4.2
对于许多应用(如重组DNA技术)而言,需要从细胞中分离DNA,并在特定位置进行切割。
尽管针对不同类型的细胞使用不同的DNA提取方法,但通常包括三个标准步骤:细胞裂解、蛋白质去除和DNA回收。
在真核细胞内,DNA 被包裹在细胞核中。因此,为了分离 DNA,需要破坏细胞膜和核膜。
此步骤可通过机械方法(如研磨或超声处理)破碎细胞,或通过化学方法(如使用去垢剂和酶)溶解细胞膜的部分结构来实现。
细胞内容物释放后,通过离心将碎片与可溶性组分分离。所获得的上清液含有核酸和水溶性蛋白质。
为了去除蛋白质,向裂解上清液中加入蛋白酶K、肽酶或溶菌酶等酶以断裂肽键。
通过加入酒精和盐(如乙酸钠),从上清液中沉淀回收DNA。
将分离出的沉淀物溶解于水或缓冲液中。
DNA 分离方案可以快速、简单,也可以复杂、耗时,具体取决于进一步处理所需的 DNA 类型和质量。 例如,质粒 DNA 提取比基因组 DNA 提取稍微复杂一些,因为在分离过程中需要适当的裂解方法将质粒 DNA 与 gDNA 分离。 然而,对于特定应用,例如需要大量高质量 DNA 样本的长程 DNA…