当光照射到物质上时，一部分被其吸收，其余部分则被反射或透射。我们所感知到的物质颜色取决于其最可能反射的波长。例如，我们看到的一块蓝色织物，其中含有一种染料，该染料强烈反射蓝光，同时强烈吸收橙光和红光。
染料通常是共轭化合物，这意味着它们具有交替的双键和单键。电子可以在共轭体系内自由移动。不同颜色的染料在吸收光的波长上必然存在差异。当我们观察一些实例时，会发现吸收波长随着共轭程度的增加而增大。
那么，波长与共轭程度之间有何关系呢？让我们从分子能级的角度来考虑。我们可以将离域电子视为占据分子轨道（MOs）。当分子吸收具有特定能量的光时，该能量恰好足以将一个电子激发到更高能级的分子轨道。最可能发生的跃迁是从最高占据分子轨道（称为HOMO）跃迁至最低未占据分子轨道（LUMO）。因此，我们预期被吸收最多的光的波长应与HOMO-LUMO之间的能隙相对应。
共轭程度较低或无共轭的分子通常具有较大的HOMO-LUMO能隙。它们吸收紫外光并反射所有可见光，因此呈现白色或无色。共轭键通过降低分子的能级（尤其是高能级）使其更稳定。共轭程度越高，HOMO-LUMO能隙越小，吸收的光波长越长。金属元素和取代基也会影响该能隙的大小。
让我们来看一个例子。视黄醇具有较小的共轭体系，而叶绿素a则具有含氮和镁的大型共轭体系。视黄醇在325 nm处吸收光，而叶绿素a在430 nm和662 nm处均有吸收。正如预期的那样，视黄醇的能量间隙更大。
我们可以使用紫外-可见光分光光度计（UV-Vis spectrophotometer）来研究吸收现象。分光光度计由光源、控制样品接收波长的装置以及光检测器组成。样品通常为透明溶液。由于化合物往往在多个波长处都有吸收，因此可以在特定波长下测量吸光度，也可以在一定波长范围内进行扫描测量。此外，由于分子处于不同的取向和振动态，每个能级跃迁都会表现出一段波长范围。
在测量过程中，光可能被吸收、穿过而不与任何分子接触，或从溶剂或化合物分子上发生散射。我们忽略向后散射的少量光。有时，本可能被分子吸收的光反而从其表面发生散射。我们使用独特的摩尔衰减系数来描述一种物质对特定波长光的透射能力。吸光度随浓度变化，而摩尔衰减系数则不随浓度改变。
测量完成后，分光光度计将接收到的光与原始光进行比较，其比值称为透射率。吸光度是透射率的负十进制对数。如果分光光度计已记录溶剂的吸光度，它会将其扣除，从而仅显示待测化合物的吸光度。结果通常以吸光度对波长作图的形式呈现。化合物吸收最强的波长称为最大吸收波长（lambda max）。如果我们计算每个波长下的摩尔衰减系数，则该系数在最大吸收波长处达到最高值。
摩尔衰减系数、吸光度、样品浓度以及光程长度（即光在样品中传播的距离）之间的关系由比尔-朗伯定律描述。如果我们已知其中任意三个变量，就可以计算出第四个变量。
在本实验中，您将使用紫外-可见
