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Development, Expansion, and <em>In vivo</em> Monitoring of Human NK Cells from Human Embryonic Stem Cells (hESCs) and Induced Pluripotent Stem Cells (iPSCs)

We present a method for deriving natural killer (NK) cells from undifferentiated hESCs and iPSCs using a feeder-free approach. This method gives rise to ...

University of Minnesota, Minneapolis

Laser flash eccitazione della band CTTS di CuBr(3)(2)(-) a 266 risultati nm nella formazione di una specie luminescente che decade attraverso un meccanismo accoppiato coerenza con la formazione di un&#39;emissione terzina tricoordinated exciplex in equilibrio con una specie di dicoordinated nonemitting terzina. Le costanti di velocit&agrave; per alcuni dei processi di decadimento, cos&igrave; come la costante di formazione dell&#39;intermedio radiativo, &egrave; stimata. Idratato elettroni e ioni cu sono prodotte in maniera efficiente anche circa un rapporto molare 1:1 in un percorso alternativo con la formazione di exciplex di copper(I). Gli spettri di assorbanza Time-resolved dell&#39;elettrone idratato e le specie luminescenti sono stati ottenuti, portando alla conclusione che il exciplex forme di alta resa a concentrazioni di ligando alta. Un altro intermedio sembra essere l&#39;anione radicale Br(2)(-).

Natura dei transitori nel Laser Flash fotolisi del complesso Tribromocuprate(I).

Laser flash excitation of the CTTS band of CuBr(3)(2)(-) at 266 nm results in the formation of a luminescent species which decays through a coupled mechanism consistent with the formation of an emitting triplet tricoordinated exciplex in equilibrium with a nonemitting triplet dicoordinated species. The rate constants for some of the decay processes, as well as the formation constant of the radiative intermediate, are estimated. Hydrated electrons and Cu(II) ions are also efficiently produced in about a 1:1 molar ratio in a competing pathway with the copper(I) exciplex formation. Time-resolved absorbance spectra of the hydrated electron and the luminescent species were obtained, leading to the conclusion that the exciplex forms in high yield at high ligand concentrations. Another intermediate appears to be the Br(2)(-) radical anion.

Nature of Transients in the Laser Flash Photolysis of the Tribromocuprate(I) Complex.

Laser flash de l&#39;excitation de la bande CTTS de CuBr(3)(2)(-) &agrave; 266 r&eacute;sultats nm dans la formation d&#39;une esp&egrave;ce luminescente qui d&eacute;cro&icirc;t &agrave; travers un m&eacute;canisme coupl&eacute; en accord avec la formation d&#39;un exciplexe de tricoordinated triplet &eacute;mettant en &eacute;quilibre avec une esp&egrave;ce d&#39;atomes de triplet quadrupler. Les constantes de vitesse pour certains des processus de d&eacute;composition, ainsi que la constante de formation de l&#39;interm&eacute;diaire radiatif, est estim&eacute;e. Hydrat&eacute;e des &eacute;lectrons et des ions Cu (II) sont produites aussi efficacement dans sur un rapport molaire de 1:1 dans une voie avec la formation d&#39;un exciplexe cuivre (i). Spectre d&#39;absorbance r&eacute;solution temporelle de l&#39;&eacute;lectron hydrat&eacute; et l&#39;esp&egrave;ce luminescente ont &eacute;t&eacute; obtenus, menant &agrave; la conclusion que l&#39;exciplexe forme des rendements &eacute;lev&eacute;s &agrave; des concentrations &eacute;lev&eacute;es de ligand. Un autre interm&eacute;diaire semble &ecirc;tre l&#39;anion radicalaire Br(2)(-).

Nature des transitoires dans la photolyse &eacute;clair au Laser du complexe Tribromocuprate(I).

Excitaci&oacute;n de flash de l&aacute;ser de la banda CTTS de CuBr(3)(2)(-) 266 resultados de nm en la formaci&oacute;n de una especie luminiscente que decae mediante un mecanismo acoplado consistente con la formaci&oacute;n de una emisi&oacute;n tr&iacute;o tricoordinated exciplex en equilibrio con una especie de dicoordinated nonemitting de tr&iacute;o. Se estima que las constantes de velocidad para algunos de los procesos de descomposici&oacute;n, as&iacute; como la constante formaci&oacute;n de los intermedios radiativo. Hidratada electrones e iones de Cu(II) se producen tambi&eacute;n eficientemente en sobre una fracci&oacute;n molar de 1:1 en un camino que compiten con la formaci&oacute;n de exciplex de cobre (i). Se obtuvieron espectros de absorbancia de tiempo resuelto el electr&oacute;n hidratado y especies luminiscentes, lleva a la conclusi&oacute;n que la exciplex forma en alto rendimiento en las concentraciones de ligando alta. Otro intermedio parece ser el ani&oacute;n radical Br(2)(-).

Naturaleza de transitorios en la fot&oacute;lisis de Flash l&aacute;ser del complejo Tribromocuprate(I).

Matrix metalloproteinases (MMPs) are zinc-dependent enzymes that play a role in the inflammatory response. These enzymes have been well studied in the context of cancer biology and inflammation. Recent studies, however, suggest that these enzymes also play roles in brain development and neurodegenerative disease. Select MMPs can target proteins critical to synaptic structure and neuronal survival, including integrins and cadherins. Here, we show that one member of the MMP family, MMP-7, which may be released from cells, including microglia, can target a protein critical to synaptic function. Through analysis of extracts from murine cortical slice preparations, we show that MMP-7 cleaves the NR1 subunit of the N-methyl-d-aspartate (NMDA) receptor to generate an N-terminal fragment of approximately 65 kDa. Moreover, studies with recombinant protein show that MMP-7-mediated cleavage of NR1 occurs at amino acid 517, which is extracellular and just distal to the first transmembrane domain. Data suggest that NR2A, which shares sequence homology with NR1, is also cleaved following treatment of slices with MMP-7, while select AMPA receptor subunits are not. Consistent with a potential effect of MMP-7 on ligand binding, additional experiments demonstrate that NMDA-mediated calcium flux is significantly diminished by MMP-7 pretreatment of cultures. In addition, the AMPA/NMDA ratio is increased by MMP-7 pretreatment. These data suggest that synaptic function may be altered in neurological conditions associated with increased levels of MMP-7.

MMP-7 cleaves the NR1 NMDA receptor subunit and modifies NMDA receptor function.

M&eacute;talloprot&eacute;inases matricielles (MMP) sont des enzymes d&eacute;pendantes du zinc qui jouent un r&ocirc;le dans la r&eacute;ponse inflammatoire. Ces enzymes ont &eacute;t&eacute; bien &eacute;tudi&eacute;s dans le cadre de la biologie du cancer et l&#39;inflammation. Des &eacute;tudes r&eacute;centes, cependant, sugg&egrave;rent que ces enzymes jouent &eacute;galement des r&ocirc;les dans les maladies neurod&eacute;g&eacute;n&eacute;ratives et de d&eacute;veloppement du cerveau. S&eacute;lectionnez MMP peut cibler des prot&eacute;ines essentielles &agrave; la structure synaptique et la survie des neurones, y compris les int&eacute;grines et cadh&eacute;rines. Ici, nous montrons qu&#39;un membre de la famille MMP, MMP-7, qui peut &ecirc;tre lib&eacute;r&eacute;s par les cellules, y compris la microglie, peut cibler une prot&eacute;ine essentielle &agrave; la fonction synaptique. Gr&acirc;ce &agrave; l&#39;analyse des extraits des pr&eacute;parations de tranches corticale murine, nous montrons que les MMP-7 fend la sous-unit&eacute; NR1 du r&eacute;cepteur N-m&eacute;thyl-d-aspartate (NMDA) pour g&eacute;n&eacute;rer un fragment N-terminal d&#39;environ 65 kDa. En outre, des &eacute;tudes avec la prot&eacute;ine recombinante montrent que clivage MMP-7-mediated de NR1 s&#39;effectue &agrave; 517, d&#39;acides amin&eacute;s qui est extracellulaire et juste distale au premier domaine transmembranaire. Donn&eacute;es sugg&egrave;rent que NR2A, qui partage une homologie de s&eacute;quence avec NR1, est aussi cliv&eacute; apr&egrave;s un traitement des tranches avec le MMP-7, tandis que certains r&eacute;cepteurs AMPA sous-unit&eacute;s ne sont pas. Compatible avec un effet potentiel de la MMP-7 sur la liaison du ligand, d&#39;autres exp&eacute;riences montrent que le flux de calcium induite par le NMDA se r&eacute;duit sensiblement par MMP-7 un pr&eacute;traitement des cultures. En outre, le ratio de l&#39;AMPA/NMDA est augment&eacute; par un pr&eacute;traitement MMP-7. Ces donn&eacute;es sugg&egrave;rent que la fonction synaptique peut &ecirc;tre alt&eacute;r&eacute;e dans les maladies neurologiques associ&eacute;es &agrave; des niveaux accrus de MMP-7.

MMP-7 s&#39;attache &agrave; la sous-unit&eacute; de r&eacute;cepteur de NMDA NR1 et modifie la fonction des r&eacute;cepteurs NMDA.

Metalloproteinasi della matrice (MMP) sono enzimi zinco-dipendenti che svolgono un ruolo nella risposta infiammatoria. Questi enzimi sono stati ben studiati nel contesto della biologia del cancro e infiammazione. Studi recenti, tuttavia, suggeriscono che questi enzimi svolgono un ruolo anche in malattie neurodegenerative e sviluppo cerebrale. Selezionare MMP pu&ograve; avere come bersaglio proteine critiche alla struttura sinaptica e sopravvivenza neuronale, tra cui le integrine e caderine. Qui, ci mostrano che un membro della famiglia MMP, MMP-7, che pu&ograve; essere rilasciato dalle cellule, tra cui la microglia, pu&ograve; indirizzare una proteina fondamentale per la funzione sinaptica. Attraverso l&#39;analisi di estratti da preparazioni murino fetta corticale, mostriamo che MMP-7 fende la subunit&agrave; NR1 del recettore N-metil-d-aspartato (NMDA) per generare un frammento N-terminale di circa 65 kDa. Inoltre, gli studi con proteina ricombinante mostrano che MMP-7-mediata scissione di NR1 si verifica all&#39;amminoacido 517, che &egrave; extracellulare e appena distale al primo dominio transmembrana. I dati suggeriscono che NR2A, che condivide omologia di sequenza con NR1, inoltre &egrave; fenduto seguente trattamento delle fette con MMP-7, mentre selezionato del recettore AMPA subunit&agrave; non sono. Coerente con un potenziale effetto di MMP-7 sul legame ligando, ulteriori esperimenti dimostrano che flusso di calcio NMDA-mediata &egrave; significativamente diminuita di MMP-7 pretrattamento delle culture. Inoltre, il rapporto AMPA/NMDA &egrave; aumentato di pretrattamento MMP-7. Questi dati suggeriscono che la funzione sinaptica pu&ograve; essere alterato in condizioni neurologiche associate con aumento dei livelli di MMP-7.

MMP-7 fende la subunit&agrave; del recettore NMDA NR1 e modifica la funzione del recettore NMDA.

Metaloproteinasas de la matriz (MMP) son enzimas dependientes de zinc que desempe&ntilde;an un papel en la respuesta inflamatoria. Estas enzimas han sido bien estudiadas en el contexto de la biolog&iacute;a del c&aacute;ncer y la inflamaci&oacute;n. Estudios recientes, sin embargo, sugieren que estas enzimas tambi&eacute;n juegan papeles en desarrollo y neurodegenerativas enfermedad del cerebro. Seleccione MMPs pueden dirigirse a las prote&iacute;nas fundamentales para la estructura sin&aacute;ptica y la supervivencia neuronal, incluyendo las integrinas y caderinas. Aqu&iacute;, demostramos a que un miembro de la familia MMP, MMP-7, que puede liberarse de las c&eacute;lulas, incluyendo la microglia, puede dirigirse a una prote&iacute;na esencial para la funci&oacute;n sin&aacute;ptica. A trav&eacute;s del an&aacute;lisis de extractos de preparaciones murino rebanada cortical, mostramos que el MMP-7 hiende la subunidad NR1 del receptor N-metil-d-aspartato (NMDA) para generar un fragmento N-terminal de aproximadamente 65 kDa. Por otra parte, los estudios con prote&iacute;na recombinante muestran que escote MMP-7-mediada de NR1 ocurre en el amino&aacute;cido 517, que es extracelular y apenas distal al primer dominio transmembrana. Datos sugieren que NR2A, que comparte homolog&iacute;a de secuencia con NR1, tambi&eacute;n es hendido despu&eacute;s del tratamiento de rebanadas con MMP-7, mientras que la selecci&oacute;n del receptor AMPA subunidades no son. Consistente con un efecto potencial de la MMP-7 sobre ligando, experimentos adicionales demuestran que el flujo de calcio mediada por NMDA disminuya significativamente por el tratamiento previo de la MMP-7 de culturas. Adem&aacute;s, se incrementa la proporci&oacute;n AMPA/NMDA por el tratamiento previo de la MMP-7. Estos datos sugieren que la funci&oacute;n sin&aacute;ptica puede alterarse en condiciones neurol&oacute;gicas asociadas con los niveles crecientes de MMP-7.

MMP-7 hiende la subunidad del receptor de NMDA NR1 y modifica la funci&oacute;n del receptor NMDA.

Natural killer (NK) cells serve as important effectors for antitumor immunity, and CD56+CD45+ NK cells can be routinely derived from human embryonic stem cells (hESCs). However, little is know about the ability of hESC-derived NK cells to mediate an effective in vivo antitumor response. Using bioluminescent imaging, we now demonstrate that H9 line hESC-derived NK cells mediate effective clearance of human tumor cells in vivo. In addition to increased in vitro killing of diverse tumor targets, the in vivo tumor clearance by H9 hESC-derived NK cells was more effective compared with NK cells derived from umbilical cord blood (UCB). Phenotypic analysis demonstrates the hESC-derived NK cells are uniformly CD94+CD117(low/-), an NK-cell population characterized by potent cytolytic activity and thus more competent to mediate tumor clearance. These studies demonstrate that hESCs provide an important model to study human lymphocyte development and may serve as a novel source for antitumor immunotherapy.

Human embryonic stem cells differentiate into a homogeneous population of natural killer cells with potent in vivo antitumor activity.

Cellules tueuses naturelles de (NK) servent d&#39;importants effecteurs de l&#39;immunit&eacute; antitumorale et CD56 + CD45 + cellules NK peuvent &ecirc;tre d&eacute;riv&eacute;s syst&eacute;matiquement les cellules souches embryonnaires humaines (CSEh). C&#39;est cependant peu conna&icirc;tre la capacit&eacute; de CSEh d&eacute;riv&eacute;es des cellules NK de provoquer une r&eacute;ponse antitumorale in vivo efficace. &Agrave; l&#39;aide de l&#39;imagerie bioluminescente, nous d&eacute;montrons maintenant que de cellules NK d&eacute;riv&eacute;es de CSEh H9 m&eacute;dient efficace apurement des cellules tumorales humaines in vivo. Outre une augmentation in vitro des cibles tumorales diverses, la clairance de tumeurs in vivo de cellules NK d&eacute;riv&eacute;es de CSEh H9 &eacute;tait plus efficace comparativement aux cellules NK provenant du sang de cordon ombilical (UCB). Analyse ph&eacute;notypique montre que les cellules NK CSEh sont uniform&eacute;ment CD94+CD117(low/-), une population de cellules NK, caract&eacute;ris&eacute;e par une puissante activit&eacute; cytolytique et donc plus comp&eacute;tente &agrave; la m&eacute;diation de d&eacute;gagement de la tumeur. Ces &eacute;tudes d&eacute;montrent que les CSEh fournissait un mod&egrave;le important pour &eacute;tudier le d&eacute;veloppement des lymphocytes humains et peut servir de source nouvelle pour l&#39;immunoth&eacute;rapie antitumorale.

Cellules souches embryonnaires humaines se diff&eacute;rencient en une population homog&egrave;ne de cellules tueuses naturelles avec la puissante activit&eacute; antitumorale in vivo.

Naturale cellule killer (NK) servono come importanti effettori per immunit&agrave; antitumorale e CD56 + CD45 + le cellule NK possono essere regolarmente derivate da cellule staminali embrionali umane (hESC). Tuttavia, poco &egrave; sapere circa la capacit&agrave; delle cellule NK hESC-derivato di mediare un&#39;efficacia risposta antitumorale in vivo. Utilizzando imaging bioluminescenti, ora dimostrare che le cellule NK hESC-derivato di H9 linea mediano efficace clearance di cellule tumorali umane in vivo. Oltre all&#39;uccisione in vitro aumento dei bersagli tumorali diverse, il giuoco del tumore in vivo da H9 hESC-derivati delle cellule NK era pi&ugrave; efficacia rispetto a cellule NK derivate da sangue del cordone ombelicale (UCB). Analisi fenotipica dimostra che le cellule NK hESC-derivati sono uniformemente CD94+CD117(low/-), una popolazione di cellule NK caratterizzata dalla potente attivit&agrave; citolitica e quindi pi&ugrave; competente per mediare la liquidazione del tumore. Questi studi dimostrano che le hESCs fornire un importante modello per studiare lo sviluppo dei linfociti umani e possono servire come fonte di romanzo per immunoterapia antitumorale.

Cellule staminali embrionali umane si differenziano in una popolazione omogenea di cellule killer naturali con potente attivit&agrave; antitumorale in vivo.

C&eacute;lulas de asesinas naturales del (NK) sirven como importantes generadores de inmunidad antitumoral, y CD56 + CD45 + las c&eacute;lulas NK pueden ser rutinariamente derivadas de c&eacute;lulas madre embrionarias humanas (hESCs). Sin embargo, poco es conocer la capacidad de mediar una eficaz respuesta antitumoral in vivo de c&eacute;lulas derivadas de las c&eacute;lulas NK. Usando proyecci&oacute;n de imagen bioluminiscente, ahora demostrar que las c&eacute;lulas NK H9 de la c&eacute;lulas derivadas de la l&iacute;nea median efectiva separaci&oacute;n de c&eacute;lulas tumorales humanas en vivo. Adem&aacute;s de la mayor matanza in vitro de objetivos diversos del tumor, la separaci&oacute;n del tumor in vivo por las c&eacute;lulas derivadas de c&eacute;lulas NK de H9 fue m&aacute;s eficaz en comparaci&oacute;n con las c&eacute;lulas NK, derivadas de la sangre de cord&oacute;n umbilical (UCB). An&aacute;lisis fenot&iacute;pico demuestra que las c&eacute;lulas derivadas de c&eacute;lulas NK son uniformemente CD94+CD117(low/-), una poblaci&oacute;n de c&eacute;lulas NK con potente actividad citol&iacute;tica y as&iacute; m&aacute;s competente para mediar la remoci&oacute;n del tumor. Estos estudios demuestran que hESCs proporcionan un importante modelo para estudiar el desarrollo de linfocitos humanos y puede servir como una fuente de la novela para inmunoterapia antitumoral.

C&eacute;lulas madre embrionarias humanas se diferencian en una poblaci&oacute;n homog&eacute;nea de c&eacute;lulas asesinas naturales con potente actividad antitumoral in vivo.

The insertion and removal of NMDA receptors from the synapse are critical events that modulate synaptic plasticity. While a great deal of progress has been made on understanding the mechanisms that modulate trafficking of NMDA receptors, we do not currently understand the molecular events required for the fusion of receptor containing vesicles with the plasma membrane. Here, we show that sphingomyelin phosphodiesterase 3 (also known as neutral sphingomyelinase-2) is critical for tumor necrosis factor (TNF) alpha-induced trafficking of NMDA receptors and synaptic plasticity. TNFalpha initiated a rapid increase in ceramide that was associated with increased surface localization of NMDA receptor NR1 subunits and a specific clustering of NR1 phosphorylated on serines 896 and 897 into lipid rafts. Brief applications of TNFalpha increased the rate and amplitude of NMDA-evoked calcium bursts and enhanced excitatory post-synaptic currents. Pharmacological inhibition or genetic mutation of neutral sphingomyelinase-2 prevented TNFalpha-induced generation of ceramide, phosphorylation of NR1 subunits, clustering of NR1, enhancement of NMDA-evoked calcium flux and excitatory post-synaptic currents.

Tumor necrosis factor-alpha-induced neutral sphingomyelinase-2 modulates synaptic plasticity by controlling the membrane insertion of NMDA receptors.

L&#39;insertion et le retrait des r&eacute;cepteurs NMDA de la synapse sont des &eacute;v&eacute;nements critiques qui modulent la plasticit&eacute; synaptique. Si beaucoup de progr&egrave;s ont &eacute;t&eacute; accompli sur la compr&eacute;hension des m&eacute;canismes qui modulent le trafic des r&eacute;cepteurs NMDA, nous ne comprenons pas actuellement les &eacute;v&eacute;nements mol&eacute;culaires requis pour la fusion des r&eacute;cepteurs contenant des v&eacute;sicules avec la membrane plasmique. Ici, nous montrons que phosphodiest&eacute;rase de sphingomy&eacute;line 3 (aussi connu sous le nom neutre sphingomy&eacute;linase-2) est critique pour le facteur de n&eacute;crose tumorale (TNF) induite par l&#39;alpha traite des r&eacute;cepteurs NMDA et la plasticit&eacute; synaptique. TNFalpha initi&eacute; une augmentation rapide de c&eacute;ramide qui &eacute;tait associ&eacute; &agrave; une localisation surface accrue des sous-unit&eacute;s de NR1 de r&eacute;cepteurs NMDA et un regroupement sp&eacute;cifique de NR1 phosphoryl&eacute;e sur s&eacute;rines 896 et 897 en radeaux lipidiques. Demandes de brefs de TNFalpha augmente le taux et amplitude de calcium &eacute;voqu&eacute;e par NMDA &eacute;clate et renforc&eacute; les courants postsynaptiques excitateurs. Inhibition pharmacologique ou mutation g&eacute;n&eacute;tique de la sphingomy&eacute;linase neutre-2 emp&ecirc;ch&eacute; induite par le TNFalpha g&eacute;n&eacute;ration de c&eacute;ramide, phosphorylation des sous-unit&eacute;s NR1, regroupement de NR1, am&eacute;lioration du flux calcique induite par le NMDA et courants postsynaptiques excitateurs.

Induite par le facteur de n&eacute;crose tumorale-alpha neutre sphingomy&eacute;linase-2 module la plasticit&eacute; synaptique en contr&ocirc;lant l&#39;insertion de la membrane des r&eacute;cepteurs NMDA.

L&#39;inserimento e la rimozione dei recettori NMDA da sinapsi sono eventi critici che modulano la plasticit&agrave; sinaptica. Mentre un grande progresso &egrave; stato fatto sulla comprensione dei meccanismi che modulano il traffico dei recettori NMDA, non attualmente comprendiamo gli eventi molecolari necessari per la fusione del recettore contenente le vescicole con la membrana plasmatica. Mostriamo qui, che quella della fosfodiesterasi della sfingomielina 3 (conosciuto anche come neutro sfingomielinasi-2) &egrave; fondamentale per il fattore di necrosi tumorale (TNF) Alfa-indotta traffico dei recettori NMDA e plasticit&agrave; sinaptica. TNFalpha avviato un rapido aumento della ceramide che &egrave; stato associato con la maggiore localizzazione superficiale della subunit&agrave; NR1 NMDA receptor e un cluster specifico di NR1 fosforilato su serines 896 e 897 in zattere lipidiche. Brevi applicazioni di TNFalpha aumentato il tasso e ampiezza di NMDA-evocato calcio scoppia e avanzate eccitatorie dei correnti. Inibizione farmacologica o mutazione genetica della sfingomielinasi neutra-2 impedito indotta da TNFalpha generazione di ceramide, fosforilazione della subunit&agrave; NR1, clustering di NR1, valorizzazione del flusso di calcio NMDA-evocato ed eccitatorie dei correnti.

Fattore di necrosi tumorale-alfa-indotta sfingomielinasi neutra-2 modula plasticit&agrave; sinaptica controllando l&#39;inserimento della membrana dei recettori NMDA.

La inserci&oacute;n y el retiro de los receptores NMDA de la sinapsis son eventos cr&iacute;ticos que modulan la plasticidad sin&aacute;ptica. Mientras se hace un gran progreso en la comprensi&oacute;n de los mecanismos que modulan el tr&aacute;fico de los receptores NMDA, no actualmente entendemos los eventos moleculares necesarios para la fusi&oacute;n del receptor que contiene ves&iacute;culas con la membrana plasm&aacute;tica. A continuaci&oacute;n, os mostramos que eso esfingomielina fosfodiesterasa 3 (tambi&eacute;n conocido como neutral esfingomielinasa-2) es fundamental para el factor de necrosis tumoral (TNF) alfa indujo tr&aacute;fico de receptores NMDA y la plasticidad sin&aacute;ptica. TNFalpha inici&oacute; un r&aacute;pido aumento de la ceramida que se asoci&oacute; con mayor superficie localizaci&oacute;n de subunidades de NR1 del receptor NMDA y un agrupamiento espec&iacute;fico de NR1 hab&iacute;a fosforilada en serinas 896 y 897 en las balsas lip&iacute;dicas. Breves aplicaciones de TNFalpha increment&oacute; la tasa y amplitud de calcio NMDA-evocado estalla y mejorado las corrientes postsin&aacute;pticos excitatorias. Inhibici&oacute;n farmacol&oacute;gica o mutaci&oacute;n gen&eacute;tica de esfingomielinasa neutral-2 prevenido TNFalpha inducida por la generaci&oacute;n de ceramida, fosforilaci&oacute;n de subunidades de NR1, agrupamiento de NR1, mejora del flujo de calcio NMDA-evocado y corrientes postsin&aacute;pticos excitatorias.

Esfingomielinasa neutral inducida por el factor de necrosis tumoral-alfa-2 modula la plasticidad sin&aacute;ptica controlando la inserci&oacute;n de la membrana de los receptores NMDA.

Human embryonic stem cells (hESCs) and induced pluripotent stem cells (iPSCs) provide an accessible, genetically tractable, and homogenous starting cell population to efficiently study human blood cell development. These cell populations provide platforms to develop new cell-based therapies to treat both malignant and nonmalignant hematological diseases. Our group previously demonstrated the ability of hESC-derived hematopoietic precursors to produce functional natural killer (NK) cells as well as an explanation of the underlying mechanism responsible for the inefficient development of T and B cells from hESCs. hESCs and iPSCs, which can be engineered reliably in vitro, provide an important new model system to study human lymphocyte development and produce enhanced cell-based therapies with the potential to serve as a "universal" source of antitumor lymphocytes. This review will focus on the application of hESC-derived NK cells with currently used and novel therapeutics for clinical trials, barriers to translation, and future applications through genetic engineering approaches.

Pluripotent stem cell-derived natural killer cells for cancer therapy.

Les cellules souches embryonnaires humaines (CSEh) et les cellules souches pluripotentes induites (CISP) fournissent une population de cellules d&eacute;part accessible et tractable g&eacute;n&eacute;tiquement homog&egrave;ne Etudier efficacement le d&eacute;veloppement des cellules de sang humain. Ces populations de cellules fournissent des plates-formes pour d&eacute;velopper de nouvelles th&eacute;rapies &agrave; base de cellules pour traiter des maladies h&eacute;matologiques malignes et non malins. Notre groupe a d&eacute;j&agrave; d&eacute;montr&eacute; la capacit&eacute; des CSEh d&eacute;riv&eacute;s de pr&eacute;curseurs h&eacute;matopo&iuml;&eacute;tiques pour produire des cellules fonctionnelles de le natural killer (NK), mais aussi une explication du m&eacute;canisme sous-jacent charg&eacute; du d&eacute;veloppement inefficace des cellules T et B de CSEh. CSEh et CISP, qui peut &ecirc;tre con&ccedil;ue de mani&egrave;re fiable in vitro, fournit un important nouveau syst&egrave;me mod&egrave;le pour &eacute;tudier le d&eacute;veloppement des lymphocytes humains et produire des th&eacute;rapies &agrave; base de cellule renforc&eacute;es susceptibles de servir de source &laquo; universelle &raquo; des lymphocytes antitumorales. Cet examen portera sur l&#39;application des CSEh d&eacute;riv&eacute;es des cellules NK avec actuellement utilis&eacute;s et des approches th&eacute;rapeutiques novatrices pour les essais cliniques, les obstacles &agrave; la traduction et les futures applications par g&eacute;nie g&eacute;n&eacute;tique.

Pluripotentes cellules souches d&eacute;riv&eacute;es cellules tueuses naturelles pour le traitement du cancer.

Cellule staminali embrionali umane (hESC) e cellule staminali pluripotenti indotte (iPSCs) forniscono un accessibile, geneticamente trattabili e omogenea partenza popolazione cellulare per studiare in modo efficace lo sviluppo delle cellule del sangue umano. Queste popolazioni cellulari offrono piattaforme per sviluppare nuove terapie cell-based per il trattamento di malattie ematologiche nonmalignant e maligne. Il nostro gruppo ha dimostrato in precedenza la capacit&agrave; di produrre funzionale naturale killer (NK) cellule precursori ematopoietiche hESC-derivati, nonch&eacute; una spiegazione del meccanismo sottostante responsabile per lo sviluppo inefficiente delle cellule T e B da hESC. hESC e iPSCs, che pu&ograve; essere costruito in modo affidabile in vitro, forniscono un importante nuovo sistema modello per studiare lo sviluppo dei linfociti umani e produrre terapie cell-based avanzate con il potenziale per servire come fonte di &quot;universale&quot; dei linfociti antitumorali. Questa recensione si concentrer&agrave; sull&#39;applicazione delle hESC derivate le cellule NK con attualmente utilizzati e si avvicina a nuove terapie per studi clinici, gli ostacoli alla traduzione e future applicazioni attraverso l&#39;ingegneria genetica.

Pluripotenti derivate da cellule staminali cellule natural killer per la terapia del cancro.

Las c&eacute;lulas madre embrionarias humanas (hESCs) y c&eacute;lulas pluripotentes inducidas (iPSCs) proporcionan una poblaci&oacute;n celular partida accesible, gen&eacute;ticamente manejable y homog&eacute;neo para estudiar eficientemente el desarrollo de las c&eacute;lulas de sangre humana. Estas poblaciones celulares ofrecen plataformas para desarrollar nuevas terapias basadas en c&eacute;lulas para tratar enfermedades hematol&oacute;gicas malignas y no malignas. Nuestro grupo demostrado previamente la capacidad de producir funcionales naturales killer (NK) c&eacute;lulas de precursores hematopoy&eacute;ticos derivados de c&eacute;lulas, as&iacute; como una explicaci&oacute;n del mecanismo subyacente responsable del ineficiente desarrollo de c&eacute;lulas T y B de hESCs. hESCs y iPSCs, que puede dise&ntilde;arse confiablemente in vitro, proporcionan un importante nuevo sistema modelo para estudiar el desarrollo de linfocitos humanos y producir mayor terapias basadas en c&eacute;lulas con el potencial de servir como una fuente &quot;universal&quot; de linfocitos antitumorales. Esta revisi&oacute;n se centrar&aacute; en la aplicaci&oacute;n de c&eacute;lulas derivadas de las c&eacute;lulas NK con utilizados actualmente y acerca de la terap&eacute;utica novedosa para ensayos cl&iacute;nicos, los obst&aacute;culos para futuras aplicaciones a trav&eacute;s de ingenier&iacute;a gen&eacute;tica y la traducci&oacute;n.

Pluripotentes derivadas de c&eacute;lulas madre c&eacute;lulas de asesino naturales para el tratamiento del c&aacute;ncer.

&#x57FA;&#x4E8E;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7597;&#x6CD5;&#x9632;&#x6CBB;&#x827E;&#x6ECB;&#x75C5;&#x6BD2;/&#x827E;&#x6ECB;&#x75C5;&#x6B63;&#x5728;&#x5F97;&#x5230;&#x66F4;&#x5927;&#x7684;&#x5174;&#x8DA3;&#x3002;&#x81EA;&#x7136;&#x6740;&#x624B; (NK) &#x7EC6;&#x80DE;&#x662F;&#x80FD;&#x591F;&#x6740;&#x6B7B;&#x591A;&#x79CD;&#x80BF;&#x7624;&#x7EC6;&#x80DE;&#x548C;&#x75C5;&#x6BD2;&#x611F;&#x67D3;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x5148;&#x5929;&#x514D;&#x75AB;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x7684;&#x4E00;&#x4E2A;&#x5173;&#x952E;&#x7EC4;&#x6210;&#x90E8;&#x5206;&#x3002;&#x867D;&#x7136;&#x5DF2;&#x8868;&#x660E; NK &#x7EC6;&#x80DE;&#x5728;&#x827E;&#x6ECB;&#x75C5;&#x6BD2; 1 &#x590D;&#x5236;&#x7684;&#x63A7;&#x5236;&#x4E2D;&#x53D1;&#x6325;&#x7740;&#x91CD;&#x8981;&#x7684;&#x4F5C;&#x7528;&#xFF0C;&#x5176;&#x529F;&#x80FD;&#x6D3B;&#x52A8;&#x5F80;&#x5F80;&#x635F;&#x5BB3;&#x4E2D;&#x611F;&#x67D3;&#x827E;&#x6ECB;&#x75C5;&#x6BD2;&#x7684; 1 &#x4E2A;&#x4EBA;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x4EE5;&#x524D;&#x8868;&#x660E; NK &#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x63A8;&#x5BFC;&#x4ECE;&#x4EBA;&#x7C7B;&#x80DA;&#x80CE;&#x5E72;&#x7EC6;&#x80DE; (hESCs) &#x4E0E;&#x5148;&#x5929;&#x6740;&#x6B7B;&#x80BF;&#x7624;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4F53;&#x5916;&#x548C;&#x4F53;&#x5185;&#x7684;&#x591A;&#x79CD;&#x7C7B;&#x578B;&#x7684;&#x80FD;&#x529B;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x73B0;&#x5728;&#x4ECE;&#x4EBA;&#x7C7B;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x591A;&#x80FD;&#x5E72;&#x7EC6;&#x80DE; &#xFF08;&#x9B54;&#x9B3C;&#xFF09; &#x6F14;&#x793A;&#x529F;&#x80FD;&#x7684; NK &#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x63A8;&#x5BFC;&#x3002;&#x66F4;&#x91CD;&#x8981;&#x7684;&#x662F;&#xFF0C;&#x8FD9;&#x4E24;&#x4E2A; hESC &#x548C;&#x673A;&#x4F53;&#x529F;&#x80FD;&#x6D3E;&#x751F; NK &#x7EC6;&#x80DE;&#x90FD;&#x80FD;&#x591F;&#x6291;&#x5236;&#x827E;&#x6ECB;&#x75C5;&#x6BD2; 1 NL4 3 CEM GFP &#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x611F;&#x67D3;&#x3002;&#x66F4;&#x591A;&#x4F7F;&#x7528;&#x611F;&#x67D3;&#x827E;&#x6ECB;&#x75C5;&#x6BD2; 1 &#x4EBA;&#x5C0F;&#x5B66; CD4(+) T &#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x8868;&#x660E; hESC &#x548C;&#x673A;&#x4F53;&#x529F;&#x80FD;&#x6D3E;&#x751F; NK &#x7EC6;&#x80DE;&#x7531;&#x81F3;&#x5C11;&#x4E09;&#x79CD;&#x4E0D;&#x540C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x673A;&#x5236;&#x5236;&#x6B62;&#x4E86; hiv-1 &#x611F;&#x67D3;&#xFF1A; &#x6740;&#x5BB3;&#x611F;&#x67D3;&#x75C5;&#x6BD2;&#x901A;&#x8FC7;&#x76F4;&#x63A5;&#x88C2;&#x89E3;&#x3001; &#x6297;&#x4F53;&#x4F9D;&#x8D56;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6BD2;&#x4F5C;&#x7528;&#x53CA;&#x8D8B;&#x5316;&#x56E0;&#x5B50;&#x548C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x56E0;&#x5B50;&#x7684;&#x751F;&#x4EA7;&#x76EE;&#x6807;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x7ED3;&#x679C;&#x5EFA;&#x7ACB;&#x7684;&#x6F5C;&#x529B;&#xFF0C;&#x5229;&#x7528; hESC &#x548C;&#x673A;&#x4F53;&#x529F;&#x80FD;-&#x6E90;&#x6027; NK &#x7EC6;&#x80DE;&#x66F4;&#x597D;&#x5730;&#x4E86;&#x89E3;&#x6297;&#x827E;&#x6ECB;&#x75C5;&#x6BD2; 1 &#x514D;&#x75AB;&#x5E76;&#x63D0;&#x4F9B;&#x4E00;&#x79CD;&#x65B0;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x514D;&#x75AB;&#x6CBB;&#x7597;&#x65B9;&#x6CD5;&#x6765;&#x6CBB;&#x7597;&#x827E;&#x6ECB;&#x75C5;&#x6BD2;/&#x827E;&#x6ECB;&#x75C5;&#x3002;

&#x4EBA;&#x7C7B;&#x80DA;&#x80CE;&#x5E72;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4EA7;&#x751F;&#x81EA;&#x7136;&#x6740;&#x624B;&#x7EC6;&#x80DE;&#xFF0C;&#x901A;&#x8FC7;&#x5229;&#x7528;&#x5404;&#x79CD;&#x4E0D;&#x540C;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x673A;&#x5236;&#x8C03;&#x89E3;&#x6297;&#x827E;&#x6ECB;&#x75C5;&#x6BD2; 1 &#x6D3B;&#x52A8;&#x3002;

Cell-based therapies against HIV/AIDS have been gaining increased interest. Natural killer (NK) cells are a key component of the innate immune system with the ability to kill diverse tumor cells and virus-infected cells. While NK cells have been shown to play an important role in the control of HIV-1 replication, their functional activities are often compromised in HIV-1-infected individuals. We have previously demonstrated the derivation of NK cells from human embryonic stem cells (hESCs) with the ability to potently kill multiple types of tumor cells both in vitro and in vivo. We now demonstrate the derivation of functional NK cells from human induced pluripotent stem cells (iPSCs). More importantly, both hESC- and iPSC-derived NK cells are able to inhibit HIV-1 NL4-3 infection of CEM-GFP cells. Additional studies using HIV-1-infected human primary CD4(+) T cells illustrated that hESC- and iPSC-derived NK cells suppress HIV-1 infection by at least three distinct cellular mechanisms: killing of infected targets through direct lysis, antibody-dependent cellular cytotoxicity, and production of chemokines and cytokines. Our results establish the potential to utilize hESC- and iPSC-derived NK cells to better understand anti-HIV-1 immunity and provide a novel cellular immunotherapeutic approach to treat HIV/AIDS.

Human pluripotent stem cells produce natural killer cells that mediate anti-HIV-1 activity by utilizing diverse cellular mechanisms.

Des th&#xE9;rapies cellulaires contre le VIH / SIDA ont gagn&#xE9; un int&#xE9;r&#xEA;t accru. Tueuses naturelles (cellules NK) sont une composante cl&#xE9; du syst&#xE8;me immunitaire inn&#xE9; avec la capacit&#xE9; de tuer les cellules tumorales et la diversit&#xE9; du virus des cellules infect&#xE9;es. Alors que les cellules NK ont &#xE9;t&#xE9; montr&#xE9; &#xE0; jouer un r&#xF4;le important dans le contr&#xF4;le de la r&#xE9;plication du VIH-1, leurs activit&#xE9;s fonctionnelles sont souvent compromises par le VIH-1-personnes infect&#xE9;es par le. Nous avons d&#xE9;j&#xE0; d&#xE9;montr&#xE9; la d&#xE9;rivation de cellules NK &#xE0; partir de cellules souches embryonnaires humaines (CSEh) avec la capacit&#xE9; de tuer puissamment plusieurs types de cellules tumorales in vitro et in vivo. Nous avons maintenant de d&#xE9;montrer la d&#xE9;rivation de cellules NK fonctionnelles de l&#x26;#39;homme cellules souches pluripotentes induites (CISP). Plus important encore, &#xE0; la fois sur les CSEh et iPSC d&#xE9;riv&#xE9;s des cellules NK sont capables d&#x26;#39;inhiber l&#x26;#39;infection &#xE0; VIH-1 NL4-3 du CEM-cellules GFP. Des &#xE9;tudes suppl&#xE9;mentaires utilisant du VIH-1-humains infect&#xE9;s CD4 primaires (+) des cellules T a d&#xE9;montr&#xE9; que les CSEh et iPSC d&#xE9;riv&#xE9;s des cellules NK supprimer le VIH-1 infection par au moins trois m&#xE9;canismes distincts de cellulaires: tuer des cibles infect&#xE9;es par lyse directe, d&#xE9;pendant des anticorps cytotoxicit&#xE9; &#xE0; m&#xE9;diation cellulaire, et la production de chimiokines et de cytokines. Nos r&#xE9;sultats &#xE9;tablissent le potentiel d&#x26;#39;utiliser des cellules de CSEh et iPSC d&#xE9;riv&#xE9; NK afin de mieux comprendre anti-VIH-1 et l&#x26;#39;immunit&#xE9; de fournir un roman approche cellulaire immunoth&#xE9;rapeutique pour traiter le VIH / SIDA.

Cellules souches pluripotentes humaines produire des cellules tueuses naturelles qui interviennent dans la lutte contre le VIH-1 Activit&#xE9; en utilisant divers m&#xE9;canismes cellulaires

Zellbasierte Therapien gegen HIV/AIDS haben erh&ouml;htes Interesse gewinnt. Nat&uuml;rliche killer (NK) Zellen sind ein wichtiger Bestandteil des angeborenen Immunsystems mit der M&ouml;glichkeit, diverse Tumorzellen und virusinfizierte Zellen zu t&ouml;ten. W&auml;hrend NK-Zellen spielen eine wichtige Rolle bei der Kontrolle der HIV-1-Replikation erwiesen haben, sind ihre funktionellen Aktivit&auml;ten oft in HIV-1-infizierten Personen gef&auml;hrdet. Wir haben zuvor die Ableitung von NK-Zellen aus menschlichen embryonalen Stammzellen (Zellkulturen) mit der F&auml;higkeit, mehrere Arten von Tumorzellen in vitro und in-vivo dabei wirksam zu t&ouml;ten bewiesen. Wir zeigen nun die Ableitung des funktionalen NK-Zellen aus menschlichen induzierten pluripotenten Stammzellen (iPSCs). Noch wichtiger ist, sind beide hESC und iPSC-abgeleiteten NK-Zellen in der Lage, die Infektion von HIV-1 NL4-3 CEM-GFP-Zellen zu hemmen. Weitere Studien mit HIV-1-infizierten Zellen der prim&auml;re menschliche CD4(+) T illustriert, dass hESC und iPSC-abgeleitet von NK-Zellen HIV-1 Infektion durch mindestens drei verschiedene zellul&auml;re Mechanismen unterdr&uuml;cken: T&ouml;tung von infizierten Ziele durch direkte Zerst&ouml;rung, Antik&ouml;rper-abh&auml;ngige zellul&auml;re Zytotoxizit&auml;t und Produktion von Chemokinen und Zytokinen. Unsere Ergebnisse fest, dass das Potenzial nutzen hESC und iPSC-abgeleiteten NK-Zellen um besser zu verstehen, anti-HIV-1-Immunit&auml;t und bieten einen neuartigen zellul&auml;ren immuntherapeutischen Ansatz zur Behandlung von HIV/AIDS.

Menschliche pluripotenten Stammzellen produzieren nat&uuml;rliche Killerzellen, die anti-HIV-1-Aktivit&auml;t zu vermitteln, durch die Verwendung von unterschiedlicher zellul&auml;rer Mechanismen.

Cell-based terapie contro l&#39;HIV/AIDS hanno guadagnato interesse aumentato. Naturale killer (NK) cellule sono un componente chiave del sistema immunitario innato con la capacit&agrave; di uccidere le cellule tumorali diversificata e cellule infettate da virus. Mentre le cellule NK hanno dimostrate di giocare un ruolo importante nel controllo della replicazione di HIV-1, loro attivit&agrave; funzionali sono spesso compromesse in individui HIV-1-infected. In precedenza abbiamo dimostrato la derivazione di cellule NK da cellule staminali embrionali umane (hESC) con la capacit&agrave; di uccidere potentemente pi&ugrave; tipi di cellule tumorali in vitro e in vivo. Abbiamo ora dimostrare la derivazione di cellule NK funzionale da cellule staminali umane pluripotenti indotte (iPSCs). Ancora pi&ugrave; importante, entrambi hESC-iPSC derivate e cellule NK sono in grado di inibire l&#39;infezione da HIV-1 NL4-3 delle cellule CEM-GFP. Ulteriori studi utilizzando l&#39;HIV-1-infected primarie CD4(+) T cellule umane illustrato che cellule NK hESC-iPSC derivate e reprimere infezione HIV-1 da almeno tre distinti meccanismi cellulari: abbattimento di bersagli infetti attraverso lisi diretta, citotossicit&agrave; cellulare anticorpo-dipendente e la produzione di chemochine e citochine. I nostri risultati stabiliscono il potenziale di utilizzare hESC iPSC derivate e NK cells per meglio comprendere l&#39;immunit&agrave; anti-HIV-1 e fornire un nuovo approccio immunotherapeutic cellulare per il trattamento di HIV/AIDS.

Cellule staminali pluripotenti umane producono le cellule natural killer che mediano l&#39;attivit&agrave; anti-HIV-1 utilizzando diversi meccanismi cellulari.

HIV / AIDS&#x306B;&#x5BFE;&#x3059;&#x308B;&#x7D30;&#x80DE;&#x30D9;&#x30FC;&#x30B9;&#x306E;&#x6CBB;&#x7642;&#x6CD5;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x95A2;&#x5FC3;&#x306E;&#x9AD8;&#x307E;&#x308A;&#x3092;&#x7372;&#x5F97;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30CA;&#x30C1;&#x30E5;&#x30E9;&#x30EB;&#x30AD;&#x30E9;&#x30FC;&#xFF08;NK&#xFF09;&#x7D30;&#x80DE;&#x306F;&#x3001;&#x69D8;&#x3005;&#x306A;&#x816B;&#x760D;&#x7D30;&#x80DE;&#x3084;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x611F;&#x67D3;&#x7D30;&#x80DE;&#x3092;&#x6BBA;&#x3059;&#x80FD;&#x529B;&#x3092;&#x6301;&#x3064;&#x81EA;&#x7136;&#x514D;&#x75AB;&#x7CFB;&#x306E;&#x4E3B;&#x8981;&#x306A;&#x30B3;&#x30F3;&#x30DD;&#x30FC;&#x30CD;&#x30F3;&#x30C8;&#x3067;&#x3059;&#x3002; NK&#x7D30;&#x80DE;&#x306F;HIV-1&#x8907;&#x88FD;&#x306E;&#x5236;&#x5FA1;&#x306B;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x679C;&#x305F;&#x3059;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x793A;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x304C;&#x3001;&#x305D;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x6A5F;&#x80FD;&#x7684;&#x6D3B;&#x52D5;&#x306F;&#x3001;&#x591A;&#x304F;&#x306E;&#x5834;&#x5408;&#x3001;HIV-1&#x611F;&#x67D3;&#x8005;&#x306B;&#x4FB5;&#x5BB3;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x4EE5;&#x524D;&#x5F37;&#x529B;in vitro&#x304A;&#x3088;&#x3073;in vivo&#x306E;&#x4E21;&#x65B9;&#x306E;&#x816B;&#x760D;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x8907;&#x6570;&#x306E;&#x7A2E;&#x985E;&#x3092;&#x6BBA;&#x3059;&#x80FD;&#x529B;&#x3092;&#x6301;&#x3064;&#x30D2;&#x30C8;&#x80DA;&#x6027;&#x5E79;&#x7D30;&#x80DE;&#xFF08;&#x30D2;&#x30C8;ES&#x7D30;&#x80DE;&#xFF09;&#x304B;&#x3089;&#x3001;NK&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x8A98;&#x5C0E;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x4ECA;&#x3001;&#x4EBA;&#x9593;&#x306E;&#x4EBA;&#x5DE5;&#x591A;&#x80FD;&#x6027;&#x5E79;&#x7D30;&#x80DE;&#xFF08;&#x6027;IPSC&#xFF09;&#x304B;&#x3089;&#x6A5F;&#x80FD;&#x7684;&#x306A;NK&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x8A98;&#x5C0E;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x306E;&#x306F;&#x3001;&#x4E21;&#x65B9;&#x306E;hESC&#x3068;IPSC&#x7531;&#x6765;&#x306E;NK&#x7D30;&#x80DE;&#x306F;CEM-GFP&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;HIV-1 NL4-3&#x306E;&#x611F;&#x67D3;&#x3092;&#x963B;&#x5BB3;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x308B;&#x3002;&#x76F4;&#x63A5;&#x6EB6;&#x89E3;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x3066;&#x611F;&#x67D3;&#x3057;&#x305F;&#x30BF;&#x30FC;&#x30B2;&#x30C3;&#x30C8;&#x306E;&#x6BBA;&#x5BB3;&#x3001;&#x6297;&#x4F53;&#x4F9D;&#x5B58;&#x6027;&#xFF1A;hESC&#x306E;&#x3068;IPSC&#x7531;&#x6765;&#x306E;NK&#x7D30;&#x80DE;&#x306F;&#x3001;&#x5C11;&#x306A;&#x304F;&#x3068;&#x3082;3&#x3064;&#x306E;&#x7570;&#x306A;&#x308B;&#x7D30;&#x80DE;&#x30E1;&#x30AB;&#x30CB;&#x30BA;&#x30E0;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;HIV-1&#x611F;&#x67D3;&#x3092;&#x6291;&#x5236;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3059;HIV-1&#x611F;&#x67D3;&#x30D2;&#x30C8;&#x521D;&#x4EE3;CD4&#xFF08;+&#xFF09;T&#x7D30;&#x80DE;&#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x305F;&#x8FFD;&#x52A0;&#x8A66;&#x9A13;&#x7D30;&#x80DE;&#x50B7;&#x5BB3;&#x6027;&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x30B1;&#x30E2;&#x30AB;&#x30A4;&#x30F3;&#x3068;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x30AB;&#x30A4;&#x30F3;&#x306E;&#x7523;&#x751F;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x306F;&#x3001;&#x512A;&#x308C;&#x305F;&#x6297;HIV-1&#x514D;&#x75AB;&#x3092;&#x7406;&#x89E3;&#x3057;&#x3001;HIV / AIDS&#x306E;&#x6CBB;&#x7642;&#x306B;&#x65B0;&#x305F;&#x306A;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x514D;&#x75AB;&#x7642;&#x6CD5;&#x7684;&#x306A;&#x30A2;&#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30C1;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x3001;hESC&#x306E;&#x3068;IPSC&#x7531;&#x6765;&#x306E;NK&#x7D30;&#x80DE;&#x3092;&#x5229;&#x7528;&#x3059;&#x308B;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x3092;&#x78BA;&#x7ACB;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x30D2;&#x30C8;&#x591A;&#x80FD;&#x6027;&#x5E79;&#x7D30;&#x80DE;&#x306F;&#x3001;&#x591A;&#x69D8;&#x306A;&#x7D30;&#x80DE;&#x30E1;&#x30AB;&#x30CB;&#x30BA;&#x30E0;&#x3092;&#x6D3B;&#x7528;&#x3057;&#x305F;&#x6297;HIV-1&#x6D3B;&#x6027;&#x3092;&#x5A92;&#x4ECB;&#x3059;&#x308B;&#x30CA;&#x30C1;&#x30E5;&#x30E9;&#x30EB;&#x30AD;&#x30E9;&#x30FC;&#x7D30;&#x80DE;&#x3092;&#x4F5C;&#x308A;&#x51FA;&#x3059;

&#xC138;&#xD3EC; &#xAE30;&#xBC18; &#xC694;&#xBC95; HIV/&#xC5D0;&#xC774;&#xC988;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xAD00;&#xC2EC; &#xC99D;&#xAC00; &#xD655;&#xBCF4; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC790;&#xC5F0; &#xD0AC;&#xB7EC; (NK) &#xC138;&#xD3EC;&#xB294; &#xB2E4;&#xC591; &#xD55C; &#xC885;&#xC591; &#xC138;&#xD3EC;&#xC640; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4;&#xC5D0; &#xAC10;&#xC5FC; &#xB41C; &#xC138;&#xD3EC;&#xB97C; &#xC8FD; &#xC77C; &#xC218; &#xC788;&#xB294; &#xD0C0;&#xACE0; &#xB09C; &#xBA74;&#xC5ED; &#xCCB4;&#xACC4;&#xC758; &#xD575;&#xC2EC; &#xAD6C;&#xC131; &#xC694;&#xC18C;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;. NK &#xC140; &#xD45C;&#xC2DC; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; hiv-1 &#xBCF5;&#xC81C;&#xC758; &#xC81C;&#xC5B4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744;, &#xD558;&#xB294; &#xB3D9;&#xC548; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC758; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC801; &#xD65C;&#xB3D9;&#xC740; &#xC885;&#xC885; &#xC5D0;&#xC774;&#xC988;-1 &#xAC10;&#xC5FC; &#xB41C; &#xAC1C;&#xC778;&#xC5D0; &#xC190;&#xC0C1; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC; &#xC774;&#xC804;&#xC5D0; potently &#xC5EC;&#xB7EC; &#xC885;&#xB958;&#xC758; &#xC0DD;&#xCCB4; &#xC678; &#xBC0F; &#xC0DD;&#xCCB4; &#xC870;&#xAC74; &#xC885;&#xC591; &#xC138;&#xD3EC;&#xB97C; &#xC8FD; &#xC77C; &#xC218; &#xC788;&#xB294; &#xC778;&#xAC04; &#xBC30;&#xC544; &#xC904;&#xAE30; &#xC138;&#xD3EC; (hESCs)&#xC5D0;&#xC11C; NK &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xC720;&#xB798;&#xB97C; &#xC99D;&#xBA85; &#xD558;&#xACE0;&#xC788;&#xB2E4;. &#xC9C0;&#xAE08; &#xC778;&#xAC04; &#xC720;&#xB3C4; &#xB9CC;&#xB2A5; &#xC904;&#xAE30; &#xC138;&#xD3EC; (iPSCs)&#xC5D0;&#xC11C; &#xD30C;&#xC0DD; &#xAE30;&#xB2A5; NK &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xBCF4;&#xC5EC; &#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB354; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xAC83;&#xC740;, &#xB450; hESC &#xBC0F; iPSC &#xC720;&#xB798; NK &#xC138;&#xD3EC; CEM GFP &#xC140;&#xC758; V-1 NL4 3 &#xAC10;&#xC5FC;&#xC744; &#xC5B5;&#xC81C; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC5D0;&#xC774;&#xC988;-1 &#xAC10;&#xC5FC; &#xB41C; &#xC778;&#xAC04;&#xC758; &#xAE30;&#xBCF8; CD4(+) T &#xC138;&#xD3EC;&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xCD94;&#xAC00; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xC640; hESC &#xBC0F; iPSC &#xC720;&#xB798; NK &#xC138;&#xD3EC; &#xC801;&#xC5B4;&#xB3C4; &#xC138; &#xAC1C;&#xC758; &#xACE0;&#xC720;&#xD55C; &#xC140;&#xB8F0;&#xB7EC; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC5D0;&#xC774;&#xC988;-1 &#xAC10;&#xC5FC;&#xC744; &#xC5B5;&#xC81C;: &#xC9C1;&#xC811; &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xC6A9; &#xD574;, &#xD56D; &#xCCB4; &#xC758;&#xC874; &#xC138;&#xD3EC; &#xC138;&#xD3EC; &#xB3C5;&#xC131;, chemokines &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; cytokines&#xC758; &#xC0DD;&#xC0B0;&#xC744; &#xD1B5;&#xD574; &#xAC10;&#xC5FC; &#xB41C; &#xB300;&#xC0C1;&#xC758; &#xC0B4;&#xC778;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xACB0;&#xACFC; &#xC124;&#xC815; hESC &#xBC0F; iPSC-&#xD30C;&#xC0DD; NK &#xD65C;&#xC6A9; &#xAC00;&#xB2A5;&#xC131;&#xC774; &#xC140; &#xB354; &#xC548;&#xD2F0; hiv-1 &#xBA74;&#xCC45; &#xD2B9;&#xAD8C;&#xC744; &#xC774;&#xD574; &#xD558; &#xACE0; HIV/&#xC5D0;&#xC774;&#xC988; &#xCE58;&#xB8CC;&#xC5D0; &#xC0C8;&#xB85C;&#xC6B4; &#xC138;&#xD3EC; immunotherapeutic &#xC811;&#xADFC; &#xBC29;&#xC2DD;&#xC744; &#xC81C;&#xACF5; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xC778;&#xAC04;&#xC758; pluripotent &#xC904;&#xAE30; &#xC138;&#xD3EC;&#xB294; &#xB2E4;&#xC591; &#xD55C; &#xC138;&#xD3EC; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;&#xC744; &#xC774;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xD56D; hiv-1 &#xD65C;&#xB3D9; &#xC911;&#xC7AC; &#xC790;&#xC5F0; &#xD0AC;&#xB7EC; &#xC138;&#xD3EC; &#xC0DD;&#xC0B0;.

Terapias basadas en c&#xE9;lulas contra el VIH / SIDA han ido ganando mayor inter&#xE9;s. Asesinas naturales (c&#xE9;lulas NK) son un componente clave del sistema inmune innato con la capacidad de matar a diversas c&#xE9;lulas tumorales y c&#xE9;lulas infectadas por virus. Mientras que las c&#xE9;lulas NK se ha demostrado que juegan un papel importante en el control de la replicaci&#xF3;n del VIH-1, sus actividades funcionales son a menudo comprometidos en VIH-1-individuos infectados. Hemos demostrado previamente la derivaci&#xF3;n de c&#xE9;lulas NK a partir de c&#xE9;lulas madre embrionarias humanas (hESCs) con la capacidad de matar de forma potente de m&#xFA;ltiples tipos de c&#xE9;lulas tumorales tanto in vitro como in vivo. Ahora demuestran la derivaci&#xF3;n de las c&#xE9;lulas NK funcionales de las c&#xE9;lulas madre pluripotentes inducidas (iPSCs). M&#xE1;s importante, tanto hCME y CMPi derivados de las c&#xE9;lulas NK son capaces de inhibir la infecci&#xF3;n por VIH-1 NL4-3 de la CEM-GFP c&#xE9;lulas. Estudios adicionales con el VIH-1-infected CD4 humanos primarios (+) las c&#xE9;lulas T de manifiesto que hESC y de IPSC derivados de las c&#xE9;lulas NK suprimir la infecci&#xF3;n VIH-1 por lo menos tres mecanismos distintos celulares: la matanza de blancos infectados a trav&#xE9;s de la lisis directa, dependiente de anticuerpos citotoxicidad celular y la producci&#xF3;n de citocinas y quimiocinas. Nuestros resultados demuestran el potencial de utilizar c&#xE9;lulas hESC y de IPSC derivado de NK para comprender mejor contra el VIH-1 la inmunidad y proporcionar un nuevo m&#xE9;todo de inmunoterapia celular, para tratar el VIH / SIDA.

C&#xE9;lulas madre pluripotentes producir c&#xE9;lulas asesinas naturales que median anti-VIH-1 mediante la utilizaci&#xF3;n de diversos mecanismos celulares

Advancements in human pluripotent stem cell (hPSC) research have potential to revolutionize therapeutic transplantation. It has been demonstrated that transcription factors may play key roles in regulating maintenance, expansion, and differentiation of hPSCs. In addition to its regulatory functions in hematopoiesis and blood-related disorders, the transcription factor RUNX1 is also required for the formation of definitive blood stem cells. In this study, we demonstrated that expression of endogenous RUNX1a, an isoform of RUNX1, parallels with lineage commitment and hematopoietic emergence from hPSCs, including both human embryonic stem cells and inducible pluripotent stem cells. In a defined hematopoietic differentiation system, ectopic expression of RUNX1a facilitates emergence of hematopoietic progenitor cells (HPCs) and positively regulates expression of mesoderm and hematopoietic differentiation-related factors, including Brachyury, KDR, SCL, GATA2, and PU.1. HPCs derived from RUNX1a hPSCs show enhanced expansion ability, and the ex vivo-expanded cells are capable of differentiating into multiple lineages. Expression of RUNX1a in embryoid bodies (EBs) promotes definitive hematopoiesis that generates erythrocytes with Î²-globin production. Moreover, HPCs generated from RUNX1a EBs possess â‰¥9-week repopulation ability and show multilineage hematopoietic reconstitution in vivo. Together, our results suggest that RUNX1a facilitates the process of producing therapeutic HPCs from hPSCs.

RUNX1a enhances hematopoietic lineage commitment from human embryonic stem cells and inducible pluripotent stem cells.

Progr&egrave;s dans la recherche (hPSC) les cellules souches pluripotentes humaines ont pourrait r&eacute;volutionner la transplantation th&eacute;rapeutique. Il a &eacute;t&eacute; d&eacute;montr&eacute; que des facteurs de transcription pourraient jouer un r&ocirc;le cl&eacute; dans la r&eacute;gulation de maintenance, l&#39;expansion et la diff&eacute;renciation des hPSCs. Outre ses fonctions de r&eacute;glementation en h&eacute;matopo&iuml;&egrave;se et troubles sanguins, le facteur de transcription RUNX1 est requis pour la formation de cellules souches sanguines d&eacute;finitif. Dans cette &eacute;tude, nous avons d&eacute;montr&eacute; que l&#39;expression de RUNX1a endog&egrave;ne, une isoforme de RUNX1, parall&egrave;le avec engagement de lignage et h&eacute;matopo&iuml;&eacute;tique &eacute;mergence de hPSCs, y compris les cellules souches embryonnaires humaines et les cellules souches pluripotentes inductible. Dans un syst&egrave;me d&eacute;fini de la diff&eacute;renciation h&eacute;matopo&iuml;&eacute;tique, l&#39;expression ectopique de RUNX1a facilite l&#39;&eacute;mergence de cellules prog&eacute;nitrices h&eacute;matopo&iuml;&eacute;tiques (CPH) et r&eacute;gule positivement l&#39;expression du m&eacute;soderme et les facteurs li&eacute;s &agrave; la diff&eacute;renciation h&eacute;matopo&iuml;&eacute;tiques, y compris Brachyury, KRR, SCL, GATA2 et PU.1. HPCs d&eacute;riv&eacute;s RUNX1a hPSCs montrent capacit&eacute; d&#39;expansion accrue et l&#39;ex vivo-&eacute;largi cellules sont capables de se diff&eacute;rencier en plusieurs lign&eacute;es. Expression de RUNX1a dans le corps embryo&iuml;des (EBs) favorise l&#39;h&eacute;matopo&iuml;&egrave;se d&eacute;finitive qui g&eacute;n&egrave;re des &eacute;rythrocytes avec production de &beta;-globine. En outre, HPCs g&eacute;n&eacute;r&eacute;s par RUNX1a EBs poss&egrave;dent la capacit&eacute; de repeuplement &ge; 9 semaines et montrent multilign&eacute;e reconstitution h&eacute;matopo&iuml;&eacute;tique in vivo. Ensemble, nos r&eacute;sultats sugg&egrave;rent que les RUNX1a facilite le processus de production des th&eacute;rapeutiques HPCs de hPSCs.

RUNX1a am&eacute;liore l&#39;engagement de la lign&eacute;e h&eacute;matopo&iuml;&eacute;tique de cellules souches embryonnaires humaines et de cellules souches pluripotentes inductible.

Avanzamenti nella ricerca sulle cellule staminali (hPSC) pluripotenti umane hanno il potenziale per rivoluzionare il trapianto terapeutico. &Egrave; stato dimostrato che fattori di trascrizione possono giocare ruoli chiave nella regolazione della manutenzione, espansione e differenziazione di hPSCs. Oltre alle sue funzioni normative in ematopoiesi e disturbi correlati a sangue, il fattore di trascrizione RUNX1 &egrave; richiesto anche per la formazione di cellule staminali del sangue definitivo. In questo studio, abbiamo dimostrato che espressione di RUNX1a endogeni, un&#39;isoforma di RUNX1, parallels con impegno di lignaggio ed ematopoietiche emergere da hPSCs, compreso sia le cellule staminali embrionali umane e cellule staminali pluripotenti inducibile. In un sistema definito differenziazione ematopoietiche, espressione ectopica di RUNX1a facilita l&#39;emergere di cellule progenitrici ematopoietiche (HPC) e regola positivamente l&#39;espressione di mesoderma ed ematopoietiche fattori correlati a differenziazione, tra cui Brachyury, KDR, SCL, GATA2 e PU.1. HPC derivato da RUNX1a hPSCs Visualizza espansione maggiore capacit&agrave; e l&#39;ex vivo-espanso cellule sono in grado di differenziare in lignaggi multipli. Espressione di RUNX1a nei corpi embryoid (EBs) promuove emopoiesi definitiva che genera eritrociti con la produzione di &beta;-globina. Inoltre, HPC generato da RUNX1a EBs possiedono capacit&agrave; di ripopolamento &ge;9-settimana e visualizza multilineare ricostituzione ematopoietica in vivo. Insieme, i nostri risultati suggeriscono che RUNX1a facilita il processo di produzione HPCs terapeutico da hPSCs.

RUNX1a migliora impegno hematopoietic lineage da cellule staminali embrionali umane e cellule staminali pluripotenti inducibile.

Human embryonic stem cell (hESC)-derived natural killer (NK) cells are a promising source of antitumor lymphocytes for immunotherapeutics. They also provide a genetically tractable platform well suited for the study of antitumor immunotherapies in preclinical models. We have previously demonstrated the potency of hESC-derived NK cells in vivo. Here we use both bioluminescent and fluorescent imaging to demonstrate trafficking of hESC-derived NK cells to tumors in vivo. Our dual-imaging approach allowed us to more specifically define the kinetics of NK cell trafficking to tumor sites. NK cell persistence and trafficking were further evaluated by flow cytometry and immunohistochemistry. This integrated approach provides a unique system to apply the use of human pluripotent stem cells to study the kinetics and biodistribution of adoptively transferred lymphocytes, advances broadly applicable to the field of immunotherapy.

Engineered Human Embryonic Stem Cell-Derived Lymphocytes to Study In Vivo Trafficking and Immunotherapy.

Les cellules souches embryonnaires humaines (CSEh)-cellules d&eacute;riv&eacute;es natural killer (NK) sont une source prometteuse de lymphocytes antitumoraux d&#39;immunoth&eacute;rapies. Ils fournissent &eacute;galement une plate-forme g&eacute;n&eacute;tiquement tractable bien adapt&eacute;e pour l&#39;&eacute;tude des immunoth&eacute;rapies antitumorales dans les mod&egrave;les pr&eacute;cliniques. Nous avons d&eacute;j&agrave; d&eacute;montr&eacute; l&#39;activit&eacute; des cellules NK CSEh issues in vivo. Ici nous utilisons fois bioluminescentes et fluorescent d&#39;imagerie afin de d&eacute;montrer que le trafic des cellules NK CSEh-d&eacute;riv&eacute;es de tumeurs in vivo. Notre approche double-imagerie a permis de d&eacute;finir plus pr&eacute;cis&eacute;ment la cin&eacute;tique du NK cell trafic vers les sites tumoraux. Persistance des cellules NK et la traite ont &eacute;t&eacute; &eacute;valu&eacute;es davantage par immunohistochimie et cytom&eacute;trie en flux. Cette approche int&eacute;gr&eacute;e offre un syst&egrave;me unique pour appliquer l&#39;utilisation de cellules souches pluripotentes humaines pour &eacute;tudier la cin&eacute;tique et la biodistribution des Moutschen transf&eacute;r&eacute; des lymphocytes, des avanc&eacute;es largement applicable au domaine de l&#39;immunoth&eacute;rapie.

Engineered immunoth&eacute;rapie et humains Lymphocytes embryonnaires de cellules souches d&eacute;riv&eacute;es d&#39;&eacute;tudier dans le trafic de Vivo.

Cellule staminali embrionali umane (hESC)-cellule derivate natural killer (NK) sono una promettente fonte di linfociti antitumorali per immunotherapeutics. Essi forniscono inoltre una piattaforma geneticamente trattabili adatta per lo studio delle immunoterapie antitumorale in modelli preclinici. In precedenza abbiamo dimostrato la potenza di derivati hESC NK cellule in vivo. Qui usiamo sia bioluminescenti e fluorescenti di imaging per dimostrare il traffico delle cellule NK hESC-derivate per tumori in vivo. Il nostro approccio dual-imaging ci ha permesso di definire pi&ugrave; precisamente la cinetica di NK cell traffico a siti tumorali. Persistenza delle cellule NK e il traffico sono stati ulteriormente valutati da immunohistochemistry e citometria a flusso. Questo approccio integrato fornisce un sistema unico per applicare l&#39;uso di cellule staminali pluripotenti umane per studiare la cinetica e biodistribuzione di adoptively trasferita linfociti, anticipi ampiamente applicabili al campo della immunoterapia.

Engineered immunoterapia e linfociti embrionali umani cellule staminali derivate per lo studio In Vivo di traffico.

Adoptive transfer of antitumor lymphocytes has gained intense interest in the field of cancer therapeutics over the past two decades. Human natural killer (NK) cells are a promising source of lymphocytes for anticancer immunotherapy. NK cells are part of the innate immune system and exhibit potent antitumor activity without need for human leukocyte antigen matching and without prior antigen exposure. Moreover, the derivation of NK cells from pluripotent stem cells could provide an unlimited source of lymphocytes for off-the-shelf therapy. To date, most studies on hematopoietic cell development from human embryonic stem cells (hESCs) and induced pluripotent stem cells (iPSCs) have used incompletely defined conditions and been on a limited scale. Here, we have used a two-stage culture system to efficiently produce NK cells from hESCs and iPSCs in the absence of cell sorting and without need for xenogeneic stromal cells. This novel combination of embryoid body formation using defined conditions and membrane-bound interleukin 21-expressing artificial antigen-presenting cells allows production of mature and functional NK cells from several different hESC and iPSC lines. Although different hESC and iPSC lines had varying efficiencies in hematopoietic development, all cell lines tested could produce functional NK cells. These methods can be used to generate enough cytotoxic NK cells to treat a single patient from fewer than 250,000 input hESCs/iPSCs. Additionally, this strategy provides a genetically amenable platform to study normal NK cell development and education in vitro.

Clinical-scale derivation of natural killer cells from human pluripotent stem cells for cancer therapy.

Transfert adoptif de lymphocytes antitumorales a acquis un int&eacute;r&ecirc;t intense dans le domaine des traitements du cancer durant les deux derni&egrave;res d&eacute;cennies. Cellules humaines de le natural killer (NK) sont une source prometteuse de lymphocytes pour immunoth&eacute;rapie anticanc&eacute;reuse. Les cellules NK font partie du syst&egrave;me immunitaire inn&eacute; et pi&egrave;ce puissante activit&eacute; antitumorale sans n&eacute;cessit&eacute; d&#39;appariement d&#39;antig&egrave;ne leucocytaire humain et sans exposition pr&eacute;alable de l&#39;antig&egrave;ne. En outre, la d&eacute;rivation de cellules NK de cellules souches pluripotentes pourrait constituer une source illimit&eacute;e de lymphocytes pour la th&eacute;rapie standard. A ce jour, la plupart des &eacute;tudes sur le d&eacute;veloppement de cellules h&eacute;matopo&iuml;&eacute;tiques par les cellules souches embryonnaires humaines (CSEh) et les cellules souches pluripotentes induites (CISP) ont utilis&eacute; des conditions incompl&egrave;tement et &eacute;t&eacute; sur une &eacute;chelle limit&eacute;e. Ici, nous avons utilis&eacute; un syst&egrave;me bi-&eacute;tag&eacute; de culture pour produire efficacement les cellules NK de CSEh et CISP en l&#39;absence de tri cellulaire et sans n&eacute;cessit&eacute; de cellules stromales x&eacute;nog&eacute;niques. Cette nouvelle combinaison d&#39;&agrave; l&#39;aide de la formation de corps embryo&iuml;des conditions d&eacute;finies et membranaires interleukine 21 artificiel pr&eacute;sentatrices cellules exprimant permet la production de cellules NK matures et fonctionnels de plusieurs gammes de CSEh et iPSC. Bien que diff&eacute;rentes lign&eacute;es de CSEh et iPSC avaient diff&eacute;rentes efficacit&eacute;s en d&eacute;veloppement h&eacute;matopo&iuml;&eacute;tique, toutes les lign&eacute;es cellulaires test&eacute;es pourraient produire des cellules NK fonctionnelles. Ces m&eacute;thodes permettent de g&eacute;n&eacute;rer les cellules NK suffisamment cytotoxiques pour traiter un seul patient de moins de 250 000 entr&eacute;es CSEh/CISP. En outre, cette strat&eacute;gie fournit une plate-forme g&eacute;n&eacute;tiquement se pr&ecirc;te pour &eacute;tudier le d&eacute;veloppement normal des cellules NK et les &eacute;tudes in vitro.

D&eacute;rivation de clinique &agrave; l&#39;&eacute;chelle des cellules tueuses naturelles de cellules souches pluripotentes humaines pour le traitement du cancer.

Trasferimento adottivo di linfociti antitumorali ha guadagnato l&#39;interesse intenso nel campo delle terapie del cancro negli ultimi due decenni. Cellule naturale killer (NK) sono una promettente fonte di linfociti per immunoterapia antitumorale. Le cellule NK sono parte del sistema immunitario innato e mostrano potente attivit&agrave; antitumorale, senza necessit&agrave; di corrispondenza antigene leucocitario umano e senza esposizione precedente dell&#39;antigene. Inoltre, la derivazione di cellule NK da cellule staminali pluripotenti potrebbe fornire una fonte illimitata di linfociti per la terapia standard. Fino ad oggi, la maggior parte dei studi sullo sviluppo di cellule ematopoietiche da cellule staminali embrionali umane (hESC) e cellule staminali pluripotenti indotte (iPSCs) hanno usato condizioni definite in modo incompleto e stato su scala limitata. Qui, abbiamo utilizzato un sistema di coltura due fasi per produrre efficientemente le cellule NK da hESC e iPSCs in assenza di un ordinamento delle cellule e senza necessit&agrave; di cellule stromali xenogeniche. Questa nuova combinazione di corpo embryoid formazione con definite condizioni e membrana-limiti interleuchina 21-esprimere cellule artificiali presentanti l&#39;antigene permette la produzione di cellule NK mature e funzionali da diverse linee di hESC e iPSC diversi. Diverse linee di hESC e iPSC avevano diversa efficienza nello sviluppo ematopoietico, tutte le linee cellulari testate potrebbero produrre funzionale delle cellule NK. Questi metodi possono essere utilizzati per generare abbastanza citotossiche delle cellule NK per trattare un paziente singolo da meno di 250.000 hESCs input/iPSCs. Inoltre, questa strategia fornisce una piattaforma geneticamente suscettibile per studiare il normale sviluppo delle cellule NK ed educazione in vitro.

Article	Year
Nature of Transients in the Laser Flash Photolysis of the Tribromocuprate(I) Complex. Inorganic chemistry\| PubMed ID: 11666253	1996
MMP-7 cleaves the NR1 NMDA receptor subunit and modifies NMDA receptor function. FASEB journal : official publication of the Federation of American Societies for Experimental Biology\| PubMed ID: 18644839	2008
Human embryonic stem cells differentiate into a homogeneous population of natural killer cells with potent in vivo antitumor activity. Blood\| PubMed ID: 19365083	2009
Tumor necrosis factor-alpha-induced neutral sphingomyelinase-2 modulates synaptic plasticity by controlling the membrane insertion of NMDA receptors. Journal of neurochemistry\| PubMed ID: 19476542	2009
Pluripotent stem cell-derived natural killer cells for cancer therapy. Translational research : the journal of laboratory and clinical medicine\| PubMed ID: 20801411	2010
Human pluripotent stem cells produce natural killer cells that mediate anti-HIV-1 activity by utilizing diverse cellular mechanisms. Journal of virology\| PubMed ID: 20962093	2011
RUNX1a enhances hematopoietic lineage commitment from human embryonic stem cells and inducible pluripotent stem cells. Blood\| PubMed ID: 23372166	2013
Engineered Human Embryonic Stem Cell-Derived Lymphocytes to Study In Vivo Trafficking and Immunotherapy. Stem cells and development\| PubMed ID: 23421330	2013
Clinical-scale derivation of natural killer cells from human pluripotent stem cells for cancer therapy. Stem cells translational medicine\| PubMed ID: 23515118	2013

David Knorr

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