fiber-optic-implantation-for-chronic-optogenetic-stimulation-brain

Fiber-optic Implantation for Chronic Optogenetic Stimulation of Brain Tissue

Elucidating patterns of neuronal connectivity has been a challenge for both clinical and basic neuroscience. Electrophysiology has been the gold standard ...

Baylor College of Medicine (BCM)

&#x8DE8;&#x7A81;&#x89E6;&#x7535;&#x8DEF;&#x8DDF;&#x8E2A;&#x4F7F;&#x7528;&#x8F6C;&#x57FA;&#x56E0;&#x7684;&#x72C2;&#x72AC;&#x75C5;&#x75C5;&#x6BD2; (RV) &#x662F;&#x4E00;&#x9879;&#x65B0;&#x5174;&#x6280;&#x672F;&#xFF0C;&#x7528;&#x4E8E;&#x8BC6;&#x522B;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x4E4B;&#x95F4;&#x7A81;&#x89E6;&#x8FDE;&#x63A5;&#x3002;&#x8865;&#x5145;&#x8FD9;&#x79CD;&#x65B9;&#x6CD5;&#xFF0C;&#x73B0;&#x5DF2;&#x80FD;&#x591F;&#x6D4B;&#x5B9A;&#x4ECE;&#x80DA;&#x80CE;&#x5E72;&#x7EC6;&#x80DE; (&#x80DA;&#x80CE;&#x5E72;&#x7EC6;&#x80DE;&#xFF09; &#x4E2D;&#xFF0C;&#x6D3E;&#x751F;&#x7684;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x8C31;&#x7CFB;&#x7684;&#x57FA;&#x672C;&#x5206;&#x5B50;&#x548C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5C5E;&#x6027;&#xFF0C;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x5C5E;&#x6027;&#x662F;&#x5728;&#x5BC6;&#x96C6;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x5BF9;&#x5236;&#x8BA2;&#x7EC6;&#x80DE;&#x66FF;&#x4EE3;&#x7597;&#x6CD5;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x62A5;&#x544A;&#x7684;&#x4EE3;&#x6E2F;&#x53E3;&#x9057;&#x4F20;&#x7684;&#x8981;&#x7D20;&#xFF0C;&#x4EE5;&#x4FBF;&#x5728; ESC &#x6E90;&#x6027;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x548C;&#x7A81;&#x89E6;&#x7F51;&#x7EDC; RV &#x4ECB;&#x5BFC;&#x8DE8;&#x7A81;&#x89E6;&#x7535;&#x8DEF;&#x8DDF;&#x8E2A;&#x7684; ESC (&#x5353;) &#x7EBF;&#x7684;&#x65B0;&#x578B;&#x9F20;&#x6807;&#x3002;&#x4E3A;&#x65B9;&#x4FBF;&#x8DE8;&#x7A81;&#x89E6;&#x8DDF;&#x8E2A;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x5DF2;&#x901A;&#x8FC7;&#x5F15;&#x5165;&#x7F16;&#x7801; tdTomato&#x3001; &#x72C2;&#x72AC;&#x75C5; G &#x7CD6;&#x86CB;&#x767D;&#x548C;&#x79BD; TVA &#x53D7;&#x4F53;&#x5230; ROSA26 &#x8F68;&#x8FF9;&#x7531;&#x57FA;&#x56E0;&#x6253;&#x9776;&#x7684; cDNA &#x5DE5;&#x7A0B;&#x65B0;&#x8BB0;&#x8005;&#x7B49;&#x4F4D;&#x57FA;&#x56E0;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x8868;&#x73B0;&#x51FA;&#x9AD8;&#x6548;&#x7387;&#x7684;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x65B0;&#x578B;&#x7684; mESCs &#x529F;&#x80FD;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x5206;&#x5316;&#x7684;&#x663E;&#x793A; synaptically &#x8FDE;&#x63A5;&#x4E0E;&#x539F;&#x4EE3;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x57F9;&#x517B;&#x7684;&#x514D;&#x75AB;&#x7EC4;&#x7EC7;&#x5316;&#x5B66;&#x53CA;&#x7535;&#x751F;&#x7406;&#x5F55;&#x97F3;&#xFF0C;&#x5C31;&#x53EF;&#x4EE5;&#x770B;&#x51FA;&#x5176;&#x80FD;&#x529B;&#x548C;&#x663E;&#x793A;&#x5176;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x6E90;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7A81;&#x89E6;&#x524D;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x7F51;&#x7EDC;&#x5728;&#x4F53;&#x5916;&#x548C;&#x4F53;&#x5185;&#x7684;&#x8DDF;&#x8E2A;&#x80FD;&#x529B;&#x3002;&#x5728;&#x4E00;&#x8D77;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x6570;&#x636E;&#x7A81;&#x51FA;&#x663E;&#x793A;&#x4F7F;&#x7528;&#x8F6C;&#x57FA;&#x56E0;&#x7684;&#x5E72;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6765;&#x8C03;&#x67E5;&#x660E;&#x786E;&#x8BC6;&#x522B;&#x7684;&#x7A81;&#x89E6;&#x524D;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x4EBA;&#x53E3;&#x7684;&#x5229;&#x76CA;&#x4E0A;&#x7684;&#x6295;&#x5165;&#x4E0E;&#x7A81;&#x89E6;&#x548C;&#x7535;&#x8DEF;&#x5F62;&#x6210;&#x7684;&#x57FA;&#x672C;&#x673A;&#x5236;&#x7684;&#x6F5C;&#x529B;&#x3002;&#x5E72; Cells2012 &#xFF1B; 30:2140-2151&#x5E74;&#x3002;

&#x8FFD;&#x67E5;&#x5230;&#x80DA;&#x80CE;&#x5E72;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5206;&#x5316;&#x7684;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x7A81;&#x89E6;&#x8FDE;&#x63A5;&#x3002;

Transsynaptic circuit tracing using genetically modified rabies virus (RV) is an emerging technology for identifying synaptic connections between neurons. Complementing this methodology, it is now possible to assay the basic molecular and cellular properties of neuronal lineages derived from embryonic stem cells (ESCs) in vitro, and these properties are under intense investigation toward devising cell replacement therapies. Here, we report the generation of a novel mouse ESC (mESC) line that harbors the genetic elements to allow RV-mediated transsynaptic circuit tracing in ESC-derived neurons and their synaptic networks. To facilitate transsynaptic tracing, we have engineered a new reporter allele by introducing cDNA encoding tdTomato, the Rabies-G glycoprotein, and the avian TVA receptor into the ROSA26 locus by gene targeting. We demonstrate high-efficiency differentiation of these novel mESCs into functional neurons, show their capacity to synaptically connect with primary neuronal cultures as evidenced by immunohistochemistry and electrophysiological recordings, and show their ability to act as source cells for presynaptic tracing of neuronal networks in vitro and in vivo. Together, our data highlight the potential for using genetically engineered stem cells to investigate fundamental mechanisms of synapse and circuit formation with unambiguous identification of presynaptic inputs onto neuronal populations of interest. STEM Cells2012;30:2140-2151.

Tracing Synaptic Connectivity onto Embryonic Stem Cell-derived Neurons.

Tra&ccedil;age de circuit transsynaptique &agrave; l&#39;aide de virus g&eacute;n&eacute;tiquement modifi&eacute; de la rage (RV) est une technologie &eacute;mergente pour identifier les connexions synaptiques entre les neurones. En compl&eacute;ment de cette m&eacute;thodologie, il est d&eacute;sormais possible d&#39;analyser les propri&eacute;t&eacute;s mol&eacute;culaires et cellulaires de base de lign&eacute;es neuronales d&eacute;riv&eacute;es de cellules souches embryonnaires (CSE) in vitro, et ces propri&eacute;t&eacute;s sont sous enqu&ecirc;te intense vers l&#39;&eacute;laboration de th&eacute;rapies de remplacement cellulaire. Nous rapportons ici, la g&eacute;n&eacute;ration d&#39;une nouvelle souris ligne ESC (mESC) qui h&eacute;berge les &eacute;l&eacute;ments g&eacute;n&eacute;tiques pour permettre le tra&ccedil;age circuit RV-mediated transsynaptique ESC-d&eacute;riv&eacute;s des neurones et leurs r&eacute;seaux synaptiques. Afin de faciliter le tra&ccedil;age transsynaptique, nous avons con&ccedil;u un nouvel all&egrave;le de journaliste en introduisant l&#39;ADNc codant pour la tdTomato, la glycoprot&eacute;ine G la rage et le r&eacute;cepteur aviaire de la TVA dans le locus ROSA26 en ciblant les g&egrave;nes. Nous d&eacute;montrer la haute efficacit&eacute; diff&eacute;renciation de ces nouveaux mESCs en neurones fonctionnels, montrer leur capacit&eacute; de synapses se connecter avec des cultures primaires de neurones exprim&eacute;e par immunohistochimie et enregistrements &eacute;lectrophysiologiques et montrer leur capacit&eacute; &agrave; agir comme des cellules de source pour un tra&ccedil;age pr&eacute;synaptique des r&eacute;seaux de neurones in vitro et in vivo. Ensemble, nos r&eacute;sultats mettent en &eacute;vidence le potentiel d&#39;utilisation des cellules souches g&eacute;n&eacute;tiquement pour &eacute;tudier les m&eacute;canismes fondamentaux de formation de la synapse et circuit avec une identification non ambigu&euml; des intrants pr&eacute;synaptiques sur des populations neuronales d&#39;int&eacute;r&ecirc;t. TIGE Cells2012 ; 30:2140-2151.

Retra&ccedil;ant la connectivit&eacute; synaptique sur neurones embryonnaires de cellules souches d&eacute;riv&eacute;es.

Transsynaptischen-Schaltung-Ablaufverfolgung mithilfe genetisch ver&auml;nderter Tollwutvirus (RV) ist eine Technologie zur Identifizierung von synaptischen Verbindungen zwischen den Neuronen. Erg&auml;nzend zu dieser Methodik, es ist nun m&ouml;glich, die molekularen und zellul&auml;ren Grundeigenschaften der neuronalen &Uuml;bertragungslinien abgeleitet aus embryonalen Stammzellen (WSR) in-vitro assay, und diese Eigenschaften werden intensiv untersucht in Richtung Gestaltung Zelltherapien Ersatz. Hier berichten wir &uuml;ber die Generation einer neuartigen Maus ESC (mESC) Linie, die die genetischen Elementen um RV-vermittelte transsynaptischen Schaltung Ablaufverfolgung in ESC-abgeleitet von Neuronen und ihrer synaptischen Netzwerke erm&ouml;glichen hegt. Transsynaptischen-Ablaufverfolgung zu erleichtern, haben wir eine neue Reporter-Allel entwickelt, durch die Einf&uuml;hrung von cDNA Kodierung TdTomato, die Tollwut-G-Glykoprotein und der Vogelgrippe TVA-Rezeptor in der ROSA26-Locus von Gene targeting. Wir hocheffiziente Differenzierung des diese neuartige mESCs in funktionale Neuronen zu demonstrieren, zeigen ihre F&auml;higkeit, mit neuronalen Prim&auml;rkulturen synaptisch zu verbinden, wie Immunhistochemie und elektrophysiologische Aufnahmen belegt und zeigen ihre F&auml;higkeit als Ausgangszellen f&uuml;r die pr&auml;synaptische Ablaufverfolgung neuronaler Netzwerke in vitro und in vivo zu agieren. Unsere Daten markieren gemeinsam das Potenzial f&uuml;r die Verwendung von gentechnisch Stammzellen zur Untersuchung der grundlegender Mechanisms der Synapse und Schaltung-Formation mit eindeutigen Identifizierung von pr&auml;synaptischen Inputs auf neuronalen Populationen von Interesse. STENGEL Cells2012; 30:2140-2151.

Ablaufverfolgung synaptischen Konnektivit&auml;t auf embryonale Stammzellen Cell-derived Neuronen.

Transsynaptic circuito analisi utilizzando virus geneticamente modificati rabbia (RV) &egrave; una tecnologia emergente per l&#39;identificazione di connessioni sinaptiche tra i neuroni. A complemento di questa metodologia, &egrave; ora possibile analizzare le propriet&agrave; molecolari e cellulari di base dei lignaggi neuronali derivate da staminali embrionali (CES) in vitro, e queste propriet&agrave; sono sotto inchiesta intenso verso ideare terapie di sostituzione cellulare. Riportiamo la generazione di un romanzo del mouse linea ESC (mescita) che porti gli elementi genetici per consentire analisi circuito transsynaptic RV-mediata in ESC-derivato i neuroni e le loro reti sinaptiche. Per facilitare l&#39;analisi transsynaptic, noi abbiamo progettato un nuovo allele reporter con l&#39;introduzione del cDNA che codifica il recettore TVA aviario tdTomato e la glicoproteina di rabbia-G nel locus ROSA26 di gene targeting. Dimostrare la differenziazione ad alta efficienza di questi nuovi mESCs in neuroni funzionali, mostrano la loro capacit&agrave; di collegare sinapticamente con colture neuronali primarie, come evidenziato da immunohistochemistry e registrazioni elettrofisiologiche e mostrare la loro capacit&agrave; di agire come cellule di origine per la tracciatura presinaptica delle reti neuronali in vitro e in vivo. Insieme, i nostri dati evidenziano il potenziale per l&#39;utilizzo di cellule staminali geneticamente ingegnerizzate per indagare i meccanismi fondamentali della formazione di sinapsi e circuito con l&#39;identificazione univoca degli ingressi presinaptico sulle popolazioni neuronali di interesse. STAMINALI Cells2012; 30:2140-2151.

Tracciatura connettivit&agrave; sinaptica sui neuroni derivato da cellule staminali embrionali.

&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x7D44;&#x307F;&#x63DB;&#x3048;&#x72C2;&#x72AC;&#x75C5;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9; (RV) &#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x305F; Transsynaptic &#x56DE;&#x8DEF;&#x30C8;&#x30EC;&#x30FC;&#x30B9; &#x30CB;&#x30E5;&#x30FC;&#x30ED;&#x30F3;&#x9593;&#x306E;&#x30B7;&#x30CA;&#x30D7;&#x30B9;&#x63A5;&#x7D9A;&#x3092;&#x8B58;&#x5225;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x65B0;&#x305F;&#x306A;&#x6280;&#x8853;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x65B9;&#x6CD5;&#x8AD6;&#x3092;&#x88DC;&#x5B8C;&#x3057;&#x3001;&#x80DA;&#x6027;&#x5E79;&#x7D30;&#x80DE; (Esc) in vitro &#x7531;&#x6765;&#x795E;&#x7D4C;&#x7CFB;&#x7D71;&#x306E;&#x5206;&#x5B50;&#x30FB;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x7269;&#x6027;&#x3092;&#x8A66;&#x91D1;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x53EF;&#x80FD;&#x306B;&#x306A;&#x308A;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3057;&#x3001;&#x30BB;&#x30EB;&#x7F6E;&#x63DB;&#x7642;&#x6CD5;&#x306E;&#x5DE5;&#x592B;&#x3078;&#x306E;&#x5F37;&#x70C8;&#x306A;&#x8ABF;&#x67FB;&#x306E;&#x4E0B;&#x3067;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x30D7;&#x30ED;&#x30D1;&#x30C6;&#x30A3;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x65B0;&#x898F;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9; ESC &#x7531;&#x6765;&#x306E;&#x30CB;&#x30E5;&#x30FC;&#x30ED;&#x30F3;&#x3068;&#x30B7;&#x30CA;&#x30D7;&#x30B9; &#x30CD;&#x30C3;&#x30C8;&#x30EF;&#x30FC;&#x30AF;&#x3067;&#x306E; RV &#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x305F; transsynaptic &#x56DE;&#x8DEF;&#x30C8;&#x30EC;&#x30FC;&#x30B9;&#x3092;&#x8A31;&#x53EF;&#x3059;&#x308B;&#x907A;&#x4F1D;&#x7684;&#x8981;&#x7D20;&#x3001;&#x6E2F;&#x6E7E; esc &#x30AD;&#x30FC; (mESC) &#x884C;&#x306E;&#x751F;&#x6210;&#x3092;&#x5831;&#x544A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;Transsynaptic &#x30C8;&#x30EC;&#x30FC;&#x30B9;&#x3092;&#x5BB9;&#x6613;&#x306B;&#x3059;&#x308B;&#x306B;&#x306F;&#x3001;tdTomato&#x3001;&#x72C2;&#x72AC;&#x75C5; G &#x7CD6;&#x86CB;&#x767D;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x9CE5;&#x306E; TVA &#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53; ROSA26 &#x306E;&#x8ECC;&#x8DE1;&#x306B;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x3092;&#x30BF;&#x30FC;&#x30B2;&#x30C3;&#x30C8; &#x30A8;&#x30F3;&#x30B3;&#x30FC;&#x30C7;&#x30A3;&#x30F3;&#x30B0; cDNA &#x3092;&#x5C0E;&#x5165;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3067;&#x65B0;&#x3057;&#x3044;&#x30EC;&#x30DD;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC; &#x30A2;&#x30EC;&#x30EB;&#x8A2D;&#x8A08;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005; &#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x5C0F;&#x8AAC;&#x306E; mESCs &#x306E;&#x6A5F;&#x80FD;&#x7684;&#x306A;&#x30CB;&#x30E5;&#x30FC;&#x30ED;&#x30F3;&#x3078;&#x306E;&#x5206;&#x5316;&#x306B;&#x9AD8;&#x52B9;&#x7387;&#x3001;&#x30B7;&#x30CA;&#x30D7;&#x30B9;&#x306E;&#x514D;&#x75AB;&#x7D44;&#x7E54;&#x5316;&#x5B66;&#x3068;&#x96FB;&#x6C17;&#x751F;&#x7406;&#x5B66;&#x7684;&#x8A18;&#x9332;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x8A3C;&#x660E;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x3088;&#x3046;&#x306B;&#x4E00;&#x6B21;&#x795E;&#x7D4C;&#x6587;&#x5316;&#x3092;&#x63A5;&#x7D9A;&#x3059;&#x308B;&#x80FD;&#x529B;&#x3092;&#x793A;&#x3059;&#x3057;&#x3001;in vitro &#x304A;&#x3088;&#x3073; in vivo &#x3067;&#x30CB;&#x30E5;&#x30FC;&#x30ED;&#x30F3;&#x306E;&#x30B7;&#x30CA;&#x30D7;&#x30B9;&#x524D;&#x30C8;&#x30EC;&#x30FC;&#x30B9; &#x30BD;&#x30FC;&#x30B9; &#x30BB;&#x30EB;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x884C;&#x52D5;&#x3059;&#x308B;&#x80FD;&#x529B;&#x3092;&#x793A;&#x3059;.&#x4E00;&#x7DD2;&#x306B;&#x3001;&#x6211;&#x3005; &#x306E;&#x30C7;&#x30FC;&#x30BF;&#x306F;&#x30B7;&#x30CA;&#x30D7;&#x30B9;&#x5165;&#x529B;&#x795E;&#x7D4C;&#x96C6;&#x56E3;&#x306E;&#x95A2;&#x5FC3;&#x3078;&#x306E;&#x660E;&#x767D;&#x306A;&#x8B58;&#x5225;&#x3068;&#x30B7;&#x30CA;&#x30D7;&#x30B9;&#x3068;&#x56DE;&#x8DEF;&#x306E;&#x5F62;&#x6210;&#x306E;&#x57FA;&#x790E;&#x7684;&#x30E1;&#x30AB;&#x30CB;&#x30BA;&#x30E0;&#x3092;&#x8ABF;&#x67FB;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x7D44;&#x307F;&#x63DB;&#x3048;&#x306E;&#x5E79;&#x7D30;&#x80DE;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x306E;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x3092;&#x5F37;&#x8ABF;&#x8868;&#x793A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x5E79; Cells2012; 30:2140-2151&#x5E74;&#x3002;

&#x80DA;&#x6027;&#x5E79;&#x7D30;&#x80DE;&#x7531;&#x6765;&#x306E;&#x30CB;&#x30E5;&#x30FC;&#x30ED;&#x30F3;&#x3078;&#x306E;&#x30B7;&#x30CA;&#x30D7;&#x30B9;&#x63A5;&#x7D9A;&#x3092;&#x30C8;&#x30EC;&#x30FC;&#x30B9;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xBCC0;&#xD615;&#xB41C; &#xAD11;&#xACAC;&#xBCD1; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; (RV)&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; Transsynaptic &#xD68C;&#xB85C; &#xCD94;&#xC801; &#xB274;&#xB7F0; &#xAC04;&#xC758; &#xC2DC; &#xB0C5; &#xC2A4; &#xC5F0;&#xACB0;&#xC744; &#xC2DD;&#xBCC4; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD55C; &#xC2E0;&#xD765; &#xAE30;&#xC220; &#xC774;&#xB2E4;. &#xC774; &#xBC29;&#xBC95;&#xB860;&#xC744; &#xBCF4;&#xC644;, &#xC2DC;&#xD5D8;&#xC758; &#xBC30;&#xC544; &#xC904;&#xAE30; &#xC138;&#xD3EC; (ESCs)&#xC5D0; &#xCCB4; &#xC678;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD30C;&#xC0DD; &#xB41C; &#xC2E0;&#xACBD; &#xACC4;&#xBCF4;&#xC758; &#xAE30;&#xBCF8;&#xC801;&#xC778; &#xBD84;&#xC790; &#xBC0F; &#xC138;&#xD3EC; &#xC18D;&#xC131; &#xC218; &#xBC0F; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xC18D;&#xC131; &#xC138;&#xD3EC; &#xB300;&#xCCB4; &#xC694;&#xBC95; &#xACE0;&#xC548;&#xC744; &#xD5A5;&#xD574; &#xAC15;&#xB82C;&#xD55C; &#xC870;&#xC0AC;&#xB97C; &#xBC1B;&#xACE0; &#xC788;&#xB2E4;. &#xC5EC;&#xAE30;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; &#xBCF4;&#xACE0; &#xC18C;&#xC124; &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4; transsynaptic RV-&#xC911;&#xC7AC; &#xD68C;&#xB85C; &#xCD94;&#xC801; ESC &#xD30C;&#xC0DD; &#xB41C; &#xC2E0;&#xACBD; &#xC138;&#xD3EC;&#xC640; &#xC2DC; &#xB0C5; &#xC2A4; &#xB124;&#xD2B8;&#xC6CC;&#xD06C;&#xC5D0; &#xC218; &#xC788;&#xB3C4;&#xB85D; &#xC720;&#xC804; &#xC694;&#xC18C;&#xB97C; &#xBE44;&#xD638; &#xD558;&#xB294; ESC (mESC) &#xB77C;&#xC778;&#xC758; &#xC138;&#xB300;. Transsynaptic &#xCD94;&#xC801;&#xC744; &#xCD09;&#xC9C4; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD558;&#xC5EC; &#xC0C8;&#xB85C;&#xC6B4; &#xAE30;&#xC790; &#xB300;&#xB9BD; &#xC720;&#xC804;&#xC790; cDNA &#xC778;&#xCF54;&#xB529; tdTomato, &#xAD11;&#xACAC;&#xBCD1; G &#xB2F9;&#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xBC0F; &#xC870;&#xB958; TVA &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xB97C; &#xB300;&#xC0C1;&#xC73C;&#xB85C; ROSA26 &#xB85C;&#xCEE4; &#xC2A4;&#xC5D0; &#xB3C4;&#xC785; &#xD558; &#xC5EC; &#xC124;&#xACC4;&#xB294; &#xC6B0;&#xB9AC;. &#xC6B0;&#xB9AC; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC801; &#xB274;&#xB7F0;&#xC73C;&#xB85C; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xC18C;&#xC124; Mescs&#xC758; &#xB192;&#xC740; &#xD6A8;&#xC728; &#xCC28;&#xBCC4;&#xD654;&#xB97C; &#xBCF4;&#xC5EC; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC758; &#xC6A9;&#xB7C9; synaptically &#xAE30;&#xBCF8; &#xC2E0;&#xACBD; &#xBB38;&#xD654;&#xC640; &#xAE30;&#xC220; &#xBC0F; electrophysiological &#xAE30;&#xB85D;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC785;&#xC99D;&#xC73C;&#xB85C; &#xC5F0;&#xACB0;&#xC744; &#xD45C;&#xC2DC; &#xD558; &#xACE0; &#xC5ED;&#xD560;&#xC758; &#xC0DD;&#xCCB4; &#xC678; &#xBC0F; &#xC0DD;&#xCCB4; &#xC870;&#xAC74; &#xC2E0;&#xACBD; &#xB124;&#xD2B8;&#xC6CC;&#xD06C; presynaptic &#xCD94;&#xC801;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC6D0;&#xBCF8; &#xC140;&#xC744; &#xC790;&#xC2E0;&#xC758; &#xB2A5;&#xB825;&#xC744; &#xBCF4;&#xC5EC;. &#xD568;&#xAED8;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xB370;&#xC774;&#xD130; &#xAD00;&#xC2EC; &#xC2E0;&#xACBD; &#xC778;&#xAD6C;&#xC5D0; presynaptic &#xC785;&#xB825;&#xC758; &#xBA85;&#xD655;&#xD55C; &#xC2DD;&#xBCC4;&#xACFC; &#xC2DC; &#xB0C5; &#xC2A4; &#xBC0F; &#xD68C;&#xB85C; &#xD615;&#xC131;&#xC758; &#xADFC;&#xBCF8;&#xC801;&#xC778; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;&#xC744; &#xC870;&#xC0AC; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD574; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xC870;&#xC791;&#xB41C; &#xC904;&#xAE30; &#xC138;&#xD3EC; &#xC0AC;&#xC6A9;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xAC00;&#xB2A5;&#xC131;&#xC744; &#xAC15;&#xC870; &#xD45C;&#xC2DC; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC904;&#xAE30; Cells2012; 30:2140-2151.

&#xBC30;&#xC544; &#xC904;&#xAE30; &#xC138;&#xD3EC; &#xC720;&#xB798; &#xC2E0;&#xACBD; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0; &#xC2DC; &#xB0C5; &#xC2A4; &#xC5F0;&#xACB0;&#xC744; &#xCD94;&#xC801; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Trazado de circuito de transsynaptic con virus de la rabia modificados gen&eacute;ticamente (RV) es una tecnolog&iacute;a emergente para la identificaci&oacute;n de conexiones sin&aacute;pticas entre las neuronas. Como complemento de esta metodolog&iacute;a, ahora es posible analizar las propiedades moleculares y celulares b&aacute;sicas de linajes neuronales derivadas de c&eacute;lulas madre embrionarias (CES) in vitro, y estas propiedades est&aacute;n bajo intensa investigaci&oacute;n hacia dise&ntilde;ar terapias de reemplazo de la c&eacute;lula. Aqu&iacute;, divulgamos la generaci&oacute;n de un nuevo rat&oacute;n l&iacute;nea ESC (mESC) que alberga los elementos gen&eacute;ticos para permitir el trazado de circuito transsynaptic RV-mediada en ESC-derivado de las neuronas y sus redes sin&aacute;pticas. Para facilitar el seguimiento de transsynaptic, hemos dise&ntilde;ado un nuevo alelo de reportero introduciendo cDNA codificaci&oacute;n tdTomato, la glicoprote&iacute;na de la rabia-G y el receptor de TVA aviar en el locus ROSA26 por gene targeting. Nos demuestran diferenciaci&oacute;n de gran eficacia de estas nuevas troncales en neuronas funcionales, muestran su capacidad para conectar CCIS con cultivos neuronales primarios seg&uacute;n lo evidenciado por inmunohistoqu&iacute;mica y grabaciones electrofisiol&oacute;gicas y mostrar su capacidad para actuar como c&eacute;lulas de origen presin&aacute;ptico seguimiento de redes neuronales in vitro e in vivo. Juntos, nuestros datos ponen de relieve el potencial para el uso de c&eacute;lulas gen&eacute;ticamente para investigar los mecanismos fundamentales de la formaci&oacute;n de sinapsis y circuito con identificaci&oacute;n inequ&iacute;voca de insumos presin&aacute;pticas en poblaciones neuronales de inter&eacute;s. TALLO Cells2012; 30:2140-2151.

Kevin Ung

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