原位杂交

原位杂交是一种用于在培养的细胞或化学保存的组织切片中定位DNA或RNA的技术。

RNA 原位杂交用于通过检测和定量特定的mRNA转录本来监测基因的表达位置。

通过单链互补RNA探针检测目标mRNA，这些探针由 体外 DNA模板的转录或化学反应合成。

探针用放射性同位素、荧光染料或其他报告分子（如生物素或地高辛）进行标记，这些分子可与标记的抗体结合并被检测。

RNA 原位 杂交主要包括四个步骤：组织固定、通透处理、杂交和检测。

首先，采集新鲜组织并进行化学处理，以终止组织内的任何生化反应并保持其结构完整性。这种保存技术称为组织固定。

接下来，需要去除组织中的蛋白质和脂质，以便探针能够进入并与目标 RNA 结合。

为了降解蛋白质并通透细胞膜，样品需用0.2摩尔的盐酸和蛋白酶等酶处理，同时使用去垢剂分解脂质。

然后在略低于RNA-探针杂交体熔点的温度下，使目标RNA与探针发生杂交。这有助于探针与互补的mRNA退火结合。通过多次洗涤去除未结合及结合不牢固的探针。

检测杂交探针的方法取决于标记类型。放射性探针通过曝光于X光胶片进行检测，而荧光探针则可在荧光显微镜下观察到。

对于其他标记，针对报告分子的抗体被标记上荧光或比色染料。

杂交探针的检测揭示了特定mRNA的分布情况，从而指示目的基因的表达位置。