Southern印迹

Southern印迹是一种利用标记的DNA探针与目标DNA杂交，以检测基因组中特定序列的技术。

该技术以英国生物学家埃德温·南（Edwin Southern）的名字命名，他首次开发了这一技术。

该实验流程包括五个主要步骤：电泳、变性、膜转移、杂交和显影。

首先，基因组DNA经限制性内切酶消化，产生的DNA片段在琼脂糖凝胶上通过凝胶电泳进行分离。

为了使双链DNA变性或分离成两条单链DNA（ssDNA），将凝胶浸泡在氢氧化钠溶液中。

然后将凝胶置于含有氯化钠和Tris缓冲液的DNA中和溶液中的海绵上，以将其pH值重置为7.0。

接下来，将尼龙膜置于凝胶上方，并用一叠纸巾压住。单链DNA通过毛细作用转移到膜上，而中和溶液中的高盐浓度有助于DNA与膜结合。

当用紫外线照射时，DNA 会共价交联到膜上。这可以防止扩散并固定 DNA 条带。

然后将膜浸泡在变性的鲑鱼精子DNA溶液中。该溶液可覆盖膜表面，防止探针DNA与膜发生非特异性结合。

探针是较短的单链DNA，其序列与目标DNA片段互补。为了便于观察，探针可标记放射性磷（P-32），或标记一种能够产生易于检测产物的酶。

当膜浸泡在含有探针的缓冲溶液中并在 42 °C 下温育时，目标单链 DNA 会与互补的探针 DNA 配对，形成带有标记的杂交双链 DNA。

经过过夜杂交后，对膜进行洗涤以去除未结合的探针。

对于放射性标记的DNA，将膜暴露于X射线胶片以进行检测。

通过加入适当的底物并观察条带在显色或发光过程中产生的信号，可以检测酶标记的探针。由于标记的探针仅与目标DNA序列结合，因此任何可见条带均表明存在目标DNA。