DNA 琼脂糖凝胶电泳

琼脂糖凝胶电泳是一种常用于根据DNA分子大小对其进行分离的技术。

琼脂糖——一种源自红藻的多糖——加入如Tris-乙酸盐EDTA（TAE）或Tris-硼酸盐EDTA（TBE）等缓冲液中，并通过加热溶解。

通常，将 1 克琼脂糖溶解在 100 毫升缓冲液中以形成 1% 的琼脂糖溶液，但根据具体应用的不同，可添加不同量的琼脂糖。

为了染色凝胶，通常将荧光染料（如溴化乙锭）加入琼脂糖溶液中。该染料可插入DNA碱基对之间，并在紫外光下发出荧光。

然后可将溶液倒入水平模具中。将梳子插入凝胶模具中，以形成加样孔，用于加载DNA样品。

琼脂糖溶液静置，使其凝固成凝胶。

凝胶由通过氢键结合的琼脂糖分子构成，形成多孔基质，DNA分子可在其中移动。

将DNA样品与上样缓冲液混合后加样至凝胶中。上样缓冲液含有甘油，可增加DNA样品的密度，有助于样品沉降至加样孔底部。

缓冲液还含有染料，例如二甲苯青和溴酚蓝，有助于监测DNA迁移条带的进程。

当在凝胶长度方向施加电势时，带负电荷的 DNA 会向正极迁移，并穿过琼脂糖孔隙的各层。

较大的DNA分子通过孔隙的速度比小分子更慢，从而可以根据分子大小进行分离。

孔的大小取决于溶液中琼脂糖的浓度。琼脂糖浓度越高，孔径越小，这有助于分离较短的DNA片段。

在紫外光下，染色的 DNA 分子呈现为荧光条带。可通过与已知大小的 DNA 片段（称为 DNA 分子量标记）进行比较，来确定条带的位置。

DNA 分子量标准（ladder）的条带可作为参照，用于确定目标 DNA 分子的大小。