16.12: 原位杂交

原位杂交 （ISH） 是一种使用标记探针检测和定位细胞、组织或组织切片中特定 DNA 或 RNA 分子的技术。该技术于 1969 年首次用于核酸的研究。它目前是科学研究和临床环境中必不可少的工具，尤其是用于诊断目的。

探针和标签的类型

探针是 DNA 或 RNA 的互补链，可与细胞中的相应核苷酸序列结合。许多不同的探针，例如单链 DNA 探针、双链 DNA 探针、反义 RNA 探针或核糖探针，以及合成的寡脱氧核苷酸探针，都用于原位杂交。探针的选择取决于几个因素，包括它们的灵敏度、特异性、稳定性和渗透到组织样本中的难

这些探针可以用放射性同位素、荧光染料或其他抗原分子进行标记以进行检测。³H、³⁵S 和 ³²P 是广泛使用的放射性标记探针，而非放射性标记包括生物素、地高辛和荧光素。这些标记可以通过末端标记、缺口平移或随机引物合成方法连接到探针 DNA 分子上。检测方法（如放射自显影、荧光显微镜检查或免疫组织化学）用于基于附着在杂交探针上的标记的靶标可视化。

原位杂交的优缺点

原位杂交的主要优点之一是它甚至可以应用于冷冻组织，以最大限度地利用难以获得的组织。此外，它可以与其他技术（如免疫组织化学）结合使用，以检测样品中的蛋白质和活性 mRNA。然而，在处理 DNA 和 RNA 拷贝数低的样品时，使用原位杂交可能难以识别靶标。