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Biochemistry

Measuring Protein Concentration with Absorbance

Description

Measuring protein concentration with absorbance is a key step in many biochemical assays. Photometric methods use the fact that samples with more light-absorbing material transmit less light. Because concentration and absorption are directly related, this makes it possible to measure an unknown sample.

Transcript

测定样品中蛋白质的浓度是许多生物化学实验的基础步骤。分光光度法测定可用少量样品完成。样品中含有的吸光物质越多,透过的光就越少。这为吸光物质提供了定量测量的依据。这些概念在科学领域极为基础,其中介绍两种技术的论文位列有史以来被引用次数最多的三篇论文之中。本视频将介绍一些最常用的分光光度蛋白质测定技术背后的原理、实验操作方法以及所收集数据的分析方式。

光度法蛋白质测定基于浓度与光吸收度之间的关系。这被称为比尔-朗伯定律,该定律指出,光吸收物质的浓度与其吸光度成正比。

这一原理是所有光度法蛋白质测定方法的基础。

对于直接吸收分析,需测定未修饰蛋白质样品的吸光度值。由于含有芳香族侧链,色氨酸和酪氨酸残基在280 nm波长处的吸光度值最高。

然而,...

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