF08;V&#xFF09;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#xFF08;GEMIICCs&#xFF09;&#x306E;&#x907A;&#x4F1D;&#x7684;&#x306B;&#x30A8;&#x30F3;&#x30B3;&#x30FC;&#x30C9;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x5206;&#x5B50;&#x3092;&#x8A18;&#x8FF0;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002; GEMIICCs&#x306F;&#x3001;&#x30EC;&#x30E0;&#x3001;&#x6052;&#x5E38;&#x7684;&#x306B;Ca2 +&#x306E;&#x96FB;&#x6D41;&#xFF08;I&#xFF08;Ca&#xFF09;&#x3092;&#xFF09;&#x3092;&#x963B;&#x5BB3;&#x3059;&#x308B;Ras&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306A;GTP&#x30A2;&#x30FC;&#x30BC;&#x306E;&#x8A98;&#x5C0E;&#x4F53;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3002; C&#x672B;&#x7AEF;&#x5207;&#x308A;&#x6368;&#x3066;&#x3089;&#x308C;&#x30EC;&#x30E0;&#xFF08;1&#x304B;&#x3089;265&#xFF09;&#x306F;&#x3001;&#x6A19;&#x7684;&#x7D30;&#x80DE;&#x819C;&#x306E;&#x640D;&#x5931;&#x306B;I&#xFF08;Ca&#xFF09;&#x306E;&#x306B;&#x3088;&#x308A;&#x3092;&#x963B;&#x5BB3;&#x3059;&#x308B;&#x80FD;&#x529B;&#x3092;&#x5931;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x9EC4;&#x8272;&#x86CD;&#x5149;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306B;&#x878D;&#x5408;&#x3055;&#x305B;&#x308B;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;Cgamma&#x306E;C1&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#xFF08;YFP&#xFF09;&#x30EC;&#x30E0;&#xFF08;1&#x304B;&#x3089;265&#xFF09;&#x306F;&#x3001;&#x6025;&#x901F;&#x306B;&#x7D30;&#x80DE;&#x8CEA;&#x304B;&#x3089;&#x30D2;&#x30C8;&#x80CE;&#x5150;&#x814E;&#x81D3;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x30DB;&#x30EB;&#x30DC;&#x30FC;&#x30EB;-12,13  -  dibutyrate&#x3068;&#x7D30;&#x80DE;&#x819C;&#x3078;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30ED;&#x30B1;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x3059;&#x308B;&#x5206;&#x5B50;&#x3092;&#x751F;&#x6210;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x7D44;&#x63DB;&#x3048;&#x578B;&#x306E;Ca&#xFF08;V&#xFF09;2.2&#x304A;&#x3088;&#x3073;Ca&#xFF08;V&#xFF09;1.2&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x306F;&#x3001;C1&#xFF08;PKCgamma&#xFF09;-YFP-&#x30EC;&#x30E0;&#xFF08;1&#x304B;&#x3089;265&#xFF09;&#x819C;&#x306E;&#x8EE2;&#x5EA7;&#x306B;&#x4ED8;&#x968F;&#x3057;&#x3066;&#x963B;&#x5BB3;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3002;&#x30A2;&#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30C1;&#x306E;&#x4E00;&#x822C;&#x6027;&#x306F;&#x3001;YFP-FKBP-&#x30EC;&#x30E0;&#xFF08;1&#x304B;&#x3089;265&#xFF09;&#x306E;&#x30E9;&#x30D1;&#x30DE;&#x30A4;&#x30B7;&#x30F3;&#x4F9D;&#x5B58;&#x30D8;&#x30C6;&#x30ED;&#x3068;&#x6052;&#x5E38;&#x7684;&#x306B;&#x7D30;&#x80DE;&#x819C;&#x3092;&#x30BF;&#x30FC;&#x30B2;&#x30C3;&#x30C8;&#x3068;&#x3057;&#x305F;&#x30E9;&#x30D1;&#x30DE;&#x30A4;&#x30B7;&#x30F3;&#x7D50;&#x5408;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;GEMIICC&#x3092;&#x4F5C;&#x6210;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x78BA;&#x8A8D;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3002; GEMIICCs&#x305D;&#x308C;&#x306B;&#x3088;&#x308A;&#x6291;&#x5236;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x30E1;&#x30AB;&#x30CB;&#x30BA;&#x30E0;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x8868;&#x9762;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x3068;&#x96FB;&#x5727;&#x30BB;&#x30F3;&#x30B5;&#x30FC;&#x56FA;&#x5B9A;&#x6570;&#x306E;&#x6E1B;&#x5C11;&#x3092;&#x9664;&#x5916;&#x3057;&#x3001;&#x30B2;&#x30FC;&#x30C8;&#x96FB;&#x8377;&#x3092;&#x640D;&#x306A;&#x3046;&#x3053;&#x3068;&#x306A;&#x304F;&#x3001;I&#xFF08;Ca&#xFF09;&#x306E;&#x4F4E;&#x4E0B;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;&#x6025;&#x901F;&#x306B;&#x8208;&#x596E;&#x6027;&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;Ca2 +&#x306E;&#x4FE1;&#x53F7;&#x3092;&#x64CD;&#x4F5C;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x5F37;&#x529B;&#x306A;&#x30C4;&#x30FC;&#x30EB;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x4F4E;&#x5206;&#x5B50;&#x8ABF;&#x7BC0;GEMIICCs&#x3092;&#x3054;&#x7D39;&#x4ECB;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x8A98;&#x5C0E;&#x7684;&#x306B;CAV&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x3092;&#x4E0D;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x907A;&#x4F1D;&#x7684;&#x306B;&#x30A8;&#x30F3;&#x30B3;&#x30FC;&#x30C9;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x5206;&#x5B50;

&#xC804;&#xC555; &#xAC1C;&#xD3D0; Ca2 + (Ca(V)) &#xCC44;&#xB110;&#xC740; &#xACE0;&#xB974;&#xAE30;&#xAC00; &#xC138;&#xD3EC; &#xC0DD;&#xBB3C;&#xD559;&#xC758; &#xC911;&#xC2EC; &#xC774;&#xBA70; &#xAD11;&#xBC94;&#xC704; &#xD558; &#xAC8C; &#xC751;&#xC6A9; &#xD504;&#xB85C;&#xADF8;&#xB7A8;&#xC5D0; &#xB530;&#xB77C;&#xC11C; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC758; &#xD65C;&#xB3D9;&#xC744; &#xADDC;&#xC81C;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xC720;&#xC804;&#xC73C;&#xB85C; &#xC778;&#xCF54;&#xB529;&#xB41C; &#xBD84;&#xC790; inducibly Ca(V) &#xCC44;&#xB110; (GEMIICCs)&#xC744; &#xC5B5;&#xC81C; &#xD558;&#xB294; &#xAC83;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC124;&#xBA85;. Gemiiccs&#xB294; Rem, Ca2 + &#xC804;&#xB958; (I(Ca)) constitutively &#xC5B5;&#xC81C; &#xD55C;&#xB2E4; Ras &#xAC19;&#xC740; Gtpase&#xC758; &#xD30C;&#xC0DD; &#xC0C1;&#xD488;. C &#xC885;&#xC810;-&#xC798;&#xB9B0; Rem(1-265) &#xBA64;&#xBE0C;&#xB808;&#xC778; &#xD0C0;&#xAC9F;&#xD305;&#xC758; &#xC190;&#xC2E4; &#xB54C;&#xBB38;&#xC5D0; i(ca)&#xC744; &#xC5B5;&#xC81C; &#xD558;&#xB294; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC744; &#xC783;&#xC5C8;&#xB2E4;. &#xC735;&#xD569; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xD0A4; &#xB2C8; &#xC544; Cgamma (YFP)-Rem(1-265) &#xBE60;&#xB974;&#xAC8C; translocated &#xBD84;&#xC790;&#xC5D0;&#xC11C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC0DD;&#xC131; &#xB41C; cytosol phorbol-12,13-dibutyrate &#xCD08;&#xC744; &#xD558; &#xC5EC; &#xC778;&#xAC04; &#xBC30;&#xC544; &#xC2E0;&#xC7A5; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0;&#xC11C;&#xC640; &#xD50C;&#xB77C;&#xC988;&#xB9C8; &#xBA64;&#xBE0C;&#xB808;&#xC778; &#xB178;&#xB780;&#xC0C9; &#xD615;&#xAD11; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; c 1 &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC7AC;&#xC870;&#xD569; Ca (V) 2.2 &#xBC0F; Ca (V) 1.2 &#xCC44;&#xB110; concomitantly C1(PKCgamma)-YFP-Rem(1-265) &#xB9C9; &#xC804;&#xC744; &#xC800;&#xD574; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC811;&#xADFC;&#xC758; &#xC77C;&#xBC18; &#xC131;&#xC740; rapamycin &#xC885;&#xC18D; heterodimerization YFP-FKBP-Rem(1-265) &#xBC0F; constitutively &#xBA64;&#xBE0C;&#xB808;&#xC778;&#xC744; &#xB300;&#xC0C1; &#xD55C; rapamycin &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; GEMIICC&#xB97C; &#xC0DD;&#xC131; &#xD558; &#xC5EC; &#xD655;&#xC778; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;. GEMIICCs &#xCDA9;&#xC804;, &#xC5B5;&#xC81C; &#xD558;&#xB294; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;&#xC73C;&#xB85C; &#xD568;&#xC73C;&#xB85C;&#xC368; &#xD45C;&#xBA74; &#xCC44;&#xB110; &#xBC0F; &#xC804;&#xC555; &#xC13C;&#xC11C; immobilization &#xAC10;&#xC18C; &#xC218; &#xBC30;&#xC81C; &#xAC8C;&#xC774;&#xD305; &#xC904;&#xC774;&#xC9C0; &#xC54A;&#xACE0; i(ca)&#xC744; &#xAC10;&#xC18C;. &#xBE60;&#xB974;&#xAC8C; &#xACE0;&#xB974;&#xAE30;&#xAC00; &#xC140;&#xC5D0; Ca2 + &#xC2E0;&#xD638;&#xB97C; &#xC870;&#xC791; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD55C; &#xAC15;&#xB825;&#xD55C; &#xB3C4;&#xAD6C;&#xB85C; &#xC791;&#xC740; &#xBD84;&#xC790; &#xADDC;&#xC81C; GEMIICCs &#xC18C;&#xAC1C; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Inducibly &#xAE30;&#xAC11; &#xBD80; &#xB300; &#xCC44;&#xB110;&#xC744; &#xBE44;&#xD65C;&#xC131;&#xD654;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xBD84;&#xC790; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xC778;&#xCF54;&#xB529;&#xB41C;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Voltaje-dependientes de Ca2 + (Ca (V)) canales son fundamentales para la biolog&#xED;a de las c&#xE9;lulas excitables, y por lo tanto la regulaci&#xF3;n de su actividad tiene amplias aplicaciones. Se describen las mol&#xE9;culas gen&#xE9;ticamente codificados para inducibly inhibir Ca (V) canales (GEMIICCs). GEMIICCs son derivados de Rem, una GTPasa Ras-al igual que constitutivamente inhibe las corrientes de Ca2 + (I (CA)). C-terminal truncado Rem (1-265) perdi&#xF3; la capacidad de inhibir I (Ca), debido a la p&#xE9;rdida de la membrana de la orientaci&#xF3;n. Fusi&#xF3;n del dominio C1 de la prote&#xED;na quinasa Cgamma a la prote&#xED;na fluorescente de color amarillo (YFP)-Rem (1-265) genera una mol&#xE9;cula que desplaza r&#xE1;pidamente de citosol a la membrana plasm&#xE1;tica con forbol-12 ,13-dibutirato en c&#xE9;lulas renales embrionarias humanas. Recombinante Ca (V) y Ca (2.2 V) 1.2 canales se inhibieron de forma concomitante con C1 (PKCgamma)-YFP-Rem (1-265) translocaci&#xF3;n de la membrana. La generalidad del planteamiento fue confirmado por la creaci&#xF3;n de un GEMIICC con rapamicina-dependiente heterodimerizaci&#xF3;n de YFP-FKBP-Rem (1-265) y una membrana de constitutivamente orientada dominio de uni&#xF3;n a la rapamicina. GEMIICCs reduce I (Ca) sin disminuir la carga de puerta, lo que excluye disminuci&#xF3;n del n&#xFA;mero de canales superficiales y la inmovilizaci&#xF3;n del detector de voltaje como mecanismos para la inhibici&#xF3;n. Se introduce peque&#xF1;a mol&#xE9;cula GEMIICCs regulados como herramientas potentes para la manipulaci&#xF3;n r&#xE1;pida de Ca2 + en las se&#xF1;ales de las c&#xE9;lulas excitables.

Mol&#xE9;culas gen&#xE9;ticamente codificados para inducibly Inactivaci&#xF3;n Canales CAV

&#x86CB;&#x767D;&#x6FC0;&#x9176; A PKA &#x4ECB;&#x5BFC;&#x589E;&#x5F3A;&#x7684; L-&#x578B;&#x9499;&#x7535;&#x6D41; &#xFF08;I(Ca,L)) &#x662F;&#x4EA4;&#x611F;&#x795E;&#x7ECF;&#x8C03;&#x8282;&#x5FC3;&#x8DF3;&#x7684;&#x5FC5;&#x8981;&#x6761;&#x4EF6;&#x662F;&#x7ECF;&#x5178;&#x7684;&#x4F8B;&#x5B50;&#xFF0C;&#x901A;&#x8FC7;&#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x3001; &#x822A;&#x9053;&#x6574;&#x6CBB;&#x548C;&#x5176;&#x635F;&#x5931;&#x662F;&#x5FC3;&#x8870;&#x7684;&#x4E00;&#x4E2A;&#x5171;&#x540C;&#x7279;&#x70B9;&#x3002;&#x673A;&#x68B0;&#x7406;&#x89E3;&#x5982;&#x4F55;&#x4E0D;&#x540C; Ca(V) &#x901A;&#x9053;&#x4E9A;&#x57FA;&#x8D21;&#x732E; PKA &#x8C03;&#x5236;&#x7684; I(Ca,L) &#x4E00;&#x76F4;&#x6FC0;&#x70C8;&#xFF0C;&#x4F46;&#x4ECD;&#x7136;&#x662F;&#x53EF;&#x671B;&#x800C;&#x4E0D;&#x53EF;&#x53CA;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;&#x672C;&#x6761;&#x5982;&#x5176;&#x50A8;&#x5907;&#x529F;&#x80FD; &#xFF08;&#x5269;&#x4F59;&#x5BB9;&#x91CF;&#x53EF;&#x7528;&#x8C03;&#x5236;&#xFF09; &#x5728;&#x5FC3;&#x810F;&#x4E2D;&#x7684;&#x5173;&#x952E;&#x529F;&#x80FD;&#x662F;&#x672A;&#x77E5;&#x7684;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x4F7F;&#x7528;&#x8FC7;&#x8868;&#x8FBE;&#x8303;&#x5F0F;&#x4E2D;&#x5FC3;&#x810F;&#x7EC6;&#x80DE;&#x540C;&#x65F6;&#x786E;&#x5B9A;&#x8F85;&#x52A9; Ca (V) beta I(Ca,L) &#x7684; PKA &#x8C03;&#x5236;&#x7684;&#x5F71;&#x54CD;&#x5E76;&#x8861;&#x91CF;&#x672C;&#x89C4;&#x4F8B;&#x5728;&#x5FC3;&#x810F;&#x50A8;&#x5907;&#x529F;&#x80FD;&#x3002;Ca (V) 1.2 &#x6E20;&#x9053;&#x542B;&#x91CE;&#x751F;&#x578B; beta(2a) &#x6216;&#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x7F3A;&#x5931;&#x578B;&#x7A81;&#x53D8;&#x4F53; &#xFF08;beta(2a,AAA)) &#x540C;&#x6837;&#x88AB;&#x4E0A;&#x8C03; pka &#x503C;&#xFF0C;&#x6263;&#x9664;&#x5FC5;&#x8981;&#x7684; &beta; &#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;&#x7136;&#x800C;&#xFF0C;&#x91CD;&#x7EC4;&#x4E0E; beta(2a) &#x7684;&#x6E20;&#x9053;&#x663E;&#x793A;&#x76F8;&#x6BD4;&#x5176;&#x4ED6; &beta; &#x5F02;&#x6784;&#x4F53;&#xFF0C;&#x552F;&#x4E00;&#x8F83;&#x9AD8;&#x7684;&#x57FA;&#x5E95; P(o) beta(2a) &#x901A;&#x9053;&#x7684;&#x6548;&#x679C;&#x53EF;&#x4EE5;&#x89E3;&#x91CA;&#x5927;&#x4E3A;&#x964D;&#x4F4E;&#x7684; PKA &#x54CD;&#x5E94;&#x3002;&#x8868;&#x8FBE;&#x7684;&#x6240;&#x6709;&#x6D4B;&#x8BD5;&#x7248;&#x589E;&#x52A0;&#x4E86;&#x57FA;&#x5E95;&#x7684;&#x7535;&#x6D41;&#x5BC6;&#x5EA6;&#xFF0C;&#x4F34;&#x968F;&#x7740;&#x540C;&#x65F6;&#x51CF;&#x5C11;&#x4E86; PKA &#x89C4;&#x4F8B;&#x7684;&#x4E25;&#x91CD;&#x7A0B;&#x5EA6;&#x3002;&#x5F53;&#x524D;&#x5BF9;&#x57FA;&#x5E95;&#x7684;&#x7535;&#x6D41;&#x5BC6;&#x5EA6;&#x589E;&#x52A0;&#x500D;&#x7684;&#x6563;&#x70B9;&#x56FE;&#x663E;&#x793A;&#x6210;&#x53CD;&#x6BD4;&#x5173;&#x7CFB;&#xFF0C;&#x662F;&#x8DE8;&#x7269;&#x79CD;&#x4FDD;&#x80B2;&#x548C;&#x7B26;&#x5408;&#x6A21;&#x578B;&#x7684;&#x6E20;&#x9053;&#x5F88;&#x5927;&#x4E00;&#x90E8;&#x5206;&#x4ECD;&#x7136;&#x672A;&#x4FEE;&#x6539; PKA &#x6FC0;&#x6D3B;&#x540E;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7ED3;&#x679C;&#x91CD;&#x65B0;&#x5B9A;&#x4E49; &beta; &#x4E9A;&#x57FA; PKA &#x8C03;&#x5236;&#x7684; Ca (V) 1.2 &#x6E20;&#x9053;&#x4E2D;&#x7684;&#x4F5C;&#x7528;&#x548C;&#x53D1;&#x73B0;&#x65B0;&#x7684;&#x8BBE;&#x8BA1;&#x539F;&#x5219;&#xFF0C;&#x8FD9;&#x79CD;&#x73B0;&#x8C61;&#x5728;&#x5FC3;&#x810F;&#x3001; vis.&#x5BF9;&#x4E8E;&#x76F8;&#x5BF9;&#x6709;&#x9650;&#x529F;&#x80FD;&#x50A8;&#x5907;&#x3002;

CaVbeta &#x4E9A;&#x57FA;&#x548C;&#x7F3A;&#x4E4F;&#x7684;&#x50A8;&#x5907;&#x529F;&#x80FD;&#xFF0C;&#x5728;&#x86CB;&#x767D;&#x6FC0;&#x9176;&#x8C03;&#x5236;&#x7684;&#x5FC3;&#x810F; CaV1.2 &#x6E20;&#x9053;&#x7684;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;

Protein kinase A (PKA)-mediated enhancement of L-type calcium currents (I(Ca,L)) is essential for sympathetic regulation of the heartbeat and is the classic example of channel regulation by phosphorylation, and its loss is a common hallmark of heart failure. Mechanistic understanding of how distinct Ca(V) channel subunits contribute to PKA modulation of I(Ca,L) has been intensely pursued yet remains elusive. Moreover, critical features of this regulation such as its functional reserve (the surplus capacity available for modulation) in the heart are unknown. Here, we use an overexpression paradigm in heart cells to simultaneously identify the impact of auxiliary Ca(V)betas on PKA modulation of I(Ca,L) and to gauge the functional reserve of this regulation in the heart. Ca(V)1.2 channels containing wild-type beta(2a) or a phosphorylation-deficient mutant (beta(2a,AAA)) were equally upregulated by PKA, discounting a necessary role for beta phosphorylation. Nevertheless, channels reconstituted with beta(2a) displayed a significantly diminished PKA response compared with other beta isoforms, an effect explainable by a uniquely higher basal P(o) of beta(2a) channels. Overexpression of all betas increased basal current density, accompanied by a concomitant decrease in the magnitude of PKA regulation. Scatter plots of fold increase in current against basal current density revealed an inverse relationship that was conserved across species and conformed to a model in which a large fraction of channels remained unmodified after PKA activation. These results redefine the role of beta subunits in PKA modulation of Ca(V)1.2 channels and uncover a new design principle of this phenomenon in the heart, vis Ã  vis a limited functional reserve.

Role of CaVbeta subunits, and lack of functional reserve, in protein kinase A modulation of cardiac CaV1.2 channels.

La prot&#xE9;ine kinase A am&#xE9;lioration (PKA) m&#xE9;di&#xE9;e par des courants calciques de type L (I (Ca, L)) est essentiel pour la r&#xE9;gulation sympathique du rythme cardiaque et est l&#x26;#39;exemple classique de la r&#xE9;glementation de canal par phosphorylation, et sa perte est une caract&#xE9;ristique commune de l&#x26;#39;insuffisance cardiaque. Compr&#xE9;hension m&#xE9;caniste de la fa&#xE7;on dont les sous-unit&#xE9;s distinctes Ca canaux (V) de contribuer &#xE0; la modulation de la PKA I (Ca, L) a &#xE9;t&#xE9; intens&#xE9;ment poursuivis mais il reste encore insaisissable. En outre, les caract&#xE9;ristiques essentielles de ce r&#xE8;glement tel que sa r&#xE9;serve fonctionnelle (la capacit&#xE9; exc&#xE9;dentaire disponible pour la modulation) dans le coeur sont inconnus. Ici, nous utilisons un paradigme surexpression dans les cellules cardiaques &#xE0; la fois d&#x26;#39;identifier l&#x26;#39;impact des auxiliaires Ca (V) b&#xEA;tas sur la modulation de la PKA I (Ca, L) et d&#x26;#39;&#xE9;valuer la r&#xE9;serve fonctionnelle de ce r&#xE8;glement dans le c&#x153;ur. Ca (V) 1.2 canaux contenant de type sauvage beta (2a) ou un mutant d&#xE9;ficient phosphorylation (b&#xEA;ta (2a, AAA)) ont &#xE9;t&#xE9; &#xE9;galement augment&#xE9;e par la PKA, actualisant un r&#xF4;le n&#xE9;cessaire pour la phosphorylation beta. N&#xE9;anmoins, les canaux reconstitu&#xE9; avec beta (2a) a pr&#xE9;sent&#xE9; une r&#xE9;ponse significativement diminu&#xE9;e par rapport &#xE0; la PKA isoformes d&#x26;#39;autres b&#xEA;ta-, un effet explicable par un P unique plus basale (o) de la b&#xEA;ta (2a) des canaux. La surexpression de tous les b&#xEA;tas augment&#xE9; la densit&#xE9; de courant de base, accompagn&#xE9;e d&#x26;#39;une diminution concomitante de l&#x26;#39;ampleur de la PKA la r&#xE9;glementation. Les diagrammes de dispersion de multiplication dans le courant de la densit&#xE9; de courant de base a r&#xE9;v&#xE9;l&#xE9; une relation inverse qui a &#xE9;t&#xE9; conserv&#xE9; &#xE0; travers les esp&#xE8;ces et conforme &#xE0; un mod&#xE8;le dans lequel une fraction importante de canaux rest&#xE9;e inchang&#xE9;e apr&#xE8;s activation de la PKA. Ces r&#xE9;sultats de red&#xE9;finir le r&#xF4;le de sous-unit&#xE9;s b&#xEA;ta PKA modulation de Ca (V) 1.2 canaux et de d&#xE9;couvrir un principe de conception nouvelle de ce ph&#xE9;nom&#xE8;ne dans le coeur, vis-&#xE0;-vis d&#x26;#39;une r&#xE9;serve fonctionnelle limit&#xE9;e.

R&#xF4;le des sous-unit&#xE9;s CaVbeta et manque de r&#xE9;serve fonctionnelle, dans la prot&#xE9;ine kinase A Modulation de canaux cardiaques Cav1.2

Protein Kinase A PKA-vermittelte Erweiterung des L-Typ-Kalzium-Str&ouml;me (I(Ca,L)) unverzichtbar f&uuml;r sympathische Verordnung des Herzrhythmus und ist das klassische Beispiel Kanal Verordnung durch Phosphorylierung und seinen Verlust ist ein gemeinsames Merkmal der Herzinsuffizienz. Mechanistische Verst&auml;ndnis beitragen wie unterschiedliche Ca(V)-Kanal-Untereinheiten PKA Modulation der I(Ca,L) intensiv verfolgt worden, dennoch bleibt schwer. Dar&uuml;ber hinaus sind kritische Funktionen dieser Verordnung wie die Funktionsreserve (die &uuml;bersch&uuml;ssige Kapazit&auml;t verf&uuml;gbar f&uuml;r Modulation) im Herzen unbekannt. Hier verwenden wir eine &Uuml;berexpression Paradigma in den Herzzellen, um gleichzeitig die Auswirkungen der zus&auml;tzlichen Ca (V)-Betaversionen auf PKA-Modulation der I(Ca,L) zu identifizieren und zu beurteilen, die funktionelle Reserve der vorliegenden Verordnung im Herzen. Ca (V) 1.2 Kan&auml;le mit Wildtyp beta(2a) oder eine Phosphorylierung-defizienten-Mutante (beta(2a,AAA)) waren ebenso herraufreguliert von PKA, Diskontierung eine notwendige Rolle f&uuml;r Beta-Phosphorylierung. Trotzdem angezeigt Kan&auml;le rekonstituiert mit beta(2a) eine deutlich verminderte PKA-Antwort im Vergleich mit anderen Beta-Isoformen, eine Wirkung, die durch eine eindeutig h&ouml;here basale P(o) beta(2a) Kan&auml;le erkl&auml;rbar. Eine &Uuml;berexpression von alle Betaversionen erh&ouml;hten basalen Stromdichte, begleitet durch einen gleichzeitigen R&uuml;ckgang des Ausma&szlig;es der PKA-Verordnung. XY Grundst&uuml;cke Falte Zunahme der Strom gegen basale Stromdichte ergab eine inverse Beziehung, die Arten konserviert und entsprach ein Modell, in dem ein gro&szlig;er Teil der Kan&auml;le nach PKA Aktivierung unver&auml;ndert blieb. Diese Ergebnisse die Rolle der Beta-Untereinheiten PKA Modulation des Ca (V) 1.2 Kan&auml;le neu zu definieren und entdecken Sie eine neue Konstruktionsprinzip dieses Ph&auml;nomens im Herzen, Vis &agrave; Vis eine begrenzte funktionelle reserve.

Die Rolle der CaVbeta Untereinheiten und mangelnde Funktionsreserve in Proteinkinase eine Modulation der kardialen CaV1.2 Kan&auml;le.

A PKA-mediata valorizzazione chinasi di proteina di correnti del calcio di tipo L (I(Ca,L)) &egrave; essenziale per regolamento comprensivo del battito cardiaco ed &egrave; il classico esempio di regolamento canale di fosforilazione, e la perdita &egrave; una caratteristica comune di insufficienza cardiaca. Comprensione meccanicistica di come distinte subunit&agrave; di canale Ca(V) contribuiscono alla modulazione PKA di I(Ca,L) &egrave; stata intensamente perseguita ancora resta sfuggente. Inoltre, caratteristiche fondamentali del presente regolamento come sua riserva funzionale (l&#39;eccesso di capacit&agrave; disponibile per la modulazione) nel cuore sono sconosciuti. Qui, usiamo un paradigma sovraespressione in cellule del cuore per identificare simultaneamente l&#39;impatto di ausiliario beta Ca (V) sulla modulazione di PKA di I(Ca,L) e di valutare la riserva funzionale del presente regolamento nel cuore. Canali CA (V) 1.2 contenenti beta(2a) wild-type o un deficit di fosforilazione mutante (beta(2a,AAA)) erano ugualmente sovraregolati da PKA, attualizzando un ruolo necessario per fosforilazione della beta. Tuttavia, canali ricostituiti con beta(2a) visualizzato una risposta PKA significativamente diminuita rispetto ad altri beta isoforme, un effetto spiegabile da un unico superiore P(o) basale dei canali beta(2a). Sovraespressione di tutte le versioni beta maggiore densit&agrave; di corrente basale, accompagnata da una concomitante diminuzione della grandezza del regolamento PKA. Tracciati a dispersione di fold aumento della corrente contro la densit&agrave; di corrente basale ha rivelato un rapporto inverso che &egrave; stato conservato tra specie e conforme a un modello in cui una grande frazione dei canali &egrave; rimasto invariata dopo l&#39;attivazione di PKA. Questi risultati ridefiniscono il ruolo delle subunit&agrave; beta nella modulazione dei canali del Ca (V) 1.2 di PKA e scoprire un nuovo principio di progettazione di questo fenomeno nel cuore, vis &agrave; vis una limitata funzionale riserva.

Ruolo della subunit&agrave; CaVbeta e la mancanza di riserva funzionale, in una modulazione di canali CaV1.2 cardiaci la chinasi di proteina.

&#x30D7;&#x30ED;&#x30C6;&#x30A4;&#x30F3;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x306F;&#x3001;L&#x578B;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;&#x96FB;&#x6D41;&#xFF08;I&#xFF08;CA&#x3001;L&#xFF09;&#xFF09;&#x306E;&#xFF08;PKA&#xFF09;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x305F;&#x62E1;&#x5F35;&#x306F;&#x3001;&#x30CF;&#x30FC;&#x30C8;&#x30D3;&#x30FC;&#x30C8;&#x306E;&#x4EA4;&#x611F;&#x795E;&#x7D4C;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x306B;&#x4E0D;&#x53EF;&#x6B20;&#x3067;&#x3042;&#x308A;&#x3001;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x898F;&#x5236;&#x306E;&#x5178;&#x578B;&#x7684;&#x306A;&#x4F8B;&#x3067;&#x3042;&#x308A;&#x3001;&#x305D;&#x306E;&#x640D;&#x5931;&#x306F;&#x5171;&#x901A;&#x306E;&#x7279;&#x5FB4;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x5FC3;&#x4E0D;&#x5168;&#x3002;&#x306E;Ca&#xFF08;V&#xFF09;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x306E;&#x30B5;&#x30D6;&#x30E6;&#x30CB;&#x30C3;&#x30C8;&#x306F;&#x3001;&#x79C1;&#x306E;PKA&#x5909;&#x8ABF;&#xFF08;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;&#x3001;L&#xFF09;&#x306B;&#x8CA2;&#x732E;&#x3059;&#x308B;&#x65B9;&#x6CD5;&#x306E;&#x7570;&#x306A;&#x308B;&#x306E;&#x30E1;&#x30AB;&#x30CB;&#x30BA;&#x30E0;&#x306E;&#x7406;&#x89E3;&#x304C;&#x6FC0;&#x3057;&#x304F;&#x3001;&#x307E;&#x3060;&#x8FFD;&#x6C42;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x304D;&#x305F;&#x3068;&#x3089;&#x3048;&#x3069;&#x3053;&#x308D;&#x306E;&#x306A;&#x3044;&#x307E;&#x307E;&#x306B;&#x306A;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x307E;&#x305F;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306A;&#x5FC3;&#x3067;&#x3001;&#x305D;&#x306E;&#x4E88;&#x5099;&#x80FD;&#xFF08;&#x5909;&#x8ABF;&#x3067;&#x4F7F;&#x7528;&#x53EF;&#x80FD;&#x306A;&#x4F59;&#x5270;&#x5BB9;&#x91CF;&#xFF09;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x898F;&#x5236;&#x306E;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x6A5F;&#x80FD;&#x306F;&#x4E0D;&#x660E;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x540C;&#x6642;&#x306B;&#x79C1;&#x306E;PKA&#x5909;&#x8ABF;&#xFF08;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;&#x3001;L&#xFF09;&#x306E;&#x88DC;&#x52A9;&#x306E;Ca&#xFF08;V&#xFF09;&#x30D9;&#x30FC;&#x30BF;&#x7248;&#x306E;&#x5F71;&#x97FF;&#x3092;&#x8B58;&#x5225;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x3001;&#x5FC3;&#x81D3;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x898F;&#x5236;&#x306E;&#x4E88;&#x5099;&#x80FD;&#x3092;&#x6E2C;&#x5B9A;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x5FC3;&#x81D3;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x3067;&#x904E;&#x5270;&#x767A;&#x73FE;&#x306E;&#x30D1;&#x30E9;&#x30C0;&#x30A4;&#x30E0;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x91CE;&#x751F;&#x578B;&#x3B2;&#xFF08;2a&#xFF09;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x6B20;&#x640D;&#x5909;&#x7570;&#x4F53;&#xFF08;&#x30D9;&#x30FC;&#x30BF;&#xFF08;2A&#x3001;AAA&#xFF09;&#xFF09;&#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;&#xFF08;V&#xFF09;1.2&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x304C;&#x5747;&#x7B49;&#x306B;&#x3B2;&#x9178;&#x5316;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x5FC5;&#x8981;&#x306A;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x5272;&#x308A;&#x5F15;&#x304F;&#x3001;PKA&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x30A2;&#x30C3;&#x30D7;&#x30EC;&#x30AE;&#x30E5;&#x30EC;&#x30FC;&#x30C8;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3002;&#x305D;&#x308C;&#x306B;&#x3082;&#x304B;&#x304B;&#x308F;&#x3089;&#x305A;&#x3001;&#x30D9;&#x30FC;&#x30BF;&#xFF08;2A&#xFF09;&#x3067;&#x518D;&#x69CB;&#x6210;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x306F;&#x3001;&#x4ED6;&#x306E;&#x3B2;&#x30A2;&#x30A4;&#x30BD;&#x30D5;&#x30A9;&#x30FC;&#x30E0;&#x3068;&#x6BD4;&#x8F03;&#x3057;&#x3066;&#x3B2;&#xFF08;2a&#xFF09;&#x306E;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x306E;&#x4E00;&#x610F;&#x306E;&#x9AD8;&#x3044;&#x57FA;&#x5E95;P&#xFF08;O&#xFF09;&#x3067;&#x8AAC;&#x660E;&#x3067;&#x304D;&#x308B;&#x52B9;&#x679C;&#x3092;&#x5927;&#x5E45;&#x306B;&#x6E1B;&#x5C11;&#x3057;&#x305F;PKA&#x5FDC;&#x7B54;&#x3092;&#x8868;&#x793A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3059;&#x3079;&#x3066;&#x306E;&#x30D9;&#x30FC;&#x30BF;&#x7248;&#x306E;&#x904E;&#x5270;&#x767A;&#x73FE;&#x306F;PKA&#x8ABF;&#x7BC0;&#x306E;&#x5927;&#x304D;&#x3055;&#x306E;&#x540C;&#x6642;&#x6E1B;&#x5C11;&#x3092;&#x4F34;&#x3063;&#x3066;&#x3001;&#x57FA;&#x5E95;&#x96FB;&#x6D41;&#x5BC6;&#x5EA6;&#x3092;&#x5897;&#x52A0;&#x3055;&#x305B;&#x305F;&#x3002;&#x57FA;&#x5E95;&#x96FB;&#x6D41;&#x5BC6;&#x5EA6;&#x306B;&#x5BFE;&#x3059;&#x308B;&#x73FE;&#x5728;&#x306E;&#x500D;&#x306B;&#x5897;&#x52A0;&#x306E;&#x6563;&#x5E03;&#x56F3;&#x306F;&#x3001;&#x7A2E;&#x9593;&#x3067;&#x4FDD;&#x5B58;&#x304A;&#x3088;&#x3073;PKA&#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x5F8C;&#x306B;&#x5909;&#x66F4;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x306A;&#x3044;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x306E;&#x5927;&#x90E8;&#x5206;&#x304C;&#x6B8B;&#x3063;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x306B;&#x9069;&#x5408;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x9006;&#x306E;&#x95A2;&#x4FC2;&#x3092;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x306F;Ca&#x306E;PKA&#x5909;&#x8ABF;&#xFF08;V&#xFF09;1.2&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x306E;&#x3B2;&#x30B5;&#x30D6;&#x30E6;&#x30CB;&#x30C3;&#x30C8;&#x306E;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x518D;&#x5B9A;&#x7FA9;&#x3057;&#x3001;&#x4E2D;&#x5FC3;&#x90E8;&#x306B;&#x3053;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306A;&#x73FE;&#x8C61;&#x306E;&#x65B0;&#x3057;&#x3044;&#x8A2D;&#x8A08;&#x539F;&#x7406;&#x3092;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x3057;&#x3001;&#x6C17;&#x529B;&#xE0;&#x6C17;&#x529B;&#x5236;&#x9650;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x4E88;&#x5099;&#x80FD;&#x3002;

CaVbeta&#x30B5;&#x30D6;&#x30E6;&#x30CB;&#x30C3;&#x30C8;&#x306E;&#x5F79;&#x5272;&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C6;&#x30A4;&#x30F3;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x306E;&#x4E88;&#x5099;&#x80FD;&#x306E;&#x6B20;&#x5982;&#x3001;&#x5FC3;&#x81D3;CaV1.2&#x30C1;&#x30E3;&#x30F3;&#x30CD;&#x30EB;&#x306E;&#x30E2;&#x30B8;&#x30E5;&#x30EC;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;

L &#xD0C0;&#xC785; &#xCE7C;&#xC298; &#xC804;&#xB958; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xD0A4; &#xB2C8; &#xC544; &#xC81C; A PKA &#xC911;&#xC7AC; &#xD5A5;&#xC0C1; (I(Ca,L)) &#xD558;&#xD2B8; &#xBE44;&#xD2B8;&#xC758; &#xACF5;&#xAC10; &#xADDC;&#xC81C;&#xB97C; &#xC704;&#xD574; &#xD544;&#xC218;&#xC801; &#xC774;&#xBA70;, &#xC778; &#xC0B0;&#xD654;&#xC5D0;&#xC758; &#xD55C; &#xCC44;&#xB110; &#xADDC;&#xC81C;&#xC758; &#xACE0;&#xC804;&#xC801;&#xC778; &#xC608;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; &#xADF8;&#xAC83;&#xC758; &#xC190;&#xC2E4;&#xC774; &#xC2EC;&#xC7A5; &#xB9C8;&#xBE44;&#xC758; &#xC77C;&#xBC18;&#xC801;&#xC778; &#xD2B9;&#xC9D5;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xAE30;&#xACC4; &#xC774;&#xD574; &#xC5B4;&#xB5BB;&#xAC8C; &#xB69C;&#xB837;&#xD55C; Ca(V) &#xCC44;&#xB110; subunits&#xC758; i(ca,l)&#xC758; PKA &#xBCC0;&#xC870;&#xC5D0; &#xAE30;&#xC5EC;&#xD560; &#xB2EC;&#xC544; &#xCD94;&#xC9C4; &#xD558;&#xACE0;&#xC788;&#xB2E4; &#xD558;&#xC9C0; &#xC544;&#xC9C1; &#xC560;&#xB9E4; &#xB0A8;&#xC544; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB610;&#xD55C;, &#xC2EC;&#xC7A5;&#xC758; &#xAE30;&#xB2A5; &#xBCF4;&#xC720; (&#xC789;&#xC5EC; &#xC6A9;&#xB7C9; &#xC0AC;&#xC6A9;&#xD560; &#xC218; &#xBCC0;&#xC870;) &#xB4F1;&#xC774; &#xADDC;&#xC815;&#xC758; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC744; &#xC54C; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB3D9;&#xC2DC;&#xC5D0; i(ca,l)&#xC758; PKA &#xBCC0;&#xC870;&#xC5D0; &#xBCF4;&#xC870; Ca (V) &#xBCA0;&#xD0C0;&#xC758; &#xC601;&#xD5A5;&#xC744; &#xC2DD;&#xBCC4; &#xD558; &#xACE0; &#xB9C8;&#xC74C;&#xC5D0;&#xC774; &#xADDC;&#xC815;&#xC758; &#xAE30;&#xB2A5; &#xBCF4;&#xC720; &#xCE21;&#xC815; &#xC5EC;&#xAE30;&#xC5D0;, &#xC6B0;&#xB9AC; &#xC2EC;&#xC7A5; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0; overexpression &#xD328;&#xB7EC;&#xB2E4;&#xC784;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC57C;&#xC0DD;-&#xD0C0;&#xC785; beta(2a) &#xC778; &#xC0B0;&#xD654; &#xBD88;&#xCDA9;&#xBD84; &#xD55C; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xD3EC;&#xD568; &#xD558;&#xB294; Ca (V) 1.2 &#xCC44;&#xB110; (beta(2a,AAA)) &#xBCA0;&#xD0C0; &#xC778; &#xC0B0;&#xD654;&#xC5D0; &#xD544;&#xC694;&#xD55C; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xD560; &#xC778;&#xD558;&#xACE0; PKA&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; upregulated &#xB3D9;&#xB4F1; &#xD558; &#xAC8C; &#xD588;&#xB2E4;. &#xADF8;&#xB7FC;&#xC5D0;&#xB3C4; &#xBD88;&#xAD6C; &#xD558; &#xACE0;, &#xCC44;&#xB110; beta(2a)&#xC640; &#xC7AC;&#xAD6C;&#xC131; &#xB2E4;&#xB978; &#xBCA0;&#xD0C0; isoforms, &#xC720;&#xC77C; &#xD558; &#xAC8C; &#xB192;&#xC740; &#xAE30;&#xC800; P(o) beta(2a) &#xCC44;&#xB110;&#xC758;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC124;&#xBA85;&#xD560; &#xC218; &#xD6A8;&#xACFC; &#xBE44;&#xD574; &#xD604;&#xC800;&#xD788; &#xAC10;&#xC18C; PKA &#xC751;&#xB2F5;&#xC744; &#xD45C;&#xC2DC; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xBAA8;&#xB4E0; &#xBCA0;&#xD0C0; overexpression &#xAE30;&#xC800; &#xC804;&#xB958; &#xBC00;&#xB3C4;, PKA &#xB808; &#xADE4; &#xB808;&#xC774; &#xC158;&#xC758; &#xD06C;&#xAE30;&#xC5D0; &#xC218; &#xBC18;&#xD558;&#xB294; &#xAC10;&#xC18C;&#xC640; &#xD568;&#xAED8; &#xC99D;&#xAC00; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC810;&#xB3C4; &#xAE30;&#xC800; &#xC804;&#xB958; &#xBC00;&#xB3C4; &#xB300; &#xD55C; &#xD604;&#xC7AC; &#xBC30; &#xC99D;&#xAC00;&#xC758; &#xC885;&#xC5D0; &#xAC78;&#xCCD0; &#xBCF4;&#xC874; &#xD558; &#xACE0; &#xC788;&#xB294; &#xCC44;&#xB110;&#xC758; &#xD070; &#xBD80;&#xBD84; &#xB0A8;&#xC544; &#xC218;&#xC815; &#xB418;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC740; PKA &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xD6C4; &#xBAA8;&#xB378;&#xC5D0; &#xB9DE; &#xCDC4; &#xB098;&#xB294; &#xBC18;&#xBE44;&#xB840; &#xAD00;&#xACC4;&#xB97C; &#xACF5;&#xAC1C; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xACB0;&#xACFC; Ca (V) 1.2 &#xCC44;&#xB110;&#xC758; PKA &#xBCC0;&#xC870;&#xC5D0; &#xBCA0;&#xD0C0; subunits&#xC758; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xC7AC;&#xC815;&#xC758; &#xD558; &#xACE0; &#xB9C8;&#xC74C;&#xC5D0;&#xC11C;&#xC774; &#xD604;&#xC0C1;&#xC758; &#xC0C8;&#xB85C;&#xC6B4; &#xB514;&#xC790;&#xC778; &#xC6D0;&#xB9AC;&#xB97C; &#xBC1D;&#xD788;&#xAE30;, vis &agrave; vis &#xC81C;&#xD55C; &#xAE30;&#xB2A5; &#xBCF4;&#xC720;.

CaVbeta &#xC18C; &#xB2E8;&#xC704; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xD0A4; &#xB2C8; &#xC544; &#xC81C; &#xC2EC;&#xC7A5; CaV1.2 &#xCC44;&#xB110;&#xC758; &#xBCC0;&#xC870;&#xC5D0;&#xC11C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xAE30;&#xB2A5; &#xC900;&#xBE44;&#xC758; &#xBD80;&#xC871;&#xC758; &#xC5ED;&#xD560;.

Mejora de la prote&#xED;na quinasa A (PKA), mediadora de las corrientes de calcio tipo L (I (Ca, L)) es esencial para la regulaci&#xF3;n comprensiva de los latidos del coraz&#xF3;n y es el ejemplo cl&#xE1;sico de la regulaci&#xF3;n por fosforilaci&#xF3;n del canal, y su p&#xE9;rdida es una caracter&#xED;stica com&#xFA;n de la insuficiencia card&#xED;aca. Comprender el mecanismo de c&#xF3;mo distintos Ca (V) subunidades de los canales contribuyen a la modulaci&#xF3;n de la PKA I (Ca, L) ha sido intensamente perseguido sin embargo, sigue siendo dif&#xED;cil de alcanzar. Por otra parte, las caracter&#xED;sticas fundamentales de este reglamento como la reserva funcional (la capacidad excedente disponible para la modulaci&#xF3;n) en el coraz&#xF3;n son desconocidos. Aqu&#xED;, nosotros usamos un paradigma sobreexpresi&#xF3;n en c&#xE9;lulas del coraz&#xF3;n para identificar al mismo tiempo el impacto de la auxiliar de Ca (V), las versiones beta de la modulaci&#xF3;n de la PKA I (Ca, L) y para evaluar la reserva funcional de este reglamento, en el coraz&#xF3;n. Ca (V) 1.2 canales que contienen beta de tipo salvaje (2a) o un mutante deficiente en la fosforilaci&#xF3;n (beta (2a, AAA)) se upregulated a partes iguales por la PKA, descontando un papel necesario para la fosforilaci&#xF3;n beta. No obstante, los canales de reconstituirse con beta (2a) muestra una respuesta PKA significativamente disminuida en comparaci&#xF3;n con otras isoformas beta, un efecto explicable por una &#xFA;nica P superior basal (o) de beta (2a) canales. La sobreexpresi&#xF3;n de todas las betas de aumento de la densidad de corriente basal, acompa&#xF1;ado por una disminuci&#xF3;n concomitante en la magnitud de la PKA regulaci&#xF3;n. Los diagramas de dispersi&#xF3;n de veces superior al actual frente a la densidad de corriente basal revel&#xF3; una relaci&#xF3;n inversa que se ha conservado entre las especies y se ajusta a un modelo en el que una gran parte de cadenas se mantuvo sin modificaciones despu&#xE9;s de la activaci&#xF3;n de PKA. Estos resultados redefinir el papel de las subunidades beta en la modulaci&#xF3;n de la PKA Ca (V) 1.2 canales y descubrir un principio nuevo dise&#xF1;o de este fen&#xF3;meno en el coraz&#xF3;n, vis &#xE0; vis una reserva funcional limitada.

El papel de las subunidades CaVbeta y la falta de reserva funcional, en la prote&#xED;na quinasa A La modulaci&#xF3;n de los canales card&#xED;acos Cav1.2

&#x5927;&#x91CF;&#x6D8C;&#x5165;&#x7684;&#x7ECF;&#x79BB;&#x5B50;&#x901A;&#x8FC7;&#x7535;&#x538B;&#x4F9D;&#x8D56;&#x6027;&#x9499; &#xFF08;Ca(V)) &#x9891;&#x9053;&#x94FE;&#x63A5;&#x7535;&#x6C14;&#x4FE1;&#x53F7;&#x5411;&#x6240;&#x6709;&#x53EF;&#x5174;&#x594B;&#x6027;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x751F;&#x7406;&#x53CD;&#x5E94;&#x3002;&#x4E0D;&#x8DB3;&#x4E3A;&#x5947;&#x7684;&#x662F;&#xFF0C;&#x963B;&#x6B62; Ca(V) &#x901A;&#x9053;&#x6D3B;&#x52A8;&#x662F;&#x529F;&#x80FD;&#x5F3A;&#x5927;&#x7684;&#x65B9;&#x6CD5;&#x6765;&#x8C03;&#x8282;&#x7EC6;&#x80DE;&#x529F;&#x80FD;&#x7684;&#x6FC0;&#x52A8;&#xFF0C;&#x548C;&#x8FD9;&#x5265;&#x524A;&#x4E3A;&#x751F;&#x7406;&#x548C;&#x6CBB;&#x7597;&#x6548;&#x76CA;&#x3002;&#x7136;&#x800C;&#xFF0C;Ca(V) &#x901A;&#x9053;&#x6291;&#x5236;&#x7684;&#x5168;&#x90E8;&#x6F5C;&#x529B;&#x4E0D;&#x662F;&#x6B63;&#x5728;&#x5B9E;&#x73B0;&#x7531;&#x5F53;&#x524D;&#x53EF;&#x7528;&#x5C0F;&#x5206;&#x5B50;&#x53D7;&#x4F53;&#x963B;&#x6EDE;&#x5242;&#x6216;&#x7531;&#x4E8E;&#x9488;&#x5BF9;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5728;&#x673A;&#x4F53;&#x4E2D;&#x7684;&#x5DF2;&#x5B9A;&#x4E49;&#x7684;&#x7EC4;&#x6216;&#x4E0D;&#x540C;&#x4E9A;&#x7EC6;&#x80DE;&#x533A;&#x57DF;&#x5185;&#x7684;&#x5355;&#x4E2A;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x7684;&#x9650;&#x5236;&#x7B2C;&#x4E8C;&#x4FE1;&#x4F7F;&#x8C03;&#x5236;&#x5668;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x5BA1;&#x67E5;&#x5DE5;&#x7A0B;&#x5E08; Ca(V) &#x6E20;&#x9053;&#xFF0C;&#x4EE5;&#x586B;&#x8865;&#x8FD9;&#x4E2A;&#x5173;&#x952E;&#x9886;&#x57DF;&#xFF0C;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x5206;&#x5B50;&#x53D7;&#x4F53;&#x963B;&#x6EDE;&#x5242;&#x7684;&#x65E9;&#x671F;&#x52AA;&#x529B;&#x3002;&#x8FD9;&#x79CD;&#x6280;&#x672F;&#x6781;&#x5927;&#x5730;&#x6269;&#x5C55;&#x5DE5;&#x5177;&#x7BB1;&#x4E2D;&#x53EF;&#x7528;&#x7684;&#x8702;&#x7A9D;&#x548C;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x7EA7;&#x7684;&#x53EF;&#x5174;&#x594B;&#x6027;&#x7EC6;&#x80DE;&#x751F;&#x7269;&#x5B66;&#x7814;&#x7A76;&#x7684;&#x751F;&#x7406;&#x5B66;&#x5BB6;&#x3002;

&#x5DE5;&#x7A0B;&#x81EA;&#x5B9A;&#x4E49;&#x7684; Ca(V) &#x901A;&#x9053;&#x7684;&#x6291;&#x5236;&#x4F5C;&#x7528;&#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x3002;

The influx of Ca(2+) ions through voltage-dependent calcium (Ca(V)) channels links electrical signals to physiological responses in all excitable cells. Not surprisingly, blocking Ca(V) channel activity is a powerful method to regulate the function of excitable cells, and this is exploited for both physiological and therapeutic benefit. Nevertheless, the full potential for Ca(V) channel inhibition is not being realized by currently available small-molecule blockers or second-messenger modulators due to limitations in targeting them either to defined groups of cells in an organism or to distinct subcellular regions within a single cell. Here, we review early efforts to engineer protein molecule blockers of Ca(V) channels to fill this crucial niche. This technology would greatly expand the toolbox available to physiologists studying the biology of excitable cells at the cellular and systems level.

Engineering proteins for custom inhibition of Ca(V) channels.

L&#x26;#39;afflux de Ca (2 +) des ions &#xE0; travers voltage-d&#xE9;pendant du calcium (Ca (V)) canaux liens signaux &#xE9;lectriques &#xE0; des r&#xE9;actions physiologiques dans toutes les cellules excitables. Il n&#x26;#39;est pas surprenant, le blocage de Ca (V) l&#x26;#39;activit&#xE9; du canal est une m&#xE9;thode puissante pour r&#xE9;guler la fonction des cellules excitables, ce qui est exploit&#xE9;e pour le b&#xE9;n&#xE9;fice &#xE0; la fois physiologique et th&#xE9;rapeutique. N&#xE9;anmoins, le potentiel d&#x26;#39;inhibition Ca canal (V) n&#x26;#39;est pas r&#xE9;alis&#xE9; par actuellement disponibles &#xE0; petites mol&#xE9;cules antagonistes ou modulateurs de second messager en raison de limitations dans les cibler soit &#xE0; des groupes d&#xE9;finis de cellules dans un organisme ou &#xE0; des r&#xE9;gions distinctes au sein d&#x26;#39;un subcellulaires seule cellule. Ici, nous passons en revue les premiers efforts pour concevoir bloquants mol&#xE9;cule de prot&#xE9;ine de Ca (V) canaux pour remplir cette niche cruciale. Cette technologie serait &#xE9;largir consid&#xE9;rablement la palette d&#x26;#39;outils &#xE0; la disposition des physiologistes qui &#xE9;tudient la biologie des cellules excitables au niveau cellulaire et des syst&#xE8;mes.

Prot&#xE9;ines d&#x26;#39;ing&#xE9;nierie pour l&#x26;#39;inhibition personnalis&#xE9; de Ca (V) Cha&#xEE;nes

Der Zustrom von Ca(2+) Ionen durch Spannung-abh&auml;ngige Kalzium (Ca(V)) Kan&auml;le Links elektrische Signale zu physiologischen Reaktionen, die in allen erregbar Zellen. Nicht &uuml;berraschend, blockieren Ca(V) Channel-Aktivit&auml;ten ist eine leistungsf&auml;hige Methode, die Funktion von excitable Zellen zu regulieren, und dies ist f&uuml;r sowohl physiologische als auch therapeutischen Nutzen ausgenutzt. Trotzdem ist das Potenzial f&uuml;r Ca(V)-Kanal-Hemmung von derzeit verf&uuml;gbaren klein-Molek&uuml;l-Blockern oder zweite-Kurier Modulatoren bedingt ins Visier nehmen sie entweder definierten Gruppen von Zellen in einem Organismus oder verschiedene subzellulare Regionen innerhalb einer einzelnen Zelle nicht realisiert. Hier &uuml;berpr&uuml;fen wir Bem&uuml;hungen, zu Ingenieur Protein-Molek&uuml;l-Blocker von Ca(V) Kan&auml;len, diese entscheidende Nische zu f&uuml;llen. Diese Technologie w&uuml;rde stark Physiologen Studium Biologie der excitable Zellen auf der zellularen und Systeme die Toolbox zur Verf&uuml;gung zuzuf&uuml;gen.

Maschinenbau Proteine f&uuml;r benutzerdefinierte Hemmung der Ca(V) Kan&auml;le.

L&#39;afflusso degli ioni di Ca(2+) attraverso il calcio voltaggio-dipendenti (Ca(V)) canali di segnali elettrici link a risposte fisiologiche in tutte le cellule eccitabili. Non sorprendentemente, bloccando l&#39;attivit&agrave; del canale Ca(V) &egrave; un metodo potente per regolare la funzione delle cellule eccitabili, e questo &egrave; sfruttato per benefici fisiologici e terapeutici. Tuttavia, il potenziale per l&#39;inibizione del canale Ca(V) non &egrave; essere realizzato da attualmente disponibili piccolo-molecola bloccanti o secondo messaggero modulatori a causa delle limitazioni nella loro destinazione di gruppi definiti di cellule in un organismo o di regioni sottocellulari distinte all&#39;interno di una singola cella. Qui, passiamo in rassegna i primi sforzi per ingegnere bloccanti molecola proteica dei canali Ca(V) per riempire questa nicchia cruciale. Questa tecnologia avrebbe espandere notevolmente la casella degli strumenti disponibile per fisiologi studiando la biologia delle cellule eccitabili a livello cellulare e sistemi.

Ingegneria proteine per inibizione personalizzata dei canali Ca(V).

&#x96FB;&#x4F4D;&#x4F9D;&#x5B58;&#x6027;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;&#xFF08;Ca&#xFF08;V&#xFF09;&#xFF09;&#x306E;&#x30C1;&#x30E3;&#x30F3;&#x30CD;&#x30EB;&#x3059;&#x3079;&#x3066;&#x306E;&#x8208;&#x596E;&#x6027;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x751F;&#x7406;&#x5B66;&#x7684;&#x53CD;&#x5FDC;&#x3078;&#x306E;&#x30EA;&#x30F3;&#x30AF;&#x306F;&#x96FB;&#x6C17;&#x4FE1;&#x53F7;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x3066;&#x306E;Ca&#xFF08;2 +&#xFF09;&#x30A4;&#x30AA;&#x30F3;&#x306E;&#x6D41;&#x5165;&#x3002;&#x9A5A;&#x304F;&#x3053;&#x3068;&#x3067;&#x306F;&#x306A;&#x3044;&#x304C;&#x3001;&#x30D6;&#x30ED;&#x30C3;&#x30AD;&#x30F3;&#x30B0;&#x306E;Ca&#xFF08;V&#xFF09;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x306F;&#x3001;&#x8208;&#x596E;&#x6027;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3092;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x5F37;&#x529B;&#x306A;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3067;&#x3042;&#x308A;&#x3001;&#x3053;&#x308C;&#x306F;&#x751F;&#x7406;&#x3068;&#x6CBB;&#x7642;&#x306E;&#x4E21;&#x65B9;&#x306E;&#x5229;&#x76CA;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x5229;&#x7528;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x305D;&#x308C;&#x306B;&#x3082;&#x304B;&#x304B;&#x308F;&#x3089;&#x305A;&#x3001;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;&#xFF08;V&#xFF09;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x306E;&#x6291;&#x5236;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x6700;&#x5927;&#x9650;&#x306E;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x306F;&#x3001;&#x73FE;&#x6642;&#x70B9;&#x3067;&#x5165;&#x624B;&#x53EF;&#x80FD;&#x306A;&#x5C0F;&#x5206;&#x5B50;&#x85AC;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x5185;&#x3067;&#x306E;&#x751F;&#x7269;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x5B9A;&#x7FA9;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x30B0;&#x30EB;&#x30FC;&#x30D7;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x7570;&#x306A;&#x308B;&#x7D30;&#x80DE;&#x5185;&#x9818;&#x57DF;&#x306E;&#x3044;&#x305A;&#x308C;&#x304B;&#x306B;&#x305D;&#x308C;&#x3089;&#x3092;&#x30BF;&#x30FC;&#x30B2;&#x30C3;&#x30C8;&#x306B;&#x5236;&#x9650;&#x304C;&#x3042;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x3001;&#x7B2C;&#x4E8C;&#x30E1;&#x30C3;&#x30BB;&#x30F3;&#x30B8;&#x30E3;&#x30FC;&#x5909;&#x8ABF;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x5B9F;&#x73FE;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x5358;&#x4E00;&#x306E;&#x30BB;&#x30EB;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x30CB;&#x30C3;&#x30C1;&#x3092;&#x57CB;&#x3081;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306E;Ca&#xFF08;V&#xFF09;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x306E;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x5206;&#x5B50;&#x30D6;&#x30ED;&#x30C3;&#x30AB;&#x30FC;&#x3092;&#x8A2D;&#x8A08;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x521D;&#x671F;&#x306E;&#x52AA;&#x529B;&#x3092;&#x78BA;&#x8A8D;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x6280;&#x8853;&#x306F;&#x975E;&#x5E38;&#x306B;&#x643A;&#x5E2F;&#x96FB;&#x8A71;&#x3084;&#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E0;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x3067;&#x306E;&#x8208;&#x596E;&#x6027;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x751F;&#x7269;&#x5B66;&#x3092;&#x7814;&#x7A76;&#x3059;&#x308B;&#x751F;&#x7406;&#x5B66;&#x3067;&#x4F7F;&#x7528;&#x53EF;&#x80FD;&#x306A;&#x30C4;&#x30FC;&#x30EB;&#x30DC;&#x30C3;&#x30AF;&#x30B9;&#x3092;&#x5C55;&#x958B;&#x3059;&#x308B;&#x3060;&#x308D;&#x3046;&#x3002;

&#x306E;Ca&#xFF08;V&#xFF09;&#x30C1;&#x30E3;&#x30F3;&#x30CD;&#x30EB;&#x306E;&#x30AB;&#x30B9;&#x30BF;&#x30E0;&#x6291;&#x5236;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x5DE5;&#x5B66;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;

&#xC804;&#xC555; &#xC885;&#xC18D; &#xCE7C;&#xC298; (Ca(V)) &#xCC44;&#xB110; &#xB9C1;&#xD06C; &#xC804;&#xAE30; &#xC2E0;&#xD638;&#xB97C; &#xBAA8;&#xB4E0; &#xACE0;&#xB974;&#xAE30;&#xAC00; &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xC0DD;&#xB9AC; &#xC801;&#xC778; &#xC751;&#xB2F5; &#xD1B5;&#xD574; Ca(2+) &#xC774;&#xC628;&#xC758; &#xC720;&#xC785;. &#xC544;&#xB2C8;&#xB098; &#xB2E4;&#xB97C;&#xAE4C;, &#xAC15;&#xB825;&#xD55C; &#xBC29;&#xBC95;&#xC744; &#xACE0;&#xB974;&#xAE30;&#xAC00; &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC744; &#xC870;&#xC808; &#xD558;&#xB294; Ca(V) &#xCC44;&#xB110; &#xD65C;&#xB3D9;&#xC744; &#xCC28;&#xB2E8; &#xD558; &#xACE0; &#xC774;&#xAC83;&#xC740; &#xC0DD;&#xB9AC; &#xC801; &#xBC0F; &#xCE58;&#xB8CC; &#xC801; &#xC774;&#xC775;&#xC744; &#xC704;&#xD574; &#xC545;&#xC6A9;. &#xADF8;&#xB7FC;&#xC5D0;&#xB3C4; &#xBD88;&#xAD6C; &#xD558; &#xACE0;, &#xD604;&#xC7AC; &#xC0AC;&#xC6A9;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xB294; &#xC791;&#xC740; &#xBD84;&#xC790; &#xCC28;&#xB2E8;&#xC81C; &#xB610;&#xB294; &#xC81C;&#xD55C;&#xC774; &#xC788;&#xC73C;&#xBBC0;&#xB85C; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC744; &#xC720;&#xAE30; &#xCCB4;&#xC5D0; &#xC788;&#xB294; &#xC140;&#xC758; &#xC815;&#xC758; &#xB41C; &#xADF8;&#xB8F9; &#xB610;&#xB294; &#xB2E8;&#xC77C; &#xC140;&#xC5D0; &#xBCC4;&#xAC1C;&#xC758; subcellular &#xC601;&#xC5ED;&#xC744; &#xB300;&#xC0C1;&#xC73C;&#xB85C; &#xB450; &#xBC88;&#xC9F8; &#xBA54;&#xC2E0;&#xC800; &#xBCC0;&#xC870;&#xAE30;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; Ca(V) &#xCC44;&#xB110; &#xC800;&#xD574;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC7A0;&#xC7AC;&#xB825;&#xC774; &#xC2E4;&#xD604; &#xD558;&#xC9C0;&#xB294;. &#xC5EC;&#xAE30;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294;&#xC774; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xD2C8;&#xC0C8;&#xB97C; &#xCC44;&#xC6B0;&#xAE30; &#xC704;&#xD574; Ca(V) &#xCC44;&#xB110;&#xC758; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xBD84;&#xC790; &#xCC28;&#xB2E8;&#xC81C;&#xB97C; &#xCD08;&#xAE30; &#xB178;&#xB825; &#xAC80;&#xD1A0;. &#xC774; &#xAE30;&#xC220;&#xC740; &#xD06C;&#xAC8C; &#xC0DD;&#xB9AC;&#xD559; &#xD734;&#xB300; &#xBC0F; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C; &#xC218;&#xC900;&#xC5D0;&#xC11C; &#xACE0;&#xB974;&#xAE30;&#xAC00; &#xC138;&#xD3EC; &#xC0DD;&#xBB3C;&#xD559; &#xACF5;&#xBD80;&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xB294; &#xB3C4;&#xAD6C; &#xC0C1;&#xC790;&#xB97C; &#xD655;&#xC7A5; &#xD588;&#xB2E4;.

Ca(V) &#xCC44;&#xB110;&#xC758; &#xC0AC;&#xC6A9;&#xC790; &#xC9C0;&#xC815; &#xC5B5;&#xC81C;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xACF5;&#xD559;.

El influjo de Ca (2 +) a trav&#xE9;s de los iones de calcio voltaje-dependientes (Ca (V)) canales de enlaces de se&#xF1;ales el&#xE9;ctricas a las respuestas fisiol&#xF3;gicas en todas las c&#xE9;lulas excitables. No es de extra&#xF1;ar, el bloqueo de Ca (V) la actividad del canal es un poderoso m&#xE9;todo para regular la funci&#xF3;n de las c&#xE9;lulas excitables, y esto es explotado para el beneficio tanto fisiol&#xF3;gicos y terap&#xE9;uticos. Sin embargo, el potencial para la inhibici&#xF3;n de canales de Ca (V) no se est&#xE1; realizando actualmente por peque&#xF1;as mol&#xE9;culas antagonistas o moduladores de segundos mensajeros debido a las limitaciones en la selecci&#xF3;n de las mismas a grupos definidos de c&#xE9;lulas de un organismo o de distintas regiones subcelulares dentro de un sola c&#xE9;lula. En este art&#xED;culo examinamos los primeros esfuerzos de maquinar los bloqueadores de mol&#xE9;culas de prote&#xED;nas de Ca (V) canales para llenar este nicho crucial. Esta tecnolog&#xED;a ser&#xED;a de gran expansi&#xF3;n de la caja de herramientas a disposici&#xF3;n de los fisi&#xF3;logos que estudian la biolog&#xED;a de las c&#xE9;lulas excitables a nivel celular y de sistemas.

Las prote&#xED;nas de ingenier&#xED;a para la inhibici&#xF3;n de encargo de Ca (V) Canales

&#x680F;&#x57DF;&#x86CB;&#x767D;&#x8D85;&#x5BB6;&#x65CF;&#x4ECE;&#x4E8B;&#x819C;&#x5185;&#x9677;&#x548C;&#x5185;&#x541E;&#x4F5C;&#x7528;&#xFF0C;&#x4F46;&#x4E0D;&#x662F;&#x63A2;&#x8BA8;&#x4E86;&#x5176;&#x4F5C;&#x7528;&#xFF0C;&#x7EC4;&#x7EC7;&#x819C;&#x86CB;&#x767D;&#x3002;&#x5C24;&#x5176;&#x662F;&#xFF0C;&#x819C;&#x811A;&#x624B;&#x67B6;&#x86CB;&#x767D;&#x5218;&#x658C; 1 &#x51FD;&#x6570;&#x542F;&#x52A8;&#x5728;&#x9AA8;&#x9ABC;&#x808C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E2D;&#x7684; T-&#x80BE;&#x5C0F;&#x7BA1;&#x6210;&#x56E0;&#x3002;&#x5218;&#x658C; 1 &#x5728;&#x5C0F;&#x9F20;&#x4E2D;&#x7684;&#x672C;&#x6784;&#x7EC4;&#x5408;&#x5F0F;&#x662F;&#x56F4;&#x4EA7;&#x671F;&#x81F4;&#x547D;&#xFF0C;&#x8FD9;&#x662F;&#x4E0E;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x6269;&#x5F20;&#x80A5;&#x539A;&#x578B;&#x5FC3;&#x808C;&#x75C5;&#x76F8;&#x5173;&#x8054;&#x3002;&#x4F46;&#x662F;&#xFF0C;&#x4E0D;&#x77E5;&#x9053;&#x658C; 1 &#x5728;&#x5FC3;&#x808C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E2D;&#x7684;&#x529F;&#x80FD;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;&#x5FC3;&#x810F; T-&#x80BE;&#x5C0F;&#x7BA1;&#x7684;&#x4E00;&#x4E2A;&#x91CD;&#x8981;&#x529F;&#x80FD;&#x662F;&#x5141;&#x8BB8; L-&#x578B;&#x9499;&#x901A;&#x9053; (Cav1.2) &#x662F;&#x57FA;&#x4E8E;&#x808C;&#x6D46;&#x7F51;&#x7684;&#x5170;&#x5C3C;&#x78B1;&#x53D7;&#x4F53;&#x6765;&#x542F;&#x52A8;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5185;&#x9499;&#x77AC;&#x53D8;&#x7684;&#x63A5;&#x8FD1;&#x3002;&#x6709;&#x6548;&#x6FC0;&#x52B1;-&#x6536;&#x7F29; (EC) &#x8026;&#x5408;&#x548C;&#x6B63;&#x5E38;&#x5FC3;&#x808C;&#x6536;&#x7F29;&#x80FD;&#x529B;&#x53D6;&#x51B3;&#x4E8E; Cav1.2 &#x672C;&#x5730;&#x5316;&#x518D;&#x5230; T-&#x80BE;&#x5C0F;&#x7BA1;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x5047;&#x8BBE;&#x5218;&#x658C; 1 &#x4E0D;&#x53EA;&#x5B58;&#x5728;&#x4E8E;&#x5FC3;&#x810F; T-&#x80BE;&#x5C0F;&#x7BA1;&#xFF0C;&#x4F46;&#x5B83;&#x4E5F;&#x5BF9;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x819C;&#x7ED3;&#x6784;&#x672C;&#x5730;&#x5316; Cav1.2&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x62A5;&#x544A;&#x5218;&#x658C; 1 &#x5FC3;&#x810F; T-&#x80BE;&#x5C0F;&#x7BA1;&#x5BF9;&#x672C;&#x5730;&#x5316;&#xFF0C;&#x5E76;&#x4E0E; Cav1.2 &#x90A3;&#x91CC;&#x96C6;&#x7FA4;&#x3002;&#x7814;&#x7A76;&#x5185;&#x5BB9;&#x5305;&#x62EC;&#x65B0;&#x9C9C;&#x540E;&#x5929;&#x7684;&#x4EBA;&#x6743;&#x548C;&#x9F20;&#x6807;&#x6210;&#x4EBA;&#x5FC3;&#x808C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4F7F;&#x7528;&#x8865;&#x5145;&#x514D;&#x75AB;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5316;&#x5B66;&#x3001; &#x7535;&#x955C;&#x4E0E;&#x53CC;&#x91CD;&#x514D;&#x75AB;&#x80F6;&#x4F53;&#x91D1;&#x6807;&#x8BB0;&#xFF0C;&#x548C; co &#x6C89;&#x6DC0;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x4F7F;&#x7528;&#x8868;&#x9762;&#x751F;&#x7269;&#x7D20;&#x548C;&#x4F4F;&#x5728;&#x5FC3;&#x808C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x548C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7CFB;&#x63A2;&#x7D22; Cav1.2 &#x5411;&#x658C; 1 &#x7ED3;&#x6784;&#x63D0;&#x4F9B;&#x7684;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x5171;&#x7126;&#x548C;&#x603B;&#x5185;&#x90E8;&#x8367;&#x5149;&#x663E;&#x5FAE;&#x6210;&#x50CF;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x53D1;&#x73B0;&#x89C6;&#x89C9;&#x4E0A;&#x548C;&#x6570;&#x91CF;&#x4E0A;&#x52A8;&#x6001;&#x5FAE;&#x7BA1;&#x62F4;&#x819C;&#x542F;&#x7528;&#x4E86;&#x57FA;&#x67B6;&#x7684;&#x5218;&#x658C; 1&#xFF0C;&#x5141;&#x8BB8;&#x6709;&#x9488;&#x5BF9;&#x6027;&#x5730;&#x7684;&#x5F00;&#x5C55; Cav1.2 &#x4ECE;&#x5FAE;&#x7BA1;&#x5230;&#x76F8;&#x5173;&#x8054;&#x7684;&#x819C;&#x3002;&#x7531;&#x4E8E; Cav1.2 &#x4F20;&#x9012;&#x5230;&#x5218;&#x658C; 1 &#x53D1;&#x751F;&#x5728;&#x7B80;&#x5316;&#x975E;&#x5FC3;&#x808C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7CFB;&#x4E2D;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x53D1;&#x73B0;&#x5176;&#x4ED6;&#x5FC3;&#x808C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7279;&#x6709;&#x7684;&#x7ED3;&#x6784;&#x5E76;&#x4E0D;&#x91CD;&#x8981;&#xFF0C;&#x57FA;&#x4E8E;&#x5FAE;&#x7BA1;&#x7684; Cav1.2 &#x4EA4;&#x8D27;&#x548C;&#x5176;&#x658C; 1 &#x811A;&#x624B;&#x67B6;&#x4E4B;&#x95F4;&#x7684;&#x5185;&#x5728;&#x5173;&#x7CFB;&#x3002;&#x5FC3;&#x808C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5206;&#x5316;&#x7684;&#x9F20;&#x6807;&#xFF0C;&#x5218;&#x658C; 1 &#x2477; &#x964D;&#x4F4E;&#x4E86;&#x8868;&#x9762; Cav1.2 &#x548C;&#x5EF6;&#x8BEF;&#x53D1;&#x5C55;&#x7684;&#x9499;&#x77AC;&#x53D8;&#xFF0C;&#x8868;&#x660E; Cav1.2 &#x9776;&#x5411;&#x658C; 1 &#x5411;&#x5FC3;&#x810F;&#x9499;&#x4FE1;&#x53F7;&#x7684;&#x91CD;&#x8981;&#x529F;&#x80FD;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x5DF2;&#x786E;&#x5B9A;&#x7EC6;&#x80DE;&#x819C;&#x76F8;&#x5173;&#x5218;&#x658C; 1 &#x8BF1;&#x5BFC;&#x819C;&#x66F2;&#x7387;&#x4E0D;&#x4EC5;&#x53EF;&#x4EE5;&#x76F4;&#x63A5;&#x5177;&#x4F53;&#x987A;&#x884C;&#x4EA4;&#x8FD0;&#x7684;&#x5FAE;&#x7BA1;&#x8FD0;&#x819C;&#x86CB;&#x767D;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;&#x8FD9;&#x79CD;&#x6A21;&#x5F0F;&#x63D0;&#x4F9B;&#x4E86;&#x5FAE;&#x7BA1;&#x548C; Cav1.2 &#x4F20;&#x9012;&#x5230; T-&#x80BE;&#x5C0F;&#x7BA1;&#x658C; 1 &#x4F9D;&#x8D56;&#x7684;&#x673A;&#x5236;&#x3002;&#x8FD9;&#x672C;&#x5C0F;&#x8BF4; Cav1.2 &#x8D29;&#x8FD0;&#x9014;&#x5F84;&#x5E94;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x6B27;&#x5171;&#x4F53;&#x8026;&#x5408;&#x3001; &#x5F71;&#x54CD;&#x54FA;&#x4E73;&#x52A8;&#x7269;&#x5FC3;&#x810F;&#x5FC3;&#x808C;&#x6536;&#x7F29;&#x529B;&#x7684;&#x91CD;&#x8981;&#x89C4;&#x7BA1;&#x65B9;&#x9762;&#x3002;

&#x5218;&#x658C; 1 &#x672C;&#x5730;&#x5316;&#x5230;&#x5FC3;&#x810F; T-&#x80BE;&#x5C0F;&#x7BA1;&#x7684; L-&#x578B;&#x9499;&#x901A;&#x9053;&#x3002;

The BAR domain protein superfamily is involved in membrane invagination and endocytosis, but its role in organizing membrane proteins has not been explored. In particular, the membrane scaffolding protein BIN1 functions to initiate T-tubule genesis in skeletal muscle cells. Constitutive knockdown of BIN1 in mice is perinatal lethal, which is associated with an induced dilated hypertrophic cardiomyopathy. However, the functional role of BIN1 in cardiomyocytes is not known. An important function of cardiac T-tubules is to allow L-type calcium channels (Cav1.2) to be in close proximity to sarcoplasmic reticulum-based ryanodine receptors to initiate the intracellular calcium transient. Efficient excitation-contraction (EC) coupling and normal cardiac contractility depend upon Cav1.2 localization to T-tubules. We hypothesized that BIN1 not only exists at cardiac T-tubules, but it also localizes Cav1.2 to these membrane structures. We report that BIN1 localizes to cardiac T-tubules and clusters there with Cav1.2. Studies involve freshly acquired human and mouse adult cardiomyocytes using complementary immunocytochemistry, electron microscopy with dual immunogold labeling, and co-immunoprecipitation. Furthermore, we use surface biotinylation and live cell confocal and total internal fluorescence microscopy imaging in cardiomyocytes and cell lines to explore delivery of Cav1.2 to BIN1 structures. We find visually and quantitatively that dynamic microtubules are tethered to membrane scaffolded by BIN1, allowing targeted delivery of Cav1.2 from the microtubules to the associated membrane. Since Cav1.2 delivery to BIN1 occurs in reductionist non-myocyte cell lines, we find that other myocyte-specific structures are not essential and there is an intrinsic relationship between microtubule-based Cav1.2 delivery and its BIN1 scaffold. In differentiated mouse cardiomyocytes, knockdown of BIN1 reduces surface Cav1.2 and delays development of the calcium transient, indicating that Cav1.2 targeting to BIN1 is functionally important to cardiac calcium signaling. We have identified that membrane-associated BIN1 not only induces membrane curvature but can direct specific antegrade delivery of microtubule-transported membrane proteins. Furthermore, this paradigm provides a microtubule and BIN1-dependent mechanism of Cav1.2 delivery to T-tubules. This novel Cav1.2 trafficking pathway should serve as an important regulatory aspect of EC coupling, affecting cardiac contractility in mammalian hearts.

BIN1 localizes the L-type calcium channel to cardiac T-tubules.

La superfamille des prot&#xE9;ines BAR domaine est impliqu&#xE9; dans invagination membranaire et l&#x26;#39;endocytose, mais son r&#xF4;le dans l&#x26;#39;organisation des prot&#xE9;ines membranaires n&#x26;#39;a pas &#xE9;t&#xE9; explor&#xE9;e. En particulier, les prot&#xE9;ines membranaires &#xE9;chafaudages Bin1 fonctions d&#x26;#39;initier T-tubule gen&#xE8;se dans les cellules musculaires squelettiques. Knockdown constitutif de BIN1 chez la souris est p&#xE9;rinatale l&#xE9;tale, qui est associ&#xE9;e &#xE0; une cardiomyopathie hypertrophique dilat&#xE9;e induite. Cependant, le r&#xF4;le fonctionnel de BIN1 dans les cardiomyocytes n&#x26;#39;est pas connue. Une fonction importante du cardiaque T-tubules est de permettre aux canaux calciques de type L (Cav1.2) d&#x26;#39;&#xEA;tre &#xE0; proximit&#xE9; de r&#xE9;cepteurs &#xE0; la ryanodine du r&#xE9;ticulum sarcoplasmique base pour lancer le calcium intracellulaire transitoire. Efficace excitation-contraction (CE) de couplage et de la contractilit&#xE9; cardiaque normale d&#xE9;pendra de la localisation Cav1.2 &#xE0; T-tubules. Nous avons suppos&#xE9; que BIN1 non seulement existe cardiaque T-tubules, mais il localise &#xE9;galement Cav1.2 &#xE0; ces structures membranaires. Nous signalons que BIN1 localise cardiaques T-tubules et les clusters l&#xE0; avec Cav1.2. Les &#xE9;tudes impliquent humain fra&#xEE;chement acquise et les cardiomyocytes adultes de souris en utilisant l&#x26;#39;immunocytochimie compl&#xE9;mentaires, la microscopie &#xE9;lectronique avec immunomarquage double &#xE9;tiquetage, et co-immunopr&#xE9;cipitation. En outre, nous utilisons biotinylation de surface et de cellules vivantes confocale et imagerie interne totale microscopie de fluorescence dans les cardiomyocytes et les lign&#xE9;es cellulaires d&#x26;#39;explorer la livraison de Cav1.2 &#xE0; BIN1 structures. Nous trouvons visuellement et quantitativement que les microtubules dynamiques sont attach&#xE9;s &#xE0; la membrane d&#x26;#39;&#xE9;chafaudages par BIN1, permettant l&#x26;#39;administration cibl&#xE9;e de Cav1.2 des microtubules &#xE0; la membrane associ&#xE9;e. Depuis Cav1.2 livraison &#xE0; BIN1 se produit dans les lignes de cellules non r&#xE9;ductionnistes myocytes, nous constatons que d&#x26;#39;autres structures sp&#xE9;cifiques des myocytes ne sont pas indispensables et il ya une relation intrins&#xE8;que entre les microtubules base Cav1.2 de livraison et son BIN1 &#xE9;chafaud. Dans les cardiomyocytes de souris diff&#xE9;renci&#xE9;s, knockdown de BIN1 r&#xE9;duit Cav1.2 de surface et des retards de d&#xE9;veloppement du calcium transitoire, ce qui indique que Cav1.2 ciblage BIN1 est fonctionnellement important de calcium cardiaque de signalisation. Nous avons identifi&#xE9; que la membrane-associated BIN1 non seulement induit courbure de la membrane, mais peut diriger sp&#xE9;cifique de livraison ant&#xE9;rograde des microtubules transport&#xE9;es par des prot&#xE9;ines membranaires. En outre, ce paradigme fournit un microtubule et BIN1 m&#xE9;canisme d&#xE9;pendant de la Cav1.2 livraison &#xE0; T-tubules. Ce roman traite Cav1.2 voie devrait servir comme un aspect important de r&#xE9;glementation de la CE couplage, affectant la contractilit&#xE9; cardiaque dans le c&#x153;ur des mammif&#xE8;res.

BIN1 localise le canal calcique de type L &#xE0; T-tubules cardiaque

Die BAR Dom&auml;ne Protein &Uuml;berfamilie ist Membran hineinziehen und Endozytose beteiligt, aber seine Rolle in der Organisation von Membranproteinen ist nicht untersucht worden. Insbesondere Funktionen der Ger&uuml;stbau-Membranprotein BIN1 zum T-R&ouml;hrchens Genese in den Zellen der Skelettmuskulatur zu initiieren. Konstitutive Niederschlag von BIN1 bei M&auml;usen ist perinatal letale, die eine induzierte dilatative Kardiomyopathie zugeordnet ist. Die funktionale Rolle der BIN1 in den Cardiomyocytes ist jedoch nicht bekannt. Eine wichtige Aufgabe der kardialen T-Tubuli ist L-Typ-Kalzium-Kan&auml;le (Cav1.2) zu erm&ouml;glichen, sich in unmittelbarer N&auml;he zum sarkoplasmatischen Retikulum-basierte Ryanodin-Rezeptoren, die intrazellul&auml;re Kalzium-Transient zu initiieren. Effiziente Anregung-Kontraktion (EG) Kupplung und normalen kardialen Kontraktilit&auml;t h&auml;ngen Cav1.2 Lokalisierung zu T-Tubuli. Wir die Hypothese, dass BIN1 nicht nur bei kardialen T-Tubuli existiert, sondern es auch Cav1.2, diese Membran-Strukturen lokalisiert. Wir berichten, dass BIN1, kardiale T-Tubuli lokalisiert und es mit Cav1.2-Clustern. Studien beinhalten frisch erworbenen Mensch und Maus Erwachsenen Cardiomyocytes mit komplement&auml;ren Immunzytochemie, Elektronen-Mikroskopie mit dual Immunogold-Beschriftung und co-Immunopr&auml;zipitation. Dar&uuml;ber hinaus haben wir verwenden Oberfl&auml;che Biotinylierung und Leben Zelle konfokale und total interne Fluoreszenz-Mikroskopie-Darstellung in Cardiomyocytes und Zelllinien, Bereitstellung von Cav1.2 f&uuml;r BIN1 Strukturen zu erkunden. Finden wir visuell und quantitativ, dass dynamische Mikrotubuli auf Membrane von BIN1, Kantenschutz angebunden sind erm&ouml;glicht gezielte Lieferung von Cav1.2 aus der Mikrotubuli an der zugeh&ouml;rigen Membran. Da Cav1.2 Lieferung an BIN1 reduktionistische nicht-Muskelfaser Zelllinien auftritt, finden wir, dass andere Muskelfaser-spezifische Strukturen nicht notwendig sind und es eine immanente Beziehung zwischen Microtubule-basierte Cav1.2 Lieferung und seine BIN1-Ger&uuml;st gibt. In differenzierten Maus Cardiomyocytes verringert Niederschlag von BIN1 Oberfl&auml;che Cav1.2 und Verz&ouml;gerungen Entwicklung der Kalzium-Transient, darauf hinweist, dass Cav1.2-targeting BIN1 funktionell wichtig, kardiale Kalzium zu signalisieren. Wir haben festgestellt, dass die Membran-assoziierte BIN1 nicht nur Kr&uuml;mmung der Membran induziert, sondern k&ouml;nnen direkt bestimmte Antegrade Lieferung von Membranproteinen Microtubule-transportiert. Au&szlig;erdem bietet dieses Paradigma eine Microtubule und BIN1-abh&auml;ngige Mechanismus der Cav1.2 Lieferung an T-Tubuli. Dieser Roman Cav1.2 Menschenhandel Weg sollte als einen wichtigen rechtlichen Aspekt der EG Kupplung, r&uuml;hrung kardiale Kontraktilit&auml;t in S&auml;ugetieren Herzen dienen.

BIN1 lokalisiert den L-Typ-Kalzium-Kanal, der kardialen T-Tubuli.

La Superfamiglia BAR dominio della proteina &egrave; coinvolta nella invaginazione di membrana ed endocitosi, ma suo ruolo nell&#39;organizzazione di proteine di membrana non &egrave; stata esplorata. In particolare, la proteina di ponteggi membrana BIN1 funzioni per avviare la genesi del tubulo T in cellule del muscolo scheletrico. Costitutiva atterramento di BIN1 nei topi &egrave; perinatale letale, che &egrave; associato con una cardiomiopatia ipertrofica indotta. Tuttavia, non &egrave; noto il ruolo funzionale di BIN1 nei cardiomyocytes. Un&#39;importante funzione di T-tubuli cardiaci &egrave; consentire canali del calcio di tipo L (Cav1.2) di essere in prossimit&agrave; di recettori basati su reticolo sarcoplasmico rianodinico di avviare il transiente di calcio intracellulare. Accoppiamento eccitazione-contrazione efficace (CE) e la contrattilit&agrave; cardiaca normale dipendono dalla localizzazione Cav1.2 a tubuli T. Abbiamo ipotizzato che BIN1 esiste non solo a T-tubuli cardiache, ma localizza anche Cav1.2 a queste strutture di membrana. Segnaliamo che BIN1 localizza ai cardiaci T-tubuli e cluster ci con Cav1.2. Gli studi coinvolgono umani appena acquisito e topo adulto cardiomyocytes mediante immunocitochimica complementare, microscopia elettronica con doppio immunogold etichettatura e co-immunoprecipitazione. Inoltre, noi usiamo biotinylation superficiali e live imaging di microscopia confocale e totale interna fluorescenza delle cellule nelle linee di cardiomiociti e cella per esplorare consegna di Cav1.2 BIN1 strutture. Troviamo visivamente e quantitativamente che la dinamici dei microtubuli sono legati alla membrana con scaffolding di BIN1, consentendo la consegna mirata di Cav1.2 da microtubuli alla membrana associata. Poich&eacute; Cav1.2 consegna a BIN1 si verifica nelle linee di cellule non-myocyte riduzionista, troviamo che altre strutture del miocita specifici non sono essenziali e c&#39;&egrave; un rapporto intrinseco tra microtubule-based Cav1.2 consegna e la sua impalcatura di BIN1. In cardiomiociti di topo differenziata, atterramento di BIN1 riduce superficie di sviluppo Cav1.2 e ritardi del transiente di calcio, che indica che Cav1.2 mira a BIN1 &egrave; funzionalmente importante per segnalazione calcio cardiaco. Abbiamo identificato BIN1 associata di membrana non solo induce la curvatura della membrana ma pu&ograve; dirigere consegna anterogrado specifici delle proteine di membrana microtubule-trasportati. Inoltre, questo paradigma fornisce un microtubulo e meccanismo di BIN1-dipendente di consegna Cav1.2 a tubuli T. Questo romanzo tratta pathway Cav1.2 dovrebbe servire come un aspetto importante di regolamentazione della CE di accoppiamento, che influenzano la contrattilit&agrave; cardiaca nei cuori dei mammiferi.

BIN1 localizza il canale del calcio tipo L a T-tubuli cardiaci.

BAR&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x30B9;&#x30FC;&#x30D1;&#x30FC;&#x30D5;&#x30A1;&#x30DF;&#x30EA;&#x30FC;&#x306F;&#x7D30;&#x80DE;&#x819C;&#x9665;&#x5165;&#x3068;&#x30A8;&#x30F3;&#x30C9;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9;&#x306B;&#x95A2;&#x4E0E;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x304C;&#x3001;&#x819C;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x3092;&#x7D44;&#x7E54;&#x5185;&#x3067;&#x306E;&#x5F79;&#x5272;&#x304C;&#x691C;&#x8A0E;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3002;&#x7279;&#x306B;&#x3001;&#x819C;&#x306E;&#x8DB3;&#x5834;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;BIN1&#x95A2;&#x6570;&#x306F;&#x3001;&#x9AA8;&#x683C;&#x7B4B;&#x7D30;&#x80DE;&#x3067;&#x306F;T-&#x7D30;&#x7BA1;&#x8D77;&#x6E90;&#x3092;&#x958B;&#x59CB;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x306E;BIN1&#x306E;&#x6052;&#x5E38;&#x7684;&#x30CE;&#x30C3;&#x30AF;&#x30C0;&#x30A6;&#x30F3;&#x306F;&#x3001;&#x8A98;&#x5C0E;&#x3055;&#x308C;&#x62E1;&#x5F35;&#x578B;&#x5FC3;&#x7B4B;&#x75C7;&#x80A5;&#x5927;&#x578B;&#x5FC3;&#x7B4B;&#x75C7;&#x306B;&#x95A2;&#x9023;&#x4ED8;&#x3051;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x5468;&#x7523;&#x671F;&#x81F4;&#x6B7B;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3002;&#x3057;&#x304B;&#x3057;&#x3001;&#x5FC3;&#x7B4B;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;BIN1&#x306E;&#x6A5F;&#x80FD;&#x7684;&#x5F79;&#x5272;&#x306F;&#x77E5;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x306A;&#x3044;&#x3002;&#x5FC3;&#x81D3;&#x306E;T-&#x7D30;&#x7BA1;&#x306E;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x6A5F;&#x80FD;&#x306F;&#x3001;L&#x578B;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#xFF08;Cav1.2&#xFF09;&#x306F;&#x7D30;&#x80DE;&#x5185;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B8;&#x30A7;&#x30F3;&#x30C8;&#x958B;&#x59CB;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x7B4B;&#x5C0F;&#x80DE;&#x4F53;&#x30D9;&#x30FC;&#x30B9;&#x306E;&#x30EA;&#x30A2;&#x30CE;&#x30B8;&#x30F3;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x306B;&#x8FD1;&#x63A5;&#x3057;&#x3066;&#x3067;&#x304D;&#x308B;&#x3088;&#x3046;&#x306B;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x52B9;&#x7387;&#x7684;&#x306A;&#x8208;&#x596E;&#x53CE;&#x7E2E;&#xFF08;EC&#xFF09;&#x30AB;&#x30C3;&#x30D7;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;&#x3068;&#x3001;&#x901A;&#x5E38;&#x306E;&#x5FC3;&#x81D3;&#x306E;&#x53CE;&#x7E2E;&#x6027;&#x306F;&#x3001;T-&#x7D30;&#x7BA1;&#x306B;Cav1.2&#x5C40;&#x5728;&#x306B;&#x4F9D;&#x5B58;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;BIN1&#x306F;&#x3001;T-&#x7D30;&#x7BA1;&#x3001;&#x5FC3;&#x81D3;&#x306B;&#x5B58;&#x5728;&#x3059;&#x308B;&#x3060;&#x3051;&#x3067;&#x306A;&#x304F;&#x3001;&#x305D;&#x308C;&#x306F;&#x307E;&#x305F;&#x3001;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x819C;&#x69CB;&#x9020;&#x306B;Cav1.2&#x3092;&#x5C40;&#x5728;&#x5316;&#x3059;&#x308B;&#x3068;&#x3044;&#x3046;&#x4EEE;&#x8AAC;&#x3092;&#x7ACB;&#x3066;&#x305F;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;BIN1&#x304C;Cav1.2&#x3068;&#x305D;&#x3053;&#x306B;T-&#x7D30;&#x7BA1;&#x3001;&#x5FC3;&#x81D3;&#x3084;&#x30AF;&#x30E9;&#x30B9;&#x30BF;&#x306B;&#x5C40;&#x5728;&#x3059;&#x308B;&#x3068;&#x5831;&#x544A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x7814;&#x7A76;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x88DC;&#x5B8C;&#x7684;&#x306A;&#x514D;&#x75AB;&#x7D30;&#x80DE;&#x5316;&#x5B66;&#x3001;&#x514D;&#x75AB;&#x4E8C;&#x91CD;&#x6A19;&#x8B58;&#x3057;&#x305F;&#x96FB;&#x5B50;&#x9855;&#x5FAE;&#x93E1;&#x3001;&#x5171;&#x514D;&#x75AB;&#x6C88;&#x964D;&#x6CD5;&#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x3066;&#x65B0;&#x305F;&#x306B;&#x53D6;&#x5F97;&#x3057;&#x305F;&#x30D2;&#x30C8;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x306E;&#x6210;&#x4F53;&#x306E;&#x5FC3;&#x7B4B;&#x7D30;&#x80DE;&#x3092;&#x542B;&#x3093;&#x3067;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;&#x8868;&#x9762;&#x306E;&#x30D3;&#x30AA;&#x30C1;&#x30F3;&#x5316;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;Cav1.2&#x306B;BIN1&#x69CB;&#x9020;&#x306E;&#x914D;&#x4FE1;&#x3092;&#x63A2;&#x6C42;&#x3059;&#x308B;&#x5FC3;&#x7B4B;&#x7D30;&#x80DE;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x7D30;&#x80DE;&#x682A;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x7D30;&#x80DE;&#x5171;&#x7126;&#x70B9;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x5168;&#x5185;&#x90E8;&#x86CD;&#x5149;&#x9855;&#x5FAE;&#x93E1;&#x30A4;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B8;&#x30F3;&#x30B0;&#x3092;&#x4F4F;&#x3093;&#x3067;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;&#x95A2;&#x9023;&#x4ED8;&#x3051;&#x3089;&#x308C;&#x305F;&#x819C;&#x3078;&#x306E;&#x5FAE;&#x5C0F;&#x7BA1;&#x304B;&#x3089;Cav1.2&#x306E;&#x6A19;&#x7684;&#x5316;&#x9001;&#x9054;&#x3092;&#x53EF;&#x80FD;&#x306B;&#x3059;&#x308B;&#x3001;BIN1&#x3067;&#x30B9;&#x30AD;&#x30E3;&#x30D5;&#x30A9;&#x30FC;&#x30EB;&#x30C9;&#x3092;&#x8996;&#x899A;&#x7684;&#x304B;&#x3064;&#x5B9A;&#x91CF;&#x7684;&#x306B;&#x52D5;&#x7684;&#x306A;&#x5FAE;&#x5C0F;&#x7BA1;&#x304C;&#x7D30;&#x80DE;&#x819C;&#x306B;&#x7E4B;&#x7559;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x308F;&#x304B;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002; 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BIN1&#x306F;&#x5FC3;&#x81D3;T-&#x7D30;&#x7BA1;&#x306B;L&#x578B;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x3092;&#x30ED;&#x30FC;&#x30AB;&#x30E9;&#x30A4;&#x30BA;

&#xBC14; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; superfamily &#xB9C9; invagination&#xC640; endocytosis&#xC5D0; &#xCC38;&#xC5EC; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xD0D0;&#xD5D8; &#xB418;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC740; &#xB9C9; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC744; &#xAD6C;&#xC131; &#xD558;&#xB294; &#xC5ED;&#xD560;. &#xD2B9;&#xD788;, &#xB9C9; &#xBE44; &#xACC4; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; BIN1 T &#xAD00; &#xCC3D;&#xC138;&#xAE30; &#xACE8;&#xACA9; &#xADFC;&#xC721; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC2DC;&#xC791; &#xC791;&#xB3D9; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC950;&#xC5D0;&#xC11C; bin1&#xC758; &#xC81C;&#xC815; &#xCD5C;&#xC800;&#xC758; perinatal&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xCE58;&#xBA85;&#xC801;&#xC778;, &#xAD00;&#xB828; &#xB41C; &#xD55C; &#xC720;&#xB3C4; &#xB41C; &#xB3D9; &#xACF5;&#xC774; &#xD655;&#xC7A5; &#xB418;&#xC5B4; hypertrophic &#xC2EC;&#xC7A5; &#xADFC;&#xC721; &#xBCD1; &#xC99D;. &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098; cardiomyocytes bin1&#xC758; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC801; &#xC5ED;&#xD560;&#xC740; &#xC54C; &#xC218; &#xC5C6;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. L &#xD0C0;&#xC785; &#xCE7C;&#xC298; &#xCC44;&#xB110; (Cav1.2) &#xC138;&#xD3EC;&#xB0B4; &#xCE7C;&#xC298; &#xACFC;&#xB3C4; &#xC2DC;&#xC791; sarcoplasmic &#xADF8;&#xBB3C; &#xAE30;&#xBC18; ryanodine &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4;&#xC5D0; &#xADFC;&#xC811;&#xC5D0;&#xC11C; &#xB420; &#xC218; &#xC788;&#xB3C4;&#xB85D; &#xC2EC;&#xC7A5; T tubules&#xC758; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC774;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xD6A8;&#xC728;&#xC801;&#xC778; &#xC790;&#xADF9;-&#xC218;&#xCD95; (EC) &#xCEE4;&#xD50C;&#xB9C1; &#xBC0F; &#xC815;&#xC0C1;&#xC801;&#xC778; &#xC2EC;&#xC7A5; &#xC218;&#xCD95; Cav1.2 &#xC9C0;&#xC5ED;&#xD654; T tubules&#xB97C; &#xB530;&#xB77C; &#xB2EC;&#xB77C; &#xC9D1;&#xB2C8;&#xB2E4;. BIN1 &#xBFD0;&#xB9CC; &#xC544;&#xB2C8;&#xB77C; &#xC2EC;&#xC7A5; T tubules&#xC5D0; &#xC874;&#xC7AC; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xADF8;&#xAC83;&#xC740; &#xB610;&#xD55C; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xB9C9; &#xAD6C;&#xC870;&#xB97C; Cav1.2 localizes &#xAC00;&#xC124;&#xC744; &#xC138;&#xC6E0;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC; &#xBCF4;&#xACE0; BIN1 &#xC2EC;&#xC7A5; T tubules localizes cav1.2&#xC640; &#xAC70;&#xAE30; &#xD074;&#xB7EC;&#xC2A4;&#xD130;. &#xC5F0;&#xAD6C;&#xC5D0;&#xB294; &#xAC13; &#xC778;&#xC218; &#xC778;&#xAC04;&#xACFC; &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4; &#xC131;&#xC778; cardiomyocytes &#xBCF4;&#xC644; immunocytochemistry, &#xB4C0;&#xC5BC; immunogold &#xB77C;&#xBCA8;, &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; &#xACF5;&#xB3D9;-immunoprecipitation &#xC804;&#xC790; &#xD604;&#xBBF8;&#xACBD;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xD3EC;&#xD568; &#xD55C;&#xB2E4;. &#xB610;&#xD55C;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; &#xD45C;&#xBA74; biotinylation &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xACE0; &#xC140; confocal &#xBC0F; &#xCD1D; &#xB0B4;&#xBD80; &#xD615;&#xAD11; &#xD604;&#xBBF8;&#xACBD; &#xC774;&#xBBF8;&#xC9D5; BIN1 &#xAD6C;&#xC870;&#xB97C; cav1.2&#xC758; &#xBC30;&#xB2EC; &#xD0D0;&#xD5D8; cardiomyocytes&#xC640; &#xC140; &#xB77C;&#xC778;&#xC5D0; &#xC0B4;&#xACE0; &#xC788;&#xB294;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; &#xCC3E;&#xC744; &#xC2DC;&#xAC01;&#xACFC; &#xC591;&#xC801; &#xB3D9;&#xC801; microtubules &#xACC1; &#xB9C9; BIN1&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; scaffolded&#xC5D0; &#xAD00;&#xB828;&#xB41C; &#xBA64;&#xBE0C;&#xB808;&#xC778;&#xC740; microtubules&#xC5D0;&#xC11C; cav1.2&#xC758; &#xB300;&#xC0C1;&#xB41C; &#xBC30;&#xB2EC; &#xD5C8;&#xC6A9;. Cav1.2 &#xBC30;&#xB2EC; BIN1 &#xD559;&#xC774; &#xC544;&#xB2CC; myocyte &#xC140; &#xB77C;&#xC778;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBC1C;&#xC0DD;, &#xC774;&#xD6C4; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; &#xCC3E;&#xC744; &#xB2E4;&#xB978; myocyte &#xAD00;&#xB828; &#xAD6C;&#xC870;&#xB294; &#xD544;&#xC218; &#xACE0; microtubule &#xAE30;&#xBC18; Cav1.2 &#xC804;&#xB2EC;&#xACFC; &#xADF8; BIN1 &#xBE44; &#xACC4; &#xC0AC;&#xC774;&#xC758; &#xBCF8;&#xC9C8;&#xC801;&#xC778; &#xAD00;&#xACC4;&#xAC00; &#xC788;&#xB2E4;. &#xCC28;&#xBCC4;&#xD654; &#xB41C; &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4; cardiomyocytes BIN1 &#xCD5C;&#xC800;&#xC758; &#xD45C;&#xBA74; Cav1.2 &#xACE0; &#xC9C0;&#xC5F0; Cav1.2 bin1&#xC744; &#xB300;&#xC0C1;&#xC73C;&#xB85C; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xC2EC;&#xC7A5; &#xCE7C;&#xC298; &#xC2E0;&#xD638; &#xC784;&#xC744; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0B4;&#xB294; &#xCE7C;&#xC298; &#xACFC;&#xB3C4; &#xAC1C;&#xBC1C;&#xC744; &#xC904;&#xC5EC;&#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC; &#xB9C9; &#xAD00;&#xB828; BIN1 &#xBFD0;&#xB9CC; &#xC544;&#xB2C8;&#xB77C; &#xB9C9; &#xACE1;&#xB960;&#xC744; &#xC720;&#xB3C4; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xC218; &#xC9C1;&#xC811; microtubule &#xC774;&#xC1A1; &#xB9C9; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xD2B9;&#xC815; antegrade &#xBC30;&#xB2EC; &#xD655;&#xC778; &#xD588;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB610;&#xD55C;,&#xC774; &#xD328;&#xB7EC;&#xB2E4;&#xC784; microtubule &#xBC0F; T tubules&#xB97C; Cav1.2 &#xBC30;&#xB2EC; BIN1 &#xC885;&#xC18D; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;&#xC744; &#xC81C;&#xACF5; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774; &#xC18C;&#xC124;&#xC740; Cav1.2 &#xBC00;&#xB9E4; &#xD1B5;&#xB85C;&#xC758; &#xCEE4;&#xD50C;&#xB9C1;, &#xD3EC;&#xC720;&#xB958; &#xB9C8;&#xC74C;&#xC5D0; &#xC2EC;&#xC7A5; &#xC218;&#xCD95;&#xC5D0; &#xC601;&#xD5A5;&#xC744; &#xBBF8;&#xCE58;&#xB294; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xADDC;&#xC81C; &#xCE21;&#xBA74;&#xC73C;&#xB85C; &#xBD09;&#xC0AC; &#xD574;&#xC57C; &#xD55C;&#xB2E4;.

BIN1 localizes &#xC2EC;&#xC7A5; T tubules&#xB97C; L-&#xD0C0;&#xC785; &#xCE7C;&#xC298; &#xCC44;&#xB110;.

El dominio BAR superfamilia de prote&#xED;nas est&#xE1; implicada en la invaginaci&#xF3;n de la membrana y la endocitosis, pero su papel en la organizaci&#xF3;n de prote&#xED;nas de la membrana no ha sido explorado. En particular, las prote&#xED;nas de membrana andamios BIN1 funciones para iniciar los t&#xFA;bulos T-g&#xE9;nesis en las c&#xE9;lulas del m&#xFA;sculo esquel&#xE9;tico. Desmontables constitutiva de BIN1 en ratones es letal perinatal, que est&#xE1; asociada con una miocardiopat&#xED;a hipertr&#xF3;fica dilatada inducida. Sin embargo, el papel funcional de BIN1 en los cardiomiocitos no se conoce. Una funci&#xF3;n importante del card&#xED;aca T-t&#xFA;bulos es permitir tipo L-canales de calcio (Cav1.2) para estar en estrecha proximidad a receptores de rianodina ret&#xED;culo sarcopl&#xE1;smico basados &#x200B;&#x200B;para iniciar el calcio intracelular transitoria. Eficiente de excitaci&#xF3;n-contracci&#xF3;n (CE) de acoplamiento y de la contractilidad cardiaca normal depende de la localizaci&#xF3;n Cav1.2 a T-t&#xFA;bulos. La hip&#xF3;tesis de que BIN1 no s&#xF3;lo existe en card&#xED;aca T-t&#xFA;bulos, sino que tambi&#xE9;n se localiza Cav1.2 a estas estructuras de membrana. Nos informan de que BIN1 se localiza en los t&#xFA;bulos T cardiaca y los grupos all&#xED; con Cav1.2. Los estudios involucran humano reci&#xE9;n adquiridos y los cardiomiocitos adultos de rat&#xF3;n utilizando inmunocitoqu&#xED;mica complementarios, microscop&#xED;a electr&#xF3;nica de doble inmunomarcaje, y co-inmunoprecipitaci&#xF3;n. Adem&#xE1;s, utilizamos biotinilaci&#xF3;n superficie celular y vivir confocal y el total de la imagen interna de la microscop&#xED;a de fluorescencia en los cardiomiocitos y l&#xED;neas celulares para explorar la entrega de Cav1.2 de BIN1 estructuras. Encontramos visual y cuantitativamente que los microt&#xFA;bulos din&#xE1;micos est&#xE1;n atados a la membrana de andamiaje para BIN1, permitiendo la entrega selectiva de Cav1.2 de los microt&#xFA;bulos a la asociada a la membrana. Desde Cav1.2 entrega a BIN1 se produce en las l&#xED;neas celulares reduccionistas no miocitos, nos encontramos con que otros miocitos espec&#xED;ficas de las estructuras no son esenciales y no hay una relaci&#xF3;n intr&#xED;nseca entre los microt&#xFA;bulos basado Cav1.2 de entrega y su andamiaje BIN1. En cardiomiocitos de rat&#xF3;n diferenciados, desmontables de BIN1 Cav1.2 reduce la superficie y el desarrollo de los retrasos del calcio transitorio, lo que indica que la orientaci&#xF3;n de Cav1.2 BIN1 es funcionalmente importante de calcio cardiaco se&#xF1;alizaci&#xF3;n. Hemos identificado que la asociada a la membrana BIN1 no s&#xF3;lo induce la curvatura de la membrana, pero puede dirigir la entrega espec&#xED;fica anter&#xF3;grada de microt&#xFA;bulos transportan prote&#xED;nas de la membrana. Por otra parte, este paradigma ofrece una microt&#xFA;bulos y BIN1 mecanismo dependiente de la Cav1.2 entrega a los t&#xFA;bulos T. Esta novela trata de Cav1.2 v&#xED;a debe servir como un importante aspecto normativo de la CE de acoplamiento, que afecta a la contractilidad card&#xED;aca en el coraz&#xF3;n de los mam&#xED;feros.

BIN1 Localiza el canal de calcio tipo L de t&#xFA;bulos T cardiaca

Rad Rem &#x5B9D;&#x77F3;/&#x57FA;&#x91CC;&#x5DF4;&#x65AF; (RGK) &#x86CB;&#x767D;&#x5148;&#x5929;&#x6291;&#x5236; Ca (V) 1 &#x548C; Ca (V) 2 (Ca(V)1-2) &#x6E20;&#x9053;&#xFF0C;&#x5177;&#x6709;&#x91CD;&#x5927;&#x7684;&#x751F;&#x7406;&#x5F71;&#x54CD;&#x4EE5;&#x53CA;&#x6F5C;&#x5728;&#x7684;&#x751F;&#x7269;&#x6280;&#x672F;&#x5E94;&#x7528;&#x7684;&#x5355;&#x4F53; G &#x86CB;&#x767D;&#x79BB;&#x5B50;&#x901A;&#x9053;&#x8C03;&#x8282;&#x7684;&#x4E00;&#x4E2A;&#x8303;&#x4F8B;&#x3002;RGK &#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x5982;&#x4F55;&#x6291;&#x5236; I(Ca) &#x7684;&#x57FA;&#x672C;&#x673A;&#x5236;&#x662F;&#x672A;&#x77E5;&#x7684;&#x5E76;&#x4E0D;&#x6E05;&#x695A;&#x5982;&#x4F55;&#x5173;&#x952E;&#x7684;&#x7ED3;&#x6784;&#x548C;&#x89C4;&#x7BA1;&#x6027;&#x8D28;&#x7684;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x86CB;&#x767D; (GTP &#x7ED1;&#x5B9A;&#x5230;&#x6838;&#x82F7;&#x9178;&#x7ED3;&#x5408;&#x57DF; &#xFF08;NBD&#xFF09; &#x548C; C &#x603B;&#x7AD9;&#x5176;&#x4E2D;&#x5305;&#x542B;&#x9488;&#x5BF9;&#x819C;&#x7684;&#x6BCD;&#x9898;&#x7684;&#x4F5C;&#x7528;) &#x7B49;&#x529F;&#x80FD;&#x5728;&#x8FD9;&#x79CD;&#x6548;&#x679C;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x663E;&#x793A; Rem &#x7531;&#x4E09;&#x4E2A;&#x72EC;&#x7ACB;&#x7684;&#x673A;&#x5236;&#x4F9D;&#x8D56;&#x4E8E;&#x4E0D;&#x540C;&#x914D;&#x7F6E;&#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#x6291;&#x5236; Ca (V) 1.2 &#x6E20;&#x9053;&#xFF1A; (1) &#x51CF;&#x5C11;&#x8868;&#x9762;&#x5BC6;&#x5EA6;&#x7684;&#x6E20;&#x9053;&#x901A;&#x8FC7;&#x63D0;&#x9AD8; dynamin &#x4F9D;&#x8D56;&#x5185;&#x541E;&#x3001; (2) &#x51CF;&#x5F31;&#x7684;&#x901A;&#x9053;&#x6253;&#x5F00;&#x6982;&#x7387; (P(o)) &#x4E0D;&#x5F71;&#x54CD;&#x7535;&#x538B;&#x4F20;&#x611F;&#x5668;&#x8FD0;&#x52A8;&#x548C; (3) &#x56FA;&#x5B9A;&#x5316;&#x7684; Ca(V) &#x901A;&#x9053;&#x7535;&#x538B;&#x4F20;&#x611F;&#x5668;&#x7684;&#x60C5;&#x51B5;&#x4E0B;&#x53D1;&#x751F;&#x3002;Rem NBD &#x548C; C &#x603B;&#x7AD9;&#x7684;&#x5B58;&#x5728; &#xFF08;&#x662F;&#x5426;&#x9488;&#x5BF9;&#x819C;&#x7684;&#x6216;&#x4E0D;&#xFF09; &#x5728;&#x4E00;&#x4E2A;&#x5206;&#x5B50;&#x5C31;&#x8DB3;&#x4EE5;&#x91CD;&#x5EFA;&#x6240;&#x6709;&#x4E09;&#x79CD;&#x673A;&#x5236;&#x3002;&#x7136;&#x800C;&#xFF0C;&#x7531;&#x901A;&#x7528;&#x819C;&#x9488;&#x5BF9;&#x6A21;&#x5757; NBD &#x819C;&#x5B9A;&#x4F4D;&#x91CD;&#x7EC4;&#x4EC5;&#x4E0B;&#x964D;&#x7684; P(o) &#x51FD;&#x6570; &#xFF08;&#x673A;&#x5236; 2&#xFF09;&#x3002;&#x6709;&#x9009;&#x62E9;&#x5730;&#x963B;&#x6B62; GTP &#x7ED1;&#x5B9A;&#x5230;&#x4E0B;&#x4E00;&#x4E2A;&#x5DE5;&#x4F5C;&#x65E5;&#x7684;&#x70B9;&#x7A81;&#x53D8;&#xFF0C;&#x6D88;&#x9664;&#x4E86;&#x56FA;&#x5B9A;&#x7535;&#x538B;&#x4F20;&#x611F;&#x5668; &#xFF08;&#x673A;&#x5236; 3&#xFF09; &#x7684;&#x80FD;&#x529B;&#x3002;&#x7ED3;&#x679C;&#x663E;&#x793A;&#xFF0C;&#x5728; Rem &#x7528;&#x4E8E;&#x6291;&#x5236; I(Ca)&#x3001; &#x9884;&#x6D4B; RGK GTPase-Ca(V) &#x4FE1;&#x9053;&#x4E32;&#x6270;&#xFF0C;&#x65B0;&#x7684;&#x751F;&#x7406;&#x65B9;&#x9762;&#x548C;&#x5EFA;&#x8BAE;&#x53D1;&#x5C55;&#x65B0;&#x578B; Ca(V) &#x901A;&#x9053;&#x963B;&#x6EDE;&#x5242;&#x7684;&#x539F;&#x59CB;&#x529E;&#x6CD5;&#x7684;&#x673A;&#x5236;&#x4E2D;&#x5C11;&#x89C1;&#x7684;&#x591A;&#x91CD;&#x6027;&#x3002;

Rem&#xFF0C;&#x6210;&#x5458; RGK &#x9176;&#xFF0C;&#x6291;&#x5236;&#x91CD;&#x7EC4; CaV1.2 &#x6E20;&#x9053;&#x4F7F;&#x7528;&#x591A;&#x4E2A;&#x673A;&#x5236;&#xFF0C;&#x9700;&#x8981;&#x6709;&#x4E0D;&#x540C;&#x7684;&#x6784;&#x8C61;&#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#x3002;

Rad/Rem/Gem/Kir (RGK) GTPases potently inhibit Ca(V)1 and Ca(V)2 (Ca(V)1-2) channels, a paradigm of ion channel regulation by monomeric G-proteins with significant physiological ramifications and potential biotechnology applications. The mechanism(s) underlying how RGK proteins inhibit I(Ca) is unknown, and it is unclear how key structural and regulatory properties of these GTPases (such as the role of GTP binding to the nucleotide binding domain (NBD), and the C-terminus which contains a membrane-targeting motif) feature in this effect. Here, we show that Rem inhibits Ca(V)1.2 channels by three independent mechanisms that rely on distinct configurations of the GTPase: (1) a reduction in surface density of channels is accomplished by enhancing dynamin-dependent endocytosis, (2) a diminution of channel open probability (P(o)) that occurs without impacting on voltage sensor movement, and (3) an immobilization of Ca(V) channel voltage sensors. The presence of both the Rem NBD and C-terminus (whether membrane-targeted or not) in one molecule is sufficient to reconstitute all three mechanisms. However, membrane localization of the NBD by a generic membrane-targeting module reconstitutes only the decreased P(o) function (mechanism 2). A point mutation that prevents GTP binding to the NBD selectively eliminates the capacity to immobilize voltage sensors (mechanism 3). The results reveal an uncommon multiplicity in the mechanisms Rem uses to inhibit I(Ca), predict new physiological dimensions of the RGK GTPase-Ca(V) channel crosstalk, and suggest original approaches for developing novel Ca(V) channel blockers.

Rem, a member of the RGK GTPases, inhibits recombinant CaV1.2 channels using multiple mechanisms that require distinct conformations of the GTPase.

Rad / Rem / Gem / Kir (RGK) GTPases puissants inhibiteurs Ca (V) 1 et Ca (V) 2 (Ca (V) 1-2) canaux, un paradigme de la r&#xE9;gulation des canaux ioniques par les prot&#xE9;ines G monom&#xE9;riques avec d&#x26;#39;importantes ramifications physiologiques et applications de la biotechnologie potentiels. Le m&#xE9;canisme (s) sous-jacente comment les prot&#xE9;ines RGK inhibent I (Ca) est inconnue, et il est difficile de savoir comment les principales propri&#xE9;t&#xE9;s structurelles et r&#xE9;glementaires de ces GTPases (tels que le r&#xF4;le de GTP se liant au domaine de liaison nucl&#xE9;otidique (NBD), et la C -terminale qui contient une membrane de ciblage &#xE0; motifs) fonction dans cet effet. Ici, nous montrons que Rem inhibe Ca (V) 1.2 canaux par trois m&#xE9;canismes ind&#xE9;pendants qui s&#x26;#39;appuient sur des configurations distinctes de la GTPase: (1) une r&#xE9;duction de la densit&#xE9; de surface des canaux est r&#xE9;alis&#xE9;e par l&#x26;#39;am&#xE9;lioration de la dynamine-endocytose d&#xE9;pendante de la, (2) une diminution de canal ouvert probabilit&#xE9; (P (o)) qui se produit sans affecter le d&#xE9;placement du capteur de tension, et (3) une immobilisation de Ca (V) des capteurs de tension de canal. La pr&#xE9;sence &#xE0; la fois du NBD Rem et C-terminale (si la membrane cible ou non) dans une mol&#xE9;cule est suffisante pour reconstituer tous les trois m&#xE9;canismes. Cependant, la localisation membranaire de la NBD par un g&#xE9;n&#xE9;rique membrane ciblage module de reconstitue seulement la diminution de P (o) fonction (m&#xE9;canisme 2). Une mutation ponctuelle qui emp&#xEA;che GTP se lier &#xE0; la NBD &#xE9;limine de fa&#xE7;on s&#xE9;lective la capacit&#xE9; d&#x26;#39;immobiliser des capteurs de tension (m&#xE9;canisme 3). Les r&#xE9;sultats r&#xE9;v&#xE8;lent une multiplicit&#xE9; rare dans les m&#xE9;canismes de Rem utilise pour inhiber I (Ca), de pr&#xE9;voir de nouvelles dimensions physiologiques de la RGK GTPase-Ca (V) de canal diaphonie, et de proposer des approches originales pour d&#xE9;velopper de nouvelles bloqueurs de canaux Ca (V).

Rem, un membre des GTPases RGK, Inhibe recombinants Cav1.2 canaux en utilisant des m&#xE9;canismes multiples qui n&#xE9;cessitent conformations distinctes de la GTPase

Rad/Rem/Gem/Kir. (RGK) GTPasen hemmen dabei wirksam Ca (V) 1 und Ca (V) 2 (Ca(V)1-2)-Kan&auml;le, ein Paradigma der Ionen-Kanal-Verordnung von G-Proteinen mit erheblichen physiologischen Auswirkungen und Einsatzm&ouml;glichkeiten der Biotechnologie Monomer. Die Mechanismen zugrunde liegen, wie RGK-Proteine hemmen I(Ca) ist unbekannt, und es ist unklar, wie die wichtige strukturelle und regulatorische Eigenschaften des diese GTPasen (z. B. die Rolle der GTP-Bindung an die Nukleotid-bindende Dom&auml;ne (NBD) und der C-Terminus enth&auml;lt eine Membran-targeting-Motiv) in diesen Effekt Funktion. Hier zeigen wir, dass Rem Ca (V) 1.2 Kan&auml;le von drei unabh&auml;ngigen Mechanismen hemmt, die auf unterschiedliche Konfigurationen von der GTPase: (1) ein R&uuml;ckgang der Oberfl&auml;chendichte der Kan&auml;le erfolgt durch Verbesserung der Dynamin-abh&auml;ngige Endozytose, (2) eine Verminderung der Kanal offen Wahrscheinlichkeit (P(o)), die ohne Beeintr&auml;chtigung der Spannung Sensor Bewegung und (3) eine Immobilisierung von Ca(V) Kanal Spannungssensoren auftritt. Das Vorhandensein von Rem NBD sowohl der C-Terminus (ob Membran-bezogene oder nicht) in einem Molek&uuml;l ist ausreichend, um alle drei Mechanismen wiederherzustellen. Membran-Lokalisierung von der NBD von einem generischen Membran-targeting-Modul rekonstruiert jedoch nur die verminderte P(o) Funktion (2-Mechanismus). Eine Punktmutation, die GTP-Bindung an die NBD selektiv verhindert beseitigt die Kapazit&auml;t zu immobilisieren Spannungssensoren (3-Mechanismus). Die Ergebnisse zeigen eine ungew&ouml;hnliche Vielfalt in die Mechanismen, die Rem wird verwendet, um I(Ca) zu hemmen, neue physiologische Dimensionen der RGK-GTPase-Ca(V)-Kanal-&Uuml;bersprechen vorherzusagen und urspr&uuml;nglichen Ans&auml;tze f&uuml;r die Entwicklung von neuartigen Ca(V)-Kanal-Blocker vorschlagen.

REM, ein Mitglied der RGK-GTPasen hemmt rekombinante CaV1.2-Kan&auml;le, die &uuml;ber mehrere Mechanismen, die unterschiedliche Konformationen von der GTPase erfordern.

GTPases rad/Rem/Gem/Kir (RGK) inibiscono potentemente Ca (V) 1 e Ca (V) 2 (Ca(V)1-2) canali, un paradigma del regolamento canale ionico da G-proteine monomeriche con significative conseguenze fisiologiche e potenziali applicazioni della biotecnologia. I meccanismi comprendono sottostante come proteine RGK inibiscono I(Ca) sono sconosciuto, e non &egrave; chiaro come propriet&agrave; strutturali e regolatori chiave di questi GTPases (ad esempio il ruolo di legame GTP nucleotide binding dominio (NBD) e C-terminale che contiene una membrana-targeting motif) presentano questo effetto. Qui, ci mostra che Rem inibisce canali Ca (V) 1.2 da tre meccanismi indipendenti che si basano su configurazioni distinte della GTPasi: (1) una riduzione nella densit&agrave; della superficie dei canali &egrave; compiuta valorizzando endocitosi dynamin-dipendente, (2) una diminuzione del canale aperto probabilit&agrave; (P(o)) che si verifica senza che incidono sulla tensione sensore movimento e (3) un&#39;immobilizzazione di sensori di tensione canale Ca(V). La presenza della Rem NBD e C-terminale (se mirate a membrana o non) in una molecola &egrave; sufficiente per ricostituire tutti e tre i meccanismi. Tuttavia, localizzazione di membrana di NBD di un generico modulo membrana-targeting ricostituisce solo la diminuita funzione P(o) (meccanismo 2). Una mutazione puntiforme che impedisce il legame GTP il NBD selettivamente elimina la capacit&agrave; di immobilizzare sensori di tensione (meccanismo 3). I risultati rivelano una molteplicit&agrave; rara nei meccanismi che REM viene utilizzato per inibire I(Ca), prevedere nuove dimensioni fisiologiche della diafonia canale RGK GTPase-Ca(V) e suggerire approcci originali per lo sviluppo di nuovi bloccanti del canale del Ca(V).

REM, un membro del GTPases RGK, inibisce ricombinante CaV1.2 canali utilizzando meccanismi multipli che richiedono distinte conformazioni della GTPasi.

&#x30E9;&#x30B8;&#x30A2;&#x30F3;/&#x30EC;&#x30E0;/ GEM /&#x30AD;&#x30FC;&#x30EB;&#xFF08;RGK&#xFF09;&#x306F;&#x5F37;&#x529B;&#x306E;Ca&#xFF08;V&#xFF09;1&#x3068;Ca&#xFF08;V&#xFF09;2&#xFF08;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;&#xFF08;V&#xFF09;1-2&#xFF09;&#x30C1;&#x30E3;&#x30F3;&#x30CD;&#x30EB;&#x3001;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x751F;&#x7406;&#x7684;&#x306A;&#x5F71;&#x97FF;&#x3092;&#x6301;&#x3064;&#x5358;&#x91CF;&#x4F53;&#x306E;G-&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x30A4;&#x30AA;&#x30F3;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x306E;&#x30D1;&#x30E9;&#x30C0;&#x30A4;&#x30E0;&#x3092;&#x963B;&#x5BB3;&#x3059;&#x308B;GTP&#x30A2;&#x30FC;&#x30BC;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x6F5C;&#x5728;&#x7684;&#x306A;&#x30D0;&#x30A4;&#x30AA;&#x30C6;&#x30AF;&#x30CE;&#x30ED;&#x30B8;&#x30FC;&#x30A2;&#x30D7;&#x30EA;&#x30B1;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x306B;&#x6700;&#x9069;&#x3067;&#x3059;&#x3002; RGK&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306F;I&#xFF08;Ca&#xFF09;&#x3092;&#x6291;&#x5236;&#x3059;&#x308B;&#x65B9;&#x6CD5;&#x306E;&#x57FA;&#x790E;&#x3068;&#x306A;&#x308B;&#x30E1;&#x30AB;&#x30CB;&#x30BA;&#x30E0;&#xFF08;s&#xFF09;&#x304C;&#x4E0D;&#x660E;&#x3067;&#x3042;&#x308A;&#x3001;&#x305D;&#x308C;&#x306F;&#x4E0D;&#x660E;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x304B;&#x3001;&#x30AD;&#x30FC;&#x306E;&#x69CB;&#x9020;&#x3068;&#x898F;&#x5236;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;GTP&#x30A2;&#x30FC;&#x30BC;&#x306E;&#x7279;&#x6027;&#xFF08;&#x4F8B;&#x3048;&#x3070;&#x3001;&#x30CC;&#x30AF;&#x30EC;&#x30AA;&#x30C1;&#x30C9;&#x7D50;&#x5408;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#xFF08;NBD&#xFF09;&#x3078;&#x306E;&#x7D50;&#x5408;GTP&#x306E;&#x5F79;&#x5272;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073;C&#x819C;&#x6A19;&#x7684;&#x30E2;&#x30C1;&#x30FC;&#x30D5;&#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x672B;&#x7AEF;&#xFF09;&#x3053;&#x306E;&#x52B9;&#x679C;&#x306E;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x30EC;&#x30E0;&#x306F;&#x3001;GTP&#x30A2;&#x30FC;&#x30BC;&#x306E;&#x5225;&#x500B;&#x306E;&#x69CB;&#x6210;&#x306B;&#x4F9D;&#x5B58;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;3&#x306E;&#x72EC;&#x7ACB;&#x3057;&#x305F;&#x30E1;&#x30AB;&#x30CB;&#x30BA;&#x30E0;&#x306B;&#x3088;&#x308B;Ca&#xFF08;V&#xFF09;1.2&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x3092;&#x963B;&#x5BB3;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3059;&#xFF1A;&#xFF08;1&#xFF09;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x306E;&#x8868;&#x9762;&#x5BC6;&#x5EA6;&#x306E;&#x4F4E;&#x4E0B;&#x3092;&#x5897;&#x5F37;&#x3059;&#x308B;&#x30C0;&#x30A4;&#x30CA;&#x30DF;&#x30F3;&#x4F9D;&#x5B58;&#x6027;&#x30A8;&#x30F3;&#x30C9;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x9054;&#x6210;&#x3001;&#xFF08;2&#xFF09;&#x7E2E;&#x5C0F;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x96FB;&#x5727;&#x30BB;&#x30F3;&#x30B5;&#x306E;&#x52D5;&#x304D;&#x306B;&#x5F71;&#x97FF;&#x3092;&#x4E0E;&#x3048;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306A;&#x304F;&#x767A;&#x751F;&#x3057;&#x3001;Ca&#xFF08;V&#xFF09;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x306E;&#x96FB;&#x5727;&#x30BB;&#x30F3;&#x30B5;&#x30FC;&#xFF08;3&#xFF09;&#x56FA;&#x5B9A;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x958B;&#x78BA;&#x7387;&#xFF08;P&#xFF08;O&#xFF09;&#xFF09;&#x306E;&#x3002;&#x30EC;&#x30E0;NBD&#x3068;C&#x672B;&#x7AEF;&#xFF08;&#x7D30;&#x80DE;&#x819C;&#x3092;&#x6A19;&#x7684;&#x3068;&#x3059;&#x308B;&#x304B;&#x3069;&#x3046;&#x304B;&#xFF09;1&#x5206;&#x5B50;&#x4E2D;&#x306B;&#x4E21;&#x65B9;&#x306E;&#x5B58;&#x5728;&#x306F;&#x3001;&#x518D;&#x69CB;&#x6210;&#x3059;&#x308B;&#x3059;&#x3079;&#x3066;&#x306E;3&#x3064;&#x306E;&#x30E1;&#x30AB;&#x30CB;&#x30BA;&#x30E0;&#x3092;&#x5341;&#x5206;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x3057;&#x304B;&#x3057;&#x3001;&#x4E00;&#x822C;&#x7684;&#x306A;&#x819C;&#x3092;&#x6A19;&#x7684;&#x3068;&#x3059;&#x308B;&#x30E2;&#x30B8;&#x30E5;&#x30FC;&#x30EB;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;NBD&#x306E;&#x819C;&#x5C40;&#x5728;&#x306F;&#x6E1B;&#x5C11;&#x3057;&#x305F;P&#xFF08;O&#xFF09;&#x6A5F;&#x80FD;&#xFF08;&#x30E1;&#x30AB;&#x30CB;&#x30BA;&#x30E0;2&#xFF09;&#x3092;&#x518D;&#x69CB;&#x6210;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002; 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Henry M. Colecraft

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